PL202372B1 - Pochodne S-nitrozotiolowe penicyloaminy lub glutationu oraz kompozycja farmaceutyczna je zawierająca do leczenia zaburzenia czynności krążenia - Google Patents

Pochodne S-nitrozotiolowe penicyloaminy lub glutationu oraz kompozycja farmaceutyczna je zawierająca do leczenia zaburzenia czynności krążenia

Info

Publication number
PL202372B1
PL202372B1 PL349006A PL34900600A PL202372B1 PL 202372 B1 PL202372 B1 PL 202372B1 PL 349006 A PL349006 A PL 349006A PL 34900600 A PL34900600 A PL 34900600A PL 202372 B1 PL202372 B1 PL 202372B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
amino
group
glycine
acetyl
compound
Prior art date
Application number
PL349006A
Other languages
English (en)
Other versions
PL349006A1 (en
Inventor
Moliner José Repolles
Perez-Rasilla Eduardo Salas
Coy Francisco Pubill
Riudavets Juan-Antonio Cerda
Rofes Cristina Negrie
Llorente Lydia Cabeza
Siso Alicia Ferrer
Adroher Nuria Trias
Banus Marcel.Li Carbo
Moreno Jesus Murat
Llaguno Pedro Michelena
Original Assignee
Lacer
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Lacer filed Critical Lacer
Publication of PL349006A1 publication Critical patent/PL349006A1/xx
Publication of PL202372B1 publication Critical patent/PL202372B1/pl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D309/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom, not condensed with other rings
    • C07D309/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom, not condensed with other rings having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D309/08—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom, not condensed with other rings having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/08—Vasodilators for multiple indications
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C381/00—Compounds containing carbon and sulfur and having functional groups not covered by groups C07C301/00 - C07C337/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D211/00—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings
    • C07D211/04—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D211/06—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D211/36—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D211/40—Oxygen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D211/00—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings
    • C07D211/04—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D211/06—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D211/36—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D211/54—Sulfur atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D211/00—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings
    • C07D211/04—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D211/06—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D211/36—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D211/56—Nitrogen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C07K5/0215—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing natural amino acids, forming a peptide bond via their side chain functional group, e.g. epsilon-Lys, gamma-Glu
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Hydrogenated Pyridines (AREA)
  • Pyrane Compounds (AREA)
  • Nitrogen- Or Sulfur-Containing Heterocyclic Ring Compounds With Rings Of Six Or More Members (AREA)

Abstract

Wynalazek obejmuje pochodn a S-nitrozotiolow a penicy- loaminy lub glutationu i jej farmaceutycznie akceptowalne sole, odpowiadaj ac a ogólnemu wzorowi (I), w którym A i B oznaczaj a grupy fenylowe lub razem tworz a grup e -CH 2 -Q- CH 2 - stanowi ac a pier scie n sk ladaj acy si e z 6 jednostek, w której Q oznacza atom tlenu, lub grup e N-R 3 , w której R 3 oznacza atom wodoru lub grup e alkilow a C 1 -C 4 ; R 1 oznacza grup e acylow a, która mo ze by c alifatyczn a grup a acylow a C 1 -C 5 lub grup e kwasu glutaminowego zwi azan a przez jej nieaminokwasow a grup e karboksylow a; R 2 oznacza grup e hydroksylow a lub grup e glicynow a zwi azan a przez wi azanie peptydowe; z tym za lozeniem, ze je sli R 1 oznacza alifatycz- na grup e acylow a wtedy R 2 oznacza grup e hydroksylow a, a je sli R 1 oznacza grup e kwasu glutaminowego wtedy R 2 oznacza grup e glicynow a. Wynalazek równie z obejmuje kompozycj e farmaceutyczn a, zawieraj ac a jako sk ladnik aktywny zwi azek wed lug wynalazku ewentualnie razem z fizjologicznie dopuszczalnymi no snikami, zaróbkami, srodkami sieciuj acymi i/lub stabilizatorami. Kompozycja wed lug wynalazku przeznaczona jest do leczenia zaburze- nia czynno sci kr azenia, zw laszcza zaburzenia czynno sci uk ladu sercowo-naczyniowego. PL PL PL PL

