RU2176253C2 - Водорастворимый гидролитически стабильный активированный полимер, способ получения активированного полиэтиленгликоля (варианты), биологически активный конъюгат - Google Patents

Водорастворимый гидролитически стабильный активированный полимер, способ получения активированного полиэтиленгликоля (варианты), биологически активный конъюгат Download PDF

Info

Publication number
RU2176253C2
RU2176253C2 RU96113123/04A RU96113123A RU2176253C2 RU 2176253 C2 RU2176253 C2 RU 2176253C2 RU 96113123/04 A RU96113123/04 A RU 96113123/04A RU 96113123 A RU96113123 A RU 96113123A RU 2176253 C2 RU2176253 C2 RU 2176253C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
residue
active
peg
biologically active
sulfone
Prior art date
Application number
RU96113123/04A
Other languages
English (en)
Other versions
RU96113123A (ru
Inventor
Милтон Дж. ХАРРИС
Original Assignee
Шеарвотер Полимерс, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Шеарвотер Полимерс, Инк. filed Critical Шеарвотер Полимерс, Инк.
Publication of RU96113123A publication Critical patent/RU96113123A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2176253C2 publication Critical patent/RU2176253C2/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
    • C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
    • C08G65/32—Polymers modified by chemical after-treatment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
    • C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
    • C08G65/32—Polymers modified by chemical after-treatment
    • C08G65/329—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds
    • C08G65/334—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds containing sulfur
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
    • C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
    • C08G65/32—Polymers modified by chemical after-treatment
    • C08G65/321—Polymers modified by chemical after-treatment with inorganic compounds
    • C08G65/326—Polymers modified by chemical after-treatment with inorganic compounds containing sulfur
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
    • C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
    • C08G65/32—Polymers modified by chemical after-treatment
    • C08G65/329—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/81—Carrier - bound or immobilized peptides or proteins and the preparation thereof, e.g. biological cell or cell fragment as carrier
    • Y10S530/812—Peptides or proteins is immobilized on, or in, an organic carrier
    • Y10S530/815—Carrier is a synthetic polymer
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/81—Carrier - bound or immobilized peptides or proteins and the preparation thereof, e.g. biological cell or cell fragment as carrier
    • Y10S530/812—Peptides or proteins is immobilized on, or in, an organic carrier
    • Y10S530/815—Carrier is a synthetic polymer
    • Y10S530/816—Attached to the carrier via a bridging agent

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Polyethers (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Other Resins Obtained By Reactions Not Involving Carbon-To-Carbon Unsaturated Bonds (AREA)
  • Addition Polymer Or Copolymer, Post-Treatments, Or Chemical Modifications (AREA)
  • Polyesters Or Polycarbonates (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Treatments Of Macromolecular Shaped Articles (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Polymers With Sulfur, Phosphorus Or Metals In The Main Chain (AREA)

Abstract

Изобретение относится к активным производным полиэтиленгликоля и родственным гидрофильным полимерам и к способам их синтеза для использования при модификации характеристик поверхностей и молекул. Водорастворимый гидролитически стабильный активированный полимер содержит по крайней мере один активный сульфоновый остаток, присоединенный к полимеру, выбранному из полиалкиленоксидов, полиоксиэтилированных полиолов и полиолефиновых спиртов, причем сульфоновый остаток является: а) активным этилсульфоновым остатком, б) SO2-СН2-СН2-X, где Х - галоген, в) винилсульфоновой группой, происходящей из активного этилсульфонового остатка, г) СО-NH-СН2-СН2-SO2-СН=СН2, д) NH-СО-СН2-СН2-SO2-СН=СН2. Изобретение позволяет получить активированные полимеры со специфической реакционной способностью, стабильностью в воде, в восстановительных условиях, и которые образуют более стабильные соединения с поверхностями и молекулами, включая биологически активные молекулы. 4 с. и 18 з.п. ф-лы.

