JPS6410228B2 - - Google Patents

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JPS6410228B2
JPS6410228B2 JP55095777A JP9577780A JPS6410228B2 JP S6410228 B2 JPS6410228 B2 JP S6410228B2 JP 55095777 A JP55095777 A JP 55095777A JP 9577780 A JP9577780 A JP 9577780A JP S6410228 B2 JPS6410228 B2 JP S6410228B2
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JP
Japan
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ring
apyrase
substance
hydrolysis
polymer
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Application number
JP55095777A
Other languages
English (en)
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JPS5672868A (en
Inventor
Marukooni Waruteru
Barutoori Furanchesuko
Pitsutarisu Furanchesuko
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
E ENNE I ENTE NAJIONAARE IDOROKARUBUURI
Original Assignee
E ENNE I ENTE NAJIONAARE IDOROKARUBUURI
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Publication date
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Publication of JPS5672868A publication Critical patent/JPS5672868A/ja
Publication of JPS6410228B2 publication Critical patent/JPS6410228B2/ja
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L33/00—Antithrombogenic treatment of surgical articles, e.g. sutures, catheters, prostheses, or of articles for the manipulation or conditioning of blood; Materials for such treatment
    • A61L33/0005—Use of materials characterised by their function or physical properties
    • A61L33/0047—Enzymes, e.g. urokinase, streptokinase

