JPS6396559A - マイクロドット免疫検定装置 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は一般には試料体液に対する特定の結合検定を実
施するための固相法に関し、そして更に詳しくはこの検
定を実施するに当ってのクロマトグラフ技術の使用に関
する。

特定の結合検定の使用は種々の臨床適用で価値が大きい
ことがわかっている。種々の生物学的液体および組織試
料を様々の成分例えば薬物、ホルモン、酵素、蛋白質、
抗体、ＤＮＡおよびＲＮＡフラグメントお↓びその他の
生物学的材料について分析することができる。特定の結
合検定には、リガンドおよび受容体からなる多数の特定
の結合対である分析物を測定する検定を包含する。リガ
ンドおよび受容体は、受容体はリガンドに特定の結合を
し、類似の特性を有する他の試料成分をリガンドと区別
し得る点で関連している。免疫検定は１種々の化合物お
よび材料の特定の抗原決定基（抗原）と結合し得る免疫
グロブリン（抗体）との間の反応による。特定の結合検
定はまたポリヌクレオチド一本領が水素結合形成を経て
相補配列を包含するその他のポリヌクレオチドの鎖と交
雑するＤＮＡおよびＲＮＡ交雑反応をも包含し得る。更
に他の特定の結合検定例えば免疫反応や交雑を包含して
いないホルモン受容体を包括する検定が知られている。

特定の結合反応の結果は往々にして直接観察し得ないこ
ともあるので、それらの間接観察のために種々の技術が
案出されている。特定の結合反応は、放射線同位元素標
識および発色団、螢光団および酵素標識の使用を包含す
る周知の技術により特定の結合対の数の一つを標識する
ことにより観察し得る。同位元素標識、発色団、および
螢光団は放射線検知器、分光光度計あるいは裸眼の使用
により検知することができる。特定の結合対の数が酵素
ラベルで標識されている場合、それらの存在は化合物例
えば染料が活性化されて検知可能な信号を生成する反応
系の酵素活性化により検知し得る。

免疫検定には３種の一般的タイブがある。拮抗結合検定
において、標識された試薬および未標識された分析物化
合物は結合材料での結合部位に対して拮抗する。培養期
間後、未結合材料を洗い去り、そして部位に結合されて
いる標識試薬め量を試料溶液中の分析物の濃度の決定の
ための参照量と対比する。第二のタイプの免疫検定はサ
ンドインチ検定として知られていて、そして一般には分
析物試料溶液金該分析物に対して免疫学的に特異的な第
一結合材料を包含する表面と接触させることを包括する
。第一結合材料と同一タイプの標識結合材料（抗原また
は抗体）ｆ：Ｏ包含する第二溶液を検定に加える。標識
結合材料は第一結合材料に結合されている任意の分析物
に結合される。次に、検定系全洗滌工程に付して分析物
と結合していない標識結合材料を除去−七して標識材料
の残量は結合分析物の量に通常比例する。

第三のタイプの免疫検定技術は凝集反応技術を包括しそ
して血液抗原および血清タイプのための周知の検定によ
り例示される。血清内の抗体と赤血球細胞表面上に存在
する抗原との免疫交差反応性は赤血球細胞および抗体の
三次元の架橋ネットワークの形成によフ指示される。血
清／赤血球細胞混合物の凝集は裸眼でみることができる
ペレットを結果として生じる。

これらの種々の検定操作は液相免疫化学技術に従って本
来達成されており、この技術では酵素および同位元素標
識反応は装置例えばマイクロタイタープレート中の液体
溶液中で行われていた。更に近年には、酵素および免疫
反応を湿式多孔性固体基質上で溶液中で実施する「固体
」相検定を実施するための技術および操作が適合されて
いた。

ローゼンフィールド（Ｒｏｓｇｎｆｔｇｌｄ）等の米国
特許第４．３２８，１８３号には、固相血液型分類操作
が開示され、これによると溶解赤血球細胞ゴーストの単
層がプラスチック・チューブの壁に共有結合される。次
に、単層を血清試料と接触させ、そして抗体が細胞膜に
より存在する抗原と反応性である場合、結合赤血球細胞
ゴーストにより試料中に存在する抗体の免疫吸着が起る
。次に赤血球細胞の抗体感作単層は凝集反応で相補抗原
を担有している血液細胞の第二の層と結合することがで
きる。細胞単層および抗体層双方の免疫学的タイプが知
られていると、第二の細胞層の形成の有無を用いて第二
の層全形成している細胞の免疫学的タイプを指示するこ
とができる。逆に、第一の細胞層の免疫特異性が知られ
ていると、同一細胞で第二の細胞単層全形成する能力は
、第一細胞層の抗原と特異的に反応性を有する抗体の免
疫吸着された層が形成されたか否かを測定する手段とし
て、依存することができる。

グラブ（の１６ｂ）等の米国特許第４，１６８．１４６
号には、確定的な「同相」サンドイッチ−タイプ免疫検
定を実施するための試験ストリップの使用が開示されて
いる。ス）　リップは抗体が吸着、吸収または共有結合
により付着させておいた吸収性担体材料から形成されて
いる。好ましい試験ストｖツブ材料にはセルロース繊維
形成性材料例えばＰＪＬイオン交換紙およびクロマトグ
ラフ紙が包含される。材料例えばセルロース薄層クロマ
トグラフィディスク、酢酸七ルロースディスク、でんぷ
んおよび三次元架橋材料例えばセファデックスＣ８ｔｔ
ｐｈａｄｍｚ）　Ｃファルマシア・ファイン・ケミカル
ズＣＰｈａｒｍａａｉａ　Ｆ４ｔ＊ｅ　Ｃｋｇｍイ６ａ
ｌｔｔ）、ウプサラＣＵｐアｓａＬα）、スエーデン〕
の使用もまた開示されている。免疫検定は試験ス）　Ｉ
Ｊツブを疑わしい抗原を含む水溶液の秤量で湿らせるこ
とによって行われる。試験溶液内の抗原分子は毛細管作
用により試験ス）　＋７ツプ全体にわたって移動するが
、結合抗体が該抗体が特異性ビ有する抗原の移動を遅ら
せるために、定まった時間にわたる抗原分子の移動の程
度は試験溶液中の抗原濃度の画数として関係がある。診
断装置の抗原含有領域は標識抗体の添加により指示され
る。

ジーセｋＣＧｉｍｇｍｌ＞等の米国特許第４，５１７，
２８８号には、′不活性多孔性材料での同相免疫検定を
実施する方法が開示されている。この特許には、多孔性
材料の特定の帯域内で結合材料を免疫学的に固定化し、
そして分析物を固定化された結合材料を含む帯域に適用
することが開示されている０次に、分析物と結合する標
識指示薬材料は、帯域中の分析物の量に相関する量で固
定化される＝うになる帯域に適用する。次に、溶媒を帯
域の中心に適用して帯域から未結合の標識指示薬をクロ
マトグラフィーで除去し、その結果帯域に残留する標識
指示薬のｘｉ測測定ることができる。

ドイチコＣＤａｓｔｓｅｈ）等の米国特許第４．３６１
，５３７号には、特定の結合検定例えば放射性同位元素
標識拮抗結合検定を行うための試験装置が開示され、こ
の装置は試料金変容するための第一帯域、展開液により
輸送され得る第一試薬で含浸された第二帯域、および第
三試薬で含浸され次第三帯域を有する毛細管現象により
現像液を輸送し得るストリップからなる。更に、装置は
測定帯域および第二試薬あるいはストリップの材料であ
ってよい遅延要素を包含している。第一試薬は、（１）
試料、（２）試料および第二試薬、あるいは（３）試料
と拮抗している第二試薬からなる群の一つと反応して測
定される唇性に基いた量で生成物を形成し得る。

試料全第一帯域と接触させ、そして次にスＩ−ＩＪツブ
を展開液に浸して試料と第一試薬との輸送を生ぜしめて
反応生成物を形成する。遅延要素は生成物または第一試
薬（移動試薬）の一方の輸送を遅延させて両者全空間的
に分離させ、そして次に移１１ｂ要素の量全測定位置で
測定する。

ズクＣＺｓｋ）等の米国特許第４，４３５，５０４号に
は、クロマトグラフィー免疫検定が開示され、この検定
ではクロマトグラフの一端から境界が形成される距離が
試料中に存在する分析物の量を指示している。特定の結
合対の一員である分析物を吸収性担体で免疫クロマトグ
ラフを行い、この担体にはその結合パートナ−が非拡散
的に結合され、セして槙々のプロトコールが用いられて
分析物が結合している領域と分析物を有していない領域
との間の輪郭を提供している。一つのプロトコールによ
ると、分析物を、ラベルが酵素１種またはそれ以上を包
含する酵素シグナル生成システムの一員である標識結合
共役物の存在下または不存在下にクロマトグラフを行う
。標識共役物が分析物でクロマトグラフされないとぎは
、共役物を存在する分析物の盆に比例してクロマトグラ
フに結合するクロマトグラフに適用する。同様に、標識
共役物が分析物でクロマトグラフされるとぎは、共役物
をその［置で存在する分析物の蛍に比例して分析物に結
合する。標識共役物はシグナル生成システムの酵素メン
バーであＶ得て、このシステムは発色団、りん光体、螢
光体、および化学ルミネッセンスならびに結合酵素シグ
ナルシステムを包含し得る。結合酵素システムを用いる
とぎは、第一酵素接触反応の生成物と反応して検知し得
る生成物を形成し得る第二酵素は分析物溶液と共にクロ
マトグラフすることができるし、または分析物のクロマ
トグラフィー後に試験ストリップに加えてもよい。

欧州特許出願東１６４．１９４号（１９８５年１２月１
１日公開）には、ズク等の方法の改善が開示され、輸送
されたクロマトグラフ材料がストリップの本体に沿った
のと実質的に同一のクロマトグラフストリップの縦のふ
ちに沿った横断速度を有する点で改良されている。これ
によってクロマトグラフ輸送フロントが凹面よりむしろ
実質的に平坦な１１とすることがｏＪ能となる。

不卯発明にとって関心があるのは本願発明者の２件の公
開されている特許出願である。ゴートン（Ｇｏｒｄｏり
の米国特許第４，４５２，９０１号には蛋白質の固定化
のための多孔性ニトロセルロース支持体の使用が開示さ
れている。このニトロセルロースシートハ、ニトロセル
ロースジ−トノ残留結合能力が、固定化されるものとは
異った、久の検定で使用される抗体のいずれかと交差反
応性でない１つでたはそれ以上のタイプの蛋白質でのブ
ロック処理によって飽和されていると、免疫検定操作に
利用することができる。

本発明の背景にとって更に関心があるのは、免疫学的検
定を行うための装置に関する１９８２年１１月３日公開
のゴートンの欧州％Ｗｆ願第願人６１８１０号示である
。この装置は、抗原、抗体または両者の限定された吸着
領域の予め選定された配列を含有する多孔性固体支持体
からなり、ここで基体上の残留吸着部位が検定で用いら
れる抗原または抗体と交差反応しない蛋白質防護剤例え
ば牛血渭アルブミンで飽和されている。多孔性支持体は
抗体による接近および抗原を結合するのに通した表面親
和力を可能とするのに十分な表面多孔度を有していると
開示されている。この支持体は種々の天然および合成重
合体および誘導体から選択され得ると開示されているが
、好１しくは厚さ０．１ｍ。

孔サイズ約０．１５μｆｉ％〜１５μ毒を有するニトロ
セルロースシートである。抗原または抗体は直接接触し
次いで防獲剤と共に培養することによって多孔性固体支
持体に通用される。未知の抗原または抗体を検出するた
めの検定は、抗−免疫グロブリン抗体であってもよい標
識抗体の使用によＶ実施される。単独または多重検定の
結果を標識抗体の検出により測定される。特定のＤＮＡ
およびＲＮＡ配列の検出のための種々の特定の結合検定
技術がよく知られている。

この検定は、一本鎖核ｍｌｌ会体の相補ポリヌクレオチ
ド配列が相互に認識し、そして相互作用して安定な二本
鎖構造を形成する核酸交雑技術操作をオリ用している。

サウザーン（Ｓｏ％ｔｈａｒｎｌ　Ｊ　、モル、ビオル
（Ｊ、Ｍｏ１．Ｂｉｏｌ−）、第９８巻、第５０３−５
１７頁（１９７５年）には、ゲル電気泳動により分離さ
れたＤＮＡ分子はアガロース電気泳動ゲルからニトロセ
ルロースＰ紙に輸送され得る操作が開示されている。Ｄ
ＮＡ断片は次に特別な配列の検出のために放射線同位元
素標識ＲＮＡ断片に対して交雑することができる。

ファルコウ（Ｆａｌｋｏｗ）等の米国特許第４，３５８
，５３５号には、感染性疾患状態と組合さったＤＮＡ配
列の検出に有用な方法が開示され、この方法では感呆性
倣生物と組合さったＤＮＡが単離され、一本鎖変注形態
で不活性支持体例えばニトロセルロースに固定されてい
る。臨床試料に存在している疑いのある病原生成物の特
徴を有するＤＮＡ配列に対して特異的な６Ｍｅポリヌク
レオチドプローブを交雑条件下に試料ＤＮＡと接触する
。次に、支持体を洗滌していずれの未交雑プローブ材料
を除云し、そしていずれの残留交雑プローブ材料の存在
が病原体の存在を指示している。

ダン（Ｄｕｎｎ　）等はセル（Ｃｇ！Ｊ）、ｊＸ１２巻
、第２３−３６頁（１９７７年）にサンドインチ交雑と
して知られている代替的交雑操作を開示している。この
操作によると。

試料ＲＮＡを、ニトロセルロースル紙支持体に結合され
ている定められたＤＮＡ断片に交雑して、その結果ＲＮ
Ａの３′すたは５′末端が一本鎖テイルとして突出する
。「テイル」配列に対して相補するＤＮＡ配列は次に交
雑条件下で標＠ＤＮＡの特定の断片で処堆丁ゐことによ
って決定することができる。

先行技術で知られている種々の特定の結合検定操作に加
えて、検定試薬の拡散またはクロマトグラフ檜送を包括
する数多くの検定操作が知られている。フルオシオン（
Ｆｏｒｇｉｏｎｇ）の米国特許第３＋８７５．０１４号
には、−組の反応を利用する血清中の酵素アスパルテー
ト・アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）の濃度を測定
するための固相試験指示薬が開示されている。第一の反
応でＡＳＴはＬ−アスパラギン酸とα−ケトゲルタール
酸とによってオキザロアセテートを形成する反応を接触
する。第二の反応に３いて、オキザロアセテートはジア
ゾニウム塩と反応して着色した反応生成物を形成する。

フォルジオンの試験指示楽はオキザロ酢酸を選択的に透
過し得る接着剤で相互に接着された一対の吸収性材料を
包含している。第一の材料を基質Ｌ−アスパラギン酸Ｓ
よびα−ケトゲルタール酸で含浸する。第二の材料は乾
燥ジアゾニウム塩染料で含浸する。装置を血清と接触ぎ
せ、そしＡＳＴが含有されていると、基質の反応を接触
してオキザロ酢酸を形成する。次に、オキザロ酢酸が接
着バリアーを経由して第ニス）　＋７ツプに拡散し、そ
してジアゾニウム塩との着色反応を活性化し、この反応
を標準と比較することができる。

キャンベル（Ｃａｍｂａｌｌ）の米国特許第３．８９３
，８０８号には、無鉛化自動車ガソリンでの鉛混在を検
知するための試験ス）　ＩＪツブが開示されている。試
験ストリップは３つの帯域を有する紙ス）Ｕツブからな
っている。第一の帯域はヨウ素で含浸され、また第二の
帯域はヨウ素とヨウ化カリウムとの混合物で処理されて
いる。試験すべき自動車ガソリンの試料をストリップに
適用し、そして第一および第二帯域を経て毛細作用によ
り第三帯域に輸送し、この第三帯域には次のジチゾン指
示薬浴液を加える。自動車ガソリンに存在する任意の有
機鉛はストリップの表面でヨウ化鉛に変換され、そして
これをジチゾン指示薬との反応によって特徴のある着色
を有する鉛ジチゾネート複合体を形成させることにより
検出する。

