JPS638397A - １７β−ヒドロキシ−１７α−（３−ヒドロキシプロピル）アンドロスタ−４，６−ジエン−３−オンの製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 で示される１７β−ヒドロキシ−１７α−（３−ヒドロ
キシプロピル）アンドロスタ−４，６−レニン−３−オ
ンの製造方法に関する。

本発明の方法によシ製造される１７β−ヒドロキシ−１
７α−（３−ヒドロキシプロピル）アンドロスタ−４，
６−レニン−３−オンハ抗アルドステロン性利尿剤とし
て知られている式 で示される１７β−ヒドロキシ−７α−メルカプト−３
−オΦソー１７α−プレグナー４−エン−２１−カルボ
ン酸＝γ−ラクトンー７α−アセテート（以下、スピロ
ノラクトンと称す）を製造するための合成中間体として
有用である。

〔従来の技術〕

従来、１７β−ヒドロキシ−１７α−（３−ヒドロキシ
プロピル）アンドロスタ−４，６−シエンー３−オンは
、アンドロスタ−４−エン−３，１７−ジオンを第３ア
ルコールのアルカリ金属塩の存在下にプロパルギルアル
コールと反応させ、得られる１７β−ヒドロキシ−１７
α−（３−ヒドロキシ−１−プロピニルファンドロスタ
ー４−エン−３−オンをクロロトリス（トリフェニルホ
スフィン）ロジウムなどの金属錯体触媒の存在下で物質
相で水素添加することによシェフβ−ヒドロキシ−１７
α−（３−ヒドロキシプロピル）アンドロスタ−４−エ
ン−３−オンとし、次いで該１７β−ヒドロキシ−１７
α−（３−ヒドロキシプロピル）アンドロスタ−４−エ
ン−３−オンヲｔｅｒｔ−フチルアルコール中でテトラ
クロロ−ｐ−ベンゾキノンと反応させることによって製
造されることが知られている（特開昭５２−１１１５５
２号公報Ｈ また、１７β−ヒドロキシ−１７α−（３−ヒドロキシ
プロピル）アンドロスタ−４，６−ジエン−３−オンの
前駆物質である前記の１７β−ヒドロヤシ−１７α−（
３−ヒドロキシプロピル）アンドロスタ−４−エン−３
−オンの製造方法としては次のような方法が知られてい
る。

（１）アンドロスタ−１，４−ジエン−３，１７−ジオ
ンを第３アルコールのアルカリ金属塩の存在下にプロパ
ルギルアルコールと反応させることｌｃ！、９１７β−
ヒドロキシ−１７α−（３−ヒドロキシ−１−プロピニ
ル）アンドロスタ−１゜４−ジエン−３−オンを得、次
いで該１７β−ヒドロキシ−１７α−（３−ヒドロキシ
−１−プロピニル）アンドロスタ−１，４−ジエン−３
−オンをクロロトリス（トリフェニルホスフィン）ロジ
ウムなどの金属錯体触媒の存在下に物質相で水素添加す
ることからなる方法（特開昭５０−３０８６１号公報参
照）。

（２）アンドロスタ−４−エン−３，１７−ジオンをｐ
−）ルエンスルホン酸の存在下にオルトギ酸エチルと反
応させ、得られる３−エトキシアンドロスタ−３，５−
ジエン−１７−オンを１−エトキシエチル＝　３−　Ｉ
Ｊチオプロピル＝エーテル又は２−（３−リチオプロポ
キシ）テトラヒドロビランと反応させて一般式（ＩＶ）
で示される１７β−ヒドロキシステロイド誘導体とし、
次いで該１７β一ヒドロキシステロイド誘導体を酸性条
件下で加水分解することからなる方法（特開昭５１−１
４３６５４号公報及び特開昭５２−４２８６７号公報参
照）。

（式中人は１−エトキシエチル基又は２−テトラヒドロ
ピラニル基を表わす） （＋）　　３β−ヒドロキシアンドロスタ−５−エン−
１７−オンを２−（２−プロピニルオキシ）テトラヒド
ロピランから調製したグリニヤール（Ｇｒｉｇｎａｒｄ
）試薬と反応させ、得られる１７α−（３−（２−テト
ラヒドロピラニルオキシ）−１−プロピニル〕アンドロ
スター５−エン−３β、１７β−ジオールをバ２ジウム
ー炭素触媒の存在下に水素化して１７α−（３−（２−
テトラヒドロピラニルオキシ）フロビルシアンドロスタ
ー５−エン−３β。

１７β−ジオールとし、該１７α−１−３−（２−テト
ラヒドロピラニルオキシ）プロピル〕アンドロスター５
−エン−３β、１７β−ジオールをオツペナウアー（０
ｐｐｅｎａｕｅｒ　）酸化反応に付することによシェフ
β−ヒドロキシ−１７α−［３−（２−テトラヒドロピ
ラニルオキシ）プロピルファンドロスター４−エン−３
−オンを得、次いで該１７β−ヒドロキシ−１７ａ−（
：３−（２−テトラヒドロピラニルオキシ）プロピルフ
ァンドロスター４−エン−３−オンｔ−１）−）ルエン
スルホン酸の存在下にエタノール中で加熱還流すること
からなる方法〔ジャーナル・オン・メデイシナル・ケミ
ストリー（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ
　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）、第６巻、第６１７−６１８頁
（１９６３年）参照〕０（式中ＴＨＰは２−テトラヒド
ロピラニル基を表わす） 〔発明が解決しようとする問題点〕 上記の従来法によれば、アンドロスタ−４−エン−３，
１７−ジオン、アンドロスタ−１，４−ジエン−３，１
７−ジオン又は３β−ヒドロキシアンドロスタ−５−エ
ン−１７−オンを原料として用い、１７β−ヒドロキシ
−１７α−（３−ヒドロキシプロピル）アンドロスタ−
４−エン−３−オンを経由して１７β−ヒドロキシ−１
７α−（３−ヒドロキシプロピル）アンドロスタ−４，
６−レニン−３−オンが製造されている。該１７β−ヒ
ドロキシ−１７α−（３−ヒドロキシプロピル）アンド
ロスタ−４，６−レニン−３−オンを製造するに際し、
使用できる原料を多くの化合物の中から選択することが
できれば、原料事情に応じてその製造プロセスを適宜変
更することが可能となシ好ましい。