Description

Opis wynalazku
Wynalazek dotyczy pochodnych S-nitrozotiolowych penicyloaminy lub glutationu oraz kompozycji farmaceutycznej je zawierającej. Pochodne te dają efekt rozszerzania naczyń i inhibitują agregację płytek, przez co są użyteczne do wytwarzania leków do leczenia zaburzenia czynności układu krążenia, zwłaszcza na poziomie sercowo-naczyniowym.
Dobrze wiadomo, że związki zdolne do uwalniania tlenku azotu (NO) do organizmu wykazują w wielu przypadkach pewien rodzaj oddziaływania na układ naczyniowy np. działanie rozszerzają ce naczynia lub hamowanie agregacji płytek, co czyni je potencjalnie użytecznymi w leczeniu różnych zaburzeń związanych z zaburzeniami czynności krążenia.
Ponadto opisano, że konkretne pochodne, które zawierają grupę S-nitrozotiolową mają, z medycznego punktu widzenia, korzystną charakterystykę dzięki temu, że są zdolne do uwalniania NO w organizmie.
Radomski i inni, Br.J. Pharmacol. (1992) 107, 745-749, opisuje, że związki S-nitrozoglutationowe (GSNO) są zdolne do inhibitowania aktywności płytek.
Golino i inni, Circulation Research, 71, No 6 (1992) opisuje, że S-nitrozocysteina jest zdolna do inhibitowania aktywności płytek, co skutkuje działaniem przeciw zakrzepicy.
Smith i inni, Met. Find. Exp. Cline. Pharmacy. (1994), 16, 5 opisuje, że GSNO daje silny efekt rozluźniający tętniczki.
WO 95/12394 opisuje zastosowanie S-nitrozowych związków addycyjnych peptydów, między innymi S-nitrozo-N-acetylopenicylinoaminy, (SNAP) jako środków zapobiegających zapaleniu naczyń pochodzenia urazowego.
WO 95/07691 opisuje zastosowanie różnych nitrozotioli w szczególności GSNO w leczeniu i zapobieganiu działania płytek i tworzenia zakrzepicy na uszkodzonej powierzchni naczynia.
WO 93/09806 opisuje S-nitrozowane białka lub grupy aminokwasowe zdolne do uwalniania NO, które dają efekt rozluźniający umięśnienie i mają hamujący wpływ na agregację płytek.
Europejski opis patentowy EP-B1-412699 opisuje S-nitrozotiole odpowiadające następującemu wzorowi:
i ich zastosowanie jako środków terapeutycznych przeciwko chorobom naczyniowo-sercowym, w szczególnoś ci jako ś rodków przeciw nadciś nieniu (podwyż szone ciś nienie krwi) i jako ś rodków do leczenia dusznicy bolesnej. Liczba możliwych związków, jakie obejmuje ten wzór jest olbrzymia a opis wyraźnie opisuje zaledwie kilkadziesiąt takich produktów. Co więcej ujawnia tylko dane dotyczące ich ogólnego działania rozluźniającego naczynia, a nic nie wspomina o aktywności płytek.
S-nitrozotiole opisane przez wyżej wymienione dokumenty nie rozwiązują wszystkich skomplikowanych problemów w leczeniu zaburzeń naczyniowych, zwłaszcza na poziomie naczyniowo-sercowym. Z tego powodu konieczny jest postęp w dziedzinie związków, które będą silniejsze i bardziej skuteczne.
Przedmiotem wynalazku są pochodne S-nitrozotiolowe penicylinoaminy lub glutationu, które mają silny efekt rozszerzania naczyń i bardzo skutecznie inhibitują agregację płytek.
Ponadto wynalazek dotyczy kompozycji farmaceutycznej zawierającej pochodną S-nitrozotiolową penicylinoaminy lub glutationu do leczenia zaburzeń związanych z zaburzeniami działania układu krążenia, zwłaszcza na poziomie sercowo-naczyniowym.
Wynalazek obejmuje pochodną S-nitrozotiolową penicyloaminy lub glutationu i jej farmaceutycznie akceptowalne sole odpowiadająca ogólnemu wzorowi (I)
PL 202 372 B1
w którym
A i B oznaczają grupy fenylowe lub razem tworzą grupę -CH2-Q-CH2- stanowiącą pierścień składający się z 6 jednostek, w której Q oznacza atom tlenu, lub grupę N-R3, w której R3 oznacza atom wodoru lub grupę alkilową C1-C4;
R1 oznacza grupę acylową, która może być alifatyczną grupą acylową C1-C5 lub grupę kwasu glutaminowego związaną przez jej nieaminokwasową grupę karboksylową;
R2 oznacza grupę hydroksylową lub grupę glicynową związaną przez wiązanie peptydowe; z tym założeniem, że jeśli R1 oznacza alifatyczną grupę acylową wtedy R2 oznacza grupę hydroksylową, a jeśli R1 oznacza grupę kwasu glutaminowego wtedy R2 oznacza grupę glicynową.
W korzystnym rozwiązaniu wynalazku pochodna S-nitrozotiolowa penicyloaminy lub glutationu odpowiada następującemu ogólnemu wzorowi (II)
w którym A i B mają znaczenia podane wyż ej i R4 oznacza grupę alkilową C1-C4.
Korzystne związki według wynalazku obejmują kwas N-acetylo-2-amino-2-[4-(4-S-nitrozomerkaptotetrahydropirano)]octowy (1)
kwas N-acetylo-2-amino-2-[4-(4-S-nitrozomerkapto-1-metylopiperydyno)]octowy (2)
PL 202 372 B1 kwas N-acetylo-2-amino-3-benzylo-3-S-nitrozomerkapto-4-fenylo-butanowy (3).
Wynalazek. Obejmuje korzystnie S-nitrozotiole odpowiadające następującemu ogólnemu wzorowi (III)
w którym A i B mają wyżej podane znaczenia.
Do korzystnych związków według wynalazku zalicza się N[N-Y-L-glutamylo-2-amino-2-(4-(4-S-nitrozomerkapto)tetrahydropirano))acetylo]-glicynę (4)
N[N-Y-L-glutamylo-2-amino-2-(4-(4-S-nitrozomerkapto-1-metylopiperydyno))acetylo]-glicynę (5)
N[N-Y-L-glutamylo-2-amino-3-benzylo-3-(S-nitrozomerkapto)-4-fenylobutanoilo]-glicynę (6)
PL 202 372 B1
Kompozycja farmaceutyczna według wynalazku, charakteryzuje się tym, że jako składnik aktywny zawiera związek o wzorze (I) ewentualnie razem z fizjologicznie dopuszczalnymi nośnikami, zaróbkami, środkami sieciującymi i/lub stabilizatorami.
Kompozycja według wynalazku przeznaczona jest do leczenia zaburzenia czynności krążenia, zwłaszcza do leczenia zaburzenia czynności układu sercowo-naczyniowego.
Dla fachowca jest oczywiste, że związki według wynalazku obejmują chiralne centra i to pozwala na rozróżnienie możliwych izomerów i/lub ich mieszanin. Rozumie się, że zarówno mieszaniny izomerów jak i czyste izomery wchodzą w zakres przedmiotu wynalazku. Te drugie można otrzymać z mieszanin izomerów konwencjonalnymi technikami dobrze znanymi ekspertom lub przez dobrze im znaną asymetryczną syntezę.
Związki według wynalazku można otrzymać w różny sposób a konkretny sposób będzie zasadniczo zależał od ich podstawowej struktury.
Na przykład związki o ogólnym wzorze (II) można otrzymać według następujących etapów przedstawionych na poniższym schemacie.
Np. wychodzi się z chlorohydratów aminokwasów, które mogą być otrzymane według znanych metod (patrz np. opis patentowy DE-A-3023830 i DE-A-2801849), następnie prowadzi się acylowanie grupy azotowej aminokwasu konwencjonalnymi technikami, np. chlorkiem kwasowym i w końcowym etapie wprowadza się grupę nitrozową do siarki grupy merkaptanowej, także stosując konwencjonalne techniki. Jeśli chodzi o związki o ogólnym wzorze (III) można je otrzymać według kolejnych etapów
PL 202 372 B1
Wychodząc z chlorohydratów aminokwasów jak w powyższym przypadku, przeprowadzono następnie zabezpieczenie grupy merkapto przez utworzenie tioeteru p-metylobenzenu następnie zabezpieczono azot aminokwasu znaną technika Boc a następnie utworzono tripeptyd z resztami kwasu glutaminowego glicyny (C-końcowy aminokwas) w stanie stałym znanymi technikami (patrz np. Barany, G. et al., The Peptides, 2,1, Gross, E. Mwienhofer, Eds. Academic Press, NY (1980); Stewart, J.M. et al., Solid Phase Peptide Synthesis, Freeman, San Francisco, CA (1969); Bodanszky, M.Et al., Peptide Synthesis, 2nd ed., Wiley, NY (1976)).
Tworzenie tripeptydów obejmuje następujące etapy:
a) umieszczenie C-końcowego aminokwasu glicyny (Gly) w postaci pochodnej tert-butoksykarbonylu (Boc) w żywicy p-metylobenzylohydryloamina/polistyren.
b) usunięcie grupy Boc kwasem trifluorooctowym i neutralizacja.
c) włączenie związku pośredniego zabezpieczonego modyfikowanego aminokwasu.
d) oszacowanie reakcji sprzęgania przez ninhydrynę Kaiser, E. et al., Anal. Biochem., 34, 595 (1970)).
e) powtórzenie powyższych etapów dla reszty kwasu γ-glutaminowego (γ-Glu), która jest włączona jako pochodna Boc lub (Boc-Glu-Obzl) chroniona benzylem.
f) acydoliza bezwodnym HF do odbezpieczenia tripeptydu i uwolnienia go z żywicy.
g) oczyszczanie i charakteryzowanie końcowego produktu.
