JPS6330492A - 新規抗生物質ａ１−ｒ２３９７物質及びその製造法 - Google Patents
新規抗生物質ａ１−ｒ２３９７物質及びその製造法Info
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- JPS6330492A JPS6330492A JP61171759A JP17175986A JPS6330492A JP S6330492 A JPS6330492 A JP S6330492A JP 61171759 A JP61171759 A JP 61171759A JP 17175986 A JP17175986 A JP 17175986A JP S6330492 A JPS6330492 A JP S6330492A
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- methanol
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- antibiotic
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- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明は抗腫瘍活性及び抗菌活性を有する新抗生物質静
−Ｒ２３９７物貿及びその製造法に関するものである。
−Ｒ２３９７物貿及びその製造法に関するものである。
従来の技術及び発明が解決しようとする問題点従来、数
多くの抗生物質が発明さｈ、医薬品、動物用薬品、農薬
等の分野で実用化されている。しかしなが呟まだ有効な
物質が見出されないため解決さ℃ていない医療あるいは
産業分野が多く残されている。たとえば癌化学療法分野
においても、新しい作用をもつ新規の抗腫瘍性抗生物質
を提供することは常に要望されている。
多くの抗生物質が発明さｈ、医薬品、動物用薬品、農薬
等の分野で実用化されている。しかしなが呟まだ有効な
物質が見出されないため解決さ℃ていない医療あるいは
産業分野が多く残されている。たとえば癌化学療法分野
においても、新しい作用をもつ新規の抗腫瘍性抗生物質
を提供することは常に要望されている。
本発明者らは以上のような点に着目し、新規な抗腫瘍性
抗生物質を提供するとともに、その製造法を確立するこ
とによって、これを解決しようとするものである。
抗生物質を提供するとともに、その製造法を確立するこ
とによって、これを解決しようとするものである。
問題点を解決するための手段
本発明者らは、上述の期待にこたえるべく、抗腫瘍活性
を有する物質の探索を続けていたところ、サーモモノ又
ポラ属に属するある菌株の培養物中にマウス白血病細胞
（Ｐ−３８８）に対する細胞障害活性その池の抗腫瘍活
性及び抗菌活性を有する物質が生産されていることを見
い出し、有効物質へａ−Ｒ２３９７物質を単離し、その
理化学的性状及び生物学的性状を確定し、さらにＸ線結
晶回析によ））、その溝遺を確立することにより本発明
を完成した。
を有する物質の探索を続けていたところ、サーモモノ又
ポラ属に属するある菌株の培養物中にマウス白血病細胞
（Ｐ−３８８）に対する細胞障害活性その池の抗腫瘍活
性及び抗菌活性を有する物質が生産されていることを見
い出し、有効物質へａ−Ｒ２３９７物質を単離し、その
理化学的性状及び生物学的性状を確定し、さらにＸ線結
晶回析によ））、その溝遺を確立することにより本発明
を完成した。
したがって、第一の本発明は、下記の（Ｉ）式で表わさ
れる新規抗腫瘍性抗生物質へｎ−Ｒ２３９７物質を提供
するものである。
れる新規抗腫瘍性抗生物質へｎ−Ｒ２３９７物質を提供
するものである。
さらに第二の本発明は、サーモモノスポラ属に属する抗
生物質へβ−Ｒ２３９７物質生産菌を培養しその培養物
から抗生物質ΔＩ Ｒ２３９７物質を採取することを
特徴とする抗生物質ΔＩ Ｒ２３９７物質の製造法を
提供するものである。
生物質へβ−Ｒ２３９７物質生産菌を培養しその培養物
から抗生物質ΔＩ Ｒ２３９７物質を採取することを
特徴とする抗生物質ΔＩ Ｒ２３９７物質の製造法を
提供するものである。
Ａｌ−Ｒ２３９７物質とＭ似の構造をもつ化合物として
谷田ら（Ｓ、Ｔａｎ１ｄａ ｅＬ ａｌ、 Ｊ、Ａｎ
ＬｉｂｉｏＬｉｃｓ。
谷田ら（Ｓ、Ｔａｎ１ｄａ ｅＬ ａｌ、 Ｊ、Ａｎ
