RS62853B1 - Proteini koji vezuju kalikrein plazme - Google Patents

Proteini koji vezuju kalikrein plazme

Info

Publication number
RS62853B1
RS62853B1 RS20220075A RSP20220075A RS62853B1 RS 62853 B1 RS62853 B1 RS 62853B1 RS 20220075 A RS20220075 A RS 20220075A RS P20220075 A RSP20220075 A RS P20220075A RS 62853 B1 RS62853 B1 RS 62853B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
antibody
protein
plasma kallikrein
sequence
human
Prior art date
Application number
RS20220075A
Other languages
English (en)
Inventor
Daniel J Sexton
Malini Viswanathan
Original Assignee
Takeda Pharmaceuticals Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Takeda Pharmaceuticals Co filed Critical Takeda Pharmaceuticals Co
Publication of RS62853B1 publication Critical patent/RS62853B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/40—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/0004—Screening or testing of compounds for diagnosis of disorders, assessment of conditions, e.g. renal clearance, gastric emptying, testing for diabetes, allergy, rheuma, pancreas functions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/02—Stomatological preparations, e.g. drugs for caries, aphtae, periodontitis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/06—Antigout agents, e.g. antihyperuricemic or uricosuric agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/04—Centrally acting analgesics, e.g. opioids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/10—Antioedematous agents; Diuretics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)

Description

Opis
STANJE TEHNIKE
[0001] Kalikrein plazme je serinska proteaza. Prekalikrein je prekursor kalikreina plazme.
SAŽETAK
[0002] Kalikrein plazme je serinska proteaza komponenta kontaktnog sistema i potencijalna meta lekova za različite upalne, kardiovaskularne, infektivne (sepsa) i onkološke bolesti (Sainz I.M. i dr., Thromb Haemost 98, 77-83, 2007). Kontaktni sistem se aktivira ili faktorom XIIa nakon izlaganja stranim ili negativno naelektrisanim površinama ili površinama endotelnih ćelija pomoću prolilarkarboksipeptidaza (SLIKA 1) (Sainz I.M. i dr., Thromb Haemost 98, 77-83, 2007). Aktivacija kalikreina plazme pojačava intrističku koagulaciju pomoću aktivacije povratne sprege faktora XII i poboljšava upale kroz proizvodnju proupalnog neapeptidnog bradikinina. Kao primarna kininogenaza u cirkulaciji, kalikrein plazme je u velikoj meri odgovoran za stvaranje bradikinina u vaskulaturi. Genetski nedostatak proteina inhibitora C1 (C1-INH), glavnog prirodnog inhibitora kalikreina plazme, dovodi do naslednog angioedema (HAE). Pacijenti sa HAE pate od akutnih napada bolnih edema koji često izazivaju nepoznati pokretači (Zuraw B.L. i dr., N Engl J Med 359, 1027-1036, 2008). Kroz upotrebu farmakoloških agenasa ili genetskih studija u modelima životinja, sistem kalikrein plazme-kinin (plazma KKS) je impliciran u različitim bolestima.
[0003] WO 2005/075665 opisuje ljudski KLKB1 koji je povezan sa kardiovaskularnim poremećajima, poremećajima endokrinog sistema i hormonima, metaboličkim bolestima, gastrointestinalnim i jetrenim oboljenjima, inflamatornim bolestima, poremećajima raka, poremećajima mišićno-skeleta, neurološkim poremećajima i urološkim poremećajima.
[0004] Vezujući proteini kalikreina plazme (npr., antitela, npr., inhibitorna antitela) su korisni terapeutski agensi za razne bolesti i stanja, npr. bolesti i stanja koji uključuju aktivnost kalikreina plazme, zbog svoje visoke potencije, specifičnosti i produžen zadržavanje u serumu. Visoka potencija može da znači efikasnost i pri niskoj dozi leka, i visoka specifičnost može smanjiti neželjene efekte zbog inhibicije srodnih serinskih proteaza van mete.
Generalno, serinske proteaze malih molekula nisu specifične kao antitela inhibitori. Produžen zadržavanje u serumu može dozvoliti neuredno doziranje.
[0005] U nekim aspektima, pronalazak se odnosi na izolovani protein (npr. antitelo, npr. ljudsko antitelo) koji se vezuje za aktivni oblik kalikreina plazme (npr. ljudski kalikrein plazme i/ili mišji kalikrein plazme) i, na primer, ne vezuje prekalikrein plazme (npr. ljudski prekalikrein plazme i/ili mišji prekalikrein plazme), kako je definisano u patentnim zahtevima.
[0006] Pronalazak obezbeđuje nukleinsku(e) kiselinu(e) koja kodira antitelo izabrano iz grupe koju čine:
(i) antitelo koje obuhvata VH sekvencu
i VH sekvencu
(ii) antitelo koje obuhvata VH sekvencu
i VH sekvencu
(iii) antitelo koje obuhvata VH sekvencu
i VH sekvencu
(iv) antitelo koje obuhvata VH sekvencu
i VH sekvencu
(v) antitelo koje sad obuhvata rži VH sekvencu i VH sekvencu
(vi) antitelo koje obuhvata VH sekvencu
i VH sekvencu
(vii) antitelo koje obuhvata VH sekvencu
i VH sekvencu
(viii) antitelo koje obuhvata VH sekvencu i VH sekvencu
(ix) antitelo koje obuhvata VH sekvencu
i VH sekvencu
(x) antitelo koje obuhvata VH sekvencu
i VH sekvencu
(xi) antitelo koje obuhvata VH sekvencu
i VH sekvencu
(xii) antitelo koje obuhvata VH sekvencu
i VH sekvencu
(xiii) antitelo koje obuhvata VH sekvencu
i VH sekvencu
(xiv) antitelo koje obuhvata VH sekvencu
i VH sekvencu
(xv) antitelo koje obuhvata VH sekvencu
i VH sekvencu
(xvi) antitelo koje obuhvata VH sekvencu i VH sekvencu
(xvii) antitelo koje obuhvata VH sekvencu i VH sekvencu
i
(xviii) antitelo koje obuhvata VH sekvencu
i VH sekvencu
[0007] Pronalazak dalje obezbeđuje vektor(e) koji sadrži nukleinsku(e) kiselinu(e) pronalaska.
[0008] Pronalazak dalje obezbeđuje ćeliju domaćina koja sadrži nukleinsku(e) kiselinu(e) pronalaska ili vektor(e) pronalaska.
[0009] Pronalazak dalje obezbeđuje metod za proizvodnju antitela koje se vezuje za aktivni oblik kalikreina ljudske plazme i ne vezuje humani prekalikrein, koji obuhvata kultivisanje ćelije domaćina pronalaska u medijumu kulture, čime se proizvodi antitelo.
[0010] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme vezuje isti epitop ili se nadmeće za vezivanje sa vezujućim proteinom kalikreina koji je ovde opisan. U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme vezuje isti epitop ili se nadmeće za vezivanje sa proteinom (npr., epi-Kal2) i/ili malim molekulom (npr., AEBSF) koji je ovde opisan i ne vezuje prekalikrein plazme.
[0011] Ovde opisan protein je izabran iz grupe koju čine M162-A04, M160-G12, M142-H08, X63-G06, X101-A01 (ovde se takođe naziva i DX-2922), X81-B01, X67-D03, X67-G04, X115-B07, X115-D05, X115-E09, X115-H06, X115-A03, X115-D01, X115-F02, X115-G04, M29-D09, M145-D11, M06-D09 i M35-G04.
[0012] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme nadmeće se sa ili vezuje isti epitop kao X81-B01 i, npr., ne vezuje prekalikrein plazme.
[0013] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme nadmeće se sa ili vezuje isti epitop kao X67-D03 i, npr., ne vezuje prekalikrein plazme.
[0014] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme nadmeće se sa ili se vezuje na isto mesto kao X101-A01 i, npr., ne vezuje prekalikrein plazme.
[0015] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme nadmeće se sa ili se vezuje na isto mesto kao M162-A04 i, npr., ne vezuje prekalikrein plazme.
[0016] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme nadmeće se sa ili se vezuje na isto mesto kao X63-G06 i, npr., ne vezuje prekalikrein plazme.
[0017] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme ne vezuje prekalikrein (npr., ljudski prekalikrein i/ili mišji prekalikrein), ali se vezuje za aktivni oblik kalikreina plazme (npr., ljudski kalikrein plazme i/ili mišji kalikrein plazme).
[0018] U određenim otelotvorenjima, protein se vezuje na ili blizu aktivnog mesta katalitičkog domena kalikreina plazme, ili njegov fragment, ili vezuje epitop koji se preklapa sa aktivnim mestom kalikreina plazme i, npr., ne vezuje prekalikrein plazme.
[0019] U nekim otelotvorenjima, protein se vezuje za jednu ili više aminokiselinu koja formira katalitičku trijadu kalikreina plazme: His434, Asp483, i/ili Ser578 (numeracija na osnovu ljudske sekvence) i, npr., ne vezuje prekalikrein plazme.
[0020] U nekim otelotvorenjima, protein se vezuje za jednu ili više aminokiselinu od: Ser479, Tyr563, i/ili Asp585 (numeracija na osnovu ljudske sekvence) i, npr., ne vezuje prekalikrein plazme.
[0021] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme vezuje jednu ili više aminokiselinu od: Arg551, Gln553, Tyr555, Thr558, i/ili Arg560 (numeracija na osnovu ljudske kalikrein sekvence). U drugim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme vezuje dve, tri, četiri ili pet (tj., sve) aminokiseline od: Arg551, Gln553, Tyr555, Thr558, i/ili Arg560 (numeracija na osnovu ljudske sekvence) i, npr., ne vezuje prekalikrein plazme.
[0022] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme vezuje jednu ili više aminokiselinu od: S478, N481, S525, i K526 (numeracija na osnovu ljudske kalikrein sekvence). U drugim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme vezuje dva, tri ili četiri (tj., sve) aminokiseline od: S478, N481, S525, i K526 (numeracija na osnovu ljudske kalikrein sekvence).
[0023] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme umanjuje proizvodnju Faktora XIIa i/ili bradikinina za više od oko 5%, oko 10%, oko 15%, oko 20%, oko 25%, oko 30%, oko 35%, oko 40%, oko 45%, oko 50%, oko 55%, oko 60%, oko 65%, oko 70%, oko 75%, oko 80%, oko 85%, oko 90%, ili oko 95% u poređenju sa standardom, npr., proizvodnja Faktora XIIa i/ili bradikinina pod istim uslovima ali u odsustvu proteina.
[0024] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme ima očiglednu konstantu inhibicije (Ki,app) manju od 1000, 500, 100, 10, 1, 0,5 ili 0,2 nM.
[0025] U jednom otelotvorenju, sekvence varijabilnog domena HC i LC su komponente istog polipeptidnog lanca.
[0026] U drugom otelotvorenju, sekvence varijabilnog domena HC i LC su komponente različitih polipeptidnih lanaca. Na primer, vezujući protein kalikreina plazme je IgG., npr., IgG1, IgG2, IgG3, ili IgG4. vezujući protein kalikreina plazme može biti rastvorljivi Fab (sFab).
[0027] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme ima vreme zadržavanja u serumu od 1 nedelje, 2 nedelje, 3 nedelje, 4 nedelje, 5 nedelja ili više, in vivo, npr., kod ljudi. U jednom otelotvorenju, vezujući protein kalikreina plazme je IgG, npr., IgG1, IgG2, IgG3 ili IgG4, koji ima vreme zadržavanja u serumu od 1 nedelje, 2 nedelje, 3 nedelje, 4 nedelje, 5 nedelja ili više in vivo, npr., kod ljudi.
[0028] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme je fizički povezan sa delom koji poboljšava vreme zadržavanja u serumu, npr., ovde opisan deo.
[0029] U drugim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme uključuje Fab2', scFv, minitelo, scFv::Fc fuziju, Fab::HSA fuziju, HSA::Fab fuziju, Fab::HSA::Fab fuziju, ili drugi molekul koji sadrži mesto za kombinovanje antigena jednog od vezujućih proteina ovde. VH i VL regioni ovih Fabs mogu biti dati kao IgG, Fab, Fab2, Fab2', scFv, PEGilovan Fab, PEGilovan scFv, PEGilovan Fab2, VH::CH1::HSA+LC, HSA::VH::CH1+LC, LC::HSA VH::CH1, HSA::LC VH::CH1, ili druga odgovarajuća konstrukcija.
[0030] U jednom otelotvorenju, vezujući protein kalikreina plazme je ljudsko ili humanizovano antitelo ili je neimunogeno u čoveku. Na primer, protein uključuje jedan ili više okvirni region ljudskog antitela, npr., svi ljudski okvirni regioni.
[0031] U jednom otelotvorenju, vezujući protein kalikreina plazme uključuje ljudski Fc domen, ili Fc domen koji je barem 95, 96, 97, 98, ili 99% identičan ljudskom Fc domenu.
[0032] U jednom otelotvorenju, vezujući protein kalikreina plazme je primatsko ili primatizovano antitelo ili je neimunogeno u čoveku. Na primer, protein uključuje jedan ili više okvirni region primatskog antitela, npr., svi primatski okvirni regioni.
[0033] U jednom otelotvorenju, vezujući protein kalikreina plazme uključuje primatski Fc domen, ili Fc domen koji je barem 95, 96, 97, 98, ili 99% identičan primatskom Fc domenu. „Primat“ uključuje ljude (Homo sapiens), šimpanze (Pan troglodytes i Pan paniscus (bonoboi)), gorile (Gorilla gorilla), gibone, majmune, lemure, aj-ajeve (Daubentonia madagascariensis), i tarsijere.
[0034] U jednom otelotvorenju, vezujući protein kalikreina plazme uključuje ljudske okvirne regione, ili okvirne regione koji su barem 95, 96, 97, 98, ili 99% identični ljudskim okvirnim regionima.
[0035] U određenim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme ne uključuje sekvence od miševa ili zečeva (npr., nije mišije ili zečije antitelo).
[0036] U određenim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme je sposoban da se veže za ćeliju ili tkivo, npr., koje eksprimira kalikrein plazme.
[0037] U jednom otelotvorenju, vezujući protein kalikreina plazme je fizički povezan sa nanočesticom, i može biti korišćen da navodi nanočesticu do ćelije ili tkiva koji eksprimiraju kalikrein plazme.
[0038] Ponekad, obelodanjenje uključuje izolovan protein (npr., antitelo, npr., ljudsko antitelo) koji vezuje isti epitop ili se nadmeće za vezivanje sa ovde opisanim vezujućim proteinom kalikreina.
[0039] Ponekad, protein vezuje isti epitop ili se nadmeće za vezivanje sa ovde opisanim proteinom (npr., epi-Kal2) i/ili malim molekulom (npr., AEBSF).
[0040] Ponekad, izolovan protein sadrži sekvencu varijabilnog domena teškog lanca imunoglobulina i sekvencu varijabilnog domena lakog lanca imunoglobulina, gde:
sekvenca varijabilnog domena teškog lanca imunoglobulina sadrži jedan, dva ili tri (npr., tri) CDR regiona varijabilnog domena teškog lanca ovde opisanog proteina, i/ili sekvenca varijabilnog domena lakog lanca imunoglobulina sadrži jedan, dva ili tri (npr., tri) CDR regiona varijabilnog domena lakog lanca ovde opisanog proteina, gde protein se vezuje za kalikrein plazme.
[0041] Ponekad, sekvenca varijabilnog domena teškog lanca imunoglobulina sadrži jedan, dva ili tri (npr., tri) CDR regiona varijabilnog domena teškog lanca od M162-A04, M160-G12, M142-H08, X63-G06, X101-A01, X81-B01, X67-D03, X67-G04, X115-B07, X115-D05, X115-E09, X115-H06, X115-A03, X115- D01, X115-F02, X115-G04, M29-D09, M145-D11, M06-D09 i M35-G04.
[0042] Ponekad, sekvenca varijabilnog domena lakog lanca imunoglobulina sadrži jedan, dva ili tri (npr., tri) CDR regiona varijabilnog domena lakog lanca od M162-A04, M160-G12, M142-H08, X63-G06, X101-A01, X81-B01, X67-D03, X67-G04, X115-B07, X115-D05, X115-E09, X115-H06, X115-A03, X115-D01, X115-F02, X115-G04, M29-D09, M145-D11, M06-D09 i M35-G04 (respektivno).
[0043] U nekim otelotvorenjima, protein inhibira kalikrein plazme (npr., ljudski kalikrein plazme i/ili mišji kalikrein plazme).
[0044] U nekim slučajevima, jedan, dva ili tri (npr., tri) CDR regiona varijabilnog domena teškog lanca su od X81-B01 i/ili jedan, dva ili tri (npr., tri) CDR regiona varijabilnog domena lakog lanca su od X81-B01.
[0045] U nekim slučajevima, jedan, dva ili tri (npr., tri) CDR regiona varijabilnog domena teškog lanca su od X67-D03 i/ili jedan, dva ili tri (npr., tri) CDR regiona varijabilnog domena lakog lanca su od X67-D03.
[0046] U nekim slučajevima, jedan, dva ili tri (npr., tri) CDR regiona varijabilnog domena teškog lanca su od X63-G06 i/ili jedan, dva ili tri (npr., tri) CDR regiona varijabilnog domena lakog lanca su od X63-G06.
[0047] U nekim slučajevima, jedan, dva ili tri (npr., tri) CDR regiona varijabilnog domena teškog lanca su od M162-A04 i/ili jedan, dva ili tri (npr., tri) CDR regiona varijabilnog domena lakog lanca su od MJ162-A04.
[0048] U nekim otelotvorenjima, sekvenca varijabilnog domena teškog lanca imunoglobulina sadrži varijabilni domen teškog lanca ovde opisanog proteina, i/ili sekvenca varijabilnog domena lakog lanca imunoglobulina sadrži varijabilni domen lakog lanca ovde opisanog proteina.
[0049] Sekvenca varijabilnog domena teškog lanca imunoglobulina sadrži varijabilni domen teškog lanca od M162-A04, M160-G12, M142- H08, X63-G06, X101-A01, X81-B01, X67-D03, X67-G04, X115-B07, X115-D05, X115- E09, X115-H06, X115-A03, X115-D01, X115-F02, X115-G04, M29-D09 i M145-D11 i sekvenca varijabilnog domena lakog lanca imunoglobulina sadrži varijabilni domen lakog lanca od M162-A04, M160-G12, M142- H08, X63-G06, X101-A01, X81-B01, X67-D03, X67-G04, X115-B07, X115-D05, X115-E09, X115-H06, X115-A03, X115-D01, X115-F02, X115-G04, M29-D09 i M145-D11
(respektivno).
[0050] U nekim otelotvorenjima, sekvenca varijabilnog domena teškog lanca imunoglobulina sadrži varijabilni domen teškog lanca od X81-B01, i sekvenca varijabilnog domena lakog lanca imunoglobulina sadrži varijabilni domen lakog lanca od X81-B01.
