PL199928B1 - Cząsteczka DNA umożliwiająca identyfikację rośliny kukurydzy tolerującej glifosat, para cząsteczek DNA, sposób wykrywania obecności cząsteczki DNA, cząsteczka DNA, sposób wbudowywania cechy tolerancji na glifosat, zestaw do wykrywania DNA, roślina kukurydzy tolerująca glifosat, transgeniczna komórka roślinna z tolerancją glifosatu, sposób wytwarzania rośliny kukurydzy i sposób hodowli rośliny kukurydzy - Google Patents

Cząsteczka DNA umożliwiająca identyfikację rośliny kukurydzy tolerującej glifosat, para cząsteczek DNA, sposób wykrywania obecności cząsteczki DNA, cząsteczka DNA, sposób wbudowywania cechy tolerancji na glifosat, zestaw do wykrywania DNA, roślina kukurydzy tolerująca glifosat, transgeniczna komórka roślinna z tolerancją glifosatu, sposób wytwarzania rośliny kukurydzy i sposób hodowli rośliny kukurydzy

Info

Publication number
PL199928B1
PL199928B1 PL348225A PL34822501A PL199928B1 PL 199928 B1 PL199928 B1 PL 199928B1 PL 348225 A PL348225 A PL 348225A PL 34822501 A PL34822501 A PL 34822501A PL 199928 B1 PL199928 B1 PL 199928B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
seq
dna
maize
plant
dna molecule
Prior art date
Application number
PL348225A
Other languages
English (en)
Other versions
PL348225A1 (en
Inventor
Carl F. Behr
Gregory R. Heck
Catherina Hironaka
Jinsong You
Original Assignee
Monsanto Technology Llc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=27395887&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=PL199928(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Monsanto Technology Llc filed Critical Monsanto Technology Llc
Publication of PL348225A1 publication Critical patent/PL348225A1/xx
Publication of PL199928B1 publication Critical patent/PL199928B1/pl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
    • C12N15/8274—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for herbicide resistance
    • C12N15/8275—Glyphosate
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8216—Methods for controlling, regulating or enhancing expression of transgenes in plant cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8216—Methods for controlling, regulating or enhancing expression of transgenes in plant cells
    • C12N15/8221—Transit peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
    • C12Q1/6895—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for plants, fungi or algae
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/13—Plant traits
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/158—Expression markers

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

Wynalazek dostarcza konstrukt DNA, który nadaje tolerancj e na glifosfat transgenicznej ro slinie zbo zowej. Dostarcza tak ze m.in. prób do wykrywania obecno sci przypadku ro sliny zbo zowej PV-ZMGT32(nk603) w oparciu o sekwencje DNA rekombinowanego konstruktu wstawionego do ge- nomu ro sliny zbo zowej i flankuj ace miejsce wstawki sekwencje genomowe. PL PL PL PL

