JPS63238042A - 新規物質ｕｃｎ―１０２８ａ - Google Patents
新規物質ｕｃｎ―１０２８ａInfo
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- JPS63238042A JPS63238042A JP62072378A JP7237887A JPS63238042A JP S63238042 A JPS63238042 A JP S63238042A JP 62072378 A JP62072378 A JP 62072378A JP 7237887 A JP7237887 A JP 7237887A JP S63238042 A JPS63238042 A JP S63238042A
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- culture
- medium
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- protein kinase
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- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
生栗上■肌■丘団
本発明はＵＣＮ −１０２８Ａおよびその製造法に関す
る。
る。
ＵＣＮ−１０２８へは抗腫瘍活性、プロティンキナーゼ
Ｃ阻害活性等を有し、抗腫瘍剤、発癌抑制剤等として有
用である。
Ｃ阻害活性等を有し、抗腫瘍剤、発癌抑制剤等として有
用である。
従来至投開
ＵＣＮ −１０２８Ａと構造が類似している物質として
は、牧草に斑点病をおこすクラドスポリウム・フレイ（
Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ ｐｈｌｅｉ）から植物毒と
して単離されたフレイクロームが知られている〔アグリ
力ルチャル・アンド・バイオロジカル・ケミストリー（
Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ ＆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ
Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）３９゜１６８３ （１９７５）
、日草誌、筺（４） ： ４２６ （１９８３） ）
。
は、牧草に斑点病をおこすクラドスポリウム・フレイ（
Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ ｐｈｌｅｉ）から植物毒と
して単離されたフレイクロームが知られている〔アグリ
力ルチャル・アンド・バイオロジカル・ケミストリー（
Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ ＆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ
Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）３９゜１６８３ （１９７５）
、日草誌、筺（４） ： ４２６ （１９８３） ）
。
発Ｈが解決しようとする問題点
フレイクロームは抗腫瘍活性およびプロティンキナーゼ
Ｃ阻害活性が弱い。
Ｃ阻害活性が弱い。
問題点を解決するための手段
本発明によると、タラトスボリウム属に属する微生物を
培地に培養することにより、優れた抗腫瘍活性およびプ
ロティンキナーゼＣ阻害活性を有する 式 で表わされるＵＣＮ −１０２８Ａが提供される。
培地に培養することにより、優れた抗腫瘍活性およびプ
