JPS61195689A - 新規物質ＫＳ−２９０２ｉ−２およびその製造法 - Google Patents
新規物質ＫＳ−２９０２ｉ−２およびその製造法Info
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- JPS61195689A JPS61195689A JP60037017A JP3701785A JPS61195689A JP S61195689 A JPS61195689 A JP S61195689A JP 60037017 A JP60037017 A JP 60037017A JP 3701785 A JP3701785 A JP 3701785A JP S61195689 A JPS61195689 A JP S61195689A
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
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- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明はノカルディオプシス属に属する微生物が産生ず
る、血小板セロトニン遊離抑制作用を有する新規物質お
よびその製造法に関する。
る、血小板セロトニン遊離抑制作用を有する新規物質お
よびその製造法に関する。
従来の技術及び発明が解決しようとする問題点血小板セ
ロトニン遊離抑制作用を有する物質としてはアスピリン
、プロスタグランジンＥ１などが知られているが、微生
物の培養物から血小板セロトニン遊離抑制作用を有する
物質が見出された例はない。
ロトニン遊離抑制作用を有する物質としてはアスピリン
、プロスタグランジンＥ１などが知られているが、微生
物の培養物から血小板セロトニン遊離抑制作用を有する
物質が見出された例はない。
有用な新規生理活性物質を提供するという目的のもとに
、天然界より人手した数多くの微生物の生産物について
研究を行った結果、新たに分離した微生物の培養物中に
血小板セロトニン放出抑制作用を有する生理活性物質が
生産される事実を見い出した。ついで、該培養物から該
物質を単離。
、天然界より人手した数多くの微生物の生産物について
研究を行った結果、新たに分離した微生物の培養物中に
血小板セロトニン放出抑制作用を有する生理活性物質が
生産される事実を見い出した。ついで、該培養物から該
物質を単離。
精製し、その理化学的性質を調べたところ新規物質であ
ることが判明した。以下、該物質をＫＳ−２９０１１ｉ
−２と称する。
ることが判明した。以下、該物質をＫＳ−２９０１１ｉ
−２と称する。
問題点を解決するための手段
ＫＳ−２９０Ｉ［ｉ−２の理化学的性質は以下に示す通
りである。
りである。
性 状：白色粉末
融 点：２４０〜２４５℃（分解）
比旋光度： 〔α：］”＝＋３４．９°（Ｃ＝０．３７
． ＣＨ，０１ｌ）溶解性： 易溶；メタノール、エタノール、ジメチルスルホキシド 難溶；クロロホルム 不溶；水 呈色反応：ヨウ素、塩化第二鉄反応に陽性。
． ＣＨ，０１ｌ）溶解性： 易溶；メタノール、エタノール、ジメチルスルホキシド 難溶；クロロホルム 不溶；水 呈色反応：ヨウ素、塩化第二鉄反応に陽性。
紫外部吸収スペクトル（５，５Ｊ１ｇ／ｍｌメタノール
溶液）；第１図 赤外部吸収スペクトル（ＫＢｒ） ３３４０、 ３０５０． ２９００． １６５０． １
６０５． １５８９． １４９３゜１４５４、１４０２
．１３４５．１３３０．１２８１．１２４６．１１４７
゜１１２９、 １１１２． １０９０． １０４５．
１００９． ９５２． ９３４゜９２２、９０６．８７
５．８３８．７９０．７７３．７４４．６９４゜６７０
、 ６４８． ６２０． ５７９． ５２７． ４９０
． ４３０ ｃｍ−−１高分解能マススペクトル： 実測値；４５７．１６５０ 計算値；ＣｚｓＬＪＪ５として４５７．１６３６１ Ｈ
−Ｎ Ｍ Ｒ（４００ＭＨｚ、 ＤＭＳＯ−ｄａ、
δ）１１．６８（１Ｈ、ｂｒ、ｓ）、 ９．４７（１Ｈ
、ｄ、Ｊ＝７．７Ｈｚ）、 ８．５４（１１（、ｂｒ、
ｓ）、 ８．０７（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．８Ｈｚ）、 ７
．６９（１Ｈ、ｄ。
溶液）；第１図 赤外部吸収スペクトル（ＫＢｒ） ３３４０、 ３０５０． ２９００． １６５０． １
６０５． １５８９． １４９３゜１４５４、１４０２
．１３４５．１３３０．１２８１．１２４６．１１４７
゜１１２９、 １１１２． １０９０． １０４５．
１００９． ９５２． ９３４゜９２２、９０６．８７
