JPS6236675B2 - - Google Patents
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- JPS6236675B2 JPS6236675B2 JP17092779A JP17092779A JPS6236675B2 JP S6236675 B2 JPS6236675 B2 JP S6236675B2 JP 17092779 A JP17092779 A JP 17092779A JP 17092779 A JP17092779 A JP 17092779A JP S6236675 B2 JPS6236675 B2 JP S6236675B2
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- Japan
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- glutamic acid
- acetic acid
- medium
- acid
- culture
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
この発明は発酵法によるＬ−グルタミン酸の製
造法に関する。 Ｌ−グルタミン酸は、ブレビバクテリウム属、
又はコリネバクテリウム属に属する微生物を使用
して発酵法により製造されている。 本発明者らは、従来知られているブレビバクテ
リウム属のＬ−グルタミン酸生産菌に酢酸要求性
を付与した変異株を誘導したところ、特に炭素源
として脂肪族アルコール又は脂肪酸と糖質とを併
用する場合において、この変異株が従来知られて
いるＬ−グルタミン酸生産菌より、高い収率でＬ
−グルタミン酸を生成蓄積することを知つた。 本発明に使用する変異株はブレビバクテリウム
属に属し、酢酸要求性を有する変異株であり、例
えば以下の菌株が挙げられる。 ブレビバクテリウム・ラクトフエルメンタム AJ 11515（FERMP 5335）（酢酸要求性株）
ブレビバクテリウム・ラクトフエルメンタム AJ 11516（FERMP 5336）（酢酸要求性、イソ
エクエン酸リアーゼ低下株） ブレビバクテリウム・フラバム AJ 11517（FERMP 5337）（酢酸要求性株） AJ11515及びAJ11516はATCC13869を、
AJ11517はATCC14067をそれぞれ親株として誘
導された。他に親株としては、ブレビバクテリウ
ム・サツカロリテイカムATCC14066、ブレビバ
クテリウム・デイバリカタムATCC14020等の
ブレビバクテリウム属のＬ−グルタミン酸生産菌
が使用できる。 上記変異株の変異誘導法としては、紫外線照
射、放射線照射、変異誘導起剤処理等の通常の方
法が用いられ、例えば200μｇ／mlのＮ−メチル
−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジンで０℃
で20分間処理する方法等がある。 上記例示の菌株の酢酸添加濃度に対する生育度
を次の第１表に示す。各菌株の生育度は、次のよ
うにして検定した。 グルコース0.5g／dl、尿素0.15ｇ／dl、硫安
0.15ｇ／dl、KH2PO40.3ｇ／dl、K2HPO40.1ｇ／
dl、MgSO4・7H2O0.01ｇ／dl、CaCl2・2H2O0.1
mg／dl、サイアミン塩酸塩10μｇ／dl、ビオチン
３μｇ／dl、Na2B4O7・10H2O0.44mg／dl、
FeCl2・6H2O4.85mg／dl、CuSO4・5H2O1.95
mg／dl、（NH4)6MO7O24・4H2O0.185mg／dl、
ZnSO4・7H2O44mg／dl、MnCl2・4H2O0.3mg／dl
および表に示す量の酢酸を含みpH7.0に調節し
た培地に、天然培地（ペプトン１g/dl、酵母エ
キス１g/dl、ＮａＣｌ0.5ｇ／dl、pH7.0）スラント
で２４時間培養した菌を無菌水で懸濁して接種し、
２４時間培養して生育値を濁度で測定した。
造法に関する。 Ｌ−グルタミン酸は、ブレビバクテリウム属、
又はコリネバクテリウム属に属する微生物を使用
して発酵法により製造されている。 本発明者らは、従来知られているブレビバクテ
リウム属のＬ−グルタミン酸生産菌に酢酸要求性
を付与した変異株を誘導したところ、特に炭素源
として脂肪族アルコール又は脂肪酸と糖質とを併
用する場合において、この変異株が従来知られて
いるＬ−グルタミン酸生産菌より、高い収率でＬ
