PL195845B1 - Rozpuszczalny w wodzie agregat pochodnych insuliny - Google Patents
Rozpuszczalny w wodzie agregat pochodnych insulinyInfo
- Publication number
- PL195845B1 PL195845B1 PL98340032A PL34003298A PL195845B1 PL 195845 B1 PL195845 B1 PL 195845B1 PL 98340032 A PL98340032 A PL 98340032A PL 34003298 A PL34003298 A PL 34003298A PL 195845 B1 PL195845 B1 PL 195845B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- insulin
- aggregate
- gel filtration
- soluble
- kav
- Prior art date
Links
- PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N insulin (human) Chemical class C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N 0.000 title description 34
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical class N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 131
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 claims abstract description 25
- 239000004026 insulin derivative Substances 0.000 claims abstract description 23
- 102000001390 Fructose-Bisphosphate Aldolase Human genes 0.000 claims abstract description 15
- 108010068561 Fructose-Bisphosphate Aldolase Proteins 0.000 claims abstract description 15
- PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N Zinc dication Chemical compound [Zn+2] PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 12
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 10
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 claims abstract description 5
- 238000012217 deletion Methods 0.000 claims abstract description 4
- 230000037430 deletion Effects 0.000 claims abstract description 4
- 239000012506 Sephacryl® Substances 0.000 claims description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 6
- 102000008857 Ferritin Human genes 0.000 claims description 4
- 108050000784 Ferritin Proteins 0.000 claims description 4
- 238000008416 Ferritin Methods 0.000 claims description 4
- 125000003162 alpha-aspartyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000003164 beta-aspartyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 46
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 46
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 41
- 101100400201 Drosophila melanogaster LysB gene Proteins 0.000 description 31
- 101000976075 Homo sapiens Insulin Proteins 0.000 description 30
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 28
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 26
- VEVRNHHLCPGNDU-MUGJNUQGSA-O desmosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCC[N+]1=CC(CC[C@H](N)C(O)=O)=C(CCC[C@H](N)C(O)=O)C(CC[C@H](N)C(O)=O)=C1 VEVRNHHLCPGNDU-MUGJNUQGSA-O 0.000 description 22
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 15
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 14
- RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N m-cresol Chemical compound CC1=CC=CC(O)=C1 RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 12
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 12
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 12
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 12
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 12
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 12
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 12
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 11
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 8
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 8
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 8
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 108010007568 Protamines Proteins 0.000 description 7
- 102000007327 Protamines Human genes 0.000 description 7
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 7
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 7
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 7
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 7
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 7
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 6
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 6
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 5
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 5
- 125000001419 myristoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 5
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 5
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 5
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 4
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 4
- -1 Zn 2+ Chemical class 0.000 description 4
- 230000004931 aggregating effect Effects 0.000 description 4
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 4
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 4
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 4
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 4
- 229940048914 protamine Drugs 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 4
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 3
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 3
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 229940070353 protamines Drugs 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000005237 Isophane Insulin Human genes 0.000 description 2
- 108010081368 Isophane Insulin Proteins 0.000 description 2
- 108010092217 Long-Acting Insulin Proteins 0.000 description 2
- 102000016261 Long-Acting Insulin Human genes 0.000 description 2
- 229940100066 Long-acting insulin Drugs 0.000 description 2
- 108010005991 Pork Regular Insulin Proteins 0.000 description 2
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 2
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 2
- 108010026951 Short-Acting Insulin Proteins 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000009843 Thyroglobulin Human genes 0.000 description 2
- 108010034949 Thyroglobulin Proteins 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 2
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 2
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 2
- 102000034238 globular proteins Human genes 0.000 description 2
- 108091005896 globular proteins Proteins 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 2
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 2
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 229910001415 sodium ion Inorganic materials 0.000 description 2
- 229960002175 thyroglobulin Drugs 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 102000005561 Human Isophane Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108010084048 Human Isophane Insulin Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102000003746 Insulin Receptor Human genes 0.000 description 1
- 108010001127 Insulin Receptor Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical class ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 229940123452 Rapid-acting insulin Drugs 0.000 description 1
- 229940123958 Short-acting insulin Drugs 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 102100026383 Vasopressin-neurophysin 2-copeptin Human genes 0.000 description 1
- 125000000337 alpha-glutamyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 239000003181 biological factor Substances 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000012928 buffer substance Substances 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- LEMUFSYUPGXXCM-JNEQYSBXSA-N caninsulin Chemical compound [Zn].C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC3N=CN=C3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)O)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1C=NC=N1 LEMUFSYUPGXXCM-JNEQYSBXSA-N 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 125000002160 cholyl group Chemical group [H]C([H])([C@]1(C([C@@]2([H])O[H])([H])[H])[H])[C@@](O[H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[C@]1(C([H])([H])[H])[C@]1([H])[C@]2([H])[C@]2([H])C([H])([H])C([H])([H])[C@@]([C@](C([H])([H])[H])(C(C(C(=O)[*])([H])[H])([H])[H])[H])([H])[C@@]2(C([H])([H])[H])[C@](O[H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- JAWGVVJVYSANRY-UHFFFAOYSA-N cobalt(3+) Chemical compound [Co+3] JAWGVVJVYSANRY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 125000003074 decanoyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 201000010064 diabetes insipidus Diseases 0.000 description 1
- 208000016097 disease of metabolism Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 125000002642 gamma-glutamyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- 239000007999 glycylglycine buffer Substances 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 239000002085 irritant Substances 0.000 description 1
- 231100000021 irritant Toxicity 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 description 1
- DEQXHPXOGUSHDX-UHFFFAOYSA-N methylaminomethanetriol;hydrochloride Chemical group Cl.CNC(O)(O)O DEQXHPXOGUSHDX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000027939 micturition Effects 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 1
- 206010033675 panniculitis Diseases 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000011197 physicochemical method Methods 0.000 description 1
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 210000004304 subcutaneous tissue Anatomy 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000011800 void material Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/62—Insulins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/22—Hormones
- A61K38/28—Insulins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/48—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones
- A61P5/50—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones for increasing or potentiating the activity of insulin
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Obesity (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
1. Rozpuszczalny w wodzie agregat pochodnych insuliny, znamienny tym, ze reszty B24-B30 lancucha B pochodnej insuliny stanowi sekwencja Phe-X-X-X-X-X-X, w której ka zdy X niezale znie od siebie oznacza dowolny kodowalny aminokwas lub delecj e, przy czym co najmniej jeden X oznacza reszt e lizynow a N e -podstawion a przez kwas 5- a-litocholowy lub 5- a-litocholowy, przez lacznik a-glutamylu lub ?-glutamylu, lub ß- lub a-aspartylu, gdzie a) agregat ma wymiary wi eksze ni z aldolaza jak okre slono w uk ladzie filtracji zelowej, oraz b) agregat obejmuje co najmniej 2 jony cynku, korzyst- nie od 2 do 5 jonów cynku, bardziej korzystnie od 2 do 3 jonów cynku, na cz asteczek pochodnej insuliny. PL PL PL PL PL PL PL PL
Description
Przedmiotem niniejszego wynalazku jest rozpuszczalny w wodzie agregat pochodnych insuliny ludzkiej o przedłużonym działaniu. Agregaty te są wykorzystywane do leczenia cukrzycy.