Description

Opis wynalazku
Niniejszy wynalazek dotyczy cząsteczki DNA umożliwiającej identyfikację rośliny kukurydzy tolerującej glifosat, pary cząsteczek DNA, sposobu wykrywania obecności cząsteczki DNA, cząsteczka DNA, sposobu wbudowywania cechy tolerancji na glifosat, zestaw do wykrywania DNA, rośliny kukurydzy tolerującej glifosat, transgenicznej komórki roślinnej z tolerancją glifosatu, sposobu wytwarzania rośliny kukurydzy i sposobu hodowli rośliny kukurydzy.
Kukurydza jest ważną rośliną uprawną i podstawowym źródłem pożywienia w wielu rejonach świata. W celu poprawienia cech agronomicznych i jakości produktu w stosunku do kukurydzy zastosowane były sposoby biotechnologiczne. Jedną z takich cech agronomicznych jest tolerancja na herbicyd, zwłaszcza tolerancja na herbicyd glifosfatowy. Cechę tą kukurydzy nadawano przez ekspresję transgenu w roślinach kukurydzy (Patent St. Zjedn. Ameryki nr 6,040,497).
Jak wiadomo, obce geny w roślinach wpływają poprzez ich miejsce w chromosomie, być może w związku z strukturą chromatyny (np. heterochromatyny) lub z bliskością transkrypcyjnych elementów regulujących (np. wzmacniaczy) ściśle przylegających do miejsc integracji (Weising i wsp., Ann. Rev. Genet 22:421-477, 1988). Z tego powodu, często koniecznym jest zbadanie dużej liczby przypadków w celu identyfikacji przypadku charakteryzującego się optymalną ekspresją wprowadzanego, będącego przedmiotem zainteresowania genu. Na przykład, obserwuje się u roślin i u innych organizmów, że w wielu przypadkach może istnieć duża zmienność poziomów ekspresji wprowadzonych genów. Mogą także istnieć różnice w układach przestrzennych i czasowych, na przykład, różnice we względnej ekspresji transgenu w różnych tkankach roślinnych, które mogą nie odpowiadać wzorom jakie są spodziewane z transkrypcyjnych elementów regulatorowych obecnych we wprowadzonym konstrukcie genowym. Z tego powodu powszechnym jest wytwarzanie od setek do tysięcy różnych przypadków i przeglądanie tych przypadków w celu znalezienia jednego przypadku, posiadającego do celów komercyjnych pożądane poziomy i wzorce ekspresji transgenu. Przypadek, który ma pożądane poziomy lub wzorce ekspresji transgenu jest użyteczny do introgresji transgenu do innego genetycznego tła poprzez płciowy outcrossing stosując konwencjonalne sposoby hodowli. Potomstwo takich krzyżówek utrzymuje charakterystykę ekspresji transgenu oryginalnego transformantu. Strategia taka stosowana jest w celu zapewnienia pewnej ekspresji genowej w wielu odmianach, które są dobrze dostosowane do miejscowych warunków wzrostowych.
Korzystna byłaby możliwość wykrywania obecności poszczególnych przypadków w celu ustalenia czy potomstwo krzyżówki płciowej zawiera transgen. Ponadto, sposób wykrywania poszczególnego przypadku byłoby pomocne do zastosowania w przepisach i uregulowaniach wymagających na przykład wstępnej aprobaty handlowej i oznakowania żywności pochodzącej z rekombinantowych roślin zbożowych. Możliwe jest wykrycie obecności transgenu, każdą dobrze znaną metodą wykrywania kwasu nukleinowego, taką jak łańcuchowa reakcja polimerazowa (PCR) lub hybrydyzacja DNA stosując sondy kwasu nukleinowego. Te sposoby wykrywania generalnie koncentrują się na często stosowanych elementach genetycznych, takich jak promotory, terminatory, geny markerowe, itp. Ponieważ wynik takich metod może być nieskuteczny do rozróżnienia pomiędzy różnymi przypadkami, zwłaszcza stosując te same konstrukty DNA chyba, że sekwencja DNA chromosomalnego DNA przylegająca do wstawionego DNA (DNA flankujące) jest znana. Próba PCR specyficzna dla tego przypadku jest dyskutowana np. przez Windels i wsp. (Med. Fac. Landbouww, Univ. Gent 64/5b:459-462, 1999), którzy zidentyfikowali przypadek tolerancji na glifosfat u soi 40-3-2 przez zastosowanie zestawu primerów w PCR spinających połączenie pomiędzy wstawką a DNA flankującym, zwłaszcza jednego primera, który włączał jedną sekwencję z wstawki i drugiego primera, który obejmował sekwencję DNA flankującego.
Przedmiotem wynalazku jest zatem cząsteczka DNA umożliwiająca identyfikację roślin kukurydzy pV-ZMGT32 (nk603) tolerujących glifosat, charakteryzująca się tym, że zawiera sekwencję nukleotydową zidentyfikowaną jako SEQ ID nr:7 lub SEQ ID nr: 8. Korzystnie cząsteczka DNA według wynalazku jest obecna w roślinie kukurydzy, nasieniu kukurydzy, tkance kukurydzy lub w jądrze komórkowym kukurydzy.
Następnie przedmiotem wynalazku jest para cząsteczek DNA składająca się z: pierwszej cząsteczki DNA i z drugiej cząsteczki DNA, charakteryzująca się tym, że cząsteczki DNA są o wystarczającej długości sąsiednich nukleotydów o sekwencji SEQ ID nr: 7 lub ich komplementów do działania jako primery DNA lub sondy diagnostyczne dla DNA ekstrahowanego z rośliny kukurydzy PV-ZMGT32(nk603) lub jej potomstwa.
PL 199 928 B1
Wynalazek dotyczy także pary cząsteczek DNA składającej się z: pierwszej cząsteczki DNA i z drugiej cząsteczki DNA, tak, że cząsteczki DNA są o wystarczającej długości sąsiednich nukleotydów o sekwencji SEQ ID nr: 8 lub ich komplementów do działania jako primery DNA lub sondy diagnostyczne dla ekstrahowanego DNA z rośliny kukurydzy PV-ZMGT32(nk603) lub jej potomstwa.
Następnym przedmiotem wynalazku jest sposób wykrywania obecności cząsteczki DNA wybranej z grupy składającej się z SEQ ID nr: 7 i SEQ ID nr: 8 w próbce DNA, polegający na tym, że (a) ekstrahuje się próbkę DNA z rośliny kukurydzy;
(b) kontaktuje się próbkę DNA z DNA pary primera zawierającą cząsteczki DNA primera o wystarczającej długości sąsiadujących nukleotydów SEQ ID nr: 7 lub jego komplementu;
(c) dostarcza się warunki reakcji do amplifikacji kwasu nukleinowego;
(d) przeprowadza się reakcję amplifikacji kwasu nukleinowego, wytwarzając w ten sposób cząsteczkę amplikonu DNA; i (e) wykrywa się cząsteczkę DNA amplikonu.
Przedmiotem wynalazku jest także sposób wykrywania obecności cząsteczki DNA wybranej z grupy składającej się z SEQ ID nr: 7 i SEQ ID nr: 8 w próbce DNA, polegający na tym, że (a) ekstrahuje się próbkę DNA z rośliny kukurydzy;
(b) kontaktuje się próbkę DNA z cząsteczką DNA zidentyfikowaną jako SEQ ID nr: 9, SEQ ID nr: SEQ ID nr: 10, SEQ ID nr: 11 lub SEQ ID nr: 12, przy czym wspomniana cząsteczka DNA jest sondą DNA, która hybrydyzuje w ścisłych warunkach hybrydyzacji z cząsteczką DNA wybraną z grupy składającej się z SEQ ID nr: 7 lub SEQ ID nr: 8, i nie hybrydyzuje w ścisłych warunkach hybrydyzacji z próbką DNA zawierającą cząsteczkę DNA zidentyfikowaną jako SEQ ID nr: 7 lub SEQ ID nr: 8;
(c) poddaje się próbkę i sondę warunkom ścisłej hybrydyzacji i wykrywa się hybrydyzację sondy z DNA.
Wynalazek dotyczy również cząsteczki DNA wybranej z grupy składającej się z SEQ ID nr: 9, SEQ ID nr: 10, SEQ ID nr: 11, SEQ ID nr: 12 i ich komplementów. Korzystnie, taka cząsteczka DNA jest obecna w roślinie kukurydzy, nasieniu kukurydzy, tkance kukurydzy lub w jądrze komórkowym kukurydzy.
Następnym przedmiotem wynalazku jest sposób wbudowywania cechy tolerancji na glifosat do roślin kukurydzy, znamienny tym, że (a) ekstrahuje się próbkę DNA z potomnych roślin kukurydzy;
(b) kontaktuje się próbkę DNA z markerową cząsteczką kwasu nukleinowego wybraną z grupy składającej się z SEQ ID nr: 9, SEQ ID nr: 10, SEQ ID nr: 11, SEQ ID nr: 12 i ich komplementami;
(c) prowadzi się sposób wspomaganego markerem wbudowywania cechy tolerancji na glifosat, przy czym cecha tolerancji na glifosat jest genetycznie związana z komplementem cząsteczki markerowego kwasu nukleinowego.
Kolejnym przedmiotem wynalazku jest zestaw do wykrywania DNA zawierający co najmniej jedną cząsteczkę DNA o dostatecznej długości sąsiadujących nukleotydów homologicznych lub komplementarnych do SEQ ID nr: 7 lub SEQ ID nr: 8, które działają jako primer DNA lub specyficzna sonda dla przypadku kukurydzy PV-ZMGT32(nk603) i jej potomstwa.
Następnym przedmiotem wynalazku jest transgeniczna komórka roślinna z tolerancją glifosatu, zawierająca włączoną w genom tej komórki roślinnej cząsteczkę DNA kodującą tolerancyjną na glifosat EPSPS oraz DNA o sekwencji nukleotydowej zdefiniowanej w SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11 i SEQ ID NO: 12.
Przedmiotem wynalazku jest również sposób wytwarzania rośliny kukurydzy, która toleruje stosowanie herbicydu glifosatu, polegający na tym, że
a) krzyżuje się roślinę zawierającej włączoną w jej genom cząsteczkę DNA kodującą tolerancyjną na glifosat EPSPS, regiony złącza SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11 i SEQ ID NO: 12, z inną rośliną kukurydzy;
b) otrzymuje się co najmniej jedno pokolenie roślin potomnych pochodzących z krzyżówki (a); i
c) dokonuje się selekcji potomstwa, które jest tolerancyjne na glifosat i zawiera regiony złącza
SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11 i SEQ ID NO: 12.
Przedmiotem wynalazku jest także sposób hodowli rośliny kukurydzy, która toleruje stosowanie herbicydu glifosat, polegający na tym, że
a) sadzi się co najmniej jedno nasienie rośliny kukurydzy zawierające włączoną w jego genom cząsteczkę DNA kodującą tolerancyjną na glifosat EPSPS i regiony łącznika SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11 oraz SEQ ID NO: 12,
PL 199 928 B1
b) prowadzi się wzrost z tego nasienia i uzyskuje się roślinę kukurydzy;
c) pokrywa się tą roślinę herbicydem glifosatem tak, że wspomniana roślina ma mniejsze uszkodzenia wegetatywne i mniejsze uszkodzenie plonowania w porównaniu do innych roślin kukurydzy, które nie zawierają SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11 i SEQ ID NO: 12. Korzystnie etapem selekcjonującym w c) w tym sposobie jest pokrywanie glifosatem.
Również korzystnie, etap selekcjonujący w części c) zawiera etapy:
(i) ekstrahowania próbki DNA z potomnych roślin kukurydzy;
(ii) kontaktowania próbki DNA z markerową cząsteczką kwasu nukleinowego wybraną z grupy składającej się z SEQ ID nr: 9, SEQ ID nr: 10, SEQ ID nr: 11, SEQ ID nr: 12 i ich komplementami;
(iii) prowadzenia sposobu wspomagania wbudowywania markera cechy tolerancji na glifosat, przy czym cecha tolerancji na glifosat jest genetycznie powiązana do komplementu cząsteczki markerowego kwasu nukleinowego.
Cząsteczka DNA charakteryzuje się tym, że wspomniana cząsteczka DNA jest obecna w roślinie kukurydzy, nasieniu kukurydzy, tkance kukurydzy lub w jądrze komórkowym kukurydzy.
Przedmiotem wynalazku jest nowa cząsteczka DNA 5' ACCAAGCTTTTATAATAG 3' (SEQ ID nr: 12) i jej komplement, przy czym ta cząsteczka DNA jest nowa w obrębie PV-ZMGT32(nk603) i w jej potomstwie. Roślina kukurydzy i jej nasiona zawierające tą cząsteczkę są przedmiotem wynalazku.
Zgodnie z innym aspektem wynalazku, przedmiotem wynalazku są cząsteczki DNA, które zawierają nowy region transgenowo/genomowy wstawki SEQ ID nr:7 i SEQ ID nr:8 i są homologiczne lub komplementarne do SEQ ID nr:7 i SEQ ID nr:8.
Cząsteczki DNA zawierające wystarczającą długość części sekwencji DNA transgenu SEQ ID nr: 7 i podobną wystarczającą długość flankującej 5' sekwencji DNA transgenu, przy czym te cząsteczki DNA są użyteczne jako DNA primerowe w metodach amplifikacji co dostarcza będącego przedmiotem wynalazku - produkt DNA amplikonu, zwłaszcza wytworzonego z DNA PV-ZMGT32(nk603) i jego potomstwa. Primery DNA homologiczne lub komplementarne do długości SEQ ID nr:7 i SEQ ID nr:8 są przedmiotem wynalazku. Amplikony wytworzone przy zastosowaniu primerów DNA, które są diagnostyczne dla przypadku kukurydzy PV-ZMGT32(nk603) i jej potomstwa są również przedmiotem wynalazku.
Zgodnie z innym aspektem wynalazku, dostarczane są sposoby wykrywania obecności DNA odpowiadającej przypadkowi kukurydzy PV-ZMGT32(nk603) w próbce. Sposoby takie obejmują: (a) kontaktowanie próbki zawierającej DNA z zestawem primerowym DNA, który jeżeli użyty jest w reakcji amplifikacji kwasu nukleinowego z wyekstrahowanym z przypadku kukurydzy PV-ZMGT32 (nk603) genomowym DNA, wytwarza amplikon, który jest diagnostyczny dla przypadku kukurydzy PVZMGT32(nk603); (b) przeprowadzenie reakcji amplifikacji kwasu nukleinowego, wytwarzając w ten sposób amplikon; i (c) wykrywanie amplikonu. Para cząsteczek DNA zawierająca zestaw primerowy homologiczny lub komplementarny do SEQ ID nr:7 lub SEQ ID nr:8 działający w reakcji amplifikacji kwasu nukleinowego do wytworzenia cząsteczki DNA amplikonu diagnostycznej dla PVZMGT32(nk603). Bardziej szczegółowo, para cząsteczek DNA zawierająca zestaw primerowy DNA, przy czym cząsteczki DNA są zidentyfikowane jako SEQ ID nr:13 lub ich komplementy i SEQ ID nr:14 lub ich komplementy; SEQ ID nr:15 lub jej komplementy i SEQ ID nr:16 lub jej komplementy. Amplikon zawierający cząsteczki DNA SEQ ID nr: 13 i SEQ ID nr: 14. Amplikon zawierający DNA SEQ ID nr: 15 i SEQ ID nr:16. Amplikon wytwarzany powyżej opisanym sposobem moż e hybrydyzować w ścisłych warunkach z SEQ ID nr:9, SEQ ID nr:10, SEQ ID nr:11 lub SEQ ID nr:12.
Zgodnie z innym aspektem, przedmiotem wynalazku są sposoby wykrywania obecności cząsteczki DNA odpowiadającej przypadkowi PV-ZMGT32(nk603) w próbce, metody te obejmują: (a) kontaktowanie próbki zawierającej DNA wyekstrahowane z rośliny kukurydzy z cząsteczką sondy DNA hybrydyzującej w ścisłych warunkach hybrydyzacji z genomowym DNA z przypadku kukurydzy PVZMGT32(nk603) lecz nie hybrydyzujący w ścisłych warunkach hybrydyzacji z kontrolnym DNA kukurydzy; (b) poddaje się próbkę i sondę ścisłym warunkom hybrydyzacji i (c) wykrywa hybrydyzację sondy do tego DNA. Bardziej szczegółowo, sposób wykrywania obecności cząsteczki DNA odpowiadającej przypadkowi PV-ZMGT32(nk603) w próbce, sposób ten polega na (a) kontaktowaniu próbki zawierającej DNA ekstrahowany z rośliny kukurydzy z cząsteczką sondy DNA, która składa się z SEQ ID nr:9, SEQ ID nr:10, SEQ ID nr:11 lub SEQ ID nr:12, przy czym wspomniana cząsteczka DNA hybrydyzuje w ścisłych warunkach hybrydyzacji z genomowymi DNA z przypadkiem kukurydzy PV-ZMGT32 (nk603) i nie hybrydyzuje w ścisłych warunkach hybrydyzacji z kontrolną cząsteczką DNA; (b) poddaje się próbkę i sondę ścisłym warunkom hybrydyzacji; i (c) wykrywa się hybrydyzację sondy DNA.
PL 199 928 B1
Zgodnie z innym aspektem, wynalazek dostarcza sposobu wyboru roślin kukurydzy według wynalazku z tolerancją na glifosfat i ich potomstwa, obejmujący ekstrakcję DNA z próbki rośliny, kontaktowanie tego DNA z cząsteczką markerowego kwasu nukleinowego wybraną z grupy obejmującej SEQ ID nr:9, SEQ ID nr:10, SEQ ID nr:11 lub SEQ ID nr:12, lub ich komplementami/wykrywanie hybrydyzacji DNA tej wspomnianej markerowej cząsteczki kwasu nukleinowego i przeprowadzenie analizy hodowli przy pomocy tego markera dla genetycznego powiązania cechy tolerancji na glifosfat z czą steczką markerowego kwasu nukleinowego.
Niniejszy wynalazek dostarcza sposobu wytwarzania rośliny kukurydzy z tolerancją herbicyd glifosfatowy obejmujący transformowanie komórki kukurydzy konstruktem DNA (pMON25496), wybieranie komórki kukurydzy z tolerancją na traktowanie skuteczną dawką glifosfatu, a następnie hodowlę tej komórki kukurydzy do wyprowadzenia płodnej rośliny kukurydzy. Płodna roślina kukurydzy może być samopylna lub krzyżowana z kompatybilnymi odmianami kukurydzy do wytworzenia potomstwa z tolerancją glifosfatu.
Wynalazek dotyczy także zestawu do wykrywania DNA obejmującego co najmniej jedną cząsteczkę DNA o wystarczającej długości sąsiadujących nukleotydów homologicznych lub komplementarnych do SEQ ID nr:7 lub SEQ ID nr:8, która działa jako primer DNA lub sonda specyficzna dla przypadku PV-ZMGT32(nk603) lub jego potomstwa.
Powyższe i inne aspekty tego wynalazku staną się oczywiste z poniższego opisu szczegółowego i towarzyszących rysunków.
Wynalazek jest zilustrowany na Figurze, 1
Figura 1 przedstawia mapę plazmidu pMON25496
Definicje powszechnie znanych w biologii molekularnej określeń można także znaleźć w Rieger i wsp., Glossary of Genetics: Classical and Molecular, 5 wydanie, Springer-Verlag: New York, 1991; i Lewin, Genes V, Oxford University Press: New York, 1994. Nomenklatura zasad DNA jaka jest stosowana zgodna jest z 37 CFR § 1.822.
Tak jak zastosowane tutaj określenie „zboże oznacza Zea mays lub kukurydzę i obejmuje odmiany roślin, które mogą być uprawiane z kukurydzą włącznie z gatunkami dzikiej kukurydzy. Tak jak stosuje się tutaj, określenie „zawierający oznacza „obejmujący lecz nie ograniczony do. „Glifosat oznacza N-fosfonometyloglicynę i jej sole. Glifosat jest składnikiem aktywnym herbicydu Roundup® (Monsanto Co.). Traktowanie „glifosatowym herbicydem odnosi się do traktowania herbicydem Roundup®, Roundupem Ultra®, Roundup Ultra Max® lub każdym innym preparatem herbicydowym zawierającym glifosat. Wybór poziomów stosowania preparatu glifosatu, który stanowi skuteczną biologicznie dawkę, jest w zakresie doświadczenia przeciętnego technika agrotechniki.
Określenie „sonda oznacza wyizolowany kwas nukleinowy, do którego dołączono wykrywany konwencjonalnie znacznik lub cząsteczkę reporterową, na przykład izotop radioaktywny, ligand, czynnik chemiluminescencyjny lub enzym. Taka sonda jest komplementarna do nici docelowego kwasu nukleinowego, w przypadku niniejszego wynalazku, do nici DNA genomowego z przypadku kukurydzy PV-ZMGT32(NK603) czy to rośliny kukurydzy czy próbki zawierającej DNA z tego przypadku. Sondy według niniejszego wynalazku, zawierają nie tylko kwasy deoksyrybonukleinowy lub rybonukleinowy ale także poliamidy i inne materiały sondy, wiążące się specyficznie do docelowej sekwencji DNA i mogące być zastosowane do wykrycia obecności tej docelowej sekwencji DNA.
„Primerami są izolowane kwasy nukleinowe, które są rozplatane do komplementarnej nici docelowego DNA przez hybrydyzację kwasu nukleinowego z powstaniem hybrydy pomiędzy primerem i tą nicią docelowego DNA, następnie wydłużonej razem z nicią DNA docelowego, a nastę pnie wydłużane razem a docelową nicią DNA przez polimerazę, na przykład polimerazę DNA. Pary primerów według niniejszego wynalazku odnoszą się do ich zastosowania do amplifikacji docelowych sekwencji kwasu nukleinowego, na przykład w reakcję polimerazy łańcuchowej (PCR) lub innymi konwencjonalnymi metodami amplifikacji kwasów nukleinowych.
Sondy i primery są wystarczającej długości nukleotydowej do związania docelowej sekwencji DNA, szczególnie w warunkach hybrydyzacji lub warunkach reakcji określonych przez operator. Ta długość może być każdą długością, która jest wystarczającą długością użyteczną do metody detekcji z wyboru. Generalnie, stosuje się nukleotydy o dł ugoś ci 11 lub wię cej nukleotydów, korzystnie 18 nukleotydów lub więcej, bardziej korzystnie 24 lub więcej nukleotydów i najkorzystniej 30 lub więcej nukleotydów. Takie sondy i primery hybrydyzują specyficznie z sekwencją docelową w ścisłych warunkach hybrydyzacji. Korzystnie, sondy i primery, według wynalazku, mają pełne podobieństwo do sekwencji DNA sąsiednich nukleotydów z sekwencjami docelowymi, jednakże sondy różniące się od
PL 199 928 B1 sekwencji docelowych DNA i dlatego zachowujące zdolność do hybrydyzacji z docelowymi sekwencjami DNA można zaprojektować konwencjonalnymi metodami.
Sposoby przygotowywania i stosowania sond i primerów są opisane w na przykład w: Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2-wydanie, vol. 1-3, Sambrook i wsp., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 1989 (dalej nazywany w skrócie „Sambrook i wsp., 1989); Current Protocols in Molecular Biology, wyd. Ausubel i wsp., Greene Publishing and Wiley-Interscience, New York, 1992 (z periodyczną aktualizacją) (dalej nazywany w skrócie, „Ausubel i wsp., 1992); i Innis i wsp., PCR Protocols: A Guide to methods and Applications, Academic Press: San Diego, 1990. Pary PCR-primer mogą pochodzić ze znanych sekwencji, na przykład, przez zastosowanie programu komputerowego przeznaczonego do tego celu jak Primer (Version 0,5© 1991). Whitehead Institute for Biomedical Research, Cambridge, MA).
Primery i sondy oparte na flankującym DNA i sekwencje wstawek ujawnione tutaj, mogą być stosowane do potwierdzenia (i, jeśli to konieczne do poprawienia) ujawnionych sekwencji metodami konwencjonalnymi, to znaczy przez reklonowanie i sekwencjonowanie takich sekwencji.
Sondy kwasu nukleinowego i primery według niniejszego wynalazku hybrydyzują w ścisłych warunkach z docelową sekwencją DNA. Każdy konwencjonalny sposób hybrydyzacji kwasu nukleinowego lub amplifikacji może być stosowany do identyfikacji w próbce obecności DNA z transgenicznych przypadków. Cząsteczki kwasu nukleinowego lub ich fragmenty są zdolne, w pewnych warunkach, do specyficznej hybrydyzacji z innymi cząsteczkami kwasu nukleinowego. Tak jak stosuje się tutaj, uważa się, że dwie cząsteczki kwasu nukleinowego są zdolne do specyficznej hybrydyzacji jedna z drugą, jeśli te dwie cząsteczki są zdolne to tworzenia naprzeciwległej, podwójnej struktury nici kwasu nukleinowego. Cząsteczki kwasu nukleinowego są uważane za „komplementarne do innej cząsteczki kwasu nukleinowego jeśli wykazują one pełną zgodność. Tak jak stosuje się tutaj, uważa się cząsteczki wykazują „całkowitą zgodność jeżeli każdy nukleotyd jednej cząsteczki jest komplementarny do nukleotydu innej cząsteczki. Dwie cząsteczki są uważane za „minimalnie komplementarne jeżeli mogą one hybrydyzować z inną cząsteczką z wystarczającą stałością pozwalającą na rozplecenie jednej z drugą co najmniej w warunkach konwencjonalnej „niskiej ś cisł o ś ci konwencjonalnie. Podobnie, cząsteczki są uważane za „komplementarne jeżeli mogą one hybrydyzować jedna z drugą z dostateczną stabilnością pozwalającą na pozostanie w stanie rozplecenia jedna z drugą w konwencjonalnie „ścisłych warunkach. Konwencjonalna ścisłość warunków jest opisana przez Sambrook i wsp., 1089 i przez Haymes i wsp., W: Nucleic Acid Hybridization, A Practical Approach, IRL Press, Washington, DC (1985). Odstępstwa od pełnej komplementarności są dlatego dopuszczalne tak długo jak takie odstępstwa nie wykluczą całkowicie zdolności tych cząsteczek do tworzenia struktury dwu niciowej. Po to, aby cząsteczka kwasu nukleinowego mogła służyć jako primer albo sonda potrzebuje ona wystarczająco komplementarnej sekwencji aby być zdolną do utworzenia stałej dwuniciowej struktury przy zastosowaniu szczególnego rozpuszczalnika i stężeń soli.
Tak jak stosuje się tutaj, zasadniczo homologiczna sekwencja jest cząsteczką kwasu nukleinowego, która będzie specyficznie hybrydyzowała z komplementarną cząsteczką kwasu nukleinowego do której jest porównywana w ścisłych warunkach hybrydyzacji. Odpowiednia ścisłość warunków promująca hybrydyzację DNA, na przykład 6,0x chlorek sodowy/cytrynian sodowy (SSC) w około 45°C, po którym następuje przemywanie w 2,0xSSC w 50°C, są znane fachowcowi w tej dziedzinie lub które można znaleźć w Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, N.Y. (1989), 6.3.1-6.3.6. Na przykład, stężenie soli w etapie przemywania może być wybrane z niskiej ścisłości o około 2,0xSSC przy 50°C do warunków wysokiej ścisłości o około 0,2xSSC przy 50°C. Ponadto, temperatura w etapie przemywania może wzrastać od warunków o niskiej ścisłości w temperaturze pokojowej, około 22°C do warunków o dużej ścisłości w około 65°C. Zarówno temperatura jak i sól mogą być różne, albo zarówno temperatura jak i stężenie soli mogą być stałe - podczas gdy inne zmienne podlegają zmianom. W korzystnej postaci, kwas nukleinowy według niniejszego wynalazku będzie hybrydyzował specyficznie z jedną lub większą ilością cząsteczek kwasu nukleinowego przedstawionych na SEQ ID nr : 9, 10, 11 i 121 lub z ich komplementami lub fragmentami zarówno w średnich warunkach ścisłości, na przykład przy 2,0 x SSC i około 65°C. W szczególnie korzystnej postaci, kwas nukleinowy według wynalazku będzie hybrydyzował specyficznie z jednym lub większa ilością cząsteczek kwasu nukleinowego przedstawionych na SEQ ID nr: 9 do SEQ ID nr 12: lub ich komplementami lub fragmentami również w ostrych warunkach hybrydyzacji. W jednym aspekcie wynalazku, korzystna cząsteczka markerowego kwasu nukleinowego, według niniejszego wynalazku, posiada sekwencje kwasu nukleinowego przedstawioną na SEQ ID nr: 9 do SEQ ID nr 12: lub ich komplementów lub fragmenPL 199 928 B1 tów. W innym aspekcie wynalazku, korzystna cząsteczka markerowego kwasu nukleinowego według wynalazku posiada pomiędzy 80% a 100% lub 90% a 100% identyczności sekwencji z sekwencją kwasu nukleinowego przedstawioną na SEQ ID nr: 9 do SEQ ID nr: 12 lub jej komplementami lub fragmentami. W dalszym aspekcie wynalazku, korzystna cząsteczka markerowego kwasu nukleinowego według wynalazku zajmuje pomiędzy 95% a 100% identyczności sekwencji z sekwencją przedstawiona na SEQ ID nr 9: do SEQ ID nr 12: lub ich komplementami lub fragmentami. Sekwencje SEQ ID nr: 9 do SEQ ID nr: 12 mogą być stosowane jako markery w sposobach hodowli roślin do identyfikowania potomstwa krzyżówek genetycznych, podobnych do sposobów opisywanych dla prostej analizy sekwencji powtórki sekwencji DNA markera w „DNA markers: Protocols, applications and overviews: (1997) 173-185, Cregan i wsp., wydawca Wiley-Liss NY; które w całości włączone jest przez zacytowanie. Hybrydyzacja sondy z docelową cząsteczką DNA może być wykrywana wieloma metodami znanymi w stanie techniki, obejmują one lecz nie są ograniczone do etykietek fluorescencyjnych, radioaktywnych, opartych, przeciwciał opartych o etykietki i etykietek chemiluminescencyjnych.
Odnośnie amplifikacji docelowej sekwencji kwasu nukleinowego (to znaczy przez PCR) stosując szczególną parę primerów amplifikacji, „warunki ścisłości są warunkami które pozwalają tej parze primera na hybrydyzację jedynie z docelową sekwencją kwasu nukleinowego do której primer posiadający odpowiadającą sekwencję typu dzikiego (lub jej komplement) mógłby się wiązać i korzystnie wytwarzać unikalny produkt amplifikacji, amplikon, w reakcji amplifikacji termalnej DNA.
Określenie „specyficzny dla (sekwencja docelowa) wskazuje, że sonda lub primer hybrydyzuje w ścisłych warunkach hybrydyzacji, tylko z sekwencją docelową, w próbce zawierającej tą sekwencję docelową.
Tak jak zastosowano tutaj „amplifikowane DNA lub „amplikon odnosi się do produktu amplifikacji docelowej sekwencji kwasu nukleinowego, będącej częścią wzorcowego kwasu nukleinowego. Na przykład, w celu określenia czy roślina kukurydzy pochodząca z krzyżówki płciowej zawiera przypadek transgenicznego genomowego DNA z tej rośliny kukurydzy według niniejszego wynalazku, DNA ekstrahowane z próbki tkanki roślinnej kukurydzy może być poddawane amplifikacji kwasu nukleinowego stosując parę primera DNA, który zawiera pierwszy primer pochodzący z sekwencji flankującej w genomie rośliny, przylegający do miejsca insercji wstawionego heterologicznego DNA i drugi primer pochodzący z wstawionego heterologicznego DNA w celu wytworzenia amplikonu, który jest diagnostyczny jeśli chodzi o obecność tego przypadku DNA. Amplikon ten może rozciągać się co do długości łącznej długości pary primerów plus jedna para zasad nukleotydowych, korzystnie plus około pięćdziesięciu par zasad nukleotydowych, bardziej korzystnie plus około sto pięćdziesięciu par zasad nukleotydowych. Ewentualnie, para zasad może pochodzić od sekwencji flankującej oba miejscach wstawionego DNA, co daje produkcję amplikonu, który obejmuje pełną wstawioną sekwencję (np., fragment DNA Mlul z konstruktu ekspresji pMON25490, Fig. 1, około 6706 par zasad nukleotydowych). Przedstawiciel pary primera pochodzącej z sekwencji genomowej rośliny może być umiejscowiony w pewnej odległości od wstawionej sekwencji DNA, odległość ta może obejmować od jednej pary zasad nukleotydowych aż do granicy reakcji amplifikacji, lub do około dwudziestu tysięcy par zasad nukleotydowych. Zastosowanie terminu „amplikon szczególnie wyłącza primery dimeryczne, które mogą być tworzone w reakcji termalnej DNA.
Amplifikacja kwasu nukleinowego może być dokonana wieloma różnymi metodami znanymi w stanie techniki, włączają c w to ł a ń cuchową reakcję polimerazy (PCR). Wiele sposobów amplifikacji znanych jest ze stanu techniki i opisanych jest między innymi w opisach patentach St. Zjedn. Am. o numerach nr 4,683,195 i 4,683,202 oraz w Protokoł ach PCR: PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications. Wydawca Innis i wsp., Academic Press, San Diego, 1990. Sposoby amplifikacji PCR były rozwijane w celu zamplifikowania do 22 kz genomowego DNA i do 42 kz bakteriofagowego DNA (Cheng i wsp., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:5695-5699, 1994). Te, jak również inne znane ze stanu techniki, sposoby amplifikacji DNA, mogą być stosowane w praktyce niniejszego wynalazku. Sekwencja heterologicznej wstawki DNA lub sekwencja flankująca DNA z przypadku kukurydzy PV-ZMGT32 (nk603) mogą być weryfikowane (i jeśli to konieczne poprawiane) przez amplifikację takich sekwencji z DNA ekstrahowanego z nasion lub roślin złożonych w depozycie ATCC o numerze dostępu nr PTA2478, stosując primery DNA pochodzące z sekwencji dostarczonych tutaj a następnie przez standardowe sekwencjonowanie DNA amplikonu PCR (-owego) lub klonowanego.
