PL199928B1 - Cząsteczka DNA umożliwiająca identyfikację rośliny kukurydzy tolerującej glifosat, para cząsteczek DNA, sposób wykrywania obecności cząsteczki DNA, cząsteczka DNA, sposób wbudowywania cechy tolerancji na glifosat, zestaw do wykrywania DNA, roślina kukurydzy tolerująca glifosat, transgeniczna komórka roślinna z tolerancją glifosatu, sposób wytwarzania rośliny kukurydzy i sposób hodowli rośliny kukurydzy - Google Patents

Cząsteczka DNA umożliwiająca identyfikację rośliny kukurydzy tolerującej glifosat, para cząsteczek DNA, sposób wykrywania obecności cząsteczki DNA, cząsteczka DNA, sposób wbudowywania cechy tolerancji na glifosat, zestaw do wykrywania DNA, roślina kukurydzy tolerująca glifosat, transgeniczna komórka roślinna z tolerancją glifosatu, sposób wytwarzania rośliny kukurydzy i sposób hodowli rośliny kukurydzy

Info

Publication number
PL199928B1
PL199928B1 PL348225A PL34822501A PL199928B1 PL 199928 B1 PL199928 B1 PL 199928B1 PL 348225 A PL348225 A PL 348225A PL 34822501 A PL34822501 A PL 34822501A PL 199928 B1 PL199928 B1 PL 199928B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
seq
dna
maize
plant
dna molecule
Prior art date
Application number
PL348225A
Other languages
English (en)
Other versions
PL348225A1 (en
Inventor
Carl F. Behr
Gregory R. Heck
Catherina Hironaka
Jinsong You
Original Assignee
Monsanto Technology Llc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=27395887&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=PL199928(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Monsanto Technology Llc filed Critical Monsanto Technology Llc
Publication of PL348225A1 publication Critical patent/PL348225A1/xx
Publication of PL199928B1 publication Critical patent/PL199928B1/pl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
    • C12N15/8274—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for herbicide resistance
    • C12N15/8275—Glyphosate
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8216—Methods for controlling, regulating or enhancing expression of transgenes in plant cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8216—Methods for controlling, regulating or enhancing expression of transgenes in plant cells
    • C12N15/8221—Transit peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
    • C12Q1/6895—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for plants, fungi or algae
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/13—Plant traits
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/158—Expression markers

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

Wynalazek dostarcza konstrukt DNA, który nadaje tolerancj e na glifosfat transgenicznej ro slinie zbo zowej. Dostarcza tak ze m.in. prób do wykrywania obecno sci przypadku ro sliny zbo zowej PV-ZMGT32(nk603) w oparciu o sekwencje DNA rekombinowanego konstruktu wstawionego do ge- nomu ro sliny zbo zowej i flankuj ace miejsce wstawki sekwencje genomowe. PL PL PL PL

