RS59632B1 - 3-[4-(7h-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1h-pirazol-1-il]oktan- ili heptan-nitril kao jak inhibitori - Google Patents

Description

Opis

[0001] Ova prijava traži prioritet U.S. Prov. Prij. Br.61/180,582, koja je podneta 22 maja, 2009.

OBLAST PRONALASKA

[0002] Predmetni pronalazak se odnosi na inhibitore Janus kinaze (JAK) 3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]oktannitril ili 3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]heptannitril, kao i na njihove kompozicije i postupke upotrebe, koji su korisni u lečenju JAK-povezanih bolesti uključujući, na primer, inflamatorne i autoimunske poremećaje, kožne poremećaje, kancer, i druge bolesti.

STANJE TEHNIKE

[0003] Proteinske kinaze (PKs) regulišu različite biološke procese uključujući između ostalih, ćelijski rast, preživljavanje, diferencijaciju, obrazovanje organa, morfogenezu, neovaskularizaciju, reparaciju tkiva, i regeneraciju. Proteinske kinaze takođe imaju specijalizovane uloge u humanim bolestima domaćina uključujući kancer. Citokini, polipeptidi niske molekulske mase ili glikoproteini, regulišu mnoge puteve uključene u inflamatorni odgovor domaćina prema sepsi. Citokini utiču na ćelijsku diferencijaciju, proliferaciju i aktivaciju, i mogu da moduliraju oba, pro-inflamatorne i anti-inflamatorne odogovore da omoguće domaćinu da reaguje na odgovarajući način na patogene. Signalizacija citokinima širokog opsega uključuje Janus kinaznu familiju (JAKs) protein tirozinskih kinaza i proteine prenosioce signala i aktivatore transkripcije (STATs). Postoje četiri poznate JAKs: JAK1 (Janus kinaza-1), JAK2, JAK3 (takođe poznata pod imenom Janus kinaza, leukocita; JAKL; i L-JAK), i TYK2 (protein-tirozin kinaza 2).

[0004] Citokinima-stimulisani imunski i inflamatorni odgovori doprinose patogenezi bolesti: patologije kao što su teška kombinovana imunodeficijencija (SCID) nastaju iz supresije imunskog sistema, dok hiperaktivni ili neodgovarajući imunski/inflamatorni odgovor doprinosi patologiji autoimunskih bolesti (npr., astma, sistemski ertematozni lupus, tiroiditis, miokarditis), i bolesti kao što su skleroderma i osteoartritis (Ortmann, R. A., T. Cheng, et al. (2000) Arthritis Res 2(1): 16-32).

[0005] Deficijencije u ekspresiji JAKs su u vezi sa sa mnogim stanjima bolesti. Na primer, Jak1-/- miševi su žgoljavi na rođenju, ne uspevaju da se hrane, i perinatalno umiru (Rodig, S. J., M. A. Meraz, et al. (1998) Cell 93(3): 373-83). Jak2-/- mišji embrioni su anemični i umiru u približno danu 12.5 postkoituma zbog nedostatka definitivne eritropoeze.

[0006] JAK/STAT put, i posebno sve četiri JAK-e, se veruje da imaju ulogu u patogenezi odgovora u astmi, hroničnoj opstruktivnoj bolesti pluća, bronhitisa, i drugih srodnih inflamatornih bolesti nižeg respiratornog trakta. Brojni citokini koji prenose signal preko JAKs su povezani sa inflamatornim bolestima/stanjima gornjeg respiratornog trakta, kao što su ona koja pogađaju nos i sinuse (npr., rinitis i sinuzitis) bilo da jesu ili nisu klasične alergijske reakcije. JAK/STAT put je takođe uključen u inflamatorne bolesti/stanja oka i hroničnih alergijskih odgovora.

[0007] Aktivacija JAK/STAT u kancerima može da se dogodi stimulacijom citokinima (npr. IL-6 ili GM-CSF) ili sa redukcijom endogenom supresijom JAK signalizacije kao što su SOCS (supresor ili signalizacije citokina) ili PIAS (proteinski inhibitor aktiviranog STAT) (Boudny, V., and Kovarik, J., Neoplasm.49:349-355, 2002). Aktivacija STAT signalizacije, kao i drugih puteva nishodno od JAKs (npr., Akt), je u korelaciji sa slabom prognozom kod mnogih tipova kancera (Bowman, T., et al. Oncogene 19:2474-2488, 2000). Povećani nivoi citokina u krvotoku koji prenose signale kroz JAK/STAT imaju ulogu uzročnika u kaheksiji i/ili hroničnom umoru. Kao takva, JAK inhibicija može da bude korisna pacijentima koji imaju kancer iz razloga koji prevazilaze potencijalnu anti-tumorsku aktivnost.

[0008] JAK2 tirozin kinaza može da bude korisna za pacijente sa mijeloproliferativnim poremećajima, npr., policitemija vera (PV), esencijalna trombocitemija (ET), mijeloidna metaplazija sa mijelofibrozom (MMM) (Levin, et al., Cancer Cell, vol. 7, 2005: 387-397). Inhibicija JAK2V617F kinaze smanjuje proliferaciju hematopoetskih ćelija, navodeći JAK2 kao potencijalnu metu za farmakološku inhibiciju kod pacijenata sa PV, ET, i MMM.

[0009] Inhibicija JAKs može da bude od koristi pacijentima koji pate od imunskih poremećaja u koži kao što je psorijaza, i senzibilizacija kože. Veruje se da održavanje psorijaze zavisi od brojnih inflamatornih citokina pored različitih hemokina i faktora rasta (JCI, 113:1664-1675), od kojih mnogi prenose signal kroz JAKs (Adv Pharmacol.2000;47:113-74).

[0010] Prema tome, široko su traženi inhibitori Janus kinaza ili srodnih kinaza. Na primer, određeni JAK inhibitori, uključujući pirolopiridin i pirolopirimidine, su prijavljeni u U.S. Ser. br. 11/637,545, koja je podneta 12 decembra, 2006.

[0011] Prema tome, nova ili poboljšana sredstva koja inhibiraju kinaze kao što su JAKs su kontinuirano potrebni za razvijanje novih i efikasnijih farmaceutika koji su usmereni na povećanje ili supresiju imunskih i inflamatornih puteva (kao što su imunosupresivna sredstva za transplante organa), kao i sredstva za prevenciju i lečenje autoimunskih bolesti, bolesti koje uključuju hiperaktivni inflamatorni odgovor (npr., ekcem), alergije, kancer (npr., prostate, leukemija, multipli mijelom), i neke imunske reakcije (npr., kožni osip ili kontaktni dermatitis ili dijareja) uzrokovane drugim terapeuticima. Jedinjenja iz pronalaska, kao i ovde opisane njihove kompozicije i postupci za upotrebu su usmerene prema ovim potrebama i drugim krajevima.

SUŠTINA PRONALASKA

[0012] Predmetni pronalazak obezbeđuje, između ostalog, JAK inhibitor 3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]oktannitril, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.

[0013] Predmetni pronalazak dalje obezbeđuje 3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]heptannitril, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.

[0014] Predmetni pronalazak dalje obezbeđuje farmaceutske kompozicije koje obuhvataju 3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]oktannitril ili 3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]heptannitril, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i bar jedan farmaceutski prihvatljivi nosač.

[0015] Predmetni pronalazak dalje obezbeđuje postupke za lečenje bilo kog od različitih JAK-povezanih bolesti i poremećaja koji se ovde navode ordiniranjem pacijentu terapeutski efikasne količine 3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]oktannitrila ili 3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]heptannitrila, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

[0016] Predmetni pronalazak dalje obezbeđuje 3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]oktannitrila ili 3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]heptannitril, njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u terapiji.

[0017] Predmetni pronalazak dalje obezbeđuje upotrebu 3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]oktannitrila ili 3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]heptanenitrila, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za proizvodnju leka za upotrebu u terapiji.

[0018] Predmetni pronalazak dalje obezbeđuje kompozicije za lokalno ili transdermalno ordiniranje gde kompozicije obuhvataju 3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]oktannitril ili 3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]heptannitril, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i bar jedan farmaceutski prihvatljivi nosač.

[0019] Predmetni pronalazak dalje obezbeđuje postupke za lečenje autoimunskih bolesti, kancera, mijeloproliferativnih poremećaja, inflamatornih bolesti, virusnih bolesti, i kožnim poremećajima kod pacijenta sa lokalnim ordiniranjem terapeutski efikasne količine 3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]oktannitrila ili 3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]heptannitrila, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

[0020] Predmetni pronalazak dalje obezbeđuje postupke za dobijanje soli fosforne kiseline 3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]oktannitrila ili soli fosforne kiseline 3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]heptannitrila.

[0021] Predmetni pronalazak dalje obezbeđuje intermedijare, postupke za njihovo dobijanje, i kompozicije koje ih sadrže, koji su korisni u dobijanju 3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]oktannitrila ili 3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]heptannitrila, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

DETALJNI OPIS

[0022] Predmetni pronalazak obezbeđuje, između ostalog, JAK inhibitor 3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]oktannitril (Formula I):

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.

[0023] Predmetni pronalazak obezbeđuje, između ostalog, JAK inhibitor 3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]heptannitril (Formula II)

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.

[0024] Ovde opisana jedinjenja mogu da budu asimetrična (npr., imaju jedan ili više stereocentara). Oba R/S enantiomera su predviđena, osim ukoliko nije drugačije naznačeno. Jedinjenja iz predmetnog pronalaska mogu da budu izolovana u optički aktivnim ili racemskim oblicima. Postupci u vezi sa dobijanjem optički aktivnih oblika iz optički neaktivnih polaznih materijala su poznati u oblasti tehnike, kao što su razdvajanje racemskih smeša ili pomoću stereoselektivne sinteze. U nekim izvođenjima, jedinjenje Formule I ili II je R enantiomer, opciono u suštini je izolovan iz S enantiomera. U nekim izvođenjima, jedinjenje Formule I ili II je S enantiomer, opciono u suštini je izolovan iz R enantiomera.

[0025] Razdvajanje racemskih smeša jedinjenja može da se izvede upotrebom bilo kog od brojnih postupaka koji su poznati u oblasti tehnike. Primer postupka uključuje frakcionu rekristalizaciju upotrebom kiseline za hiralno razdvajanje koja je optički aktivna, organska kiselina koja obrazuje so. Pogodna sredstva za razdvajanje za postupke frakcione rekristalizacije su, na primer, optički aktivne kiseline, kao što su D i L oblici vinske kiseline, diacetilvinske kiseline, dibenzoilvinske kiseline, bademove kiseline, jabučne kiseline, mlečne kiseline ili razne optički aktivne kamforsulfonske kiseline kao što je β-kamforsulfonska kiselina.

[0026] Razdvajanje racemskih smeša može takođe da se izvede elucijom na koloni napunjenoj sa sa optički aktivnim sredstvom za razdvajajnje (npr., dinitrobenzoilfenilglicin). Pogodan sastav rastvarača za eluciju može da odredi stručnjak iz oblasti tehnike.

[0027] Termin, "jedinjenje," kao što se ovde koristi je namenjeno da uključi, osim ukoliko nije drugačije navedeno, sve stereoizomere i izotope prikazanih struktura.

[0028] Sva jedinjenja, i njihove farmaceutski prihvatljive soli, mogu da se nađu zajedno sa drugim supstancama kao što su voda i rastvarači (npr. hidrati i solvati) ili mogu da budu izolovani.

[0029] U nekim izvođenjima, jedinjenja iz pronalaska, ili njihova so, je u suštini izolovana. Pod "u suštini izolovana" se podrazumeva da je jedinjenje bar delom ili u suštini izdvojeno od okruženja u kome je nastalo ili gde je uočeno. Parcijalno razdvajanje može da uključi, na primer, kompoziciju obogaćenu jedinjenjem iz pronalaska. Suštinsko razdvajanje može da uključi kompozicije koje sadrže bar oko 50%, bar oko 60%, bar oko 70%, bar oko 80%, bar oko 90%, bar oko 95%, bar oko 97%, ili bar oko 99% u odnosu na masu jedinjenja iz pronalaska, ili njegovu so. Postupci za izolovanje jedinjenja i njihovih soli su rutinski u oblasti tehnike.

[0030] Fraza "farmaceutski prihvatljiva" je ovde korišćena da označi ona jedinjenja, materijale, kompozicije, i/ili dozne oblike koji su, u okviru zdrave medicinske procene, pogodni za upotrebu u kontaktu sa tkivima humanih bića i životinja bez preterane toksičnosti, iritacije, alergijskog odgovora, ili drugog problema ili komplikacije, srazmerno sa razumnim odnosom koristi/rizika.

[0031] Izrazi, "ambijentalna temperatura" i "sobna temperatura," kao što se ovde koriste, su jasni u oblasti tehnike, i generalno se odnose na temperaturu, npr. temperaturu reakcije, koja je približna temperaturi sobe u kojoj se reakcija izvodi, na primer, temperaturi od oko 20 °C do oko 30 °C.

[0032] Jedinjenja iz pronalaska mogu da se dobiju u skladu sa postupcima sinteze koji su opisani u tekstu ispod u odeljku Primera. U drugom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje postupak za dobijanje soli fosforne kiseline jedinjenja Formule III:

gde R<1>je H ili metil, koji obuhvata kombinovanje jedinjenja Formule III sa fosfornom kiselinom. U nekim izvođenjima, kombinovanje se izvodi u prisustvu organskog rastvarača (kao što je alkohol) na temperaturi većoj od oko 20 °C (npr., većoj od oko 40 °C, većoj od oko 60 °C, većoj od oko 80 °C, ili većoj od oko 100 °C). U nekim izvođenjima, kombinovanje može da se izvede na oko 60 °C. U nekim izvođenjima, alkohol može da bude metanol, etanol, izopropanol, ili butanol. U nekim izvođenjima, alkohol je izopropanol.

[0033] U nekim izvođenjima, predmetni pronalazak obezbeđuje postupak za dobijanje soli fosforne kiseline 3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]oktannitrila koja uključuje kombinovanje 3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]oktannitrila sa fosfornom kiselinom, opciono u prisustvu organskog rastvarača (kao što je alkohol) na temperaturi većoj od oko 20 °C (npr., većoj od oko 40 °C, većoj od oko 60 °C, većoj od oko 80 °C, ili većoj od oko 100 °C). U nekim izvođenjima, kombinovanje može da se izvede na oko 60 °C. U nekim izvođenjima, alkohol može da bude metanol, etanol, izopropanol, ili butanol.

