RS59037B1 - Kompozicije lipidnih nanočestica i postupci za isporuku irnk - Google Patents

Kompozicije lipidnih nanočestica i postupci za isporuku irnk

Info

Publication number
RS59037B1
RS59037B1 RS20190937A RSP20190937A RS59037B1 RS 59037 B1 RS59037 B1 RS 59037B1 RS 20190937 A RS20190937 A RS 20190937A RS P20190937 A RSP20190937 A RS P20190937A RS 59037 B1 RS59037 B1 RS 59037B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
mrna
protein
cells
composition
lipid
Prior art date
Application number
RS20190937A
Other languages
English (en)
Inventor
Braydon Charles Guild
Frank Derosa
Michael Heartlein
Original Assignee
Translate Bio Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=46317537&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=RS59037(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Translate Bio Inc filed Critical Translate Bio Inc
Publication of RS59037B1 publication Critical patent/RS59037B1/sr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A61K48/0008—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
    • A61K38/1816—Erythropoietin [EPO]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/47—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2), e.g. cellulases, lactases
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • A61K38/482—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • A61K38/4846—Factor VII (3.4.21.21); Factor IX (3.4.21.22); Factor Xa (3.4.21.6); Factor XI (3.4.21.27); Factor XII (3.4.21.38)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/55—Protease inhibitors
    • A61K38/57—Protease inhibitors from animals; from humans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A61K48/0008—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition
    • A61K48/0025—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition wherein the non-active part clearly interacts with the delivered nucleic acid
    • A61K48/0041—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition wherein the non-active part clearly interacts with the delivered nucleic acid the non-active part being polymeric
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A61K48/005—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'active' part of the composition delivered, i.e. the nucleic acid delivered
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A61K48/0075—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the delivery route, e.g. oral, subcutaneous
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A61K48/0083—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the administration regime
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A61K48/0091—Purification or manufacturing processes for gene therapy compositions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/007—Pulmonary tract; Aromatherapy
    • A61K9/0073—Sprays or powders for inhalation; Aerolised or nebulised preparations generated by other means than thermal energy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Synthetic bilayered vehicles, e.g. liposomes or liposomes with cholesterol as the only non-phosphatidyl surfactant
    • A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes or liposomes coated or grafted with polymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Synthetic bilayered vehicles, e.g. liposomes or liposomes with cholesterol as the only non-phosphatidyl surfactant
    • A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes or liposomes coated or grafted with polymers
    • A61K9/1272—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes or liposomes coated or grafted with polymers comprising non-phosphatidyl surfactants as bilayer-forming substances, e.g. cationic lipids or non-phosphatidyl liposomes coated or grafted with polymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/5123—Organic compounds, e.g. fats, sugars
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
    • C07K14/505—Erythropoietin [EPO]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/81—Protease inhibitors
    • C07K14/8107—Endopeptidase (E.C. 3.4.21-99) inhibitors
    • C07K14/811—Serine protease (E.C. 3.4.21) inhibitors
    • C07K14/8121—Serpins
    • C07K14/8125—Alpha-1-antitrypsin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/52—Genes encoding for enzymes or proenzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
    • C12N15/88—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation using microencapsulation, e.g. using amphiphile liposome vesicle
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2465—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1) acting on alpha-galactose-glycoside bonds, e.g. alpha-galactosidase (3.2.1.22)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
    • C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
    • C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
    • C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12N9/644—Coagulation factor IXa (3.4.21.22)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01022—Alpha-galactosidase (3.2.1.22)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
    • C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12Y304/21022—Coagulation factor IXa (3.4.21.22)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Otolaryngology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Nanotechnology (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)

