JPH0353891A - 新抗生物質ｓｆ２１９７ｃ物質およびその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は新抗生物質ＳＦ２１９７Ｃ物質，およびアクチ
ノマデュラ属に属する微生物による新抗生物質ＳＦ２１
９７Ｃ物質の製造法に関するものである。

［従来の技術および発明が解決しようとする課題１従来
，微生物が生産する種々の抗生物質が知られており，医
薬品，動物薬，農薬等の分野で実用化されている。しか
しながら，耐性菌の出現等の問題から現在も新規な抗生
物質の出現が常に求められている。

［課題を解決するための手段１ 本発明者らは，先に特定の微生物を培養することにより
，強い抗菌作用を有する物質が培養液中３ に生産，蓄積されることを見いだし，その有効物質を採
取することに成功し，ＳＦ２１９７Ａ物質およびＢ物質
と命名し特許出願を行った（特開昭６０−８３５８５お
よび特開昭６１−１４１８８９）。　本発明者らはこれ
と同一菌株の培養液中に他の新規な有効物質が生産され
ていることを見いだし，該物質を単離し抗生物質ＳＦ２
１９７Ｃ物質と命名した。

本発明は上記の知見に基づいて完或されたものである。

即ち，本発明の第ｌの要旨は，新抗生物質ＳＦ２１９７
Ｃ物質に関する発明であって，本物質の理化学的および
生物学的性状は次の通りである。

（１）ＳＦ２１９７Ｃ物質の理化学的性状１）外観：無
色針状結晶 ２）融点＝５４°Ｃ ３）比旋光度：〔α）：０＝　−　３７．２゜（Ｃ１，
メタノール） ４）元素分析値：炭素５９．６％，水素９．３％，窒素
１１．３％ ５）質量分析：　ＦＤ−ＭＳにより分子イオンピークｍ
　／　ｚ　４４０（Ｍ　”）が認められた。

６）分子式：Ｃ２２Ｈ４ｏＮ４０５ ７）紫外部吸収スペクトル：特徴的吸収を示さない。

８）赤外部吸収スペクトル：第１図に示す通りである。

９）’Ｈ−ＮＭＲスペクトル：第２図に示す通りである
。

ｌＯ）ｌ３Ｃ−ＮＭＲスペクトル：第３図に示す通りで
ある。

１１）　溶解性：メタノール，クロロホルム，アセトン
，酢酸エチルに可溶。水，ｒｒ ヘキサンに不溶。

１２）呈色反応：レミュー，ヨウ素試薬および塩化第二
鉄試薬に陽性。ニンヒド リン試薬に陰性。

１３）薄層クロマトグラフィ一二 シリカゲル薄層（メルク社製，　Ａｒｔ５７１４）を使
用し，展開溶媒がクロロホルム−メタノール（１０：１
）の場合　Ｒｆ値０．３９，　　トルエンアセトン（１
：１）の場合　Ｒｆ値０．４４上記の理化学的性状およ
びＮＭＲなどによる構造解析の結果，本物質の構造は下
式のごとく決定された。

ＣＨ， １ （２）　Ｓ．Ｆ　２　１　９　７Ｇ物質の生物学的性状
本発明によるＳＦ２１９７Ｇ物質の好気性細菌に対する
最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）を第１表に，嫌気性細菌に
対する旧Ｃを第２表に，　またキャンビロバクターに対
するＭＩＧを第３表に示す。　これらの表が示すように
，ＳＦ２１９７Ｃ物質は種々のダラム陽性菌，ダラム陰
性菌，マイコプラズマ，トレポネーマ等に抗菌活性を有
し，特に嫌気性菌およびキャンピ口バクターに対して優
れた抗菌力を示す。従って，これらの細菌に起因する人
．動物の疾病の予防及び治療に用いることが出来る。

＝７ 第１表 被 検 菌 ＭＩＣ（μｇ７ｍＱ） 培地 培地ｌ ：　Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ　Ｄｉｓｋ　Ａｇａｒ−Ｎ
（Ｎｉｓｓｕｉ）培地２ ：１５％馬血清添加ＰＰＬＯ　Ｂｒｏｔｈ（Ｄｉｆｃｏ
）８ 第２表 被 検 苗 ＭＩＣ（μｇ／ｍ（２） 培地 ５４６２ ０．０２５ １ 培地ｌ ：　ＧＡＭ　　Ａｇａｒ （Ｎｉｓｓｕｉ） 培地２ ＝５％馬血液添加Ｔｒｙｐｔｉｃａｓｅ　Ｓｏｙ　Ａｇ
ａｒ（ＢＢＬ） 第３表 被検菌　　ＭＩＣ（μｇ／ｍ（１） 培地：５％馬血液添加Ｈｅａｒｔ　ｌｎｆｕｓｉｏｎ　
Ａｇａｒ（Ｄｉｆｃｏ） （３）ＳＦ２１９７Ｃ物質の急性毒性 マウスに対する急性毒性試験では，　１００ｍｇ／ｋｇ
の腹腔内投与で全例生存し．何らの異常も認められなか
った。

