JPS61239892A - 固定化マルトオリゴ糖生成アミラ−ゼ - Google Patents
固定化マルトオリゴ糖生成アミラ−ゼInfo
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- JPS61239892A JPS61239892A JP8134085A JP8134085A JPS61239892A JP S61239892 A JPS61239892 A JP S61239892A JP 8134085 A JP8134085 A JP 8134085A JP 8134085 A JP8134085 A JP 8134085A JP S61239892 A JPS61239892 A JP S61239892A
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- JP
- Japan
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- enzyme
- immobilized
- amylase
- carrier
- forming
- Prior art date
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- Granted
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- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は固定化マルトリオリゴ糖生成アミラーゼに関し
、詳しくは特定の多孔性担体に固定された活性の高い固
定化マルトリオリゴ糖生成アミラーゼに関する。
、詳しくは特定の多孔性担体に固定された活性の高い固
定化マルトリオリゴ糖生成アミラーゼに関する。
〔従来技術及び発明が解決しようとする問題点〕近年、
でん粉またはアミロースに作用してマルトトリオース、
マルトテトラオース、マルトペンタオース、マルトヘキ
サオース等のマルトリオリゴ糖を生成する各種マルトリ
オリゴ糖生成アミラーゼが相ついで発見され、マルトリ
オリゴ糖の効率的な工業的製造に期待が集まっている。
でん粉またはアミロースに作用してマルトトリオース、
マルトテトラオース、マルトペンタオース、マルトヘキ
サオース等のマルトリオリゴ糖を生成する各種マルトリ
オリゴ糖生成アミラーゼが相ついで発見され、マルトリ
オリゴ糖の効率的な工業的製造に期待が集まっている。
マルトリオリゴ糖生成アミラーゼとしてはβ−アミラー
ゼ以外に次のものが知られている。
ゼ以外に次のものが知られている。
マルトトリオース生成アミラーゼ〔若生勝雄ら：＊粉化
学、２６，１７５．（１９７９）、ストレプトミセス・
グリセウス（Ｓｔｒｅ ｔｏｍ ｃｅｓ ｇｒｉｓｅｕ
ｓ）起原のもの；高崎義幸：昭和５８年度日本農芸化学
大会要旨集、Ｐ１６９ （１９８３）、バチルス（Ｂａ
ｃｉｌｌｕｓ）属起原のもの〕 マルトテトラオース生成アミラーゼ（Ｊ、Ｆ、Ｒｏｂｙ
ｔａｎｄ Ｒ，Ｊ、 Ａｃｋｅｒｍａｎ ： Ａｒｃｈ
、 Ｂｉｏｃｈｅｍ、 Ｂｉｏｐｈｙｓ、。
学、２６，１７５．（１９７９）、ストレプトミセス・
グリセウス（Ｓｔｒｅ ｔｏｍ ｃｅｓ ｇｒｉｓｅｕ
ｓ）起原のもの；高崎義幸：昭和５８年度日本農芸化学
大会要旨集、Ｐ１６９ （１９８３）、バチルス（Ｂａ
ｃｉｌｌｕｓ）属起原のもの〕 マルトテトラオース生成アミラーゼ（Ｊ、Ｆ、Ｒｏｂｙ
ｔａｎｄ Ｒ，Ｊ、 Ａｃｋｅｒｍａｎ ： Ａｒｃｈ
、 Ｂｉｏｃｈｅｍ、 Ｂｉｏｐｈｙｓ、。
１４５．１０５ （１９７１）、シュードモナス・ス
トツツェリ （Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ５ｔｕｔｚｅ
ｒｉ）起原のもの〕 マルトペンタオース生成アミラーゼ（Ｎ、 ５ａｉｔｏ
：Ａｒｃｈ、 Ｂｉｏｃｈｅｍ、 Ｂｉｏｐｈｙｓ、、
１５５ 、 ２９０（１９７３）、バチルス・リケニ
ホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｔ
ｓ）起原のもの；小林ら；昭和５８年度日本澱粉学会大
会要旨集、Ｐ２Ｏ３（１９８３）；肖像ら：昭和５９年
度日本農芸化学大会要旨集、Ｐ５８４ （１９８４）） マルトヘキサオース生成アミラーゼ（Ｋ、 Ｋａｉｎｕ
ｍｚら：ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ、、２６．２８１ （１
９７２）、エアロバクター・エアロゲネス（Ａｅｒｏｂ
ａｃｔｅｒ７−８原のもの； Ｊ、Ｆ、 Ｋｅｎｎｅｄ
ｙ ａｎｄ Ｃ。
トツツェリ （Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ５ｔｕｔｚｅ
ｒｉ）起原のもの〕 マルトペンタオース生成アミラーゼ（Ｎ、 ５ａｉｔｏ
：Ａｒｃｈ、 Ｂｉｏｃｈｅｍ、 Ｂｉｏｐｈｙｓ、、
１５５ 、 ２９０（１９７３）、バチルス・リケニ
ホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｔ
ｓ）起原のもの；小林ら；昭和５８年度日本澱粉学会大
会要旨集、Ｐ２Ｏ３（１９８３）；肖像ら：昭和５９年
度日本農芸化学大会要旨集、Ｐ５８４ （１９８４）） マルトヘキサオース生成アミラーゼ（Ｋ、 Ｋａｉｎｕ
ｍｚら：ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ、、２６．２８１ （１
９７２）、エアロバクター・エアロゲネス（Ａｅｒｏｂ
ａｃｔｅｒ７−８原のもの； Ｊ、Ｆ、 Ｋｅｎｎｅｄ
ｙ ａｎｄ Ｃ。
Ａ、 Ｗｈｉｔｅ ： ５ｔｉｉｒｋｅ、 ３上、９
３．（１９７９）；谷口ら：澱粉化学、１主、１０７
（１９Ｂ２）；Ｙ、 Ｔａｋａｓａｋｉ ： Ａｇｒｉ
ｃ、 Ｂｉｏｌ、 Ｃｈｅ＋＋＋、＋ ４７ 。
３．（１９７９）；谷口ら：澱粉化学、１主、１０７
（１９Ｂ２）；Ｙ、 Ｔａｋａｓａｋｉ ： Ａｇｒｉ
ｃ、 Ｂｉｏｌ、 Ｃｈｅ＋＋＋、＋ ４７ 。
しかしながら、これらのマルトリオリゴ糖生成アミラー
ゼは一般のアミラーゼに比べて非常に高価であり、それ
らアミラーゼを用いて製造されたマルトリオリゴ糖の試
薬グレード品が少量生産されているにすぎない。したが
って、これらマルトリオリゴ糖生成アミラーゼを用いて
各種オリゴ糖を工業的に生産するためには、これらアミ
ラーゼを効率的に使用することが不可欠である。その具
体的手法としてこれらアミラーゼを固定化して使用する
ことが考えられる。
ゼは一般のアミラーゼに比べて非常に高価であり、それ
らアミラーゼを用いて製造されたマルトリオリゴ糖の試
薬グレード品が少量生産されているにすぎない。したが
って、これらマルトリオリゴ糖生成アミラーゼを用いて
各種オリゴ糖を工業的に生産するためには、これらアミ
ラーゼを効率的に使用することが不可欠である。その具
体的手法としてこれらアミラーゼを固定化して使用する
ことが考えられる。
これまでにマルトトリオース以上の重合度を有するマル
トリオリゴ糖を生成するアミラーゼの固定化例としては
、マルトヘキサオース生成アミラーゼをポリアクリルア
ミドに放射線重合法によって包括固定化する方法（Ｂｉ
ｏｔｅｃｈ、 ａｎｄ Ｂｉｏｅｎｇ、。
トリオリゴ糖を生成するアミラーゼの固定化例としては
、マルトヘキサオース生成アミラーゼをポリアクリルア
ミドに放射線重合法によって包括固定化する方法（Ｂｉ
ｏｔｅｃｈ、 ａｎｄ Ｂｉｏｅｎｇ、。
２５、ｐ１０９５−１１０７ （１９８３））が知ら
れているにすぎない。しかし、この方法は酵素の固定化
率は高いが、大量生産に不向きであり、高価である上に
固定化酵素の重量あたりの活性が低いという欠点があっ
た。
れているにすぎない。しかし、この方法は酵素の固定化
率は高いが、大量生産に不向きであり、高価である上に
固定化酵素の重量あたりの活性が低いという欠点があっ
た。
そこで、本発明者らは上記マルトリオリゴ糖生成アミラ
