RS57903B1

RS57903B1 - Stabilizovane formulacije koje sadrže antitela protiv interleukin-6 receptora (il-6r)

Info

Publication number: RS57903B1
Application number: RS20181286A
Authority: RS
Inventors: Daniel B Dix; Kenneth S Graham; Douglas E Kamen; Scott M Walsh
Original assignee: Regeneron Pharma
Priority date: 2010-01-08
Filing date: 2011-01-07
Publication date: 2019-01-31
Also published as: HRP20201428T1; TWI533884B; LT3409269T; AU2011204311A1; KR20120133376A; EP4588938A2; AU2011204311B2; ECSP12012092A; EP3756652A1; HUE051115T2; ES3040609T3; US20190002574A1; PL2521536T3; US20250197515A1; PT3409269T; EP4588938A3; PL4098247T3; ZA201205035B; SI4098247T1; LT2521536T

Description

Opis

OBLAST PRONALASKA

[0001] Ovaj se pronalazak odnosi na oblast terapijskih formulacija antitela. Preciznije, ovaj se pronalazak odnosi na oblast farmaceutskih formulacija koje obuhvataju ljudsko antitelo koje se specifično veže na ljudski interleukin-6 receptor.

STANJE TEHNIKE

[0002] Terapijski makromolekuli (npr., antitela) moraju da budu formulisani na način koj ne samo da čini te molekule pogodnim za isporuku pacijentima, već takođe održava njihovu stabilnost tokom skladištenja. Na primer, terapijska antitela u tečnom rastvoru su sklona raspadanju, agregaciji i/ili neželjenim hemijskim modifikacijama osim ako rastvor nije propisno formulisan. Stabilnost antitela u tečnoj formulaciji zavisi ne samo od vrsta ekscipijenata korišćenih u toj formulaciji, već takođe i od količina i proporcija ekscipijenata jednih prema drugima. Pored toga, druga moguća svojstva nezavisno od stabilnosti moraju biti uzete u obzir kada se priprema tečna formulacija antitela. Primeri takvih dodatnih mogućih svojstava obuhvataju viskoznost rastvora i koncentrata antitela koje je moguće smestiti datom formulacijom. Dakle, kada se formuliše terapijsko antitelo, velika se pažnja mora posvetiti dolasku do formulacije koja ostaje stabilna, obuhvata odgovarajuću koncentraciju antitela, poseduje pogodu viskoznost kao i druga svojstva koja omogućavaju da se ta fromulacija praktično isporuči pacijentima.

[0003] Antitela na humanom interleukin-6 receptoru (hIL-6R) su jedan primer terapijski relevantnog makromolekula koji zahteva propisnu formulaciju. Anti-hIL-6R antitela su klinički korisna za tretiranje i/ili sprečavanje bolesti kao što je reumatoidni artritis, ankilozirajući spondilitis, i druga stanja. Primeri anti-IL-6R antitela su opisani, inter alia, u US 7,582,298; 6,410,691; 5,817,790; 5,795,695; i 6,670,373. Specifično važno anti-hIL-6R antitelo sa velikim terapijskim potencijalom je antitelo pomenuto u US 7,582,298 kao VQ8F11-21 (takođe se pominje ovde i kao "mAb1").

[0004] Iako su poznata anti-hIL-6R antitela, ostaje potreba u ovoj oblasti za novim farmaceutskim formulacijama koje obuhvataju anti-hIL-6R antitela koje su dovoljno stabilna i takođe pogodna za isporuku pacijentima.

KRATAK OPIS PRONALASKA

[0005] Ovaj pronalazak zadovoljava gore pomenutu potrebu da se dobiju farmaceutske formulacije koje obuhvataju humano antitelo koje se specifično veže na humani interleukin-6 receptor (hIL-6R).

[0006] Ovaj pronalazak obezbeđuje farmaceutsku formulaciju koja obuhvata: (i) humano antitelo koje se specifično veže na humani interleukin-6 receptor (hIL-6R), pri čemu je to antitelo u koncentraciji od 5 mg/ml do 200 mg/ml i obuhvata promenljivi region teškog lanca koji ima sekvencu amino kiseline iz SEK ID BR:18 i promenljivi region lakog lanca koji ima sekvencu amino kiseline iz SEK ID BR:26; (ii) histidinu koncentraciji od 10 mM do 25 mM; (iii) arginin u koncentraciji od 25 mM do 50 mM; (iv) saharozu u količini od 5% do 10% w/v; i (v) polisorbat 20 u količini od 0,1% do 0,2% w/v.

[0007] Formulacije antitela mogu biti sadržane unutar pogodne posude korisne za čuvanje farmaceutskih formulacija. Primeri takvih pogodnih posuda obuhvataju, npr., staklene ili plastične bočice, špriceve i patrone. Posuda mora da bude providna ili neprovidna (npr., u boji ćilibara).

[0008] Prema izvesnim varijantnim rešenjima, farmaceutske formulacije ostaju relativno stabilne posle skladištenja za nekoliko dana, meseci ili godina na datoj temperaturi. Na primer, kod izvesnih primera izvođenja, visok procenat antitela (npr., 90%, 95%, 96% ili više) se održava u svom prirodnom obliku posle barem 3, 6, 9 ili više meseci skladištenja. Procenat prirodnog oblika antitela moguće je izmeriti, npr., pomoću SE-HPLC, ili pomoću nekog drugog postupka poznatog u ovoj oblasti. Temperatura skladištenja na kojoj se održava stabilnost antitela može biti, npr., -80°C, -40°C, -20°C, 0°C, 5°C, 25°C, 45°C, ili viša.

KRATAK OPIS SLIKA NACRTA

[0009]

Slika 1 pokazuje procenat prirodnog mAb1 preostalog, kako se meri putem SE-HPLC, prema različitim količinama vremena skladištenja na -20°C (puni trouglovi), -30°C (puni kvadrati), i -80°C (puni dijamanti).

Slika 2 pokazuje procenat kiselih vrsta mAb1, kako je izmereno putem CEX-HPLC, prema različitim količinama vremena skladištenja na -20°C (puni trouglovi), -30°C (puni kvadrati), i -80°C (puni dijamanti).

Slika 3 pokazuje procenat prirodnog mAb1 zaostalog u različitim minimalnim formulacijama ekscipijenta, kao je izmereno pomoću SE-HPLC, prema različitim količinama vremena za skladištenje na - 30°C. Puni dijamanti predstavljaju formulaciju 1 (80 mg/mL mAb1, 0,13% polisorbat 20, 6% saharoza, 10 mM histidin); puni kvadrati predstavljaju formulaciju 2 (80 mg/mL mAb1, 0,13% polisorbat 20, 10 mM histidin); puni trouglovi predstavljaju formulaciju 3 (80 mg/mL mAb, 1% saharoze, 10 mM histidina); otvoreni kvadrati predstavljaju formulaciju 4 (80 mg/mL mAb1, 2% saharoze, 10 mM histidina); strelice predstavljaju formulaciju 5 (80 mg/mL mAb1, 4% saharoza, 10 mM histidin); puni krugovi predstavljaju formulaciju 6 (80 mg/mL mAb1, 6% saharoze, 10 mM histidina); krstići predstavljaju formulaciju 7 (80 mg/mL antitela, 10 mM histidina); i otvoreni krugovi predstavljaju formulaciju 8 (65 mg/mL antitelo, 10 mM histidina). Sve formulacije su iznete u Tabeli 6 (videti Primer 2, dole).

