PT100979B - Epitopos de celula t dos alergenos principais de dermatophagoides (acaro do po domestico), peptidos modificados, sequencias de acidos nucleicos que os codificam, composicoes farmaceuticas que os contem e seu uso

Info

Description

Claims

PT100979B

Publication number: PT100979B
Application number: PT100979A
Authority: PT
Inventors: Bruce L Rogers; Richard D Garman; Julia L Greenstein; Mei-Chang Kuo
Original assignee: Immulogic Pharma Corp
Priority date: 1991-10-16
Filing date: 1992-10-16
Publication date: 1999-08-31
Also published as: NZ244772A; JPH07502890A; DE69233772D1; AU676668B2; JP2009005709A; EP0623168B1; NO941371L; IL103452A; MX9205985A; PT100979A; AU2865492A; IL103452A0; HU220462B1; EP0623168A1; FI941757L; KR100260342B1; KR940702936A; ES2334179T3; HU9401108D0; FI110385B

MEMÓRIA DESCRITIVA

Pedidos de Patente Relacionados

Este pedido de patente é uma continuação em parte do pedido de patente U.S.S.N. 07/881,396 entitulado T Cell Epitopes of the Major Allergens from Dermatophaqoides (House Dust Mite), apresentado em 8 de Maio de 1992, o qual é uma continuação em parte do pedido de patente U.S.S.N. 07/777,859 entitulado T Cell Epitopes of the Major Allergens from Dermatophaqoides (House Dust Mite) apresentado em 16 de Outubro de 1991, cujos princípios são aqui incorporados por referência.

Antecedentes do invento

Publicações recentes têm documentado a importância de respostas aos alergenos proteicos do Grupo I (e.g., Der p I, e Der f I) e do Grupo II (e.g., Der p II e Der f II) em alergias a ácaros do pó doméstico. Por exemplo, tem sido documentado que mais de 60% dos pacientes possuem pelo menos 50% dos seus anticorpos anti-ácaro dirigidos contra estas proteínas (e.g., Lind, P. et al., Allerqy, 39.:259-274 (1984); van der Zee, J.S. et al., Journal Allerqy and Clinicai Immunoloqy. 81: 884-896 (1988)). É possível que as crianças mostrem um maior grau de reactividade aos alergenos do Grupo I e do Grupo II (Thompson, P.J., et al., Immunoloqy, 64.:301-314 (1988)). A alergia a ácaros do género Dermatophaqoides (D.) está associada a condições tais como asma, rinite e dermatite ectópica. Duas espécies, D. pteronvssinus e D. farinae, predominam e, como resultado, tem sido dispendido um esforço considerável na tentativa de identificar os alergenos produzidos por estas duas espécies.

Tem sido efectuado um esforço conjunto para caracterizar por clonagem de genes os alergenos principais de ambos D. pteronvssinus e D. farinae. Consequentemente, várias publicações têm descrito as sequências nucleotídicas completas dos vários alergenos incluído Der p I (Thomas, W.R., et al., International Archives of Allerqy and Applied Immunoloqy, 85: 127-129 (1988); e Chua, K.Y. et al., Journal of Experimental Medicine, 167: 175-182 (1988)), Der p II (Chua, K.Y. et al., International

J ^{74 486}

IPC-017(Portugal)

-3Archives of Allerqy and Applied Immunoloov, 91: 118-123 (1990)), Der f I (Dilworth, R.J., et al., Clinicai and Experimental Allerqy, 21.:25-32 (1991)), Der f II (Yuuki, T., et al., Japan Journal Ãlleraol., 39: 557-461 (1990) ; e Trudinger, Μ., et al., Clinicai and Experimental Allerqy, 21:33-37 (1991)) e um alergeno de baixa massa molecular (Ovey, E.R., et al., Journal of Experimental Medicine, 170:1457-1462 (1989)).

As sequências nucleotídicas publicadas dos ADNc codificadores de Der p I e Der f I demonstram que estas duas proteínas são altamente homólogas a nível dos aminoácidos (81% de identidade) e que os produtos proteicos maduros compreendem 222 e 223 resíduos, respectivamente (Chua, K.Y. et al., Journal of Experimental Medicine, 167:175-182 (1988) e Dilworth, R.J., et al., supra)). Os alergenos proteicos Der p II e Der f II compreendem ambos 129 resíduos, e são também altamente homólogos (88% de identidade) na sequência de aminoácidos (Trudinger, Μ., et al. supra; Yuuki, T., et al. supra); Chua, K.Y. et al., International Archives of Allerqy and Applied Immunoloqy, 91: 118-123 (1990)).

isolamento dos clones de ADNc codificadores de Der p I e Der p II permitiu estudos de ligação de anticorpo nos antigénios recombinantes (Green, W.K., et al., International Archives of Allerqy and Applied Immunoloqy, 92.:30-38 (1990); Chua, K.Y. et al., International Archives of Allerqy and Applied Immunoloqy,

91.:124-129 (1990)). Fragmentos de ADN complementares a Der p I têm sido expressos em E. coli e estudos de ligação de IgE, com IgE de soros humanos combinados alérgicos a ácaro, têm demonstrado regiões de ligação e de não-ligação em toda a molécula (Thomas, W.R., et al., In: Epitopes of Atopic Allerqens, Proceedinqs of Workshop from XIV Conqress of the European Academv of Allerqy and Clinicai Immunoloqy, Ber1in, Set. 1989. pp 77-82). Foram descritos epitopos de célula T de Der p I (0'Hehir, R.E., et al., Annual Review Immunoloqy, 9.: 67-95 (1991); Stewart, G.A., et al., In: Epitopes of Atopic Allerqens. Proceedinqs of Workshop from XIV Conqress of the European Academy of Allerqy and Clinicai Immunoloqy,

J ^{74 486}

IPC-017(Portugal)

Berlin, Set. 1989. pp 41-47; Yessel, H., et al., In: T cell Activation in Health and Disease: Discrimination Between Immunity and Tolerance, Conference 22-26 Set., 1990, Trinity College, Oxford, U.K. and Hessel, H., et al., Journal of Immunolocrv, 148 (3): 738-745 (1 de Fev. 1992).

Sumário do invento

O presente invento proporciona péptidos isolados dos principais alergenos proteicos do género Dermatophaqoides. Os péptidos no âmbito do invento compreendem pelo menos um epítopo de célula T, preferivelmente pelo menos dois epitopos de célula T, de um alergeno proteico seleccionado de entre os alergenos Der p I, Der p II, Der f I ou Der f II. O invento proporciona ainda péptidos compreendendo pelo menos duas regiões, cada região compreendendo pelo menos um epítopo de célula T de um alergeno proteico de ácaro. As regiões são derivadas do mesmo ou de diferentes alergenos proteicos do género Dermatophagoides.

O invento refere-se também a péptidos modificados possuindo propriedades terapêuticas semelhantes ou melhoradas em relação às dos correspondentes alergenos que ocorrem naturalmente ou das suas porções, mas possuindo efeitos secundários reduzidos, assim como péptidos modificados possuindo propriedades melhoradas tal como aumento de solubilidade e estabilidade. Péptidos do invento são capazes de modificar, num indivíduo sensível a ácaros de pó doméstico ao qual eles sejam administrados, a resposta alérgica do indivíduo a um alergeno de ácaro de pó doméstico ou a um alergeno imunologicamente cruzadamente reactivo com alergeno de ácaro de pó doméstico. Proporcionam-se também processos de tratamento ou de diagnóstico da sensibilidade de um indivíduo a ácaros de pó doméstico e composições terapêuticas compreendendo um ou mais péptidos do invento.

Breve Descrição dos Desenhos

A Fig. 1 apresenta a subclonagem e expressão dos alergenos de Grupo I e Grupo II de D. pteronvssinus e D. farinae.

A Fig. 2a apresenta os adaptadores utilizados na expressão

-574 486

IPC-017(Portugal) de Der ρ I e Der f I e a Fig. 2b apresenta os iniciadores para a amplificação de Der f II e Der ρ II e um iniciador de mutagénese para Der ρ II.

A Fig. 3 apresenta vários péptidos de comprimento desejado derivados dos alergenos proteicos Der ρ I e Der ρ II.

A Fig. 4 apresenta vários péptidos de comprimento desejado derivados dos alergenos proteicos Der f I e Der f II.

A Fig. 5 é uma representação gráfica representando as respostas de linhas de células T de 33 pacientes iniciadas in vitro pela proteína Der ρ I quer purificada no seu estado nativo (N) ou recombinante (R) e analisadas quanto à resposta a vários péptidos Der ρ I que se sobrepõem, pela percentagem de respostas com um índice de estimulação de célula T (I.E.) de pelo menos 2 de entre os indivíduos testados, pelo índice médio de estimulação de célula T das respostas positivas para o péptido e pela soma ordenada das respostas ao péptido.

A Fig. 6 é uma representação gráfica representando as respostas de linhas de células T de 16 pacientes iniciadas in vitro pela proteína Der f I e analisadas quanto à resposta a vários péptidos Der f I que se sobrepõem, pela percentagem de respostas com um I.E. de pelo menos 2 de entre os indivíduos testados, pelo índice médio de estimulação de célula T das respostas positivas para o péptido e pela soma ordenada das respostas ao péptido.

A Fig. 7 é uma representação gráfica representando as respostas de linhas de células T de 14 pacientes iniciadas in vitro pela proteína Der ρ I e analisadas quanto à resposta a vários péptidos Der ρ I que se sobrepõem e péptidos Der f I substancialmente coincidentes, pela percentagem de respostas com um I.E. de pelo menos 2 de entre os indivíduos testados, pelo índice médio de estimulação de célula T das respostas positivas para o péptido e pela soma ordenada das respostas ao péptido.

-674 486

IPC-017(Portugal)

A Fig. 8 é uma representação gráfica representando as respostas de linhas de células T de 8 pacientes iniciadas in vitro pela proteína Der f I e analisadas quanto à resposta a vários péptidos Der f I que se sobrepõem e péptidos Der p I substancialmente coincidentes, pela percentagem de respostas com um I.E. de pelo menos 2 de entre os indivíduos testados, pelo índice médio de estimulação de célula T das respostas positivas para o péptido e pela soma ordenada das respostas ao péptido.

A Fig. 9 é uma representação gráfica representando as respostas de linhas de células T de 29 pacientes iniciadas in vitro pela proteína Der p II e analisadas quanto à resposta a vários péptidos Der p II que se sobrepõem , pela percentagem de respostas com um I.E. de pelo menos 2 de entre os indivíduos testados, pelo índice médio de estimulação de célula T das respostas positivas para o péptido e pela soma ordenada das respostas ao péptido.

A Fig. 10 é uma representação gráfica representando as respostas de linhas de células T de 10 pacientes iniciadas in vitro pela proteína Der f II e analisadas quanto à resposta a vários péptidos Der f II que se sobrepõem , pela percentagem de respostas com um I.E. de pelo menos 2 de entre os indivíduos testados, pelo índice médio de estimulação de célula T das respostas positivas para o péptido e pela soma ordenada das respostas ao péptido.

A Fig. 11 é uma representação gráfica representando as respostas de linhas de células T de 10 pacientes iniciadas in vitro pela proteína Der f II e analisadas quanto à resposta a vários péptidos Der f II que se sobrepõem e péptidos Der p II substancialmente coincidentes, pela percentagem de respostas com um I.E. de pelo menos 2 de entre os indivíduos testados, pelo índice médio de estimulação de célula T das respostas positivas para o péptido e pela soma ordenada das respostas ao péptido.

A Fig. 12 é uma representação gráfica representando as respostas de linhas de células T de 26 pacientes iniciadas in

J 74 486 . IPC-017(Portugal)

vitro pela proteína Der p II e analisadas quanto à resposta a vários péptidos Der f II que se sobrepõem, pela percentagem de respostas com um I.E. de pelo menos 2 de entre os indivíduos testados, pelo índice médio de estimulação de célula T das respostas positivas para o péptido e pela soma ordenada das respostas ao péptido.

A Fig. 13 é uma representação gráfica representando as respostas de linhas de células T de 33 pacientes iniciadas in vitro pela proteína Der p I e analisadas quanto à resposta a péptidos seleccionados de comprimentos desejados derivados do alergeno proteico Der p I, pela percentagem de respostas com um I.E. de pelo menos 2 de entre os indivíduos testados, pelo índice médio de estimulação de célula T das respostas positivas para o péptido e pela soma ordenada das respostas ao péptido.

A Fig. 14 é uma representação gráfica representando as respostas de linhas de células T de 9 pacientes iniciadas in vitro pela proteína Der f I e analisadas quanto à resposta a péptidos seleccionados de comprimentos desejados derivados do alergeno proteico Der f I, pela percentagem de respostas com um

I.E. de pelo menos 2 de entre os indivíduos testados, pelo índice médio de estimulação de célula T das respostas positivas para o péptido e pela soma ordenada das respostas ao péptido.

A Fig. 15a é uma representação gráfica representando as respostas de linhas de células T de 30 pacientes emparelhados iniciadas in vitro pela proteína Der ρ I e analisadas quanto à resposta a péptidos seleccionados de comprimentos desejados derivados dos alergenos proteicos Der p I e Der f I, pela percentagem de respostas com um I.E. de pelo menos 2 de entre os indivíduos testados, pelo índice médio de estimulação de célula T das respostas positivas para o péptido e pela soma ordenada das respostas ao péptido.

A Fig. 15b é uma representação gráfica derivada dos mesmos

-874 486

IPC-017(Portugal) dados apresentados na Fig.

15a resposta de células T iniciadas por Der ρ I a péptidos Der ρ I preferidas e analisadas, pela percentagem de respostas com um I.E. de pelo menos 2 de entre os indivíduos testados (acima de cada barra), pelo índice médio de estimulação de célula T (acima de cada barra entre parêntesis) e pela soma ordenada das respostas ao péptido.

A Fig. 16a é uma representação gráfica representando as respostas de linhas de células T de 9 pacientes iniciadas in vitro pela proteína Der f I e analisadas quanto à resposta a péptidos seleccionados de comprimentos desejados derivados dos alergenos proteicos Der f I e Der ρ I, pela percentagem de respostas com um I.E. de pelo menos 2 de entre os indivíduos testados e pelo índice médio de estimulação de célula T de respostas com um I.E. de pelo menos 2 para o péptido.

A Fig. 16b é uma representação gráfica derivada dos mesmos dados apresentados na Fig. 16a apresentando a resposta de linhas de células T iniciada por Der ρ I a péptidos Der f I e Der ρ I preferíveis, pela percentagem de respostas com um I.E. de pelo menos 2 de entre os indivíduos testados e pelo índice médio de estimulação de célula T de respostas com um I.E. de pelo menos 2 para o péptido.

A Fig. 17a é uma representação gráfica representando a resposta de células T de 29 pacientes iniciadas in vitro pela proteína Der ρ II e analisada quanto à resposta a péptidos seleccionados de comprimentos desejados derivados da proteína Der ρ II pelo índice de estimulação de célula T de uma resposta com um I.E. de pelo menos 2 para o péptido.

A Fig. 17b é uma representação gráfica representando a resposta de 30 pacientes iniciada in vitro pela proteína Der p II e analisada quanto à resposta a péptidos seleccionados derivados da proteína Der ρ II, pela percentagem de respostas com um I.E. de pelo menos 2 de entre os indivíduos testados (acima de cada barra), pelo índice médio de estimulação de

486

IPC-017(Portugal) —9—

célula T médio (acima de cada barra em parêntesis) e pela soma ordenada da resposta ao péptido (eixo dos X).

A Fig. 18a é uma representação gráfica representando a resposta de células T de 10 pacientes iniciada in vitro pela proteína Der f II e analisada quanto à resposta a péptidos seleccionados de comprimentos desejados derivados das proteínas Der η II e Der f II, pelo índice de estimulação de célula T de uma resposta com um I.E. de pelo menos 2 para o péptido.

A Fig. 18b é uma representação gráfica derivada dos mesmos dados apresentados na Fig. 18a apresentando a resposta de linhas de células T iniciada por Der f II a péptidos Der p II preferíveis analisada, pela percentagem de respostas com um I.E. de pelo menos 2 de entre os indivíduos testados (acima de cada barra), pelo índice médio de estimulação de célula T (acima de cada barra em parêntesis) e pela soma ordenada das respostas ao péptido.

A Fig. 18c é uma representação gráfica representando a resposta de linhas de células T de 4 pacientes emparelhados iniciada in vitro com alergeno de grupo I de ácaro e analisada quanto à resposta a péptidos Der p I e Der f I preferidos, pela percentagem de respostas com um I.E. de pelo menos 2 de entre os indivíduos testados e pelo índice médio de estimulação de célula T de respostas positivas para o péptido.

A Fig. 18d é uma representação gráfica representando as respostas de linhas de células T de 6 pacientes emparelhados iniciada in vitro com alergeno do grupo II de ácaro e analisada quanto à resposta a péptidos Der p II preferidos, pela percentagem de respostas com um I.E. de pelo menos 2 de entre os indivíduos testados e pelo índice médio de estimulação médio das respostas positivas para o péptido.

A Fig. 19a-19b são representações gráficas dos resultados de um ensaio de ligação directa de IgE a proteínas Der ρ I e Der p. II purificadas por afinidade e recombinantes, e certos

J ^{74 486}

IPC-017(Portugal)

-10péptidos que se sobrepõem Der ρ I e Der ρ II.

A Fig. 20a-20b são representações gráficas dos resultados de um ensaio de ligação directa de IgE a proteínas Der f I e Der f II purificadas por afinidade e recombinantes, e certos péptidos que se sobrepõem Der f I e Der f II.

A Fig. 21a-21h são representações gráficas dos resultados de um ensaio de ligação directa de IgE a uma mistura de alergenos de ácaro purificados bioquimicamente (AAP) e vários péptidos derivados de Der ρ I, Der f I, Der ρ II e Der f II.

A Fig. 22 é um alinhamento composto das sequências de aminoácido de cinco clones de Der ρ I (a)-(e) os quais ilustram o polimorfismo na proteína Der ρ I. A numeração refere-se à sequência do clone Der ρ I (a). 0 símbolo (-) é utilizado para indicar que o resíduo de aminoácido de um clone Der ρ I é idêntico às sequências de aminoácido correspondentes de Der ρ I (a) naquela posição. As sequências de aminoácido destes clones indicam que pode existir variação significativa em Der ρ I, com cinco resíduos de aminoácido polimórficos encontrados nas cinco sequências.

A Fig. 23 é um alinhamento composto de sequências de aminoácido de três clones de Der ρ II (c), (1) e (2) os quais ilustram o polimorfismo na proteína Der ρ II. A numeração refere-se à sequência do clone Der ρ II (c). 0 símbolo (.) é utilizado para indicar que o resíduo de aminoácido de um clone Der ρ II é idêntico ao resíduo de aminoácido correspondente de Der ρ II (c) naquela posição.

A Fig. 24 é um alinhamento composto de sequências de aminoácidos de seis clones de Der f I (i.e., pFLl, pFL2, MT3, MT5, MT18 e MT16) os quais ilustram o polimorfismo na proteína Der f II. A numeração refere-se às sequências do clone Der f pLFl. 0 símbolo (.) é utilizado para indicar que o resíduo de aminoácido de um clone Der f II é idêntico ao resíduo de aminoácido correspondente de Der f II pFLl naquela posição.

J ^{74 486}

IPC-017(Portugal)

-11A Fig. 25 apresenta as sequências de nucleótidos e de aminoácidos de um péptido seleccionado que compreende várias regiões derivadas de alergenos proteicos Der p I, Der p II e Der f I.

A Fig. 26 apresenta as sequências de nucleótidos e de aminoácidos de um péptido seleccionado o que compreende várias regiões derivadas de alergenos proteicos Der ρ I, Der p II e Der f I.

A Fig. 27 apresenta as sequências de nucleótidos e de aminoácidos de um péptido seleccionado que compreende várias regiões derivadas de alergenos proteicos Der ρ I, Der ρ II e Der f I.

A Fig. 28 apresenta as sequências de aminoácidos de péptidos modificados de acordo com o invento.

Descrição Detalhada do Invento presente invento proporciona péptidos isolados derivados dos principais alergenos proteicos do género Dermatophaqoides. Como aqui utilizado, um péptido ou fragmento de uma proteína refere-se a uma sequência de aminoácidos possuindo menos resíduos de aminoácido do que a sequência de aminoácidos completa da proteína. Péptidos do invento incluem péptidos derivados de Der ρ I (SEQ ID NO: 1 e 2), Der ρ II (SEQ ID NO: 3 e 4), Der f I (SEQ ID NO: 5 e 6) e Der f II (SEQ ID NO: 7 e 8), os quais compreendem pelo menos um epitopo de célula T do alergeno.

Péptidos compreendendo pelo menos duas regiões, cada região compreendendo pelo menos um epitopo de célula T de um alergeno proteico do género Dermatophaqoides estão também dentro do âmbito do invento. Cada região destes péptidos é derivada do mesmo ou de diferentes alergenos de ácaro. Péptidos isolados ou regiões de péptidos isolados, cada compreendendo pelo menos dois epitopos de célula T de um alergeno proteico de ácaro são particularmente desejáveis por aumentarem a eficiência

-12J74 486

IPC-017(Portugal) terapêutica. Péptidos que são imunologicamente relacionados (e.g., por anticorpo ou reactividade cruzada de célula T) com péptidos do presente invento estão também dentro do âmbito do invento. Péptidos imunologicamente relacionados por reactividade cruzada de anticorpo são ligados por anticorpos específicos para um péptido de um alergeno proteico do género Dermatophagoides. Péptidos imunologicamente relacionados por reactividade cruzada de célula T são capazes de reagir com as mesmas células T como um péptido do invento.

Os péptidos isolados do invento podem ser produzidos por técnicas de ADN recombinante numa célula hospedeira transformada com um ácido nucleico possuindo a sequência codificadora desse péptido. Os péptidos isolados do invento pode também ser produzidos por síntese química. Em certas situações limitadas, péptidos isolados podem ser produzidos por clivagem química do alergeno proteico. Quando um péptido é produzido por técnicas recombinantes, células hospedeiras transformadas com um ácido nucleico contendo uma sequência codificadora do péptido ou um equivalente funcional da sequência do ácido nucleico, são cultivadas num meio adequado para as células e os péptidos podem ser purificados do meio de cultura celular, de células hospedeiras, ou de ambas utilizando técnicas conhecidas na arte para a purificação de péptidos e de proteínas incluindo cromatografia de permuta iónica, cromatografia de filtração em gel, ultrafiltração, electroforese ou imunopurificação com anticorpos específicos para o péptido, para o alergeno proteico do género Dermatophagoides, do qual o péptido é derivado, ou para uma sua porção. Os péptidos isolados do invento estão substancialmente isentos de material celular ou de meio de cultura quando produzidos por técnicas de ADN recombinante, ou substancialmente isentos de precursores químicos ou de outros compostos químicos quando sintetizados quimicamente.

presente invento proporciona vectores de expressão e células hospedeiras transformadas para expressar sequências de ácido nucleico do invento. Uma sequência de ácido nucleico

J 74 486

IPC-017(Portugal)

-13codificadora de um alergeno proteico de ácaro, ou de pelo menos um seu fragmento pode ser expressa em células bacterianas tais como E. Coli, células de insecto (baculovírus), leveduras ou células de mamífero, tais como células de ovário de hamster Chinês (COH). Vectores de expressão apropriados, promotores, intensificadores, e outros elementos de controlo de expressão podem ser encontrados em Sambrook et al. Molecular Cloning: A Laboratorv Manual, segunda edição, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York (1989). Outros vectores de expressão apropriados, promotores, intensificadores e outros elementos de expressão são conhecidos dos peritos na arte. A expressão em células de mamífero, de levedura ou de insecto conduzem à glicosação parcial ou completa do material recombinante e formação de quaisquer ligações dissulfureto inter- ou intra-cadeias. Vectores adequados para a expressão em leveduras incluem YepSecl (Baldari et al. (1987) Embo J. 6.:229-234); pMFa (Kurjan e Herskowitz (1982) Cell 30:933-943); JRY88 (Schultz et al. (1987) Gene 54: 113-123) e pYES2 (Invitrogen Corporation, San Diego, CA). Estes vectores encontram-se livremente disponíveis, sistemas de expressão de baculovírus e mamíferos estão também disponíveis. Por exemplo, um sistema de baculovírus está disponível comercialmente (PharMingen, San Diego, CA) para a expressão em células de insecto enquanto que o vector pMSG está disponível comercialmente (Pharmacia, Piscataway, NJ) para expressão em células de mamífero.

Para expressão em E. coli, vectores de expressão adequados incluem, entre outros, pTRC (Amann et al. (1988) Gene 69:301-315; pGEX (Amrad Corp., Melbourne, Australia); pMAL (N.E. Biolabs, Beverly, MA); pRIT5 (Pharmacia, Piscataway, NJ); pET-lld (Novagen, Madison, WI) Jameel et al., (1990) J. Virol. 64: 3963—3966; e pSEM (Knapp et al. (1990) BioTechnigues 8.: 280-281). A utilização de pTRC e de pET-lld, por exemplo, conduzirá à expressão de proteínas não fundidas. A utilização de pMAL, pRIT5, pSEM e pGEX conduzirá à expressão de alergeno fundido a proteína de ligação a maltose E (pMAL), a proteína A (pRIT5), a 0-galactosidase truncada (pSEM) ou glutationa

-14J 74 486

IPC-017(Portugal)

S-transferase (pGEX). Quando um alergeno proteico de ácaro, fragmento, ou seus fragmentos é expresso como uma proteína de fusão, é particularmente vantajoso introduzir um local de clivagem enzimática na junção da fusão entre a proteína portadora e o alergeno proteico de ácaro ou um seu fragmento. Um alergeno proteico de ácaro ou um seu fragmento podem posteriormente ser recuperados da proteína de fusão através de clivagem enzimática no local enzimático e de purificação bioquímica utilizando técnicas convencionais para a purificação de proteínas e péptidos. Locais adequados de clivagem enzimática incluem aqueles para o factor de coagulação sanguíneo Xa ou para a trombina para os quais os enzimas e protocolos apropriados para a clivagem estão disponíveis comercialmente, por exemplo, Sigma Chemical Company, St. Louis, MO e N.E. Biolabs, Bervely, MA. Os diferentes vectores possuem também diferentes regiões promotoras, permitindo a expressão constitutiva ou indutiva com, por exemplo, indução com IPTG (PRTC, Amann et al-, (1988) supra; pET-lld, Novagen, Madison, WI) ou indução por temperatura (pRIT5, Pharmacia, Piscataway, NJ).

Para se obterem os péptidos isolados do presente invento, um alergeno de ácaro é dividido em péptidos sem sobreposição de comprimento desejado ou em péptidos com sobreposição com os comprimentos desejados, como discutido no Exemplo III os quais podem ser produzidos recombinantemente, sinteticamente, ou em certas situações limitadas, por clivagem química do alergeno. Os péptidos compreendendo pelo menos um epitopo de célula T são capazes de originar uma resposta de célula T, tal como estimulação (i.e. proliferação ou secreção de linfoquina) e/ou capazes de induzir anergia de célula T (i.e. tolerização). Para determinar péptidos compreendendo pelo menos um epitopo de célula T, são testados péptidos isolados por, por exemplo, técnicas de biologia da célula T, para determinar se os péptidos originam uma resposta da célula T ou induzem anergia de célula T. Aqueles péptidos que mostraram originar uma resposta da célula T ou induzir anergia de célula T são definidos como possuindo actividade estimuladora da célula

486

IPC-017(Portugal)

-15Τ.

Como discutido nos Exemplos, a actividade estimuladora da célula T humana pode ser testada por cultura de células T obtidas a partir de um indivíduo sensível a alergeno de ácaro (i.e., um indivíduo que possui uma resposta imunitária mediada por IgE a alergeno de ácaro) com um péptido derivado do alergeno e determinando se a proliferação de células T ocorre em resposta ao péptido como medido, por exemplo, por incorporação celular de timidina tritiada. índices de estimulação para respostas de células T a péptidos podem ser calculados como CPM máximo em resposta ao péptido dividido por CPM do controlo. Um índice de estimulação da célula T (I.E.) igual a, ou duas vezes maior do que o nível de fundo é considerado positivo. Resultados positivos são utilizados para calcular o índice médio de estimulação para cada péptido para o grupo de péptidos testados. Péptidos preferidos deste invento compreendem pelo menos um epítopo de célula T e possuem um índice médio de estimulação da célula T superior ou igual a 2,0. Um péptido que possua um índice médio de estimulação da célula T superior ou igual a 2,0 é considerado útil como agente terapêutico. Péptidos preferidos possuem um índice médio de estimulação da célula T de pelo menos 2,5, mais preferivelmente de pelo menos 3,5, ainda mais preferivelmente de pelo menos 4,0, e ainda mais preferivelmente de pelo menos 5,0.

Para além disso, péptidos preferidos possuem um índice de positividade (I.P.) de pelo menos cerca de 100, mais preferivelmente de pelo menos 150, ainda mais preferivelmente de pelo menos cerca de 200 e ainda mais preferivelmente de pelo menos cerca de 250. 0 índice de positividade para um péptido é determinado multiplicando o índice médio de estimulação da célula T pela percentagem de indivíduos, numa população de indivíduos sensíveis a ácaros do pó doméstico (e.g. preferivelmente pelo menos 9 indivíduos, mais preferivelmente pelo menos 16 indivíduos ou mais, mais preferivelmente pelo menos 29 indivíduos ou mais, ou ainda mais preferivelmente pelo menos 30 indivíduos ou mais) que possuam células T que

-16J 74 486

IPC-017(Portugal) respondam ao péptido. Assim, o índice de positividade representa a força da resposta da célula T a um péptido (I.E.) e a frequência da resposta da célula T a um péptido numa população de indivíduos sensíveis a ácaros do pó doméstico. Por exemplo, como apresentado na Fig. 5, o péptido DPI-1 possui um

I.E. médio de 4,7 e 73% de respostas positivas no grupo de indivíduos testados resultando num índice de positividade de 343,1. Péptidos de Der d I, possuindo um índice de positividade de pelo menos cerca de 150 e um índice médio de estimulação da célula T de pelo menos cerca de 4 incluem: DPI-1 (SEQ ID NO: 9); DPI-21.1 (SEQ ID NO: 27); DPI-21.2 (SEQ ID NO: 28);

DPI-23.1 (SEQ ID NO: 33); DPI-23.2 (SEQ ID NO: 34); DPI-25.2 (SEQ ID NO: 36); e DPI-26.1 (SEQ ID NO: 37).

De modo a determinar epítopos precisos da célula T por exemplo, por técnicas finas de mapeamento, um péptido possuindo actividade estimuladora da célula T e assim compreendendo pelo menos um epítopo da célula T como determinado por técnicas de biologia da célula T, é modificado por adição ou delecção de resíduos de aminoácido tanto na extremidade amina como na extremidade carboxi do péptido e testado para determinar uma alteração na reactividade da célula T ao péptido modificado. Se dois ou mais péptidos que partilhem uma área de sobreposição na sequência da proteína nativa mostrarem ter actividade estimuladora da célula T humana, como determinado por técnicas de biologia de célula T, podem ser produzidos péptidos adicionais compreendendo toda ou uma porção de tais péptidos e estes péptidos adicionais podem ser testados por um procedimento semelhante. Seguindo esta técnica, são seleccionados e produzidos péptidos recombinantemente ou sinteticamente. Os péptidos são seleccionados com base em vários factores incluindo a força da resposta da célula T ao péptido (e.g. índice de estimulação), a frequência da resposta da célula T ao péptido numa população de indivíduos sensíveis a ácaros do pó doméstico, e a potencial reactividade cruzada do péptido com outros alergenos do género PermatoDhaaoides. As propriedades físicas e químicas destes péptidos seleccionados (e.g., solubilidade, estabilidade) são examinadas para

J 74 486

IPC-017(Portugal)

-17determinar se os péptidos são adequados para utilização em composições terapêuticas ou se os péptidos necessitam de modificações como as aqui descritas. A capacidade dos péptidos seleccionados ou dos péptidos modificados seleccionados de estimular células T humana (e.g., indução de proliferação, secreção de linfoquina) é determinada.

Para além disso, péptidos preferidos do invento não ligam imunoglobulina E (IgE) ou ligam IgE numa extensão substancialmente inferior à do alergeno proteico a partir do qual o péptido é derivado. As principais complicações da imunoterapia comum são as respostas mediadas por IgE tal como a anafilaxia. A imunoglobulina E é um mediador de reacções anafiláticas que resultam da ligação e da reticulação do antigénio a IgE em mastócitos ou basófilos e da libertação de mediadores (e.g., histamina, serotonina, factores quimiotácticos eosinófilos). Assim, a anafilaxia numa percentagem substancial de uma população de indivíduos sensíveis a ácaros do pó doméstico poderia ser evitada pela utilização na imunoterapia de um péptido ou péptidos que não liguem IgE numa percentagem substancial (e.g., pelo menos cerca de 75%) de uma população de indivíduos sensíveis a alergeno de ácaros do pó doméstico, ou se o péptido ligar IgE, essa ligação não resultar na libertação de mediadores a partir de mastócitos ou basófilos. 0 risco de anafilaxia poderia ser reduzido pela utilização na imunoterapia de um péptido ou péptidos que possuam ligação reduzida a IgE. Para além disso, péptidos que possuam actividade mínima estimuladora de IgE são desejáveis para eficácia terapêutica. A actividade mínima estimuladora de IgE refere-se à produção de IgE que é inferior à quantidade de IgE produzida e/ou produção de IL-4 estimulada pelo alergeno proteico nativo (e.g., Der ρ I).

Um péptido do invento, quando administrado a um indivíduo sensível a ácaros do pó doméstico, é capaz de modificar a resposta alérgica do indivíduo ao alergeno. Particularmente, péptidos do invento compreendendo pelo menos um epitopo de célula T de um alergeno de ácaro ou pelo menos duas regiões

-18J 74 486

IPC-017(Portugal) derivadas de um alergeno de ácaro, cada um compreendendo pelo menos um epítopo de célula T, quando administrados a um indivíduo sensível a ácaros do pó doméstico são capazes de modificar a resposta da célula T do indivíduo ao alergeno. Tal como aqui utilizado, modificações da resposta alérgica de um indivíduo a ácaros do pó doméstico podem ser definidas como a não responsividade ou diminuição nos sintomas após exposição ao alergeno de ácaro, como determinado por procedimentos clínicos comuns (ver e.g., Varney et al., British Medicai Journal. 302: 265-269 (1990)) incluindo diminuição em sintomas asmáticos induzidos por alergeno proteico de ácaros. Como aqui referido, uma diminuição nos sintomas inclui qualquer redução na resposta alérgica de um indivíduo ao alergeno após o indivíduo ter completado um regime de tratamento com um pêptido ou proteína do invento. Esta diminuição pode ser subjectiva (i.e. o paciente sente-se mais confortável na presença do alergeno). A diminuição dos sintomas pode ser também determinada clinicamente, utilizando testes de pele comuns como os conhecidos na arte.

Como um resultado do trabalho aqui descrito, foram produzidos péptidos derivados de alergenos de ácaro compreendendo pelo menos um epítopo de célula T. Acredita-se que epitopos de célula T estão envolvidos na iniciação e perpetuação das respostas imunitárias a alergeno(s) de ácaro que são responsáveis pelos sintomas clínicos da alergia a ácaros. Estes epitopos de célula T são supostos desencadear os acontecimentos iniciais ao nível da célula T ajudante por ligação a uma molécula HLA apropriada na superfície de uma célula apresentando antigénios e estimulando a subpopulação relevante de células T. Estes acontecimentos conduzem à proliferação de células T, secreção de linfoquinas, reacções inflamatórias locais, recrutamento de células imunitárias adicionais ao local e activação da cascata de célula B conducente à produção de anticorpos. Um isotipo destes anticorpos, IgE, é fundamentalmente importante no desenvolvimento de sintomas alérgicos e a sua produção é influenciada precocemente na cascata de acontecimentos, ao nível

486

IPC-017(Portugal)

-19da célula T ajudante, pela natureza das linfoquinas segregadas. Um epitopo de célula T é o elemento básico ou unidade mais pequena de reconhecimento por um receptor de célula T, onde o epitopo compreende resíduos de aminoácido essenciais para o reconhecimento do receptor o qual pode ser contíguo e/ou não contíguo na sequência de aminoácidos da proteína. Sequências de aminoácido que mimetizam as do epitopo da célula T e que modificam a resposta alérgica a alergenos proteicos do género Dermatophagoides estão no âmbito deste invento.

A exposição de pacientes alérgicos a ácaros, a péptidos do presente invento, pode tolerar ou anergizar subpopulações de células T, de tal modo que elas se tornem não responsivas a alergeno(s) de ácaro e não participem no estabelecimento de uma resposta imunitária após tal exposição. Em adição, a administração de um péptido do presente invento pode modificar o perfil de secreção de linfoquina, tal como comparado com a exposição ao alergeno proteico de ácaro que ocorre naturalmente ou uma sua porção (e.g., resulta numa diminuição de IL-4 e/ou um aumento em IL-2). Além disso, exposição a um péptido do invento pode influenciar subpopulações de células T que participam normalmente na resposta a alergeno(s) de ácaro, de tal forma que estas células T são afastadas do local(locais) de exposição normal ao alergeno (e.g. mucosa nasal, pele ou pulmão) no sentido do local(locais) de administração terapêutica do péptido. Esta redistribuição de subpopulações de células T pode melhorar ou reduzir a capacidade do sistema imunitário de um indíviduo estabelecer uma resposta imunitária no local de exposição normal a alergeno(s) de ácaro, resultando numa diminuição dos sintomas alérgicos.

Péptidos isolados do invento compreendem pelo menos um epitopo de célula T de um alergeno proteico do género Dermatophacfoides e consequentemente, o péptido compreende pelo menos aproximadamente sete resíduos de aminoácidos do alergeno proteico. Para propósitos de eficácia terapêutica, composições terapêuticas do invento compreendem preferivelmente pelo menos dois epitopos de célula T de um alergeno de ácaro.

486

IPC-017(Portugal)

-20Consequentemente, péptidos isolados do invento compreendem preferivelmente pelo menos dois epitopos de célula T e consequentemente, o péptido compreende pelo menos aproximadamente oito resíduos de aminoácido, e preferivelmente quinze resíduos de aminoácido. Adicionalmente, composições terapêuticas do invento compreendem preferivelmente uma percentagem suficiente de epitopos de célula T do alergeno proteico inteiro, de tal forma que um regime terapêutico de administração da composição ao indíviduo sensível a ácaros do pó doméstico resulta em células T do indíviduo sendo toleráveis ao alergeno proteico. Péptidos do invento produzidos sinteticamente compreendendo até aproximadamente quarenta e cinco resíduos de aminoácido de comprimento, e mais preferivelmente até aproximadamente trinta resíduos de aminoácido de comprimento são particularmente desejáveis, pois aumentos de comprimento podem resultar em dificuldades de síntese do péptido assim como retenção de propriedades indesejáveis (e.g., ligação de imunoglobulinas ou actividade enzimática) devida à manutenção de semelhanças conformacionais entre o péptido e o alergeno proteico do qual é derivado. Todos os péptidos apresentados na Fig. 3 e Fig. 4 mostraram ter actividade estimuladora de célula T humana.

