PL180149B1 - sposób wytwarzania aktywowanego poli(glikolu etylenowego),koniugat biologicznie aktywny, sposób wytwarzania koniugatu poli(glikolu etylenowego sposób wytwarzania sulfonu winylowego i sposób wytwarzania sulfonu haloetylowego PL PL PL PL PL PL PL PL - Google Patents
sposób wytwarzania aktywowanego poli(glikolu etylenowego),koniugat biologicznie aktywny, sposób wytwarzania koniugatu poli(glikolu etylenowego sposób wytwarzania sulfonu winylowego i sposób wytwarzania sulfonu haloetylowego PL PL PL PL PL PL PL PLInfo
- Publication number
- PL180149B1 PL180149B1 PL94314298A PL31429894A PL180149B1 PL 180149 B1 PL180149 B1 PL 180149B1 PL 94314298 A PL94314298 A PL 94314298A PL 31429894 A PL31429894 A PL 31429894A PL 180149 B1 PL180149 B1 PL 180149B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- moiety
- sulfone
- active
- poly
- ethylene glycol
- Prior art date
Links
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 title claims abstract description 361
- -1 poly(ethylene glycol) Polymers 0.000 title claims abstract description 95
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 25
- AFOSIXZFDONLBT-UHFFFAOYSA-N divinyl sulfone Chemical compound C=CS(=O)(=O)C=C AFOSIXZFDONLBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 94
- 150000003457 sulfones Chemical group 0.000 claims abstract description 115
- 150000003573 thiols Chemical group 0.000 claims abstract description 75
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims abstract description 74
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 70
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 68
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims abstract description 65
- 150000004820 halides Chemical class 0.000 claims abstract description 44
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims abstract description 40
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethyl mercaptane Natural products CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 37
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 claims abstract description 35
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 claims abstract description 35
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 33
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 29
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims abstract description 26
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 24
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims abstract description 20
- 150000001412 amines Chemical group 0.000 claims abstract description 14
- 150000001721 carbon Chemical group 0.000 claims abstract description 12
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 11
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 80
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 63
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 63
- LUYAMNYBNTVQJG-UHFFFAOYSA-N 1-chloro-2-(2-chloroethylsulfonyl)ethane Chemical compound ClCCS(=O)(=O)CCCl LUYAMNYBNTVQJG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 35
- MBDUIEKYVPVZJH-UHFFFAOYSA-N 1-ethylsulfonylethane Chemical compound CCS(=O)(=O)CC MBDUIEKYVPVZJH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 35
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 23
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 21
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- GHKCSRZBNZQHKW-UHFFFAOYSA-N 1-sulfanylethanol Chemical group CC(O)S GHKCSRZBNZQHKW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 claims description 10
- 125000000020 sulfo group Chemical group O=S(=O)([*])O[H] 0.000 claims description 9
- 150000002367 halogens Chemical group 0.000 claims description 8
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical group OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 239000012620 biological material Substances 0.000 claims description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 7
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 5
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 claims description 4
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 4
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 claims description 3
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 claims description 3
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 claims description 3
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 claims description 3
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000011203 carbon fibre reinforced carbon Substances 0.000 claims description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 claims description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 2
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 claims description 2
- OFBPGACXRPVDQW-UHFFFAOYSA-N thiirane 1,1-dioxide Chemical compound O=S1(=O)CC1 OFBPGACXRPVDQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- CREMABGTGYGIQB-UHFFFAOYSA-N carbon carbon Chemical compound C.C CREMABGTGYGIQB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 125000000325 methylidene group Chemical group [H]C([H])=* 0.000 abstract description 17
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 abstract description 8
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 abstract description 7
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 abstract 3
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 62
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 21
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 21
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 20
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 20
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 17
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 15
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 13
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 13
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 12
- 239000000047 product Substances 0.000 description 12
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 12
- FYSNRJHAOHDILO-UHFFFAOYSA-N thionyl chloride Chemical compound ClS(Cl)=O FYSNRJHAOHDILO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 11
- XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N Heavy water Chemical compound [2H]O[2H] XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N 0.000 description 10
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 10
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 10
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 10
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 9
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 9
- AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N Methanesulfonic acid Chemical class CS(O)(=O)=O AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 8
- 239000002243 precursor Chemical group 0.000 description 8
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 7
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 7
- YYROPELSRYBVMQ-UHFFFAOYSA-N 4-toluenesulfonyl chloride Chemical compound CC1=CC=C(S(Cl)(=O)=O)C=C1 YYROPELSRYBVMQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 6
- 239000012359 Methanesulfonyl chloride Substances 0.000 description 6
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 6
- QARBMVPHQWIHKH-UHFFFAOYSA-N methanesulfonyl chloride Chemical compound CS(Cl)(=O)=O QARBMVPHQWIHKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 5
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 5
- 125000001309 chloro group Chemical group Cl* 0.000 description 5
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 5
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 5
- ZFKJVJIDPQDDFY-UHFFFAOYSA-N fluorescamine Chemical compound C12=CC=CC=C2C(=O)OC1(C1=O)OC=C1C1=CC=CC=C1 ZFKJVJIDPQDDFY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 5
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 5
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 5
- 125000001174 sulfone group Chemical group 0.000 description 5
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 4
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 4
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 4
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 4
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 4
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 4
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 4
- WFKWXMTUELFFGS-UHFFFAOYSA-N tungsten Chemical compound [W] WFKWXMTUELFFGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229910052721 tungsten Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000010937 tungsten Substances 0.000 description 4
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 4
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 3
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 3
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 3
- MGNCLNQXLYJVJD-UHFFFAOYSA-N cyanuric chloride Chemical compound ClC1=NC(Cl)=NC(Cl)=N1 MGNCLNQXLYJVJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 description 3
- 125000000879 imine group Chemical group 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N methane Natural products C VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 3
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 3
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 3
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 2
- BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N Aspirin Chemical compound CC(=O)OC1=CC=CC=C1C(O)=O BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 2
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 2
- SMWDFEZZVXVKRB-UHFFFAOYSA-N Quinoline Chemical compound N1=CC=CC2=CC=CC=C21 SMWDFEZZVXVKRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IUHFWCGCSVTMPG-UHFFFAOYSA-N [C].[C] Chemical group [C].[C] IUHFWCGCSVTMPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 229960001138 acetylsalicylic acid Drugs 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 2
- HAXFWIACAGNFHA-UHFFFAOYSA-N aldrithiol Chemical compound C=1C=CC=NC=1SSC1=CC=CC=N1 HAXFWIACAGNFHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 239000002473 artificial blood Substances 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 2
- LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N cystine group Chemical group C([C@@H](C(=O)O)N)SSC[C@@H](C(=O)O)N LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 2
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 2
- 230000009145 protein modification Effects 0.000 description 2
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 2
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M sulfonate Chemical compound [O-]S(=O)=O BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 125000001273 sulfonato group Chemical group [O-]S(*)(=O)=O 0.000 description 2
- 125000005147 toluenesulfonyl group Chemical group C=1(C(=CC=CC1)S(=O)(=O)*)C 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 229920003169 water-soluble polymer Polymers 0.000 description 2
- XGMDYIYCKWMWLY-UHFFFAOYSA-N 2,2,2-trifluoroethanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CC(F)(F)F XGMDYIYCKWMWLY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NGNBDVOYPDDBFK-UHFFFAOYSA-N 2-[2,4-di(pentan-2-yl)phenoxy]acetyl chloride Chemical compound CCCC(C)C1=CC=C(OCC(Cl)=O)C(C(C)CCC)=C1 NGNBDVOYPDDBFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen sulfide Chemical class S RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N Dimethyl sulfoxide Chemical compound [2H]C([2H])([2H])S(=O)C([2H])([2H])[2H] IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N 0.000 description 1
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical compound C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N Maleimide Chemical compound O=C1NC(=O)C=C1 PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004721 Polyphenylene oxide Substances 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 229910006124 SOCl2 Inorganic materials 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 description 1
- 235000012544 Viola sororia Nutrition 0.000 description 1
- 241001106476 Violaceae Species 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 1
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001370 alpha-amino acid derivatives Chemical group 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 230000003466 anti-cipated effect Effects 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000010533 azeotropic distillation Methods 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 238000006664 bond formation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- PFKFTWBEEFSNDU-UHFFFAOYSA-N carbonyldiimidazole Chemical compound C1=CN=CN1C(=O)N1C=CN=C1 PFKFTWBEEFSNDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- VMKJWLXVLHBJNK-UHFFFAOYSA-N cyanuric fluoride Chemical compound FC1=NC(F)=NC(F)=N1 VMKJWLXVLHBJNK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000032050 esterification Effects 0.000 description 1
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 125000002791 glucosyl group Chemical class C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 1
- 150000002314 glycerols Chemical class 0.000 description 1
- 125000001072 heteroaryl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 description 1
- 229920001519 homopolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000004170 methylsulfonyl group Chemical group [H]C([H])([H])S(*)(=O)=O 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- VEYYWZRYIYDQJM-UHFFFAOYSA-N n-α-acetyllysine Chemical compound CC(=O)NC(C(O)=O)CCCCN VEYYWZRYIYDQJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 230000009965 odorless effect Effects 0.000 description 1
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010979 pH adjustment Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000006320 pegylation Effects 0.000 description 1
- 150000002978 peroxides Chemical class 0.000 description 1
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N phenol group Chemical group C1(=CC=CC=C1)O ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QIIPQYDSKRYMFG-UHFFFAOYSA-M phenyl carbonate Chemical compound [O-]C(=O)OC1=CC=CC=C1 QIIPQYDSKRYMFG-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N phloretic acid Chemical compound OC(=O)CCC1=CC=C(O)C=C1 NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 150000003017 phosphorus Chemical class 0.000 description 1
- 229920000233 poly(alkylene oxides) Polymers 0.000 description 1
- 229920000570 polyether Polymers 0.000 description 1
- 229920000151 polyglycol Polymers 0.000 description 1
- 239000010695 polyglycol Substances 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000004952 protein activity Effects 0.000 description 1
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 1
- 229920013730 reactive polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 229960001922 sodium perborate Drugs 0.000 description 1
- YKLJGMBLPUQQOI-UHFFFAOYSA-M sodium;oxidooxy(oxo)borane Chemical compound [Na+].[O-]OB=O YKLJGMBLPUQQOI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- 229960002317 succinimide Drugs 0.000 description 1
- CYFLXLSBHQBMFT-UHFFFAOYSA-N sulfamoxole Chemical group O1C(C)=C(C)N=C1NS(=O)(=O)C1=CC=C(N)C=C1 CYFLXLSBHQBMFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006277 sulfonation reaction Methods 0.000 description 1
- 125000000472 sulfonyl group Chemical group *S(*)(=O)=O 0.000 description 1
- 229920001897 terpolymer Polymers 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N toluene-4-sulfonic acid Chemical compound CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- TUQOTMZNTHZOKS-UHFFFAOYSA-N tributylphosphine Chemical compound CCCCP(CCCC)CCCC TUQOTMZNTHZOKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ILWRPSCZWQJDMK-UHFFFAOYSA-N triethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN(CC)CC ILWRPSCZWQJDMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
- C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
- C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
- C08G65/32—Polymers modified by chemical after-treatment
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
- C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
- C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
- C08G65/32—Polymers modified by chemical after-treatment
- C08G65/329—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds
- C08G65/334—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds containing sulfur
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
- A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
- C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
- C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
- C08G65/32—Polymers modified by chemical after-treatment
- C08G65/321—Polymers modified by chemical after-treatment with inorganic compounds
- C08G65/326—Polymers modified by chemical after-treatment with inorganic compounds containing sulfur
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
- C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
- C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
- C08G65/32—Polymers modified by chemical after-treatment
- C08G65/329—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/81—Carrier - bound or immobilized peptides or proteins and the preparation thereof, e.g. biological cell or cell fragment as carrier
- Y10S530/812—Peptides or proteins is immobilized on, or in, an organic carrier
- Y10S530/815—Carrier is a synthetic polymer
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/81—Carrier - bound or immobilized peptides or proteins and the preparation thereof, e.g. biological cell or cell fragment as carrier
- Y10S530/812—Peptides or proteins is immobilized on, or in, an organic carrier
- Y10S530/815—Carrier is a synthetic polymer
- Y10S530/816—Attached to the carrier via a bridging agent
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Polyethers (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Other Resins Obtained By Reactions Not Involving Carbon-To-Carbon Unsaturated Bonds (AREA)
- Addition Polymer Or Copolymer, Post-Treatments, Or Chemical Modifications (AREA)
- Polyesters Or Polycarbonates (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Treatments Of Macromolecular Shaped Articles (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Polymers With Sulfur, Phosphorus Or Metals In The Main Chain (AREA)
Abstract
1 Aktywowany poli(glikol etylenowy) o ogólnym wzorze R-(OCH 2 CH2 )n -Y w którym n oznacza liczbe calkowita od 5 do 3000, Y jest wybrany z grupy skladajacej sie z -NH- OC-CH 2 -CH 2 -S O 2 -CH=CH 2 , -CO-NH-CH2 -CH2-SO2- CH=CH2 i SO 2 -CH 2 -CH2 -X, gdzie X oznacza chlorowiec, a R jest wybrany z grupy skladajacej sie z H-, H 3 C-, CH2=CH-SO2 -, X-CH 2 -CH2 -SO2 -, CH2 =CH-SO2- CH 2 -CH2 -CO-NH-, CH 2 =CH-SO2 -CH 2 -CH 2 -NH-CO- 6 Sposób wytwarzania aktywowanego poli(glikolu etylenowego) majacego aktywne ugrupowanie sulfonowe kowalentnie zwiazane z po- li(glikolem etylenowym), znamienny tym, ze obejmuje etap przylaczenia ugrupowania zawierajacego siarke bezposrednio do atomu wegla poli(glikolu etylenowego) a nastepnie przeksztalcenia ugrupowania zawierajacego siarke w aktywne ugrupowanie sulfonowe 13 Sposób wytwarzania aktywowanego poli(glikolu etylenowego) majacego aktywne ugrupowanie sulfonowe kowalentnie zwiazane z poli(glikolem ety- lenowym), znamienny tym, ze obejmuje aktywowanie poli(glikolu etylenowego) z wytworzeniem reaktywnego ugrupowania aminowego kowalentnie zwiazanego z poli(glikolem etylenowym), dostarczenie laczacego ugrupowania zawierajacego aktywne ugrupowanie sulfonu i aktywne ugrupowanie estru sukcynoimidylowego oraz reakcje reaktywnego ugrupowania aminowego z aktywnym ugrupowaniem estru sukcynoimidylowego z wytworzeniem aktywowanego polimeru. 15 Sposób wytwarzania aktywowanego poli(glikolu etylenowego) majacego aktywne ugrupowanie sulfonowe kowalentnie zwiazane z poli(glikolem ety- lenowym), znamienny tym, ze obejmuje aktywowanie poli(glikolu etylenowego) z wytworzeniem reaktywnego ugrupowania estrowego sukcynoimidylowego kowalentnie zwiazanego z wymienionym polimerem, dostarczenie laczacego ugrupowania zawierajacego aktywne ugrupowanie sulfonu i aktywne ugrupowanie aminowe oraz reakcje reaktywnego ugrupowania aminowego z aktywnym ugrupowaniem estru sukcynoimidylowego z wytworzeniem polimeru. 17 Koniugat biologicznie aktywny, znamienny tym, ze zawiera aktywna biologicznie czasteczke i aktywowany poli(glikol etylenowy) o ogólnym wzorze R-(OCH2C H2)n-Y w którym n oznacza liczbe calkowita od 5 do 3000, Y jest wybrany z grupy skladajacej sie z -NH-OC-CH 2 -CH 2-SO 2-CH=CH2 , -CO-NH-CH2- CH 2 -SO 2 -CH=CH 2 i SO 2 -CH 2 -CH 2 -X, gdzie X oznacza chlorowiec, a R jest wybrany z grupy skladajacej sie z H-, H3C-, CH 2 =CH-SO2 -, X-CH2 -CH 2 -SO2-, CH 2 =CH-S O 2 -CH 2 -CH 2 -CO-NH-, CH2 = CH -SO 2 -CH2 -CH2-NH-CO-, przy czym aktywowany poli(glikol etylenowy) jest kowalentnie zwiazany z aktywna biologicznie czasteczka przez aktywne ugrupowanie sulfonu 22 Sposób wytwarzania koniugatu poli(glikolu etylenowego) i biologicznie aktywnej czasteczki majacej ugrupowanie tiolowe, znamienny tym, ze obejmuje dostarczenie aktywowanego poli(glikolu etylenowego) otrzymanego sposobem polegajacym na przylaczeniu ugrupowania zawierajacego siarke bezposrednio do atomu wegla poli(glikolu etylenowego) a nastepnie przeksztalceniu ugrupowania zawierajacego siarke w aktywne ugrupowanie sulfonowe, reakcje biologicznie aktywnej czasteczki z aktywowanym poli(glikolem etylenowym) z wytworzeniem kowalentnego wiazania pomiedzy ugrupowaniem tiolowym wymienionej biologicznie aktywnej czasteczki i aktywnym ugrupowaniem sulfonu aktywowanego poli(glikolu etylenowego) 24 Sposób wytwarzania koniugatu poli(glikolu etylenowego) i biologicznie aktywnej czasteczki zawierajacej ugrupowanie tiolowe, znamienny tym, ze obejmuje etapy (a) poddania poli(glikolu etylenowego) majacego co najmniej jedno aktywne ugrupowanie hydroksylowe reakcji ze zwiazkiem w celu wytworzenia poli(glikolu etylenowego) podstawionego albo estrem albo halogenkiem, (b) poddania poli(glikolu etylenowego) z etapu (a) podstawionego estrem albo halogenkiem reakcji z merkaptoetanolem w celu zamiany ugrupo- wania estrowego lub halogenkowego na rodnik merkaptoetanolowy, PL PL PL PL PL PL PL PL
Description
Przedmiotem wynalazku jest aktywowany poli(glikol etylenowy), sposób wytwarzania aktywowanego poli(glikolu etylenowego), koniugat biologicznie aktywny i sposób wytwarzania koniugatu biologicznie aktywnego, sposób wytwarzania sulfonu winylowego i sposób wytwarzania sulfonu haloetylowego. Pochodne polimerów hydrofitowych stosuje się do modyfikowania charakterystyki powierzchni i cząsteczek.
Badano zastosowanie poli(glikolu etylenowego) („PEG”) w środkach farmaceutycznych, na sztucznych wszczepach i do innych zastosowań, gdzie duże znaczenie ma zgodność biologiczna. Zaproponowano różne pochodne poli(glikolu etylenowego) („pochodne PEG”), które mają aktywne ugrupowanie umożliwiające przyłączenie PEG do środków farmaceutycznych i wszczepów oraz ogólnie do cząsteczek i powierzchni w celu zmodyfikowania charakterystyki fizycznej lub chemicznej cząsteczek lub powierzchni.
Na przykład zaproponowano pochodne PEG do sprzęgania PEG z powierzchniami w celu kontrolowania zwilżania, gromadzenia statycznego i przyłączania innych rodzajów cząsteczek do powierzchni, włącznie z białkami i resztami białek. W szczególności zaproponowano stosowanie pochodnych PEG w celu przyłączania do powierzchni plastykowych
180 149 soczewek kontaktowych, aby zmniejszyć gromadzenie się białek i ograniczyć przymglenie wzroku. Zaproponowano stosowanie pochodnych PEG do przyłączania ich do sztucznych naczyń krwionośnych w celu zmniejszenia gromadzenia się białek i niebezpieczeństwa blokady. Pochodne PEG zaproponowano do unieruchamiania białek na powierzchni, np. w enzymatycznej katalizie reakcji chemicznych.
W innych przykładach zaproponowano przyłączanie pochodnych PEG do cząsteczek, włącznie z białkami, w celu osłaniania cząsteczki przed atakiem chemicznym, w celu ograniczenia niekorzystnych wpływów ubocznych cząsteczki lub w celu zwiększenia wymiarów cząsteczki, aby w ten sposób potencjalnie uzyskać substancje użyteczne leczniczo, które jednak pod innymi względami nie są przydatne, lub są nawet szkodliwe w stosunku do żywego organizmu. Małe cząsteczki, które normalnie byłyby wydalone poprzez nerki, pozostają zatrzymane w strumieniu krwi, jeśli ich wymiary zwiększą się w wyniku przyłączenia zgodnej biologicznie pochodnej PEG. Białka i inne substancje, które dają odpowiedź immunologiczną po ich wstrzyknięciu, mogą być w pewnym stopniu ukryte przed układem immunologicznym w wyniku sprzęgania cząsteczki PEG z białkiem.
Pochodne PEG zaproponowano także do oddzielania powinowactwa od masy komórkowej, np. powinowactwa enzymów. Podczas oddzielania powinowactwa, pochodna PEG zawiera grupę funkcyjną do odwracalnego sprzęgania z enzymem zawartym w masie komórkowej. PEG i koniugat enzymu są oddzielane od masy komórkowej, a następnie enzym jest oddzielany od pochodnej PEG, jeśli to jest pożądane.
Sprzęganie pochodnych PEG z białkami ilustruje pewne trudności, jakie występują podczas przyłączania PEG do powierzchni i cząsteczek. W przypadku licznych powierzchni i cząsteczek, liczba miejsc dostępnych do reakcji sprzęgania w pochodnej PEG jest w pewnej mierze ograniczona. Białka np. mają zwykle ograniczoną liczbę i wyróżnione rodzaje reaktywnych miejsc dostępnych do sprzęgania. Jeszcze większe problemy wynikają z faktu, że pewne miejsca reaktywne mogą być odpowiedzialne za aktywność biologiczną białka, gdy enzym katalizuje pewne reakcje chemiczne. Pochodna PEG przyłączona do dostatecznej liczby takich miejsc mogłaby niekorzystnie wpływać na aktywność białka.
Miejsca reaktywne, które tworzą miejsca przyłączania pochodnych PEG do białek, są określane przez strukturę białka. Białka, włącznie z enzymami, są zbudowane z różnych sekwencji α-aminokwasów, które mają ogólną strukturę H2N-CHR-COOH. Ugrupowanie aaminowe (H2N-) jednego aminokwasu łączy się z ugrupowaniem karboksylowym (-COOH) sąsiedniego aminokwasu, z wytworzeniem wiązań amidowych, które można przedstawić jako -(NH-CHR-CO)n, przy czym n może mieć wartość setek lub tysięcy. Fragment przedstawiony przez R może zawierać miejsca reaktywne do biologicznej aktywności białka i do przyłączania pochodnych PEG.
W lizynie np., która jest aminokwasem tworzącym część łańcucha głównego większości białek, ugrupowanie -NH2 jest obecne w położeniu epsilon, a także w położeniu alfa. Grupa epsilon-NH2 może reagować w środowisku alkalicznym. Wiele pracy poświęcono opracowaniu pochodnych PEG przyłączanych do ugrupowania epsilon-NH2 w lizynowej frakcji białka. Wspólną cechą tych wszystkich pochodnych PEG jest to, że lizynowa frakcja aminokwasów białka zwykle ulega dezaktywacji, co może być wadą, gdy lizyna ma znaczenie dla aktywności białka.
W publikacji PCT WO 92/16292 ujawniono siarkolubną matrycę absorpcyjną którą można stosować do oczyszczania immunoglobulin za pomocą wiązania jonowego i strącania. Jak przedstawiono w tej publikacji struktura siarkolubnej matrycy absorpcyjnej obejmuje 3 różne części: (a) polimer hydrofitowy, który zwykle jest agarozą (b) sulfon dietylowy połączony z polimerem hydrofitowym przez tlen, azot lub atom siarki; i (c) aromatyczny lub hetero-aromatyczny ligand połączony z grupą sulfonu dietylowego.
Matryce stosowano do siarkolubnego wiązania z immunoglobulinami. Ujawniono, że grupa sulfonu dietylowego pochodzi z sulfonu diwinylowego. Ponadto, grupa sulfonu dietylowego jest połączona swoimi dwoma końcami z agarozą i ligandem. Grupa sulfonu dietylowego w żaden sposób nie jest aktywną grupą to znaczy nie jest zdolna do reagowania z proteiną lub peptydem lub powierzchnią z wytworzeniem wiązania kowalencyjnego. Rozwiązanie według publikacji WO 92/16292 zatem nie ujawnia aktywowanego polimeru według wynalazku.
180 149
Natomiast w publikacji PCT WO 93/01498 ujawniono polimer mający aktywowaną grupę sulfonu winylowego połączoną z polimerem, takim jak glikol polietylenowy. Jednak, grupa sulfonu winylowego w polimerze ujawnionym w publikacji WO 93/01498 pochodzi z sulfonu diwinylowego. Cząsteczka sulfonu diwinylowego ma grupę winylową przyłączoną do każdego boku grupy sulfonowej. W istocie polimer według WO 93/01498 wytwarzano za pomocą reakcji polimeru takiego jak glikol polietylenowy bezpośrednio z sulfonem di winylowym. Ujawniony pośredni reaktywny polimer miał dwa atomy węgla łączące macierzysty polimer i grupę sulfonową. Te dwa dodatkowe atomy węgla pochodzą z jednej z dwóch grup winylowych cząsteczki sulfonu diwinylowego. W tym przypadku żadne połączenie estrowe lub amidowe nie tworzy się w przeciwieństwie do rozwiązania według wynalazku, w którym sulfon diwinylowy nie bierze udziału w syntezie.
Ponadto według publikacji WO 93/01498 sulfon diwinylowy reaguje bezpośrednio z macierzystym polimerem, przy czym dwie grupy winylowe w cząsteczce sulfonu diwinylowego mogą być aktywne w tym samym czasie i reagować z dwoma różnymi cząsteczkami polimeru macierzystego powodując sieciowanie. Takie sieciowanie daje mniej wolnych aktywnych ugrupowań sulfonu winylowego dostępnych w reakcji sprzęgającej. Natomiast w sposobie według wynalazku znaczące sieciowanie nie występuje.
Ponadto, ponieważ sposób ujawniony w cytowanej publikacji WO 93/01498 obejmuje sulfon diwinylowy można się spodziewać, że pewne zanieczyszczenie spowodowane przez nieprzereagowany lub częściowo przereagowany reagent sulfonowy jest nieuchronne w pośrednim reagencie aktywnego polimeru jak również w koniugatach wytworzonych z tego pośredniego reagenta polimerowego. Ze stanu techniki również wiadomo, że sulfon diwinylowy jest toksyczny gdy wprowadzony do organizmu zwierzęcia. A zatem pośredni polimer i koniugaty ujawnione w WO 93/01498 nie są odpowiednie do zastosowań farmaceutycznych in vivo, w przeciwieństwie do tych według wynalazku.