しかして、本発明の目的は、１７β−ヒドロキシ−１７
α−（３−ヒドロキシプロピル）アンドロスタ−４，６
−レニン−３−オンを容易に製造することができる新し
い方法を提供することにある。

〔問題点を解決するための手段〕

本発明によれば、上記の目的は、 （式中Ｒ１はアルキレン基を表わす） で示される３、３−アルキレンジオキクアンドロスタ−
４，６−レニン−１フーオンを一般式（式中Ｒ２は水素
原子又は低級アルキル基を表わし、Ｒ３及びＲ４はそれ
ぞれ低級アルキル基を表わすか又は−緒になってアルキ
レン基を表わす）で示される有機リチウム化合物と反応
させ、得られる反応生成物を酸の存在下に加水分解する
ことを特徴とする１７β−ヒドロキシ−１７α−（３−
ヒドロキシプロピル）アンドロスｐ　−４，６−シエン
−３−オンの製造方法を提供することによって達成され
、また前記一般式（１）で示される３、３−アルキレン
ジオキ７アンドロスター４．６−レニン−１フーオンと
して、式 で示される７α−ヒドロキシアンドロスタ−４−エン−
３，１７−ジオンを酸の存在下に一般式％式％（） （式中Ｒ１は前記定義のとおシである）で示されるアル
キレングリコールと反応させることにより製造されたも
のを用いる１７β−ヒドロキシ−１７α−（３−ヒドロ
キシプロピル）アンドロスタ−４，６−レニン−３−オ
ンの製造方法全提供することによって達成される。

前記の一般式中のＲ１が表わすアルキレン基としては、
例えばエチレン基、プロピレン基（−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ
３）−３，１，２−ジメチルエチレン基、エチルエチレ
ン基、トリメチレン基、１−メチルトリメチレン基、２
−メチルトリメチレン基、テトラメチレン基などが挙げ
られる。一般式（Ｉ［）中のＲ２が表わす低級アルキル
基としては、例えばメチル基、エチル基、プロピル基、
イソプロピル基などが挙げられる。また一般式（ｎ）中
のＲ３及びＲ４がそれぞれ表わす低級アルキル基として
は、例えばメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロ
ピル基などが挙げられ、またＲ３及びＲ４が一緒になっ
て表わすアルキレン基としては、例えばトリメチレン基
、１−メチルトリメチレン基、２−メチルトリメチレン
基、テトラメチレン基、１−メチルテトラメチレン基、
２−メチルテトラメチレン基などが挙げられる。

一般式（■）で示される有ｉ　１Ｊチウム化合物として
は、例えば３−リチオプロピル−１−メトキシエチル−
エーテル、１−エトキシエチル＝　３−　ＩＪチオプロ
ピル＝エーテル、３−リチオプロピル−１−グロポキシ
エテルーエーテル、１−インプロポキシエチル−３−リ
チオプロピル＝エーテル、３−リチオプロピル＝１−メ
トキシプロピル＝ニーｆル、１−エトキシプロピル−３
−リチオプロピル−エーテル、３−リチオプロピル＝１
−プロポキシプロピル＝エーテル、３−リチオプロピル
＝１−メ）キシ−１−メチルエチル＝エーテル、１−エ
トキシ−１−メチルエチル−３−リチオプロピル−エー
テル、３−’）チオプロピル＝１−、７１チル−１−プ
ロポキシエチル−エーテル、２−（３−リチオプロポキ
シ）テトラヒドロフラン、２−（３−リチオプロポキシ
）テトラヒドロピラン、２−（３−リチオプロポキシ）
−４−メチルテトラヒドロピランなどが使用される。有
機リチウム化合物は、例えば、対応する一般式（式中Ｒ
１・Ｒ３及びＲ４は前記定義のとおシであシ、Ｘはハロ
ゲン原子を表わす） で示されるハロゲン化物を通常知られているハロゲン化
アルキルをアルキルリチウムに変換する方法に従って金
属リチウムと反応させることによって容易に製造するこ
とができる〔例えば、ザ・ジャーナル・オン・オルガニ
ック・ケミストリー（Ｔｈｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　
Ｏｒｇａｎｉｃ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　）、第３７巻、
第１９４７頁（１９７２年）；ジャーナル・オン・ジ・
アメリカン・ケミカル・ソサエティー（Ｊｏｕｒｎａｌ
　ｏｆｔｈｅ　Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　
５ｏｃｉｅｔｙ）、第９９巻、第２７５１頁（１９７７
年）：特開昭５１−１４３６５４号公報；特開昭５２−
４２８６７号公報などを参照〕。