ＬｉｂｉｏＬｉｃｓ。
Ｖｏｌ、 ３４．４Ｓ９１９！３１）ｌ：Ｊ： ’）、
ツカルティアノ一種とみられる微生物の代謝産物中から
単ｇＩされたアンサマイトシン群化合物が挙げられるが
、Ａｌ−Ｒ２３９７物貿はこれらのいずれとも異なり、
新規物質と判定した。
ツカルティアノ一種とみられる微生物の代謝産物中から
単ｇＩされたアンサマイトシン群化合物が挙げられるが
、Ａｌ−Ｒ２３９７物貿はこれらのいずれとも異なり、
新規物質と判定した。
本発明に使用される八ｇ−Ｒ２３９７物質生産菌の一例
としては、本発明者らによ１）インド国の土壌より新た
に分離されたへ１−Ｒ２３９７株がある。Ａｌ−Ｒ２３
９７株の菌学的性状は、次の通りである。
としては、本発明者らによ１）インド国の土壌より新た
に分離されたへ１−Ｒ２３９７株がある。Ａｌ−Ｒ２３
９７株の菌学的性状は、次の通りである。
１、形態
基土菌糸は、よく伸長分岐し、通常分断しない。
一般に気菌糸の着生は少なく、チロシン寒天、グリセロ
ール・アスパラギン寒天上などで、わずかに気菌糸の着
生が認められる。気菌糸の分岐は単純分岐で車軸分岐は
認められない。
ール・アスパラギン寒天上などで、わずかに気菌糸の着
生が認められる。気菌糸の分岐は単純分岐で車軸分岐は
認められない。
胞子の着生は極めて限られた条件でしか確認されておら
ず、例えば４分の１濃度に希釈したチロシン寒天で生育
した気菌糸上に２８℃１約１ケ月培養後、緑色の単胞子
性胞子を集合して着生した。
ず、例えば４分の１濃度に希釈したチロシン寒天で生育
した気菌糸上に２８℃１約１ケ月培養後、緑色の単胞子
性胞子を集合して着生した。
胞子の大きさは直径１．０〜１．２ミクロンのほぼ球形
で、表面は平滑、運動性は認められず、１００℃煮沸水
中での生存試験で胞子の耐熱性は認められなかっｔこ。
で、表面は平滑、運動性は認められず、１００℃煮沸水
中での生存試験で胞子の耐熱性は認められなかっｔこ。
単胞子の着生は栄養菌糸にも観察された。
胞子のう、菌核などの特殊構造は観察されていな（１゜
■、各種培地上の生育状態
八β−Ｒ２３９７株の各種培地上の生育状態は次表に示
す通りである。色の記載について（）内に示す標準はコ
ンテイナー・コーポレーション・オブ・アメリカ（Ｃｏ
ｎｔａｉｎｅｒ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ ｏｆ＾ｍｅ
ｒｉｃａ）社製の［カラー・ハーモニイー・マニアル（
Ｃｏｌｏｒ Ｉｌａｒｍｏｎｙ Ｍａｎｕａｌ）Ｊに記
載のものを用いた。観察は２８℃で１４〜３０日培養後
に行なった。（３７℃の培養性状も下記と同様だった。
す通りである。色の記載について（）内に示す標準はコ
ンテイナー・コーポレーション・オブ・アメリカ（Ｃｏ
ｎｔａｉｎｅｒ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ ｏｆ＾ｍｅ
ｒｉｃａ）社製の［カラー・ハーモニイー・マニアル（
Ｃｏｌｏｒ Ｉｌａｒｍｏｎｙ Ｍａｎｕａｌ）Ｊに記
載のものを用いた。観察は２８℃で１４〜３０日培養後
に行なった。（３７℃の培養性状も下記と同様だった。
）
培 地 発胃（色 気菌糸 可溶性は裏面）
色素 シュクロース・ 普通、 貧弱、白（ａ） なし硝
酸塩寒天 なし グルコース・ 普通、 なし 〃アスパラギ
ン寒天 なし グリセロール・ 普通、 貧弱、白（ａ）〃アスパラ
ギン寒天 なし スターチ寒天 普通、 なし 〃なし オートミール寒天 良好、 なし 〃淡黄色 イースト麦芽寒天 良好、 貧弱、白（ａ）〃茶色 チロシン寒天 良好、 貧弱、白（ａ）〃淡赤褐色 栄養寒天 普通、 なし 〃なし ベネット寒天 良好、 なし なし リンゴ酸・ 微弱、 なし 〃カルシウム
寒天 なし １／４チロシン寒天 普通、 貧弱、緑 〃なし （
２２ｆｅ−２１ｉｇ） ■、生理的性質 （１）生育温度範囲：２！３’Ｃ〜５５℃の温度範囲で
生育し、３５℃〜４５℃で良好に生育する６（２）ゼラ
チンの液化：陰性 （３）スターチの加水分解：陽性 （４）硝酸塩の還元：陰性 （５）脱脂乳のペプトン化：陽性 脱脂乳の凝固：陰性 （６）耐塩性：１．５％ＮａＣ１添加寒天培地上でよく
生育、３％ＮａＣβでわずかに生育。４％以上では生育
しない。
色素 シュクロース・ 普通、 貧弱、白（ａ） なし硝
酸塩寒天 なし グルコース・ 普通、 なし 〃アスパラギ