−グルタミン酸を生成蓄積することを知つた。 本発明に使用する変異株はブレビバクテリウム
属に属し、酢酸要求性を有する変異株であり、例
えば以下の菌株が挙げられる。 ブレビバクテリウム・ラクトフエルメンタム AJ 11515（FERMP 5335）（酢酸要求性株）
ブレビバクテリウム・ラクトフエルメンタム AJ 11516（FERMP 5336）（酢酸要求性、イソ
エクエン酸リアーゼ低下株） ブレビバクテリウム・フラバム AJ 11517（FERMP 5337）（酢酸要求性株） AJ11515及びAJ11516はATCC13869を、
AJ11517はATCC14067をそれぞれ親株として誘
導された。他に親株としては、ブレビバクテリウ
ム・サツカロリテイカムATCC14066、ブレビバ
クテリウム・デイバリカタムATCC14020等の
ブレビバクテリウム属のＬ−グルタミン酸生産菌
が使用できる。 上記変異株の変異誘導法としては、紫外線照
射、放射線照射、変異誘導起剤処理等の通常の方
法が用いられ、例えば200μｇ／mlのＮ−メチル
−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジンで０℃
で20分間処理する方法等がある。 上記例示の菌株の酢酸添加濃度に対する生育度
を次の第１表に示す。各菌株の生育度は、次のよ
うにして検定した。 グルコース0.5g／dl、尿素0.15ｇ／dl、硫安
0.15ｇ／dl、KH2PO40.3ｇ／dl、K2HPO40.1ｇ／
dl、MgSO4・7H2O0.01ｇ／dl、CaCl2・2H2O0.1
mg／dl、サイアミン塩酸塩10μｇ／dl、ビオチン
３μｇ／dl、Na2B4O7・10H2O0.44mg／dl、
FeCl2・6H2O4.85mg／dl、CuSO4・5H2O1.95
mg／dl、（NH4)6MO7O24・4H2O0.185mg／dl、
ZnSO4・7H2O44mg／dl、MnCl2・4H2O0.3mg／dl
および表に示す量の酢酸を含みpH7.0に調節し
た培地に、天然培地（ペプトン１g/dl、酵母エ
キス１g/dl、ＮａＣｌ0.5ｇ／dl、pH7.0）スラント
で２４時間培養した菌を無菌水で懸濁して接種し、
２４時間培養して生育値を濁度で測定した。
【表】
又、上記例示のイソクエン酸リアーゼ（以下
ICLと略記する）低下株のICL活性を第２表に示
す。 ＩＣＬ活性は次の様にして検定した。
ICLと略記する）低下株のICL活性を第２表に示
す。 ＩＣＬ活性は次の様にして検定した。
【表】
グルコース2.5ｇ／dl、酢酸アンモニウム0.8
ｇ／dl、KH2PO40.1ｇ／dl、MgSO4・7H2O0.1
ｇ／dl、FeSO4・7H2O0.1g／dl、FeSO4・
7H2O1mg／dl、MnSO4・4H2O１mg／dl、尿素0.4
ｇ／dl、ビオチン0.3μｇ／dl、サイアミン・塩
酢酸20μｇ／dl、および大豆分解濃縮液（Ｔ−Ｎ
として）48mg／dl（pH7.0）を含有する培地を調
整し、その20mlずつを500ml容振盪フラスコに入
れ、115℃で10分間加熱殺菌した。この培地に試
験菌株を接種し、往復振盪培養機により、31.5℃
で、対数増殖初期（10〜16時間）まで培養した。
培養液より菌体を分離し、洗浄後超音波粉砕し、
セフアデラクスＧ−10で処理したものを酵素標品
として用いた。 酵素活性の測定は、椎尾らの方法に準じて行な
つた。 （ジャーナル・オブ・バイオケミストリー 49
巻262頁 1961年） これらの変異株を培養する培地は、酢酸要求性
を満足せしめるべき物質を含有するほかは、炭素
源、窒素源、無機イオン、更に必要に応じ有機微
量栄養素を含有する通常の培地である。 酢酸要求性を満足せしめるべき栄養源としては
酢酸、プロピオン酸等の低級脂肪酸、パルミチン
酸、ステアリン酸等の高級脂肪酸、エタノール、
プロパノール等の脂肪族アルコールがある。 炭素源として、糖質のほかに上記酢酸要求性を
満足せしめるべき物質も使用できる。特に糖質と
上記酢酸要求性を満足せしめるべき物質が炭素源
として併用された場合により好ましい結果が得ら
れる。併用する場合の糖質と酢酸要求性を満足せ
しめるべき物質の使用量は、炭素源の種類によつ
て異なるが、通常重量にて前者が３〜２に対し、
後者が２〜１の割合が望ましい。糖質としては、
グルコース、フラクトース、シユクロース等の単
糖又はオリゴ糖及びこれらを含有する澱粉、セル
ロース等の加水分解物、果汁、甘蔗廃糖蜜、甜菜
廃糖蜜、大豆ホエイ等が使用できる。 窒素源としては例えば通常のＬ−グルタミン酸
