MC1316A1

MC1316A1 - Ion nouveaux derives de flavone et procede pour leur preparat0

Info

Publication number: MC1316A1
Application number: MC801442A
Authority: MC
Inventors: Shirai Haruyoshi; Ishitsuka Hideo; Suhara Yasuji; Umeda Isao
Original assignee: Hoffmann La Roche
Priority date: 1979-04-10
Filing date: 1980-04-03
Publication date: 1981-03-10
Also published as: PT71078A; FI801050A7; AU538214B2; DE3069488D1; IL59770A; EP0019081B1; EP0019081A1; IE800711L; CU35257A; JPH01117879A; IE49670B1; AU5715780A; US4352792A; NZ193316A; NO801024L; DK152980A; IL59770A0; PT71078B; ZW8180A1; PH17987A

Description

-1-

10

La présente invention concerne de nouveaux dérivés de 3-alcoxyflavone, un procédé pour leur préparation et des compositions pharmaceutiques contenant des dérivés de 3-alcoxyflavone qui présentent une activité antivirale.

Plus particulièrement, la présente invention concerne des agents antivirus qui contiennent, comme constituant actif, un dérivé de 3-alcoxyflavone représenté par la formule générale suivante

15

dans laquelle H est un groupe hydroxy, alcoxy inférieur, alcanoyloxy inférieur, alcoxycarbonyloxy inféra

20 rieur ou nicotinoyloxy ; R est un groupe hydroxy ou alcoxy inférieur; R^ est de l'hydrogène ou un groupe alcoxy inférieur; est de l'hydrogène ou un groupe hydroxy ou alcoxy inférieur; R^ est un groupe hydroxy, alcoxy inférieur, alcanoyloxy inférieur, aminoacyloxy, 25 glycosyloxy, un radical d'acide dicarboxylique hydroxy-substitué, un groupe amino, nicotinoyloxy ou alcoxycarbonyloxy inférieur et R^ est un groupe alcoxy inférieur.

La présente invention concerne aussi des composés nouveaux de la formule générale

R^°

10

dans laquelle E est un groupe hydroxy, alcanoyloxy inférieur, alcoxycarbonyloxy inférieur ou nicotinoyl-PO

oxy; E est un groupe hydroxy ou alcoxy inférieur; E^ est de l'hydrogène ou un groupe alcoxy inférieur;

est un groupe hydroxy, alcanoyloxy inférieur, aminoacyloxy, glycosyloxy, un radical d'acide dicarboxy-lique hydroxy-substitué, un groupe amino, nicotinoyl-oxy ou alcoxycarbonyloxy inférieur et E est un groupe alcoxy inférieur, avec les conditions que quand R est un groupe acétoxy, E^° ne peut pas être un groupe acétoxy, et quand E^0 est un groupe hydroxy, E^° ne peut pas être un groupe méthoxy,

et un procédé pour la préparation de ces composés.

Un groupe alcoxy inférieur contient de 1 à 4 atomes de carbone; on préfère les groupes méthoxy et éthoxy. Un groupe alcanoyloxy inférieur contient de 2 à 7 atomes de carbone, comme les groupes acétoxy, propionyloxy, butyryloxy, isobutyryloxy ou pivaloyloxy. Un groupe alcoxycarbonyloxy inférieur contient jusqu'à 7 atomes de carbone; on préfère le groupe éthoxycarbo-nyloxy. Un groupe aminoacyloxy peut être dérivé d'un amino-acide aliphatique. Des groupes aminoacyloxy spécialement préférés sont les groupes L-lysyloxy, L-ala-nyloxy, Ii-glutaminyloxy et a-glutamyloxy. Un groupe glycosyloxy peut être dérivé d'un monosaccharide. Des groupes glycosyloxy spécialement préférés sont les

groupes glucosyloxy, mannosyloxy et galactosyloxy. Des exemples de résidus d'acides dicarboxyliques hydroxylés sont les résidus de l'acide 1-hydroxy-1,2-éthanedicar-boxylique et de l'acide 1,2-dihydroxy-1,2-éthanedicar-boxylique.

Des exemples représentatifs des composés représentés par la formule I sont les suivants :

(A) Composés nouveaux

4 ' -ac é t oxy-5-iiydroxy-3,3 ' , 7 -trimé thoxyf lavo ne ; 5-hydro xy-4 ' -(L-lysyloxy) -3,3', 7-triméthoxyflavone ; 4' -(p-D-glucopyranosyloxy)-5-hydroxy-3 »3' ,8-tri-méthoxyflavone;

41 -(l-alanyloxy) -5-hydroxy-3 » 3 ',7-triméthoxyflavone ; 4'-(L-glutaminyloxy)-5-tiydroxy-3,3 ' ,7-triméthoxy-flavone;

4 ' -(l-a-glutamyloxy) -5-hydroxy-3,3 ', 7-triméthoxy-flavone;

41 -(3-carboxy-2,3-dihydroxypropionyloxy ) -5-hydroxy-3»3' ,7-triméthoxyflavone;

4'-amino-5 »7-cLiliyâ'roxy-3-iiiéth.oxyf lavone ; 4' -amino-5-hydroxy-3,7-â.i^é thoxyf lavone ; 3*3',7-triméthoxy-4',5-bis-(nicotinoyloxy)-flavone; 4' ^-bis-Céthoxycarbonyloxy)^^1 t 7-trimé thoxyf lavone ;

5-hydroxy-3 »31,7-triméthoxy-4 ' -(pivaloyloxy) -f lavone;

5-(isobutyryloxy)-3,3',7-triméthoxy-4'-(pivaloyl-oxy)-flavone;

3»3' ,7-tiriméthoxy-4',5-bis-(propionyloxy)-flavone; 3-éthoxy-4',5-dihydroxy-3',7-diméthoxyflavone; 41,5-dihydroxy-3-isopropoxy-3.' , 7 -dimé thoxyf lavone ;

(B) Composés connus

4',5-dihydroxy~3,3',7-trimé thoxyflavone; 4 '-hydroxy-3,3 ' , 5 ^-"tétramé thoxyf lavone; 5,7-dihydroxy-3,4'-dimé thoxyflavone;

■?

ti'

10

15

-4-

3*,5-dihydroxy-3,4',7-triméthoxyflavone;

4',5-dihydroxy-3,7-diméthoxyf lavone;

5-hydroxy-5,4',7-triméthoxyflavone;

4',5-dihydroxy-2f,3,7-triméthoxyflavone; 4* ,5-diacétoxy-3,3' » 7-"t^inié thoxyf lavone.