ン寒天 なし グリセロール・ 普通、 貧弱、白（ａ）〃アスパラ
ギン寒天 なし スターチ寒天 普通、 なし 〃なし オートミール寒天 良好、 なし 〃淡黄色 イースト麦芽寒天 良好、 貧弱、白（ａ）〃茶色 チロシン寒天 良好、 貧弱、白（ａ）〃淡赤褐色 栄養寒天 普通、 なし 〃なし ベネット寒天 良好、 なし なし リンゴ酸・ 微弱、 なし 〃カルシウム
寒天 なし １／４チロシン寒天 普通、 貧弱、緑 〃なし （
２２ｆｅ−２１ｉｇ） ■、生理的性質 （１）生育温度範囲：２！３’Ｃ〜５５℃の温度範囲で
生育し、３５℃〜４５℃で良好に生育する６（２）ゼラ
チンの液化：陰性 （３）スターチの加水分解：陽性 （４）硝酸塩の還元：陰性 （５）脱脂乳のペプトン化：陽性 脱脂乳の凝固：陰性 （６）耐塩性：１．５％ＮａＣ１添加寒天培地上でよく
生育、３％ＮａＣβでわずかに生育。４％以上では生育
しない。
（７）メラニン様色素の生ｒ＆：陰性
■、炭素源の利用性
（１）利用する：Ｄ−グルフース、Ｄ−７ラクトース、
Ｄ−キシロース、グリセロール、Ｌ−７ラビ７−ス、Ｄ
−マンニトール、ラフィノース（２）利用しない：ｉ−
ミーイノシトール−ラムノース、シェークロース ■、細胞壁組成 全菌体加水分解中のアミノ酸としてＤＬ型フジアミノピ
メリン酸有する。糖としてアラビノース、キシロースは
、はとんど認められず、マジュロースの存在は、不明瞭
である。
Ｄ−キシロース、グリセロール、Ｌ−７ラビ７−ス、Ｄ
−マンニトール、ラフィノース（２）利用しない：ｉ−
ミーイノシトール−ラムノース、シェークロース ■、細胞壁組成 全菌体加水分解中のアミノ酸としてＤＬ型フジアミノピ
メリン酸有する。糖としてアラビノース、キシロースは
、はとんど認められず、マジュロースの存在は、不明瞭
である。
以上の通り、八〇 −［２３９７株は、形態的性質、生
理的性質および菌体の化学分析結果などから判断し、サ
ーモモノスポラ０エスピー（Ｔｈｅｒｍｏｍｏｎｏｓｐ
ｏｒａ ｓｐ、）八（１−Ｒ２３９７と同定した。
理的性質および菌体の化学分析結果などから判断し、サ
ーモモノスポラ０エスピー（Ｔｈｅｒｍｏｍｏｎｏｓｐ
ｏｒａ ｓｐ、）八（１−Ｒ２３９７と同定した。
なお本菌株は、工業技術院微生物工業技術研究所に微工
研菌寄第８８０２号（ＦＥＲＮ Ｐ−１３８０２）とし
て寄託さｈている。
研菌寄第８８０２号（ＦＥＲＮ Ｐ−１３８０２）とし
て寄託さｈている。
Ａｌ−Ｒ２３９７株は他の放線菌の場合に見られるよう
に、その性状が変化しやすい。例えば、へβ−Ｒ２３９
７株の、またはこの株に由来する突然変異株（自然発生
または誘発性）、形質接合体または遺伝子組換え体であ
っても、抗生物質へｊ！−Ｒ２３９７物質を生産するも
のは全て本発明に使用出来る。本発明の方法では、前記
の菌を通常の微生物が利用しうる栄養物を含有する培地
で培養する。栄養源としては、グルコース、水あめ、デ
キストリン、シュクロース、澱粉、糖みっ、動・植物油
等を使用できる。また窒素源として、大豆粉、小麦はい
芽、コーンステイープリカー、綿実がす、肉エキス、ペ
プトン、酵母エキス、硫酸アンモニウム、硝酸ソーダ、
尿素等を使用できる。その他、必要に応じ、ナトリウム
、カリウム、カルシウム、マグネシウム、コバルト、塩
素、燐酸、硫酸、及びその他のイオンを生成することが
できる無［幾塩類を添加することは有効である。また菌
の発をを助け、抗生物質Ａｌ−Ｒ２３９７物質の生産を
促進するような有機および無機物を適当に添加すること
ができる。培養法としては、好気的条件での培養法、特
に深部培養法が最も適している。培養に適当な温度は２
８〜５５℃であるが、多くの場合、２８〜３７℃付近で
培養する。抗生物質Ａｌ−Ｒ２３９７物質の生産は培地
や培養条件により異なるが、振どう培養、タンク培養と
も通常３〜１０日の間でその蓄積が最高に達する。培養
物中の抗生物質へｊ！−Ｒ２３９７物質の蓄積量が最高
になった時に培養を停止し、培ｇｉ液から目的物質を単
離精製する。
に、その性状が変化しやすい。例えば、へβ−Ｒ２３９
７株の、またはこの株に由来する突然変異株（自然発生
または誘発性）、形質接合体または遺伝子組換え体であ
っても、抗生物質へｊ！−Ｒ２３９７物質を生産するも
のは全て本発明に使用出来る。本発明の方法では、前記
の菌を通常の微生物が利用しうる栄養物を含有する培地
で培養する。栄養源としては、グルコース、水あめ、デ