Description

Настоящее изобретение относится к активным производным полиэтиленгликоля и родственным гидрофильным полимерам и к способам их синтеза для использования при модификации характеристик поверхностей и молекул.
Предпосылки создания изобретения
Проводились исследования по использованию полиэтиленгликоля ("ПЭГ") в фармацевтических препаратах, искусственных имплантатах и других областях применения, где важное значение имеет биологическая совместимость. Чтобы обеспечить возможность присоединения ПЭГ к фармацевтическим веществам и имплантатам, а также к молекулам и поверхностям обычно для модификации физических или химических характеристик молекулы или поверхности, были предложены различные производные полиэтиленгликоля ("ПЭГ-производные"), содержащие активный остаток.
Так, например, для присоединения ПЭГ к поверхностям с целью регулирования смачивания, накопления статического электричества и присоединения к поверхности молекул других типов, включая белки и остатки белков, предложены ПЭГ-производные. В частности, были предложены ПЭГ-производные для присоединения к поверхностям пластмассовых контактных линз с целью уменьшить накопление белков и улучшить зрительное восприятие за счет уменьшения помутнения таких линз. Были предложены ПЭГ-производные для присоединения к искусственным кровеносным сосудам с целью уменьшить накопление белков и опасность закупорки. Предложены ПЭГ-производные для иммобилизации белков на поверхности, как при ферментном катализе химических реакций.
Кроме того, например, были предложены ПЭГ-производные для присоединения к молекулам, включая молекулы белков, с целью защиты молекулы от химического воздействия, для ограничения нежелательных побочных эффектов молекулы или для увеличения размеров молекулы, потенциально содействуя тем самым созданию полезных веществ, которые с медицинской точки зрения приносят определенную пользу, но в остальном бесполезны или даже вредны для живого организма. Небольшие молекулы, которые обычно выделялись бы через почки, удерживают в токе крови, если их размеры увеличивают присоединением биологически совместимого ПЭГ-производного. Белки и другие вещества, которые при их инъекции вызывают иммунную реакцию, можно в определенной мере скрыть от иммунной системы присоединением к белку ПЭГ-молекулы.
Были предложены также ПЭГ-производные для выделения по сродству, например, ферментов, из клеточной массы. При разделении по сродству ПЭГ-производное вводит функциональную группу для обратимого присоединения к ферменту, который содержится в клеточной массе. ПЭГ и продукт присоединения фермента выделяют из клеточной массы, а затем при необходимости фермент отделяют от ПЭГ-производного.
Сочетание ПЭГ-производных с белками отражает некоторые проблемы, с которыми приходится сталкиваться при присоединении ПЭГ к поверхностям и молекулам. У многих поверхностей и молекул число участков, доступных для реакций сочетания с ПЭГ-производным, до некоторой степени ограничено. Так, белки, как правило, располагают ограниченным числом реакционноспособных участков определенного типа, которые доступны для сочетания. Еще более проблематичным является то, что некоторые реакционноспособные участки могут быть ответственными за биологическую активность белка, как это бывает, когда фермент катализирует некоторые химические реакции. ПЭГ-производное, которое присоединено к достаточному числу таких участков, может оказывать неблагоприятное воздействие на активность белка.
Реакционноспособные участки, которые образуют места присоединения ПЭГ-производных к белкам, определяются структурой белка. Белки, включая энзимы, построены из различных последовательностей альфа- аминокислот, которые характеризуются общей структурой H2N-CHR-COOH. Альфа-аминовый остаток (H2N-) одной аминокислоты соединен с карбоксильным остатком (-COOH) смежной аминокислоты, образуя амидные мостики, которые могут быть представлены как -(NH-CHR-CO)n-, где n может составлять сотни или тысячи. Фрагмент, обозначенный R, может содержать реакционноспособные участки, обусловливающие биологическую активность белка и место присоединения ПЭГ-производных.
Так, например, в лизине, который является аминокислотой, образующей часть главной цепи большинства белков, остаток -NH2 находится в эпсилон-положении, а также в альфа-положении. Эпсилон-остаток -NH2 в условиях щелочных значений pH свободен для реакций. Много усилий в данной области техники было направлено на создание ПЭГ-производных для присоединения к эпсилон-остатку -NH2 лизиновой фракции белка. Общим у всех этих ПЭГ-производных является то, что такая лизиновая аминокислотная фракция белка обычно оказывается инертной, что может являться недостатком там, где важное значение для активности белка имеет лизин.
В патенте США 5122614 на имя Zalipsky указано, что ПЭГ-молекулы, активированные оксикарбонил-N-дикарбоксимидной функциональной группой, в водных щелочных условиях могут быть присоединены посредством уретанового мостика к аминогруппе полипептида. Отмечено, что активированный ПЭГ-N-сукцинимидный карбонат образует с аминогруппами стабильные, стойкие к гидролизу уретановые мостики. Там же указано, что аминогруппа более реакционноспособна при щелочных величинах pH (8,0-9,5), а при пониженных значениях pH реакционная способность резко падает. Однако при значениях pH 8,0-9,5 также резко усиливается гидролиз несвязанного ПЭГ-производного. Zalipsky устраняет проблему повышения скорости взаимодействия несвязанного ПЭГ-производного с водой применением избытка ПЭГ-производного для связывания с поверхностью белка. Используя избыток, с ПЭГ связывают достаточное количество реакционноспособных эпсилон-аминовых участков для модификации белка до того, как у ПЭГ-производного появляется благоприятная возможность оказаться гидролизованным и не способным к взаимодействию.
Способ Zalipsky приемлем для присоединения лизиновой фракции белка к ПЭГ-производному по одному активному участку этого ПЭГ-производного. Однако, если скорость гидролиза ПЭГ-производного оказывается существенной, присоединение по более чем одному активному участку ПЭГ-молекулы может стать проблематичным, так как простой избыток не снижает скорости гидролиза.
Так, например, линейный ПЭГ с активными участками на каждом конце присоединяется к белку одним концом, но если скорость гидролиза значительна, другой конец взаимодействует с водой и скорее оказывается блокированным относительно нереакционноспособным гидроксильным остатком, который структурно обозначен как -ОН, чем образует "гантелеподобную" молекулярную структуру с присоединенными с каждого из концов белковыми или другими требуемыми группами. Подобная проблема возникает, если молекулу необходимо присоединить к поверхности с помощью ПЭГ- соединительного агента, поскольку ПЭГ вначале присоединяют к поверхности или он соединяется с молекулой, а противоположный конец ПЭГ-производного должен оставаться активным для последующей реакции. Если из-за гидролиза возникает сложная ситуация, тогда противоположный конец обычно становится инертным.
Кроме того, в патенте США 5122614 на имя Zalipsky описано несколько других ПЭГ-производных, взятых из ранее выданных патентов. Отмечается, что ПЭГ-сукциноил-N-гидроксисукцинимидный эфир образует сложноэфирные мостики, которые в водной среде обладают ограниченной стабильностью, что указывает, таким образом, на нежелательно короткий период полупревращения этого производного. Указано, что ПЭГ-цианурхлорид проявляет нежелательную токсичность и не обладают способностью для специфического взаимодействия с конкретными функциональными группами белка. Следовательно, ПЭГ-цианурхлоридное производное может проявлять нежелательные побочные эффекты и может понижать белковую активность, поскольку по различным реакционноспособным участкам оно соединяется с рядом аминокислот различных типов. ПЭГ-фенилкарбонат, как сказано, образует токсичные гидрофобные фенольные остатки, которые обладают сродством с белками. О ПЭГ, активированном карбонилдиимидазолом, говорится, что он слишком медленно взаимодействует с белковыми функциональными группами, требуя для достижения достаточной модификации белка большой продолжительности реакции.
Тем не менее для присоединения к функциональным группам аминокислот, отличными от эпсилон-остатка - NH2 лизина, были предложены другие ПЭГ-производные. Гистидин включает реакционноспособный иминовый остаток, отвечающий формуле -N(H)-, но многие производные, взаимодействующие с эпсилон-остатком -NH2, вступают также во взаимодействие с -N(H)-. Цистеин включает реакционноспособный тиоловый остаток, отвечающий формуле -SH, но ПЭГ-малеимидное производное, которое взаимодействует с этим остатком, подвергается гидролизу.
Как можно видеть из приведенных выше ссылок, затрачены значительные усилия на создание различных ПЭГ-производных, предназначенных для присоединения к лизиновой аминокислотной фракции различных белков, в частности к -NH2-остатку. Продемонстрирована проблематичность синтеза и использования многих из этих производных. Некоторые образуют с белком нестабильные соединения, которые подвержены гидролизу и, следовательно, в водной среде, в такой, как ток крови, на очень длительный срок не сохраняются. Некоторые образуют более прочные соединения, но подвергаются гидролизу до образования такого соединения, а это означает, что реакционноспособная группа ПЭГ-производного может оказаться инертной еще до того, как может быть присоединен белок. Некоторые в определенной мере токсичны, поэтому менее пригодны для использования in vivo. Некоторые слишком медленно взаимодействуют, чтобы быть практически полезными. Некоторые вызывают потерю белком активности из-за присоединения по участкам, ответственным за активность белка. Некоторые не обладают специфическими свойствами на участках, к которым они присоединяются, что также может привести к потере требуемой активности и отсутствию воспроизводимости результатов.
Краткое изложение сущности изобретения
Согласно изобретению предложены водорастворимые и гидролитически стабильные производные полиэтиленгликолевых ("ПЭГ") полимеров и родственные гидрофильные полимеры, содержащие по одному или несколько активных сульфоновых остатков. Эти полимерные производные с активными сульфоновыми остатками высоко селективны для сочетания не с аминовыми остатками, а с тиоловыми остатками молекул и на поверхностях, прежде всего при значениях pH приблизительно 9 или меньше. Сульфоновый остаток, связь между полимером и сульфоновым остатком и связь между тиоловым остатком и сульфоновым остатком в восстановительных условиях обычно не обладают обратимостью и устойчивы к гидролизу в течение продолжительных периодов в водной окружающей среде при значениях pH приблизительно 11 или менее. Следовательно, такими активными сульфонсодержащими полимерными производными в требуемых водных условиях можно модифицировать физические и химические характеристики самых разнообразных веществ.
Так, условия для модификации биологически активных веществ можно оптимизировать с учетом сохранения высокой степени биологической активности. Фармацевтические препараты, начиная аспирином и кончая пенициллином, можно успешно модифицировать присоединением активных сульфонсодержащих полимерных производных, если эти фармацевтические вещества предварительно модифицируют с тем, чтобы они содержали тиоловые остатки. Также успешно можно модифицировать большие белки, включающие цистеиновые звенья, у которых имеются активные тиоловые остатки. Для введения цистеиновых групп по требуемым местам молекулы белка можно применять технику получения рекомбинантной ДНК ("генетической инженерии"). Эти цистеины можно сочетать с активными сульфонсодержащими полимерными производными для создания гидролитически стабильных соединений с различными белками, которые обычно не содержат цистеиновых звеньев.
Специфические сульфоновые остатки для активированных полимеров по изобретению представляют собой те, у которых имеется по меньшей мере по два углеродных атома, связанных с сульфоновой группой -SO2-, так, чтобы присутствовал реакционноспособный участок для тиолспецифических реакций сочетания при втором от сульфоновой группы углеродном атоме.
Более конкретно активные сульфоновые остатки представляют собой винилсульфон, активные этилсульфоны, включая галоидэтилсульфоны, и тиолспецифические активные производные этих сульфонов. Винилсульфоновый остаток может быть представлен структурно как -SO2-CH=CH2; активный этилсульфоновый остаток может быть структурно представлен как - SO2-CH2-CH2-Z, где Z может обозначать галоидную или какую-либо другую отщепляемую группу, способную замещаться тиолом с образованием соединения сульфона или тиола -SO2-CH2-CH2-S-W, где W обозначает биологически активную молекулу, поверхность или какой-нибудь другой объект. Производными винил- и этилсульфонов могут служить и другие заместители при условии сохранения водорастворимости и тиолспецифической реакционной способности реакционноспособного участка у второго углеродного атома.
Изобретение включает гидролитически стабильные конъюгаты веществ, включающих тиоловые остатки, с полимерными производными, содержащими активные сульфоновые остатки. Так, например, водорастворимый, активированный сульфоном ПЭГ-полимер можно сочетать с биологически активной молекулой на ее реакционноспособном тиоловом участке. Химическая связь, посредством которой ПЭГ сочетают с биологически активной молекулой, включает сульфоновый остаток, присоединенный к тиоловому остатку, и имеет формулу ПЭГ-SO2-CH2-CH2-S-W, где W обозначает биологически активную молекулу независимо от того, являлся ли сульфоновый остаток перед сочетанием с ПЭГ винилсульфоном или активным этилсульфоном.
В объем изобретения включены также биологические материалы, у которых имеется поверхность, содержащая один или несколько реакционноспособных тиоловых участков и один или несколько водорастворимых, активированных сульфоном полимеров по изобретению, присоединенных к поверхности сульфоновой и тиоловой связью. Биологические материалы и другие вещества можно также сочетать с активированными сульфоном полимерными производными посредством связи, отличной от сульфоновой и тиоловой связи, такой, как обычная аминовая связь, в результате чего уходит более гидролитически стабильная активирующая группа, т.е. сульфоновый остаток, способная вступать в последующие реакции.
Изобретение включает способ синтеза активированных полимеров по изобретению. Серусодержащий остаток присоединяют непосредственно к углеродному атому полимера, а затем превращают в активный сульфоновый остаток. Альтернативно этому сульфоновый остаток может быть получен присоединением соединительного агента, на одном конце которого имеется такой сульфоновый остаток, к обычному активированному полимеру таким образом, что этот сульфоновый остаток содержится на конце полученного полимера.
Более конкретно водорастворимый полимер, включающий по меньшей мере один активный гидроксильный остаток, вступает во взаимодействие с образованием замещенного полимера, содержащего более реакционноспособный остаток. Этот полученный замещенный полимер вступает во взаимодействие с замещением этого более реакционноспособного остатка серусодержащим остатком, у которого имеются по меньшей мере два углеродных атома, причем сера в этом серусодержащем остатке связана непосредственно с углеродным атомом полимера. Далее серусодержащий остаток вступает в реакции с окислением серы, -S-, до сульфона, -SO2-, и с образованием участка при втором углеродном атоме сульфонсодержащего остатка, реакционной способности которого достаточно для образования связей с тиолсодержащими остатками.
Еще более конкретно способ синтеза активированных полимеров по изобретению включает взаимодействие полиэтиленгликоля с гидроксилактивирующим соединением с образованием сложного эфира или с галоидсодержащим производным с образованием галоидзамещенного ПЭГ. Затем полученный активированный ПЭГ вступает во взаимодействие с меркаптоэтанолом с замещением меркаптоэтанольным радикалом сложноэфирного остатка или галогенида. Серу в меркаптоэтанольном остатке окисляют до сульфона. Этанольный сульфон активируют либо активированием гидроксильного остатка, либо замещением этого гидроксильного остатка более активным остатком, таким, как атом галогена. Затем при необходимости активный этилсульфон полиэтиленгликоля можно конвертировать в винилсульфон отщеплением активированного гидроксила или другого активного остатка и введением углерод-углеродной двойной связи, смежной с сульфоновой группой -SO2.
Изобретение включают также способ получения конъюгата какого-либо вещества и полимерного производного, которое содержит активный сульфоновый остаток. Этот способ включает стадию образования связи между полимерным производным и веществом, причем такое связывание происходит между сульфоновым остатком и тиоловым остатком.
Таким образом, по изобретению предлагаются активированные полимеры, которые обладают специфической реакционной способностью, стабильностью в воде, стабильностью в восстановительных условиях и которые образуют более стабильные соединения с поверхностями и молекулами, включая биологически активные молекулы, чем те, что достигались ранее. Такой активированный полимер может быть использован для модификации характеристик поверхностей и молекул, когда важное значение имеет биологическая совместимость. Поскольку активированный полимер стабилен в водных условиях и образует с тиоловыми остатками стабильные соединения, для сохранения активности биологически активных веществ и для оптимизации скорости реакции сочетания полимера можно выбирать наиболее благоприятные реакционные условия.
Подробное описание изобретения
Синтез, используемый для получения активных сульфонов полиэтиленгликоля и родственных полимеров, включает по меньшей мере четыре стадии, на которых серу связывают с полимерной молекулой, а затем конвертируют посредством ряда реакций в активную сульфоновую функциональную группу. Молекула исходного ПЭГ-полимера включает по меньшей мере один гидроксильный остаток, -ОН, который способен принимать участие в химических взаимодействиях, и его рассматривают как "активный" гидроксильный остаток. Молекула ПЭГ может включать множество активных гидроксильных остатков, способных вступать в химическое взаимодействие, как это описано ниже. В действительности же эти активные гидроксильные остатки являются относительно нереакционноспособными, и первая стадия синтеза состоит в получении ПЭГ, содержащего более реакционноспособный остаток.
Более реакционноспособный остаток обычно следует получать по одному из двух путей: активированием или замещением гидроксила. Для любого специалиста в данной области техники очевидны и другие методы, но активирование или замещение гидроксила являются двумя наиболее часто используемыми техническими приемами. При активировании гидроксила водородный атом -H гидроксильного остатка -ОН замещают более активной группой. Обычно проводят взаимодействие кислоты или производного кислоты, такого, как галоидангидрид кислоты, с ПЭГ с получением реакционноспособного сложного эфира, в котором ПЭГ и кислотный остаток соединены через сложноэфирную связь. Такой кислотный остаток обычно более реакционноспособен, чем гидроксильный остаток. Типичными сложными эфирами являются сульфонатные, карбоксилатные и фосфатные эфиры.
Сульфониловые галоидангидриды кислот, которые пригодны для использования при практическом осуществлении изобретения, включают метансульфонилхлорид и п-толуолсульфонилхлорид. Метансульфонилхлорид отвечает формуле CH3SO2Cl и известен также как мезилхлорид. Метансульфониловые сложные эфиры иногда называют мезилатами. Пара-толуолсульфонил-хлорид отвечает формуле H3CC6H4SO2Cl и известен также как тозилхлорид. Толуолсульфониловые сложные эфиры иногда называют тозилатами.
В реакции замещения гидроксильную группу -ОН молекулы ПЭГ целиком замещают более реакционноспособным остатком, обычно атомом галогена. Так, можно провести взаимодействие тионилхлорида, отвечающего формуле SOCl2, с ПЭГ с получением более реакционноспособного хлорзамещенного ПЭГ. Замещение гидроксильного остатка другим остатком в данной области техники иногда называют активированием гидроксила. Термин "активирование гидроксила" в данном описании следует понимать как обозначающий замещение, а также этерификацию и другие методы активирования гидроксила.
В области химической технологии термины "группа", "функциональная группа", "остаток", "активный остаток", "реакционноспособный участок" и "радикал" в некоторых случаях являются синонимами, и в данной области техники и в настоящем описании их используют для четкого обозначения поддающихся определению участков или звеньев молекулы и тех звеньев, которые выполняют некоторую функцию или проявляют активность и являются реакционноспособными в отношении других молекул или частей молекул. В этом смысле при сочетании с полимером белок или остаток белка можно рассматривать как молекулу или как функциональную группу либо остаток.
Термин "ПЭГ" в данной области техники и в настоящем описании используют для описания любого из нескольких конденсационных полимеров этиленгликоля, отвечающих общей формуле, структурно изображаемой как H(OCH2CH2)nОН, которая может быть также представлена как HO- СН2CH2-(OCH2CH2)n-ОН. ПЭГ известен также как полиоксиэтилен, полиэтиленоксид, полигликоль и полиэфиргликоль. ПЭГ может быть получен в виде сополимеров окиси этилена и многих других мономеров.
Полиэтиленгликоль используют для биологических целей, так как он обладает свойствами, которые весьма желательны и в целом приемлемы для биологических или биотехнических областей применения. ПЭГ обычно прозрачен, бесцветен, не обладает запахом, растворим в воде, термостабилен, инертен ко многим химическим реагентам, не гидролизуется, не деструктируется и нетоксичен. Полиэтиленгликоль считают биологически совместимым, то есть можно сказать, что ПЭГ способен к сосуществованию с живыми тканями и организмами, не принося им вреда. Более конкретно ПЭГ не обладает иммуногенностью, т.е., иными словами, ПЭГ не проявляет тенденцию вызывать иммунную реакцию организма. При присоединении к остатку, выполняющему в организме некоторую определенную функцию, ПЭГ проявляет тенденцию к маскировке этого остатка и способен ослаблять или устранять любую иммунную реакцию, благодаря чему организм способен переносить присутствие такого остатка. Таким образом, активированные сульфоном ПЭГ по изобретению должны быть практически нетоксичными и по существу не должны проявлять тенденции к возбуждению иммунной реакции или вызывать свертывание крови либо другие нежелательные эффекты.
Вторая стадия синтеза состоит в связывании серы непосредственно с углеродным атомом полимера и в такой форме, в которой ее можно конвертировать в этилсульфон или этилсульфоновое производное, обладающее сходными свойствами реакционноспособности. Термин "этил" относится к остатку, содержащему идентифицируемую группу из двух соединенных между собой углеродных атомов. Необходимо, чтобы второй углеродный атом в цепи активного сульфонового ПЭГ-производного в направлении от сульфоновой группы образовывал реакционноспособный участок для соединения тиоловых остатков с сульфоном. Такого результата можно достичь за счет взаимодействия активного участка, созданного на вышеупомянутой первой стадии, который обычно содержится в эфир- или галоидзамещенном ПЭГ, в ходе проведения реакции замещения со спиртом, который также содержит реакционноспособный тиоловый остаток, присоединенный к этиловой группе, т.е. тиоэтаноловый остаток. Этот тиоловый остаток окисляют до сульфона, а второй в направлении от сульфона в этильной группе углеродный атом конвертируют в реакционноспособный участок.
Соединения, включающие тиоловые остатки, -SH, представляют собой органические соединения, схожие со спиртами, которые содержат гидроксильный остаток -ОН, за исключением того, что в тиолах кислородный атом по меньшей мере одного гидроксильного остатка замещен серой. Активирующий остаток ПЭГ-производного после первой реакции, который обычно представляет собой либо галоидный, либо кислотный остаток эфира, отщепляют от полимера и замещают спиртовым радикалом тиоэтанолового соединения. Серу этого тиолового остатка спирта связывают непосредственно с углеродным атомом полимера.
В качестве спирта следует использовать тот, что дает тиоэтаноловый остаток для прямого присоединения к углеродному атому полимерной цепи или который можно легко конвертировать в тиоэтаноловый остаток или замещенный остаток с аналогичными свойствами реакционноспособности. Примером такого спирта служит меркаптоэтанол, который отвечает формуле HSCH2CH2OH и который иногда называют также тиоэтанолом.
На третьей стадии синтеза для конверсии серы, которая присоединена к углероду, в сульфоновую группу, -SO2, используют окислитель. Существует множество таких окислителей, включая перекись водорода и перборат натрия. Может быть использован катализатор, такой, как вольфрамовая кислота. Однако образующийся сульфон находится не в той форме, которая активна для тиолселективных реакций, и необходимо удалять относительно нереакционноспособный гидроксильный остаток спирта, который присоединяли в ходе проведения реакции замещения на второй стадии.
На четвертой стадии гидроксильный остаток спирта, который присоединяли на второй стадии, конвертируют в более реакционноспособную форму либо путем активирования гидроксильной группы, либо путем замещения гидроксильной группы более реакционноспособной группой, как и на первой стадии этой реакционной последовательности. Замещение обычно производят галогенидом с получением галоидэтилсульфона или его производного, обладающего реакционноспособным участком у второго относительно сульфонового остатка углеродного атома. Обычно второй углеродный атом этиловой группы следует активировать хлоридным или бромидным галогеном. Активирование гидроксила должно создавать участок аналогичной реакционной способности, такой, как остаток сульфонатного эфира. Приемлемыми реагентами являются кислоты, галоидангидриды кислот и другие, упомянутые ранее в связи с первой стадией этой реакционной последовательности, прежде всего тионилхлорид в случае замещения гидроксильной группы атомом хлора.
Получаемый полимерный активированный этилсульфон стабилен, может быть выделен в чистом виде и пригоден для тиолселективных реакций сочетания. Как показано в примерах, ПЭГ-хлорэтилсульфон стабилен в воде при значениях pH приблизительно 7 или меньше, но тем не менее может быть успешно использован для тиолселективных реакций сочетания в условиях щелочных значений pH, вплоть до по крайней мере приблизительно 9.
В ходе проведения реакции тиолового сочетания возможно вытеснение хлорида тиоловым остатком, как это происходит в нижеследующей реакции:
ПЭГ-SO2-CH2-CH2-Cl+W-S-H-->ПЭГ-SO2-CH2-CH2-S-W,
где W обозначает остаток, к которому присоединяется тиоловый остаток SH и который может быть биологически активной молекулой, поверхностью или каким-либо другим веществом. Однако, не руководствуясь какой-либо теорией, на основании поддающейся наблюдению кинетики реакции, как показано в примере 3, полагают, что хлорэтил и другие активированные этилсульфоны и реакционноспособные производные конвертируют в ПЭГ-винилсульфон и что с тиоловым остатком фактически связывают именно ПЭГ-винилсульфон или его производное. Тем не менее получаемая сульфоновая и тиоловая связь не отличима ни от активного ПЭГ-этилсульфона, ни от ПЭГ-винилсульфона, вследствие чего для присоединения к тиоловым группам активный этилсульфон можно использовать при значениях pH выше 7.
ПЭГ-винилсульфон также стабилен, может быть выделен в чистом виде и способен образовывать тиолселективные, гидролитически стабильные соединения, обычно за гораздо меньший период, чем галоидэтилсульфон или другой активированный этилсульфон, как это подробнее поясняется ниже.
На пятой стадии, которую можно добавить к синтезу, проводят взаимодействие активированного этилсульфона с любым из разнообразных оснований, таким, как гидроксид натрия или триэтиламин, с получением ПЭГ-винилсульфона или одного из его активных производных для использования в тиолселективных реакциях сочетания.
Как показано в нижеприведенных примерах, прежде всего в примере 3, ПЭГ-винилсульфон быстро взаимодействует с тиоловыми остатками и стоек к гидролизу в воде при значениях pH менее приблизительно 11 в течение по крайней мере нескольких дней. Эту реакцию можно представить следующим образом:
ПЭГ-SO2-CH = CH2+W-S-H--->ПЭГ-SO2-CH2-CH2-S-W.
Тиоловый остаток присоединяют, как принято говорить, "через двойную связь". W-S-остаток присоединяют к концевому звену CH2 этой двойной связи, углерод которой является вторым от сульфоновой группы SO2 углеродным атомом. Водородный атом H присоединяется к группе CH с двойной связью. Однако при pH выше приблизительно 9 селективность сульфонового остатка к тиолу уменьшается, и сульфоновый остаток становится несколько более реакционноспособен в отношении аминогрупп.
Согласно другому варианту вышеописанного синтеза активированные сульфоном ПЭГ-производные можно получать присоединением соединительного агента, содержащего сульфоновый остаток, к ПЭГ, активированному другой функциональной группой. Так, например, активированный амином ПЭГ, ПЭГ-NH2, при благоприятных условиях при pH приблизительно 9 или менее взаимодействует с небольшой молекулой, у которой на одном конце имеется сукцинимидиловый активный сложноэфирный остаток NHS-O2C-, а на другом конце - сульфоновый остаток, винилсульфон -SO2-CH= CH2. Активированный амином ПЭГ образует с сукцинимидиловым эфиром прочную связь. Получаемый ПЭГ активируют винилсульфоновым остатком на конце и делают его гидролитически стабильным. Реакцию и полученный активированный винилсульфоном ПЭГ структурно отображают следующим образом:
ПЭГ-NH2+NHS-O2C-CH2-CH2-SO2-CH= CH2 --->ПЭГ-NН-OC-CH2-CH2-SO2-CH= CH2
