JPS61280547A - 血小板の計数方法及び装置 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は血液中の血小板の計数測定を行うための方法及
び装置に関するものである。

従来血小板の測定に際しては、試料の前処理が必要な多
血小板血漿法（ＰＲＰ法）や標本作成を要する眼視法な
どが用いられている。ＰＲＰ法では、毛細管に血液を採
取し静置法又は遠心沈降法によって赤血球、白血球層を
沈降させて多血小板血漿層のみを取出し、この層の液中
の血小板数を粒子計数装置で１個ずつ計数測定するもの
である。

この方法では、赤血球及び白血球を分離するために血小
板の浮態する部分を濃縮させたものモあるから、上記の
計数画定された血小板数は、別に求めり血液のへマドク
リット値に関係した補正値で補正したうえで単位体積あ
たりの血液中の血小板数に換算される。このＰＲＰ法は
、比較的精度が高く試料作成に熟練を要しない反面、多
血小板血漿を作成するための時間や手数が掛り、又赤血
球す−僅かでも混入すると大きな誤差を生すること。

補正による換算が敏瑣であるなどの難点ｂ−あり。

このためＰＲＰ法を自動化することは困難である。

従来性われている眼視法では、血液の塗抹挿木を作成し
、顕微鏡で直接に目で数えるものであるが、塗抹面との
血小板の分布が不均一になること。

塗抹に熟練を要すること、又血小板がプレパラートガラ
ス面に付着しやすく破壊されやすいなどの難点ｂ’−あ
った。

本発明は上述の如き従来法から全く離れて、単に赤血球
計数測定と同様な血液試料σ）希釈操作のみで血小板の
計数測定ｂ；自動的に且つ高精度で行い得る測定方法及
び装ｋを提供することを目的とする。本発明は又血小板
数の計数測定に用いる補正値ｂ”−赤血球数のみですみ
、最終結果の演算も比較的簡単な自動計数測定方法及び
これに応じて製作費も比較的低廉な自動計数測定装置を
実現することを目的とする。さらに、本発明はスクリー
ニング測定用として、より一層簡略で精度の優れた計数
測定方法及び装置を提供することを目的とする。

本発明による自動測定技術は、他σ）血液に関する′４
ラメータである赤血球数、白血球数、ヘモグロビン値、
ヘマトリック値などの画定が同時に可能な血液に関する
パラメータの自動測定装置に組み入れて、これらのパラ
メータの計数測定時に血小板数を新たに加えるかたちで
測定することも可能である。

ところで、全血を希釈するだけで直ちに血小板の計数測
定を行うに際しては、希釈された浮態液試料が検出器内
部に吸引され１粒子通過時の電気的インピーダンス変化
を検出する微細孔領域に漂っている血小板以外の粒子う
ｔこの領域内にいわゆる巻き込み現象によって侵入しパ
ルス信号を発生し誤差の原因となる。このため、従来は
、この種の粒子の侵入に伴う誤差を防止するのに、検出
器内部を２重構造にして微細孔から赤血球、血小板等の
全粒子を吸引するとともにこの微細孔の周縁から清浄な
希釈液を供給するなど検出領域の構造的改良に力が注が
れてきた。これによれば、血小板計数は粒子によって生
ずる電気的パルスの波高弁別のみで十分正確に行い得ろ
ｂ”−１異物や粒子が全く混在しない清浄な希釈液の供
給、２重壁の微小な検出領域の製作など構造と及び製作
コスト上の問題から現実には用いられていなかった。

本発明は、粒子通過を電気的インピーダンス変化から検
出する検出領域にＬ記と同様にいわゆる赤血球（白血球
も）の巻き込みに伴う出力パルス数の増加を予め統計的
に’１１．出しておき、血小板による出力を赤血球（白
血球も）によるパルス数で修正することを原理とするも
のである。

このような統計的技法に到達するには多大の試験及び計
算ｂ；反覆された。上記σ）検出方式を実施するに際し
てシー、最初、パルス波高弁別による血小板実測値と従
来法による実測値との差Ｉ！１″一検体の赤血球数（白
血球数はこねに比べてはるかに小さく無祝し得る）に比
例すると仮定し、赤血球数Ｒ，ＢＣ／１００　ＣＸ　１
０’／ａｍ３）により不法実測値−に＝４．６６を得て
、補正後の血小板数を改めて計算した。その結果、補正
する前の相関係数はｒ＝０．９０７２、平均値による補
正を行った後σ）相関係数はｒ　＝０．８４７４と低減
した。このことは、拳法補正計数値二本法実測値−４、
（ｅＬ　ｏは定数）として血小板数をＬ記パルス波高弁
別で測定したとき、その従来法との相関係数がｒ＝０．
９０７２となることを示すだけでなく、赤血球数に依存
しない如くに見えた。