キストリン、シュクロース、澱粉、糖みっ、動・植物油
等を使用できる。また窒素源として、大豆粉、小麦はい
芽、コーンステイープリカー、綿実がす、肉エキス、ペ
プトン、酵母エキス、硫酸アンモニウム、硝酸ソーダ、
尿素等を使用できる。その他、必要に応じ、ナトリウム
、カリウム、カルシウム、マグネシウム、コバルト、塩
素、燐酸、硫酸、及びその他のイオンを生成することが
できる無［幾塩類を添加することは有効である。また菌
の発をを助け、抗生物質Ａｌ−Ｒ２３９７物質の生産を
促進するような有機および無機物を適当に添加すること
ができる。培養法としては、好気的条件での培養法、特
に深部培養法が最も適している。培養に適当な温度は２
８〜５５℃であるが、多くの場合、２８〜３７℃付近で
培養する。抗生物質Ａｌ−Ｒ２３９７物質の生産は培地
や培養条件により異なるが、振どう培養、タンク培養と
も通常３〜１０日の間でその蓄積が最高に達する。培養
物中の抗生物質へｊ！−Ｒ２３９７物質の蓄積量が最高
になった時に培養を停止し、培ｇｉ液から目的物質を単
離精製する。
本発明のＡｌ−Ｒ２３９７物質の検定にあたってはマウ
ス白血病細胞（Ｐ−３８８）に対する細胞障害性の測定
及び検定菌としてクリプトコツカス・ネオ７オルマンス
８９０１０（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒ
ｍａｎｓ ８９０１０）を用いる。寒天培地上の生育阻
止円径は３０〜３００μｇ／ｍρにおいて、濃度の対数
と直線開係を示し、１４〜２ＳＩＩＩＩ１１の１止円を
与える。
ス白血病細胞（Ｐ−３８８）に対する細胞障害性の測定
及び検定菌としてクリプトコツカス・ネオ７オルマンス
８９０１０（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒ
ｍａｎｓ ８９０１０）を用いる。寒天培地上の生育阻
止円径は３０〜３００μｇ／ｍρにおいて、濃度の対数
と直線開係を示し、１４〜２ＳＩＩＩＩ１１の１止円を
与える。
本発明より得られたへｆ−Ｒ２３９７物質は中性の脂溶
性物質であるので、培養物からＡｌ−Ｒ２３９７物質の
単離、精製にあたっては、その特性を利用して行なうこ
とがでこる。即ち、アンバーライトＸＡＤ−２（ローム
・アンド・バー入社製）、ダイヤイオンＩＰ−２０（三
菱化成社製）等の合成吸着剤、セファデックスＬｌｌ−
２０（７アルマシア社製）、トヨバールＩＩＷ・４０（
東洋曹達社製）等のゲル濾過剤、シリカゲル、アルミナ
等による溶媒抽出法、更にメタノール等を溶媒とする結
晶化法等が有効である。
性物質であるので、培養物からＡｌ−Ｒ２３９７物質の
単離、精製にあたっては、その特性を利用して行なうこ
とがでこる。即ち、アンバーライトＸＡＤ−２（ローム
・アンド・バー入社製）、ダイヤイオンＩＰ−２０（三
菱化成社製）等の合成吸着剤、セファデックスＬｌｌ−
２０（７アルマシア社製）、トヨバールＩＩＷ・４０（
東洋曹達社製）等のゲル濾過剤、シリカゲル、アルミナ
等による溶媒抽出法、更にメタノール等を溶媒とする結
晶化法等が有効である。
以上のような方法によｌ）、あるいはこれらを適宜組合
わせることにより、高純度のＡｌ−Ｒ２３９７物質が得
られる。得られたＡｊ！−Ｒ２３９７物貿の物理化学的
性状は、次のとおりである。
わせることにより、高純度のＡｌ−Ｒ２３９７物質が得
られる。得られたＡｊ！−Ｒ２３９７物貿の物理化学的
性状は、次のとおりである。
（イ）分子式および元素分析値二０３□Ｉ＋４、＋４２
０８ｆｊ！炭素 ６１．１９％ 水素 ６．８０％ 窒素 ４．５３％ 塩素 ６．０３％ （ロ）分子量： ６０４ （ＦＤ−ＭＳＩ：ｔ−；イテＭ／２６０５（Ｈ
＋１）全観測した。）（ハ）融点： ２０８〜２１１℃ （ニ）比旋光度： 〔α″１）２コ ＝−６９，７°（ｃ ０．１、メタノ
ール〕（ホ）紫外線吸収スペクトル： メタノール溶液中で測定したスペクトルを第１図に示す
、２２１ｎ＋ｎ（ε３７，７３０） 、 ２４０ｎｍ（
ｓｈ．ε２８，７９０）。
０８ｆｊ！炭素 ６１．１９％ 水素 ６．８０％ 窒素 ４．５３％ 塩素 ６．０３％ （ロ）分子量： ６０４ （ＦＤ−ＭＳＩ：ｔ−；イテＭ／２６０５（Ｈ
＋１）全観測した。）（ハ）融点： ２０８〜２１１℃ （ニ）比旋光度： 〔α″１）２コ ＝−６９，７°（ｃ ０．１、メタノ