Description

Opis pronalaska
[0001] Novi pristupi i terapije su još uvek potrebni za lečenje proteinskih i enzimskih deficijencija. Na primer, bolesti lizozomskog skladištenja su grupa od približno 50 retkih naslednih metaboličkih poremećaja koji su rezultat defekata u lizozomskoj funkciji, obično usled nedostatka enzima neophodnih za metabolizam. Fabrijeva bolest je bolest lizozomskog skladištenja koja je rezultat deficijencije enzima alfa galaktozidaze (GLA) i koja prouzrokuje da se glikolipid poznat kao globotriaozilceramid nakuplja u krvnim sudovima i drugim tkivima, što dovodi do raznih bolnih manifestacija. Za određene bolesti, poput Fabrijeve bolesti, postoji potreba za zamenom proteina ili enzima koji se normalno izlučuje u krvotok od strane ćelija. Terapije, kao što je genska terapija, koje povećavaju nivo ili proizvodnju pogođenog proteina ili enzima, mogu obezbediti lečenje ili čak izlečenje ovakvih oboljenja. Ipak, postoji nekoliko ograničenja upotrebe konvencionalne genske terapije u ove svrhe.
[0002] Konvencionalna genska terapija uklјučuje upotrebu DNK u cilju insercije želјene genetičke informacije u ćelije domaćine. DNK koja je uvedena u ćeliju se obično u određenoj meri ugrađuje u genom jedne ili više transfektovanih ćelija, što omogućava dugotrajno dejstvo uvedenog genetičkog materijala u domaćinu. Iako mogu postojati značajne koristi od ovakvog kontinuiranog dejstva, ugradnja egzogene DNK u genom domaćina može takođe imati mnogo štetnih efekata. Na primer, moguće je da će uvedena DNK biti insertovana u intaktan gen, što će rezultovati mutacijom koja ometa ili čak potpuno eliminiše funkciju endogenog gena. Prema tome, genska terapija sa DNK može dovesti do oštećenja vitalne genetičke funkcije u tretiranom domaćinu, kao što je, npr. eliminacija ili štetno smanjena proizvodnja esencijalnog enzima ili, pak, remećenje gena kritičnog za regulaciju ćelijskog rasta čiji rezultat dalje može biti neregulisana ili kancerska proliferacija ćelija. Pored navedenog, sa konvencionalnom genskom terapijom zasnovanom na DNK je neophodno da bude uključena jaka promotorska sekvenca da bi se postigla efektivna ekspresija želјenog genskog proizvoda, što opet može dovesti do neželјenih promena u regulaciji normalne genske ekspresije u ćeliji. Moguće je takođe da će genetički materijal tipa DNK rezultovati indukcijom neželјenih anti-DNK antitela, što zauzvrat može pokrenuti potencijalno fatalni imuni odgovor. Pristupi genske terapije u kojima se upotrebljavaju virusni vektori mogu takođe dovesti do nepovolјnog imunog odgovora. U pojedinim okolnostima, virusni vektor se može čak integrisati u genom domaćina. Dodatno, proizvodnja virusnih vektora kliničkog gradusa je i skupa i vremenski zahtevna. Cilјana isporuka uvedenog genetičkog materijala upotrebom virusnih vektora može biti i teška za kontrolu. Stoga, dok je genska terapija zasnovana na DNK ispitivana za isporuku sekretovanih proteina upotrebom virusnih vektora (US Patent No.
6,066,626; US2004/0110709), ovi pristupi mogu biti ograničeni usled ovakvih raznih razloga.
[0003] Druga prepreka koja je postala očigledna u navedenim prethodnim pristupima, prilikom isporuke nukleinskih kiselina koje kodiraju protein koji se može izlučivati, je u nivoima proteina koji su konačno proizvedeni. Teško je postići značajne nivoe želјenog proteina u krvi, a količine istog se takođe ne održavaju konstantnim tokom vremena. Na primer, količina proteina koji se proizvodi isporukom nukleinske kiseline ne dostiže normalne fiziološke nivoe. Pogledati npr. US2004/0110709.
[0004] Nasuprot DNK, upotreba RNK kao agensa za gensku terapiju je značajno bezbednija pošto (1) RNK ne uklјučuje rizik da bude stabilno integrisana u genom transfektovane ćelije, čime se eliminiše briga da će uvedeni genetički materijal narušiti normalno funkcionisanje esencijalnog gena ili prouzrokovati mutaciju koja će rezultovati štetnim ili onkogenim efektima; (2) za efektivnu translaciju kodiranog proteina nisu potrebne strane promotorske sekvence, čime se ponovo izbegavaju mogući štetni sporedni efekti; (3) za razliku od plazmidne DNK (pDNK), informaciona RNK (iRNK) je lišena imunogenih CpG motiva tako da se ne proizvode anti-RNK antitela; i (4) bilo kakvi štetni efekti koji nastaju kao rezultat genske terapije na bazi iRNK bi bili ograničenog trajanja usled relativno kratkog poluživota RNK. Pored navedenog, nije neophodno ni da iRNK uđe u jedro da bi izvršila svoju funkciju, dok DNK mora da prevaziđe ovu glavnu barijeru.
[0005] Jedan od razloga zbog kojih se genska terapija zasnovana na iRNK nije koristila više u prošlosti, jeste što je iRNK daleko manje stabilna od DNK, posebno kada stigne do citoplazme ćelije i izložena je degradujućim enzimima. Prisustvo hidroksilne grupe na drugom atomu ugljenika u okviru ostatka šećera u iRNK, prouzrokuje steričku smetnju koja sprečava da iRNK obrazuje stabilniju strukturu dvostruke spirale tipa DNK i na taj način čini iRNK podložnijom hidrolitičkom razlaganju. Rezultat je da se, sve do skoro, široko verovalo da je iRNK previše labilna da bi izdržala protokole transfekcije. Napreci u modifikacijama u cilju stabilizacije RNK su podstakli veći interes za upotrebu iRNK umesto plazmidne DNK u genskoj terapiji. Određeni nosači isporuke, kao što su katjonski lipidni ili polimerni nosači za isporuku, mogu takođe pomoći u zaštiti transfekovane iRNK od endogenih RNaza. Ipak, uprkos povećanoj stabilnosti modifikovane iRNK, isporuka iRNK ćelijama in vivo na način koji omogućava terapijske nivoe proizvodnje proteina je još uvek izazov, posebno za iRNK koje kodiraju proteine pune dužine. Dok je isporuka iRNK koja kodira proteine koji se izlučuju prethodno razmatrana (US2009/0286852), nivoi sekretovanih proteina pune dužine koji bi zapravo bili proizvedeni putem in vivo isporuke iRNK nisu poznati i ne postoji razlog da se očekuje da će nivoi premašiti one koji se mogu uočiti kod genske terapije zasnovane na DNK.
[0006] Do danas, značajan napredak u upotrebi iRNK genske terapije je učinjen samo u primenama u kojima niski nivoi translacije nisu bili ograničavajući faktor, kao što je imunizacija sa iRNK koje kodiraju antigene. Klinička ispitivanja koja su uklјučivala vakcinaciju za tumorske antigene, intradermalnom injekcijom “gole” ili iRNK u protaminskom kompleksu, pokazala su izvodlјivost, nedostatak toksičnosti i obećavajuće rezultate. X. Su i saradnici, Mol. Pharmaceutics 8:774-787 (2011). Nažalost, niski nivoi translacije su značajno ograničili iskorišćavanje genske terapije na bazi iRNK u drugim primenama koje zahtevaju više nivoe kontinuirane ekspresije proteina kodiranog sa iRNK, da bi se ispoljio biološki ili terapijski efekat.
[0007] WO 2007/024708 opisuje RNK, oligoribonukleotidne i poliribonukleotidne molekule koji sadrže pseudouridin ili modifikovani nukleozid.
[0008] Su i saradnici, (Mol Pharm. 6. jun 2011;8(3):774-87) opisuju biorazgradive nanočestice sa strukturisanim jezgrom i omotačem i sa poli(β-amino estarskim) (PBAE) jezgrom obavijenim fosfolipidnim dvoslojnim omotačem, za isporuku vakcina na bazi iRNK.
[0009] Kormann i saradnici (Nat Biotechnol. ferbruar 2011;29(2):154-7) ispituju terapijsku korisnost hemijski modifikovane iRNK kao alternative genskoj terapiji zasnovanoj na DNK.
[0010] WO 2011/068810 opisuje kompozicije i postupke modulacije ekspresije gena ili proizvodnje proteina transfekcijom cilјnih ćelija sa nukleinskim kiselinama.
[0011] US 2012/0195936 opisuje poliribonukleotid sa sekvencom koja kodira protein ili proteinski fragment, pri čemu poliribonukleotid sadrži kombinaciju nemodifikovanih i modifikovanih nukleotida.
[0012] Pronalazak obezbeđuje kompoziciju koja sadrži (a) najmanje jedan molekul iRNK čiji najmanje jedan deo kodira funkcionalni polipeptid koji se izlučuje; i (b) lipozomski nosač za transfer koji sadrži lipidnu nanočesticu koja sadrži jedan ili više katjonskih lipida, jedan ili više nekatjonskih lipida i jedan ili više lipida modifikovanih sa PEG, za upotrebu u postupku lečenja subjekta sa defektom ili deficijencijom u navedenom proteinu koji se izlučuje, pri čemu je iRNK inkapsulirana u nosaču za transfer i pri čemu se kompozicija primenjuje isporukom preko pluća, nebulizacijom.
[0013] Isporuka genskih terapijskih agenasa sa iRNK u skladu sa pronalaskom dovodi do proizvodnje terapijski efektivnih nivoa sekretovanih proteina putem "depo efekta". iRNK koja kodira sekretovani protein se nanosi u lipidne nanočestice i dostavlјa cilјnim ćelijama in vivo. Cilјne ćelije tada deluju kao depo izvori za proizvodnju solubilnog, sektretovanog proteina u cirkulatornom sistemu, u terapijskim nivoima. U pojedinim primerima izvođenja, nivoi proizvedenog sekretovanog proteina su iznad normalnih fizioloških nivoa.
[0014] Kompozicije pronalaska su korisne u kontroli i lečenju velikog broja bolesti, naročito bolesti koje su rezultat proteinskih i/ili enzimskih deficijencija, pri čemu se protein ili enzim normalno izlučuje. Osobe koje boluju od ovakih oboljenja mogu u osnovi biti sa genetičkim defektima koji vode kompromitovanoj ekspresiji proteina ili enzima, uklјučujući, na primer, odsustvo sinteze sekretovanog proteina, smanjenje sinteze sekretovanog proteina ili sintezu sekretovanog proteina kome nedostaje ili je sa smanjenom biološkom aktivnošću.
[0015] iRNK može kodirati klinički koristan protein koji se izlučuje. Na primer, iRNK može kodirati funcionalan sekretovan enzim iz ciklusa uree ili sekretovani enzim za koga se pretpostavlja da je uključen u bolesti lizozomskog skladištenja. iRNK može kodirati, na primer, eritropoetin (npr. humani EPO) ili α-galaktozidazu (npr. humanu α-galaktozidazu (humanu GLA).
[0016] U pojedinim primerima izvođenja pronalaska, iRNK može sadržavati jednu ili više modifikacija koje obezbeđuju stabilnost iRNK (npr. u odnosu na iRNK divljeg tipa ili nativnu verziju iRNK), a može sadržavati i jednu ili više modifikacija u odnosu na iRNK divljeg tipa koja koriguju defekt za koji se pretpostavlja da je uključen u prateću aberantnu ekspresiju proteina. Na primer, nukleinske kiseline predmetnog pronalaska mogu sadržavati modifikacije jednog ili oba od 5’ i 3' netranslatirajućih regiona. Ovakve modifikacije mogu uklјučivati, ali nisu ograničene na, uklјučivanje delimične sekvence citomegalovirusnog (CMV) neposredno ranog gena tipa 1 (IE1), poli A repa, Cap1 strukture ili sekvence koja kodira humani hormon rasta (hGH)). U pojedinim primerima izvođenja, iRNK je modifikovana tako da se smanjuje imunogenost iRNK.
[0017] Takođe se razmatraju postupci lečenja subjekta koji uključuju primenu kompozicije pronalaska. Na primer, opisani su postupci lečenja ili prevencije stanja u kojima je proizvodnja određenog sekretovanog proteina i/ili upotreba određenog sekretovanog proteina neadekvatna ili kompromitovana. Postupci koji su ovde opisani mogu biti upotrebljeni za lečenje subjekta sa deficijencijom jednog ili više enzima iz ciklusa uree ili jednog ili više enzima koji su deficijentni u poremećaju lizozomskog skladištenja.
[0018] U kompozicijama pronalaska, iRNK je formulisana u lipozomskom nosaču za transfer da bi se olakšala isporuka cilјnoj ćeliji. Nosači za transfer sadrže jedan ili više katjonskih lipida, nekatjonskih lipida i lipida modifikovanih sa PEG. Na primer, nosač za transfer može sadržavati najmanje jedan od sledećih katjonskih lipida: C12-200, DLin-KC2-DMA, DODAP, HGT4003, ICE, HGT5000 ili HGT5001. U primerima izvođenja, nosač za transfer sadrži holesterol (chol) i/ili lipid modifikovan sa PEG. U pojedinim primerima izvođenja, nosači za transfer sadrže DMG-PEG2K. U određenim primerima izvođenja, nosač za transfer sadrži jednu od sledećih lipidnih formulacija: C12-200, DOPE, chol, DMG-PEG2K; DODAP, DOPE, holesterol, DMG-PEG2K; HGT5000, DOPE, chol, DMG-PEG2K, HGT5001, DOPE, chol, DMG-PEG2K.
[0019] U primerima izvođenja pronalaska, sekretovani protein se proizvodi od strane cilјne ćelije tokom kontinuiranog vremenskog perioda. Na primer, sekretovani protein može biti proizveden tokom više od jednog sata, više od četiri, više od šest, više od 12, više od 24, više od 48 sati ili više od 72 sata nakon primene. U pojedinim primerima izvođenja, maksimalan nivo polipeptida je eksprimiran oko šest sati nakon primene. U pojedinim primerima izvođenja, ekspresija polipeptida se kontinuirano održava na najmanje terapijskom nivou. U pojedinim primerima izvođenja, polipeptid je eksprimiran na najmanje terapijskom nivou tokom više od jednog, više od četiri, više od šest, više od 12, više od 24, više od 48 sati ili više od 72 sata nakon primene. U pojedinim primerima izvođenja, polipeptid je detektabilan na nivou seruma ili tkiva pacijenta (npr. u jetri ili plućima). U pojedinim primerima izvođenja, nivo detektabilnog polipeptida je posledica kontinualne ekspresije sa iRNK kompozicije tokom perioda vremena većeg od jednog, većeg od četiri, većeg od šest, većeg od 12, većeg od 24, većeg od 48 sati ili većeg od 72 sata nakon primene.
[0020] U određenim primerima izvođenja, sekretovani protein se proizvodi u nivoima iznad normalnih fizioloških nivoa. Nivo sekretovanog proteina može biti povećan u poređenju sa kontrolom.
[0021] U pojedinim primerima izvođenja, kontrola predstavlja bazalni fiziološki nivo polipeptida kod normalne individue ili u populaciji normalnih individua. U drugim primerima izvođenja, kontrola je bazalni fiziološki nivo polipeptida kod osobe sa deficijencijom u relevantnom proteinu ili polipeptidu ili u populaciji osoba sa deficijencijom u relevantnom proteinu ili polipeptidu. U pojedinim primerima izvođenja, kontrola može predstavljati normalan nivo relevantnog proteina ili polipeptida kod osobe kojoj se primenjuje kompozicija. U ostalim primerima izvođenja, kontrola je nivo ekspresije polipeptida nakon druge terapijske intervencije, npr. nakon direktne injekcije odgovarajućeg polipeptida u jednoj ili u više uporedivih vremenskih tačaka.
[0022] U određenim primerima izvođenja, polipeptid je eksprimiran u cilјnoj ćeliji na nivou koji je najmanje 1,5 put, najmanje 2 puta, najmanje 5 puta, najmanje 10 puta, najmanje 20 puta, 30 puta, najmanje 100 puta, najmanje 500 puta, najmanje 5000 puta, najmanje 50.000 puta ili najmanje 100.000 puta veći od kontrolnog. U pojedinim primerima izvođenja, stepen povećanja ekspresije koji je veći nego u kontroli se održava tokom više od jednog, više od četiri, više od šest, više od 12, više od 24 ili više od 48 sati ili više od 72 sata nakon primene. Na primer, u jednom primeru izvođenja, nivoi sekretovanog proteina koji se detektuju u serumu su za najmanje 1,5 put, najmanje 2 puta, najmanje 5 puta, najmanje 10 puta, najmanje 20 puta, 30 puta, najmanje 100 puta, najmanje 500 puta, najmanje 5000 puta, najmanje 50.000 puta ili najmanje 100.000 puta veći nego u kontroli, a tokom najmanje 48 sati ili 2 dana. U određenim primerima izvođenja, nivoi sekretovanog proteina se mogu detektovati 3 dana, 4 dana, 5 dana ili 1 nedelјu ili više nakon primene. Povećani nivoi sekretovanog proteina mogu biti detektovani u serumu i/ili u tkivu (npr. u jetri, plućima).
[0023] U pojedinim primerima izvođenja, opisani postupak obezbeđuje produžen poluživot želјenog sekretovanog proteina u cirkulaciji. Na primer, sekretovani protein može biti detektovan satima ili danima duže nego što iznosi poluživot koji se uočava nakon subkutane injekcije sekretovanog proteina. U primerima izvođenja, poluživot sekretovanog proteina se održava duže od 1 dana, 2 dana, 3 dana, 4 dana, 5 dana ili 1 nedelјe ili više.
[0024] U pojedinim primerima izvođenja pronalaska, primena podrazumeva jednu ili ponovljene doze.
[0025] Polipeptid može biti, na primer, jedan ili više od eritropoetina, α-galaktozidaze, LDL receptora, Faktora VIII, Faktora IX, α-L-iduronidaze (za MPS I), iduronat sulfataze (za MPS II), heparin-N-sulfataze (za MPS IIIA), α-N-acetilglukozaminidaze (za MPS IIIB), galaktoza 6-sultataze (za MPS IVA), lizozomske kisele lipaze, arilsulfataze-A.
[0026] Pronalazak se odnosi na kompozicije koje obezbeđuju ćeliji ili subjektu iRNK čiji najmanje jedan deo kodira funkcionalni protein, u količini koja je znatno manja od količine odgovarajućeg funkcionalnog proteina koji se proizvodi sa te iRNK. Drugim rečima, u određenim primerima izvođenja, iRNK koja je isporučena u ćeliju može proizvesti količinu proteina koja je znatno veća od količine iRNK koja je isporučena ćeliji. Na primer, u datom vremenskom periodu, na primer 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 15, 20 ili 24 sata nakon primene iRNK ćeliji ili subjektu, količina odgovarajućeg proteina generisanog tom iRNK može iznositi najmanje 1,5; 2, 3, 5, 10, 15, 20, 25, 50, 100, 150, 200, 250, 300, 400, 500 ili više puta više od količine iRNK koja je zapravo primenjena ćeliji ili subjektu. Navedeno može biti izmereno na osnovu odnosa mase po masi, na osnovu odnosa molova po molu i/ili molekula po molekulu. Protein može biti izmeren na razne načine. Na primer, u ćeliji, izmereni protein može biti protein koji je kvantifikovan kao unutarćelijski protein, vanćelijski protein ili kombinacija ova dva. Kod subjekta, izmereni protein može biti protein koji je izmeren u serumu; u specifičnom tkivu ili tkivima kao što su jetra, bubreg, srce ili mozak; u specifičnom tipu ćelija kao što je jedan od raznih tipova ćelija jetre ili mozga; ili u bilo kojoj od kombinacija seruma, tkiva i/ili tipa ćelije. Štaviše, bazalna količina endogenog proteina može biti izmerena u ćeliji ili subjektu pre primene iRNK i potom oduzeta od količine proteina koji je izmeren nakon primene iRNK, da bi se dobila količina odgovarajućeg proteina koji je proizveden sa iRNK. Na ovaj način, iRNK može obezbediti rezervoar ili depo izvor velike količine terapijskog materijala ćeliji ili subjektu, na primer, u poređenju sa količinom iRNK koja je isporučena ćeliji ili subjektu. Depo izvor može delovati kao kontinualni izvor za ekspresiju polipeptida sa iRNK tokom kontinuiranog vremenskih perioda.
[0027] Prethodno razmatrane i mnoge druge karakteristike i prateće prednosti predmetnog pronalaska će postati razumljivije nakon detaljnog opisa pronalaska koji sledi, kada se uzmu u obzir zajedno sa pridruženim primerima. Razni primeri izvođenja koji su ovde opisani su komplementarni i mogu se kombinovati ili koristiti zajedno, na način koji stručnjak smatra relevantnim i u skladu sa smernicama koje su ovde opisane.
KRATAK OPIS NACRTA
[0028]
SL.1 prikazuje nukleotidnu sekvencu 5’ CMV sekvence (SEQ ID NO:1), gde je X, ukoliko je prisutan, GGA.
SL.2 prikazuje nukleotidnu sekvencu 3’ hGH sekvence (SEQ ID NO:2).
SL.3 prikazuje nukleotidnu sekvencu iRNK za humani eritropoetin (EPO) (SEQ ID NO:3). Na 5’ kraju ove sekvence se bočno može nalaziti SEQ ID NO:1, a na 3' kraju SEQ ID NO:2.
SL.4 prikazuje nukleotidnu sekvencu iRNK za humanu alfa-galaktozidazu (GLA) (SEQ ID NO:4). Na 5’ kraju ove sekvence se bočno može nalaziti SEQ ID NO:1, a na 3' kraju SEQ ID NO:2.
SL.5 prikazuje nukleotidnu sekvencu iRNK za humani alfa-1 antitripsin (A1AT) (SEQ ID NO:5). Na 5’ kraju ove sekvence se bočno može nalaziti SEQ ID NO:1, a na 3' kraju SEQ ID NO:2.
SL.6 prikazuje nukleotidnu sekvencu iRNK za humani faktor IX (FIX) (SEQ ID NO:6). Na 5’ kraju ove sekvence bočno se bočno može nalaziti SEQ ID NO:1, a na 3' kraju SEQ ID NO:2.
SL.7 prikazuje kvantifikaciju sekretovanih nivoa hEPO proteina upotrebom ELISA testa. Detektovani protein je rezultat njegove proizvodnje sa hEPO iRNK koja je intravenski isporučena primenom jednokratne doze raznih formulacija lipidnih nanočestica. Formulacije sa C12-200 (30 ug), HGT4003 (150 ug), ICE (100 ug), DODAP (200 ug) su predstavlјene kao katjonska/jonizujuća lipidna komponenta svakog ispitivanog proizvoda (Formulacije 1-4). Vrednosti su izračunate analizom krvi koji je uzorkovana četiri sata nakon primene.
SL.8 prikazuje merenje hematokrita kod miševa tretiranih sa jednom IV dozom lipidnih nanočestica koje su sadržavale iRNK za humani EPO (Formulacije 1-4). Uzorci pune krvi su uzimani 4 sata (Dan 1), 24 h (Dan 2), 4 dana, 7 dana i 10 dana nakon primene.
SL. 9 prikazuje merenja hematokrita kod miševa tretiranih sa lipidnim nanočesticama koje su sadržavale iRNK za humani EPO, i to bilo sa jednom IV dozom ili sa tri injekcije (dana 1, dana 3, dana 5). Uzorci pune krvi su uzimani pre injeciranja (dan -4), na Dan 7 i Dan 15. Formulacija 1 je primenjena: (30 ug, jednokratna doza) ili (3 x 10 ug, doze date dana 1, dana 3, dana 5); Formulacija 2 je primenjena: (3 x 50 ug, doze date dana 1, dana 3, dana 5).
SL. 10 prikazuje kvantifikaciju sekretovanih nivoa humanog α-galaktozidaznog (hGLA) proteina upotrebom ELISA testa. Detektovani protein je rezultat proizvodnje sa iRNK za hGLA koja je isporučena lipidnim nanočesticama (Formulacija 1; jednokratna intravenska doza od 30 ug, izracunato na osnovu inkapsulirane iRNK). hGLA protein je detektovan tokom 48 sati.
SL. 11 prikazuje hGLA aktivnost u serumu. hGLA aktivnost je izmerena upotrebom supstrata 4-metilumbeliferil-α-D-galaktopiranozida (4-MU-α-gal), na 37°C. Podaci predstavljaju srednju vrednost od 6 do 9 pojedinačnih merenja.
SL. 12 prikazuje kvantifikaciju nivoa hGLA proteina u serumu upotrebom ELISA testa. Protein je proizveden sa hGLA iRNK koja je isporučena putem lipidnih nanočestica na bazi C12-200 (C12-200:DOPE:Chol:DMGPEG2K, 40:30:25:5 (Formulacija 1); 30 ug iRNK, izračunato na osnovu inkapsulirane iRNK, jednokratna IV doza). hGLA protein je praćen tokom 72 sata. po jednokratnoj intravenskoj dozi, izračunato na osnovu inkapsulirane iRNK). hGLA protein je praćen tokom 72 sata.
SL. 13 prikazuje kvantifikaciju nivoa hGLA proteina u jetri, bubrezima i slezini upotrebom ELISA testa. Protein je proizveden sa hGLA iRNK koja je isporučena putem lipidnih nanočestica na bazi C12-200 (Formulacija 1; 30 ug iRNK, izračunato na osnovu inkapsulirane iRNK, jednokratna IV doza). hGLA protein je praćen tokom 72 sata.
SL. 14 prikazuje studiju odgovora na dozu, praćenjem proizvodnje hGLA proteina u vidu sekretovanog humanog GLA proteina nakon MRT u serumu (A) i jetri (B). Uzorci su mereni 24 časa nakon primene (Formulacija 1; jednokratna doza, IV, N=4 miša/grupi) - kvantifikacija ELISA testom.
SL. 15 prikazuje farmakokinetički profil alfa-galaktozidaze nakon ERT kod atimičnih golih (engl. nude) miševa (doza od 40 ug/kg), kao i za hGLA protein proizveden sa MRT (Formulacija 1; doza iRNK od 1,0 mg/kg).
SL. 16 prikazuje kvantifikaciju nivoa sekretovanog hGLA proteina kod Fabri miševa tretiranih sa MRT, upotrebom ELISA testa. hGLA protein je proizveden sa hGLA iRNK koja je isporučena putem lipidnih nanočestica na bazi C12-200 (Formulacija 1; 10 ug iRNK po jednokratnoj intravenskoj dozi, izračunato na osnovu inkapsulirane iRNK). Serum je praćen tokom 72 sata.
SL.17 prikazuje kvantifikaciju nivoa hGLA proteina u jetri, bubrezima, slezini i srcu Fabri KO miševa tretiranih sa MRT, upotrebom ELISA testa. Protein je proizveden sa hGLA iRNK koja je isporučena putem lipidnih nanočestica na bazi C12-200 (Formulacija 1; 30 ug iRNK, izračunato na osovu inkapsulirane iRNK, jednokratna IV doza). hGLA protein je praćen tokom 72 sata. Literaturne vrednosti koje predstavlјaju normalne fiziološke nivoe su prikazane u vidu isprekidane linije.
SL.18 prikazuje kvantifikaciju nivoa sekretovanog hGLA proteina kod Fabri miševa tretiranih sa MRT i alfa-galaktozidazom, upotrebom ELISA testa. Obe terapije su primenjene u vidu jednokratne intravenske doze od 1,0 mg/kg.
SL. 19 prikazuje kvantifikaciju nivoa hGLA proteina u jetri, bubrezima, slezini i srcu kod Fabri KO miševa tretiranih sa MRT i ERT (za alfa-galaktozidazu), upotrebom ELISA testa. Protein je proizveden sa hGLA iRNK koja je isporučena putem lipidnih nanočestica (Formulacija 1; 1,0 mg/kg iRNK, izračunato na osnovu inkapsulirane iRNK, jednokratna IV doza).
SL. 20 prikazuje relativnu kvantifikaciju globotrioazilceramida (Gb3) i lyso-Gb3 u bubrezima tretiranih i netretiranih miševa. Mužjaci Fabri KO miševa su tretirani jednom dozom bilo lipidnih nanočestica sa GLA iRNK ili alfa-galaktozidazom u koncentraciji od 1,0 mg/kg. Količina odražava količinu Gb3/lyso-Gb3 nakon nedelju dana od primene.
SL. 21 prikazuje relativnu kvantifikaciju globotrioazilceramida (Gb3) i lyso-Gb3 u srcu tretiranih i netretiranih miševa. Mužjaci Fabri KO miševa su tretirani jednokratnom dozom bilo lipidnih nanočestica sa GLA iRNK ili alfa-galaktozidazom u koncentraciji od 1,0 mg/kg. Količina odražava količinu Gb3/lyso-Gb3 nakon nedelju dana od primene.
SL. 22 prikazuje studiju odgovora na dozu kroz praćenje proizvodnje GLA proteina u vidu sekretovanog humanog GLA proteina koji je dobijen sa MRT, u serumu. Uzorci su mereni 24 sata nakon primene (jednokratna doza, IV, N=4 miša/grupi) bilo lipidnih nanočestica na bazi HGT4003 (Formulacija 3) ili lipidnih nanočestica na bazi HGT5000 (Formulacija 5) - kvantifikovano ELISA testom.
SL.23 prikazuje proizvodnju hGLA proteina, izmerenu u serumu (A) ili u jetri, bubrezima i slezini (B). Uzorci su mereni 6 sati i 24 časa nakon primene (jednokratna doza, IV, N=4 miša/grupa) lipidnih nanočestica na bazi HGT5001 (Formulacija 6) - kvantifikovano ELISA testom.
SL. 24 prikazuje kvantifikaciju nivoa sekretovanog proteina humanog Faktora IX upotrebom ELISA testa (srednja vrednost u ng/mL ± standarna devijacija). FIX protein je proizveden sa FIX iRNK koja je isporučena putem lipidnih nanočestica na bazi C12-200 (C12-200:DOPE:Chol:DMGPEG2K, 40:30:25:5 (Formulacija 1); 30 ug iRNK po jednokratnoj intravenskoj dozi, izračunato na osnovu inkapsulirane iRNK). FIX protein je praćen tokom 72 sata. (n=24 miša)
SL. 25 prikazuje kvantifikaciju nivoa sekretovanog humanog α-1-antitripsinskog (A1AT) proteina upotrebom ELISA testa. A1AT protein je proizveden sa A1AT iRNK koja je isporučena lipidnim nanočesticama na bazi C12-200 (C12-200:DOPE:Chol:DMGPEG2K, 40:30:25:5 (Formulacija 1); 30 ug iRNK po jednokratnoj intravenskoj dozi, izračunato na osnovu inkapsuliranje iRNK). Protein A1AT je praćen tokom 24 sata.
SL.26 prikazuje kvantifikaciju hEPO proteina koji je detektovan u plućima i serumu tretiranih miševa nakon intratrahealne primene nanočestica sa hEPO iRNK (izmereno u mIU) (lipidne nanočestice na bazi C12-200, HGT5000 ili HGT5001; Formulacije 1, 5, 6, tim redom), upotrebom ELISA testa. Životinje su žrtvovane 6 sati nakon primene (n=4 miša po grupi).
OPIS POKAZNIH PRIMERA IZVOĐENJA
[0029] Opis obezbeđuje kompozicije i postupke za unutarćelijsku isporuku iRNK koja se nalazi u okviru lipozomskog nosača za transfer, u jednu ili više cilјnih ćelija zarad proizvodnje terapijskih nivoa sekretovanog funkcionalnog proteina.
[0030] Termin "funkcionalan", kako se ovde upotrebljava da bi se kvalifikovao protein ili enzim, označava da protein ili enzim ima biološku aktivnost ili, alternativno, da je u stanju da obavlјa istu ili sličnu funkciju kao nativni ili protein ili enzim koji normalno funkcioniše. iRNK kompozicije pronalaska su korisne za lečenje raznih metaboličkih ili genetičkih poremećaja, a posebno onih genetičkih ili metaboličkih poremećaja koji uklјučuju odsustvo ekspresije, pogrešnu ekspresiju ili deficijenciju proteina ili enzima. Termin "terapijski nivoi" se odnosi na nivoe proteina koji su detektovani u krvi ili tkivima i koji su iznad kontrolnih nivoa, pri čemu kontrola mogu biti normalni fiziološki nivoi ili nivoi kod subjekta pre primene iRNK kompozicije. Termin "sekretovan" se odnosi na protein koji se detektuje izvan cilјne ćelije, u vanćelijskom prostoru. Protein može biti detektovan u krvi ili u tkivima. U kontekstu predmetnog pronalaska, termin "proizveden" se koristi u svom najširem smislu, da bi se označila translacija najmanje jedne iRNK u protein ili enzim. Kao što je ovde obezbeđeno, kompozicije uklјučuju nosač za transfer. Kako se ovde upotrebljava, termin "nosač za transfer" uklјučuje bilo koji od standardnih farmaceutskih nosača, razblaživača, ekscipijenasa i sličnih koji su generalno namenjeni za upotrebu u kontekstu primene biološki aktivnih agenasa, uklјučujući nukleinske kiseline. Kompozicije, a naročito nosači za transfer koji su ovde opisani su sposobni da isporuče iRNK u cilјnu ćeliju.
iRNK
[0031] iRNK u kompozicijama pronalaska može kodirati, na primer, sekretovani hormon, enzim, receptor, polipeptid, peptid ili drugi protein od interesa koji se normalno izlučuje. U jednom primeru izvođenja pronalaska, iRNK može opciono sadržavati hemijske ili biološke modifikacije koje, na primer, pobolјšavaju stabilnost i/ili poluživot takve iRNK ili koje pobolјšavaju ili na drugi način olakšavaju proizvodnju proteina.
[0032] Jedna ili više jedinstvenih iRNK može biti istovremeno isporučena cilјnim ćelijama, na primer, kombinovanjem dve jedinstvene iRNK u jedan nosač za transfer. U jednom primeru izvođenja predmetnog pronalaska, terapijska prva iRNK i terapijska druga iRNK mogu biti formulisane u jedan nosač za transfer i primenjene. Predmetni pronalazak takođe razmatra istovremenu isporuku i/ili istovremenu primenu terapijske prve iRNK i druge nukleinske kiseline da bi se olakšala i/ili pobolјšala funkcija ili isporuka terapijske prve iRNK. Na primer, takva druga nukleinska kiselina (npr. egzogena ili sintetska iRNK) može kodirati membranski transportni protein koji nakon ekspresije (npr. translacije egzogene ili sintetske iRNK) olakšava isporuku ili pobolјšava biološku aktivnost prve iRNK. Alternativno, terapijska prva iRNK može biti primenjena sa drugom nukleinskom kiselinom koja funkcioniše kao "šaperon", na primer, za usmeravanje načina uvijanja bilo koje terapijske prve iRNK.
[0033] Takođe se razmatraju postupci koji obezbeđuju isporuku jedne ili više terapijskih nukleinskih kiselina za lečenje jednog poremećaja ili deficijencije, pri čemu svaka ovakva terapijska nukleinska kiselina funkcioniše različitim mehanizmom delovanja. Na primer, kompozicije predmetnog pronalaska mogu sadržavati terapijsku prvu iRNK koja se, na primer, primenjuje da bi se korigovala deficijencija endogenog proteina ili enzima, a koja je praćena primenom druge nukleinske kiseline koja se primenjuje da bi se deaktivirali ili "isključili" (engl. kock-down) endogena nukleinska kiselina koja pogrešno funkcioniše i njen proteinski ili enzimski proizvod. Ovakve "druge" nukleinske kiseline mogu kodirati, na primer iRNK ili siRNK.
[0034] Nakon transfekcije, prirodna iRNK u kompozicijama pronalaska može biti degradovana, sa poluživotom između 30 minuta i nekoliko dana. iRNK u kompozicijama pronalaska poželјno zadržava barem neku sposobnost da se translatira, čime se proizvodi funkcionalan sekretovani protein ili enzim. Shodno navedenom, pronalazak obezbeđuje kompozicije koje sadrže stabilizovanu iRNK. U pojedinim primerima izvođenja pronalaska, aktivnost iRNK je produžena tokom dužeg vremenskog perioda. Na primer, aktivnost iRNK može biti produžena tako da se kompozicije predmetnog pronalaska primenjuju subjektu na pola nedelјe ili na dve nedelje ili još poželjnije na mesečnom, dvomesečnom, kvartalnom ili godišnjem nivou. Proširena ili produžena aktivnost iRNK predmetnog pronalaska je direktno povezana sa količinom sekretovanog funkcionalnog proteina ili enzima koji se proizvodi sa takve iRNK. Slično navedenom, aktivnost kompozicija predmetnog pronalaska može dalјe biti proširena ili produžena modifikacijama napravlјenim tako da se pobolјša ili pojača translacija iRNK. Štaviše, količina funkcionalnog proteina ili enzima koji se proizvodi od strane cilјne ćelije je funkcija količine iRNK koja je isporučena cilјnim ćelijama, kao i stabilnosti takve iRNK. U onoj meri u kojoj se stabilnost iRNK predmetnog pronalaska može pobolјšati ili pojačati, poluživot, aktivnost proizvedenog sekretovanog proteina ili enzima i učestalost doziranja kompozicije dalјe može biti proširena.
[0035] Shodno navedenom, u pojedinim primerima izvođenja, iRNK u kompozicijama pronalaska sadrži najmanje jednu modifikaciju koja obezbeđuje povećanu ili pojačanu stabilnost nukleinske kiseline, uklјučujući, na primer, pobolјšanu otpornost na digestiju nukleazama in vivo. Kako se ovde upotrebljavaju, termini "modifikacija" i "modifikovan" kao takvi se odnose na nukleinske kiseline koje su ovde obezbeđene, uklјučuju najmanje jednu promenu koja poželјno povećava stabilnost i čini iRNK stabilnijom (npr. rezistentnom na digestiju nukleazama) u odnosu na verziju divljeg tipa ili verziju iRNK koja se javlja u prirodi. Kako se ovde upotrebljavaju, izrazi "stabilan" i "stabilnost" kao takvi termini koji se odnose na nukleinske kiseline predmetnog pronalaska, a naročito u pogledu iRNK, označavaju povećanu ili pojačanu otpornost na degradaciju, na primer, nukleazama (tj. endonukleazama ili egzonukleazama) koje su normalno sposobne da degraduju takve iRNK. Povećana stabilnost može uklјučivati, na primer, manju osetlјivost na hidrolizu ili drugo uništavanje endogenim enzimima (npr. endonukleazama ili egzonukleazama) ili u uslovima unutar cilјne ćelije ili tkiva, čime se povećava ili poboljšava vreme zadržavanja takve iRNK u cilјnoj ćeliji, tkivu, subjektu i/ili citoplazmi. Stabilizovane molekule iRNK koji su ovde obezbeđeni, karakteriše i duži poluživot u odnosu na njihove nemodifikovane parnjake koji se javljaju u prirodi (npr. verziju iRNK divlјeg tipa). Termini "modifikacija" i "modifikovani", kao termini koji se odnose na iRNK predmetnog pronalaska, takođe podrazumevaju izmene koje poboljšavaju ili pojačavaju translaciju nukleinskih kiselina tipa iRNK, uklјučujući, na primer, uklјučivanje sekvenci koje funkcionišu u inicijaciji translacije proteina (npr. Kozakovu konsenzusnu sekvencu). (Kozak, M., Nucleic Acids Res 15 (20):8125-48 (1987)).
[0036] U pojedinim primerima izvođenja, iRNK pronalaska je podvrgnuta hemijskoj ili biološkoj modifikaciji da bi se učinila stabilnijom. Primeri modifikacija iRNK uklјučuju depleciju baze (npr. delecijom ili supstitucijom jednog nukleotida drugim) ili modifikaciju baze, na primer, hemijsku modifikaciju baze. Izraz "hemijske modifikacije", kako se ovde upotrebljava, uklјučuje modifikacije koje uvode hemijske promene koje se razlikuju od onih koje se sreću kod iRNK koje se javljaju u prirodi, na primer, kovalentne modifikacije poput uvođenja modifikovanih nukleotida (npr. nukleotidnih analoga ili uklјučivanje bočnih grupa koje se ne javljaju u prirodi u takve molekule iRNK).
[0037] Dodatno, pogodne modifikacije uklјučuju izmene u jednom ili u više nukleotida u okviru kodona, tako da kodon kodira istu aminokiselinu ali je stabilniji od kodona koji se nalazi u verziji iRNK divlјeg tipa. Na primer, pokazana je inverzna korelacija između stabilnosti RNK i velikog broja ostataka citidina (C) i/ili uridina (U), a utvrđeno je da je RNK bez C i U ostataka stabilna u odnosu na dejstvo većine RNaza (Heidenreich i saradnici, J Biol Chem 269, 2131-8 (1994)). U pojedinim primerima izvođenja, broj C i/ili U ostataka u sekvenci iRNK je smanjen. U još jednom primeru izvođenja, broj C i/ili U ostataka je smanjen supstitucijom jednog kodona koji kodira određenu aminokiselinu sa drugim kodonom koji kodira istu ili srodnu aminokiselinu. Razmatrane modifikacije nukleinskih kiselina tipa iRNK predmetnog pronalaska takođe uključuju ugradnju pseudouridina. Ugradnja pseudouridina u nukleinske kiseline predmetnog pronalaska tipa iRNK može povećati stabilnost i kapacitet translacije, kao i značajno smanjiti imunogenost in vivo. Pogledati, npr. Kariko K. i saradnici, Molecular Therapy 16(11):1833-1840 (2008). Supstitucije i modifikacije iRNK predmetnog pronalaska mogu biti izvedene postupcima koji su dobro poznati prosečno iskusnom stručnjaku.