Selon le procédé fourni par la présente invention, les nouveaux dérivés de 3-alcoxyflavone représentés par la formule II ci-dessus peuvent être préparés

(a) en acylant le groupe hydroxy dans la position 4' ou les groupes hydroxy dans les positions 1 et 4' d'un composé représenté par la formule générale

III

20

OH

21 >• 41

dans laquelle R est un groupe alcoxy inférieur; R

est de l'hydrogène ou un groupe alcoxy inférieur et

R6"1 est. un groupe alcoxy inférieur

25 par traitement avec un dérivé réactif d'un acide alca-

noi'que inférieur, d'un amino-acide aliphatique, d'un acide dicarboxylique hydroxylé ou d'acide nicotinique,

ou

(b) en glycosylant le groupe hydroxy dans la 30 position 4* d'un composé représenté par la formule générale III ci-dessus par traitement avec un dérivé réactif d'un monosaccharide, ou

(c) en faisant réagir une 2',4',6'-trihydroxy-2-alcoxy-acétophénone avec un anhydride bis-(4-acétami-

35 dobenzoi'que) et un sel de métal alcalin d'acide 4-

-5-

acétamidobenzoique et en traitant le composé résultant avec un hydroxyde de métal alcalin de manière à obtenir une 4'-amino-5,7-dihydroxy-3-alcoxyflavone et, si nécessaire, en traitant ce composé avec un diazoalcane 5 de façon à former un dérivé 7-alcoxylé.

L'acylation selon le mode de mise en oeuvre (a) du présent procédé, la glycosylation selon le mode de mise en oeuvre (b) du présent procédé et la réaction selon le mode de mise en oeuvre (c) du présent procédé 10 peuvent être effectuées d'une manière en elle-même connue et comme illustré par les exemples ci-après.

Les dérivés de 3-alcoxyflavone de formule I et de formule II fournis par la présente invention font montre d'une activité antivirale et spécialement inhi-15 bent la réplication de rhinovirus et d'entérovirus humains tels que les virus ECHO, les virus Coxsackie, les poliovirus, etc., dans des cultures de cellules embryonnaires de poumon humain ou de cellules HeLa à des doses de 0,05 à 10^îg/ml. 20 Les résultats d'essais d'études d'activité

antivirale sont les suivants 1# Activité antivirale in vitro

1) Inhibition de l'effet cytopathogène viral.

y 4x

Une suspension de cellules HeLa (6 x 10 J a 25 été mélangée avec des rhinovirus HGP (3 x 10^ unités formatrices de plaque, PFU) ou des virus Coxsackie B1 (3 x 105 PPU) et appliquée dans une plaque pour microessais contenant les composés à essayer dilués en série. On a cultivé ensuite les cellules avec le milieu 30 essentiel minimal d'Eagle contenant 2 % de sérum de veau, 1 °/o de bouillon au phosphate tryptosé, 100yng/cm^ de streptomycine et 20 unités/cm^ de pénicilline G. L'effet cytopathogène viral a été observé au microscope après culture pendant 1 jour à 37°C pour l'infection 35 par virus Coxsackie et après culture pendant 2 jours à

-6-

33° C pour l'infection par rhinovirus.

Les résultats sont présentés dans le Tableau 1. L'activité antivirale des composés essayés est exprimée par la concentration inhibant de 50 % l'effet 5 cytopathogène viral par rapport à la culture témoin

(IC5cP •

Tableau 1

^ ■ —- A M A

IC50 C/ig/cm3;

ooinpose —

Rhinovirus HGP

virus Coxsackie B1

4•,5-dihydroxy-3,3 ', 7-

trimé thoxyf lavone

0,1

0,1-0,2

4•-hydroxy-3,3',5 >7-

té tramé thoxyf1avone

2-7

6-7

5,7-dihydroxy-3,4 ' -

dimé thoxyf1avone

0,5

>4

3',5-dihydroxy-3,4 ',7-

trimé thoxyflavone

3

3-10

4',5-dihydroxy-3,7-

diméthoxyflàvone

0,1

5-hydroxy-3,4',7-

triméthoxyf lavone

1

>8

4',5-dihydroxy-2',3,7-

triméthoxyflavone

0,3

1-3

4'-acétoxy-5-hydroxy-

3,3',7-triméthoxyflavone

0,5

0,25-0,5

5-hydroxy-4'-(L-lysyloxy-

3,31,7-triméthoxyflavone

0,25

4 ' -O-D-glucopyranosyloxy) -

5-hydr oxy-3,3' f7-tri

mé thoxyflavone

0,25

0,25-0,5

4'-(L-alanyloxy)-5-hydroxy-

3,3', 7-trimé thoxyflavone

0,5

0,25-0,5

-7-

Tableau 1 (Suite)

Composé

IC50 ^

Rhinovirus HGP

virus Coxsackie B1

4'-(L-glutaminyloxy)-5-hydroxy-3,3',7-trimé thoxyflavone

0,25-0,5

. 4'-(L-a-glutamyloxy)-5-hydroxy-3,3',7-triméthoxyflavone

0,25

0,25-0,5

4 ' - ( 3 -c arb oxy-2,3 -dihydroxy-propionyloxy;-5-hydroxy-3,3',7-triméthoxyf lavone

0,1-0,2

4'-amino-5 »7-dihydroxy-3-méthoxyflavone

1-3

3-10

4'-amino-5-hydroxy-3 » 7-

diméthoxyflavone

3

10 - 30

3,3^,7-triméthoxy-4, ^-his-

^nicotinoyloxy) -flavone

0,3- 1

4',5-diacé t oxy-3 » 31 » 7-tri-méthoxyflavone

0,1-0,2

41,5-"bis-(éthoxyearbonyloxy)-3,3*,7-trimé thoxyf1avone

0,3- 1

0,3-1

5-hydroxy-3,3',7-trimé thoxy-4'-(pivaloyloxy)-flavone

0,3

0,3-1

5-(isobutyryloxy)-3,3l,7-triméthoxy-4'-(pivaloyloxy)-flavone

0,3

0,3- 1

3,3'»7-trimé'thoxy-4*,5-bis-(propionyloxy)-flavone

0,1-0,2

3-éthoxy-4',5-dihydroxy-3',7-dimé thoxyflavone

0,05-0,1

4',5-dihydroxy-3~isopropoxy-3',7-diméthoxyflavone

0,05-0,1

-8-

De plus, les spectres d'activité in vitro de la 4',5-dihydroxy-3,3',7-triméthoxyflavone (A) et de la 4',5-dihydroxy-3,7-diméthoxyflavone (B) sont présentés dans le Tableau 2.