Slika 4 pokazuje procenat prirodnog mAb1 zaostalog u različitim minimalnim formulacijama ekscipijenta, kao je izmereno pomoću SE-HPLC, prema različitim količinama vremena za skladištenje na - 20°C. Puni dijamanti predstavljaju formulaciju 1 (80 mg/mL mAb1, 0,13% polisorbat 20, 6% saharoza, 10 mM histidin); puni kvadrati predstavljaju formulaciju 2 (80 mg/mL mAb1, 0,13% polisorbat 20, 10 mM histidin); puni trouglovi predstavljaju formulaciju 3 (80 mg/mL mAb, 1% saharoze, 10 mM histidin); otvoreni kvadrati predstavljaju formulaciju 4 (80 mg/mL mAb1, 2% saharozu, 10 mM histidin); zvezdice predstavljaju formulaciju 5 (80 mg/mL mAb1, 4% saharoza, 10 mM histidin); puni krugovi predstavljaju formulaciju 6 (80 mg/mL mAb1, 6% saharoza, 10 mM histidin); krstići predstavljaju formulaciju 7 (80 mg/mL antitelo, 10 mM histidin); i otvoreni krugovi predstavljaju formulaciju 8 (65 mg/mL antitelo, 10 mM histidin). Sve formulacije su iznete u Tabeli 6 (videti Primer 2, dole).

DETALJAN OPIS

[0010] Osim ako nije drugačije definisano, svi tehnički i naučni pojmovi korišćeni ovde imaju isto značenje kako to obično razume prosečan stručnjak u ovoj oblasti u koju ovaj pronalazak spada. Kako se ovde koristi, pojam "oko," kada se koristi u vezi sa određenom navedenom brojčanom vrednošću, znači da ta vrednost može da se razlikuje od navedene vrednosti za ne više od 1%. Na primer, kako se ovde koristi, pojam "oko 100" obuhvata 99 i 101 i sve vrednosti između (npr., 99,1, 99,2, 99,3, 99,4, itd.).

[0011] Iako je postupke i materijale slične ili identične onima koji su opisani ovde moguće koristiti u praksi ili testiranju ovog pronalaska, sada se opisuju preporučeni postupci i materijali.

FARMACEUTSKE FORMULACIJE

[0012] Kako se koristi ovde, izraz "farmaceutska formulacija" znači kombinaciju barem jednog aktivnog sastojka (npr., mali molekul, makromolekul, jedinjenje, itd. koje može da ispolji biološko dejstvo kod humane ili nehumane životinje), i barem jedan neaktivni sastojak koji, kada se kombinuje sa aktivnim sastrojkom i/ili jedan ili više dodatnih neaktivnih sastojaka, jeste pogodan za terapijsku isporuku humanoj ili nehumanoj životinji. Pojam "formulacija," kako se ovde koristi, znači "farmaceutska formulacija" osim ako nije specifično drugačije navedeno. Specifične komponente uzete kao primer i formulacije obuhvaćene ovim pronalaskom su sada opisane do detalja dole u tekstu.

[0013] Farmaceutske formulacije mogu, u izvesnim izvođenjima da budu formulacije fluida. Kako se ovde koristi, izraz "formulacija fluida" znači mešavinu barem dve komponente koje postoje pretežno u stanju fluida kao što je oko 5°C do oko 45°C. Formulacije fluida obuhvataju, inter alia, formulacije tečnosti. Formulacije fluida mogu imati nisku, umerenu ili visoku viskoznost zavisno od njihovih specifičnih konstituenata.

ANTITELA KOJA SE SPECIFIČNO VEZUJU NA hIL-6R

[0014] Farmaceutske formulacije obuhvataju humano antitelo, ili njegov fragment vezivanja antigena, koji se veže specifično na hIL-6R. Kako se ovde koristi, pojam "hIL-6R" znači humani receptor citokina koji specifično vezuje interleukin-6 (IL-6). Kod izvesnih izvođenja, antitelo koje je sadržano u farmaceutskim formulacijama iz ovog opisa specifično se veže na vanćelijski domen hIL-6R. Vanćelijski domen hIL-6R je predstavljen sekvencom amino kiseline iz SEK ID BR:74.

[0015] Pojam "antitelo", kako se ovde koristi, je generalno predviđen da se odnosi na molekule imunoglobulina koji sadrže četiri lanca polipeptida, dva teška (H) lanca i dva laka (L) lanca međusobno povezana disulfidnim vezama, kao i njihove multimere (npr., IgM); međutim, molekuli imunoglobulina sadrže samo tri teška lanca (t.j., nemaju lake lance) su takođe obuhvaćeni definicijom pojma "antitelo." Svaki teški lanac obuhvata promenljivi region teškog lanca (ovde skraćeno kao HCVR ili VH) i konstantni region teškog lanca. Konstantni region teškog lanca obuhvata tri domena, CH1, CH2 i CH3. Svaki laki lanac obuhvata promenljivi region lakog lanca (ovde je skraćen kao LCVR ili VL) i konstantni region lakog lanca. Konstantni region lakog lanca obuhvata jedan domen (CL1). Regione promenljivog teškog (VH) i promenljivog lakog (VL) lanca moguće je podpodeliti u regione hiperpromenljivosti, poznate kao regione određivanja komplementarnosti (CDRs), koji su ispreplitani sa regionima koji su očuvaniji (stabilniji), pod naslovom okvirni regioni (FR). Svaki promenljivi teški (VH) i promenljivi laki (VL) se sastoji od tri regiona za određivanje komplementarnosti (CDR) i četiri okvirna regiona (FR), raspoređena od amino-terminusa na karboksi terminus u sledećem redosledu: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4.

[0016] Osim ako nije specifično drugačije naznačeno, pojam "antitelo," kako se ovde koristi, treba razumeti da obuhvata potpune molekule antitela kao i njihove fragmente vezivanja antigena. Pojam "antigen vezujući deo" ili "antigen vezujući fragment" antitela (ili jednostavno "deo antitela" ili "fragment antitela"), kako se ovde koristi, se odnosi na jedan ili više fragmenata antitela koje zadržava stabilnost da se specifično veže na hIL-6R.

[0017] Kako se ovde koristi, pojam "izolovano antitelo", je predviđeno da se odnosi na antitelo koje je pretežno bez drugih antitela koja imaju različite antigenske specifičnosti (npr., izolovano antitelo koje specifično vezuje hIL-6R je pretežno bez antitela koja specifično vezuju antigene koji nisu hIL-6R).

[0018] Pojam "specifično veže," ili sličan, znači da neko antitelo ili antigen vezujući fragment njegov formira kompleks sa antigenom koji je relativno stabilan pod fiziološkim uslovima. Specifično vezivanje je moguće karakterisati konstantnom disocijacije od barem oko 1x10<-6>M ili više. Postupci za određivanje da li se dva molekula specifično vezuju su dobro poznati u ovoj oblasti i obuhvataju, na primer, dijalizu ravnoteže između jedinjenja visoke molekularne težine i male molekularne težine, površinske rezonance plazmona, i sličnog. Izolovano antitelo koje specifično veže hIL-6R može, međutim, da ima unakrsnu reaktivnost sa drugim antigenima, kao to su IL-6R molekuli od drugih vrsta. U kontekstu ovog opisa, višestruko specifična (npr. bispecifična) antitela koja se vezuju na hIL-6R kao i jedan ili više dodatnih antigena se smatra da "specifično vezuju" hIL-6R. Pored toga, izolovano antitelo može biti pretežno bez drugog ćelijskog materijala i/ili hemikalija.

[0019] Anti-hIL-6R antitelo obuhvata promenljivi region teškog lanca (HCVR) koji ima sekvencu amino kiseline SEK ID BR: 18. Anti-hIL-6R antitelo obuhvata promenljivi region lakog lanca (LCVR) koji ima sekvencu amino kiseline SEK ID br: 26.

[0020] Antitelo uzeto kao primer, ne kao ograničenje, korišćeno je ovde u Primerima se pominje kao "mAb1." Antitelo se takođe pominje u US 7,582,298 kao VQ8F11-21. mAb1 (VQ8F11-21) obuhvata par HCVR/LCVR sekvence amino kiseline koji ima SEK ID BR:18/26, i HCDR1-HCDR2-HCDR3 / LCDR1-LCDR2-LCDR3 domene predstavljene SEK ID BR:20 - 22 - 24 / SEK ID BR:28 - 30 - 32.