[0038] Ograničenja u smanjenju broja C i U ostataka u sekvenci će verovatno biti veća unutar kodirajućeg regiona iRNK, u poređenju sa netranlatirajućim regionom, (tj. verovatno neće biti moguće eliminisati sve C i U ostatke koji su prisutni u molekulu uz zadržavanje sposobnosti glasnika da kodira želјenu sekvencu aminokiselina). Degeneracija genetičkog koda, međutim, predstavlјa mogućnost da se dozvoli smanjenje broja C i/ili U ostataka koji su prisutni u sekvenci, uz održavanje istog kapaciteta kodiranja (tj. u zavisnosti od toga koja je aminokiselina kodirana kodonom, može biti ostvarivo nekoliko različitih mogućnosti modifikacije RNK sekvenci). Na primer, kodoni za Gly mogu biti izmenjeni u GGA ili GGG i biti prisutni umesto GGU ili GGC.
[0039] Termin modifikacija takođe podrazumeva, na primer, ugradnju nenukleotidnih veza ili modifikovanih nukleotida u iRNK sekvence predmetnog pronalaska (npr. modifikacije jednog ili oba od 3’ i 5' krajeva iRNK molekula koji kodira funkcionalni sekretovani protein ili enzim). Takve modifikacije uklјučuju adiciju baza u sekvencu iRNK (npr. uklјučivanje poli A repa ili dužeg poli A repa), izmenu 3’ UTR ili 5' UTR, obrazovanje kompleksa iRNK sa agensom (npr. sa proteinom ili komplementarnim molekulom nukleinske kiseline), kao i uklјučivanje elemenata koji menjaju strukturu iRNK molekula (npr. koji obrazuju sekundarne strukture).
[0040] Smatra se da poli A rep stabilizuje prirodne glasnike. Stoga, u jednom primeru izvođenja, dugi poli A rep može biti dodat molekulu iRNK što čini iRNK stabilnijom. Poli repovi mogu biti dodati upotrebom različitih tehnika koje su prepoznate u stanju tehnike. Na primer, dugi poli A repovi mogu biti dodati na sintetske ili in vitro transkribovane iRNK upotrebom poli A polimeraze (Yokoe i saradnici, Nature Biotechnology. 1996; 14:1252-1256). Transkripcioni vektor takođe može kodirati duge poli A repove. Pored toga, poli A repovi mogu biti dodati transkripcijom direktno sa PCR produkata. U jednom primeru izvođenja, dužina poli A repa je najmanje oko 90, 200, 300, 400 najmanje 500 nukleotida. U jednom primeru izvođenja, dužina poli A repa je podešena tako da kontroliše stabilnost modifikovanog molekula iRNK pronalaska i, time, transkripciju proteina. Na primer, pošto dužina poli A repa može uticati na poluživot molekula iRNK, dužina poli A repa može biti podešena tako da se modifikuje nivo rezistencije iRNK na nukleaze i da se time kontroliše vremenski tok ekspresija proteina u ćeliji. U jednom primeru izvođenja, stabilizovani molekuli iRNK su dovolјno rezistentni na in vivo degradaciju (npr. nukleazama) tako da se mogu dostaviti u cilјnu ćeliju bez nosača za transfer.
[0041] U jednom primeru izvođenja, iRNK može biti modifikovana ugradnjom 3’ i/ili 5' netranslatirajućih (UTR) sekvenci koje se ne javljaju u prirodi, u iRNK molekulima divlјeg tipa. U jednom primeru izvođenja, 3’ i/ili 5' bočna sekvenca koja prirodno okružuje iRNK i kodira drugi, nesrodan protein, može biti ugrađena u nukleotidnu sekvencu iRNK molekula koja kodira terapijski ili funkcionalni protein, da bi ga modifikovala. Na primer, 3’ ili 5' sekvence iRNK molekula koji su stabilni (npr. globina, aktina, GAPDH, tubulina, histona ili enzima iz ciklusa limunske kiseline) mogu biti ugrađene u 3’ i/ili 5' region molekula nukleinske kiseline tipa sens iRNK da bi se povećala stabilnosti sens iRNK molekula. Pogledati, npr. US2003/0083272.
[0042] U pojedinim primerima izvođenja, iRNK u kompozicijama pronalaska sadrži modifikaciju 5’ kraja iRNK koja podrazumeva uključivanje parcijalne sekvence neposredno ranog gena tipa 1 (IE1) CMV-a ili njegovog fragmenta (npr. SEQ ID NO:1) da bi se poboljšala rezistencija na nukleazu i/ili pobolјšao poluživot iRNK. Pored povećanja stabilnosti sekvence nukleinske kiseline tipa iRNK, iznenađujuće je otkriveno da uklјučivanje parcijalne sekvence neposredno ranog gena tipa 1 (IE1) CMV-a pojačava translaciju iRNK i ekspresiju funkcionalnog proteina ili enzima. Takođe se razmatra uklјučivanje sekvence gena za humani hormon rasta (hGH) ili njegovog fragmenta (npr. SEQ ID NO:2) na 3’ krajeve nukleinske kiseline (npr. iRNK) da bi se dodatno stabilizovala iRNK. U principu, poželјne modifikacije pobolјšavaju stabilnost i/ili farmakokinetička svojstva (npr. poluživot) iRNK u odnosu na njihove nemodifikovane parnjake i uklјučuju, na primer, modifikacije koje su uvedene da bi se poboljšala navedena rezistencija iRNK na digestiju nukleazama in vivo.
[0043] Dodatno se razmatraju varijante sekvenci nukleinskih kiselina označenih kao SEQ ID NO:1 i/ili SEQ ID NO:2, pri čemu varijante zadržavaju funkcionalna svojstva nukleinskih kiselina uklјučujući stabilizaciju iRNK i/ili farmakokinetička svojstava (npr. poluživot). Varijante mogu biti sa identičnošću sekvence većom od 90%, većom od 95%, većom od 98% ili većom od 99% sa SEQ ID NO:1 ili SEQ ID NO:2.
[0044] U pojedinim primerima izvođenja, kompozicija može sadržavati stabilišući reagens. Kompozicije mogu uklјučiti jedan ili više reagenasa za formulisanje koji se direktno ili indirektno vezuju za i stabilišu iRNK, čime se povećava vreme zadržavanja u cilјnoj ćeliji. Ovakvi reagensi poželјno dovode do pobolјšanog poluživota iRNK u cilјnim ćelijama. Na primer, stabilnost iRNK i efikasnost translacije mogu biti povećani ugradnjom "stabilišućih reagenasa" koji obrazuju komplekse sa iRNK i prirodno se javlјaju unutar ćelije (pogledati npr. U.S. Pat. No. 5,677,124). Ugradnja stabilišućeg reagensa može biti postignuta, na primer, kombinovanjem poli A i proteina in vitro sa iRNK koju je potrebno stabilisati, pre ugradnje ili inkapsulacije iRNK unutar nosača za transfer. Primeri stabilišućih reagenasa uklјučuju jedan ili više proteina, peptida, aptamera, pomoćnih proteina za translaciju, iRNK vezujućih proteina i/ili faktora inicijacije translacije.
[0045] Stabilizacija kompozicija može takođe biti poboljšana upotrebom ostataka koji inhibiraju opsonizaciju, a koji obično predstavljaju velike hidrofilne polimere koji su hemijski ili fizički vezani za nosač za transfer (npr. interkalacijom strukture “sidra” koja je rastvorljiva u lipidima u samu membranu ili direktnim vezivanjem na aktivne grupe membranskih lipida). Ovakvi hidrofilni polimeri koji inhibiraju opsonizaciju obrazuju zaštitni površinski sloj koji značajno smanjuje preuzimanje lipozoma preko sistema makrofag-monocit i retikulo-endotelnim sistemom (npr. kao što je opisano u U.S. Pat. No.
4,920,016). Nosači za transfer koji su modifikovani sa ostacima koji inhibiraju opsonizaciju tako ostaju u cirkulaciji mnogo duže nego njihovi nemodifikovani parnjaci.
[0046] Kada RNK hibridizuje sa komplementarnim molekulom nukleinske kiseline (npr. DNK ili RNK), ona može biti zaštićena od nukleaza. (Krieg i saradnici, Melton. Methods in Enzimology.1987; 155, 397-415). Stabilnost hibridizovane iRNK se verovatno javlja usled inherentne specifičnosti većine RNaza ka jednolančanim molekuluma. U pojedinim primerima izvođenja, stabilišući reagens koji je izabran da obrazuje kompleks sa iRNK je eukariotski protein, (npr. protein sisara). U još jednom primeru izvođenja, iRNK može biti modifikovana hibridizacijom sa drugim molekulom nukleinske kiseline. Ukoliko je celokupan molekula iRNK hibridizovan sa komplementarnim molekulom nukleinske kiseline, inicijacija translacije može biti smanjena. U pojedinim primerima izvođenja, 5’ netranslatirajući region i AUG start region iRNK molekula mogu opciono ostati nehibridizovani. Nakon inicijacije translacije, aktivnost odmotavanja ribozomskog kompleksa može funkcionisati čak i u slučaju dupleksa sa visokim afinitetom, tako da se translacija može nastaviti. (Liebhaber. J. Mol. Biol. 1992; 226:2-13; Monia i saradnici, J Biol Chem.1993; 268:14514-22)
[0047] Podrazumeva se da bilo koji od prethodno opisanih postupaka za pobolјšanje stabilnosti iRNK može biti upotrebljen bilo samostalno ili u kombinaciji sa jednim ili sa više od drugih prethodno opisanih postupaka i/ili kompozicija.
[0048] iRNK predmetnog pronalaska može biti opciono kombinovana sa reporterskim genom (npr. uzvodno ili nizvodno od kodirajućeg regiona iRNK) koji, na primer, olakšava utvrđivanje stepena isporuke iRNK cilјnim ćelijama ili tkivima. Pogodni reporterski geni mogu uklјučivati, na primer, iRNK zelelnog fluorescentnog proteina (GFP iRNK), iRNK Renilla luciferaze (luciferazna iRNK), iRNK luciferaze svica ili bilo koju od njihovih kombinacija. Na primer, GFP iRNK može biti fuzionisana sa iRNK koja kodira protein koji se može sekretovati, da bi se olakšala potvrda lokalizacije iRNK u cilјnim ćelijama koje će delovati kao depoi za proizvodnju proteina.
[0049] Kako se ovde upotrebljavaju, pojmovi "transfekt" ili "transfekcija" označavaju unutarćelijsko uvođenje iRNK u ćeliju ili, poželјno, u cilјnu ćeliju. Uvedena iRNK može biti stabilno ili tranzientno održavana u cilјnoj ćeliji. Termin "efikasnost transfekcije" se odnosi na relativnu količinu iRNK koja je preuzeta od strane cilјne ćelije koja je podvrgnuta transfekciji. U praksi, efikasnost transfekcije se procenjuje količinom proizvoda reporterske nukleinske kiseline koja se eksprimira od strane cilјnih ćelija nakon transfekcije. Poželјni primeri izvođenja uključuju kompozicije sa visokim efikasnostima transfekcije i posebno one kompozicije koje svode na minimum štetne efekte posredovane transfekcijama ćelija koje nisu ciljne. Kompozicije predmetnog pronalaska koje karakterišu visoke efikasnosti transfekcije, pobolјšavaju verovatnoću da će odgovarajuće doze iRNK biti isporučene u cilјnu ćeliju, uz svođenje potencijalnih sistemskih neželјenih efekata na minimum. U jednom primeru izvođenja predmetnog pronalaska, nosači za transfer predmetnog pronalaska su sposobni da isporuče velike sekvence iRNK (npr. iRNK od najmanje 1 kDa, 1,5kDa, 2 kDa, 2,5kDa, 5kDa, 10kDa, 12kDa, 15kDa, 20kDa, 25kDa, 30kDa ili više). Lipozomi kao nosači za transfer pronalaska inkapsuliraju iRNK bez ugrožavanja biološke aktivnosti. U pojedinim primerima izvođenja, nosač za transfer karakteriše preferencijalno i/ili značajno vezivanje za cilјnu ćeliju u odnosu na ćelije koje nisu ciljne. Nosač za transfer isporučuje svoj sadržaj u cilјnu ćeliju tako da se iRNK isporučuje u odgovarajuću subćelijsku strukturu kao što je citoplazma.
Nosač za transfer
[0050] Nosač za transfer u kompozicijama pronalaska predstavlja lipozomski nosač za transfer koji sadrži lipidnu nanočesticu. Nosač za transfer može biti izabran i/ili pripremlјen za optimizovanu isporuku iRNK u cilјnu ćeliju.
[0051] Lipozomski nosači za transfer se koriste da bi se olakšala isporuka nukleinskih kiselina cilјnim ćelijama. Lipozomi (tj. lipozomske lipidne nanočestice) su generalno korisni u raznim primenama u istraživanjima, industriji i medicini, naročito kada se upotrebljavaju kao nosači za transfer dijagnostičkih ili terapijskih jedinjenja in vivo (Lasic, Trends Biotechnol. 16:307-321, 1998; Drummond i saradnici, Pharmacol. Rev.51:691-743, 1999). Obično su okarakterisani kao mikroskopske vezikule koje sadrže unutrašnji vodeni prostor odvojen od spolјašnjeg medijuma membranom sa jednim ili sa više dvosloja. Dvoslojne membrane lipozoma su obično obrazovane od amfifilnih molekula, kao što su lipidi sintetskog ili prirodnog porekla koji sadrže prostorno odvojene hidrofilne i hidrofobne domene (Lasic, Trends Biotechnol. 16:307-321, 1998). Dvoslojne membrane lipozoma takođe mogu biti obrazovane od amfifilnih polimera i površinski aktivnih sredstava (npr. polimerozoma, niozoma itd.).
[0052] U kontekstu predmetnog pronalaska, lipozomski nosač za transfer služi za transport iRNK do cilјne ćelije. U svrhu primene predmetnog pronalaska, lipozomski nosači za transfer su pripremlјeni tako da sadrže želјene nukleinske kiseline. Proces ugradnje želјenog entiteta (npr. nukleinske kiseline) u lipozom se često naziva kao "opterećivanje" (Lasic, i saradnici, FEBS Lett. 312:255-258, 1992). Ugradnja nukleinske kiseline u lipozome se ovde označava i kao "inkapsulacija", pri čemu je nukleinska kiselina u potpunosti sadržana u unutrašnjem prostoru lipozoma. Svrha ugradnje iRNK u nosač za transfer, kao što je lipozom, često je da se nukleinska kiselina zaštiti od sredine koja može sadržavati enzime ili hemikalije koje degraduju nukleinske kiseline i/ili koja sadrži sisteme ili receptore koji dovode do brzog izlučivanja nukleinskih kiselina. U skladu sa navedenim, izabrani nosač za transfer je sposoban da pobolјša stabilnost iRNK koja je u njemu sadržana. Lipozom može omogućiti da inkapsulirana iRNK stigne do ciljne ćelije i/ili može preferencijalno omogućiti da inkapsulirana iRNK stigne do cilјne ćelije ili, alternativno, ograničava isporuku takve iRNK na druga mesta ili u druge ćelije gde prisustvo primenjene iRNK može biti beskorisno ili nepoželјno. Štaviše, ugradnja iRNK u katjonski lipozom takođe olakšava isporuku takve iRNK u cilјnu ćeliju.
[0053] Idealno, lipozomski nosači za transfer su pripremlјeni tako da inkapsuliraju jednu ili više želјenih iRNK, odnosno tako da kompozicije pokazuju visoku efikasnost transfekcije i povećanu stabilnost. Dok lipozomi mogu olakšati uvođenje nukleinskih kiselina u cilјne ćelije, dodavanje polikacija (npr. poli L-lizina i protamina), kao kopolimera, može olakšati, a u pojedinim slučajevima i značajno pobolјšati efikasnost transfekcije nekoliko tipova katjonskih lipozoma, za 2-28 puta i u brojnim ćelijskim linijama in vitro i in vivo. (Pogledati N.J. Caplen i saradnici, Gene Ther.1995; 2:603; S. Li i saradnici, Gene Ther.
1997; 4, 891)
Lipidne nanočestice
[0054] U predmetnom pronalasku, nosač za transfer je formulisan kao lipidna nanočestica. Kako se ovde upotrebljava, izraz "lipidna nanočestica" se odnosi na nosač za transfer koji sadrži jedan ili više katjonskih lipida, nekatjonskih lipida i lipida modifikovanih sa PEG. Poželјno je da su lipidne nanočestice formulisane tako da isporučuju jednu ili više iRNK jednoj ili više cilјnih ćelija. Primeri pogodnih lipida uklјučuju, na primer, fosfatidilna jedinjenja (npr. fosfatidilglicerol, fosfatidilholin, fosfatidilserin, fosfatidiletanolamin, sfingolipide, cerebrozide i gangliozide). U jednom primeru izvođenja, nosač za transfer je izabran na osnovu njegove sposobnosti da olakša transfekciju iRNK u cilјnu ćeliju.
[0055] Pronalazak razmatra upotrebu lipidnih nanočestica kao nosača za transfer koji sadrže katjonski lipid za inkapsulaciju i/ili pobolјšanje isporuke iRNK u cilјnu ćeliju koja će delovati kao depo za proizvodnju proteina. Kako se ovde upotrebljava, izraz "katjonski lipid" se odnosi na bilo koji broj vrsta lipida koji su sa neto pozitivnim naelektrisanjem na izabranom pH, kao što je fiziološki pH. Razmatrane lipidne nanočestice se pripremaju uklјučivanjem višekomponentnih lipidnih smeša u različitim odnosima, a koje uključuju jedan ili više katjonskih lipida, nekatjonskih lipida i lipida modifikovanih sa PEG. U literaturi je opisano nekoliko katjonskih lipida, od kojih su mnogi komercijalno dostupni.
[0056] Posebno pogodni katjonski lipidi za upotrebu u kompozicijama pronalaska uklјučuju one koji su opisani u međunarodnoj patentnoj publikaciji WO 2010/053572, a naročito C12-200 opisan u paragrafu [00225] WO 2010/053572. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska koriste lipidne nanočestice koje sadrže jonizujući katjonski lipid opisan u privremenoj U.S. patentnoj prijavi 61/617,468, podnetoj 29. marta 2012. god., kao što je, npr. (15Z,18Z)-N,N-dimetil-6-(9Z,12Z)-oktadeka-9, 12-dien-1-il)tetrakoza-15,18-dien-1-amin (HGT5000), (15Z,18Z)-N,N-dimetil-6-((9Z,12Z)-oktadeka-9, 12-dien-1-il)tetrakoza-4,15,18-trien-1-amin (HGT5001) ili (15Z,18Z)-N,N-dimetil-6-((9Z,12Z)-oktadeka-9,12-dien-1-il)tetrakoza-5,15,18-trien-1-amin (HGT5002).
[0057] U pojedinim primerima izvođenja, upotrebljava se katjonski lipid N-[1-(2,3-dioleiloksi)propil]-N,N,N-trimetilamonijum hlorid ili "DOTMA". (Felgner i saradnici, (Proc. Nat'l Acad. Sci.84, 7413 (1987); U.S. Pat. No. 4,897,355). DOTMA može biti formulisan samostalno ili može biti iskombinovan sa neutralnim lipidom, dioleoilfosfatidil-etanolaminom ili "DOPE" ili sa drugim katjonskim ili nekatjonskim lipidima u lipozomski nosač za transfer ili u lipidnu nanočesticu, pri čemu takvi lipozomi mogu biti upotrebljeni za pobolјšanje isporuke nukleinske kiseline u cilјne ćelije. Drugi pogodni katjonski lipidi uklјučuju, na primer, 5-karboksispermilglicindioktadecilamid ili "DOGS", 2,3-dioleloksi-N-[2(sperminkarboksamido)etil]-N,N-dimetil-1-propanaminijum ili "DOSPA" (Behr i saradnici, Proc. Nat.'1 Acad. Sci. 86, 6982 (1989); U.S. Pat. No. 5,171,678; U.S. Pat. No. 5,334,761), 1,2-dioleoil-3-dimetilamonijum-propan ili "DODAP", 1,2-dioleoil-3-trimetilamonijum-propan ili "DOTAP". Razmatrani katjonski lipidi takođe uklјučuju 1,2-disteariloksi-N,N-dimetil-3-aminopropan ili "DSDMA", 1,2-dioleloksi-N,N-dimetil-3-aminopropan ili "DODMA", 1,2-dilinoleiloksi-N,N-dimetil-3-aminopropan ili "DLinDMA", 1,2-dilinoleniloksi-N,N-dimetil-3-aminopropan ili "DLenDMA", N-dioleil-N,N-dimetilamonijum hlorid ili "DODAC", N,N-distearil-N,N-dimetilamonijum bromid ili "DDAB", N-(1,2-dimiriloksiprop-3-il)-N,N-dimetil-N-hidroksietil amonijum bromid ili "DMRIE", 3-dimetilamino-2-(holest-5-en-3-betα-oksibutan-4-oksi)-1-(cis,cis-9,12-oktadekadienoksi)propan ili "CLinDMA", 2-[5’-(holest-5)-en-3-beta-oksi)-3'-oksapentoksi)-3-dimeti 1-1-(cis,cis-9',1-2'-oktadekadienoksi)propan ili "CpLinDMA", N,N-dimetil-3,4-dioleiloksibenzilamin ili "DMOBA", 1,2-N,N'-dioleilkarbamil-3-dimetilaminopropan ili "DOcarbDAP", 2,3-dilinoleoiloksi-N,N-dimetilpropilamin ili "DLinDAP", 1,2-N,N'-dilinoleilkarbamil-3-dimetilaminopropan ili "DLincarbDAP", 1,2-dilinoleilkarbamil-3-dimetilaminopropan ili "DLinCDAP", 2,2-dilinoleil-4-dimetilaminometil-[1,3]-dioksolan ili "DLin-K-DMA", 2,2-dilinoleil-4-dimetilaminoetil-[1,3]-dioksolan ili "DLin-K-XTC2-DMA" i 2-(2,2-di((9Z,12Z)-oktadeka-9,12-dien-1-il)-1,3-dioksolan-4-il)-N,N-dimetiletanamin (DLin-KC2-DMA)) (pogledati, WO 2010/042877; Semple i saradnici, Nature Biotech. 28:172-176 (2010)) ili njihove smeše. (Heyes J. i saradnici, J Controlled Release 107:276-287 (2005); Morrissey DV i saradnici, Nat. Biotechnol.23(8): 1003-1007 (2005); PCT publikacija WO2005/121348A1).
[0058] Upotreba katjonskih lipida na bazi holesterola je takođe obuhvaćena predmetnim pronalaskom. Takvi katjonski lipidi na bazi holesterola mogu biti upotrebljeni bilo samostalno ili u kombinaciji sa drugim katjonskim ili nekatjonskim lipidima. Pogodni katjonski lipidi na bazi holesterola uklјučuju, na primer, DC-Chol (N,N-dimetil-N-etilkarboksamidoholesterol), 1,4-bis(3-N-oleilamino-propil)piperazin (Gao i saradnici, Biochem. Biophys. Res. Comm.179, 280 (1991); Wolf i saradnici, BioTechniques 23, 139 (1997); U.S. Pat. No.5,744,335) ili ICE.
[0059] Takođe se razmatraju katjonski lipidi kao što su lipidi na bazi dialkilamina, na bazi imidazola i na bazi guanidinijuma. Na primer, određeni primeri izvođenja su usmereni na kompoziciju koja sadrži jedan ili više od katjonskih lipida na bazi imidazola, na primer, imidazolni estar holesterola ili "ICE" lipid (3S, 10R, 13R, 17R)-10, 13-dimetil-17-((R)-6-metilheptan-2-il)-2, 3, 4, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17-tetradekahidro-1H-ciklopenta[a]fenantren-3-il 3-(1H-imidazol-4-il)propanoat, predstavlјen strukturom (I) u nastavku teksta. U poželјnom primeru izvođenja, nosač za transfer za isporuku iRNK može sadržavati jedan ili više katjonskih lipida na bazi imidazola, na primer, imidazolski estar holesterola ili "ICE" lipid (3S, 10R, 13R, 17R)-10, 13-dimetil-17- ((R)-6-metilheptan-2-il)-2, 3, 4, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17-tetradekahidro-1H-ciklopenta[a]fenantren-3-il 3-(1H-imidazol-4-il)propanoat, predstavlјen strukturom (I).
Bez želјe da bude vezano za određenu teoriju, veruje se da je fuzogenost katjonskog lipida na bazi imidazola, ICE, u vezi sa remećenjem endozoma, koje je olakšano imidazolnom grupom, koji ima niži pKa u odnosu na tradicionalne katjonske lipide. Endozomski poremećaj zauzvrat promoviše osmotsko bubrenje i poremećaj lipozomske membrane, nakon čega sledi transfekcija ili unutarćelijsko oslobađanje sadržaja nukleinske kiseline/nukleinskih kiselina koje se tu nalazi, u cilјnu ćeliju.
[0060] Katjonske lipide na bazi imidazola takođe karakteriše njihova smanjena toksičnost u odnosu na druge katjonske lipide. Katjonski lipidi na bazi imidazola (npr. ICE) se mogu kombinovati sa tradicionalnim katjonskim lipidima, nekatjonskim lipidima i lipidima modifikovanim sa PEG. Katjonski lipid može biti prisutan u molarnom odnosu od oko 1% do oko 90%, od oko 2% do oko 70%, od oko 5% do oko 50%, od oko 10% do oko 40% ukupnih lipida koji su prisutni u nosaču za transfer ili, poželјno, od oko 20% do oko 70% ukupnih lipida koji su prisutni u nosaču za transfer.
[0061] Slično navedenom, određeni primeri izvođenja su usmereni na lipidne nanočestice koje sadrže HGT4003 katjonski lipid 2-((2,3-bis((9Z,12Z)-oktadeka-9,12-dien-1-iloksi)propil)disulfanil)-N,N-dimetiletanamin, predstavlјen strukturom (II) ispod, a kao što je dalјe opisano u privermenoj U.S. prijavi br. 61/494,745, podnetoj 8. juna 2011. god.:
[0062] U drugim primerima izvođenja, kompozicije koje su ovde opisane su usmerene na lipidne nanočestice koje sadrže jedan ili više lipida koji su podložni cepanju, kao što su, na primer, jedan ili više katjonskih lipida ili jedinjenja koja sadrže disulfidnu (S-S) funkcionalnu grupu koja se može raskinuti (npr. HGT4001, HGT4002, HGT4003, HGT4002, HGT4003, HGT4004 i HGT4005), kao što je dodatno opisano u privremenoj U.S. prijavi br.61/494,745.
[0063] Fosfolipidi i derivatizovani lipidi modifikovani sa polietilen glikolom (PEG), kao što su derivatizovani cerarmidi (PEG-CER) uklјučujući N-oktanoil-sfingozin-1-[sukcinil(metoksi polietilen glikol)-2000] (C8 PEG-2000 ceramid), koriste se u skladu sa pronalaskom u kombinaciji sa drugim lipidima sa kojima zajedno čine nosač za transfer (tj. lipidnu nanočesticu). Razmatrani lipidi modifikovani sa PEGi uklјučuju, ali nisu ograničeni na, polietilen glikolni lanac dužine do 5 kDa koji je kovalentno vezan za lipid sa alkilnim lancem(lancima) dužine od C6-C20. Dodavanje ovkvih komponenti može sprečiti kompleksnu agregaciju i može takođe obezbediti način za povećanje zadržavanja u cirkulaciji, kao i za povećanje isporuke kompozicije tipa lipid-nukleinska kiselina u cilјnu ćeliju (Klibanov i saradnici (1990) FEBS Letters, 268 (1):235-237) ili oni mogu biti izabrani zarad brze izmene iz formulacije in vivo (pogledati U.S. Pat. No.5,885,613). Posebno korisni izmenlјivi lipidi su PEG-ceramidi sa kraćim acilnim lancima (npr. C14 ili C18). Fosfolipid i derivatizovani lipidi modifikovani sa PEG predmetnog pronalaska mogu biti prisutni u molarnom odnosu od oko 0% do oko 20%, od oko 0,5% do oko 20%, od oko 1% do oko 15%, od oko 4% do oko 10% ili od oko 2% ukupnih lipida prisutnih u lipozomskom nosaču za transfer.
[0064] Predmetni pronalazak takođe upotrebljava nekatjonske lipide. Kako se ovde upotrebljava, izraz "nekatjonski lipid" se odnosi na bilo koji neutralni, cviterjonski ili anjonski lipid. Kako se ovde upotrebljava, izraz "anjonski lipid" se odnosi na bilo koji broj vrsta lipida koji su sa neto negativnim naelektrisanjem na odabranom pH, kao što je fiziološki pH. Nekatjonski lipidi uklјučuju, ali nisu ograničeni na, distearoilfosfatidilholin (DSPC), dioleoilfosfatidilholin (DOPC), dipalmitoilfosfatidilholin (DPPC), dioleoilfosfatidilglicerol (DOPG), dipalmitoilfosfatidilglicerol (DPPG), dioleoilfosfatidilethanolamine (DOPE), palmitoiloleoilfosfatidilholin (POPC), palmitoilfosfatidiletanolamin (POPE), dioleoilfosfatidiletanolamin 4-(N-maleimidometil)-cikloheksan-1-karboksilat (DOPE-mal), dipalmitoil fosfatidil etanolamin (DPPE), dimiristofilfosfoetanolamin (DMPE), distearoil-fosfatidil-etanolamin (DSPE), 16-O-monometil PE, 16-O-dimetil PE, 18-1-trans PE, 1-stearoil-2-oleoil-fosfatidietanolamin (SOPE), holesterol ili njihove smeše. Navedeni nekatjonski lipidi se koriste u kombinaciji sa drugim ekscipijensima, uklјučujući katjonske lipide. Upotrebljen u kombinaciji sa katjonskim lipidom, nekatjonski lipid može biti prisutan u molarnom odnosu od 5% do oko 90% ili poželјno od oko 10% do oko 70% ukupnih lipida koji su prisutni u nosaču za transfer.
[0065] Poželјno je da se nosač za transfer (tj. lipidna nanočestica) priprema kombinovanjem višestrukih lipidnih (i opciono polimernih) komponenti. Na primer, nosač za transfer može biti pripremljen upotrebom C12-200, DOPE, chol, DMG-PEG2K u molarnom odnosu 40:30:25:5 ili DODAP, DOPE, holesterola, DMG-PEG2K u molarnom odnosu od 18:56:20:6 ili HGT5000, DOPE, chol, DMG-PEG2K u molarnom odnosu 40:20:35:5 ili HGT5001, DOPE, chol, DMG-PEG2K u molarnom odnosu 40:20:35:5. Izbor katjonskih lipida, nekatjonskih lipida i lipida modifikovanih sa PEG koji čine lipidne nanočestice, kao i relativni molarni odnos takvih lipida jednih prema drugima, zasniva se na karakteristikama izabranog/izabranih lipida, prirodi ćelija na koje je predviđeno da se ciljano deluje, kao i na karakteristikama iRNK koje se isporučuje. Dodatna razmatranja uklјučuju, na primer, zasićenje alkilnog lanca, kao i veličinu, naelektrisanje, pH, pKa, fuzogenost i toksičnost izabranog/izabranih lipida. Stoga, molarni odnosi se mogu prilagoditi tako da budu u skladu sa navednim parametrima. Na primer, u primerima izvođenja, procenat katjonskog lipida u lipidnoj nanočestici može biti veći od 10%, veći od 20%, veći od 30%, veći od 40%, veći od 50%, veći od 60% ili veći od 70%. Procenat nekatjonskog lipida u lipidnim nanočesticama može biti veći od 5%, veći od 10%, veći od 20%, veći od 30% ili veći od 40%. Procenat holesterola u lipidnim nanočesticama može biti veći od 10%, veći od 20%, veći od 30% ili veći od 40%. Procenat lipida modifikovanog sa PEG u lipidnim nanočesticama može biti veći od 1%, veći od 2%, veći od 5%, veći od 10% ili veći od 20%.
[0066] U određenim poželјnim primerima izvođenja, lipidne nanočestice pronalaska sadrže najmanje jedan od sledećih katjonskih lipida: C12-200, DLin-KC2-DMA, DODAP, HGT4003, ICE, HGT5000 ili HGT5001. U primerima izvođenja, nosač za transfer sadrži holesterol i lipid modifikovan sa PEG. U pojedinim primerima izvođenja, nosači za transfer sadrže DMG-PEG2K. U određenim primerima izvođenja, nosač za transfer sadrži jednu od sledećih lipidnih formulacija: C12-200, DOPE, chol, DMG-PEG2K; DODAP, DOPE, holesterol, DMG-PEG2K; HGT5000, DOPE, chol, DMG-PEG2K, HGT5001, DOPE, chol, DMG-PEG2K.
[0067] Lipozomski nosači za transfer za upotrebu u kompozicijama pronalaska mogu biti pripremljeni raznim tehnikama koje su trenutno poznate u stuci. Višeslojne vezikule (MLV) mogu biti pripremljene konvencionalnim tehnikama, na primer, deponovanjem izabranog lipida na unutrašnjem zidu pogodnog kontejnera ili posude, rastvaranjem lipida u odgovarajućem rastvaraču, a zatim uparavanjem rastvarača da bi na unutrašnjoj strani posude ostao tanak film ili sušenjem raspršivanjem.
Vodena faza se zatim može dodati u posudu, uz mešanje vorteksovanjem, što rezultuje obrazovanjem MLV. Jednoslojne vezikule (ULV) se zatim mogu obrazovati homogenizacijom, sonikacijom ili ekstruzijom višeslojnih vezikula. Dodatno, jednoslojne vezikule mogu biti dobijene tehnikama uklanjanja deterdženta.
[0068] U određenim primerima izvođenja ovog opisa, kompozicije predmetnog pronalaska sadrže nosač za transfer u kome je iRNK vezana i za površinu nosača za transfer i inkapsulirana unutar istog nosača za transfer. Na primer, tokom pripreme kompozicija, katjonski lipozomski nosači za transfer mogu biti vezani sa iRNK elektrostatičkim interakcijama.
[0069] U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska mogu biti ispunjene dijagnostičkim radionuklidom, fluorescentnim materijalima ili drugim materijalima koji se mogu detektovati kako in vitro tako i u in vivo primenama. Na primer, pogodni dijagnostički materijali za upotrebu u predmetnom pronalasku mogu uklјučivati rodamin-dioleoilfosfatidiletanolamin (Rh-PE), iRNK zelenog fluorescentnog proteina (GFP iRNK), iRNK Renilla luciferaze i iRNK luciferaze svica.
[0070] Izbor odgovarajuće veličine lipozomskog nosača za transfer mora uzeti u obzir mesto cilјne ćelije ili tkiva i, do određene mere, primenu za koju se lipozom priprema. U pojedinim primerima izvođenja, može biti poželјno da se ograniči transfekcija iRNK na određene ćelije ili tkiva. Lipozomski nosač za transfer može biti dimenzioniran tako da je veličina lipozoma dovolјnog prečnika da se ograniči ili izričito izbegne distribucija u određene ćelije ili tkiva. U principu, veličina nosača za transfer je u opsegu od oko 25 do 250 nm, poželјno manja od oko 250nm, 175nm, 150nm, 125nm, 100nm, 75nm, 50nm, 25nm ili 10nm.
[0071] Dostupni su razni alternativni postupci za određivanje veličine populacije lipozomskih nosača za transfer koji su poznati u struci. Jedan takav postupak određivanja veličine je opisan u U.S. Pat. No.
4,737,323. Sonikacija lipozomske suspenzije bilo u kupatilu ili sonikacijom sa sondom dovodi do progresivnog smanjenja veličine čestica, do malih ULV, prečnika manjeg od oko 0,05 mikrona. Homogenizacija je još jedan postupak koji se oslanja na energiju cepanja i fragmentaciju velikih lipozoma u manje. U uobičajenoj proceduri homogenizacije, MLV povratno cirkulišu kroz standardni homogenizator za emulzije dok se ne utvrdi prisustvo izabrane veličine lipozoma, obično između oko 0,1 i 0,5 mikrona. Veličina lipozomskih vezikula može biti određena kvazi-električnim rasipanjem svetlosti (QELS od engl. quasi-electric light scattering), kao što je opisano u Bloomfield, Ann. Rev. Biophys. Bioeng. 10:421-450 (1981). Prosečan prečnik lipozoma može biti smanjen sonikacijom prethodno obrazovanih lipozoma. Intermitentni ciklusi sonikacije mogu biti naizmenični sa QELS procenom radi vođene i efikasne sinteze lipozoma.
Cilјne ćelije
[0072] Kako se ovde upotrebljava, termin "cilјna ćelija" se odnosi na ćeliju ili tkivo na koje treba usmeriti ili ciljano delovati kompozicijama pronalaska. U pojedinim primerima izvođenja, cilјne ćelije su deficijentne u proteinu ili enzimu od interesa.
[0073] U jednom primeru izvođenja, kompozicije pronalaska olakšavaju endogenu proizvodnju jednog ili više funkcionalnih proteina i/ili enzima kod subjekta, a naročito proizvodnju proteina i/ili enzima koji pokazuju manju imunogenost u odnosu na njihove rekombinantno pripremlјene pandane. Nosači za transfer sadrže iRNK koja kodira deficijentni protein ili enzim. Nakon raspodele takvih kompozicija u cilјnim tkivima i naknadne transfekcije navedenih cilјnih ćelija, egzogena iRNK koja se nalazi u okviru lipozomskog nosača za transfer (tj. lipidne nanočestice) može biti in vivo prevedena translacijom da bi se proizveo funkcionalan protein ili enzim koji je kodiran egzogeno primenjenom iRNK (npr. protein ili enzim u kome je subjekat deficijentan). Shodno navedenom, kompozicije predmetnog pronalaska koriste sposobnost subjekta da vrši translaciju egzogeno ili rekombinantno pripremlјene iRNK radi proizvodnje endogeno translatiranog proteina ili enzima i da se time proizvede (i gde je primenjivo, izluči) funkcionalni protein ili enzim. Eksprimirane ili translacijom prevedene proteine ili enzime mogu takođe karakterisati in vivo post-translacione modifikacije koje se javljaju u prirodi, a koje su često odsutne kod rekombinantno pripremlјenih proteina ili enzima, čime se dodatno smanjuje imunogenost translatiranog proteina ili enzima.
[0074] Primena iRNK koja kodira deficijentni protein ili enzim izbegava potrebu za isporukom nukleinskih kiselina u specifične organele unutar cilјne ćelije (npr. mitohondrije). Umesto toga, nakon transfekcije cilјne ćelije i isporuke nukleinskih kiselina u citoplazmu cilјne ćelije, sadržaj iRNK unutar nosača za transfer može biti preveden translacijom, odnosno funkcionalni protein ili enzim može biti eksprimiran.
[0075] Kao što je ovde obezbeđeno, kompozicija može sadržavati ligand koji je sposoban da pobolјša afinitet kompozicije za cilјnu ćeliju. Cilјani ligandi mogu biti vezani za spolјni dvosloj lipidne čestice tokom formulisanja ili nakon formulisanja. Ovakvi postupci su dobro poznati u stanju tehnike. Dodatno, pojedine formulacije lipidnih čestica mogu koristiti fuzogene polimere kao što su PEAA, hemaglutinin, drugi lipopeptidi (pogledati U.S. Patent Application Ser. No. 08/835,281, i 60/083,294) i druge karakteristike koje su korisne in vivo i/ili za unutarćelijsku isporuku. U pojedinim drugim primerima izvođenja, kompozicije predmetnog pronalaska pokazuju pobolјšane efikasnosti transfekcije i/ili pokazuju pobolјšanu selektivnost prema cilјnim ćelijama ili tkivima od interesa. Razmatrane su stoga kompozicije koje sadrže jedan ili više liganada (npr. peptida, aptamera, oligonukleotida, vitamina ili drugih molekula) koji su sposobni da pobolјšaju afinitet kompozicija i njihovog sadržaja nukleinskih kiselina za cilјne ćelije ili tkiva. Pogodni ligandi mogu opciono biti vezani ili povezani sa površinom nosača za transfer. U pojedinim primerima izvođenja, cilјani ligand može prolaziti kroz površinu nosača za transfer ili biti inkapsuliran unutar nosača za transfer. Pogodni ligandi su izabrani na osnovu njihovih fizičkih, hemijskih ili bioloških osobina (npr. selektivnog afiniteta i/ili prepoznavanja markera ili karakteristika površine cilјnih ćelija). Ciljna mesta koja su specifična za ćeliju i njihov odgovarajući ciljani ligand mogu široko varirati. Pogodni ligandi za cilјano dejstvo su izabrani tako da se iskoriste jedinstvene karakteristike cilјne ćelije, čime se kompoziciji omogućava da pravi razliku između cilјnih i ćelija koje nisu ciljne. Prisustvo takvih cilјanih liganada koji su konjugovani na ostatke koji su prisutni u nosaču za transfer (tj. lipidnoj nanočestici) stoga olakšava prepoznavanje i preuzimanje kompozicija predmetnog pronalaska od strane cilјnih ćelija i tkiva. Primeri pogodnih ciljanih liganada uklјučuju jedan ili više peptida, proteina, aptamera, vitamina i oligonukleotida.
Primene i davanja
[0076] Kako se ovde upotrebljava, termin "subjekat" se odnosi na bilo koju životinju (npr. sisara), uklјučujući, ali ne ograničavajući se na, lјude, primate različite od čoveka, glodare i slično, kojima se primenjuju kompozicije predmetnog pronalaska. Uobičajeno je da se termini "subjekat" i "pacijent" ovde upotrebljavaju naizmenično i da se odnose na humanog subjekta.
