RS20080197A - Upotreba derivata pirazola/4,3-d/pirimidin-5-il) kao inhibitora pde5 - Google Patents

Upotreba derivata pirazola/4,3-d/pirimidin-5-il) kao inhibitora pde5

Info

Publication number
RS20080197A
RS20080197A RSP-2008/0197A RSP20080197A RS20080197A RS 20080197 A RS20080197 A RS 20080197A RS P20080197 A RSP20080197 A RS P20080197A RS 20080197 A RS20080197 A RS 20080197A
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
compound
condition
carboxypiperidine
another embodiment
test
Prior art date
Application number
RSP-2008/0197A
Other languages
English (en)
Inventor
Michael Brent Tollefson
Original Assignee
Pfizer Products Inc.,
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Pfizer Products Inc., filed Critical Pfizer Products Inc.,
Publication of RS20080197A publication Critical patent/RS20080197A/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/02—Stomatological preparations, e.g. drugs for caries, aphtae, periodontitis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/02—Drugs for disorders of the urinary system of urine or of the urinary tract, e.g. urine acidifiers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/08—Drugs for disorders of the urinary system of the prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/06—Antiabortive agents; Labour repressants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/08—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for gonadal disorders or for enhancing fertility, e.g. inducers of ovulation or of spermatogenesis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/10—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for impotence
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/04—Antipruritics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/14—Drugs for dermatological disorders for baldness or alopecia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/04—Drugs for skeletal disorders for non-specific disorders of the connective tissue
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/02—Muscle relaxants, e.g. for tetanus or cramps
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/04—Centrally acting analgesics, e.g. opioids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/08—Antiepileptics; Anticonvulsants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/08—Antiepileptics; Anticonvulsants
    • A61P25/10—Antiepileptics; Anticonvulsants for petit-mal
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/08—Antiepileptics; Anticonvulsants
    • A61P25/12—Antiepileptics; Anticonvulsants for grand-mal
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/20—Hypnotics; Sedatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/22—Anxiolytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/24—Antidepressants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/30—Drugs for disorders of the nervous system for treating abuse or dependence
    • A61P25/32—Alcohol-abuse
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A61P27/06—Antiglaucoma agents or miotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A61P27/12—Ophthalmic agents for cataracts
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/16—Otologicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/14—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/48—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones
    • A61P5/50—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones for increasing or potentiating the activity of insulin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/08—Vasodilators for multiple indications
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/14—Vasoprotectives; Antihaemorrhoidals; Drugs for varicose therapy; Capillary stabilisers

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Gynecology & Obstetrics (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Addiction (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Psychology (AREA)
  • Pregnancy & Childbirth (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Oncology (AREA)

Abstract

Predmetni pronalazak se odnosi na (I) l-(l-(2-etoksietil)-3-etil-7-(4-metilpiridin- 2-ilamino)-l H-pirazolo[4,3-d|pirimidin-5-il)piperidin-4-karboksilnu kiselinu i njene soli. Pronalazak dalje obuhvata farmaceutske kompozicije, postupke lečenja i postupke siteze koji se odnose na Formulu (I). Formula (I) je upotrebljena za inhibiciju PDE5 enzima.