ーゼを効率よく固定化し、かつ固定化酵素の重量あたり
の活性も工業的使用に十分な値をもち、長期間にわたっ
てその活性を維持しろる固定イし酵素を開発すべく鋭意
研究を重ねた。
ーゼを効率よく固定化し、かつ固定化酵素の重量あたり
の活性も工業的使用に十分な値をもち、長期間にわたっ
てその活性を維持しろる固定イし酵素を開発すべく鋭意
研究を重ねた。
その結果、特定の多孔性担体に固定することによって目
的とする優れた固定化酵素が得られることを見出し、本
発明を完成した。
的とする優れた固定化酵素が得られることを見出し、本
発明を完成した。
すなわち本発明は、下記特性を有する多孔性担体に固定
された固定化マルトリオリゴ糖生成アミラーゼである。
された固定化マルトリオリゴ糖生成アミラーゼである。
イ）酵素との親和性が８０％以上である口）１００Å以
上の細孔径を有する細孔の比表面積が２０〜３００ｒｄ
／ｇである 酵素の固定化方法としては各種の方法が知られており、
その１つに物理的吸着法、イオン結合法。
上の細孔径を有する細孔の比表面積が２０〜３００ｒｄ
／ｇである 酵素の固定化方法としては各種の方法が知られており、
その１つに物理的吸着法、イオン結合法。
共有結合法等を含む担体結合法がある。この中、物理的
吸着法、イオン結合法は操作が簡単であり、酵素タンパ
ク質の活性中心の破壊あるいは高次構造の変化が小さく
、また担体の再生利用も容易であることから適当な担体
を発見できれば工業化に対して有望な方法と云える。
吸着法、イオン結合法は操作が簡単であり、酵素タンパ
ク質の活性中心の破壊あるいは高次構造の変化が小さく
、また担体の再生利用も容易であることから適当な担体
を発見できれば工業化に対して有望な方法と云える。
本発明ではマルトリオリゴ糖生成アミラーゼの担体とし
て、（イ）酵素との親和性が８０％以上であり、（口”
）１００Å以上の細孔径を有する細孔の比表面積が２０
〜３００ｄ／ｇである多孔性担体を使用する。ここで、
酵素と担体の親和性は次の方法によって求めた値を意味
する。
て、（イ）酵素との親和性が８０％以上であり、（口”
）１００Å以上の細孔径を有する細孔の比表面積が２０
〜３００ｄ／ｇである多孔性担体を使用する。ここで、
酵素と担体の親和性は次の方法によって求めた値を意味
する。
担体０．５ ｇに対し２５１Ｕの酵素をｐ Ｈ７，０の
５０ｍＭリン酸緩衝液２，０ｒｒ１の溶液としたもの５
０ｍｊ！三角フラスコに入れ、室温下で１時間、１２０
ストローク、４ｃｍ幅で振とうしながら酵素を担体に固
定化したのち濾過を行ない、得られた濾液中の活性を測
定して次式により酵素と担体との親和性を求める。
５０ｍＭリン酸緩衝液２，０ｒｒ１の溶液としたもの５
０ｍｊ！三角フラスコに入れ、室温下で１時間、１２０
ストローク、４ｃｍ幅で振とうしながら酵素を担体に固
定化したのち濾過を行ない、得られた濾液中の活性を測
定して次式により酵素と担体との親和性を求める。
添加した酵素活性
親和性を求める際に用いる酵素の純度は必ずしも絶対的
なものではないが、好ましくは比活性が３０１ Ｕ／■
・タンパク質以上あるものを使用する。なお、上記酵素
と担体の親和性は工業的に利用する場合の酵素活性担体
重量比よりも低いレベルで求めたものであるが、酵素と
担体の親和性を知る尺度として重要である。すなわち、
実際に高い酵素活性／担体重量比において固定化した酵
素が基質に対し高い発現活性を示すものは上記親和性に
ついても高い値を示すことを本発明者らは見出している
。この親和性については、上記の如く８０％以上である
ことが必要であるが、マルトｔトラオース生成アミラー
ゼ用担体の場合は９５％以上であることが好ましく、マ
ルトペンタオース生成アミラーゼ用担体の場合は８０％
以上であることが好ましい。これらの値は使用酵素の８
原および比活性によって決まる。ここで発現活性とは以
下の如く定義されるものである。
なものではないが、好ましくは比活性が３０１ Ｕ／■
・タンパク質以上あるものを使用する。なお、上記酵素