ール〕（ホ）紫外線吸収スペクトル： メタノール溶液中で測定したスペクトルを第１図に示す
、２２１ｎ＋ｎ（ε３７，７３０） 、 ２４０ｎｍ（
ｓｈ．ε２８，７９０）。
２Ｓ３ｎｍ（ｔ ２＋４００）に吸収極大を観測した。
（へ）赤外線吸収スペクトル：
臭化カリウム錠で測定したスペクトルを第２図に示す。
（ト）水素核核磁気共鳴スペクトル（重ジメチルスルホ
キシド、４００ＨＩＩｚ）ｐｐ＋ｏ ：０．９４ （３
Ｈ、ｄ）、 １．０７ （６Ｈ、ｄ）、１．５５（３Ｈ
、ｂｒｓ）。
キシド、４００ＨＩＩｚ）ｐｐ＋ｏ ：０．９４ （３
Ｈ、ｄ）、 １．０７ （６Ｈ、ｄ）、１．５５（３Ｈ
、ｂｒｓ）。
１．８４ （３Ｈ、ｓ）、 ３．２２（３Ｈ、ｓ）、
３．８８（３Ｈ、ｓ）。
３．８８（３Ｈ、ｓ）。
５．２８（１１１，ｄｄ）、その皿
（チ）溶解性ニ
ジメチルスルホキシド、メタノールに可溶；アセトン、
酢酸エチル、クロロホルムに難溶；水、ｎ−ヘキサンに
不溶 （す）呈色反応： 過マンガン酸カリウム、グレイグ・リーバック試薬、１
０％硫酸、モリブデン酸試薬に陽性：ニンヒドリン試薬
に陰性 （ヌ）薄層クロマトグラフィベメルクシリカゲルプレー
ト、０．２５ｍｍ）； ａ） Ｊｊｔ開溶媒： クロロホルムーメタノーノ喧１
０：１）Ｒｆ Ｏ，６９ ｂ）展開溶媒：トルエン−アセトン（２：１）Ｒｆ Ｏ
，２９ （ノリ 外観：無色板状結晶 発明の効果 本発明によるΔＮ−８２３９７物質は抗腫瘍活性を示し
、そのマウス白血病細胞（Ｐ−３８８）に対する５０％
阻害濃度は４ｐｇ／ｍｌ以下であった。本物質の延命効
果は後記の試験例に示した。またへβ−Ｒ２３９７物質
は抗真菌活性を示し、その各種の真菌に対する抗真菌ス
ペクトルは０′Ｓ１表に示すとおりである。Ａｌ−Ｒ２
３９７物質の各濃度のメタノール溶液をペーパーディス
クに２０μβずつしみ送主せ、寒天平板法で測定した阻
止用の直径で示した。
酢酸エチル、クロロホルムに難溶；水、ｎ−ヘキサンに
不溶 （す）呈色反応： 過マンガン酸カリウム、グレイグ・リーバック試薬、１
０％硫酸、モリブデン酸試薬に陽性：ニンヒドリン試薬
に陰性 （ヌ）薄層クロマトグラフィベメルクシリカゲルプレー
ト、０．２５ｍｍ）； ａ） Ｊｊｔ開溶媒： クロロホルムーメタノーノ喧１
０：１）Ｒｆ Ｏ，６９ ｂ）展開溶媒：トルエン−アセトン（２：１）Ｒｆ Ｏ
，２９ （ノリ 外観：無色板状結晶 発明の効果 本発明によるΔＮ−８２３９７物質は抗腫瘍活性を示し
、そのマウス白血病細胞（Ｐ−３８８）に対する５０％
阻害濃度は４ｐｇ／ｍｌ以下であった。本物質の延命効
果は後記の試験例に示した。またへβ−Ｒ２３９７物質
は抗真菌活性を示し、その各種の真菌に対する抗真菌ス
ペクトルは０′Ｓ１表に示すとおりである。Ａｌ−Ｒ２
３９７物質の各濃度のメタノール溶液をペーパーディス
クに２０μβずつしみ送主せ、寒天平板法で測定した阻
止用の直径で示した。
ｆｊｉＪ１表 Ａｌ−Ｒ２３９７物質の抗真菌スペクト
ル濃度 検定面〔阻止円直径（闘）〕（μｇ／ｍ）
１ ２ ３ ４５００ ２７．２
２４．０ ０ ０２５０ ２３．９ ２
２．１ ０ ０１２５ ２２．２ ．８８
．５０ ０６３ １７．４ １５，４ ０
０３１ １４．２ １２．６ ０
０１、クリットコツカス・ネオ７オルマンス８９０１０
（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ
Ｍ９０１０）２、トリゴノプシス・パリアビリス８９０
３１（ＴｒｉＨｏｎｏｐｓｉｓ ｖａｒｉａｂｉｌｉｓ
８９０３１）３、サツカロマイセス・セレビシアエ５
ＩＩＹ３（Ｓａｃｃｌ＋ａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖ
ｉｓｉａｅ ５ｔｌＹ３）４、カンシタ・フルビカンス
８９００１（Ｃａｎｄｉｄａ ａＮｂｉｃａｎｓ ８９
００１）上記の結果から明らかなように、Ａｌ−Ｒ２３
９７物質は真菌に対し抗菌作用を示し、真菌治療剤とし
ての有用性も期待される。
ル濃度 検定面〔阻止円直径（闘）〕（μｇ／ｍ）
１ ２ ３ ４５００ ２７．２
２４．０ ０ ０２５０ ２３．９ ２
２．１ ０ ０１２５ ２２．２ ．８８
．５０ ０６３ １７．４ １５，４ ０
０３１ １４．２ １２．６ ０
０１、クリットコツカス・ネオ７オルマンス８９０１０
（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ
Ｍ９０１０）２、トリゴノプシス・パリアビリス８９０
３１（ＴｒｉＨｏｎｏｐｓｉｓ ｖａｒｉａｂｉｌｉｓ
８９０３１）３、サツカロマイセス・セレビシアエ５
ＩＩＹ３（Ｓａｃｃｌ＋ａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖ
ｉｓｉａｅ ５ｔｌＹ３）４、カンシタ・フルビカンス
８９００１（Ｃａｎｄｉｄａ ａＮｂｉｃａｎｓ ８９
００１）上記の結果から明らかなように、Ａｌ−Ｒ２３
９７物質は真菌に対し抗菌作用を示し、真菌治療剤とし
ての有用性も期待される。
叉亀餞
以下に本発明の実施例を示すが、これらはＪ）ｔなる一
例であって本発明を限定するものではない。
例であって本発明を限定するものではない。
ここに例示しなかった多くの変法あるいは修飾手段を用
いうることは勿論のことである。
いうることは勿論のことである。
実施例
種培地として、スターチ２．０％、グルツース１．０％
、小麦胚芽０．６％、ポリペプトン０．５％、酵母エキ
ス０．３％、大豆粉０．２％、炭酸カルシウム０．１％
を含む培地を用いた。
、小麦胚芽０．６％、ポリペプトン０．５％、酵母エキ
ス０．３％、大豆粉０．２％、炭酸カルシウム０．１％
を含む培地を用いた。
また、生産培地として、水飴１．０％、スターチ１゜０
％、大豆粉１．５％、サングレインＦ２１．０％、炭酸
カルシウム０．２％、硫酸マグネシウム（７水塩）０゜
１％、硫酸第１鉄（７水塩）ｏ、ｏｏｏｓ％、塩化コバ
ルト（６水塩）０．０００５％、を含む培地を用いた。
％、大豆粉１．５％、サングレインＦ２１．０％、炭酸
カルシウム０．２％、硫酸マグネシウム（７水塩）０゜
１％、硫酸第１鉄（７水塩）ｏ、ｏｏｏｓ％、塩化コバ
ルト（６水塩）０．０００５％、を含む培地を用いた。
なお、殺菌前ｐＨはすべてｐＨ７、ｏに調製して使用し
た。前記種培地２０−を分注した１００Ｊ！容三角７ラ
スフを１２０’Ｃで３０分間殺菌し、これにサーモモノ
スポラ＾Ｎ−Ｒ２３９７（ＦＥＲＮ Ｐ−８８０２）の
斜面培養の３〜４白金耳を接種し、２８℃で４日間振盪
培養し、第１種培養とした。ついで種培地８０社を分注
した５００−容三角フラスコを１２０℃で３０分間殺菌
し、前記第１種培１！５−を接種し、２８℃で２日問振
盪培養し、これを第２種培養とした。さらに種培地１１
を分注した５！容三角フラスコを１２０℃で３０分間殺
菌し、第２種培ａＳＯ−を接種し、２８℃１日間振盪培
養し、これを第３種培養とした。
た。前記種培地２０−を分注した１００Ｊ！容三角７ラ
スフを１２０’Ｃで３０分間殺菌し、これにサーモモノ
スポラ＾Ｎ−Ｒ２３９７（ＦＥＲＮ Ｐ−８８０２）の
斜面培養の３〜４白金耳を接種し、２８℃で４日間振盪
培養し、第１種培養とした。ついで種培地８０社を分注
した５００−容三角フラスコを１２０℃で３０分間殺菌
し、前記第１種培１！５−を接種し、２８℃で２日問振
盪培養し、これを第２種培養とした。さらに種培地１１
を分注した５！容三角フラスコを１２０℃で３０分間殺
菌し、第２種培ａＳＯ−を接種し、２８℃１日間振盪培
養し、これを第３種培養とした。
予め１２０℃３０分間殺菌した３５Ｎの生産培地を含む
、５０１容ジヤー７フーメンターに前記のｆ５３種培養
１１を接種し、２８℃５日間通気＜２０１／分）、攪拌
（初期２５０ｒｐｎ＋、 ４１時間以降３５０ｒｐｍ）
培養した。培養終了後、濾過助剤として珪藻土を加えて
濾過した。
、５０１容ジヤー７フーメンターに前記のｆ５３種培養
１１を接種し、２８℃５日間通気＜２０１／分）、攪拌
（初期２５０ｒｐｎ＋、 ４１時間以降３５０ｒｐｍ）
培養した。培養終了後、濾過助剤として珪藻土を加えて
濾過した。
得られた培養濾液８５１と、菌体な５０％アセトン水４
０βで室温１時間攪拌し、濾過して菌体を除いた菌体抽
出液を濃縮して得られた菌体抽出濃縮液１２！とを合わ
せ、ダイヤイオンＩＩＰ−２０（三菱化成社製）４゜５
１を充填したカラムを通過させることにより、有効成分
を吸着させた。引き続き、カラムを脱イオン水７０１に
て水洗後、有効成分を５０％アセトン水にて溶出した。
０βで室温１時間攪拌し、濾過して菌体を除いた菌体抽
出液を濃縮して得られた菌体抽出濃縮液１２！とを合わ
せ、ダイヤイオンＩＩＰ−２０（三菱化成社製）４゜５
１を充填したカラムを通過させることにより、有効成分