ロティンキナーゼＣ阻害活性を有する 式 で表わされるＵＣＮ −１０２８Ａが提供される。
以下にＵＣＮ −１０２８Ａの物理化学的性質、生理活
性および抗腫瘍活性を示す。
性および抗腫瘍活性を示す。
（Ａ）物理化学的性質
（１）分子式： Ｃ４４ＨｚｓＯ＋ｚ
（２）分子量ニア５８
（３）質量分析：Ｅｉマススペクトル法、第１図に示す
。
。
（４）紫外部吸収スペクトル：第２図に示す。
（Ｍ ｅ ＯＴｌ中で測定）
（５）光外部吸収スペクトル：第３図に示す。
（ＣＩＩＣｌ 、中で測定）
（６）溶解性：水に不溶
アルカリ水、メタノール、アセト
ン、ｎ−ヘキサンに可溶
クロロホルム、酢酸エチルに易溶
（７） ’Ｈ−ＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ 、
ＣＤＣｊ！ ３中で測定、内部標準ＴＭＳ） δ（ｐｐｍ） １．３（ｄ、６Ｈ）、 ３．２（ｍ、２
Ｈ）、 ３．７（ｍ、２ｔｌ）。
ＣＤＣｊ！ ３中で測定、内部標準ＴＭＳ） δ（ｐｐｍ） １．３（ｄ、６Ｈ）、 ３．２（ｍ、２
Ｈ）、 ３．７（ｍ、２ｔｌ）。
３．８（ｓ、６Ｈ）、 ４．３（ｓ、６１１）、 ５．
０（ｍ、２Ｈ）、 ６．２（ｓ。
０（ｍ、２Ｈ）、 ６．２（ｓ。
２Ｈ）、 ６．９（ｍ、８１１）、 ７．２（ｍ、２１
１）、 ５．９（ｓ、２１１）（８） １３Ｃ−ＮＭ
Ｒスペクトル（４００ＭＨｚ −ＣＤＣｌ ｘ中で測定
、内部標準ＴＭＳ） δ（ｐｐｍ） 第４図に示す。
１）、 ５．９（ｓ、２１１）（８） １３Ｃ−ＮＭ
Ｒスペクトル（４００ＭＨｚ −ＣＤＣｌ ｘ中で測定
、内部標準ＴＭＳ） δ（ｐｐｍ） 第４図に示す。
（９） 薄層クロマトグラフィー
シリカゲルＴＬＣ（Ａｒｔ ５７１５ Ｅ、 Ｍｅｒ
ｃｋ社製）でクロロホルム：メタノール（９７：３ｖ／
いの展開系でＲｆは０．６０である。
ｃｋ社製）でクロロホルム：メタノール（９７：３ｖ／
いの展開系でＲｆは０．６０である。
（Ｂ）生理活性
（１１プロティンキナーゼＣ阻害活性
プロティンキナーゼＣ阻害活性の測定は吉川らの方法〔
ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ
ｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｎ
＋１ｓｔｒｙ）２５７１３３４１ （１９８２） ）で
行った。
ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ
ｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｎ
＋１ｓｔｒｙ）２５７１３３４１ （１９８２） ）で
行った。
具体的には、２．５μ５ｏｌｅ 酢酸マグネシウム、
５０μｇヒストンタイプＵｓ（シグマ社製）、２０μｇ
ホスファチジルセリン、０．８μｇダイオレイン、２５
ｎ ｍｏｌｅ ＣａＣｊ！２．５ ｐｇ粗酵素（吉川ら
の方法によりラットの脳より部分精製したもの）、５
ｐ ｒ＠）ｌｅ ）リス塩酸緩衝液（ｐＨ７，５）を含
む２５０μｌの溶液に１０μｌの検体（ＵＣＮ −１０
２８Ａまたはレフイクローム）溶液を加え、３０℃で３
分間、インキュベートした。つぎに、１．２５ｎ ｍｏ
ｌｅ （γ−３２Ｐ〕＾ＴＰ （５〜１０Ｘ１０’ ｃ
ｐｍ／ｎ ｍｏｌｅ）を加え、３０℃で３分間、リン酸
化反応を行った後、２５％トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）を
加えて反応を停止させた。反応液を酢酸セルロース膜（
ポアサイズ０．４５μｍ） （東洋濾紙社製）で濾過し
、５％ＴＣＡで４回洗浄後、該膜上に残った放射活性を
測定した。一方、検体を加えないで前記と同様に放射活
性を測定し対照とした。対照に対して５０％阻害を示す