一般式（りで示される３、３−アルキレンジオキシアン
ドロスタ−４，６−レニン−１フーオント一般式（ＩＩ
）で示される有機リチウム化合物との反応において、有
機リチウム化合物の使用量は３，３−アルキレンジオキ
シアンドロスタ−４，６−レニン−１フーオンの１モル
に対して約１０〜２０モルの量であることが好ましい。

反応は有機溶媒中で貸なうのが好ましく、有機溶媒とし
ては、ψりえば、ジエチルエーテル、ジプロピルエーテ
ル、ジブチルエーテル、１．２−ジメトキシエタン、ジ
エチレングリコールジメチルエーテル、テトラヒドロフ
ラン、テトラヒドロピランなどの鎖式又は環式のエーテ
ルなどの反応に悪影響を及ぼさ々い溶媒が単独で又は二
種以上の混合物として使用される。

反応は約−５〜３０°Ｃの範囲の温度で行なうのが好適
であり、またアルゴン、ヘリウム、窒素などの反応に悪
影響を及ぼさない気体の雰囲気中で行なうのが良い結果
を与える。

このようにして得られる一般式（［）で示される３、３
−アルキレンジオキシアンドロスタ−４，６−レニン−
１フーオンと一般式（ｎ）で示される有機リチウム化合
物との反応生成物を反応混合物から単離すること危く酸
の存在下に加水分解する。この場合、一般式（１）で示
される３、３−アルキレンジオキシアンドロスタ−４，
６−レニン−１フーオンと一般式（■）で示される有機
リチウム化合物との反応生成物を含む反応混合物、その
濃縮物、該反応混合物を食塩水、水などと接触させて得
られた有機層などを酸の存在下における加水分解反応に
付すればよい。加水分解反応の溶媒としては水のみを使
用してもよいが、水に対して少なくとも部分的に可溶で
あシしかも加水分解反応に悪影響を及ぼさない有機溶媒
を併用するのが好適である。

有機溶媒としては、例えば、テトラヒドロフラン、ジオ
キサンなどの環状エーテル；メタノール、エタノール、
イソプロピルアルコールなどの低級アルコールなどが単
独で又は二種以上の混合物として使用される。水の使用
量は一般式（１）で示される３、３−アルキレンジオキ
シアンドロスタ−４，６−レニン−１フーオンに対して
約５〜２０容量倍の範囲であることが好ましい。加水分
解反応系に存在させる酸としては、塩酸、硫酸、燐酸、
過塩素酸などの無機酸；Ｉ）−）ルエンスルホン酸、ト
リフルオロ酢酸などの有様酸などが使用される。

酸の使用量はとくに限定されるものではないが、反応液
の…が約０．５〜３の範囲内となるような量が好ましく
、とくに反応液の田が１８度となるような量が好嫁しい
。反応は通常約０〜６０°Ｃの範囲の温度で行なわれ、
とくに約１５〜２５℃の範囲の温度で行なうのが好適で
ある。

このようにして得られる加水分解反応混合物からの１７
β−ヒドロキシ−１７α−（３−ヒドロキシプロピル）
アンドロスタ−４，６−レニン−３−オンの分離・′ｆ
ｐＩ製は例えば次の方法により行なうことができる。反
応混合物を、例えば重曹水などの塩基性水溶液と混合し
て中和したのち、酢酸エチル、クロロホルム、塩化メチ
レンなどの溶媒で抽出し、抽出液から溶媒を留去し、次
いでその残渣を一般有機合成反応によシ得られる生成物
の精製に採用される操作と同様の精製操作に付すること
によって１７β−ヒドロキシ−１７α−（３−ヒドロキ
ノプロピル）アンドロスタ−４，６−ジエン−３−オン
を取得することができる。

一般式（１）で示される３、３−アルキレンジオキシア
ンドロスタ−４，６−ジエン−１フーオンは、例えば、
前述の方法によシ製造することができる。

一般式（Ｉ［［）で示されるアルキレングリコールの丈
用量ｉｊニアα−ヒドロキシアンドロスタ−４−エン−
３，１７−ジオンの１モルに対して約１５〜３０モルの
量であることが好ましい。反応系に存在させる酸として
は、例えばフマル酸、シュウ酸などの有機酸々どを使用
するのが好適である。酸の使用ｆｉ：ｉｊ　７α−ヒド
ロキシアンドロスタ−４−エン−３，１７−ジオンの１
モルに対して約０．１〜０．５モルのＫであることが好
ましい。反応は有機溶媒中で行なうことが好ましく、有
機溶媒としては、例エバ、ベンゼン、トルエン、キシレ
ンなどの芳香族炭化水素；１，２−ジクロロエタン、四
塩化炭素などのハロゲン化炭化水素などの反応に悪影響
を及ぼさない有機溶媒を使用することができる。

反応温度は約５０〜１００℃の範囲内が好ましい。

この反応を促進させる観点から、反応は生成する水を反
応系外に除去し々から行なうことが好適である。生成す
る水を反応系外に除去する方法としては、通常有機反応
において生成する水を反応系外に留出させるに使用され
る方法をそのまま採用することができ、特に水を共沸混
合物として反応系外に留出させる方法を採用することが
好ましい。

水を共沸混合物として留出させるに際しては、反応に悪
影響を及ぼさずかつ水と共沸混合物を形成しうる有機溶
媒を使用する。かかる有機溶媒としテハｓ　Ｅ’ｌ　ｘ
−ハｓ　ベンゼン、トルエン、キシレンなどの芳香族炭
化水素；ｌ、２−ジクロロエタン、四塩化炭素などのハ
ロゲン化炭化水素などが挙げられるが、芳香族炭化水素
を使用するのが好ましい。

