JPS61148128A - 抗体の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 グルカゴンは動物の糖代謝に極めて重要な働きをするホ
ルモンであるが、その血中濃度の測定は従って臨床上極
めて重要である。本出願は本ホルモン、特に膵臓由来の
グルカゴンの血中濃度の測定に有用なイムノアッセイ用
抗体の製造法に関するものである。

グルカゴンには化学構造上類似しているといわ−Ｔｙｒ
　−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ
−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ　−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ
−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ−怨 Ｔｈｒ−ＯＨ）と腸管グルカゴンが存在し、血糖値に影
響するものは主として胚グルカゴンとされている。従っ
て臨床的に必要な測定値は主として膵由来グルカゴンの
血中濃度であるが、従来、入手可能な胚グルカゴンと牛
血清アルブミンとの縮合物による抗体の作成操作によっ
ては、肝グルカゴンに特異性を持つ臨床応用可能な抗体
の生成は極くまれであり、主として膵グルカゴンと腸管
グルカゴンの両者と交叉する抗体が得られることは良く
知られている所である。本発明者らは、胚グルカゴンに
特異的な抗体を作成することが出来る抗原の製造を目的
とし、種々のペプチドを合成して、検討した結果、グル
カゴンの１５番からＣ一端に至るペンタデカペプチドが
本目的に極めて有用なものであるという予期せざる新知
見を得、本発明を完成したものである。

本発明はＩ−１−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａ
ｌａ−０ｌ−１−Ａ５ｐ−Ｓｅｒ−Ａｒ　−Ｑｌｎ−Ｔ
ｒｐ−Ｌｅｕ　−Ｍｅ　ｔ−Ａｓｎ−’ｌ’ｈｒ−Ｏｆ
ｌで表わされる新規ペプチド（ｒ）ト牛血清アルブミン
とをグルタルアルデヒドで縮合せしめ、その縮合生成物
を補元動物に投与することを特徴とする胚グルカゴンに
特異的な抗体を製造する方法に関する。

本明細書において、アミノ酸、ペプチド、保護基、活性
基、その他に関し略号で表示する場合、それらはＩＵＰ
ＡＣ−ＩＵＢ　　Ｃｏｍｍ１ｓｓｉｏｎ　ｏｎＢｉｏｌ
ｏｇｉｃａｌ　Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅによる略号あ
るいは当該分野における慣用略号に基づくものであり、
その例を次に挙げる。また、アミノ酸などに関し光学異
性体がありうる場合は、特に明示しなければ５体を示す
ものとする。

Ａｒｇ　　：　　アルギニン Ｔｒｐ　　：　　トリプトファン Ａｓｎ　　：　　アスパラギン Ａｓｐ　　：　　アスパラギン酸 Ｔｈｒ　　：　　スレオニン Ｓｅｒ　　：　　セリン Ｑｌｕ：　　グルタミン酸 Ｇｌｎ：　　グルタミン Ａｌａ：　　アラニン Ｖａｌ：　　バリン Ｍｅｔ：　　メチオニン Ｍｅｔ（ｏ）：メチオニンスルフオキシドＬｅｕ　　：
　　ロイシン Ｐｈｅ　　：　　フェニルアラニン ’ｌ’ｙｒ　　：　　チロシン Ｌｙｓ　　：　　リジン Ｈｉｓ　　：　　ヒスチジン Ｐｒｏ　　：　　プロリン Ｇｌｙ　　：　　グリシン １１ｅ　　：　　インロイシン ＣｙＳ　：　シスチン Ｚ　　　：　カルボベンゾキシ Ｂｏｃ　　：　　ｔ　−ブチルオキシカルボニルＱＢｕ
ｔ：　　ｔ−ブチルエステル ＯＨｚ　ｌ　：　　ベンジルエステル ０Ｎｉ（：　　Ｎ−ヒドロキシ−５−ノルボルネン−２
，３−ジカルボキシイミドエス テル ＭＢＳ　　：　　Ｎ−ヒドロキシ−ｐ−メトキシベンゼ
ンスルホニル ＨＯＮＢ：　　５−ノルボルネン−２，３−ジカルボキ
シイミド ＤＣＣ：　　Ｎ、Ｎ’−ジシクロへキシルカルボジイミ
ド ＤＣＵ　　：　　Ｎ、Ｎ’−ジシクロへキシルウレアＤ
ＭＦ　　：　　Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミドＮＭＰ　
　：　　Ｎ−メチル−２−ピロリドンＴＦＡ　：　トリ
フルオロ酢酸 ＴＨＦ　　：　　テトラヒドロフラン ＴＥＡ　：　トリエチルアミン ＤＣＨＡ：　　ジシクロヘキシルアミンＣＭＣ：　　カ
ルボキシメチルセルロースＢＳＡ　　：　　牛血清アル
ブミン 本発明で用いるペプチド（１）は、ペプチド合成の常套
手段で製造しうる。固相合成法、液相合成法のいずれに
よってもよいが、液相合成法が有利な場合が多い。その
ようなペプチド合成の手段は、たとえば°Ｔｈｅ　Ｐｅ
ｐｔｉｄｅｓ　’　、第１巻（１９６６）　、　５ｃｈ
ｒｏｄｅｒ　ａｎｄ　Ｌｕｂｋｅ著、　Ａｃａｄｅｍｉ
ｃＰｒｅｓｓ　、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ　、　Ｕ、　Ｓ、
　Ａ、あるいは１ペプチド合成°、泉屋ら著、丸善株式
会社（１９７５年）に記載されており、たとえばアジド
法、クロライド法、酸無水物法、混酸無水物法、ＤＣＣ
法。

活性エステル法、ウッドワード試薬Ｋを用いる方法、カ
ルボジイミダゾール法、酸化還元法、ＤＣＣ／アディテ
ィブ（例、ＨＯＮＢ、ＨＯＢｔ、ＨＯ８ｕ）法などがあ
げられる。

本発明で用いるペプチド（１）は、そのペプチド結合の
任意の位置で２分される２種のフラグメントの一方に相
当する反応性カルボキシル基を有する原料と、他方のフ
ラグメントに相当する反応・性アミノ基を有する原料を
ペプチド合成の常套手段で縮合させ、生成する縮合物が
保護基を有する場合、その保護基を常套手段で脱離させ
ることにより製造しうる。