Description

UPOTREBA DERIVATA PIRAZOLO[4,3-D]PIRIMIDIN-5-IL) KAO INHIBITORA
PDE5
OBLAST PRONALASKA
Ovaj pronalazak se odnosi uglavnom na l-(l-(2-etoksietil)-3-etil-7-(4-metilpiridin- 2-ilamino)-l H-pirazolo[4,3-d|pirimidin-5-il)piperidin-4-karboksilnu kiselinu i njene soli. Ovaj pronalazak se odnosi i na farmaceutske kompozicije kojie sadrže ovo jedinjenje ili njegove soli, metode lečenja koji koriste ovo jedinjenje ili njegove soli i metode za dobijanje ovog jedinjenja ili njegovih soli. Uopšteno, ovo jedinjenje i njegove soli inhibiraju enzim fosfodiesterazu tipa 5 specifičnu za ciklični guanil monofosfat ("PDE5" od phosphodiesterase enzvme type 5)
OSNOVA PRONALASKA
Hipertenzija je stanje vezano, pored drugih fizioloških problema, sa povećanim rizikom udara, infarktom miokarda, atrijalnom fibrilacijom, otkazivanjem srca, oboljenjem perifernih krvnih sudova i oštećenjem bubrega..1 pored brojnih lekova dostupnih u različitim farmaceutskim kategorijama kojima se lece hipertenzija i srodni fiziološki problemi, svi pacijenti ne odgovaraju na ove lekove onoliko efikasno ili bezbedno koliko bi bilo poželjno. Potrebno je još terapeutskih agenasa za lečenje hipertenzije i srodnih stanja.
U literaturi je objavljena jedna klasa terapeutskih agenasa korisnih za lečenje hipertenzije. To su inhibitori PDE5 enzima ("PDE5 inhibitori"). Uopšteno, epitelijalne ćelije krvnih sudova luče oksid azota koji deluje na glatku muskulaturu krvnih sudova i dovodi do aktiviranja guanilat ciklaze i akumulacije cikličnog guanozin monofosfata ("cGMP")-Akumulacija cGMP izaziva relaksaciju mišića i širenje krvnih sudova , što dovodi do smanjenja krvnog pritiska. Fosfodiesteraze specifične za cGMP inaktiviraju cGMP hidrolizom u guanozin 5'-monofosfat ("GMP"). Jedna od fosfodiesteraza cGMP koja učestvuje u inaktivaciji cGMP je enzim PDE5. Inhibitori enzima PDE5 smanjuju brzinu hidrolize cGMP. Ovo smanjenje hidrolize cGMP jača delovanje oksida azota koji dovodi do smanjenja krvnog pritiska.
U literaturi su objavljena jedinjenja koja su inhibitori PDE5. Na primer, WO2005049616 prikazuje jednu klasu pirazolo[4,3-d]pirimidinil jedinjenja. WO2005049617 prikazuje drugu klasu pirazolo[4,3-d]pirimidinil jedinjenja. V/02004096810 prikazuje drugu klasu pirazolo[4,3-d]pirimidinil jedinjenja. EP 1348707 prikazuje drugu klasu pirazolo[4,3-djpirimidinil jedinjenja.
Poželjno je identifikovanje još jedinjenja koja su inhibitori PDE5. Ova jedinjenja se mogu koristiti za lečenje osoba koje pate od, ili su pdložna hipertenziji i/ili srodnim fiziološkim problemima i time proširio opseg raspoloživih tretmana takvih osoba.
REZIME PRONALASKA
U jednom obliku, pronalazak sadrži l-(l-(2-etoksietil)-3-etil-7-(4-metilpiridin-2-ilamino)-l H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)piperidin-4-karboksilnu kiselinu i njene farmaceutski prihvatljive soli.
U jednom drugom obliku, pronalazak obuhvata farmaceutsko jedinjenje koje sadrži 1-(1 .-(2-etoksietil)-3-etil-7-(4-metilpiridin-2-ilamino)-lH-pirazolo[4,3-d] pirimidin-5-il)piperidin-4-karboksilnu kiselinu, ili njenu farmaceutski prihvatljivu so i farmaceutski prihvatljiv nosač.
U jednom drugom obliku, pronalazak obuhvata farmaceutsko jedinjenje koje sadrži 1-(l-(2-etoksietil)-3-etil-7-(4-metilpiridin-2-ilamino)-lH-pirazolo[4,3-d] pirimidin-5-il)piperidin-4-karboksilnu kiselinu, ili njenu farmaceutski prihvatljivu so, jedan ili više terapeutskih agenasa i farmaceutski prihvatljiv nosač
U jednom drugom obliku, pronalazak sadrži metode za tretman stanja nekog subjekta davanjem tom subjektu terapeutski efikasne količine l-(l-(2-etoksietil)-3-etil-7-(4-metilpiridin-2-ilamino)-lH-pirazoio(4,3-d]pirimidin-5-il)piperidin-4-karboksilne kiseline, ili njene farmaceutski prihvatljive soli. Stanja koja se mogu tretirati u skladu sa ovim pronalaskom obuhvataju kardiovaskularna stanja, metabolička stanja, stanja centralnog nervnog sistema, pulmonarna stanja, seksualnu disfunkciju, bolove i disfunkciju bubrega.
U jednom drugom obliku, pronalazak sadrži metode za tretman stanja nekog subjekta davanjem tom subjektu terapeutski efikasne količine l-(l-(2-ctoksietil)-3-etil-7-(4-metilpiridin-2-ilamino)-lH-pirazolo(4,3-d]pirimidin-5-il)piperidin-4-karboksilne kiseline, ili njene farmaceutski prihvatljive soli. jedan ili više dodatnih terapeutskih agenasa i farmaceutski prihvatljiv nosač. Stanja koja se mogu tretirati u skladu sa ovim pronalaskom obuhvataju kardiovaskularna stanja, metabolička stanja, stanja centralnog nervnog sistema, pulmonarna stanja, seksualnu disfunkciju, bolove i disfunkciju bubrega.
U jednom drugom obliku, pronalazak obuhvata upotrebu l-(l-(2-etoksietil)-3-etil-7-(4-metilpiridin-2-ilamino)-lH-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)piperidin-4-karboksilne kiseline, ili njene farmaceutski prihvatljive soli, za dobijanje medikamenta za tretiranje stanja kod nekog subjekta. Ta stanja obuhvataju kardiovaskularna stanja, metabolička stanja, stanja centralnog nervnog sistema, pulmonarna stanja, seksualnudisfunkciju, bolove i disfunkciju bubrega.
U jednom drugom obliku, pronalazak sadrži metode za dobijanje l-(l-(2-etoksietil)-3-etil-7-(4-metilpiridin-2-ilamino)-lH-pirazolo(4,3-d]pirimidin-5-il)piperidin-4-karboksilne kiseline, ili njene farmaceutski prihvatljive soli.
KRATAK OPIS SLIKA
Slika1 prikazuje grafikon koji ilustruje efekt na krvni pritisak ponovljenog oralnog davanja l-(l-(2-etoksietil)-3-etil-7-(4-metilpiridin-2-ilamino)-lH-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)piperidin-4-karboksilne kiseline (1 mg/kg dnevne oralne doze), same i u kombinaciji sa enalaprilom, u modelu svesnih, spontano hipertenzivnih pacova.
Slika2 prikazuje grafikon koji ilustruje efekt na količinu cGMP u 24-časovnom urinu ponovljenog oralnog davanja l-(l-(2-etoksietil)-3-etil-7-(4-metilpiridin-2-ilamino)-lH-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)piperidin-4-karboksilne kiseline (1 mg/kg dnevne oralne doze), same ili u kombinaciji sa enalaprilom, u modelu svesnih, spontano hipertenzivnih pacova.
DETALJAN OPIS PRONALASKA
Namena ovih detaljnih oblika pronalaska je samo da upozna druge stručnjake sa pronalascima podnete Prijave, njenim principima i praktičnom primenom, tako da drugi stručnjaci mogu da prilagode i primene pronalaske u njihovim brojnim oblicima, da bi mogli najbolje da odgovore zahtevima neke odredjene upotrebe. Prema tome, ovi pronalasci nisu ograničeni na oblike opisane u ovoj specifikaciji, i mogu se modifikovati na različite načine.
Skraćenice i definicije
Kad se radi o 'H NMR, simbol "8" odnosi se na 'H NMR hemijsko pomeranje.
Kad se radi o 'H NMR, skraćenica "br" odnosi se na široki signal 'H NMR.
Kad se radi o H NMR, skraćenica "d" odnosi se na širinu maksimuma'H NMR
Kad sc radi o 511 NMR, skraćenica "m" odnosi se na maksimum multipleta 'H NMR
Kad se radi o 'H NMR, skraćenica "q" odnosi se na maksimum kvarteta "H NMR.
Kad se radi o 'H NMR, skraćenica "s" odnosi se na maksimum singleta 'H NMR
Kad se radi o 'H NMR, skraćenica "t" odnosi se na maksimum tripleta 'H NMR.
Skraćenica "BSA" odnosi se na albumin goveđeg seruma (bovine serum albumin).
Skraćenica "CDI" odnosi se na karbodiimid.
Skraćenica "DMSO" odnosi se na dimetilsulfoksid.
Skraćenica "DBAD" odnosi se na dibenzilazodikarboksilat.
Skraćenica "EDTA" odnosi se na etilendiamintetracetat.
Skraćenica "HEPES" odnosi se na 4-(2-hidroksietil)-l-piperazinetansulfonsku kiselinu. Skraćenica "HRMS" (od High Resolution Mass Spectroscopv) odnosi se na Masenu spektroskopiju velike moći razdvajanja, (skeniranje pozitivnom elektrosprej jonizacijom)
Skraćenica "iPrOAc" odnosi se na izopropil acetat.
Skraćenica "LCMS" (od Liquid Chromatographv Mass Spectroscopy) odnosi se na Masenu spektroskopiju tečnom hromatografijom
Skraćenica "m/z" odnosi se na maksimum masenog spektra.
Skraćenica "NaN(TMS)2" odnosi se na natrijum heksarnetildisilazid.
Skraćenica "pfu" odnosi se na jedinice koje formiraju plake (plaque-forming units).
Skraćenica "Pt/C" odnosi se na platinu na ugljeniku
Skraćenica "PMSF" odnosi se na fenilmetilsulfonil fluorid.
Skraćenica "SPA" odnosi se na scintilacioni test.
Skraćenica "THF" odnosi se na tetrahidrofuran.
Skraćenica "Tris-HCl" odnosi se na Tris(hidroksimetil)aminometan hidrohlorid.
Termin"stanje uslovljeno cGMP-om" odnosi se na stanje uslovljeno cGMP-om, bilo da nastaje neposrednom regulacijom pomoću cGMP, bilo posrednom regulacijom preko cGMP kao komponente signalnog puta.
Termin"stanje uslovljeno PDE5 " odnosi se na svako stanje uslovljeno enzimom PDE5.
Termin"subjekt sa hipertenzijom" odnosi se na osobu sa hipertenzijom, koja pati od dejstva povišenog krvnog pritiska ili je podložna hipertenziji ako se ne tretira tako da spreči ili kontroliše takvu hipertenziju.
Termin"farmaceutski prihvatljiv nosač" odnosi se na nosač koji je kompatibilan sa ostalim sastojcima preparata i neškodljiv je za subjekta. Takvi nosači mogu biti farmaceutski prihvatljiv materijal, kompozicija ili nosač kao što su tečan ili čvrst filtar, razblaživač, inertni punjač, rastvarač ili materijal kapsula, koji se koriste za nošenje ili transport hemijskog agensa. Najbolja kompozicija zavisi od načina primene.
Termin"terapijski efikasna količina" odnosi se na onu količinu leka ili farmaceutskog agensa koji će da dovede do biološkog ili medicinskog odgovora tkiva, sistema ili životinje, koji je tražio istraživač ili kliničar.
Termin"lečenje" (i odgovarajući termini "tretman" i "tretiranje") obuhvataju palijativno, restorativno i preventivno tretiranje subjekta. Termin"palijativno lečenje" odnosi se na tretman koji olakšava ili smanjuje učinak ili intenzitet stanja subjekta bez izlečenja oboljenja. Termin"preventivno lečenje" (i odgovarajući termin "profilaktičko lečenje") odnosi se ili na sprečavanje nastajanja pretklinički očiglednog ukupnog stanja ili na sprečavanje nastajanja pretklinički očiglednog stupnja oboljenja subjekta. Termin"restorativno lečenje" odnosi se na tretman koji zaustavlja napredovanje oboljenja ili smanjuje njegove patološke manifestacije ili u potpunosti eliminiše oboljenje subjekta.
B. Jedinjenje karboksipiperidina
U jednom obliku, sadašnji pronalazak obuhvata jedinjenje strukture:
i soli (naročito farmaceutski prihvatljivih soli) ovog jedinjenja. Odgovarajuće ime ovog jedinjenja je l-(l-(2-etoksietil)-3-etil-7-(4-metilpiridin-2-ilamino)-lH-pirazolo(4,3-d]pirimidin-5-il)piperidin-4-karboksilna kiselina. Ukoliko nije drugačije naznačeno, u ovoj prijavi naziv "Jedinjenje karboksipiperidina" podrazumeva ovo jedinjenje, sve tautomerne oblike jedinjenja i farmaceutski prihvatljive soli ovog jedinjenja i njhove tautomerne oblike. Jedinjenje karboksipiperidina se koristi kao, na primer, inhibitor enzima PDE5.
U jednom obliku, sadašnji pronalazak je usmeren na oblik slobodne kiseline jedinjenja karboksipiperidina
U jednom drugom obliku, sadašnji pronalazak je usmeren na farmaceutski prihvatljive soli jedinjenja karboksipiperidina.
WO2004096810 prikazuje rod jedinjenja koja generički obuhvataju jedinjenje karboksipiperidina. Iako VVO2004096810 daje primere specifičnih jedinjenja u okviru ovog roda, on ne isključuje jedinjenje karboksipiperidina. Medjutim, jedinjenje karboksipiperidina ima najmanje jednu ili više različitih osobina u odnosu na specifična jedinjenja opisana u VVO2004096810. Ove osobine uključuju, na primer, efikasnost (npr. veću moćin vitro, ex vivoi/iliin vivo),bezbednost ) npr., veću selektivnost i/ili manju toksičnost), farmakokinetičke osobine (npr., Cmax, duži poluživot i/ili niži klirens) i proizvodne osobine (npr., lakoća sinteze i/ili dostupnost polaznih materijala).
C. Soli
Kao što je navedeno, jedinjenje karboksipiperidina može biti ili u obliku slobodne kiseline ili u obliku soli. Različiti oblici soli jedinjenja karboksipiperidina mogu imati medjusobno različite fizičke osobine. Shodno tome, izbor specifičnog oblika soli jedinjenja karboksipiperidina može da utiče na stabilnost jedinjenja (na primer u datom opsegu temperatura i/ili vlažnosti), rastvorljivost jedinjenja i druge fizičke osobine jedinjenja koje mogu uticati na proizvedeni lek. Osim toga, soli jedinjenja karboksipiperidina će uglavnom imati veću rastvorljivost u vodi nego odgovarajući oblik slobodne kisline.
Kada se so jedinjenja karboksipiperidina daje ljudima ili životinjama (vs., na primer, primeni zain vitrotestiranje), poželjno je da so bude farmaceutski prihvatljiva so. Termin'Tarmaceutski prihvatljiva so " odnosi se na so koja se uglavnom smatra pogodnom za humanu upotrebu (naročito ne-toksična so). Farmaceutski prihvatljive soli uključuju soli dobijene dodavanjem baze ili kiseline odgovarajućoj slobodnoj kiselini. Ove soli se tipično mogu dobiti uobičajenim načinom iz jedinjenja karboksipiperidina.
Ilustrativan primer soli dobijenih dodavanjem baze jedinjenju karboksipiperidina uključuju metalne soli i organske soli. Metalne soli uključuju soli alkalnih metala (grupa Ia), kao što su soli litijuma, natrijuma i kalijuma, soli zemnoalkalnih metala (grupa Ha), kao što su soli kalcijuma i magnezijuma, i druge fiziološki prihvatljive metalne soli, kao što su soli aluminijuma i cinka. Organske soli uključuju soli dobijene od sekundarnih, tercijarnih i kvaternarnih amina (kao što su trometamin, dietilamin, trietilamin, etanolamin, dietanolamin, trietanolamin, etilendiamin, N,N'-dibenziletiIendiamin, meglumin (N-metilglukamin), prokain, hloroprokain, i holin) i soli dobijene sa baznim aminokiselinama (kao što su arginin, lizin and histidin).
D. Tautomeri
Termin jedinjenje karboksipiperidina (kao i odgovarajuća struktura) se u ovoj prijavi koristi tako da obuhvati sve tautomerne izomere l-(l-(2-etoksietil)-3-etil-7-(4-metilpiridin-2-ilamino)-lH-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)piperidin-4-karboksilne kiseline. Reprezentativni tautomerni izomeri jedinjenja karboksipiperidina prikazani su niže:
E. Metode lečenja
Ovaj pronalazak dalje sadrži metode za tretiranje stanja subjekta koji ima ili je podložan sticanju takvog stanja, davanjem subjektu terapeutski efikasne količine jedinjenja karboksipiperidina. U jednom obliku, tretman je preventivan tretman, u jednom drugom obliku, tretman je palijativan tretman. U nekom drugom obliku, tretman je restorativan tretman.
U jednom drugom obliku, stanje je uslovljeno PDE5-om.
U jednom drugom obliku, stanje je uslovljeno cGMP-om. Stanje u kome je, na primer, nedovoljna količina cGMP glavna komponenta, i čiji su proizvodnja ili dejstvo modulisani kao odgovor na PDE5 enzim, će se stoga smatrati poremećajem u kome posreduje cGMP.
U jednom drugom obliku, stanje je odabrano iz grupe koju čine kardiovaskularna stanja, metabolička stanja, stanja centralnog nervnog sistema, pulmonarna stanja, seksualna disfunkcija, bolovi i disfunkcija bubrega.
U jednom drugom obliku, stanje je kardiovaskularno oboljenje odabrano iz grupe koju čine hipertenzija (uključujući esencijalnu hipertenziju, pulmonarnu hipertenziju, pulmonarnu arterijsku hipertenziju, sekundarnu hipertenziju, izolovanu sistolnu hipertenziju, hipertenziju vezanu za dijabetes, hipertenziju vezanu za aterosklerozu, i renovaskularnu hipertenziju); komplikacije povezane sa hipertenzijom (uključujući vaskularno organsko oštećenje, kongestivno otkazivanje srca, angina, udar, glaukom i oštećena funkcija bubrega); valvularna insuficijencija; stabilna, nestabilna i promenljiva (Prinzmetal) angina; oboljenje perifernih krvnih sudova; infarkt miokarda; udar (uključujući oporavak od udara); tromboembolije; restenoza; arterioskleroza; ateroskleroza; angiostenoza posle bajpasa; angioplastika (uključujući perkutanu transluminalnu angioplastiku i perkutanu transluminalnu koronarnu angioplastiku); hiperlipidemija; hipoksična vazokonstrikcija; vaskulitis (uključujući Kawasaki-ev sindrom); otkazivanje srca (uključujući kongestivno otkazivanje srca, dekompćnzovano otkazivanje srca, sistolno otkazivanje srca, dijastolno otkazivanje srca, otkazivanje leve komore srca, otkazivanje desne komore srca, i hipertrofiju leve komore); Rainaudov fenomen; preeklampsija; trudnoća,-indukovan visoki krvni pritisak; kardiomiopatija; i arterijski okluzivni poremećaji.
U jednom drugom obliku, stanje je hipertenzija.
U jednom drugom obliku, stanje je pulmonarna hipertenzija.
U jednom drugom obliku, stanje je pulmonarna arterijska hipertenzija.
U jednom drugom obliku, stanje je otkazivanje srca.
U jednom drugom obliku, stanje je dijastolno otkazivanje srca.
U jednom drugom obliku, stanje je sistolno otkazivanje srca.
U jednom drugom obliku, stanje je angina.
U jednom drugom obliku, stanje je tromboza.
U jednom drugom obliku, stanje je udar (uključujući oporavak od udara)
U jednom drugom obliku, stanje je stanje vezano za disfunkciju endotela (uključujući stanje odabrano iz grupe koju čine aterosklerotična oštećenja, ishemija miokarda, periferna ishemia, valvularna insuficijencija, pulmonarna arterijska hipertenzija, angina, ugrušci, vaskularne komplikacije posle vaskularnog bajpasa, vaskularna dilatacija, vaskularna repermeabilizacija, i transplantacija srca).
U jednom drugom obliku, stanje je metaboličko stanje odabrano iz grupe koju čine Sindrom X; dijabetes (uključujući dijabetes tipa I i tipa II); rezistencija na insulin; sindromi insulinske rezistencije (uključujući dijabetes, poremećaje insulinskog receptora, Rabson-Mendenhal-ov sindrom, leprehaunizam, Kobberling-Dunnigan-ov sindrom, Seip-ov sindrom, Lawrence-ov sindrom, Cushing-ov sindrom, akromegalija, feohomocitom, glukagonom, primarni aldosteronizam, somatostatinom, Lipoatrofični dijabetes, dijabetes indukovan toksinom p-ćelija, Grave-ovo oboljenje, Hashimoto-ov tiroiditis i idiopatska Addison-ova bolest); smanjena tolerancija na glukozu; dijabetične komplikacije (uključujući dijabetičnu gangrenu, dijabetičnu arteropatiju, dijabetičnu nefropatiju, dijabetičnu glomerulosklerozu, dijabetičnu dermatopatiju, dijabetičnu neuropatiju, perifernu dijabetičnu neuropatiju, dijabetičnu kataraktu i dijabetičnu retinopatiju); hiperglikemija; i gojaznost.
U jednom drugom obliku, stanje je insulinska rezistencija.
U jednom drugom obliku, stanje je nefropatija.
U jednom drugom obliku, stanje je stanje centralnog nervnog sistema odabrano iz grupe koju čine vaskularna demencija, kraniocerebralna trauma; cerebralni infarkt; cerebrovaskularni insult; demencija; poremećaji koncentracije; Alzheimer-ova bolest; Parkinson-ova bolest; amiolateralna skleroza; Huntington-ova bolest; multipla skleroza; Creutzfeld-Jacob-ova bolest; anksioznost; depresija; poremećaji spavanja i migrene.
U jednom drugom obliku, stanje je Alzheimer-ova bolest
U jednom drugom obliku, stanje je Parkinson-ova bolest.
U jednom drugom obliku, stanje je amiolateralna skleroza.
U jednom drugom obliku, stanje je poremećaj koncentracije.
U jednom drugom obliku, stanje je pulmonarno stanje odabrano iz grupe koju čine astma; akutni respiratorni distress; cistična fibroza; bronhitis; i hronična reverzibilna pulmonarna obstrukcija.
U jednom drugom obliku, stanje je bol. U jednom drugom obliku, stanje je akutni bol. Primeri akutnog bola uključuju akutni bol vezan za povrede ili hirurške intervencije. U jednom drugom obliku, stanje je hroničan bol.. Primeri hroničnog bola uključuju neuropatske bolove (uključujući postherpetičnu neuralgiju i bol vezan za periferalne neuropatije i neuropatije kancera ili dijabetesa), sindrom karpalng tunela, bol u leđima (uključujući bol vezan za diskusherniju ili prelomljene pršljenove ili nepravilnosti u hodu, sakroilične zglobove, paraspinalne mišiće ili posteriorni longitudinalni ligament), glavobolju, bolove kod kancera (uključujući bolove vezane za tumore, kao što su bol u kostima, glavobolja, facijalni bolovi ili trbušni bolovi) ili bolovi vezani za terapiju kancera (uključujući posthemoterapijski sindrom, sindrom hroničnih postoperativnih bolova, postradijacijski sindrom, bol vezan za imunoterapiju, ili bolove vezane za hormonsku terapiju), bolove kod artritisa (uključujući bolove kod osteoartritisa i reumatoidnog artritisa), hronične postoperativne bolove, postherpetičnu neuralgiju, trigeminalnu neuralgiju, HIV neuropatiju, fantomske bolove u udovima, centralni bol posle udara i bolove vezane za hronični alkoholizam, hipotiroidizam, uremiju, multiplu sklerozu, povrede kičmene moždine, Parkinson-ovu bolest, epilepsiju i vitaminsku deficijenciju. U jednom drugom obliku, stanje je neodređeni bol (uključujući bolove kod trauma centralnog nervnog sistema, oštećenja/iščašenja, opekotine, infarkt miokarda i akutni pankreatitis, postoperativne bolove (bolovi posle bilo kog hirurškog zahvata), posttraumatski bolovi, bubrežne kolike, bolovi kod kancera i bolovi u leđima). U jednom drugom obliku, stanje je bol vezan za inflamaciju (uključujući artritične bolove (kao što su osteoartritis i bolovi kod reumatoidnih oboljenja), ankilozni spondilitis, trbušni bolovi (uključujući inflamatorno oboljenje creva, funkcionalni crevni poremećaj, gastro-ezofagijalni refluks, dispepsiju, sindrom nervoznih creva, sindrom funkcionalnih abdominalnih bolova, Crohn-ovu bolest, ileitis, ulcerozni kolitis, bolove kod dismenoreje, cistitisa, pankreatitisa i karlični bolovi). U jednom drugom obliku, stanje su bolovi koji nastaju usled mišićno-skeletnih poremećaja (uključujući mijalgiju, fibromijalgiju, spondilitis, sero-negativne (ne-reumatoidne) arteropatije, nezglobni reumatizam, distrofinopatiju, glikogenolizu, polimiozitis i piomiozitis). U jednom drugom obliku, stanje je odabrano iz grupe koju čine srčani i vaskularni bolovi (uključujući bol prouzrokovan anginom, infarktom miokarda, mitralnom stenozom, perikarditisom, Ravnaud-ovim fenomenom, skleredomom i ishemijom skeletnih mišića). U jednom drugom obliku, stanje je stanje odabrano iz grupe koju čine bolovi glave (uključujući migrene kao što migrene sa aurom i migrene bez aure), razne glavobolje, glavobolja kao kod pritiska, glavobolja izazvana raznim uzrocima, glavobolja vezana za vaskularne poremećaje; orofacijalni bolovi, uključujući zubobolju, bol u ušima, sindrom suvih usta i temporomandibularni miofascijalni bol).
