JPH0128758B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は12α−ヒドロキシプレグナ−１，４−
ジエン−３−オン−20α−カルブアルデヒド及び
その製造法に関する。 本発明により提供される12α−ヒドロキシプレ
グナ−１，４−ジエン−３−オン−20α−カルブ
アルデヒドは公知文献に未記載の新規化合物であ
り、優れた抗炎症作用を有するプレドニゾン、プ
レドニゾロンに代表されるコルチコイド系ステロ
イドの合成原料となる12α−ヒドロキシプレグナ
−１，４−ジエン−３，20−ジオンを製造するた
めの中間体として有用である。 従来、プレドニゾンの製造法としては、デオキ
シコール酸を出発原料として20数段階の工程を経
る方法〔エル・エフ・フイーザー、エム・フイー
ザー共著；ステロイド（レインホルド社発行、
1959年）、634〜647頁参照〕が知られているが、
この方法は用いる試薬が高価であるうえに工程が
長く、工業的実施には必ずしも適していない。 本発明者らは、プレドニゾンを製造するために
有用な中間体について鋭意検討した結果、12α−
ヒドロキシプレグナ−１，４−ジエン−３−オン
−20α−カルブアルデヒドがデオキシコール酸及
び／又はその塩に微生物を作用させることによつ
て容易に得られ、かつ簡単にプレドニゾンの含成
原料となる12α−ヒドロキシプレグナ−１，４−
ジエン−３，20−ジオンに導きうることを見出
し、本発明を完成するに至つた。 （上記式中、Ｒは水素原子、アルカリ金属又はア
ルカリ土類金属を示し、R¹はアルキル基を示
す。） 本発明によれば、デオキシコール酸及び／又は
その塩を基質として12α−ヒドロキシプレグナ−
１，４−ジエン−３−オン−20α−カルブアルデ
ヒドを生産するアルカリゲネス属に属する細菌
を、デオキシコール酸及び／又はその塩を含む培
地に培養することにより、12α−ヒドロキシプレ
グナ−１，４−ジエン−３−オン−20α−カルブ
アルデヒドを高選択率、高収率で得ることができ
る。 上記のアルカリゲネス属に属する細菌として
は、アルカリゲネス・フエカリスD4020−K15
（Alcaligenes faecalis D4020−K15）菌株（微
工研条寄第204号）がある。この菌株は土壤中か
ら取得したアルカリゲネス・フエカリスD4020
（Alcaligenes faecalis D4020）菌株（微工研条
寄第182号）に突然変異処理を施して得られた変
異株である。 アルカリゲネス・フエカリスD4020菌株及びア
ルカリゲネス・フエカリスD4020−K15菌株の菌
株的性質を列挙すると次表のとおりである。

【表】

【表】 上記の表に示した菌学的性質に基づき、アルカ
リゲネス・フエカリスD4020菌株及びアルカリゲ
ネス・フエカリスD4020−K15菌株の同定を行な
つた。アルカリゲネス・フエカリスD4020菌株
は、桿菌であること、周鞭毛を有していること、
グラム染色が陰性であることなどの顕微鏡的所見
並びにオキシダーゼ反応及びカタラーゼ反応がと
もに陽性であること、好気性であること、Ｏ−Ｆ
テストの結果が酸化的（Oxidative）であること
などの生理学的性質からバージエイズ・マニユア
ル・オブ・デイターミネイテイブ・バクテリオロ
ジー第７版及び第８版に基づき、アルカリゲネス
属に属する細菌であると同定した。さらにアルカ
リゲネス・フエカリスD4020菌株は、ゼラチンを
液化しない点、ミルクがアルカリ性となる以外に
変化しない点及び脱窒反応がない点から、アルカ
リゲネス属のフエカリス種に属する細菌であると
同定した。また、一般に突然変異株はその親株と
同じ種に属するものと考えられており、アルカリ
ゲネス・フエカリスD4020−K15菌株はアルカリ
ゲネス属のフエカリス種に属する細菌であると判
定した。 本発明による12α−ヒドロキシプレグナ−１，
４−ジエン−３−オン−20α−カルブアルデヒド
の生産は、デオキシコール酸及び／又はその塩を