このようにして得られる一般式（１）で示される３、３
−アルキレンジオキシアンドロスタ−４，６−レニン−
１フーオンの反応混合物からの分離・精製は例えば次の
方法によυ行なうことができる。

反応混合物を、例えば重曹水などの塩基性水溶液と混合
して中和したのち、ベンゼン、トルエン、キシレン、１
．２−ジクロロエタン、四塩化炭素などの有機溶媒で抽
出し、抽出液から溶媒を留去し、次いでその残渣を再結
晶、クロマトグラフィーなどの精製操作に付することに
よって一般式（１）で示される３、３−アルキレンジオ
キシアンドロスタ−４，６−レニン−１フーオンを取得
することができる。

原料として使用する７α−ヒドロキシアンドロスタ−４
−エン−３，１７−ジオンは、例えば、３α、７α−ジ
ヒドロキシ−５β−コ２７酸（以下、ＣＤＣＡと称する
）及び／又はその塩を基質として７α−ヒドロキシアン
ドロスタ−４−エン−３゜１７−ジオンを生産する能力
を有するシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　）
属プチダ（ｐｕｔｉｄａ　）　ｇ又はシュードモナス（
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　）スツチｘす（５ｔｕｔｚｅ
ｒｉ　）　ｇに属する細菌を、ＣＤＣＡ及び／又はその
塩を含む培地に培養して７α−ヒドロキシアンドロスタ
−４−エン−３，１７−ジオンを生成せしめ、これを採
取することによって高選択率でかつ収率よく製造される
。

ＣＤＣＡ及び／又はその塩を基質として７α−ヒドロキ
シアンドロスタ−４−エン−３，１７−ジオンを生産す
る能力を有するシュードモナス属プチダ種に属する細菌
としては、例えばシュードモナス・プチダｐ　４　Ｑ　
ｌ　４−Ａ　ｌ　５　ｌ　５　（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａ
ｓｐｕｔｉｄａ　Ｄ４０１４−Ａ１６１５）菌株（微工
研菌寄第６５７２号）があシ、またＣＤＣＡ及び／又は
その塩を基質として７α−ヒドロキシアンドロスタ−４
−エン−３，１７−ジオンを生産する能力を有するシュ
ードモナス属スツチェリ種に属する細菌としては、例え
ばシュードモナス・スッチェリＭ−１４９２（Ｐｓｅｕ
ｄｏｍｏｎａｓ　　５ｔｕｔｚｅｒｉ　Ｍ−１４９２）
菌株（微工研菌寄第８７７１号）がある。シュードモナ
ス・プチダＤ４０１４−Ａ１６１５菌株は土壌中よシ採
取したシュードそナス・プチダＤ４０１４［Ｆ］ツ竺翌
＝ｐｕｔｉｄａＤ　４０１４　）菌株（微工研蚤寄第　
２０５号）に突然変異処理を施して得られた変異株であ
シ、これらの菌株の菌学的性質は特開昭５８−１４９６
９８号公報又は特開昭５９−３９２９８号公報に記載さ
れているとおりである。また、シュードモナス・スッチ
ェＩＪＭ−１４９２菌株は土壌中よシ採取したシュード
モナス・スツチェリＣ−３７−２（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎ
ａｓｓｔｕｔｚｅｒｌ　Ｃ−３７−２）菌株（微工研菌
寄第８７７０号）に突然変異処理を施して得られた変異
株であシ、これらの菌株の菌学的性質を次表に示す。

（注１）：生理学的性質において、＋、士及び−は次の
ことを意味する。

＋・・・・・・その性質又はその生成あり±・・・・・
・その性質又はその生成の有無が判定しアｔい−・・・
・・・その性質又はその生成なしく注２）：ヒュー・ア
ンド・ライフソン培地の炭素源をそれぞれ糖類１〜１５
と代えた培地での菌による糖類からの酸の生成及びガス
の発生を観察したものである。

＋・・・・・・酸の生成又はガスの発生あり±・・・・
・・酸の生成又はガスの発生の有無が判定國い−・・・
・・・醗の生成又はガスの発生なし上記の表に示した菌
学的性質に基づき、シュードモナス・スツチェリＣ−３
７−２菌株及びシュードモナス・スツチェリＭ−１４９
２菌株の同定を行すった。シュードモナス・スツチェＩ
Ｊ　Ｃ−３７＝２菌株は桿菌であること、極単鞭毛を有
していること、ダラム染色が陰性であることなどの顕微
鏡的所見、並びにオキシダーゼ反応及びカタラーゼ反応
がともに陽性であること、好気性であること、０−Ｆテ
ストの結果が酸化的（ｏｘｉｄａｔｉｖｅ　）　テある
ことなどの生理学的性質からパージエイズ・マニュアル
・オブ・デイターミネイティブ・バクテリオｏジー（Ｂ
ｅｒｇｅｙｓ　Ｍａｎｕａｌ　ｏｆ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎ
ａｔｉｖｅＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）第８版に基づき
、シュードモナス属に属する細菌であると同定した。さ
らにシュードモナス・スツチェリＣ−３７−２菌株は可
溶性色素を生産しない点、脱窒反応を行なう点、ゼラチ
ンを分解しない点、デンプンを分解する点などからシュ
ードモナス属のスツチェリ種に属する細菌であると同定
した。また、一般に突然変異株はその親株と同じ種に属
するものと考えられており、シュードモナス・スツチェ
リＭ−１４９２菌株はシュードモナス属のスツチェリ種
に属する細菌であると判定した。