Rozwiązanie według wynalazku dodatkowo istotnie różni się od wynalazku według WO 93/01498 tym, że gdy aktywnym ugrupowaniem sulfonu według wynalazku jest ugrupowanie sulfonu winylowego pochodzącego z aktywnej grupy sulfonu etylowego to grupa sulfonowa jest połączona bezpośrednio z końcowym atomem węgla polimeru. W przeciwieństwie do tego ugrupowanie sulfonu winylowego w polimerze ujawnionym w publikacji WO 93/01498 nie tylko, że pochodzi z sulfonu diwinylowego ale tworzy grupę etylową pomiędzy końcowym atomem węgla polimeru a grupą sulfonową.
Patent US 5 122 614, Zalipsky, ujawnia, że cząsteczki PEG aktywowane funkcyjną grupą oksykarbonylo-N-dikarboksyimidową mogą być przyłączone w warunkach alkalicznych w wodzie do grupy aminowej polipeptydu poprzez wiązanie metanowe. Uważa się, że aktywny węglan N-sukcynoimidu PEG tworzy trwałe, odporne na hydrolizę wiązania metanowe z grupami aminowymi. Stwierdzono, że grupa aminowa jest bardziej reaktywna w środowisku zasadowym przy pH od około 8,0 do 9,5, a reaktywność ta gwałtownie maleje przy niższych wartościach pH. Jednakże przy wartościach pH od 8,0 do 9,5 szybko także wzrasta hydroliza niesprzężonej pochodnej PEG. Zalipsky umka trudności związanej ze wzrostem szybkości reakcji niesprzężonej pochodnej PEG z wodą przez użycie nadmiaru pochodnej PEG do związania powierzchni białka. W wyniku użycia tego nadmiaru, zostaje związana z PEG liczba reaktywnych miejsc epsilon-aminowych dostateczna do zmodyfikowania białka zanim ta pochodna PEG ulegnie hydrolizie i stanie się niereaktywna.
Sposób Zalipsky’ego nadaje się do przyłączenia lizynowej frakcji białka do pochodnej PEG na jednym aktywnym miejscu pochodnej PEG. Jednakże, jeśli szybkość hydrolizy pochodnej PEG jest znaczna, to może być utrudnione uzyskanie przyłączenia do więcej niż jednego aktywnego miejsca na cząsteczce PEG, ponieważ zwykły nadmiar nie zmniejsza szybkości hydrolizy.
Na przykład, liniowy PEG z aktywnymi miejscami na każdym końcu przyłączy się do białka na jednym końcu, lecz, jeśli szybkość hydrolizy jest znaczna, to będzie on reagował z wodą na drugim końcu i zostanie osłonięty za pomocą mało reaktywnego ugrupowania hydroksylowego, reprezentowanego strukturalnie jako -OH, ale raczej nie utworzy „hantlowej” struktury cząsteczkowej z przyłączonymi białkami lub z innymi pożądanymi grupami na
180 149 każdym końcu. Podobna trudność powstaje wtedy, gdy jest pożądane sprzęganie cząsteczki z powierzchnią za pomocą środka wiążącego typu PEG, ponieważ PEG jest przyłączany najpierw do powierzchni lub sprzęga z cząsteczką a przeciwny koniec pochodnej PEG musi pozostać reaktywny do kolejnej reakcji. Jeśli problemem jest występowanie hydrolizy, to przeciwny koniec zwykłe staje się nieaktywny.
W patencie US 5 122 614, Zalipsky, ujawniono także kilka innych pochodnych PEG z wcześniejszych patentów. Uważa się, że ester sukcynoilo-N-hydroksylsukcynoimidu PEG tworzy wiązania estrowe, które mają ograniczoną trwałość w środowiskach wodnych, co powoduje niekorzystnie krótki okres półtrwania tej pochodnej. Stwierdzono, że chlorek cyjanurowy PEG wykazuje niepożądaną toksyczność i jest niespecyficzny w reakcji z określonymi grupami funkcyjnymi na białku. Z tego powodu pochodna typu chlorku cyjanurowego PEG może powodować niepożądane skutki uboczne i może zmniejszać aktywność białka, ponieważ przyłącza się do kilku rodzajów aminokwasów na różnych miejscach reaktywnych. Sądzi się, że fenylowęglan PEG wytwarza toksyczne hydrofobowe reszty fenolowe, które wykazują powinowactwo do białek. Uważa się, że PEG aktywowany za pomocą karbonylodiimidazolu reaguje zbyt wolno z funkcyjnymi grupami białka i wymaga długich czasów reakcji, aby uzyskać dostateczne zmodyfikowanie białka.
Zaproponowano stosowanie także innych pochodnych PEG do przyłączania ich do grup funkcyjnych na aminokwasach innych niż epsilon-NH2 lizyny. Histydyna zawiera reaktywne ugrupowanie iminowe, przedstawione strukturalnie jako -N(H)-, lecz wiele pochodnych reagujących z epsilon-NH2 reaguje także z -N(H)~. Cysteina zawiera reaktywne ugrupowanie tiolowe, przedstawione strukturalnie jako -SH, lecz maleimidowa pochodna PEG, która reaguje z tym ugrupowaniem, jest podatna na hydrolizę.
Jak widać z powyższego próbnego przeglądu, poświęcono znaczny wysiłek na opracowanie różnych pochodnych PEG do przyłączania różnych białek, w szczególności do ugrupowania -NH2 na lizynowej frakcji aminokwasu. Okazało się, że wiele z tych pochodnych stwarza trudności podczas wytwarzania i stosowania. Niektóre tworzą nietrwałe wiązania z białkiem, które ulegają hydrolizie i dlatego są nie bardzo trwałe w środowiskach wodnych, takich jak strumienie krwi. Niektóre tworzą trwalsze wiązania, ale ulegają hydrolizie przed utworzeniem wiązanią co oznaczą że reaktywna grupa na pochodnej PEG może zostać zdezaktywowana zanim będzie możliwe przyłączenie białka. Niektóre pochodne wykazują pewną toksyczność i dlatego są mało przydatne do stosowania in vivo. Niektóre reagują zbyt wolno, aby mogły być użyteczne w praktyce. Niektóre powodują utratę aktywności białka w wyniku przyłączania się do miejsc powodujących aktywność białka. Niektóre nie są specyficzne pod względem miejsc, do których się przyłączają co także może być powodem utraty pożądanej aktywności i powodem niepowtarzalności wyników.
Według wynalazku aktywowany poli(glikol etylenowy) charakteryzuje się ogólnym wzorem
R- (OCH2CH2)n-Y w którym n oznacza liczbę całkowitą od 5 do 3000; Y jest wybrany z grupy składającej się z -NH-OC-CH2-CH2-SO2-CH=CH2, -CO-NH-CH2-CH2-SO2-CH=CH2 i SO2-CH2-CH2-X, gdzie X oznacza chlorowiec, a R jest wybrany z grupy składającej się z H-, H3C-, CH2=CHSO2-, X-CH2-CH2-SO2-, CH2=CH-SO2-CH2-CH2-CO-NH-, CH2=CH-SO2-CH2-CH2-NH-CO-.
Korzystnie we wzorze ogólnym aktywowanego poli(glikol etylenowego) n oznacza liczbę całkowitą od 45 do 110.
Korzystnie we wzorze ogólnym aktywowanego poli(glikol etylenowego) Y oznacza -CO-NH-CH2-CH2-SO2-CHCH2.
Korzystnie we wzorze ogólnym aktywowanego poli(glikol etylenowego) Y oznacza -NH-CO-CH2-CH2-SO2-CH=CH2.
Korzystnie we wzorze ogólnym aktywowanego poli(glikol etylenowego) Y oznacza -SO2-CH2-CH2-CI.
180 149
Według wynalazku sposób wytwarzania aktywowanego poli(glikolu etylenowego) mającego aktywne ugrupowanie sulfonowe kowalentnie związane z poli(glikolem etylenowym), charakteryzuje się tym, że obejmuje etap przyłączenia ugrupowania zawierającego siarkę bezpośrednio do atomu węgla poli(glikolu etylenowego) a następnie przekształcenia ugrupowania zawierającego siarkę w aktywne ugrupowanie sulfonowe.
Sposób obejmuje dodatkowo etap wydzielania aktywowanego polimeru mającego aktywne ugrupowanie sulfonu, a etap przyłączenia ugrupowania zawierającego siarkę bezpośrednio do atomu węgla poli(glikolu etylenowego) obejmuje etapy aktywowania co najmniej jednej aktywowalnej grupy hydroksylowej na polimerze i poddania wytworzonego związku reakcji z zawierającym alkohol ugrupowaniem tiolowym w celu spowodowania bezpośredniego przyłączenia siarki do łańcucha węgiel-węgiel poli(glikolu etylenowego).
Wymieniony etap aktywowania co najmniej jednej aktywowalnej grupy hydroksylowej wybiera się z etapów składających się z podstawienia hydroksylowego i zastąpienia wodoru hydroksylowego bardziej reaktywnym ugrupowaniem.
Ugrupowaniem tiolowym zawierającym alkohol jest merkaptoetanol.
W sposobie według wynalazku ugrupowanie tiolowe zawierające alkohol korzystnie przekształca się w aktywne ugrupowanie sulfonowe na etapach utleniania do sulfonu siarki w ugrupowaniu zawierającym siarkę i poddania produktu reakcji z ugrupowaniem aktywującym lub podstawiającym grupę hydroksylową. Sulfon jest aktywnym sulfonem etylowym i sposób obejmuje dodatkowo etap wytworzenia ugrupowania suifonu winylowego na polimerze w wyniku reakcji aktywnego sulfonu etylowego z silną zasadą.
W drugim aspekcie wynalazku sposób wytwarzania aktywowanego poli(glikolu etylenowego) mającego aktywne ugrupowanie sulfonowe kowalentnie związane z poli(głikolem etylenowym), charakteryzuje się tym, że obejmuje aktywowanie poli(glikolu etylenowego) z wytworzeniem reaktywnego ugrupowania aminowego kowalentnie związanego z poli(glikolem etylenowym), dostarczenie łączącego ugrupowania zawierającego aktywne ugrupowanie sulfonu i aktywne ugrupowanie estru sukcynoimidylowego oraz reakcję reaktywnego ugrupowania aminowego z aktywnym ugrupowaniem estru sukcynoimidylowego z wytworzeniem aktywowanego polimeru.
Korzystnie aktywne ugrupowanie sulfonu oznacza -NH-CO-CH2-CH2-SO2-CH=CH2.
W kolejnym aspekcie wynalazku sposób wytwarzania aktywowanego poli(glikolu etylenowego) mającego aktywne ugrupowanie sulfonowe kowalentnie związane z poli(glikolem etylenowym), charakteryzuje się tym, że obejmuje aktywowanie poli(glikolu etylenowego) z wytworzeniem reaktywnego ugrupowania estrowego sukcynoimidylowego kowalentnie związanego z wymienionym polimerem, dostarczenie łączącego ugrupowania zawierającego aktywne ugrupowanie sulfonu i aktywne ugrupowanie aminowe oraz reakcję reaktywnego ugrupowania aminowego z aktywnym ugrupowaniem estru sukcynoimidylowego z wytworzeniem polimeru.
Korzystnie jako aktywne ugrupowanie sulfonu stosuje się -CO-NH-CO-CH2-CH2-SO2CH=CH2.
Według wynalazku koniugat biologicznie aktywny, charakteryzuje się tym, że zawiera aktywną biologicznie cząsteczkę i aktywowany połi(glikol etylenowy) o ogólnym wzorze
R-(OCH2CH2)n-Y w którym n oznacza liczbę całkowitą od 5 do 3000; Y jest wybrany z grupy składającej się z -NH-OC-CH2-CH2-SO2-CH-CH2, -CO-NH-CH2-CH2-SO2-CH=CH2 i SO2-CH2-CH2-X, gdzie X oznacza chlorowiec, a R jest wybrany z grupy składającej się z H-, H3C-, CH2-CHSO2-, X-CH2-CH2-SO2-, CH2=CH-SO2-CH2-CH2-CO-NH-, CH2=CH-SO2-CH2-CH2-NH-CO-, przy czym aktywowany poli(glikol etylenowy) jest kowalentnie związany z aktywną biologicznie cząsteczką przez aktywne ugrupowanie sulfonu.
W strukturze koniugatu n oznacza korzystnie liczbę całkowitą od 45 do 110, a Y oznacza korzystnie -CO-NH-CH2-CH2-SO2-CH=CH2, lub -NH-OC-CH2-CH2-SO2-CH=CH2, lub Y oznacza -SO2-CH2-CH2-CI.
180 149
Według wynalazku sposób wytwarzania koniugatu polimerowego biologicznie aktywnej cząsteczki mającej ugrupowanie tiolowe, charakteryzuje się tym, że obejmuje dostarczenie aktywowanego poli(glikolu etylenowego) otrzymanego sposobem polegającym na przyłączeniu ugrupowania zawierającego siarkę bezpośrednio do atomu węgla poli(glikolu etylenowego) a następnie przekształceniu ugrupowania zawierającego siarkę w aktywne ugrupowanie sulfonowe, reakcję biologicznie aktywnej cząsteczki z aktywowanym poli(glikolem etylenowym) z wytworzeniem kowalentnego wiązania pomiędzy ugrupowaniem tiolowym wymienionej biologicznie aktywnej cząsteczki i aktywnym ugrupowaniem sulfonu aktywowanego poli(glikolu etylenowego).
Biologicznie aktywną cząsteczkę wybiera się z grupy składającej się z syntetyków, biomateriałów, białek, środków farmaceutycznych, komórek i witamin.
W kolejnym aspekcie wynalazku sposób wytwarzania koniugatu poli(glikolu etylenowego) biologicznie aktywnej cząsteczki zawierającej ugrupowanie tiolowe, charakteryzuje się tym, że obejmuje etapy:
(a) poddania poli(glikolu etylenowego) mającego co najmniej jedno aktywne ugrupowanie hydroksylowe reakcji ze związkiem w celu wytworzenia poli(glikolu etylenowego) podstawionego albo estrem albo halogenkiem;
(b) poddania poli(glikolu etylenowego) z etapu (a) podstawionego estrem albo halogenkiem reakcji z merkaptoetanolem w celu zamiany ugrupowania estrowego lub halogenkowego na rodnik merkaptoetanolowy;
(c) poddania podstawionego merkaptoetanolem poli(glikolu etylenowego) z etapu (b) reakcji ze środkiem utleniającym w celu utlenienia do sulfonu siarki w ugrupowaniu merkaptoetanolowym;
(d) poddania sulfonu z etapu (c) reakcji ze związkiem w celu zamiany grupy hydroksylowej ugrupowania merkaptoetanolowego na ugrupowanie estrowe lub halogenkowe z wytworzeniem aktywnego ugrupowania sulfonu etylowego;
(e) poddanie sulfonu etylowego etapu (d) reakcji z zasadą w celu wytworzenia aktywowanego poli(glikolu etylenowego) mającego aktywne ugrupowanie sulfonu winylowego;
(f) izolowania sulfonu winylowego poli(glikolu etylenowego) etapu (e) i (g) poddania aktywnego ugrupowania sulfonu winylowego reakcji z ugrupowaniem tiolowym biologicznie aktywnej cząsteczki z wytworzeniem koniugatu.
W dalszym aspekcie wynalazku sposób wytwarzania koniugatu poli(glikolu etylenowego) biologicznie aktywnej cząsteczki zawierającej ugrupowanie tiolowe, charakteryzuje się tym, że obejmuje etapy:
(a) poddania poli(glikolu etylenowego) mającego co najmniej jedno aktywne ugrupowanie hydroksylowe reakcji ze związkiem w celu wytworzenia poli(glikolu etylenowego) podstawionego albo estrem albo halogenkiem;
(b) poddania poli(glikolu etylenowego) z etapu (a) podstawionego estrem albo halogenkiem reakcji z merkaptoetanolem w celu zamiany ugrupowania estrowego lub halogenkowego na rodnik merkaptoetanolowy;
(c) poddania podstawionego merkaptoetanolem poli(glikolu etylenowego) z etapu (b) reakcji ze środkiem utleniającym w celu utlenienia do sulfonu siarki w ugrupowaniu merkaptoetanolowym;
(d) poddania sulfonu z etapu (c) reakcji ze związkiem w celu przekształcenia grupy hydroksylowej ugrupowania merkaptoetanolu w ugrupowanie halogenkowe tworząc aktywowany poli(glikol etylenowy) mający aktywne ugrupowanie sulfonu etylowego;
(e) izolowania aktywowanego poli(glikolu etylenowego) etapu (d) i (f) poddania aktywnego ugrupowania sulfonu etylowego reakcji z ugrupowaniem tiolowym biologicznie aktywnej cząsteczki tworząc wspomniany koniugat.
W innym aspekcie wynalazku sposób wytwarzania koniugatu poli(głikolu etylenowego) i biologicznie aktywnej cząsteczki zawierającej ugrupowanie tiolowe, charakteryzuje się tym, że aktywuje się poli(glikol etylenowy) z wytworzeniem reaktywnego ugrupowania aminowego kowalentnie związanego z poli(glikolem etylenowym), zapewnia się cząsteczkę łącznika mającą aktywne ugrupowanie sulfonowe i aktywowane ugrupowanie estru sukcynoimidylo
180 149 wego, poddaje się reaktywne ugrupowanie aminowe reakcji z aktywnym ugrupowaniem estru sukcynoimidylowego z wytworzeniem aktywowanego poli(glikolu etylenowego) mającego aktywne ugrupowanie sulfonu kowalentnie związane z poli(glikolem etylenowym) i poddaje się aktywne ugrupowanie sulfonu reakcji z ugrupowaniem tiolowym biologicznie aktywnej cząsteczki z wytworzeniem koniugatu.
W powyższym sposobie jako aktywne ugrupowanie sulfonowe korzystnie stosuje się -NH-OC-CH2-CH2-SO2-CH=CH2.
W kolejnym aspekcie wynalazku sposób wytwarzania koniugatu poli(glikolu etylenowego) i biologicznie aktywnej cząsteczki zawierającej ugrupowanie tiolowe, charakteryzuje się tym, że aktywuje się poli(glikol etylenowy) z wytworzeniem reaktywnego ugrupowania estru sukcynimidylowego kowalentnie związanego z poli(glikolem etylenowym), zapewnia się cząsteczkę łącznika mającą aktywne ugrupowanie sulfonu i aktywne ugrupowanie aminowe, poddaje się reaktywne ugrupowanie aminowe reakcji z aktywnym ugrupowaniem estru sukcynimidylowym z wytworzeniem aktywowanego poli(glikolu etylenowego) zawierającego aktywne ugrupowanie sulfonu oraz poddaje się aktywne ugrupowanie sulfonu aktywowanego poli(glikolu etylenowego) reakcji z ugrupowaniem tiolowym aktywnej biologicznie cząsteczki z wytworzeniem koniugatu. Jako aktywne ugrupowanie sulfonu korzystnie stosuje się -CONH-CH2-CH2-SO2-CH-CH2.
Według wynalazku sposób wytwarzania sulfonu winylowego poli(glikolu etylenowego) charakteryzuje się tym, że obejmuje etapy:
(a) poddania poli(glikolu etylenowego) mającego co najmniej jedno aktywne ugrupowanie hydroksylowe reakcji ze związkiem w celu wytworzenia poli(glikolu etylenowego) podstawionego albo estrem albo halogenkiem;
(b) poddania poli(glikolu etylenowego) z etapu (a) podstawionego estrem albo halogenkiem reakcji z merkaptoetanolem w celu zamiany ugrupowania estrowego lub halogenkowego na rodnik merkaptoetanolowy;
(c) poddania podstawionego merkaptoetanolem poli(glikolu etylenowego) z etapu (b) reakcji ze środkiem utleniającym w celu utlenienia do sulfonu siarki w ugrupowaniu merkaptoetanolowym;
(d) poddania sulfonu z etapu (c) reakcji ze związkiem w celu zamiany grupy hydroksylowej ugrupowania merkaptoetanolowego na ugrupowanie estrowe lub halogenkowe;
(e) poddania sulfonu etylenowego z etapu (d) reakcji z zasadą w celu wytworzenia sulfonu winylowego poli(glikolu etylenowego). Sposób ten dodatkowo obejmuje etapy izolowania sulfonu winylowego poli(glikolu etylenowego). W tym sposobie halogenkiem z etapu (d) jest chlor i produktem etapu (d) jest sulfon chloroetylowy poli(glikolu etylenowego).
Sposób powyższy obejmuje dodatkowo etapy rozpuszczania kryształów sulfonu chloroetylowego poli(glikolu etylenowego) w rozpuszczalniku organicznym przed reakcją z zasadą w celu wytworzenia sulfonu winylowego poli(giikolu etylenowego), i izolowania produktu sulfonu winylowego poli(glikolu etylenowego), przez odsączenie w celu usunięcia zasady i odparowanie rozpuszczalnika.
Według wynalazku sposób wytwarzania sulfonu haloetylowego poli(glikolu etylenowego) charakteryzuje się tym, że obejmuje etapy:
(a) poddania poli(glikolu etylenowego) mającego co najmniej jedno aktywne ugrupowanie hydroksylowe reakcji ze związkiem w celu wytworzenia poli(glikolu etylenowego) podstawionego albo estrem albo halogenkiem;
(b) poddania poli(glikolu etylenowego) z etapu (a) podstawionego estrem albo halogenkiem reakcji z merkaptoetanolem w celu zamiany ugrupowania estrowego lub halogenkowego na rodnik merkaptoetanolowy;
(c) poddania podstawionego merkaptoetanolem poli(glikolu etylenowego) z etapu (b) reakcji ze środkiem utleniającym w celu utlenienia do sulfonu siarki w ugrupowaniu merkaptoetanolowym;
(d) poddania sulfonu z etapu (c) reakcji ze związkiem w celu zamiany grupy hydroksylowej ugrupowania merkaptoetanolowego na ugrupowanie halogenkowe z wytworzeniem
180 149 sulfonu haloetylowego poli(glikolu etylenowego). Dodatkowym etapem jest etap izolowania sulfonu haloetylowego poli(glikolu etylenowego).
Niniejszy wynalazek ujawnia rozpuszczalne w wodzie i odporne na hydrolizę pochodne poli(glikolu etylenowego) („PEG”) i podobnych polimerów hydrofilowych, które mają jedno lub kilka aktywnych ugrupowań sulfonowych. Pochodne polimerowe z aktywnymi ugrupowaniami są bardzo selektywne podczas sprzęgania z ugrupowaniami tiolowymi zamiast z ugrupowaniami aminowymi na cząsteczkach i na powierzchniach, zwłaszcza przy pH około 9 lub poniżej. Ugrupowanie sulfonowe, wiązanie pomiędzy polimerem a ugrupowaniem sulfonowym i wiązanie pomiędzy ugrupowaniem tiolowym a ugrupowaniem sulfonowym nie są zwykle odwracalne w środowiskach redukujących i są odporne na hydrolizę w ciągu długich okresów czasu w środowiskach wodnych o pH około 11 lub poniżej. Zatem za pomocą aktywnych polimerowych pochodnych sulfonowych można modyfikować charakterystykę fizyczną i chemiczną różnorodnych substancji w środowiskach wodnych stawiających ostre wymagania.
Można np. optymalizować warunki modyfikowania substancji aktywnych biologicznie w celu zachowania ich dużej aktywności biologicznej. Środki farmaceutyczne, od aspiryny do penicyliny, mogą być użytecznie modyfikowane w wyniku przyłączania aktywnych polimerowych pochodnych sulfonowych, jeśli te środki farmaceutyczne są zmodyfikowane tak, aby zawierały ugrupowania tiolowe. Mogą być także użytecznie modyfikowane duże białka zawierające jednostki cysteinowe, które mają aktywne ugrupowania tiolowe. Do wprowadzania grup cysteinowych w pożądane miejsca w białku można stosować techniki z technologii rekombinantów DNA („inżynierii genetycznej”). Te cysteiny można sprzęgać z aktywnymi polimerowymi pochodnymi sulfonowymi w celu uzyskania odpornych na hydrolizę wiązań na różnorodnych białkach, które normalnie nie zawierająjednostek cysternowych.
Specyficznymi ugrupowaniami w aktywowanych polimerach według wynalazku są takie ugrupowania, które mają co najmniej dwa atomy węgla połączone z grupą sulfonową -SO2poprzez miejsce reaktywne w dla tiolowo specyficznych reakcjach sprzęgania na atomie węgla drugim od grupy sulfonowej.
Mówiąc dokładniej, aktywnymi ugrupowaniami sulfonowymi są ugrupowania sulfonu winylowego, aktywne sulfony etylowe, włącznie z sulfonami haloetylowymi i tiolospecyficzne aktywne pochodne tych sulfonów. Ugrupowanie sulfonu winylowego można przedstawić strukturalnie jako -SO2-CH=CH2; aktywne ugrupowanie sulfonu etylowego można przedstawić strukturalnie jako -SO2-CH2-CH2-Z, w którym Z może oznaczać halogen lub inną odszczepialną grupę, która może być podstawiona tiolem z wytworzeniem wiązania sulfonowego i holowego -SO2-CH2-CH2-S-W, w którym W oznacza cząsteczkę aktywną biologicznie, powierzchnię lub pewną inną substancję. Pochodne sulfonów winylowych i etylowych mogą zawierać także inne podstawniki, o ile zostanie zachowana rozpuszczalność w wodzie i tiolowo specyficzna reaktywność miejsca reaktywnego na drugim węglu.
Wynalazek obejmuje odporne na hydrolizę koniugaty substancji mających ugrupowania tiolowe z pochodnymi polimerowymi mającymi aktywne ugrupowania sulfonowe. Na przykład, rozpuszczalny w wodzie, aktywowany sulfonem polimer PEG może być sprzężony z biologicznie aktywną cząsteczką w reaktywnym miejscu tiolowym. Wiązanie, za pomocą którego PEG jest sprzęgany z biologicznie aktywną cząsteczką, obejmuje ugrupowanie tiolowe sprzęgnięte z ugrupowaniem tiolowym i ma strukturę PEG-SO2-CH2-CH2-W, w której W oznacza biologicznie aktywną cząsteczką, przy czym ugrupowanie sulfonowe przed sprzęganiem PEG mogło być ugrupowaniem sulfonu winylowego lub aktywnym ugrupowaniem sulfonu etylowego.
Przedmiotem wynalazku są także biomateriały zawierające powierzchnię mającą jedno lub kilka reaktywnych miejsc holowych i jeden lub kilka rozpuszczalnych w wodzie aktywowanych sulfonem polimerów według wynalazku sprzężonych z powierzchnią za pomocą wiązania sulfonowego i tiolowego. Biomateriały i inne substancje mogą być także sprzęgane z pochodnymi polimerów aktywowanych sulfonem poprzez wiązanie inne niż wiązanie sulfonowe i holowe, takie jak zwykłe wiązanie aminowe, aby pozostawić bardziej odporną na hydrolizę grupę aktywującą a mianowicie ugrupowanie sulfonowe, dostępne do następnych reakcji.