基質として12α−ヒドロキシプレグナ−１，４−
ジエン−３−オン−20α−カルブアルデヒドを生
産するアルカリゲネス属に属する細菌を、デオキ
シコール酸及び／又はその塩を含む培地に培養す
ることにより行なわれる。デオキシコール酸の塩
としては具体的にはデオキシコール酸のナトリウ
ム、カリウムなどのアルカリ金属の塩又はカルシ
ウム、マグネシウムなどのアルカリ土類金属の塩
が挙げられる。デオキシコール酸及び／又はその
塩の濃度は通常約１〜200ｇ／の範囲でよいが、
生産される12α−ヒドロキシプレグナ−１，４−
ジエン−３−オン−20α−カルブアルデヒドの収
量、培養条件及び操作性などの経済的観点から約
10〜100ｇ／の範囲が好ましい。培養方法は原
則的には一般微生物の好気培養で採用される方法
と同じであるが、通常は液体培地による振盪培養
法又は通気撹拌培養法が用いられる。培地は上記
のデオキシコール酸及び／又はその塩を基質とし
て12α−ヒドロキシプレグナ−１，４−ジエン−
３−オン−20α−カルブアルデヒドを生産するア
ルカリゲネス属に属する細菌が資化利用できる栄
養源を含有するものであればよい。炭素源として
はデオキシコール酸及び／又はその塩を単一炭素
源としてもよく、或いはデオキシコール酸及び／
又はその塩にグルコース、グリセリン、ペプト
ン、肉エキス、酵母エキスなどを併用してもよ
い。また窒素源としては、例えば硫酸アンモニウ
ム、塩化アンモニウム、燐酸アンモニウム、硝酸
アンモニウム、硝酸ナトリウム、硝酸カリウムな
どの無機窒素源、又はポリペプトン、ペプトン、
肉エキスなどの無機窒素源が用いられる。また、
この他に燐酸水素２カリウム、燐酸２水素カリウ
ム、硫酸マグネシウムなどの無機塩類が添加され
る。培養条件に特徴はないが、通常25〜35℃で10
時間〜７日間振盪培養又は通気撹拌培養を行な
う。 このようにして培養液中に蓄積された12α−ヒ
ドロキシプレグナ−１，４−ジエン−３−オン−
20α−カルブアルデヒドは、基質のデオキシコー
ル酸又はその塩と比較して水に対する溶解度が著
しく小さく、通常は培養液中に析出沈澱してく
る。この12α−ヒドロキシプレグナ−１，４−ジ
エン−３−オン−20α−カルブアルデヒドを分離
採取するには、沈澱している12α−ヒドロキシプ
レグナ−１，４−ジエン−３−オン−20α−カル
ブアルデヒドをデカンテーシヨンにより浮遊して
いる菌体を含む培養液から分離するか、または浮
遊している菌体が沈澱しないような回転数で遠心
分離を行ない、析出している12α−ヒドロキシプ
レグナ−１，４−ジエン−３−オン−20α−カル
ブアルデヒドを沈澱させたのち上記のデカンテー
シヨンにより12α−ヒドロキシプレグナ−１，４
−ジエン−３−オン−20α−カルブアルデヒドを
分離する方法が採られる。沈澱した12α−ヒドロ
キシプレグナ−１，４−ジエン−３−オン−20α
−カルブアルデヒドを除去した培養液に含まれる
菌体その他の不溶成分を濾過又は遠心分離などに
より分離除去して得られた培養濾液又は上清に、
水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カル
シウムなどのアルカリを加えてその培養濾液又は
上清をアルカリ性としたのち、上記のアルデヒド
を溶解しかつ水と相分離する有機溶媒、例えば酢
酸エチル、クロロホルム、クロロホルムとメタノ
ールの混合液などを用いて抽出操作を行ない、得
られた抽出液を集め、これより溶媒を溜去するこ
とによつて、培養液中に溶解している12α−ヒド
ロキシプレグナ−１，４−ジエン−３−オン−
20α−カルブアルデヒドを回収することができ
る。この有機溶媒による抽出操作は培養濾液又は
上清についてのみでなく、培養液そのものについ
て行なうことができる。上記の方法で得られた沈
澱物又は抽出物中には12α−ヒドロキシプレグナ
−１，４−ジエン−３−オン−20α−カルブアル
デヒドの他に残存基質のデオキシコール酸及び／