と担体の親和性は工業的に利用する場合の酵素活性担体
重量比よりも低いレベルで求めたものであるが、酵素と
担体の親和性を知る尺度として重要である。すなわち、
実際に高い酵素活性／担体重量比において固定化した酵
素が基質に対し高い発現活性を示すものは上記親和性に
ついても高い値を示すことを本発明者らは見出している
。この親和性については、上記の如く８０％以上である
ことが必要であるが、マルトｔトラオース生成アミラー
ゼ用担体の場合は９５％以上であることが好ましく、マ
ルトペンタオース生成アミラーゼ用担体の場合は８０％
以上であることが好ましい。これらの値は使用酵素の８
原および比活性によって決まる。ここで発現活性とは以
下の如く定義されるものである。
固定化酵素の発現する活性がその使用条件によって絶対
値が大きく変わるので、次のような測定条件を設定して
求めた。すなわち、固定化酵素１０ ｍｇ （ｗｅｔ）
を０．５ｍｊ２の１０ｍＭリン酸バフ７ｙ （ｐＨ７
，０）（５０ｍｆ三角フラスコ中）に加え、十分に馴染
ませた後、Ｉｏｎ／ｖ％可溶性でん粉（Ｍｅｒｃｋ社製
）５．０ｍｌを加えて４０℃で１０分間往復振とう機に
より１２０ストローク／ ｍ ｉ ｎ、４ｃｍ幅で振と
うしながら酵素反応を行ない、生成還元糖をＳｏｍｏｇ
ｙｉ−Ｎｅｌｓｏｎ法で測定し、発現する活性を求めた
。なお、１単位とは１分間に１μｍｏβ； の
グルコシド結合を切断する酵素量を意味する。
値が大きく変わるので、次のような測定条件を設定して
求めた。すなわち、固定化酵素１０ ｍｇ （ｗｅｔ）
を０．５ｍｊ２の１０ｍＭリン酸バフ７ｙ （ｐＨ７
，０）（５０ｍｆ三角フラスコ中）に加え、十分に馴染
ませた後、Ｉｏｎ／ｖ％可溶性でん粉（Ｍｅｒｃｋ社製
）５．０ｍｌを加えて４０℃で１０分間往復振とう機に
より１２０ストローク／ ｍ ｉ ｎ、４ｃｍ幅で振と
うしながら酵素反応を行ない、生成還元糖をＳｏｍｏｇ
ｙｉ−Ｎｅｌｓｏｎ法で測定し、発現する活性を求めた
。なお、１単位とは１分間に１μｍｏβ； の
グルコシド結合を切断する酵素量を意味する。
本発明に用いる担体は、さらに以下の条件を満足するも
のであることを要する。すなわち、担体の１００Å以上
の細孔径を有する細孔の比表面積が２０〜３００ ｒｒ
ｆ／ｇ、好ましくは４０〜２００ｒｒｒ／ｇであること
が必要である。この比表面積が３００ｒｒｆ／ｇを越え
ると、担体Ｉｔ強度が弱いものとなり、好ましくない。
のであることを要する。すなわち、担体の１００Å以上
の細孔径を有する細孔の比表面積が２０〜３００ ｒｒ
ｆ／ｇ、好ましくは４０〜２００ｒｒｒ／ｇであること
が必要である。この比表面積が３００ｒｒｆ／ｇを越え
ると、担体Ｉｔ強度が弱いものとなり、好ましくない。
なお、マルトテトラオース生成アミラーゼ用担体にあっ
ては、さらに４００ＪÅ以上の細孔径を有する細孔の比
表面積が３〜１００イ／ｇ、好ましくは５〜５０ｎｆ／
ｇであることが望ましい。ここで、比表面積は水銀圧大
法により測定した値である。
ては、さらに４００ＪÅ以上の細孔径を有する細孔の比
表面積が３〜１００イ／ｇ、好ましくは５〜５０ｎｆ／
ｇであることが望ましい。ここで、比表面積は水銀圧大
法により測定した値である。
上記の条件は、いずれか一方を満足するだけでは不十分
であり、すべての条件を同時に満たすものだけが基質に
対して高い反応性を示す。
であり、すべての条件を同時に満たすものだけが基質に
対して高い反応性を示す。
本発明に使用する多孔性担体としては上記特性を満足す
るものであれば、素材、製法等を問わないが、通常はフ
ェノール系吸着樹脂、スチレン−ジビニルベンゼン系吸
着樹脂、トリアジン系吸着樹脂、アクリルエステル系吸
着樹脂２弱塩基性アニオン交換樹脂などの多孔性合成樹
脂が用いられる。より具体的には、デュオライト系樹脂
（ダイヤモンドシャムロツタ社製）の商品名ｒ Ｓ −
７６１Ｊ 。
るものであれば、素材、製法等を問わないが、通常はフ
ェノール系吸着樹脂、スチレン−ジビニルベンゼン系吸