Description

Opis wynalazku
Niniejszy wynalazek dotyczy cząsteczki DNA umożliwiającej identyfikację rośliny kukurydzy tolerującej glifosat, pary cząsteczek DNA, sposobu wykrywania obecności cząsteczki DNA, cząsteczka DNA, sposobu wbudowywania cechy tolerancji na glifosat, zestaw do wykrywania DNA, rośliny kukurydzy tolerującej glifosat, transgenicznej komórki roślinnej z tolerancją glifosatu, sposobu wytwarzania rośliny kukurydzy i sposobu hodowli rośliny kukurydzy.
Kukurydza jest ważną rośliną uprawną i podstawowym źródłem pożywienia w wielu rejonach świata. W celu poprawienia cech agronomicznych i jakości produktu w stosunku do kukurydzy zastosowane były sposoby biotechnologiczne. Jedną z takich cech agronomicznych jest tolerancja na herbicyd, zwłaszcza tolerancja na herbicyd glifosfatowy. Cechę tą kukurydzy nadawano przez ekspresję transgenu w roślinach kukurydzy (Patent St. Zjedn. Ameryki nr 6,040,497).
Jak wiadomo, obce geny w roślinach wpływają poprzez ich miejsce w chromosomie, być może w związku z strukturą chromatyny (np. heterochromatyny) lub z bliskością transkrypcyjnych elementów regulujących (np. wzmacniaczy) ściśle przylegających do miejsc integracji (Weising i wsp., Ann. Rev. Genet 22:421-477, 1988). Z tego powodu, często koniecznym jest zbadanie dużej liczby przypadków w celu identyfikacji przypadku charakteryzującego się optymalną ekspresją wprowadzanego, będącego przedmiotem zainteresowania genu. Na przykład, obserwuje się u roślin i u innych organizmów, że w wielu przypadkach może istnieć duża zmienność poziomów ekspresji wprowadzonych genów. Mogą także istnieć różnice w układach przestrzennych i czasowych, na przykład, różnice we względnej ekspresji transgenu w różnych tkankach roślinnych, które mogą nie odpowiadać wzorom jakie są spodziewane z transkrypcyjnych elementów regulatorowych obecnych we wprowadzonym konstrukcie genowym. Z tego powodu powszechnym jest wytwarzanie od setek do tysięcy różnych przypadków i przeglądanie tych przypadków w celu znalezienia jednego przypadku, posiadającego do celów komercyjnych pożądane poziomy i wzorce ekspresji transgenu. Przypadek, który ma pożądane poziomy lub wzorce ekspresji transgenu jest użyteczny do introgresji transgenu do innego genetycznego tła poprzez płciowy outcrossing stosując konwencjonalne sposoby hodowli. Potomstwo takich krzyżówek utrzymuje charakterystykę ekspresji transgenu oryginalnego transformantu. Strategia taka stosowana jest w celu zapewnienia pewnej ekspresji genowej w wielu odmianach, które są dobrze dostosowane do miejscowych warunków wzrostowych.
Korzystna byłaby możliwość wykrywania obecności poszczególnych przypadków w celu ustalenia czy potomstwo krzyżówki płciowej zawiera transgen. Ponadto, sposób wykrywania poszczególnego przypadku byłoby pomocne do zastosowania w przepisach i uregulowaniach wymagających na przykład wstępnej aprobaty handlowej i oznakowania żywności pochodzącej z rekombinantowych roślin zbożowych. Możliwe jest wykrycie obecności transgenu, każdą dobrze znaną metodą wykrywania kwasu nukleinowego, taką jak łańcuchowa reakcja polimerazowa (PCR) lub hybrydyzacja DNA stosując sondy kwasu nukleinowego. Te sposoby wykrywania generalnie koncentrują się na często stosowanych elementach genetycznych, takich jak promotory, terminatory, geny markerowe, itp. Ponieważ wynik takich metod może być nieskuteczny do rozróżnienia pomiędzy różnymi przypadkami, zwłaszcza stosując te same konstrukty DNA chyba, że sekwencja DNA chromosomalnego DNA przylegająca do wstawionego DNA (DNA flankujące) jest znana. Próba PCR specyficzna dla tego przypadku jest dyskutowana np. przez Windels i wsp. (Med. Fac. Landbouww, Univ. Gent 64/5b:459-462, 1999), którzy zidentyfikowali przypadek tolerancji na glifosfat u soi 40-3-2 przez zastosowanie zestawu primerów w PCR spinających połączenie pomiędzy wstawką a DNA flankującym, zwłaszcza jednego primera, który włączał jedną sekwencję z wstawki i drugiego primera, który obejmował sekwencję DNA flankującego.
Przedmiotem wynalazku jest zatem cząsteczka DNA umożliwiająca identyfikację roślin kukurydzy pV-ZMGT32 (nk603) tolerujących glifosat, charakteryzująca się tym, że zawiera sekwencję nukleotydową zidentyfikowaną jako SEQ ID nr:7 lub SEQ ID nr: 8. Korzystnie cząsteczka DNA według wynalazku jest obecna w roślinie kukurydzy, nasieniu kukurydzy, tkance kukurydzy lub w jądrze komórkowym kukurydzy.
Następnie przedmiotem wynalazku jest para cząsteczek DNA składająca się z: pierwszej cząsteczki DNA i z drugiej cząsteczki DNA, charakteryzująca się tym, że cząsteczki DNA są o wystarczającej długości sąsiednich nukleotydów o sekwencji SEQ ID nr: 7 lub ich komplementów do działania jako primery DNA lub sondy diagnostyczne dla DNA ekstrahowanego z rośliny kukurydzy PV-ZMGT32(nk603) lub jej potomstwa.
PL 199 928 B1
Wynalazek dotyczy także pary cząsteczek DNA składającej się z: pierwszej cząsteczki DNA i z drugiej cząsteczki DNA, tak, że cząsteczki DNA są o wystarczającej długości sąsiednich nukleotydów o sekwencji SEQ ID nr: 8 lub ich komplementów do działania jako primery DNA lub sondy diagnostyczne dla ekstrahowanego DNA z rośliny kukurydzy PV-ZMGT32(nk603) lub jej potomstwa.
Następnym przedmiotem wynalazku jest sposób wykrywania obecności cząsteczki DNA wybranej z grupy składającej się z SEQ ID nr: 7 i SEQ ID nr: 8 w próbce DNA, polegający na tym, że (a) ekstrahuje się próbkę DNA z rośliny kukurydzy;
(b) kontaktuje się próbkę DNA z DNA pary primera zawierającą cząsteczki DNA primera o wystarczającej długości sąsiadujących nukleotydów SEQ ID nr: 7 lub jego komplementu;
(c) dostarcza się warunki reakcji do amplifikacji kwasu nukleinowego;
(d) przeprowadza się reakcję amplifikacji kwasu nukleinowego, wytwarzając w ten sposób cząsteczkę amplikonu DNA; i (e) wykrywa się cząsteczkę DNA amplikonu.
Przedmiotem wynalazku jest także sposób wykrywania obecności cząsteczki DNA wybranej z grupy składającej się z SEQ ID nr: 7 i SEQ ID nr: 8 w próbce DNA, polegający na tym, że (a) ekstrahuje się próbkę DNA z rośliny kukurydzy;
(b) kontaktuje się próbkę DNA z cząsteczką DNA zidentyfikowaną jako SEQ ID nr: 9, SEQ ID nr: SEQ ID nr: 10, SEQ ID nr: 11 lub SEQ ID nr: 12, przy czym wspomniana cząsteczka DNA jest sondą DNA, która hybrydyzuje w ścisłych warunkach hybrydyzacji z cząsteczką DNA wybraną z grupy składającej się z SEQ ID nr: 7 lub SEQ ID nr: 8, i nie hybrydyzuje w ścisłych warunkach hybrydyzacji z próbką DNA zawierającą cząsteczkę DNA zidentyfikowaną jako SEQ ID nr: 7 lub SEQ ID nr: 8;
(c) poddaje się próbkę i sondę warunkom ścisłej hybrydyzacji i wykrywa się hybrydyzację sondy z DNA.
Wynalazek dotyczy również cząsteczki DNA wybranej z grupy składającej się z SEQ ID nr: 9, SEQ ID nr: 10, SEQ ID nr: 11, SEQ ID nr: 12 i ich komplementów. Korzystnie, taka cząsteczka DNA jest obecna w roślinie kukurydzy, nasieniu kukurydzy, tkance kukurydzy lub w jądrze komórkowym kukurydzy.
Następnym przedmiotem wynalazku jest sposób wbudowywania cechy tolerancji na glifosat do roślin kukurydzy, znamienny tym, że (a) ekstrahuje się próbkę DNA z potomnych roślin kukurydzy;
(b) kontaktuje się próbkę DNA z markerową cząsteczką kwasu nukleinowego wybraną z grupy składającej się z SEQ ID nr: 9, SEQ ID nr: 10, SEQ ID nr: 11, SEQ ID nr: 12 i ich komplementami;
(c) prowadzi się sposób wspomaganego markerem wbudowywania cechy tolerancji na glifosat, przy czym cecha tolerancji na glifosat jest genetycznie związana z komplementem cząsteczki markerowego kwasu nukleinowego.
Kolejnym przedmiotem wynalazku jest zestaw do wykrywania DNA zawierający co najmniej jedną cząsteczkę DNA o dostatecznej długości sąsiadujących nukleotydów homologicznych lub komplementarnych do SEQ ID nr: 7 lub SEQ ID nr: 8, które działają jako primer DNA lub specyficzna sonda dla przypadku kukurydzy PV-ZMGT32(nk603) i jej potomstwa.
Następnym przedmiotem wynalazku jest transgeniczna komórka roślinna z tolerancją glifosatu, zawierająca włączoną w genom tej komórki roślinnej cząsteczkę DNA kodującą tolerancyjną na glifosat EPSPS oraz DNA o sekwencji nukleotydowej zdefiniowanej w SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11 i SEQ ID NO: 12.
Przedmiotem wynalazku jest również sposób wytwarzania rośliny kukurydzy, która toleruje stosowanie herbicydu glifosatu, polegający na tym, że
a) krzyżuje się roślinę zawierającej włączoną w jej genom cząsteczkę DNA kodującą tolerancyjną na glifosat EPSPS, regiony złącza SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11 i SEQ ID NO: 12, z inną rośliną kukurydzy;
b) otrzymuje się co najmniej jedno pokolenie roślin potomnych pochodzących z krzyżówki (a); i
c) dokonuje się selekcji potomstwa, które jest tolerancyjne na glifosat i zawiera regiony złącza
SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11 i SEQ ID NO: 12.
Przedmiotem wynalazku jest także sposób hodowli rośliny kukurydzy, która toleruje stosowanie herbicydu glifosat, polegający na tym, że
a) sadzi się co najmniej jedno nasienie rośliny kukurydzy zawierające włączoną w jego genom cząsteczkę DNA kodującą tolerancyjną na glifosat EPSPS i regiony łącznika SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11 oraz SEQ ID NO: 12,
PL 199 928 B1
b) prowadzi się wzrost z tego nasienia i uzyskuje się roślinę kukurydzy;
c) pokrywa się tą roślinę herbicydem glifosatem tak, że wspomniana roślina ma mniejsze uszkodzenia wegetatywne i mniejsze uszkodzenie plonowania w porównaniu do innych roślin kukurydzy, które nie zawierają SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11 i SEQ ID NO: 12. Korzystnie etapem selekcjonującym w c) w tym sposobie jest pokrywanie glifosatem.
Również korzystnie, etap selekcjonujący w części c) zawiera etapy:
(i) ekstrahowania próbki DNA z potomnych roślin kukurydzy;
(ii) kontaktowania próbki DNA z markerową cząsteczką kwasu nukleinowego wybraną z grupy składającej się z SEQ ID nr: 9, SEQ ID nr: 10, SEQ ID nr: 11, SEQ ID nr: 12 i ich komplementami;
(iii) prowadzenia sposobu wspomagania wbudowywania markera cechy tolerancji na glifosat, przy czym cecha tolerancji na glifosat jest genetycznie powiązana do komplementu cząsteczki markerowego kwasu nukleinowego.
Cząsteczka DNA charakteryzuje się tym, że wspomniana cząsteczka DNA jest obecna w roślinie kukurydzy, nasieniu kukurydzy, tkance kukurydzy lub w jądrze komórkowym kukurydzy.
Przedmiotem wynalazku jest nowa cząsteczka DNA 5' ACCAAGCTTTTATAATAG 3' (SEQ ID nr: 12) i jej komplement, przy czym ta cząsteczka DNA jest nowa w obrębie PV-ZMGT32(nk603) i w jej potomstwie. Roślina kukurydzy i jej nasiona zawierające tą cząsteczkę są przedmiotem wynalazku.
Zgodnie z innym aspektem wynalazku, przedmiotem wynalazku są cząsteczki DNA, które zawierają nowy region transgenowo/genomowy wstawki SEQ ID nr:7 i SEQ ID nr:8 i są homologiczne lub komplementarne do SEQ ID nr:7 i SEQ ID nr:8.
Cząsteczki DNA zawierające wystarczającą długość części sekwencji DNA transgenu SEQ ID nr: 7 i podobną wystarczającą długość flankującej 5' sekwencji DNA transgenu, przy czym te cząsteczki DNA są użyteczne jako DNA primerowe w metodach amplifikacji co dostarcza będącego przedmiotem wynalazku - produkt DNA amplikonu, zwłaszcza wytworzonego z DNA PV-ZMGT32(nk603) i jego potomstwa. Primery DNA homologiczne lub komplementarne do długości SEQ ID nr:7 i SEQ ID nr:8 są przedmiotem wynalazku. Amplikony wytworzone przy zastosowaniu primerów DNA, które są diagnostyczne dla przypadku kukurydzy PV-ZMGT32(nk603) i jej potomstwa są również przedmiotem wynalazku.
Zgodnie z innym aspektem wynalazku, dostarczane są sposoby wykrywania obecności DNA odpowiadającej przypadkowi kukurydzy PV-ZMGT32(nk603) w próbce. Sposoby takie obejmują: (a) kontaktowanie próbki zawierającej DNA z zestawem primerowym DNA, który jeżeli użyty jest w reakcji amplifikacji kwasu nukleinowego z wyekstrahowanym z przypadku kukurydzy PV-ZMGT32 (nk603) genomowym DNA, wytwarza amplikon, który jest diagnostyczny dla przypadku kukurydzy PVZMGT32(nk603); (b) przeprowadzenie reakcji amplifikacji kwasu nukleinowego, wytwarzając w ten sposób amplikon; i (c) wykrywanie amplikonu. Para cząsteczek DNA zawierająca zestaw primerowy homologiczny lub komplementarny do SEQ ID nr:7 lub SEQ ID nr:8 działający w reakcji amplifikacji kwasu nukleinowego do wytworzenia cząsteczki DNA amplikonu diagnostycznej dla PVZMGT32(nk603). Bardziej szczegółowo, para cząsteczek DNA zawierająca zestaw primerowy DNA, przy czym cząsteczki DNA są zidentyfikowane jako SEQ ID nr:13 lub ich komplementy i SEQ ID nr:14 lub ich komplementy; SEQ ID nr:15 lub jej komplementy i SEQ ID nr:16 lub jej komplementy. Amplikon zawierający cząsteczki DNA SEQ ID nr: 13 i SEQ ID nr: 14. Amplikon zawierający DNA SEQ ID nr: 15 i SEQ ID nr:16. Amplikon wytwarzany powyżej opisanym sposobem moż e hybrydyzować w ścisłych warunkach z SEQ ID nr:9, SEQ ID nr:10, SEQ ID nr:11 lub SEQ ID nr:12.
Zgodnie z innym aspektem, przedmiotem wynalazku są sposoby wykrywania obecności cząsteczki DNA odpowiadającej przypadkowi PV-ZMGT32(nk603) w próbce, metody te obejmują: (a) kontaktowanie próbki zawierającej DNA wyekstrahowane z rośliny kukurydzy z cząsteczką sondy DNA hybrydyzującej w ścisłych warunkach hybrydyzacji z genomowym DNA z przypadku kukurydzy PVZMGT32(nk603) lecz nie hybrydyzujący w ścisłych warunkach hybrydyzacji z kontrolnym DNA kukurydzy; (b) poddaje się próbkę i sondę ścisłym warunkom hybrydyzacji i (c) wykrywa hybrydyzację sondy do tego DNA. Bardziej szczegółowo, sposób wykrywania obecności cząsteczki DNA odpowiadającej przypadkowi PV-ZMGT32(nk603) w próbce, sposób ten polega na (a) kontaktowaniu próbki zawierającej DNA ekstrahowany z rośliny kukurydzy z cząsteczką sondy DNA, która składa się z SEQ ID nr:9, SEQ ID nr:10, SEQ ID nr:11 lub SEQ ID nr:12, przy czym wspomniana cząsteczka DNA hybrydyzuje w ścisłych warunkach hybrydyzacji z genomowymi DNA z przypadkiem kukurydzy PV-ZMGT32 (nk603) i nie hybrydyzuje w ścisłych warunkach hybrydyzacji z kontrolną cząsteczką DNA; (b) poddaje się próbkę i sondę ścisłym warunkom hybrydyzacji; i (c) wykrywa się hybrydyzację sondy DNA.
PL 199 928 B1
Zgodnie z innym aspektem, wynalazek dostarcza sposobu wyboru roślin kukurydzy według wynalazku z tolerancją na glifosfat i ich potomstwa, obejmujący ekstrakcję DNA z próbki rośliny, kontaktowanie tego DNA z cząsteczką markerowego kwasu nukleinowego wybraną z grupy obejmującej SEQ ID nr:9, SEQ ID nr:10, SEQ ID nr:11 lub SEQ ID nr:12, lub ich komplementami/wykrywanie hybrydyzacji DNA tej wspomnianej markerowej cząsteczki kwasu nukleinowego i przeprowadzenie analizy hodowli przy pomocy tego markera dla genetycznego powiązania cechy tolerancji na glifosfat z czą steczką markerowego kwasu nukleinowego.
Niniejszy wynalazek dostarcza sposobu wytwarzania rośliny kukurydzy z tolerancją herbicyd glifosfatowy obejmujący transformowanie komórki kukurydzy konstruktem DNA (pMON25496), wybieranie komórki kukurydzy z tolerancją na traktowanie skuteczną dawką glifosfatu, a następnie hodowlę tej komórki kukurydzy do wyprowadzenia płodnej rośliny kukurydzy. Płodna roślina kukurydzy może być samopylna lub krzyżowana z kompatybilnymi odmianami kukurydzy do wytworzenia potomstwa z tolerancją glifosfatu.
Wynalazek dotyczy także zestawu do wykrywania DNA obejmującego co najmniej jedną cząsteczkę DNA o wystarczającej długości sąsiadujących nukleotydów homologicznych lub komplementarnych do SEQ ID nr:7 lub SEQ ID nr:8, która działa jako primer DNA lub sonda specyficzna dla przypadku PV-ZMGT32(nk603) lub jego potomstwa.
Powyższe i inne aspekty tego wynalazku staną się oczywiste z poniższego opisu szczegółowego i towarzyszących rysunków.
Wynalazek jest zilustrowany na Figurze, 1
Figura 1 przedstawia mapę plazmidu pMON25496
Definicje powszechnie znanych w biologii molekularnej określeń można także znaleźć w Rieger i wsp., Glossary of Genetics: Classical and Molecular, 5 wydanie, Springer-Verlag: New York, 1991; i Lewin, Genes V, Oxford University Press: New York, 1994. Nomenklatura zasad DNA jaka jest stosowana zgodna jest z 37 CFR § 1.822.
Tak jak zastosowane tutaj określenie „zboże oznacza Zea mays lub kukurydzę i obejmuje odmiany roślin, które mogą być uprawiane z kukurydzą włącznie z gatunkami dzikiej kukurydzy. Tak jak stosuje się tutaj, określenie „zawierający oznacza „obejmujący lecz nie ograniczony do. „Glifosat oznacza N-fosfonometyloglicynę i jej sole. Glifosat jest składnikiem aktywnym herbicydu Roundup® (Monsanto Co.). Traktowanie „glifosatowym herbicydem odnosi się do traktowania herbicydem Roundup®, Roundupem Ultra®, Roundup Ultra Max® lub każdym innym preparatem herbicydowym zawierającym glifosat. Wybór poziomów stosowania preparatu glifosatu, który stanowi skuteczną biologicznie dawkę, jest w zakresie doświadczenia przeciętnego technika agrotechniki.
Określenie „sonda oznacza wyizolowany kwas nukleinowy, do którego dołączono wykrywany konwencjonalnie znacznik lub cząsteczkę reporterową, na przykład izotop radioaktywny, ligand, czynnik chemiluminescencyjny lub enzym. Taka sonda jest komplementarna do nici docelowego kwasu nukleinowego, w przypadku niniejszego wynalazku, do nici DNA genomowego z przypadku kukurydzy PV-ZMGT32(NK603) czy to rośliny kukurydzy czy próbki zawierającej DNA z tego przypadku. Sondy według niniejszego wynalazku, zawierają nie tylko kwasy deoksyrybonukleinowy lub rybonukleinowy ale także poliamidy i inne materiały sondy, wiążące się specyficznie do docelowej sekwencji DNA i mogące być zastosowane do wykrycia obecności tej docelowej sekwencji DNA.
„Primerami są izolowane kwasy nukleinowe, które są rozplatane do komplementarnej nici docelowego DNA przez hybrydyzację kwasu nukleinowego z powstaniem hybrydy pomiędzy primerem i tą nicią docelowego DNA, następnie wydłużonej razem z nicią DNA docelowego, a nastę pnie wydłużane razem a docelową nicią DNA przez polimerazę, na przykład polimerazę DNA. Pary primerów według niniejszego wynalazku odnoszą się do ich zastosowania do amplifikacji docelowych sekwencji kwasu nukleinowego, na przykład w reakcję polimerazy łańcuchowej (PCR) lub innymi konwencjonalnymi metodami amplifikacji kwasów nukleinowych.
Sondy i primery są wystarczającej długości nukleotydowej do związania docelowej sekwencji DNA, szczególnie w warunkach hybrydyzacji lub warunkach reakcji określonych przez operator. Ta długość może być każdą długością, która jest wystarczającą długością użyteczną do metody detekcji z wyboru. Generalnie, stosuje się nukleotydy o dł ugoś ci 11 lub wię cej nukleotydów, korzystnie 18 nukleotydów lub więcej, bardziej korzystnie 24 lub więcej nukleotydów i najkorzystniej 30 lub więcej nukleotydów. Takie sondy i primery hybrydyzują specyficznie z sekwencją docelową w ścisłych warunkach hybrydyzacji. Korzystnie, sondy i primery, według wynalazku, mają pełne podobieństwo do sekwencji DNA sąsiednich nukleotydów z sekwencjami docelowymi, jednakże sondy różniące się od
PL 199 928 B1 sekwencji docelowych DNA i dlatego zachowujące zdolność do hybrydyzacji z docelowymi sekwencjami DNA można zaprojektować konwencjonalnymi metodami.
Sposoby przygotowywania i stosowania sond i primerów są opisane w na przykład w: Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2-wydanie, vol. 1-3, Sambrook i wsp., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 1989 (dalej nazywany w skrócie „Sambrook i wsp., 1989); Current Protocols in Molecular Biology, wyd. Ausubel i wsp., Greene Publishing and Wiley-Interscience, New York, 1992 (z periodyczną aktualizacją) (dalej nazywany w skrócie, „Ausubel i wsp., 1992); i Innis i wsp., PCR Protocols: A Guide to methods and Applications, Academic Press: San Diego, 1990. Pary PCR-primer mogą pochodzić ze znanych sekwencji, na przykład, przez zastosowanie programu komputerowego przeznaczonego do tego celu jak Primer (Version 0,5© 1991). Whitehead Institute for Biomedical Research, Cambridge, MA).
Primery i sondy oparte na flankującym DNA i sekwencje wstawek ujawnione tutaj, mogą być stosowane do potwierdzenia (i, jeśli to konieczne do poprawienia) ujawnionych sekwencji metodami konwencjonalnymi, to znaczy przez reklonowanie i sekwencjonowanie takich sekwencji.
Sondy kwasu nukleinowego i primery według niniejszego wynalazku hybrydyzują w ścisłych warunkach z docelową sekwencją DNA. Każdy konwencjonalny sposób hybrydyzacji kwasu nukleinowego lub amplifikacji może być stosowany do identyfikacji w próbce obecności DNA z transgenicznych przypadków. Cząsteczki kwasu nukleinowego lub ich fragmenty są zdolne, w pewnych warunkach, do specyficznej hybrydyzacji z innymi cząsteczkami kwasu nukleinowego. Tak jak stosuje się tutaj, uważa się, że dwie cząsteczki kwasu nukleinowego są zdolne do specyficznej hybrydyzacji jedna z drugą, jeśli te dwie cząsteczki są zdolne to tworzenia naprzeciwległej, podwójnej struktury nici kwasu nukleinowego. Cząsteczki kwasu nukleinowego są uważane za „komplementarne do innej cząsteczki kwasu nukleinowego jeśli wykazują one pełną zgodność. Tak jak stosuje się tutaj, uważa się cząsteczki wykazują „całkowitą zgodność jeżeli każdy nukleotyd jednej cząsteczki jest komplementarny do nukleotydu innej cząsteczki. Dwie cząsteczki są uważane za „minimalnie komplementarne jeżeli mogą one hybrydyzować z inną cząsteczką z wystarczającą stałością pozwalającą na rozplecenie jednej z drugą co najmniej w warunkach konwencjonalnej „niskiej ś cisł o ś ci konwencjonalnie. Podobnie, cząsteczki są uważane za „komplementarne jeżeli mogą one hybrydyzować jedna z drugą z dostateczną stabilnością pozwalającą na pozostanie w stanie rozplecenia jedna z drugą w konwencjonalnie „ścisłych warunkach. Konwencjonalna ścisłość warunków jest opisana przez Sambrook i wsp., 1089 i przez Haymes i wsp., W: Nucleic Acid Hybridization, A Practical Approach, IRL Press, Washington, DC (1985). Odstępstwa od pełnej komplementarności są dlatego dopuszczalne tak długo jak takie odstępstwa nie wykluczą całkowicie zdolności tych cząsteczek do tworzenia struktury dwu niciowej. Po to, aby cząsteczka kwasu nukleinowego mogła służyć jako primer albo sonda potrzebuje ona wystarczająco komplementarnej sekwencji aby być zdolną do utworzenia stałej dwuniciowej struktury przy zastosowaniu szczególnego rozpuszczalnika i stężeń soli.
Tak jak stosuje się tutaj, zasadniczo homologiczna sekwencja jest cząsteczką kwasu nukleinowego, która będzie specyficznie hybrydyzowała z komplementarną cząsteczką kwasu nukleinowego do której jest porównywana w ścisłych warunkach hybrydyzacji. Odpowiednia ścisłość warunków promująca hybrydyzację DNA, na przykład 6,0x chlorek sodowy/cytrynian sodowy (SSC) w około 45°C, po którym następuje przemywanie w 2,0xSSC w 50°C, są znane fachowcowi w tej dziedzinie lub które można znaleźć w Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, N.Y. (1989), 6.3.1-6.3.6. Na przykład, stężenie soli w etapie przemywania może być wybrane z niskiej ścisłości o około 2,0xSSC przy 50°C do warunków wysokiej ścisłości o około 0,2xSSC przy 50°C. Ponadto, temperatura w etapie przemywania może wzrastać od warunków o niskiej ścisłości w temperaturze pokojowej, około 22°C do warunków o dużej ścisłości w około 65°C. Zarówno temperatura jak i sól mogą być różne, albo zarówno temperatura jak i stężenie soli mogą być stałe - podczas gdy inne zmienne podlegają zmianom. W korzystnej postaci, kwas nukleinowy według niniejszego wynalazku będzie hybrydyzował specyficznie z jedną lub większą ilością cząsteczek kwasu nukleinowego przedstawionych na SEQ ID nr : 9, 10, 11 i 121 lub z ich komplementami lub fragmentami zarówno w średnich warunkach ścisłości, na przykład przy 2,0 x SSC i około 65°C. W szczególnie korzystnej postaci, kwas nukleinowy według wynalazku będzie hybrydyzował specyficznie z jednym lub większa ilością cząsteczek kwasu nukleinowego przedstawionych na SEQ ID nr: 9 do SEQ ID nr 12: lub ich komplementami lub fragmentami również w ostrych warunkach hybrydyzacji. W jednym aspekcie wynalazku, korzystna cząsteczka markerowego kwasu nukleinowego, według niniejszego wynalazku, posiada sekwencje kwasu nukleinowego przedstawioną na SEQ ID nr: 9 do SEQ ID nr 12: lub ich komplementów lub fragmenPL 199 928 B1 tów. W innym aspekcie wynalazku, korzystna cząsteczka markerowego kwasu nukleinowego według wynalazku posiada pomiędzy 80% a 100% lub 90% a 100% identyczności sekwencji z sekwencją kwasu nukleinowego przedstawioną na SEQ ID nr: 9 do SEQ ID nr: 12 lub jej komplementami lub fragmentami. W dalszym aspekcie wynalazku, korzystna cząsteczka markerowego kwasu nukleinowego według wynalazku zajmuje pomiędzy 95% a 100% identyczności sekwencji z sekwencją przedstawiona na SEQ ID nr 9: do SEQ ID nr 12: lub ich komplementami lub fragmentami. Sekwencje SEQ ID nr: 9 do SEQ ID nr: 12 mogą być stosowane jako markery w sposobach hodowli roślin do identyfikowania potomstwa krzyżówek genetycznych, podobnych do sposobów opisywanych dla prostej analizy sekwencji powtórki sekwencji DNA markera w „DNA markers: Protocols, applications and overviews: (1997) 173-185, Cregan i wsp., wydawca Wiley-Liss NY; które w całości włączone jest przez zacytowanie. Hybrydyzacja sondy z docelową cząsteczką DNA może być wykrywana wieloma metodami znanymi w stanie techniki, obejmują one lecz nie są ograniczone do etykietek fluorescencyjnych, radioaktywnych, opartych, przeciwciał opartych o etykietki i etykietek chemiluminescencyjnych.
Odnośnie amplifikacji docelowej sekwencji kwasu nukleinowego (to znaczy przez PCR) stosując szczególną parę primerów amplifikacji, „warunki ścisłości są warunkami które pozwalają tej parze primera na hybrydyzację jedynie z docelową sekwencją kwasu nukleinowego do której primer posiadający odpowiadającą sekwencję typu dzikiego (lub jej komplement) mógłby się wiązać i korzystnie wytwarzać unikalny produkt amplifikacji, amplikon, w reakcji amplifikacji termalnej DNA.
Określenie „specyficzny dla (sekwencja docelowa) wskazuje, że sonda lub primer hybrydyzuje w ścisłych warunkach hybrydyzacji, tylko z sekwencją docelową, w próbce zawierającej tą sekwencję docelową.
Tak jak zastosowano tutaj „amplifikowane DNA lub „amplikon odnosi się do produktu amplifikacji docelowej sekwencji kwasu nukleinowego, będącej częścią wzorcowego kwasu nukleinowego. Na przykład, w celu określenia czy roślina kukurydzy pochodząca z krzyżówki płciowej zawiera przypadek transgenicznego genomowego DNA z tej rośliny kukurydzy według niniejszego wynalazku, DNA ekstrahowane z próbki tkanki roślinnej kukurydzy może być poddawane amplifikacji kwasu nukleinowego stosując parę primera DNA, który zawiera pierwszy primer pochodzący z sekwencji flankującej w genomie rośliny, przylegający do miejsca insercji wstawionego heterologicznego DNA i drugi primer pochodzący z wstawionego heterologicznego DNA w celu wytworzenia amplikonu, który jest diagnostyczny jeśli chodzi o obecność tego przypadku DNA. Amplikon ten może rozciągać się co do długości łącznej długości pary primerów plus jedna para zasad nukleotydowych, korzystnie plus około pięćdziesięciu par zasad nukleotydowych, bardziej korzystnie plus około sto pięćdziesięciu par zasad nukleotydowych. Ewentualnie, para zasad może pochodzić od sekwencji flankującej oba miejscach wstawionego DNA, co daje produkcję amplikonu, który obejmuje pełną wstawioną sekwencję (np., fragment DNA Mlul z konstruktu ekspresji pMON25490, Fig. 1, około 6706 par zasad nukleotydowych). Przedstawiciel pary primera pochodzącej z sekwencji genomowej rośliny może być umiejscowiony w pewnej odległości od wstawionej sekwencji DNA, odległość ta może obejmować od jednej pary zasad nukleotydowych aż do granicy reakcji amplifikacji, lub do około dwudziestu tysięcy par zasad nukleotydowych. Zastosowanie terminu „amplikon szczególnie wyłącza primery dimeryczne, które mogą być tworzone w reakcji termalnej DNA.
Amplifikacja kwasu nukleinowego może być dokonana wieloma różnymi metodami znanymi w stanie techniki, włączają c w to ł a ń cuchową reakcję polimerazy (PCR). Wiele sposobów amplifikacji znanych jest ze stanu techniki i opisanych jest między innymi w opisach patentach St. Zjedn. Am. o numerach nr 4,683,195 i 4,683,202 oraz w Protokoł ach PCR: PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications. Wydawca Innis i wsp., Academic Press, San Diego, 1990. Sposoby amplifikacji PCR były rozwijane w celu zamplifikowania do 22 kz genomowego DNA i do 42 kz bakteriofagowego DNA (Cheng i wsp., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:5695-5699, 1994). Te, jak również inne znane ze stanu techniki, sposoby amplifikacji DNA, mogą być stosowane w praktyce niniejszego wynalazku. Sekwencja heterologicznej wstawki DNA lub sekwencja flankująca DNA z przypadku kukurydzy PV-ZMGT32 (nk603) mogą być weryfikowane (i jeśli to konieczne poprawiane) przez amplifikację takich sekwencji z DNA ekstrahowanego z nasion lub roślin złożonych w depozycie ATCC o numerze dostępu nr PTA2478, stosując primery DNA pochodzące z sekwencji dostarczonych tutaj a następnie przez standardowe sekwencjonowanie DNA amplikonu PCR (-owego) lub klonowanego.
