JPS60199849A - フエナレン−１−オン誘導体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 技術分野 本発明は新規なフェナレン−１−オン誘導体に関する。

発明の構成 本発明のフェナレン−１−オン誘導体は、文献未載の新
規化合物であり、下記の構造式（１）で表わされる。

本発明者らは微生物を培養して得られる培養生産物につ
いての一連の研究を行なった結果、高知型の土壌より分
離したアスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇ−１Ｎｕｓ　）属
に属する微生物がサイクリックアデノシンモノホスフェ
ート（以下ｒｃ−ＡＭＰＪと云う）に特異的なホスホジ
ェステラーゼ（以下［ＰＤＥＪと云う）阻害活性を有す
る物質を生産するという事実及び該物質が上記構造式（
すで表わされる新規な化合物であるという事実を見い出
し、ここに本発明を完成するに至った。

本発明の上記ＰＤＥ阻害活性を有する化合物は、通常用
いられるグルコース、でんぷん等を主炭素源とする栄養
培地にアスペルギルス属に属し、該化合物の生産能を有
する微生物を培養し、培養体から単離精製することによ
り製造される。

本発明化合物の製造に最も好適な、上記微生物の一興体
例としては、本発明者らが土壌から分離したアスペルギ
ルス属に属する菌株を例示することができる。その菌学
的性質は次の通りである。

（Ｎ　各培地における生育状態 ｌ）麦芽エキス寒天培地 生育は速やかで、培９８日後には集落は直径６５〜７０
ｍｍに達する。集落は円形、平坦であり、白色から灰白
色の菌糸がうすくまばらに生育する。培養８日目頃より
黒褐色の分生子頭の着生がみられ、８日目には集落中心
部に同心円状に分生子頭の密生が認められも集落裏面側
よび寒天内の着色はみられない。

２）ツアペック寒天培地 生育は良好で、培養８日後には集落は直径４５〜５０ｍ
ｍに達する。集落は円形、平坦であり、白色から灰白色
の菌糸がまばらに長く伸び、５日目には中心部では黒褐
色、周縁部では白色の分生子頭の着生が始まる。その後
中心部は丸く盛り上り、この部分の分生柄の長さは５　
ｍｍ近くに達し、集落全面が黒褐色の分生子頭に覆われ
る。集落裏面および寒天内の着色はみられない。

（Ｂ）　生理学的性質 本菌株の生育しつるｐＨ及び温度の範囲と、最適生育ｐ
Ｈ及び温度は次に示す通りである。

ｐＨ温度 生育の範囲　２．０〜１１．４１２〜４２℃最適生育峯
件　８４６〜８．９　８２〜８７°ＣｐＨについてはサ
ブロー液体培地を用いて２７°Ｃ，７日間、温度につい
てはサブロー寒天培地（ＰＨ６，２）　を用いて７日間
それぞれ培養した。

（Ｃ）　形態学的性質 不稔菌糸は隔壁をもち、白色あるいは灰白色の円形、平
坦な集落を形成する。分生子が着生するに従い、集落表
面は黒褐色に変化する。分生子頭は直径６０〜２００μ
ｍの球形で、黒褐色を呈する。分生子柄は直線状に伸ひ
、まれに隔壁を有すものがある。壁はやや厚く、表面は
平滑で直径は８．８〜１７μｍである。頂嚢は直径５０
〜６０μｍのほぼ球形をなし、無色透明である。梗子は
２重に着生し、１次梗子が１７〜２０μｍ、２次梗子が
８，８〜１５μｍである。分生子は直径８．１〜４．２
μｍのほぼ球形黒色のものが長崎状に連なり、表面は屈
曲した隆起構造をもつ。

菌核は視察されない。

以上の菌学的性質をもとにして、ギルマン（Ｊ。

Ｃ，Ｇｉｌｍａｎ　）の１−ア　マニアル　オブ　ソイ
ルファンジャイ（Ａ　Ｍａｎｕａｇ　ｏｆ　５ｏｉｎ　
Ｆｕｎｇｉ　、　２ｎｄｅｄ　、Ｔｌ１ｅ　Ｉｏｗａ　
５ｔａｔｅ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　Ｐｒｅｓｓ　、Ａ
ｍｅｓ　。

