JPS6023625B2 - 抗血栓性材料 - Google Patents
抗血栓性材料Info
- Publication number
- JPS6023625B2 JPS6023625B2 JP56213388A JP21338881A JPS6023625B2 JP S6023625 B2 JPS6023625 B2 JP S6023625B2 JP 56213388 A JP56213388 A JP 56213388A JP 21338881 A JP21338881 A JP 21338881A JP S6023625 B2 JPS6023625 B2 JP S6023625B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- urokinase
- immobilized
- blood
- enzyme
- antithrombotic
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired
Links
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は抗血栓性材料に関し、詳しくは担体に固定化さ
れた線熔系賦活化酵素を修飾処理することにより、材料
表面への血小板の粘着を抑制した抗血栓性材料に関する
。
れた線熔系賦活化酵素を修飾処理することにより、材料
表面への血小板の粘着を抑制した抗血栓性材料に関する
。
人工臓器やカテーテル等を使用した際に生じる血液凝固
は主として内因性血液凝固と血小板の粘着に起因するこ
とが知られている。
は主として内因性血液凝固と血小板の粘着に起因するこ
とが知られている。
内因性血液凝固は、血液と異物表面との接触による凝固
系第皿因子の活性化により初期反応が開始され、凝固系
因子のカスケード的活性化の結果、Ｘａやトロンビン等
が生成され、最終的にはフィプリン網が形成されること
により生じる。
系第皿因子の活性化により初期反応が開始され、凝固系
因子のカスケード的活性化の結果、Ｘａやトロンビン等
が生成され、最終的にはフィプリン網が形成されること
により生じる。
また、血小板の材料表面への粘着は、血４・板が材料表
面に接触したときに異物認識して表面に粘着し、赤血球
やフィプリンを巻込むことにより血栓を形成する。上記
二つの原因は血栓形成において相互に相乗り的に作用す
る。そこで、生じたフィプリン網を溶解するために、表
面にゥロキナーゼを固定化した抗血栓性材料が提案され
ている。
面に接触したときに異物認識して表面に粘着し、赤血球
やフィプリンを巻込むことにより血栓を形成する。上記
二つの原因は血栓形成において相互に相乗り的に作用す
る。そこで、生じたフィプリン網を溶解するために、表
面にゥロキナーゼを固定化した抗血栓性材料が提案され
ている。
ウロキナーゼは血液中のプラスミノーゲンを活性化して
プラスミンに変化させる線溶系賦活化酵素であり、従っ
て、血栓を溶解除去する抗血栓性の点ではすぐれた機能
を有しているが、反面、固定化したウロキナーゼが原因
となって、材料表面上に血小板の粘着が増大する問題が
ある。前記したように材料表面の血小板の粘着は、内因
性血液凝固と共に血栓を形成する原因となる。このよう
に血液と材料との接触によって生じる血４・板粘着は血
栓形成に直接関係する重要な反応であるが、その反応機
序は未だ十分に解明されていない。
プラスミンに変化させる線溶系賦活化酵素であり、従っ
て、血栓を溶解除去する抗血栓性の点ではすぐれた機能
を有しているが、反面、固定化したウロキナーゼが原因
となって、材料表面上に血小板の粘着が増大する問題が
ある。前記したように材料表面の血小板の粘着は、内因
性血液凝固と共に血栓を形成する原因となる。このよう
に血液と材料との接触によって生じる血４・板粘着は血
栓形成に直接関係する重要な反応であるが、その反応機
序は未だ十分に解明されていない。
一方において、材料表面には幾種類かの血糠タンパク質
が多少とも常に吸着されており、皿嬢タンパク質の種類
によって血小板粘着数が左右されるのも事実であるが、
血小板粘着性の小さいタンパク質のみを特異的に吸着す
る材料も未だ知られていない。そこで、本発明者らは、
従来の抗血栓性材料における上記した種々の問題を解決
するために鋭意研究した結果、材料に固定化したウロキ
ナーゼの糖残基を特定の修飾酵素により修飾することに