5 Tableau 2

Souche de virus

Concentration inhibitrice minimale (ug/cm3)

(A)

(B)

rhinovirus type

1A

0,03

2

0,1

3

0,1

0,3

4

1,0

0,3 - 1,0

9

0,1

0,3

13

0,3 - 1,0

14

0,1

0,3

16

0,3

0,3 - 1,0

17

0,3

0,1

21

0,3

26

0,3

30

0,03 - 0,1

0,1

32

0,1

0,3

34

0,3

36

0,3

39

0,1

0,3

44

0,05 - 0,5

0,5

47

0,3

50

0,3

53

0,1

0,3

55

0,3

0,1 - 0,3

Virus Coxsackie

A21

0,1 - 0,3

-

B 1

0

1

o ru

0,1

Virus ECHO type

9

0,1 - 0,3

-

11

0

1

o

-

12

0,1 - 0,3

19

0,1 - 0,3

- \

-9-

Tableau 2 (Suite)

Souche de virus

Concentration inhibitrice minimale (yug/cm^)

(A) (B)

poliovirus type 1

0,1 - 0,3

2) Inhibition de la réplication virale 10 On a déterminé les effets de la 4-' , 5-dihydroxy-

3,3',7-triméthoxyflavone sur la réplication de rhinovirus HGP, 1A et de virus Coxsackie B1 dans des cellules HeLa, Des couches monocellulaires de ces cellules (4 x 105) ont été infectées de chaque virus (4 x 10^ 15 PPïï). Ensuite, ces cellules ont été lavées avec du milieu essentiel minimal d'Eagle et ensuite cultivées avec ce milieu contenant 2 % de sérum de veau, 1 % de bouillon phosphaté tryptosé, 100 ^ug/cm^ de sulfate de streptomycine, 20 unités/cm^ de pénicilline G et de la 20 4-',5-dihydroxy-3,3'»7-triméthoxyflavone à diverses doses. Les productions totales de rhinovirus et de virus Coxsackie par réplication dans les cultures ont été déterminées 2 jours et 1 jour après l'infection, respectivement.

25 Les résultats sont représentés sur la figure

1, montrant que la 4',5-dihydroxy-3,31 »7-triméthoxyflavone réduit très considérablement la réplication virale à des concentrations de 0,5 à 2^g/cnr5, doses auxquelles le développement des cellules HeLa n'est

30 pas affecté.

2. Activité antivirale in vivo

1) Activité contre les virus Coxsackie Les composés selon la présente invention indiqués dans le Tableau 3 ont été essayés en ce qui 35 concerne leurs activités antivirales contre l'infec-

V)

-10-

tion mortelle de virus Coxsackie B1 chez la souris. Les souris ddy pesant 15 g ont été infectées par voie intra-péritonéale d'environ 10 fois la dose LD^q de virus Coxsackie B1. Les souris infectées ont été trai-5 tées ensuite 4 ou 9 fois, 2, 6, 18 et 30 heures ou

0, 2, 5, 18, 24, 42, 48, 66 et 72 heures après l'infection par les composés administrés par voie intrapérito-néale, intraveineuse ou orale, et on a noté le nombre d'animaux ayant survécu jusqu'à 21 jours.

10 Les résultats sont présentés dans le Tableau

3. Des souris témoin traitées avec une solution saline tamponnée au phosphate ou avec de l'eau sont mortes 3 à 5 jours après l'infection.

Tableau 5

Composé

■

Dose

Voie

Survivants (°/o)

41,5-dihydr oxy-3, 3 ' » 7-triméthoxy-

20 mgAg i.p.

20

flavone

10 " x 9

»

10

40 11 x 9

p.o.

30

20 " x 9

ti

10

5-hydroxy-4•-(L-lysyloxy)-

10 mg/kg x .9

i i.v.

54

3,3',7-triméthoxyflavone

4'-(L-alanyloxy)-5-hydroxy-

10 mg/kg x 9

i.v.

42

3,3',7-triméthoxyflavone

4'-(L-glutaminyloxy)-5-hydroxy-

10 mgAg x 9

i.v.

54

3,3', 7-"briroé thoxyf lavone

3,3',7-triméthoxy-4',5-bis

20 mgAg x 9

p.o.

30

(nicotinoyloxy)flavone

10 " x 9

H

40

Tableau 3 (Suite)

Composé

Dose

Voie

Survivants (%)

4' ,5-cLiacétoxy-3,3 ', 7-trimé thoxy

20 mg/kg x 9

i.p.

67

flavone

10 11 x 9

H

54

80 " x 42^

P.o.

60

40 11 x 4

H

50

40 " x 9

n

50

20 " x 9

H

20

4', 5 -bi s ( é t hoxy c ar b onyl oxy ) -

20 mg/kg x 9

p.o.

30

3,3* >7-'triraié thoxyf lavone

10 11 x 9

Il

30

5-(i s obutyryloxy)-3,31,7-trimé thoxy-

20 mg/kg x 9

p.o.

40

4'-(pivaloyloxy)-flavone

10 " x 9

Il

30

Aucun

0

-13-

Le Tableau 4 suivant indique l'activité anti-virale de la 4',5-diacétoxy-3)3',7-triméthoxyflavone contre l'infection par diverses doses de virus Coxsackie B1 chez lgéouris. Le composé mis en suspension 5 dans une solution à 0,5 % de carboxyméthylcellulose a été administré par voie orale 0, 2, 5, 18, 24, 42, 48, 66 et 72 heures après infection mortelle de virus Coxsackie B1 (par voie intrapéritonéale). On a enregistré le nombre de souris survivantes au jour 21.