Stan techniki
W języku angielskim „diabetes” jest ogólnym terminem dla określenia zaburzeń u człowieka, których cechą jest nadmierne wydalanie moczu; objaw ten obserwuje się w cukrzycy (diabetes mellitus) i w moczówce prostej (diabetes insipidus). Cukrzyca jest chorobą metaboliczną, w której dochodzi do częściowej lub całkowitej utraty zdolności do wykorzystania glukozy. Na cukrzycę choruje około 2% populacji ogólnej.
Od czasu wprowadzenia insuliny w latach 20. XX wieku usiłuje się ulepszyć leczenie cukrzycy. Aby uniknąć skrajnego poziomu glukozy w surowicy, chorzy z cukrzycą często poddają się terapii, polegającej na wielokrotnych wstrzyknięciach w ciągu dnia, kiedy to insulinę podaje się przy każdym posiłku. Wielu chorych z cukrzycą leczy się poprzez wielokrotne wstrzyknięcia insuliny w ciągu dnia według schematu obejmującego jedno lub dwa wstrzyknięcia dziennie insuliny o przedłużonym działaniu, w celu pokrycia zapotrzebowania podstawowego, uzupełnione wstrzyknięciami „bolusowymi” insuliny o krótkim czasie działania w celu pokrycia zapotrzebowania związanego z posiłkami.
Kompozycje insuliny o przedłużonym działaniu są znane ze stanu techniki. I tak, jednym z głównych typów kompozycji insuliny o przedłużonym działaniu są wodne roztwory do wstrzyknięć kryształów insuliny lub insuliny bezpostaciowej (amorficznej). Związkami insuliny, typowo stosowanymi w tych kompozycjach, są insulina protaminowa, insulina cynkowa lub insulina protaminowo-cynkowa.
Gdy insulinę ludzką lub zwierzęcą doprowadza się do tworzenia postaci wyżej związanych, na przykład w obecności jonów Zn2+, wynikiem jest strącenie w postaci kryształów lub produktu bezpostaciowego (Brange, Galenics of Insulin, str. 20-27, Springer Verlag 1987). I tak, w pH 7 i przy zastosowaniu 6 Zn2+/heksamer insuliny wieprzowej wynikiem jest niemal całkowite wytrącenie z roztworu (Grant, Biochem J., 126, 433-440, 1972). Największy sugerowany agregat rozpuszczalny utworzony jest z 4 jednostek heksamerycznych, co odpowiada masie cząsteczkowej około 144 kDa. Blundell i wsp. (Diabetes 21 (supl. 2), 492-505, 1972) opisali rozpuszczalną jednostkę insuliny wieprzowej w obecnoś ci Zn2+ w pH 7 jako heksamer. Wczesne badania ultrawirowania w pH 2 wykazały, ż e dominuje dimer insuliny o masie cząsteczkowej 12 kDa (Jeffrey, Nature 197, 1104-1105, 1963; Jeffrey, Biochemistry 5, 489-498, 1966; Jeffrey, Biochemistry 5, 3820-3824, 1966), Fredericq, pracując w pH 8 i przy zastosowaniu 0,4-0,8% (wagowo) Zn2+ w stosunku do insuliny, opisywał mas ę czą steczkową 72 kDa, odpowiadającą strukturze dodekamerycznej, i, przy zastosowaniu 1% Zn, masę cząsteczkową około 200-300 kDa (Arch. Biochem. Biophys. 65, 218-228, 1956). Wyczerpujący przegląd stanów związania insuliny zwierzęcej można znaleźć w artykule Blundell i wsp. (Adv. Protein Chem. 26, 297330, 1972).
Zastosowanie zawiesin insuliny wiąże się z pewnymi niedogodnościami. I tak, aby zapewnić dokładne dawkowanie, cząstki insuliny należy równomiernie zawiesić poprzez delikatne wstrząsanie, przed pobraniem określonej objętości zawiesiny z fiolki lub wytłoczeniem jej z naboju. Przy przechowywaniu zawiesin insuliny temperaturę należy utrzymywać w węższych granicach, niż w przypadku roztworów insuliny, aby zapobiec tworzeniu się grudek lub koagulacji.
Jakkolwiek uprzednio uważano, że protaminy są nieimmunogenne, obecnie okazało się, że protaminy mogą być immunogenne u człowieka, i że ich zastosowanie w celach leczniczych może doprowadzić do wytworzenia się przeciwciał (Samuel i wsp., Studies on the immunogenicity of protamines in humans and experimental animals by means of a micro-complement fixation test, Clin. Exp. Immunol. 33, str. 252-260 (1978)). Uwododniono również, że sam kompleks protaminy z insuliną jest immunogenny (Kurtz i wsp., Circulating IgG antibody to protamine in patients treated with protamineinsulins. Diabetologica 25, str. 322-324 (1983)). Tak więc u niektórych pacjentów należy unikać długotrwałego stosowania kompozycji insuliny, zawierających protaminę.
Innym typem kompozycji insuliny o przedłużonym działaniu są roztwory o wartości pH poniżej pH fizjologicznego, z których insulina będzie się wytrącać z powodu wzrostu pH po wstrzyknięciu roztworu. Wadą tych kompozycji jest to, że stałe cząstki insuliny działają jako środek miejscowo drażniący, powodując zapalenie tkanki w miejscu wstrzyknięcia. W publikacji WO 91/12817 (Novo Nordisk A/S) opisano rozpuszczalne kompozycje insuliny o przedłużonym działaniu, zawierające kompleksy
PL 195 845 B1 insuliny z kobaltem (III). Czas działania tych kompleksów jest jedynie pośredni, a biodostępność jest mniejsza.
Rozpuszczalne pochodne insuliny, zawierające podstawniki lipofilowe, połączone z grupą ε-aminową reszty lizynowej w dowolnej z pozycji B26-B30 opisano na przykład w WO 95/07931 (Novo Nordisk A/S), WO 96/00107 (Novo Nordisk A/S) i WO 97/31022 (Novo Nordisk A/S). Pochodne takie po wstrzyknięciu podskórnym mają przedłużone działanie w porównaniu z rozpuszczalną insuliną ludzką, a to przedłużone działanie tłumaczy się odwracalnym wiązaniem z albuminą w tkance podskórnej, we krwi i w tkankach obwodowych (Markussen, Diabetologia 39, 281-288, 1996; Kurzhals, Biochem J. 312, 725-731, 1995; Kurzhals, J. Pharm Sciences 85, 304-308, 1996, i Whittingham, Biochemistry 36, 2826-2831, 1997).
Obecnie jednak odkryliśmy nowy mechanizm wydłużania działania niektórych rozpuszczalnych pochodnych insuliny. Ten nowy mechanizm opiera się w części lub w całości na tworzeniu rozpuszczalnych zagregowanych postaci pochodnych, o wielkości większej od aldolazy (masa cząsteczkowa = 158 kDa) w określonym układzie filtracji żelowej.
