JPS62281891A - アンスラサイクリン化合物およびその用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔発明の背景〕 炎五斑１ 本発明は、抗腫瘍活性を有するアンスラサイクリン化合
物である１３−デオキソ−１１−デオキシカルミノマイ
シン（以下Ｒ２０Ｙ５という）、１３−デオキソ−カル
ミノマイシン（以下Ｒ２０×という）、及び１３−デオ
キソ−１０−ヒドロキシカルミノマイシン（以下Ｒ２０
Ｘ２という）（前記のｍｉを総称して、以下Ｒ２０物質
という）の３′−デアミノ−３’−（３−シアノ−４−
モルホリニル）誘導体に関する。

Ｌｎ亘盟 アンスラサイクリン化合物としては、従来より放線菌の
培養液から得られるダウンマイシン（米国特許第３，６
１６．２４２号明ｌｌｌ１書参照）およびアドリアマイ
シン（米国特許第 ３．５９０．０２８号明細書参照）が知られており、こ
れらの化合物は抗腫瘍剤として臨床的に広く利用されて
いる。しかし、これらの化合物は、強力な抗腫瘍作用を
示すものの副作用も強いため、必ずしも満足できるもの
ではない。

本発明のアンスラサイクリン化合物（詳細後記）に関連
する化合物として、ジュゼッッペ・カツシネリらは、本
発明化合物のリーディングコンパウンドであるＲ２０Ｙ
５をストレプトマイセス・ペウセティウス・バール・カ
ニシラス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｐｅｕｃｅｔｉｕ
ｓ　ｖａｒ、　ｃａｅｃｉｕｓ）の変異株すなわちスト
レプトマイセス・ベウセティウス・バール・オウレウス
（Ｓｔｒｃｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｐｅｕｃｅｔｉｕｓ　ｖ
ａｒ、　ａｕｒｃｕｓ）の培養液より取得し、これが抗
腫瘍活性を有することを報告している（特開昭５５−７
６８９６号公報）。また、ジュゼッッペ・カッシネリら
は本発明化合物のり−ディングコンパウンドであるＲ２
０Ｘをストレプトマイセス・ペウセティウス・バール・
カニシラス（ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｐｅｔ＋ｃｅ
ｔｉＵｓｖａｒ、　ｃａｅｓｉｕｓ）の変異株すなわち
ストレプトマイセス・ベウセティウス・バール・カルミ
ナタス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｃｓ　ｐｅｕｃｅｔｉｕ
ｓ　ｖａｒ、　　ｃａｒｍｉｎａｔｕｓ　）の培養液よ
り取得し、これが抗腫瘍活性を有することを報告してい
る（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　　Ｎａｔｕｒａｌ　Ｐｒｏ
ｄｕｃｔｓ、す（３）、　　４３５−４３９（１９８５
））。一方、梅沢らは、本発明のり−ディングコンバウ
ンドであるＲ２０Ｘ２　（Ｄ７８８−７＞　をストレプ
トマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）　Ｄ　７８８
の変異株すなわちストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｙｏ
ｍｙｃｅｓ）　ＲＭ　Ｐ　−５の培養液より取得し、こ
れが抗腫瘍活性を有することを報告している（特開昭６
１−３３１・９４号公報）。さらに、アンスラサイクリ
ン化合物のシアノモルフオリニル誘導体としてアドリア
マイシンおよびダウンマイシンの各種誘導体が合成され
て、その抗Ｉｔ！！瘍活性が報告されている（特開昭６
０−２２４６９６号公報、特開昭５９−３３２７８号公
報、特（；４昭５９−２１２４８４号公報、特開昭５９
−２１２４９９号公報、Ｅｄｗａｒｄ　Ｈ，Ａｃｔｏｎ
ｅｔ、　　ａｌ、　　：　　Ｊ、　　Ｈｅｄ、　　Ｃｈ
ｅｍ、、２７．６３８−６４５　（１９８４）　　、Ｂ
ｒａｎｉａ＋ｉｒ　１．５ｉｋｉｃ　ｅｔ、　ａｔ、：
　５ｃｉｅｎｃｅ、　２２８．１５４４−１５４６（１
９８５）参照）。

しかしながら、これらの化合物も、本発明者らの知る限
りにおいて、抗腫瘍活性または毒性の点において必ずし
も満足できるものではない。

アンスラサイクリン化合物は抗腫瘍剤として有用な一群
をなすものであるから、よりすぐれたアンスラサイクリ
ン化合物については不断の希求があるといえよう。

〔発明の概要〕

本発明は上記の希求に応えるものである。

すなわち、本発明によるアンスラサイクリン化合物は、
下式（Ｉ）で示されるものである。本発明は、この化合
物の酸付加塩にも関する。

本発明は、この化合物の用途にも関するものである。

すなわち、本発明による抗腫瘍剤は、下式（Ｉ）で示さ
れるアンスラサイクリン化合物またはその酸付加塩を有
効成分とするものである。

式中、ＲおよびＲ２はそれぞれ水素原子または水酸基で
あって、下記の組合せから選ばれる。

（イ）　　Ｒ：Ｈ、Ｒ２：Ｈ （ロ）　　Ｒ：０）−１、Ｒ２： Ｈ（ハ）　　Ｒ：ＯＨ、Ｒ２：ＯＨ 〔発明の詳細な説明） （１里文立１ １）化合物の種類 本発明による化合物は前記の式（Ｉ）で示されるが、Ｒ
およびＲ２の組合せが３種であるところから、この化合
物は３種に大別することができ、またそれぞれにつきシ
アノ基の立体配置に関して２種類の異性体が存在する。