Amplikon wytworzony tymi sposobami może być wykryty wieloma różnymi technikami. Jedną taką metodą jest Genetic Bit Analysis (Nikiforov i wsp., Nucleic Acid Res. 22:4167-4175, 1994) gdzie zaprojektowane DNA oligonukleotydowe obejmuje zarówno przylegającą sekwencję flankującą geno8
PL 199 928 B1 mowego DNA jak i sekwencję wstawionego DNA. Oligonukleotyd jest unieruchomiony w studzienkach płytki z mikrostudzienkami. Po przeprowadzeniu PCR regionu będącego przedmiotem zainteresowania (stosując jeden primer w sekwencji wstawki i jeden w przylegającej flankującej sekwencji genomowej), pojedynczo-łańcuchowy produkt PCR może być hybrydyzowany z unieruchomionym oligonukleotydem i służyć jako wzorzec dla reakcji wydłużenia pojedynczą zasadą, stosując polimerazę DNA i znakowany ddNPT, specyficzny dla spodziewanej nast ępnej zasady. Odczyt może być dokonany w oparciu o fluorescencję lub o ELISA. Sygnał wskazuje obecność sekwencji wstawkowej/flankują cej odpowiedzialnych za pomyślną amplifikację, hybrydyzację i wydłużenie pojedynczą zasadą.
Inną metodą jest technika Pyrosequencing, jaka została opisana przez Winge (Innov. Pharma. Tech. 00:18-24, 2000). W tej metodzie oligonukleotyd jest zaprojektowany tak, że obejmuje przylegające genomowe DNA i wstawkowe DNA. Oligonukleotyd jest zhybrydyzowany z jednołańcuchowym produktem PCR z regionu będącego przedmiotem zainteresowania (jeden primer we wstawionej sekwencji i jeden we flankującej sekwencji genomowej DNA) i inkubowany w obecności polimerazy DNA, ATP, sulfurylazy, lucyferazy, apyrazy, adenozyno-5'-fosfosulfatu i lucyferyny. DNTP są dodawane indywidualnie i włączenie daje w wyniku sygnał świetlny, który jest mierzony. Sygnał świetlny wskazuje na obecność wstawki insert transgenu/sekwencja flankująca jako wyniku skutecznej amplifikacji, hybrydyzacji i wydłużenia pojedynczego lub wielozasadowego.
Fluorescencja Polaryzacyjna opisana przez Chen i wsp., (Genone Res. 9:492-498, 1999) jest sposobem, który może być stosowany do wykrywania amplikonu według wynalazku. Stosując ten sposób, oligonkleotyd tak jest zaprojektowany aby pokryć genomowe flankujące oraz wstawowe połączenia DNA. Oligonukleotyd ten jest zhybrydyzowany z jednołańcuchowym produktem PCR z regionu będącego przedmiotem zainteresowania (jeden primer we wstawionej sekwencji DNA i jeden we flankującej sekwencji genomowego DNA) i inkubowany w obecności polimerazy DNA i fluorescencyjnie znakowanego ddNTP. Przedłużenie o jedną zasadę skutkuje włączeniem ddNTP. Włączenie może być mierzone jako zmiana polaryzacji przy zastosowaniu fluorometru. Zmiana w polaryzacji wskazuje na obecność transgenicznej wstawki/sekwencji flankującej jako wyniku skutecznej amplifikacji, hybrydyzacji i wydłużenia pojedynczego zasadowego.
Taqman® (PE Applied Biosystems, Foster City, CA) jest opisany jako sposób wykrywania i oznaczania ilościowego obecności sekwencji DNA i jest w pełni zrozumiały w postaci instrukcji dostarczonej przez producenta. W skrócie, sonda oligonukleotydowa FRET jest tak zaprojektowana aby pokryć genomowe flankowanie oraz połączenie wstawki DNA. Sonda FRET i primery PCR (jeden primer we wstawionej sekwencji DNA i jeden w flankującej sekwencji genomowej) są poddawane cyklizacji w obecności ciepłostałej polimerazy i dNTP. Hybrydyzacja sondy FRET daje w wyniku odczepienie i uwolnienie cząstki fluorescencji od oziębianej cząstki sondy FRET. Sygnał fluorescencyjny wskazuje na obecność flankującej/wstawkowej sekwencji transgenu wynikłych ze skutecznej amplifikacji i hybrydyzacji.
Cząsteczkowy Beacons był opisany do stosowania w wykrywaniu sekwencji jak opisano w Tyangi i wsp., (Nature Biotech. 14:303-308, 1996). W skrócie, sonda oligonukleotydowa FRET jest tak zaprojektowana aby nałożyć się na połączenie genomowe flankujące i DNA wstawkowe. Unikalna budowa sondy FRET polega na tym, że zawiera ona strukturę drugorzędową która utrzymuje cząsteczki fluorescencji i cząsteczki wygaszające w ścisłej bliskości. Sonda FRET i primery PCR (jeden primer we wstawkowej sekwencji DNA i jeden w flankującej sekwencji genomowej) są poddawane cyklizacji w obecności termostabilnej polimerazy i dNTP. Pomyślna amplifikacja PCR, hybrydyzacja sondy FRET do docelowej sekwencji daje w wyniku usunięcie drugorzędowej struktury sondy i przestrzenne oddzielenie cząsteczek fluorescencji i cząsteczek wygaszających. Sygnał fluorescencyjny wskazuje na obecność flankującej/wstawkowej sekwencji transgenu wynikających ze skutecznej amplifikacji i hybrydyzacji.
P r z y k ł a d y
P r z y k ł a d 1
PV-ZMGT32 (nk603) (dalej zwane jako nk603) przypadek transgenicznej kukurydzy był generowany przez bombardowanie mikropociskami zarodków kukurydzy (Songstad i wsp., In Vitro Cell Plant 32:179-183, 1996) stosując liniowy fragment DNA Mlu I pochodzący z pMON25496 (Figura 1). Ten fragment DNA zawiera dwie transgeniczne kasety ekspresji, które wspólnie nadają roślinie tolerancję na glifosat. Pierwsza kaseta jest złożona z promotora aktyny 1 ryżu i wstawki (P-Os.Act1 i I-Os.Act1, patent St. Zjedn. Am. nr 5,641,876), operacyjnie zwią zanych z przejściowym peptydem chloroplastu Arabidopsis EPSPS (TS-At.EPSPS:CTP2, Klee i wsp., Mol. Gen. Genet. 210:47-442,
PL 199 928 B1
1987), operacyjnie połączony z syntazą 5-enolopyruwiloshikimato-3-fosforanową (EPSPS) z Agrobacterium sp. szczepu CP4 (Agrtu.aroA:CP4, opis patentowy St. Zjedn. Am.) i operacyjnie połączony z terminatorem transkrypcji synatazy nopaliny (T-AGRTU. nos, Fraley i wsp., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80:4803-4807, 1983). Drugą kasetą ekspresyjną transgenu stanowi promotor wirusa mozaiki kalafiora 35S zawierający tandemową duplikację regionu wzmacniacza (P-CaMV.35S, Kay i wsp., Science 236:1299-1302, 1987; opis patentowy St. Zjedn. Am. nr 5,164,316), zwią zany operacyjnie z intronem Hsp70 Zea mays (I-Zm.Hsp70, opis patentowy St. Zjed. Am. nr 5,326,865), operacyjnie związany z przejściowym peptydem chloroplastu Arabidopsis EPSPS (TS-At.EPSPS:CTP2, Klee i wsp., Mol. Gen. Genet. 210:47-442, 1987), operacyjnie połączony z tolerującą glifosat syntazą 5-enolopiruwoiloloshikimato-3-fosforanową (EPSPS) z AgrobacteItrium sp. szczepu CP4 (AGRTU. aroA:CP4, opis patentowy St. Zjedn. Am.) i operacyjnie połączony z terminatorem transkrypcji synatazy nopaliny (T-AGRTU.nos, Fraley i wsp., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80:4803-4807, 1983). Transgeniczny kalus z tolerancją na glifosat, powstały po bombardowaniu, oddzielano z medium zawierającego 3mM glifosat i rośliny następnie regenerowano. Wyprodukowano trzysta cztery rośliny z 91 niezależnych transgenicznych przypadków z populacji, wybrano nk603 w oparciu o złożoną kombinację charakterystyk włączając w to tolerancję na glifosfat, działania agrotechniczne i pojedynczą wstawkę transgeniczną. Ocena przypadku nk603 i pochodzącego z niego potomstwa, prowadzona w szklarni i na polu, wskazuje ż e ta transgeniczna wstawka nadaje tolerancję , która przekracza handlowe dokumentacje dla pełnej wegetatywnej i reprodukcyjnej tolerancji na 340 g glifosfatu/akr (840 g glifosfatu/hektar; 32 oz Roundap Ultra/akr) kiedy zastosowano w stadium V4 i V8 liści.
P r z y k ł a d 2
Tolerancję na glifosat kukurydzy nk603 porównano do bieżących standardów handlowych, GA21 (Opis patentowy St. Zjedn. Am. nr 6,040,497), dla tolerancji na glifosat uszkodzeń wegetatywnych i wpływu na wydajność. GA21 zawiera co najmniej 3 transgeniczne kasety ekspresyjne ułożone w tandem w genomie kukurydzy przypadku (SCP/GM/232-Finał , European Comission Health & Consumer Protectio Directorate-General). Kaseta transgenu GA21 składa się z promotora aktyny ryżu 1 i intronu połączonego z chloroplastowym peptydem przejściowym karboksylazy rybulozo-1,5-bifosforanu połączonym ze zmodyfikowanym opornym na glifosat kukurydzowym EPSPS i regionem terminacji transkrypcji 3' syntazy nopaliny. Rośliny nk603 i GA21 były uprawiane w rzędach w powtórzonych poletkach doświadczalnych. Stosowano następujące zabiegi: 1) bez oprysków, 2) opryski w iloś ci 64 uncji/akr Roundup Ultra® w stadium V4 liś ci i ponownie 64 uncje/akr Roundup Ultra® w stadium V8 liści, 3) oprysk 96 uncji/akr Roundup Ultra® w stadium V4 liści i ponownie 96 uncji/akr Roundup Ultra® w stadium V8 liści. Tolerancja wegetatywna mierzona była jako procent uszkodzeń wegetatywnych oznaczonych jako ilość malformacji liścia obserwowanych 10 dni po traktowaniu herbicydem w stadium V8 liścia. Wydajność z każdego poletka mierzona była w buszlach /akr i procent redukcji wydajności oznaczono dla każdego zabiegu z herbicydem w porównaniu do zabiegów gdzie nie stosowano oprysku. Wyniki przedstawione w Tabeli 1 pokazują, że nk603 wykazuje mniejszy procent uszkodzeń wegetatywnych niż rośliny GA21 i ten obserwowany procent redukcji wydajności jest także mniejszy dla przypadku nk603. Niska ilość przypadków uszkodzeń wegetatywnych obserwowana była w poletkach nie opryskiwanych, obserwacja ta może zależeć od różnych czynników środowiskowych, innych niżeli wystawienie na herbicyd glifosatowy. Podwójna kaseta ekspresyjna pMON25496 w nk603, porównana została do uszkodzeń wegetatywnych i wskaźnik płodności z 3 niezależ nych przypadków kukurydzy otrzymanych jedynie z promotora CaMV.35S prowadzącego ekspresję genu tolerancji glifosatu (AGRTU. aroA:CP4). Obserwowano, że podwójna kaseta ekspresji nadawała wyższy poziom tolerancji wegetatywnej i tolerancji rozrodczej, niż trzy niezależne przypadki kukurydzy (ev 1, ev 2 i ev 3) zawierające tylko kasetę ekspresji, w których ekspresja genu tolerancji na glifosat była prowadzona przez promotora CaMV.35S. Wyższy poziom tolerancji wegetatywnej na uszkodzenia herbicydem glifosatowym był obserwowany dla nk603 plus 3 dodatkowe przypadki kukurydzy pochodzące z pMON25496, porównując do średniego uszkodzenia w 6 przypadkach kukurydzy pochodzących z konstruktu, w którym ekspresja genu tolerancji glifosatu była prowadzona tylko przez promotora aktyny ryżu i intron (P-Os. Act1/I-Os. Act1). Rośliny transformowane podwójną kasetą ekspresji posiadają wyższy poziom tolerancji glifosatowej na uszkodzenie wegetatywne i upośledzenie płodności, niż rośliny pochodzące z transformacji pojedynczymi kasetami ekspresji, dającej poprawienie oporności dającej utratę wydajności w wyniku stosowania herbicydu glifosfatowego. Konstrukt pMON25496 dostarcza dwóch roślinnych kaset
PL 199 928 B1 ekspresji o pojedynczej lokalizacji w nk603, nadających wyższy poziom tolerancji glifosatowej niż potrójny tandem wstawki występujący w standardzie handlowym - GA21.
T a b e l a 1
Tolerancja glifosfatu przez nk603 - Uszkodzenia wegetatywne, Wydajność i Ocena Płodności
Przypadek Traktowanie % Uszkodzeń weg. Wydajność (buszle/akr) % redukcji wydajności
GA21 bez oprysków 0,3 142,2
64 oz Roundup Ultra® przy V4 a następnie 64 oz przy V8 5,3 134,1 5,7
96 02 Roundup Ultra® przy V4 a następnie 96 oz przy V8 8,3 129,1 9,2
nk603 bez oprysków 0,9 145,6
64 oz Roundup Ultra® przy V4 a następnie 64 oz przy V8 2,9 138,5 4,9
96 oz Roundup Ultra® przy V4 a następnie 96 oz przy V8 4,7 140,1 3,8
Traktowanie Ocena płodności**
nk603 64 oz Roundup Ultra® przy V8 4,5
CaMV.35S ev 1 64 oz Roundup Ultra® przy V8 2,0
CaMV.35S ev 2 64 oz Roundup Ultra® przy V8 2,2
CaMV.35S ev 3 64 oz Roundup Ultra® przy V8 2,4
śred. % uszkodzeń weg.
nk603 plus 3 dodatkowe przypadki pMON25496 128 oz Roundup Ultra® przy V4 a następnie przez 128oz przy V8 22,9
Sześć P-Os.Act1 przypadków o pojedynczej kasecie 128 oz Roundup Ultra® przy V4 a następnie przez 128oz przy V8 28,9
* Uszkodzenia Weg obserwowane 10 dni po traktowaniu V8 jest jednym pomiarem zrobionym w celu oceny uszkodzeń wege-tatywnych w odpowiedzi na traktowanie glifosfatem.
** stopień płodności męskiej: 4-5 = pełna płodność; 3 = znaczące zredukowanie wyrzucenia pyłku; 0-2 = pełna sterylność - wysoka sterylność, nie odpowiednie do stosowania w handlu.
P r z y k ł a d 3
Odpowiednią cząsteczkę flankującą DNA od nk603 klonowano stosując zligowane adaptery i gniazda PCR jak opisano w zestawie Genome Walker™ (katalog # K1807-1, CloneTech Laboratories, Inc, Palo Alto, CA). Pierwszy genomowy DNA z przypadku nk603 był oczyszczony metodą CTAB (Rogers i wsp., Plant Mol. Biol 5:69-76, 1985). Genomowe biblioteki DNA do amplifikacji były przygotowywane zgodnie z instrukcją producenta (Genome Walker™ CloneTech Laboratories, Inc, Palo Alto, CA). W odrębnych reakcjach, genomowy DNA był trawiony przez noc w 37°C następującymi restrykcyjnymi endonukleazami tępych końców EcoRV, Scal Dral, PvuII i Stul (CloneTech Laboratories, Inc, Palo Alto, Ca). Mieszanina reakcyjna była ekstrahowana fenol : chloroform, DNA strącano przez dodanie etanolu do fazy wodnej, osadzano przez odwirowanie a następnie ponownie zawieszano w buforze Tris-EDTA (10 mM Tris-HCl, pH 8,0, 1 mM EDTA). Oczyszczone fragmenty DNA z tępymi końcami ligowano do adapterów Genome Walker™ zgodnie z protokołem producenta. Po ligacji, każda rekcja była ogrzewana (70°C przez 5 min) do zatrzymania reakcji a następnie rozcieńczana 10-krotnie w buforze Tris-EDTA. Tylko 1 z każdej przeprowadzonej ligacji była następnie amplifikowana w 50 μΐ reakcji, która obejmowała 1 μl odpowiedniej, zligowanej do adaptera, biblioteki, 1 μl 10 μM adaptera
PL 199 928 B1 primera Genome Walker™ API (5' GTATATCGACTCACTATAGGGC 3', SEQ ID nr: 1), 1 μ| 10 mM nk603 specyficznego wobec transgenu nukleotydu.
(5' TGACGTATCAAAGTACCGACAAAAACATCC 3' SEQ ID nr: 2) 1 μl 10 mM deoksyrybonukleotydu, 2,5 μl sulfotlenku dimetylowego, 5 μl 10X buforu PCR zawierającego MgCl2, 0,5 μl (2,5 jednostki) termostabilnej polimerazy DNA Amplitaqą (PE Applied Biosystems, Foster City, CA), i H2O do 50 μΚ Rekcje prowadzono w termocyklerze stosując wyliczoną temperaturę kontrolną i następujące warunki cyklizacji: 1 cykl w 95°C przez 9 min; 7 cykli w 94°C przez 2 sek., 70°C przez 3 min; 36 cykli w 94°C przez 2 sek., 65°C przez 3 min; 1 cykl w 65°C przez 4 min. Jeden μl każdej pierwotnej reakcji rozcieńczano 50-krotnie wodą i amplifikowano w drugorzędowej reakcji (1 μl odpowiedniego rozcieńczenia z reakcji pierwotnej), 1 μl 10 μM Genome Walker™ zagnieżdżonego adaptera primera AP2 (5' ACTATAGGGCACGCGTGGT 3', SEQ ID nr 3, dostarczonego przez producenta), 1 μl 10 μM transgeno-specyficznego wobec nk603 zagnieżdżonego oligonukleotydu.
(5' CTTTGTTTTATTTTGGACTATCCCGACTC 3', SEQ ID nr 4), 1 μl 10 mM deoksyrybonukleotydu, 2,5 μl sulfotlenku dimetylowego, 5 μl 10X buforu PCR zawierającego MgCl2, 0,5 μl (2,5 jednostki) termostabilnej polimerazy DNA Amplitaq (PE Applied Biosystems, Foster City, CA), i H2O do 50 μ^ stosując następujące warunki cyklizacji: 1 cykl w 95°C przez 9 min; 5 cykli w 94°C przez 2 sek., 70°C przez 3 min; 24 cykle w 94°C przez 2 sek., 65°C przez 3 min; 1 cykl w 65°C przez 4 min.
Produkty PCR, reprezentujące 5 regionów, które spinają połączenie pomiędzy transgenicznym insertem nk603 i sąsiadującym DNA flankującym kukurydzy, były oczyszczane elektroforezą na żelu agarozowym a następnie oczyszczane z matrycy agarozowej stosując zestaw QIAquick Gel Extraction Kit (katalog#28704, Qiagen Inc., Valencia, CA) i klonowane wprost do wektora pGEM-T Easy vector (katalog. # A1360, Promega, Madison, WI). Tożsamość klonowanych produktów PCR i powiązanie z fragmentem Mlu I pMON25496 została potwierdzona przez analizę sekwencji DNA (ABI Prism™377, PE Biosystems, Foster City, CA i oprogramowanie do analizy sekwencji DNASTAR Inc., Madison, WI).
Podobnie, nk603 3'-flankująca sekwencja DNA kukurydzy była amplifikowana i klonowana stosując specyficzne primery zagnieżdżonego genu, takie jak, SEQ ID nr 5 (5' AGATTGAATCCTGTTGCCGGTCTTGC 3' i SEQ ID nr: 6 (5' GCGGTGTCATCTATGTTAACTAGATCGGG 3') która topi się do T-AGRTU.nos terminatora transkrypcyjnego. Dwa transkrypcyjne terminatory T-AGRTU.nos są obecne w transgeniczno/genomowej wstawce nk603, jedna wewnętrzna w konstrukcie i jedna przy końcu 3' konstruktu przyległego do genomowego DNA kukurydzy. Produkty PCR wytworzone w tej reakcji były sekwencjonowane i sekwencja DNA spinająca połączenie pomiędzy sekwencją transgeniczną a flankującą były oddzielone od produktów wewnętrznego T-AGRTU przez porównanie do znanych elementów sekwencji genetycznych konstruktu pMON25496 jak opisano poprzednio.
Sekwencja DNA kukurydzy flankująca oba miejsca transgenicznej wstawki była oznaczana w odniesieniu do wykrywania nk603 przez sekwencjonowanie produktów amplifikacji pochodzących z Genome Walker™ i następnie porównanie do znanej sekwencji transgenu. Przy końcu 5' wstawki transgenicznej, oznaczono sekwencję segmentu 498 kz otaczającego złącze wstawki (SEQ ID nr 7). Stanowiła ona sekwencję o 304 parach zasad (kz) flankującą genomowe DNA kukurydzy (nukleotydy 1-304 w SEQ ID nr: 7), 45 kz pMON25496 sekwencji konstruktu DNA (nukleotydy 305-349 w SEQ ID nr: 7) i 149 kz sekwencji DNA z końca 5' P-Os.Act1 (nukleotydy 350-498 w SEQ ID nr: 7).
Sekwencję DNA oznaczano dla segmentu 1183 kz dookoła złącza wstawki (SEQ ID nr 8), która rozpoczyna się od 164 kz terminatora transkrypcyjnego T-AGRTU.nos (nukleotydy 1-164 w SEQ ID nr; 8), sekwencji DNA konstruktu o 217 kz pMON25496 (nukleotydy 165-381 w SEQ ID nr: 8), 305 kz genów plastydu kukurydzy, rps 11 i rpo (segmenty częściowe każdego genu odpowiadające zasadom 63-363 aksesji X07810 Genbank, odpowiadające zasadom 382-686 w SEQ ID nr: 8), i pozostała sekwencja DNA stanowiąca genomową sekwencję DNA.
Cząsteczki złącza DNA, SEQ ID nr: 9, SEQ ID nr: 10, SEQ ID nr 11, i SEQ ID nr: 12 są nowymi cząsteczkami DNA w nk603 i są diagnostyczne dla rośliny kukurydzy nk603 i jej potomstwa. Cząsteczki złącza DNA, SEQ ID nr: 9, SEQ ID nr: 10 i SEQ ID nr: 11 stanowią około 9 nukleotydów po każdej stronie transgenowego fragmentu DNA i genomowego DNA kukurydzy. SEQ ID nr: 9 stwierdzono w pozycji nukleotydowej 259-314 SEQ ID nr 7.
Cząsteczki złącza, SEQ ID nr: 10 i 11 są zlokalizowane w pozycjach nukleotydowych SEQ ID nr: 8, odpowiednio - 373-390 i 678-695, reprezentując łączącą cząsteczkę DNA konstruktu sekwencji DNA z sekwencją DNA plastydu kukurydzy (SEQ ID nr 10) i konstruktową sekwencję z genomową sekwencją DNA kukurydzy (SEQ ID nr: 11). SEQ ID n: 12 zlokalizowana jest w pozycji nukleoty12
PL 199 928 B1 dowej 156-173 w SEQ ID nr: 8 i reprezentuje nową cząsteczką DNA w nk603 wynikającą z jej wystąpienia w fuzji terminatora sekwencji T-AGRTU.nos z odwróconym fragmentem sekwencji promotora aktyny ryżu.
P r z y k ł a d 4
Pary primerów przypadku DNA są stosowane do wytworzenia amplikonu diagnostycznego dla nk603. Ten przypadek pary primerów obejmuje ale nie jest ograniczony do SEQ ID nr: 13 i SEQ ID nr: 14 dla cząsteczki DNA amplikonu i SEQ ID nr: 15 i SEQ ID nr: 16 dla 3' cząsteczki DNA. Poza tymi parami primerów dodatkowo każda para primera pochodząca z SEQ ID nr: 7 i SEQ ID nr: 8, gdy stosowana jest w reakcji amplifikacji DNA, wytwarza diagnostyczny amplikon dla nk603; jest przedmiotem niniejszego wynalazku. Warunki amplifikacji dla tej analizy są przedstawione w Tabeli 2 i Tabeli 3 dla regionu połączenia 5' wstawka transgenowa/połączenie genomowe. Ta sama metoda jest zastosowana do amplifikacji cząsteczki 3' DNA amplikonu stosując cząsteczki DNA primera SEQ ID nr: 15 i SEQ ID nr: 16, jakkolwiek, każda modyfikacja tych sposobów stosujących cząsteczki DNA lub ich komplementy do wytworzenia cząsteczki DNA diagnostycznej dla nk603 mieści się w zakresie umiejętności fachowca w tej dziedzinie. Ponadto, kontrolna para primera (SEQ ID nr: 17 i 18) do amplifikacji endogennego genu kukurydzy jest włączona jako standard wewnętrzny do warunków reakcji. Analiza próbki ekstraktu DNA z tkanek rośliny nk603 powinna zawierać pozytywną kontrolę ekstraktu tkankowego DNA z nk603, negatywną kontrolę ekstraktu DNA z rośliny kukurydzy, która nie jest nk603 i negatywną kontrolę, która nie zawiera wzorca ekstraktu DNA kukurydzy. Dodatkowe cząsteczki DNA primera o dostatecznej dł ugoś ci mogą być wybrane z SEQ ID nr: 7 i SEQ ID nr: 8 przez fachowców biegł ych w sposobach amplifikacji DNA i warunkach optymalizacji produkcji amplikonu, który może różnić się od sposobów wskazanych w Tabeli 2 i Tabeli 3, lecz daje w wyniku diagnostyczny amplikon dla nk603. Zastosowanie tych sekwencji DNA primerów z modyfikacjami do Tabeli 2 i 3 mieści się w zakresie wynalazku. Amplikon, w którym co najmniej jedna cząsteczka DNA primera o dostatecznej długości pochodziła z SEQ ID nr: 7 i SEQ ID nr: 8, to 1A, jest diagnostyczna dla nk603, jest przedmiotem wynalazku. Amplikon, w którym co najmniej jedna cząsteczka DNA primera o dostatecznej długości pochodziła z którychkolwiek genetycznych elementów pMON25496 jest diagnostyczna dla nk603, jest również przedmiotem wynalazku. Próba dla amplikonu nk603 może zostać przeprowadzona przy zastosowaniu Stratagene Robocycler, MJ Engine, Parkin-Elmer 9700 lub Eppendorf Mastercycler Gradient termocyklizator jak pokazano na Tabeli 3 lub sposobami i aparaturą znanymi w stanie techniki.
T a b e l a 2
Procedura PCR i mieszanina reakcyjna dla potwierdzenia w nk603 regionu złącza - 5' wstawka transgen/genomowy
Etap Odczynnik Ilość Komentarz
1 2 3 4
1 Woda wolna od nukleazy dodana do końcowej objętości 20 pl -
2 10X bufor reakcyjny (z MgCL) 2,0 pl 1X stężenie końcowe buforu, 1,5 mM stężenie końcowe MgCl2
3 10 mM roztwór dATP, dCTP, dGTP i dTTP 0,4 pl 200 pM stężenie końcowe każdego cNTP
4 przypadek primera (SEQ ID nr 13) (zawieszony w 1X bufor TE lub wodzie wolnej od nukleazy do stężenia 10 μM) 0,4 pl 0,2 pM stężenie końcowe
5 przypadek primera (SEQ ID nr 14) (zawieszony w 1X bufor TE lub wodzie wolnej od nukleazy do stężenia 10 μM) 0,4 pl 0,2 pM stężenie końcowe
6 przypadek primera (SEQ ID nr 17) (zawieszony w 1X bufor TE lub wodzie wolnej od nukleazy do stężenia 10 μM) 0,2 pl 0,1 pM stężenie końcowe
PL 199 928 B1 cd. tabeli 1
1 2 3 4
7 przypadek primera (SEQ ID nr 18) (zawieszony w 1X bufor TE lub wodzie wolnej od nukleazy do stężenia 10 μM) 0,2 il 0,1 iM stężenie końcowe
8 bez Rnazy, Dnazay 0,1 il 50 ng/reakcję
9 REDTaq polimeraza DNA (1 jednostka/il) 1 il zaleca się zmienić pipety przed następnym etapem) 1 jednostka/reakcji
10 Ekstrahowane DNA (wzorce): • Próbki do analizy • poszczególne liście • zgrupowane liście (maksimum 50 liści/grupę) • Kontrola negatywna • Kontrola negatywna • Kontrola pozytywna • 10-200 ng genomowego DNA • 200 ng genomowego DNA • 50 ng genomowego DNA nk603 bez wzorca DNA • 50 ng genomowego DNA
T a b e l a 3
Sugerowane parametry dla różnych termocyklerów
Delikatne mieszanie, jeśli jest potrzebne (bez ogrzewania górnej powierzchni termocyklera) dodanie 1-2 kropli oleju mineralnego na wierzch reakcji. PCR przeprowadzać w Stratagene Robocycler, MJ Engine, Perkin-Elmer 9700 lub Eppendprf Mastercycler Gradient termocyklerze stosując następujące parametry cyklizacji. Uwaga: MJ Engine lub termocykler Eppendprf Mastercycler Gradient powinny poruszać się w określonym trybie. Praca termocyklera Perkin-Elmer 9700 z prędkością jednostajną nastawioną na maksimum.
Numer cyklu Ustawienia : Stratagene Robocykler
1 94°C 3 minuty
38 94°C 1 minuta 60°C 1 minuta 72°C 1 minuta 30 sekund
1 72°C 10 minut
Ustawienia: MJ Engine lub Perkin-Elmer 9700
1 94°C 3 minuty
38 94°C 10 sekund 60°C 30 sekund 72°C 1 minuta
1 72°C 10 minut
Ustawienia: Eppendorf Mastercycler Gradient
1 94°C 3 minuty
38 94°C 15 sekund
Ustawienia: Eppendorf Mastercycler Gradient
60°C 15 sekund 72°C 1 minuta
1 72°C 10 minut
PL 199 928 B1
WYKAZ SEKWENCJI <110> Monsanto Co Behr, Carl Hironaka, Catherine Heck, Gregory You, Jinsong <120> przypadek- rośliny zbożowej PV-ZMGT32 (nk603) i kompozycje i sposoby jej wykrywania
<130> 38-21 (52258)B
<150> 60/213,567
<151> 2000-06-22
<150> 60/241,215
<151> 2000-10-13
<150> 60/240,014
<151> 2000-10-13
<160> 16
<170> Patentln 'wersja 3.0
<210> 1
<211> 22
<212> DNA
<213> sztuczny
<220>
<221> źródło
<222> (1) .. (22)
<223> w pełni zsyntetyzowany
<400> 1 gtatatcgac tcactatagg gc <210> 2 <211> 30 <212> DNA <213> sztuczny <220>
<221> źródło <222> (1)..(30) <223> w pełni zsyntetyzowany <400> 2 tgacgtatca aagtaccgac aaaaacatcc <21O> 3
PL 199 928 B1
<211> 19
<212> DNA
<213> sztuczny'
<220>
<221> źródło
<222> (1).-(19)
<223> w pełni zsyntetyzowany
<400> 3 actatagggc acgcgtggt <210> 4 <211> 29 <212> DNA <213> sztuczny <220>
<221> źródło <222> (1) . . (29) <223> w pełni zsyntetyzowany <400> 4 ctttgtttta ttttggacta tcccgactc <21O> 5 <211> 26 <212> DNA <213> sztuczny <220>
<221> źródło <222> (1)..(26) <223> w pełni zsyntetyzowany <400> 5 agattgaatc ctgttgccgg tcttgc
<210> 6
<211> 28
<212> DNA
<213> sztuczny
<220>
<221> źródło
<222> (1)..(28)
<223> w pełni zsyntetyzowany
PL 199 928 B1 <400> 6 gcggtgtcat ctatgttact agatcggg <210> 7 <211> 498 <212 > DNA <213> sztuczny <220>
<22l> źródło <222> (1) . . (498) <223> 1-304 genomowy DNA Zea maize
305-349 DNA konstruktora wektora 350-498 DNA promotora aktyny 1 ryżu <400> 7
aatcgatcca aaatcgcgac tgaaatggtg gaagaaagag agaacagaga gcctcacgtt 60
tccagggtga agtatcagag gatttaccgc ccatgccttt tatggagaca agaaggggag 120
gaggtaaaca gatcagcatc agcgctcgaa agtttcgtca aaggatgcgg aactgtttcc 180
agccgccgtc gccattcggc cagactcctc ctctctcggc atgagccgat cttttctctg 240
gcatttccaa ccctagagac 9tgcgtccct ggtgggctgc tcggccagca agccttgtag 300
cggcccacgc gtggtaccaa gcttgatatc cctagggcgg ccgcgttaac aagcttactc 360
gaggtcactc atatgcttga gaagagagtc gggatagtcc aaaataaaac aaaggtaaga 420
ttaccggtca aaagtgaaaa catcagttaa aaggtgtata aagtaaaata tcggtaataa 480
aaggtggccc aaagtgaa 498
<210> 8 <211> 1183 <212> DNA <213> sztuczny <220>
<221> źródło <222> (1) . . (1183) <223> 1-164 terminator nos 3 Agrobacterium tumefaciens
5-381 DNA konstruktora wektora 382-686 geny plastydowe Zea maize rpsll i rpoA 687-1183 genomowy DNA Zea maize <400> 8 gacgttattt atgagatggg tttttatgat tagagtcccg caattataca tttaatacgc 60 gatagaaaac aaaatatagc gcgcaaacta ggataaatta tcgcgcgcgg tgtcatctat 120
PL 199 928 B1
gttactagat cggggatatc cccggggaat tcggtaccaa gcttttataa tagtagaaaa 180
gagtaaattt cactttgggc caccttttat taccgatatt ttactttata ccacctttta 240
actgatgttt tcacttttga ccaggtaatc ttacctttgt tttattttgg actatcccga 300
ctctcttctc aagcatatga atgacctcga gtaagcttgt taacgcggcc gccctaggga 360
tatcaagctt ggtaccacgc gacacacttc cactctagtg tttgagtgga tcctgttatc 420
tcttctcgaa ccataacaga ctagtattat ttgatcattg aatcgtttat ttctcttgaa 480
agcggtttca ttttttttta cagacgtctt tttttaggag gtcgacatcc attatgcggc 540
ataggtgtta catcgcgtat acaacttaac cgtacaccac ttttagcaat ggctcgtaat 600
gcggcatctc ttccgctacc agcacctttt accataactt ctgctcgttg caaacccact 660
gtacgaatag catctactgc tgttctgctg actttatttt ttttaataaa gtgaaaaacc 720
ataaaatgga caacaacacc ctgcccttca ctaccggtcg gagcgacgcc gaagatgggg 780
ttcaacacgg tcgcgacacg gatgcaacgg accctccaag ccaatactcg aggccggacc 840
gacgacgtag gcaggggtgg ccataacgac ggtggcggca tccaacttgt tctttccctt 900
tctctgtctt caacttgcgc cggcagtctg ctagacccag gggatgctgt gtggaggaga 960
ggtcgcgggg cccgattttt atagcctggg cgaggacgag cttggccgaa ccgatccaga 1020
gctctgcgca aatcacgaag aaccagtggg gccgctcgcg cctagcccac cgccaggagc 1080
ggggcttgtt gcgagccgta gcgtcgggaa ggggacgacc cgctaggggg gcccatgctc 1140
cagcgcccag agagaaaaaa agaaaggaag gcgcgagatg atg 1183
<210> 9 <211> 19 <212> DNA <213> sztuczny <220>
<22ΐ> źródło <222> (1)..(19) <223> genomowe i wektorowe DNA i Zea naize <400> 9 tgtagcggcc cacgcgtgg <210> 10 <2ll> 18
PL 199 928 B1
<212> DNA
<213> sztuczny'
<220>
<221> źródło
<222> (1) . (18)
<223> plastydowe i wektorowe DNA Zea maize
<400> 10
taccacgcga cacacttc 18 <210> 11 <211> 18 <212> DNA <213 > sztuczny <220>
<221> źródło <222> (1) . . (18) <-223> genomowe i wektorowe DNA Zea maize <400> 11 tgctgttctg ctgacttt 18 <210> 12 <211> 18 <212> DNA <213> sztuczny <220>
<221> źródło <222> (1) . . (18) <223> DNA Agrobacterium tumefaciens terminatora nos 3 i promotora aktyny ryżu
<400> 12 accaagcttt tataatag
<210> 13
<211> 22
<212> DNA
<213> sztuczny
<220>
<221> źródło
<222> (1) . . (22)
<223> w pełni zsyntetyzowany
PL 199 928 B1 <400> 13 aatcgatcca aaatcgcgac tg 22 <210> 14 <211> 22 <212 > DNA <213> sztuczny <220>
<221> źródło <222> (1)..(22) <223> w pełni zsyntetyzowany <400> 14 ttcactttgg gccacctttt at 22 <210> 15 <211> 22 <212> DNA <213> sztuczny <220>
<221> źródło <222> (1) . . (22) <223> w pełni zsyntetyzowany <400> 15 gacgttattt atgagatggg tt 22 <210> 16 <211> 22 <212> DNA <213> sztuczny <220>
<221> źródło <222> (1) . . (22) <223 > w pełni zsyntetyzowany <400> 16 catcatctcg cgccttcctt tc 22
PL 199 928 B1