[0077] Kompozicije pronalaska obezbeđuju isporuku iRNK za lečenje brojnih poremećaja. Kompozicije predmetnog pronalaska su pogodne za lečenje bolesti ili poremećaja koji podrazumevaju deficijenciju proteina i/ili enzima koji se izlučuju ili sekretuju od strane cilјne ćelije u okolnu vanćelijsku tečnost (npr. iRNK koje kodiraju hormone i neurotransmitere). U primerima izvođenja, bolest može uklјučivati defekt ili deficijenciju u sekretovanom proteinu (npr. Fabrijevu bolesti ili ALS). Simptomi oboljenja mogu biti pobolјšani obezbeđivanjem kompozicija pronalaska (npr. kod cistične fibroze). Poremećaji za koje je predmetni pronalazak koristan uklјučuju, ali nisu ograničeni na, poremećaje kao što su Huntingtonova bolest; Parkinsonova bolest; mišićne distrofije (kao što je npr. Dišenova i Bekerova); bolesti hemofilije (kao što su npr. hemofilija B (FIX), hemofilija A (FVIII); spinalna mišićna atrofija povezana sa SMN1 (SMA); amiotrofična lateralna skleroza (ALS); galaktozemija povezana sa GALT; cistična fibroza (CF); poremećaji povezani sa SLC3A1, uklјučujući cistinuriju; poremećaji povezani sa COL4A5, uklјučujući Alportov sindrom; deficijencije galaktocerebrozidaze; adrenoleukodistrofija i adrenomijeloneuropatija povezane sa X hromozomom; Fridrihova ataksija; Pelizaeus-Merzbacher-ova bolest; tuberozna skleroza povezana sa TSC1 i TSC2; Sanfilipo B sindrom (MPSIIIB); cistinoza povezana sa CTNS-om; poremećaji povezani sa FMR1 koji uklјučuju sindrom fragilnog X hromozoma, sindrom tremora/ataksije udružen sa fragilnim X hromozomom i sindrom prevremene insuficijencije jajnika povezan sa fragilnim X hromozomom; Prader-Vilijev sindrom; nasledna hemoragična telangiektazija (AT); Njuman-Pikova bolest tipa C1; bolesti povezane sa neuronskim ceroidnim lipofuscinozama, uklјučujući juvenilnu neuronsku ceroidnu lipofuscinozu (JNCL), juvenilnu Batenovu bolest, bolest Santavuori-Haltia, Jansky-Bielschowsky-evu bolest i PTT-1 i TPP1 deficijencije; ataksija u detinjstvu sa hipomijelinizacijom centralnog nervnog sistema/iščezavanjem bele mase povezana sa EIF2B1, EIF2B2, EIF2B3, EIF2B4 i EIF2B5; epizodna ataksija tipa 2 povezana sa CACNA1A i CACNB4; poremećaji povezani sa MECP2, uklјučujući klasičan Retov sindrom, tešku neonatalnu encefalopatiju povezanu sa MECP2 i PPM-X sindrom; atipičan Retov sindrom povezan sa CDKL5; Kenedijeva bolest (SBMA); cerebralna autozomno dominantna arteriopatija sa subkortikalnim infarktima i leukoencefalopatijom povezna sa Notch-3 (CADASIL); epileptični poremećaji povezani sa SCN1A i SCN1B; poremećaji povezani sa polimerazom G koji uklјučuju Alpers-Huttenlocher-ov sindrom, senzornu ataksičnu neuropatiju povezanu sa POLG, dizartriju i oftalmoparezu, kao i autozomno dominantnu i recesivnu progresivnu eksternu oftalmoplegiju sa delecijama mitohondrijske DNK; hipoplazija nadbubrežne žlezde povezana sa X hromozomom; agamaglobulinemija povezana sa X hromozomom; Vilsonova bolest; i Fabrijeva bolest. iRNK pronalaska može kodirati funkcionalne proteine ili enzime koji se izlučuju u vanćelijski prostor. Na primer, sekretovani proteini uključuju faktore zgrušavanja, komponente signalnog puta komplemenata, citokine, hemokine, hemoatraktante, proteinske hormone (npr. EGF, PDF), proteinske komponente seruma, antitela, receptore slične toll receptorima koji se mogu izlučivati i drugo. U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije predmetnog pronalaska mogu uklјučivati iRNK koja kodira eritropoetin, α1-antitripsin, karboksipeptidazu N ili humani hormon rasta.
[0078] U primerima izvođenja, pronalazak kodira protein koji se može sekretovati i koji se sastoji od subjedinica koje su kodirane sa više od jednog gena. Na primer, sekretovani protein može biti heterodimer, gde je svaki lanac ili subjedinica kodirana odvojenim genom. Moguće je da se više od jednog molekula iRNK isporučuje u okviru nosača za transfer i da iRNK kodira odvojene subjedinice sekretovanog proteina. Alternativno, jedna iRNK može biti konstruisana tako da kodira više od jedne subjedinice (npr. u slučaju jednolančanog Fv antitela). U određenim primerima izvođenja, odvojeni iRNK molekuli koji kodiraju pojedinačne subjedinice mogu biti primenjeni u odvojenim nosačima za transfer. U jednom primeru izvođenja, iRNK može kodirati antitela pune dužine (i teške i lake lance varijabilnog i konstantnog regiona) ili fragmente antitela (npr. Fab, Fv ili jednolančani Fv (scFv) da bi se subjektu obezbedio imunitet. U drugim primerima izvođenja, sekretovani protein je citokin ili drugi sekretujući protein koji se sastoji od više od jedne subjedinice (npr. IL-12 ili IL-23).
[0079] Kompozicije pronalaska mogu biti primenjene subjektu. U pojedinim primerima izvođenja, kompozicija je formulisana u kombinaciji sa jednim ili sa više od dodatnih nukleinskih kiselina, nosača, cilјanih liganada ili stabilišućih reagenasa, ili u farmakološkim kompozicijama u kojima je pomešana sa pogodnim ekscipijensima. Na primer, u jednom primeru izvođenja, kompozicije pronalaska mogu biti pripremlјene tako da isporučuju iRNK koja kodira dva ili više različitih proteina ili enzima. Tehnike za formulisanje i primenu lekova se mogu pronaći u "Remington's Pharmaceutical Sciences", Mack Publishing Co., Easton, PA, najnovije izdanje. Kompozicije predmetnog pronalaska mogu biti primenjene i dozirane u skladu sa trenutnom medicinskom praksom, uzimajući u obzir kliničko stanje subjekta, mesto i način primene, raspored primene, starost, pol, telesnu težinu subjekta i druge faktore koji su relevantni prosečno iskusnim kliničarima. "Efektivna količina", za svrhe koje su ovde opisane, može biti određena na osnovu relevantnih razmatranja koja su poznata stručnjacima u eksperimentalnim kliničkim istraživanjima, farmakološkoj, kliničkoj i medicinskoj praksi. U pojedinim primerima izvođenja, primenjena količina je efektivna za postizanje barem neke stabilizacije, pobolјšanja ili eliminacije simptoma i drugih indikatora koji su izabrani kao odgovarajući parametric napredovanja bolesti, regresije ili pobolјšanja od strane stručnjaka. Na primer, pogodna količina i režim doziranja je onaj koji prouzrokuje najmanje prolaznu proizvodnju proteina. Aerosoli koji sadrže kompozicije predmetnog pronalaska mogu biti inhalirani (za nazalnu, trahealnu ili bronhijalnu isporuku).
[0080] U jednom primeru izvođenja, kompozicije pronalaska su formulisane tako da su pogodne za produženo oslobađanje iRNK koja je u njima sadržana. Takve kompozicije sa produženim oslobađanjem se mogu konvencionalno primeniti subjektu u produženim intervalima doziranja. Na primer, u jednom primeru izvođenja, kompozicije predmetnog pronalaska se primenjuju subjektu dva puta dnevno, svakog dana ili svakog drugog dana. U poželјnom primeru izvođenja, kompozicije predmetnog pronalaska se primenjuju subjektu dva puta nedelјno, jednom nedelјno, na svakih deset dana, na svake dve nedelјe, na svake tri nedelјe ili poželјnije na svake četiri nedelјe, jednom mesečno, na svakih šest nedelјa, na svakih osam nedelјa, svakog drugog meseca, na svaka tri meseca, na svaka četiri meseca, na svakih šest meseci, na svakih osam meseci, na svakih devet meseci ili godišnje. Poželјno je da se upotrebljeni načini za produženo oslobađanje kombinuju sa modifikacijama koje se uvode u iRNK da bi se pobolјšala stabilnost.
[0081] U predmetnom pronalasku se takođe razmatraju liofilizovane farmaceutske kompozicije koje sadrže jednu ili više lipozomskih nanočestica koje su ovde opisane i srodne postupke za upotrebu takvih liofilizovanih kompozicija kao što je opisano, na primer, u privremenoj prijavi US br.61/494,882, podnetoj 8. juna 2011. god. Na primer, liofilizovane farmaceutske kompozicije u skladu sa pronalaskom mogu biti rekonstituisane pre primene ili mogu biti rekonstituisane in vivo. Na primer, liofilizovana farmaceutska kompozicija opisa može biti formulisana u odgovarajućem doznom obliku i primenjena tako da se dozni oblik rehidrira tokom vremena in vivo, u telesnim tečnostima subjekta.
[0082] Dok su određena jedinjenja i kompozicije predmetnog pronalaska opisani sa specifičnošću u skladu sa određenim primerima izvođenja, primeri koji slede služe samo da ilustruju jedinjenja pronalaska i nisu predviđeni da iste ograniče.
[0083] Jednina termina koja se upotrebljava u specifikaciji, osim ukoliko nije jasno naznačeno suprotno, podrazumeva da je uključena i množina pojma. Opisi koji uklјučuju "ili" između jednog ili više članova grupe, smatraju se zadovoljavajućim ukoliko su jedan, više od jednog ili svi članovi grupe prisutni u, upotreblјeni u ili na drugi način relevantni za dati proizvod ili proces, ukoliko nije naznačeno suprotno ili drugačije očigledno iz konteksta. Kada su elementi predstavlјeni u vidu lista (npr. kao Markuš grupa ili sličan format), podrazumeva se da je svaka podgrupa elemenata takođe opisana, i da bilo koji element(i) može biti uklonjen iz grupe. Treba imati na umu da, u principu, kada se pronalazak ili aspekti pronalaska odnose na to da su obuhvaćeni određeni elementi, karakteristike itd., određeni primeri izvođenja pronalaska ili aspekti pronalaksa se sastoje ili se suštinski sastoje od takvih elemenata, karakteristika itd. U svrhu pojednostavlјenja, primeri izvođenja koji slede nisu u svakom navođenju izričito opisani sa tako mnogo reči.
PRIMERI
Uporedni primer 1: Depo za proizvodnju proteina putem intravenske isporuke polinukleotidnih kompozicija
Informaciona RNK
[0084] Humani eritropoetin (EPO) (SEQ ID NO:3; SL.3), humana alfa-galaktozidaza (GLA) (SEQ ID NO:4;
SL.4), humani alfa-1 antitripsin (A1AT) (SEQ ID NO:5; SL.5) i humani Faktor IX (FIX) (SEQ ID NO:6; SL.
6) su sintetisani in vitro transkripcijom sa plazmidne DNK matrice koja kodira gen, nakon čega je sledilo dodavanje strukture 5' kape (Cap1) (Fechter i Brownlee, J. Gen. Virology 86:1239-1249 (2005)) i 3’ poli (A) repa dužine od približno 200 nukleotida, što je određeno elektroforezom na gelu. 5’ i 3' netranslatirajući regioni su bili prisutni u svakom iRNK proizvodu u primerima koji slede i definisani su kao SEQ ID NO:1 i 2 (SL.1 i SL.2), tim redom.
Formulacije lipidnih nanočestica
[0085] Formulacija 1: Alikvoti etanolskih rastvora C12-200, DOPE, Chol i DMG-PEG2K (40:30:25:5), koncentracije 50 mg/mL, su pomešani i razblaženi sa etanolom do konačne zapremine od 3 mL. Posebno je pripremljen vodeni puferisan rastvor iRNK (10 mM citrat/150 mM NaCl, pH 4,5) iz osnovnog rastvora koncentracije 1 mg/mL. Lipidni rastvor je brzo injeciran u vodeni rastvor iRNK i promućkan da bi se dobila konačna suspenzija u 20% etanolu. Dobijena suspenzija nanočestica je profiltrirana, dijafiltrirana sa 1x PBS-om (pH 7,4), koncentrovana i čuvana na 2-8°C.
[0086] Formulacija 2: Alikvoti etanolskih rastvora DODAP, DOPE, holesterola i DMG-PEG2K (18:56:20:6), koncentracije 50 mg/mL, su pomešani i razblaženi sa etanolom do konačne zapremine od 3 mL. Posebno je pripremljen vodeni puferisan rastvor EPO iRNK (10 mM citrat/150 mM NaCl, pH 4,5) iz osnovnog rastvora koncentracije 1 mg/mL. Lipidni rastvor je brzo injeciran u vodeni rastvor iRNK i promućkan da bi se dobila konačna suspenzija u 20% etanolu. Dobijena suspenzija nanočestica je profiltrirana, dijafiltrirana sa 1x PBS-om (pH 7,4), koncentrovana i čuvana na 2-8°C. Konačna koncentracija = 1,35 mg/mL EPO iRNK (inkapsulirane). Zave= 75,9 nm (Dv(50)= 57,3 nm; Dv(90)= 92,1 nm).
[0087] Formulacija 3: Alikvoti etanolskih rastvora HGT4003, DOPE, holesterola i DMG-PEG2K (50:25:20:5), koncentracije 50 mg/mL, su pomešani i razblaženi sa etanolom do konačne zapremine od 3 mL. Posebno je pripremljen vodeni puferisan rastvor iRNK (10 mM citrat/150 mM NaCl, pH 4,5) iz osnovnog rastvora koncentracije 1 mg/mL. Lipidni rastvor je brzo injeciran u vodeni rastvor iRNK i promućkan da bi se dobila konačna suspenzija u 20% etanolu. Dobijena suspenzija nanočestica je profiltrirana, dijafiltrirana sa 1x PBS-om (pH 7,4), koncentrovana i čuvana na 2-8°C.
[0088] Formulacija 4: Alikvoti etanolskih rastvora ICE, DOPE i DMG-PEG2K (70:25:5), koncentracije 50 mg/mL, su pomešani i razblaženi sa etanolom do konačne zapremine od 3 mL. Posebno je pripremljen vodeni puferisan rastvor iRNK (10 mM citrat/150 mM NaCl, pH 4,5) iz osnovnog rastvora koncentracije 1 mg/mL. Lipidni rastvor je brzo injeciran u vodeni rastvor iRNK i promućkan da bi se dobila konačna suspenzija u 20% etanolu. Dobijena suspenzija nanočestica je profiltrirana, dijafiltrirana sa 1x PBS-om (pH 7,4), koncentrovana i čuvana na 2-8°C.
[0089] Formulacija 5: Alikvoti etanolskih rastvora HGT5000, DOPE, holesterola i DMG-PEG2K (40:20:35:5), koncentracije 50 mg/mL, su pomešani i razblaženi sa etanolom do konačne zapremine od 3 mL. Posebno je pripremljen vodeni puferisan rastvor EPO iRNK (10 mM citrat/150 mM NaCl, pH 4,5) iz osnovnog rastvora koncentracije 1 mg/mL. Lipidni rastvor je brzo injeciran u vodeni rastvor iRNK i promućkan da bi se dobila konačna suspenzija u 20% etanolu. Dobijena suspenzija nanočestica je profiltrirana, dijafiltrirana sa 1x PBS-om (pH 7,4), koncentrovana i čuvana na 2-8°C. Konačna koncentracija = 1,82 mg/mL EPO iRNK (inkapsulirane). Zave= 105,6 nm (Dv(50)= 53,7 nm; Dv(90)= 157 nm).
[0090] Formulacija 6: Alikvoti etanolskih rastvora HGT5001, DOPE, holesterola i DMG-PEG2K (40:20:35:5), koncentracije 50 mg/mL, su pomešani i razblaženi sa etanolom do konačne zapremine od 3 mL. Posebno je pripremljen vodeni puferisan rastvor EPO iRNK (10 mM citrat/150 mM NaCl, pH 4,5) iz osnovnog rastvora koncentracije 1 mg/mL. Lipidni rastvor je brzo injeciran u vodeni rastvor iRNK i promućkan da bi se dobila konačna suspenzija u 20% etanolu. Dobijena suspenzija nanočestica je profiltrirana, dijafiltrirana sa 1x PBS-om (pH 7,4), koncentrovana i čuvana na 2-8°C.
Analiza proteina proizvedenog putem intravenski isporučenih nanočestica sa iRNK – protokol injeciranja
[0091] Ispitivanja su urađena upotrebom mužjaka CD-1 miševa starosti od približno 6-8 nedelјa na početku svakog eksperimenta, osim ukoliko nije drugačije naznačeno. Uzorci su uvedeni jednom bolusnom injekcijom u repnu venu, u ekvivalentnoj ukupnoj dozi od 30-200 mikrograma inkapsulirane iRNK. Miševi su žrtvovani i perfundovani fiziološkim rastvorom u naznačenim vremenskim tačkama.
Izolacija tkiva organa za analizu
[0092] Jetra i slezina svakog miša su izolovane, raspodeljene na tri dela i uskladištene, bilo u 10%-tnom neutralno puferisanom formalinu ili su trenutno zamrznute i čuvane na -80°C za naknadnu analizu.
Izolacija seruma za analizu
[0093] Sve životinje su eutanazirane asfiksijom sa CO2, 48 sati nakon primene doze (± 5%), nakon čega su urađene torakotomija i terminalno prikupljanje krvi iz srca. Puna krv (maksimalna količina koja se mogla dobiti) je prikuplјena punkcijom srca kod eutaniziranih životinja, nakon čega je krv prebačena u epruvete za izdvajanje seruma, ostavlјena da se zgruša na sobnoj temperaturi najmanje 30 minuta i centrifugirana na 22°C ± 5°C na 9300 g tokom 10 minuta da bi se ekstrahovao serum. U međuvremenu, puna krv je prikupljana punkcijom facijalne vene ili sečenjem repa, u zapremini od približno 40-50 µL. Uzorci prikuplјeni od životinja koji nisu bile tretirane su korišćeni kao bazalna vrednost, za poređenja prilikom analize životinja koje su ispitivane.
Imunosorbentna analiza povezana sa enzimom (ELISA)
[0094] EPO ELISA: Kvantifikacija EPO proteina je urađena praćenjem procedure koja je navedena u uputstvu komercijalnog ELISA kompleta za humani EPO (Quantikine IVD, R&D Systems, kataloški br. Dep-00). Upotrebljene pozitivne kontrole su bile rekombinantan humani protein eritropoetina ultra čistog i stepena čistoće za kulture kriva (R&D Systems, kataloški br. 286-EP i 287-TC, tim redom). Detekcija je praćena putem apsorpcije (450 nm), upotrebom Molecular Device Flex Station instrumenta.
[0095] GLA ELISA: Standardne ELISA procedure su bile praćene upotrebom ovčjeg anti-alfagalaktozidaznog G-188 IgG kao antitijela za hvatanje i korišćenjem zečjeg anti-alfa-galaktozidaznog TK-88 IgG kao sekundarnog (detektujućeg) antitela (Shire Human Genetic Therapies). Za aktivaciju rastvora 3,3’,5,5'-tetrametilbenzidinskog (TMB) supstrata je upotrebljen koziji anti-zečji IgG koji je bio konjugovan sa peroksidazom rena (HRP). Reakcija je zaustavljena upotrebom 2N H2SO4nakon 20 minuta. Detekcija je praćena putem apsorpcije (450 nm), upotrebom Molecular Device Flex Station instrumenta. Serum netretiranih miševa i humani protein alfa-galaktozidaza su korišćeni kao negativne i pozitivne kontrole, tim redom.
[0096] FIX ELISA: Kvantifikacija FIX proteina je urađena praćenjem procedure koja je navedena u uputstvu komercijalnog ELISA kompleta za humani FIX (AssayMax, Assay Pro, kataloški br. EF1009-1). A1AT ELISA: Kvantifikacija A1AT proteina je urađena praćenjem procedure koja je navedena u uputstvu komercijalnog ELISA kompleta za humani A1AT (Innovative Research, kataloški br. IRAPKT015).
Imunoblot (Western blot) analiza
[0097] (EPO): Imunoblot analiza je urađena upotrebom anti-hEPO antitela (R&D Systems, #MAB2871) i ultra čistog humanog EPO proteina (R&D Systems, #286-EP) kao kontrolom.
Rezultati
[0098] Rad opisan u ovom primeru prikazuje upotrebu lipidnih nanočestica sa inkapsuliranom iRNK kao depo-izvora za proizvodnju proteina. Takav depo efekat može biti postignut na više mesta unutar tela (tj. u jetri, bubregu, slezini i mišiću), a postignuto je i dalje kvantifikovano merenje željenog proteina koji je dobijen sa egzogene informacione iRNK koja je isporučena lipozomskim nanočesticama. Prilikom upotrebe iRNK za humani eritropoetin (hEPO), humanu alfa-galaktozidazu (hGLA), humani alfa-1 antitripsin (hA1AT) i humani faktor IX (hFIX) je pokazano i izlučivanje proteina iz depoa.
1A. Rezultati in vivo proizvodnje humanog EPO proteina
[0099] Proizvodnja hEPO proteina je pokazana za različite formulacije lipidnih nanočestica. Od četiri različita katjonska lipidna sistema, lipidne nanočestice na bazi C12-200 su proizvele najveću količinu hEPO proteina nakon četiri sata od intravenske primene, što je izmereno ELISA testom (SL. 7). Ova formulacija (Formulacija 1) je rezultovala u 18,3 ug/mL hEPO proteina koji je izlučen u krvotok. Normalni nivoi hEPO proteina u serumu ljudi iznose 3,3-16,6 mIU/mL (NCCLS dokument C28-P; vol.12, br. 2). Na osnovu specifične aktivnosti od 120,000 IU/mg EPO proteina, time se dobija količina od 27,5-138 pg/mL hEPO proteina kod normalnih humanih individua. Prema tome, jednokratnom dozom od 30 ug katjonske lipidne formulacije na bazi C12-200 koja je inkapsulirala hEPO iRNK, dobijeno je povećanje u odgovarajućem proteinu koje je bilo za preko 100,000 puta veće u odnosu na fiziološke nivoe.
[0100] Od ispitivanih lipidnih sistema, formulacija lipidnih nanočestica na bazi DODAP-a je bila najmanje efikasna. Ipak, uočena količina humanog EPO proteina koji je dobijena isporukom putem lipidnih nanočestica na bazi DODAP-a koje su inakapsulirale iRNK za EPO je iznosila 4,1 ng/mL, što je još uvek 30 puta više u odnosu na normalne fiziološke nivoe EPO proteina (Tabela 1).
Tabela 1. Sirove vrednosti sekretovanog hEPO proteina za razne sisteme nanočestica na bazi katjonskih lipida, izmerene ELISA analizom (kao što je prikazano na SL.8). Doze su izračunate na osnovu inkapsulirane iRNK za hEPO. Vrednosti proteina su prikazane u vidu nanograma humanog EPO proteina po mililitru seruma. Promene u hematokritu su izračunate poređenjem vrednosti pre uzorkovanja (Dan -1) i Dana 10.
[0101] Pored navedenog, dobijeni protein je ispitan i da bi se utvrdilo da li je bio aktivan i da li je pravilno funkcionisao. U slučaju zamenske terapije sa iRNK (MRT) upotrebom hEPO iRNK, promene u hematokritu su praćene tokom perioda od deset dana za pet različitih formulacija lipidnih nanočestica (SL.8, Tabela 1), a da bi se procenila aktivnost proteina. Tokom ovog vremenskog perioda, dve od pet formulacija su pokazale povećanje hematokrita (≥15%) što ukazuje da se primenom takvih sistema proizvodi aktivni hEPO protein.
[0102] U drugom eksperimentu, promene hematokrita su praćene tokom perioda od 15 dana (SL.9, Tabela 2). Formulacija lipidnih nanočestica (Formulacija 1) je primenjena ili kao pojedinačna doza od 30 (µg ili u vidu tri manje doze od po 10 µg koje su injecirane dana 1, dana 3 i dana 5. Slično tome, Formulacija 2 je primenjena u vidu 3 doze od po 50 (µg na dan 1, dan 3 i dan 5. C12-200 je proizveo značajno povećanje hematokrita. Sveukupno posmatrano, uočeno je povećanje do ∼25% promene, što je ukazalo na aktivan humani EPO protein koji je proizveden primenom navedenih sistema.
Tabela 2 Nivoi hematokrita svake grupe tokom perioda posmatranja od 15 dana (SL.9). Miševima su primenjene doze u vidu jednokratne ili tri injekcije, svakog drugog dana. N=4 miša po grupi.
1B. Rezultati in vivo proizvodnje humanog GLA proteina
[0103] Istražen je i drugi proteinski sistem na bazi egzogenih molekula da bi se demonstrirao "depo efekat" prilikom upotrebe lipidnih nanočestiva sa iRNK. Životinje su intravenski injecirane sa jednokratnom dozom od 30 mikrograma inkapsulirane humane iRNK za alfa-galaktozidazu (hGLA), upotrebom sistema lipidnih nanočestica na bazi C12-200, i zatim su životinje žrtvovane nakon šest sati (Formulacija 1). Kvantifikacija sekretovanog hGLA proteina je urađena ELISA testom. Kao kontrole su korišćeni serum netretiranih miševa i humani protein alfa-galaktozidaze. Detekcija humanog alfagalaktozidaznog proteina je praćena tokom perioda od 48 sati.
[0104] Merlјivi nivoi hGLA proteina su uočeni tokom vremenskog perioda eksperimenta sa maksimalnim nivoom od 2,0 ug/mL hGLA proteina u šestom satu (SL.10). Tabela 3 navodi specifične količine hGLA koje su utvrđene u serumu. Prijavljeno je da normalna aktivnost kod zdravih muškaraca iznosi približno 3,05 nanomola/h/mL. Aktivnost za alfa-galaktozidazu, rekombinantni humani alfagalaktozidazni protein, je iznosila 3,56 x 10<6>nanomol/h/mg. Analiza ovih vrednosti ukazuje na količinu od približno 856 pg/mL hGLA proteina kod normalnih zdravih muških osoba. Količina od 2,0 ug/mL hGLA proteina koja je uočena šest sati nakon primene lipidnih nanočestica sa hGLA iRNK je stoga iznosila preko 2300 puta više u odnosu na normalne fiziološke nivoe. Dalјe, nakon 48 sati, još uvek su se mogli detektovati značajni nivoi hGLA proteina (86,2 ng/mL). Navedeni nivo je reprezentativan kao skoro 100 puta veća količine hGLA proteina u odnosu na fiziološke količine, a koja je još uvek bile prisutna nakon 48 sati.
Tabela 3. Sirove vrednosti sekretovanog hGLA proteina tokom vremena, izmerene ELISA analizom (kao što je prikazano na SL.10). Vrednosti su prikazane kao nanogrami hGLA proteina po mililitru seruma. N=4 miša po grupi.
[0105] Dodatno, poluživot alfa-galaktozidaze prilikom primene u koncentraciji od 0,2 mg/kg je iznosio približno 108 minuta. Proizvodnja GLA proteina putem "depo efekta" i primene lipidnih nanočestica sa GLA iRNK, pokazuje značajno povećanje vremena zadržavanja u krvi u poređenju sa direktnom injekcijom čistog rekombinantnog proteina. Kao što je prethodno opisano, nakon 48 sati su prisutne značajne količine proteina.
[0106] Profil aktivnosti α-galaktozidaznog proteina koji je proizveden upotrebom lipidnih nanočestica sa GLA iRNK je izmeren kao funkcija metabolizma 4-metilumbeliferil-α-D-galaktopiranozida (4-MU-αgal). Kao što je prikazano u SL.11, protein proizveden upotrebom ovih sistema nanočestica je prilično aktivan i odražava nivoe dostupnog proteina (SL. 12, Tabela 3). AUC poređenja hGLA proizvodnje zasnovane na terapiji sa iRNK u odnosu na zamensku terapiju enzimom (ERT) kod miševa i lјudi pokazuje 182-struko i 30-struko povećanje, tim redom (Tabela 4).
Tabela 4. Poređenje Cmaxi AUCinfvrednosti kod Fabri pacijenata nakon IV primene doze od 0,2 mg/kg alfa-galaktozidaze (farmakološka doza) sa onima koji se detektuju kod miševa nakon IV primene doze alfa-galaktozidaze i GLA iRNK.<a>Podaci su iz objavlјene publikacije (Gregory M. Pastores i saradnici, Safety and Pharmacokinetics of hGLA in patients with Fabry disease and end-stage renal disease. Nephrol Dial Transplant (2007) 22:1920-1925.<b>Bolest bubrega koja nije u terminalnoj fazi.<c>Aktivnost α-galaktozidaze 6 sati nakon primene doze (najranije vreme koje je ispitivano u studiji).
[0107] Pokazana je sposobnost lipidnih nanočestica sa inkapsuliranom iRNK da cilјano deluju na organe koji mogu delovati kao depoi za proizvodnju želјenog proteina. Uočeni nivoi sekretovanog proteina su bili za nekoliko redova veličine iznad normalnih fizioloških nivoa. Ovakav "depo efekat" je reproducibilan. SL. 12 ponovo pokazuje da je robusna proizvodnja proteina uočena nakon primene jednokratne doze od 30 ug hGLA iRNK u lipidnim nanočesticama na bazi C12-200 (Formulacija 1) kod miševa divlјeg tipa (CD-1). U ovom eksperimentu, nivoi hGLA su analizirani tokom perioda od 72 sata. Maksimalni prosek od 4,0 ug humanog hGLA proteina/mL seruma je detektovan šest sati nakon primene. Na osnovu vrednosti od ∼1 ng/mL hGLA proteina koliko iznosi normalan fiziološki nivo, hGLA MRT je obezbedila ugrubo 4000 puta viši nivo proteina. Kao i prethodno, hGLA protein se mogao detektovati do 48 sati nakon primene (SL.12).
[0108] Analiza tkiva koja su izolovana u ovom istom eksperimentu je obezbedila uvid u distribuciju hGLA proteina kod miševa tretiranih sa MRT za hGLA (SL.13). nivoi hGLA proteina iznad fiziološkog su detektovani u jetri, slezini i bubrezima svih tretiranih miševa, uz maksimalnu vrednost koja je uočena između 12 i 24 sata nakon primene. Detektabilni nivoi proteina dobijenog sa MRT su mogli biti uočeni tri dana nakon jednokratne injekcije lipidnih nanočestica sa hGLA.
[0109] Dodatno, pokazano je da proizvodnju hGLA nakon primene nanočestica na bazi C12-200 sa hGLA iRNK karkateriše dozno-zavistan odgovor u serumu (SL.14A), kao i u jetri (SL.14B).
[0110] Jedna od inherentnih karakteristika zamenske iRNK terapije posredovane lipidnim nanočesticama bi bio farmakokinetički profil odgovarajućeg proizvedenog proteina. Na primer, tretman miševa zasnovan na ERT u kome se upotrebljava alfa-galaktozidaza, rezultuje poluživotom u plazmi od približno 100 minuta. Nasuprot tome, alfa-galaktozidaza proizvedena putem MRT je sa vremenom zadržavanja u krvi od približno 72 sata i vremenskom tačkom maksimalne vrednosti od 6 sati. Navedeno omogućava mnogo veću izloženost organa i time njihovog učestvovanja u mogućem kontinuiranom preuzimanju želјenog proteina. Poređenje PK profila je prikazano na SL.15 i ukazuje na jasnu razliku u brzini klirensa i, konačno, da se veliki pomeraj u površini ispod krive (AUC) može postići posredstvom tretmana zasnovanog na MRT-u.
[0111] U odvojenom eksperimentu, hGLA MRT je primenjena u mišijem modelu bolesti, kod hGLA KO miševa (Fabri miševa). Doza od 0,33 mg/kg lipidnih nanočestica na bazi C12-200 sa hGLA iRNK (Formulacija 1) je primenjena ženkama KO miševa u vidu jednokratne, intravenske injekcije. Znatne količine hGLA proteina koji je dobijen sa MRT su zabeležene u vidu maksimalne vrednosti nakon 6 sati (∼560 ng/mL seruma) što je približno 600 puta više od normalnih fizioloških nivoa. Dalјe, hGLA protein je još uvek bio detektabilan 72 sata nakon primene (SL.16).
[0112] Kvantifikacija GLA proteina dobijenog sa MRT u vitalnim organima je pokazala značajnu akumulaciju, kao što je prikazano u SL.17. Poređenje količine uočenog hGLA proteina koji je proizveden sa MRT i prijavlјenih normalnih fizioloških nivoa koji se mogu naći u klјučnim organima je uneto na grafik (normalni nivoi su prikazani u vidu isprekidanih linija). Dok su nivoi proteina u 24 sata viši nego u 72 sata nakon primene, nivoi hGLA proteina koji su detektovani u jetri, bubrezima, slezini i srcima tretiranih Fabri miševa su bili ekvivalentni nivoima kod miševa divlјeg tipa. Na primer, 3 dana nakon jednokratnog MRT tretmana, u bubrezima tretiranih miševa je nađeno 3,1 ng hGLA proteina/mg tkiva.
[0113] U narednom eksperimentu, sprovedeno je poređenje tretmana sa alfa-galaktozidazom na bazi ERT i tretmana mužjaka Fabri KO sa hGLA primenom MRT. Jednokratna intravenska doza od 1,0 mg/kg je data u oba slučaja terapije, a miševi su žrtvovani nedelјu dana nakon primene. Serumski nivoi hGLA proteina su analizirani 6 sati i 1 nedelјu nakon injeciranja, dok je nakupljanje hGAL proteina u jetri, bubregu, slezini i srcu analizirano nedelјu dana nakon primene. Kao dodatak analizama biodistribucije, mera efikasnosti je određena merenjem redukcije globotrioazilceramida (Gb3) i lyso-Gb3 u bubregu i srcu. SL.18 prikazuje nivoe hGLA proteina u serumu nakon tretmana mužjaka Fabri miševa bilo sa alfagalaktozidazom ili sa lipidnim nanočesticama sa GLA iRNK (Formulacija 1). Uzorci seruma su analizirani 6 sati i 1 nedelјu nakon primene. Robusan signal je detektovan kod miševa tretiranih sa MRT nakon 6 sati, pri čemu je serumski nivo hGLA proteina iznosio ∼4,0 ug/mL. Nasuprot tome, u istom trenutku nije bilo preostale alfa-galaktozidaze koja bi se mogla detektovati.
[0114] U ovom eksperimentu, Fabri miševi su žrtvovani nedelјu dana nakon inicijalne injekcije, nakon čega su organi izolovani i analizirani (jetra, bubreg, slezina, srce). SL.19 prikazuje poređenje humanog GLA proteina koji je utrđen u svakom odgovarajućem organu nakon bilo hGLA MRT ili alfagalaktozidaznog ERT tretmana. Nivoi odgovaraju hGLA koja je prisutna nakon jedne nedelje od primene. hGLA protein je detektovan u svim analiziranim organima. Na primer, kod miševa tretiranih sa MRT je došlo do akumulacije hGLA proteina u bubregu, u koncentraciji od 2,42 ng hGLA proteina/mg proteina, dok su miševi tretirani alfa-galaktozidazom imali samo rezidualne nivoe (0,37 ng/mg proteina). Navedeno odgovara 6,5 puta višem nivou hGLA proteina nakon tretmana sa hGLA MRT. Nakon analize srca, utvrđena je vrednost od 11,5 ng hGLA proteina/mg proteina kod kohorte koja je tretirana sa MRT u odnosu na samo 1,0 ng/mg proteina nakon tretmana alfa-galaktozidazom. Navedeno odgovara nakupljanju većem od ∼11 puta u srcu miševa koji su tretirani sa hGLA MRT u odnosu na terapiju sa ERT.
[0115] Pored sprovedenih analiza biodistribucije, analize efikasnosti su utvrđene merenjem nivoa globotrioazilceramida (Gb3) i lyso-Gb3 u klјučnim organima. Direktno poređenje redukcije Gb3 nakon jednokratnog intravenskog MRT tretmana sa 1,0 mg/kg GLA u poređenju sa terapijom baziranom na alfa-galaktozidaznoj ERT u ekvivalentnoj dozi, ukazala je na značajnu razliku u nivoima Gb3 u bubrezima, kao i u srcu. Na primer, nivoi Gb3 prilikom GLA MRT su ukazali na smanjenje od 60,2% u odnosu na smanjenje od 26,8% koje je uočeno prilikom tretmana sa alfa-galaktozidazom (SL.20). Dalјe, nivoi Gb3 u srcu su bili smanjeni za 92,1% u odnosu na 66,9% koliko je iznosilo smanjenje nakon MRT i tretmana sa alfa-galaktozidazom, tim redom (SL.21).
[0116] Drugi relevantni biomarker za merenje efikasnosti je lyso-Gb3. GLA MRT je efikasnije smanjila lyso-Gb3 nego alfa-galaktozidaza, u bubrezima i srcu (SL.20 i SL.21, tim redom). Preciznije, Fabri miševi tretirani sa MRT su pokazali smanjenje lyso-Gb3 od 86,1% i 87,9% u bubrezima i srcu u odnosu na miševe tretirane sa alfa-galaktozidazom kod kojih je smanjenje iznosilo 47,8% i 61,3%, tim redom.
[0117] U rezultate za tretman sa hGLA u lipidnim nanočesticama na bazi C12-200 je su dalje uključene druge formulacije lipidnih nanočestica. Na primer, hGLA iRNK je inkapsulirana u lipidne nanočestice na bazi HGT4003 (Formulacija 3) ili HGT5000 (Formulacija 5) koje su bile primenjene kao jednokratna IV doza i koje su rezultovale proizvodnjom hGLA 24 sata nakon primene (SL. 22). Proizvodnja hGLA je zavisila od doze. Slično navedenom, proizvodnja hGLA je uočena 6 sati i 24 sata nakon primene iRNK za hGLA koja je bila inkapsulirana u lipidnim nanočesticama na bazi HGT5001 (Formulacija 6) i primenjena je jednokratno (IV). Proizvodnja hGLA je zabeležena u serumu (SL.23A), kao i u organima (SL.23B).
[0118] Sveukupno, zamenska terapija sa iRNK koja je primenjena u vidu depoa za proizvodnju proteina, dovela je do proizvodnje velike količine aktivnog, funkcionalnog terapijskog proteina na nivoima iznad fizioloških. Pokazano je da ovaj postupak dovodi do produženog poluživota željenog proteina u cirkulaciji, kao i da je navedeni protein koji je dobijen sa MRT veoma efikasan za terapiju, kao što je pokazano poređenjem sa alfa-galaktozidaznim enzimom u Fabri miševima.
1C. Rezultati in vivo proizvodnje protein humanog FIX
[0119] Urađene su i studije primene lipidnih nanočestica sa iRNK za Faktor IX (FIX) kod miševa divljeg tipa (CD-1) i određena je količina FIX proteina koji se luči u krvotok. Nakon jednokratne intravenske injekcije lipidnih nanočestica na bazi C12-200 (C12-200:DOPE:Chol:PEG u odnosu 40:30:25:5) sa FIX iRNK u dozi od 30 ug (doza izračunata na osnovu inkapsulirane iRNK) (Formulacija 1), primećena je robusna proizvodnja proteina (SL.24).
[0120] Farmakokinetička analiza tokom 72 sata je pokazala da FIX protein dobijen sa MRT može biti detektovan u svim ispitivanim vremenskim tačkama (SL. 24). Maksimalna koncentracija u serumu je utvrđena 24 sata nakon injekcije, sa vrednošću od ∼3 ug (2995 ± 738 ng/mL) FIX proteina/mL seruma. Navedeno predstavlјa još jedan uspešan primer depo efekta.
1D. Rezultati in vivo proizvodnje humanog A1AT proteina
[0121] Studije su urađene i primenom lipidnih nanočestica sa iRNK za alfa-1-antitripsin (A1AT) kod miševa divljeg tipa (CD-1) i određivanjem A1AT proteina koji se luči u krvotok. Nakon jednokratne intravenske injekcije lipidnih nanočestica na bazi C12-200 sa A1AT iRNK u dozi od 30 ug (doza izračunata na osnovu inkapsulirane iRNK) (Formulacija 1), primećena je robusna proizvodnja proteina (SL.25).
[0122] Kao što je prikazano na SL.25, detektabilni nivoi humanog A1AT proteina koji je dobijen sa A1AT MRT mogu biti uočeni tokom perioda od 24 sata nakon primene. Maksimalni nivo u serumu od ∼48 ug A1AT proteina/mL seruma je detektovan 12 sati nakon injeciranja.
Primer 2: Depo za proizvodnju proteina putem isporuke polinukleotidnih kompozicija preko pluća
Protokol za injeciranje
[0123] Sve studije su urađene upotrebom ženki CD-1 ili BALB/C miševa starosti od približno 7-10 nedelјa na početku svakog eksperimenta. Ispitivane kompozicije su uvedene jednokratnom intrarahealnom primenom u vidu aerosola. Miševi su žrtvovani i perfundovani fiziološkim rastvorom u naznačenim vremenskim tačkama. Pluća svakog miša su izolovana, raspodeljena na dva dela i sačuvana bilo u 10%-tnom neutralno puferisanom formalinu ili su trenutno zamrznuta i čuvana na -80°C za naknadnu analizu. Serum je izolovan kao što je opisano u Primeru 1. EPO ELISA: kao što je opisano u Primeru 1.
Rezultati
[0124] Depo efekat može biti postignut isporukom preko pluća (npr. intranazalnom, intratrahealnom, nebulizacijom). Postignuto je i kvantifikovano merenje želјenog proteina dobijenog sa egzogene iRNK koja je dopremljena u vidu sistema nanočestica.
[0125] Proizvodnja humanog EPO proteina posredstvom lipidnih nanočestica sa hEPO iRNK je ispitana kod CD-1 miševa nakon jednokratne intratrahealne primene (MicroSprayer®). Ispitano je nekoliko formulacija, upotrebom različitih katjonskih lipida (Formulacije 1, 5, 6). Sve formulacije su rezultovale visokom inkapsulacijom humane EPO iRNK. Po primeni, životinje su žrtvovane nakon šest sati i uzorkovana su pluća, kao i serum.
[0126] Humani EPO protein je detektovan na mestu primene (u plućima) nakon tretmana putem isporuke aerosola. Analiza seruma šest sati nakon primene je pokazala detektabilne količine hEPO proteina u cirkulaciji. Ovi podaci (prikazani na SL.26) ukazuju na sposobnost pluća da deluju kao "depo" za proizvodnju (i sekreciju) hEPO proteina.