[0034] U nekim izvođenjima, predmetni pronalazak obezbeđuje postupak za dobijanje soli fosforne kiseline 3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]heptannitrila koji uključuje kombinovanje 3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]heptannitrila sa fosfornom kiselinom, opciono u prisustvu organskog rastvarača (kao što je alkohol) na temperaturi većoj od oko 20 °C (npr., većoj od oko 40 °C, većoj od oko 60 °C, većoj od oko 80 °C, ili većoj od oko 100 °C). U nekim izvođenjima, kombinovanje može da se izvede na oko 60 °C. U nekim izvođenjima, alkohol može da bude metanol, etanol, izopropanol, ili butanol.

[0035] Predmetni pronalazak takođe uključuje farmaceutski prihvatljive soli ovde opisanih jedinjenja. Kao što se ovde koristi, "farmaceutski prihvatljive soli" se odnosi na derivate prikazanih jedinjenja pri čemu je roditeljsko jedinjenje modifikovano konverzijom postojećeg ostatka baze ili kiseline u njegov oblik soli. Primeri farmaceutski prihvatljivih soli uključuju, ali nisu ograničene na, mineralne ili organske kisele soli baznih ostataka kao što su amini; alkalne ili organske soli ostataka kiselina kao što su karboksilne kiseline; i slično. Farmaceutski prihvatljive soli iz predmetnog pronalaska uključuju uobičajene ne-toksične soli koje nastaju od roditeljskog jedinjenja, na primer, od ne-toksičnih neorganskih ili organskih kiselina. Farmaceutski prihvatljive soli iz predmetnog pronalaska mogu da se sintetišu iz roditeljskog jedinjenja koje sadrži bazni ili kiseli ostatak konvencionalnim hemijskim postupcima. Generalno, takve soli mogu da se dobiju reagovanjem slobodnih kiselih ili baznih oblika ovih jedinjenja sa stehiometrijskom količinom odgovarajuće baze ili kiseline u vodi ili u organskom rastvaraču, ili smeši ta dva; generalno, ne-vodeni medijumi kao što su etar, etil acetat, alkoholi (npr., metanol, etanol, izopropanol, ili butanol) ili acetonitril (ACN) su poželjni. Liste pogodnih soli mogu da se pronađu u Remington’s Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1985, p.1418 and Journal of Pharmaceutical Science, 66, 2 (1977).

Postupci

[0036] Jedinjenja iz pronalaska mogu da moduliraju aktivnost jedne ili više Janus kinaza (JAKs). Termin "moduliranje" podrazumeva da se odnosi na sposobnost da se poveća ili smanji aktivnost jednog ili više članova familije JAK kinaza. Prema tome, jedinjenja iz pronalaska mogu da se koriste u postupcima moduliranja JAK dovođenjem u kontakt JAK sa bilo kojim ili više od jedinjenja ili ovde opisanih kompozicija. U nekim izvođenjima, jedinjenja iz predmetnog pronalaska mogu da deluju kao inhibitori jedne ili više JAKs. U daljim izvođenjima, jedinjenja iz pronalaska mogu da se koriste za modulaciju aktivnosti JAK kod individue kojoj je potrebna modulacija receptora ordiniranjem modulirajuće količine jedinjenja iz pronalaska, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

[0037] Drugi aspekt predmetnog pronalaska se odnosi na postupak lečenja JAK-povezane bolesti ili poremećaja kod individue (npr., pacijenta) ordiniranjem individui kojoj je potreban takav tretman terapeutski efikasne količine ili doze jedinjenja iz predmetnog pronalaska ili njihove farmaceutske kompozicije. JAK-povezana bolest može da uključi bilo koju bolest, poremećaj ili stanje koje je direktno ili indirektno povezano sa ekspresijom ili aktivnosti JAK, uključujući prekomernu ekspresiju i/ili abnormalne nivoe aktivnosti. JAK-povezana bolest može takođe da uključi bilo koju bolest, poremećaj ili stanje koje može da se spreči, ublaži, ili izleči modulacijom JAK aktivnosti.

[0038] Primeri JAK-povezanih bolesti uključuju bolesti koje uključuju imunski sistem uključujući, na primer, odbacivanje transplanta organa (npr., odbacivanje alografta i bolest grafta protiv domaćina).

[0039] Dalji primeri JAK-povezanih bolesti uključuju autoimunske bolesti kao što su multiple skleroza, reumatoidni artritis, juvenilni artritis, psorijazni artritis, tip I dijabetesa, lupus, psorijaza, inflamatorna bolest creva, ulcerozni kolitis, Kronova bolest, mijastenija gravis, imunoglobulinske nefropatije, autoimunski tiroidni poremećaji, i slično. U nekim izvođenjima, autoimunska bolest je autoimunski bulozni kožni poremećaj kao što je pemphigus vulgaris (PV) ili bulozni pemfigoid (BP).

[0040] Dalji primeri JAK-povezanih bolesti uključuju alergijska stanja kao što su astma, alergije na hranu, atopični dermatitis i rinitis. Dalji primeri JAK-povezanih bolesti uključuju virusne bolesti kao što je Epštajn Barov Virus (EBV), Hepatitis B, Hepatitis C, HIV, HTLV 1, Varičela-Zoster Virus (VZV) i Humani Papiloma Virus (HPV).

[0041] Dalji primeri JAK-povezanih bolesti ili stanja uključuju kožne poremećaje kao što je psorijaza (na primer, psoriasis vulgaris), atopični dermatitis, opis kože, iritacija kože, senzibilizacija kože (npr., kontaktni dermatitis ili alergijski kontaktni dermatitis). Na primer, određene supstance uključujući neke farmaceutike kada se primene lokalno mogu da uzrokuju senzibilizaciju kože. U nekim izvođenjima, istovremeno davanje ili sekvencijalno davanje bar jednog JAK inhibitora iz pronalaska zajedno sa sredstvom koje uzrokuje neželjenu senzibilizaciju mogu da budu poželjni u lečenju takve neželjene senzibilizacije ili dermatitisa. U nekim izvođenjima, kožni poremećaj je tretiran sa lokalnim ordiniranjem bar jednog JAK inhibitora iz pronalaska.

[0042] U daljim izvođenjima, JAK-povezana bolest je kancer uključujući one koji se karakterišu čvrstim tumorima (npr., kancer prostate, kancer bubrega, kancer jetre, kancer pankreasa, kancer želuca, kancer grudi, kancer pluća, kancere glave i vrata, kancere tiroidee, glioblastom, Kapošijev sarokm, Kastelmanova. bolest, melanom itd.), hematološki kanceri (npr., limfom, leukemija kao što je akutna limfoblastna leukemija, akutna mijelogena leukemija (AML) ili multipli mijelom), i kancer kože kao što je kožni T-ćelijski limfom (CTCL) i kožni B-ćelijski limfom. Primer CTCLs uključuju Sezarijev sindrom i mikozne fungoide.

[0043] U nekim izvođenjima, ovde opisani JAK inhibitori, kao i drugi JAK inhibitori, kao što su oni koji su prijavljeni u U.S. Ser. Br. 11/637,545, mogu da se koriste za lečenje kancera povezanih sa inflamacijom. U nekim izvođenjima, kancer je povezan sa inflamatornom bolesti creva. U nekim izvođenjima, inflamatorna bolest creva je ulcerozni kolitis. U nekim izvođenjima, inflamatorna bolest creva je Kronova bolest. U nekim izvođenjima, kancer povezan sa inflamacijom je kancer povezan sa kolitisom. U nekim izvođenjima, kancer povezan sa inflamacijom je kancer debelog creva ili kolorektalni kancer. U nekim izvođenjima, kancer je kancer želuca, gastrointestinalni karcinoidni tumor, gastrointestinalni stromalni tumor (GIST), adenokarcinom, kancer tankog creva, ili rektalni kancer.

[0044] JAK-povezane bolesti mogu dalje da uključe one koji se karakterišu ekspresijom mutiranog JAK2 kao što su oni koji imaju bar jednu mutaciju u pseudo-kinaznom domenu (npr., JAK2V617F).

[0045] JAK-povezane bolesti mogu dalje da uključe mijeloproliferativne poremećaje (MPDs) kao što je policitemija vera (PV), esencijelna trombocitemija (ET), mijelofibroza sa mijeloidnom metaplazijom (MMM), primarna mijelofibroza (PMF), hronična mijelogena leukemija (CML), hronična mijelomonocitna leukemija (CMML), hipereozinofilni sindrom (HES), sistemska bolest mast ćelija (SMCD), i slično. U nekim izvođenjima, mijeloproliferativni poremećaj je primarna mijelofibroza (PMF) ili policitemija vera/esencijelna trombocitemija posle mijelofibroze (Post-PV/ET MF).

[0046] Predmetni pronalazak dalje obezbeđuje postupke lečenja psorijaze ili drugih kožnih poremećaja ordiniranjem lokalne formulacije koja sadrži jedinjenje iz pronalaska.

[0047] Predmetni pronalazak dalje obezbeđuje postupak za lečenje dermatoloških nepoželjnih efekata od drugih farmaceutika ordiniranjem jedinjenja iz pronalaska. Na primer, brojna farmaceutska sredstva dovode do neželjenih alergijskih reakcija koji mogu da se ispolje u obliku osipa u obliku akni ili povezanog dermatitisa. Primeri farmaceutskih sredstava koji imaju nepoželjne neželjene efekte uključuju anti-kancerogene lekove kao što su gefitinib, cetuksimab, erlotinib, i slično. Jedinjenja iz pronalaska mogu da se ordiniraju sistemski ili lokalno (npr., lokalizovan u blizini dermatitisa) u kombinaciji sa (npr., istovremeno ili sekvencijalno) farmaceutskim sredstvom koje ima nepoželjni dermatološki sporedni efekat. U nekim izvođenjima, jedinjenje iz pronalaska može lokalno da se ordinira zajedno sa jednim ili više drugih farmaceutika, gde drugi farmaceutici kada se primenjuju lokalno u odsustvu jedinjenja iz pronalaska uzrokuju kontaktni dermatitis, alergijsku kontaktnu senzibilizaciju, ili slični kožni poremećaj. Prema tome, kompozicije iz pronalaska uključuju lokalne formulacije koje sadrže jedinjenje iz pronalaska i dalje farmaceutsko sredstvo koje može da uzrokuje dermatitis, kožne poremećaje, ili srodna neželjena dejstva.

[0048] Dalje JAK-povezane bolesti uključuju inflamaciju i inflamatorne bolesti. Primeri inflamatornih bolesti uključuju inflamatorne bolesti oka (npr., iritis, uveitis, skleritis, konjunktivitis, ili srodne bolesti), inflamatorne bolesti respiratornog trakta (npr., gornjeg respiratornog trakta uključujući nos i sinuse kao što su rinitis ili sinuzitis ili nižeg respiratornog trakta uključujući bronhitis, hroničnu opstruktivnu bolest pluća, i slično), inflamatornu miopatiju kao što je miokarditis, i druge inflamatorne bolesti.

[0049] Ovde opisani JAK inhibitori mogu dalje da se koriste za lečenje ishemijskih povreda reperfuzijom ili bolesti ili stanja koje je povezano sa inflamatornim ishemijskim događajem koa što je šlog ili srčani udar. Ovde opisani JAK inhibitori mogu dalje da se koriste za lečenje anoreksije, kaheksije, ili umora koji nastaju ili su povezani sa kancerom. Ovde opisani JAK inhibitori mogu dalje da se koriste za lečenje restenoze, sklerodermitisa, ili fibroze. Ovde opisani JAK inhibitori mogu dalje da se koriste za lečenje stanja koja su povezana sa hipoksijom ili astrogliozom kao što su, na primer, diabetska retinopatija, kancer, ili neurodegeneracija. Videti, npr., Dudley, A.C. et al. Biochem. J. 2005, 390(Pt 2):427-36 i Sriram, K. et al. J. Biol. Chem.2004, 279(19):19936-47. Epub 2004 Mar 2. Ovde opisani JAK inhibitori mogu da se koriste za lečenje Alzhajmerove bolesti.

[0050] Ovde opisani JAK inhibitori mogu dalje da se koriste za lečenje drugih inflamatornih bolesti kao što je sindrom sistemskog inflamatornog odgovora (SIRS) i septički šok.

[0051] Ovde opisani JAK inhibitori mogu dalje da se koriste za lečenje gihta i povećane veličine prostate zbog, npr., benigne hipertrofije prostate ili benigne hiperplazije prostate.

[0052] U nekim izvođenjima, ovde opisani JAK inhibitori mogu dalje da se koriste za lečenje poremećaja suvog oka. Kao što se ovde koristi, "poremećaj suvog oka" je namenjen da obuhvati stanja bolesti rezimirano nedavno u zvaničnom izveštaju Dry Eye Workshop (DEWS), koji suvo oko definiše kao " multifaktorijalnu bolest suza i očne površine koji za rezultat ima simptome nelagode, vizuelnog ometanja, i nestabilnosti suznog filma sa potencijalnim oštećenjem očne površine. Prati ga povećana osmolarnost suznog filma i inflamacija očne površine." Lemp, "The Definition and Classification of Dry Eye Disease: Report of the Definition and Classification Subcommittee of the International Dry Eye Workshop", The Ocular Surface, 5(2), 75-92 April 2007. U nekim izvođenjima, pormećaj suvog oka je izabran između suvog oka sa nedostatkom suza (ADDE) ili poremećaja isparavanja u suvom oku, ili njihove odgovarajuće kombinacije.

[0053] U daljem aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje postupak za lečenje konjunktivitisa, uveitisa (uključujući hronični uveitis), horioditis, retinitis, ciklitis, sklieritis, episkleritis, ili iritis; lečenje inflamacije ili bola povezanog sa transplantom rožnjače, LASIK laserska in situ keratomileuza (eng. laser assisted in situ keratomileusis), fotoreaktivna keratektomija, ili LASEK laserski asistirana sub-epitelna keratomileuza (eng. aser assisted sub-epithelial keratomileusis); inhibiranje gubitka oštrine vida povezane sa transplantom rožnjače, LASIK, fotoreaktivna keratektomija, ili LASEK; ili inhibiranje odbacivanja transplanta kod pacijenta kome je potrebno, koji obuhvata ordiniranje pacijentu terapeutski efikasne količine jedinjenja iz pronalaska, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

[0054] Dodatno, jedinjenje iz pronalaska, kao i drugi JAK inhibitori kao što su oni koji su prijavljeni u U.S. Ser. No.11/637,545, mogu da se koriste za lečenje respiratorne disfunkcije ili prestanka sa radom povezane sa virusnom infekcijom, kao što je virus gripa i SARS.