着樹脂、トリアジン系吸着樹脂、アクリルエステル系吸
着樹脂２弱塩基性アニオン交換樹脂などの多孔性合成樹
脂が用いられる。より具体的には、デュオライト系樹脂
（ダイヤモンドシャムロツタ社製）の商品名ｒ Ｓ −
７６１Ｊ 。
ｒＳ−７６２Ｊ、ｒＥｓ−７７１Ｊ、ｒＥＳ−８６１０
Ｊなど；ダイヤイオン系樹脂（三菱化成工業■製）の商
品名ｒＨＰ−１０Ｊ、ｒＨＰ−２０Ｊ、ｒＨＰ−５０Ｊ
、ｒＳＰ−２０６Ｊなど；アンバーライト系樹脂（ロー
ム・アンド・ハース社製）の商品名ｒＸＡＤ−７Ｊ、ｒ
ＸＡＤ−８Ｊなどを挙げることができる。
Ｊなど；ダイヤイオン系樹脂（三菱化成工業■製）の商
品名ｒＨＰ−１０Ｊ、ｒＨＰ−２０Ｊ、ｒＨＰ−５０Ｊ
、ｒＳＰ−２０６Ｊなど；アンバーライト系樹脂（ロー
ム・アンド・ハース社製）の商品名ｒＸＡＤ−７Ｊ、ｒ
ＸＡＤ−８Ｊなどを挙げることができる。
また、多孔性担体の粒径については、発現活性が高けれ
ば特に制限はないが、通常は０．０５〜１．５龍、より
好ましくは０．２〜１．０ｍのものを用いるのが適当で
ある。粒径が小さいことは酵素の固定化や発現活性に対
しては好ましい要因であるが、あまり小さいと、固定化
酵素を反応器に充填し、これにでん粉液化液を供給した
ときに、圧力損失が大きいため、運転上不都合である。
ば特に制限はないが、通常は０．０５〜１．５龍、より
好ましくは０．２〜１．０ｍのものを用いるのが適当で
ある。粒径が小さいことは酵素の固定化や発現活性に対
しては好ましい要因であるが、あまり小さいと、固定化
酵素を反応器に充填し、これにでん粉液化液を供給した
ときに、圧力損失が大きいため、運転上不都合である。
一方、粒径があまり大きいと、酵素の固定化や発現活性
に対して効率的でない。
に対して効率的でない。
また、酵素としてはマルトトリオース生成アミラーゼか
らマルトヘキサオース生成アミラーゼまでの酵素が本発
明の対象とされ、酵素の固定化は各種の方法を適用しう
るが、最も一般的な方法は、前述したように、適当な緩
衝液に酵素を溶解し、この酵素液を担体と混ぜて攪拌す
る方法である。
らマルトヘキサオース生成アミラーゼまでの酵素が本発
明の対象とされ、酵素の固定化は各種の方法を適用しう
るが、最も一般的な方法は、前述したように、適当な緩
衝液に酵素を溶解し、この酵素液を担体と混ぜて攪拌す
る方法である。
次いで、濾過等の操作により固・液分離を行ない、得ら
れた固定化酵素を適当な緩衝液で洗浄する。
れた固定化酵素を適当な緩衝液で洗浄する。
緩衝液としてはリン酸緩衝液（ｐＨ６〜７）、トリス塩
酸緩衝液（ｐ Ｈ７〜９）または蒸留水などが好適に用
いられる。
酸緩衝液（ｐ Ｈ７〜９）または蒸留水などが好適に用
いられる。
酵素の固定化量は、用いる酵素およびその比活性や担体
の種類等によっても異なるが、通常は担体１ｇ当りタン
パク質として１〜４０■、好ましくは２〜１５■が適当
である。
の種類等によっても異なるが、通常は担体１ｇ当りタン
パク質として１〜４０■、好ましくは２〜１５■が適当
である。
酵素の固定化量が担体１ｇ当りタンパク質として１■よ
り少ない場合、固定化率が高く、効率的に固定化するこ
とができるが、発現活性の絶対値が小さく、目的成分の
収量が少ない。一方、固定化量が担体１ｇ当りタンパク
質として４０■よりも多い場合、酵素固定化時の固定化
率が低下するため、酵素の使用効率が悪いばかりでなく
、発現活性として利用される割合も減少し、好ましくな
い。
り少ない場合、固定化率が高く、効率的に固定化するこ
とができるが、発現活性の絶対値が小さく、目的成分の
収量が少ない。一方、固定化量が担体１ｇ当りタンパク
質として４０■よりも多い場合、酵素固定化時の固定化
率が低下するため、酵素の使用効率が悪いばかりでなく
、発現活性として利用される割合も減少し、好ましくな
い。
次に、本発明を実施例により詳しく説明する。
実施例１
酵素としてマルトテトラオース生成アミラーゼ（シュー
ドモナス・ストツツェリ起原のもの、比活性８０．８Ｉ