U jednom drugom obliku, stanje je seksualna disfunkcija (uključujući seksualnu disfunkciju odabranu iz grupe koju čine impotencija (organska ili psihička); muška disfunkcija vezana za erekciju; disfunkcija klitorisa; seksualna disfunkcija posle povreda kičmene moždine; ženski seksualni poremećaji uzbuđivanja; seksualna disfunkcija ženskog orgazma; poremećaj ženski seksualni bolni poremećaj; i poremećaj ženske hipoaktivne seksualne želje).
U jednom drugom obliku, stanje je muška disfunkcija erekcije.
U jednom drugom obliku, stanje je disfunkcija bubrega (uključujući renalne disfunkcije odabrane iz grupe koju čine akutno otkazivanje bubrega, hronično otkazivanje bubrega; nefropatija (kao što je dijabetička nefropatija); tubulointersticijalni poremećaji; glomerulopatija; i nefritis. U jednom drugom obliku, stanje je kancerozno stanje odabrano iz grupe koju čine kancero kaheksija, metastaze tumora i neoplazija.
U jednom drugom obliku, stanje je osteoporoza
U jednom drugom obliku, stanje je gastrointestinalno stanje odabrano iz grupe koju čine rskavičavi ezofagus; analna fisura; poremećaj rada creva; sindrom pojačanog nadražaja creva i hemoroidi. U jednom drugom obliku, stanje je urološko stanje odabrano iz grupe koju čine opstrukcija pražnjenja bešike; inkontinencija i benigna hiperplazija prostate.
U jednom drugom obliku, stanje je stanje kože, odabrano od psorijaze; urtikarije i nekroze kože..
U jednom drugom obliku, stanje je oftalmološko stanje odabrano od oboljenja retine; degeneracije makule i glaukoma.
U jednom drugom obliku, stanje je netolerancija nitrata..
U jednom drugom obliku, stanje je ćelavost.
U jednom drugom obliku, stanje je ginekološko stanje odabrano iz grupe koju čine dismenoreje (primarne i sekundarne); neplodnost i prevremeni trudovi. U jednom drugom obliku, stanje je sekundarna dismenoreja.
U jednom drugom obliku, ovaj pronalazak dalje obuhvata metode za indukovanje gubitka težine subjekta davanjem subjektu terapijski efikasne količine jedinjenja karboksipiperidina
F. Subjekti
Jedinjenje karboksipiperidina (uključujući odgovarajuće metode lečenja i farmaceutske kompozicije) je pogodno za primenu, na primer, u sisarskim subjektima, kao što su ljudi, drugi primati (npr., majmuni, šimpanze), kućne životinje (npr., psi, mačke, konji), domaće životinje (npr., koze, ovce, svinje, goveda), laboratorijske životinje (npr., miševi, pacovi), divlje životinje i životinje iz zoološkog vrta (npr. vukovi, medvedi, jeleni). U jednom obliku, subjekt je sisarski subjekt. U jednom drugom obliku, subjekt je čovek..
G. Pretpostavljeni mehanizam
Bez oslanjanja na neku određenu teoriju, pretpostavljeno je da je jedinjenje karboksipiperidina inhibitor enzima PDE5. Dalje je pretpostavljeno da jedinjenje karboksipiperidina inhibira delovanje enzima PDE5, čime dovodi do povećanja nivoa intracelularnog cGMP. Ovaj porast nivoa intracelulamog cGMP smanjuje intracelularno signalizovanje pomoću kalcijuma, što sa svoje strane dovodi do relaksacije glatkih mišića krvnih sudova i smanjenja krvnog pritiska.
H. Način davanja i doziranje
Jedinjenje karboksipiperidina se obično daje u terapijski efikasnoj količini. U jednom obliku, jedinjenje karboksipiperidina se daje u količini koja inhibira enzim PDE5. Jedinjenje karboksipiperidina može se dati bilo na koji pogodan način u obliku farmaceutskog preparata prilagođenog tom načinu, i u dozi koja će biti efikasna u nameravanom tretmanu. Terapijski efikasne doze jedinjenja karboksipiperidina potrebne da spreče ili zaustave napredovanje medicinskog stanja ili da ga leče lako se utvrđuju jednim od uobičajenih načina korišćenjem pretkliničkih i kliničkih pristupa poznatih medicinskoj struci.
Režim doziranja datog jedinjenja i/ili preparata koji ga sadrže zasniva se na nizu faktora, uključujući tip, starost, telesnu težinu, pol i medicinsko stanje pacijenta, ozbiljnost stanja, način primene i aktivnosti jedinjenja koje se koristi. Stoga će režim doziranja varirati zavisno od specifičnosti situacije. Za tretiranje navedenih stanja korisne su doze jedinjenja karboksipiperidina od oko 0,001 mg do oko 100 mg po kilogramu telesne težine na dan. U jednom obliku, ukupna dnevna doza jedinjenja karboksipiperidina (data odjednom ili podeljena) je tipično od oko 0,001 mg/kg do oko 20 mg/kg (t.j. mg jedinjenja/kg telesne težine). U jednom drugom obliku, ukupna dnevna doza jedinjenja karboksipiperidina je od oko 0,005 mg/kg do oko 10 mg/kg. U jednom drugom obliku, ukupna dnevna doza jedinjenja karboksipiperidina je od oko 0,005 mg/kg do oko 5 mg/kg. U jednom drugom obliku, ukupna dnevna doza jedinjenja karboksipiperidina je od oko 0,001 mg/kg do oko 1 mg/kg.. Ove doze su zasnovane na prosečnomsubjektu, telesne težine od oko 65 kg do oko 75 kg. Lekar će lako biti u stanju da odredi doze za subjekte čija telesna težina izlazi iz ovog opsega, kao što je slučaj kod dece. Da bi se postigla željena dnevna doza, davanje jedinjenja karboksipiperidina može se ponoviti više puta u toku dana (tipično ne više o 4 puta na dan).
Radi pogodnosti, jedinjenje karboksipiperidina se može dati u vidu jedinične doze. Po želji, u toku dana se može dati više jediničnih doza da bi se povećala ukupna dnevna doza. Oblici jedinične doze, npr., mogu biti tablete ili kapsule koje sadrže 0,01, 0,05, 0,1 , 0,5, 1, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 125, 150, 175, 200, 250 ili 500 mg jedinjenja karboksipiperidina. U jednom obliku jedinična doza sadrži od oko 0. 01 mg do oko 500 mg jedinjenja karboksipiperidina. U jednom drugom obliku, jedinična doza sadrži od oko 0,05 mg do oko 250 mg jedinjenja karboksipiperidina. U jednom drugom obliku, jedinična doza sadrži od oko 0,1 mg do oko 100 mg jedinjenja karboksipiperidina.. U jednom drugom obliku, jedinična doza sadrži od oko 0,5 mg do oko 50 mg jedinjenja karboksipiperidina
1. Korišćenje u dobijanju leka
U jednom drugom obliku, ovaj pronalazak uključuje upotrebu jedinjenja karboksipiperidina kao leka (kao što je tableta sa jediničnom dozom ili kapsula sa jediničnom dozom).
Ovaj pronalazak dalje uključuje upotrebu jedinjenja karboksipiperidina za dobijanje leka (kao što je tableta sa jediničnom dozom ili kapsula sa jediničnom dozom), za lečenje jednog ili više stanja identifikovanih u prethodnim odeljcima u kojima se razmatraju metodi lečenja. U jednom obliku, to stanje je hipertenzija.
J. Farmaceutske kompozicije
Za tretiranje stanja o kojima je prethodno govoreno, jedinjenje karboksipiperidina se može datiper se,u vidu slobodne kiseline. U jednom drugom obliku, jedinjenje karboksipiperidina može se dati kao jedna ili više farmaceutski prihvatljivih soli slobodne kiseline jedinjenjaper se.U jednom drugom obliku, jedinjenje karboksipiperidina može se dati kao smeša slobodnekiseline jedinjenja per sei jedne ili više farmaceutski prihvatljivih soli slobodnekiseline jedinjenja per se.
Ovaj pronalazak dalje uključuje farmaceutske kompozicije koje sadrže jedinjenje karboksipiperidina. U jednom obliku, farmaceutska kompozicija sadrži jedinjenje karboksipiperidina u vidu slobodne kiseline. U jednom drugom obliku, farmaceutska kompozicija sadrži jednu ili više farmaceutski prihvatljivih soli jedinjenja karboksipiperidina. U jednom drugom obliku, farmaceutska kompozicija sadrži smešu jedinjenja karboksipiperidina u vidu slobodne kiseline i jednu ili više farmaceutski prihvatljivih soli jedinjenja karboksipiperidina. U jednom obliku, farmaceutska kompozicija sadrži jedinjenje karboksipiperidina i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv nosač. Nosač može biti čvrst, tečan, ilii jedno i drugo, i može se formulisati sa jedinjenjem karboksipiperidina kao jedinična doza u vidu, na primer, tablete, koja može sadržati jedinjenje karboksipiperidina od 0,05% do 95% težine. I druge farmakološki aktivne supstancije mogu biti prisutne.
Jedinjenje karboksipiperidina može se dati bilo kojim pogodnim načinom, najčešće u obliku farmaceutske kompozicije prilagođene tom načinu, i u dozi efikasnoj za planirani tretman. Jedinjenje karboksipiperidina i odgovarajuće kompozicije, na primer, mogu se davati oralno, rektalno.parenteralno ili topično.
Za oralnu primenu doze u čvrstom obliku može se, npr., dati u vidu zasebnih jedinica,
kao što su tvrde ili meke kapsule, pilule, kašete, pastile, ili tablete, od kojih svaka sadrži prethodno određenu količinu najmanje jednog jedinjenja ovog pronalaska. U
jednom drugom obliku, oralna primena može biti u vidu praška ili granula. U jednom drugom obliku, oralna doza je u obliku za sisanje, kao što je, na primer, pastila. U tom obliku čvrste doze, jedinjenje karboksipiperidina se obično kombinuje sa jednim ili više dodataka.. U slučaju kapsula, tableta i pilula, oblici doze mogu takođe da sadrže i puferske agense ili se mogu pripremiti tablete sa gastrorezistentnim oblogama
U jednom drugom obliku, oralna primena može biti i u obliku tečnih doza. Oralna primena u tečnim oblicima doze uključuje, na primer, farmaceutski prihvatljive emulzije, rastvore, suspenzije, sirupe, i eliksire koji sadrže inertne razblaživače koji se uobičajeno koriste u struci (npr., voda). Ove kompozicije takođe mogu da sadrže dodatke, kao što su agensi za vlaženje, emulzifikatori, agensi za suspendovanje, ukus (npr. zaslađivač) i/ili aromu. U jednom drugom obliku, ovaj pronalazak sadrži dozu za parenteralnu primenu. "Parenteralna primena" uključuje, npr., subkutane injekcije, intravenske injekcije, intraperitonealne, intramuskularne injekcije, intrasternalne injekcije i infuziju. Preparati koji se mogu injecirati (npr. sterilne vodene ili uljane suspenzije koje se mogu injecirati) mogu se formulisati na uobičajen način korišćenjem pogodnih agenasa za dispergovanje, vlaženje i/ili suspendovanje.
U jednom drugom obliku, ovaj pronalazak uključuje topičan oblik doze. "Topična primena" uključuje, na primer, transdermalno davanje, kao što je putem transdermalnih flastera ili uređaja za jonoforezu, intraokularnu primenu, ili intranazalnu primenu ili inhalaciju. Kompozicije za topičnu primenu takođe uključuju, na primer, topične gelove, sprejeve, masti i pomade. Topična formulacija može da uključi jedinjenje koje podstrekava apsorpciju ili prodiranje aktivnog sastojka kroz kožu ili druge bolešću napadnute površine. Kada se jedinjenja ovog pronalaska primenjuju transdermalno, davanje se vrši korišćenjem nalepljenih rezervoara ili porozne membrane ili nekom vrstom čvrste matrice. Kompozicije pogodne za očnu topičnu primenu uključuju, na primer, kapi za oči gde je jedinjenje ovog pronalaska rastvoreno ili suspendovano u pogodnom nosaču. Za intranazalno davanje ili davanje inhalacijom, aktivna jedinjenja ovog pronalaska se pogodno isporučuju u vidu rastvora ili suspenzije u posudi sa pumpicom za raspršivanje, koju pacijent stisne ili pumpa, ili kao sprej aerosola u kontejneru pod pritiskom ili u nebulajzeru, uz korišćenje pogodnog raspršivača.
U jednom drugom obliku, ovaj pronalazak uključuje oblik doze za rektalno davanje.
Ti oblici za rektalno doziranje mogu biti u obliku, na primer, supozitorija
Mogu se takođe koristiti i drugi materijali kao nosači i drugi oblici davanja poznati u farmaceutskoj struci. Farmaceutske kompozicije ovog pronalaska mogu se dobiti bilo kojom dobro poznatom farmaceutskom tehnikom, kao što su efektivne formulacije i postupci primenjivanja. Prethodna razmatranja u pogledu efektivnih formulacija i postupaka primenjivama dobro su poznata u struci i opisana u standardnim udžbenicima. Formulacija leka se razmatra u, na primer, Hoover, John E., Remington' s Pharmaceutical Sciences. Mack Publishing Co., Easton, Pennsvlvania, 1975; Liberman, et al., Eds., Pharmaceutical Dosage Forms. Marcel Decker, New York, N.Y., 1980; i Kibbe, et al., Eds., Handbook of Pharmaceutical Excipients (3. izd.), American Pharmaceutical Association, Washington, 1999.
K. Kombinacije i kombinaciona terapija
Jedinjenje karboksipiperidina se takođe može dati u kombinaciji sa drugim terapeutskim sredstvima da bi se lečila različita stanja koja su prethodno razmatrana. Jedinjenje karboksipiperidina i drugi terapeutski agens(i) mogu se dati istovremeno (ili u istom doziranju ili u zasebnim oblicima doze) ili zasebno. Prema tome, u jednom obliku ovaj pronalazak uključuje metode za tretiranje stanja subjekta koji ima, ili je podložan tom stanju, davanjem subjektu terapijski efikasne količine jedinjenja karboksipiperidina i jedan ili više dodatnih terapeutskih agenasa. U jednom drugom obliku, ovaj pronalazak uključuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži jedinjenje karboksipiperidina, jedan ili više dodatnih terapeutskih agenasa i farmaceutski prihvatljiv nosač.
U jednom drugom obliku jedinjenje karboksipiperidina se može dati sa aspirinom.
U jednom drugom obliku, jedinjenje karboksipiperidina se može dati zajedno sa jednim ili više diuretika. Primeri pogodnih diuretika uključuju hidrohlorotiazid (kao što su MICROZIDE™ i ORETIC™), hidroflumetiazid (kao što je SALURON™), bemetanid (kao što je BUMEX™), torsemid (kao što je DEMADEX™), metolazon (kao što je ZAROXOLYN™), hlorotiazid (kao što su DIURIL™, ESIDRIX™ i HYDRODIURIL™), triamteren (kao što je DYRENIUM™), etakrinična kiselina (kao što je EDECRIN™), hlortalidon (kao što je HYGROTON™), furosemid (kao što je LASIX™), indapamid (kao što je OZOL™) i amilorid {kao što su MIDAMOR™ i MODURETIC™).
U jednom drugom obliku, jedinjenje karboksipiperidina može se dati zajedno sa jednim ili više inhibitora enzima koji vrši konverziju angiotenzina. Primeri pogodnih inhibitora enzima koji vrši konverziju angiotenzina uključuju kvinapril (kao što je ACCUPRIL™), perindopril (kao što je ACEON™), kaptopril (kao što je CAPOTEN™), enalapril (kao što su VASOTEC™ i ENALAPRILAT™), ramipril (kao što je ALTACE™), cilazapril, delapril, fosenopril (kao što je MONOPRIL™), zofenopril, indolapril, benazepril (kao što je LOTENSIN™), lizinopril (kao što su PRINIVIL™ i ZESTRIL™), spirapril, triolapril (kao što je MAVIK™), perindep, pentopril, meksipril (kao što je UNIVASC™), fasidotril, S-alimerkaptokaptopril, i pivopril.
U jednom obliku, jedinjenje karboksipiperidina može se dati zajedno sa jednim ili više blokatora receptora angiotenzina II. Primeri pogodnih blokatora receptora angiotenzina II uključuju kandesartan (kao što je ATACAND™), eprosartan (kao što je TEVETEN™), irbesartan (kao sto je AVEPRO™), losartan (kao što je COZAAR™), olmesartan, olmesartan medoksomil (kao što je BENICAR™), tasosartan, telmisartan; (kao što je MICARDIS™), valsartan (kao stoje DIOVAN™), zolasartan, FI-6828K, RNH-6270, UR-7198, Way-126227, KRH-594, TAK-536, BRA-657, i TA-606.
U jednom drugom obliku, jedinjenje karboksipiperidina može se dati zajedno sa jednim ili više blokatora kalcijumovih kanala. Primeri pogodnih blokatora kalcijumovih kanala, uključuju nifedipin (kao što su ADALAT™, ADALAT CC™ i PROCARDIA™), verapamil (kao što su CALAN™, COVERA-HS™, JEOPTIN SR™ i VERELAN™), diltiazem (kao što su CARDIZEM™ CARD1ZEM CD™, CARDIZEM LA™, CARDIZEM SR™, DILACOR™, T1AMATE™ i T1AZAC™), isradipin (kao što su DINACIRC™ i DINACIRC CR™), amlodipin (kao stoje NORVASC™), felodipin (kao stoje PLENDIL™), nizoldipin (kao što je SULAR™), bepridil (kao što je VASCOR™), vatanidipin, klevidipin, lerkanidipin, dilitiazem, i NNC-55-0396.
U jednom drugom obliku, jedinjenje karboksipiperidina može se dati zajedno sa jednim ili više beta blokatora. Primeri pogodnih beta blokatora uključuju timolol (kao što je BLOCARDEN™), karteolol (kao što je CARTROL™), karvedilol (kao što je COREG™), nadolol (kao što je CORGARD™), propranolol (kao što je INNOPRAN XL™), betaksolol (kao što je KERLONE™), penbutolol (kao što je LEVATOL™), metoprolol (kao što su LOPRESSOR™ i TOPROL-XL™), atnolol (kao što je TENORMIN™), pindolol (kao što je VISKEN™), i bisoprolol.
U jednom drugom obliku, jedinjenje karboksipiperidina može se dati zajedno sa jednim ili više alfa blokatora. Primeri pogodnih alfa blokatora uključuju, prazosin, doksazosin (kao stoje CARDURA™), fenoksibenzamin (kao što je DIBENZYLIN™), terazosin (kao što je HYTRIN™), CDR1-93/478 i CR-2991.
U jednom drugom obliku, jedinjenje karboksipiperidina može se dati zajedno sa jednim ili više alfa-beta blokatora. Primer pogodnog alfa-beta blokatora je labetalol .(kao što je NORMODYNE™ ili TRANDATE™).
U jednom drugom obliku,, jedinjenje karboksipiperidina može se dati zajedno sa jednim ili više antagonista receptora aldosterona. Primer pogodnog antagonista receptora aldosterona uključuje eplerenon (kao što je INSPRA™) i spironolakton (kao što je
ALDACTONE™).
U jednom drugom obliku, jedinjenje karboksipiperidina može se dati zajedno sa jednim ili više inhibitora renina. Primeri pogodnih inhibitora renina uključuju aliskiren (SPP 100), SPP-500/600 i YS-004-39.
U jednom drugom obliku, jedinjenje karboksipiperidina može se dati zajedno sa jednim ili više centralnih antiadrenergika. Primeri pogodnih centralnih antiadrenergika uključuju metildopu (kao što je ALDOMET™), kionidin (kao što je CATAPRES™ ili CATAPRES-TTS™), guanfacin (kao što je TENEKS™), i guanabenz (kao što je
WYTENSIN™).
U jednom drugom obliku, jedinjenje karboksipiperidina može se dati zajedno sa jednim ili više glikozida/inotropnih agenasa. Primer pogodnog glikozido/inotropnog agensa je digoksin (kao što je LANOXIN™).
U jednom drugom obliku, jedinjenje karboksipiperidina može se dati zajedno sa jednim ili više natriuretskih peptida humanog B-tipa. Primer pogodnog natriuretskog peptida humanog B-tipa je nesiritid (kao što je NATRECOR™).
U jednom drugom obliku, jedinjenje karboksipiperidina može se dati zajedno sa jednim ili više organskih nitrata ili donora oksida azota. "Donor oksida azota" odnosi se na jedinjenje koje daje, oslobađa i/ili posredno ili neposredno prenosi vrste azot monoksida, i/ili stimuliše endogenu proizvodnju oksida azota ili relaksirajućeg faktora endotela (EDRF - od endothelium-derived relaxing factor)in vivoi/ili povišava endogene nivoe oksida azota ili EDRFin vivo.On takođe uključuje jedinjenja koji su supstrati za azot oksid sintazu. Primeri pogodnih donora azotoksida uključuju S-nitrozotiole, nitrite, nitrate, N-okso-N-nitrozamine, SPM 3672, SPM 5185, SPM 5186 i njihove analogone, natrijum nitroprusid, nitroglicerin, izosorbid dinitrat, izosorbid mononitrat, molsidomin, SIN-1 i supstrate različitih izozima azot oksid sintaze.
U jednom drugom obliku, jedinjenje karboksipiperidina može se dati zajedno sa jednim ili više agonista bradikinina.
U jednom drugom obliku, jedinjenje karboksipiperidina može se dati zajedno sa jednim ili više rastvorljivih aktivatora guanilat ciklaze. Primer pogodnog rastvorljivog aktivatora guanliat ciklaze jeste BAY-41-8543.
U jednom drugom obliku, jedinjenje karboksipiperidina može se dati zajedno sa jednim ili više neutralnih inhibitora endopeptidaze. Primeri pogodnih inhibitora neutralne endopeptidaze uključuju omapatrilat, fasidotril, miksanpril, sampatrilat, Zl 3752A
U jednom drugom obliku, jedinjenje karboksipiperidina može se dati zajedno sa jednim ili više antagonista . Primeri pogodnih endotelijskih antagonista uključuju ambrizentan, darusentan, J-104132, SPP-301 , TBC-3711 , YM-62899, YM-91746 i BMS-193884.
U jednom drugom obliku, jedinjenje karboksipiperidina može se dati zajedno sa jednim ili više inhibitora 3-hidroksi-3-metilglutaril koenzim A reduktaze. Primeri pogodnih inhibitora 3-hidroksi-3-metilglutaril koenzim A reduktaze uključuju fluvastatin (kao što je LESCOL™), atorvastatin (kao što je LIPITOR™), lovastatin (kao što je ALTOCOR™ ili MEVACOR™), pravastatin (kao što je PRAVACHOL™), rosuvastatin (kao što je CRESTOR™), i simvastatin (kao što je ZOCOR™).