Аналогичный активированный ПЭГ можно получить взаимодействием активированного амином ПЭГ, такого, как сукцинимидиловый активный сложный эфир ПЭГ, ПЭГ-CO2-NHS, с небольшой молекулой, на одном конце которой имеется аминовый остаток, а на другом - винилсульфоновый остаток. Такой сукцинимидиловый эфир образует прочную связь с аминовым остатком, как показано в следующей схеме:
ПЭГ-CO2-NHS+NH2-CH2-CH2-SO2-CH= CH2--->ПЭГ-CO-NH-CH2-CH2-SO2-CH= CH2.
Активные ПЭГ-сульфоны по изобретению могут характеризоваться любой молекулярной массой и могут быть линейными или разветвленным с сотнями ответвлений. ПЭГ может быть замещенным или незамещенным при условии, что по крайней мере один реакционноспособный участок пригоден для замещения сульфоновыми остатками. Типичная средняя молекулярная масса ПЭГ составляет 200-100000, а его биологические свойства могут варьироваться в зависимости от молекулярной массы и от степени разветвленности и замещения, поэтому не все такие производные могут быть использованы для биологических или биотехнических целей. Для большинства биологических и биотехнических целей следует использовать практически линейный, прямоцепочечный ПЭГ-винилсульфон или бис-винилсульфон или же следует применять активированный этилсульфон, практически незамещенный, кроме винилсульфоновых или этилсульфоновых остатков и при необходимости других дополнительных функциональных групп. Для многих биологических и биотехнических областей применения такими заместителями обычно служат нереакционноспособные группы, такие, как водородный атом Н- и метил CH3- ("м-ПЭГ").
ПЭГ может включать более одного присоединенного винилсульфонового остатка либо остатка-предшественника или один конец ПЭГ может быть блокирован относительно нереакционноспособным остатком, таким, как метиловый радикал, -CH3. Такая блокированная форма может быть использована, например, если полимерные цепи желательно просто присоединить по различным тиоловым участкам вдоль белковой цепи. Присоединение ПЭГ-молекул к биологически активной молекуле, такой, как белок или другое фармацевтическое средство, или к поверхности иногда называют "ПЭГилированием".
Линейный ПЭГ с активными гидроксилами на каждом конце может быть активирован с каждого конца винилсульфоном либо его предшественником или же производными сходной реакционноспособности, в результате чего он становится бифункциональным. Такую бифункциональную структуру, например, ПЭГ-бис-винилсульфон, иногда называют гантельной структурой, которая может быть использована, например, в качестве мостика или распорки для присоединения биологически активной молекулы к поверхности или для присоединения более чем одной такой биологически активной молекулы к ПЭГ-молекуле. Стойкость сульфонового остатка к гидролизу делает его особенно пригодным для бифункциональных или гетеробифункциональных применений.
Другой областью применения ПЭГ-винилсульфона и его предшественника является дендритный активированный ПЭГ, у которого множество ответвлений из ПЭГ присоединено к центральной, сердцевинной структуре. Дендритные ПЭГ-структуры могут быть высоко разветвленными; они общеизвестны как "звездчатые" молекулы. Звездчатые молекулы в целом описаны в патенте США 5171264, выданном на имя Merrill, содержание которого включено в настоящее описание в качестве ссылки. Сульфоновые остатки могут быть использованы для получения на конце ПЭГ-цепи, проходящей от сердцевины, активной функциональной группы и в качестве мостика для присоединения функциональной группы к лучам звездчатой молекулы.
ПЭГ-винилсульфон и его предшественники и производные могут быть использованы для непосредственного присоединения к поверхностям и молекулам, у которых имеется тиоловый остаток. Однако более типично присоединение гетеробифункционального ПЭГ- производного, на одном конце которого имеется сульфоновый остаток, а у группы на противоположном конце - другой функциональный остаток, к поверхности или молекуле посредством другого остатка. В случае замещения одним из других активных остатков гетеробифункциональная гантельная структура ПЭГ может быть использована, например, для переноса белковой или другой биологически активной молекулы сульфоновыми мостиками на один конец и другим мостиком, таким, как аминовый мостик, на другой конец, в результате чего образуется молекула, проявляющая два различных действия. Гетеробифункциональный ПЭГ, у которого имеется сульфоновый остаток на одном конце и аминовый специфический остаток - на другом конце, может присоединяться как к цистеиновому, так и к лизиновому фрагментам белков. При необходимости можно достичь прочной аминовой связи, и в этом случае гидролитически стабильный непрореагировавший сульфоновый остаток оказывается доступным для последующих тиолспецифических реакций.
Другие активные группы для гетеробифункциональных, активированных сульфоном ПЭГ можно выбрать среди остатков самых разнообразных соединений. Для биологических и биотехнических применений заместители обычно следует выбирать из реакционноспособных остатков, которые, как правило, используют в химии ПЭГ для активирования ПЭГ, такие, как альдегиды, трифторэтилсульфонат, который также иногда называют трезилатом, н-гидроксилсукцинимидный эфир, цианурхлорид, цианурфторид, ацилазид, сукцинат, пара- диазобензиловая группа, 3-(пара-диазофенилокси)-2-гидроксипропилоксигруппа и другие.
Примеры активных остатков, отличных от сульфона, представлены Davis и др. в патенте США 4179337; Lee и др. в патентах США 4296097 и 4430260; Iwasaki и др. в патенте США 4670417; Katre и др. в патентах США 4766106, 4917888 и 4931544; Nakagawa и др. в патенте США 4791192; Nitecki и др. в патентах США 4902502 и 5089261; Saifer в патенте США 5080891; Zalipsky в патенте США 5122614; Shadle и др. в патенте США 5153265; Rhee и др. в патенте США 5162430; в публикации заявки на Европейский патент 0247860 и в Международных заявках US 86/01252; GB 89/01261: GB 89/01262; GB 89/01263; US 90/03252; US 90/06843; US 91/06103; US 92/00432 и US 92/02047, содержание которых включено в настоящее описание в качестве ссылок.
Для любого специалиста в данной области техники должно быть очевидно, что гантельные структуры, о которых речь шла выше, могут быть использованы для переноса самых различных заместителей и сочетаний заместителей. Можно модифицировать фармацевтические вещества, такие, как аспирин, витамины, пенициллин и другие многочисленные материалы; полипептиды, белки и фрагменты белков различных функциональности и молекулярной массы; клетки различных типов; поверхности для биоматериалов и почти любое вещество. Под используемым в описании термином "белок" следует понимать, среди прочего, пептиды и полипептиды, которые являются полимерами аминокислот. Термин "биоматериал" обозначает материал, обычно синтетического происхождения, а иногда полученный из пластмассы, который пригоден для имплантации в живой организм для восстановления поврежденных или больных частей организма. Примером биоматериала служат искусственные кровеносные сосуды.
Одно из прямоцепочечных ПЭГ-производных по изобретению для биологических и биотехнических целей отвечает базовой формуле R-CH2CH2-(OCH2CH2)n-Y-. Предпочтительный ПЭГ-мономер OCH2CH2 вдоль главной полимерной цепи практически не замещен и не имеет боковых групп. Величина подстрочного символа "n" составляет от примерно 5 до 3000. Более типичный интервал равен от примерно 5 до 2200, что соответствует молекулярной массе от примерно 220 до 100000. Еще более типичен интервал от примерно 34 до 1100, что соответствует молекулярной массе в интервале от примерно 1500 до 50000. В большинстве областей применения приемлема молекулярная масса от примерно 2000 до 5000, что соответствует значению "n" от примерно 45 до 110.
В вышеприведенной формуле Y обозначает -SO2-, CH=CH2 или -SO2-CH2-CH2-X, где X обозначает атом галогена. R обозначает группу, которая может быть той же, что и Y, или отличной от нее. R может представлять собой НО-, H3СО-, CH2= CH-SO2-, Cl-CH2-CH2-SO2- или активирующую полимер группу, отличную от CH2= CH-SO2-, Cl-CH2-CH2-SO2-, такую, как упоминаемая в отношении вышеперечисленных патентов и опубликованных заявок на патент.
Активные полимерные производные являются водорастворимыми и гидролитически стабильными и образуют с тиоловыми группами водорастворимые и гидролитически стабильные связи. Эти производные рассматривают как неограниченно растворимые в воде или как приближающиеся к неограниченной растворимости и как обеспечивающие способность молекул, которые в других условиях нерастворимы, переходить в раствор при образовании с ними конъюгатов.
Гидролитическая стабильность производных означает, что связь между полимером и сульфоновым остатком является водостойкой и что винилсульфоновый остаток не взаимодействует с водой при pH менее приблизительно 11 в течение продолжительного периода времени, составляющего по меньшей мере несколько дней, и потенциально неограниченного, как показано в нижеприведенном примере 3. Активированный этилсульфон можно конвертировать в винилсульфон в условиях щелочных значений pH с идентичной конечной стабильностью. Гидролитическая стабильность тиоловой связи означает, что конъюгаты активированного полимера и вещества, содержащего тиоловый остаток, в водной среде обладают стабильностью по месту сульфонтиоловой связи в течение длительного периода времени при значениях pH ниже приблизительно 11. От многих белков можно ожидать утраты активности при щелочных значениях pH, равных 11 или выше, вследствие чего для любого специалиста в данной области техники должно быть очевидно, что во многих областях применения активных сульфонсодержащих ПЭГ-производных значения pH должны составлять менее 11, несмотря на стабильность сульфонового остатка при более высоких значениях pH.
Для возможности применения для модификации белков и других веществ необходима лишь стабильность сульфона в течение промежутка времени, достаточного для взаимодействия сульфона с реакционноспособным тиоловым остатком такого белка или другого вещества. Скорость реакции сульфонового остатка с тиолом в зависимости от значения pH может варьироваться, как это показано в нижеприведенном примере 2, и реакция может завершаться в течение от примерно 2 до 30 мин, т. е. значительно быстрее реакции гидролиза, если таковой имеет место. Можно ожидать, что время взаимодействия винилсульфона с тиолом находится в гораздо более широком интервале, поскольку он стабилен в течение длительного периода времени. Кроме того, как показано в нижеприведенном примере 3, в условиях щелочных значений pH хлорэтилсульфон не гидролизуют, а конвертируют в винилсульфон, который остается стабильным в течение нескольких дней и является еще более реакционноспособным в отношении тиоловых групп. Таким образом, в отношении модификации характеристик веществ активные этилсульфоны также можно рассматривать как гидролитически стабильные в течение длительного периода времени в широком интервале значений pH.
Полагают, что для подобных модификации и активирования активным сульфоновым остатком приемлемы другие водорастворимые полимеры, отличные от ПЭГ. Эти другие полимеры включают поливиниловый спирт ("ПВС"); другие полиалкиленоксиды, такие, как полипропиленгликоль ("ППГ") и тому подобное; полиоксиэтилированные полиолы, такие, как полиоксиэтилированный глицерин, полиоксиэтилированный сорбит и полиоксиэтилированная глюкоза и тому подобное. Полимеры могут представлять собой гомополимеры или статистические или блоксополимеры и тройные сополимеры на основе мономеров вышеуказанных полимеров, прямоцепочечные или разветвленные, замещенные или незамещенные, подобные ПЭГ, но обладающие по крайней мере одним активным участком, способным взаимодействовать с образованием сульфонового остатка.
В нижеследующем примере 1 представлен синтез, выделение и определение характеристик поли(этиленгликоль)-хлорэтилсульфона с последующим получением поли(этиленгликоль)-винилсульфона из хлорэтилсульфона. Другие полимерные сульфоны, реакционноспособный участок которых находится у второго от сульфоновой группы углеродного атома, получают аналогично, поэтому стадии такой процедуры должны быть очевидными для любого специалиста в данной области техники, если основываться на нижеприведенном примере 1 и полимерах, перечисленных выше.
Пример 1: Синтез
Стадии реакции можно проиллюстрировать с помощью нижеследующих схем:
(1) ПЭГ-OH+CH3SO2Cl-->ПЭГ-OSO2CH3;
(2) ПЭГ-OSO2CH3+HSCH2CH2OH-->ПЭГ-SCH2CH2OH;
(3) ПЭГ-SCH2CH2OH+H2O2-->ПЭГ-SO2CH2CH2OH;
(4) ПЭГ-SO2CH2CH2OH+SOCl2-->ПЭГ-SO2CH2CH2Cl;
(5) ПЭГ-SO2CH2CH2Cl+NaOH-->ПЭГ-SO2-CH=CH2+HCl.
Каждая из вышеприведенных реакций подробно описана ниже.
Реакция 1. Реакция 1 представляет собой получение метансульфонилового эфира полиэтиленгликоля, который можно также называть метансульфонатом или мезилатом полиэтиленгликоля. Тозилат и галогениды могут быть получены по аналогичным процедурам, которые очевидны любому специалисту в данной области техники.
Для получения мезилата двадцать пять граммов ПЭГ с молекулярной массой 3400 сушили азеотропной перегонкой в 150 мл толуола. Во время сушки ПЭГ отгоняли приблизительно половину толуола. В толуол и раствор ПЭГ добавляли сорок миллилитров сухого дихлорметана с последующим охлаждением на ледяной бане. В охлажденный раствор добавляли 1,230 мл дистиллированного метансульфонилхлорида, что составляет 1,06 весового эквивалента гидроксильных групп ПЭГ, и 2,664 мл сухого триэтиламина, что составляет 1,3 весового эквивалента гидроксильных групп ПЭГ. Термин "весовой эквивалент", используемый выше, можно понимать как "совместный вес", относящийся к весу соединения, которое взаимодействует с эквивалентным весом гидроксильных групп ПЭГ.
Реакционную смесь оставляли на ночь, причем в течение этого промежутка времени она нагревалась до комнатной температуры. В осадок выпадал гидрохлорид триэтиламмония, и этот осадок удаляли фильтрованием. После этого выпариванием в роторном испарителе объем массы уменьшали до 20 мл. Добавлением в 100 мл холодного сухого этилового эфира осаждали мезилат. Ядерно-магнитный резонансный (ЯМР) анализ показал 100%-ную конверсию гидроксильных групп в мезилатные группы.
Реакция 2. Реакция 2 представляет собой получение поли(этиленгликоль)-меркаптоэтанола взаимодействием мезилата с меркаптоэтанолом. Это взаимодействие вызывает вытеснение метансульфонатного радикала из ПЭГ. Серу меркаптоэтанолового радикала присоединяют непосредственно к углероду углерод-углеродной главной цепи ПЭГ.
Двадцать граммов мезилата из реакции 1 растворяли в 150 мл дистиллированной воды. Раствор мезилата и воды охлаждали погружением в ледяную баню. В охлажденный раствор добавляли 2,366 мл меркаптоэтанола, что составляло 3 весовых эквивалента гидроксильных групп ПЭГ. Добавляли также 16,86 мл 2 H NaOH. Реакционную смесь кипятили с обратным холодильником в течение 3 ч, т. е. это означает, что пары, поднимавшиеся из реакционной смеси, непрерывно конденсировали и возвращали в реакционную смесь.
Полученный поли(этиленгликоль)-меркаптоэтанол трижды экстрагировали дихлорметаном, используя каждый раз приблизительно 25 мл дихлорметана. Органические фракции собирали и сушили над безводным сульфатом магния. Объем массы уменьшали до 20 мл и продукт осаждали добавлением в 150 мл холодного сухого диэтилового эфира.
ЯМР-анализ ПЭГ-SCH2CH2OH в d6-ДМСО, в диметилсульфоксиде, давал нижеследующие пики: 2,57 частей/млн, триплет, -CH2-S-; 2,65 частей/млн, триплет, -S-CH2-; 3,5 частей/млн, синглет главной цепи и 4,76 частей/млн, триплет, - ОН. Гидроксильный пик при 4,76 частей/млн указывал на 81%-ное замещение. Однако пик 2,65 частей/млн для -S-CH2- указывал на 100%-ное замещение. Согласно наблюдениям гидроксильные пики часто дают заниженные значения процентного замещения, поэтому пик 2,65 частей/млн для -S-CH2- считают более достоверным и подтверждающим 100%-ное замещение.
Реакция 3. Реакция 3 представляет собой окисление поли(этиленгликоль)-меркаптоэтанольного продукта перекисью с конверсией серы, S, в сульфон, SO2. Получают ПЭГ- этанолсульфон.
Двадцать граммов ПЭГ-SCH2CH2OH растворяли в 30 мл 0,123 М раствора вольфрамовой кислоты и охлаждали на ледяной бане. Раствор вольфрамовой кислоты готовили растворением кислоты в растворе гидроокиси натрия с pH 11,5 и с последующим доведением значения pH до 5,6 добавлением ледяной уксусной кислоты. В раствор вольфрамовой кислоты и поли(этиленгликоль)-меркаптоэтанола добавляли двадцать миллилитров дистиллированной воды и 2,876 мл 30%-ной перекиси водорода, что составляло 2,5 весового эквивалента гидроксильных групп, и в течение ночи реакционной смеси давали нагреться до комнатной температуры.
Окисленный продукт трижды экстрагировали дихлорметаном, используя каждый раз по 25 мл дихлорметана. Собранные органические фракции промывали разбавленным водным раствором бикарбоната натрия и сушили над безводным сульфатом магния. Объем массы уменьшали до 20 мл. ПЭГ- этанолсульфоновый продукт осаждали добавлением в холодный сухой этиловый эфир.
ЯМР-анализ ПЭГ-SO2CH2CH2OH в d6-ДМСО, в диметилсульфоксиде, давал нижеследующие пики: 3,25 частей/млн, триплет, -CH2-SO2-; 3,37 частей/млн, триплет, -SO2CH2-; 3,50 частей/млн, главная цепь; 3,77 частей/млн, триплет, -CH2OH; 5,04 частей/млн, триплет, -ОН. Гидроксильный пик при 5,04 частей/млн указывал на 85%-ное замещение. Однако пик при 3,37 частей/млн для -SO2-CH2- указывал на 100%-ное замещение, и его считают более достоверным.
Реакция 4. Реакция 4 представляет собой заключительную стадию синтеза, выделения и определения характеристик поли(этиленгликоль)-хлорэтилсульфона.
Для синтеза этого продукта двадцать граммов ПЭГ-SO2CH2CH2OH, поли(этиленгликоль)-этанолсульфона, растворяли в 100 мл свежеперегнанного тионилхлорида и кипятили с обратным холодильником в течение ночи. Тионилхлорид перегоняли над хинолином. Перегонкой удаляли избыток тионилхлорида. Добавляли пятьдесят миллилитров толуола и 50 мл дихлорметана и удаляли перегонкой.
Для выделения продукта ПЭГ-хлорэтилсульфоновый раствор растворяли в 20 мл дихлорметана и осаждали добавлением в 100 мл холодного сухого этилового эфира. Осадок перекристаллизовывали из 50 мл этилацетата, выделяя конечный продукт.
Для определения характеристик этого продукта использовали ядерно-магнитный резонансный анализ. ЯМР-анализ ПЭГ-SO2CH2-CH2-Cl в d6-ДМСО, в диметилсульфоксиде, давал нижеследующие пики: 3,50 частей/млн.частей, главная цепь; 3,64 частей/млн, триплет, -CH2-SO2-; 3,80 частей/млн, триплет, -SO2-CH2-. Небольшой гидроксильный триплет примеси появлялся при 3,94 частей/млн. Расчет процентного замещения для этого спектра был затруднен из-за близости важных пиков к очень большому пику главной цепи.
Реакция 5. Реакция 5 представляет собой конверсию поли(этиленгликоль)-хлорэтилсульфона из стадии реакции 4 в поли(этиленгликоль)-винилсульфон и выделение и определение характеристик винилсульфонового продукта.
ПЭГ-винилсульфон легко получали растворением твердого ПЭГ-хлорэтилсульфона в дихлорметановом растворителе с последующим добавлением двух эквивалентов NaOH. Раствор фильтровали для удаления основания и растворитель выпаривали, выделяя в качестве конечного продукта ПЭГ-SO2-CH=CH2, ПЭГ-винилсульфон.
Характеристики ПЭГ-винилсульфона определяли ЯМР-анализом в d6-ДМСО, в диметилсульфоксиде. ЯМР-анализ давал нижеследующие пики: 3,50 частей/млн, главная цепь; 3,73 частей/млн, триплет, -CH2-SO2-; 6,21 частей/млн, триплет, = CH2; 6,97 частей/млн, дублет дублетов, -SO2-CH-. Пик 6,97 частей/млн для -SO2-CH- указывал на 84%-ное замещение. Пик 6,21 частей/млн для =CH2 указывал на 94%-ное замещение. Титрование меркаптоэтанолом и 2,2'-дитиодипиридином указывало на 95%-ное замещение.
Пример 2: Тиолселективная реакционная способность
Пример 2 показывает, что ПЭГ-винилсульфон и его предшественник ПЭГ-хлорэтилсульфон значительно более реакционноспособны в отношении тиоловых групп (-SH), чем аминогруппы (-NH2) или иминогруппы (-NH-). Соединения, содержащие тиоловые группы, представляют собой органические соединения, схожие со спиртами, которые содержат гидроксильные группы -ОН, за исключением того, что в тиолах кислородный атом гидроксильной группы заменен серой. Тиолы иногда называют также сульфгидрилами или меркаптанами. ПЭГ-винилсульфон содержит винилсульфоновую группу -SO2-CH=CH2. ПЭГ-хлорэтилсульфон содержит хлорэтилсульфоновую группу -SO2CH2CH2Cl.
Селективность в отношении тиолов при модификации белка важна, поскольку это означает, что цистеиновые звенья (содержащие -SH) должны быть модифицированы предпочтительнее лизиновых звеньев (содержащих -NH2) и гистидиновых звеньев (содержащих -NH-). Селективность ПЭГ-винилсульфона в отношении тиолов означает, что ПЭГ может быть селективно присоединен к цистеиновым звеньям, таким образом сохраняя активность белка в случае особых белков и регулируя число ПЭГ-молекул, присоединенных к белку.
Относительную реакционную способность ПЭГ-винилсульфона в отношении тиоловых и аминогрупп определяли измерением скоростей реакции ПЭГ-винилсульфона с N-α-ацетиллизинметиловым эфиром и с меркаптоэтанолом. N-α-ацетиллизинметиловый эфир представляет собой лизиновую модель, содержащую аминогруппу, сокращенно представляемую как Lys-NH2. Меркаптоэтанол служит в качестве цистеиновой модели, содержащей тиоловую группу и сокращенно представляемую как Cys-SH. Аналогично определяли относительную реакционную способность ПЭГ-хлорэтилсульфона. Эта молекула может служить как "защищенная" форма винилсульфона, так как она стабильна в кислоте, но при добавлении основания конвертируется в ПЭГ-винилсульфон.
Реакционную способность ПЭГ-винилсульфона и ПЭГ-хлорэтилсульфонового предшественника изучали при значениях pH 8,0, 9,0 и 9,5. Буферами для регулирования pH служили 0,1М фосфат для pH 8,0 и 0,1М борат для pH 9,0 и 9,5. Для замедления конверсии тиола в дисульфид при измерении реакционной способности меркаптоэтанола в оба буфера добавляли 5 мМ раствора этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТК).
Для каждого из трех уровней щелочных значений pH в ходе проведения взаимодействия ПЭГ-производных по изобретению с Lys-NH2 в 0,3 мМ раствор Lys-NH2 в соответствующем буфере при перемешивании добавляли 3 мМ раствор ПЭГ-производного. За взаимодействием наблюдали добавлением флуоресцамина в реакционный раствор с получением флуоресцентного производного в результате взаимодействия с аминогруппами. Эту стадию наблюдения осуществляли добавлением 50 мкл реакционной смеси в 1,950 мл фосфатного буфера с pH 8,0 с последующим добавлением при интенсивном перемешивании 1,0 мл раствора флуоресцамина. Раствор флуоресцамина представлял собой 0,3 мг флуоресцамина на 1 мл ацетона.
Флуоресценцию измеряли спустя 10 мин после смешения. Возбуждение оказывалось видимым при длине волны 390 нм. Излучение света происходило при 475 нм. При pH 8,0 в течение 24 ч никакой реакции не наблюдали ни для ПЭГ-винилсульфона, ни для ПЭГ-хлорэтилсульфона. При pH 9,5 реакция протекала медленно, но по истечении нескольких дней все аминогруппы оказывались прореагировавшими.
В ходе проведения взаимодействия ПЭГ-винилсульфона и ПЭГ-хлорэтилсульфонового предшественника с Cys-SH для каждого из трех уровней щелочных значений pH 2 мМ раствор ПЭГ-производного добавляли в 0,2 мМ раствор Cys-SH в соответствующем буфере. За реакцией наблюдали добавлением в реакционный раствор 4-дитиопиридина. Этот 4-дитиопиридин взаимодействует с Cys-SH с образованием 4-тиопиридона, который поглощает ультрафиолетовые лучи.
Стадию наблюдения осуществляли добавлением 50 мкл реакционной смеси в 0,950 мл 0,1 М фосфатного буфера с pH 8,0, содержавшего 5 мМ ЭДТК, с последующим добавлением в тот же самый буфер одного миллилитра 2 мМ 4-дитиопиридина.
Поглощение лучей 4-тиопиридоном измеряли при 324 нм. ПЭГ-винилсульфон, а также ПЭГ-хлорэтилсульфон проявляли реакционную способность в отношении Cys-SH, причем ПЭГ-винилсульфон показывал более значительную реакционную способность. При pH 9,0 реакция завершается по истечении двух минут в случае использования винилсульфона и по истечении 15 мин в случае использования хлорэтилсульфона. Однако эти реакции оказывались слишком быстрыми для определения точных констант скорости. При pH 8,0 реакции протекали медленнее, но все же завершались в течение одного часа для винилсульфона и в течение трех часов для хлорэтилсульфона. Конверсия хлорэтилсульфона в винилсульфон значительно медленнее взаимодействия винилсульфона с Cys-SH. Таким образом, скорость взаимодействия хлорэтилсульфона с Cys-SH зависит, по-видимому, от скорости конверсии хлорэтилсульфона в винилсульфон. Тем не менее скорость такой реакции все же намного выше скорости взаимодействия с Lys-NH2.
Вышеописанные исследования кинетики показывают, что ПЭГ-винилсульфон намного более реакционноспособен с тиоловыми группами, чем с аминовыми группами, а это свидетельствует о том, что присоединение ПЭГ-винилсульфона к белку, содержащему как цистеиновые, так и лизиновые группы, происходит преимущественно за счет взаимодействия с цистеином. Поскольку реакционная способность с аминогруппами идентична реакционной способности с иминогруппами, реакционная способность гистидиновых подзвеньев должна быть также намного меньше реакционной способности с цистеиновыми подзвеньями. Кроме того, селективность в отношении тиоловых групп очевиднее при пониженных значениях pH в случае ПЭГ-хлорэтилсульфона и ПЭГ-винилсульфона, хотя реакции ПЭГ-хлорэтилсульфона оказываются несколько более замедленными.
Применимость многих ПЭГ-производных ограничена, так как они быстро взаимодействуют с водой, препятствуя тем самым попыткам присоединить это производное к молекулам и поверхностям в водных условиях. Нижеприведенный пример 3 показывает, что ПЭГ-винилсульфон и ПЭГ-хлорэтилсульфон обладают стабильностью в воде.
Пример 3: Гидролитическая стабильность
ПЭГ-винилсульфон растворяли в тяжелой воде, в окиси дейтерия D2O, и вели наблюдения с помощью ЯМР-анализа. Реакции не происходило. В тяжелой воде, в которую добавляли боратный буфер до pH 9,0, раствор ПЭГ-хлорэтилсульфона образовывал ПЭГ-винилсульфон. Наблюдения посредством ЯМР-анализа показали, что после образования ПЭГ-винилсульфон оставался стабильным в тяжелой воде в течение трех дней.
ПЭГ-хлорэтилсульфон остается в воде стабильным до тех пор, пока раствор не становится основным, после чего он превращается в винилсульфон. Конверсия в винилсульфон продемонстрирована растворением ПЭГ-хлорэтилсульфона в воде при pH 7 и в боратном буфере при pH 9. ПЭГ-производное экстрагируют хлористым метиленом. Удаление хлористого метилена с последующим ЯМР-анализом показали, что ПЭГ- хлорэтилсульфон стабилен при нейтральном pH 7,0 и взаимодействует с основанием с образованием ПЭГ-винилсульфона.
Винилсульфон стабилен в воде в течение нескольких дней даже при щелочных значениях pH. Высокие гидролитическая стабильность и тиолспецифическая реакционная способность ПЭГ-винилсульфона означают, что ПЭГ-винилсульфон и его предшественник могут быть использованы для модификации молекул и поверхностей в водных условиях, как показано в нижеприведенном примере 4.
Пример 4: Конъюгирование с белком
Модификацию белка демонстрировали присоединением ПЭГ-производного к бычьему сывороточному альбумину (БСА) двумя различными методами. БСА представляет собой белок. Природный немодифицированный БСА включает цистеиновые группы, которые не содержат тиоловых групп. Цистеиновые звенья связаны как дисульфидные мостики, S-S.
В первом методе в течение 24 ч в 0,1 М боратном буфере при pH 9,5 и комнатной температуре проводили взаимодействие м-ПЭГ-винилсульфона с молекулярной массой 5000 с немодифицированным БСА. Раствор содержал 1 мг БСА и 1 мг м-ПЭГ-винилсульфона с молекулярной массой 5000 на каждый миллилитр раствора. Результаты использования модельных соединений примера 2 показали, что лизиновые подзвенья (и, возможно, гистидиновые подзвенья) должны быть модифицированы в таких относительно щелочных условиях и в отсутствии свободных тиоловых групп, доступных для взаимодействия.
Присоединение к лизиновым подзвеньям демонстрировали двумя путями. Во-первых, хроматография с вытеснением по размерам показала, что молекулярная масса белка увеличивалась приблизительно на 50%, что указывало, таким образом, на присоединение к белку примерно 10 молекул ПЭГ. Во-вторых, анализ с флуоресцамином показал, что число лизиновых групп в молекуле БСА уменьшалось приблизительно на десять.
Во втором методе БСА обрабатывали трибутилфосфином для восстановления дисульфидных связей S-S до тиоловых групп, -SH, которые доступны для взаимодействия. Затем модифицированный БСА при pH 8,0 и комнатной температуре в 0,1 М фосфатном буфере обрабатывали в течение 1 ч ПЭГ-хлорэтилсульфоном. Раствор содержал 1 мг модифицированного БСА и 1 мг м-ПЭГ-хлорэтилсульфона с молекулярной массой 5000 на миллилитр раствора. Результаты показали, что лизиновые группы в таких условиях оказывались нереакционноспособными. Однако тиоловые группы проявляли реакционную способность.
Присоединение ПЭГ к белку демонстрировали хроматографией с вытеснением по размерам, которая показала увеличение молекулярной массы белка приблизительно на 25%. Анализ с флуоресцамином указывал на отсутствие изменений числа лизиновых подзвеньев в белке, подтверждая таким образом, что присоединения ПЭГ к лизиновым подзвеньям не происходило. Тем самым подтверждалось замещение тиоловых групп.
Заявляемое изобретение описано на примере конкретных вариантов его выполнения. Однако вышеприведенное описание не следует рассматривать как ограничивающее объем изобретения приведенными в качестве примеров вариантами выполнения, и для любого специалиста в данной области техники должно быть очевидно, что в них можно вносить изменения, не выходя при этом за существо и объем изобретения, которое описано выше. Напротив, изобретение включает все варианты, модификации и эквиваленты, которые могут подпадать под фактический объем изобретения, определяемый прилагаемой формулой изобретения.