Péptidos preferidos compreendem toda ou uma porção das áreas de principal reactividade de células T nos alergenos proteicos Der ρ I, Der f I, Der ρ II e Der f II, i.e., Região 1, Região 2, Região 3, Região 4, Região 5, Região 6a, Região 6b, Região 7, Região 8, Região 9 e Região 10. Cada área é defenida como se segue: a Região 1 compreende os resíduos de aminoácido 1-28 dos alergenos proteicos Der ρ I e Der f I; a Região 2 compreende os resíduos de aminoácido 36-68 dos alergenos proteicos Der ρ I e Der f I; a Região 3 compreende os resíduos de aminoácido 74-109 dos alergenos proteicos Der ρ I e Der f I; a Região 4 compreende os resíduos de aminoácido 118-139 dos alergenos proteicos Der ρ I e Der f I; a Região 5 compreende os resíduos de aminoácido 141-166 dos alergenos proteicos Der ρ I e Der f I; a Região 6a compreende os resíduos de aminoácido 161-185 dos alergenos proteicos Der ρ I e Der f I; a Região 6b

J 74 486

IPC-017(Portugal)

-21/Z c - > ** // compreende os resíduos de aminoácido 173-201 dos alergenos proteicos Der p I e Der f I; a Região 7 compreende os resíduos de aminoácido 1-26 dos alergenos proteicos Der p II e Der f II; a Região 8 compreende os resíduos de aminoácido 33-67 dos alergenos proteicos Der p II e Der f II; a Região 9 compreende os resíduos de aminoácido 79-104 dos alergenos proteicos Der p II e Der f II e a Região 10 compreende os resíduos de aminoácido 107-129 dos alergenos proteicos Der p II e Der f II.

Os péptidos preferidos derivados da proteína Der p I compreendem toda ou uma porção dos seguintes péptidos: DP 1-1 (SEQ ID NO: 9); DP 1-2 (SEQ ID NO: 10); DP 1-3 (SEQ ID NO: 11); DP 1-4 (SEQ ID NO: 12); DP 1-11.1 (SEQ ID NO: 13); DP 1-12.1 (SEQ ID NO: 14); DP 1-5 (SEQ ID NO: 15); DP 1-13 (SEQ ID NO: 17); DP 1-14 (SEQ ID NO: 18); DP 1-15 (SEQ ID NO: 19); DP I-6.1(SEQ ID NO: 20); DP 1-7.1 (SEQ ID NO: 21); DP 1-8 (SEQ ID NO; 22); DP 1-9 (SEQ ID NO: 23); DP 1-16 (SEQ ID NO: 24); DP 1-10 (SEQ ID NO: 25); DP 1-17 (SEQ ID NO: 26); DP 1-21.1 (SEQ ID NO: 27); DP 1-21.2 (SEQ ID NO: 28); DP 1-22.1 (SEQ ID NO: 29); DP 1-22.2 (SEQ ID NO: 30); DP 1-22.3 (SEQ ID NO: 31); DP 1-22.4 (SEQ ID NO: 32); DP 1-23.1 (SEQ ID NO: 33); DP 1-23.2 (SEQ ID NO: 34); DP 1-25.1 (SEQ ID NO: 35); DP 1-25.2 (SEQ ID NO: 36); DP 1-26.1 (SEQ ID NO: 37); DP 1-27.1 (SEQ ID NO: 38); DP 1-28.1 (SEQ ID NO: 39); e DP 1-28.2 (SEQ ID NO: 40), onde a porção do péptido possui um índice médio de estimulação de célula T substancialmente equivalente ou maior que o índice médio de estimulação de célula T do péptido a partir do qual é derivado tal como apresentado na Fig. 5 e Fig. 13. Mais preferivelmente, péptidos derivados da proteína Der p I compreendem toda ou uma porção dos seguintes péptidos: DP 1-21.2, DP 1-22.2, DP 1-23.1, DP 1-25.2, DP 1-26.1, DP 1-27.1 e DP 1-28.1, e mais preferivelmente, péptidos derivados da proteína Der p I compreendem toda ou uma porção de DP 1-21.2, DP 1-23.1 e DP I26.1, onde a porção do péptido possui um índice médio de estimulação de célula T substancialmente equivalente ou maior que o índice médio de estimulação de célula T do péptido a partir do qual é derivado tal como apresentado na Fig. 5 e Fig.

13.

J 74 486

IPC-017(Portugal)

22Os péptidos preferidos derivados das proteínas Der f I, Der p II e Der f II incluem: DF 1-1 (SEQ ID NO: 72); DF 1-2.1 (SEQ ID NO: 73); DF 1-3 (SEQ ID NO: 74); DF 1-4 (SEQ ID NO: 75); DF 1-11 (SEQ ID NO: 76); DF 1-12 (SEQ ID NO: 77); DF 1-5 (SEQ ID NO: 78); DF 1-13 (SEQ ID NO: 79); DF 1-14 (SEQ ID NO: 80); DF 1-15 (SEQ ID NO: 81); DF 1-6 (SEQ ID NO: 82); DF 1-7 (SEQ ID NO: 83); DF 1-8.1 (SEQ ID NO: 84); DF 1-8 (SEQ ID NO: 85); DF 1-9 (SEQ ID NO: 86); DF 1-16 (SEQ ID NO: 87); DF 1-10 (SEQ ID NO: 88); DF 1-17 (SEQ ID NO: 89); DF 1-21.1 (SEQ ID NO: 90); DF 1-21.2 (SEQ ID NO: 91); DF 1-22.1 (SEQ ID NO: 92); DF 1-22.2 (SEQ ID NO: 93); DF 1-22.4 (SEQ ID NO: 94); DF 1-23.1 (SEQ ID NO: 95); DF

I- 23.2 (SEQ ID NO: 96); DF 1-25.1 (SEQ ID NO: 97); DF 1-25.2 (SEQ ID NO: 98); DF 1-26.1 (SEQ ID NO: 99); DF 1-27.1 (SEQ ID NO: 100); DF 1-28.1 (SEQ ID NO: 101); DF 1-28.2 (SEQ ID NO: 102); DP 11-20 (SEQ ID NO: 50); DP 11-20.1 (SEQ ID NO: 51); DP

II- 20.2 (SEQ ID NO: 52); DP 11-20.3 (SEQ ID NO; 53); DP 11-20.4 (SEQ ID NO: 54); DP 11-20.5 (SEQ ID NO: 55); DP 11-20.6 (SEQ ID NO: 56); DP II-l (SEQ ID NO: 41); DP II-2 (SEQ ID NO: 42); DP II-3.1 (SEQ ID NO: 43); DP II-4 (SEQ ID NO: 44); DP II-5 (SEQ ID NO: 45); DP II-6 (SEQ ID NO: 46); DP II-7 (SEQ ID NO: 47); DP II—8 (SEQ ID NO: 48); DP II-9 (SEQ ID NO: 49); DP II-l.l (SEQ ID NO: 57); DP II-l.2 (SEQ ID NO: 58); DP II-2.1 (SEQ ID NO: 59); DP II-2.2 (SEQ ID NO: 60); DP II-2.3 (SEQ ID NO: 61); DP 11-21 (SEQ ID NO: 62); DP 11-22 (SEQ ID NO: 63); DP 11-26 (SEQ ID NO: 64); DP 11-26.1 (SEQ ID NO: 65); DP 11-23 (SEQ ID NO: 66); DP 11-23.1 (SEQ ID NO: 67); DP 11-24 (SEQ ID NO: 68); DP 11-25 (SEQ ID NO: 69); DP 11-25.1 (SEQ ID NO: 70); DP 11-25.2 (SEQ ID NO: 71); DF II-l (SEQ ID NO: 103); DF II-2 (SEQ ID NO: 104); DF 11-13.1 (SEQ ID NO: 105); DF II-3.1 (SEQ ID NO: 106); DF II-4.5 (SEQ ID NO: 107); DF II-4.3 (SEQ ID NO: 108); DF 11-15 (SEQ ID NO: 109); DF 11-16 (SEQ ID NO: 110); DF 11-17 (SEQ ID NO: 111); DF 11-18 (SEQ ID NO: 112); DF 11-19 (SEQ ID NO: 113); DF 11-19.1 (SEQ ID NO: 114); DF 11-21 (SEQ ID NO: 115); e DF 11-22 (SEQ ID NO: 116), ou porções dos péptidos compreendendo pelo menos um epítopo de célula T. Preferivelmente, uma porção de um péptido derivado de Der f I, Der p II e Der f II possui um índice médio de estimulação de célula T equivalente ou maior que o índice médio de estimulação de célula T do péptido a partir do qual é

J 74 486

IPC-017(Portugal) derivado, tal como é apresentado na Fig. 10, Fig. 15a, Fig. 15b e Fig. 16. Mais preferivelmente, péptidos derivados de proteínas Der p II e Der f I compreendem toda ou uma porção dos seguintes péptidos: DF 1-22.2, DP 11-20.6, DP 11-22, DP 11-24 e DP 11-25.2.

Uma concretização do presente invento descreve um péptido de um alergeno proteico do género Dermatophagoides. o péptido ou uma sua porção compreende pelo menos um epítopo de célula T do alergeno proteico e possui a fórmula X_n-Y-Z_m. De acordo com a fórmula, Y é uma sequência de aminoácido seleccionada a partir do grupo consistindo em DF 1-21.1 (SEQ ID no: 90); df 1-21.2 (SEQ ID NO: 91); DF 1-22.1 (SEQ ID NO: 92); DF 1-22.2 (SEQ ID NO:93); DF 1-22.4 (SEQ ID NO: 94); DF 1-23.1 (SEQ ID NO: 95); DF

I- 23.2 (SEQ ID NO: 96); DF 1-25.1 (SEQ ID NO: 97); DF 1-25.2 (SEQ ID NO: 98); DF 1-26.1 (SEQ ID NO: 99); DF 1-27.1 (SEQ ID NO: 100); DF 1-28.1 (SEQ ID NO: 101); DF 1-28.2 (SEQ ID NO: 102); DF 1-1 (SEQ ID NO: 72); DP 11-20 (SEQ ID NO: 50); DP

II- 20.1 (SEQ ID NO: 51); DP 11-20.2 (SEQ ID NO: 52); DP 11-20.3 (SEQ ID NO: 53); DP 11-20.4 (SEQ ID NO: 54); DP 11-20.5 (SEQ ID NO: 55); DP 11-20.6 (SEQ ID NO: 56); DP II-l (SEQ ID NO: 41); DP II-l.l (SEQ ID NO: 57); DP II-l.2 (SEQ ID NO: 58); DP II-2.1 (SEQ ID NO: 59); DP II-2.2 (SEQ ID NO: 60); DP II-2.3 (SEQ ID NO: 61); DP 11-21 (SEQ ID NO: 62); DP 11-22 (SEQ ID NO: 63); DP 11-26 (SEQ ID NO: 64); DP 11-26.1 (SEQ ID NO: 65); DP 11-23 (SEQ ID N0: 66); DP 11-23.1 (SEQ ID NO: 67); DP 11-24 (SEQ ID NO: 68); DP 11-25 (SEQ ID NO: 69); DP 11-25.1 (SEQ ID NO: 70); DP 11-25.2 (SEQ ID NO: 71); DF II-l (SEQ ID NO: 103); DF II-2 (SEQ ID NO: 104); DF 11-13.1 (SEQ ID NO: 105); DF II-3.1 (SEQ ID NO: 106); DF II-4.5 (SEQ ID NO: 107); DF II-4.3 (SEQ ID NO: 108); DF 11-15 (SEQ ID NO: 109); DF 11-16 (SEQ ID NO: 110); DF 11-17 (SEQ ID NO: 111); DF 11-18 (SEQ ID NO: 112); DF 11-19 (SEQ ID NO: 113); DF 11-19.1 (SEQ ID NO: 114); DF 11-21 (SEQ ID NO: 115); e DF 11-22 (SEQ ID NO: 116). Adicionalmente, x_n são resíduos de aminoácido contíguos ao terminal amina de Y na sequência de aminoácidos do alergeno proteico e Z_m são resíduos de aminoácido contiguos ao terminal carboxi de Y na sequência de aminoácidos do alergeno proteico. Na fórmula, n é 0-30 e m é 0-30.

J 74 486

IPC-017(Portugal)

Outra concretização do presente invento proporciona péptidos compreendendo pelo menos duas regiões, cada região compreendendo pelo menos um epítopo de célula T de um alergeno proteico do género Dermatophagoides e consequentemente, cada região compreende pelo menos aproximadamente sete resíduos de aminoácido). Estes péptidos compreendendo pelo menos duas regiões podem compreender tantos resíduos de aminoácido como desejado e preferivelmente compreendem pelo menos cerca de 14, mais preferivelmente cerca de 30, e mais preferivelmente ainda pelo menos 40 resíduos de aminoácido de um alergeno de ácaro. Cada região de tal péptido compreende preferivelmente até 45 resíduos de aminoácido de comprimento, mais preferivelmente até 40 resíduos de comprimento e mais preferivelmente ainda até 30 resíduos de aminoácido de comprimento, visto que aumentos no comprimento de uma região podem resultar na dificuldade na síntese do péptido assim como na retenção de uma propriedade indesejável (e.g., ligação de imunoglobulina ou actividade enzimática) devido à manutenção de semelhança conformacionais entre o péptido e o alergeno proteico do qual ele é derivado. Se desejado, as sequências de aminoácido das regiões podem ser produzidas e unidas por um ligador para aumentar a sensibilidade ao processamento por células apresentando antigénio. Tal ligador pode ser qualquer sequência de aminoácidos que não seja do epítopo ou qualquer agente ligador ou de junção apropriado. Para obter péptidos preferidos compreendendo pelo menos duas regiões, cada compreendendo pelo menos um epítopo de célula T, as regiões são dispostas numa configuração diferente de uma configuração das regiões do alergeno que ocorre naturalmente ou uma combinação de diferentes alergenos proteicos de ácaro. Por exemplo, as regiões contendo epítopo(s) de célula T podem ser dispostas numa configuração não contígua e podem preferivelmente ser derivadas do mesmo alergeno proteico ou de uma combinação de alergenos proteicos. Não contíguo é definido como uma disposição de regiões contendo epítopo(s) de célula T, a qual é diferente daquela que uma sequência de aminoácidos apresenta no alergeno proteico a partir do qual as regiões são derivadas. Adicionalmente, as regiões não contíguas contendo epitopos de células T podem ser dispostas numa ordem não sequencial (e.g.,

J 74 486

IPC-017(Portugal)

-25numa ordem diferente da ordem dos aminoácidos do alergeno proteico nativo a partir do qual a região contendo epítopo(s) da célula T é derivada, na qual os aminoácidos estão dispostos de um terminal amino para um terminal carboxi). Um péptido pode compreender pelo menos 15%, pelo menos 30%, pelo menos 50% ou até 100% dos epítopos de célula T de um alergeno de ácaro.

As regiões individuais de péptido podem ser produzidas e testadas de modo a determinar quais as regiões que ligam imunoglobulina E específica para um alergeno de ácaro e quais de tais regiões provocariam a libertação de mediadores (e.g. histamina) a partir de mastócitos ou basófilos. Aquelas regiões de péptido que mostraram ligar imunoglobulina E e provocar a libertação de mediadores dos mastócitos ou basófilos em mais do que aproximadamente 10-15% dos soros alérgicos testados, preferivelmente não foram incluídas nas regiões de péptido dispostas para formar péptidos do invento.

Os péptidos preferidos do invento compreendem duas ou mais regiões derivadas do mesmo ou de diferentes alergenos de ácaro (e.g., Der ρ I, Der ρ II, Der f I e Der f II). Por exemplo, uma região pode ser derivada de Der ρ I e uma região pode ser derivada de Der ρ II; uma região pode ser derivada de Der ρ I e uma região pode ser derivada de Der f I; uma região pode ser derivada de Der ρ II e uma região pode ser derivada de Der f I; uma região pode ser derivada de Der ρ II e uma região pode ser derivada de Der f II; uma região pode ser derivada de Der ρ I e uma região pode ser derivada de Der f II e uma região pode ser derivada de Der f I e uma região pode ser derivada de Der f II. Adicionalmente, as regiões podem ser derivadas do mesmo alergeno proteico, e.g., Der ρ I e Der ρ I, etc.

As regiões de um péptido do invento compreendem preferivelmente todas ou uma porção das áreas preferidas acima discutidas de principal reactividade de célula T em cada alergeno de ácaro (i.e., Regiões l-6a-6b de Der ρ I e Der f I e Regiões 7-10 de Der ρ II e Der f II). Por exemplo, uma região pode compreender toda ou uma porção da Região 1 (resíduos de

J 74 486

IPC-017(Portugal)

-26aminoácido 1-28 de Der p I ou Der f I) e uma região pode compreender toda ou porção da Região 2 (resíduos de aminoácido 36-68 de Der p I ou Der f I). Os péptidos do invento podem compreender toda ou uma porção de duas ou mais destas Regiões (i.e., Regiões 1-10) e péptidos resultantes preferidos não ligam IgE e provocam a libertação de mediadores a partir de mastócitos ou basófilos. Os péptidos preferidos derivados de Der p I e Der f I compreendem toda ou uma porção da Região 1, Região 2, Região 3 e opcionalmente Região 4. Os péptidos preferidos derivados de Der p II e Der f II compreendem toda ou uma porção da Região 7 e Região 8, e Região 10. Adicionalmente, se uma destas Regiões mostra ligar IgE e provocar a libertação de mediadores a partir de mastócitos ou basófilos, então é preferível que o péptido não compreenda tais Regiões, mas compreenda antes várias Regiões derivadas de tais Regiões, as quais não liguem IgE ou provoquem a libertação de mediadores a partir de mastócitos ou basófilos.

Os exemplos de regiões preferidas incluem toda ou uma porção das seguintes sequências de aminoâcidos: DP 1-21.1 (SEQ ID NO: 27),* DP 1-21.2 (SEQ ID NO: 28); DP 1-22.1 (SEQ ID NO: 29); DP 1-22.2 (SEQ ID NO: 30); DP 1-22.3 (SEQ ID NO: 31); DP 1-22.4 (SEQ ID NO: 32); DP 1-23.1 (SEQ ID NO: 33); DP 1-23.2 (SEQ ID NO: 34); DP 1-25.1 (SEQ ID NO: 35); DP 1-25.2 (SEQ ID NO: 36); DP 1-26.1 (SEQ ID NO: 37); DP 1-27.1 (SEQ ID NO: 38); DP 1-28.1 (SEQ ID NO: 39); DP 1-28.2 (SEQ ID NO: 40); DP 1-1 (SEQ ID NO:9); DF 1-1 (SEQ ID NO: 72); DF 1-21.1 (SEQ ID NO: 90); DF 1-21.2 (SEQ ID NO: 91); DF 1-22.1 (SEQ ID NO: 92); DF 1-22.2 (SEQ ID NO: 93); DF 1-22.4 (SEQ ID NO: 94); DF 1-23.1 (SEQ ID NO: 95); DF 1-23.2 (SEQ ID NO: 96); DF 1-25.1 (SEQ ID NO: 97); DF 1-25.2 (SEQ ID NO: 98); DF 1-26.1 (SEQ ID NO: 99); DF 1-27.1 (SEQ ID NO: 100); DF 1-28.1 (SEQ ID NO: 101); DF 1-28.2 (SEQ ID NO: 102); DP 11-20 (SEQ ID NO: 50); DP 11-20.1 (SEQ ID NO: 51); DP 11-20.2 (SEQ ID NO: 52); DP 11-20.3 (SEQ ID NO: 53); DP 11-20.4 (SEQ ID NO: 54); DP 11-20.5 (SEQ ID NO: 55); DP 11-20.6 (SEQ ID NO: 56); DP II-l (SEQ ID NO: 41); DP II-l.l (SEQ ID NO: 57); DP II-1.2 (SEQ ID NO: 58); DP II-2.1 (SEQ ID NO: 59); DP II-2.2 (SEQ ID NO: 60); DP II-2.3 (SEQ ID NO: 61);

F . ' /

J ^{74 486}

IPC-017(Portugal)

-27ID NO: 62); DP 11-22 (SEQ ID NO: 63); DP 11-26 (SEQ ID NO: 64); DP 11-26.1 (SEQ ID NO: 65); DP 11-23 (SEQ ID NO: 66); DP 11-23.1 (SEQ ID NO: 67); DP 11-24 (SEQ ID NO: 68); DP 11-25 (SEQ ID NO: 69); DP 11-25.1 (SEQ ID NO: 70); DP 11-25.2 (SEQ ID NO: 71); DF II-l (SEQ ID NO: 103); DF II-2 (SEQ ID NO: 104); DF 11-13.1 (SEQ ID NO: 105); DF II-3.1 (SEQ ID NO: 106); DF II-4.5 (SEQ ID NO: 107); DF II—4.3 (SEQ ID NO: 108); DF 11-15 (SEQ ID NO: 109); DF 11-16 (SEQ ID NO: 110); DF 11-17 (SEQ ID NO: 111); DF 11-18 (SEQ ID NO: 112); DF 11-19 (SEQ ID NO: 113); DF 11-19.1 (SEQ ID NO: 114); DF 11-21 (SEQ ID NO: 115); e DF 11-22 (SEQ ID NO: 116), as sequências de aminoácidos de tais regiões sendo apresentadas na Fig. 3 e Fig. 4, ou porções das ditas regiões compreendendo pelo menos um epitopo de célula T.

Péptidos preferidos compreendem várias combinações de duas ou mais regiões, cada região compreendendo toda ou uma porção das áreas preferidas acima discutidas de reactividade principal de célula T. Péptidos preferidos compreendem uma combinação de duas ou mais regiões (cada região possuindo uma sequência de aminoácidos tal como apresentado na Fig. 3 e Fig. 4) incluindo: DP 1-22.1 (SEQ ID NO: 29) e DP 1-25.1 (SEQ ID NO: 35); DP 1-21.1 (SEQ ID NO: 27) e DP 1-25.2 (SEQ ID NO: 36); DP 1-22.1 (SEQ ID NO: 29) e DP 1-1 (SEQ ID NO: 9); DP 1-21.1 (SEQ ID NO: 27), DP 1-22.1 (SEQ ID NO: 29) e DP 1-25.2 (SEQ ID NO: 36); DP 1-21.2 (SEQ ID NO: 28), DP 1-22.1 (SEQ ID NO: 29) e DP 1-23.1 (SEQ ID NO: 39); DP 1-1 (SEQ ID NO: 9), DP 1-22.1 (SEQ ID NO: 29) e DP 1-23.1 (SEQ ID NO: 33); DP 1-1 (SEQ ID NO: 9), DP 1-22.1 (SEQ ID NO: 29) e DP 1-25.2 (SEQ ID NO: 36); DP 1-21.1 (SEQ ID NO: 27), DP 1-22.1 (SEQ ID NO: 29), DP 1-23.1 (SEQ ID NO: 33) e DP 1-25.2 (SEQ ID NO: 36); DP 1-21.2 (SEQ ID NO: 28), DP 1-22.1 (SEQ ID NO: 29) e DP 1-25.2 (SEQ ID NO: 36); DP 1-21.2 (SEQ ID NO: 27), DP 1-22.1 (SEQ ID NO: 29); DP 1-25.2 (SEQ ID NO: 36), e DP 1-26.1 (SEQ ID NO: 37); DF 1-21.2 (SEQ ID NO: 91) e DF 1-22.1 (SEQ ID NO: 92); DF 1-21.1 (SEQ ID NO: 90), DF 1-22.1 (SEQ ID NO: 92), e DF 1-25.1 (SEQ ID NO 97); DF 1-21.2 (SEQ ID NO: 91), DF 1-22.1 (SEQ ID NO: 92), e DF 1-25.1 (SEQ ID NO 97); DF 1-1 (SEQ ID NO: 72), DF 1-22.1 (SEQ ID NO: 92); DF 1-1 (SEQ ID NO: 72), DF 1-22.1 (SEQ ID NO: 92), e DF 1-25.1 (SEQ ID NO 97); DF

J ⁷⁴ 486

IPC-017(Portugal) &

I- 22.1 (SEQ ID NO: 29), e DF 1-25.1 (SEQ ID NO 35); DF 1-21.1 (SEQ ID NO: 90), DF 1-22.1 (SEQ ID NO: 92), e DF 1-23.1 (SEQ ID NO 95); DP 1-21.1 (SEQ ID NO: 27) e DF 1-22.1 (SEQ ID NO: 92); DP 1-1 (SEQ ID NO: 9), DP 1-23.1 (SEQ ID NO: 33), DP 1-25.1 (SEQ ID NO 35), e DF 1-1 (SEQ ID NO: 72); t) DP 1-1 (SEQ ID NO: 9), DP 1-25.1 (SEQ ID NO: 35), DP 1-23.1 (SEQ ID NO 33), e DF 1-21.2 (SEQ ID NO: 91); DP 1-1 (SEQ ID NO: 9), DP 1-25.1 (SEQ ID NO:

35), DP 1-23.1 (SEQ ID NO 33), e DF 1-21.1 (SEQ ID NO: 90); DP

II- 22 (SEQ ID NO: 63) e DP 11-25.2 (SEQ ID NO: 71); DP 11-22 (SEQ ID NO: 63), DP 11-25.2 (SEQ ID NO: 71) e DP 1-21.1 (SEQ ID NO: 27) e DP 1-22.1 (SEQ ID NO: 29), DP 11-22 (SEQ ID NO: 63), DP 11-25.2 (SEQ ID NO: 71), DP 11-20.6 (SEQ ID NO: 56), DP

I- 22.1 (SEQ ID NO: 29), DP 1-21.1 (SEQ ID NO: 27) e DP 1-23.1 (SEQ ID NO: 33); DP 11-22 (SEQ ID NO: 63), DP 11-25.2 (SEQ ID NO: 71), DP 11-20.6 (SEQ ID NO: 56), DP 1-21.1 (SEQ ID NO: 27), DP 1-22.1 (SEQ ID NO: 29) e DP 1-25.2 (SEQ ID NO: 36); DP 11-22 (SEQ ID NO: 63), DP 11-25.2 (SEQ ID NO: 71) e DP 1-21.1 (SEQ ID NO: 27), DP 1-22.1 (SEQ ID NO: 29) e DP 1-25.2 (SEQ ID NO: 36); DP 11-22 (SEQ ID NO: 63), DP 11-25.2 (SEQ ID NO: 71), DP 1-21.1 (SEQ ID NO: 27), DP 1-22.1 (SEQ ID NO: 29) e DP 1-23.1 (SEQ ID NO: 33); DP 11-22 (SEQ ID NO: 63), DP 11-25.2 (SEQ ID NO: 71), DP 1-1 (SEQ ID NO: 9), e DP 1-22.1 (SEQ ID NO: 29); DF II-4.5 (SEQ ID NO: 107) e DF II-2 (SEQ ID NO: 104); DF II-4.5 (SEQ ID NO: 107) e DF 11-19.1 (SEQ ID NO: 114); DF II-4.5 (SEQ ID NO: 107), DF II-2 (SEQ ID NO: 104), e DF 11-19.1 (SEQ ID NO: 114); DF II-4.5 (SEQ ID NO: 107), DF II-2 (SEQ ID NO: 104), e DF II-9 (SEQ ID NO: 86); DF II-4.5 (SEQ ID NO: 107); e DF 1-21.1 (SEQ ID NO: 90); DF II-4.5 (SEQ ID NO: 107), DP 11-22 (SEQ ID NO: 63), e DP 11-25.2 (SEQ ID NO: 71); e i') DF II-4.5 (SEQ ID NO: 107), DF

II- 2 (SEQ ID NO: 104), e DP 11-22 (SEQ ID NO: 63).

Pêptidos adicionais preferidos compreendem uma combinação de duas ou mais Regiões e incluem as seguintes combinações: DP 1-21.2, DP 1-23.1, DP 1-26.1, DP 11-20.6, DP 11-22, DP 11-25.2 e DF 11-22.2; DP 1-21.2, DF 11-22.2; DP 1-21.2, DF 1-22.2, DP 1-23.1, DP 1-25.2, DP 1-26.1, DP 1-27.1, DP 11-20.6, DP 11-22, DP 11-24, e DP 11-25.2; DP 1-23.1, DP 1-21.2, DP 1-22, DF 1-22.2, DP 11-20.6, e DP 11-25.2; DP 1-23.1, DP I 21.2, DF

J 74 486

IPC-017(Portugal)

I- 22.2, DP 11-20.6, e DP 11-25.2; DP 1-23.1, DF 1-22 e DP

II- 20.6; DP 1-26.1, DF 1-22.2 e DP 11-25.2; DP 1-21.2, DF 1-22.2 e DP 11-22; e DP 1-21.2 e DP 11-22.

Os péptidos mais preferidos compreendem uma combinação de duas ou mais regiões (cada região possuindo uma sequência de aminoácidos tal como apresentado na Fig.3 e Fig.4) derivadas de alergenos de ácaro Der ρ I, Der p II e Der f I, cada um dos referidos péptidos preferidos possuindo as seguintes disposições sequenciais específicas de sequências de aminoácidos tal como apresentado nas Figs. 25-27: DPI-26.1, DPII-25.2, DFI-22, DPII-20.6 e DPI-21.2 respectivamente; DPII-25.2, DFI-22.2, DPI-23.1, DPII-22, DPI-21.2 e DPII-20.6 respectivamente; e DPII-25.2, DPI-21.2, DPI-23.1, DPI-26.1, DPII-22, DPII-20.6 e DFI-22.2 respectivamente. As sequências de ácido nucleico e aminoácido dos péptidos acima são apresentadas nas Figs. 25, 26 e 27 respectivamente.

Péptidos dos alergenos proteicos do género Dermatophaqoides dentro do âmbito do invento podem ser utilizados em processos de tratamento e prevenção de reacções alérgicas a alergenos de ácaro. Assim, um aspecto do presente invento refere-se a composições terapêuticas compreendendo um péptido de Der ρ I, Der ρ II, Der f I, ou Der f II incluindo pelo menos um epítopo de célula T, ou preferivelmente pelo menos dois epítopos de célula T, e um portador ou diluente farmaceuticamente aceitável. Noutro aspecto, a composição terapêutica compreende um portador ou diluente farmaceuticamente aceitável e um péptido compreendendo pelo menos duas regiões, cada região compreendendo pelo menos um epítopo de célula T de um alergeno de ácaro e derivado do mesmo ou de diferentes alergenos proteicos de ácaro.

Composições terapêuticas preferidas compreendem pelo menos um péptido de pelo menos um alergeno proteico do género Dermatophaqoides. A composição compreende uma percentagem suficiente de epítopos de célula T de pelo menos um alergeno proteico, tal que um regime terapêutico de administração da composição a um indíviduo sensível a alergeno de ácaro de pó

486

IPC-017(Portugal)

-30doméstico resulte em células T de um indíviduo que é tolerável ao alergeno proteico. Preferivelmente, a composição compreende uma percentagem suficinte de epitopos de célula T de um ou mais alergenos proteicos tal que pelo menos cerca de 40%, e mais preferivelmente pelo menos cerca de 60% da reactividade da célula T de cada proteína esteja incluída na composição. Tais composições podem ser administradas a um indivíduo para tratar ou prevenir a sensibilidade a ácaros do pó doméstico ou a alergeno que é imunologicamente cruzadamente reactivo com ácaro de pó doméstico.

Administração de composições terapêuticas do presente invento para dessensibilizar um indíviduo pode ser efectuada utilizando técnicas conhecidas. Por exemplo, um péptido derivado de um alergeno de ácaro compreendendo pelo menos um epitopo de célula T pode ser administrado em combinação com um diluente, um portador e/ou um adjuvante apropriados. Para induzir anergia da célula T num indíviduo, a composição terapêutica é preferivelmente administrada numa forma não imunogénica, e.g., não contém adjuvante. Diluentes farmaceuticamente aceitáveis incluem soluções tamponadas salinas e aquosas, portadores farmaceuticamente aceitáveis incluem polietilenoglicol (Wie et al. International Archives of Allergy and Applied Immunologv, 64: 84-99 (1981) e lipossomas (Strejan et al., Journal of Neuroimmunoloqy, 7.:27 (1984)). Tais composições serão geralmente administradas por injecção, (subcutânea, intravenosa, etc.) administração oral, (e.g. tal como na forma de uma cápsula), inalação, aplicação transdérmica ou administração rectal. As composições terapêuticas do invento são administradas a indíviduos sensíveis a ácaros do pó doméstico em dosagens e por períodos de tempo eficazes para reduzir a sensibilidade (i.e., reduzir a resposta alérgica) do indíviduo a um alergeno de ácaro de pó doméstico. Uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma ou mais, da mesma ou de diferentes composições terapêuticas pode ser administrada simultaneamente ou sequencialmente a um indíviduo sensível a ácaros do pó doméstico. Quantidades eficazes de composições terapêuticas variam de acordo com factores tais como o grau de sensibilidade de um indíviduo a

J ^{74 486}

IPC-017(Portugal)

ácaros do pó doméstico, idade, sexo, e peso do indíviduo, e capacidade do péptido estimular uma resposta de célula T no indivíduo.

Ainda noutro aspecto do presente invento, proporciona-se uma composição compreendendo pelo menos dois péptidos (e.g., uma mistura física de pelo menos dois péptidos), compreendendo cada um pelo menos um epitopo de célula T de um alergeno proteico do género Dermatophaqoides. Os péptidos são derivados do mesmo ou de diferentes alergenos de ácaro. Tais composições podem ser administradas na forma de uma composição terapêutica com um portador ou diluente farmaceuticamente aceitável. Uma quantidade eficaz de uma ou mais dessas composições pode ser administrada simultaneamente ou sequencialmente a um indivíduo sensível a ácaros de pó doméstico.

Composições preferidas e combinações preferidas de péptidos que podem ser administrados simultaneamente ou sequencialmente (compreendendo péptidos possuindo sequências de aminoácido apresentadas na Fig. 3 e Fig. 4) incluem as seguintes combinações: DP 1-22.1 (SEQ ID NO: 29) e DP 1-25.1 (SEQ ID NO:

35) ; DP 1-21.1 (SEQ ID NO: 27) e DP 1-25.2 (SEQ ID NO: 36); DP 1-22.1 (SEQ ID NO; 29) e DP 1-1 (SEQ ID NO: 9); DP 1-21.1 (SEQ ID NO: 27), DP 1-22.1 (SEQ ID NO: 29) e DP 1-25.2 (SEQ ID NO:

36) ; DP 1-21.2 (SEQ ID NO: 28), DP 1-22.1 (SEQ ID NO: 29) e DP 1-23.1 (SEQ ID NO: 39); DP 1-1 (SEQ ID NO: 9), DP 1-22.1 (SEQ ID NO: 29) e DP 1-23.1 (SEQ ID NO: 33); DP 1-1 (SEQ ID NO: 9), DP 1-22.1 (SEQ ID NO: 29) e DP 1-25.2 (SEQ ID NO: 36); DP 1-21.1 (SEQ ID NO: 27), DP 1-22.1 (SEQ ID NO: 29), DP 1-23.1 (SEQ ID NO: 33) e DP 1-25.2 (SEQ ID NO: 36); DP 1-21.2 (SEQ ID NO: 28), DP 1-22.1 (SEQ ID NO: 29) e DP 1-25.2 (SEQ ID NO: 36); DP 1-21.2 (SEQ ID NO: 27), DP 1-22.1 (SEQ ID NO: 29); DP 1-25.2 (SEQ ID NO: 36), e DP 1-26.1 (SEQ ID NO: 37); DF 1-21.2 (SEQ ID NO: 91) e DF 1-22.1 (SEQ ID NO: 92); DF 1-21.1 (SEQ ID NO: 90), DF 1-22.1 (SEQ ID NO: 92), e DF 1-25.1 (SEQ ID NO: 97); DF 1-21.2 (SEQ ID NO: 91), DF 1-22.1 (SEQ ID NO: 92), e DF 1-25.1 (SEQ ID NO 97); DF 1-1 (SEQ ID NO: 72), DF 1-22.1 (SEQ ID NO: 92); DF 1-1 (SEQ ID NO: 72), DF 1-22.1 (SEQ ID NO: 92), e DF 1-25.1 (SEQ

J 74 486

IPC-017(Portugal)

-32e DF 1-25.1 (SEQ ID NO

ID NO 97); DF 1-22.1 (SEQ ID NO: 29),

35); DF 1-21.1 (SEQ ID NO: 90), DF 1-22.1 (SEQ ID NO: 92), e DF

1-23.1 (SEQ ID NO 95); DP 1-21.1 (SEQ ID NO: 27) e DF 1-22.1 (SEQ ID NO: 92); DP 1-1 (SEQ ID NO: 9), DP 1-23.1 (SEQ ID NO: 33), DP 1-25.1 (SEQ ID NO: 35), e DF 1-1 (SEQ ID NO: 72); DP 1-1 (SEQ ID NO: 9), DP 1-25.1 (SEQ ID NO: 35), DP 1-23.1 (SEQ ID NO

33), e DF 1-21.2 (SEQ ID NO: 91); DP 1-1 (SEQ ID NO: 9), DP

1-25.1 (SEQ ID NO: 35), DP 1-23.1 (SEQ ID NO 33), e DF 1-21.1 (SEQ ID NO: 90); DP 11-22 (SEQ ID NO: 63) e DP 11-25.2 (SEQ ID NO: 71); DP 11-22 (SEQ ID NO: 63), DP 11-25.2 (SEQ ID NO: 71) e DP 1-21.1 (SEQ ID NO: 27) e DP 1-22.1 (SEQ ID NO: 29), DP 11-22 (SEQ ID NO: 63), DP 11-25.2 (SEQ ID NO: 71), DP 11-20.6 (SEQ ID NO: 56), DP 1-22.1 (SEQ ID NO: 29), DP 1-21.1 (SEQ ID NO: 27) e DP 1-23.1 (SEQ ID NO: 33); DP 11-22 (SEQ ID NO: 63), DP 11-25.2 (SEQ ID NO: 71), DP 11-20.6 (SEQ ID NO: 56), DP 1-21.1 (SEQ ID

NO: 27), DP 1-22.1 (SEQ ID NO: 29) e DP 1-25.2 (SEQ ID NO: 36);

DP 11-22 (SEQ ID NO: 63), DP 11-25.2 (SEQ ID NO: 71) e DP 1-21.1 (SEQ ID NO: 27), DP 1-22.1 (SEQ ID NO: 29) e DP 1-25.2 (SEQ ID NO: 36); DP 11-22 (SEQ ID NO: 63), DP 11-25.2 (SEQ ID NO: 71), DP 1-21.1 (SEQ ID NO: 27), DP 1-22.1 (SEQ ID NO: 29) e DP 1-23.1 (SEQ ID NO: 33); DP 11-22 (SEQ ID NO: 63), DP 11-25.2 (SEQ ID NO: 71), DP 1-1 (SEQ ID NO: 9), e DP 1-22.1 (SEQ ID NO: 29); DF II-4.5 (SEQ ID NO: 107) e DF II-2 (SEQ ID NO: 104); DF II-4.5 (SEQ ID NO: 107) e DF 11-19.1 (SEQ ID NO: 114); DF II-4.5 (SEQ ID NO: 107), DF II-2 (SEQ ID NO: 104), e DF 11-19.1 (SEQ ID NO: 114); DF II-4.5 (SEQ ID NO: 107), DF II-2 (SEQ ID NO: 104), e DF II-9 (SEQ ID NO: 86); DF II-4.5 (SEQ ID NO: 107); e DF 1-21.1 (SEQ ID NO: 90); DF II-4.5 (SEQ ID NO: 107), DP 11-22 (SEQ ID NO: 63), e DP 11-25.2 (SEQ ID NO: 71); e DF II-4.5 (SEQ ID NO: 107), DF II-2 (SEQ ID NO: 104), e DP 11-22 (SEQ ID NO: 63); DP 1-26.1, DP 11-25.2, DF 1-22, DP 11-20.6 e DP 1-21.2.