これらの６種の化合物をその名称と共に一括して示せば
、下記の通りである。

ＨＨＣＮＭ−Ｒ２０Ｙ５−Ａ Ｂ ＯＨＨＣＮＭ−Ｒ２０Ｘ−Ａ Ｂ ＯＨＯＨＣＮＭ−Ｒ２０Ｘ２−Ａ Ｂ すなわち、ＣＮＭ−Ｒ２０Ｙ５−Ａおよび−Ｂは、アン
スラサイクリン化合物Ｒ２０Ｙ５、すなわち１３−デオ
キソ−１１−デオキシカルミノママイシン、の３′　−
デアミノ−３’　　−（３−シアノ−４−モルホリニル
）誘導体であって、下式（ＩＩ＞で示される化学構造を
有する。シアノ基の立体化学により２種類の異性体が存
在し、ＷｊＦＡクロマトグラフィーの挙動により一方を
ＣＮＭ　−Ｒ２０Ｙ５−Ａ、他方を−Ｂとする。

（ｎ） ＣＮＭ−Ｒ２０Ｘ−ＡＪ５Ｊ：び−Ｂ１．ｔ、アンスラ
サイクリン化合物Ｒ２０Ｘ、すなわち、１３−デオキソ
−カルミノマイシン、の３′　−デアミノ−３’　　−
（３−シアノ−４−モルホリニル）誘導体であって、下
式（ＩＩＩ）で示される化学構造を有する。シアノ基の
立体化学により２種類の異性体が存在し、薄層クロマト
グラフィーの挙動により一方をＣＮＭ−Ｒ２０Ｘ−Ａ、
他方を−Ｂとする。

（厘） ＣＮＭ−Ｒ２０Ｘ２−Ａおよび−Ｂは、アンスラサイク
リン化合物Ｒ２０Ｘ２、ずなわち１０−ヒドロキシ−１
３−デオキソカルミノマイシン、の３′−デアミノ−３
’−（３−シアノ−４−モルホリニル）誘導体であって
、下式（ＩＶ）で示される化学構造を有する。シアノ基
の立体化学により２種類の異性体が存在し、８層クロマ
トグラフィーの挙動により一方をＣＮＭ−Ｒ２０Ｘ２−
Ａ、他方を−Ｂとする。

（■ン これらの化合物はモルホリニル基由来の三級アミン窒素
原子を有するから、酸付加塩が存在する。

その場合の酸としては、合目的的な任意のもの、たとえ
ば、塩酸、ｆｉｔ酸、リン酸などの無掘酸、および酢酸
、プロピオン酸、マレイン酸、オレイン酸、パルミチン
酸、クエン酸、コハク酸、酒石酸、フマル酸、グルタミ
ン酸、パントテン酸、ラウリルスルホン酸などの有機酸
、がある。

２）物理化学的性状 本発明によるアンスラサイクリン化合物（ＣＮＮＩ？−
Ｒ２０物質）の物理化学的性状は表１および表２に示す
通りである。

表２　紫外部・可視部吸収スペクトル 表２　続き ロ　　ム　　の胛゛告 １）概要 本発明の３′−デアミノ−３’−（３−シアノ−４−モ
ルホリニル）誘導体は、微生物の培養によって産生され
るその粗化合物であるＲ２０Ｙ５、Ｒ２０ＸおよびＲ２
０Ｘ２の化学的修飾（Ｅｄｗａｒｄ　Ｈ，Ａｃｊｏｎ等
の還元アルキル化）によって製造することができる。

２ＪＲ２０Ｙ５、Ｒ２０ＸおよびＲ２０Ｘ２Ｒ２０Ｙ５
、Ｒ２０ｘおよびＲ２０Ｘ２は、本発明者らが分離した
アクチノマジュラ・ロゼオビオラセアＲ２０株またはそ
の変異株の培養物より取得することができる。なおＲ２
０Ｙ５、Ｒ２０ＸおよびＲ２０Ｘ２はともに公知物質で
あり、Ｒ２０Ｙ５は特開昭５５−７６８９６号公報の記
載の方法によっても製造することができ、Ｒ２０ＸはＪ
ｏｕｒｎａｌ　ｏｒ　Ｎａｔｕｒａｌ　Ｐｒｏｄｕｃｔ
ｓ　、　４８　（３）、４３５−４３９　（１９８５）
の記載の方法によっても製造することができ、Ｒ２０Ｘ
２は特開昭６１−３３１９４号公報の記載の方法によっ
ても製造することができることは前記したとおりである
。