Claims (14)

Patentni zahtevi
1. Kompozicija koja sadrži (a) najmanje jedan molekul iRNK čiji najmanje jedan deo kodira funkcionalan sekretovani polipeptid; i (b) lipozomski nosač za transfer koji sadrži lipidnu nanočesticu koja sadrži jedan ili više katjonskih lipida, jedan ili više nekatjonskih lipida i jedan ili više lipida modifikovanih sa PEG, za upotrebu u postupku lečenja subjekta sa defektom ili deficijencijom u navedenom sekretovanom polipeptidu, pri čemu je iRNK inkapsulirana u nosač za transfer i pri čemu se kompozicija primenjuje isporukom u pluća putem nebulizacije.
2. Kompozicija za upotrebu prema patentnom zahtevu 1, pri čemu se defekt ili deficijencija odnosi na bolest ili poremećaj koji je jedan iz grupe koju čine Hantigtonova bolest; Parkinsonova bolest; mišićna distrofija (kao što je npr. Dišenova i Bekerova); bolesti hemofilije (kao što su npr. hemofilija B (FIX), hemofilija A (FVIII); spinalna mišićna atrofija povezana sa SMN1 (SMA); amiotrofična lateralna skleroza (ALS); galaktozemija povezana sa GALT; cistična fibroza (CF); poremećaji povezani sa SLC3A1, uklјučujući cistinuriju; poremećaji povezani sa COL4A5, uklјučujući Alportov sindrom; deficijencije galaktocerebrozidaze; adrenoleukodistrofija i adrenomijeloneuropatija povezane sa X hromozomom; Fridrihova ataksija; Pelizaeus-Merzbacher-ova bolest; tuberozna skleroza povezana sa TSC1 i TSC2; Sanfilipo B sindrom (MPSIIIB); cistinoza povezana sa CTNS-om; poremećaji povezani sa FMR1 koji uklјučuju sindrom fragilnog X hromozoma, sindrom tremora/ataksije udružen sa fragilnim X hromozomom i sindrom prevremene insuficijencije jajnika povezan sa fragilnim X hromozomom; Prader-Vilijev sindrom; nasledna hemoragična telangiektazija (AT); Njuman-Pikova bolest tipa C1; bolesti povezane sa neuronskim ceroidnim lipofuscinozama, uklјučujući juvenilnu neuronsku ceroidnu lipofuscinozu (JNCL), juvenilnu Batenovu bolest, bolest Santavuori-Haltia, Jansky-Bielschowsky-evu bolest i PTT-1 i TPP1 deficijencije; ataksija u detinjstvu sa hipomijelinizacijom centralnog nervnog sistema/nestajanjem bele mase povezana sa EIF2B1, EIF2B2, EIF2B3, EIF2B4 i EIF2B5; epizodna ataksija tipa 2 povezana sa CACNA1A i CACNB4; poremećaji povezani sa MECP2, uklјučujući klasičan Retov sindrom, tešku neonatalnu encefalopatiju povezanu sa MECP2 i PPM-X sindrom; atipičan Retov sindrom povezan sa CDKL5; Kenedijeva bolest (SBMA); cerebralna autozomno dominantna arteriopatija sa subkortikalnim infarktima i leukoencefalopatijom povezna sa Notch-3 (CADASIL); epileptični poremećaji povezani sa SCN1A i SCN1B; poremećaji povezani sa polimerazom G koji uklјučuju Alpers-Huttenlocher-ov sindrom, senzornu ataksičnu neuropatiju povezanu sa POLG, dizartriju i oftalmoparezu, kao i autozomno dominantnu i recesivnu progresivnu eksternu oftalmoplegiju sa delecijama mitohondrijske DNK; hipoplazija nadbubrežne žlezde povezana sa X hromozomom; agamaglobulinemija povezana sa X hromozomom; Vilsonova bolest; i Fabrijeva bolest.
3. Kompozicija za upotrebu prema patentnom zahtevu 1 ili patentnom zahtevu 2, gde iRNK kodira enzim koji je abnormalno deficijentan kod osobe sa poremećajem lizozomskog skladištenja.
4. Kompozicija za upotrebu prema patentnom zahtevu 1 ili patentnom zahtevu 2, gde polipeptid kodiran sa iRNK predstavlja polipeptid eritropoetina, α-galaktozidazni polipeptid, polipeptid LDL receptora, faktora VIII, faktora IX, α-L-iduronidaze, iduronat sulfataze, heparin-N-sulfataze, α-Nacetilglukozaminidaze, galaktoza 6-sulfataze, β-galaktozidaze, lizozomske kisele lipaze ili arilsulfataze-A.
5. Kompozicija za upotrebu prema bilo kom od patentnih zahteva 1-4, gde RNK molekul sadrži:
najmanje jednu modifikaciju koja obezbeđuje stabilnost molekulu RNK;
modifikaciju 5’ netranslatirajućeg regiona navedenog RNK molekula, opciono gde navedena modifikacija obuhvata uklјučivanje Cap1 strukture; ili
modifikaciju 3’ netranslatirajućeg regiona navedenog RNK molekula, opciono gde navedena modifikacija obuhvata uklјučivanje poli A repa.
6. Kompozicija za upotrebu prema bilo kom od patentnih zahteva 1-5, koja dalјe sadrži agens za olakšavanje prenosa RNK molekula u unutarćelijski kompartman cilјne ćelije, opciono pri čemu je navedena cilјna ćelija izabrana iz grupe koja se sastoji od hepatocita, epitelnih ćelija, hematopoetskih ćelija, epitelnih ćelija, endotelnih ćelija, ćelija pluća, ćelija kostiju, matičnih ćelija, mezenhimskih ćelija, nervnih ćelija, ćelija srca, adipocita, ćelija vaskularnih glatkih mišića, kardiomiocita, ćelija skeletnih mišića, beta ćelija, ćelija hipofize, ćelija sinovijalne ovojnice, ćelija jajnika, ćelija testisa, fibroblasta, B ćelija, T ćelija, retikulocita, leukocita, granulocita i tumorskih ćelija.
7. Kompozicija za upotrebu prema bilo kom od patentnih zahteva 1-6, gde lipidne nanočestice sadrže
C12-200;
DLinKC2DMA, CHOL, DOPE i DMG-PEG-2000; ili
C12-200, DOPE, CHOL i DMGPEG2K.
8. Kompozicija za upotrebu prema bilo kom od patentnih zahteva 1-7, gde lipidna nanočestica sadrži lipid podložan cepanju.
9. Kompozicija za upotrebu prema bilo kom od patentnih zahteva 1-8, pri čemu je navedena kompozicija liofilizovana.
10. Kompozicija za upotrebu prema bilo kom od patentnih zahteva 1-9, pri čemu je navedena kompozicija rekonstituisana liofilizovana kompozicija.
11. Kompozicija za upotrebu prema bilo kom od patentnih zahteva 1-10, pri čemu je kompozicija za primenu subjektu dva puta nedelјno, jednom nedelјno, na svakih deset dana, na svake dve nedelјe ili na svake tri nedelјe.
12. Kompozicija za upotrebu prema bilo kom od patentnih zahteva 1-11, gde je veličina nosača za transfer unutar opsega od oko 25 do 250 nm.
13. Kompozicija za upotrebu prema bilo kom od patentnih zahteva 1-11, gde je veličina nosača za transfer manja od 250 nm, 175 nm, 150 nm, 125 nm, 100 nm, 75 nm, 50 nm, 25 nm ili 10 nm.
14. Kompozicija za upotrebu prema bilo kom od patentnih zahteva 1-13, pri čemu se polipeptid eksprimira na najmanje terapijskom nivou tokom više od jednog, više od četiri, više od šest, više od 12, više od 24, više od 48 sati ili više od 72 sata nakon primene, opciono pri čemu se nivo sekretovanog proteina može detektovati 3 dana, 4 dana, 5 dana ili 1 nedelјu ili više nakon primene.
RS20190937A 2011-06-08 2012-06-08 Kompozicije lipidnih nanočestica i postupci za isporuku irnk RS59037B1 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201161494881P 2011-06-08 2011-06-08
EP12728007.1A EP2717893B1 (en) 2011-06-08 2012-06-08 Lipid nanoparticle compositions and methods for mrna delivery
PCT/US2012/041724 WO2012170930A1 (en) 2011-06-08 2012-06-08 Lipid nanoparticle compositions and methods for mrna delivery

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS59037B1 true RS59037B1 (sr) 2019-08-30

Family

ID=46317537

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20190937A RS59037B1 (sr) 2011-06-08 2012-06-08 Kompozicije lipidnih nanočestica i postupci za isporuku irnk

Country Status (29)

Country Link
US (24) US20140206753A1 (sr)
EP (4) EP2717893B1 (sr)
JP (7) JP6184945B2 (sr)
KR (4) KR102128248B1 (sr)
CN (3) CN111671918A (sr)
AU (5) AU2012267531B2 (sr)
BR (1) BR112013031553A2 (sr)
CA (2) CA2838069C (sr)
CL (1) CL2013003478A1 (sr)
CY (1) CY1122123T1 (sr)
DK (3) DK4458350T3 (sr)
ES (3) ES2911653T3 (sr)
HK (1) HK1199206A1 (sr)
HR (1) HRP20191338T1 (sr)
HU (1) HUE044277T2 (sr)
IL (3) IL307511A (sr)
LT (1) LT2717893T (sr)
ME (1) ME03491B (sr)
MX (2) MX421064B (sr)
NZ (1) NZ719345A (sr)
PE (1) PE20140797A1 (sr)
PL (2) PL3586861T3 (sr)
PT (2) PT2717893T (sr)
RS (1) RS59037B1 (sr)
RU (1) RU2013154295A (sr)
SI (1) SI2717893T1 (sr)
SM (1) SMT201900445T1 (sr)
TR (1) TR201910686T4 (sr)
WO (1) WO2012170930A1 (sr)