O presente invento também proporciona processos de detecção de sensibilidade de indivíduos a alergenos de ácaro de pó doméstico compreendendo a combinação de uma amostra de sangue obtido do indivíduo com um pêptido do presente invento, sob condições apropriadas para ligação de componentes sanguíneos com o pêptido, e determinação da extensão a que ocorre tal ligação.

J 74 486 4/χ

IPC-017(Portugal) ' _

A extensão em que ocorre a ligação é determinada pela avaliação da função de célula T, proliferação de célula T ou uma sua combinação.

É igualmente possível modificar a estrutura de um péptido do invento para tais propósitos tal como aumentar a solubilidade, intensificar a eficácia terapêutica ou preventiva, ou a estabilidade (e.g., tempo de prateleira ex vivo, e resistência a degradação proteolítica in vivo). Pode ser produzido um péptido modificado, no qual a sequência de aminoácidos tenha sido alterada, tal como por substituição, delecção ou adição de aminoácidos, para modificar a imunogenicidade e/ou reduzir a alerginicidade, ou ao qual um componente tenha sido adicionado para o mesmo propósito.

Por exemplo, um péptido pode ser modificado de maneira que mantenha a capacidade de induzir anergia da célula T e ligação de proteínas MHC sem a capacidade de induzir uma forte resposta proliferativa ou possivelmente qualquer resposta proliferativa quando administrada numa forma imunogénica. Neste caso, resíduos de ligação críticos para o receptor de célula T podem ser determinados utilizando as técnicas conhecidas (e.g., substituição de cada resíduo e determinação da presença ou ausência de reactividade de célula T). Os resíduos que mostram ser essenciais para interactuar com o receptor de célula T podem ser modificados por substituição do aminoácido essencial com outro, preferivelmente um resíduo de aminoácido semelhante (uma substituição conservativa) cuja presença mostre intensificar, diminuir mas não eliminar, ou não afectar a reactividade da célula T. Para além disto, os resíduos de aminoácido que não são essenciais para a interacção do receptor de célula T podem ser modificados por substituição por outro aminoácido cuja incorporação pode intensificar, diminuir ou não afectar a reactividade de célula T, mas não eliminar a ligação relevante a MHC.

Adicionalmente, péptidos do invento podem ser modificados por substituição de um aminoácido, que mostre ser essencial para

-34J74 486

IPC-017(Portugal) interactuar com o complexo preferivelmente um resíduo (substituição conservativa) cuja diminuir mas não eliminar, ou não T. Para além disso, resíduos essenciais para interacção com o ainda ligam o substituição intensificar, reactividade preferidas para aminoácidos não essenciais incluem mas não estão limitadas a substituições com alanina, ácido glutâmico ou a um metilaminoácido.

proteico MHC, de aminoácido com outro, semelhante intensificar, presença mostre afectar a actividade da célula de aminoácido que não são complexo proteico MHC, mas que complexo proteico MHC, podem ser modificados por por outro aminoácido cuja incorporação pode não afectar, ou diminuir mas não eliminar a de célula T. Substituições de aminoácidos

Outro exemplo de uma modificação de péptidos é a substituição de resíduos de cisteína preferivelmente por serina, treonina, leucina ou ácido glutâmico para minimizar dimerização por ligações dissulfureto. Por exemplo, a estabilidade de um péptido de Der p II ou Der f II que inclua os primeiros dez resíduos de aminoácido de qualquer dos alergenos pode ser intensificada por substituição da cisteína localizada no 8^aresíduo de aminoácido, preferivelmente com alanina, ou ácido glutâmico, ou alternativamente com serina ou treonina.

De modo a aumentar a estabilidade e/ou reactividade, os péptidos podem também ser modificados para incorporar um ou mais polimorfismos na sequência de aminoácido de um alergeno proteico resultantes de variações alélicas naturais tal como apresentado nas Figs. 25-27. Adicionalmente, D-aminoácidos, aminoácidos não naturais ou análogos não aminoácidos podem ser substituídos ou adicionados para produzir um péptido modificado dentro do âmbito deste invento. Além disso, os péptidos do presente invento podem ser modificados utilizando o método do polietilenoglicol (PEG) de A. Sehon e colaboradores (Wie et al. supra) para produzir um péptido conjugado com PEG. Adicionalmente, pode ser adicionado PEG durante a síntese quimica de um péptido do invento. Modificações de péptidos ou de suas porções podem também incluir redução/alquilação (Tarr in: Methods of Protein

486

IPC-017(Portugal)

Microchracterization, J. E. Silver ed. Humana Press, Clifton, NJ, pp 155-194 (1986)); acilação (Tarr, supra); esterificação (Tarr, supra); acoplamento químico a um portador apropriado (Mishell e Shiigi, eds, Selected Methods in Cellular Immunolocfv. WH Freeman, San Francisco, CA (1980); Patente U.S. 4 939 239); ou tratamento moderado com formalina (Marsh International Archives of Allerqv and Applied Immunoloov, 41: 199-215 (1971)).

Noutra concretização, péptidos dum grupo de alergenos (e.g., Der ρ I ou Der ρ II) podem ser modificados para aumentar a reactividade de célula T. Dada a reactividade cruzada entre os alergenos do Grupo I e Grupo II, um péptido de um grupo de alergenos que pode ser menos reactivo do que um péptido de um outro grupo de alergenos correspondente em posição de aminoácido pode ter um ou mais aminoácidos substituídos com um ou mais aminoácidos do péptido correspondente (e.g., péptido DF II-l, resíduo dezassete [metionina] na sequência de aminoácido de Der f II pode ser substituído com o aminoácido localizado no resíduo dezassete em Der ρ II [leucina] para aumentar a reactividade do péptido de Der f II). Adicionalmente, péptidos podem ser modificados para incorporar um polimorfismo na sequência de aminoácidos de um alergeno proteico resultante de varição alélica natural. Modificações de péptidos para incluir um ou mais destes polimorfismos podem resultar em estabilidade e/ou reactividade aumentada.

Para facilitar a purificação e aumentar potencialmente a solubilidade de péptidos do invento, é possível adicionar grupo(s) repórter ao esqueleto do péptido. Por exemplo, pode ser adicionada poli-histidina a um péptido para purificar o péptido numa cromatografia de afinidade de ião metálico imobilizado (Huchuli, E. et al., Bio/Technoloqy, 6.:1321-1325 (1988)). Adicionalmente, locais específicos de clivagem de endoprotease podem ser introduzidos, se desejado, entre um grupo repórter e sequências de aminoácido de um péptido para facilitar o isolamento de péptidos isentos de sequências irrelevantes. De modo a dessensibilizar com êxito um indíviduo a um antigénio proteico, pode ser necessário aumentar a solubilidade de um

486

IPC-017(Portugal)

-36péptido pela adição de grupos funcionais ao péptido ou pela não inclusão de epitopos de célula T hidrófobos ou regiões contendo epitopos hidrófobos nos péptidos.

Para auxiliar potencialmente o processamento conveniente de antigénios de epitopos de célula T num péptido, locais sensíveis de protease canónica podem ser manipulados recombinantemente ou sintéticamente entre regiões, cada compreendendo pelo menos um epítopo de célula T. Por exemplo, pares de aminoácidos carregados, tais como KK ou RR, podem ser introduzidos entre regiões num péptido durante a construção recombinante do péptido. 0 péptido resultante pode ser tornado sensível à catepsina e/ou outras enzimas de clivagem semelhantes à tripsina para gerar porções do péptido contendo um ou mais epitopos de célula T. Adicionalmente, tais resíduos de aminoácido carregados podem resultar num aumento da solubilidade de um péptido.

A mutagénese dirigida ao sítio de ADN codificador de um péptido do invento pode ser utilizada para modificar a estrutura do péptido. Tais métodos podem envolver PCR (Ho et al., Gene, 77: 51-59 (1989)) ou síntese total de genes mutados (Hostomsky, Z., et al., Biochem. Biophys. Res. Comm.. 161; 1056-1063 (1989)). Para aumentar a expressão bacteriana, os métodos acima mencionados podem ser utilizados em conjugação com outros procedimentos para alterar os codões eucarióticos nas construções de ADN codificadoras de péptidos do invento para uns preferencialmente utilizados em E. coli.

Exemplos específicos de péptidos do invento, modificados de acordo com um ou mais dos procedimentos de modificação acima discutidos, incluem mas não estão limitados a modificações ao péptido DP 1-23.1 tal como apresentado na Fig. 28 e ao péptido DPII-22 tal como apresentado na Fig. 28. Mais especificamente, modificações aos péptidos 23.1 incluem a adição de aminoácidos carregados (23.1.2) pares de aminoácidos carregados (23.1.1) para aumentar a solubilidade e substituição de um resíduo de cisteína com serina 23.1.3 ou ácido glutâmico (23.1.4) para aumentar a solubilidade. Alterações ao péptido 22 incluem a

J 74 486

IPC-017(Portugal)

adição de pares de aminoâcidos carregados (22.1 e 22.2) para aumentar a solubilidade.

O presente invento também proporciona ácidos nucleicos possuindo sequências codificadoras de péptidos do invento. Sequências de ácido nucleico utilizadas em qualquer concretização deste invento podem ser ADNc tal como aqui descrito, ou alternativamente, podem ser qualquer sequência de oligodesoxinucleótidos possuindo toda ou uma porção de uma sequência aqui representada, ou seus equivalentes funcionais. Estas sequências de oligodesoxinucleótidos podem ser produzidas quimicamente ou mecanicamente, utilizando técnicas conhecidas. Um equivalente funcional de uma sequência de oligonucleótidos é um que seja 1) uma sequência capaz de hibridar com um oligonucleótido complementar ao qual a sequência (ou porções de sequência correspondentes) de SEQ ID NO:1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5 e SEQ ID NO: 7, ou seus fragmentos hibridam, ou 2) a sequência (ou porção de sequência correspondente) complementar a SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5 e SEQ ID NO: 7 e/ou 3) uma sequência que codifique um produto (e.g., um polipéptido ou péptido) possuindo as mesmas características funcionais do produto codificado pela sequência (ou porção de sequência correspondente) de SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5 e SEQ ID NO: 7. Se um equivalente funcional deve reunir um ou mais critérios dependerá da sua utilização (e.g., se está a ser utilizado apenas como uma oligo-sonda, necessita de reunir apenas o primeiro ou segundo critérios e se é para ser utilizado para produzir um péptido do presente invento, necessita apenas de reunir o terceiro critério).

Este invento é ilustrado adicionalmente pelos seguintes exemplos não limitantes.

Exemplo I. Purificação de Alergenos de Ácaro Nativo

O que se segue é uma descrição do trabalho efectuado para purificar os alergenos do Grupo I e do Grupo II dos ácaros de pó doméstico Dermatophaqoides pteronvssinus e Dermatophaqoides

J 74 486

IPC-017(Portugal)

-38farinae na sua forma nativa como antigénios primários para mapeamento de epitopo de célula T humana.

Todos os quatro alergenos proteicos, Der f I, Der ρ I, Der f II e Der ρ II, foram purificados por imunoafinidade a partir de meio de cultura esgotado de ácaro obtido a partir de Commonwelth Sera Laboratories Melbourne, Australia ou de Dr. Larry G. Arlian em Wright State University Dayton, Ohio. Um extracto aquoso a 10% (p/v) de meio de cultura esgotado de ácaro desidratado foi preparado em PBS (Solução Salina Tamponada com Fosfato) com agitação durante a noite a 4’C. 0 material insolúvel foi removido por centrifugação a 10 OOOxg durante 1 hora a 4°c. o sobrenadante foi então filtrado várias vezes sob vácuo através de papel Whatman #1, e recentrifugado a 15 OOOxg durante 1 hora a 4°C. Uma filtração final foi efectuada através de um filtro de acetato de celulose de 0,45 m.

Anticorpos monoclonais 4C1 e 6D6 (University of Virgínia, NC) foram utilizados para a purificação por imunoafinidade dos alergenos de ácaro do Grupo I ou do Grupo II, respectivamente (Chapman et al., J. Allerqy Clin. Immunol..

80.:1479-1484 (1987); Heymann et al., J. Allergy Clin. Immunol, 83.:1055-1067 (1989)). O anticorpo monoclonal 4C1 reage com um epitopo compartilhado por ambas as proteínas Der f I e Der ρ I; analogamente, o anticorpo monoclonal 6D6 reage com ambas as proteínas Der f II e Der ρ II.

Para cada anticorpo monoclonal, o fluido ascítico foi separado em 50% de sulfato de amónio e os anticorpos acoplados a Sepharose 4B (Pharmacia), activada com CNBr, em NaHCO₃ 100 mM, NaCl 500 mM, pH 8,3, durante a noite a 4°C.

As colunas de anticorpo monoclonal foram equilibradas em PBS e os extractos filtrados foram aplicados a 15 ml por hora. A coluna foi então lavada em 20 volumes de PBS, após a qual foi efectuada uma lavagem mais rigorosa de 20 volumes de coluna com PBS suplementado com NaCl 500 mM. As proteínas foram eluídas em NaCl 500 mM, glicina 100 mM pH 11,0, e as fracções foram

486

IPC-017(Portugal)

avaliadas quanto ao teor em espectrofotométrica a 280 nm.

proteína por absorvância

As fracções do pico foram combinadas e dialisadas extensivamente contra PBS, concentradas com um dispositivo de diálise a pressão negativa (obtido em Amicon, Beverly MA) e foram utilizadas em estudos de mapeamento do epítopo de célula T dos alergenos de ácaro do Grupo I e Grupo

II. As proteínas recuperadas foram obtidas com purezas variando de 80% (grupo II) a 90% (grupo I).

Foi ainda aplicada cromatografia de HPLC de Fase Inversa para purificar ainda mais o alergeno proteico de ácaro do grupo II purificado por imunoafinidade de acordo com as condições em Heymann et al., J. Allerqy Clin. Immunol. , 83.:1055-1067 (1989). Resumidamente, a proteína purificada por imunoafinidade foi aplicada a uma coluna C-8, 300 Â, 5 μιη (Applied Biosystems Inc.) em 0,1% v/v de TFA/H₂O. 0 caudal para a columa foi de 1 ml/min. com um gradiente de 0-60% de acetonitrilo/0,1% de TFA, durante 60 minutos. As proteínas do grupo II eluiram próximo de 45% de acetonitrilo/0,1% de TFA. As fracções foram analisadas quanto à pureza por electroforese em gel de poliacrilamida-SDS, seguida de varrimento densitométrico. As fracções com proteína do grupo II com pureza superior a 90% foram utilizadas subsequentemente para mapeamento de célula T humana do alergeno.

Exemplo II. Expressão de Alergeno Recombinante de Ácaro que se segue é a descrição do trabalho efectuado para produzir os alergenos do grupo I e do grupo II de ácaros de pó doméstico Dermatophagoides pteronvssinus e Dermatophaqoides farinae como proteínas recombinantes em E. coli.

Todos os quatro alergenos proteicos, Der f I, Der p I, Der f II e Der p II, foram fundidos nos seus terminais amino maduros com a sequência de comando MGHHHHHHEF (onde os aminoácidos EF são codificados pelo local de restrição de EcoRI GAATTC). Como a porção de aminoácidos H₆ coordena iões Ni⁺⁺ nas colunas de agarose NTA (Diagen GmbH), esta actividade foi explorada na purificação das proteínas recombinantes (Hochuli

-40J74 486

IPC-017(Portugal) et al., Biotechnolocrv, 86: 1321-1325 (1988)). Finalmente, todos os quatro alergenos foram subclonados no vector de expressão pETlld (Studier et al., Methods In Enzvmolocrv. 185; 60-88 (1990) sob o controlo transcricional do promotor gn 10 do fago T7.

Os ADNc codificando os alergenos do grupo I de D. pteronvssinus e D. farinae foram obtidos junto do Dr. Wayne Thomas na forma de plasmideo como subclones de A gtn (Chua et al., J. Exp. Med.. 167:175-182 (1988); Dilworth et al., Clin. Exp. Allergy. 21:25-32 (1991)). O ADNc de Der p I tinha sido subclonado a partir de um plasmideo M13 RF, como um fragmento EcoRI, no pUC18 por Dr. Roland Buelow em immuLogic (Paio Alto), ao passo que o ADNc de Der f I foi directamente manipulado a partir de plasmideo M13 mpl9 RF de Df I (1).

Inicialmente os ADNc foram subclonados no vector de expressão pTrc99A His6 Insert RRRS, o qual é uma versão modificada de pTrc99A (Amann et al. , Gene. 69.:301-315 (1988)). 0 vector original foi modificado pela adição de um adaptador sintético (consistindo em dois oligonucleótidos complementares) codificadores da sequência de comando MGHHHHHHEF entre os locais Ncol (MG) e EcoRI (EF) na extremidade 5' do poliligador, e uma RRS (Sequência Retro Reguladora) no seu local Hind III na extremidade 3' do poliligador. A sequência de comando foi utilizada como auxiliar de purificação tal como descrito acima, ao passo que a RRS foi adicionada para melhorar a estabilidade da mensagem recombinante e portanto aumentar o rendimento de proteína recombinante (Skoglund et al., Gene, 88.:1-5 (1990). Finalmente, uma inserção, neste caso de um ADNc Amb a 1.1 codificador do alergeno principal da tasneira pequena (Rafnar et al., J. Biol. Chem.. 226:1229-1236 (1991)) foi subclonado no quadro (in frame) com o comando Hg como um fragmento de EcoRI a PstI.

Para expressar os alergenos de ácaro do grupo I, o ADNc Amb a 1.1 foi excisado por digestão com EcoRl/HindIIl e substituído por adaptadores com prolongamentos SEcoRI/HindIII

J 74 486

IPC-017(Portugal)

(composto por um par de oligonucleótidos complementares). Estes adaptadores (Fig. 2a) codificam os primeiros cinco aminoácidos, até ao local Pst I, do terminal NH₂ de Der ρ I madura e os primeiros dez aminoácidos, até ao local Hpal, do terminal NH₂ de Der f I madura. Após ligação do local EcoRi do vector e do local $EcoRI dos adaptadores, o local EcoRi no vector foi destruído, deixando o local EcoRi codificado internamente pelo adaptador como o único local EcoRi nas construções intermediárias pTrc99A His₆ 5' pl RSS e pTrc99A Hisg 5' fl RRS. 0 ADNc Der ρ I foi inserido como um fragmento PstI/EcoRI no pTrc99A His₆ 5' pl RSS digerido com PstI/EcoRI, enquanto que o ADNc de Der f I foi inserido como um fragmento Hpal/EcoRI no pTrc99A Hisg 5⁷ fl RRS digerido com Hpal/EcoRI. A sequência da extremidade 5' de cada construção, pTrc99A Hisg 5' pl RRS e pTrc99A Hisg 5' fl RRS, foi verificada pelo método de sequenciação de ADN por terminação da cadeia por dideoxi utilizando um conjunto de reagentes Sequenase^ II (u. S. Biochemicals). Ambas as cassetes codificadoras de H₆ pl e H₆ fl foram excisadas por digestão com Ncol/Nhel (um local Nhel existia na extremidade 3' do adaptador RRS) e inseridos em pETlld digerido com Ncol/Nhel. Estas duas construções, pETlld His₆ pl RRS e PETlld His₆ fl RRS, foram transformadas em bactérias competentes BL21 [DE3] para expressão das proteínas recombinantes. A BL21 [DE3] contém um fago A recombinante lisogénico, DE3, com um gene de ARN-polimerase de fago T7 sob o controlo transcricional do promotor lac UV5. A expressão do gene da ARN-polimerase de T7 é induzida pela adição de IPTG (isopropil-B-D-tiogalactopiramjsido), o qual por sua vez conduz a um elevado nível de expressão do gene recombinante subclonado em 3' do promotor gn 10 de T7 do vector pET.

Os ADNc codificadores de alergenos do grupo II de D. pteronvssinus e D. farinae foram também obtidos junto do Dr. Wayne Thomas na forma de plasmídeo como subclones de z\ gtll (Chua et al., Int. Arch. Appl. Immun. . 91: 118-123 (1990); Trudinger et al., Clin. Exp. Allerqy, 21: 33-37 (1991). O ADNc de Der ρ II original foi subclonado a partir de um plasmídeo M13RF nos vectores pCA e pGEX pelo Dr. Roland Buelow em ImmunLogic (Paio Alto). 0 grupo de Dr. Thomas tinha fornecido o

486

IPC-017(Portugal)

ADNc de Der f II como um subclone em pGEX. Ambos os plasmídeos pGEX contendo os ADNc do grupo II foram utilizados como molde para amplificação por PCR com o mesmo par de iniciadores 5' com sentido/3' anti-sentido (Fig. 2b). Os iniciadores foram concebidos para fundir um local EcoRI(GAATTC codificador dos aminoácidos EF) em estrutura com o terminal NH₂ das proteínas do grupo II maduras e colocar um local PstI em 3' da região codificadora do grupo II. Um Controlador Térmico de Pesquisa MJ com um programa de 30 X (94°C 1 min./55°C 1 min. 30 seg./72°C 2 min.) foi utilizado em conjugação com os reagentes de um conjunto Perkin Elmer-Cetus Gene Amp para amplificação por PCR. Os produtos de PCR foram digeridos com EcoRI/PstI e subclonados em M13mpl9RF digerido com EcoRI/PstI. A análise da sequência de ADN foi efectuada para verificar a sequência dos produtos de PCR. Os M13RF correctos foram digeridos com EcoRI/PstI, as suas inserções de ADNc do grupo II isolados, e subclonados em pTrc99A His₆ Amb a 1.1 RRS digerido com EcoRI/PstI (o que serviu para trocar o grupo de ADNc do grupo II com o ADNc de tasneira (Fig.i)).

O ADNc de Der f II possuía um polimorfismo de sequência na posição 54 (i.e., um resíduo de treonina em lugar de isoleucina). Para alterar este polimorfismo foi efectuada mutagénese dirigida do resíduo T₅₄ em ADNc de Der f II utilizando um conjunto Muta-Gene de Bio-Rad Laboratories, baseado no método de Kunkel, Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 82: 488-492 (1985). 0 M13mpl9RF original com o ADNc de Der f II T54 foi transformado em bactérias CJ236, as quais toleram a incorporação de uracilo em lugar da timidina durante a replicação de ADN, e preparou-se ADN de fago de cadeia simples como molde. Um iniciador mutagénico de 17 pares de bases (Fig. 2b) foi temperado (annealed) ao ADN molde de fago. Utilizou-se ADN-polimerase de T4 para copiar o ADN molde iniciado pelo oligonucleótido mutagénico, e utilizou-se ADN-ligase de T4 para selar os intervalos na cadeia de ADN. A reacção foi transformada em bactérias MV1190, que são do tipo selvagem para a edição de resíduos uracilo de ADN e portanto replicam selectivamente a cadeia mutagenizada (não contendo uracilos), e

-4374 486

IPC-O17(Portugal) preparou-se ADN de fago de cadeia simples de placas recombinantes (brancas). Vários recombinantes foram sujeitos a análise de sequência de ADN, e os ADNc de Der f II com a sequência I₅₄ correcta foram subclonados como fragmentos EcoRI/PstI em pTrc99A Hisg Amb a 1.1 RRS digerido com EcoRI/PstI.

Como um trabalho prévio tinha mostrado que o vector pETlld foi, na maioria dos casos, capaz de expressar proteínas recombinantes a níveis mais elevados que o vector pTrc99A, os dois ADNc de grupo II de ácaro foram subclonados como proteínas de fusão Hg no vector T7. 0 pTrc ppA Hisg f II RRS e pTrc 99 A Hisg p II RRS foram digeridos com Nco I/Nhe I, as inserções de ADNc foram isoladas, e subclonadas em pETlld Hisg pl (Fig. 1) digeridos com Ncol/Nhel. Plasmídeos recombinantes foram transformados em bactérias BL 12 [DE3] para expressão.

Bactérias hospedeiras BL21 DE3 contendo as construções de expressão de alergeno de ácaro pETlld foram repicadas em placas de ágar BHI (3,7% p/v de Infusão de Coração e Cérebro da Difco; 1,5% p/v agar da Difco) suplementadas com 200 /xg/ml de ampicilina e incubadas durante a noite a 37°C. Uma única colónia foi inoculada em 2 ml de 200 /xg/ml de ampicilina/meio BHI (3,7% p/v de Infusão de Coração e Cérebro da Difco) e agitada a 300 rpm a 37 °C até estar túrbida mas não saturada. A cultura de 2 ml foi então adicionada a 100 ml de 200 /ig/ml de ampicilina/meio BHI e agitada a 300 rpm a 37°C até estar túrbida mas não saturada, ponto este em que a cultura foi dividida em 18 x 500 ml (9 litros) de 200 /xg/ml de ampicilina/meio BHI e agitada a 300 rpm a 37°C. Quando a DO₅₉₅ da cultura atingiu 1,0, a expressão das moléculas recombinantes foi induzida pela adição de IPTG a 400 μΜ, e deixada prosseguir durante duas horas.

As bactérias foram recolhidas por centrifugação a 10 000 X g durante 15 minutos, e ressuspensas em 1/20 do seu volume em tampão de lise (0,2 mg/ml de lisozima, NaPO₄ 100 mM pH 8,0, NaCl 50 mM), incubadas em gelo durante 30 minutos e congeladas a -70°C. As bactérias congeladas foram fracturadas por uma rápida

J74 486

IPC-017(Portugal)

descongelação a 37°C e depois sonicadas 5 vezes durante 20 segundos a intervalos de 30 segundos. As amostras sonicadas foram centrifugadas a 15 000 x g para separar as proteínas bacterianas solúveis daquelas em partículas. As proteínas solúveis foram desprezadas, e as proteínas sedimentadas foram ressuspensas em guanidina HC1 6 M, 2-mercaptoetanol 100 mM, NaP0₄ 100 mM, Tris 10 mM pH 8,0. Esta suspensão foi sujeita a centrifugação a 15 000 x g, e o sobrenadante foi removido, ajustado a pH 8,0 com NaOH 10 N, e foi aplicado a uma coluna de agarose NTA que tinha sido equilibrada em guanidina HC1 6 M, NaP0₄ 100 mM, Tris 10 mM pH 8,0. A coluna foi lavada em guanidina HCL 6 M, NaP0₄ 100 mM, Tris 10 mM pH 8,0 até a DO₂₈₀do efluente alcançar a DO de fundo. 0 tampão da coluna foi então mudado para ureia 8 M, NaPO₄ 100 mM, Tris 10 mM pH 8,0. Após equilíbrio, foi realizada uma lavagem mais rigorosa em ureia 8 M, NaOAc 100 mM, Tris 10 mM pH 6,3 até a D0₂₈₀ do efluente atingir a DO de fundo. A proteína recombinante de ácaro (como uma fusão H₆) foi então eluída em ureia 8 M, NaOAc 100 mM, Tris 10 mM pH 4,5 e recolheram-se em aliquotas cujo perfil a ϋθ₂θθ foi monitorizado. O pico de proteína foi dialisado 3 vezes em 500 volumes de PBS para análise de célula T humana. O rendimento variou de 10 a 70 mg de proteína recombinante por litro com uma pureza (determinada por varrimento densitométrico) variando de 80 (Der f II) a 95%.

Para purificar ainda mais o alergeno proteico Der f II recombinante, aplicou-se cromatografia HPLC de Fase Inversa. Aproximadamente 100 mg de proteína His₆-Der f II foi reduzida em DTT 20 mM a 36 °C durante 30 minutos e depois aplicada a uma coluna PRO RPC HR 10/10 da Pharmacia em 0,1% v/v de TFA/H₂O. 0 caudal para a coluna foi 1,5 ml/min. com um gradiente de 0-70% de acetonitrilo em 0,1% de TFA durante 40 minutos, seguido de um gradiente de 70-100% de acetonitrilo em 0,1% de TFA. A proteína His-Der f II eluiu entre 54-96% de acetonitrilo. As fracções detectadas a 214 nm e 280 nm foram analisadas quanto à pureza por electroforese em gel de poliacrilamida-SDS/varrimento densitométrico. Aquelas fracções com proteína His₆-Der f II de pureza maior do que 95% foram subsequentemente utilizadas para

-45J74 486

IPC-017(Portugal)

humana do alergeno. O rendimento de HPLC de fase inversa preparativa foi aproximadamente de 69%.

Determinação de Polimorfismos da Sequência de Nucleótidos nos Alergenos Der d I, Der ρ II e Der f II

Esperava-se que existissem polimorfismos de sequência na sequência de ácidos nucleicos codificadoras de Der ρ I, Der p II, Der f I e Der f II, devido a variação alélica natural entre ácaros individuais. Vários polimorfismos de sequência de nucleótidos e de aminoácidos resultantes foram encontrados durante a sequenciação de diferentes clones Der ρ I, Der ρ II e Der f II. Os polimorfismos de sequência de aminoácidos são apresentados nas Fig. 22, 23, e 24.

Exemplo III Síntese de Péptidos que se sobrepõem

Os péptidos que se sobrepõem Der ρ I, Der f I, Der ρ II e Der f II tal como apresentado nas Figs. 3 e 4 foram sintetizados utilizando a química sintética Fmoc/tBoc padrão e purificados por diálise ou HPLC de Fase Inversa. Os resíduos de aminoácido dos péptidos sintetizados estão entre parêntesis pelo nome do péptido e a sequência de aminoácidos (em código de uma letra) está perto do nome do péptido. Os nomes dos péptidos são consistentes ao longo das figuras. As proteínas Der ρ I, Der f I, Der ρ II e Der f II estão divididos em péptidos que se sobrepõem de tal maneira que os péptidos que se sobrepõem de Der Ρ I, Der f I assim como para Der ρ II e Der f II possuem números de resíduos de aminoácidos correspondentes, e.g. DP 1-1 e DF 1-1 contém ambos resíduos de aminoácido 1-20 dos alergenos Der ρ I e Der f I, respectivamente. Esta correspondência na posição dos aminoácidos entre os péptidos Der p e Der f foi efectuada propositadamente de modo a testar melhor a reactividade cruzada de epitopos de célula T Der p e Der f e, assim, determinar péptidos que, após administração a um indivíduo sensível a ácaros do pó, tratariam a sensibilidade a ambos os alergenos Der p e Der f. Na concepção de péptidos que se sobrepõem,a relação dos alergenos do Grupo I e Grupo II ao nível de reactividade cruzada de células T foi considerada. Em adição, a função dos alergenos do Grupo I como serina-proteases foi considerada e as

486

IPC-017(Portugal)

-46sequências de aminoácidos de outras serina-proteases conhecidas,

e.g., papaína, actinidina, foram examinadas para identificar regiões semelhantes conservadas e variáveis nos alergenos do

Grupo I. Esperava-se que regiões conservadas nos alergenos do

Grupo I contivessem epitopos de célula T compartilhados”.

Exemplo IV Respostas Primárias de Célula T de Pacientes Alérgicos a Ácaros a Proteínas e Péptidos Der p I e Der p II

Células mononucleares de sangue periférico (PBMC) foram purificadas por centrifugação em Ficoll-Hypaque de um espécime de sangue periférico de paciente R.B. alérgico a ácaro e foram ensaiadas quanto à proliferação em resposta a vários antigénios,

i.e., péptidos Der p I purificado por afinidade, Der p II purificado por afinidade, vários Der p I e Der p II. Para ensaio, 5 x 10^ PBMC foram cultivadas em micropoços em triplicado durante 7 dias, a 37°C, na presença de várias concentrações de antigénio em 200 μΐ de RPMI-1640 contendo 5% de soro AB humano. Cada poço recebeu então 1 /xCi de timidina tritiada durante 16 horas. As contagens incorporadas foram colhidas em filtros de fibra de vidro e processadas para contagem de cintilação líquida. A Tabela I apresenta os resultados deste ensaio. São apresentadas as CPM +/- desvio padrão. 0 índice de estimulação de cada resposta (I.E.) é a razão de CPM de ³H-timidina incorporada pelas células em resposta ao antigénio dividida por CPM de ³H-timidina incorporada por células apenas no meio. Os resultados indicam que este paciente responde com um I.E. de pelo menos 2,0 a péptidos DP 1-1, DP 1-3, DP 1-8, DP 1-10, DP 1-5.2, DP II-4 e DP II-9. Assim, estes péptidos contêm epitopos de célula T de Der p I ou Der p II reconhecidos por células T deste paciente alérgico em particular.

486

IPC-017(Portugal)

-4ΊCPM ± D.P.

I.E.

TABELA I

Antigénio

Concentração uq/ml

Meio	—	1071	+	30	——
Der p I	10	920	+	15	0,9
	30	2122	+	93	2,0
	100	1492	+	13	1/4
DP 1-1	10	1099	+	48	1/0
	30	3527	+	73	3,3
	100	2746	+	81	. 2,6
DP 1-2	10	1395	+	47	1/3
	30	1283	±	34	1/5
	100	1486	+	38	1/4
DP 1-3	10	2608	+	52	2/4
	30	1561	+	13	1/5
	100	5252	+	67	4,9
DP 1-8	10	1439	+	32	1/3
	30	1045	±	32	1/0
	100	2272	+	40	2/1
DP 1-10	10	1936	+	50	1,8
	30	3042	±	89	2,8
	100	2644	+	63	2,5
DP 1-5.2	10	1374	+	20	1/3
	30	2241	+	87	2/1
	100	3132	+	111	2/9
Der p II	10	1113	+	35	1/0
	30	2104	+	43	2,0
	100	1057	+	27	1/0
DP II-4	10	2126	±	25	2,0
	30	1979	+	94	1,8
	100	2314	+	116	2,2
DP II-9	10	3970	±	87	3/7
	30	4464	+	86	4/2
	100	2237	+	53	2/1

486

IPC-017(Portugal)

-48Exemplo V Estudos de epitopos de célula T com Der ρ I

Células mononucleares de sangue periférico (PBMC) foram purificadas por centrifugação em Ficoll-Hypaque de 60 ml de sangue periférico heparinizado de indivíduos alérgicos a ácaros do pó doméstico que exibiam sintomas clínicos de alergia a ácaros e que eram positivos no teste de pele a ácaros do pó doméstico.

Cultivaram-se 10⁷ PBMC do indivíduo 543 em 10 ml de RPMI-1640 contendo 5% de soro AB humano combinado e suplementado com glutamina, penicilina, estreptomicina e tampão HEPES na presença de 20 /xg/ml de Der ρ I nativo purificado/ml a 37°C durante 7 dias. As células viáveis foram então purificadas por centrifugação em Ficoll-Hypaque e cultivadas durante 2 semanas adicionais em RPMI-1640/5% de soro AB contendo 5 unidades de IL-2 humana recombinante/ml e 5 unidades de IL-4 humana recombinante/ml. As células T resultantes foram então testadas num ensaio de proliferação secundário para avaliar as respostas de célula T a várias proteínas e péptidos de ácaro de pó doméstico. Para ensaio, 2 x 10⁴ das células T resultantes foram cultivadas em 200 μΐ de RPMI-1640/5% de soro AB durante 3 dias a 37°C, na presença de 2 x 10⁴ células B transformadas com o vírus Epstein-Barr autólogas (20 000 Rads), como células apresentando antigénio com várias concentrações de péptidos Der ρ I nativos purificados ou Der ρ I sintéticos. Cada poço recebeu então 1 gCi de timidina tritiada durante 16 horas. As contagens incorporadas foram recolhidas em filtros de fibra de vidro e processadas para contagem de cintilação liquida. Apenas o meio, actuando como controlo negativo, não continha alergeno ou péptido. Os resultados desta experiência indicam que este paciente em particular responde com um I.E. de pelo menos 2.0 a vários péptidos derivados da proteína Der ρ I, incluindo DP 1-1, DP 1-2, DP 1-4, DP 1-11, DP 1-5, DP 1-13, DP 1-15, DP 1-6.1, DP 1-8, DP 1-9, DP 1-16, DP 1-10 e DP 1-17 (resultados não apresentados).

procedimento anterior foi seguido com um número de outros indíviduos alérgicos excepto a) em casos individuais, o período

J 74 486

IPC-017(Portugal)

-49de tempo de cultura com IL-2 e IL-4 variava; b) em casos individuais, as células T foram iniciadas tanto com proteína Der P I nativa purificada (N) como recombinante (R), em 20 gg/ml ou em 10gg/ml; e c) em casos individuais, PBMC autólogas irradiadas com raios-X (3500 Rads) foram utilizadas como células apresentando antigénio num ensaio de proliferação secundário. Em adição, três pêptidos (DP 1-11 (SEQ ID NO: 117), DP 1-12 (SEQ ID NO: 118), e DP II-3 (SEQ ID NO: 119)) mostraram conter um baixo número de alterações conservativas da sequência nativa na sua sequência de aminoácidos. Três pêptidos adicionais (DP 1-11.1 (SEQ ID NO: 13), DP 1-12.1 (SEQ ID NO: 14), e DP II-3.1 (SEQ ID NO: 43)) foram sintetizados sem nenhuma alteração da sequência nativa. Alguma análise de célula T foi efectuada com os pêptidos originais (i.e., DP 1-11, DP 1-12 e DP II-3). Após análise de célula T conduzida com os pêptidos adicionais (i.e., DP 1-11.1, DP 1-12.1 e DP II-3.1) não foi detectada qualquer diferença significativa no I.E. médio ou na percentagem de respostas positivas entre os pêptidos originais e os pêptidos adicionais. Assim, os dados de ambos os grupos de pêptidos foram combinados.

Os resultados individuais foram considerados positivos e utilizados se o indíviduo respondeu à proteína Der p I e pelo menos a um péptido derivado a partir de Der p I a um I.E. de 2.0 ou mais. Um sumário dos resultados de 33 experiências positivas é apresentado na Fig. 5. As linhas de células T iniciadas com PBMC estimuladas com Der p I recombinante ou nativo foram testadas quanto à reactividade a pêptidos Der p I sintéticos. 0 máximo de resposta para cada péptido numa titulação do antigénio é expressa como o indíce de estimulação de célula T (I.E.). O I.E. é as contagens por minuto (CPM) incorporadas pelas células em resposta ao péptido divididas pelas CPM incorporadas pelas células apenas em meio. Um valor de I.E. superior ao nível de fundo indica que o péptido contém um epítopo de célula T. No entanto, apenas valores de I.E. individuais maiores ou iguais a 2.0 (uma resposta de duas-vezes ou maior que o fundo), aqui referida como resultados positivos, foram utilizados no cálculo de índices médios de estimulação de célula T para cada péptido para o paciente ou grupos de pacientes testados. Entre

J ^{74 486}

IPC-017(Portugal)

-50parêntesis acima de cada barra no histograma estão os índices médios de estimulação de célula T calculados após se descartarem as respostas positivas muito elevadas ou muito baixas para cada pêptido, para minimizar o efeito de valores extremos. 0 índice de estimulação de célula T é calculado por:

a ZZ (CPM de célula T + APC + Antigénio)

CPM de célula T + APC + Controlo

A barra representa o valor cumulativo ordenado da resposta ao pêptido em grupos de pacientes. Para determinar o valor cumulativo ordenado, foram determinados os 5 péptidos com o maior I.E. em cada indíviduo e atribuiu-se um valor de ordenação numérico em ordem decrescente, com 5 representando a resposta mais forte. Os valores de ordenação para cada pêptido foram então somados no grupo de pacientes para determinar o valor cumulativo ordenado para o pêptido. Acima de cada barra está a percentagem de respostas positivas com um I.E. de pelo menos 2 para o pêptido no grupo de pacientes testados. Com a percentagem de positivos e o índice médio de estimulação de célula T, o índice de positividade (I.P.) para cada pêptido pode ser calculado. O I.P. para cada indíviduo é determinado por multiplicação do I.E. médio pela percentagem de indivíduos, numa população de indivíduos sensíveis a ácaro de pó doméstico (e.g. preferivelmente pelo menos 15 indivíduos, mais preferivelmente pelo menos 30 indivíduos ou mais) que responderam com um I.E. de pelo menos 2.0 àquele pêptido (e.g., para DP 1-1 na Fig. 5, o I.P. seria de cerca de 343 (73% x 4.7). 0 I.P. representa por isso a força de uma resposta de célula T (I.E.) e a frequência de uma resposta de célula T a um pêptido numa população de indivíduos sensíveis a ácaros do pó doméstico. A Fig. 5 demonstra que os péptidos DP 1-1, DP 1-2, DP 1-3, DP 1-4, DP 1-5, DP 1-6.1, DP 1-7.1, DP 1-8, DP 1-9, DP 1-16, e DP 1-10 contêm regiões significativas de reactividade de célula T neste painel de pacientes.