[0021] Farmaceutska formulacija prema ovom pronalasku obuhvata 5 mg/mL do 200 mg/mL antitela; oko 25 mg/mL do oko 180 mg/mL antitela; oko 25 mg/mL do oko 150 mg/mL antitela; ili oko 50 mg/mL do oko 180 mg/mL antitela. Na primer, formulacije mogu da obuhvate 5 mg/mL; oko 10 mg/mL; oko 15 mg/mL; oko 20 mg/mL; oko 25 mg/mL; oko 30 mg/mL; oko 35 mg/mL; oko 40 mg/mL; oko 45 mg/mL; oko 50 mg/mL; oko 55 mg/mL; oko 60 mg/mL; oko 65 mg/mL; oko 70 mg/mL; oko 75 mg/mL; oko 80 mg/mL; oko 85 mg/mL; oko 86 mg/mL; oko 87 mg/mL; oko 88 mg/mL; oko 89 mg/mL; oko 90 mg/mL; oko 95 mg/mL; oko 100 mg/mL; oko 105 mg/mL; oko 110 mg/mL; oko 115 mg/mL; oko 120 mg/mL; oko 125 mg/mL; oko 130 mg/mL; oko 131 mg/mL; oko 132 mg/mL; oko 133 mg/mL; oko 134 mg/mL; oko 135 mg/mL; oko 140 mg/mL; oko 145 mg/mL; oko 150 mg/mL; oko 155 mg/mL; oko 160 mg/mL; oko 165 mg/mL; oko 170 mg/mL; oko 175 mg/mL; oko 180 mg/mL; oko 185 mg/mL; oko 190 mg/mL; oko 195 mg/mL; ili 200 mg/mL antitela koje se specifično vezuje na hIL-6R.

EKSCIPIJENTI i pH

[0022] Farmaceutske formulacije iz ovog opisa obuhvataju jedan ili više ekscipijenata. Pojam "ekscipijent," kako se ovde koristi, označava bilo koji neterapijski agens dodat u formulaciju da bi se dobila željena konzistencija, viskoznost ili efekat stabilizacije. Farmaceutska formulacija iz ovog pronalaska obuhvata dve amino kiseline: histidin u koncentraciji od 10 do 25 mM i arginin u koncentraciji od 25 do 50 mM.

[0023] U izvesnim izvođenjima, te formulacije mogu da sadrže histidn u koncentraciji od 10 mM; oko 10,5 mM; oko 11 mM; oko 11,5 mM; oko 12 mM; oko 12,5 mM; oko 13 mM; oko 13,5 mM; oko 14 mM; oko 14,5 mM; oko 15 mM; oko 15,5 mM; 16 mM; oko 16.5 mM; oko 17 mM; oko 17,5 mM; oko 18 mM; oko 18,5 mM; oko 19 mM; oko 19,5 mM; oko 20 mM; oko 20,5 mM; oko 21 mM; oko 21,5 mM; oko 22 mM; oko 22,5 mM; oko 23 mM; oko 23,5 mM; oko 24 mM; oko 24,5 mM; ili 25 mM.

[0024] U izvesnim izvođenjima, te formulacije mogu sadržati arginin u koncentraciji od 25 mM; oko 25.5 mM; oko 26 mM; oko 26.5 mM; oko 27 mM; oko 27.5 mM; oko 28 mM; oko 28.5 mM;oko 29 mM; oko 29.5 mM; oko 30 mM; oko 35 mM; oko 40 mM; oko 45 mM; ili 50 mM.

[0025] Količina šećera sadržanog unutar farmaceutskih formulacija je od 5% do 10% w/v. Na primer, farmaceutske formulacije mogu obuhvatiti 5,0%; oko 5,5%; oko 6,0%; 6,5%; oko 7,0%; oko 7,5%; oko 8,0%; oko 8,5%; oko 9,0%; oko 9,5%; 10%. Šećer je saharoza.

[0026] Farmaceutske formulacije obuhvataju surfaktant, naime polisorbat 20. Polisorbat 20 je takođe poznat kao TWEEN 20, sorbitan monolaurat i polioksietilensorbitan monolaurat.

[0027] Količina surfaktanta sadržanog unutar farmaceutskih formulacije je od 0,1% do 0,2% w/v. Na primer, te formulacije mogu sadržati 0,10%; oko 0,11%; oko 0,12%; oko 0,13%; oko 0,14%; oko 0,15%; oko 0,16%; oko 0,17%; oko 0,18%; oko 0,19%; 0,20%.

[0028] Farmaceutske formulacije mogu imati pH od oko 5,0 do oko 8,0. Na primer, te formulacije mogu imati pH od oko 5,0; oko 5,2; oko 5,4; oko 5,6; oko 5,8; oko 6,0; oko 6,2; oko 6,4; oko 6,6; oko 6,8; oko 7,0; oko 7,2; oko 7,4; oko 7,6; oko 7,8; ili oko 8,0.

PRIMERI FORMULACIJA

[0029] Prema jednom varijantnom rešenju ovog opisa, ta farmaceutska formulacija obuhvata: (i) humano antitelo koje se specifično veže na hIL-6R (npr., mAb1); (ii) amino kiselinu (npr., histidin); i (iii) šećer (npr., saharozu). Specifično, neograničavajući primeri izvođenja obuhvaćeni ovim varijantnim rešenjem opisa su izneti u Tabeli 1. Ove formulacije nisu obuhvaćene obimom patentnih zahteva.

Tabela 1: Primeri farmaceutskih formulacija koje obuhvataju mAb1, histidin i saharozu

[0030] Prema još jednom varijantnom rešenju ovog opisa, farmaceutska supstanca obuhvata: (i) humano antitelo koje se specifično veže na hIL-6R (npr., mAb1); (ii) amino kiselinu (npr., histidin); (iii) šećer (npr., saharozu); i (iv) surfaktant (npr., polisorbat 20).

Specifično, neograničavajući primeri izvođenja obuhvaćeni varijantnim rešenjem ovog opisa su izneti u Tabelama 2A i 2B (nije u obimu ovih patentnih zahteva).

Tabela 2A: Primeri farmaceutskih formulacija koje obuhvataju mAb1, histidin, saharozu i polisorbat 20

Tabela 2B: Primeri farmaceutskih formulacija koje obuhvataju mAb1, histidin, saharozu i polisorbat 20

[0031] Prema još jednom varijantnom rešenju ovog opisa, farmaceutska supstanca obuhvata: (i) humano antitelo koje se specifično veže na hIL-6R (npr., mAb1); (ii) prva amino kiselina (npr., histidin); (iii) šećer (npr., saharoza); (iv) surfaktant (npr., polisorbat 20); i (v) druga amino kiselina (npr., arginin). Specifični, neograničavajući primeri izvođenja obuhvaćeni ovim varijantnim rešenjem opisa su izneti u Tabelama 3A, 3B, 3C, 3D, 3E i 3F. Formulacije u Tabelama 3A i 3C nisu obuhvaćene obimom patentnih zahteva. Formulacije u prva četiri stuba u Tabelama 3B, 3D, 3E, 3F nisu obuhvaćene obimom patentnih zahteva.

Tabela 3A: Primeri farmaceutskih formulacija koje obuhvataju mAb1, histidin, suharoza, polisorbat 20 i Arginin

mAb1 (mg/ml) 100 150 100 150 100 150

Tabela 3B: Primeri farmaceutskih formulacija koje sadrže mAb1, histidin, saharozu, polisorbat 20 i arginin

Tabela 3C: Primeri farmaceutskih formulacija koje obuhvataju mAb1, histidin, suharoza, polisorbat 20 i arginin

Tabela 3D: Primeri farmaceutskih formulacija koje sadrže mAb1, histidin,

saharozu, polisorbat 20 i arginin

Tabela 3E: Primeri farmaceutskih formulacija koje obuhvataju mAb1,

histidin, suharozu, polisorbat 20 i arginin

Tabela 3F: Primeri farmaceutskih formulacija koje sadrže mAb1, histidin,

saharozu, polisorbat 20 i arginin

[0032] Dodatni neograničavajući primeri farmaceutskih formulacija obuhvaćenih ovim opisom su izneti ovde na drugom mestu, uključujući radne Primere predstavljene dole.