Claims (22)

1. Водорастворимый гидролитически стабильный активированный полимер, содержащий по крайней мере один активный сульфоновый остаток, присоединенный к полимеру, выбранному из группы, состоящей из полиалкиленоксидов, полиоксиэтилированных полиолов и полиолефиновых спиртов, где указанный по крайней мере один активный сульфоновый остаток является а) активным этилсульфоновым остатком; б) SO2-CH2-CH2-X, где Х обозначает галоген; в) винилсульфоновой группой, происходящей из активного этилсульфонового остатка; г) CO-NH-CH2-CН2-SO2-CH=CH2; д) NH-CO-CH2-CH2-SO2-CH=CH2.
2. Водорастворимый полимер по п.1, отличающийся тем, что полимер обладает гантельной структурой, включающей сульфоновый активный остаток по меньшей мере на одном конце главной полимерной цепи и активный остаток, который может быть таким же или отличным от указанного активного остатка на противоположном конце главной полимерной цепи.
3. Водорастворимый полимер по п.2, отличающийся тем, что включает другой активный остаток на противоположном конце главной полимерной цепи, который реакционноспособен в отношении аминовых остатков.
4. Водорастворимый полимер по п.1, отличающийся тем, что по меньшей мере один активный сульфоновый остаток способен образовывать связь с реакционноспособным остатком на поверхности биологически активной молекулы.
5. Водорастворимый полимер по п.4, отличающийся тем, что реакционноспособный остаток представляет собой тиоловый остаток.
6. Водорастворимый полимер по п.1, отличающийся тем, что имеет формулу
R-(OCH2CH2)n-Y
где n составляет 5-3000;
Y обозначает группу, выбранную из -SO2-CH=CH2, и -SO2-CH2-CH2-X, где Х обозначает галоген, или производные этой группы;
R выбирают из группы, состоящей из НО-, Н3СО-, -SO2-CH=CH2 и -SO2-CH2-CH2-X, где Х обозначает галоген.
7. Водорастворимый полимер по п.1, отличающийся тем, что указанный полимер является полиэтиленгликолем.
8. Водорастворимый полимер по п.6, отличающийся тем, что R представляет собой остаток, взаимодействующий с аминовым остатком, представленный группой -Х-СН2-СН2-SO2-, где Х обозначает галоген.
9. Биологически активный конъюгат, состоящий из (а) одной, имеющей по крайней мере одну реакционноспособную тиоловую группу, или двух биологически активных молекул, по крайней мере одна из которых имеет реакционноспособную тиоловую группу, и (б) водорастворимого гидролитически стабильного активированного полимера, содержащего по крайней мере один активный сульфоновый остаток, присоединенный к полимеру, выбранному из группы, состоящей из полиалкиленоксидов, полиоксиэтилированных полиолов и полиолефиновых спиртов, где указанный по крайней мере один активный сульфоновый остаток является а) активным этилсульфоновым остатком; б) SO2-CH2-CH2-X, где Х обозначает галоген; в) винилсульфоновой группой, происходящей из активного этилсульфонового остатка; г) CO-NH-CH2-CН2-SO2-CH=CH2; д) NH-CO-CH2-CH2-SO2-CH=CH2.
10. Биологически активный конъюгат по п.9, отличающийся тем, что указанная биологически активная молекула является белком, имеющим цистеиновые группы.
11. Биологически активный конъюгат по п.10, отличающийся тем, что указанный конъюгат имеет следующую формулу
ПЭГ-SO2-CH2-CН2-S-W,
где W представляет собой биологически активную молекулу;
ПЭГ обозначает полиэтиленгликоль.
12. Биологически активный конъюгат по п.9, отличающийся тем, что указанный конъюгат включает: две биологически активные молекулы, по крайней мере одна из которых имеет реакционноспособный тиоловый остаток, а водорастворимый гидролитически стабильный активированный полимер представляет собой полимер с гантельной структурой, имеющий по крайней мере один концевой активный сульфоновый остаток, который образует связь с тиоловым остатком указанной биологически активной молекулы, а другая биологически активная молекула образует связь с другим активным остатком на указанном полимере.
13. Биологически активный конъюгат по п.12, отличающийся тем, что указанная биологически активная молекула выбрана из группы, включающей белки, фармацевтические вещества, клетки, витамины и их комбинации.
14. Биологически активный конъюгат по п.13, отличающийся тем, что указанный биологически активный конъюгат включает водорастворимый полимер, имеющий активный сульфоновый остаток, который селективен в отношении реакции с тиоловым остатком, и активный остаток, который селективен в отношении реакции с аминовым остатком, и два белка, причем первый белок, имеющий тиоловый остаток, который образует с сульфоновым остатком указанного полимера гидролитически стабильную связь, и второй белок, содержащий аминовый остаток, у которого аминовый остаток образует связь с другим активным остатком указанного полимера.
15. Биологически активный конъюгат по п.9, отличающийся тем, что указанный гидролитически стабильный биологически активный конъюгат является продуктом взаимодействия 1) по меньшей мере одной биологически активной молекулы формулы W-SH, где W представляет собой остаток биологически активной молекулы, а SH-представляет собой реакционноспособный тиоловый остаток, и 2) производного полиэтиленгликоля, активированного одним или несколькими сульфоновыми остатками и имеющего формулу
R-CH2-CH2-(OCH2CH2)n-Y,
где n составляет 5 - 3000;
Y обозначает -SO2-CH=CH2 или SO2-CH2-CH2-Х, где Х обозначает галоген;
значения R выбирают из группы, состоящей из НО-, Н3СО, Х-CH2-CH2-SO2-, где Х обозначает галоген, и СН2=СН-SO2-,
где реакционноспособный остаток присоединен к по меньшей мере одному активированному сульфоновому остатку.
16. Биологически активный конъюгат по п.15, отличающийся тем, что указанная биологически активная молекула является белком, а реакционноспособный тиоловый остаток содержится в цистеиновом остатке указанного белка.
17. Биологически активный конъюгат по п.15, отличающийся тем, что указанный конъюгат имеет следующую формулу:
R-CH2-CH2-(OCH2CH2)n-SO2-CH2-CH2-S-W,
где n составляет 5-3000;
значения R выбирают из группы, состоящей из НО- и Н3СО-;
W представляет собой остаток биологически активной молекулы.
18. Биологически активный конъюгат по п.15, отличающийся тем, что указанный конъюгат имеет следующую формулу:
W-S-CH2-CH2-SO2-CH2-CH2-(OCH2CH2)n-SO2-CH2-CH2-S-W,
где n составляет 5-3000;
W представляет собой остаток биологически активной молекулы.
19. Биологически активный конъюгат по п.15, отличающийся тем, что указанный конъюгат имеет следующую формулу:
R-CH2-CH2-(OCH2CH2)n-SO2-CH2-CH2-S-белок,
где n составляет 5-3000;
значения R выбирают из группы, состоящей из НО- и Н3СО-.
20. Биологически активный конъюгат по п.15, отличающийся тем, что указанный конъюгат имеет следующую формулу:
белок-S-CH2-CH2-SO2-CH2-CH2-(OCH2CH2)n-SO2-CH2-CH2-S-белок, где n составляет 5-3000.
21. Способ получения активированного полиэтиленгликоля, имеющего активную винилсульфоновую группу, предусматривающий взаимодействие активированного амином полиэтиленгликоля с молекулой, которая имеет сукцинимидильную активную эфирную единицу NHS-O2C на одном терминальном конце и винилсульфоновую единицу -SO2-CH=CH2 на другом конце, с получением:
ПЭГ-NH-CO-CH2-CH2-SO2-CH=CH2.
22. Способ получения активированного полиэтиленгликоля, имеющего активную винилсульфоновую группу, предусматривающий взаимодействие сукцинимидилового активного сложного эфира полиэтилегликоля с молекулой, которая имеет аминовую группу -NH2 на одном конце и винилсульфоновую группу -SO2-CH=CH2, с получением:
ПЭГ-СО-NH-CH2-CH2-SO2-CH=CH2.
RU96113123/04A 1993-11-12 1994-11-14 Водорастворимый гидролитически стабильный активированный полимер, способ получения активированного полиэтиленгликоля (варианты), биологически активный конъюгат RU2176253C2 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/151,481 US5446090A (en) 1993-11-12 1993-11-12 Isolatable, water soluble, and hydrolytically stable active sulfones of poly(ethylene glycol) and related polymers for modification of surfaces and molecules
US151.481 1993-11-12

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU96113123A RU96113123A (ru) 1998-09-27
RU2176253C2 true RU2176253C2 (ru) 2001-11-27

Family

ID=22538958

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU96113123/04A RU2176253C2 (ru) 1993-11-12 1994-11-14 Водорастворимый гидролитически стабильный активированный полимер, способ получения активированного полиэтиленгликоля (варианты), биологически активный конъюгат

Country Status (26)

Country Link
US (6) US5446090A (ru)
EP (2) EP0728155B1 (ru)
JP (1) JP3114998B2 (ru)
KR (1) KR100225746B1 (ru)
CN (1) CN1085689C (ru)
AT (1) ATE215577T1 (ru)
AU (1) AU687937B2 (ru)
BG (1) BG63399B1 (ru)
BR (1) BR9408048A (ru)
CA (1) CA2176203C (ru)
CZ (1) CZ295640B6 (ru)
DE (1) DE69430317T2 (ru)
DK (1) DK0728155T3 (ru)
EE (1) EE03448B1 (ru)
ES (1) ES2173943T3 (ru)
FI (1) FI117441B (ru)
HK (1) HK1042312A1 (ru)
HU (1) HU225649B1 (ru)
NO (1) NO315377B1 (ru)
NZ (1) NZ276313A (ru)
PL (1) PL180149B1 (ru)
RO (2) RO118434B1 (ru)
RU (1) RU2176253C2 (ru)
SK (1) SK284527B6 (ru)
UA (1) UA58481C2 (ru)
WO (1) WO1995013312A1 (ru)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2362807C2 (ru) * 2002-06-21 2009-07-27 Ново Нордиск Хелт Кэр Аг Конъюгат полипептида фактора vii, способ его получения, его применение и содержащая его фармацевтическая композиция
RU2401283C2 (ru) * 2005-02-04 2010-10-10 Энзон Фармасьютикалз, Инк. Способ получения полимерных конъюгатов
RU2441036C1 (ru) * 2010-09-30 2012-01-27 Общество с ограниченной ответственностью Научно-производственное объединение "Перспектива" (ООО НПО "Перспектива") Способ получения активированного полиэтиленоксида