[0051] U nekim otelotvorenjima, sekvenca varijabilnog domena teškog lanca imunoglobulina sadrži varijabilni domen teškog lanca od X67-D03, i sekvenca varijabilnog domena lakog lanca imunoglobulina sadrži varijabilni domen lakog lanca od X67-D03.
[0052] U nekim otelotvorenjima, protein sadrži teški lanac ovde opisanog proteina, i laki lanac ovde opisanog proteina.
[0053] U nekim otelotvorenjima, protein sadrži teški lanac od M162-A04, M160-G12, M142-H08, X63-G06, X101-A01, X81-B01, X67-D03, X67-G04, X115- B07, X115-D05, X115-E09, X115-H06, X115-A03, X115-D01, X115-F02, X115-G04, M29-D09 i M145-D11 i laki lanac od M162-A04, M160-G12, M142-H08, X63-G06, X101-A01, X81-B01, X67-D03, X67-G04, X115-B07, X115-D05, X115-E09, X115-H06, X115-A03, X115-D01, X115-F02, X115-G04, M29-D09 i M145-D11 (respektivno).
[0054] U nekim otelotvorenjima, protein sadrži teški lanac od X81-B01, i/ili laki lanac od X81-B01.
[0055] U nekim otelotvorenjima, protein sadrži teški lanac od X67-D03, i/ili laki lanac od X67-D03.
[0056] Vezujući protein kalikreina plazme ne vezuje prekalikrein (npr., ljudski prekalikrein i/ili mišji prekalikrein), ali se vezuje za aktivni oblik kalikreina plazme (npr., ljudski kalikrein plazme i/ili mišji kalikrein plazme).
[0057] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme umanjuje proizvodnju Faktora XIIa i/ili bradikinina za više od oko 5%, oko 10%, oko 15%, oko 20%, oko 25%, oko 30%, oko 35%, oko 40%, oko 45%, oko 50%, oko
55%, oko 60%, oko 65%, oko 70%, oko 75%, oko 80%, oko 85%, oko 90%, ili oko 95% u poređenju sa standardom, npr., proizvodnjom Faktora XIIa i/ili bradikinina pod istim uslovima ali u odsustvu proteina.
[0058] Ponekad, protein uključuje jednu ili više od narednih karakteristika: (a) ljudski CDR ili ljudski okvirni region; (b) sekvenca varijabilnog domena HC imunoglobulina sadrži jedan ili više (npr., 1, 2, ili 3) CDR koje su barem 85, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, ili 100% identične sa CDR ovde opisanog varijabilnog domena HC; (c) sekvenca varijabilnog domena LC imunoglobulina sadrži jedan ili više (npr., 1, 2, ili 3) CDR koje su barem 85, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, ili 100% identične sa CDR ovde opisanog varijabilnog domena LC; (d) sekvenca varijabilnog domena LC imunoglobulina je barem 85, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, ili 100% identična ovde opisanom varijabilnom domenu LC (npr., ukupno ili u okvirnim regionima ili CDR); (e) sekvenca varijabilnog domena HC imunoglobulina je barem 85, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, ili 100% identična ovde opisanom varijabilnom domenu HC (npr., ukupno ili u okvirnim regionima ili CDR); (f) protein vezuje epitop vezan ovde opisanim proteinom, ili se nadmeće za vezivanje sa ovde opisanim proteinom; (g) primatski CDR ili primatski okvirni region; (h) sekvenca varijabilnog domena HC imunoglobulina sadrži CDR1 koji se razlikuje u barem jednoj aminokiselini ali ne više od 2 ili 3 aminokiseline od CDR1 ovde opisanog varijabilnog domena HC; (i) sekvenca varijabilnog domena HC imunoglobulina sadrži CDR2 koji se razlikuje u barem jednoj aminokiselini ali ne više od 2, 3, 4, 5, 6, 7, ili 8 aminokiseline od CDR2 ovde opisanog varijabilnog domena HC; (j) sekvenca varijabilnog domena HC imunoglobulina sadrži CDR3 koji se razlikuje u barem jednoj aminokiselini ali ne više od 2, 3, 4, 5, ili 6 aminokiseline od CDR3 ovde opisanog varijabilnog domena HC; (k) sekvenca varijabilnog domena LC imunoglobulina sadrži CDR1 koji se razlikuje u barem jednoj aminokiselini ali ne više od 2, 3, 4, ili 5 aminokiseline od CDR1 ovde opisanog varijabilnog domena LC; (1) sekvenca varijabilnog domena LC imunoglobulina sadrži CDR2 koji se razlikuje u barem jednoj aminokiselini ali ne više od 2, 3, ili 4 aminokiseline od CDR2 ovde opisanog varijabilnog domena LC; (m) sekvenca varijabilnog domena LC imunoglobulina sadrži CDR3 koji se razlikuje u barem jednoj aminokiselini ali ne više od 2, 3, 4, ili 5 aminokiseline od CDR3 ovde opisanog varijabilnog domena LC ; (n) sekvenca varijabilnog domena LC imunoglobulina se razlikuje u barem jednoj aminokiselini ali ne više od 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ili 10 aminokiseline ovde opisanog varijabilnog domena LC (npr., ukupno ili u okvirnim regionima ili CDR); i (o) sekvenca varijabilnog domena HC imunoglobulina se razlikuje u barem jednoj aminokiselini ali ne više od 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ili 10 aminokiseline ovde opisanog varijabilnog domena HC (npr., ukupno ili u okvirnim regionima ili CDR).
[0059] U nekim otelotvorenjima, protein ima očiglednu konstantu inhibicije (Ki,app) manju od 1000, 500, 100, 10, 1, 0,5 ili 0,2 nM.
[0060] Antitelo ne vezuje prekalikrein (npr., ljudski prekalikrein i/ili mišji prekalikrein), ali se vezuje za aktivni oblik kalikreina plazme (npr., ljudski kalikrein plazme i/ili mišji kalikrein plazme).
[0061] U poželjnom otelotvorenju, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima lake i teške lance antitela izabranih iz grupe koja se sastoji od M162-A04, M160-G12, M142-H08, X63-G06, X101-A01, X81-B01, X67-D03, X67-G04, X115-B07, X115-D05, X115-E09, X115-H06, X115-A03, X115-D01, X115-F02, X115-G04, M29-D09 i M145-D11.
[0062] U poželjnom otelotvorenju, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima teški lanac antitela izabran iz grupe koja se sastoji od: M162-A04, M160-G12, M142-H08, X63-G06, X101-A01, X81-B01, X67-D03, X67-G04, X115- B07, X115-D05, X115-E09, X115-H06, X115-A03, X115-D01, X115-F02, X115-G04, M29-D09 i M145-D11.
[0063] U poželjnom otelotvorenju, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima laki lanac antitela izabran iz grupe koja se sastoji od: M162-A04, M160-G12, M142-H08, X63-G06, X101-A01, X81-B01, X67-D03, X67-G04, X115- B07, X115-D05, X115-E09, X115-H06, X115-A03, X115-D01, X115-F02, X115-G04, M29-D09 i M145-D11.
[0064] Protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) lake i teške varijabilne regione antitela izabrane iz grupe koja se sastoji od M162-A04, M160-G12, M142-H08, X63-G06, X101-A01, X81-B01, X67-D03, X67-G04, X115-B07, X115-D05, X115-E09, X115-H06, X115-A03, X115-D01, X115-F02, X115-G04, M29-D09 i M145-D11.
[0065] Protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima varijabilni region teškog lanca antitela izabran iz grupe koja se sastoji od: M162-A04, M160-G12, M142-H08, X63-G06, X101-A01, X81-B01, X67-D03, X67-G04, X115-B07, X115-D05, X115-E09, X115-H06, X115-A03, X115-D01, X115-F02, X115-G04, M29-D09 i M145-D11.
[0066] Protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima varijabilni region lakog lanca antitela izabran iz grupe koja se sastoji od: M162-A04, M160-G12, M142-H08, X63-G06, X101-A01, X81-B01, X67- D03, X67-G04, X115-B07, X115-D05, X115-E09, X115-H06, X115-A03, X115-D01, X115-F02, X115-G04, M29-D09 i M145-D11.
[0067] Ponekad, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima jedan ili više (npr., 1, 2, ili 3) CDR teškog lanca izabran od odgovarajućeg CDR iz grupe teških lanaca koja se sastoji od M162-A04, M160-G12, M142-H08, X63-G06, X101-A01, X81-B01, X67-D03, X67-G04, X115-B07, X115-D05, X115-E09, X115-H06, X115-A03, X115-D01, X115-F02, X115-G04, M29-D09, M145-D11, M06- D09 i M35-G04.
[0068] Ponekad, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima jedan ili više (npr., 1, 2, ili 3) CDR lakog lanca izabran od odgovarajućeg CDR iz grupe lakih lanaca koja se sastoji od M162-A04, M160-G12, M142-H08, X63-G06, X101-A01, X81-B01, X67-D03, X67-G04, X115-B07, X115-D05, X115-E09, X115-H06, X115-A03, X115-D01, X115-F02, X115-G04, M29-D09, M145-D11, M06- D09 i M35-G04.
[0069] Ponekad, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima jedan ili više (npr., 1, 2, ili 3) CDR teškog lanca izabran od odgovarajućeg CDR iz grupe teških lanaca koja se sastoji od M162-A04, M160-G12, M142-H08, X63-G06, X101-A01, X81-B01, X67-D03, X67-G04, X115-B07, X115-D05, X115-E09, X115-H06, X115-A03, X115-D01, X115-F02, X115-G04, M29-D09, M145-D11, M06- D09 i M35-G04.
i jedan ili više (npr., 1, 2, ili 3) CDR lakog lanca izabran od odgovarajućeg CDR iz grupe lakih lanaca koja se sastoji od M162-A04, M160-G12, M142-H08, X63-G06, X101-A01, X81-B01, X67-D03, X67-G04, X115-B07, X115-D05, X115-E09, X115-H06, X115-A03, X115-D01, X115-F02, X115-G04, M29-D09, M145-D11, M06-D09 i M35-G04 (respektivno).
[0070] U poželjnom otelotvorenju, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima lake i teške lance od X81-B01.
[0071] U poželjnom otelotvorenju, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima teški lanac od X81-B01.
[0072] U poželjnom otelotvorenju, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima laki lanac od X81-B01.
[0073] U poželjnom otelotvorenju, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) lake i teške varijabilne regione antitela izabrane od X81-B01.
[0074] U poželjnom otelotvorenju, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima varijabilni region teškog lanca antitela od X81-B01.
[0075] U poželjnom otelotvorenju, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima varijabilni region lakog lanca antitela od X81-B01.
[0076] Ponekad, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima jedan ili više (npr., 1, 2, ili 3) CDR teškog lanca odgovarajućeg CDR teškog lanca od X81-B01.
[0077] Ponekad, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima jedan ili više (npr., 1, 2, ili 3) CDR lakog lanca odgovarajućeg CDR lakog lanca od X81-B01.
[0078] Ponekad, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima jedan ili više (npr., 1, 2, ili 3) CDR teškog lanca teškog lanca od X81-B01 i jedan ili više (npr., 1, 2, ili 3) CDR lakog lanca odgovarajućeg CDR lakog lanca od X81-B01.
[0079] U poželjnom otelotvorenju, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima lake i teške lance od X67-D03.
[0080] U poželjnom otelotvorenju, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima teški lanac od X67-D03.
[0081] U poželjnom otelotvorenju, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima laki lanac od X67-D03.
[0082] U poželjnom otelotvorenju, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) lake i teške varijabilne regione antitela izabrane od X67-D03.
[0083] U poželjnom otelotvorenju, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima varijabilni region teškog lanca antitela od X67-D03.
[0084] U poželjnom otelotvorenju, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima varijabilni region lakog lanca antitela od X67-D03.
[0085] U poželjnom slučaju, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima jedan ili više (npr., 1, 2, ili 3) CDR teškog lanca odgovarajućeg CDR teškog lanca od X67-D03.
[0086] U poželjnom slučaju, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima jedan ili više (npr., 1, 2, ili 3) CDR lakog lanca odgovarajućeg CDR lakog lanca od X67-D03.
[0087] U poželjnom slučaju, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima jedan ili više (npr., 1, 2, ili 3) CDR teškog lanca teškog lanca od X67-D03 i jedan ili više (npr., 1, 2, ili 3) CDR lakog lanca odgovarajućeg CDR lakog lanca od X67-D03.
[0088] U jednom otelotvorenju, sekvence varijabilnog domena HC i LC su komponente istog polipeptidnog lanca.
[0089] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme ima vreme zadržavanja u serumu od 1 nedelje, 2 nedelje, 3 nedelje, 4 nedelje, 5 nedelja ili više, in vivo, npr., kod ljudi. U jednom otelotvorenju, vezujući protein kalikreina plazme je IgG, npr., IgG1, IgG2, IgG3 ili IgG4, koji ima vreme zadržavanja u serumu od 1 nedelje, 2 nedelje, 3 nedelje, 4 nedelje, 5 nedelja ili više in vivo, npr., kod ljudi.
[0090] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikrein plazme je fizički povezan sa delom koji poboljšava vreme zadržavanja u serumu, npr., ovde opisan deo.
[0091] U drugim otelotvorenjima, sekvence varijabilnog domena HC i LC su komponente različitih polipeptidnih lanaca. Na primer, protein je IgG, npr., IgG1, IgG2, IgG3, ili IgG4. protein može biti rastvorljivi Fab (sFab).
[0092] U drugim otelotvorenjima, protein uključuje Fab2', scFv, minitelo, scFv::Fc fuziju, Fab::HSA fuziju, HSA::Fab fuziju, Fab::HSA::Fab fuziju, ili drugi molekul koji sadrži mesto za kombinovanje antigena jednog od vezujućih proteina ovde. VH i VL regioni ovih Fabs mogu biti dati kao IgG, Fab, Fab2, Fab2', scFv, PEGilovan Fab, PEGilovan scFv, PEGilovan Fab2, VH::CH1::HSA+LC, HSA::VH::CH1+LC, LC::HSA VH::CH1, HSA::LC VH::CH1, ili druga odgovarajuća konstrukcija.
[0093] U jednom otelotvorenju, protein je ljudsko ili humanizovano antitelo ili je neimunogen kod ljudi. Na primer, protein uključuje jedan ili više okvirni region ljudskog antitela, npr., svi ljudski okvirni regioni.
[0094] U jednom otelotvorenju, protein uključuje ljudski Fc domen, ili Fc domen koji je barem 95, 96, 97, 98, ili 99% identičan ljudskom Fc domenu.
[0095] U jednom sluč otelotvorenju aju, protein je primatsko ili primatizovano antitelo ili je neimunogen kod ljudi. Na primer, protein uključuje jedan ili više okvirni region primatskog antitela, npr., svi primatski okvirni regioni.
[0096] U jednom otelotvorenju, protein uključuje primatski Fc domen, ili Fc domen koji je barem 95, 96, 97, 98, ili 99% identičan primatskom Fc domenu. „Primat“ uključuje ljude (Homo sapiens), šimpanze (Pan troglodytes i Pan paniscus (bonoboi)), gorile (Gorilla gorilla), gibone, majmune, lemure, aj-ajeve (Daubentonia madagascariensis), i tarsijere.
[0097] U jednom otelotvorenju, protein uključuje ljudske okvirne regione, ili okvirne regione koji su barem 95, 96, 97, 98, ili 99% identični ljudskim okvirnim regionima.
[0098] U određenim otelotvorenjima, protein ne uključuje sekvence od miševa ili zečeva (npr., nije mišije ili zečije antitelo).
[0099] U određenim otelotvorenjima, protein je sposoban da se veže za ćeliju ili tkivo, npr., koji eksprimira kalikrein plazme.
[0100] U jednom otelotvorenju, protein je fizički povezan sa nanočesticom, i može biti korišćen da navodi nanočesticu do ćelije ili tkiva koji eksprimiraju kalikrein plazme.
[0101] U nekim aspektima, obelodanjenje uključuje farmaceutski sastav koji obuhvata ovde opisan vezujući protein kalikreina, npr., uključujući farmaceutski prihvatljiv nosač. U nekim otelotvorenjima, sastav može biti barem 10, 20, 30, 50,
75, 85, 90, 95, 98, 99, ili 99,9% bez drugih vrsta proteina. U jednom otelotvorenju, farmaceutski sastav može biti barem 10, 20, 30, 50, 75, 85, 90, 95, 98, 99, ili 99,9% bez fragmenata vezujućeg proteina koji ne vezuje kalikrein plazme (npr., ljudski kalikrein plazme) ili vezuje kalikrein plazme (npr., ljudski kalikrein plazme sa Ki,appod 5000 nM ili više.
[0102] U nekim aspektima, pronalazak omogućava upotrebu proteina kodiranih nukleinskim kiselinama pronalaska, u postupku tretmana ili prevencije poremećaja povezanog sa kalikreinom plazme kod pacijenta, gde postupak obuhvata:
primenu proteina (npr., antitelo, npr., ljudsko antitelo) koji vezuje kalikrein plazme (npr., ljudski kalikrein plazme i/ili mišji kalikrein plazme) i, npr., ne vezuje prekalikrein (npr., ljudski prekalikrein i/ili mišji prekalikrein) pacijentu.
[0103] U nekim otelotvorenjima, protein vezuje isti epitop ili se nadmeće za vezivanje sa ovde opisanim proteinom (npr., epi-Kal2) i/ili malim molekulom (npr., AEBSF).
[0104] U nekim otelotvorenjima, protein vezuje isti epitop ili se nadmeće za vezivanje sa ovde opisanim vezujućim proteinom kalikreina.
[0105] U nekim otelotvorenjima, poremećaj povezan sa kalikreinom plazme je izabran iz grupe koju čine reumatoidni artritis, giht, upalna bolest creva, oralni mukozitis, neuropatski bol, upalni bol, spinalna stenoza - degenerativna bolest kičme, arterijska ili venska tromboza, post operativni ileus, aortna aneurizma, osteoartritis, vaskulitis, edem, nasledni angioedem, cerebralni edem, plućna embolija, moždani udar, zgrušavanje na ventrikularnim pomoćnim uređajima ili stentovima, povreda glave ili peri-tumorski moždani edem, sepsa, akutni ishemijski događaj srednje cerebralne arterije (MCA) (moždani udar), restenoza (npr., nakon angioplastike), sistemski lupus eritematozni nefritis, i opekotina. U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme redukuje primetno zgrušavanje povezano sa sistemom aktiviranja dodirom (tj., sistem unutrašnjeg aktiviranja) za barem 10% mereno npr., APTT testom zgrušavanja U drugim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme redukuje primetno zgrušavanje povezano sa sistemom aktiviranja dodirom za barem 20%, barem 30%, barem 40%, barem 50%, barem 60%, barem 70%, barem 80%, barem 90%, barem 95%, barem 99%, ili čak 100% (tj., bez primetnog zgrušavanja).
[0106] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme se primenjuje u kombinaciji sa drugim tretmanom za poremećaj.