１重ｗａ　、　Ｕ、　Ｓ、　Ａ、　１９５７年９」及び
ラバー等（Ｋ、　Ｂ、　Ｒａｐｅｒ　ａｎｄ　Ｄ、　１
．　Ｆｅｕｕｅｌｌ　）の［ザ　ゲアス　アスペルギル
ス、　（Ｔｈｅ　Ｇｅｕｕｓ　Ａｓｐｅｒｇ■−１ｕｓ
　、Ｔｈｅ　Ｗｉｌｌｉａｍｓ　＆　ＷｉｌｋＩｎｓ　
、Ｃｏ、Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ　。

１９６５年ン」の分類検索表等より検索すると、本菌株
はアスペルギルスニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉ
ｇｅｒ　）又はこれときわめて近縁の菌種であると同定
されたが、尚その種の決定を行ない得る明確な根拠は見
い出せないため、これはアスペルギルス　エスピーＮｘ
２９７０と命名され微工研に微工研菌寄第７８９０号と
して受託された。

上記アスペルギルス　エスピーｆｆ１２９７０を始めと
するアスペルギルス属に属する本発明化合物生産菌によ
る本発明化合物の製造は、通常の方法に従って行なうこ
とができる。微生物培養のための培地も一般に利用され
るそれと同様でよく、通常炭素源としては、グルコース
、可溶性デンプン等を使用できる。窒木鎗としてはとく
に限定されることはないが、ペプトン、大豆粉加水分解
物等の天然有機窒素源が好ましい。無機塩類としては塩
化ナトリウム、炭酸カルシウム、硫酸銅、塩化マンガン
、硫酸亜鉛等を過室使用できる。その他微量栄養素とし
て、酵母エキス、麦芽エキスなどを用いることができる
。

培養条件は培地組成によって異なるが、通常ｐＨ４〜９
、温度２５〜８７°Ｃの範囲とするのが望ましく、振盪
培翼、通気撹拌培養も可能であるが、静置液体培養によ
るのがよく、これによれば所望目的化合物の著量の産生
がみられる。該静置液体培養では約５〜２０日間の培養
が適当である。

培養終了後、培養液中に生産された目的物質を単離精製
する。単離精製方法は特に制限されず、生産された物質
の理化学的性状を利用した公知の各種方法をいずれも採
用できる。その具体的−例としでは以下の方法を例示で
きる。即ち培養液を常法、に従い一過若しくは遠心分離
して予め菌体とｐ液に分離する。次いで菌体にメタノー
ル等を加え培養体を抽出した後、抽出物を更にメタノー
ル、酢酸エチル、クロロホルム、エーテル、ｎ−ヘキサ
ン、ベンゼン等の単独又は混合溶媒を適宜組み合せて抽
出し、溶媒を留去した後、残渣をシリカゲル又はセファ
デックスＬＨ−２０（、ファルマシア社）等でゲル濾過
し、得られる各両分を更に必要に応じて溶媒抽出、ゲル
濾過、中和、濃縮、結晶化等の操作を単独又は適宜組み
合せて繰返し行なうことにより単離精製できる。

斯して得られる本発明化合物の理化学的性質は次の通り
である。

■　元素分析値 Ｃ＋６２．７０％　、Ｊ４．０１％ ■　分子量 ＳＩＭＳスペクトル（第１図）により分子量２８８■　
融点 ２８０°Ｃ（分解点） ■　紫外線吸収スペクトル（［ＪＶ　Ｈｎｍ　）ＵＶ分
析図は第２図に示す通りであり、４１２ｎｍに極大吸収
を有する。

■　赤外線吸収スペクトル（ＩＲ；　ｃｍ　’）ＫＢｒ
錠でのＩＲスペクトルは第８図に示す通りであり、主な
吸収ピークとしては、８４００〜Ｂ２００．１６００．
１１６０等が認められる。