180 149
Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania aktywowanych polimerów według wynalazku. Ugrupowanie zawierające siarkę jest związane bezpośrednio z atomem węgla polimeru, a następnie przeprowadzone w aktywne ugrupowanie sulfonowe. Alternatywnie można wytworzyć ugrupowanie sulfonowe przez przyłączenie środka łączącego, który ma ugrupowanie sulfonowe na jednym końcu, do zwykłego aktywowanego polimeru, tak aby uzyskany polimer miał ugrupowanie sulfonowe na swym końcu.
Mówiąc dokładniej, rozpuszczalny w wodzie polimer mający co najmniej jedno aktywne ugrupowanie hydroksylowe, jest poddawany reakcji w celu wytworzenia polimeru podstawionego mającego na sobie ugrupowanie bardziej reaktywne. Wytworzony podstawiony polimer poddaje się reakcji w celu zastąpienia bardziej reaktywnego ugrupowania przez ugrupowanie zawierające siarkę, które ma co najmniej dwa atomy węgla i w którym ugrupowanie zawierające siarkę jest związane bezpośrednio z atomem węgla polimeru. Następnie ugrupowanie zawierające siarkę jest poddawane reakcjom w celu utlenienia siarki, -S-, do sulfonu, -SO2- i wprowadzenia dostatecznie reaktywnego miejsca na drugi atom węgla ugrupowania zawierającego sulfon w celu wytworzenia wiązań z ugrupowaniami zawierającymi tiol.
Mówiąc bardziej dokładnie, sposób wytwarzania aktywowanych polimerów według wynalazku obejmuje poddawanie poli(glikolu etylenowego) reakcji ze związkiem aktywującym hydroksyl w celu wytworzenia estru lub z pochodną zawierającą halogen w celu wytworzenia PEG podstawionego halogenem. Uzyskany aktywowany PEG poddaje się następnie reakcji z merkaptoetanolem w celu zastąpienia ugrupowania estrowego lub halogenku rodnikiem merkaptoetanolowym. Siarkę w ugrupowaniu merkaptoetanolowym utlenia się do sulfonu. Sulfon etanolowy aktywuje się albo w wyniku aktywowania ugrupowania hydroksylowego, albo w wyniku podstawienia ugrupowania hydroksylowego bardziej aktywnym ugrupowaniem, takim jak halogen. Następnie aktywny sulfon etylowy PEG można przeprowadzić w sulfon winylowy, jeśli to jest pożądane, w wyniku rozszczepienia aktywowanego hydroksylu lub innego aktywnego ugrupowania i wprowadzenia podwójnego wiązania węgiel-węgiel w sąsiedztwie grupy sulfonowej -SO2-.
Przedmiotem wynalazku jest także sposób wytwarzania koniugatu substancji z pochodną polimerową, która ma aktywne ugrupowanie sulfonowe. Sposób obejmuje etap utworzenia wiązania pomiędzy pochodną polimerową i substancją, przy czym wiązanie to może być pomiędzy ugrupowaniem sulfonowym a ugrupowaniem tiolowym.
Zatem, przedmiotem wynalazku są aktywowane polimery, które mają specyficzną reaktywność, są trwałe w wodzie i w środowiskach redukujących i tworzą trwalsze niż dotychczas wiązania z powierzchniami i cząsteczkami, włącznie z cząsteczkami aktywnymi biologicznie. Aktywowany polimer może być użyty do modyfikowania charakterystyk powierzchni i cząsteczek, gdy duże znaczenie ma zgodność biologiczna. Ponieważ aktywowany polimer jest trwały w środowiskach wodnych i tworzy trwałe wiązania z ugrupowaniami tiolowymi, to można wybrać warunki najbardziej odpowiednie do zachowania aktywności substancji aktywnych biologicznie i do optymalizacji szybkości reakcji sprzęgania polimerowego.
Droga syntetyczna wytwarzania aktywnych sulfonów poli(glikolu etylenowego) i podobnych polimerów obejmuje co najmniej cztery etapy, w których siarka jest wiązana z cząsteczką polimeru, a następnie przeprowadzona w kilku reakcjach w aktywną sulfonową grupę funkcyjną. Cząsteczka wyjściowego polimeru PEG ma co najmniej jedno ugrupowanie hydroksylowe, -OH, które może brać udział w reakcjach chemicznych i które uważa się za „aktywne” ugrupowanie hydroksylowe. Cząsteczka PEG może mieć kilka aktywnych ugrupowań hydroksylowych dostępnych do reakcji chemicznej, jak to objaśniono poniżej. Te aktywne ugrupowania hydroksylowe są w rzeczywistości stosunkowo mało reaktywne i pierwszym etapem syntezy jest wytwarzanie PEG z ugrupowaniem bardziej reaktywnym.
Ugrupowanie bardziej reaktywne uzyskuje się zwykle jednym z dwóch sposobów - aktywacji hydroksylowej lub podstawienia hydroksylowego. Są możliwe także inne sposoby, co powinno być jasne dla fachowca, lecz dwoma sposobami stosowanymi najczęściej jest właśnie aktywacja hydroksylowa i podstawienie hydroksylowe. W sposobie aktywacji hydroksylowej, atomu wodoru -H na ugrupowaniu hydroksylowym zostaje zastąpiony grupą bardziej reaktywną. Zwykle PEG poddaje się reakcji z kwasem lub pochodną kwasu, taką jak
180 149 chlorek kwasowy, z wytworzeniem reaktywnego estru, w którym PEG jest związany z ugrupowaniem kwasowym poprzez wiązanie estrowe. Ugrupowanie kwasowe jest zwykle bardziej reaktywne niż ugrupowanie hydroksylowe. Estrami są zwykle estry sulfonianowe, karboksylowe i fosforowe.
Halogenkami kwasów sulfonylowych przydatnymi do wykonywania wynalazku są: chlorek metanosulfonylu i chlorek p-toluenosulfonylu. Chlorek metanosulfonylu ma wzór strukturalny CH3SO2CI i jest także znany jako chlorek mezylu. Estry metanosulfonylowe są niekiedy nazywane mezylanami. Chlorek p-toluenosulfonylu ma wzór strukturalny H3CC64SO2CI i jest znany także jako chlorek tozylu. Estry toluenosulfonylowe są niekiedy nazywane tozy łanami.
W reakcji podstawienia cała grupa -OH jest podstawiona przez bardziej reaktywne ugrupowanie, zwykle przez halogenek. Na przykład chlorek tionylu o wzorze strukturalnym SOCI2 można poddać reakcji z PEG z wytworzeniem bardziej reaktywnego PEG podstawionego chlorem. Zastąpienie ugrupowania hydroksylowego innym ugrupowaniem nazywa się niekiedy w technice „aktywacją hydroksylową”. Określenie „aktywacja hydroksylowa” powinno być odnoszone w niniejszym opisie zarówno do podstawienia, jak i do estryfikacji i do innych sposobów aktywacji hydroksylowej.
Określenia „grupa”, „grupa funkcyjna”, „ugrupowanie”, „ugrupowanie aktywne”, „miejsce reaktywne” i „rodnik” są w technice chemicznej w pewnym stopniu synonimami i są stosowane w technice i w niniejszym opisie, odnosząc się do wyraźnych, możliwych do określenia części cząsteczki lub jednostek cząsteczki lub do jednostek, które wykonują pewną funkcję lub mają aktywność i są reaktywne z innymi cząsteczkami lub częściami cząsteczek. W tym sensie można uważać białko lub resztę białka za cząsteczkę albo za grupę fimkcyjną lub ugrupowanie, gdy jest ono sprzężone z polimerem.
Określenie „PEG” jest stosowane w technice i w niniejszym opisie do opisania dowolnego z kilku polimerów kondensacyjnych glikolu etylenowego o wzorze ogólnym przedstawionym za pomocą struktury H(OCH2CH2)nH. PEG jest znany także jako polioksyetylen, poli(tlenek etylenu), poliglikol i polieteroglikol. PEG może być wytwarzany w postaci kopolimerów tlenku etylenu z wieloma innymi monomerami.
Poli(glikol etylenowy) jest używany do zastosowań biologicznych, ponieważ ma bardzo korzystne właściwości i jest ogólnie aprobowany do zastosowań biologicznych i biotechnicznych. PEG jest to zwykle substancja klarowna, bezbarwna, bez zapachu, rozpuszczalna w wodzie, odporna na ogrzewanie i na działanie wielu czynników chemicznych, nie ulega hydrolizie i nie psuje się oraz jest nietoksyczna. Poli(glikol etylenowy) jest uważany za zgodny biologicznie, tzn., że PEG może współistnieć z żywymi tkankami lub organizmami nie powodując szkody. Mówiąc dokładniej, PEG nie jest immunogeniczny, tzn., że nie wykazuje tendencji do wytwarzania w ciele odpowiedzi immunologicznej. Po przyłączeniu do ugrupowania spełniającego w ciele pewną pożądaną funkcję, PEG wykazuje tendencję do maskowania ugrupowania i może zmniejszać lub eliminować jakąkolwiek odpowiedź immunologiczną, dzięki czemu organizm może tolerować obecność tego ugrupowania. Zatem, PEG aktywowane sulfonem według wynalazku powinny być zasadniczo nietoksyczne i nie powinny wykazywać tendencji do odpowiedzi immunologicznej lub do powodowania blokad lub innych niepożądanych efektów.
Na drugim etapie syntezy łączy się siarkę bezpośrednio z atomem węgla w polimerze w takiej postaci, że może być ona przeprowadzona w sulfon etylowy lub w pochodną sulfonu etylowego o podobnych właściwościach reaktywnych. Określenie „etylowy” odnosi się do ugrupowania z identyfikowaną grupą dwóch połączonych ze sobą atomów węgla. Aktywna pochodna sulfonowa PEG wymaga, aby drugi od grupy sulfonowej atom węgla w łańcuchu dostarczał miejsce reaktywne do utworzenia wiązań ugrupowań holowych z sulfonem. Taki wynik można uzyskać w wyniku reakcji podstawienia alkoholem aktywnego ugrupowania wytworzonego na pierwszym wymienionym powyżej etapie, którym to ugrupowaniem jest zwykle PEG podstawiony estrem lub halogenkiem, przy czym alkohol ten zawiera także reaktywne ugrupowanie tiolowe połączone z grupą etylową, a więc ugrupowanie tioetanolowe. Ugrupowanie tiolowe utlenia się do sulfonu, a drugi z kolei atom węgla od sulfonu na grupie etylowej staje się miejscem reaktywnym.
180 149
Związki zawierające ugrupowania tiolowe -SH są związkami organicznymi podobnymi do alkoholi, które zawierają ugrupowanie hydroksylowe -OH, z ta różnicą, że w fiołach co najmniej jedno ugrupowanie hydroksylowe jest zastąpione przez siarkę. Aktywujące ugrupowanie na pochodnej PEG z pierwszej reakcji, którym zwykle jest halogenek lub ugrupowanie kwasowe estru, jest odszczepiane od polimeru i zastępowane przez rodnik alkoholowy związku tioetanołowego. Siarka w ugrupowaniu tiolowym alkoholu jest połączona bezpośrednio z atomem węgla na polimerze.
Alkoholem powinien być związek, który albo dostarcza ugrupowanie tioetanolowe do bezpośredniego przyłączenia do węgla w łańcuchu polimeru, lub który może być z łatwością przeprowadzony w ugrupowanie tioetanolowe lub podstawione ugrupowanie o podobnych właściwościach reaktywnych. Przykładem takiego alkoholu jest merkaptoetanol, który może być przedstawiony wzorem HSCH2CH2OH i który czasem nazywa się tioetanolem.
Na trzecim etapie syntezy stosuje się środek utleniający w celu przeprowadzenia siarki przyłączonej do węgla w grupę sulfonową -SO2. Istnieją liczne takie środki utleniające, włącznie z nadtlenkiem wodoru i nadboranem sodu. Może być przy tym przydatny katalizator, taki jak kwas wolframowy. Jednakże wytworzony sulfon nie jest w postaci aktywnej do tioloselektywnych reakcji i jest konieczne usunięcie mało reaktywnego ugrupowania hydroksylowego alkoholu, który został dodany w reakcji podstawienia na drugim etapie.
Na czwartym etapie przeprowadza się ugrupowanie hydroksylowe alkoholu dodanego na drugim etapie w postać bardziej reaktywną albo poprzez aktywowanie grupy hydroksylowej albo poprzez podstawienie grupy hydroksylowej bardziej reaktywną grupą, podobnie jak na pierwszym etapie w tej sekwencji reakcji. Podstawienie odbywa się zwykle za pomocą halogenku z wytworzeniem sulfonu haloetylowego lub jego pochodnej mającej miejsce reaktywne na drugim węglu od ugrupowania sulfonowego. Zwykle drugi węgiel na grupie etylowej będzie aktywowany przez halogen chlorkowy lub bromkowy. Aktywacja hydroksylu powinna wprowadzić miejsce reaktywne o reaktywności podobnej do reaktywności estru sulfonianowego. Odpowiednimi reagentami są kwasy, halogenki kwasowe i inne związki, wymienione powyżej w pierwszym etapie reakcji, a zwłaszcza chlorek tionylu służący do podstawienia grupy hydroksylowej atomem chloru.
Wytworzony polimeryczny aktywowany sulfon etylowy jest trwały, izolowany i nadaje się do tiolo-selektywnych reakcji sprzęgania. Jak pokazano w przykładach, sulfon chloroetylowy PEG jest trwały w wodzie o pH około 7 lub poniżej, lecz może być korzystnie stosowany w tiolo-selektywnych reakcjach sprzęgania w warunkach zasadowego pH co najmniej równego około 9.
W reakcji sprzęgania tiolowego jest możliwe, że ugrupowanie tiolowe zastąpi chlorek, jak w następującej reakcji:
PEG-SO2-CH2-CH2-CI + W-S-H PEG-SO2-CH2-CH2-S-W, gdzie W oznacza ugrupowanie, z którym jest połączone ugrupowanie tiolowe SH i może być cząsteczką aktywną biologicznie, powierzchnią lub pewną inną substancją. Chociaż nie chcemy być związani przez teorię, uważamy na podstawie obserwowanej kinetyki reakcji, jak to pokazano w przykładzie ΙΠ, że sulfony chloroetylowe, inne aktywowane sulfony etylowe i ich reaktywne pochodne są przeprowadzane w sulfony winylowe PEG i że to właśnie sulfon winylowy PEG lub jego pochodna jest w rzeczywistości związany z ugrupowaniem tiolowym. Nie mniej jednak, nie można odróżnić, czy wytworzone wiązanie sulfonowe i tiolowe pochodzi z aktywnego sulfonu etylowego PEG, czy też z sulfonu winylowego PEG, a zatem aktywny sulfon etylowy może być stosowany przy wartościach pH powyżej 7 w celu połączenia z grupami tiolowymi.
Także sulfon winylowy PEG jest trwały i izolowany i może tworzyć wiązania tioloselektywne i odporne na hydrolizę, zwykle w ciągu znacznie krótszego czasu niz sulfon haloetylowy lub inny aktywowany sulfon etylowy, jak to objaśniono poniżej.
Na piątym etapie, który też może być włączony do syntezy, aktywowany sulfon etylowy podaje się reakcji z dowolnymi zasadami, takimi jak wodorotlenek sodu lub trietyloamina, w celu wytworzenia sulfonu winylowego PEG lub jednej z jego aktywnych pochodnych do stosowania w tiolo-selektywnych reakcjach sprzęgania.
180 149
Jako pokazano w poniższych przykładach, a zwłaszcza w przykładzie ΠΙ, sulfon winylowy PEG reaguje szybko z ugrupowaniami tiolowymi i jest odporny na hydrolizę w wodzie o pH około 11 w ciągu co najmniej kilku dni. Reakcję można przedstawić następująco:
PEG-SO2-CH=CH2 + W-S-H -» PEG-SO2-CH2-CH2-S-W.
Uważa się, że ugrupowania tiolowe przyłącza się „poprzez podwójne wiązanie”. Ugrupowanie W-S przyłącza się do końcowego CH2 podwójnego wiązania, które jest drugim węglem od grupy sulfonowej -SO2. Wodór H przyłącza się do CH podwójnego wiązania. Jednak przy pH powyżej około 9, selektywność zamiany ugrupowania sulfonowego na tiol zmniejsza się i ugrupowanie sulfonowe staje się trochę bardziej reaktywne z grupami aminowymi.
Alternatywnie, do powyższej syntezy można wytwarzać sulfono-aktywowane pochodne PEG w wyniku przyłączenia do PEG aktywowanego inną grupą funkcyjną środka łączącego mającego ugrupowanie sulfonowe. Na przykład, amino-aktywowany PEG, PEG-NH2, poddaje się reakcji w korzystnych warunkach przy pH około 9 lub poniżej, z małą cząsteczką, która ma aktywne sukcynoimidylowe ugrupowanie estrowe NHS-O2C na jednym końcu i ugrupowanie sulfonowe, sulfonu winylowego -SO2-CH=CH2, na drugim końcu. Amino-aktywowany PEG tworzy trwałe wiązanie z estrem sykcynoimidylowym. Wytworzony PEG jest aktywowany za pomocą ugrupowania sulfonu winylowego na końcu i jest odporny na hydrolizę. Reakcję i wytworzony amino-aktywowany PEG można przedstawić następująco:
PEG-NH2 + NHS-O2C-CH2-CH2-SO2-CH=CH2 -» PEG-NH-OC-CH2-CH2-SO2-CU CH2.
Podobny aktywowany PEG można otrzymać w wyniku reakcji aktywowanego aminą PEG, takiego jak aktywny ester sukcynimidylowy PEG, PEG-CO2-NHS, z małą cząsteczką, która na jednym końcu ma ugrupowanie aminowe, a na drugim końcu ugrupowanie sulfonu winylowego. Ester sukcynoimidylowy tworzy trwałe wiązanie z ugrupowaniem aminowym, jak następuje:
PEG-CO2-NHS +NH2-CH2-CH2-SO2-CH=CH2 -» PEG-CO-NH-CH2-CH2-SO2-CH=CH2.
Aktywne sulfony PEG według wynalazku mogą mieć dowolny ciężar cząsteczkowy i mogą być liniowe lub rozgałęzione z setkami ramion. PEG może być podstawiony lub niepodstawiony, pod warunkiem, że pozostaje co najmniej jedno miejsce reaktywne do podstawienia ugrupowaniami sulfonowymi. PEG ma zwykle średni ciężar cząsteczkowy od 200 do 100 000, a jego właściwości biologiczne mogą się zmieniać w zależności od ciężaru cząsteczkowego, stopnia rozgałęzienia i stopnia podstawienia; z tego powodu nie wszystkie tego rodzaju pochodne mogą być przydatne do zastosowań biologicznych i biotechnicznych. Do większości zastosowań biologicznych i biotechnicznych stosuje się w zasadzie liniowy, prostołańcuchowy sulfon winylowy PEG, sulfon bis(winylowy) PEG lub aktywowany sulfon etylowy PEG, w zasadzie niepodstawiony z wyjątkiem ugrupowań sulfonu winylowego lub sulfonu etylowego i, jeśli to jest pożądane, innych dodatkowych grup funkcyjnych. Do wielu zastosowań biologicznych i biotechnicznych podstawnikami mogą zwykle być grupy niereaktywne, takie jak wodór H- i metyl CH3- („m-PEG”).
PEG może mieć więcej niż jedno ugrupowanie sulfonu winylowego lub ugrupowanie prekursorowe lub też PEG może być osłonięty na jednym końcu mało reaktywnym ugrupowaniem, takim jak rodnik metylowy, -CH3. Osłonięta postać może być przydatna np. wtedy, gdy jest pożądane po prostu przyłączenie łańcuchów polimerowych w różnych miejscach dołowych wzdłuż łańcucha białkowego. Przyłączenie cząsteczek PEG do cząsteczki aktywnej biologicznie, takiej jak białko lub inny środek farmaceutyczny, lub do powierzchni, nazywa się czasem „PEGilowaniem”.
Liniowy PEG z aktywnymi grupami hydroksylowymi na każdym końcu może być aktywowany na każdym końcu za pomocą sulfonu winylowego lub jego prekursora lub pochodnych o podobnej reaktywności, w celu uczynienia go dwufiinkcyjnym. Dwufunkcyjną strukturę, np. sulfon bis(winylowy) PEG, nazywa się czasem strukturą hantli i może być ona stosowana np. jako łącznik lub rozdzielnik w celu przyłączenia cząsteczki aktywnej biologicznie do powierzchni lub w celu przyłączenia więcej niż jednej takiej cząsteczki aktywnej biologicznie do cząsteczki PEG. Odporność na hydrolizę ugrupowania sulfonowego czyni je szczególnie przydatnym do zastosowań dwufunkcyjnych lub heterodwufunkcyjnych.
180 149
Innym zastosowaniem sulfonu winylowego PEG i jego prekursora jest aktywowany dendrytycznie PEG, w którym kilka ramion PEG jest przyłączonych do centralnej struktury rdzeniowej. Dendrytyczne struktury PEG mogą być silnie rozgałęzione i są znane zwykle jako cząsteczki „gwiaździste”. Gwiaździste cząsteczki są opisane ogólnie w patencie US 5 171 264, Merrill, który włącza się do niniejszego opisu jako odnośnik. Sulfonowe ugrupowania mogą być stosowane do uzyskania aktywnej grupy funkcyjnej na jednym końcu łańcucha PEG wychodzącego z rdzenia i służącego jako łącznik do przyłączenia grupy funkcyjnej do ramion gwiaździstej cząsteczki.
Sulfon winylowy PEG, jego prekursory i pochodne mogą być stosowane do przyłączenia bezpośrednio do powierzchni i do cząsteczek mających ugrupowanie tiolowe. Jednakże zwykle heterodwufunkcyjną pochodną PEG mającą ugrupowanie sulfonowe na jednym końcu i inne ugrupowanie frinkcyjne na drugim końcu przyłącza się za pomocą tego innego ugrupowania do powierzchni lub cząsteczki. Heterodwufunkcyjną hantlowa struktura PEG, gdy jest podstawiona jednym z innych aktywnych ugrupowań, może być użyta np. do przenoszenia białka lub innej aktywnej biologicznie cząsteczki poprzez wiązania sulfonowe na jednym końcu i poprzez inne wiązanie na drugim końcu, takie jak wiązanie amidowe, w celu wytworzenia cząsteczki mającej dwie różne aktywności. Heterodwufunkcyjny PEG mający ugrupowanie sulfonowe na jednym końcu i amino-specyficzne ugrupowanie na drugim końcu może być przyłączany zarówno do cysteinowych, jak również do lizynowych frakcji białek. Można uzyskać trwałe wiązanie aminowe, a potem w miarę potrzeby może być wykorzystane w następnych tiolo-specyficznych reakcjach odporne na hydrolizę, nieprzereagowane ugrupowanie sulfonowe.
Inne grupy aktywne dla heterodwufunkcyjnych sulfono-aktywowanych PEG mogą być wybrane spośród różnorodnych związków. Do zastosowań biologicznych i biotechnicznych podstawnikami są zwykłe reaktywne ugrupowania stosowane zwykle w chemii PEG do aktywowania PEG, takie jak aldehydy, sulfonian trifluoroetylu, nazywany czasem także trezylanem, ester nhydroksysukcynoimidu, chlorek cyjanurowy, fluorek cyjanurowy, azydek acylowy, bursztynian, grupa priiazobenzylową grupa 3-(p-diazofenyloksy)-2-hydroksypropoksylowa i inne.
Przykłady aktywnych ugrupowań innych niż sulfonowe są podane w: Davis i in., US Patent 4 179 337; Lee i in., US Patent 4 296 097 i 4 430 260; Iwasaki i in., US Patent 4 670 417; Katre i in., US Patent 4 766 106, 4 917 888 i 4 931 544; Nakagawa i in, US Patent 4 791 192; Nitecki i in., US Patent 4 902 502 i 5 089 261; Saifer, US Patent 5 080 891; Zalipsky, US Patent 5 122 614; Shadle i in., US Patent 5 153 265; Rhee i in., US Patent 5 192 430; Europejskie Zgłoszenie Patentowe 0 247 868; i Międzynarodowe Zgłoszenia PCT US86/01252; GB89/01261; GB89/01262; GB89/01263; US90/03252; US90/06843; US91/06193; US92/00432; i US92/02047, których treść włącza się do niniejszego opisu jako odnośnik.
Dla fachowca powinno być jasne, że omówione powyżej struktury hantlowe mogą być użyte do przenoszenia bardzo różnorodnych podstawników i kombinacji podstawników. Mogą być nimi modyfikowane środki farmaceutyczne, takie jak aspiryną witaminy, penicylina i inne środki, zbyt liczne, aby można je wymienić; polipeptydy lub białka i fragmenty białek o różnych grupach funkcyjnych i ciężarach cząsteczkowych; komórki różnego rodzaju; powierzchnie dla biomateriałów; prawie dowolne substancje. Stosowane w niniejszym opisie określenie „białko” należy rozumieć w ten sposób, że obejmuje ono peptydy i polipeptydy, które są polimerami aminokwasów. Określenie „biomateriał” oznacza materiał, zwykle syntetyczny, czasem wykonany z plastyku, który nadaj e się do wszczepiania w żywy organizm w celu naprawy uszkodzonych lub chorych części. Jako przykład biomateriału można podać sztuczne naczynia krwionośne.
Jedna prostołańcuchowa pochodna PEG według wynalazku do zastosowań biologicznych i biotechnicznych ma podstawową strukturę R-(OĆH2CH2)n-Y- Monomer PEG, czyli OCH2CH2, jest korzystnie w zasadzie niepodstawiony i nierozgałęziony wzdłuż głównego łańcucha polimeru. Dolny indeks „n” może mieć wartość od około 5 do 3000. Częściej zakres ten wynosi od około 5 do 2200, co odpowiada ciężarowi cząsteczkowemu od około 220 do 100 000. Jeszcze częściej zakres ten wynosi od około 34 do 1100, co odpowiada zakresowi ciężarów cząsteczkowych od około 1100 do 50 000. Większość zastosowań wykonuje się
180 149 przy użyciu ciężarów cząsteczkowych w zakresie od 2000 do 5000, co odpowiada wartości „n” od około 45 do 110.
W powyższej strukturze Y oznacza -SO2-, CH=CH2 lub -SO2-CH2-CH2-X, gdzie X oznacza halogen. R oznacza grupę taką samą jak Y lub różną od niej. R może oznaczać: H-, H3C-. CH2=CH-SO2-, CI-CH2-CH2-SO2-, lub polimerową grupę aktywującą różną od CH2=CH-SO2- i CI-CH2-CH2-SO2-, jak podawano w powyższych patentach i opublikowanych zgłoszeniach patentowych.
