MC1968A1

MC1968A1 - Procede de preparation de composes antiviraux et procede de preparation de formulations pharmaceutiques les contenant

Info

Publication number: MC1968A1
Application number: MC881999A
Authority: MC
Inventors: Thomas Anthony Krenitsky; Lilia Marie Beauchamp
Original assignee: Wellcome Found
Priority date: 1987-08-15
Filing date: 1988-08-11
Publication date: 1989-09-29
Also published as: DE3855333D1; FI89713C; DE3855333T2; DK451388D0; EP0308065B1; NO883612L; AU2097888A; DK170803B1; IL87434A0; FI89713B; LU88746I2; JPS6468373A; NO883612D0; KR960002849B1; LV5264A3; MY103760A; ATE138660T1; AP55A; NL960001I2; EP0596542B1

Description

La présente invention concerne de nouveaux esters de 9-(2-hydroxyéthoxyméthyl)guanine possédant d'intéressantes propriétés antivirales.

La 9->( 2-hydroxyéthoxyméthyl ) guanine, autrement connue sous la dénomination "acyclovir", est douée d'une puissante activité antivirale/ en particulier contre les herpèsvirus (H.J. Schaeffer et coll., Nature/ 272, 583-585 (1978)/ brevet britannique N° 1 523 865 et brevet des E.U.A. N° 4 199 574). L'acyclovir n'est cependant que faiblement soluble dans l'eau, ce qui limite les possibilités de formulation du principe actif dans le cas des préparations pharmaceutiques aqueuses où la solubilité est nécessaire.

En outre, l'acyclovir n'est que faiblement absorbé à partir du tractus gastro-intestinal après une administration par voie orale (taux de récupération de 15 % dans l'urine lors d'essais sur des rats, et de 20 % chez les êtres humains). Une biodisponibilité aussi basse oblige à administrer de fortes doses de principe actif afin d'atteindre et de maintenir des taux antiviraux efficaces dans le plasma.

Le brevet européen N° 99 493 décrit des esters d'acides aminés d'acyclovir, notamment les esters de glycine et d'alanine, qui présentent une solubilité améliorée comparativement à l'acyclovir.

La Demanderesse a maintenant découvert que les esters de valine et d'isoleucine d'acyclovir, caractérisés par un embranchement de chaîne latérale adjacent à l'atome de carbone situé en °< , et que n'a pas fait connaître le brevet européen N° 99 493, présentent, de façon surprenante, une meilleure biodisponibilité après administration par voie orale, comparativement aux esters d'alanine et de glycine mentionnés dans ce brevet.

Selon un aspect caractéristique de la présente invention, la Demanderesse propose les composés de formule (I) :

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^ ^ N (i)

^ i

Œ^OC^C^OCOaUR-^Nl^

dans laquelle R^ représente un groupe de formule -Ct^CH^^ ou -CH(CH^)Cê^CH^/ et ses sels pharmaceutiquement acceptais bles. Les composés de formule (I) peuvent également être respectivement appelés le L-valinate de 2-(2-amino-l/6-dihydro - 6-oxo-9j3(purine-9-yl )méthoxy)éthyle et le L-iso-leucinate de 2-( 2-amino-l / 6-dihydro - 6-oxo-9_H (purine-9-yl)méthoxy)ét'hyle. Les fragments de valine et d'isoleucine 15 peuvent être en configuration D/ L ou racémique DL, mais ils sont de préférence sous la forme L.

Dans des essais.- sur des rats, en mesurant le taux de récupération urinaire sous forme d'acyclovir (% de la dose administrée) après administration par voie orale/ les 20 composés de l'invention manifestent un important accroissement de l'absorption à partir de l'intestin comparativement aux autres esters et à l'acyclovir. Cette forte absorption permet d'administrer moins de .principe actif tout en obtenant encore des taux plasmatiques de principe actif équi-25 valents après administration par voie orale. Le valinate considéré est particulièrement préféré en raison de son absorption particulièrement bonne à partir de l'intestin.

Outre cette biodisponibilité relativement élevée/ les composés selon l'invention exercent sensiblement le 30 même effet antiviral que l'acyclovir "in vitro". L'accroissement avantageux de la biodisponibilité du composé n'est donc pas acquise aux dépens de l'activité antivirale. En fait/ il a été constaté que dans certaines applications cliniques/ par exemple le traitement de la kératite du 35 stroma/ certains esters d'acides aminés s'avèrent produire un effet thérapeutique supérieur à celui de l'acyclovir (brevet européen N° 99 493)

Les sels pharmaceutiquement acceptables des composés de formule (i) sont de préférence des sels d'addition d'acides dérivés d'un acide approprié/ par exemple l'acide chlorhydrique/ sulfurique, phosphorique/ maléique/ fumarique/ citrique/ tartrique/ lactique/ acétique ou p-toluènesulfonique. Des sels particulièrement préférés sont les chlorhydrates des composés de formule (I).

Lors d'expérimentations chez l'animal/ on a découvert que l'administration par voie orale des composés de formule (I) ci-dessus donnait lieu à des taux mesurables d'acyclovir dans le plasma. Ainsi/ sous un autre aspect de l'invention/ la Demanderesse propose une méthode pour engendrer de l'acyclovir "in vivo"/ par administration à un mammifère d'un composé de formule (I) ci-dessus' ou d'un sel pharmaceutiquement acceptable de composé de formule (I).

Les composés selon l'invention peuvent être préparés de manière classique/ par exemple par un procédé tel que décrit ci-dessous.

Ainsi/ sous un autre aspect caractéristique de la présente invention/ la Demanderesse propose un procédé pour la préparation des composés de formule (I) ci-dessus et de leurs sels pharmaceutiquement acceptables/ qui consiste a) à faire réagir un composé de formule (II)

x

(dans laquelle X est un groupe hydroxy facultativement protégé et Y est un groupe amino facultativement protégé) avec une valine ou isoleucine facultativement protégée ou l'un de leurs équivalents fonctionnels ;

b) à convertir un composé de formule (III)

(II)

ch2och2ch2oh

5

20

(III)

15 CHjOCHJCHJOCOCHCR^NI^

(dans laquelle est comme défini ci-dessus, et M représente un groupe hydroxy et G représente un atome ou groupe qui peut être remplacé par un groupe amino ou converti en 10 un groupe .amino, ou bien G représente un groupe amino et

M représente un atome ou groupe qui peut être remplacé par un groupe hydroxy ou converti en un groupe hydroxy) en un composé de formule (I) ou un sel pharmaceutiquement acceptable de composé de formule (I) ; ou

15 c) à faire réagir un composé de formule (IV)

*

N

(IV)

Q

(dans laquelle X et Y sont comme définis ci-dessus et Q représente un atome ou groupe .partant) avec un composé de formule (V)

25 ACH2OCH2CH2OCOCH(R1)R2 (V)

(dans laquelle R^ est comme défini ci-dessus, A représente un groupe ou atome partant et R2 est un groupe amino facultativement protégé) ; et, facultativement, à effectuer l'une ou plusieurs des conversions suivantes, en tout 30 ordre désiré :

i) élimination de quelconques groupes protecteurs ii) lorsque le produit résultant est un composé de formule (i), conversion dudit composé en l'un de ses sels pharmaceutiquement accepta-35 bles : et iii) lorsque le produit résultant est un sel phar-

maceutiquement acceptable d'un composé de formule (I)/ conversion dudit sel en le composé d'origine.