アルパティ（Ａ１６ｇｒｔｙ）の米国性ｎ！３，８９５
，９１４号には、生物学的体液中のバルビッール酸Ｓよ
びバルビッール酸誘導体検出のための試験ス）　ＩＪツ
ブが開示されている。

このストリップは３つの帯域を有する吸収性紙からなる
。

第一帯域は適用される試料液体を酸性化するために酸で
含浸されている。第二帯域はパルピッレート−水銀複合
体を形成するよう反応し得るアルカリ性緩衝化酢酸水銀
で含浸されている。第三帯域は水銀指示化合物例えばジ
フェニルカルバゾンで含浸されている。試験すべき液体
の試料を第一帯域に適用し、そしてストリップを溶媒に
浸漬する。試料中に存在するパルピッレートが反応して
パルピッレート−水銀覆合体を形成し、このものは第三
帯域に輸送され、水銀指示化合物と反応する。

カリエス（Ｋｔｓｌｌｉａａ　）の米国＃ＲＭ４，２９
８，６８８号には、生物学的体液中のグルコースレベル
を測定するため検定装置が開示されている。装置は、未
処理であってもよい測定帯域、グルコースオキシダーゼ
を含む反応帯域Ｓよびペルオキシダーゼおよび指示業物
質例えばｏ−）ルイジンＳよびオラゾル・イエローを含
有する検出帯域に区別されている紙試験ス）　ＩＪツブ
からなる。検定すべき材料を測定帯域を経て反応帯域に
拡散せしめ、この反応帯域でいずれのグルコースはグル
コースオキシダーゼと反応し、そして次に検出帯域に拡
散せしめ、この帯域で着色反応が生じ、その程度は反応
帯域で実施された反応の程度に左右される。

供試材料の装置中への拡散を助けるのに水を用いてもよ
く、そして試験ストリップは１だガラス毛＃ｌ管内に封
入し又もよい。

フオグト＜ｐｏｇｔ）等の米国特許ｉ４，４４４．１９
３号には、汗の中の塩化物のレベルを測定するための定
量試験装置が開示されている。のう飽性線維症をスクリ
ーニングするのに使用するよう企図されている装置は、
対象者の皮膚にのせたとぎに一定量の汗を採集する平ら
なバッチからなる。

パッチは化学的に処理した吸収剤材料の２つの同心円反
応領域からなる。汗試料を内部円反応領域の中心に導入
し、この領域は、塩化物の閾唾量を「スクリーン・アウ
ト」するために予定した濃度以下で汗試料中の全塩化物
と反応し得る化学組成物例えばりん酸銀を含有している
。外側の環状反応領域は化学組成物例えばクロム酸銀を
含有し、この組成物は茶色であって、到達する塩化物の
いずれとも反応して白色塩化銀を形成し、そして予定し
た閾値を超える塩化物の存在を示す着色シグナルを生成
する。

本発明にとって関心のあるのは、ライ−ランド（Ｗｉ、
−１ａｎｄ）およびブタ−マン（１：ｈ！ｇｒｍａｎｎ
χ　Ｊ、クロマドグ（Ｃｈｒｏｍａｔｏｇ、）、　ｇ２
８巻、ｍ２−１１頁（１９６７年）の開示であり、これ
は薄層クロマトグラフフオーマツトに用いられるセファ
デックスゲルを蛋白質の分離に使用することに関する。

セファデックスは通常の薄層クロマトグラフ基質として
知られてなく、ぼた通常の薄層クロマトグラフは蛋白質
の分離に実施されていないが、セファデックスＧ−２５
の高度に架橋した粒子に薄層クロマトグラフフォーマッ
トを上昇させるのに使用されていたが、セファデックス
をビーズの形態に製造する変化により、粒子が好都合に
接着、結合しないので、上昇クロマトグラフを実施不可
能としてしまった。蛋白質の分離に下降薄層クロマトグ
ラフフォーマットに？いて太ぎい孔のセファデックスタ
イプＧ−１００およびＧ−２００の使用も１だ開示され
ている。

モリス（Ｍｏｒｒｉｘ）、Ｊ、クロマドグ、第１６巻、
第１６７−１７５貞（１９６４年）には、蛋白質のため
の下降クロマトグラフィーでのセファデックスタイプＧ
−１００およびＧ−２００プｖ−１−の使用が開示され
ている。この開示では、かかる輸送が遅いことを認めて
いるが、最適の操作条件下ではヒトＣＯヘモグロビンは
約４−５時間で僅か約７０順移動している旨述べている
。

近年の特定の結合検定技術に関して行われ℃ぎた多大の
進歩にも拘らず、これらの技術を改善する多くの機会が
なお残されている。現今の検定技術の特別な限定は数多
くの付加および洗滌工程の必要性である。望１しくない
交差反応を防止し、かつ過剰の試薬および介在する物質
を除云するのに、必要とされるこれらの工程は、操作を
複雑にし、そして実施し得る分析操作の複体化のタイプ
およびレベルを有効に制約する。技術者によって行わな
ければならない洗滌および付加工程の数を除去あるいは
減少させることは検定を英流しそして検定結果を解析す
る時間忘よび費用を減少させるだけではなく、結果の解
析を自動化する困難さを減少さゼる。これらの理由から
、最小の数の付加および洗滌工程を必要とする固相恢疋
装置を包含する新しい系が非常に望１れている。このよ
うな装置は好ましくは広い範囲の材料に対する検定を実
施するのに使用可能であシ、そして本質的に自動式で複
雑な反応順序を達成し得るものである。

本発明によれば、試料液体に基いて特定の結合検定操作
を央画するための新規な方法および装置が提供される。

これらの方法および装置は最小の洗Ｍ％よび付加工程を
要し、また種々の分析物（限定するものではないが、抗
体、抗原。

ＤＮＡ配りｌｌＲＮＡ配列およびその他の化学：ｗｉを
Ｓ宮する）の定電、定性特異結合検定を実施するのに有
用である。本発明による試験装置の使用において、反応
剤はクロマドグフィー材料の部位で選択的に固定化され
、そし又多数の反応剤が固定化された試薬と順序接触し
、そして未反応の材料をそれから物理的に除云し、筐た
時間および順序は装置のデザインによジ決定される。

特に、本発明の装置は試料中の分析物の検定のための試
験ストリップからなり、このストリップは選択されたク
ロマトグラフィー溶媒により未固定試楽および反応性試
料成分の迅速なクロマトグラフィー溶媒輸送のための能
力を有する一定の長さのクロマトグラフィー材料からｒ
ｌる。このストリップは、クロマトグラフィー溶媒輸送
が開始される第一の末端、クロマトグラフィー溶媒輸送
が終る第二の末端および前記第一および第二の末端の間
に位置する多数の帯域を包含する。帯域は第一蛍Ｍ、（
溶媒中で移動可■しであり、かつ分析物が固定化された
形態である場合分析物に反応性であり、分析物による溶
媒輸送に対して固足化可能である第一試薬で含浸されて
いる）、第二帯域（分析物を含有している疑いのある試
料を受答するため）ゴロよび第三帯域（第一帯域の下流
に位置し、そして溶媒輸送に対して固定化され、そして
分析物と選択的に反応可能であり、第三帯域で分析物に
固定化された形態を付与するように第二試薬で含浸され
ている）を包含する。第一および第二帯域は第一末端か
ら十分な間隔を２いて第一末端（但し、第一および第二
帯域ではない）とクロマトグラフィー溶媒との接触を可
能としている。装置は更に、試料が第二帯域に受容され
た後でかつ第一末端がクロマトグラフィー溶媒に浸漬さ
れると、第二および第三帯域間の分析物および第一試薬
の相対移動度または部位関係が分析物が第一試薬が第三
帯域に到達する前に第三帯域で溶媒＠送に対して処理さ
れ、固定化されるようなものであり、これにより干渉性
試料成分および第一試薬と反応性を有する試材の非分析
物成分が第一試薬が第三帯域にクロマトグラフィー溶媒
輸送される前に、クロマトグラフィー溶媒輸送により第
三帯域から構成される装置は任意に第三Ｂよび第四（指
示薬）試薬で含浸された第四だよび第三帯域を包含する
第三帯域での第一試薬の検出手段を包含する。

装置を用いる検定操作は、ｔｃＬｌ　　第二帯域中で試
料を処理し；（ｂ）　　第一末端をクロマトグラフィー
溶媒中に分析物および第一試薬を第三帯域にクロマトグ
ラフィーで輸送するのに十分な時間浸漬し、而して分析
物と第一試薬との相対移動度あるいは第二？よび第三帯
域間の部位関係が第一試薬が第三帯域に到達する前に分
析物が第三帯域で処理され、そしてこれにより第一試薬
と反応性を有する試薬の干渉性試料物質および非分析物
成分が第一試薬の到達前に、クロマトグラフィー溶媒に
より第三帯域から除かれるようなものであり；そしてｆ
ｃ）　　第三帯域中の第一試薬の存在を検知することに
よって達成される。

本発明の顕著な特徴は１分析物および第一試薬の相対移
動度あるいは第二または第三帯域間の部位の関係が、分
析物が第一試薬が第三帯域に到達する前に第三帯域で溶
媒輸送に対して処理され、固定化されるようなものであ
り、そしてその結果干渉性試料成分および第一試薬と反
応性を有する試料の非分析成分が、第一試薬が第三帯域
にクロマトグラフィー溶媒輸送される前にクロマトグラ
フィー溶媒輸送により第三帯域から除去されることを提
供するにある。

この特徴により、「洗滌」工程が第一試薬が第三帯域と
接触する前に本来第三帯域で実施され、この特徴によっ
て（第三帯域の）洗滌工程および（第一試薬の）付加工
程が共に除去される。手による洗滌工程を避けることが
可能となった結果、追加の試薬を試験ス）　ＩＪツブに
組み入れ、それで追加の工程を避けることが可能となる
。追加試薬の組み入れＳよび手による洗滌工程の除去に
よって、本発明の装置は２種でたはそれ以上の反応を順
次実施することが可能である。更には、多重クロマトグ
ラフィー溶媒輸送経路を用いることが可能となジ、その
結果試料、第一試薬および任意の他の材料例えば指示薬
試薬を、部分的に不一致のクロマトグラフィー溶媒輸送
経路に沿って維持されている分離を伴う予定した順番に
従って輸送することができる。

多重経路は液体マイクロ回路を構成するように形成する
こともでき、この回路は種々の試薬を特別の位置に順次
クロマトグラフィー溶媒輸送することによＶ様々の多工
程検定操作を実施するよう「プログラム」することがで
きる。

本発明の更に他の特徴として、薄層クロマトグラフィー
支持体材料が待に本発明による迅速クロマトグラフィー
輸送に適し℃いることが見い出された。ＤＮＡ％Ｓよび
ＭＡ配列、蛋白質および大型ポリペプチド（抗体および
種々の抗原を包含する）は通常薄層クロマトグラフィー
支狩俸にクロマトグラフィー輸送されていなかったが、
この材料の迅速クロマトグラフィー溶媒輸送が、支持体
の非特異的結合部位が非特異的蛋白遮断剤例えば午血清
アルブミンで処理することによる如く遮断を適当に行っ
たとぎに、可能であることが見い出された。蛋白質、大
型ポリペプチドおよびその他の材料は本発明に従って他
のクロマトグラフィー材料例えばベーパークロマトグラ
フィーに用いられている材料により輸送し得るが、薄層
クロマトグラフィー支持体の使用がこの材料の使用によ
って速度および分解が改善されるので特に好ましい。

不発明の装置は、クロマトグラフィー′＃媒を用いて第
二帯域で含浸された分析物含有試料材料および第一帯域
で含浸された第一試薬を順次第三帯域に輸送し、そこで
第二試薬が分析物材料と選択的に反応して分析物を固定
化することができる。本発明の多孔性ス）　ＩＪツブ装
装置−沈着された分析物および第一試料材料のクロマト
グラフィー溶媒輸送に依存することによジ、先行技術で
の恢定システムで必要とされていた多くの追加２よび洗
滌工程を回避することが可能である。

本発明の著しい特徴は、分析物および第一試薬の相対移
動度あるいは第二または第三帯域間の部位の関係が、第
一試薬が第三帯域に達しそして分析物と接触する前に、
分析物が第三帯域で処理され、そして溶媒輸送に対して
固定化されるようなものであるところに存する。この本
発明の特徴は、第二帯域を第三帯域と一致させるように
することにより、ｊなわち試料をＩ接第三帝域に沈Ｍさ
せることにより達成される。あるいは１だ、試料および
第一試薬の移動度あるいは装置のデザインが、第一試薬
ならびに分析された干渉性試料成分および第一試薬と反
応性を有する試料の非分析物成分が第三帯域で分析物の
固定化の前に相互に接触するようにしないようにするこ
とであってもよい。

本発明の第二の著しい特徴は、干渉性物質および第一試
薬と反応性を有する試料の非分析物成分が、第一試薬が
第三帯域に達する前に、クロマトグラフィー溶媒輸送に
より第三帯域から除かれてし１うことにある。この特徴
により、洗滌工程が第一試薬の第三帯域への接触の前に
第三帯域で本来実施され、そして試料適用後試料の非分
析物成分および次に第三帯域に適用される試薬類と干渉
するかまたは交差反応し得る材料を除去するための手で
の洗滌工程を除去することができる。この洗滌工程の除
去によって、クロマトグラフィーで移動ｏＪ能な試薬材
料（例えば第一試薬材料）をス）　ＩＪＪツブ料に、検
定操作の過程でかかる試薬を適用する必要性に代って、
装置の製造過程の間に予備適用することがＯＴ能となる
。

本発明の一態様によると、試料材料が適用される第二帯
域および第二試薬が固定化される第三帯域は、第一試薬
が第三帯域に達する前に、第三帯域での溶媒輸送に対し
て固定化されるために、一致していてもよい。しかし、
試料の非分析物成分（クロマトグラフィー溶媒にほとん
どあるいは全く溶解性を有していない）が第三帯域に留
らないようにするために、第二ｇよび第三帯域が一致し
ていないのが好１しく、第三帯域ではこれらのものは分
析物、第二試薬あるいは第三帯域に次に適用されるその
他の試薬と干渉するかあるいは交差反応し得る。干渉性
試料成分Ｓよび第一試薬と反応性を有する非分析物試料
成分の小量がクロマトグラフィー溶媒＠送に対してＦＦ
答し得なく、そし℃それ故に第三帯域を超えて輸送され
る代ジに第一試薬と反応し得る許容性は本発明の範囲内
にあり、この場合この反応は第三帯域で分析物材料の検
出と干渉しない。

本発明の実施化に当り使用される試薬の同一性は試）験
する分析物の同一性に従って変化する。分析物（α外α
１ｙｔｅ）が抗原または抗体である場合、分析物と第二
試薬との間の免疫学的特異結合反応を用いて第三帯域で
分析物を固定化することができる。分析物が抗体である
ときは、固定化された第二試薬が抗体が特異的に反応性
を有する抗原であり、１だ第一試薬が分析物抗体と特異
的に反応性を有する標識抗原あるいは分析物抗体と特異
的に反応性を有する標識抗免疫グロブリン抗体で、ｌ！
？）り得る。分析物が抗原であるとぎは、固定化された
第二試薬は抗原と特異的に反応性を有する抗体であり、
筐た第一試薬は標識抗体あるいは抗原とも特典的に反応
性を有する他の特異的結合材料であり得る。

分析物が特定のヌクレオチド配列を有するＤＮＡあるい
はＤＮＡ鎖である場合、第二試薬はストリップ材料に対
して固定化された一本鎖ＤＮＡ：たはＲＮＡプローブで
あり、このものは分析物ヌクレオチド配列の第一部分と
交雑して分析物を固定化し得るヌクレオチド配列を提示
している。