■　核磁気共鳴スペクトル（’Ｈ−ＮＭＲ！　ｐｐｍ　
）ＤＭＳＯ−ｄ、を溶媒として測定したＨ−ＮＭＲスペ
クトルは第４図に示す通りであり、主なピークとしては
１８．８　（ｂｒｓ、　ＩＨ）、１８．０（ｂｒｓ、Ｉ
Ｈ）、６．２５（ｄ−ｎｉｋｅ　、　０．９Ｈｚ　、Ｉ
Ｈ）、５．９６（ｓ、１ｔｌ）、８．７１　（ｓ　、　
８Ｈ）、２．８０（ｂｒｓ　、　８Ｈ）が認められる。

■　核磁気共鳴スペクトル（１８ＣＮＭＲ＋　ｐｐｌｎ
）ＤＭＳＯ−ｄ６を溶媒として測定した％１８ｃｍＮＭ
Ｒ袈スペクトルは第５図に示す通りであり、主なピーク
としては、次のものが認められる。

１７２．２　（Ｓ） １７０．１　（６） １７０．０　（８） １７０．０　（Ｓ） １１５．０　（ｄｌ １４４．１　（８） １８０．６　（８） ９９．８　（ｄ） １６７．７　（８１ １０７，０（８） １１０．０　＜８） １０１．１　（８） １２８．０　（ｓ） ５８．８　（ｑ） ２５．２　（ｑ） ■　薄）ｍクロマトグラフィー（ＴＬＣ）シリカゲルを
用いたＴＬＣ分析の結果、Ｒｆ値は下記の通りであった
。

Ｒ（値＝０．４０（クロロホルム：メタノール：水＝１
８：６：１） ■　呈色反応 塩化第二鉄反応に陽性 ［相］　溶剤に対する溶解性 クロロホルム、酢酸エチル、エーテル、シクロヘキサン
に不溶で、水にはほとんど溶けず、メタノール、ジメチ
ルホルムアミド、５％水酸化ナトリウム水溶液に溶解す
る。

■　塩基性、酸性、中性の区別 酸性 ■　物質の色 淡黄褐色 上記各種の理化学的性質の分析から、本発明化合物は前
記の構造式（１）で表わされる構造を有し、２．８，４
．９−テトラヒドロキシ−７−メトキシ−６−メチル−
ＩＨ−フェナレン−１−オンと呼ばれる化合物であると
推定される。

本発明化合物（フェナレン−１−オン誘導体（１））は
Ｃ−ＡＭＰ　に特異的なＰＤＥ　阻害活性を有し、Ｃ−
ＡＭＰ　の代謝異常により、その低下に起因する各種の
疾病、例えば動脈硬化、高血圧、気管支喘息、糖尿病、
癌等の予防又は治療剤として有用であり、特に之等のう
ちで高血圧治療剤として極めて有効に利用できる。

一般にＣ−ＡＭＰ　は動物組織に広く分布し、種々のホ
ルモン作用の２次伝達物質として、生理、生化学的に重
要な役割をもつ物質である。また細胞の増殖・分化、血
流動態、中枢神経への作用、インスリン、ヒスタミンの
分泌などに関与していることが知られている。Ｃ−ＡＭ
Ｐ　はアゾニールサイクラーゼの働きによってアデノシ
ントリホスフェート（ＡＴＰ）より生合成され、Ｃ−Ａ
ＭＰ・ホスホジェステラーゼ（ＰＤＥ）によって分解さ
れ、この両酵素の作用により細胞内の濃度が調節されて
いる。従って、一般にＰＤＥ阻害物質を生体に投与する
ことにより、Ｃ−ＡＭＰの分解酵素であるＰＤＥ　が阻
害されて細胞内のＣ−ＡＭＰ濃度は上昇するため、血小
板凝集抑制、血圧降下、抗喘息、インスリン分泌亢進、
抗癌等の薬理効果が期待できる。

実　施　例 次に本発明を−り一明らかにするために本発明化合物の
製造例を実施例として挙げ、次いで試験例を挙げる。

実施例１゜ アスペルギルス　エスピー　陽２９７０　（微工研菌寄
第７８９０号）を、下記組成の培地１０ｎＪを入れたモ
ノ試験管（Ｍｏｎｏｄ　ｔｕｂｅ　）　に接種し、２７
°Ｃ，ＰＨ＝７．２で８日間、モノ（Ｍｏｎｏｄ　）大
振とう培養装置で培養を行なった。