ペプチド（１）を製造する反応工程で、Ａｓｐは通常保
護しておくのが望ましい場合が多く、最終工程としては
ペプチド（Ｉ）の構成アミノ酸残基の少くとも一つが保
護された保護ペプチド（Ｉ）から保護基金すべて説釘る
ことによシ製造しつる場合が多い。

原料の反応【関与すべきでない官能基の保護および保護
基、ならびにその保護基の脱離、反応【関与する官能基
の活性化などもまた公知のものあるいは手段から適宜選
択しうる。

原料のアミノ基の保護基としでは、たとえばカルボベン
ゾキク、ｔ−グチルオキク方ルボニル。

ｔ−アミルオキクカルボニ〜、インボルニルオキγカル
ボニル、アーメトキシペンジルオキクカルポニル、２−
クワルーベンヅルオキｙカルボニル、アダマンチルオギ
ク方ルボニル、トリプルオファセチル、フタリｆｉ１．
ホルミル、０−ニトワフェニルスルフェニＡ／、ジフェ
ニルホスフィノチオイルなどがあげられる。カルボキＶ
ル基の保護基としては、たとえばアルキルエステル（例
、メチル、エチル、プロピル、グチル、ｔ−ブチルなど
のエステ＃基しペンシルエステル基、ｒ−ニトロベンヅ
ルエヌテル基、ｐ−メトキシベンゾルエヌテル基、Ｐ−
クロルベンジルエステル基、ベンズとドリルエステル基
、カルボベンゾキシとドヲジド基、ｔ−プチルオギシカ
ルボニルヒドフゾド基、トリ千ルヒドラジド基などがあ
げられる。

アルギニンのグアニジノ基の保護基としては、たとえば
ニトロ基、トシ／Ｉ’基、ｐ−メトキシベンゼンヌルホ
ニル基、カルボベンゾキク、イソボルニルオキシカルボ
ニル、アダマンチルオキシカルボニル等が例示される。

ま之、そのグアニジノ基ハ、酸（例、ベンゼンヌルホン
酸、トルエンヌルホン酸、塩酸）硫酸など）塩の形で保
護してもよスレオニンの水酸基は、たとえばエステル化
またけエーテル化によって保護することができる。

このエステル化に適する基としてはたとえばアセｆ″′
基７ど０低吸７″＊　／　１　″基・／’Ｃ７ｙ′ｄ　
／Ｉ／基　　　　　　　　　（などのアロイル基、ベン
ジルオキシカルボニル基、エチルオキクカルポニ〜基な
どの炭酸から誘導される基などがあげられる。またエー
テル化に適する基としては、たとえばベンジル基、テト
フヒドロビフニル基、ｔ−ブチル基などである。しかし
ながらスレオニンの水酸基は必ずしも保護する必要ハ逢
い。メチオニンはヌルホキサイドの形で保護しておいて
もよい。原料のカルボキシ／Ｓ’基の活性化されたもの
としては、たとえば対応する酸無水物、アジド、活性エ
ステル（ベンタクプロフェノールｅｐ−ニトロフェノー
ル、Ｍ−ハイトロキタサクンンイミド、Ｎ−ハイドロキ
シベンズトリアゾール、Ｎ−ハイドワキ５／−５−フル
ボルネン−２，３−ジカルボキシイミドなどとのエステ
ル）などがあけられる。ベプタイド結合形成度応り脱水
剤（例、ジシクロへキンルカルポジイミド、カルボジイ
ミダゾール等のカルボジイミド試薬）の存在下に実施し
うる場合がある。

本ベデタイド縮合反応は溶媒の存在下に行うことができ
る。溶媒としては、ベデタイド縮合反応に使用しうろこ
とが知られているものから適宜選択されうる。たとえば
無水または含水のジメチルホルムアミド、ジメチルスル
ホキサイド、ピリジン、クワロホルム、ジオキサン、ジ
クロルメタン、テトフハイドワフフン、酢酸エチル、Ｍ
−メチルピロリドンあるいはこれらの適宜の混合物など
があげられる。

反応温度はペプチド結合形成度広に使用されうろことが
知られている範囲から適宜選択され、通常約−４０℃−
約６０℃、好ましくは約−２０℃−約０℃の範囲から適
宜選択される。

不縮合反応終了後、生成物が保護基士官している場合、
それは常法によシ離脱できる。かかる常法としては、た
とえば還元的方法（例、バッジツム黒等の触媒金用いる
水素添那、液体アンモニア中金潟ナトリウムによる還元
）、アンドリンス（例、トリフ／Ｉ／オロ酢酸、７ツ化
水素、メタンスルホン酸等の強酸によるアシドリシス）
などがあげられる。

上記のようにして製造されたペプチド（Ｉ）は反応終了
混合物から、ペプチドの分離手段、抽出、分配、カフム
クロマトグラフイーなどくよりｓ取できる。

ペプチド（Ｉ）はアルギニン残基上官するので、塩とし
ても採取しうる。塩全形成しうる酸としては、之とえば
塩酸、臭化水素は、硝酸、硫酸、リン酸などの無機酸、
あるいはたとえばギ酸−酢酸、ププビオン酸、乳酸、ク
エン酸、シを酸−マレイン酸などの宥橿酸があげられる
。

本発明で用いるペプチド（１）を製造しつる原料もまた
前記ペプチド合成の常套手段で、そのアミノ酸配列にし
たがって各々のアミノ酸を順次縮合させることにより製
造しうる。

この様にして得られたペンタデカペプチド（１）と牛血
清アルブミンとの縮合は公知のグルタルアルデヒド法［
例、ＰＲＯＣＥＥＤＩＮＧＳ　　ＯＦ　ＴＨＥ　ＳＯＣ
［ＥＴＹＦＯＲＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　　Ｂｉｏｌ
ｏｇｙ　　ａｎｄ　　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　。

