JPS6251979A - 変異エシエリヒア・コリ - Google Patents
変異エシエリヒア・コリInfo
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- JPS6251979A JPS6251979A JP18985185A JP18985185A JPS6251979A JP S6251979 A JPS6251979 A JP S6251979A JP 18985185 A JP18985185 A JP 18985185A JP 18985185 A JP18985185 A JP 18985185A JP S6251979 A JPS6251979 A JP S6251979A
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- Japan
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- escherichia coli
- dna
- phage
- cyclodextrin glucanotransferase
- restriction enzyme
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/1048—Glycosyltransferases (2.4)
- C12N9/1051—Hexosyltransferases (2.4.1)
- C12N9/1074—Cyclomaltodextrin glucanotransferase (2.4.1.19)
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- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
一般にサイクロデキストリン グルカノトランスフェラ
ーゼ生産菌として、バチルス（肱り且匹）属やクレブシ
ラ（■吐鉦且」）属の細菌などが用いられてきた。しか
し、その生産は微量で、かつ不安定であり、また培地中
に含まれるきよう雑物が多く、サイクロデキストリン
グルカノトランスフェラーゼの分離精製が困難であった
０本発明者らは、バチルス・マセランス（旺虹且皿ｕ江
葺邸）のサイクロデキストリン グルカノトランスフェ
ラーゼ構造遺伝子をエシェリヒア・コリ（シに１」ユニ
毘ｊエ 曲〉内でクローン化することに成功し、この変
異株を培養したところ、安定に短時間でサイクロデキス
トリン グルカノトランスフェラーゼを生産させること
ができたものである。本発明は、サイクロデキストリン
グルカノトランスフェラーゼを生産するエシェリヒア
・コリである。
ーゼ生産菌として、バチルス（肱り且匹）属やクレブシ
ラ（■吐鉦且」）属の細菌などが用いられてきた。しか
し、その生産は微量で、かつ不安定であり、また培地中
に含まれるきよう雑物が多く、サイクロデキストリン
グルカノトランスフェラーゼの分離精製が困難であった
０本発明者らは、バチルス・マセランス（旺虹且皿ｕ江
葺邸）のサイクロデキストリン グルカノトランスフェ
ラーゼ構造遺伝子をエシェリヒア・コリ（シに１」ユニ
毘ｊエ 曲〉内でクローン化することに成功し、この変
異株を培養したところ、安定に短時間でサイクロデキス
トリン グルカノトランスフェラーゼを生産させること
ができたものである。本発明は、サイクロデキストリン
グルカノトランスフェラーゼを生産するエシェリヒア
・コリである。
本発明のサイクロデキストリン グルカノトランスフェ
ラーゼを生産するエシェリヒア・コリは７欠のようζこ
して創製することができる。
ラーゼを生産するエシェリヒア・コリは７欠のようζこ
して創製することができる。