10 Tableau 4

Survivants/total

15

Administrati on du composé

Infection Coxsackie

2,5x 10x de virus B1 (LD50)

40x

160x

40 mgAg x 9

4/7

3/7

2/7

20 " x 9

3/7

2/7

1/7

10 w x 9

2/7

1/7

0/7

20

0

0/7

2) Activité contre le virus grippal On a essayé la 4*,5-diacétoxy-3,3',7-triméthoxyf lavone en ce qui concerne son activité contre le 25 virus de la grippe A2/Adachi chez la souris. Les souris ddy pesant 12 g ont été infectées par voie intranasale d'environ 5 fois la dose LD^0 du virus grippal. On a administré le composé aux souris 9 fois par voie intrapéritonéale et on a noté le nombre de survivants à 30 21 jours. W

-14-

Tableau 5

10

15

20

25

30

Traitement

Survivants

(%)

Solution saline tamponnée au

phosphate

0/8

(0)

4' ^-diacétoxy-J^1

,7-trimé thoxy-

flavone

20 mgAg x 9,*

i.p.

2/7

(29)

40 mgAg x 9»

i.p.

3/8

(38)

amantadine

20 mg/kg x 9

i.p.

0/6

(0)

40 mg/kg x 9,

i.p.

2/7

(29)

* administrée 0,5 heure avant et 4, 8, 12, 24, 28, 32, 48 et 56 heures après l'infection.

Comme montré dans le Tableau 5» l'activité antivirale du composé est au moins aussi forte que celle de 1 ' amantadine, un agent classique contre le virus grippal.

En plus de ce qui précède, les composés fournis par la présente invention sont bien tolérés et ne présentent aucune cytotoxicité à des concentrations 10 à 100 fois supérieures à leurs doses actives contre les infections virales. Quand ils sont administrés oralement à des souris, ces composés ne présentent aucun symptôme toxique à une dose de 5 g/kg. Le Tableau 6 suivant donne les résultats concernant la toxicité aiguë chez la souris.

-15-

Tableau 6

Composé

1 )

LD^0 (mg/kg) '

5

i

P

• y•

p.o.5<)

4',5-dihydroxy-3,3',7-trimé thoxyflavone

>1

000

>5 000

10

5 -hydroxy-41 - (L-lysyloxy ) -3,3',7-trimé thoxyflavone

1

000

>5 ooo

4'-(L-alanyloxy)-5-hydroxy-3,3',7-triméthoxyflavone

>1

000

>5 000

15

4 *-.(L-glutaminyloxy)-5-hydroxy-3,31,7-t^imêthoxyflavone

>1

000

>5 000

1!

4*,5-diacétoxy-3,3',7-triméthoxyf lavone

>1

000

>5 000

1) On a administré aux souris ddy pesant 15 - 20 g 20 une seule dose du composé. On a enregistré le nombre de souris survivantes le jour 21.

2) Les composés ont été dissous dans du diméthyl-sulfoxyde.

3) Les composés ont été mis en suspension dans

25 une solution à 0,5 % de carboxyméthylcellulose et on a effectué un traitement aux ultrasons.

Comme mentionné ci-dessus, les composés de formule I et de formule II peuvent être utilisés comme médicaments contre des maladies virales causées par des 50 rhinovirus, des entérovirus, des virus grippaux, etc., sous la forme de préparations pharmaceutiques.

Les préparations pharmaceutiques contiennent au moins un des composés antiviraux en association avec un véhicule pharmaceutique compatible. Ce véhicule

-16-

peut être une matière inerte organique ou inorganique utilisable comme véhicule pour administration intestinale, percutanée ou parentérale, comme par exemple de l'eau, de la gélatine, de la gomme arabique, du lac-5 tose, de l'amidon, du stéarate de magnésium, du talc, des huiles végétales, des polyalcoylène-glycols, de la vaseline, etc. De plus, les préparations pharmaceutiques peuvent contenir d'autres agents pharmaceutique-ment actifs tels que des fébrifuges, des calmants, des 10 anti-inflammatoires, des anti-histaminiques, des inducteurs d'interféron, etc. Les préparations pharmaceutiques peuvent être présentées dans une forme solide pour administration orale, comme sous la forme de comprimés, de capsules, de pilules, de poudres, de gra-15 nules, etc.; une forme liquide pour administration orale, comme des solutions, des sirops, des suspensions, des élixirs, etc.; des préparations pour administration parentérale telles que des solutions, suspensions ou émulsions stériles; et des préparations pour admi-20 nistration topique, telles que des solutions, des suspensions, des pommades, des poudres micronisées, des aérosols, etc. Les préparations pharmaceutiques peuvent être stérilisées et/ou peuvent contenir des adjuvants tels que des conservateurs, des stabilisants, 25 des agents mouillants, des émulsionnants, des sels pour faire varier la pression osmotique ou des tampons.

Les préparations pharmaceutiques peuvent être administrées de manière que la concentration de l'ingrédient actif fournie par la présente invention soit 30 supérieure à la concentration inhibitrice minimale pour la réplication virale particulière que l'on traite.

Les doses pour traitement dépendent de la voie d'administration, de l'âge, du poids et de l'état du patient et de la maladie particulière à traiter. 35 Des doses typiques pour adultes sont, par exemple, de

-17-

100 à 1 000 mg, 3 à 6 fois par jour pour administra-

p tion orale ou parentérale et de 0,1 à 100^ug/cm , 3 à 6 fois par jour pour administration topique.

Les exemples suivants illustrent le procédé selon la présente invention.