第一試薬は標識特異結合材料例えは分析物ヌクレオチド
配列の第二部分と交雑して分析物により固定化され得る
ヌクレオチド配列を有する標識ＤＮＡ”！たはＲＮＡプ
ローベであり得る。

本発明の検定方法および装置は２種または４種もの試薬
のみを用いるものに限られる必要はない。事実１本発明
の方法および装置によって提供される顕著な利点は、多
工程検定操作を手で実施する追加２よび洗浄工程の最小
限の数で実施する能力にあり、ごれはかかる洗浄工程を
種々の分析物および反応剤のクロマトグラフィー輸送に
より「自製的に」実施することによりあるいは製造中に
反応剤を装置に予備適用することによジ行われる。この
多工程検定操作は本発明の装置に追加の試薬および試薬
帯域を組み入れることによって実施することができる。

この試薬は第一試薬の検知のための手段の一部として反
応のために第三帯域にクロマトグラフィーで輸送するこ
とかでざる。本発明の一態様によると、第三および第四
試薬を試験装置に組み入れて化学的基質材料および酵素
標識第一試薬との反応のための染料化合物を提供するこ
ともできる。更には、追加の試薬を反応のために他の帯
域にクロマトグラフィー輸送し得ること、またこのよう
な反応の生成物を固定化するかまたは更に反応もしくは
検定のために他のところに輸送し得ることも企図されて
いる。１だ、装置を単−試料材料内の多重分析物の検出
のために用い得ることも企図されている。

本発明は検定の実施において手による洗＃および追加工
程の除去のために提供されることが企図されているが、
ある種の手による洗浄および追加工程が本発明に従って
いずれかの特別な検定操作の実施に通していることも筐
た企図されている。

本発明による方法は、試料材料を含む分析物を第三帯域
に輸送するクロマトグラフィー溶媒の流れはこの帯域か
ら（ＪＩＬ＜ない）固定されていない材料を除去するの
に役立つところに特徴を有する。このような固定されて
いない材料は、第一試薬と分析物との間の反応に干渉す
る試料成分ならびに第一試薬と反応性を有する非分析物
試料成分を包含する。抗体含有液体での特定の抗体の検
出のための免疫検定の場合、第三帯域で固定化される抗
原材料（第二試薬）と特異的に反応性を有する抗体は抗
原材料と反応し、そして自体でこの帯域で固定化される
。第二試薬と特異的に反応性を有していない試料中に存
在する非分析物仇体は第二試薬により第三帯域で固定化
されず、試料材料の他の成分と一緒に第三帯域からクロ
マトグラフィー輸送でとり云される。これは、検定が伝
統的な「サンドイッチ」＠足であり、そして第一試薬が
標識種特異的抗免疫グロブリン抗体であり、そして第三
帯域から非分析物抗体を除去しないと偽の陽性結果を生
じる場合に、特に有利である。分析物と第一試薬との反
応に干渉する可能性のある試料成分を除去しないと偽の
陰性結果を生じる。−例として、検定が特定のＤＮＡ−
’！たはＲＮＡポリヌクレオチド配列の検出のための交
雑検定である場合、試料核酸材料を、プローベを結合し
そして検定に干渉する非核酸試料材料例えば多糖類、ポ
リペプチドおよび蛋白質から分離するのが望ましい。

本発明による装置は、種々の検定操作を実施するために
、単一もしくは多重クロマトグラフィー溶媒輸送経路を
利用している。最も簡単な（単一経路）装置は第一末端
、第一末端の下流の第二末端、標識第一試薬が沈着され
ている第一帯域：試料を受容する第二帯域：および第二
試薬で含浸された第五帯域を包含する阜−＠送経路を伴
うス）　ＩＪツブかうｒｘる。三つの帯域は、単一クロ
マトグラフィー溶媒輸送経路に沿って、第三帯域が第一
Ｓよび第二帯域から下流に位置し、そして第二帯域が第
一帯域から下流に位置するように配列されている。

最も簡単な（多重経路）装置は別々に第三帯域に通じて
いる２個の不一致経路からなる。第一試薬は一つの経路
で第一帯域に適用され、そしてその後試料を他の経路で
第二帯域に適用される。クロマトグラフィー溶媒、２個
のクロマトグラフィー輸送経路のストリップ材料、第一
Ｓよび第二帯域の配置、および材料自体の組成は、試料
材料が第三帯域と接触し、そして第一試薬と反応性を有
する試料のいずれの非分析物成分およびいずれの干渉性
物質が第一試薬が第五帯域にクロマトグラフィー溶媒輸
送される前に第三帯域から除去されるようなものである
。更に複雑な多重輸送経路装置を構成することができ、
この場＠ｒ第一、第二だよび第五帯域が一つの経路に沿
って位置し、また第四８よび第五帯域（＃素反応基質お
よび染料化合物で含浸されている）は第五帯域に通じて
いる第二の部分的不一致の経路に位置している。更に複
雑な多成分系を、試薬と試料材料との間の分離を維持す
るために、また特別な配列に従って材料を接触、反応さ
せるために、追加のクロマトグラフィー輸送経路を利用
して構成することができる。

不一致および部分的不一致（ｎｏｗ−ｃｏｔ％ａｉｄｓ
％ｔ）クロマトグラフィー溶媒輸送経路は種々の手段に
より形成させることができる。不透過性バリヤーを経路
の間に形成させて、選択された帯域および領域への輸送
までに溶媒輸送された材料を分離することができる。こ
のようなバリヤーは、クロマトグラフィー溶媒輸送経路
を構成する材料の長さの間に不透過性材料を物理的に中
間挿入することによって形成させることができる。ある
いは１だ、クロマトグラフィー溶媒輸送材料、例えばニ
トロセルロースをエツチングして経路（ｐａｔｈｗａｙ
）の間にギャップを形成させ妃とができる。これらのギ
ャップは、ギャップの一方の側から他の側への材料の潜
在クロマトグラフィー溶媒輸送、ひいてはギャップの一
方の側の物質と他の側の材料との相互作用を防止する。

単一、二、三および西経路装置ならびにそれらの機能を
包含する本発明の種々の態仔を以下に記載する。

単一経路装置 図面を参照するに、第１ｃＬ、１ｂおよびＩＣ図は液体
試料中の分析物の検知のための試験装置（ｉｏ）を説明
する。

この装置は、クロマトグラフィー溶媒輸送が始する第一
末端（１４）ゴロよびクロマトグラフィー溶媒輸送が終
る第二末端（１８）を伴うクロマトグラフィー材料の長
さく１１）からなる。材料長さく１１）は第一帯域（１
５）、第三帯域（１６）Ｓよび第三帯域（１７）からな
る。第一帯域（１５）はクロマトゲラフイー溶媒中で移
動可能であり、分析物が固定化された形態の場合分析物
による溶媒輸送に対して反応、固定化可能である第一試
薬（２１）で含浸されている。第二帯域（１６）は第一
帯域（１５）の下流にあり、そして分析すべき試料を受
容するのに適した部位を備えている。第三帯域（１７）
は第二帯域（１６）の下流にあり、そして第二試薬で含
浸されている。この試薬は溶媒輸送に対して固定化され
、そして分析物と選択的に反応して分析物に固定化形態
を付与する。装置は更にクロマトグラフィー材料の長さ
く１１）が付着されている不活性支持体ス）　＋７ツプ
（１２）を包含し℃いる。装置は更にクロマトグラフィ
ー材料（１１）の上にのせられ、材料の第一末端（１４
）を露出した１１とするカバープレート（１３）を包含
している。カバープＶ−）（１３）は第二帯域（１６）
および第三帯域（１７）に相当し、かつ露出した１１と
する２個の開口部を定めている。第一および第二除去可
能なタブ（１９）、（２０）はそれぞれ第二および第三
帯域（１６）、　　（１７）をカバーしている。この図
３よび他の図にとって、第三帯域（１７）と第二末端（
１８）との間の破線はこれらの２個の特徴部の間に延長
された距離を示し、これは、クロマトグラフィー溶媒フ
ロントが第二末端に達し、そしてクロマトグラフィー溶
媒輸送が停止するときに先立って、第三帯域（１７）へ
あるいはこれを超えて全ての材料のクロマトグラフィー
溶媒輸送のために提供される。

第１ａ、１ｂおよび１６図の装置（１０）を用いるため
の操作によると、第一タブ（１９）を装置（ｌＯ）から
除さ、供試材料の試料を第二帯域（１６）に適用し、そ
して第一タブ（１９）を再びのせる。装置（１０）を次
にその第一末端（１４）においてクロマトグラフィー溶
媒（２２）の容器（２１）甲に浸漬する。次に、クロマ
トグラフィー溶媒（２２）をクロマトグラフィー材料の
長さく１１）中を進めて第一帯域（１５）で含浸された
第一試薬および第三帯域（１６）に適用された試料を第
三帯域（１７）に輸送する。そこで、固定化された第二
試薬材料が試料中に存在する分析物と選択的に反応して
これを固定化する。試料の非分析物成分は第三帯域（１
７）から運び去られる。次に、第一試薬を第三帯域（１
７）に輸送し、ここで分析物が固定化された形態である
場合分析物により溶媒輸送に対して固定化される。分析
物がなくなった試料および第一試薬のクロマトグラフィ
ー溶媒輸送は、クロマトグラフィー溶媒（２２）が材料
の第二末端（１８）に違するまで続けられる。次に、第
二タブ（２０）を除去し、そして染料あるいは他の反応
性材料を第三帯域（１７）での第一試薬の存在を検知す
るために第三帯域（１７）に適用することができる。

第２６−２ｆ図は第１ａ図に示した装置の正面図である
。

これらの図は図式的に分析物ＣＥ）および非分析物（Ｃ
）を包含する試料中の分析物ＣＢ）の分析のための試験
装置！ｔ（３０）の操作を表わしている。これによると
、装置はクロマトグラフィー溶媒輸送が始まる第一末端
（３４）およびクロマトグラフィー溶媒輸送が終る第二
末端（３８）、ならびに第一帯域（３５）、第二帯域（
３６）および第三帯域（３７）からなる。第一帯域（３
５）はクロマトグラフィー溶媒（４２）中で移動可能で
あジ、そして分析物（Ｂ）が固定化された形態である場
合分析物（Ｅ）により溶媒輸送に対して反応、固定化さ
れ得る第一試薬（Ａ）で含浸されている。第三帯域（３
７）は第二試薬（Ｄ）で含浸され、この試薬は溶媒輸送
に対して固定化され、そして分析物（Ｂ）と選択的に反
応して第三帯域（３７）中で分析物ＣＥ）に固定化され
た形態を付与する。

装置は更にクロマトグラフィー材料の長さく３１）が付
着されている不活性支持体ス）　ＩＪツブ（３２）を包
含している。

装置は更に材料（３１）の上にのせられて材料の第一末
端（１４）を露出した１−！にしているカバープレー）
　（３３）を包含している。カバープレー）　（３３）
は第二帯域（３６）および第三帯域（３７）に相当し、
かつ露出したままにしている２個の開口部を定めている
。第一ぢよび第二の除去可能なタブ（３９）、　　（４
０）がカバープレート（３３）の上にのせられ、それぞ
れ第二および第三帯域（３６）、（３７）をカバーして
いる。

使用時、第一タブ（３９）をカバープレート（３３）か
ら除去し、そして分析物（Ｂ）および非分析物（のを包
含する分析すべき材料の試料を第三帯域（３６）に進用
する。次に、第一タブ（３９）をカバープレー）　（３
３）の上に再びのせて、試料材料が乾燥するのを防止す
るために第二帯域（３６）の部位をカバーする。

’４２ｂ図に図示した如く、試験装置の第一末端（３４
）をクロマトグラフィー溶媒（４２）の容器（４１）中
に浸直し、この溶媒はクロマトグラフィー材料（３１）
を経て進行して第一帯域（３５）と接触し、そして第一
試薬（Ａ）をクロマトグラフィー溶媒フロント（４３）
の後に第二末端（３８）の方向へ下流に輸送する。

第２ｃ図に図示した如く、クロマトグラフィー溶媒フロ
ント（４３）は第二帯域（３６）と接触し、通過する。

ここで分析物（Ｂ）および非分析物（の材料からなる試
料液体は予め沈着されていた。試料が液体であり、かつ
また第二帯域が乾燥されないのが好）しい。第二帯域で
の乾燥試料材料は溶媒に迅速に可溶化され得るようなも
のではなくてよく、結果として第一試薬は第三帯域に輸
送される前に試料成分と接触、反応することができる（
以下に記載の「テトロード」西経路装置はこの制限を要
し、そして乾燥試料を分析しなければならないような若
干の事例に使用するのに適している）。溶解またはＭさ
れた分析物（Ｂ）および非分析物（の材料を含む試料液
体がクロマトグラフィー溶媒輸送フロン）　（４３）の
前に試料輸送フロン）　（４４）に沿って押し進められ
、このフロントの後に第一試薬（、りが輸送される。

第２ｄ図は、試料輸送フロン）（４４）が第三帯域（３
７）と接触し、通過するにつれて、分析物ＣＢ＞と還択
的に反応し得る第二試薬（Ｄ）が分析物ＣＢ＞と反応し
て第三帯域（３７）で分析物に固定化された形態を付与
する。第二試薬（Ｄ）は試料液体の非分析物成分（のど
特異的に反応性を有してなく、そしてこれらの材料は第
三帯域（３７）で固定化されなかった。

第２＃図は、試料輸送フロン）　（４４）および非分析
物試料成分（のは第三帯域（３７）から第二末端（３８
）の方へ下流にクロマトグラフィー輸送される。同時に
、その後に第三試薬（Ａ）が輸送されるクロマトグラフ
ィー溶媒フロント（４３）は第三帯域（４０）と接触さ
せ、この帯域の上で分析物ＣＥ）が固定化される。第一
試薬（Ａ）は、分析物ＣＥ）が固定化された形態である
場合分析物ＣＥ）により溶媒輸送に対して反応、固定化
され得る。好１しくは過剰の濃度で存在している第一試
薬（Ａ）の若干は第三帯域（３７）で分析物ＣＥ）によ
り固定化される。いずれの過剰の第一試薬（、りは第三
帯域（３７）を通ってクロマトグラフィー溶媒輸送によ
り引続いて輸送される。

第２ｆ図に図示した如く、試料輸送フロン）（４４）お
よびクロマトグラフィー溶媒フロント（４３）は装置の
第二末端（３８）に最終的に達し、この点でクロマトグ
ラフィー溶媒輸送が終る。第二末端（３８）に輸送され
た過剰の第一試薬材料（Ａ）ｌまそこで拡散によって移
動し、分析の確度に影響することなく非分析物試料材料
（（１’）と接触、反応する。

第一試薬材料（Ａ）は直接検知可能な標識物質（例えば
放射性同位元素標識物質）あるいは他の材料との反応に
より検知可能なものであってもよい。第一試薬（Ａ）が
直接検知可能である場合、試料材料中の特定の分析物Ｃ
Ｂ）の存在は第三帯域（３７）で第一試薬（Ａ）の存在
の検知により例えば放射課カウンターによる如くして検
出することができる。

あるいは壕だ、第一試薬（Ａ）が直接検知可能でない場
合例えば酵素標識試薬による場合、追加の試薬を例えば
呈色反応を生じさせるために第三帯域（３７）に加えて
もよい。従って、第二タブ（４０）をカバープレー）　
（３３）から除去し、そして酵素基質および染料物質を
加えて固定化されたｇ　−試薬（Ａ）の存在下に呈色反
応を生じさせることができる。