グルコース　２％ でんぷん　２％ ファイトンペプトン　２％ （ＢＢＬ社製） 酵母エキス　０．５％ 塩化ナトリウム　０．２５％ 炭酸カルシウム　０．３２％ 硫酸銅（５水塩）　０．０００５％ 塩化マンガン（４水塩）　０．０００５％硫酸亜鉛（７
水＃Ａ）　０．００５％ 上記の培地ｘｏｏｍＡ！を入れた５００ｍｎ容三角フラ
スコ１本あたりに、前述で得られた種培ｇｔ本を接種し
、２γ°Ｃで１１日間静置培養を行なった。

得られた培養液を、加熱処理（８５℃以上、６分間）し
た後、減圧濾過によりＰ液と菌体とに分けた。この菌体
（培養液１６．２１分月こメタノールを１６．２Ａ’加
え、ＮａＣ４飽和、酸性（ｐＨ約８）条件下で撹拌処理
し、減圧−過後、メタノール抽出液を減圧濃縮乾固した
。乾固物に水を加え溶解し、酢酸エチルで８回抽出を行
ない、抽出液を合せて濃縮した。ついでこの酢酸エチル
抽出濃縮液に５％ＮａＨＣＯｓ水溶液を加え、８回抽出
を行ない、抽出液を集め、塩酸で酸性にもどした後、さ
らに酢酸エチルで８回抽出を行なった。抽出液を合せて
濃縮し、途中で水洗、脱水を行ない油状の濃縮物６．９
Ｉ／を得た。この油状濃縮物を、シリカゲルのドライカ
ラムにかけ、クロロホルム：メタノールの溶媒系で順次
溶出させ、目的物溶出画分１．１６１を得た。さらにセ
ファデックスＬＨ−２０のカラムにかけ、メタノールで
溶出し、目的物溶出画分を得た。これを減圧濃縮後、分
取用薄層クロマトグラフィー（展開溶媒、クロロホルム
：メタノール：水＝１８：６：１）で分取し、再度セフ
ァデックスＬＨ−２０のカラムにかけ、メタノールで溶
出し、濃縮乾固し、本発明化合物１５５ｍＮを得た。

このものの理化学的性質は、前述した通りであつた。

試験例１゜ ＜　Ｃ−ＡＭＰ　−ＰＤＥに対する阻害活性〉（ｌン　
測定法 酵紫反応液として、２０ｍＭ硫酸マグネシウム溶液５０
ｔｔｌｌ、６ｍＭＣ−ＡＭＰ（ベーリンガーマンハイム
・山之内！＆り溶液１５０μｌ、７Ｕ／ｍｌｌアルカリ
ホスファターゼ（ベーリンガーマンハイム・山之内製、
仔牛腸由来）溶液５ｏμｌ、０．０５Ｕ／ｍｌ　ホスホ
ジェステラーゼ（ベーリンガーマンハイム・山之内製、
牛心臓由来ン溶液２００μｌ及び本発明化合物又は対照
化合物としてのテオフィリンを夫々別々に含む試料液１
００μｌの全量５５０μｌよりなる混合液を調製した。

尚試料液以外はすべて５０ｍＭ　）　！Ｊス塩酸緩衝液
（ＰＨ７，５）に溶解させて用いた。上記反応液を８７
°Ｃにて４６分間反応させたのち、５５％トリクロル酢
酸５０μｌを加え、反応を停止させ、遠心分離（８００
０ｒｐｍ、１０分間）を行ない、その上清中の無機リン
をホスファ−Ｂ　−テスト　ワコー（Ｐｈｏｓｐｈｏｒ
　Ｂ　−ｔｅｓｔ　Ｗａｋｏ　。

和光紬薬工業社製）を用いて定量した。

Ｃ−ＡＭＰ−ＰＤＥ阻害活性は、対照として試料液に変
え蒸留水を反応液に加えた場合の無機リンの生成量から
、試料液を加えた場合の無機リンの生成量を差し引き、
これをさらに対照の無機リンの生成量にて除した値の百
分率として表わした。