Aktywne pochodne polimerowe są rozpuszczalne w wodzie, są odporne na hydrolizę i tworzą rozpuszczalne w wodzie i odporne na hydrolizę wiązania z grupami tiolowymi. Te pochodne uważa się za nieskończenie rozpuszczalne w wodzie lub zbliżone do nieskończonej rozpuszczalności i po sprzężeniu ich z tą pochodną mogą umożliwiać przechodzenie do roztworu cząsteczek skądinąd nierozpuszczalnych.
Odporność pochodnych na hydrolizę oznaczą że wiązanie pomiędzy polimerem a ugrupowaniem sulfonowym jest trwałe w wodzie i że ugrupowanie sulfonu winylowego nie reaguje z wodą przy pH poniżej około 11 w ciągu długiego okresu czasu, co najmniej kilku dni, a możliwie w ciągu nieskończenie długiego okresu czasu, jak to pokazano w przykładzie ΙΠ poniżej. Można przeprowadzić aktywowany sulfon etylowy w sulfon winylowy w warunkach zasadowego pH, uzyskując taką samą odporność. Odporność na hydrolizę wiązania holowego oznacza, że koniugaty aktywowanego polimeru i substancji mającej ugrupowanie tiolowe są trwałe przy wiązaniu sulfon-tiol w ciągu długich okresów czasu w środowiskach wodnych przy pH poniżej około 11. Można się spodziewać, że większość białek utraci swą aktywność w środowisku zasadowym przy pH 11 i powyżej, czyli dla fachowca jest jasne, że wiele zastosowań aktywnych sulfonowych pochodnych PEG będzie miało miejsce przy pH poniżej 11, bez względu na trwałość ugrupowania sulfonowego przy wyższym pH.
Do tego, by sulfon mógł być użyteczny do modyfikowania białek i innych substancji, jest konieczne jedynie, aby sulfon był trwały w ciągu czasu pozwalającego na przereagowanie ugrupowania sulfonowego z reaktywnym ugrupowaniem tiolowym na białku lub na innej substancji. Szybkość reakcji ugrupowania sulfonowego z tiolem może się zmieniać w zależności od pH, jak pokazano w przykładzie Π poniżej, od około 2 minut do 30 minut, to znaczy, że reakcja ta jest znacznie szybsza od szybkości ewentualnej hydrolizy. Przewiduje się, że sulfon winylowy będzie mógł reagować z tiolem w znacznie szerszym zakresie czasów reakcji, ponieważ jest trwały w ciągu długich okresów czasu. Także, jak pokazano w przykładzie ΠΙ poniżej, w warunkach zasadowego pH sulfon chloroetylowy nie ulega hydrolizie, ale jest przeprowadzany w sulfon winylowy, który pozostaje trwały w ciągu kilku dni i jest nawet bardziej reaktywny względem grup holowych. Zatem, dla celów modyfikowania charakterystyki substancji także aktywne sulfony etylowe mogą być uważane za odporne na hydrolizę w ciągu dłuższych okresów czasu i w szerokim zakresie pH.
Przyjmuje się, że także inne niż PEG polimery rozpuszczalne w wodzie nadają się do podobnego modyfikowania i aktywowania za pomocą aktywnego ugrupowania sulfonowego. Jako te inne polimery można wymienić: poli(alkohol winylowy) („PVA”); inne poli(tlenki alkilenowe), takie jak poli(glikol propylenowy) („PPG”) itp.; poli(oksyetylowane poliole), takie jak poli(oksyetylowana gliceryna), poli(oksyetylowany sorbitol), poli(oksyetylowana glukoza) itp. Polimery te mogą być homopolimerami albo kopolimerami i terpolimerami bezładnymi lub blokowymi opartymi na monomerach powyższych polimerów, o łańcuchu prostym lub rozgałęzionym, albo mogą być podstawione lub niepodstawione, podobne do PEG, lecz mające co najmniej jedno aktywne miejsce dostępne dla reakcji utworzenia ugrupowania sulfonowego.
W następującym przykładzie I przedstawiono syntezę, izolowanie i charakteryzowanie sulfonu chloroetylowego poli(glikolu etylenowego), a następnie wytwarzanie sulfonu winylowego poli(glikolu etylenowego) z sulfonu chloroetylowego. Wytwarzanie innych polimerycznych sulfonów mających reaktywne miejsca na drugim atomie węgla od grupy sulfonowej jest podobne i etapy tego wytwarzania powinny być oczywiste dla fachowca na podstawie poniższego przykładu I i na podstawie podanych powyżej polimerów.
180 149
Przykład I. Synteza
Etapy reakcji mogą być przedstawione strukturalnie w następujący sposób:
(1) PEG-OH + CH3SO2CI -> PEG-OSO2CH3 (2) PEG-OSO2CH3 + HSCH2CH2OH -> PEG-SCH2CH2OH (3) PEG-SCH2CH2OH + H2O2 -> PEG-SO2CH2CH2OH (4) PEG-SO2CH2CH2OH + SOCI2 -> PEG-SO2CH2CH2CI (5) PEG-SO2CH2CH2CI + NaOH -> PEG-SO2-CH=CH2 + HC1.
Każdą z powyższych reakcji szczegółowo opisano poniżej:
Reakcja 1.
Reakcja 1 przedstawia wytwarzanie metanosulfonylowego estru poli(glikolu etylenowego), który jest także nazywany metanosulfonianem lub mezylanem poli(glikolu etylenowego). Tozylan i halogenki mogą być wytwarzane podobnymi sposobami, które, jak sądzimy, są oczywiste dla fachowca.
W celu wytworzenia mezylanu, 25 g PEG o ciężarze cząsteczkowym 3400 wysuszono przez destylację azeotropową w 150 ml toluenu. Podczas suszenia PEG oddestylowano około połowy toluenu. 40 ml suchego dichlorometanu dodano do toluenu i roztworu PEG, następnie ochłodzono w kąpieli lodowej. Do ochłodzonego roztworu dodano 1,230 ml przedestylowanego chlorku metanosulfonylu, co odpowiada 1,06 gramorównoważnika w stosunku do grup hydroksylowych PEG, i 2, 664 ml suchej trietyloaminy, co odpowiada 1,3 gramorównoważnika w stosunku do grup hydroksylowych PEG. Stosowane w niniejszym określenie „gramorównoważnik” można uważać za „ciężar równoważnikowy” i podaj e ono ilość związku, która przereaguje z gramorównoważnikiem grup hydroksylowych PEG.
Mieszaninę reakcyjną pozostawiono na noc, przy czym ogrzała się ona w ciągu tego czasu do temperatury pokojowej. Wytrącił się chlorowodorek trietyloamoniowy, który odsączono. Następnie zmniejszono objętość do 20 ml przy użyciu wyparki obrotowej. Mezylan wytrącono przez dodanie go do 100 ml zimnego suchego eteru etylowego. Metodą NMR stwierdzono 100-proc. konwersję grup hydroksylowych na grupy mezylanowe.
Reakcja 2.
Reakcja 2 przedstawia wytwarzanie merkaptoetanolu poli(glikolu etylenowego) w wyniku reakcji metylenu z merkaptoetanolem. Reakcja powoduje wyparcie rodnika metanosulfonianowego z PEG. Siarka w rodniku merkaptoetanolowym jest związana bezpośrednio z węglem w łańcuchu głównym węgiel-węgiel PEG.
g mezylanu w reakcji 1 rozpuszczono w 150 ml wody destylowanej. Roztwór mezylanu w wodzie ochłodzono przez zanurzenie w kąpieli lodowej. Do ochłodzonego roztworu dodano 2, 366 ml merkaptoetanolu, co odpowiada 3 gramorównoważnikom w stosunku do grup hydroksylowych PEG. Dodano także 16,86 ml 2N NaOH. Całość ogrzewano do wrzenia pod chłodnicą zwrotną w ciągu 3 godzin, co oznacza, że powstające podczas reakcji pary skraplano w sposób ciągły i zawracano do reakcji.
Wytworzony merkaptoetanol poli(glikolu etylenowego) ekstrahowano trzykrotnie dichlorometanem, stosując za każdym razem około 25 ml dichlorometanu. Frakcje organiczne połączono i wysuszono nad bezwodnym siarczanem magnezu. Zmniejszono objętość do 20 ml i wytrącono produkt przez dodanie go do 150 ml zimnego suchego eteru.
Analiza NMR w dimetylosulfotlenku d^-DMSO dała następujące piki dla PEGSCH2CH2OH: 2,57 ppm, tryplet, -CH2-S-; 2,65 ppm, tryplet, -S-CH2-; 3,5 ppm, singlet łańcucha głównego; i 4, 76 ppm, tryplet, -OH. Pik hydroksylowy przy 4,76 ppm wskazywał na 81-proc, stopień podstawienia. Stwierdzono, że piki hydroksylowe często dawały zaniżone procentowe wartości stopnia podstawienia i dlatego przyjęto, że pik 2,65 ppm dla -S-CH2- jest pewniejszy i potwierdza 100-proc. stopień podstawienia.
Reakcja 3.
Reakcja 3 przedstawia utlenianie nadtlenkiem markaptoetanolu poli(glikolu etylenowego) w celu przeprowadzenia siarki S w sulfon SO2. Wytwarza się przy tym sulfon etanolowy PEG.
g PEG-SCH2CH2OH rozpuszczono w 30 ml 0,123 M roztworu kwasu wolframowego i ochłodzono w kąpieli lodowej. Roztwór kwasu wolframowego przygotowano przez roz puszczenie kwasu w roztworze wodorotlenku sodu o pH 11,5 i następne nastawienie pH 5,6 za pomocą lodowatego kwasu octowego. Do roztworu kwasu wolframowego i merkaptoetanolu poli(glikolu etylenowego) dodano 20 ml wody destylowanej i 2,876 ml 30% nadtlenku wodoru, co odpowiada 2,5 gramorównoważnika w stosunku do grup hydroksylowych, po czym mieszaninę reakcyjną pozostawiono na noc, aby ogrzała się w ciągu tego czasu do temperatury pokojowej.
Utleniony produkt ekstrahowano trzykrotnie dichlorometanem, stosując za każdym razem około 25 ml dichlorometanu. Frakcje organiczne połączono, przemyto rozcieńczonym wodnym dwuwęglanem sodu i wysuszono nad bezwodnym siarczanem magnezu. Zmniejszono objętość do 20 ml. Wytrącono produkt, sulfon etanolowy PEG, przez dodanie go do zimnego suchego eteru etylowego.
Analiza NMR w dimetylosulfotlenku dó-DMSO dała następujące piki dla PEGSO2CH2CH2OH: 3,25 ppm, tryplet, -CH2-SO2-; 3,37 ppm, tryplet, -SO2-CH2-; 3,50 ppm, łańcuch główny; 3,77 ppm, tryplet, -CH2OH; 5,04 ppm, tryplet, -OH. Pik hydroksylowy przy 5,04 ppm wskazywał na 85-proc. stopień podstawienia. Jednakże pik przy 3,37 ppm dla -SO2CH2- wskazywał na 100-proc. stopień podstawienia i jest uważany za pewniejszy.
Reakcja 4.
Reakcja 4 przedstawia końcowy etap w syntezie, izolowaniu i charakteryzowaniu sulfonu chloroetylowego poli(glikolu etylenowego).
W celu wytworzenia produktu rozpuszczono 20 g sulfonu etanolowego poli(glikolu etylenowego), PEG-SO2CH2CH2OH, w 100 ml świeżo destylowanego chlorku tionylu i roztwór ogrzewano do wrzenia pod chłodnicą zwrotną w ciągu nocy. Chlorek tionylu destylowano nad chinoliną. Nadmiar chlorku tionylu usunięto przez destylację. Dodano 50 ml toluenu i 50 ml dichlorometanu i usunięto je przez destylację.
W celu izolowania produktu rozpuszczono sulfon chloroetylowy PEG w 20 ml dichlorometanu i wytrącono przez dodanie do 100 ml zimnego suchego eteru etylowego. Wytrącony osad przekrystalizowano z 50 ml octanu etylu w celu izolowania produktu.
Do scharakteryzowania produktu zastosowano magnetyczny rezonans jądrowy. Analiza NMR w dimetylosulfotlenku d^-DMSO dała następujące piki dla PEG-SO2CH2CH2C1; 3,50 ppm, łańcuch główny; 3,64 ppm, tryplet, -CH2SO2-; 3,80 ppm, tryplet, -SO2-CH2-. Przy 3,94 ppm pojawił się mały tryplet zanieczyszczenia hydroksylowego. Obliczenie procentowego stopnia podstawienia dla tego widma było utrudnione z powodu zbliżenia ważnych pików do bardzo dużego piku łańcucha głównego.
Reakcja 5.
Reakcja 5 przedstawia konwersję sulfonu chloroetylowego poli(glikolu etylenowego) z reakcji w etapie 4 na sulfon winylowy poli(glikolu etylenowego) oraz izolowanie i scharakteryzowanie produktu, sulfonu winylowego.
Sulfon winylowy PEG wytworzono z łatwością przez rozpuszczenie stałego sulfonu chloroetylowego PEG w rozpuszczalniku dichlorometanie i następne dodanie 2 równoważników NaOH. Roztwór przesączono w celu usunięcia zasady i rozpuszczalnik odparowano w celu izolowania produktu końcowego PEG-SO2-CH=CH2, sulfonu winylowego PEG.
Sulfon winylowy PEG scharakteryzowano metodą analizy NMR w dimetylosulfotlenku dg-DMSO. Analiza NMR dała następujące piki: 3,50 ppm, łańcuch główny; 3,73 ppm, tryplet, -CH2-SO2-; 6,21 ppm, tryplet, =CH2; 6,97 ppm, dublet dubletów, -SO2-CH-. Pik 6,97 ppm dla -SO2-CH- wskazywał na 84-proc. stopień podstawienia. Pik 6,21 ppm dla =CH2 wskazywał na 94-proc. stopień podstawienia. Miareczkowanie merkaptoetanolem i 2,2'-ditiodipirydyną wskazywało na 95-proc. stopień podstawienia.
Przykład Π. Reaktywnośćtiolo-selektywna
Przykład II pokazuje, że sulfon winylowy PEG i jego prekursor, sulfon chloroetylowy PEG, są znacznie bardziej reaktywne z grupami tiolowymi (-SH) niż z grupami aminowymi (-NH2) lub z grupami iminowymi (-NH-). Związki zawierające grupy tiolowe są związkami organicznymi, które przypominają alkohole zawierające grupę hydroksylową -OH, z tą różnicą, że w tiolach tlen w grupie hydroksylowej jest zastąpiony siarką. Tiole są nazywane czasem sulfohydrylami lub merkaptanami. Sulfon winylowy PEG zawiera grupę sulfonu wi
180 149 nylowego -SO2-CH=CH2. Sulfon chloroetylowy PEG zawiera grupę sulfonu chloroetylowego -SO2CH2CH2C1.
Selektywność względem tioli jest ważna w przypadku modyfikowania białka, ponieważ oznacza ona, że jednostki cysteinowe (zawierające -SH) będą modyfikowane wybiórczo przed jednostkami lizynowymi (zawierającymi -NH2) i jednostkami histydynowymi (zawierającymi -NH-). Selektywność sulfonu winylowego PEG względem tioli oznacza, że PEG może być selektywnie przyłączony do jednostek cysternowych i w ten sposób zostaje zachowana aktywność białka względem specyficznych białek i kontrolowana liczba cząsteczek PEG przyłączonych do białka.
Względną reaktywność sulfonu winylowego PEG z grupami tiolowymi i aminowymi oznaczano przez pomiar szybkości reakcji sulfonu winylowego PEG z estrem metylowym Nα-acetylolizyny i z merkaptoetanolem. Ester metylowy N-a-acetylolizyny jest modelem lizyny zawierającym grupę aminową i nazwę jego skraca się do Lys-NH2. Merkaptoetanol służy jako model cysteiny zawierający grupę tiolową i nazwę jego skraca się do Cys-SH. W podobny sposób oznaczono względną reaktywność sulfonu chloroetylowego PEG. Ta cząsteczka służy jako „osłonięta” postać sulfonu winylowego, ponieważ jest trwała w kwasie, ale przechodzi w sulfon winylowy PEG po dodaniu zasady.
Reaktywność sulfonu winylowego PEG i prekursora, sulfonu chloroetylowego PEG, zbadano przy pH: 8,0, 9,0 i 9,5. Buforami do regulowania pH były: 0,1 M fosforan o pH 8,0 i 0,1 M boran o pH 9,0 i o pH 9,5. Podczas pomiaru reaktywności merkaptoetanolu dodawano do obu buforów 5 mM kwas etylenodiaminotetraoctowy (EDTA) w celu opóźnienia konwersji tiolu na disiarczek.
Podczas reakcji pochodnych PEG według wynalazku z Lys-NH2 dodawano, z jednoczesnym mieszaniem, 3mM roztwór pochodnej PEG do 0,3 mM roztworu Lys-NH2 w buforze odpowiednim dla każdej z trzech wartości zasadowego pH. Przebieg, reakcji monitorowano przez dodanie fluorescaminy do roztworu reakcyjnego w celu wytworzenia fluorescencyjnej pochodnej w wyniku reakcji z pozostającymi grupami aminowymi. Etap monitorowania wykonywano przez dodanie 50 μΐ mieszaniny reakcyjnej do 1,950 ml buforu fosforanowego o pH 8,0 i następnie dodanie 1,0 ml roztworu fluorescaminy, z jednoczesnym silnym mieszaniem. Roztwór fluorescaminy zawierał 0,3 mg fluorosceaminy na 1 ml acetonu.
Fluorescencję mierzono 10 minut po mieszaniu. Stwierdzono wzbudzenie przy długości fali 390 nm. Emisja światła zachodziła przy 475 nm. Nie stwierdzono żadnej reakcji w ciągu 24 godzin przy pH 8,0 ani dla sulfonu winylowego PEG, ani dla sulfonu chloroetylowego PEG. Przy pH 9,5 reakcja była powolna, ale wszystkie grupy aminowe przereagowały po kilku dniach.
Podczas reakcji z Cys-SH sulfonu winylowego PEG i prekursora, sulfonu chloroetylowego PEG, dodawano 2 mM roztwór pochodnej PEG do 0,2 mM roztworu Cys-SH w buforze odpowiednim dla każdej z trzech wartości zasadowego pH. Przebieg reakcji monitorowano przez dodanie 4-ditiopirydyny do roztworu reakcyjnego. 4-Ditiopirydyna reaguje z Cys-SH z wytworzeniem 4-tiopirydonu, który absorbuje światło nadfioletowe.
Etap monitorowania wykonano przez dodanie 50 μΐ mieszaniny reakcyjnej do 0,950 ml 0,1 M buforu fosforanowego o pH 8,0 i następne dodanie 1,0 ml 2mM 4-ditiopirydyny w tym samym buforze.
Absorbancję 4-tiopirydonu mierzono przy 324 nm. Zarówno sulfon winylowy PEG, jak również sulfon chloroetylowy PEG wykazywały reaktywność względem Cys-SH, przy czym sulfon winylowy PEG wykazywał większą reaktywność. Przy pH 9,0 reakcja zakończyła się w ciągu 2 minut przy użyciu sulfonu winylowego i w ciągu 15 minut przy użyciu sulfonu chloroetylowego. Jednakże reakcje te były zbyt szybkie, aby można było dokładnie oznaczyć stałe szybkości. Przy pH 8,0 reakcje były powolniejsze, ale nadal zakończyły się w ciągu 1 godziny dla sulfonu winylowego i w ciągu 3 godzin dla sulfonu chloroetylowego. Konwersja sulfonu chloroetylowego na sulfon winylowy jest znacznie powolniejsza niż reakcja sulfonu winylowego z Cys-SH. Zatem wydąje się, że szybkość reakcji sulfonu chloroetylowego z Cys-SH zależy od szybkości konwersji sulfonu chloroetylowego na sulfon winylowy. Nie mniej jednak, te szybkości reakcji były jeszcze znacznie większe niż w przypadku reakcji z Lys-NH2.
Powyższe badania kinetyczne wykazują co następuje: Sulfon winylowy PEG jest znacznie bardziej reaktywny z grupami tiolowymi niż z grupami aminowymi, co wskazuje na to, że przyłączenie sulfonu winylowego PEG do białka zawierającego zarówno grupy cysternowe, jak i lizynowe, zachodzi głównie w wyniku reakcji z cysteiną. Ponieważ reaktywność z grupami aminowymi jest zbliżona do reaktywności z grupami iminowymi, dlatego reaktywność podjednostek histydynowych będzie także znacznie mniejsza niż reaktywność z podjednostkami cysternowymi. Selektywność względem grup tiolowych jest także wyraźna przy niższych wartościach pH dla sulfonu chloroetylowego PEG i sulfonu winylowego PEG, chociaż reakcje sulfonu chloroetylowego PEG są trochę powolniejsze.
Przydatność wielu pochodnych PEG jest ograniczoną ponieważ reagują one szybko z wodą i w ten sposób przeszkadzają w próbach przyłączenia pochodnej do cząsteczek i do powierzchni w warunkach środowiska wodnego. Poniższy przykład ΙΠ pokazuje, że sulfon chloroetylowy PEG jest trwały w wodzie.
Przykład ΙΠ. Odporność na hydrolizę
Sulfon winylowy PEG rozpuszczono w ciężkiej wodzie, tlenku deuteru D2O, i monitorowano metodą NMR. Reakcja nie zachodziła. Roztwór sulfonu chloroetylowego PEG wytworzył sulfon winylowy PEG w ciężkiej wodzie, którą buforowano boranem do pH 9,0. Monitorowanie metodą NMR pokazało, że po wytworzeniu sulfon winylowy PEG jest trwały w ciężkiej wodzie w ciągu 3 dni.
Sulfon chloroetylowy PEG jest trwały w wodzie, dopóki roztwór nie stanie się zasadowy, po czym ulega konwersji na sulfon winylowy. Wykazano konwersję na sulfon winylowy przez rozpuszczenie sulfonu chloroetylowego w wodzie o pH 7 i w buforze boranowym o pH 9. Pochodną PEG ekstrahuje się do chlorku metylenu. Po usunięciu chlorku metylenu analiza NMR wykazała, że sulfon chloroetylowy PEG jest trwały przy obojętnym pH 7,0 i reaguje z zasadą z wytworzeniem sulfonu winylowego PEG.
Sulfon winylowy jest trwały w ciągu kilku dni, nawet przy zasadowym pH. Znaczna odporność na hydrolizę i tiolo-specyficzna reaktywność sulfonu winylowego PEG oznacza, że sulfon winylowy PEG i jego prekursor są przydatne do modyfikowania cząsteczek i powierzchni w środowisku wodnym, jak to pokazuje następny przykład IV.
Przykład IV. Sprzęganie białka
Dwoma sposobami wykazano modyfikowanie białka w wyniku przyłączenia pochodnej PEG do albuminy surowicy wołowej (BSA, od -bovine serum albuminę). BSA jest białkiem. Rodzima niemodyfikowana BSA zawiera grupy cystyno we, które nie zawierają grup tiolowych. Jednostki cystynowe są związane za pomocą wiązań disiarczkowych S-S.
W pierwszym sposobie, sulfon winylowy m-PEG o ciężarze cząsteczkowym 5000 poddawano reakcji z niemodyfikowaną BSA w ciągu 24 godzin w 0,1 M buforze boranowym o pH 9,5 w temperaturze pokojowej. 1 ml roztworu zawierał lmg BSA i 1 mg sulfonu winylowego m-PEG o ciężarze cząsteczkowym 5000. Wyniki uzyskane dla związku modelowego z przykładu II pokazały, że podjednostki lizyny (i ewentualnie podjednostki histydyny) mogą być modyfikowane w tych dość zasadowych warunkach i pod nieobecność wolnych grup tiolowych dostępnych dla reakcji.
Przyłączenie do podjednostek lizynowych wykazano dwoma sposobami: Po pierwsze, chromatografia wykluczania według wielkości (SEC) pokazała, że ciężar cząsteczkowy białka zwiększył się o około 50%, co wskazuje na przyłączenie około 10 cząsteczek PEG do cząsteczki białka. Po drugie, analiza za pomocą fluorescaminy wykazała, że liczba grup lizynowych w cząsteczce BSA zmniejszyła się o około 10.
W drugim sposobie, BSA poddano działaniu tributylofosfiny w celu zredukowania wiązań disiarczkowych S-S do grup tiolowych -SH, które są dostępne dla reakcji. Modyfikowany BSA poddano następnie działaniu sulfonu chloroetylowego PEG przy pH 8,0 w 0,1 M buforze fosforanowym w temperaturze pokojowej w ciągu 1 godziny. 1 ml roztworu zawierał 1 mg modyfikowanej BSA i 1 mg sulfonu chloroetylowego m-PEG o ciężarze cząsteczkowym 5000. Wyniki pokazały, że grupy lizynowe były niereaktywne w tych warunkach. Jednak grupy tiolowe byty reaktywne.
180 149
Przyłączenie PEG do białka wykazano metodą chromatografii wykluczania według wielkości, która pokazała, że ciężar cząsteczkowy białka zwiększył się o około 25%. Analiza za pomocą fluorescaminy wykazała, że liczba podjednostek lizyny w białku nie zmieniła się, co potwierdziło fakt, że przyłączenie PEG nie miało miejsca na podjednostkach lizyny. W ten sposób potwierdzono podstawienie na grupach tiolowych.
Wynalazek zastrzeżony w niniejszym opisie przedstawiono dla kilku szczegółowych przykładowych rozwiązań. Jednak powyższy opis nie ma ograniczać wynalazku do podanych przykładowych rozwiązań i fachowiec powinien móc rozpoznać, że mogą być wprowadzane zmiany w ramach zakresu i celu wynalazku, jak to opisano w powyższym opisie. Przeciwnie, wynalazek obejmuje wszelkie alternatywy, modyfikacje i odpowiedniki, jakie mogą być włączone w ramach rzeczywistego zakresu i celu wynalazku, określonych w załączonych zastrzeżeniach patentowych.
180 149
Departament Wydawnictw UP RP. Nakład 70 egz. Cena 4,00 zł.
Claims (35)
- Zastrzeżenia patentowe1. Aktywowany poli(glikol etylenowy) o ogólnym wzorzeR-(OCH2CH2)n-Y w którym n oznacza liczbę całkowitą od 5 do 3000; Y jest wybrany z grupy składającej się z -NH-OC-CH2-CH2-SO2-CH=CH2, -CO-NH-CH2-CH2-SO2-CH=CH2 i SO2-CH2-CH2-X, gdzie X oznacza chlorowiec, a R jest wybrany z grupy składającej się z H-, H3C-, CH2=CHSO2-, X-CH2-CH2-SO2-, CH2=CH-SO2-CH2-CH2-CO-NH-, CH2=CH-SO2-CH2-CH2-NH-CO-.