１２８．３４７−３５０　（１９６８）］によって実施
しうる。牛血清アルブミンは、抗原のキャリアーとして
使用するものであシ、場合によ）同様の目的に使用しう
る他の蛋白質で代替しうる場合もありうる。ペンタデカ
ペプチドＣＩ）と牛血清アルブミンの使用量比は１０■
対灼２０■が最適であう、度応囲は７．３前後が良効な
時果を与える場合が多い。また厘応時間は室温で２〜６
ＦＦ間がよい場合が多いが、特に３時間前後が適当な場
合が多いい。

この様にして重数した１合生成物は常套手段で４゛σ前
後で水に対して透析し、凍結乾燥して保存することがで
きる。

以上の様にして製造した本発明の縮合生成物は、種々の
＠Ｕ物（例、ウサギ、マフス）に常法に従って投与する
こと＆でよって効率よ（膵グｆｉＩオプンに対し特異的
な、しかも度応注のよい抗体で産生ずることができる。

ペプチドＣＩ）は、抗体産生ずるに有効な盪でよく、た
とえばウサギに１＠豹２鴫の皮下投与で２週間）きに５
回行うと抗体で産生レラる場合もある。

以下の参考例において、薄層り奮マトグフフイーは、メ
ルク頽シリカゲルデレートロＱ１ｚｓ４又は、フナ＝Ｖ
薬品社製　セルロースプレートβアビセルｓｙを用い、
下記の展開溶媒で用いた。

１１ｆＬ！タップホルム：メタノール：６酸コ９：１：
０．５ ｎｔａ＝ｙフワホル二二メタノール：水ｘ’ｒ：３：０
＋５ Ｒｆ’：ｎ−ブタノール；ピリジン：酢＃１．：水コ３
０　１　２０　　：　　６　　：　　２４参考例　１ （１）　　Ｅｏａ−五５ｎ−Ｔｈｒ　ＯＢｚ上の製法Ｂ
ｏｃ−でｈｒ　　０Ｂｚｌ　　ｌＬ２ｇｔ−’ｌ”Ｆム
３ｏａｍに溶かし、室温でｚＯ分間振〕混ぜ本読、濃塩
酸３０１１１１’ｔ”２ｆｉｌｌえ、溶液で減圧製部す
る。残留物ｔで１１［ＦＩＪ％’（溶か一氷冷しで冨ム
５Ｇ−で加えて中和する。これにＢｏａ−ムａｎ−ＯＨ
７５，７ｇ、ＨＯｆｆ１１１５４．５ｇ、Ｉ）ＧＯ７４
，３ｇ１ｍえて１５時間かき混ぜる。析出したｎｃゴｔ
ろ失した後、溶媒を減圧で留去Ｌ−残留４ｆＩｌｔ−酢
酸エチル１ｉに溶かす。こｉで１０％クエン酸水（３０
０１１Ｘ３）、飽和炭酸水素ナトリクム水（３ｏａｍＸ
３）、水（３００叫×３）で悪文洗浄し、無水硫酸ナト
リクムで乾漠する。溶Ｖ＆を減圧で留去した後、残留物
にエーテル＜’ｕｔ）ｔ−ｍえて、粉末として、ろ取し
た後、アセトニトリルよシ再結晶する。収量１０５．Ｉ
ｇ（７５，２９６）ｍｌ　　１１５５−１６６°ｃ（α
〕′Ｄ３−１３．９°（ｃ＝０゜９、ＤＭＦ中）、Ｒｆ
ｌ　　０．５　１　．０２ｏＦＩｚ＊ＯフＮ３　として
の元素分析計算値ｊ　Ｃ５６，７２；　Ｈ６、９ｏ；ｙ
　９．９２．実験ｆｉｔ：　Ｃ５７，０１；　Ｈ６゜８
’ＨＮ　９．９４ （２）　　Ｂｏａ−Ｍｅｔ、（０）−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−
ＯＢＺＩの製造Ｂｏａ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−ＯＢｚｌ　　
５０　、ＯｇＴＩＣＴ　ＩＦム１７０＋１１１金加えて
、室温で３０分間振り混ぜた後、濃縮しエーテ／ｌ１５
００ｆｆｉ１を加えて（３）末としてろ取し、乾燥する
。これ七ＴゴＦ　４００　ｍｔに溶か二氷冷しでＭＡ２
０ｆｆｌｌｔ−７Ｊｌえた後、ＢＯＣ−Ｍｅｔ（０）−
ＯＮＥ　（ＢｏＣ−Ｍｅｉ（０）−０Ｈ３１，３ｇ、　
ＥＩＯＮＢ２３．３ｇ１ｒ−Ｔ！Ｉ？２００ｍ１に溶解
し、氷冷し、ＤＣＣ２６，８ｇ’ｔ”７１１１えて、４
時間かき混ぜて調製する。）を加え、１５時間かき混ぜ
る。溶媒を減圧で留去したのち、残留物に酢酸エチル（
２０ａｂｕｔ）　、ニーテアｂ（２ｏｏｍｌ）’ｉ加え
、粉末としてろ取し、アセトニトリルよシ再沈澱する。

収量４８．５ｇ（７２，０％）、４Ｂ１４５−１４７°
Ｃ〔α）”、’−６．ｓ　（Ｃｓ１．　ｌ　、　ＤＭＦ
中）、　Ｒｆｌｏ、　　ｌ　９　、　Ｃ２ｓＨＣ２５Ｈ
３６０としての元素分析計算ｆｌ：　Ｃ５２，６２；　
Ｈ６，７１；　　ｍ　９．１３２ｉ３５，６２．実験値
：　Ｃ５２，４４；　　Ｈ６，７３；Ｎ　　９．５０ｉ
　　Ｓ　　５．１５ （３）　ＥＯＱ−Ｌｅｕ−ｕｅｔ（ｏ）−Ａａｎ−Ｔｈ
ｒ−ＯＢＺＩの製法 Ｂｏｏ−ＩＪｅｔ（０）−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−ＯＥｚｌ　
ｌ　５．ｏ　ｇＫＴＦＡ４５１＋１１ｔ″加え、室温で
４５分間振ル混ぜ九後、濃縮し、ニー２１％ｌ１ｏｏｌ
ｌ＠加えて粉末としてろ取し、乾燥する。、これｔ″Ｄ
Ｍ］Ｐ５０１１１に溶解し、氷冷し、？ＩＩｊＡ５．７
１１１ｉ加え、これにＢｏａ−Ｌｅｕ−ｏＮＥ　（Ｂｏ
ａ−Ｌｅｕ−ＯＨ６，６９ｇ　。