（１）　　Ｒ２０株 アンスラサイクリン化合物Ｒ２０Ｙ５、Ｒ２０×および
Ｒ２０Ｘ２生産能を有するアクチノマジュラ属の菌株と
して、本発明者らの見出しているＲ２０株は、下記の内
容のものである。

■　由来および寄託番号 Ｒ２０株は福岡県嘉穂郡嘉穂町大字小野谷の野菜畑で採
取した土壌から分離されたものであり、昭和５８年７月
５日に工業技術院微生物工業技術研究所に寄託されて「
微工研条寄第９４５号」の番号を得ている。

■　菌学的性状および生理学的性質 国際放線菌命名委員会（ＩＳＰ）の方法便覧に従って行
なった本菌株の特徴づけは、下記のとおりである。

Ａ）　形態性状 基生菌糸は分枝しながら寒天培地表面に放射状に広がり
、菌糸の分断はｌｉ！察されない。空中菌糸は主軸を長
く伸ばし、短枝をほず直角（主軸に対して）に分校（単
軸分校）し、その先端に１０個内外またはそれ以上の胞
子からなる密な小螺旋状胞子ｖＡ（１〜３回転、径２．
０〜２．５μ）、ｔ；よび疑似胞子のう（径２．５〜３
．５μ）や胞子塊を形成する。

胞子鎖は幅０．５〜０．８μの円筒状のシースに覆われ
、その表面は粗面状を呈し、個々の胞子は指骨状に連結
する。胞子塊は不定形で、その胞子表面ば粘質状物質で
包まれている。ｉ離胞子はまれに観察され、円筒形また
は長円形、幅０．５〜０．８μ、長さ０．７〜１．１μ
、平滑表面を呈する。真正胞子のう、鞭毛胞子、菌核な
とは観、察されない。全細胞加水分解物中にメゾ型ジア
ノピメリン酸とマジュロースを含むことがら、細胞壁タ
イプは■Ｂと判断される。

Ｂ）　培養性状 多種培地における培養性状（２７℃培Ｍ）の観察結果は
、表３に示す通りである。

Ｃ）　生理的性状 生理的性状（炭素源の同化性を含む）は、表４に示す通
りである。

Ｄ）　考察および同定 本菌株は、’（１）細胞壁タイプがＩ［［Ｂであり、（
２）胞子鎖は１０個またはそれ以上の胞子からなり、（
３）疑似胞子のうや胞子塊を形成し、（４）真正胞子の
うおよび鞭毛胞子が観察されないことから、アクチノマ
ジュラ（Ａｃ　ｔ　ｉ　ｎｏｍａｄｕ　ｒａ　）属に所
属すると判断される。野々村の検索表〔醗工、第５２巻
、７１〜７７頁、１９７４年）と記載〔醗工、第４９巻
、９０４〜９１２頁、１９７１年〕より、本菌株はＡ、
ロゼオビオラセエ （Ａ、　ｒｏｓｅｏｖｉｏｌａｃｅａ）に最も近縁であ
ると判断される。

そこで、本菌株Ａ、ロゼオビオラセエの標準菌株（ＫＣ
ＣＡ−１４５（野々村Ａ−５＞）を同条件下で培養し、
両菌株の主要な性状について比較した。結果は表５に示
されるように、菌叢色、裏面色および最適成育温度に僅
少な差異がみられる・ものの、分類学的には極めてよく
類似している。

よって、本菌株は、アクチノマジュラ・ロゼオごオラセ
エ（＾ｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ　ｒｏｓｅｏｖｉｏｌａ
ｃｅａＮｏｎｏｍｕｒａ　ｅｔ　０ｈａｒａ　１９７１
）であると同定された。

（２）　　培養／Ｒ２０Ｙ５、Ｒ２０ＸおよびＲ２０Ｘ
２の生産 アンスラサイクリン化合物Ｒ２０Ｙ５、Ｒ２０×および
Ｒ２０Ｘ２は、アクチノマジュラ届に属するＲ２０Ｙ５
、Ｒ２０ＸおよびＲ２０ｘ２生産菌を適当な培地で好気
的に培養し、培養物ｈＸら目的物を採取することによっ
て％Ａ造することができる。

培地は、Ｒ２０Ｙ５、Ｒ２０ＸおよびＲ２０Ｘ２生産菌
が利用しうる任意の栄養源を含有するものでありうる。

具体的には、例えば、炭素源としてグルコース、シュー
クロース、マルトース、スターチ、および油脂類などが
使用でき、窒素源として大豆粉、綿実粕、肉エキス、ペ
プトン、乾燥酵母、酵母エキス、およびコーンスチープ
リカーなどの有機物並びにアンモニウム塩または硝酸塩
、たとえば硫酸アンモニウム、硝酸ナトリウム、および
塩化アンモニウムなどの無機物が使用できる。

また、必要に応じて、食塩、塩化カリウム、リンｌｌｌ
！２塩、重金属塩など無磯塩類を添加することができる
。発酵中の発泡を抑制するために、常法に従って適当な
消泡剤、たとえばシリコーンを添加することもできる。