Claims (15)

  1. Zastrzeżenia patentowe
    1. Cząsteczka DNA umożliwiająca identyfikację roślin kukurydzy pV-ZMGT32 (nk603) tolerujących glifosat, znamienna tym, że zawiera sekwencję nukleotydową zidentyfikowaną jako SEQ ID nr: 7 lub SEQ ID nr: 8.
  2. 2. Para cząsteczek DNA składająca się z: pierwszej cząsteczki DNA i z drugiej cząsteczki DNA, znamienna tym, że cząsteczki DNA są o wystarczającej długości sąsiednich nukleotydów o sekwencji SEQ ID nr: 7 lub ich komplementów do działania jako primery DNA lub sondy diagnostyczne dla DNA ekstrahowanego z rośliny kukurydzy PV-ZMGT32(nk603) lub jej potomstwa.
  3. 3. Para cząsteczek DNA składająca się z: pierwszej cząsteczki DNA i z drugiej cząsteczki DNA, znamienna tym, że cząsteczki DNA są o wystarczającej długości sąsiednich nukleotydów o sekwencji SEQ ID nr: 8 lub ich komplementów do działania jako primery DNA lub sondy diagnostyczne dla ekstrahowanego DNA z rośliny kukurydzy PV-ZMGT32(nk603) lub jej potomstwa.
  4. 4. Sposób wykrywania obecności cząsteczki DNA wybranej z grupy składającej się z SEQ ID nr: 7 i SEQ ID nr: 8 w próbce DNA, znamienny tym, że (a) ekstrahuje się próbkę DNA z rośliny kukurydzy;
    (b) kontaktuje się próbkę DNA z DNA pary primera zawierającą cząsteczki DNA primera o wystarczającej długości sąsiadujących nukleotydów SEQ ID nr: 7 lub jego komplementu; lub SEQ ID nr 8: lub jej komplementu;
    (c) dostarcza się warunki reakcji do amplifikacji kwasu nukleinowego;
    (d) przeprowadza się reakcję amplifikacji kwasu nukleinowego, wytwarzając w ten sposób cząsteczkę amplikonu DNA; i (e) wykrywa się cząsteczkę DNA amplikonu.
  5. 5. Sposób wykrywania obecności cząsteczki DNA wybranej z grupy składającej się z SEQ ID nr: 7 i SEQ ID nr: 8 w próbce DNA, znamienny tym, że (a) ekstrahuje się próbkę DNA z rośliny kukurydzy;
    (b) kontaktuje się próbkę DNA z cząsteczką DNA zidentyfikowaną jako SEQ ID nr: 9, SEQ ID nr: SEQ ID nr: 10, SEQ ID nr: 11 lub SEQ ID nr: 12, przy czym wspomniana cząsteczka DNA jest sondą DNA, która hybrydyzuje w ścisłych warunkach hybrydyzacji z cząsteczką DNA wybraną z grupy składającej się z SEQ ID nr: 7 lub SEQ ID nr: 8, i nie hybrydyzuje w ścisłych warunkach hybrydyzacji z próbką DNA nie zawierają c ą czą steczki DNA zidentyfikowanej jako SEQ ID nr: 7 lub SEQ ID nr: 8;
    (c) poddaje się próbkę i sondę warunkom ścisłej hybrydyzacji i wykrywa się hybrydyzację sondy z DNA.
  6. 6. Cząsteczka DNA wybrana z grupy składającej się z SEQ ID nr: 9, SEQ ID nr: 10, SEQ ID nr: 11, SEQ ID nr: 12 i ich komplementów.
  7. 7. Sposób wbudowywania cechy tolerancji na glifosat do roślin kukurydzy, znamienny tym, że (a) ekstrahuje się próbkę DNA z potomnych roślin kukurydzy;
    (b) kontaktuje się próbkę DNA z markerową cząsteczką kwasu nukleinowego wybraną z grupy składającej się z SEQ ID nr: 9, SEQ ID nr: 10, SEQ ID nr: 11, SEQ ID nr: 12 i ich komplementami;
    (c) prowadzi się sposób wspomaganego markerem wbudowywania cechy tolerancji na glifosat, przy czym cecha tolerancji na glifosat jest genetycznie związana z komplementem cząsteczki markerowego kwasu nukleinowego.
  8. 8. Zestaw do wykrywania DNA zawierający co najmniej jedną cząsteczkę DNA o dostatecznej długości sąsiadujących nukleotydów homologicznych lub komplementarnych do SEQ ID nr: 7 lub SEQ ID nr: 8, które działają jako primer DNA lub specyficzna sonda dla przypadku kukurydzy PVZMGT32(nk603) i jej potomstwa.
  9. 9. Transgeniczna komórka roślinna z tolerancją glifosatu, zawierająca włączoną w genom tej komórki roślinnej cząsteczkę DNA kodującą tolerancyjną na glifosat EPSPS oraz DNA o sekwencji nukleotydowej zdefiniowanej w SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11 i SEQ ID NO: 12.
  10. 10. Sposób wytwarzania rośliny kukurydzy która toleruje stosowanie herbicydu glifosatu, znamienny tym, że
    a) krzyżuje się roślinę zawierającej włączoną w jej genom cząsteczkę DNA kodującą tolerancyjną na glifosat EPSPS, regiony złącza SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11 i SEQ ID NO: 12, z inną rośliną kukurydzy;
    b) otrzymuje się co najmniej jedno pokolenie roślin potomnych pochodzących z krzyżówki (a); i
    PL 199 928 B1
    c) dokonuje się selekcji potomstwa, które jest tolerancyjne na glifosat i zawiera regiony złącza SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11 i SEQ ID NO: 12.
  11. 11. Sposób hodowli rośliny kukurydzy, która toleruje stosowanie herbicydu glifosat, znamienny tym, że
    a) sadzi się co najmniej jedno nasienie rośliny kukurydzy zawierające włączoną w jego genom cząsteczkę DNA kodującą tolerancyjną na glifosat EPSPS i regiony złącza SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11 oraz SEQ ID NO: 12,
    b) prowadzi się wzrost z tego nasienia i uzyskuje się roślinę kukurydzy;
    c) pokrywa się tą roślinę herbicydem glifosatem tak, że wspomniana roślina ma mniejsze uszkodzenia wegetatywne i mniejsze uszkodzenie plonowania w porównaniu do innych roślin kukurydzy, które nie zawierają SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11 i SEQ ID NO: 12.
  12. 12. Sposób według zastrz. 11, znamienny tym, że etapem selekcjonującym w c) jest pokrywanie glifosatem.
  13. 13. Sposób według zastrz. 12, znamienny tym, że etap selekcjonujący w części c) zawiera etapy:
    (i) ekstrahowania próbki DNA z potomnych roślin kukurydzy;
    (ii) kontaktowania próbki DNA z markerową cząsteczką kwasu nukleinowego wybraną z grupy składającej się z SEQ ID nr: 9, SEQ ID nr: 10, SEQ ID nr: 11, SEQ ID nr: 12 i ich komplementami;
    (iii) prowadzenia sposobu wspomagania wbudowywania markera cechy tolerancji na glifosat, przy czym cecha tolerancji na glifosat jest genetycznie powiązana do komplementu cząsteczki markerowego kwasu nukleinowego.
  14. 14. Cząsteczka DNA według zastrz. 1, znamienna tym, że wspomniana cząsteczka DNA jest obecna w roślinie kukurydzy, nasieniu kukurydzy, tkance kukurydzy lub w jądrze komórkowym kukurydzy.
  15. 15. Cząsteczka DNA według zastrz. 6, znamienna tym, że wspomniana cząsteczka DNA jest obecna w roślinie kukurydzy, nasieniu kukurydzy, tkance kukurydzy lub w jądrze komórkowym kukurydzy.
PL348225A 2000-06-22 2001-06-22 Cząsteczka DNA umożliwiająca identyfikację rośliny kukurydzy tolerującej glifosat, para cząsteczek DNA, sposób wykrywania obecności cząsteczki DNA, cząsteczka DNA, sposób wbudowywania cechy tolerancji na glifosat, zestaw do wykrywania DNA, roślina kukurydzy tolerująca glifosat, transgeniczna komórka roślinna z tolerancją glifosatu, sposób wytwarzania rośliny kukurydzy i sposób hodowli rośliny kukurydzy PL199928B1 (pl)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US21356700P 2000-06-22 2000-06-22
US24001400P 2000-10-13 2000-10-13
US24121500P 2000-10-13 2000-10-13

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL348225A1 PL348225A1 (en) 2002-01-02
PL199928B1 true PL199928B1 (pl) 2008-11-28

Family

ID=27395887

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL348225A PL199928B1 (pl) 2000-06-22 2001-06-22 Cząsteczka DNA umożliwiająca identyfikację rośliny kukurydzy tolerującej glifosat, para cząsteczek DNA, sposób wykrywania obecności cząsteczki DNA, cząsteczka DNA, sposób wbudowywania cechy tolerancji na glifosat, zestaw do wykrywania DNA, roślina kukurydzy tolerująca glifosat, transgeniczna komórka roślinna z tolerancją glifosatu, sposób wytwarzania rośliny kukurydzy i sposób hodowli rośliny kukurydzy

Country Status (21)

Country Link
US (8) US6825400B2 (pl)
EP (3) EP2210951B1 (pl)
CN (2) CN101186918A (pl)
AR (4) AR031665A1 (pl)
AT (2) ATE323168T1 (pl)
BG (1) BG65315B1 (pl)
BR (2) BRPI0100752B1 (pl)
CA (1) CA2349841C (pl)
CY (2) CY1106109T1 (pl)
CZ (2) CZ305949B6 (pl)
DE (2) DE60142092D1 (pl)
DK (3) DK1582592T3 (pl)
ES (3) ES2564464T3 (pl)
HU (2) HU226193B1 (pl)
ID (1) ID30575A (pl)
MX (1) MXPA01006407A (pl)
PL (1) PL199928B1 (pl)
PT (2) PT1167531E (pl)
RS (1) RS49990B (pl)
SI (3) SI1582592T1 (pl)
UY (1) UY26788A1 (pl)