486

IPC-017(Portugal)

-51Exemplo VI Estudos de Epitopos de Célulà T coiti Der f

I

Realizaram-se experiências semelhantes àquelas do Exemplo V para determinar as áreas reactivas para a célula T de proteína Der f I. Por exemplo, PBMC do paciente 783 alérgico a ácaros do pó doméstico foram isoladas tal como descrito no Exemplo V e foram estimuladas in vitro com Der f I recombinante purificada a 20 /xg/ml. Os resultados do ensaio de proliferação com péptidos Der f I utilizando PBMC autólogas irradiadas com raios-X (3500 Rads), como células apresentando antigénio indicam que as células T deste paciente respondem aos péptidos DF 1-8.1, DF 1-9, DF 1-6, DF 1-10, DF 1-2.1, DF 1-3, DF 1-11, DF 1-5, DF 1-1,

E DF 1-17 (dados não apresentados).

procedimento anterior foi seguido num número de pacientes, excepto em casos individuais, as linhas de células T foram iniciadas com Der f I purificada por afinidade a 20 jig/ml ou a 10 jug/rnl e células B transformadas com vírus Epstein-Barr autólogas irradiadas com rais-X (25.000 Rads), foram utilizadas como células apresentando antigénio. Um sumário dos resultados de 16 experiências positivas é apresentado na Fig. 6. Os dados foram analisados tal como descrito no Exemplo V. Os dados indicam que são encontradas áreas significativas de reactividade de célula T na proteína Der f I nos péptidos DF 1-1, DF 1-2, DF 1-3, DF 1-4, DF 1-11, DF 1-5, DF 1-6, DF 1-7, DF 1-14, DF 1-15, DF 1-8.1 e DF 1-9.

Exemplo VII Um Estudo Indicador da Reactividade Cruzada de Epitopos de Célula T de Der ρ I e Der f I

As proteínas Der ρ I e Der f I são muito homólogas (81% de identidade). Assim, foram efetuadas experiências, semelhantes às do Exemplo V, para determinar as respostas de célula T de linhas de células T iniciadas com Der ρ I quando desafiadas com vários péptidos Der ρ I e péptidos Der f II substancialmente coincidentes. As linhas de célula T foram iniciadas in vitro tal como descrito no Exemplo V e testadas quanto à resposta a uma série de péptidos Der ρ I e Der f I substancialmente coincidentes (e.g., DP 1-1 (resíduos de aminoácido 1-20 de Der p I) ou DF I-l (resíduos de aminoácido 1-20 de Der f I). Os dados

486

IPC-017(Portugal)

-52foram analisados tal como descrito no Exemplo V com a excepção dos valores de I.E., mais elevado e mais baixo das respostas positivas de cada péptido não terem sido omitidos dos cálculos de I.E. médio. Um sumário de um número de tais experiências é apresentado na Fig. 7. Os resultados de 14 experiências positivas indicam que as células T iniciadas com Der p I respondem a vários péptidos Der f I indicando reactividade cruzada dentro dos alergenos do Grupo I. As células T iniciadas por Der p I respondem significativamente aos péptidos DF 1-1, DF

1-2, DF 1-3, DF 1-4, DF 1-11, DF 1-12, DF 1-15, DF 1-8, DF 1-9, DF 1-15 e DF 1-6. Em alguns pacientes, o péptido Der f I foi um estimulador mais potente de células T iniciadas por Der p I do que o péptido correspondente Der p I. A Fig. 8 apresenta os resultados das experiências inversas nas quais as células T de um número de pacientes foram iniciadas in vitro pela proteína Der f I e analisadas quanto à resposta a vários péptidos Def p I e a um conjunto de péptidos Der f I substancialmente coincidentes. Os resultados de 8 experiências positivas indicam que as células T iniciadas por Der f I respondem significativamente a péptidos, DP 1-1, DP 1-3, DP 1-4, DP 1-11/11.1, DP 1-14, DP 1-5, DP 1-15 e DP 1-8.

Exemplo VIII Estudos de Epitopos de Célula T com Der p II

Realizaram-se experiências semelhantes às do Exemplo V para determinar as áreas reactivas de célula T da proteína Der p II. Por exemplo, foram isoladas PBMC do paciente 348 alérgico a ácaros do pó doméstico como descrito no Exemplo V e foram estimuladas in vitro com 20 μg/ml de Der p II nativa purificada. Os resultados de um ensaio de proliferação utilizando células B autólogas transformadas com vírus Epstein-Barr, irradiadas com raios-X (25.000 Rads), como células apresentando antigénio com vários péptidos Der p II demonstram que este paciente em particular responde bem aos péptidos DP II-l, DP II-7, DP II-8, DP II-2, e DP II-9 (dados não apresentados).

procedimento anterior foi seguido com um número de pacientes excepto em casos individuais, as linhas de células T foram iniciadas com Der p II recombinante a 20 μg/ml ou a 3

486

IPC-017(Portugal)

-53jug/ml e PBMC autólogas irradiadas com raios-X (3500 Rads) foram utilizadas como células apresentando antigénio. Um sumário de resultados de 26 experiências positivas é apresentado na Fig. 9.

Os dados foram analisados como descrito no Exemplo V, com a excepção de a soma ordenada das respostas do péptido ter sido analisada atribuindo um valor de 3, 2 ou 1 às três respostas de I.E. mais elevadas. Áreas de reactividade significativa de célula T na proteína Der p II para este painel de pacientes são encontradas nos péptidos DP II-l, DP II-2, DP II-3, DP II-4, DP

II-7, DP II-8 e DP II-9.

Exemplo IX Estudos de Enítopo de Célula T com Der f II

Realizaram-se experiências semelhantes àquelas do Exemplo V para determinar as áreas reactivas de célula T da proteína Der f II. Por exemplo, PBMC do paciente 384 alérgico a ácaro de pó doméstico foram estimuladas in vitro com Der f II recombinante purificada e a linha de células T foi então desafiada na presença de células B transformadas com vírus Epstein-Barr, autólogas, irradiadas com raios-X (25.000 Rads), como células apresentando antigénio, com vários péptidos Der f II que se sobrepõem. Os resultados deste ensaio de proliferação indicam que células T deste paciente em particular respondem bem aos péptidos DF II-l, DF II-2, DF II-3.1, DF II-4.5, DF 11-15, DF 11-16 e DF 11-19.1 (dados não apresentados).

O procedimento anterior foi seguido com 10 pacientes excepto em casos individuais, as linhas de células T foram iniciadas por estimulação das PBMC do paciente com 20 /xg/ml ou 3 /jg/ml de Der f II nativa purificada, e foram ensaiadas na presençade PBMC autólogas, irradiadas com raios-X (3500 Rads), como células apresentando antigénio. Um sumário de resultados de 10 experiências positivas é apresentado na Fig. 10. Os dados foram analisados como detalhado no Exemplo IX, com a excepção dos valores mais elevados e mais baixos de I.E. das respostas positivas para cada péptido não terem sido omitidos dos cálculos. Os dados indicam que áreas significativas de reactividade de célula T na proteína Der f II são encontradas nos péptidos DF II-l, DF II-2, DF 11-13.1, DF II-4.5, DF 11-15,

^{74 486}IPC-017(Portugal) DP 11-17 e DP 11-19.9.

Exemplo X Um Estudo Indicador da Reactividade Cruzada de Epítopos de célula T de Der ρ II e Der f II

Realizou-se um estudo semelhante ao descrito no Exemplo VII para determinar a reactividade cruzada de células T das proteínas Der ρ II e Der f II. As células T iniciadas com a proteína Der f II foram desafiadas com vários péptidos Der f II e com um conjunto de péptidos Der ρ II substancialmente coincidentes. Um sumário dos resultados de 10 experiências positivas é apresentado na Fig. 11. Os resultados indicam que as células T iniciadas com Der f II respondem significativamente aos péptidos DP II-l, DP II-3/3.1, DP II-4, e DP II-7. A Fig. 12 apresenta os resultados de experiências inversas nas quais as células T de um número de pacientes foram iniciadas in vitro pela proteína Der ρ II e analisadas quanto à resposta a vários péptidos Der f II. Os resultados de 26 experiências positivas indicam que células T iniciadas por Der ρ II respondem significativamente aos péptidos DF II-l, DF II-4.5, DF 11-15, DF 11-17, DF 11-18 e DF 1-19.1.

Exemplo XI Síntese de Péptidos Dominantes

Com base nas análises descritas nos Exemplo V-X, foram identificadas as áreas principais de reactividade de célula T nas Der ρ I, Der ρ II. Der f I e Der f II. Em cada estudo, todos os pacientes testados responderam ao alergeno proteico (e.g., Der ρ I) e pelo menos um péptido derivado de uma área principal de reactividade de célula T na proteína. Foram identificadas sete regiões (Região 1, Região 2, Região 3, Região 4, Região 5, Região 6a e Região 6b) de reactividade principal de célula T nas proteínas Der ρ I e Der f I. Estas regiões são definidas como se segue: Região 1, resíduos de aminoácido 1-28 das proteínas Der p I e Der f I; Região 2, resíduos de aminoácido 36-68 das proteínas Der ρ I e Der f I; Região 3, resíduos de aminoácido 74-109 das proteínas Der ρ I e Der f I; Região 4, resíduos de aminoácido 118-139 das proteínas Der ρ I e Der f I; Região 5, resíduos de aminoácido 141-166 das proteínas Der ρ I e Der f I; e Região 6a, resíduos de aminoácido 161-185 das proteínas Der p

-55^{74 486}

IPC-017(Portugal)

I e Der f I e Região 6b, resíduos de aminoácido 173-201 das proteínas Der p I e Der f I.

Analogamente, foram identificadas quatro regiões principais de reactividade de célula T (Região 7, Região 8, Região 9 e Região 10) nas proteínas Der d II e Der f II. Estas regiões são definidas como se segue: Região 7, resíduos de aminoácido 1-26 das proteínas Der p II e Der f II; Região 8, resíduos de aminoácido 33-67 das proteínas Der p II e Der f II; Região 9, resíduos de aminoácido 79-104 das proteínas Der p II e Der f II; e Região 10, resíduos de aminoácido 107-129 das proteínas Der p

II e Der f II. Com base em parte na reactividade de célula T descrita nos Exemplos V-X, foram seleccionados péptidos derivados de Der p I, Der f I, Der p II e Der f II e foram modificados por adição ou delecção de resíduos de aminoácido tanto na extremidade 5· como na extremidade 3 * do péptido. Na concepção destes péptidos seleccionados, foram considerados vários factores, incluindo a soma ordenada dos péptidos que se sobrepõem, a percentagem de respostas com um I.E. de pelo menos 2,0 para os péptidos, a reactividade cruzada potencial dos péptidos, a dificuldade de fabrico dos péptidos, etc. Foram efectuados estudos de célula T semelhantes àqueles descritos nos Exemplos V-X utilizando estes péptidos seleccionados para definir mais precisamente as áreas principais de reactividade de célula T nas Regiões l-6a e 6b de proteína Der p I e Der f I e Regiões 7-10 de proteína Der p II e Der f II.

Os resultados de estudos de célula T utilizando péptidos seleccionados derivados das proteínas Der p I, Der f I, Der p II e Der f II são apresentados nas Figs. 13-18a-d. 0 procedimento descrito no Exemplo V foi seguido com linhas de células T de um número de pacientes iniciadas in vitro pela proteína Der p I depois analisadas quanto à resposta a péptidos seleccionados derivados da sequência de Der p I. Os resultados de 33 experiências positivas apresentadas na Fig. 13 indicam que as células T iniciadas por Der p I respondem significativamente a péptidos encontrados nos péptidos DP 1-21.1, DP 1-21.2, DP 1-22.2, DP 1-25.2, DP 1-22.1, DP 1-23.1, DP 1-23.2, DP 1-26.1, e

-56| 74 486

IPC-017(Portugal)

DP 1-28.1.

Analogamente, o procedimento descrito no exemplo VI foi seguido com linhas de células T de 9 pacientes iniciadas in vitro pela proteína Der f I e depois analisadas quanto à resposta a péptidos seleccionados derivados da proteína. Os dados foram analisados tal como descrito no Exemplo VI. Os resultados dos 9 pacientes apresentados na Fig.14 demonstram a reactividade de célula T a péptidos seleccionados de Der f I.

Noutra experiência, as linhas de células T de um número de pacientes foram iniciadas in vitro pela proteína Der ρ I e analisadas quanto à resposta a péptidos seleccionados derivados de proteína Der ρ I e a um conjunto de péptidos substancialmente coincidentes derivados da proteína de Der f I. Os dados de 30 experiências positivas foram analisados tal como descrito no Exemplo V. Tal como apresentado na Fig. 15a, as células T iniciadas por Der ρ I respondem significativamente a péptidos DF 1-21.1, DF 1-21.2, DF 1-23.1, DF 1-22.2, DF 1-22.3, DF 1-22.4, DF 1-23.2, DF 1-25.1, DF 1-26.1 e DF 1-27.1. A Fig 15b é uma subsérie dos dados apresentados na Fig 15a e mostra a resposta de células T iniciadas por Der ρ I a péptidos, analisada por soma de valores ordenados. Fig. 15b mostra que DP 1-23.1 possui a soma de valores ordenados mais elevada deste grupo de péptidos neste estudo. Fig. 16a apresenta os resultados da experiência inversa nas quais as células T de 9 pacientes foram iniciadas in vitro pela proteína Der f I e desfiadas com péptidos Der f I seleccionados e com um conjunto de péptidos de Der ρ I substancialmente coincidentes. Os resultados indicam que células T iniciadas por Der f I de 9 pacientes respondem a péptidos seleccionados a partir de Der ρ I. A Fig 16a mostra que DF 1-22.2 e DF 1-25.1 possuem os índices de estimulação mais elevados deste grupo de péptidos. A Fig. 16b é uma subsérie dos mesmos resultados tal como apresentado na Fig. 16a e mostra a resposta de péptidos Der f I e Der ρ I preferidos. A Fig. 16b mostra que DF 1-22.2 possui o índice de estimulação mais elevado deste grupo de péptidos preferidos nesta experiência.

-5774 486

IPC-017(Portugal)

-57Outra experiência seguindo Exemplo VIII analisou a resposta vitro pela proteína Der ρ II //

ÍAA'· ·'-~J ---------------- ·¹ *·· C8> '^,J o procedimento descrito no de 29 pacientes iniciados in e desafiados com péptidos seleccionados derivados da sequência Der ρ II. A Fig. 17a mostra que as células T iniciadas por Der ρ II de um paciente respondem a péptidos seleccionados de Der ρ II. A Fig. 17b apresenta os resultados de uma experiência semelhante àquela apresentada na A Fig. 17a com uma série de 30 pacientes e com o valor maior e menor omitido da média. A Fig. 17b mostra que DP 11-20.6 possui a soma de valores ordenados mais elevada deste grupo de péptidos preferidos neste estudo. A Fig 18a apresenta a experiência inversa na qual células T de um paciente foram iniciadas in vitro pela proteína Der f II e desafiadas com péptidos seleccionados derivados da sequência de Der ρ II. A Fig 18a mostra que células T iniciadas por Der f II de 10 pacientes respondem a péptidos seleccionados de Der ρ II. Tal como apresentado na Fig. 18a DP 11-25 possui o maior índice de estimulação. A Fig. 18b é uma subsérie dos mesmos dados apresentados na Fig. 18a e mostra a resposta de linhas de célula T iniciadas por Der f II nativa a péptidos Der ρ II preferidos analisada por soma de valores ordenados. Tal como é apresentado na Fig. 18b, DPII-25.2 possui a maior soma valores ordenados dos péptidos preferidos neste estudo.

Exemplo XII Estudo Indicador de Reactividade Cruzada de Epitopos do Grupo I e do Grupo II Seleccionados

Realizou-se um estudo semelhante àquele descrito no Exemplo VII com células T de 4 pacientes emparelhados iniciados in vitro com proteínas do Grupo I de Der f e Der p, depois analisadas quanto à resposta a péptidos preferidos seleccionados de Der ρ I e Der f I. Os resultados na Fig. 18c demonstram que reactividade de célula T a um número de péptidos Der ρ I preferidos, seleccionados, foi essencialmente equivalente para o seu correspondente Der f I e vice-versa.

A Fig. 18d apresenta os resultados de um estudo semelhante com células T de 6 pacientes emparelhados iniciados in vitro com proteínas do Grupo II de Der p e Der f, depois analisadas quanto

-5874 486

IPC-017(Portugal) à resposta a péptidos preferidos II. Semelhantes aos resultados seleccionados Der p II e Der f na Fig. 18c, reactividade de célula T a um número de péptidos preferidos seleccionados de Der

P II são essencialmente equivalentes aos seus correspondentes Der f II e vice-versa.

Exemplo XIII Ensaio de Ligação Directa de IgE a Alergenos Proteicos e Péptidos de Ácaro

Placas de ensaio (#25882-96) foram revestidas com 5/xg/ml de cada antigénio de revestimento listado nas Figs. 19, 20 e 21 a 50 μΙ/lOOml/poço e incubadas durante a noite a 4’C. Os antigénios de revestimento foram removidos e os poços foram bloqueados com 0,5% de gelatina em PBS, 300gl/poço durante duas horas à temperatura ambiente. Plasma humano combinado (uma mistura de amostras de plasma de 20 pacientes que foram positivos a testes de pele para extracto de ácaro comercial) foi diluído em série com PBS-Tween 20 (PBS com 0,05% detergente não iónico Tween-20 Sigma St Louis, MO) e ΙΟΟμΙ/poço foram adicionados e incubados durante a noite a 4°C (as diluições de plasma foram testadas em duplicado). O segundo anticorpo (IgE anti-humana, de cabra, biotinada, 1:1000, Kirkegaard & Perry Laboratories Inc. Gaithersburg, MD) foi adicionado a ΙΟΟμΙ/poço durante uma hora a temperatura ambiente. Esta solução foi removida e estreptavidina-HRPO, 1:10000, (Southern Biotechnology Associates, Inc. Birmingham, AL) foi então adicionada a ΙΟΟμΙ/poço durante uma hora a temperatura ambiente (todos os poços foram lavados três vezes com PBS-Tween entre cada passo de incubação). 0 sistema de Substrato de Peroxidase de Membrana TMB (Kirkegaard & Perry Laboratories) foi picado de fresco e adicionado a lOOml/poço. A cor foi deixada desenvolver durante 2-5 minutos. A reacção foi interrompida pela adição de 100 ml/poço de ácido fosfórico 1M. As placas foram lidas num Auto-leitor de Microplaca IL310 (Biotech Instruments, Winooski, VT) com um filtro de 450 nm. Foi feita a média dos níveis de absorvância de poços duplicados. Os resultados gráficos (log da diluição versus absorvância) dos ensaios de ELISA são apresentados nas Figs. 19a-b, 20a-b e 21a-h. A ordem dos antigénios de revestimento listada verticalmente nas legendas

-5974 486

IPC-017(Portugal)

destas figuras corresponde na ordem da esquerda para a direita aos antigénios de revestimento listados para cada histograma.

Os resultados do ensaio de ELISA apresentados na Fig. 19b demonstram a boa ligação de ambos os Der p II purificado bioquimicamente e Der p II recombinante frDer p II) com IgE humana e a ligação não detectável aos péptidos Der p II. A ligação de IgE ao conjunto de péptidos e proteínas Der p (Figs. 20a e 20b) mostra o mesmo perfil de reactividade que o conjunto Der f. Isto é, ligação não detectávelvel a péptidos Der f I ou Der f II ou Der f I recombinante com ligação apenas a Der f I purificado bioquimicamente e recombinante e Der f II purificado bioquimicamente. Em ambos os casos parece existir melhor ligação a Der p II ou Der f II recombinantes do que às formas purificadas bioquimicamente. Todas as conclusões derivadas dos resultados dos ensaios de ELISA anteriores foram corroborados por outro método de ensaio, transferências de pontos em papel de nitrocelulose, utilizando o mesmo conjunto de reagentes de anticorpo e antigénio.

A preparação de antigénio que foi utilizada como um controlo positivo foi uma mistura dos quatro principais alergenos de ácaro purificados bioquimicamente (termo AAP de Alergeno de Acaro Purificado); Der f I. Der f II, Der p I e Der E II. A reserva foi gerada a uma concentração de 100 pg de cada proteína por mililitro ou 400 gg de proteína total/ml. Esta preparação foi utilizada em cada placa revestida de ELISA. Os resultados destes ensaios de ELISA são apresentados na Fig. 21a-h. Existe uma evidente ligação tanto à proteína purificada ou recombinante como à preparação de antigénio AAP em cada placa indicando boa reactividade de IgE. Contudo, a preparação de antigénio AAP exibe um elevado grau de reactividade não específica mostrada na diluição de fundo onde não foi adicionada solução do primeiro anticorpo. Esta reactividade não específica ocorre entre o antigénio AAP e o segundo anticorpo biotinado e não compromete a detecção de reactividade específica de IgE ao antigénio. Utilizando um valor quantitativo de duas vezes superior ao do fundo à mais elevada concentração de plasma como

486

IPC-017(Portugal) uma leitura positiva, não existe reactividade detectável de IgE em nemhum dos 56 péptidos analisados por este método.

Embora o invento tenha sido descrito com referência às suas concretizações preferidas, outras concretizações podem atingir os mesmos resultados. Variações e modificações ao presente invento serão óbvias para os peritos na arte e pretendeu-se cobrir nas reivindicações em apêndice todas essas modificações e equivalentes que seguem no verdadeiro espírito e âmbito do invento.

-6174 486

IPC-017(Portugal) (1) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a. 1:

(i) CARACTERISTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 834 pares de base (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADNc (ix) CARACTERÍSTICA:

(A) NOME/CHAVE: CDS (B) LOCALIZAÇÃO: 1..738 (XI) DESCRIÇÃO DA SEQUENCIA: SEQ ID N^a. 1:

AAA AAC	CGA TTT TTG ATG AGT	GCA Ala
48 Lys 1	Asn	Arg Phe	Leu 5	Met	Ser
CAA 96	TTC	GAT	TTG	AAT	GCT	GAA	ACT
Gin	Phe	Asp	Leu 20	Asn	Ala	Glu	Thr
GCT 144	CCA	GCT	GAA	ATC	GAT	TTG	CGA
Ala	Pro	Alá 35	Glu	Ile	ASP	Leu	Arg 40
CGT 192	ATG	CAA	GGA	GGC	TGT	GGT	TCA
Arg	Met 50	Gin	Gly	Gly	Cys	Gly 55	ser
GCA 240	ACT	GAA	TCA	GCT	TAT	TTG	GCT
Ala 65	Thr	Glu	Ser	Ala	Tyr 70	Leu	Ala
GCT 288	GAA	CAA	GAA	TTA	GTC	GAT	TGT
Ala	Glu	Gin	Glu	Leu 85	Vai	Asp	cys
GAT 336	ACC	ATT	CCA	CGT	GGT	ATT	GAA
ASp	Thr	Ile	Pro 100	Arg Gly	Ile	G1U
CAA 384	GAA	AGC	TAC	TAT	CGA	TAC	GTT
Gin	Glu	Ser 115	Tyr	Tyr	Arg	Tyr	Vai 120
CCA 432	AAT	GCA	CAA	CGT	TTC	GGT	ATC
Pro	Asn 130	Ala	Gin	Arg	Phe	Gly 135	Ile

GAA GCT TTT GAA CAC CTC AAA ACT

Glu Ala Phe Glu His Leu Lys Thr 10 15

AAC GCC TGC AGT ATC AAT GGA AAT

Asn Ala Cys ser Ile Asn Gly Asn 25 30

CAA ATG CGA ACT GTC ACT CCC ATT

Gin Met Arg Thr Vai Thr Pro ile 45

TGT TGG GCT TTC TCT GGT GTT GCC cys Trp Ala Phe Ser Gly Vai Ala 60

CAC CGT AAT CAA TCA TTG GAT CTT

His Arg Asn Gin Ser Leu Asp Leu 7580

GCT TCC CAA CAC GGT TGT CAT GGT

Ala Ser Gin His Gly Cys His Glv 9055

TAC ATC CAA CAT AAT GGT GTC GTC

Tyr Ile Gin His Asn Gly Vai Vai 105110

GCA CGA GAA CAA TCA TGC CGA CGA

Ala Arg Glu Gin ser Cys Arg Arg 125

TCA AAC TAT TGC CAA ATT TAC CCA

Ser Asn Tyr Cvs Gin Ile Tyr Pro 140

-6274 486

IPC-017(Portugal)

CCA AAT

GCA AAC AAA

ATT CGT GAA GCT TTG GCT CAA ACC CAC AGC GCT

βίου Pro 145

Asn

Ala

Asn

Lys

Ile 150

Arg Glu Ala Leu

Ala 155

Gin

Thr

HÍS

Ser Ala 160

ATT 528

GCC

GTC

ATT

GGC

ATC

AAA

GAT

TTA

GAC

GCA

TTC

CGT

CAT

TAT

Ile

Ala

Val

Ile

lie 165

Gly

Ile

Lys

Asp

Leu 170

Asp

Ala

Phe

Arg

His 175

Tyr

GAT 576

GGC

CGA

ACA

ATC

ATT

CAA

CGC

GAT

AAT

GGT

TAC

CAA

CCA

AAC

TAT

Asp

Gly

Axg

Thr 180

ile

Gin

Arg

Asp 185

Asn

Gly

Tyr

Gin

pro 190

Asn

Tyr

CAC 624

GCT

GTC

AAC

ATT

GTT

GGT

TAC

AGT

AAC

GCA

CAA

GGT.

GTC

GAT

TAT

His

Ala

Val 155

Asn

Ile

Val

Gly

Tyr 200

Ser

Asn

Ala

Gin

Gly 205

Val

Asp

Tyr

TGG 672

ATC

GTA

CGA

AAC

AGT

TGG

GAT

ACC

AAT

TGG

GGT

GAT

AAT

GGT

TAC

Trp

Ile 210

val

Arg

Asn

ser

Trp Asp 215

Thr

Asn

Trp

Gly 220

Asp

Asn

Gly

Tyr

GGT 720

TAT

TTT

GCT

GCC

AAC

ATC

GAT

TTG

ATG

ATT

GAA

TAT

CCA

Gly 225

Tyr

Phe

Ala

Asn 230

Ile

Asp

Leu

Met

Met 235

Ile

Glu

Tyr

Pro 240

TAT GTT GTC ATT CTC TAAACAAAAA GACAATTTCT TATATGATTG TCACTAATTT

775

Tyr Val Val Ile Leu

245

ATTTAAAATC ΑΆΑΑΤΤΤΤΤΤ AGAAAATGAA TAAATTCATT CACAAAAATT ΆΛΑΑΑΑΑΆΑ S34 (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a. 2:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 245 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteína (Xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a. 2


J 74 486
IPC-017(Portugal)	-63-	<- j yr ^:'y

Lys 1

Asn Arg Phe Leu 5

Met Ser Ala

G1U

Ala Phe Glu His Leu Lys

Thr

10

15

Gin

Phe

ASP

Leu

Asn

Ala

G1U

Thr

Asn

Ala

Cys

ser

Ile

Asn

Gly

Asn

20

25

30

Ala

Pro

Ala

G1U

ile

Asp

Leu

Arg

Gin

Met

Arg

Thr

val

Thr

Pro

ile

35

40

45

Arg

Met

Gin

Gly

cys

Gly

ser

Cys

Trp

Ala

Phe

ser

Gly

val

Ala

50

55

60

Ala

Thr

G1U

Ser

Ala

Tyr

Leu

Ala

HiS

Arg

Asn

Gin

ser

Leu

ASP

Leu

65

70

75

80

Ala

Glu

Gin

G1U

Leu

val

Asp

cys

Ala

Ser

Gin

His

Gly

cys

HÍS

Gly

85

90

95

Asp

Thr

Ile

Pro

Arg

Gly

ile

Glu

Tyr

Ile

Gin

His

Asn

Gly

Val

100

105

110

Gin

Glu

Ser

Tyr

Arg

Tyr

Val

Ala

Arg

G1U

Gin

Ser

cys

Arg

115

120

125

Pro

ASU

Ala

Gin

Arg

Phe

Gly

Ile

Ser

Asn

Tyr

cys

Gin.

Ile

Tyr

Pro

130

135

140

Pro

Asn

Ala

Asn

Lys

Ile

Arg

G1U

Ala

Leu

Ala

Gin

Thr

His

Ser

Ala

145

150

155

160

Ile

Ala

Val

Ile

Gly

Ile

Lys

Asp

Leu

Asp

Ala

Phe

Arg

His

Tyr

165

170

175

Asp

Gly

Arg

Thr

11©

Ile

Gin

Arg

Asp

Asn

Gly

Tyr

Gin

Pro

Asn

Tyr

leo

185

190

His

Ala

Val

Asn

lie

Val

Gly

Tyr

Ser

Asn

Ala

Gin

Gly

Val

Asp

Tyr

195

200

205

Trp

Ile

val

Arg

Asn

Ser

Trp

Asp

Thr 'Asn

Trp

Gly

Asp

Asn

Gly

Tyr

210

215

220

Gly

Tyr

Phe

Ala

Asn

Ile

Asp

Leu

Met

11©

G1U

Tyr

pro

225

230

235

240

Tyr val val Ile Leu

245 (3) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^e. 3:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 588 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ií) TIPO DE MOLÉCULA: ADNc

-64(ix) CARACTERISTICA:

486

IPC-017(Portugal)

(A) NOME/CHAVE: CDS (B) LOCALIZAÇÃO: 69..509 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a. 3:

CACAAATTCT TCTTTCTTCC TTACTACTGA TCATTAATCT CAAAACAAAA CCAAACAAAC

CATTCAAA ATG ATG TAC AAA ATT TTG TGT CTT TCA TTG TTG GTC GCA GCC 110

Met Met Tyr Lys Ile Leu Cvs Leu ser Leu Leu vai Ala Ala 15 10

GTT

GCT

CGT

GAT CAA

GTC

GAT

GTC

AAA

GAT

TGT

GCC

AAT

CAT

GAA

ATC

158

Vai

Ala

Arg

Asp Gin '

Val

Asp

Val

Lys

Asp

Cys

Ala

Asn

HÍS

Glu

Ile

15

20

25

30

AAA

GTT

TTG GTA

CCA

GGA

TGC

CAT

GGT

TCA

GAA

CCA

TGT

ATC

ATT

206

Lys

val

Leu Val

Pro

Gly

cys

His

Gly

Ser

Glu

Pro

Cys

Ile

35

40

45

CAT

CGT

GGT

AAA CCA

TTC

CAA

TTG

GAA

GCC

GTT

TTC

GAA

GCC

AAC

CAA

254

His

Arg Gly

Lys Pro

Phe

Gin

Leu

G1U

Ala

Val

Phe

G1U

Ala

Asn

Gin

50

55

60

AAC

ACA

AAA

ACG GCT

AAA

ATT

GAA

ATC

AAA

GCC

TCA

ATC

GAT

GGT

TTA

302

Asn

Thr

Lys

Thr Ala

Lys

Ile

Glu

Ile

Lys

Ala

Ser

Ile

Asp

Gly

Leu

65

70

75

GAA

GTT

GAT

GTT CCC

GGT

ATC

GAT

CCA

AAT

GCA

TGC

CAT

TAC

ATG

AAA

350

G1U

Vai

Asp

val Pro

Gly

Ile

Asp

Pro

Asn

Ala

Cys

His

Tyr

Met

Lys

80

85

90

TGC

CCA

TTG

GTT AAA

GGA

CAA

TAT

GAT

ATT

AAA

TAT

ACA

TGG

AAT

398

Cys

Pro

Leu

Val Lvs

Gly

Gin

Tyr

Asp

Ile

Lys

Tyr

Thr

Trp

Asn

95

100

105

110

GTT

CCG

AAA

ATT GCA

CCA

AAA

TCT

GAA

AAT

GTT

GTC

ACT

GTT

AAA

446

val

Pro

Lys

Ile Ala

Pro

Lys

ser

Glu

Asn

Val

Thr

Val

Lys

115

120

125

GTT

ATG

GGT

GAT GAT

GGT

GTT

TTG

GCC

TGT

GCT

ATT

GCT

ACT'

CAT

GCT

494

Vai

Met

Gly

Asp Asp

Gly

Val

LeU

Ala

Cys

Ala

Ile

Alâ.

Thr

His

Ala

130

135

140

AAA

ATC

CGC

GAT taaataaaca aaatttattg attttgtaat cacaaàtgat

546

Lys

ile

Arg

ASp

145

TGATTTTCTT TCCAAAAAAA AAATAAATAA AATTTTGGGA AT 58$

J 74 486

IPC-017(Portugal) (4) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N². 4:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 146 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear

(ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteína (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^s. 4:

Met

Tyr

Lys

Ile

Leu

cys

Leu

Ser

Leu

val

Ala

val

Ala

1

5

10

15

Arg

Asp

GJ.n

Val

Asp

Val

Lys

Asp

Cys

Ala

Asn

His

Glu

Ile

Lys

20

25

30

Val

Leu

Val

Pro

Gly

Cys

His

Gly

Ser

Glu

Pro

cys

Ile

His

Arg

35

40

.45

Gly

Lys

Pro

Phe

Gin

Leu

Glu

Ala

Val

Phe

Glu

Ala

Asn

Gin

Ásn

Thr

50

55

60

Lys

Thr

Ala

Lys

Ile

Glu

Ile

Lys

Ala

ser

Ile

ASp

Gly

Leu

Glu

Val

65

70

75

80

Asp

Val

Pro

Gly

Ile

Asp

Pro

Asn

Ala

Cys

His

Tyr

Met

Lys

Cys

Pro

85

90

95

Leu

Val

Lys

Gly

Gin

Tyr

Asp

Ile

Lys

Tyr

Thr

Trp

Asn

Val

Pro

100

105

110

Lys

Ile

Ala

Prô

Lys

Ser

Glu

Asn

Val

Thr

Val

Lys

Val

Met

115

120

125

Gly

Asp

Gly

val

Leu

Ala

Cys

Ala

Ile

Ala

Thr

His

Ala

Lys

ile

13 0

135

140

Arg Asp

145 (5) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^s. 5:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 1072 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADNc

J 74 486

IPC-017(Portugal)

(ix) CARACTERÍSTICA:

(A) NOME/CHAVE: CDS (B) LOCALIZAÇÃO: 36..1001 (XI) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^B. 5:

CGTTTTCTTC catcaaaatt aaaaattcat caaaa atg aaa ttc gtt ttg gcc 53

Met Lys Phe Vai Leu Ala

ATT GCC TCT TTG 101

TTG GTA

TTG Leu

1 AGC ACT GTT TAT GCT CGT

5 CCA GCT TCA

Ser

Thr 15

val Tyr

Ala

Arg

lie

Ala

Ser Leu 10

Leu

Val

Pro 20

Ala

ser

ATC 149

AAA

ACT

TTT

GAA

TTC

AAA

GCC

TTC

AAC

AAA

AAC

TAT

GCC

Ile

Lys

Thr 25

Phe

Glu

Phe

Lys 30

Lys

Ala

Phe

Asn

Lys 35

Asn

Tyr

Ala

ACC 197

GTT

GAA

GAG

GAA

GTT

GCC

CGT

AAA

AAC

TTG

GAA

TCA

TTG

Thr

Vai 40

Glu

G1U

Val 45

Ala

Arg

Lys

Asn

Phe 50

Leu

G1U

Ser

Leu

AAA 245

TAT

GTT

GAA

GCT

AAC

AAA

GGT

GCC

ATC

AAC

CAT

TTG

TCC

GAT

TTG

Lys 55

Tyr

val

G1U

Ala

Asn 60

Lys

Gly

Ala

Ile

Asn 65

His

Leu

Ser

Asp

Leu 70

TCA 293

TTG

GAT

GAA

TTG

AAA

AAC

CGT

TAT

TTG

ATG

AGT

GCT

GAA

GCT

TTT

ser

Leu

Asp

Glu

Phe 75

Lys

Asn

Arg

Tyr

Leu 80

Met

ser

Ala

G1U

Ala 85

phe

GAA 341

CAA

CTC

AAA

ACT

CAA

TTC

GAT

TTG

AÀT

GCC

GAA

ACA

AGC

GCT

TGC

Glu

Gin

Leu

Lys 90

Thr

Gin

Phe

Asp

Leu 95

Asn

Ala

Glu

Thr

Ser 100

Ala

Cys

CGT 389

ATC

AAT

TCG

GTT

AAC

GTT

CCA

TCG

GAA

TTG

GAT

TTA

CGA

TCA

CTG

Arg

lie

Asn 105

Ser

val

Asn

Val

Pro 110

Ser

Glu

Leu

Asp

Leu 115

Arg

Ser

Leu

CGA 437

ACT

GTC

ACT

CCA

ATC

CGT

ATG

CAA

GGA

GGC

TGT

GGT

TCA

TGT

TGG

Arg

Thr 120

Val

Thr

Pro

ile

Arg 125

Met

Gin

Gly

Cys 130

Gly

Ser

Cys

Trp

GCT 485

TTC

TCT

CGT

GTT

GCC

GCA

ACT

GAA

TCA

GCT

TAT

TTG

GCC

TAC

CGT

Ala 135

Phe

Ser

Gly

Val

Ala 140

Ala

Thr

Glu

Ser

Ala 145

Tyr

Leu

Ala

Tyr

Arg 150

AAC

ACG

TCT

TTG

GAT

CTT

TCT

GAA

CAG

GAA

CTC

GTC

GAT

TGC

GCA

TCT

533

Asn

Thr

Ser

Leu

Asp

Leu

Ser

G1U

Gin

Glu

Leu

Val

Asp

Cys

Ala

Ser

155

160

165

CAA

CAC

GGA

TGT

CAC

GGC

GAT

ACA

ATA

CCA

AGA

GCC

ATC

GAA

TAC

ATC

581

Gin

His

Gly

Cys

His

Gly

Asp

Thr

Ile

Pro

Arg

Gly

Ile

G1U

Tyr

Ile

170

175

180

-6774 486

IPC-017(Portugal) /1 /

CAA CAA ΑΛΤ

GGT GTC GTT GAA GAA AGÀ AGC TAT

CCA TAC GTT GCA CGA

629 Gin

Gin

Asn 185

pro

Tyr 195

Vai Ala Arg

Gly Vai Vai

Glu Glu 190

Arg Ser

Tyr

GAA

CAA

CGA

TGC

CGA

CCA

AAT

TCG

CAA

CAT

TAC

GGT

ATC

TCA

AAC

677

Glu

Gin

Axg

cys

Arg

Pro

Asn

Ser

Gin

His

Tyr

Gly

Ile

Ser

Asn

200

205

210

TAC

TGC

CAA

ATT

TAT

CCA

GAT

GTG

ΑΑΆ

CAA

ATC

CGT

GAA

GCT

TTG

725

Tyr

Cys

Gin

ile

Tyr

Pro

Asp

Vai

Lys

Gin

Ile

Arg

G1U

Ala

Leu

215

220

225

230

ACT

CAA

ACA

CAC

ACA

GCT

ATT

GCC

GTC

ATT

GGC

ATC

AAA

GAT

TTG

773

Thr

Gin

Thr

His

Thr

Ala

Ile

Ala

Vai

Ile

Ila

Gly

Ile

Lys

Asp

Leu

235

240

245

AGA

GC,T

TTC

CAA

CAT

TAT

GAT

GGA

CGA

ACA

ATC

ATT

CAA

CAT

GAC

ΆΑΤ

821

Arg

Ala

Phè

Gin

His

Tyr

Asp G1V

Arg

Thr

I1Ê

Ile

Gin

His

Asp

Asn

250

255

260

GGT

TAT

CAA

CCA

AAC

TAT

CAT

GCC

GTC

AAC

ATT

GTC

GGT

TAC

GGA

AGT

869

Gly

Tyr

Gin

Pro

Asn

Tyr

His

Ala

Vai

Asn

Ile

Vai

Gly

Tyr

Gly

Ser

265

270

275

ACA

CAA

GGC

GAC

GAT

TAT

TGG

ATC

GTA

CGA

AAC

AGT

TGG

GAT

ACT

AGC

917

Thr

Gin

Gly

Asp

Tyr

Trp

Ile

Vai

Arg

Asn

ser

Trp

Asp

Thr

280

285

290

TGG

GGA

GAT

AGC

GGA

TAC

GGA

TAT

TTC

CAA

GCC

GGA AAC

AAC

CTC

ATG

965

Trp

Gly

Asp

Ser

Gly

Tyr

Gly

Tyr

Phe

Gin

Ala

Gly Asn Asn

Leu

Met

295

300

305

310

ATG

ATC

GAA

CAA

TAT

CCA

TAT

GTT

GTA

ATC

ATG

TGAACATTTG AAATTGAATA

1018

Met

Ile

Glu

Gin

Tyr

Pro

Tyr

Vai

Ile

Met

315

320

TATTTATTTG TTTTCAAAAT AAAAACAACT ACTCTTGCGA GTATTTTTTA CTCG 1072 (6) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^s. 6:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 321 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteína

J ^{74 486}

IPC-017(Portugal)

-68(xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N². 6:

Met Lys Phé Vai 1

Leu 5

Ala

Ile Ala ser Leu Leu Val Leu 10

Ser

Thr 15

Val

Tyr

Ala

Arg

Pro

Ala

Ser

Ile

Lys

Thr

Phe

Glu

G1U

Phe

Lys

Ala

20

25

30

Phe

Asn.