Gdy utworzy się tripeptyd poddaje się go, ostatecznemu etapowi, nitrozowaniu grupy merkapto uwolnionej z grupy zabezpieczającej.
Przeprowadzone testy pokazują, że nowe S-nitrozowane związki według wynalazku mają własności rozszerzania naczyń, które są, co najmniej porównywalne z właściwościami uzyskanymi z GSNO, a w niektórych przypadkach znacznie lepsze. Ponadto mają zdolność inhibitowania agregacji płytek podobną lub lepszą w porównaniu z GSNO, w niektórych przypadkach znacznie lepszą.
A zatem związki według wynalazku można stosować w bardzo efektywny sposób do produkcji leku o działaniu rozszerzającym naczynia i przeciwskrzepowym do leczenia zaburzeń w funkcjonowaniu układu krążenia, zwłaszcza na poziomie sercowo-naczyniowym i wieńcowym.
W konsekwencji związki o ogólnym wzorze (I) jak również ich farmaceutycznie akceptowalne sole można wykorzystać za pomocą konwencjonalnych technik farmaceutycznych do wytwarzania leków, które można podawać w różny sposób.
Np. można je podawać doustnie w postaci preparatów farmaceutycznych takich jak tabletki, syropy i zawiesiny, pozajelitowo w postaciach takich jak roztwory lub emulsje i temu podobne. Można je podawać miejscowo w postaci kremów, pomadek, balsamów i temu podobne i przez skórę np. przez zastosowanie plastrów lub opasek. Można je stosować bezpośrednio do odbytu w postaci czopków. Preparaty mogą zawierać fizjologicznie dopuszczalne nośniki, zaróbki, aktywatory, środki sieciujące, stabilizatory i temu podobne. W przypadku iniekcji można je wprowadzić w postaci fizjologicznie dopuszczalnych buforów, środków rozpuszczających lub roztworów izotonicznych. Dzienną dawkę można zmieniać w zależności od symptomów, wieku, wagi ciała pacjenta, specyficznego trybu podawania i tak dalej. Zwykle dzienna dawka dla dorosłej osoby może wynosić od 0,1 do 500 g i może być podawana jednorazowo lub podzielona na kilka dawek w ciągu dnia.
W przykładach opisano szczegółowo odpowiednie sposoby otrzymywania różnych związków według wynalazku o ogólnym wzorze (I). W świetle tych przykładów i ogólnej wiedzy fachowca można otrzymać związki nie przedstawione w przykładach odpowiednio modyfikując zamieszczone przykłady. W konsekwencji podane przykłady nie należy interpretować jako ograniczające zakres ochrony, lecz zaledwie jako dodatkowe dokładniejsze wyjaśnienie, które daje fachowcowi głębsze zrozumienie wynalazku.
P r z y k ł a d y
W części doświadczalnej przykładów użyto następujących skrótów:
AcOEt octan etylu
AcOH kwas octowy
Boc tert-butoksykarbonyl
Bzl benzyl
DCC dicykloheksylokarbodiimid
DCM dichlorometan
DIEA N-etylodiizopropyloamina
DIP-CI sonda wprowadzona bezpośrednio-jonizacja chemiczna
DMF dimetyloformamid
PL 202 372 B1
DMSO-d6 dimetylosulfotlenek deuter-heksa
EDTA Na2 sól sodowa kwasu etylenodiaminotetraoctowego
EtOH etanol
EtOEt eter dietylowy
FAB bombardowanie atomowe szybkie
CGMP 3', 5' cykliczny monofosforan Guanosine
HPLC chromatografia cieczowa wysokociśnieniowa
MeCN acetonitryl
MeOH metanol
MS spektrometria masowa
ODQ [1H-[1,2,4]oksadizol[4-3a]chinoksalin-1-on]
PyAOP heksafluorofosforan 7-azabenzotriazol-1-ilooksitris(pirolidyno)fosfoniowy tBuOH tert-butanol
TFA kwas trifluorooctowy
Chlorohydraty wyjściowych aminokwasów syntetyzowano według niemieckich opisów patentowych DE-A-3023830 i DE-A-2801849.
Widma nuklearnego rezonansu magnetycznego realizowano w aparaturze Varian Gemini-200. W widmach 1H-NMR wskazano czę stotliwo ść roboczą i rozpuszczalnik stosowany przy wykonywaniu widma. Pozycję sygnałów podano w δ (ppm) stosując jako odniesienie sygnał protonów rozpuszczalnika. Wartości odniesienia wynoszą 7,24 ppm dla chloroformu i 2,49 ppm dla dimetylosulfotlenku deuteru. W nawiasach wskazano liczbę protonów odpowiadającą każdemu sygnałowi mierzonemu przez całkowanie elektroniczne i rodzaj sygnału wskazano stosując następujące skróty: s (pojedynczy), d (dublet), t (triplet), dd (dublet dubletu), sb (szerokość sygnału), sc (zespół sygnału), d.e. D2O (znika podczas robienia widma po dodaniu trochę kropel wody deuterowej).
W widmie 13C-NMR wskazano częstotliwość pracy i rozpuszczalnik dla każdego widma. Pozycję sygnałów podano jako δ (ppm) stosując jako odniesienie sygnał protonów rozpuszczalnika. Wartości odniesienia wynoszą 77,00 ppm dla chloroformu i 39,50 ppm dla dimetylosulfotlenku deuteru. Do magnetycznego rezonansu nuklearnego stosowano Attached Proton Test (ATP).
Analizę za pomocą HPLC do określenia czystości próbki prowadzono w następujących warunkach:
A - zwykły gradient
Kolumna: RP-C18, symetria 150 x 3,9 mm, 5 μ, 100A
Faza ruchoma: H2O + H3PO4 0,1%/CH3CN + 5% H2O + 0,1% H3PO4
Temperatura: temperatura pokojowa
Przepływ 1 ml/min
Objętość iniekcji: 10 μ!
B-izokratyczna
Kolumna: RP-C18, symetria 150 x 3,9 mm, 5 μ, 100A
Faza ruchoma: 50% H2O + H3PO4 0,1% i 50% CH3CN + 5% H2O + 0,1% H3PO4
Temperatura: temperatura pokojowa
Przepływ 1 ml/min
Objętość iniekcji: 10 μ!
W wytwarzaniu tripeptydów, techniki chromatografii preparatywnej i HPLC zastosowano do oczyszczania, a identyfikację produktu potwierdzano spektrometrią masową i analizą aminokwasu. Czystość tripeptydów analizowano HPLC w następujących warunkach: Kolumna typu Nucleosyl
C18, 250 x 4 mm, 120 A, 10 μm; przepływ de 1 m!/min; eluenty A = H2O + (0,045% TFA) i B = CH3CN (+ 0,036% TFA).
Widmo w ultrafiolecie (UV) wykonano stosując spektrofotometr Shimadzu UV-160A. Dla każdego związku wskazano długość fali (λ) w nm i absorpcję molekularną (ε) w cm-1mol-1l.
W przypadku chromatografii wysokociśnieniowej cieczowej (HPLC) zastosowano detektor z fotodiodą ultrafioletową Hewlett-Packard 1040A.
PL 202 372 B1
P r z y k ł a d 1. Wytwarzanie kwasu N-acetylo-2-amino-2-[4-(4-S-nitrozomerkaptotetrahydropirano)]octowego (1).
Etap 1) Do 250 ml szklanej kolby zaopatrzonej w mieszadło magnetyczne wprowadzono 4,0 g (17,6 mmoli) chlorohydratu kwasu 2-amino-2-[4-(4-merkaptotetrahydropirano)]octowego i 60 ml 0,5 N roztworu wodorotlenku potasu. Następnie dodano 3,07 g (21,8 mmoli) bezwodnego węglanu potasu i 60 ml MeCN. Mieszaninę ochłodzono w łaźni lodowej i dodano kropla po kropli 1,42 ml (19,7 mmoli) chlorku acetylu rozpuszczonego w 15 ml MeCN. 0,5 N wodorotlenek potasu dodawano aż do uzyskania pH 9-10. Mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez 2 godziny. Po czym dodano 2 N kwas chlorowodorowy do pH=6 i rozpuszczalnik usunięto pod obniżonym ciśnieniem. Otrzymane ciało stałe suszono pod obniżonym ciśnieniem nad pięciotlenkiem fosforu i zawieszono w 150 ml absolutnego EtOH i mieszano w temperaturze pokojowej. Nierozpuszczalną pozostałość odfiltrowano i przemyto absolutnym EtOH. Rozpuszczalnik odparowano pod obniżonym ciśnieniem. Otrzymano 3,98 surowego produktu pośredniego kwasu N-acetylo-2-amino-2-[4-(4-merkaptotetrahydropirano)]octowego, który poddano różnym preparatywnym chromatografiom z odwróconą fazą z wytworzeniem 80 mg produktu o czystości 90% (HPLC gradient A, λ = 205 nm) 1H-NMR (200 Mhz, DMSO-d6): 7,40 (1H, d, J = 10Hz, NH), 4,13 (1H, d, J = 10Hz, CH), 3,75-3,50 (4H, s.c.,CH2), 1,90-1,80 (4H, s.c, CH2), 1,65 (3H, s, CH3).
13C-NMR (50 Mhz, DMSO-d6): 171,50 (CO-N), 168,90 (CO), 63,69 (CH2), 63,27 (CH2), 62,80 (CH), 49,18 (C), 37,58 (CH2), 36,12 (CH2), 23,01 (CH3).
Etap 2) 80 mg (0,34 mmole) kwasu N-acetylo-2-amino-2-(4-(4-merkaptotetrahydropirano))octowego rozpuszczono w 4000 μΐ MeOH, a następnie dodano 500 μΐ 1 N roztworu HCl i 136 μΐ 5M roztworu NaNO2. Powstały roztwór poddano obróbce w ciągu 1 minuty w łaźni ultradźwiękowej, po czym dodano 50 μΐ 10 N NaOH i 14 μΐ H2O.
Z powstałego roztworu oddzielono próbkę A 470 μl a do pozostałości dodano wodę w obfitości, zamrożono i liofilizowano z wytworzeniem 190 mg higroskopijnego ciała stałego B, które było lekko wilgotne.
HPLC (gradient A): λ 220 nm: czystość frakcji A 68% λ 339 nm: czystość frakcji A 95%
NMR frakcja B:
1H-NMR (200 Mhz, DMSO-d6): 8,00-7,50 (1H, s.c, NH), 4,50-4,00 (1H, s.c, CH), 3,80-3,40 (4H, s.c, CH2), 2,40-1,80 (4H, s.c.,CH2), 1,88 (3H, s, CH3).