Families Citing this family (406)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BRPI0100752B1 (pt) * 2000-06-22 2015-10-13 Monsanto Co moléculas e pares de moléculas de dna, processos para detectar molécula de dna e para criar um traço tolerante a glifosato em plantas de milho, bem como kit de detecção de dna
CA2420406C (en) * 2000-09-29 2014-12-09 Monsanto Technology Llc Glyphosate tolerant wheat plant 33391 and compositions and methods for detection thereof
EP1337669A2 (en) 2000-11-30 2003-08-27 Ses Europe N.V./S.A. Glyphosate resistant transgenic sugar beet characterised by a specific transgene insertion (t227-1), methods and primers for the detection of said insertion
AU2003299579B2 (en) 2002-12-05 2008-09-04 Monsanto Technology Llc Bentgrass event ASR-368 and compositions and methods for detection thereof
BR122015019398B1 (pt) 2003-01-31 2019-10-01 Monsanto Technology Llc Métodos para produzir planta de alfafa tolerante a glifosato tendo evento transgênico j-163 e para produzir feno de alfafa
AU2004236718C1 (en) * 2003-05-02 2010-06-10 Corteva Agriscience Llc Corn event TC1507 and methods for detection thereof
US7157281B2 (en) * 2003-12-11 2007-01-02 Monsanto Technology Llc High lysine maize compositions and event LY038 maize plants
HRP20150814T1 (xx) * 2003-12-15 2015-08-28 Monsanto Technology, Llc Biljka kukuruza mon88017 te sastavi i postupci za njezino otkrivanje
AR047598A1 (es) * 2004-02-10 2006-01-25 Monsanto Technology Llc Semilla de maiz transgenica con mayor contenido de aminoacidos
US7855323B2 (en) * 2004-02-10 2010-12-21 Monsanto Technology Llc Recombinant DNA for gene suppression
US7683237B2 (en) * 2004-02-10 2010-03-23 Monsanto Technology Llc Maize seed with synergistically enhanced lysine content
JP2007530036A (ja) * 2004-03-25 2007-11-01 シンジェンタ パーティシペーションズ アクチェンゲゼルシャフト Ｍｉｒ６０４系統トウモロコシ
US20070197474A1 (en) * 2004-03-30 2007-08-23 Clinton William P Methods for controlling plants pathogens using N-phosphonomethylglycine
EP1729580B1 (en) 2004-03-30 2018-04-11 Monsanto Technology LLC Methods for controlling plant pathogens using n-phosphonomethylglycine
CN102094032B (zh) 2004-04-30 2014-02-26 美国陶氏益农公司 新除草剂抗性基因
EP1794308B1 (en) * 2004-09-29 2013-08-28 Pioneer-Hi-Bred International, Inc. Corn event das-59122-7 and methods for detection thereof
AP2693A (en) 2005-05-27 2013-07-16 Monsanto Technology Llc Soybean event MON89788 and methods for detection thereof
CA2616535A1 (en) 2005-07-29 2007-02-08 Monsanto Technology Llc Development of novel germplasm using segregates from transgenic crosses
BRPI0615087A2 (pt) * 2005-08-24 2011-05-03 Pioneer Hi Bred Int métodos e composições para a expressão de um polinucleotìdeo de interesse
RU2460281C2 (ru) * 2005-10-03 2012-09-10 Монсанто Текнолоджи Ллс Семена трансгенных растений с повышенным содержанием лизина
EA023885B1 (ru) 2005-10-13 2016-07-29 МОНСАНТО ТЕКНОЛОДЖИ, ЭлЭлСи Конструкция рекомбинантной днк для индуцирования стерильности в трансгенном растении, стерильные трансгенные растения и способы получения гибридных семян
ES2637948T3 (es) 2005-10-28 2017-10-18 Dow Agrosciences Llc Nuevos genes de resistencia a herbicidas
CA2639900C (en) * 2006-01-23 2014-08-26 Board Of Trustees Of Michigan State University Methods for breeding glyphosate resistant plants and compositions thereof
WO2008063755A2 (en) * 2006-10-03 2008-05-29 Monsanto Technology Llc Methods for hybrid corn seed production and compositions produced therefrom
TWM318228U (en) * 2006-11-02 2007-09-01 Datafab Sys Inc Structure for protecting terminal of memory card adapter
WO2009064652A1 (en) * 2007-11-15 2009-05-22 Monsanto Technology Llc Soybean plant and seed corresponding to transgenic event mon87701 and methods for detection thereof
CN101939437A (zh) 2008-02-15 2011-01-05 孟山都技术公司 对应于转基因事件mon87769的大豆植物和种子及其检测方法
MX341747B (es) 2008-02-29 2016-08-31 Monsanto Technology Llc Evento de maiz mon87460 y composiciones y metodos para detectarlo.
EP2113172A1 (de) * 2008-04-28 2009-11-04 Bayer CropScience AG Verfahren zur verbesserten Nutzung des Produktionspotentials transgener Pflanzen
WO2010024976A1 (en) 2008-08-29 2010-03-04 Monsanto Technology Llc Soybean plant and seed corresponding to transgenic event mon87754 and methods for detection thereof
CN107699545A (zh) 2008-09-29 2018-02-16 孟山都技术公司 大豆转基因时间mon87705及其检测方法
AR075126A1 (es) * 2009-01-29 2011-03-09 Bayer Cropscience Ag Metodo para el mejor uso del potencial de produccion de plantas transgenicas
US10555527B2 (en) 2009-05-18 2020-02-11 Monsanto Technology Llc Use of glyphosate for disease suppression and yield enhancement in soybean
WO2011062904A1 (en) 2009-11-23 2011-05-26 Monsanto Technology Llc Transgenic maize event mon 87427 and the relative development scale
EA022553B1 (ru) 2010-01-22 2016-01-29 Байер Интеллектуэль Проперти Гмбх Применение комбинации биологически активных веществ, набор и средство, содержащие комбинацию биологически активных веществ, для борьбы с вредителями животного происхождения и способ улучшения использования продукционного потенциала трансгенного растения
CN101812527B (zh) * 2010-04-20 2014-09-17 北京农业职业学院 一种快速检测6种转基因玉米的方法
NZ603506A (en) 2010-06-04 2013-11-29 Monsanto Technology Llc Transgenic brassica event mon 88302 and methods of use thereof
US8673583B2 (en) * 2010-09-15 2014-03-18 Dow Agrosciences, Llc. Monoclonal antibodies and detection methods for enzymes that confer resistance to 2,4-dichlorophenoxyacetic acid
CN103270173B (zh) 2010-10-12 2017-11-21 孟山都技术公司 对应于转基因事件mon87712的大豆植物和种子及其检测方法
AR083875A1 (es) 2010-11-15 2013-03-27 Bayer Cropscience Ag N-aril pirazol(tio)carboxamidas
WO2012072489A1 (de) 2010-11-29 2012-06-07 Bayer Cropscience Ag Alpha-beta-ungesättigte imine
KR20180096815A (ko) 2010-12-01 2018-08-29 바이엘 인텔렉쳐 프로퍼티 게엠베하 작물에서 선충류를 구제하고 수확량을 증가시키기 위한 플루오피람의 용도
EP2460407A1 (de) 2010-12-01 2012-06-06 Bayer CropScience AG Wirkstoffkombinationen umfassend Pyridylethylbenzamide und weitere Wirkstoffe
BR112013022998A2 (pt) 2011-03-10 2018-07-03 Bayer Ip Gmbh método para aprimorar a germinação das sementes.
EP3292761A1 (en) 2011-03-23 2018-03-14 Bayer Intellectual Property GmbH Active compound combinations
CN103517900A (zh) 2011-04-08 2014-01-15 拜耳知识产权有限责任公司 杀真菌剂肟基-四唑衍生物
WO2012143127A1 (en) 2011-04-22 2012-10-26 Bayer Cropsciences Ag Active compound combinations comprising a (thio)carboxamide derivative and a fungicidal compound
WO2012171914A1 (en) 2011-06-14 2012-12-20 Bayer Intellectual Property Gmbh Use of an enaminocarbonyl compound in combination with a biological control agent
CN103635483B (zh) 2011-07-01 2016-11-09 孟山都技术公司 用于选择性调控蛋白质表达的方法和组合物
MX2014001072A (es) 2011-07-28 2014-09-25 Genective Evento vco-ø1981-5 de maiz tolerante a glifosato y kit y metodo para detectar el mismo.
IN2014DN00156A (pl) 2011-08-10 2015-05-22 Bayer Ip Gmbh
BR112014003919A2 (pt) 2011-08-22 2017-03-14 Bayer Cropscience Ag métodos e meios para modificar um genoma de planta
EP2561759A1 (en) 2011-08-26 2013-02-27 Bayer Cropscience AG Fluoroalkyl-substituted 2-amidobenzimidazoles and their effect on plant growth
CN102952861B (zh) * 2011-08-26 2014-12-31 深圳出入境检验检疫局动植物检验检疫技术中心 转基因玉米多重pcr-dhplc检测引物及检测方法
CN103874681B (zh) 2011-09-12 2017-01-18 拜耳知识产权有限责任公司 杀真菌性4‑取代的‑3‑{苯基[(杂环基甲氧基)亚氨基]甲基}‑1,2,4‑噁二唑‑5(4h)‑酮衍生物
UA115971C2 (uk) 2011-09-16 2018-01-25 Байєр Інтеллектуал Проперті Гмбх Застосування ацилсульфонамідів для покращення врожайності рослин
AR087873A1 (es) 2011-09-16 2014-04-23 Bayer Ip Gmbh Uso de fenilpirazolin-3-carboxilatos para mejorar el rendimiento de las plantas
EP2755484A1 (en) 2011-09-16 2014-07-23 Bayer Intellectual Property GmbH Use of 5-phenyl- or 5-benzyl-2 isoxazoline-3 carboxylates for improving plant yield
ES2628436T3 (es) 2011-10-04 2017-08-02 Bayer Intellectual Property Gmbh ARNi para el control de hongos y oomicetos por la inhibición del gen de sacaropina deshidrogenasa
CA2792804A1 (en) 2011-10-18 2013-04-18 Dow Agrosciences Llc Materials and methods for detecting the aryloxyalkanoate dioxygenase gene (aad-12) containing event pdab4472-1606 in plants
CN102409092B (zh) * 2011-11-17 2013-06-26 四川省农业科学院分析测试中心 转基因玉米nk603结构特异定量pcr精准检测方法
CN102409094B (zh) * 2011-11-17 2013-06-26 四川省农业科学院分析测试中心 转基因玉米nk603品系特异定量pcr精准检测方法
WO2013075817A1 (en) 2011-11-21 2013-05-30 Bayer Intellectual Property Gmbh Fungicide n-[(trisubstitutedsilyl)methyl]-carboxamide derivatives
US9725414B2 (en) 2011-11-30 2017-08-08 Bayer Intellectual Property Gmbh Fungicidal N-bicycloalkyl and N-tricycloalkyl pyrazole-4-(thio)carboxamide derivatives
WO2013092519A1 (en) 2011-12-19 2013-06-27 Bayer Cropscience Ag Use of anthranilic acid diamide derivatives for pest control in transgenic crops
CN104039769B (zh) 2011-12-29 2016-10-19 拜耳知识产权有限责任公司 杀真菌的3-[(1,3-噻唑-4-基甲氧基亚氨基)(苯基)甲基]-2-取代的-1,2,4-噁二唑-5(2h)-酮衍生物
WO2013098147A1 (en) 2011-12-29 2013-07-04 Bayer Intellectual Property Gmbh Fungicidal 3-[(pyridin-2-ylmethoxyimino)(phenyl)methyl]-2-substituted-1,2,4-oxadiazol-5(2h)-one derivatives
JP6182158B2 (ja) 2012-01-25 2017-08-16 バイエル・インテレクチュアル・プロパティ・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツングＢａｙｅｒ Ｉｎｔｅｌｌｅｃｔｕａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｙ ＧｍｂＨ フルオピラムとバシルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）と生物学的防除剤とを含んだ活性化合物組合せ
EP2806739A1 (en) 2012-01-25 2014-12-03 Bayer Intellectual Property GmbH Active compound combinations containing fluopyram and biological control agent
US8975469B1 (en) 2012-02-21 2015-03-10 Pioneer Hi Bred International Inc Maize hybrid X13C704HR
US8952229B1 (en) 2012-02-21 2015-02-10 Pioneer Hi Bred International Inc Maize inbred PH1K0H1
PE20190345A1 (es) 2012-02-27 2019-03-07 Bayer Ip Gmbh Combinaciones de compuestos activos
WO2013139949A1 (en) 2012-03-23 2013-09-26 Bayer Intellectual Property Gmbh Compositions comprising a strigolactame compound for enhanced plant growth and yield
JP2015517996A (ja) 2012-04-12 2015-06-25 バイエル・クロップサイエンス・アーゲーＢａｙｅｒ Ｃｒｏｐｓｃｉｅｎｃｅ Ａｇ 殺真菌剤として有用なｎ−アシル−２−（シクロ）アルキルピロリジンおよびピペリジン
EP2838363A1 (en) 2012-04-20 2015-02-25 Bayer Cropscience AG N-cycloalkyl-n-[(trisubstitutedsilylphenyl)methylene]-(thio)carboxamide derivatives
AU2013251109B2 (en) 2012-04-20 2017-08-24 Bayer Cropscience Ag N-cycloalkyl-N-[(heterocyclylphenyl)methylene]-(thio)carboxamide derivatives
UA126903C2 (uk) 2012-05-08 2023-02-22 Монсанто Текнолоджи Ллс Об'єкт кукурудзи mon 87411
EP2662361A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG Pyrazol indanyl carboxamides
CN104768934B (zh) 2012-05-09 2017-11-28 拜耳农作物科学股份公司 吡唑茚满基甲酰胺
EP2662362A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG Pyrazole indanyl carboxamides
BR112014027644A2 (pt) 2012-05-09 2017-06-27 Bayer Cropscience Ag 5-halogenopirazol-indanil-carboxamidas
EP2662364A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG Pyrazole tetrahydronaphthyl carboxamides
EP2662363A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG 5-Halogenopyrazole biphenylcarboxamides
EP2662370A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG 5-Halogenopyrazole benzofuranyl carboxamides
EP2662360A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG 5-Halogenopyrazole indanyl carboxamides
AR091104A1 (es) 2012-05-22 2015-01-14 Bayer Cropscience Ag Combinaciones de compuestos activos que comprenden un derivado lipo-quitooligosacarido y un compuesto nematicida, insecticida o fungicida
CN107027809A (zh) 2012-05-30 2017-08-11 拜耳作物科学股份公司 包含生物防治剂和选自呼吸链复合物i或ii抑制剂的杀真菌剂的组合物
PT2854552T (pt) 2012-05-30 2019-07-25 Bayer Cropscience Ag Composição compreendendo um agente de controlo biológico e um fungicida selecionado a partir de inibidores da biossíntese de aminoácidos ou proteínas, inibidores da produção de atp e inibidores da síntese da parede celular
HRP20181752T1 (hr) 2012-05-30 2018-12-28 Bayer Cropscience Ag Pripravak koji sadrži biološko kontrolno sredstvo i fluopikolid
TR201816257T4 (tr) 2012-05-30 2018-11-21 Bayer Cropscience Ag Bir biyolojik kontrol ajanı ve trifloksistrobin içeren bileşim.
EP3281526A1 (en) 2012-05-30 2018-02-14 Bayer CropScience Aktiengesellschaft Composition comprising a biological control agent and a fungicide
WO2013178658A1 (en) 2012-05-30 2013-12-05 Bayer Cropscience Ag Compositions comprising a biological control agent and an insecticide
EP2854535A1 (en) 2012-05-30 2015-04-08 Bayer Cropscience AG Compositions comprising a biological control agent and an insecticide
KR20150023475A (ko) 2012-05-30 2015-03-05 바이엘 크롭사이언스 아게 생물학적 방제제, 및 지질막 합성, 멜라닌 생합성, 핵산 합성 또는 신호 전달의 억제제로부터 선택된 살진균제를 포함하는 조성물
EP2879493B1 (en) 2012-07-31 2018-09-19 Bayer CropScience AG Pesticidal compositions comprising a terpene mixture and flupyradifurone
WO2014043435A1 (en) 2012-09-14 2014-03-20 Bayer Cropscience Lp Hppd variants and methods of use
EP2719280A1 (en) 2012-10-11 2014-04-16 Bayer CropScience AG Use of N-phenylethylpyrazole carboxamide derivatives or salts thereof for resistance management of phytopathogenic fungi
ES2665320T3 (es) 2012-10-19 2018-04-25 Bayer Cropscience Ag Procedimiento de tratamiento de plantas contra hongos resistentes a fungicidas usando derivados de carboxamida o de tiocarboxamida
CA2888559C (en) 2012-10-19 2021-03-02 Bayer Cropscience Ag Method for enhancing tolerance to abiotic stress in plants using carboxamide or thiocarboxamide derivatives
CN105357968A (zh) 2012-10-19 2016-02-24 拜尔农科股份公司 包含羧酰胺衍生物的活性化合物复配物
PL2908640T3 (pl) 2012-10-19 2020-06-29 Bayer Cropscience Ag Sposób stymulowania wzrostu roślin przy pomocy pochodnych karboksamidu
EP2735231A1 (en) 2012-11-23 2014-05-28 Bayer CropScience AG Active compound combinations
BR112015012473A2 (pt) 2012-11-30 2017-07-11 Bayer Cropscience Ag misturas binárias pesticidas e fungicidas
EP2925138A1 (en) 2012-11-30 2015-10-07 Bayer CropScience AG Ternary fungicidal and pesticidal mixtures
WO2014083033A1 (en) 2012-11-30 2014-06-05 Bayer Cropsience Ag Binary fungicidal or pesticidal mixture
WO2014083088A2 (en) 2012-11-30 2014-06-05 Bayer Cropscience Ag Binary fungicidal mixtures
EP2925134B1 (en) 2012-11-30 2019-12-25 Bayer CropScience AG Ternary fungicidal mixtures
WO2014086759A2 (en) 2012-12-03 2014-06-12 Bayer Cropscience Ag Composition comprising biological control agents
CN105007741A (zh) 2012-12-03 2015-10-28 拜耳作物科学股份公司 包含生物防治剂和杀真菌剂的组合物
PT2925142T (pt) 2012-12-03 2018-05-18 Bayer Cropscience Ag Composição que compreende um agente de controlo biológico e um insecticida
EP2925144A2 (en) 2012-12-03 2015-10-07 Bayer CropScience AG Composition comprising a biological control agent and an insecticide
WO2014086753A2 (en) 2012-12-03 2014-06-12 Bayer Cropscience Ag Composition comprising biological control agents
JP2015535532A (ja) 2012-12-03 2015-12-14 バイエル・クロップサイエンス・アクチェンゲゼルシャフト 生物農薬および殺菌剤を含む組成物
EP3318129B1 (en) 2012-12-03 2019-11-06 Bayer CropScience Aktiengesellschaft Method for pest control by applying a combination of paecilomyces lilacinus and fluopyram
MX2015006631A (es) 2012-12-03 2015-08-05 Bayer Cropscience Ag Composicion que comprende un agente de control biologico y un insecticida.
AR093909A1 (es) 2012-12-12 2015-06-24 Bayer Cropscience Ag Uso de ingredientes activos para controlar nematodos en cultivos resistentes a nematodos
AR093996A1 (es) 2012-12-18 2015-07-01 Bayer Cropscience Ag Combinaciones bactericidas y fungicidas binarias
BR112015014307A2 (pt) 2012-12-19 2017-07-11 Bayer Cropscience Ag difluorometil-nicotínico- tetrahidronaftil carboxamidas
KR20150119031A (ko) 2013-02-11 2015-10-23 바이엘 크롭사이언스 엘피 스트렙토미세스-기반 생물학적 방제제 및 살곤충제를 포함하는 조성물
MX2015010260A (es) 2013-02-11 2016-04-04 Bayer Cropscience Lp Composicion que comprenden un agente de control biologico y un fungicida.
MX2015010259A (es) 2013-02-11 2015-10-29 Bayer Cropscience Lp Composiciones que comprenden un agente de control biologico basado en la cepa nrrl b-50550 de streptomyces microflavus y otro agente de control biologico.
US8907159B1 (en) 2013-02-13 2014-12-09 Pioneer Hi Bred International Inc Maize inbred PH24DM
US8921672B1 (en) 2013-02-13 2014-12-30 Pioneer Hi Bred International Inc Maize inbred PH24DS
US8916744B1 (en) 2013-02-13 2014-12-23 Pioneer Hi Bred International Inc Maize inbred PH24DV
RU2723717C2 (ru) 2013-03-07 2020-06-17 Атеникс Корп. Гены токсинов и способы их применения
US9554573B2 (en) 2013-04-19 2017-01-31 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Binary insecticidal or pesticidal mixture
BR112015026235A2 (pt) 2013-04-19 2017-10-10 Bayer Cropscience Ag método para melhorar a utilização do potencial de produção de plantas transgênicas envolvendo a aplicação de um derivado de ftaldiamida
TW201507722A (zh) 2013-04-30 2015-03-01 Bayer Cropscience Ag 做為殺線蟲劑及殺體內寄生蟲劑的ｎ－（２－鹵素－２－苯乙基）－羧醯胺類
WO2014177514A1 (en) 2013-04-30 2014-11-06 Bayer Cropscience Ag Nematicidal n-substituted phenethylcarboxamides
US9770022B2 (en) 2013-06-26 2017-09-26 Bayer Cropscience Ag N-cycloalkyl-N-[(bicyclylphenyl)methylene]-(thio)carboxamide derivatives
CN105611827A (zh) 2013-10-09 2016-05-25 孟山都技术公司 转基因玉米事件mon87403和其检测方法
AR097995A1 (es) 2013-10-14 2016-04-27 Syngenta Participations Ag Método para sembrar filas de cultivos
CN105793243A (zh) 2013-12-05 2016-07-20 拜耳作物科学股份公司 N-环烷基-n-{[2-(1-取代的环烷基)苯基]亚甲基}-(硫代)甲酰胺衍生物
US10071967B2 (en) 2013-12-05 2018-09-11 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft N-cycloalkyl-N-{[2-(1-substitutedcycloalkyl)phenyl]methylene}-(thio)carboxamide derivatives
EP2885970A1 (en) 2013-12-21 2015-06-24 Bayer CropScience AG Fungicide compositions comprising compound I, at least one succinate dehydrogenase (SDH) inhibitor and at least one triazole fungicide
MX2016011745A (es) 2014-03-11 2017-09-01 Bayer Cropscience Lp Variantes de hppd y metodos de uso.
WO2015160620A1 (en) 2014-04-16 2015-10-22 Bayer Cropscience Lp Compositions comprising ningnanmycin and an insecticide
WO2015160618A1 (en) 2014-04-16 2015-10-22 Bayer Cropscience Lp Compositions comprising ningnanmycin and a biological control agent
WO2015160619A1 (en) 2014-04-16 2015-10-22 Bayer Cropscience Lp Compositions comprising ningnanmycin and a fungicide
PT3837970T (pt) 2014-10-15 2023-09-12 Monsanto Technology Llc Genes de tolerância a herbicidas e métodos de uso dos mesmos
WO2016075327A2 (en) 2014-11-14 2016-05-19 Basf Plant Science Company Gmbh Production of pufas in plants
CN104745708A (zh) * 2015-04-02 2015-07-01 湖南省食品安全生产工程技术研究中心 一种转基因玉米nk603品系的lamp检测试剂盒及检测方法
EP3283476B1 (en) 2015-04-13 2019-08-14 Bayer Cropscience AG N-cycloalkyl-n-(biheterocyclyethylene)-(thio)carboxamide derivatives
CN104878095B (zh) * 2015-04-30 2018-10-26 北京大北农科技集团股份有限公司 用于检测除草剂耐受性玉米植物dbn9858的核酸序列及其检测方法
CN104830845B (zh) * 2015-04-30 2018-10-30 北京大北农科技集团股份有限公司 用于检测除草剂耐受性玉米植物dbn9878的核酸序列及其检测方法
CN104830846B (zh) * 2015-04-30 2018-10-30 北京大北农科技集团股份有限公司 用于检测除草剂耐受性玉米植物dbn9898的核酸序列及其检测方法
CN104830847B (zh) * 2015-04-30 2019-01-11 北京大北农科技集团股份有限公司 用于检测玉米植物dbn9936的核酸序列及其检测方法
CN104878090B (zh) * 2015-04-30 2019-01-15 北京大北农科技集团股份有限公司 用于检测除草剂耐受性玉米植物dbn9877的核酸序列及其检测方法
CN104846084B (zh) * 2015-04-30 2019-02-01 北京大北农科技集团股份有限公司 用于检测玉米植物dbn9927的核酸序列及其检测方法
CN104878096B (zh) * 2015-04-30 2019-01-15 北京大北农科技集团股份有限公司 用于检测除草剂耐受性玉米植物dbn9868的核酸序列及其检测方法
CN104878094B (zh) * 2015-04-30 2019-01-15 北京大北农科技集团股份有限公司 用于检测除草剂耐受性玉米植物dbn9888的核酸序列及其检测方法
EP3097782A1 (en) 2015-05-29 2016-11-30 Bayer CropScience Aktiengesellschaft Methods for controlling phytopathogenic nematodes by combination of fluopyram and biological control agents
US10829779B2 (en) 2015-07-15 2020-11-10 University Of Florida Research Foundation, Incorporated Use of elongator genes to improve plant disease resistance
EA201890696A1 (ru) 2015-09-11 2018-09-28 Байер Кропсайенс Акциенгезельшафт Варианты гфпд и способы применения
CN105331725B (zh) * 2015-11-30 2018-04-24 中国农业大学 转maroACC基因抗除草剂玉米CC-2的侧翼序列及其应用
BR112019001764A2 (pt) 2016-07-29 2019-05-07 Bayer Cropscience Ag combinações de compostos ativos e métodos para proteção de material de propagação de plantas
BR112019010476A2 (pt) 2016-11-23 2019-09-10 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC molécula de ácido nucleico recombinante, vetor, célula hospedeira, planta transgênica, semente transgênica, polipeptídeo recombinante, composição, método para controlar uma população de pragas, para matar pragas, para produzir um polipeptídeo, planta ou célula vegetal, método para proteger uma planta contra uma praga, para aumentar o rendimento em uma planta, uso e produto primário
BR112019011293A2 (pt) 2016-12-19 2019-10-08 Basf Se compostos de fórmula i, intermediários, composição agroquímica, uso e método para combater fungos nocivos fitopatogênicos
CN110431234B (zh) 2017-01-18 2024-04-16 巴斯夫农业种子解决方案美国有限责任公司 Bp005毒素基因及其使用方法
US11286498B2 (en) 2017-01-18 2022-03-29 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Use of BP005 for the control of plant pathogens
US11425910B2 (en) 2017-02-21 2022-08-30 Basf Se Substituted oxadiazoles for combating phytopathogenic fungi
BR112019018056A2 (pt) 2017-03-07 2020-08-11 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC molécula de ácido nucleico recombinante, cassete de expressão, célula hospedeira, plantas, sementes transgênicas, polipeptídeo recombinante, métodos para conferir tolerância e para controlar ervas daninhas, produto de utilidade e uso da sequência de nucleotídeos
AU2018247768A1 (en) 2017-04-07 2019-10-03 Basf Se Substituted oxadiazoles for combating phytopathogenic fungi
WO2018188962A1 (en) 2017-04-11 2018-10-18 Basf Se Substituted oxadiazoles for combating phytopathogenic fungi
EP3612029A1 (en) 2017-04-21 2020-02-26 Bayer CropScience LP Method of improving crop safety
JP7160487B2 (ja) 2017-05-04 2022-10-25 ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア 植物病原菌を駆除するための置換５－（ハロアルキル）－５－ヒドロキシ－イソオキサゾール
WO2018202491A1 (en) 2017-05-04 2018-11-08 Basf Se Substituted trifluoromethyloxadiazoles for combating phytopathogenic fungi
WO2018219797A1 (en) 2017-06-02 2018-12-06 Basf Se Substituted oxadiazoles for combating phytopathogenic fungi
WO2018234139A1 (en) 2017-06-19 2018-12-27 Basf Se 2-[[5-(trifluoromethyl)-1,2,4-oxadiazol-3-yl]aryloxy](thio)acetamides for combating phytopathogenic fungi
WO2019025250A1 (en) 2017-08-04 2019-02-07 Basf Se SUBSTITUTED TRIFLUOROMETHYLOXADIAZOLES FOR COMBATING PHYTOPATHOGENIC FUNGI
WO2019038042A1 (en) 2017-08-21 2019-02-28 Basf Se SUBSTITUTED TRIFLUOROMETHYLOXADIAZOLES FOR THE CONTROL OF PHYTOPATHOGENIC FUNGI
BR112020004441B1 (pt) 2017-09-18 2024-01-16 Basf Se Compostos da fórmula i, composição agroquímica, semente revestida, uso de compostos e método não-terapêutico de combate de fungos
WO2019068811A1 (en) 2017-10-06 2019-04-11 Bayer Aktiengesellschaft COMPOSITIONS COMPRISING FLUOPYRAM AND TIOXAZAFENE
US20210032651A1 (en) 2017-10-24 2021-02-04 Basf Se Improvement of herbicide tolerance to hppd inhibitors by down-regulation of putative 4-hydroxyphenylpyruvate reductases in soybean
WO2019083810A1 (en) 2017-10-24 2019-05-02 Basf Se IMPROVING HERBICIDE TOLERANCE FOR 4-HYDROXYPHENYLPYRUVATE DIOXYGENASE (HPPD) INHIBITORS BY NEGATIVE REGULATION OF HPPD EXPRESSION IN SOYBEANS
US11147275B2 (en) 2017-11-23 2021-10-19 Basf Se Substituted trifluoromethyloxadiazoles for combating phytopathogenic fungi
WO2019121143A1 (en) 2017-12-20 2019-06-27 Basf Se Substituted cyclopropyl derivatives
WO2019137995A1 (en) 2018-01-11 2019-07-18 Basf Se Novel pyridazine compounds for controlling invertebrate pests
WO2019145221A1 (en) 2018-01-29 2019-08-01 BASF Agro B.V. New agrochemical formulations
WO2019154665A1 (en) 2018-02-07 2019-08-15 Basf Se New pyridine carboxamides
US20200354321A1 (en) 2018-02-07 2020-11-12 Basf Se New pyridine carboxamides
US11917995B2 (en) 2018-03-01 2024-03-05 BASF Agro B.V. Fungicidal compositions of mefentrifluconazole
WO2019219464A1 (en) 2018-05-15 2019-11-21 Basf Se Substituted trifluoromethyloxadiazoles for combating phytopathogenic fungi
WO2019224092A1 (en) 2018-05-22 2019-11-28 Basf Se Pesticidally active c15-derivatives of ginkgolides
US11091768B2 (en) 2018-05-23 2021-08-17 The United States Of America, As Represented By The Secretary Of Agriculture Fruit-specific promoters
EP3802521A1 (de) 2018-06-04 2021-04-14 Bayer Aktiengesellschaft Herbizid wirksame bizyklische benzoylpyrazole
EP3613736A1 (en) 2018-08-22 2020-02-26 Basf Se Substituted glutarimide derivatives
EP3628158A1 (en) 2018-09-28 2020-04-01 Basf Se Pesticidal mixture comprising a mesoionic compound and a biopesticide
WO2020083662A1 (en) 2018-10-23 2020-04-30 Basf Se Tricyclic pesticidal compounds
EP3643705A1 (en) 2018-10-24 2020-04-29 Basf Se Pesticidal compounds
EP3670501A1 (en) 2018-12-17 2020-06-24 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole compounds as fungicides
CA3122208A1 (en) 2019-01-11 2020-07-16 Basf Se Crystalline forms of 1-(1,2-dimethylpropyl)-n-ethyl-5-methyl-n-pyridazin-4-yl-pyrazole-4-carboxamide
EP3696177A1 (en) 2019-02-12 2020-08-19 Basf Se Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests
WO2020231751A1 (en) 2019-05-10 2020-11-19 Bayer Cropscience Lp Active compound combinations
CN113923987B (zh) 2019-05-29 2024-10-01 巴斯夫欧洲公司 用于防除动物害虫的介离子咪唑鎓化合物和衍生物