En ce qui concerne le procédé (a)/ la réaction d1estérification peut être effectuée de manière classique, par exemple dans un solvant tel que la pyridine ou le diméthylformamide, en présence d'un agent de couplage tel que le N, N '-dicyclohexylcarbodiimide, et, facultativement, en présence d'une base catalytique telle que la 4-diméthyl-aminopyridine. L'eau formée pendant la réaction peut, au besoin, être éliminée de manière classique, par exemple par distillation ou par l'addition d'une substance fixant l'eau. Ensuite, l'ester obtenu comme produit réactionnel peut être isolé de manière classique.

Comme alternative à l'utilisation de valine ou d'isoleucine elle-même, on peut utiliser un équivalent fonctionnel de l'acide, par exemple un halogénure d'acide tel que le chlorure d'acide, ou un anhydride d'acide. Dans un tel cas, afin d'éviter des réactions secondaires indésirables, il est avantageux d'utiliser un dérivé à groupe amino protégé. Des exemples de groupes préférés pour la protection du groupe amino comprennent des groupes acyle, par exemple alcanoyle en Cj-C4 tels qu'acétyle, et aryl-oxycarbonyle, par exemple benzyloxycarbonyle. Un dérivé approprié à groupe amino protégé est, par exemple, un composé dans lequel le groupe amino de l'acide aminé est remplacé par un groupe azido.

La conversion d'un composé de formule (III) en un composé de formule (I) par le procédé (b) peut être réalisée de diverses manières. Par exemple, G peut représenter un groupe azido qui peut être réduit en un groupe amino par hydrogénation catalytique, en utilisant un catalyseur approprié tel que du palladium sur charbon. En variante, G peut représenter un atome d'halogène ou un groupe alkylthio ou alkylsulfonyle qui peut être converti en un groupe azido qui peut lui-même être converti en un

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groupe amino par hydrogénation catalytique en utilisant, par exemple, de l'hydrogène en présence de palladium sur charbon. Pour la préparation du composé de formule (I), un composé de formule (III) dans lequel M est un groupe amino 5 peut être converti en un composé dans lequel M est un groupe hydroxy, par exemple par traitement par un enzyme désaminant tel que 1'adénosine-désaminase.

Ces procédés, ainsi que d'autres procédés classiques, sont décrits dans l'ouvrage Fused Pyrimidines, 10 Partie II, Purines, édité par D.J. Brown (1971), Wiley-Interscience.

Dans le procédé (c), le groupe Q de la formule (IV) peut représenter, par exemple, un atome d'hydrogène ; un groupe acyle, par exemple un groupe alcanoyle en C^-C^ 15 tel que le groupe acétyle ou un groupe aroyle tel que le groupe benzoyle ; ou un groupe tri(alkyle en C^-C4 ) si'lyle tel que le groupe triméthylsilyle. Le groupe A de la formule (V) peut représenter, par exemple, un atome d'halogène (par exemple le chlore) ou un groupe acyloxy dont 20 le fragment acyle peut être,par exemple, un groupe alcanoyle en C^-C^ tel que le groupe acétyle ou un groupe acétyle tel que le groupe benzoyle. Le groupe R2 peut représenter un groupe protecteur de groupe amino tel que, par exemple, un groupe alcanoyle en C^-C^ (par exemple 25 acétyle) ou aryloxycarbonyle (par exemple benzyloxy-

carbonyle), et il peut également représenter un groupe azido. La réaction peut être commodément effectuée dans un solvant fortement polaire tel que le diméthylformamide ou 1'hexaméthylènephosphoramide, avantageusement en pré-30 sence d'une base telle que la triéthylamine ou le carbonate de potassium. En variante, on peut effectuer une condensation thermique en chauffant les composés des formules (IV) et (V) en présence d'une quantité catalytique d'un acide fort, par exemple l'acide sulfurique. 35 Les composés des formules (II) à (V), utilisés comme composés intermédiaires dans la synthèse du composé

t

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de formule (I)/ peuvent être préparés de manière classique, par exemple par les procédés décrits dans le brevet britannique N° 1 523 865. Ces procédés se fondent sur des composés intermédiaires préparés à partir de purines sim-plement substituées, qui peuvent être disponibles dans le commerce ou préparées par des techniques qui sont connues en soi et sont décrites dans la littérature, par exemple dans l'ouvrage susmentionné. Ainsi, par exemple, les composés de formule (III) peuvent être préparés d'une façon générale en suivant un mode opératoire analogue à celui du procédé (c), c'est-à-dire en faisant réagir une purine appropriée avec un' composé de formule (v).

Les conversions facultatives i)., ii) et iii) peuvent être exécutées de manière classique. Ainsi, par 15 exemple, l'élimination de groupes protecteurs dans la conversion i) peut être effectuée par hydrolyse, solvo-lyse ou hydrogénolyse, comme il convient. En ce qui concerne l'élimination de groupes protecteurs fixés sur les radicaux acyle d'acide aminés, les techniques préférées 20 sont 1'hydrogénolyse, par exemple de groupes protecteurs aryloxycarbonyle, et la conversion de groupe azido, par exemple par1 hydrogénation catalytique en utilisant par exemple un catalyseur au platine. En ce qui concerne la protection des groupes présents aux positions 2 et/ou 25 6 du noyau purique, ceux-ci peuvent être par exemple choisis parmi des groupes arylméthyle tels que le groupe benzyle, ou les groupes tri(alkyle en C^-C^)-silyle tels que le groupe triméthylsilyle. Les groupes bloquants arylméthyle peuvent par exemple être éliminés par hydro-30 génolyse, par exemple par hydrogénation en présence de nickel de Raney ou d'un catalyseur au platine. Les groupes bloquants trialkylsilyle peuvent par exemple être éliminés par solvolyse, par exemple par alcoolyse.

La conversion d'un composé de formule (I) en 35 un sel pharmaceutiquement acceptable peut être effectuée de manière classique, par exemple par traitement du composé

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10

15

20

. 25

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avec un acide approprié de façon à former un sel d'addition d'acide, par exemple par lyophilisation d'une solution méthanolique de l'ester d'origine avec une solution acide.

d'origine de formule (I) peut être effectuée de manière classique. '

composés de formule (I) et leurs sels pharmaceutiquement acceptables (ci-après appelés les "composés actifs" ou "ingrédients actifs") pour leur emploi en thérapie médicale, par exemple dans le traitement ou la prophylaxie d'une maladie virale chez un animal, par exemple un mammifère tel que l'homme. Les composés sont particulièrement intéressants à utiliser pour le traitement ou la prophylaxie de maladies causées par divers virus ADN, par exemple des infections herpétiques telles que l'herpès, la varicelle et le zona, les maladies à cytomégalovirus,

ainsi que les maladies causées par les virus de l'hépatite B et le virus Epstein-Barr ou 1'herpèsvirus humain -6 (HHV-6). Les composés actifs peuvent également être utilisés pour le traitement ou la prophylaxie d'infections rétrovirales telles que les infections par HIV et les infections par le virus du papillome ou le virus de la verrue humaine. Outre leur emploi en thérapie médicale humaine, les composés de formule (I) peuvent être administrés à d'autres animaux pour le traitement ou la prophylaxie de maladies virales, par exemple chez d'autres mammifères. Par exemple, les composés actifs sont particulièrement intéressants à utiliser pour le traitement de la rhinopneumopathie équine.

méthode pour le traitement ou la prophylaxie d'une maladie virale chez un animal, par exemple un mammifère tel que l'homme, qui consiste à administrer à l'animal une quantité antivirale efficace d'un composé de formule (I) ou

De même, la conversion d'un sel en le composé

La présente invention propose également les

La présente invention propose également une

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d'un sel pharmaceutiquement acceptable de composé de formule (I).