又はその塩並びに副生物がほとんど含まれておら
ず、例えばメタノール水溶液からの再結晶により
容易に高純度の12α−ヒドロキシプレグナ−１，
４−ジエン−３−オン−20α−カルブアルデヒド
を取得することができる。 本発明により得られる12α−ヒドロキシプレグ
ナ−１，４−ジエン−３−オン−20α−カルブア
ルデヒドは、（方法−１）これを炭酸カリウム、
酸化バリウムなどの脱水剤の存在下にピペリジン
と反応させて12α−ヒドロキシ−22−（Ｎ−ピペ
リジル）ビスノル−１，４，20（22）−コラトリエ
ン−３−オンとし、ついでこの生成物をオゾン酸
化することにより12α−ヒドロキシプレグナ−
１，４−ジエン−３，20−ジオンに誘導できる。 また（方法−２）によれば、12α−ヒドロキシ
プレグナ−１，４−ジエン−３−オン−20α−カ
ルブアルデヒドと一般式（） R¹COOH …（） （式中、R¹はアルキル基を表わす。）で示される
カルボン酸又はその反応性誘導体、例えば酸ハラ
イド、酸無水物などとを常法により反応させるこ
とにより一般式（）で示される12α−アシルオ
キシプレグナ−１，４−ジエン−３−オン−20α
−カルブアルデヒドが得られる。代表的な反応例
として挙げられる12α−ヒドロキシプレグナ−
１，４−ジエン−３−オン−20α−カルブアルデ
ヒドと一般式（）で示されるカルボン酸のクロ
ライドとの反応はトリエチルアミン、ピリジンな
どの第３級アミンの存在下に行なわれる。この反
応は溶媒中で行なうのが好ましく、溶媒として塩
化メチレン、クロロホルム又はこれらとベンゼ
ン、トルエン、酢酸エチルなどとの混合溶媒が好
ましく用いられる。この反応は通常室温で行なう
が、必要に応じて約60℃までの加温下に行なうこ
ともできる。反応後、反応混合物を希塩酸水、重
曹水、水などで洗滌したのち乾燥し、ついでこれ
より低沸点物を留去することにより一般式（）
で示される12α−アシルオキシプレグナ−１，４
−ジエン−３−オン−20α−カルブアルデヒドの
粗生成物を得る。この粗生成物をそのまま次の反
応に用いることができる。一般式（）で示され
る12α−ヒドロキシプレグナ−１，４−ジエン−
３−オン−20α−カルブアルデヒドとピペリジ
ン、ピロリジン、モルホリンなどの第２級アミン
とを反応させることにより一般式（）で示され
るエナミンが生成する。第２級アミンは一般式
（）で示される12α−アシルオキシプレグナ−
１，４−ジエン−３−オン−20α−カルブアルデ
ヒドに対して等モル〜２倍モル量用いる。反応中
に副生する水を、ベンゼン、トルエンなどの水と
共沸する溶媒を用いて加熱還流下に反応系から除
去する。この反応は特に触媒を要しないが、ｐ−
トルエンスルホン酸などの触媒の存在下に反応を
行なうこともできる。反応後、反応混合物から減
圧下に低沸点物を留去することにより、一般式
（）で示されるエナミンの粗生成物が得られる。
この粗生成物をそのまま次の反応に用いることが
できる。一般式（）で示されるエナミンをオゾ
ン酸化又は無水クロム酸、ピリジニウムクロルク
ロメート、重クロム酸ナトリウムなどを用いて酸
化することにより、一般式（）で示される12α
−アシルオキシプレグナ−１，４−ジエン−３，
20−ジオンを得ることができる。なお、無水クロ
ム酸を用いる酸化反応は通常ピリジン溶媒中で行
なう。この場合、一般式（）で示されるエナミ
ンを溶解させたピリジン溶液に無水クロム酸とピ
リジンの混合液を徐々に加えるか、又は無水クロ
ム酸とピリジンの混合液に一般式（）で示され
るエナミンを溶解させたピリジン溶液を徐々に加
えることにより反応を行なう。この酸化反応は氷
冷下ないしは室温下に行なわれる。反応後、反応
混合物をベンゼン、トルエンなどで希釈し、これ
より固形物を濾過により除去したのち、濾液に希
塩酸水を加え、ついでベンゼン、トルエンなどで
抽出し、抽出液から低沸点物を留去することによ
り、一般式（）で示される12α−アシルオキシ
プレグナ−１，４−ジエン−３，20−ジオンの粗