[0055] U drugom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje ili so pronalaska za upotrebu u jednom od postupaka lečenja kao što je ovde opisano. U daljem aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje upotrebu jedinjenja ili soli pronalaska za dobijanje leka za upotrebu u jednom od postupaka lečenja kao što je ovde opisano.

[0056] Kao što se ovde koristi, termin "dovođenje u kontakt" se odnosi na međusobno povezivanje naznačenih sistema u in vitro sistemu ili in vivo sistemu. Na primer, "dovođenje u kontakt" JAK sa jedinjenjem iz pronalaska uključuje ordiniranje jedinjenja predmetnog pronalaska individui ili pacijentu, kao što je čovek, koji ima JAK, kao i, na primer, uvođenje jedinjenja iz pronalaska u uzorak koji sadrži ćelijski ili prečišćeni preparat koji sadrži JAK.

[0057] Kao što se ovde koristi, termin "individua" ili "pacijent," se koristi naizmenično, odnosi se na bilo koju životinju, uključujući sisare, poželjno miševe, pacove, druge glodare, zečeve, pse, mačke, svinje, stoku, ovce, konje, ili primate, i najpoželjnije na ljude.

[0058] Kao što se ovde koristi, fraza "terapeutski efikasna količina" se odnosi na količinu aktivnog jedinjenja ili farmaceutskog sredstva koji pokreće biološki ili medicinski odgovor koji se traži u tkivu, sistemu, životinji, individui ili čoveku od strane istraživača, veterinara, medicinskog lekara ili drugog kliničara.

[0059] Kao što se ovde koristi, termin "lečenje" ili "tretman" se odnosi na jedno ili više od (1) prevencije bolesti; na primer, prevencije bolesti, stanja ili poremećaja kod individue koja može da bude predisponirana da razvije bolest, stanje ili poremećaj ali još ne prolazi kroz ili ispoljava patologiju ili simptomatologiju bolesti; (2) inhibiranja bolesti; na primer, inhibiranja bolesti, stanja ili poremećaja u individui koja prolazi kroz ili ispoljava patologiju ili simptomatologiju bolesti, stanja ili poremećaja (tj., zaustavljanja daljeg razvijanja patologije i/ili simptomatologije); i (3) ublažavanja bolesti; na primer, ublažavanja bolesti, stanja ili poremećaja kod individue koja prolazi kroz ili ispoljava patologiju ili simptomatologiju bolesti, stanja ili bolesti (tj., reverziju patologije i/ili simptomatologije) kao što je smanjenje težine simptoma bolesti.

Kombinovane terapije

[0060] Jedan ili više dodatnih farmaceutskih sredstava kao što su, na primer, hemoterapeutici, antiinflamatorna sredstva, steroidi, imunosupresanti, kao što su Bcr-Abl, Flt-3, RAF i inhibitori FAK kinaze kao što su, na primer, oni koji su opisani u WO 2006/056399, ili druga sredstva mogu da se koriste u kombinaciji sa jedinjenjem iz predmetnog pronalaska za lečenje JAK-povezanih bolesti, poremećaja ili stanja. Jedno ili više dodatnih terapeutskih sredstava mogu da se ordiniraju pacijentu istovremeno ili sekvencijalno.

[0061] Primer hemoterapeutika uključuje inhibitore proteazoma (npr., bortezomib), talidomid, revlimid, i DNK oštećujuća sredstva kao što su melfalan, doksorubicin, ciklofosfamid, vinkristin, etopozid, karmustin, i slično.

[0062] Primeri steroida uključuju kortikosteroide kao što su deksametazon ili prednizon.

[0063] Primeri pogodnih inhibitora Bcr-Abl uključuju jedinjenja, i njegove farmaceutski prihvatljive soli, roda i vrsta prikazanih u U.S. Pat. br. 5,521,184, WO 04/005281, EP2005/009967, EP2005/010408, i U.S. Ser. br.60/578,491.

[0064] Primeri pogodnih inhibitora Flt-3 uključuju jedinjenja, i njihove farmaceutski prihvatljive soli, kao što je prikazano u WO 03/037347, WO 03/099771, i WO 04/046120.

[0065] Primeri pogodnih inhibitora RAF uključuju jedinjenja, i njihove farmaceutski prihvatljive soli, kao što je prikazano u WO 00/09495 i WO 05/028444.

[0066] Primeri pogodnih inhibitora FAK uključuju jedinjenja, i njihove farmaceutski prihvatljive soli, kao što je prikazano u WO 04/080980, WO 04/056786, WO 03/024967, WO 01/064655, WO 00/053595, i WO 01/014402.

[0067] U nekim izvođenjima, jedinjenje iz pronalaska može da se koristi u kombinaciji sa jednom ili više drugih kinaznih inhibitora uključujući imatinib, posebno za lečnjen pacijenata koji su otporni na imatinib ili druge kinazne inhibitore.

1

[0068] U nekim izvođenjima, jedinjenje iz pronalaska može da se koristi u kombinaciji sa hemoterapeutikom u lečenju kancera, kao što je multipli mijelom, i može da unapredi odgovor na tretman u poređenju sa odgovorom na samo hemoterapeutsko sredstvo, bez pogoršanja njegovih toksičnih efekata. Primeri dodatnih farmaceutskih sredstava koji se koriste u tretmanu multiplog mijeloma, na primer, mogu da uključe, bez ograničenja, melfalan, melfalan plus prednizon [MP], doksorubicin, deksametazon, i Velkad (bortezomib). Dalja dodatna sredstva korišćena u tretmanu multiplog mijeloma uključuju Bcr-Abl, Flt-3, RAF i FAK kinazne inhibitore. Dodatni ili sinergistički efekti su poželjni ishodi kombinovanja JAK inhibitora iz predmetnog pronalaska sa dodatnim sredstvom. Dalje, otpornost ćelija multiplog mijeloma sa sredstvima kao što je deksametazon mogu da budu reverzibilni nakon tretmana sa JAK inhibitorom iz predmetnog pronalaska. Sredstva mogu da se kombinuju sa predmetnim jedinjenjem u jednom ili kontinuiranom doznom obliku, ili sredstva mogu da se ordiniraju isstovremeno ili sekvencijalno kao različiti dozni oblici.

[0069] U nekim izvođenjima, kortikosteroid kao što je deksametazon je ordiniran pacijentu u kombinaciji sa jedinjenjem iz pronalaska pri čemu je deksametazon ordiniran naizmenično za razliku od kontinuirano.

[0070] U nekim daljim izvođenjima, kombinacije jedinjenja iz pronalaska sa drugim terapeutskim sredstvima mogu da se ordiniraju pacijentu pre, tokom, i/ili posle transplanta kostne srži ili transplanta stem ćelija.

Farmaceutske formulacije i dozni oblici

[0071] Kada se koriste kao farmaceutska sredstva, jedinjenja iz predmetnog pronalaska mogu da se ordiniraju u obliku farmaceutskih kompozicija. Ove kompozicije mogu da se pripreme na način koji je dobro poznat u farmaceutskoj oblasti tehnike, i mogu da se ordiniraju različitim načinima davanja, u zavisnosti od toga da li je poželjan lokalni ili sistemski efekat i od površine koja treba da se tretira. Ordiniranje može da bude lokalno (uključujući transdermalno, epidermalno, očno i na mukoznim membranama uključujući intranazalna, vaginalna i rektalna isporuka), plućno (npr., inhalacijom ili insuflacijom praškova ili aerosoli, uključujući nebulizator; intratrahealno ili intranazalno), oralno ili parenteralno. Parenteralno ordiniranje uključuje intravenozno, intraarterijalno, subkutanozno, intraperitonealno intramuskularno ili injekcijom ili infuzijom; ili intrakranijalno, npr., intratekalno ili intraventrikularno, ordiniranje. Parenteralno ordiniranje može da bude u obliku jedne bolus doze, ili može da bude, na primer, kontinuiranom perfuzionom pumpom. Farmaceutske kompozicije i formulacije za lokalno davanje mogu da uključe transdermalne flastere, ulja, losione, kreme, gelove, kapi, supozitorije, sprejeve, tečnosti i praškove. Konvencionalni farmaceutski nosači, vodeni, praškovi ili uljane baze, sredstva za zgrudvavanje i slično mogu da budu potrebni ili poželjni. Obloženi kondomi, rukavice i slično mogu takođe da budu korisni.

[0072] Ovaj pronalazak takođe uključuje farmaceutske kompozicije koje sadrže, kao aktivni sastojak, jedinjenje ponalaska ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, u kombinaciji sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivim nosačima (ekscipijensima). U nekim izvođenjima, kompozicija je pogodna za lokalno ordiniranje. U dobijanju kompozicija pronalaska, aktivni sastojak je obično pomešan sa ekscipijensom, razblažen sa ekscipijensom ili obuhvaćen unutar takvog nosača u obliku, na primer, kapsule, kesice, papira, ili drugog kontejnera. Kada ekscipijens služi kao rastvarač, može da bude u čvrstom obliku, polu-čvrstom, ili tečnom materijalu, koji deluje kao nosač, nosač ili medijum za aktivni sastojak. Prema tome, kompozicije mogu da budu u obliku tableta, pilula, praškova, lozengi, kesica, kapsula, eliksira, suspenzija, emulzija, rastvora, sirupa, aerosoli (u čvrstom obliku ili tečni medijum), ulja koja sadrže, na primer, do 10% u odnosu na težinu aktivnog jedinjenja, meke i tvrde želatinske kapsule, supozitorije, sterilne injektabilne rastvore, i sterilne spakovane praškove.

[0073] U dobijanju formulacije, aktivno jedinjenje može da bude samleveno da se dobije odgovarajuća veličina čestica pre kombinovanja sa drugim sastojcima. Ukoliko je aktivno jedinjenje u suštini nerastvorljivo, može da bude samleveno do veličine čestice koja je manja od 200 meša. Ukoliko je aktivno jedinjenje u suštini rastvorljivo u vodi, veličina čestica može mlevenjem da se prilagodi da obezbedi u suštini jednoobraznu distribuciju u formulaciji, npr. oko 40 meša.

[0074] Jedinjenje iz pronalaska može da se samelje upotrebom dobro poznatih postupaka za mlevenje kao što je vlažno mlevenje da se dobije veličina čestice koja je pogodna za obrazovanje tablete i za druge tipove formulacija. Fino podeljeni (nanočestični) preparati jedinjenja iz pronalaska mogu da se dobiju postupcima koji su dobro poznati u oblasti tehnike, npr., videti međunarodnu prijavu br. WO 2002/000196.

[0075] Neki primeri pogodnih ekscipijenasa uključuju laktozu, dekstrozu, saharozu, sorbitol, manitol, skrobove, gumu akaciju, kalcijum fosfat, alginate, tragakant, želatin, kalcijum silikat, mikrokristalnu celulozu, polivinilpirolidon, celulozu, vodu, sirup, i metil celulozu. Formulacije mogu dodatno da uključe: sredstva za podmazivanje kao što je talk, magnezijum stearat, i mineralno ulje; sredstva za vlaženje; sredstva za emulgovanje i suspenziju; sredstva za konzervisanje kao što su metil- i propilhidroksi-benzoati; zaslađivači; i sredstva za davanje ukusa. Kompozicije iz pronalaska mogu da budu formulisane tako da obezbede brzo, produženo ili odloženo oslobađanje aktivnog sastojka posle ordiniranja pacijentu korišćenjem postupaka dobro poznatih u oblasti tehnike.

[0076] Kompozicije mogu da budu formulisane u jediničnom doznom obliku, svaka doza sadrži od oko 5 do oko 1000 mg (1 g), češće oko 100 do oko 500 mg, aktivnog sastojka. Termin "jedinični dozni oblici" se odnosi na fizički diskretne jedinice pogodne kao jedinične doze za humane subjekte i druge sisare, svaka jedinica sadrži prethodno određenu količinu aktivnog materijala za kog je izračunato da proizvodi željeni terapeutski efekat, povezano sa pogodnim farmaceutskim ekscipijensom.

[0077] Aktivno jedinjenje može da bude efikasno u širokom opsegu doza i generalno je ordinirano u farmaceutski efikasnoj količini. Treba razumeti, međutim, da će količina jedinenja koje se stvarno daje obično biti određena od strane lekara, prema relevantnim okolnostima, uključujući stanje koje treba da se leči, izabrani način davanja, pravo jedinjenje koje se ordinira, starost, težinu, i odgovor indiviualnog pacijenta, ozbiljnost simptoma pacijenta, i slično.

[0078] Za dobijanje čvrstih kompozicija kao što su tablete, glavni aktivni sastojak je pomešan sa farmaceutskim ekscipijensom da se obrazuje čvrsta preformulacija kompozicije koja sadrži homogenu smešu jedinjenja iz predmetnog pronalaska. Kada se odnosi na ove kompozicije preformulacije kao homogene, aktivni sastojak je obrično rasejan jednako kroz kompoziciju tako da kompozicija može brzo da bude podeljena u jednake efikasne jedinične dozne oblike kao što su tablete, pilule i kaspsule. Ova čvrsta preformulacija je zatim podeljena na manje delove u jedinične dozne oblike prethodno opisanog tipa koji sadrži od, na primer, oko 0.1 do oko1000 mg aktivnog sastojka predmetnog pronalaska.

[0079] Tablete ili pilule predmetnog pronalaska mogu da budu obložene ili na neki drugi način sastavljene da se obezbedi dozni obik dajući prednost prodženog delovanja. Na primer, tableta ili pilula može da obuhvati unutrašnju dozu i spoljašnju doznu komponentu, pri čemu je druga u obliku omotača na prvoj. Dve komponente mogu da budu razdvojene sa enteričnim slojem koji služi za otpor u dezintegraciji u stomaku i omogućava unutrašnjoj komponenti da inaktno prođu kroz duodenum ili da bude odložen u oslobađanju. Različiti materijali mogu da se koriste za takve enterične slojeve ili oblaganja, takvi materijali uključujući broj polimerinih kiselina i smeša polimerinih kiselina sa takvim materijalima kao što je šelak, cetil alkohol, i celulozni acetat.