La présente invention propose également l'utilisation d'un composé de formule (I) dans la fabrication d'un médicament destiné au traitement ou à la prophylaxie d'une infection virale.

Les çomposés actifs peuvent être administrés par toute voie appropriée à l'affection à traiter, des voies convenables comprenant les voies orale, rectale, nasale, topique (y compris buccale et sublinguale), vaginale et parentérale (y compris sous-cutanée, intramusculaire, intraveineuse, intradermique, intrathécale et épidurale). On comprendra, que la voie préférée peut différer selon, par exemple, l'état du receveur.

Pour chacun des emplois et indications indiqués ci-dessus, la quantité requise d'un ingrédient actif (comme défini ci-dessus) dépend d'un certain-nombre de facteurs comprenant la gravité de l'affection à traiter et l'identité du receveur, et elle sera en fin-de- compte laissée à l'appréciation du médecin.ou vétérinaire -trai- .-tant. Cependant, en général, pour chacun de ces empJLois.. ou indications, une dose efficace convenable se situe dans l'intervalle de 0,1 à 250 mg par kilogramme de poids corporel, du receveur et par jour, de préférence. dans l'intervalle de ,1 à 100 mg par kilogramme de poids corporel et par jour, et mieux encore, dans l'intervalle de 5 à 20 mg par kilogramme de poids corporel et par jour ; une dose optimale est d'environ 10 mg par kilogramme de poids corporel et par jour. (Sauf indication contraire, tous les poids d'ingrédient actif sont calculés pour le composé d'origine de formule (I) : pour ses sels, les chiffres doivent être augmentés proportionnellement). La dose désirée est de préférence présentée en deux, trois ou quatre sous-doses, ou davantage, administrées à intervalles appropriés tout au long de la journée. Ces sous-doses peuvent être administrées dans des formes posologi-

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ques unitaires, contenant par exemple 10 à 1000 mg/ de préférence 20 à 500 mg/ et mieux encore 100 à 400 mg d'ingrédient actif par forme posologique unitaire.

Les composés de la présente invention peuvent 5 être administrés seuls ou en association avec d'autres agents thérapeutiques/ par exemple avec la 9-(2-hydroxy-éthoxyméthyl)guanine (acyclovir) employée pour traiter les infections à herpèsvirus/ en particulier par le virus de l'herpès (I)/ et avec la zidovudine employée pour trai-10 ter les infections rétrovirales/ en particulier les infections à HIV.

Bien que les ingrédients actifs puissent être administrés seuls/ il est préférable de les présenter sous forme de formulations pharmaceutiques. Les formulations 15 de la présente invention/ tant pour un usage en médecine vétérinaire que pour un usage en médecine humaine/ comprennent au moins un ingrédient actif/ comme défini ci-dessus / en association avec un ou plusieurs supports ou véhicules acceptables pour ce ou ces ingrédients actifs 20 et/ facultativement/ avec d'autres ingrédients thérapeutiques. Le ou les supports doivent être "acceptables" en ce sens qu'ils doivent être compatibles avec les autres ingrédients de la formulation et ne: pas être préjudiciables à leur receveur.

25 Les formulations englobent celles qui sont adap tées à l'administration par voie orale/ rectale./ nasale, topique (y compris buccale et sublinguale)/ vaginale ou parentérale (y compris sous-cutanée, intramusculaire, intraveineuse, intradermique, intrathécale et épidurale). 30 Les formulâtionj.s peuvent commodément être présentées sous forme posologique unitaire et peuvent être préparées par l'un quelconque des procédés bien connus dans l'art de la pharmacie. Ces procédés comprennent l'étape qui consiste à mettre l'ingrédient actif en association avec le sup-35 port qui se compose d'un ou plusieurs ingrédients secondaires. En .général/ les formulations sont préparées en

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mettant uniformément et intimement en association l'ingrédient actif avec des véhicules liquides ou des supports solides finement divisés, ou les deux, puis, si nécessaire, en conformant le produit.

5 Les formulations de la présente invention, qui sont adaptées à l'administration orale, peuvent être présentées sous forme d'unités discrètes telles que des capsules, cachets ou comprimés, contenant chacun une quantité prédéterminée de l'ingrédient actif ; sous forme 10 d'une poudre ou de granulés ï sous forme d'une solution ou.d'une suspension dans un liquide aqueux ou un liquide non aqueux ; ou sous.forme d'une émulsion liquide de type huile-dans-eau ou d'une émulsion liquide de type eau-dans-huile. L'ingrédient actif peut également être 15 présenté sous forme d'un bol, d'un électuaire ou d'une pâte.

Un comprimé peut être fabriqué par compression ou moulage, facultativement avec un ou plusieurs Ingrédients secondaires. Les comprimés pressés peuvent être 20 préparés en comprimant, dans une machine appropriée, l'ingrédient actif sous une forme s'écoulant librement telle qu'une poudre ou des granulés, facultativement en mélange avec.un liant, un lubrifiant, un diluant inerte, un conservateur, un agent tensio-actif ou un agent dispersant. 25 Les comprimés moulés peuvent être préparés en moulant,

dans une machine appropriée, un mélange du composé actif réduit en poudre avec un diluant liquide inerte. Les comprimés peuvent facultativement être enrobés ou entaillés et ils peuvent être formulés de façon à assurer une libé-30 ration lente ou réglée de l'ingrédient actif qu'ils renferment.

Pour des infections de l'oeil ou d'autres tissus externes, par exemple la bouche ou la peau, les formulations sont de préférence appliquées sous forme d'une 35 pommade ou crème à usage topique contenant l'ingrédient actif en une proportion de, par exemple, 0,075 à 20 % en

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i poids, de préférence 0,2 à 15 % en poids, et mieux encore 0,5 à 10 % en poids. Lorsqu'ils sont formulés dans une pommade, les ingrédients actifs peuvent être employés avec une base de pommade soit paraffinique, soit miscible à l'eau. En variante, les ingrédients actifs peuvent être formulés dans une crème avec une base de crème du type huile-dans-eau. En outre, des applications topiques peuvent être faites à travers la peau au moyen d'un•dispositif d'ionophorèse.

Si on le désire, la phase aqueuse de la base de crème peut comprendre, par exemple, au moins 30 % en poids d'un polyalcool, c'est-à-dire un alcool comportant deux ou plusieurs groupes hydroxyle tel que le propylène-glycol, le butane-1,3-diol, le mannitol, le sorbitol, le glycérol et un polyéthylène-glycol, et leurs mélanges. Les formulations à usage topique peuvent avantageusement contenir un composé, qui accentue l'absorption ou la pénétration de l'ingrédient actif à travers la peau ou autres zones affectées. Des exemples de ces activateurs de pénétration dermique comprennent le diméthylsulfoxyde et analogues du même genre.

Les formulations adaptées à l'administration topique à l'oeil comprennent également des gouttes pour instillations oculaires dans lesquelles l'ingrédient actif se trouve dissous ou en suspension dans un véhicule approprié, notamment un solvant aqueux capable de dissoudre l'ingrédient actif. L'ingrédient actif est de préférence présent dans ces formulations en une concentration de 0,5 à 20 %, avantageusement 0,5 à 10 %, et notamment environ 1,5 %, en poids.