ＣＤＣＡ及び／又はその塩を基質として７α−ヒドロキ
シアンドロスタ−４−エン−３，１７−ジオンを生産す
る能力を有するシュードモナス属プチダ種又はシュード
モナス属スツチェリ種に属する細菌をＣＤＣＡ及び／又
はその塩を含む培地で培養することによシフα−ヒドロ
キシアンドロスタ−４−エン−３，１７−ジオンが生産
される。ＣＤＣＡの塩としては具体的にはＣＤＣＡのナ
トリウム、カリウムなどのアルカリ金属の塩又はカルシ
ウム、マグネシウムなどのアルカリ土類金属の塩が挙げ
られる。ＣＤＣＡ及び／又はその塩の培地中の濃度は通
常約１〜１００　？／ｌの範囲でよいが、７α−ヒドロ
キシアンドロスタ−４−エン−３，１７−ジオンを穏和
な条件下で容易にかつ高収量で得る観点からは約１０〜
５０　？／ｌの範囲が好ましい。培養方法は原則的には
一般微生物の好気培養で採用される方法と同じであるが
、通常は液体培地による振とり培養法又は通気攪拌培養
法が用いられる。培地としては上記のＣＤＣＡ及び／又
はその塩を基質として７α−ヒドロキシアンドロスタ−
４−エン−３，１７−シオンヲ生産スる能力を有するシ
ュードモナス属プチダ種又はシュードモナス属スツチェ
リ種に属する細菌が資化利用できる栄養源を含有するも
のであればよい。

炭素源としてはＣＤＣＡ及び／又はその塩を単一炭素源
としてもよく、或いはＣＤＣＡ及び／又はその塩にアラ
ビノースなどのペントース類；グルコース、マンノース
、フラクトース、ガラクトースナトのヘキンース類；シ
ュークロース、マルトースなどの二糖類；デンプン分解
物：糖アルコール類、グリセリンなどの多価アルコール
類；又はポリペプトン、ペプトン、肉エキス、麦芽エキ
ス、コーンステイープリカー、酵母エキス、各種アミノ
酸、有機酸などを併用してもよい。また窒素源としては
、例えば硝酸アンモニウム、硝酸ナトリウム、硝酸カリ
ウムなどの無機窒素源、又はポリペプトン、ペプトン、
肉エキスなどの有機窒素源が用匹られる。また、この他
に燐酸水素２カリウム、燐酸２水素カリウム、硫酸マグ
ネシウムなどの無機塩類が添加される。培養条件に特徴
はないが、通常２５〜３５℃で１０時間〜７日間振とり
培養又は通気攪拌培養を行なう。

このようにして培養液中に蓄積された７α−ヒドロキシ
アンドロスタ−４−エン−３，１７−ジオンは通常その
大部分が沈殿物として得られる。蓄積された７α−ヒド
ロキシアンドロスタ−４−エン−３，１７−ジオンを分
離、採取するには、７α−ヒドロキシアンドロスタ−４
−エン−３，１７−ジオンを溶解しかつ水と相分離する
有機溶媒、例、ｆ、−ハ酢ｅエチル、クロロホルム、ク
ロロホルムとメタノールの混合液などを用いて抽出する
方法が採られる。有機溶媒による抽出は、沈殿物及び菌
体を含んだ状態の培養物について行なってもよいし、培
養物から濾過又は遠心分離により分離された不溶成分に
ついて行なってもよい。前者の抽出方法を採る場合には
、培養液をこれに水酸化ナトリウムの水溶液などのアル
カリ水溶液を加えてアルカリ性にしたのち上記の有機溶
媒による抽出操作を行なうのが好ましい。後者の抽出方
法を採る場合には、必要に応じて濾過又は遠心分離など
によって分離除去される培養濾液又は上澄みに、好まし
くは水酸化ナトリウムの水溶液などのアルカリ水溶液を
加えて該培養濾液又は上澄みをアルカリ性にしたのち、
上記の有機溶媒による抽出操作を施すことにより、培養
液中に溶解している７α−ヒドロキシアンドロスタ−４
−エン−３，１７−ジオンを回収することができる。こ
のようにして得られた抽出液を集め、これよシ溶媒を留
去することにより７α−ヒドロキシアンドロスタ−４−
エン−３，１７−ジオンをほぼ全量回収することができ
る。回収された７α−ヒドロキシアンドロスタ−４−エ
ン−３，１７−ジオンの精製は例えばメタノール、メタ
ノール水溶液などから再結晶することによシ行なわれる
。

本発明の方法によって製造される１７β−ヒドロキシ−
１７α−（３−ヒドロキシプロピル）アンドロスタ−４
，６−レニン−３−オンは、これを例えば特開昭５２−
１１１５５２号公報に記載の方法に従ってチオ酢酸と反
応させ、得られた１７β−ヒドロキシ−１７α−（３−
ヒドロキシプロピル）−７α−メルカプトアンドロスタ
−４−工／−３−オン＝７α−アセテートをジョーンズ
（Ｊｏｎｅａ　）試薬で酸化することによってスピロノ
ラクトンに誘導される。