培養方法としては、一般に行われている抗生物質の生産
の方法と同じく、好気的液体深部培養法が最も適してい
る。培養温度は２５℃〜４５℃が適当であるが、２７℃
〜３０℃が好ましい。この方法でＲ２０Ｙ５、Ｒ２０Ｘ
オヨヒＲ２０Ｘ　２＋７）生産量は、振盪培養、通気浣
拌培養共に６日〜７日で最高に達する。

このようにしてＲ２０Ｙ５、Ｒ２０ＸおよびＲ２０Ｘ２
の蓄積された培養物が得られる。培養物中では、Ｒ２０
Ｙ５、Ｒ２０ＸおよびＲ２０Ｘ２はその一部は菌体中に
存在するが、その大部分は培養か液に存在する。

このような培養物からＲ２０Ｙ５、Ｒ２０ＸおよびＲ２
０Ｘ２を採取するには、合目的的な任意の方法が利用可
能である。その一つの方法は、抽出の原理に基くもので
あって、その一つの方法には、たとえば、培養ン戸液中
のＲ２０Ｙ５、Ｒ２０ＸおよびＲ２０Ｘ２についてはこ
れを水不混和性（７）Ｒ２０Ｙ５、Ｒ２０Ｘｅ、、ｌ’
Ｒ２０Ｘ２用溶媒、たとえば酢酸エチル、クロロホルム
、ブタノールなどで抽出する方法（培Ｈｔ涙液は中性な
いし微塩基性であると抽出効率が良好である）、あるい
は菌体内のＲ２０Ｙ５、Ｒ２０ＸおよびＲ２０Ｘ２につ
いては濾過、遠心分離などで得た菌体集体をクロロホル
ム、酢酸エチル、ブタノール、メタノール、エタノール
、アセトン、塩酸溶液または酢酸溶液などで処理して回
収することができる。菌体を分離せずに培養物そのま・
を上記抽出操作に付すこともできる。適当な溶媒を用い
た向流分配法も抽出の範驕に入れることができる。

培養物からＲ２０Ｙ５、Ｒ２０ＸＪ５にびＲ２０×２を
採取する他の方法の一つは、吸着の原理に基くものであ
って、既に液状となっているＲ２０Ｙ５、Ｒ２０×およ
びＲ２０Ｘ２含有物、たとえば培養２戸液あるいは上記
のようにして抽出操作を行なうことによって得られる抽
出液、を対象として、適当な吸る剤、たとえば活性炭、
アルミナ、シリカゲル、「ダイヤイオンＨＰ２０Ｊ　　
（三菱化成社製）など、を用いたカラムクロマトグラフ
ィー、液体クロマトグラフィー、その他によって目的Ｒ
２０Ｙ５、Ｒ２０ＸおよびＲ２０Ｘ２を吸着させ、その
後溶離させることによって、Ｒ２０Ｙ５、Ｒ２０Ｘおよ
びＲ２０Ｘ２を得ることができる。このようにして得ら
れたＲ２０Ｙ５、Ｒ２０×およびＲ２０Ｘ２溶液を減圧
濃縮乾固すれば、Ｒ２０Ｙ５、Ｒ２０ＸおにびＲ２０Ｘ
２（７）Ｉ標品が得られる。

このようにして得られるＲ２０Ｙ５、Ｒ２０ＸおよびＲ
２０Ｘ２の粗標品からざらにＲ２０Ｙ５、Ｒ２０Ｘおよ
びＲ２０Ｘ２の精製品を分離精製するためには、上記の
抽出法および吸着法を必要に応じて組合せて必要回数用
いればよい。たとえば、シリカゲル、弱酸性イオン交換
樹脂、活性炭などの吸着剤またはゲル濾過剤を用いたカ
ラムクロマトグラフィー、適当な溶媒を用いた液体クロ
マトグラフィー、および向流分配法を適宜組合わせて実
施することができる。具体的には、たとえば、Ｒ２０Ｙ
５、Ｒ２０ＸおよびＲ２０Ｘ２粗標品を少量のクロロホ
ルムに溶解し、シリカゲルカラムを用いて、適当な溶媒
で展開して活性成分を溶出させ、溶出液を減圧濃縮後、
ざらにＴＬＣ″Ｃ−展開し、かきとって溶出させると、
Ｒ２０Ｙ５、Ｒ２０ＸおよびＲ２０Ｘ２が単一物質とし
て分離されるから、これを濃縮乾固すれば、Ｒ２０Ｙ５
、Ｒ’２０　ＸおよびＲ２０Ｘ２を得ることができる。

このようにして得られるＲ２０Ｙ５、Ｒ２０ＸおよびＲ
２０Ｘ２の理化学的性質は、次の表６の通りである。Ｒ
２０Ｙ５．Ｒ２０ＸおよびＲ２０Ｘ２に対するこれらの
値は、それぞれ特開昭５５−７６８９６号公報、Ｊｏｕ
ｒｎａｌ　ｏｆ　ＮａｔｕｒａｌＰｒｏｄｕｃｔｓ、　
４８（３）、４３５−４３９（１９８５）および特開昭
６１−３３１９４号公報記載の物理化学的性状とよく一
致している。