ＨＯＭＢ５．７０ｇ、ＤＣＣ６，５６６よｌｕ製）を加
えて、１５時間かき混ぜる。溶［１−減圧で留去した後
、残留物に酢酸エチル２００１１１ｇ加えて、粉末とし
てろ取し、アセトニトリル−ｒｎ酸エチルよ〕再沈澱す
る。収量１５．Ｏｇ（８３，４％）、ｍ、ｐ、１３４−
１３６°ｃ、　（ａ）”、’　−１ｓ、　ｌ。

（Ｃｓ１．Ｏ，ＤＭＦ中）、ｘｒ４　　ａ、ｚｓ。

０３１ＨｔｇＯＬｔ３Ｍ５Ｓ　　としての元素分析計算
値；Ｃ５４、４５；　Ｈ７，２２：　Ｎ　１０．２４；
　Ｓ　４．５９．実験＠＋ｃ　５４，５２；　Ｅ［７，
６０；　Ｍ　９，８９；　３３゜（４）　Ｚ−Ｇｉｎ−
Ｔｒｐ−ＯＢｚｌの製造ＴＩ−’ｌ”ｒ’マフ−Ｂｚｌ
・バラトルエンスルホンａｌｌｊＥ５ｏ、Ｏｇｔ−でｉ
ｙｓｏａｍに溶かし、氷冷し、で１１！Ａ１５．　＋―
、Ｚ−Ｇｉｎ−ＯＨ２ａ−Ｏｚ、ＨＯＨＢ１９．７ｇ、
ＤＣ（’！２．　７ｇ！−沈えて、１５時間かぎ混ぜる
。析出したＤＣｌｌｒｔ−ろ去した後、濃ＭＬ−残留物
を酢酸エチル３００−に溶かす。

これｔ！ｇ和炭＃！７Ｘ素ナトリケふ水（１５０ｍＸ２
）、１０９６りｘン酸水（１５０ｍＸ２）、水（１５０
１＋１（Ｘ２）で累次洗浄する。溶［七減圧で留去した
後、残留物をでＩ！ＩＦ５００−に溶かし、不溶物ｔろ
失する。これｔ−Ｍした後、エーテル５０　　　　　　
　　　　　　。

ｏＩｌｌｔ−加えて、粉末としてろ取しアセトニトリル
よシ再結晶する。収量４５，１ｇ（８２，１３％）　、
　（ｄ）％’　＋５．　ａ’　　（（１：１．０　、　
ＤＭＦ中）、ｍｒ’　　ｏ、６０．Ｃｓ工ｌｌ３ｊ１０
６Ｎ４としての元素分析計＄ｆＬ　Ｃ６６、８９ｉ　　
ｉｆ　５．１３０；　　Ｎ　１０゜０７、実験ｉｆ：　
ｃ　５６．７９；　Ｈｓ、ｖｌ；　Ｎ　１０゜（５）　
　Ｚ−Ｖａｌ−Ｇｌ！１−でｒｐ−ＯＥ［の製造Ｚ−Ｇ
１ｎ−Ｔｒｐ−ＯＢｚｌ　５０．Ｏｇｆメタノール’７
００１１に溶かし、５時間接触還元（触：ｇ：パラジウ
ム黒）すると、結晶が析出するので、これでろ取する。

これｔ−ＤＭＦ３００＋１１１に隠濁し、でＥＡ１３１
１１ｉ加えて溶かし、触ｖ＆でろ失する。これにＺ−Ｖ
ａｌ−ＯＮＢ　３７．Ｏｇｆ加えて、１０時間かき混ぜ
之後、１Ｎ−塩酸１００１１全沈えて中和し、さらに水
５００１１’ｉｊＨ加えて、粉末としてろ取する。これ
をメタノールで十分洗浄する。収量４３．０ｇ（８４，
７９６）、！１１１ｘ　　２４６−２４ｆＱ〔α）”、
’　＋１２．４’　（Ｃｓ０．９．ＤＭＦ中）、ｉｆ工
　０．１４　、Ｃ２ｇＨ３ｓＯ，Ｎ、としての元素分析
計算１ｉ：　Ｃ６１，ｓ８；　Ｈ６，２４；ｉｆ　１２
．３８実験値ｊ　Ｃ６１，８６：　Ｅ［６，３０ｉ　　
Ｎ　１２．３６（ｃｓ）　　Ｚ−Ｐｈｅ−’７ａｌ−Ｇ
ｌｎ−でｒｐ−ＯＨの製造Ｚ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ
−ＯＨ５、ｌ　ｇｆ酢酸１００酎に溶かし、３時間接触
還元したのち触媒でろ去し、ｍＷｌする。これＴＪ：ｎ
Ｍｉｐｚｏｏｍｔに懸濁し、これにＴｍＡ２ｍ１．Ｚ−
Ｐｈｅ−ＯＲ２，７０ｇよシ調製したＺ−ｐｈｅ　ＯＮ
Ｅ　ｋｍえて、７時間かき混ぜる６溶媒を減圧で留去し
、残留物に酢酸水ｔＪえてゲルとしてろ取する。これを
メタノールより再沈澱する。収２ｉｉ５．５０ｇ、　（
８４，５９６）　ｅｍ、ｐ、　２４　ａｏｃ、　〔ａ〕
”：　＋　４．’１°（ｃ＝ｘ、。