Amplikon wytworzony tymi sposobami może być wykryty wieloma różnymi technikami. Jedną taką metodą jest Genetic Bit Analysis (Nikiforov i wsp., Nucleic Acid Res. 22:4167-4175, 1994) gdzie zaprojektowane DNA oligonukleotydowe obejmuje zarówno przylegającą sekwencję flankującą geno8
PL 199 928 B1 mowego DNA jak i sekwencję wstawionego DNA. Oligonukleotyd jest unieruchomiony w studzienkach płytki z mikrostudzienkami. Po przeprowadzeniu PCR regionu będącego przedmiotem zainteresowania (stosując jeden primer w sekwencji wstawki i jeden w przylegającej flankującej sekwencji genomowej), pojedynczo-łańcuchowy produkt PCR może być hybrydyzowany z unieruchomionym oligonukleotydem i służyć jako wzorzec dla reakcji wydłużenia pojedynczą zasadą, stosując polimerazę DNA i znakowany ddNPT, specyficzny dla spodziewanej nast ępnej zasady. Odczyt może być dokonany w oparciu o fluorescencję lub o ELISA. Sygnał wskazuje obecność sekwencji wstawkowej/flankują cej odpowiedzialnych za pomyślną amplifikację, hybrydyzację i wydłużenie pojedynczą zasadą.
Inną metodą jest technika Pyrosequencing, jaka została opisana przez Winge (Innov. Pharma. Tech. 00:18-24, 2000). W tej metodzie oligonukleotyd jest zaprojektowany tak, że obejmuje przylegające genomowe DNA i wstawkowe DNA. Oligonukleotyd jest zhybrydyzowany z jednołańcuchowym produktem PCR z regionu będącego przedmiotem zainteresowania (jeden primer we wstawionej sekwencji i jeden we flankującej sekwencji genomowej DNA) i inkubowany w obecności polimerazy DNA, ATP, sulfurylazy, lucyferazy, apyrazy, adenozyno-5'-fosfosulfatu i lucyferyny. DNTP są dodawane indywidualnie i włączenie daje w wyniku sygnał świetlny, który jest mierzony. Sygnał świetlny wskazuje na obecność wstawki insert transgenu/sekwencja flankująca jako wyniku skutecznej amplifikacji, hybrydyzacji i wydłużenia pojedynczego lub wielozasadowego.
Fluorescencja Polaryzacyjna opisana przez Chen i wsp., (Genone Res. 9:492-498, 1999) jest sposobem, który może być stosowany do wykrywania amplikonu według wynalazku. Stosując ten sposób, oligonkleotyd tak jest zaprojektowany aby pokryć genomowe flankujące oraz wstawowe połączenia DNA. Oligonukleotyd ten jest zhybrydyzowany z jednołańcuchowym produktem PCR z regionu będącego przedmiotem zainteresowania (jeden primer we wstawionej sekwencji DNA i jeden we flankującej sekwencji genomowego DNA) i inkubowany w obecności polimerazy DNA i fluorescencyjnie znakowanego ddNTP. Przedłużenie o jedną zasadę skutkuje włączeniem ddNTP. Włączenie może być mierzone jako zmiana polaryzacji przy zastosowaniu fluorometru. Zmiana w polaryzacji wskazuje na obecność transgenicznej wstawki/sekwencji flankującej jako wyniku skutecznej amplifikacji, hybrydyzacji i wydłużenia pojedynczego zasadowego.
Taqman® (PE Applied Biosystems, Foster City, CA) jest opisany jako sposób wykrywania i oznaczania ilościowego obecności sekwencji DNA i jest w pełni zrozumiały w postaci instrukcji dostarczonej przez producenta. W skrócie, sonda oligonukleotydowa FRET jest tak zaprojektowana aby pokryć genomowe flankowanie oraz połączenie wstawki DNA. Sonda FRET i primery PCR (jeden primer we wstawionej sekwencji DNA i jeden w flankującej sekwencji genomowej) są poddawane cyklizacji w obecności ciepłostałej polimerazy i dNTP. Hybrydyzacja sondy FRET daje w wyniku odczepienie i uwolnienie cząstki fluorescencji od oziębianej cząstki sondy FRET. Sygnał fluorescencyjny wskazuje na obecność flankującej/wstawkowej sekwencji transgenu wynikłych ze skutecznej amplifikacji i hybrydyzacji.
Cząsteczkowy Beacons był opisany do stosowania w wykrywaniu sekwencji jak opisano w Tyangi i wsp., (Nature Biotech. 14:303-308, 1996). W skrócie, sonda oligonukleotydowa FRET jest tak zaprojektowana aby nałożyć się na połączenie genomowe flankujące i DNA wstawkowe. Unikalna budowa sondy FRET polega na tym, że zawiera ona strukturę drugorzędową która utrzymuje cząsteczki fluorescencji i cząsteczki wygaszające w ścisłej bliskości. Sonda FRET i primery PCR (jeden primer we wstawkowej sekwencji DNA i jeden w flankującej sekwencji genomowej) są poddawane cyklizacji w obecności termostabilnej polimerazy i dNTP. Pomyślna amplifikacja PCR, hybrydyzacja sondy FRET do docelowej sekwencji daje w wyniku usunięcie drugorzędowej struktury sondy i przestrzenne oddzielenie cząsteczek fluorescencji i cząsteczek wygaszających. Sygnał fluorescencyjny wskazuje na obecność flankującej/wstawkowej sekwencji transgenu wynikających ze skutecznej amplifikacji i hybrydyzacji.
P r z y k ł a d y
P r z y k ł a d 1
PV-ZMGT32 (nk603) (dalej zwane jako nk603) przypadek transgenicznej kukurydzy był generowany przez bombardowanie mikropociskami zarodków kukurydzy (Songstad i wsp., In Vitro Cell Plant 32:179-183, 1996) stosując liniowy fragment DNA Mlu I pochodzący z pMON25496 (Figura 1). Ten fragment DNA zawiera dwie transgeniczne kasety ekspresji, które wspólnie nadają roślinie tolerancję na glifosat. Pierwsza kaseta jest złożona z promotora aktyny 1 ryżu i wstawki (P-Os.Act1 i I-Os.Act1, patent St. Zjedn. Am. nr 5,641,876), operacyjnie zwią zanych z przejściowym peptydem chloroplastu Arabidopsis EPSPS (TS-At.EPSPS:CTP2, Klee i wsp., Mol. Gen. Genet. 210:47-442,
PL 199 928 B1
1987), operacyjnie połączony z syntazą 5-enolopyruwiloshikimato-3-fosforanową (EPSPS) z Agrobacterium sp. szczepu CP4 (Agrtu.aroA:CP4, opis patentowy St. Zjedn. Am.) i operacyjnie połączony z terminatorem transkrypcji synatazy nopaliny (T-AGRTU. nos, Fraley i wsp., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80:4803-4807, 1983). Drugą kasetą ekspresyjną transgenu stanowi promotor wirusa mozaiki kalafiora 35S zawierający tandemową duplikację regionu wzmacniacza (P-CaMV.35S, Kay i wsp., Science 236:1299-1302, 1987; opis patentowy St. Zjedn. Am. nr 5,164,316), zwią zany operacyjnie z intronem Hsp70 Zea mays (I-Zm.Hsp70, opis patentowy St. Zjed. Am. nr 5,326,865), operacyjnie związany z przejściowym peptydem chloroplastu Arabidopsis EPSPS (TS-At.EPSPS:CTP2, Klee i wsp., Mol. Gen. Genet. 210:47-442, 1987), operacyjnie połączony z tolerującą glifosat syntazą 5-enolopiruwoiloloshikimato-3-fosforanową (EPSPS) z AgrobacteItrium sp. szczepu CP4 (AGRTU. aroA:CP4, opis patentowy St. Zjedn. Am.) i operacyjnie połączony z terminatorem transkrypcji synatazy nopaliny (T-AGRTU.nos, Fraley i wsp., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80:4803-4807, 1983). Transgeniczny kalus z tolerancją na glifosat, powstały po bombardowaniu, oddzielano z medium zawierającego 3mM glifosat i rośliny następnie regenerowano. Wyprodukowano trzysta cztery rośliny z 91 niezależnych transgenicznych przypadków z populacji, wybrano nk603 w oparciu o złożoną kombinację charakterystyk włączając w to tolerancję na glifosfat, działania agrotechniczne i pojedynczą wstawkę transgeniczną. Ocena przypadku nk603 i pochodzącego z niego potomstwa, prowadzona w szklarni i na polu, wskazuje ż e ta transgeniczna wstawka nadaje tolerancję , która przekracza handlowe dokumentacje dla pełnej wegetatywnej i reprodukcyjnej tolerancji na 340 g glifosfatu/akr (840 g glifosfatu/hektar; 32 oz Roundap Ultra/akr) kiedy zastosowano w stadium V4 i V8 liści.
P r z y k ł a d 2
Tolerancję na glifosat kukurydzy nk603 porównano do bieżących standardów handlowych, GA21 (Opis patentowy St. Zjedn. Am. nr 6,040,497), dla tolerancji na glifosat uszkodzeń wegetatywnych i wpływu na wydajność. GA21 zawiera co najmniej 3 transgeniczne kasety ekspresyjne ułożone w tandem w genomie kukurydzy przypadku (SCP/GM/232-Finał , European Comission Health & Consumer Protectio Directorate-General). Kaseta transgenu GA21 składa się z promotora aktyny ryżu 1 i intronu połączonego z chloroplastowym peptydem przejściowym karboksylazy rybulozo-1,5-bifosforanu połączonym ze zmodyfikowanym opornym na glifosat kukurydzowym EPSPS i regionem terminacji transkrypcji 3' syntazy nopaliny. Rośliny nk603 i GA21 były uprawiane w rzędach w powtórzonych poletkach doświadczalnych. Stosowano następujące zabiegi: 1) bez oprysków, 2) opryski w iloś ci 64 uncji/akr Roundup Ultra® w stadium V4 liś ci i ponownie 64 uncje/akr Roundup Ultra® w stadium V8 liści, 3) oprysk 96 uncji/akr Roundup Ultra® w stadium V4 liści i ponownie 96 uncji/akr Roundup Ultra® w stadium V8 liści. Tolerancja wegetatywna mierzona była jako procent uszkodzeń wegetatywnych oznaczonych jako ilość malformacji liścia obserwowanych 10 dni po traktowaniu herbicydem w stadium V8 liścia. Wydajność z każdego poletka mierzona była w buszlach /akr i procent redukcji wydajności oznaczono dla każdego zabiegu z herbicydem w porównaniu do zabiegów gdzie nie stosowano oprysku. Wyniki przedstawione w Tabeli 1 pokazują, że nk603 wykazuje mniejszy procent uszkodzeń wegetatywnych niż rośliny GA21 i ten obserwowany procent redukcji wydajności jest także mniejszy dla przypadku nk603. Niska ilość przypadków uszkodzeń wegetatywnych obserwowana była w poletkach nie opryskiwanych, obserwacja ta może zależeć od różnych czynników środowiskowych, innych niżeli wystawienie na herbicyd glifosatowy. Podwójna kaseta ekspresyjna pMON25496 w nk603, porównana została do uszkodzeń wegetatywnych i wskaźnik płodności z 3 niezależ nych przypadków kukurydzy otrzymanych jedynie z promotora CaMV.35S prowadzącego ekspresję genu tolerancji glifosatu (AGRTU. aroA:CP4). Obserwowano, że podwójna kaseta ekspresji nadawała wyższy poziom tolerancji wegetatywnej i tolerancji rozrodczej, niż trzy niezależne przypadki kukurydzy (ev 1, ev 2 i ev 3) zawierające tylko kasetę ekspresji, w których ekspresja genu tolerancji na glifosat była prowadzona przez promotora CaMV.35S. Wyższy poziom tolerancji wegetatywnej na uszkodzenia herbicydem glifosatowym był obserwowany dla nk603 plus 3 dodatkowe przypadki kukurydzy pochodzące z pMON25496, porównując do średniego uszkodzenia w 6 przypadkach kukurydzy pochodzących z konstruktu, w którym ekspresja genu tolerancji glifosatu była prowadzona tylko przez promotora aktyny ryżu i intron (P-Os. Act1/I-Os. Act1). Rośliny transformowane podwójną kasetą ekspresji posiadają wyższy poziom tolerancji glifosatowej na uszkodzenie wegetatywne i upośledzenie płodności, niż rośliny pochodzące z transformacji pojedynczymi kasetami ekspresji, dającej poprawienie oporności dającej utratę wydajności w wyniku stosowania herbicydu glifosfatowego. Konstrukt pMON25496 dostarcza dwóch roślinnych kaset
PL 199 928 B1 ekspresji o pojedynczej lokalizacji w nk603, nadających wyższy poziom tolerancji glifosatowej niż potrójny tandem wstawki występujący w standardzie handlowym - GA21.
T a b e l a 1
Tolerancja glifosfatu przez nk603 - Uszkodzenia wegetatywne, Wydajność i Ocena Płodności
Przypadek Traktowanie % Uszkodzeń weg. Wydajność (buszle/akr) % redukcji wydajności
GA21 bez oprysków 0,3 142,2
64 oz Roundup Ultra® przy V4 a następnie 64 oz przy V8 5,3 134,1 5,7
96 02 Roundup Ultra® przy V4 a następnie 96 oz przy V8 8,3 129,1 9,2
nk603 bez oprysków 0,9 145,6
64 oz Roundup Ultra® przy V4 a następnie 64 oz przy V8 2,9 138,5 4,9
96 oz Roundup Ultra® przy V4 a następnie 96 oz przy V8 4,7 140,1 3,8
Traktowanie Ocena płodności**
nk603 64 oz Roundup Ultra® przy V8 4,5
CaMV.35S ev 1 64 oz Roundup Ultra® przy V8 2,0
CaMV.35S ev 2 64 oz Roundup Ultra® przy V8 2,2
CaMV.35S ev 3 64 oz Roundup Ultra® przy V8 2,4
śred. % uszkodzeń weg.
nk603 plus 3 dodatkowe przypadki pMON25496 128 oz Roundup Ultra® przy V4 a następnie przez 128oz przy V8 22,9
Sześć P-Os.Act1 przypadków o pojedynczej kasecie 128 oz Roundup Ultra® przy V4 a następnie przez 128oz przy V8 28,9
* Uszkodzenia Weg obserwowane 10 dni po traktowaniu V8 jest jednym pomiarem zrobionym w celu oceny uszkodzeń wege-tatywnych w odpowiedzi na traktowanie glifosfatem.
** stopień płodności męskiej: 4-5 = pełna płodność; 3 = znaczące zredukowanie wyrzucenia pyłku; 0-2 = pełna sterylność - wysoka sterylność, nie odpowiednie do stosowania w handlu.
P r z y k ł a d 3
Odpowiednią cząsteczkę flankującą DNA od nk603 klonowano stosując zligowane adaptery i gniazda PCR jak opisano w zestawie Genome Walker™ (katalog # K1807-1, CloneTech Laboratories, Inc, Palo Alto, CA). Pierwszy genomowy DNA z przypadku nk603 był oczyszczony metodą CTAB (Rogers i wsp., Plant Mol. Biol 5:69-76, 1985). Genomowe biblioteki DNA do amplifikacji były przygotowywane zgodnie z instrukcją producenta (Genome Walker™ CloneTech Laboratories, Inc, Palo Alto, CA). W odrębnych reakcjach, genomowy DNA był trawiony przez noc w 37°C następującymi restrykcyjnymi endonukleazami tępych końców EcoRV, Scal Dral, PvuII i Stul (CloneTech Laboratories, Inc, Palo Alto, Ca). Mieszanina reakcyjna była ekstrahowana fenol : chloroform, DNA strącano przez dodanie etanolu do fazy wodnej, osadzano przez odwirowanie a następnie ponownie zawieszano w buforze Tris-EDTA (10 mM Tris-HCl, pH 8,0, 1 mM EDTA). Oczyszczone fragmenty DNA z tępymi końcami ligowano do adapterów Genome Walker™ zgodnie z protokołem producenta. Po ligacji, każda rekcja była ogrzewana (70°C przez 5 min) do zatrzymania reakcji a następnie rozcieńczana 10-krotnie w buforze Tris-EDTA. Tylko 1 z każdej przeprowadzonej ligacji była następnie amplifikowana w 50 μΐ reakcji, która obejmowała 1 μl odpowiedniej, zligowanej do adaptera, biblioteki, 1 μl 10 μM adaptera
PL 199 928 B1 primera Genome Walker™ API (5' GTATATCGACTCACTATAGGGC 3', SEQ ID nr: 1), 1 μ| 10 mM nk603 specyficznego wobec transgenu nukleotydu.
(5' TGACGTATCAAAGTACCGACAAAAACATCC 3' SEQ ID nr: 2) 1 μl 10 mM deoksyrybonukleotydu, 2,5 μl sulfotlenku dimetylowego, 5 μl 10X buforu PCR zawierającego MgCl2, 0,5 μl (2,5 jednostki) termostabilnej polimerazy DNA Amplitaqą (PE Applied Biosystems, Foster City, CA), i H2O do 50 μΚ Rekcje prowadzono w termocyklerze stosując wyliczoną temperaturę kontrolną i następujące warunki cyklizacji: 1 cykl w 95°C przez 9 min; 7 cykli w 94°C przez 2 sek., 70°C przez 3 min; 36 cykli w 94°C przez 2 sek., 65°C przez 3 min; 1 cykl w 65°C przez 4 min. Jeden μl każdej pierwotnej reakcji rozcieńczano 50-krotnie wodą i amplifikowano w drugorzędowej reakcji (1 μl odpowiedniego rozcieńczenia z reakcji pierwotnej), 1 μl 10 μM Genome Walker™ zagnieżdżonego adaptera primera AP2 (5' ACTATAGGGCACGCGTGGT 3', SEQ ID nr 3, dostarczonego przez producenta), 1 μl 10 μM transgeno-specyficznego wobec nk603 zagnieżdżonego oligonukleotydu.
(5' CTTTGTTTTATTTTGGACTATCCCGACTC 3', SEQ ID nr 4), 1 μl 10 mM deoksyrybonukleotydu, 2,5 μl sulfotlenku dimetylowego, 5 μl 10X buforu PCR zawierającego MgCl2, 0,5 μl (2,5 jednostki) termostabilnej polimerazy DNA Amplitaq (PE Applied Biosystems, Foster City, CA), i H2O do 50 μ^ stosując następujące warunki cyklizacji: 1 cykl w 95°C przez 9 min; 5 cykli w 94°C przez 2 sek., 70°C przez 3 min; 24 cykle w 94°C przez 2 sek., 65°C przez 3 min; 1 cykl w 65°C przez 4 min.
Produkty PCR, reprezentujące 5 regionów, które spinają połączenie pomiędzy transgenicznym insertem nk603 i sąsiadującym DNA flankującym kukurydzy, były oczyszczane elektroforezą na żelu agarozowym a następnie oczyszczane z matrycy agarozowej stosując zestaw QIAquick Gel Extraction Kit (katalog#28704, Qiagen Inc., Valencia, CA) i klonowane wprost do wektora pGEM-T Easy vector (katalog. # A1360, Promega, Madison, WI). Tożsamość klonowanych produktów PCR i powiązanie z fragmentem Mlu I pMON25496 została potwierdzona przez analizę sekwencji DNA (ABI Prism™377, PE Biosystems, Foster City, CA i oprogramowanie do analizy sekwencji DNASTAR Inc., Madison, WI).
Podobnie, nk603 3'-flankująca sekwencja DNA kukurydzy była amplifikowana i klonowana stosując specyficzne primery zagnieżdżonego genu, takie jak, SEQ ID nr 5 (5' AGATTGAATCCTGTTGCCGGTCTTGC 3' i SEQ ID nr: 6 (5' GCGGTGTCATCTATGTTAACTAGATCGGG 3') która topi się do T-AGRTU.nos terminatora transkrypcyjnego. Dwa transkrypcyjne terminatory T-AGRTU.nos są obecne w transgeniczno/genomowej wstawce nk603, jedna wewnętrzna w konstrukcie i jedna przy końcu 3' konstruktu przyległego do genomowego DNA kukurydzy. Produkty PCR wytworzone w tej reakcji były sekwencjonowane i sekwencja DNA spinająca połączenie pomiędzy sekwencją transgeniczną a flankującą były oddzielone od produktów wewnętrznego T-AGRTU przez porównanie do znanych elementów sekwencji genetycznych konstruktu pMON25496 jak opisano poprzednio.
Sekwencja DNA kukurydzy flankująca oba miejsca transgenicznej wstawki była oznaczana w odniesieniu do wykrywania nk603 przez sekwencjonowanie produktów amplifikacji pochodzących z Genome Walker™ i następnie porównanie do znanej sekwencji transgenu. Przy końcu 5' wstawki transgenicznej, oznaczono sekwencję segmentu 498 kz otaczającego złącze wstawki (SEQ ID nr 7). Stanowiła ona sekwencję o 304 parach zasad (kz) flankującą genomowe DNA kukurydzy (nukleotydy 1-304 w SEQ ID nr: 7), 45 kz pMON25496 sekwencji konstruktu DNA (nukleotydy 305-349 w SEQ ID nr: 7) i 149 kz sekwencji DNA z końca 5' P-Os.Act1 (nukleotydy 350-498 w SEQ ID nr: 7).
Sekwencję DNA oznaczano dla segmentu 1183 kz dookoła złącza wstawki (SEQ ID nr 8), która rozpoczyna się od 164 kz terminatora transkrypcyjnego T-AGRTU.nos (nukleotydy 1-164 w SEQ ID nr; 8), sekwencji DNA konstruktu o 217 kz pMON25496 (nukleotydy 165-381 w SEQ ID nr: 8), 305 kz genów plastydu kukurydzy, rps 11 i rpo (segmenty częściowe każdego genu odpowiadające zasadom 63-363 aksesji X07810 Genbank, odpowiadające zasadom 382-686 w SEQ ID nr: 8), i pozostała sekwencja DNA stanowiąca genomową sekwencję DNA.
Cząsteczki złącza DNA, SEQ ID nr: 9, SEQ ID nr: 10, SEQ ID nr 11, i SEQ ID nr: 12 są nowymi cząsteczkami DNA w nk603 i są diagnostyczne dla rośliny kukurydzy nk603 i jej potomstwa. Cząsteczki złącza DNA, SEQ ID nr: 9, SEQ ID nr: 10 i SEQ ID nr: 11 stanowią około 9 nukleotydów po każdej stronie transgenowego fragmentu DNA i genomowego DNA kukurydzy. SEQ ID nr: 9 stwierdzono w pozycji nukleotydowej 259-314 SEQ ID nr 7.
Cząsteczki złącza, SEQ ID nr: 10 i 11 są zlokalizowane w pozycjach nukleotydowych SEQ ID nr: 8, odpowiednio - 373-390 i 678-695, reprezentując łączącą cząsteczkę DNA konstruktu sekwencji DNA z sekwencją DNA plastydu kukurydzy (SEQ ID nr 10) i konstruktową sekwencję z genomową sekwencją DNA kukurydzy (SEQ ID nr: 11). SEQ ID n: 12 zlokalizowana jest w pozycji nukleoty12
PL 199 928 B1 dowej 156-173 w SEQ ID nr: 8 i reprezentuje nową cząsteczką DNA w nk603 wynikającą z jej wystąpienia w fuzji terminatora sekwencji T-AGRTU.nos z odwróconym fragmentem sekwencji promotora aktyny ryżu.
P r z y k ł a d 4
Pary primerów przypadku DNA są stosowane do wytworzenia amplikonu diagnostycznego dla nk603. Ten przypadek pary primerów obejmuje ale nie jest ograniczony do SEQ ID nr: 13 i SEQ ID nr: 14 dla cząsteczki DNA amplikonu i SEQ ID nr: 15 i SEQ ID nr: 16 dla 3' cząsteczki DNA. Poza tymi parami primerów dodatkowo każda para primera pochodząca z SEQ ID nr: 7 i SEQ ID nr: 8, gdy stosowana jest w reakcji amplifikacji DNA, wytwarza diagnostyczny amplikon dla nk603; jest przedmiotem niniejszego wynalazku. Warunki amplifikacji dla tej analizy są przedstawione w Tabeli 2 i Tabeli 3 dla regionu połączenia 5' wstawka transgenowa/połączenie genomowe. Ta sama metoda jest zastosowana do amplifikacji cząsteczki 3' DNA amplikonu stosując cząsteczki DNA primera SEQ ID nr: 15 i SEQ ID nr: 16, jakkolwiek, każda modyfikacja tych sposobów stosujących cząsteczki DNA lub ich komplementy do wytworzenia cząsteczki DNA diagnostycznej dla nk603 mieści się w zakresie umiejętności fachowca w tej dziedzinie. Ponadto, kontrolna para primera (SEQ ID nr: 17 i 18) do amplifikacji endogennego genu kukurydzy jest włączona jako standard wewnętrzny do warunków reakcji. Analiza próbki ekstraktu DNA z tkanek rośliny nk603 powinna zawierać pozytywną kontrolę ekstraktu tkankowego DNA z nk603, negatywną kontrolę ekstraktu DNA z rośliny kukurydzy, która nie jest nk603 i negatywną kontrolę, która nie zawiera wzorca ekstraktu DNA kukurydzy. Dodatkowe cząsteczki DNA primera o dostatecznej dł ugoś ci mogą być wybrane z SEQ ID nr: 7 i SEQ ID nr: 8 przez fachowców biegł ych w sposobach amplifikacji DNA i warunkach optymalizacji produkcji amplikonu, który może różnić się od sposobów wskazanych w Tabeli 2 i Tabeli 3, lecz daje w wyniku diagnostyczny amplikon dla nk603. Zastosowanie tych sekwencji DNA primerów z modyfikacjami do Tabeli 2 i 3 mieści się w zakresie wynalazku. Amplikon, w którym co najmniej jedna cząsteczka DNA primera o dostatecznej długości pochodziła z SEQ ID nr: 7 i SEQ ID nr: 8, to 1A, jest diagnostyczna dla nk603, jest przedmiotem wynalazku. Amplikon, w którym co najmniej jedna cząsteczka DNA primera o dostatecznej długości pochodziła z którychkolwiek genetycznych elementów pMON25496 jest diagnostyczna dla nk603, jest również przedmiotem wynalazku. Próba dla amplikonu nk603 może zostać przeprowadzona przy zastosowaniu Stratagene Robocycler, MJ Engine, Parkin-Elmer 9700 lub Eppendorf Mastercycler Gradient termocyklizator jak pokazano na Tabeli 3 lub sposobami i aparaturą znanymi w stanie techniki.
T a b e l a 2
Procedura PCR i mieszanina reakcyjna dla potwierdzenia w nk603 regionu złącza - 5' wstawka transgen/genomowy
Etap Odczynnik Ilość Komentarz
1 2 3 4
1 Woda wolna od nukleazy dodana do końcowej objętości 20 pl -
2 10X bufor reakcyjny (z MgCL) 2,0 pl 1X stężenie końcowe buforu, 1,5 mM stężenie końcowe MgCl2
3 10 mM roztwór dATP, dCTP, dGTP i dTTP 0,4 pl 200 pM stężenie końcowe każdego cNTP
4 przypadek primera (SEQ ID nr 13) (zawieszony w 1X bufor TE lub wodzie wolnej od nukleazy do stężenia 10 μM) 0,4 pl 0,2 pM stężenie końcowe
5 przypadek primera (SEQ ID nr 14) (zawieszony w 1X bufor TE lub wodzie wolnej od nukleazy do stężenia 10 μM) 0,4 pl 0,2 pM stężenie końcowe
6 przypadek primera (SEQ ID nr 17) (zawieszony w 1X bufor TE lub wodzie wolnej od nukleazy do stężenia 10 μM) 0,2 pl 0,1 pM stężenie końcowe
PL 199 928 B1 cd. tabeli 1
1 2 3 4
7 przypadek primera (SEQ ID nr 18) (zawieszony w 1X bufor TE lub wodzie wolnej od nukleazy do stężenia 10 μM) 0,2 il 0,1 iM stężenie końcowe
8 bez Rnazy, Dnazay 0,1 il 50 ng/reakcję
9 REDTaq polimeraza DNA (1 jednostka/il) 1 il zaleca się zmienić pipety przed następnym etapem) 1 jednostka/reakcji
10 Ekstrahowane DNA (wzorce): • Próbki do analizy • poszczególne liście • zgrupowane liście (maksimum 50 liści/grupę) • Kontrola negatywna • Kontrola negatywna • Kontrola pozytywna • 10-200 ng genomowego DNA • 200 ng genomowego DNA • 50 ng genomowego DNA nk603 bez wzorca DNA • 50 ng genomowego DNA
T a b e l a 3
Sugerowane parametry dla różnych termocyklerów
Delikatne mieszanie, jeśli jest potrzebne (bez ogrzewania górnej powierzchni termocyklera) dodanie 1-2 kropli oleju mineralnego na wierzch reakcji. PCR przeprowadzać w Stratagene Robocycler, MJ Engine, Perkin-Elmer 9700 lub Eppendprf Mastercycler Gradient termocyklerze stosując następujące parametry cyklizacji. Uwaga: MJ Engine lub termocykler Eppendprf Mastercycler Gradient powinny poruszać się w określonym trybie. Praca termocyklera Perkin-Elmer 9700 z prędkością jednostajną nastawioną na maksimum.
Numer cyklu Ustawienia : Stratagene Robocykler
1 94°C 3 minuty
38 94°C 1 minuta 60°C 1 minuta 72°C 1 minuta 30 sekund
1 72°C 10 minut
Ustawienia: MJ Engine lub Perkin-Elmer 9700
1 94°C 3 minuty
38 94°C 10 sekund 60°C 30 sekund 72°C 1 minuta
1 72°C 10 minut
Ustawienia: Eppendorf Mastercycler Gradient
1 94°C 3 minuty
38 94°C 15 sekund
Ustawienia: Eppendorf Mastercycler Gradient
60°C 15 sekund 72°C 1 minuta
1 72°C 10 minut
PL 199 928 B1
WYKAZ SEKWENCJI <110> Monsanto Co Behr, Carl Hironaka, Catherine Heck, Gregory You, Jinsong <120> przypadek- rośliny zbożowej PV-ZMGT32 (nk603) i kompozycje i sposoby jej wykrywania
<130> 38-21 (52258)B
<150> 60/213,567
<151> 2000-06-22
<150> 60/241,215
<151> 2000-10-13
<150> 60/240,014
<151> 2000-10-13
<160> 16
<170> Patentln 'wersja 3.0
<210> 1
<211> 22
<212> DNA
<213> sztuczny
<220>
<221> źródło
<222> (1) .. (22)
<223> w pełni zsyntetyzowany
<400> 1 gtatatcgac tcactatagg gc <210> 2 <211> 30 <212> DNA <213> sztuczny <220>
<221> źródło <222> (1)..(30) <223> w pełni zsyntetyzowany <400> 2 tgacgtatca aagtaccgac aaaaacatcc <21O> 3
PL 199 928 B1
<211> 19
<212> DNA
<213> sztuczny'
<220>
<221> źródło
<222> (1).-(19)
<223> w pełni zsyntetyzowany
<400> 3 actatagggc acgcgtggt <210> 4 <211> 29 <212> DNA <213> sztuczny <220>
<221> źródło <222> (1) . . (29) <223> w pełni zsyntetyzowany <400> 4 ctttgtttta ttttggacta tcccgactc <21O> 5 <211> 26 <212> DNA <213> sztuczny <220>
<221> źródło <222> (1)..(26) <223> w pełni zsyntetyzowany <400> 5 agattgaatc ctgttgccgg tcttgc
<210> 6
<211> 28
<212> DNA
<213> sztuczny
<220>
<221> źródło
<222> (1)..(28)
<223> w pełni zsyntetyzowany
PL 199 928 B1 <400> 6 gcggtgtcat ctatgttact agatcggg <210> 7 <211> 498 <212 > DNA <213> sztuczny <220>
<22l> źródło <222> (1) . . (498) <223> 1-304 genomowy DNA Zea maize
305-349 DNA konstruktora wektora 350-498 DNA promotora aktyny 1 ryżu <400> 7
aatcgatcca aaatcgcgac tgaaatggtg gaagaaagag agaacagaga gcctcacgtt 60
tccagggtga agtatcagag gatttaccgc ccatgccttt tatggagaca agaaggggag 120
gaggtaaaca gatcagcatc agcgctcgaa agtttcgtca aaggatgcgg aactgtttcc 180
agccgccgtc gccattcggc cagactcctc ctctctcggc atgagccgat cttttctctg 240
gcatttccaa ccctagagac 9tgcgtccct ggtgggctgc tcggccagca agccttgtag 300
cggcccacgc gtggtaccaa gcttgatatc cctagggcgg ccgcgttaac aagcttactc 360
gaggtcactc atatgcttga gaagagagtc gggatagtcc aaaataaaac aaaggtaaga 420
ttaccggtca aaagtgaaaa catcagttaa aaggtgtata aagtaaaata tcggtaataa 480
aaggtggccc aaagtgaa 498
<210> 8 <211> 1183 <212> DNA <213> sztuczny <220>
<221> źródło <222> (1) . . (1183) <223> 1-164 terminator nos 3 Agrobacterium tumefaciens
5-381 DNA konstruktora wektora 382-686 geny plastydowe Zea maize rpsll i rpoA 687-1183 genomowy DNA Zea maize <400> 8 gacgttattt atgagatggg tttttatgat tagagtcccg caattataca tttaatacgc 60 gatagaaaac aaaatatagc gcgcaaacta ggataaatta tcgcgcgcgg tgtcatctat 120
PL 199 928 B1
gttactagat cggggatatc cccggggaat tcggtaccaa gcttttataa tagtagaaaa 180
gagtaaattt cactttgggc caccttttat taccgatatt ttactttata ccacctttta 240
actgatgttt tcacttttga ccaggtaatc ttacctttgt tttattttgg actatcccga 300
ctctcttctc aagcatatga atgacctcga gtaagcttgt taacgcggcc gccctaggga 360
tatcaagctt ggtaccacgc gacacacttc cactctagtg tttgagtgga tcctgttatc 420
tcttctcgaa ccataacaga ctagtattat ttgatcattg aatcgtttat ttctcttgaa 480
agcggtttca ttttttttta cagacgtctt tttttaggag gtcgacatcc attatgcggc 540
ataggtgtta catcgcgtat acaacttaac cgtacaccac ttttagcaat ggctcgtaat 600
gcggcatctc ttccgctacc agcacctttt accataactt ctgctcgttg caaacccact 660
gtacgaatag catctactgc tgttctgctg actttatttt ttttaataaa gtgaaaaacc 720
ataaaatgga caacaacacc ctgcccttca ctaccggtcg gagcgacgcc gaagatgggg 780
ttcaacacgg tcgcgacacg gatgcaacgg accctccaag ccaatactcg aggccggacc 840
gacgacgtag gcaggggtgg ccataacgac ggtggcggca tccaacttgt tctttccctt 900
tctctgtctt caacttgcgc cggcagtctg ctagacccag gggatgctgt gtggaggaga 960
ggtcgcgggg cccgattttt atagcctggg cgaggacgag cttggccgaa ccgatccaga 1020
gctctgcgca aatcacgaag aaccagtggg gccgctcgcg cctagcccac cgccaggagc 1080
ggggcttgtt gcgagccgta gcgtcgggaa ggggacgacc cgctaggggg gcccatgctc 1140
cagcgcccag agagaaaaaa agaaaggaag gcgcgagatg atg 1183
<210> 9 <211> 19 <212> DNA <213> sztuczny <220>
<22ΐ> źródło <222> (1)..(19) <223> genomowe i wektorowe DNA i Zea naize <400> 9 tgtagcggcc cacgcgtgg <210> 10 <2ll> 18
PL 199 928 B1
<212> DNA
<213> sztuczny'
<220>
<221> źródło
<222> (1) . (18)
<223> plastydowe i wektorowe DNA Zea maize
<400> 10
taccacgcga cacacttc 18 <210> 11 <211> 18 <212> DNA <213 > sztuczny <220>
<221> źródło <222> (1) . . (18) <-223> genomowe i wektorowe DNA Zea maize <400> 11 tgctgttctg ctgacttt 18 <210> 12 <211> 18 <212> DNA <213> sztuczny <220>
<221> źródło <222> (1) . . (18) <223> DNA Agrobacterium tumefaciens terminatora nos 3 i promotora aktyny ryżu
<400> 12 accaagcttt tataatag
<210> 13
<211> 22
<212> DNA
<213> sztuczny
<220>
<221> źródło
<222> (1) . . (22)
<223> w pełni zsyntetyzowany
PL 199 928 B1 <400> 13 aatcgatcca aaatcgcgac tg 22 <210> 14 <211> 22 <212 > DNA <213> sztuczny <220>
<221> źródło <222> (1)..(22) <223> w pełni zsyntetyzowany <400> 14 ttcactttgg gccacctttt at 22 <210> 15 <211> 22 <212> DNA <213> sztuczny <220>
<221> źródło <222> (1) . . (22) <223> w pełni zsyntetyzowany <400> 15 gacgttattt atgagatggg tt 22 <210> 16 <211> 22 <212> DNA <213> sztuczny <220>
<221> źródło <222> (1) . . (22) <223 > w pełni zsyntetyzowany <400> 16 catcatctcg cgccttcctt tc 22
PL 199 928 B1