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  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
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  • Chemical & Material Sciences (AREA)
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  • Epidemiology (AREA)
  • Materials For Medical Uses (AREA)
  • Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、表面上にアピラーゼ〔この酵素はア
デノシン二リン酸（ADP）をアデノシン―5′―
リン酸（AMP）に変化させる反応に関して触媒
作用を示し、AMPはその後アデノシンに変化さ
れる〕を不動化させることにより、生体適合性の
高分子物質を製造する方法に係る。
各種の物質に生体適合特性を与えうることは、
現時点では、実用的な面で非常に重要な問題であ
る。これに関して、良好な機械特性、加工性およ
び強度、あるいは無毒性であること等の特性のた
め、中位の期間または長期間皮下に挿入される人
工器官の形成または体外循環系で使用される補助
装置（たとえば腎臓透析装置、心肺装置等）の部
材の形成に利用される物質が存在している。この
目的のためには、脂肪族または芳香族ポリアミド
重合体、ポリエステル、ポリカーボネート、ポリ
ウレタンおよびPVCから特殊な金属合金までの
広凡な範囲の物質が使用できる。しかしながら、
残念なことには、これら物質の使用は一般に生体
適合性が乏しいため非常に制限される。これは、
血液循環系に異物が挿入されると直ちに、非常に
複雑なプロセスの開始によりトロンビンの生成が
起るためである。まず異物の表面に血小板が付着
し、つづいて血小板からADPおよびセロトニン
が放出され、これにより血小板の凝集を生じるも
のである。血小板の凝集自体は、トロンビンの形
成における基本的な工程である。これは、フイブ
リノーゲンのフイブリンへの変化を促進すること
によるリン脂質の放出（血液凝固プロセスに必須
のもの）を生じるためである。血小板凝集誘発剤
として、したがつてトロンビン形成プロセスの開
始剤としてのADPの役割は公知である（たとえ
ば、A.GaarderおよびA.Hellem、“ネーチヤー
（Nature）”192，531（1961）参照）。それ故、血
液と接触するように置かれた物質の表面に血小板
が付着することにより生成したADPをAMPおよ
びアデノシンに変えうるアピラーゼの如き酵素を
不動化させることは、血小板の凝集を阻害し、ト
ロンビンの生成を阻止できることは明白である。
これに関して、本発明者等は、トロンビン生成
物質の表面におけるアピラーゼの不動化により、
この物質に、良好な生体適合特性を与えることを
見出し、本発明に至つた。
これらの特性は酵素を不動化させるために使用
する系には左右されない。不動化は、高分子物質
の表面における吸着―架橋処理によつて行われ
る。他の方法によれば、生体適合性を高めようと
する物質の表面上に存在する官能基にアピラーゼ
を共有結合させることができる。必要であれば、
前もつて物質を活性化し、表面上に活性基を結合
させ、これをアピラーゼの不動化に使用すること
ができる。たとえば、表面を温和な条件下で加水
分解した脂肪族または芳香族ポリアミドのアミノ
基（またはカルボキシル基）に酵素を共有結合さ
せることができる。同様に、表面を加水分解した
ポリエステルのカルボキシル基も使用できる。
本発明を以下の実施例により詳述するが、これ
らの実施例は本発明を限定するものではない。
実施例 １ ナイロン―６製のリング（長さ９mm、内径４
mm、外径５mm）を調製した。加工中、縁が丸くな
るように注意した。このリングの外周面中央部に
深さ0.25mmの溝を設けた。
ついで、このリングを3.5規定HCl中で37℃に
おいて１時間加水分解した。ナイロンの表面で加
水分解が行なわれたことを、水洗したリングを飽
和四ホウ酸塩中にトリニトロベンゼンスルホン酸
0.1％（重量／容量）を含有する溶液に浸漬する
ことにより行なつた比色試験によつて確認した。
約１時間後、ナイロンの表面がオレンジ色とな
り、これにより加水分解が行なわれたことを確認
した。この時点で、リングを2.5％グルタルアル
デヒド溶液中に浸漬し、４℃で3.5時間浸漬して
おいた。ついで、リングを冷却した水で迅速に洗
浄し、アピラーゼ（固有活性3.4U.I.／mg、基質と
してADPを使用する）８mg／mlを含有する
0.01Mリン酸塩緩衝剤溶液に浸漬した。反応を４
℃で１昼夜続けた。反応後、リングを蒸留水で洗
浄し、酵素の活性度を試験した。１つのリング
を、ADP0.25mg／mlおよびCaCl20.5mg／mlを含有
するPH7.4の0.1MトリスHCl緩衝剤溶液50ml中に
浸漬した。混合物を25℃で撹拌し続けた。サンプ
ル１mlを30分間隔で取出し、Fiskeおよび
Subbarowの方法（C.H.Fiske，Y.Subbarow、
“ジヤーナル・オブ・バイオロジカル・ケミスト
リー（J.Biol.Chem.）66，375（1925））に従つて
無機リン酸塩を測定するために分析した。各リン
グについて、反応１時間で放出される無機リン酸
塩4.5μモルに相当する酵素活性度が測定された。
表面のアミノ基に共有結合したアピラーゼを有
するナイロンリングについて、これを平均サイズ
の犬の大腿静脈内に挿入して“イン・ビボ”生体
適合性試験を行なつた。挿入を全身麻酔下で行な
い、リングを静脈内に挿入した際、絹糸によりこ
れを固定した。傷口を縫合し、動物に抗生物質を
注射した。
同様な操作により、比較のため、前記処理を行
なつていないナイロンリングを挿入した。挿入期
間15日後に、リングを取出し、検査した。アピラ
ーゼを不動化したリングは開口したままであつた
が、比較用のリングはトロンビンにより完全に閉
塞されていた。犬から摘出したアピラーゼ付リン
グについての測定では、１時間内に放出された無
機リン酸塩は約4μモルであつた。
実施例 ２ 実施例１と同様のナイロン―６製リングを調製
し、アピラーゼ８mg／mlを含有する0.01Mリン酸
塩緩衝剤溶液（PH７）に浸漬した。４時間後、２
倍量の2.5％グルタルアルデヒドの0.01Mリン酸
塩緩衝剤（PH７）溶液を添加した。混合物を４℃
で１昼夜放置して反応させた。ついで、リングを
洗浄し、前記実施例１の操作に従つて酵素活性試
験を行なつた。酵素活性は、各リングについて１
時間で無機リン酸塩2μモルを放出しうる程度で
あつた。
アピラーゼ付リングおよび比較用リングを平均
サイズの犬の大腿静脈に挿入することにより、
“イン・ビボ”生体適合性試験を行なつた。この
方法は実施例１で記載したものと同じである。
アピラーゼ付リングでは開口したままであり、
測定された酵素活性は１時間で放出される無機リ
ン酸塩約2μモルに等しかつた。
しかしながら、比較用ナイロンリングは完全に
閉塞されていた。
実施例 ３ 実施例１と同様のポリエチレンテレフタレート
製のリングを調製した。リングを1M NaOH中
で50℃において５時間加水分解した。ついで、リ
ングを洗浄し、0.1Mリン酸塩緩衝剤（PH6.8）中
にアピラーゼ８mg／mlおよびＮ―エチル―N′―
（３―ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド
10mg／mlを含有する溶液50ml中に浸漬した。反応
を４℃で１夜行なつた。このようにして、アピラ
ーゼは、酵素のε―アミノリジン基と表面加水分
解ポリエステルのカルボキシル基との間でのアミ
ノ結合の形成により支持体上に結合された。
実施例１と同様に実施したリングについての酵
素活性試験では、各リングにつき１時間で放出さ
れる無機リン酸塩約4μモルであつた。
このアピラーゼ付ポリエステルリングおよび未
処理リングを実験用の犬の大腿静脈内に挿入する
ことにより、“イン・ビボ”生体適合性試験を行
なつた。挿入15日後、リングを摘出した。比較用
のリングは完全に閉塞されていたが、アピラーゼ
付リングでは少量の特発性トロンビンが付着して
いたが開口されたままであつた。
生体内に挿入した後のリングについての酵素活
性試験では、１時間に放出される無機リン酸塩が
約3μモルであることを示した。
実施例 ４ 実施例１と同様のポリエチレンテレフタレート
を調製した。これに、実施例２の操作に従つて、
アピラーゼを架橋した。不動化後、各リングにつ
いての酵素活性を測定したところ、１時間で放出
される無機リン酸塩は約3μモルであることがわ
かつた。実施例１の方法により実施した犬につい
ての“イン・ビボ”生体適合性試験では、架橋ア
ピラーゼを有するリングについてはプラスの結果
を示した。すなわち、このリングでは開口された
ままであり、トロンビンはほぼ付着しておらず、
一方、比較用のリングは閉塞されていた。リング
についての残留酵素活性は１時間に無機リン酸塩
約2.5μモルを放出する程度であつた。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １ 生体適合性物質の製法において、ポリアミド
    重合体及びポリエチレンテレフタレート重合体で
    なる群から選ばれる高分子物質の表面を加水分解
    により活性化し、加水分解した高分子物質を、グ
    ルタルアルデヒド及びＮ―エチル―N′―（３―
    ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドでなる
    群から選ばれる架橋剤の緩衝剤溶液及びアピラー
    ゼの緩衝剤溶液に浸漬し、又は該架橋剤と共にア
    ピラーゼを含有する緩衝剤溶液に浸漬し、該高分
    子物質を十分な時間浸漬して表面にアピラーゼを
    共有結合させることを特徴とする、生体適合性物
    質の製法。 ２ 特許請求の範囲第１項記載の製法において、
    前記高分子物質がポリアミド重合体であり、前記
    加水分解を酸加水分解法で行う、生体適合性物質
    の製法。 ３ 特許請求の範囲第１項記載の製法において、
    前記高分子物質がポリエチレンテレフタレート重
    合体であり、前記加水分解をアルカリ加水分解法
    で行う、生体適合性物質の製法。
JP9577780A 1979-08-01 1980-07-15 Manufacture of living body adjustable substance Granted JPS5672868A (en)