前述の如く、血小板計数値の誤差にはいわゆる巻き込み
現象による赤血球数の算入す１主たろものである以と、
このＲＢＣカウントを有意な補正式に導入してやる必要
ｂ−あった。そこで、不法実測値のりカウント（ｒｅｃ
ｏｕｎｔ　）再現性を調べたが、こねはきわめ℃悪く、
その原因が検出器内部に入り込んでしまった赤血球によ
ることｂ−判明した。

そこで次に、上述の補正法を含んだ最小２乗多項式近似
による補正を試みた。血小板の不法実測と式により、４
８検体について、各検体の１回目、２回目、６回目計数
に対して補正なし、１＝０　、−＝１　、−＝２　、　
ｍ＝３までの相関＆ｉｌｌへ？、：が、１回目計数では
いずれもｒ　＝　０．８程度でそれほどよくなかった。

また、１回目計数では補正なしのとき、相関係数ｒ＝０
．８６５７．ｍ＝１の補正項までとってもｒ＝０．８６
９８と殆んど変らなかった。これに対し、５回目計数で
は補正なしのとき、ｒ＝０．９２５０、−＝１の補正項
までとるとｒ＝０．９７７２とよくなった。従って、血
小板の実測値は同一のサンプルについて６回目の計数に
対応した値を採り、最小２乗多項式近似でｍ＝１までの
補正をすると十分であることが判明した。

これらの結果を示すのが添付図第１図、第２図、第６図
並びに下記の第１表である。

第　　１　　表 測定条件および補正式別相関係数 ＊　　ａｏ＝４．７９．　　α、、＝３．３１＊＊　　
ａｏ＝１ｓ、’；’、　　ｃＬ、＝−Ｑ、５５７次で、
不法により同一検体の直線性を調べた。すなわち、ＲＢ
Ｃ（赤血球数）と不法実測値とを第４図に見る如くグラ
フ化したところ、 となり、これは先に不法実測値−従来法災側値＝第１表
及びｖ、５図などから明らかな如く、不法リカウント再
現性は６回目以降の測定で良好になるので検出器内部に
被画定試料の検体を充満させてから再現性をテストした
結果、測定値の安定性が従来法よりもすぐれていた。

上述した諸点から、血液（全血で可）試料を希釈して血
球粒子の浮態液を調製すること、この浮懸液中に含まれ
る粒子の電気的パルス信号を個別的に検出すること、検
出されたパルス信号かち所定のパルス波高に達しない第
１のパルス出力とこの所定のパルス波高以との第２のパ
ルス出力とを弁別してそれぞれ計数し、上記の第１のパ
ルス出力の実測値Ｐ１（単位：　１０　’／ｙ３）か１
式によって血小板数ＰＬ（単位：　１０’／ｍ３）が求
められることがはっきりした。

次に、別々の検体を次々と測定ｊろときては、やはり赤
血球数な補正パラメータとして式が成立する。ここに、
ＲＢＣ（Ｌ）は今回σ）検体σ）赤血球数であり、ＲＢ
Ｃ（Ｌ−１）は前回の検体の、又ＲＢＣ（シー（＠−＋
））は（ｍ　−１）回前のそれぞれの検体の赤」ｒ■球
数である。

先に実験結果に関連して述べた如く、再現性から見て前
々回までの試料の影響があることを考慮して今回、前回
、Ｋ１１４回、前４４回の各検体をと式にあ℃はめて、
ＲＢＣ（す、ＲＢＣ（ｉ−１）。