Claims (15)

  1. Zastrzeżenia patentowe
    1. Cząsteczka DNA umożliwiająca identyfikację roślin kukurydzy pV-ZMGT32 (nk603) tolerujących glifosat, znamienna tym, że zawiera sekwencję nukleotydową zidentyfikowaną jako SEQ ID nr: 7 lub SEQ ID nr: 8.
  2. 2. Para cząsteczek DNA składająca się z: pierwszej cząsteczki DNA i z drugiej cząsteczki DNA, znamienna tym, że cząsteczki DNA są o wystarczającej długości sąsiednich nukleotydów o sekwencji SEQ ID nr: 7 lub ich komplementów do działania jako primery DNA lub sondy diagnostyczne dla DNA ekstrahowanego z rośliny kukurydzy PV-ZMGT32(nk603) lub jej potomstwa.
  3. 3. Para cząsteczek DNA składająca się z: pierwszej cząsteczki DNA i z drugiej cząsteczki DNA, znamienna tym, że cząsteczki DNA są o wystarczającej długości sąsiednich nukleotydów o sekwencji SEQ ID nr: 8 lub ich komplementów do działania jako primery DNA lub sondy diagnostyczne dla ekstrahowanego DNA z rośliny kukurydzy PV-ZMGT32(nk603) lub jej potomstwa.
  4. 4. Sposób wykrywania obecności cząsteczki DNA wybranej z grupy składającej się z SEQ ID nr: 7 i SEQ ID nr: 8 w próbce DNA, znamienny tym, że (a) ekstrahuje się próbkę DNA z rośliny kukurydzy;
    (b) kontaktuje się próbkę DNA z DNA pary primera zawierającą cząsteczki DNA primera o wystarczającej długości sąsiadujących nukleotydów SEQ ID nr: 7 lub jego komplementu; lub SEQ ID nr 8: lub jej komplementu;
    (c) dostarcza się warunki reakcji do amplifikacji kwasu nukleinowego;
    (d) przeprowadza się reakcję amplifikacji kwasu nukleinowego, wytwarzając w ten sposób cząsteczkę amplikonu DNA; i (e) wykrywa się cząsteczkę DNA amplikonu.
  5. 5. Sposób wykrywania obecności cząsteczki DNA wybranej z grupy składającej się z SEQ ID nr: 7 i SEQ ID nr: 8 w próbce DNA, znamienny tym, że (a) ekstrahuje się próbkę DNA z rośliny kukurydzy;
    (b) kontaktuje się próbkę DNA z cząsteczką DNA zidentyfikowaną jako SEQ ID nr: 9, SEQ ID nr: SEQ ID nr: 10, SEQ ID nr: 11 lub SEQ ID nr: 12, przy czym wspomniana cząsteczka DNA jest sondą DNA, która hybrydyzuje w ścisłych warunkach hybrydyzacji z cząsteczką DNA wybraną z grupy składającej się z SEQ ID nr: 7 lub SEQ ID nr: 8, i nie hybrydyzuje w ścisłych warunkach hybrydyzacji z próbką DNA nie zawierają c ą czą steczki DNA zidentyfikowanej jako SEQ ID nr: 7 lub SEQ ID nr: 8;
    (c) poddaje się próbkę i sondę warunkom ścisłej hybrydyzacji i wykrywa się hybrydyzację sondy z DNA.
  6. 6. Cząsteczka DNA wybrana z grupy składającej się z SEQ ID nr: 9, SEQ ID nr: 10, SEQ ID nr: 11, SEQ ID nr: 12 i ich komplementów.
  7. 7. Sposób wbudowywania cechy tolerancji na glifosat do roślin kukurydzy, znamienny tym, że (a) ekstrahuje się próbkę DNA z potomnych roślin kukurydzy;
    (b) kontaktuje się próbkę DNA z markerową cząsteczką kwasu nukleinowego wybraną z grupy składającej się z SEQ ID nr: 9, SEQ ID nr: 10, SEQ ID nr: 11, SEQ ID nr: 12 i ich komplementami;
    (c) prowadzi się sposób wspomaganego markerem wbudowywania cechy tolerancji na glifosat, przy czym cecha tolerancji na glifosat jest genetycznie związana z komplementem cząsteczki markerowego kwasu nukleinowego.
  8. 8. Zestaw do wykrywania DNA zawierający co najmniej jedną cząsteczkę DNA o dostatecznej długości sąsiadujących nukleotydów homologicznych lub komplementarnych do SEQ ID nr: 7 lub SEQ ID nr: 8, które działają jako primer DNA lub specyficzna sonda dla przypadku kukurydzy PVZMGT32(nk603) i jej potomstwa.
  9. 9. Transgeniczna komórka roślinna z tolerancją glifosatu, zawierająca włączoną w genom tej komórki roślinnej cząsteczkę DNA kodującą tolerancyjną na glifosat EPSPS oraz DNA o sekwencji nukleotydowej zdefiniowanej w SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11 i SEQ ID NO: 12.
  10. 10. Sposób wytwarzania rośliny kukurydzy która toleruje stosowanie herbicydu glifosatu, znamienny tym, że
    a) krzyżuje się roślinę zawierającej włączoną w jej genom cząsteczkę DNA kodującą tolerancyjną na glifosat EPSPS, regiony złącza SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11 i SEQ ID NO: 12, z inną rośliną kukurydzy;
    b) otrzymuje się co najmniej jedno pokolenie roślin potomnych pochodzących z krzyżówki (a); i
    PL 199 928 B1
    c) dokonuje się selekcji potomstwa, które jest tolerancyjne na glifosat i zawiera regiony złącza SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11 i SEQ ID NO: 12.
  11. 11. Sposób hodowli rośliny kukurydzy, która toleruje stosowanie herbicydu glifosat, znamienny tym, że
    a) sadzi się co najmniej jedno nasienie rośliny kukurydzy zawierające włączoną w jego genom cząsteczkę DNA kodującą tolerancyjną na glifosat EPSPS i regiony złącza SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11 oraz SEQ ID NO: 12,
    b) prowadzi się wzrost z tego nasienia i uzyskuje się roślinę kukurydzy;
    c) pokrywa się tą roślinę herbicydem glifosatem tak, że wspomniana roślina ma mniejsze uszkodzenia wegetatywne i mniejsze uszkodzenie plonowania w porównaniu do innych roślin kukurydzy, które nie zawierają SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11 i SEQ ID NO: 12.
  12. 12. Sposób według zastrz. 11, znamienny tym, że etapem selekcjonującym w c) jest pokrywanie glifosatem.
  13. 13. Sposób według zastrz. 12, znamienny tym, że etap selekcjonujący w części c) zawiera etapy:
    (i) ekstrahowania próbki DNA z potomnych roślin kukurydzy;
    (ii) kontaktowania próbki DNA z markerową cząsteczką kwasu nukleinowego wybraną z grupy składającej się z SEQ ID nr: 9, SEQ ID nr: 10, SEQ ID nr: 11, SEQ ID nr: 12 i ich komplementami;
    (iii) prowadzenia sposobu wspomagania wbudowywania markera cechy tolerancji na glifosat, przy czym cecha tolerancji na glifosat jest genetycznie powiązana do komplementu cząsteczki markerowego kwasu nukleinowego.
  14. 14. Cząsteczka DNA według zastrz. 1, znamienna tym, że wspomniana cząsteczka DNA jest obecna w roślinie kukurydzy, nasieniu kukurydzy, tkance kukurydzy lub w jądrze komórkowym kukurydzy.
  15. 15. Cząsteczka DNA według zastrz. 6, znamienna tym, że wspomniana cząsteczka DNA jest obecna w roślinie kukurydzy, nasieniu kukurydzy, tkance kukurydzy lub w jądrze komórkowym kukurydzy.
PL348225A 2000-06-22 2001-06-22 Cząsteczka DNA umożliwiająca identyfikację rośliny kukurydzy tolerującej glifosat, para cząsteczek DNA, sposób wykrywania obecności cząsteczki DNA, cząsteczka DNA, sposób wbudowywania cechy tolerancji na glifosat, zestaw do wykrywania DNA, roślina kukurydzy tolerująca glifosat, transgeniczna komórka roślinna z tolerancją glifosatu, sposób wytwarzania rośliny kukurydzy i sposób hodowli rośliny kukurydzy PL199928B1 (pl)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US21356700P 2000-06-22 2000-06-22
US24001400P 2000-10-13 2000-10-13
US24121500P 2000-10-13 2000-10-13

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL348225A1 PL348225A1 (en) 2002-01-02
PL199928B1 true PL199928B1 (pl) 2008-11-28

Family

ID=27395887

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL348225A PL199928B1 (pl) 2000-06-22 2001-06-22 Cząsteczka DNA umożliwiająca identyfikację rośliny kukurydzy tolerującej glifosat, para cząsteczek DNA, sposób wykrywania obecności cząsteczki DNA, cząsteczka DNA, sposób wbudowywania cechy tolerancji na glifosat, zestaw do wykrywania DNA, roślina kukurydzy tolerująca glifosat, transgeniczna komórka roślinna z tolerancją glifosatu, sposób wytwarzania rośliny kukurydzy i sposób hodowli rośliny kukurydzy

Country Status (21)

Country Link
US (8) US6825400B2 (pl)
EP (3) EP1167531B1 (pl)
CN (2) CN101186918A (pl)
AR (4) AR031665A1 (pl)
AT (2) ATE466945T1 (pl)
BG (1) BG65315B1 (pl)
BR (2) BRPI0100752B1 (pl)
CA (1) CA2349841C (pl)
CY (2) CY1106109T1 (pl)
CZ (2) CZ305949B6 (pl)
DE (2) DE60118660T2 (pl)
DK (3) DK1582592T3 (pl)
ES (3) ES2343252T3 (pl)
HU (2) HU226193B1 (pl)
ID (1) ID30575A (pl)
MX (1) MXPA01006407A (pl)
PL (1) PL199928B1 (pl)
PT (2) PT1167531E (pl)
RS (1) RS49990B (pl)
SI (3) SI1167531T1 (pl)
UY (1) UY26788A1 (pl)