発酵に用いられるアンモニウム塩、アンモニア水
アンモニアガス、尿素等が用いられ、その他必要
に応じて、リン酸塩、マグネシウム塩等の無機イ
オンが適宜培地に添加される。また必要に応じて
サイアミン、ビオチン等の微量栄養素が適宜使用
される。さらに、ビオチンが過剰に存在する培地
には、ポリオキシエチレンソルビタンモノパルミ
テート、ペニシリン等のビオチン作用抑制物質が
常法により培地に添加される。培養は好気的条件
下で行うのがよく、培養温度は24〜37℃、培養中
pHは６〜９に制御するのがよく、pHの調整には無
機あるいは有機の酸性あるいはアルカリ性物質、
さらには尿素、炭酸カルシウム、アンモニアガス
等を使用することができる。発酵液からのＬ−グ
ルタミン酸の採取はイオン交換樹脂法、その他の
公知の方法を適宜組合せることにより行われる。 実施例 １ グルコーズ2.3ｇ／dl、酢酸アンモニウム１
ｇ／dl、酢酸ナトリウム１ｇ／dl、KH2PO40.1
ｇ／dl、MgSO4・7H2O0.1ｇ／dl、サイアミン．
塩酸塩20μｇ／dl、尿素0.6ｇ／dl、FeSO4・
7H2O1mg／dl、MnSO4・4H2O１mg／dl、大豆分解
濃縮液（Ｔ−Ｎとして）36mg／dlおよびビオチン
２μｇ／（pH7.0）を含有する培地を調製し、
その20mlずつを500ml容振盪フラスコに入れ115℃
で10分加熱殺菌した。 この培地にそれぞれ下記の表の菌を接種し往復
振盪培養機により31.5℃で培養を行つた。 なお、培養中は培養液をpH6.5〜8.0に保つた
め、45ｇ／dl尿素又は2NH2SO4を用いて調整し
た。 36時間で培養を終了し、培養液中に蓄積したＬ
−グルタミン酸の対基質収率を求めた。その結果
を、次の第３表に示す。
ｇ／dl、KH2PO40.1ｇ／dl、MgSO4・7H2O0.1
ｇ／dl、FeSO4・7H2O0.1g／dl、FeSO4・
7H2O1mg／dl、MnSO4・4H2O１mg／dl、尿素0.4
ｇ／dl、ビオチン0.3μｇ／dl、サイアミン・塩
酢酸20μｇ／dl、および大豆分解濃縮液（Ｔ−Ｎ
として）48mg／dl（pH7.0）を含有する培地を調
整し、その20mlずつを500ml容振盪フラスコに入
れ、115℃で10分間加熱殺菌した。この培地に試
験菌株を接種し、往復振盪培養機により、31.5℃
で、対数増殖初期（10〜16時間）まで培養した。
培養液より菌体を分離し、洗浄後超音波粉砕し、
セフアデラクスＧ−10で処理したものを酵素標品
として用いた。 酵素活性の測定は、椎尾らの方法に準じて行な
つた。 （ジャーナル・オブ・バイオケミストリー 49
巻262頁 1961年） これらの変異株を培養する培地は、酢酸要求性
を満足せしめるべき物質を含有するほかは、炭素
源、窒素源、無機イオン、更に必要に応じ有機微
量栄養素を含有する通常の培地である。 酢酸要求性を満足せしめるべき栄養源としては
酢酸、プロピオン酸等の低級脂肪酸、パルミチン
酸、ステアリン酸等の高級脂肪酸、エタノール、
プロパノール等の脂肪族アルコールがある。 炭素源として、糖質のほかに上記酢酸要求性を
満足せしめるべき物質も使用できる。特に糖質と
上記酢酸要求性を満足せしめるべき物質が炭素源
として併用された場合により好ましい結果が得ら
れる。併用する場合の糖質と酢酸要求性を満足せ
しめるべき物質の使用量は、炭素源の種類によつ
て異なるが、通常重量にて前者が３〜２に対し、
後者が２〜１の割合が望ましい。糖質としては、
グルコース、フラクトース、シユクロース等の単
糖又はオリゴ糖及びこれらを含有する澱粉、セル
ロース等の加水分解物、果汁、甘蔗廃糖蜜、甜菜
廃糖蜜、大豆ホエイ等が使用できる。 窒素源としては例えば通常のＬ−グルタミン酸
発酵に用いられるアンモニウム塩、アンモニア水
アンモニアガス、尿素等が用いられ、その他必要
に応じて、リン酸塩、マグネシウム塩等の無機イ
オンが適宜培地に添加される。また必要に応じて
サイアミン、ビオチン等の微量栄養素が適宜使用
される。さらに、ビオチンが過剰に存在する培地
には、ポリオキシエチレンソルビタンモノパルミ
テート、ペニシリン等のビオチン作用抑制物質が
常法により培地に添加される。培養は好気的条件
下で行うのがよく、培養温度は24〜37℃、培養中
pHは６〜９に制御するのがよく、pHの調整には無
機あるいは有機の酸性あるいはアルカリ性物質、
さらには尿素、炭酸カルシウム、アンモニアガス
等を使用することができる。発酵液からのＬ−グ
ルタミン酸の採取はイオン交換樹脂法、その他の