、ＤＭＦ中）　、　ＲｆＬｏ、１．、５　、　ＣＣ５１
１ＥＩ４４０８Ｎ・騒Ｈ，Ｏとしての元素分析計算＠ｉ
　：　Ｃ６３，２３；Ｈ６，２８；　Ｎ　１１．６４．
　　実驕値：　Ｃｊ　６３．１１；Ｈ６，２９；　　Ｗ
　１１．８０ （７）　　Ｂｏａ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−Ｐｈｅ−Ｖａ
ｌ−Ｇｉｎ−Ｔｒｐ−ＯＩＩ　Ｏ型造 Ｚ−Ｐｈｅ−Ｔａｌｌ−Ｇｌｎ−でｒ７）−０！！　　
８．　５　ｇｔ−１ＤＭＦ１５０ｍｌ、酢酸５０　＋１
１の混液に″溶かし、５時間接触遺児する。触謀金ろ去
した後、濃縮し、残留物にメタノール１００ｆｌ１１’
ｉ加えて沼晶としてろ取する。これ金、ＤＭＦ２００［
１１１Ｃ怒濁し、テにＡ３．０ｒｎｌ、Ｅｏａ−ムａｐ
（ＯＢｚｌ）ＱＮＢ　　（Ｂｏａ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）
−ＯＨ３，９ｇ、ＨＯＮＢ２．４　ｇ。

ＤＣＣ２，７ｇより調製）全加えて、１０時間かき混ぜ
る。溶媒で減圧で留去したのち、残留物に酢酸水ｔ′迦
えて、ゲルとしてろ取し、ＤＭＦ、水よシ再沈澱する。

収！６．３ｇ（５８，１％）。

勇］；ｌ　　１９１−１９２°Ｃ（分解）、〔α〕智−
６゜２°（ａ＝１．ｌ　、ＤＭＦ中）、ｍｔ”ｏ、１０
００ｇＨｓ７０ｘｚＮｔ　・３／２　Ｈ２Ｏとしての元
素分析計算値：　Ｃ６０，６４ｉ　１！　６．６３；　
Ｉｆ　１０．フロ、実験値：　０６０．３０；　ＩＩ　
６．４８；　ＩＩ　１１．３４（８）　　Ｅｏｃ−０１
ｍ−ム５ｐ（ＯＥｚｌ）−Ｆｈｅ−マａニーＧユｎ−Ｔ
ｒｐ−ＯＨＯｇ造 Ｂｏａ−ム５ｐ（ＯＢｚｌ）−Ｐｈｅ−４ａｌ−Ｇｌｎ
−Ｔｒｐ−ＯＨ６，Ｏｇに、ＴＦＡ５０ｉ１ｔ″窒素気
流中加え、１ｏ分間ふ〕混ぜた後、濃縮しエーテルｔ−
ｍえて粉末としてろ取する。これ’ｉＤＭＦ１００ＯＬ
ｉに溶かし、１ＣＡ２，０１ｌｉ’ｉ加え、Ｂｏｏ−Ｇ
ｌｎ−０１１Ｂ（Ｂｏａ−Ｇｉｎべ旧１．７６ｇ、ＨＯ
ＮＢｌ、３４ｇ、ＤＣＣ！１．５４ｇから調製）會加え
て、１５時間かき混ぜる。これに酢酸水を加えて、粉末
として、ろ取し几のち、アセトニトリル、７Ｘよシ再沈
澱する。収ｆｉ５．５０ｇ（８２，６％）、八ｐ。

２１０−２１２°Ｃ（分解）、〔α）”Ｄ　　−１０，
１’（ｏｗｌ、１．ＤＭＦ中）、ｉｆｌ　　０．０９゜
Ｃ５１Ｈ６５０１３Ｎ９　としての元素分析計算［：Ｃ
６０、５２：　Ｈ６，４７；　　Ｎ　１２．４６．実験
値８Ｃ６０，１９；　　Ｈ６，：５）ｇ　　Ｎ　　１２
．２３（９）　　ｚ−Ａｒｇ（Ｍ］３Ｓ）−ム１ａ−Ｏ
Ｂｕｉの製造Ｚ−Ａｈａ−ＯＥｕ１１；　　３１　、　
Ｏｇｆメタノ−／Ｉ／３００１１１１に溶かし、５時間
接触還児した後、触媒ｔろ去し、濃縮する。一方、２−
ムｒＢ（ＭＢｓ）−０Ｈ−ＤＣＨＡ５３．Ｏｇｔ−酢酸
！ｆ−／５１５００１１１に石濁し１ｏ９６クエン酸２
００１１に７ＪＩえて、よく振り混ぜた後、水洗し、無
水は酸ナトリフムで乾燥する。

これｔ−ＴＨ７５００１１１に溶かし、これに、先に調
製した■−ム１ａ−ＯＢｕｔ　’ｌｊＨ加えＥＩＯＩｆ
Ｂ　１４．９　ｇｆ加えて氷冷し、ＤＯＣ１７，Ｉｇを
加えて１０時間かき混ぜる。析出したＤＣｆｆ’４ろ去
し、濃縮した後、酢酸エチル５ｏＯＩＩＫ溶かし、１０
％クエン酸水（２００ｍｌＸ３）、飽和炭酸水素す）９
つ入水（，２００１１１Ｘ３）、水（２０００！ｌＸ３
）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥する。溶Ｋｋ減
圧で留去し之のち、残留物にエーテ、Ｉｔ／３００［ｆ
ｉｌｉ加えて粉末として、ろ取する。収−１＋＋、５ｇ
（６６，８％）、！ＬＰ、１２５−１２７’Ｃ，（α〕
２ｏ５−６．０’　（ＯＨ１，Ｏ、ＤＭＦ中）、ｍｒＬ
。

＋　６２　ｍ　ＣｇａＪＩｘ＊０ｓＮ６Ｓとしての元素
分析計算値：Ｃ５５，５２；　Ｈ６，４９；　ｆｆ　ｌ
工、５６；Ｅ１５゜２７、実験値：　Ｃ５５，フｌ；　
Ｈ６，４９；　ｆｆ　１１．８１；８５ｊ９ （１０）　　Ｚ−ムｒｇ（ＭＢｓ）−ムｒｇ（ＭＥＮ）
−ム工ａ−０’Ｅｕ’ｅの製造 ２−ムｒｇ（ＭＥｓ）−ム１ａ−ＱＢｕ’ｔ：　　４３
　ｇｔ−メタノール５００１１１に溶かＬ−５時間還元
したのち、濃縮する。残留物をＤＭＩＦ２００ｍ［溶か
し、２−ムｒｇ（ＭＢｓ）−０１１（ｚ−ムｒｇ（ＭＢ
Ｓ）−０Ｈ−ＤＣＩｆ人４９．７ｇよプ調ｇ）、ｍａｉ
ｎ１４．Ｏｃｓ’ｅｍえ、氷冷し、Ｄａｃ１６．１ｇ’
ｃｍえて、１５時間かき混ぜる。析出したＤＣＴｒをろ
去した後％濃縮し、残留物をクロロホルム５ｏｏｉｕに
溶かす。これｔｌＯ％クエン酸７Ｋ（３００［０１Ｘ３
）、飽和炭愈素ナトリウム水（３００叫×３）、水（３
００（１１×３）の順に洗浄し、硫酸マグネシウムで乾
燥する。溶ｇ全減圧で留去したのち、メタノ−／Ｉ／３
００ｆｆｌｌｔ−加えて、結晶としてろ取し、メタノー
ルよシ再結晶する。収ｆｉ５２．４ｇ（７９，２％）。