検体の濃度をＩＣｓ。とじた。
５０μｇヒストンタイプＵｓ（シグマ社製）、２０μｇ
ホスファチジルセリン、０．８μｇダイオレイン、２５
ｎ ｍｏｌｅ ＣａＣｊ！２．５ ｐｇ粗酵素（吉川ら
の方法によりラットの脳より部分精製したもの）、５
ｐ ｒ＠）ｌｅ ）リス塩酸緩衝液（ｐＨ７，５）を含
む２５０μｌの溶液に１０μｌの検体（ＵＣＮ −１０
２８Ａまたはレフイクローム）溶液を加え、３０℃で３
分間、インキュベートした。つぎに、１．２５ｎ ｍｏ
ｌｅ （γ−３２Ｐ〕＾ＴＰ （５〜１０Ｘ１０’ ｃ
ｐｍ／ｎ ｍｏｌｅ）を加え、３０℃で３分間、リン酸
化反応を行った後、２５％トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）を
加えて反応を停止させた。反応液を酢酸セルロース膜（
ポアサイズ０．４５μｍ） （東洋濾紙社製）で濾過し
、５％ＴＣＡで４回洗浄後、該膜上に残った放射活性を
測定した。一方、検体を加えないで前記と同様に放射活
性を測定し対照とした。対照に対して５０％阻害を示す
検体の濃度をＩＣｓ。とじた。
その結果を第１表に示す。
（２）プロティンキナーゼＡ阻害活性
プロティンキナ−ゼム活性の測定はクオ（Ｋｕｏ）らの
方法〔バイオケミストリー（Ｂ ｉｏｃｈｅｍ ｉｓ
ｔｒｙ）６４、１３４９（１９６９））で行った。具体
的には、５ ｐ ｍｏｌｅトリス塩酸緩衝液（ｐＨ６，
８） 、２．５μｍｏｌｅ酢酸マグネシウム、１００μ
ｇヒストンタイプＩｔｓ（シグマ社製）１．０．２５
ｎｍｏｌｅ Ｃ−ＡＭＰ 、 ２００μｇ粗酵素〔クオ
（Ｋｕｏ） らの方法により子牛の心臓より部分精製し
たもの〕を含む２５０μｌの溶液に１０μｌの検体溶液
を加え、以下、前記プロティンキナーゼＣ阻害活性の測
定の場合と同様に行いＩＣ５゜を求めた。その結果を第
１表に示す。
方法〔バイオケミストリー（Ｂ ｉｏｃｈｅｍ ｉｓ
ｔｒｙ）６４、１３４９（１９６９））で行った。具体
的には、５ ｐ ｍｏｌｅトリス塩酸緩衝液（ｐＨ６，
８） 、２．５μｍｏｌｅ酢酸マグネシウム、１００μ
ｇヒストンタイプＩｔｓ（シグマ社製）１．０．２５
ｎｍｏｌｅ Ｃ−ＡＭＰ 、 ２００μｇ粗酵素〔クオ
（Ｋｕｏ） らの方法により子牛の心臓より部分精製し
たもの〕を含む２５０μｌの溶液に１０μｌの検体溶液
を加え、以下、前記プロティンキナーゼＣ阻害活性の測
定の場合と同様に行いＩＣ５゜を求めた。その結果を第
１表に示す。
第 １ 表
ＵＣＮ −１０２８八はフレイクロームに比べて、選択
的にプロティンキナーゼＣ阻害活性を有する。
的にプロティンキナーゼＣ阻害活性を有する。
（Ｃ）抗腫瘍活性
（１１ＭＣＦ７細胞
９６六マイクロタイタープレートにＲＰＭＩ １６４０
培地（Ｇｉｂｃｏ社製）、１０％牛脂児血清、１０μｇ
／ｍｌインシュリン及び１０−８Ｍエストラジオールか
らなる培地（以下、培地Ａと称す）で４．５Ｘ１０’個
／ ｍ ｌに調製したＭＣＦ ７細胞を０．１ｍｊ２ず
っ該プレートの各穴に分注した。該プレートを炭酸ガス
インキュベータ内で３７℃、２０時間培養後、これに培
地Ａにより適宜希釈した検体０．０５ｎ＋ｊ！ずつ加え
た。その後、３７℃で１時間炭酸ガスインキュベータ内
で培養後、培養上清を除去した。
培地（Ｇｉｂｃｏ社製）、１０％牛脂児血清、１０μｇ
／ｍｌインシュリン及び１０−８Ｍエストラジオールか
らなる培地（以下、培地Ａと称す）で４．５Ｘ１０’個
／ ｍ ｌに調製したＭＣＦ ７細胞を０．１ｍｊ２ず
っ該プレートの各穴に分注した。該プレートを炭酸ガス
インキュベータ内で３７℃、２０時間培養後、これに培
地Ａにより適宜希釈した検体０．０５ｎ＋ｊ！ずつ加え
た。その後、３７℃で１時間炭酸ガスインキュベータ内
で培養後、培養上清を除去した。