Les formulations adaptées à l'administration topique dans la bouche comprennent des pastilles renfermant l'ingrédient actif dans une base aromatisée, habituellement le saccharose et la gomme arabique ou adragante ; des pastilles renfermant l'ingrédient actif dans une base inerte telle que la gélatine et la glycérine, ou le

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saccharose et la gomme arabique ; et des bains de bouche contenant l'ingrédient actif dans un véhicule liquide approprié.

Les formulations adaptées à l'administration rectale peuvent être présentées sous forme d'un suppositoire avec une base appropriée comprenant/ par exemple/ du beurre de cacao ou un salicylate.

Les formulations adaptées à l'administration nasale dans lesquelles le support est une matière solide comprennent une poudre grossière •dont la grosseur de particules se situe par exemple dans l'intervalle de 20 à 500 micromètres/ qjui est administrée à la manière dont on prend une prise/ c'est-à-dire par inhalation rapide par les voi'es nasales à partir d'un récipient de poudre "15 maintenu tout près du nez. Des formulations appropriées dans lesquelles le support est un liquide/ par exemple pour une administration sous forme de pulvérisation nasale ou de gouttes nasales/ comprennent des solutions aqueuses ou huileuses de l'ingrédient actif. 20 Les formulations adaptées à l'administration vaginale peuvent être présentées sous forme de pessaires/ tampons/ crèmes/ gels7 pâtes/ mousses ou produits à pulvériser/ contenant./ en plus de l'ingrédient actif/ des supports tels que ceux connus dans l'art pharmaceutique comme étant appropriés.

Les formulations adaptées à l'administration parentérale comprennent des solutions injectables stériles aqueuses et non aqueuses qui peuvent contenir des antioxydants, tampons/ bactériostats et solutés qui ren-30 dent la formulation isotonique vis-à-vis du sang du receveur considéré : et des suspensions stériles aqueuses et non aqueuses qui peuvent contenir des agents suspendants et des agents épaississants. Les formulations peuvent être présentées dans des récipients à dose unitaire ou à 35 doses multiples/ par exemple des ampoules scellées et des flacons/ et peuvent être conservées à l'état lyophilisé

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en ne nécessitant que l'addition du véhicule liquide stérile, par exemple de l'eau pour injections, immédiatement avant l'emploi. Des solutions et suspensions injectables extemporanées peuvent être préparées à partir de 5 poudres, granulés et comprimés stériles du genre précédemment décrit. Les formulations destinées à l'administration intramusculaire sont particulièrement préférées.

Les formulations posologiques unitaires préférées sont celles qui contiennent l'ingrédient actif en une 10 dose quotidienne ou une sous-dose unitaire quotidienne,

telle que décrite ci-dessus, ou une fraction appropriée de celle-ci.

Il est bien entendu qu'outre les ingrédients mentionnés en particulier ci-dessus, les formulations de *15 la présente invention peuvent contenir d'autres agents classiques dans l'art pharmaceutique eu égard au type de formulation en question ; par exemple, les formulations adaptées à l'administration orale peuvent contenir des agents aromatisants.

20 La présente invention propose en outre des com positions à usage vétérinaire, comprenant au moins un ingrédient actif tel que défini ci-dessus en association avec un support ou véhicule à usage vétérinaire pour cet ingrédient actif.

25 • Les supports ou véhicules à usage vétérinaire sont des matières utiles dans le but d'administrer la composition et il peut s'agir de matières solides, liquides ou gazeuses qui sont par ailleurs inertes ou acceptables en art'vétérinaire et sont compatibles avec l'ingrédient 30 actif. Ces compositions à usage vétérinaire peuvent être administrées par voie orale, parentérale ou toute autre voie désirée.

Pour l'administration orale, les compositions peuvent être présentées sous forme de comprimés, granulés, 35 breuvage/ pâte/ cachets/ capsules ou suppléments alimentaires. Les granulés peuvent être fabriqués par les tech-

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niques bien connues de granulation au mouillé, précompression ou concassage de briquettes. Ils peuvent être administrés aux animaux dans un véhicule liquide inerte de manière à constituer un breuvage, ou dans une suspension formée 5 avec une base aqueuse ou huileuse. De préférence, ces compositions contiennent de plus des ingrédients secondaires tels qu'un agent dispersant. Ces compositions contiennent de préférence 15 à 85 % d'ingrédient actif.

Les exemples non limitatifs suivants illustrent 10 la présente invention.

Exemple 1A : L-valinate de 2-(2-amino-l,6-dihydro-6-oxy-

9H(purine-9-yl)méthoxy)éthyle a) N-[(benzyloxy)carbonyl]-L-valinate de 2-[(2-amino-l,6-dihydro-6-oxo-9H-purine-9-yl)méthoxy]éthyle 15 On chauffe à 60°C une suspension de 2000 g d'acyclovir (Burroughs Wellcome Co.) dans 150 ml de diméthylformamide (DMF) anhydre pour obtenir une solution incolore. A la solution chaude, on ajoute 3,012 g de N-carbobenzoxy-L-valine (CBZ-L-valine) (Sigma Chemicals, 20 St. Louis, MO, U.S.A. et J. Am. Chem. Soc., 79, 5697

(1957)), 154 mg de 4-diméthylaminopyridine .(DMAP) (Chem. Ber. , 89, 2921-33 (1956)) et 2,998 g de dicyclohexylcarbo-diimide (DCC) (-brevet des E.U.A. N° 2 656 383). On laisse refroidir à la température ambiante la solution légèrement 25 - jaune et on l'agite pendant une nuit. On observe un précipité blanc au bout de 30 minutes. On recharge le mélange réactionnel avec les quantités indiquées ci-dessus de CBZ-valine, DMAP et DCC, et l'on agite la suspension trouble à la température ambiante pendant 2 jours. On filtre 30 la suspension pour enlever 1,418 g d'un solide blanc. On concentre le filtrat pour obtenir une huile jaune clair. On purifie l'huile par chromatographie instantanée sur gel de silice, en éluant avec un gradient (0 à 15 %) de métha-nol dans le dichlorométhane, pour obtenir 3,751 g (92,1 %) 35 du composé du titre sous forme d'un solide blanc.

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b) L-valinate de 2-[(2-amino-l/6-dihydro-6-oxo-9H-purine-9-yl)méthoxy]éthyle

On secoue sur un appareil de Parr, sous 276 kPa de H2 pendant 3 heures, un mélange de 5/0 g de N-[(benzyl-oxy)carbonyl]-L-valinate de 2-[(2-amino-l/6-dihydro-6-oxo-9H-purine-9-yl)méthoxy]éthyle/ 2 g de catalyseur à 5 % de palladium sur charbon-50 % d'eau/ et 50 ml de diméthyl-formamide. On filtre le mélange à travers un tampon de Célite et l'évaporé sous vide pour obtenir une huile. On cristallise' un solide dans un mélange eau-éthanol (1:3 en volume) et le recristallise pour obtenir 1/5 g du composé du titre.