ｍ、ｐ、　　１１６−１１８°ｃ　、　（ａ）”、’　
−ｓ、ａｏ（Ｃ＝１．Ｏ，ＤＭＦ中）　、　Ｘｔ工　０
，４２．ＣａｚＨｓｔＯｚｘＭｑＥｈ・２Ｈ２０として
の元素分析計算値＋　Ｃｓｏ、ａａｉ　Ｈ６，３５；　
　Ｈ１３，０２；Ｓ　６．６ｚ、実験＠：　Ｃｊ　５１
．０５ｉ　１！　６．０８；　Ｍ　１３．１１；Ｆ３６
，６２ （１１）　　Ｅｏｃ−３ｅｒ−Ａｒｇ（ＭＥ３　）−Ａ
ｒｇ（ｌＪ］３Ｂ　）−Ａｌａ−ＯＢｕ’ＣＯｇ造 Ｚ−Ａｒｇ（ＭＢＳ）−ｈｒｇ、（ＭＥｓ）−ム１ａ−
ＯＢｕｔ３０、ＯｇｇＤＭＩＦ８０１１１．メタノ−／
Ｉ／：ｓｏｏｍｉの混液に溶かし、７時間接触還元する
。触、Ｋｋろ去し、メタノールを減圧で留去したのち、
これにＥｏｃ−３ｅｒ−ＯＨ’７．３　ｇ、　ＨＯＮＢ
　６．３　ｇｆ加え、氷冷し、ＤＣＣ７，３ｇｔ″加え
て１０時間かき混ぜる。析出したＤＣ！Ｕ’ｉろ去し、
溶媒全減圧で留去し、残留物でクロロホルム５００１１
１１に溶かす。これで飽和炭酸水素ナトリウム（３００
１ＩＸ２）。

水（３０ａｍｌｘ２　）で洗浄し、硫酸マグネシウムで
乾燥する。溶Ｋｋ減圧で留去したのち、クロロホルム３
０頗にとかしシリカゲルのカフム（４００ｇ）Ｋ：つけ
る。クワロホルム：メタノー＃！ＩＢ’酸（９：ｏ、？
＝０．３５）の溶媒で屓関し、８００１１１１から２ｊ
までの画分金集めて、ｍ縮し、エーテ／Ｉ／ｌ−加えて
粉末とする。収ｆｚ５．ａｇ（’７９．０９６）、ｘｐ
、　ａｓ−ａａ’ｃ、（α）−，６−ｚＯ，９’（６ｘ
ｌ、ｏ、メタノール中ン、Ｈｆ１０．３３　、ＣａｚＨ
ａｈＯｌａＭｘｏＳｚ”ＨｍＯとしての元素分析計算ｔ
ｉｌ：　ｃ　４９．０９；　Ｈ６，６３；　Ｎ　１３゜
９６；　　３６．３９．実験＠！　Ｃ４８，９６；　　
Ｈ６，５５；　Ｎ　１３．　’７０；　　Ｓ　５．８４
（１２）　　Ｂｏａ−ムｓｐ（ＯＢｚｌ）−Ｂｏｒ−Ａ
ｒｇ（Ｍｎ２）−Ａｒｇ（ＭＢＳ　）−Ａｌａ−Ｑｌｌ
の製造Ｂｏａ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ（ＭＢｊ９　）−Ａｒｇ
（ＭＥＳ　）　−Ａｌａ−○ＢｕＴ−１０，５ｇｉＣＴ
ＦＡ５０ｍｌ金加え、室温で６０分振り混ぜた後、濃縮
し、エータｆｉ／３００ＩＩ　ｋｍえて粉末としてろ取
する。これｉＤＭＦ５ｏｍｔに溶かし、Ｔ　Ｅ　Ａ　４
．　１　ａｔ　、　Ｂｏａ−４ｓｐ（Ｏｎ２＄１）−Ｏ
ＮＥ　（Ｆｏｅ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）・ＯＨ３，４０ｇ
、ＨＯｆｆＥｌ、９７ｇ、ＤＣＣ２，２７ｇより調製）
を加えて１５時間かき混ぜる。溶媒で減圧で留去したの
ち、残留物に酢酸水を加えて、粉末として、ろ取し載燥
するつこれをアセトニトリル・エーテルよ〕再沈釘る。