Exemple 1

Un mélange de 0,67 S de 2',61-dihydroxy-2',4'-diméthoxy-acétophénone, de 3,5 g d'anhydride bis-(4-(benzyloxy)-3-méthoxy-benzoîque) et de 1 g de 4-(ben-zyloxy)-3-méthoxybenzoate de sodium est chauffé à 180-185°C sous pression réduite pendant 3 heures* Après refroidissement, on ajoute 12 cet de solution a 10 % d'hydroxyde de potassium dans l'éthanol et le mélange est chauffé au reflux sous azote pendant 30 minutes. Au mélange refroidi, on ajoute 20 cm^ d'acide chlorhy-drique 1N et 100 cm^ de chloroforme, et ensuite on secoue, La phase organique est séparée et concentrée sous pression réduite. On chromâtographie le résidu sur gel de silice avec du chloroforme. Après recristallisation à partir d'acétate d1éthyle/hexane, on obtient 0,86 g (rendement 60 %) de 4,-(benzyloxy)-5-hydroxy-3»3'»7-triméthoxyflavone sous la forme de cristaux jaunes : point de fusion 156-157°C*

Une solution de 0,86 g de 4'-(benzyloxy)-5-hydroxy-3,3',7-triméthoxyflavone dans 30 cm^ d'éthanol est hydrogénée en présence de 30 mg de catalyseur à 5 % de palladium sur charbon de bois à la température ambiante sous la pression atmosphérique. Après 1 heure, le catalyseur est éliminé par filtration et le filtrat est évaporé sous pression réduite. Le résidu est recristallisé à partir d'acétate d'éthyle/hexane. On obtient 0,58 g (rendement 90 %) de 4',5-dihydroxy-3»3',7-triméthoxyflavone sous Informe de cristaux jaunes : point de fusion 171-173°C.

-18-

Exemple 2

D'une manière analogue à celle décrite dans l'exemple 1, à partir de 2'-hydroxy-2,4',6'-trimétiioxy-acétophénone, on obtient de la 4'-hydroxy-3,3',5>7-5 tétraméthoxyflavone : point de fusion 221-223°0 (rendement ï 24 °/o) •

Exemple 3

Au lieu des matières de départ utilisées dans l'exemple 1, on utilise de la 21,4',6-trihydroxy-2-10 méthoxyacétophénone, de l'anhydride bis-(4-méthoxy-benzoîque) et du 4-méthoxybenzoate de sodium et on conduit le traitement d'une manière similaire à celle de l'exemple 1. On obtient de la 5,7-dibydroxy-3,4'-diméthoxyflavone : point de fusion - 238-239°C (Rende-15 ment : 40 %) +

Exemple 4

D'une manière analogue à celle décrite dans l'exemple 1, à ceci près qu'on utilise de l'anhydride bis-(3-benzyloxy)-4-méthoxybenzo£que) et du 3-(benzyl-20 oxy)-4-méthoxybenzoate de sodium, on obtient de la

3' ,5-dihydr oxy-3,4' ,7-trimé thoxyf lavone : point de fusion 171°0 (Rendement: 33 %).

Exemple 5

D'une manière analogue à celle décrite dans 25 l'exemple 1, à ceci près qu'on utilise de l'anhydride bis-(4-benzyloxybenzoi'que) et du 4-benzyloxybenzoate de sodium, on obtient de la 4' ,5-dihydroxy-3,7-dimétho-xyflavone : point de fusion 252-253°C (Rendement : 23%). Exemple 6

30 D'une manière analogue à celle décrite dans l'exemple 1, à ceci près qu'on utilise de l'anhydride bis-(4-méthoxybenzoïque) et du 4-méthoxybenzoate de potassium, on obtient de la 5-hydroxy-3,4',7-triméthoxyflavone : point de fusion 143-145°C (Rendement 37 %).

Exemple 7

D'une manière analogue à celle décrite dans l'exemple 1, à ceci près qu'on utilise de l'anhydride bis-(4- (benzyloxy)-2-méthoxybenzoïque) et du 4-(ben-zyloxy)-2-méthoxybenzoate de sodium, on obtient de la 4',5-dihydroxy-2',3,7-triméthoxyflavone : point de fusion 191-192°C (Rendement 50 %).

Exemple 8

Un mélange de 250 mg de 4',5-dihydroxy-3,3',7-triméthoxyf lavone, de 60 mg d'acétate de sodium et de 70 mg d'anhydride acétique est chauffé à 100°C pendant 2 heures. Le mélange de réaction est évaporé sous pression réduite et le résidu est traité par extraction avec 30 cm^ de chloroforme. L'élimination du solvant de l'extrait et la recristallisation ultérieure du résidu à partir de méthanol donnent 250 mg (rendement 90 °/o) de 4 '-acétoxy-5-hydroxy-3 »3 *> 7-trimé thoxyf lavone sous la forme de cristaux jaunes : point de fusion 168-169°C.

Exemple 9

Une solution contenant 460 mg de 4',5-dihydr oxy-3,3',7-triméthoxyflavone et 600 mg de N,N'-di-(benzyloxycarbonyl)-L-lysine dans 5 cm^ de pyridine est refroidie entre -10 et -5°C, On ajoute à la solu-tion 0,21 cnr de chlorure de thionyle, tout en agitant pendant 5 minutes, et on abandonne le mélange à -5°C pendant 3 heures. On y ajoute 30 cm^ d'eau et le mélange est traité par extraction avec 50 cm^ de chloroforme. L'extrait est séché sur du sulfate de sodium anhydre et ensuite concentré sous pression réduite. Le concentré est appliqué sur une colonne de gel de silice et ensuite la colonne eist éluée avec du chloroforme pour donner 900 mg d'ester de N,N'-di-(benzyloxy-carbonyl)-L-lysyle de 4',5-dihydroxy-3*3',7-triméthoxyflavone . CL

-20-

On dissout 920 mg de cet ester dans 3 cm^ d'acide acétique contenant 25 % d'acide bromhydrique. Après 45 minutes à la température'ambiante, le mélange est lyophilisé pour donner 780 mg de 5-hydro:xy-4 ' -(L-5 lysyloxy)-3,3',7-triméthoxyflavone sous la forme d'une poudre jaune pâle : point de fusion 164°G (déc). Exemple 10

A une solution glacée contenant 250 mg de

7.

4' ,5-dihydroxy-3»3' »7-triméthoxyflavone dans 10 cnr 10 d'acétone, on ajoute alternativement une solution de

400 mg de bromure de 3,3,4,6-tétra-O-aeétyl-a-D-gluco-pyranosyle dans 10 cm? d'acétone et 5 cm^ de solution aqueuse à 0,8 % d'hydroxyde de sodium en 30 minutes, en agitant. Après abandon du mélange réactionnel à la 15 température ambiante pendant 3 heures, on y ajoute

20 cm^ de solution aqueuse à 0,2 % d'hydroxyde de sodium. On continue l'agitation à la température ambiante pendant 3 heures, période durant laquelle une cristallisation se produit. Les cristaux sont recueillis 20 par filtration et recristallisés à partir d'éthanol pour donner 390 mg (rendement 80 %) de 4'-(p-D-gluco-pyranosyloxy)-5-hydroxy-3,3',7-triméthoxyflavone sous la-forme d'aiguilles jaune pâle : point de fusion 203-204°0.