STABILNOST I VISKOZNOST FARMACEUTSKIH FORMULACIJA

[0033] Farmaceutske formulacije iz ovog opisa obično ispoljavaju visoke nivoe stabilnosti. Pojam "stabilno," kako se ovde koristi u vezi sa farmaceutskim formulacijama, znači da antitela unutar tih farmaceutskih formulacija zadržavaju prihvatljiv stepen strukture i/ili funkciju i/ili biološku aktivnost posle skladištenja tokom definisanog perioda vremena. Formulacija može biti stabilna iako antitelo sadržano u njoj ne održava 100% njene strukture i/ili funkciju i/ili biološku aktivnost posle skladištenja tokom definisanog perioda vremena. Pod izvesnim okolnostima, održavanje od oko 80%, oko 85%, oko 90%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% strukture antitela i/ili funkcije i/ili biološku aktivnost posle skladištenja tokom definisanog perioda vremena je moguće posmatrati kao "stabilno."

[0034] Stabinost je moguće izmeriti, inter alia, određivanjem procenta zaostalog prirodnog tela u formulaciji posle skladištenja tokom definisanog perioda vremena na datoj temperaturi. Procenat prirodnog antitela moguće je odrediti , inter alia, ekskluzionom hromatografijom (npr., tečna hromatografija visokih performansi sa isključivanjem prema veličini [SE-HPLC]). "Prihvatljiv stepen stabilnosti," jer je to fraza koja se ovde koristi, znači barem 90% prirodnog oblika antitela moguće je detektovati u formulaciji posle skladištenja tokom definisane količine vremena na datoj temperaturi. Kod izvesnih izvođenja, barem oko 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ili 100% prirodnog oblika antitela moguće je detektovati u formulaciji posle skladištenja tokom definisanog perioda vremena na datoj temperaturi. Ta definisana količina vremena posle koje se meri stabilnost može da bude barem 1 mesec, barem 2 meseca, barem 3 meseca, barem 4 meseca, barem 5 meseci, barem 6 meseci, barem 7 meseci, barem 8 meseci, barem 9 meseci, barem 10 meseci, barem 11 meseci, barem 12 meseci, barem 18 meseci, barem 24 meseci, ili više. Temperatura na kojoj je tu farmaceutsku formulaciju moguće skladištti pri proceni stabilnosti može biti bilo koja temperatura od oko -80°C do oko 45°C, npr., skladištenje na oko -30°C, oko -20°C, oko 0°C, oko 5°C, oko 25°C, ili oko 45°C. Na primer, farmaceutska formulacija može da se smatra stabilnom ako se posle 3 meseca skladištenja na 5°C, više od oko 90%, 95%, 96% ili 97% prirodnog antitela detektuje putem SE-HPLC. Farmaceutsku formulaciju je takođe moguće smatrati stabilnom ako se posle 6 meseci od skladištenja na 5°C, više od oko 90%, 95%, 96% ili 97% prirodnog antitela detektuje pomoću SE-HPLC. Farmaceutska formulacija može takođe da se smatra stabilnom ako je posle 9 meseci od skladištenja na 5°C, više od oko 90%, 95%, 96% ili 97% prirodnog antitela detektovano korišćenjem SE-HPLC. Farmaceutska formulacija može takođe da se smatra stabilnom ako posle 3 meseci od skladištenja na 25°C, više od oko 90%, 95%, 96% ili 97% prirodnog antitela je detektovano korišćenjem SE-HPLC. Farmaceutska formulacja može takođe da se smatra stabilnom ako se posle 6 meseci skladištenja na 25°C, detektuje više od oko 90%, 95%, 96% ili 97% prirodnog antitela putem SE-HPLC. Farmaceutska formulacija može takođe da se smatra stabilnom ako je posle 9 meseci od skladištenja na 25°C, više od oko 90%, 95%, 96% ili 97% prirodnog antitela detektovano korišćenjem SE-HPLC.

[0035] Druge postupke je moguće koristiti da se proceni stabilnost formulacija iz ovog pronalaska kao što je, npr., diferencijalna skenirajuća kalorimetrija (DSC) da bi se odredila toplotna stabilnost, kontrolisano mešanje da bi se odredile mehanička stabilnaost, i apsorpcija na oko 350 nm ili oko 405 nm da bi se odredila zamućenost rastvora. Na primer, formulacija iz ovog opisa može da se smatra stabilnom ako, posle 6 ili više meseci skladištenja na oko 5°C do oko 25°C, promena u OD405te formulacije bude manja od oko 0,05 (npr., 0,04, 0,03, 0,02, 0,01, ili manje) od OD405za formulaciju na t=0.

[0036] Stabilnost je takođe moguće proceniti merenjem biološke aktivnosti i/ili afiniteta vezivanja antitela na njegov cilj. Na primer, formulacija iz ovog opisa može da se posmatra kao stabilna ako se, posle skladištenja na npr., 5°C, 25°C, 45°C, itd. tokom definisanog perioda vremena (npr., 1 do 12 meseci), to anti-IL-6R antitelo sadržano u toj formulaciji veže na IL-6R sa afinitetom koji je barem 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, ili više od afiniteta vezivanja antitela pre pomenutog skladištenja. Dodatni postupci za proenu stabilnosti antitela u formulaciji su prikazani na Primerima prikazanim dole.

[0037] U obliku fluida, farmaceutske formulacije mogu, u izvesnim izvođenjima, da ispolje niske do umerene nivoe viskoznosti. "Viskoznost" kako se ovde koristi može da bude "kinematička viskoznost" ili "apsolutna viskoznost". "Kinematička viskoznost" je mera otpora protoka fluida pod uticajem gravitacije. Kada se dva fluida jednake količine postave u identične kapilarne viskometre i ostave da teku pod gravitacijom, viskozni fluid zahteva duži vremenski period nego manje viskozan fluid da proteče kroz kapilar. Na primer, ako jednom fluidu treba 200 sekundi da završi svoj protok i drugom fluidu treba 400 sekundi, drugi fluid je dvostruko viskozniji od prvog na kinematičkoj skali viskoznosti. "Apsolutna viskoznost", ponekad se zove dinamička ili prosta viskoznost, je proizvod kinematičke viskoznosti i gustine fluida (apsolutna viskoznost = kinematička viskoznost x gustina). Dimenzija kinematičke viskoznosti je L<2>/T pri čemu je L dužina i T je vreme. Najčešće, kinematička viskoznost se izražava u centistokama (cSt). SI jedinica kinematičke viskoznosti je mm<2>/s, koja je 1 cSt. Apsolutna viskoznost je izražena u jedinicama centipoaza (cP). SI jedinica apsolutne viskoznosti je miliPaskal-sekund (mPa-s), pri čemu 1 cP = 1 mPa-s.

[0038] Kako se ovde koristi, nizak nivo viskoznosti, kao referenca na formulaciju fluida iz ovog opisa, će ispoljiti apsolutnu viskoznost manju od oko 20 cPoaza (cP). Na primer, smatra se da će formulacija fluida iz ovog opisa imati "nisku viskoznost," ako, kada se izmeri korišćenjem standarnih tehnika merenja viskoznosti, ta formulacija ispoljava apsolutnu viskoznost od oko 19 cP, oko 18 cP, oko 17 cP, oko 16 cP, oko 15 cP, oko 14 cP, oko 13 cP, oko 12 cP, oko 11 cP, oko 10 cP, oko 9 cP, oko 8 cP, oko 7 cP, oko 6 cP, oko 5 cP, oko 4 cP, ili manje. Kako se ovde koristi, umereni nivo viskoznosti, u vezi sa formulacijom fluida iz ovog opisa, će ispoljiti apsolutnu viskoznost od između oko 30 cP i oko 20 cP. Na primer, smatraće se da formulacija fluida iz ovog opisa ima "umerenu viskoznost," ako kada se izmeri korišćenjem standardnih tehnika merenja viskoznosti, ta formulacija ispoljava apsolutnu viskoznost od oko 30 cP, oko 29 cP, oko 28 cP, oko 27 cP, oko 26 cP, oko 25 cP, oko 24 cP, oko 23 cP, oko 22 cP, oko 21 cP ili oko 20 cP.