Families Citing this family (403)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BRPI0100752B1 (pt) * 2000-06-22 2015-10-13 Monsanto Co moléculas e pares de moléculas de dna, processos para detectar molécula de dna e para criar um traço tolerante a glifosato em plantas de milho, bem como kit de detecção de dna
CZ300073B6 (cs) 2000-09-29 2009-01-21 Monsanto Technology Llc Zpusob vylepšení tolerance vuci glyfosátu u rostliny pšenice, její bunka, její DNA, dvojice molekulDNA primeru, zpusoby její detekce, zpusob šírení vlastnosti tolerance vuci glyfosátu u rostlin, DNAdetekcní kit
AU2002218413A1 (en) 2000-11-30 2002-06-11 Ses Europe N.V. Glyphosate resistant transgenic sugar beet characterised by a specific transgene insertion (t227-1), methods and primers for the detection of said insertion
US7569747B2 (en) 2002-12-05 2009-08-04 Monsanto Technology Llc Bentgrass event ASR-368 and compositions and methods for detection thereof
CA2743564C (en) 2003-01-13 2013-11-12 Monsanto Technology Llc Glyphosate tolerant alfalfa events and methods for detection thereof
MXPA05011795A (es) * 2003-05-02 2006-02-17 Dow Agrosciences Llc Evidencia de maiz tc1507 y metodos para deteccion del mismo.
US7157281B2 (en) * 2003-12-11 2007-01-02 Monsanto Technology Llc High lysine maize compositions and event LY038 maize plants
HUE025703T2 (en) 2003-12-15 2016-04-28 Monsanto Technology Llc MON88017 corn plant and compositions, and a method for detecting them
US7855323B2 (en) * 2004-02-10 2010-12-21 Monsanto Technology Llc Recombinant DNA for gene suppression
AR047598A1 (es) * 2004-02-10 2006-01-25 Monsanto Technology Llc Semilla de maiz transgenica con mayor contenido de aminoacidos
US7683237B2 (en) * 2004-02-10 2010-03-23 Monsanto Technology Llc Maize seed with synergistically enhanced lysine content
EP2281447B1 (en) * 2004-03-25 2016-07-27 Syngenta Participations AG Corn event MIR604
EP1729580B1 (en) 2004-03-30 2018-04-11 Monsanto Technology LLC Methods for controlling plant pathogens using n-phosphonomethylglycine
US20070197474A1 (en) * 2004-03-30 2007-08-23 Clinton William P Methods for controlling plants pathogens using N-phosphonomethylglycine
PT2319932E (pt) * 2004-04-30 2013-11-27 Dow Agrosciences Llc Novo gene de resistência a herbicida
UA97088C2 (ru) * 2004-09-29 2012-01-10 Пионер Хай-Бред Интернешнл, Инк. Трансгенная кукуруза das-59122-7, стойкая к насекомым, и способы его обнаружения
AP2693A (en) 2005-05-27 2013-07-16 Monsanto Technology Llc Soybean event MON89788 and methods for detection thereof
WO2007015945A2 (en) 2005-07-29 2007-02-08 Monsanto Technology Llc Development of novel germplasm using segregates from transgenic crosses
US7973218B2 (en) * 2005-08-24 2011-07-05 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Methods and compositions for controlling weeds
UA102367C2 (ru) * 2005-10-03 2013-07-10 Монсанто Текнолоджи Ллс Семя трансгенной кукурузы с повышенным содержанием лизина
CA2625031C (en) 2005-10-13 2016-07-19 Monsanto Technology Llc Methods for producing hybrid seed
EP1947926B1 (en) 2005-10-28 2014-11-26 Dow AgroSciences LLC Novel herbicide resistance genes
CN101437843B (zh) * 2006-01-23 2013-08-07 密歇根州立大学评议会 抗草甘膦植物的育种方法及组合物
BRPI0719815A2 (pt) * 2006-10-03 2014-05-20 Monsanto Technology Llc Métodos para produção de semente de milho híbrido e composições produzidas a partir dos mesmos
TWM318228U (en) * 2006-11-02 2007-09-01 Datafab Sys Inc Structure for protecting terminal of memory card adapter
BR122017018105B1 (pt) * 2007-11-15 2024-01-23 Monsanto Technology Llc Molécula de dna genômico de soja transgênica
EP2240586A1 (en) 2008-02-15 2010-10-20 Monsanto Technology, LLC Soybean plant and seed corresponding to transgenic event mon87769 and methods for detection thereof
BR122018010813B1 (pt) 2008-02-29 2023-12-19 Monsanto Technology Llc Cromossomo, alimento processado ou produto alimentício de milho processado, métodos de detecção da presença de sequências em uma amostra de tecido de milho e para obtenção de uma planta de milho tolerante a déficit de água que carece de um gene marcador selecionável e polinucleotídeo
EP2113172A1 (de) * 2008-04-28 2009-11-04 Bayer CropScience AG Verfahren zur verbesserten Nutzung des Produktionspotentials transgener Pflanzen
US9078406B2 (en) 2008-08-29 2015-07-14 Monsanto Technology Llc Soybean plant and seed corresponding to transgenic event MON87754 and methods for detection thereof
AR075549A1 (es) 2008-09-29 2011-04-20 Monsanto Technology Llc Evento transgenico de soja mon87705 y metodos para detectar el mismo
AR075126A1 (es) * 2009-01-29 2011-03-09 Bayer Cropscience Ag Metodo para el mejor uso del potencial de produccion de plantas transgenicas
WO2010135324A1 (en) 2009-05-18 2010-11-25 Monsanto Technology Llc Use of glyphosate for disease suppression and yield enhancement in soybean
US8618358B2 (en) 2009-11-23 2013-12-31 Monsanto Technology Llc Transgenic maize event MON 87427 and the relative development scale
CN102811617A (zh) 2010-01-22 2012-12-05 拜耳知识产权有限责任公司 杀螨和/或杀虫活性物质结合物
CN101812527B (zh) * 2010-04-20 2014-09-17 北京农业职业学院 一种快速检测6种转基因玉米的方法
WO2011153186A1 (en) 2010-06-04 2011-12-08 Monsanto Technology Llc Transgenic brassica event mon 88302 and methods of use thereof
CN103209993B (zh) * 2010-09-15 2014-12-10 陶氏益农公司 针对赋予对2,4-二氯苯氧乙酸的抗性的酶的单克隆抗体和检测方法
CA2814532C (en) 2010-10-12 2021-07-27 Monsanto Technology Llc Soybean plant and seed corresponding to transgenic event mon87712 and methods for detection thereof
WO2012065944A1 (en) 2010-11-15 2012-05-24 Bayer Cropscience Ag N-aryl pyrazole(thio)carboxamides
EP2646413A1 (de) 2010-11-29 2013-10-09 Bayer Intellectual Property GmbH Alpha-beta-ungesättigte imine
EP2460407A1 (de) 2010-12-01 2012-06-06 Bayer CropScience AG Wirkstoffkombinationen umfassend Pyridylethylbenzamide und weitere Wirkstoffe
KR20130123416A (ko) 2010-12-01 2013-11-12 바이엘 인텔렉쳐 프로퍼티 게엠베하 작물에서 선충류를 구제하고 수확량을 증가시키기 위한 플루오피람의 용도
US20130345058A1 (en) 2011-03-10 2013-12-26 Wolfram Andersch Use of lipochito-oligosaccharide compounds for safeguarding seed safety of treated seeds
HUE038497T2 (hu) 2011-03-23 2018-10-29 Bayer Ip Gmbh Hatóanyag-kombinációk
BR112013025871A2 (pt) 2011-04-08 2016-07-26 Bayer Ip Gmbh composto de fórmula (i) e sua utilização, composição para o controle dos fungos nocivos fitopatogênicos, método para o controle de fungos fitopatogênicos das culturas e processo para a produção das composições
PL2699093T3 (pl) 2011-04-22 2016-04-29 Bayer Cropscience Ag Kombinacje związku aktywnego zawierające pochodną karboksyamidową i związek grzybobójczy
ES2699258T3 (es) 2011-06-14 2019-02-08 Bayer Cropscience Ag Uso de un compuesto de enaminocarbonilo en combinación con un agente de control biológico
AP2013007316A0 (en) 2011-07-01 2013-12-31 Monsanto Technology Llc Methods and compositions for selective regulation of protein expression
WO2013014241A1 (en) 2011-07-28 2013-01-31 Genective Glyphosate tolerant corn event vco-ø1981-5 and kit and method for detecting the same
WO2013020985A1 (en) 2011-08-10 2013-02-14 Bayer Intellectual Property Gmbh Active compound combinations comprising specific tetramic acid derivatives
MX348003B (es) 2011-08-22 2017-03-08 Bayer Cropscience Nv Metodos y medios para modificar un genoma vegetal.
EP2561759A1 (en) 2011-08-26 2013-02-27 Bayer Cropscience AG Fluoroalkyl-substituted 2-amidobenzimidazoles and their effect on plant growth
CN102952861B (zh) * 2011-08-26 2014-12-31 深圳出入境检验检疫局动植物检验检疫技术中心 转基因玉米多重pcr-dhplc检测引物及检测方法
MX347562B (es) 2011-09-12 2017-05-03 Bayer Ip Gmbh Derivados fungicidas de 3-fenil[(heterociclilmetoxi)imino]metil}-1 ,2,4-oxadiazol-5(4h)-ona sustituidos en 4.
PH12014500562A1 (en) 2011-09-16 2014-04-14 Bayer Ip Gmbh Use of acylsulfonamides for improving plant yield
JP6100265B2 (ja) 2011-09-16 2017-03-22 バイエル・インテレクチュアル・プロパティ・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツングＢａｙｅｒ Ｉｎｔｅｌｌｅｃｔｕａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｙ ＧｍｂＨ 植物収量を向上させるためのフェニルピラゾリン−３−カルボン酸化合物の使用
AU2012307322B2 (en) 2011-09-16 2016-07-14 Bayer Intellectual Property Gmbh Use of 5-phenyl- or 5-benzyl-2 isoxazoline-3 carboxylates for improving plant yield
EA028662B1 (ru) 2011-10-04 2017-12-29 Байер Интеллекчуал Проперти Гмбх Рнк-интерференция для борьбы с грибами и оомицетами путем ингибирования гена сахаропиндегидрогеназы
AR088363A1 (es) 2011-10-18 2014-05-28 Dow Agrosciences Llc MATERIALES Y METODOS PARA LA DETECCION DEL EVENTO pDAB4472-1606 QUE CONTIENE EL GEN ARILOXIALCANOATO DIOXIGENASA (AAD-12) EN PLANTAS
CN102409094B (zh) * 2011-11-17 2013-06-26 四川省农业科学院分析测试中心 转基因玉米nk603品系特异定量pcr精准检测方法
CN102409092B (zh) * 2011-11-17 2013-06-26 四川省农业科学院分析测试中心 转基因玉米nk603结构特异定量pcr精准检测方法
MX2014005976A (es) 2011-11-21 2014-08-27 Bayer Ip Gmbh Derivados de n-[(silil trisustituido)metil]-carboxamida fungicidas.
CA2857438A1 (en) 2011-11-30 2013-06-06 Bayer Intellectual Property Gmbh Fungicidal n-bicycloalkyl and n-tricycloalkyl (thio)carboxamide derivatives
IN2014CN04325A (pl) 2011-12-19 2015-09-04 Bayer Cropscience Ag
BR112014015993A8 (pt) 2011-12-29 2017-07-04 Bayer Ip Gmbh composto, composição, método para o controle dos fungos, utilização dos compostos e processo para a produção das composições
KR102028903B1 (ko) 2011-12-29 2019-10-07 바이엘 인텔렉쳐 프로퍼티 게엠베하 살진균 3-[(피리딘-2-일메톡시이미노)(페닐)메틸]-2-치환-1,2,4-옥사디아졸-5(2h)-온 유도체
ES2665361T3 (es) 2012-01-25 2018-04-25 Bayer Intellectual Property Gmbh Combinación de principios activos que contiene bacilo de fluopyram y agente de control biológico
EP2806739A1 (en) 2012-01-25 2014-12-03 Bayer Intellectual Property GmbH Active compound combinations containing fluopyram and biological control agent
US8952229B1 (en) 2012-02-21 2015-02-10 Pioneer Hi Bred International Inc Maize inbred PH1K0H1
US8975469B1 (en) 2012-02-21 2015-03-10 Pioneer Hi Bred International Inc Maize hybrid X13C704HR
BR122019010639B1 (pt) 2012-02-27 2020-12-22 Bayer Intellectual Property Gmbh combinação, método para controle de fungos fitopatogênicos prejudiciais e uso da referida combinação
WO2013139949A1 (en) 2012-03-23 2013-09-26 Bayer Intellectual Property Gmbh Compositions comprising a strigolactame compound for enhanced plant growth and yield
US9357778B2 (en) 2012-04-12 2016-06-07 Bayer Cropscience Ag N-acyl-2-(cyclo)alkypyrrolidines and piperidines useful as fungicides
CA2865599C (en) 2012-04-20 2020-10-27 Bayer Cropscience Ag N-cycloalkyl-n-[(heterocyclylphenyl)methylene]-(thio)carboxamide derivatives
WO2013156560A1 (en) 2012-04-20 2013-10-24 Bayer Cropscience Ag N-cycloalkyl-n-[(trisubstitutedsilylphenyl)methylene]-(thio)carboxamide derivatives
JP6315481B2 (ja) 2012-05-08 2018-04-25 モンサント テクノロジー エルエルシー トウモロコシイベントｍｏｎ８７４１１
MX2014013497A (es) 2012-05-09 2015-02-10 Bayer Cropscience Ag Pirazol indanil carboxamidas.
EP2662363A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG 5-Halogenopyrazole biphenylcarboxamides
EP2662370A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG 5-Halogenopyrazole benzofuranyl carboxamides
EP2662361A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG Pyrazol indanyl carboxamides
US9375005B2 (en) 2012-05-09 2016-06-28 Bayer Cropscience Ag 5-halogenopyrazole indanyl carboxamides
EP2662360A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG 5-Halogenopyrazole indanyl carboxamides
EP2662364A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG Pyrazole tetrahydronaphthyl carboxamides
EP2662362A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG Pyrazole indanyl carboxamides
AR091104A1 (es) 2012-05-22 2015-01-14 Bayer Cropscience Ag Combinaciones de compuestos activos que comprenden un derivado lipo-quitooligosacarido y un compuesto nematicida, insecticida o fungicida
PL2854548T4 (pl) 2012-05-30 2019-06-28 Bayer Cropscience Ag Kompozycja zawierająca środek do kontroli biologicznej i środek grzybobójczy wybrany z metalaksylu- i metalalksylu-M
PL3488700T3 (pl) 2012-05-30 2021-05-31 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Kompozycja zawierająca środek do kontroli biologicznej i środek grzybobójczy
BR112014029906A2 (pt) 2012-05-30 2018-04-17 Bayer Cropscience Ag composições compreendendo um agente de controle biológico e um inseticida.
KR20150021539A (ko) 2012-05-30 2015-03-02 바이엘 크롭사이언스 아게 생물학적 방제제, 및 유사분열 및 세포 분열의 억제제 또는 다중부위 작용을 갖는 화합물로부터 선택된 살진균제를 포함하는 조성물
DK2854547T3 (en) 2012-05-30 2018-11-26 Bayer Cropscience Ag COMPOSITION CONTAINING A BIOLOGICAL PESTICID AND TRIFLOXY STROBIN
US9386773B2 (en) 2012-05-30 2016-07-12 Bayer Cropscience Ag Compositions comprising a biological control agent and a fungicide from the group consisting of inhibitors of the respiratory chain at complex I or II
CN104507317B (zh) 2012-05-30 2019-11-15 拜尔农作物科学股份公司 包含生物防治剂和杀真菌剂的组合物、及其用途、试剂盒
EP2854535A1 (en) 2012-05-30 2015-04-08 Bayer Cropscience AG Compositions comprising a biological control agent and an insecticide
CA2880369C (en) 2012-07-31 2021-05-04 Bayer Cropscience Ag Pesticidal compostions comprising a terpene mixture and flupyradifurone
MX369284B (es) 2012-09-14 2019-11-04 Bayer Cropscience Lp Variantes de hppd y metodos de uso.
EP2719280A1 (en) 2012-10-11 2014-04-16 Bayer CropScience AG Use of N-phenylethylpyrazole carboxamide derivatives or salts thereof for resistance management of phytopathogenic fungi
CA2888600C (en) 2012-10-19 2021-08-10 Bayer Cropscience Ag Active compound combinations comprising carboxamide derivatives
MX380476B (es) 2012-10-19 2025-03-12 Bayer Cropscience Ag Método de promoción de crecimiento de planta usando derivados de carboxamida.
LT2908641T (lt) 2012-10-19 2018-04-25 Bayer Cropscience Ag Būdas, skirtas augalų apdorojimui kovojant prieš grybus, kurie yra atsparūs fungicidams, panaudojant karboksamido arba tiokarboksamido darinius
WO2014060519A1 (en) 2012-10-19 2014-04-24 Bayer Cropscience Ag Method for enhancing tolerance to abiotic stress in plants using carboxamide or thiocarboxamide derivatives
EP2735231A1 (en) 2012-11-23 2014-05-28 Bayer CropScience AG Active compound combinations
BR112015012054A2 (pt) 2012-11-30 2017-07-11 Bayer Cropscience Ag mistura fungicida ou pesticida binária
CN104994736B (zh) 2012-11-30 2018-02-06 拜耳作物科学股份公司 二元农药和杀真菌混合物
CN104981162B (zh) 2012-11-30 2017-11-28 拜耳作物科学股份公司 三元杀真菌混合物
UA116223C2 (uk) 2012-11-30 2018-02-26 Байєр Кропсайєнс Акцієнгезелльшафт Подвійна фунгіцидна суміш
PY1356939A (es) 2012-11-30 2017-08-01 Bayer Cropscience Ag Mezclas de fungicidas ternarios y pesticidas
US20150282490A1 (en) 2012-12-03 2015-10-08 Bayer Cropscience Ag Composition comprising a biological control agent and a fungicide
WO2014086750A2 (en) 2012-12-03 2014-06-12 Bayer Cropscience Ag Composition comprising a biological control agent and an insecticide
CN105451563A (zh) 2012-12-03 2016-03-30 拜耳作物科学股份公司 包含生物防治剂的组合物
MX356779B (es) 2012-12-03 2018-06-13 Bayer Cropscience Ag Composicion que comprende un agente de control biologico y un fungicida.
JP2015535532A (ja) 2012-12-03 2015-12-14 バイエル・クロップサイエンス・アクチェンゲゼルシャフト 生物農薬および殺菌剤を含む組成物
WO2014086758A2 (en) 2012-12-03 2014-06-12 Bayer Cropscience Ag Composition comprising a biological control agent and an insecticide
EP2925142B1 (en) 2012-12-03 2018-01-31 Bayer CropScience AG Composition comprising a biological control agent and an insecticide
WO2014086753A2 (en) 2012-12-03 2014-06-12 Bayer Cropscience Ag Composition comprising biological control agents
WO2014090765A1 (en) 2012-12-12 2014-06-19 Bayer Cropscience Ag Use of 1-[2-fluoro-4-methyl-5-(2,2,2-trifluoroethylsulfinyl)phenyl]-5-amino-3-trifluoromethyl)-1 h-1,2,4 tfia zole for controlling nematodes in nematode-resistant crops
AR093996A1 (es) 2012-12-18 2015-07-01 Bayer Cropscience Ag Combinaciones bactericidas y fungicidas binarias
WO2014095677A1 (en) 2012-12-19 2014-06-26 Bayer Cropscience Ag Difluoromethyl-nicotinic- tetrahydronaphtyl carboxamides
WO2014124369A1 (en) 2013-02-11 2014-08-14 Bayer Cropscience Lp Compositions comprising a streptomyces-based biological control agent and a fungicide
EP2953468A1 (en) 2013-02-11 2015-12-16 Bayer Cropscience LP Compositions comprising a streptomyces-based biological control agent and an insecticide
MX2015010313A (es) 2013-02-11 2015-11-18 Bayer Cropscience Lp Composiciones que comprenden gougerotina y por lo menos un agente de control biologico.
US8907159B1 (en) 2013-02-13 2014-12-09 Pioneer Hi Bred International Inc Maize inbred PH24DM
US8921672B1 (en) 2013-02-13 2014-12-30 Pioneer Hi Bred International Inc Maize inbred PH24DS
US8916744B1 (en) 2013-02-13 2014-12-23 Pioneer Hi Bred International Inc Maize inbred PH24DV
BR112015021651B1 (pt) 2013-03-07 2021-12-28 Bayer Cropscience Lp Molécula de ácido nucleico recombinante, cassete de expressão, célula hospedeira de bactéria, polipeptídeo recombinante, composição e métodos para aplicação dos mesmos
KR20150144779A (ko) 2013-04-19 2015-12-28 바이엘 크롭사이언스 악티엔게젤샤프트 살충성 또는 농약성 2성분 혼합물
CA2909725A1 (en) 2013-04-19 2014-10-23 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Method for improved utilization of the production potential of transgenic plants
TW201507722A (zh) 2013-04-30 2015-03-01 Bayer Cropscience Ag 做為殺線蟲劑及殺體內寄生蟲劑的ｎ－（２－鹵素－２－苯乙基）－羧醯胺類
WO2014177514A1 (en) 2013-04-30 2014-11-06 Bayer Cropscience Ag Nematicidal n-substituted phenethylcarboxamides
CN105636939B (zh) 2013-06-26 2018-08-31 拜耳作物科学股份公司 N-环烷基-n-[(二环基苯基)亚甲基]-(硫代)甲酰胺衍生物
BR112016007566A2 (pt) 2013-10-09 2017-09-12 Monsanto Technology Llc evento de milho transgênico mon87403 e métodos para a detecção do mesmo
AR097995A1 (es) 2013-10-14 2016-04-27 Syngenta Participations Ag Método para sembrar filas de cultivos
US10070645B2 (en) 2013-12-05 2018-09-11 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft N-cycloalkyl-N-{[2-(1-substitutedcycloalkyl)phenyl]methylene}-(thio)carboxamide derivatives
TW201607929A (zh) 2013-12-05 2016-03-01 拜耳作物科學公司 Ｎ－環烷基－ｎ－｛［２－（１－經取代環烷基）苯基］亞甲基｝－（硫代）甲醯胺衍生物
EP2885970A1 (en) 2013-12-21 2015-06-24 Bayer CropScience AG Fungicide compositions comprising compound I, at least one succinate dehydrogenase (SDH) inhibitor and at least one triazole fungicide
CN106459986B (zh) 2014-03-11 2020-06-30 拜耳作物科学有限合伙公司 Hppd变体和使用方法
WO2015160619A1 (en) 2014-04-16 2015-10-22 Bayer Cropscience Lp Compositions comprising ningnanmycin and a fungicide
WO2015160618A1 (en) 2014-04-16 2015-10-22 Bayer Cropscience Lp Compositions comprising ningnanmycin and a biological control agent
WO2015160620A1 (en) 2014-04-16 2015-10-22 Bayer Cropscience Lp Compositions comprising ningnanmycin and an insecticide
UY36337A (es) 2014-10-15 2016-06-01 Monsanto Technology Llc Adn recombinante que codifica genes de tolerancia a herbicidas, plantas y métodos de uso de los mismos
AU2015344980B2 (en) 2014-11-14 2021-11-11 Basf Plant Science Company Gmbh Materials and methods for increasing the tocopherol content in seed oil
CN104745708A (zh) * 2015-04-02 2015-07-01 湖南省食品安全生产工程技术研究中心 一种转基因玉米nk603品系的lamp检测试剂盒及检测方法
EP3283476B1 (en) 2015-04-13 2019-08-14 Bayer Cropscience AG N-cycloalkyl-n-(biheterocyclyethylene)-(thio)carboxamide derivatives
CN104846084B (zh) * 2015-04-30 2019-02-01 北京大北农科技集团股份有限公司 用于检测玉米植物dbn9927的核酸序列及其检测方法
CN104830846B (zh) * 2015-04-30 2018-10-30 北京大北农科技集团股份有限公司 用于检测除草剂耐受性玉米植物dbn9898的核酸序列及其检测方法
CN104878090B (zh) * 2015-04-30 2019-01-15 北京大北农科技集团股份有限公司 用于检测除草剂耐受性玉米植物dbn9877的核酸序列及其检测方法
CN104830845B (zh) * 2015-04-30 2018-10-30 北京大北农科技集团股份有限公司 用于检测除草剂耐受性玉米植物dbn9878的核酸序列及其检测方法
CN104878094B (zh) * 2015-04-30 2019-01-15 北京大北农科技集团股份有限公司 用于检测除草剂耐受性玉米植物dbn9888的核酸序列及其检测方法
CN104830847B (zh) * 2015-04-30 2019-01-11 北京大北农科技集团股份有限公司 用于检测玉米植物dbn9936的核酸序列及其检测方法
CN104878096B (zh) * 2015-04-30 2019-01-15 北京大北农科技集团股份有限公司 用于检测除草剂耐受性玉米植物dbn9868的核酸序列及其检测方法
CN104878095B (zh) * 2015-04-30 2018-10-26 北京大北农科技集团股份有限公司 用于检测除草剂耐受性玉米植物dbn9858的核酸序列及其检测方法
EP3097782A1 (en) 2015-05-29 2016-11-30 Bayer CropScience Aktiengesellschaft Methods for controlling phytopathogenic nematodes by combination of fluopyram and biological control agents
WO2017011462A1 (en) * 2015-07-15 2017-01-19 University Of Florida Research Foundation, Inc. Use of elongator genes to improve plant disease resistance
KR20180043838A (ko) 2015-09-11 2018-04-30 바이엘 크롭사이언스 악티엔게젤샤프트 Ｈｐｐｄ 변이체 및 사용 방법
CN105331725B (zh) * 2015-11-30 2018-04-24 中国农业大学 转maroACC基因抗除草剂玉米CC-2的侧翼序列及其应用
BR112019001764A2 (pt) 2016-07-29 2019-05-07 Bayer Cropscience Ag combinações de compostos ativos e métodos para proteção de material de propagação de plantas
CA3043493A1 (en) 2016-11-23 2018-05-31 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Axmi669 and axmi991 toxin genes and methods for their use
EP3555056A1 (en) 2016-12-19 2019-10-23 Basf Se Substituted oxadiazoles for combating phytopathogenic fungi
CN110431234B (zh) 2017-01-18 2024-04-16 巴斯夫农业种子解决方案美国有限责任公司 Bp005毒素基因及其使用方法
UY37570A (es) 2017-01-18 2018-08-31 Bayer Cropscience Lp Uso de bp005 para el control de patógenos de planta
US11425910B2 (en) 2017-02-21 2022-08-30 Basf Se Substituted oxadiazoles for combating phytopathogenic fungi
WO2018165091A1 (en) 2017-03-07 2018-09-13 Bayer Cropscience Lp Hppd variants and methods of use
EP3606912A1 (en) 2017-04-07 2020-02-12 Basf Se Substituted oxadiazoles for combating phytopathogenic fungi
WO2018188962A1 (en) 2017-04-11 2018-10-18 Basf Se Substituted oxadiazoles for combating phytopathogenic fungi
WO2018195256A1 (en) 2017-04-21 2018-10-25 Bayer Cropscience Lp Method of improving crop safety
WO2018202491A1 (en) 2017-05-04 2018-11-08 Basf Se Substituted trifluoromethyloxadiazoles for combating phytopathogenic fungi
JP7160487B2 (ja) 2017-05-04 2022-10-25 ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア 植物病原菌を駆除するための置換５－（ハロアルキル）－５－ヒドロキシ－イソオキサゾール
WO2018219797A1 (en) 2017-06-02 2018-12-06 Basf Se Substituted oxadiazoles for combating phytopathogenic fungi
US20200190043A1 (en) 2017-06-19 2020-06-18 Basf Se 2-[[5-(trifluoromethyl)-1,2,4-oxadiazol-3-yl]aryloxy](thio)acetamides for combating phytopathogenic fungi
WO2019025250A1 (en) 2017-08-04 2019-02-07 Basf Se SUBSTITUTED TRIFLUOROMETHYLOXADIAZOLES FOR COMBATING PHYTOPATHOGENIC FUNGI
WO2019038042A1 (en) 2017-08-21 2019-02-28 Basf Se SUBSTITUTED TRIFLUOROMETHYLOXADIAZOLES FOR THE CONTROL OF PHYTOPATHOGENIC FUNGI
EP3684761A1 (en) 2017-09-18 2020-07-29 Basf Se Substituted trifluoromethyloxadiazoles for combating phytopathogenic fungi
WO2019068811A1 (en) 2017-10-06 2019-04-11 Bayer Aktiengesellschaft COMPOSITIONS COMPRISING FLUOPYRAM AND TIOXAZAFENE
BR112020008092A2 (pt) 2017-10-24 2020-09-15 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC método para conferir tolerância a um herbicida e planta de soja transgênica
WO2019083808A1 (en) 2017-10-24 2019-05-02 Basf Se IMPROVING HERBICIDE TOLERANCE AGAINST HPPD INHIBITORS BY REGULATION OF PUTATIVE REDUCED 4-HYDROXYPHENYLPYRUVATE REDUCES IN SOYBEANS
WO2019101511A1 (en) 2017-11-23 2019-05-31 Basf Se Substituted trifluoromethyloxadiazoles for combating phytopathogenic fungi
WO2019121143A1 (en) 2017-12-20 2019-06-27 Basf Se Substituted cyclopropyl derivatives
WO2019137995A1 (en) 2018-01-11 2019-07-18 Basf Se Novel pyridazine compounds for controlling invertebrate pests
US12285015B2 (en) 2018-01-29 2025-04-29 BASF Agro B.V. Agrochemical formulations
WO2019154665A1 (en) 2018-02-07 2019-08-15 Basf Se New pyridine carboxamides
EP3749660A1 (en) 2018-02-07 2020-12-16 Basf Se New pyridine carboxamides
CN111801014B (zh) 2018-03-01 2022-05-27 巴斯夫农业公司 氯氟醚菌唑的杀真菌组合物
WO2019219464A1 (en) 2018-05-15 2019-11-21 Basf Se Substituted trifluoromethyloxadiazoles for combating phytopathogenic fungi
WO2019224092A1 (en) 2018-05-22 2019-11-28 Basf Se Pesticidally active c15-derivatives of ginkgolides
WO2019226938A1 (en) 2018-05-23 2019-11-28 The United States Of America, As Represented By The Secretary Of Agriculture Fruit-specific promoters
CN112513033A (zh) 2018-06-04 2021-03-16 拜耳公司 除草活性的双环苯甲酰基吡唑
EP3613736A1 (en) 2018-08-22 2020-02-26 Basf Se Substituted glutarimide derivatives
EP3628158A1 (en) 2018-09-28 2020-04-01 Basf Se Pesticidal mixture comprising a mesoionic compound and a biopesticide
KR102896266B1 (ko) 2018-10-23 2025-12-04 바스프 에스이 트리시클릭 살충 화합물
EP3643705A1 (en) 2018-10-24 2020-04-29 Basf Se Pesticidal compounds
EP3670501A1 (en) 2018-12-17 2020-06-24 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole compounds as fungicides
SI3908584T1 (sl) 2019-01-11 2023-07-31 Basf Se Kristalne oblike 1-(1,2-dimetilpropil)-n-etil-5-metil-n-piridazin-4-il -pirazol-4-karboksamida
EP3696177A1 (en) 2019-02-12 2020-08-19 Basf Se Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests
US12439919B2 (en) 2019-05-10 2025-10-14 Bayer Cropscience Lp Active compound combinations