Analyse : Calculé : C-48/14 ; H-6,22 ; N-25/91 Trouvé : C-47/84 ; H-6/26 ; N-25/75 Exemple 1B : Chlorhydrate monohydraté de L-valinate de

2-(2-amino-l,6-dihydro-6-oxo-9H(purine-9-yl)-méthoxy)éthyle a) N—[(benzyloxy)carbonyl]—L—valinate de 2-[(2-amino-l/6-dihydro-6-oxo-9H-purine-9-yl)méthoxy[éthyle 20 On chauffe à 60°C une suspension de 2000 g d'acyclovir (Burroughs Wellcome Co.) dans 150 ml de diméthylformamide (DMF) anhydre pour obtenir une solution incolore. On ajoute à la solution chaude 3/012 g de CBZ-L-valine (Sigma Chemicals/ St. Louis/ MO/ U.S.A. et 25 J. Am. Chem. Soc./ 79/ 5697 (1957))/ 154 mg de 4-diméthyl-aminopyridine (DMAP) (Chem. Ber., 89, 2921-33 (1956)) et 2/998 g de dicyclohexylcarbodiimide (DCC) (brevet des E.U.A. N0 2 656 383). On laisse refroidir à la température ambiante la solution légèrement jaune et on l'agite 30 pendant une nuit. On observe un précipité blanc au bout de 30 minutes. On recharge le mélange réactionnel avec les quantités indiquées ci-dessus de CBZ-L-valine/ DMAP et DCC et l'on agite la suspension trouble à la température ambiante pendant 2 jours. On filtre la suspension 35 pour enlever 1/418 g d'un solide blanc. On concentre le filtrat pour obtenir une huile jaune clair. On purifie

18

l'huile par chromatographie instantanée sur gel de silice, en éluant avec un gradient (0 à 15 %) de méthanol dans le dichlorométhane pour obtenir 3,751 g (92,1 %) du composé du titre sous forme d'un solide blanc.

b) Chlorhydrate monohydraté de L-valinate de 2-[(2-amino-1,6-dihydro-6-oxo-9H-purine-9-yl)méthoxy]éthyle

On secoue sur un appareil de Parr, sous 345 kPa de H2 pendant un jour, un mélange de 3,730 g de N-[(ben-zyloxy)carbonyl]-L-valinate de 2-[(2-amino-l,6-dihydro-6-oxo-9H-purine-9-yl)méthoxy]éthyle, 377 mg de catalyseur à 5 % de palladium sur charbon, 100 ml de méthanol, 100 ml de tétrahydrofuranne (THF) et 18 ml d'une solution aqueuse de HCl 0,5M. On filtre le mélange réaction-nel à travers un tampon de Célite, puis on le concentre pour obtenir un solide blanc. On recristallise ce solide dans un mélange eau-éthanol pour obtenir 1,762 g (60,0 %) du composé du titre sous forme d'une poudre blanche ; P.F. 150°C (le solide se ratatine ; se transforme progressivement en huile et se décompose en moussant àl95°C). Analyse : Calculé : C-41,22 ; H, 6,12 : N-22,19 ; Cl-9,36 Trouvé : C-41,09 : H-6,10- ; N-22,12 ; Cl-9,28 Exemple 1C : Chlorhydrate monohydraté de D-valinate de

2-(2-amino-l,6-dihydro-6-oxo-9H(purine-9-yl)-méthoxy)éthyle a) N-[(benzyloxy)carbonyl]-D-valinate de 2-[(2-amino-l,6-dihydro-6-oxo-9H-purine-9-yl)méthoxy]éthyle

On chauffe à 60°C une suspension de 1,00 g d'acyclovir (Burroughs Wellcome Co.) dans 80 ml de diméthylformamide (DMF) anhydre pour obtenir une solution incolore. On ajoute à la solution chaude 1, 70 g de CBS- D-valine (Iprevet des E.U.A. N° 4 411 925), 74 mg de 4-diméthylaminopyridine (DMAP) (Chem. Ber., 89, 2921-33 (1956)) et 1,60 g de dicyclohexylcarbodiimide (DCC)

(brevet des E.U.A. N° 2 656 383). On laisse refroidir à la température ambiante la solution limpide et on l'agite pendant 2 jours sous azote.

19

On recharge le mélange réactionnel avec les quantités indiquées ci-dessus de CBZ-D-valine, DMAP et DCC et l'on agite la suspension trouble à la température ambiante pendant 2 jours. On filtre la suspension pour enlever un solide blanc. On concentre le filtrat incolore, on dissout le résidu provenant du filtrat dans un mélange de méthanol et de dichlorométhane et on chromatographie sur gel de silice, en éluant avec un gradient (de 0 à 10 %) de méthanol dans le dichlorométhane pour obtenir 1,10 g (52 %) du composé du titre sous forme d'un solide blanc. P.F. = 155-158°C. Analyse : Calculé : C 52,05 ; H 6,01 ; N 17,34 Trouvé : C 52,02 ; H 5,98 ; N 17,32. b) Chorhydrate monohydraté de D-valinate de 2-L(2-amino-l,6-dihydro-6-oxo-9H-purine-9-yl)méthoxy] éthyle

On secoue sur un appareil de Parr, sous 304 kPa de Hg pendant 4 jours, un mélange de 0,94 g de N-^(benzyl-oxy) carbonyl^-D-l/alinate de 2-^(2-amino-l, 6-dihydro-6-oxo-9H-pyrine-9-yl)méthoxy] éthyle, 200 mg de catalyseur à 5 % de palladium sur charbon, 25 ml de méthanol, 25 ml de tétra-hydrofuranne (THF) et 4,5 ml d'une solution aqueuse de HC1 0,5 M. On filtre le mélange réactionnel à travers une membrane Millipore, on concentre le filtrat et on sèche : on obtient ainsi le composé'" cité en titre, sous la forme d'un solide d'un blanc légèrement sale ; P.F.: 185-188°C. Analyse : Calculé : C 40,47; H 6,18; N 21,37; Cl 10,82 Trouvé : C 40,62; H 5,98; N 21,20; Cl 10,91. Exemple 1D : Chlorhydrate monohydraté de DL-valinate de

2 - (2-amino-l,6-dihydro-6-oxo-9H(pyrine-9-yl)-méthoxy)éthyle a ) N-t (benzyloxy ) carbonyl]]-DL-valinate de 2-I ( 2-amino-1, 6-dihydro-6-oxo-9H-purine-9-yl)méthoxyjéthyle

On chauffe à 60°C une suspension de 2,000 g d'acyclovir (Burroughs Wellcome Co.) dans 150 ml de diméthylformamide (DMF) anhydre pour obtenir une solution incolore. On ajoute à la solution chaude 3,012 g de

\d

1 i i

K

i

20

CBZ-DL-valine '(Sigma Chemicals, St. Louis, MO, U.S.A. et Chemical Abstracts, Vol. 101 (5), 38799j), 154 mg de 4-diméthylaminopyridine (DMAP) (Chem. Ber., 89, 2921-33 (1956)) et 2,998 g de dicyclohexylcarbodiimide (DCC) 5 (brevet des E.U.A. N° 2 656 383). On laisse la solution refroidir à la température ambiante et on l'agite pendant une nuit. On recharge le mélange réactionnel avec les quantités indiquées ci-dessus de DBZ-DL-valine, DMAP et DCC et l'on agite la suspension à la tempé-10 rature ambiante pendant 2 jours. On filtre la suspension pour enlever un solide blanc. On concentre le filtrat et on purifie par chromatographie instantanée sur gel de silice, en éluant avec un gradient (0 à 15 %) de méthanol dans le dichlorométhane : on obtient ainsi le composé du titre.

b) Chlorhydrate monohydraté de DL-valinate de 2-Ç(2-amino-1,6-dihydro-6-oxo-9H-purine-9-yl)méthoxyH éthyle

On secoue sur un appareil de Parr, sous 345 kPa de Hg pendant un jour, un mélange de 3,730 g de 20 N-£(benzyloxy)carbonyl!-DL-valinate de 2-£(2-amino-1,6-dihydro-6-oxo-9H-purine-9-yl)méthoxy]éthyle, 377 mg de catalyseur à 5 % de palladium sur charbon , 100 ml de méthanol, 100 ml de tétrahydrofuranne (THF) et 18 ml d'une solution aqueuse de HC1 0,5M. On filtre 25 le mélange réactionnel à travers un tampon de Célite, puis on le concentre pour obtenir un solide blanc. On recristallise ce solide dans un mélange eau/éthanol pour obtenir le composé'du titre.