Families Citing this family (456)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6143866A (en) * 1989-07-18 2000-11-07 Amgen, Inc. Tumor necrosis factor (TNF) inhibitor and method for obtaining the same
US6552170B1 (en) * 1990-04-06 2003-04-22 Amgen Inc. PEGylation reagents and compounds formed therewith
US6057287A (en) 1994-01-11 2000-05-02 Dyax Corp. Kallikrein-binding "Kunitz domain" proteins and analogues thereof
US20010055581A1 (en) 1994-03-18 2001-12-27 Lawrence Tamarkin Composition and method for delivery of biologically-active factors
US5583114A (en) 1994-07-27 1996-12-10 Minnesota Mining And Manufacturing Company Adhesive sealant composition
USRE38827E1 (en) 1994-07-27 2005-10-11 3M Innovative Properties Company Adhesive sealant composition
US5672662A (en) * 1995-07-07 1997-09-30 Shearwater Polymers, Inc. Poly(ethylene glycol) and related polymers monosubstituted with propionic or butanoic acids and functional derivatives thereof for biotechnical applications
WO1997028828A1 (en) 1996-02-09 1997-08-14 Amgen Boulder Inc. Composition comprising interleukin-1 inhibitor and controlled release polymer
US5747639A (en) * 1996-03-06 1998-05-05 Amgen Boulder Inc. Use of hydrophobic interaction chromatography to purify polyethylene glycols
TW555765B (en) * 1996-07-09 2003-10-01 Amgen Inc Low molecular weight soluble tumor necrosis factor type-I and type-II proteins
WO1998012274A1 (en) * 1996-09-23 1998-03-26 Chandrashekar Pathak Methods and devices for preparing protein concentrates
US8003705B2 (en) * 1996-09-23 2011-08-23 Incept Llc Biocompatible hydrogels made with small molecule precursors
AU4981897A (en) 1996-10-15 1998-05-11 Navix, Inc. Stabilized conjugates of uncomplexed subunits of multimeric proteins
CA2273852C (en) 1996-12-06 2009-09-29 Amgen Inc. Combination therapy using an il-1 inhibitor for treating il-1 mediated diseases
ATE247974T1 (de) 1996-12-06 2003-09-15 Amgen Inc Kombinationtherapie mit einem tnf-bindendem protein zür behandlung von durch tnf verursachten erkrangungen
US6743248B2 (en) 1996-12-18 2004-06-01 Neomend, Inc. Pretreatment method for enhancing tissue adhesion
US6371975B2 (en) 1998-11-06 2002-04-16 Neomend, Inc. Compositions, systems, and methods for creating in situ, chemically cross-linked, mechanical barriers
US20030191496A1 (en) * 1997-03-12 2003-10-09 Neomend, Inc. Vascular sealing device with microwave antenna
US20040176801A1 (en) * 1997-03-12 2004-09-09 Neomend, Inc. Pretreatment method for enhancing tissue adhesion
AU7282698A (en) * 1997-05-15 1998-12-08 Theratech, Inc. Targeted delivery to t lymphocytes
US6284246B1 (en) 1997-07-30 2001-09-04 The Procter & Gamble Co. Modified polypeptides with high activity and reduced allergenicity
US6251866B1 (en) 1997-08-05 2001-06-26 Watson Laboratories, Inc. Conjugates targeted to the interleukin-2 receptor
US6168784B1 (en) 1997-09-03 2001-01-02 Gryphon Sciences N-terminal modifications of RANTES and methods of use
US6129928A (en) * 1997-09-05 2000-10-10 Icet, Inc. Biomimetic calcium phosphate implant coatings and methods for making the same
US6407218B1 (en) * 1997-11-10 2002-06-18 Cytimmune Sciences, Inc. Method and compositions for enhancing immune response and for the production of in vitro mabs
US7229841B2 (en) * 2001-04-30 2007-06-12 Cytimmune Sciences, Inc. Colloidal metal compositions and methods
US6066673A (en) * 1998-03-12 2000-05-23 The Procter & Gamble Company Enzyme inhibitors
CA2323048C (en) * 1998-03-12 2006-10-10 Shearwater Polymers, Inc. Poly(ethylene glycol) derivatives with proximal reactive groups
US6495136B1 (en) 1998-03-26 2002-12-17 The Procter & Gamble Company Proteases having modified amino acid sequences conjugated to addition moieties
BR9909130A (pt) 1998-03-26 2000-12-19 Procter & Gamble Variantes de protease de serina tendo substituições de amino-ácido
US6908757B1 (en) 1998-03-26 2005-06-21 The Procter & Gamble Company Serine protease variants having amino acid deletions and substitutions
US6632457B1 (en) * 1998-08-14 2003-10-14 Incept Llc Composite hydrogel drug delivery systems
US6458147B1 (en) 1998-11-06 2002-10-01 Neomend, Inc. Compositions, systems, and methods for arresting or controlling bleeding or fluid leakage in body tissue
US6994686B2 (en) * 1998-08-26 2006-02-07 Neomend, Inc. Systems for applying cross-linked mechanical barriers
DE69914611T2 (de) * 1998-08-28 2004-12-23 Gryphon Therapeutics, Inc., South San Francisco Verfahren zur herstellung von polyamidketten von genauer länge und deren konjugate mit proteinen
US6551613B1 (en) * 1998-09-08 2003-04-22 Alza Corporation Dosage form comprising therapeutic formulation
AU743363B2 (en) 1998-09-22 2002-01-24 Procter & Gamble Company, The Personal care compositions containing active proteins tethered to a water insoluble substrate
US6660843B1 (en) * 1998-10-23 2003-12-09 Amgen Inc. Modified peptides as therapeutic agents
US6830756B2 (en) * 1998-11-06 2004-12-14 Neomend, Inc. Systems, methods, and compositions for achieving closure of vascular puncture sites
US6899889B1 (en) * 1998-11-06 2005-05-31 Neomend, Inc. Biocompatible material composition adaptable to diverse therapeutic indications
US7279001B2 (en) * 1998-11-06 2007-10-09 Neomend, Inc. Systems, methods, and compositions for achieving closure of vascular puncture sites
US6949114B2 (en) 1998-11-06 2005-09-27 Neomend, Inc. Systems, methods, and compositions for achieving closure of vascular puncture sites
EP1137373A4 (en) * 1998-12-04 2004-05-19 Chandrashekhar P Pathak BIOCOMPATIBLE, CROSSLINKED POLYMERS
EP2311895B1 (en) 1999-02-01 2017-04-12 Eidgenössische Technische Hochschule Zürich Biomaterials formed by nucleophilic addition reaction to conjugated unsaturated groups
US6958212B1 (en) * 1999-02-01 2005-10-25 Eidgenossische Technische Hochschule Zurich Conjugate addition reactions for the controlled delivery of pharmaceutically active compounds
WO2000078285A1 (en) * 1999-06-18 2000-12-28 University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey Controlled release of therapeutics by in-situ entrapment by matrix cross-linking
MXPA02000842A (es) 1999-07-22 2002-07-30 Procter & Gamble Conjugados de proteasa que tienen sitios de corte protegidos estericamente.
JP2003505067A (ja) 1999-07-22 2003-02-12 ザ、プロクター、エンド、ギャンブル、カンパニー 特定のエピトープ領域にアミノ酸欠失及び置換を有するサブチリシンプロテアーゼの変異体
US6946128B1 (en) 1999-07-22 2005-09-20 The Procter & Gamble Company Protease conjugates having sterically protected epitope regions
WO2001007578A2 (en) 1999-07-22 2001-02-01 The Procter & Gamble Company Subtilisin protease variants having amino acid substitutions in defined epitope regions
US7008635B1 (en) 1999-09-10 2006-03-07 Genzyme Corporation Hydrogels for orthopedic repair
US6303119B1 (en) 1999-09-22 2001-10-16 The Procter & Gamble Company Personal care compositions containing subtilisin enzymes bound to water insoluble substrates
US7074878B1 (en) * 1999-12-10 2006-07-11 Harris J Milton Hydrolytically degradable polymers and hydrogels made therefrom
US6348558B1 (en) 1999-12-10 2002-02-19 Shearwater Corporation Hydrolytically degradable polymers and hydrogels made therefrom
HUP0203751A3 (en) 2000-01-10 2005-01-28 Maxygen Holdings Ltd Redwood C G-csf conjugates
WO2001058935A2 (en) 2000-02-11 2001-08-16 Maxygen Aps FACTOR VII OR VIIa-LIKE MOLECULES
US6527432B2 (en) 2000-05-15 2003-03-04 Tecan Trading Ag Bidirectional flow centrifugal microfluidic devices
NZ522847A (en) * 2000-05-16 2004-11-26 Bolder Biotechnology Inc Methods for refolding proteins containing free cysteine residues
US7291673B2 (en) * 2000-06-02 2007-11-06 Eidgenossiche Technische Hochschule Zurich Conjugate addition reactions for the controlled delivery of pharmaceutically active compounds
MXPA03000310A (es) * 2000-07-12 2004-12-13 Gryphon Therapeutics Inc Quimiocinas sinteticas bioactivas, modificadas con polimeros y metodos para su elaboracion y uso.
US20030191291A1 (en) * 2000-09-08 2003-10-09 Kochendoerfer Gerd G. Synthetic erythropoiesis stimulating proteins
US7118737B2 (en) * 2000-09-08 2006-10-10 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Polymer-modified synthetic proteins
CA2426692C (en) * 2000-10-19 2011-01-25 Eidgenossische Technische Hochschule Zurich Block copolymers for multifunctional self-assembled systems
EP2316490A3 (en) 2000-10-31 2012-02-01 PR Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for enhanced delivery of bioactive molecules
TW593427B (en) * 2000-12-18 2004-06-21 Nektar Therapeutics Al Corp Synthesis of high molecular weight non-peptidic polymer derivatives
US7053150B2 (en) 2000-12-18 2006-05-30 Nektar Therapeutics Al, Corporation Segmented polymers and their conjugates
EP1366075B1 (en) 2001-02-27 2009-05-27 Maxygen Aps New interferon beta-like molecules
MXPA03008498A (es) * 2001-03-20 2005-06-30 Univ Zuerich Procesamiento en dos fases de polimeros termosensibles para uso como biomateriales.
US6538104B2 (en) * 2001-04-27 2003-03-25 Medical Analysis Systems, Inc. Stabilization of cardiac troponin I subunits and complexes
US20040077835A1 (en) * 2001-07-12 2004-04-22 Robin Offord Chemokine receptor modulators, production and use
ATE376020T1 (de) * 2001-08-22 2007-11-15 Bioartificial Gel Technologies Inc Verfahren zu herstellung von aktivierten polyethylenglykolen
US8008252B2 (en) 2001-10-10 2011-08-30 Novo Nordisk A/S Factor VII: remodeling and glycoconjugation of Factor VII
US7795210B2 (en) 2001-10-10 2010-09-14 Novo Nordisk A/S Protein remodeling methods and proteins/peptides produced by the methods
US7173003B2 (en) 2001-10-10 2007-02-06 Neose Technologies, Inc. Granulocyte colony stimulating factor: remodeling and glycoconjugation of G-CSF
US7157277B2 (en) 2001-11-28 2007-01-02 Neose Technologies, Inc. Factor VIII remodeling and glycoconjugation of Factor VIII
US7214660B2 (en) 2001-10-10 2007-05-08 Neose Technologies, Inc. Erythropoietin: remodeling and glycoconjugation of erythropoietin
EP2292273A3 (en) 2001-10-10 2011-11-23 BioGeneriX AG Remodeling and glycoconjugation of peptides
US7056500B2 (en) 2001-10-18 2006-06-06 Nektar Therapeutics Al, Corporation Polymer conjugates of opioid antagonists
US8013134B2 (en) * 2001-11-23 2011-09-06 Olink Ab Kit for proximity probing with multivalent proximity probes
PT3025726T (pt) * 2002-01-18 2020-01-09 Biogen Ma Inc Compostos do polímero polialquileno e utilizações dos mesmos
US20030179692A1 (en) * 2002-03-19 2003-09-25 Yoshitaka Ohotomo Storage medium
US8282912B2 (en) * 2002-03-22 2012-10-09 Kuros Biosurgery, AG Compositions for tissue augmentation
PT2298278E (pt) 2002-06-07 2016-02-25 Dyax Corp Prevenção e redução da perda de sangue e resposta inflamatória
US7153829B2 (en) 2002-06-07 2006-12-26 Dyax Corp. Kallikrein-inhibitor therapies
DE60336555D1 (de) 2002-06-21 2011-05-12 Novo Nordisk Healthcare Ag Pegylierte glykoformen von faktor vii
US7034127B2 (en) * 2002-07-02 2006-04-25 Genzyme Corporation Hydrophilic biopolymer-drug conjugates, their preparation and use
MXPA05002477A (es) * 2002-09-05 2005-10-19 Gen Hospital Corp Asialo-interferones y el tratamiento de cancer de higado.
MXPA05002476A (es) * 2002-09-05 2005-10-19 Gi Company Inc Asialo-interferones modificados y sus usos.
US7569214B2 (en) 2002-09-09 2009-08-04 Nektar Therapeutics Al, Corporation Method for preparing water-soluble polymer derivatives bearing a terminal carboxylic acid
CN1312279C (zh) * 2002-11-07 2007-04-25 连云港新阳医药有限公司 聚乙二醇修饰门冬酰胺酶的制备方法
RS20050501A (sr) * 2002-12-26 2007-08-03 Mountain View Pharmaceuticals Inc., Polimerni konjugati citokina,hemokina,faktora rasta, polipeptidnih hormona i njihovih antagonista sa očuvanom aktivnošću vezivanja receptora
GEP20084486B (en) * 2002-12-26 2008-09-25 Mountain View Pharmaceuticals Polymer conjugates of interferon-beta with enhanced biological potency
US8034900B2 (en) * 2002-12-30 2011-10-11 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Water-soluble thioester and selenoester compounds and methods for making and using the same
US20050130892A1 (en) * 2003-03-07 2005-06-16 Xencor, Inc. BAFF variants and methods thereof
US20050221443A1 (en) * 2003-01-06 2005-10-06 Xencor, Inc. Tumor necrosis factor super family agonists
US7910661B2 (en) * 2003-01-06 2011-03-22 Nektar Therapeutics Thiol-selective water-soluble polymer derivatives
US7553930B2 (en) * 2003-01-06 2009-06-30 Xencor, Inc. BAFF variants and methods thereof
US20060014248A1 (en) * 2003-01-06 2006-01-19 Xencor, Inc. TNF super family members with altered immunogenicity
CN1723232B (zh) * 2003-01-06 2012-08-22 尼克塔治疗公司 巯基选择性水溶性聚合物衍生物
EP1596887B1 (en) 2003-02-26 2022-03-23 Nektar Therapeutics Polymer-factor viii moiety conjugates
US20090123367A1 (en) * 2003-03-05 2009-05-14 Delfmems Soluble Glycosaminoglycanases and Methods of Preparing and Using Soluble Glycosaminoglycanases
US20060104968A1 (en) 2003-03-05 2006-05-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminogly ycanases
US7871607B2 (en) 2003-03-05 2011-01-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminoglycanases
EP2330213A1 (en) 2003-03-05 2011-06-08 Halozyme, Inc. Soluble hyaluronidase glycoprotein (sHASEGP), process for preparing the same, uses and pharmaceutical compositions comprising thereof
AU2004221824B2 (en) 2003-03-14 2009-08-27 Ratiopharm Gmbh Branched water-soluble polymers and their conjugates
US7587286B2 (en) * 2003-03-31 2009-09-08 Xencor, Inc. Methods for rational pegylation of proteins
US7610156B2 (en) * 2003-03-31 2009-10-27 Xencor, Inc. Methods for rational pegylation of proteins
US7642340B2 (en) 2003-03-31 2010-01-05 Xencor, Inc. PEGylated TNF-α variant proteins
US8791070B2 (en) 2003-04-09 2014-07-29 Novo Nordisk A/S Glycopegylated factor IX
CA2522345A1 (en) 2003-04-09 2004-11-18 Neose Technologies, Inc. Glycopegylation methods and proteins/peptides produced by the methods
US9040664B2 (en) 2003-04-11 2015-05-26 Antriabio, Inc. Materials and methods for preparing protein-polymer conjugates
EP1613274B1 (en) 2003-04-15 2010-03-03 GlaxoSmithKline LLC Human il-18 substitution mutants and their conjugates
US7932364B2 (en) 2003-05-09 2011-04-26 Novo Nordisk A/S Compositions and methods for the preparation of human growth hormone glycosylation mutants
US20040249119A1 (en) * 2003-06-05 2004-12-09 Fox Martin Edward Novel mPEG propionaldehyde precursor
GB0316294D0 (en) 2003-07-11 2003-08-13 Polytherics Ltd Conjugated biological molecules and their preparation
PL1656410T3 (pl) * 2003-07-22 2010-08-31 Nektar Therapeutics Sposób wytwarzania sfunkcjonalizowanych polimerów z polimerycznych alkoholi
WO2005012484A2 (en) 2003-07-25 2005-02-10 Neose Technologies, Inc. Antibody-toxin conjugates
CA3050564A1 (en) * 2003-08-29 2005-03-10 Dyax Corp. Poly-pegylated protease inhibitors
CN1852740B (zh) 2003-09-17 2011-05-11 耐科塔医药公司 多支链聚合物的药物前体
EP1675620B1 (en) * 2003-10-09 2019-05-08 Ambrx, Inc. Polymer derivatives
EP1675871A2 (en) 2003-10-10 2006-07-05 Xencor Inc. Protein based tnf-alpha variants for the treatment of tnf-alpha related disorders
DE602004029173D1 (de) 2003-10-10 2010-10-28 Novo Nordisk As Il-21-derivate
US7524813B2 (en) * 2003-10-10 2009-04-28 Novo Nordisk Health Care Ag Selectively conjugated peptides and methods of making the same
ES2428358T3 (es) * 2003-10-17 2013-11-07 Novo Nordisk A/S Terapia de combinación
US8637650B2 (en) 2003-11-05 2014-01-28 Genovoxx Gmbh Macromolecular nucleotide compounds and methods for using the same
US20080305992A1 (en) 2003-11-24 2008-12-11 Neose Technologies, Inc. Glycopegylated erythropoietin
NZ547168A (en) * 2003-11-24 2010-05-28 Biogenerix Ag Glycopegylated erythropoietin
US8633157B2 (en) 2003-11-24 2014-01-21 Novo Nordisk A/S Glycopegylated erythropoietin
JP2008504216A (ja) 2003-12-02 2008-02-14 サイトイミューン サイエンシズ インコーポレイテッド モノクローナル抗体の生成のための方法および組成物
US7956032B2 (en) 2003-12-03 2011-06-07 Novo Nordisk A/S Glycopegylated granulocyte colony stimulating factor
US20060040856A1 (en) * 2003-12-03 2006-02-23 Neose Technologies, Inc. Glycopegylated factor IX
NZ548123A (en) 2004-01-08 2010-05-28 Novo Nordisk As O-linked glycosylation of peptides
JP4833862B2 (ja) * 2004-01-28 2011-12-07 サイトイミューン サイエンシズ インコーポレイテッド 官能化コロイド金属組成物および方法
BRPI0507169A (pt) 2004-02-02 2007-06-26 Ambrx Inc polipeptìdeos do hormÈnio de crescimento humano modificados e seu usos
KR100580644B1 (ko) * 2004-02-16 2006-05-16 삼성전자주식회사 생물분자를 고체 기판상에 비공유적으로 고정화 하는 방법및 그에 의하여 제조되는 마이크로어레이
US7351787B2 (en) * 2004-03-05 2008-04-01 Bioartificial Gel Technologies, Inc. Process for the preparation of activated polyethylene glycols
EP1725262B1 (en) * 2004-03-15 2021-05-26 Nektar Therapeutics Polymer-based compositions and conjugates of hiv entry inhibitors
WO2005091944A2 (en) * 2004-03-17 2005-10-06 Eli Lilly And Company Glycol linked fgf-21 compounds
JP2008505853A (ja) 2004-04-13 2008-02-28 クインテセンス バイオサイエンシーズ インコーポレーティッド 細胞傷害性薬剤としての非天然のリボヌクレアーゼ複合体
EP1771205B1 (en) 2004-06-18 2016-10-26 Ambrx, Inc. Novel antigen-binding polypeptides and their uses
WO2006010143A2 (en) 2004-07-13 2006-01-26 Neose Technologies, Inc. Branched peg remodeling and glycosylation of glucagon-like peptide-1 [glp-1]
JP2008506703A (ja) 2004-07-14 2008-03-06 ユニバーシティ オブ ユタ リサーチ ファウンデーション ネトリン関連化合物および用途
JP2008507280A (ja) * 2004-07-21 2008-03-13 アンブレツクス・インコーポレイテツド 非天然コードアミノ酸を用いた生合成ポリペプチド
WO2006031811A2 (en) 2004-09-10 2006-03-23 Neose Technologies, Inc. Glycopegylated interferon alpha
WO2006034455A2 (en) 2004-09-23 2006-03-30 Vasgene Therapeutics, Inc. Polipeptide compounds for inhibiting angiogenesis and tumor growth
US7235530B2 (en) 2004-09-27 2007-06-26 Dyax Corporation Kallikrein inhibitors and anti-thrombolytic agents and uses thereof
US7612153B2 (en) * 2004-10-25 2009-11-03 Intezyne Technologies, Inc. Heterobifunctional poly(ethylene glycol) and uses thereof
EP1814573B1 (en) 2004-10-29 2016-03-09 ratiopharm GmbH Remodeling and glycopegylation of fibroblast growth factor (fgf)
JP5243041B2 (ja) * 2004-12-21 2013-07-24 ネクター セラピューティックス 安定化ポリマーチオール試薬
JP2008525032A (ja) 2004-12-22 2008-07-17 アンブレツクス・インコーポレイテツド 組換えヒト成長ホルモンを発現及び精製するための方法
JP4990792B2 (ja) * 2004-12-22 2012-08-01 アンブレツクス・インコーポレイテツド アミノアシル−ｔＲＮＡシンテターゼの組成物およびこの使用
BRPI0519170A8 (pt) * 2004-12-22 2018-05-08 Ambrx Inc formulações de hormônio de crescimento humano que compreendem um aminoácido não naturalmente codificado
CA2594557C (en) 2004-12-22 2016-04-26 Ambrx, Inc. Modified human growth hormone
NZ555308A (en) 2004-12-22 2010-10-29 Ambrx Inc Compositions containing, methods involving, and uses of non-natural amino acids and polypeptides
CA2593682C (en) 2005-01-10 2016-03-22 Neose Technologies, Inc. Glycopegylated granulocyte colony stimulating factor
US7402730B1 (en) 2005-02-03 2008-07-22 Lexicon Pharmaceuticals, Inc. Knockout animals manifesting hyperlipidemia
AU2006213822B2 (en) * 2005-02-09 2011-05-26 Covidien Lp Synthetic sealants
EP1868652A2 (en) 2005-04-05 2007-12-26 Istituto di Richerche di Biologia Molecolare P. Angeletti S.p.A. Method for shielding functional sites or epitopes on proteins
US9187546B2 (en) 2005-04-08 2015-11-17 Novo Nordisk A/S Compositions and methods for the preparation of protease resistant human growth hormone glycosylation mutants
US8273339B2 (en) * 2005-04-12 2012-09-25 Nektar Therapeutics Polymer-based compositions and conjugates of antimicrobial agents
AU2006237329B2 (en) 2005-04-18 2012-04-12 Novo Nordisk A/S IL-21 variants
US7833979B2 (en) * 2005-04-22 2010-11-16 Amgen Inc. Toxin peptide therapeutic agents
SI1881850T1 (sl) 2005-05-13 2011-01-31 Lilly Co Eli Glp-1 pegilirane spojine
US20080255026A1 (en) * 2005-05-25 2008-10-16 Glycopegylated Factor 1X Glycopegylated Factor Ix
WO2006127910A2 (en) 2005-05-25 2006-11-30 Neose Technologies, Inc. Glycopegylated erythropoietin formulations
WO2007008300A2 (en) * 2005-05-31 2007-01-18 ECOLE POLYTECHNIQUE FéDéRALE DE LAUSANNE Triblock copolymers for cytoplasmic delivery of gene-based drugs
KR20080026135A (ko) * 2005-06-03 2008-03-24 암브룩스, 인코포레이티드 개선된 인간 인터페론 분자 및 이의 용도
EA015890B1 (ru) 2005-06-14 2011-12-30 Тайджен Байотекнолоджи Ко. Лтд. Производные пиримидина
US8193206B2 (en) 2005-06-14 2012-06-05 Taigen Biotechnology Co., Ltd. Pyrimidine compounds
US8633300B2 (en) 2005-06-17 2014-01-21 Novo Nordisk Healthcare Ag Selective reduction and derivatization of engineered proteins comprising at least one non-native cysteine
EP1926768B1 (en) 2005-07-18 2011-09-14 Nektar Therapeutics Branched functionalized polymers using branched polyol cores
US8008453B2 (en) 2005-08-12 2011-08-30 Amgen Inc. Modified Fc molecules
WO2007021297A1 (en) * 2005-08-18 2007-02-22 Ambrx, Inc. COMPOSITIONS OF tRNA AND USES THEREOF
US20070105755A1 (en) 2005-10-26 2007-05-10 Neose Technologies, Inc. One pot desialylation and glycopegylation of therapeutic peptides
US20090048440A1 (en) 2005-11-03 2009-02-19 Neose Technologies, Inc. Nucleotide Sugar Purification Using Membranes
HRP20110404T1 (hr) * 2005-11-08 2011-08-31 Ambrx Ubrzivači za modifikaciju ne-prirodnih aminokiselina i polipeptida ne-prirodnih aminokiselina
EP1951890A4 (en) * 2005-11-16 2009-06-24 Ambrx Inc PROCESSES AND COMPOSITIONS WITH NON-NATURAL AMINO ACIDS
KR101423898B1 (ko) * 2005-12-14 2014-07-28 암브룩스, 인코포레이티드 비-천연 아미노산 및 폴리펩티드를 함유하는 조성물, 비-천연 아미노산 및 폴리펩티드를 포함하는 방법, 및 비-천연 아미노산 및 폴리펩티드의 용도
WO2007075534A2 (en) 2005-12-16 2007-07-05 Nektar Therapeutics Al, Corporation Polymer conjugates of glp-1
US7743730B2 (en) * 2005-12-21 2010-06-29 Lam Research Corporation Apparatus for an optimized plasma chamber grounded electrode assembly
CA2841386A1 (en) 2005-12-30 2007-07-12 Zensun (Shanghai) Science & Technology Limited Extended release of neuregulin for improved cardiac function
CA2637569C (en) * 2006-01-18 2013-01-08 Yuhua Li Pharmaceutical compositions with enhanced stability
EP2319542B1 (en) 2006-02-21 2018-03-21 Nektar Therapeutics Segmented degradable polymers and conjugates made therefrom
EP2004231A4 (en) 2006-04-07 2013-07-10 Nektar Therapeutics CONJUGATES OF ANTI-TNF-ALPHA ANTIBODY
EP2007804B1 (en) 2006-04-20 2014-06-18 Amgen, Inc Glp-1 compounds
US7560588B2 (en) 2006-04-27 2009-07-14 Intezyne Technologies, Inc. Poly(ethylene glycol) containing chemically disparate endgroups
AU2007253264A1 (en) 2006-05-24 2007-11-29 Novo Nordisk Health Care Ag Factor IX analogues having prolonged in vivo half life
US8840882B2 (en) * 2006-06-23 2014-09-23 Quintessence Biosciences, Inc. Modified ribonucleases
US8242179B2 (en) * 2006-06-23 2012-08-14 Surmodics, Inc. Hydrogel-based joint repair system and method
WO2008010991A2 (en) 2006-07-17 2008-01-24 Quintessence Biosciences, Inc. Methods and compositions for the treatment of cancer
CN101516388B (zh) 2006-07-21 2012-10-31 诺和诺德公司 通过o-联糖基化序列的肽的糖基化
KR20090060294A (ko) * 2006-09-08 2009-06-11 암브룩스, 인코포레이티드 변형된 인간 혈장 폴리펩티드 또는 Ｆｃ 스캐폴드 및 그의 용도
AU2007292892B9 (en) * 2006-09-08 2013-02-28 Ambrx, Inc. Hybrid suppressor tRNA for vertebrate cells
CN101511856B (zh) * 2006-09-08 2016-01-20 Ambrx公司 脊椎动物细胞中抑制因子trna的转录
US7985783B2 (en) 2006-09-21 2011-07-26 The Regents Of The University Of California Aldehyde tags, uses thereof in site-specific protein modification
US8969532B2 (en) 2006-10-03 2015-03-03 Novo Nordisk A/S Methods for the purification of polypeptide conjugates comprising polyalkylene oxide using hydrophobic interaction chromatography
WO2008060780A2 (en) * 2006-10-04 2008-05-22 Novo Nordisk A/S Glycerol linked pegylated sugars and glycopeptides
PE20081140A1 (es) * 2006-10-25 2008-09-22 Amgen Inc Agentes terapeuticos a base de peptidos derivados de toxinas
AU2007310777A1 (en) 2006-10-26 2008-05-02 Novo Nordisk A/S IL-21 variants
AU2007325838B2 (en) 2006-11-22 2013-09-19 Bristol-Myers Squibb Company Targeted therapeutics based on engineered proteins for tyrosine kinases receptors, including IGF-IR
MX2009005780A (es) 2006-11-30 2009-06-10 Nektar Therapeutics Al Corp Metodo para preparar un conjugado de polimeros.
ZA200904022B (en) 2006-12-08 2010-08-25 Lexicon Pharmaceuticals Inc Monoclonal antibodies against ANGPTL3
US8617531B2 (en) 2006-12-14 2013-12-31 Bolder Biotechnology, Inc. Methods of making proteins and peptides containing a single free cysteine
EP2117603A2 (en) 2006-12-19 2009-11-18 Bracco International B.V. Targeting and therapeutic compounds and gas-filled microvesicles comprising said compounds
JP5340956B2 (ja) 2006-12-20 2013-11-13 アーケマ・インコーポレイテッド ポリマーの封入および／または結合
WO2008088983A1 (en) 2007-01-18 2008-07-24 Eli Lilly And Company PEGYLATED Aβ FAB
US8889632B2 (en) 2007-01-31 2014-11-18 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Stabilized p53 peptides and uses thereof
EP2111228B1 (en) 2007-02-02 2011-07-20 Bristol-Myers Squibb Company 10Fn3 domain for use in treating diseases associated with inappropriate angiogenesis
US20090227689A1 (en) * 2007-03-05 2009-09-10 Bennett Steven L Low-Swelling Biocompatible Hydrogels
US20090227981A1 (en) * 2007-03-05 2009-09-10 Bennett Steven L Low-Swelling Biocompatible Hydrogels
CA2682147C (en) 2007-03-30 2017-08-08 Ambrx, Inc. Modified fgf-21 polypeptides and their uses
EP2144923B1 (en) 2007-04-03 2013-02-13 BioGeneriX AG Methods of treatment using glycopegylated g-csf
WO2008125655A1 (en) * 2007-04-13 2008-10-23 Kuros Biosurgery Ag Polymeric tissue sealant
CN101675071B (zh) * 2007-05-02 2014-06-18 Ambrx公司 经修饰干扰素β多肽和其用途
MX2009012609A (es) 2007-05-22 2009-12-07 Amgen Inc Composiciones y metodos para producir proteinas de fusion bioactivas.
WO2008154639A2 (en) 2007-06-12 2008-12-18 Neose Technologies, Inc. Improved process for the production of nucleotide sugars
US7968811B2 (en) * 2007-06-29 2011-06-28 Harley-Davidson Motor Company Group, Inc. Integrated ignition and key switch
US9125807B2 (en) * 2007-07-09 2015-09-08 Incept Llc Adhesive hydrogels for ophthalmic drug delivery
CN101361968B (zh) 2007-08-06 2011-08-03 健能隆医药技术（上海）有限公司 白介素-22在治疗脂肪肝中的应用
CN101820913A (zh) * 2007-08-09 2010-09-01 第一三共株式会社 在表达含死亡结构域的受体的细胞中诱导细胞凋亡的免疫脂质体
US8067028B2 (en) * 2007-08-13 2011-11-29 Confluent Surgical Inc. Drug delivery device
WO2009026334A2 (en) * 2007-08-21 2009-02-26 Genzyme Corporation Treatment with kallikrein inhibitors
US8207112B2 (en) 2007-08-29 2012-06-26 Biogenerix Ag Liquid formulation of G-CSF conjugate
US20110014118A1 (en) * 2007-09-21 2011-01-20 Lawrence Tamarkin Nanotherapeutic colloidal metal compositions and methods
JP2011520769A (ja) * 2007-09-21 2011-07-21 サイトイミューン サイエンシズ インコーポレイテッド ナノ治療コロイド金属組成物および方法
CA2702043A1 (en) * 2007-10-08 2009-04-16 Quintessence Biosciences, Inc. Compositions and methods for ribonuclease-based therapies
MX2010004400A (es) * 2007-10-23 2010-05-20 Nektar Therapeutics Polimeros de multiples brazos dirigidos a la hidroxiapatita y conjugados de estos.
WO2009062151A1 (en) 2007-11-08 2009-05-14 Cytimmune Sciences, Inc. Compositions and methods for generating antibodies
US20090123519A1 (en) * 2007-11-12 2009-05-14 Surmodics, Inc. Swellable hydrogel matrix and methods
CN101903439A (zh) * 2007-11-12 2010-12-01 因特拉迪格姆公司 杂双官能的聚乙二醇试剂
CA2703830A1 (en) 2007-11-20 2009-05-28 Ambrx, Inc. Modified insulin polypeptides and their uses
SG188143A1 (en) 2008-02-08 2013-03-28 Ambrx Inc Modified leptin polypeptides and their uses