Families Citing this family (516)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX2011004859A (es) 2008-11-07 2011-08-03 Massachusetts Inst Technology Lipidoides de aminoalcohol y usos de los mismos.
PL3338765T3 (pl) * 2009-12-01 2019-06-28 Translate Bio, Inc. Pochodna steroidowa dla dostarczania mrna w ludzkich chorobach genetycznych
CA2807552A1 (en) 2010-08-06 2012-02-09 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
US9193827B2 (en) 2010-08-26 2015-11-24 Massachusetts Institute Of Technology Poly(beta-amino alcohols), their preparation, and uses thereof
ES3005233T3 (en) 2010-10-01 2025-03-14 Modernatx Inc Modified nucleosides, nucleotides, and nucleic acids, and uses thereof
US8853377B2 (en) 2010-11-30 2014-10-07 Shire Human Genetic Therapies, Inc. mRNA for use in treatment of human genetic diseases
US9238716B2 (en) 2011-03-28 2016-01-19 Massachusetts Institute Of Technology Conjugated lipomers and uses thereof
JP2014511687A (ja) 2011-03-31 2014-05-19 モデルナ セラピューティクス インコーポレイテッド 工学操作された核酸の送達および製剤
EP2709590A4 (en) * 2011-05-11 2015-05-13 Nanovalent Pharmaceuticals Inc REINFORCED GROWTH INHIBITION OF OSTEOSARCOMS THROUGH CYTOTOXIC POLYMERIZED LIPOSOMAL NANOPARTICLES TO AIM AT THE ALCAM CELL SURFACE RECEPTOR
DK3336082T3 (da) 2011-06-08 2020-04-27 Translate Bio Inc Spaltelige lipider
PT2717893T (pt) 2011-06-08 2019-08-20 Translate Bio Inc Composições de nanopartículas lipídicas e métodos para transferência de arnm
EP3854413A1 (en) 2011-07-06 2021-07-28 GlaxoSmithKline Biologicals SA Immunogenic combination compositions and uses thereof
WO2013066438A2 (en) 2011-07-22 2013-05-10 President And Fellows Of Harvard College Evaluation and improvement of nuclease cleavage specificity
US9464124B2 (en) 2011-09-12 2016-10-11 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
EP2763701B1 (en) 2011-10-03 2018-12-19 Moderna Therapeutics, Inc. Modified nucleosides, nucleotides, and nucleic acids, and uses thereof
KR20150000461A (ko) 2011-10-27 2015-01-02 메사추세츠 인스티튜트 오브 테크놀로지 약물 캡슐화 마이크로스피어를 형성할 수 있는, ｎ-말단 상에 관능화된 아미노산 유도체
JP2015501844A (ja) 2011-12-16 2015-01-19 モデルナ セラピューティクス インコーポレイテッドＭｏｄｅｒｎａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ． 修飾ヌクレオシド、ヌクレオチドおよび核酸組成物
EP3865123A1 (en) 2012-03-29 2021-08-18 Translate Bio, Inc. Lipid-derived neutral nanoparticles
US9572897B2 (en) 2012-04-02 2017-02-21 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins
US9254311B2 (en) 2012-04-02 2016-02-09 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of proteins
WO2013151663A1 (en) 2012-04-02 2013-10-10 modeRNA Therapeutics Modified polynucleotides for the production of membrane proteins
CN108949772A (zh) 2012-04-02 2018-12-07 现代泰克斯公司 用于产生与人类疾病相关的生物制剂和蛋白质的修饰多核苷酸
US10501513B2 (en) 2012-04-02 2019-12-10 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of oncology-related proteins and peptides
US9283287B2 (en) 2012-04-02 2016-03-15 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins
WO2013185067A1 (en) 2012-06-08 2013-12-12 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Nuclease resistant polynucleotides and uses thereof
WO2013185069A1 (en) 2012-06-08 2013-12-12 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Pulmonary delivery of mrna to non-lung target cells
EP2882706A1 (en) 2012-08-13 2015-06-17 Massachusetts Institute of Technology Amine-containing lipidoids and uses thereof
WO2014028429A2 (en) 2012-08-14 2014-02-20 Moderna Therapeutics, Inc. Enzymes and polymerases for the synthesis of rna
ES2921623T3 (es) 2012-11-26 2022-08-30 Modernatx Inc ARN modificado terminalmente
EP2929035A1 (en) * 2012-12-07 2015-10-14 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Lipidic nanoparticles for mrna delivering
US20160024181A1 (en) 2013-03-13 2016-01-28 Moderna Therapeutics, Inc. Long-lived polynucleotide molecules
US10258698B2 (en) 2013-03-14 2019-04-16 Modernatx, Inc. Formulation and delivery of modified nucleoside, nucleotide, and nucleic acid compositions
EP2968586B1 (en) 2013-03-14 2018-07-25 Translate Bio, Inc. Cftr mrna compositions and related methods and uses
ES2647832T3 (es) 2013-03-14 2017-12-26 Translate Bio, Inc. Ácidos ribonucleicos con nucleótidos modificados con 4-tio y procedimientos relacionados
EP2970940B1 (en) * 2013-03-14 2018-07-25 Translate Bio, Inc. Mrna therapeutic compositions and use to treat diseases and disorders
ES2981185T3 (es) 2013-03-14 2024-10-07 Translate Bio Inc Métodos para la purificación de ARN mensajero
ES2882110T3 (es) * 2013-03-14 2021-12-01 Translate Bio Inc Métodos y composiciones para administrar anticuerpos codificados con ARNm
US8980864B2 (en) 2013-03-15 2015-03-17 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions and methods of altering cholesterol levels
EP4614148A3 (en) 2013-03-15 2025-12-17 Translate Bio, Inc. Synergistic enhancement of the delivery of nucleic acids via blended formulations
WO2014179562A1 (en) 2013-05-01 2014-11-06 Massachusetts Institute Of Technology 1,3,5-triazinane-2,4,6-trione derivatives and uses thereof
WO2015011633A1 (en) * 2013-07-23 2015-01-29 Protiva Biotherapeutics, Inc. Compositions and methods for delivering messenger rna
US20150044192A1 (en) 2013-08-09 2015-02-12 President And Fellows Of Harvard College Methods for identifying a target site of a cas9 nuclease
US20160194625A1 (en) 2013-09-03 2016-07-07 Moderna Therapeutics, Inc. Chimeric polynucleotides
WO2015034925A1 (en) 2013-09-03 2015-03-12 Moderna Therapeutics, Inc. Circular polynucleotides
US9388430B2 (en) 2013-09-06 2016-07-12 President And Fellows Of Harvard College Cas9-recombinase fusion proteins and uses thereof
US9340799B2 (en) 2013-09-06 2016-05-17 President And Fellows Of Harvard College MRNA-sensing switchable gRNAs
WO2015048744A2 (en) 2013-09-30 2015-04-02 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides encoding immune modulating polypeptides
KR20160067219A (ko) 2013-10-03 2016-06-13 모더나 세라퓨틱스, 인코포레이티드 저밀도 지단백질 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드
MX2016005239A (es) * 2013-10-22 2016-08-12 Shire Human Genetic Therapies Tratamiento con acido ribonucleico mensajero para la fenilcetonuria.
WO2015061467A1 (en) 2013-10-22 2015-04-30 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Lipid formulations for delivery of messenger rna
US11224642B2 (en) * 2013-10-22 2022-01-18 Translate Bio, Inc. MRNA therapy for argininosuccinate synthetase deficiency
CA2928040A1 (en) 2013-10-22 2015-04-30 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Cns delivery of mrna and uses thereof
CA3236835A1 (en) 2013-11-22 2015-05-28 Mina Therapeutics Limited C/ebp alpha short activating rna compositions and methods of use
US20150166984A1 (en) 2013-12-12 2015-06-18 President And Fellows Of Harvard College Methods for correcting alpha-antitrypsin point mutations
JP6822841B2 (ja) 2014-03-09 2021-01-27 ザ・トラステイーズ・オブ・ザ・ユニバーシテイ・オブ・ペンシルベニア オルニチントランスカルバミラーゼ（ｏｔｃ）欠損症の処置において有用な組成物
PT3122878T (pt) * 2014-03-24 2019-02-01 Translate Bio Inc Terapia de arnm para o tratamento de doenças oculares
DK3134131T3 (en) 2014-04-23 2022-02-07 Modernatx Inc Nucleic acid vaccines
JP6571679B2 (ja) 2014-04-25 2019-09-04 トランスレイト バイオ， インコーポレイテッド メッセンジャーｒｎａの精製方法
US10392438B2 (en) 2014-05-16 2019-08-27 Pfizer Inc. Bispecific antibodies
US10022455B2 (en) 2014-05-30 2018-07-17 Translate Bio, Inc. Biodegradable lipids for delivery of nucleic acids
US10837039B2 (en) 2014-06-10 2020-11-17 Curevac Real Estate Gmbh Methods and means for enhancing RNA production
CA2952824C (en) 2014-06-24 2023-02-21 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Stereochemically enriched compositions for delivery of nucleic acids
CA2953265C (en) 2014-07-02 2023-09-26 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Encapsulation of messenger rna
WO2016004202A1 (en) 2014-07-02 2016-01-07 Massachusetts Institute Of Technology Polyamine-fatty acid derived lipidoids and uses thereof
EP3169693B1 (en) 2014-07-16 2022-03-09 ModernaTX, Inc. Chimeric polynucleotides
WO2016014846A1 (en) 2014-07-23 2016-01-28 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of intrabodies
WO2016022363A2 (en) 2014-07-30 2016-02-11 President And Fellows Of Harvard College Cas9 proteins including ligand-dependent inteins
GB201420139D0 (en) 2014-11-12 2014-12-24 Ucl Business Plc Factor IX gene therapy
MA56412A (fr) 2014-12-05 2022-05-04 Translate Bio Inc Thérapie par l'arn messager pour le traitement des maladies articulaires
US20170360900A1 (en) 2014-12-22 2017-12-21 Codexis, Inc. Human alpha-galactosidase variants
CN114642735A (zh) 2015-01-21 2022-06-21 菲泽尔克斯公司 用于将治疗剂和诊断剂递送到细胞中的方法、组合物和系统
JP6929791B2 (ja) 2015-02-09 2021-09-01 デューク ユニバーシティ エピゲノム編集のための組成物および方法
US20170151281A1 (en) 2015-02-19 2017-06-01 Batu Biologics, Inc. Chimeric antigen receptor dendritic cell (car-dc) for treatment of cancer
WO2016149508A1 (en) 2015-03-19 2016-09-22 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Mrna therapy for pompe disease
EP3283059B1 (en) 2015-04-13 2024-01-03 CureVac Manufacturing GmbH Method for producing rna compositions
JP6851319B2 (ja) 2015-04-27 2021-03-31 ザ・トラステイーズ・オブ・ザ・ユニバーシテイ・オブ・ペンシルベニア ヒト疾患のＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９媒介性の修正のためのデュアルＡＡＶベクター系
GB201508025D0 (en) * 2015-05-11 2015-06-24 Ucl Business Plc Fabry disease gene therapy
ES2949540T3 (es) 2015-06-19 2023-09-29 Massachusetts Inst Technology 2,5-piperazinadionas sustituidas con alquenilo y su uso en composiciones para suministrar un agente a un sujeto o una célula
US11364292B2 (en) 2015-07-21 2022-06-21 Modernatx, Inc. CHIKV RNA vaccines
MA42502A (fr) 2015-07-21 2018-05-30 Modernatx Inc Vaccins contre une maladie infectieuse
WO2017015637A1 (en) 2015-07-22 2017-01-26 Duke University High-throughput screening of regulatory element function with epigenome editing technologies
US11564893B2 (en) 2015-08-17 2023-01-31 Modernatx, Inc. Methods for preparing particles and related compositions
WO2017035416A2 (en) 2015-08-25 2017-03-02 Duke University Compositions and methods of improving specificity in genomic engineering using rna-guided endonucleases
RS63030B1 (sr) 2015-09-17 2022-04-29 Modernatx Inc Jedinjenja i kompozicije za intracelularno isporučivanje terapeutskih sredstava
EP3359670B2 (en) 2015-10-05 2024-02-14 ModernaTX, Inc. Methods for therapeutic administration of messenger ribonucleic acid drugs
EP4089175A1 (en) 2015-10-13 2022-11-16 Duke University Genome engineering with type i crispr systems in eukaryotic cells
CN108473969B9 (zh) 2015-10-14 2024-08-23 川斯勒佰尔公司 用于增强生产的rna相关酶的修饰
EP3364950A4 (en) 2015-10-22 2019-10-23 ModernaTX, Inc. VACCINES AGAINST TROPICAL DISEASES
EP3364981A4 (en) 2015-10-22 2019-08-07 ModernaTX, Inc. VACCINE AGAINST THE HUMAN CYTOMEGALOVIRUS
AU2016342048B2 (en) * 2015-10-22 2022-09-08 Modernatx, Inc. Broad spectrum influenza virus vaccine
SG10202104041PA (en) 2015-10-23 2021-06-29 Harvard College Nucleobase editors and uses thereof
CA3007955A1 (en) 2015-12-10 2017-06-15 Modernatx, Inc. Lipid nanoparticles for delivery of therapeutic agents
JP7114465B2 (ja) 2015-12-22 2022-08-08 モデルナティエックス インコーポレイテッド 薬剤の細胞内送達のための化合物および組成物
WO2017112943A1 (en) 2015-12-23 2017-06-29 Modernatx, Inc. Methods of using ox40 ligand encoding polynucleotides
WO2017120612A1 (en) 2016-01-10 2017-07-13 Modernatx, Inc. Therapeutic mrnas encoding anti ctla-4 antibodies
EP3405579A1 (en) 2016-01-22 2018-11-28 Modernatx, Inc. Messenger ribonucleic acids for the production of intracellular binding polypeptides and methods of use thereof
ES2835051T3 (es) 2016-03-31 2021-06-21 Ethris Gmbh Secuencias de UTR mínimas novedosas
KR102369898B1 (ko) 2016-04-08 2022-03-03 트랜슬레이트 바이오 인코포레이티드 다량체 코딩 핵산 및 그 용도
US20190167811A1 (en) 2016-04-13 2019-06-06 Modernatx, Inc. Lipid compositions and their uses for intratumoral polynucleotide delivery
EP3443081A4 (en) 2016-04-13 2019-10-30 Duke University CRISPR / CAS9-BASED REPRESSORS FOR IN VIVO SHUT-OFF OF GEN-TARGETS AND METHOD OF USE
US20180126003A1 (en) * 2016-05-04 2018-05-10 Curevac Ag New targets for rna therapeutics
EP3896164A1 (en) 2016-05-18 2021-10-20 ModernaTX, Inc. Polynucleotides encoding alpha-galactosidase a for the treatment of fabry disease
MA45053A (fr) 2016-05-18 2019-03-27 Modernatx Inc Polynucléotides codant pour un régulateur de conductance transmembranaire de fibrose kystique pour le traitement de la fibrose kystique
JP7088911B2 (ja) 2016-05-18 2022-06-21 モデルナティエックス インコーポレイテッド リラキシンをコードするポリヌクレオチド
DK3458083T5 (da) 2016-05-18 2024-10-21 Modernatx Inc Polynukleotider, der koder for interleukin-12 (il12), og anvendelser heraf
CN109312313A (zh) 2016-06-13 2019-02-05 川斯勒佰尔公司 用于治疗鸟氨酸转氨甲酰酶缺乏症的信使rna疗法
AU2017286980B2 (en) 2016-06-30 2023-10-26 Arbutus Biopharma Corporation Compositions and methods for delivering messenger RNA
EP4275747A3 (en) 2016-07-19 2024-01-24 Duke University Therapeutic applications of cpf1-based genome editing
KR20250103795A (ko) 2016-08-03 2025-07-07 프레지던트 앤드 펠로우즈 오브 하바드 칼리지 아데노신 핵염기 편집제 및 그의 용도
US11661590B2 (en) 2016-08-09 2023-05-30 President And Fellows Of Harvard College Programmable CAS9-recombinase fusion proteins and uses thereof
US10907156B2 (en) 2016-08-19 2021-02-02 Fundación Para La Investigación Biomédica Del Hospital Univ. Ramón Y Cajal MiR-127 agents for use in the treatment of renal fibrosis
WO2018039438A1 (en) 2016-08-24 2018-03-01 President And Fellows Of Harvard College Incorporation of unnatural amino acids into proteins using base editing
SG11201903089RA (en) 2016-10-14 2019-05-30 Harvard College Aav delivery of nucleobase editors
AU2017345766A1 (en) 2016-10-21 2019-05-16 Modernatx, Inc. Human cytomegalovirus vaccine
US11583504B2 (en) 2016-11-08 2023-02-21 Modernatx, Inc. Stabilized formulations of lipid nanoparticles
MA46762A (fr) 2016-11-10 2019-09-18 Translate Bio Inc Procédé amélioré de préparation de nanoparticules lipidiques chargées d'arnm
JP7560946B2 (ja) 2016-11-10 2024-10-03 トランスレイト バイオ， インコーポレイテッド メッセンジャーｒｎａの皮下送達
MX2019005470A (es) * 2016-11-10 2019-11-21 Translate Bio Inc Formulación de nanopartículas lipídicas basadas en ice mejorada para el suministro de arnm.
CN110167587A (zh) 2016-11-11 2019-08-23 摩登纳特斯有限公司 流感疫苗
ES3035746T3 (en) 2016-11-23 2025-09-08 Mayo Found Medical Education & Res Particle-mediated delivery of inhibitory rna
WO2018119359A1 (en) 2016-12-23 2018-06-28 President And Fellows Of Harvard College Editing of ccr5 receptor gene to protect against hiv infection
WO2018127382A1 (en) 2017-01-03 2018-07-12 Ethris Gmbh Ornithine transcarbamylase coding polyribonucleotides and formulations thereof
FI3565891T3 (fi) 2017-01-09 2023-07-04 Whitehead Inst Biomedical Res Menetelmiä geeniekspression muuttamiseksi häiritsemällä säätelysilmukoita muodostavia transkriptiotekijämultimeerejä
WO2018151816A1 (en) 2017-02-16 2018-08-23 Modernatx, Inc. High potency immunogenic compositions
CA3054321A1 (en) 2017-02-27 2018-08-30 Translate Bio, Inc. Methods for purification of messenger rna
WO2018157153A1 (en) 2017-02-27 2018-08-30 Translate Bio, Inc. Large scale synthesis of messenger rna
ES2925083T3 (es) * 2017-02-27 2022-10-13 Translate Bio Inc Métodos de purificación de ARN mensajero
AU2018224326B2 (en) 2017-02-27 2024-01-04 Translate Bio, Inc. Novel codon-optimized CFTR mRNA
MX2019010275A (es) 2017-02-28 2019-10-15 Univ Pennsylvania Novedoso vector del subtipo f del virus adenoasociado (aav) y usos de este.
JOP20190200A1 (ar) 2017-02-28 2019-08-27 Univ Pennsylvania تركيبات نافعة في معالجة ضمور العضل النخاعي
KR20230093072A (ko) 2017-03-01 2023-06-26 더 트러스티스 오브 더 유니버시티 오브 펜실베니아 안구 장애에 대한 유전자 치료
WO2018165257A1 (en) 2017-03-07 2018-09-13 Translate Bio, Inc. Polyanionic delivery of nucleic acids
EP3592381A1 (en) 2017-03-09 2020-01-15 President and Fellows of Harvard College Cancer vaccine
US11898179B2 (en) 2017-03-09 2024-02-13 President And Fellows Of Harvard College Suppression of pain by gene editing
WO2018165629A1 (en) 2017-03-10 2018-09-13 President And Fellows Of Harvard College Cytosine to guanine base editor
KR20190132405A (ko) 2017-03-15 2019-11-27 모더나티엑스, 인크. 치료제의 세포내 전달을 위한 화합물 및 조성물
ES3020935T3 (en) 2017-03-15 2025-05-23 Modernatx Inc Lipid nanoparticle formulation
CA3056133A1 (en) 2017-03-15 2018-09-20 Modernatx, Inc. Crystal forms of amino lipids
WO2018170245A1 (en) 2017-03-15 2018-09-20 Modernatx, Inc. Broad spectrum influenza virus vaccine
MA47787A (fr) 2017-03-15 2020-01-22 Modernatx Inc Vaccin contre le virus respiratoire syncytial
WO2018176009A1 (en) 2017-03-23 2018-09-27 President And Fellows Of Harvard College Nucleobase editors comprising nucleic acid programmable dna binding proteins
WO2018187590A1 (en) 2017-04-05 2018-10-11 Modernatx, Inc. Reduction or elimination of immune responses to non-intravenous, e.g., subcutaneously administered therapeutic proteins
WO2018191722A1 (en) 2017-04-14 2018-10-18 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Compositions and methods for transient gene therapy with enhanced stability
WO2018200542A1 (en) 2017-04-24 2018-11-01 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Gene therapy for ocular disorders
BR112019023303A2 (pt) 2017-05-11 2020-06-16 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Terapia de gene para lipofuscinoses ceroides neuronais
WO2018209320A1 (en) 2017-05-12 2018-11-15 President And Fellows Of Harvard College Aptazyme-embedded guide rnas for use with crispr-cas9 in genome editing and transcriptional activation
MX2019013752A (es) 2017-05-16 2020-07-20 Translate Bio Inc Tratamiento de la fibrosis quística mediante el suministro de arnm que codifica cftr optimizado en codones.
US11421011B2 (en) 2017-05-18 2022-08-23 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding tethered interleukin-12 (IL12) polypeptides and uses thereof
ES2952779T3 (es) 2017-05-18 2023-11-06 Modernatx Inc ARN mensajero modificado que comprende elementos de ARN funcionales
US11377643B2 (en) 2017-05-31 2022-07-05 Ultragenyx Pharmaceutical Inc. Therapeutics for glycogen storage disease type III
CA3098592A1 (en) 2017-05-31 2018-12-06 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Gene therapy for treating peroxisomal disorders
US12077501B2 (en) 2017-06-14 2024-09-03 Modernatx, Inc. Compounds and compositions for intracellular delivery of agents
US20200131498A1 (en) 2017-06-14 2020-04-30 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding methylmalonyl-coa mutase
EP3638292A1 (en) 2017-06-14 2020-04-22 ModernaTX, Inc. Polynucleotides encoding coagulation factor viii
WO2018232357A1 (en) 2017-06-15 2018-12-20 Modernatx, Inc. Rna formulations
US10034951B1 (en) 2017-06-21 2018-07-31 New England Biolabs, Inc. Use of thermostable RNA polymerases to produce RNAs having reduced immunogenicity
CN111801345A (zh) 2017-07-28 2020-10-20 哈佛大学的校长及成员们 使用噬菌体辅助连续进化(pace)的进化碱基编辑器的方法和组合物
EP3676376B1 (en) 2017-08-30 2025-01-15 President and Fellows of Harvard College High efficiency base editors comprising gam
CA3073851A1 (en) * 2017-08-31 2019-03-07 Life Technologies Corporation Cationic lipid compositions for tissue-specific delivery
WO2019046809A1 (en) 2017-08-31 2019-03-07 Modernatx, Inc. METHODS OF MANUFACTURING LIPID NANOPARTICLES
EP4219715A3 (en) 2017-09-08 2023-09-06 MiNA Therapeutics Limited Stabilized cebpa sarna compositions and methods of use
CA3075205A1 (en) 2017-09-08 2019-03-14 Mina Therapeutics Limited Stabilized hnf4a sarna compositions and methods of use
US10653767B2 (en) 2017-09-14 2020-05-19 Modernatx, Inc. Zika virus MRNA vaccines
EP3688173B1 (en) * 2017-09-29 2025-12-17 Intellia Therapeutics, Inc. In vitro method of mrna delivery using lipid nanoparticles
US11795443B2 (en) 2017-10-16 2023-10-24 The Broad Institute, Inc. Uses of adenosine base editors
EP3714048B1 (en) 2017-11-22 2025-04-09 ModernaTX, Inc. Polynucleotides encoding ornithine transcarbamylase for the treatment of urea cycle disorders
WO2019104160A2 (en) 2017-11-22 2019-05-31 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding phenylalanine hydroxylase for the treatment of phenylketonuria
JP7424976B2 (ja) 2017-11-22 2024-01-30 モダーナティエックス・インコーポレイテッド プロピオン酸血症の治療用のプロピオニルＣｏＡカルボキシラーゼアルファ及びベータサブユニットをコードするポリヌクレオチド
AU2018375164B2 (en) 2017-11-30 2025-05-15 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Gene therapy for Mucopolysaccharidosis IIIA
EA202091352A1 (ru) 2017-11-30 2020-08-27 Дзе Трастиз Оф Дзе Юниверсити Оф Пенсильвания Генотерапия мукополисахаридоза iiib
WO2019118949A1 (en) 2017-12-15 2019-06-20 The Broad Institute, Inc. Systems and methods for predicting repair outcomes in genetic engineering
US11167043B2 (en) 2017-12-20 2021-11-09 Translate Bio, Inc. Composition and methods for treatment of ornithine transcarbamylase deficiency
EP3735270A1 (en) 2018-01-05 2020-11-11 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding anti-chikungunya virus antibodies
JP7333563B2 (ja) * 2018-01-18 2023-08-25 イーザアールエヌーエー イムノセラピーズ エンヴェー 脂質ナノ粒子
WO2019148101A1 (en) 2018-01-29 2019-08-01 Modernatx, Inc. Rsv rna vaccines
WO2019152802A1 (en) 2018-02-02 2019-08-08 Translate Bio, Inc. Cationic polymers
EP3773745A1 (en) 2018-04-11 2021-02-17 ModernaTX, Inc. Messenger rna comprising functional rna elements
EP4242307A3 (en) 2018-04-12 2023-12-27 MiNA Therapeutics Limited Sirt1-sarna compositions and methods of use
EP3784252A4 (en) * 2018-04-18 2022-03-16 Oisin Biotechnologies, Inc. FUSOGENIC LIPID DNANOPARTICLES AND METHODS FOR THEIR PRODUCTION AND USE IN TARGET CELL SPECIFIC MANUFACTURE OF A THERAPEUTIC PROTEIN AND TREATMENT OF A TARGET CELL RELATED DISEASE, CONDITION OR DISORDER
AU2019271132B2 (en) * 2018-05-15 2026-02-05 Translate Bio, Inc. Subcutaneous delivery of messenger RNA
US11964051B2 (en) 2018-05-16 2024-04-23 Translate Bio, Inc. Ribose cationic lipids
US12157760B2 (en) 2018-05-23 2024-12-03 The Broad Institute, Inc. Base editors and uses thereof
US20210346306A1 (en) 2018-05-23 2021-11-11 Modernatx, Inc. Delivery of dna
AU2019277361B2 (en) * 2018-05-30 2025-04-24 Translate Bio, Inc. Messenger RNA vaccines and uses thereof
US12357580B2 (en) 2018-06-19 2025-07-15 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Lipid nanoparticle compositions for delivery of mRNA and long nucleic acids
EP3820495A4 (en) 2018-07-09 2022-07-20 The Broad Institute Inc. RNA-PROGRAMMABLE EPIGENETIC RNA MODIFIERS AND THEIR USES
US20220184185A1 (en) 2018-07-25 2022-06-16 Modernatx, Inc. Mrna based enzyme replacement therapy combined with a pharmacological chaperone for the treatment of lysosomal storage disorders
IL267923B2 (en) 2018-08-02 2023-06-01 Grifols Worldwide Operations Ltd The composition containing the most concentrated alpha-1 type protein inhibitor and a method for obtaining it
US10842885B2 (en) 2018-08-20 2020-11-24 Ucl Business Ltd Factor IX encoding nucleotides
GB201813528D0 (en) 2018-08-20 2018-10-03 Ucl Business Plc Factor IX encoding nucleotides
CN118421617A (zh) 2018-08-24 2024-08-02 川斯勒佰尔公司 用于纯化信使rna的方法
IL280935B2 (en) * 2018-08-24 2025-04-01 Flagship Pioneering Innovations Vi Llc Modified plant-based courier packaging and its uses
KR20210091120A (ko) 2018-08-29 2021-07-21 트랜슬레이트 바이오 인코포레이티드 Mrna-로딩된 지질 나노입자를 제조하는 개선된 공정
WO2020047201A1 (en) 2018-09-02 2020-03-05 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding very long-chain acyl-coa dehydrogenase for the treatment of very long-chain acyl-coa dehydrogenase deficiency
GB2592504B (en) * 2018-09-04 2023-02-15 Univ Texas Compositions and methods for organ specific delivery of nucleic acids
EP3846822A4 (en) * 2018-09-04 2022-07-06 The Board Of Regents Of The University Of Texas System COMPOSITIONS AND METHODS FOR ORGAN-SPECIFIC DELIVERY OF NUCLEIC ACIDS
EP3849595B1 (en) 2018-09-13 2025-11-19 ModernaTX, Inc. Polynucleotides encoding glucose-6-phosphatase for the treatment of glycogen storage disease
WO2020056155A2 (en) 2018-09-13 2020-03-19 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding branched-chain alpha-ketoacid dehydrogenase complex e1-alpha, e1-beta, and e2 subunits for the treatment of maple syrup urine disease
US20220401584A1 (en) 2018-09-14 2022-12-22 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding uridine diphosphate glycosyltransferase 1 family, polypeptide a1 for the treatment of crigler-najjar syndrome
AU2019345067A1 (en) 2018-09-19 2021-04-08 Modernatx, Inc. High-purity peg lipids and uses thereof
WO2020061367A1 (en) 2018-09-19 2020-03-26 Modernatx, Inc. Compounds and compositions for intracellular delivery of therapeutic agents
US12151029B2 (en) 2018-09-19 2024-11-26 Modernatx, Inc. PEG lipids and uses thereof
WO2020061457A1 (en) 2018-09-20 2020-03-26 Modernatx, Inc. Preparation of lipid nanoparticles and methods of administration thereof
EP3856233A1 (en) 2018-09-27 2021-08-04 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding arginase 1 for the treatment of arginase deficiency
US20210324002A1 (en) 2018-09-28 2021-10-21 Nutcracker Therapeutics, Inc. Tertiary amino lipidated cationic peptides for nucleic acid delivery
WO2020072914A1 (en) 2018-10-04 2020-04-09 New England Biolabs, Inc. Methods and compositions for increasing capping efficiency of transcribed rna
US11072808B2 (en) 2018-10-04 2021-07-27 New England Biolabs, Inc. Methods and compositions for increasing capping efficiency of transcribed RNA
CN113166783B (zh) 2018-10-09 2024-10-11 不列颠哥伦比亚大学 包含无有机溶剂和去污剂的转染活性囊泡的组合物和系统以及与之相关的方法
WO2020092453A1 (en) 2018-10-29 2020-05-07 The Broad Institute, Inc. Nucleobase editors comprising geocas9 and uses thereof
EP3877538A1 (en) 2018-11-08 2021-09-15 Translate Bio, Inc. Methods and compositions for messenger rna purification
WO2020097409A2 (en) 2018-11-08 2020-05-14 Modernatx, Inc. Use of mrna encoding ox40l to treat cancer in human patients
AU2019378763B2 (en) 2018-11-12 2025-06-26 Translate Bio, Inc. Methods for inducing immune tolerance
EP3883592A1 (en) 2018-11-21 2021-09-29 Translate Bio, Inc. Treatment of cystic fibrosis by delivery of nebulized mrna encoding cftr
PL3891274T3 (pl) 2018-12-06 2024-03-25 Arcturus Therapeutics, Inc. Kompozycje i sposoby leczenia niedoboru transkarbamylazy ornityny
MX2021007552A (es) 2018-12-20 2021-08-11 Codexis Inc Variantes de alfa-galactosidasa humana.
CN113453707A (zh) 2018-12-21 2021-09-28 库瑞瓦格股份公司 用于疟疾疫苗的rna
US12351837B2 (en) 2019-01-23 2025-07-08 The Broad Institute, Inc. Supernegatively charged proteins and uses thereof
EP3914232A1 (en) * 2019-01-25 2021-12-01 F. Hoffmann-La Roche AG Lipid vesicle for oral drug delivery
EP4491229A3 (en) 2019-02-08 2025-05-14 CureVac SE Coding rna administered into the suprachoroidal space in the treatment of ophtalmic diseases
WO2020190750A1 (en) 2019-03-15 2020-09-24 Modernatx, Inc. Hiv rna vaccines
EP3942043A2 (en) 2019-03-19 2022-01-26 The Broad Institute, Inc. Methods and compositions for editing nucleotide sequences
WO2020208361A1 (en) 2019-04-12 2020-10-15 Mina Therapeutics Limited Sirt1-sarna compositions and methods of use
WO2020214842A1 (en) 2019-04-17 2020-10-22 The Broad Institute, Inc. Adenine base editors with reduced off-target effects
WO2020242720A1 (en) 2019-05-02 2020-12-03 University Of Florida Research Foundation, Inc. Compositions for treatment of diffuse intrinsic pontine glioma
CN114375190A (zh) 2019-05-08 2022-04-19 阿斯利康(瑞典)有限公司 用于皮肤和伤口的组合物及其使用方法
EP3968952A1 (en) 2019-05-14 2022-03-23 Translate Bio, Inc. Improved process of preparing mrna-loaded lipid nanoparticles
JP7686574B2 (ja) 2019-05-22 2025-06-02 マサチューセッツ インスティテュート オブ テクノロジー 環状ｒｎａ組成物及び方法
EP3986452A1 (en) 2019-06-18 2022-04-27 CureVac AG Rotavirus mrna vaccine
JP2022537052A (ja) * 2019-06-21 2022-08-23 カーナル バイオロジクス， インコーポレイテッド 操作された腫瘍選択的タンパク質発現
WO2020262150A1 (ja) * 2019-06-24 2020-12-30 国立大学法人北海道大学 脂質ナノ粒子
WO2020263883A1 (en) 2019-06-24 2020-12-30 Modernatx, Inc. Endonuclease-resistant messenger rna and uses thereof
US20220387628A1 (en) 2019-06-24 2022-12-08 Modernatx, Inc. Messenger rna comprising functional rna elements and uses thereof
EP4414002B1 (en) 2019-07-18 2026-05-13 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Rac2 g12v mutant for use in ablating hematopoiesis and in the treatment of hematopoietic malignancies
EP3999034A4 (en) * 2019-07-19 2023-08-23 University Of Florida Research Foundation, Incorporated Multilamellar rna nanoparticles
EP4003397B1 (en) 2019-07-30 2025-02-26 Translate Bio, Inc. Treatment of cystic fibrosis by delivery of nebulized mrna encoding cftr
JP2022544412A (ja) 2019-08-14 2022-10-18 キュアバック アーゲー 免疫賦活特性が減少したｒｎａ組み合わせおよび組成物
ES2918001B2 (es) 2019-08-14 2026-05-13 Acuitas Therapeutics Inc Nanoparticulas lipidicas mejoradas para el suministro de acidos nucleicos
CA3155015A1 (en) 2019-09-19 2021-03-25 Modernatx, Inc. Carbonate containing lipid compounds and compositions for intracellular delivery of therapeutic agents
MX2022003269A (es) 2019-09-19 2022-07-04 Modernatx Inc Compuestos lipidicos de cola ramificada y composiciones para la administracion intracelular de agentes terapeuticos.
WO2021055609A1 (en) 2019-09-20 2021-03-25 Translate Bio, Inc. Mrna encoding engineered cftr
JP7650873B2 (ja) 2019-10-09 2025-03-25 トランスレイト バイオ， インコーポレイテッド メッセンジャーｒｎａの組成物、方法および使用
US12435330B2 (en) 2019-10-10 2025-10-07 The Broad Institute, Inc. Methods and compositions for prime editing RNA
US12378560B2 (en) 2019-10-29 2025-08-05 Northwestern University Sequence multiplicity within spherical nucleic acids
AU2020397956A1 (en) 2019-12-04 2022-07-07 Orna Therapeutics, Inc. Circular RNA compositions and methods
US10980836B1 (en) 2019-12-11 2021-04-20 Myeloid Therapeutics, Inc. Therapeutic cell compositions and methods of manufacturing and use thereof
KR20220142432A (ko) * 2019-12-20 2022-10-21 트랜슬레이트 바이오 인코포레이티드 메신저 rna의 직장 전달
US12053551B2 (en) 2019-12-20 2024-08-06 Translate Bio, Inc. Process of preparing mRNA-loaded lipid nanoparticles
CN115335083A (zh) * 2020-01-10 2022-11-11 斯特姆詹尼克斯公司 用于表达所关注基因和/或调控信号传导通路的纳米颗粒
JP2023511633A (ja) 2020-01-28 2023-03-20 モデルナティエックス インコーポレイテッド コロナウイルスｒｎａワクチン
EP3886897A1 (en) 2020-02-04 2021-10-06 CureVac AG Coronavirus vaccine
AU2021215938A1 (en) 2020-02-07 2022-09-01 Modernatx, Inc. Sars-cov-2 mrna domain vaccines
WO2021173840A1 (en) 2020-02-25 2021-09-02 Translate Bio, Inc. Improved processes of preparing mrna-loaded lipid nanoparticles
WO2021178510A1 (en) 2020-03-03 2021-09-10 Arcturus Therapeutics, Inc. Compositions and methods for the treatment of ornithine transcarbamylase deficiency
JP2021147353A (ja) * 2020-03-19 2021-09-27 国立大学法人信州大学 組成物、脂質粒子製造用キット、物質送達方法及び検出方法
CN113521269A (zh) 2020-04-22 2021-10-22 生物技术Rna制药有限公司 冠状病毒疫苗
WO2021222304A1 (en) 2020-04-27 2021-11-04 Modernatx, Inc. Sars-cov-2 rna vaccines
BR112022022603A2 (pt) 2020-05-08 2023-01-17 Broad Inst Inc Métodos e composições para edição simultânea de ambas as fitas de sequência alvo de nucleotídeos de fita dupla
CA3177407A1 (en) 2020-05-12 2021-11-18 James M. Wilson Compositions for drg-specific reduction of transgene expression
US12514932B2 (en) * 2020-05-14 2026-01-06 Translate Bio, Inc. PEG lipidoid compounds
WO2021159130A2 (en) 2020-05-15 2021-08-12 Modernatx, Inc. Coronavirus rna vaccines and methods of use
US20240042015A1 (en) 2020-05-19 2024-02-08 Orna Therapeutics, Inc. Circular rna compositions and methods
CN116322758A (zh) 2020-05-29 2023-06-23 库尔维科欧洲股份公司 基于核酸的组合疫苗
CA3184474A1 (en) 2020-06-01 2021-12-09 Modernatx, Inc. Phenylalanine hydroxylase variants and uses thereof
CA3181680A1 (en) 2020-06-12 2021-12-16 University Of Rochester Encoding and expression of ace-trnas
JP2023531451A (ja) 2020-06-17 2023-07-24 ザ・トラステイーズ・オブ・ザ・ユニバーシテイ・オブ・ペンシルベニア 遺伝子療法患者の治療のための組成物及び方法
WO2025056938A1 (en) 2023-09-11 2025-03-20 BioNTech SE Rna compositions for delivery of incretin agents
KR20230038503A (ko) 2020-07-13 2023-03-20 더 트러스티스 오브 더 유니버시티 오브 펜실베니아 샤르코-마리-투스 질환의 치료에 유용한 조성물
EP4179112A4 (en) 2020-07-13 2024-11-20 The Board of Trustees of the Leland Stanford Junior University Systems and methods to assess rna stability
EP4172194A1 (en) 2020-07-31 2023-05-03 CureVac SE Nucleic acid encoded antibody mixtures
US11406703B2 (en) 2020-08-25 2022-08-09 Modernatx, Inc. Human cytomegalovirus vaccine
EP4204015A4 (en) 2020-08-31 2025-01-01 The Board of Trustees of the Leland Stanford Junior University Systems and methods for producing rna constructs with increased translation and stability
CA3170743A1 (en) 2020-08-31 2022-03-03 Susanne RAUCH Multivalent nucleic acid based coronavirus vaccines
CZ310613B6 (cs) 2020-09-23 2026-01-28 Ústav organické chemie a biochemie AV ČR, v. v. i. Lipidoidy pro transfekci nukleových kyselin a jejich použití
WO2022067010A1 (en) 2020-09-25 2022-03-31 Modernatx, Inc. Multi-proline-substituted coronavirus spike protein vaccines
CA3094859A1 (en) * 2020-10-01 2022-04-01 Entos Pharmaceuticals Inc. Proteolipid vesicles formulated with fusion associated small transmembrane proteins
US20230364206A1 (en) 2020-10-07 2023-11-16 Regenxbio Inc. Gene therapy for ocular manifestations of cln2 disease
AU2021356684A1 (en) 2020-10-09 2023-05-11 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods for treatment of fabry disease
KR20230118715A (ko) 2020-10-14 2023-08-11 조지 메이슨 리서치 파운데이션 인코포레이티드 이온화 가능 지질 및 이의 제조 및 사용 방법
JP2023545503A (ja) 2020-10-15 2023-10-30 トランスレイト バイオ， インコーポレイテッド メッセンジャーｒｎａの大規模合成
JP2023549140A (ja) * 2020-11-04 2023-11-22 マイエロイド・セラピューティクス，インコーポレーテッド 操作されたキメラ融合タンパク質組成物およびその使用方法
US11771652B2 (en) 2020-11-06 2023-10-03 Sanofi Lipid nanoparticles for delivering mRNA vaccines
WO2022104131A1 (en) 2020-11-13 2022-05-19 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding cystic fibrosis transmembrane conductance regulator for the treatment of cystic fibrosis
MX2023006445A (es) 2020-12-01 2023-08-10 Univ Pennsylvania Composiciones y usos de estas para el tratamiento del síndrome de angelman.
AR124216A1 (es) 2020-12-01 2023-03-01 Univ Pennsylvania Composiciones nuevas con motivos selectivos específicos del tejido y composiciones que las contienen
US20240050378A1 (en) * 2020-12-02 2024-02-15 Merck Sharp & Dohme Llc Lipid nanoparticle compositions containing monoester cationic lipids
GB2603454A (en) 2020-12-09 2022-08-10 Ucl Business Ltd Novel therapeutics for the treatment of neurodegenerative disorders
US20240299309A1 (en) 2020-12-22 2024-09-12 CureVac SE Pharmaceutical composition comprising lipid-based carriers encapsulating rna for multidose administration
US20240156946A1 (en) 2020-12-22 2024-05-16 CureVac SE Rna vaccine against sars-cov-2 variants
WO2022150717A1 (en) 2021-01-11 2022-07-14 Modernatx, Inc. Seasonal rna influenza virus vaccines
JP2024504614A (ja) * 2021-01-14 2024-02-01 トランスレイト バイオ， インコーポレイテッド ｍＲＮＡがコードする抗体を送達する方法および組成物
US20240139309A1 (en) 2021-01-15 2024-05-02 Modernatx, Inc. Variant strain-based coronavirus vaccines
JP2024503698A (ja) 2021-01-15 2024-01-26 モデルナティエックス インコーポレイテッド 変異型株ベースのコロナウイルスワクチン
EP4087938A2 (en) 2021-01-27 2022-11-16 CureVac AG Method of reducing the immunostimulatory properties of in vitro transcribed rna
EP4284335A1 (en) 2021-02-01 2023-12-06 RegenxBio Inc. Gene therapy for neuronal ceroid lipofuscinoses
US11524023B2 (en) 2021-02-19 2022-12-13 Modernatx, Inc. Lipid nanoparticle compositions and methods of formulating the same
US20240299531A1 (en) 2021-03-15 2024-09-12 Moderna TX, Inc Therapeutic use of sars-cov-2 mrna domain vaccines
KR20240013094A (ko) 2021-03-17 2024-01-30 마이얼로이드 테라퓨틱스, 인크. 조작된 키메라 융합 단백질 조성물 및 그의 사용 방법
EP4313001A4 (en) * 2021-03-22 2025-11-26 Univ Texas Compositions and methods for targeted administration to cells
WO2022204219A1 (en) 2021-03-22 2022-09-29 Recode Therapeutics, Inc. Compositions and methods for targeted delivery to cells
KR20230175196A (ko) 2021-03-23 2023-12-29 리코드 테라퓨틱스, 인크. 폴리뉴클레오티드 조성물, 관련된 제제, 및 이의 사용 방법
WO2022204380A1 (en) 2021-03-24 2022-09-29 Modernatx, Inc. Lipid nanoparticles containing polynucleotides encoding propionyl-coa carboxylase alpha and beta subunits and uses thereof
WO2022204371A1 (en) 2021-03-24 2022-09-29 Modernatx, Inc. Lipid nanoparticles containing polynucleotides encoding glucose-6-phosphatase and uses thereof
WO2022204390A1 (en) 2021-03-24 2022-09-29 Modernatx, Inc. Lipid nanoparticles containing polynucleotides encoding phenylalanine hydroxylase and uses thereof
US20240226025A1 (en) 2021-03-24 2024-07-11 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding methylmalonyl-coa mutase for the treatment of methylmalonic acidemia
WO2022204370A1 (en) 2021-03-24 2022-09-29 Modernatx, Inc. Lipid nanoparticles and polynucleotides encoding ornithine transcarbamylase for the treatment of ornithine transcarbamylase deficiency
CA3214137A1 (en) 2021-03-26 2022-09-29 Mina Therapeutics Limited Tmem173 sarna compositions and methods of use
MX2023011400A (es) 2021-03-26 2023-10-09 Glaxosmithkline Biologicals Sa Composiciones inmunogenicas.
WO2022207862A2 (en) 2021-03-31 2022-10-06 Curevac Ag Syringes containing pharmaceutical compositions comprising rna
US11744902B2 (en) * 2021-04-06 2023-09-05 Animatus Biosciences, Inc. Targeting technology to selectively express mRNAs in cardiomyocytes while avoiding stimulation of cardiac fibroblasts
AU2022258312A1 (en) 2021-04-12 2023-10-26 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions useful for treating spinal and bulbar muscular atrophy (sbma)
AU2022258335A1 (en) 2021-04-13 2023-11-23 Modernatx, Inc. Respiratory virus combination vaccines
WO2022221440A1 (en) 2021-04-14 2022-10-20 Modernatx, Inc. Influenza-coronavirus combination vaccines
MX2023012513A (es) 2021-04-23 2023-12-15 Univ Pennsylvania Nuevas composiciones con motivos selectivos para el cerebro y composiciones que las contienen.
EP4334446A1 (en) 2021-05-03 2024-03-13 CureVac SE Improved nucleic acid sequence for cell type specific expression
BR112023023642A2 (pt) 2021-05-11 2024-01-30 Myeloid Therapeutics Inc Métodos e composições para integração genômica
WO2022245888A1 (en) 2021-05-19 2022-11-24 Modernatx, Inc. Seasonal flu rna vaccines and methods of use
US20240384277A1 (en) 2021-06-15 2024-11-21 Modernatx, Inc. Engineered polynucleotides for cell-type or microenvironment-specific expression
WO2022264109A1 (en) 2021-06-18 2022-12-22 Sanofi Multivalent influenza vaccines
US20240376445A1 (en) 2021-06-22 2024-11-14 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding uridine diphosphate glycosyltransferase 1 family, polypeptide a1 for the treatment of crigler-najjar syndrome
CZ310443B6 (cs) 2021-07-19 2025-06-25 Ústav organické chemie a biochemie AV ČR, v. v. i. Cyklohexanové lipidoidy pro transfekci nukleových kyselin a jejich použití
WO2023002509A1 (en) 2021-07-23 2023-01-26 Institute For Stem Cell Science And Regenerative Medicine Lipid formulation for delivery of therapeutic agents
EP4392140A1 (en) 2021-08-24 2024-07-03 BioNTech SE In vitro transcription technologies
EP4392560B1 (en) 2021-08-27 2026-03-11 Peking University Constructs and methods for preparing circular rna
CA3229889A1 (en) 2021-09-03 2023-03-09 Glaxosmithkline Biologicals Sa Substitution of nucleotide bases in self-amplifying messenger ribonucleic acids
CN117940158A (zh) 2021-09-03 2024-04-26 库瑞瓦格欧洲公司 用于核酸递送的包含磷脂酰丝氨酸的新型脂质纳米颗粒
IL309505A (en) 2021-09-03 2024-02-01 CureVac SE Novel lipid nanoparticles for delivery of nucleic acids
WO2023056044A1 (en) 2021-10-01 2023-04-06 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding relaxin for the treatment of fibrosis and/or cardiovascular disease
EP4415690A4 (en) * 2021-10-14 2025-12-17 Kernal Biologics Inc COMPOSITIONS AND PROCEDURES FOR THE DISPENSING OF FUNDS
EP4419081A1 (en) 2021-10-22 2024-08-28 Sail Biomedicines, Inc. Mrna vaccine composition
US20250027108A1 (en) 2021-10-29 2025-01-23 CureVac SE Improved circular rna for expressing therapeutic proteins
WO2023077148A1 (en) 2021-11-01 2023-05-04 Tome Biosciences, Inc. Single construct platform for simultaneous delivery of gene editing machinery and nucleic acid cargo
TW202346593A (zh) 2021-11-05 2023-12-01 法商賽諾菲公司 呼吸道融合病毒rna疫苗
CN118541346A (zh) 2021-11-08 2024-08-23 奥纳治疗公司 用于递送环状多核苷酸的脂质纳米颗粒组合物
WO2023087019A2 (en) 2021-11-15 2023-05-19 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions for drg-specific reduction of transgene expression
WO2023092069A1 (en) 2021-11-18 2023-05-25 Modernatx, Inc. Sars-cov-2 mrna domain vaccines and methods of use
EP4433031A1 (en) 2021-11-19 2024-09-25 Branca Bunus Limited A composition comprising a therapeutically active agent packaged within a drug delivery vehicle
KR20240107356A (ko) 2021-11-23 2024-07-09 세일 바이오메디슨스, 인크. 박테리아-유래 지질 조성물 및 이의 용도
US12186387B2 (en) 2021-11-29 2025-01-07 BioNTech SE Coronavirus vaccine
CA3239417A1 (en) 2021-11-30 2023-06-08 Yvonne CHAN Human metapneumovirus vaccines
WO2023099884A1 (en) 2021-12-01 2023-06-08 Mina Therapeutics Limited Pax6 sarna compositions and methods of use
US20240408157A1 (en) 2021-12-02 2024-12-12 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods for treatment of fabry disease
EP4444345A2 (en) 2021-12-08 2024-10-16 ModernaTX, Inc. Herpes simplex virus mrna vaccines
GB202117758D0 (en) 2021-12-09 2022-01-26 Ucl Business Ltd Therapeutics for the treatment of neurodegenerative disorders
CN119095613A (zh) 2021-12-17 2024-12-06 赛诺菲 莱姆病rna疫苗
WO2023122080A1 (en) 2021-12-20 2023-06-29 Senda Biosciences, Inc. Compositions comprising mrna and lipid reconstructed plant messenger packs
KR20240126870A (ko) 2021-12-22 2024-08-21 캠프4 테라퓨틱스 코포레이션 조절 rna들을 표적으로 하는 안티센스 올리고뉴클레오티드를 사용한 유전자 전사의 조절
EP4452335A1 (en) 2021-12-22 2024-10-30 Tome Biosciences, Inc. Co-delivery of a gene editor construct and a donor template
TW202340467A (zh) 2022-01-10 2023-10-16 賓州大學委員會 有用於治療c9orf72介導之病症之組成物及方法
EP4466027A1 (en) 2022-01-17 2024-11-27 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods of inducing cell death of a population of solid tumor cells
CA3241143A1 (en) 2022-01-21 2023-07-27 Allen T. HORHOTA Systemic administration of circular rna polynucleotides encoding muscle proteins or protein complexes
EP4469063A1 (en) 2022-01-27 2024-12-04 BioNTech SE Pharmaceutical compositions for delivery of herpes simplex virus antigens and related methods
US20250099614A1 (en) 2022-01-28 2025-03-27 CureVac SE Nucleic acid encoded transcription factor inhibitors
US20250134919A1 (en) 2022-02-07 2025-05-01 University Of Rochester OPTIMIZED SEQUENCES FOR ENHANCED tRNA EXPRESSION OR/AND NONSENSE MUTATION SUPPRESSION
WO2023161350A1 (en) 2022-02-24 2023-08-31 Io Biotech Aps Nucleotide delivery of cancer therapy
WO2023170435A1 (en) 2022-03-07 2023-09-14 Mina Therapeutics Limited Il10 sarna compositions and methods of use
WO2023177904A1 (en) 2022-03-18 2023-09-21 Modernatx, Inc. Sterile filtration of lipid nanoparticles and filtration analysis thereof for biological applications
CA3255112A1 (en) 2022-03-23 2023-09-28 Nanovation Therapeutics Inc. HIGH STEROL LIPID NANOPARTICLES
WO2023183909A2 (en) 2022-03-25 2023-09-28 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding fanconi anemia, complementation group proteins for the treatment of fanconi anemia
CN119654166A (zh) 2022-04-01 2025-03-18 内诺维什疗法股份有限公司 mRNA递送方法及其组合物
WO2023196914A1 (en) 2022-04-08 2023-10-12 Modernatx, Inc. Influenza nucleic acid compositions and uses thereof
CN119365208A (zh) 2022-04-13 2025-01-24 巴塞罗那自治大学 通过表达klotho蛋白的基因疗法治疗神经肌肉疾病
WO2023205744A1 (en) 2022-04-20 2023-10-26 Tome Biosciences, Inc. Programmable gene insertion compositions
WO2023215831A1 (en) 2022-05-04 2023-11-09 Tome Biosciences, Inc. Guide rna compositions for programmable gene insertion
CN119522105A (zh) 2022-05-06 2025-02-25 赛诺菲 核酸疫苗的信号序列
WO2023225670A2 (en) 2022-05-20 2023-11-23 Tome Biosciences, Inc. Ex vivo programmable gene insertion
WO2023230481A1 (en) 2022-05-24 2023-11-30 Modernatx, Inc. Orthopoxvirus vaccines
CA3248209A1 (en) 2022-05-25 2023-11-30 CureVac SE Escherichia coli Antigenic Polypeptide-Based Nucleic Acid Vaccine (FIMH)
WO2023231959A2 (en) 2022-05-30 2023-12-07 Shanghai Circode Biomed Co., Ltd Synthetic circular rna compositions and methods of use thereof
AU2023283551A1 (en) 2022-06-10 2024-12-19 Camp4 Therapeutics Corporation Methods of modulating progranulin expression using antisense oligonucleotides targeting regulatory rnas
WO2023242817A2 (en) 2022-06-18 2023-12-21 Glaxosmithkline Biologicals Sa Recombinant rna molecules comprising untranslated regions or segments encoding spike protein from the omicron strain of severe acute respiratory coronavirus-2
KR20250044484A (ko) 2022-06-24 2025-03-31 튠 쎄라퓨틱스, 인코포레이티드 표적 유전자 억제를 통해 저밀도 지단백질을 감소시키기 위한 조성물, 시스템, 및 방법
US12297285B2 (en) 2022-06-24 2025-05-13 Orna Therapeutics, Inc. Circular RNA encoding chimeric antigen receptors targeting BCMA
WO2024002985A1 (en) 2022-06-26 2024-01-04 BioNTech SE Coronavirus vaccine
WO2024015890A1 (en) 2022-07-13 2024-01-18 Modernatx, Inc. Norovirus mrna vaccines
KR20250048616A (ko) * 2022-07-19 2025-04-09 센젠 센신 바이오테크놀로지 컴퍼니 리미티드 Sars-cov-2 s 단백질에 대한 mrna 및 그의 용도
WO2024020587A2 (en) 2022-07-22 2024-01-25 Tome Biosciences, Inc. Pleiopluripotent stem cell programmable gene insertion
MA71619A (fr) 2022-07-26 2025-05-30 Modernatx, Inc. Polynucléotides modifiés pour la régulation temporelle de l'expression
EP4577236A1 (en) 2022-08-22 2025-07-02 The Henry M. Jackson Foundation for the Advancement of Military Medicine, Inc. Vaccines against coronaviruses
WO2024044147A1 (en) 2022-08-23 2024-02-29 Modernatx, Inc. Methods for purification of ionizable lipids
WO2024050483A1 (en) 2022-08-31 2024-03-07 Modernatx, Inc. Variant strain-based coronavirus vaccines and uses thereof
EP4356933A1 (en) * 2022-09-07 2024-04-24 Eyegene, Inc. Composition for delivering modified nucleic acid-containing mrna
WO2024063789A1 (en) 2022-09-23 2024-03-28 BioNTech SE Compositions for delivery of malaria antigens and related methods
AU2023347390A1 (en) 2022-09-23 2025-04-10 BioNTech SE Compositions for delivery of plasmodium csp antigens and related methods
CN120225219A (zh) 2022-09-23 2025-06-27 生物技术欧洲股份公司 用于递送肝期抗原的组合物及相关方法
WO2024063788A1 (en) 2022-09-23 2024-03-28 BioNTech SE Compositions for delivery of malaria antigens and related methods
CA3267272A1 (en) 2022-09-26 2024-04-04 Glaxosmithkline Biologicals Sa FLU VIRUS VACCINES
EP4594743A1 (en) * 2022-09-30 2025-08-06 Merck Sharp & Dohme LLC An analytical method using lc-ms/ms proteomics to characterize proteins translated from mrna
WO2024083345A1 (en) 2022-10-21 2024-04-25 BioNTech SE Methods and uses associated with liquid compositions
EP4608442A1 (en) 2022-10-28 2025-09-03 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Nucleic acid based vaccine
AU2023374764A1 (en) 2022-11-04 2025-06-19 Sanofi Pasteur Inc. Respiratory syncytial virus rna vaccination
JP2025536595A (ja) 2022-11-04 2025-11-07 サノフィ パスツール インコーポレイテッド メッセンジャーｒｎａテール付加の方法
TW202425959A (zh) 2022-11-08 2024-07-01 美商歐納醫療公司 遞送多核苷酸的脂質及奈米顆粒組合物
WO2024102762A1 (en) 2022-11-08 2024-05-16 Orna Therapeutics, Inc. Lipids and lipid nanoparticle compositions for delivering polynucleotides
WO2024102677A1 (en) 2022-11-08 2024-05-16 Orna Therapeutics, Inc. Circular rna compositions
WO2024102954A1 (en) 2022-11-10 2024-05-16 Massachusetts Institute Of Technology Activation induced clipping system (aics)
WO2024102434A1 (en) 2022-11-10 2024-05-16 Senda Biosciences, Inc. Rna compositions comprising lipid nanoparticles or lipid reconstructed natural messenger packs
JP2025540101A (ja) 2022-12-01 2025-12-11 キャンプ４ セラピューティクス コーポレイション 調節ｒｎａを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドを用いたｓｙｎｇａｐ１遺伝子転写の調節
JP2025540306A (ja) * 2022-12-07 2025-12-11 ザ・ユニバーシティ・オブ・ブリティッシュ・コロンビア 中枢神経系へのペプチドまたはタンパク質の供給のための組成物および方法
EP4630057A1 (en) 2022-12-08 2025-10-15 Recode Therapeutics, Inc. Lipid nanoparticle compositions and uses thereof
WO2024121378A1 (en) 2022-12-09 2024-06-13 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Novel human antiviral genes related to the eleos and lamassu prokaryotic systems
WO2024124148A1 (en) * 2022-12-09 2024-06-13 Ohio State Innovation Foundation Lipid compounds and methods of making and use thereof
WO2024125597A1 (en) 2022-12-14 2024-06-20 Providence Therapeutics Holdings Inc. Compositions and methods for infectious diseases
WO2024126809A1 (en) 2022-12-15 2024-06-20 Sanofi Mrna encoding influenza virus-like particle
EP4634207A1 (en) 2022-12-15 2025-10-22 Sanofi Pasteur Inc. Mrna recombinant capping enzymes
EP4634390A2 (en) 2022-12-15 2025-10-22 Orna Therapeutics, Inc. Circular rna compositions and methods
WO2024130070A2 (en) 2022-12-17 2024-06-20 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Recombinant aav capsids with cardiac- and skeletal muscle- specific targeting motifs and uses thereof
WO2024130067A2 (en) 2022-12-17 2024-06-20 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Recombinant aav mutant vectors with cardiac and skeletal muscle-specific targeting motifs and compositions containing same
WO2024133160A1 (en) 2022-12-19 2024-06-27 Glaxosmithkline Biologicals Sa Hepatitis b compositions
WO2024138194A1 (en) 2022-12-22 2024-06-27 Tome Biosciences, Inc. Platforms, compositions, and methods for in vivo programmable gene insertion
WO2024134199A1 (en) 2022-12-22 2024-06-27 Mina Therapeutics Limited Chemically modified sarna compositions and methods of use
WO2024133884A2 (en) 2022-12-23 2024-06-27 Sanofi Optimized tailing of messenger rna
KR20250153793A (ko) 2023-01-27 2025-10-27 세일 바이오메디슨스, 인크. 변형된 지질 조성물 및 이의 용도
WO2024157221A1 (en) 2023-01-27 2024-08-02 BioNTech SE Pharmaceutical compositions for delivery of herpes simplex virus glycoprotein c, glycoprotein d, and glycoprotein e antigens and related methods
EP4658306A1 (en) 2023-01-30 2025-12-10 ModernaTX, Inc. Epstein-barr virus mrna vaccines
EP4658239A1 (en) 2023-02-03 2025-12-10 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Rna formulation
GB202302092D0 (en) 2023-02-14 2023-03-29 Glaxosmithkline Biologicals Sa Analytical method
KR20250155004A (ko) 2023-02-23 2025-10-29 유니버시티 오브 로체스터 폐쇄 말단 dna 가닥 분자를 제조하기 위한 제제 및 방법
JP2026504797A (ja) 2023-03-02 2026-02-10 サノフィ・パスツール クラミジア（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ）の治療に使用するための組成物
CN120858173A (zh) 2023-03-07 2025-10-28 赛诺菲巴斯德有限公司 用kp34聚合酶制造信使rna
JP2026509258A (ja) 2023-03-08 2026-03-17 キュアバック エスイー 核酸送達のための新規な脂質ナノ粒子製剤
CN121263402A (zh) 2023-03-15 2026-01-02 雷纳嘉德医疗管理公司 用于基因编辑以及作为疫苗和治疗剂的包含编码rna分子的脂质纳米颗粒
AU2024236558A1 (en) 2023-03-15 2025-10-09 Renagade Therapeutics Management Inc. Delivery of gene editing systems and methods of use thereof
WO2024197033A1 (en) 2023-03-21 2024-09-26 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding relaxin for the treatment of heart failure
JP2026511495A (ja) 2023-03-23 2026-04-14 アンスティチュ ナショナル ドゥ ラ サンテ エ ドゥ ラ ルシェルシュ メディカル ウイルス複製のモジュレートのための、ｇａｓ７の発現及び／又は活性のモジュレート
WO2024205657A2 (en) 2023-03-29 2024-10-03 Orna Therapeutics, Inc. Lipids and lipid nanoparticle compositions for delivering polynucleotides
AU2024250317A1 (en) * 2023-04-05 2025-11-06 Seqirus Inc. Rna delivery vehicle
WO2024215721A1 (en) 2023-04-10 2024-10-17 Modernatx, Inc. Lyme disease vaccines
WO2024220712A2 (en) 2023-04-19 2024-10-24 Sail Biomedicines, Inc. Vaccine compositions
EP4701657A1 (en) 2023-04-27 2026-03-04 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Influenza virus vaccines
WO2024223728A1 (en) 2023-04-27 2024-10-31 Glaxosmithkline Biologicals Sa Influenza virus vaccines
AU2024265267A1 (en) 2023-05-03 2025-11-20 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding cystic fibrosis transmembrane conductance regulator for the treatment of cystic fibrosis
WO2024228044A1 (en) 2023-05-03 2024-11-07 BioNTech SE Optimized csp variants and related methods
AU2024265158A1 (en) 2023-05-03 2025-11-06 BioNTech SE Optimized csp variants and related methods
WO2024231727A1 (en) 2023-05-05 2024-11-14 Sanofi Compositions for use in treatment of acne
AU2024269222A1 (en) 2023-05-05 2025-10-09 Orna Therapeutics, Inc. Circular rna compositions and methods
TW202508620A (zh) 2023-05-10 2025-03-01 尼可拉斯 克拉克 呼吸道mrna組合疫苗
WO2024230934A1 (en) 2023-05-11 2024-11-14 CureVac SE Therapeutic nucleic acid for the treatment of ophthalmic diseases
WO2024234006A1 (en) 2023-05-11 2024-11-14 Tome Biosciences, Inc. Systems, compositions, and methods for targeting liver sinusodial endothelial cells (lsecs)
WO2024254552A1 (en) 2023-06-08 2024-12-12 Modernatx, Inc. Stabilized flavivirus vaccines
EP4724085A1 (en) 2023-06-12 2026-04-15 The Trustees of The University of Pennsylvania Aav gene therapy for mucopolysaccharidosis iiib
WO2024263826A1 (en) 2023-06-22 2024-12-26 Modernatx, Inc. Sars-cov-2 t cell vaccines
EP4734960A1 (en) 2023-06-28 2026-05-06 Sanofi Pasteur Inc. Sterol analogs in lipid nanoparticle formulations
AR133098A1 (es) 2023-06-29 2025-08-27 Univ Pennsylvania Aav mutante con motivos dirigidos al sistema nervioso central y composiciones que lo contienen
CN121532514A (zh) 2023-07-07 2026-02-13 上海环码生物医药有限公司 用于季节性流感的环状rna疫苗及使用方法
WO2025019352A2 (en) 2023-07-14 2025-01-23 Modernatx, Inc. Mers-cov mrna vaccines
WO2025017151A1 (en) 2023-07-18 2025-01-23 Sanofi Stable poly(a)-encoding messenger rna templates
CN121889496A (zh) 2023-07-19 2026-04-17 赛诺菲 牙龈卟啉单胞菌抗原构建体
WO2025024324A1 (en) 2023-07-21 2025-01-30 BioNTech SE Compositions for delivery of plasmodium antigens and related methods
IL325865A (en) 2023-07-21 2026-03-01 BioNTech SE Compositions for administering Plasmodium antigens and related methods
WO2025024337A1 (en) 2023-07-24 2025-01-30 BioNTech SE Compositions for delivery of plasmodium antigens and related methods
WO2025029700A1 (en) 2023-07-28 2025-02-06 Modernatx, Inc. Vlp enteroviral vaccines
CN121772938A (zh) 2023-08-03 2026-03-31 百欧恩泰欧洲股份公司 用于递送单纯疱疹病毒抗原的药物组合物及相关方法
WO2025030154A1 (en) 2023-08-03 2025-02-06 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Pharmaceutical compositions for delivery of herpes simplex virus glycoprotein b antigens and related methods
WO2025034612A1 (en) 2023-08-04 2025-02-13 Modernatx, Inc. Varicella-zoster virus mrna vaccine
WO2025035143A1 (en) 2023-08-10 2025-02-13 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods for treatment of spinal muscular atrophy
KR20260052931A (ko) 2023-08-11 2026-04-20 쑤저우 아보젠 바이오사이언시스 컴퍼니 리미티드 캡핑된 mrna 및 이의 제조방법
WO2025045142A1 (en) 2023-08-29 2025-03-06 Shanghai Circode Biomed Co., Ltd. Circular rna encoding vegf polypeptides, formulations, and methods of uses
WO2025049959A2 (en) 2023-09-01 2025-03-06 Renagade Therapeutics Management Inc. Gene editing systems, compositions, and methods for treatment of vexas syndrome
WO2025050069A1 (en) 2023-09-01 2025-03-06 Tome Biosciences, Inc. Programmable gene insertion using engineered integration enzymes
WO2025051975A1 (en) 2023-09-06 2025-03-13 Sanofi Modified influenza b hemagglutinin polypeptides and nucleic acids and uses thereof
EP4520345A1 (en) 2023-09-06 2025-03-12 Myneo Nv Product
WO2025054556A1 (en) 2023-09-07 2025-03-13 BioNTech SE Rna compositions for delivery of mpox antigens and related methods
AU2024343011A1 (en) 2023-09-11 2026-03-26 BioNTech SE Rna compositions for delivery of incretin agents
WO2025072482A1 (en) 2023-09-27 2025-04-03 Modernatx, Inc. Immunoglobulin a protease polypeptides, polynucleotides, and uses thereof
AU2024357861A1 (en) 2023-10-12 2026-04-23 Renagade Therapeutics Management Inc. Nickase-retron template-based precision editing system and methods of use
WO2025083211A1 (en) 2023-10-20 2025-04-24 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Use of factor h for the treatment of dementia
WO2025087266A1 (en) 2023-10-23 2025-05-01 Abogen Biosciences (Shanghai) Co., Ltd. Immunomodulatory mrna cassettes, and uses thereof
WO2025101501A1 (en) 2023-11-07 2025-05-15 Orna Therapeutics, Inc. Circular rna compositions
WO2025101862A1 (en) 2023-11-08 2025-05-15 Axelyf ehf. Single domain antibody binders of myc
WO2025101685A1 (en) 2023-11-09 2025-05-15 University Of Rochester Suppression of nonsense mutations using anticodon engineered (ace)-trnas
WO2025102034A1 (en) 2023-11-10 2025-05-15 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Gene therapy for barth syndrome
WO2025106661A1 (en) 2023-11-14 2025-05-22 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions with cardiac and skeletal musclespecific targeting motifs and uses thereof
TW202523695A (zh) 2023-11-22 2025-06-16 美商旗艦先鋒創新有限責任（Ｖｉｉ）公司 用於治療非酒精性脂肪性肝病之方法及組成物
US12364773B2 (en) 2023-12-01 2025-07-22 Recode Therapeutics, Inc. Lipid nanoparticle compositions and uses thereof
WO2025128871A2 (en) 2023-12-13 2025-06-19 Renagade Therapeutics Management Inc. Lipid nanoparticles comprising coding rna molecules for use in gene editing and as vaccines and therapeutic agents
WO2025132839A1 (en) 2023-12-21 2025-06-26 Glaxosmithkline Biologicals Sa Influenza virus vaccines
WO2025134071A1 (en) 2023-12-22 2025-06-26 Sanofi Malic and glutaric acid based ionizable lipids
WO2025130965A1 (en) * 2023-12-22 2025-06-26 Beijing Jitai Pharmaceutical Technology Co., Ltd. Uses of lipid nanoparticle compositions
WO2025141521A1 (en) 2023-12-29 2025-07-03 Sanofi Lipids having dendritic moieties
WO2025155753A2 (en) 2024-01-17 2025-07-24 Renagade Therapeutics Management Inc. Improved gene editing system, guides, and methods
WO2025174765A1 (en) 2024-02-12 2025-08-21 Renagade Therapeutics Management Inc. Lipid nanoparticles comprising coding rna molecules for use in gene editing and as vaccines and therapeutic agents
WO2025184172A1 (en) 2024-02-27 2025-09-04 Overt Bio, Inc. Cancer reactive t cell receptors
WO2025184170A1 (en) 2024-02-27 2025-09-04 Overt Bio, Inc. Methods and compositions for improving t cell function in an immunosuppressive environment
WO2025186788A1 (en) 2024-03-08 2025-09-12 Waters Technologies Corporation Methods for chromatographic characterization of lipid nanoparticle compositions
WO2025194019A1 (en) 2024-03-14 2025-09-18 Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc Methods for treating liver fibrosis and non-alcoholic fatty liver disease
US20250298009A1 (en) 2024-03-22 2025-09-25 Waters Technologies Corporation Methods for characterizing lipid nanoparticle compositions
WO2025202937A1 (en) 2024-03-26 2025-10-02 BioNTech SE Cancer vaccines
GB202404607D0 (en) 2024-03-29 2024-05-15 Glaxosmithkline Biologicals Sa RNA formulation
WO2025210592A1 (en) 2024-04-05 2025-10-09 Sanofi Pasteur Inc. Muscle cell lnp-mrna quality control assays
WO2025213131A1 (en) 2024-04-05 2025-10-09 BioNTech SE Rna compositions for delivery of orthopox antigens and related methods
WO2025215072A1 (en) 2024-04-10 2025-10-16 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Class i lanthipeptides with anti-viral function
US20250327777A1 (en) 2024-04-19 2025-10-23 Waters Technologies Corporation Dextran improves the sizing analysis of lipid nanoparticles during size exclusion chromatography analysis
EP4677108A1 (en) 2024-04-22 2026-01-14 Basecamp Research Ltd Method and compositions for detecting off-target editing
WO2025226656A1 (en) 2024-04-23 2025-10-30 Modernatx, Inc. Hepatitis b virus mrna vaccines
WO2025224182A2 (en) 2024-04-23 2025-10-30 Basecamp Research Ltd Single construct platform for simultaneous delivery of gene editing machinery and nucleic acid cargo
WO2025229572A1 (en) 2024-05-01 2025-11-06 Glaxosmithkline Biologicals Sa Epstein-barr virus antigen-encoding messenger ribonucleic acid and antigen protein vaccines
WO2025231403A1 (en) * 2024-05-03 2025-11-06 Revivity Pharma Corporation Methods of administering and manufacturing toxic compounds
WO2025235862A1 (en) 2024-05-10 2025-11-13 Inndura Therapeutics Inc. A modified immune cell receptor comprising a target-binding domain and the extracellular domain of cd16a
WO2025245188A2 (en) 2024-05-21 2025-11-27 Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc Methods of treating liver steatosis and non-alcoholic fatty liver disease
WO2025250751A1 (en) 2024-05-31 2025-12-04 Orna Therapeutics, Inc. Circular rna compositions and methods
WO2025248096A1 (en) 2024-05-31 2025-12-04 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Antimicrobial peptides having liquid-liquid phase separation activities
WO2025255388A1 (en) 2024-06-05 2025-12-11 Camp4 Therapeutics Corporation Modulation of syngap1 gene transcription using antisense oligonucleotides targeting regulatory rnas
WO2025255199A1 (en) 2024-06-05 2025-12-11 Modernatx, Inc. Argininosuccinate synthase 1 and argininosuccinate lyase polypeptides and polynucleotides and uses thereof
WO2026006151A2 (en) 2024-06-24 2026-01-02 University Of Rochester Functionalization of ace-trna encoding synthetic linear picovectors
WO2026003582A2 (en) 2024-06-27 2026-01-02 Axelyf ehf. Lipids and lipid nanoparticles
WO2026008743A1 (en) 2024-07-02 2026-01-08 Sanofi Pasteur Inc. Water-soluble polyanionic polymer as adjuvant for carrier-formulated nucleic acid
WO2026015882A1 (en) 2024-07-12 2026-01-15 BioNTech SE Hsv antigen fragments and related methods
WO2026030209A1 (en) 2024-07-29 2026-02-05 University Of Rochester Use of decoding trnas to boost protein expression or function
WO2026027730A1 (en) 2024-07-31 2026-02-05 Sanofi Modified h5 influenza hemagglutinin polypeptides and nucleic acids and uses thereof
WO2026027887A2 (en) 2024-08-02 2026-02-05 Mina Therapeutics Limited Hbg1/2-sarna compositions and methods of use
WO2026055342A1 (en) 2024-09-04 2026-03-12 Arsenal Biosciences, Inc. Synthetic pathway activators
WO2026053147A1 (en) 2024-09-05 2026-03-12 Sanofi Pasteur Inc. Helper lipids and lnp compositions comprising same
WO2026052773A1 (en) 2024-09-06 2026-03-12 Sanofi Modified influenza a hemagglutinin polypeptides and nucleic acids and uses thereof
WO2026080379A1 (en) 2024-10-07 2026-04-16 Modernatx, Inc. Lyme disease mrna vaccines
WO2026093322A1 (en) 2024-10-28 2026-05-07 Sanofi Pasteur Inc. Improved dna constructs for manufacturing messenger rna by in vitro transcription
WO2026093547A1 (en) 2024-10-31 2026-05-07 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Methods and vaccine compositions for the treatment of cancer