また別法として、１７β−ヒドロキシ−１７α−（３−
ヒドロキシプロピル）アンドロスタ−４゜６−レニン−
３−オンは、これをジョーンズ試薬で酸化して１７β−
ヒドロキシ−３−オキソ−１７α−プレグナ−４，６−
レニン−２１−カルボン酸＝γ−ラクトン（以下、これ
をカンレノンと称す）とし、該カンレノンをチオ酢酸と
反応させることによってもスピロノラクトンに誘導され
為〔実施例〕 以下、実施例によフ本発明を説明するが、本発明はこれ
らの実施例によシ限定されるものではない０ 参考例１ シュードモナス・スツチェリＭ−１４９２菌株の取得培
地１（組成：ペプトン０．５％、肉エキス０．５チ、食
塩０．５係及び寒天１．５％；田？７．８）のスラント
に生育させ之シュードモナス・スッチェリＣ−３７〜２
菌株の一白金耳を、予め試験管（内径：２１ｍ；長さ：
２００ｓｍ）内に準備し九培地２（ｍ成：ＣＤＣＡ３％
、硝酸７　ｙ　モ＝　ラム０．２　％、燐酸２水素カリ
ウム０．１％、燐酸水素２カリウム０．６％、硫酸マグ
ネシウム・７水和物０．０２％、酵母エキス０．０２％
、グルコースｏ、ｏｓｌ、ペプトンＯ，０５％及び水酸
化ナトリウム０．３％；田ニア、５）ＯｌｏＷＬｌに植
菌し、３０℃で２４４時間振り培養した。この培養液の
Ｑ、　４　ｗ、ｌを予め試験管（内径：２１１ＥＩｌ；
長さ？　２００目）・内に準備した培地３（組成：ＣＤ
ＣＡｏ、５％、硝酸アンモニウム０．２％、燐酸２水素
カリウム０．１％、燐酸水素２カリウム０．６％、硫酸
マグネシウム・７水和物０．０２％、酵母エキス０．０
２％及びグルコース０．１％：Ｆ４′（：８．５）の１
Ｏｔｎｌに加え、３０℃で６時間振とり培養した。次い
で、この対数増殖期にある菌体を孔径０．４５μのメン
プレンフィルターテ無菌的に濾過集菌し、０．１Ｍ燐酸
塩緩衝液（Ｆ４−１？７．０）２０ｒｎｌで洗滌後、同
じ緩衝液２５ｄＫ懸濁させた。

この菌懸濁液４ｄを試験管（内径：　２１　ｍ　：長さ
；２００闘）に入れ、これに終濃度が５０μ２／コにな
るようにＮ−メチル−Ｎ′−二トローＮ−ニトロソグア
ニジンを添加し、１０分後にその０．　ｌ　ｒＬｉ！ｔ
−培ｉ４［組成ニアα−ヒドロキシアンドロスタ−４−
エン−３，１７−ジオン０．１％、硝酸アンモチ、酵母
エキス０．０５　％及びポリオキシエチレン（２０）ソ
ルビタンモノオレエート（ツイーン８０）０．０５％；
）’＋１ニア、５３に加え、さらにペニシリンＧを濃度
が１ｏｏｔｌ／σになるよって加えたのち、３０℃で１
８８時間振り培養した。得られた培養液を、培地１のプ
レート上に約１００〜５００個のコロニ、−が出現する
ように、稀釈して該プレートに塗布したのち、３０℃で
一夜培養を行なった。出現したコロニーを培地１のスラ
ントに単離したのち、各分離株を培地２の１０ｍＪ中で
２日間退とう培養した。得られたそれぞれの培養液中の
生産物を薄、１クロマトグラフイーで検定し、７α−ヒ
ドロキシアンドロスタ−４−エン−３，１７−ジオンを
選択的に蓄積している１菌株を見出し。

コレラシュードモナス・スツチェＩＪＭ−１４９２菌昧
と命名した。

参考例２ シュードモナス・プチダＤ４０１４−Ａ１６１５菌株を
次に示す方法で培養した。ＣＤＣＡ１０Ｆ。

硝酸アンモニウム２．０５’、燐酸２水素カリウム１．
０ｔ１燐酸水素２カリウム６、　Ｏｒ　、硫酸マグネシ
ウム・７水和物０−２　’　、酵母エキス０．２　Ｐ　
、グルフ−スｏ、ｓｒ、ペプトン０．５Ｆ及び水酸化ナ
トリウム１．０？の混合物に水道水を加えて容量１ｆ！
：１ｔに調整しくμ（：８．５）これを培地とした。こ
の培地を２６容発酵槽に入れ、１２０℃で１５分間蒸気
滅菌を行なった。予め上記の培地と同じ培地で試験管振
とり機にて２０時間増殖させた種菌５０ｍを上記の培地
に添加し、攪拌速度３００ｒｐｍ、通気量ｏ、　５　ｖ
ｖｍ及び３０℃の条件下で４８時間通気攪拌培養を行な
った。培養後、培養液を充分に混和し、その一部を薄層
クロマトグラフィーにより分析した結果、ＣＤＣＡは残
存していないことが確認された。培養液に１規定の水酸
化ナトリウム水溶液を加えることによって田を１０に調
整したのち、培養液をクロロホルム／エタノール混合溶
媒（容量比：　４／１　）の５ｔで抽出した。抽出液か
ら菌株変性物などの不溶物を濾別し、４液から溶媒を減
圧下に留去することによ５７．Ｑ　？の乾固物を得喪。

この乾固物を高速液体クロマトグラフィーによって分析
した縫果、乾固物は純度８６慢の７α−ヒドロキシアン
ドａスター４−エン−３，１７−ジオンであることが判
明した。この７α−ヒドロキシアンドロスタ−４−エン
−３，１７−ジオンを８０容量−のメタノール水溶液を
使用して再結晶することによシ、４．Ｏｆの精製物を得
た。