Krótki opis rysunków
Figura 1. Krzywa kalibracji wartości KAV względem masy cząsteczkowej w układzie filtracji żelowej z zastosowaniem kolumny Sephacryl® S-300 HR w obojętnym eluencie wodnym, zawierającym 125 mM chlorku sodowego i 20 mM fosforanu sodowego w pH 7,4. Widoczna jest niemal liniowa zależność między KAV a logarytmem masy cząsteczkowej. Normy przedstawiono w Tabeli 1.
Figura 2. Filtracja żelowa LysB29 (NEffi-karboksyheptadekanoilo)des(B30) insuliny ludzkiej, o zawartości, odpowiednio, 0, 2 i 3 Zn2+/heksamer, z zastosowaniem kolumny Sephacryl® S-300 HR w obojętnym eluencie wodnym, zawierającym 125 mM chlorku sodowego i 20 mM fosforanu sodowego w pH 7,4, dowodząca znaczenia Zn2+ dla tworzenia się agregatów tej pochodnej. Kolumnę 28 x 1 cm eluuje się z prędkością 15 ml/min. Pochodne insuliny wstrzyknięto (200 μθ jako standardowy preparat, zawierający 600 μM pochodnej, 0, 2 lub 3 Zn2+/6 cząsteczek insuliny, 20 mM NaCl, 16 mM fenolu, 16 mM m-krezolu, 7 mM fosforanu sodowego w pH 7,5.
Figura 3. Filtracja żelowa LysB29 (NEffi-karboksyheptadekanoilo)des(B30) insuliny ludzkiej, o zawartości 3 Zn2+/heksamer z zastosowaniem kolumny Sephacryl® S-300 HR w obojętnym eluencie wodnym, zawierającym 5 mM buforu - fosforanu sodowego, pH 7,5, 10 mM chlorku sodowego, 16 mM fenolu, 16 mM m-krezolu i 1,6% (masa/objętość) glicerolu. Porównanie z Figurą 2 uwidacznia znaczenie stężenia chlorku sodowego dla tworzenia się agregatów tej pochodnej.
Figura 4. Schemat syntezy sprzężonych ligandów.
Opis wynalazku
Termin „pochodna insuliny” w rozumieniu niniejszego opisu oznacza insulinę ludzką lub jej analog, w którym co najmniej jeden podstawnik przyłączony jest do jednego lub więcej aminokwasów.
Przez „analog insuliny ludzkiej” (i podobne określenia) w niniejszym opisie rozumie się insulinę ludzką, w której dokonano delecji jednego lub więcej aminokwasów, lub zastąpienia jednego lub więcej aminokwasów, włączając w to aminokwasy niekodowalne, lub insulinę ludzką, zawierającą dodatkowe aminokwasy, to znaczy więcej niż 51 aminokwasów.
Niniejszy wynalazek opiera się na odkryciu nowego zagregowanej i rozpuszczalnej postaci pochodnych insuliny. Nowa, rozpuszczalna, zagregowana postać pochodnych insuliny rozpuszcza się powoli po wstrzyknięciu podskórnym, co sprawia, że nadaje się do długodziałających preparatów insuliny; korzystne jest to, że preparat nie zawiera strątu. Korzyści z zastosowania preparatów rozpuszczalnych zamiast zawiesin są następujące: większa precyzja dawkowania, brak konieczności wstrząsania fiolki lub penu, możliwość zastosowania cieńszej igły, a zatem zmniejszenie bólu towarzyszącego wstrzyknięciu, łatwiejsze napełnianie fiolek lub naboju i brak konieczności stosowania kulki w naboju - stosuje się ją w celu zawieszania strątu w nieobecności powietrza.
Niniejszy wynalazek dotyczy rozpuszczalnego w wodzie agregatu pochodnych insuliny, cechujących się większymi rozmiarami, niż aldolaza, korzystnie, większymi, niż ferrytyna, według oznaczenia w układzie filtracji żelowej, jak to opisano w niniejszym zgłoszeniu.
Dokładniej, przedmiotem wynalazku jest rozpuszczalny w wodzie agregat pochodnych insuliny, charakteryzujący się tym, że reszty B24-B30 łańcucha B pochodnej insuliny stanowi sekwencja Phe-X-X-X-X-X-X, w której każdy X niezależnie od siebie oznacza dowolny kodowalny aminokwas lub delecję, przy czym co najmniej jeden X oznacza resztę lizynową NE-podstawioną przez kwas 5-α-litocholowy lub 5-e-litocholowy, przez łącznik α-glutamylu lub γ-glutamylu, lub β- lub α-aspartylu, gdzie a) agregat ma wymiary większe niż aldolaza jak określono w układzie filtracji żelowej, oraz b)
PL 195 845 B1 agregat obejmuje co najmniej 2 jony cynku, korzystnie od 2 do 5 jonów cynku, bardziej korzystnie od 2 do 3 jonów cynku, na 6 czą steczek pochodnej insuliny.
Objętość agregatu według niniejszego wynalazku, korzystnie, odpowiada wartości KAV poniżej 0,32, korzystnie, poniżej 0,20, według oznaczenia filtracją żelową z zastosowaniem żelu Sephacryl® S-300 HR, lub wartości KAV poniżej 0,50, korzystnie, poniżej 0,40, według oznaczenia filtracją żelową z zastosowaniem żelu Superose® 6HR.
Agregat jest, korzystnie, rozpuszczalny w pH w zakresie od 6,8 do 8,5.
Nową zagregowaną postać można obserwować dla pochodnych insuliny w warunkach, w których dla większości insulin, jak wiadomo, istnieje jednostka heksameryczna. Tak więc, w korzystnym wykonaniu, postać zagregowana składa się z podjednostek heksamerycznych, korzystnie, co najmniej 4, korzystniej, od 5 do 50, jeszcze korzystniej, 5-200 podjednostek heksamerycznych. Każda z podjednostek heksamerycznych zagregowanych postaci według niniejszego wynalazku może wykazywać dowolną ze znanych struktur R6, R3T3 lub T6 (Kaarsholm, Biochemistry 28, 4427-4435, 1989).