より、ウロキナーゼの線塔活性を低下させることなく、
材料への血小板粘着を抑え得ることを見出して本発明に
至ったものである。
が多少とも常に吸着されており、皿嬢タンパク質の種類
によって血小板粘着数が左右されるのも事実であるが、
血小板粘着性の小さいタンパク質のみを特異的に吸着す
る材料も未だ知られていない。そこで、本発明者らは、
従来の抗血栓性材料における上記した種々の問題を解決
するために鋭意研究した結果、材料に固定化したウロキ
ナーゼの糖残基を特定の修飾酵素により修飾することに
より、ウロキナーゼの線塔活性を低下させることなく、
材料への血小板粘着を抑え得ることを見出して本発明に
至ったものである。
従って、本発明による抗血栓性材料は、材料に固定化さ
れたウロキナーゼがガラクトースオキシダーゼにより修
飾処理されていることを特徴とする。
れたウロキナーゼがガラクトースオキシダーゼにより修
飾処理されていることを特徴とする。
本発明において用いる材料は生体に対して実質的に有害
に作用せず、ゥロキナーゼが固定化されればどのような
材料でも用いることができる。
に作用せず、ゥロキナーゼが固定化されればどのような
材料でも用いることができる。
このような材料として、通常、高分子重合体が用いられ
、例えばポリエチレン、ポリプロピレン、ポリイソブチ
レン、ポリメチルベンテン、ポリスチレン、天然ゴム、
クロロブレンゴム、ポリ塩化ビニル、ポリフッ化ビニル
、ポリテトラフルオロヱチレン、ポリ塩化ビニリデン、
ポリ酢酸ビニル、ポリビニルアルコール、エチレンービ
ニルアルコール共重合体、ポリアクリロニトリル、ポリ
グリコール酸、ポリビニルピロリドン、ポリビニルホル
マール、ポリビニルブチラール、アセタール樹脂、アク
リル樹脂、ポリアクリルアミド、ポリカーボネート、ポ
リスルホン、ポリエチレンテレフタレート、ポリエチレ
ンナフタレート、ポリアミド、ポリイミド、セルロース
、ニトロセルロ−ス、セロハン、コラーゲン、ゼラチン
、多糠類等の合成及び天然重合体を挙げることができる
。材料へのウロキナーゼの固定化の方法は何ら制限され
ず、従来より知られている酵素の固定化方法を任意に用
いることができ、共有結合法、イオン結合法等の適宜の
方法が用いられる。例えばカルボジィミド試薬或いはウ
ッドワード試薬と共に上記酵素を材料に反応させれば容
易に共有結合にて固定化されるが、これらの方法に限定
されるものではない。また、上記酵素を材料にイオン結
合させるには、上記酵素の水溶液に材料を浸糟すればよ
い。材料に固定されるウロキナーゼの量については特に
制限はないが、通常、材料面積１の当り０．１〜２００
仏夕が固定化されていれば良好な抗血栓性を有する。
、例えばポリエチレン、ポリプロピレン、ポリイソブチ
レン、ポリメチルベンテン、ポリスチレン、天然ゴム、
クロロブレンゴム、ポリ塩化ビニル、ポリフッ化ビニル
、ポリテトラフルオロヱチレン、ポリ塩化ビニリデン、
ポリ酢酸ビニル、ポリビニルアルコール、エチレンービ
ニルアルコール共重合体、ポリアクリロニトリル、ポリ
グリコール酸、ポリビニルピロリドン、ポリビニルホル
マール、ポリビニルブチラール、アセタール樹脂、アク
リル樹脂、ポリアクリルアミド、ポリカーボネート、ポ
リスルホン、ポリエチレンテレフタレート、ポリエチレ
ンナフタレート、ポリアミド、ポリイミド、セルロース
、ニトロセルロ−ス、セロハン、コラーゲン、ゼラチン
、多糠類等の合成及び天然重合体を挙げることができる
。材料へのウロキナーゼの固定化の方法は何ら制限され
ず、従来より知られている酵素の固定化方法を任意に用
いることができ、共有結合法、イオン結合法等の適宜の
方法が用いられる。例えばカルボジィミド試薬或いはウ
ッドワード試薬と共に上記酵素を材料に反応させれば容
易に共有結合にて固定化されるが、これらの方法に限定
されるものではない。また、上記酵素を材料にイオン結
合させるには、上記酵素の水溶液に材料を浸糟すればよ
い。材料に固定されるウロキナーゼの量については特に
制限はないが、通常、材料面積１の当り０．１〜２００
仏夕が固定化されていれば良好な抗血栓性を有する。
また、本発明においてはウロキナーゼ以外の抗凝血物質
がウロキナーゼと共に固定化されていても差支えない。
本発明による抗血栓性材料はこのように材料上に固定化
されたウロキナーゼの糖残基をガラクトースオキシダー
ゼにより修飾処理して得られる。