[0107] U nekim otelotvorenjima, ovde opisan protein je izabran iz grupe koju čine M162-A04, M160-G12, M142-H08, X63-G06, X101-A01, X81-B01, X67- D03, X67-G04, X115-B07, X115-D05, X115-E09, X115-H06, X115-A03, X115-D01, X115-F02, X115-G04, M29-D09 i M145-D11.
[0108] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme nadmeće se sa ili vezuje isti epitop kao X81-B01.
[0109] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme nadmeće se sa ili vezuje isti epitop kao X67-D03.
[0110] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme ne vezuje prekalikrein (npr., ljudski prekalikrein i/ili mišji prekalikrein), ali se vezuje za aktivni oblik kalikreina plazme (npr., ljudski kalikrein plazme i/ili mišji kalikrein plazme).
[0111] U određenim otelotvorenjima, protein se vezuje na ili blizu aktivnog mesta katalitičkog domena kalikreina plazme, ili njegov fragment, ili vezuje epitop koji se preklapa sa aktivnim mestom kalikreina plazme.
[0112] U nekim otelotvorenjima, protein se vezuje za jednu ili više aminokiselinu koja formira katalitičku trijadu kalikreina plazme: His434, Asp483, i/ili Ser578 (numeracija na osnovu ljudske sekvence).
[0113] U nekim otelotvorenjima, protein se vezuje za jednu ili više aminokiselinu od Ser479, Tyr563, i/ili Asp585 (numeracija na osnovu ljudske sekvence).
[0114] U drugim otelotvorenjima, protein se vezuje za jednu ili više aminokiselinu od Arg551, Gln553, Tyr555, Thr558, i/ili Arg560 (numeracija na osnovu ljudske sekvence). U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme vezuje jednu ili više aminokiselinu od: S478, N481, S525, i K526 (numeracija na osnovu ljudske kalikrein sekvence).
[0115] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme umanjuje Faktor Xlla i/ili bradikinin production za više od oko 5%, oko 10%, oko 15%, oko 20%, oko 25%, oko 30%, oko 35%, oko 40%, oko 45%, oko 50%, oko 55%, oko 60%, oko 65%, oko 70%, oko 75%, oko 80%, oko 85%, oko 90%,
ili oko 95% u poređenju sa standardom, npr., proizvodnjom Faktora XII i/ili bradikinina pod istim uslovima ali u odsustvu proteina.
[0116] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme ima očiglednu konstantu inhibicije (Ki,app) manju od 1000, 500, 100, 10, 5, 1, 0,5, ili 0,2 nM.
[0117] U jednom otelotvorenju, sekvence varijabilnog domena HC i LC su komponente istog polipeptidnog lanca.
[0118] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme ima vreme zadržavanja u serumu od 1 nedelje, 2 nedelje, 3 nedelje, 4 nedelje, 5 nedelja ili više, in vivo, npr., kod ljudi. U jednom otelotvorenju, vezujući protein kalikreina plazme je IgG, npr., IgG1, IgG2, IgG3 ili IgG4, koji ima vreme zadržavanja u serumu od 1 nedelje, 2 nedelje, 3 nedelje, 4 nedelje, 5 nedelja ili više in vivo, npr., kod ljudi.
[0119] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme je fizički povezan sa delom koji poboljšava vreme zadržavanja u serumu, npr., ovde opisanim delom.
[0120] U drugim otelotvorenjima, sekvence varijabilnog domena HC i LC su komponente različitih polipeptidnih lanaca. Na primer, vezujući protein kalikreina plazme je IgG, npr., IgG1, IgG2, IgG3, ili IgG4. Vezujući protein kalikreina plazme može biti rastvorljivi Fab (sFab).
[0121] U drugim implementacijama vezujući protein kalikreina plazme uključuje Fab2', scFv, minitelo, scFv::Fc fuziju, Fab::HSA fuziju, HSA::Fab fuziju, Fab::HSA::Fab fuziju, ili drugi molekul koji sadrži mesto za kombinovanje antigena jednog od vezujućih proteina odavde. VH i VL regioni ovih Fab-a mogu se dati kao IgG, Fab, Fab2, Fab2', scFv, PEGilovan Fab, PEGilovan scFv, PEGilovan Fab2, VH::CH1::HSA+LC, HSA::VH::CH1+LC, LC::HSA VH::CH1, HSA::LC VH::CH1, ili druga odgovarajuća konstrukcija.
[0122] U jednom otelotvorenju, vezujući protein kalikreina plazme je ljudsko ili humanizovano antitelo ili je neimunogeno u čoveku. Na primer, protein uključuje jedan ili više okvirni region ljudskog antitela, npr., svi ljudski okvirni regioni.
[0123] U jednom otelotvorenju, vezujući protein kalikreina plazme uključuje ljudski Fc domen, ili Fc domen koji je barem 95, 96, 97, 98, ili 99% identičan ljudskom Fc domenu.
[0124] U jednom otelotvorenju, vezujući protein kalikreina plazme je primatsko ili primatizovano antitelo ili je neimunogeno u čoveku. Na primer, protein uključuje jedan ili više okvirni region primatskog antitela, npr., svi primatski okvirni regioni.
[0125] U jednom otelotvorenju, vezujući protein kalikreina plazme uključuje primatski Fc domen, ili Fc domen koji je barem 95, 96, 97, 98, ili 99% identičan primatskom Fc domenu. „Primat“ uključuje ljude (Homo sapiens), šimpanze (Pan troglodytes i Pan paniscus (bonoboi)), gorile (Gorilla gorilla), gibone, majmune, lemure, aj-ajeve (Daubentonia madagascariensis), i tarsijere.
[0126] U jednom otelotvorenju, vezujući protein kalikreina plazme uključuje ljudske okvirne regione, ili okvirne regione koji su barem 95, 96, 97, 98, ili 99% identični ljudskim okvirnim regionima.
[0127] U određenim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme ne uključuje sekvence od miševa ili zečeva (npr., nije mišije ili zečije antitelo).
[0128] U određenim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme je sposoban da se veže za ćeliju ili tkivo, npr., koji eksprimira kalikrein plazme.
[0129] U jednom otelotvorenju, vezujući protein kalikreina plazme je fizički povezan sa nanočesticom, i može biti korišćen da navodi nanočesticu do ćelije ili tkiva koji eksprimiraju kalikrein plazme.
[0130] Pronalazak omogućava upotrebu proteina kodiranih nukleinskim kiselinama iz pronalaska, u postupku tretmana ili prevencije poremećaja povezanog sa kalikreinom plazme kod pacijenta, gde postupak obuhvata:
primenu proteina (npr., antitelo, npr., ljudsko antitelo) koji obuhvata sekvencu varijabilnog domena teškog lanca imunoglobulina i sekvencu varijabilnog domena lakog lanca imunoglobulina kako je opisana u zahtevima pacijentu, gde protein se vezuje za kalikrein plazme (npr., ljudski kalikrein plazme i/ili mišji kalikrein plazme).
[0131] U nekim otelotvorenjima, poremećaj povezan sa kalikreinom plazme je izabran iz grupe koju čine reumatoidni artritis, giht, upalna bolest creva, oralni mukozitis, neuropatski bol, upalni bol, spinalna stenoza - degenerativna bolest kičme, arterijska ili venska tromboza, post operativni ileus, aortna aneurizma,
osteoartritis, vaskulitis, edem, nasledni angioedem, cerebralni edem, plućna embolija, moždani udar, zgrušavanje na ventrikularnim pomoćnim uređajima ili stentovima, povreda glave ili peri-tumorski moždani edem, sepsa, akutni ishemijski događaj srednje cerebralne arterije (MCA) (moždani udar), restenoza (npr., nakon angioplastike), sistemski lupus eritematozni nefritis, i opekotina. U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme redukuje primetno zgrušavanje povezano sa sistemom aktiviranja dodirom (tj., sistem unutrašnjeg aktiviranja) za barem 10% mereno npr., testom zgrušavanja APTT (npr., za barem 20%, barem 30%, barem 40%, barem 50%, barem 60%, barem 70%, barem 80%, barem 90%, barem 95%, barem 99%, ili čak 100% (tj., bez primetnog zgrušavanja)).
[0132] U nekim otelotvorenjima, protein se primenjuje u kombinaciji sa drugim tretmanom za poremećaj.
[0133] U nekim otelotvorenjima, protein se primenjuje u kombinaciji sa drugim agensom izabranim iz grupe koju čine ekalantid, C1 inhibitor esteraze, aprotinin, inhibitor receptora bradikinina B2 (npr., ikatibant).
[0134] U nekim slučajevima, sekvenca varijabilnog domena teškog lanca imunoglobulina sadrži jedan, dva ili tri (npr., tri) CDR regiona varijabilnog domena teškog lanca od M162-A04, M160-G12, M142-H08, X63-G06, X101-A01, X81-B01, X67-D03, X67-G04, X115-B07, X115-D05, X115-E09, X115-H06, X115-A03, X115-D01, X115-F02, X115-G04, M29-D09, M145-D11, M06-D09 i M35-G04, i/ili
sekvenca varijabilnog domena lakog lanca imunoglobulina sadrži jedan, dva ili tri (npr., tri) CDR regiona varijabilnog domena lakog lanca od M162-A04, M160-G12, M142-H08, X63-G06, X101-A01, X81-B01, X67-D03, X67-G04, X115-B07, X115-D05, X115-E09, X115-H06, X115-A03, X115-D01, X115-F02, X115-G04, M29-D09, M145-D11, M06-D09 i M35-G04 (respektivno).
[0135] U nekim otelotvorenjima, protein inhibira kalikrein plazme.
[0136] U nekim slučajevima, jedan, dva ili tri (npr., tri) CDR regiona varijabilnog domena teškog lanca su od X81-B01 i/ili jedan, dva ili tri (npr., tri) CDR regiona varijabilnog domena lakog lanca su od X81-B01.
[0137] U nekim slučajevima, jedan, dva ili tri (npr., tri) CDR regiona varijabilnog domena teškog lanca su od X67-D03 i/ili jedan, dva ili tri (npr., tri) CDR regiona varijabilnog domena lakog lanca su od X67-D03.
[0138] U nekim slučajevima, sekvenca varijabilnog domena teškog lanca imunoglobulina sadrži varijabilni domen teškog lanca ovde opisanog proteina, i/ili sekvenca varijabilnog domena lakog lanca imunoglobulina sadrži varijabilni domen lakog lanca ovde opisanog proteina.
[0139] Sekvenca varijabilnog domena teškog lanca imunoglobulina sadrži varijabilni domen teškog lanca od M162-A04, M160-G12, M142-H08 X63-G06, X101-A01, X81-B01, X67-D03, X67-G04, X115-B07, X115-D05, X115- E09, X115-H06, X115-A03, X115-D01, X115-F02, X115-G04, M29-D09 i M145-D11, i sekvenca varijabilnog domena lakog lanca imunoglobulina sadrži varijabilni domen lakog lanca od M162-A04, M160-G12, M142-H08, X63-G06, X101-A01, X81-B01, X67-D03, X67-G04, X115-B07, X115-D05, X115-E09, X115-H06, X115-A03, X115-D01, X115-F02, X115-G04, M29-D09 i M145-D11.
[0140] U nekim otelotvorenjima, sekvenca varijabilnog domena teškog lanca imunoglobulina sadrži varijabilni domen teškog lanca od X81-B01, i sekvenca varijabilnog domena lakog lanca imunoglobulina sadrži varijabilni domen laskog lanca od X81-B01.
[0141] Sekvenca varijabilnog domena teškog lanca imunoglobulina sadrži varijabilni domen teškog lanca od X67-D03, i sekvenca varijabilnog domena lakog lanca imunoglobulina sadrži varijabilni domen lakog lanca od X67-D03.
[0142] U nekim otelotvorenjima, protein sadrži teški lanac ovde opisanog proteina, i/ili laki lanac ovde opisanog proteina.
[0143] U nekim otelotvorenjima, protein sadrži teški lanac od M162-A04, M160-G12, M142-H08, X63-G06, X101-A01, X81-B01, X67-D03, X67-G04, X115-B07, X115-D05, X115-E09, X115-H06, X115-A03, X115-D01, X115-F02, X115-G04, M29-D09 i M145-D11, i/ili laki lanac od M162-A04, M160-G12, M142-H08, X63-G06, X101-A01, X81-B01, X67-D03, X67-G04, X115-B07, X115-D05, X115-E09, X115-H06, X115-A03, X115-D01, X115-F02, X115-G04, M29-D09 i M145-D11 (respektivno).
[0144] U nekim otelotvorenjima, protein sadrži teški lanac od X81-B01, i/ili laki lanac od X81-B01.
[0145] U nekim otelotvorenjima, protein sadrži teški lanac od X67-D03, i/ili laki lanac od X67-D03.
[0146] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme ne vezuje prekalikrein (npr., ljudski prekalikrein i/ili mišiji prekalikrein), ali se vezuje za aktivni oblik kalikreina plazme (npr., ljudski kalikrein plazme i/ili mišiji kalikrein plazme).
[0147] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme umanjuje proizvodnju Faktora XIIa i/ili bradikinina za više od oko 5%, oko 10%, oko 15%, oko 20%, oko 25%, oko 30%, oko 35%, oko 40%, oko 45%, oko 50%, oko 55%, oko 60%, oko 65%, oko 70%, oko 75%, oko 80%, oko 85%, oko 90%, ili oko 95% u poređenju sa standardom, npr., proizvodnjom Faktora XIIa i/ili bradikinina pod istim uslovima ali u odsustvu proteina.
[0148] Ponekad, protein uključuje jednu ili više od narednih karakteristika: (a) ljudski CDR ili ljudski okvirni region; (b) sekvencu varijabilnog domena HC imunoglobulina koja sadrži jedan ili više (npr., 1, 2, ili 3) CDR koji su barem 85, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, ili 100% identični sa CDR ovde opisanog varijabilnog domena HC; (c) sekvencu varijabilnog domena LC imunoglobulina koja sadrži jedan ili više (npr., 1, 2, ili 3) CDR koji su barem 85, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, ili 100% identični sa CDR ovde opisanog varijabilnog domena LC; (d) sekvencu varijabilnog domena LC imunoglobulina koja je barem 85, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, ili 100% identična ovde opisanom varijabilnom domenu LC (npr., ukupno ili u okvirnim regionima ili CDR); (e) sekvencu varijabilnog domena HC imunoglobulina koja je barem 85, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, ili 100% identična ovde opisanom varijabilnom domenu HC (npr., ukupno ili u okvirnim regionima ili CDR); (f) protein vezuje epitop vezan ovde opisanim proteinom, ili se nadmeće za vezivanje sa ovde opisanim proteinom; i (g) primatski CDR ili primatski okvirni region.
[0149] U nekim otelotvorenjima, protein ima očiglednu konstantu inhibicije (Ki,app) manju od 1000, 500, 100, 10, 5, 1, 0,5 ili 0,2 nM.
[0150] U nekim otelotvorenjima, antitelo ne vezuje prekalikrein (npr., ljudski prekalikrein), ali se vezuje za aktivni oblik kalikreina plazme (npr., ljudski kalikrein plazme).
[0151] U poželjnom otelotvorenju, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima lake i teške lance antitela izabranih iz grupe koja se sastoji od M162-A04, M160-G12, M142-H08, X63-G06, X101-A01, X81-B01, X67-D03, X67-G04, X115-B07, X115-D05, X115-E09, X115-H06, X115-A03, X115-D01, X115-F02, X115-G04, M29-D09 i M145-D11.
[0152] U poželjnom otelotvorenju, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima teški lanac antitela izabran iz grupe koja se sastoji od: M162-A04, M160-G12, M142-H08, X63-G06, X101-A01, X81-B01, X67-D03, X67-G04, X115- B07, X115-D05, X115-E09, X115-H06, X115-A03, X115-D01, X115-F02, X115-G04, M29-D09 i M145-D11.
[0153] U poželjnom otelotvorenju, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima laki lanac antitela izabran iz grupe koja se sastoji od: M162-A04, M160-G12, M142-H08, X63-G06, X101-A01, X81-B01, X67-D03, X67-G04, X115-B07, X115-D05, X115-E09, X115-H06, X115-A03, X115-D01, X115-F02, X115-G04, M29-D09 and M145-D11.
[0154] Protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) lake i teške varijabilne regione antitela izabrane iz grupe koja se sastoji od M162-A04, M160-G12, M142-H08, X63-G06, X101A01, X81-B01, X67-D03, X67-G04, X115-B07, X115-D05, X115-E09, X115-H06, X115-A03, X115-D01, X115-F02, X115-G04, M29-D09 i M145-D11.
[0155] Protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima varijabilni region teškog lanca antitela izabran iz grupe koja se sastoji od: M162-A04, M160-G12, M142-H08, X63-G06, X101-A01, X81-B01, X67- D03, X67-G04, X115-B07, X115-D05, X115-E09, X115-H06, X115-A03, X115-D01, X115-F02, X115-G04, M29-D09 i M145-D11.
[0156] Protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima varijabilni region lakog lanca antitela izabran iz grupe koja se sastoji od: M162-A04, M160-G12, M142-H08, X63-G06, X101-A01, X81-B01, X67- D03, X67-G04, X115-B07, X115-D05, X115-E09, X115-H06, X115-A03, X115-D01, X115-F02, X115-G04, M29-D09 i M145-D11.
[0157] Ponekad, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima jedan ili više (npr., 1, 2, ili 3) CDR teškog lanca izabran od odgovarajućeg CDR iz grupe teških lanaca koja se sastoji od M162-A04, M160-G12, M142-H08, X63-G06, X101-A01, X81-B01, X67-D03, X67-G04, X115-B07, X115-D05, X115-E09, X115-H06, X115-A03, X115-D01, X115-F02, X115-G04, M29-D09, M145-D11, M06- D09 i M35-G04.
[0158] Ponekad, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima jedan ili više (npr., 1, 2, ili 3) CDR lakog lanca izabran od odgovarajućeg CDR iz grupe lakih lanaca koja se sastoji od M162-A04, M160-G12, M142-H08, X63-G06, X101-A01, X81-B01, X67-D03, X67-G04, X115-B07, X115-D05, X115-E09, X115-H06, X115-A03, X115-D01, X115-F02, X115-G04, M29-D09, M145-D11, M06-D09 i M35-G04.
[0159] Ponekad, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima jedan ili više (npr., 1, 2, ili 3) CDR teškog lanca izabran od odgovarajućeg CDR iz grupe teških lanaca koja se sastoji od M162-A04, M160-G12, M142-H08, X63-G06, X101-A01, X81-B01, X67-D03, X67-G04, X115-B07, X115-D05, X115-E09, X115-H06, X115-A03, X115-D01, X115-F02, X115-G04, M29-D09, M145-D11, M06- D09 i M35-G04 i jedan ili više (npr., 1, 2, ili 3) CDR lakog lanca izabran od odgovarajućeg CDR iz grupe lakih lanaca koja se sastoji od M162-A04, M160-G12,
M142-H08, X63-G06, X101-A01, X81-B01, X67-D03, X67-G04, X115-B07, X115-D05, X115-E09, X115-H06, X115-A03, X115-D01, X115-F02, X115-G04, M29-D09, M145-D11, M06-D09 i M35-G04 (respektivno).