本発明の第２の要旨とするところは，アクチノマデュラ
属に属する新抗生物質ＳＦ２１９７Ｃ生産菌を培養し，
その培養物から新抗生物質ＳＦ２１９７Ｃ物質を採取す
ることを特徴とする新抗生物質ＳＦ２１９７Ｃ物質の製
造法にある。

（１）ＳＦ２　１　９７ｃ物質の生産菌本発明に使用さ
れるＳＦ２１９７Ｃ物質の生産菌の一例としては，特開
昭６０−８３５８．．５の「新規抗生物質ＳＦ２１９７
Ａ物質及びその製造法」及び特開昭６１−１４１８８９
の「新抗生物質ＳＦ２１９７Ｂ物質及びその製造法」に
菌学的性状を記載した放線菌ＳＦ２１９７株がある。こ
れらの特許明細書の中で本発明者らはＳＦ２１９７株が
放線菌の中でミクロヒスポラ（Ｍｉｃｒｏｂｉｓｐｏｒ
ａ）属に属するものと判断し，本菌株をミクロビスボラ
・エスビー・Ｓ　Ｆ　２　１　９７　（Ｍｉｃｒｏｂｉ
ｓｐｏｒａｓｐ．ｓＦ２１９７）と呼称した。しかし，
その後の詳細な分類学的研究の結果，ＳＦ２１９７株は
アクチノマデュラ属の新種であることが判明し，アクチ
ノマデュラ・アトラメンタリア（Ａｃｔｉｎｏｍａｄｕ
ｒａａｔｒａｍｅｎｔａｒｉａ）と命名された。これら
の結果はｌｎｌＪ．Ｓｙｓｔ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．．
　３７：３４２−３４６（１９８７）に掲載され，本菌
名は既に承認名とされている。　従って，本発明者らは
ＳＦ２１９７株の菌学的性状をこの文献に記載の通りと
し，また工業技術院微生物工業技術研究所に受託されて
いる微工研菌寄第７２１３号（ＦＥＲＭ　Ｐ−７２１３
）のミクロビスポラ・エスピー・ＳＦ２１９７をアクチ
ノマデュラ・アトラメンタ１ｌ リア・ＳＦ２１９７と改名した。ＳＦ２１９７株は他の
放線菌に見られるように，その性状か変化しやすい。例
えば，ＳＦ２１９７株に由来する突然変異株（自然発生
または誘発性），形質接合体または遺伝子組換え体であ
っても，ＳＦ２１９７Ｃ物質を生産するものは全て本発
明に使用出来る。

（２）ｓｐ２ｆ９７ｃ生産菌の培養法 本発明の方法では，前記の菌を通常の微生物が利用しう
る栄養物を含有する培地で培養する。栄養源としては，
従来放線菌の培養に利用されている公知のものが使用で
きる。例えば，炭素源として，グルコース，水あめ，デ
キストリン，グリセリン，糖みつ，動・植物油等を使用
しうる。また窒素源として，大豆粕，小麦胚芽，コーン
スティープリカー，綿実粕，肉エキス，ペプトン，酵母
エキス，硫酸アンモニウム，硝酸ソーダ，尿素等を使用
しうる。その他．必要に応じ，ナトリウム，カリウム，
カルシウム，マグ不シウム，コバルト塩素，燐酸，硫酸
，およびその他のイオンを生戊ｌ２ することができる無機塩類を添加することは有効である
。また菌の発育を助け，ＳＦ２１９７Ｃ物質の生産を促
進するような有機および無機物を適当に添加することが
できる。

培養法としては，好気的条件での培養法，特に深部培養
法が最も適している。培養に適当な温度は２０’０−３
５°Ｃであるが，多くの場合，２５°Ｏ−３２℃で培養
する。ＳＦ２１９７Ｃ物質の生産は培地や培養条件によ
り異なるが．振盪培養，タンク培養のいずれにおいても
通常２〜７日の間でその蓄積が最高に達する。培養中の
ＳＦ２１９７Ｃ物質の蓄積量が最高になった時に培養を
停止し，培養液から目的物質を単離精製する。