７α−ヒドロキシアンドロスタ−４−エン−３゜１７−
ジオンの精製物の分析結果を以下に示す。

融点＝２４５〜２４７℃ マススペクトルｍ／ｅ　：　３０２　（Ｍ）＋２８４（
Ｍ−Ｈ２０〕” またｍ／１３＝１２４より３−ケト−４−エンの存在が
確認された。

ＮＭＲ（ＣＤα３ｅ　９０　ＭＨｚ　）δ；０．９２（
Ｂ、３凡１ｇ−ＣＨ５）、　１．２２（１１，３Ｈ，１
９−ＣＨ３）、　４．０９　（ＡＩＨ，７β−Ｈ）、　
５．７９（３，１に４−Ｈ）ｐｐｍ 参考例３ 参考例２においてシュードモナス・プチダＤ４０１４−
Ａ１６１５菌株に代えてシュードモナス・スツチェリＭ
−１４９２’ｍ株を用い、かつ培地中のＣＤＣＡの使用
舊を１０ｒから３Ｏ５ＩＫ変更し、また培地中の水酸化
す）ｌラム、の使用λを１．０２から３．０？に変更し
た以外は同様の操作を行なうことによシ、乾固物を２１
．９？得た。彦お、得られ之培養液の一部を薄層クロマ
トグラフィーによシ分析した結果、培養液中にはＣＤＣ
Ａが残存していないことが確認され次。乾固物を高速液
体クロマトグラフィーによって分析した結果、該乾固物
は純度８５偵の７α−ヒドロキンアンドロスタ−４−エ
ン−３，１７−ジオンであることが判明し念。この７α
−ヒドロキシアンドロスタ−４−エン−３，１７−ジオ
ンをメタノールを使用して再結晶することによシ、１０
．５７の精製物を得た。

（２）塩酸 ７α−ヒドロキシアンドロスタ−４−エン−３゜１７−
ジオン５．　Ｏｆ　、エチレングリコール５　ｒｐｔｌ
、７マル酸０．５Ｆ及びベンゼン４００ｄの混合物をデ
ィーン・スターク（Ｄｅａｎ−８ｔａｒｋ）　ノ水分離
管を備えた反応器中で攪拌下に加熱還流し喪。加熱還流
開始よ９１日後にエチレングリコール１５ｆｆｉ／を追
加し、その１日後にエチレングリコール５　ｍｌ及びフ
マル酸０．１？を追加して、さらに１日加熱還流を行な
った。なお、加熱還流中、生成する水はディーン・スタ
ークの水分離管を用いて反応系から除去した。得られた
反応混合液を氷冷した飽和重曹水に注ぎ、ベンゼン層を
分離し２、水層をベンゼンで抽出した。先に分離したベ
ンゼン層とベンゼン抽出液とを合わせ、飽和食塩水で洗
滌し、無水炭酸カリウムで乾燥した。乾燥液を減圧下に
濃縮することにより粗結晶を６．２１？得た。この粗結
晶を１６ｄのメタノールと数滴のピリジンとの混合溶媒
を用いて再結晶することによＪ、３．３−エチレンジオ
キシアンドロスタ−４，６−ジエン−１７−オンを３．
９を得た（収率；７２チ）。得られた３、３−エチレン
ジオキシアンドロスタ−４，６−レニン−１フーオンの
分析結果を以下に示す。

融点＝１５３〜１５９℃ 比旋光度：〔α）、＋１４９°（ｃ＝１．１　ｏ、　（
Ｊα３）リチウム・ワイヤー１．３８　ｆを細かく切っ
てフラスコに入れ、アルゴン雰囲気下にｎ−ペンタンで
２回洗滌したのち、無水ジエチルエーテル４０ｄを加え
た。この混合物に攪拌下、室温で３−ブロモプロピル−
１−エトキシエチル＝エーテル３？を加え、溶液の温度
が上昇して３０℃を越え喪時点で氷−食塩浴を用いて冷
却し念。溶液の温度を約５℃に維持しながら、３−ブロ
モプロピル−１−エトキシエチル＝エーテル１６’ｌを
無水ジエチルエーテル２０ｍ／に溶解して得られた溶液
を約４０分を要して滴下し、滴下終了後、０℃でさらに
５０分間攪拌を続けた。得られた混合物に３．３−エチ
レンジオキシアンドロスタ−４，６−レニン−１フーオ
ン１．７２を無水テトラヒドロフラン１０ｄに溶解して
得られた溶液を０〜５℃で滴下し、その後Ｏ〜５℃で１
時間、室温でさらに４時間攪拌を続けた。得られた反応
混合物中の溶液を固体が混入しないようにして氷冷した
飽和食塩水に注いだ。これより有機層を分離し、水層を
テトラヒドロフラン５０ｍ／で抽出した。先に得られた
有機層と抽出液とを合わせ、約３０！／の容量になるま
で減圧下に濃縮した。

得られた濃縮液に２規定の塩酸２Ｑｒｎｌを加え、室温
下で２時間攪拌を行なった。得られた反応混合液を飽和
重曹水に注ぎ、酢酸エチルで２回抽出した。抽出液を合
わせ、飽和重曹水及び飽和食塩水で順次洗滌したのち、
無水硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥液を減圧下に濃
縮して４．１？の濃縮物を得之。このものは下記の分析
結果よυ１７β−ヒドロキシー１７α−（３−ヒドロキ
シプロピル）アンドロスタ−４，６−ジエン−３−オン
を含有していることが判明した。