第３ａおよび３ｂ図は試料液体中の分析物の検出のため
の「ダイオードＪ　（ｄｓａｄｏ）と称される二経路装
置を説明する。この装置は第一試薬の酵素ベルとの反応
による検知可能な増色シグナルを生成するのに使用し得
る追加試薬を組み入れている。装置は、クロマトグラフ
ィー溶媒輸送が始まる第一末端（５４）およびクロマト
グラフィー溶媒輸送が終る第二末端（６０）を伴うクロ
マトグラフィー材料（５１）の長さからなる。材料の長
さは中心溶媒バリヤ一手段（６２）により分割され、こ
こで左縁（６７）で左手クロマトグラフィー溶媒櫓送経
路を定め、１だ右縁（６８）で右手クロマトグラフィー
溶媒輸送経路を定めている。材料の長さは第一帯域（５
５）、第二帯域（５６）、第三帯域（５７）、第四帯域
（５８）および第五帯域（５９）かうなる。第一帯域（
５５）は左手クロマトグラフィー溶媒輸送経路中に位置
し、そしてクロマトグラフィー溶媒中で移動可能であり
、そして分析物が固定化された形態である場合分析物に
よｒ：Ｊ溶媒輸送に対して反応、固定化し得る第一試薬
で含浸されている。第二帯域（５６）は左手クロマトグ
ラフィー溶媒輸送経路に沿って第一帯域（５５）の下流
にあり、そして分析すべき試料を受容するだめの適当な
部位を備えている。

第四帯域（５８）は右手クロマトグラフィー溶媒輸送経
路中に位置し、そしてクロマトグラフィー溶媒中で移動
可能である第三試薬で含浸されている。第五帯域（５９
）は右手クロマトグラフィー溶媒輸送経路に沿って第四
帯域（５８）の下流にあり、そしてクロマトグラフィー
溶媒中で移動可能である第四試薬で含浸されている。溶
媒輸送に対して固定化されている第二試薬で含浸された
第三帯域（５７）は第一（５５）、第二（５６）、第四
（５８）および第五（５９）帯域から第二末端（６０）
の方向に下流に位置している。

左手ゴｄよび右手クロマトグラフィー溶媒輸送経路を定
めている申心俗媒バリヤー（６２）に加えて、装置は第
一溶媒バフル（６３）ゴｄよび第二溶媒バフル（６４）
を包含し、これらは上昇溶媒に第一末端（５４）と第二
末端（６０）との間の更に回路状のルートを横断させる
ことによって右手クロマトグラフィー溶媒輸送経路に沿
ってクロマトグラフィー溶媒輸送を遅延せしめる。右溶
媒バリヤー（６５）および左溶媒バリヤー（６６）も存
在し、これらは試料材料ならびに第一、第三および第四
試薬のクロマトグラフィー溶媒輸送を第三帯域（５７）
の方向に向けさせる。

装置は更にクロマトグラフィー材料の長さが付着された
不活性支持体ス）Ｕツブ（５２）お↓び材料の長さく５
１）上にのせられ、材料の第一末端（５４）ｅ露出した
ま＼にしておくカバープレート（５３）ｔ−包含してい
る。カバープレー）（５３）は第二帯域（５６）に相当
し、かつ露出したま＼にしておく孔を定めている。タブ
（６１）が第二帯域（５６）に試料材料寸たは試薬を適
用するのに除去することができる。

第３αおよび３ｂ図の装置（５０）？使用するための操
作に従って、タブ（６１）ｔ−カバープレー）（５３）
上の第二帯域（５６）上のその位置から除去し、そして
分析すべき材料の液体試料を第二帯域（５６）に適用す
る。次に、タブ（６１）を検定操作中試料材料の乾燥を
防止するために第二帯域（５６）上に再びのせる。装置
（５０）ｔ−その第一末端（５４）でクロマトグラフィ
ー溶媒中に浸漬し、次にこの溶媒は左手および右手溶媒
輸送経路に沿って第二末端（６０）の方向に下流へ進行
する。右手溶媒輸送経路に沿ったクロマトグラフィー溶
媒輸送は第一（６３）および第二（６４）バブルで与え
られる回旋状経路の結果として遅延させられる。左手経
路に沿って、クロマトグラフィー溶媒は第一帯域（５５
）で含浸された第一試薬および第二帯域（５６）で沈着
された液体試料材料全第一試薬が試料材料に接触するこ
となく第三帯域に輸送する。

第三帯域（５７）で、固定化された第二試薬は試料中に
存在する分析物と選択的に反応してこれを固定化する。

試料の非分析物成分は第三帯域（５７）からクロマトグ
ラフィーで運び去られる。次に、第一試薬が第三帯域（
５７）と接触し、ここで分析物が固定化された形態であ
る場合分析物により溶媒輸送に対して固定化され得るも
のとなる。

同時に、右手輸送経路に沿って進むクロマトグラフィー
溶媒は第四（５８）および第五（５９）帯域で沈着した
第三および第四試薬全担有、混和する。例示的には酵素
接触着色シグナル手段全包含する第三および第四試薬は
次に右溶媒バリヤー（６５）および中心溶媒バリヤー（
６２）の間のギャップを経て左手輸送経路中にチャンネ
ル化される。試料材料および第一試薬の大部分はこの時
筐でに第一試薬と特異的に反応して検知可能なシグナル
を生じる第三おＬび第四試薬との接触を最小限とするた
めに右溶媒バリヤー（６５）と左溶媒バリヤー（６６）
との間の狭いギャップ全通して輸送されてしまう。しか
し試料および第一試薬金倉む若干量の溶媒が右手溶媒輸
送経路中に輸送され、ここでこれらのものは第三および
第四試薬と反応して会合点で検知可能なシグナルを生じ
る。クロマトグラフィー溶媒輸送が続くにつれて、第三
および第四試薬が右溶媒バリヤー（６５）と左溶媒バリ
ヤー（６６）との間のギヤツブ金経て第三帯域（５７）
に輸送される。第三帯域（５７）と接触すると、第三お
よび第四試薬はいずれの固定化第一試薬と反応して分析
物の存在を指示する検知可能なシグナルを生じる。

二経路装置（トリオード） 第４αおよび４ｈ図は試料液体中の分析物の検出のため
の改良された二経路〔トリオード（ｔｒ４ｏｄｏ））装
置（７０）を説明する。装置は第３図のダイオード装置
に対する改良をなすものであり、この装置が試料および
第一試薬が第三および第四試薬とのこれらの試薬が第三
帯域（７７）と接触する前に接触を防止する助けをなす
第三クロマトグラフィー溶媒輸送経路を包含する点に改
良がある。装置は、クロマトグラフィー溶媒輸送が始ま
る第一末端（７４）お↓びりはマドグラフィー溶媒輸送
が終る第二末端Ｃ８０）’ｆｒ伴うクロマトグラフィー
材料（７１）の長さ？包含する。材料の長さは溶媒不透
過性バリヤー（８２−８５）により材料の左縁（８８）
、第一溶媒バリヤー（８２）お↓び第二溶媒バリヤー（
８３）にニジ定められている左手溶媒輸送経路、第二温
媒バリヤー（８３）および第三溶媒バリヤー（８４）に
より定められている中心溶媒輸送経路、および第三溶媒
バリヤー（８４）、第四溶媒バリヤー（８５）および材
料の右縁（８９）により定められている右手溶媒輸送経
路に分割される。三つの溶媒輸送経路が合して中心溶媒
輸送経路の延長を形成し、この経路は第一（８２）およ
び第四（８５）溶媒バリヤーおよび材料の左（８８）お
よび右（８９）縁に工り定められている。

クロマトグラフィー材料の長さは第一帯域（７５）、第
二帯域（７６）、第三帯域（７７）、第四帯域（７８）
および第五帯域（７９）からなる。第一帯域（７５）は
左手クロマトグラフィー溶媒輸送経路に位置し、そして
クロマトグラフィー溶媒中で移動可能で、１、そして分
析物が固定化された形態である場合分析物により溶媒輸
送に対して反応および固定化し得る第一試薬で含浸され
ている。第二帯域（７６）は第一帯域（７５）の下流に
あり、そして第一（８２）および第四（８５）溶媒バリ
ヤーによって定められる中心溶媒輸送経路の延長に位置
する。第四帯域（７８）は右手クロマトグラフィー溶媒
輸送り路に位置し、そしてクロマトグラフィー溶媒中で
移動可能である第三試薬で含浸されている。第五帯域（
７９）は右手クロマトグラフィー溶媒輸送経路に沿って
装置の第二末端（８０）の方に下流にあジ、そしてクロ
マトグラフィー溶媒中で移動可能である第四試薬で含浸
されている。第三帯域（７７）は第一（８２）および第
四（８５）溶媒バリヤーにより定められる中心溶媒輸送
経路の延長での第一（７５）、第二（７６）、第四（７
８）および第五（７９）帯域の下流に位置している。

第三（８４）および第四（８５）溶媒バリヤーおよび材
料（８９）の右縁により定められる右手溶媒輸送経路は
第一溶媒、＜フル（８３）および第二溶媒パフ／Ｉ／（
８４）の位置であり、これらバフルｔＬ上昇溶媒を第一
末端（７４）と第二末端（８０）との間の更に回路とし
たルーＩｆ横切るようにさせることによって、右手クロ
マトグラフィー溶媒輸送経路に沿ってクロマトグラフィ
ー溶媒輸送全遅延させる。

装置（７０）は更にクロマトグラフィー材料の長さく７
１）が付着されている不活性支持体ス）　ＩＪツブ（７
２）および材料の長さく７１）の上にのせて材料の第一
末端（７４）ｋ露出したま＼にしておくカバープレート
（７３）ｔ−包含している。

カバープレー）　（７３）は第二帯域（７６）に相当し
、露出した筐＼とする開口部を定めている。タブ（８１
）が第二帯域（７６）ｔ−カバーし、そして試料材、ｆ
＋または試薬全第二帯域（７６）に適用するために除去
することができる。

第４６お工び４ｂ図の改良装置（７０）は第３αおよび
３ｂ図の装置（５０）と同じ操作に従って使用される。

殊に、カバータブ（８１）はカバープレー）（７３）上
の第二帯域（７６）上のその位置から除去し、そして分
析すべき材料の液体試料を第二帯域（７６）に適用する
。次に、タブ（８１）全検定操作中試料材料が乾燥する
のを防止するために第二帯域（７６）上に再びのせる。

装置（７０）ｔ−その第一末端（７４）においてクロマ
トグラフィー溶媒中に浸漬しこの溶媒は次に左手、中心
および右手溶媒経路に沿って第二末端の方へ下流へ進行
する。右手溶媒輸送経路に沿ったクロマトグラフィー溶
媒輸送は、第一（８３）および第二（８４）バブルによ
りその上につけられている回旋状経路の結果として遅延
される。左手経路に沿って、クロマトグラフィー溶媒は
第一帯域（７５）で含浸された第一試薬ぢよび第二帯域
（７６）で沈着された液体試料を第三帯域（７７）に輸
送する。クロマトグラフィー溶媒はまた中心クロマトグ
ラフィー溶媒輸送経路に沿って輸送され、このものは左
手クロマトグラフィー溶媒輸送経路と右手溶媒輸送経路
との接点に達し、そして第一試薬の右手溶媒輸送経路中
への逆流を防止し、この経路において第四および第五帯
域は第一試薬と特異的に反応して着色シグナルを生じる
第三および第四試薬で含浸させる。第４ａおよび４ｂ図
の装置（８０）が第３６および３ｂ図の装置（６０）に
１さる改良を示し工いるのは、この逆流の最小限化だよ
び次の早期反応の防止にある。

この装置（６０）に３いて、第四（５８）および（また
は）第五試薬（５９）と特異的に反応し得る第一試薬材
料の一部分はこの装置の右手輸送経路中に逆流すること
ができ、第一、第三ゴｄよび第四試薬の値が早期に消費
され、そして必らずしも分析物の検出と組み合されない
疑似シグナルが生成され得る効果がある。

クロマトグラフィー溶媒輸送は第三帯域（７７）の方向
へ輸送される試料および第一試薬を伴って続行する。第
一（８２）ｇよび第四（８５）溶媒バリヤーは試薬の流
れを第五帯域に集中するように設計されている。第三帯
域（７７）において、固定化された第二試薬は試料中に
存在する分析物と選択的に反応して固定化するが、−万
試料の非分析物成分は固定化されず、第三帯域（７７）
から外に輸送される。

次に、第一試薬は第三帯域（７７）と接触し、ここで試
薬は分析物が固定化された形態である場合分析物によジ
浴媒輸送に対して固定化される。同時に、右手だ媒輸送
経路な進むクロマトグラフィー溶媒は第四帯域（７８）
で沈着した第三試薬Ｓよび第五帯域（７９ンで沈着した
第四試薬を相方している。第三および第四試薬は第四溶
媒バリヤー（８５）により第一試薬が延長中に輸送され
た後中心溶媒輸送経路の延長中にチャンネル化される。

クロマトグラフィー溶媒輸送が続くにつれて、第三およ
び第四試薬が第三帯域（５７）Ｋ！送され、ここでこれ
らの試薬がいずれの固定化第一試薬と反応して検知可能
な着色シグナルを生じる。

図面を参照するに、第５図は線５−５に沿ってみた第３
α図の試薬装置（５０）の横断面図を示す。この図はク
ロマトグラフィー溶媒輸送が生じる毛管現象を有する材
料（５１）を具体的に示す。材料は不活性支持体ス）　
ＩＪツブ（５２）と不活性カバーシート（５３）の間の
サンドインチとし、これを経て溶媒輸送が起り得ない。

別々の溶媒輸送経路を示す材料の２つの部分（５１）は
、溶媒輸送に対して不透過性である中心溶媒バリヤー（
６２）によｐ分離されている。溶媒バリヤー（６２）は
不透過性材料であってもよく、あるいは溶媒クロマトグ
ラフィー輸送はギャップを横切って起らないような十分
な巾の材料（５工）中の空気またはガス充填ギャップを
示す。

西経路装置（テトロード） 第６ａおよび６ｂ図では試料液体中の分析物の検出のた
めの改善された四経路〔テトロード（ｔｅｔｒｏｄｅ　
）］装置（９０）を説明する。装置は第４図に示したト
リオード装置の改良をなすものであり、４個の溶媒輸送
経路の配置が第一試薬と第三または第四試薬との早期接
触を防止するだけではなく、第一試薬が試料が第五帯域
（９７）に接触する前に試料と接触するのを防止する働
きをする点で改良されている。

装置は第一末端（９４）を伴う長さのクロマトグラフィ
ー材料（９１）からなり、この末端でクロマトグラフィ
ー溶媒輸送が始′！！九そして第二末端を伴い、この末
端でクロマトグラフィー溶媒輸送が終る。装置の第一末
端（９４）はその中心でひりこ箇されていて、装置の左
および右側面間のギャップを定めている。材料の長さは
更に溶媒不透過性バリヤー（１０３−１０７）により四
つのクロマトグラフィー溶媒輸送経路に分割され、これ
らの経路は装置の長さに沿って中途で合併して第三帯域
（９７）が位置している中心クロマトグラフィー溶媒輸
送経路を形成する。左手のクロマトグラフィー溶媒輸送
経路は、装置の左縁（１０８）および一方の側での第一
溶媒バリヤー（１０３）ｇよび装置の左ギャップ縁（１
１０）および他の側での嬉二、第三（１ｏ４−１０５）
溶媒バリヤーにより℃定められる。右手のクロマトグラ
フィー溶媒輸送経路は装置の右縁（１０９）ｊ６よび一
方の側の第五溶媒バリヤー（１０７）および装置の右ギ
ャツブ縁（１１１）＄５よび他の側の第四溶媒バリヤー
（１０６）によって定められる。ギャップの下流および
左手、右手の溶媒輸送経路の間に左中心および右中心溶
媒輸送経路が定められる。左中心経路は一方の側の第二
溶媒バリヤー（１０４）および第三溶媒バリヤー（１０
５）によって定められ、そしてギャップの頂上の第一末
＠（９４）７５１ら左手溶媒経路に通じている。右中心
経路は、一方の側の第三溶媒バリヤー（１０５）および
他の側の第四溶媒バリヤー（１０６）によって定められ
、そしてギャップの頂上の第一末端（９４）から左手溶
媒経路に通じている。