収量６．Ｏｇ（５１，５％）、ＬＸＪ、１２６−１３０
’ｅ、（ａ）’Ｄ’＋３．５゜（ｃ＝１．Ｏ，ＤＭＦ中
）、Ｅｆ”　　０．１？。

（ａａｇＨ６）０１７９１１１９ε・２Ｈ，Ｏとしての
元素分析計算値：　０４９．２６５１Ｋ　６．１２；　
！１１３．　ｌ’７；　＄５．４８．実験値＋　０４９
．６２−１［５，８４；　　贋１３、ｏｏ；　　Ｓ　５
．０３ （ゞ）　Ｂｏａ−Ｇｉｎ−Ａｏ”０°ＢＺＩ）−Ｐ！１
°−７°１−ＩＧＧｌｎでｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ、（０
）−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−ＯＢｚｌの製造 Ｂｏａ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ（０）−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−ＯＢ
ｚｌ　　３゜２５ｇにでＦＡ２５Ｑ１１ｔ−７Ｊｌえ、
室温で１５分間ふシ混ぜた後、濃縮し、残留物にエータ
Ａ−１００１１１金加えて３木として、ろ取し、乾燥す
る。これｔＮＭＰ１０叫に溶かし、Ｔｒｉｍム２岨１え
てよぐ振シ混ぜ念のち、エーテル１００ＬＩＩＩｔ−加
え、粉本として再びろ取する。これｔ−ＤＭＦｌｏｏｌ
ｌに溶かしさらにＢｏａ−Ｇｉｎ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）
−Ｐｈｅ−Ｔａｌ−（ｕｎ−Ｔｒｐ−ＯＥＩ　４．　Ｂ
　Ｏｇ　、　ＥｔＯＮＢ　２．グＯｇを加えて溶かし九
のち、氷冷し、ＤＣＣＩ、５５６″ｆｒ−加えて５８時
間かき混ぜるとｙ応液がゲル状になる。溶媒を減圧で留
去したのち、残留物を含水アセトニ）　リｌＩで十分に
洗浄する。収量５．１５ｇ（’Ｆ６，８％Ｌｘｚ　　２
３　４°Ｃ（分解）〔α）％７−１５．８°　（（３＝
Ｑ、４．酢酸中）。

Ｒｆ”　　Ｑ、　　６３．０７フＨ，ｚｏａＯｚｏＨ１
４Ｂとしての元素分析計算値ｒ　Ｃ５８，６１；　Ｈ６
，６４：　Ｋ　１２．４３↓　ｓｚ、ａｓ、　　実験ｆ
！：　ｃ　５９．１３；　Ｈ６゜９６ｉ　　Ｎ　　１２
，４０；　　３　１．フ０（１４）　　Ｅｏａ−Ａａｐ
（ＯＥｚｌ）−Ｓｅｒ−Ａｒｇ（ＭＢＳ）−Ａｒｇ（Ｍ
ＥＳ　）−Ａｌａ−Ｇｉｎ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−Ｆｈ
ｅ　−Ｔａｌ−Ｇｉｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ（Ｑ）
−Ａｓｎ−τｈｒ−ＯＢｚｌの製造 Ｂｏａ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−Ｐｈｅ−’７ａ
ｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ（０）−Ａｓｎ−
Ｔｈｒ−ＯＥ２＋１５．２０ｇにアニソールｌｉｔ金加
え、さらに窒累気流中、でＩＦＡ３５１１ｔ−加えて、
室温で１５分間かき混ぜ、濃縮し、残留物にエーテル１
００岨で加えて粉末としてろ取する。これｔ−Ｉｆ　Ｍ
　Ｐ　２０１１（にとかし、ＴＲｊＡ２．　　フク’Ｅ
ｌｆ加えて十分に擾）混ぜ之のち、エータに２００叫ｋ
ｍえて、粉末としてろ取する。

これをｎＭＦｌｓｏｅｓｉ（ＣＩ＃かし、Ｂｏａ−Ａｓ
ｐ（ＯＥｚｌ）−Ｓｅｒ−ムｒｇ（Ｍｎ２）−４ｊｇ（
ＭＢＳ）−ム１ａ−ＯＨ３，６６ｇ、ＨＯＮ１２．３６
ｇｔ−加え、氷、食塩で一１０’ｌ：に冷却し、ＤＣＣ
Ｉ、０２ｇｋ７Ｊｌえる。

度応液ｔ−０’Ｃで１０時間、室温で２４時間かき混ぜ
たのち、析出したＤＣｒＩｔ−ろ去し、溶［１−減圧で
留去する。残留物に水５ｏａｔｔ−加えて粉末としてろ
取したのち、含水アセトニトリルで十分に洗浄する。収
量５．３ｇ（６１，１％）、ｒｌｌ、１１．２３フ００
（分解）、〔α）”−７，ｌｏ（Ｃ＝Ｏ。

９、＃酸中）　、　Ｒｆ”　　０．６３　、　Ｃｘｚｏ
Ｈｚａ工０＋１４Ｎ２８８３・２胸０としての元素分析
計算値：Ｃ５４，８２；　Ｈ６，３２；　Ｍ　１３．３
２；　　Ｓ　３．５７．実験値８０５４．４７暮Ｈ６，
１６：　ｆｆ　１３．０７；　！３３゜（１５）　　Ｈ
−Ａｓｐ−３ｅｒ−Ａｒｇ−ムｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−
Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａミニ−Ｇ１−でｒｐ−Ｌｅｕ−Ｍ
ｅｔ（０）−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−ＱＴＩの製造 Ｂｏａ−ム５ＩＩ（ＯＢｚｌ）−Ｓｅｒ−ムｒｇ（ＭＥ
Ｓ）−人ｒｇ（ＭＥＳ　）−Ａｌａ−Ｇｌｎ−ム８１）
（ＯＢＺＩ）−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−でｒＩ＋−Ｌ
ｅｕ−ｗｅｔ；（ｏ）−ムＢｎ−Ｔｈｒ−ＯＢｚ１４０
０■にア＝ソール０．２５ｍ１＠ゴえ、これにメタンス
ルホン酸５ｗｔ６加えて、室温で６０分振シ混ぜ光後、
エーテル１００１１１ｉ加えて油状物全沈澱させる。エ
ーテルを傾斜法で除い友のち、残留物を水１０１１１に
とかし、アンバーライトエＩＩＡ−４１ｏ　（酢酸型）
のカフム（１ｘ１ｏｃｍ）ｔ−通し、溶出液（液量５ａ
ｍｉ）ｇ氷冷し、３Ｎアンモニア水１ｏａｕ’２加えて
０℃で３０分間かき混ぜ之のち、凍結乾燥する。これで
水３０ｍ１にとかし、ＣＭＣのカフム（２，２ｘ１ａｃ
ｏ＋）Ｋ付し、水（５０００１１）から０．２Ｍ酢酸ア
ンモニア水（５０ｏｍｌ）までの線型勾配法で溶出し、
１５０１１から１９５０＋１までの画分を集めて凍結乾
燥する。収量１５０１１１−次にこれｔ水２Ｇｌｎｉに
溶かし、アンバーフィトＸＡＤ−２０カラム（１，６Ｎ
５ｃｍ）に付臥水（２００叫）から８０９６エタノール
（２００頗）までの線型勾配法−ζ番出し、１８０１１
１から２２５ｍ１までの両分で集め、エタノールを留去
したのち、凍結乾燥する。収量１１５１Ｉ１ｇ、［α］
２Ｄ４−３３．６’　　（Ｑ＝−０，６，５０９６酢酸
水中）。