Stwierdzono również, że substancje takie, jak Zn2+ i związki fenolowe, o których wiadomo, że stabilizują jednostkę heksameryczną, stabilizują nowe zagregowane postacie niektórych pochodnych insuliny. „Cegiełkami” budującymi agregaty mogą być jednostki heksameryczne, znane z ustalonej przez krystalografię rentgenowską struktury insuliny (Blundell, Diabetes 21 (supl. 2), 492-505, 1972). Jony takie, jak Zn2+, o których wiadomo, że stabilizują jednostkę heksameryczną jako kompleksy 2 lub
Zn2+/heksamer (Blundell, Diabetes 21 (supl. 2), 492-505, 1972), mają zasadnicze znaczenie dla tworzenia się agregatów niektórych pochodnych, na przykład ludzkiej LysB29 (N εω-karboksyheptadekanoilo)des(B30)insuliny. Figura 2 przedstawia filtrację żelową ludzkiej LysB29 (NIokarboksyheptadekanoilo)des(B30)insuliny w opisanym układzie z preparatów zawierających, odpowiednio, 0, 2 i 3 Zn2+/heksamer. W nieobecności Zn2+ agregaty nie tworzą się, a pozycja elucji wskazuje na obecność monomeru lub dimeru. Tak więc agregat według niniejszego wynalazku, korzystnie, zawiera co najmniej dwa jony cynkowe, korzystniej, od 2 do 5 jonów cynkowych, jeszcze korzystniej od 2 do 3 jonów cynkowych, na sześć cząsteczek pochodnej insuliny. Ponadto agregat, korzystnie, zawiera co najmniej 3 cząsteczki związku fenolowego na sześć cząsteczek pochodnej insuliny. We wnęce środkowej struktury 2 Zn2+/heksamer 6 reszt GluB13 zapewnia miejsca wiązania dla jonów Ca2+ w liczbie do trzech (Sudmeier i wsp., Science 212, 560-562, 1981). I tak dodanie jonów Ca2+ stabilizuje heksamer i można je dodawać do preparatów farmaceutycznych, pod warunkiem, że pochodna insuliny pozostanie w roztworze.
Czas połowiczej eliminacji agregatu według niniejszego wynalazku po wstrzyknięciu podskórnym u człowieka jest, korzystnie, równie długi lub dłuższy, niż po wstrzyknięciu preparatu insuliny ludzkiej NPH.
W szczególnie korzystnym wykonaniu niniejszego wynalazku agregat składa się z pochodnych insuliny, których wiązanie albuminy jest mniejsze, niż ludzkiej LysB29 (N εω-karboksyheptadekanoilo)des(B30)insuliny.
Pierwotnymi strukturami pochodnych insuliny, które można wykorzystywać według niniejszego wynalazku, są struktury gdzie reszty B24-B30 łańcucha B pochodnej insuliny stanowi sekwencja Phe-X-X-X-X-X-X, w której każdy X niezależnie od siebie oznacza dowolny kodowalny aminokwas lub delecję, pod warunkiem, że pochodna insuliny wykazuje siłę działania co najmniej 5%, według na przykład testu komórkowego wolnych tłuszczów lub według powinowactwa do receptora insulinowego.
Lipofilowy podstawnik przy reszcie lizynowej pochodnej insuliny agregatu według niniejszego wynalazku stanowi, kwas 5-a-litocholowy lub 5-e-litocholowy.
Podstawnik lipofilowy jest, korzystnie, połączony z resztą lizynową poprzez łącznik γ- lub α-glutamylowy.
Niniejszy wynalazek dostarcza nowe pochodne insuliny, zdolne do tworzenia agregatów. Przedmiotowe pochodne insuliny można wytwarzać w postaci agregatów w preparatach farmaceutycznych, lub w postaci niezagregowanej w preparatach farmaceutycznych, ale w tym przypadku agregaty tworzą się po podskórnym wstrzyknięciu tych preparatów.
Preparat farmaceutyczny zawiera agregaty, których znaczna część (korzystnie, ponad 75%) ma rozmiary większe od aldolazy, przy oznaczeniu w filtracji żelowej z zastosowaniem jako eluentu ośrodka preparatu.
Preparat farmaceutyczny, zawierający analogi insuliny zarówno w postaci agregatów, jak i analogi szybkodziałające, przy czym te ostatnie stanowią, korzystnie, insulinę ludzką lub jeden z analoPL 195 845 B1
B26 B28 B29 gów insuliny ludzkiej AspB26, LysB28ProB29 lub des(B30). Preparat taki zapewnia zarówno szybki początek działania, jak i profil przedłużonego działania.
Preparat farmaceutyczny, korzystnie, zawiera insulinę agregującą i insulinę szybkodziałającą w stosunku molowym od 90:10 do 10:90.
Powolną dysocjację postaci zagregowanych można jeszcze bardziej spowalniać in vivo poprzez dodanie farmaceutycznie dopuszczalnych środków, zwiększających lepkość preparatu farmaceutycznego. Tak więc preparat farmaceutyczny według niniejszego wynalazku może również zawierać środek zwiększający lepkość, korzystnie, glikol polietylenowy, glikol polipropylenowy, ich kopolimery, dekstrany i/lub polilaktydy. Preparat farmaceutyczny, korzystnie, zawiera również substancję buforową, taką jak bufor TRIS, fosforanowy, glicynowy lub glicyloglicynowy (lub inną substancję amfoteryczną), środek nadający izotoniczność, taki jak NaCl, glicerol, mannit i/lub laktozę, oraz fenol i/lub m-krezol jako środki konserwujące. Spośród środków pomocniczych preparatu farmaceutycznego szczególnie istotne są chlorek sodu, stosowany jako środek nadający izotoniczność, i fenol, stosowany jako środek konserwujący, poprzez sprzyjanie agregacji preparatu, i poprzez to skuteczne wydłużanie czasu znikania z miejsca wstrzyknięcia. Preparat farmaceutyczny według niniejszego wynalazku, korzystnie, zawiera jony Na+ w stężeniu od 10 do 150 mM. Najkorzystniejszy jest preparat farmaceutyczny, zawierający 0,1-2 mM pochodnej insuliny według niniejszego wynalazku, 0,3-0,9% Zn (wagowo w stosunku do pochodnej insuliny), i związki fenolowe, takie jak fenol lub m-krezol, lub ich mieszaniny, w całkowitym stężeniu 5-50 mM, oraz jony Na+ w stężeniu od 10 mM do 150 mM.
Przedmiotem niniejszego wynalazku jest również sposób leczenia cukrzycy, polegający na podawaniu osobie, wymagającej takiego leczenia, skutecznej ilości rozpuszczalnych w wodzie agregatów pochodnych insuliny według niniejszego wynalazku lub skutecznej ilości pochodnej insuliny według niniejszego wynalazku, zdolnej do tworzenia rozpuszczalnych w wodzie agregatów po wstrzyknięciu podskórnym.
Pochodne insuliny według niniejszego wynalazku można wytwarzać sposobami ogólnymi opisanymi w WO 95/07931 (Novo Nordisk A/S), WO 97/31022 (Novo Nordisk A/S), zgłoszeniu PCT nr DK97/00296 (Novo Nordisk A/S), EP 511600 (Kurakay Co. Ltd.) i EP 712862 (Eli Lilly). Pochodne wymienione w Tabeli 2 wytworzono poprzez wybiórczą acylację grupy ε-aminowej LysB29 ludzkiej des(B30)insuliny przez ligandy aktywowane w postaci odpowiednich estrów N-hydroksybursztynimidowych. Sprzężone ligandy można wytwarzać konwencjonalnymi metodami chemii peptydów (Fig. 4).