材料の長さは第一帯域（９５）、第五帯域（９６）、第
三帯域（９７）、第四帯域（９８）、第五帯域（９９）
および第六帯域（１００）を包含している。第一帯域（
９５）ｌま左手クロマトグラフィー溶媒輸送経路に位置
し、そして第一試薬で含浸されている。第一試薬はクロ
マトグラフィー溶媒中で移動可能であり、分析物が固定
化された形態であるとぎは分析物による溶媒輸送に対す
る固定化Ｒよび反応が可能である。

第二帯域（９６）は第一帯域（９５）の下流にある左手
溶媒輸送経路でそして左中心溶媒輸送経路が左手輸送経
路と合併している点に位置している。第四帯域（９８）
は右手クロマトグラフィー溶媒輸送経路中に位置し、そ
してクロマトグラフィー溶媒中で移動可能な第三試薬で
含浸されている。

第五帯域（９９）は右手クロマトグラフィー溶媒輸送経
路に旧って装置の第二末端（１０１）の方を向いた下流
に位置し、そし℃クロマトグラフィー溶媒中で移動可能
である第四試薬で含浸されている。第三帯域（９７〕は
、第１（１０３）：Ｎよび第五（１０７）溶媒バリヤー
により定められた中心溶媒輸送経路の姫長で、第一（９
５）、第二（９６）、第四（９８）、および第五（９９
）帯域の下流に位置している。第六帯域（１００）は第
二末端（１０１）に近い第三帯域（９７）の下流に位置
し、そして第二末端で溶媒の存在を指示する第五試薬で
含浸されている。

装置（９０）は更にクロマトグラフィー材料の長さく９
１）が付着されている不活性支持体ス）　ＩＪツブ（９
２）および材料の長さく９１）上におかれて材料の第一
末端（９４）を露出したままにしているカバープレート
（９３）を包含している。

不活性支持体ストリップ（９２）およびカバープレー）
　（９３）に溶媒に対して不透過性であり、そしてクロ
マトグラフィー材料をとりかこみ、その結果その縁に沿
って不透過性であ九カバープレートが第一末端（９４）
でクロマトグラフィー材料を露出している場合にのみ溶
媒で湿潤され得る。

カバープレート（９３）は更に第二帯域（９６）に相当
し、かつ露出した一！１にしておく開口部を定めている
。夕玖１０２）が第二帯域（９６）をカバーし、そし℃
除去されると試料材料または試薬を第二帯域（９６）に
適用することができる。

第６１ｓ：Ｍよび６ｂ図の改良装置（９０）は第３ａ、
３ｂ。

４ａＮよび４ｂ図の装置（５０）および（７０）と同じ
操作に従って使用される。殊に、タブ（１０２）はカバ
ープレート（９３）上の第二帯域（９６）上のその位置
から除かれ、そして分析される材料の液体試料を第二帯
域（９６）に適用する。

次に、タブ（１０２）を、検定操作中試料材料を乾燥か
ら防止するために、第五帯域（９６）上に再びのせる。

装置（９０）をクロマトグラフィー溶媒中に溶媒が四つ
の溶媒輸送経路の全てについて第一末端（９４）と接！
！Ｉｔするような深さに浸ｆｆ１Ｌ、ただし、ここでは
カバープレートが溶媒輸送が第一および第四経路よりも
第二１６よび第三溶媒経路で第二末端の方向に下流に開
始されるように設計されている。次に、溶媒は左手、左
中心、左中心Ｒよび左手溶媒経路に沿って第二末端の方
向に下流に進行する。

左中心溶媒輸送経路に沿ってクロマトグラフィー俗媒輸
送が進行し、その結果溶媒が第一帯域（９５）と第三帯
域（９６）との間にある左手クロマトグラフィー溶媒輸
送経路上に輸送される。左中心輸送経路は左手溶媒輸送
経路よりも短いので、この溶媒は、左手経路の第一末端
（９４）から進行する溶媒が第一と第二の帯域間の領域
に到達する前に、該帯域に到達する。左中心経路から導
入される溶媒はこのようにして第一帯域（９５）で沈着
した第一試薬を第二帯域（９６）に沈着した試料材料か
ら分離する作用をする。溶媒は第二帯域で試料物質と接
触し、これらを可溶化し、そしてこれらを下流に第二末
端（１０１）の方に輸送する。同時に、溶媒は第一帯域
（９５）で含浸された第一試薬と接触し、そして第一末
端（８４）から「下流」に進行する溶媒フロントに会合
する１で第一末端（９４）の方向にこの「上流」を輸送
する。次に、第一試薬は第三帯域（１０１）の方向に下
流に輸送されるが、左中心溶媒輸送経路により導入され
る溶媒の塊により試料材料から分離される。左中心溶媒
輸送経路から導入される液体の集団はまた場合によって
は試料材料が乾燥している場合に有用である。溶媒の集
団は往々にして材料を可溶化し、そして試料と第一試薬
との間の分離を維持しながら輸送するのに十分な時間を
提供する。

右中心溶媒輸送経路に沿ってクロマトグラフィー溶媒輸
送は、溶媒が右中心輸送経路と右手輸送経路との接点に
輸送されるように進行する。右中心経路は右手経路より
も短く、そして右手経路は装置の第四溶媒バリヤー（１
０６）と右縁（１０９）との間に収縮されているので、
右中心経路を経て右手経路との接点に輸送される溶媒は
、溶媒が右手経路に沿って「下方に」流れる前に、この
点に達する。久に、溶媒は、右手輸送経路を経て下流の
流れに会合する前に第四（９８）および第三帯域（９９
）においてそれぞれ含浸された第三および第四試薬を混
和する右手経路の第一末端（９４）の方に「上流に」流
れる。正味の溶媒流「下流」は次に第三および第四試薬
を第三帯域（９７）の方に輸送する。一方、右中心経路
を経る溶媒流れは試料および第一試料が第三および第四
試薬に逆流、混和するのを防止するのに役立っていた。

クロマトグラフィー溶媒輸送は第三帯域（９７）の方に
輸送される試料および第一試薬と共に続行する。第三帯
域（９７）で、第二固定化試薬は試料中に存在する分析
物と選択して反応して固定化するようにする。試料の非
分析物成分は第三帯域（９７）から輸送されてし１う。

次に、第一試薬は第三帯域（９７）と接触し、ここで分
析物が固定化された形態であるとぎ分析物による溶媒輸
送に対して固定化される。同時に、右手溶媒輸送経路に
沿って進行するクロマトグラフィー溶媒は、いずれの未
結合第一試薬材料が第三帯域（９７）をすぎて輸送され
た後、第三および第四試薬を第三帯域に輸送する。第三
帯域（９７）において、第三および第四試薬はいずれの
固定化第一試薬と反応して検知可能なシグナルを生成し
得る。染料化合物例えばジアゾニウム塩を第三筒たは第
四試薬として使用する場合、着色シグナルは往々にして
使用されたりａマドグラフィー溶媒に不溶である着色さ
れた複合体であり、それにより反応された染料は第三帯
域（９７）で固定化される。

装置は、クロマトグラフィー溶媒が第二末端（１０１）
に達しなく、そして試料、および第一、第三および第四
試薬が第三帯域に接触するまでクロマトグラフィー溶媒
輸送が続くのに十分な長さを有するように設置ｔされて
いる。クロマトグラフィー溶媒が装置の丈を十分に進行
したかどうかを決定するために、第六帯域（Ｚｏｏ　）
を装置の第二末端（１０１）の近くにおいてもよい。こ
の帯域は、溶媒の存在を指示する物質例えば硫酸銅であ
ってよい第五試薬で含浸させてもよい。それで、第六帯
域が溶媒が装置の全体の長さを進行したことを示すシグ
ナルを提供する場合、第三帯域は陽性または陰性反応を
検出するための観察の用意ができている。

クロマトグラフィーストリップ材料の説明本発明で有用
なクロマトグラフィーストリップ材料は。

選択されたクロマトグラフィー溶媒により未固定試薬お
よび反応性試料成分のクロマトグラフィー溶媒輸送のた
めの毛管現象および能力を有する材料を包含する。例え
ばペーパークロマトグラフィーに使用するよっな稿々の
クロマトグラフィー支持体材料が本発明に使用するのに
適しているが、薄層クロマトグラフィー支持体の使用が
本発明の使用に好ましい。その理由はこのような支持体
の使用により本発明による検定の速度および分解が改善
されるからである。

材料は好ましくは不活性であり、そして一般には分析物
、試薬あるいは反応生成物のいずれとも物理的または化
学的に反応しないものである。材料は織布および非織布
を包含するベーパークロマトグラフィー技術で使用する
のに適した繊維状材料を包含していてもよい。更に好ま
しいのは微孔性もしくは微粒状構造を有する材料であり
、薄層クロマトグラフィーで使用するのに適した微孔性
もしくは微粒状材料が特に好ましい。

本発明に特に適した薄層クロマトグラフィー材料には粒
状薄層クロマトグラフィー材料例えばシリカまたは微粒
状セルロースを包含する。好ましい非粒状微孔性材料に
は微孔性セルロースエステル例えば脂肪族カルボン酸例
えばニー７個の炭素原子を有するアルカンカルボン酸例
えば酢酸。

プロピオン酸、または酪酸もしくは吉草酸のいずれとセ
ルロースとのエステルが包含される。特に好ましいのは
ニトロセルロースから製造した微孔性材料であ九この用
語はセルロースのいずれの硝酸エステルを企図している
。適当な材料には前記カルボン酸セルロースエステルの
いずれかと組合さったニトロセルロースが包含される。

それで、純粋なニトロセルロースエステルは約３個の硝
酸基７６個の炭素原子を有するセルロースのエステルか
らなるようなものとして使用することができる。最も好
ましいのは、０．４５μｍの気孔サイズを有する商品名
「ミリボア・タイプＨＡＷＰ」（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｍ　
Ｔｙｐｅ　ＨＡＷＰ）〔ミリボア・コーポレーション（
Ｍｉ　ｌ　ｌ　ｐａｒｅ　Ｃｏｒｐ、入ベッドフォード
。

マサチューセッツ〕のもとでの混合アセテート／ナイト
レートセルロースエステル材料テアル。

種々のクロマトグラフィー材料はそれ自体適当な形状例
えばフィルム、ストリップまたはシートで使用し得る。

これらの材料は適切な不活性支持体材料例えば紙、ガラ
ス、プラスチック、金属または織布に被ｉ、貼付または
積層してもよい。（一つの好ましい不活性支持体材料は
ミラー（Ｍｙ！ａｒ）である。）このような支持体材料
はクロマトグラフィー材料に構造上の支持を与える効果
を有するだけではなく、検出操作中の試薬および溶媒材
料の蒸発を防止する。多孔性固体支持体は好１しくは約
０．０１ｍ＋乃至約０．５朋、最も好１しくは約０．１
　ｍｍの範囲の厚さのス）Ｕツブの形態である。ス）　
ＩＪツブはその他の寸法で大巾に変り得るが、検定展開
時間を短かくしおよび材料の使用を最小限とするために
かなり小さくするのが好ましい。ストリップのサイズが
極度に小さいときは、取り扱いおよび得られた結果の観
察を助けるためにス）　ＩＪンブは適当なハンドルまた
はホルダーに付着させることができる。巾約３電、長さ
７５朋のストリップが本発明による単一経路装置を組立
てるのに特に適当であることがわかった。多重経路装置
は多重経路が形成され℃いるより大きいストリップを用
いることができる。孔サイズは広い限度内で変えること
ができる〃ζ好１しくは約０．０５−１０μ慣、殊に約
０．１−１．０μ惰、最も好１しくは約０，４５μ憔で
ある。孔サイズと支持体厚さとの組合せは、所望の速度
および分解の特性を得るために使用する特定の試薬の特
徴に従って変えることができる。

本発明の材料の形をつくるに当り、材料中の不均一な流
れを生じ得る材料あるいは材料の先端での不整合さを避
けるのが望ましい。ストリップ材料の好ましい形成手段
は、タングステンカーバイド回転刃を有するペーパーカ
ッターを使用することを包含する。他の適当な手段には
例えば大量生産に用いるのに特に適しているレーザー・
カッターのような方法が包含される。

装置のス）　ＩＪツブ材料は化学的に不活性であるのが
好筐しいので、第二試薬が第三帯域で溶媒輸送に対して
固定化されるために、第三帯域で活性化されなければな
らないこともある。ストリップ材料および第二試薬の特
別な化学的性状に従って第二試薬を固定化するのに種々
の方法を必要とする。一般に、ストリップ材料がニトロ
セルロースまたは混合ニトロセルロースエステルである
場合、第二試薬の固定化に特別な化学結合を必要としな
い。他の材料および試薬について種々の技術を使用する
ことができ、これらの技術には例えばカルボニルジイミ
ダゾール、ゲルタールアルデヒドまたはコハク酸のよう
な材料による官能化あるいは例えば臭化シアンのような
材料による処理を包含する。

その他の適当な反応にはアルデヒド、カルボニルおよび
アミン基の還元のためのシッフ塩基？よびホウ水素化物
による処理が包含される。ＤＮＡ、ＲＮＡおよびある棟
の抗原はストリップ材料に塙ぎ込むことによｐ溶媒輸送
に対して固定化することができる。焼き込みは約り０℃
〜約１２０℃の範囲の温度弔約５分〜約１２時間に変る
時間実施することができる。好ましくは約８０℃で約２
時間である。

抗体の説明 本発明の免疫検定を実施するのに有用な抗体は、生物学
的液体中のその検出が所望されている種々の分析物と特
異的に反応し得るものを包含する。このような抗体は好
ましくはＩｇＧまたはＩＱＭ抗体あるいはその混合物で
あ九これらは非分析物分子と結合可能な抗体との組合せ
を本質的に含有していない。抗体はポリクロナールまた
はモノクロナールであってよく、市販されているかある
いはマウス腹水、組織培養あるいは当該分野で知られて
いる他の技術により得られる。モノクロナール抗体生産
のためのハイブリドーマ操作の典型的な説明は次のもの
にみられる。Ｊ。

Ｒ，ワンプ（Ｗｃｔｒｓｄａ）およびＶ、Ｒ，ズラウス
キ（Ｚｓｒａｗａｋｉ）、ガストロエンテｏｏシイ（Ｇ
ａｓｔｒｏ−％ｔ＃ｒＯＪ１１＋１７ｙ）ｓ第８０巻、
第２２５頁（１９８１年）；マーシャクーロステスティ
ン（Ｍａｒｏｈａｋ−Ｒｏｔｈａｔｇｉｎ）、Ａ６等、
Ｊ、イムツル（Ｊ、Ｉ雪原ｎｏｒ、λ第１２２巻、第２
４９１頁（１９７９年）；オイ（０ｔ）Ｖ、Ｙ、および
り、Ａ、ヘルツエンベルブ（Ｈｅｒｚａｎｂ−デｇ）、
「イムノグロブリン・プロデューシング・ハイブリッド
Ｊ　（ＩｒｎｍＩｒｎｍ５ｎｏ％ｔｉ？ｌＰｒｏｄｕａ
ｉｓｇＨｙｂｒｉｄ）、ミクエル（Ｍｉｓｈｇｌｌ）、
Ｂ、Ｂ、およびＳ　、Ｍ。

シイギ（ｓｈｔ＜ｔｉｏ　（ｉ）、ｒセレクテツド・メ
ンツズ・イｙ−セルラー・イムノロシイＪ　（Ｓａｌｅ
ｅｔｇｄ　Ｍｅｔｈｏｄｓｉｓ　Ｃｅ１ｌｕｌａｒ　Ｉ
ｍｍｌｍｍ５ｎｏｌｏ、サンフランシスコニＷ。