[0160] U poželjnom otelotvorenju, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima lake i teške lance od X81-B01.
[0161] U poželjnom otelotvorenju, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima teški lanac od X81-B01.
[0162] U poželjnom otelotvorenju, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima laki lanac od X81-B01.
[0163] U poželjnom otelotvorenju, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) lake i teške varijabilne regione antitela izabrane od X81-B01.
[0164] U poželjnom otelotvorenju, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima varijabilni region teškog lanca antitela od X81-B01.
[0165] U poželjnom otelotvorenju, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima varijabilni region lakog lanca antitela od X81-B01.
[0166] Ponekad, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima jedan ili više (npr., 1, 2, ili 3) CDR teškog lanca odgovarajućeg CDR teškog lanca od X81-B01.
[0167] Ponekad, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima jedan ili više (npr., 1, 2, ili 3) CDR lakog lanca odgovarajućeg CDR lakog lanca od X81-B01.
[0168] Ponekad, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima jedan ili više (npr., 1, 2, ili 3) CDR teškog lanca teškog lanca od X81-B01 i jedan ili više (npr., 1, 2, ili 3) CDR lakog lanca odgovarajućeg CDR lakog lanca od X81-B01.
[0169] U poželjnom otelotvorenju, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima lake i teške lance od X67-D03.
[0170] U poželjnom otelotvorenju, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima teški lanac od X67-D03.
[0171] U poželjnom otelotvorenju, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima laki lanac od X67-D03.
[0172] U poželjnom otelotvorenju, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) lake i teške varijabilne regione antitela izabrane od X67-D03.
[0173] U poželjnom otelotvorenju, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima varijabilni region teškog lanca antitela od X67-D03.
[0174] U poželjnom otelotvorenju, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima varijabilni region lakog lanca antitela od X67-D03.
[0175] Ponekad, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima jedan ili više (npr., 1, 2, ili 3) CDR teškog lanca odgovarajućeg CDR teškog lanca od X67-D03.
[0176] Ponekad, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima jedan ili više (npr., 1, 2, ili 3) CDR lakog lanca odgovarajućeg CDR lakog lanca od X67-D03.
[0177] Ponekad, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima jedan ili više (npr., 1, 2, ili 3) CDR teškog lanca teškog lanca od X67-D03 i jedan ili više (npr., 1, 2, ili 3) CDR lakog lanca odgovarajućeg CDR lakog lanca od X67-D03.
[0178] U jednom otelotvorenju, sekvence varijabilnog domena HC i LC su komponente istog polipeptidnog lanca.
[0179] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme ima vreme zadržavanja u serumu od 1 nedelje, 2 nedelje, 3 nedelje, 4 nedelje, 5 nedelja ili više, in vivo, npr., kod ljudi. U jednom otelotvorenju, vezujući protein kalikreina plazme je IgG, npr., IgG1, IgG2, IgG3 ili IgG4, koji ima vreme zadržavanja u serumu od 1 nedelje, 2 nedelje, 3 nedelje, 4 nedelje, 5 nedelja ili više in vivo, npr., kod ljudi.
[0180] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme je fizički povezan sa delom koji poboljšava vreme zadržavanja u serumu, npr., ovde opisanim delom.
[0181] U drugim otelotvorenjima, sekvence varijabilnog domena HC i LC su komponente različitih polipeptidnih lanaca. Na primer, protein je IgG, npr., IgG1, IgG2, IgG3, ili IgG4. protein može biti rastvorljivi Fab (sFab).
[0182] U drugim implementacijama protein uključuje Fab2', scFv, minitelo, scFv::Fc fuziju, Fab::HSA fuziju, HSA::Fab fuziju, Fab::HSA::Fab fuziju, ili drugi molekul koji sadrži mesto za kombinovanje antigena jednog od vezujućih proteina odavde. VH i VL regioni ovih Fab-a mogu se dati kao IgG, Fab, Fab2, Fab2', scFv, PEGilovan Fab, PEGilovan scFv, PEGilovan Fab2, VH::CH1 ::HSA+LC, HSA::VH::CH1+LC, LC::HSA VH::CH1, HSA::LC VH::CH1, ili druga odgovarajuća konstrukcija.
[0183] U jednom otelotvorenju, protein je ljudsko ili humanizovano antitelo ili je neimunogen kod ljudi. Na primer, protein uključuje jedan ili više okvirni region ljudskog antitela, npr., svi ljudski okvirni regioni.
[0184] U jednom otelotvorenju, protein uključuje ljudski Fc domen, ili Fc domen koji je barem 95, 96, 97, 98, ili 99% identičan ljudskom Fc domenu.
[0185] U jednom otelotvorenju, protein je primatsko ili primatizovano antitelo ili je neimunogen kod ljudi. Na primer, protein uključuje jedan ili više okvirni region primatskog antitela, npr., svi primatski okvirni regioni.
[0186] U jednom otelotvorenju, protein uključuje primatski Fc domen, ili Fc domen koji je barem 95, 96, 97, 98, ili 99% identičan primatskom Fc domenu. „Primat“ uključuje ljude (Homo sapiens), šimpanze (Pan troglodytes i Pan paniscus (bonoboi)), gorile (Gorilla gorilla), gibone, majmune, lemure, aj-ajeve (Daubentonia madagascariensis), i tarsijere.
[0187] U jednom otelotvorenju, protein uključuje ljudske okvirne regione, ili okvirne regione koji su barem 95, 96, 97, 98, ili 99% identični ljudskim okvirnim regionima.
[0188] U određenim otelotvorenjima, protein ne uključuje sekvence od miševa ili zečeva (npr., nije mišije ili zečije antitelo).
[0189] U određenim otelotvorenjima, protein je sposoban da se veže za ćeliju ili tkivo, npr., koji eksprimira kalikrein plazme.
[0190] U jednom otelotvorenju, protein je fizički povezan sa nanočesticom, i može biti korišćen da navodi nanočesticu do ćelije ili tkiva koji eksprimiraju kalikrein plazme.
[0191] U nekim aspektima, pronalazak omogućava upotrebu proteina kodiranih nukleinskim kiselinama iz pronalaska, u postupku pospešivanja zarastanja rana kod pacijenta, gde postupak obuhvata:
primenu proteina (npr., antitelo, npr., ljudsko antitelo) koji vezuje kalikrein plazme (npr., ljudski kalikrein plazme i/ili mišji kalikrein plazme) i, npr., ne vezuje prekalikrein (npr., ljudski prekalikrein i/ili mišji prekalikrein) pacijentu.
[0192] U nekim otelotvorenjima, protein vezuje isti epitop ili se nadmeće za vezivanje sa ovde opisanim vezujućim proteinom kalikreina. U nekim otelotvorenjima, protein vezuje isti epitop ili se nadmeće za vezivanje sa ovde opisanim proteinom (npr., epi-Kal2) i/ili malim molekulom (npr., AEBSF).
[0193] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme se primenjuje u kombinaciji sa drugim tretmanom za zarastanje rana.
[0194] U nekim otelotvorenjima, ovde opisan protein je izabran iz grupe koju čine M162-A04, M160-G12, M142-H08, X63-G06, X101-A01, X81-B01, X67- D03, X67-G04, X115-B07, X115-D05, X115-E09, X115-H06, X115-A03, X115-D01, X115-F02, X115-G04, M29-D09, M145-D11, M06-D09 i M35-G04.
[0195] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme nadmeće se sa ili vezuje isti epitop kao X81-B01.
[0196] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme nadmeće se sa ili vezuje isti epitop kao X67-D03.
[0197] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme ne vezuje prekalikrein (npr., ljudski prekalikrein), ali se vezuje za aktivni oblik kalikreina plazme (npr., ljudski kalikrein plazme).
[0198] U određenim otelotvorenjima, protein se vezuje na ili blizu aktivnog mesta katalitičkog domena kalikreina plazme, ili njegov fragment, ili vezuje epitop koji se preklapa sa aktivnim mestom kalikreina plazme.
[0199] U nekim otelotvorenjima, protein se vezuje za jednu ili više aminokiselinu koja formira katalitičku trijadu kalikreina plazme: His434, Asp483, i/ili Ser578 (numeracija na osnovu ljudske sekvence). U drugim otelotvorenjima, protein se vezuje za jednu ili više aminokiselinu koji formira region za prepoznavanje supstrata: Arg551, Gln553, Tyr555, Thr558, i/ili Arg560 (numeracija na osnovu ljudske sekvence). U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme vezuje jednu ili više aminokiselinu od: S478, N481, S525, i K526 (numeracija na osnovu ljudske kalikrein sekvence).
[0200] U nekim otelotvorenjima, protein se vezuje za jednu ili više aminokiselinu od Ser479, Tyr563, i/ili Asp585 (numeracija na osnovu ljudske sekvence).
[0201] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme umanjuje proizvodnju Faktora XIIa i/ili bradikinina za više od oko 5%, oko 10%, oko 15%, oko 20%, oko 25%, oko 30%, oko 35%, oko 40%, oko 45%, oko 50%, oko 55%, oko 60%, oko 65%, oko 70%, oko 75%, oko 80%, oko 85%, oko 90%, ili oko 95% u poređenju sa standardom, npr., proizvodnjom Faktora XIIa i/ili bradikinina pod istim uslovima ali u odsustvu proteina.
[0202] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme ima očiglednu konstantu inhibicije (Ki,app) manju od 1000, 500, 100, 10, 5, 1, 0,5 ili 0,2 nM.
[0203] U jednom otelotvorenju, sekvence varijabilnog domena HC i LC su komponente istog polipeptidnog lanca.
[0204] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme ima vreme zadržavanja u serumu od 1 nedelje, 2 nedelje, 3 nedelje, 4 nedelje, 5 nedelja ili više, in vivo, npr., kod ljudi.
U jednom otelotvorenju, vezujući protein kalikreina plazme je IgG, npr., IgG1, IgG2, IgG3 ili IgG4, koji ima vreme zadržavanja u serumu od 1 nedelje, 2 nedelje, 3 nedelje, 4 nedelje, 5 nedelja ili više in vivo, npr., kod ljudi.
[0205] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme je fizički povezan sa delom koji poboljšava vreme zadržavanja u serumu, npr., ovde opisanim delom.
[0206] U drugim otelotvorenjima, sekvence varijabilnog domena HC i LC su komponente različitih polipeptidnih lanaca. Na primer, vezujući protein kalikreina plazme je IgG, npr., IgG1, IgG2, IgG3, ili IgG4. Vezujući protein kalikreina plazme može biti rastvorljivi Fab (sFab).
[0207] U drugim implementacijama vezujući protein kalikreina plazme uključuje Fab2', scFv, minitelo, scFv::Fc fuziju, Fab::HSA fuziju, HSA::Fab fuziju, Fab::HSA::Fab fuziju, ili drugi molekul koji sadrži mesto za kombinovanje antigena jednog od vezujućih proteina odavde. VH i VL regioni ovih Fab-a mogu se dati kao IgG, Fab, Fab2, Fab2', scFv, PEGilovan Fab, PEGilovan scFv, PEGilovan Fab2, VH::CH1::HSA+LC, HSA::VH::CH1+LC, LC::HSA VH::CH1, HSA::LC VH::CH1, ili druga odgovarajuća konstrukcija.
[0208] U jednom otelotvorenju, vezujući protein kalikreina plazme je ljudsko ili humanizovano antitelo ili je neimunogeno u čoveku. Na primer, protein
uključuje jedan ili više okvirni region ljudskog antitela, npr., svi ljudski okvirni regioni.
[0209] U jednom otelotvorenju, vezujući protein kalikreina plazme uključuje ljudski Fc domen, ili Fc domen koji je barem 95, 96, 97, 98, ili 99% identičan ljudskom Fc domenu.
[0210] U jednom otelotvorenju, vezujući protein kalikreina plazme je primatsko ili primatizovano antitelo ili je neimunogeno u čoveku. Na primer, protein uključuje jedan ili više okvirni region primatskog antitela, npr., svi primatski okvirni regioni.
[0211] U jednom otelotvorenju, vezujući protein kalikreina plazme uključuje primatski Fc domen, ili Fc domen koji je barem 95, 96, 97, 98, ili 99% identičan primatskom Fc domenu. „Primat“ uključuje ljude (Homo sapiens), šimpanze (Pan troglodytes i Pan paniscus (bonoboi)), gorile (Gorilla gorilla), gibone, majmune, lemure, aj-ajeve (Daubentonia madagascariensis), i tarsijere.
[0212] U jednom otelotvorenju, vezujući protein kalikreina plazme uključuje ljudske okvirne regione, ili okvirne regione koji su barem 95, 96, 97, 98, ili 99% identični ljudskim okvirnim regionima.
[0213] U određenim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme ne uključuje sekvence od miševa ili zečeva (npr., nije mišije ili zečije antitelo).
[0214] U određenim otelotvorenjima, protein je sposoban da se veže za ćeliju ili tkivo, npr., koji eksprimira kalikrein plazme.
[0215] U jednom otelotvorenju, vezujući protein kalikreina plazme je fizički povezan sa nanočesticom, i može biti korišćen da navodi nanočesticu do ćelije ili tkiva koji eksprimiraju kalikrein plazme.
[0216] U nekim aspektima, pronalazak omogućava upotrebu proteina kodiranih nukleinskim kiselinama iz pronalaska, u postupku pospešivanja zarastanja rana kod pacijenta, gde postupak obuhvata:
primenu proteina (npr., antitelo, npr., ljudsko antitelo) koji obuhvata sekvencu varijabilnog domena teškog lanca imunoglobulina i sekvencu varijabilnog domena lakog lanca imunoglobulina kako je definisano zahtevima pacijentu, gde protein se vezuje za kalikrein plazme.
[0217] U nekim otelotvorenjima, protein se primenjuje u kombinaciji sa drugim tretmanom za zarastanje rana.
[0218] U nekim slučajevima, sekvenca varijabilnog domena teškog lanca imunoglobulina sadrži jedan, dva ili tri (npr., tri) CDR regiona varijabilnog domena teškog lanca od M162-A04, M160-G12, M142-H08, X63-G06, X101-A01, X81-B01, X67-D03, X67-G04, X115-B07, X115-D05, X115-E09, X115-H06, X115-A03, X115-D01, X115-F02, X115-G04, M29-D09, M145-D11, M06-D09 i M35-G04, i/ili
sekvenca varijabilnog domena lakog lanca imunoglobulina sadrži jedan, dva ili tri (npr., tri) CDR regiona varijabilnog domena lakog lanca od M162-A04, M160-G12, M142-H08, X63-G06, X101-A01, X81-B01, X67-D03, X67-G04, X115- B07, X115-D05, X115-E09, X115-H06, X115-A03, X115-D01, X115-F02, X115-G04, M29-D09, M145-D11, M06-D09 i M35-G04 (respektivno).
[0219] Protein inhibira kalikrein plazme.
[0220] U nekim slučajevima, jedan, dva ili tri (npr., tri) CDR regiona varijabilnog domena teškog lanca su od X81-B01 i/ili jedan, dva ili tri (npr., tri) CDR regiona varijabilnog domena lakog lanca su od X81-B01.
[0221] U nekim slučajevima, jedan, dva ili tri (npr., tri) CDR regiona varijabilnog domena teškog lanca su od X67-D03 i/ili jedan, dva ili tri (npr., tri) CDR regiona varijabilnog domena lakog lanca su od X67-D03.
[0222] Sekvenca varijabilnog domena teškog lanca imunoglobulina sadrži varijabilni domen teškog lanca ovde opisanog proteina, i/ili sekvenca varijabilnog domena lakog lanca imunoglobulina sadrži varijabilni domen lakog lanca ovde opisanog proteina.
[0223] Sekvenca varijabilnog domena teškog lanca imunoglobulina sadrži varijabilni domen teškog lanca od M162-A04, M160-G12, M142-H08, X63-G06, X101-A01, X81-B01, X67-D03, X67-G04, X115-B07, X115-D05, X115- E09, X115-H06, X115-A03, X115-D01, X115-F02, X115-G04, M29-D09 i M145-D11, i sekvenca varijabilnog domena lakog lanca imunoglobulina sadrži varijabilni domen lakog lanca od M162-A04, M160-G12, M142-H08, X63-G06, X101-A01, X81-B01, X67-D03, X67-G04, X115-B07, X115-D05, X115-E09, X115-H06, X115-A03, X115-D01, X115-F02, X115-G04, M29-D09 i M145-D11 (respektivno).
[0224] U nekim otelotvorenjima, sekvenca varijabilnog domena teškog lanca imunoglobulina sadrži varijabilni domen teškog lanca od X81-B01, i sekvenca varijabilnog domena lakog lanca imunoglobulina sadrži varijabilni domen lakog lanca od X81-B01.
[0225] U nekim otelotvorenjima, sekvenca varijabilnog domena teškog lanca imunoglobulina sadrži varijabilni domen teškog lanca od X67-D03, i sekvenca varijabilnog domena lakog lanca imunoglobulina sadrži varijabilni domen lakog lanca od X67-D03.
[0226] U nekim otelotvorenjima, protein sadrži teški lanac ovde opisanog proteina, i/ili laki lanac ovde opisanog proteina.
[0227] U nekim otelotvorenjima, protein sadrži teški lanac od M162-A04, M160-G12, M142-H08, X63-G06, X101-A01, X81-B01, X67-D03, X67-G04, X115- B07, X115-D05, X115-E09, X115-H06, X115-A03, X115-D01, X115-F02, X115-G04, M29-D09 i M145-D11, i/ili laki lanac od M162-A04, M160-G12, M142-H08, X63-G06, X101-A01, X81-B01, X67-D03, X67-G04, X115- B07, X115-D05, X115-E09, X115-H06, X115-A03, X115-D01, X115-F02, X115-G04, M29-D09 i M145-D11 (respektivno).
[0228] U nekim otelotvorenjima, protein sadrži teški lanac od X81-B01, i/ili laki lanac od X81-B01.
[0229] U nekim otelotvorenjima, protein sadrži teški lanac od X67-D03, i/ili laki lanac od X67-D03.
[0230] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme ne vezuje prekalikrein (npr., ljudski prekalikrein i/ili mišiji prekalikrein), ali se vezuje za aktivni oblik kalikreina plazme (npr., ljudski kalikrein plazme i/ili mišiji kalikrein plazme).
[0231] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme umanjuje Faktor XIIa i/ili proizvodnju bradikinina za više od oko 5%, oko 10%, oko 15%, oko 20%, oko 25%, oko 30%, oko 35%, oko 40%, oko 45%, oko 50%, oko 55%, oko 60%, oko 65%, oko 70%, oko 75%, oko 80%, oko 85%, oko 90%, ili oko 95% u poređenju sa standardom, npr., proizvodnjom Faktora XIIa i/ili bradikinina pod istim uslovima ali u odsustvu proteina.