25 Exemple 11

Une solution contenant 500 mg de 4',5-dihy-droxy-3,3',7-triméthoxyflavone et 360 mg de N-(benzyl-oxycarbonyl)-L-alanine dans 5 cm^ de pyridine est refroidie entre -10°C et -5°C. On ajoute à la solution 30 0,38 g de chlorure de thionyle en 15 minutes, tout en agitant, et le mélange réactionnel est abandonné à -5°G pendant 3 heures. On ajoute 30 cnr* d'eau et le mélange est traité par extraction avec 50 cm^ de chloroforme. L'extrait est séché sur du sulfate de sodium 35 anhydre et ensuite concentré sous pression réduite.

-21-

Le concentré est appliqué sur une colonne de gel de silice et la colonne est éluée avec du chloroforme pour donner 540 mg d'ester de N-(benzyloxycarbonyl)-L-alanyle de 4',5-dihydroxy-3,3',7-triméthoxyflavone.

5 On dissout ensuite 640 mg de cet ester dans

3 cm^ d'acide acétique contenant 25 % d'acide bromhy-drique. La solution est abandonnée à la température ambiante pendant 45 minutes et ensuite lyophilisée pour donner une poudre jaune pâle qui est ensuite lavée avec 10 trois portions de 10 cnr* de dichlorométhane. La matière insoluble est séchée sur de l'anhydride phosphorique sous pression réduite pour donner 370 mg (rendement 64 c/o) de bromhydrate de 4'-(L-alanyloxy)-5-hydroxy-3»3*»7-triméthoxyflavone : point de fusion 201-203°C. 15 Exemple 12

Une solution contenant 500 mg de 4',5-dihydro-xy-3>3' ,7-triméthoxyf lavone et 450 mg de N-(benzyloxy-carbonyl)-L-glutamine dans 5 cm^ de pyridine est refroidie entre -10 et -5°C. On ajoute à la solution 20 200 mg de chlorure de thionyle en 15 minutes, tout en agitant, et le mélange réactionnel est abandonné à -5°0 pendant 3 heures. On ajoute 30 cm^ d'eau et le mélange est traité par extraction avec 50 cm^ de chloroforme. L'extrait est séché sur du sulfate de sodium anhydre 25 ©t ensuite concentré sous pression réduite. Le concentré est appliqué sur une colonne de gel de silice et la colonne est éluée avec un solvant mixte chloroforme/ méthanol (9*1» v/v) pour donner 830 mg d'ester de N-(benzyloxycarbonyl)-L-glutaminyle de 4',5-dihydroxy-30 3 »3',7-triméthoxyflavone.

On dissout 830 mg de cet ester dans 3 cm^ d'acide acétique contenant 25 % d'acide bromhydrique. La solution est abandonnée à la température ambiante pendant 45 minutes et soumise à une lyophilisation, suivie 35 d'un lavage au dichl orométhane pour donner 750 mg

-22-

(rendement 98 %) de "bromhydrate de 4' -(L-glutaminyl-oxy)-5-hydroxy-3,3' ,7-triméthoxyf lavone : point de fusion 185-188°G.

Exemple 15

5 Une solution contenant 500 mg de 4',5-dihydro-

xy-3,31,7-triméthoxyflavone et 600 mg de 5-p_nitroben-zyl-N-(benzyloxycarbonyl)-L-glutamate dans 5 cm^ de py-ridine est refroidie entre -10 et -5°0. On ajoute à la solution 0,17 g de chlorure de thionyle en 15 minutes, 10 en agitant, et le mélange réactionnel est abandonné à -5°0 pendant 5 heures. On ajoute 50 cm^ d'eau et on traite le mélange par extraction avec 50 cm^ de chloroforme. L'extrait est séché sur du sulfate de sodium anhydre et concentré sous pression réduite. Le concen-15 tré est appliqué sur une colonne de gel de silice et la colonne est éluée avec un solvant mixte acétate d'é-thyle/hexane (1:1, v/v) pour donner 670 mg de cristaux jaune pâle.

On dissout 670 mg des cristaux dans 50 cm 20 de chloroforme et la solution est hydrogénée en présence de 50 mg de noir de palladium à la température ambiante sous la pression atmosphérique pendant 5 heures. Le catalyseur est éliminé par filtration et le filtrat est évaporé à sec. Le résidu est lavé avec

•5 ✓ 5

25 10 cnr de dichl or omethane et dissous dans 5 cnr d'acide acétique contenant 25 % d'acide bromhydrique. La solution est abandonnée à la température ambiante pendant 45 minutes et soumise à une lyophilisation, suivie d'un lavage trois fois avec chaque fois 10 cm^ de di-50 chlorométhane pour donner 570 mg (rendement 84 %) de bromhydrate de 4'-(L-a-glutamyloxy)-5-hydroxy-5,3',7-triméthoxyflavone : point de fusion 243-246°G.

Exemple 14

Une solution contenant 500 mg de 4*,5-dihy-35 droxy-3,3',7-triméthoxyf lavone, 470 mg d'ester de mono-

s

-23-

p-méthoxybenzyle d'acide 2,3-0-isopropylidènetartrique et une goutte de diméthylf ormamide dans 5 cm^ de pyri-dine est.refroidie entre -10 et -5°C. On ajoute à la solution 170 mg de chlorure de thionyle en 15 minutes 5 en agitant et on maintient le mélange à -5°C pendant

•Z ,

3 heures. On y ajoute 30 cnr d'eau et le mélangé est traité par extraction avec 50 cm^ de chloroforme. L'extrait est séché sur du sulfate de sodium anhydre, filtré et on concentre le filtrat. On applique le concen-10 tré sur une colonne de gel de silice et la colonne est éluée avec du chloroforme pour donner 520 mg de matière solide jaune pâle.