[0080] Tečni oblici u kojima jedinjenja i kompozicije iz predmetnog pronalaska mogu da budu uključene za oralno davanje ili davanje injekcijom uključuju vodene rastvore, odgovarajuće aromatizovane sirupe, vodene ili uljane suspenzije, i aromatizovane emulzije sa jestivim uljima kao što je laneno ulje, susamovo ulje, kokosovo ulje, ili ulje kikirikija, kao i eliksiri i slični farmaceutski nosači.

[0081] Kompozicije za inhalaciju ili insuflaciju uključuju rastvore ili suspenzije u farmaceutski prihvatljivim, vodenim ili organskim rastvaračima, ili njihovim smešama, i praškovima. Tečne ili čvrste kompozicije mogu da sadrže pogodne farmaceutski prihvatljive ekscipijense kako je opisano sa supra. U nekim izvođenjima, kompozicije se ordiniraju oralnim ili nazalnim respiratornim načinom za lokalni ili sistemski efekat. Kompozicije koje se unutra nalaze mogu da budu nebulizovane upotrebom inertnih gasova. Nebulizovani rastvori mogu da se udahnu direktno iz sprave nebulizatora ili nebulizujuća sprava može da bude vezana sa maskom za lice, ili mašinom za disanje sa prekidima sa pozitivnim pritiskom. Rastvor, suspenzija, ili kompozicije praška mogu oralno ili nazalno da se ordiniraju iz sprava koje isporučuju formulaciju na odgovarajući način.

[0082] Lokalne formulacije mogu da sadrže jedan ili više konvencionalnih nosača. U nekim izvođenjima, masti mogu da sadrže vodu i jedan ili više hidrofobnih nosača izabranih između, na primer, tečnog parafina, polioksietilen alkil etra, propilen glikola, belog vazelina, i slično. Kompozicije nosača krema mogu da budu zasovane na vodi u kombinaciji sa glicerolom i jednom ili više drugih komponenti, npr. glicerinmonostearatom, PEG-glicerinmonostearatom i cetilstearil alkoholom. Gelovi mogu da budu formulisani upotrebom izopropil alkohola i vode, pogodno kombinovano sa drugim komponentama kao što su, na primer, glicerol, hydroksietil celuloza, i slično. U nekim izvođenjima, lokalne formulacije sadrže bar oko 0.1, bar oko 0.25, bar oko 0.5, bar oko 1, bar oko 2, ili bar oko 5 mas % jedinjenja iz pronalaska. Lokalne formulacije mogu pogodno sa budu spakovane u tubama, na primer, 100 g koje su opciono povezane sa instrukcijama za lečenje odabrane formulacije, npr., psorijaze ili drugog stanja kože.

[0083] Pronalazak dalje obezbeđuje farmaceutsku formulaciju za lokalnu primenu na koži, koja obuhvata terapeutski efikasnu količinu jedinjenja iz pronalaska, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.

[0084] U nekim izvođenjima, farmaceutska formulacija obuhvata:

emulziju ulja u vodi; i

terapeutski efikasnu količinu jedinjenja iz pronalaska, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.

[0085] U nekim izvođenjima, emulzija obuhvata vodu, uljanu komponentu, i komponentu emulgatora.

[0086] Kao što se ovde koristi, termin "komponenta emulgatora" se odnosi na, u jednom aspektu, na supstancu, ili smeše supstanci koje održavaju element ili česticu u suspenziji u tečnom medijumu. U nekim izvođenjima, komponenta emulgatora dozvoljava uljanoj fazi da obrazuje emulziju kada se kombinuje sa vodom. U nekim izvođenjima, komponenta emulgatora se odnosi na jedan ili više nejonskih emulgatora.

[0087] U nekim izvođenjima, uljana komponenta je prisutna u količini od oko 10% do oko 40% u odnosu na težinu formulacije.

[0088] U nekim izvođenjima, uljana komponenta obuhvata jednu ili više supstanci nezavisno izabranih između vazelina, masnih alkohola, mineralnih ulja, triglicerida, i silikonskih ulja.

1

[0089] U nekim izvođenjima, uljana komponenta obuhvata jednu ili više supstanci nezavisno izabranih između belog vazelina, cetil alkohola, stearil alkohola, lakog mineralnog ulja, triglicerida srednjih lanaca, i dimetikona.

[0090] U nekim izvođenjima, uljana komponenta obuhvata komponentu okluzivnog sredstva.

[0091] U nekim izvođenjima, komponenta okluzivnog sredstva je prisutna u količini od oko 2% do oko 15% u odnosu na težinu formulacije.

[0092] Kao što se ovde koristi, termin "komponenta okluzivnog sredstva" se odnosi na hidrofobno sredstvo ili smeše hidrofobnih sredstava koji obrazuju okluzivni film na koži koji smanjuje transepidermalni gubitak vode (TEWL) prevencijom ispravanja vode iz rožnatog (stratum corneum) sloja epidermisa.

[0093] U nekim izvođenjima, komponenta okluzivnog sredstva obuhvata jednu ili više supstanci izabranih između masnih kiselina (npr., lanolin kiselina), masnih alkohola (npr., lanolin alkohola), ugljovodoničnih ulja & voskova (npr., vazelina), polihidričnih alkohola (npr., propilen glikol), silikona (npr., dimetikon), sterola (npr., holesterol). životinjske ili biljne masti (npr., kakao puter), biljnog voska (npr., Karnauba vosak), i estrara voska (npr., pčelinji vosak).

[0094] U nekim izvođenjima, komponenta okluzivnog sredstva obuhvata jednu ili više supstanci izabranih između masnih alkohola lanolinske kiseline, lanolin alkohola, vazelina, propilen glikola, dimetikona, holesterola, kakao putera, Karnauba voska, i pčelinjeg voska.

[0095] U nekim izvođenjima, komponenta okluzivnog sredstva obuhvata vazelin.

[0096] U nekim izvođenjima, komponenta okluzivnog sredstva obuhvata beli vazelin.

[0097] U nekim izvođenjima, uljana komponenta obuhvata komponentu sredstva za učvršćivanje.

[0098] U nekim izvođenjima, komponenta sredstva za učvršćivanje se nalazi u količini od oko 2% do oko 8% u odnosu na težinu formulacije.

[0099] Kao što se ovde koristi, termin "komponenta sredstva za učvršćivanje " se odnosi na supstancu ili smešu supstanci koja povećava viskozitet i/ili konzistenciju formulacije ili poboljšava reologiju formulacije.

[0100] U nekim izvođenjima, komponenta sredstva za učvršćivanje obuhvata jednu ili više supstanci nezavisno izabranih između masnih alkohola.

[0101] U nekim izvođenjima, komponenta sredstva za učvršćivanje obuhvata jednu ili više supstanci nezavisno izabranih između C12-20masnih alkohola.

[0102] U nekim izvođenjima, komponenta sredstva za učvršćivanje obuhvata jednu ili više supstanci nezavisno izabranih između C16-18masnih alkohola.

[0103] U nekim izvođenjima, komponenta sredstva za učvršćivanje obuhvata jednu ili više supstanci nezavisno izabranih između cetil alkohola i stearil alkohola.

[0104] U nekim izvođenjima, uljana komponenta obuhvata komponentu ovlaživača.

[0105] U nekim izvođenjima, komponenta ovlaživača je prisutna u količini od oko 5% do oko 15% u odnosu na težinu formulacije.

[0106] Kao što se ovde koristi, termin "komponenta ovlaživača" se odnosi na sredstvo koje umekšava ili smiruje kožu ili smiruje iritiranu unutrašnju površinu.

[0107] U nekim izvođenjima, komponenta ovlaživača obuhvata jednu ili više supstanci nezavisno izabranih između mineralnih ulja i triglicerida.

[0108] U nekim izvođenjima, komponenta ovlaživača obuhvata jednu ili više supstanci nezavisno izabranih između lakog mineralnog ulja i triglicerida srednjih lanaca.

[0109] U nekim izvođenjima, komponenta ovlaživača obuhvata jednu ili više supstanci nezavisno izabranih između lakog mineralnog ulja, triglicerida srednjih lanaca, i dimetikona.

[0110] U nekim izvođenjima, voda se nalazi u količini od oko 35% do oko 65% u odnosu na težinu formulacije.

[0111] U nekim izvođenjima, komponenta emulgatora se nalazi u količini od oko 1% do oko 9% u odnosu na težinu formulacije.

[0112] U nekim izvođenjima, komponenta emulgatora obuhvata jednu ili više supstanci nezavisno izabranih između gliceril masih estara i sorbitan masnih estara.

[0113] U nekim izvođenjima, komponenta emulgatora obuhvata jednu ili više supstanci nezavisno izabranih između gliceril stearata, i polisorbata 20.

[0114] U nekim izvođenjima, farmaceutska formulacija dalje obuhvata komponentu sredstva za stabilizaciju.

[0115] U nekim izvođenjima, komponenta sredstva za stabilizaciju se nalazi u količini od oko 0.05% do oko 5% u odnosu na težinu formulacije.

[0116] Kao što se ovde koristi, termin " komponenta sredstva za stabilizaciju " se odnosi na supstancu ili smešu supstanci koja poboljšava stabilnost farmaceutske formulacije i/ili kompatibilost komponenti u formulaciji. U nekim izvođenjima, komponenta sredstva za stabilizaciju sprečava nakupljanje emulzije i stabilizuje kapljice u emulziji ulja u vodi.

[0117] U nekim izvođenjima, komponenta sredstva za stabilizaciju obuhvata jednu ili više supstanci nezavisno izabranih između polisaharida.

[0118] U nekim izvođenjima, komponenta sredstva za stabilizaciju obuhvata ksantan gumu.

[0119] U nekim izvođenjima, farmaceutska formulacija dalje obuhvata komponentu rastvarača.

[0120] U nekim izvođenjima, komponenta rastvarača se nalazi u količini od oko 10% do oko 35% u odnosu na težinu formulacije.

[0121] Kao što se ovde koristi, termin " komponenta rastvarača " je tečna supstanca ili smeša tečnih supstanci sposobnih da rastvore jedinjenje pronalaska ili druge supstance u formulaciji. U nekim izvođenjima, komponenta rastvarača je tečna supstanca ili smeša tečnih supstanci u kojima jedinjenje iz pronalaska, ili njegova farmaceutski prihvtljiva so, ima razumu rastvorljivost.

[0122] U nekim izvođenjima, komponenta rastvarača obuhvata jednu ili više supstanci nezavisno izabranih između alkilen glikola i polialkilen glikola.

[0123] U nekim izvođenjima, komponenta rastvarača obuhvata jednu ili više supstanci nezavisno izabranih između propilen glikola i polietilen glikola.

[0124] U nekim izvođenjima, jedinjenje iz pronalaska se nalazi u količini od oko 0.5% do oko 2.0% u odnosu na težinu formulacije na slobodno baznoj osnovi.

1

[0125] U nekim izvođenjima, jedinjenje iz pronalaska se nalazi u količini od oko 0.5% u odnosu na težinu formulacije na slobodno baznoj osnovi.

[0126] U nekim izvođenjima, jedinjenje iz pronalaska se nalazi u količini od oko 1% u odnosu na težinu formulacije na slobodno baznoj osnovi.

[0127] U nekim izvođenjima, jedinjenje iz pronalaska se nalazi u količini od oko 1.5% u odnosu na težinu formulacije na slobodno baznoj osnovi.

[0128] U nekim izvođenjima, jedinjenje iz pronalaska se nalazi u količini izabranoj od oko 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 09, 1.0, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, i 2.0% u odnosu na težinu kompozicije na slobodno baznoj osnovi.

[0129] U nekim izvođenjima, farmaceutska formulacija obuhvata: vodu; uljanu komponentu; komponentu emulgatora; komponentu rastvarača; komponentu sredstva za stabilizaciju; i od oko 0.5% do oko 2.0% jedinjenja iz pronalaska, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, u odnosu na težinu formulacije na slobodno baznoj osnovi.

[0130] U nekim izvođenjima, farmaceutska formulacija obuhvata:

od oko 35% do oko 65% vode u odnosu na težinu formulacije;

od oko 10% do oko 40% komponente ulja u odnosu na težinu formulacije;

od oko 1% do oko 9% komponente emulgatora u odnosu na težinu formulacije;

od oko 10% do oko35% komponente rastvarača u odnosu na težinu formulacije;

od oko 0.05% do oko 5% komponente sredstva za stabilizaciju u odnosu na težinu formulacije; i od oko 0.5% do oko 2.0% jedinjenja iz pronalaska, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, u odnosu na težinu formulacije na slobodno baznoj osnovi.

[0131] U nekim izvođenjima:

uljana komponenta obuhvata jednu ili više supstanci nezavisno izabranih između vazelina, masnih alkohola, mineralnih ulja, triglicerida, i dimetikona;

komponenta emulgatora obuhvata jednu ili više supstanci nezavisno izabranih između gliceril masnih estara i sorbitan masnih estara;

komponenta rastvarača obuhvata jednu ili više supstanci nezavisno izabranih između alkilen glikola i polialkilen glikola; i

komponenta sredstva za stabilizaciju obuhvata jednu ili više supstanci nezavisno izabranih između polisaharida.

[0132] U nekim izvođenjima:

uljana komponenta obuhvata jednu ili više supstanci nezavisno izabranih između belog vazelina, cetil alkohola, stearil alkohola, lakog mineralnog ulja, triglicerida srednjeg lanca, i dimetikona; komponenta emulgatora obuhvata jednu ili više supstanci nezavisno izabranih između gliceril stearata i polisorbata 20;

komponenta rastvarača obuhvata jednu ili više supstanci nezavisno izabranih između propilen glikola i polietilen glikola; i

komponenta sredstva za stabilizaciju obuhvata ksantan gumu.

[0133] U nekim izvođenjima, farmaceutska formulacija obuhvata:

od oko 35% do oko 65% vode u odnosu na težinu formulacije;

od oko 2% do oko 15% komponente okluzivnog sredstva u odnosu na težinu formulacije;

1

od oko 2% do oko 8% komponente sredstva za učvršćivanje u odnosu na težinu formulacije; od oko 5% do oko 15% komponente ovlaživača u odnosu na težinu formulacije;

od oko 1% do oko 9% komponente emulgatora u odnosu na težinu formulacije;

od oko 0.05% do oko 5% komponente stabilizatora u odnosu na težinu formulacije;

od oko 10% do oko 35% komponente rastvarača u odnosu na težinu formulacije; i

od oko 0.5% do oko 2.0% jedinjenja iz pronalaska, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, u odnosu na težinu formulacije na slobodno baznoj osnovi.