残渣をＰｒｏＳ （ｕ成： ＮａＣ１Ｂｇ／７！、Ｋ
ＣＪ ０．２ｇ／ ｌ 、 Ｎａ２１１ＰＯ４１，５ｇ
／ Ｉ！及びＫＩＩＺＰＯ４０，２ｇ ／ １ ）で
−回洗浄後、これに新鮮な培地Ａを０．１ｍｌずつ加え
、炭酸ガスインキベータ内で３７℃、７２時間培養した
。培養上清を除去後、残渣に培地Ａ及び０．０２％ニュ
ートラルレッドからなる培地を０．１ｍｊｌ！ずつ加え
、３７℃で１時間炭酸ガスインキュベータ内で培養し、
細胞を染色した。培養上清を除去後、残渣を生理食塩水
で１回洗浄した。
ＣＪ ０．２ｇ／ ｌ 、 Ｎａ２１１ＰＯ４１，５ｇ
／ Ｉ！及びＫＩＩＺＰＯ４０，２ｇ ／ １ ）で
−回洗浄後、これに新鮮な培地Ａを０．１ｍｌずつ加え
、炭酸ガスインキベータ内で３７℃、７２時間培養した
。培養上清を除去後、残渣に培地Ａ及び０．０２％ニュ
ートラルレッドからなる培地を０．１ｍｊｌ！ずつ加え
、３７℃で１時間炭酸ガスインキュベータ内で培養し、
細胞を染色した。培養上清を除去後、残渣を生理食塩水
で１回洗浄した。
ついでＯ，０ＯＩＮ塩酸／３０％エタノールで色素を抽
出後、マイクロプレートリーダーにより５５０ｎｍの吸
光度を測定した。無処理細胞と既知濃度の検体で処理し
た細胞の吸光度を比較することにより細胞の増殖を５０
％阻害する検体濃度（ＩＣ１゜）を算出した。その結果
を第２表に示す。
出後、マイクロプレートリーダーにより５５０ｎｍの吸
光度を測定した。無処理細胞と既知濃度の検体で処理し
た細胞の吸光度を比較することにより細胞の増殖を５０
％阻害する検体濃度（ＩＣ１゜）を算出した。その結果
を第２表に示す。
（２１Ｈｅ１ａＳ３細胞
９６穴マイクロタイタープレートにＭＥＭ培地（日永製
薬製）及び２ｍＭグルタミンからなる培地で３Ｘ１０’
個／ｍｌに調製したＨｅ１ａＳ、細胞を０．１ｍｊ２ず
つ該プレートの各穴に分注した。以下前記ＭＣＦ ７細
胞の場合と同様にしてＩＣ１゜を算出した。その結果を
第２表に示す。
薬製）及び２ｍＭグルタミンからなる培地で３Ｘ１０’
個／ｍｌに調製したＨｅ１ａＳ、細胞を０．１ｍｊ２ず
つ該プレートの各穴に分注した。以下前記ＭＣＦ ７細
胞の場合と同様にしてＩＣ１゜を算出した。その結果を
第２表に示す。
第 ２ 表
次にＵＣＮ −１０２８Ａの製造法について説明する。
ＵＣＮ −１０２８Ａはクラドスポリウム属に属するＵ
ＣＮ−１０２８Ａ生産菌株を培地に培養し、培養物から
ＵＣＮ−１０２８Ａを採取することによって得ることが
できる。
ＣＮ−１０２８Ａ生産菌株を培地に培養し、培養物から
ＵＣＮ−１０２８Ａを採取することによって得ることが
できる。
ＵＣＮ −１０２８Ａ生産菌株としてはクラドスポリウ
ム属に属し、ｔｌｃＮ −１０２８Ａ生産能を有する菌
株であればいずれの菌株でも用いることができる。代表
的菌株として本発明者らが大阪府の家屋外壁ブロック塀
から分離したＫＡＣ−２２１５株があげられる。
ム属に属し、ｔｌｃＮ −１０２８Ａ生産能を有する菌
株であればいずれの菌株でも用いることができる。代表
的菌株として本発明者らが大阪府の家屋外壁ブロック塀
から分離したＫＡＣ−２２１５株があげられる。
ＫＡＣ−２２１５株の菌学的性質は次の通りである。
麦芽エキス寒天培地を用いて、２０°Ｃで培養した時、
３週間で集落の径は５．５〜６ｃｍに達する。
３週間で集落の径は５．５〜６ｃｍに達する。
集落表面の中央部は、灰緑色を呈し、その周囲は灰色を
呈する。集落裏面は暗緑黒色を呈する。菌糸は隔壁を有
し、培地中及び培地上に伸長する。
呈する。集落裏面は暗緑黒色を呈する。菌糸は隔壁を有
し、培地中及び培地上に伸長する。
菌糸直径は、１．５〜５μｍで、よく分岐する。分生子
柄は、褐色あるいは暗褐色で菌糸から立ち上がり、隔壁
を有する。分生子は、分生子柄またはその分岐に端生じ