13C-NMR (50 Mhz, DMSO-d6): 173,00 (CO), 169,52 (CO), 67,69 (CH2-O), 63,45 (CH), 53,78 (C), 32,17 (CH2), 22,80 (CH3).
P r z y k ł a d 2. Wytwarzanie kwasu N-acetylo-2-amino-2-[4-(4-S-nitrozomerkapto-1-metylopiperydyno]octowego (2).
PL 202 372 B1
Etap 1) Do 250 ml szklanej kolby zaopatrzonej w mieszadło magnetyczne wprowadzono 3,69 g (13 mmoli) chlorohydratu kwasu 2-amino-2-[4-(4-merkapto-1-metylopiperydyno)]octowego i 30 ml 0,5 N roztworu wodorotlenku potasu. Następnie dodano 1,2 g (16 mmoli) bezwodnego węglanu potasu i 30 ml MeCN. Mieszaninę ochłodzono w łaź ni lodowej i dodano kropla po kropli 1,0 ml (14 mmoli) chlorku acetylu rozpuszczonego w 10 ml MeCN. 0,5 N wodorotlenek potasu dodawano aż do uzyskania pH 9-10. Mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez 2 godziny. Po czym dodano 2 N kwas chlorowodorowy do pH=6 i rozpuszczalnik usunięto pod obniżonym ciśnieniem. Otrzymane ciało stałe suszono pod obniżonym ciśnieniem nad pięciotlenkiem fosforu i suche ciało stałe zawieszono w 100 ml absolutnego EtOH i mieszano w temperaturze pokojowej, nierozpuszczalną pozostałość odfiltrowano i przemyto absolutnym EtOH. Rozpuszczalnik odparowano pod obniżonym ciśnieniem. Otrzymano 2,8 surowego produktu pośredniego kwasu N-acetylo-2-amino-2-[4-(4-merkaptometylopiperydyno)]octowego, który poddano różnym preparatywnym chromatografiom z odwróconą fazą z wytworzeniem 0,5 mg produktu o czystości 99% (HPLC gradient A, λ = 210 nm) 1H-NMR (200 Mhz, DMSO-d6): 8,35 (1H, d, J = 10Hz, NH), 4,43 (1H, d, J = 10Hz, CH), 3,35-3,00 (4H, s.c.,CH2), 2,70 (3H, s, CH3), 2,20-1,90 (4H, s.c, CH2), 1,85 (3H, s, CH3).
13C-NMR (50 Mhz, DMSO-d6): 170,55 (CO-N), 170,05 (CO), 61,77 (CH), 49,33 (CH2), 49,28 (CH2), 46,38 (C), 42,26 (CH3), 33,05 (CH2), 33,14 (CH2), 22,42 (CH3).
Etap 2) 50 mg (0,20 mmole) kwasu N-acetylo-2-amino-2-(4-(4-merkapto-1-metylopiperydyno))octowego rozpuszczono w 800 μΐ 1 N HCl, i następnie dodano 80 μΐ 5M roztworu NaNO2. Powstały roztwór poddano obróbce w ciągu 1 minuty w łaźni ultradźwiękowej po czym dodano 80 μl 10 N NaOH i 40 μΐ H2O.
Z powstałego roztworu oddzielono próbkę A 100 μl a resztę, zamrożono i liofilizowano z wytworzeniem 190 mg ciała stałego B.
HPLC (gradient A):
λ 230 nm: czystość frakcji A 90%; czystość frakcji B 93% λ 334 nm: czystość frakcji A 98%; czystość frakcji B 98%
NMR frakcja B:
1H-NMR (200 Mhz, D2O): 4,71 (1H, s, CH), 2,70-2,20 (8H, sc, CH2), 1,95 (3H, s, CH3-N), 1,71 (3H, s, CH3-CO).
13C-NMR (50 Mhz, D2O): 172,51 (CO), 171,52 (CO), 61,08 (CH), 58,18 (C), 48,09 (CH2-N), 48,01 (CH2-N), 42,18 (CH3-N), 30,44 (CH2), 29,85 (CH2), 20,17 (CH3-CO).
P r z y k ł a d 3. Wytwarzanie kwasu N-acetylo-2-amino-3-benzylo-3-S-nitrozomerkapto-4-feny-
(5,9 mmoli) kwasu 2-amino-3-benzylo-3-merkapto-4-fenylo-butanowego i 20 ml 0,5 N roztworu wodorotlenku potasu. Następnie dodano 1,0 g (7,2 mmoli) bezwodnego węglanu potasu i 20 ml MeCN. Mieszaninę ochłodzono w łaźni lodowej i dodano kroplami 0,5 ml (6,5 mmoli) chlorku acetylu rozpuszczonego w 8 ml MeCN. Dodawano 0,5 N wodorotlenek potasu aż do uzyskania pH 12-13. Mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez 2 godziny. Następnie dodawano 2 N kwas chlorowodorowy aż do uzyskania pH=6 i rozpuszczalnik usunięto pod obniżonym ciśnieniem. Otrzymany surowy produkt zawieszono w 100 ml absolutnego EtOH i mieszano w temperaturze pokojowej. Nierozpuszczalną pozostałość odfiltrowano i przemyto absolutnym EtOH. Rozpuszczalnik usunięto pod obniżonym ciśnieniem. Pozostałość rekrystalizowano z wody. Nierozpuszczalną część odfiltrowano i odrzucono. Filtrat zamrożono i liofilizowano. Otrzymano 1,64 g produktu pośredniego kwasu N-acetylo-2-amino-3-benzylo-3-merkapto-4-fenylo-butanowego. Wydajność: 81%.
PL 202 372 B1 1H-NMR (200 Mhz, DMSO-d6): 7,68 (1H, d, J = 8Hz, NH), 7,35-7,05 (10H, sc, CHar), 4,36 (1H, d, J = 8Hz, CH), 3,42-3,02 (2H, sc, CH2-Car), 2,95-2,55 (2H, sc, CH2), 1,82 (3H, s, CH3).
13C-NMR (50 Mhz, DMSO-d6): 172,94 (CO-N), 169,08 (CO), 138,55 (Car), 138,16 (Car), 132,36 (2CHar), 131,89 (2CHar) 127,78 (2CHar), 127,53 (2CHar), 126,44 (CHar), 126,26 (CHar), 60,16 (CH), 55,62 (C), 43,70 (CH2), 42,94 (CH2), 23,14 (CH3).
Etap 2) 0,62 g (1,8 mmoli) kwasu N-acetylo-2-amino-3-benzylo-3-merkapto-4-fenylo-butanowego rozpuszczono w 25 ml MeOH, i następnie dodano 25 ml 1 N HCl i 250 mg roztworu NaNO2 w 25 ml H2O. Powstały roztwór mieszano przez 35 minut w temperaturze pokojowej, filtrowano i przemyto wodą. Po wysuszeniu pod obniżonym ciśnieniem w obecności P2O5, otrzymano 0,33 g ciała stałego.
HPLC (izokratyczna B): λ 220 nm: czystość 91% λ 220 nm: czystość 100% 1H-NMR (200 Mhz, DMSO-d6): 8,77 (1H, d, J = 10Hz, NH), 7,28-7,00 (10H, sc, CHar), 5,33 (1H, d, J = 10Hz, CH), 4,12-3,90 (2H, sc, CH2), 3,88-3,38 (2H, sc, CH2), 1,86 (3H, s, CH3).
13C-NMR (50 Mhz, DMSO-d6): 171,55 (CO-N), 169,67 (CO-O), 135,51 (Car), 135,27 (Car), 131,52 (CHar), 131,41 (CHar), 128,15 (CHar), 128,05 (CHar), 127,04 (CHar), 65,13 (CH), 56,11 (CH), 40,91 (CH2), 40,15 (CH2), 22,29 (CH3).
P r z y k ł a d 4: Wytwarzanie N[N-Y-L-glutamylo-2-amino-2-(4-(4-S-nitrozomerkapto)tetrahydropirano))acetyloglicyny (4).
Etap 1) W 250 ml kolbie szklanej zaopatrzonej w mieszadło magnetyczne zmieszano 5,8 g (25,5 mmoli) chlorohydratu kwasu 2-amino-2-(4-(4-merkaptotetrahydropirano))octowego, 4,7 g (25,5 mmoli) α-bromo-p-ksylenu i 100 ml mieszaniny H2O/EtOH 3:1. Dodano 11 ml trietyloaminy i stworzono atmosferę argonu oraz mieszaninę mieszano przez 18 godzin w temperaturze pokojowej. Dodano 50 ml mieszaniny H2O/EtOH 3:1 i mieszaninę mieszano przez następne 2 godziny. Powstałą zawiesinę filtrowano i przemyto 100 ml wody i 50 ml EtOH. Otrzymano ciało stałe, które suszono pod obniżonym ciśnieniem. Dodano 300 ml stężonego kwasu chlorowodorowego i rozpuszczalnik usunięto pod obniżonym ciśnieniem. Obróbkę kwasem powtórzono drugi raz i otrzymano ciało stałe, które suszono pod obniżonym ciśnieniem. Otrzymano 1,59 g produktu przejściowego.
1H-NMR (200 Mhz, DMSO-d6): 8,80-8,30 (3H, sb, H3N+), 7,26 (2H, d, J = 8Hz, CHar), 7,12 (2H, d, J = 8Hz, CHar), 4,03 (1H, s, CH-N), 3,85-3,55 (6H, sc, CH2-Car, CH2-O), 2,26 (3H, s, CH3), 2,05-1,08 (4CH, sc, CH2).
13C-NMR (50 Mhz, DMSO-d6): 168,98 (CO), 136,64 (Car), 133,80 (Car), 129,55 (CHar), 129,29 (CHar), 62,36 (CH2-O), 59,85 (CH-N), 49,15 (C), 32,03 (CH2), 31,19 (CH2), 30,84 (CH2), 20,69 (CH3).
Etap 2) 1004 mg chlorohydratu kwasu 2-amino-2-(4-(4-(p-metylobenzylomerkapto)tetrahydropirano))octowego (3,029 moli) zawieszono w 20 ml tBuOH/H2O 2:1 i 5% NaOH dodawano aż do uzyskania pH=9. Następnie dodano 3 równoważniki Boc2O i mieszaninę pozostawiono na 30 minut, po czym pH nastawiono jeszcze raz na 9. Przedłużono prowadzenie reakcji jeszcze o 30 minut i znowu
PL 202 372 B1 skorygowano pH. Porównano z wyjściowym aminokwasem. Przez porównanie z wyjściowym aminokwasem stosując chromatografię cienkowarstwową (TLC) potwierdzono, że reakcja zaszła do końca.
Produkt wyodrębniono przez dwie kolejne ekstrakcje 50 ml heksanu i fazę wodną potraktowano 1 N HCl pH=2. Następnie wykonano trzy etapy ekstrakcyjne każ dy 60 ml AcOEt. Roztwór AcEt wysuszono bezwodnym MgSO4, i po usunięciu rozpuszczalnika drogą odparowania, produkt ponownie rozpuszczono w DCM i znowu odparowano. Ten etap powtórzono jeszcze dwa razy i otrzymano 1191 mg (3,015 mmoli) produktu pośredniego chronionego N-Boc.
Produkt scharakteryzowano przez:
a)TLC, z CHCl3/MeOH/AcOH 85:10:5 jako fazą ruchomą. El Rf=0,48, nie obserwowano sygnału materiału wyjściowego
b) HPLC z gradientem od 10% do 100% MeCN w 30 min + izokratyczna przy 100% MeCN przez 5 minut. Uzyskana czystość wynosiła 96% (220 nm).
c) spektrometrię masową techniką FAB: M wyliczone=395, (M+H+) doświadczalne = 396,0
d) NMR (CDCl): 7,18 (2H, d, J = 8Hz), 7,09 (2H, d, J = 8Hz), 5,54 (1H, d, J = 11,2Hz), 4,44 (1H, d, J = 8,3Hz), 3,69 (1H, J = 11,2Hz), 3,57 (1H, d, J = 11,2Hz), 3,75-3,98 (4H, sb), 2,32 (3H, s), 1,26-2,19 (4H, sb), 1,46 (9H, s).