[0039] Kao što je ilustrovano na Primeru 6 dole, ovi pronalazači su neočekivano otkrili da formulacije fluida sa niskom do umerenom viskoznošću obuhvataju visoke koncentracije antihIL-6R antitela (npr., sve do barem 175 mg/mL) je moguće dobiti formulisanjem antitela sa 25 mM do 100 mM histidina i 25 mM do 50 mM arginina. Pored toga, još je otkriveno da je viskoznost te formulacije moguće smanjiti na čak veći nivo podešavanjem sadržaja saharoze na manje od 10%.

POSUDE ZA FARMACEUTSKE FORMULACIJE I POSTUPCI ISPORUKE

[0040] Farmaceutske formulacije opisane ovde je moguće držati unutar posude pogodne za skladištenje lekova i drugih terapijskih supstanci. Na primer, farmaceutske formulacije je moguće držati unutar zaptivene i sterilizovane plastične ili staklene posude koja ima definisanu zapreminu kao što je bočica, ampula, špric, patrona ili boca. Različiti tipovi bočica mogu biti korišćeni da se smeste formulacije iz ovog opisa uključujući, npr., provide i neprovidne (npr., ćilibarske) staklene ili plastične bočice. Slično, bilo koji tip šprica je moguće koristiti da se smeste i/ili isporuče farmaceutske formulacije iz ovog opisa.

[0041] Farmaceutske formulacije je moguće staviti u "normalne volfram" špriceve ili špriceve sa "malo volframa". Kao što će prosečni stručnjaci u ovoj oblasti razumeti, postupak pravljenja staklenih špriceva generalno obuhvata upotrebu vruće šipke od volframa koji funkcioniše da probije staklo čime se stvara rupa iz koje je tečnosti moguće izvući i istisnuti iz šprica. Ovaj proces daje kao rezultat odlaganje količina volframa u tragovima na unutrašnju površinu šprica. Naknadno pranje i drugi procesni koraci mogu biti korišćeni da bi se smanjila količina volframa u špricu. Kako se ovde koristi, pojam "normalna količina volframa" znači špric koji obuhvata više od 500 delova po milijardi (ppb) volframa. Pojam "mala količina volframa" znači da špric obuhvata manje od 500 ppb volframa. Na primer, špric sa malo volframa, prema ovom opisu, može sadržati manje od oko 490, 480, 470, 460, 450, 440, 430, 420, 410, 390, 350, 300, 250, 200, 150, 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10 ili manje ppb volframa.

[0042] Gumeni potiskivači koji se koriste u špricevima, i gumeni čepovi koji se koriste da se zatvore otvori bočica, mogu biti obloženi da bi se sprečilo zagađivanje medicinskih sadržaja šprica ili bočice, ili da se sačuva njihova stabilnost. Dakle, farmaceutske formulacije iz ovog opisa, prema izvesnim izvođenjima, mogu da budu sadržane unutar šprica koji obuhvata potiskivač sa oblogom, ili unutar bočice koja je zaptivena sa gumenim čepom sa zaptivnom oblogom. Na primer, taj potiskivač ili čep mogu biti obloženi tankim fluorokarbonskim slojem. Primeri obloženih čepova i/ili potiskivača pogodni za upotrebu sa bočicama i špricevima koji sadrže farmaceutske formulacije iz ovog opisa su pomenuti u, npr., U.S. patentima br.

4,997,423; 5,908,686; 6,286,699; 6,645,635; i 7,226,554. Posebni primeri obloženih gumenih čepova i potiskivača koje je moguće koristiti u kontekstu ovog opisa su komercijalno dostupni pod trgovačkim nazivom "FluroTec®," kompanije West Pharmaceutical Services, Inc. (Lionville, PA).

[0043] Prema izvesnim izvođenjima, farmaceutske formulacije je moguće sadržati u špricu sa malom količinom volframa koji obuhvata potiskivač sa slojem obloge od fluorokarbona. Kako se ovde razmatra u odeljku Primeri dole u tekstu, kombinacija šprica sa malom količinom volframa i potiskivača obloženog fluorokarbonskom oblogom je primećena da daje neočekivajuće karakteristike stabilnosti u pogledu farmaceutskih formulacija iz ovog opisa.

[0044] Farmaceutske formulacije je moguće isporučiti pacijentu parenteralnim rutama isporuke kao što je injekcija (npr., potkožno, intravenozno, intramuskularno, intraperitonealno, itd.) ili perkutanom, mukoznom, nazalnom, pulmonarnom ili oralnom isporukom. Moguće je koristiti brojne uređaje za višekratnu isporuku farmaceutskih formulacija kao što je olovka i/ili automatski brizgač. Primeri obuhvataju, ali se ne ograničavaju na AUTOPEN™ (Owen Mumford, Inc., Woodstock, UK), DISETRONIC™ olovka (Disetronic Medical Systems, Bergdorf, Switzerland), HUMALOG MIX 75/25™ olovka, HUMA- LOG™ olovka, HUMALIN 70/30™ olovka (Eli Lilly i Co., Indianapolis, IN), NOVOPEN™ I, II i III (Novo Nordisk, Copenhagen, Denmark), NOVOPEN JUNIOR™ (Novo Nordisk, Copenhagen, Denmark), BD™ olovka (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ), OPTIPEN™, OPTIPEN PRO™, OPTIPEN STARLET™, olovka OPTICLIK™ (sanofi-aventis, Frankfurt, Germany), da se pomenu samo neki od mogućih proizvođača. Primeri uređaja za jednokratnu isporuku kao što su olovke i/ili automatski brizgači imaju primene u potkožnoj isporuci farmaceutske supstance iz ovog opisa obuhvataju, ali se ne ograničavaju na SOLOSTAR™ olovku (sanofi-aventis), FLEXPEN™ (Novo Nordisk), i KWIKPEN™ (Eli Lilly), SURECLICK™ Autoinjector (Amgen, Thousand Oaks, CA), PENLET™ (Haselmeier, Stuttgart, Germany), EPIPEN (Dey, L.P.), i HUMIRA™ Pen (Abbott Labs, Abbott Park, IL), su samo neki od postojećih.

[0045] Ovde se takođe razmatra upotreba mikroinfuzora za isporuku farmaceutskih formulacija. Kako se ovde koristi, pojam "mikroinfuzor" znači uređaj za potkožnu isporuku projektovan da se polako isporuče velike količine (npr., najviše do oko 2,5 mL ili više) terapijske formulacije tokom produženog perioda vremena (npr., oko 10, 15, 20, 25, 30 ili više minuta). Videti, npr., U.S.

6,629,949; US 6,659,982; i Meehan et al., J. Controlled Release 46:107-116 (1996). Mikroinfuzori su posebno korisni za isporuku velikih doza terapijskih proteina sadržanih u visokoj koncentraciji (npr., oko 100, 125, 150, 175, 200 / ili više mg/mL) i/ili viskoznih rastvora.