、連鎖する。盆生子の個体発生の様式は、出芽型で、最
も若い分生子は、分生子連鎖の先端に位置する。分生子
柄先端の分岐細胞は、１〜２細胞から成り、幅３〜４μ
ｍ、単細胞の分生子は、卵形、レモン形あるいは楕円形
を呈し、淡褐色で長さ４〜６μｍ、幅３〜４μｍ。
柄は、褐色あるいは暗褐色で菌糸から立ち上がり、隔壁
を有する。分生子は、分生子柄またはその分岐に端生じ
、連鎖する。盆生子の個体発生の様式は、出芽型で、最
も若い分生子は、分生子連鎖の先端に位置する。分生子
柄先端の分岐細胞は、１〜２細胞から成り、幅３〜４μ
ｍ、単細胞の分生子は、卵形、レモン形あるいは楕円形
を呈し、淡褐色で長さ４〜６μｍ、幅３〜４μｍ。
以上の観察の結果、本菌は、タラトスボリウム・クラド
スポリオイデス（Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍｃｌａｄｏ
ｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓ）と同定された。タラトスボリウ
ム・クラドスポリオイデスについての菌学的性質は、！
リス（Ｅｌｌｉｓ）著、ｒデマチアシス・ハイフオミセ
ーテス（Ｄｅｍａｔｉａｃｅｏｕｓ ｈｙｐｈｏｍｙｃ
ｅｔｅｓ ）（１９７１年］Ｊに記載されている。
スポリオイデス（Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍｃｌａｄｏ
ｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓ）と同定された。タラトスボリウ
ム・クラドスポリオイデスについての菌学的性質は、！
リス（Ｅｌｌｉｓ）著、ｒデマチアシス・ハイフオミセ
ーテス（Ｄｅｍａｔｉａｃｅｏｕｓ ｈｙｐｈｏｍｙｃ
ｅｔｅｓ ）（１９７１年］Ｊに記載されている。
本菌株は゛クラドスポリウム・クラドスポリオイデスＫ
ＡＣ−２２１５’”と命名され、微工研条寄第１２８５
号として昭和６２年２月１０日に工業技術院微生物工業
技術研究所に寄託された。
ＡＣ−２２１５’”と命名され、微工研条寄第１２８５
号として昭和６２年２月１０日に工業技術院微生物工業
技術研究所に寄託された。
本発明で使用する菌の培養においては通常の糸状菌の培
養法が一般に用いられる。培養培地としては炭素源、窒
素源、無機物等を程よく含有する培地ならば天然培地又
は合成培地のいずれも用いられる。炭素源としてはブド
ウ糖、殿粉、グリセロール、マンノース、フラクトース
、シュークロース、糖蜜、炭化水素、アルコール（メタ
ノール、エタノールなど）、有機酸（コハク酸、酢酸な
ど）などが用いられる。窒素源としては塩化アンモニウ
ム、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウム、硝酸ナトリ
ウム、尿素、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、乾燥酵
母、コーン・スチープ・リカー、大豆粉、カザミノ酸な
どが用いられる。無機物としては食塩、塩化カリウム、
硫酸第一鉄、硫酸亜鉛、硫酸マンガン、硫酸銅、炭酸カ
ルシウム、燐酸塩などが用いられる。さらに、ＵＣＮ
−１０２８Ａの生産を促進する物質、例えばビオチン、
ビタミンなどを培地に添加してもよい。
養法が一般に用いられる。培養培地としては炭素源、窒
素源、無機物等を程よく含有する培地ならば天然培地又
は合成培地のいずれも用いられる。炭素源としてはブド
ウ糖、殿粉、グリセロール、マンノース、フラクトース
、シュークロース、糖蜜、炭化水素、アルコール（メタ
ノール、エタノールなど）、有機酸（コハク酸、酢酸な
ど）などが用いられる。窒素源としては塩化アンモニウ