On dissout 520 mg de cette matière solide dans

3 s

50 cnr de chloroforme et on hydrogéné la solution pen-15 dant 3 heures en présence de 50 mg de noir de palladium à la température ambiante sous la pression atmosphérique. Le catalyseur est éliminé par filtration et le filtrat est évaporé à sec. On lave le résidu avec du dichlorométhane et on le dissout dans 3 cm^ d'acide 20 acétique contenant 25 % d'acide bromhydrique. La solution est abandonnée à la température ambiante pendant 45 minutes et le mélange est soumis à une lyophilisation, suivie d'un lavage trois fois avec chaque fois 10 cm^ de dichlorométhane, pour donner 280 mg (rende-25 ment 74- %) de 4'-(3-carboxy-2,3-dihydroxy-propionyloxy)-5-hydroxy-3,3',7-triméthoxyflavone : point de fusion 179-180°C.

Exemple 15

Un mélange de 847 mg de 2',4',6'-trihydroxy-30 2-méthoxy-acétophénone, de 5,82 g d'anhydride bis-(4-acétamidobenzoi'que) et de 1,2 g de 4-acétamidobenzoate de sodium est chauffé à 230°0 sous pression réduite pendant 3 heures. Après refroidissement, on ajoute 90 cm^ de méthanol et 40 cm^ de solution aqueuse à 35 40 % d'hydroxyde de potassium et le mélange est chauffé

S

-24-

au reflux pendant 1 heure. Après élimination du métha-nol par évaporation sous pression réduite, le résidu aqueux est dilué avec 200 cm^ d'eau et on filtre la suspension résultante. Le filtrat est saturé d'anhy-5 dride carbonique et la suspension résultante est trai-

SÇ

tée par extraction trois fois avec chaque fois 150 cet d'acétate d'éthyle. Les extraits combinés sont lavés à l'eau, séchés sur du sulfate de sodium anhydre et évaporés sous pression réduite pour donner 640 mg de rési-10 du jaune.

On chromâtographie 460 mg de ce résidu sur 15 g de gel de silice. On élue la colonne avec un mélange acétate d'éthyle/hexane (1:1, v/v) et on évapore 120 cm^ de l'éluat sous pression réduite pour obtenir un 15 résidu jaune pâle. La recristallisation du résidu à partir de méthanol donne 17 mg de 4'-amino-5,7-dihydroxy-3-méthoxyflavone sous la forme de cristaux jaune pâle : spectre de W 1ïï (dans DMSO-d6) ô 3,75 (3H), 5,98 (2H), 6,16 (1H), 6,41 (1H), 6,68 (2H), 7,83 (2H), 11 (1H, 20 large) et 12,82 ppm (H).

On élue ensuite la colonne avec un mélange acétone-méthanol (1:1, v/v) et l'éluat, après élimination du solvant, est traité avec une solution de diazo-méthane dans l'éther. Après abandon du mélange à la 25 température ambiante toute une nuit, la solution est évaporée pour donner 400 mg de matière solide.

On chromatographie 400 mg de cette matière solide sur 18 g de gel de silice. On développe la colonne avec un mélange acétate d'éthyle/hexane et on 30 fractionne l'éluat (chaque fraction 30 cnr*). On combine les fractions 3 à 9, on les évapore sous pression réduite pour obtenir un résidu cristallin jaune. La recristallisation du résidu à partir de méthanol donne 129 mg de 4'-amino-5-hydroxy-3,7-diméthoxyflavone sous 35 la forme de cristaux jaunes : point de fusion 221°C.

-25-

Bxemple 16

A une solution glacée contenant 200 mg (0,58 mmole) de 4' ,5-dihydr oxy-3,31 ,7-triméthoxyf lavone dans 10 cm^ de pyridine, on ajoute 220 mg (1,2 mmole) 5 de chlorhydrate de chlorure de nicotinoyle en 10 minutes, en agitant. Après agitation à la température ambiante pendant 3 heures, le mélange est évaporé sous pression réduite pour donner un résidu huileux.

/ -5

On dissout le résidu dans 30 cnr de chloro-

10 forme et on le lave successivement deux fois avec

20 cm-* chaque fois de solution aqueuse saturée de bi-

'■ ■ 2

carbohate de sodium et deux fois avec 20 cnr chaque fois d'eau. La sqlution est séchée sur du sulfate de sodium anhydre.et ensuite filtrée. Le filtrat est éva-15 poré pour donner 200 mg de matière solide. La recristal-5 J lisation de cette matière solide à partir de benzène donne 170 mg (rendement 53 %) de 3,31,7-trimé thoxy-4-' ,5-kis-(nicotinoyloxy)-flavone sous la forme d'aiguilles incolores : point de fusion 212-214°C. 20 Exemple 17

D'une manière analogue à celle décrite dans l'exemple 16, à ceci près qu'on utilise du chlorure de propionyle à la place du chlorhydrate de chlorure de nicotinoyle, on obtient de la 3,3',7-triméthoxy-25 4',5-bis-(propionyloxy)-flavone : point de fusion 106-107°C (rendement 47 %)•

Exemple 18

D'une manière analogue à celle décrite dans l'exemple 16, à ceci près qu'on utilise du chlorure 30 d'acétyle à la place du chlorhydrate de chlorure de nicotinoyle, des cristaux bruts de 4',5-diacétoxy-3,3',7-triméthoxyflavone sont obtenus et recristallisés à partir d'acétate d'éthyle/hexane pour donner le produit pur correspondant fondant à 165-166°C (rende-35 ment 90 %).

■

S1 fe

-26-

Exemple 19

D'une manière analogue à celle décrite dans l'exemple 16, à ceci près qu'on utilise du chlorofor-miate d'éthyle à la place du chlorhydrate de chlorure 5 âe nicotinoyle, des cristaux bruts de 4',5-bis-(éthoxy-carbonyloxy)-J,3',7-triméthoxyflavone sont obtenus et recristallisés à partir d'acétate d*éthyle/hexane pour donner le produit pur correspondant fondant à 106-107°C (rendement 95 %)•

10 Exemple 20

A une solution contenant 0,2 g de 4',5-dihydro-xy-3,3',7-triméthoxyf lavone dans 3 cm^ de pyridine, on ajoute 0,15 cm^ de chlorure de pivaloyle, en agitant. On agite le mélange à la température ambiante pendant 15 3 heures et ensuite on le chauffe à 75°0 pendant

1 heure. Après refroidissement, on évapore le mélange pour obtenir un résidu huileux.