サイクロデキストリン グルカノトランスフェラーゼ遺
伝子の調製は次のようにする。
伝子の調製は次のようにする。
バチルス・マセランスＩＡ旧２４３株はサイクロデキス
トリン グルカノトランスフェラーゼを菌体外に分泌・
する細菌として知られている。本菌体から５ａｉｔｏ
、 Ｍｉｕｒａ法（Ｓａｉｔｏ 、 Ｈ、ａｎｄ Ｍｉ
ｕｒａ 。
トリン グルカノトランスフェラーゼを菌体外に分泌・
する細菌として知られている。本菌体から５ａｉｔｏ
、 Ｍｉｕｒａ法（Ｓａｉｔｏ 、 Ｈ、ａｎｄ Ｍｉ
ｕｒａ 。
Ｋ 、 、 Ｂｉｏｃｈｉｍ 、 Ｂｉｏｐ
ｈｙｓ 、 へｃｔａ、 ７Ｊ、 ６１９
、 （＋９１３４） ）により染色体ＤＮＡを：ｌ
ＩＩ製する。これを制限酵素５ｉＬ３Ａ１で部分分解し
、分解物からショ糖密度勾配超遠心法により約２Ｋｂ以
上の染色体ＤＮＡ断片を分能する。
ｈｙｓ 、 へｃｔａ、 ７Ｊ、 ６１９
、 （＋９１３４） ）により染色体ＤＮＡを：ｌ
ＩＩ製する。これを制限酵素５ｉＬ３Ａ１で部分分解し
、分解物からショ糖密度勾配超遠心法により約２Ｋｂ以
上の染色体ＤＮＡ断片を分能する。
別に、ファージλＬ４７［ＩＮＡを制限酵素１１３ｍ１
ｌｌで切断し、これに先の染色体ＤＮＡ断片を混合し、
更にＴ４ＤＮＡリガーゼを添加して、連結処理をする。
ｌｌで切断し、これに先の染色体ＤＮＡ断片を混合し、
更にＴ４ＤＮＡリガーゼを添加して、連結処理をする。
この処理７αを用いてイン ビトロ パッケイジフグ法
（ｌｌｏｒｎ、Ｂ、、Ｍｅｔｌ＋ｏｄｓ ｉｎ ＥｎＺ
ｙＮＯ＋Ｏｇｙ、６ｆＪ、２９９．（１９７９））によ
り入ファージ粒子を形成し、この人ファージ粒子をエシ
ェリヒア・コリ讐Ｌ９５の培養菌懸濁液に添加して、サ
イクロデキストリン グルカノトランスフェラーゼ生産
能を保有する特殊形質導大ファージを得る。得られた特
殊形質導入ファージ粒子より、サイクロデキストリン
グルカノトランスフェラーゼ遺伝子を含むλフアージＤ
ＮＡをｙＡ製する。このＤＮＡを制限酵素Ｓａｕ ３Ａ
ｌ で部分分解し、プラスミドｐＢＲ３２２の制限酵素
Ｒａｍ Ｈｌ切断祁部分Ｔ４リガーゼを用いて結合し、
ハイブリットプラスミド混合物を得る。この７毘合物を
用いてエシェリヒア・コリへＬｅｄｅｒｂｅｒｇ、Ｃｏ
ｈｅｎ法（Ｌｅｄｅｒｂｅｒｇ、Ｅ、Ｍ、 ａｎｄ Ｃ
ｏｈｅｎ、Ｓ、Ｎ、、Ｊ、Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、。
（ｌｌｏｒｎ、Ｂ、、Ｍｅｔｌ＋ｏｄｓ ｉｎ ＥｎＺ
ｙＮＯ＋Ｏｇｙ、６ｆＪ、２９９．（１９７９））によ
り入ファージ粒子を形成し、この人ファージ粒子をエシ
ェリヒア・コリ讐Ｌ９５の培養菌懸濁液に添加して、サ
イクロデキストリン グルカノトランスフェラーゼ生産
能を保有する特殊形質導大ファージを得る。得られた特
殊形質導入ファージ粒子より、サイクロデキストリン
グルカノトランスフェラーゼ遺伝子を含むλフアージＤ
ＮＡをｙＡ製する。このＤＮＡを制限酵素Ｓａｕ ３Ａ
ｌ で部分分解し、プラスミドｐＢＲ３２２の制限酵素
Ｒａｍ Ｈｌ切断祁部分Ｔ４リガーゼを用いて結合し、
ハイブリットプラスミド混合物を得る。この７毘合物を
用いてエシェリヒア・コリへＬｅｄｅｒｂｅｒｇ、Ｃｏ
ｈｅｎ法（Ｌｅｄｅｒｂｅｒｇ、Ｅ、Ｍ、 ａｎｄ Ｃ
ｏｈｅｎ、Ｓ、Ｎ、、Ｊ、Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、。
月１．１０７２．（１９７４））により形質転換する。
形質転換株の中からアンピシリン耐性（５０μｇ／ｌ）
かつサイクロデキストリン グルカノトランスフェラー
ゼ活性のある株を逼択する。この菌株を培養し、培！！
菌体からプラスミドｐＥＤｓ＋を得た。
かつサイクロデキストリン グルカノトランスフェラー