[0134] U nekim izvođenjima:

komponenta okluzivnog sredstva obuvata vazelin;

komponenta sredstva za učvršćivanje jedne ili više supstanci nezavisno izabrana između jednog ili više masnih alkohola;

komponenta ovlaživača obuhvata jednu ili više supstanci nezavisno izabranih između mineralnih ulja i triglicerida;

komponenta emulgatora obuhvata jednu ili više supstanci nezavisno izabranih između gliceril masnih estara i sorbiran masnih estara;

komponenta sredstva za stabilizaciju obuhvata jednu ili više supstanci nezavisno izabranih između polisaharida; i

komponenta rastvarača obuhvata jednu ili više supstanci nezavisno izabranih između alkilen glikola i polialkilen glikola.

[0135] U nekim izvođenjima:

komponenta okluzivnog sredstva obuhvata beli vazelin;

komponenta sredstva za učvršćivanje obuhvata jednu ili više supstanci nezavisno izabranih između acetil alkohola i stearil alkohola;

komponenta ovlaživača obuhvata jednu ili više supstanci nezavisno izabranih između lakog mineralnog ulja, triglicerida srednjih lanaca, i dimetikona;

komponenta emulgatora obuhvata jednu ili više supstanci nezavisno izabranih između gliceril stearata i polisorbat 20;

komponenta sredstva za stabilizaciju obuhvata ksantan gumu; i

komponenta rastvarača obuhvata jednu ili više supstanci nezavisno izabranih između propilen glikola i polietilen glikola.

[0136] U nekim izvođenjima, farmaceutska formulacija dalje obuvata komponentu antimikrobnog konzervansa.

[0137] U nekim izvođenjima, komponenta antimikrobnog konzervansa se nalazi u količini od oko 0.05% do oko 3% u odnosu na težinu formulacije.

[0138] Kao što se ovde koristi, fraza " komponenta antimikrobnog konzervansa " je suspstanca ili smeša supstanci sa razvojem mikroba u formulaciji.

[0139] U nekim izvođenjima, komponenta antimikrobnog konzervansa obuhvata jednu ili više supstanci nezavisno izabranih između alkil parabena i fenoksietanola.

[0140] U nekim izvođenjima, komponenta antimikrobnog konzervansa obuhvata jednu ili više supstanci nezavisno izabranih između metil parabena, propil parabena, i fenoksietanola.

[0141] U nekim izvođenjima, farmaceutska formulacija dalje obuhvata komponentu helatnog sredstva.

[0142] Kao što se ovde koristi, fraza "komponenta heliratnog sredstva" se odnosi na jedinjenje ili smeše jedinjenja koje ima sposobnost jakog vezivanja sa metalnim jonima.

1

[0143] U nekim izvođenjima, komponenta helatnog sredstva obuhvata edetat dinatrijum.

[0144] Kao što se ovde koristi, "% u odnosu na težinu formulacije" označava procent koncentracije komponente u formulaciji na mas/mas osnovi. Na primer, 1% mas/mas komponente A = [(masa komponente A) / (ukupna masa formulacije)] x 100.

[0145] Kao što se ovde koristi, "% u odnosu na težinu formulacije na slobodno baznoj osnovi" jedinjenja iz pronalaska, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so’ označava da % mas/mas je izračunata na osnovu mase slobodne baze jedinjenja iz pronalaska u ukupnoj formulaciji.

[0146] U nekim izvođenjima, komponente se nalaze u tačno naznačenim opsezima (npr., termin "oko" nije prisutan). U nekim izvođenjima, "oko" znači plus ili minus 10% vrednosti.

[0147] Kao što će biti jasno, neke komponente ovde opisanih farmaceutskih formulacija mogu da sadrže brojne funkcije. Na primer, dobijena supstanca može da deluje i kao komponenta sredstva za emulgovanje i sredstvo za stabilizaciju. U nekim takvim slučajevima, funkcija date komponente može se smatrati jedinstvenom, čak iako njegova svojstva mogu da omoguće višestruku funkcionalnost. U nekim izvođenjima, svaka komponenta iz formulacije obuhvata različite supstance ili smešu supstanci.

[0148] Kao što se ovde koristi, termin "komponenta" može da označi jednu supstancu ili smešu supstanci.

[0149] Kao što se ovde koristi, termin "masna kiselina" se odnosi na alifatičnu kiselinu koja je zasićena ili nezasićena. U nekim izvođenjima, masna kiselina u smeši različitih masnih kiselina. U nekim izvođenjima, masna kiselina ima između oko osam do oko trideset ugljenikovih atoma u proseku. U nekim izvođenjima, masna kiselina ima oko 12 do 20, 14-20, ili 16-18 ugljenikovih atoma u proseku. Pogodne masne kiseline uključuju, ali nisu ograničene na, cetil kiselinu, stearinsku kiselinu, laurinsku kiselinu, miristinsku kiselinu, erukinsku kiselinu, palmitinsku kiselinu, palmitoleinsku kiselinu, kaprinsku kiselinu, kaprilnu kiselinu, oleinsku kiselinu, linolnu kiselinu, linoleinsku kiselinu, hidroksistearinsku kiselinu, 12-hidroksistearinsku kiselinu, cetostearinsku kiselinu, izostearinsku kiselinu, seskvioleinsku kiselinu, seskvi-9-oktadekansku kiselinu, seskvizooktadekansku kiselinu, behensku kiselinu, izobehensku kiselinu, i arahidonsku kiselinu, ili njihove smeše.

[0150] Kao što se ovde koristi, termin "masni alkohol" se odnosi na alifatični alkohol koji je zasićen ili nezasićen. U nekim izvođenjima, masni alkohol u smeši različitih masnih alkohola. U nekim izvođenjima, masni alkohol ima između oko 12 do oko 20, oko 14 do oko 20, ili oko 16 do oko 18 ugljenikovih atoma u proseku. Pogodni masni alkoholi uključuju, ali nisu ograničeni na, stearil alkohol, lauril alkohol, palmitil alkohol, cetil alkohol, kapril alkohol, kaprilil alkohol, oleil alkohol, linolenil alkohol, arahidil alkohol, behenski alkohol, isobehenski alkohol, selahil alkohol, himil alkohol, i linoleil alkohol, ili njihove smeše.

[0151] Kao što se ovde koristi, termin "polialkilen glikol", koji se koristi zasebno ili kombinovano sa drugim terminima, se odnosi na polimer koji sadrži oksialkilen monomerne jedinice, ili kopolimer različitih oksialkilenskih monomerskih jedinica, gde alkilen grupa ima 2 do 6, 2 do 4, ili 2 do 3 atoma ugljenika. Kao što se ovde koristi, termin "oksialkilen", koji se koristi zasebno ili kombinovano sa drugim terminima, odnosi se na grupu formule -O-alkilen-. U nekim izvođenjima, polialkilen glikol je polietilen glikol.

[0152] Kao što se ovde koristi, termin, "sorbitanski masni estar" uključuje proizvode dobijene od sorbitana ili sorbitola i masnih kiselina i, opciono, poli(etilen glikol) jedinice, uključujući sorbitanske estre i polietoksilovane estre sorbitana. U nekim izvođenjima, masni estar sorbitana je polietoksilovani estar sorbitana.

1

[0153] Kao što se ovde koristi, termin "estar sorbitana" se odnosi na jedinjenje, ili smešu jedinjenja, dobijenih esterifikacijom sorbitola i bar jedne masne kiseline. Masne kiseline korisne za dobijanje estara sorbitana uključuju, ali nisu ograničene na, one koji se ovde opisuju. Pogodni estri sorbitana uključuju, ali nisu ograničeni na, Span™ serije (dostupne od Uniqema), koji uključuje Span 20 (sorbitan monolaurat), 40 (sorbitan monopalmitat), 60 (sorbitan monostearat), 65 (sorbitan tristearat), 80 (sorbitan monooleat), i 85 (sorbitan trioleat). Drugi pogodni estri sorbitana uključuju one koji su navedeni u R. C. Rowe and P. J. Shesky, Handbook of pharmaceutical excipients, (2006), 5th ed.

[0154] Kao što se ovde koristi, termin "polietoksilovani estar sorbitana" se odnosi na jedinjenje, ili njegovu smešu, koja se dobija etoksilacijom estra sorbitana. Polioksetilenska porcija jedinjenja može da bude između masnog estra i ostatka sorbitana. Kao što se ovde koristi, termin "estar sorbitana" se odnosi na jedinjenja, ili smešu jedinjenja, dobijenu esterifikacijom sorbitola i bar jedne masne kiseline. Masne kiseline dobijene od polietoksilovanih estara sorbitana uključuju, ali nisu ograničeni na, one koji se ovde opisuju. U nekim izvođenjima, polioksietilenska porcija jedinjenja ili smeše ima oko 2 do oko 200 oksietilenskih jedinica. U nekim izvođenjima, polioksietilenska porcija jedinjenja ili smeše ima oko 2 do oko 100 oksietilenskih jedinica. U nekim izvođenjima, polioksietilenska porcija jedinjenja ili smeše ima oko 4 do oko 80 oksietilenskih jedinica. U nekim izvođenjima, polioksietilenska porcija jedinjenja ili smeše ima oko 4 do oko 40 oksietilenskih jedinica. U nekim izvođenjima, polioksietilenska porcija jedinjenja ili smeše ima oko 4 do oko 20 oksietilenskih jedinica. Pogodni polietoksilovani estri sorbitana uključuju, ali nisu ograničeni na Tween™ serije (dostupne od Uniqema), što uključuje Tween 20 (POE(20) sorbitan monolaurat), 21 (POE(4) sorbitan monolaurat), 40 (POE(20) sorbitan monopalmitat), 60 (POE(20) sorbitan monostearat), 60K (POE(20) sorbitan monostearat), 61 (POE(4) sorbitan monostearat), 65 (POE(20) sorbitan tristearat), 80 (POE(20) sorbitan monooleat), 80K (POE(20) sorbitan monooleat), 81 (POE(5) sorbitan monooleat), i 85 (POE(20) sorbitan trioleat). Kao što se ovde koristi, skraćenica "POE" se odnosi na polioksietilen. Broj koji prati POE skraćenicu se odnosi na broj jedinica oksietilena koji se ponavljaju u jedinjenju. Drugi pogodni polietoksilovani estri sorbitana uključuju polioksietilenske estre masnih kiselina sorbitana koji se navode u R. C. Rowe and P. J. Shesky, Handbook of pharmaceutical excipients, (2006), 5th ed. U nekim izvođenjima, polietoksilovani estar sorbitana je polisorbat. U nekim izvođenjima, polietoksilovani estar sorbitana je polisorbat 20.

[0155] Kao što se ovde koristi, termin "gliceril masni estri" se odnosi na mono-, di- ili trigliceride masnih kiselina. Gliceril masni estri mogu opciono da budu supstituisani sa grupama sulfonske grupe, ili njihovim farmaceutski prihvatljivim solima. Pogodne masne kiseline za dobijanje masnih kiselina uključuju, ali nisu ograničeni na, one koji su ovde opisani. U nekim izvođenjima, gliceril masni estar je mono-glicerid masne kiseline koji ima 12 do 18 ugljenikovih atoma. U nekim izvođenjima, gliceril masni estar je gliceril stearat.

[0156] Kao što se ovde koristi, termin "trigliceridi" se odnosi na triglicerid masne kiseline. U nekim izvođenjima, triglicerid su trigliceridi srednjeg lanca.

[0157] Kao što se ovde koristi, termin "alkilen glikol" se odnosi na grupu formule -O-alkilen-, gde alkilen grupa ima 2 do 6, 2 do 4, ili 2 do 3 ugljenikova atoma. U nekim izvođenjima, alkilen glikol je propilen glikol (1,2-propandiol).

[0158] Kao što se ovde koristi, termin "polietilen glikol" se odnosi na polimer koji sadrži monomerne jedinice etilen glikola formule -O-CH2-CH2-. Pogodni polietilen glikoli mogu da imaju slobodnu hidroksilnu grupu na svakom kraju molekula polimera, ili mogu da imaju jednu ili više hidroksilnih grupa eterifikovanih sa nižim alkilom, npr., metil grupom. Takođe pogodni su derivati polietilen glikola koji imaju karboksi grupe koje mogu da se esterifikuju. Polietilen glikoli korisni u predmetnom pronalasku mogu da budu polimeri bilo koje dužine lanca ili molekulske mase, i mogu da uključe grananje. U nekim

1

izvođenjima, prosečna molekulska masa polietilen glikola je od oko 200 do oko 9000. U nekim izvođenjima, prosečna molekulska masa polietilen glikola je od oko 200 do oko 5000. U nekim izvođenjima, prosečna molekulska masa polietilen glikola je od oko 200 do oko 900. U nekim izvođenjima, prosečna molekulska masa polietilen glikola je oko 400. Pogodni polietilen glikoli uključuju, ali nisu ograničeni na polietilen glikol-200, polietilen glikol-300, polietilen glikol-400, polietilen glikol-600, i polietilen glikol-900. Broj iza crtice u nazivu se odnosi na srednju molekulsku masu polimera.

[0159] Formulacije krema ulja u vodi mogu da se sintetišu prema upotrebi viseće mešalice sa noževima za mešanje sa visokim i niskim smicanjem. Na primer, u nekim izvođenjima, formulacija može da se sintetiše prema sledećoj proceduri.

1. Faza antimikrobnog konzerviranja može da se dobije mešanjem bar porcije antimikrobnog konzervansa sa porcijom komponente konzervansa.

2. Sledeće, faza sredstva za stabilizaciju je pripremljena mešanjem komponente sredstva za stabilizaciju sa porcijom komponente rastvarača.

3. Uljana faza je nakon toga pripremljena mešanjem komponente emolijenta, komponente emulgatora, komponente okluzivnog sredstva, i komponente sredstva za stvrdnjavanje. Uljana faza je zagrejana do 70-80 °C da se otopi i obrazuje jednoobraznu smešu.

4. Vodena faza je sledeža pripremljena mešanjem prečišćene vode, ostatka preostale komponente, i komponente sredstva za helaciju. Faza je zagrejana do 70-80 °C.

