JPS6277325A - アルブミンの膜分離方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は、アルブミンの膜分離方法に関するものである
。詳しくは、再生セルロース多孔膜を用いて、血漿タン
パクを含む溶液からアルブミンを）へ択的に分離する方
法に関するものである。

（人間の）面液中に含まれる血漿タンパクのうち、アル
ブミンは脂肪酸、酵素、ホルモンなどの低分子物質と結
合して、その運搬体としての働きや血漿の膨質浸透圧の
調整により、循環匍液量を保持する働き等がある。

アルブミンは血漿中より分離、濃縮されアルブミン製剤
として治療等に利用されている。本発明は血漿及び血漿
タンパクを含む溶液からアルブミンを選択的に分離する
刃尖を提供する。同時に。

血漿タンパクを含む溶液中に存在するウィルス或いは他
の微生物を除去する方法を提供する。

従来の技術 従来、血漿タンパクを含む溶液からアルブミンを分離す
るには、エタノール分画法等の如く該溶液に沈殿剤を加
えたり、塩析を生じさせ、その後遠心分離による方法が
行なわれている。しかし、低濃度の血漿タンパク質溶液
に沈殿剤を加えたり。

塩析を生じる条件においても液が白濁するのみで凝集、
沈殿を生じない場合が多い。特に、高分子物質のような
保設畳質を含んだ血漿タン・（り溶液ではその傾向が顕
著であり、遠心分離では分離できないという問題点があ
る。

また１血漿タンパクの分子の大きさの差を利用し、限外
濾過法により膜の孔を′ｆ１１用する方法も検討されて
いる。しかし、この場合、タンパク質が膜に吸着し回収
率が低いという問題及び分離係数が小さく、精製度が充
分でないという問題がある。

発明が解決しようとする問題点 本発明は、上述の遠心分離法或いは限外濾過法による血
漿タンパク溶液からアルブミンの分離における問題点を
解決し、再生セルロース膜を用い高選択性且つ高収率で
アルブミンを分離する方法を提供する。

すなわち、本発明の目的は血漿を含む浴液に酸性有機溶
液金加え、アルブミン以外の血漿タンパクと酸との化合
物を生じしめ、再生セルロース多孔膜で該化合物を除去
した後、Ｐ数音中和しアルブミンゲ沈殿として分離する
アルブミンの膜分離方法全提供することにある。また、
本発明の方法’Ｋ　、１：ると血漿タンパクを含む溶液
中に存在するウィルス或いは微生物等をも同時に除去す
る方法を提供する。

問題点を解決するための手段 本発明は血漿タンパクを含む溶液に酸性有材−溶液を加
え、アルブミン以外の血漿タンパク−酸化合物を生じさ
せ、平均孔径が０．０２〜０．２μｍＸ空孔率１０チ以
上の再生セルロース多孔膜で該化合物を除去し、しかる
後、涙液を中和レアルプミンを沈殿として分離すること
を特徴とするアルブミンの膜分矧［方法である。

即ち、本発明の方法は、血漿タンパクを含む溶液に酸性
有＆渚液を加え、アルブミン以外の血漿タンパクと酸と
の化合物を形成せしめた後、該化合物を平均孔径０．０
２μｍ−０，２μｍ１空孔率１０％以上、４次の平均孔
径（７４）と３次の平均孔径（７３）との比（γ４／γ
３）が１．３以下である孔径分布を有す再生セルロース
多孔膜で濾過し、アルブミン以外の血漿タンパク−酸化
合物を除去する。しかる後、炉液を中和し、アルブミン
を沈殿として分離回収することを特徴とする。

本発明の特徴は、第１に再生セルロース多孔膜を用いる
ことである。血漿タンパクの高分子多孔膜への吸着性の
相関を検討した結果、高分子多孔膜が親水性であるほど
血漿タンパクの吸着量が少ないことが明らかになった。

すなわち、セルロース系高分子多孔膜は殆んど血漿タン
パクを吸着しない。なかでも、再生セルロース多孔膜の
血漿タンパク吸着量は、セルロースアセテート多孔膜、
セルロースナイトレート多孔膜のそれに較べて少ない。

このような血漿タンパク吸着量の極めて小さい再生セル
ロース多孔膜音用いて、血漿タンパクを含む密液を濾過
する場合、膜面への血漿タンパク吸＠による液の膜透過
速度の低下及び血漿タンパクの回収率の低下もない。

本発明でいう再生セルロース多孔膜とは、膜表面及び膜
断面を電子顕微鏡で観察したとき、いずれの面において
も０．０２μｍ以上の孔が観察されるＢ’Ａｋ危味し平
膜状、中空糸状及びチューブ状いずれの形態のものも利
用される。膜の平均孔径が０．０２μｍ未満では限外濾
過速度が非常に小さく、また溶液中Ｋｉ解している血漿
タンパク（アルブミン）のろ液中への回収率が極端ＫＩ
ＪＸさくなる。