Etap 3) Tripeptydy wytworzono technikami syntezy fazowej ciała stałego wychodząc z 1595 g Boc-Gly-OCH2-Pam-żywica (Neosystem, ref. No RP00801) podstawienia 0,63 mmole/g. Skala robocza wynosiła 1,005 mmoli.
Ogólna procedura dodawania reszty aminowej jest następująca:
1) Pęcznienie żywicy przy użyciu 5 przemyć stosując DCM w ciągu 0,5 minuty.
2) Usunięcie grupy Boc 40% TFA w DCM, 1 x 1 min + 1 x 20 min.
3) Przemywanie DCM, 5 x 0,5 minuty.
4) Badanie za pomocą ninhydryny.
5) Przemywanie DMF, 3 x 1 minuta.
6) Sprzęganie w ciągu okresu czasu wynoszącym 1,5 godziny
7) Przemywanie DMF, 3 x 1 minuta.
8) Przemywanie DCM, 5 x 0,5 minuty.
9) Badanie za pomocą ninhydryny.
W przypadku gdy test za pomocą ninhydryny w końcowym etapie jest dodatni przechodzi się do powtórzenia etapów 5 do 8.
Sprzęganie realizuje się za pomocą 6 równoważników (eq) DIEA, 3 eq. Boc-aminokwasu i 3 eq.
środka aktywnego, który w tym przypadku oznacza PyAOp (heksafluorofosforan 7-azabenzotriazol-1-iloksitris(pirolidyno)fosfoniowy). Dla sprzęgania γ-Glu stosuje się Boc-Glu-(a-Obzl).
Finalizując sekwencję sprzęgania, powstałą peptydylożywicę poddaje się acydolizie HF/p-krezolem (9:1) w ciągu 1 godziny w temperaturze 0°C. Po odparowaniu pozostałość stałą ekstrahuje się bezwodnym EtOEt i następnie peptyd oddziela się przez ekstrakcję 10% AcOH. Od razu po zmniejszeniu objętości przez odparowanie, surowy produkt liofilizuje się i charakteryzuje przez a) HPLC o gradiencie od 5% do 65% MeCN w 30 minut.
b) MS techniką elektrosprayu: Mwyliczone = 377, (M+H )doświadczalne = 378,2.
Ilość peptydu oznaczono przez analizę aminokwasu: m=329 g (0,873 mmole). We wszystkich ilościowych oznaczeniach stosowano analizę peptydową dodawania zewnętrznego patrona Ile (izoleucyny) do próbki do hydrolizy.
Oczyszczanie tripeptydów (w dwóch partiach) wykonano stosując HPLC na skalę preparatywną. Stosowany układ był następujący:
- Kolumna: C18 Nucleosyl, 200 x 20 mm, 120 A, 10 μm.
- Eluent: A=H2O (+0,1% TFA), B=MeCN (+0,1%, TFA).
- Gradient: Izokratyczna 0% B przez 40 minut + gradient od 0% do 10% B w 40 minut.
- Przepływ: 25 ml/minutę.
Całkowita ilość otrzymanego tripeptydu pośredniego wynosiła 227 mg (0,602 mmole). Scharakteryzowano go przez:
a) HPLC w gradiencie od 5% do 45% MeCN w 20 minut. Otrzymana czystość wynosiła 95% (220 nm). Mniejszy pik przy 8,4 minuty zmniejszył się we względnych proporcjach aż do zniknięcia, przez postępujące rozcieńczania stosowanej próbki. W konsekwencji wnioskuje się, że odpowiada to agregacji tripeptydu (a nie oksydacji) i uznaje się go zatem jako ważny produkt.
b) MS Elektrospray: Mwyliczone = 377 (M+H )doświadczalne = 378,2.
PL 202 372 B1
Etap 4) Do roztworu 14,2 mg (0,38 mmoli) tripeptydu otrzymanego w etapie 3 w 800 μl 1 N HCl dodano 76 μl 0,5M NaNO2. Mieszanie prowadzono w kąpieli ultradźwiękowej w temperaturze pokojowej przez 1 minutę, po czym dodano 80 μl 10 N roztworu NaOH. Otrzymany roztwór zamrożono i liofilizowano, a otrzymane ciało stałe scharakteryzowano przez:
1H-NMR (200 Mhz, DMSO-d6): 8,90-8,50 (2H, sb, NH), 5,35 (1H, d, J = 10Hz, CH), 4,10-3,00 (3H, sc, CH2, CH), 1,95-1,65 (4H, sc, 2CH2).
13C-NMR (50 Mhz, DMSO-d6): 172,18 (CO-N), 171,21 (CO-N), 68,40 (CO-O), 63,03 (CH2), 62,31 (C), 59,56 (CH) 53,19 (CH), 41,20 (CH2), 32,94 (CH2), 31,71 (CH2), 31,41 (CH2), 7,12 (CH2).
HPLC (metoda A): λ 220 nm (czystość 94%); λ 334 nm czystość 95%)
UV: λ 346 nm ε (H2O) 502 cm-1mol-1l
P r z y k ł a d 5. Wytwarzanie: N[N-Y-L-glutamylo-2-amino-2-(4-(4-S-nitrozomerkapto-1-metylopiperydyno))acetylo]glicyny (5)
Etap 1) W 100 ml szklanej kolbie zaopatrzonej w mieszadło magnetyczne zmieszano 6,4 g (23 mmole) dichlorohydratu kwasu 2-amino-2-(4-(4-merkapto-1-metylopiperydyno))octowego, 4,3 g (23 mmole) ε-bromo-p-ksyleno i 40 ml mieszaniny H2O/EtOH 1:1. Dodano 13 ml trietyloaminy, stworzono atmosferę argonu i mieszaninę mieszano przez 42 godziny w temperaturze pokojowej. Z powstałego roztworu usunięto rozpuszczalnik pod obniżonym ciśnieniem i do otrzymanego surowego produktu dodano 20 ml absolutnego EtOH. Otrzymane ciało stałe filtrowano i przemywano kolejno absolutnym EtOH i EtOEt, i suszono pod obniżonym ciśnieniem. Otrzymano 2,11 g produktu pośredniego, chlorohydratu kwasu 2-amino-2-(4-(4-(p-metylobenzylomerkapto)-1-metylopiperydyno))octowego, wydajność 29,6.
Widmo NMR rejestrowano w D2O i jako odniesienie wzięto 4,75 ppm dla HDO.
1H-NMR (200 Mhz, D2O): 7,28 (2H, d, J = 8Hz, CHar), 7,15 (2H, d, J = 8Hz, CHar), 3,64-3,74 (2H, sc, CH2-Car), 3,62 (1H, s, CH-N), 3,4-3,1 (4H, sc, CH2-N), 2,76 (3H, s, CH3-N), 2,24 (3H, s, CH3), 2,15-1,92 (4H, sc, CH2).
13C-NMR (50 Mhz, D2O): 173,15 (CO), 141,00 (Car), 136,39 (Car),132, 58 (CHar), 131,95 (CHar), 63,57 (CH-N), 52,48 (CH2)+, 50,65 (C), 45,66 (CH3-N), 34,05 (CH2), 32,35 (CH2), 31,28 (CH2), 22,77 (CH3).
Etap 2) Wychodząc z 1016 mg (2,958 mmoli) związku pośredniego otrzymanego w poprzednim etapie i postępując w sposób opisany w etapie 2 przykładu 4 otrzymano 1016 mg (2,490 mmoli) związku pośredniego zabezpieczonego N-Boc, który scharakteryzowano przez:
a) CCF (faza ruchoma CHCI3/MeOH/AcOH 85:10:5).
Rf=0,32, bez obserwowania sygnału materiału wyjściowego.
b) Gradient HPLC od 10% do 100% MeCN w 30 minut.
Czystość wynosiła 96% (220 nm).
c) MS techniką FAB: Mwyliczone = 408 (M+H )doświadczalne = 408,9.
d) MS techniką elektrospreyu: (M+H+)doświadczalne = 409,3.
Etap 3) Pośredni tripeptyd otrzymano stosując sposób opisany w etapie 3 przykładu 4, wychodząc z 794 mg żywicy wymienionej wyżej. Skala robocza wynosiła 0,5 moli. Z powodu trudności w rozpuszczeniu pochodnej-Boc jako zasadę zastosowano N-metylomorfolinę (3 równoważniki) zamiast
PL 202 372 B1
DIEA w reakcji sprzęgania wymienionej wyżej. Po wprowadzeniu yG!u, tripeptyd był złożony i wiązanie peptyd-żywica rozerwało się przez acydolizę w sposób wyżej opisany. Ostatecznie otrzymano surowy produkt w 10% AcOH, który poddano liofilizacji, a następnie oznaczono ilościowo. Otrzymano 137 mg (0,351 mmoli) związku pośredniego tripeptydu i scharakteryzowano go przez:
a) HPLC, gradient izokratyczny 0% przez 10 minut + 5% >65% MeCN przez 30 minut. Widać było, że wstrzyknięty produkt w roztworze octowym eluował w fazie czołowej, co powodowało konieczność liofilizacji próbek aby wyeliminować kwas i ponownego rozpuszczenia liofilizatu w 1 mM HCl. W ten sposób peptyd mógł być obserwowany chromatograficznie i eluował w 6,8 minut przy stosowanym gradiencie.
b) MS techniką elektrospreyu: Mwyliczone = 390 (M+H+)doświadczalne = 391,2.
Oczyszczanie surowego produktu przeprowadzono HPLC, na skalę preparatywną z parametrami opisanymi wcześniej w przykładzie 4, stosowano izokratyczną elucję 0% B przez 40 minut, po czym stosowano gradient 0% do 10% B przez 40 minut. W ten sposób otrzymano 107 mg (0,274 mmole) produktu scharakteryzowanego przez:
a) Gradient HPLC od 0% do 0% przez 10 minut plus 0% do 30% przez 20 minut. Czystość wynosiła 94% (220 nm). Potwierdzono, że dodatkowy pik przy 8,0 minutach odpowiada w tym przypadku agregacji i to oznacza prawidłowy produkt.
b) MS techniką elektrosprayu: Mwyliczony = 390 (M+H+)doświadczalne = 391,1.
Etap 4) Wychodząc z 10,0 mg (0,026 mmoli) tripeptydu otrzymanego w poprzednim etapie nitrozowanie przeprowadzono według sposobu opisanego w etapie 4 przykładu 4, stosując 52 μ. 0,5M NaNO2. Otrzymany produkt scharakteryzowano przez:
13C-NMR (50 Mhz, DMSO-d6): 171,57 (CO-N), 170,99 (CO-N), 170,76 (CO-N), 168,20 (CO-O), 60,23 (C), 59,53 (CH), 51,57 (CH), 49,02 (CH2), 42,20 (CH3), 41,59 (CH2), 30,49 (CH2), 29,75 (CH2), 29,31 (CH2), 26,05 (CH2).
HPLC (metoda B): λ 220 nm (czystość 74%); λ 334 nm czystość 88%).
UV: λ 346 nm ε (H2O) 198 cm-1mol-1l.
P r z y k ł a d 6. Wytwarzanie N [N-y-L-g!utamy!o-2-amino-3-benzy!o-3-(S-nitrozomerkapto)-4-