U jednom drugom obliku, jedinjenje karboksipiperidina može se dati zajedno sa niacinom ili jednim ili više derivata nikotinske kiseline. Primeri pogodnog niacina ili derivata nikotinske kiseline uključuju NIACOR™, NIASPAN™, NICOLAR™, i SLO-NIACIN™.
U jednom drugom obliku, jedinjenje karboksipiperidina može se dati zajedno sa jednim ili više derivata fibrinske kiseline. Primeri pogodnih derivata fibrinske kiseline uključuju klofibrat (kao što je ATROM1D-S™), gemfibrozil (kao što je LOPID™), i fenofibrat (kao što je TRICOR™).
U jednom drugom obliku, jedinjenje karboksipiperidina može se dati zajedno sa jednim ili više inhibitora žučne kiseline. Primeri pogodnih inhibitora žučne kiseline uključuju kolestipol (kao što je COLESTID™), holestiramin (kao što su LOCHOLEST™, PREVALITE™, QUESTRAN™, i QUESTRAN LIGHT™), kolesevelam (kao što je
VVELCHO<L>™).
U jednom drugom obliku, jedinjenje karboksipiperidina može se dati zajedno sa jednim ili više inhibitora apsorpcije holesterola. Primer pogodnog inhibitora apsorpcije holesterola je ezetimib (kao što je ZETIA™).
U jednom drugom obliku, jedinjenje karboksipiperidina može se dati zajedno sa jednim ili više inhibitora holesteril estra transportnog proteina. Primer pogodnog inhibitora holesteril estra transportnog proteina je torcetrapib.
U jednom drugom obliku, jedinjenje karboksipiperidina može se dati zajedno sa jednim ili više inhibitora apikalne žučne kiseline zavisne od natrijuma. Primeri pogodnih inhibitora apikalne žučne kiseline zavisne od natrijuma uključuju SD-5613, AZD7806 i 264W94.
U jednom drugom obliku, jedinjenje karboksipiperidina može se dati zajedno sa jednim ili više inhibitora alfa glukozidaze. Primeri pogodnih inhibitora alfa glukozidaze uključuju miglitol (kao što je GLYSET™) i akarbozu (kao stoje PRECOSE™).
U jednom drugom obliku, jedinjenje karboksipiperidina može se dati zajedno sa jednim ili više biguanida. Primeri pogodnih biguanida uključuju rosiglitazon (kao što je AVANDMET™) i metformin (kao što su GLUCOPHAGE™ i GLUCOPHAGE XR™).
U jednom drugom obliku, jedinjenje karboksipiperidina može se dati zajedno sa jednim ili više insulina. Primeri pogodnih insulina uključuju HUMALOG™, HUMALOG 50/50™, HUMALOG 75/25™, HUMULIN 50/50™, HUMALIN 75/25™, HUMALIN L™, HUMALIN N™, HUMALIN R™, HUMALIN R U-500™, HUMALIN U™, ILETIN II LENTE™, ILETIN II NPH™, ILETIN II REGULAR™, LANTUS™, NOVOLIN 70/30™, NOVILIN N™, NOVILIN R™, NOVOLOG™, VELOSUL1N BR™, i EXUBERA™.
U jednom drugom obliku, jedinjenje karboksipiperidina može se dati zajedno sa jednim ili više meglitnida. Primeri pogodnih meglitnida uključuju repaglinid (kao što je PRANDIN™) i natglinid (kao što je STARLIX™).
U jednom drugom obliku, jedinjenje karboksipiperidina može se dati zajedno sa jednom ili više sulfonilurea. Primeri pogodnih sulfonilurea uključuju glimepirid (kao što je AMARYL™), gliburid (kao što je DIABETA™, GLYNASE PRESTAB™ ili MICRONASE™), i- glipizid (kao što su GLUCOTROL™ i GLUCOTROL XL™).
U jednom drugom obliku, jedinjenje karboksipiperidina može se dati zajedno sa jednim ili više tiazolidindiona. Primeri pogodnih tiazolidindiona uključuju pioglitazon (kao što je ACTOS™) i rosiglitazon (kao što je AVANDIA™).
U jednom drugom obliku, jedinjenje karboksipiperidina može se dati zajedno sa jednim ili više alfa-2-delta liganada. Primeri pogodnih alfa-2-deIta liganada uključuju gabapentin, pregabalin (kao što je LYRICA™), [(lR,5R,6S)-6-(aminometil)biciklo[3.2.0]hept-6-il] sirćetnu kiselinu, 3-(l-aminometil-cikloheksilmetil)-4H-[l,2,4]oksadiazol-5-on, C-[l-(lH-tetrazol-5-ilmetil)-cikloheptil]-metilamin, (3S,4S)-(1-aminometil-3,4-dimetil-ciklopentil)-sirćetnu kiselinu, (la,3a,5a)-(3-amino-metil-biciklo [3.2.0]hept-3-iI)-sirćetnu kiselinu, (3S,5R)-3-aminometil-5-metil-oktanonsku kiselinu, (3S,5R)-3-amino-5-metiI-heptanonsku kiselinu, (3S,5R)-3-amino-5-metil- nonanonsku kiselinu i (3S,5R)-3-amino-5-metil-oktanononsku kiselinu i), (2S,4S)-4-(3-Hlorofenoksi)pralin, i (2S,4S)-4-(3-Fluorobenzil)pralin.
L. Kompleti
Ovaj pronalazak dalje uključuje i komplete pogodne za primenu obavljanja opisanih metoda tretmana. U jednom obliku, kit sadrži oblik prve doze u koju ulazi jedinjenje karboksipiperidina i pakovanje za prvu dozu. U jednom drugom obliku, kit sadrži oblik prve doze u koju ulazi jedinjenje karboksipiperidina i oblik druge doze sa drugim terapeutskim agensom.
U jednom drugom obliku, kit sadrži oblik prve doze u koju ulazi jedinjenje karboksipiperidina i oblik druge doze sa inhibitorom enzima koji konvertuje angiotenzin.
U jednom drugom obliku, kit sadrži oblik prve doze u koju ulazi jedinjenje karboksipiperidina i oblik druge doze sa antagonistom receptora angiotenzina II.
U jednom drugom obliku, kit sadrži oblik prve doze u koju ulazi jedinjenje karboksipiperidina i oblik druge doze sa antagonistom receptora aldosterona.
U jednom drugom obliku, kit sadrži oblik prve doze u koju ulazi jedinjenje karboksipiperidina i oblik druge doze sa donorom oksida azota.
M. Sinteza jedinjenja
Jedinjenje karboksipiperidina može se dobiti korišćenjem metoda ilustrovanih u šemama sinteze i eksperimentalnim postupcima opisanim niže. Opšte šeme sinteze date su kao ilustracija bez namere da budu ograničavajuće. Polazni materijali koji se koriste za dobijanje jedinjenja karboksipiperidina se mogu kupiti ili se mogu dobiti rutinskim metodima dobro poznatim stručnjacima (kao što su metodi izloženi u standardnim referentnim knjigama kao što je COMPENDIUM OF ORGANIC SVNTHETIC METHODS, Vol. I-VI (izdavač Wiley-lnterscience)).
PRIMER 1 l-(l-(2-etoksietil)-3-etil-7-(4-metilpiridin-2-ilamino)-lH-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)piperidin-4-karboksilna kiselina.
1. Stupanj: Pobijanje l-( 2- etoksietil)- 3- etil- 4- nitro- l H- pirazol- 5- karboksamida
U bocu od 1L stave se 3-etil-4-nitropirazol-5-karboksamid (dobijen kao što je opisano u EP 1176142 na strani 18) (15,0 g, 81 mmol), trifenilfosfin (25,6 g, 97,8 mmol), i tetrahidrofuran (120 mL). Dobijena smeša se ohladi stavljanjem u ledeno kupatilo na 0°C i u bocu se doda 2-etoksietanol (9,5 ml, 98 mmol). Zatim se, u periodu od 2,5h, u bocu dodaje rastvor di-terc-butil azodikarboksilata (22,5 g, 97,8 mmol) u tetrahidrofuranu (90 mL). Smeša se meša uz hladjenje tokom jednog sata, a zatim se zagreje do sobne temperature i meša još jedan sat. Smeša se ponovo ohladi na 0°C, tretira 6M hlorovodoničnom kiselinom (40 mL) i zagreje do 40°C tokom jednog sata. Smeša se delimično koncentruje i ekstrahujc izmedju etilacetata i vode. Vodeni sloj se ponovo ckstrahuje etilacetatom. Kombinovani organski slojevi se isperu vodom, operu slanom vodom, osuše preko magnezijumsulfata, filtriraju i zatim koncentruju. Dobijeno viskozno ulje se zatim tretira 2-propanolom i ova smeša se zatim koncentruje. Dobijeni materijal se tretira 2-propanolom i zagreva. Po hlađenju, dobijeni kristali se filtruju, isperu hladnim 2-propanolom i osuše da bi dali 16,5 g naslovnog jedinjenja.
2. Stupanj: Pobijanje 4- amino- l-( 2- etoksietil)- 3- etil- lH- pirazol- 5- karboksamida
l-(2-etoksietil)-3-etil-4-nitro-lH-pirazol-5-karboksamid iz 1. stupnja (15,0 g, 58 mmol), 5% Platina-na-ugljeniku (0,75 g), i izopropil acetat (150 mL) kombinuju se i smeša se meša pod 80 psi vodonika oko 50 sati. Smeša se zatim filtruje kroz celit, celit se ispere acetonitrilom i fdtrat se zatim koncentruje. Materijal na kraju kristališe i daje 13,7 g hidrata naslovnog jedinjenja.
3. Stupanj : l-( 2- etoksietil)- 3- etil- lH- pirazolo[ 4, 3- d] pirimidin- 5, 7( 4H, 6H)- dion
Smeša karbonildiimidazola (12,3 g, 76,1 mmol) u acetonitrilu (123mL) zagreva se do 50°C. 4-amino-l-(2-etoksietil)-3-etil-lH-pirazol-5-karboksamid dobijen u stupnju 3. (13,2 g, 58 mmol) dodavanje smeši tokom perioda od jednog sata i temperatura smeše sc tokom tog dodavanja penje na 75°C Smeša se zatim ohladi i meša preko noći. Smeša se ohladi u ledenom kupatilu i filtruje. Kolač na filtru se opere vodom i osuši. Dobija se 12,8 g naslovnog jedinjenja.
4. Stupanj Pobijanje 5J- dihlorQ- l-( 2- etoksietil)- 3- etil- lH- pirazolof4, 3- c| pirimidin
Smeša l-(2-etoksietil)-3-etil-lH-pirazoIo[4,3d]pirimidin-5,7(4H,6H)-diona iz 3.stupnja (25,2 g, 100 mmol) tretira se jedinjenjem PhPOCI2(195 g, 1000 mmol) i greje, pod N2, na 135°C tokom 20h, uz mešanje. Smeša se zatim ohladi, pa greje na 140°C tokom dodatnih 20 h. Smeša se ohladi i polako doda smeši leda (600 g)/voda (200 mL). Ovo se meša tokom 3h, a nastala čvrsta supstancija se pokupi filtrovanjem i ispere vodom (2 x 100 mL). Čvrsta supstancija se suspenduje u etilacetatu (300 mL). Poda se voda (200 mL) i pH podesi na 1-2. Tada se doda 10% NaHC03(125 mL) (što daje pH~7) i slojevi se razdvoje. Organski sloj se zatim ispere vodom (400 mL), pa zasićenim rastvorom natrijumhlorida (150 mL). Organski rastvor se zatim osuši i koncentruje. Pobija se 23 g naslovnog jedinjenja. 5. Stupanj Pobijanje N-[ 5- hloro- l-( 2- etoksietil)- 3- etil- lH- pirazolo[ 4, 3- c] pirimidin- 7- in- 4-
metilpiridin- 2- ilamin
Smeša 2-amino-4-pikolina (4,32 g, 40 mmol) i 5,7-dihIoro-l-(2-etoksietiI)-3-etil-lH-pirazolo[4,3-d]pirimidina iz 4. stupnja (5,78 g, 20 mmol) tretira se sa THF {25 mL) i ohladi na 0°C. Smeša se meša i tretira sa IM LiN(TMS)2u THF (40 mL, 40 mmol) takvom brzinom da se temperatura održava ispod 5°C. Smeša se zatim meša 30 min i tretira 10% rastvorom limunske kiseline dok se ne postigne pH 6-7. Smeša se delimično koncentruje pod sniženim pritiskom. Smeša se zatim meša na 5°C tokom 1 h. Dobijena čvrsta supstancija se zatim pokupi filtrovanjem uz usisavanje i ispere vodom (40 mL). Čvrsta supstancija se zatim osuši u vakuum pećnici na temperaturi manjoj od 60°C i dobija se 7,0 g naslovnog jedinjenja.
6. Stupanj Pobijanje l-( l-( 2- etoksietil)- 3- etil- 7-( 4- metilpiridin- 2- ilamino)- lH- pirazolo[ 4, 3-d] pirimidin- 5- il) piperidin- 4- karboksilne kiseline
Smeša N-[5-hloro-l-(2-etoksietil)-3-etil-lH-pirazolo[4,3-d|pirimidin-7-il]-4-metilpiridin-2-ilamina iz 5. stupnja (5,42 g, 166 mmol), izonipekotinske (heksahidroizonikotinske) kiseline {85,9 g, 665 rnmol), cezijum karbonata (162 g, 498 mmol), i PMSO (55 mL) greje se, uz mešanje, na 125°C. Posle 20h smeša se ohladi na 20°C i doda voda (165 mL). Smeša se meša 15 min i zatim tretira etilacetatom (55 mL). Slojevi se razdvoje i vodeni sloj se tretira drugom porcijom etilacetata (55 mL). Slojevi se ponovo razdvoje i vodeni sloj se dovede na pH~5 pomoću 6 M HCI. Posle mešanja tokom 1 sata, dobijena čvrsta supstancija se filtruje, ispere vodom (20 mL) i osušiin vacuuo.Dobija se 5,5g naslovnog jedinjenja. 'H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 5; l,10,(t, 3 H), 1,30 (t, 3 H), 1,49-1,60 (m, 2 H), 1,84-1,95 (m, 2 H), 2,32-2,36 (m, 3 H), 2,2-2,57 (m, 1 H), 2,78 (q, 2 H), 2,99-3,08 (m, 2 H), 3,52 (q, 2 H), 3,78 (t, 2 H), 4,45-4,53 (m, 2 H), 4,56-4,64 (m, 2 H), 6,91 (d, 1 H), 8,05 (s, 1 H), 8,18 (d, 1 H), 9,63 (s, 1 H), 12,18 (s, 1 H). LCMS m/z 454.
Alternativno, smeša N-[5-hloro-l-(2-etoksietil)-3-etil-lH-pirazolo[4,3-d] pirimidin-7-il]-4-rnetilpiridin-2-ilamina iz 5. stupnja može se kombinovati sa izonipekotinskom (heksahidroizonikotinskom) kiselinom (izmedju 1 i 10 ekvivalenata) i bazom i zagrevati do izmedju 100-125°C u rastvaraču dok se reakcija završi. Pogodne baze uključuju cezijum karbonat, natrijum karbonat i kalijum karbonat. Pogodni rastvarači uključuju DMSO i N,N-dimetilformamid. Pošto se ohladi, može se dodati voda i bazni rastvor ekstrahovati (između 1 i 3 puta) nekim organskim rastvaračem, kao što je etilacetat. Ostatak baznog sloja se zakiseli do pH 5 pomoću HC1. Smeša se meša približno 1 sat. Čvrsta supstancija se otfiltruje, ispere vodom i osušiin vaccuoi dobija se naslovna supstancija
PRIMER 2
1 -(1 -(2-etoksietil)-3-etil-7-(4-metilpiridin-2-ilamino)-1 H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)piperidin-4-karboksilna kiselina 1. Stupanj Pobijanje l-( 2- etoksietin- 3- etil- 4- nitro- lH- pirazol- 5- karboksamida
l-(2-etoksietil)-3-etil-4-nitro-lH-pirazol-5-karboksamid je dobijen kao u 1.stupnju Primera 1
2. Stupanj Pobijanje 4- amino- l-( 2- etolcsietil)- 3- etil- lH- pirazol- 5- karboksamida
Smeša l-(2-etoksietil)-3-etil-4-nitro-lH-pirazol-5-karboksamida iz 1. stupnja (5,70 g, 22 mmol) i paladijum hidroksida (1,0 g) u etanolu (110 mL) tretirana je amonijum formijatom (7,01 g, 111 mmol) u četiri nejednake porcije u približno 10-minutnim intervalima. Pobijena smeša je grejana pod refluksorn a zatim ohlađena. Smeša je filtrovana kroz celit i koncentrovana. Pobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni od silika gela korišćenjem smeše etilacetata i heksana kao eluenasa. Pobija se 2,45 g naslovnog jedinjenja.'HNMR(400 MHz, CPC13): 5 1,17 (t, 3 H), 1,21-1,32 (m, 3 H), 2,60 (q, 2 H), 3,53 (q, 2 H), 3,79-3,95 (m, 2 H), 4,38-4,52 (m, 2 H). MS (ESI) m/z 227.
3. Stupanj l-( 2- etoksietil)- 3- etil- lH- pirazolo[ 4, 3- d] pirimidin- 5, 7( 4H, 6H)- dion
Smeša 4-amino-l-(2-etoksietil)-3-etil-lH-pirazol-5-karboksamida iz 2. stupnja (2,44 g, 10,8 mmol) u N,N-dimetilformamidu (40 mL) tretira se karbonildiimidazolom (1,92 g, 11,9 rnmol) i greje na 80 °C preko noći. Smeša je koncentrovanain vaccuoa ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni od silika gela korišćenjem smeše etilacetata i heksana kao eluenasa. Dobija se 1,04 g naslovnog jedinjenja. MS (ESI) m/z 253
4: Stupanj Pobijanje 5, 7- dihloro- l-( 2- etoksietil)- 3- etil- lH- pirazolo[ 4, 3- d] pirimidina
Smeša l-(2-etoksietil)-3-etil-lH-pirazolof4,3-d|pirimidin-5,7(4H,6H)-diona dobijenog u 3. stupnju (7,2 g) i fosforoksihlorida (200 mL) sa jednom kapi N,N-dimetilformamida grejana je sa refluksom preko noći. Smeša je ohladjena i fosforoksihlorid uparen pod sniženim pritiskom. Ostatku je dodat led i nastala smeša je ekstrahovana hloroformom. Organski slojevi su osušeni nad magnezijumsulfatom, profiltrovani i upareni. Pobija se 2,09 g 5,7-dihloro-l-(2-etoksietil)-3-etil-lH- pirazolo[4,3-d]pirimidina u vidu ulja koje stajanjem očvrsne. LCMS m/z 289.
5: Stupanj Pobijanje l-( l-( 2- etoksietil)- 3- etil- 7-( 4- metilpiridin- 2- ilamino)- lH- pirazolor4, 3-d1pirimidin- 5- il) piperidin- 4- karboksilne kiseline
5,7-dihloro-l-(2-etoksietil)-3-etil-lH-pirazolo[4,3-d]pirimidin dobijen u 4. stupnju (1 mmol), 2-amino-4-pikolin (2 mmol), N,N-diizopropiletilamin (3 mmol), i N-metilpirolidon (1 mL) dodati su u svaki od dva reakciona suda. Svaki sud je ozračen u CEM Discover mikrotalasnoj pećnici tokom 15 minuta na 150°C. Izonipekotinska (heksahidroizonikotinska) kiselina (3 mmol) doda se svakom reakcionom sudu i nastala smeša ozrači 15 minuta na 180°C. Sadržaji oba reakciona suda se spoje. Smeši se dodaju voda i etilacetat i smeša se promućka. Smeši se doda hlorovodonična kiselina (IM) i smeša se ponovo promućka. Razdvoje se slojevi. Organski sloj se osuši nad magnezijumsulfatom, profiltruje i upari. pH vodenog sloja se povisi do oko šest dodavanjem zasićenog natrijumkarbonata i vodeni sloj se zatim ekstrahuje etilacetatom. Organski sloj se osuši preko magnezijumsulfata, profiltruje, doda prethodnom organskom ostatku i upari Rastvor se prečisti putem RP-HPLC na Varian Dynamax C-18, na koloni (250x41,4mm), gradijentom od 10-95% acetonitril/voda (hlorovodonična kiselina) tokom 15 minuta u dva dela. Frakcije su spojene i uparene. Dobija se 0,26 g naslovnogjedinjenja.. 'H NMR (400 MHz, DMSOd6): 5; 1,10 (t, 3 H), 1,30 (t, 3 H), 1,49-1,60 (m, 2 H), 1,84-1,95 (m, 2 H), 2,32-2,36 (m, 3 H), 2,52-2,57 (m, 1 H), 2,78 (q, 2 H), 2,99-3,08 (m, 2 H), 3,52 (q, 2 H), 3,78 (t, 2 H), 4,45-4.53 (m, 2 H), 4,56-4,64 (m, 2 H), 6,91 (d, 1 H), 8,05 (s, 1 H), 8,18 (d, 1 H), 9,63 (s, 1 H), 12,18 (s, 1 H). LCMS m/z 454.
Protokoli
N. Testiranje potencije i selektivnosti
Metod 1 Inhibicija : enzima PDE5 humanih trombocita: Scintilacioni test.
Za određivanje inhibicije aktivnosti enzima PDE5 testiranim jedinjenjem može se upotrebiti nekiinvitro test. Kao što je niže objašnjeno specifičnije, ovaj test meri vrednost PDE5 ICsoza testirano jedinjenje (tj., koncentracija testiranog jedinjenja potrebna da inhibira 50% u odnosu na neinhibirane kontrole, hidrolizu cGMP u GMP, katalizovanu enzimom PDE5).
Enzim PDE5 koji se koristi u probi može se dobiti iz humanih trombocita odgovarajućom modifikacijom metoda koji su dali Tompson, WJ et al.; Biochemistry 18(23), 5228-5237, 1979, opisanom u Ballard SA etal.; J. Urology 159(6), 2164-2171, 1998. Enzim PDE5 izolovan iz humanih trombocita može se upotrebiti za katalizu hidrolize f<3>H]cGMP (Amersham Biosciences) u 5' nukleotid [<J>H]GMP. [<J>H]GMP se vezuje za SPA kuglice od itrijumsilikata (Amersham Biosciences) i detektuje se u scintilacionom brojaču. Specifičnije, dejstvo testiranog jedinjenja na različitim koncentracijama u probi se može odrediti stavljanjem u kontakt datog jedinjenja sa fiksiranom količinom enzima PDE5 u prisustvu supstrata (cGMP ili cAMP u odnosu 3:1 neobeleženog prema obeleženom sa<3>H). Brojanje scintilacija se može koristiti kao stoje opisano da se odredi relativna aktivnost enzima PDE5. Inhibicija aktivnosti enzima PDE5 se tada izračunava relativno u odnosu na ukupnu aktivnost enzima PDE5 neinhibiranih kontrola
Proba za PDE5 IC50: mikrotitarska ploča sa 96-ležišta
Reagensi:
Pufer A: 20 mM Tris-HCI, 5 raM MgCI2, pH 7,4
Pufer B: 2 mg/ml BSA u Puferu A ( pufer za enzim)
cGMP supstrat: Finalna koncentracija u probi 500 nM
Količina<3>H-obeleženog supstrata koja se dodaje zavisi od specifičnog aktiviteta [<J>H]cGMP, a supstrat cGMP se razblažuje 10 mM matičnim rastvorom hladnog cGMP u Puferu A da konačna koncentracija supstrata u probi bude 500 nm.
PDE enzim: Pripremljen u Puferu B. Faktor razblaženja je određen aktivnošću enzima.
SPA kuglice: Suspenzija 20 mg/ml pripremljena u dH20.
Matični rastvori standardnih i testiranih jedinjenja prave se kao 5 mM u 100% DMSO. Jedinjenje se serijski razblažuje u ploči za razblaživanje koristeći 1/2 log format razblaživanja u 10 tačaka. Po 2 uJ svakog razblaženja jedinjenja stavlja se u duplikatu u ležišta mikrotitarske ploče. U označena kontrolna ležišta stavi se po 2 ul 100% DMSO. Po 25 u.1 Pufera A stavi se u sva ležišta. Po 25 u.1 Pufera B stavi se u ležišta za negativne kontrole. Po 25 u.1 enzima doda se u sva ostala ležišta. Po 50 u.1 supstrata doda se u sva ležišta. Ploče se zatope i inkubiraju 60 minuta na platformi mućkalice na 30°C. Po 50 ul SPA kugllica dodaje se da zaustave reakciju. Ploče se ponovo zatope i mućkaju 15 minuta da omoguće kuglicama da vežu nastali GMP. Ostavi se 30 minuta da se kuglice slegnu i meri se na NXT TopCount scintillacionom brojaču. Podaci se analiziraju fitovanjem krivih pomoću aplikacije za pretraživanje ploča. Procenat inhibicije u ovoj probi izračunava se na sledeći način : Inhibicija (%) = [(srednja vrednost maksimuma - vrednost za jedinjenje/ (srednja vrednost maksimuma - srednja vrednost minimuma)] x 100.
Vrednost IC50se određuje iz sigmoidnih krivih zavisnosti odgovora od doze enzimske aktivnosti vs. koncentracija jedinjenja
Jedinjenje karboksipiperidina se testira prema Metodu 1. Izmerene odgovarajuće vrednosti PDE5 IC50date su u Tabeli A.
Prethodno opisana jedinjenja u primerima iz VVO2004096810 testirana su prema Metodu 1 . Izmerene odgovarajuće vrednosti PDE5 IC50date su u Tabeli B.
Metod 1A Alternativan rest za određivaje inhibicije enzima PDE5 humanih trombocita
Scintilacioni test ( Scintillation Proximity Assav)
PDE5 ICsoza testirano jedinjenje može se takođe odrediti alternativnim in vitro testom koji se razlikuje od Metoda 1 kao što je dalje opisano
Proba za PDE5 ICjp : format mikrotitarske ploče sa 96- ležišta
Reagensi:
Pufer A: 20 mM Tris-HCl, 5 mM MgCI2, pH 7,4
Pufer B: 2 mg/ml BSA u Puferu A ( pufer za enzim)
cGMP supstrat: Finalna koncentracija u probi 50 nM
Količina<3>H-obeleženog supstrata koja se dodaje zavisi od specifičnog aktiviteta [<3>H]cGMP, i razblažuje se Puferom A.
PDE enzim: Pripremljen u Puferu B. Faktor razblaženja je određen aktivnošću enzima.
SPA kuglice: Suspenzija 4 mg/ml pripremljena u dH20.
Matični rastvori standardnih i testiranih jedinjenja prave se kao 2 mM u 100% DMSO. Testirano jedinjenje se serijski razblažuje u ploči za razblaživanje koristeći 1/5 log format razblaživanja u 10 tačaka, tako da početna koncentracija u probi bude 2 uM za početnu IC50; konfirmatorne IC50se dobijaju korišćenjem 1/3 log razblaženja u 10 tačaka. Po 27 u.1 Pufera A stavi se u sva ležišta mikrotitarske ploče.. Iz ploče sa razblaženjima dodaje se po 3 ul razblaženog jedinjenja u duplikatu ili po 3 ul 100% DMSO (u pozitivne i negativne kontrole). Dodaje se po 30 ul enzima. U ležištima sa negativnim kontrolama Pufer B zamenjuje enzim.
Po 30 ul obeleženog supstrata dodaje se u sva ležišta
Posle inkubiranja od 60 minuta na sobnoj temperaturi, reakcija se zaustavlja dodavanjem 30 u.1 kugllica od itrijum silikata. Ove kuglice su guste (teške) i zahtevaju stalno mućkanje kada se dodaju ploči. Ploče se zatope i mućkaju petnaest minuta na platformi mućkalice da bi se omogućilo kuglicama da vežu nastali GMP.