Ｈ，７リーマン（Ｆｒｅｅｍａｎ）、パブリッシング（
Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ）、１９７９年；およびワンプ（
Ｋ％す房の米国特許第４，５１５．８９３号。異った抗
原特異性のモノクロナール抗体あるいはモノクロナール
抗体とポリクロナール抗体の混合物の使用が望ましいこ
ともある。抗体の特別の源またはタイプとは無関係に、
一般に不純物を含まないのが好ましい。抗体はカラムク
ロマドグ２フイーまたは他の通常の手段で精製すること
ができる力ζ既知の親和精製技術により精製するのが好
ましい。

抗原の説明 本発明の免疫検定を実施するのに有用な抗原＆良木発明
のクロマトグラフィーストリップ材料に存在する場合分
析物抗体が特異的に反応性を有する抗原決定基金提示す
る天然または合成の材料である。合成抗原には通常の化
学合成ならびに組換えＤＮＡ技術に従って構成されるも
のが包含される。抗原材料は特定の抗体の検出のための
サンドインチ検定での反応帯域に結合された反応材料と
して用いることができる。これらの材料は固定化抗体の
検出のためのシグナル分子と同じ検定で標識−用いるこ
とができる。

免疫検定のための遮断剤の説明 本発明の免疫検定の装置の製造に有用な遮断剤には、本
発明の試料材料または試薬のクロマトグラフィー溶媒輸
送を阻害し得るクロマトグラフィーストリップ材料での
過剰の結合部位を遮断し得るものが包含される。本発明
の装置の構成において、第二試薬をまず第三帯域で固定
化する。

一旦第三帯域で第二試薬が固定化されてしまうと、次に
ストリップを試薬または試料材料のクロマトグラフィー
溶媒輸送を干渉するクロマトグラフィー材料の過剰の結
合部位を遮断するように処理する。非特異的蛋白質例え
ばゼラチンまたは総血清中に存在するようなものからな
る遮断溶液の使用が特に適当である。このよりな蛋白質
は検定の試薬材料と干渉または交差反応しないように選
択される。部位の遮断は血清溶液例えば生理食塩水中の
３チ牛血清アルブミン（ＥｆｉＡ　）で処理することに
よって実施し得る。次に、ストリップを３０℃〜５０℃
の範囲、好ましくは４０℃の温度で２時間以内の間培養
し、そして生理食塩水で洗う。

しかし免疫検定のための好ましい遮断材料はゼラチン溶
液例えば培養を必要としない１％ＬＢゼラチン溶液であ
る。

免疫検　のための溶媒系の説明 本発明による免疫検定のための適当なクロマトグラフィ
ー溶媒系には、分析物、第一試薬ならびにいずれの追加
の試薬および材料を可溶化し、そしてこれらを第三帯域
に輸送し得る溶媒が包含される。このような溶媒は、ス
トリップ材料と輸送された材料との静電相互作用を防止
するのに十分なイオン強度を有していなければならない
。本発明による免疫検定操作に使用するのに好ましい溶
媒は中性範囲のｐＨｋ有する生理食塩水溶液である。蛋
白質ならびに清浄剤例えばドデシル硫酸ナトリウム（Ｓ
ＤＳ　）、トライトン（Ｔｒｉ　ｔ　ｏ％）！−１００
およびナトリウムデオキシコレートｃＤＯｃ）は、スト
リップ材料との非特異的結合を最小限とするが所望の結
合および固定化反応を阻害するような過剰量でないよう
な量でクロマトグラフィー溶媒に混入することができる
。その他のクロマトグラフィー溶媒例えば高性能液体ク
ロマトグラフィーＣＨＰＬＣ）溶媒および高性能薄層ク
ロマトグラフィー（ＨＰＴＬＣ）溶媒（蛋白質および他
の試薬の可溶化に有利に働きかっス）ＩＪツブ材料例え
ばニトロセルロースへの結合を最小限とする溶媒）を使
用し得る。バレクＣＰａｒｅｋｈ’）等、アナル、ビオ
ヶムＣＡｓａＬ、ＢイｏｃＡｓｍ、）第１４８巻、第８
７−９２頁（１９８５年）には種々のクロマトグラフィ
ー溶媒例えば酢醗アンモニウム緩衝剤（ｐＨｓ、９）中
の５０％ピリジンあるいは４０％アセトニトリルの溶液
が開示され、これらは本発明の免疫検定に特に適当であ
る。

ＤＮＡおよびＲＮＡ交雑材料の説明 本発明によって有用なりＮＡおよびＡＮＡ交雑材料は、
一般に分析物遺伝子材料に相補的である塩基配列を有す
る標識および未標識ＤＮＡおよびＲＮＡポリヌクレオチ
ドプローブを包含している。本発明のプローブは一般に
は約２５〜１０，０００の塩基、好ましくは約３０〜５
，０００の塩基を有している。プローブは分析物遺伝子
材料の塩基配列に対して完全に相補的である必要はなく
、そして一般に塩基配列間に約７０％あるいはより大き
いホモロギイ（ｈａｍｏｌｏｇｙ）が存在していること
を条件として交雑される。ＤＮＡおよびＲＮＡ交雑に係
る条件はクロサ（Ｃデ０８α）等、Ｊ、バクトＣＢａｅ
ｔ、）、第１１５（３壜、第９０４−９１１頁（１９７
３年）Ｋ一般的に開示されている。ポリヌクレオチドプ
ローブ材料は当該分野で周知の技術に従って得ることが
できる。例えば、コルンベルグ＜Ｉｒｏｒｎｂｅデｇχ
ＤＮＡレブリケーション、Ｗ、Ｈ，７リーマン・アンド
・カンパニー、サンフランシスコ、６７０−６７９Ｊｊ
（１９７８年）；ダラスＣＤａｌｌα８）等、Ｊ、バク
チリオル（Ｊ、Ｂａａｔｒｔｏｌ＞、第１３９巻、第８
５０−８５８頁（１９７９年）およびンウ（Ｓｏ〕等、
ネイチュア（Ｎａｔｕｒｒｓ’）。

第２７７巻、第４５３−４５６頁（１９７９年）を参照
。

本発明の一つの交雑サンドインチ検定操作によると、検
定装置の第一帯域を第一試薬で含浸させ、この試薬は標
識されていてもよく、分析物核酸の塩基配列の第一部分
に一般的に相補する塩基配列を有するポリヌクレオチド
プローブからなる。第三帯域で、分析物核酸の塩基配列
の第二部分に一般的罠相補する露出され次塩基配列を有
するポリヌクレオチドからなる第二試薬を固定化する。

検定操作によると、試料を含む分析物全第二帯域に適用
し、そして交雑条件下に第三帯域にクロマトグラフィー
で輸送味その結果分析物材料は第二試薬の塩基配列に対
するその塩基配列の第二部分の交雑によって固定化され
る。第一試薬は次に交雑条件下に第三帯域にクロマトグ
ラフィーで輸送され、この帯域で分析物分子塩基配列の
第一部分の塩基配列によるその塩基配列の交雑によって
固定化される。試料成分および第一試薬の相対移動度あ
るいは第二および第三帯域間の部位の関係は、分析物が
処理され、第一試薬が第三帯域に到達する前に第三帯域
で溶媒輸送に対して固定化される。

更に、干渉性試料成分お↓び第一試薬と反応し得る試料
の非分析物成分は第一試薬が第三帯域にクロマトグラフ
ィー輸送される前に第三帯域から除去される。

交雑検定のための遮断剤の説明 本発明によるポリヌクレオチド交雑検定で使用するのに
適した遮断剤には、本発明の試料材料または試料のクロ
マトグラフィー溶媒輸送を阻害し得るクロマトグラフィ
ーストリップ材料での過剰の結合部位を制限または遮断
し得る遮断剤が包含される。更に、かかる材料は本発明
の試料および試薬ポリヌクレオチド材料の交雑全阻害し
てはならない。交雑検定のための好ましい遮断剤は、５
ｓｐｘ：緩衝剤（それ自体は０．９　Ｍ　　ＮａＣ１，
５６０ｍＭ　　Ｎａ＆ＰＱ４、および５ｍＭエチレンジ
アミン四酢駿ｃＥＤＴＡ）（ｐＨ７，４））およびデン
ハルトＣＤｇｎｈａｒｄｔ’ｓ　）溶液〔０，１％フイ
コル（Ｆイｅ　ｏ　ｌ　ｌ　）、０．１％ポリビニルピ
ロリドンおよび１　ｍ９／ｄＥ　Ｓ　Ａからなる〕から
なる溶液である。第二試薬が固定化されたニトロセルロ
ースストリップは、この溶液で２時間６５℃で密封バッ
グ中で処理することにより遮断される。

、　　−のための　媒々の説明 本発明によるポリヌクレオチド交雑検定のための適当な
クロマトグラフィー溶媒系には、分析物、第一試薬およ
びいずれの追加の試薬および材料を可溶化しそしてこれ
ら全第三帯域に輸送し得る溶媒が包含される。本発明に
よるポリヌクレオチド交雑検定に使用するための好まし
い溶媒は、Ｓ：！ＥＰＥ緩衝剤（それ自体は０．９　Ｍ
　　ＮａＣＬ、　　５６０　ｍＭＮａＨ２Ｆｏ４および
５ｍＭ　　ＥＤＴＡＣｐＨ７，４）からなるχデンハル
ト溶液（０，０６％フイコル、０．０６％ポリビニルピ
ロリドンおよび０．６η１ＩＩＩＥＳＡ）および５０％
脱イオン化ホルムアミドからなる。好ましい溶媒は随意
担体ＤＮＡ例えば１００μｆ／ゴヒト胎盤ＤＮＡあるい
はサケ精子ＤＮＡ’ｚ包含していてもよい。

路　　およ　°　　バリヤ一 本発明により試薬および試料材料の連続輸送を達成する
のに種々の手段が知られている。このような手段は、試
料材料および試薬の配置、試料材料および試薬が輸送さ
れる経路Ｃｐａｔｈｗａｙ）の長さの変化およびこの輸
送が起る速度の操作を包含し得る。経路距離全変更する
ための手段には、溶媒バリヤーの使用による渦巻形経路
の形成が包含される。

本発明によるクロマトグラフィー流れを遮断する溶媒バ
リヤーは種々の物理的または化学的エツチング技術によ
フ形成することができる。巾０．ｌｌ１ｌ１１未満ギャ
ップが液体の流れを阻害することがわかつ九　しかし、
このようなギャップを形成するための好ましい手段はレ
ーザーエツチング技術の使用を包含する。一つの操作に
よると、ＣＯｔレーザーを使用することができ、この場
合ミラー裏うちしたニトロセルロース金支持取付具にと
りつけ、この取付具は極めて接近した配置許容差の可能
なコンピューター制御Ｘ−７テーブルにとりつけられて
いる。あるいはまた、ビーム移動メカニズムを使用して
もよい。適当な光学レンズおよび慎重なビーム焦点合せ
の組合せを用いて、約ｏ、ｏｏｓインチの直径金有する
レーザービームスポットをニトロセルロース上に焦点合
せすることができる。レーザー出力を慎重にコントロー
ルすることにより、巾約０．００５インチのニトロセル
ロースの狭い経路をミラー裏うちから除去するかあるい
はこれに溶融することができる。

ＣＯ，レーザーの使用は、レーザーからの光とニトロセ
ルロースとの好ましいカップリング効果のために特に好
ましい。しかし、レーザービームの波長が溶媒輸送材料
に所望の効果音生じるならば、他のタイプのレーザーも
適当である。移動ビームあるいはＸ−Ｙテーブルの使用
にニジ、正確な経路そらせチャンネルあるいはその他の
複雑な形状を一トロセルロース上に発生させることがで
きる。

溶媒、試薬および試料材料のクロマトグラフィー輸送速
度を変更することにより経路を有効に延長もしくは短縮
させるために、機械的および化学的手段を使用すること
ができる。適当な手段にはクロマトグラフィー支持体の
親水性を様々の程度に変更することが包含される。支持
体の親水性は、種々の物質例えば蛋白質あるいは清浄剤
全ス）ＩＪツブ上での材料の表面張力あるいは粘度に影
響を及ぼす媒質あるいはクロマトグラフィー溶媒に加え
ることによって化学的に変化させることができる。この
ような材料は、輸送されるレーンを経で輸送されるべき
反応材料と相容性を有していなければならず、また平版
印刷あるいは当該分野で既知の他の技術によって適切な
レーンに選択的に適用することができる。

ストリップ材料が薄層クロマトグラフィー支持体を包含
していないときは、機械的手段全使用して支持体の気孔
層、ひいてはクロマトグラフィー輸送の速度を変更する
こともできる。多孔性クロマトグラフィー材料例えば紙
の圧縮によフ材料の孔サイズが減少され、これによジ一
般に該支持体を通した材料の拡散速度が増大される。お
るレーン全選択的により大きいかまたはより小さい範囲
に圧縮し、そして他の圧縮をしないことにエフ、反応材
料の第三帯域へのクロマトグラフィー配送をプログラム
化することが可能である。材料は当業者に知られている
通常の彫刻技術により圧縮することができる。

検出手段 第三帯域での第一試薬の検出のための種々の手段が利用
可能である。このような手段は一般に検知し得るシグナ
ルを生じ得るシグナル分子で第一試薬を標識することを
包含し、このシグナル分子は放射性同位元素標識、発色
団、螢光団あるいは酵素ラベルであってよい。放射性同
位元素で標識したシグナル分子は検知可能なシグナルを
放出するのに特に有効であるが、これらの検出には特別
な装置を必要とし、また健康および安全上の難点を提示
する。特に好ましいのは、可視スペクトル中の光を包含
する検知可能なシグナルを生じる標識指示薬分子の使用
にある。特に適当なのは、酵素レベルの使用にあり、こ
こでは第一試薬分子は酵素または補酵素で標識し、次に
検知し得るシグナルを生成するように放射線を吸収ある
いは放出する色素材料を活性化する反応を接触する。

本発明のシグナル生成システムに有用な酵素系にはアル
カリ性ホスファターゼ、セイヨウワサビペルオキシダー
ゼ、グルコースオキシダーゼ、β−ガラクトシダーゼお
よびβ−ラクタマーゼを包含する。シグナル生成システ
ムに有用なその他の酵素および補酵素には、米国特許第
４，２７５゜１４９号（第１９−２０欄）および米国特
許第４，３１８゜９８０号（第１０−１４欄）に開示さ
れたものが包含され、これらの記載を参考として本文に
挿入する。染料前駆体を染料に酸化する過酸化水素を生
産する酵素の使用は当該分野で周知である。適当な組合
せには、サツカリドオキシダーゼ、例えばグルコースオ
キシダーゼおよびガラクトースオキシダーゼならびにヘ
テロサイクリックオキシダーゼ例えばウリカーゼおよび
キサンチンオキシダーゼ（酵素例えばペルオキシダーゼ
およびチトクロームＣオキシダーゼと組合されて過酸化
水素を生成し、そして染料前駆体を酸化する）が包含さ
れる。その他のオキシドレダクターゼの使用もまた酵素
例えばヒドロラーゼおよびトランスフェラーゼの使用の
如く適当である。種々の補酵素例えばＮＡＤＨ。