５．８３８．７９０．７７３．７４４．６９４゜６７０
、 ６４８． ６２０． ５７９． ５２７． ４９０
． ４３０ ｃｍ−−１高分解能マススペクトル： 実測値；４５７．１６５０ 計算値；ＣｚｓＬＪＪ５として４５７．１６３６１ Ｈ
−Ｎ Ｍ Ｒ（４００ＭＨｚ、 ＤＭＳＯ−ｄａ、
δ）１１．６８（１Ｈ、ｂｒ、ｓ）、 ９．４７（１Ｈ
、ｄ、Ｊ＝７．７Ｈｚ）、 ８．５４（１１（、ｂｒ、
ｓ）、 ８．０７（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．８Ｈｚ）、 ７
．６９（１Ｈ、ｄ。
Ｊ＝８．３Ｈｚ）、 ７．６０（１Ｈ、＋ｊ、Ｊ＝８
．１ｔｌｚ）、 ｃａ、？、５（２）１゜ｍ）、
７．３Ｈ１Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．５ｆｌＺ）、 ７．２７
（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．５Ｈｚ）。
．１ｔｌｚ）、 ｃａ、？、５（２）１゜ｍ）、
７．３Ｈ１Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．５ｆｌＺ）、 ７．２７
（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．５Ｈｚ）。
６、６９（ｉｌｌ、 ｂｒ、 ｓ）、 ６．４０（Ｉ
ｔｌ、 ｄ、 Ｊ＝９．５ｆｌｚ）、 ５．４０（１
Ｈ、ｄ、 Ｊ＝３．６Ｈｚ）、 ５．０Ｈ３Ｈ，ｂｒ
、 ｓ）、 ｃａ、 ４．５（ＩＨ。
ｔｌ、 ｄ、 Ｊ＝９．５ｆｌｚ）、 ５．４０（１
Ｈ、ｄ、 Ｊ＝３．６Ｈｚ）、 ５．０Ｈ３Ｈ，ｂｒ
、 ｓ）、 ｃａ、 ４．５（ＩＨ。
ｍ） 、 ４．４８ （１Ｈ、ｂｒ、 ｑ、 Ｊ ＝岨
Ｚ） 、 ４．１８ （１Ｈ、ｂｒ、 ｓ） 。
Ｚ） 、 ４．１８ （１Ｈ、ｂｒ、 ｓ） 。
４．０５（１Ｈ、ｂｒ、ｓ）、 １．７０（３Ｈ，ｄ
、Ｊ＝７．２ｆｌｚ）１３Ｃ−Ｎ Ｍ Ｒ（１００ＭＨ
ｚ、 ＤＭＳＯ−ｄ、 δＣ）１７２．２． １４０
．１． １３８．９． １３３．８． １２７．５．
１２５．５゜１２５．１． １２５．０． １２４．４
． １２２．２． Ｉ２１．８． １２１．１゜１１
９．７． １１９．２． １１８．５． １１７．４．
１１４．８． １１１．１゜１０９．７． ７７．１
． ７６．４． ７１．６． ７１．４． ６６．８．
４５．１゜１５．３ 以上のデータよりＫＳ−２９０Ｉｆ ｉ−２は、新規化
合物であることが判明した。
、Ｊ＝７．２ｆｌｚ）１３Ｃ−Ｎ Ｍ Ｒ（１００ＭＨ
ｚ、 ＤＭＳＯ−ｄ、 δＣ）１７２．２． １４０
．１． １３８．９． １３３．８． １２７．５．
１２５．５゜１２５．１． １２５．０． １２４．４
． １２２．２． Ｉ２１．８． １２１．１゜１１
９．７． １１９．２． １１８．５． １１７．４．
１１４．８． １１１．１゜１０９．７． ７７．１
． ７６．４． ７１．６． ７１．４． ６６．８．
４５．１゜１５．３ 以上のデータよりＫＳ−２９０Ｉｆ ｉ−２は、新規化
合物であることが判明した。
次に各種展開溶媒によるＫＳ−２９０ＩＩ ｉ−２の薄
層クロマトグラフィーのＲｆ値を第１表に示す。検出は
３６５０人の紫外線照射により行った。
層クロマトグラフィーのＲｆ値を第１表に示す。検出は
３６５０人の紫外線照射により行った。
第１表 ＫＳ−２９０旧−２のシリカゲル薄層クロマト
グラフィー 展開溶媒 Ｒｆ値 １、メタノール：水−８： ２（ｖ／ｖ） ０．４
９２、 メタノール：水：クロロホルム ＝６３：２７＋１０（ｖ／ｖ） ０．４２薄層：逆相
シリカゲルプレー） ＲＰ−１８（メルク社、Ａｒｔ
１５６８５） 展開：室温、上昇法、１時間 ＫＳ−２９０旧−２は、血小板セロトニン放出抑制作用
を有する。
グラフィー 展開溶媒 Ｒｆ値 １、メタノール：水−８： ２（ｖ／ｖ） ０．４
９２、 メタノール：水：クロロホルム ＝６３：２７＋１０（ｖ／ｖ） ０．４２薄層：逆相
シリカゲルプレー） ＲＰ−１８（メルク社、Ａｒｔ
１５６８５） 展開：室温、上昇法、１時間 ＫＳ−２９０旧−２は、血小板セロトニン放出抑制作用
を有する。
次に、ＫＳ−２９０旧−２の製造法について説明する。
ＫＳ−２９０ＩＩ ｉ−２は、ノカルディオプシス属に
属し、ＫＳ−２９０ＩＩ ｉ−２生産能を有する微生物
を培地に培養し、培養物中にＫＳ−２９０１１ｉ−２を
生成蓄積させ、該培養物からＫＳ−２９０旧−２を採取
することにより製造される。
属し、ＫＳ−２９０ＩＩ ｉ−２生産能を有する微生物