Pošto se ostavi 30 minuta da se kuglice slegnu, ploče se mere se na NXT TopCount scintillacionom brojaču i podaci se analiziraju na sledeći način. Vrednosti procenta inhibicije izračunavaju se korišćenjem srednjih vrednosti 0% i 100% kontrola na svakoj ploči. Procenjena 4 parametra logističnog modela sigmoidnog odgovora na dozu su zatim izračunavana korišćenjem vrednosti inhibicije u svakom ležištu sa datim jedinjenjem. Formula za logistički model sa 4 parametra može se izraziti kao Y = ((a - d)/(l + (X/c)<A>b)) + d, gde je Y odgovor, X koncentracija, a donja asimptota (minimalni odgovor), d gornja asimptota (maksimalni odgovor), c IC50modela (u istim jednicatna kao X), i b nagib (kao što je opisano u De Lean, A., P. J. Munson, i D. Rodbard ("Simultaneous analysis of families of sigmoidal curves: application to bioassav, radioligand assay, and physiological dose-response curves." Am. J.Physiol.. 235(2): E97-E102, 1978). Ove procene se koriste da se izračunaju koncentracije koje odgovaraju 50% inhibiciji.
Jedinjenje karboksipiperidina je testirano prema Metodu la. Izmerene odgovarajuće vrednosti PDE5 IC50date su uTabeliC.
Prethodno opisana jedinjenja u primerima iz WO2004096810 testirana su prema Metodu la. Izmerene odgovarajuće vrednosti PDE5 IC50date su uTabeliD.
Metod 2: Inhibicija enzima PDE6 humane mrežnjače Scintilacioni test ( Scintillation
Proximity Assav, SPA)
Inhibicija aktivnosti PDE6 enzima testiranim jedinjenjem može se meritiin vitrotestom prema Metodu 1 koristeći, umesto enzima PDE5 poluprečišćeni enzim PDE6 iz mrežnjače čoveka, govečeta ili psa. Ovim testom se meri vrednost IC50PDE6 za testirano jedinjenje (tj., koncentracija testiranog jedinjenja potrebna da inhibira 50% u odnosu na neinhibirane kontrole hidrolizu [<3>H]cGMP u 5'-nukleotid [<3>H]GMP katalizovanu enzimom PDE6). [3H]GMP vezuje sc za SPA kuglice itrijum silikata i detektuje brojanjem scintilacija.
Prečišćavanje PDE6: PDE6 se može izolovati i prečistiti iz sledećeg: Rastvorljiv PDE6 iz štapića/ PDE6 iz štapića spoljnog segmenta goveđih očiju (Charles River Ltd, France); PDE6 iz čepića psećih očiju (LAS); ili rastvorljiv PDE6 iz štapića i čepića očiju čoveka (I.I.A.M.).
Pufer za homogenizovanje
20 mM Hepes (Sigma) 2,383 g
1 mM EDTA (Sigma) 0,186 g
Rastvoriti u 300ml HPLC (Acros) ili dvostruko dejonizovanoj vodi.
100 mM PMSF (Sigma) 0,174 g/10 ml etanola
Dodati 5ml rastvora PMSF puferu, polako da se izbegne precipitacija.
Dodati 250 mM saharoze (Fisher) 42,78 g
Doterati zapreminu na 500 ml i mešati dok se rastvori
Podesiti pH na 7,2 koristeći IM NaOH.
Čuvati na 4°C
Pobijanje mrežnjača Ostaviti oči da se odmrznu i postanu meke, a rožnjača i sočiva prozračni. Podržavajući oko da rožnjača bude na vrhu, napraviti mali zasek kroz konjunktivu ispod nivoa ženice. Zasek treba da bude dovoljan da omogući tečnosti da iscuri. Koristeći fine makaze, iseći oko rožnjače tako da se omogući njeno podizanje kao klapne. Koristeći malu kukicu, zahvatiti sočivo i blago ga izvući iz orbite, pazeći da se istovremeno ne izvuče i mrežnjača. Pustiti da mrežnjača sama padne na osnovicu orbite.
Pažljivo podići mrežnjaču i locirati optički nerv. Preseći optički nerv i prebaciti mrežnjaču u mali sud koji sadži nekoliko mililitara pufera za homogenizovanje. Blago podići mrežnjaču na površinu pufera i ukloniti sav vidljiv obojeni materijal iz ženice. Preneti mrežnjaču u drugi sud sa čistim puferom da bi se uklonili i poslednji tragovi pigmenta i tada je prebaciti u Corning Costar centrifužnu epruveti od 50 ml (Sigma) i držati na ledu.
Izolovanje i prečišćavanje PDE6 iz mrežnjače: Uzeti po 2 ml pufera za homogenizaciju po jednoj mrežnjači govečeta i 1 ml po mrežnjači psa i čoveka. Homogenizovati držeći rukom homogenizer zaveslajima 3x5 sekundi, hladeći na ledu između svakog zaveslaja. Profiltrovati homogenat kroz dvostruki sloj hirurške gaze.Centrifugirati na 100 000xg 60 minuta, na 4°C. Ako ima dovoljno zapremine, profiltrovati citosol kroz 0,22 uM Steril-D pack, ili kroz 0,22 u.M filtar na kraju šprica (npr. Millex®- GV). Prečistiti kroz FPLC (Pharmacia FPLC LKB/FRAC - 100, Pharmacia) ili razliti u manje porcije i čuvati u tečnom azotu do upotrebe.
Metod 2A: Scintilacioni test. ( SPA) inhibicije enzima PDE6 humane mrežnjače
Inhibicija aktivnosti enzima PDE6 testiranim jedinjenjem može se takođe meritiin vitrotestom prema Metodu 1A koristeći, umesto enzima PDE5 poluprečišćeni enzim PDE6 iz mrežnjače čoveka, govečeta ili psa. Ovim testom se meri vrednost IC50PDE6 za testirano jedinjenje (tj., koncentracija testiranog jedinjenja potrebna da inhibira 50% u odnosu na neinhibirane kontrole hidrolizu [<3>H]cGMP u 5'-nukleotid [<J>H]GMP katalizovanu enzimom PDE6). [<3>H]GMP vezuje se za SPA kuglice itrijum silikata i detektuje brojanjem scintilacija.
Metod 3: Alternativni Scintillacioni test ( SPA) inhibicije humanog rekombinantnog enzima
PDE11
Inhibicija aktivnosti enzima PDE11 testiranim jedinjenjem može se meritiin vitrotestom prema Metodu 1 koristeći, umesto enzima PDE5, enzim PDE11 eksprimiran u insekatskim ćelijama Sf9. Ovim testom se meri vrednost IC50PDE11 za testirano jedinjenje (tj., koncentracija testiranog jedinjenja potrebna da inhibira 50% u odnosu na neinhibirane kontrole hidrolizu [<3>H]cGMP u 5'-nukleotid [<3>H]GMP katal izovanu enzimom PDE11).
[<3>H]GMP vezuje se za SPA kuglice itrijum silikata i detektuje brojanjem scintilacija.
Ekspresija i prečišćavanje PDE11:
( a) Ekspresija: Inficirati 200 ml insekatskih Sf9 ćelija (Invitrogen, Carlsbad, CA) n\10<6>/mn sa miiltinlir.ifetom infekciie 2 koristeći eksnresioni vektor hakuloviriisa koii sadrži transponovan PDE-11A1 (SEQ ID Br: 1) (pFastBac system, Invitrogen) (4xl0<7>pfu/ml). Inkubirati na 27 °C uz mućkanje na 220 obrt/min tokom 48 sati. Pokupiti inficirane ćelije taloženjem na 2000 obrt/min, 10 minuta, na 4°C. Čuvati talog inficiranih ćelija na -80°C do prečišćavanja. Resuspendovati otopljene taloge ćelija do koncentracije 1x10<7>ćelija/ml (=20 ml pufera koji se sastoji od 20 mMHepesa (pH 7,2), 1 mMEDTA, 20 mM saharoze, 150 mM NaCl i tablete inbitora proteaza). Dobro promešati i ostaviti da stoji na ledu 10 minuta. Sonikovati 5x5 sekundi, na ledu. Centrifugirati smešu na 12 000 obrt/min 10 minuta na 4°C, u SS34. Čuvati nerastvorljiv talog na -80°C i preći na prečišćavanje rastvorljivog materijala, (b) Prečišćavanje: Pripremiti kolonu (prečnika 1,0 cm, Kontes) ispiranjem prazne kolone dva puta TBS-om. Zatim pomešati kuglice (Anti-Flag M2 Agarose, Sigma) sa TSB i preneti ih u kolonu. Ostaviti kuglice da se slegnu. Isprati kolonu sa 3 zapremine kolone 0,1 M glicinom (pH 3,5). Zatim isprati kolonu sa 5 zapremina kolone TBS (ne dopustiti da se osuši). Naneti ekstrakt na kolonu i pustiti da on uđe u kolonu pod dejtvom gravitacije. Naneti na kolonu i proboj kolone. Isprati kolonu sa 15 zapremina kolone TBS. Eluirati protein u 5x1 ml alikvotima FLAG peptida (Sigma) (tj. 100 ug/ml u TBS). Eluirati zadržani protein jednim mililitrom 0,1 M glicina, i odmah dodati 25 ul IM trisa da ga neutrališe.
Metod 3A: Alternativni Scintillacioni test ( SPA) inhibicije humanog rekombinantnog enzima
PDEU
Inhibicija aktivnosti PDE11 enzima testiranim jedinjenjem može se takođe meritiin vitrotestom prema Metodu 1A koristeći, umesto enzima PDE5, enzim PDE11 eksprimiran u insekatskim ćelijama Sf9. Ovim testom se meri vrednost IC50PDE11 za testirano jedinjenje (tj., koncentracija testiranog jedinjenja potrebna da inhibira 50% u odnosu na neinhibirane kontrole hidrolizu [<3>H]cGMP u 5'-nukleotid [<3>H]GMP katalizovanu enzimom PDE11).
[<3>H]GMP vezuje se za SPA kuglice itrijum silikata i detektuje brojanjem scintilacija.
Jedinjenje karboksipiperidina je testirano Metodom 2, Metodom 2A, Metodom 3 i Metodom 3 A. Izmerene odgovarajuće vrednosti IC50za enzime PDE6 i PDE11 date su u
Tabeli E.
Jedinjenja prethodno opisana u primerima iz WO2004096810 testirana su prema Metodu 2, Metodu 2A, Metodu 3, i Metodu 3A. Izmerene odgovarajuće vrednosti IC50za enzime PDE6 i PDE11 date su u Tabeli F.
Dodatni testovi koji se mogu upotrebiti za određivanje efikasnosti testiranog jedinjenja uključuju nižcopisane Metod 4, Metod 4A, Metod 5 i Metod 6:
Metod 4: Test sa prstenovima aorte
Jedanex vivotest se može upotrebiti za merenje neposredne relaksacije prstena aorte izloženog testiranom jedinjenju. Kao što je specifičnije objašnjeno niže, testirano jedinjenje koje inhibira aktivnost enzima PDE5 dovodi do relaksacije prstena aorte pojačavajući signal cGMP (tj., inhibirajući hidrolizu cGMP u GMP katalizovanu enzimom PDE5) do čega dolazi kada je prsten aorte izložen stabilnom donoru oksida azota, kao što je dietiltriamin NONOat (diazen-l-ijum-l,2-diolat, poznat takođe kao "DETA-NO"). Test meri vrednost EC50testiranog jedinjenja (tj., koncentraciju testiranog jedinjenja koja dovodi do 50% maksimalnog mogućeg efektivnog odgovora na testirano jedinjenje).
Mužjaci pacova soja Sprague-Dawley (250-350 g) su ugušeni korišćenjem gasa CO2i njihove plućne aorte su pažljivo izvađene i stavljene u Krebsov pufer. Aorte su zatim pažljivo odvojene od vezivnog tkiva i podeljene u 8 sekcija, svaka po 3-4 mm dužine.
Prstenovi aorte su obešeni pod naprezanjem u mirovanju od 1 grama izmedju paralelnih žica od nerđajućeg čelika u 15 mililitarskom termostatu za tkiva, termostatiranom okolnim vodenim omotačem na 37°C. Napon je meren pomoću izometrijskih transduktora u Ponemahovom sistemu sa platformom za tkiva (Ponemah tissue platform system). Ostavljeno je da se svaki preparat uravnoteži najmanje 60 minuta pre testiranja jedinjenja. Tokom ovog vremena tkiva su takođe inkubirana sa 200 uM NG-monometil-L-argininom ("L-NMMA"), a inkubacioni medijuini menjani svakih 15 do 20 minuta (L-NMMA je dodavan posle svakog ispiranja da bi se održala finalna koncentracija od 200 uM u svakom termostatu za tkiva).
Posle perioda uravnotežavanja, registrovane su bazne linije napona za svako tkivo. Meren je odgovor na vazokonstriktor fenileferin (1 uM) i kada odgovor na fenileferin dostigne maksimum, meri se vaskularna reaktivnost davanjem acetilholina (1 uM). Posle još jednog perioda ispiranja, registrovana je druga bazna linija posle dodavanja vazokonstriktora noradrenalina (25 nM) svakom kupatilu i inkubiranja tkiva tokom vremenskog perioda (oko 15 minuuta) dovoljnog da tkivo dostigne stabilan tonus. Egzogeni podstrek oksidom azota postignut je korišćenjem stabilnog donora oksida azota, DETA-NO. Koncentracija DETA-NO se titruje (kumulativno u semi-log priraštajima) da bi se dostigla približno 5 do 15%-na relaksacija od prethodne vazokonstrikcije izazvane noradrenalinom. Konstruišu se krive odgovora na kumulativne koncentracije za svaki prsten , koristeći tipično 5 doza/prsten, uz 15 minuta između svakog dodavanja.
Metod 4A: Alternativni test sa prstenovima aorte
Metod 4 može se modifikovati u alternativni protokol za merenje direktne relaksacije prstenova aorte pacova izloženih testiranom jedinjenju. Ovaj alternativni metod razlikuje se od Metoda 4 u sledećem: Za alternativan metod, endotelijum se prvo ukloni blagim trljanjem lumena krvnog suda između prstiju, pre nego što se pripreme prstenovi (ogoljeni prstenovi). Naprezanje u mirovanju se postavlja na 2 grama i određuje se vazokonstrikcijski odgovor na maksimalnu koncentraciju fenileferina (1 uM), posle čega se (posle perioda ispiranja) još dva puta izloži 300 nM fenileferina. Za svako tkivo konstruiše se odnos između koncentracije i odgovora na noradrenalin u opsegu koncentracija od 0,1 do 300 nM. Posle ponovnog perioda ispiranja, tkiva se konstriktuju EC90koncentracijom noradrenalina za testiranje jedinjenja
Metod 5: Culex™ test
Delovanje testiranog jedinjenja na sistemski arterijski krvni pritisak može se proceniti u modelu sa svesnim spontano hipertenzivnim pacovom ("SHR"), kome su prethodno ubačene kanile.. Ovaj test se izvodi pomoću automatskog sistema za uzimanje uzoraka krvi ("ABS"). Culex™ ABS sistem (Bioanalvtical Svstem, Inc., West Lafavette, IN) sadrži laptop kompjuter, četiri kontrolne jedinice i metaboličke kaveze. Ovaj ABS sistem omogućuje sakupljanje velikog broja uzoraka krvi od jednog pacova, bez izazivanja nepotrebnog stresa kod životinje. Osim toga, ABS sistem omogućuje sakupljanje uzoraka urina koji se potencijalno mogu iskoristiti za identifikaciju biomarkera. Ovim pristupom izvedene su studije efikasnosti i standardne farmakokinetičke studije na svesnim nesputanim SHR pacovima da bi se istovremeno definisao odnos između slobodne koncentracije leka u plazmi ili potencijalnog/nih biomarkera i farmakološkog efekta (smanjenja srednje vrednosti arterijskog krvnog pritiska).
SHR pacovi, stari 12 do 16 nedelja, teški oko 300 g, podvrgnuti su hirurškoj kanulaciji obe jugularne vene i desne karotidne arterije. Posle oporavka od hirurškog zahvata, životinje su stavljane u Culex™ kaveze i privezane za ručicu sa senzorom koji kontroliše pokretanje kaveza kada se životinja kreće i sprečavaju uvrtanje katetara. Upostavljaju se veze između desnog jugularnog katetra i Culex™ sterilne cevčie za uzimanje uzoraka krvi i levog jugularnog katetra kroz koji se daje jedinjenje, a katetar u desnoj karotidnoj arteriji povezan je sa transduktorom pritiska da bi se beležili krvni pritisci. Da bi se održala vidljivost katetara, desna jugularna kanula se održava "tend" funkcijom Culex™ koja ispira katetar sa 20 ul heparina u fiziološkom rastvoru (10 jedinica/mL) svakih 12 minuta ili između uzimanja uzoraka, a leva jugularna kanila je ispunjena heparinom u fiziološkom rastvoru soli (20 jedinica/mL). vidljivost desne karotidne kanile se održava sporom infuzijom heparina u fiziološkom rastvoru ili direktno u produženu cevčicu kada se krvni pritisak ne registruje, ili kroz transduktor pritiska tokom merenja krvnog pritiska. Životinje se ostave da se aklimatizuju najmanje dva sata pre nego što se evaluira jedinjenje. Testirano jedinjenje se može dati intravenozno ili oralno preko cevčice. Protokoli za uzimanje uzoraka krvi (vreme uzimanja i zapremina) se programiraju korišćenjem Culex™ softvera. Ukupna količina krvi uzeta od svake životinje ne prelazi 750 uL/24h i 10 mL/kg u toku dve nedelje. Mere se puls, krvni pritisak i koncentracija leka. Sistemski arterijski krvni pritisak i puls registruje PONEMAH (Gould Instrument Svstem, Vallev View, OH), transduktor pritiska preko sistema za dobijanje podataka za beleženje krvnog pritiska i pulsa, tokom 6 do 24 sata na osnovu eksperimentalnog protokola. Srednja vrednost arterijskog krvnog pritiska (primarna završna tačka) se analizira da se dobije efikasnost jedinjenja
Korišćenjem metoda LC/MS/MS opisanog niže, analizirani su uzorci krvi za merenje koncentracije leka u plazmi, kao i za procenu potencijalnih biomarkera.
Metod LC/ MS/ MS
Pripremanje uzorka: Uzorci plazme (po 50 uL, nepoznat, kontrola ili šlepa proba) se pomešaju sa 10 uL acetonitrikvoda ili sa standardnim rastvorom testiranog jedinjenja i 150 u,L rastvora internog standarda (100 ng/mL testiranog jedinjenja u acetonitrilu). Smeša se centrifugira na 3000 obrt/min 5 minuta i 125 uL supernatanta se prenese u ploču sa 96 ležišta. Rastvarač se upari pod strujom azota a ostatak se rekonstituiše sa 80 uL acetonitrila/0,1% vodenog rastvora mravlje kiseline (20:80 v/v).
Zapremina od 20 uL svakog pripremljenog uzorka injecira se na Phenomenex Synergi 4 um MAX-RP 2,0x75 mm kolonu i eluira brzinom protoka od 0,4 mL/min postepenim eluirajem od 0,1% vodenog rastvora mravlje kiseline (mobilna faza A) do acetonitrila (mobilna faza B). Program gradijenta sastoji se od početnog nanošenja 90% mobilne faze A, posle čega sledi linearan gradijent do 75% mobilne faze B od 0,2 do 1,15 minuta posle injeciranja uzorka i održava se na 75% mobilne faze B do 2,0 minuta. Mobilna faza se linearno menja opet do 90% mobilne faze A od 2,0 do 2,1 minuta, a sledeće injeciranje se obavlja u 3,00. minutu. Detekcija se vrši masenom spektrometrijom korišćenjem elektrospreja pozitivnih jona (ESI) uz praćenje multiple reakcije prelaza m/z 454,00 (MH+ testirano jedinjenje) —>■ m/z 408,00, m/z 466,24 (MH+ testirano jedinjenje) —► 409,33. Napon raspršenog jonskog mlaza podešava se na 5000. Kalibraciona kriva se konstruiše korišćenjem odnosa površina pod maksimumima analiziranog jedinjenja u odnosu na interni standard. Tražene koncentracije se određuju inverznim predviđanjem iz odnosa površina njihovih maksimuma prema kalibracionoj krivoj.
Metod 6: Implantacija radio transmitera za telemctrijsko praćenje krvnog pritiska spontano
hipertenzivnih pacova
Dejstvo testiranog jedinjenja na sistemski arterijski krvni pritisak može se proceniti na modelu spontano hipertenzivnih pacova ("SHR") korišćenjem telemetrije. SHR pacovi se anesteziraju izofluran gasom pomoću aparata za anesteziranje izofluranom, koji se kalibriše da dodaje izofluran u nekom opsegu procenata kiseoniku kad ovaj prolazi kroz unutrašnje komore aparata. Životinje se stave u indukcionu komoru i daje im se 4-5% izoflurana dok ne dostignu hirurški nivo anestezije. Tokom hirurške intervencije održavaju se na l-2%> via nosne šupljine, kada se izofluran daje preko preko manjeg uređaja za anesteziju izofluranom, na hirurškom stočiću.
Posle davanja anestezije, pacovima su implantirani transmiteri primenom aseptičnih postupaka, sa komercijalno dostupnim sterilnim radio-telemetrijskim jedinicama (Data Sciences,International, Roseville, MN 55113-1136). Pre hirurškog zahvata, polje na kome će zahvat biti izvršen se obrije, istrlja Dial<IM>proizvodom antimikrobijskog rastvora (koji sadrži 4% hlorheksidin glukonata i 4% izopropil alkohola), posle čega se nanese rastvor joda (10%) u vidu spreja. Izvrši se 2,5 do 3,0 cm laparotomija i radio-telemetrijske jedinice se usade u abdomen, sa vrhom katetra ubačenim u abdominalnu aortu.. Za održavanje mekoće tkiva koriste se Baby Weitlaner retraktori. Presek abdominalne aorte od 1 cm delimično je seciran i taj deo nakratko zatvoren klemama, probušen iglom br.21 i vrh katetra transmitera uvučen u krvni sud i osiguran jednim 4,0 svilenim šavom pričvršćen za susedni psoas mišić Telo transmitera je zatim uvučeno u abdominalnu šupljinu i istovremeno pričvršćeno za abdominalni mišićni zid dok je zatvaran otvor 4,0 svilenim šavom. Kožni sloj je zatvoren subdermalnim kontinuiranim 4,0 šavom koji se apsorbuje. Posle zatvaranja, subkutano (s.c.) davanje markaina, praćeno je topičnim nanošenjem joda na i oko šava, respektivno. Svi pacovi su dobili postoperativnu injekciju buprenorfina @ 0,05 mg/kg, s.c. pre nego što su došli k svesti. Tipična zapremina doze za pacova od 0,300 kg biće 0,050 mL. Pre neo što se da buprenorfin, pacovi moraju u potpunosti da se oporave od operativne anestezije. Oni tada dobijaju istu dozu jednom dnevno, tokom 2 uzastopna dana, osim ako životinja ne pokaže da ima rizične postoperativne bolove.
Posle operacije, pacovi su vraćani u svoje kaveze i čuvani individualno u kavezima sa čvrstim dnom postavljenim papirom. Oporavak je trajao najmanje 7 dana pre nego što je otpočet eksperimentalni postupak. Primećeno je da pacovi tipično imaju hipertenziju tokom nekoliko dana posle operacije i vraćaju se na "normotenzivne" nivoe oko 7. postoperativnog dana. Hranjeni su standardnom hranom za pacove i davana im je voda ad libitum tokom celog eksperimentalnog perioda.
Testirano jedinjenje se daje intragastrično (i.g.), preko cevčice, korišćenjem igle za cevčice od nerđajućeg čelika, 2Vi inča (6,35 cm), br. 18 sa kuglicom na vrhu. Za davanje jedne doze dnevno, zapremina je 3,33 mL/kg, i.g. Zapremina doze testiranog jedinjenja je oko 1 mL/pacov. Nosač u kome se daje testirano jedinjenje je metilceluloza (0,5%) + Tvveen 80 (0,1%) u 50 mM citratnom puferu pH=5,0.
Podaci o krvnom pritisku se dobijaju korišćenjem programa za dobijanje podataka (Data Sciences International's data acquisition program, Version 3.0). Uzorci za krvni pritisak u trajanju od 5 sekundi beleže se u intervalima 1,5-3 minuta tokom 24 sata na dan tokom celog ispitivanja. Ovi podaci se obradjuju i daju u srednjim vrednostima u željenim vremenskim intervalima, pomoću Data Science softvera za analizu podataka. Svođenje svih drugih podataka vrši se na Microsoft Excel<IM>obrascima(eng. spreadsheets).
O. Testovi na toksičnost
Metod 7: Test na mikronukleuse
In vitrotest na mikronukleuse može se koristiti za odredjivanje mutagenog potencijala testiranog jedinjenja. Ovaj test detektuje hromozomske anomalije koje nastaju usled izlaganja testiranom jedinjenju, merenjem formiranja malih fragmenata DNK vezanih za membrane, kao što su mikronukleusi u citoplazmi interfaznih ćelija.