Lys

Asn

Tyr

Ala

Thr

Val

Glu

GlU

G1U

Val

Ala

Arg

Lys

35

40

45

Asn

Phe

Leu

C1U

Ser

Leu

Lys

Tyr

Val

Glu

Ala

Asn

Lys

Gly

Ala

Ile

50

55

60

Asn

His

Leu

Ser

Asp

Leu

ser

Leu

Asp

Glu

Phe

Lys

Asn

Arg

Tyr

Leu

65

70

75

80

Met

Ser

Ala

Glu

Ala

Phe

Glu

Gin

Leu

Lys

Thr

Gin

Phe

Asp

Leu

Asn

85

90

95

Ala

Glu

Thr

ser

Ala

Cys

Arg

Ile

Asn

Ser

val

Asn

Val

Pro

ser

Glu

100

105

110

Leu

Asp

Leu

Arg

ser

Leu

Arg

Thr

Val

Thr

pro

ile

Arg

Met

Gin

Gly

115

120

125

Gly

Cys

Gly

Ser

Cys

Trp

Ala

Phe

Ser

Gly

Val

Ala

Thr

Glu

Ser

130

135

140

Ala

Tyr

Leu

Ala

Tyr

Arg Asn

Thr

Ser

Leu

Asp

Leu

Ser

Glu

Gin

Glu

145

150

155

160

Leu

Vai

Asp

Cys

Ala

Ser

Gin

His

Gly

Cys

His

Gly Asp

Thr

Ile

Pro

165

170

175

Arg

Gly

Ile

GlU

Tyr

lie

Gin

Asn

Gly

Val

Glu

G1U

Arg

ser

180

185

190

Tyr

Pro

Tyr

val

Ala

Arg

Glu

Gin

Arg

Cys

Arg

Pro

Asn

Ser

Gin

195

200

205

His

Tyr

Gly

Ile

Ser

Asn

Tyr

cys

Gin

Ile

Tyr

Pro

Asp

Val

Lys

210

215

220

Gin

Ile

Arg

Glu

Ala

Leu

Thr

Gin

Thr

Ris

Thr

Ala

Ile

Ala

Val

Ile

225

230

235

240

Ile

Gly

Ile

Lys

Asp

Leu

Arg

Ala

Phe

Gin

His

Tyr

Asp

Gly

Arg

Thr

245

250

255

Ile

Gin

His

Asp

Asn

Gly

Tyr

Gin

Pro

Asn

Tyr

His

Ala

Val

Asn

260

265

270

Ile

Vai

Gly

Tyr

Gly

ser

Thr

Gin

Gly

Asp

Tyr

Trp

Ile

Val

Arg

275

280

285

Asn

Ser

Trp

Asp

Thr

Trp

Gly

Asp

Ser

Gly

Tyr

Gly

Tyr

Phe

Gin

290

295

300

Ala

Gly

Asn

Leu

Met

Ile

Glu

Gin

iyr

Pro

Tyr

Val

Ile

305

310

315

320

Met

......

-6974 486

IPC-017(Portugal)

(7) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^B. 7:

(í) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 491 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: simples (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADNc (ix) CARACTERÍSTICA:

(A) NOME/CHAVE: CDS (B) LOCALIZAÇÃO: 1..390

( GAT 48 Asp 1

xi) CAA Gin

DESCRIÇÃO DA

SEQUÊNCIA: SEQ ID N GAT TGT GCC AAC AAT GAA

^a. 7: ATC AAA AAA GTA

GTC GAT

GTT AAA Val Lys 5

vai

Asp

Asp cys

Ala

Asn 10

Asn

G1U

Ile

Lys Lys Val 15

ATG

GTC

GAT

GGT

TGC

CAT

GCT

TCT

GAT

CCA

TGC

ATA

ATC

CAT

CGT

GGT

96

Met

val

Asp

Gly

cys

His

Gly

ser

Asp

Pro

cys

ile

Ile

His

Arg

Gly

20

25

30

AAA

CCA

TTC

ACT

TTG

GAA

GCC

TTA

TTC

GAT

GCC

AAC

CAA

AAC

ACT AAA

144

Lys

Pro

Phe

Thr

Leu

Glu

Ala

Leu

Phe

Asp

Ala

Asn

Gin

Asn

Thr

Lys

35

40

45

ACC

GCT

AAA

ACT

GAA

ATC

AAA

GCC

AGC

CTC

GAT

GGT

CTT

GAA

ATT

GAT

192

Thr

Ala

Lys

Thr

Glu

lie

Lys

Ala

ser

Leu

Asp Gly

Leu

Glu

Ile

Asp

50

55

60

GTT

CCC

GGT

ATT

CAT

ACC

AAT

GCT

TGC

CAT

TTT

ATG

AAA

TGT

CCA

TTG

240

Val

pro

Gly

.Ile

Asp

Thr

Asn

Ala

cys

His

Phe

Met

Lys

Cys

Pro

Leu

65

70

75

so

GTT

AAA

GGT

CAA

TAT

GAT

GCC

AAA

TAT

ACA

TGG

AAT

GTG

CCC

AAA

288

Val

Lys

Gly

Gin

Tyr

Asp

Ala

Lys

Tyr

Thr

Trp

Asn

val

pro

Lys

85

90

95

att

GCA

CCA

AAA

TCT

GAA

AAC

GTT

GTC

GTT

ACA

GTC

AAA

CTT

GTT

GGT

336

Ile

Ala

Pro

Lys

ser

Glu

Asn

vai

Val

Thr

Val

Lys

Leu

Val

Gly

100

105

110

GAT

AAT

GGT

GTT

TTG

GCT

TGC

GCT

ATT

GCT

ACC

CAC

GCT

AAA

ATC

CGT

384

Asp

Asn

Gly

val

Leu

Ala

Cys

Ala

Ile

Ala

Thr

His

Ala

Lys

Ile

Arg

115

120

125

GAT TAAAAAAAAA aaataaatat gaaaattttc accaacatcg aacaaaattc

437

Asp

130

AATAACCAAA ATTTGAATCA AAAACGGAAT TCCAAGCTGA GCGCCGGTCG CTAC

491

J ^{74 486}

IPC-017(Portugal)

(8) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N². 8:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 129 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteína (xí) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N². 8:

Asp

Gin

val

Asp

Val

Lys

Asp

Cys

Ala

Asn

Glu

Ile

Lys

val

1

5

10

15

Met

Val

Asp

Gly

Cys

His

Gly

Ser

Asp

Pro

cys

lie

ile

His

Arg

Gly

20

25

30

Lys

Pro

Phe

Thr

Leu

Glu

Ala

Leu

Phe

Asp

Ala

Asn

Gin

Asn

Thr

Lys

35

40

45

Thr

Ala

Lys

Thr

Glu

Ile

Lys

Ala

Ser

Leu

Asp

Gly

Leu

Glu

Ile

Asp

50

55

60

Val

Pro

Gly

ile

Asp

Thr

Asn

Ala

cys

His

Pha

Met

Lys

Cys

Pro

Leu

65

70

75

80

Val

Lys

Gly

Gin

Tyr

Asp

Ala

Lys

Tyr

Thr

Trp

Asn

Val

Pro

Lys

85

90

95

Ile

Ala

Pra

Lys

Ser

G1U

Asn

Val

Thr

Val

Lys

Leu

val

Gly

100

105

110

ASp

Asn

Gly

Val

Lèu

Ala

Cys

Ala

Ile

Ala

Thr

HÍ5

Ala

Lys

ile

Arg

115

120

125

Asp (9) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N². 9:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 20 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal

ΊΑ 486

IPC-017(Portugal)

-71(xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a. 9:

Thr Asn Ala Cys Ser Ile Asn Gly Asn Ala Pro Ala Glu Ile Asp Leu 15 10 15

Arg Gin Met Arg (10) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a. 10:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 27 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a. 10:

Glu Ile Asp Leu Arg Gin Met Arg Thr Val Thr Pro Ile Arg Met Gin 15 10 15

Gly Gly Cys Gly Ser Cys Trp Ala Phe Ser Gly

25 (11) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a.ll:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 29 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal

(Xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a. 11:

-7274 486

IPC-017(Portugal)

Thr Vai Thr Pro Ile Arg Met Gin Gly Gly Cys

Gly Ser Cys Trp Ala

Phe Ser Gly Vai

Ala Ala Thr Glu Ser Ala Tyr Leu Ala (12) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a . 12:

(í) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 21 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE fragmento: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a. 12:

(13) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a. 13:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 22 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (Xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a. 13:

His Arg Asn Gin Ser Leu Asp Leu Ala Glu Gin Glu Leu Vai Asp Cys

10 15

Ala Ser Gin His Gly Cys

J 74 486

IPC-017(Portugal) ti

Cl·--73-

(14) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a . 14:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 21 aminoâcidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^s. 14:

Glu Leu Vai Asp Cys Ala Ser Gin His Gly Cys His Gly Asp Thr Ile 15 10 15

Pro Arg Gly Ile Glu (15) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a . 15:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 28 aminoâcidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a. 15:

Gly Asp Thr Ile Pro Arg Gly Ile Glu Tyr Ile Gin His Asn Gly Vai

10 15

Vai Gin Glu Ser Tyr Tyr Arg Tyr Vai Ala Arg Glu

25 (16) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^e. 16:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 20 aminoâcidos (B) TIPO: aminoácido

ΊΑ 486

IPC-017(Portugal)

-Ί Α- (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (Xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^s. 16:

Glu Tyr Ile Gin His Asn Gly Val Val Gin Glu Ser Tyr Tyr Arg Tyr 15 10 15

Val Ala Arg Glu (17) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N² . 17:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 25 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (XÍ) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N². 17;

His Asn Gly Val Val Gin Glu Ser Tyr Tyr Arg Tyr Val Ala Arg Glu

10 15

Gin Ser Cys Arg Arg Pro Asn Ala Gin

25 (18) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a. 18:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 19 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido

74 486	/7 / / fy:/ ^/
IPC-017(Portugal)
-75-	O- ^J '
(v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal
(xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a. 18:

Gin Ser Cys Arg Arg Pro Asn Ala Gin Arg Phe Gly Ile Ser Asn Tyr

10 15

Cys Gin Ile (19) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^e. 19:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 22 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: pêptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N². 19:

Arg	Phe	Gly	Ile	Ser	Asn Tyr Cys	Gin Ile Tyr Pro	Pro Asn Ala Asn
1				5		10	15
Lys	Ile	Arg	Glu	Ala	Leu
			20

(20) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a. 20:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 24 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: pêptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (Xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^s . 20:

j 74 486

IPC-017(Portugal)

Tyr	Pro	Pro	Asn	Ala	Asn	Lys	Ile	Arg Glu Ala	Leu Ala Gin Thr His
1				5				10	15
Ser	Ala	Ile	Ala	Val	Ile	Ile	Gly
			20

(21) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N². 21:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 26 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N². 21:

Ala Gin Thr His Ser Ala Ile Ala Val Ile Ile Gly Ile Lys Asp Leu

10 15

Asp Ala Phe Arg His Tyr Asp Gly Arg Thr

25 (22) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N². 22:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 26 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a . 22:

Ile Lys Asp Leu Asp Ala Phe Arg His Tyr Asp Gly Thr Arg lie ile

10 15

Gin Arg Asp Asn Gly Tyr Gin Pro Asn Tyr

IPC-017(Portugal)

-77J 74 486

(23) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a . 23:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 23 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a. 23:

Ile Ile Gin Arg Asp Asn Gly Tyr Gin Pro Asn Tyr His Ala Val Asn 15 10 15

Ile Val Gly Tyr Ser Asn Ala (24) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a. 24:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 22 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a. 24:

His Ala Val Asn Ile Val Gly Tyr Ser Asn Ala Gin Gly Val Asp Tyr 15 10 15

Trp Ile Val Arg Asn Ser (25) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a. 25:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 24 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido

J ^{74 486}

IPC-017(Portugal) (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a . 25:

Gin Gly Vai Asp Tyr Trp Ile Vai Arg Asn Ser Trp Asp Thr Asn Trp

10 15

Gly Asp Asn Gly Tyr Gly Tyr Phe (26) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a. 26:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 26 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: 1inear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a. 26:

Gly Asp Asn Gly Tyr Gly Tyr Phe Ala Ala Asn Ile Asp Leu Met Met

10 15

Ile Glu Glu Tyr Pro Tyr Vai Vai Ile Leu

25 (27) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a. 27:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 28 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido

-7974 486

IPC-017(Portugal) (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N⁵. 27:

Thr Asn Ala Cys Ser Ile Asn Gly Asn Ala Pro Ala Glu Ile Asp Leu

10 15

Arg Gin Met Arg Thr Val Thr Pro Ile Arg Met Gin

25 (28) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^E. 28:

(i) CARACTERISTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 24 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N². 28:

Ser Ile Asn Gly Asn Ala Pro Ala Glu Ile Asp Leu Arg Gin Met Arg

10 15

Thr Val Thr Pro Ile Arg Met Gin (29) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a . 29:

(i) CARACTERISTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 29 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^s . 29:

-80J 74 486

IPC-017(Portugal)

Ala

Phe

Ser Gly

Val

Ala

Thr

Glu

Ser

Ala

Tyr

Leu Ala

His Arg

1

5

10

15

Asn

Gin

Ser Leu

Asp

Leu

Ala

Glu

Gin

Glu

Leu

Val

Asp

20

25

(30) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a. 30:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 25 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a . 30:

Val Ala Ala Thr Glu Ser Ala Tyr Leu Ala His Arg Asn Gin Ser Leu 15 10 15

Asp Leu Ala Glu Gin Glu Leu Val Asp

25 (31) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a. 31:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 25 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a. 31:

Ala Phe Ser Gly Val Ala Ala Thr Glu Ser Ala Tyr Leu Ala His Arg 15 10 15

Asn Gin Ser Leu Asp Leu Ala Glu Gin

486

IPC-017(Portugal)

(32) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a . 32:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 29 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a. 32:

Val Ala Ala Thr Glu Ser Ala Tyr Leu Ala His Arg Asn Gin Ser Leu

10 15

Asp Leu Ala Glu Gin Glu Leu Val Asp Cys Ala Ser Gin

25 (33) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a. 33:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 28 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (V) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a. 33:

Glu Tyr Ile Gin His Asn Gly Val Val Gin Glu Ser Tyr Tyr Arg Tyr 15 10 15

Val Ala Arg Glu Gin Cys Arg Arg Pro Asn Ala Gin

25 (34) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a. 34:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 29 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido

-82IPC-017(Portugal)

(D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a. 34:

Asp Thr Ile Pro Arg Gly Ile Glu Tyr Ile Gin His Asn Gly Val Val

10 15

Gin Glu Ser Tyr Tyr Arg Tyr Val Ala Arg Glu Gin Ser

25 (35) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a. 35:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 29 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (Xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a. 35:

Gin Ile

Thr His

Tyr Pro

Ser Ala

Pro Asn

Ile Ala

Ala Asn

Val Ile

Lys Ile

Ile Gly

Arg Glu

Ile Lys

Ala Leu

Asp

Ala Gin (36) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a. 36:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 22 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido

IPC-017(Portugal)

-83(v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal

J74 486

/ ^z '/· -(Xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N². 36:

Gin Ile Tyr Pro Pro Asn Ala Asn Lys Ile Arg Glu Ala Leu Ala Gin

Thr His Ser Ala Ile Ala (37) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a. 37:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 26 aminoâcidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a. 37:

Ile Ile Gly Ile Lys Asp Leu Asp Ala Phe Arg His Tyr Asp Gly Arg

10 15

Thr Ile Ile Gin Arg Asp Asn Gly Tyr Gin (38) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a. 38:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 25 aminoâcidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a. 38:

J 74 486

IPC-017(Portugal)

-84Arg Asp Asn Gly Tyr Gin Phe Asn Tyr His Ala Val Asn Ile Val Gly 15 10 15

Tyr Ser Asn Ala Gin Gly Val Asp Tyr

25 (39) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N². 39:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 29 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N². 39:

Asn Ile Val Gly Tyr Ser Asn Ala Gin Gly Val Asp Tyr Trp Ile Val

10 15

Arg Asn Ser Trp Asp Thr Asn Trp Gly Asp Asn Gly Tyr

25 (40) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N². 40:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 23 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N² . 40:

Asn Ile Val Gly Tyr Ser Asn Ala Gin Gly Val Asp Tyr Trp Ile Val 15 10 15

Arg Asn Ser Trp Asp Thr Asn

J 74 486

IPC-017(Portugal)

-85(41) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N². 41:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 20 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N². 41:

Asp Gin Vai Asp Vai Lys Asp Cys Ala Asn His Glu Ile Lys Lys Vai

Leu Vai Pro Gly (42) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N² . 42:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 25 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a. 42:

His Glu Ile Lys Lys Vai Leu Vai Pro Gly Cys His Gly Ser Glu Pro

10 15

Cys Ile Ile His Arg Gly Lys Pro Phe (43) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N². 43:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 29 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido

J 74 486

IPC-017(Portugal) (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (Xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a. 43:

His Gly Ser Glu Pro Cys Ile Ile His Arg Gly Lys Pro Phe Gin Leu

10

Glu Ala Val Phe Glu Ala Asn Gin Asn Thr Lys Thr Ala

25 (44) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a. 44:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 25 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (XÍ) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^s. 44:

Gin Leu Glu Ala Val Phe Glu Ala Asn Gin Asn Thr Lys Thr Ala Lys

10 15

Ile Glu Ile Lys Ala Ser Ile Asp Gly (45) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a. 45:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 27 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido

J 74 486

IPC-017(Portugal)

(v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a. 45:

Lys Ile Glu Ile Lys Ala Ser Ile Asp Gly Leu Glu Val Asp Val Pro

10 15

Gly Ile Asp Pro Asn Ala Cys His Tyr Met Lys

25 (46) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a. 46:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 26 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a. 46:

Leu Glu Val Asp Val Pro Gly Ile Asp Pro Asn Ala Cys His Tyr Met

10 15

Lys Cys Pro Leu Val Lys Gly Gin Gin Tyr

25 (47) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a. 47:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 27 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a. 47:

j 74 486

IPC-017(Portugal)

Cys	Pro	Leu	Val	Lys	Gly Gin	Gin	Tyr	Asp	Ile Lys	Tyr Thr Trp Asn
1				5				10		15
Val	Pro	Lys	Ile	Ala	Pro Lys	Ser	Glu	Asn	Val
			20				25

(48) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N². 48:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 26 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N⁵. 48:

Asp Ile Lys Tyr Thr Trp Asn Val Pro Lys Ile Ala Pro Lys Ser Glu

10 15

Asn Val Val Val Thr Val Lys Val Met Gly

25 (49) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N². 49:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 25 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N². 49:

Val Val Thr Val Lys Val Met Gly Asp Asp Gly Val Leu Ala Cys Ala

10 15

Ile Ala Thr His Ala Lys Ile Arg Asp

25

-8974 486

IPC-017(Portugal)

(50) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a. 50:

(i) CARACTERISTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 26 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (Xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N². 50:

Asp Gin Vai Asp Vai Lys Asp Cys Ala Asn His Glu Ile Lys Lys Vai

10 15

Leu Vai Pro Gly Cys His Gly Ser Glu Pro

25 (51) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N². 51:

(i) CARACTERISTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 26 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a . 51:

Asp Gin Vai Asp Vai Lys Asp Glu Ala Asn His Glu Ile Lys Lys Vai

10 15

Leu Vai Pro Gly Cys His Gly Ser Glu Pro

25 (52) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N² . 52:

(i) CARACTERISTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 26 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido

486

IPC-017(Portugal)

-90(D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a . 52:

Asp Gin Val Asp Val Lys Asp Ser Ala Asn His Glu Ile Lys Lys Val

10 15

Leu Val Pro Gly Cys His Gly Ser Glu Pro

25 (53) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a. 53:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 26 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: 1inear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (Xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a. 53:

Asp Gin Val Asp Val Lys Asp Cys Ala Asn His Glu Ile Lys Lys Val

10 15

Leu Val Pro Gly Glu His Gly Ser Glu Pro

25 (54) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a. 54:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 26 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido

J 74 486

IPC-017(Portugal)

-91(v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (XÍ) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N². 54;

Asp Gin Val Asp Val Lys Asp Cys Ala Asn His Glu Ile Lys Lys Val 15 10 15

Leu Val Pro Gly Ser His Gly Ser Glu Pro

25 (55) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N² . 55:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 26 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N². 55:

Asp Gin Val Asp Val Lys Asp Glu Ala Asn His Glu Ile Lys Lys Val 15 10 15

Leu Val Pro Gly Glu His Gly Ser Glu Pro

25 (56) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N². 56:

(1) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 26 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N². 56:

J 74 486

IPC-017(Portugal) / ’ 'r^-92- .....'

Asp Gin Val Asp Val Lys Asp Ser Ala Asn His Glu Ile Lys Lys Val

10 15

Leu Val Pro Gly Ser His Gly Ser Glu Pro

25 (57) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a . 57:

(i) CARACTERISTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 20 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a . 57:

Asp Gin Val Asp Val Lys Asp Glu Ala Asn His Glu Ile Lys Lys Val 15 10 15

Leu Val Pro Gly (58) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N². 58:

(i) CARACTERISTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 20 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a. 58:

Asp Gin Val Asp Val Lys Asp Ser Ala Asn His Glu Ile Lys Lys Val 15 10 15

Leu Val Pro Gly

J 74 486

IPC-017(Portugal)

(59) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^B. 59:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 16 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: pêptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (Xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a . 59:

His Glu Ile Lys Lys Val Leu Val Pro Gly Cys His Gly Ser Glu Pro 15 10 15 (60) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a. 60:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 16 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: pêptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a . 60:

His Glu Ile Lys Lys Val Leu Val Pro Gly Glu His Gly Ser Glu Pro

10 15 (61) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a. 61:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 16 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: pêptido

-94J 74 486

IPC-017(Portugal) (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^s. 61:

His Glu Ile Lys Lys Vai Leu Vai Pro Gly Ser His Gly Ser Glu Pro

10 15 (62) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^e. 62:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 28 aminoâcidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N² . 62:

Lys Pro Phe Gin Leu Glu Ala Vai Phe Glu Ala Asn Gin Asn Thr Lys

10 15

Thr Ala Lys Ile Glu Ile Lys Ala Ser Thr Asp Gly

25 (63) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^s. 63:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 28 aminoâcidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (V) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (Xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N². 63:

J 74 486

IPC-017(Portugal)

Gin

Leu

Glu

Ala

Vai

Phe

Glu

Ala

Asn

Gin

Asn

Thr Lys

Thr Ala Lys

1

5

10

15

Ile

Glu

Ile

Lys

Ala

Ser

Ile

Asp

Gly

Leu

Glu

Vai

20

25

(64) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a. 64:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 27 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a . 64:

Phe Glu Ala Asn Gin Asn Thr Lys Thr Ala Lys Ile Glu Ile Lys Ala

10 15

Ser Ile Asp Gly Leu Glu Vai Asp Vai Pro Gly

25 (65) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N². 65:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 23 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a. 65:

Gin Asn Thr Lys Thr Ala Lys Ile Glu Ile Lys Ala Ser Ile Asp Gly

1.5 10 15

Leu Glu Vai Asp Vai Pro Gly

J 74 486

IPC-017(Portugal) (66) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a . 66:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 26 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ IDN⁵. 66:

Pro Leu Val Lys Gly Gin Gin Tyr Asp Ile Lys Tyr Thr Trp Asn Val

10 15

Pro Lys Ile Ala Pro Lys Ser Glu Asn Val

25 (67) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a. 67:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 26 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (Xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a. 67:

Pro Leu Val Lys Gly Gin Gin Tyr Asp Ile Lys Tyr Thr Tyr Asn Val

10 15

Pro Lys Ile Ala Pro Lys Ser Glu Asn Val

25 (68) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a. 68:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 13 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido

IPC-017(Portugal)

J74 486

(D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (Xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N². 68:

Lys Ser Glu Asn Val Val Val Thr Val Lys Val Met Gly

10 (69) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^E. 69:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 23 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N⁵. 69:

Thr Val Lys Val Met Gly Asp Asp Gly Val Leu Ala Cys Ala Ile Ala

10 15

Thr His Ala Lys Ile Arg Asp (70) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a. 70:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 23 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal

ΊΑ 486

IPC-017 (Portugal)

-98- .............^r (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^s. 70:

Thr Val Lys Val Met Gly Asp Asp Gly Val Leu Ala Glu Ala Ile Ala

10 15

Thr His Ala Lys Ile Arg Asp (71) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N². 71:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 23 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (Xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N² . 71:

Thr Val Lys Val Leu Gly Asp Asp Gly Val Leu Ala Ser Ala Ile Ala 15 10 15

Thr His Ala Lys Ile Arg Asp (72) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^fi. 72:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 21 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^e. 72:

‘J 74 486

IPC-017(Portugal)

Thr Ser Ala Cys Arg Ile Asn Ser Val Asn Val Pro Ser Glu Leu Asp 15 10 15

Leu Arg Ser Leu Arg (73) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a. 73:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 27 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA; péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (Xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a. 73:

Glu Leu Asp Leu Arg Ser Leu Arg Thr Val Thr Pro Ile Arg Met Gin

10 15

Gly Gly Cys Gly Ser Cys Trp Ala Phe Ser Gly

25 (74) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a. 74:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 29 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (Xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a. 74:

Thr Val Thr Pro Ile Arg Met Gin Gly Gly Cys Gly Ser Cys Trp Ala

10 15

Phe Ser Gly Val Ala Ala Thr Glu Ser Ala Tyr Leu Ala

25

-10074 486

IPC-017(Portugal)

(75) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a. 75:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 21 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a. 75:

Val	Ala	Ala	Thr	Glu Ser Ala Tyr	Leu Ala Tyr Arg Asn	Thr Ser Leu
1				5	10	15
Asp	Leu	Ser	Glu	Gin
			20

(76) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a. 76:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 22 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a. 76:

Tyr Arg Asn Thr Ser Leu Asp Leu Ser Glu Gin Glu Leu Val Asp Cys

5 10 15

Ala Ser Gin His Gly Cys (77) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a. 77:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 21 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido

486

IPC-017(Portugal)

-101-

(D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a . 77:

Glu Leu Vai Asp Cys Ala Ser Gin His Gly Cys His Gly Asp Thr Ile

10 15

Pro Arg Gly Ile Glu (78) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a. 78:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 28 aminoâcidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a. 78:

Gly Asp Thr Ile Pro Arg Gly Ile Glu Tyr Ile Gin Gin Asn Gly Vai

10 15

Vai Glu Glu Arg Ser Tyr Pro Tyr Vai Ala Arg Glu

25 (79) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a. 79:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 25 aminoâcidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido

486

IPC-017(Portugal)

-102-

(v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (ΧΪ) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ IDN². 79:

Gin Asn Gly Val Val Glu Glu Arg Ser Tyr Pro Tyr Val Ala Arg Glu

10 15

Gin Arg Cys Arg Arg Pro Asn Ser Gin

25 (80) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N². 80:

(í) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 19 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N². 80:

Gin Arg Cys Arg Arg Pro Asn Ser Gin His Tyr Gly Ile Ser Asn Tyr

10 15

Cys Gin Ile (81) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a. 81:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 22 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (Xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ IDN². 81:

J 74 486

IPC-017(Portugal)

His Tyr Gly Ile Ser Asn Tyr

5

Gin Ile Arg Glu Ala Leu (82) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N². 82:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 24 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N² . 82:

Tyr Pro Pro Asp Val Lys Gin Ile Arg Glu Ala Leu Phe Gin Thr His 15 10 15

Thr Ala Ile Ala Val Ile Ilè Gly (83) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N². 83:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 26 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N². 83:

Thr Gin Thr His Thr Ala Ile Ala Val Ile Ile Gly Ile Lys Asp Leu 15 10 15

Arg Ala Phe Gin His Tyr Asp Gly Arg Thr

486

IPC-017(Portugal)

-104-

(84) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^e. 84:

(í) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 26 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N² . 84:

Ile Lys Asp Leu Arg Ala Phe Gin His Tyr Asp Gly Arg Thr Ile Ile

10 15

Gin His Asp Asn Gly Tyr Gin Pro Asn Tyr (85) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a . 85:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 15 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N². 85:

Asp Gly Arg Thr Ile Ile Gin His Asp Asn Gly Tyr Gin Pro Asn

10 15 (86) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N². 86:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 23 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear

IPC-017(Portugal)

-105-

(ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N² . 86:

Ile Ile Gin His Asp Asn Gly Tyr Gin Pro Asn Tyr His Ala Vai Asn 15 10 15

Ile Vai Gly Tyr Gly Ser Thr (87) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N². 87:

(i) CARACTERISTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 22 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N². 87:

His Ala Vai Asn Ile Vai Gly Tyr Gly Ser Thr Gin Gly Asp Asp Tyr

10 15

Trp Ile Vai Arg Asn Ser (88) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a. 88:

(i) CARACTERISTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 24 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal

486

IPC-017(Portugal)

-106(xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^s. 88:

Gin Gly Asp Asp Tyr Trp Ile Val Arg Asn Ser Trp Asp Thr Thr Trp 15 10 15

Gly Asp Ser Gly Tyr Gly Tyr Phe (89) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a. 89:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 26 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: pêptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a. 89:

Gly Asp Ser Gly Tyr Gly Tyr Phe Gin Ala Gly Asn Asn Leu Met Met

10 15

Ile Glu Gin Tyr Pro Tyr Val Val Ile Met

25 (90) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a. 90:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 29 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: pêptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^e . 90:

486

IPC-017(Portugal)

-107Thr Ser Ala Cys Arg Ile Asn Ser Vai Asn Vai Pro Ser Glu Leu Asp 15 10 15

Leu Arg Ser Leu Arg Thr Vai Thr Pro Ile Arg Met Gin

25 (91) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N². 91:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 25 aminoâcidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N² . 91:

Arg Ile Asn Ser Vai Asn Vai Pro Ser Glu Leu Asp Leu Arg Ser Leu 15 10 15

Arg Thr Vai Thr Pro Ile Arg Met Gin

25 (92) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N². 92:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 29 aminoâcidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (XÍ) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N² . 92:

Ala Phe Ser Gly Vai Ala Ala Thr Glu Ser Ala Tyr Leu Ala Tyr Arg

10 15

Asn Thr Ser Leu Asp Leu Ser Glu Gin Glu Leu Vai Asp

25

-10874 486

IPC-017(Portugal) (93) INFORMAÇÃO PARA SEQ

ID N^a . 93:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 25 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a . 93:

Vai	Ala	Ala	Thr	Glu	Ser	Ala	Tyr	Leu	Ala Tyr Arg Asn Thr	Ser Leu
1				5					10	15
Asp	Leu	Ser	Glu	Gin	Glu	Leu	Vai	Asp
			20					25

(94) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a. 94:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 29 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (V) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (Xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a. 94:

Vai Ala Ala Thr Glu Ser Ala Tyr Leu Ala Tyr Arg Asn Thr Ser Leu

10 15

Asp Leu Ser Glu Gin Glu Leu Vai Asp Cys Ala Ser Gin

25 (95) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a. 95:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 29 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido

J 74 486

IPC-017(Portugal) fF.

C

-109(D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N² . 95:

Glu Tyr Ile Gin Gin Asn Gly Val Val Glu Glu Arg Ser Tyr Pro Tyr

10 15

Val Ala Arg Glu Gin Arg Cys Arg Arg Pro Asn Ser Gin

25 (96) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N². 96:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 29 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N² . 96:

Asp Thr Ile Pro Arg Gly Ile Glu Tyr Ile Gin Gin Asn Gly Val Val

10 15

Glu Glu Arg Ser Tyr Pro Tyr Val Ala Arg Glu Gin Arg

25 (97) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N². 97:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 29 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal ' J 74 486

IPC-017(Portugal)

-110(XÍ) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N². 97:

Gin Ile Tyr Pro Pro Asp Val Lys Gin Ile Arg Glu Ala Leu Thr Gin 15 10 15

Thr His Thr Ala Ile Ala Val Ile Ile Gly Ile Lys Asp

25 (98) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a . 98:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 22 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (Xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a . 98:

Gin	Ile	Tyr	Pro	Pro	Asp Val Lys	Gin Ile Arg Glu Ala	Leu Thr Gin
1				5		10	15
Thr	His	Thr	Ala	Ile	Ala
			20

(99) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a. 99:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 26 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (Xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a. 99:

486

IPC-017(Portugal)

111Arg

Ile Ile Gly Ile

Thr Ile Ile Gin

Lys Asp Leu Arg Ala

His Asp Asn Gly Tyr

Phe Gin His Tyr

Gin

Asp

Gly (100) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a. 100: CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 25 aminoâcidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (i) (ii)

TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v)

TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi)

DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a . 100:

His

Tyr

Asp Asn

Gly Ser

Gly

Thr

Tyr Gin Pro Asn Tyr His Ala Val Asn

10

Gin Gly Asp Asp Tyr

Ile

Val

Gly (101) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a. 101: CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 29 aminoâcidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (i) (ϋ)

TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v)

TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal

Asn

Arg (xi)

Ile Val

Asn Ser

DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a . 101:

Gly Tyr Gly Ser Thr Gin Gly Asp Asp Tyr

10

Trp Asp Thr Thr Trp Gly Asp Ser Gly Tyr

25

Trp

Ile

Val

J ^{74 486}

IPC-017(Portugal)

-112(102) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N² . 102:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 23 aminoâcidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a . 102:

Asn Ile Vai Gly Tyr Gly Ser Thr Gin Gly Asp Asp Tyr Trp Ile Vai 15 10 15

Arg Asn Ser Trp Asp Thr Thr (103) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a. 103:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 20 aminoâcidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a. 103:

Asp Gin Vai Asp Vai Lys Asp Cys Ala Asn Asn Glu Ile Lys Lys Vai

10 15

Met Vai Asp Gly (104) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N². 104:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 25 aminoâcidos (B) TIPO: aminoácido

486

IPC-017(Portugal)

-113-

(D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a . 104:

Asn Glu Ile Lys Lys Val Met Val Asp Gly Cys His Gly Ser Asp Pro

10 15

Cys Ile Ile His Arg Gly Lys Pro Phe

25 (105) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^s. 105:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 29 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a. 105:

His Gly Ser Asp Pro Cys Ile Ile His Arg Gly Lys Pro Phe Thr Leu

10 15

Glu Ala Leu Phe Asp Ala Asn Gin Asn Thr Lys Thr Ala

25 (106) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a. 106:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

74 486

IPC-017(Portugal)

-114(v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a. 106:

His Arg Gly Lys Pro Phe Thr Leu Glu Ala Leu Phe Asp Ala Asn Gin

10 15

Asn Thr Lys (107) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N². 107:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 25 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N². 107:

Thr	Leu Glu Ala Leu Phe Asp Ala Asn Gin Asn Thr	Lys Thr Ala Lys
1				5			10	15
Ile	Glu	Ile	Lys	Ala	Ser	Leu Asp Gly
			20			25

(108) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N². 108:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 26 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a. 108:

Gin Asn Thr Lys Thr Ala Lys Ile Glu Ile Lys Ala Ser Leu Asp Gly

IPC-017(Portugal)

-115-

Leu Glu Ile Asp Val Pro Gly Ile Asp Thr

25 (109) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N² . 109:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 27 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N² . 109:

Lys Ile Glu Ile Lys Ala Ser Leu Asp Gly Leu Glu Ile Asp Val Pro

10 15

Gly Ile Asp Thr Asn Ala Cys His Phe Met Lys

25 (110) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N² . 110:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 26 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N² . 110:

Leu Glu Ile Asp Val Pro Gly Ile Asp Thr Asn Ala Cys His Phe Met

10 15

Lys Cys Pro Leu Val Lys Gly Gin Gin Tyr

-116-

74 486

IPC-017(Portugal) f' (111) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^s. 111:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 27 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (Xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a . 111:

Cys Pro Leu Val Lys Gly Gin Gin Tyr Asp Ala Lys Tyr Thr Trp Asn

10 15

Val Pro Lys Ile Ala Pro Lys Ser Glu Asn Val

25 (112) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a. 112:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 26 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a. 112:

Asp Ala Lys Tyr Thr Trp Asn Val Pro Lys Ile Ala Pro Lys Ser Glu

10 15

Asn Val Val Val Thr Val Lys Leu Val Gly

25 (113) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N². 113:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 35 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido

J 74 486

IPC-017(Portugal)

-117- (D) TOPOLOGIA:

linear

(ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (Xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a . 113:

Pro

Lys

Ile

Ala

Pro Lys

Ser

Glu

Asn

Val

Thr

Val

Lys

Leu

1

5

10

15

Val

Gly

Asp

Asn

Gly Val

Leu

Ala

Cys

Ala

Ile

Ala

Thr

His

Ala

Lys

20

25

30

Ile Arg Asp (114) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a. 114:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 25 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a. 114:

Val Val Thr Val Lys Leu Val Gly Asp Asn Gly Val Leu Ala Cys Ala

10 15

Ile Ala Thr His Ala Lys Ile Arg Asp

25 (115) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a. 115:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 28 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear

118

486

IPC-017(Portugal) (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a. 115:

Lys	Pro Phe Thr Leu Glu Ala Leu Phe Asp Ala Asn Gin Asn Thr Lys
1				5				10		15
Thr	Ala	Lys	Ile	Glu	Ile	Lys Ala	Ser	Leu	Asp Gly
			20				25

(116) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a . 116:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 28 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (Xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a. 116:

Thr	Leu Glu Ala Leu Phe Asp Ala Asn Gin Asn	Thr Lys Thr Ala Lys
1				5		10			15
Ile	Glu	Ile	Lys	Ala	Ser Leu Asp Gly	Leu	Glu	Ile
			20		25

(117) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a. 117:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 22 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido ^{74 486}

IPC-017(Portugal)

-119-

(v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a. 117:

His Arg Asn Gin Ser Leu Asp Leu Ala Glu Gin Asp Leu Val Asp Cys

10 15

Ala Ser Gin His Gly Cys (118) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a. 118:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 21 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: pêptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a. 118:

Asp Leu Val Asp Cys Ala Ser Gin His Gly Cys His Gly Asp Thr Ile

10 15

Pro Arg Gly Ile Glu (119) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N^a. 119:

(i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 29 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: pêptido (v) TIPO DE FRAGMENTO: N-terminal (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID N^a. 119:

486

IPC-017(Portugal)

His Gly Ser Glu Pro Cys Ile Ile His Arg Gly Lys Pro Phe Gin Leu 15 10 15

Glu Ala Vai Phe Glu Ala Vai Gin Asn Thr Lys Thr Ala

25

486

IPC-017(Portugal)

Ala Ala Thr Glu Ser Ala Tyr

Leu Ala His Arg Asn Gin Ser Leu

1-25.2 (SEQ ID N² 36) tal como definida na reivindicação2;

z) DP 11-22 (SEQ ID N² 63) e DP 11-25.2 (SEQ ID N² 71) tal como definida na reivindicação 3, DP 1-21.1 (SEQ ID N² 27) tal como definida na reivindicação 2, DP 1-22.1 (SEQ ID N² 29) tal como definida na reivindicação 10 e DP 1-25.2 (SEQ ID N² 36) tal como definida na reivindicação 2;

a^z) DP 11-22 (SEQ ID N² 63) e DP 11-25.2 (SEQ ID N² 71) tal como definida na reivindicação 3, DP 1-21.1 (SEQ ID N² 27) tal

como definida na reivindicação 2 , DP 1-22.1 (SEQ ID N² 29) tal como definida na reivindicação 10 e DP 1-23.1 (SEQ ID N² 33) tal como definida na reivindicação 2; b^z) DP 11-22 (SEQ ID N^a 63) e DP 11-25.2 (SEQ ID N^a 71) tal como definidas na reivindicação 3, DP 1-1 (SEQ ID N² 9) tal como definida na reivindicação 2 e DP 1-22.1 (SEQ ID N² 29) tal como definida na reivindicação 10 f

c^z) DF II-4.5 (SEQ ID N² 107) e DF II-2 (SEQ ID N² 104) tal como definidas na reivindicação 26;

d^z) DF II-4.5 (SEQ ID N² 107) e DF 11-19.1 (SEQ ID N² 114) tal como definidas na reivindicação 26;

e^z) DF II-4.5 (SEQ ID N^a 107), DF II-2 (SEQ ID N^s 104) e DF 11-19.1 (SEQ ID N² 114) tal como definidas na reivindicação 26;

f^z) DF II-4.5 (SEQ ID N² 107) e DF II-2 (SEQ ID N² 104) tal como definidas na reivindicação 26 e DF II-9 (SEQ ID N² 86) tal como definida na reivindicação 30;

g^z) DF II-4.5 (SEQ ID N^a 107) e DF 1-21.1 (SEQ ID N^a 90) tal como definidas na reivindicação 26;

h^z) DF II-4.5 (SEQ ID N^a 107) tal como definida na reivindicação 26, DP 11-22 (SEQ ID N² 63) e DP 11-25.2 (SEQ ID N²71) tal como definida na reivindicação 3; e i^z) DF II-4.5 (SEQ ID N^a 107) e DF II-2 (SEQ ID N^a 104) tal como definidas na reivindicação 26 e DP 11-22 (SEQ ID N² 63) tal /

J 74 486

IPC-017(Portugal)

-178- como definida na reivindicação 3.