生成物が得られる。この粗生成物を必要に応じて
シリカゲルカラムクロマトグラフイーにより精製
するか、再結晶法により精製することにより高純
度の一般式（）で示される12α−ヒドロキシプ
レグナ−１，４−ジエン−３，20−ジオンを得る
ことができる。一般式（）で示される12α−ア
シルオキシプレグナ−１，４−ジエン−３，20−
ジオンを通常の加水分解反応に付することにより
12α−ヒドロキシプレグナ−１，４−ジエン−
３，20−ジオンが得られる。例えば、この加水分
解反応はメタノール、エタノールなどの溶媒中で
水酸化カリウム、水酸化ナトリウムなどの存在
下、室温ないし溶媒の還流温度で行なわれる。反
応後、反応混合物を減圧下に濃縮し、ついでベン
ゼン、トルエンなどで希釈し、水、希塩酸水など
で洗滌し、乾燥したのち、これより低沸点物を留
去することにより12α−ヒドロキシプレグナ−
１，４−ジエン−３，20−ジオンの粗生成物が得
られる。この粗生成物は例えば酢酸エチルなどか
ら再結晶することにより精製することができる。 12α−ヒドロキシプレグナ−１，４−ジエン−
３，20−ジオンは例えば次の方法によりプレドニ
ゾンに誘導できる。 〔上記式中、Meはメチルを表わし、Acはアセチ
ル基を表わす。〕 すなわち、12α−ヒドロキシプレグナ−１，４
−ジエン−３，20−ジオンを三酸化クロムで酸化
し、さらにその酸化生成物を水酸化カリウムの存
在下に二酸化セレンで酸化することによりプレグ
ナ−１，４，９（11）−トリエン−３，12，20−ト
リオンを得る。このプレグナ−１，４，９（11）−
トリエン−３，12，20−トリオンを白金の存在下
に水素添加することにより12α−ヒドロキシプレ
グナ−１，４，９（11）−トリエン−３，20−ジオ
ンとし、ついでこの生成物に酸性条件下でメタノ
ールを作用させて12α−メトキシプレグナ−１，
４，９（11）−トリエン−３，20−ジオンを得、こ
の生成物に塩化水素を作用させることにより12−
クロロプレグナ−１，４，９（11）−トリエン−
３，20−ジオンを得る。この12−クロロプレグナ
−１，４，９（11）−トリエン−３，20−ジオンを
炭酸水素ナトリウムで処理することによりプレグ
ナ−１，４，11−トリエン−３，20−ジオンを
得、この生成物に臭素を作用させて11，12−ジブ
ロモプレグナ−１，４−ジエン−３，20−ジオン
とし、ついでこれをクロム酸銀及び三酸化クロム
の存在下に加水分解することにより12−ブロモプ
レグナ−１，４−ジエン−３，11，20−トリオン
を得、この生成物に金属亜鉛を作用させてプレグ
ナ−１，４−ジエン−３，11，20−トリオンとす
る。このプレグナ−１，４−ジエン−３，11，20
−トリオンを無水酢酸で処理することにより20−
アセトキシ−１，４，17（20）−トリエン−３，11
−ジオンを得る。この生成物に過テレフタル酸を
作用させることにより20−アセトキシ−17α，
20α−エポキシプレグナ−１，４−ジエン−３，
11−ジオンとし、これを加水分解して17α−ヒド
ロキシプレグナ−１，４−ジエン−３，11，20−
トリオンを得、ついでこの生成物にヨードを作用
させて17α−ヒドロキシ−21−ヨードプレグナ−
１，４−ジエン−３，11，20−トリオンを得る。
この17α−ヒドロキシ−21−ヨードプレグナ−
１，４−ジエン−３，11，20−トリオンをアセト
ン中で酢酸カリウムで処理することにより21−ア
セトキシ−17α−ヒドロキシプレグナ−１，４−
ジエン−３，11，20−トリオンとし、これを加水
分解することによりプレドニゾンを得ることがで
きる。 また12α−ヒドロキシプレグナ−１，４−ジエ
ン−３，20−ジオンは次の方法により公知化合物
であるプレグナ−１，４，11（12）−トリエン−
３，20−ジオンを経由してプレドニゾン、さらに
はプレドニゾロンに誘導できる。 （上記式中、R²はアルキル基を表わす。） すなわち、12α−ヒドロキシプレグナ−１，４