公知の方法を適宜組合せることにより行われる。 実施例 １ グルコーズ2.3ｇ／dl、酢酸アンモニウム１
ｇ／dl、酢酸ナトリウム１ｇ／dl、KH2PO40.1
ｇ／dl、MgSO4・7H2O0.1ｇ／dl、サイアミン．
塩酸塩20μｇ／dl、尿素0.6ｇ／dl、FeSO4・
7H2O1mg／dl、MnSO4・4H2O１mg／dl、大豆分解
濃縮液（Ｔ−Ｎとして）36mg／dlおよびビオチン
２μｇ／（pH7.0）を含有する培地を調製し、
その20mlずつを500ml容振盪フラスコに入れ115℃
で10分加熱殺菌した。 この培地にそれぞれ下記の表の菌を接種し往復
振盪培養機により31.5℃で培養を行つた。 なお、培養中は培養液をpH6.5〜8.0に保つた
め、45ｇ／dl尿素又は2NH2SO4を用いて調整し
た。 36時間で培養を終了し、培養液中に蓄積したＬ
−グルタミン酸の対基質収率を求めた。その結果
を、次の第３表に示す。
【表】
実施例 ２
ブレビバクテリウム・ラクトフエルメンタム
ATCC13869及びＡＪ11516を、甘蔗廃糖蜜（全糖
として）5.6ｇ／dl、酢酸1.4ｇ／dl、KH2PO40.2
ｇ／dl、MgSO4・7H2O0.1ｇ／dl、硫酸アンモニ
ウム0.05ｇ／dl、MnSO4・4H2O１mg/dl、
FeSO4・7H2O１mg／dl、ビオチン３μｇ／、大
豆加水分解濃縮液を（全窒素として）36mg／dl、
及びサイアミン塩酸塩200μｇ／ｌを含有する培
地300mlを、1.5容ジャーフアーメンターに張込
み120℃で15分間滅菌した。 この培地に前培養した菌を接種し、31.5℃でpH
を7.8に保ちつつ振とう培養した。 培養開始後、培養液の26倍希釈液の562nｍに
おける吸光度が、0.3に到達した時にポリオキシ
エチレンソルビタンモノパルテイトを添加した。 又、培養液中の残存酢酸が0.1ｇ／dl以下にな
つた時点で、あらかじめ調整したフイード液（甘
蔗廃糖蜜、17ｇ／dl、酢酸アンモニウム（酢酸分
として）15ｇ／dl、酢酸15ｇ／dl、酢酸ナトリウ
ム（酢酸分として）13ｇ／dlを含む）を残存酢酸
濃度が常に0.1〜0.5ｇ／dlの範囲にとどまるよう
に、フイード液を連続的に補給した。 以上の結果培養48時間後第４表に示す量のＬ−
グルタミン酸が培養液中に生成蓄積した。
ATCC13869及びＡＪ11516を、甘蔗廃糖蜜（全糖
として）5.6ｇ／dl、酢酸1.4ｇ／dl、KH2PO40.2
ｇ／dl、MgSO4・7H2O0.1ｇ／dl、硫酸アンモニ
ウム0.05ｇ／dl、MnSO4・4H2O１mg/dl、
FeSO4・7H2O１mg／dl、ビオチン３μｇ／、大
豆加水分解濃縮液を（全窒素として）36mg／dl、
及びサイアミン塩酸塩200μｇ／ｌを含有する培
地300mlを、1.5容ジャーフアーメンターに張込
み120℃で15分間滅菌した。 この培地に前培養した菌を接種し、31.5℃でpH
を7.8に保ちつつ振とう培養した。 培養開始後、培養液の26倍希釈液の562nｍに
おける吸光度が、0.3に到達した時にポリオキシ
エチレンソルビタンモノパルテイトを添加した。 又、培養液中の残存酢酸が0.1ｇ／dl以下にな
つた時点で、あらかじめ調整したフイード液（甘
蔗廃糖蜜、17ｇ／dl、酢酸アンモニウム（酢酸分
として）15ｇ／dl、酢酸15ｇ／dl、酢酸ナトリウ
ム（酢酸分として）13ｇ／dlを含む）を残存酢酸
濃度が常に0.1〜0.5ｇ／dlの範囲にとどまるよう
に、フイード液を連続的に補給した。 以上の結果培養48時間後第４表に示す量のＬ−
グルタミン酸が培養液中に生成蓄積した。
【表】
実施例 ３
グルコーズ１ｇ／dl、エタノール0.5ｇ／dl、
KH2PO40.1ｇ／dl、MgSO4・7H2O0.1ｇ／dl、
MnSO4・4H2O１mg／dl、FeSO4・7H2O１mg/dl、
ビオチン３μｇ／dl、硫酸アンモニウム1.0ｇ／
dl、大豆加水分解濃縮液（全窒素として）96mg／
dl、サイアミン・塩酸塩200μｇ／を含有する
培地を調製し、その30mlを、500ml容振とうフラ
スコに分注し、115℃で10分間加熱殺菌した。ブ
レビバクテリウム・ラクトフエルメンタム
ATCC13869又はAJ11516を、接種し、往復振盪
培養機により31.5℃で培養を行なつた。 初発培地中のエタノールが、消費された時点か
らフイード液（グルコーズ30ｇ／dl、エタノール
15ｇ／dl、硫安15ｇ／dl、を含有する）の1.4ｇ／