- 2. Aktywowany poli(glikol etylenowy) według zastrz. 1, w którym n oznacza liczbę całkowitą od 45 do 110.
- 3. Aktywowany poli(glikol etylenowy) według zastrz. 1, w którym Y oznacza -CONH-CH2-CH2-SO2-CH=CH2.
- 4. Aktywowany poli(glikol etylenowy) według zastrz. 1, w którym Y oznacza -NHCO-CH2-CH2-SO2-CH=CH2.
- 5. Aktywowany poli(glikol etylenowy) według zastrz. 1, w którym Y oznacza -SO2CH2-CH2-C1.
- 6. Sposób wytwarzania aktywowanego poli(glikolu etylenowego) mającego aktywne ugrupowanie sulfonowe kowalentnie związane z poli(glikolem etylenowym), znamienny tym, że obejmuje etap przyłączenia ugrupowania zawierającego siarkę bezpośrednio do atomu węgla poli(glikolu etylenowego) a następnie przekształcenia ugrupowania zawierającego siarkę w aktywne ugrupowanie sulfonowe.
- 7. Sposób według zastrz. 6, znamienny tym, że dodatkowo obejmuje etap wydzielania aktywowanego polimeru mającego aktywne ugrupowanie sulfonu.
- 8. Sposób według zastrz. 6, znamienny tym, że etap przyłączenia ugrupowania zawierającego siarkę bezpośrednio do atomu węgla poli(glikolu etylenowego) obejmuje etapy aktywowania co najmniej jednej aktywo walnej grupy hydroksylowej na polimerze i poddania wytworzonego związku reakcji z zawierającym alkohol ugrupowaniem tiolowym w celu spowodowania bezpośredniego przyłączenia siarki do łańcucha węgiel-węgiel poli(glikolu etylenowego).
- 9. Sposób według zastrz. 8, znamienny tym, że etap aktywowania co najmniej jednej aktywowalnej grupy hydroksylowej wybiera się z etapów składających się z podstawienia hydroksylowego i zastąpienia wodoru hydroksylowego bardziej reaktywnym ugrupowaniem.
- 10. Sposób według zastrz. 8, znamienny tym, że ugrupowaniem tiolowym zawierającym alkohol jest merkaptoetanol.
- 11. Sposób według zastrz. 8, znamienny tym, że ugrupowanie tiolowe zawierające alkohol przekształca się w aktywne ugrupowanie sulfonowe na etapach utleniania do sulfonu siarki w ugrupowaniu zawierającym siarkę i poddania produktu reakcji z ugrupowaniem aktywującym lub podstawiającym grupę hydroksylową.
- 12. Sposób według zastrz. 11, znamienny tym, że sulfon jest aktywnym sulfonem etylowym i sposób obejmuje dodatkowo etap wytworzenia ugrupowania sulfonu winylowego na polimerze w wyniku reakcji aktywnego sulfonu etylowego z silną zasadą.
- 13. Sposób wytwarzania aktywowanego poli(glikolu etylenowego) mającego aktywne ugrupowanie sulfonowe kowalentnie związane z poli(glikolem etylenowym), znamienny tym, że obejmuje aktywowanie poli(glikolu etylenowego) z wytworzeniem reaktywnego ugrupowania aminowego kowalentnie związanego z poli(glikolem etylenowym), dostarczenie180 149 łączącego ugrupowania zawierającego aktywne ugrupowanie sulfonu i aktywne ugrupowanie estru sukcynoimidylowego oraz reakcję reaktywnego ugrupowania aminowego z aktywnym ugrupowaniem estru sukcynoimidylowego z wytworzeniem aktywowanego polimeru.
- 14. Sposób według zastrz. 13, znamienny tym, że aktywne ugrupowanie sulfonu oznacza -NH-CO-CH2-CH2-SO2-CH=CH2.
- 15. Sposób wytwarzania aktywowanego poli(glikołu etylenowego) mającego aktywne ugrupowanie sulfonowe kowalentnie związane z poli(glikolem etylenowym), znamienny tym, że obejmuje aktywowanie poli(glikolu etylenowego) z wytworzeniem reaktywnego ugrupowania estrowego sukcynoimidylowego kowalentnie związanego z wymienionym polimerem, dostarczenie łączącego ugrupowania zawierającego aktywne ugrupowanie sulfonu i aktywne ugrupowanie aminowe oraz reakcję reaktywnego ugrupowania aminowego z aktywnym ugrupowaniem estru sukcynoimidylowego z wytworzeniem polimeru.
- 16. Sposób według zastrz. 15, znamienny tym, że jako aktywne ugrupowanie sulfonu stosuje się-CO-NH-CO-CH2-CH2-SO2-CH=CH2. ...
- 17. Koniugat biologicznie aktywny, znamienny tym, że zawiera aktywną biologicznie cząsteczkę i aktywowany poli(glikol etylenowy) o ogólnym wzorzeR-(OCH2CH2)n-Y w którym n oznacza liczbę całkowitą od 5 do 3000; Y jest wybrany z grupy składającej się z -NH-OC-CH2-CH2-SO2-CH=CH2, -CO-NH-CH2-CH2-SO2-CH=CH2 i SO2-CH2-CH2-X, gdzie X oznacza chlorowiec, a R jest wybrany z grupy składającej się z H-, H3C-, CH2=CHSO2-, X-CH2-CH2-SO2-, CH2=CH-SO2-CH2-CH2-CO-NH-, CH2=CH-SO2-CH2-CH2-NH-CO-, przy czym aktywowany poli(glikol etylenowy) jest kowalentnie związany z aktywną biologicznie cząsteczką przez aktywne ugrupowanie sulfonu.
- 18. Koniugat według zastrz. 17, znamienny tym, że n oznacza liczbę całkowitą od 45 do 110.
- 19. Koniugat według zastrz. 17, znamienny tym, że Y oznacza -CO-NH-CH2-CH2SO2-CH=CH2.
- 20. Koniugat według zastrz. 17, znamienny tym, że Y oznacza -NH-OC-CH2-CH2SO2-CH=CH2.
- 21. Koniugat według zastrz. 17, znamienny tym, że Y oznacza -SO2-CH2-CH2-C1.
- 22. Sposób wytwarzania koniugatu poli(glikolu etylenowego) i biologicznie aktywnej cząsteczki mającej ugrupowanie tiolowe, znamienny tym, że obejmuje dostarczenie aktywowanego poli(glikolu etylenowego) otrzymanego sposobem polegającym na przyłączeniu ugrupowania zawierającego siarkę bezpośrednio do atomu węgla poli(glikolu etylenowego) a następnie przekształceniu ugrupowania zawierającego siarkę w aktywne ugrupowanie sulfonowe, reakcję biologicznie aktywnej cząsteczki z aktywowanym poli(glikolem etylenowym) z wytworzeniem kowalentnego wiązania pomiędzy ugrupowaniem tiolowym wymienionej biologicznie aktywnej cząsteczki i aktywnym ugrupowaniem sulfonu aktywowanego poli(glikolu etylenowego).
- 23. Sposób według zastrz. 22, znamienny tym, że biologicznie aktywną cząsteczkę wybiera się z grupy składającej się z syntetyków, biomateriałów, białek, środków farmaceutycznych, komórek i witamin.
- 24. Sposób wytwarzania koniugatu poli(glikolu etylenowego) i biologicznie aktywnej cząsteczki zawierającej ugrupowanie tiolowe, znamienny tym, że obejmuje etapy:(a) poddania poli(glikolu etylenowego) mającego co najmniej jedno aktywne ugrupowanie hydroksylowe reakcji ze związkiem w celu wytworzenia poli(glikolu etylenowego) podstawionego albo estrem albo halogenkiem;(b) poddania poli(glikolu etylenowego) z etapu (a) podstawionego estrem albo halogenkiem reakcji z merkaptoetanolem w celu zamiany ugrupowania estrowego lub halogenkowego na rodnik merkaptoetanolowy;(c) poddania podstawionego merkaptoetanolem poli(glikolu etylenowego) z etapu (b) reakcji ze środkiem utleniającym w celu utlenienia do sulfonu siarki w ugrupowaniu merkaptoetanolowym;180 149 (d) poddania sulfonu z etapu (c) reakcji ze związkiem w celu zamiany grupy hydroksylowej ugrupowania merkaptoetanolowego na ugrupowanie estrowe lub halogenkowe z wytworzeniem aktywnego ugrupowania sulfonu etylowego;(e) poddanie sulfonu etylowego etapu (d) reakcji z zasadą w celu wytworzenia aktywowanego poli(glikolu etylenowego) mającego aktywne ugrupowanie sulfonu winylowego;(f) izolowania sulfonu winylowego poli(glikolu etylenowego) etapu (e) i (g) poddania aktywnego ugrupowania sulfonu winylowego reakcji z ugrupowaniem tiolowym biologicznie aktywnej cząsteczki z wytworzeniem koniugatu.
- 25. Sposób wytwarzania koniugatu poli(glikolu etylenowego) i biologicznie aktywnej cząsteczki zawierającej ugrupowanie tiolowe, znamienny tym, że obejmuje etapy:(a) poddania poli(glikolu etylenowego) mającego co najmniej jedno aktywne ugrupowanie hydroksylowe reakcji ze związkiem w celu wytworzenia poli(glikołu etylenowego) podstawionego albo estrem albo halogenkiem;(b) poddania poli(glikolu etylenowego) z etapu (a) podstawionego estrem albo halogenkiem reakcji z merkaptoetanolem w celu zamiany ugrupowania estrowego lub halogenkowego na rodnik merkaptoetanolowy;(c) poddania podstawionego merkaptoetanolem poli(glikolu etylenowego) z etapu (b) reakcji ze środkiem utleniającym w celu utlenienia do sulfonu siarki w ugrupowaniu merkaptoetanolowym;(d) poddania sulfonu z etapu (c) reakcji ze związkiem w celu przekształcenia grupy hydroksylowej ugrupowania merkaptoetanolu w ugrupowanie halogenkowe tworząc aktywowany poli(glikol etylenowy) mający aktywne ugrupowanie sulfonu etylowego;(e) izolowania aktywowanego poli(glikolu etylenowego) etapu (d) i (f) poddania aktywnego ugrupowania sulfonu etylowego reakcji z ugrupowaniem tiolowym biologicznie aktywnej cząsteczki tworząc wspomniany koniugat.
- 26. Sposób wytwarzania koniugatu poli(glikolu etylenowego) i biologicznie aktywnej cząsteczki zawierającej ugrupowanie tiolowe, znamienny tym, że aktywuje się poli(glikol etylenowy) z wytworzeniem reaktywnego ugrupowania aminowego kowalentnie związanego z poli(glikolem etylenowym), zapewnia się cząsteczkę łącznika mającą aktywne ugrupowanie sulfonowe i aktywne ugrupowanie estru sukcynoimidylowego, poddaje się reaktywne ugrupowanie aminowe reakcji z aktywnym ugrupowaniem estru sukcynoimidylowego z wytworzeniem aktywowanego poli(glikolu etylenowego) mającego aktywne ugrupowanie sulfonu kowalentnie związane z poli(glikolem etylenowym) i poddaje się aktywne ugrupowanie sulfonu reakcji z ugrupowaniem tiolowym biologicznie aktywnej cząsteczki z wytworzeniem koniugatu.
- 27. Sposób według zastrz. 26, znamienny tym, że jako aktywne ugrupowanie sulfonowe stosuje się -NH-OC-CH2-CH2-SO2-CH=CH2.
- 28. Sposób wytwarzania koniugatu poli(glikolu etylenowego) i biologicznie aktywnej cząsteczki zawierającej ugrupowanie tiolowe, znamienny tym, że aktywuje się poli(glikol etylenowy) z wytworzeniem reaktywnego ugrupowania estru sukcynimidylowego kowalentnie związanego z poli(glikolem etylenowym), zapewnia się cząsteczkę łącznika mającą aktywne ugrupowanie sulfonu i aktywne ugrupowanie aminowe, poddaje się reaktywne ugrupowanie aminowe reakcji z aktywnym ugrupowaniem estru sukcynimidylowym z wytworzeniem aktywowanego poli(glikolu etylenowego) zawierającego aktywne ugrupowanie sulfonu oraz poddaje się aktywne ugrupowanie sulfonu aktywowanego poli(glikolu etylenowego) reakcji z ugrupowaniem tiolowym aktywnej biologicznie cząsteczki z wytworzeniem koniugatu.
- 29. Sposób według zastrz. 28, znamienny tym, że jako aktywne ugrupowanie sulfonu stosuje się -CO-NH-CH2-CH2-SO2-CH=CH2.
- 30. Sposób wytwarzania sulfonu winylowego poli(glikolu etylenowego), znamienny tym, że obejmuje etapy:(a) poddania poli(glikolu etylenowego) mającego co najmniej jedno aktywne ugrupowanie hydroksylowe reakcji ze związkiem w celu wytworzenia poli(glikolu etylenowego) podstawionego albo estrem albo halogenkiem;180 149 (b) poddania poli(glikolu etylenowego) z etapu (a) podstawionego estrem albo halogenkiem reakcji z merkaptoetanolem w celu zamiany ugrupowania estrowego lub halogenkowego na rodnik merkaptoetanolowy;(c) poddania podstawionego merkaptoetanolem poli(glikolu etylenowego) z etapu (b) reakcji ze środkiem utleniającym w celu utlenienia do sulfonu siarki w ugrupowaniu merkaptoetanolowym;(d) poddania sulfonu z etapu (c) reakcji ze związkiem w celu zamiany grupy hydroksylowej ugrupowania merkaptoetanolowego na ugrupowanie estrowe lub halogenkowe;(e) poddania sulfonu etylenowego z etapu (d) reakcji z zasadą w celu wytworzenia sulfonu winylowego poli(glikolu etylenowego).
- 31. Sposób według zastrz. 30, znamienny tym, że dodatkowo obejmuje etapy izolowania sulfonu winylowego poli(glikolu etylenowego).
- 32. Sposób według zastrz. 30, znamienny tym, że halogenkiem z etapu (d) jest chlor i produktem etapu (d) jest sulfon chloroetylowy poli(glikolu etylenowego).
- 33. Sposób według zastrz. 30, znamienny tym, że obejmuje dodatkowo etapy rozpuszczania kryształów sulfonu chloroetylowego poli(glikolu etylenowego) w rozpuszczalniku organicznym przed reakcją z zasadą w celu wytworzenia sulfonu winylowego poli(glikolu etylenowego), i izolowania produktu sulfonu winylowego poli(glikolu etylenowego), przez odsączenie w celu usunięcia zasady i odparowanie rozpuszczalnika.
- 34. Sposób wytwarzania sulfonu haloetylowego poli(glikolu etylenowego), znamienny tym, że obejmuje etapy:(a) poddania połi(glikolu etylenowego) mającego co najmniej jedno aktywne ugrupowanie hydroksylowe reakcji ze związkiem w celu wytworzenia poli(glikolu etylenowego) podstawionego albo estrem albo halogenkiem;(b) poddania poli(glikolu etylenowego) z etapu (a) podstawionego estrem albo halogenkiem reakcji z merkaptoetanolem w celu zamiany ugrupowania estrowego lub halogenkowego na rodnik merkaptoetanolowy;(c) poddania podstawionego merkaptoetanolem poli(glikolu etylenowego) z etapu (b) reakcji ze środkiem utleniającym w celu utlenienia do sulfonu siarki w ugrupowaniu merkaptoetanolowym;(d) poddania sulfonu z etapu (c) reakcji ze związkiem w celu zamiany grupy hydroksylowej ugrupowania merkaptoetanolowego na ugrupowanie halogenkowe z wytworzeniem sulfonu haloetylowego poli(glikolu etylenowego).
- 35. Sposób według zastrz. 34, znamienny tym, że dodatkowo obejmuje etap izolowania sulfonu haloetylowego poli(glikolu etylenowego).* * *
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US08/151,481 US5446090A (en) | 1993-11-12 | 1993-11-12 | Isolatable, water soluble, and hydrolytically stable active sulfones of poly(ethylene glycol) and related polymers for modification of surfaces and molecules |
| PCT/US1994/013013 WO1995013312A1 (en) | 1993-11-12 | 1994-11-14 | Water soluble active sulfones of poly(ethylene glycol) |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL314298A1 PL314298A1 (en) | 1996-09-02 |
| PL180149B1 true PL180149B1 (pl) | 2000-12-29 |
Family
ID=22538958
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL94314298A PL180149B1 (pl) | 1993-11-12 | 1994-11-14 | sposób wytwarzania aktywowanego poli(glikolu etylenowego),koniugat biologicznie aktywny, sposób wytwarzania koniugatu poli(glikolu etylenowego sposób wytwarzania sulfonu winylowego i sposób wytwarzania sulfonu haloetylowego PL PL PL PL PL PL PL PL |
Country Status (26)
| Country | Link |
|---|---|
| US (6) | US5446090A (pl) |
| EP (2) | EP0728155B1 (pl) |
| JP (1) | JP3114998B2 (pl) |
| KR (1) | KR100225746B1 (pl) |
| CN (1) | CN1085689C (pl) |
| AT (1) | ATE215577T1 (pl) |
| AU (1) | AU687937B2 (pl) |
| BG (1) | BG63399B1 (pl) |
| BR (1) | BR9408048A (pl) |
| CA (1) | CA2176203C (pl) |
| CZ (1) | CZ295640B6 (pl) |
| DE (1) | DE69430317T2 (pl) |
| DK (1) | DK0728155T3 (pl) |
| EE (1) | EE03448B1 (pl) |
| ES (1) | ES2173943T3 (pl) |
| FI (1) | FI117441B (pl) |
| HK (1) | HK1042312A1 (pl) |
| HU (1) | HU225649B1 (pl) |
| NO (1) | NO315377B1 (pl) |
| NZ (1) | NZ276313A (pl) |
| PL (1) | PL180149B1 (pl) |
| RO (2) | RO118434B1 (pl) |
| RU (1) | RU2176253C2 (pl) |
| SK (1) | SK284527B6 (pl) |
| UA (1) | UA58481C2 (pl) |
| WO (1) | WO1995013312A1 (pl) |
Families Citing this family (459)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6143866A (en) * | 1989-07-18 | 2000-11-07 | Amgen, Inc. | Tumor necrosis factor (TNF) inhibitor and method for obtaining the same |
| US6552170B1 (en) * | 1990-04-06 | 2003-04-22 | Amgen Inc. | PEGylation reagents and compounds formed therewith |
| US6057287A (en) | 1994-01-11 | 2000-05-02 | Dyax Corp. | Kallikrein-binding "Kunitz domain" proteins and analogues thereof |
| US20010055581A1 (en) | 1994-03-18 | 2001-12-27 | Lawrence Tamarkin | Composition and method for delivery of biologically-active factors |
| US5583114A (en) | 1994-07-27 | 1996-12-10 | Minnesota Mining And Manufacturing Company | Adhesive sealant composition |
| USRE38827E1 (en) | 1994-07-27 | 2005-10-11 | 3M Innovative Properties Company | Adhesive sealant composition |
| US5672662A (en) * | 1995-07-07 | 1997-09-30 | Shearwater Polymers, Inc. | Poly(ethylene glycol) and related polymers monosubstituted with propionic or butanoic acids and functional derivatives thereof for biotechnical applications |
| WO1997028828A1 (en) | 1996-02-09 | 1997-08-14 | Amgen Boulder Inc. | Composition comprising interleukin-1 inhibitor and controlled release polymer |
| US5747639A (en) * | 1996-03-06 | 1998-05-05 | Amgen Boulder Inc. | Use of hydrophobic interaction chromatography to purify polyethylene glycols |
| TW555765B (en) * | 1996-07-09 | 2003-10-01 | Amgen Inc | Low molecular weight soluble tumor necrosis factor type-I and type-II proteins |
| WO1998012274A1 (en) * | 1996-09-23 | 1998-03-26 | Chandrashekar Pathak | Methods and devices for preparing protein concentrates |
| US8003705B2 (en) * | 1996-09-23 | 2011-08-23 | Incept Llc | Biocompatible hydrogels made with small molecule precursors |
| AU4981897A (en) | 1996-10-15 | 1998-05-11 | Navix, Inc. | Stabilized conjugates of uncomplexed subunits of multimeric proteins |
| CA2273852C (en) | 1996-12-06 | 2009-09-29 | Amgen Inc. | Combination therapy using an il-1 inhibitor for treating il-1 mediated diseases |
| ATE247974T1 (de) | 1996-12-06 | 2003-09-15 | Amgen Inc | Kombinationtherapie mit einem tnf-bindendem protein zür behandlung von durch tnf verursachten erkrangungen |
| US6743248B2 (en) | 1996-12-18 | 2004-06-01 | Neomend, Inc. | Pretreatment method for enhancing tissue adhesion |
| US6371975B2 (en) | 1998-11-06 | 2002-04-16 | Neomend, Inc. | Compositions, systems, and methods for creating in situ, chemically cross-linked, mechanical barriers |
| US20030191496A1 (en) * | 1997-03-12 | 2003-10-09 | Neomend, Inc. | Vascular sealing device with microwave antenna |
| US20040176801A1 (en) * | 1997-03-12 | 2004-09-09 | Neomend, Inc. | Pretreatment method for enhancing tissue adhesion |
| AU7282698A (en) * | 1997-05-15 | 1998-12-08 | Theratech, Inc. | Targeted delivery to t lymphocytes |
| US6284246B1 (en) | 1997-07-30 | 2001-09-04 | The Procter & Gamble Co. | Modified polypeptides with high activity and reduced allergenicity |
| US6251866B1 (en) | 1997-08-05 | 2001-06-26 | Watson Laboratories, Inc. | Conjugates targeted to the interleukin-2 receptor |
| US6168784B1 (en) | 1997-09-03 | 2001-01-02 | Gryphon Sciences | N-terminal modifications of RANTES and methods of use |
| US6129928A (en) * | 1997-09-05 | 2000-10-10 | Icet, Inc. | Biomimetic calcium phosphate implant coatings and methods for making the same |
| US6407218B1 (en) * | 1997-11-10 | 2002-06-18 | Cytimmune Sciences, Inc. | Method and compositions for enhancing immune response and for the production of in vitro mabs |
| US7229841B2 (en) * | 2001-04-30 | 2007-06-12 | Cytimmune Sciences, Inc. | Colloidal metal compositions and methods |
| US6066673A (en) * | 1998-03-12 | 2000-05-23 | The Procter & Gamble Company | Enzyme inhibitors |
| CA2323048C (en) * | 1998-03-12 | 2006-10-10 | Shearwater Polymers, Inc. | Poly(ethylene glycol) derivatives with proximal reactive groups |
| US6495136B1 (en) | 1998-03-26 | 2002-12-17 | The Procter & Gamble Company | Proteases having modified amino acid sequences conjugated to addition moieties |
| BR9909130A (pt) | 1998-03-26 | 2000-12-19 | Procter & Gamble | Variantes de protease de serina tendo substituições de amino-ácido |
| US6908757B1 (en) | 1998-03-26 | 2005-06-21 | The Procter & Gamble Company | Serine protease variants having amino acid deletions and substitutions |
| US6632457B1 (en) * | 1998-08-14 | 2003-10-14 | Incept Llc | Composite hydrogel drug delivery systems |
| US6458147B1 (en) | 1998-11-06 | 2002-10-01 | Neomend, Inc. | Compositions, systems, and methods for arresting or controlling bleeding or fluid leakage in body tissue |
| US6994686B2 (en) * | 1998-08-26 | 2006-02-07 | Neomend, Inc. | Systems for applying cross-linked mechanical barriers |
| DE69914611T2 (de) * | 1998-08-28 | 2004-12-23 | Gryphon Therapeutics, Inc., South San Francisco | Verfahren zur herstellung von polyamidketten von genauer länge und deren konjugate mit proteinen |
| US6551613B1 (en) * | 1998-09-08 | 2003-04-22 | Alza Corporation | Dosage form comprising therapeutic formulation |
| AU743363B2 (en) | 1998-09-22 | 2002-01-24 | Procter & Gamble Company, The | Personal care compositions containing active proteins tethered to a water insoluble substrate |
| US6660843B1 (en) * | 1998-10-23 | 2003-12-09 | Amgen Inc. | Modified peptides as therapeutic agents |
| US6830756B2 (en) * | 1998-11-06 | 2004-12-14 | Neomend, Inc. | Systems, methods, and compositions for achieving closure of vascular puncture sites |
| US6899889B1 (en) * | 1998-11-06 | 2005-05-31 | Neomend, Inc. | Biocompatible material composition adaptable to diverse therapeutic indications |
| US7279001B2 (en) * | 1998-11-06 | 2007-10-09 | Neomend, Inc. | Systems, methods, and compositions for achieving closure of vascular puncture sites |
| US6949114B2 (en) | 1998-11-06 | 2005-09-27 | Neomend, Inc. | Systems, methods, and compositions for achieving closure of vascular puncture sites |
| EP1137373A4 (en) * | 1998-12-04 | 2004-05-19 | Chandrashekhar P Pathak | BIOCOMPATIBLE, CROSSLINKED POLYMERS |
| EP2311895B1 (en) | 1999-02-01 | 2017-04-12 | Eidgenössische Technische Hochschule Zürich | Biomaterials formed by nucleophilic addition reaction to conjugated unsaturated groups |
| US6958212B1 (en) * | 1999-02-01 | 2005-10-25 | Eidgenossische Technische Hochschule Zurich | Conjugate addition reactions for the controlled delivery of pharmaceutically active compounds |
| WO2000078285A1 (en) * | 1999-06-18 | 2000-12-28 | University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey | Controlled release of therapeutics by in-situ entrapment by matrix cross-linking |
| MXPA02000842A (es) | 1999-07-22 | 2002-07-30 | Procter & Gamble | Conjugados de proteasa que tienen sitios de corte protegidos estericamente. |
| JP2003505067A (ja) | 1999-07-22 | 2003-02-12 | ザ、プロクター、エンド、ギャンブル、カンパニー | 特定のエピトープ領域にアミノ酸欠失及び置換を有するサブチリシンプロテアーゼの変異体 |
| US6946128B1 (en) | 1999-07-22 | 2005-09-20 | The Procter & Gamble Company | Protease conjugates having sterically protected epitope regions |