ＮＡＤＰＨ，ピリドキサルホスフエート、ＦＡＤＥおよ
びＦＭＮＨは特にオキシドレダクターゼと組合せて使用
し得る。

実施例１゜ この実施例では、梅毒抗体の検出のための単一経路の免
疫検定装置を製造し、使用した。厚さ約０．１ｍおよび
平均孔サイズ０．４５μ溝を有する微孔性ニトロセルロ
ース材料を厚さ約０．１ｍの不活性ミラー（Ｍｙｌａｒ
）支持体シート〔ミクロン・セパレーション・インダス
トリース（Ｍｉａ−ｒｏｓ　５ｅｐａｒａｔｉｏｎ　Ｉ
ｎｄｓａｔｒｉａｓ　）、　ウオルサム（Ｔｉｃｓ！　
ｔｈａｎ　）、マサチューセッツ〕（流延した。２７ｍ
Ｘ３ｉｔｍの寸法の片をロータリー・グレード・ペーパ
ー・カッター〔アルビン、クンザー、Ｃｔ　、（Ａｌｔ
ｉｎ、Ｗｉｓｄ−ｘｏｒ、Ｃｔ、））で切断した。装置
の組立てを助けるために、グリッドをニトロセルロース
にグラフィックス・ソフトウェア・パッケージおよびヒ
コーレット・パラカード（Ｈｍｓｕｌａｔｔ　Ｐｔ５ｃ
ｋａｒｄ　）　９８１６コンピコーター〔パロ・アルド
・Ｃａ、（Ｐａｌｏ　Ａｌｔｏ、　Ｃｓ、）］を用いて
インクジェットプリンター〔ヒコーレット・パラカード
、シンクジェット、（Ｔｈｉｓｋｊａｔ　）、パｏ−ア
ルド・Ｃａ、〕　　でプリントした。グリッドは：ｈＩ
Ｉｉ間隔で５ラインで交叉している巾約３ｎ、長さ３１
ｖ１の番号を付けたレーンの多くのものからなるグリッ
ドであり、最初のラインはグリッドの最初の端から９龍
であった。第一と第二のラインは第一帯域を定め、第三
のラインは第二帯域の中心を定め、そして第四と第五の
ラインは第三帯域を定めている。２　’７ｆｌｌｘ　２
９ｗのミラーカバープレートを用いてニトロセルロース
Ｋｍせて第一端で露出したニトロセルロースの被覆して
いたい２ｎタブを残した。更に、第二および第三帯域に
相当するニトロセルロースカバーに直径２顛の孔をパン
チした。ＪＫ。

９０Ｘ２７１１０１のミラーストリップを切断してクロ
マトグラフィー中孔を被った。ミラーの両片を一面でラ
バーセメント〔スタンフォード、ベルウッド、ＩＩ（Ｓ
ｔａ％ｆｏデｄ。

ＥａｌＬｖｙｏｏｄ、　Ｉｔ））　　で被覆し、そして
少くとも１時間乾燥させた。

トレボネマ・パリダム（ｔデー２註 包含する梅毒抗原を兎の畢丸内注射により単離−そし【
示差遠心分離により精製した。抗原を抗原１０’細胞／
−の濃度で１！！！９／−の濃度の牛血清アルブミンと
共に包含するＴＢＳ浴液の０．５μｔアリコート中交互
のレーンで第三帯域に施した。交互のレーンを一つのレ
ーンからの材料が他のものを汚染しないように用いた。

次に、ニトロセルロースを室温で１時間ゆっくりとかく
はんしてＴＢＳ溶液（０．１５Ａｆ＃αｃｔ，０．０２
Ｍトリス−ＨＣｌ，ｐＨ　７．６　）中ＬＢゼラチン〔
イノチク、ボーレン（Ｉ％ｏｔｇａｈ。

Ｗｏｈｌｅｎ．）スイス〕の１％溶液と共に培養するこ
と罠よって防護した。次に、シートを排水臥風乾した。

ペルオキシダーゼ標識山羊ヒトＩｇＧ抗体〔カークガー
ド−ペリ（Ｋｔｒｋａｇａａｒｄ−Ｆｅｒｒｙ）、ゲツ
テイスバーグ、メリーランド〕を１％ＬＢゼラチンおよ
び１．０％トライトン（Ｔｒｉｔｏｎ）Ｘ−　１　０　
０からなる混合物中１：５の比で希釈した。抗体混合物
を次に０．５μＬアリコートで予め抗原を適用しておい
た同一レーンの第一帯域に適用した。次に，１％ＬＥゼ
ラチンおよび１６０％トライトンＺ−１００からなる同
じ希釈剤混合物を０．５μｔアリコートで装置の第二（
試料受容）帯域に加えた。

ミラー支持体ストリップおよびカバーシートを処理ずみ
ニトロセルロースに貼付し、その結果第二および第三帯
域および第一の端２ｔｍが霧出された。陽性および陰性
血清試料を０．５μｔアリコートで第二帯域に適用し、
そして試料ポートを予め調製したミラーストリップで被
った。次Ｋ。

シートの第一端をＴＢＳおよび１％ゼラチンを包含する
溶媒に浸漬し、そして液体フロントを約１０分間かけて
シートの頂部に上昇せしめた。カバーシートをはく離す
ると露出されたクロマトグラフィー材料が残った。次に
、ストリップの第三の帯域を１５分間ＴＢ８１　０ｄ、
３０％過酸化水素溶液４μｔおよび３ＩＩＩ９／−の濃
度でメタノール中に４−クロロナフトールを包含する溶
液０．８−からなるペルオキシダーゼ指示薬溶液中に浸
漬した。陽性血清および酵素標識抗体の存在は第三帯域
での青黒色スポットの存在となって生じた。

実施例２。

この実施例では、ＨＩＶ（ヒト免疫不全ウィルス）に対
するＡＩＤＳ患者抗体を検出するための単独エッチ経路
装置ｋｆｉ造した。実施例１の一般操作を用いたが、但
しニトロセルロース全実施例１の方法論に従ってラバー
セメントを用いて８インチ×１１インチミラーシートに
手でのｐ付けした。バッキングを経て燃焼することなく
ＣＯ２レーザ−での調節した処理により、平行ライン全
ニトロセルロースに３ｍ間隔でエツチングした。〔レー
ザー・エイジ・インコーホレーテッドＣＬａ５ｓｒ　Ａ
１７＃　Ｉｎｃ．）ワウケガン（Ｗａｓｋｇｇａｓ）、
ＩＩＱ　　この実施例では、すべてのレーンをチャンネ
ル間の液流がなかったものとして用いた。

適当なＨＩＶ抗原〔ガロ（Ｇα１ｌｏ）、米国特許第４
、５　２　０．１　１　３号〕を製造からの洗浄剤を除
くために３０分間３０チ重量／容量バイオビーズ（Ｂｉ
ｏｂｅαｄａ）〔バイオラド（Ｂｉｏｒａｄ）、　リッ
チモンド、Ｃａ、）で処理し九次に、抗原を実施例１の
方法に従ってニトロセルロースに適用した。次Ｋ、実施
例１に従ったペルオキシダーゼ標識山羊抗ヒ）ＩｇＧｉ
第一帯域に適用し、そして実施例１の残余の操作に従っ
た。陽性および陰性ＨＩＴ／血清試料による試験で陽性
試料に対して陽性呈色反応が生じ、また陰性試料に対し
て呈色反応が生じなかった。

実施例３゜ この実施例では、特定の抗原全検出するための単独経路
免疫検定装置を記載する。この装置は原則的には実施例
１の抗体検出装置と類似しているが、但し検出すべき抗
原と特異的に反応する抗体を装置の第三帯域での溶媒輸
送に対して固定化し、この帯域で抗体は分析物試料に関
連する物質を含む抗原と選択的に結合する。このように
固定化された抗原材料は次に関連のある抗原の同一また
は他の抗原性エピトープと特異的に反応する標識抗体で
処理することによって検出することができる。

微孔性固体基質材料、好ましくは約０．１ｍの厚さのニ
トロセルロースを好ましくは同一の厚さのミラーシート
に流延する。次に、グリッドを、巾約３ｍｍお工び長さ
約２０−１００■好筐しくに長さ約７５１０Ｉの数多く
のレーンを包含するインクジェット・プリンターでニト
ロセルロースにプリントした。次に、検定すべき抗原の
１８１またはそれ以上の抗原決定基と特異的に反応する
抗体材料をス）　ＩＪツブの一端の近く、好ましくは一
端から約Ｌｏｗの位置でストリップの第三帯域に適用す
る。抗体材料はポリクロナールまたはモノクロナール抗
体あるいはこれらの組合せであってよく、そしてＩｇＧ
、　　ＩｇｌＭまたは他の組の免疫グロブリンもしくは
これらの組合せであってよい。抗体は手操作の手段例え
ば毛細管、ピペットまたは液体噴霧剤によって多孔性基
体に適用することができる。免疫グロブリンをスプレー
によって適用する場合、例えばミクロエレクトロニクス
分野で知られている操作によって小形化された型板もし
くはアプリケーターを既知の平板印刷技術と組合せて使
用することができる。

抗体は第三帯域に任意の適当な幾何学例えばドツト、ラ
インまたはスポットを提供するよりに通用することがで
きる。抗体溶液はｌｐｔよりも少い童で適用されるのが
好ましく、約０．５μｔの濾が直径約１〜２朋のスポッ
トを生成するのに符に好ましい。このサイズの帯域が陽
性呈色シグナルの目でみる検査に依存する装置にとって
好ましい。少い目の這の抗体溶辰もまた使用し得るが、
この遺では分光光度手段による評価を公安とする小さい
目の帯域を生成し得る。本発明の装置を非可視的手段例
えば反射分元元度計により評価することが企図されてい
る場合、０．５μｔよりも少い童を、本発明の装置の組
立に心安な抗体材料の虚を更に減少させるように適用す
ることが好ましい。

溶液で適用される抗体の濃度は好ましくは本発明のニト
ロセルロースシートに適用される場合約１００−１５０
がＩｇＭ／溶液成の範囲にある。約１２０−１４０μ？
Ｉｇ１Ｍ／溶液μの範囲の抗体濃度が最も好ましい。更
に高い濃度が適用し得るが、第三帯域の結合効能を増大
させるのに役立つことがない。更に低い濃度もまた適用
することができ、陽性結合シグナルの密度が減退する効
果がある。更に低い抗体濃度は陽性シグナル強度を試験
結果の可視的評価を阻害する程度に減少させることが企
図されているが、減少された結合シグナル強度は不発明
の装置の自動化された評価のための分元元度またはその
他の技術を不肖に阻害しないことが企図されている。

抗体材料を第三帯域に添加した後、第三帯域およびスト
リップ材料の残部は好ましくは防睡剤例えば１％ＬＢゼ
ラチン溶液で処理する。この時点で、分析物の１種また
はそれ以上の抗原決定基と特異的に反応する標識材料を
包含する第一試薬を第三帯域と第一端との間に位置する
第一帯域に適用する。この標識抗体材料はクロマトグラ
フィー溶媒輸送に対して固定化されてなく、クロマトグ
ラフィーで移動性であって、その結果第三帯域に輸送さ
れ得るようになることが企図されている。第一試薬は例
えば毛細管、ピペットまたは液体噴霧剤のような手段で
適用することができる。抗体材料はポリクロナールまた
はモノクロラールであってよく、分析物で表わされる抗
原に対して特異的に反応し得る限り様々なサブタイプお
よびエピトープ特異性を有Ｌ　”’Ｃイテヨ１／’ｏ抗
俸材料は標識され、それにより可視的、分光尤度あるい
は他の手段により検出することができる。

検出可能な呈色反応を接触する酵素結合抗体が特に好ま
しい。

第三帯域に固定抗体また第一帯域に標識クロマトグラフ
ィー移動抗体を適用した後、装置は、第三帯域および随
意第二帯域を除き、−態様ではス）　ＩＪツブの端で３
−５ｍに対してミラーであってよいカバーで被ってもよ
い。カバーはクロマトグラフィー溶媒の蒸発および装置
のいずれの揮発性試薬の蒸発を防止する。

抗原検定装置を使用するために、血清あるいは他の生物
学的もしくは非生物学的体液であってよい試料を装置の
第三帯域に適用する。試料溶ｇ、は０１μＬ−５μｔの
量特に好ましくはｌμｔの量で適用される。抗原濃度と
活性との相違により、これらの蛍は変化し得るが、適切
な容量を決定するのは当業者の能力内に十分にある。

試料材料の適用後、試験装置の端をクロマトグラフィー
溶媒溶液に浸漬する。一つの好ましい溶液は１％ＬＢゼ
ラチン溶液を包含するが、当業者で知られている他のク
ロマトグラフィー溶媒は同等に有用である。溶媒は第三
帯域の方に溶媒フロントの若干後ろに第一試薬の抗体を
輸送するストリップを経て進行する。溶媒フロントが試
験装置を上に進行するにつれて、これが次に試料材料に
出会い、材料を第三帯域の方に担送し、輸送する。試料
材料は溶媒フロントよりも若干光に輸送され、一方第一
試薬材料は溶媒フロントより若干後に輸送される。結果
として、２種の材料は混和しない。分析物材料が第三帯
域で第二試薬により固定化される場合のみ、第一試薬は
分析物に追いつぎ、そして反応する。試料中に含まれる
他の材料は溶媒によりクロマトグラフィーで＠送され続
け、そして第三帯域から除云される。分析物材料が第三
帯域に結合されていない場合、第一試薬は続いてクロマ
トグラフィーで輸送され、そして第三帯域から除云され
、これによって該帯域でシグナルを生じない。

実施例４゜ この実施例では、ＨＩＶの検出のための２経路「ダイオ
ード」装置を製造した。この実施例によれば、試験装置
は第３図の装置の一般形態でニトロセルロースおよびミ
ラ一層双方を切断する高エネルギーレーザーで切断した
。より低いエネルギービームでの第二のバスはニトロセ
ルロース層のみを切断して２つのクロマトグラフィー溶
媒輸送経路を創成する。第三帯域は実施例２に記載した
のと同一のＨＩＶ製剤で含浸し、そして第一帯域を実施
例２の方法に従って同じホスファターゼ標識山羊抗ヒト
ＩＱＧ抗体で含浸した。この実施例の装置はまた第四Ｓ
よび第五の帯域を包含し、この場合＃素基質化合’＊：
ｓよび色素化置物からなる第三Ｓよび第四試薬で含浸し
た。第四帯域は０．１　Ｍ　トＵス塩基中０．１Ａ１５
−ブロモ−４−クロロ−３−インドリルホスフェートか
らなる第三試薬で含浸し、一方第五帯域は水中の０．１
　Ｍニトロブルーテトラゾリウム〔シグマ（Ｓｇｍａ）
］の０５μｔからなる第四試薬で含浸した。次に、全体
の装置を第二（試料）帯域で試料ボートと共にミラーカ
バーで被った。陽性および陰性ＨＩＶ血清試料を第三帯
域に適用し、そして装置を１％ＬＢゼラチンおよびＴＥ
Ｓからなる溶媒中に浸漬した。陽性血清試料は陽性呈色
反応を示し、一方陰性血清試料では陰性呈色反応を示し
た。

この実施例の装置の変化には第４図Ｓよび′＃Ｊ６図に
例示したとおりの「トリオード」および「テトロード」
を包含する。これらの装置には同じ試薬？よび材料を導
入するが、但し追加のチャンネルを装置にエツチングす
る。これらのチャンネルは試薬の混和および輸送に時間
を合わせ、そして試薬と試料材料との早期混和を防止す
るのに使用し得る。

実施例５゜ この実施例では、単独経路ポリヌクレオチド交雑検定装
置を製造し、そして使用する。巾約５朋×長さ５５謂で
厚さ約０．１ｍｓ＋の微孔性ニトロセルロース材料の片
を厚さ約０．１朋のミラー（Ｍｙｌａｒ）支持体シート
上に流延する。ストリップを０．９　Ｍ　ＮａＣｌ、　
　５６０　ｍｕ　ＮａＨ２ＰＯ４および５惰Ｍ　ＥＤＴ
Ａ（ｐＨ７，４）からなる５ＳＰＥ緩衝液で予備湿潤す
る。ス）　ＩＪツブの第一端から約２７朋の第三帯域に
、０．９　Ｍ　ＮａＣＬ、　５６０　ｍＡｆ　Ｎ　ａＨ
２Ｐ　０４および５溝Ｍ　ＥＤＴＡ（ｐＨ７，４）から
なる５ＳＰＥ緩衝刑中の分析物ポリヌクレオチドの塩基
配列の第一部分に一般的に相補する約１５ピコモルの直
鎖変性ＤＮＡを包含する第二試薬済液約１．５μｔを加
える。次に、このストリップを風乾し、そして２時間８
０℃で焼成する。