ＲＢＣ（Ｑ−２）、ＲＢＣ（Ｑ−３）のそれぞれの係数
α５、ａ２、ｃＬ３、α、さらに常数ｃＬｏ　　を多数
の実験から統計的に求めた。その結果は次のとおりであ
る。

α。＝０．９．　　＝＝、＝ＣＬ６５２．　　α２＝２
．５６゜４３＝０．５７９　、　　ｔｚ、＝０．６８６
゜従って１式 ｂ−得られ、第６図と同様な結果が得られた。この式で
α。＋　ａ、ｌ　”２１　ａ３１α４を一旦定めてしま
うと、別の装置で測定しても測定結果に殆んど狂いがな
くほぼ等しい血小板数の測定精度が得られた。この場合
の測定条件は、検出器の微細孔の径８０μ、検出器の内
径６　ｙｘ、検出器への１回の試料吸引量０．５　ｍｌ
　（そのうち０．２５　ｍｌをス１ｊ定試料にする）、
各検体の測定時間約１１秒間であった。

従って、これらの諸条件を変えない限り、第４図より明
へかな如く上記の定数、係数には普遍性がある。一方、
これらの諸条件のいくつかを変えた場合には、予め数十
検体以、Ｊ：ＶＣついてＰＷＬ−ＰＬを算出してからα
。、〜ｃＬ、、ｒＬを求める必要ｂ”−ある。と式で得
られる相関係数はｒ＝０．９４４５であった。

さらに、丘記実験結果から、５回目までＱ）実測例を用
いると式 ％式％ で十分正確な結果が得られ２・ことが判った。ここに、
ＲＢＣ（赤血球数）の正常値は、男性ｂ−約４５０−５
１０　ＣＸ１０’／ｙ３）、女性ｂ”−約５９５〜４６
５　Ｃ×１０４／ａｘ３〕であるから、を式の補正値は
男性で１９７〜２１．６８．女性の場合１７．８７−２
０．１９、それぞれの平均値は２０．６９．１９．０５
になり、さらに男女の区別をなくして総合平均したとき
の補正値はＲＢＣ＝５９５〜５１０〔×１０４／＃Ｊ３
〕　となることから１９８６が得られる。

従って、男女の区別が可能であれば、赤血球数が正常値
の範囲内であることを確認したうえ（異常テあれば、異
常性をディスプレイするだけにとどめる）、血小板数の
実測値から各対応する補正値２０．６９．１９０５を引
き算することにより十分に正しい値の血小板数す−求め
られ、この簡略化した式の適用はスクリーニング的な測
定で力を発揮する。男女の別なしに測定する場合には、
単に１９８６を引き算するだけでほぼ正しい血小板数ｂ
１求められる（単位：　Ｘ　１０’／ａｃｔ３）。血小
板数ｂ’−異常値を示すものと判定されたときには、従
来法又はさらに精密な測定法で再測定、又は反復測定を
行うことが適当である。

以上のように、数十検体について予めα。＊　ｃＬ＋を
求めておくだけで式 ％式％ によってスクリーニング的な血小板数の計数画定酪可能
であること６”−判る。

本発明の方法を実施するための装置の実施例について以
下説明する。

第５図は、赤血球数が−正常囲内の値０）とぎ、予め定
められていた補正値を単純に引き算をして血小板数を計
数測定する簡便な装置を示す。検出装置８の出力は、弁
別回路９で所定の弁別レベルに達したパルス出力信号と
上記所定の弁別レベルに達しない信号とを別々に出力し
、前者を赤血球数（白血球を含んでもよい）として計数
判定回路１５で正常値であるか否かを判別し、一方面小
板領域のパルスは計数演算回路１６に入れられここで得
られた計数値から前述した補正値＜ｃ）ｂ：単に引き算
される。計数判定回路１５による判定出力及び計数演算
回路１６の出力はともに表字回路１７に表示又は印字さ
れる。すなわち、赤血球数（白血球数を含んでもよい）
の正常範囲内にあるか否かの判定結果（直接の計数値を
併せてもよい）と補正ずみσ）血小板数とが表示回路１
７によって表示される。

第６図及び第７図は、検出器４σ）周辺につ（′−ての
改良を示している。、第６図は、検出器１８σ）内部と
外部を同一の浮態液検体で充満し、補正計算用の赤血球
数をたえず今回の検体によるもσ）に限定する。これに
より前回以前の検体の赤血球数σ）影響は一切受けない
から補正演算は簡単に行える。