３）　　Ｒ２０Ｙ　５、Ｒ２０ＸおよびＲ２０Ｘ２の化
学的修飾 本発明のアンスラサイクリン化合物は、上記のようして
１！？たＲ２０Ｙ５、Ｒ２０ＸおよびＲ２０×２または
これらの酸付加塩を次の式（Ｖ）で示される化合物（ジ
グリコールアルデヒド）と反応させることにより製造す
ることができる。この化合物（Ｖ）は、メソ−エリスリ
トールからＣａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ　Ｒｅ５ｅａｒｃ
ｈ　、　３５．１９５〜２０２（１９７４）に記載の方
法により製造することができる。

ＣＨ３ＣＨＯ Ｒ２０Ｙ５、Ｒ２０ＸおよびＲ２０Ｘ２またはこれらの
酸付加塩と式（Ｖ）の化合物との反応は、溶媒中で実施
することが普通である。使用し得る溶媒としては、アセ
トニトリル、メタノール、エタノール、水、クロロホル
ム、ジクロロメタン、四塩化炭素、ベンゼン、ジオキサ
ン、テトラヒドロフラン等の単独または混合物がある。

この反応は、還元剤としてシアン水素化ホウ素ナトリウ
ム（ＮａＢＨ３０Ｎ）を用いるか、もしくはシアン化ナ
トリウム（ＮａＣＮ）あるいはシアン化カリウム（ＫＣ
Ｎ）等によるシアンイオンの存在下に還元剤として水素
化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ４）あるいはシアン水素
化ホウ素ナトリウム＜ＮａＢＨ３０Ｎ）等を用いて行な
う。還元剤の使用量は臨界的でなく、Ｒ２０Ｙ５、Ｒ２
０ｘおよびＲ２０Ｘ２の１モルに対して少なくとも１モ
ル、好ましくは１〜５モル、の準で使用することができ
る。

式（Ｖ）（７）化合物の使用ｆｍ　ハ、Ｒ２０Ｙ５、Ｒ
２０ＸおよびＲ２０Ｘ２の１モルに対して１．５モル以
上、好ましくは２〜１０モル、の割合であることが有利
である。

反応温度は、一般に、使用溶媒の凝固点乃至５０℃の範
囲内、特にｖ温付近、が適している。

上記反応条件下では、アミン基をモルフオリニル基に転
化する反応は、約１０分間乃至２時間で終了させること
ができる。

本発明の方法でＲ２０Ｙ５、Ｒ２０Ｘ、ｌ１５よびＲ２
０Ｘ２と式（■）の化合物との反応で得られる反応混合
物から本発明の目的化合物である３′−デアミノ−３’
−（３−シアノ−４−モルホリニル）誘導体を単離・精
製するには、アンスラサイクリン・グリコシドのＷ　Ｎ
Ｊ体製造の分野で用いられる公知の精製法、例えばシリ
カゲル等を用いるクロマトグラフィー、によることがで
きる。

このようにして得られる式（Ｉ）で示される３′−デア
ミノ−３’−（３−シアノ−４−モルホリニル）誘導体
は、それ自体公知の方法に従ってその酸付加塩、例えば
塩酸、ｌｉｉ！ｔＰａ、リン酸などの無機酸、或いは酢
酸、プロピオン酸、マレイン酸、オレイン酸、バルミチ
ン酸、クエン酸、コハク酸、酒石酸、フマル酸、グルタ
ミン酸、パントテン酸、ラウリルスルホン酸などの有機
酸、で処理することによりその酸付加塩に変えることが
できる。

本発明化合物の用途 本発明によるアンスラサイクリン化合物は、後述するよ
うに白血病培養ｍ胞Ｐ３８８に対して強い増殖阻止作用
を有し、制癌剤として有用な化合物である。

１）生理活性 （１）　　抗腫瘍性 本発明化合物は、マウス白血病培養細胞Ｐ３８８の増殖
を抑制する作用を有する。たとえば、１０％牛脂児血清
を含むＲＰＭＩ　　１６４０ＩｍへＰ３８８１１を５ｘ
１０’　個／１ｔｔｐ接＋！ｌ、その中に本物質を０．
１〜２０　ｎｇ／−の濃度で添加して３７℃にて炭酸ガ
ス培養器中で２日間培養し、対照区に対する５０％増殖
阻害濃度（ＩＣ５ｏ）を求めた。表７にその結果を示す
。

以上の結果に示されるように、本発明化合物は、マウス
白血病細胞Ｐ３８８に対してザめて低濃度で増殖を阻止
することから、制癌剤としての用途が期待される。

２）抗腫瘍剤 このように、本発明のアンスラサイクリン化合物は、動
物の腫瘍、特に損性腫瘍、に対して抗腫瘍性を示すこと
が明らかにされた。

したがって、本発明化合物は抗腫瘍剤ないし腫瘍治療剤
として使用することができる。

抗腫瘍剤としての本発明化合物は合目的的な任意の投与
経路で、また採用投与経路によって決まる剤型で、投与
することができる。薬剤としては製糖上許容される担体
ないし希釈剤で希釈された形態がふつうである。