US20130189239A1 (en) 2008-02-27 2013-07-25 Novo Nordisk A/S Conjugated Factor VIII Molecules
TWI395593B (zh) 2008-03-06 2013-05-11 Halozyme Inc 可活化的基質降解酵素之活體內暫時性控制
US20090226531A1 (en) * 2008-03-07 2009-09-10 Allergan, Inc. Methods and composition for intraocular delivery of therapeutic sirna
WO2009128917A2 (en) 2008-04-14 2009-10-22 Halozyme, Inc. Modified hyaluronidases and uses in treating hyaluronan-associated diseases and conditions
AU2008355098B2 (en) 2008-04-21 2012-11-15 Gpcr Therapeutics, Inc Heterocyclic compounds
TWI394580B (zh) 2008-04-28 2013-05-01 Halozyme Inc 超快起作用胰島素組成物
WO2009139905A2 (en) * 2008-05-16 2009-11-19 Nektar Therapeutics Conjugates of a cholinesterase moiety and a polymer
AR071874A1 (es) 2008-05-22 2010-07-21 Bristol Myers Squibb Co Proteinas de dominio de armazon basadas en fibronectina multivalentes
ES2560807T3 (es) * 2008-07-21 2016-02-22 Polytherics Limited Nuevos reactivos y procedimiento de conjugación de moléculas biológicas
EP2318029B1 (en) 2008-07-23 2017-11-01 Ambrx, Inc. Modified bovine g-csf polypeptides and their uses
KR101671537B1 (ko) 2008-08-11 2016-11-01 넥타르 테라퓨틱스 다분지형 중합체 알카노에이트 컨쥬게이트
US20110171164A1 (en) * 2008-09-19 2011-07-14 Nektar Therapeutics Polymer conjugates of glp-2-like peptides
EP2340046A2 (en) * 2008-09-19 2011-07-06 Nektar Therapeutics Polymer conjugates of ziconotide peptides
US20110171162A1 (en) * 2008-09-19 2011-07-14 Nektar Therapeutics Polymer conjugates of thymosin alpha 1 peptides
WO2010033204A2 (en) * 2008-09-19 2010-03-25 Nektar Therapeutics Polymer conjugates of c-peptides
EP2340047A1 (en) * 2008-09-19 2011-07-06 Nektar Therapeutics Polymer conjugates of kiss1 peptides
EP2344200A2 (en) * 2008-09-19 2011-07-20 Nektar Therapeutics Modified therapeutics peptides, methods of their preparation and use
EP2350118B1 (en) * 2008-09-19 2016-03-30 Nektar Therapeutics Carbohydrate-based drug delivery polymers and conjugates thereof
US20110165113A1 (en) * 2008-09-19 2011-07-07 Nektar Therapeutics Polymer conjugates of v681-like peptides
US20110171166A1 (en) * 2008-09-19 2011-07-14 Nektar Therapeutics Polymer conjugates of osteocalcin peptides
AU2009292651A1 (en) * 2008-09-19 2010-03-25 Nektar Therapeutics Polymer conjugates of AOD-like peptides
US20110206633A1 (en) * 2008-09-19 2011-08-25 Nektar Therapectics Polymer conjugates of cd-np peptides
WO2010033223A1 (en) * 2008-09-19 2010-03-25 Nektar Therapeutics Polymer conjugates of opioid growth factor peptides
EP2340045B1 (en) 2008-09-19 2017-04-12 Nektar Therapeutics Polymer conjugates of protegrin peptides
US8278418B2 (en) 2008-09-26 2012-10-02 Ambrx, Inc. Modified animal erythropoietin polypeptides and their uses
PE20110480A1 (es) 2008-09-26 2011-07-01 Ambrx Inc Microorganismos y vacunas dependientes de replicacion de aminoacidos no naturales
BRPI0920743A2 (pt) 2008-10-01 2016-09-20 Quintessence Biosciences Inc ribonucleases terapeuticas
WO2010056847A2 (en) 2008-11-13 2010-05-20 Taigen Biotechnology Co., Ltd. Lyophilization formulation
US9271929B2 (en) 2008-11-25 2016-03-01 École Polytechnique Fédérale De Lausanne (Epfl) Block copolymers and uses thereof
CN102307993B (zh) 2008-12-09 2014-06-25 哈洛齐梅公司 延长的可溶性ph20多肽及其用途
GB0823309D0 (en) * 2008-12-19 2009-01-28 Univ Bath Functionalising reagents and their uses
JP2013516389A (ja) * 2009-01-06 2013-05-13 ダイアックス コーポレーション カリクレイン阻害剤による粘膜炎治療
US20110318322A1 (en) 2009-01-12 2011-12-29 Nektar Therapeutics Conjugates of a Lysosomal Enzyme Moiety and a Water Soluble Polymer
JP5890182B2 (ja) 2009-02-12 2016-03-22 インセプト エルエルシー ヒドロゲルプラグによる薬物送達
US9005598B2 (en) 2009-03-04 2015-04-14 Polytherics Limited Conjugated proteins and peptides
US8067201B2 (en) * 2009-04-17 2011-11-29 Bristol-Myers Squibb Company Methods for protein refolding
DK3266463T3 (da) 2009-06-09 2024-01-08 Prolong Pharmaceuticals Llc Hæmoglobinsammensætninger
BR112012002709A2 (pt) 2009-08-05 2019-04-30 Pieris Ag formulações de liberação controlada de muteínas de lipocalina
PT2477603E (pt) 2009-09-17 2016-06-16 Baxalta Inc Co-formulação estável de hialuronidase e imunoglobulina e métodos para a sua utilização
WO2011050938A1 (de) 2009-10-26 2011-05-05 Genovoxx Gmbh Konjugate von nukleotiden und methoden zu deren anwendung
BR112012009801A8 (pt) 2009-10-30 2016-08-30 Cns Therapeutics Inc Polipeptídeo neurturina e variante de neurturina
EA201290541A1 (ru) 2009-12-21 2013-05-30 Амбркс, Инк. Модифицированные бычьи соматотропиновые полипептиды и их применение
JP2013515081A (ja) 2009-12-21 2013-05-02 アンブルックス，インコーポレイテッド 修飾されているブタのソマトトロピンポリペプチドおよびそれらの使用
JO2976B1 (en) 2009-12-22 2016-03-15 ايلي ليلي اند كومباني Axentomodulin polypeptide
AR079344A1 (es) 2009-12-22 2012-01-18 Lilly Co Eli Analogo peptidico de oxintomodulina, composicion farmaceutica que lo comprende y uso para preparar un medicamento util para tratar diabetes no insulinodependiente y/u obesidad
ES2905545T3 (es) * 2010-01-06 2022-04-11 Takeda Pharmaceuticals Co Proteínas de unión a calicreína plasmática
CN102161754B (zh) * 2010-02-13 2012-06-13 华中科技大学同济医学院附属协和医院 枝化状聚乙二醇衍生物的功能化修饰方法
AU2011222883B2 (en) 2010-03-05 2016-05-26 Omeros Corporation Chimeric inhibitor molecules of complement activation
CA2797093C (en) 2010-04-26 2019-10-29 Atyr Pharma, Inc. Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of cysteinyl-trna synthetase
CA2797362C (en) 2010-04-27 2020-12-08 Atyr Pharma, Inc. Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of isoleucyl trna synthetases
WO2011139853A2 (en) 2010-04-28 2011-11-10 Atyr Pharma, Inc. Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of alanyl trna synthetases
EP2563383B1 (en) 2010-04-29 2017-03-01 Atyr Pharma, Inc. Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of valyl trna synthetases
US8986680B2 (en) 2010-04-29 2015-03-24 Atyr Pharma, Inc. Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of Asparaginyl tRNA synthetases
CA2797977C (en) 2010-05-03 2019-08-20 Atyr Pharma, Inc. Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of phenylalanyl-alpha-trna synthetases
WO2011139986A2 (en) 2010-05-03 2011-11-10 Atyr Pharma, Inc. Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of arginyl-trna synthetases
CN103140233B (zh) 2010-05-03 2017-04-05 Atyr 医药公司 与甲硫氨酰‑tRNA合成酶的蛋白片段相关的治疗、诊断和抗体组合物的发现
EP2566499B1 (en) 2010-05-04 2017-01-25 aTyr Pharma, Inc. Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of p38 multi-trna synthetase complex
EP2569331A1 (en) 2010-05-10 2013-03-20 Perseid Therapeutics LLC Polypeptide inhibitors of vla4
CA2799197C (en) 2010-05-14 2019-10-29 Atyr Pharma, Inc. Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of phenylalanyl-beta-trna synthetases
JP2013533217A (ja) 2010-05-17 2013-08-22 セビックス・インコーポレイテッド Ｐｅｇ化ｃ−ペプチド
US9034598B2 (en) 2010-05-17 2015-05-19 Atyr Pharma, Inc. Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of leucyl-tRNA synthetases
EP3091028A1 (en) 2010-05-26 2016-11-09 Bristol-Myers Squibb Company Fibronectin based scaffold proteins having improved stability
AU2011258106B2 (en) 2010-05-27 2017-02-23 Pangu Biopharma Limited Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of glutaminyl-tRNA synthetases
CN103118694B (zh) 2010-06-01 2016-08-03 Atyr医药公司 与赖氨酰-tRNA合成酶的蛋白片段相关的治疗、诊断和抗体组合物的发现
JP6116479B2 (ja) 2010-07-12 2017-04-19 エータイアー ファーマ， インコーポレイテッド グリシルｔＲＮＡ合成酵素のタンパク質フラグメントに関連した治療用、診断用および抗体組成物の革新的発見
DK2595624T3 (en) 2010-07-20 2018-03-26 Halozyme Inc Methods of treating or preventing adverse side effects associated with administration of an anti-hyaluronan agent
KR102159909B1 (ko) 2010-07-30 2020-09-25 알콘 인코포레이티드 수분이 풍부한 표면을 갖는 실리콘 히드로겔 렌즈
US9567386B2 (en) 2010-08-17 2017-02-14 Ambrx, Inc. Therapeutic uses of modified relaxin polypeptides
PE20140160A1 (es) 2010-08-17 2014-02-08 Ambrx Inc Polipeptidos de relaxina modificados y sus usos
JP5964304B2 (ja) 2010-08-25 2016-08-03 エータイアー ファーマ， インコーポレイテッド チロシルｔＲＮＡ合成酵素のタンパク質フラグメントに関連した治療用、診断用および抗体組成物の革新的発見
US8961501B2 (en) 2010-09-17 2015-02-24 Incept, Llc Method for applying flowable hydrogels to a cornea
TWI480288B (zh) 2010-09-23 2015-04-11 Lilly Co Eli 牛顆粒細胞群落刺激因子及其變體之調配物
WO2012054822A1 (en) 2010-10-22 2012-04-26 Nektar Therapeutics Pharmacologically active polymer-glp-1 conjugates
EP2637680B1 (en) 2010-11-12 2017-03-01 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Cancer therapies
ES2866674T3 (es) 2010-11-12 2021-10-19 Nektar Therapeutics Conjugados de una fracción de IL-2 y un polímero
MX385858B (es) 2010-11-24 2025-03-18 Lexicon Pharmaceuticals Inc Anticuerpos que se unen a notum pectinacetilesterasa.
US20140371258A1 (en) 2010-12-17 2014-12-18 Nektar Therapeutics Water-Soluble Polymer Conjugates of Topotecan
WO2012088282A1 (en) 2010-12-21 2012-06-28 Nektar Therapeutics Multi-arm polymeric prodrug conjugates of pemetrexed-based compounds
US20130331443A1 (en) 2010-12-22 2013-12-12 Nektar Therapeutics Multi-arm polymeric prodrug conjugates of taxane-based compounds
US10894087B2 (en) 2010-12-22 2021-01-19 Nektar Therapeutics Multi-arm polymeric prodrug conjugates of cabazitaxel-based compounds
KR102011156B1 (ko) 2011-01-06 2019-08-16 다이액스 코포레이션 혈장 칼리크레인 결합 단백질
EP2907504B1 (en) 2011-02-08 2017-06-28 Halozyme, Inc. Composition and lipid formulation of a hyaluronan-degrading enzyme and the use thereof for treatment of benign prostatic hyperplasia
PH12013501865A1 (en) 2011-03-16 2014-01-06 Amgen Inc Potent and selective inhibitors of nav1.3 and nav1.7
US20140187488A1 (en) 2011-05-17 2014-07-03 Bristol-Myers Squibb Company Methods for maintaining pegylation of polypeptides
WO2012166555A1 (en) 2011-05-27 2012-12-06 Nektar Therapeutics Water - soluble polymer - linked binding moiety and drug compounds
WO2012171335A1 (en) 2011-06-16 2012-12-20 The Hong Kong University Of Science And Technology Multi-vinylsulfone containing molecule
US20130022592A1 (en) 2011-06-17 2013-01-24 Daniel Edward Vaughn Continuous subcutaneous insulin infusion methods with a hyaluronan-degrading enzyme
EP2720712B1 (en) 2011-06-17 2016-03-02 Halozyme, Inc. Stable formulations of a hyaluronan-degrading enzyme
US9993529B2 (en) 2011-06-17 2018-06-12 Halozyme, Inc. Stable formulations of a hyaluronan-degrading enzyme
AU2012280474A1 (en) 2011-07-01 2014-01-16 Bayer Intellectual Property Gmbh Relaxin fusion polypeptides and uses thereof
AU2012278944B2 (en) 2011-07-05 2015-09-17 Bioasis Technologies Inc. p97-antibody conjugates and methods of use
WO2013020079A2 (en) 2011-08-04 2013-02-07 Nektar Therapeutics Conjugates of an il-11 moiety and a polymer
US20130071394A1 (en) 2011-09-16 2013-03-21 John K. Troyer Compositions and combinations of organophosphorus bioscavengers and hyaluronan-degrading enzymes, and methods of use
US10226417B2 (en) 2011-09-16 2019-03-12 Peter Jarrett Drug delivery systems and applications
CA2853358A1 (en) 2011-10-24 2013-05-02 Halozyme, Inc. Companion diagnostic for anti-hyaluronan agent therapy and methods of use thereof
US9522951B2 (en) 2011-10-31 2016-12-20 Bristol-Myers Squibb Company Fibronectin binding domains with reduced immunogenicity
US8962553B2 (en) 2011-11-17 2015-02-24 Cebix Ab Method of treating a diabetic subject having a microvascular impairment disorder by a pegylated C-peptide
US9205150B2 (en) 2011-12-05 2015-12-08 Incept, Llc Medical organogel processes and compositions
WO2013102211A2 (en) 2011-12-29 2013-07-04 Walensky Loren D Stabilized antiviral fusion helices
SG11201403714TA (en) 2011-12-30 2014-07-30 Halozyme Inc Ph20 polypeptide variants, formulations and uses thereof
EP2814514B1 (en) 2012-02-16 2017-09-13 Atyr Pharma, Inc. Histidyl-trna synthetases for treating autoimmune and inflammatory diseases
EP2831237B1 (en) 2012-03-30 2017-11-29 The Board of Regents of the University of Oklahoma High molecular weight heparosan polymers and methods of production and use thereof
WO2013151991A1 (en) 2012-04-02 2013-10-10 Surmodics, Inc. Hydrophilic polymeric coatings for medical articles with visualization moiety
EP2833905B1 (en) 2012-04-04 2018-05-02 Halozyme, Inc. Combination therapy with hyaluronidase and a tumor-targeted taxane
US9844582B2 (en) 2012-05-22 2017-12-19 Massachusetts Institute Of Technology Synergistic tumor treatment with extended-PK IL-2 and therapeutic agents
US9175082B2 (en) 2012-05-31 2015-11-03 Sorrento Therapeutics, Inc. Antigen binding proteins that bind PD-L1
US9738724B2 (en) 2012-06-08 2017-08-22 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising site-specific non-natural amino acid residues, methods of their preparation and methods of their use
HK1208181A1 (en) 2012-06-21 2016-02-26 Sorrento Therapeutics, Inc. Antigen binding proteins that bind c-met
CN105051065A (zh) 2012-06-22 2015-11-11 索伦托治疗有限公司 与ccr2结合的抗原结合蛋白
EP3135690A1 (en) 2012-06-26 2017-03-01 Sutro Biopharma, Inc. Modified fc proteins comprising site-specific non-natural amino acid residues, conjugates of the same, methods of their preparation and methods of their use
WO2014022515A1 (en) 2012-07-31 2014-02-06 Bioasis Technologies, Inc. Dephosphorylated lysosomal storage disease proteins and methods of use thereof
US9395468B2 (en) 2012-08-27 2016-07-19 Ocular Dynamics, Llc Contact lens with a hydrophilic layer
SI2890402T1 (sl) 2012-08-31 2019-07-31 Sutro Biopharma, Inc. Modificirane aminokisline vsebujoče acido skupino
WO2014062856A1 (en) 2012-10-16 2014-04-24 Halozyme, Inc. Hypoxia and hyaluronan and markers thereof for diagnosis and monitoring of diseases and conditions and related methods
CN104884056A (zh) 2012-11-12 2015-09-02 雷德伍德生物科技股份有限公司 用于制备缀合物的化合物和方法
WO2014078733A1 (en) 2012-11-16 2014-05-22 The Regents Of The University Of California Pictet-spengler ligation for protein chemical modification
US9310374B2 (en) 2012-11-16 2016-04-12 Redwood Bioscience, Inc. Hydrazinyl-indole compounds and methods for producing a conjugate
US9383357B2 (en) 2012-12-07 2016-07-05 Northwestern University Biomarker for replicative senescence
EP3907237A1 (en) 2012-12-20 2021-11-10 Amgen Inc. Apj receptor agonists and uses thereof
US20150361159A1 (en) 2013-02-01 2015-12-17 Bristol-Myers Squibb Company Fibronectin based scaffold proteins
WO2014165277A2 (en) 2013-03-12 2014-10-09 Amgen Inc. POTENT AND SELECTIVE INHIBITORS OF Nav1.7
NZ711373A (en) 2013-03-13 2020-07-31 Bioasis Technologies Inc Fragments of p97 and uses thereof
CA2906775A1 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Bh4 stabilized peptides and uses thereof
WO2014144148A1 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Stabilized sos1 peptides
WO2014151369A2 (en) 2013-03-15 2014-09-25 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Stabilized ezh2 peptides
CA3175360C (en) 2013-05-31 2024-05-28 Sorrento Therapeutics, Inc. Antigen binding proteins that bind pd-1
TW201534726A (zh) 2013-07-03 2015-09-16 Halozyme Inc 熱穩定ｐｈ２０玻尿酸酶變異體及其用途
WO2015006555A2 (en) 2013-07-10 2015-01-15 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising multiple site-specific non-natural amino acid residues, methods of their preparation and methods of their use
WO2015013510A1 (en) 2013-07-25 2015-01-29 Ecole Polytechnique Federale De Lausanne Epfl High aspect ratio nanofibril materials
US20150093399A1 (en) 2013-08-28 2015-04-02 Bioasis Technologies, Inc. Cns-targeted conjugates having modified fc regions and methods of use thereof
WO2015054658A1 (en) 2013-10-11 2015-04-16 Sutro Biopharma, Inc. Modified amino acids comprising tetrazine functional groups, methods of preparation, and methods of their use
CN104623637A (zh) 2013-11-07 2015-05-20 健能隆医药技术（上海）有限公司 Il-22二聚体在制备静脉注射药物中的应用
EP3570093B1 (en) 2013-11-15 2021-09-15 Tangible Science, Inc. Contact lens with a hydrophilic layer
CN115504924A (zh) 2013-11-27 2022-12-23 雷德伍德生物科技股份有限公司 肼基-吡咯并化合物及用于生成缀合物的方法
WO2015081891A1 (en) 2013-12-06 2015-06-11 Baikang (Suzhou) Co., Ltd Bioreversable promoieties for nitrogen-containing and hydroxyl-containing drugs
IL247942B (en) 2014-03-27 2022-09-01 Dyax Corp Compositions and methods for drops in macular edema as a result of diabetes
MA39711A (fr) 2014-04-03 2015-10-08 Nektar Therapeutics Conjugués d'une fraction d'il-15 et d'un polymère
CN106795506B (zh) 2014-05-14 2020-11-27 达特茅斯学院理事会 去免疫化溶葡萄球菌酶和使用方法
US10941182B2 (en) 2014-06-10 2021-03-09 Amgen Inc. Apelin polypeptides
WO2016025647A1 (en) 2014-08-12 2016-02-18 Massachusetts Institute Of Technology Synergistic tumor treatment with il-2, a therapeutic antibody, and a cancer vaccine
EP3180018B1 (en) 2014-08-12 2019-07-24 Massachusetts Institute Of Technology Synergistic tumor treatment with il-2 and integrin-binding-fc-fusion protein
SG11201701382PA (en) 2014-08-22 2017-03-30 Sorrento Therapeutics Inc Antigen binding proteins that bind cxcr3
EP3186281B1 (en) 2014-08-28 2019-04-10 Halozyme, Inc. Combination therapy with a hyaluronan-degrading enzyme and an immune checkpoint inhibitor
ES2885854T3 (es) 2014-10-14 2021-12-15 Polytherics Ltd Proceso para la conjugación de un péptido o proteína con un reactivo que comprende un grupo saliente que incluye una porción de PEG
AU2015332533B2 (en) 2014-10-14 2018-08-30 Halozyme, Inc. Compositions of adenosine deaminase-2 (ADA2), variants thereof and methods of using same
EP3220956B1 (en) * 2014-10-24 2023-08-09 Abzena (UK) Limited Conjugates and conjugating reagents
MX2017004947A (es) 2014-10-24 2017-06-29 Bristol Myers Squibb Co Polipeptidos del factor de crecimiento de fibroblastos 2 (fgf-21) modificados y usos de los mismos.
GB201419108D0 (en) 2014-10-27 2014-12-10 Glythera Ltd Materials and methods relating to linkers for use in antibody drug conjugates
CN107206119B (zh) 2014-12-09 2021-01-29 实体科学公司 具有生物相容性层的医疗设备涂层
IL254389B2 (en) 2015-03-11 2023-03-01 Nektar Therapeutics Polymer conjugates and the il–7 group
EP3270945A4 (en) 2015-03-18 2018-09-05 Massachusetts Institute of Technology Selective mcl-1 binding peptides
US10464975B2 (en) 2015-07-02 2019-11-05 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Stabilized anti-microbial peptides
JP7049989B2 (ja) 2015-08-28 2022-04-07 デイナ ファーバー キャンサー インスティチュート，インコーポレイテッド Ｂｆｌ－１と結合するペプチド
US20190002506A1 (en) 2015-08-28 2019-01-03 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Stabilized peptides for covalent binding to target protein
WO2017062832A1 (en) 2015-10-08 2017-04-13 Nektar Therapeutics Combination of an il-2rbeta-selective agonist and a long-acting il-15 agonist
WO2017083306A1 (en) 2015-11-09 2017-05-18 R.P. Scherer Technologies, Llc Anti-cd22 antibody-maytansine conjugates and methods of use thereof
US11286307B2 (en) 2015-12-11 2022-03-29 Takeda Pharmaceutical Company Limited Plasma kallikrein inhibitors and uses thereof for treating hereditary angioedema attack
ES2986360T3 (es) 2016-01-29 2024-11-11 Yuhan Corp Proteínas de unión a antígeno que se unen a PD-L1
CN109069578A (zh) 2016-02-29 2018-12-21 达纳-法伯癌症研究所股份有限公司 用于治疗感染的钉合的细胞内靶向抗微生物肽
US10421785B2 (en) 2016-04-11 2019-09-24 Bar-Ilan University Delta receptor agonist peptides and use thereof
WO2017180998A2 (en) 2016-04-15 2017-10-19 Beckman Coulter, Inc. Photoactive macromolecules and uses thereof
WO2017181143A1 (en) 2016-04-15 2017-10-19 Generon (Shanghai) Corporation, Ltd. Use of il-22 in treating necrotizing enterocolitis
US11198715B2 (en) 2016-07-22 2021-12-14 Massachusetts Institute Of Technology Selective Bfl-1 peptides
JP6949102B2 (ja) 2016-08-09 2021-10-13 イーライ リリー アンド カンパニー 併用療法
ES2935622T3 (es) 2016-08-26 2023-03-08 Dana Farber Cancer Inst Inc Polipéptidos y miméticos de bcl-w para el tratamiento o la prevención de la neuropatía periférica y la pérdida auditiva inducidas por la quimioterapia
US12344643B2 (en) 2016-12-07 2025-07-01 The University Of Chicago Compositions and methods for inhibition of FOXP3
CN109923179A (zh) 2016-12-12 2019-06-21 贝克顿·迪金森公司 水溶性聚合物染料
SG10201912034UA (en) 2017-02-08 2020-02-27 Bristol Myers Squibb Co Modified relaxin polypeptides comprising a pharmacokinetic enhancer and uses thereof
WO2018170299A1 (en) 2017-03-15 2018-09-20 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Inhibitors of prokaryotic gene transcription and uses thereof
WO2018172503A2 (en) 2017-03-24 2018-09-27 Basf Se Liquid laundry detergent comprising modified saccharide or polysaccharide
KR20250057110A (ko) 2017-05-15 2025-04-28 넥타르 테라퓨틱스 지속 작용성 인터류킨-15 수용체 효현제 및 관련 면역요법 조성물 및 방법
PE20200697A1 (es) 2017-06-22 2020-06-16 Catalyst Biosciences Inc Polipeptidos de serina proteasa 1 de tipo membrana modificada (mtsp-1) y metodos de uso
AU2018304230A1 (en) 2017-07-19 2020-02-06 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Stabilized anti-microbial peptides for the treatment of antibiotic-resistant bacterial infections
WO2019036605A2 (en) 2017-08-17 2019-02-21 Massachusetts Institute Of Technology MULTIPLE SPECIFICITY BINDING AGENTS OF CXC CHEMOKINES AND USES THEREOF
US11897917B2 (en) 2017-09-27 2024-02-13 The University Of York Bioconjugation of polypeptides
KR102777151B1 (ko) 2017-11-21 2025-03-05 더 보드 어브 트러스티스 어브 더 리랜드 스탠포드 주니어 유니버시티 인터루킨-2의 부분 효능제
CN120118207A (zh) 2017-12-15 2025-06-10 丹娜-法伯癌症研究院有限公司 稳定肽-介导的靶向蛋白降解
WO2019118719A1 (en) 2017-12-15 2019-06-20 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Selective targeting of apoptosis proteins by structurally-stabilized and/or cysteine-reactive noxa peptides
WO2019133399A1 (en) 2017-12-26 2019-07-04 Becton, Dickinson And Company Deep ultraviolet-excitable water-solvated polymeric dyes
EP3749678A1 (en) 2018-02-07 2020-12-16 Dana Farber Cancer Institute, Inc. Cell-permeable stapled peptide modules for cellular delivery
EP3765852A1 (en) 2018-03-14 2021-01-20 Dana Farber Cancer Institute, Inc. Stabilized peptides for biomarker detection
CN112384573A (zh) 2018-03-30 2021-02-19 贝克顿·迪金森公司 含侧基发色团的水溶性聚合染料
WO2019222435A1 (en) 2018-05-16 2019-11-21 Halozyme, Inc. Methods of selecting subjects for combination cancer therapy with a polymer-conjugated soluble ph20
KR102167755B1 (ko) 2018-05-23 2020-10-19 주식회사 큐어바이오 단편화된 grs 폴리펩타이드, 이의 변이체 및 이들의 용도
EP3813867A1 (en) 2018-07-22 2021-05-05 Bioasis Technologies Inc. Treatment of lymmphatic metastases
EP3844188A1 (en) 2018-08-28 2021-07-07 Ambrx, Inc. Anti-cd3 antibody folate bioconjugates and their uses
KR20210057124A (ko) 2018-09-11 2021-05-20 암브룩스, 인코포레이티드 인터류킨-2 폴리펩타이드 접합체 및 그의 용도
WO2020060975A1 (en) 2018-09-17 2020-03-26 Massachusetts Institute Of Technology Peptides selective for bcl-2 family proteins
JP2022512746A (ja) 2018-10-19 2022-02-07 アンブルックス，インコーポレイテッド インターロイキン－１０ポリペプチド複合体、その二量体、およびそれらの使用
US12441776B2 (en) 2018-11-30 2025-10-14 Eirgen Pharma Ltd. Oxyntomodulin peptide analog formulations
US20220075098A1 (en) * 2018-12-19 2022-03-10 Tangible Science, Inc. Systems and methods of treating a hydrogel-coated medical device
JP7604376B2 (ja) 2018-12-28 2024-12-23 バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド 改変ウロキナーゼ型プラスミノゲンアクティベータポリペプチドおよび使用方法
WO2020154032A1 (en) 2019-01-23 2020-07-30 Massachusetts Institute Of Technology Combination immunotherapy dosing regimen for immune checkpoint blockade
CN119455003A (zh) 2019-02-12 2025-02-18 Ambrx公司 包含抗体-tlr激动剂缀合物的组合物、方法和用途
JP7727551B2 (ja) 2019-04-18 2025-08-21 デイナ ファーバー キャンサー インスティチュート，インコーポレイテッド 構造的に安定化されたペプチドによるユビキチンおよびユビキチン様ｅ１活性化酵素の選択的標的化
EP3958983A1 (en) 2019-04-26 2022-03-02 The Procter & Gamble Company Reduction of tooth staining derived from cationic antimicrobials
WO2021126827A1 (en) 2019-12-16 2021-06-24 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Structurally-stabilized oncolytic peptides and uses thereof
WO2021127493A1 (en) 2019-12-20 2021-06-24 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Structurally-stabilized glucagon-like peptide 1 peptides and uses thereof
AU2021209045A1 (en) 2020-01-13 2022-07-28 Takeda Pharmaceutical Company Limited Plasma kallikrein inhibitors and uses thereof for treating pediatric hereditary angioedema attack
CN115362168A (zh) 2020-01-14 2022-11-18 辛德凯因股份有限公司 偏向化il2突变蛋白方法和组合物
EP4106794A4 (en) 2020-02-19 2024-03-20 Evive Biotechnology (Shanghai) Ltd METHOD FOR TREATING TRANSPLANT AND HOST DISEASE
WO2021173889A1 (en) 2020-02-26 2021-09-02 Ambrx, Inc. Uses of anti-cd3 antibody folate bioconjugates
JP7894318B2 (ja) 2020-03-04 2026-07-23 デイナ ファーバー キャンサー インスティチュート，インコーポレイテッド 抗ウイルスの構造的に安定化されたＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ペプチドおよびその使用
EP4117732A1 (en) 2020-03-11 2023-01-18 Ambrx, Inc. Interleukin-2 polypeptide conjugates and methods of use thereof
WO2021216845A1 (en) 2020-04-22 2021-10-28 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Antiviral structurally-stabilized ace2 helix 1 peptides and uses thereof
AU2021262752A1 (en) 2020-04-27 2022-10-13 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Structurally-stabilized and HDMX-selective p53 peptides and uses thereof
US20210355468A1 (en) 2020-05-18 2021-11-18 Bioasis Technologies, Inc. Compositions and methods for treating lewy body dementia
US20210393787A1 (en) 2020-06-17 2021-12-23 Bioasis Technologies, Inc. Compositions and methods for treating frontotemporal dementia
WO2022040596A1 (en) 2020-08-20 2022-02-24 Ambrx, Inc. Antibody-tlr agonist conjugates, methods and uses thereof
WO2022081827A1 (en) 2020-10-14 2022-04-21 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Chimeric conjugates for degradation of viral and host proteins and methods of use
WO2022098848A1 (en) 2020-11-05 2022-05-12 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Antiviral structurally-stabilized ebolavirus peptides and uses thereof
US12552834B2 (en) 2021-01-25 2026-02-17 Massachusetts Institute Of Technology Selective MENA binding peptides
WO2022212899A1 (en) 2021-04-03 2022-10-06 Ambrx, Inc. Anti-her2 antibody-drug conjugates and uses thereof
MX2024002824A (es) 2021-09-08 2024-06-28 Dana Farber Cancer Inst Inc Conjugados antivirales de peptido de coronavirus 2 del sindrome respiratorio agudo severo (sars-cov-2)-colesterol estructuralmente engrapados y usos de los mismos.
EP4155349A1 (en) 2021-09-24 2023-03-29 Becton, Dickinson and Company Water-soluble yellow green absorbing dyes
EP4518900A1 (en) 2022-05-04 2025-03-12 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Ebolavirus surface glycoprotein peptides, conjugates, and uses thereof
US20250383357A1 (en) 2022-07-01 2025-12-18 Beckman Coulter, Inc. Novel fluorescent dyes and polymers from dihydrophenanthrene derivatives
WO2024044327A1 (en) 2022-08-26 2024-02-29 Beckman Coulter, Inc. Dhnt monomers and polymer dyes with modified photophysical properties
WO2024196805A1 (en) 2023-03-17 2024-09-26 Beckman Coulter, Inc. Benzothienopyrrole cyanine dyes
WO2024241086A1 (en) 2023-05-24 2024-11-28 Ambrx, Inc. Pegylated bovine interferon lambda and methods of use thereof
CN121866309A (zh) 2023-09-21 2026-04-14 贝克曼库尔特有限公司 用于流式细胞术的二氢菲（dhp）桥接染料
WO2025227129A2 (en) 2024-04-25 2025-10-30 Starrock Pharma Llc Delivery vehicles comprising proglucagon derived polypeptides and anabolic polypeptides and uses thereof
US20250341516A1 (en) 2024-05-01 2025-11-06 BioLegend, Inc. Compositions for use with multiple fluorophores and methods of using
WO2026043823A2 (en) 2024-08-19 2026-02-26 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising site-specific non-natural amino acid residues, methods of preparation and uses thereof