ゼ活性のある株を逼択する。この菌株を培養し、培！！
菌体からプラスミドｐＥＤｓ＋を得た。
プラスミドｐＥＤｓ＋のフィジカルマツプ（制限酵素切
断地図）は第４図に示した通りであり、白ぬきの部分は
ヘクターｐＢＲ３２２由来、黒塗りの部分は染色体断片
部分で、このクローン化された断片の大きさは約４．４
Ｋｂである。ここに得られる形質転換体はサイクロデキ
ストリン グルカノトランスフェラーゼを安定によく生
産する便れた変異エシェリヒア・コリである。本菌はエ
シェリヒア・コリＣＣ６０Ｏ−ｐＥＤｓｌ（ＦＥＲＢＰ
−７７４）として微工研に寄託されている。
断地図）は第４図に示した通りであり、白ぬきの部分は
ヘクターｐＢＲ３２２由来、黒塗りの部分は染色体断片
部分で、このクローン化された断片の大きさは約４．４
Ｋｂである。ここに得られる形質転換体はサイクロデキ
ストリン グルカノトランスフェラーゼを安定によく生
産する便れた変異エシェリヒア・コリである。本菌はエ
シェリヒア・コリＣＣ６０Ｏ−ｐＥＤｓｌ（ＦＥＲＢＰ
−７７４）として微工研に寄託されている。
この変異エシェリヒア・コリはサイクロデキストリン
グルカノトランスフェラーゼの生ｌ性において全く新規
であり、サイクロデキストリンクルカットランスフェラ
ーゼの工業生産上極めて有用である。
グルカノトランスフェラーゼの生ｌ性において全く新規
であり、サイクロデキストリンクルカットランスフェラ
ーゼの工業生産上極めて有用である。
次に本発明を実施例及び試験例により詳しく説明する。
実施例 変異エシェリヒア・コリの創製バチルス・マセ
ランスｌＡＭ１２４３株をフスマ培地（６％フスマ抽出
液、０．５％マルト エキストラクト、０．５％イース
ト エキストラクト、０．５％ポリペプトン、 ０．０
５％塩（ヒカルシウム）で４８時間培養し、遠心分離に
て集菌、洗浄し、得られた菌体から５ａｉｔｏ、Ｍｉｕ
ｒａの方法（Ｓａｉｔｏ、Ｈ，ａｎｄ Ｍｉｕｒａ。
ランスｌＡＭ１２４３株をフスマ培地（６％フスマ抽出
液、０．５％マルト エキストラクト、０．５％イース
ト エキストラクト、０．５％ポリペプトン、 ０．０
５％塩（ヒカルシウム）で４８時間培養し、遠心分離に
て集菌、洗浄し、得られた菌体から５ａｉｔｏ、Ｍｉｕ
ｒａの方法（Ｓａｉｔｏ、Ｈ，ａｎｄ Ｍｉｕｒａ。
に、、Ｂｉｏｃｈｉｍ、８ｉｏｐｈｙｓ、Ａｃｔａ’、
′Ｌ２．６１９．（＋９６４））によって染色体ＤＮＡ
を分離し、これをトリス塩酸・ＥＤＴＡ緩衝液に、３解
し、制限酵素５ｉＬ３ＡＩ を添加して、３７℃で部分
分解した後、分解物からショ糖密度勾配超遠心法で約２
に６以上の染色体断片を分離、取得した。
′Ｌ２．６１９．（＋９６４））によって染色体ＤＮＡ
を分離し、これをトリス塩酸・ＥＤＴＡ緩衝液に、３解
し、制限酵素５ｉＬ３ＡＩ を添加して、３７℃で部分
分解した後、分解物からショ糖密度勾配超遠心法で約２
に６以上の染色体断片を分離、取得した。
用いたファージベクター人Ｌ４７のＤＮＡ概略開裂地図
は第１図に示した通りであり、このファージ入Ｌ４７Ｄ
ＮＡは４０．６Ｋｂで制限酵素ｈＬ旧によって２箇所切
断されるものである。
は第１図に示した通りであり、このファージ入Ｌ４７Ｄ
ＮＡは４０．６Ｋｂで制限酵素ｈＬ旧によって２箇所切
断されるものである。
ＬＬＨｌで切断したλＬ４７ＤＮＡと前記のバチルス・
マセランスＩＡ旧２４３株から得られた約２に６以上の
染色体断片を混合し、Ｔ４ＤＮＡリガーゼを添加して連
結処理した（ Ｗｅｉｓｓ、Ｂ、、５ａｂｌｏｎ、Ａ、
Ｊ、、Ｌｉｖｅ、Ｔ、Ｒ。
マセランスＩＡ旧２４３株から得られた約２に６以上の
染色体断片を混合し、Ｔ４ＤＮＡリガーゼを添加して連
結処理した（ Ｗｅｉｓｓ、Ｂ、、５ａｂｌｏｎ、Ａ、
Ｊ、、Ｌｉｖｅ、Ｔ、Ｒ。