W 100 ml kolbie szklanej zaopatrzonej w mieszadło magnetyczne zmieszano 1,25 g (3,7 mmoli) chlorohydratu kwasu 2-amino-3-benzylo-3-merkapto-4-fenylobutanowego, 0,68 g (3,7 mmoli) α-bromo-p-ksylenu i 40 ml mieszaniny H2O/EtOH 1:1. Dodano 1,6 ml trietyloaminy i większą część zawieszonego ciała stałego rozpuszczono. Stworzono atmosferę argonu oraz mieszaninę mieszano przez 24 godziny w temperaturze pokojowej. Etanol i część trietyloaminy usunięto pod obniżonym ciśnieniem. Powstałą zawiesinę filtrowano i otrzymano biały osad. Oczyszczono go kolumnową chromatografią z odwróconą fazą stosując CH3CN-H2O. 100 ml MeOH/HCl (1:1) dodano na otrzymane ciało stałe i rozpuszczalnik usunięto pod obniżonym ciśnieniem. Otrzymano 0,5 g produktu pośredniego, chlorohydratu kwasu 2-amino-3-benzylo-3-(4-metylobenzylomerkapto)-4-fenylobutanowego.
PL 202 372 B1 1H-NMR (200 Mhz, DMSO-d6): 8,95-8,50 (3H, sb, H3N+), 7,45-7,25 (10H, sc, CHar), 7,08 (2H, d, J = 10Hz, CHar), 6,98 (2H, d, J = 10 Hz, CHar), 4,05 (1H, s, CH-N), 3,55-3,0 (4H, sc, CH2-C6H5, CH2-Car), 2,90-2,60 (2H, sc, CH2), 2,20 (3H, s, CH3).
13C-NMR (50 Mhz, DMSO-d6): 168,70 (CO), 136,53 (Car), 136,00 (Car), 134,94 (Car), 132,50 (Car), 131,18 (CHar), 129,169 (CHar), 128,90 (CHar), 128,26 (CHar), 128,02 (CHar), 127,07 (CHar), 57,06 (CH-N), 53,64 (C), 42,22 (CH2), 41,65 (CH2), 31,90 (CH2-S), 20,48 (CH3).
Etap 2) Wychodząc z dwóch frakcji otrzymanych w poprzednim etapie (180 mg o czystości 83% i 530 mg o czystości 94%) i postępując jak opisano w etapie 2 przykładu 4 otrzymano 733 mg (1,45 mmoli) produktu pośredniego chronionego N-Boc, scharakteryzowanego przez:
a) CCF (CHCl3-MeOH-HOAc 85:10:5), Rf=0,63.
b) HPLC gradient od 10% do 100% MeCN, 30 minut, izokratyczna 100%, 5 minut, czystość: 91% (220 nm).
c) EM-MALDI-TOF (widmo masowe): Matryca z kwasu dihydrobenzoesowego, Mwyliczone = 505 (M+H )eksperymentalne = 528,585 (M+Na).
d) NMR: Potwierdzono obecność grupy Boc.
Etap 3) Pośredni tripeptyd otrzymano stosując sposób opisany w etapie 3 przykładu 4 wychodząc z 0,43 mmoli żywicy wymienionej wyżej. Po etapie acydolitycznym surowy produkt wydzielono i zawierał on 14,4 mg (29,96 μmoli) pośredniego tripeptydu, który scharakteryzowano przez:
a) HPLC analityczny gradient od 5% do 65% przez 30 minut, przybliżona czystość 95%.
b) EM-elektrospray Mwyliczone = 487 (M+H ), Mdoświadczalne = 488,3.
Etap 4) Wychodząc z 5,7 mg (0,012 mmoli) pośredniego tripeptydu otrzymanego w poprzednim etapie przeprowadzono nitrozowanie według opisu w etapie 4 przykładu 4 stosując 24 μl 0,5 M NaNO2. Otrzymany produkt scharakteryzowano przez: HPLC (metoda A): λ 220 nm czystość 68%; λ 334 nm czystość 86%.
UV: λ 345 nm ε (H2O) 368 cm-1mol-1l.
P r z y k ł a d 7. Test in vitro rozszerzenia naczyń.
Sposób stosowany w badaniach jest zasadniczo taki sam jak ten opisany w następujących odniesieniach:
• Furchgot, R.F. „Methods in nitric oxide research”. Feelisch & Stamler eds. John Wiley & Sons, Chochester, England, pp 567-581.
• Trongvanichnam, K, et al. Jpn J. Pharmacol. 1996; 71: 167-173.
• Salas, E., et al. Eur. J. Pharmacol. 1994; 258: 47-55.
Związki badano przy 5 różnych stężeniach od 0,001 do 10 nM stosując 6 do 9 tętniczych pierścieni dla każdego związku. Otrzymane wyniki porównano z wynikami S-nitrozoglutationu (GSNO), którego użyto jako produkt odniesienia.
Wyniki pokazano w poniższej tabeli 1 gdzie CE50 (efektywne stężenie 50), jest stężeniem każdego testowanego związku przy którym powstaje rozszerzenie równe 50% tętniczego pierścienia uprzednio zwężonego 1 μM norepinefryną.
T a b e l a 1 - Test rozszerzania naczyń
Związek CE50 μίνΐ (przeciętna ± SD)
GSNO 1,56 ± 0,55
Produkt otrzymany w przykładzie 1 0,375 ± 0,05
Produkt otrzymany w przykładzie 2 0,024 ± 0,003
Produkt otrzymany w przykładzie 3 0,63 ± 0,21
Produkt otrzymany w przykładzie 4 1,73 ± 0,27
Produkt otrzymany w przykładzie 5 1,89 ± 0,82
Jak można było zauważyć wszystkie badane związki mają silne działanie rozszerzające naczynia, podobne lub dużo większe niż związek odniesienia (GSNO), a związek 2 ma działanie rozszerzające naczynia dużo silniejsze niż działanie związku odniesienia.
PL 202 372 B1
P r z y k ł a d 8. Test in vitro inhibitowania agregacji płytek.
Sposób zastosowany w próbach jest zasadniczo taki sam jak ten opisany w następujących odniesieniach:
• Loscalzo J, et al. En : Methods in nitric oxide research (Feelisch M, Stamler JS, eds.) John Wiley & Sons, Chichester, England, pp 583-591.
• Radomski MW, et al. Br J Pharmacol 1987: 92: 181-187.
• Salas E, et al. Br J Pharmacol 1994: 112: 1071-1076.
Związki badano dla czterech różnych stężeń stosując płytki od 5 do 23 różnych dawców. Otrzymane wyniki porównano z wynikami otrzymanymi dla S-nitrozoglutationu (GSNO), który był stosowany jako produkt odniesienia.
Wyniki pokazano w tabeli 2 i wyrażono jako CI50 (stężeniu inhibitowania 50), które jest stężeniem każdego z testowanych związków przy którym otrzymano inhibitowanie 50% agregatów otrzymanych z sub-maksymalnym stężeniem kolagenu (1 μg/ml).
T a b e l a 2 - Test inhibitowania agregacji płytek
Związek IC50 μM (przeciętna ± SD)
GSNO 0,48 ± 0,19
Produkt otrzymany w przykładzie 1 0,07 ± 0,02
Produkt otrzymany w przykładzie 2 0,19 ± 0,02
Produkt otrzymany w przykładzie 3 0,24 ± 0,027
Produkt otrzymany w przykładzie 4 0,20 ± 0,12
Produkt otrzymany w przykładzie 5 0,047 ± 0,011
Produkt otrzymany w przykładzie 6 0,35 ± 0,11
Z tabeli 2 widać, że wszystkie badane związki mają silne działanie inhibitujące agregację płytek, podobne lub większe od działania związku odniesienia (GSNO), a związki 1 i 5 mają największe działanie inhibitujące agregację płytek w stosunku do produktu odniesienia.
P r z y k ł a d 9. Test in vitro wzrostu wewnątrzpłytkowych poziomów GMPc.
Związek otrzymany w przykładzie 5 (5) badano in vitro aby zbadać jego zdolność do zwiększania wewnątrzpłytkowych poziomów GMPc w wytwarzaniu ludzkich płukanych płytek.
Sposób stosowany w badaniu był zasadniczo taki sam jak ten opisany w cytowanym odniesieniu w przykładzie 8.
Związki badano przy 4 różnych stężeniach stosując różne płytki od 5 dawców. Otrzymane wyniki porównano z wynikami otrzymanymi z GSNO (produkt odniesienia) i z podstawowymi wartościami. Wyniki przedstawiono w tabeli 3, wyrażone jako pmol/109 płytek.
T a b e l a 3 - Test wzrostu wewnątrzpłytkowych poziomów GMPc
μΜ GMPc (pmol/109 płytek)
GSNO Związek 5
3 27,6 ± 6,0 ---
1 24 ± 0,5 21,1 ± 0,5
0,3 6,6 ± 0,6 6,50 ± 0,5
0,1 1 ± 0,5 1,50 ± 0,4
0,03 ... 1,60 ± 0,5
0 1,33 ± 0,38 1,33 ± 0,38
PL 202 372 B1
Związek 5 zwiększa wewnątrzpłytkowe poziomy GMPc w podobny sposób jak GSNO. Należy zaznaczyć, że dla wartości bliskich IC50 związek 5 wpływa na poziomy GMPc mniej niż GSNO gdy stosuje się go w stężeniu bliskim jego IC50.
P r z y k ł a d 10. Test in vitro blokady inhibitowania agregacji płytek.
Sposób stosowany w badaniu opisano w odniesieniach cytowanych w przykładzie 8, które uzupełnia się • Moro MA, et al. Pr Nat Acad Sc USA. 1996; 93: 1480-5.
Badano ODQ in vitro aby zablokować inhibitowanie agregacji płytek osiągnięte przez otrzymane produkty w wytwarzaniu mytych płytek ludzkich.
Związek otrzymany w przykładzie 5 (5) testowano dla trzech różnych stężeń w obecności i nieobecności ODQ (1 μM) stosując płytki od 5 różnych dawców. Otrzymane wyniki porównano z wynikami otrzymanymi z GSNO (produkt odniesienia) i z wartościami w nieobecności ODQ. Wyniki pokazano w tabeli 4 i 5 i wyrażono w % inhibitowania maksymalnej agregacji.
T a b e l a 4 - Produkt odniesienia (GSNO)
[pM] % inhibitowania bez ODQ % inhibitowania z ODQ
1 92,65 ± 0,9 32,65 ± 0,9
0,3 79,33 ± 17 3,3 ± 3
0,1 34,2 ± 25 0
T a b e l a 5 - Związek 5
[pM] % inhibitowania bez ODQ % inhibitowania z ODQ
0,3 96 0
0,1 96 0
0,03 83 ± 1,4 0
0,01 17 0
0,003 0 0
ODQ (1 μM) jest zdolny do blokowania efektu inhibitującego GSNO i związku 5 gdy stosuje się dawkę IC50. Przy wyższych dawkach niż IC50 efekt inhibitowania agregacji jest lepiej blokowany w przypadku związku 5 w porównaniu z produktem odniesienia.