79 - Composição de acordo com a reivindicação 76, caracterizado por compreender a seguinte combinação de péptidos: DP 1-21.1 (SEQ ID N^a 27), DP 1-23.1 (SEQ ID N^a 33) e DP 1-26.1 (SEQ ID N^a 37) tal como definidas na reivindicação 2, DP 11-20.6 (SEQ ID N^e 56), DP 11-22 (SEQ ID N^a 63), DP 11-25.2 (SEQ ID N^a71) e DF 1-22.2 (SEQ ID N^a 93) tal como definidas na reivindicação 3.

80 - Composição terapêutica, caracterizada por compreender pelo menos um péptido de pelo menos um alergeno proteico do género Dermatophacroides e um portador ou diluente farmaceuticamente aceitável, compreendendo a referida composição uma percentagem suficiente dos epitopos de célyula T do referido pelo menos um alergeno proteico, de tal modo que por administração da composição a um indivíduo sensível a um alergeno de ácaros de pó doméstico, as células T do indivíduo serem tornadas tolerantes para pelo menos esse alergeno proteico.

81 - Composição de acordo com a reivindicação 80, caracterizada por o referido alergeno proteico ser seleccionado de entre o grupo consistindo em: Der ρ I; Der f I; Der ρ II; e Der f II.

82 - Péptido modificado de acordo com a reivindicação 21 ou 56, caracterizado por pelo menos um dos resíduos de aminoácido que liga o complexo proteico MHC, mas que não é essencial para essa ligação, estar substituído.

83 - Péptido modificado de acordo com a reivindicação 82, caracterizado por os referidos resíduos de aminoâcidos estarem substituídos por aminoâcidos seleccionados de entre o grupo constituído por alanina, ácido glutâmico e um metilaminoácido.

84 - Péptido modificado de acordo com a reivindicação 82, caracterizado por pelo menos um dos resíduos de aminoácido que é essencial para a ligação do complexo proteico MHC estar

J74 486

IPC-017(Portugal)

-179substituído com um resíduo de aminoácido conservativo.

85 - Péptido modificado de acordo com a reivindicação 21 ou

1-22.1 (SEQ ID N² 29) tal como definida na reivindicação 10 eDP

1-21.1 (SEQ ID N² 27) tal como definida na reivindicação 2,DP

1-22.1 (SEQ ID N² 29) tal como definida na reivindicação 10, DP

I- 21.1 (SEQ ID N² 27) e DP 1-23.1 (SEQ ID N² 33) tal como definidas na reivindicação 2;

y) DP 11-22 (SEQ ID N² 63), DP 11-25.2 (SEQ ID N² 71) e DP

II- 20.6 (SEQ ID N² 56) tal como definidas na reivindicação 3, DP

1”) DF 11-19. 1 (SEQ ID N ² 114) tal como definida na reivindicação 26; m) DF 11-21 (SEQ ID N² 115 ) tal como definida na reivindicação 26; e n) DF 11-22 (SEQ ID N² 116 ) tal como def inida na reivindicação 26.

1-25.1 (SEQ ID N^a 97) tal como definidas na reivindicação 26;

m) DF 1-21.2 (SEQ ID N^a 91), DF 1-22.1 (SEQ ID N^a 92) e DF 1-25.1 (SEQ ID N^s 97) tal como definidas na reivindicação 26;

n) DF 1-1 (SEQ ID N^a 72) e DF 1-22.1 (SEQ ID N^a 92) tal como definidas na reivindicação 26;

O) DF 1-1 (SEQ ID N^a 72), DF 1-22.1 (SEQ ID N^a 92) e DF 1-25.1 (SEQ ID N^s 97) tal como definidas na reivindicação 26;

p) DP 1-22.1 (SEQ ID N^a 29) e DP 1-25.1 (SEQ ID N² 35) tal como definidas na reivindicação 10;

q) DF 1-21.1 (SEQ ID N^a 90), DF 1-22.1 (SEQ ID N^a 92) e DF 1-23.1 (SEQ ID N^a 95) tal como definidas na reivindicação 26;

r) DP 1-21.1 (SEQ ID N^a 27) tal como definida na reivindicação 2 e DF 1-22.1 (SEQ ID N^a 92) tal como definida na reivindicação 26;

S) DP 1-1 (SEQ ID N^a 9) e DP 1-23.1 (SEQ ID N^a 33) tal como definidas na reivindicação 2, DP 1-25.1 (SEQ ID N^a 35) tal como definida na reivindicação 10 e DF 1-1 (SEQ ID N^a 72) tal como definida na reivindicação 26;

t) DP 1-1 (SEQ ID N^e 9) tal como definida na reivindicação 2, DP 1-25.1 (SEQ ID N^a 35) tal como definida na reivindicação 10, DP 1-23.1 (SEQ ID N² 33) tal como definida na reivindicação 2 e DF 1-21.2 (SEQ ID N² 91) tal como definida na reivindicação 26;

u) DP I-l (SEQ ID N² 9) tal como definida na reivindicação 2, DP 1-25.1 (SEQ ID N² 35) tal como definida na reivindicação 10, DP 1-23.1 (SEQ ID N² 33) tal como definida na reivindicação 2 e DF 1-21.1 (SEQ ID N² 90) tal como definida na reivindicação 26;

V) DP 11-22 (SEQ ID N^a 63) e DP 11-25.2 (SEQ ID N^a 71) tal como definidas na reivindicação 3;

W) DP 11-22 (SEQ ID N² 63) e DP 11-25.2 (SEQ ID N^a 71) tal como definidas na reivindicação 3, DP 1-21.1 (SEQ ID N² 27) tal como definida na reivindicação 2 e DP 1-22.1 (SEQ ID N² 29) tal como definida na reivindicação 10;

X) DP 11-22 (SEQ ID N² 63), DP 11-25.2 (SEQ ID N² 71) e DP 11-20.6 (SEQ ID N^a 56) tal como definidas na reivindicação 3, DP 1-22.1 (SEQ ID N² 29) tal como definida na reivindicação 10, DP 1-21.1 (SEQ ID N^a 27) e DP 11-23,1 (SEQ ID N² 33) tal como definidas na reivindicação 2;

y) DP 11-22 (SEQ ID N² 63), DP 11-25.2 (SEQ ID N² 71) e

74 486

IPC-017(Portugal)

-145-

DP 11-20,6 (SEQ ID N² 56) tal como definidas na reivindicação 3, DP 1-21.1 (SEQ ID N² 27) tal como definida na reivindicação 2, DP 1-22.1 (SEQ ID N^fi 29) tal como definida na reivindicação 10 e DP 1-25.2 (SEQ ID N² 36) tal como definida na reivindicação 2;

Z) DP 11-22 (SEQ ID N² 63) e DP 11-25.2 (SEQ ID N² 71) tal como definidas na reivindicação 3, DP 1-21.1 (SEQ ID N² 27) tal como definida na reivindicação 2, DP 1-22.1 (SEQ ID N² 29) tal como definida na reivindicação 10 e DP 1-25.2 (SEQ ID N² 36) tal como definida na reivindicação 2;

a') DP 11-22 (SEQ ID N^a 63) e DP 11-25.2 (SEQ ID N^a 71) tal como definidas na reivindicação 3, DP 1-21.1 (SEQ ID N² 27) tal como definida na reivindicação 2, DP 1-22.1 (SEQ ID N^a 29) tal como definida na reivindicação 10 e DP 1-23.1 (SEQ ID N² 33) tal como definida na reivindicação 2;

b^z) DP 11-22 (SEQ ID N² 63) e DP 11-25.2 (SEQ ID N² 71) tal como definidas na reivindicação 3, DP 1-1 (SEQ ID N² 9) tal como definida na reivindicação 2 e DP 1-22.1 (SEQ ID N^a 29) tal como definida na reivindicação 10;

e^z) DF II-4.5 (SEQ ID N^a 107), DF II-2 (SEQ ID N^a 104) e DF 11-19.1 (SEQ ID N^a 114) tal como definidas na reivindicação 26;

f^z) DF 11-4,5 (SEQ ID N² 107) e DF II-2 (SEQ ID N² 104) tal como definidas na reivindicação 26 e DF II-9 (SEQ ID N^a 86) Ile Ile Gin His Asp Asn Gly Tyr Gin Pro Asn Tyr His Ala Vai Asn 15 10 15

Ile Vai Gly Tyr Gly Ser Thr;

g^z) DF II-4.5 (SEQ ID N² 107) e DF 1-21.1 (SEQ ID N² 90) tal como definidas na reivindicação 26;

h^z) DF II-4.5 (SEQ ID N² 107) tal como definida na reivindicação 26, DP 11-22 (SEQ ID N² 63) e DP 11-25.2 (SEQ ID N² 71) tal como definidas na reivindicação 3; e i^z) DF II-4.5 (SEQ ID N^a 107) e DF II-2 (SEQ ID N^a 104) tal como definidas na reivindicação 26 e DP 11-22 (SEQ ID N² 63) tal como definida na reivindicação 3.

-14674 486

IPC-017(Portugal)

1) DF II- -19.: L (SEQ ID N² 114) Val Val Thr Val Lys Leu Val Gly Asp Asn Gly Val Leu Ala Cys Ala 1 5 10 15 Ile Ala Thr His Ala Lys Ile Arg Asp; 20 25 m) DF II- -21 (SEQ ID N^a 115) Lys Pro Phe Thr Leu Glu Ala Leu Phe Asp Ala Asn Gin Asn Thr Lys 1 5 10 15 Thr Ala Lys Ile Glu Ile Lys Ala Ser Leu Asp Gly; e 20 25 n) DF II- -22 (SEQ ID N^a 116) Thr Leu Glu Ala Leu Phe Asp Ala Asn Gin Asn Thr Lys Thr Ala Lys 1 5 10 15 Ile Glu Ile Lys Ala Ser Leu Asp Gly Leu Glu Ile. 20 25

1-1

ID

Cys (SEQ Arg Ile

N^a

Asn Ser Val Asn Val Pro Ser Glu Leu Asp

Leu Arg Ser Leu Arg;

72)

1) DP 1-7.1 (SEQ ID N² 21) tal como definida na reivindicação 10;

m) DP 1-8 (SEQ ID N^a 22) tal como definida na reivindicação 10;

n) DP 1-9 (SEQ ID N² 23) tal como definida na reivindicação

1 5 10 15 Cys Gin Ile;

-125j) DP 1-15 (SEQ ID N² 19)

74 486

IPC-017(Portugal)

Arg Phe Gly Ile Ser Asn Tyr Cys Gin Ile Tyr Pro Pro Asn Ala Asn 1 5 10 15 Lys Ile Arg Glu Ala Leu; 20 k) DP 1-6. 1 (SEQ ID N² 20) Tyr Pro Pro Asn Ala Asn Lys Ile Arg Glu Ala Leu Ala Gin Thr His 1 5 10 15 Ser Ala Ile Ala Val Ile Ile Gly; 20 1) DP 1-7. ,1 (SEQ ID N^a 21) Ala Gin Thr His Ser Ala Ile Ala Val Ile Ile Gly Ile Lys Asp Leu 1 5 10 15 Asp Ala Phe Arg His Tyr Asp Gly Arg Thr; 20 ’ 25 m) DP 1-8 (SEQ ID N^a 22) Ile Lys Asp Leu Asp Ala Phe Arg His Tyr Asp Gly Thr Arg Ile Ile 1 5 10 15 Gin Arg Asp Asn Gly Tyr Gin Pro Asn Tyr; 20 25 n) DP 1-9 (SEQ ID N² 23) Ile Ile Gin Arg Asp Asn Gly Tyr Gin Pro Asn Tyr His Ala Val Asn 1 5 10 15 Ile Val Gly Tyr Ser Asn Ala; 20 o) DP 1-16 (SEQ ID N² 24) His Ala Val Asn Ile Val Gly Tyr Ser Asn Ala Gin Gly Val Asp Tyr 1 5 10 15 Trp Ile Val Arg Asn Ser; 20 P) DP 1-10 (SEQ ID N^a 25) Gin Gly Val Asp Tyr Trp Ile Val Arg Asn Ser Trp Asp Thr Asn Trp 1 5 10 15 Gly Asp Asn Gly Tyr Gly Tyr Phe; >

q) DP 1-17 (SEQ ID N² 26)

74 486

IPC-017(Portugal)

-126-

Gly Asp Asn Gly Tyr Gly Tyr Phe Ala Ala Asn Ile Asp Leu Met Met 15 10 15

Ile Glu Glu Tyr Pro Tyr Vai Vai Ile Leu;

1 - Péptido isolado de um alergeno proteico do género Dermatophaqoides, caracterizado por o referido péptido compreender pelo menos um epítopo de célula T do referido alergeno proteico, possuindo o referido péptido um índice de positividade de pelo menos cerca de 150 e um índice médio de estimulação da célula T de pelo menos cerca de 4,0, determinados numa população de indivíduos sensíveis ao referido alergeno proteico.

2;

i) DF 1-1 (SEQ ID N^a 72) tal como definida na reivindicação

2;

Thr

P)

Ser

DF

Ala

2;

b) DP 1-2 (SEQ ID N^a 10) tal como definida na reivindicação 10; c) DP 1-3 (SEQ ID N^a 11) tal como definida na reivindicação 10; d) DP 1-4 (SEQ ID N^a 12) tal como definida na reivindicação 10; e) DP I- •12.1 (SEQ ID N^a 14) tal como definida na reivindicação : 10; f) DP 1-5 (SEQ ID N^a 15) tal como definida na reivindicação

2;

IPC-017(Portugal)

Glu Ile Asp -124- Ile :--7 LJ Arg Met Gin Leu Arg Gin Met Arg Thr Vai Thr Pro 1 5 10 15 Gly Gly Cys Gly Ser Cys Trp Ala Phe Ser Gly; 20 25 c) DP 1-3 (SEQ ID N^a 11) Thr Vai Thr Pro Ile Arg Met Gin Gly Gly Cys Gly Ser Cys Trp Ala 1 5 10 15 Phe Ser Gly Vai Ala Ala Thr Glu Ser Ala Tyr Leu Ala; 20 25 d) DP 1-4 (SEQ ID N^a 12) Vai Ala Ala Thr Glu Ser Ala Tyr Leu Ala His Arg Asn Gin Ser Leu 1 5 10 15 Asp Leu Ala Glu Gin; 20 e) DP 1-11.1 (SEQ ID N^a 13) His Arg Asn Gin Ser Leu Asp Leu Ala Glu Gin Glu Leu Vai Asp Cys 1 5 10 15 Ala Ser Gin His Gly Cys; » r 20 f) DP 1-12.1 (SEQ ID N^a 14); Glu Leu Vai Asp Cys Ala Ser Gin His Gly Cys His Gly Asp Thr Ile 1 5 10 15 Pro Arg Gly Ile Glu; 20 g) DP 1-5 (SEQ ID N^a 15) Gly Asp Thr Ile Pro Arg Gly Ile Glu Tyr Ile Gin His Asn Gly Vai 1 5 10 15 Vai Gin Glu Ser Tyr Tyr Arg Tyr Vai Ala Arg Glu r 20 25 h) DP 1-13 (SEQ ID N^e 17) His Asn Gly Vai Vai Gin Glu Ser Tyr Tyr Arg Tyr Vai Ala Arg Glu 1 5 10 15 Gin Ser Cys Arg Arg Pro Asn Ala Gin • r 20 25 i) DP 1-14 (SEQ ID N^a 18) Gin Ser Cys Arg Arg Pro Asn Ala Gin Arg Phe Gly Ile Ser Asn Tyr

2 - Péptido isolado de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por ser seleccionado de entre o grupo constituído por: DP 1-1 (SEQ ID N^e 9)

Thr Asn Ala Cys Ser Ile Asn Gly Asn Ala Pro Ala Glu Ile Asp Leu 1 5 10 15 Arg Gin Met Arg; 20 DP 1-21. .1 (SEQ ID N² 27) Thr Asn Ala Cys Ser Ile Asn Gly Asn Ala Pro Ala Glu Ile Asp Leu 1 5 10 15 Arg Gin Met Arg Thr Val Thr Pro Ile Arg Met Gin; 20 25 DP 1-21 .2 (SEQ ID N² 28) Ser Ile Asn Gly Asn Ala Pro Ala Glu Ile Asp Leu Arg Gin Met Arg 1 5 10 15 Thr Val Thr Pro Ile Arg Met Gin t

DP 1-23.1 (SEQ ID N⁹ 33)

Glu Tyr Ile Gin His Asn Gly Val Val Gin Glu Ser Tyr Tyr Arg Tyr 1 5 10 15 Val Ala Arg Glu Gin Cys Arg Arg Pro Asn Ala Gin; 20 25 DP 1-23. 2 (SEQ ID N² 34) Asp Thr Ile Pro Arg Gly Ile Glu Tyr Ile Gin His Asn Gly Val Val 1 5 10 15 Gin Glu Ser Tyr Tyr Arg Tyr Val Ala Arg Glu Gin Ser • /

3 ^{74 486}

IPC-017(Portugal)

-172-

t) DF 1-22.2 (SEQ ID N² 93 ) tal como definida na reivindicação 3 ; u) DF 1-22.4 (SEQ ID N² 94 ) tal como definida na reivindicação 26; v) DF 1-23.1 (SEQ ID N² 95 ) tal como definida na reivindicação 26; w) DF 1-23.2 (SEQ ID N² 9 6 ) tal como def inida na reivindicação 26; x) DF 1-25.1 (SEQ ID N² 97) tal como def inida na reivindicação 26; y) DF 1-25.2 (SEQ ID N^a 89 ) tal como definida na reivindicação 44; z) DF 1-26.1 (SEQ ID N² 99 ) tal como definida na reivindicação 26; a' ) DF 1-27.1 (SEQ ID N² 100 ) tal como definida na reivindicação 26; b' ) DF 1-28.1 (SEQ ID N² 101) tal como definida na reivindicação 26; c' ) DF 1-28.2 (SEQ ID N² 102 ) tal como definida na reivindicação 26; d' ) DP 11-20 (SEQ ID N² 50 ) tal como definida na reivindicação 26; e' ) DP 11-20.1 (SEQ ID N ² 51) tal como definida na reivindicação 26; f' ) DP 11-20.2 (SEQ ID N ² 52 ) tal como definida na reivindicação 26; g' ) DP 11-20.3 (SEQ ID N ² 53 ) tal como definida na re ivindicação 26; h' ) DP 11-20.4 (SEQ ID N ² 54 ) tal como definida na reivindicação 26; i' ) DP 11-20.5 (SEQ ID N ² 55 ) tal como definida na reivindicação 26; j') DP 11-20.6 (SEQ ID N ² 56 ) tal como definida na reivindicação 3; k' ) DE ’ II-l (SEQ ID N² 41) tal como definida na reivindicação 26; 1' ) DP II-l.l (SEQ ID N^s ^! 57) tal como definida na

reivindicação 26;

74 486 ff)

IPC-017(Portugal) /-

m^z ) DP II-l.2 (SEQ -173- como ..... c definida na ID N² 58 ) tal reivindicação 26; n^z ) DP II-2.1 (SEQ ID N² 59 ) tal como definida na reivindicação 26; o · ) DP II-2.2 (SEQ ID N² 60 ) tal como definida na reivindicação 26; p^z ) DP II-2.3 (SEQ ID N² 61 ) tal como definida na reivindicação 26; q^z ) DP 11-21 (SEQ ID N^e 62) tal como def inida na reivindicação 26; r^z ) DP 11-22 (SEQ ID N² 63 ) tal como definida na reivindicação 3; s · ) DP 11-26 (SEQ ID N² 64 ) tal como def inida na reivindicação 26; t^z ) DP 11-26.: 1 (SEQ ID N² 65) tal como definida na reivindicação 26; u^z ) DP 11-23 (SEQ ID N“ 66) tal como definida na reivindicação 26; v^z ) DP 11-23. 1 (SEQ ID N² 67) tal como definida na reivindicação 26; w^z ) DP 11-24 (SEQ ID N² 68 ) tal como definida na reivindicação 26; x^z ) DP 11-25 (SEQ ID N² 69 ) tal como definida na

reivindicação 26;

y^z ) DP 11-25.1 (SEQ ID N² 70 ) tal como definida na reivindicação 26; z ^z ) DP 11-25.2 (SEQ ID N² 71) tal como definida na reivindicação 3; a) DF II-l (SEQ ID N ² 103 ) tal como definida na reivindicação 26; b) DF II-2 (SEQ ID N ² 104) tal como definida na reivindicação 26; c) DF 11-13.1 (SEQ ID N² 105) tal . como definida na reivindicação 26; d”) DF II-3.1 (SEQ ID N² 106) tal como definida na

reivindicação 26;

e”) DF II-4.5 (SEQ ID N² 107) tal como definida na reivindicação 26;

74 486

IPC-017(Portugal)

-174-

f) DF II-4.3 (SEQ ID N^a reivindicação 26; g”) DF 11-15 (SEQ ID N² reivindicação 26; h”) DF 11-16 (SEQ ID N² reivindicação 26; i) DF 11-17 (SEQ ID N^a reivindicação 26; j « ) DF 11-18 (SEQ ID N² reivindicação 26; k) DF 11-19 (SEQ ID N^a reivindicação 26; 1) DF 11-19. 1 (SEQ ID N^a reivindicação 26; m) DF 11-21 (SEQ ID N² reivindicação 26; e n) DF 11-22 (SEQ ID N^a

108 ) tal como /9 definida / . / / na 109 ) tal como definida na 110 ) tal como definida na 111) tal como definida na 112 ) tal como def inida na 113 ). tal como definida na 114) tal como definida na 115 ) tal como definida na

116) tal como definida na reivindicação 26, e por a referida composição compreender uma percentagem suficiente dos epitopos de célula T de pelo menos um alergeno proteico de tal modo que por administração da composição a um indivíduo sensível a um alergeno de ácaros do pó doméstico, as células T do indivíduo serem tornadas tolerantes para pelo menos esse alergeno proteico.

77 - Composição de acordo com a reivindicação 76, caracterizada por os referidos péptidos serem seleccionados de entre o grupo consistindo em:

a) DP 1-21.1 (SEQ ID N^a 27) tal como definida na reivindicação 2; b) DP 1-23.1 (SEQ ID N² 3 3 ) tal como definida na reivindicação 2; c) DP 1-26.1 (SEQ ID N^a 37) tal como definida na reivindicação 2; d) DP 11-20. 6 (SEQ ID N² 56 ) tal como def inida na reivindicação 3; e) DP 11-22 (SEQ ID N^a 63) tal como def inida na reivindicação 3; f) DP 11-25. 2 (SEQ ID N² 71) tal como def inida na

J 74 486

IPC-017(Portugal)

-175- reivindicação 3; e

g) DF 1-22.2 (SEQ ID N^a 93) tal como definida na reivindicação 3.

78 - Composição de acordo com a reivindicação 75, caracterizada por compreender uma combinação dos péptidos seleccionados de entre o grupo consistindo em:

a) DP 1-22.1 (SEQ ID N² 29) e DP 1-25.1 (SEQ ID N^a 35) tal como definidas na reivindicação 10;

b) DP 1-21.1 (SEQ ID N^a 27) e DP 1-25.2 (SEQ ID N° 36) tal como definidas na reivindicação 2;

c) DP 1-22.1 (SEQ ID N² 29) tal como definida na reivindicação 10 e DP 1-1 (SEQ ID N² 9) tal como definida na reivindicação 2;

d) DP 1-21.1 (SEQ ID N² 27) tal como definida na reivindicação 2, DP 1-22.1 (SEQ ID N² 29) tal como definida na reivindicação 10 e DP 1-25.2 (SEQ ID N² 36) tal como definida na reivindicação 2;

e) DP 1-21.2 (SEQ ID N² 28) tal como definida na reivindicação 2, DP 1-22.1 (SEQ ID N² 29) e DP 1-28.1 (SEQ ID N²39) tal como definidas na reivindicação 10;

f) DP I-l (SEQ ID N² 9) tal como definida na reivindicação 2, DP 1-22.1 (SEQ ID N^a 29) tal como definida na reivindicação 10 e DP 1-23.1 (SEQ ID N^e 33) tal como definida na reivindicação 2;

g) DP 1-1 (SEQ ID N² 9) tal como definida na reivindicação 2, DP 1-22.1 (SEQ ID N² 29) tal como definida na reivindicação 10 e DP 1-25.2 (SEQ ID N² 36) tal como definida na reivindicação 2;

h) DP 1-21.1 (SEQ ID N² 27) tal como definida na reivindicação 2, DP 1-22.1 (SEQ ID N² 29) tal como definida na reivindicação 10, DP 1-23.1 (SEQ ID N^s 33) e DP 1-25.2 (SEQ ID N^a36) tal como definidas na reivindicação 2;

i) DP 1-21.2 (SEQ ID N^a 28) tal como definida na reivindicação 2, DP 1-22.1 (SEQ ID N² 29) tal como definida na reivindicação 10 e DP 1-25.2 (SEQ ID N² 36) tal como definida na reivindicação 2;

j) DP 1-21.1 (SEQ ID N^a 27) tal como definida na reivindicação 2, DP 1-22.1 (SEQ ID N^a 29) tal como definida na reivindicação 10, DP 1-25.2 (SEQ ID N² 36) e DP 1-26.1 (SEQ ID N²

J 74 486

IPC-017(Portugal)

-176-

'3 74 486

IPC-017(Portugal)

-160-

f) DP 11-23 (SEQ ID N² 66 ) tal como def inida na reivindicação 26; g”) DP 11-23. 1 (SEQ ID N^s 67) tal como definida na reivindicação 26; h”) DP 11-24 (SEQ ID N² 68 ) tal como def inida na reivindicação 26; i) DP 11-25 (SEQ ID N² 69 ) tal como definida na reivindicação 26; j ) DP 11-25. 1 (SEQ ID N² 70) tal como definida na reivindicação 26; k) DP 11-25. 2 (SEQ ID N² 71) tal como definida na reivindicação 3; 1) DF II-l (SEQ ID N² 103) tal como def inida na reivindicação 26; m) DF II-2 (SEQ ID N^a 104) tal como definida na reivindicação 26; n) DF 11-13. 1 (SEQ ID N² 105) tal . como definida na reivindicação 26; o) DF II-3.3 - (SEQ ID N² 106) tal como definida na reivindicação 26; p ”) DF II-4.E ί (SEQ ID N^a 107) tal como definida na reivindicação 26; q) DF II-4.3 1 (SEQ ID N² 108) tal como definida na reivindicação 26; r) DF 11-15 (SEQ ID N² 109) tal como def inida na reivindicação 26; S) DF 11-16 (SEQ ID N² 110) tal como definida na reivindicação 26; t) DF 11-17 (SEQ ID N^s 111) tal como definida na reivindicação 26; u) DF 11-18 (SEQ ID N² 112) tal como definida na reivindicação 26; v”) DF 11-19 (SEQ ID N² 113) tal como definida na reivindicação 26; w) DF 11-19. 1 (SEQ ID N² 114) tal como , definida na reivindicação 26; X) DF 11-21 (SEQ ID N² 115) tal como definida na reivindicação 26; e

J 74 486

IPC-017(Portugal)

-161- y”) DF 11-22 (SEQ ID N² 116) tal como definida na reivindicação 26.

3 ' - attattggcatcaaagatttagacgcattccgtcattatgatggccgaacaatcattcaa

IIGIKDLDAFRHYDGRTIIQ

70 80 90 100 110120

I I I I II

CGCGATAATGGTTACCAAACTGTTAAAGTTCTGGGTGATGATGGTGTTTTGGCCTCTGCT

R D N G Y Q T V K V L G D D G V L A S A 130 140 1 150 1 160 1 170 1 180 1 i 1 < 1 i 1 ATTGCTACTCATGCTAAAATCCGCGATGTTGCCGCAACTGAATCAGCTTATTTGGCCTAC I A T H A K I R D V A A T E S A Y L A Y 190 200 210 220 230 240

I

CGTAACACGTCTTTGGATCTTTOTGAACAGGAACTCGTCGATCAATTGGAAGCCGTTTTC

R N T S L D L S E Q E L V D Q I> Ξ A V F 250 1 260 1 270 1 280 1 290 1 300 1 GAAGCCAACCAAAACACAAAAACCGCTAAAATTGAAATCAAAGCCTCAATCGATGGTTTA E A N Q N T K T A K I E I K A S I D G L

74 486

IPC-017(Portugal) -147- r* ..... •sr 310 1 320 1 330 340 1 1 350 1 360 1 GAAGTTGAATACATCCAACATAATGGTGTCGTCCAAGAAAGCTACTATCGATACGTTGCA

EVEYIQHNGVVQESYYRYVA

370 380 390 400 410 420

I I I I I I

CGAGAACAATCATGCCGACGACCAAATGCACAAGATCAAGTCGATGTCAAAGATTCTGCC

R E Q S C R R P N A Q D Q V D V K D S A 430 1 440 1 450 460 470 480 l 1 1 1 1 1 AATCATGAAATCAAAAAAGTTTTGGTACCAGGATCGCATGGTTCAGAACCAAGTATCAAT N H E I K K V L V P G S H G S E P S I N 490 500 510 520 530 540

GGAAATGCTCCAGCTGAAATCGATTTGCGACAAATGCGAACTGTCACTCCCATTCGTATG

GNAPAEIDLRQMRTVTPIRM

CAATAATGA-3¹

Q - -

b) DP 11-25.2, DF 1-22.2, DP 1-23.1 e DP 11-22 tal como definidas na reivindicação 3, DP 1-26.1 e DP 1-21.2 tal como definidas na reivindicação 2 e DP 11-20.6 tal como definida na reivindicação 3.

c) DP 11-25.2 tal como definida na reivindicação 3, DP

I- 21.1 e DP 1-26.1 tal como definidas na reivindicação 2, DP

II- 22, DP 11-20.6 e DF 1-22.2 tal como definidas na reivindicação 3.

3 ^{74 486}

IPC-017(Portugal)

-127reivindicação 2;

b') DP 1-26.1 (SEQ reivindicação 2;

C') DP 1-27.1

Asp Asn Gly

ID N²

3 - Péptido isolado de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por ser seleccionado de entre o grupo constituído por: DP 1-21.2 e DP 1-26 tal como definidas na reivindicação 2, DP 1-23.1,

Glu Tyr Ile Gin His Asn Gly Val Val Gin Glu Ser Tyr Tyr Arg Tyr 1 5 10 15 Val Ala Arg Glu Gin Ser Cys Arg Arg Pro Asn Ala Gin; 20 25 DP 11-20.6 Asp Gin Val Asp Val Lys Asp Ser Ala Asn His Glu Ile Lys Lys Val 1 5 10 15 Leu Val Pro Gly Ser His Gly Ser Glu Pro /

4 - Péptido isolado de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por não se ligar a imunoglobulina E específica para um alergeno proteico do género Dermatochagoides numa percentagem substancial de indivíduos sensíveis ao alergeno proteico, ou se a ligação do péptido à referida imunoglobulina E ocorrer, essa ligação não resultar na libertação de mediadores a partir de mastócitos ou basófilos numa percentagem substancial de indivíduos sensíveis ao alergeno proteico.

5 - Péptido isolado de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por o péptido se ligar a imunoglobulina E numa extensão substancialmente menor do que aquela em que o alergeno proteico, do qual o péptido é derivado, se liga à referida imunoglobulina E.

6 - Péptido isolado de acordo com a reivindicação 2, caracterizado por a população de indivíduos ser de pelo menos 9 indivíduos.

7 - Péptido isolado de acordo com a reivindicação 2, caracterizado por a população de indivíduos ser de pelo menos 29 indivíduos.

8 - Péptido isolado de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por compreender pelo menos dois epitopos de célula T.

/9* 74 486 βΊ IPC-017(Portugal) /' ;Γ < Γ;-'.. -134- , -> ί ··H q) DF 1-21.1 (SEQ ID N^s 90)

Thr Ser Ala Cys Arg Ile Asn Ser Val Asn Val Pro Ser Glu Leu Asp 1 5 10 15 Leu Arg Ser Leu Arg Thr Val Thr Pro Ile Arg Met Gin; 20 25 r) DF 1-21.2 (SEQ ID N² 91); Arg Ile Asn Ser Val Asn Val Pro Ser Glu Leu Asp Leu Arg Ser Leu 1 5 10 15 Arg Thr Val Thr Pro Ile Arg Met Gin • f 20 25 s) DF 1-22.1 (SEQ ID N² 92) Ala Phe Ser Gly Val Ala Ala Thr Glu Ser Ala Tyr Leu Ala Tyr Arg 1 5 10 15 Asn Thr Ser Leu Asp Leu Ser Glu Gin Glu Leu Val Asp; 20 25 t) DF I- 22 . 2 (SEQ ID N^a 93 ) tal como definida na

reivindicação 3;

u) DF 1-22.4 (SEQ ID N² 94) Val Ala Ala Thr Glu Ser Ala Tyr Leu Ala Tyr Arg Asn Thr Ser Leu 1 5 10 15 Asp Leu Ser Glu Gin Glu Leu Val Asp Cys Ala Ser Gin; 20 25 v) DF 1-23.1 (SEQ ID N² 95) Glu Tyr Ile Gin Gin Asn Gly Val Val Glu Glu Arg Ser Tyr Pro Tyr 1 5 10 15 Val Ala Arg Glu Gin Arg Cys Arg Arg Pro Asn Ser Gin; 20 25 w) DF 1-23.2 (SEQ ID N² 96) Asp Thr Ile Pro Arg Gly Ile Glu Tyr Ile Gin Gin Asn Gly Val Val 1 5 10 15 Glu Glu Arg Ser Tyr Pro Tyr Val Ala Arg Glu Gin Arg; 20 25 x) DF 1-25.1 (SEQ ID N^a 97) Gin Ile Tyr Pro Pro Asp Val Lys Gin Ile Arg Glu Ala Leu Thr Gin 1 5 10 15 Thr His Thr Ala Ile Ala Val Ile Ile Gly Ile Lys Asp; 20 25

J

74 486

IPC-017(Portugal) //

·- y -135- f /7

y) DF 1-25.2 (SEQ ID N² 98)

Gin Ile Tyr Pro Pro Asp Val Lys Gin Ile Arg Glu Ala Leu Thr Gin

9 · a) DP 1-1 (SEQ ID N^a 9) tal como definida na reivindicação t b) DP 1-2 (SEQ ID N^a 10) tal como definida na reivindicação 10; c) DP 1-3 (SEQ ID N^a 11) tal como definida na reivindicação 10; d) DP 1-4 (SEQ ID N^a 12) tal como definida na reivindicação 10; e) DP 1-11.1 (SEQ ID N^a 13 ) tal como definida na

reivindicação 10;

f) DP 1-12.1 (SEQ ID N^a 14) tal como definida na

74 486

IPC-017(Portugal)

-129- reivindicação 10;

g) DP 1-5 (SEQ ID N² 15) tal como definida na reivindicação 10; h) DP 1-13 (SEQ ID N² 17) tal como definida na reivindicação 10; i) DP 1-14 (SEQ ID N² 18) tal como definida na reivindicação 10; j) DP 1-15 (SEQ ID N² 19) tal como definida na reivindicação 10; k) DP I- 6.1 (SEQ ID N^a 20 ) tal como definida na

reivindicação 10;

9 - Péptido isolado de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por quando administrado a um indivíduo sensível a ácaros (mite) do pó doméstico, induzir anergia de célula T no indivíduo ou modificar o perfil de secrecção de linfoquinas das células T, no indivíduo.