EP3769623A1 (en) 2019-07-22 2021-01-27 Basf Se Mesoionic imidazolium compounds and derivatives for combating animal pests
EP3975718A1 (en) 2019-05-29 2022-04-06 Basf Se Mesoionic imidazolium compounds and derivatives for combating animal pests
WO2020244969A1 (en) 2019-06-06 2020-12-10 Basf Se Pyridine derivatives and their use as fungicides
WO2020244970A1 (en) 2019-06-06 2020-12-10 Basf Se New carbocyclic pyridine carboxamides
KR20220017940A (ko) 2019-06-06 2022-02-14 바스프 에스이 살진균 n-(피리드-3-일)카르복사미드
EP3766879A1 (en) 2019-07-19 2021-01-20 Basf Se Pesticidal pyrazole derivatives
UY38795A (es) 2019-07-22 2021-02-26 Bayer Ag 5-amino pirazoles y triazoles como plaguicidas
CA3148209A1 (en) 2019-07-23 2021-01-28 Bayer Aktiengesellschaft Novel heteroaryl-triazole compounds as pesticides
UY38794A (es) 2019-07-23 2021-02-26 Bayer Ag Novedosos compuestos de heteroaril-triazol como plaguicidas
WO2021022069A1 (en) 2019-08-01 2021-02-04 Bayer Cropscience Lp Method of improving cold stress tolerance and crop safety
EP3701796A1 (en) 2019-08-08 2020-09-02 Bayer AG Active compound combinations
EP4034656A1 (en) 2019-09-26 2022-08-03 Bayer Aktiengesellschaft Rnai-mediated pest control
CN114760842A (zh) 2019-10-02 2022-07-15 拜耳公司 包含脂肪酸的活性化合物结合物
WO2021063736A1 (en) 2019-10-02 2021-04-08 Basf Se Bicyclic pyridine derivatives
WO2021063735A1 (en) 2019-10-02 2021-04-08 Basf Se New bicyclic pyridine derivatives
TW202128663A (zh) 2019-10-09 2021-08-01 德商拜耳廠股份有限公司 作為殺蟲劑之新穎雜芳基三唑化合物
AU2020363864A1 (en) 2019-10-09 2022-04-21 Bayer Aktiengesellschaft Novel heteroaryl-triazole compounds as pesticides
US12241075B2 (en) 2019-10-14 2025-03-04 Basf Agricultural Solutions Us Llc Insect resistant genes and methods of use
WO2021089673A1 (de) 2019-11-07 2021-05-14 Bayer Aktiengesellschaft Substituierte sulfonylamide zur bekämpfung tierischer schädlinge
WO2021097162A1 (en) 2019-11-13 2021-05-20 Bayer Cropscience Lp Beneficial combinations with paenibacillus
TW202134226A (zh) 2019-11-18 2021-09-16 德商拜耳廠股份有限公司 作為殺蟲劑之新穎雜芳基-三唑化合物
EP4061131A1 (en) 2019-11-18 2022-09-28 Bayer Aktiengesellschaft Active compound combinations comprising fatty acids
TW202136248A (zh) 2019-11-25 2021-10-01 德商拜耳廠股份有限公司 作為殺蟲劑之新穎雜芳基-三唑化合物
AR121242A1 (es) 2020-01-31 2022-05-04 Pairwise Plants Services Inc Supresión de la respuesta de escape a la sombra en plantas
MX2022010059A (es) 2020-02-18 2022-08-25 Bayer Ag Nuevos compuestos de heteroaril-triazol como pesticidas.
EP3708565A1 (en) 2020-03-04 2020-09-16 Bayer AG Pyrimidinyloxyphenylamidines and the use thereof as fungicides
CA3180157A1 (en) 2020-04-16 2021-10-21 Pairwise Plants Services, Inc. Methods for controlling meristem size for crop improvement
WO2021209490A1 (en) 2020-04-16 2021-10-21 Bayer Aktiengesellschaft Cyclaminephenylaminoquinolines as fungicides
TW202200570A (zh) 2020-04-21 2022-01-01 德商拜耳廠股份有限公司 作為殺蟲劑之經２—（雜）芳基取代的稠合雜環衍生物
CN115443267B (zh) 2020-04-28 2025-09-05 巴斯夫欧洲公司 杀害虫化合物
EP3903582A1 (en) 2020-04-28 2021-11-03 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors ii
EP3903583A1 (en) 2020-04-28 2021-11-03 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors iii
EP3903584A1 (en) 2020-04-28 2021-11-03 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors iv
EP3903581A1 (en) 2020-04-28 2021-11-03 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors i
TWI907288B (zh) 2020-05-06 2025-12-01 德商拜耳廠股份有限公司 作為殺蟲劑之新穎雜芳基三唑化合物
BR112022022595A2 (pt) 2020-05-06 2022-12-20 Bayer Ag Piridina (tio)amidas como compostos fungicidas
JP2023525349A (ja) 2020-05-12 2023-06-15 バイエル、アクチエンゲゼルシャフト 殺真菌性化合物としてのトリアジンおよびピリミジン（チオ）アミド化合物
EP3909950A1 (en) 2020-05-13 2021-11-17 Basf Se Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests
CN115803317B (zh) 2020-05-19 2025-07-15 拜耳作物科学股份公司 作为杀真菌化合物的氮杂双环(硫代)酰胺
CN116096230A (zh) 2020-06-02 2023-05-09 成对植物服务股份有限公司 控制分生组织大小以改良作物的方法
US12565489B2 (en) 2020-06-04 2026-03-03 Bayer Aktiengesellschaft Heterocyclyl pyrimidines and triazines as novel fungicides
BR112022024413A2 (pt) 2020-06-10 2023-02-07 Bayer Ag Heterociclos substituídos com azabiciclila como fungicidas inovadores
EP3945089A1 (en) 2020-07-31 2022-02-02 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors v
WO2021249800A1 (en) 2020-06-10 2021-12-16 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole compounds as fungicides
PY2149243A (es) 2020-06-17 2022-03-16 Pairwise Plants Srvices Inc Métodos para el control del tamaño del meristemo para la mejora de cultivos
CA3187296A1 (en) 2020-06-18 2021-12-23 Bayer Aktiengesellschaft 3-(pyridazin-4-yl)-5,6-dihydro-4h-1,2,4-oxadiazine derivatives as fungicides for crop protection
EP4167738A1 (en) 2020-06-18 2023-04-26 Bayer Aktiengesellschaft Composition for use in agriculture
UY39276A (es) 2020-06-19 2022-01-31 Bayer Ag Uso de compuestos de 1,3,4–oxadiazol–2–ilpirimidina para controlar microorganismos fitopatógenos, métodos de uso y composiciones.
UY39275A (es) 2020-06-19 2022-01-31 Bayer Ag 1,3,4-oxadiazol pirimidinas como fungicidas, procesos e intermediarios para su preparación, métodos de uso y usos de los mismos
BR112022025692A2 (pt) 2020-06-19 2023-02-28 Bayer Ag 1,3,4-oxadiazóis e seus derivados como fungicidas
BR112022025710A2 (pt) 2020-06-19 2023-03-07 Bayer Ag 1,3,4-oxadiazol pirimidinas e 1,3,4-oxadiazol piridinas como fungicidas
EP3929189A1 (en) 2020-06-25 2021-12-29 Bayer Animal Health GmbH Novel heteroaryl-substituted pyrazine derivatives as pesticides
EP4175961A1 (de) 2020-07-02 2023-05-10 Bayer Aktiengesellschaft Heterocyclen-derivate als schädlingsbekämpfungsmittel
CN111826387A (zh) * 2020-07-07 2020-10-27 黑龙江省农业科学院农产品质量安全研究所 一种转基因玉米品系鉴定阳性质粒分子
EP3960727A1 (en) 2020-08-28 2022-03-02 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors vi
EP3939961A1 (en) 2020-07-16 2022-01-19 Basf Se Strobilurin type compounds and their use for combating phytopathogenic fungi
WO2022017836A1 (en) 2020-07-20 2022-01-27 BASF Agro B.V. Fungicidal compositions comprising (r)-2-[4-(4-chlorophenoxy)-2-(trifluoromethyl)phenyl]-1- (1,2,4-triazol-1-yl)propan-2-ol
US20230313221A1 (en) * 2020-07-31 2023-10-05 Inari Agriculture Technology, Inc. Expedited breeding of transgenic crop plants by genome editing
US12529062B2 (en) 2020-07-31 2026-01-20 Inari Agriculture Technology, Inc. INIR12 transgenic maize
EP3970494A1 (en) 2020-09-21 2022-03-23 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors viii
WO2022033991A1 (de) 2020-08-13 2022-02-17 Bayer Aktiengesellschaft 5-amino substituierte triazole als schädlingsbekämpfungsmittel
WO2022053453A1 (de) 2020-09-09 2022-03-17 Bayer Aktiengesellschaft Azolcarboxamide als schädlingsbekämpfungsmittel
WO2022058327A1 (en) 2020-09-15 2022-03-24 Bayer Aktiengesellschaft Substituted ureas and derivatives as new antifungal agents
EP3974414A1 (de) 2020-09-25 2022-03-30 Bayer AG 5-amino substituierte pyrazole und triazole als schädlingsbekämpfungsmittel
US20230397607A1 (en) 2020-10-27 2023-12-14 BASF Agro B.V. Compositions comprising mefentrifluconazole
CN112266419B (zh) * 2020-10-29 2023-02-03 中国科学院微生物研究所 一种人工合成的抗除草剂蛋白
WO2022090069A1 (en) 2020-11-02 2022-05-05 Basf Se Compositions comprising mefenpyr-diethyl
WO2022090071A1 (en) 2020-11-02 2022-05-05 Basf Se Use of mefenpyr-diethyl for controlling phytopathogenic fungi
WO2022106304A1 (en) 2020-11-23 2022-05-27 BASF Agro B.V. Compositions comprising mefentrifluconazole
EP4259627B1 (en) 2020-12-14 2025-08-20 Basf Se Sulfoximine pesticides
EP3915971A1 (en) 2020-12-16 2021-12-01 Bayer Aktiengesellschaft Phenyl-s(o)n-phenylamidines and the use thereof as fungicides
WO2022129196A1 (en) 2020-12-18 2022-06-23 Bayer Aktiengesellschaft Heterobicycle substituted 1,2,4-oxadiazoles as fungicides
CA3205419A1 (en) 2020-12-18 2022-06-23 Bayer Aktiengesellschaft Use of dhodh inhibitor for controlling resistant phytopathogenic fungi in crops
WO2022129190A1 (en) 2020-12-18 2022-06-23 Bayer Aktiengesellschaft (hetero)aryl substituted 1,2,4-oxadiazoles as fungicides
WO2022129188A1 (en) 2020-12-18 2022-06-23 Bayer Aktiengesellschaft 1,2,4-oxadiazol-3-yl pyrimidines as fungicides
EP4036083A1 (de) 2021-02-02 2022-08-03 Bayer Aktiengesellschaft 5-oxy substituierte hetereozyklen, als schädlingsbekämpfungsmittel
EP4291641A1 (en) 2021-02-11 2023-12-20 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for modifying cytokinin oxidase levels in plants
EP4043444A1 (en) 2021-02-11 2022-08-17 Basf Se Substituted isoxazoline derivatives
WO2022182834A1 (en) 2021-02-25 2022-09-01 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for modifying root architecture in plants
BR112023019400A2 (pt) 2021-03-30 2023-12-05 Bayer Ag 3-(hetero)aril-5-clorodifluorometil-1,2,4-oxadiazol como fungicida
WO2022207496A1 (en) 2021-03-30 2022-10-06 Bayer Aktiengesellschaft 3-(hetero)aryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide
EP4333616A1 (en) 2021-05-03 2024-03-13 Basf Se Additives for enhancing the pesticidal effectiveness of pesticidal microorganisms
JP2024516278A (ja) 2021-05-06 2024-04-12 バイエル・アクチエンゲゼルシヤフト アルキルアミド置換環付加イミダゾール類及び殺虫剤としてのそれらの使用
CN117651702A (zh) 2021-05-12 2024-03-05 拜耳公司 作为害虫防治剂的2-(杂)芳基取代的稠合杂环衍生物
EP4091451A1 (en) 2021-05-17 2022-11-23 BASF Agro B.V. Compositions comprising mefentrifluconazole
IL308529A (en) 2021-05-18 2024-01-01 Basf Se New converted pyridines as fungicides
AU2022278417A1 (en) 2021-05-18 2023-11-30 Basf Se New substituted pyridines as fungicides
BR112023023989A2 (pt) 2021-05-18 2024-01-30 Basf Se Compostos, composição, método para combater fungos fitopatogênicos e semente
MX2023014775A (es) 2021-06-17 2024-01-15 Pairwise Plants Services Inc Modificacion de factores de transcripcion de la familia de factores reguladores del crecimiento en soja.
UY39827A (es) 2021-06-24 2023-01-31 Pairwise Plants Services Inc Modificación de genes de ubiquitina ligasa e3 hect para mejorar los rasgos de rendimiento
MX2023014883A (es) 2021-07-01 2024-02-12 Pairwise Plants Services Inc Metodos y composiciones para mejorar el desarrollo del sistema radicular.
EP4119547A1 (en) 2021-07-12 2023-01-18 Basf Se Triazole compounds for the control of invertebrate pests
AU2022321882A1 (en) 2021-08-02 2024-02-15 Basf Se (3-pirydyl)-quinazoline
CN117794908A (zh) 2021-08-02 2024-03-29 巴斯夫欧洲公司 (3-喹啉基)-喹唑啉
CA3229056A1 (en) 2021-08-12 2023-02-16 Pairwise Plants Services, Inc. Modification of brassinosteroid receptor genes to improve yield traits
PL4384016T3 (pl) 2021-08-13 2026-01-19 Bayer Aktiengesellschaft Kombinacje związków aktywnych i kompozycje grzybobójcze je zawierające
PY2270221A (es) 2021-08-17 2023-03-20 Pairwise Plants Services Inc Métodos y composiciones para modificar genes de histidina quinasa receptores de citoquinina en plantas
EP4140986A1 (en) 2021-08-23 2023-03-01 Basf Se Pyrazine compounds for the control of invertebrate pests
WO2023025682A1 (en) 2021-08-25 2023-03-02 Bayer Aktiengesellschaft Novel pyrazinyl-triazole compounds as pesticides
EP4140995A1 (en) 2021-08-27 2023-03-01 Basf Se Pyrazine compounds for the control of invertebrate pests
EP4395531A1 (en) 2021-08-30 2024-07-10 Pairwise Plants Services, Inc. Modification of ubiquitin binding peptidase genes in plants for yield trait improvement
EP4144739A1 (de) 2021-09-02 2023-03-08 Bayer Aktiengesellschaft Anellierte pyrazole als schädlingsbekämpfungsmittel
AR126938A1 (es) 2021-09-02 2023-11-29 Pairwise Plants Services Inc Métodos y composiciones para mejorar la arquitectura de las plantas y los rasgos de rendimiento
EP4151631A1 (en) 2021-09-20 2023-03-22 Basf Se Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests
EP4405377A1 (en) 2021-09-21 2024-07-31 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for reducing pod shatter in canola
EP4413127A1 (en) 2021-10-04 2024-08-14 Pairwise Plants Services, Inc. Methods for improving floret fertility and seed yield
UY39970A (es) 2021-10-07 2023-04-28 Pairwise Plants Services Inc Métodos para mejorar la fertilidad de la flor y el rendimiento de semillas
WO2023072670A1 (en) 2021-10-28 2023-05-04 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors x
WO2023072671A1 (en) 2021-10-28 2023-05-04 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors ix
EP4426677A1 (en) 2021-11-03 2024-09-11 Bayer Aktiengesellschaft Bis(hetero)aryl thioether (thio)amides as fungicidal compounds
WO2023099445A1 (en) 2021-11-30 2023-06-08 Bayer Aktiengesellschaft Bis(hetero)aryl thioether oxadiazines as fungicidal compounds
EP4194453A1 (en) 2021-12-08 2023-06-14 Basf Se Pyrazine compounds for the control of invertebrate pests
AR127904A1 (es) 2021-12-09 2024-03-06 Pairwise Plants Services Inc Métodos para mejorar la fertilidad de floretes y el rendimiento de semillas
EP4198033A1 (en) 2021-12-14 2023-06-21 Basf Se Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests
EP4198023A1 (en) 2021-12-16 2023-06-21 Basf Se Pesticidally active thiosemicarbazone compounds
AR128372A1 (es) 2022-01-31 2024-04-24 Pairwise Plants Services Inc Supresión de la respuesta de evitación de la sombra en las plantas
CN119012913A (zh) 2022-02-01 2024-11-22 环球化学股份有限公司 控制害虫的方法和组合物
WO2023148030A1 (en) 2022-02-01 2023-08-10 Globachem Nv Methods and compositions for controlling pests in corn
EP4479392A1 (en) 2022-02-17 2024-12-25 Basf Se Pesticidally active thiosemicarbazone compounds
EP4238971A1 (en) 2022-03-02 2023-09-06 Basf Se Substituted isoxazoline derivatives
US20240327858A1 (en) 2022-03-02 2024-10-03 Pairwise Plants Services, Inc. Modification of brassinosteroid receptor genes to improve yield traits
EP4499842A1 (en) 2022-03-31 2025-02-05 Pairwise Plants Services, Inc. Early flowering rosaceae plants with improved characteristics
US20230357789A1 (en) 2022-04-07 2023-11-09 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for improving resistance to fusarium head blight
UY40232A (es) 2022-04-21 2023-11-15 Pairwise Plants Services Inc Métodos y composiciones para mejorar rasgos de rendimiento
PY2331827A (es) 2022-05-02 2023-11-08 Pairwise Plants Services Inc Métodos y composiciones para mejorar el rendimiento y la resistencia a enfermedades
KR20250004024A (ko) 2022-05-03 2025-01-07 바이엘 악티엔게젤샤프트 원치 않는 미생물을 방제하기 위한 (5s)-3-[3-(3-클로로-2-플루오로페녹시)-6-메틸피리다진-4-일]-5-(2-클로로-4-메틸벤질)-5,6-디히드로-4h-1,2,4-옥사디아진의 용도
CN119522219A (zh) 2022-05-03 2025-02-25 拜耳公司 (5s)-3-[3-(3-氯-2-氟苯氧基)-6-甲基哒嗪-4-基]-5-(2-氯-4-甲基苄基)-5,6-二氢-4h-1,2,4-噁二嗪的晶型
UY40255A (es) 2022-05-05 2023-11-15 Pairwise Plants Services Inc Métodos y composiciones para modificar la arquitectur radicular y/o mejorar los rangos de rendimient
UY40326A (es) 2022-06-27 2023-12-29 Pairwise Plants Services Inc Métodos y composiciones para modificar el escape a la sombra en plantas
AR129748A1 (es) 2022-06-29 2024-09-25 Pairwise Plants Services Inc Métodos y composiciones para controlar el tamaño del meristemo para el mejoramiento de cultivos
UY40336A (es) 2022-06-29 2023-12-29 Pairwise Plants Services Inc Métodos y composiciones para controlar el tamaño del meristemo para el mejoramiento de cultivos
AU2023317620A1 (en) 2022-08-02 2025-02-13 Basf Se Pyrazolo pesticidal compounds
US20240043857A1 (en) 2022-08-04 2024-02-08 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for improving yield traits
US20240060081A1 (en) 2022-08-11 2024-02-22 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for controlling meristem size for crop improvement
EP4584282A1 (en) 2022-09-08 2025-07-16 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for improving yield characteristics in plants
EP4342885A1 (en) 2022-09-20 2024-03-27 Basf Se N-(3-(aminomethyl)-phenyl)-5-(4-phenyl)-5-(trifluoromethyl)-4,5-dihydroisoxazol-3-amine derivatives and similar compounds as pesticides
EP4295688A1 (en) 2022-09-28 2023-12-27 Bayer Aktiengesellschaft Active compound combination
WO2024068519A1 (en) 2022-09-28 2024-04-04 Bayer Aktiengesellschaft 3-(hetero)aryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide
WO2024068517A1 (en) 2022-09-28 2024-04-04 Bayer Aktiengesellschaft 3-(hetero)aryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide
WO2024068520A1 (en) 2022-09-28 2024-04-04 Bayer Aktiengesellschaft 3-(hetero)aryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide
WO2024068518A1 (en) 2022-09-28 2024-04-04 Bayer Aktiengesellschaft 3-heteroaryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide
EP4361126A1 (en) 2022-10-24 2024-05-01 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors xv
EP4619399A1 (en) 2022-11-16 2025-09-24 Basf Se New substituted tetrahydrobenzoxazepine
CN120202195A (zh) 2022-11-16 2025-06-24 巴斯夫欧洲公司 作为杀真菌剂的取代的苯并二氮杂䓬类
CN120202194A (zh) 2022-11-16 2025-06-24 巴斯夫欧洲公司 作为杀真菌剂的取代的四氢苯并二氮杂䓬
EP4619393A1 (en) 2022-11-16 2025-09-24 Basf Se Substituted benzodiazepines as fungicides
EP4385326A1 (en) 2022-12-15 2024-06-19 Kimitec Biogorup Biopesticide composition and method for controlling and treating broad spectrum of pests and diseases in plants
UY40567A (es) 2022-12-19 2024-06-28 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Genes de toxina de insecto y métodos de uso de estos
EP4389210A1 (en) 2022-12-21 2024-06-26 Basf Se Heteroaryl compounds for the control of invertebrate pests
WO2024165343A1 (en) 2023-02-08 2024-08-15 Basf Se New substituted quinoline compounds for combatitng phytopathogenic fungi
WO2024173622A1 (en) 2023-02-16 2024-08-22 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for modifying shade avoidance in plants
UY40661A (es) 2023-03-02 2024-10-15 Pairwise Plants Services Inc Métodos y composiciones para modificar la evitación de la sombra en plantas
UY40664A (es) 2023-03-09 2024-10-15 Pairwise Plants Services Inc Modificación de genes de la vía de señalización de brasinoesteroide para mejorar rasgos de rendimien
KR20250156732A (ko) 2023-03-17 2025-11-03 바스프 에스이 식물병원성 진균을 퇴치하기 위한 치환된 피리딜/피라지딜 디히드로벤조티아제핀 화합물
EP4455137A1 (en) 2023-04-24 2024-10-30 Basf Se Pyrimidine compounds for the control of invertebrate pests
AU2023445097A1 (en) 2023-04-26 2025-11-06 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors xvi
PY2439028A (es) 2023-05-18 2025-06-18 Monsanto Technology Llc Métodos y composiciones para mejorar las características de rendimiento de las plantas
EP4467535A1 (en) 2023-05-25 2024-11-27 Basf Se Lactam pesticidal compounds
WO2025008447A1 (en) 2023-07-05 2025-01-09 Bayer Aktiengesellschaft Composition for use in agriculture
CN121399131A (zh) 2023-07-05 2026-01-23 巴斯夫欧洲公司 用于对抗植物病原性真菌的取代的吡啶基/吡嗪基二氢吡咯并三嗪化合物
WO2025008446A1 (en) 2023-07-05 2025-01-09 Bayer Aktiengesellschaft Composition for use in agriculture
CN121464139A (zh) 2023-07-05 2026-02-03 巴斯夫欧洲公司 用于对抗植物病原性真菌的取代的喹啉基/喹喔啉基二氢吡咯并三嗪化合物
EP4488273A1 (en) 2023-07-06 2025-01-08 Basf Se Triazole compounds for the control of invertebrate pests
EP4488269A1 (en) 2023-07-06 2025-01-08 Basf Se Triazole compounds for the control of invertebrate pests
EP4488270A1 (en) 2023-07-06 2025-01-08 Basf Se Triazole compounds for the control of invertebrate pests
PY2455894A (es) 2023-07-18 2025-03-28 Pairwise Plants Services Inc Métodos y composiciones para modificar la arquitectura radicular en plantas
AR133310A1 (es) 2023-07-27 2025-09-17 Pairwise Plants Services Inc Métodos y composiciones para modificar rasgos de rendimiento de las plantas
WO2025026738A1 (en) 2023-07-31 2025-02-06 Bayer Aktiengesellschaft 6-[5-(ethylsulfonyl)-1-methyl-1h-imidazol-4-yl]-7-methyl-3-(pentafluoroethyl)-7h-imidazo[4,5-c]pyridazine derivatives as pesticides
WO2025026815A1 (en) 2023-08-01 2025-02-06 Globachem Nv Insecticidal mixtures
EP4501112A1 (en) 2023-08-01 2025-02-05 Globachem NV Plant defense elicitors
CN121693504A (zh) 2023-08-09 2026-03-17 拜耳公司 作为新杀真菌剂的氮杂联芳基取代的4,5-二氢-1h-2,4,5-噁二嗪
WO2025031843A1 (en) 2023-08-09 2025-02-13 Basf Se New substituted benzoxazine picolinonitrile compounds for combatting phytopathogenic fungi
CN121693501A (zh) 2023-08-09 2026-03-17 拜耳公司 作为新的杀菌剂的哒嗪-4-基噁二嗪
WO2025031842A1 (en) 2023-08-09 2025-02-13 Basf Se New substituted benzoxazepine picolinonitrile compounds for combatting phytopathogenic fungi
WO2025064734A1 (en) 2023-09-21 2025-03-27 Pairwise Plants Services, Inc. Early flowering black raspberry plants with improved characteristics
WO2025068226A2 (en) 2023-09-29 2025-04-03 Basf Se Methods for protecting plants using mixtures comprising sulfur and selected terpenes
WO2025078181A1 (en) 2023-10-09 2025-04-17 Basf Se Fungicidal mixture comprising substituted pyridines
WO2025078183A1 (en) 2023-10-09 2025-04-17 Basf Se Fungicidal mixture comprising substituted quinazolyl quinolines
WO2025078128A1 (en) 2023-10-11 2025-04-17 Bayer Aktiengesellschaft Pyridazin-3-one-4-yloxadiazines as novel fungicides
US20250122522A1 (en) 2023-10-11 2025-04-17 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for improving crop yield traits
WO2025098876A1 (en) 2023-11-10 2025-05-15 Bayer Aktiengesellschaft Active compound combinations having insecticidal/acaricidal properties
WO2025098874A1 (en) 2023-11-10 2025-05-15 Bayer Aktiengesellschaft Active compound combinations having fungicidal/insecticidal/acaricidal properties
WO2025098875A1 (en) 2023-11-10 2025-05-15 Bayer Aktiengesellschaft Active compound combinations having insecticidal/acaricidal properties
WO2025131902A1 (en) 2023-12-21 2025-06-26 Basf Se Methods for protecting plants using mixtures comprising sulfur, selected terpenes and phosphites.
EP4574819A1 (en) 2023-12-22 2025-06-25 Basf Se Diazinone compounds for the control of invertebrate pests
WO2025168620A1 (en) 2024-02-07 2025-08-14 Bayer Aktiengesellschaft Heteroaryl-substituted 4,5-dihydro-1h-2,4,5-oxadiazines as novel fungicides
US20250270578A1 (en) 2024-02-22 2025-08-28 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for improving yield characteristics in plants
WO2025180964A1 (en) 2024-03-01 2025-09-04 Basf Se New substituted benzoxazepine compounds for combatting phytopathogenic fungi
WO2025186065A1 (en) 2024-03-05 2025-09-12 Bayer Aktiengesellschaft Heteroaryl-substituted (aza)quinoxaline derivatives as pesticides
WO2025190927A1 (en) 2024-03-14 2025-09-18 Bayer Aktiengesellschaft Active compound combinations having insecticidal/acaricidal properties
WO2025211272A1 (en) 2024-04-04 2025-10-09 Nihon Nohyaku Co., Ltd. Pesticidal mixtures comprising an ethylsulfone compound
EP4640052A1 (en) 2024-04-24 2025-10-29 Basf Se Mixtures of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors with at least one further pesticide i
WO2025223904A1 (en) 2024-04-24 2025-10-30 Basf Se Mixtures of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors with at least one further pesticide i
EP4652843A1 (en) 2024-05-21 2025-11-26 Kimitec Biogroup S.L Biopesticide composition, procedure of obtain thereof, and method for controlling and treating broad spectrum of pests in plants
EP4652842A1 (en) 2024-05-21 2025-11-26 Kimitec Biogroup S.L Biopesticide composition, procedure of obtain thereof, and method for controlling and treating broad spectrum of pests, diseases and weeds in plants
WO2025257121A1 (en) 2024-06-12 2025-12-18 Bayer Aktiengesellschaft Active compound combinations having insecticidal/acaricidal properties
WO2025257122A1 (en) 2024-06-12 2025-12-18 Bayer Aktiengesellschaft Active compound combinations having insecticidal/acaricidal properties
WO2026002763A1 (en) 2024-06-26 2026-01-02 Basf Se Pesticidal mixtures and applications of beauveria bassiana and dimpropyridaz
WO2026012814A1 (en) 2024-07-10 2026-01-15 Basf Se Compositions and methods to enhance crop yield and plant health
WO2026021911A1 (en) 2024-07-23 2026-01-29 Basf Se New substituted benzothiazine pyridine compounds for combatting phytopathogenic fungi
WO2026021910A1 (en) 2024-07-23 2026-01-29 Basf Se New substituted benzothiazine pyridine compounds for combatting phytopathogenic fungi
WO2026021912A1 (en) 2024-07-23 2026-01-29 Basf Se New substituted benzothiazine pyridine compounds for combatting phytopathogenic fungi
WO2026021909A1 (en) 2024-07-23 2026-01-29 Basf Se New substituted benzothiazine pyridine compounds for combatting phytopathogenic fungi
WO2026027375A1 (de) 2024-07-29 2026-02-05 Bayer Aktiengesellschaft Hydroxy-dihydropyridinon carboxamide als schädlingsbekämpfungsmittel
WO2026027723A1 (en) 2024-08-01 2026-02-05 Syngenta Crop Protection Ag Herbicide resistant plants
WO2026037853A1 (en) 2024-08-14 2026-02-19 Basf Se Benzoxazole derivatives as pesticidal compounds
WO2026041702A1 (en) 2024-08-21 2026-02-26 Basf Se Benzoxazole derivatives as pesticidal compounds
WO2026057375A1 (en) 2024-09-11 2026-03-19 Basf Se Mixtures of ambruticin with at least one further pesticide
EP4710766A1 (en) 2024-09-11 2026-03-18 Basf Se Mixtures of ambruticin with at least one further pesticide