−ジエン−３，20−ジオンを通常のスルホネート
化反応に付することにより、一般式（）で示さ
れるスルホネートが得られる。例えば、このスル
ホネート化反応は、12α−ヒドロキシプレグナ−
１，４−ジエン−３，20−ジオンをピリジン、ピ
コリン又はこれらとベンゼン、トルエンなどとの
混合溶媒に溶解し、この溶液に一般式（） R²SO₂Cl …（） （式中、R²はアルキル基を表わす。）で示される
スルホン酸クロライドを該12α−ヒドロキシプレ
グナ−１，４−ジエン−３，20−ジオンに対し等
モル〜２倍モル量加え、室温ないしは必要に応じ
て約80℃までの加温下に行なわれる。反応後、反
応混合物を希塩酸水などにあけ、ベンゼンなどで
抽出し、抽出液を希塩酸水、重曹水、水などで洗
滌し、乾燥したのち、これにより低沸点物を留去
することにより一般式（）で示されるスルホネ
ートの粗生成物が得られる。この粗生成物を例え
ば酢酸エチルなどから再結晶することにより高純
度の一般式（）で示されるスルホネートを得る
ことができる。一般式（）で示されるスルホネ
ートは、これを脱スルホン酸反応に付することに
より、公知化合物であるプレグナ−１，４，11
（12）−トリエン−３，20−ジオンに誘導される。
この脱スルホン酸反応は通常、酢酸カリウム、塩
化リチウム、コリジン、ポタシウムｔ−ブトキサ
イドなどの反応助剤（スルホン酸を捕捉すること
ができる化合物）の存在下に行なわれる。反応助
剤の使用量は一般式（）で示されるスルホネー
トに対して等モル〜20倍モル量である。この反応
はヘキサメチルホスホルトリアミド、Ｎ，Ｎ−ジ
メチルホルムアミドなどの溶媒中で行なうのが好
ましく、通常約80〜140℃の温度下に加熱して行
なわれる。プレグナ−１，４，11（12）−トリエン
−３，20−ジオンは常法によりプレドニゾン、さ
らにはプレドニゾロンに誘導される。 以下、実施例及び参考例によつて本発明をさら
に詳細に説明する。 参考例 １ アルカリゲネス・フエカリスD4020−K15菌株
の取得方法 培地１（組成：デオキシコール酸0.5％、水酸化
ナトリウム0.05％、ペプトン0.5％、酵母エキス
0.5％、塩化ナトリウム0.5％及び寒天1.5％）スラ
ントに生育させたアルカリゲネス・フエカリス
D4020菌株の一白金耳を、予め試験管内に準備し
た培地２（組成：デオキシコール酸２％、水酸化
ナトリウム0.2％、硝酸アンモニウム0.2％、燐酸
２水素カリウム0.1％、燐酸水素２カリウム0.6
％、硫酸マグネシウム・７水和物0.02％及び酵母
エキス0.02％）の10mlに植菌し、30℃で８〜10時
間振盪培養した。この培養液の0.3mlを予め試験
管に準備した培地３（組成：デオキシコール酸0.5
％、水酸化ナトリウム0.05％、グルコース0.1％、
硝酸アンモニウム0.2％、燐酸２水素カリウム0.1
％、燐酸水素２カリウム0.6％、硫酸マグネシウ
ム・７水和物0.02％及び酵母エキス0.02％）の10
mlに加え、30℃で10〜15時間培養した。ついで、
この対数増殖期にある菌体を0.45μのメンブレン
フイルターで無菌的に濾過集菌し、0.1M燐酸塩
緩衝液（PH：7.0）20mlで洗滌後、同じ緩衝液25
mlに懸濁させた。これに終濃度が20μｇ／mlにな
るようにＮ−メチル−N′−ニトロ−Ｎ−ニトロ
ソグアニジンを添加し、30℃で10〜15分間振盪す
ることにより突然変異処理を行なつた。突然変異
処理を施した菌体を0.45μのメンブレンフイルタ
ーで濾過集菌し、0.1M燐酸塩緩衝液（PH：7.0）
20mlで洗滌後、同じ緩衝液20mlに懸濁した。得ら
れた菌懸濁液を滅菌生理食塩水で希釈し、それを
培地４（組成：デオキシコール酸0.5％、水酸化ナ
トリウム0.05％、硝酸アンモニウム0.2％、燐酸
２水素カリウム0.1％、燐酸水素２カリウム0.6
％、硫酸マグネシウム・７水和物0.02％、酵母エ
キス0.02％及び寒天1.5％）の寒天平板上に500〜