5. Vodena faza iz koraka 4, faza antimikrobnog konzervansa iz koraka 1, i jedinjenje iz pronalaska, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, su kombinovani da se obrazuje smeša.

6. Faza stabilizujućeg sredstva iz koraka 2 je zatim dodata u smešu iz koraka 5.

7. Uljana faza iz koraka 3 je zatim kombinovana pod mešanjem sa visokim smicanjem sa smešom iz koraka 6 da se obrazuje emulzija.

8. Konačno, dodatna komponenta antimikrobnog konzervansa može zatim da se doda u emulziju iz koraka 7. Mešanje se nastavlja, i nakon toga je proizvod ohlađen pod uslovima mešanja sa niskim smicanjem.

[0160] Količina jedinjenja ili kompozicije koja se daje pacijentu će se razlikovati u zavisnosti od toga šta se ordinira, svrhe ordiniranja, kao što je profilaksa ili terapija, stanja pacijenta, načina davanja, i slično. U terapeutskim primenama, kompozicije mogu da se ordiniraju pacijentu koji već ima bolest u količini koja je dovoljna da izleči ili bar delom zaustavi simptome bolesti i njene komplikacije. Efektivne doze će zavisiti od stanja bolesti koja se tretira kao i od procene kliničkog lekara u zavisnosti od lekara kao što je težina simptoma bolesti, starosti, težine i opšteg stanja pacijenta, i slično.

[0161] Kompozicije koje se ordiniraju pacijentu mogu da budu u obliku gore opisanih farmaceutskih formulacija. Ove kompozicije mogu da budu sterilisane konvencionalnim postupcima sterilizacije, ili mogu da budu sterilno proceđene. Vodeni rastvori mogu u tom obliku da budu spakovani za upotrebu, ili liofilizovani, liofilizovani preparat se kombinuje sa sterilnim vodenim nosačem u vodi pre ordiniranja. pH jedinjenja preparata že obično biti između 3 i 11, poželjnije od 5 do 9 i najpoželjnije od 7 do 8. Biće jasno da upotreba određenih od navedenih ekscipijenasa, nosača, ili stabilizatora će dovesti do obrazovanja farmaceutskih soli.

[0162] Terapeutska doza jedinjenja iz predmetnog pronalaska može da se razlikuje u skladu sa, na primer, određenom upotrebom za koju je tretman napravljen, načina ordiniranja jedinjenja, zdravlja i stanja pacijenta, i procene lekara koji određuje terapiju. Proporcija ili koncentracija jedinjenja iz pronalaska u farmaceutskoj kompoziciji može da se razlikuje u zavisnosti od brojnih faktora uključujući dozu, hemijske karakteristike (npr., hidrofobnost), i načina ordiniranja. Na primer, jedinjenje iz pronalaska može da bude obezbeđeno u fiziološkom rastvoru pufera u vodi koji sadrži oko 0.1 do oko

2

10% mas/v jedinjenja za parenteralno ordiniranje. Neki uobičajeni dozni opsezi su od oko 1 µg/kg do oko 1 g/kg telesne težine po danu. U nekim izvođenjima, dozni opseg je od oko 0.01 mg/kg do oko 100 mg/kg telesne težine po danu. Doza će verovatno zavisiti od takvih varijabli kao što je tip i obim progresije bolesti ili poremećaja, sveukupni zdravstveni status određenog pacijenta, relativna biološka efikasnost izabranog jedinjenja, formulacije ekscipijensa, i načina njegovog davanja. Efikasne doze mogu da se ekstrapoliraju sa krive doznog odgovora koji je dobiven od in vitro ili životinjskog modela ispitivanih sistema.

[0163] Kompozicije iz pronalaska mogu dalje da uključe jedno ili više dodatnih farmaceutskih sredstava kao što je hemoterapeutik, steroid, anti-inflamatorno jedinjenje, ili imunosupresant, primeri koji se navode gore u tekstu.

Obeležena jedinjenja i postupci ispitivanja

[0164] Drugi aspekt predmetnog pronalaska se odnosi na obeležena jedinjenja iz pronalaska (radioobeležena, fluorescentno obeležena, itd.) koja mogu da budu korisna ne samo za postupke snimanja već takođe u testovima, u in vitro i in vivo, za lokalizovanje i kvantifikovanje JAK u uzorcima tkiva, uključujući humano, i za identifikovanje JAK liganda inhbicijom vezivanja obeleženog jedinjenja. Prema tome, predmetni pronalazak uključuje JAK testove koji sadrže takva obeležena jedinjenja. Predmetni pronalazak dalje uključuje jedinjenja iz pronalaska koja su obeležena izotopima. "Izotopski" ili "radioobeleženo" jedinjenje je jedinjenje iz pronalaska gde su jedan ili više atoma zamenjeni ili supstituisani sa atomom koji ima atomsku masu ili maseni broj različit od atomske mase ili masenog broja koji se obično nalazi u prirodi (tj., javlja se u prirodi). Pogodni radioizotopi koji mogu da budu inkorporisani u jedinjenja iz predmetnog pronalaska uključuju ali nisu ograničeni na<2>H (takođe napisan D za deuterijum),<3>H (takođe napisan T za tricijum),<11>C,<13>C,<14>C,<13>N,<15>N,<15>O,<17>O,<18>O,<18>F,<35>S,<36>C1,<82>Br,<75>Br,<76>Br,<77>Br,<123>I,<124>I,<125>I i<131>I. Radioizotop koji je inkorporisan u trenutno radio-obeležena jedinjenja će zavisiti od specifične primene tog radio-obeleženog jedinjenja. Na primer, za in vitro JAK obeležavanje i kompetitivne testove, jednjenja koja uključuju<3>H,<14>C,<82>Br,<12>5I,<131>I,<35>S ili će generalno najviše biti korisna. Za primene u radiosnimanju<11>C,<18>F,<125>I,<123>I,<124>I,<131>I,<75>Br,<76>Br ili<77>Br će generalno biti najviše korisno.

[0165] Jasno je da "radio-obeleženo " ili "obeleženo jedinjenje" je jedinjenje koje je inkorporisalo bar jedan radioizotop. U nekim izvođenjima radioizotop je izabran iz grupe koja obuhvata<3>H,<14>C,<125>I,<35>S i<82>Br.

[0166] Predmetni pronalazak može dalje da uključi sintetičke postupke za inkorporaciju radio-izotopa u jedinjenjima iz pronalaska. Sintetički postupci za uključivanje radio-izotopa u organskim jedinjenjima su dobro poznati u oblasti tehnike, i stručnjak iz oblasti tehnike će brzo prepoznati postupke koji mogu da se primene na jedinjenjima iz pronalaska.

[0167] Obeleženo jedinjenje pronalaska može da se koristi u skrining testu da se jedinjenja identifikuju/ispitaju. Na primer, novo sintetisano ili identifikovano jedinjenje (tj., jedinjenje koje se ispituje) koje je obeleženo može da se ispita za njegovu sposobnost vezivanja za JAK praćenjem variranja njegove koncentracije kada se dovede u kontakt s JAK, praćenjem obeležavanja. Na primer, jedinjenje koje se ispituje (obeleženo) može da se proceni za njegovu sposobnost da smanji vezivanje sa drugim jedinjenjem za koje je poznao da se vezuje sa JAK (tj., standardno jedinjenje). Prema tome, sposobnost jedinjenja koje se ispituje da bude u kompeticiji sa standardnim jedinjenjem za vezivanje sa JAK direktno korelira sa njegovim afinitetom vezivanja. Suprotno tome, u nekim drugim skrining testovima, standardno jedinjenje je obeleženo i jedinjenja koja se ispituju su neobeležena. Prema tome, koncentracija obeleženog standardnog jedinjenja je praćena da bi se procenila kompeticija između standardnog jedinjenja i jedinjenja koje se ispituje, i relativni afinitet vezivanja jedinjenja koje se ispituje je na taj način utvrđen.

Kitovi

[0168] Predmetni pronalazak takođe uključuje farmaceutske kitove korisne, na primer, u lečenju ili prevenciji JAK-povezanih poremećaja ili bolesti, kao što je kancer, koji uključuje jedan ili više kontejnera koji sadrže farmaceutsku kompoziciju koja obuhvata terapeutski efikasnu količinu jedinjenja iz pronalaska. Takvi kitovi dalje mogu da uključe, ukoliko je potrebno, jedan ili više različitih konvencionalnih komponenti farmaceutskog kita, kao što su, na primer, kontejneri sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivim nosačima, dodatnim kontejnerima, itd., kao što će biti očigledno stručnjacima iz oblasti tehnike. U kit se mogu uključiti instrukcije, ili kao inserti ili kao obeleživači, koji označavaju količinu komponenti koja treba da se ordinira, uputstva za ordiniranja, i/ili uputstva za mešanje komponenti.

[0169] Pronalazak će detaljnije biti opisan korišćenjem specifičnih primera. Primeri koji slede su ponuđeni u svrhu ilustracije, i nisu namenjeni da ograniče pronalazak na bilo koji način. Stručnjaci iz oblasti tehnike će brzo prepoznati različite ne-kritične parametre koji mogu da budu promenjeni ili modifikovani da se u suštini dobiju isti rezultati.

PRIMERI

Primer 1. so fosforne kiseline 3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]oktannitrila

[0170]

Korak 1: Oct-2-ennitril

[0171]

[0172] U rastvor 1.0 M kalijum terc-butoksida u tetrahidrofuranu (165 mL, 0.165 mol) na 0 °C u kapima je dodat rastvor dietil cijanometilfosfonata (27 mL, 0.17 mol) u tetrahidrofuranu (100 mL). Reakcija je zagrejana do sobne temperature i zatim je ohlađena do 0 °C ponovo posle mešanja 30 min. U reakcionu smešu je dodat rastvor heksanala (18 mL, 0.15 mol) u tetrahidrofuranu (150 mL). Reakcija je mešana preko noći, omogućeno je da se zagreje do sobne temperature. Reakcija je ugašena sa vodom i ekstrahovana je sa etil acetatom (EtOAc). Kombinovani organski slojevi su isprani sa slanim rastvorom, osušeni preko MgSO4, koncentrovani, i prečišćeni na silika gelu (eluiranjem sa 0 do 15% EtOAc u heksanima) da se dobije željeni proizvod (∼17 g, 92%) kao smeša cis i trans izomera. MS izračunato za C8H14N(M+H)<+>: m/z = 124.113; Nađeno: 124.3.

Korak 2: 3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]oktannitril

[0173]

[0174] Smeša 4-(1H-pirazol-4-il)-7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidina (u suštini dobijena kao što je opisano u Primeru 65 U.S. Pat. Prij. Pub. No.2007/0135461 ili međunarodne prij. br. PCT/US2006/047369 (objavljena pod WO 2007/070514); 12 g, 0.038 mol), okt-2-ennitrila (6.0 g, 0.049 mol) i 1,8- diazabiciklo[5.4.0]undec-7-ena (DBU, 4.6 mL, 0.030 mol) u acetonitrilu (120 mL, 2.3 mol) je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Posle koncentrovanja u vakuumu, dobijeni ostatak je prešičćen na gelu od silike (eluiranjem sa 0 do 40% EtOAc u heksanima) da se dobije željeni proizvod (15 g, 89.89%). Enantiomeri (vreme zadržavanja prve maksimalne vrednosti 11.02 min, vreme zadržavanja druge maksimalne vrednosti 14.10 min) su razdvojeni na ChiralCel OD-H koloni (30X250 mm, 5µM), eluiranjem sa mobilnom fazom 15% etanola i 85% heksana na 25 mL/min. MS izračunato za C23H35N6OSi(M+H)<+>: m/z = 439.264; Nađeno: 439.4.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.91 (1H, s), 8.38 (1H, s), 8.37 (1H, s), 7.46 (1H, d, J = 3.8 Hz), 6.86 (1H, d, J = 3.8 Hz), 5.73 (2H, s), 4.59 (1H, m), 3.60 (2H, t, J = 8.3 Hz), 3.06 (2H, td, J = 16.8 and 7.5 Hz), 2.21 (1H, m), 2.01 (1H, m), 1.40-1.21 (6H, m), 0.98 (2H, t, J = 8.3 Hz), 0.91 (3H, t, J = 6.3 Hz), 0.00 (9H, s) ppm.

Korak 3: 3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]oktannitril

[0175]

[0176] U rastvor 3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]octannitrila (13 g, 0.030 mol) (pik 2 iz hiralnog razdvajanja u Koraku 2) u acetonitrilu (200.0 mL, 3.829 mol) i vodi (16.0 mL, 0.888 mol, ∼8% acetonitril/voda) je dodat litijum tetrafluoroborat (28.4 g, 0.297 mol). Reakcija je bila na refluksu 100 °C preko noći. Smeša je ohlađena i 7.2 M amonijum hidroksid u vodi (17 mL, 0.12 mol) je dodat u porcijama tokom perioda od 5 minuta na sobnoj temperaturi, podešavajući pH do 9-10 uz mešanje od 2 h. Čvrsta supstanca je uklonjena ceđenjem i ostatak nakon ceđenja je rastvoren sa acetonitrilom, vodom i MeOH za prečišćavanje sa preparativnoj LCMS (XBridge C18 Kolona, eluiranjem sa gradijentom acetonitrila/vodi koji sadrži 0.15% NH4OH) da se dobije željeni proizvod (5.9 g, 64%). MS izračunato za C17H21N6(M+H)<+>: m/z = 309.183; Nađeno: 309.3.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-D6) δ 12.10 (1H, s), 8.78 (1H, s), 8.66 (1H, s), 8.36 (1H, s), 7.58 (1H, m), 6.97 (1H, m), 4.71 (1H, m), 3.18 (1H, m), 3.16 (1H, br s), 1.93 (1H, m), 1.81 (1H, m), 1.19 (5H, m), 0.97 (1H, m), 0.78 (3H, t, J = 6.3 Hz) ppm.

