JPS6130556B2 - - Google Patents
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- JPS6130556B2 JPS6130556B2 JP9494578A JP9494578A JPS6130556B2 JP S6130556 B2 JPS6130556 B2 JP S6130556B2 JP 9494578 A JP9494578 A JP 9494578A JP 9494578 A JP9494578 A JP 9494578A JP S6130556 B2 JPS6130556 B2 JP S6130556B2
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Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
この発明は発酵法によるＬ―グルタミン酸の製
造法に関する。 本発明者等は、ブレビバクテリウム属に属する
菌株の２，６―ピリジン―ジカルボン酸に耐性を
有する変異株の中からＬ―グルタミン酸生産能の
優秀な菌株を多数分離することに成功した。 即ち本発明は、ブレビバクテリウム属に属し、
２，６―ピリジン―ジカルボン酸に耐性を有し、
かつＬ―グルタミン酸生産能を有する変異株を培
養し、培地中に生成蓄積したＬ―グルタミン酸を
採取することを特徴とする、Ｌ―グルタミン酸の
製造法である。 本発明に使用するブレビバクテリウム属の２，
６―ピリジン―ジカルボン酸に耐性を有する菌株
は例えば以下の菌株が挙げられる。 ブレビバクテリウム・ラクトフアーメンタム
AJ11285（FERM―Ｐ 4570） （２，６―ピリジン―ジカルボン酸耐性株） ブレビバクテリウム・フラバム AJ11286
（FERM―P4571） （２，６―ピリジン―ジカルボン酸耐性株） これらの変異株は、ブレビバクテリウム属ある
いはコリネバクテリウム属のＬ―グルタミン生産
菌を親株として変異誘導される。例えば具体的に
は、ブレビバクテリウム・ラクトフアーメンタム
（Brevibacterium lactofermentum）
ATCC13869，ブレビバクテリウム・フラバム
（Brevibacterium flavum）ATCC1407，ブレビ
バクテリウム・デイバリカタム
（Brevibacterium divaricatum）ATCC14020，ブ
レビバクテリウム・サツカロリテイカム
（Brevibacterium saccharoliticum）
ATCC14066，コリネバクテリウム・グルタミカ
ム（Corynebacterium glutamicum）〔ミクロコ
ツカス・グルタミカム（Micrococcus
glutamicum）〕ATCC13032及びコリネバクテリ
ウム・アセトアシドフイラム（Corynebacterium
acetoacidophilum）ATCC13870等がある。 上記変異株の変異誘導方法としては、紫外線照
射、放射線照射、変異誘導起剤処理等の通常の方
法が用いられ、例えば2000μｇ／mlのＮ―メチル
―N′―ニトロ―Ｎ―ニトロソグアニジンで０℃
で20分間処理する方法等がある。 上記例示の菌株の各薬剤耐性に関する実験結果
を次の第１表に示す。
造法に関する。 本発明者等は、ブレビバクテリウム属に属する
菌株の２，６―ピリジン―ジカルボン酸に耐性を
有する変異株の中からＬ―グルタミン酸生産能の
優秀な菌株を多数分離することに成功した。 即ち本発明は、ブレビバクテリウム属に属し、
２，６―ピリジン―ジカルボン酸に耐性を有し、
かつＬ―グルタミン酸生産能を有する変異株を培
養し、培地中に生成蓄積したＬ―グルタミン酸を
採取することを特徴とする、Ｌ―グルタミン酸の
製造法である。 本発明に使用するブレビバクテリウム属の２，
６―ピリジン―ジカルボン酸に耐性を有する菌株
は例えば以下の菌株が挙げられる。 ブレビバクテリウム・ラクトフアーメンタム
AJ11285（FERM―Ｐ 4570） （２，６―ピリジン―ジカルボン酸耐性株） ブレビバクテリウム・フラバム AJ11286
（FERM―P4571） （２，６―ピリジン―ジカルボン酸耐性株） これらの変異株は、ブレビバクテリウム属ある
いはコリネバクテリウム属のＬ―グルタミン生産
菌を親株として変異誘導される。例えば具体的に
は、ブレビバクテリウム・ラクトフアーメンタム
（Brevibacterium lactofermentum）
ATCC13869，ブレビバクテリウム・フラバム
（Brevibacterium flavum）ATCC1407，ブレビ
バクテリウム・デイバリカタム
（Brevibacterium divaricatum）ATCC14020，ブ
レビバクテリウム・サツカロリテイカム
（Brevibacterium saccharoliticum）
ATCC14066，コリネバクテリウム・グルタミカ