TERAPIJSKE UPOTREBE FARMACEUTSKIH FORMULACIJA

[0046] Farmaceutske formulacije iz ovog pronalaska su korisne, inter alia, za lečenje, sprečavanje i/ili poboljšanje bilo koje bolesti ili poremećaja povezanog sa aktivnošću IL-6, uključujući bolesti ili poremećaje posredovane aktivacijom IL-6 receptora. Primeri, neograničavajućih bolesti i poremećaja koje je moguće lečiti i/ili sprečiti isporukom farmaceutskih formulacija iz ovog pronalaska obuhvataju, npr., reumatoidni artritis, ankilozirajući spondilitis, Kronovu bolest, ulcerativni kolitis, pankreatitis, juvenilni idiopatski artritis, vaskulitis, Kavasakijevu bolest, sistemski eritemski lupus, psorijazu, psorijazni artritis, Sjogrenov sindrom, Stilovu bolest, Kastlemanovu bolest, multipla sklerozu, bolesti povezane sa abnormalnom koagulacijom krvi ili fibrinolizom (npr., tromboza), (npr., kancer dojke, leukemija, kancer jajnika, melanom, kancer prostate, pankreasni kancer, limfom, kancer pluća, karcinom ćelije bubrega, kolorektalni kancer, multipli mijelom, itd.), kaheksija, hronično odbijanje transplantiranih organa i ćelija, kardiopatija, virusna infekcija (npr., HIV infekcija, EBV infekcija, itd.), plazmacitoza, hiperimunoglobulinemija, anemija, nefritis, mesoteliom, i gubitak sluha i drugih poremećaji unutrašnjeg uha.

[0047] Dakle, ovaj opis obuhvata postupke za lečenje, sprečavanje, i/iili poboljšanje bilo koje bolesti ili poremećaja povezanih sa aktivnošću IL-6 ili aktivacijom IL-6R (uključujući bilo koju od gore pomenutih kao primer navedenih bolesti, poremećaja i stanja). Terapijski postupci opisani ovde obuhvataju isporuku pacijentu bilo koje formulacije koja obuhvata anti-hIL-6R antitelo kako je ovde opisano. Pacijent kom se isporučuje ta farmaceutska formulacija može da bude, npr., bilo koja humana ili ne-humana životinja kojoj je potrebna takva terapija, sprečavanje i/ili poboljšanje, ili koji bi se inače osećao bolje od suzbijanja ili ublažavanja IL-6 i/ili IL-6R-posredovane aktivnosti. Na primer, pacijent može da bude pojedinac kom je dijagnostikovano, ili za kog se smatra da postoji rizik od uticaja bilo koje od gore pomenutih bolesti ili poremećaja. Ovaj opis još obuhvata upotrebu bilo koje od farmaceutskih formulacija opisanih ovde za proizvodnju leka za lečenje, sprečavanje i/ili poboljšanje bilo koje bolesti ili poremećaja povezanog sa aktivnošću IL-6 ili aktivacijom IL-6R (uključujući bilo koju od gore pomenutih, kao primer navedenih, bolesti, poremećaja i stanja).

PRIMERI

[0048] Sledeći priemeri su izneti da bi se dalo prosečnom stručnjaku u ovoj oblasti potpuno objašnjenje i opis načina na koji se prave i koriste postupci i supstance iz ovog pronalaska, i koje nisu predviđene da ograničavaju obim onoga što ovi pronalazači smatraju svojim pronalaskom. Nastojalo se da se postigne preciznost u pogledu korišćenih brojeva (npr., količina, temperature, itd.) ali neke eksperimetnalne greške i odstupanja treba uzeti u obzir. Osim ako nije drugačije navedeno, delovi su delovi prema težini, molekularna težina je prosečna molekularna težina, temperatura se smatra da je u stepenima Celzijusove skale, I pritisak je na ili blizu atmosferskog.

Primer 1. Stabilnost potpuno humanog antitela anti-humanog interleukin-6 receptora (IL-6R)("mAb1") posle skladištenja na niskim temperaturama (referentni primer)

[0049] U ovom Primeru, različite formulacije su napravljene sa anti-humanim IL-6R antitelom bez ekscipijenata. Primer antitela korišćenog u ovom i svim naknadnim Primerima iznetih dole u tekstu je antitelo koje obuhvata promenljivi region teškog lanca (HCVR) sa sekvencom amino kiseline iz SEK ID BR:18, i promenljivi region lakog lanca (LCVR) sa sekvencom amino kiseline iz SEK ID BR:26. Ovo antitelo se ovde pominje kao "mAb1".

[0050] Kao preliminarni eksperiment, stabilnost mAb1 u tečnom rastvoru je određena prema različitim količinama vremena u zamrznutom skladištu na -20°C, -30°C i -80°C. Koncentracija mAb1 korišćenog u ovom Primeru je bila 128 mg/mL. U različitim vremenskim tačkama, stabilnost mAb1 je određena tečnom hromatografijom visokih performansi sa ekskluzijom prema veličini (SE-HPLC) i katjonizmenjivačkom tečnom hromatografijom visokih performansi (CEX-HPLC). Stabilnost je procenjena na osnovu procenta prirodnog mAb1 koje je preostalo u uzorku (putem SE-HPLC; Tabela 4) i putem procenta kiselinskih vrsta primećenih u tom uzorku (putem CEX-HPLC; Tabela 5) (Povećanje procenta kiselinskih vrsta je dosledno sa deamidacijom antitela i zato se smatra neželjenom pojavom kada je reč o farmaceutskim formulacijama iz ovog opisa).

Tabela 4: % Prirodno mAb1 preostaje (SE-HPLC)

Tabela 5: % Kiselinske vrste (CEX-HPLC)

[0051] Rezultati iz Tabela 3 i 4 su prikazani na Slikama 1 i 2, prema opisanom redosledu. Ovi rezultati pokazuju da mAb1 može ostati stabilno pri koncentraciji od 128 mg/mL tokom barem 9 meseci kada se čuva na -80°C.

Primer 2. Stabilnost mAb1 formulacija koje sadrže minimalne ekscipijente (referentni primer)

[0052] Dobijeno je osam različitih formulacija koje sadrže mAb1 i minimalne ekscipijente kako je prikazano u Tabeli 6.

Tabela 6: mAb1 minimalne formulacije ekscipijenta

nastavak

[0053] Te formulacije su testirane na stabilnost pomoću SE-HPLC posle različitih vremenskih perioda na -30°C i -20°C. Rezultati, izraženi u procentima preostalog prirodnog mAb1, su prikazani u Tabelama 7 (-30°C skladištenje) i 8 (-20°C).

Tabela 7: % Prirodno mAb1 preostalo (SE-HPLC) posle skladištenja na -30°C

Tabela 8: % Prirodno mAb1 preostalo (SE-HPLC) posle skladištenja na -20°C

[0054] Rezultati iz Tabela 7 i 8 su prikazani na Slikama 3 i 4, prema opisanom redosledu. Kako je prikazano na ovom Primeru, stabilnost mAb1 je održana do značajnog nivoa u formulacijama 1, 4, 5 i 6 posle nekoliko meseci skladištenja na -20°C i -30°C. Ti rezultati označavaju da je stabilnost mAb1 na -20°C i -30°C moguće povećati dodavanjem barem 2% saharoze.

Primer 3. Stabilizovana formulacija mAb1 (referentni primer)

[0055] Stabilizovana formulacija koja obuhvata različite koncentracije mAb1 je pripremljena za upotrebu u Primerima 4 i 5 dole. Ova formulacija, označena kao "Formulacija A", je prikazana u Tabeli 9.

Tabela 9: Stabilizovana mAb1 Formulacija "A"

Primer 4. Stabilnost Formulacije A posle skladištenja na 5°C

[0056] Formulacija A (videti Primer 3) obuhvata 25, 50 ili 100 mg/mL mAb1 je testirana na stabilnost posle nekoliko meseci skladištenja na 5°C u providnim bočicama. Stabilnost je procenjena pomoću sledećih parametara: (a) vizuelni izgled; (b) zamućenost (OD 405 nm); (c) pH; (d) procenat ukupnog mAb1 oporavljenog (kako je izmereno pomoću RP-HPLC); (d) procenat prirodnog mAb1 oporavljenog (kako je izmereno pomoću SE-HPLC); (e) procenat glavnih vršnih vrednosti mAb1 oporavljenog (kako je izmereno pomoću CEX-HPLC); i (f) procenat kiselih vrsta mAb1 oporavljenih (kako je izmereno pomoću CEX-HPLC). Rezultati stabilnosti za Formulaciju A koji sadrže 25, 50 i 100 mg/mL od mAb1 su sažeto prikazani u Tabelama 10, 11 i 12, prema opisanom redosledu.