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0011237A1 (de) * 1978-11-18 1980-05-28 Bayer Ag Polyäther-Derivate, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung als Arzneimittel
US5122614A (en) * 1989-04-19 1992-06-16 Enzon, Inc. Active carbonates of polyalkylene oxides for modification of polypeptides
WO1993001498A1 (en) * 1991-07-04 1993-01-21 Immunodex K/S Water-soluble, polymer-based reagents and conjugates comprising moieties derived from divinyl sulfone

Family Cites Families (55)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3784524A (en) * 1971-06-25 1974-01-08 Grace W R & Co Urethane/thioether-containing polyene composition and the reaction product thereof
US4179337A (en) * 1973-07-20 1979-12-18 Davis Frank F Non-immunogenic polypeptides
US4134887A (en) * 1973-10-17 1979-01-16 Hoechst Aktiengesellschaft Phenyl-azo-phenyl dyestuffs
CH586739A5 (ru) * 1973-10-17 1977-04-15 Hoechst Ag
US4179387A (en) * 1974-03-12 1979-12-18 Fuji Photo Film Co., Ltd. Process for producing magnetic FE oxide
IL47468A (en) * 1975-06-12 1979-05-31 Rehovot Res Prod Process for the cross-linking of proteins using water soluble cross-linking agents
US4002531A (en) * 1976-01-22 1977-01-11 Pierce Chemical Company Modifying enzymes with polyethylene glycol and product produced thereby
DE2607766C3 (de) * 1976-02-26 1978-12-07 Behringwerke Ag, 3550 Marburg Verfahren zur Herstellung von trägergebundenen biologisch aktiven Substanzen
US4228019A (en) * 1978-06-19 1980-10-14 Texaco Development Corp. Secondary recovery process
US4473693A (en) * 1978-08-04 1984-09-25 Stewart Walter W Aminonaphthalimide dyes for intracellular labelling
US4356166A (en) * 1978-12-08 1982-10-26 University Of Utah Time-release chemical delivery system
US4430260A (en) * 1979-02-27 1984-02-07 Lee Weng Y Penicillin-polyvinyl alcohol conjugate and process of preparation
US4296097A (en) * 1979-02-27 1981-10-20 Lee Weng Y Suppression of reaginic antibodies to drugs employing polyvinyl alcohol as carrier therefor
US4280979A (en) * 1979-09-18 1981-07-28 Union Carbide Corporation Copolymers, compositions, and articles, and methods for making same
US4241199A (en) * 1979-09-18 1980-12-23 Union Carbide Corporation Novel polyester diols
JPS585320A (ja) * 1981-07-01 1983-01-12 Toray Ind Inc グラフト共重合体
US4973493A (en) * 1982-09-29 1990-11-27 Bio-Metric Systems, Inc. Method of improving the biocompatibility of solid surfaces
JPS59204144A (ja) * 1983-04-12 1984-11-19 Daikin Ind Ltd 新規含フッ素化合物およびその製法
SE470099B (sv) * 1984-05-17 1993-11-08 Jerker Porath Sulfonaktiverade tioeteradsorbenter för separation av t ex protein
SE454885B (sv) * 1984-10-19 1988-06-06 Exploaterings Ab Tbf Polymerbelagda partiklar med immobiliserade metalljoner pa sin yta jemte forfarande for framstellning derav
US4616644A (en) * 1985-06-14 1986-10-14 Johnson & Johnson Products, Inc. Hemostatic adhesive bandage
EP0206448B1 (en) * 1985-06-19 1990-11-14 Ajinomoto Co., Inc. Hemoglobin combined with a poly(alkylene oxide)
US4766106A (en) * 1985-06-26 1988-08-23 Cetus Corporation Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation
EP0229108B1 (en) * 1985-06-26 1990-12-27 Cetus Corporation Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation
US4917888A (en) * 1985-06-26 1990-04-17 Cetus Corporation Solubilization of immunotoxins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation
US4883864A (en) * 1985-09-06 1989-11-28 Minnesota Mining And Manufacturing Company Modified collagen compound and method of preparation
US4983494A (en) * 1985-10-16 1991-01-08 Fuji Photo Film Co., Ltd. Image forming process including heating step
CA1283046C (en) * 1986-05-29 1991-04-16 Nandini Katre Tumor necrosis factor formulation
US4791192A (en) * 1986-06-26 1988-12-13 Takeda Chemical Industries, Ltd. Chemically modified protein with polyethyleneglycol
US4871785A (en) * 1986-08-13 1989-10-03 Michael Froix Clouding-resistant contact lens compositions
DE3628717A1 (de) * 1986-08-23 1988-02-25 Agfa Gevaert Ag Haertungsmittel fuer proteine, eine damit gehaertete bindemittelschicht und eine solche schicht enthaltendes fotografisches aufzeichnungsmaterial
US4931544A (en) * 1986-09-04 1990-06-05 Cetus Corporation Succinylated interleukin-2 for pharmaceutical compositions
DE3634525A1 (de) * 1986-10-10 1988-04-21 Miles Lab Testmittel und indikatoren zum nachweis von thiolgruppen und verfahren zu deren herstellung
US5080891A (en) * 1987-08-03 1992-01-14 Ddi Pharmaceuticals, Inc. Conjugates of superoxide dismutase coupled to high molecular weight polyalkylene glycols
US5153265A (en) * 1988-01-20 1992-10-06 Cetus Corporation Conjugation of polymer to colony stimulating factor-1
NL8800577A (nl) * 1988-03-08 1989-10-02 Stichting Tech Wetenschapp Werkwijze voor het aanbrengen van een bloedcompatibele bekleding op polyetherurethaanvormstukken.
GB8824593D0 (en) * 1988-10-20 1988-11-23 Royal Free Hosp School Med Liposomes
GB8824592D0 (en) * 1988-10-20 1988-11-23 Royal Free Hosp School Med Purification process
GB8824591D0 (en) * 1988-10-20 1988-11-23 Royal Free Hosp School Med Fractionation process
US5162430A (en) * 1988-11-21 1992-11-10 Collagen Corporation Collagen-polymer conjugates
US4902502A (en) * 1989-01-23 1990-02-20 Cetus Corporation Preparation of a polymer/interleukin-2 conjugate
US5089261A (en) * 1989-01-23 1992-02-18 Cetus Corporation Preparation of a polymer/interleukin-2 conjugate
AU5858690A (en) * 1989-06-14 1991-01-08 Cetus Corporation Polymer/antibiotic conjugate
US5234903A (en) * 1989-11-22 1993-08-10 Enzon, Inc. Chemically modified hemoglobin as an effective, stable non-immunogenic red blood cell substitute
US5171264A (en) * 1990-02-28 1992-12-15 Massachusetts Institute Of Technology Immobilized polyethylene oxide star molecules for bioapplications
DE69130333T2 (de) * 1990-08-31 1999-03-04 Regents Of The University Of Minnesota, Minneapolis, Minn. Harze für die Feststoff-Peptidsynthese
US5380536A (en) * 1990-10-15 1995-01-10 The Board Of Regents, The University Of Texas System Biocompatible microcapsules
SE467308B (sv) * 1990-10-22 1992-06-29 Berol Nobel Ab Fast yta belagd med ett hydrofilt ytterskikt med kovalent bundna biopolymerer, saett att framstaella en saadan yta och ett konjugat daerfoer
GEP20002142B (en) * 1991-01-18 2000-06-25 Amgen Inc Method for Treatment and Prevention of TNF Mediated Diseases
AU1674292A (en) * 1991-03-15 1992-10-21 Synergen, Inc. Pegylation of polypeptides
AU1676992A (en) * 1991-03-18 1992-10-21 Enzon, Inc. Hydrazine containing conjugates of polypeptides and glycopolypeptides with polymers
DK52791D0 (da) * 1991-03-22 1991-03-22 Kem En Tec As Adsorptionsmatricer
DK130991D0 (da) * 1991-07-04 1991-07-04 Immunodex K S Polymere konjugater
US5414135A (en) 1991-12-30 1995-05-09 Sterling Winthrop Inc. Vinyl sulfone coupling of polyoxyalkylenes to proteins
EP0622394A1 (en) * 1993-04-30 1994-11-02 S.A. Laboratoires S.M.B. Reversible modification of sulfur-containing molecules with polyalkylene glycol derivatives and their use