[0232] Ponekad, protein uključuje jednu ili više od narednih karakteristika: (a) ljudski CDR ili ljudski okvirni region; (b) sekvencu varijabilnog domena HC imunoglobulina koja sadrži jedan ili više (npr., 1, 2, ili 3) CDR koji su barem 85, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, ili 100% identični sa CDR ovde opisanog varijabilnog domena HC; (c) sekvencu varijabilnog domena LC imunoglobulina koja sadrži jedan ili više (npr., 1, 2, ili 3) CDR koji su barem 85, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, ili 100% identični sa CDR ovde opisanog varijabilnog domena LC; (d) sekvencu varijabilnog domena LC imunoglobulina je barem 85, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, ili 100% identična ovde opisanom varijabilnom domenu LC (npr., ukupno ili u okvirnim regionima ili CDR); (e) sekvencu varijabilnog domena HC imunoglobulina koja je barem 85, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, ili 100% identična ovde opisanom varijabilnom domenu HC (npr., ukupno ili u okvirnim regionima ili CDR); (f) protein vezuje epitop vezan ovde opisanim proteinom, ili se nadmeće za vezivanje sa ovde opisanim proteinom; i (g) primatski CDR ili primatski okvirni region.
[0233] U nekim otelotvorenjima, protein ima očiglednu konstantu inhibicije (Ki,app) manju od 1000, 500, 100, 10, 5, 1, 0,5 ili 0,2 nM.
[0234] U nekim otelotvorenjima, antitelo ne vezuje prekalikrein (npr., ljudski prekalikrein i/ili mišiji prekalikrein), ali se vezuje za aktivni oblik kalikreina plazme (npr., ljudski kalikrein plazme i/ili mišiji kalikrein plazme).
[0235] U poželjnom otelotvorenju, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima lake i teške lance antitela izabranih iz grupe koja se sastoji od M162-A04, M160-G12, M142-H08, X63-G06, X101-A01, X81-B01, X67-D03, X67-G04, X115-B07, X115-D05, X115-E09, X115-H06, X115-A03, X115-D01, X115-F02, X115-G04, M29-D09 i M145-D11.
[0236] U poželjnom otelotvorenju, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima teški lanac antitela izabran iz grupe koja se sastoji od: M162-A04, M160-G12, M142-H08, X63-G06, X101-A01, X81-B01, X67-D03, X67-G04, X115- B07, X115-D05, X115-E09, X115-H06, X115-A03, X115-D01, X115-F02, X115-G04, M29-D09 i M145-D11.
[0237] U poželjnom otelotvorenju, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima laki lanac antitela izabran iz grupe koja se sastoji od: M162-A04, M160-G12, M142-H08, X63-G06, X101-A01, X81-B01, X67-D03, X67-G04, X115-B07, X115-D05, X115-E09, X115-H06, X115-A03, X115-D01, X115-F02, X115-G04, M29-D09 i M145-D11.
[0238] Protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) lake i teške varijabilne regione antitela izabrane iz grupe koja se sastoji od M162-A04, M160-G12, M142-H08, X63-G06, X101-A01, X81-B01, X67-D03, X67-G04, X115-B07, X115-D05, X115-E09, X115-H06, X115-A03, X115-D01, X115-F02, X115-G04, M29-D09 i M145-D11.
[0239] Protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima varijabilni region teškog lanca antitela izabran iz grupe koja se sastoji od: M162-A04, M160-G12, M142-H08, X63-G06, X101-A01, X81-B01, X67- D03, X67-G04, X115-B07, X115-D05, X115-E09, X115-H06, X115-A03, X115-D01, X115-F02, X115-G04, M29-D09 i M145-D11.
[0240] Protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima varijabilni region lakog lanca antitela izabran iz grupe koja se sastoji od: M162-A04, M160-G12, M142-H08, X63-G06, X101-A01, X81-B01, X67- D03, X67-G04, X115-B07, X115-D05, X115-E09, X115-H06, X115-A03, X115-D01, X115-F02, X115-G04, M29-D09 i M145-D11.
[0241] U poželjnom slučaju, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima jedan ili više (npr., 1, 2, ili 3) CDR teškog lanca izabran od odgovarajućeg CDR iz grupe teških lanaca koja se sastoji od M162-A04, M160-G12, M142-H08, X63-G06, X101-A01, X81-B01, X67-D03, X67-G04, X115-B07, X115-D05, X115-E09, X115-H06, X115-A03, X115-D01, X115-F02, X115-G04, M29-D09, M145-D11, M06- D09 i M35-G04.
[0242] U poželjnom slučaju, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima jedan ili više (npr., 1, 2, ili 3) CDR lakog lanca izabran od odgovarajućeg CDR iz grupe lakih lanaca koja se sastoji od M162-A04, M160-G12, M142-H08, X63-G06, X101-A01, X81-B01, X67-D03, X67-G04, X115-B07, X115-D05, X115-E09, X115-H06, X115-A03, X115-D01, X115-F02, X115-G04, M29-D09, M145-D11, M06-D09 i M35-G04.
[0243] U poželjnom slučaju, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima jedan ili više (npr., 1, 2, ili 3) CDR teškog lanca izabran od odgovarajućeg CDR iz grupe teških lanaca koja se sastoji od M162-A04, M160-G12, M142-H08, X63-G06, X101-A01, X81-B01, X67-D03, X67-G04, X115-B07, X115-D05, X115-E09, X115-H06, X115-A03, X115-D01, X115-F02, X115-G04, M29-D09, M145-D11, M06-D09 i M35-G04 i jedan ili više (npr., 1, 2, ili 3) CDR lakog lanca izabran od odgovarajućeg CDR iz grupe lakih lanaca koja se sastoji od M162-A04, M160-G12, M142-H08, X63-G06, X101-A01, X81-B01, X67-D03, X67-G04, X115-B07, X115-D05, X115-E09, X115-H06, X115-A03, X115-D01, X115-F02, X115-G04, M29-D09, M145-D11, M06-D09 i M35-G04 (respektivno).
[0244] U poželjnom otelotvorenju, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima lake i teške lance od X81-B01.
[0245] U poželjnom otelotvorenju, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima teški lanac od X81-B01.
[0246] U poželjnom otelotvorenju, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima laki lanac od X81-B01.
[0247] U poželjnom otelotvorenju, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) lake i teške varijabilne regione antitela izabrane od X81-B01.
[0248] U poželjnom otelotvorenju, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima varijabilni region teškog lanca antitela od X81-B01.
[0249] U poželjnom otelotvorenju, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima varijabilni region lakog lanca antitela od X81-B01.
[0250] U poželjnom slučaju, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima jedan ili više (npr., 1, 2, ili 3) CDR teškog lanca odgovarajućeg CDR teškog lanca od X81-B01.
[0251] U poželjnom slučaju, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima jedan ili više (npr., 1, 2, ili 3) CDR lakog lanca odgovarajućeg CDR lakog lanca od X81-B01.
[0252] U poželjnom slučaju, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima jedan ili više (npr., 1, 2, ili 3) CDR teškog lanca teškog lanca od X81-B01 i jedan ili više (npr., 1, 2, ili 3) CDR lakog lanca odgovarajućeg CDR lakog lanca od X81-B01.
[0253] U poželjnom slučaju, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima lake i teške lance od X67-D03.
[0254] U poželjnom otelotvorenju, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima teški lanac od X67-D03.
[0255] U poželjnom otelotvorenju, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima laki lanac od X67-D03.
[0256] U poželjnom otelotvorenju, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) lake i teške varijabilne regione antitela izabrane od X67-D03.
[0257] U poželjnom otelotvorenju, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima varijabilni region teškog lanca antitela od X67-D03.
[0258] U poželjnom otelotvorenju, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima varijabilni region lakog lanca antitela od X67-D03.
[0259] U poželjnom slučaju, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima jedan ili više (npr., 1, 2, ili 3) CDR teškog lanca odgovarajućeg CDR teškog lanca od X67-D03.
[0260] U poželjnom slučaju, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima jedan ili više (npr., 1, 2, ili 3) CDR lakog lanca odgovarajućeg CDR lakog lanca od X67-D03.
[0261] U poželjnom slučaju, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima jedan ili više (npr., 1, 2, ili 3) CDR teškog lanca teškog lanca od X67-D03 i jedan ili više (npr., 1, 2, ili 3) CDR lakog lanca odgovarajućeg CDR lakog lanca od X67-D03.
[0262] U jednom otelotvorenju, sekvence varijabilnog domena HC i LC su komponente istog polipeptidnog lanca.
[0263] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme ima vreme zadržavanja u serumu od 1 nedelje, 2 nedelje, 3 nedelje, 4 nedelje, 5 nedelja ili više, in vivo, npr., kod ljudi. U jednom otelotvorenju, vezujući protein kalikreina plazme je IgG, npr., IgG1, IgG2, IgG3 ili IgG4, koji ima vreme zadržavanja u serumu od 1 nedelje, 2 nedelje, 3 nedelje, 4 nedelje, 5 nedelja ili više in vivo, npr., kod ljudi.
[0264] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme je fizički povezan sa delom koji poboljšava vreme zadržavanja u serumu, npr., ovde opisanim delom.
[0265] U drugom otelotvorenju, sekvence varijabilnog domena HC i LC su komponente različitih polipeptidnih lanaca. Na primer, protein je IgG, npr., IgG1, IgG2, IgG3, ili IgG4. protein može biti rastvorljivi Fab (sFab).
[0266] U drugim implementacijama protein uključuje Fab2', scFv, minitelo, scFv::Fc fuziju, Fab::HSA fuziju, HSA::Fab fuziju, Fab::HSA::Fab fuziju, ili drugi molekul koji sadrži mesto za kombinovanje antigena jednog od vezujućih proteina odavde. VH i VL regioni ovih Fab-a mogu se dati kao IgG, Fab, Fab2, Fab2', scFv, PEGilovan Fab, PEGilovan scFv, PEGilovan Fab2, VH::CH1::HSA+LC, HSA::VH::CH1+LC, LC::HSA VH::CH1, HSA::LC VH::CH1, ili druga odgovarajuća konstrukcija.
[0267] U jednom otelotvorenju, protein je ljudsko ili humanizovano antitelo ili je neimunogen kod ljudi. Na primer, protein uključuje jedan ili više okvirni region ljudskog antitela, npr., svi ljudski okvirni regioni.
[0268] U jednom otelotvorenju, protein uključuje ljudski Fc domen, ili Fc domen koji je barem 95, 96, 97, 98, ili 99% identičan ljudskom Fc domenu.
[0269] U jednom otelotvorenju, protein je primatsko ili primatizovano antitelo ili je neimunogen kod ljudi. Na primer, protein uključuje jedan ili više okvirni region primatskog antitela, npr., svi primatski okvirni regioni.
[0270] U jednom otelotvorenju, protein uključuje primatski Fc domen, ili Fc domen koji je barem 95, 96, 97, 98, ili 99% identičan primatskom Fc domenu. „Primat“ uključuje ljude (Homo sapiens), šimpanze (Pan troglodytes i Pan paniscus (bonoboi)), gorile (Gorilla gorilla), gibone, majmune, lemure, aj-ajeve (Daubentonia madagascariensis), i tarsijere.
[0271] U jednom otelotvorenju, protein uključuje ljudske okvirne regione, ili okvirne regione koji su barem 95, 96, 97, 98, ili 99% identični ljudskim okvirnim regionima.
[0272] U određenim otelotvorenjima, protein ne uključuje sekvence od miševa ili zečeva (npr., nije mišije ili zečije antitelo).
[0273] U određenim otelotvorenjima, protein je sposoban da se veže za ćeliju ili tkivo, npr., koji eksprimira kalikrein plazme.
[0274] U jednom otelotvorenju, protein je fizički povezan sa nanočesticom, i može biti korišćen da navodi nanočesticu do ćelije ili tkiva koji eksprimiraju kalikrein plazme.
[0275] U nekim aspektima, pronalazak omogućava upotrebu proteina kodiranih nukleinskim kiselinama iz pronalaska, u postupku za tretman ili prevencije reumatoidnog artritisa kod pacijenta, gde postupak obuhvata:
primenu proteina (npr., antitelo, npr., ljudsko antitelo) koji obuhvata sekvencu varijabilnog domena teškog lanca imunoglobulina i sekvencu varijabilnog domena lakog lanca imunoglobulina kako je zahtevima definisano pacijentu, gde protein se vezuje za kalikrein plazme.
[0276] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme ne vezuje prekalikrein (npr., ljudski prekalikrein i/ili mišiji prekalikrein), ali se vezuje za aktivni oblik kalikreina plazme (npr., ljudski kalikrein plazme i/ili mišiji kalikrein plazme).
[0277] U nekim otelotvorenjima, protein se primenjuje u kombinaciji sa drugim tretmanom za reumatoidni artritis.
[0278] U nekim otelotvorenjima, protein inhibira kalikrein plazme (npr., ljudski kalikrein plazme i/ili mišiji kalikrein plazme).
[0279] Sekvenca varijabilnog domena teškog lanca imunoglobulina sadrži varijabilni domen teškog lanca ovde opisanog proteina, i sekvenca varijabilnog domena lakog lanca imunoglobulina sadrži varijabilni domen lakog lanca ovde opisanog proteina.
[0280] U nekim otelotvorenjima, protein sadrži teški lanac ovde opisanog proteina, i/ili laki lanac ovde opisanog proteina.
[0281] U nekim aspektima, pronalazak omogućava upotrebu proteina kodiranih nukleinskim kiselinama iz pronalaska, u postupku tretmana ili prevencije gihta kod pacijenta, gde postupak obuhvata:
primenu proteina (npr., antitelo, npr., ljudsko antitelo) koji obuhvata sekvencu varijabilnog domena teškog lanca imunoglobulina i sekvencu varijabilnog domena lakog lanca imunoglobulina kako je zahtevima definisano pacijentu, gde protein se vezuje za kalikrein plazme.
[0282] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme ne vezuje prekalikrein (npr., ljudski prekalikrein i/ili mišiji prekalikrein), ali se vezuje za aktivni oblik kalikreina plazme (npr., ljudski kalikrein plazme i/ili mišiji kalikrein plazme).
[0283] U nekim otelotvorenjima, protein se primenjuje u kombinaciji sa drugim tretmanom za giht.
[0284] U nekim otelotvorenjima, protein inhibira kalikrein plazme (npr., ljudski kalikrein plazme i/ili mišiji kalikrein plazme).
[0285] Sekvenca varijabilnog domena teškog lanca imunoglobulina sadrži varijabilni domen teškog lanca ovde opisanog proteina, i sekvenca varijabilnog domena lakog lanca imunoglobulina sadrži varijabilni domen lakog lanca ovde opisanog proteina.
[0286] U nekim otelotvorenjima, protein sadrži teški lanac ovde opisanog proteina, i/ili laki lanac ovde opisanog proteina.
[0287] U nekim aspektima, pronalazak omogućava upotrebu proteina kodiranih nukleinskim kiselinama iz pronalaska, u postupku tretmana ili prevencije upalnu bolest creva kod pacijenta, gde postupak obuhvata:
primenu proteina (npr., antitelo, npr., ljudsko antitelo) koji obuhvata sekvencu varijabilnog domena teškog lanca imunoglobulina i sekvencu varijabilnog domena lakog lanca imunoglobulina kako je zahtevima definisano pacijentu, gde protein se vezuje za kalikrein plazme.
[0288] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme ne vezuje prekalikrein (npr., ljudski prekalikrein i/ili mišiji prekalikrein), ali se vezuje za aktivni oblik kalikreina plazme (npr., ljudski kalikrein plazme i/ili mišiji kalikrein plazme).
[0289] U nekim otelotvorenjima, protein se primenjuje u kombinaciji sa drugim tretmanom za upalnu bolest creva.
[0290] U nekim otelotvorenjima, protein inhibira kalikrein plazme (npr., ljudski kalikrein plazme i/ili mišiji kalikrein plazme).
[0291] Sekvenca varijabilnog domena teškog lanca imunoglobulina sadrži varijabilni domen teškog lanca ovde opisanog proteina, i sekvenca varijabilnog domena lakog lanca imunoglobulina sadrži varijabilni domen lakog lanca ovde opisanog proteina.
[0292] U nekim otelotvorenjima, protein sadrži teški lanac ovde opisanog proteina, i/ili laki lanac ovde opisanog proteina.
[0293] U nekim aspektima, pronalazak omogućava upotrebu proteina kodiranih nukleinskim kiselinama i/ili povezani proteini iz pronalaska u postupku tretmana ili prevencije oralnog mukozitisa kod pacijenta, gde postupak obuhvata:
primenu proteina (npr., antitelo, npr., ljudsko antitelo) koji obuhvata sekvencu varijabilnog domena teškog lanca imunoglobulina i sekvencu varijabilnog domena lakog lanca imunoglobulina kako je zahtevima definisano pacijentu, gde protein se vezuje za kalikrein plazme.
[0294] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme ne vezuje prekalikrein (npr., ljudski prekalikrein i/ili mišiji prekalikrein), ali se vezuje za aktivni oblik kalikreina plazme (npr., ljudski kalikrein plazme i/ili mišiji kalikrein plazme).
[0295] U nekim otelotvorenjima, protein se primenjuje u kombinaciji sa drugim tretmanom za oralnog mukozitisa.
[0296] U nekim otelotvorenjima, protein inhibira kalikrein plazme (npr., ljudski kalikrein plazme i/ili mišiji kalikrein plazme).
[0297] Sekvenca varijabilnog domena teškog lanca imunoglobulina sadrži varijabilni domen teškog lanca ovde opisanog proteina, i sekvenca varijabilnog domena lakog lanca imunoglobulina sadrži varijabilni domen lakog lanca ovde opisanog proteina.
[0298] U nekim otelotvorenjima, protein sadrži teški lanac ovde opisanog proteina, i/ili laki lanac ovde opisanog proteina.
[0299] U nekim aspektima, pronalazak omogućava upotrebu proteina kodiranih nukleinskim kiselinama iz pronalaska, u postupku tretmana ili prevencije neuropatskog bola kod pacijenta, gde postupak obuhvata:
primenu proteina (npr., antitelo, npr., ljudsko antitelo) koji obuhvata sekvencu varijabilnog domena teškog lanca imunoglobulina i sekvencu varijabilnog domena lakog lanca imunoglobulina kako je zahtevima definisano pacijentu, gde protein se vezuje za kalikrein plazme.
[0300] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme ne vezuje prekalikrein (npr., ljudski prekalikrein i/ili mišiji prekalikrein), ali se vezuje za aktivni oblik kalikreina plazme (npr., ljudski kalikrein plazme i/ili mišiji kalikrein plazme).
[0301] U nekim otelotvorenjima, protein se primenjuje u kombinaciji sa drugim tretmanom za neuropatski bol.
[0302] U nekim otelotvorenjima, protein inhibira kalikrein plazme (npr., ljudski kalikrein plazme i/ili mišiji kalikrein plazme).
[0303] Sekvenca varijabilnog domena teškog lanca imunoglobulina sadrži varijabilni domen teškog lanca ovde opisanog proteina, i sekvenca varijabilnog domena lakog lanca imunoglobulina sadrži varijabilni domen lakog lanca ovde opisanog proteina.