EP3769623A1 (en) 2019-07-22 2021-01-27 Basf Se Mesoionic imidazolium compounds and derivatives for combating animal pests
WO2020244970A1 (en) 2019-06-06 2020-12-10 Basf Se New carbocyclic pyridine carboxamides
WO2020244969A1 (en) 2019-06-06 2020-12-10 Basf Se Pyridine derivatives and their use as fungicides
AU2020286573A1 (en) 2019-06-06 2021-12-23 Basf Se Fungicidal n-(pyrid-3-yl)carboxamides
EP3766879A1 (en) 2019-07-19 2021-01-20 Basf Se Pesticidal pyrazole derivatives
MX2022000950A (es) 2019-07-22 2022-02-14 Bayer Ag 5-amino pirazoles y triazoles como plaguicidas.
CN118561817A (zh) 2019-07-23 2024-08-30 拜耳公司 作为农药的新的杂芳基-三唑化合物
BR112022000942A2 (pt) 2019-07-23 2022-05-17 Bayer Ag Compostos de heteroaril-triazol como pesticidas
CA3149206A1 (en) 2019-08-01 2021-02-04 Bayer Cropscience Lp Method of improving cold stress tolerance and crop safety
EP3701796A1 (en) 2019-08-08 2020-09-02 Bayer AG Active compound combinations
WO2021058659A1 (en) 2019-09-26 2021-04-01 Bayer Aktiengesellschaft Rnai-mediated pest control
CA3156302A1 (en) 2019-10-02 2021-04-08 Bayer Aktiengesellschaft COMBINATIONS OF ACTIVE COMPOUNDS INCLUDING FATTY ACIDS
WO2021063736A1 (en) 2019-10-02 2021-04-08 Basf Se Bicyclic pyridine derivatives
WO2021063735A1 (en) 2019-10-02 2021-04-08 Basf Se New bicyclic pyridine derivatives
UY38911A (es) 2019-10-09 2021-05-31 Bayer Ag Compuestos de heteroarilo-triazol como pesticidas, formulaciones, usos y métodos de uso de los mismos
AR120176A1 (es) 2019-10-09 2022-02-02 Bayer Ag Compuestos de heteroarilo-triazol como pesticidas
US12241075B2 (en) 2019-10-14 2025-03-04 Basf Agricultural Solutions Us Llc Insect resistant genes and methods of use
US20220380318A1 (en) 2019-11-07 2022-12-01 Bayer Aktiengesellschaft Substituted sulfonyl amides for controlling animal pests
WO2021097162A1 (en) 2019-11-13 2021-05-20 Bayer Cropscience Lp Beneficial combinations with paenibacillus
WO2021099271A1 (en) 2019-11-18 2021-05-27 Bayer Aktiengesellschaft Active compound combinations comprising fatty acids
TW202134226A (zh) 2019-11-18 2021-09-16 德商拜耳廠股份有限公司 作為殺蟲劑之新穎雜芳基-三唑化合物
TW202136248A (zh) 2019-11-25 2021-10-01 德商拜耳廠股份有限公司 作為殺蟲劑之新穎雜芳基-三唑化合物
WO2021155084A1 (en) 2020-01-31 2021-08-05 Pairwise Plants Services, Inc. Suppression of shade avoidance response in plants
PY2112437A (es) 2020-02-18 2022-08-16 Bayer Ag Nuevos compuestos de heteroaril-triazol como pesticidas
EP3708565A1 (en) 2020-03-04 2020-09-16 Bayer AG Pyrimidinyloxyphenylamidines and the use thereof as fungicides
WO2021209490A1 (en) 2020-04-16 2021-10-21 Bayer Aktiengesellschaft Cyclaminephenylaminoquinolines as fungicides
WO2021211926A1 (en) 2020-04-16 2021-10-21 Pairwise Plants Services, Inc. Methods for controlling meristem size for crop improvement
US20230212163A1 (en) 2020-04-21 2023-07-06 Bayer Aktiengesellschaft 2-(het)aryl-substituted condensed heterocyclic derivatives as pest control agents
EP3903583A1 (en) 2020-04-28 2021-11-03 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors iii
EP3903584A1 (en) 2020-04-28 2021-11-03 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors iv
WO2021219513A1 (en) 2020-04-28 2021-11-04 Basf Se Pesticidal compounds
EP3903581A1 (en) 2020-04-28 2021-11-03 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors i
EP3903582A1 (en) 2020-04-28 2021-11-03 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors ii
EP4146628A1 (en) 2020-05-06 2023-03-15 Bayer Aktiengesellschaft Pyridine (thio)amides as fungicidal compounds
TWI891782B (zh) 2020-05-06 2025-08-01 德商拜耳廠股份有限公司 作為殺蟲劑之新穎雜芳基三唑化合物
WO2021228734A1 (en) 2020-05-12 2021-11-18 Bayer Aktiengesellschaft Triazine and pyrimidine (thio)amides as fungicidal compounds
EP3909950A1 (en) 2020-05-13 2021-11-17 Basf Se Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests
EP4153566A1 (en) 2020-05-19 2023-03-29 Bayer CropScience Aktiengesellschaft Azabicyclic(thio)amides as fungicidal compounds
MX2022015107A (es) 2020-06-02 2023-03-01 Pairwise Plants Services Inc Metodos para controlar el tama?o del meristema para mejorar los cultivos.
US12565489B2 (en) 2020-06-04 2026-03-03 Bayer Aktiengesellschaft Heterocyclyl pyrimidines and triazines as novel fungicides
EP3945089A1 (en) 2020-07-31 2022-02-02 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors v
WO2021249800A1 (en) 2020-06-10 2021-12-16 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole compounds as fungicides
CA3186659A1 (en) 2020-06-10 2021-12-16 Bayer Aktiengesellschaft Azabicyclyl-substituted heterocycles as fungicides
WO2021257775A1 (en) 2020-06-17 2021-12-23 Pairwise Plants Services, Inc. Methods for controlling meristem size for crop improvement
US20230292747A1 (en) 2020-06-18 2023-09-21 Bayer Aktiengesellschaft Composition for use in agriculture
CN116157017A (zh) 2020-06-18 2023-05-23 拜耳公司 作为杀菌剂用于作物保护的3-(哒嗪-4-基)-5,6-二氢-4h-1,2,4-噁二嗪衍生物
WO2021255089A1 (en) 2020-06-19 2021-12-23 Bayer Aktiengesellschaft 1,3,4-oxadiazole pyrimidines and 1,3,4-oxadiazole pyridines as fungicides
UY39276A (es) 2020-06-19 2022-01-31 Bayer Ag Uso de compuestos de 1,3,4–oxadiazol–2–ilpirimidina para controlar microorganismos fitopatógenos, métodos de uso y composiciones.
WO2021255091A1 (en) 2020-06-19 2021-12-23 Bayer Aktiengesellschaft 1,3,4-oxadiazoles and their derivatives as fungicides
UY39275A (es) 2020-06-19 2022-01-31 Bayer Ag 1,3,4-oxadiazol pirimidinas como fungicidas, procesos e intermediarios para su preparación, métodos de uso y usos de los mismos
EP3929189A1 (en) 2020-06-25 2021-12-29 Bayer Animal Health GmbH Novel heteroaryl-substituted pyrazine derivatives as pesticides
KR20230039665A (ko) 2020-07-02 2023-03-21 바이엘 악티엔게젤샤프트 해충 방제제로서의 헤테로사이클 유도체
CN111826387A (zh) * 2020-07-07 2020-10-27 黑龙江省农业科学院农产品质量安全研究所 一种转基因玉米品系鉴定阳性质粒分子
EP3960727A1 (en) 2020-08-28 2022-03-02 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors vi
EP3939961A1 (en) 2020-07-16 2022-01-19 Basf Se Strobilurin type compounds and their use for combating phytopathogenic fungi
WO2022017836A1 (en) 2020-07-20 2022-01-27 BASF Agro B.V. Fungicidal compositions comprising (r)-2-[4-(4-chlorophenoxy)-2-(trifluoromethyl)phenyl]-1- (1,2,4-triazol-1-yl)propan-2-ol
US12529062B2 (en) 2020-07-31 2026-01-20 Inari Agriculture Technology, Inc. INIR12 transgenic maize
US20230313221A1 (en) * 2020-07-31 2023-10-05 Inari Agriculture Technology, Inc. Expedited breeding of transgenic crop plants by genome editing
EP3970494A1 (en) 2020-09-21 2022-03-23 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors viii
WO2022033991A1 (de) 2020-08-13 2022-02-17 Bayer Aktiengesellschaft 5-amino substituierte triazole als schädlingsbekämpfungsmittel
WO2022053453A1 (de) 2020-09-09 2022-03-17 Bayer Aktiengesellschaft Azolcarboxamide als schädlingsbekämpfungsmittel
WO2022058327A1 (en) 2020-09-15 2022-03-24 Bayer Aktiengesellschaft Substituted ureas and derivatives as new antifungal agents
EP3974414A1 (de) 2020-09-25 2022-03-30 Bayer AG 5-amino substituierte pyrazole und triazole als schädlingsbekämpfungsmittel
WO2022089969A1 (en) 2020-10-27 2022-05-05 BASF Agro B.V. Compositions comprising mefentrifluconazole
CN112266419B (zh) * 2020-10-29 2023-02-03 中国科学院微生物研究所 一种人工合成的抗除草剂蛋白
WO2022090071A1 (en) 2020-11-02 2022-05-05 Basf Se Use of mefenpyr-diethyl for controlling phytopathogenic fungi
WO2022090069A1 (en) 2020-11-02 2022-05-05 Basf Se Compositions comprising mefenpyr-diethyl
WO2022106304A1 (en) 2020-11-23 2022-05-27 BASF Agro B.V. Compositions comprising mefentrifluconazole
WO2022128524A1 (en) 2020-12-14 2022-06-23 Basf Se Sulfoximine pesticides
EP3915971A1 (en) 2020-12-16 2021-12-01 Bayer Aktiengesellschaft Phenyl-s(o)n-phenylamidines and the use thereof as fungicides
WO2022129196A1 (en) 2020-12-18 2022-06-23 Bayer Aktiengesellschaft Heterobicycle substituted 1,2,4-oxadiazoles as fungicides
WO2022129190A1 (en) 2020-12-18 2022-06-23 Bayer Aktiengesellschaft (hetero)aryl substituted 1,2,4-oxadiazoles as fungicides
JP2023554063A (ja) 2020-12-18 2023-12-26 バイエル・アクチエンゲゼルシヤフト 作物における耐性植物病原性真菌を防除するためのｄｈｏｄｈ阻害剤の使用
WO2022129188A1 (en) 2020-12-18 2022-06-23 Bayer Aktiengesellschaft 1,2,4-oxadiazol-3-yl pyrimidines as fungicides
EP4036083A1 (de) 2021-02-02 2022-08-03 Bayer Aktiengesellschaft 5-oxy substituierte hetereozyklen, als schädlingsbekämpfungsmittel
EP4043444A1 (en) 2021-02-11 2022-08-17 Basf Se Substituted isoxazoline derivatives
EP4291641A1 (en) 2021-02-11 2023-12-20 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for modifying cytokinin oxidase levels in plants
US12365910B2 (en) 2021-02-25 2025-07-22 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for modifying root architecture in plants
WO2022207496A1 (en) 2021-03-30 2022-10-06 Bayer Aktiengesellschaft 3-(hetero)aryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide
BR112023019400A2 (pt) 2021-03-30 2023-12-05 Bayer Ag 3-(hetero)aril-5-clorodifluorometil-1,2,4-oxadiazol como fungicida
EP4333616A1 (en) 2021-05-03 2024-03-13 Basf Se Additives for enhancing the pesticidal effectiveness of pesticidal microorganisms
WO2022233777A1 (en) 2021-05-06 2022-11-10 Bayer Aktiengesellschaft Alkylamide substituted, annulated imidazoles and use thereof as insecticides
EP4337661A1 (de) 2021-05-12 2024-03-20 Bayer Aktiengesellschaft 2-(het)aryl-substituierte kondensierte heterocyclen-derivate als schädlingsbekämpfungsmittel
EP4091451A1 (en) 2021-05-17 2022-11-23 BASF Agro B.V. Compositions comprising mefentrifluconazole
BR112023023989A2 (pt) 2021-05-18 2024-01-30 Basf Se Compostos, composição, método para combater fungos fitopatogênicos e semente
EP4341258B1 (en) 2021-05-18 2025-12-03 Basf Se New substituted pyridines as fungicides
CN117355518A (zh) 2021-05-18 2024-01-05 巴斯夫欧洲公司 用作杀真菌剂的新型取代吡啶类
US20220411813A1 (en) 2021-06-17 2022-12-29 Pairwise Plants Services, Inc. Modification of growth regulating factor family transcription factors in soybean
UY39827A (es) 2021-06-24 2023-01-31 Pairwise Plants Services Inc Modificación de genes de ubiquitina ligasa e3 hect para mejorar los rasgos de rendimiento
US12529063B2 (en) 2021-07-01 2026-01-20 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for enhancing root system development
EP4119547A1 (en) 2021-07-12 2023-01-18 Basf Se Triazole compounds for the control of invertebrate pests
EP4380926A1 (en) 2021-08-02 2024-06-12 Basf Se (3-quinolyl)-quinazoline
US20240351995A1 (en) 2021-08-02 2024-10-24 Basf Se (3-pirydyl)-quinazoline
US12365911B2 (en) 2021-08-12 2025-07-22 Pairwise Plants Services, Inc. Modification of brassinosteroid receptor genes to improve yield traits
JP2024529148A (ja) 2021-08-13 2024-08-01 バイエル、アクチエンゲゼルシャフト 活性化合物組合せおよびこれらを含む抗真菌剤組成物
PY2270221A (es) 2021-08-17 2023-03-20 Pairwise Plants Services Inc Métodos y composiciones para modificar genes de histidina quinasa receptores de citoquinina en plantas
EP4140986A1 (en) 2021-08-23 2023-03-01 Basf Se Pyrazine compounds for the control of invertebrate pests
MX2024002386A (es) 2021-08-25 2024-03-14 Bayer Ag Nuevos compuestos de pirazinil-triazol como pesticidas.
EP4140995A1 (en) 2021-08-27 2023-03-01 Basf Se Pyrazine compounds for the control of invertebrate pests
EP4395531A1 (en) 2021-08-30 2024-07-10 Pairwise Plants Services, Inc. Modification of ubiquitin binding peptidase genes in plants for yield trait improvement
EP4144739A1 (de) 2021-09-02 2023-03-08 Bayer Aktiengesellschaft Anellierte pyrazole als schädlingsbekämpfungsmittel
AR126938A1 (es) 2021-09-02 2023-11-29 Pairwise Plants Services Inc Métodos y composiciones para mejorar la arquitectura de las plantas y los rasgos de rendimiento
EP4151631A1 (en) 2021-09-20 2023-03-22 Basf Se Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests
CA3232804A1 (en) 2021-09-21 2023-03-30 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for reducing pod shatter in canola
US20230108968A1 (en) 2021-10-04 2023-04-06 Pairwise Plants Services, Inc. Methods for improving floret fertility and seed yield
AR127300A1 (es) 2021-10-07 2024-01-10 Pairwise Plants Services Inc Métodos para mejorar la fertilidad de la flor y el rendimiento de semillas
WO2023072671A1 (en) 2021-10-28 2023-05-04 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors ix
WO2023072670A1 (en) 2021-10-28 2023-05-04 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors x
CN118541353A (zh) 2021-11-03 2024-08-23 拜耳公司 作为杀真菌化合物的双(杂)芳基硫醚(硫代)酰胺
WO2023099445A1 (en) 2021-11-30 2023-06-08 Bayer Aktiengesellschaft Bis(hetero)aryl thioether oxadiazines as fungicidal compounds
EP4194453A1 (en) 2021-12-08 2023-06-14 Basf Se Pyrazine compounds for the control of invertebrate pests
AR127904A1 (es) 2021-12-09 2024-03-06 Pairwise Plants Services Inc Métodos para mejorar la fertilidad de floretes y el rendimiento de semillas
EP4198033A1 (en) 2021-12-14 2023-06-21 Basf Se Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests
EP4198023A1 (en) 2021-12-16 2023-06-21 Basf Se Pesticidally active thiosemicarbazone compounds
UY40132A (es) 2022-01-31 2023-08-31 Pairwise Plants Services Inc Supresión de la respuesta de evitación de la sombra en las plantas
CN119012913A (zh) 2022-02-01 2024-11-22 环球化学股份有限公司 控制害虫的方法和组合物
CN118984651A (zh) 2022-02-01 2024-11-19 环球化学股份有限公司 控制玉米上害虫的方法和组合物
US20250197358A1 (en) 2022-02-17 2025-06-19 Basf Se Pesticidally active thiosemicarbazone compounds
PY2314419A (es) 2022-03-02 2023-09-25 Pairwise Plants Services Inc Modificación de genes del receptor de brasinoesteroides para mejorar rasgos de rendimiento
EP4238971A1 (en) 2022-03-02 2023-09-06 Basf Se Substituted isoxazoline derivatives
WO2023192838A1 (en) 2022-03-31 2023-10-05 Pairwise Plants Services, Inc. Early flowering rosaceae plants with improved characteristics
AU2023251095A1 (en) 2022-04-07 2024-10-17 Monsanto Technology Llc Methods and compositions for improving resistance to fusarium head blight
EP4511387A1 (en) 2022-04-21 2025-02-26 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for improving yield traits
UY40250A (es) 2022-05-02 2023-11-15 Pairwise Plants Services Inc Métodos y composiciones para mejorar el rendimiento y la resistencia a enfermedades
JP2025516324A (ja) 2022-05-03 2025-05-27 バイエル、アクチエンゲゼルシャフト 望ましくない微生物を防除するための（５ｓ）－３－［３－（３－クロロ－２－フルオロフェノキシ）－６－メチルピリダジン－４－イル］－５－（２－クロロ－４－メチルベンジル）－５，６－ジヒドロ－４ｈ－１，２，４－オキサジアジンの使用
CN119522219A (zh) 2022-05-03 2025-02-25 拜耳公司 (5s)-3-[3-(3-氯-2-氟苯氧基)-6-甲基哒嗪-4-基]-5-(2-氯-4-甲基苄基)-5,6-二氢-4h-1,2,4-噁二嗪的晶型
UY40255A (es) 2022-05-05 2023-11-15 Pairwise Plants Services Inc Métodos y composiciones para modificar la arquitectur radicular y/o mejorar los rangos de rendimient
UY40326A (es) 2022-06-27 2023-12-29 Pairwise Plants Services Inc Métodos y composiciones para modificar el escape a la sombra en plantas
US20240002873A1 (en) 2022-06-29 2024-01-04 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for controlling meristem size for crop improvement
CN119487055A (zh) 2022-06-29 2025-02-18 成对植物服务股份有限公司 用于控制分生组织大小以进行作物改良的方法和组合物
CA3263381A1 (en) 2022-08-02 2024-02-08 Basf Se PYRAZOLO PESTICIDE COMPOUNDS
WO2024030984A1 (en) 2022-08-04 2024-02-08 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for improving yield traits
CA3264244A1 (en) 2022-08-11 2024-02-15 Pairwise Plants Services, Inc. METHODS AND COMPOSITIONS FOR REGULATING MERISTEME SIZE FOR CROP IMPROVEMENT
EP4584282A1 (en) 2022-09-08 2025-07-16 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for improving yield characteristics in plants
EP4342885A1 (en) 2022-09-20 2024-03-27 Basf Se N-(3-(aminomethyl)-phenyl)-5-(4-phenyl)-5-(trifluoromethyl)-4,5-dihydroisoxazol-3-amine derivatives and similar compounds as pesticides
WO2024068520A1 (en) 2022-09-28 2024-04-04 Bayer Aktiengesellschaft 3-(hetero)aryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide
WO2024068518A1 (en) 2022-09-28 2024-04-04 Bayer Aktiengesellschaft 3-heteroaryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide
EP4295688A1 (en) 2022-09-28 2023-12-27 Bayer Aktiengesellschaft Active compound combination
WO2024068517A1 (en) 2022-09-28 2024-04-04 Bayer Aktiengesellschaft 3-(hetero)aryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide
WO2024068519A1 (en) 2022-09-28 2024-04-04 Bayer Aktiengesellschaft 3-(hetero)aryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide
EP4361126A1 (en) 2022-10-24 2024-05-01 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors xv
EP4619399A1 (en) 2022-11-16 2025-09-24 Basf Se New substituted tetrahydrobenzoxazepine
CN120202194A (zh) 2022-11-16 2025-06-24 巴斯夫欧洲公司 作为杀真菌剂的取代的四氢苯并二氮杂䓬
CN120202196A (zh) 2022-11-16 2025-06-24 巴斯夫欧洲公司 作为杀真菌剂的取代的苯并二氮杂䓬类
WO2024104815A1 (en) 2022-11-16 2024-05-23 Basf Se Substituted benzodiazepines as fungicides
EP4385326A1 (en) 2022-12-15 2024-06-19 Kimitec Biogorup Biopesticide composition and method for controlling and treating broad spectrum of pests and diseases in plants
AU2023408197A1 (en) 2022-12-19 2025-06-26 Basf Agricultural Solutions Us Llc Insect toxin genes and methods for their use
EP4389210A1 (en) 2022-12-21 2024-06-26 Basf Se Heteroaryl compounds for the control of invertebrate pests
EP4662210A1 (en) 2023-02-08 2025-12-17 Basf Se New substituted quinoline compounds for combatitng phytopathogenic fungi
EP4665747A1 (en) 2023-02-16 2025-12-24 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for modifying shade avoidance in plants
UY40661A (es) 2023-03-02 2024-10-15 Pairwise Plants Services Inc Métodos y composiciones para modificar la evitación de la sombra en plantas
UY40664A (es) 2023-03-09 2024-10-15 Pairwise Plants Services Inc Modificación de genes de la vía de señalización de brasinoesteroide para mejorar rasgos de rendimien
KR20250156732A (ko) 2023-03-17 2025-11-03 바스프 에스이 식물병원성 진균을 퇴치하기 위한 치환된 피리딜/피라지딜 디히드로벤조티아제핀 화합물
EP4455137A1 (en) 2023-04-24 2024-10-30 Basf Se Pyrimidine compounds for the control of invertebrate pests
AU2023445097A1 (en) 2023-04-26 2025-11-06 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors xvi
UY40746A (es) 2023-05-18 2024-12-13 Pairwise Plants Services Inc Métodos y composiciones para mejorar las características de rendimiento de las plantas
EP4467535A1 (en) 2023-05-25 2024-11-27 Basf Se Lactam pesticidal compounds
CN121464139A (zh) 2023-07-05 2026-02-03 巴斯夫欧洲公司 用于对抗植物病原性真菌的取代的喹啉基/喹喔啉基二氢吡咯并三嗪化合物
WO2025008447A1 (en) 2023-07-05 2025-01-09 Bayer Aktiengesellschaft Composition for use in agriculture
WO2025008446A1 (en) 2023-07-05 2025-01-09 Bayer Aktiengesellschaft Composition for use in agriculture
WO2025008227A1 (en) 2023-07-05 2025-01-09 Basf Se Substituted pyridyl/pyrazinyl dihydropyrrolotriazine compounds for combatting phytopath-ogenic fungi
EP4488269A1 (en) 2023-07-06 2025-01-08 Basf Se Triazole compounds for the control of invertebrate pests
EP4488273A1 (en) 2023-07-06 2025-01-08 Basf Se Triazole compounds for the control of invertebrate pests
EP4488270A1 (en) 2023-07-06 2025-01-08 Basf Se Triazole compounds for the control of invertebrate pests
PY2455894A (es) 2023-07-18 2025-03-28 Pairwise Plants Services Inc Métodos y composiciones para modificar la arquitectura radicular en plantas
AR133310A1 (es) 2023-07-27 2025-09-17 Pairwise Plants Services Inc Métodos y composiciones para modificar rasgos de rendimiento de las plantas
WO2025026738A1 (en) 2023-07-31 2025-02-06 Bayer Aktiengesellschaft 6-[5-(ethylsulfonyl)-1-methyl-1h-imidazol-4-yl]-7-methyl-3-(pentafluoroethyl)-7h-imidazo[4,5-c]pyridazine derivatives as pesticides
KR20260042262A (ko) 2023-08-01 2026-03-30 글로바켐 엔브이 살충 혼합물
EP4501112A1 (en) 2023-08-01 2025-02-05 Globachem NV Plant defense elicitors
CN121646591A (zh) 2023-08-09 2026-03-10 巴斯夫欧洲公司 用于对抗植物病原性真菌的新型取代的苯并噁嗪吡啶甲腈化合物
WO2025031842A1 (en) 2023-08-09 2025-02-13 Basf Se New substituted benzoxazepine picolinonitrile compounds for combatting phytopathogenic fungi
WO2025031668A1 (en) 2023-08-09 2025-02-13 Bayer Aktiengesellschaft Azaheterobiaryl-substituted 4,5-dihydro-1h-2,4,5-oxadiazines as novel fungicides
CN121693501A (zh) 2023-08-09 2026-03-17 拜耳公司 作为新的杀菌剂的哒嗪-4-基噁二嗪
WO2025064734A1 (en) 2023-09-21 2025-03-27 Pairwise Plants Services, Inc. Early flowering black raspberry plants with improved characteristics
WO2025068226A2 (en) 2023-09-29 2025-04-03 Basf Se Methods for protecting plants using mixtures comprising sulfur and selected terpenes
AU2024358155A1 (en) 2023-10-09 2026-04-16 Basf Se Fungicidal mixture comprising substituted quinazolyl quinolines
AU2024358203A1 (en) 2023-10-09 2026-04-16 Basf Se Fungicidal mixture comprising substituted pyridines
WO2025078128A1 (en) 2023-10-11 2025-04-17 Bayer Aktiengesellschaft Pyridazin-3-one-4-yloxadiazines as novel fungicides
WO2025080600A1 (en) 2023-10-11 2025-04-17 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for improving crop yield traits
WO2025098875A1 (en) 2023-11-10 2025-05-15 Bayer Aktiengesellschaft Active compound combinations having insecticidal/acaricidal properties
WO2025098876A1 (en) 2023-11-10 2025-05-15 Bayer Aktiengesellschaft Active compound combinations having insecticidal/acaricidal properties
WO2025098874A1 (en) 2023-11-10 2025-05-15 Bayer Aktiengesellschaft Active compound combinations having fungicidal/insecticidal/acaricidal properties
WO2025131902A1 (en) 2023-12-21 2025-06-26 Basf Se Methods for protecting plants using mixtures comprising sulfur, selected terpenes and phosphites.
EP4574819A1 (en) 2023-12-22 2025-06-25 Basf Se Diazinone compounds for the control of invertebrate pests
WO2025168620A1 (en) 2024-02-07 2025-08-14 Bayer Aktiengesellschaft Heteroaryl-substituted 4,5-dihydro-1h-2,4,5-oxadiazines as novel fungicides
WO2025178902A1 (en) 2024-02-22 2025-08-28 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for improving yield characteristics in plants
WO2025180964A1 (en) 2024-03-01 2025-09-04 Basf Se New substituted benzoxazepine compounds for combatting phytopathogenic fungi
WO2025186065A1 (en) 2024-03-05 2025-09-12 Bayer Aktiengesellschaft Heteroaryl-substituted (aza)quinoxaline derivatives as pesticides
WO2025190927A1 (en) 2024-03-14 2025-09-18 Bayer Aktiengesellschaft Active compound combinations having insecticidal/acaricidal properties
WO2025211272A1 (en) 2024-04-04 2025-10-09 Nihon Nohyaku Co., Ltd. Pesticidal mixtures comprising an ethylsulfone compound
EP4640052A1 (en) 2024-04-24 2025-10-29 Basf Se Mixtures of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors with at least one further pesticide i
WO2025223904A1 (en) 2024-04-24 2025-10-30 Basf Se Mixtures of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors with at least one further pesticide i
EP4652842A1 (en) 2024-05-21 2025-11-26 Kimitec Biogroup S.L Biopesticide composition, procedure of obtain thereof, and method for controlling and treating broad spectrum of pests, diseases and weeds in plants
EP4652843A1 (en) 2024-05-21 2025-11-26 Kimitec Biogroup S.L Biopesticide composition, procedure of obtain thereof, and method for controlling and treating broad spectrum of pests in plants
WO2025257122A1 (en) 2024-06-12 2025-12-18 Bayer Aktiengesellschaft Active compound combinations having insecticidal/acaricidal properties
WO2025257121A1 (en) 2024-06-12 2025-12-18 Bayer Aktiengesellschaft Active compound combinations having insecticidal/acaricidal properties
WO2026002763A1 (en) 2024-06-26 2026-01-02 Basf Se Pesticidal mixtures and applications of beauveria bassiana and dimpropyridaz
WO2026012814A1 (en) 2024-07-10 2026-01-15 Basf Se Compositions and methods to enhance crop yield and plant health
WO2026021909A1 (en) 2024-07-23 2026-01-29 Basf Se New substituted benzothiazine pyridine compounds for combatting phytopathogenic fungi
WO2026021911A1 (en) 2024-07-23 2026-01-29 Basf Se New substituted benzothiazine pyridine compounds for combatting phytopathogenic fungi
WO2026021912A1 (en) 2024-07-23 2026-01-29 Basf Se New substituted benzothiazine pyridine compounds for combatting phytopathogenic fungi
WO2026021910A1 (en) 2024-07-23 2026-01-29 Basf Se New substituted benzothiazine pyridine compounds for combatting phytopathogenic fungi
WO2026027375A1 (de) 2024-07-29 2026-02-05 Bayer Aktiengesellschaft Hydroxy-dihydropyridinon carboxamide als schädlingsbekämpfungsmittel
WO2026027723A1 (en) 2024-08-01 2026-02-05 Syngenta Crop Protection Ag Herbicide resistant plants
WO2026037853A1 (en) 2024-08-14 2026-02-19 Basf Se Benzoxazole derivatives as pesticidal compounds
WO2026041702A1 (en) 2024-08-21 2026-02-26 Basf Se Benzoxazole derivatives as pesticidal compounds
WO2026057375A1 (en) 2024-09-11 2026-03-19 Basf Se Mixtures of ambruticin with at least one further pesticide
EP4710766A1 (en) 2024-09-11 2026-03-18 Basf Se Mixtures of ambruticin with at least one further pesticide
EP4721566A1 (en) 2024-10-07 2026-04-08 Kimitec Biogroup S.L Microbial composition based on bacillus infantis strain for agricultural use
WO2026082481A1 (en) 2024-10-17 2026-04-23 Bayer Aktiengesellschaft Active compound combinations having insecticidal/acaricidal properties
WO2026082514A1 (en) 2024-10-18 2026-04-23 Basf Se Pesticidal mixtures and applications of dimpropyridaz