がウロキナーゼと共に固定化されていても差支えない。
本発明による抗血栓性材料はこのように材料上に固定化
されたウロキナーゼの糖残基をガラクトースオキシダー
ゼにより修飾処理して得られる。
修飾処理の方法はウロキナーゼが失活しない穏和な条件
であれば特に制限されないが、通常、固定化ウロキナー
ゼを緩衝液に浸潰し、ｐＨ７〜９の範囲で１０〜４０ｏ
ｏの温度で１〜１独特間程度反応させればよい。尚、酵
素の糠残基を修飾する酵素としてはガラクトースオキシ
ダーゼ以外にも８−ガラクトシダーゼやノィラミニダー
ゼ等が知られているが、ガラクトースオキシダーゼによ
る修飾と異なり、これらでウロキナーゼを修飾しても、
材料への血小板粘着を抑える効果は認められず、また、
過ヨウ素酸による酵素糖残基の修飾も知られているが、
ウロキナーゼに適用すればウロキナーゼの酵素活性が低
下することが認められるので、酵素活性を低下させるこ
となく、材料への血小板粘着を抑える効果はガラクトー
スオキシダーゼ特有のものであると考えられる。
であれば特に制限されないが、通常、固定化ウロキナー
ゼを緩衝液に浸潰し、ｐＨ７〜９の範囲で１０〜４０ｏ
ｏの温度で１〜１独特間程度反応させればよい。尚、酵
素の糠残基を修飾する酵素としてはガラクトースオキシ
ダーゼ以外にも８−ガラクトシダーゼやノィラミニダー
ゼ等が知られているが、ガラクトースオキシダーゼによ
る修飾と異なり、これらでウロキナーゼを修飾しても、
材料への血小板粘着を抑える効果は認められず、また、
過ヨウ素酸による酵素糖残基の修飾も知られているが、
ウロキナーゼに適用すればウロキナーゼの酵素活性が低
下することが認められるので、酵素活性を低下させるこ
となく、材料への血小板粘着を抑える効果はガラクトー
スオキシダーゼ特有のものであると考えられる。
本発明による抗血栓性材料は、使用目的に応じて、材料
を予め所要形状に成形しておけば、粒子状、シート状、
管状等いずれの形態でも調製できる。本発明による抗血
栓性材料は以上のように、材料に固定化したウロキナー
ゼに起因する血小板粘着を抑えつつ、ウロキナーゼの線
溶活性を維持するので、血行回路、反応器等の直接血液
と接触する人工臓器に使用すれば、血液凝固系の活性化
に伴う血栓形成を効果的に阻止することができる。
を予め所要形状に成形しておけば、粒子状、シート状、
管状等いずれの形態でも調製できる。本発明による抗血
栓性材料は以上のように、材料に固定化したウロキナー
ゼに起因する血小板粘着を抑えつつ、ウロキナーゼの線
溶活性を維持するので、血行回路、反応器等の直接血液
と接触する人工臓器に使用すれば、血液凝固系の活性化
に伴う血栓形成を効果的に阻止することができる。
以下に実施例により本発明を説明するが、本発明は実施
例により何ら限定されるものではない。実施例芳香族ポ
リアミドフィルム（約１の）を水で洗浄した後、ＩＮ塩
酸／メタノール溶液中に３０００の温度で３０分間浸漬
、縄拝し、部分加水分解して活性化した。
例により何ら限定されるものではない。実施例芳香族ポ
リアミドフィルム（約１の）を水で洗浄した後、ＩＮ塩
酸／メタノール溶液中に３０００の温度で３０分間浸漬
、縄拝し、部分加水分解して活性化した。
水で洗浄後、エチルジメチルアミノプロピルカルボジィ
ミド塩酸塩（ＥＤＣ）１０ミリモルを含有する酢酸緩衝
液（５肌Ｍ、ＰＨ４．８）２５地中に１５分間浸債、損
拝した後、ウロキナーゼ５００単位含むリン酸カリウム
緩衝液２５机を添加し、一夜蝿拝して、ウロキナーゼを
直接ポリアミド上に固定化した。このウロキナーゼ固定
化ポリアミド（以下、１一ＵＫと略称する。
ミド塩酸塩（ＥＤＣ）１０ミリモルを含有する酢酸緩衝
液（５肌Ｍ、ＰＨ４．８）２５地中に１５分間浸債、損
拝した後、ウロキナーゼ５００単位含むリン酸カリウム
緩衝液２５机を添加し、一夜蝿拝して、ウロキナーゼを
直接ポリアミド上に固定化した。このウロキナーゼ固定
化ポリアミド（以下、１一ＵＫと略称する。
）を浸潰した上記リン酸緩衝液に１０単位のガラクトー
スオキシダーゼを添加し、１６０の温度で４時間反応さ
せた後、１肌Ｍトリスー塩酸緩衝液（ＮａＣＩＯ．１４
８Ｍ）で洗浄し、かくしてガラクトースオキシダーゼ修
飾処理１−ＵＫ（以下、１−ＵＫ−ＧＯと略称する。）
を得た。この１一ＵＫ−ＧＯの表面に血小板（多血小板
血凝）を１５分間接触させ、６０の音の顕微鏡により血
小板粘着数を調べた。