ム（Corynebacterium glutamicum）〔ミクロコ
ツカス・グルタミカム（Micrococcus
glutamicum）〕ATCC13032及びコリネバクテリ
ウム・アセトアシドフイラム（Corynebacterium
acetoacidophilum）ATCC13870等がある。 上記変異株の変異誘導方法としては、紫外線照
射、放射線照射、変異誘導起剤処理等の通常の方
法が用いられ、例えば2000μｇ／mlのＮ―メチル
―N′―ニトロ―Ｎ―ニトロソグアニジンで０℃
で20分間処理する方法等がある。 上記例示の菌株の各薬剤耐性に関する実験結果
を次の第１表に示す。
【表】
第１表の各菌株の生育度は次のようにして検定
した。酢酸ナトリウム0.8g／ｄ、酢酸アンモニ
ウム0.5g／ｄ、KH2PO40.2g／ｄ、MgSO4・
7ag0.1g／ｄ、サイアミン塩酸塩20μｇ／ｄ
、ビオチン１μｇ／ｄ、FeSO4・7ag 1mg／
ｄ、MnSO4・4ag 1mg／ｄ、大豆分解濃縮
液（Ｔ―Ｎとして）10mg／ｄおよび表に示す
量の２，６―ピリジンジカルボン酸を含みPH7.0
に調節した培地に、天然培地（ペプトン1g／ｄ
、酵母エキス1g／ｄ、NaC0.5g／ｄ、PH
7.0）スラントで24時間培養した菌を無菌水で懸
濁して接種し、24時間培養して生育値を濁度で測
定した。 これらの菌株を用いてＬ―グルタミン酸を生
成、蓄積せしめる方法は、従来のＬ―グルタミン
酸生成微生物の培養の採用されていた方法が用い
られる。即ち炭素源としては、例えば甘蔗、甜菜
からの糖汁あるいは廃糖蜜、澱粉質原料加水分解
物等の糖質原料、酢酸、エチルアルコール等が用
いられ、窒素源としては例えば通常のＬ―グルタ
ミン酸発酵に用いられるアンモニウム塩、アンモ
ニア水、アンモニアガス、尿素等が用いられ、そ
の他必要に応じて、りん酸塩、マグネシウム塩等
の無機イオンが適宜培地に添加される。また必要
に応じて、サイアミン、ビオチン等の微量栄養素
が適宜使用される。さらに、ビオチンが過剰に存
在する培地には、ポリオキシソルビタンモノパル
ミテート、ペニシリン等のビオチン作用抑制物質
が常法により培地に添加される。培養は好気的条
件下で行うのがよく、培養温度は24〜37℃、培養
中PHは６〜９に制御するのがよく、PHの調節には
無機あるいは有機の酸性あるいはアルカリ性物
質、さらに尿素、炭酸カルシウム、アンモニアガ
スス等を使用することができる。発液からのＬ―
グルタミン酸の採取はイオン交換樹脂法、その他
の公知の方法を適宜組合せることにより行なわれ
る。 実施例 １ グルコース10g／ｄ、KH2PO40.1g／ｄ、
MgSO4・7ag0.1g／ｄ、サイアミン塩酸塩20μ
ｇ／ｄ、大豆分解濃縮液（Ｔ―Ｎとして）
40mg／ｄ、FeSO4・7ag1mg／ｄ、MnSO4・
4aq1mg／ｄおよびビオチン３μｇ／（PH
7.0）の組成を有する培地を調製し、その20mlず
つを500ml容振盪フラスコに入れ115℃で10分加熱
殺菌した。この培地にそれぞれ下記の表の菌を接
種した往復振盪培養機によりり31.5℃で培養を行
つた。 なお、培養中はPHが7.0〜7.4になつた時点で、
尿素40g／ｄ溶液を添加しながら、42時間で発
酵終了し、発酵液中に蓄積したＬ―グルタミン酸
の対糖収率を求めた。その結果を次の第２表に示
す。
した。酢酸ナトリウム0.8g／ｄ、酢酸アンモニ
ウム0.5g／ｄ、KH2PO40.2g／ｄ、MgSO4・
7ag0.1g／ｄ、サイアミン塩酸塩20μｇ／ｄ
、ビオチン１μｇ／ｄ、FeSO4・7ag 1mg／
ｄ、MnSO4・4ag 1mg／ｄ、大豆分解濃縮
液（Ｔ―Ｎとして）10mg／ｄおよび表に示す
量の２，６―ピリジンジカルボン酸を含みPH7.0
に調節した培地に、天然培地（ペプトン1g／ｄ
、酵母エキス1g／ｄ、NaC0.5g／ｄ、PH
7.0）スラントで24時間培養した菌を無菌水で懸
濁して接種し、24時間培養して生育値を濁度で測
定した。 これらの菌株を用いてＬ―グルタミン酸を生
成、蓄積せしめる方法は、従来のＬ―グルタミン
酸生成微生物の培養の採用されていた方法が用い
られる。即ち炭素源としては、例えば甘蔗、甜菜
からの糖汁あるいは廃糖蜜、澱粉質原料加水分解
物等の糖質原料、酢酸、エチルアルコール等が用
いられ、窒素源としては例えば通常のＬ―グルタ
ミン酸発酵に用いられるアンモニウム塩、アンモ
ニア水、アンモニアガス、尿素等が用いられ、そ
の他必要に応じて、りん酸塩、マグネシウム塩等
の無機イオンが適宜培地に添加される。また必要
に応じて、サイアミン、ビオチン等の微量栄養素
が適宜使用される。さらに、ビオチンが過剰に存
在する培地には、ポリオキシソルビタンモノパル
ミテート、ペニシリン等のビオチン作用抑制物質
が常法により培地に添加される。培養は好気的条
件下で行うのがよく、培養温度は24〜37℃、培養
中PHは６〜９に制御するのがよく、PHの調節には
無機あるいは有機の酸性あるいはアルカリ性物
質、さらに尿素、炭酸カルシウム、アンモニアガ