を培地に培養し、培養物中にＫＳ−２９０１１ｉ−２を
生成蓄積させ、該培養物からＫＳ−２９０旧−２を採取
することにより製造される。
ＫＳ−２９０ＩＩ ｉ−２生産性微生物としては、ノカ
ルディオプシス属に属し、ＫＳ−２９０ＩＩ ｉ−２生
産能を有するものであれば、いずれの微生物でもよい。
ルディオプシス属に属し、ＫＳ−２９０ＩＩ ｉ−２生
産能を有するものであれば、いずれの微生物でもよい。
具体的に好適な一例として、本発明者らが東京都多摩市
の草地の土壌より分離したノカルディオプシス・エスピ
ー（Ｎｏｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ ｓｐ、）Ｋ−２９０株
があげられる。該菌株は、工業技術院微生物工業技術研
究所に微工研条寄第６９６号（寄託日： １９Ｂ５年１
月１９日）として寄託されている。
の草地の土壌より分離したノカルディオプシス・エスピ
ー（Ｎｏｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ ｓｐ、）Ｋ−２９０株
があげられる。該菌株は、工業技術院微生物工業技術研
究所に微工研条寄第６９６号（寄託日： １９Ｂ５年１
月１９日）として寄託されている。
Ｋ−２９０菌株の形態的特徴および生理的性質を観察、
試験した結果は次の通りである。
試験した結果は次の通りである。
該菌は、一般に放線菌の生育に用いられる種々の天然培
地および合成培地において普通もしくは良好な生育を示
す。気中菌糸の着生は、合成培地において比較的良好で
あり、色調は白もしくはベージュである。基生菌糸の色
調は、黄灰色からベージュであるが、チロシン寒天培地
やイースト・麦芽寒天培地およびペプトン・イースト鉄
寒天培地においては赤褐色となる。可溶性色素の生成は
見られない。また、メラニン様色素の生成もない。
地および合成培地において普通もしくは良好な生育を示
す。気中菌糸の着生は、合成培地において比較的良好で
あり、色調は白もしくはベージュである。基生菌糸の色
調は、黄灰色からベージュであるが、チロシン寒天培地
やイースト・麦芽寒天培地およびペプトン・イースト鉄
寒天培地においては赤褐色となる。可溶性色素の生成は
見られない。また、メラニン様色素の生成もない。
胞子は、気中菌糸より単純分枝した先端に、２０個以上
の連鎖を形成し、屈曲状である。胞子の形態は球型から
円筒型で、大きさは、０．６〜０、８ Ｘ Ｏ１７〜１
．０μｍであり、電子顕微鏡観察による胞子表面は平滑
（ｓｍｏｏｔｈ） もしくは、いぼ状（ｗａｒｔｙ）
である。鞭毛は認められず、また胞子嚢も見出されない
。
の連鎖を形成し、屈曲状である。胞子の形態は球型から
円筒型で、大きさは、０．６〜０、８ Ｘ Ｏ１７〜１
．０μｍであり、電子顕微鏡観察による胞子表面は平滑
（ｓｍｏｏｔｈ） もしくは、いぼ状（ｗａｒｔｙ）
である。鞭毛は認められず、また胞子嚢も見出されない
。
各種培地上での生育状態
各種培地上において、２８℃、２０日間培養した時の生
育および色の特徴を下記に示す。色の表示はＣｏ１ａｒ
Ｈａｒｍｏｎｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｎｔａｉｎｅｒ
Ｃｏｒｐｏｒａ−ｔｉｏｎ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ）
による色の分類に従ったものである。
育および色の特徴を下記に示す。色の表示はＣｏ１ａｒ
Ｈａｒｍｏｎｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｎｔａｉｎｅｒ
Ｃｏｒｐｏｒａ−ｔｉｏｎ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ）
による色の分類に従ったものである。
なお、培地中への色素生成は、いずれの培地でもなかっ
た。
た。
（１） シュクロース・硝酸塩寒天培地化 育：普通
気中菌糸：中程度、ナチュラル（２ｄＣ）基生菌糸の色
二パール（３ｂａ） （２）グルコース・アスパラギン寒天培地化 育：良好
、隆起状 気中菌糸：中程度〜良好、パール（３ｂａ）〜ベージａ
（３ｇｃ） 基生菌糸の色ニライト・アイポリ−（２Ｃａ）（３）グ
リセロール・アスパラギン寒天培地化 育：普通 気中菌糸：良好、ベール・ブルー（１４Ｃａ）基生菌糸
の色：バーチメン）（ＩＣｂ）〜ダーク・コバルトダレ
−（２ｉｈ） （４）スターチ寒天培地 生 育：普通 気中菌糸：中程度〜良好、パール（３ｂａ）基生菌糸の
色：ビスケラ）（２８Ｃ） （５）チロシン寒天培地 生 育：良好 気中菌糸：良好、ビスツ（３８Ｃ） 基生菌糸の色：ヌード・タン（４ｇｃ＞（６）栄養寒天