Ｕ／■・タンパク質）を用い、担体として第１表に示し
たものを使用して固定化酵素を得た。すなわち、担体０
．２ｇに対し１００ＩＵの酵素をｐＨ７，０の５０ｍＭ
リン酸緩衝液で２．０−ｍｌ１としてものを５０ｍｌ！
三角フラスコに入れ、室温下１時間、１２０ストロース
、ｄａａ幅で振とうしながら酵素を担体に固定化した。
ドモナス・ストツツェリ起原のもの、比活性８０．８Ｉ
Ｕ／■・タンパク質）を用い、担体として第１表に示し
たものを使用して固定化酵素を得た。すなわち、担体０
．２ｇに対し１００ＩＵの酵素をｐＨ７，０の５０ｍＭ
リン酸緩衝液で２．０−ｍｌ１としてものを５０ｍｌ！
三角フラスコに入れ、室温下１時間、１２０ストロース
、ｄａａ幅で振とうしながら酵素を担体に固定化した。
次いで、これを濾過して濾液を除き、さらに１０ｍＭリ
ン酸緩衝液（ｐ Ｈ７，０”）を用いタンパク質が流出
しなくなるまで十分に洗浄して固定化酵素を得た。
ン酸緩衝液（ｐ Ｈ７，０”）を用いタンパク質が流出
しなくなるまで十分に洗浄して固定化酵素を得た。
この固定化酵素について、前記した方法により親和性を
測定し、かつ固定化酵素の発現する活性についても測定
した。結果を担体の比表面積の値と共に第１表に示す。
測定し、かつ固定化酵素の発現する活性についても測定
した。結果を担体の比表面積の値と共に第１表に示す。
比較例１
親和性が十分でない担体を用いたこと以外は実施例１と
同様にして固定化酵素を得た。測定結果を第２表に示す
。
同様にして固定化酵素を得た。測定結果を第２表に示す
。
比較例２
比表面積の物性が十分でない担体を用いたこと以外は実
施例１と同様にして固定化酵素を得た。
施例１と同様にして固定化酵素を得た。
測定結果を第３表に示す。
実施例２
酵素としてマルトペンタオース生成アミラーゼ（バチル
ス・リケニホルミス起源のもの、比活性４０．９１Ｕ／
ｍｇ・タンパク質）を用いたこと以外は実施例１と同様
に行なった。なお、発現活性は４０℃で測定した。結果
を第４表に示す。
ス・リケニホルミス起源のもの、比活性４０．９１Ｕ／
ｍｇ・タンパク質）を用いたこと以外は実施例１と同様
に行なった。なお、発現活性は４０℃で測定した。結果
を第４表に示す。
比較例３
親和性が十分でない担体を用いたこと以外は実施例２と
同様にして固定化酵素を得た。測定結果を第５表に示す
。
同様にして固定化酵素を得た。測定結果を第５表に示す
。
比較例４
比表面積の物性が十分でない担体を用いたこと以外は実
施例２と同様にして固定化酵素を得た。
施例２と同様にして固定化酵素を得た。
測定結果を第６表に示す。
使用例
実施例１に示す方法で得た固定化酵素（担体をＬＨ３Ｖ
（液時空間速度）１．０ｈｒ−１で温度４０℃の当該
カラムリアクターに供給した。その運転結果を第１図に
示す。
（液時空間速度）１．０ｈｒ−１で温度４０℃の当該
カラムリアクターに供給した。その運転結果を第１図に
示す。
図から明らかなように、１５００時間を越えて安定して
運転できることを確認すると共に製品中の基質を除いた
マルトテトラオースの純度は８０〜９０％と高純度のも
のを得ることができた。
運転できることを確認すると共に製品中の基質を除いた
マルトテトラオースの純度は８０〜９０％と高純度のも
のを得ることができた。
本発明によれば、マルトリオリゴ糖生成アミラーゼは効
率よく固定化され、しかも固定化酵素の重量あたりの活
性も十分に高い。その上、この活性は長期間保持される
。
率よく固定化され、しかも固定化酵素の重量あたりの活
性も十分に高い。その上、この活性は長期間保持される
。
それ故、この固定化酵素を用いれば、工業的にマルトリ
オリゴ糖を製造することができる。
オリゴ糖を製造することができる。
第１図は固定化酵素を使用したときの経過時間と相対活
性を示すものである。
性を示すものである。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 下記特性を有する多孔性担体に固定された固定化マルト