を吸着させた。引き続き、カラムを脱イオン水７０１に
て水洗後、有効成分を５０％アセトン水にて溶出した。
活性画分を集め、減圧下、アセトンを留去して１５Ｎと
し、これを酢酸エチル１５１で抽出した後、酢酸エチル
層を無水硫酸ナトリウムで脱水して、減圧下濃縮し、１
６ｇの油状物質を得た。得られた油状物質を珪そう±１
６ｇ１：まぶし、−夜減圧下乾燥後、クロロホルムで充
填したシリカゲルＣ−２００（和光純薬工業社製）７０
０Ｊの塔の上にのせ、クロロホルム、次いでクロロホル
ム−メタノール混Ｗｔ （ｔｏ Ｏ：１）で洗浄ｆ＆、
クロロホルム−メタノール混液（５０：１）にて展開す
るクロマトグラフィーを行った。
し、これを酢酸エチル１５１で抽出した後、酢酸エチル
層を無水硫酸ナトリウムで脱水して、減圧下濃縮し、１
６ｇの油状物質を得た。得られた油状物質を珪そう±１
６ｇ１：まぶし、−夜減圧下乾燥後、クロロホルムで充
填したシリカゲルＣ−２００（和光純薬工業社製）７０
０Ｊの塔の上にのせ、クロロホルム、次いでクロロホル
ム−メタノール混Ｗｔ （ｔｏ Ｏ：１）で洗浄ｆ＆、
クロロホルム−メタノール混液（５０：１）にて展開す
るクロマトグラフィーを行った。
展開液はシリカゾル薄層クロマトグラフィー（メルク社
６０Ｆ２５４５７１４、展開溶媒：クロロホルム−メタ
ノール（１０：１））を行ない、Ｒｒ値、０．６９ヲ示
Ｌ、かつｊｌＩｓ１図に示したような紫外部吸収スペク
トルをもつ分画を集め、減圧下に濃縮乾固して９３３＋
＋＋ｇの油状物質を得たにの油状物質を少量のメタノー
ルに溶解し、メタノールにて充填したセファデックスＬ
１１−２０（ファルマシア社製）１１の塔にのせ、メタ
ノールにて展開してクロマトグラフィーを行った。活性
画分を減圧下濃縮乾固し、３３５ｍｇの油状物質を得た
。この油状物質を少量のメタノールに溶解し、１６時間
室温に放置したところ、＾ρ−Ｒ２３９７物質の無色結
晶９４．１ｍｇが得られた。このうち、２０ｍｇを熱メ
タノール２０社に溶解し、減圧下メタノールを除去した
後、残渣にエタノールを加えて、室温放置し、再結晶さ
せ、ΔＮ−Ｒ２３９７物質の無色板状晶．８８ｍｇを得
た。本物質は前記の理化学的特性を有する。さらにこの
結晶をＸ線結晶回折に付して、八β−Ｒ２３９７物質の
溝造を確立した。
６０Ｆ２５４５７１４、展開溶媒：クロロホルム−メタ
ノール（１０：１））を行ない、Ｒｒ値、０．６９ヲ示
Ｌ、かつｊｌＩｓ１図に示したような紫外部吸収スペク
トルをもつ分画を集め、減圧下に濃縮乾固して９３３＋
＋＋ｇの油状物質を得たにの油状物質を少量のメタノー
ルに溶解し、メタノールにて充填したセファデックスＬ
１１−２０（ファルマシア社製）１１の塔にのせ、メタ
ノールにて展開してクロマトグラフィーを行った。活性
画分を減圧下濃縮乾固し、３３５ｍｇの油状物質を得た
。この油状物質を少量のメタノールに溶解し、１６時間
室温に放置したところ、＾ρ−Ｒ２３９７物質の無色結
晶９４．１ｍｇが得られた。このうち、２０ｍｇを熱メ
タノール２０社に溶解し、減圧下メタノールを除去した
後、残渣にエタノールを加えて、室温放置し、再結晶さ
せ、ΔＮ−Ｒ２３９７物質の無色板状晶．８８ｍｇを得
た。本物質は前記の理化学的特性を有する。さらにこの
結晶をＸ線結晶回折に付して、八β−Ｒ２３９７物質の
溝造を確立した。
試験例（抗腫瘍効果）
腹腔内にＰ −３８８腫瘍細胞を移植したマウスに、Δ
Ｎ−Ｒ２３９７物質を１日１回連続２日間腹腔内投与し
た。この延命効果をｐｔＳ２表にＴ／Ｃ％値として表示
した。
Ｎ−Ｒ２３９７物質を１日１回連続２日間腹腔内投与し
た。この延命効果をｐｔＳ２表にＴ／Ｃ％値として表示
した。
ｆ５２表
化合物 投与量（μｇ／ｋｇ） 抗腫瘍効
果Ｐ−３８８（Ｔ／Ｃ％） ΔＮ−［２３９７物質 ３７０ １９
６，４１２０ ．１７２，３ ４１１５６．６ １４ １２８．９
果Ｐ−３８８（Ｔ／Ｃ％） ΔＮ−［２３９７物質 ３７０ １９
６，４１２０ ．１７２，３ ４１１５６．６ １４ １２８．９
１１図は＾ｉ’−Ｒ２３９７物質のメタノール溶液中２
０μｇ／１１の濃度での紫外部吸収スペクトルを示し、
第２図はＡｌ−Ｒ２３９７物質の臭化カリウム錠での赤
外部吸収スペクトルを示す。 手続補正書（峠） 昭和６２年１０月ノＱ日
０μｇ／１１の濃度での紫外部吸収スペクトルを示し、
第２図はＡｌ−Ｒ２３９７物質の臭化カリウム錠での赤