Family Cites Families (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4683195A (en) 1986-01-30 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences
US4683202A (en) 1985-03-28 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying nucleic acid sequences
US5164316A (en) 1987-01-13 1992-11-17 The University Of British Columbia DNA construct for enhancing the efficiency of transcription
US5641876A (en) 1990-01-05 1997-06-24 Cornell Research Foundation, Inc. Rice actin gene and promoter
US5633435A (en) 1990-08-31 1997-05-27 Monsanto Company Glyphosate-tolerant 5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthases
US5593874A (en) * 1992-03-19 1997-01-14 Monsanto Company Enhanced expression in plants
US5362865A (en) 1993-09-02 1994-11-08 Monsanto Company Enhanced expression in plants using non-translated leader sequences
US5853973A (en) * 1995-04-20 1998-12-29 American Cyanamid Company Structure based designed herbicide resistant products
WO1998044140A1 (en) * 1997-04-03 1998-10-08 Dekalb Genetics Corporation Glyphosate resistant maize lines
US6040497A (en) * 1997-04-03 2000-03-21 Dekalb Genetics Corporation Glyphosate resistant maize lines
US5948956A (en) 1997-10-16 1999-09-07 Oms Investments, Inc. Transgenic plants and method for node segment transformation
DE69941009D1 (de) 1998-11-17 2009-07-30 Monsanto Technology Llc Phosphonat metabolisierende pflanzen
BRPI0100752B1 (pt) * 2000-06-22 2015-10-13 Monsanto Co moléculas e pares de moléculas de dna, processos para detectar molécula de dna e para criar um traço tolerante a glifosato em plantas de milho, bem como kit de detecção de dna
CZ300073B6 (cs) * 2000-09-29 2009-01-21 Monsanto Technology Llc Zpusob vylepšení tolerance vuci glyfosátu u rostliny pšenice, její bunka, její DNA, dvojice molekulDNA primeru, zpusoby její detekce, zpusob šírení vlastnosti tolerance vuci glyfosátu u rostlin, DNAdetekcní kit
US7569747B2 (en) * 2002-12-05 2009-08-04 Monsanto Technology Llc Bentgrass event ASR-368 and compositions and methods for detection thereof