Ｒｆ’　　０．５４（アビセル）、アミノ酸分析（４％
チオグリコール酸　５．７Ｍ−塩酸加水分解）！　Ａｒ
ｇ　２．０３（２）　；　’Ｉ’ｒ１）　Ｏ８ａ’（１
）　；　Ａａｐ　３．０、Ｘ３）　；　　Ｔｈｒ　０．
９′７Ｃ１）　；　　３ｅｒ　０．７Ｘｌ）　；　Ｇｌ
ｎ２、ＩＪｚ）　Ｈムｌａ　ｌ、　０（ＸＩ）　：　Ｍ
ａｌ　ｌ、　０５１）　；Ｍｌｌｌｌ、　１．ｏｃ（１
）　；　　Ｌｅｕ　１．　Ｏ，Ｘｌ）　；　Ｐｈｅｌ、
ａｓ（１）ｅ（ペプチド含量８５．７４） （１６）　　Ｈ−Ａａｐ−３ｅｒ−ムｒｇ−ムｒｇ−Ａ
ｌａ−Ｇｉｎ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｍａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒ
ｙ−Ｉ、ａｕ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−０１１（郡ユ
１８ｍ（１５−２９）　）の製造に一ム５ｐ−Ｅｌｏｒ
−ムｒｇ−ムｒｇ−Ａｌａ−Ｇｉｎ−ムＢｐ−Ｆｈｅ−
Ｔａｌ−Ｇｌｎ−でｒｐ−Ｌｓｕ−Ｍｅｔ（Ｑ）−ムｇ
ｎ−Ｔｈｒ−ＯＨ２２５ｑｔ−５％チオグリコール徴求
２ｏＩＩＬＩＫ；１！かし、５０たで２０時間放置する
とゲルが析出する。水を減圧で留去したのち、残留物上
５０９１ｙｅ：陵ｓｍＫ：溶かし、セ７アデプクｊＧ−
２５のカフム（２，３Ｘ１Ｌ１３０）に仕す。５０％酢
酸水で溶出し、１００ｍｌから２４０ｒｎｉまでの画分
金集めてス結乾燥す逼。収量２２０■、〔α〕臂−３０
．Ｏ’　　（ａ−０，３，５０９６酢酸水中）。

Ｒｆ”　　０．５９（７ビーに＃）Ｐ７ミ／Ｍ析（４％
チオグリコール酸、５．７Ｍ−項七水分解）：　人ｒｇ
　　２，１９２）；　　Ｔｒｙ　　Ｇ、９１（１）；　
　五５１）３，１３、ｓ）　＝　ｒｈｘ−ａ、　ｑｉ　
＝　３ｅｒ　Ｑ、　ａｉｌ）　；　Ｇ１ｎ２ＳｚＣＸｚ
）　；ムｌａ　ｌ、　０ＥＸ１）　；　Ｔａ工Ｇ、　９
１１）　；Ｍｅｔ；　　１．ＯＣＸユ）　　；　　　ｒ
ａｅｕ　　３、Ｏ穴１）　　；　　Ｐｈｅ　］、　ａフ
（１）；　　ペプチド含ｆｉ’７９．３％参考列ユ ｇｌｕｃａｇｏｎ（１５−２９）とＢＳＡとの結合体の
製造 グｈカーｆ：ｙ（１５−２９）１０ｍ９．ＢＢＡ２０ダ
を０．２　Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，３）４ｍＪに溶か
し、５９６グルタルアルデヒド水溶液４ｔｔｔｌを加え
て、室温で３時間かき混ぜた後、４℃で透析（水２１×
４）し、凍結乾燥する。収量３８１１Ｉ９゜上記で得ら
れた凍結乾燥物〔グルカゴン（１５−２９）とＢＳＡの
縮合物〕及びＢＡＡのアミノ酸分析（各１■を６Ｎ−Ｈ
Ｃｌ　１！！ｔｌ中で１１０℃。

２４時間加水分解）の測定結果を次表に示す。

以下余白 上記のアミノ酸分析の結果は、Ｂ５Ａｌ分子に対しグル
カゴン（１５−２９）の約１０分子が縮合していること
を示す。また、本縮合物は約２７０〜３００℃の分解点
を示す。

実施例１ 抗体の製造法 参考例２と同様な方法で製造したグルカゴン（１５−２
９）と牛血溝の結合物ｓＷｔｇ（グルカゴン（１ｓ−２
９）２■を、牛血溝と結合したもの）を蒸留水Ｌｄに溶
かし、これにフロイント　コンプリート　アジュバント
（Ｆｒｅｕｎｄ　ｃｏｍｐＩｅｔｅａｄｊｕｖａｎｔ　
）　１　ａｔを加えてよく混和し、乳剤を作り、これを
ウサギの皮下数ケ所に注射する。以上の操作を３週問お
きに５回行ない、最終の注射後、１０日で採血し、Ｐｉ
ｌｏｔ　ａｓｓａｙを行なう。その結果、膵グルカゴン
と特異的に反応し、腸管グルカゴンとは反応せず、最終
希釈磯度６８０００倍で使用可能なグルカゴン抗体を得
る事が出来る。又、この抗体は、各種グルカゴンフラグ
メント（グルカゴン（１５−２３）ＮＨ２，グルカゴン
（１−１４）　　　　　　　　　　　１０Ｍｅ、ｙｈカ
ーｒ：、ｐ（２５−２９））とは全く反応しない。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. Ｈ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ
   −Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−
   Ｍｅｔ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−ＯＨで表わされるペプチドと
   牛血清アルブミンとをグルタルアルデヒドで縮合せしめ
   た縮合生成物を哺乳動物に投与することを特徴とする膵
   グルカゴンに特異的な抗体を製造する方法。