培地 生 育：普通 気中菌糸：貧弱、ビスツ（３６Ｃ） 基生菌糸の色：ヌード・タン（４ｇｃ）（７） イー
スト・麦芽寒天培地 化 育：良好、ひだ状 気中菌糸：中程度、パール（２ｂａ） 基生菌糸の色：アンバー（３βＣ）〜クローブ・ブラウ
ン＜３ｐρ） （８）オートミール寒天培地 生 育：貧弱、粒状 気中菌糸：なし 基生菌糸の色ニライト・アイポリ−（２ｅａ）（９）ペ
プトン・イースト鉄寒天培地 生 育：良好、ひだ状 気中菌糸：なし 基生菌糸の色：カメル（３ｉｅ） 各種生理的性質 に−２９０株の生理的諸性質を以下に示す。生育温度範
囲については、２日後の結果、脱脂牛乳、七′ラテンお
よび繊維素への作用については、２８℃、１ケ月後、そ
の他は２８℃で３週間後の観察結果を示した。
二パール（３ｂａ） （２）グルコース・アスパラギン寒天培地化 育：良好
、隆起状 気中菌糸：中程度〜良好、パール（３ｂａ）〜ベージａ
（３ｇｃ） 基生菌糸の色ニライト・アイポリ−（２Ｃａ）（３）グ
リセロール・アスパラギン寒天培地化 育：普通 気中菌糸：良好、ベール・ブルー（１４Ｃａ）基生菌糸
の色：バーチメン）（ＩＣｂ）〜ダーク・コバルトダレ
−（２ｉｈ） （４）スターチ寒天培地 生 育：普通 気中菌糸：中程度〜良好、パール（３ｂａ）基生菌糸の
色：ビスケラ）（２８Ｃ） （５）チロシン寒天培地 生 育：良好 気中菌糸：良好、ビスツ（３８Ｃ） 基生菌糸の色：ヌード・タン（４ｇｃ＞（６）栄養寒天
培地 生 育：普通 気中菌糸：貧弱、ビスツ（３６Ｃ） 基生菌糸の色：ヌード・タン（４ｇｃ）（７） イー
スト・麦芽寒天培地 化 育：良好、ひだ状 気中菌糸：中程度、パール（２ｂａ） 基生菌糸の色：アンバー（３βＣ）〜クローブ・ブラウ
ン＜３ｐρ） （８）オートミール寒天培地 生 育：貧弱、粒状 気中菌糸：なし 基生菌糸の色ニライト・アイポリ−（２ｅａ）（９）ペ
プトン・イースト鉄寒天培地 生 育：良好、ひだ状 気中菌糸：なし 基生菌糸の色：カメル（３ｉｅ） 各種生理的性質 に−２９０株の生理的諸性質を以下に示す。生育温度範
囲については、２日後の結果、脱脂牛乳、七′ラテンお
よび繊維素への作用については、２８℃、１ケ月後、そ
の他は２８℃で３週間後の観察結果を示した。
（１）炭素源の資化性
Ｄ−グルコース、１−イノシトール、Ｄ−フラクトース
、Ｌ−ラムノースを資化するが、Ｌ−アラビノース、Ｄ
−キシロース、Ｄ−マンニトール、シュクロースおよび
ラフィノースは資化しない。
、Ｌ−ラムノースを資化するが、Ｌ−アラビノース、Ｄ
−キシロース、Ｄ−マンニトール、シュクロースおよび
ラフィノースは資化しない。
（２）ゼラチンの液化：液化しない。
（３）脱脂牛乳の凝固、ペプトン化
ペプトン化したが凝固はわずかである。
（４）繊維素の分解作用；なし
く５〕 スターチの加水分解作用；ある（６）生育温
度範囲；１０〜４２℃ （７）メラニン様色素の生成；なし に−２９０株は、中温菌であり、寒天培地に気中菌糸を
形成する。胞子は気中菌糸から単純分枝した胞子柄より
２０個以上の屈曲状の連鎖として着成し、運動性は見ら
れない。基生菌糸においては、分枝は頻繁に見られるが
、明瞭な分断は観察されなかった。
度範囲；１０〜４２℃ （７）メラニン様色素の生成；なし に−２９０株は、中温菌であり、寒天培地に気中菌糸を
形成する。胞子は気中菌糸から単純分枝した胞子柄より
２０個以上の屈曲状の連鎖として着成し、運動性は見ら
れない。基生菌糸においては、分枝は頻繁に見られるが
、明瞭な分断は観察されなかった。
全菌体の加水分解による分析では、メン型のジアミノピ
メリン酸が検出され、また糖質については、マジコロー
スなどの特徴的な糖は検出されなかった。よって該菌株
をノカルディオプシス・エスピー（Ｎｏｃａｒｄｉｏｐ
ｓｉｓ ｓｐ、） Ｋ−２９０と命名した。
メリン酸が検出され、また糖質については、マジコロー
スなどの特徴的な糖は検出されなかった。よって該菌株
をノカルディオプシス・エスピー（Ｎｏｃａｒｄｉｏｐ
ｓｉｓ ｓｐ、） Ｋ−２９０と命名した。
微生物の培養に際しては放線菌の培養に用いられる通常
の培養方法が適用される。用いられる培地は菌の資化し
ろる炭素源、窒素源、無機物等を程よく含有する培地で
あれば天然培地、合成培地いずれでも用いうる。
の培養方法が適用される。用いられる培地は菌の資化し
ろる炭素源、窒素源、無機物等を程よく含有する培地で
あれば天然培地、合成培地いずれでも用いうる。
炭素源としてはグルコース、フラクトース、スタヒロー
ス、澱Ｌデキストリン、マンノース、マルトース、糖蜜