10 20 30 40 5060

I I I I II

10 15

Arg Arg Pro Asn Ala Gin,

Val Gin Glu Ser Tyr Tyr Arg Tyr

1015

Arg Pro Asn Ala Gin,

Val Gin Glu Ser Tyr Tyr Arg Tyr

1015

Arg Pro Asn Ala Gin.

10;

74 486

IPC-017(Portugal)

g) DP 1-6.1 (SEQ ID N² 20 ) tal como definida na reivindicação 10;

h) DP 1-7.1 (SEQ ID N² 21) tal como definida na reivindicação 10;

i) DP 1-17 (SEQ ID N² 26) tal como definida na reivindicação 10;

j ) DP 1-21.1 (SEQ ID N⁹ 27 ) tal como def inida na reivindicação 2; k) DP 1-21.2 (SEQ ID N⁹ 28 ) tal como definida na reivindicação 2; 1) DP 1-23.2 (SEQ ID N² 34) tal como def inida na reivindicação 2; Λ m) DP 1-26.1 (SEQ ID N^a 37 ) tal como definida na reivindicação 2; n) DP 1-27.1 (SEQ ID N² 38 ) tal como definida na reivindicação 10; o) DP 1-28.1 (SEQ ID N⁹ 39 ) tal como definida na reivindicação 10; e p) DP 1-28.2 (SEQ ID N^a 40 ) tal como definida na

reivindicação 10.

10;

o) DP 1-16 (SEQ ID N² 24 ) tal como definida na reivindicação 10; p) DP 1-10 (SEQ ID N a 25) tal como definida na reivindicação 10; q) DP 1-17 (SEQ ID N 2 26 ) tal como definida na reivindicação 10; r) DP 1-21.1 (SEQ ID N ² 27 ) tal como definida na reivindicação 2; s) DP 1-21.2 (SEQ ID N ² 28 ) tal como def inida na reivindicação 2; t) DP 1-22.1 (SEQ ID N ² 29 ) tal como definida na reivindicação 10; u) DP 1-22.2 (SEQ ID N ² 30 ) tal como def inida na reivindicação 10; v) DP 1-22.3 (SEQ ID N ² 31) tal como definida na reivindicação 10; w) DP 1-22.4 (SEQ ID N ² 32 ) tal como definida na reivindicação io; x) DP 1-23.1 (SEQ ID N ² 33 ) tal como definida na reivindicação 2; Y) DP 1-23.2 (SEQ ID N ² 34 ) tal como definida na

74 486 Λ/ V c j /—

IPC-017 (Portugal) reivindicação 2;

Z ) DP 1-25.1 (SEQ ID N^a 35 ) tal como definida na reivindicação 10; a' ) DP 1-25.2 (SEQ ID N^a 36 ) tal como def inida na reivindicação 2; b' ) DP 1-26.1 (SEQ ID N^a 37 ) tal como definida na reivindicação 2; c' ) DP 1-27.1 (SEQ ID N^a 38 ) tal como definida na reivindicação 10; d' ) DP 1-28.1 (SEQ ID N^a 39 ) tal como definida na reivindicação 10; e' ) DP 1-28.2 (SEQ ID N^a 40 ) tal como definida na

reivindicação 10; e

f'I 1 DP 1-5.1 (SEQ ID N^a 16) Glu Tyr Ile Gin His Asn Gly Val Val Gin Glu Ser Tyr Tyr Arg Tyr 1 5 10 15 Val Ala Arg Glu. 20

10 - Péptido de Der p I completo isolado ou uma sua porção, caracterizado por compreender pelo menos um epitopo de célula T de Der p I, sendo o referido péptido seleccionado de entre o grupo constituído por:

a) DP 1-1 (SEQ ID N^e 9) tal como definida na reivindicação

b) DP 1-2 (SEQ ID N^a 10)

11 - Porção de um péptido isolado de acordo com a reivindicação 10, caracterizada por ter um índice médio de estimulação de célula T de pelo menos 4,0.

12 - Péptido de acordo com a reivindicação 10 completo, isolado ou uma sua porção, caracterizado por não se ligar a imunoglobulina E específica para Der ρ I numa percentagem substancial de indivíduos sensíveis a Der ρ I, ou se a ligação do péptido ou da sua porção à referida imunoglobulina E ocorrer, essa ligação não resultar na libertação de mediadores a partir de mastócitos ou basófilos numa percentagem substancial de indivíduos sensíveis a Der ρ I.

13 - Péptido de acordo com a reivindicação 10 completo, isolado ou uma sua porção, caracterizado por, num indivíduo

74 486

IPC-017(Portugal)

-128- sensível a ácaros do pó doméstico ao qual é administrado, modificar a resposta alérgica do indivíduo a um alergeno de ácaros do pó doméstico.

14 - Porção de um péptido isolado, de acordo com a reivindicação 10, caracterizada por compreender pelo menos 15 resíduos de aminoácido.

15 10 15

Thr His Thr Ala Ile Ala;

z) DF 1-26 i.l (SEQ ID N² 99) Ile Ile Gly Ile Lys Asp Leu Arg Ala Phe Gin His Tyr Asp Gly Arg 1 5 10 15 Thr Ile Ile Gin His Asp Asn Gly Tyr Gin;

15 - Ácido nucleico isolado, caracterizado por possuir uma sequência que codifica um péptido da reivindicação 10 completo ou uma sua porção, ou o equivalente funcional da referida sequência de ácido nucleico.

16 - Péptido isolado caracterizado por ser cruzadamente reactivo, de um ponto de vista imunológico, com anticorpos específicos para um péptido da reivindicação 10 completo ou para uma sua porção.

17 - Péptido isolado caracterizado por ser cruzadamente reactivo, de um ponto de vista imunológico, com células T reactivas com um péptido da reivindicação 10 completo ou com uma sua porção.

18 - Péptido de Der p I isolado, caracterizado por possuir uma sequência de aminoácidos correspondendo substancialmente a uma sequência de aminoácidos de um péptido seleccionado de entre o grupo constituído por:

19 - Ácido nucleico isolado, caracterizado por possuir uma sequência que codifica um péptido da reivindicação 18, ou o equivalente funcional da referida sequência de ácido nucleico.

20 25

w^z ) DP II-l. 1 (SEQ ID N^a 57 ) tal como definida na reivindicação 26; x^z ) DP II-l.2 (SEQ ID N² 58 ) tal como definida na reivindicação 26; y^z ) DP II-2.1 (SEQ ID N² 59 ) tal como definida na reivindicação 26; z · ) DP II-2.2 (SEQ ID N² 60 ) tal como def inida na reivindicação 26; a) DP II-2.3 (SEQ ID N^a 61) tal como def inida na reivindicação 26; b”) DP 11-21 (SEQ ID N² 62 ) tal como definida na reivindicação 26; c) DP 11-22 (SEQ ID N² 63 ) tal como definida na reivindicação 3; d) DP 11-26 (SEQ ID N² 64) tal como definida na reivindicação 26; e) DP 11-26.: 1 (SEQ ID N^a 65) tal como definida na

reivindicação 26;

20 25 u^z) DP II-8 (SEQ ID N^a 48)

Asp Ile Lys Tyr Thr Trp Asn Val Pro Lys Ile Ala Pro Lys Ser Glu 1 5 10 15 Asn Val Val Val Thr Val Lys Val Met Gly; 20 25 v^z; ) DP II- -9 (SEQ ID N^a 49) Val Val Thr Val Lys Val Met Gly Asp Asp Gly Val Leu Ala Cys Ala 1 5 10 15 Ile Ala Thr His Ala Lys Ile Arg Asp •

20 25

J 74 486

IPC-017(Portugal) s^z) DP II-6 (SEQ ID N^s 46)

Leu Glu Val Asp Val Pro Gly Ile Asp Pro Asn Ala Cys His Tyr Met 1 5 10 15 Lys Cys Pro Leu Val Lys Gly Gin Gin Tyr; 20 25 t^z; ) DP II- -7 (SEQ ID N^a 47) Cys Pro Leu Val Lys Gly Gin Gin Tyr Asp Ile Lys Tyr Thr Trp Asn 1 5 10 15 Val Pro Lys Ile Ala Pro Lys Ser Glu Asn Val • f

20 25 r') DP II-5 (SEQ ID N² 45)

Lys Ile Glu Ile Lys Ala Ser Ile Asp Gly Leu Glu Val Asp Val Pro 1 5 10 15

Gly Ile Asp Pro Asn Ala Cys His Tyr Met Lys;

20 25

f) DP II-4.3 (SEQ ID N^a 108)

Gin Asn Thr Lys Thr Ala Lys Ile Glu Ile Lys Ala Ser Leu Asp Gly 1 5 10 15 Leu Glu Ile Asp Val Pro Gly Ile Asp Thr; 20 25 g) DF II- -15 (SEQ ID N² 109) Lys Ile Glu Ile Lys Ala Ser Leu Asp Gly Leu Glu Ile Asp Val Pro 1 5 10 15 Gly Ile Asp Thr Asn Ala Cys His Phe Met Lys; 20 25 h) DF II- -16 (SEQ ID N^a 110) Leu Glu Ile Asp Val Pro Gly Ile Asp Thr Asn Ala Cys His Phe Met 1 5 10 15 Lys Cys Pro Leu Val Lys Gly Gin Gin Tyr; 20 25 i) DF II- -17 (SEQ ID N² 111) Cys Pro Leu Val Lys Gly Gin Gin Tyr Asp Ala Lys Tyr Thr Trp Asn 1 5 10 15 Val Pro Lys Ile Ala Pro Lys Ser Glu Asn Val; 20 25 j) DF II- -18 (SEQ ID N² 112) Asp Ala Lys Tyr Thr Trp Asn Val Pro Lys Ile Ala Pro Lys Ser Glu 1 5 10 15 Asn Val Val Val Thr Val Lys Leu Val Gly; 20 25 k) DF II· -19 (SEQ ID N² 113) Pro Lys Ile Ala Pro Lys Ser Glu Asn Val Val Val Thr Val Lys Leu 1 5 10 15 Val Gly Asp Asn Gly Val Leu Ala Cys Ala Ile Ala Thr His Ala Lys 20 25 30

Ile Arg Asp

74 486

IPC-017(Portugal)

-140-

20 25 e') DP 11-20.1 (SEQ ID N² 51)

Asp Gin Val Asp Val Lys Asp Glu Ala Asn His Glu Ile Lys Lys Val 1 5 10 15 Leu Val Pro Gly Cys His Gly Ser Glu Pro; 20 25

-136J74 486

IPC-017(Portugal)

f^z) DP 11-20.2 (SEQ ID N^a 52) Asp Gin Val Asp Val Lys Asp Ser Ala Asn His Glu Ile Lys Lys Val 1 5 10 15 Leu Val Pro Gly Cys His Gly Ser Glu Pro; 20 25 g^z) DP 11-20.3 (SEQ ID N^a 53) Asp Gin Val Asp Val Lys Asp Cys Ala Asn His Glu Ile Lys Lys Val 1 5 10 15 Leu Val Pro Gly Glu His Gly Ser Glu Pro; 20 25 h') DP 11-20.4 (SEQ ID N^a 54) Asp Gin Val Asp Val Lys Asp Cys Ala Asn His Glu Ile Lys Lys Val 1 5 10 15 Leu Val Pro Gly Ser His Gly Ser Glu Pro; 20 25 i') DP 11-20.5 (SEQ ID N^a 55) Asp Gin Val Asp Val Lys Asp Glu Ala Asn His Glu Ile Lys Lys Val 1 5 10 15 Leu Val Pro Gly Glu His Gly Ser Glu Pro; 20 25 j') DP 11-20.6 (SEQ ID N² 56) tal como definida na reivindicação 3; k^z) DP II-l (SEQ ID N^a 41) Asp Gin Val Asp Val Lys Asp Cys Ala Asn His Glu Ile Lys Lys Val 1 5 10 15 Leu Val Pro Gly; 20 l^z) DP II-l.l (SEQ ID N^a 57) Asp Gin Val Asp Val Lys Asp Glu Ala Asn His Glu Ile Lys Lys Val 1 5 10 15 Leu Val Pro Gly; 20 m^z) DP II-1.2 (SEQ ID N² 58) Asp Gin Val Asp Val Lys Asp Ser Ala Asn His Glu Ile Lys Lys Val 1 5 10 15

Leu

Val Pro Gly;

εέί·;^

J 74 486

IPC-017(Portugal)

-137<

(SEQ ID

N^a 59) n') DP II—2.1

His Glu Ile Lys Lys Val Leu Val Pro Gly Cys HÍS Gly Ser Glu Pro; 1 5 10 15 O') DP II-2.2 (SEQ ID N^e 60) HÍS Glu Ile Lys Lys Val Leu Val Pro Gly Glu HÍS Gly Ser Glu Pro; 1 5 10 15 p^z) DP II-2.3 (SEQ ID N^a 61) His Glu Ile Lys Lys Val Leu Val Pro Gly Ser His Gly Ser Glu Pro; 1 5 10 15 q') DP 11-21 (SEQ ID N² 62) Lys Pro Phe Gin Leu Glu Ala Val Phe Glu Ala Asn Gin Asn Thr Lys 1 5 10 15 Thr Ala Lys Ile Glu Ile Lys Ala Ser Thr Asp Gly; 20 25 r^z) DP 11-22 (SEQ ID N^a 63) tal como definida na reivindicação 3; S^z) DP 11-26 (SEQ ID N² 64) Phe Glu Ala Asn Gin Asn Thr Lys Thr Ala Lys Ile Glu Ile Lys Ala 1 5 10 15 Ser Ile Asp Gly Leu Glu Val Asp Val Pro Gly; • Γ 20 25 t^z) DP 11-26.1 (SEQ ID N^s 65) Gin Asn Thr Lys Thr Ala Lys Ile Glu Ile Lys Ala Ser Ile Asp Gly 1 5 10 15 Leu Glu Val Asp Val Pro Gly; 20 U^z) DP 11-23 (SEQ ID N² 66) Pro Leu Val Lys Gly Gin Gin Tyr Asp Ile Lys Tyr Thr Trp Asn Val 1 5 10 15 Pro Lys Ile Ala Pro Lys Ser Glu Asn Val t 20 25 V^z) DP 11-23.1 (SEQ ID N^a 67) Pro Leu Val Lys Gly Gin Gin Tyr Asp Ile Lys Tyr Thr Tyr Asn Val 1 5 10 15 Pro Lys Ile Ala Pro Lys Ser Glu Asn Val • r

74 486

IPC-017(Portugal)

C-138-

w^z ) DP II- -24 (SEQ ID N² 68 0 Lys Ser Glu Asn Val Val Val Thr Val Lys Val Met Gly r 1 5 10 x^z ) DP II- -25 (SEQ ID N^a 69 ·) Thr Val Lys Val Met Gly Asp Asp Gly Val Leu Ala Cys Ala Ile Ala 1 5 10 15 Thr His Ala Lys Ile Arg Asp; 20 y' ) DP II- -25.1 (SEQ ID N^a 70) Thr Val Lys Val Met Gly Asp Asp Gly Val Leu Ala Glu Ala Ile Ala 1 5 10 15 Thr His Ala Lys Ile Arg Asp; 20 z ^z ) DP I 1-25.2 (SEQ ID N^a 71) ta 1 como definid a na

reivindicação 3;

a) DF II-l (SEQ ID N^a 103)

Asp Gin Val Asp Val Lys Asp Cys Ala Asn Asn Glu Ile Lys Lys Val 1 5 10 15 Met Val Asp Gly; 20 b) DF II- -2 (SEQ ID N^s ^! 104) Asn Glu Ile Lys Lys Val Met Val Asp Gly Cys His Gly Ser Asp Pro 1 5 10 15 cys Ile Ile His Arg Gly Lys Pro Phe; 20 25 c”) DF II- -13.: L (SEQ ID N^a 105) His Gly Ser Asp Pro Cys Ile Ile His Arg Gly Lys Pro Phe Thr Leu 1 5 10 15 Glu Ala Leu Phe Asp Ala Asn Gin Asn Thr Lys Thr Ala • / 20 25 d) DF II- -3.1 (SEQ ID N^a : L06) His Arg Gly Lys Pro Phe Thr Leu Glu Ala Leu Phe Asp Ala Asn Gin 1 5 10 15

Asn Thr Lys;

J74 486

IPC-017(Portugal)

-139-

e”] ) DF II-4.5 (SEQ ID N^a 107) Thr Leu Glu Ala Leu Phe Asp Ala Asn Gin Asn Thr Lys Thr Ala Lys 1 5 10 15 Ile Glu Ile Lys Ala Ser Leu Asp Gly;

20 25 a^z) DF 1-27.1 (SEQ ID N² 100)

His Asp Asn Gly Tyr Gin Pro Asn Tyr His Ala Val Asn Ile Val Gly 1 5 10 15 Tyr Gly Ser Thr Gin Gly Asp Asp Tyr; 20 25 b') DF 1-28.1 (SEQ ID N^a 101) Asn Ile Val Gly Tyr Gly Ser Thr Gin Gly Asp Asp Tyr Trp Ile Val 1 5 10 15 Arg Asn Ser Trp Asp Thr Thr Trp Gly Asp Ser Gly Tyr; 20 25 c') DF 1-28.2 (SEQ ID N² 102) Asn Ile Val Gly Tyr Gly Ser Thr Gin Gly Asp Asp Tyr Trp Ile Val 1 5 10 15 Arg Asn Ser Trp Asp Thr Thr, • r 20 d') DP II- -20 (SEQ ID N² 50) Asp Gln Val Asp Val Lys Asp Cys Ala Asn His G1U Ile Lys Lys Val 1 5 10 15 Leu Val Pro Gly Cys His Gly Ser Glu Pro • r

20 - Péptido isolado, de acordo com a reivindicação 18, caracterizado por ser seleccionado de entre o grupo constituído por:

a) DP 1-1 (SEQ ID N^a 9) tal como definida na reivindicação

20 25

r) DP I- 21 . 1 (SEQ ID N^a 27) tal como definida na reivindicação 2; s) DP I- 21 . 2 (SEQ ID N^a 28) tal como definida na reivindicação 2; t) DP 1-22 1.1 (SEQ ID N^a 29) Ala Phe Ser Gly Vai Ala Ala Thr Glu Ser Ala Tyr Leu Ala His Arg 1 5 10 15 Asn Gin Ser Leu Asp Leu Ala Glu Gin Glu Leu Vai Asp; 20 25 u) DP 1-22 1.2 (SEQ ID N^a 30) Vai Ala Ala Thr Glu Ser Ala Tyr Leu Ala His Arg Asn Gin Ser Leu 1 5 10 15 Asp Leu Ala Glu Gin Glu Leu Vai Asp; 20 25 v) DP 1-22 !.3 (SEQ ID N² 31) Ala Phe Ser Gly Vai Ala Ala Thr Glu Ser Ala Tyr Leu Ala His Arg 1 5 10 15 Asn Gin Ser Leu Asp Leu Ala Glu Gin; 20 25 w) DP 1-22 !.4 (SEQ ID N^a 32) Vai Ala Ala Thr Glu Ser Ala Tyr Leu Ala His Arg Asn Gin Ser Leu 1 5 10 15 Asp Leu Ala Glu Gin Glu Leu Vai Asp Cys Ala Ser Gin; 20 25 x) DP I- 23 . 1 (SEQ ID N^a 33) tal como definida na reivindicação 2; y) DP I- 23 . 2 (SEQ ID N^a 34) tal como definida na

reivindicação 2;

z) DP 1-25 i.l (SEQ ID N^a 35) Gin Ile Tyr Pro Pro Asn Ala Asn Lys Ile Arg Glu Ala Leu Ala Gin 1 5 10 15 Thr His Ser Ala Ile Ala Vai Ile Ile Gly Ile Lys Asp; 20 25 a¹ ) DP I- 25 . 2 (SEQ ID N^a 36 ) tal como defi nida na

20 25

DP 11-22

Gin Leu Glu Ala Val Phe Glu Ala Asn Gin Asn Thr Lys Thr Ala Lys 1 5 10 15 Ile Glu Ile Lys Ala Ser Ile Asp Gly Leu Glu Val, 20 25 DP II-2E i.2 Thr Val Lys Val Leu Gly Asp Asp Gly Val Leu Ala Ser Ala Ile Ala 1 5 10 15 Thr His Ala Lys Ile Arg Asp Λ

e DF 1-22.2

Val Ala Ala Thr Glu Ser Ala Tyr Leu Ala Tyr Arg Asn Thr Ser Leu 1 5 10 15 Asp Leu Ser Glu Gin Glu Leu Val Asp. 20 25

r,

-123- .z-Z ...... ...

J ^{74 486}

IPC-017(Portugal)

20 25

74 486

IPC-017(Portugal)

-122Ile Arg Glu Ala Leu Ala Gin

DP 1-25.2 (SEQ ID N² 36)

Gin Ile Tyr Pro Pro Asn Ala Asn Lys

Thr His Ser Ala Ile Ala;

e DP 1-26.1 (SEQ ID N² 37)

Ile Ile Gly Ile Lys Asp Leu Asp Ala Phe Arg His Tyr Asp Gly Arg 15 10 15

Thr Ile Ile Gin Arg Asp Asn Gly Tyr Gin.

21 - Péptido modificado ou porção modificada de um péptido caracterizado por o péptido modificado ou porção modificada de um péptido ser um péptido modificado ou porção modificada da reivindicação 10.

22 - Péptido modificado caracterizado por o péptido modificado ser um péptido da reivindicação 18.

23 - Péptido modificado de acordo com a reivindicação 18,

caracterizai do p or ser seleccionado de entre o grup o de péptidos constituído por: DP 1-23.1.1 Lys Lys Glu Tyr Ile Gin His Asn Gly Vai Vai Gin Glu Ser Tyr Tyr 1 5 10 15 Arg Tyr Vai Ala Arg Glu Gin Ser Cys Arg Arg Pro Asn Ala Gin, 20 25

-13274 486

IPC-017(Portugal)

DP 1-23.1.2,

Lys Glu Tyr Ile Gin His Asn Gly 15

Tyr Val Ala Arg Glu Gin Ser Cys

DP 1-23.1.3

Glu Tyr Ile Gin His Asn Gly Val 15

Val Ala Arg Glu Gin Ser Ser Arg e DP 1-23.1.4.

Glu Tyr Ile Gin His Asn Gly Val 15

Val Ala Arg Glu Gin Ser Glu Arg

Val Val Gin Glu Ser Tyr Tyr Arg

24 - Péptido modificado ou uma porção modificada de um péptido de acordo com a reivindicação 21, caracterizado por não se ligar a imunoglobulina E específica para Der p I numa percentagem substancial de indivíduos sensíveis a Der p I, ou se a ligação do péptido ou da sua porção à referida imunoglobulina E ocorrer, essa ligação não resultar na libertação de mediadores a partir de mastócitos ou basófilos numa percentagem substancial de indivíduos sensíveis a Der p I.

25 - Péptido modificado ou uma porção modificada de um péptido de acordo com a reivindicação 21, caracterizado por, num indivíduo sensível a ácaros do pó doméstico ao qual é administrado, modificar a resposta alérgica do indivíduo a um alergeno de ácaros do pó doméstico.

26;

-165-

Ί4 486

IPC-017(Portugal)

b) DF 1-2.1 (SEQ ID N^a 73) tal como definida na reivindicação 44;

c) DF 1-3 (SEQ ID N² 74) tal como definida na reivindicação 44;

d) DF 1-4 (SEQ ID N² 75) tal como definida na reivindicação *44;

e) DF 1-11 (SEQ ID N² 76) tal como definida na reivindicação 44; f) DF 1-12 (SEQ ID N² 77 ) tal como definida na reivindicação 44; g) DF Ι- -5 (SEQ ID N² 78) tal como definida na reivindicação 44; h) DF 1-13 (SEQ ID N² 79) tal como definida na reivindicação 44; i) DF 1-14 (SEQ ID N² 80 ) tal como def inida na reivindicação 44; j ) DF 1-15 (SEQ ID N^a 81) tal como definida na reivindicação 44;

DF 1-6 (SEQ ID N² 82) tal como definida na reivindicação 44; 1) DF 1-7 (SEQ ID N² 83) tal como definida na reivindicação 44; m) DF I- 8.1 (SEQ ID N² 84 ) tal como ' definida na

reivindicação 44;

n) DF 1-8 (SEQ ID N² 85) tal como definida na reivindicação 44; O) DF 1-9 (SEQ ID N² 86) tal como definida na reivindicação

26;

j ) DP 11-22 (SEQ ID N² 63) tal como definida na reivindicação 3; k) DP 11-25.1 (SEQ ID N^a 70) tal como definida na reivindicação 26; 1) DP 11-21 (SEQ ID N^a 62) tal como definida na reivindicação 26; m) DP 11-25 (SEQ ID N² 69) tal como definida na reivindicação 26; n) DP 11-20.6 (SEQ ID N² 56) tal como definida na reivindicação 3; o) DP 11-20 (SEQ ID N^a 50) tal como definida na reivindicação 26; p) DF II-4.5 (SEQ ID N⁹ 107) tal como def inida na reivindicação 26; q) DF II-2 (SEQ ID N² 104) tal como definida na reivindicação 26; r) DF 11-19.1 (SEQ ID N^a 114) tal . como definida na reivindicação 26; s) DF 11-17 (SEQ ID N² 111) tal como def inida na reivindicação 26; t) DF 11-15 (SEQ ID N² 109) tal como definida na reivindicação 26; u) DP 11-25.2 (SEQ ID N² 71) tal como def inida na reivindicação 3; e V) DF 1-22.2 (SEQ ID N⁹ 93) tal como definida na reivindicação 3.

56 - Péptido modificado ou porção modificada, caracterizado por ser um péptido modificado ou porção modificada de um péptido ou porção da reivindicação 44.

57 - Péptido modificado ou porção modificada de um péptido de acordo com a reivindicação 56, caracterizado por ser seleccionado de entre o grupo de péptidos constituído por: DP 11-22.1

J 74 486

IPC-017(Portugal)

-164-

Lys Lys Gin Leu Glu Ala Vai Phe Glu Ala Asn Gin Asn Thr Lys Thr 1 5 10 15 Ala Lys Ile Glu Ile Lys Ala Ser Ile Asp Gly Leu Glu Vai 20 25 e DP II- -22.2. Lys Gin Leu Glu Ala Vai Phe Glu Ala Asn Gin Asn Thr Lys Thr Ala 1 5 10 15 Lys Ile Glu Ile Lys Ala Ser Ile Asp Gly Leu Glu Vai Lys 20 25 58 - Péptido modificado ou uma porção modificada de um

péptido, de acordo com a reivindicação 56, caracterizado por não se ligar a imunoglobulina E específica para um alergeno proteico do género Dermatophaqoides numa percentagem substancial de indivíduos sensíveis ao alergeno proteico, ou se a ligação do péptido ou da sua porção à referida imunoglobulina E ocorrer, essa ligação não resultar na libertação de mediadores a partir de mastócitos ou basófilos numa percentagem substancial de indivíduos sensíveis ao alergeno proteico.

59 - Péptido modificado ou uma porção modificada de um péptido, de acordo com a reivindicação 56, caracterizado por se ligar a imunoglobulina E numa extensão substancialmente menor do que aquela em que o alergeno proteico, do qual o péptido é derivado, se liga à referida imunoglobulina E.

60 - Péptido modificado ou uma porção modificada de um péptido, de acordo com a reivindicação 56, caracterizado por, num indivíduo sensível a ácaros do pó doméstico ao qual é administrado, modificar a resposta alérgica do indivíduo a um alergeno de ácaros do pó doméstico.

61 - Péptido isolado de um alergeno proteico do género Dermatophaqoides, caracterizado por o referido péptido ser seleccionado de entre o grupo consistindo em:

a) DF 1-1 (SEQ ID N^a 72) tal como definida na reivindicação

26;

74 486 .·' ,·,·/ ....... IPC-017(Portugal) 141· zz j) DF 1-21.1 reivindicação 26; (SEQ ID N² 90 ) tal como definida na k) DF 1-22.1 reivindicação 26; (SEQ ID N⁹ 92) tal como definida na 1) DF 1-23.1 reivindicação 26; (SEQ ID N² 95 ) tal como definida na m) DF 1-25.1 reivindicação 26; (SEQ ID N⁹ 97 ) tal como definida na n) DP II-l reivindicação 26; (SEQ ID N⁹ 41) tal como def inida na

o) DP II-1.2 (SEQ ID N² 58) tal como def inida na reivindicação 26; P) DP II-2.0 (SEQ ID N² 56) tal como definida na reivindicação 3; q) DP 11-20.3 (SEQ ID N² 53) tal como definida na reivindicação 26; r) DP 11-21 (SEQ ID N⁹ 62) tal como definida na reivindicação 26; s) DP 11-22 (SEQ ID N^a 63) tal como definida na reivindicação 3; t) DP 11-25 (SEQ ID N^a 69) tal como definida na reivindicação 26; u) DP 11-25.2 (SEQ ID N² 71) tal como def inida na reivindicação 3; v) DF II-2 (SEQ ID N² 104) tal como definida : na reivindicação 26; w) DF II-4.5 (SEQ ID N² 107) tal como definida na reivindicação 26; X) DF 11-15 (SEQ ID N² 109) tal como definida na reivindicação 26; y) DF 11-17 (SEQ ID N² 111) tal como def inida na reivindicação 26; z) DF 11-19.1 (SEQ ID N² 114) tal . como ι definida na reivindicação 26; a' ) DF 1-22.2 (SEQ ID N² 93) tal como definida na

reivindicação 3; e b') DP 11-20.6 (SEQ ID N^s 56), reivindicação 3.

tal como definida na

-142de acordo com a reivindicação 26,

74 486

IPC-017(Portugal)

26 - Péptido isolado caracterizado por compreender pelo menos duas regiões, compreendendo cada região pelo menos um epítopo de célula T de um alergeno proteico do género Dermatophaqoides, sendo as referidas regiões derivadas dos mesmos ou de diferentes alergenos proteicos do género Dermatophaqoides, compreendendo cada uma das referidas regiões uma sequência de aminoâcidos completa, ou uma sua porção, seleccionada de entre o grupo constituído por:

74 486

IPC-017(Portugal) σ

a) DP 1-21.1 (SEQ -133- 27 ) tal como definida na ID N² reivindicação 2; b) DP 1-21.2 (SEQ ID N ² 28 ) tal como def inida na reivindicação 2; c) DP 1-22.1 (SEQ ID N^a 29 ) tal como definida na reivindicação 10; d) DP 1-22.2 (SEQ ID N² 30 ) tal como def inida na reivindicação 10; e) DP 1-22.3 (SEQ ID N^s 31) tal como definida na reivindicação 10; f) DP 1-22.4 (SEQ ID N^a 32 ) tal como definida na reivindicação 10; g) DP 1-23.1 (SEQ ID N^a 33 ) tal como definida na reivindicação 2; h) DP 1-23.2 (SEQ ID N² 34) tal como def inida na reivindicação 2; i) DP 1-25.1 (SEQ ID N² 35 ) tal como definida na reivindicação 10; j) DP 1-25.2 (SEQ ID N² 36) tal como definida na reivindicação 2; k) DP 1-26.1 (SEQ ID N² 37 ) tal como definida na reivindicação 2; 1) DP 1-27.1 (SEQ ID N² 38 ) tal como definida na reivindicação 10; m) DP 1-28.1 (SEQ ID N² 39 ) tal como definida na reivindicação 10; n) DP 1-28.2 (SEQ ID N² 40 ) tal como definida na reivindicação 10; o) DP 1-1 (SEQ ID N² 9) tal como definida na reivindic açã<

27 - Péptido isolado, de acordo com a reivindicação 26, caracterizado por as referidas regiões compreenderem uma sequência de aminoácidos seleccionada de entre o grupo constituído por:

a) DP 1-21.1 (SEQ ID N² 27 ) tal como definida na reivindicação 2; b) DP 1-21.2 (SEQ ID N^a 28 ) tal como definida na reivindicação 2; c) DP 1-22.1 (SEQ ID N^a 29 ) tal como definida na reivindicação 10; d) DP 1-23.1 (SEQ ID N² 33 ) tal como definida na reivindicação 2; e) DP 1-25.2 (SEQ ID N^a 36 ) tal como definida na reivindicação 2; f) DP 1-26.1 (SEQ ID N² 37) tal como definida na reivindicação 2; g) DP 1-28.1 (SEQ ID N^a 39 ) tal como def inida na

reivindicação 10;

h) DP 1-1 (SEQ ID N^a 9) tal como definida na reivindicação

28 - Péptido isolado, caracterizado sequência de seleccionada de por as referidas regiões compreenderem uma aminoácidos entre completa, ou uma o grupo constituído por:

sua porção,

a) DP 1-21.1 (SEQ ID N² 27 ) tal como definida na reivindicação 2; b) DP 1-23 . 1 (SEQ ID N^a 33 ) tal como definida na reivindicação 3; c) DP 1-26 . 1 (SEQ ID N^a 37) tal como definida na reivindicação 2; d) DP 11-20 .6 (SEQ ID N^a 56 ) tal como definida na reivindicação 3; e) DP 11-22 ! (SEQ ID 1 N^a 63 ) tal como def inida na reivindicação 3; f) DP 11-25 .2 (SEQ ID N^a 71) tal como def inida na reivindicação 3; e g) DF 1-22 . 2 (SEQ ID N^a 93 ) , tal como def inida na

reivindicação 3.

29 - Péptido isolado, de acordo com a reivindicação 26, caracterizado por as referidas regiões compreenderderem uma sequência de aminoácidos seleccionada de entre o grupo constituído por:

a) DP 1-21.1 (SEQ ID N² 27 ) tal como def inida na reivindicação 2; b) DP 1-23. 1 (SEQ ID N^a 33) tal como definida na reivindicação 3; C) DP 1-26. 1 (SEQ ID N^a 37 ) tal como definida na reivindicação 2; d) DP 11-20. 6 (SEQ ID N^a 56 ) tal como definida na reivindicação 3; e) DP 11-22 (SEQ ID N ² 63 ) tal como definida na reivindicação 3; f) DP 11-25. 2 (SEQ ID N^s 71) tal como definida na reivindicação 3; e g) DF 1-22.2 (SEQ ID N f^B 93 ) , tal como definida na

reivindicação 3.

74 486

IPC-017(Portugal)

-143-

30;

p) DF 1-16 (SEQ ID N² 87 ) tal como definida na reivindicação 44; q) DF 1-10 (SEQ ID N² 88 ) tal como definida na reivindicação 44; r) DF 1-17 (SEQ ID N² 89 ) tal como definida na reivindicação 44; s) DF 1-21. 1 (SEQ ID N ² 90 ) tal como definida na reivindicação 26; t) DF 1-21. 2 (SEQ ID N ² 91) tal como definida na

reivindicação 26;

74 486

IPC-017(Portugal)

-166-

U) DF 1-22.1 (SEQ ID N² 92) tal como definida na reivindicação 26; v) DF 1-22.2 (SEQ ID N² 93) tal como definida na reivindicação 3; w) DF 1-22.4 (SEQ ID N² 94) tal como def inida na reivindicação 26; x) DF 1-23.1 (SEQ ID N² 95) tal como definida na reivindicação 26; y) DF 1-23.2 (SEQ ID N^E 96) tal como definida na reivindicação 26; z) DF 1-25.1 (SEQ ID N^E 97) tal como def inida na reivindicação 26; a^z ) DF 1-25.2 (SEQ ID N^E 98) tal como definida na reivindicação 26; b · ) DF 1-26.1 (SEQ ID N^a 99) tal como definida na reivindicação 26; c^z ) DF 1-27.1 (SEQ ID N^a 100) tal como definida na reivindicação 26; d^z ) DF 1-28.1 (SEQ ID N² 101) tal como definida na reivindicação 26; e^z ) DF 1-28.2 (SEQ ID N^E 102) tal como definida na reivindicação 26; f · ) DP 11-20 (SEQ ID N^E 50) tal como definida na reivindicação 26; g^z ) DP 11-20.1 (SEQ ID N² 51) tal como definida na reivindicação 26; h^z ) DP 11-20.2 (SEQ ID N^E 52) tal como definida na reivindicação 26; i^z ) DP 11-20.3 (SEQ ID N² 53) tal como def inida na reivindicação 26; j ^z ) DP 11-20.4 (SEQ ID N^a 54) tal como definida na reivindicação 26; k^z ) DP 11-20.5 (SEQ ID N^E 55) tal como definida na reivindicação 26; l^z ) DP 11-20.6 (SEQ ID N^E 56) tal como definida na reivindicação 3; m^z ) DP ’ II-l (SEQ : ID N^a 41) ' tal i como definida na

reivindicação 26;

74 486

IPC-017(Portugal)

-167-

o ⁷ ) DP II-2 (SEQ ID N² 42 ) tal como def inida na reivindicação 44; p⁷ ) DP II-3 . 1 (SEQ ID N ² 43 ) tal como definida na reivindicação 44; q' ) DP II-4 (SEQ ID N² 44 ) tal como definida na reivindicação 44; r⁷ ) DP II-5 ( SEQ ID N² 45 ) tal como definida na reivindicação 44; S⁷ ) DP II-6 (SEQ ID N² 46 ) tal como definida na reivindicação 44; t⁷ ) DP II-7 (SEQ ID N^a 47 ) tal como definida na reivindicação 44; u⁷ ) DP II-8 (SEQ ID N^a 48 ) tal como definida na reivindicação 44; v⁷ ) DP II-9 (SEQ ID N^a 49 ) tal como definida na

reivindicação 44;

w⁷ ) DP II-l.1 (SEQ ID N^a 57) tal como def inida na reivindicação 26; x⁷ ) DP II-l.2 (SEQ ID N² 58 ) tal como def inida na reivindicação 26; y⁷ ) DP II-2.1 (SEQ ID N² 59 ) tal como def inida na reivindicação 26; z ⁷ ) DP II-2.2 (SEQ ID N² 60 ) tal como definida na reivindicação 26; a”) DP II-2.3 (SEQ ID N^e 61) tal como definida na reivindicação 26; b) DP 11-21 (SEQ ID N^a 62 ) tal como def inida na reivindicação 26; c) DP 11-22 (SEQ ID N² 63 ) tal como definida na reivindicação 3; d) DP 11-26 (SEQ ID N^e 64) tal como definida na reivindicação 26; e) DP 11-26.: 1 (SEQ ID N² 65) tal como definida na reivindicação 26; f) DP 11-23 (SEQ ID N^a 66 ) tal como def inida na reivindicação 26; g) DP 11-23. 1 (SEQ ID N^e 67) tal como definida na

reivindicação 26;

) 74 486

IPC-017(Portugal)

-168- h”) DP 11-24 (SEQ ID N² 68) tal como definida na reivindicação 26;

i”) DP 11-25 (SEQ ID N^s 69) tal como definida na reivindicação 26;

j ) DP reivindicação k”) DP 11-25.1 (SEQ ID N^a 70) 26; 11-25.2 (SEQ ID N² 71) tal tal como como definida definida na na reivindicação 3; 1) DF II-l (SEQ ID N^a 103) tal como def inida na reivindicação 26; m) DF II-2 (SEQ ID N^a 104) tal < □ orno definida na reivindicação 26; n) DF 11-13.1 (SEQ ID N^e 105) tal como definida na reivindicação 26; o”) DF II-3.1 (SEQ ID N² 106) tal como definida na reivindicação 26; p) DF II-4.5 (SEQ ID N² 107) tal como definida na reivindicação 26; q) DF II-4.3 (SEQ ID N^a 108) tal como definida na reivindicação 26; r) DF 11-15 (SEQ ID N^a 109) tal como definida na reivindicação 26; s”) DF 11-16 (SEQ ID N^s 110) tal como definida na reivindicação 26; t”) DF 11-17 (SEQ ID N^a 111) tal como definida na reivindicação 26; u) DF 11-18 (SEQ ID N² 112) tal como definida na reivindicação 26; v) DF 11-19 (SEQ ID N² 113) tal como definida na reivindicação 26; w) DF 11-19.1 (SEQ ID N^a 114) tal como definida na reivindicação 26; x”) DF 11-21 (SEQ ID N^a 115) tal como definida na reivindicação 26; e y”) DF 11-22 (SEQ ID N² 116) tal como definida na

62 - Composição terapêutica, caracterizada por compreender reivindicação 26.