Claims (12)

1. Pochodna S-nitrozotiolowa penicyloaminy lub glutationu i jej farmaceutycznie akceptowalne sole odpowiadająca ogólnemu wzorowi (I) w którym
A i B oznaczają grupy fenylowe lub razem tworzą grupę -CH2-Q-CH2- stanowiącą pierścień składający się z 6 jednostek, w której Q oznacza atom tlenu, lub grupę N-R3, w której R3 oznacza atom wodoru lub grupę alkilową C1-C4;
PL 202 372 B1
R1 oznacza grupę acylową, która może być alifatyczną grupą acylową C1-C5 lub grupę kwasu glutaminowego związaną przez jej nieaminokwasową grupę karboksylową;
R2 oznacza grupę hydroksylową lub grupę glicynową związaną przez wiązanie peptydowe; z tym założeniem, że jeśli R1 oznacza alifatyczną grupę acylową wtedy R2 oznacza grupę hydroksylową, a jeśli R1 oznacza grupę kwasu glutaminowego wtedy R2 oznacza grupę glicynową.
2. S-nitrozotiole według zastrz. 1 odpowiadające następującemu ogólnemu wzorowi (II) w którym A i B mają znaczenia podane wyżej i R4 oznacza grupę alkilową C1-C4.
3. Związek według zastrz. 1 albo 2, będący kwasem N-acetylo-2-amino-2-[4-(4-S-nitrozomerka-
4. Związek według zastrz. 1 albo 2, będący kwasem N-acetylo-2-amino-2-[4-(4-S-nitrozomerkapto-1-metylopiperydyno)]octowym (2)
5. Związek według zastrz. 1 albo 2, będący kwasem N-acetylo-2-amino-3-benzylo-3-S-nitrozomerkapto-4-fenylo-butanowym (3)
PL 202 372 B1
6. S-nitrozotiole według zastrz. 1, które odpowiadają następującemu ogólnemu wzorowi (III) w którym A i B mają wyż ej podane znaczenia.
7. Związek według zastrz. 1 albo 6 będący N[N-y-L-glutamylo-2-amino-2-(4-(4-S-nitrozomerkapto)tetrahydropirano))acetylo]-glicyna (4)
8. Związek według zastrz. 1 albo 6 będący N[N-y-L-glutamylo-2-amino-2-(4-(4-S-nitrozo-merkapto-1-metylopiperydyno))acetylo]-glicyna (5)
9. Związek według zastrz. 1 albo 6 będący N[N-y-L-glutamylo-2-amino-3-benzylo-3-(S-nitrozomerkapto)-4-fenylobutanoilo]-glicyna (6)
10. Kompozycja farmaceutyczna, znamienna tym, że jako składnik aktywny zawiera związek zdefiniowany w zastrzeżeniu 1 ewentualnie razem z fizjologicznie dopuszczalnymi nośnikami, zaróbkami, środkami sieciującymi i/lub stabilizatorami.
11. Kompozycja według zastrz. 10 do leczenia zaburzenia czynności krążenia.
12. Kompozycja według zastrz. 10 do leczenia zaburzenia czynności układu sercowo-naczyniowego.
PL349006A 1999-01-27 2000-01-19 Pochodne S-nitrozotiolowe penicyloaminy lub glutationu oraz kompozycja farmaceutyczna je zawierająca do leczenia zaburzenia czynności krążenia PL202372B1 (pl)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
ES009900159A ES2147162B1 (es) 1999-01-27 1999-01-27 "s-nitrosotioles como agentes para el tratamiento de disfunciones circulatorias".
PCT/ES2000/000019 WO2000044714A1 (es) 1999-01-27 2000-01-19 S-nitrosotioles como agentes para el tratamiento de disfunciones circulatorias