| WO2001007578A2 (en) | 1999-07-22 | 2001-02-01 | The Procter & Gamble Company | Subtilisin protease variants having amino acid substitutions in defined epitope regions |
| US7008635B1 (en) | 1999-09-10 | 2006-03-07 | Genzyme Corporation | Hydrogels for orthopedic repair |
| US6303119B1 (en) | 1999-09-22 | 2001-10-16 | The Procter & Gamble Company | Personal care compositions containing subtilisin enzymes bound to water insoluble substrates |
| US7074878B1 (en) * | 1999-12-10 | 2006-07-11 | Harris J Milton | Hydrolytically degradable polymers and hydrogels made therefrom |
| US6348558B1 (en) | 1999-12-10 | 2002-02-19 | Shearwater Corporation | Hydrolytically degradable polymers and hydrogels made therefrom |
| HUP0203751A3 (en) | 2000-01-10 | 2005-01-28 | Maxygen Holdings Ltd Redwood C | G-csf conjugates |
| WO2001058935A2 (en) | 2000-02-11 | 2001-08-16 | Maxygen Aps | FACTOR VII OR VIIa-LIKE MOLECULES |
| US6527432B2 (en) | 2000-05-15 | 2003-03-04 | Tecan Trading Ag | Bidirectional flow centrifugal microfluidic devices |
| NZ522847A (en) * | 2000-05-16 | 2004-11-26 | Bolder Biotechnology Inc | Methods for refolding proteins containing free cysteine residues |
| US7291673B2 (en) * | 2000-06-02 | 2007-11-06 | Eidgenossiche Technische Hochschule Zurich | Conjugate addition reactions for the controlled delivery of pharmaceutically active compounds |
| MXPA03000310A (es) * | 2000-07-12 | 2004-12-13 | Gryphon Therapeutics Inc | Quimiocinas sinteticas bioactivas, modificadas con polimeros y metodos para su elaboracion y uso. |
| US20030191291A1 (en) * | 2000-09-08 | 2003-10-09 | Kochendoerfer Gerd G. | Synthetic erythropoiesis stimulating proteins |
| US7118737B2 (en) * | 2000-09-08 | 2006-10-10 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | Polymer-modified synthetic proteins |
| CA2426692C (en) * | 2000-10-19 | 2011-01-25 | Eidgenossische Technische Hochschule Zurich | Block copolymers for multifunctional self-assembled systems |
| EP2316490A3 (en) | 2000-10-31 | 2012-02-01 | PR Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for enhanced delivery of bioactive molecules |
| TW593427B (en) * | 2000-12-18 | 2004-06-21 | Nektar Therapeutics Al Corp | Synthesis of high molecular weight non-peptidic polymer derivatives |
| US7053150B2 (en) | 2000-12-18 | 2006-05-30 | Nektar Therapeutics Al, Corporation | Segmented polymers and their conjugates |
| EP1366075B1 (en) | 2001-02-27 | 2009-05-27 | Maxygen Aps | New interferon beta-like molecules |
| MXPA03008498A (es) * | 2001-03-20 | 2005-06-30 | Univ Zuerich | Procesamiento en dos fases de polimeros termosensibles para uso como biomateriales. |
| US6538104B2 (en) * | 2001-04-27 | 2003-03-25 | Medical Analysis Systems, Inc. | Stabilization of cardiac troponin I subunits and complexes |
| US20040077835A1 (en) * | 2001-07-12 | 2004-04-22 | Robin Offord | Chemokine receptor modulators, production and use |
| ATE376020T1 (de) * | 2001-08-22 | 2007-11-15 | Bioartificial Gel Technologies Inc | Verfahren zu herstellung von aktivierten polyethylenglykolen |
| US8008252B2 (en) | 2001-10-10 | 2011-08-30 | Novo Nordisk A/S | Factor VII: remodeling and glycoconjugation of Factor VII |
| US7795210B2 (en) | 2001-10-10 | 2010-09-14 | Novo Nordisk A/S | Protein remodeling methods and proteins/peptides produced by the methods |
| US7173003B2 (en) | 2001-10-10 | 2007-02-06 | Neose Technologies, Inc. | Granulocyte colony stimulating factor: remodeling and glycoconjugation of G-CSF |
| US7157277B2 (en) | 2001-11-28 | 2007-01-02 | Neose Technologies, Inc. | Factor VIII remodeling and glycoconjugation of Factor VIII |
| US7214660B2 (en) | 2001-10-10 | 2007-05-08 | Neose Technologies, Inc. | Erythropoietin: remodeling and glycoconjugation of erythropoietin |
| EP2292273A3 (en) | 2001-10-10 | 2011-11-23 | BioGeneriX AG | Remodeling and glycoconjugation of peptides |
| US7056500B2 (en) | 2001-10-18 | 2006-06-06 | Nektar Therapeutics Al, Corporation | Polymer conjugates of opioid antagonists |
| US8013134B2 (en) * | 2001-11-23 | 2011-09-06 | Olink Ab | Kit for proximity probing with multivalent proximity probes |
| PT3025726T (pt) * | 2002-01-18 | 2020-01-09 | Biogen Ma Inc | Compostos do polímero polialquileno e utilizações dos mesmos |
| US20030179692A1 (en) * | 2002-03-19 | 2003-09-25 | Yoshitaka Ohotomo | Storage medium |
| US8282912B2 (en) * | 2002-03-22 | 2012-10-09 | Kuros Biosurgery, AG | Compositions for tissue augmentation |
| PT2298278E (pt) | 2002-06-07 | 2016-02-25 | Dyax Corp | Prevenção e redução da perda de sangue e resposta inflamatória |
| US7153829B2 (en) | 2002-06-07 | 2006-12-26 | Dyax Corp. | Kallikrein-inhibitor therapies |
| ES2363205T3 (es) * | 2002-06-21 | 2011-07-26 | Novo Nordisk Health Care Ag | Glicoformas del factor vii pegilado. |
| DE60336555D1 (de) | 2002-06-21 | 2011-05-12 | Novo Nordisk Healthcare Ag | Pegylierte glykoformen von faktor vii |
| US7034127B2 (en) * | 2002-07-02 | 2006-04-25 | Genzyme Corporation | Hydrophilic biopolymer-drug conjugates, their preparation and use |
| MXPA05002477A (es) * | 2002-09-05 | 2005-10-19 | Gen Hospital Corp | Asialo-interferones y el tratamiento de cancer de higado. |
| MXPA05002476A (es) * | 2002-09-05 | 2005-10-19 | Gi Company Inc | Asialo-interferones modificados y sus usos. |
| US7569214B2 (en) | 2002-09-09 | 2009-08-04 | Nektar Therapeutics Al, Corporation | Method for preparing water-soluble polymer derivatives bearing a terminal carboxylic acid |
| CN1312279C (zh) * | 2002-11-07 | 2007-04-25 | 连云港新阳医药有限公司 | 聚乙二醇修饰门冬酰胺酶的制备方法 |
| RS20050501A (sr) * | 2002-12-26 | 2007-08-03 | Mountain View Pharmaceuticals Inc., | Polimerni konjugati citokina,hemokina,faktora rasta, polipeptidnih hormona i njihovih antagonista sa očuvanom aktivnošću vezivanja receptora |
| GEP20084486B (en) * | 2002-12-26 | 2008-09-25 | Mountain View Pharmaceuticals | Polymer conjugates of interferon-beta with enhanced biological potency |
| US8034900B2 (en) * | 2002-12-30 | 2011-10-11 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | Water-soluble thioester and selenoester compounds and methods for making and using the same |
| US20050130892A1 (en) * | 2003-03-07 | 2005-06-16 | Xencor, Inc. | BAFF variants and methods thereof |
| US20050221443A1 (en) * | 2003-01-06 | 2005-10-06 | Xencor, Inc. | Tumor necrosis factor super family agonists |
| US7910661B2 (en) * | 2003-01-06 | 2011-03-22 | Nektar Therapeutics | Thiol-selective water-soluble polymer derivatives |
| US7553930B2 (en) * | 2003-01-06 | 2009-06-30 | Xencor, Inc. | BAFF variants and methods thereof |
| US20060014248A1 (en) * | 2003-01-06 | 2006-01-19 | Xencor, Inc. | TNF super family members with altered immunogenicity |
| CN1723232B (zh) * | 2003-01-06 | 2012-08-22 | 尼克塔治疗公司 | 巯基选择性水溶性聚合物衍生物 |
| EP1596887B1 (en) | 2003-02-26 | 2022-03-23 | Nektar Therapeutics | Polymer-factor viii moiety conjugates |
| US20090123367A1 (en) * | 2003-03-05 | 2009-05-14 | Delfmems | Soluble Glycosaminoglycanases and Methods of Preparing and Using Soluble Glycosaminoglycanases |
| US20060104968A1 (en) | 2003-03-05 | 2006-05-18 | Halozyme, Inc. | Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminogly ycanases |
| US7871607B2 (en) | 2003-03-05 | 2011-01-18 | Halozyme, Inc. | Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminoglycanases |
| EP2330213A1 (en) | 2003-03-05 | 2011-06-08 | Halozyme, Inc. | Soluble hyaluronidase glycoprotein (sHASEGP), process for preparing the same, uses and pharmaceutical compositions comprising thereof |
| AU2004221824B2 (en) | 2003-03-14 | 2009-08-27 | Ratiopharm Gmbh | Branched water-soluble polymers and their conjugates |
| US7587286B2 (en) * | 2003-03-31 | 2009-09-08 | Xencor, Inc. | Methods for rational pegylation of proteins |
| US7610156B2 (en) * | 2003-03-31 | 2009-10-27 | Xencor, Inc. | Methods for rational pegylation of proteins |
| US7642340B2 (en) | 2003-03-31 | 2010-01-05 | Xencor, Inc. | PEGylated TNF-α variant proteins |
| US8791070B2 (en) | 2003-04-09 | 2014-07-29 | Novo Nordisk A/S | Glycopegylated factor IX |
| CA2522345A1 (en) | 2003-04-09 | 2004-11-18 | Neose Technologies, Inc. | Glycopegylation methods and proteins/peptides produced by the methods |
| US9040664B2 (en) | 2003-04-11 | 2015-05-26 | Antriabio, Inc. | Materials and methods for preparing protein-polymer conjugates |
| EP1613274B1 (en) | 2003-04-15 | 2010-03-03 | GlaxoSmithKline LLC | Human il-18 substitution mutants and their conjugates |
| US7932364B2 (en) | 2003-05-09 | 2011-04-26 | Novo Nordisk A/S | Compositions and methods for the preparation of human growth hormone glycosylation mutants |
| US20040249119A1 (en) * | 2003-06-05 | 2004-12-09 | Fox Martin Edward | Novel mPEG propionaldehyde precursor |
| GB0316294D0 (en) | 2003-07-11 | 2003-08-13 | Polytherics Ltd | Conjugated biological molecules and their preparation |
| PL1656410T3 (pl) * | 2003-07-22 | 2010-08-31 | Nektar Therapeutics | Sposób wytwarzania sfunkcjonalizowanych polimerów z polimerycznych alkoholi |
| WO2005012484A2 (en) | 2003-07-25 | 2005-02-10 | Neose Technologies, Inc. | Antibody-toxin conjugates |
| CA3050564A1 (en) * | 2003-08-29 | 2005-03-10 | Dyax Corp. | Poly-pegylated protease inhibitors |
| CN1852740B (zh) | 2003-09-17 | 2011-05-11 | 耐科塔医药公司 | 多支链聚合物的药物前体 |
| EP1675620B1 (en) * | 2003-10-09 | 2019-05-08 | Ambrx, Inc. | Polymer derivatives |
| EP1675871A2 (en) | 2003-10-10 | 2006-07-05 | Xencor Inc. | Protein based tnf-alpha variants for the treatment of tnf-alpha related disorders |
| DE602004029173D1 (de) | 2003-10-10 | 2010-10-28 | Novo Nordisk As | Il-21-derivate |
| US7524813B2 (en) * | 2003-10-10 | 2009-04-28 | Novo Nordisk Health Care Ag | Selectively conjugated peptides and methods of making the same |
| ES2428358T3 (es) * | 2003-10-17 | 2013-11-07 | Novo Nordisk A/S | Terapia de combinación |
| US8637650B2 (en) | 2003-11-05 | 2014-01-28 | Genovoxx Gmbh | Macromolecular nucleotide compounds and methods for using the same |
| US20080305992A1 (en) | 2003-11-24 | 2008-12-11 | Neose Technologies, Inc. | Glycopegylated erythropoietin |
| NZ547168A (en) * | 2003-11-24 | 2010-05-28 | Biogenerix Ag | Glycopegylated erythropoietin |
| US8633157B2 (en) | 2003-11-24 | 2014-01-21 | Novo Nordisk A/S | Glycopegylated erythropoietin |
| JP2008504216A (ja) | 2003-12-02 | 2008-02-14 | サイトイミューン サイエンシズ インコーポレイテッド | モノクローナル抗体の生成のための方法および組成物 |
| US7956032B2 (en) | 2003-12-03 | 2011-06-07 | Novo Nordisk A/S | Glycopegylated granulocyte colony stimulating factor |
| US20060040856A1 (en) * | 2003-12-03 | 2006-02-23 | Neose Technologies, Inc. | Glycopegylated factor IX |
| NZ548123A (en) | 2004-01-08 | 2010-05-28 | Novo Nordisk As | O-linked glycosylation of peptides |
| JP4833862B2 (ja) * | 2004-01-28 | 2011-12-07 | サイトイミューン サイエンシズ インコーポレイテッド | 官能化コロイド金属組成物および方法 |
| BRPI0507169A (pt) | 2004-02-02 | 2007-06-26 | Ambrx Inc | polipeptìdeos do hormÈnio de crescimento humano modificados e seu usos |
| KR100580644B1 (ko) * | 2004-02-16 | 2006-05-16 | 삼성전자주식회사 | 생물분자를 고체 기판상에 비공유적으로 고정화 하는 방법및 그에 의하여 제조되는 마이크로어레이 |
| US7351787B2 (en) * | 2004-03-05 | 2008-04-01 | Bioartificial Gel Technologies, Inc. | Process for the preparation of activated polyethylene glycols |
| EP1725262B1 (en) * | 2004-03-15 | 2021-05-26 | Nektar Therapeutics | Polymer-based compositions and conjugates of hiv entry inhibitors |
| WO2005091944A2 (en) * | 2004-03-17 | 2005-10-06 | Eli Lilly And Company | Glycol linked fgf-21 compounds |
| JP2008505853A (ja) | 2004-04-13 | 2008-02-28 | クインテセンス バイオサイエンシーズ インコーポレーティッド | 細胞傷害性薬剤としての非天然のリボヌクレアーゼ複合体 |
| EP1771205B1 (en) | 2004-06-18 | 2016-10-26 | Ambrx, Inc. | Novel antigen-binding polypeptides and their uses |
| WO2006010143A2 (en) | 2004-07-13 | 2006-01-26 | Neose Technologies, Inc. | Branched peg remodeling and glycosylation of glucagon-like peptide-1 [glp-1] |
| JP2008506703A (ja) | 2004-07-14 | 2008-03-06 | ユニバーシティ オブ ユタ リサーチ ファウンデーション | ネトリン関連化合物および用途 |
| JP2008507280A (ja) * | 2004-07-21 | 2008-03-13 | アンブレツクス・インコーポレイテツド | 非天然コードアミノ酸を用いた生合成ポリペプチド |
| WO2006031811A2 (en) | 2004-09-10 | 2006-03-23 | Neose Technologies, Inc. | Glycopegylated interferon alpha |
| WO2006034455A2 (en) | 2004-09-23 | 2006-03-30 | Vasgene Therapeutics, Inc. | Polipeptide compounds for inhibiting angiogenesis and tumor growth |
| US7235530B2 (en) | 2004-09-27 | 2007-06-26 | Dyax Corporation | Kallikrein inhibitors and anti-thrombolytic agents and uses thereof |
| US7612153B2 (en) * | 2004-10-25 | 2009-11-03 | Intezyne Technologies, Inc. | Heterobifunctional poly(ethylene glycol) and uses thereof |
| EP1814573B1 (en) | 2004-10-29 | 2016-03-09 | ratiopharm GmbH | Remodeling and glycopegylation of fibroblast growth factor (fgf) |
| JP5243041B2 (ja) * | 2004-12-21 | 2013-07-24 | ネクター セラピューティックス | 安定化ポリマーチオール試薬 |
| JP2008525032A (ja) | 2004-12-22 | 2008-07-17 | アンブレツクス・インコーポレイテツド | 組換えヒト成長ホルモンを発現及び精製するための方法 |
| JP4990792B2 (ja) * | 2004-12-22 | 2012-08-01 | アンブレツクス・インコーポレイテツド | アミノアシル−ｔＲＮＡシンテターゼの組成物およびこの使用 |
| BRPI0519170A8 (pt) * | 2004-12-22 | 2018-05-08 | Ambrx Inc | formulações de hormônio de crescimento humano que compreendem um aminoácido não naturalmente codificado |
| CA2594557C (en) | 2004-12-22 | 2016-04-26 | Ambrx, Inc. | Modified human growth hormone |
| NZ555308A (en) | 2004-12-22 | 2010-10-29 | Ambrx Inc | Compositions containing, methods involving, and uses of non-natural amino acids and polypeptides |
| CA2593682C (en) | 2005-01-10 | 2016-03-22 | Neose Technologies, Inc. | Glycopegylated granulocyte colony stimulating factor |
| US7402730B1 (en) | 2005-02-03 | 2008-07-22 | Lexicon Pharmaceuticals, Inc. | Knockout animals manifesting hyperlipidemia |
| US7365127B2 (en) * | 2005-02-04 | 2008-04-29 | Enzon Pharmaceuticals, Inc. | Process for the preparation of polymer conjugates |
| AU2006213822B2 (en) * | 2005-02-09 | 2011-05-26 | Covidien Lp | Synthetic sealants |
| EP1868652A2 (en) | 2005-04-05 | 2007-12-26 | Istituto di Richerche di Biologia Molecolare P. Angeletti S.p.A. | Method for shielding functional sites or epitopes on proteins |
| US9187546B2 (en) | 2005-04-08 | 2015-11-17 | Novo Nordisk A/S | Compositions and methods for the preparation of protease resistant human growth hormone glycosylation mutants |
| US8273339B2 (en) * | 2005-04-12 | 2012-09-25 | Nektar Therapeutics | Polymer-based compositions and conjugates of antimicrobial agents |
| AU2006237329B2 (en) | 2005-04-18 | 2012-04-12 | Novo Nordisk A/S | IL-21 variants |
| US7833979B2 (en) * | 2005-04-22 | 2010-11-16 | Amgen Inc. | Toxin peptide therapeutic agents |
| SI1881850T1 (sl) | 2005-05-13 | 2011-01-31 | Lilly Co Eli | Glp-1 pegilirane spojine |
| US20080255026A1 (en) * | 2005-05-25 | 2008-10-16 | Glycopegylated Factor 1X | Glycopegylated Factor Ix |
| WO2006127910A2 (en) | 2005-05-25 | 2006-11-30 | Neose Technologies, Inc. | Glycopegylated erythropoietin formulations |
| WO2007008300A2 (en) * | 2005-05-31 | 2007-01-18 | ECOLE POLYTECHNIQUE FéDéRALE DE LAUSANNE | Triblock copolymers for cytoplasmic delivery of gene-based drugs |
| KR20080026135A (ko) * | 2005-06-03 | 2008-03-24 | 암브룩스, 인코포레이티드 | 개선된 인간 인터페론 분자 및 이의 용도 |
| EA015890B1 (ru) | 2005-06-14 | 2011-12-30 | Тайджен Байотекнолоджи Ко. Лтд. | Производные пиримидина |
| US8193206B2 (en) | 2005-06-14 | 2012-06-05 | Taigen Biotechnology Co., Ltd. | Pyrimidine compounds |
| US8633300B2 (en) | 2005-06-17 | 2014-01-21 | Novo Nordisk Healthcare Ag | Selective reduction and derivatization of engineered proteins comprising at least one non-native cysteine |
| EP1926768B1 (en) | 2005-07-18 | 2011-09-14 | Nektar Therapeutics | Branched functionalized polymers using branched polyol cores |
| US8008453B2 (en) | 2005-08-12 | 2011-08-30 | Amgen Inc. | Modified Fc molecules |
| WO2007021297A1 (en) * | 2005-08-18 | 2007-02-22 | Ambrx, Inc. | COMPOSITIONS OF tRNA AND USES THEREOF |
| US20070105755A1 (en) | 2005-10-26 | 2007-05-10 | Neose Technologies, Inc. | One pot desialylation and glycopegylation of therapeutic peptides |
| US20090048440A1 (en) | 2005-11-03 | 2009-02-19 | Neose Technologies, Inc. | Nucleotide Sugar Purification Using Membranes |
| HRP20110404T1 (hr) * | 2005-11-08 | 2011-08-31 | Ambrx | Ubrzivači za modifikaciju ne-prirodnih aminokiselina i polipeptida ne-prirodnih aminokiselina |
| EP1951890A4 (en) * | 2005-11-16 | 2009-06-24 | Ambrx Inc | PROCESSES AND COMPOSITIONS WITH NON-NATURAL AMINO ACIDS |
| KR101423898B1 (ko) * | 2005-12-14 | 2014-07-28 | 암브룩스, 인코포레이티드 | 비-천연 아미노산 및 폴리펩티드를 함유하는 조성물, 비-천연 아미노산 및 폴리펩티드를 포함하는 방법, 및 비-천연 아미노산 및 폴리펩티드의 용도 |
| WO2007075534A2 (en) | 2005-12-16 | 2007-07-05 | Nektar Therapeutics Al, Corporation | Polymer conjugates of glp-1 |
| US7743730B2 (en) * | 2005-12-21 | 2010-06-29 | Lam Research Corporation | Apparatus for an optimized plasma chamber grounded electrode assembly |
| CA2841386A1 (en) | 2005-12-30 | 2007-07-12 | Zensun (Shanghai) Science & Technology Limited | Extended release of neuregulin for improved cardiac function |
| CA2637569C (en) * | 2006-01-18 | 2013-01-08 | Yuhua Li | Pharmaceutical compositions with enhanced stability |
| EP2319542B1 (en) | 2006-02-21 | 2018-03-21 | Nektar Therapeutics | Segmented degradable polymers and conjugates made therefrom |
| EP2004231A4 (en) | 2006-04-07 | 2013-07-10 | Nektar Therapeutics | CONJUGATES OF ANTI-TNF-ALPHA ANTIBODY |
| EP2007804B1 (en) | 2006-04-20 | 2014-06-18 | Amgen, Inc | Glp-1 compounds |
| US7560588B2 (en) | 2006-04-27 | 2009-07-14 | Intezyne Technologies, Inc. | Poly(ethylene glycol) containing chemically disparate endgroups |
| AU2007253264A1 (en) | 2006-05-24 | 2007-11-29 | Novo Nordisk Health Care Ag | Factor IX analogues having prolonged in vivo half life |
| US8840882B2 (en) * | 2006-06-23 | 2014-09-23 | Quintessence Biosciences, Inc. | Modified ribonucleases |
| US8242179B2 (en) * | 2006-06-23 | 2012-08-14 | Surmodics, Inc. | Hydrogel-based joint repair system and method |
| WO2008010991A2 (en) | 2006-07-17 | 2008-01-24 | Quintessence Biosciences, Inc. | Methods and compositions for the treatment of cancer |
| CN101516388B (zh) | 2006-07-21 | 2012-10-31 | 诺和诺德公司 | 通过o-联糖基化序列的肽的糖基化 |
| KR20090060294A (ko) * | 2006-09-08 | 2009-06-11 | 암브룩스, 인코포레이티드 | 변형된 인간 혈장 폴리펩티드 또는 Ｆｃ 스캐폴드 및 그의 용도 |
| AU2007292892B9 (en) * | 2006-09-08 | 2013-02-28 | Ambrx, Inc. | Hybrid suppressor tRNA for vertebrate cells |
| CN101511856B (zh) * | 2006-09-08 | 2016-01-20 | Ambrx公司 | 脊椎动物细胞中抑制因子trna的转录 |
| US7985783B2 (en) | 2006-09-21 | 2011-07-26 | The Regents Of The University Of California | Aldehyde tags, uses thereof in site-specific protein modification |
| US8969532B2 (en) | 2006-10-03 | 2015-03-03 | Novo Nordisk A/S | Methods for the purification of polypeptide conjugates comprising polyalkylene oxide using hydrophobic interaction chromatography |
| WO2008060780A2 (en) * | 2006-10-04 | 2008-05-22 | Novo Nordisk A/S | Glycerol linked pegylated sugars and glycopeptides |
| PE20081140A1 (es) * | 2006-10-25 | 2008-09-22 | Amgen Inc | Agentes terapeuticos a base de peptidos derivados de toxinas |
| AU2007310777A1 (en) | 2006-10-26 | 2008-05-02 | Novo Nordisk A/S | IL-21 variants |
| AU2007325838B2 (en) | 2006-11-22 | 2013-09-19 | Bristol-Myers Squibb Company | Targeted therapeutics based on engineered proteins for tyrosine kinases receptors, including IGF-IR |
| MX2009005780A (es) | 2006-11-30 | 2009-06-10 | Nektar Therapeutics Al Corp | Metodo para preparar un conjugado de polimeros. |
| ZA200904022B (en) | 2006-12-08 | 2010-08-25 | Lexicon Pharmaceuticals Inc | Monoclonal antibodies against ANGPTL3 |
| US8617531B2 (en) | 2006-12-14 | 2013-12-31 | Bolder Biotechnology, Inc. | Methods of making proteins and peptides containing a single free cysteine |
| EP2117603A2 (en) | 2006-12-19 | 2009-11-18 | Bracco International B.V. | Targeting and therapeutic compounds and gas-filled microvesicles comprising said compounds |
| JP5340956B2 (ja) | 2006-12-20 | 2013-11-13 | アーケマ・インコーポレイテッド | ポリマーの封入および／または結合 |
| WO2008088983A1 (en) | 2007-01-18 | 2008-07-24 | Eli Lilly And Company | PEGYLATED Aβ FAB |
| US8889632B2 (en) | 2007-01-31 | 2014-11-18 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Stabilized p53 peptides and uses thereof |
| EP2111228B1 (en) | 2007-02-02 | 2011-07-20 | Bristol-Myers Squibb Company | 10Fn3 domain for use in treating diseases associated with inappropriate angiogenesis |
| US20090227689A1 (en) * | 2007-03-05 | 2009-09-10 | Bennett Steven L | Low-Swelling Biocompatible Hydrogels |
| US20090227981A1 (en) * | 2007-03-05 | 2009-09-10 | Bennett Steven L | Low-Swelling Biocompatible Hydrogels |
| CA2682147C (en) | 2007-03-30 | 2017-08-08 | Ambrx, Inc. | Modified fgf-21 polypeptides and their uses |
| EP2144923B1 (en) | 2007-04-03 | 2013-02-13 | BioGeneriX AG | Methods of treatment using glycopegylated g-csf |
| WO2008125655A1 (en) * | 2007-04-13 | 2008-10-23 | Kuros Biosurgery Ag | Polymeric tissue sealant |
| CN101675071B (zh) * | 2007-05-02 | 2014-06-18 | Ambrx公司 | 经修饰干扰素β多肽和其用途 |
| MX2009012609A (es) | 2007-05-22 | 2009-12-07 | Amgen Inc | Composiciones y metodos para producir proteinas de fusion bioactivas. |
| WO2008154639A2 (en) | 2007-06-12 | 2008-12-18 | Neose Technologies, Inc. | Improved process for the production of nucleotide sugars |
| US7968811B2 (en) * | 2007-06-29 | 2011-06-28 | Harley-Davidson Motor Company Group, Inc. | Integrated ignition and key switch |