外部吸収スペクトルを示す。 手続補正書（峠） 昭和６２年１０月ノＱ日
Claims (2)
- （１）下記の理化学的性質を有する新規抗生物質Ａｌ−
Ｒ２３９７物質 （イ）分子式および元素分析値：Ｃ＿３＿１Ｈ＿４＿１
Ｎ＿２Ｏ＿８Ｃｌ 炭素６１．１９％ 水素６．８０％ 窒素４．５３％ 塩素６．０３％ （ロ）分子量： ６０４（ＦＤ−ＭＳにおいてＭ／Ｚ６０５（Ｈ＋１）を
観測した。） （ハ）融点： ２０８〜２１１℃ （ニ）比旋光度 〔α〕＿Ｄ＾２＾３＝−６９．７°（ｃ０．１、メタノ
ール） （ホ）紫外線吸収スペクトル： メタノール溶液中で測定したスペクトルを第１図に示す
。２２１ｎｍ（ε３７，７３０）、２４０ｎｍ（ｓｈ．
ε２８，７９０）、２８３ｎｍ（ε２，４００）に吸収
極大を観測した。 （ヘ）赤外線吸収スペクトル： 臭化カリウム錠で測定したスペクトルを第２図に示す。 （ト）水素核核磁気共鳴スペクトル（重ジメチルスルホ
キシド、４００ＭＨｚ）ｐｐｍ： ０．９４（３Ｈ、ｄ）、１．０７（６Ｈ、ｄ）、１．５
５（３Ｈ、ｂｒｓ）、１．８４（３Ｈ、ｓ）、３．２２
（３Ｈ、ｓ）、３．８８（３Ｈ、ｓ）、５．２８（１Ｈ
、ｄｄ）、その他 （チ）溶解性： ジメチルスルホキシド、メタノールに可溶； アセトン３酢酸エチル、クロロホルムに難溶； 水、ｎ−ヘキサンに不溶 （リ）呈色反応： 過マンガン酸カリウム、グレイグ・リーバック試薬、１
０％硫酸、モリブデン酸試薬に陽性；ニンヒドリン試薬
に陰性 （ヌ）薄層クロマトグラフィー（メルクシリカゲルプレ
ート、０．２５ｍｍ）； ａ）展開溶媒：クロロホルム−メタノール（１０：１） Ｒｆ０．６９ ｂ）展開溶媒：トルエン−アセトン（２：１） Ｒｆ０．２９ （ル）外観：無色板状結晶 - （２）サーモモノスポラ属に属し、抗生物質Ａｌ−Ｒ２
３９７物質を生産する菌を培養し、その培養物からＡｌ
−Ｒ２３９７物質を採取することを特徴とする新抗生物
質Ａｌ−Ｒ２３９７物質の製造法
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61171759A JPH0662632B2 (ja) | 1986-07-23 | 1986-07-23 | 新規抗生物質ａ１−ｒ２３９７物質及びその製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61171759A JPH0662632B2 (ja) | 1986-07-23 | 1986-07-23 | 新規抗生物質ａ１−ｒ２３９７物質及びその製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6330492A true JPS6330492A (ja) | 1988-02-09 |
| JPH0662632B2 JPH0662632B2 (ja) | 1994-08-17 |
Family
ID=15929155
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61171759A Expired - Lifetime JPH0662632B2 (ja) | 1986-07-23 | 1986-07-23 | 新規抗生物質ａ１−ｒ２３９７物質及びその製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0662632B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111635418A (zh) * | 2020-06-17 | 2020-09-08 | 山东大学 | 一种美登木素衍生物及其合成方法和应用 |
-
1986
- 1986-07-23 JP JP61171759A patent/JPH0662632B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111635418A (zh) * | 2020-06-17 | 2020-09-08 | 山东大学 | 一种美登木素衍生物及其合成方法和应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0662632B2 (ja) | 1994-08-17 |
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