1000個のコロニーを出現させるように塗布したの
ち、30℃で３〜４日間培養した。出現したコロニ
ー中の極小コロニーを培地１のスラントに単離し
たのち、その一白金耳を予め試験管に準備した培
地５（組成：デオキシコール酸0.2％、水酸化ナト
リウム0.02％、グルコース0.1％、硝酸アンモニ
ウム0.2％、燐酸２水素カリウム0.1％、燐酸水素
２カリウム0.6％、硫酸マグネシウム・７水和物
0.02％及び酵母エキス0.02％）の10mlに植菌し、
30℃で24時間振盪培養した。得られたそれぞれの
培養液中の生産物を薄層クロマトグラフイーによ
り検定し、上記の培養条件下で12α−ヒドロキシ
プレグナ−１，４−ジエン−３−オン−20α−カ
ルブアルデヒドを選択的に蓄積している一菌株を
見い出し、これをアルカリゲネス・フエカリス
D4020−K15と命名した。 実施例 １ アルカリゲネス・フエカリスD4020−K15菌株
（微工研条寄第204号）を次に示す方法で培養し
た。デオキシコール酸1.0ｇ、グルコース0.1ｇ、
硝酸アンモニウム0.2ｇ、燐酸２水素カリウム
0.12ｇ、燐酸水素カリウム0.61ｇ、硫酸マグネシ
ウム・７水和物0.02ｇ、酵母エキス0.02ｇ及び水
酸化ナトリウム0.1ｇに水道水を加えて容量を100
ml（PH：8.4）に調整し、これを培地とした。こ
の培地を500ml容坂口フラスコに入れ、120℃で15
分間、蒸気殺菌を行なつた。予め上記の培地と同
じ培地で試験管振盪機にて１日間増殖させた種菌
の10mlを上記の500ml容坂口フラスコに添加し、
30℃で２日間振盪培養した。培養後、この培養液
を集め、遠心分離機で培養中に生じた沈澱物と菌
体とからなる混合物を培養液上清と分離した。こ
の混合物に１規定の水酸化ナトリウム水溶液を加
えることにより、この溶液のPHを９に調整し、つ
いでこの溶液を酢酸エチル200mlで抽出した。一
方、培養液上清に１規定の水酸化ナトリウム水溶
液を加え、この溶液のPHを９に調整したのち、こ
の溶液を酢酸エチル200mlで抽出した。この抽出
液と上記で得られた抽出液との混合液を無水硫酸
ナトリウムで乾燥し、ロータリー・エバポレータ
ーで酢酸エチルを溜去することにより、12α−ヒ
ドロキシプレグナ−１，４−ジエン−３−オン−
20α−カルブアルデヒドを700mg得た。 得られた12α−ヒドロキシプレグナ−１，４−
ジエン−３−オン−20α−カルブアルデヒドの一
部を取り、これにメタノールを加えて１％溶液と
し、この溶液25μをミクロボンダパツクＣ−18
カラムを備えた高速液体クロマトグラフイー（米
国ウオーターズ社製、HLC−GPC−244型）に注
入した。移動相としてPH4.0に調整した水／メタ
ノールの25／75容量比の混合液を流速１ml／分で
流し、検出を屈折率方式で行なつた。得られた液
体クロマトグラムにおける各ピークの面積比を積
分計（島津製作所製、島津クロマトパツクＣ−
R1A）で求め、この面積比から上記の12α−ヒド
ロキシプレグナ−１，４−ジエン−３−オン−
20α−カルブアルデヒドの純度を求めたところ、
96％であつた。 上記で得られた12α−ヒドロキシプレグナ−
１，４−ジエン−３−オン−20α−カルブアルデ
ヒドの確認を下記の方法で行なつた。 融点：194〜201℃ マススペクトルｍ／Ｚ：342〔Ｍ〕⁺

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 12α−ヒドロキシプレグナ−１，４−ジエン
   −３−オン−20α−カルブアルデヒド。 ２ デオキシコール酸及び／又はその塩を基質と
   して12α−ヒドロキシプレグナ−１，４−ジエン
   −３−オン−20α−カルブアルデヒドを生産する
   アルカリゲネス属に属する細菌を、デオキシコー
   ル酸及び／又はその塩を含む培地に培養すること
   を特徴とする12α−ヒドロキシプレグナ−１，４
   −ジエン−３−オン−20α−カルブアルデヒドの
   製造法。