Niektóre pochodne, wymienione w wyżej wspomnianych zgłoszeniach patentowych i opisane w publikacjach Markussena, Diabetologia 39, 281-288, 1996; Kurzhals, Biochem J. 312, 725-731, 1995; Kurzhals, J. Pharm Sciences 85, 304-308, 1996, i Whittingham, Biochemistry 36, 2826-2831, 1997, jako pochodne o przedłużonym działaniu z uwagi na mechanizm wiązania z albuminą, wykazują również zdolność do tworzenia rozpuszczalnych agregatów o dużej masie cząsteczkowej według niniejszego wynalazku. Ludzka LysB29 (NElitocholilo-Y-Glu-)des(B30)insulina według WO 95/07931 i ludzka LysB29 (NEffi-karboksyheptadekanoilo-)des(B30)insulina według WO 97/31022 są przykładami pochodnych insuliny zdolnych do tworzenia rozpuszczalnych agregatów o dużej masie cząsteczkowej w pH obojętnym. Istnieje wybiórczość między podstawnikami lipofilowymi w zakresie ich zdolności do pobudzania tworzenia się agregatów. I tak, z dwóch izomerów, ludzkiej LysB29 (NElitocholilo-Y-Glu-)des(B30)insuliny i ludzkiej LysB29 (NElitocholilo -a-Glu-)des(B30)insuliny, jedynie ten pierwszy tworzy agregaty w preparatach - por. Tabela 1.
Oznaczanie tworzenia się agregatów
Istnienia postaci zagregowanej dowodzi się poprzez filtrację żelową z zastosowaniem żelu z granicą wykluczenia wynoszącą 1500 kDa dla białek globularnych i 400 kDa dla dekstranów liniowych. W filtracji żelowej stosuje się wodny układ buforowy o pH obojętnym, i pochodne insuliny w postaci zagregowanej nakłada się na kolumnę w postaci preparatu farmaceutycznego w stężeniu 600 nmol insuliny/ml. Zagregowane postacie pochodnych insuliny eluują przed aldolazą, której masa cząsteczkowa wynosi 158 kDa.
Doświadczenie z filtrację żelową, w warunkach opisanych w tym rozdziale, jest bezpośrednią metodą fizykochemiczną ujawnienia potencjalnych właściwości tworzenia agregatów przez pochodną insuliny. Znikanie po wstrzyknięciu podskórnym u świń odzwierciedla połączenie właściwości wiązania z albuminą i tworzenia polimeru pochodnej insuliny, poza rozmaitymi czynnikami biologicznymi.
Tworzenie rozpuszczalnych agregatów o dużej masie cząsteczkowej wykazuje się poprzez filtrację żelową z zastosowaniem kolumny Sephacryl® S-300 HR w obojętnym eluencie wodnym, zawie6
PL 195 845 B1 rającym 125 mM chlorku sodowego i 20 mM fosforanu sodowego w pH 7,4. Ten układ buforowy dobrano w celu naśladowania siły jonowej i pH tkanki, w celu umożliwienia wykrycia pochodnych agregujących w warunkach zbliżonych do warunków po wstrzyknięciu podskórnym. Oczywiście, w innych układach buforowych, o mniejszym stężeniu chlorku sodowego, lub niższej lub wyższej wartości pH, pochodne mogą nie występować w stanie zagregowanym. Jednakże, gdy konieczna jest ocena rzeczywistego stanu agregacji w preparacie farmaceutycznym, jako eluent do filtracji żelowej stosuje się ośrodek preparatu, poza Zn2+, które są związane z insuliną. Kolumnę 28x1 cm eluuje się z prędkością 15 ml/h. Pochodne insuliny wstrzyknięto (200 μθ w postaci standardowego preparatu, zawierającego 600 μM pochodnej, 200 lub 300 μM Zn2+, 20 mM NaCl (lub innej substancji), 16 mM fenolu, 16 mM m-krezolu, 7 mM fosforanu sodowego, w pH 7,5.
Granicę wykluczenia Sephacryl® S-300 HR producent - Pharmacia - określa na 1500 kDa dla białek globularnych i 400 kDa dla dekstranów liniowych. W praktyce elucja substancji rozpuszczonych o różnej wielkości cząsteczki charakteryzuje się dostępną objętością według wartości KAV:
kAV = (VE - V0) (VT - V0) przy czym VE oznacza objętość elucji, V0 oznacza pustą objętość, na przykład objętość dekstranu niebieskiego, VT oznacza objętość całkowitą. Tak więc wartość KAV nie zależy od rozmiarów kolumny. W tym układzie aldolaza (masa cząsteczkowa 158 kDa) eluuje przy wartości KAV około 0,32, albumina - przy wartości KAV około 0,38, a monomeryczna postać insuliny (masa cząsteczkowa 6 kDa) przy wartości KAV około 0,71. Kalibracja kolumny z zastosowaniem serii norm masy cząsteczkowej wykazuje niemal liniową zależność między KAV a logarytmem masy cząsteczkowej - zob. Fig. 1.
T a b e l a 1
Wartości KAV, stałe wiązania z albuminą i czas połowiczej eliminacji dla wiążących się pochodnych insuliny o wymiarach większych od aldolazy (masa cząsteczkowa 158 kDa), niewiążących się pochodnych insuliny o wymiarach mniejszych od aldolazy i norm stosowanych jako znaczniki masy cząsteczkowej. Stałe wiązania z albuminą i czas połowiczej eliminacji u świń normalizowano stosując jako związek odniesienia ludzką LysB29 (NEtetradekanoilo)des(B30)insulinę. T50% eliminacji dla insuliny NPH u świń mierzono do 10,5 h (Markussen i wsp., 1996).
| Związki | Kav | Wiązanie z albuminą Kass (mol/l)-1 | T 50% eliminacji [h] |
| 1 | 2 | 3 | 4 |
| Wiążące się pochodne insuliny ludzkiej, tworzące agregaty o wymiarach większych, niż aldolaza** | |||
| LysB29 (NElitocholilo-Y-Glu-)-des(B30) | 0,04* | 0,3x105 | 22,8 |
| LysB29(NEo-karboksyheptadekanoilo)(B30) | 0,05 | 25x105 | 18,7 |
| LysB29 (NEo-karboksynonadekanoilo)(B30) | 0,04 | 36x105 | 21,9 |
| LysB29 (NE cholesteryloksykarbonylo) | 0,00 | ||
| Niewiążące się pochodne insuliny ludzkiej, tworzące agregaty o wymiarach mniejszych, niż aldolaza** | |||
| Insulina ludzka*** | 0,61 | 0 | (2) |
| Insulina ludzka (bez cynku) | 0,72 | ||
| LysB29(NElitocholilo) (bez cynku) | 0,74 | ||
| LysB29 (NEdekanoilo)*** | 0,67 | 0,06x105 | 5,1 |
| LysB29 (NEtetradekanoilo)des(B30) | 0,51 | 1,0x105 | 14,3 |
| LysB29 (NElitocholilo-a-Glu-)des(B30) | 0,53 | 0,3x105 | 11,8 |
| Normy**** |
PL 195 845 B1 cd. tabeli 1
| 1 | 2 | 3 | 4 |
| B9Asp, B27 insulina ludzka (monomeryczna, m.cz. 6 kDa) | 0,71 | 0 | (1) |
| Rybonukleaza (m.cz. 13,7 kDa) | 0,63 | ||
| Albumina (m.cz. 67 kDa) | 0,38 | ||
| Aldolaza (m.cz. 158 kDa) | 0,32 | ||
| Katalaza (m.cz. 232 kDa) | 0,30 | ||
| Ferrytyna (m.cz. 440 kDa) | 0,19 | ||
| Tyreoglobulina (m.cz. 669 kDa) | 0,08 |
* 75% pochodnej eluowanej w głównym piku, a 25% w pozycji monomeru lub dimeru.