21

10

Exemple 2 : Chlorhydrate de L-isoleucinate de 2-(2-amino-1,6-dihydro-6-oxo-9H(purine-9-yl)méthoxy)-éthyle a) N-[(benzyloxy)carbonyl]-L-isoleucinate de 2-[(2-amino-1,6-dihydro-6-oxo-9H-purine-9-yl)méthoxy]éthyle

On agite à la température ambiante, sous azote, un mélange de 1,0 g (4,4 mmoles) d'acyclovir (Burroughs Wellcome Co-) , 74 mg(0,6 mmole) de 4-diméthy.laminopyri-dine (Aldrich Chemical Co. et Chem. Ber., 89, 2921-33

(1956)), 1,6 g (8,0 mmoles) de 1,3-dicyclohexylcarbodii-

mide (Aldrich Chemical Co. et brevet des E.U.A.

N° 2 656 383), 1,8 g (6,6 mmoles) de N-carbobenzoxy-L-

isoleucine (Sigma Chemical Co. et Bull. Chem.. Soc. Jap.

(1966), 39/ 947 ou Tetrahedron,' 40 (24) 5207-11 (1984))

et 0,3 g de tamis moléculaires (Davison type 3A : Fisher

Scientific'Co.) dans 80 ml de N,N-diméthylformamide anhydre..Au bout de 4 jours, on ajoute des suppléments de 1,6 g (8,0 mmoles) de 1,3-dicyclohexylcarbodiimide et

1,8 g (6,6 mmoles) de N-carbobenzoxy-L-isoleucine. On

20 poursuit l'agitation à la température ambiante pendant

7 jours. On filtre le mélange résultant et l'on concentre le filtrat limpide sous vide jusqu'à l'obtention d'un résidu semi-solide. En éluant le résidu à partir de gel de silice 60 (EM, 0,037-0,062 mm ; 8,5 x 14 cm) avec un

25 gradient (2,5 à 5 %) de méthanol dans le chlorure de méthylène, on obtient 0,8 g (45 %) de N-[(benzyloxy)-

carbonyl ]-L-isoleucinate de 2-[( 2-amino-l, 6-d.ihydro-6-

oxo-9H-purine-9-yl)méthoxy]éthyle sous forme d'un solide blanc.

30 P.F. 155-157°C

UV (MeOH) : X 255 nm (£= 17700) 279 (9800) ;

m 8.x *

^min 230 l6100>

RMN (200 MHz, Me2SO-dg) : 0,73-0,80 millionièmes (m, 6H),

1,13-1,33 (m, 2H), 1,66-1,70 (m, 1H), 3,64 (t, 2H), 3,92

35 (t, 1H), 4,16 (m, 2H), 5,00 (s, 2H), 5,32 (s, 2H), 6,47

(large s, 2H), 7,33 (s, 5H), 7,65 (d, J=8Hz, 1H),7,78 (s, 1H), 10,59 (large s, 1H) ;

22

SM (C1/CH4 t 70°C) : m/z 473 (1/0 %, M+l), 347 (23/2,

M-125)/ 225 (100,0, M-247).

° C

[*]£ : -3'07° (c = 0/488, HCl 6N).

CCM : une seule tache sur gel de silice avec MeOH/CH2Cl2 5 à 10 % ; Rf = 0/38

CLHP : un seul pic sur Supelco LCg avec MeOH/E^O à 50 % ;

100 % K1=7/02 Analyse (calculé pour C^H^NgO^. H20 ) :

Calculé : C-53/87 : H-6/16 ; N-17,13 10 Trouvé : C-53,94 ; H-6,20 -, N-17,04

b) Chlorhydrate de L-isoleucinate de 2-[(2-amino-l/6-dihydro-6-oxo-9H-purine-9-yl)méthoxy]éthyle

On traite une solution de 1/11 g (2,2 mmoles) de N-[(benzyloxy)carbonyl]-L-isoleucinate de 2-[(2-amino-15 1,6-dihydro-6-oxo-9H-purine-9-yl)méthoxy]éthyle dans 50 ml d'un mélange méthanol-tétrahydrofuranne à 1:1, a.vec 5 ml d'acide chlorhydrique 0/5N et 0/30 g de palladium à 5 % sur charbon (MCB Reagents). On hydrogène le mélange sur un hydrogénateur de Parr à 345 kPa pendant 11 heures, on 20 - le filtre à travers un tampon de Célite et on concentre le filtrat sous vide pour obtenir 0,86 g (92 %) de chlorhydrate de L-isoleucinate de 2-[(2-amino-l,6-dihydro-6-oxo-9.H-purine-9-yl )méthoxy] éthyle sous forme d'un solide d'un blanci cassé.

25 P.F. 180-182°C (ramollissement effervescent à 150°C environ)

UV ( Me OH ) : X 254 nm (£= 13 400), 272 (9000),

max xep.

. 224 (3600)

mm

RMN (200 MHz, Me2SO-d^) : 0,77-0/84 millionièmes (m/ 6H)/ 30 1,13-1/37 (m, 2H), 1/82 (m, 1H), 3,73 (t, 2H), 3,73 (t,

2H), 3,87 (large t, 1H),"4,14-4,40 (m, 2H), 5,36 (s, 2H), 6,70 (large s, 2H), 7,97 (s, 1H), 8/46 (large s, 3H), 10,87 (s, 1H) ;

SM (Cl/CH4 î 150°C) : m/z 367 (6,9 %, M+29), 339 (100/ 35 M+l), 225 (92,9, M-113)

23

[*]

20 ° C

+11,15° (c = 2,0 HOAc)

10

15

20

25

30

35

CCM : une seule tache sur gel de silice avec MeOH à 10 %

dans * Rf = 0,12

CHLP : un seul pic sur Versapack C.

MeOH/H2O/0,l % de F3CCOOH

'18 100

avec 10 % de K1=3,74

Analyse (calculé pour C^4H22N6O4-l'25HCl.l,10MeOH.0,251^0) Calculé : C-42,81 ; H-6,70 7 N-19,84 ; Cl-10,46 Trouvé : C-42,82 ; H-6,50 ; N-19,64 ; Cl-10,46 Exemple 3 : Formulations de comprimés

On prépare les formulations suivantes A, B et C en granulant au mouillé les ingrédients à l'aide d'une solution de la polyvinylpyrrolidone, puis en ajoutant le stéarate de magnésium et en comprimant (B.P. Pharmacopée Britannique).