（２）結果 本発明化合物のＣ−ＡＭＰ　−ＰＤＥ　ｌこ対する阻害
活性を、陽性対照のテオフィリンと比較し、その結果を
第６図に示した。第６図において横軸は本発明化合物（
図中（１）と表示）又はテオフィリン（図中（２）と表
示）を検体として、２等検体の反故中での最終濃度を対
数目盛で示したものであり、縦軸は阻害率（％）を示す
。

該図より本発明化合物の５０％阻害濃度（ＩＣＡＯ）は
６．５Ｘ１０’Ｍであり、対照としたテオフィリンの場
合の２．８　Ｘ　１０−ＢＭに比較して、約８５０倍強
い阻害活性を示すことが明らかである。

【図面の簡単な説明】

第１図乃至第５図は夫々本発明化合物のマススペクトル
分析図、紫外線吸収スペクトル分析図、赤外線吸収スペ
クトル分析図、ＩＨ−ＮＭＲ分析図及び１”Ｃ−ＮＭＲ
分析図であり、　第６図は本発明化合物のＣ−ＡＭＰ　
−ＰＤＥ阻害活性をめたグラフである。 （以上） 第２図 手続補正書（０劃 昭和５９年９月１０日 １　事件の表示 昭和５９年特許願第５５８４６号 ２　発明の名称 フェナレン−１−オン誘導体 ３　補正をする者 事件との関係　特許出願人 株式会社大塚製薬工場 ４代理人 自発 ６　補正の対象 明細書中「発明の詳細な説明」の項 補正の内容 １）　明細書第２真下から第８〜７行に［Ａ　ｓｐｅｒ
ｇｌｌｌｕｓＪとあるをｒ　Ａ　５ｐｅｒｏ　ｉ　ｌ　
Ｉｕｓ　Ｊと訂正する。 ２）　明細書第６頁第３行に「ラバー」とあるを「レイ
バー」と訂正する。 ３）　明細書第６頁第４行に［Ｆ　ｅｕｕｅｌｌＪとあ
るをｒ　Ｆ　ｅｎｎｅｌｌＪと訂正する。 ４）　明細書第６頁第４〜５行に「ザ　グアス」とある
を「ザ　ジーナス」と訂正する。 ５）　明細書第６頁第５行にｒ　Ｇ　ｅｕｕｓ　Ａ　ｓ
ｐｅｒｇ　１１１ｕｓＪとあるを「Ｇｅｎｕｓ　Ａｓｐ
ｅｒｇｌｌｌｕｓＪと訂正する。 ６）　明細書第６頁第８〜９行に［アスペルギルスニガ
ー（Ａｓｐｅｒｇｌｌｌｕｓ　ｎ１ｏｅｒ　）　Ｊとあ
るを［アスペルギルス・ニガー（Ａ　ｓｐｅｒｇ　ｌ　
ｌ　ｌｕｓｎｉｇｅｒ　）　Ｊと訂正する。 ７）　明細書第７頁第３行に「ペプトン」とあるを削除
する。 ８）　明細書第７頁第３行に「大豆粉加水分解物等」と
あるを「大豆粉加水分解物より得られるヘプトン等」と
訂正する。 ９）　明細書第７頁第７行に「微量栄養素」とあるを削
除する。 １０）　明ｔａｒｓ第７頁第７行に「麦芽エキスなど」
とあるを「などに含まれる微量栄養素」と訂正する。 １１）　明細書第１７頁第３行にｒｅ−ＴｅｓｔＪとあ
るをｒＢ−ＴｅｓｔＪと訂正する。 １２）　明細書第１７頁第５行にｒＡＭＰ−ＰＤＥＪと
あるをｒＡＭＰ−ＰＤＥＪと訂正する。 １３）　明細■第１７頁第１２行にｒＡＭＰ−ＰＤＥＪ
とあるをｒＡＭＰ−ＰＤＥＪと訂正する。 （以　上）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 ■　構造式 で表わされるフェナレン−１−オン誘導体。