リオリゴ糖生成アミラーゼ。 イ）酵素との親和性が８０％以上である ロ）１００Å以上の細孔径を有する細孔の比表面積が２
０〜３００ｍ＾２／ｇである
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8134085A JPS61239892A (ja) | 1985-04-18 | 1985-04-18 | 固定化マルトオリゴ糖生成アミラ−ゼ |
| EP86105255A EP0200095B1 (en) | 1985-04-18 | 1986-04-16 | Immobilized maltooligosaccharide-forming amylase and process for the production of maltooligosaccharide using said enzyme |
| DE8686105255T DE3673686D1 (de) | 1985-04-18 | 1986-04-16 | Immobilisierte maltooligosaccharid-bildende amylase und verfahren zur herstellung von maltooligosaccharid unter verwendung des genannten enzyms. |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8134085A JPS61239892A (ja) | 1985-04-18 | 1985-04-18 | 固定化マルトオリゴ糖生成アミラ−ゼ |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61239892A true JPS61239892A (ja) | 1986-10-25 |
| JPH0332999B2 JPH0332999B2 (ja) | 1991-05-15 |
Family
ID=13743639
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8134085A Granted JPS61239892A (ja) | 1985-04-18 | 1985-04-18 | 固定化マルトオリゴ糖生成アミラ−ゼ |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61239892A (ja) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5749196A (en) * | 1980-09-05 | 1982-03-20 | Sharp Kk | Device for firing discharge lamp |
| JPS601879A (ja) * | 1983-06-20 | 1985-01-08 | Oki Electric Ind Co Ltd | 半導体レ−ザの製造方法 |
-
1985
- 1985-04-18 JP JP8134085A patent/JPS61239892A/ja active Granted
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5749196A (en) * | 1980-09-05 | 1982-03-20 | Sharp Kk | Device for firing discharge lamp |
| JPS601879A (ja) * | 1983-06-20 | 1985-01-08 | Oki Electric Ind Co Ltd | 半導体レ−ザの製造方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0332999B2 (ja) | 1991-05-15 |
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