Formulation A

Ingrédient actif Lactose B.P.

Polyvinylpyrrolidone B.P. Amidon-glycolate de sodium Stéarate de magnésium

Formulation B

Ingrédient actif Lactose Avicel PH 101 Polyvinylpyrrolidone B.P. Amidon-glycolate de sodium Stéarate de magnésium

Formulation C Ingrédient actif Lactose Amidon mg/comprimé 250 210 15 20

5

500

mg/comprimé 250 150 • 60 15 20 5

mg/comprimé 250 26 9 12

3

300

mg/comprimé 250

26 9 12 3

500 300

mg/comprimé 100 200 50

L

24

Polyvinylpyrrolidone B.P. 5

Stéarate de magnésium 4

359

On prépare les formulations suivantes D et E 5 en comprimant directement les ingrédients mélangés. Le lactose de la formulation E est du type pour compression. Formulation D

mg/comprimé

Ingrédient actif 250

10 Avicel 150

Stéarate de magnésium 4

404

Formulation E

mg/comprimé

-L5 Ingrédient actif 250

Lactose 150

Avicel 100

Stéarate de magnésium 5

505

20 Formulation F (formulation à libération réglée)

On prépare cette formulation en granulant au mouillé les ingrédients ci-dessous à l'aide d'une solution de la polyvinylpyrrolidone/ puis en ajoutant le stéarate de magnésium et en comprimant. 25 mg/comprimé

Ingrédient actif 500

Hydroxypropylméthyl-cellulose

(Methocel K4M Premium) 112

30

Lactose B.P. 53

Polyvinylpyrrolidone B.P. 28

Stéarate de magnésium 7

700

Exemple 4 : Formulations de capsules Formulation A

On prépare une formulation de capsule en rnélan-35 géant les ingrédients de la Formulation D de l'Exemple 3 ci-dessus et en remplissant du mélange une capsule de

25

gélatine dure en deux parties. On prépare la Formulation B (ci-dessous) d'une manière analogue.

Formulation B

mg/capsule

Ingrédient actif 250

Lactose B.P. 143

Amidon-glycolate de sodium 25

Stéarate de magnésium 2

420

10 Formulation C

mg/capsule

Ingrédient actif 250

Macrogol 4000 B.P. 350

600

15 on prépare ces capsules en faisant fondre le

Macrogol 4000 B.P./ en dispersant l'ingrédient actif dans la masse fondue et en remplissant de la masse fondue une capsule de gélatine dure en deux parties.

Formulation D

20 mg/capsule

Ingrédient actif 250

Lécithine 100

Huile d'arachide 100

450

25 on prépare ces capsules en dispersant l'ingré

dient actif dans la lécithine et l'huile d'arachide et en remplissant' de la dispersion des capsules de gélatine élastique molle.

Formulation E (Capsule à libération réglée)

30 on prépare la formulation suivante de capsule à

libération réglée en extrudant les ingrédients (a)/ (b) et (c) au moyen d'une extrudeuse, puis en transformant l'extrudat en petites sphères et en le séchant. On revêt ensuite les nodules séchés avec une membrane régulatrice

35 de libération (d) et on en remplit une capsule de gélatine dure en deux parties.

26

mg/capsule

(a) Ingrédient actif 250

(b) Cellulose microcristalline 125

(c) Lactose B.P. 125 5 (d) Ethyl-cellulose 13

513

Exemple 5 : Solution à usage ophtalmique

Ingrédient actif 0,5 g

Propylène-glycol 0/2 g

10 Thiomersal 0/001 g

Eau purifiée jusqu'à 100 ml pH ajusté à 7/5

Exemple 6 : Formulation injectable

Ingrédient actif 0/200 g

15 Tampon citrate apyrogène stérile (pH 7/0)/

jusqu'à 10 ml

On dissout l'ingrédient actif dans la majeure partie du tampon citrate (35-40°C), puis on complète au volume et on filtre à travers un filtre microporeux stérile dans un flacon de verre ambré de 10 ml (type 1) que l'on bouche avec des fermetures et capuchons stériles. Exemple 7 : Formulation pour injection intramusculaire Ingrédient actif 0/20 g

Alcool benzylique 0/10 g

Glycofurol 75 1,45 g

Eau pour injections, q.s. pour 3,00 ml

On dissout l'ingrédient actif dans le glycofurol. On ajoute et on dissout ensuite l'alcool benzylique et l'on ajoute de l'eau jusqu'à 3 ml. On filtre ensuite le mélange à travers un filtre microporeux stérile et on l'introduit dans des flacons en verre ambré de 3 ml (type 1) que l'on bouche hermétiquement.

Exemple 8 : Suspension en sirop

Ingrédient actif 0,25 g

Solution de sorbitol 1,50 g

Glycérol 2,00 g

20

25

30

35

27

Benzoate de sodium 0/005 g

Arôme f 0/0125 ml

Eau purifiée/ q.s. pour 5/00 ml

On dissout le benzoate de sodium dans une portion de l'eau purifiée et l'on ajoute la solution de sor-bitol. On ajoute et dissout l'ingrédient actif. On ajoute le glycérol et l'arôme et les incorpore en mélangeant. On ajoute de l'eau jusqu'à un volume final de 5 ml.

Exemple 9 : Suppositoire rog/suppositoire Ingrédient actif (63 jim)* 250

Graisse dure B.P.

(Witepsol H15 - Dynamit Nobel) 1700

1950

* L'ingrédient actif est utilisé sous forme d'une poudre dont au moins 90 % des particules mesurent 63 pm ou moins de diamètre.

On fait fondre un cinquième du Witepsol H15 dans une cuve chemisée de vapeur d'eau à une température maximale de 45°C. On tamise l'ingrédient actif à travers un tamis .de 200 pm et l'ajoute à la base fondue tout en mélangeant/ en utilisant un mélangeur Silverson équipé d'une tête coupante/ jusqu'à ce qu'on obtienne une dispersion lisse. Tout en maintenant le mélange à 45°C/ on ajoute le reste du Witepsol H15 à la suspension et l'on agite-pour assurer un mélange homogène. On passe la totalité de la suspension à travers une toile d'acier inoxydable de 250 yum et on la laisse refroidir jusqu'à 40°C sous agitation continue. A une température de 38°C à 40°C/ on introduit le mélange dans des moules appropriés en matière plastique. On laisse les suppositoires refroidir à la température ambiante.

Exemple 10 : Pessaires

Ingrédient actif/ 63 um Dextrose anhydre mg/pessaire 250 543

\

28

Amidon

Stéarate de magnésium

200

7

1000

On mélange directement les ingrédients ci-dessus et l'on prépare des pessaires en comprimant directement le mélange résultant.

Exemple 11

a) Activité antivirale dans des monocouches de cellules Vero disposées dans des cuvettes à plusieurs alvéoles. On détermine l'activité des composés selon la méthode d'essai par réduction du nombre de plaques, dans laquelle on infecte une monocouche de cellules avec une suspension de HSV 1, puis les recouvre d'agarose nutritif sous forme de gel pour garantir l'absence totale de diffusion du virus à travers la culture. Dans la couche recouvrante d'agarose nutritif, on incorpore le composé en une gamme de concentrations de molarité connue. Pour chaque concentration, on exprime le nombre de plaques en pourcentage par rapport au témoin et l'on trace une courbe de réponse à la dose. D'après cette courbe, on estime la concentration inhibitrice à 50 %

b) Détermination de la biodisponibilité par voie orale

On administre le composé à essayer à des rats Long Evans par gavage à une dose équivalente à 25 mg/kg d'acyclovir. On recueille les urines pendant 24 et 48 heures après l'administration, on les filtre par ultrafiltra-tion et les analyse par chromatographie liquide à haute pression à phase inversée. On exprime la biodisponibilité par voie orale du composé par le pourcentage de la dose

On soumet à l'essai le virus de l'herpès (HSV 1)

Composé

£I50_(£H)

Exemple 1 Exemple 2 Acyclovir

0,84 3,8 0,08 - 0,1

29

10

15

20.