検出器１８の下端には非液管１９をそなえており、コッ
ク２０を介して検出器内の試料を排出させる。

試料浮態液２は導入管２４を介しコック２１．２２の開
路で検出器１８内と試料室２６内に同時に導入される。

検出器１８の器壁に穿った微細孔２８を通じて電極２６
．２７は電気的に結ばれ得る。すなわち、定量装ｆｔ２
９により試料室２５から検出器１８内に所定量の浮態液
試料ｂ−吸引されるとき、微細孔２８の検出領域を血球
粒子が通過すると電極２６．２７間の電気的インピーダ
ンスが変化し、この時のインピーダンスが検出回路７に
よりパルス出力としてとり出される。と記装置の使用中
、定量装置２９．コック２０．２１．２２は生理食塩水
等からなる浮態液２により検出器１８の内部と電気的に
接続していてよいが、検出器１８の外部とはコック２５
等を介して電気的に接続したり電気的漏洩がないように
しなければならない。この電気的漏洩を防止するために
、例えば浮態液が第７図に示すように液滴として流路系
統で継続されるようにすることｂ−好ましい。

【図面の簡単な説明】

第１図、第２囚、第６図は本発明の方法による血小板測
定値と従来法との比較をなすにあたり、赤血球数の影響
が今回、前回、前々回のものまで順次考慮すると測定精
度が如何にとがるかを示すグラフ、＠４図は本発明によ
る方法と従来法とによる血小板数測定値が赤血球数によ
っていかに変るかを補正の有無も含めて対比して示すグ
ラフ。 第５図は本発明装置の一実施例、第６図及び第７図は本
発明装置の検出器周辺の改良を示す概略破断縦断面図で
ある。 １．２５・・・試料室又は容器、　２・・・浮態液。 ６・・・微細孔、　４・・・検出器、　　６．６’、２
６．２７・・・電＠、　７・・・検出回路、　５．２９
−°”定量装置・８・°°検出装置、　９・・・升別回
路、　　１７・・・表示回路、　　１５・・・計数判定
回路、　　１６・°°計数演算回路。 特許出願人　東亜医用電子株式会社 （外２名） 第２図 従　釆　ｊ五　　　　　　　　　　　′第３図 従来法　　　　′ 第４図 第５図 θ 第６図

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、血液試料を希釈して血球粒子の浮懸液を調製するこ
   と、前記浮懸液中に含まれる粒子の個別的パルス信号を
   検出すること、検出されたパルス信号から所定の弁別レ
   ベルに達しない第１のパルス出力と前記弁別レベル以上
   の第２のパルス出力とを弁別してそれぞれ計数すること
   、前記第１のパルス出力の実測値から式 ＰＣ〔×１０＾４／ｍｍ＾３〕＝Ｐ＿ｍ〔×１０＾４／
   ｍｍ＾３〕−Ｃ（ここに、ＰＬは血小板数；Ｐ＿ｍは実
   測値；Ｃは前記浮懸液中の赤血球濃度に基づく補正定数
   であつて、男では２０．６９、女では１９．０３、総合
   平均では１９．８６を表す） によつて前記浮懸液中の血小板数を算定すること、を特
   徴とする血液中の血小板の測定方法。 ２、血液試料を希釈した浮懸液中に含まれる血球粒子を
   検出器の微細孔通過時の電気的インピーダンス変化に基
   づき個別的パルス信号として検出するための検出装置、
   前記個別的パルス信号を所定の弁別レベルに達しない血
   小板領域に対応するパルス出力信号と前記弁別レベル以
   上の赤血球・白血球の領域に対応するパルス出力信号と
   に弁別するための弁別回路、前記弁別レベル以上の赤血
   球・白血球の領域に対応するパルス出力信号の計数値が
   正常範囲内にあるか否かを判定する計数判定回路、前記
   血小板の領域に対応するパルス出力信号を計数するとと
   もに所定の補正値を単純減算する計数演算回路、並びに
   前記計数演算回路のそれぞれの出力に基づいて赤血球・
   白血球の計数値が正常範囲内にあるか否か及び補正ずみ
   の血小板を表示又は印字するための表示回路、によつて
   構成されたことを特徴とする血液中の血小板の自動計数
   測定装置を同時に供給するようにしたことを特徴とする
   前記自動計数測定装置。 ３、特許請求の範囲２記載の血小板の自動計数測定装置
   において、前記微細孔により連通する前記検出器の内部
   及び外部に事実上同一の浮懸液を同時に供給するように
   したことを特徴とする前記自動計数測定装置。