抗腫瘍剤として本発明化合物を実際に投与する場合には
、これを注射用蒸留水または生理食塩水に溶解して注射
する方法が代表的なものの一つとして挙げられる。具体
的には、動物の場合は腹腔的注射、皮下注射、静脈また
は動脈への血管内注射および局所投与などの注射による
方法が、ヒトの場合は静脈または動脈への血管内注射ま
たは局所投与などの注射による方法がある。

本発明化合物の投与量は、動物試験の結果および種々の
情況を勘案して、連続的または間けつ的に投与したとき
に総投与セが一定量を越えないように定められる。具体
的な投与ａは、投与方法、患者または被処理動物の状況
、たとえば年令、体重、性別、感受性、食餌、投与時間
、併用する薬剤、患者またはその病気の程度に応じて変
化することはいうまでもなく、また一定の条件のもとに
おける適齢と投与回数は、上記指針を基として専門医の
適量決定試験によって決定されなければならない。

実　　験　　例 本発明化合物の原料となるＲ２０Ｙ５、Ｒ２０×および
Ｒ２０Ｘ２の製造法を実施ＴｆＡ１および実施例２にお
いて例示し、ＣＮＭ−Ｒ２０Ｙ５−ＡおよびＢの＠Ａ造
法を実施例３に、ＣＮＭ−Ｒ２０Ｘ−ＡおよびＢの製造
法を実施例４に、ＣＮＭ−Ｒ２０Ｘ２−ＡおよびＢの製
造法を実施例５に例示する。

以下において「％」は「ｗ／■％」である。

支ｉ■ユ（Ｒ２０Ｙ　５、Ｒ２０１５Ｊ：びＲ２０Ｘ２
の製造） （１）　　種母の調製 使用した培地は、下記の組成の成分を１リツトルの水に
溶解してｐＨ７，２に調製したものである。

ブドウ糖　　　　　　　　　　０．４％Ｍ母エキス　　
　　　　　　０．４％ 麦芽エキス　　　　　　　　ｉ、ｏ％ 上記培地１０Ｃ）ｔｅを５００ｄ三角フラスコに分注殺
菌し、アクチノマジュラ・ロゼオビオラセエＲ２０をス
ラントより１白金耳接種し、２７℃にて５日間ロータリ
ーシェーカー（２０Ｏｒｐｍ）で培養したものを種母と
した。

（２）　　　培　　養 使用した培地は、下記の組成の成分を１リフドルの水に
溶解してｐＨ６，８に調製したちのである。

ブドウ糖　　　　　　　　　　０．５％麦芽糖　　　　
　　　　　　４．０％ 魚　　粉　　　　　　　　　　　　　　　　　２．０％
ｌＩ？母エキス　　　　　　　　０．２％乾燥酵母　　
　　　　　　　０．２％ 炭酸カルシウム（沈降性）　０．４％ 上記培地２００リツトルを３００リツトル容ジャーファ
ーメンタ−に入れて殺菌したものへ、上記種母２０本分
を接種した。通気１１　ｖ、ｖ、ｍ　、回転数２００回
／分、２７℃で１０日間培養を行った。

実施例２　（Ｒ２０Ｙ５、Ｒ２０ＸおよびＲ２０Ｘ２の
製造） 実施例１で得られた培養液をｉ濾過し、菌体とン涙液と
を分離した。炉液を５Ｎ＊酸化ナトリウムでｐＨ９，０
に調整し、［ダイヤイオンＰＡ３０８ｊ（三菱化成社製
）のカラム２０Ｘ１００ｏｎに吸着させた。蒸留水で洗
浄した後、酢酸−メタノール（１：９９）混液で溶出さ
せた。溶出液に濃アンモニア水を加えてアルカリとした
後、濃縮し、この濃縮液をｐＨ８，，５に調整して、ク
ロロホルム−メタノール（９：　１　）混液で３回反復
抽出した。

この抽出液を濃縮後、６倍量のヘキサンを加えて生じた
沈殿を乾燥すると、３２００ｑの黒赤色粉末が１ｑられ
た。これを更にクロロホルム：メタノール：水＝７０：
１０：１で平衡化したシリカゲルカラム（メルク社［シ
リカゲル６０Ｊ　、５ｘ４０　ｃｍ　）にのせ、Ｒ２０
Ｙ５、Ｒ２０ＸおよびＲ２０Ｘ２の画分を分画した。得
られた両分を減圧乾固した後、クロロホルム：メタノー
ル：酢酸：水＝４０：８：　１　：　１（７）１媒系で
用いてＴＬｃ（メルク社「シリカゲル６ｏ」）にて展開
し、Ｒｏｆ、値０．５０．０．４８ｔ−ｉにびｏ、３５
付近のバンドをそれぞれがきとり、クロロボルム−メタ
ノール（１０：１）で溶出させた。このようにして、Ｒ
２０Ｙ５　１４５ｑ、Ｒ２０Ｘ　　２２０　ｍｇおよび
Ｒ２０Ｘ　２　２５　ｍｇを得た。