ム、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウム、硝酸ナトリ
ウム、尿素、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、乾燥酵
母、コーン・スチープ・リカー、大豆粉、カザミノ酸な
どが用いられる。無機物としては食塩、塩化カリウム、
硫酸第一鉄、硫酸亜鉛、硫酸マンガン、硫酸銅、炭酸カ
ルシウム、燐酸塩などが用いられる。さらに、ＵＣＮ
−１０２８Ａの生産を促進する物質、例えばビオチン、
ビタミンなどを培地に添加してもよい。
培養法としては液体培養法又は固体培養法のいずれでも
よいが、通常は液体培養法、とくに深部攪拌培養法が用
いられる。培養温度は２０〜３５℃、特に２３〜２８℃
が好適で、培地のｐｔ＋はアンモニア水、炭酸アンモニ
ウム溶液などを添加して、ｐＨ４〜１０、特に５〜７の
範囲が望ましい。液体培養で通常１〜７日培養を行なう
と、ＵＣＮ −１０２８Ａが培養液中に生成蓄積する。
よいが、通常は液体培養法、とくに深部攪拌培養法が用
いられる。培養温度は２０〜３５℃、特に２３〜２８℃
が好適で、培地のｐｔ＋はアンモニア水、炭酸アンモニ
ウム溶液などを添加して、ｐＨ４〜１０、特に５〜７の
範囲が望ましい。液体培養で通常１〜７日培養を行なう
と、ＵＣＮ −１０２８Ａが培養液中に生成蓄積する。
培養液中の生成量が最大に達したときに培養を停止し、
培養液中よりＵＣＮ −１０２８Ａを精製単離する。
培養液中よりＵＣＮ −１０２８Ａを精製単離する。
培養液からのＵＣＮ −１０２８Ａの単離精製には、微
生物代謝生産物を、その培養液から単離するためにふつ
う用いられる分離、精製の方法が利用される。例えば、
まず培養生産物を培養液と菌体とに濾過、遠心分離など
によって分離する。菌体はクロロホルム、アセトンなど
ＵＣＮ−１０２８Ａ ？容解性？容剤で抽出し、抽出液
を減圧下に濃縮して溶媒を除き、ついで水に溶解して水
溶液とする。前述の菌体を除去した液と菌体を処理して
得られた液を非イオン性多孔性樹脂、例えばＩＰ−２０
（三菱化成製）等で処理して、活性成分を該樹脂に吸着
させた後、メタノールで溶出する。溶出液を濃縮した後
、酢酸エチルなどの溶剤による抽出、ゲル濾過剤、シリ
カゲルなどの担体を用いたカラムクロマトグラフィーを
組み合わせてＵＣＮ −１０２８Ａを単離することがで
きる。
生物代謝生産物を、その培養液から単離するためにふつ
う用いられる分離、精製の方法が利用される。例えば、
まず培養生産物を培養液と菌体とに濾過、遠心分離など
によって分離する。菌体はクロロホルム、アセトンなど
ＵＣＮ−１０２８Ａ ？容解性？容剤で抽出し、抽出液
を減圧下に濃縮して溶媒を除き、ついで水に溶解して水
溶液とする。前述の菌体を除去した液と菌体を処理して
得られた液を非イオン性多孔性樹脂、例えばＩＰ−２０
（三菱化成製）等で処理して、活性成分を該樹脂に吸着
させた後、メタノールで溶出する。溶出液を濃縮した後
、酢酸エチルなどの溶剤による抽出、ゲル濾過剤、シリ
カゲルなどの担体を用いたカラムクロマトグラフィーを
組み合わせてＵＣＮ −１０２８Ａを単離することがで
きる。
以下に実施側番示す。
実施例１
種菌としてはタラトスポリウム・クラドスポリオイデス
ＫＡＣ−２２１５株を用いた。均菌株の１白金耳を３０
Ｏｎ＋ｊ！容量の三角フラスコ中の下記組成の種培地５
０ｍｊ２に植菌し、２５℃で７２時間振とう培養した。
ＫＡＣ−２２１５株を用いた。均菌株の１白金耳を３０
Ｏｎ＋ｊ！容量の三角フラスコ中の下記組成の種培地５
０ｍｊ２に植菌し、２５℃で７２時間振とう培養した。
種培地組成：ペプトン５ ｇ／ＩＩ、エビオス５ｇ／Ｉ
ｔ、グルコース１０ ｇ／Ｉｌ、野菜ジュース２００Ｂ
１／ ｌ−、炭酸カルシウム３ ｇ ／ ｌ （ｐＨ