Family Cites Families (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4683195A (en) 1986-01-30 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences
US4683202A (en) 1985-03-28 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying nucleic acid sequences
US5164316A (en) 1987-01-13 1992-11-17 The University Of British Columbia DNA construct for enhancing the efficiency of transcription
US5641876A (en) 1990-01-05 1997-06-24 Cornell Research Foundation, Inc. Rice actin gene and promoter
US5633435A (en) 1990-08-31 1997-05-27 Monsanto Company Glyphosate-tolerant 5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthases
US5593874A (en) 1992-03-19 1997-01-14 Monsanto Company Enhanced expression in plants
US5362865A (en) 1993-09-02 1994-11-08 Monsanto Company Enhanced expression in plants using non-translated leader sequences
US5853973A (en) * 1995-04-20 1998-12-29 American Cyanamid Company Structure based designed herbicide resistant products
AR012335A1 (es) * 1997-04-03 2000-10-18 Dekalb Genetics Corp Planta de maiz transgenica fertil y metodo para prepararla, dichas plantas endogamica y cruzada resistentes al glifosato, metodos para cultivar eincrementar el rendimiento de maiz, producir forraje, alimento para seres humanos, almidon, y criar plantas.
US6040497A (en) * 1997-04-03 2000-03-21 Dekalb Genetics Corporation Glyphosate resistant maize lines
US5948956A (en) 1997-10-16 1999-09-07 Oms Investments, Inc. Transgenic plants and method for node segment transformation
EP1135511B1 (en) * 1998-11-17 2009-06-17 Monsanto Technology LLC Phosphonate metabolizing plants
BRPI0100752B1 (pt) * 2000-06-22 2015-10-13 Monsanto Co moléculas e pares de moléculas de dna, processos para detectar molécula de dna e para criar um traço tolerante a glifosato em plantas de milho, bem como kit de detecção de dna
CA2420406C (en) * 2000-09-29 2014-12-09 Monsanto Technology Llc Glyphosate tolerant wheat plant 33391 and compositions and methods for detection thereof
AU2003299579B2 (en) * 2002-12-05 2008-09-04 Monsanto Technology Llc Bentgrass event ASR-368 and compositions and methods for detection thereof