** nałożono próbkę 200 μ jako preparat farmaceutyczny, zawierający 600 μM lub pochodnej, 200 ąM Zn2+, 0-20 mM chlorku sodowego, 7 mM fosforanu sodowego, 16 mM fenolu, 16 mM m-krezolu, 1,6% glicerolu, w pH 7,5 *** tak samo, jak **, z tym wyjątkiem, że 300 ąM Zn2+ **** normy nałożono po rozpuszczeniu w wodzie
Przykłady pochodnych insuliny, zdolnych do tworzenia rozpuszczalnych agregatów o dużej masie cząsteczkowej i wykazujących przedłużone działanie, oparte głównie na tej właściwości, stanowią ludzkie insuliny LysB29 (N^itocholilo-Y-Glu)des(B30) - zob. Tabela 1. Warto zauważyć, że w tej klasie związków stosunek między czasem połowiczej eliminacji a stałą wiązania albuminy jest wysoki. Przykłady pochodnych insuliny, niezdolnych do tworzenia rozpuszczalnych agregatów o dużej masie cząsteczkowej, lecz wykazujących przedłużone działanie, oparte na właściwości wiązania z albuminą, stanowią ludzka insulina LysB29 (N^itocholilo-a- Glu)des(B30) i ludzka insulina LysB29 (Nietradekanoilo)des(B30) - zob. Tabela 1. Warto zauważyć, że w tej klasie związków stosunek między czasem połowiczej eliminacji a stałą wiązania alnuminy jest niski. W patencie WO 97/31022 opisano wytwarzanie preparatu farmaceutycznego LysB29 (Ni!-karboksyheptadekanoilo)des(B30)insuliny ludzkiej, zawierającego 600 ąml/ml pochodnej, 5 mM buforu fosforanu sodowego (pH 7,5), 10 mM chlorku sodowego, 16 mM fenolu, 16 mM m-krezolu, 1-2 Zn2+/heksamer i 1,6% (wagowo) glicerolu. W celu ustalenia stopnia agregacji tego preparatu wykonano filtrację żelową, stosując kolumnę opisaną powyżej, lecz z zastosowaniem jako eluentu ośrodka preparatu. Zn2+ jest w większości związany z insuliną, tak więc nie uważa się go za składnik ośrodka. Ponieważ eluent zawiera substancje fenolowe, stężenie pochodnej we frakcjach monitoruje się HPLC - zob. Fig. 3. Wartość KAV około 0,45 wskazuje że w preparacie dominują jednostki heksameryczne lub dodekameryczne, to znaczy, w opublikowanym preparacie nie były obecne agregaty pochodnej insuliny o dużej masie cząsteczkowej.
Opracowano inny sposób pomiaru zdolności pochodnych insuliny do tworzenia rozpuszczalnych agregatów o dużej masie cząsteczkowej, odpowiedni do aparatury HPLC. Wymiary kolumny, objętość wstrzyknięcia i prędkość przepływu są takie same, jak w sposobie pierwszym, natomiast temperaturę zwiększa się do 37°C, a bufor fosforanowy zamienia na chlorowodorek trishydroksymetyloaminometanowy i dodatkowo chlorek sodowy. Stan zagregowania insuliny definiuje się jako eluowanie przed normą aldolazową w filtracji żelowej, podobnie jak w sposobie pierwszym.
B29
W Tabeli 2 przedstawiono wartości KAV dla dwóch poziomów. W porównaniu z normą - LysB29 (N4etradekanoilo)des(B30)insuliną - z tendencją pochodnej insuliny do tworzenia dużych agregatów koreluje długi czas znikania z miejsca wstrzyknięcia podskórnego.
T a b e l a 2
Tworzenie agregatów przez pochodne insuliny, mierzone według sposobu filtracji żelowej 2
| Związki | Kav (Superose 6HR)2) | Wiązanie z albuminą | Znikanie u świń1) | |
| 2 Zn2+/6 ins. | 3 Zn2+/6 ins. | Kass (105M1) | T50% (h) | |
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| LysB29 (Nslitocholilo-y-Glu-)-des(B30)HI | 0,00 | -0,01 | 0,33 | 22,8 |
PL 195 845 B1 cd. tabeli 2
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| LysB29 (NEdezoksycholilo-y-Glu-)-des(B30)HI | 0,20 | 0,07 | 0,03 | 13,9 |
| LysB29 (NElitocholilo-a-amido-y-Glu-)-des (B30)HI | -0,02 | 0,00 | 0,23 | >34 |
| LysB29 (NElitocholilo-e-Asp)-des(B30)HI | 0,18 | 0,11 | nie wyk. | nie wyk. |
| Lys829 (NElitocholilo-e-Ala)-des(B30)HI | 0,00 | 0,13 | nie wyk. | nie wyk. |
| LysB29 (NElitocholilo-y-aminobutanoilo)-des (B30)HI | 0,06 | 0,00 | nie wyk. | nie wyk. |
| LysB29 (NElitocholilo)-des(B30)HI | -0,01 | 0,23 | 0,38 | >34 |
| LysB29 (NEdehydrolito-cholilo)des(B30)Hl | 0,05 | 0,03 | 0,26 | >34 |
| LysB29 (NEcholanoilo)-des(B30)HI | 0,40 | 0,17 | 0,48 | 20,1 |
| LysB29 (NEheksadekanoilo-a-amido-y-Glu) des(B30)HI | 0,38 | 0,41 | 0,56 | 15,3 |
| AspA21LysB29 (NEtetradekanoilo)des(B30)HI | 0355 | 0,46 | 0,97 | 16,4 |
| LysB29 (NEtetradekanoilo)-des(B30)HI | 0,58 | 0,56 | 1,00 | 14,3 |
| Insulina ludzka (HI) | 0,64 | 0,64 | - | 2 |
| Normy: | ||||
| AspB9GluB27Hl (monomeryczna, m.cz. 6 kDa) | 0,73 | |||
| Rybonukleaza (m.cz. 13,7 kDa) | 0,72 | |||
| Owalbumina (m.cz. 43 kDa) | 0,58 | |||
| Aldolaza (m.cz. 158 kDa) | 0,50 | |||
| Ferrytyna (m.cz. 440 kDa) | 0,40 | |||
| Tyreoglobulina (m.cz. 669 kDa) | 0,28 |
1) znormalizowane dla insuliny ludzkiej LysB29(Ni'tetradekanoilo)-des(B30) (T50%=14,3 h)
2) Superose 6 HR 10/30 (Pharmacia Biotech) eluuje się w temperaturze 37°C chlorkiem sodu 140 mM, trishydroksymetyloaminometanem 10 mM, azydkiem sodowym 0,02% i kwasem solnym, dodanym do uzyskania pH 7,4. Po czasie elucji 90 min. (0,25 ml/min.) następuje etap płukania 150 min. (0,5 ml/min). Objętość wstrzyknięcia wynosiła 200 μΙ
Claims (7)
1. Rozpuszczalny w wodzie agregat pochodnych insuliny, znamienny tym, że reszty B24-B30 łańcucha B pochodnej insuliny stanowi sekwencja Phe-X-X-X-X-X-X, w której każdy X niezależnie od siebie oznacza dowolny kodowalny aminokwas lub delecję, przy czym co najmniej jeden X oznacza resztę lizynową NE-podstawioną przez kwas 5-a-litocholowy lub 5-a-litocholowy, przez łącznik aglutamylu lub γ-glutamylu, lub β- lub α-aspartylu, gdzie a) agregat ma wymiary większe niż aldolaza jak określono w układzie filtracji żelowej, oraz b) agregat obejmuje co najmniej 2 jony cynku, korzystnie od 2 do 5 jonów cynku, bardziej korzystnie od 2 do 3 jonów cynku, na cząsteczek pochodnej insuliny.