dl量を２回添加し、36時間で培養を終了した。 第５表に、発酵液中に蓄積したＬ−グルタミン
酸の使用炭素源に対する収率を示す。
KH2PO40.1ｇ／dl、MgSO4・7H2O0.1ｇ／dl、
MnSO4・4H2O１mg／dl、FeSO4・7H2O１mg/dl、
ビオチン３μｇ／dl、硫酸アンモニウム1.0ｇ／
dl、大豆加水分解濃縮液（全窒素として）96mg／
dl、サイアミン・塩酸塩200μｇ／を含有する
培地を調製し、その30mlを、500ml容振とうフラ
スコに分注し、115℃で10分間加熱殺菌した。ブ
レビバクテリウム・ラクトフエルメンタム
ATCC13869又はAJ11516を、接種し、往復振盪
培養機により31.5℃で培養を行なつた。 初発培地中のエタノールが、消費された時点か
らフイード液（グルコーズ30ｇ／dl、エタノール
15ｇ／dl、硫安15ｇ／dl、を含有する）の1.4ｇ／
dl量を２回添加し、36時間で培養を終了した。 第５表に、発酵液中に蓄積したＬ−グルタミン
酸の使用炭素源に対する収率を示す。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ ブレビバクテリウム属に属し、酢酸要求性を
有し、かつＬ−グルタミン酸生産能を有する微生
物を液体培養中に好気的に培養し、培地中に生成
蓄積されたＬ−グルタミン酸を採取することを特
徴とする発酵法によるＬ−グルタミン酸の製造
法。 ２ 液体培地が炭素源として脂肪族アルコール又
は脂肪酸、及び糖質を含有するものである特許請
求の範囲第１項記載の製造法。
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17092779A JPS5692794A (en) | 1979-12-27 | 1979-12-27 | Preparation of l-glutamic acid by fermentation method |
| US06/218,071 US4368266A (en) | 1979-12-27 | 1980-12-19 | Method for producing L-glutamic acid by fermentation |
| FR8027549A FR2472610A1 (fr) | 1979-12-27 | 1980-12-24 | Mutants et procede pour produire de l'acide l-glutamique par fermentation |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17092779A JPS5692794A (en) | 1979-12-27 | 1979-12-27 | Preparation of l-glutamic acid by fermentation method |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5692794A JPS5692794A (en) | 1981-07-27 |
| JPS6236675B2 true JPS6236675B2 (ja) | 1987-08-07 |
Family
ID=15913932
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP17092779A Granted JPS5692794A (en) | 1979-12-27 | 1979-12-27 | Preparation of l-glutamic acid by fermentation method |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5692794A (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2009093703A1 (ja) | 2008-01-23 | 2009-07-30 | Ajinomoto Co., Inc. | Ｌ-アミノ酸の製造法 |
-
1979
- 1979-12-27 JP JP17092779A patent/JPS5692794A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5692794A (en) | 1981-07-27 |
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