[0304] U nekim otelotvorenjima, protein sadrži teški lanac ovde opisanog proteina, i/ili laki lanac ovde opisanog proteina.
[0305] U nekim aspektima, pronalazak omogućava upotrebu proteina kodiranih nukleinskim kiselinama iz pronalaska, u postupku tretmana ili prevencije upalnog bola kod pacijenta, gde postupak obuhvata:
primenu proteina (npr., antitelo, npr., ljudsko antitelo) koji obuhvata sekvencu varijabilnog domena teškog lanca imunoglobulina i sekvencu varijabilnog domena lakog lanca imunoglobulina kako je zahtevima definisano pacijentu, gde protein se vezuje za kalikrein plazme.
[0306] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme ne vezuje prekalikrein (npr., ljudski prekalikrein i/ili mišiji prekalikrein), ali se vezuje za aktivni oblik kalikreina plazme (npr., ljudski kalikrein plazme i/ili mišiji kalikrein plazme).
[0307] U nekim otelotvorenjima, protein se primenjuje u kombinaciji sa drugim tretmanom za upalni bol.
[0308] U nekim otelotvorenjima, protein inhibira kalikrein plazme (npr., ljudski kalikrein plazme i/ili mišiji kalikrein plazme).
[0309] Sekvenca varijabilnog domena teškog lanca imunoglobulina sadrži varijabilni domen teškog lanca ovde opisanog proteina, i sekvenca varijabilnog domena lakog lanca imunoglobulina sadrži varijabilni domen lakog lanca ovde opisanog proteina.
[0310] U nekim otelotvorenjima, protein sadrži teški lanac ovde opisanog proteina, i/ili laki lanac ovde opisanog proteina.
[0311] U nekim aspektima, pronalazak omogućava upotrebu proteina kodiranih nukleinskim kiselinama iz pronalaska, u postupku tretmana ili prevencije spinalne stenoze - degenerativne bolesti kičme kod pacijenta, gde postupak obuhvata:
primenu proteina (npr., antitelo, npr., ljudsko antitelo) koji obuhvata sekvencu varijabilnog domena teškog lanca imunoglobulina i sekvencu varijabilnog domena lakog lanca imunoglobulina kako je zahtevima definisano pacijentu, gde protein se vezuje za kalikrein plazme.
[0312] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme ne vezuje prekalikrein (npr., ljudski prekalikrein i/ili mišiji prekalikrein), ali se vezuje za aktivni oblik kalikreina plazme (npr., ljudski kalikrein plazme i/ili mišiji kalikrein plazme).
[0313] U nekim otelotvorenjima, protein se primenjuje u kombinaciji sa drugim tretmanom za spinalnu stenozu - degenerativnu bolesti kičme.
[0314] U nekim otelotvorenjima, protein inhibira kalikrein plazme (npr., ljudski kalikrein plazme i/ili mišiji kalikrein plazme).
[0315] Sekvenca varijabilnog domena teškog lanca imunoglobulina sadrži varijabilni domen teškog lanca ovde opisanog proteina, i sekvenca varijabilnog domena lakog lanca imunoglobulina sadrži varijabilni domen lakog lanca ovde opisanog proteina.
[0316] U nekim otelotvorenjima, protein sadrži teški lanac ovde opisanog proteina, i/ili laki lanac ovde opisanog proteina.
[0317] U nekim aspektima, pronalazak omogućava upotrebu proteina kodiranih nukleinskim kiselinama iz pronalaska, u postupku tretmana ili prevencije arterijske ili venske tromboze kod pacijenta, gde postupak obuhvata:
primenu proteina (npr., antitelo, npr., ljudsko antitelo) koji obuhvata sekvencu varijabilnog domena teškog lanca imunoglobulina i sekvencu varijabilnog domena lakog lanca imunoglobulina kako je zahtevima definisano pacijentu, gde protein se vezuje za kalikrein plazme.
[0318] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme ne vezuje prekalikrein (npr., ljudski prekalikrein i/ili mišiji prekalikrein), ali se vezuje za aktivni oblik kalikreina plazme (npr., ljudski kalikrein plazme i/ili mišiji kalikrein plazme).
[0319] U nekim otelotvorenjima, protein se primenjuje u kombinaciji sa drugim tretmanom za arterijsku ili vensku trombozu.
[0320] U nekim otelotvorenjima, protein inhibira kalikrein plazme (npr., ljudski kalikrein plazme i/ili mišiji kalikrein plazme).
[0321] Sekvenca varijabilnog domena teškog lanca imunoglobulina sadrži varijabilni domen teškog lanca ovde opisanog proteina, i sekvenca varijabilnog domena lakog lanca imunoglobulina sadrži varijabilni domen lakog lanca ovde opisanog proteina.
[0322] U nekim otelotvorenjima, protein sadrži teški lanac ovde opisanog proteina, i/ili laki lanac ovde opisanog proteina.
[0323] U nekim aspektima, pronalazak omogućava upotrebu proteina kodiranih nukleinskim kiselinama iz pronalaska, u postupku tretmana ili prevencije post operativnog ileusa kod pacijenta, gde postupak obuhvata:
primenu proteina (npr., antitelo, npr., ljudsko antitelo) koji obuhvata sekvencu varijabilnog domena teškog lanca imunoglobulina i sekvencu varijabilnog domena lakog lanca imunoglobulina kako je zahtevima definisano pacijentu, gde protein se vezuje za kalikrein plazme.
[0324] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme ne vezuje prekalikrein (npr., ljudski prekalikrein i/ili mišiji prekalikrein), ali se vezuje za aktivni oblik kalikreina plazme (npr., ljudski kalikrein plazme i/ili mišiji kalikrein plazme).
[0325] U nekim otelotvorenjima, protein se primenjuje u kombinaciji sa drugim tretmanom za post operativni ileus.
[0326] U nekim otelotvorenjima, protein inhibira kalikrein plazme (npr., ljudski kalikrein plazme i/ili mišiji kalikrein plazme).
[0327] Sekvenca varijabilnog domena teškog lanca imunoglobulina sadrži varijabilni domen teškog lanca ovde opisanog proteina, i sekvenca varijabilnog domena lakog lanca imunoglobulina sadrži varijabilni domen lakog lanca ovde opisanog proteina.
[0328] U nekim otelotvorenjima, protein sadrži teški lanac ovde opisanog proteina, i/ili laki lanac ovde opisanog proteina.
[0329] U nekim aspektima, pronalazak omogućava upotrebu proteina kodiranih nukleinskim kiselinama iz pronalaska, u postupku tretmana ili prevencije aortne aneurizme kod pacijenta, gde postupak obuhvata:
primenu proteina (npr., antitelo, npr., ljudsko antitelo) koji obuhvata sekvencu varijabilnog domena teškog lanca imunoglobulina i sekvencu varijabilnog domena lakog lanca imunoglobulina kako je zahtevima definisano pacijentu, gde protein se vezuje za kalikrein plazme.
[0330] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme ne vezuje prekalikrein (npr., ljudski prekalikrein i/ili mišiji prekalikrein), ali se vezuje za aktivni oblik kalikreina plazme (npr., ljudski kalikrein plazme i/ili mišiji kalikrein plazme).
[0331] U nekim otelotvorenjima, protein se primenjuje u kombinaciji sa drugim tretmanom za aortni aneurizam.
[0332] U nekim otelotvorenjima, protein inhibira kalikrein plazme (npr., ljudski kalikrein plazme i/ili mišiji kalikrein plazme).
[0333] Sekvenca varijabilnog domena teškog lanca imunoglobulina sadrži varijabilni domen teškog lanca ovde opisanog proteina, i sekvenca varijabilnog domena lakog lanca imunoglobulina sadrži varijabilni domen lakog lanca ovde opisanog proteina.
[0334] U nekim otelotvorenjima, protein sadrži teški lanac ovde opisanog proteina, i/ili laki lanac ovde opisanog proteina.
[0335] U nekim aspektima, pronalazak omogućava upotrebu proteina kodiranih nukleinskim kiselinama iz pronalaska, u postupku tretmana ili prevencije osteoartritisa kod pacijenta, gde postupak obuhvata:
primenu proteina (npr., antitelo, npr., ljudsko antitelo) koji obuhvata sekvencu varijabilnog domena teškog lanca imunoglobulina i sekvencu varijabilnog domena lakog lanca imunoglobulina kako je zahtevima definisano pacijentu, gde protein se vezuje za kalikrein plazme.
[0336] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme ne vezuje prekalikrein (npr., ljudski prekalikrein i/ili mišiji prekalikrein), ali se vezuje za aktivni oblik kalikreina plazme (npr., ljudski kalikrein plazme i/ili mišiji kalikrein plazme).
[0337] U nekim otelotvorenjima, protein se primenjuje u kombinaciji sa drugim tretmanom za osteoartritis.
[0338] U nekim otelotvorenjima, protein inhibira kalikrein plazme (npr., ljudski kalikrein plazme i/ili mišiji kalikrein plazme).
[0339] Sekvenca varijabilnog domena teškog lanca imunoglobulina sadrži varijabilni domen teškog lanca ovde opisanog proteina, i sekvenca varijabilnog domena lakog lanca imunoglobulina sadrži varijabilni domen lakog lanca ovde opisanog proteina.
[0340] U nekim otelotvorenjima, protein sadrži teški lanac ovde opisanog proteina, i/ili laki lanac ovde opisanog proteina.
[0341] U nekim aspektima, pronalazak omogućava upotrebu proteina kodiranih nukleinskim kiselinama iz pronalaska, u postupak tretmana ili prevencije vaskulitisa kod pacijenta, gde postupak obuhvata:
primenu proteina (npr., antitelo, npr., ljudsko antitelo) koji obuhvata sekvencu varijabilnog domena teškog lanca imunoglobulina i sekvencu varijabilnog domena lakog lanca imunoglobulina kako je zahtevima definisano pacijentu, gde protein se vezuje za kalikrein plazme.
[0342] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme ne vezuje prekalikrein (npr., ljudski prekalikrein i/ili mišiji prekalikrein), ali se vezuje za aktivni oblik kalikreina plazme (npr., ljudski kalikrein plazme i/ili mišiji kalikrein plazme).
[0343] U nekim otelotvorenjima, protein se primenjuje u kombinaciji sa drugim tretmanom za vaskulitis.
[0344] U nekim otelotvorenjima, protein inhibira kalikrein plazme (npr., ljudski kalikrein plazme i/ili mišiji kalikrein plazme).
[0345] Sekvenca varijabilnog domena teškog lanca imunoglobulina sadrži varijabilni domen teškog lanca ovde opisanog proteina, i sekvenca varijabilnog domena lakog lanca imunoglobulina sadrži varijabilni domen lakog lanca ovde opisanog proteina.
[0346] U nekim otelotvorenjima, protein sadrži teški lanac ovde opisanog proteina, i/ili laki lanac ovde opisanog proteina.
[0347] U nekim aspektima, pronalazak omogućava upotrebu proteina kodiranih nukleinskim kiselinama iz pronalaska, u postupku tretmana ili prevencije povrede glave ili peri-tumorskog moždanog edema kod pacijenta, gde postupak obuhvata:
primenu proteina (npr., antitelo, npr., ljudsko antitelo) koji obuhvata sekvencu varijabilnog domena teškog lanca imunoglobulina i sekvencu varijabilnog domena lakog lanca imunoglobulina kako je zahtevima definisano pacijentu, gde protein se vezuje za kalikrein plazme.
[0348] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme ne vezuje prekalikrein (npr., ljudski prekalikrein i/ili mišiji prekalikrein), ali se vezuje za aktivni oblik kalikreina plazme (npr., ljudski kalikrein plazme i/ili mišiji kalikrein plazme).
[0349] U nekim otelotvorenjima, protein se primenjuje u kombinaciji sa drugim tretmanom za povredu glave ili peri-tumorski moždani edem.
[0350] U nekim otelotvorenjima, protein inhibira kalikrein plazme (npr., ljudski kalikrein plazme i/ili mišiji kalikrein plazme).
[0351] Sekvenca varijabilnog domena teškog lanca imunoglobulina sadrži varijabilni domen teškog lanca ovde opisanog proteina, i sekvenca varijabilnog domena lakog lanca imunoglobulina sadrži varijabilni domen lakog lanca ovde opisanog proteina.
[0352] U nekim otelotvorenjima, protein sadrži teški lanac ovde opisanog proteina, i/ili laki lanac ovde opisanog proteina.
[0353] U nekim aspektima, pronalazak omogućava upotrebu proteina kodiranih nukleinskim kiselinama iz pronalaska, u postupku tretmana ili prevencije sepse kod pacijenta, gde postupak obuhvata:
primenu proteina (npr., antitelo, npr., ljudsko antitelo) koji obuhvata sekvencu varijabilnog domena teškog lanca imunoglobulina i sekvencu varijabilnog domena lakog lanca imunoglobulina kako je zahtevima definisano pacijentu, gde protein se vezuje za kalikrein plazme.
[0354] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme ne vezuje prekalikrein (npr., ljudski prekalikrein i/ili mišiji prekalikrein), ali se vezuje za aktivni oblik kalikreina plazme (npr., ljudski kalikrein plazme i/ili mišiji kalikrein plazme).
[0355] U nekim otelotvorenjima, protein se primenjuje u kombinaciji sa drugim tretmanom za sepsu.
[0356] U nekim otelotvorenjima, protein inhibira kalikrein plazme (npr., ljudski kalikrein plazme i/ili mišiji kalikrein plazme).
[0357] Sekvenca varijabilnog domena teškog lanca imunoglobulina sadrži varijabilni domen teškog lanca ovde opisanog proteina, i sekvenca varijabilnog domena lakog lanca imunoglobulina sadrži varijabilni domen lakog lanca ovde opisanog proteina.
[0358] U nekim otelotvorenjima, protein sadrži teški lanac ovde opisanog proteina, i/ili laki lanac ovde opisanog proteina.
[0359] U nekim aspektima, pronalazak omogućava upotrebu proteina kodiranih nukleinskim kiselinama iz pronalaska, u postupku tretmana ili prevencije akutnog ishemijskog događaja srednje cerebralne arterije (MCA) (moždani udar) kod pacijenta, gde postupak obuhvata: primenu proteina (npr., antitelo, npr., ljudsko antitelo) koji obuhvata sekvencu varijabilnog domena teškog lanca imunoglobulina i sekvencu varijabilnog domena lakog lanca imunoglobulina kako je zahtevima definisano pacijentu, gde protein se vezuje za kalikrein plazme.
[0360] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme ne vezuje prekalikrein (npr., ljudski prekalikrein i/ili mišiji prekalikrein), ali se vezuje za aktivni oblik kalikreina plazme (npr., ljudski kalikrein plazme i/ili mišiji kalikrein plazme).
[0361] U nekim otelotvorenjima, protein se primenjuje u kombinaciji sa drugim tretmanom za akutni ishemijski događaj srednje cerebralne arterije (MCA) (moždani udar).
[0362] U nekim otelotvorenjima, protein inhibira kalikrein plazme (npr., ljudski kalikrein plazme i/ili mišiji kalikrein plazme).
[0363] Sekvenca varijabilnog domena teškog lanca imunoglobulina sadrži varijabilni domen teškog lanca ovde opisanog proteina, i/ili sekvenca varijabilnog domena lakog lanca imunoglobulina sadrži varijabilni domen lakog lanca ovde opisanog proteina.
[0364] U nekim otelotvorenjima, protein sadrži teški lanac ovde opisanog proteina, i/ili laki lanac ovde opisanog proteina.
[0365] U nekim aspektima, pronalazak omogućava upotrebu proteina kodiranih nukleinskim kiselinama iz pronalaska, u postupku tretmana ili prevencije restenoze (npr., nakon angioplastike) kod pacijenta, gde postupak obuhvata:
primenu proteina (npr., antitelo, npr., ljudsko antitelo) koji obuhvata sekvencu varijabilnog domena teškog lanca imunoglobulina i sekvencu varijabilnog domena lakog lanca imunoglobulina kako je zahtevima definisano pacijentu, gde protein se vezuje za kalikrein plazme.
[0366] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme ne vezuje prekalikrein (npr., ljudski prekalikrein i/ili mišiji prekalikrein), ali se vezuje za aktivni oblik kalikreina plazme (npr., ljudski kalikrein plazme i/ili mišiji kalikrein plazme).
[0367] U nekim otelotvorenjima, protein se primenjuje u kombinaciji sa drugim tretmanom za restenozu (npr., nakon angioplastike).
[0368] U nekim otelotvorenjima, protein inhibira kalikrein plazme (npr., ljudski kalikrein plazme i/ili mišiji kalikrein plazme).
[0369] Sekvenca varijabilnog domena teškog lanca imunoglobulina sadrži varijabilni domen teškog lanca ovde opisanog proteina, i sekvenca varijabilnog domena lakog lanca imunoglobulina sadrži varijabilni domen lakog lanca ovde opisanog proteina.
[0370] U nekim otelotvorenjima, protein sadrži teški lanac ovde opisanog proteina, i/ili laki lanac ovde opisanog proteina.
[0371] U nekim aspektima, pronalazak omogućava upotrebu proteina kodiranih nukleinskim kiselinama iz pronalaska, u postupku tretmana ili prevencije sistemskog lupus eritematozni nefritisa kod pacijenta, gde postupak obuhvata:
primenu proteina (npr., antitelo, npr., ljudsko antitelo) koji obuhvata sekvencu varijabilnog domena teškog lanca imunoglobulina i sekvencu varijabilnog domena lakog lanca imunoglobulina kako je zahtevima definisano pacijentu, gde protein se vezuje za kalikrein plazme.
[0372] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme ne vezuje prekalikrein (npr., ljudski prekalikrein i/ili mišiji prekalikrein), ali se vezuje za aktivni oblik kalikreina plazme (npr., ljudski kalikrein plazme i/ili mišiji kalikrein plazme).
[0373] U nekim otelotvorenjima, protein se primenjuje u kombinaciji sa drugim tretmanom za sistemski lupus eritematozni nefritisa.
[0374] U nekim otelotvorenjima, protein inhibira kalikrein plazme (npr., ljudski kalikrein plazme i/ili mišiji kalikrein plazme).
[0375] Sekvenca varijabilnog domena teškog lanca imunoglobulina sadrži varijabilni domen teškog lanca ovde opisanog proteina, i sekvenca varijabilnog domena lakog lanca imunoglobulina sadrži varijabilni domen lakog lanca ovde opisanog proteina.
[0376] U nekim otelotvorenjima, protein sadrži teški lanac ovde opisanog proteina, i/ili laki lanac ovde opisanog proteina.
[0377] U nekim aspektima, pronalazak omogućava upotrebu proteina kodiranih nukleinskim kiselinama iz pronalaska, u postupku tretmana ili prevencije opekotina kod pacijenta, gde postupak obuhvata:
primenu proteina (npr., antitelo, npr., ljudsko antitelo) koji obuhvata sekvencu varijabilnog domena teškog lanca imunoglobulina i sekvencu varijabilnog domena lakog lanca imunoglobulina kako je zahtevima definisano pacijentu, gde protein se vezuje za kalikrein plazme.