2. Agregat według zastrz. 1, znamienny tym, że ma wymiary większe od ferrytyny jak określono w układzie filtracji żelowej.
3. Agregat według zastrz. 1, albo 2, znamienny tym, że jego widoczna objętość odpowiada wartości KAV poniżej 0,32 określonej według filtracji żelowej z zastosowaniem Sephacryl® S-300 HR.
4. Agregat według zastrz. 3, znamienny tym, że jego widoczna objętość odpowiada wartości KAV poniżej 0,20 określonej według filtracji żelowej z zastosowaniem żelu Sephacryl® S-300 HR.
5. Agregat według zastrz. 1 albo 2, znamienny tym, że jego widoczna objętość odpowiada wartości KAV poniżej 0,50 określonej według filtracji żelowej z zastosowaniem Superose® 6HR.
PL 195 845 B1
6. Agregat według zastrz. 5, znamienny tym, że jego widoczna objętość odpowiada wartości KAV poniżej 0,40 określonej według filtracji żelowej z zastosowaniem żelu Superose® 6HR.
7. Agregat rozpuszczalny w wodzie, określony tak jak w zastrzeżeniu 1, znamienny tym, że jest rozpuszczalny w zakresie pH od 6,8 do 8,5.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DK121897 | 1997-10-24 | ||
| US6417097P | 1997-11-04 | 1997-11-04 | |
| PCT/DK1998/000461 WO1999021888A1 (en) | 1997-10-24 | 1998-10-23 | Aggregates of human insulin derivatives |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL340032A1 PL340032A1 (en) | 2001-01-15 |
| PL195845B1 true PL195845B1 (pl) | 2007-10-31 |
Family
ID=26065414
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL98340032A PL195845B1 (pl) | 1997-10-24 | 1998-10-23 | Rozpuszczalny w wodzie agregat pochodnych insuliny |
Country Status (20)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP1025125B1 (pl) |
| JP (1) | JP2003525846A (pl) |
| KR (1) | KR100539193B1 (pl) |
| CN (1) | CN1240718C (pl) |
| AT (1) | ATE243711T1 (pl) |
| AU (1) | AU757933B2 (pl) |
| BR (1) | BR9813128A (pl) |
| CA (1) | CA2308705A1 (pl) |
| DE (1) | DE69815877T2 (pl) |
| DK (1) | DK1025125T3 (pl) |
| ES (1) | ES2202899T3 (pl) |
| HU (1) | HUP0004096A3 (pl) |
| IL (2) | IL135400A0 (pl) |
| NO (1) | NO20002050L (pl) |
| PL (1) | PL195845B1 (pl) |
| PT (1) | PT1025125E (pl) |
| RU (1) | RU2218349C2 (pl) |
| UA (1) | UA69393C2 (pl) |
| WO (1) | WO1999021888A1 (pl) |
| ZA (1) | ZA989722B (pl) |
Families Citing this family (28)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7316999B2 (en) | 2000-06-02 | 2008-01-08 | Novo Nordisk A/S | Glucose dependent release of insulin from glucose sensing insulin derivatives |
| MY137181A (en) | 2001-05-21 | 2009-01-30 | Nektar Therapeutics | Pulmonary administration of chemically modified insulin |
| US7317000B2 (en) | 2001-12-02 | 2008-01-08 | Novo Nordisk A/S | Glucose-dependent insulins |
| JP4463814B2 (ja) * | 2003-08-05 | 2010-05-19 | ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ | 新規のインスリン誘導体 |
| EP2287184A3 (en) * | 2003-08-05 | 2011-08-10 | Novo Nordisk A/S | Novel insulin derivatives |
| CA2910494C (en) * | 2004-07-19 | 2018-10-23 | Biocon Limited | Insulin-oligomer conjugates, formulations and uses thereof |
| WO2006125765A2 (en) * | 2005-05-26 | 2006-11-30 | Novo Nordisk A/S | Acylated insulin with high purity |
| EP1969004B1 (en) | 2005-12-28 | 2011-08-10 | Novo Nordisk A/S | Compositions comprising an acylated insulin and zinc and method of making the said compositions |
| ATE482977T1 (de) * | 2006-02-27 | 2010-10-15 | Novo Nordisk As | Insulinderivate |
| WO2007140619A1 (en) * | 2006-06-08 | 2007-12-13 | Diabecore Medical Inc. | Derivatized insulin oligomers |
| CN101573133B (zh) | 2006-07-31 | 2014-08-27 | 诺沃-诺迪斯克有限公司 | Peg化延长的胰岛素 |
| WO2008034881A1 (en) | 2006-09-22 | 2008-03-27 | Novo Nordisk A/S | Protease resistant insulin analogues |
| CN101674812B (zh) | 2007-04-30 | 2013-12-11 | 诺沃-诺迪斯克有限公司 | 干燥蛋白组合物的方法、干燥的蛋白组合物和包含干燥的蛋白的药物组合物 |
| US9034818B2 (en) | 2007-06-13 | 2015-05-19 | Novo Nordisk A/S | Pharmaceutical formulations comprising an insulin derivative |
| WO2009112583A2 (en) | 2008-03-14 | 2009-09-17 | Novo Nordisk A/S | Protease-stabilized insulin analogues |
| PT2910570T (pt) | 2008-03-18 | 2017-01-24 | Novo Nordisk As | Análogos de insulina acilados, estabilizados contra proteases |
| ES2607003T3 (es) | 2008-10-30 | 2017-03-28 | Novo Nordisk A/S | Tratamiento de diabetes mellitus utilizando inyecciones de insulina con una frecuencia de inyección inferior a la diaria |
| DK2632478T3 (da) | 2010-10-27 | 2019-10-07 | Novo Nordisk As | Behandling af diabetes melitus under anvendelse af insulinindsprøjtninger indgivet med varierende indsprøjtningsintervaller |
| CN103191416A (zh) * | 2012-01-05 | 2013-07-10 | 四川大学 | 一种猪胰岛素超分子聚集体及其制备方法 |
| CA2870313A1 (en) | 2012-04-11 | 2013-10-17 | Novo Nordisk A/S | Insulin formulations |
| JP2016519127A (ja) | 2013-04-30 | 2016-06-30 | ノヴォ ノルディスク アー／エス | 新規投与レジメン |
| CN105636979B (zh) | 2013-10-07 | 2020-01-10 | 诺和诺德股份有限公司 | 胰岛素类似物的新衍生物 |
| AR099569A1 (es) | 2014-02-28 | 2016-08-03 | Novo Nordisk As | Derivados de insulina y los usos médicos de estos |