例えば、血漿ＶＣ０，０７規定の塩酸メタノール浴液を
加えたものの濾過では涙液中へのアルブミン回収率は２
０％以下である。従って、朽生でルロース多孔膜の孔径
は、アルブミン以外の血漿クンバクと酸との化合物を除
去可能な範囲で太）ければ大きいほど良いが、上記血漿
タンパク−酸化合物および血漿タンパク密液中の微生物
粒子の涙液中への混入を防止するため０．２μｍ　Ｊ、
”ノ、下であることが必要である。

また、再生セルロース多孔版の空孔率は１０％以上必要
である。１０チ未満では限外濾過速度が非常に小さい。

空孔率が６０％を越えると多孔膜の力学的性質が低下し
、ピンホールなど欠陥を生じたり、多孔膜を本１６成す
るセルロースが欠落し、涙液中に混入する恐れもめる。

一力、同一の平均孔径、空孔率の再生セルロース多孔膜
Ｖ？−お・いて、限外濾過速度の孔径分布依存性を検討
した結果、γ４／γ３の値が小さいｕ濾過速Ｈとが大き
くなることを見出し、γ４／γ３く１．３においてアル
ブミン９外の血漿タンパク−酸化合物を除去し、且つ濾
過速度も太きくなるという知見をイＨた　。

このような、４ｊ」生セルロース多孔膜は、酢酸セ、／
Ｉ１０〜スあるいハ硝酸セルロースなどのセルロース誘
導体多孔膜をアルカリ水溶液でケ／化することπより得
ることが知られている（米国特ト第４２１９５１７号）
。しかし、得られる多孔膜の力学的性質（特に強度）の
上からは、銅アンモニア伝の再生セルロース多孔膜が好
ましい。

本発明の第２の特徴は、血漿タンパクを含む溶液に酸性
有機溶液を加え、アルブミンを溶解状態に保ったま１、
その他の血漿タンパク−酸化合物を不溶物とすることで
ある。

一般に血漿からアルブミンを分離するには、コーン分画
法が知られている。しかし、コーン分画でアルブミンを
濃縮・精製する場合、第４分画以下ではじめて９８％以
上のアルブミンが得られる。

−刀、血漿タンパクと酸とが化合物を形成することは知
られていたが、これらの化合物は水溶液中では不溶性で
ありアルブミン全分離することは極めて困難である。

デラヴイール（Ｄｅｌａｖｉｌｌｅ　、Ｇ、）はトリク
ロロ酢酸アルコール溶液中でアルブミンは溶解するが、
他の血漿タンパクはトリクロロ酢酸と化合物を生成し不
消化することを示した。〔アニュアル・リポート・オブ
・ファーマコロジー　フランス（Ａｎｎ　。

ｐｈａｒｍ、　Ｆｒａｎｃｅ、　１２１．０９　（１９
５４４）Ｏ〕本発明者らは、血漿タンパク−酸化合物の
有機溶媒への溶解性の差に着眼し鋭意検討した結果本発
明に到達した。すなわち、血漿タンパクを含む浴液に酸
性有機溶液を加え、アルブミン以外の血漿タンパク−酸
化合物を生成させ、該化合物を再生セルロース多孔膜で
Ｆ遇することにより、アルブミンのみを含む濾液を得る
。しかる後、該炉液全中和し、アルブミンを沈殿として
分離することを特徴とするアルブミンの膜分離方法であ
る。

ここで酸性有機浴液とは、塩酸、トリクロロ酢酸、モノ
クロロ酢酸、ギ酸、乳酸、サリチル酸、クエン酸、酒石
酸等からなる群から選ばれる１種以上の酸及び有機溶媒
で構成される。有機溶媒としては水と任意Ｖｃｌ解し合
うメタノール、エタノール、アセトン、メチルエチルケ
トン等が利用できる。この時の酸濃度は０．０１規定以
上が好ましい。酸濃度が０．０１規定以下の場合には、
アルブミンの洛解量が小さくなり回収率が低くなる。

また、血漿タンパクを含む溶液に加える酸性有機溶液の
鉛は、タンパク質溶液の匍量〜２０倍量が好ましい。酸
性有機溶液が等量未満の場合はアルブミン−酸化合物も
一部不溶となりアルブミンの回収率が低下する。また、
２０倍お以上では、アルブミン以外の血漿タンパク−酸
化合物が一部沼角トシ、最終的に得るアルブミンの純度
が低下する。アルブミン以外の血漿タンパクを除去し、
アルブミンのみを含む酸性有機溶液から沈殿としてアル
ブミンを分離するために用いる中和剤は、水酸化ナトリ
ウム、水酸化カリウム等の剣、機物或いはジエチルアミ
ン等の有機塩基が利用できるが、中和によりアルブミン
以外の沈殿物を生じるものは使用できない。例えば、酸
性アセトン浴液では無機アルカリは使用できない。

本発明の方法で得るアルブミンの物理化学的性質すなわ
ち、種々のｐＨの水θ液への浴が性、電気泳動度、飾光
性は、崩漿よりコーン分画法で得られるアルブミンと同
じであり、本発明により血漿タンパクを含む溶液からア
ルブミンを高選択的に且つ高回収率で分熱することが可
能である。