[0378] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme ne vezuje prekalikrein (npr., ljudski prekalikrein i/ili mišiji prekalikrein), ali se vezuje za aktivni oblik kalikreina plazme (npr., ljudski kalikrein plazme i/ili mišiji kalikrein plazme).
[0379] U nekim otelotvorenjima, protein se primenuje u kombinaciji sa drugim tretmanom za opekotine.
[0380] U nekim otelotvorenjima, protein inhibira kalikrein plazme (npr., ljudski kalikrein plazme i/ili mišiji kalikrein plazme).
[0381] Sekvenca varijabilnog domena teškog lanca imunoglobulina sadrži varijabilni domen teškog lanca ovde opisanog proteina, i sekvenca varijabilnog domena lakog lanca imunoglobulina sadrži varijabilni domen lakog lanca ovde opisanog proteina.
[0382] U nekim otelotvorenjima, protein sadrži teški lanac ovde opisanog proteina, i/ili laki lanac ovde opisanog proteina.
[0383] U nekim aspektima, pronalazak omogućava upotrebu proteina kodiranih nukleinskim kiselinama iz pronalaska, u postupku detektovanja kalikreina plazme u uzorku, gde postupak obuhvata: dovođenje u dodir uzorka sa proteinom; i detektovanja interakcije između proteina i kalikreina plazme, ako je prisutan.
[0384] U nekim otelotvorenjima, protein dalje uključuje detektabilno obeležje.
[0385] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme ne vezuje prekalikrein (npr., ljudski prekalikrein i/ili mišiji prekalikrein), ali se vezuje za aktivni oblik kalikreina plazme (npr., ljudski kalikrein plazme i/ili mišiji kalikrein plazme). U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme vezuje prekalikrein (npr., ljudski prekalikrein i/ili mišiji prekalikrein) i aktivni oblik kalikreina plazme (npr., ljudski kalikrein plazme i/ili mišiji kalikrein plazme).
[0386] U nekim aspektima, pronalazak omogućava upotrebu proteina kodiranih nukleinskim kiselinama iz pronalaska, u postupku detektovanja kalikreina plazme u pacijenta, gde postupak obuhvata: primenu proteina ovde opisanog pacijentu; i detektovanja interakcije između proteina i kalikreina plazme u pacijentu, ako je prisutan. Na primer, detektovanja obuhvata snimanje pacijenta.
[0387] U nekim otelotvorenjima, protein dalje uključuje detektabilno obeležje.
[0388] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme ne vezuje prekalikrein (npr., ljudski prekalikrein i/ili mišiji prekalikrein), ali se vezuje za aktivni oblik kalikreina plazme (npr., ljudski kalikrein plazme i/ili mišiji kalikrein plazme). U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme vezuje prekalikrein (npr., ljudski prekalikrein i/ili mišiji prekalikrein) i aktivni oblik kalikreina plazme (npr., ljudski kalikrein plazme i/ili mišiji kalikrein plazme).
[0389] U nekim aspektima, pronalazak omogućava upotrebu proteina kodiranih nukleinskim kiselinama iz pronalaska, u postupku modulacije aktivnosti kalikreina plazme, npr. u postupku tretmana i prevencije poremećaja povezanog sa kalikreinom plazme. Postupak obuhvata: interakciju kalikrein plazme sa proteinom (npr. u ljudskom pacijentu), time i modulacija aktivnosti kalikreina plazme.
[0390] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme ne vezuje prekalikrein (npr., ljudski prekalikrein i/ili mišiji prekalikrein), ali se vezuje za aktivni oblik kalikreina plazme (npr., ljudski kalikrein plazme i/ili mišiji kalikrein plazme).
[0391] U nekim otelotvorenjima, poremećaj povezan sa kalikreinom plazme je izabran iz grupe koju čine reumatoidni artritis, giht, upalna bolest creva, oralni mukozitis, neuropatski bol, upalni bol, spinalna stenoza - degenerativna bolest kičme, arterijska ili venska tromboza, post operativni ileus, aortna aneurizma, osteoartritis, vaskulitis, edem, nasledni angioedem, cerebralni edem, plućna embolija, moždani udar, zgrušavanje indukovano ventrikularnim pomoćnim uređajima ili stentovima, povreda glave ili peri-tumorski moždani edem, sepsa, akutni ishemijski događaj srednje cerebralne arterije (MCA) (moždani udar), restenoza (npr., nakon angioplastike), sistemski lupus eritematozni nefritis/vaskulitis, i opekotina.
[0392] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme redukuje primetno zgrušavanje povezano sa sistemom aktiviranja dodirom (tj., sistem unutrašnjeg aktiviranja) za barem 10% mereno npr., APTT testom zgrušavanja. U drugim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme redukuje primetno zgrušavanje povezano sa sistemom aktiviranja dodirom za barem 20%, barem 30%, barem 40%, barem 50%, barem 60%, barem 70%, barem 80%, barem 90%, barem 95%, barem 99%, ili čak 100% (tj., bez primetnog zgrušavanja).
[0393] U nekim aspektima, pronalazak omogućava upotrebu proteina kodiranih nukleinskim kiselinama iz pronalaska, u postupku tretiranja poremećaja povezanog sa kalikreinom plazme, gde postupak obuhvata primenu, pacijentu, proteina u količini dovoljnoj da tretira poremećaj povezan sa kalikreinom plazme kod pacijenta. Postupak dalje može da uključuje pružanje pacijentu druge terapije koja je terapija za poremećaj povezanog sa kalikreinom plazme, npr., kao što je opisano ovde.
[0394] U nekim otelotvorenjima, poremećaj povezan sa kalikreinom plazme je izabran iz grupe koju čine reumatoidni artritis, giht, upalna bolest creva, oralni mukozitis, neuropatski bol, upalni bol, spinalna stenoza - degenerativna bolest kičme, arterijska ili venska tromboza, post operativni ileus, aortna aneurizma, osteoartritis, vaskulitis, edem, nasledni angioedem, cerebralni edem, plućna embolija, moždani udar, zgrušavanje indukovano ventrikularnim pomoćnim uređajima ili stentovima, povreda glave ili peri-tumorski moždani edem, sepsa, akutni ishemijski događaj srednje cerebralne arterije (MCA) (moždani udar), restenoza (npr., nakon angioplastike), sistemski lupus eritematozni nefritis/vaskulitis, i opekotina.
[0395] U nekim aspektima, pronalazak omogućava upotrebu proteina kodiranih nukleinskim kiselinama iz pronalaska, u postupku snimanja pacijenta. Postupak uključuje primenu proteina pacijentu, i npr., detektovanja interakcije između proteina i kalikreina plazme kod pacijenta, ako je prisutan.
[0396] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme ne vezuje prekalikrein (npr., ljudski prekalikrein i/ili mišiji prekalikrein), ali se vezuje za aktivni oblik kalikreina plazme (npr., ljudski kalikrein plazme i/ili mišiji kalikrein plazme). U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme vezuje prekalikrein (npr., ljudski prekalikrein i/ili mišiji prekalikrein) i aktivni oblik kalikreina plazme (npr., ljudski kalikrein plazme i/ili mišiji kalikrein plazme).
[0397] U nekim otelotvorenjima, protein ne inhibira aktivnost kalikreina plazme.
[0398] U nekim otelotvorenjima, protein inhibira aktivnost kalikreina plazme (npr., ljudski kalikrein plazme i/ili mišiji kalikrein plazme).
[0399] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme može da uključi detektabilno obeležje (npr., radionuklid ili MRI-detektabilno obeležje).
[0400] U nekim otelotvorenjima, pacijent ima ili se sumnja da ima poremećaj povezan sa kalikreinom plazme. Postupak je koristan, npr., za dijagnozu poremećaja povezanog sa kalikreinom plazme.
[0401] U nekim otelotvorenjima, poremećaj povezan sa kalikreinom plazme je izabran iz grupe koju čine reumatoidni artritis, giht, upalna bolest creva, oralni mukozitis, neuropatski bol, upalni bol, spinalna stenoza - degenerativna bolest kičme, arterijska ili venska tromboza, post operativni ileus, aortna aneurizma, osteoartritis, vaskulitis, edem, nasledni angioedem, cerebralni edem, plućna embolija, moždani udar, zgrušavanje indukovano ventrikularnim pomoćnim uređajima ili stentovima, povreda glave ili peri-tumorski moždani edem, sepsa, akutni ishemijski događaj srednje cerebralne arterije (MCA) (moždani udar), restenoza (npr., nakon angioplastike), sistemski lupus eritematozni nefritis, i opekotina.
[0402] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme redukuje primetno zgrušavanje povezano sa sistemom aktiviranja dodirom (tj., sistem unutrašnjeg aktiviranja) za barem 10% mereno npr., testom zgrušavanja APTT (npr., za barem 20%, barem 30%, barem 40%, barem 50%, barem 60%, barem 70%, barem 80%, barem 90%, barem 95%, barem 99%, ili čak 100% (tj., bez primetnog zgrušavanja)).
[0403] U nekim aspektima, pronalazak omogućava upotrebu proteina kodiranih nukleinskim kiselinama iz pronalaska, u postupku snimanja kalikreinaplazme, npr., kod pacijenta ili uzorka (npr., biopsija uzorka). Postupak uključuje primenu proteina npr., pacijentu ili uzorak, i detektovanja interakcije između proteina i kalikreina plazme, ako je prisutan.
[0404] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme ne vezuje prekalikrein (npr., ljudski prekalikrein i/ili mišiji prekalikrein), ali se vezuje za aktivni oblik kalikreina plazme (npr., ljudski kalikrein plazme i/ili mišiji kalikrein plazme). U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme vezuje prekalikrein (npr., ljudski prekalikrein i/ili mišiji prekalikrein) i aktivni oblik kalikreina plazme (npr., ljudski kalikrein plazme i/ili mišiji kalikrein plazme).
[0405] U nekim otelotvorenjima, protein ne inhibira aktivnost kalikreina plazme.
[0406] U nekim otelotvorenjima, protein inhibira aktivnost kalikreina plazme (npr., ljudski kalikrein plazme i/ili mišiji kalikrein plazme).
[0407] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme može da uključi detektabilno obeležje (npr., radionuklid ili MRI-detektabilno obeležje).
[0408] U nekim otelotvorenjima, pacijent ima ili se sumnja da ima poremećaj povezan sa kalikreinom plazme. Postupak je koristan, npr., za dijagnozu poremećaja povezanog sa kalikreinom plazme.
[0409] U nekim otelotvorenjima, poremećaj povezan sa kalikreinom plazme je izabran iz grupe koju čine reumatoidni artritis, giht, upalna bolest creva, oralni mukozitis, neuropatski bol, upalni bol, spinalna stenoza - degenerativna bolest kičme, arterijska ili venska tromboza, post operativni ileus, aortna aneurizma, osteoartritis, vaskulitis, edem, nasledni angioedem, cerebralni edem, plućna embolija, moždani udar, zgrušavanje indukovano ventrikularnim pomoćnim uređajima ili stentovima, povreda glave ili peri-tumorski moždani edem, sepsa, akutni ishemijski događaj srednje cerebralne arterije (MCA) (moždani udar), restenoza (npr., nakon angioplastike), sistemski lupus eritematozni nefritis, i opekotina.
[0410] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme redukuje primetno zgrušavanje povezano sa sistemom aktiviranja dodirom (tj., sistem unutrašnjeg aktiviranja) za barem 10% mereno npr., testom zgrušavanja APTT (npr., za barem 20%, barem 30%, barem 40%, barem 50%, barem 60%, barem 70%, barem 80%, barem 90%, barem 95%, barem 99%, ili čak 100% (tj., bez primetnog zgrušavanja)).
[0411] U nekim aspektima, pronalazak omogućava upotrebu proteina kodiranih nukleinskim kiselinama iz pronalaska za tretman ovde opisanog poremećaja, kao što su npr., reumatoidni artritis, giht, upalna bolest creva, oralni mukozitis, neuropatski bol, upalni bol, spinalna stenoza - degenerativna bolest kičme, arterijska ili venska tromboza, post operativni ileus, aortna aneurizma, osteoartritis, vaskulitis, edem, nasledni angioedem,
cerebralni edem, plućna embolija, moždani udar, zgrušavanje indukovano ventrikularnim pomoćnim uređajima ili stentovima, povreda glave ili peri-tumorski moždani edem, sepsa, akutni ishemijski događaj srednje cerebralne arterije (MCA) (moždani udar), restenoza (npr., nakon angioplastike), sistemski lupus eritematozni nefritis, ili opekotina; ili da pospeši zarastanje rana.
[0412] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme ne vezuje prekalikrein (npr., ljudski prekalikrein i/ili mišiji prekalikrein), ali se vezuje za aktivni oblik kalikreina plazme (npr., ljudski kalikrein plazme i/ili mišiji kalikrein plazme). U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme vezuje prekalikrein (npr., ljudski prekalikrein i/ili mišiji prekalikrein) i aktivni oblik kalikreina plazme (npr., ljudski kalikrein plazme i/ili mišiji kalikrein plazme). U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme vezuje prekalikrein (npr., ljudski prekalikrein i/ili mišiji prekalikrein) i aktivni oblik kalikreina plazme (npr., ljudski kalikrein plazme i/ili mišiji kalikrein plazme).
[0413] U nekim aspektima, pronalazak omogućava upotrebu proteina kodiranih nukleinskim kiselinama iz pronalaska za proizvodnju leka za tretman ovde opisanog poremećaja, kao što su npr., reumatoidni artritis, giht, upalna bolest creva, oralni mukozitis, neuropatski bol, upalni bol, spinalna stenoza - degenerativna bolest kičme, arterijska ili venska tromboza, post operativni ileus, aortna aneurizma, osteoartritis, vaskulitis, edem, nasledni angioedem, cerebralni edem, plućna embolija, moždani udar, zgrušavanje indukovano ventrikularnim pomoćnim uređajima ili stentovima, povreda glave ili peri-tumorski moždani edem, sepsa, akutni ishemijski događaj srednje cerebralne arterije (MCA) (moždani udar), restenoza (npr., nakon angioplastike), sistemski lupus eritematozni nefritis, ili opekotina; ili za proizvodnju leka za zarastanje rana.
[0414] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme redukuje primetno zgrušavanje povezano sa sistemom aktiviranja dodirom (tj., sistem unutrašnjeg aktiviranja) za barem 10% mereno npr., testom zgrušavanja APTT (npr., za barem 20%, barem 30%, barem 40%, barem 50%, barem 60%, barem 70%, barem 80%, barem 90%, barem 95%, barem 99%, ili čak 100% (tj., bez primetnog zgrušavanja)).
[0415] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme ne vezuje prekalikrein (npr., ljudski prekalikrein i/ili mišiji prekalikrein), ali se vezuje za aktivni oblik kalikreina plazme (npr., ljudski kalikrein plazme i/ili mišiji kalikrein plazme).
[0416] Detalji jednog ili više otelotvorenja pronalaska su dati u priloženim crtežima i opisu u nastavku. Ostale karakteristike, predmeti i prednosti pronalaska će biti očigledne iz opisa i crteža, i iz patentnih zahteva.
KRATAK OPIS CRTEŽA
[0417]
SLIKA 1 je šematski prikaz uloge kalikreina plazme (pKal) u intrinzičnom putu koagulacije i upale.
SLIKA 2 prikazuje efekat M162-A04 na edem karcinogena izazvanog karaginanom. Oticanje šapa mereno je pomeranjem vode.
SLIKA 3 prikazuje efekat M162-A04 na termičku hiperalgeziju izazvanu karaginanom. Latentnost bolova merena je Hargrivs postupkom nakon injekcije karaginana.
SLIKA 4 prikazuje poravnanje sekvence DNK lakog lanca negermlinovanih (X63-G06) i germlinovanih, kodonski optimizovanih (X81-B01) verzija istog antitela otkrivenog korišćenjem ROLIC afinitetno sazrevanje. Položaji naznačeni zvezdicom (*) su konzervirani, dok prazni prostori odgovaraju bazama izmenjenim u X81-B01 zbog optimizacije kodova ili germlinovanja.
SLIKA 5 prikazuje poravnanje aminokiselinske sekvence lakog lanca negermlinovanih (X63-G06) i germlinovanih, kodonski optimizovanih (X81-B01) verzija istog antitela otkrivenog korišćenjem ROLIC afiniteta sazrevanja. Položaji naznačeni zvezdicom (*) su konzervirani, dok prazni prostori odgovaraju aminokiselinama izmenjenim u X81-B01 zbog germlinovanja. Ukupno 11 aminokiselina se razlikuju između negermlinovanog (X63-G06) i germlinovanog, kodonski optimizovanog antitela (X81-B01).
SLIKA 6 prikazuje poravnanje sekvence DNK teškog lanca negermlinovanih (X63-G06) i germlinovanih, kodonski optimizovanih (X81-B01) verzija istog antitela otkrivenog korišćenjem ROLIC afiniteta sazrevanja. Položaji naznačeni zvezdicom (*) su konzervirani, dok prazni prostori odgovaraju DNK bazama izmenjenim u X81-B01 zbog kodonske optimizacije.
SLIKA 7 prikazuje poravnanje aminokiselinske sekvence teškog lanca negermlinovanih (X63-G06) i germlinovanih, kodonski optimizovanih (X81-B01) verzija istog antitela otkrivenog korišćenjem ROLIC afiniteta sazrevanja. Položaji označeni zvezdicom (*) su konzervirani. Dva antitela imaju istu sekvencu aminokiselina u teškim lancima.
SLIKA 8A prikazuje EPI-KAL2 nadmetanje za X81-B01 vezivanje pKal. X81-B01 (IgG) je uhvaćen na anti-ljudskoj Fc fragment specifičnoj površini CM5 BIACORE® čipa. pKal (100 nM) je proticao preko površine u prisustvu (niži senzogram na SLICI) ili odsustvu 1 μM EPI-KAL2 (gornji senzogram na SLICI).
SLIKA 8B prikazuje EPI-KAL2 nadmetanje za X67-D03 vezivanje pKal. X67-D03 (IgG) je uhvaćen na anti- ljudskoj Fc fragment specifičnoj površini CM5 Biacore čipa. pKal (100 nM) je proticao preko površine u prisustvu (niži senzogram na SLICI) ili odsustvu 1 μM EPI-KAL2 (gornji senzogram na SLICI).
SLIKA 9 prikazuje rezultate mapiranja epitopa CLIPS za antitela navedena u Tabeli 12.
SLIKE 10A-10C prikazuju ClustalW poravnanje pKal sekvenci od različitih vrsta. Položaji naznačeni sa „*“ su konzervirani položaji između, dok položaji naznačeni sa „:“ označavaju konzervativne supstitucije između vrsta. Položaji naznačeni sa „.“ imaju nekonzervativne supstitucije u nekim vrstama. Potezi aminokiselina označeni simbolom „@“ pokazali su se visoko solventno izloženi rastvaračima izračunavanjem pristupačnosti solventnosti na površini. Potezi aminokiselina označenih sa „+“ identifikovani su kao potencijalni epitopi antitela navedenih u Tabeli 12.