Also Published As

Publication number Publication date
YU43701A (sh) 2003-12-31
HU226193B1 (en) 2008-06-30
CZ20012203A3 (cs) 2002-02-13
US6825400B2 (en) 2004-11-30
PL348225A1 (en) 2002-01-02
DK1167531T3 (da) 2006-08-14
AR031665A1 (es) 2003-10-01
PT1582592E (pt) 2010-06-16
BG105637A (en) 2002-04-30
SI1167531T1 (sl) 2006-10-31
HU0800015D0 (en) 2008-03-28
EP1582592B1 (en) 2010-05-05
ID30575A (id) 2001-12-27
US9701980B2 (en) 2017-07-11
EP2210951B1 (en) 2016-01-06
EP2210951A3 (en) 2011-01-05
US20100017902A1 (en) 2010-01-21
HU0102569D0 (en) 2001-08-28
BRPI0100752B1 (pt) 2015-10-13
DE60118660D1 (de) 2006-05-24
CN101186918A (zh) 2008-05-28
SI2210951T1 (sl) 2016-04-29
BG65315B1 (bg) 2008-01-31
CN1332246A (zh) 2002-01-23
CA2349841C (en) 2012-12-11
DE60142092D1 (de) 2010-06-17
US20020013960A1 (en) 2002-01-31
MXPA01006407A (es) 2004-05-11
SI1582592T1 (sl) 2010-08-31
CA2349841A1 (en) 2001-12-22
CZ305949B6 (cs) 2016-05-18
US7582434B2 (en) 2009-09-01
DK1582592T3 (da) 2010-08-16
AR053231A2 (es) 2007-04-25
US7193071B2 (en) 2007-03-20
RS49990B (sr) 2008-09-29
AR066163A2 (es) 2009-07-29
CY1106109T1 (el) 2011-06-08
BR0100752A (pt) 2002-02-13
CZ299722B6 (cs) 2008-10-29
HU230814B1 (hu) 2018-06-28
ES2343252T3 (es) 2010-07-27
EP1167531A1 (en) 2002-01-02
US20040139493A1 (en) 2004-07-15
US20070056056A1 (en) 2007-03-08
EP2210951A2 (en) 2010-07-28
UY26788A1 (es) 2001-10-25
CY1110083T1 (el) 2015-01-14
US8273959B2 (en) 2012-09-25
DE60118660T2 (de) 2007-03-29
EP1582592A1 (en) 2005-10-05
CN100350043C (zh) 2007-11-21
BR122013026754B1 (pt) 2018-02-27
US20070292854A1 (en) 2007-12-20
ATE323168T1 (de) 2006-04-15
US8722969B2 (en) 2014-05-13
US20140304849A1 (en) 2014-10-09
HUP0102569A2 (hu) 2003-08-28
DK2210951T3 (en) 2016-03-21
US20120329654A1 (en) 2012-12-27
AR065690A2 (es) 2009-06-24
US20170327838A1 (en) 2017-11-16
EP1167531B1 (en) 2006-04-12
ATE466945T1 (de) 2010-05-15
ES2564464T3 (es) 2016-03-22
ES2261330T3 (es) 2006-11-16
PT1167531E (pt) 2006-07-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
PL199928B1 (pl) Cząsteczka DNA umożliwiająca identyfikację rośliny kukurydzy tolerującej glifosat, para cząsteczek DNA, sposób wykrywania obecności cząsteczki DNA, cząsteczka DNA, sposób wbudowywania cechy tolerancji na glifosat, zestaw do wykrywania DNA, roślina kukurydzy tolerująca glifosat, transgeniczna komórka roślinna z tolerancją glifosatu, sposób wytwarzania rośliny kukurydzy i sposób hodowli rośliny kukurydzy
JP6167075B2 (ja) ダイズ事象ｍｏｎ８９７８８およびその検出方法
CN103088017B (zh) 棉花事件mon 88913及其组合物和检测方法
AU2002215363B2 (en) Cotton event PV-GHGT07(1445) and compositions and methods for detection thereof
AU2002215363A1 (en) Cotton event PV-GHGT07(1445) and compositions and methods for detection thereof
ME00840B (me) Dnk sekvence vezane za kukuruzni transformant pv-zmgt 32 (nk 603) i preparati i metode za njegovu detekciju