（３）ＳＦ２１９７Ｃ物質の抽出・精製法本発明によっ
て得られるＳＦ２　１　９７Ｃ物質の培養液からの採取
に当たっては，その性状を利用した通常の分離手段，例
えば，溶剤抽出法，イオン交換樹脂法，吸着または分配
力ラムクロマト法，ゲル濾過法，沈澱法等を単独でまた
は適宜組み合わせて抽出精製することができる。　例え
ば，培養濾液中のＳＦ２１９７Ｃ物質は合或吸着剤であ
るダイヤイオンＨＰ−２０　（三菱化成社製）等に吸着
され，アセトン水等で溶出される。ＳＦ２１９７Ｃ物質
を更に精製するには，シリカゲル（ワコーゲルＣ−２０
０．和光純薬工業社製等），アルミナ等の吸着剤やセフ
ァデックスＬＨ−２０（ファルマシア社製）トヨパール
ＨＷ−４０（東ソー社製）等を用いるクロマトグラフィ
ーを行うとよい。

以下に本発明の実施例を示すが，これらは単なる一例で
あって本発明を限定するものではない。

ここに例示しなかった多くの変法あるいは修飾手段を用
いうろことは勿論のことである。

実施例ｌ 種培地として，スターチ２．０％，グルコース１．０％
，ポリペプトン０．５％，小麦胚芽０．６％，酵母エキ
ス０，３％．大豆粕０．２％及び炭酸カルシウム０．２
％（殺菌前ｐＨ７．０）の組戒からなる培地を用いた。

また，生産培地として，大豆油０．７％，酢酸ナトリウ
ム０．５％　コーンスティーブリ力−３．０％脱脂ぬか
１，０％，硫酸マグ不シウム（７水塩）０．２％，硫酸
銅（５水塩）０．００１％及び食塩０２％（殺菌前ｐＨ
７．０）の組成からなる培地を用いた。

前記の種培地２０ｍｌ２を分注した１００ｍｆｆ容三角
フラスコを１２０℃で１５分間殺菌し，これにアクチノ
マデュラ・アトラメンタリア・ＳＦ２１９７株（　ＦＥ
ＲＮｐ−７２１３）の斜面寒天培養の２〜３白金耳を接
種し，２８℃で５日間振盪培養し，第１種培養とした。

次いで，種培地８０ｍｆｆを分注した５００ｍＱ容三角
フラスコを１２０℃で１５分間殺菌し，前記第１種培養
４ｍＱを接種し，２８°Ｃで２日間振盪培養し，これを
第２種培養とした。更に，種培地１Ｑを分注した５Ｑ容
三角フラスコを１２０℃で３０分間殺菌し，第２種培養
８０＋Ｊを接種し，２８℃で１日間振盪培養し，これを
第３種培養とした。

予め１２０℃で３０分間殺菌した３５（の種培地を含む
５０Ｑ．容ジャー・フアーメンターに，前記の第３種培
養１４を接種し．２８℃で１日間通気（２０Ｍ分），撹
拌（２０Ｏｒｐｍ）培養し，これを第４種培養とした。

ｌ５ 予め，ｌ２０℃で３０分間殺菌した２００ａの生産培地
を含む３００Ｑ容タンク２基に，前記の第４種培養を各
１００．ずつ接種し，３２℃で２日間通気（１００１２
／分），撹拌（１２Ｏｒｐｍ）培養した。　培養終了後
，濾過助剤として珪藻土を加えて濾過し，濾液３５０氾
を得た。

実施例２ 実施例ｌで得られた培養濾液３５０Ｑを，ダイヤイオン
ＨＰ−２０（三菱化戒社製）１７Ｑに吸着させ，水洗後
５０％メタノール水で予洗した。　有効戊分を８０％ア
セトン水５０Ｉ２で溶出し，溶離液を１５Ｑまで濃縮後
，　１８１２の酢酸エチルで抽出した。抽出液を濃縮乾
固しＳＦ２１９７Ｃ物質を含む油状物３５ｇを得た。こ
の油状物をシリカゲル力ラム（ワコーゲルＣ２００，和
光純薬社製）３００ｍＱのカラムに付し，クロロホルム
ｌ．５Ｑで洗った後，クロロホルム−メタノール（５０
：　１）２（２，クロロホルム−メタノール（２０：１
）２１２で順次溶出し，　１００ｍｌ２ずつ分画した。