、Ｆａｒｅｅｄ、Ｇ、Ｃ，ａｎｄ Ｒｉｃｌ＋ａｒｄｓ
ｏｎ、Ｃ，Ｃ，、Ｊ、Ｂｉｏｌ、 Ｃｈｅｗ。
ｏｎ、Ｃ，Ｃ，、Ｊ、Ｂｉｏｌ、 Ｃｈｅｗ。
、ηし−、４５４３．（１９６８））。処理液を、イン
ビトロバツケイジング キット（宝酒造社製品）に添
加して、イン ビトロ バツケイジング法（Ｈｏｒｎ、
８．、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、
ｊ３Ｊ３，２９９．（１９７９））により当該ＤＮＡを
７７一ジ粒子に導入した。このファージ粒子をエシェリ
ヒア・コリ讐Ｌ９５の菌体懸（窮ｌαに添加し、１％可
溶性澱粉、１．２％の寒天を含む入ｔｇＩｌ！！（バク
トドリブトンｌｏｇ、ＮａｃＩ２．５ｇを水１１に溶解
）に添加して、３７℃で培養し、出現したプラークにヨ
ウ素液を噴霧して、ヨウ素反応を起こさなかったファー
ジをサイクロデキストリン グルカノトランスフェラー
ゼ生産ファージとして分離することができた。
ビトロバツケイジング キット（宝酒造社製品）に添
加して、イン ビトロ バツケイジング法（Ｈｏｒｎ、
８．、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、
ｊ３Ｊ３，２９９．（１９７９））により当該ＤＮＡを
７７一ジ粒子に導入した。このファージ粒子をエシェリ
ヒア・コリ讐Ｌ９５の菌体懸（窮ｌαに添加し、１％可
溶性澱粉、１．２％の寒天を含む入ｔｇＩｌ！！（バク
トドリブトンｌｏｇ、ＮａｃＩ２．５ｇを水１１に溶解
）に添加して、３７℃で培養し、出現したプラークにヨ
ウ素液を噴霧して、ヨウ素反応を起こさなかったファー
ジをサイクロデキストリン グルカノトランスフェラー
ゼ生産ファージとして分離することができた。
得られたサイクロデキストリン グルカノトランスフェ
ラーゼ生産ファージを単離し、これをエシェリヒア・コ
リＷＬ６６とともに入培地で３７℃で培養した。培！！
液を遠心分離して宿主菌体な除き、ポリエチレングリコ
ールを加えてファージ粒子を凝集させたのち、遠心分離
によってファージ粒子を集め、新規なファージを得た。
ラーゼ生産ファージを単離し、これをエシェリヒア・コ
リＷＬ６６とともに入培地で３７℃で培養した。培！！
液を遠心分離して宿主菌体な除き、ポリエチレングリコ
ールを加えてファージ粒子を凝集させたのち、遠心分離
によってファージ粒子を集め、新規なファージを得た。
このファージをλＣＤ２と名づけた。
このファージ粒子を、５０％ホルムアミドを含むファー
ジ懸濁用緩衝液に対して透析し、入ＣＤ２ファージＤＮ
Ａを得た。ファージλＣＤ２ＤＮＡは４５．０にｂの大
きざで５そのフィジカルマツプ（制限酵素切断地図）を
第２図に示す。ここで白めさの部分はベクター人Ｌ４７
由来で、黒塗りの部分は染色体断片部分である。各略記
号はすべて制限酵素である。
ジ懸濁用緩衝液に対して透析し、入ＣＤ２ファージＤＮ
Ａを得た。ファージλＣＤ２ＤＮＡは４５．０にｂの大
きざで５そのフィジカルマツプ（制限酵素切断地図）を
第２図に示す。ここで白めさの部分はベクター人Ｌ４７
由来で、黒塗りの部分は染色体断片部分である。各略記
号はすべて制限酵素である。
このファージ入ＣＤ２ＤＮＡをβＰでラベルし、バチル
ス・マセランスＩＡ旧２４３株染色体ＤＮＡ 、エシェ
リヒア・コリーシ９５株染色体ＤＮＡおよびα−アミラ
ーゼ高生産株バチルス・ズブチリス（江■且邸錐■旦ｊ
） ＮＡ６４染色体ＤＮＡのそれぞれの巳四−Ｒ１分解
物とサザンハイプリダイゼーション（５ａｕｔｈｅｒｎ
、Ｅ、Ｍ、、、１．Ｍｏ１．Ｂｉｏｌ、、邦、５０３．
（＋９７５））を行ったところ、エシェリヒア・コリ、
バチルス・ズブチリス染色体ＤＮＡとは全くハイブリダ
イズしなかったが、バチルス・マセランスＩＡＭ１２４