本発明でいう再生セルロース多孔膜の平均孔径γ４／γ
３及び（平均）全孔率の測定力法は次のとおりである。

〈再生セルロース多孔膜の平均孔径ｒ４／ｒ３の測定力
法〉 多孔膜１−尚りの孔半径がγ〜γ＋ｄｒに存在する孔の
数ｋ　Ｎ（ｒ）　ｄｒと表わすと（Ｎ（ｒ）は孔径分墳
】１メ」数）、ｉ次の平均孔半径γｉは（１）式で与え
られる。

和牛セルロース多孔膜の表面のｔ子顕微鏡写真を走査ハ
２電子顕微鏡を用いて撮影する。該４共から公知の方法
で孔径分布関数Ｎ　（ｒ）を専出し、これを（１）式に
代入する。すなわち、走査型電子顕微鏡写真を適当な大
きさく例えば２０ｃＴｎＸ２０（７））に拡大、焼付け
し、得られた写真上に等間隔にテストライン（直Ｍ）ｋ
ｚｏ本描く。各々のテストラインは多砂の孔を横切る。

孔を横切った時の孔内に存在するテストラインの長さを
測定し、この頻吸分布関数を求める。このｆＡ度分布関
数を用いて、０１」えは、ステレオロジ（例えは、諏訪
紀夫迄０定量形態学”岩波昏店）の′５法でＮ（ｒ）を
定める。なお、平均孔径は２γ３である。

また、γ４／γ３は上記、（１）式でう）、出さするγ
４．γ３から直接計算される。

く（平均）空孔率の測定方法〉 平面状の多孔膜の場合、４７ｗＪＲφの円形に切り出し
、該多孔膜を真空乾燥し、水分率を０．５チ以下とする
。乾燥後の多孔膜の厚さをｄ（σ）、重量をＷ（１）と
すると、空孔率Ｐｒρ（イ）は（２）式で与えられる。

中空糸状多孔膜の場合、中空糸の内径をＤ２（ｃｒｎ）
、外径をり、（σＩ）とし、中空糸の長さをｔ（ｃｒｎ
）、重量’ｘ　Ｗ　（ｆ）とすると、Ｐｒｐは（３）式
で与えられる。

Ｐｒｐ（％）＝（１２２〕×１００（３）０．３７５Ｘ
ｙｒ×（ＤＩ　−Ｄ２　）　ｘｔ実施例 本発明を更に詳細に説明するため、以下に実施例を示す
が、本発明は下記の実施例により何ら制限されるもので
はない。

実施例１ １重量％の生血アルブミン水溶液及び１重量％牛血グロ
ブリンの生理食塩水溶液′ｆ：２５℃下で等量混合し、
血漿タンパク清液とした。この血漿タンパク溶液１容に
対し０．０２規定の塩酸メタノール溶液１０容を室温下
で加えたところ液が白濁した。この白濁した溶液を、平
均孔径０．０５μｍ１Ｆ４／Ｆ３＝　１．２．９ｕ孔率
３５％の銅アンモニア法再生セルロース多孔膜でν過し
たところ、透明なり液が得られた。この濾液に苛性リー
グを加え、ｐＨ’ｉ６にしたところ、アルブミンが結晶
とじて析出した。

この時のアルブミンの純度は９８チ、回収率は９２％で
あった。

実施例２ 血漿タンパク溶液として牛血清、酸性有機溶液として０
．１９規定トリクロロ酢酸の６０％アセトン水溶液を用
いた以外は実施例１と同様に行なった。得られたアルブ
ミンの純度は９８チ、回収率は７８チであった。

比較例 平均孔径０．０５μｍ、空孔率１１係のポリカーボネー
ト膜にュクリボア膜）を用いた以外は実施例１と同様に
行なった０得られたアルブミンの純度は９８チであった
が、回収率は２６％と低かった。

このように本発明の方法によれば血漿タンノくり浴液か
ら高選択性、高回収率でアルブミンを分離することが可
能である０ 発明の効果 本発明の方法によれば、面漿タンノ（り浴液の血睡タン
パクの組成（アルブミンの含有率）Ｋよらず、高選択的
に、高回収率でアルブミンを分離することができる。

′１．た、本発明の方法で得るアルブミンは、元のアル
ブミンと同じ性状を示す。従って、本発明の方法は、血
漿製剤分野匠おけるアルブミンの分離等に退屈すること
ができる。しかも、回収されるアルブミン中には、血漿
中π混入している恐れのある微生物粒子が除去されてい
る。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）血漿タンパクを含む溶液に酸性有機溶液を加え、
   アルブミン以外の血漿タンパク−酸化合物を生じさせ、
   平均孔径が０．０２〜０．２μｍ、空孔率１０％以上の
   再生セルロース多孔膜で該化合物を除去し、しかる後、
   濾液を中和しアルブミンを沈殿として分離することを特
   徴とするアルブミンの膜分離方法
2. （２）再生セルロース多孔膜が銅アンモニア法セルロー
   ス多孔膜であることを特徴とする特許請求の範囲第１項
   記載のアルブミンの膜分離方法