等の炭水化物、クエン酸、リンゴ酸、酢酸、フマール酸
などの有機酸、グルタミン酸等のアミノ酸あるいはグル
セロール等が用いられる。
ス、澱Ｌデキストリン、マンノース、マルトース、糖蜜
等の炭水化物、クエン酸、リンゴ酸、酢酸、フマール酸
などの有機酸、グルタミン酸等のアミノ酸あるいはグル
セロール等が用いられる。
窒素源としては塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、
硝酸アンモニウム、リン酸アンモニウム等のアンモニウ
ム塩、アスパラギン酸、グルタミン、シスチン、アラニ
ン等のアミノ酸、尿素、ペプトン、肉エキス、酵母エキ
ス、乾燥酵母、コーン・スチープ・リカー、大豆粉、綿
実粕、大豆カゼイン、カザミノ酸、ファーマメディア等
が用いられる。
硝酸アンモニウム、リン酸アンモニウム等のアンモニウ
ム塩、アスパラギン酸、グルタミン、シスチン、アラニ
ン等のアミノ酸、尿素、ペプトン、肉エキス、酵母エキ
ス、乾燥酵母、コーン・スチープ・リカー、大豆粉、綿
実粕、大豆カゼイン、カザミノ酸、ファーマメディア等
が用いられる。
無機物としてはリン酸二水素カリウム、リン酸水素二ナ
トリウム、硫酸マグネシウム、硫酸第一鉄、硫酸マンガ
ン、硫酸コバルト、硫酸亜鉛、パントテン酸カルシウム
、モリブデン酸アンモニウム、硫酸アルミニウムカリウ
ム、炭酸バリウム、炭酸カルシウム、塩化コバルト、食
塩等が用いられる。
トリウム、硫酸マグネシウム、硫酸第一鉄、硫酸マンガ
ン、硫酸コバルト、硫酸亜鉛、パントテン酸カルシウム
、モリブデン酸アンモニウム、硫酸アルミニウムカリウ
ム、炭酸バリウム、炭酸カルシウム、塩化コバルト、食
塩等が用いられる。
その他必要に応じて培地にビタミン、サイアミン等閑体
の増殖あるいはＫＳ−２９０旧−２の生産を促進する物
質を加えることができる。
の増殖あるいはＫＳ−２９０旧−２の生産を促進する物
質を加えることができる。
用いられる微生物が特定の物質を要求する場合は勿論生
育に必要な物を加えることが必要である。
育に必要な物を加えることが必要である。
培養は振盪培養法、通気攪拌培養法等により、２０〜４
０℃の温度で中性付近のｐＨで行われる。
０℃の温度で中性付近のｐＨで行われる。
３〜１５日の培養によってＫＳ−２９０ＩＩ ｉ−２の
蓄積が最大に達し、培養は完了する。
蓄積が最大に達し、培養は完了する。
培養物中に、蓄積したＫＳ−２９０ＩＩ ｉ−２を培養
液から単離採取するに際しては、通常の生理活性物質の
培養液から採取する方法が適用される。
液から単離採取するに際しては、通常の生理活性物質の
培養液から採取する方法が適用される。
即ち、濾過、遠心分離等による菌体除去、吸着樹脂、シ
リカゲル、シラナイズドシリカゲノペアルミニウム、セ
ルロース、珪藻土、珪酸マグネシウム、ゲル濾過剤等を
用いるカラムクロマトグラフィーもしくは薄層クロマト
グラフィーによる活性物質の吸脱着処理等によってＫＳ
２９０ ＩＩ ｉ−２は単離される。
リカゲル、シラナイズドシリカゲノペアルミニウム、セ
ルロース、珪藻土、珪酸マグネシウム、ゲル濾過剤等を
用いるカラムクロマトグラフィーもしくは薄層クロマト
グラフィーによる活性物質の吸脱着処理等によってＫＳ
２９０ ＩＩ ｉ−２は単離される。
培養液からＫＳ−２９０ＩＩ ｉ−２を単離する１例は
次の通りである。
次の通りである。
培養液を濾過もしくは遠心分離することによって菌体を
除去する。得られた炉液もしくは上澄液を吸着樹脂、ダ
イヤイオンＨＰ−１０（三菱化成工業側製）で処理して
活性物質を樹脂に吸着する。
除去する。得られた炉液もしくは上澄液を吸着樹脂、ダ
イヤイオンＨＰ−１０（三菱化成工業側製）で処理して
活性物質を樹脂に吸着する。
ついで、メタノール等の適当な溶剤にて溶出し、溶出液
を減圧濃縮することにより溶剤をとばし水溶液とする。
を減圧濃縮することにより溶剤をとばし水溶液とする。
ついで、この水溶液に水と混和しない溶媒たとえば酢酸
エチル、酢酸ブチル等を添加して抽出する。
エチル、酢酸ブチル等を添加して抽出する。
抽出液を減圧濃縮し、ダイヤイオンＨＩ”２０ＳＳ（三
菱化成工業側製）カラムクロマトグラフィーを行う。展
開溶媒としては、９０％（Ｖ／Ｖ）メタノ −−ル
を用いる。ついで、得られる溶出液を減圧下濃縮シ、セ
ファデックスＬＨ＝２０（ファルマシア社製）のクロマ
トグラフィー（展開溶媒：クロロホルム：メタノール−
１： ＩＶ／Ｖ）を行う。
菱化成工業側製）カラムクロマトグラフィーを行う。展
開溶媒としては、９０％（Ｖ／Ｖ）メタノ −−ル
を用いる。ついで、得られる溶出液を減圧下濃縮シ、セ