実施例３ （３′−デアミノ−３’−（３−シアノ−４−モルホリ
ニル）−Ｒ２０Ｙ５−、ＡおよびＢの製造）Ｒ２０Ｙ５
　５７０１１１９（１，１７９ミリモル）をメタノール
／クロロホルム（１／１）の混液５０ｄに溶解させ、ジ
グリコールアルデヒド２８０＋１！９（２，３５８ミリ
モル）及びシアン水素化ホウ素ナトリウム１４８Ｒ９（
２，３５８ミリモル）を添加して、室温で１時間反応さ
せる。反応終了後、反応液を７０Ｉｄ、の水で希釈し、
クロロホルム層を分離し、水層をさらにクロロホルム５
０ｄで２回抽出し、クロロホルム層を５（７の水で数回
洗浄する。

クロロホルム層を無水硫酸ナトリウムで脱水後、減圧濃
縮乾固物を酢酸エチル５０ｍ１に溶解し、０．２％リン
酸氷水５０＃ｌｉ！数回洗浄する。酢酸エチル層を無水
硫酸ナトリウムで脱水後、減圧濃縮乾固し、シリカゲル
カラムクロマトグラフィー（メルク社［シリカゲル６０
Ｊ、２３０〜４００メツシユ）に供し、クロロホルム：
メタノール（２００：３）の混合溶媒により溶出させて
、３′　−デアミノ−３’　　−（３−°シアノー４一
を得た。混合物を、クロロホルム：メタノール（１０：
１）の溶媒系を用いて薄層クロマトグラフィー（メルク
社「シリカゲル６０」）にて展開し、Ｒｆ値約０．５１
および約０．５４の黄色画分をかきとった。このように
して得られた両分をン容出、濃縮し、りｏＯホルム／ヘ
キサンにより結晶化して、ＣＮＭ−Ｒ２０Ｙ５−△　１
．０勺およびＣＮＭ−Ｒ２０Ｙ５−８　　１．５ηを青
た。

見上ＩＡ （３′−デアミノ−３’−（３−シアノ−４−モルホリ
ニル）−Ｒ２０Ｘ−ＡおよびＢの製造）Ｒ２０Ｘ　　３
３０＋１１４Ｆ（０．６７３ミ’）モル）をメタノール
２０ｍに溶解させ、ジグリコールアルデヒド４０４ｎ＋
ｇ（３．３６４ミリモル）のアセトニトリル／水＜１／
１）溶液１００ｄ、及びシアン水素化ホウ素ナトリウム
８４．　５ｆｆｉ９（１．３４５ミリモル）のアセトニ
トリル／水（１／１）溶液１０ｒｄ！を添加して、室温
で１時間反応させる。反応終了後、反応液を減圧濃縮し
、クロロホルム３０ｍで２回抽出を行い、クロロホルム
層を３０ｄの水で数回洗浄する。クロロホルム層を無水
硫酸ナトリウムで脱水後、減圧濃縮乾固する。濃縮乾固
物を酢酸エチル３０ｍに溶解し、０、２％リン酸氷水３
０ｉｎｅ数回洗浄する。酢酸エチル層を無水硫酸ナトリ
ウムで脱水後、減圧濃縮乾固した．濃縮乾固物をクロロ
ホルム：メタノール（１０：１）の溶媒系を用いて簿Ｂ
クロマトグラフィー（メルり社「シリカゲル６０」）に
て展開し、Ｒｆ値約０．５１および約０．５４の赤色画
分をかきとった。このようにして得られた両分を溶出、
濃縮し、クロロホルム／ヘキサンにより結晶化して、Ｃ
ＮＭ−Ｒ２０Ｘ−Ａ　　２．１１９およびＣＮＭ−Ｒ２
０Ｘ−８　　４．２＊ｌ！だ。

支見丘工 （３′　−デアミノ−３’　　−　（３−アミノ−４−
モルホリニル）−Ｒ２０Ｘ２−ＡおよびＢの製造）Ｒ２
０Ｘ２　　６５０■（１．２６３ミリモル）をメタノー
ル／クロロホルム（１／１）の混液６０ｄに溶解させ、
ジグリコールアルデヒド３００ｑ（２．５２６ミリモル
）及びシアノ水素化ホウ素太トリウム１５９ＩＲｇ＜２
．５２６ミリモル）を添加して室温で１時間反応させる
。反応終了後、反応液を９０ｍの水で希釈し、クロロホ
ルム層を分離し、水層をさらにクロロホルム５（７で２
回抽出し、クロロホルム層を５０成の水で数回洗浄する
。クロロホルム層を無水硫酸ナトリウムで脱水後、減圧
濃縮乾固し、その乾固物を酢酸エチル５０威に溶解し、
０．２％リン酸氷水５０ｄ数回洗浄する。酢酸エチル層
を、無水硫酸ナトリウムで脱水後、減圧濃縮乾固した。