Tabela 10: Stabilnost Formulacije A koja obuhvata 25 mg/mL mAb1 posle skladištenja na 5°C u providnim bočicama

Tabela 11A: Stabilnost Formulacije A koja obuhvata 50 mg/mL mAb1 posle skladištenja na 5°C u providnim bočicama (0-9 meseci)

Tabela 11B: Stabilnost formulacije A koja obuhvata 50 mg/mL mAb1 posle skladištenja na 5°C u providnim bočicama (12 - 24 meseci)

Tabela 12A: Stabilnost Formulacije A koja obuhvata 100 mg/mL mAb1 posle skladištenja na 5°C u providnim bočicama (0 – 9 meseci)

Tabela 12B: Stabilnost formulacije A koja obuhvata 100 mg/mL mAb1 posle skladištenja na 5°C u providnim bočicama (12 - 24 meseca)

[0057] Rezultati ovog Primera pokazuju da je Formulacija A koja obuhvata 25, 50 ili 100 mg/mL mAb1 ostala stabilna posle barem 9 meseci skladištenja, na 5°C u providnim bočicama, sa oko 97% ili više prirodnog mAb1 peostalog u svim uzorcima posle 9 meseci skladištenja pod takvim uslovima. Za formulacije od 50 i 100 mg/mL, 96,9% i 96,5% prirodnog mAb1, prema opisanom redosledu, je detektovano posle najviše 24 meseca skladištenja na 5°C. Pored toga, procenat kiselinskih vrsta je ostao na 29% ili niže za sve analizirane vremenske tačke, čime je potvrđena stabilnost tih formulacija.

[0058] Slične studije stabilnosti su takođe izvedene korišćenjem Formulacije A koja obuhvata 75 mg/mL mAb1 posle skladištenja na 2-8°C. Nije primećeno značajno pogoršanje za bilo koju od koncentracija testiranih posle 24 meseca na 2-8°C u skladištu kako je utvrđeno pomoću SE-HPLC i CEX-HPLC (podaci nisu prikazani).

Tabela 13: Stabilnost Formulacije A koja obuhvata 25 mg/mL mAb1 posle skladištenja na 5°C u 5 mL providnim bočicama

Primer 5. Stabilnost Formulacije A proizvedene u providnim i ćilibarskim staklenim bočicama

[0059] Izvedeni su dodatni eksperimenti da bi se uporedila stabilnost Formulacije A (videti Primer 3) koji obuhvata 25 i 100 mg/mL mAb1 proizvedenog u staklenim bočicama od ćilibara prema istoj formulaciji proizvedenoj u providnim bočicama. Dva tipa ćilibarskih bočica je korišćeno u ovom Primeru: 5 mL i 20 mL ćilibarske bočice. Stabilnost je procenjena posle skladištenja na 5°C, 25°C ili 45°C na osnovu istih parametara kako je korišćeno u Primeru 4. Rezultati za formulacije od 25 mg/mL i 100 mg/mL su sažeto prikazani u Tabelama 13 do 21.

Tabela 14: Stabilnost Formulacije A koja obuhvata 100 mg/mL mAb1 posle skladištenja na 5°C u 5 mL providnim bočicama

Tabela 15: Stabilnost formulacije A koja obuhvata 25 mg/mL mAb1 posle skladištenja na 5°C u 5 mL bočicama boje ćilibara

(nastavak)

Tabela 16: Stabilnost formulacije A koja obuhvata 100 mg/mL mAb1 posle skladištenja na 5°C u 5 mL bočicama boje ćilibara

Tabela 17: Stabilnost formulacije A koja obuhvata 25 mg/mL mAb1 posle skladištenja na 5°C u 20 mL bočicama boje ćilibara

Tabela 17, nastavak ...: Stabilnost formulacije A koja obuhvata 25 mg/mL mAb1 posle skladištenja na 5°C u 20 mL bočicama boje ćilibara

Tabela 18: Stabilnost formulacije A koja obuhvata 100 mg/mL mAb1 posle skladištenja na 5°C u 20 mL bočicama boje ćilibara

Tabela 19: Stabilnost Formulacije A koja obuhvata 100 mg/mL mAb1 posle skladištenja na 25°C i 45°C u providnim bočicama

Tabela 20: Stabilnost Formulacije A koja obuhvata 100 mg/mL mAb1 posle skladištenja na 25°C i 45°C u 5 mL ćilibarskim bočicama

(Nastavak)

Tabela 21: Stabilnost Formulacije A koja obuhvata 100 mg/mL mAb1 posle skladištenja na 25°C i 45°C u 20 mL bočice boje ćilibara

[0060] Kako je prikazano na ovom Primeru, Formulacija A koja obuhvata 25 mg/mL ili 100 mg/mL mAb1 je ispoljila jednake profile stabilnosti kada je skladištena bilo u providnim ili ćilibarskim bočicama. Pored toga, kako je prikazano u Primeru 4 za skladištenje u providnim bočicama, relativno visoka stabilnost mAb1 je održavana u Formulaciji A kada se čuva bilo u providnim ili ćilibarskim bočicama na 5°C tokom najviše 12 meseci.

Primer 6. Dejstvo koncentracija arginina, histidina i saharoze na viskoznost i stabilnost formulacija koje sadrže 150 mg/mL mAb1

[0061] Pripremljeno je nekoliko formulacija koje su sadržale 150 mg/mL, 175 mg/mL i 200 mg/mL mAb1 i različite količine histidina, arginina i saharoze. Viskoznost i osmolalnost su izmerene za svaku formulaciju. Pored toga, stabilnost tih formulacija od 150 mg/mL posle 4 nedelje skladištenja na 45°C je procenjena u smislu preostalog procenta prirodnog mAb1 (pomoću SE-HPLC) i preostalog procenta glavne vršne vrednosti (pomoću CEX-HPLC). Rezultati su sažeto prikazani u Tabeli 22 (referentni primeri).

Tabela 22: Dejstvo arginina, histidina i saharoze na viskoznost i stabilnost mAb1 formulacija

nastavak

[0062] Rezultati predstavljeni u Tabeli 16 pokazuju da je povećanje koncentracije histidina na 25 mM ili 100 mM i dodavanje arginina u tu formulaciju (25 mM ili 50 mM) značajno smanjilo viskoznost formulacije u poređenju sa formulacijama koje su sadržale samo 10 mM histidin i nisu sadržale arginin. Pored toga, smanjenje koncentracije saharoze od 10% do 5% sa dodatim histidinom i argininom je smanjilo viskoznost te formulacije do još većeg nivoa.

[0063] Na osnovu barem dela gore opisanog, dobijene su sledeće formulacije (označene kao "Formulacija B" i "Formulacija C") su iznete u Tabeli 23.

Tabela 23: Stabilizovane Formulacije "B" i "C" mAb1

Primer 7. Stabilnost Formulacije B koja obuhvata 150 mg/mL mAb1 kada je proizvedeno u bočici i špricevima

[0064] Formulacija B (videti Tabelu 23) koja obuhvata 150 mg/mL mAb1 je dobijena u 2 mL staklenoj bočici i dva različita šprica: redovna i mala količina volframa. Preparati su skladišteni na 5, 25 i 45°C za različite količine vremena. Stabilnost mAb1 posle skladištenja je izmerena pomoću SE-HPLC i CEX-HPLC. Rezultati su prikazani u Tabeli 24. (Povećanje u procentu kiselinskih vrsta je u skladu sa deamidacijom antitela i prema tome se smatra neželjenim fenomenom kada je reč o farmaceutskim formulacijama iz ovog opisa).