第二試薬を適用したストリップ材料を次に５ＳＰＥ緩衝
液で予備湿潤し、そして５ＳＰＥ緩衝剤ならびに０．１
％フイコル（Ｆ　ｓ　ｅ　ｏ　ｌ　ｌ　）　ｓ　０．１
％ポリビニルピロリドンおよび１　ｍｔｙ／ｍｌ　　Ｂ
　ＳＡからなるデ７ハＡ／ト（Ｄａｔｓｈａｒｄｔ’ｚ
）液からなる防護液で含浸する。ス）　ＩＪツブを密封
バッグ中で２時間６５℃とし、次に風乾する。

次に、ス）　ＩＪツブを第一端から７絹の第一帯域で分
析物ポリヌクレオチドの塩基配列の第二部分に一般に相
補的な塩基配列を有する直鎖でかつ変性した放射性同位
元素標識ポリヌクレオチドを包含する第一試薬材料約１
００ピコモルで含浸する。第一試薬はその５′宋端で！
ｆｆ１Ｐラジオラベル８よびＴ４ポリヌクレオチドキナ
ーゼでの処理により標識する。久に、第一試薬材料を風
乾し、そしてミラーカバープレート（第一８よび第三帯
域間の第三帯域にわたるギャッフヲ有する）をニトロセ
ルロースクロマトグラフィー材料上にのせる。

検定は試料材料を含む分析物を第三帯域に適用すること
によフ本発明のポリヌクレオチド交雑検定装置で実施す
る。

次に、カバータブを第二帯域にのせ、そして検定装置を
５ＳＰＥ溶ｇ、（０，９ＮａＣ！、、５６０ｍＭ　Ｎａ
ＨｘＰＯ４，５ｍｕ　　ＥＤＴＡ（ｐＨ７，４）、デン
ハルト液（０，０６％フィコル、０．０６％ポリビニル
ピロリドンおよび０６■１ｍ１ＥＳＡ）および５０％脱
イオン化ホルムアミドからなるクロマトグラフィー溶媒
約１７５μを中に浸漬する。ストリックを３７℃で培養
中に溶媒は装置に沿って上方に進み、そして第一試薬を
可溶化しそしてクロマトグラフィーで第三帯域の方に輸
送する。第一試薬と試料成分との相対移動度は、分析物
が第一試薬が第三帯域に到達する前に第三帯域で処理さ
れ、また浴媒憎送に対して固定化されるようなものであ
る。更に、任意の介在試料成分および第一試薬と反応し
得る試料の非分析物成分は、第一試薬が第三帯域にクロ
マトグラフィー輸送される前に第五帯域から除去される
。

第三帯域に到達すると、試料内の任意の分析物はその帯
域で固定化された第二試薬で第二塩基配列で交雑するこ
とにより固定化される。任意の未交雑材料は第一試薬の
到達前にクロマトグラフィー溶媒輸送により第三帯域か
ら除去される。第五帯域に到達すると、同位元素標識第
一試薬はそれ自体分析物の第一塩基配列で交雑により固
定化される。

ストリツ１ｗよびクロマトグラフィー溶媒を溶媒フロン
トがストリップの頂部に達するまで３７℃で培養し、こ
の時にストリップを溶媒から除き、そして風乾する。次
に、ストリップをコダック（Ｋｏｄａｋ）ＸＡＲ−５フ
イルムでオートラジオグラフィーに何する。試料材料中
の分析物の存在は第三帯域で接触したフィルムの露光に
より指示される。

この実施例の装置の変化には酵素ラベルおよび検出シス
テムを用いる「ダイオードＪ、ｒ）ＩＪオード」および
「テトラオード」装置が包含されている。

本発明の実施化において数多くの変形および変化が前述
の好ましい態様の説明を考慮して当業者に想起し得るも
のと予想される。従って、本発明は特許請求の範囲によ
ってのみ制限される。

【図面の簡単な説明】

第１ｃｃ、３α、４ｃＬ＃よび６ａ図は本発明の試験装
置の３種の異った形態の正面図である。 第１６．３ｂ、４ｂおよび６ｂ図は第１α、３α、およ
び４６図に示した試験装置のそれぞれ線１６−１６．３
６−３ｂ、４ｂ−４ｂおよび６ｂ−６６に沿った横断■
図である。 第１ｃ図は第１ａ図に示した試験装置のクロマトグラフ
ィー溶媒と接触している横断面図である。 第２ａ−２７図は本発明の方法の実施化に従った異った
時点でのＫｌａ図に示した装置の正面図である。 第５図は＠５−５に沿ってみた第３ｃＬ図の試験装置の
横断面図である。 図面における符号の意義は次のとおりである。 １０・・・装置、１４・・・第一末端、１８・・・第二
末端、１１・・・クロマトグラフィー材料、１５・・・
第一帯域、１６・・・第五帯域、１７・・・第三帯域、
２１・・・第一試薬、１２・・・支持体ス）　ＩＪツブ
、１３・・・カバープレー）、１９．２０・・・タブ、
２２・・・溶媒、Ａ・・・第一試薬、Ｂ・・・分析物、
Ｃ・・・非分析物、３０・・・装置、３４・・・第一末
端、３８・・・第二末端、３５・・・第一帯域、３６・
・・第二帯域、３７・・・第三帯域、３１・・・クロマ
トグラフィー材料％　３３・・・カバープレート、３９
．４０・・・タブ、４３・・・クロマトグラフィー浴媒
フロント、４４・・・輸送フロント、５１・・・クロマ
トグラフィー材料、５４・・・第一末端、６０・・・第
二末端、６２・・・バリヤ一手段、６７・・・左縁、６
８・・・右縁、５５・・・第一帯域、５６・・・第二帯
域、５７・・・第三帯域、５８・−・第四帯域、５９・
・・第五帯域、６３・・・第一バフル、６４・・・第二
バフル、６５・・・右バリヤー、６６・・・左バリヤー
、５２・・・支持体ストリップ、６１・・・タブ、５３
・・・カバープレー）、７０・・・装置、７１・・・ク
ロマトグラフィー材料、７４・・・第一末端、８０・・
・第二末端、８２〜８５・−・バリヤー、８８・・・左
縁、８９・・・右縁、７５・・・第一帯域、７６・・・
第二帯域、７７・・・第三帯域、７８・・・第四帯域、
７９・・・第五帯域、８３．８４・・・バフル、８１・
・・タブ、７３・・・カバープレート。 ９０・・・装置、９１・・・クロマトグラフィー材料、
９４・・・第一末端、１０１・・・第二末端、１０３〜
１０７・・・バリヤー、９５・・・第一帯域、９６・・
・第五帯域、９７・・・第三帯域、９８・・・第四帯域
、９９・・・第五帯域、１００・・・第六帯域、１０４
・・・キャラ７’ｆｉ、９２・・・ストリップ、９３・
・・カバープレート。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、連続した反応系列によつて試料中の分析物の分析を
   するための試験ストリップにおいて、前記ストリップが
   選択されたクロマトグラフィー溶媒により未固定試薬お
   よび反応性試料成分の迅速なクロマトグラフィー溶媒輸
   送のための毛管性および能力を有するクロマトグラフィ
   ー材料の丈からなり、前記ストリップがクロマトグラフ
   ィー溶媒輸送が開始される第一の末端；クロマトグラフ
   ィー溶媒輸送が終る第二の末端；前記第一および第二の
   末端の間に位置する多数の帯域を包含し、前記帯域が前
   記溶媒中で移動可能であり、そして前記分析物が固定化
   された形態である場合前記分析物により溶媒輸送に反応
   性でありかつ固定化可能である第一試薬で含浸した第一
   帯域、 前記試料を受容するための第二帯域、 前記第一帯域の下流の溶媒輸送に対して固定化され、か
   つ分析物との選択的反応が可能であり、該第三帯域で固
   定化された形態で分析物を付与するような第二試薬で含
   浸された第三帯域、 前記第三帯域で前記第一試薬を検出するための手段を包
   含し、而して前記第一および第二帯域が前記第一の末端
   から十分な間隔があつて前記第一および第二帯域ではな
   く前記第一の末端と前記クロマトグラフィー溶媒との接
   解が可能であり、 これにより、前記試料が前記第二帯域に受容され、そし
   て前記第一の末端が前記クロマトグラフィー溶媒中に浸
   漬された後、前記試料成分と前記第一試薬との相対移動
   度あるいは前記第二および第三帯域間の部位の関係が分
   析物が第一試薬が第三帯域に到達する前に第三帯域で溶
   媒輸送に対して処理され、固定化されるようなものであ
   り、そしてこれにより干渉性試料成分および前記第一試
   薬と反応性を有する試料の非分析物成分が、第一試薬が
   第三帯域にクロマトグラフィー溶媒輸送される前に、ク
   ロマトグラフィー溶媒輸送により前記第三帯域から除去
   されることを特徴とする試験ストリップ。 ２、前記第三帯域で前記第一試薬を検出するための手段
   が前記第一試薬でのラベルである特許請求の範囲第１項
   記載の試験ストリップ。 ３、前記ラベルが放射性同位元素ラベル、発色団、螢光
   団および酵素ラベルからなる群から選択される特許請求
   の範囲第２項記載の試験ストリップ。 ４、多重クロマトグラフィー溶媒輸送経路を包含する特
   許請求の範囲第１項記載の試験ストリップ。 ５、前記試料および前記第一試薬のクロマトグラフィー
   溶媒輸送経路が部分的に不一致である特許請求の範囲第
   ４項記載の試験ストリップ。 ６、前記ラベルが酵素ラベルであり、そして前記ラベル
   と反応性を有する第三試薬が第四の帯域で処理され、そ
   して前記クロマトグラフィー溶媒での相対移動度を有し
   、それにより第三試薬が、前記第一試薬が前記第三帯域
   に輸送された後、前記溶媒により前記第三帯域に輸送さ
   れる特許請求の範囲第３項記載の試験ストリップ。 ７、前記第三試薬が指示薬物質である特許請求の範囲第
   ４項記載の試験ストリップ。 ８、前記第一試薬および第三試薬のクロマトグラフィー
   溶媒輸送経路が部分的に不一致である特許請求の範囲第
   ６項記載の試験ストリップ。 ９、前記進行経路が溶媒不透過性バリヤーにより分離さ
   れている特許請求の範囲第４項記載の試験ストリップ。 １０、前記溶媒不透過性バリヤーがレーザーエッチング
   により形成される特許請求の範囲第９項記載の試験スト
   リップ。 １１、前記クロマトグラフィー材料が薄層クロマトグラ
   フィー材料である特許請求の範囲第１項記載の試験スト
   リップ。 １２、前記クロマトグラフィー材料がニトロセルロース
   である特許請求の範囲第１１項記載の試験ストリップ。 １３、前記分析物が抗体である特許請求の範囲第１項記
   載の試験ストリップ。 １４、前記分析物が抗原である特許請求の範囲第１項記
   載の試験ストリップ。 １５、前記分析物がポリヌクレオチドである特許請求の
   範囲第１項記載の試験ストリップ。 １６、連続した系列の反応によつて試料中の分析物の分
   析を行う方法において、次のストリップすなわち選択さ
   れたクロマトグラフィー溶媒により未固定試薬および反
   応性試料成分の迅速なクロマトグラフィー溶媒輸送のた
   めの毛管性および能力を有するクロマトグラフィー材料
   の丈からなり、前記ストリップが クロマトグラフィー溶媒輸送が開始される第一の末端；
   クロマトグラフィー溶媒輸送が終る第二の末端；前記第
   一および第二の末端の間に位置する多数の帯域を包含し
   、前記帯域が前記溶媒中で移動可能であり、そして前記
   分析物が固定化された形態である場合前記分析物により
   溶媒輸送に反応性でありかつ固定化可能である第一試薬
   で含浸した第一帯域、 前記試料を受容するための第二帯域、 前記第一帯域の下流の溶媒輸送に対して固定化され、か
   つ分析物との選択的反応が可能であり、該第三帯域で固
   定化された形態で分析物を付与するような第二試薬で含
   浸された第三帯域、 前記第三帯域で前記第一試薬を検出するための手段を包
   含し、而して前記第一および第二帯域が前記第一の末端
   から十分な間隔があつて前記第一および第二帯域ではな
   く前記第一の末端と前記クロマトグラフィー溶媒との接
   解が可能であり、 これにより、前記試料が前記第二帯域に受容され、そし
   て前記第一の末端が前記クロマトグラフィー溶媒中に浸
   漬された後、前記試料成分と前記第一試薬との相対移動
   度あるいは前記第二および第三帯域間の部位の関係が分
   析物が第一試薬が第三帯域に到達する前に第三帯域で溶
   媒輸送に対して処理され、固定化されるようなものであ
   り、そしてこれにより干渉性試料成分および前記第一試
   薬と反応性を有する試料の非分析物成分が、第一試薬が
   第三帯域にクロマトグラフィー溶媒輸送される前に、ク
   ロマトグラフィー溶媒輸送により前記第三帯域から除去
   されるストリップを使用することを特徴とし、そして （１）前記第二帯域中で前記試料を処理し；（２）前記
   第一末端を前記クロマトグラフィー溶媒中に、前記分析
   物および前記第一試薬を前記第三帯域にクロマトグラフ
   ィーで輸送するのに十分な時間浸漬し、而して前記分析
   物と前記第一試薬との相対移動度あるいは前記第二およ
   び第三帯域間の部位関係が第一試薬が第三帯域に到達す
   る前に分析物が第三帯域で処理され、そしてこれにより
   前記第一試薬と反応性を有する試料の干渉性試料物質お
   よび非分析物成分が第一試薬の到達前にクロマトグラフ
   ィー溶媒により前記第三帯域から除かれるようなもので
   あり；そして （３）前記第三帯域中の前記第一試薬または反応生成物
   の存在を検知する ことを特徴とする分析方法。 １７、前記第三帯域で前記第一試薬を検知する手段が前
   記第一試薬でのラベルである特許請求の範囲第１６項記
   載の方法。 １８、前記第三帯域で前記第一試薬を検知する手段が前
   記第一試薬と反応性を有する第四試薬である特許請求の
   範囲第１６項記載の方法。 １９、第四試薬が指示物質である特許請求の範囲第１８
   項記載の方法。 ２０、前記第三試薬を第四帯域で処理し、そして前記第
   一試薬が前記第三帯域に輸送された後第三帯域にクロマ
   トグラフィーで輸送される特許請求の範囲第１８項記載
   の方法。 ２１、前記試験ストリップが多重クロマトグラフィー溶
   媒経路を包含する特許請求の範囲第１６項記載の方法。 ２２、前記第一試薬および第三試薬が部分的に不一致の
   進行経路に沿つて輸送される特許請求の範囲第２１項記
   載の方法。 ２３、前記試料および第三試薬が部分的に不一致の進行
   経路に沿つて輸送される特許請求の範囲第２０項記載の
   方法。 ２４、前記クロマトグラフィー溶媒経路が溶媒不透過性
   バリヤーの結果として部分的に不一致である特許請求の
   範囲第２１項記載の方法。 ２５、前記第二帯域が前記第三帯域と一致している特許
   請求の範囲第１６項記載の方法。 ２６、前記クロマトグラフィー材料が薄層クロマトグラ
   フィー材料である特許請求の範囲第１６項記載の方法。 ２７、前記クロマトグラフィー材料がニトロセルロース
   である特許請求の範囲第１６項記載の方法。 ２８、前記ニトロセルロースが約０．１μ〜約１μの範
   囲の平均孔サイズを有することを特徴とする特許請求の
   範囲第２６項記載の方法。 ２９、前記分析物が抗体である特許請求の範囲第１６項
   記載の方法。 ３０、前記分析物が抗原である特許請求の範囲第１６項
   記載の方法。 ３１、前記分析物がポリヌクレオチドである特許請求の
   範囲第１６項記載の方法。