ファデックスＬＨ＝２０（ファルマシア社製）のクロマ
トグラフィー（展開溶媒：クロロホルム：メタノール−
１： ＩＶ／Ｖ）を行う。
ついで、得られる溶出液を減圧下濃縮し、ＫＳ−２９０
ＩＩｉ−２の白色粉末を得る。
ＩＩｉ−２の白色粉末を得る。
上記精製工程中のＫＳ−２９０ＩＩ ｉ−２の検出はシ
リカゲル薄層クロマトグラフィー、ついでヨウ素反応又
は３６５０人の紫外線照射法により行った。
リカゲル薄層クロマトグラフィー、ついでヨウ素反応又
は３６５０人の紫外線照射法により行った。
以下に実施例を示す。
実施例
種菌としてノカルディオプシス・エスピーに−２９０（
微工研条寄第６９６号）を用いる。該菌を第一種培地と
してグルコースＬＯｇ／ｄＥ、可溶性デンプン１．０ｇ
／ａ、肉エキス０．３ｇ／ａ、、酵母エキス０．５ｇ／
ｄｅ、バクトドリプトン（ディフコ社製）０．５ｇ／ｄ
ｅ、炭酸カルシウム０．２ ｇ／ｄＬ ｐＨ７゜２〜７
．４の組成を有する３００ｍ１三角フラスコ中の４０ｍ
１の種培地に植菌する。ついで３０℃で菌が十分生育す
るまで振盪培養する。この種培養液４Ｑｍｌを２１三角
フラスコ中の同一組成の種Ｊ３地４０ Ｑｍｌに植菌す
る。ついで２８℃で３日間振動培養する。この種培養液
１．２１を３０ρジャーファーメンタ−中の下記発酵培
地１１１［に植菌する。
微工研条寄第６９６号）を用いる。該菌を第一種培地と
してグルコースＬＯｇ／ｄＥ、可溶性デンプン１．０ｇ
／ａ、肉エキス０．３ｇ／ａ、、酵母エキス０．５ｇ／
ｄｅ、バクトドリプトン（ディフコ社製）０．５ｇ／ｄ
ｅ、炭酸カルシウム０．２ ｇ／ｄＬ ｐＨ７゜２〜７
．４の組成を有する３００ｍ１三角フラスコ中の４０ｍ
１の種培地に植菌する。ついで３０℃で菌が十分生育す
るまで振盪培養する。この種培養液４Ｑｍｌを２１三角
フラスコ中の同一組成の種Ｊ３地４０ Ｑｍｌに植菌す
る。ついで２８℃で３日間振動培養する。この種培養液
１．２１を３０ρジャーファーメンタ−中の下記発酵培
地１１１［に植菌する。
発酵培地ニゲルコース０．５ｇ／ｄｌｌ、可溶性デンプ
ン３．０ｇ／ａ、大豆粉３．０ ｇ ／ｄＬコーンステ
イープリカー０．５ｇ／Ｊ、酵母エキス０．５ｇ／ｄｅ
。
ン３．０ｇ／ａ、大豆粉３．０ ｇ ／ｄＬコーンステ
イープリカー０．５ｇ／Ｊ、酵母エキス０．５ｇ／ｄｅ
。
炭酸カルシウムＯ，：３ ｇ ／ ａ、、ｐＨ７，２〜
７．４゜培養は３０℃で９日間通気攪拌下に行う。培養
終了後、培養液を連続遠心分離（１５，００Ｏｒｐｍ＞
する。
７．４゜培養は３０℃で９日間通気攪拌下に行う。培養
終了後、培養液を連続遠心分離（１５，００Ｏｒｐｍ＞
する。
上清液１ＭをダイヤイオンＨＰ−１０（三菱化成工業■
製）を充填した１ｆｌのカラムに通塔し、２１の水、２
１の２０％（Ｖ／Ｖ）メタノールで洗浄後、２１のメタ
ノールで溶出する。溶出液を全て集めて濃縮して２０
Ｑｍｌとし、酢酸エチル６００ｍ１で抽出する。酢酸エ
チル層を無水硫酸ナトリウムで脱水後、セライト−５４
５（半井化学社製）５０ｇを加え、濃縮乾固する。これ
を水を用いて充填した１ ８２ｍｌのダイヤイオ７８Ｐ
−２０ＳＳ（三菱化成工業■製）カラムの上端に供給す
る。
製）を充填した１ｆｌのカラムに通塔し、２１の水、２
１の２０％（Ｖ／Ｖ）メタノールで洗浄後、２１のメタ
ノールで溶出する。溶出液を全て集めて濃縮して２０
Ｑｍｌとし、酢酸エチル６００ｍ１で抽出する。酢酸エ
チル層を無水硫酸ナトリウムで脱水後、セライト−５４
５（半井化学社製）５０ｇを加え、濃縮乾固する。これ
を水を用いて充填した１ ８２ｍｌのダイヤイオ７８Ｐ
−２０ＳＳ（三菱化成工業■製）カラムの上端に供給す
る。
４０ Ｑｍｌの７０％（Ｖ／Ｖ）メタノール、さらに５
００ｍ１の８０％（Ｖ／Ｖ）メタノールで洗浄後、９０
％（Ｖ／Ｖ）メタノールで溶出する。溶出画分１５ｇず
つ分取するとフラクション番号６〜２１にＫＳ−２９０
旧−２が溶出される。この両分を集めて減圧下で濃縮す
るを約２６０ｍｇの油状物質が得られる。これを５ｍｌ
のクロロホルム：メタノール−１： １ （Ｖ／Ｖ）
に溶解し、同一組成の溶媒を用いて充填した５５ｍ１の
セファデックスＬＨ−２０（ファルマシア社製）カラム
の上端に供給し、展開培養として充填培養と同一組成の
溶媒を用いて溶出する。溶出画分を５ｇずつ分取すると
フラクション番号４２〜４７にＫＳ−２９０Ｕ ｉ−２
が溶出する。この両分を集め濃縮乾固すると約２８．６
ｍｇの白色粉末が得られる。
００ｍ１の８０％（Ｖ／Ｖ）メタノールで洗浄後、９０
％（Ｖ／Ｖ）メタノールで溶出する。溶出画分１５ｇず
つ分取するとフラクション番号６〜２１にＫＳ−２９０