| US9125807B2 (en) * | 2007-07-09 | 2015-09-08 | Incept Llc | Adhesive hydrogels for ophthalmic drug delivery |
| CN101361968B (zh) | 2007-08-06 | 2011-08-03 | 健能隆医药技术（上海）有限公司 | 白介素-22在治疗脂肪肝中的应用 |
| CN101820913A (zh) * | 2007-08-09 | 2010-09-01 | 第一三共株式会社 | 在表达含死亡结构域的受体的细胞中诱导细胞凋亡的免疫脂质体 |
| US8067028B2 (en) * | 2007-08-13 | 2011-11-29 | Confluent Surgical Inc. | Drug delivery device |
| WO2009026334A2 (en) * | 2007-08-21 | 2009-02-26 | Genzyme Corporation | Treatment with kallikrein inhibitors |
| US8207112B2 (en) | 2007-08-29 | 2012-06-26 | Biogenerix Ag | Liquid formulation of G-CSF conjugate |
| US20110014118A1 (en) * | 2007-09-21 | 2011-01-20 | Lawrence Tamarkin | Nanotherapeutic colloidal metal compositions and methods |
| JP2011520769A (ja) * | 2007-09-21 | 2011-07-21 | サイトイミューン サイエンシズ インコーポレイテッド | ナノ治療コロイド金属組成物および方法 |
| CA2702043A1 (en) * | 2007-10-08 | 2009-04-16 | Quintessence Biosciences, Inc. | Compositions and methods for ribonuclease-based therapies |
| MX2010004400A (es) * | 2007-10-23 | 2010-05-20 | Nektar Therapeutics | Polimeros de multiples brazos dirigidos a la hidroxiapatita y conjugados de estos. |
| WO2009062151A1 (en) | 2007-11-08 | 2009-05-14 | Cytimmune Sciences, Inc. | Compositions and methods for generating antibodies |
| US20090123519A1 (en) * | 2007-11-12 | 2009-05-14 | Surmodics, Inc. | Swellable hydrogel matrix and methods |
| CN101903439A (zh) * | 2007-11-12 | 2010-12-01 | 因特拉迪格姆公司 | 杂双官能的聚乙二醇试剂 |
| CA2703830A1 (en) | 2007-11-20 | 2009-05-28 | Ambrx, Inc. | Modified insulin polypeptides and their uses |
| SG188143A1 (en) | 2008-02-08 | 2013-03-28 | Ambrx Inc | Modified leptin polypeptides and their uses |
| US20130189239A1 (en) | 2008-02-27 | 2013-07-25 | Novo Nordisk A/S | Conjugated Factor VIII Molecules |
| TWI395593B (zh) | 2008-03-06 | 2013-05-11 | Halozyme Inc | 可活化的基質降解酵素之活體內暫時性控制 |
| US20090226531A1 (en) * | 2008-03-07 | 2009-09-10 | Allergan, Inc. | Methods and composition for intraocular delivery of therapeutic sirna |
| WO2009128917A2 (en) | 2008-04-14 | 2009-10-22 | Halozyme, Inc. | Modified hyaluronidases and uses in treating hyaluronan-associated diseases and conditions |
| AU2008355098B2 (en) | 2008-04-21 | 2012-11-15 | Gpcr Therapeutics, Inc | Heterocyclic compounds |
| TWI394580B (zh) | 2008-04-28 | 2013-05-01 | Halozyme Inc | 超快起作用胰島素組成物 |
| WO2009139905A2 (en) * | 2008-05-16 | 2009-11-19 | Nektar Therapeutics | Conjugates of a cholinesterase moiety and a polymer |
| AR071874A1 (es) | 2008-05-22 | 2010-07-21 | Bristol Myers Squibb Co | Proteinas de dominio de armazon basadas en fibronectina multivalentes |
| ES2560807T3 (es) * | 2008-07-21 | 2016-02-22 | Polytherics Limited | Nuevos reactivos y procedimiento de conjugación de moléculas biológicas |
| EP2318029B1 (en) | 2008-07-23 | 2017-11-01 | Ambrx, Inc. | Modified bovine g-csf polypeptides and their uses |
| KR101671537B1 (ko) | 2008-08-11 | 2016-11-01 | 넥타르 테라퓨틱스 | 다분지형 중합체 알카노에이트 컨쥬게이트 |
| US20110171164A1 (en) * | 2008-09-19 | 2011-07-14 | Nektar Therapeutics | Polymer conjugates of glp-2-like peptides |
| EP2340046A2 (en) * | 2008-09-19 | 2011-07-06 | Nektar Therapeutics | Polymer conjugates of ziconotide peptides |
| US20110171162A1 (en) * | 2008-09-19 | 2011-07-14 | Nektar Therapeutics | Polymer conjugates of thymosin alpha 1 peptides |
| WO2010033204A2 (en) * | 2008-09-19 | 2010-03-25 | Nektar Therapeutics | Polymer conjugates of c-peptides |
| EP2340047A1 (en) * | 2008-09-19 | 2011-07-06 | Nektar Therapeutics | Polymer conjugates of kiss1 peptides |
| EP2344200A2 (en) * | 2008-09-19 | 2011-07-20 | Nektar Therapeutics | Modified therapeutics peptides, methods of their preparation and use |
| EP2350118B1 (en) * | 2008-09-19 | 2016-03-30 | Nektar Therapeutics | Carbohydrate-based drug delivery polymers and conjugates thereof |
| US20110165113A1 (en) * | 2008-09-19 | 2011-07-07 | Nektar Therapeutics | Polymer conjugates of v681-like peptides |
| US20110171166A1 (en) * | 2008-09-19 | 2011-07-14 | Nektar Therapeutics | Polymer conjugates of osteocalcin peptides |
| AU2009292651A1 (en) * | 2008-09-19 | 2010-03-25 | Nektar Therapeutics | Polymer conjugates of AOD-like peptides |
| US20110206633A1 (en) * | 2008-09-19 | 2011-08-25 | Nektar Therapectics | Polymer conjugates of cd-np peptides |
| WO2010033223A1 (en) * | 2008-09-19 | 2010-03-25 | Nektar Therapeutics | Polymer conjugates of opioid growth factor peptides |
| EP2340045B1 (en) | 2008-09-19 | 2017-04-12 | Nektar Therapeutics | Polymer conjugates of protegrin peptides |
| US8278418B2 (en) | 2008-09-26 | 2012-10-02 | Ambrx, Inc. | Modified animal erythropoietin polypeptides and their uses |
| PE20110480A1 (es) | 2008-09-26 | 2011-07-01 | Ambrx Inc | Microorganismos y vacunas dependientes de replicacion de aminoacidos no naturales |
| BRPI0920743A2 (pt) | 2008-10-01 | 2016-09-20 | Quintessence Biosciences Inc | ribonucleases terapeuticas |
| WO2010056847A2 (en) | 2008-11-13 | 2010-05-20 | Taigen Biotechnology Co., Ltd. | Lyophilization formulation |
| US9271929B2 (en) | 2008-11-25 | 2016-03-01 | École Polytechnique Fédérale De Lausanne (Epfl) | Block copolymers and uses thereof |
| CN102307993B (zh) | 2008-12-09 | 2014-06-25 | 哈洛齐梅公司 | 延长的可溶性ph20多肽及其用途 |
| GB0823309D0 (en) * | 2008-12-19 | 2009-01-28 | Univ Bath | Functionalising reagents and their uses |
| JP2013516389A (ja) * | 2009-01-06 | 2013-05-13 | ダイアックス コーポレーション | カリクレイン阻害剤による粘膜炎治療 |
| US20110318322A1 (en) | 2009-01-12 | 2011-12-29 | Nektar Therapeutics | Conjugates of a Lysosomal Enzyme Moiety and a Water Soluble Polymer |
| JP5890182B2 (ja) | 2009-02-12 | 2016-03-22 | インセプト エルエルシー | ヒドロゲルプラグによる薬物送達 |
| US9005598B2 (en) | 2009-03-04 | 2015-04-14 | Polytherics Limited | Conjugated proteins and peptides |
| US8067201B2 (en) * | 2009-04-17 | 2011-11-29 | Bristol-Myers Squibb Company | Methods for protein refolding |
| DK3266463T3 (da) | 2009-06-09 | 2024-01-08 | Prolong Pharmaceuticals Llc | Hæmoglobinsammensætninger |
| BR112012002709A2 (pt) | 2009-08-05 | 2019-04-30 | Pieris Ag | formulações de liberação controlada de muteínas de lipocalina |
| PT2477603E (pt) | 2009-09-17 | 2016-06-16 | Baxalta Inc | Co-formulação estável de hialuronidase e imunoglobulina e métodos para a sua utilização |
| WO2011050938A1 (de) | 2009-10-26 | 2011-05-05 | Genovoxx Gmbh | Konjugate von nukleotiden und methoden zu deren anwendung |
| BR112012009801A8 (pt) | 2009-10-30 | 2016-08-30 | Cns Therapeutics Inc | Polipeptídeo neurturina e variante de neurturina |
| EA201290541A1 (ru) | 2009-12-21 | 2013-05-30 | Амбркс, Инк. | Модифицированные бычьи соматотропиновые полипептиды и их применение |
| JP2013515081A (ja) | 2009-12-21 | 2013-05-02 | アンブルックス，インコーポレイテッド | 修飾されているブタのソマトトロピンポリペプチドおよびそれらの使用 |
| JO2976B1 (en) | 2009-12-22 | 2016-03-15 | ايلي ليلي اند كومباني | Axentomodulin polypeptide |
| AR079344A1 (es) | 2009-12-22 | 2012-01-18 | Lilly Co Eli | Analogo peptidico de oxintomodulina, composicion farmaceutica que lo comprende y uso para preparar un medicamento util para tratar diabetes no insulinodependiente y/u obesidad |
| ES2905545T3 (es) * | 2010-01-06 | 2022-04-11 | Takeda Pharmaceuticals Co | Proteínas de unión a calicreína plasmática |
| CN102161754B (zh) * | 2010-02-13 | 2012-06-13 | 华中科技大学同济医学院附属协和医院 | 枝化状聚乙二醇衍生物的功能化修饰方法 |
| AU2011222883B2 (en) | 2010-03-05 | 2016-05-26 | Omeros Corporation | Chimeric inhibitor molecules of complement activation |
| CA2797093C (en) | 2010-04-26 | 2019-10-29 | Atyr Pharma, Inc. | Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of cysteinyl-trna synthetase |
| CA2797362C (en) | 2010-04-27 | 2020-12-08 | Atyr Pharma, Inc. | Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of isoleucyl trna synthetases |
| WO2011139853A2 (en) | 2010-04-28 | 2011-11-10 | Atyr Pharma, Inc. | Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of alanyl trna synthetases |
| EP2563383B1 (en) | 2010-04-29 | 2017-03-01 | Atyr Pharma, Inc. | Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of valyl trna synthetases |
| US8986680B2 (en) | 2010-04-29 | 2015-03-24 | Atyr Pharma, Inc. | Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of Asparaginyl tRNA synthetases |
| CA2797977C (en) | 2010-05-03 | 2019-08-20 | Atyr Pharma, Inc. | Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of phenylalanyl-alpha-trna synthetases |
| WO2011139986A2 (en) | 2010-05-03 | 2011-11-10 | Atyr Pharma, Inc. | Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of arginyl-trna synthetases |
| CN103140233B (zh) | 2010-05-03 | 2017-04-05 | Atyr 医药公司 | 与甲硫氨酰‑tRNA合成酶的蛋白片段相关的治疗、诊断和抗体组合物的发现 |
| EP2566499B1 (en) | 2010-05-04 | 2017-01-25 | aTyr Pharma, Inc. | Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of p38 multi-trna synthetase complex |
| EP2569331A1 (en) | 2010-05-10 | 2013-03-20 | Perseid Therapeutics LLC | Polypeptide inhibitors of vla4 |
| CA2799197C (en) | 2010-05-14 | 2019-10-29 | Atyr Pharma, Inc. | Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of phenylalanyl-beta-trna synthetases |
| JP2013533217A (ja) | 2010-05-17 | 2013-08-22 | セビックス・インコーポレイテッド | Ｐｅｇ化ｃ−ペプチド |
| US9034598B2 (en) | 2010-05-17 | 2015-05-19 | Atyr Pharma, Inc. | Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of leucyl-tRNA synthetases |
| EP3091028A1 (en) | 2010-05-26 | 2016-11-09 | Bristol-Myers Squibb Company | Fibronectin based scaffold proteins having improved stability |
| AU2011258106B2 (en) | 2010-05-27 | 2017-02-23 | Pangu Biopharma Limited | Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of glutaminyl-tRNA synthetases |
| CN103118694B (zh) | 2010-06-01 | 2016-08-03 | Atyr医药公司 | 与赖氨酰-tRNA合成酶的蛋白片段相关的治疗、诊断和抗体组合物的发现 |
| JP6116479B2 (ja) | 2010-07-12 | 2017-04-19 | エータイアー ファーマ， インコーポレイテッド | グリシルｔＲＮＡ合成酵素のタンパク質フラグメントに関連した治療用、診断用および抗体組成物の革新的発見 |
| DK2595624T3 (en) | 2010-07-20 | 2018-03-26 | Halozyme Inc | Methods of treating or preventing adverse side effects associated with administration of an anti-hyaluronan agent |
| KR102159909B1 (ko) | 2010-07-30 | 2020-09-25 | 알콘 인코포레이티드 | 수분이 풍부한 표면을 갖는 실리콘 히드로겔 렌즈 |
| US9567386B2 (en) | 2010-08-17 | 2017-02-14 | Ambrx, Inc. | Therapeutic uses of modified relaxin polypeptides |
| PE20140160A1 (es) | 2010-08-17 | 2014-02-08 | Ambrx Inc | Polipeptidos de relaxina modificados y sus usos |
| JP5964304B2 (ja) | 2010-08-25 | 2016-08-03 | エータイアー ファーマ， インコーポレイテッド | チロシルｔＲＮＡ合成酵素のタンパク質フラグメントに関連した治療用、診断用および抗体組成物の革新的発見 |
| US8961501B2 (en) | 2010-09-17 | 2015-02-24 | Incept, Llc | Method for applying flowable hydrogels to a cornea |
| TWI480288B (zh) | 2010-09-23 | 2015-04-11 | Lilly Co Eli | 牛顆粒細胞群落刺激因子及其變體之調配物 |
| RU2441036C1 (ru) * | 2010-09-30 | 2012-01-27 | Общество с ограниченной ответственностью Научно-производственное объединение "Перспектива" (ООО НПО "Перспектива") | Способ получения активированного полиэтиленоксида |
| WO2012054822A1 (en) | 2010-10-22 | 2012-04-26 | Nektar Therapeutics | Pharmacologically active polymer-glp-1 conjugates |
| EP2637680B1 (en) | 2010-11-12 | 2017-03-01 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Cancer therapies |
| ES2866674T3 (es) | 2010-11-12 | 2021-10-19 | Nektar Therapeutics | Conjugados de una fracción de IL-2 y un polímero |
| MX385858B (es) | 2010-11-24 | 2025-03-18 | Lexicon Pharmaceuticals Inc | Anticuerpos que se unen a notum pectinacetilesterasa. |
| US20140371258A1 (en) | 2010-12-17 | 2014-12-18 | Nektar Therapeutics | Water-Soluble Polymer Conjugates of Topotecan |
| WO2012088282A1 (en) | 2010-12-21 | 2012-06-28 | Nektar Therapeutics | Multi-arm polymeric prodrug conjugates of pemetrexed-based compounds |
| US20130331443A1 (en) | 2010-12-22 | 2013-12-12 | Nektar Therapeutics | Multi-arm polymeric prodrug conjugates of taxane-based compounds |
| US10894087B2 (en) | 2010-12-22 | 2021-01-19 | Nektar Therapeutics | Multi-arm polymeric prodrug conjugates of cabazitaxel-based compounds |
| KR102011156B1 (ko) | 2011-01-06 | 2019-08-16 | 다이액스 코포레이션 | 혈장 칼리크레인 결합 단백질 |
| EP2907504B1 (en) | 2011-02-08 | 2017-06-28 | Halozyme, Inc. | Composition and lipid formulation of a hyaluronan-degrading enzyme and the use thereof for treatment of benign prostatic hyperplasia |
| PH12013501865A1 (en) | 2011-03-16 | 2014-01-06 | Amgen Inc | Potent and selective inhibitors of nav1.3 and nav1.7 |
| US20140187488A1 (en) | 2011-05-17 | 2014-07-03 | Bristol-Myers Squibb Company | Methods for maintaining pegylation of polypeptides |
| WO2012166555A1 (en) | 2011-05-27 | 2012-12-06 | Nektar Therapeutics | Water - soluble polymer - linked binding moiety and drug compounds |
| WO2012171335A1 (en) | 2011-06-16 | 2012-12-20 | The Hong Kong University Of Science And Technology | Multi-vinylsulfone containing molecule |
| US20130022592A1 (en) | 2011-06-17 | 2013-01-24 | Daniel Edward Vaughn | Continuous subcutaneous insulin infusion methods with a hyaluronan-degrading enzyme |
| EP2720712B1 (en) | 2011-06-17 | 2016-03-02 | Halozyme, Inc. | Stable formulations of a hyaluronan-degrading enzyme |
| US9993529B2 (en) | 2011-06-17 | 2018-06-12 | Halozyme, Inc. | Stable formulations of a hyaluronan-degrading enzyme |
| AU2012280474A1 (en) | 2011-07-01 | 2014-01-16 | Bayer Intellectual Property Gmbh | Relaxin fusion polypeptides and uses thereof |
| AU2012278944B2 (en) | 2011-07-05 | 2015-09-17 | Bioasis Technologies Inc. | p97-antibody conjugates and methods of use |
| WO2013020079A2 (en) | 2011-08-04 | 2013-02-07 | Nektar Therapeutics | Conjugates of an il-11 moiety and a polymer |
| US20130071394A1 (en) | 2011-09-16 | 2013-03-21 | John K. Troyer | Compositions and combinations of organophosphorus bioscavengers and hyaluronan-degrading enzymes, and methods of use |
| US10226417B2 (en) | 2011-09-16 | 2019-03-12 | Peter Jarrett | Drug delivery systems and applications |
| CA2853358A1 (en) | 2011-10-24 | 2013-05-02 | Halozyme, Inc. | Companion diagnostic for anti-hyaluronan agent therapy and methods of use thereof |
| US9522951B2 (en) | 2011-10-31 | 2016-12-20 | Bristol-Myers Squibb Company | Fibronectin binding domains with reduced immunogenicity |
| US8962553B2 (en) | 2011-11-17 | 2015-02-24 | Cebix Ab | Method of treating a diabetic subject having a microvascular impairment disorder by a pegylated C-peptide |
| US9205150B2 (en) | 2011-12-05 | 2015-12-08 | Incept, Llc | Medical organogel processes and compositions |
| WO2013102211A2 (en) | 2011-12-29 | 2013-07-04 | Walensky Loren D | Stabilized antiviral fusion helices |
| SG11201403714TA (en) | 2011-12-30 | 2014-07-30 | Halozyme Inc | Ph20 polypeptide variants, formulations and uses thereof |
| EP2814514B1 (en) | 2012-02-16 | 2017-09-13 | Atyr Pharma, Inc. | Histidyl-trna synthetases for treating autoimmune and inflammatory diseases |
| EP2831237B1 (en) | 2012-03-30 | 2017-11-29 | The Board of Regents of the University of Oklahoma | High molecular weight heparosan polymers and methods of production and use thereof |
| WO2013151991A1 (en) | 2012-04-02 | 2013-10-10 | Surmodics, Inc. | Hydrophilic polymeric coatings for medical articles with visualization moiety |
| EP2833905B1 (en) | 2012-04-04 | 2018-05-02 | Halozyme, Inc. | Combination therapy with hyaluronidase and a tumor-targeted taxane |
| US9844582B2 (en) | 2012-05-22 | 2017-12-19 | Massachusetts Institute Of Technology | Synergistic tumor treatment with extended-PK IL-2 and therapeutic agents |
| US9175082B2 (en) | 2012-05-31 | 2015-11-03 | Sorrento Therapeutics, Inc. | Antigen binding proteins that bind PD-L1 |
| US9738724B2 (en) | 2012-06-08 | 2017-08-22 | Sutro Biopharma, Inc. | Antibodies comprising site-specific non-natural amino acid residues, methods of their preparation and methods of their use |
| HK1208181A1 (en) | 2012-06-21 | 2016-02-26 | Sorrento Therapeutics, Inc. | Antigen binding proteins that bind c-met |
| CN105051065A (zh) | 2012-06-22 | 2015-11-11 | 索伦托治疗有限公司 | 与ccr2结合的抗原结合蛋白 |
| EP3135690A1 (en) | 2012-06-26 | 2017-03-01 | Sutro Biopharma, Inc. | Modified fc proteins comprising site-specific non-natural amino acid residues, conjugates of the same, methods of their preparation and methods of their use |
| WO2014022515A1 (en) | 2012-07-31 | 2014-02-06 | Bioasis Technologies, Inc. | Dephosphorylated lysosomal storage disease proteins and methods of use thereof |
| US9395468B2 (en) | 2012-08-27 | 2016-07-19 | Ocular Dynamics, Llc | Contact lens with a hydrophilic layer |
| SI2890402T1 (sl) | 2012-08-31 | 2019-07-31 | Sutro Biopharma, Inc. | Modificirane aminokisline vsebujoče acido skupino |
| WO2014062856A1 (en) | 2012-10-16 | 2014-04-24 | Halozyme, Inc. | Hypoxia and hyaluronan and markers thereof for diagnosis and monitoring of diseases and conditions and related methods |
| CN104884056A (zh) | 2012-11-12 | 2015-09-02 | 雷德伍德生物科技股份有限公司 | 用于制备缀合物的化合物和方法 |
| WO2014078733A1 (en) | 2012-11-16 | 2014-05-22 | The Regents Of The University Of California | Pictet-spengler ligation for protein chemical modification |
| US9310374B2 (en) | 2012-11-16 | 2016-04-12 | Redwood Bioscience, Inc. | Hydrazinyl-indole compounds and methods for producing a conjugate |
| US9383357B2 (en) | 2012-12-07 | 2016-07-05 | Northwestern University | Biomarker for replicative senescence |
| EP3907237A1 (en) | 2012-12-20 | 2021-11-10 | Amgen Inc. | Apj receptor agonists and uses thereof |
| US20150361159A1 (en) | 2013-02-01 | 2015-12-17 | Bristol-Myers Squibb Company | Fibronectin based scaffold proteins |
| WO2014165277A2 (en) | 2013-03-12 | 2014-10-09 | Amgen Inc. | POTENT AND SELECTIVE INHIBITORS OF Nav1.7 |
| NZ711373A (en) | 2013-03-13 | 2020-07-31 | Bioasis Technologies Inc | Fragments of p97 and uses thereof |
| CA2906775A1 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-18 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Bh4 stabilized peptides and uses thereof |
| WO2014144148A1 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-18 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Stabilized sos1 peptides |
| WO2014151369A2 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-25 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Stabilized ezh2 peptides |
| CA3175360C (en) | 2013-05-31 | 2024-05-28 | Sorrento Therapeutics, Inc. | Antigen binding proteins that bind pd-1 |
| TW201534726A (zh) | 2013-07-03 | 2015-09-16 | Halozyme Inc | 熱穩定ｐｈ２０玻尿酸酶變異體及其用途 |
| WO2015006555A2 (en) | 2013-07-10 | 2015-01-15 | Sutro Biopharma, Inc. | Antibodies comprising multiple site-specific non-natural amino acid residues, methods of their preparation and methods of their use |
| WO2015013510A1 (en) | 2013-07-25 | 2015-01-29 | Ecole Polytechnique Federale De Lausanne Epfl | High aspect ratio nanofibril materials |
| US20150093399A1 (en) | 2013-08-28 | 2015-04-02 | Bioasis Technologies, Inc. | Cns-targeted conjugates having modified fc regions and methods of use thereof |
| WO2015054658A1 (en) | 2013-10-11 | 2015-04-16 | Sutro Biopharma, Inc. | Modified amino acids comprising tetrazine functional groups, methods of preparation, and methods of their use |
| CN104623637A (zh) | 2013-11-07 | 2015-05-20 | 健能隆医药技术（上海）有限公司 | Il-22二聚体在制备静脉注射药物中的应用 |
| EP3570093B1 (en) | 2013-11-15 | 2021-09-15 | Tangible Science, Inc. | Contact lens with a hydrophilic layer |
| CN115504924A (zh) | 2013-11-27 | 2022-12-23 | 雷德伍德生物科技股份有限公司 | 肼基-吡咯并化合物及用于生成缀合物的方法 |
| WO2015081891A1 (en) | 2013-12-06 | 2015-06-11 | Baikang (Suzhou) Co., Ltd | Bioreversable promoieties for nitrogen-containing and hydroxyl-containing drugs |
| IL247942B (en) | 2014-03-27 | 2022-09-01 | Dyax Corp | Compositions and methods for drops in macular edema as a result of diabetes |
| MA39711A (fr) | 2014-04-03 | 2015-10-08 | Nektar Therapeutics | Conjugués d'une fraction d'il-15 et d'un polymère |
| CN106795506B (zh) | 2014-05-14 | 2020-11-27 | 达特茅斯学院理事会 | 去免疫化溶葡萄球菌酶和使用方法 |
| US10941182B2 (en) | 2014-06-10 | 2021-03-09 | Amgen Inc. | Apelin polypeptides |
| WO2016025647A1 (en) | 2014-08-12 | 2016-02-18 | Massachusetts Institute Of Technology | Synergistic tumor treatment with il-2, a therapeutic antibody, and a cancer vaccine |
| EP3180018B1 (en) | 2014-08-12 | 2019-07-24 | Massachusetts Institute Of Technology | Synergistic tumor treatment with il-2 and integrin-binding-fc-fusion protein |
| SG11201701382PA (en) | 2014-08-22 | 2017-03-30 | Sorrento Therapeutics Inc | Antigen binding proteins that bind cxcr3 |
| EP3186281B1 (en) | 2014-08-28 | 2019-04-10 | Halozyme, Inc. | Combination therapy with a hyaluronan-degrading enzyme and an immune checkpoint inhibitor |
| ES2885854T3 (es) | 2014-10-14 | 2021-12-15 | Polytherics Ltd | Proceso para la conjugación de un péptido o proteína con un reactivo que comprende un grupo saliente que incluye una porción de PEG |
| AU2015332533B2 (en) | 2014-10-14 | 2018-08-30 | Halozyme, Inc. | Compositions of adenosine deaminase-2 (ADA2), variants thereof and methods of using same |
| EP3220956B1 (en) * | 2014-10-24 | 2023-08-09 | Abzena (UK) Limited | Conjugates and conjugating reagents |
| MX2017004947A (es) | 2014-10-24 | 2017-06-29 | Bristol Myers Squibb Co | Polipeptidos del factor de crecimiento de fibroblastos 2 (fgf-21) modificados y usos de los mismos. |
| GB201419108D0 (en) | 2014-10-27 | 2014-12-10 | Glythera Ltd | Materials and methods relating to linkers for use in antibody drug conjugates |
| CN107206119B (zh) | 2014-12-09 | 2021-01-29 | 实体科学公司 | 具有生物相容性层的医疗设备涂层 |
| IL254389B2 (en) | 2015-03-11 | 2023-03-01 | Nektar Therapeutics | Polymer conjugates and the il–7 group |
| EP3270945A4 (en) | 2015-03-18 | 2018-09-05 | Massachusetts Institute of Technology | Selective mcl-1 binding peptides |