Korak 4. so fosforne kiseline 3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]oktannitrila

[0177] U rastvor 3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]oktannitrila (iz Koraka 3, 4.50 g, 0.0146 mol) u izopropil alkoholu (80 mL, 1 mol) je dodata smeša fosforne kiseline (1.43 g, 0.0146 mol)

2

u izopropanolu (5.0 mL) dok je rastvor držan na 60 °C. So fosforne kiseline je istaložena. Zagrevanje je nastavljeno ali nije uticalo na rastvaranje. Nakon hlađenja do sobne temperature, soli fosforne kiseline su proceđene, osušene na vazduhu, nakon čega su isprane sa malo dietil etra, i osušene na vazduhu. MS izračunato za bazu, C17H21N6(M+H)<+>: m/z = 309.183; Nađeno: 309.3.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.10 (1H, s), 8.79 (1H, s), 8.66 (1H, s), 8.36 (1H, s), 7.58 (1H, d, J = 3.6 Hz), 6.97 (1H, d, J = 3.6 Hz), 4.71 (1H, m), 3.17 (2H, m), 1.94 (1H, m), 1.81 (1H, m), 1.18 (5H, m), 0.97 (1H, m), 0.78 (3H, t, J = 6.8 Hz). Potvrđeno je da je proizvod 99.9% čist pomoću tri različita nanošenja na reverzno faznoj HPLC koloni, i ima 99.7% viša enantiomera sa šest različitih nanošenja na hiralnoj HPLC koloni.

Primer 2. so fosforne kiseline 3-[-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]heptannitrila

[0178]

Korak 1. Hept-2-ennitril

[0179]

[0180] U rastvor 1.00 M kalijum terc-butoksida u tetrahidrofuranu (49.3 mL, 49.3 mmol) na 0 °C u kapima je dodat rastvor dietil cijanometilfosfonata (8.37 mL, 51.7 mmol) u tetrahidrofuranu (63 mL). Reakcija je zagrejana do sobne temperature i zatim je ponovo ohlađena do 0 °C. U reakcionu smešu je dodat rastvor pentanala (5.0 mL, 47 mmol) u tetrahidrofuranu (12.6 mL). Reakciji je omogućeno zagrevanje do sobne temperature i mešanje preko noći. Posle gašenja sa vodom, smeša je ekstrahovana sa etrom. Kombinovani organski slojevi su isprani sa slanim rastvorom, osušeni, i upareni do isušivanja. Sirova smeša je direktno korišćena u sledećem koraku. LCMS izračunato za C7H12N(M+H)<+>: m/z = 110.1; Nađeno: 110.3.

Korak 2. 3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]heptannitril

[0181]

[0182] U rastvor 4-(1H-pirazol-4-il)-7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidina (6.1 g, 19 mmol) u acetonitrilu (58 mL) je dodat sirov hept-2-ennitril (2.6 g, 23 mmol), nakon čega se dodaje 1,8-diazabiciklo[5.4.0]undec7-en (3.49 mL, 23.4 mmol). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko vikenda i zatim je uparen do isušivanja. Ostatak je prečišćen na gelu od silike, eluiran sa 0 do 50% etil acetata u heksanu, da se dobije željeni proizvod (6.90 g, 84%). LCMS izračunato za C22H33N6OSi(M+H)<+>: m/z = 425.2; Nađeno: 425.4. Racemska smeša je primenjena na OD-H koloni (3x25cm, 5 µM), eluiranjem sa 15% etanolom i 85% smeši heksana na brzini protoka sa 28 mL/min da se dobiju dva željena enantiomera. Vreme zadržavanja prvog pika 9.46 min; drugi pik (3.45 g) vreme zadržavanja 12.35 min.

Korak 3.3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]heptannitril

[0183]

[0184] Balon zapremine 500 mL sa okruglim dnom koji je opremljen sa mešalicom, kondenzatorom i dovodom za azot, je napunjen sa acetonitrilom (58 mL), vodom (5.0 mL), 3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]heptannitrilom (2-i pik od hiralnog razdvajanja u Koraku 2, 3.50 g, 8.24 mmol), i litijum tetrafluoroboratom (7.88 g, 82.4 mmol). Smeša je zagrejana do refluksa preko noći. U reakcionu smešu je dodato 7.2 M amonijum hidroksida u vodi (4.3 mL, 31 mmol) u porcijama tokom perioda od 5 minuta na sobnoj temperaturi u podešavanje pH do 9-10. Dobijena reakciona smeša je mešana 2 sata na sobnoj temperaturi. Čvrsta supstanca je uklonjena ceđenjem i ostatak nakon ceđenja je prečišćen na RP-HPLC (XBridge kolona C18, 30 x 100 mm 5 µM; sa zapreminom injekcije 5 mL i brzinom protoka 60 mL/min; na gradijentu vode i acetonitrila i 0.15% NH4OH) da se dobije željeni proizvod (1.79 g, 74%). LCMS izračunato za C16H19N6(M+H)<+>: m/z = 295.2; Nađeno: 295.2.

Korak 4.3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]heptannitril fosfat

[0185] U rastvor 3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]heptannitrila (0.363 g, 1.23 mmol) u izopropil alkoholu (8.0 mL) je dodata fosforna kiselina (0.133 g, 1.36 mmol) u 1.0 mL izopropil alkoholu na 60 °C. Smeša je zagrejana na 60 °C 1 h, zatim je ohlađena do sobne temperature. Precipitat je proceđen filtriran i osušen na vazduhu, ispran sa etil etrom, nakon čega je dalje osušen na vazduhu da se dobije željena so fosforne kiseline (418 mg, 86.5%).<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 12.10 (1H, s), 8.78 (1H, s), 8.66 (1H, s), 8.36 (1H, s), 7.58 (1H, m), 6.97 (1H, m), 4.71 (1H, m), 3.18 (1H, m), 3.17 (1H, m), 1.93 (1H, m), 1.82 (1H, m), 1.21 (3H, m), 0.95 (1H, m), 0.78 (3H, t, J = 7.2 Hz) ppm.

Primer A: In vitro JAK kinazni test

[0186] Jedinjenja iz pronalaska su ispitana za inhibitornu aktivnost JAK meta u skladu sa sledećim in vitro testom koji je opisan u Park et al., Analytical Biochemistry 1999, 269, 94-104. Katalitički domeni JAK1 (a.a.837-1142), JAK2 (a.a.828-1132) i JAK3 (a.a.781-1124) sa N-terminalnim His obeleživačem su eksprimirani upotrebom bakulovirusa u ćelijama insekta i prečišćeni. Katalitička aktivnost JAK1, JAK2 ili JAK3 je ispitana merenjem fosforilacije biotinilovanog peptida. Fosforilovani peptid je detektovan homogenom fluorescencijom koja se razvija u vremenu (HTRF). IC50je merena za svaku kinazu u 40 µL

2

reakcijama koje sadrže enzim, ATP i 500 nM peptida u 50 mM Tris (pH 7.8) puferu sa 100 mM NaCl, 5 mM DTT, i 0.1 mg/mL (0.01%) BSA. Koncentracija ATP u rekacijama je bila 90 µM za Jak1, 30 µM za Jak2 i 3 µM za Jak3. Reakcije su izvedene na sobnoj temperaturi 1 hr i zatim su zaustavljene sa 20 µL 45 mM EDTA, 300 nM SA-APC, 6 nM Eu-Py20 u test puferu (Perkin Elmer, Boston, MA). Vezivanje sa Europium obeleženim antitelom se dogodilo tokom 40 minuta i signal HTRF je izmeren na Fusion čitaču ploča (Perkin Elmer, Boston, MA).

[0187] Pronađeno je da su jedinjenja iz pronalaska potentni JAK inhibitori. Za Primer 1, pronađeno je da enantiomer koji se dobija iz pika 2 koraka hiralnog razdvajanja ima vrednost IC50manju od 10 nM za JAK2. Oblik soli fosforne kiseline istog enantiomera je bio slično aktivan. Takođe za Primer 1, enantiomer koji se dobija iz pika 1 koraka hiralnog razdvajanja je takođe pronađeno da ima vrednost IC50manju od 10 nM za JAK2, iako nije tako potentan kao drugi enantiomer.

Tabela 1

Primer B: Ćelijski testovi

[0188] Linije ćelija kancera koje zavise od citokina i prema tome JAK/STAT prenosa signala, za rast (npr., INA-6), su zasejane na 6000 ćelija po bunariću (format ploče sa 96 bunarića) u RPMI 1640, 10% FBS, i 1 ng/mL odgovarajućeg citokina. Jedinjenja su dodata ćelijama u DMSO/medijumu (konačna koncentracija 0.2% DMSO) i inkubirane su 72 časa na 37 °C, 5% CO2. Efekat jedinjenja na ćelijsku vijabilnost je procenjen upotrebom CellTiter-Glo Luminescentnog Testa za ispitivanje ćelijske vijabilnosti (Promega) zatim sa TopCount (Perkin Elmer, Boston, MA) kvantifikovanjem. Potencijalni efekti jedinjenja koji nisu usmereni na metu su paralelno mereni upotrebom ne-JAK usmerene ćelijske linije sa istim očitavanjem testa. Svi eksperimenti se obično izvode u duplikatu.

[0189] Gore navedene ćelijske linije su korišćene za ispititvanje efekata jedinjenja na fosforilaciju JAK kinaza ili potencijalnih nishodnih supstrata kao što su STAT proteini, Akt, Shp2, ili Erk. Ovi eksperimenti su izvedeni nako nedostatka citokina preko noći, zatim sledi kratko pre-inkubiranje sa jedinjenjem (2 časa ili manje) i stimulacijom citokinima od približno 1 časa ili manje. Proteini su nakon toga ekstrahovani iz ćelija i analizirani postupcima koji su poznati stručnjacima iz oblati tehnike kao što su Western blotting ili ELISA test upotrebom antitela koja mogu da razlikuju fosforilovani i ukupni protein. Ovi eksperimenti koriste normalne ili ćelije kancera da se ispita aktivnost jedinjenja na biologiju preživljavanja tumorske ćelije ili na medijatorima inflamatorne bolesti. Na primer, u vezi sa poslednjim, citokini kao što su IL-6, IL-12, IL-23, ili IFN su korišćeni da stimulišu aktivaciju JAK što dovodi do fosforilacije STAT protein(a) i potencijalno u transkripcionim profilima (koji su ispitani čipom ili tehnologijom qPCR) ili proizvodnje i/ili sekrecije proteina, kao što je IL-17. Sposobnosti jedinjenja da inhibiraju ove efekt posredovane citokinima su izmereni postupcima koji su uobičajeni stručnjacima iz oblasti tehnike.

2

[0190] Jedinjenja iz pronalaska mogu da se ispitaju u ćelijskim modelima dizajniranim da se ispita njihova potencija i aktivnost prema mutiranim JAKs, na primer, JAK2V617F mutacija je pronađena u mijeloidnim proliferativnim poremećajima. Ovi eksperimenti često koriste ćelije koje zavise od citokina hematološke linije (npr. BaF/3) u kojoj su JAK kinaze divljeg tipa ili mutirane ektopično eksprimirane (James, C., et al. Nature 434:1144-1148; Staerk, J., et al. JBC 280:41893-41899). Krajnje tačke uključuju efekte jedinjenja na ćelijsko preživljavanje, proliferaciju, i fosforilovane JAK, STAT, Akt, ili Erk proteine.

[0191] Jedinjenja iz pronalaska mogu da se procene za njihovu aktivnost inhibiranja T-ćelijske proliferacije. Takav test može da se posmatra kao test proliferacije (tj. JAK) pokrenute drugim citokinom i takođe je pojednostavljeni test imunske supresije ili inibicije imunske aktivacije. Sledi kratak pregled kako se takvi eksperimenti izvode. Mononuklearne ćelije iz periferne krvi (PBMCs) su dobijene iz uzoraka pune krvi čoveka upotrebom Ficoll Hypaque postupka razdvajanja i T-ćelije (frakcija 2000) su dobijene iz PBMC-a elutrijacijom. Sveže izolovane humane T-ćelije su održavane u medijumu kulture koji je dopunjen sa (RPMI 1640 dopunjen sa 10% serumum iz fetusa govečeta, 100 U/ml penicilinom, 100 µg/ml streptomicinom) na gustini od 2 x 10<6>ćelija/ml na 37 °C do 2 dana. Za analizu stimulisane ćelijske proliferacije IL-2, T-ćelije su prvo tretirane sa Fitohemaglutininom (PHA) na konačnoj koncentraciji od 10 µg/mL tokom 72. Nakon jednog ispiranja sa PBS, 6000 ćelija/bunariću su zasejane na ploče sa 96-bunarića i tretirane sa jedinjenjima na različitim koncentracijama u medijumu kulture u prisustvu 100 U/mL humanog IL-2 (ProSpec-Tany TechnoGene; Rehovot, Israel). Ploče su inkubirane na 37 °C tokom 72 i indeks proliferacije je procenjen upotrebom CellTiter-Glo Luminescentnih reagenasa u skladu sa fabrički predloženim protokolom (Promega; Madison, WI).

Primer C: In vivo anti-tumorska efikasnost

[0192] Jedinjenja iz pronalaska mogu da se procene u modelima ksenografta humanog tumora kod imunski kompromitovanih miševa. Na primer, tumorogena varijanta INA-6 plazmacitoma ćelijske linije može da se koristi za subkutanoznu inokulaciju SCID miševa (Burger, R., et al. Hematol J.2:42-53, 2001). Životinje koje nose tumor su nakon toga nasumično raspoređene u grupe koje su tretirane sa lekom ili sa nosačem i različite doze jedinjenja mogu da se ordiniranju bilo kojim brojem uobičajenih načina davanja uključujući oralno, i.p., ili kontinuiranom infuzijom korišćenjem implantabilnih pumpi. Tumorski rast tokom vremena može da se prati pomoću šublera. Dalje, uzorci tumora mogu da budu sakupljeni u bilo kom vremenu nakon početka tretmana za analizu kao što je opisano gore u tekstu (Primer B) da se procene efekti jedinjenja na JAK aktivnost i nishodne signalne puteve. Dodatno, selektivnost jedinjenja može da se ispita upotrebom modela ksenografta tumora koji su pokrenuti sa drugim poznatim kinazama (npr. Bcr-Abl) kao što je K562 model tumora.