ＩＲ（フィルム）νｍａｘ　： ３３５０（ｓ、水酸基）ｔ　　１６６５（ｖｓ、共役カ
ルボニル基）、１６２０（ｍ、二重結合）、１５８５（
Ｗ、二重結合）ｃＩＭ−１ ＮＭＲ（ＣＤαｓ、　６０ＭＨｚ）δ：５．６（８，Ｉ
Ｈ，４−Ｈ）、６．０４（ｓ、２Ｈ，６−Ｈおよび７−
Ｈ）ｐｐｍ リ　　　　　　　５ＣＯＣＨ３ （ａ）　　カンレノンの製造 実施例で得られた１７β−ヒドロキシ−１７α−（３−
にニトロキシプロピル）アンドロスタ−４，６−レニン
−３−オンを含む粗生成物４．１２をアセトン５０ｍＪ
及びｔｅｒｔ−プ’Ｊ−にアルコール６０ｄの混合溶媒
に加熱下に溶解させた。この溶液に水冷下でジョーンズ
（Ｊｏｎｅｓ　）試薬ＩＱｔｒｔｌを滴下した。滴下終
了後、水冷下に２０分間攪拌を続けたのち、さらにジョ
ーンズ試薬５　ｙｔｌを追加し、室温下で２０分間攪拌
した。得られた反応混合物にイソプロピルアルコール１
０ｍ／を加えたのち、減圧下に濃縮した。得られた濃縮
物を水で稀釈したのち、酢酸エチルで抽出し、抽出液を
飽和重曹水で洗滌し之のち、無水硫酸マグネシウムで乾
燥した。

乾燥液を減圧下に濃縮することにより、２．Ｑｆの濃縮
物を得た。

得られ念ａ蒲物をアセトン１０ｘｌに溶解し、ジョーン
ズ試薬２ｍｌを加え之のち、室温下で２０分間攪拌した
。得られた反応混合物にイソプロピルアルコール１！に
ｇを加えたのち減圧下に濃縮し、その＠細物に上記と同
様な処理操作を施すことによシ、２．０２の油状物質を
得た。

得られた油状物質をカラムクロマトグラフィー〔充填剤
ニジリカゲル（２０ｔ）；溶出液：ｎ−ヘキサン／酢酸
エチル混合溶謀（容量比：２／１〜１／１））を用いて
精製することによシ、カンレノンを含有する油状物質０
．９８Ｐを得た。この油状物質をｎ−ヘキサン１゜５　
ｒｕｌとアセトンｌ　ｒｎｌとの混合溶媒を用いて再結
晶することによシ、カンレノンを０．５６ｆ’得た。カ
ンレノンの収率は実施例の（ｂ）で使用した３、３−エ
チレンジオキシアンドロスタ−４，６−レニン−１フー
オン基準で３２係であつ良。得られたカンレノンの分析
結果を以下に示す。

融点＝１６３〜１６８℃ 比旋光度：　〔α’ｌ、＋２２°（ｃ＝１．０５、ＣＨ
Ｑ！３）（ｂ）　　スピロノラクトンの製造 カンレノン０．４００５’をメタノールｉ、５ｍ／に溶
解し、この溶液にチオ酢酸Ｑ、　２４　ｒｎｅを加熱還
流下に加え、さらに３０分間加熱還流を継続した。

得られた反応混合液に６０℃の水１．６　ｒｎｅを加え
、室温まで冷却したのち、酢酸エチル’ｌｏｍｌで稀釈
した。得られた溶液を飽和重曹水及び飽和食塩水で厘次
洗滌したのち、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥
液を減圧下に濃縮することにより０．６０７２の粗結晶
を得た。この粗結晶□をメタノールを用いて再結晶する
ことによりスピロノラクトンを０．４０８９得た（収率
：８３φ）。得られたスピロノラクトンの分析結果を以
下に示す。

融点：１３０〜１３５℃ 比旋光度：〔α鱈−３６．６’（Ｃ＝１．１３、ＣＨα
３）〔発明の効果〕 本発明によれば、上記の実施例から明らかなとおり、７
α−ヒドロキシアンドロスタ−４−エン−３，１７−ジ
オンから一般式（１）で示される３、３−アルキレンジ
オキシアンドロスタ−４，６−レニン−１フーオンを経
由して１７β−ヒドロキシ−１７α−（３−ヒドロキシ
プロピル）アンドロスタ−４，６−レニン−３−オンを
容易に製造することができる。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） （式中Ｒ＾１はアルキレン基を表わす） で示される３，３−アルキレンジオキシアンドロスタ−
   ４，６−ジエン−１７−オンを一般式▲数式、化学式、
   表等があります▼（II） （式中Ｒ＾２は水素原子又は低級アルキル基を表わし、
   Ｒ＾３及びＲ＾４はそれぞれ低級アルキル基を表わすか
   又は一緒になつてアルキレン基を表わす）で示される有
   機リチウム化合物と反応させ、得られる反応生成物を酸
   の存在下に加水分解することを特徴とする１７β−ヒド
   ロキシ−１７α−（３−ヒドロキシプロピル）アンドロ
   スタ−４，６−ジエン−３−オンの製造方法。 ２、一般式（ I ）で示される３，３−アルキレンジオ
   キシアンドロスタ−４，６−ジエン−１７−オンが７α
   −ヒドロキシアンドロスタ−４−エン−３，１７−ジオ
   ンを酸の存在下に 一般式 ＨＯ−Ｒ＾１−ＯＨ（III） （式中Ｒ＾１は前記定義のとおりである） で示されるアルキレングリコールと反応させることによ
   り製造されたものである特許請求の範囲第１項記載の製
   造方法。