旧−２が溶出される。この両分を集めて減圧下で濃縮す
るを約２６０ｍｇの油状物質が得られる。これを５ｍｌ
のクロロホルム：メタノール−１： １ （Ｖ／Ｖ）
に溶解し、同一組成の溶媒を用いて充填した５５ｍ１の
セファデックスＬＨ−２０（ファルマシア社製）カラム
の上端に供給し、展開培養として充填培養と同一組成の
溶媒を用いて溶出する。溶出画分を５ｇずつ分取すると
フラクション番号４２〜４７にＫＳ−２９０Ｕ ｉ−２
が溶出する。この両分を集め濃縮乾固すると約２８．６
ｍｇの白色粉末が得られる。
なお、上記精製工程中のＫＳ−２９０旧−２の検出は、
シリカゲル薄層クロマトグラフィー、次いでヨウ素反応
または、３６５０人の紫外線照射法により行った。
シリカゲル薄層クロマトグラフィー、次いでヨウ素反応
または、３６５０人の紫外線照射法により行った。
次に、ＫＳ−２９０旧−２の血小板セロトニン放出抑制
作用を実験例により説明する。
作用を実験例により説明する。
実験例
血小板からのセロトニン放出に及ぼす影響１）方法
白色家兎血液９．２５ｖｏｌを頚動脈より、７７ｍＭ８
ＤＴＡ ０．７５ｖｏｌ中に採取し、２００Ｘｇ、１５
分遠心して、多血小板血漿（ＰＲＰ）を得た。
ＤＴＡ ０．７５ｖｏｌ中に採取し、２００Ｘｇ、１５
分遠心して、多血小板血漿（ＰＲＰ）を得た。
このＰＲＰを（＋４Ｃ）−セロトニン（２μＣｉ／１０
０ｍ１ ＰＲＰ） と３７℃、ｌｈｒインキニベート
して、（１４Ｃ’］−セロトニンを取り込ませた。その
後、６５０Ｘｇで１５分遠心して血小板沈査を得た。こ
の血小板沈査をトリス緩衝生理食塩水（ｐＨ７，４゜１
ｍＭ ＢＤＴＡを含む）で洗浄後、最後に、Ｃａ ＋
＋−ｆｒｅｅ Ｔｙｒｏｄｅ液に１Ｑ９ｃｅｌｌｓ／
ｍｌになるように浮遊させた。
０ｍ１ ＰＲＰ） と３７℃、ｌｈｒインキニベート
して、（１４Ｃ’］−セロトニンを取り込ませた。その
後、６５０Ｘｇで１５分遠心して血小板沈査を得た。こ
の血小板沈査をトリス緩衝生理食塩水（ｐＨ７，４゜１
ｍＭ ＢＤＴＡを含む）で洗浄後、最後に、Ｃａ ＋
＋−ｆｒｅｅ Ｔｙｒｏｄｅ液に１Ｑ９ｃｅｌｌｓ／
ｍｌになるように浮遊させた。
このようにして調製した〔１４Ｃ〕−セロトニン放射化
血小板浮遊液０．４７５ｍ１に被検薬物溶液５誠を入れ
て３７℃で３分インキュベート後、刺激薬トロンビン（
＃濃度０．２５Ｖ／ ｍｌ）又は、Ａ２３１８７ （終
濃度２ μＭ） ＋ ＣａＣ１２（０，５ｍＭ）を加え
、更に３分インキュベートした。ただちに、反応液９．
３ｍｌを取り、氷冷した０、１Ｍホルムアルデヒド５ｍ
Ｍ ＢＤＴＡ液３０１１１中に入れ、反応を停止した。
血小板浮遊液０．４７５ｍ１に被検薬物溶液５誠を入れ
て３７℃で３分インキュベート後、刺激薬トロンビン（
＃濃度０．２５Ｖ／ ｍｌ）又は、Ａ２３１８７ （終
濃度２ μＭ） ＋ ＣａＣ１２（０，５ｍＭ）を加え
、更に３分インキュベートした。ただちに、反応液９．
３ｍｌを取り、氷冷した０、１Ｍホルムアルデヒド５ｍ
Ｍ ＢＤＴＡ液３０１１１中に入れ、反応を停止した。
３． ＯＯＯｒｐｍで１０分０℃で遠心後上清２５０Ｉ
ＩＩｌを取って液体シンチレーションカウンターで放射
活性を測定した。
ＩＩｌを取って液体シンチレーションカウンターで放射
活性を測定した。
２）実験成績 第 、 表
第２表に示すようにＫＳ−２９０１１ｉ−２は濃度依存
的ニセロトニン放出を抑制シタ。
的ニセロトニン放出を抑制シタ。
発明の効果
ＫＳ−２９０ＩＩ ｉ−２は、セロトニン放出抑制作用
を有する。
を有する。
第１図は、ＫＳ−２９０旧−２の紫外部吸収スペクトル
である。 手続補正書 昭和６０年μ月Ｓ日
である。 手続補正書 昭和６０年μ月Ｓ日
Claims (3)
- （１）下記理化学的性質を有する新規物質ＫＳ−２９０
IIｉ−２ 性状：白色粉末 融点：２４０〜２４５℃（分解） 比旋光度：〔α〕＾２＾０＿Ｄ＝＋３４．９°（ｃ＝０
．３７、ＣＨ＿３ＯＨ）溶解性： 易溶；メタノール、エタノール、ジメチルスルホキシド 難溶；クロロホルム 不溶；水 呈色反応：ヨウ素、塩化第二鉄反応に陽性。 紫外部吸収スペクトル（メタノール溶液）：第１図 赤外部吸収スペクトル（ＫＢｒ） ３３４０、３０５０、２９００、１６５０、１６０５、
１５８９、１４９３、１４５４、１４０２、１３４５、
１３３０、１２８１、１２４６、１１４７、１１２９、
１１１２．１０９０、１０４５、１００９、９５２、９
３４、９２２、９０６、８７５、８３８、７９０、７７
３、７４４、６９４、６７０、６４８、６２０、５７９
、５２７、４９０、４３０ｃｍ＾−＾１高分解能マスス
ペクトル： 実測値；４５７．１６５０ 計算値；Ｃ＿２＿６Ｈ＿２＿３Ｎ＿３Ｏ＿５として４５