３ Ｋの染色体ＤＮＡとは２箇所で特異的にハイブリダ
イズしており、クローン化した遺伝子はバチルス・マセ
ランスＩＡＭ１２４３株由来であることが確かめられた
。
ス・マセランスＩＡ旧２４３株染色体ＤＮＡ 、エシェ
リヒア・コリーシ９５株染色体ＤＮＡおよびα−アミラ
ーゼ高生産株バチルス・ズブチリス（江■且邸錐■旦ｊ
） ＮＡ６４染色体ＤＮＡのそれぞれの巳四−Ｒ１分解
物とサザンハイプリダイゼーション（５ａｕｔｈｅｒｎ
、Ｅ、Ｍ、、、１．Ｍｏ１．Ｂｉｏｌ、、邦、５０３．
（＋９７５））を行ったところ、エシェリヒア・コリ、
バチルス・ズブチリス染色体ＤＮＡとは全くハイブリダ
イズしなかったが、バチルス・マセランスＩＡＭ１２４
３ Ｋの染色体ＤＮＡとは２箇所で特異的にハイブリダ
イズしており、クローン化した遺伝子はバチルス・マセ
ランスＩＡＭ１２４３株由来であることが確かめられた
。
ここに得られた入ＣＤ２ファージＤＮＡをトリス塩酸・
ＥＤＴＡ緩衝液に溶解し、制限酵素Ｓｉ！Ｌ３Ａ１を添
加し、３７℃で部分分解した。分解物からショ糖密度勾
配超遠心法で約２に６以上の染色体断片を分離、取得し
、プラスミドｐＢＲ３２２を用いて再クローン化を図っ
た。
ＥＤＴＡ緩衝液に溶解し、制限酵素Ｓｉ！Ｌ３Ａ１を添
加し、３７℃で部分分解した。分解物からショ糖密度勾
配超遠心法で約２に６以上の染色体断片を分離、取得し
、プラスミドｐＢＲ３２２を用いて再クローン化を図っ
た。
再クローン化に用いたプラスミドｐＢＲ３２２の概略開
裂地図は第３図に示すが、このプラスミドｐＢＲ３２２
は４．４にｂてアンピシリン耐性（Ａｐ’ｌを有し、制
限酵素ＬＬｔ旧によって１箇所切断されるものである。
裂地図は第３図に示すが、このプラスミドｐＢＲ３２２
は４．４にｂてアンピシリン耐性（Ａｐ’ｌを有し、制
限酵素ＬＬｔ旧によって１箇所切断されるものである。
む」−旧で１第所切断したρＢＲ３２２と前記の入ＣＤ
２）７−ジから得られた約２に６以上の染色体断片を混
合し、Ｔ４ＤＮＡリガーゼを添加して連結処理した。こ
の処理）αを用い、エシェリヒア・コリＣ６００株を宿
主として、Ｌｅｄｅｒｂｅｒｇ、Ｃｏｈｅｎ法（Ｌｅｄ
ｅｒｂｅｒｇ、Ｅ、Ｍ、 ａｎｄ Ｃｏｈｅｎ、Ｓ、Ｎ
、、Ｊ、Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、＋１ｌｊｌｌ−、ＩＯ？
２＋（１９７４））により、当該プラスミドを導入した
。
２）７−ジから得られた約２に６以上の染色体断片を混
合し、Ｔ４ＤＮＡリガーゼを添加して連結処理した。こ
の処理）αを用い、エシェリヒア・コリＣ６００株を宿
主として、Ｌｅｄｅｒｂｅｒｇ、Ｃｏｈｅｎ法（Ｌｅｄ
ｅｒｂｅｒｇ、Ｅ、Ｍ、 ａｎｄ Ｃｏｈｅｎ、Ｓ、Ｎ
、、Ｊ、Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、＋１ｌｊｌｌ−、ＩＯ？
２＋（１９７４））により、当該プラスミドを導入した
。
得られた形質転換処理菌体を選択培地である可溶性お粉
１％、アンピシリン５０μｇ／ｌ、寒天１．６％を含む
し培地（バクトドリブトン１０ｇ、酵母エキス５ｇ 、
ＮａＣ１５ｇを１１の水に溶解）にて３７℃で培養し、
アンピシリン耐性株を得た。このアンピシリン耐性株を
アンピシリン５０μｇ／ｍｌ、１％可溶性澱粉を含むし
培地にて３７℃で２４時間培養し、培！Ｉ液中のサイク
ロデキストリンの有無をペーパークロマトグラフィーお
よび高速液体クロマトグラフィーによって調べた。
１％、アンピシリン５０μｇ／ｌ、寒天１．６％を含む
し培地（バクトドリブトン１０ｇ、酵母エキス５ｇ 、
ＮａＣ１５ｇを１１の水に溶解）にて３７℃で培養し、
アンピシリン耐性株を得た。このアンピシリン耐性株を
アンピシリン５０μｇ／ｍｌ、１％可溶性澱粉を含むし