活性画分を集めて濃縮乾固し，ＳＦ２１９７Ｃ物質を含
む油状物１５ｇを得た。この油状物を再度シ１６ リカゲル力ラム（ワコーゲルＣ−２００）２００ｍ４の
カラムに付し，クロロホルムＩＱ，　　クロロホルム−
メタノール（５０：１）ＩＱ，　　クロロホルム−メタ
ノール（２０：１）ｌ（２の順に溶出した。活性画分を
集め濃縮乾固し，ＳＦ２１９７Ｃ物質の粗油状物８ｇを
得た。この粗油状物８ｇをメタノールで平衡化したセフ
ァデックスＬＨ−２０　（ファルマシア社製）５００ｍ
Ｑのカラムに付し同溶媒で展開した。活性画分を集め濃
縮乾固し，３ｇの油状物を得た。この油状物をアセトン
５ｍｌ２に溶解し，予めｎ−ヘキサンで充填したワコー
ゲルＣ−３００　　１００ｍｆ２のカラムに吸着せしめ
ｎ−ヘキサンーアセトン（１：１）の混合溶媒で展開し
ＳＦ２１９７Ｃ物質を含有する画分６００ｍ＋２を得た
。　この活性画分を減圧濃縮し少量のメタノールに溶解
し，予めメタノールで平衡化したトヨバールＨＷ−４０
　（東ソー社製）　３００ｎ＋Ｉ２のカラムにかけ同溶
媒で展開した。活性画分を集め濃縮乾固し８２０ｍｇの
油状物を得た。これを３ｍＱのメタノールに溶解し，１
ｍ＋２ずつを高速液体クロマトグラフィー分取用逆相カ
ラムＳ−３４３　（山村化学研究所製ＯＤ５　，２０Ｘ
　２５０ｍｍ）にチャージし，７０％メタノール水にて
流速５ｍ（２／ｍｉｎで溶出した。　バチルス・ズブチ
リス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｓｕｂｔｉｌｉｓ）に活性を
示す分画を集め濃縮乾固し，ＳＦ２１９７Ｃ物質の粗粉
末２４０ｍｇを得た。この粗粉末を少量のアセトンに溶
解しｎ−ヘキサンを加え放置し，ＳＦ２１９７Ｃ物質８
０ｍｇを無色針状結晶として単離した。

［発明の効果］ 本発明の新抗生物質ＳＦ２１９７Ｃ物質は各種の細菌に
対し優れた抗菌活性を有するので、抗菌剤としての有用
性が期待できる。

【図面の簡単な説明】

第１図は，抗生物質ＳＦ２１９７Ｃ物質の臭化カリウム
錠での赤外部吸収スペクトルを示す。 第２図は，抗生物質ＳＦ２１９７Ｃ物質のジメチルスル
ホキシドーｄ　溶液中での’Ｈ　−Ｎ　Ｍ　Ｒス６ ベクトルを示す。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）下記の理化学的性質を有する新抗生物質ＳＦ２１
   ９７Ｃ物質 １）外観：無色針状結晶 ２）融点：５４℃ ３）比旋光度：〔α〕＾２＾０＿Ｄ＝−３７．２゜（ｃ
   １、メタノール ４）元素分析値：炭素５９．６％、水素９．３％、窒素
   １１．３％ ５）質量分析：ＦＤ−ＭＳにより分子イオンピーク ￥ｍ￥／￥ｚ￥４４０（Ｍ＾＋）が認められた。 ６）分子式：Ｃ＿２＿２Ｈ＿４＿０Ｎ＿４Ｏ＿５７）紫
   外部吸収スペクトル：特徴的吸収を示さない。 ８）赤外部吸収スペクトル：第１図に示す通りである。 ９）＾１Ｈ−ＮＭＲスペクトル：第２図に示す通りであ
   る。 １０）＾１＾３Ｃ−ＮＭＲスペクトル：第３図に示す通
   りである。 １１）溶解性：メタノール、クロロホルム、アセトン、
   酢酸エチルに可溶。 水，ｎ−ヘキサンに不溶。 １２）呈色反応：レミュー、ヨウ素試薬および塩化第二
   鉄試薬に陽性。 ニンヒドリン試薬に陰性。 １３）薄層クロマトグラフィー： シリカゲル薄層（メルク社製，Ａｒｔ５７１４）を使用
   し展開溶媒がクロロホルム−メタ ノール（１０：１）の場合Ｒｆ値０．３９、展開溶媒ト
   ルエン−アセトン（１：１） の場合Ｒｆ値０．４４
2. （２）アクチノマデュラ属に属する新抗生物質ＳＦ２１
   ９７Ｃ生産菌を培養し、その培養物から新抗生物質ＳＦ
   ２１９７Ｃ物質を採取することを特徴とする新抗生物質
   ＳＦ２１９７Ｃ物質の製造法。