７．１６３６＾１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ
−ｄ＿６、δ）１１．６８（１Ｈ、ｂｒ．ｓ）、９．４
７（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．７Ｈｚ）、８．５４（１Ｈ、ｂ
ｒ．ｓ）、８．０７（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．８Ｈｚ）、７
．６９（１Ｈｄ、Ｊ＝８．３Ｈｚ）、７．６０（１Ｈ、
ｄ、Ｊ＝８．１Ｈｚ）、ｃａ．７．５（２Ｈ、ｍ）、７
．３１（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．５Ｈｚ）、７．２７（１Ｈ
、ｔ、Ｊ＝７．５Ｈｚ）、６．６９（１Ｈ、ｂｒ．ｓ）
、６．４０（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝９．５Ｈｚ）、５．４０（
１Ｈ、ｄ、Ｊ＝３．６Ｈｚ）、５．０１（３Ｈ、ｂｒ．
ｓ）、ｃａ．４．５（１Ｈ、ｍ）、４．４８（１Ｈ、ｂ
ｒ．ｑ、Ｊ≒７Ｈｚ）、４．１８（１Ｈ、ｂｒ．ｓ）、
４．０５（１Ｈ、ｂｒ．ｓ）、１．７０（３Ｈ、ｄ、Ｊ
＝７．２Ｈｚ）＾１＾３Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、Ｄ
ＭＳＯ−ｄ＿６、δｃ）１７２．２、１４０．１、１３
８．９、１３３．８、１２７．５、１２５．５、１２５
．１、１２５．０、１２４．４、１２２．２、１２１．
８、１２１．１、１１９．７、１１９．２、１１８．５
、１１７．４、１１４．８、１１１．１、１０９．７、
７７．１、７６．４、７１．６、７１．４、６６．８、
４５．１、１５．３ - （２）ノカルディオプシス属に属し、ＫＳ−２９０IIｉ
−２生産能を有する微生物を培地に培養し、培養物中に
ＫＳ−２９０IIｉ−２を生成蓄積させ、該培養物からＫ
Ｓ−２９０IIｉ−２を採取することを特徴とする新規物
質ＫＳ−２９０IIｉ−２の製造法。 - （３）該微生物がノカルディオプシス・エスピーＫ−２
９０微工研条寄第６９６号であることを特徴とする特許
請求の範囲第２項記載の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60037017A JPS61195689A (ja) | 1985-02-26 | 1985-02-26 | 新規物質ＫＳ−２９０２ｉ−２およびその製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60037017A JPS61195689A (ja) | 1985-02-26 | 1985-02-26 | 新規物質ＫＳ−２９０２ｉ−２およびその製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61195689A true JPS61195689A (ja) | 1986-08-29 |
Family
ID=12485895
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60037017A Pending JPS61195689A (ja) | 1985-02-26 | 1985-02-26 | 新規物質ＫＳ−２９０２ｉ−２およびその製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61195689A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5004833A (en) * | 1988-09-21 | 1991-04-02 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | KS-501 derivatives |
-
1985
- 1985-02-26 JP JP60037017A patent/JPS61195689A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5004833A (en) * | 1988-09-21 | 1991-04-02 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | KS-501 derivatives |
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