スオキシダーゼを添加し、１６０の温度で４時間反応さ
せた後、１肌Ｍトリスー塩酸緩衝液（ＮａＣＩＯ．１４
８Ｍ）で洗浄し、かくしてガラクトースオキシダーゼ修
飾処理１−ＵＫ（以下、１−ＵＫ−ＧＯと略称する。）
を得た。この１一ＵＫ−ＧＯの表面に血小板（多血小板
血凝）を１５分間接触させ、６０の音の顕微鏡により血
小板粘着数を調べた。
尚、コントロールには、１−ＵＫをガラクトースオキシ
ダーゼを含有しないトリスー塩酸緩衝液に浸潰したもの
を用いた。結果を第１表に示す。次に、上で得た修飾処
理固定化ウロキナーゼとコントロールの酵素活性を合成
基質法により測定した。
ダーゼを含有しないトリスー塩酸緩衝液に浸潰したもの
を用いた。結果を第１表に示す。次に、上で得た修飾処
理固定化ウロキナーゼとコントロールの酵素活性を合成
基質法により測定した。
合成基質としてＧＩｕ松ｒｙｌ一ＧＩｙｃｙｌ−〜ｇｎ
ｙｌ−ｍｅ比ｙｌ−ｃｏｕｍａｒｙｌ−ａｍｉｄｅを用
い、これを５伍ｎＭのトリスー塩酸緩衝液（０．１ＭＮ
ａＣ１、１肌Ｍ ＣａＣ１２、ＰＨ８．０）に溶解した
（終濃度０．１ｍＭ）。この溶液２のとに固定化ウロキ
ナーゼを浸潰し、３７０の温度で３０分間反応させた後
、１り重量％酢酸水溶液３．帆【を加えて反応を停止さ
せ、蛍光分光光度計（励起波長３８仇ｍ、反射波長４６
仇ｍ）にて遊離したＡｍｉｎｏ−ｍｅｔｈｙｌ一Ｃｏｍ
ｍａｒｉｎ（ＡＭＣ）の濃度を測定した。結果を第１表
に示す。上の結果から明らかなように、１一ＵＫのガラ
ク第１表 トースオキシダーゼによる修飾によってウロキナーゼの
酵素活性を低下させることなく、材料への血小板粘着を
大幅に減少させることができる。
ｙｌ−ｍｅ比ｙｌ−ｃｏｕｍａｒｙｌ−ａｍｉｄｅを用
い、これを５伍ｎＭのトリスー塩酸緩衝液（０．１ＭＮ
ａＣ１、１肌Ｍ ＣａＣ１２、ＰＨ８．０）に溶解した
（終濃度０．１ｍＭ）。この溶液２のとに固定化ウロキ
ナーゼを浸潰し、３７０の温度で３０分間反応させた後
、１り重量％酢酸水溶液３．帆【を加えて反応を停止さ
せ、蛍光分光光度計（励起波長３８仇ｍ、反射波長４６
仇ｍ）にて遊離したＡｍｉｎｏ−ｍｅｔｈｙｌ一Ｃｏｍ
ｍａｒｉｎ（ＡＭＣ）の濃度を測定した。結果を第１表
に示す。上の結果から明らかなように、１一ＵＫのガラ
ク第１表 トースオキシダーゼによる修飾によってウロキナーゼの
酵素活性を低下させることなく、材料への血小板粘着を
大幅に減少させることができる。
比較例実施例１と同様にして得た固定化ゥロキナーゼを
０．１Ｎ過ヨウ素酸水溶液に室温で２時間浸潰した 後
、１仇ｈＭ ト リ ス ー 塩酸緩衝液（ＮａＣＩＯ
．１４９Ｍ、ｐＨ７．４）で洗浄して、過ヨウ素酸を除
いた。
０．１Ｎ過ヨウ素酸水溶液に室温で２時間浸潰した 後
、１仇ｈＭ ト リ ス ー 塩酸緩衝液（ＮａＣＩＯ
．１４９Ｍ、ｐＨ７．４）で洗浄して、過ヨウ素酸を除
いた。
次に実施例と同機にして材料への血小板粘着数と酵素活
性を調べた。また、上記固定化ウロキナーゼのガラクト
ースオキシダーゼ処理前後の血小板粘着数と酵素活性を
併せて第２表に示す。上の結果から固定化ゥロキナーゼ
を過ヨウ素酸第２表逆Ｂ※過ヨウ素酸処理品 処理することにより、材料への血小板粘着数は減少する
が、酵素活性が完全に失なわれることが明らかである。
性を調べた。また、上記固定化ウロキナーゼのガラクト
ースオキシダーゼ処理前後の血小板粘着数と酵素活性を
併せて第２表に示す。上の結果から固定化ゥロキナーゼ
を過ヨウ素酸第２表逆Ｂ※過ヨウ素酸処理品 処理することにより、材料への血小板粘着数は減少する
が、酵素活性が完全に失なわれることが明らかである。
Claims (1)
- １ 担体に固定化されたウロキナーゼかガラクトースオ
キシダーゼにより修飾処理されていることを特徴とする
抗血栓性材料。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56213388A JPS6023625B2 (ja) | 1981-12-30 | 1981-12-30 | 抗血栓性材料 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56213388A JPS6023625B2 (ja) | 1981-12-30 | 1981-12-30 | 抗血栓性材料 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58118762A JPS58118762A (ja) | 1983-07-14 |