25

30

35

qui est excrété dans les urines, exprimé en acyclovir.

Composé Récupération urinaire

(% de la dose) exprimée en acyclovir

Exemple 1 63

Exemple 2 50

Acyclovir (ACF) 15

Ester glycylique de AVC 30

Ester L-alanylique de AVC 34

d) Données sur la toxicité...

Détermination de l'inhibition de croissance de cellules mammifères non infectées

_..0n_ mesure, la susceptibilité, .des composés candi-. -

dats à inhiber la croissance de cellules D98 (humaines) et de cellules L (murines) en déterminant le nombre de cellules après avoir exposé pendant trois jours un nombre donné de cellules à diverses dilutions du composé (J.L. Rideout et T.A. Krenitsky, G.W. Koszalka, N.K. Cohn, E.Y. Chao, G.B. Elion, V.S. Latter et R.B. Williams (1982), J. Med. Chem., 25: 1040-1044). On compare ensuite le nombre de' cellules au nombre obtenu en l'absence de composé. On exécute la numération cellulaire, soit par comptage direct de particules, puis trypsination de la monocouche/ soit par détermination spectrophotométrique de la quantité de colorant vital absorbé par les cellules. Ces deux méthodes donnent 'des résultats comparables.

Analyse des résultats

On calcule la concentration de composé qui donne lieu à 50 % des valeurs témoins (CI^q)/ soit par interpolation directe sur des graphiques montrant le logarithme de la concentration du composé en fonction du pourcentage par rapport à la valeur témoin/ soit par un programme informatique qui analyse les résultats selon le même algorithme. Dans ces calculs, on utilise les résultats entrant dans l'intervalle de 20 % à 80 % du témoin..

30

Exemple Toxicité envers les cellules (% du témoins à 100 juM)

Cellules D-98 Cellules L

Acyclovir

99

72

1B

91

85

2

80

83

-n

31

Claims

REVENDICATIONS

1. Procédé de préparation d'un composé de for-

10

15

20

25

30

35

mule (I)

(I)

dans laquelle R^ représente un groupe de formule -CH( CH^^

ou -CH(CHg)Cï^CH^/ ou un sel pharmaceutiquement acceptable d'un tel composé/ caractérisé en ce qu'il consiste :

a) à faire réagir un composé de formule (II) :

X

(II)

a^oco^ou

(dans laquelle X est un groupe hydroxy facultativement protégé/ et Y est un groupe amino facultativement protégé) avec une valine ou isoleucine facultativement protégée ou un équivalent fonctionnel de celle-ci ; ou b) à convertir un composé de formule (III) :

M

(III)

c%oo^c%ocogh(£, )

(dans laquelle R^ est comme défini ci-dessus/ et M représente un groupe hydroxy et G représente un atome ou groupe qui peut être remplacé par un groupe amino ou converti en un groupe amino/ ou bien G représente un groupe amino et M représente un atome ou groupe qui peut être remplacé par un groupe hydroxy ou converti en un groupe hydroxy)

32

en un composé de formule (I) ou un sel pharmaceutiquement acceptable d'un tel composé ; ou c) à faire réagir un composé de formule (IV) :

(IV)

Q

(dans laquelle X et Y sont comme définis ci-dessus et Q

10 représente un atome ou groupe partant), avec un composé

de formule (V) :

. ach2och2ch2ococh(r1)r2 (V)

(dans laquelle R, est comme défini ci-dessus, A représente

2

un atome ou groupe partant et R est un groupe amino fa-15 cultativement protégé) ; et, facultativement, à effectuer l'une ou plusieurs des conversions suivantes en tout ordre désiré :

i) éliminer de quelconques groupes protecteurs •,

ii) lorsque le produit résultant est un composé de for-20 mule (I), convertir ledit composé en l'un de ses sels pharmaceutiquement acceptables ; et iii) lorsque le produit résultant est un sel pharmaceutiquement acceptable d'un composé de formule (I), convertir ledit sel en le composé d'origine de formule

25 (I).

2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le composé préparé est le L-valinate de

2-(2-amino-l,6-dihydro-6-oxo-9H(purine-9-yl)méthoxy)éthyle.

3. Procédé selon la revendication 1, caractérisé 30 en ce que le composé préparé est le L-isoleucinate de

2-(2-amino-l,6-dihydro-6-oxo-9H(purine-9-yl)méthoxy)-éthyle.

4. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il comprend 1'opé-

i

35 ration consistant à mélanger un composé de formule (I) avec un acide pour former un sel.

33

10

15

20

25

30

35

5. Procédé selon la revendication 4, caractérisé en ce que ledit acide est l'acide chlorhydrique.

6. Procédé de préparation d'une formulation pharmaceutique contenant un composé de formule (I) tel que défini dans la revendication 1 ou un sel pharmaceutiquement acceptable d'un tel composé/ caractérisé en ce qu'il consiste à préparer un composé de formule (I) ou un sel pharmaceutiquement acceptable d'un tel composé

a) en faisant réagir un composé de formule (II)

X

'N

(II)

Û^OG^a^OM

(dans laquelle X est un groupe hydroxy facultativement protégé/ et Y est un groupe amino facultativement protégé) avec une valine ou isoleucine facultativement protégée ou un équivalent fonctionnel de celle-ci ; ou b) -en-convertissant un composé de formule (III) :

(III)

c%0c^c%0c0ch (£, )

(dans laquelle est comme défini ci-dessus/ et M représente un groupe hydroxy et G représente un atome ou groupe qui peut être remplacé par un groupe amino ou converti en un groupe amino/ ou bien G représente un groupe amino et M représente un atome ou groupe qui peut être remplacé par un groupe hydroxy ou converti en un groupe hydroxy) en un composé de formule (I) ou un sel pharmaceutiquement acceptable d'un tel composé ; ou c) en faisant réagir un composé de formule (IV) :

V

34

Q

(dans laquelle X et Y sont comme définis ci-dessus et Q représente un atome ou groupe partant) avec un composé de formule (V) :

10 aci^ochjchgocochcr^^ (v)

(dans laquelle est comme défini ci-dessus, A représente un groupe ou atome partant et R£ est un groupe amino facultativement protégé) ; et/ facultativement/ en effectuant l'une ou plusieurs des conversions suivantes/ en 15 tout ordre désiré :

i) éliminer de quelconques groupes protecteurs ;

ii) lorsque le produit résultant est un composé de formule (I)/ convertir ledit composé en l'un de ses sels pharmaceutiquement acceptables ; et

20 iii) lorsque le produit résultant est un sel pharmaceutiquement acceptable d'un composé de formule (I)/ convertir ledit sel en le composé d'origine de formule

(I) /

et à mettre le composé résultant en association avec un 25 support''pharmaceutiquement acceptable pour celui-ci.