Test se izvodi sa ćelijama jajovoda kineskog hrčka (CHO ćelije) pod različitim testiranim uslovima u odsustvu i prisustvu metaboličke aktivacije. Saglasnost u rezultatima između ovog testa iin vitrocitogenetike iznosi oko 85%. Direktno (-S9) testiranje se izvodi primenom kontinuiranog tretmana tokom 24 sata ili 3 sata, dok testiranje metaboličke aktivacije (+S9) obuhvata 3-časovni tretman. Klastogenost je indikovana povećanim brojem ćelija sa mikronukleusima u prvoj interfazi posle tretiranja (u binukleiranim ćelijama sa blokiranom citokinezom). Rezultati se upoređuju sa nivoom citotoksičnosti (merenim udelom binukleiranih ćelija) koji proizvodi testirano jedinjenje. Da bi se pokazala validnost testa potrebno je da negativne (tretirane nosačem) i pozitivne (poznatog odgovora) kontrole odgovore u okviru utvrđenih referentnih opsega.
Negativan - Negativan rezultat ne identifikuje genotoksički rizik koji je određen specifičnim završetkom testa (pr. negativanin vitromikronukleus). Testirano jedinjenje koje pokaže negativan odgovor nije ispunilo specifične kriterijume procene testa koji mogu da obuhvate jedno, ili oba, od sledećeg: 1) reproducibilno povećanje zavisno od doze u specifičnoj završnoj tački testa u poređenju sa negativnom (nosač) kontrolom i/ili 2) jednu ili više testiranih koncentracija koje postižu najmanje povećanje specifičnih završnih tačaka u odnosu na kontrole.
Pozitivan. Pozitivan rezultat identifikuje genotoksički rizik koji je određen specifičnim završetkom testa (pr. pozitivanin vitromikronukleus). Testirano jedinjenje koje pokaže pozitivan odgovor ispunilo je specifične kriterijume procene testa koji mogu da obuhvate jedno, ili oba, od sledećeg: 1) reproducibilno povećanje zavisno od doze u specifičnoj završnoj tački testa u poređenju sa negativnom (nosač) kontrolom i/ili 2) jedna ili više testiranih koncentracija koje postižu najmanje povećanje specifičnih završnih tačaka u odnosu na kontrole.
Nepouzdan- Nepouzdan rezultat je rezervisan za situacije gde je testirano jedinjenje procenjeno u validnom testu ili testovima (npr. kriterijumi prihvatljivosti testa su zadovoljavajući), ali ne pokazuje negativan ili pozitivan rezultat kako je definisano utvrđenim kriterijumima evaluacije. To može da govori o postojanju slabog pozitivnog odgovora što zahteva dodatno ponovljeno testiranje ili krajnje potvrdno testiranje svakog pojedinačnog slučaja.
Neubedljiv - Neubedljiv rezultat je rezervisan za situacije u kojima je testirano jedinjenje procenjivano u neispravnom testu (tj. kriterij um i prihvatljivosti testa ne zadovoljavaju iz tehničkih razloga, pr. negativne i pozitivne kontrole ne odgovaraju adekvatno). Preporučuje se ponovljeno testiranje da bi se ustanovio valjan rezultat testa.
Jedinjenje karboksipiperidina je testirano u skladu sa Metodom 7 i dalo je nepouzdan rezultat.
Jedinjenja prethodno izneta u primerima iz V/02004096810 koja su testirana prema Metodu 7. Odgovarajući rezultati testa sa mikronukleusom dati su uTabeli G.
Dodatni testovi koji se mogu koristiti za procenjivanje toksičnosti testiranog jedinjenja (npr., kad test sa mikronukleusima daje dvosmislen rezultat) obuhvataju Metod 8, Metod 9 i Metod 10, koji su niže opisani:
Metod 8.In vitrostrukturne hromozomske aberacije u limfocitima periferne krvi čoveka
In vitrotest strukturnih hromozomskih aberacija može se primeniti za procenu testiranog jedinjenja u pogledu njegove sposobnosti da izazove strukturne i numeričke hromozomske aberacije u prisustvu i odsustvu sisarske metaboličke aktivacije u perifernim limfocitima čoveka.
Izračunavanja koncentracija zasnovana su na odgovarajućem faktorom grupe od 1,000. Testirano jedinjenje se rastvara i razblažuje DMSO-om, koji će služiti i kao kontrola nosača u zapremini ekvivalentnoj onoj koja je korišćena za davanje testiranog jedinjenja (1% finalna koncentracija).
Heparinizovana humana periferna venska krv zdravog muškog dobrovoljnog davaoca dodaje se medijumu za kultivisanje, posle čega se dodaje fitohemaglutinin M (Sigma Chemical Co., St. Louis, Missouri) da bi se stimulisala ćelijska deoba limfocita. Primarne kulture se inkubiraju najmanje 45 sati pre tretiranja testiranim jedinjenjem.
Koristi se sledeća pozitivna kontrola:
Korišćeni su sledeći tretmani:
Dozirane su pojedinačne kulture ćelija za svaku koncentraciju i kontrolu nosača. Ćelijskim kulturama se daje Colcemid® (Ciba, Svvitzerland), 0,1 ug/mL, 2 sata pre sakupljanja ćelija. Ćelije su pokupljene centrifugiranjem, ostavljene da nabubre u hipotoničnom rastvoru, a zatim fiksirane u rastvoru metanola i glacijalne sirćetne kiseline. Suspenzija fiksiranih ćelija se kapne na vlažnu mikroskopsku pločicu, osuši i oboji Giemsa-om. Za svaku koncentraciju testiranog leka pravljene su najmanje po 2 pločice po kulturi.
Citotoksičnost se meri procenjivanjem morfologije hromozoma i inhibicije mitoze (mitotski indeks). Mitotski indeks se određuje za sve usove tretiranja pregledanjem 1000 ćelija po jednom uslovu da bi se odredio deo ćelija u metafazi.
Maksimalna koncentracija odabrana za ispitivanje hromozomskih aberacija je najveća doza pri kojoj se očekuje dovoljan broj metafaznih ćelija koje se mogu analizirati. Ako je to moguće, najveća odabrana doza treba da suprimira mitotski indeks za oko 50%, ali ne više od 70%) smanjenja.
Najmanje jedna koncentracija za svaki uslov testiranja se odabere za analizu uz istovremenu pozitivnu kontrolu i kontrolu nosača. Mikroskopske pločice se ne analiziraju naslepo. Po nahođenju direktora studije, mogu se procenjivati dodatne koncentracije po završetku početne evaluacije da bi se dobilo dalje razjašnjenje efekta (tj. povećanje ili odsustvo aberacija).
Najveća koncentracija u testu odabrana za analizu treba da ispuni 1 od sledećih kriteerijuma: (1) da dovede približno do 50% smanjenja mitotskog indeksa, u poređenju sa kontrolom sa nosačem, (2) da pokaže dokaz o nepotpunoj rastvorljivosti, ili (3) da je ekvivalentna maksimalnoj koncentraciji od 5000 ug/mL ili 10 mM (koja god je manja). Kada je moguće, u po 100 prihvatljivih diploidnih metafaznih ćelija iz svake kulture procene se oštećenja hromozoma. Izuzetak od ovoga je vidljivo povećanje učestalosti abnormalnih ćelija za vreme sakupljanja (tj., >10 aberantnih ćelija zabeleženih u prvih 50 prihvatljivih ćelija), u kom slučaju se dalja analiza obustavlja. Metafazne ćelije odabrane za analizu moraju biti intaktne (tj. da imaju 46±2 hromozoma) i da imaju minimum hromozoma koji se preklapaju. Osim toga, hromozomi treba da budu izduženi tako da se pojedinačni kraci i centromerni regioni mogu lako identifikovati. Svaka metafazna ćelija se klasifikuje kao normalna ili abnormalna, i zabeleži se tip/tipovi i broj abnormalnosti prisutnih u ćeliji. Za abnormalne ćelije zabeleže se nonijusom X i Y koordinate na mikroskopskoj pločici. Strukturne hromozomske aberacije se klasifikuju kao prekidi hromatida (Ct brk), fragmenti hromatida (Ct Frg), oštećenja hromatida, uključujući razmene, prstenove, dicentričnosti i translokacije (R), prekidi hromozoma (CsBrk), fragmenti hromozoma (Cs Frg) i višestruki prekidi (M). Pored toga, i ćelije sa sprašenim hromozomima (PV) se unose u ukupan zbir aberacija. Ćelije koje sadrže prekide se registruju, ali se ne unose u ukupan zbir aberacija. Numeričke hromozomske aberacije su određene za svaki uslov tretiranja i za odgovarajuće kontrole sa nosačem određivanjem broja poliploidnih i endodupliranih ćelija. Indeksi poliploidnosti se dobijaju pregledanjem, kada je to moguće, 1000 metafaznih ćelija/kultura i pravljenjem tabela broja metafaznih ćelija koje su poliploidne ili endoduplirane.
Fisher-ov egzaktan jednosmerni test na ukupnom broju aberantnih ćelija iz svake tretirane grupe u poređenju sa ukupnim brojem aberantnih ćelija u negativnim kontrolama su iskorišćene za statističku analizu.<5>p-vrednost <0,05 smatra se statistički signifikantnom.
Smatra se daje test validan ako zadovoljava sledeće kriterijume:
1. Pozitivna kontrola indukuje statistički signifikantan porast procenta ćelija sa hromozomskim aberacijama kada se uporedi sa paralelnim kontrolama sa nosačem i indukovane frekvencije su uporedive s objavljenim ili referentnim podacima. 2. Kontrolne kulture sa nosačem imaju <3 ćelije sa aberacijama ili procenat koji se smatra uporediv s objavljenim ili referentnim podacima. 3. Oko 50% inhibicije mitotskog indeksa se dobija sa najvećim nivoima doza. Ovaj zahtev nije primenljiv na testirana jedinjenja za koja nije postignuta vidna citotoksičnost na maksimalnoj rastvorljivoj koncentraciji ili najvećoj dozvoljenoj dozi.
Metod 9. Studija toksičnosti na mužjacima SD/ 1GS pacova kod sedmodnevnog davanja
oralno kroz cevčicu
Toksičnost testiranog jedinjenja može se proceniti na pacovskom modelu. Ova studija određuje potencijalnu toksičnost testiranog jedinjenja i toksičnost sistematskog izlaganja ovim jedinjenjima kada se daju oralno, preko cevčica, jednom dnevno, 7 uzastopnih dana, 6 do 8 nedelja starim mužjacima Charles River SD/IGS pacova teškim između 175g i 200g. Za izvođenje ove studije koristi se Xybion Path/Tox Systcm (Xybion Medical Systems Corporation, Cedar Knolls, NJ).
Testirano jedinjenje se dozira 7 dana, jednom dnevno, oralno preko cevčice, u zapremini od 10 mL/kg telesne težine. Tri grupe pacova (n=5) dobijaju testirano jedinjenje u dozama od 30 mg/kg/dan, 100 mg/kg/dan, odnosno 500 mg/kg/dan. Kontrolna grupa (n=5) dobija nosač (0,5% metilceluloza (w/v) i 0,1% polisorbat 80 w/v u 50 mM fosfatnom puferu). Oralni put se bira zato što je to planirani put davanja ljudima. Odgovarajuća količina testiranog jedinjenja se suspenduje u 0,5% metilcelulozi (w/v) i 0,1% polisorbatu 80 w/v u 50 mM citratnom puferu. pH dozirane suspenzije održava se između 3 i 9.
Svaka životija se serijski iskrvavi u 1., 3., 8. i 24. satu posle davanja doze u Danu 1. Za metaboličke analize sakuplja se urin približno 24 sata. Jednom dnevno, pre perioda tretiranja, vrše se opservacije preživelih i životinja na samrti. Klinički simptomi se opservirajusvakog dana, 1-3 sata posle davanja doze. Posle 7. dana, vršena je eutanazija životinja totalnim iksrvavljenjem. Životinje koje su nađene mrtve stavljane su u frižider, a obdukcija je vršena što je skorije moguće (u toku radnog vremena). Krajnja telesna težina, uzorci krvi i težine organa nisu mereni kod životinja koje su nađene mrtve. Životinje koje su žrtvovane (na samrti, po planu i van plana) su odmah obdukovane. merene su im telesne težine i uzimani su uzorci krvi i svi uzorci kliničke patologije, osim uzoraka urina.
Različita tkiva (adrenalne žlezde, femurna kost, mozak, cekum, kolon, duodenum, epididimis, srce, ileum, jejunum, bubreg, jetra, pankreas, skeletni mišić biceps femora, slezina, želudac, testis, timus, tireoidea, lumbalna kičmena moždina, mezenterični limfni čvor) se izmere, brzo zamrznu, oboje i fiksiraju. Posle makroskopskog pregleda, tkiva koja su imala velike abnormalnosti zadržavaju se i ostavljaju u formalinu. Patolog obrađuje i mikroskopski ispituje sva sakupljena tkiva sa velikim abnormalnostima. Tkiva se obrežu, ukalupe, naprave se preseci i oboje hematoksilinom i eozinom i patolog ih ispituje mikroskopski po svom nahođenju. Razmazi kostne srži pripremaju se i boje VVright-ovom bojom. Da bi se razjasnila priroda tkivnih promena u nekoj životinji, po zahtevu patologa izvodi se dodatno prikupljanje tkiva, pravljenje preseka, bojenje i obavlja ispitivanje pod mikroskopom.
Kliničke opservacije, telesne težine, glavne opservacije pri obdukciji i histopatološki nalazi unose se direktno u Xybion Path/Tox System.
Metod 10. BioLum Ames- ov test na genske mutacije
Test mutagenosti naSalmonelli(poznat i kao Ames-ov test) može se iskoristiti za određivanje mutagenog potencijala testiranog jedinjenja. Test meri brzinu mutiranja bakterija koje su izložene dejstvu testiranog jedinjenja. Vidi, na primer, Ames.B.N., Durston;.W.E., Yamasaki.E. i Lee, F.D. (1973). Karcinogeni su mutageni: jednostavan sistem za testiranje koji kombinuje homogenate jetre za aktivaciju i bakterije za detekciju.. Proc. Natl Acad. Sci. USA, 70, 2281- 2285). Neki se karcinogeni aktiviraju kad se enzimski transformišu u elektrofilne vrste koje su u stanju da se kovalentno vežu za DNK. U Ames-ovom testu, S9 (9000xg supernatant) frakcije se dobijaju iz jetre pacova prethodno tretiranih fenobarbitalom (PB)/5,6-benzoflavon (BF) ili Aroclorom 1254 da bi se indukovala enzimska aktivnost koja će da metaboliše dati lek.
BioLum Ames-ov test je potpunija verzija standardnog bakterijskog testa (Ames) za genske mutacije. Da bi se pokazala validnost testa, potrebno je da negativna (sa nosačem) i pozitivna (sa poznatim odgovorom) kontrola odgovore u opsegu ustanovljenih referentnih opsega.
Negativan - Negativan rezultat ne identifikuje genotoksički rizik koji je određen specifičnim završetkom testa (pr. negativanin vitromikronukleus). Testirano jedinjenje koje pokaže negativan odgovor nije ispunilo specifične kriterijume procene testa koji mogu da obuhvate jedno, ili oba, od sledećeg: 1) reproducibilno povećanje zavisno od doze u specifičnoj završnoj tački testa u poređenju sa negativnom (nosač) kontrolom i/ili 2) jedna ili više testiranih koncentracija koje postižu najmanje povećanje specifičnih završnih tačaka u odnosu na kontrole.
Pozitivan. Pozitivan rezultat identifikuje genotoksički rizik koji je određen specifičnim završetkom testa (pr. pozitivanin vitromikronukleus). Testirano jedinjenje koje pokaže pozitivan odgovor ispunilo je specifične kriterijume procene testa koji mogu da obuhvate jedno, ili oba, od sledećeg: 1) reproducibilno povećanje zavisno od doze u specifičnoj završnoj tački testa u poređenju sa negativnom (nosač) kontrolom i/ili 2) jedna ili više testiranih koncentracija koje postižu najmanje povećanje specifičnih završnih tačaka u odnosu na kontrole.
Nepouzdan- Nepouzdan rezultat je rezervisan za situacije gde je testirano jedinjenje procenjeno u validnom testu ili testovima (npr. kriterijumi prihvatljivosti testa su zadovoljavajući), ali ne pokazuje negativan ili pozitivan rezultat kako je definisano utvrđenim kriterij um ima evaluacije. To može da govori o postojanju slabog pozitivnog odgovora što zahteva dodatno ponovljeno testiranje ili krajnje potvrdno testiranje svakog pojedinačnog slučaja.
Neubedljiv - Neubedljiv rezultat je rezervisan za situacije u kojima je testirano jedinjenje procenjivano u neispravnom testu (tj. kriterijumi prihvatljivosti testa ne zadovoljavaju iz tehničkih razloga, pr. negativne i pozitivne kontrole ne odgovaraju adekvatno). Preporučuje se ponovljeno testiranje da bi se ustanovio valjan rezultat testa.
P. Farmakokinetička/ farmakodinamička studija
Metod 11: Farmakokinetika jednostruke doze i oralna biodostu pnost kod mužjaka Sprague-Davvlev pacova posle intravenozne i oralne primene
Za procenti farmakokinetičkih osobina jednostruke doze i apsolutne oralne biodostupnosti testiranog jedinjenja može se koristitiin vivomodel. Kao što će biti specifičnije objašnjeno, testirano jedinjenje se daje Sprague-Dawley (SD) pacovima ili intravenozno ili oralno u unakrsnom tipu ispitivanja i mere se dobijene farmakokinetičke osobine i oralna biodostupnost.
Mužjacima pacova data je doza od 2,0 mg/kg oralno (n=2) kroz cevčicu u vidu suspenzije (0,5% metilceluloza/0,1% Tvveen 80 u destilovanoj vodi). Posle perioda ispiranja od 72h, istim pacovima je dat bolus doze od 2,0 mg/kg intravenozno (n=2) kao rastvor (70% PEG 400/20% 0,05 M citratni pufer pH 3/10% etanol). Serijski uzorci krvi (za plazmu) uzimani su od svakog pacova tokom 24 sata posle doza datih na oba načina. Koncentracije testiranog jedinjenja u plazmi određene su korišćenjem LC/MS/MS metoda, sa donjom granicom određivanja (LLOQ) od 1,2 (za-534) ng/mL. Farmakokinetički parametri testiranog jedinjenja određeni su iz podataka o koncentraciji u plazmi u različitim vremenima, primenom
non- compartmental metoda.
LC/MS/MS: 1) Kolona: Hvperso; AQUASIL C-18 2,lx20mm, 3,0um; 2) Mobilna faza: Vodena faza: voda sa 0,1% mravljom kiselinom,organska faza: acetontril; jonizacija: +ESI (AP1 4000). MRM: m/z 494,4 -> m/z 394,0 (Primer 261 u WO2004096810). m/z 509,44 -» m/z 409,80 (Primer 263 u WO2004096810), m/z 495.33 — m/z 395,20 (Primer 262 u VVO2004096810),. Granice detekcije su 0,12 ng/mL (Primer 261 u V/02004096810), 1,3 ng/mL (Primer 263 u VVO2004096810) i 0,11 ng/mL (Primer 262 u VVO2004096810).
V/atson (Verzija 6.4.0.04) je korišćen da se izračuna srednja koncentracija testiranog jedinjenja, odgovarajuće standardne devijacije (SD) i procentni koeficijent varijacije (%CV), kao i za procenu farmakokinetičkih parametara (izvedenihnon- compartmentalmetodima) i vezane za to statistike (srednje vrednosti, SD&CV%) kada se to može primeniti. (Pošto je n=2, ne izračunava se SD ili CV ?). Koncentracije ispod granice izračunavanja (BLQ) se daju kao nula (0) i koriste se za evaluaciju srednje koncentracije i procenu AUC. Maksimalne koncentracije u plazmi (Cmax) i vreme za koje se dostiže maksimalna koncentracija (tmax) se registruju direktno iz individualnih profila zavisnosti koncentracije u plazmi od vremena. Završna log-linearna faza krive zavisnosti koncentracije u plazmi od vremena odredjuje se linearnom regresijom podataka u eksperimentalnim tačkama. Krajnji poluživot (t/2) izračunava se kao ln(2) podeljeno apsolutnom vrednošću nagiba završne log-linearne faze. Površina pod krivom zavisnosti koncentracije u plazmi od vremena, počev od nultog vremena do vremena u kome je bila poslednja koncentracija koja se mogla odrediti (t) [AUC(o-t)] određena je korišćenjem linearnog trapezoidalnog metoda. Površina pod krivom zavisnosti koncentracije u plazmi od vremena, od nultog vremena do beskonačnosti [AUC(o-a,)] određena je kao AUC(o-t) plus ekstrapolisana površina. Ekstrapolisana površina je određena deljenjem poslednje izmerene koncentracije u plazmi nagibom završne log-linearne faze. Sistemski klirens iz plazme (CL) izračunava se kao doza/ AUC(o.«,), dok se zapremina raspodele u stacionarnom stanju (VdSS) izračunava kao CL x MRT, gde se MRT (od mean residence time), definiše kao AUMC(o.m/AUC(o-a)). Apsolutna PO biodostupnost (F) se izračunava kao odnos AUC(o.,„), normalizovane na dozu za pojedinačnu životinju posle PO davanja, prema AUC(o. ,■„), normalizovane na dozu za pojedinačnu životinju posle IV davanja planiranu unakrsnu studiju. Maksimalna koncentracija u plazmi (Cmax), vreme da se dostigne maksimalna koncentracija (tmax), krajnji poluživot (t'/i), površina pod krivom zavisnosti koncentracije u plazmi od nultog vremena do beskonačnosti [AUC(o_t)], zapremina raspodele u stacionarnom stanju (Vdss);sistemski klirens plazme (CL) i apsolutna PO biodostupnost (F) prikazani su u Tabeli C
Jedinjenje karboksipiperidina je testirano prema Metodu 11 i rezultati su prikazani u Tabeli PI. Jedinjenja opisana prethodno u primerima iz VVO2004096810 testirana su prema metodu 1 1. Rezultati za ova jedinjenja takođe su data uTabeli H.
Q. Biološki Protokoli — Istovremeno davanje sa inhibitorom enzima koji konvertuje
angiotenzin
Metod 12: Kombinaciona terapija SHR pacova
Sprovedena je studija da bi se video efekt ponovljenog oralnog doziranja jedinjenja karboksipiperidina na sniženje krvnog pritiska i da li istovremeno davanje jedinjenja karboksipiperidina sa inhibitorom enzima koji konvertuje angiotenzin, enalaprilom, može da dovede do daljeg snižavanja krvnog pritiska. Studija se sastojala u tretiranju spontano hipertenzivnih pacova (SHR), praćenih telemetrijski kao što je opisano u Metodu F, jedinjenjem karboksipiperidina (1 mg/kg jednom dnevno, oralno) i enalaprilom (0,007% u vodi za piće) pojedinačno ili u kombinaciji tokom 7 dana(Slika1) (n=12/grupa). Jedinjenje karboksipiperidina snižavalo je krvni pritisak u odnosu na vrednost bazne linije pre davanja u odnosu na grupu tretiranu nosačem za 1 1±1 mm Hg u 1. danu. Smanjenje krvnog pritiska održavano je tokom 7 dana, ostajući 9±1 mm Hg ispod bazne linije pre tretiranja u danu 7.
Enalapril takođe snižava krvni pritisak od bazne linije pre tretiranja u odnosu na grupu tretiranu nosačem sa maksimalnim sniženjem od 22±2 mm Hg u danu 7. Kombinacija jedinjenja karboksipiperidina i enalaprila snižavala je krvni pritisak više nego što je krvni pritisak bio snižavan svakim od agenasa svih dana.
Promene cGMP mehanističkog biomarkera u urinu merene su u periodu od 24 sata, 9. dana. cGMPje bio povišen u urinu sakupljenom od 0-24. sata i u grupi tretiranoj jedinjenjem karboksipiperidina i u grupi tretiranoj kombinacijom jedinjenja karboksipiperidina + enalapril, u odnosu na grupu tretiranu nosačem(Slika2) (n=T2/grupa).
Jasno je data referenca za sva dokumenta spomenuta u ovoj prijavi kao što je prethodno detaljno objašnjeno. Kada je govoreno o elementima ovog izuma ili njegovim prevashodnim oblicima, korišćeni su opisi "neki", "jedan" i "navedeni" da označe da postoje jedan ili više takvih elemenata. Termini "koji sadrži", "koji uključuje" i "koji ima" imaju nameru da budu sveobuhvatni i da znače da mogu postojati i dodatni elementi, osim onih koji su navedeni.