Family Cites Families (527)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2647121A (en) 1951-02-02 1953-07-28 Ruth P Jacoby Diamine-bis-acetamides
US2819718A (en) 1953-07-16 1958-01-14 Isidore H Goldman Drainage tube
US2717909A (en) 1953-09-24 1955-09-13 Monsanto Chemicals Hydroxyethyl-keryl-alkylene-ammonium compounds
US2844629A (en) 1956-04-25 1958-07-22 American Home Prod Fatty acid amides and derivatives thereof
US3096560A (en) 1958-11-21 1963-07-09 William J Liebig Process for synthetic vascular implants
FR1378382A (fr) 1962-12-01 1964-11-13 Sandoz Sa Amides de l'acide amino-propionique, utilisables en particulier pour le traitement des fibres textiles
GB1072118A (en) 1962-12-01 1967-06-14 Sandoz Ag Amides of aminopropionic acid
JPS5141663B1 (sr) 1966-03-12 1976-11-11
JPS4822365B1 (sr) 1968-10-25 1973-07-05
NL143127B (nl) 1969-02-04 1974-09-16 Rhone Poulenc Sa Versterkingsorgaan voor een defecte hartklep.
JPS4822365Y1 (sr) 1969-11-28 1973-06-29
US3614955A (en) 1970-02-09 1971-10-26 Medtronic Inc Standby defibrillator and method of operation
US3614954A (en) 1970-02-09 1971-10-26 Medtronic Inc Electronic standby defibrillator
JPS5024216B1 (sr) 1970-12-29 1975-08-14
JPS5012146Y2 (sr) 1971-07-27 1975-04-15
JPS5123537Y2 (sr) 1972-01-17 1976-06-17
US3945052A (en) 1972-05-01 1976-03-23 Meadox Medicals, Inc. Synthetic vascular graft and method for manufacturing the same
US3805301A (en) 1972-07-28 1974-04-23 Meadox Medicals Inc Tubular grafts having indicia thereon
JPS5210847Y2 (sr) 1972-10-11 1977-03-09
JPS49127908A (sr) 1973-04-20 1974-12-07
JPS5624664B2 (sr) 1973-06-28 1981-06-08
US4013507A (en) 1973-09-18 1977-03-22 California Institute Of Technology Ionene polymers for selectively inhibiting the vitro growth of malignant cells
JPS5123537A (ja) 1974-04-26 1976-02-25 Adeka Argus Chemical Co Ltd Kasozaisoseibutsu
GB1527592A (en) 1974-08-05 1978-10-04 Ici Ltd Wound dressing
US3995623A (en) 1974-12-23 1976-12-07 American Hospital Supply Corporation Multipurpose flow-directed catheter
JPS5813576B2 (ja) 1974-12-27 1983-03-14 アデカ ア−ガスカガク カブシキガイシヤ 安定化された合成高分子組成物
JPS5524302Y2 (sr) 1975-03-31 1980-06-10
DE2520814A1 (de) 1975-05-09 1976-11-18 Bayer Ag Lichtstabilisierung von polyurethanen
US4281669A (en) 1975-05-09 1981-08-04 Macgregor David C Pacemaker electrode with porous system
JPS5210847A (en) 1975-07-16 1977-01-27 Nippon Steel Corp Pinch roll
US4096860A (en) 1975-10-08 1978-06-27 Mclaughlin William F Dual flow encatheter
CA1069652A (en) 1976-01-09 1980-01-15 Alain F. Carpentier Supported bioprosthetic heart valve with compliant orifice ring
US4134402A (en) 1976-02-11 1979-01-16 Mahurkar Sakharam D Double lumen hemodialysis catheter
US4072146A (en) 1976-09-08 1978-02-07 Howes Randolph M Venous catheter device
US4335723A (en) 1976-11-26 1982-06-22 The Kendall Company Catheter having inflatable retention means
US4099528A (en) 1977-02-17 1978-07-11 Sorenson Research Co., Inc. Double lumen cannula
US4140126A (en) 1977-02-18 1979-02-20 Choudhury M Hasan Method for performing aneurysm repair
US4265745A (en) 1977-05-25 1981-05-05 Teijin Limited Permselective membrane
US4182833A (en) 1977-12-07 1980-01-08 Celanese Polymer Specialties Company Cationic epoxide-amine reaction products
US4180068A (en) 1978-04-13 1979-12-25 Motion Control, Incorporated Bi-directional flow catheter with retractable trocar/valve structure
DE2960875D1 (en) 1978-04-19 1981-12-10 Ici Plc A method of preparing a tubular product by electrostatic spinning
US4284459A (en) 1978-07-03 1981-08-18 The Kendall Company Method for making a molded catheter
US4227533A (en) 1978-11-03 1980-10-14 Bristol-Myers Company Flushable urinary catheter
US4375817A (en) 1979-07-19 1983-03-08 Medtronic, Inc. Implantable cardioverter
DE3010841A1 (de) 1980-03-21 1981-10-08 Ulrich Dr.med. 6936 Haag Uthmann Katheder
US4308085A (en) 1980-07-28 1981-12-29 Jenoptik Jena Gmbh Process for the preparation of high molecular thermoplastic epoxide-amine-polyadducts
US4339369A (en) 1981-04-23 1982-07-13 Celanese Corporation Cationic epoxide-amine reaction products
US4406656A (en) 1981-06-01 1983-09-27 Brack Gillium Hattler Venous catheter having collapsible multi-lumens
US4475972A (en) 1981-10-01 1984-10-09 Ontario Research Foundation Implantable material
US4401472A (en) 1982-02-26 1983-08-30 Martin Marietta Corporation Hydraulic cement mixes and processes for improving hydraulic cement mixes
US4568329A (en) 1982-03-08 1986-02-04 Mahurkar Sakharam D Double lumen catheter
US4546499A (en) 1982-12-13 1985-10-15 Possis Medical, Inc. Method of supplying blood to blood receiving vessels
US4530113A (en) 1983-05-20 1985-07-23 Intervascular, Inc. Vascular grafts with cross-weave patterns
US4550447A (en) 1983-08-03 1985-11-05 Shiley Incorporated Vascular graft prosthesis
US4647416A (en) 1983-08-03 1987-03-03 Shiley Incorporated Method of preparing a vascular graft prosthesis
US5104399A (en) 1986-12-10 1992-04-14 Endovascular Technologies, Inc. Artificial graft and implantation method
US4710169A (en) 1983-12-16 1987-12-01 Christopher T Graham Urinary catheter with collapsible urethral tube
US4571241A (en) 1983-12-16 1986-02-18 Christopher T Graham Urinary catheter with collapsible urethral tube
US4737518A (en) 1984-04-03 1988-04-12 Takeda Chemical Industries, Ltd. Lipid derivatives, their production and use
US4562596A (en) 1984-04-25 1986-01-07 Elliot Kornberg Aortic graft, device and method for performing an intraluminal abdominal aortic aneurysm repair
US4782836A (en) 1984-05-24 1988-11-08 Intermedics, Inc. Rate adaptive cardiac pacemaker responsive to patient activity and temperature
US4897355A (en) 1985-01-07 1990-01-30 Syntex (U.S.A.) Inc. N[ω,(ω-1)-dialkyloxy]- and N-[ω,(ω-1)-dialkenyloxy]-alk-1-yl-N,N,N-tetrasubstituted ammonium lipids and uses therefor
US4662382A (en) 1985-01-16 1987-05-05 Intermedics, Inc. Pacemaker lead with enhanced sensitivity
US4762915A (en) 1985-01-18 1988-08-09 Liposome Technology, Inc. Protein-liposome conjugates
US4860751A (en) 1985-02-04 1989-08-29 Cordis Corporation Activity sensor for pacemaker control
US5223263A (en) 1988-07-07 1993-06-29 Vical, Inc. Liponucleotide-containing liposomes
CA1320724C (en) 1985-07-19 1993-07-27 Koichi Kanehira Terpene amino alcohols and medicinal uses thereof
US4701162A (en) 1985-09-24 1987-10-20 The Kendall Company Foley catheter assembly
US4737323A (en) 1986-02-13 1988-04-12 Liposome Technology, Inc. Liposome extrusion method
DE3616824A1 (de) 1986-05-17 1987-11-19 Schering Ag Verwendung von haertbaren kunstharzmischungen fuer oberflaechenbeschichtungen und druckfarben und verfahren zu ihrer herstellung
DE3780374D1 (de) 1986-07-31 1992-08-20 Irnich Werner Frequenzadaptierender herzschrittmacher.
US4960409A (en) 1986-09-11 1990-10-02 Catalano Marc L Method of using bilumen peripheral venous catheter with adapter
JPH0829776B2 (ja) 1986-10-29 1996-03-27 東燃化学株式会社 合成樹脂製容器及びその製造用金型
US4720517A (en) 1986-11-24 1988-01-19 Ciba-Geigy Corporation Compositions stabilized with N-hydroxyiminodiacetic and dipropionic acids and esters thereof
US4920016A (en) 1986-12-24 1990-04-24 Linear Technology, Inc. Liposomes with enhanced circulation time
JPS63125144U (sr) 1987-02-09 1988-08-16
JPS63154788U (sr) 1987-03-31 1988-10-11
EP0414663A4 (en) 1987-04-16 1991-07-17 The Liposome Company, Inc. Liposome continuous size reduction method and apparatus
JPS63312934A (ja) 1987-06-16 1988-12-21 Hitachi Cable Ltd 半導体用リ−ドフレ−ム材
DE3728917A1 (de) 1987-08-29 1989-03-09 Roth Hermann J Neue lipide mit unsymmetrisch substituierter disulfidbruecke
US4946683A (en) 1987-11-18 1990-08-07 Vestar, Inc. Multiple step entrapment/loading procedure for preparing lipophilic drug-containing liposomes
US5047540A (en) 1987-12-17 1991-09-10 Shionogi & Co., Ltd. Lipid derivatives
US5138067A (en) 1987-12-17 1992-08-11 Shionogi & Co. Ltd. Lipid derivatives
US4892540A (en) 1988-04-21 1990-01-09 Sorin Biomedica S.P.A. Two-leaflet prosthetic heart valve
US5176661A (en) 1988-09-06 1993-01-05 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Composite vascular catheter
US5024671A (en) 1988-09-19 1991-06-18 Baxter International Inc. Microporous vascular graft
US5200395A (en) 1988-10-18 1993-04-06 Ajinomoto Company, Inc. Pharmaceutical composition of BUF-5 for treating anemia
CA2001401A1 (en) 1988-10-25 1990-04-25 Claude Piantadosi Quaternary amine containing ether or ester lipid derivatives and therapeutic compositions
US5185154A (en) 1989-02-02 1993-02-09 Liposome Technology, Inc. Method for instant preparation of a drug containing large unilamellar vesicles
EP0737750B1 (en) 1989-03-21 2003-05-14 Vical, Inc. Expression of exogenous polynucleotide sequences in a vertebrate
US6214804B1 (en) * 1989-03-21 2001-04-10 Vical Incorporated Induction of a protective immune response in a mammal by injecting a DNA sequence
US5703055A (en) 1989-03-21 1997-12-30 Wisconsin Alumni Research Foundation Generation of antibodies through lipid mediated DNA delivery
FR2645866B1 (fr) 1989-04-17 1991-07-05 Centre Nat Rech Scient Nouvelles lipopolyamines, leur preparation et leur emploi
US5194654A (en) 1989-11-22 1993-03-16 Vical, Inc. Lipid derivatives of phosphonoacids for liposomal incorporation and method of use
US5279833A (en) 1990-04-04 1994-01-18 Yale University Liposomal transfection of nucleic acids into animal cells
US5101824A (en) 1990-04-16 1992-04-07 Siemens-Pacesetter, Inc. Rate-responsive pacemaker with circuitry for processing multiple sensor inputs
US5264618A (en) 1990-04-19 1993-11-23 Vical, Inc. Cationic lipids for intracellular delivery of biologically active molecules
US5405379A (en) 1990-07-26 1995-04-11 Lane; Rodney J. Self expanding vascular endoprosthesis for aneurysms
US5693338A (en) 1994-09-29 1997-12-02 Emisphere Technologies, Inc. Diketopiperazine-based delivery systems
JPH0765267B2 (ja) 1990-08-22 1995-07-12 花王株式会社 柔軟仕上剤
US5206027A (en) 1990-09-13 1993-04-27 Fuji Photo Film Co., Ltd. Amphipathic compound and liposome comprising the same
AU633453B2 (en) 1990-10-09 1993-01-28 Cook Incorporated Percutaneous stent assembly
EP0491082B1 (de) 1990-12-19 1995-04-12 Peter Dr. Ing. Osypka Herzschrittmacherleitung mit einem inneren Kanal und mit einem Elektrodenkopf
US5116360A (en) 1990-12-27 1992-05-26 Corvita Corporation Mesh composite graft
US5405363A (en) 1991-03-15 1995-04-11 Angelon Corporation Implantable cardioverter defibrillator having a smaller displacement volume
US5330768A (en) 1991-07-05 1994-07-19 Massachusetts Institute Of Technology Controlled drug delivery using polymer/pluronic blends
US5545449A (en) 1991-10-02 1996-08-13 Weyerhaeuser Company Polyether-reinforced fiber-based materials
US5151105A (en) 1991-10-07 1992-09-29 Kwan Gett Clifford Collapsible vessel sleeve implant
JPH0753535B2 (ja) 1992-02-14 1995-06-07 株式会社カワタ 粉粒体の材料供給装置における弁装置
US5284491A (en) 1992-02-27 1994-02-08 Medtronic, Inc. Cardiac pacemaker with hysteresis behavior
US5352461A (en) 1992-03-11 1994-10-04 Pharmaceutical Discovery Corporation Self assembling diketopiperazine drug delivery system
SE9200951D0 (sv) 1992-03-27 1992-03-27 Kabi Pharmacia Ab Pharmaceutical composition containing a defined lipid system
WO1993020079A1 (en) 1992-04-06 1993-10-14 Biosite Diagnostics Incorporated Novel opiate derivatives and protein and polypeptide opiate derivative conjugates and labels
US6670178B1 (en) 1992-07-10 2003-12-30 Transkaryotic Therapies, Inc. In Vivo production and delivery of insulinotropin for gene therapy
CA2141685A1 (en) 1992-08-04 1994-02-17 Koji Naito Antiallergic composition
US5334761A (en) 1992-08-28 1994-08-02 Life Technologies, Inc. Cationic lipids
US5461223A (en) 1992-10-09 1995-10-24 Eastman Kodak Company Bar code detecting circuitry
US5300022A (en) 1992-11-12 1994-04-05 Martin Klapper Urinary catheter and bladder irrigation system
US5496362A (en) 1992-11-24 1996-03-05 Cardiac Pacemakers, Inc. Implantable conformal coil patch electrode with multiple conductive elements for cardioversion and defibrillation
US5552155A (en) 1992-12-04 1996-09-03 The Liposome Company, Inc. Fusogenic lipsomes and methods for making and using same
US5716395A (en) 1992-12-11 1998-02-10 W.L. Gore & Associates, Inc. Prosthetic vascular graft
AU6045094A (en) 1993-02-19 1994-09-14 Nippon Shinyaku Co. Ltd. Drug composition containing nucleic acid copolymer
US5395619A (en) 1993-03-03 1995-03-07 Liposome Technology, Inc. Lipid-polymer conjugates and liposomes
US5697953A (en) 1993-03-13 1997-12-16 Angeion Corporation Implantable cardioverter defibrillator having a smaller displacement volume
US5624976A (en) 1994-03-25 1997-04-29 Dentsply Gmbh Dental filling composition and method
EP0702516A4 (en) 1993-06-01 1998-04-22 Life Technologies Inc GENETIC IMMUNIZATION WITH CATIONIC LIPIDS
US5314430A (en) 1993-06-24 1994-05-24 Medtronic, Inc. Atrial defibrillator employing transvenous and subcutaneous electrodes and method of use
DE4325848A1 (de) 1993-07-31 1995-02-02 Basf Ag Verfahren zur Herstellung von N-(2-Hydroxyethyl)-piperazin
EP1062999A3 (en) 1993-10-06 2001-03-14 The Kansai Electric Power Co., Inc. Method for removing carbon dioxide from combustion exhaust gas
US5609624A (en) 1993-10-08 1997-03-11 Impra, Inc. Reinforced vascular graft and method of making same
SE9303481L (sv) 1993-10-22 1995-04-23 Berol Nobel Ab Hygienkomposition
AU1091095A (en) 1993-11-08 1995-05-29 Harrison M. Lazarus Intraluminal vascular graft and method
NZ277614A (en) 1993-11-24 1998-05-27 Megabios Corp Piperazine-containing amphiphiles and their use in liposomes for delivering genetic material intracellularly
US5595756A (en) 1993-12-22 1997-01-21 Inex Pharmaceuticals Corporation Liposomal compositions for enhanced retention of bioactive agents
US5464924A (en) 1994-01-07 1995-11-07 The Dow Chemical Company Flexible poly(amino ethers) for barrier packaging
US5844107A (en) 1994-03-23 1998-12-01 Case Western Reserve University Compacted nucleic acids and their delivery to cells
US6077835A (en) 1994-03-23 2000-06-20 Case Western Reserve University Delivery of compacted nucleic acid to cells
AU689479B2 (en) 1994-04-12 1998-04-02 Transave, Inc. Fusogenic liposomes and methods of making and using same
US5853717A (en) 1994-07-20 1998-12-29 Cytotherapeutics, Inc. Methods and compositions of growth control for cells encapsulated within bioartificial organs
US5820873A (en) 1994-09-30 1998-10-13 The University Of British Columbia Polyethylene glycol modified ceramide lipids and liposome uses thereof
US5885613A (en) 1994-09-30 1999-03-23 The University Of British Columbia Bilayer stabilizing components and their use in forming programmable fusogenic liposomes
US5641665A (en) 1994-11-28 1997-06-24 Vical Incorporated Plasmids suitable for IL-2 expression
US6071890A (en) 1994-12-09 2000-06-06 Genzyme Corporation Organ-specific targeting of cationic amphiphile/DNA complexes for gene therapy
US5965434A (en) 1994-12-29 1999-10-12 Wolff; Jon A. Amphipathic PH sensitive compounds and delivery systems for delivering biologically active compounds
US6485726B1 (en) 1995-01-17 2002-11-26 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Receptor specific transepithelial transport of therapeutics
US5830430A (en) 1995-02-21 1998-11-03 Imarx Pharmaceutical Corp. Cationic lipids and the use thereof
EP0822835A1 (en) 1995-04-17 1998-02-11 Imarx Pharmaceutical Corp. Hybrid magnetic resonance contrast agents
US5772694A (en) 1995-05-16 1998-06-30 Medical Carbon Research Institute L.L.C. Prosthetic heart valve with improved blood flow
US5783383A (en) 1995-05-23 1998-07-21 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Method of detecting cytomegalovirus (CMV)
US7422902B1 (en) 1995-06-07 2008-09-09 The University Of British Columbia Lipid-nucleic acid particles prepared via a hydrophobic lipid-nucleic acid complex intermediate and use for gene transfer
US5981501A (en) 1995-06-07 1999-11-09 Inex Pharmaceuticals Corp. Methods for encapsulating plasmids in lipid bilayers
CA2222328C (en) 1995-06-07 2012-01-10 Inex Pharmaceuticals Corporation Lipid-nucleic acid particles prepared via a hydrophobic lipid-nucleic acid complex intermediate and use for gene transfer
US5609629A (en) 1995-06-07 1997-03-11 Med Institute, Inc. Coated implantable medical device
US5705385A (en) 1995-06-07 1998-01-06 Inex Pharmaceuticals Corporation Lipid-nucleic acid particles prepared via a hydrophobic lipid-nucleic acid complex intermediate and use for gene transfer
US5607385A (en) 1995-08-17 1997-03-04 Medtronic, Inc. Device and algorithm for a combined cardiomyostimulator and a cardiac pacer-carioverter-defibrillator
US5744335A (en) 1995-09-19 1998-04-28 Mirus Corporation Process of transfecting a cell with a polynucleotide mixed with an amphipathic compound and a DNA-binding protein
FR2740978B1 (fr) 1995-11-10 1998-01-02 Ela Medical Sa Dispositif medical actif du type defibrillateur/cardioverteur implantable
US5874105A (en) 1996-01-31 1999-02-23 Collaborative Laboratories, Inc. Lipid vesicles formed with alkylammonium fatty acid salts
US6183774B1 (en) 1996-01-31 2001-02-06 Collaborative Laboratories, Inc. Stabilizing vitamin A derivatives by encapsulation in lipid vesicles formed with alkylammonium fatty acid salts
US5783566A (en) * 1996-05-10 1998-07-21 California Institute Of Technology Method for increasing or decreasing transfection efficiency
ATE273320T1 (de) 1996-04-11 2004-08-15 Univ British Columbia Fusogene liposomen
US5935936A (en) 1996-06-03 1999-08-10 Genzyme Corporation Compositions comprising cationic amphiphiles and co-lipids for intracellular delivery of therapeutic molecules
US5913848A (en) 1996-06-06 1999-06-22 Luther Medical Products, Inc. Hard tip over-the-needle catheter and method of manufacturing the same
US5677124A (en) 1996-07-03 1997-10-14 Ambion, Inc. Ribonuclease resistant viral RNA standards
US5736573A (en) 1996-07-31 1998-04-07 Galat; Alexander Lipid and water soluble derivatives of drugs
US7288266B2 (en) 1996-08-19 2007-10-30 United States Of America As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Liposome complexes for increased systemic delivery
PT941066E (pt) 1996-08-26 2004-03-31 Transgene Sa Complexos de lipido cationico - acido nucleico
US6458574B1 (en) 1996-09-12 2002-10-01 Transkaryotic Therapies, Inc. Treatment of a α-galactosidase a deficiency
ATE395904T1 (de) 1996-09-13 2008-06-15 Lipoxen Technologies Ltd Liposome
TW520297B (en) 1996-10-11 2003-02-11 Sequus Pharm Inc Fusogenic liposome composition and method
EP1003556B1 (en) 1996-11-04 2006-03-01 Qiagen GmbH Cationic reagents for transfection
US6887665B2 (en) 1996-11-14 2005-05-03 Affymetrix, Inc. Methods of array synthesis
US5985930A (en) 1996-11-21 1999-11-16 Pasinetti; Giulio M. Treatment of neurodegenerative conditions with nimesulide
US6204297B1 (en) 1996-11-26 2001-03-20 Rhodia Inc. Nonionic gemini surfactants
JPH10197978A (ja) 1997-01-09 1998-07-31 Mitsubishi Paper Mills Ltd ハロゲン化銀写真感光材料
EP0853123A1 (de) 1997-01-10 1998-07-15 Roche Diagnostics GmbH Reinigung von DNA durch Cross-Flow-Filtration
FR2760193B1 (fr) 1997-02-28 1999-05-28 Transgene Sa Lipides et complexes de lipides cationiques et de substances actives, notamment pour la transfection de cellules
US5837283A (en) 1997-03-12 1998-11-17 The Regents Of The University Of California Cationic lipid compositions targeting angiogenic endothelial cells
ES2355588T3 (es) * 1997-03-14 2011-03-29 The Children's Hospital Of Philadelphia Composiciones para uso en terapia génica para el tratamiento de hemofilia.
US5945326A (en) 1997-03-20 1999-08-31 New England Biolabs, Inc. Method for cloning and producing the Spel restriction endonuclease
US6060082A (en) 1997-04-18 2000-05-09 Massachusetts Institute Of Technology Polymerized liposomes targeted to M cells and useful for oral or mucosal drug delivery
WO1998051278A2 (en) 1997-05-14 1998-11-19 Inex Pharmaceuticals Corporation High efficiency encapsulation of charged therapeutic agents in lipid vesicles
US20030104044A1 (en) 1997-05-14 2003-06-05 Semple Sean C. Compositions for stimulating cytokine secretion and inducing an immune response
US6835395B1 (en) 1997-05-14 2004-12-28 The University Of British Columbia Composition containing small multilamellar oligodeoxynucleotide-containing lipid vesicles
JPH115786A (ja) 1997-06-13 1999-01-12 Pola Chem Ind Inc 新規アミノヒドロキシプロピルピペラジン誘導体
US6067471A (en) 1998-08-07 2000-05-23 Cardiac Pacemakers, Inc. Atrial and ventricular implantable cardioverter-defibrillator and lead system
US6165484A (en) 1997-08-26 2000-12-26 Wake Forest University EDTA and other chelators with or without antifungal antimicrobial agents for the prevention and treatment of fungal infections
US6060308A (en) 1997-09-04 2000-05-09 Connaught Laboratories Limited RNA respiratory syncytial virus vaccines
JPH1180142A (ja) 1997-09-05 1999-03-26 Pola Chem Ind Inc ジフェニルアルキル化合物の製造法
WO1999014346A2 (en) 1997-09-19 1999-03-25 Sequitur, Inc. SENSE mRNA THERAPY
DE69837274T2 (de) 1997-10-10 2007-11-08 Inex Pharmaceuticals Corp., Burnaby Verfahren zur verkapselung von nukleinsäuren in lipiddoppelschichten
US6734171B1 (en) 1997-10-10 2004-05-11 Inex Pharmaceuticals Corp. Methods for encapsulating nucleic acids in lipid bilayers
US6066626A (en) 1997-10-29 2000-05-23 Genzyme Corporation Compositions and method for treating lysosomal storage disease
US6165763A (en) 1997-10-30 2000-12-26 Smithkline Beecham Corporation Ornithine carbamoyltransferase
US6096075A (en) 1998-01-22 2000-08-01 Medical Carbon Research Institute, Llc Prosthetic heart valve
US6617171B2 (en) 1998-02-27 2003-09-09 The General Hospital Corporation Methods for diagnosing and treating autoimmune disease
US6271209B1 (en) 1998-04-03 2001-08-07 Valentis, Inc. Cationic lipid formulation delivering nucleic acid to peritoneal tumors
US6176877B1 (en) 1998-04-20 2001-01-23 St. Jude Medical, Inc. Two piece prosthetic heart valve
DE19822602A1 (de) 1998-05-20 1999-11-25 Goldschmidt Ag Th Verfahren zur Herstellung von Polyaminosäureestern durch Veresterung von sauren Polyaminosäuren oder Umesterung von Polyaminosäureestern
NO313244B1 (no) 1998-07-08 2002-09-02 Crew Dev Corp Fremgangsmåte for isolering og produksjon av magnesitt eller magnesiumklorid
US6055454A (en) 1998-07-27 2000-04-25 Cardiac Pacemakers, Inc. Cardiac pacemaker with automatic response optimization of a physiologic sensor based on a second sensor
WO2000006120A1 (en) 1998-07-31 2000-02-10 Korea Institute Of Science And Technology Lipid emulsion and solid lipid nanoparticle as a gene or drug carrier
CA2340652C (en) 1998-08-20 2013-09-24 Cook Incorporated Coated implantable medical device comprising paclitaxel
US6210892B1 (en) 1998-10-07 2001-04-03 Isis Pharmaceuticals, Inc. Alteration of cellular behavior by antisense modulation of mRNA processing
US6656498B1 (en) 1998-11-25 2003-12-02 Vanderbilt University Cationic liposomes for gene transfer
US6248725B1 (en) 1999-02-23 2001-06-19 Amgen, Inc. Combinations and methods for promoting in vivo liver cell proliferation and enhancing in vivo liver-directed gene transduction
CA2371732A1 (en) 1999-04-02 2000-10-12 Mosaic Technologies Methods of detecting microorganism using immobilized probes
US6379698B1 (en) 1999-04-06 2002-04-30 Isis Pharmaceuticals, Inc. Fusogenic lipids and vesicles
US8647864B2 (en) 1999-04-14 2014-02-11 Novartis Ag Compositions and methods for generating an immune response utilizing alphavirus-based vector systems
EP1173600A2 (en) 1999-04-20 2002-01-23 The University Of British Columbia Cationic peg-lipids and methods of use
KR100642955B1 (ko) 1999-04-23 2006-11-10 알자 코포레이션 방출성 결합 및 그를 함유하는 조성물
US6169923B1 (en) 1999-04-23 2001-01-02 Pacesetter, Inc. Implantable cardioverter-defibrillator with automatic arrhythmia detection criteria adjustment
KR20020018197A (ko) 1999-05-19 2002-03-07 추후보정 Ｆｃ 융합 단백질로서의 인터페론-알파 단백질의 발현 및분비
US6696424B1 (en) 1999-05-28 2004-02-24 Vical Incorporated Cytofectin dimers and methods of use thereof
US6346382B1 (en) 1999-06-01 2002-02-12 Vanderbilt University Human carbamyl phosphate synthetase I polymorphism and diagnostic methods related thereto
US7094423B1 (en) 1999-07-15 2006-08-22 Inex Pharmaceuticals Corp. Methods for preparation of lipid-encapsulated therapeutic agents
AU6105300A (en) 1999-07-16 2001-02-05 Purdue Research Foundation Vinyl ether lipids with cleavable hydrophilic headgroups
PT1200578E (pt) 1999-07-23 2004-08-31 Genentech Inc Metodo para purificacao de adn de plasmideo sem solventes organicos e sem arnase utilizando filtracao de fluxo tangencial
US6358278B1 (en) 1999-09-24 2002-03-19 St. Jude Medical, Inc. Heart valve prosthesis with rotatable cuff
WO2001023002A1 (en) 1999-09-30 2001-04-05 National Jewish Medical And Research Center Method for inhibition of pathogenic microorganisms
US6371983B1 (en) 1999-10-04 2002-04-16 Ernest Lane Bioprosthetic heart valve
AU7868400A (en) 1999-10-08 2001-04-23 Alza Corporation Neutral-cationic lipid for nucleic acid and drug delivery
US7060291B1 (en) 1999-11-24 2006-06-13 Transave, Inc. Modular targeted liposomal delivery system
CN101041079A (zh) 1999-12-30 2007-09-26 诺瓦提斯公司 用于基因治疗的新的胶体合成载体
WO2001060414A2 (en) 2000-02-17 2001-08-23 Genzyme Corporation Genetic modification of the lung as a portal for gene delivery
US6370434B1 (en) 2000-02-28 2002-04-09 Cardiac Pacemakers, Inc. Cardiac lead and method for lead implantation
US6565960B2 (en) 2000-06-01 2003-05-20 Shriners Hospital Of Children Polymer composite compositions
WO2002000870A2 (en) 2000-06-26 2002-01-03 Christian Plank Method for transfecting cells using a magnetic field
IL138474A0 (en) 2000-09-14 2001-10-31 Epox Ltd Highly branched water-soluble polyamine oligomers, process for their preparation and applications thereof
US7427394B2 (en) 2000-10-10 2008-09-23 Massachusetts Institute Of Technology Biodegradable poly(β-amino esters) and uses thereof
USRE43612E1 (en) 2000-10-10 2012-08-28 Massachusetts Institute Of Technology Biodegradable poly(β-amino esters) and uses thereof
US6998115B2 (en) 2000-10-10 2006-02-14 Massachusetts Institute Of Technology Biodegradable poly(β-amino esters) and uses thereof
JP2004511572A (ja) 2000-10-25 2004-04-15 ザ　ユニバーシティ　オブ　ブリティッシュ　コロンビア 標的化送達のための脂質製剤
GB0028361D0 (en) 2000-11-21 2001-01-03 Glaxo Group Ltd Method of separating extra chromosomal dna from other cellular components
US20020094528A1 (en) 2000-11-29 2002-07-18 Salafsky Joshua S. Method and apparatus using a surface-selective nonlinear optical technique for detection of probe-target interations
JP2002167368A (ja) 2000-12-01 2002-06-11 Nitto Denko Corp アルキル置換デンドリマーおよびその製造法
US20050004058A1 (en) 2000-12-07 2005-01-06 Patrick Benoit Sequences upstream of the carp gene, vectors containing them and uses thereof
DE10109897A1 (de) 2001-02-21 2002-11-07 Novosom Ag Fakultativ kationische Liposomen und Verwendung dieser
US20020192721A1 (en) 2001-03-28 2002-12-19 Engeneos, Inc. Modular molecular clasps and uses thereof
KR100823815B1 (ko) 2001-04-23 2008-04-21 신에쓰 가가꾸 고교 가부시끼가이샤 에스테르 구조를 갖는 신규 3급 아민 화합물 및 그 제조방법
US6585410B1 (en) 2001-05-03 2003-07-01 The United States Of America As Represented By The Administrator Of The National Aeronautics And Space Administration Radiant temperature nulling radiometer
US20030077251A1 (en) 2001-05-23 2003-04-24 Nicolas Escriou Replicons derived from positive strand RNA virus genomes useful for the production of heterologous proteins
EP1903054A3 (de) 2001-06-05 2008-07-23 CureVac GmbH Stabilisierte mRNA mit erhöhtem G/C-Gehalt und optimierter Codon Usage für die Gentherapie
CA2462144C (en) 2001-09-28 2016-09-20 Max-Planck-Gesellschaft Zur Forderung Der Wissenschaften E.V. Micro-rna molecules
WO2003040288A2 (de) 2001-11-09 2003-05-15 Bayer Healthcare Ag Isotopencodierte affinitätsmarker 3
DE10162480A1 (de) 2001-12-19 2003-08-07 Ingmar Hoerr Die Applikation von mRNA für den Einsatz als Therapeutikum gegen Tumorerkrankungen
DE10207178A1 (de) 2002-02-19 2003-09-04 Novosom Ag Komponenten für die Herstellung amphoterer Liposomen
DE10214983A1 (de) * 2002-04-04 2004-04-08 TransMIT Gesellschaft für Technologietransfer mbH Vernebelbare Liposomen und ihre Verwendung zur pulmonalen Applikation von Wirkstoffen
US20030215395A1 (en) 2002-05-14 2003-11-20 Lei Yu Controllably degradable polymeric biomolecule or drug carrier and method of synthesizing said carrier
US7601367B2 (en) 2002-05-28 2009-10-13 Mirus Bio Llc Compositions and processes using siRNA, amphipathic compounds and polycations
EP1519714B1 (en) 2002-06-28 2010-10-20 Protiva Biotherapeutics Inc. Method and apparatus for producing liposomes
DE10229872A1 (de) 2002-07-03 2004-01-29 Curevac Gmbh Immunstimulation durch chemisch modifizierte RNA
US20040028804A1 (en) 2002-08-07 2004-02-12 Anderson Daniel G. Production of polymeric microarrays
CA2495535A1 (en) 2002-08-22 2004-03-04 Celltran Limited Cell culture surface
MXPA05004762A (es) 2002-11-04 2005-08-03 Ge Bayer Silicones Gmbh & Co Copolimeros de poliamino y/o poliamonio polisiloxano i lineales.
AU2003281978A1 (en) 2002-11-22 2004-06-18 Boehringer Ingelheim International Gmbh 2,5-diketopiperazines for the treatment of obesity
EP1581201A4 (en) 2002-12-23 2011-03-30 Vical Inc METHOD FOR PRODUCING STERILIC DRUGS ON POLYNUCLEOTIDE BASIS
AU2003301148A1 (en) 2002-12-23 2004-07-22 Vical Incorporated Codon-optimized polynucleotide-based vaccines against human cytomegalovirus infection
CA2508279A1 (en) 2002-12-23 2004-07-22 Vical Incorporated Method for freeze-drying nucleic acid/block copolymer/cationic surfactant complexes
US7169892B2 (en) 2003-01-10 2007-01-30 Astellas Pharma Inc. Lipid-peptide-polymer conjugates for long blood circulation and tumor specific drug delivery systems
US8054291B2 (en) 2003-01-20 2011-11-08 Asahi Kasei Emd Corporation Pointing device
WO2004078940A2 (en) 2003-03-05 2004-09-16 Senesco Technologies, Inc. USE OF ANTISENSE OLIGONUCLEOTIDES OR siRNA TO SUPPRESS EXPRESSION OF eIF-5A1
US20040224912A1 (en) 2003-05-07 2004-11-11 Isis Pharmaceuticals Inc. Modulation of PAI-1 mRNA-binding protein expression
US7619017B2 (en) 2003-05-19 2009-11-17 Wacker Chemical Corporation Polymer emulsions resistant to biodeterioration
EP1644479A4 (en) 2003-06-16 2008-04-23 Mark W Grinstaff FUNCTIONAL SYNTHETIC MOLECULES AND MACROMOLECULES FOR GENERAL FEEDING
US20070003607A1 (en) 2003-09-02 2007-01-04 Vibhudutta Awasthi Neutral liposome-encapsulated compounds and methods of making and using thereof
EP1675943A4 (en) 2003-09-15 2007-12-05 Massachusetts Inst Technology SYNTHESIS OF BIOMATERIALS ARRANGED IN AN ARRAY IN THE NANOLITE ASSEMBLY AND SCREENING THEREOF
CN1882693B (zh) 2003-09-15 2012-08-15 普洛体维生物治疗公司 聚乙二醇修饰的脂质化合物及其应用
US20050069590A1 (en) 2003-09-30 2005-03-31 Buehler Gail K. Stable suspensions for medicinal dosages
EA010056B1 (ru) 2003-10-10 2008-06-30 Паудерджект Вэксинс, Инк. Конструкции нуклеиновых кислот
WO2005037226A2 (en) 2003-10-17 2005-04-28 Georgia Tech Research Corporation Genetically engineered enteroendocrine cells for treating glucose-related metabolic disorders
KR20060111471A (ko) 2003-11-10 2006-10-27 니폰 가야꾸 가부시끼가이샤 디이모늄염 화합물 및 그의 용도
CN1906308B (zh) * 2003-12-19 2011-09-14 诺华疫苗和诊断公司 小干扰rna的细胞转染制剂、相关组合物以及制备和使用方法
US7022214B2 (en) 2004-01-21 2006-04-04 Bio-Rad Laboratories, Inc. Carrier ampholytes of high pH range
US7556684B2 (en) 2004-02-26 2009-07-07 Construction Research & Technology Gmbh Amine containing strength improvement admixture
US20060228404A1 (en) 2004-03-04 2006-10-12 Anderson Daniel G Compositions and methods for treatment of hypertrophic tissues
US20060024670A1 (en) 2004-05-18 2006-02-02 Luke Catherine J Influenza virus vaccine composition and methods of use
DE602005003673T2 (de) 2004-05-19 2008-04-10 Clariant Finance (Bvi) Ltd., Road Town Monoazofarbstoffe
ES2647491T3 (es) 2004-05-21 2017-12-21 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. Vectores del alfavirus para las vacunas del virus de la gripe
WO2005120152A2 (en) 2004-06-07 2005-12-22 Protiva Biotherapeutics, Inc. Cationic lipids and methods of use
ATE536418T1 (de) 2004-06-07 2011-12-15 Protiva Biotherapeutics Inc Lipidverkapselte interferenz-rna
US7670595B2 (en) 2004-06-28 2010-03-02 Merck Patent Gmbh Fc-interferon-beta fusion proteins
GB0418172D0 (en) 2004-08-13 2004-09-15 Ic Vec Ltd Vector
DE102004042546A1 (de) 2004-09-02 2006-03-09 Curevac Gmbh Kombinationstherapie zur Immunstimulation
DE102004043342A1 (de) 2004-09-08 2006-03-09 Bayer Materialscience Ag Blockierte Polyurethan-Prepolymere als Klebstoffe
CA2586708A1 (en) 2004-11-05 2006-05-11 Novosom Ag Improvements in or relating to pharmaceutical compositions comprising an oligonucleotide as an active agent
WO2006060723A2 (en) 2004-12-03 2006-06-08 Vical Incorporated Methods for producing block copolymer/amphiphilic particles
WO2006074546A1 (en) 2005-01-13 2006-07-20 Protiva Biotherapeutics, Inc. Lipid encapsulated interfering rna
GB0502482D0 (en) 2005-02-07 2005-03-16 Glaxo Group Ltd Novel compounds
WO2007086883A2 (en) 2005-02-14 2007-08-02 Sirna Therapeutics, Inc. Cationic lipids and formulated molecular compositions containing them
WO2006105043A2 (en) 2005-03-28 2006-10-05 Dendritic Nanotechnologies, Inc. Janus dendrimers and dendrons
EP2476756A1 (en) 2005-06-15 2012-07-18 Massachusetts Institute of Technology Amine-containing lipids and uses thereof
HUE043492T2 (hu) * 2005-08-23 2019-08-28 Univ Pennsylvania Módosított nukleozidokat tartalmazó RNS és eljárások az alkalmazására
US9012219B2 (en) 2005-08-23 2015-04-21 The Trustees Of The University Of Pennsylvania RNA preparations comprising purified modified RNA for reprogramming cells
WO2007031091A2 (en) 2005-09-15 2007-03-22 Santaris Pharma A/S Rna antagonist compounds for the modulation of p21 ras expression
CA2626253A1 (en) 2005-10-18 2007-04-26 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. Mucosal and systemic immunizations with alphavirus replicon particles
WO2007051303A1 (en) 2005-11-02 2007-05-10 Protiva Biotherapeutics, Inc. MODIFIED siRNA MOLECULES AND USES THEREOF
US9149543B2 (en) 2005-12-15 2015-10-06 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Methods and models for rapid, widespread delivery of genetic material to the CNS using non-viral, cationic lipid-mediated vectors
US7238791B1 (en) 2005-12-16 2007-07-03 Roche Diagnostics Operations, Inc. 6-monoacetylmorphine derivatives useful in immunoassay
US20090221684A1 (en) 2005-12-22 2009-09-03 Trustees Of Boston University Molecules for Gene Delivery and Gene Therapy, and Methods of Use Thereof
CN100569877C (zh) 2005-12-30 2009-12-16 财团法人工业技术研究院 含多uv交联反应基的分枝状结构化合物及其应用
WO2007120863A2 (en) 2006-04-14 2007-10-25 Epicentre Technologies Kits and methods for generating 5' capped rna
US9085778B2 (en) 2006-05-03 2015-07-21 VL27, Inc. Exosome transfer of nucleic acids to cells
US20070275923A1 (en) 2006-05-25 2007-11-29 Nastech Pharmaceutical Company Inc. CATIONIC PEPTIDES FOR siRNA INTRACELLULAR DELIVERY
CA2654302A1 (en) 2006-06-05 2007-12-13 Massachusetts Institute Of Technology Crosslinked, degradable polymers and uses thereof
US20090186805A1 (en) 2006-07-06 2009-07-23 Aaron Thomas Tabor Compositions and Methods for Genetic Modification of Cells Having Cosmetic Function to Enhance Cosmetic Appearance
FR2904144A1 (fr) 2006-07-19 2008-01-25 St Microelectronics Rousset Procede de fabrication d'un wafer de semi-conducteur comprenant un filtre optique integre
ES2293834B1 (es) 2006-07-20 2009-02-16 Consejo Superior Investig. Cientificas Compuesto con actividad inhibidora de las interacciones ubc13-uev, composiciones farmaceuticas que lo comprenden y sus aplicaciones terapeuticas.
WO2008011561A2 (en) 2006-07-21 2008-01-24 Massachusetts Institute Of Technology End-modified poly(beta-amino esters) and uses thereof
WO2008042973A2 (en) 2006-10-03 2008-04-10 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipid containing formulations
CA2665620A1 (en) 2006-10-12 2008-04-17 Copernicus Therapeutics Inc. Codon optimized cftr
DE102006051516A1 (de) 2006-10-31 2008-05-08 Curevac Gmbh (Basen-)modifizierte RNA zur Expressionssteigerung eines Proteins
EP1920765A1 (en) 2006-11-07 2008-05-14 Medigene AG Liposome preparation by single-pass process
WO2008140615A2 (en) 2006-12-21 2008-11-20 Novozymes, Inc. Modified messenger rna stabilizing sequences for expressing genes in bacterial cells
DE102007001370A1 (de) 2007-01-09 2008-07-10 Curevac Gmbh RNA-kodierte Antikörper
US7700734B2 (en) * 2007-01-09 2010-04-20 Shu-Wha Lin Recombinant human factor IX and use thereof
US8859229B2 (en) 2007-02-02 2014-10-14 Yale University Transient transfection with RNA
WO2008113364A2 (en) 2007-03-20 2008-09-25 Recepticon Aps Amino derivatives to prevent nephrotoxicity and cancer
JP5186126B2 (ja) 2007-03-29 2013-04-17 公益財団法人地球環境産業技術研究機構 新規トリアジン誘導体ならびにその製法およびそのガス分離膜としての用途
WO2008131114A2 (en) 2007-04-18 2008-10-30 Cornerstone Pharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical formulations containing lipoic acid derivatives
WO2008137470A1 (en) 2007-05-01 2008-11-13 Pgr-Solutions Multi-chain lipophilic polyamines
US20090163705A1 (en) 2007-05-21 2009-06-25 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Cationic lipids
AU2008290545A1 (en) 2007-08-23 2009-02-26 Novartis Ag Methods for detecting oligonucleotides
WO2009030254A1 (en) 2007-09-04 2009-03-12 Curevac Gmbh Complexes of rna and cationic peptides for transfection and for immunostimulation
NZ584048A (en) 2007-10-02 2012-08-31 Marina Biotech Inc Lipopeptides for delivery of nucleic acids
WO2009046739A1 (en) 2007-10-09 2009-04-16 Curevac Gmbh Composition for treating prostate cancer (pca)
EP2500427B1 (en) 2007-11-22 2014-07-30 Japan Science and Technology Agency Translation regulation system in cell or artifical cell model by using low-molecular-weight RNA
CN102006890A (zh) 2007-12-04 2011-04-06 阿尔尼拉姆医药品有限公司 靶向脂质
CA2710983A1 (en) 2007-12-27 2009-10-01 The Ohio State University Research Foundation Lipid nanoparticle compositions and methods of making and using the same
JP5697988B2 (ja) 2007-12-27 2015-04-08 プロチバ バイオセラピューティクス インコーポレイティッド 干渉ｒｎａを使用したポロ様キナーゼ発現のサイレンシング方法
JP5749494B2 (ja) 2008-01-02 2015-07-15 テクミラ ファーマシューティカルズ コーポレイション 核酸の送達のための改善された組成物および方法
US20110097720A1 (en) 2008-01-02 2011-04-28 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Screening method for selected amino lipid-containing compositions
WO2009098277A1 (en) 2008-02-08 2009-08-13 Intercell Ag Flaviviridae mutants comprising a deletion in the capsid protein for use as vaccines
EP3604533A1 (en) 2008-04-11 2020-02-05 Arbutus Biopharma Corporation Site-specific delivery of nucleic acids by combining targeting ligands with endosomolytic components
NZ588583A (en) 2008-04-15 2012-08-31 Protiva Biotherapeutics Inc Novel lipid formulations for nucleic acid delivery
WO2009127230A1 (en) 2008-04-16 2009-10-22 Curevac Gmbh MODIFIED (m)RNA FOR SUPPRESSING OR AVOIDING AN IMMUNOSTIMULATORY RESPONSE AND IMMUNOSUPPRESSIVE COMPOSITION
US20090263407A1 (en) 2008-04-16 2009-10-22 Abbott Laboratories Cationic Lipids and Uses Thereof
US8222221B2 (en) 2008-06-04 2012-07-17 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Modulation of gene expression through endogenous small RNA targeting of gene promoters
CA2730737A1 (en) 2008-07-15 2010-01-21 Novartis Ag Immunogenic amphipathic peptide compositions
WO2010009065A2 (en) 2008-07-15 2010-01-21 Novartis Ag Amphipathic peptide compositions
JP5024216B2 (ja) 2008-07-23 2012-09-12 トヨタ自動車株式会社 内燃機関の点火時期制御装置及び点火時期制御方法
US20100035249A1 (en) 2008-08-05 2010-02-11 Kabushiki Kaisha Dnaform Rna sequencing and analysis using solid support
JP5492207B2 (ja) 2008-08-27 2014-05-14 ライフ テクノロジーズ コーポレーション 生物学的サンプルの処理装置および処理方法
WO2010037408A1 (en) 2008-09-30 2010-04-08 Curevac Gmbh Composition comprising a complexed (m)rna and a naked mrna for providing or enhancing an immunostimulatory response in a mammal and uses thereof
JP5777519B2 (ja) 2008-10-09 2015-09-09 テクミラ ファーマシューティカルズ コーポレイション 改良されたアミノ脂質および核酸の送達方法
EP2349210B1 (en) 2008-10-16 2015-03-18 Marina Biotech, Inc. Processes and compositions for liposomal and efficient delivery of gene silencing therapeutics
US9080211B2 (en) 2008-10-24 2015-07-14 Epicentre Technologies Corporation Transposon end compositions and methods for modifying nucleic acids
US20120009222A1 (en) 2008-10-27 2012-01-12 Massachusetts Institute Of Technology Modulation of the immune response
MX2011004859A (es) * 2008-11-07 2011-08-03 Massachusetts Inst Technology Lipidoides de aminoalcohol y usos de los mismos.
EP4241767B1 (en) 2008-11-10 2024-10-23 Arbutus Biopharma Corporation Novel lipids and compositions for the delivery of therapeutics
EP2350296A4 (en) 2008-11-17 2013-04-03 Enzon Pharmaceuticals Inc BRANCHED CATIONIC LIPIDS FOR THE SYSTEM FOR INTRODUCING NUCLEIC ACIDS
WO2010083615A1 (en) 2009-01-26 2010-07-29 Protiva Biotherapeutics, Inc. Compositions and methods for silencing apolipoprotein c-iii expression
US20120101148A1 (en) 2009-01-29 2012-04-26 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. lipid formulation
US20100222489A1 (en) 2009-02-27 2010-09-02 Jiang Dayue D Copolymer composition, membrane article, and methods thereof
AU2010223967B2 (en) 2009-03-12 2015-07-30 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipid formulated compositions and methods for inhibiting expression of Eg5 and VEGF genes
WO2010114789A1 (en) 2009-04-02 2010-10-07 The Siemon Company Telecommunications patch panel
EP2419144B1 (en) 2009-04-17 2019-08-07 Oxford University Innovation Limited Composition for delivery of genetic material
US9220682B2 (en) 2009-04-22 2015-12-29 Emory University Nanocarrier therapy for treating invasive tumors
SG176553A1 (en) 2009-05-05 2012-01-30 Muthiah Manoharan Lipid compositions
TR201811076T4 (tr) 2009-06-10 2018-08-27 Arbutus Biopharma Corp Geliştirilmiş lipit formulasyonu.
US9051567B2 (en) 2009-06-15 2015-06-09 Tekmira Pharmaceuticals Corporation Methods for increasing efficacy of lipid formulated siRNA
AU2010260148A1 (en) * 2009-06-15 2012-02-02 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipid formulated dsRNA targeting the PCSK9 gene
US9018187B2 (en) 2009-07-01 2015-04-28 Protiva Biotherapeutics, Inc. Cationic lipids and methods for the delivery of therapeutic agents
US8569256B2 (en) 2009-07-01 2013-10-29 Protiva Biotherapeutics, Inc. Cationic lipids and methods for the delivery of therapeutic agents
US8236943B2 (en) 2009-07-01 2012-08-07 Protiva Biotherapeutics, Inc. Compositions and methods for silencing apolipoprotein B
WO2011001780A1 (ja) 2009-07-02 2011-01-06 コニカミノルタホールディングス株式会社 特定分散剤を含有する外水相を利用する二段階乳化法によるリポソームの製造方法、ならびに当該リポソームの製造方法を用いるリポソーム分散液またはその乾燥粉末の製造方法およびそれにより製造されるリポソーム分散液またはその乾燥粉末
EP2451475A2 (en) 2009-07-06 2012-05-16 Novartis AG Self replicating rna molecules and uses thereof
TW201116294A (en) 2009-07-15 2011-05-16 Novartis Ag RSV F protein compositions and methods for making same
WO2011011447A1 (en) 2009-07-20 2011-01-27 Protiva Biotherapeutics, Inc. Compositions and methods for silencing ebola virus gene expression
IN2012DN01378A (sr) 2009-07-30 2015-06-05 Salvat Lab Sa
EP3165234B1 (de) 2009-07-31 2019-04-03 ethris GmbH Rna mit einer kombination aus unmodifizierten und modifizierten nucleotiden zur proteinexpression
DE102009043342A1 (de) 2009-09-29 2011-03-31 Bayer Technology Services Gmbh Stoffe für selbstorganisierte Träger zur kontrollierten Freisetzung eines Wirkstoffs
JP5741442B2 (ja) 2009-11-20 2015-07-01 コニカミノルタ株式会社 リポソームの製造方法
PL3338765T3 (pl) 2009-12-01 2019-06-28 Translate Bio, Inc. Pochodna steroidowa dla dostarczania mrna w ludzkich chorobach genetycznych
KR101878502B1 (ko) 2009-12-07 2018-07-13 더 트러스티스 오브 더 유니버시티 오브 펜실바니아 세포 리프로그래밍을 위한 정제된 변형 ｒｎａ를 포함하는 ｒｎａ 제제
WO2011069529A1 (en) 2009-12-09 2011-06-16 Curevac Gmbh Mannose-containing solution for lyophilization, transfection and/or injection of nucleic acids
EP3494963A1 (en) 2009-12-18 2019-06-12 The University of British Columbia Methods and compositions for delivery of nucleic acids
EP2338520A1 (de) 2009-12-21 2011-06-29 Ludwig Maximilians Universität Konjugat mit Zielfindungsligand und dessen Verwendung
AU2010334911A1 (en) 2009-12-23 2012-07-12 Novartis Ag Lipids, lipid compositions, and methods of using them
AU2014259532B2 (en) 2009-12-23 2016-09-08 Novartis Ag Lipids, lipid compositions, and methods of using them
US20130123338A1 (en) 2010-05-12 2013-05-16 Protiva Biotherapeutics, Inc. Novel cationic lipids and methods of use thereof
KR101198715B1 (ko) * 2010-05-14 2012-11-13 한국생명공학연구원 핵산 및 친수성 음이온 화합물의 고효율 포획을 위한 비대칭 리포솜 및 이의 제조방법
CA2800401C (en) 2010-06-03 2020-09-15 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Biodegradable lipids for the delivery of active agents
CN101863544B (zh) 2010-06-29 2011-09-28 湖南科技大学 一种氰尿酸基重金属螯合絮凝剂及其制备方法
WO2012000104A1 (en) 2010-06-30 2012-01-05 Protiva Biotherapeutics, Inc. Non-liposomal systems for nucleic acid delivery
SI2591114T1 (sl) 2010-07-06 2016-10-28 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Imunizacija velikih sesalcev z majhnimi odmerki RNA
US9770463B2 (en) 2010-07-06 2017-09-26 Glaxosmithkline Biologicals Sa Delivery of RNA to different cell types
US11291635B2 (en) 2010-07-06 2022-04-05 Glaxosmithkline Biological Sa Virion-like delivery particles for self-replicating RNA molecules
ES2646669T3 (es) 2010-07-06 2017-12-14 Glaxosmithkline Biologicals Sa Procedimientos de aumento de una respuesta inmunitaria mediante el suministro de ARN
AU2011276234B2 (en) 2010-07-06 2016-02-25 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Liposomes with lipids having an advantageous pKa- value for RNA delivery
EP3449910A1 (en) 2010-07-06 2019-03-06 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Cationic oil-in-water emulsions
US20130323269A1 (en) 2010-07-30 2013-12-05 Muthiah Manoharan Methods and compositions for delivery of active agents
CA2807552A1 (en) 2010-08-06 2012-02-09 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
WO2012019630A1 (en) 2010-08-13 2012-02-16 Curevac Gmbh Nucleic acid comprising or coding for a histone stem-loop and a poly(a) sequence or a polyadenylation signal for increasing the expression of an encoded protein
US9193827B2 (en) 2010-08-26 2015-11-24 Massachusetts Institute Of Technology Poly(beta-amino alcohols), their preparation, and uses thereof
TR201908635T4 (tr) 2010-08-31 2019-07-22 Glaxosmithkline Biologicals Sa Protein kodlayıcı rna?nın lipozomal verilmesine uygun lipitler.
BR112013004879A2 (pt) 2010-08-31 2018-04-24 Novartis Ag lipossomas pequenos para entrega de rna que codifica imunogénio
WO2012031043A1 (en) 2010-08-31 2012-03-08 Novartis Ag Pegylated liposomes for delivery of immunogen-encoding rna
ES3005233T3 (en) 2010-10-01 2025-03-14 Modernatx Inc Modified nucleosides, nucleotides, and nucleic acids, and uses thereof
US8853377B2 (en) * 2010-11-30 2014-10-07 Shire Human Genetic Therapies, Inc. mRNA for use in treatment of human genetic diseases
WO2012116715A1 (en) 2011-03-02 2012-09-07 Curevac Gmbh Vaccination in newborns and infants
WO2012113413A1 (en) 2011-02-21 2012-08-30 Curevac Gmbh Vaccine composition comprising complexed immunostimulatory nucleic acids and antigens packaged with disulfide-linked polyethyleneglycol/peptide conjugates
WO2012116714A1 (en) 2011-03-02 2012-09-07 Curevac Gmbh Vaccination in elderly patients
US9238716B2 (en) 2011-03-28 2016-01-19 Massachusetts Institute Of Technology Conjugated lipomers and uses thereof
WO2012133737A1 (ja) 2011-03-31 2012-10-04 公益財団法人地球環境産業技術研究機構 架橋性アミン化合物、該化合物を用いた高分子膜及びその製造方法
JP2014511687A (ja) 2011-03-31 2014-05-19 モデルナ セラピューティクス インコーポレイテッド 工学操作された核酸の送達および製剤
CN103687957A (zh) 2011-05-17 2014-03-26 现代治疗公司 工程化核酸及其用于非人类脊椎动物的方法
EP2532649B1 (en) 2011-06-07 2015-04-08 Incella GmbH Amino lipids, their synthesis and uses thereof
PT2717893T (pt) * 2011-06-08 2019-08-20 Translate Bio Inc Composições de nanopartículas lipídicas e métodos para transferência de arnm
DK3336082T3 (da) 2011-06-08 2020-04-27 Translate Bio Inc Spaltelige lipider
US9862926B2 (en) 2011-06-27 2018-01-09 Cellscript, Llc. Inhibition of innate immune response
CA2841047A1 (en) 2011-07-06 2013-01-10 Novartis Ag Immunogenic compositions and uses thereof
EP4014966A1 (en) 2011-07-06 2022-06-22 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Liposomes having useful n:p ratio for delivery of rna molecules
EP3854413A1 (en) 2011-07-06 2021-07-28 GlaxoSmithKline Biologicals SA Immunogenic combination compositions and uses thereof
AU2012280901B2 (en) 2011-07-06 2016-11-10 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Oil-in-water emulsions that contain nucleic acids
RU2649133C2 (ru) 2011-07-06 2018-03-29 Новартис Аг Катионные эмульсии масло-в-воде
SG11201400250UA (en) 2011-08-31 2014-03-28 Novartis Ag Pegylated liposomes for delivery of immunogen-encoding rna
WO2013039857A1 (en) 2011-09-12 2013-03-21 modeRNA Therapeutics Engineered nucleic acids and methods of use thereof
US9464124B2 (en) 2011-09-12 2016-10-11 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
WO2013039861A2 (en) 2011-09-12 2013-03-21 modeRNA Therapeutics Engineered nucleic acids and methods of use thereof
EP2763701B1 (en) 2011-10-03 2018-12-19 Moderna Therapeutics, Inc. Modified nucleosides, nucleotides, and nucleic acids, and uses thereof
JP2014530602A (ja) 2011-10-05 2014-11-20 プロティバ バイオセラピューティクス インコーポレイテッド アルデヒドデヒドロゲナーゼをサイレンシングするための組成物および方法
KR20150000461A (ko) 2011-10-27 2015-01-02 메사추세츠 인스티튜트 오브 테크놀로지 약물 캡슐화 마이크로스피어를 형성할 수 있는, ｎ-말단 상에 관능화된 아미노산 유도체
EP2791159A4 (en) 2011-12-14 2015-10-14 Moderna Therapeutics Inc MODIFIED NUCLEIC ACIDS AND ACUTE TREATMENT USES THEREOF
WO2013130161A1 (en) 2011-12-14 2013-09-06 modeRNA Therapeutics Methods of responding to a biothreat
JP2015501844A (ja) 2011-12-16 2015-01-19 モデルナ セラピューティクス インコーポレイテッドＭｏｄｅｒｎａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ． 修飾ヌクレオシド、ヌクレオチドおよび核酸組成物
CN104968354A (zh) 2011-12-21 2015-10-07 现代治疗公司 增加器官或器官外植体的活力或寿命的方法
WO2013101690A1 (en) 2011-12-29 2013-07-04 modeRNA Therapeutics Modified mrnas encoding cell-penetrating polypeptides
EP4721752A2 (en) 2011-12-30 2026-04-08 Cellscript, Llc Herstellung und verwendung von in vitro-synthetisierter ssrna zur einführung in säugetierzellen zur induktion einer biologischen oder biochemischen wirkung
WO2013106496A1 (en) 2012-01-10 2013-07-18 modeRNA Therapeutics Methods and compositions for targeting agents into and across the blood-brain barrier
WO2013120497A1 (en) 2012-02-15 2013-08-22 Curevac Gmbh Nucleic acid comprising or coding for a histone stem-loop and a poly(a) sequence or a polyadenylation signal for increasing the expression of an encoded therapeutic protein
WO2013120499A1 (en) 2012-02-15 2013-08-22 Curevac Gmbh Nucleic acid comprising or coding for a histone stem-loop and a poly (a) sequence or a polyadenylation signal for increasing the expression of an encoded pathogenic antigen
DK2817287T3 (da) 2012-02-24 2019-01-02 Arbutus Biopharma Corp Trialkyl kationisk lipid og metoder til anvendelse deraf
CA2859452C (en) 2012-03-27 2021-12-21 Curevac Gmbh Artificial nucleic acid molecules for improved protein or peptide expression
ES2762873T3 (es) 2012-03-29 2020-05-26 Translate Bio Inc Lípidos catiónicos ionizables
EP3865123A1 (en) 2012-03-29 2021-08-18 Translate Bio, Inc. Lipid-derived neutral nanoparticles
US9572897B2 (en) 2012-04-02 2017-02-21 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins
US9254311B2 (en) 2012-04-02 2016-02-09 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of proteins
WO2013151663A1 (en) 2012-04-02 2013-10-10 modeRNA Therapeutics Modified polynucleotides for the production of membrane proteins
US9283287B2 (en) 2012-04-02 2016-03-15 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins
CN108949772A (zh) 2012-04-02 2018-12-07 现代泰克斯公司 用于产生与人类疾病相关的生物制剂和蛋白质的修饰多核苷酸
US20140275229A1 (en) 2012-04-02 2014-09-18 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides encoding udp glucuronosyltransferase 1 family, polypeptide a1
US20150050354A1 (en) 2012-04-02 2015-02-19 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the treatment of otic diseases and conditions
WO2013185069A1 (en) 2012-06-08 2013-12-12 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Pulmonary delivery of mrna to non-lung target cells
WO2013185067A1 (en) 2012-06-08 2013-12-12 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Nuclease resistant polynucleotides and uses thereof
US20150126589A1 (en) 2012-06-08 2015-05-07 Ethris Gmbh Pulmonary Delivery of Messenger RNA
RU2488732C1 (ru) 2012-07-26 2013-07-27 Общество с ограниченной ответственностью "Новые композитные технологии" Способ изготовления напорной комбинированной трубы
EP2882706A1 (en) 2012-08-13 2015-06-17 Massachusetts Institute of Technology Amine-containing lipidoids and uses thereof
ES2921623T3 (es) 2012-11-26 2022-08-30 Modernatx Inc ARN modificado terminalmente
US9636301B2 (en) 2012-12-04 2017-05-02 Arbutus Biopharma Corporation In vitro release assay for liposome encapsulated vincristine
EP2929035A1 (en) 2012-12-07 2015-10-14 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Lipidic nanoparticles for mrna delivering
EP2931319B1 (en) 2012-12-13 2019-08-21 ModernaTX, Inc. Modified nucleic acid molecules and uses thereof
US20150315541A1 (en) 2012-12-13 2015-11-05 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for altering cell phenotype
JP2016504050A (ja) 2013-01-17 2016-02-12 モデルナ セラピューティクス インコーポレイテッドＭｏｄｅｒｎａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ． 細胞表現型の改変のためのシグナルセンサーポリヌクレオチド
WO2014158795A1 (en) 2013-03-12 2014-10-02 Moderna Therapeutics, Inc. Diagnosis and treatment of fibrosis
US20160024181A1 (en) 2013-03-13 2016-01-28 Moderna Therapeutics, Inc. Long-lived polynucleotide molecules
US20160032316A1 (en) 2013-03-14 2016-02-04 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Purification and Purity Assessment of RNA Molecules Synthesized with Modified Nucleosides
EP2968586B1 (en) 2013-03-14 2018-07-25 Translate Bio, Inc. Cftr mrna compositions and related methods and uses
ES2647832T3 (es) 2013-03-14 2017-12-26 Translate Bio, Inc. Ácidos ribonucleicos con nucleótidos modificados con 4-tio y procedimientos relacionados
ES2680595T3 (es) 2013-03-14 2018-09-10 Translate Bio, Inc. Evaluación cuantitativa para eficacia de ARN mensajero para tapar
US10258698B2 (en) 2013-03-14 2019-04-16 Modernatx, Inc. Formulation and delivery of modified nucleoside, nucleotide, and nucleic acid compositions
EA201591286A1 (ru) 2013-03-14 2016-02-29 Шир Хьюман Дженетик Терапис, Инк. Количественная оценка эффективности кэп матричной рнк
ES2981185T3 (es) 2013-03-14 2024-10-07 Translate Bio Inc Métodos para la purificación de ARN mensajero
EP2970940B1 (en) 2013-03-14 2018-07-25 Translate Bio, Inc. Mrna therapeutic compositions and use to treat diseases and disorders
ES2882110T3 (es) 2013-03-14 2021-12-01 Translate Bio Inc Métodos y composiciones para administrar anticuerpos codificados con ARNm
EP4614148A3 (en) 2013-03-15 2025-12-17 Translate Bio, Inc. Synergistic enhancement of the delivery of nucleic acids via blended formulations
EP2971161B1 (en) 2013-03-15 2018-12-26 ModernaTX, Inc. Ribonucleic acid purification
EP2971033B8 (en) 2013-03-15 2019-07-10 ModernaTX, Inc. Manufacturing methods for production of rna transcripts
WO2014144039A1 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Moderna Therapeutics, Inc. Characterization of mrna molecules
US10077439B2 (en) 2013-03-15 2018-09-18 Modernatx, Inc. Removal of DNA fragments in mRNA production process
WO2014144711A1 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Moderna Therapeutics, Inc. Analysis of mrna heterogeneity and stability
EP2983804A4 (en) 2013-03-15 2017-03-01 Moderna Therapeutics, Inc. Ion exchange purification of mrna
US8980864B2 (en) 2013-03-15 2015-03-17 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions and methods of altering cholesterol levels
WO2014179562A1 (en) 2013-05-01 2014-11-06 Massachusetts Institute Of Technology 1,3,5-triazinane-2,4,6-trione derivatives and uses thereof
US9895443B2 (en) 2013-06-26 2018-02-20 Massachusetts Institute Of Technology Multi-tailed lipids and uses thereof
HUE056760T2 (hu) 2013-07-11 2022-03-28 Modernatx Inc A CRISPR-hez kapcsolódó fehérjéket és a szintetikus SGRNS-ket kódoló szintetikus polinukleotidokat tartalmazó készítmények és felhasználási módjaik
WO2015011633A1 (en) 2013-07-23 2015-01-29 Protiva Biotherapeutics, Inc. Compositions and methods for delivering messenger rna
CA2915728A1 (en) 2013-08-21 2015-02-26 Thomas Kramps Respiratory syncytial virus (rsv) vaccine
US20160194625A1 (en) 2013-09-03 2016-07-07 Moderna Therapeutics, Inc. Chimeric polynucleotides
WO2015034925A1 (en) 2013-09-03 2015-03-12 Moderna Therapeutics, Inc. Circular polynucleotides
WO2015048744A2 (en) 2013-09-30 2015-04-02 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides encoding immune modulating polypeptides
WO2015051173A2 (en) 2013-10-02 2015-04-09 Moderna Therapeutics, Inc Polynucleotide molecules and uses thereof
WO2015051169A2 (en) 2013-10-02 2015-04-09 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotide molecules and uses thereof
US20160243221A1 (en) 2013-10-18 2016-08-25 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions and methods for tolerizing cellular systems
MX2016005239A (es) 2013-10-22 2016-08-12 Shire Human Genetic Therapies Tratamiento con acido ribonucleico mensajero para la fenilcetonuria.
US11224642B2 (en) 2013-10-22 2022-01-18 Translate Bio, Inc. MRNA therapy for argininosuccinate synthetase deficiency
CA2928040A1 (en) 2013-10-22 2015-04-30 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Cns delivery of mrna and uses thereof
WO2015061467A1 (en) * 2013-10-22 2015-04-30 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Lipid formulations for delivery of messenger rna
WO2015085318A2 (en) 2013-12-06 2015-06-11 Moderna Therapeutics, Inc. Targeted adaptive vaccines
US20150167017A1 (en) 2013-12-13 2015-06-18 Moderna Therapeutics, Inc. Alternative nucleic acid molecules and uses thereof
CN111304231A (zh) 2013-12-30 2020-06-19 库瑞瓦格股份公司 人工核酸分子
US20170002060A1 (en) 2014-01-08 2017-01-05 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides for the in vivo production of antibodies
ES2754239T3 (es) 2014-03-12 2020-04-16 Curevac Ag Combinación de vacunación y agonistas de OX40
WO2015154188A1 (en) 2014-04-09 2015-10-15 The University Of British Columbia Drill cover and chuck mechanism
DK3134131T3 (en) 2014-04-23 2022-02-07 Modernatx Inc Nucleic acid vaccines
US10837039B2 (en) 2014-06-10 2020-11-17 Curevac Real Estate Gmbh Methods and means for enhancing RNA production
WO2015196128A2 (en) 2014-06-19 2015-12-23 Moderna Therapeutics, Inc. Alternative nucleic acid molecules and uses thereof
WO2015196130A2 (en) 2014-06-19 2015-12-23 Moderna Therapeutics, Inc. Alternative nucleic acid molecules and uses thereof
IL316479A (en) 2014-06-25 2024-12-01 Acuitas Therapeutics Inc Novel lipids and lipid nanoparticle compositions for nucleic acid delivery
WO2016005004A1 (en) 2014-07-11 2016-01-14 Biontech Rna Pharmaceuticals Gmbh Stabilization of poly(a) sequence encoding dna sequences
DK3169334T3 (da) 2014-07-16 2021-07-05 Ethris Gmbh Rna til anvendelse til behandling af ledbånds- eller senelæsioner
KR20170075742A (ko) 2014-10-02 2017-07-03 프로티바 바이오쎄라퓨틱스, 인코포레이티드 B형 간염 바이러스 유전자 발현을 제거하는 조성물 및 방법
WO2016071857A1 (en) 2014-11-07 2016-05-12 Protiva Biotherapeutics, Inc. Compositions and methods for silencing ebola virus expression
WO2016077125A1 (en) 2014-11-10 2016-05-19 Moderna Therapeutics, Inc. Alternative nucleic acid molecules containing reduced uracil content and uses thereof
EP3218508A4 (en) 2014-11-10 2018-04-18 Modernatx, Inc. Multiparametric nucleic acid optimization
WO2016118724A1 (en) 2015-01-21 2016-07-28 Moderna Therapeutics, Inc. Lipid nanoparticle compositions
EP3247398A4 (en) 2015-01-23 2018-09-26 Moderna Therapeutics, Inc. Lipid nanoparticle compositions
CA2979998A1 (en) 2015-03-20 2016-09-29 Protiva Biotherapeutics, Inc. Compositions and methods for treating hypertriglyceridemia
WO2016164762A1 (en) 2015-04-08 2016-10-13 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides encoding low density lipoprotein receptor egf-a and intracellular domain mutants and methods of using the same
WO2016183366A2 (en) 2015-05-12 2016-11-17 Protiva Biotherapeutics, Inc. Compositions and methods for silencing expression of hepatitis d virus rna
WO2016197133A1 (en) 2015-06-04 2016-12-08 Protiva Biotherapeutics, Inc. Delivering crispr therapeutics with lipid nanoparticles
US20180245074A1 (en) 2015-06-04 2018-08-30 Protiva Biotherapeutics, Inc. Treating hepatitis b virus infection using crispr
EP3307305A4 (en) 2015-06-10 2019-05-22 Modernatx, Inc. TARGETED ADAPTIVE VACCINES
HUE067372T2 (hu) 2015-06-29 2024-10-28 Acuitas Therapeutics Inc Lipidek és nanoszemcsés lipid formulázások nukleinsavak beadására
HK1248278A1 (zh) 2015-07-29 2018-10-12 Arbutus Biopharma Corporation 用於使乙型肝炎病毒基因表达沉默的组合物及方法
WO2017049286A1 (en) 2015-09-17 2017-03-23 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides containing a morpholino linker
SI3350333T1 (sl) 2015-09-17 2022-04-29 ModernaTX,Inc. Polinukleotidi, ki zajemajo stabilizacijsko repno regijo
WO2017049074A1 (en) 2015-09-18 2017-03-23 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotide formulations for use in the treatment of renal diseases
RS63986B1 (sr) 2015-10-28 2023-03-31 Acuitas Therapeutics Inc Novi lipidi i lipidne formulacije nanočestica za isporuku nukleinskih kiselina
WO2017102010A1 (en) 2015-12-17 2017-06-22 Biontech Rna Pharmaceuticals Gmbh Novel cytokine fusion proteins
US20180371392A1 (en) 2015-12-21 2018-12-27 Curevac Ag Inlay for a culture plate and corresponding method for preparing a culture plate system with such inlay
JP6949845B2 (ja) 2015-12-22 2021-10-13 キュアバック アーゲー Ｒｎａ分子組成物の作製方法
US11248223B2 (en) 2015-12-23 2022-02-15 Curevac Ag Method of RNA in vitro transcription using a buffer containing a dicarboxylic acid or tricarboxylic acid or a salt thereof
EP3397613A1 (en) 2015-12-30 2018-11-07 Acuitas Therapeutics Inc. Lipids and lipid nanoparticle formulations for delivery of nucleic acids
US9834510B2 (en) 2015-12-30 2017-12-05 Arcturus Therapeutics, Inc. Aromatic ionizable cationic lipid
BR112020021054A2 (pt) 2018-04-25 2021-02-17 Ethris Gmbh composição, processo para a preparação de uma composição, e, composições sólida e para uso
US20240156946A1 (en) 2020-12-22 2024-05-16 CureVac SE Rna vaccine against sars-cov-2 variants