６、Ｏ、殺菌前にＮａＯＨで調整） 種培養液を、３０Ｉ！容量のジャーファーメンタ−中の
下記組成の発酵培地１８１に５％（容量）の割合で移し
２５℃で通気攪拌（回転数３５Ｏｒ、ｐ、ｍ、通気量１
８１ ／ｌｌｌ１ｎ ）により培養を行った。
ｔ、グルコース１０ ｇ／Ｉｌ、野菜ジュース２００Ｂ
１／ ｌ−、炭酸カルシウム３ ｇ ／ ｌ （ｐＨ
６、Ｏ、殺菌前にＮａＯＨで調整） 種培養液を、３０Ｉ！容量のジャーファーメンタ−中の
下記組成の発酵培地１８１に５％（容量）の割合で移し
２５℃で通気攪拌（回転数３５Ｏｒ、ｐ、ｍ、通気量１
８１ ／ｌｌｌ１ｎ ）により培養を行った。
発酵培地組成：可溶性デンプン５０ ｇ／１２、乾燥酵
母２０ ｇ／ｌ ＫＨ２ＰＯ４０，５ｇ＃！、Ｍｇ５Ｑ
４・７！１□ＯＯ，５ｇ／ｌ、炭酸カルシウム５ｇ／２
、（ｐＨ７，０、殺菌前にＭａｉｌで調整）、培養中の
ｐＨは調節しないで８０時間、培養した。
母２０ ｇ／ｌ ＫＨ２ＰＯ４０，５ｇ＃！、Ｍｇ５Ｑ
４・７！１□ＯＯ，５ｇ／ｌ、炭酸カルシウム５ｇ／２
、（ｐＨ７，０、殺菌前にＭａｉｌで調整）、培養中の
ｐＨは調節しないで８０時間、培養した。
培養液を濾過し、菌体を得た。菌体にアセトン３０ｆｉ
を加え、撹拌し、υＣＮ−１０２８Ａ＠！ｌ質を抽出し
た。アセトン抽出液に脱イオン水９０１を加えた後該液
を２℃の非イオン性多孔性樹脂（ＨＰ−２０；三菱化成
製）をつめたカラムに通塔し、ＵＣＮ −１０２８Ａを
吸着させた。ついで、５０％メタノール溶液で不純物を
溶出させた後、ＵＣＮ −１０２８Ａをメタノールで溶
出させた。溶出液を濃縮後、ｐＨを１．７に調整し、酢
酸エチルで抽出した。酢酸エチル層を濃縮し、濃縮液を
３００１１１１の非イオン性多孔性樹脂（ＨＰ２０−ｓ
ｓ ；三菱化成製）をつめたカラムに通塔した。５０
％メタノール溶液で洗った後、７０％メタノール、９０
％メタノール、１００％メタノール（各１りで溶出を行
い、ＵＣＮ −１０２８Ａを含む両分を得た。その成分
を含む溶出液を濃縮後、濃縮液をセファデックスＬＨ２
０カラムクロマトグラフィーにかけ、メタノールで溶出
した。
を加え、撹拌し、υＣＮ−１０２８Ａ＠！ｌ質を抽出し
た。アセトン抽出液に脱イオン水９０１を加えた後該液
を２℃の非イオン性多孔性樹脂（ＨＰ−２０；三菱化成
製）をつめたカラムに通塔し、ＵＣＮ −１０２８Ａを
吸着させた。ついで、５０％メタノール溶液で不純物を
溶出させた後、ＵＣＮ −１０２８Ａをメタノールで溶
出させた。溶出液を濃縮後、ｐＨを１．７に調整し、酢
酸エチルで抽出した。酢酸エチル層を濃縮し、濃縮液を
３００１１１１の非イオン性多孔性樹脂（ＨＰ２０−ｓ
ｓ ；三菱化成製）をつめたカラムに通塔した。５０
％メタノール溶液で洗った後、７０％メタノール、９０
％メタノール、１００％メタノール（各１りで溶出を行
い、ＵＣＮ −１０２８Ａを含む両分を得た。その成分
を含む溶出液を濃縮後、濃縮液をセファデックスＬＨ２
０カラムクロマトグラフィーにかけ、メタノールで溶出
した。
活性物質を含む両分を濃縮して、ＵＣＮ −１０２８Ａ
（８，２Ｎ）を得た。
（８，２Ｎ）を得た。
培養、精製操作中のＵＣＮ −１０２８Ａの動向はプロ
ティンキナーゼＣの阻害活性および薄層クロマトグラフ
ィーによるＵＣＮ −１０２８４の赤橙色のスポットを
目安にして追跡した。
ティンキナーゼＣの阻害活性および薄層クロマトグラフ
ィーによるＵＣＮ −１０２８４の赤橙色のスポットを
目安にして追跡した。
尤凱■四果
本発明により優れた抗腫瘍活性およびプロティンキナー
ゼＣ阻害活性を有するＵＣＮ −１０２８Ａが提供され
る。
ゼＣ阻害活性を有するＵＣＮ −１０２８Ａが提供され
る。
第１図はＵＣＮ −１０２８ＡのＥｌマススペクトルを
示す。 第２図はＵＣＮ −１０２８Ａの紫外部吸収スペクトル