Claims (21)

1. Jedinjenje i farmaceutski prihvatljive soli ovog jedinjenja koja imaju strukturu
2. Jedinjenje iz zahteva 1 , naznače time, sto je slobodna kiselina.
3. Farmaceutski prihvatljive soli jedinjenja iz zahteva 1.
4. Farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje, ili farmaceutski prihvatljiva so ovog jedinjenja, čija je struktura farmaceutski prihvatljiv nosač
5. Farmaceutska kompozicija iz zahteva 4 koja sadrži slobodnu kiselinu ovog jedinjenja.
6. Farmaceutska kompozicija iz zahteva 4 koja sadrži farmaceutski prihvatljivu so ovog jedinjenja,
7. Farmaceutska kompozicija iz zahteva 4 koja sadrži i inhibitor enzima koji konvertuje angiotenzin
8. Farmaceutska kompozicija iz zahteva 4 koja sadrži i antagonist receptora angiotenzina II.
9. Postupak tretiranja stanja u subjektu, metod koji uključuje davanje subjektu terapeutski efikasne količine jedinjenja, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, strukture: gde je stanje odabrano iz grupe koju čine kardiovaskularna stanja, metabolička stanja, stanja centralnog nervnog sistema, pulmonarna stanja, seksualna disfunkcija, bol i renalna disfunkcija.
10. Postupak iz zahteva 9, naznače time , što je stanje, kardiovaskularno stanje.
11. Postupak iz zahteva 10 , naznače time , stoje kardiovaskularno stanje, hipertenzija.
12. Postupak iz zahteva 10, naznače time , što je kardiovaskularno stanje, otkazivanje srca.
13. Postupak iz zahteva 10, naznače time , stoje kardiovaskularno stanje, angina.
14. Postupak iz zahteva 9, koji uključuje davanje subjektu i terapijski efikasne količine inhibitora enzima koji konvertuje angiotenzin
15. Postupak iz zahteva 9, koji uključuje davanje subjektu i terapijski efikasne količine antagonista receptora angiotenzina II.
16. Upotreba jedinjenja ili njegove farmaceutski prihvatljive soli koji imaju strukturu za proizvodnju leka za tretiranje stanja odabranog iz grupe koju čine kardiovaskularna stanja, metabolička stanja, stanja centralnog nervnog sistema, pulmonarna stanja, seksualna disfunkcija, bol i renalna disfunkcija
17. Upotreba iz zahteva 16,naznačena time, što je stanje kardiovaskularno stanje.
18. Upotreba iz zahteva 17 ,naznačena time, što je stanje hipertenzija
19. Upotreba iz zahteva 17 ,naznačena time, što je kardiovaskularno stanje otkazivanje srca.
20. Upotreba iz zahteva 18 ,naznačena time, što je kardiovaskularno stanje angina
21. Postupak za dobijanje prvog jedinjenja strukture-. naznačen time što obuhvata reakciju drugog jedinjenja strukture: sa izonipekotinskom (heksahidroizonikotinskom) kiselinom dajući prvo jedinjenje.
RSP-2008/0197A 2005-11-10 2006-10-31 Upotreba derivata pirazola/4,3-d/pirimidin-5-il) kao inhibitora pde5 RS20080197A (sr)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US73532005P 2005-11-10 2005-11-10
PCT/IB2006/003132 WO2007054778A1 (en) 2005-11-10 2006-10-31 Pyrazolo[4,3-d]pyrimidin-5-yl)derivative used as pde5 inhibitors