培地にて３７℃で２４時間培養し、培！Ｉ液中のサイク
ロデキストリンの有無をペーパークロマトグラフィーお
よび高速液体クロマトグラフィーによって調べた。
ペーパークロマトグラフィーは培養液をｎ−ブタノール
／ｎ−プロパツール／水（３１５／４）の溶媒系で６０
℃、２回上昇眉間を行ったのち、９０％アセトンのヨウ
素溶液にペーパークロマトグラムを漫してサイクロデキ
ストリンの呈色を検索し、発色したものをサイクロデキ
ストリン グルカノトランスフェラーゼ分泌株として分
離することができた。
／ｎ−プロパツール／水（３１５／４）の溶媒系で６０
℃、２回上昇眉間を行ったのち、９０％アセトンのヨウ
素溶液にペーパークロマトグラムを漫してサイクロデキ
ストリンの呈色を検索し、発色したものをサイクロデキ
ストリン グルカノトランスフェラーゼ分泌株として分
離することができた。
得られたサイクロデキストリン グルカノトランスフェ
ラーゼ生産菌株を単離し、これをアンピシリン５０μｇ
／ｍｌを含むし培地にて３７℃で培養し、培′！！液を
遠心分離して集菌し、洗浄後、分離菌体からアルカリ抽
出法（ＢｉｒｎｂｏｉＩＩ、Ｈ，Ｃ，ａｎｄ Ｄｏｌｙ
＋Ｊ、。
ラーゼ生産菌株を単離し、これをアンピシリン５０μｇ
／ｍｌを含むし培地にて３７℃で培養し、培′！！液を
遠心分離して集菌し、洗浄後、分離菌体からアルカリ抽
出法（ＢｉｒｎｂｏｉＩＩ、Ｈ，Ｃ，ａｎｄ Ｄｏｌｙ
＋Ｊ、。
Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｓ１ｄｓ Ｒｅｓ、＋ Ｌ 、＋５
１３．（＋９７９））によってプラスミドを分離、探索
し、新規なプラスミドを得た。このプラスミドをプラス
ミドｐＥＤｓｌ と名づけた。
１３．（＋９７９））によってプラスミドを分離、探索
し、新規なプラスミドを得た。このプラスミドをプラス
ミドｐＥＤｓｌ と名づけた。
プラスミドｐＥＤｓ＋は８．８Ｋｂの大きさで、そのプ
イジカルマップ〈制限酵素切断地図）を第４図に示す、
ここで白ぬきの部分はベクターｐ８Ｒ３２２由来で、黒
塗りの部分は染色体断片部分てあり、各略記号はすべて
制限酵素である。
イジカルマップ〈制限酵素切断地図）を第４図に示す、
ここで白ぬきの部分はベクターｐ８Ｒ３２２由来で、黒
塗りの部分は染色体断片部分てあり、各略記号はすべて
制限酵素である。
試験例１ サイクロデキストリン グルカノトランスフ
ェラーゼの生産 アンピシリン５０μ８／１を含むＬ培地を、５００ｍ
ｌた。その間培養物をｆｍｌずつ採取して、生産される
サイクコデキストリン グルカノトランスフェラーゼの
活性を測定した。
ェラーゼの生産 アンピシリン５０μ８／１を含むＬ培地を、５００ｍ
ｌた。その間培養物をｆｍｌずつ採取して、生産される
サイクコデキストリン グルカノトランスフェラーゼの
活性を測定した。
第５図は、サイクロデキストリン グルカノトランスフ
ェラーゼ活性の経時的変化を示すものである。ここてＡ
はサイクロデキストリン グルカノトランスフェラーゼ
活性、Ｂは菌の生育を示している。
ェラーゼ活性の経時的変化を示すものである。ここてＡ
はサイクロデキストリン グルカノトランスフェラーゼ
活性、Ｂは菌の生育を示している。
第５図から明らかなように、サイクロデキストリン グ
ルカノトランスフェラーゼ活性は培養後８時間で最高値
に達する。
ルカノトランスフェラーゼ活性は培養後８時間で最高値
に達する。
第１ＵｊＪはファージλＬ４７のフィジカルマツプ（制
限酵素切断地図）、第２図はファージλＣＤ２のフィジ
カルマツプ、第３図はプラスミドｐＢＲ３２２のフィジ
カルマツプ、第４図はｐＥＤｓ＋のフィジカルマツプを
それぞれ示している。 第５図は試験例においてサイクロデキストリングルカノ