Primer D: Ispitivanje odgovora kasnog tipa reakcije kontaktne preosetljiivosti mišje kože

[0193] Jedinjenja iz pronalaska mogu takođe da se ispitaju za efikasnost (inhibiranja JAK meta) u T-ćelijski usmerenom modelu kojim se ispituje mišji kasni tip reakcije preosetljivosti. Kasni tip odgovora kontaktne preosetljivosti mišje kože (DTH) se smatra validnim modelom kliničkog kontaktnog dermatitisa, i drugih T-limfocitima posredovanih imunskih poremećaja kože, kao što je psorijaza (Immunol Today.1998 Jan;19(1):37-44). Mišji DTH deli brojne karakteristike sa psorijazom, uključujući infiltrat imunskih ćelija, i prateće povećanje u inflamatornim citokinima, i hiperproliferaciji keratinocita. Dalje, mnoge klase sredstava koji su efikasni u lečenju u klinici su takođe efikasni inhibitori DTH odgovora kod miševa (Agents Actions.1993 Jan;38(1-2):116-21).

[0194] U danu 0 i 1, Balb/c miševi su senzibilisani sa lokalnom primenom, na njihovom obrijanom abdomenu sa antigenom 2,4,dinitro-fluorobenzenom (DNFB). U danu 5, uši su merene za zadebljanje korišenjem inžinjerskog mikrometra. Ovo merenje je snimljeno i korišeno je kao bazalni nivo. Oba životinjska uha su nakon toga izazvana sa lokalnom primenom DNFB u ukupno 20 µL (10 µL na

2

unutrašnjoj školjci i 10 µL na spoljašnjoj školjci) na koncentraciji od 0.2%. Dvadeset četiri do sedamdeset dva časa posle izazova, uši su ponovo merene. Tretman sa jedinjenjem koje se ispituje je dat kroz senzibilizaciju i faze izazova (dan -1 do dan 7) ili pre ili tokom faze izazova (obično popodne u danu 4 do dana 7). Tretman jedinjenja koja se ispituju (u različitim koncentracijama) je ordiniran ili sistemski ili lokalno (lokalna primena tretmana na ušima). Efikasnost jedinjenja koje se ispituje je naznačena sa smanjenjem u oticanju uha u poređenju sa situacijom bez tretmana. Ukoliko jedinjenje uzrokuje smanjenje od 20% ili više onda se smatra efikasnim. U nekim eksperimentima, miševi su izazavani ali nisu senzibilisani (negativna kontola).

[0195] Efekat inhibicije (inhibiranje aktivacije puteva JAK-STAT) jedinjenja koja se ispituju mogu da se potvrde sa imunohistohemijkom analizom. Aktivacija JAK-STAT puta(eva) dovodi do obrazovanja i premeštanja funkcionalnih transkripcionih faktora. Dalje, influks imunskih ćelija i povećana proliferacija keratinocita treba takođe da obezbedi jedinstvene promene profila ekspresije u uhu koji mogu da budu istraženi i kvantifikovani. Preseci uha fiksirani u formalinu i ukalupljeni u parafinu (sakupljeni posle faze izazova u DTH modelu) u podvrgnuti imunohistohemijskoj analizi upotrebom antitela koje specifično interaguje sa fosforilovanim STAT3 (klon 58E12, Cell Signaling Technologies). Mišje uši su tretirane radi poređenja, sa jedinjenjem koje se ispituje, nosačem, ili deksametazonom (klinički efikasan tretman za psorijazu), ili bez bilo kog tretmana, u DTH modelu. Jedinjenje koje se ispituje i deksametazon mogu da proizvode slične transkripcione promene i kvalitativno i kvantitativno, i oba, jedinjenje koje se ispituje i deksametazon mogu da smanje broj infiltriranih ćelija. I sistemska i lokalna primena jedinjenja koje se ispituje može da proizvede inhibitorni efekat, tj., smanjenje u broju infiltriranih ćelija i inhibiciju promena na nivou transkripcije.

Primer E: In vivo anti-inflamatorna aktivnost

[0196] Jedinjenja iz pronalaska mogu da budu procenjena kod modela glodara ili u modelima koji ne obuhvataju glodare koji su dizajnirani da repliciraju pojedinačni ili kompleksni inflamatorni odgovor. Na primer, modeli artritisa kod glodara mogu da se koriste za ispitivanje terapeutskog potencijala jedinjenja koja su dozirana preventivno ili terapeutski. Ovi modeli uključuju ali nisu ograničeni na artritis indukovan kolagenom kod miša ili pacova, artritis indukovan adjuvansom kod pacova, i artritis indukovan antitelom prema kolagenu. Autoimunske bolesti, uključujući ali bez ograničenja na, multiple sklerozu, tip I-dijabetes melitus, uveoretinitis, tiroiditis, mijastenija gravis, imunoglobulinske nefropatije, miokarditis, senzibilizacija disajnih puteva (astma), lupus, ili kolitis mogu takođe da se koriste da se proceni terapeutski potencijal ovde navedenih jedinjenja. Ovi modeli su dobro uspostavljeni u istraživačkoj zajednici i poznati su onima koji su školovani iz oblasti tehnike (Current Protocols in Immunology, Vol 3., Coligan, J.E. et al, Wiley Press.; Methods in Molecular Biology: Vol.

225, Inflammation Protocols., Winyard, P.G. and Willoughby, D.A., Humana Press, 2003.).

Primer F: Životinjski modeli za tretman suvog oka, uveitisa, i konjuktivitisa

[0197] Sredstva mogu da budu procenjena u jednom ili više prekliničkih modela suvog oka koji su poznati školovanima iz ove oblasti tehnike uključujući, ali bez ograničenja, zečji konkanavalin A (ConA) model suzne žlezde, skopolaminski mišji modela (subkutanozni ili transdermalni), Botulinumn mišji model suzne žlezde, ili bilo koji broj spontanih autoimukih modela glodara koji dovode do disfunkcije žlezde oka (npr. NOD-SCID, MRL/lpr, ili NZB/NZW) (Barabino et al., Experimental Eye Research 2004, 79, 613-621 and Schrader et al., Developmental Opthalmology, Karger 2008, 41, 298-312). Krajnje tačke u ovim modelima mogu da uključe histopatologiju očnih žlezdi i oka (rožnjače, itd.) i moguće klasičan Schirmer-ov test ili njegove modifikovane verzije (Barabino et al.) koji meri proizvodnju suza. Aktivnost može da bude procenjena doziranjem brojnim načinima ordiniranja (npr. sistemski ili lokalno) koja može početi pre ili nakon postojanja merljive bolesti.

2

[0198] Sredstva mogu biti procenjena u jednom ili više prekliničkih modela uveitisa koji su poznati školovanima iz oblasti tehnike. Oni uključuju, ali nisu ograničeni na, modele eksperimentalnog autoimunskog uveitisa (EAU) i uveitisa indukovanog endotoksinom (EIU). EAU eksperimenti mogu da se sprovedu kod zeca, pacova, ili miša i mogu da uključe pasivnu ili aktivnu imunizaciju. Na primer, bilo koji od brojnih antigena mrežnjače može da se koristi za senzibilisanje životinja sa relevantnim imunogenom posle čega životinje mogu očno da budu izazvane sa istim antigenom. EIU model je akutniji i uključuje lokalno ili sistemsko davanje lipopolisaharida u subletalnim dozama. Krajnje tačke i za EIU i EAU modele mogu da uključe fundoskopski pregled, histopatološki između ostalih. Ovi modeli su dati pregledom u Smith et al. (Immunology and Cell Biology 1998, 76, 497-512). Aktivnost je procenjena doziranjem brojnim načinima ordiniranja (npr. sistemski ili lokalno) koj može da počne pre ili nakon postojanja merljive bolesti. Neki modeli navedeni gore u tekstu mogu takođe da razviju skleritis/episkleritis, horioditis, ciklitis, ili iritis i prema tome su korisni u ispitivanju potencijalne aktivnosti jedinjenja za terapeutski tretman ovih bolesti.

[0199] Sredstva se takođe mogu proceniti u jednom ili više prekliničkih modela konjuktivitisa koji su poznati školovanima iz oblasti tehnike. Oni uključuju, ali nisu ograničeni na, modele glodara koji koriste zamorca, pacova, ili miša. Modeli zamoraca uključuju aktivnu ili pasivnu imunizaciju i/ili protokole imunskog izazova sa antigenima kao što je ovoalbumin ili ambrozija (pregled je dat Groneberg, D.A., et al., Allergy 2003, 58, 1101-1113). Modeli pacova i miša su slični u opštem dizajnu sa onim kod zamorca (takođe je pregled dat u Groneberg). Aktivnost može da se poceni doziranjem sa brojim načinima ordiniranja (npr. sistemskim ili lokalnim) koji mogu da počnu pre ili nakon postojanja merljive bolesti. Krajnje tačke takvih ispitivanja mogu da uključe, na primer, histološke, imunološke, biohemijske, ili molekularne analize očnih tkiva kao što je konjuktiva.

2

Claims (20)

1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje, koje je izabrano između: 3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]oktannitrila; i 3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]heptannitrila; ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.
2. 2. Jedinjenje prema zahtevu 1, koje je: (a) 3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]primidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]oktannitril, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so; (b) (3R)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]primidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]oktannitril, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so; (c) (3S)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]primidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]oktannitril, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so; (d) so fosforne kiseline 3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]primidin-4-il)-1H- pirazol-1-il]oktannitrila ; (e) so fosforne kiseline (3R)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]primidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]oktannitrila ; (f) so fosforne kiseline (3S)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]primidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]oktannitrila ; (g) 3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]primidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]heptannitril, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so; (h) (3R)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]primidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]heptannitril, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so; (i) (3S)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]primidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]heptannitril, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so; (j) so fosforne kiseline 3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]primidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]heptannitrila ; (k) so fosforne kiseline (3R)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]primidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]heptannitrila ; ili (l) so fosforne kiseline(3S)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]primidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]heptannitrila .
3. 3. Kompozicija koja obuhvata jedinjenje ili so prema zahtevu 1 ili zahtevu 2, i bar jedan farmaceutski prihvatljivi nosač.
4. 4. Kompozicija prema zahtevu 3 koja je pogodna za (a) lokalno ordiniranje; ili (b) za transdermalno ordiniranje.
5. 5. Kompozicija prema zahtevu 4 (b) koja je u obliku transdermalnog flastera, masti, losiona, kreme, ili gela.
6. 6. Jedinjenje ili so prema zahtevu 1 ili zahtevu 2 za upotrebu u lečenju bolesti pacijenta, pri čemu je pomenuta bolest povezana sa JAK aktivnosti.
7. 7. Jedinjenje ili so prema zahtevu 1 ili zahtevu 2 za upotrebu u lečenju (a) autoimunske bolesti; (b) kancera; (c) mijeloproliferativnog poremećaja; (d) inflamatorne bolesti; (e) virusne bolesti; (f) odbacivanja transplanta organa; (g) ishemijske povrede reperfuzijom ili bolesti koja je povezana sa inflamatornim ishemijskim događajem; (h) anoreksije ili kaheksije; (i) slabosti; (j) odbacivanja alografta ili bolesti grafta protiv domaćina; (k) reumatoidnog artritisa; (l) psorijaze; (m) dermatitisa; (n) iritisa; (o) uveitisa; (p) skleritisa; ili (q) konjuktivitisa.
8. 8. Jedinjenje za upotrebu prema zahtevu 7(a) pri čemu je pomenuta autoimunska bolest : (a) poremećaj kože, multiple skleroza, reumatoidni artritis, psorijazni artritis, juvenilni artritis, tip I dijabetesa, lupus, psorijaza, inflamatorna bolest creva, Kronova bolest, mijastenija gravis, imunoglobulinske nefropatije, miokarditis ili autoimunski poremećaj tiroidee; (b) bulozni kožni poremećaj; (c) reumatoidni artritis; ili (d) poremećaj kože.
9. 9. Jedinjenje za upotrebu prema zahtevu 8(b) gde pomenuti bulozni kožni poremećaj je pemfigus vulgaris (PV) ili bulozni pemfigoid (BP).
10. 10. Jedinjenje za upotrebu prema zahtevu 8(d) gde je pomenuti kožni poremećaj (a) atopični dermatitis ili psorijaza; ili (b) senzibilizacija kože, iritacija kože, kožni osip, kontaktni dermatitis ili alergijska kontaktna senzibilizacija.
11. 11. Jedinjenje za upotrebu prema zahtevu 7(b) gde je pomenuti kancer (a) čvrsti tumor; (b) kancer prostate, kancer bubrega, hepatični kancer, kancer grudi, kancer pluća, kancer tiroidee, Kapošijev sarkom, Kastelmanova bolest ili kancer pankreasa; (c) limfom, leukemija, ili multipli mijelom; ili (d) kožni T-ćelijski limfom ili kožni B-ćelijski limfom. 1
12. 12. Jedinjenje za upotrebu prema zahtevu 7(c) gde je pomenuti mijeloproliferativni poremećaj policitemija vera (PV), esencijelna trombocitemija (ET), primarna mijelofibroza (PMF), hronična mijelogena leukemija (CML), hronična mijelomonocitna leukemija (CMML), hipereozinofilni sindrom (HES), idiopatska mijelofibroza (IMF), ili sistemska bolest mast ćelija (SMCD).
13. 13. Jedinjenje za upotrebu prema zahtevu 7(d), gde je pomenuta inflamatorna bolest iritis, uveitis, skleritis, konjuktivitis, inflamatorna bolest respiratornog trakta, inflamatorna miopatija, ili miokarditis.
14. 14. Jedinjenje za upotrebu prema zahtevu 7(e) gde je pomenuta virusna bolest Epštajn Barov Virus (EBV), Hepatitis B, Hepatitis C, HIV, HTLV 1, Varičela-Zoster Virus (VZV) ili Humani Papiloma Virus (HPV).
15. 15. Postupak za dobijanje soli fosforne kiseline jedinjenja formule III:

    gde R<1>je H ili metil, koji obuhvata kombinovanje jedinjenja formule III sa fosfornom kiselinom.
16. 16. Postupak prema zahtevu 15, gde je pomenuti postupak postupak za dobijanje: (a) soli fosforne kiseline 3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]oktannitrila ; ili (b) soli fosforne kiseline 3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]heptannitrila .
17. 17. Postupak prema zahtevu 15 ili zahtevu 16, gde se pomenuto kombinovanje izvodi u prisustvu organskog rastvarača.
18. 18. Postupak prema zahtevu 17, gde je organski rastvarač alkohol.
19. 19. Postupak prema zahtevu 18, gde je alkohol izabran iz grupe koja obuhvata metanol, etanol, izopropanol, i butanol.
20. 20. Postupak prema zahtevu 15 ili zahtevu 16, gde se kombinovanje izvodi na temperaturi koja je (a) veća od oko 20 °C; ili (b) 60 °C. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5 2