濃縮乾固物をクロロホルム：メタノール（１０：１）の
溶媒系を用いて薄層クロマトグラフィー（メルク社「シ
リカゲル６０」）にて展開し、Ｒｆ値約　１０、４０お
よび約０．４３の赤色画分をかきとった。このようにし
てｉ９られた両分を溶出、濃縮し、クロロホルム／ヘキ
サンにより結晶化して、ＣＮＭ−Ｒ２０Ｘ２−△　１．
４ηＬ１−３よびＣＮＭ　−Ｒ２０Ｘ２−８１．２ｒｎ
ｇを得た。

【図面の簡単な説明】

第１図は、ＣＮＭ−Ｒ２０Ｙ５−Ａの紫外部・可視部吸
収スペクトル図を模写したものである。 １、メタノール中 ２、アルカリ性メタノール中 同様にして、第２図ｔよＣＮＭ　−　Ｒ２０Ｙ５−８の
、第３図はＣＮＭ−Ｒ２０Ｘ−Ａの、第４図はＣＮＭ−
Ｒ２０Ｘ−Ｂの、第５図はＣＮＭ−Ｒ２０Ｘ２−Ａの、
第６図はＣＮＭ−Ｒ２０Ｘ２−Ｂの、紫外部・可視部吸
収スペクトル図を模写したものである。 第７図は、ＣＮＭ−　Ｒ２０Ｙ５−Ａの赤外吸収スペク
トル図を模写したものである。 同様にして、第８図はＣＮＭ−Ｒ２０Ｙ５−Ｂの、第９
図はｃＮＭ−Ｒ２０Ｘ−Ａ（７）、第１０図はＣＮＭ−
Ｒ２０Ｘ−Ｂの、第１１図はＣＮＭ−Ｒ２０Ｘ２−Ａの
、第１２図はＣＮＭ−　Ｒ２０×２−８の、赤外吸収ス
ペクトル図を模写したちのであ、る。 第１３図は、ＣＮＭ−Ｒ２０Ｙ５−Ａの重クロロホルム
中での　１Ｈ−ＮＭＲスペクトル図を模写したものであ
る。 同様にして、第１４図はＣＮＭ−Ｒ２０Ｙ５−Ｂ（７）
、第１５図はＣＮＭ−Ｒ２０−Ｘ−Ａ（７）、第１６［
ＩＣＮＭ−Ｒ２０Ｘ−８の、第１７図はＣＮＭ−Ｒ２０
Ｘ２−Ａの、第１８図はＣＮＭ−Ｒ２０Ｘ２−Ｂ（７）
　１Ｈ−ＮＭＲスペクトＡｚ図を模写したものである。 第１９図は、Ｒ２０Ｙ５の紫外部・可視部吸収スペクト
ル図を模写したものである。 １、メタノール中 ２、酸性メタノール中 ３、アルカリ性メタノール中 同様にして、第２０図はＲ２０Ｘの、第２１図は、Ｒ２
０Ｘ２の、紫外部・可視部吸収スペクトル図を模写した
ものである。 第２２図は、Ｒ２０Ｙ５の赤外吸収スペクトル図を模写
したものである。 同様にして、第２３図はＲ２０Ｘの、第２４図はＲ２０
Ｘ２の、赤外吸収スペク１〜ル図を模写したものである
。 第２５図は、Ｒ２０Ｙ５の重クロロボルム中での１Ｈ−
ＮＭＲスペクトル図を模写したものである。 同様にして、第２６図はＲ２０Ｘの、第２７図はＲ２０
Ｘ２の、’Ｈ−ＮＭＲスペクトル図を模写したものであ
る。 出願人代理人　　佐　　藤　　−雄 εに　　　　　　　　第１９図 波　長　（１ｍ） 濃　長　（諧〕 Ｓ（卿） 手続補正書 昭和６２年５月２２日

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、下式（ I ）で示されるアンスラサイクリン化合物
   またはその酸付加塩。 ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｉ） 式中、Ｒ＿１およびＲ＿２はそれぞれ水素原子または水
   酸基であつて、下記の組合せから選ばれる。 （イ）Ｒ＿１：Ｈ、Ｒ＿２：Ｈ （ロ）Ｒ＿１：ＯＨ、Ｒ＿２：Ｈ （ハ）Ｒ＿１：ＯＨ、Ｒ＿２：ＯＨ ２、下式（ I ）で示されるアンスラサイクリン化合物
   またはその酸付加塩を有効成分とする抗腫瘍剤。 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） 式中、Ｒ＿１またはＲ＿２はそれぞれ水素原子または水
   酸基であって、下記の組合せから選ばれる。 （イ）Ｒ＿１：Ｈ、Ｒ＿２：Ｈ （ロ）Ｒ＿１：ＯＨ、Ｒ＿２：Ｈ （ハ）Ｒ＿１：ＯＨ、Ｒ＿２：ＯＨ