On dissout le résidu dans 10 crn^ d'un solvant mixte éthanol/hexane (1:1, v/v) et on abandonne 20 le mélange dans un réfrigérateur toute une nuit, période durant laquelle une cristallisation se produit. Les cristaux sont recueillis par filtration, lavés à l'hexane et séchés. On obtient 200 mg de 5-hydroxy-3,3',7-triméthoxy-4'-(pivaloyloxy)-flavone sous la 25 forme d'aiguilles jaunes : point de fusion 163-164°C. Exemple 21

A une solution contenant 0,2 g de 5-hydroxy-3,3',7-triméthoxy-4'-(pivaloyloxy)-flavone dans 3 cm^ de pyridine, on ajoute 0,05 cm^ de chlorure d'isobuty-30 ryle et on agite le mélange à la température ambiante pendant 3 heures. Après élimination du solvant par évaporation sous pression réduite, le résidu huileux résultant est dissous dans 5 cnr* d'un solvant mixte éthanol/hexane (1:1, v/v). La solution est abandonnée

35 dans un réfrigérateur toute une nuit, période durant

\

-27-

laqueile une cristallisation se produit. Les cristaux sont recueillis par filtration, lavés à l'hexane et séchés. On obtient 200 mg de 5-(isobutyryloxy)-3,3' ,7-triméthoxy-4'-(pivaloyloxy)-flavone sous la forme 5 d'aiguilles incolores ï point de fusion 151-152°C. Exemple 22

D'une manière analogue à celle décrite dans l'exemple 1, à ceci près qu'on utilise de la 2-éthoxy-2',6'-dihydroxy-4'-méthoxyacétophénone à la place de 10 la 2' ,6'-dihydroxy-2,4-'-diméthoxyacétophénone, on obtient une poudre jaune pâle de 3-éthoxy-4' ,5-dihydroxy-3' ,7-dimé thoxyflavone. La cristallisation à partir d'éthanol donne le produit pur sous la forme d'aiguilles jaune pâle; point de fusion 168-169°C.

15 Exemple 23

D'une manière analogue à celle décrite dans l'exemple 1, à ceci près qu'on utilise de la 2',6'-dihydroxy-2-isopropoxy-4'-méthoxyacétophénone à la place de la 2',6' -dihydroxy-2,4' -diméthoxyacétophénone, 20 on obtient une poudre jaune pâle de 4-' ,5-dihydroxy-3-isopropoxy-3',7-diméthoxyflavone. La cristallisation à partir d'éthanol donne le produit pur sous la forme d'aiguilles jaunes; point de fusion 169-171°C.

Claims

-28-

10

15

20

25

30

- REVENDICATIONS -1 - Un procédé pour la préparation de dérivés de 3-alcoxyflavone de la formule générale rAÛ

II

10

dans laquelle R est un groupe hydroxy, alcanoyloxy inférieur, alcoxycarbonyloxy inférieur ou nicotinoyl-

oxy; R^ est un groupe hydroxy ou alcoxy inférieur;

R^0 est de l'hydrogène ou un groupe alcoxy inférieur;

r^O. es^. un group@ hydroxy, alcanoyloxy inférieur,

aminoacyloxy, glycosyloxy, un résidu d'acide dicarbo-

xylique hydroxylé, un groupe amino, nicotinoyloxy ou fiO

alcoxycarbonyloxy inférieur et R est un groupe alco-

A Q

xy inférieur, avec les conditions que quand R est un groupe acétoxy, R^° ne peut pas être un groupe acétoxy et quand R^° est un groupe hydroxy, R60 ne peut pas être un groupe méthoxy,

caractérisé en ce que a) on acyle le groupe hydroxylé dans la position 4' ou les groupes hydroxylé dans les positions 1 et 4' d'un composé représenté par la formule générale

35

III

-29-

dans laquelle E est un groupe alcoxy inférieur, R est de l'hydrogène ou un groupe alcoxy inférieur et R^ est un groupe alcoxy inférieur, par traitement avec un dérivé réactif d'un acide alcanoîque inférieur, d'un amino-acide aliphatique, d'un acide dicarboxy-lique hydroxylé ou d'acide nicotinique, ou b) on glycosyle le groupe hydroxylé dans la position 4' d'un composé représenté par la formule générale III ci-dessus par traitement avec un dérivé réactif d'un monosaccharide ou c) on fait réagir une 2',4',6'-trihydroxy-2-alcoxyacétophénone avec un anhydride bis-(4-acétamido-benzoîque) et un sel de. métal alcalin d'acide 4-acéta-midobenzoîque et on traite le composé résultant avec un hydroxyde de métal alcalin de manière à obtenir une 4'-amino-5,7-dihydroxy-3-alcoxyflavone et, si nécessaire, on traite ce' composé avec un diazoalcane de manière à former un dérivé 7-alcoxy correspondant.

2 - Un procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'on prépare la 3-éthoxy-4',5-dihydro-xy-3',7-diméthoxyflavone.

3 - Un procédé pour la préparation de compositions pharmaceutiques contenant comme constituant actif un dérivé de 3-alcoxyflavone de la formule

>i dans laquelle R est un groupe hydroxy, alcoxy inférieur, alcanoyloxy inférieur, alcoxycarbonyloxy infé

P

rieur ou nicotinoyloxy; R est un groupe hydroxy ou

, 5C N

alcoxy inférieur; Ir est de 1*hydrogéné ou un groupe alcoxy inférieur; R^ est de l'hydrogène, un groupe hydroxy ou un groupe alcoxy inférieur; R-* est un groupe hydroxy, alcoxy inférieur, alcanoyloxy inférieur, aminoacyloxy, glycosyloxy, un résidu d'acide dicarboxy-lique hydroxylé, un groupe amino, nicotinoyloxy ou alôoxycarbonyloxy et R^ est un groupe alcoxy inférieur, caractérisé en ce que le constituant actif est mélangé avec des véhicules solides ou liquides inertes, non-toxiques, thérapeutiquement compatibles, et que le mélange est mis à une forme de dosage appropriée.

4 - L'invention telle que décrite ci-dessus.

n v N i © 'a °

O R L® l N A U

en pages

..... contenant — Renvois r

mer ajo'-ité mot rayé mil osé C>U R A VJ

Conseil en Propriété Industrielle

26bu, Boul. Princesse Charlotte MONTÉE CARLO

Par Procurotfpn^-^A—