| JPS6023625B2 true JPS6023625B2 (ja) | 1985-06-08 |
Family
ID=16638369
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP56213388A Expired JPS6023625B2 (ja) | 1981-12-30 | 1981-12-30 | 抗血栓性材料 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6023625B2 (ja) |
-
1981
- 1981-12-30 JP JP56213388A patent/JPS6023625B2/ja not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS58118762A (ja) | 1983-07-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4800016A (en) | Extracorporeal blood de-heparinization system | |
| US4004979A (en) | Preparation of active proteins cross-linked to inactive proteins | |
| US4394373A (en) | Method of achieving hemostasis | |
| US4213962A (en) | Artificial medical material with anticoagulative activity | |
| EP0309473B1 (en) | An article adapted for contact with blood, a process for the preparation thereof as well as uses thereof | |
| JP2000516828A (ja) | 改善されたヘパリン化生体物質の作製方法 | |
| Beddows et al. | The immobilization of enzymes onto hydrolyzed polyethylene‐g‐co‐2‐HEMA | |
| JPS6023625B2 (ja) | 抗血栓性材料 | |
| US4092219A (en) | Preparation of enzyme-membrane complexes | |
| JPS6341541A (ja) | 表面にキトサン成分を有する高分子成形物及びその製造方法 | |
| JPS647788B2 (ja) | ||
| JPH04285561A (ja) | 医療用材料の滅菌方法および医療用器具の製造方法 | |
| EP0352330A1 (en) | Fibroin moldings, process for their preparation, heparin-immobilizing carrier, and process for its preparation | |
| JPS6040862B2 (ja) | 抗血栓性材料 | |
| JPS6158196B2 (ja) | ||
| NZ198369A (en) | Disinfecting and washing immobilised lactase | |
| JP2787507B2 (ja) | 生理活性物質を固定化した担持物とその製造方法 | |
| JPS6115900A (ja) | 変性セルロ−ス系多孔質膜 | |
| JP2510109B2 (ja) | 酵素固定用繊維状担体の製法 | |
| JPH0757760B2 (ja) | 生体由来物質の固定化方法 | |
| JPS6182760A (ja) | 抗血栓性医用材料 | |
| JPS60103964A (ja) | 抗血栓性材料 | |
| JPH0759842A (ja) | サブチリシンを固定化した医療材料 | |
| JPH047377B2 (ja) | ||
| EP0480843A2 (en) | Antithrombogenic medical material and medical device |