を示す。 第３図はＵＣＮ −１０２８Ａの赤外部吸収スペクトル
を示す。 第４図はＵＣＮ −１０２８Ａの” Ｃ−ＮＭＲスペク
トルを示す。
示す。 第２図はＵＣＮ −１０２８Ａの紫外部吸収スペクトル
を示す。 第３図はＵＣＮ −１０２８Ａの赤外部吸収スペクトル
を示す。 第４図はＵＣＮ −１０２８Ａの” Ｃ−ＮＭＲスペク
トルを示す。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で表わされるＵＣＮ−１０２８Ａ。 ２、クラドスポリウム属に属し、ＵＣＮ−１０２８Ａを
生産する能力を有する微生物を培地に培養し、培養物中
にＵＣＮ−１０２８Ａを生成蓄積させ、該培養物から生
成蓄積したＵＣＮ−１０２８Ａを採取することを特徴と
するＵＣＮ−１０２８Ａの製造法。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62072378A JPH0627102B2 (ja) | 1987-03-26 | 1987-03-26 | 新規物質ｕｃｎ―１０２８ａ |
| EP88302520A EP0284358B1 (en) | 1987-03-26 | 1988-03-22 | Novel anti-tumor compounds, method for the preparation thereof, and pharmaceutical preparations containing them |
| DE8888302520T DE3881566T2 (de) | 1987-03-26 | 1988-03-22 | Antitumor-derivate, verfahren zu ihrer herstellung und pharmazeutische zusammensetzungen, die sie enthalten. |
| US07/173,174 US4992570A (en) | 1987-03-26 | 1988-03-24 | UCN-1028A and UCN-1028C and process for the production thereof |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62072378A JPH0627102B2 (ja) | 1987-03-26 | 1987-03-26 | 新規物質ｕｃｎ―１０２８ａ |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63238042A true JPS63238042A (ja) | 1988-10-04 |
| JPH0627102B2 JPH0627102B2 (ja) | 1994-04-13 |
Family
ID=13487576
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62072378A Expired - Lifetime JPH0627102B2 (ja) | 1987-03-26 | 1987-03-26 | 新規物質ｕｃｎ―１０２８ａ |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0627102B2 (ja) |
-
1987
- 1987-03-26 JP JP62072378A patent/JPH0627102B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0627102B2 (ja) | 1994-04-13 |
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