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0011237A1 (de) * 1978-11-18 1980-05-28 Bayer Ag Polyäther-Derivate, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung als Arzneimittel
US5122614A (en) * 1989-04-19 1992-06-16 Enzon, Inc. Active carbonates of polyalkylene oxides for modification of polypeptides
WO1993001498A1 (en) * 1991-07-04 1993-01-21 Immunodex K/S Water-soluble, polymer-based reagents and conjugates comprising moieties derived from divinyl sulfone

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Энциклопедия полимеров. М.:, Советская энциклопедия, 1974, т. 2, с. 933-935. *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2362807C2 (ru) * 2002-06-21 2009-07-27 Ново Нордиск Хелт Кэр Аг Конъюгат полипептида фактора vii, способ его получения, его применение и содержащая его фармацевтическая композиция
RU2401283C2 (ru) * 2005-02-04 2010-10-10 Энзон Фармасьютикалз, Инк. Способ получения полимерных конъюгатов
RU2441036C1 (ru) * 2010-09-30 2012-01-27 Общество с ограниченной ответственностью Научно-производственное объединение "Перспектива" (ООО НПО "Перспектива") Способ получения активированного полиэтиленоксида

Also Published As

Publication number Publication date
US20050209416A1 (en) 2005-09-22
CA2176203C (en) 2003-06-10
FI962004A0 (fi) 1996-05-10
EP0728155A1 (en) 1996-08-28
ES2173943T3 (es) 2002-11-01
KR960705869A (ko) 1996-11-08
US5446090A (en) 1995-08-29
DE69430317D1 (de) 2002-05-08
DK0728155T3 (da) 2002-07-29
JP3114998B2 (ja) 2000-12-04
HU225649B1 (en) 2007-05-29
AU1054895A (en) 1995-05-29
FI117441B (fi) 2006-10-13
EP1176160A2 (en) 2002-01-30
BG100568A (bg) 1996-12-31
RO121855B1 (ro) 2008-06-30
NZ276313A (en) 1997-04-24
EE9600128A (et) 1997-04-15
CZ295640B6 (cs) 2005-09-14
PL314298A1 (en) 1996-09-02
SK60896A3 (en) 1997-04-09
RO118434B1 (ro) 2003-05-30
EP0728155B1 (en) 2002-04-03
WO1995013312A1 (en) 1995-05-18
US20040037801A1 (en) 2004-02-26
US5739208A (en) 1998-04-14
FI962004L (fi) 1996-05-10
US6610281B2 (en) 2003-08-26
AU687937B2 (en) 1998-03-05
US7214366B2 (en) 2007-05-08
HU9601253D0 (en) 1996-07-29
JPH09508926A (ja) 1997-09-09
CZ137596A3 (en) 1996-10-16
KR100225746B1 (ko) 1999-10-15
CA2176203A1 (en) 1995-05-18
CN1085689C (zh) 2002-05-29
EP1176160A3 (en) 2004-03-03
CN1137280A (zh) 1996-12-04
UA58481C2 (ru) 2003-08-15
HUP9601253A2 (en) 2001-06-28
NO315377B1 (no) 2003-08-25
US6894025B2 (en) 2005-05-17
US20020150548A1 (en) 2002-10-17
NO961918L (no) 1996-07-12
NO961918D0 (no) 1996-05-10
EE03448B1 (et) 2001-06-15
BG63399B1 (bg) 2001-12-29
ATE215577T1 (de) 2002-04-15
BR9408048A (pt) 1996-12-24
SK284527B6 (sk) 2005-05-05
DE69430317T2 (de) 2002-10-02
PL180149B1 (pl) 2000-12-29
HK1042312A1 (en) 2002-08-09
US5900461A (en) 1999-05-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP0728155B1 (en) Water soluble active sulfones of poly(ethylene glycol)
JP5681605B2 (ja) アジドまたはアセチレン末端水溶性ポリマー
ES2307865T3 (es) Metodo para preparar conjugados polimericos.
JP5095061B2 (ja) ポリ（エチレングリコール）の１−ベンゾトリアゾリル炭酸エステルの調製のための方法
KR100807141B1 (ko) 고분자량 비펩티드성 중합체 유도체의 합성