| DK3554534T3 (da) | 2016-12-16 | 2021-08-23 | Novo Nordisk As | Farmaceutisk sammensætning omfattende insulin |
| CA3082033A1 (en) | 2017-08-24 | 2019-02-28 | Novo Nordisk A\S | Glp-1 compositions and uses thereof |
| US10335464B1 (en) | 2018-06-26 | 2019-07-02 | Novo Nordisk A/S | Device for titrating basal insulin |
| JP7518149B2 (ja) | 2019-07-12 | 2024-07-17 | ノヴォ ノルディスク アー／エス | 高濃度インスリン製剤 |
| US11318191B2 (en) | 2020-02-18 | 2022-05-03 | Novo Nordisk A/S | GLP-1 compositions and uses thereof |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DK0792290T3 (da) * | 1993-09-17 | 2001-10-01 | Novo Nordisk As | Acyleret insulin |
| US5559094A (en) * | 1994-08-02 | 1996-09-24 | Eli Lilly And Company | AspB1 insulin analogs |
| US6451970B1 (en) * | 1996-02-21 | 2002-09-17 | Novo Nordisk A/S | Peptide derivatives |
-
1998
- 1998-10-23 EP EP98949960A patent/EP1025125B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-10-23 WO PCT/DK1998/000461 patent/WO1999021888A1/en not_active Ceased
- 1998-10-23 PL PL98340032A patent/PL195845B1/pl unknown
- 1998-10-23 ES ES98949960T patent/ES2202899T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-10-23 DE DE69815877T patent/DE69815877T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1998-10-23 DK DK98949960T patent/DK1025125T3/da active
- 1998-10-23 BR BR9813128-1A patent/BR9813128A/pt not_active IP Right Cessation
- 1998-10-23 IL IL13540098A patent/IL135400A0/xx not_active IP Right Cessation
- 1998-10-23 HU HU0004096A patent/HUP0004096A3/hu unknown
- 1998-10-23 RU RU2000112882/04A patent/RU2218349C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1998-10-23 AU AU96221/98A patent/AU757933B2/en not_active Ceased
- 1998-10-23 CN CNB988104458A patent/CN1240718C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1998-10-23 KR KR10-2000-7004229A patent/KR100539193B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 1998-10-23 CA CA002308705A patent/CA2308705A1/en not_active Abandoned
- 1998-10-23 UA UA2000042275A patent/UA69393C2/uk unknown
- 1998-10-23 PT PT98949960T patent/PT1025125E/pt unknown
- 1998-10-23 JP JP2000517995A patent/JP2003525846A/ja not_active Withdrawn
- 1998-10-23 AT AT98949960T patent/ATE243711T1/de not_active IP Right Cessation
- 1998-10-26 ZA ZA989722A patent/ZA989722B/xx unknown
-
2000
- 2000-03-31 IL IL135400A patent/IL135400A/en unknown
- 2000-04-18 NO NO20002050A patent/NO20002050L/no not_active Application Discontinuation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| UA69393C2 (uk) | 2004-09-15 |
| EP1025125A1 (en) | 2000-08-09 |
| RU2218349C2 (ru) | 2003-12-10 |
| AU757933B2 (en) | 2003-03-13 |
| HUP0004096A2 (hu) | 2001-05-28 |
| KR20010031247A (ko) | 2001-04-16 |
| ATE243711T1 (de) | 2003-07-15 |
| PT1025125E (pt) | 2003-11-28 |
| PL340032A1 (en) | 2001-01-15 |
| DK1025125T3 (da) | 2003-10-06 |
| WO1999021888A1 (en) | 1999-05-06 |
| BR9813128A (pt) | 2000-08-15 |
| IL135400A (en) | 2007-08-19 |
| DE69815877T2 (de) | 2004-05-19 |
| JP2003525846A (ja) | 2003-09-02 |
| ZA989722B (en) | 1999-04-26 |
| DE69815877D1 (de) | 2003-07-31 |
| CN1240718C (zh) | 2006-02-08 |
| ES2202899T3 (es) | 2004-04-01 |
| KR100539193B1 (ko) | 2005-12-27 |
| CN1281466A (zh) | 2001-01-24 |
| NO20002050D0 (no) | 2000-04-18 |
| NO20002050L (no) | 2000-06-23 |
| AU9622198A (en) | 1999-05-17 |
| IL135400A0 (en) | 2001-05-20 |
| EP1025125B1 (en) | 2003-06-25 |
| HUP0004096A3 (en) | 2001-12-28 |
| CA2308705A1 (en) | 1999-05-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| PL195845B1 (pl) | Rozpuszczalny w wodzie agregat pochodnych insuliny | |
| JP5351884B2 (ja) | インスリン分泌促進性ペプチドの懸濁製剤及び使用 | |
| EP1996224B1 (en) | Mixtures of amylin and insulin | |
| US6127334A (en) | Methods for producing biphasic insulin formulations | |
| AU719361B2 (en) | Insulin preparations containing carbohydrates | |
| AU782110B2 (en) | GLP-2 formulations | |
| JP6690062B2 (ja) | インスリン含有医薬組成物 | |
| US6451762B1 (en) | Aggregates of human insulin derivatives | |
| EP1432430A2 (en) | Pre-mixes of glp-1 and basal insulin | |
| JP2003535106A (ja) | グルコース検知性インスリン誘導体からの、インスリンのグルコース依存性放出 | |
| EP1044016A1 (en) | Stabilised insulin compositions | |
| HRP20000427A2 (en) | Insoluble compositions for controlling blood glucose | |
| KR20110021758A (ko) | 이형체-특이적 인슐린 유사체 | |
| PT96841A (pt) | Processo para a preparacao de composicoes farmaceuticas de insulina contendo novos complexos insulinicos de co(iii) | |
| US20050222006A1 (en) | Aggregates of human insulin derivatives | |
| EA031390B1 (ru) | Система длительного высвобождения гидрофобных белков на основе амида гиалуроновой кислоты | |
| MXPA00003697A (en) | Aggregates of human insulin derivatives | |
| CZ20001175A3 (cs) | Ve vodě rozpustné agregáty insulinových derivátů charakterizované větší velikostí než aldolasa, farmakologické preparáty, farmakologická směs | |
| AU2002313662A1 (en) | Pre-mixes of GLP-1 and basal insulin | |
| HK1208626B (zh) | 含有降血糖活性成分的长效控释脂质体凝胶组合物及其制备方法 |