Applications Claiming Priority (1)

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IT24838/79A IT1122388B (it) 1979-08-01 1979-08-01 Procedimento per la preparazione di materiali biocompatibili tramite l'immobilizzazione superficiale di apirasi

Publications (2)

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JPS5672868A JPS5672868A (en) 1981-06-17
JPS6410228B2 true JPS6410228B2 (ja) 1989-02-21

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AT (1) AT387906B (ja)
AU (1) AU536483B2 (ja)
BE (1) BE884301A (ja)
BR (1) BR8004430A (ja)
CA (1) CA1148466A (ja)
CH (1) CH645920A5 (ja)
DE (1) DE3026805A1 (ja)
DK (1) DK157887C (ja)
ES (1) ES493749A0 (ja)
FI (1) FI75737C (ja)
FR (1) FR2462475A1 (ja)
GB (1) GB2055848B (ja)
IE (1) IE49853B1 (ja)
IT (1) IT1122388B (ja)
LU (1) LU82623A1 (ja)
NL (1) NL190694C (ja)
NO (1) NO159607C (ja)
SE (1) SE448820B (ja)

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IT1122388B (it) 1986-04-23
DK157887C (da) 1990-07-23
NL8004068A (nl) 1981-02-03
GB2055848B (en) 1983-07-20
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AU6004980A (en) 1981-02-05
LU82623A1 (fr) 1981-02-02
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