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS20080197A true RS20080197A (sr) 2009-05-06

Family

ID=37685872

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RSP-2008/0197A RS20080197A (sr) 2005-11-10 2006-10-31 Upotreba derivata pirazola/4,3-d/pirimidin-5-il) kao inhibitora pde5

Country Status (29)

Country Link
US (2) US20090156618A1 (sr)
EP (1) EP1948661B1 (sr)
JP (1) JP4208959B1 (sr)
KR (1) KR101012592B1 (sr)
CN (1) CN101305007B (sr)
AP (1) AP2008004437A0 (sr)
AR (1) AR057885A1 (sr)
AT (1) ATE435865T1 (sr)
AU (1) AU2006313486B2 (sr)
BR (1) BRPI0618284A2 (sr)
CA (1) CA2629339C (sr)
CR (1) CR9966A (sr)
DE (1) DE602006007728D1 (sr)
DK (1) DK1948661T3 (sr)
DO (1) DOP2006000248A (sr)
EA (1) EA200800920A1 (sr)
EC (1) ECSP088441A (sr)
ES (1) ES2326919T3 (sr)
IL (1) IL190456A (sr)
MA (1) MA29943B1 (sr)
NL (1) NL2000291C2 (sr)
NO (1) NO20082593L (sr)
PE (1) PE20070764A1 (sr)
RS (1) RS20080197A (sr)
TN (1) TNSN08209A1 (sr)
TW (1) TW200738723A (sr)
UY (1) UY29909A1 (sr)
WO (1) WO2007054778A1 (sr)
ZA (1) ZA200803173B (sr)

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20110050654A (ko) * 2008-08-01 2011-05-16 바이오크리스트 파마수티컬즈, 인코퍼레이티드 Ｊａｋ3 억제제로서의 피페리딘 유도체
WO2010043633A1 (en) * 2008-10-15 2010-04-22 Palau Pharma, S. A. 2h-pyrazolo [4,3-d]pyrimidin-5-amine derivatives as h4 histamine receptor antagonists for the treatment of allergic, immunological and inflammatory diseases
EP2556820A4 (en) * 2010-04-05 2015-01-21 Sk Chemicals Co Ltd COMPOSITION CONTAINING PDE5 INHIBITOR FOR MITIGATION OF SKIN WRINKLES
EP3189835B1 (en) * 2011-02-28 2018-07-25 National Cerebral and Cardiovascular Center Medical agent for suppressing malignant tumor metastasis
MX363696B (es) 2011-04-21 2019-03-28 Origenis Gmbh Pirazolo[4,3-d]pirimidinas utiles como inhibidores de cinasas.
US9637491B2 (en) 2012-10-19 2017-05-02 Origenis Gmbh Pyrazolo[4,3-D]pyrimidines as kinase inhibitors
BR112015008380A2 (pt) * 2012-10-23 2017-07-04 Pfizer uso de um composto de pirazol[4,3-d]pirimidina tetrassubstituída para o tratamento de nefropatia diabética
KR20170066334A (ko) 2014-08-12 2017-06-14 주식회사 메지온 유데나필 조성물을 이용하여 폰탄 환자에서 심근 성능을 개선시키는 방법
JP2022550734A (ja) 2019-09-24 2022-12-05 メジオン ファーマ カンパニー リミテッド ウデナフィル組成物を用いた単心室心疾患における運動能力、単心室性能、および心筋性能指数（ｍｐｉ）を改善する方法

Family Cites Families (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1998001428A1 (en) 1996-07-08 1998-01-15 Du Pont Pharmaceuticals Company AMIDINOINDOLES, AMIDINOAZOLES, AND ANALOGS THEREOF AS INHIBITORS OF FACTOR Xa AND OF THROMBIN
BR9909808A (pt) 1998-04-20 2000-12-26 Pfizer Pirazolopirimidinonas inibidoras de cgmp pde5 para o tratamento da disfunção sexual
GB9822238D0 (en) * 1998-10-12 1998-12-09 Pfizer Ltd Process for preparation of pyrazolo[4,3-D]pyrimidin-7-ones and intermediates thereof
EP1123296B1 (en) 1998-10-23 2003-09-17 Pfizer Limited PYRAZOLOPYRIMIDINONE cGMP PDE5 INHIBITORS FOR THE TREATMENT OF SEXUAL DYSFUNCTION
DE19942474A1 (de) 1999-09-06 2001-03-15 Merck Patent Gmbh Pyrazolo[4,3-d]pyrimidine
CA2407594A1 (en) 2000-04-28 2001-11-08 Acadia Pharmaceuticals, Inc. Muscarinic agonists
DE10031584A1 (de) 2000-06-29 2002-01-10 Merck Patent Gmbh 5-Aminoalkyl-pyrazolo[4,3-d]pyrimidine
WO2002016348A1 (en) 2000-08-09 2002-02-28 Astrazeneca Ab Antiangiogenic bicyclic derivatives
EP1348707B1 (en) 2002-03-28 2010-08-25 Ustav Experimentalni Botaniky AV CR, v.v.i. (Institute of Experimental Botany Academy of Sciences of the Czech Republic, PRO) Pyrazolo[4,3-d]pyrimidines, processes for their preparation and methods for therapy
EP1620437B1 (en) * 2003-04-29 2009-06-17 Pfizer Limited 5,7-diaminopyrazolo¬4,3-d pyrimidines useful in the traetment of hypertension
CN1791429A (zh) 2003-05-22 2006-06-21 奥坦纳医药公司 包含pde4抑制剂和pde5抑制剂的组合物
WO2005046698A1 (en) 2003-11-10 2005-05-26 Synta Pharmaceuticals, Corp. Fused heterocyclic compounds
GB0327319D0 (en) * 2003-11-24 2003-12-24 Pfizer Ltd Novel pharmaceuticals
GB0327323D0 (en) * 2003-11-24 2003-12-31 Pfizer Ltd Novel pharmaceuticals
ES2317209T3 (es) * 2004-04-07 2009-04-16 Pfizer Inc. Pirazolo(4,3-) pirimidinas.
JP5368701B2 (ja) 2004-07-02 2013-12-18 エクセリクシス、インコーポレイテッド ｃ−Ｍｅｔモジュレーター及び使用方法
JP2008517994A (ja) * 2004-10-28 2008-05-29 ファルマシア・アンド・アップジョン・カンパニー・エルエルシー 新規医薬品

Also Published As

Publication number Publication date
TW200738723A (en) 2007-10-16
AP2008004437A0 (en) 2008-04-30
DK1948661T3 (da) 2009-09-07
DE602006007728D1 (de) 2009-08-20
KR20080063830A (ko) 2008-07-07
AU2006313486B2 (en) 2011-10-27
TNSN08209A1 (fr) 2009-10-30
PE20070764A1 (es) 2007-08-13
CA2629339C (en) 2010-07-27
NO20082593L (no) 2008-07-22
UY29909A1 (es) 2007-06-29
JP4208959B1 (ja) 2009-01-14
CR9966A (es) 2008-06-16
US8518956B2 (en) 2013-08-27
EP1948661B1 (en) 2009-07-08
CA2629339A1 (en) 2007-05-18
EA200800920A1 (ru) 2008-10-30
AR057885A1 (es) 2007-12-26
ATE435865T1 (de) 2009-07-15
NL2000291A1 (nl) 2007-05-11
KR101012592B1 (ko) 2011-02-07
IL190456A0 (en) 2008-11-03
JP2009519215A (ja) 2009-05-14
BRPI0618284A2 (pt) 2011-08-23
IL190456A (en) 2012-10-31
CN101305007B (zh) 2011-07-20
DOP2006000248A (es) 2007-10-15
US20090156618A1 (en) 2009-06-18
HK1120803A1 (en) 2009-04-09
ECSP088441A (es) 2008-06-30
AU2006313486A1 (en) 2007-05-18
MA29943B1 (fr) 2008-11-03
NL2000291C2 (nl) 2009-02-17
CN101305007A (zh) 2008-11-12
WO2007054778A1 (en) 2007-05-18
ES2326919T3 (es) 2009-10-21
US20110059993A1 (en) 2011-03-10
ZA200803173B (en) 2009-01-28
EP1948661A1 (en) 2008-07-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US9096592B2 (en) Bicyclic aza heterocycles, and use thereof
JP6054967B2 (ja) 置換アネレート化ピリミジンおよびその使用
US8518956B2 (en) 1-(1-(2-ethoxyethyl)-3-ethyl-7-(4-methylpyridin-2-ylamino)-1H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidin-5-yl) piperidine-4-carboxylic acid and salts thereof
US9505786B2 (en) Substituted annulated triazines and use thereof
JP5575274B2 (ja) 医薬組成物のためのｍｎｋｌ／ｍｎｋ２阻害活性を有する４−［シクロアルキルオキシ（ヘテロ）アリールアミノ］チエノ「２，３−ｄ］ピリミジン
JP6864674B2 (ja) ビアリールキナーゼ阻害剤
JP5344637B2 (ja) 縮合二環式ピリミジン
HK1220974A1 (zh) 三氟甲基取代的稠合嘧啶类及其用途
CN104159899A (zh) 取代的三嗪衍生物及其作为可溶性鸟苷酸环化酶激发物的用途
WO2013078765A1 (zh) 噻吩[3，2-d]并嘧啶-4-酮类化合物、其制备方法、药物组合物及用途
US20170233413A1 (en) Substituted annulated pyrimidines and use thereof
CN107074883A (zh) 氨基取代的环状嘧啶及其用途
HK1120803B (en) Pyrazolo[4,3,-d]pyrimidin-5-yl derivative used as pde5 inhibitors
HK1199641B (en) Substituted triazine derivatives and use thereof as stimulators of soluble guanylate cyclase
HK1190403B (en) Substituted imidazopyridines and imidazopyridazines and the use thereof