スス等を使用することができる。発液からのＬ―
グルタミン酸の採取はイオン交換樹脂法、その他
の公知の方法を適宜組合せることにより行なわれ
る。 実施例 １ グルコース10g／ｄ、KH2PO40.1g／ｄ、
MgSO4・7ag0.1g／ｄ、サイアミン塩酸塩20μ
ｇ／ｄ、大豆分解濃縮液（Ｔ―Ｎとして）
40mg／ｄ、FeSO4・7ag1mg／ｄ、MnSO4・
4aq1mg／ｄおよびビオチン３μｇ／（PH
7.0）の組成を有する培地を調製し、その20mlず
つを500ml容振盪フラスコに入れ115℃で10分加熱
殺菌した。この培地にそれぞれ下記の表の菌を接
種した往復振盪培養機によりり31.5℃で培養を行
つた。 なお、培養中はPHが7.0〜7.4になつた時点で、
尿素40g／ｄ溶液を添加しながら、42時間で発
酵終了し、発酵液中に蓄積したＬ―グルタミン酸
の対糖収率を求めた。その結果を次の第２表に示
す。
【表】
実施例 ２
酢酸アンモニウム1.0g／ｄ、酢酸ナトリウム
1.0g／ｄ、KH2PO40.2g／ｄ、MgSO4・
7aq0.08g／ｄ、FeSO47aq2mg／ｄ、
MnSO4・4aq1mg／ｄ、大豆加水分解濃縮液を
Ｔ―Ｎとして50mg／ｄ、サイアミン塩酸塩200
μｇ／、ビオチン３μｇ／の組成を有する培
地をアンモニア水でPH7.0に調整し、その300mlを
1.5容ジヤーフアーメンターに張込み、115℃で
10分加熱殺菌した。 培地にあらかじめ培養した下記の菌を接種し、
31.5℃でPHを酢酸を半分アンモニア水で中和した
酢酸濃度60g／ｄのフイード液でPH7.8に保ちつ
つ培養した。フイード液は培地中の酢酸が消費さ
れた時点でPHが上昇するので、これを指標にし、
PHが上昇して7.8に達した時一定量ずつ培地に添
加し、48時間の培養を行つた。第３表に使用酢酸
に対する生成Ｌ―グルタミン酸の収率を示す。
1.0g／ｄ、KH2PO40.2g／ｄ、MgSO4・
7aq0.08g／ｄ、FeSO47aq2mg／ｄ、
MnSO4・4aq1mg／ｄ、大豆加水分解濃縮液を
Ｔ―Ｎとして50mg／ｄ、サイアミン塩酸塩200
μｇ／、ビオチン３μｇ／の組成を有する培
地をアンモニア水でPH7.0に調整し、その300mlを
1.5容ジヤーフアーメンターに張込み、115℃で
10分加熱殺菌した。 培地にあらかじめ培養した下記の菌を接種し、
31.5℃でPHを酢酸を半分アンモニア水で中和した
酢酸濃度60g／ｄのフイード液でPH7.8に保ちつ
つ培養した。フイード液は培地中の酢酸が消費さ
れた時点でPHが上昇するので、これを指標にし、
PHが上昇して7.8に達した時一定量ずつ培地に添
加し、48時間の培養を行つた。第３表に使用酢酸
に対する生成Ｌ―グルタミン酸の収率を示す。
【表】
Claims (1)
- １ ブレビバクテリウムに属し２，６―ピリジン
ジカルボン酸に耐性を有し、かつＬ―グルタミン
酸生産能を有する変異株を培養し、培地中に生成
蓄積したＬ―グルタミン酸を採取することを特徴
とするＬ―グルタミン酸の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9494578A JPS5521764A (en) | 1978-08-02 | 1978-08-02 | Preparation of l-glutamic acid |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9494578A JPS5521764A (en) | 1978-08-02 | 1978-08-02 | Preparation of l-glutamic acid |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5521764A JPS5521764A (en) | 1980-02-16 |
| JPS6130556B2 true JPS6130556B2 (ja) | 1986-07-14 |
Family
ID=14124075
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9494578A Granted JPS5521764A (en) | 1978-08-02 | 1978-08-02 | Preparation of l-glutamic acid |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5521764A (ja) |
-
1978
- 1978-08-02 JP JP9494578A patent/JPS5521764A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5521764A (en) | 1980-02-16 |
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