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL349006A1 PL349006A1 (en) 2002-06-17
PL202372B1 true PL202372B1 (pl) 2009-06-30

Family

ID=8307080

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL349006A PL202372B1 (pl) 1999-01-27 2000-01-19 Pochodne S-nitrozotiolowe penicyloaminy lub glutationu oraz kompozycja farmaceutyczna je zawierająca do leczenia zaburzenia czynności krążenia

Country Status (37)

Country Link
US (1) US6800612B2 (pl)
EP (1) EP1157987B1 (pl)
JP (1) JP3795330B2 (pl)
KR (1) KR100671878B1 (pl)
CN (1) CN1166631C (pl)
AP (1) AP1439A (pl)
AT (1) ATE249428T1 (pl)
AU (1) AU764725B2 (pl)
BG (1) BG64983B1 (pl)
BR (1) BR0007395B1 (pl)
CA (1) CA2359027C (pl)
CU (1) CU23098A3 (pl)
CZ (1) CZ298871B6 (pl)
DE (2) DE10083902T1 (pl)
DK (1) DK1157987T3 (pl)
EA (1) EA003577B1 (pl)
EE (1) EE04524B1 (pl)
ES (2) ES2147162B1 (pl)
GB (1) GB2363604B (pl)
GE (1) GEP20043220B (pl)
HK (1) HK1043586A1 (pl)
HR (1) HRP20010562B1 (pl)
HU (1) HUP0105203A3 (pl)
ID (1) ID29777A (pl)
IL (1) IL144381A (pl)
IS (1) IS2153B (pl)
MX (1) MXPA01007570A (pl)
NO (1) NO326806B1 (pl)
NZ (1) NZ513162A (pl)
OA (1) OA11823A (pl)
PL (1) PL202372B1 (pl)
PT (1) PT1157987E (pl)
RS (1) RS50072B (pl)
SI (1) SI1157987T1 (pl)
TR (1) TR200102003T2 (pl)
WO (1) WO2000044714A1 (pl)
ZA (1) ZA200106182B (pl)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2173044B1 (es) * 2001-03-13 2004-01-16 Lacer Sa Derivados de glicina, n-(n-l-gamma-glutamil-3-(nitrosotio)-l-valil) y sus aplicaciones.
AU2004275809A1 (en) * 2003-09-26 2005-04-07 Nitromed, Inc. Nitrosated glutamic acid compounds, compositions and methods of use
EP1939179A1 (en) * 2006-12-28 2008-07-02 Lacer, S.A. Stable S-nitrosothiols, method of synthesis and use
PL2197417T3 (pl) 2007-10-17 2012-08-31 Pharmagenix Ag Kompozycja farmaceutyczna zawierająca S-nitrozoglutation i polisacharyd

Family Cites Families (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US37839A (en) * 1863-03-03 Improved spoke-machine
GB1567561A (en) 1977-01-18 1980-05-14 Ucb Sa Amino-spiro(oxa-(orthia)cycloalkane-penam) - carboxylic acids
GB2052497B (en) 1979-06-25 1983-06-29 Ucb Sa 6 - amino - spiro - (penam - 2,4' - piperidine) - 3 - carboxylic acid derivatives
DE3805965A1 (de) 1988-02-25 1989-09-07 Tamas Geb Szenasi Eszter Verwendung der pflanze euphorbia hirta l. und ihrer extrakte sowie ihrer wirkstoffe
US5025001A (en) 1988-06-15 1991-06-18 Brigham And Women's Hospital S-nitroso derivatives of ACE inhibitors and the use thereof
EP0412699B1 (en) * 1989-08-07 1994-04-27 Takeda Chemical Industries, Ltd. Nitrosothiol derivatives, their production and use
EP0480061B1 (en) 1990-04-26 1996-12-04 Senju Pharmaceutical Co., Ltd. Hepatic disorder inhibitor
US5187305A (en) * 1990-11-26 1993-02-16 Glaxo Inc. S-nitroso-N-alkonoylpenicillamines
AU3071592A (en) 1991-11-14 1993-06-15 Brigham And Women's Hospital Nitrosylation of protein sh groups and amino acid residues as a therapeutic modality
NZ248332A (en) 1992-08-07 1995-01-27 Sankyo Co Hiv protease inhibitor and its use
EP1393723A3 (en) * 1993-09-17 2004-10-20 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Use of nitric oxide-adducts to prevent thrombosis on artificial and vascular surfaces
US5728705A (en) 1993-10-04 1998-03-17 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Method of inducing vasorelaxation to treat pulmonary hypertension
JPH09508097A (ja) 1993-11-02 1997-08-19 アメリカ合衆国 虚血再灌流傷害における保護剤としての酸化窒素放出化合物の使用
GB9423868D0 (en) 1994-11-25 1995-01-11 Wellcome Found Compounds for use in medicine
US6627738B2 (en) 1995-09-15 2003-09-30 Duke University No-modified hemoglobins and uses therefor
AU6782198A (en) 1997-03-27 1998-10-20 Trustees Of Boston University Novel antiplatelet agent

Also Published As

Publication number Publication date
PT1157987E (pt) 2004-01-30
DE60005154T2 (de) 2004-07-08
AP2001002247A0 (en) 2001-09-30
EE04524B1 (et) 2005-08-15
KR20010101767A (ko) 2001-11-14
PL349006A1 (en) 2002-06-17
BR0007395A (pt) 2001-10-30
AP1439A (en) 2005-06-27
EA200100823A1 (ru) 2002-02-28
TR200102003T2 (tr) 2001-12-21
CA2359027C (en) 2008-10-28
ZA200106182B (en) 2002-10-28
HRP20010562B1 (en) 2010-08-31
JP2002535385A (ja) 2002-10-22
GB0120581D0 (en) 2001-10-17
US6800612B2 (en) 2004-10-05
HUP0105203A2 (en) 2002-06-29
CU23098A3 (es) 2005-11-18
NO326806B1 (no) 2009-02-16
IL144381A0 (en) 2002-05-23
CN1337946A (zh) 2002-02-27
BR0007395B1 (pt) 2010-11-16
GB2363604A (en) 2002-01-02
MXPA01007570A (es) 2003-05-14
EA003577B1 (ru) 2003-06-26
EP1157987B1 (en) 2003-09-10
IS2153B (is) 2006-10-13
DK1157987T3 (da) 2003-11-24
NO20013385D0 (no) 2001-07-06
ATE249428T1 (de) 2003-09-15
DE60005154D1 (de) 2003-10-16
CA2359027A1 (en) 2000-08-03
ES2206178T3 (es) 2004-05-16
AU764725B2 (en) 2003-08-28
HK1043586A1 (en) 2002-09-20
CZ298871B6 (cs) 2008-02-27
SI1157987T1 (en) 2004-02-29
WO2000044714A1 (es) 2000-08-03
CN1166631C (zh) 2004-09-15
YU53601A (sh) 2004-03-12
HUP0105203A3 (en) 2002-08-28
KR100671878B1 (ko) 2007-01-19
NO20013385L (no) 2001-09-17
GEP20043220B (en) 2004-04-26
BG64983B1 (bg) 2006-11-30
NZ513162A (en) 2003-01-31
EE200100389A (et) 2002-12-16
JP3795330B2 (ja) 2006-07-12
ES2147162B1 (es) 2001-03-16
HRP20010562A2 (en) 2002-08-31
OA11823A (en) 2005-08-16
AU3046000A (en) 2000-08-18
IL144381A (en) 2005-08-31
GB2363604B (en) 2003-09-10
US20020058629A1 (en) 2002-05-16
CZ20012678A3 (cs) 2001-10-17
IS6020A (is) 2001-07-23
EP1157987A1 (en) 2001-11-28
ID29777A (id) 2001-10-11
RS50072B (sr) 2009-01-22
BG105824A (en) 2002-06-28
ES2147162A1 (es) 2000-08-16
DE10083902T1 (de) 2002-01-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP2000501382A (ja) 新規アミノ酸誘導体、それらの調製方法及びこれらの化合物を含む医薬組成物
PT93245B (pt) Processo para a preparacao de novos derivados de glicina e de composicoes farmaceuticas que os contem
CA1312702C (en) Oligopeptidyl nitrile derivatives, agents containing them, a process for their preparation, and their use
CN111971290B (zh) 用于预防或治疗关节疾病的葡萄糖胺衍生物
DE19937721A1 (de) Neue Diketopiperazine
EP1668017A1 (en) Disulfide, sulfide, sulfoxide, and sulfone derivatives of cyclic sugars and uses thereof
DE10005631A1 (de) Arginin-Mimetika als Faktor X¶a¶-Inhibitoren
Hattori et al. Solution-phase synthesis and biological evaluation of triostin A and its analogues
PT98227A (pt) Processo de preparacao de 1,4-diamino-2-3-di-hidroxi-butanos substituidos e de composicoes farmaceuticas que os contem
PL202372B1 (pl) Pochodne S-nitrozotiolowe penicyloaminy lub glutationu oraz kompozycja farmaceutyczna je zawierająca do leczenia zaburzenia czynności krążenia
US7183430B2 (en) Compounds which can block the response to chemical substances or thermal stimuli or mediators of inflammation of nociceptors, production method thereof and compositions containing same
EP0333000A2 (en) Peptides with inhibitory activity of enzymatic systems, process for their preparation and pharmaceutical compositions containing them
JP2026513487A (ja) アミノ酸に由来するセラミド、その合成方法及び使用
EP3431478B1 (en) Micromolecular lung-targeting drug
CN104557897B (zh) 法舒地尔‑硫辛酸二联体的合成及其应用
GB2185486A (en) Conjugate of alpha-melanotropin with p-L-sarcolysine (melphalan)
EP4574212A1 (en) Histone deacetylase inhibitors
HK40086425A (zh) 秋水仙碱衍生物的制备方法及其用途

Legal Events

Date Code Title Description
LAPS Decisions on the lapse of the protection rights

Effective date: 20110119