Tabela 24: Stabilnost Formulacije B koja obuhvata 150 mg/mL mAb1 u bočici i špricu

[0065] Kako je prikazano u ovoj tabeli, Formulacija B koja obuhvata 150 mg/mL mAb1, je skladištena na 5°C u staklenoj bočici ili špricu, je ostala relativno stabilna tokom barem 3 meseca.

Primer 8: Stabilnost formulacija mAb1 u prethodno napunjenim špricevima

[0066] Niz eksperimenata je izveden da bi se procenila stabilnost različitih formulacija mAb1 u unapred napunjenim špricevima. Za ove eksperimente različiti luer i nameštena igla, špric od redovne količine volframa i špric od male količine folframa su korišćeni u kombinaciji sa različitim tipovima klipova (obloženi i neobloženi) i sa kapicom na vrhu. Formulacije su testirane za stabilnost posle skladištenja u unapred napunjenim špricevima na 45°C, 25°C i 5°C za različite količine vremena (u opsegu od 14 dana do 12 meseci, zavisno od testiranih uslova).

[0067] Šest različtiih formulacija mAb1 su testirane za stabilnost u unapred napunjenim špricevima u ovom Primeru: (1) Formulacija A (videti Tabelu 9) koja obuhvata 100 mg/mL mAb1; (2) Formulacija A (videti Tabelu 9) koja obuhvata 25 mg/mL mAb1; (3) Formulacija B (videti Tabelu 23) koja obuhvata 150 mg/mL mAb1; (4) Formulacija B (videti Tabelu 23) koja obuhvata 25 mg/mL mAb1; (5) Formulacija C (videti Tabelu 23) koja obuhvata 175 mg/mL od mAb1; i (6) Formulacija C (videti Tabelu 23) koja obuhvata 25 mg/mL od mAb1. Formulacija A nije u obuhvaćena ovde traženim obimom patentne zaštite.

[0068] Stabilnost je procenjena pomoću sledećih parametara: (a) vizuelna analiza; (b) zamućenost (OD405nm); (c) procenat oporavka pomoću RP-HPLC; (d) procenat prirodnog mAb1 pomoću SE-HPLC; (e) procenat vršne vrednosti glavnog mAb1 pomoću CEX-HPLC; i (f) procenat kiselinskih vrsta pomoću CEX-HPLC.

[0069] Rezultati iz eksperimenta uzetog kao primer gde se procenjuje stabilnost Formulacije A, koja obuhvata 100 mg/mL mAb1 u dva različita šprica (Špric #1 i Špric #2) su prikazani dole u Tabelama 25 i 26 dole.

Tabela 25: Stabilnost formulacije A obuhvata 100 mg/mL mAb1 u prethodno napunjenom špricu sa nameštenom iglom #1

Tabela 25 nast...: Stabilnost formulacije A obuhvata 100 mg/mL mAb1 u prethodno napunjenom špricu sa nameštenom iglom #1

Tabela 26: Stabilnost formulacije A obuhvata 100 mg/mL mAb1 u prethodno napunjenom špricu sa nameštenom iglom #2

(nastavak)

[0070] Rezultati iz drugog eksperimenta kao primera procene stabilnosti Formulacije C, koja obuhvata 175 mg/mL mAb1 u dva različita šprica (Špric #1 i Špric #3) su prikazani u Tabelama 27 i 28 dole.

[0071] Rezultati iz ovog niza eksperimenata pokazuju da različite formulacije ostaju relativno stabilne u prethodno napunjenim špricevima, posebno kada se čuvaju na i ispod temperatura od 25°C , tokom mesec dana ili duže. Pored toga, različite formulacije opisane ovde čini se da imaju povećanu stabilnost kada se drže u špricevima napavljenim od malo volframa koji sadže potiskivače sa fluorokarbonskom oblogom.

Tabela 27: Stabilnost formulacije C koja obuhvata 175 mg/mL mAb1 u prethodno napunjenom špricu sa nameštenom iglom #1

Tabela 28: Stabilnost formulacije C koja obuhvata 175 mg/mL mAb1 u prethodno napunjenom špricu sa nameštenom iglom #3

Claims

Patentni zahtevi

1. Farmaceutska formulacija koja obuhvata:

(i) humano antitelo koje se specifično veže na humani interleukin-6 receptor (hIL-6R), pri čemu je to antitelo u koncentraciji od 5 mg/ml do 200 mg/ml i obuhvata promenljivi region teškog lanca sa sekvencom amino kiseline od SEK ID BR:18 i promenljivi region lakog lanca sa sekvencom amino kiseline iz SEK ID BR:26;

(ii) histidin u koncentraciji od 10 mM do 25 mM;

(iii) arginin u koncentraciji od 25 mM do 50 mM;

(iv) saharozu u količini od 5% do 10% w/v; i

(v) polisorbat 20 u količini od 0,1% do 0,2% w/v.

2. Farmaceutska formulacija iz patentnog zahteva 1, pri čemu ta formulacija ima pH od oko 6.

3. Farmaceutska formulacija prema patentnom zahtevu 1 ili 2, pri čemu se barem 90% od prirodnog oblika pomenutog antitela oporavlja posle devet meseci skladištenja na 5°C, kako je određeno tečnom hromatografijom visokih performansi sa ekskluziojom prema veličini (SE-HPLC).

4. Farmaceutska formulacija prema patentnom zahtevu 1 ili 2, pri čemu se barem 95% od prirodnog oblika pomenutog antitela oporavlja posle devet meseci skladištenja na 5°C, kako je određeno tečnom hromatografijom visokih performansi sa ekskluziojom prema veličini (SE-HPLC).

5. Farmaceutska formulacija prema patentnom zahtevu 1 ili 2, pri čemu se barem 96% od prirodnog oblika pomenutog antitela oporavlja posle devet meseci skladištenja na 5°C, kako je određeno tečnom hromatografijom visokih performansi ekskluzionom prema veličini (SE-HPLC).

6. Farmaceutska formulacija prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 5 koja je sadržana u staklenoj bočici.

7. Farmaceutska formulacija prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 5 koja je sadržana u špricu.

8. Farmaceutska formulacija prema patentnom zahtevu 7 pri čemu pomenuti špric obuhvata fluorokarbonom obložen klip ili pomenuti špric je špric sa malom količinom volframa.

9. Farmaceutska formulacija prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 5 koja je sadržana u mikroinfuzoru.

10. Farmaceutska formulacija prema patentnom zahtevu 1, obuhvata:

(i) 25 do 200 mg/mL humanog antitela koje se specifično veže na humani interleukin-6 receptor (hIL-6R), pri čemu to antitelo obuhvata promenljivi region teškog lanca sa sekvencom amino kiseline od SEK ID BR:18 i promenljivi region lakog lanca sa sekvencom amino kiseline od SEK ID BR:26;

(ii) oko 25 mM histidina;

(iii) oko 5% w/v saharoze; i

(iv) oko 0,2% w/v polisorbata 20; i

(v) oko 50 mM arginina.

11. Farmaceutska formulacija prema patentnom zahtevu 1, obuhvata (i) oko 175 mg/mL humanog antitela koje se specifično veže na humani interleukin-6 receptor (hIL-6R), pri čemu pomenuto antitelo obuhvata promenljivi region teškog lanca i promenljivi region lakog lanca (HCVR / LCVR) para sekvence amino kiseline iz SEK ID BR: 18/26;

(ii) oko 25 mM histidina;

(iii) oko 5% saharoze;

(iv) oko 0,2% polisorbata 20; i

(v) oko 50 mM arginina.

12. Farmaceutska formulacija prema patentnom zahtevu 11, pri čemu je ta formulacija sadržana u prethodno napunjenom špricu sa nameštenom iglom.