トランスフェラーゼ活性の経時変化および菌の生育を示
す図である。 第３図 第４図 リイクにｌｉｐキストリン グルカノトランスフ１Ｌ＋
ラー’Ｌ！ ｉ工（”１５（−＊ −ｕｎｉｔｓ／ｍｌ
） 手続補正書（自発） 昭和６０年１１月２７日
限酵素切断地図）、第２図はファージλＣＤ２のフィジ
カルマツプ、第３図はプラスミドｐＢＲ３２２のフィジ
カルマツプ、第４図はｐＥＤｓ＋のフィジカルマツプを
それぞれ示している。 第５図は試験例においてサイクロデキストリングルカノ
トランスフェラーゼ活性の経時変化および菌の生育を示
す図である。 第３図 第４図 リイクにｌｉｐキストリン グルカノトランスフ１Ｌ＋
ラー’Ｌ！ ｉ工（”１５（−＊ −ｕｎｉｔｓ／ｍｌ
） 手続補正書（自発） 昭和６０年１１月２７日
Claims (1)
- サイクロデキストリン グルカノトランスフェラーゼを
生産するエシェリヒア・コリ。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18985185A JPS6251979A (ja) | 1985-08-30 | 1985-08-30 | 変異エシエリヒア・コリ |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18985185A JPS6251979A (ja) | 1985-08-30 | 1985-08-30 | 変異エシエリヒア・コリ |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6251979A true JPS6251979A (ja) | 1987-03-06 |
Family
ID=16248248
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP18985185A Pending JPS6251979A (ja) | 1985-08-30 | 1985-08-30 | 変異エシエリヒア・コリ |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6251979A (ja) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61135589A (ja) * | 1984-12-03 | 1986-06-23 | Hayashibara Biochem Lab Inc | シクロマルトデキストリン グルカノトランスフエラ−ゼ遺伝子を含む組換えｄｎａとその利用 |
| JPS61135581A (ja) * | 1985-10-14 | 1986-06-23 | Hayashibara Biochem Lab Inc | シクロマルトデキストリングルカノトランスフエラ−ゼ活性を有するポリペプチド |
-
1985
- 1985-08-30 JP JP18985185A patent/JPS6251979A/ja active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61135589A (ja) * | 1984-12-03 | 1986-06-23 | Hayashibara Biochem Lab Inc | シクロマルトデキストリン グルカノトランスフエラ−ゼ遺伝子を含む組換えｄｎａとその利用 |
| JPS61135581A (ja) * | 1985-10-14 | 1986-06-23 | Hayashibara Biochem Lab Inc | シクロマルトデキストリングルカノトランスフエラ−ゼ活性を有するポリペプチド |
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