Also Published As

Publication number Publication date
US20140294938A1 (en) 2014-10-02
HUE044277T2 (hu) 2019-10-28
SMT201900445T1 (it) 2019-09-09
PL2717893T3 (pl) 2019-12-31
ES2911653T3 (es) 2022-05-20
JP6184945B2 (ja) 2017-08-23
US20220362406A1 (en) 2022-11-17
JP6463810B2 (ja) 2019-02-06
PL3586861T3 (pl) 2022-05-23
CA2838069C (en) 2021-10-12
US10238754B2 (en) 2019-03-26
TR201910686T4 (tr) 2019-08-21
US9597413B2 (en) 2017-03-21
JP2017014278A (ja) 2017-01-19
IL229699A0 (en) 2014-01-30
AU2024278311A1 (en) 2025-01-09
US11052159B2 (en) 2021-07-06
US11338044B2 (en) 2022-05-24
SI2717893T1 (sl) 2019-10-30
EP4458350B1 (en) 2025-12-24
AU2017204509B2 (en) 2019-04-11
US20220111071A1 (en) 2022-04-14
US20220378939A1 (en) 2022-12-01
US9308281B2 (en) 2016-04-12
CN111671918A (zh) 2020-09-18
PT3586861T (pt) 2022-04-21
CN111671919A (zh) 2020-09-18
JP2023087094A (ja) 2023-06-22
JP6372042B2 (ja) 2018-08-15
DK2717893T3 (da) 2019-07-22
US20220105201A1 (en) 2022-04-07
HRP20191338T1 (hr) 2019-10-18
BR112013031553A2 (pt) 2020-11-10
RU2013154295A (ru) 2015-07-20
IL280771B2 (en) 2024-03-01
JP2014523411A (ja) 2014-09-11
US20170239371A1 (en) 2017-08-24
KR20220025112A (ko) 2022-03-03
US11730825B2 (en) 2023-08-22
NZ719345A (en) 2023-03-31
AU2012267531B2 (en) 2017-06-22
CN103906527A (zh) 2014-07-02
US11951181B2 (en) 2024-04-09
US20210060177A1 (en) 2021-03-04
JP6752299B2 (ja) 2020-09-09
US10888626B2 (en) 2021-01-12
EP4458350A3 (en) 2025-01-22
US20200338214A1 (en) 2020-10-29
MX367605B (es) 2019-08-28
US20220040330A1 (en) 2022-02-10
US20190175761A1 (en) 2019-06-13
KR20240135871A (ko) 2024-09-12
US20220111070A1 (en) 2022-04-14
WO2012170930A1 (en) 2012-12-13
US20220111072A1 (en) 2022-04-14
US20190192689A1 (en) 2019-06-27
US20250108126A1 (en) 2025-04-03
NZ618275A (en) 2016-11-25
US20230285593A1 (en) 2023-09-14
IL229699B (en) 2021-02-28
US20230293723A1 (en) 2023-09-21
ES3063637T3 (en) 2026-04-17
CL2013003478A1 (es) 2014-07-04
US11951179B2 (en) 2024-04-09
EP2717893B1 (en) 2019-05-08
US20230330262A1 (en) 2023-10-19
US20190321489A1 (en) 2019-10-24
CN103906527B (zh) 2020-07-10
DK3586861T3 (da) 2022-04-25
US10413618B2 (en) 2019-09-17
ME03491B (me) 2020-01-20
CY1122123T1 (el) 2020-11-25
US20140206753A1 (en) 2014-07-24
LT2717893T (lt) 2019-08-12
AU2019201924A1 (en) 2019-04-11
IL280771B1 (en) 2023-11-01
HK1199206A1 (en) 2015-06-26
US20250152735A1 (en) 2025-05-15
CA3107288A1 (en) 2012-12-13
US20210300755A1 (en) 2021-09-30
KR102128248B1 (ko) 2020-07-01
EP2717893A1 (en) 2014-04-16
JP2017203045A (ja) 2017-11-16
WO2012170930A9 (en) 2014-01-03
MX2019010226A (es) 2019-10-15
JP2020186266A (ja) 2020-11-19
US11547764B2 (en) 2023-01-10
KR20200084048A (ko) 2020-07-09
EP3586861A1 (en) 2020-01-01
AU2017204509C1 (en) 2019-07-25
EP4458350A2 (en) 2024-11-06
US11185595B2 (en) 2021-11-30
AU2017204509A1 (en) 2017-07-20
AU2012267531A1 (en) 2013-12-19
JP2026050449A (ja) 2026-03-19
AU2021204597A1 (en) 2021-07-29
PE20140797A1 (es) 2014-07-11
MX421064B (es) 2025-02-10
IL307511A (en) 2023-12-01
IL280771A (en) 2021-04-29
MX2013014419A (es) 2014-01-23
US20140294939A1 (en) 2014-10-02
ES2740248T3 (es) 2020-02-05
DK4458350T3 (da) 2026-02-02
US10350303B1 (en) 2019-07-16
JP2019048900A (ja) 2019-03-28
US11291734B2 (en) 2022-04-05
EP3586861B1 (en) 2022-02-09
US20230285592A1 (en) 2023-09-14
US11951180B2 (en) 2024-04-09
US10507249B2 (en) 2019-12-17
KR20140044356A (ko) 2014-04-14
US12121592B2 (en) 2024-10-22
US20200085973A1 (en) 2020-03-19
JP7645058B2 (ja) 2025-03-13
PT2717893T (pt) 2019-08-20
EP4043025A1 (en) 2022-08-17
AU2019201924B2 (en) 2021-04-08
CA2838069A1 (en) 2012-12-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11730825B2 (en) Lipid nanoparticle compositions and methods for mRNA delivery
HK40120170A (en) Lipid nanoparticle compositions and methods for mrna delivery
HK40079866A (en) Lipid nanoparticle compositions and methods for mrna delivery