J 74 486

IPC-017(Portugal)

-169 pelo menos um péptido isolado de acordo com a reivindicação 1 e um portador ou diluente farmaceuticamente aceitável.

63 - Composição terapêutica, caracterizada por compreender pelo menos um péptido isolado de acordo com a reivindicação 18 e um portador ou diluente farmaceuticamente aceitável.

64 - Composição terapêutica, caracterizada por compreender pelo menos um péptido isolado de acordo com a reivindicação 28 e um portador ou diluente farmaceuticamente aceitável.

65 - Composição terapêutica, caracterizada por compreender pelo menos um péptido isolado de acordo com a reivindicação 34 e um portador ou diluente farmaceuticamente aceitável.

66 - Composição terapêutica, caracterizada por compreender pelo menos um péptido isolado de acordo com a reivindicação 38 e um portador ou diluente farmaceuticamente aceitável.

67 - Composição terapêutica, caracterizada por compreender pelo menos um péptido isolado de acordo com a reivindicação 44 e um portador ou diluente farmaceuticamente aceitável.

68 - Composição terapêutica, caracterizada por compreender pelo menos um péptido isolado de acordo com a reivindicação 61 e um portador ou diluente farmaceuticamente aceitável.

69 - Processo para detectar a sensibilidade a ácaros do pó doméstico num indivíduo, caracterizado por compreender combinar uma amostra de sangue obtida do indivíduo com pelo menos um péptido da reivindicação 1, sob condições apropriadas para a ligação dos componentes sanguíneos com o péptido, e determinar a extensão em que a ligação ocorre, como indicador da sensibilidade do indivíduo a ácaros do pó doméstico.

70 - Processo de acordo com a reivindicação 69, caracterizado por a extensão em que ocorre a ligação ser determinada pela avaliação da função da célula T, da proliferação das células T ou de uma sua combinação.

J 74 486

IPC-017(Portugal)

-170-

71 - Processo para detectar a sensibilidade a ácaros do pó doméstico num indivíduo, caracterizado por compreender combinar uma amostra de sangue obtida do indivíduo com pelo menos um péptido da reivindicação 18, sob condições apropriadas para a ligação dos componentes sanguíneos com o péptido, e determinar a extensão em que a ligação ocorre, como indicador da sensibilidade do indivíduo a ácaros do pó doméstico.

72 - Processo de acordo com a reivindicação 71, caracterizado por a extensão em que ocorre a ligação ser determinada pela avaliação da função da célula T, da proliferação das células T ou de uma sua combinação.

73 - Processo para detectar a sensibilidade a ácaros do pó doméstico num indivíduo, caracterizado por compreender combinar uma amostra de sangue obtida do indivíduo com pelo menos um péptido completo da reivindicação 38, ou uma sua porção, sob condições apropriadas para a ligação dos componentes sanguíneos com o péptido ou sua porção e determinar a extensão em que a ligação ocorre, como indicador da sensibilidade do indivíduo a ácaros do pó doméstico.

74 - Processo de acordo com a reivindicação 73, caracterizado por a extensão em que ocorre a ligação ser determinada pela avaliação da função da célula T, da proliferação das células T ou de uma sua combinação.

75 - Composição terapêutica, caracterizada por compreender um portador ou diluente farmaceuticamente aceitável e pelo menos dois péptidos, compreendendo cada um dos referidos péptidos pelo menos um epítopo de célula T de um alergeno proteico do género Dermatophagoides, sendo os referidos péptidos derivados do mesmo alergeno proteico ou de alergenos proteicos diferentes do género Dermatophagoides.

76 - Composição de acordo com a reivindicação 84, caracterizada por os referidos péptidos serem seleccionados de entre o grupo consistindo em:

-171-

IPC-017(Portugal)

a) DP 1-21.1 (SEQ ID N^a 27 ) tal como definida na reivindicação 2; b) DP 1-21.2 (SEQ ID N^a 28 ) tal como definida na reivindicação 2; c) DP 1-22.1 (SEQ ID N² 29 ) tal como definida na reivindicação 10; d) DP 1-22.2 (SEQ ID N^a 30 ) tal como definida na reivindicação 10; e) DP 1-22.3 (SEQ ID N^a 31 ) tal como definida na reivindicação 10; f) DP 1-22.4 (SEQ ID N² 32 ) tal como def inida na reivindicação 10; g) DP 1-23.1 (SEQ ID N^a 33 ) tal como definida na reivindicação 2; h) DP 1-23.2 (SEQ ID N² 34) tal como definida na reivindicação 2; i) DP 1-25.1 (SEQ ID N² 35 ) tal como definida na reivindicação 10; j ) DP 1-25.2 (SEQ ID N^a 36 ) tal como definida na reivindicação 2; k) DP 1-26.1 (SEQ ID N² 37 ) tal como def inida na reivindicação 2; 1) DP 1-27.1 (SEQ ID N² 38 ) tal como def inida na reivindicação 10; m) DP 1-28.1 (SEQ ID N^a 39) tal como def inida na reivindicação 10; n) DP 1-28.2 (SEQ ID N² 40 ) tal como definida na reivindicação 10; o) DP I O · -1 (SEQ ID N² 9) tal como definida na reivindicação * / p) DF I -1 (SEQ ID N² 72) tal como definida na reivindicação 26; q) DF 1-21.1 (SEQ ID N^a 90 ) tal como definida na reivindicação 26; r) DF 1-21.2 (SEQ ID N² 91) tal como definida na reivindicação 26; S) DF 1-22.1 (SEQ ID N² 92) tal como definida na

reivindicação 26;

30;

74 486 Zj ί

IPC-017 (Portugal) _rj \

-157- Z~ ¹

P) DF 1-16 (SEQ ID N² 87) His Ala Val Asn Ile Val Gly Tyr Gly Ser Thr Gin Gly Asp Asp Tyr 1 5 10 15 Trp Ile Val Arg Asn Ser; 20 q) DF 1-10 (SEQ ID N^a 88) Gin Gly Asp Asp Tyr Trp Ile Val Arg Asn Ser Trp Asp Thr Thr Trp 1 5 10 15 Gly Asp Ser Gly Tyr Gly Tyr Phe • r 20 r) DF 1-17 (SEQ ID N^a 89) Gly Asp Ser Gly Tyr Gly Tyr Phe Gin Ala Gly Asn Asn Leu Met Met 1 5 10 15 Ile Glu Gin Tyr Pro Tyr Val Val Ile Met • 20 25

s) DF 1-21.1 (SEQ ID N² 90 ) tal como definida na reivindicação 26; t) DF 1-21.2 (SEQ ID N^a 91) tal como def inida na reivindicação 26; u) DF 1-22.1 (SEQ ID N² 92 ) tal como def inida na reivindicação 26; v) DF 1-22.2 (SEQ ID N^a 93 ) tal como definida na reivindicação 3; w) DF 1-22.4 (SEQ ID N² 94 ) tal como definida na reivindicação 26; x) DF 1-23.1 (SEQ ID N^a 95 ) tal como definida na reivindicação 26; y) DF 1-23.2 (SEQ ID N² 96 ) tal como definida na reivindicação 26; z) DF 1-25.1 (SEQ ID N^a 97 ) tal como definida na reivindicação 26; a' ) DF 1-25.2 (SEQ ID N² 98 ) tal como definida na reivindicação 26; b' ) DF 1-26.1 (SEQ ID N² 99 ) tal como def inida na reivindicação 26; c' ) DF 1-27.1 (SEQ ID N^a 100) tal como definida na reivindicação 26; d' ) DF 1-28.1 (SEQ ID N^s 101) tal como definida na

J 74 486

IPC-017(Portugal)

-158- reivindicação 26;

e⁷ ) DF 1-28.2 (SEQ : ID N^a 102) tal como definida na reivindicação 26; f · ) DP 11-20 (SEQ ID N ² 50 ) tal como definida na reivindicação 26; g⁷ ) DP 11-20. 1 (SEQ ID N^a 51) tal como definida na reivindicação 26; h⁷ ) DP 11-20. 2 (SEQ ID N² 52 ) tal como definida na reivindicação 26; i⁷) DP 11-20 . 3 (SEQ ID N^a 53) tal como definida na reivindicação 26; j ⁷ ) DP 11-20. 4 (SEQ ID N² 54 ) tal como definida na reivindicação 26; k⁷ ) DP 11-20. 5 (SEQ ID N² 55 ) tal como definida na reivindicação 26; l⁷ ) DP 11-20 . 6 (SEQ ID N² 56 ) tal como definida na

reivindicação 3;

m⁷) DP I :i-i (SEQ : ID N² 4 1) tal com ιο definida na reivindicação 26 i; o⁷) DP II- 2 (SEQ ID N¹ = 42) His Glu Ile Lys Lys Val Leu Val Pro Gly Cys His Gly Ser Glu Pro 1 5 10 15 Cys Ile Ile His Arg Gly Lys Pro Phe; 20 25 p⁷) DP II- -3.1 (SEQ ID N^B 43) His Gly Ser Glu Pro Cys Ile Ile His Arg Gly Lys Pro Phe Gin Leu 1 5 10 15 Glu Ala Val Phe Glu Ala Asn Gin Asn Thr Lys Thr Ala; 20 25 q⁷) DP II- -4 (SEQ ID N ² 44) Gin Leu Glu Ala Val Phe Glu Ala Asn Gin Asn Thr Lys Thr Ala Lys 1 5 10 15 Ile Glu Ile Lys Ala Ser Ile Asp Gly;

30 - Péptido isolado de acordo com a reivindicação 26, caracterizado por o referido péptido compreender uma combinação de regiões seleccionada de entre o grupo constituído por:

a) DP 1-22.1 (SEQ ID N^s 29) e DP 1-25.1 (SEQ ID N² 35) tal como definidas na reivindicação 10;

b) DP 1-21.1 (SEQ ID N² 27) e DP 1-25.2 (SEQ ID N^a 36) tal como definidas na reivindicação 2;

c) DP 1-22.1 (SEQ ID N^a 29) tal como definida na reivindicação 10 e DP 1-1 (SEQ ID N^a 9) tal como definida na reivindicação 2;

d) DP 1-21.1 (SEQ ID N= 27) tal como definida na reivindicação 2, DP 1-22.1 (SEQ ID N^a 29) tal como definida na reivindicação 10 e DP 1-25.2 (SEQ ID N² 36) tal como definida na reivindicação 2;

e) DP 1-21.2 (SEQ ID N^a 28) tal como definida na reivindicação 2, DP 1-22.1 (SEQ ID N^a 29) e DP 1-28.1 (SEQ ID N^a39) tal como definidas na reivindicação 10;

f) DP 1-1 (SEQ ID N² 9) tal como definida na reivindicação 2, DP 1-22.1 (SEQ ID N² 29) tal como definida na reivindicação 10 e DP 1-23.1 (SEQ ID N² 33) tal como definida na reivindicação 2;

g) DP 1-1 (SEQ ID N² 9) tal como definida na reivindicação 2, DP 1-22.1 (SEQ ID N^a 29) tal como definida na reivindicação 10 e DP 1-25.2 (SEQ ID N² 36) tal como definida na reivindicação 2;

h) DP 1-21.1 (SEQ ID N² 27) tal como definida na reivindicação 2, DP 1-22.1 (SEQ ID N² 29) tal como definida na reivindicação 10, DP 1-23.1 (SEQ ID N² 33) e DP 1-25.2 (SEQ ID N^a

31 - Péptido isolado de acordo com a reivindicação 26, caracterizado por o referido péptido compreender a seguinte combinação de regiões: DP 1-21.1 (SEQ ID N^fi 27), DP 1-23.1 (SEQ ID N^a 33) e DP 1-26.1 (SEQ ID N^a 37) tal como definidas na reivindicação 2, DP 11-20.6 (SEQ ID N^a 56), DP 11-22 (SEQ ID N^a63), DP 11-25.2 (SEQ ID N^a 71) e DF 1-22.2 (SEQ ID N^a 93) tal como definidas na reivindicação 3.

32 - Ácido nucleico isolado, caracterizado por possuir uma sequência que codifica o péptido completo da reivindicação 28 ou uma sua porção, ou um equivalente funcional da referida sequência de ácido nucleico.

33 - Péptido isolado caracterizado por ser produzido numa célula hospedeira transformada com o ácido nucleico da reivindicação 32.

34 - Péptido isolado de acordo com a reivindicação 26, caracterizado por o referido péptido ter um arrranjo de sequências de aminoâcidos, sequencial e específico, sendo o referido arranjo de sequências de aminoâcidos seleccionado de entre o grupo consistindo em:

a) DP 1-26.1, DP 11-25.2, DF 1-22, DP 11-20.6 e DP 1-21.2, respectivamente, tal como definidas abaixo.

35 - Péptido isolado, de acordo com a reivindicação 26, caracterizado por as regiões compreenderem uma sequência de aminoácidos seleccionada de entre o grupo constituído por:

a) DP 1-21.1 (SEQ ID N^a 27 ) tal como definida na reivindicação 2; b) DP 1-21.2 (SEQ ID N^e 28 ) tal como definida na reivindicação 2; c) DP 1-22.1 (SEQ ID N² 29 ) tal como definida na reivindicação io; d) DP 1-22.2 (SEQ ID N⁹ 30 ) tal como def inida na reivindicação io; e) DP 1—22.3 (SEQ ID N² 31) tal como def inida na reivindicação io; f) DP 1-22.4 (SEQ ID N^a 32) tal como def inida na

reivindicação 10;

J 74 486

IPC-017(Portugal)

-148-

g) DP 1-23.1 (SEQ ID N® 33) tal como definida na reivindicação 2; h) DP 1-23.2 (SEQ ID N® 34 ) tal como def inida na reivindicação 2; i) DP 1-25.1 (SEQ ID N® 35) tal como definida na reivindicação 10; j ) DP 1-25.2 (SEQ ID N= 36) tal como def inida na reivindicação 2; k) DP 1-26.1 (SEQ ID N® 37) tal como definida na reivindicação 2; 1) DP 1-27.1 (SEQ ID N® 38 ) tal como definida na reivindicação 10; m) DP 1-28.1 (SEQ ID N® 39) tal como definida na reivindicação 10; n) DP 1-28.2 (SEQ ID N® 40) tal como def inida na reivindicação 10; o) DP I O · -1 (SEQ ID N® 9) tal como definida na reivindicação p) DF I· -1 (SEQ ID N® 72) tal como definida na reivindicação 26; q) DF 1-21.1 (SEQ ID N® 90 ) tal como def inida na reivindicação 26; r) DF 1-21.2 (SEQ ID N= 91) tal como def inida na reivindicação 26; s) DF 1-22.1 (SEQ ID N® 92) tal como definida na reivindicação 26; t) DF 1-22.2 (SEQ ID N® 93) tal como definida na reivindicação 26; u) DF 1-22.4 (SEQ ID N® 94) tal como definida na reivindicação 3; v) DF 1-23.1 (SEQ ID N® 95 ) tal como def inida na reivindicação 26; w) DF 1-23.2 (SEQ ID N® 96 ) tal como definida na reivindicação 26; x) DF 1-25.1 (SEQ ID N® 97) tal como definida na reivindicação 26; y) DF 1-25.2 (SEQ ID N® 98 ) tal como def inida na reivindicação 26;

J 74 486

IPC-017(Portugal)

-149-

z ) DF : E-26.1 (SEQ ID : N^a 99) tal como definida na reivindicação 26; a^z ) DF 1-27 .: 1 (SEQ ID N^a 100) tal como def inida na reivindicação 26; b^z ) DF 1-28.: 1 (SEQ ID N^a 101) tal como definida na re ivindicação 26; c^z ) DF 1-28 . 2 (SEQ ID N^a 102) tal como definida na reivindicação 26; d^z ) DP 11-20 (SEQ ID : N^a 50 ) tal como definida na reivindicação 26; e^z ) DP 11-20 .1 (SEQ ID N^a 51) tal como definida na reivindicação 26; f · ) DP 11-20 .2 (SEQ ID N^a 52 ) tal como definida na reivindicação 26; g^z ) DP 11-20 .3 (SEQ ID N^a 53) tal como definida na reivindicação 26; h^z ) DP 11-20 .4 (SEQ ID N^a 54) tal como definida na reivindicação 26; i ^z ) DP 11-20 .5 (SEQ ID N^a 55) tal como definida na reivindicação 26; j ^z ) DP 11-20 .6 (SEQ ID N^a 56 ) tal como definida na reivindicação 3; k^z ) DP II-l (SEQ ID N^a 41) · tal i como definida na reivindicação 26; 1^z ) DP II-l . 1 (SEQ ID N^a 57 ) tal como definida na reivindicação 26; m^z ) DP II-l. 2 (SEQ ID N^a 58 ) tal como definida na reivindicação 26; n^z ) DP II-2 . 1 (SEQ ID N^a 59) tal como definida na reivindicação 26; o^z ) DP II-2 . 2 (SEQ ID N^a 60) tal como def inida na reivindicação 26; p^z ) DP II-2 . 3 (SEQ ID N^a 61) tal como definida na reivindicação 26; q^z ) DP 11-21 (SEQ : ID N^a 62) tal como def inida na reivindicação 26; r^z ) DP 11-22 (SEQ : ID N^e 63 ) tal como definida na

reivindicação 3;

J 74 486 77 IPC-017 (Portugal) v: 7 _r

S ' ) DP 11-26 (SEQ -150- def inida na ID N² 64 ) tal como reivindicação 26; t' ) DP 11-26.1 (SEQ ID N² 65) tal como definida na reivindicação 26; U^z ) DP 11-23 (SEQ ID N² 66 ) tal como definida na reivindicação 26; V^z ) DP 11-23.1 (SEQ ID N² 67) tal como definida na reivindicação 26; w' ) DP 11-24 (SEQ ID N² 68 ) tal como def inida na reivindicação 26; x' ) DP 11-25 (SEQ ID N² 69 ) tal como definida na reivindicação 26; y' ) DP 11-25.1 (SEQ ID N² 70) tal como definida na reivindicação 26; z' ) DP 11-25.2 (SEQ ID N² 71) tal como definida na reivindicação 3; a) DF II-l (SEQ ID N² 103) tal como definida na reivindicação 26; b”) DF II-2 (SEQ ID N^a 104) tal como definida na reivindicação 26; c) DF 11-13.1 (SEQ ID N² 105) tal . como definida na reivindicação 26; d) DF II-3.1 (SEQ ID N² 106) tal como definida na reivindicação 26; e”) DF II-4.5 (SEQ ID N² 107) tal como definida na reivindicação 26; f) DF II-4.3 (SEQ ID N² 108) tal como definida na reivindicação 26; g) DF 11-15 (SEQ ID N² 109) tal como def inida na reivindicação 26; h) DF 11-16 (SEQ ID N² 110) tal como definida na reivindicação 26; i) DF 11-17 (SEQ ID N² 111) tal como definida na reivindicação 26; j « ) df 11-18 (SEQ ID N² 112) tal como definida na reivindicação 26; k) DF 11-19 (SEQ ID N² 113) tal como definida na

reivindicação 26;

74 486

IPC-017(Portugal) r

-151-

36 - Ácido nucleico isolado, caracterizado por possuir uma sequência que codifica o péptido completo da reivindicação 26 ou uma sua porção, ou um equivalente funcional da referida sequência de ácido nucleico.

36) tal como definidas na reivindicação 2;

i) DP 1-21.2 (SEQ ID N² 28) tal como definida na reivindicação 2, DP 1-22.1 (SEQ ID N² 29) tal como definida na reivindicação 10 e DP 1-25.2 (SEQ ID N² 36) tal como definida na reivindicação 2;

j) DP 1-21.1 (SEQ ID N² 27) tal como definida na reivindicação 2, DP 1-22.1 (SEQ ID N² 29) tal como definida na reivindicação 10, DP 1-25.2 (SEQ ID N² 36) e DP 1-26.1 (SEQ ID N²

37) tal como definidas na reivindicação 2;

k) DF 1-21.2 (SEQ ID N⁹ 91) e DF 1-22.1 (SEQ ID N² 92) tal como definidas na reivindicação 26;

l) DF 1-21.1 (SEQ ID N⁹ 90), DF 1-22.1 (SEQ ID N² 92) e DF 1-25.1 (SEQ ID N² 97) tal como definidas na reivindicação 26;

m) DF 1-21.2 (SEQ ID N^a 91), DF 1-22.1 (SEQ ID N^a 92) e DF 1-25.1 (SEQ ID N² 97) tal como definidas na reivindicação 26;

O) DF 1-1 (SEQ ID N^s 72), DF 1-22.1 (SEQ ID N^s 92) e DF 1-25.1 (SEQ ID N⁹ 97) tal como definidas na reivindicação 26;

p) DP 1-22.1 (SEQ ID N⁹ 29) e DP 1-25.1 (SEQ ID N= 35) tal como definida na reivindicação 10;

q) DF 1-21.1 (SEQ ID N⁹ 90), DF 1-22.1 (SEQ ID N⁹ 92) e DF

I- 23.1 (SEQ ID N⁹ 95) tal como definida na reivindicação 26;

r) DP 1-21.1 (SEQ ID N² 27) tal como definida na reivindicação 2 e DF 1-22.1 (SEQ ID N² 92) tal como definida na reivindicação 26;

s) DP 1-1 (SEQ ID N⁹ 9) e DP 1-23.1 (SEQ ID N^a 33) tal como definidas na reivindicação 2, DP 1-25.1 (SEQ ID N^a 35) tal como definida na reivindicação 10 e DF 1-1 (SEQ ID N⁹ 72) tal como definida na reivindicação 26;

t) DP 1-1 (SEQ ID N⁹ 9) tal como definida na reivindicação 2, DP 1-25.1 (SEQ ID N² 35) tal como definida na reivindicação 10, DP 1-23.1 (SEQ ID N⁹ 33) tal como definida na reivindicação 2 e DF 1-21.2 (SEQ ID N^a 91) tal como definida na reivindicação 26;

u) DP 1-1 (SEQ ID N² 9) tal como definida na reivindicação 2, DP 1-25.1 (SEQ ID N² 35) tal como definida na reivindicação 10, DP 1-23.1 (SEQ ID N^a 33) tal como definida na reivindicação 2 e DF 1-21.1 (SEQ ID N² 90) tal como definida na reivindicação 26;

w) DP 11-22 (SEQ ID N⁹ 63) e DP 11-25.2 (SEQ ID N⁹ 71) tal como definidas na reivindicação 3, DP 1-21.1 (SEQ ID N² 27) tal como definida na reivindicação 2 e DP 1-22.1 (SEQ ID N⁹ 29) tal como definida na reivindicação 10;

X) DP 11-22 (SEQ ID N² 63), DP 11-25.2 (SEQ ID N² 71) e DP

II- 20.6 (SEQ ID N⁹ 56) tal como definidas na reivindicação 3, DP

J 74 486

IPC-017(Portugal)

-177-

37 - Péptido isolado caracterizado por ser produzido numa célula hospedeira transformada com o ácido nucleico da reivindicação 36.

37) tal como definidas na reivindicação 2;

k) DF 1-21.2 (SEQ ID N² 91) e DF 1-22.1 (SEQ ID N² 92) tal como definidas na reivindicação 26;

l) DF 1-21.1 (SEQ ID N^a 90), DF 1-22.1 (SEQ ID N² 92) e DF

-144-

74 486

IPC-017(Portugal)

37 ) tal como definida na

Arg

Tyr (SEQ ID

Gin Phe

N² 38)

Asn Tyr His

Ala

Vai

Asn Ile

Vai

Gly

Tyr

Ser Asn Ala

Gin

Gly Vai

Asp Tyr;

Asn d') DP 1-28.1 Ile Vai Gly

Tyr (SEQ ID

Ser Asn

N^a 39)

Ala Gin

Gly

Vai

Asp

Tyr Trp

Ile

Vai

Arg

Asn Ser Trp

Asp

Thr Asn

Trp Gly

Asp

Asn

Gly

Tyr;

Arg e') DP 1-28.2 Ile

Vai Gly

Tyr (SEQ ID

Ser Asn

N² 40)

Ala Gin

Gly

Vai

Asp

Tyr Trp

Ile

Vai

Asn

Asp

Thr Asn,

Ser Trp a referida porção do referido péptido tem um índice médio no qual de estimulação de célula T equivalente ou superior ao índice médio de estimulação de célula T do referido péptido

38 - Péptido isolado completo, ou uma sua porção, de um alergeno proteico do género Dermatophagoides, caracterizado por o referido péptido, ou sua porção, compreender pelo menos um epítopo de célula T do referido alergeno proteico, possuindo o referido péptido a fórmula X_n-Y-Z_m, na qual Y é uma sequência de aminoácidos seleccionada de entre o grupo consistindo em:

a) DF 1-21.1 (SEQ ID N² 90 ) tal como definida na reivindicação 26; b) DF 1-21.2 (SEQ ID N² 91 ) tal como definida na reivindicação 26; c) DF 1-22.1 (SEQ ID N^s 92 ) tal como definida na reivindicação 26; d) DF 1-22.2 (SEQ ID N² 93 ) tal como definida na reivindicação 3; e) DF 1-22.4 (SEQ ID N² 94) tal como definida na reivindicação 26; f) DF 1-23.1 (SEQ ID N^E 95 ) tal como def inida na reivindicação 26; g) DF 1-23.2 (SEQ ID N² 96 ) tal como def inida na reivindicação 26; h) DF 1-25.1 (SEQ ID N² 97) tal como definida na

reivindicação 26;

74 486

IPC-017(Portugal)

-152-

i) DF 1-25.2 (SEQ ID N² 98 ) tal como def inida na reivindicação 26; j) DF 1-26.1 (SEQ ID N^s 99 ) tal como definida na reivindicação 26; k) DF 1-27.1 (SEQ ID N² 100) tal como definida na reivindicação 26; 1) DF 1-28.1 (SEQ ID N^a 101) tal como definida na reivindicação 26; m) DF 1-28.2 (SEQ ID N^a 102 ) tal como def inida na reivindicação 26; n) DF 1-1 (SEQ ID N^a 72) tal como definida na reivindicação 26; o) DP 11-20 (SEQ ID N^a 50 ) tal como definida na

reivindicação 26;

P) DP 11-20.1 (SEQ ID N² 51) tal como def inida na reivindicação 26; q) DP 11-20.2 (SEQ ID N^a 52 ) tal como def inida na re ivindicação 26; r) DP 11-20.3 (SEQ ID N² 53 ) tal como definida na reivindicação 26; s) DP 11-20.4 (SEQ ID N² 54) tal como definida na reivindicação 26; t) DP 11-20.5 (SEQ ID N^a 55 ) tal como def inida na reivindicação 26; u) DP 11-20.6 (SEQ ID N² 56 ) tal como definida na reivindicação 3; v) DP II-l (SEQ ID N ² 41) tal como definida : na reivindicação 26; w) DP II-l.1 (SEQ ID N^a 57) tal como definida na reivindicação 26; x) DP II-l.2 (SEQ ID N^a 58) tal como definida na reivindicação 26; y) DP II-2.1 (SEQ ID N² 59 ) tal como definida na reivindicação 26; z) DP II-2.2 (SEQ ID N^a 60 ) tal como definida na reivindicação 26; a' ) DP 11-62.3 (SEQ ID N² 61) tal como definida na

reivindicação 26;

J 74 486

IPC-017(Portugal)

-153-

b^z ) DP 11-21 (SEQ ID N² 62 ) tal como definida na reivindicação 26; c' ) DP 11-22 (SEQ ID N² 63 ) tal como def inida na reivindicação 3; d' ) DP 11-26 (SEQ ID N² 64 ) tal como definida na reivindicação 26; e^z ) DP 11-26. 1 (SEQ ID N^a 65) tal como definida na reivindicação 26; f' ) DP 11-23 (SEQ ID N² 66) tal como definida na reivindicação 26; g') DP 11-23 . 1 (SEQ ID N^a 67) tal como definida na reivindicação 26; h' ) DP 11-24 (SEQ ID N² 68 ) tal como def inida na reivindicação 26; i' ) DP 11-25 (SEQ ID N² 69 ) tal como definida na reivindicação 26; j ') DP 11-25 . 1 (SEQ ID N^a 70) tal como definida na reivindicação 26; k^z ) DP 11-25. 2 (SEQ ID N² 71) tal como definida na reivindicação 3; 1' ) DF II-l (SEQ ID N² 103) tal como def inida na reivindicação 26; m^z ) DF II-2 (SEQ ID N² 104) tal como def inida na reivindicação 26; n^z ) DF 11-13. 1 (SEQ ID N² 105) tal coroo definida na reivindicação 26; o^z ) DF II-3.1 . (SEQ ID N² 106) tal como definida na reivindicação 26; p^z ) DF II-4.E i (SEQ ID N² 107) tal como definida na reivindicação 26; q^z ) DF II-4.2 í (SEQ ID N² 108) tal como def inida na reivindicação 26; r' ) DF 11-15 (SEQ ID N² 109) tal como def inida na reivindicação 26; S ^z ) DF 11-16 (SEQ ID N² 110) tal como def inida na reivindicação 26; t^z ) DF 11-17 (SEQ ID N^a 111) tal como definida na

reivindicação 26;

J 74 486

IPC-017(Portugal)

-154-

U^z ) DF 11-18 (SEQ ID N² 112 ) tal como def inida na reivindicação 26; v^z ) DF 11-19 (SEQ ID N² 113 ) tal como def inida na reivindicação 26; w^z ) DF 11-19. 1 (SEQ ID N ² 114 ) tal como definida na reivindicação 26; x^z ) DF 11-21 (SEQ ID N² 115 ) tal como definida na reivindicação 26; e y^z ) DF 11-22 (SEQ ID N^e 116) , tal como definida na

reivindicação 26, na qual X_n são resíduos de aminoácidos contíguos ao terminal amino de Y na sequência de aminoácidos do referido alergeno proteico, na qual Z_m são resíduos de aminoácidos contíguos ao terminal carboxi de Y na sequência de aminoácidos do referido alergeno proteico, na qual n é 0-30 e na qual m é 0-30.

39 - Péptido isolado completo da reivindicação 38 ou uma sua porção, caracterizado por n=0 e m=0.

40 - Porção de um péptido isolado da reivindicação 38, caracterizada por a porção compreender pelo menos quinze resíduos de aminoácido.

41 - Péptido isolado da reivindicação 38, caracterizado por o péptido compreender até 45 aminoácidos.

42 - Péptido isolado de acordo com a reivindicação 38, completo, ou uma sua porção, caracterizado por não se ligar a imunoglobulina E específica para um alergeno proteico do género Dermatophacroides numa percentagem substancial de indivíduos sensíveis ao alergeno proteico, ou se a ligação do péptido ou da sua porção à referida imunoglobulina E ocorrer, essa ligação não resultar na libertação de mediadores a partir de mastócitos ou basófilos numa percentagem substancial de indivíduos sensíveis ao alergeno proteico.

43 - Péptido isolado de acordo com a reivindicação 38, caracterizado por o péptido se ligar a imunoglobulina E numa

J 74 486

IPC-017(Portugal)

-155- extensão substancialmente menor do que aquela em que o alergeno proteico, do qual o péptido é derivado, se liga à referida imunoglobulina E.

44 - Péptido isolado completo, ou uma sua porção, de um alergeno proteico do género Dermatophacroides, caracterizado por o referido péptido, ou sua porção, compreender pelo menos um epítopo de célula T do referido alergeno proteico, possuindo o referido péptido uma sequência de aminoácidos seleccionada de entre o grupo consistindo em:

a) DF 1-1 (SEQ ID N² ' 72) tal como defi .nida na reivindicação 26; b) DF 1-2. .1 (SEQ ID N ² 73) Glu Leu Asp Leu Arg Ser Leu Arg Thr Val Thr Pro Ile Arg Met Gin 1 5 10 15 Gly Gly Cys Gly Ser Cys Trp Ala Phe Ser Gly; 20 25 c) DF 1-3 (SEQ ID N² 74) Thr Val Thr Pro Ile Arg Met Gin Gly Gly Cys Gly Ser Cys Trp Ala 1 5 10 15 Phe Ser Gly Val Ala Ala Thr Glu Ser Ala Tyr Leu Ala; 20 25 d) DF 1-4 (SEQ ID N² 75) Val Ala Ala Thr Glu Ser Ala Tyr Leu Ala Tyr Arg Asn Thr Ser Leu 1 5 10 15 Asp Leu Ser Glu Gin; 20 e) DF 1-11 (SEQ ID N² 76) Tyr Arg Asn Thr Ser Leu Asp Leu Ser Glu Gin Glu Leu Val Asp Cys 1 5 10 15 Ala Ser Gin His Gly Cys • f 20 f) DF 1-12 (SEQ ID N° 77) Glu Leu Val Asp Cys Ala Ser Gin His Gly Cys His Gly Asp Thr Ile 1 5 10 15 Pro Arg Gly Ile Glu; 20 g) DF 1-5 (SEQ ID N² 78)

-156-

IPC-017(Portugal)

Gly Asp Thr Ile Pro Arg Gly Ile Glu Tyr Ile Gin Gin Asn Gly Val 1 5 10 15 Val Glu Glu Arg Ser Tyr Pro Tyr Val Ala Arg Glu; 20 25 h) DF 1-13 I (SEQ ID N² 79) Gin Asn Gly Val Val Glu Glu Arg Ser Tyr Pro Tyr Val Ala Arg Glu 1 5 10 15 Gin Arg Cys Arg Arg Pro Asn Ser Gin; » 20 25 i) DF 1-14 / (SEQ ID N² 80) Gin Arg Cys Arg Arg Pro Asn Ser Gin His Tyr Gly Ile Ser Asn Tyr 1 5 10 15 cys Gin Ile; j) DF 1-15 (SEQ ID N² 81) His Tyr Gly Ile Ser Asn Tyr Cys Gin Ile Tyr Pro Pro Asp Val Lys 1 5 10 15 Gin Ile Arg Glu Ala Leu; 20 k) DF 1-6 (SEQ ID N² 1 82) Tyr Pro Pro Asp Val Lys Gin Ile Arg Glu Ala Leu Phe Gin Thr His 1 5 10 15 Thr Ala Ile Ala Val Ile Ile Gly; 20 1) DF 1-7 (SEQ ID N² : 83) Thr Gin Thr HÍS Thr Ala Ile Ala Val Ile Ile Gly Ile Lys Asp Leu 1 5 10 15 Arg Ala Phe Gin His Tyr Asp Gly Arg Thr • r 20 25 m) DF 1-8. .1 (SEQ ID N ² 84) Ile Lys Asp Leu Arg Ala Phe Gin His Tyr Asp Gly Arg Thr Ile Ile 1 5 10 15 Gin His Asp Asn Gly Tyr Gin Pro Asn Tyr • / 20 25 n) DF 1-8 (SEQ ID N² 85) Asp Gly Arg Thr Ile Ile Gin His Asp Asn Gly Tyr Gin Pro Asn • r 1 5 10 15 o) DF 1-9 (SEQ ID N² 86) tal como definida na reivindicação

45 - Porção de um péptido isolado de acordo com a reivindicação 44, caracterizada por ter um índice médio de estimulação de célula T equivalente ou superior ao índice médio de estimulação de célula T do referido péptido.

46 - Porção de um péptido isolado de acordo com a reivindicação 44, caracterizada por a porção compreender pelo menos quinze resíduos de aminoácido.

47 - Péptido isolado de acordo com a reivindicação 44, caracterizado por o péptido compreender até 45 aminoácidos.

48 - Péptido isolado de acordo com a reivindicação 44, completo, ou uma sua porção, caracterizado por possuir uma actividade estimuladora de imunoglobulina E mínima.

49 - Péptido isolado de acordo com a reivindicação 44, completo ou uma sua porção, caracterizado por não se ligar a imunoglobulina E específica para um alergeno proteico do género Dermatophaqoides numa percentagem substancial de indivíduos sensíveis ao alergeno proteico, ou se a ligação do péptido ou da sua porção à referida imunoglobulina E ocorrer, essa ligação não resultar na libertação de mediadores a partir de mastócitos ou basófilos numa percentagem substancial de indivíduos sensíveis ao alergeno proteico.

50 - Péptido isolado de acordo com a reivindicação 44, completo, ou uma sua porção, caracterizado por se ligar a imunoglobulina E numa extensão substancialmente menor do que aquela em que o alergeno proteico, do qual o péptido é derivado, se liga à referida imunoglobulina E.

51 - Péptido isolado de acordo com a reivindicação 44, completo ou uma sua porção, caracterizado por, num indivíduo sensível a ácaros do pó doméstico ao qual é administrado,

Ό 74 486

IPC-017(Portugal)

-162- modificar a resposta alérgica do indivíduo a um alergeno de ácaros do pó doméstico.

52 - Ácido nucleico isolado, ou o equivalente funcional do referido ácido nucleico, caracterizado por possuir uma sequência que codifica um péptido da reivindicação 44 completo ou uma sua porção, ou uma sequência funcionalmente equivalente.

53 - Péptido isolado caracterizado por ser cruzadamente reactivo, de um ponto de vista imunológico, com anticorpos específicos para um péptido da reivindicação 44 completo ou para uma sua porção.

54 - Péptido isolado caracterizado por ser cruzadamente reactivo, de um ponto de vista imunológico, com células T reactivas com um péptido da reivindicação 44 completo ou com uma sua porção.

55 - Péptido isolado de um alergeno proteico do género Dermatophaqoides, caracterizado por o referido péptido ser seleccionado de entre o grupo consistindo em:

a) DF 1-1 (SEQ ID N² 72) tal como definida na reivindicação 26; b) DF 1-21.1 (SEQ ID N² 90) tal como definida na reivindicação 26; c) DF 1-22.1 (SEQ ID N² 92 ) tal como definida na reivindicação 26; d) DF 1-25.1 (SEQ ID N² 97 ) tal como definida na reivindicação 26; e) DF 1-23.1 (SEQ ID N^a 95 ) tal como def inida na reivindicação 26; f) DF 1-9 (SEQ ID N^a 86) tal como definida na reivindicação 30; g) DF 1-21.2 (SEQ ID N² 91) tal como def inida na reivindicação 26; h) DP II-l (SEQ ID N² - 41) tal como definida na reivindicação 26; i) DP II-1.2 (SEQ ID N² 58 ) tal como definida na

74 486

IPC-017(Portugal)

-163- reivindicação

56, caracterizado por pelo menos um dos resíduos de aminoácido que liga ao receptor de célula T, mas que não é essencial para essa ligação, estar substituído.