| US10464975B2 (en) | 2015-07-02 | 2019-11-05 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Stabilized anti-microbial peptides |
| JP7049989B2 (ja) | 2015-08-28 | 2022-04-07 | デイナ ファーバー キャンサー インスティチュート，インコーポレイテッド | Ｂｆｌ－１と結合するペプチド |
| US20190002506A1 (en) | 2015-08-28 | 2019-01-03 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Stabilized peptides for covalent binding to target protein |
| WO2017062832A1 (en) | 2015-10-08 | 2017-04-13 | Nektar Therapeutics | Combination of an il-2rbeta-selective agonist and a long-acting il-15 agonist |
| WO2017083306A1 (en) | 2015-11-09 | 2017-05-18 | R.P. Scherer Technologies, Llc | Anti-cd22 antibody-maytansine conjugates and methods of use thereof |
| US11286307B2 (en) | 2015-12-11 | 2022-03-29 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Plasma kallikrein inhibitors and uses thereof for treating hereditary angioedema attack |
| ES2986360T3 (es) | 2016-01-29 | 2024-11-11 | Yuhan Corp | Proteínas de unión a antígeno que se unen a PD-L1 |
| CN109069578A (zh) | 2016-02-29 | 2018-12-21 | 达纳-法伯癌症研究所股份有限公司 | 用于治疗感染的钉合的细胞内靶向抗微生物肽 |
| US10421785B2 (en) | 2016-04-11 | 2019-09-24 | Bar-Ilan University | Delta receptor agonist peptides and use thereof |
| WO2017180998A2 (en) | 2016-04-15 | 2017-10-19 | Beckman Coulter, Inc. | Photoactive macromolecules and uses thereof |
| WO2017181143A1 (en) | 2016-04-15 | 2017-10-19 | Generon (Shanghai) Corporation, Ltd. | Use of il-22 in treating necrotizing enterocolitis |
| US11198715B2 (en) | 2016-07-22 | 2021-12-14 | Massachusetts Institute Of Technology | Selective Bfl-1 peptides |
| JP6949102B2 (ja) | 2016-08-09 | 2021-10-13 | イーライ リリー アンド カンパニー | 併用療法 |
| ES2935622T3 (es) | 2016-08-26 | 2023-03-08 | Dana Farber Cancer Inst Inc | Polipéptidos y miméticos de bcl-w para el tratamiento o la prevención de la neuropatía periférica y la pérdida auditiva inducidas por la quimioterapia |
| US12344643B2 (en) | 2016-12-07 | 2025-07-01 | The University Of Chicago | Compositions and methods for inhibition of FOXP3 |
| CN109923179A (zh) | 2016-12-12 | 2019-06-21 | 贝克顿·迪金森公司 | 水溶性聚合物染料 |
| SG10201912034UA (en) | 2017-02-08 | 2020-02-27 | Bristol Myers Squibb Co | Modified relaxin polypeptides comprising a pharmacokinetic enhancer and uses thereof |
| WO2018170299A1 (en) | 2017-03-15 | 2018-09-20 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Inhibitors of prokaryotic gene transcription and uses thereof |
| WO2018172503A2 (en) | 2017-03-24 | 2018-09-27 | Basf Se | Liquid laundry detergent comprising modified saccharide or polysaccharide |
| KR20250057110A (ko) | 2017-05-15 | 2025-04-28 | 넥타르 테라퓨틱스 | 지속 작용성 인터류킨-15 수용체 효현제 및 관련 면역요법 조성물 및 방법 |
| PE20200697A1 (es) | 2017-06-22 | 2020-06-16 | Catalyst Biosciences Inc | Polipeptidos de serina proteasa 1 de tipo membrana modificada (mtsp-1) y metodos de uso |
| AU2018304230A1 (en) | 2017-07-19 | 2020-02-06 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Stabilized anti-microbial peptides for the treatment of antibiotic-resistant bacterial infections |
| WO2019036605A2 (en) | 2017-08-17 | 2019-02-21 | Massachusetts Institute Of Technology | MULTIPLE SPECIFICITY BINDING AGENTS OF CXC CHEMOKINES AND USES THEREOF |
| US11897917B2 (en) | 2017-09-27 | 2024-02-13 | The University Of York | Bioconjugation of polypeptides |
| KR102777151B1 (ko) | 2017-11-21 | 2025-03-05 | 더 보드 어브 트러스티스 어브 더 리랜드 스탠포드 주니어 유니버시티 | 인터루킨-2의 부분 효능제 |
| CN120118207A (zh) | 2017-12-15 | 2025-06-10 | 丹娜-法伯癌症研究院有限公司 | 稳定肽-介导的靶向蛋白降解 |
| WO2019118719A1 (en) | 2017-12-15 | 2019-06-20 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Selective targeting of apoptosis proteins by structurally-stabilized and/or cysteine-reactive noxa peptides |
| WO2019133399A1 (en) | 2017-12-26 | 2019-07-04 | Becton, Dickinson And Company | Deep ultraviolet-excitable water-solvated polymeric dyes |
| EP3749678A1 (en) | 2018-02-07 | 2020-12-16 | Dana Farber Cancer Institute, Inc. | Cell-permeable stapled peptide modules for cellular delivery |
| EP3765852A1 (en) | 2018-03-14 | 2021-01-20 | Dana Farber Cancer Institute, Inc. | Stabilized peptides for biomarker detection |
| CN112384573A (zh) | 2018-03-30 | 2021-02-19 | 贝克顿·迪金森公司 | 含侧基发色团的水溶性聚合染料 |
| WO2019222435A1 (en) | 2018-05-16 | 2019-11-21 | Halozyme, Inc. | Methods of selecting subjects for combination cancer therapy with a polymer-conjugated soluble ph20 |
| KR102167755B1 (ko) | 2018-05-23 | 2020-10-19 | 주식회사 큐어바이오 | 단편화된 grs 폴리펩타이드, 이의 변이체 및 이들의 용도 |
| EP3813867A1 (en) | 2018-07-22 | 2021-05-05 | Bioasis Technologies Inc. | Treatment of lymmphatic metastases |
| EP3844188A1 (en) | 2018-08-28 | 2021-07-07 | Ambrx, Inc. | Anti-cd3 antibody folate bioconjugates and their uses |
| KR20210057124A (ko) | 2018-09-11 | 2021-05-20 | 암브룩스, 인코포레이티드 | 인터류킨-2 폴리펩타이드 접합체 및 그의 용도 |
| WO2020060975A1 (en) | 2018-09-17 | 2020-03-26 | Massachusetts Institute Of Technology | Peptides selective for bcl-2 family proteins |
| JP2022512746A (ja) | 2018-10-19 | 2022-02-07 | アンブルックス，インコーポレイテッド | インターロイキン－１０ポリペプチド複合体、その二量体、およびそれらの使用 |
| US12441776B2 (en) | 2018-11-30 | 2025-10-14 | Eirgen Pharma Ltd. | Oxyntomodulin peptide analog formulations |
| US20220075098A1 (en) * | 2018-12-19 | 2022-03-10 | Tangible Science, Inc. | Systems and methods of treating a hydrogel-coated medical device |
| JP7604376B2 (ja) | 2018-12-28 | 2024-12-23 | バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド | 改変ウロキナーゼ型プラスミノゲンアクティベータポリペプチドおよび使用方法 |
| WO2020154032A1 (en) | 2019-01-23 | 2020-07-30 | Massachusetts Institute Of Technology | Combination immunotherapy dosing regimen for immune checkpoint blockade |
| CN119455003A (zh) | 2019-02-12 | 2025-02-18 | Ambrx公司 | 包含抗体-tlr激动剂缀合物的组合物、方法和用途 |
| JP7727551B2 (ja) | 2019-04-18 | 2025-08-21 | デイナ ファーバー キャンサー インスティチュート，インコーポレイテッド | 構造的に安定化されたペプチドによるユビキチンおよびユビキチン様ｅ１活性化酵素の選択的標的化 |
| EP3958983A1 (en) | 2019-04-26 | 2022-03-02 | The Procter & Gamble Company | Reduction of tooth staining derived from cationic antimicrobials |
| WO2021126827A1 (en) | 2019-12-16 | 2021-06-24 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Structurally-stabilized oncolytic peptides and uses thereof |
| WO2021127493A1 (en) | 2019-12-20 | 2021-06-24 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Structurally-stabilized glucagon-like peptide 1 peptides and uses thereof |
| AU2021209045A1 (en) | 2020-01-13 | 2022-07-28 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Plasma kallikrein inhibitors and uses thereof for treating pediatric hereditary angioedema attack |
| CN115362168A (zh) | 2020-01-14 | 2022-11-18 | 辛德凯因股份有限公司 | 偏向化il2突变蛋白方法和组合物 |
| EP4106794A4 (en) | 2020-02-19 | 2024-03-20 | Evive Biotechnology (Shanghai) Ltd | METHOD FOR TREATING TRANSPLANT AND HOST DISEASE |
| WO2021173889A1 (en) | 2020-02-26 | 2021-09-02 | Ambrx, Inc. | Uses of anti-cd3 antibody folate bioconjugates |
| JP7894318B2 (ja) | 2020-03-04 | 2026-07-23 | デイナ ファーバー キャンサー インスティチュート，インコーポレイテッド | 抗ウイルスの構造的に安定化されたＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ペプチドおよびその使用 |
| EP4117732A1 (en) | 2020-03-11 | 2023-01-18 | Ambrx, Inc. | Interleukin-2 polypeptide conjugates and methods of use thereof |
| WO2021216845A1 (en) | 2020-04-22 | 2021-10-28 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Antiviral structurally-stabilized ace2 helix 1 peptides and uses thereof |
| AU2021262752A1 (en) | 2020-04-27 | 2022-10-13 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Structurally-stabilized and HDMX-selective p53 peptides and uses thereof |
| US20210355468A1 (en) | 2020-05-18 | 2021-11-18 | Bioasis Technologies, Inc. | Compositions and methods for treating lewy body dementia |
| US20210393787A1 (en) | 2020-06-17 | 2021-12-23 | Bioasis Technologies, Inc. | Compositions and methods for treating frontotemporal dementia |
| WO2022040596A1 (en) | 2020-08-20 | 2022-02-24 | Ambrx, Inc. | Antibody-tlr agonist conjugates, methods and uses thereof |
| WO2022081827A1 (en) | 2020-10-14 | 2022-04-21 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Chimeric conjugates for degradation of viral and host proteins and methods of use |
| WO2022098848A1 (en) | 2020-11-05 | 2022-05-12 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Antiviral structurally-stabilized ebolavirus peptides and uses thereof |
| US12552834B2 (en) | 2021-01-25 | 2026-02-17 | Massachusetts Institute Of Technology | Selective MENA binding peptides |
| WO2022212899A1 (en) | 2021-04-03 | 2022-10-06 | Ambrx, Inc. | Anti-her2 antibody-drug conjugates and uses thereof |
| MX2024002824A (es) | 2021-09-08 | 2024-06-28 | Dana Farber Cancer Inst Inc | Conjugados antivirales de peptido de coronavirus 2 del sindrome respiratorio agudo severo (sars-cov-2)-colesterol estructuralmente engrapados y usos de los mismos. |
| EP4155349A1 (en) | 2021-09-24 | 2023-03-29 | Becton, Dickinson and Company | Water-soluble yellow green absorbing dyes |
| EP4518900A1 (en) | 2022-05-04 | 2025-03-12 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Ebolavirus surface glycoprotein peptides, conjugates, and uses thereof |
| US20250383357A1 (en) | 2022-07-01 | 2025-12-18 | Beckman Coulter, Inc. | Novel fluorescent dyes and polymers from dihydrophenanthrene derivatives |
| WO2024044327A1 (en) | 2022-08-26 | 2024-02-29 | Beckman Coulter, Inc. | Dhnt monomers and polymer dyes with modified photophysical properties |
| WO2024196805A1 (en) | 2023-03-17 | 2024-09-26 | Beckman Coulter, Inc. | Benzothienopyrrole cyanine dyes |
| WO2024241086A1 (en) | 2023-05-24 | 2024-11-28 | Ambrx, Inc. | Pegylated bovine interferon lambda and methods of use thereof |
| CN121866309A (zh) | 2023-09-21 | 2026-04-14 | 贝克曼库尔特有限公司 | 用于流式细胞术的二氢菲（dhp）桥接染料 |
| WO2025227129A2 (en) | 2024-04-25 | 2025-10-30 | Starrock Pharma Llc | Delivery vehicles comprising proglucagon derived polypeptides and anabolic polypeptides and uses thereof |
| US20250341516A1 (en) | 2024-05-01 | 2025-11-06 | BioLegend, Inc. | Compositions for use with multiple fluorophores and methods of using |
| WO2026043823A2 (en) | 2024-08-19 | 2026-02-26 | Sutro Biopharma, Inc. | Antibodies comprising site-specific non-natural amino acid residues, methods of preparation and uses thereof |
Family Cites Families (58)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3784524A (en) * | 1971-06-25 | 1974-01-08 | Grace W R & Co | Urethane/thioether-containing polyene composition and the reaction product thereof |
| US4179337A (en) * | 1973-07-20 | 1979-12-18 | Davis Frank F | Non-immunogenic polypeptides |
| US4134887A (en) * | 1973-10-17 | 1979-01-16 | Hoechst Aktiengesellschaft | Phenyl-azo-phenyl dyestuffs |
| CH586739A5 (pl) * | 1973-10-17 | 1977-04-15 | Hoechst Ag | |
| US4179387A (en) * | 1974-03-12 | 1979-12-18 | Fuji Photo Film Co., Ltd. | Process for producing magnetic FE oxide |
| IL47468A (en) * | 1975-06-12 | 1979-05-31 | Rehovot Res Prod | Process for the cross-linking of proteins using water soluble cross-linking agents |
| US4002531A (en) * | 1976-01-22 | 1977-01-11 | Pierce Chemical Company | Modifying enzymes with polyethylene glycol and product produced thereby |
| DE2607766C3 (de) * | 1976-02-26 | 1978-12-07 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Verfahren zur Herstellung von trägergebundenen biologisch aktiven Substanzen |
| US4228019A (en) * | 1978-06-19 | 1980-10-14 | Texaco Development Corp. | Secondary recovery process |
| US4473693A (en) * | 1978-08-04 | 1984-09-25 | Stewart Walter W | Aminonaphthalimide dyes for intracellular labelling |
| DE2850058A1 (de) * | 1978-11-18 | 1980-05-29 | Bayer Ag | Polyaether-derivate, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung als arzneimittel |
| US4356166A (en) * | 1978-12-08 | 1982-10-26 | University Of Utah | Time-release chemical delivery system |
| US4430260A (en) * | 1979-02-27 | 1984-02-07 | Lee Weng Y | Penicillin-polyvinyl alcohol conjugate and process of preparation |
| US4296097A (en) * | 1979-02-27 | 1981-10-20 | Lee Weng Y | Suppression of reaginic antibodies to drugs employing polyvinyl alcohol as carrier therefor |
| US4280979A (en) * | 1979-09-18 | 1981-07-28 | Union Carbide Corporation | Copolymers, compositions, and articles, and methods for making same |
| US4241199A (en) * | 1979-09-18 | 1980-12-23 | Union Carbide Corporation | Novel polyester diols |
| JPS585320A (ja) * | 1981-07-01 | 1983-01-12 | Toray Ind Inc | グラフト共重合体 |
| US4973493A (en) * | 1982-09-29 | 1990-11-27 | Bio-Metric Systems, Inc. | Method of improving the biocompatibility of solid surfaces |
| JPS59204144A (ja) * | 1983-04-12 | 1984-11-19 | Daikin Ind Ltd | 新規含フッ素化合物およびその製法 |
| SE470099B (sv) * | 1984-05-17 | 1993-11-08 | Jerker Porath | Sulfonaktiverade tioeteradsorbenter för separation av t ex protein |
| SE454885B (sv) * | 1984-10-19 | 1988-06-06 | Exploaterings Ab Tbf | Polymerbelagda partiklar med immobiliserade metalljoner pa sin yta jemte forfarande for framstellning derav |
| US4616644A (en) * | 1985-06-14 | 1986-10-14 | Johnson & Johnson Products, Inc. | Hemostatic adhesive bandage |
| EP0206448B1 (en) * | 1985-06-19 | 1990-11-14 | Ajinomoto Co., Inc. | Hemoglobin combined with a poly(alkylene oxide) |
| US4766106A (en) * | 1985-06-26 | 1988-08-23 | Cetus Corporation | Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation |
| EP0229108B1 (en) * | 1985-06-26 | 1990-12-27 | Cetus Corporation | Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation |
| US4917888A (en) * | 1985-06-26 | 1990-04-17 | Cetus Corporation | Solubilization of immunotoxins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation |
| US4883864A (en) * | 1985-09-06 | 1989-11-28 | Minnesota Mining And Manufacturing Company | Modified collagen compound and method of preparation |
| US4983494A (en) * | 1985-10-16 | 1991-01-08 | Fuji Photo Film Co., Ltd. | Image forming process including heating step |
| CA1283046C (en) * | 1986-05-29 | 1991-04-16 | Nandini Katre | Tumor necrosis factor formulation |
| US4791192A (en) * | 1986-06-26 | 1988-12-13 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Chemically modified protein with polyethyleneglycol |
| US4871785A (en) * | 1986-08-13 | 1989-10-03 | Michael Froix | Clouding-resistant contact lens compositions |
| DE3628717A1 (de) * | 1986-08-23 | 1988-02-25 | Agfa Gevaert Ag | Haertungsmittel fuer proteine, eine damit gehaertete bindemittelschicht und eine solche schicht enthaltendes fotografisches aufzeichnungsmaterial |
| US4931544A (en) * | 1986-09-04 | 1990-06-05 | Cetus Corporation | Succinylated interleukin-2 for pharmaceutical compositions |
| DE3634525A1 (de) * | 1986-10-10 | 1988-04-21 | Miles Lab | Testmittel und indikatoren zum nachweis von thiolgruppen und verfahren zu deren herstellung |
| US5080891A (en) * | 1987-08-03 | 1992-01-14 | Ddi Pharmaceuticals, Inc. | Conjugates of superoxide dismutase coupled to high molecular weight polyalkylene glycols |
| US5153265A (en) * | 1988-01-20 | 1992-10-06 | Cetus Corporation | Conjugation of polymer to colony stimulating factor-1 |
| NL8800577A (nl) * | 1988-03-08 | 1989-10-02 | Stichting Tech Wetenschapp | Werkwijze voor het aanbrengen van een bloedcompatibele bekleding op polyetherurethaanvormstukken. |
| GB8824593D0 (en) * | 1988-10-20 | 1988-11-23 | Royal Free Hosp School Med | Liposomes |
| GB8824592D0 (en) * | 1988-10-20 | 1988-11-23 | Royal Free Hosp School Med | Purification process |
| GB8824591D0 (en) * | 1988-10-20 | 1988-11-23 | Royal Free Hosp School Med | Fractionation process |
| US5162430A (en) * | 1988-11-21 | 1992-11-10 | Collagen Corporation | Collagen-polymer conjugates |
| US4902502A (en) * | 1989-01-23 | 1990-02-20 | Cetus Corporation | Preparation of a polymer/interleukin-2 conjugate |
| US5089261A (en) * | 1989-01-23 | 1992-02-18 | Cetus Corporation | Preparation of a polymer/interleukin-2 conjugate |
| US5122614A (en) * | 1989-04-19 | 1992-06-16 | Enzon, Inc. | Active carbonates of polyalkylene oxides for modification of polypeptides |
| AU5858690A (en) * | 1989-06-14 | 1991-01-08 | Cetus Corporation | Polymer/antibiotic conjugate |
| US5234903A (en) * | 1989-11-22 | 1993-08-10 | Enzon, Inc. | Chemically modified hemoglobin as an effective, stable non-immunogenic red blood cell substitute |
| US5171264A (en) * | 1990-02-28 | 1992-12-15 | Massachusetts Institute Of Technology | Immobilized polyethylene oxide star molecules for bioapplications |
| DE69130333T2 (de) * | 1990-08-31 | 1999-03-04 | Regents Of The University Of Minnesota, Minneapolis, Minn. | Harze für die Feststoff-Peptidsynthese |
| US5380536A (en) * | 1990-10-15 | 1995-01-10 | The Board Of Regents, The University Of Texas System | Biocompatible microcapsules |
| SE467308B (sv) * | 1990-10-22 | 1992-06-29 | Berol Nobel Ab | Fast yta belagd med ett hydrofilt ytterskikt med kovalent bundna biopolymerer, saett att framstaella en saadan yta och ett konjugat daerfoer |
| GEP20002142B (en) * | 1991-01-18 | 2000-06-25 | Amgen Inc | Method for Treatment and Prevention of TNF Mediated Diseases |
| AU1674292A (en) * | 1991-03-15 | 1992-10-21 | Synergen, Inc. | Pegylation of polypeptides |
| AU1676992A (en) * | 1991-03-18 | 1992-10-21 | Enzon, Inc. | Hydrazine containing conjugates of polypeptides and glycopolypeptides with polymers |
| DK52791D0 (da) * | 1991-03-22 | 1991-03-22 | Kem En Tec As | Adsorptionsmatricer |
| DK130991D0 (da) * | 1991-07-04 | 1991-07-04 | Immunodex K S | Polymere konjugater |
| WO1993001498A1 (en) * | 1991-07-04 | 1993-01-21 | Immunodex K/S | Water-soluble, polymer-based reagents and conjugates comprising moieties derived from divinyl sulfone |
| US5414135A (en) | 1991-12-30 | 1995-05-09 | Sterling Winthrop Inc. | Vinyl sulfone coupling of polyoxyalkylenes to proteins |
| EP0622394A1 (en) * | 1993-04-30 | 1994-11-02 | S.A. Laboratoires S.M.B. | Reversible modification of sulfur-containing molecules with polyalkylene glycol derivatives and their use |
-
1993
- 1993-11-12 US US08/151,481 patent/US5446090A/en not_active Expired - Lifetime
-
1994
- 1994-11-14 PL PL94314298A patent/PL180149B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1994-11-14 ES ES95901226T patent/ES2173943T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1994-11-14 UA UA96062250A patent/UA58481C2/uk unknown
- 1994-11-14 AU AU10548/95A patent/AU687937B2/en not_active Ceased
- 1994-11-14 RO RO96-00959A patent/RO118434B1/ro unknown
- 1994-11-14 CN CN94194460A patent/CN1085689C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1994-11-14 RO ROA200000307A patent/RO121855B1/ro unknown
- 1994-11-14 KR KR1019960702507A patent/KR100225746B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 1994-11-14 DK DK95901226T patent/DK0728155T3/da active
- 1994-11-14 WO PCT/US1994/013013 patent/WO1995013312A1/en not_active Ceased
- 1994-11-14 DE DE69430317T patent/DE69430317T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1994-11-14 EE EE9600128A patent/EE03448B1/xx not_active IP Right Cessation
- 1994-11-14 BR BR9408048A patent/BR9408048A/pt not_active Application Discontinuation
- 1994-11-14 JP JP07514031A patent/JP3114998B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1994-11-14 SK SK608-96A patent/SK284527B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1994-11-14 EP EP95901226A patent/EP0728155B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-11-14 NZ NZ276313A patent/NZ276313A/en not_active IP Right Cessation
- 1994-11-14 HU HU9601253A patent/HU225649B1/hu not_active IP Right Cessation
- 1994-11-14 CA CA002176203A patent/CA2176203C/en not_active Expired - Fee Related
- 1994-11-14 AT AT95901226T patent/ATE215577T1/de not_active IP Right Cessation
- 1994-11-14 EP EP01122161A patent/EP1176160A3/en not_active Withdrawn
- 1994-11-14 CZ CZ19961375A patent/CZ295640B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1994-11-14 RU RU96113123/04A patent/RU2176253C2/ru active
-
1995
- 1995-06-07 US US08/473,734 patent/US5739208A/en not_active Expired - Lifetime
-
1996
- 1996-05-06 BG BG100568A patent/BG63399B1/bg unknown
- 1996-05-10 NO NO19961918A patent/NO315377B1/no not_active IP Right Cessation
- 1996-05-10 FI FI962004A patent/FI117441B/fi not_active IP Right Cessation
-
1998
- 1998-02-23 US US09/027,679 patent/US5900461A/en not_active Expired - Lifetime
-
1999
- 1999-04-19 US US09/294,188 patent/US6610281B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2002
- 2002-05-30 HK HK02104035.7A patent/HK1042312A1/en unknown
-
2003
- 2003-08-25 US US10/647,621 patent/US6894025B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2005
- 2005-04-22 US US11/112,118 patent/US7214366B2/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0728155B1 (en) | Water soluble active sulfones of poly(ethylene glycol) | |
| US5629384A (en) | Polymers of N-acryloylmorpholine activated at one end and conjugates with bioactive materials and surfaces | |
| US5414135A (en) | Vinyl sulfone coupling of polyoxyalkylenes to proteins | |
| US8003742B2 (en) | Polymer derivatives with proximal reactive groups | |
| JP5681605B2 (ja) | アジドまたはアセチレン末端水溶性ポリマー | |
| WO1997003106A1 (en) | Poly(ethylene glycol) and related polymers monosubstituted with propionic or butanoic acids and functional derivatives thereof for biotechnical applications | |
| WO1999001469A1 (en) | A method for attaching polyethylene glycol to macromolecules |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Decisions on the lapse of the protection rights |
Effective date: 20101114 |