Also Published As

Publication number Publication date
CY1106109T1 (el) 2011-06-08
US20140304849A1 (en) 2014-10-09
CN101186918A (zh) 2008-05-28
US20100017902A1 (en) 2010-01-21
HUP0102569A2 (hu) 2003-08-28
UY26788A1 (es) 2001-10-25
AR031665A1 (es) 2003-10-01
SI1582592T1 (sl) 2010-08-31
CZ305949B6 (cs) 2016-05-18
CY1110083T1 (el) 2015-01-14
ES2261330T3 (es) 2006-11-16
EP2210951B1 (en) 2016-01-06
YU43701A (sh) 2003-12-31
HU230814B1 (hu) 2018-06-28
ATE323168T1 (de) 2006-04-15
EP2210951A3 (en) 2011-01-05
HU0102569D0 (en) 2001-08-28
EP1167531A1 (en) 2002-01-02
BG65315B1 (bg) 2008-01-31
US20120329654A1 (en) 2012-12-27
US8273959B2 (en) 2012-09-25
CA2349841A1 (en) 2001-12-22
CN1332246A (zh) 2002-01-23
EP2210951A2 (en) 2010-07-28
CN100350043C (zh) 2007-11-21
MXPA01006407A (es) 2004-05-11
US7582434B2 (en) 2009-09-01
SI1167531T1 (sl) 2006-10-31
ES2343252T3 (es) 2010-07-27
SI2210951T1 (sl) 2016-04-29
US20070056056A1 (en) 2007-03-08
HU0800015D0 (en) 2008-03-28
EP1582592A1 (en) 2005-10-05
ES2564464T3 (es) 2016-03-22
DK1582592T3 (da) 2010-08-16
CZ299722B6 (cs) 2008-10-29
US8722969B2 (en) 2014-05-13
BRPI0100752B1 (pt) 2015-10-13
CZ20012203A3 (cs) 2002-02-13
DK1167531T3 (da) 2006-08-14
US20020013960A1 (en) 2002-01-31
RS49990B (sr) 2008-09-29
US9701980B2 (en) 2017-07-11
AR066163A2 (es) 2009-07-29
EP1582592B1 (en) 2010-05-05
ID30575A (id) 2001-12-27
BR0100752A (pt) 2002-02-13
AR053231A2 (es) 2007-04-25
US20040139493A1 (en) 2004-07-15
US20070292854A1 (en) 2007-12-20
DE60142092D1 (de) 2010-06-17
DE60118660D1 (de) 2006-05-24
BR122013026754B1 (pt) 2018-02-27
CA2349841C (en) 2012-12-11
PL348225A1 (en) 2002-01-02
EP1167531B1 (en) 2006-04-12
AR065690A2 (es) 2009-06-24
PT1167531E (pt) 2006-07-31
ATE466945T1 (de) 2010-05-15
US6825400B2 (en) 2004-11-30
PT1582592E (pt) 2010-06-16
DE60118660T2 (de) 2007-03-29
DK2210951T3 (en) 2016-03-21
HU226193B1 (en) 2008-06-30
US7193071B2 (en) 2007-03-20
BG105637A (en) 2002-04-30
US20170327838A1 (en) 2017-11-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
PL199928B1 (pl) Cząsteczka DNA umożliwiająca identyfikację rośliny kukurydzy tolerującej glifosat, para cząsteczek DNA, sposób wykrywania obecności cząsteczki DNA, cząsteczka DNA, sposób wbudowywania cechy tolerancji na glifosat, zestaw do wykrywania DNA, roślina kukurydzy tolerująca glifosat, transgeniczna komórka roślinna z tolerancją glifosatu, sposób wytwarzania rośliny kukurydzy i sposób hodowli rośliny kukurydzy
JP6167075B2 (ja) ダイズ事象ｍｏｎ８９７８８およびその検出方法
CN103088017B (zh) 棉花事件mon 88913及其组合物和检测方法
AU2002215363B2 (en) Cotton event PV-GHGT07(1445) and compositions and methods for detection thereof
AU2002215363A1 (en) Cotton event PV-GHGT07(1445) and compositions and methods for detection thereof
ME00840B (me) Dnk sekvence vezane za kukuruzni transformant pv-zmgt 32 (nk 603) i preparati i metode za njegovu detekciju