Aminokiseline označene sivim su pronađene izračunavanjem pristupačnosti solventnosti na površini koja se zakopava kada je kompleksirana sa inhibitorima aktivnog mesta Kunitz domena. Podvučeni položaji su aminokiseline koje formiraju katalitičku trijadu (His434, Asp483 i Ser578, numerisanje bazirano na ljudskoj sekvenci).
SLIKA 11A i 11B prikazuje Biacore analizu nadmetanja sa epi-kal2, kako je ovde opisano u Primeru 12, za (i) DX-2922 i (ii) M6-D09 antitela.
SLIKA 12 prikazuje Biacore analizu nadmetanja sa AEBSF, kako je ovde opisano u Primeru 12, za (i) DX-2911 i (ii) M6-D09 antitela.
SLIKA 13 prikazuje Biocore analizu koja pokazuje da se DX-2922 vezuje za kalikrein plazme koji je vezan za kininogen visoke molekularne težine (HMWK). SLIKA 14 prikazuje grafikon koji pokazuje inhibiciju edema zavisnu od doze od strane X101-A01 kod edema šape izazvanog karaginanom (CPE) kod pacova.
DETALJAN OPIS
Definicije
[0418] Zarad pogodnosti, pre daljeg opisa predmetnog pronalaska, ovde su definisani određeni izrazi koji se koriste u specifikaciji, primerima i priloženim patentnim zahtevima. Ostali termini su definisani kako se pojavljuju u specifikaciji.
[0419] Oblici jednine uključuju i oblike množine, osim ako kontekst jasno ne diktira drugačije.
[0420] Izraz „agonist“, kad se ovde koristi, ima za cilj da se odnosi na agens koji oponaša ili reguliše na gore (npr. potencira ili dopunjuje) bioaktivnost proteina. Agonist može biti protein divljeg tipa ili njegov derivat koji ima najmanje jednu bioaktivnost proteina divljeg tipa. Agonist može takođe biti jedinjenje koje povećava barem jednu bioaktivnost proteina. Agonist može takođe biti jedinjenje koje povećava interakciju polipeptida sa drugim molekulom, na primer, ciljanim peptidom ili nukleinskom kiselinom.
[0421] „Antagonist“, kad se ovde koristi, ima za cilj da se odnosi na agens koji reguliše na dole (na primer, potiskuje ili inhibira) najmanje jednu bioaktivnost proteina. Antagonist može biti jedinjenje koje inhibira ili smanjuje interakciju između proteina i nekog drugog molekula, npr. ciljanog peptida ili enzimskog supstrata. Antagonist takođe može biti jedinjenje koje smanjuje količinu prisutnog eksprimiranog proteina.
[0422] Izraz „antitelo“ se odnosi na protein koji uključuje najmanje jedan varijabilni domen (varijabilni region) imunoglobulina ili sekvencu varijabilnog domena (varijabilnog regiona) imunoglobulina. Na primer, antitelo može da sadrži varijabilni region teškog (H) lanca (skraćeno ovde kao VH ili HV) i varijabilni region lakog (L) lanca (skraćeno ovde kao VL ili LV). U drugom primeru, antitelo uključuje dva varijabilna regiona teškog (H) lanca i dva varijabilna regiona lakog (L) lanca. Izraz „antitelo“ obuhvata antigen-vezujući fragmente antitela (npr. jednolančana antitela, Fab i sFab fragmenti, F(ab')2, Fd fragmenti, Fv fragmenti, scFv i fragmenti antitela domena (dAb) (de Wildt i dr., Eur J Immunol.1996; 26(3):629-39)), kao i kompletna antitela. Antitelo može imati strukturne karakteristike IgA, IgG, IgE, IgD, IgM (kao i njihove podtipove). Antitela mogu biti iz bilo kog izvora, ali poželjna su primatska (ljudi i ne-ljudski primat) i primatizovana.
[0423] VH i VL regioni mogu se dalje podeliti na regione hipervariabilnosti, nazvane „regioni koji određuju komplementarnost“ („CDR“), razdvojeni regionima koji su konzervirani, označeni kao „okvirni regioni“ („FR“). Definisan je domet okvirnog regiona i CDR (pogledati, Kabat, E.A., i dr. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No.91-3242, and Chothia, C. i dr. (1987) J. Mol. Biol.196:901-917). Definicije Kabata se ovde koriste. Svaki VH i VL obično se sastoje od tri CDR i četiri FR-a, raspoređenih od amino-terminusa do karboksi-terminusa u sledećem redosledu: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4.
[0424] Kad se ovde koristi, „sekvenca varijabilnog domena imunoglobulina“ odnosi se na sekvencu aminokiselina koja može da formira strukturu varijabilnog domena imunoglobulina tako da jedan ili više CDR region budu pozicionirani u konformaciji pogodnoj za mesto za vezivanje antigena. Na primer, sekvenca može obuhvatiti sve ili deo aminokiselinske sekvence varijabilnog domena u prirodi. Na primer, sekvenca može izostaviti jednu, dve ili više N- ili C-terminalne aminokiseline, unutrašnje aminokiseline, može uključivati jednu ili više umetaka ili dodatnih terminalnih aminokiselina, ili može uključivati i druge izmene. U jednom otelotvorenju, polipeptid koji uključuje sekvence varijabilnog domena imunoglobulina može da se poveže sa drugim sekvencom varijabilnog domena imunoglobulina kako bi se formiralo mesto za vezivanje antigena, npr. struktura koja poželjno interakuje sa kalikreinom plazme.
[0425] VH ili VL lanac antitela može dalje da uključi sve ili deo konstantnog regiona teškog ili lakog lanca, kako bi se stvorio težak ili lak lanac imunoglobulina, respektivno. U jednom aspektu, antitelo je tetramer dva teška lanca imunoglobulina i dva laka lanca imunoglobulina, pri čemu su teški i laki lanci imunoglobulina međusobno povezani, na primer, sa disulfidnim vezama. U IgG, konstantni region teškog lanca sadrži tri domena imunoglobulina, CH1, CH2 i CH3. Konstantni region lakog lanca uključuje CL domen. Varijabilni region teških i lakih lanaca sadrži vezujući domen koji se interakuje sa antigenom. Konstantni regioni antitela tipično posreduju vezivanje antitela na tkiva ili faktore domaćina, uključujući različite ćelije imunog sistema (npr. efektorske ćelije) i prvu komponentu (Clq) klasičnog sistema komplemenata. Laki lanci imunoglobulina mogu biti kapa ili lambda tipa. U jednom otelotvorenju, antitelo je glikozilisano. Antitelo može biti funkcionalno za citotoksičnost zavisnu od antitela i/ili citotoksičnost posredovanu komplementom.
[0426] Jedan ili više region antitela može biti ljudski ili efikasno ljudski. Na primer, jedan ili više varijabilnih regiona može biti ljudski ili efikasno ljudski. Na primer, jedan ili više CDR mogu biti ljudski, npr. HC CDR1, HC CDR2, HC CDR3, LC CDR1, LC CDR2 i/ili LC CDR3. Svaki CDR lakog lanca (LC) i/ili teškog lanca (HC) može biti ljudski. HC CDR3 može biti ljudski. Jedan ili više okvirni region mogu biti ljudski, npr. FR1, FR2, FR3 i/ili FR4 HC i/ili LC. Na primer, Fc region može biti ljudski. U jednom aspektu, svi okvirni regioni su ljudski, na primer, izvedeni iz ljudskih somatskih ćelija, npr., hematopoetske ćelije koje proizvodi imunoglobuline ili ne-hematopoetske ćelije. U jednom otelotvorenju, ljudske sekvence su germlinijske sekvence, na primer, kodirane germlinijskom nukleinskom kiselinom. U jednom otelotvorenju, ostaci okvira (FR) izabranog Faba mogu se pretvoriti u tip aminokiselina odgovarajućeg ostatka u najsličnijem primatskom germlinijskom genu, posebno ljudskom germlinijskom genu. Jedan ili više konstantnih regiona mogu biti ljudski ili efikasno ljudski. Na primer, najmanje 70, 75, 80, 85, 90, 92, 95, 98 ili 100% varijabilnog domena imunoglobulina, konstantni region, konstantni domeni (CHI, CH2, CH3 i/ili CL1) ili celo antitelo mogu biti ljudski ili efikasno ljudski.
[0427] Celo ili deo antitela mogu biti kodirani sa genom imunoglobulina ili njegovim segmentom. Primeri ljudskih gena imunoglobulina uključuju kapa, lambda, alfa (IgAl i IgA2), gama (IgG1, IgG2, IgG3, IgG4), delta, epsilon i mu konstantni region gena, kao i mnoge gene varijabilnog regiona imunoglobulina. „Laki lanci“ imunoglobulina pune dužine (oko 25 KDa ili oko 214 aminokiselina) kodirani su varijabilnim regionom gena na NH2-terminusu (oko 110 aminokiselina) i kapa ili lambda konstantnim regionom gena na COOH-terminusu. „Teški lanci“ imunoglobulina pune dužine (oko 50 KDa ili oko 446 aminokiselina) su slično kodirani genom varijabilnog regiona (oko 116 aminokiselina) i jednim od gore pomenutih gena konstantnog regiona, npr. gama (kodiranje oko 330 aminokiselina). Dužina ljudskog HC značajno varira jer HC CDR3 varira od oko 3 aminokiselinska ostataka do preko 35 aminokiselinskih ostataka.
[0428] Izraz „antigen-vezujući fragment“ antitela pune dužine odnosi se na jedan ili više fragmenata antitela pune dužine koji zadržavaju sposobnost da se specifično vezuju za ciljanu grupu od interesa. Primeri vezujućih fragmenata obuhvaćenih pojmom „antigen-vezujući fragment“ antitela pune dužine i koji zadržavaju funkcionalnost uključuju (i) Fab fragment, monovalentni fragment koji se sastoji od domena VL, VH, CL i CH1; (ii) F(ab')2fragment, dvovalentni fragment koji uključuje dva Fab fragmenta povezana disulfidnim mostom na zglobnom regionu; (iii) Fd fragment koji se sastoji od domena VH i CH1; (iv) Fv fragment koji se sastoji od VL i VH domena jednog kraka antitela, (v) fragment dAb (Ward i dr., (1989) Nature 341:544-546), koji se sastoji od VH domena; i (vi) izolovan region za određivanje komplementarnosti (CDR). Osim toga, iako su dva domena Fv fragmenta, VL i VH, kodirana odvojenim genom, mogu se spojiti, koristeći rekombinantne postupke, pomoću sintetičkog veznika koji im omogućava da budu napravljeni kao pojedinačni proteinski lanac u kom su VL i VH region, kako bi se formirali monovalentni molekuli poznati kao jednolančani Fv (scFv). Pogledati, na primer, U.S. Pat. br.5,260,203, 4,946,778, i 4,881,175; Bird i dr. (1988) Science 242:423-426; i Huston i dr. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883.
[0429] Fragmenti antitela mogu se dobiti korišćenjem bilo koje odgovarajuće tehnike uključujući i konvencionalne tehnike poznate stručnjacima u oblasti. Izraz „monospecifično antitelo“ odnosi se na antitelo koje pokazuje jedinstvenu vezivnu specifičnost i afinitet za određenu metu, na primer, epitop. Ovaj izraz uključuje „monoklonsko antitelo“ ili „sastav monoklonskih antitela“, koji se ovde koristi odnosi na sastav antitela ili njihovih fragmenata mono molekularnog sastava, bez obzira na to kako je antitelo generisano.
[0430] Antitela su „germlinovana“ vraćanjem jednu ili više ne-germlinijskih aminokiselina u okvirom regionu do odgovarajućih germlinijskih aminokiselina antitela, sve dok su vezujuća svojstva značajno zadržana.
[0431] Konstanta inhibicije (Ki) daje meru potencije inhibitora; to je koncentracija inhibitora koja je potrebna da se smanji aktivnost enzima za pola i ne zavisi od koncentracije enzima ili supstrata. Očigledna Ki (Ki,app) se dobija na različitim koncentracijama supstrata merenjem inhibitornog efekta različitih koncentracija inhibitora (npr., inhibitornog vezujućeg proteina) na stepen reakcije (npr., aktivnost enzima); uklapanje promenu konstante brzine pseudoprvog reda kao funkcije koncentracije inhibitora u Morisonovu jednačinu (Jednačina 1) daje procenu očigledne vrednosti Ki. Ki se dobija iz y-intercepta ekstrakovanog iz linearne regresivne analize putanje Ki,app nasuprot koncentraciji supstrata.
[0432] Gde su: v = izmerena brzina; v0= brzina u odsustvu inhibitora; Ki,app= očigledna konstanta inhibicije; I = ukupna koncentracija inhibitora; i E = ukupna koncentracija enzima.
[0433] Kad se ovde koristi, „afinitet vezivanja“ odnosi se na konvencionalnu konstantu pridruživanja ili KA. KAje recipročna konstanti disociacije (KD). Vezujući protein može, na primer, imati afinitet vezivanja najmanje 10<5>, 10<6>, 10<7>, 10<8>, 10<9>, 10<10>i 10<11>M<-1>za određeni ciljani molekul, npr. kalikrein plazme. Vezivanje višeg afiniteta vezujućeg proteina na prvu metu u odnosu na drugu metu može biti indikovano višim KA(ili manjom numeričkom vrednosti KD) za vezivanje prve mete od KA(ili numerička vrednost KD) za vezivanje druge mete. U takvim slučajevima, vezujući protein ima specifičnost za prvu metu (npr., protein u prvoj konformaciji ili njegova imitacija) u odnosu na drugu metu (na primer, isti protein u drugoj konformaciji ili njegova imitacija ili drugi protein). Razlike u afinitetu vezivanja (npr. za specifičnost ili druga poređenja) mogu biti najmanje 1,5, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 37,5, 50, 70, 80, 91, 100, 500, 1000, 10,000 ili 10<5>puta.
[0434] Afinitet vezivanja može se odrediti različitim postupcima uključujući ravnotežnu dijalizu, vezivanje ravnoteže, gel filtraciju, ELISA, površinsku plazmonsku rezonancu ili spektroskopiju (npr. pomoću fluorescentne analize). Primeri uslova za procenu afiniteta vezivanja su u HBS-P puferu (10 mM HEPES pH7,4, 150 mM NaCI, 0,005% (v/v) Surfaktant P20). Ove tehnike mogu se koristiti za merenje koncentracije vezanih i slobodnih vezujućih proteina kao funkcije vezivanja proteina (ili ciljane) koncentracije. Koncentracija vezanog vezujućeg proteina ([Vezan]) odnosi se na koncentraciju slobodnog vezujućeg proteina ([Slobodan]) i na koncentraciju mesta vezivanja za vezujući protein na metu gde je (N) broj mesta vezivanja po meti molekula prema sledećoj jednačini:
[Vezan] = N • [Slobodan]/((1/KA) [Slobodan]).
[0435] Nije uvek potrebno precizno odrediti KA, iako, pošto je ponekad dovoljno da se dobije kvantitativno merenje afiniteta, na primer, određeno korišćenjem postupka kao što je ELISA ili FACS analiza, proporcionalno je KA, i stoga se može koristiti za upoređivanje, kao što je određivanje da li je veći afinitet, npr. dvostruko veći, kako bi se dobilo kvalitativno merenje afiniteta, ili da se dobije zaključak o afinitetu, npr. po aktivnosti u funkcionalnom testu, npr. in vitro ili in vivo test.
[0436] Izraz „vezujući protein“ odnosi se na protein koji može da interakuje sa ciljanim molekulom. Ovaj izraz je međusobno zamenjiv sa „ligandom“. „Vezujući protein kalikreina plazme“ se odnosi na protein koji može da interakuje sa (npr., vezuje) kalikreinom plazme, i naročito sadrži proteine koji poželjno ili specifično interakuju sa i/ili inhibiraju kalikrein plazme. Protein inhibira kalikrein plazme ako uzrokuje smanjenje aktivnosti kalikreina plazme u odnosu na aktivnost kalikreina plazme u odsustvu proteina i pod istim uslovima. U nekim otelotvorenjima vezujući protein kalikreina plazme je antitelo.
[0437] „Konzervativna supstitucija aminokiselina“ je ona u kojoj se aminokiselinski ostatak zamenjuje aminokiselinskim ostacima koji imaju sličan bočni lanac. Porodice aminokiselinskih ostataka koji imaju slične bočne lance su definisane u struci. Ove porodice uključuju aminokiseline sa baznim bočnim lancima (npr. lizin, arginin, histidin), kiselim bočnim lancima (npr. asparaginska kiselina, glutaminska kiselina), nenaelekstrisanim polarnim bočnim lancima (npr. glicin, asparagin, glutamin, serin, treonin, tirozin (npr. treonin, valin, izoleucin) i aromatičnim bočnim lancima (npr. tirozin, terezin, tinein, fenilalanin, triptofan, histidin).
[0438] Moguće je da jedan ili više okvir i/ili CDR aminokiselinski ostatak vezujućeg proteina uključuje jednu ili više mutacija (npr. supstitucije (npr. konzervativne supstitucije ili zamene ne-esencijalnih aminokiselina), umetanja ili brisanja) u odnosu na ovde opisan vezujući protein. Vezujući protein kalikreina plazme može imati mutacije (npr. supstitucije (npr. konzervativne supstitucije ili supstitucije ne-esencijalnih aminokiselina), umetanja ili brisanja) (npr. najmanje jedan, dva, tri ili četiri i/ili manje od 15, 12, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3 ili 2 mutacije) u odnosu na ovde opisan vezujući protein, npr. mutacije koje nemaju značajan uticaj na funkciju proteina. Mutacije mogu biti prisutne u okvirnim regionima, CDR i/ili konstantnim regionima. Ponekad, mutacije su prisutne u okvirnim regionima. Ponekad, mutacije su prisutne u CDR. U nekim otelotvorenjima mutacije su prisutne u konstantnom regionu. Da li će se tolerisati određena supstitucija, tj. neće negativno uticati na biološka svojstva, kao što je aktivnost vezivanja, može se predvideti, na primer, procenom da li je mutacija konzervativna ili postupkom Bowie, i dr. (1990) Science 247:1306-1310.
[0439] Motiv sekvence za biopolimere mogu uključivati položaje koje mogu da varirajuće aminokiseline. Na primer, simbol „X“ u takvom kontekstu uglavnom se odnosi na bilo koju aminokiselinu (npr. bilo koja od dvadesetak prirodnih aminokiselina), osim ako nije drugačije naznačeno, npr., Dd se odnosi na bilo koju ne-cisteinsku aminokiselinu. Druge dozvoljene aminokiseline mogu takođe biti naznačene na primer, koristeći zagrade i kose linije. Na primer, „(A/V/F/N/K)“ znači da su alanin, triptofan, fenilalanin, asparagin i glutamin dozvoljeni na tom određenom položaju.
[0440] „efikasno ljudski“ varijabilni region imunoglobulina je varijabilni region imunoglobulina koji uključuje dovoljan broj položaja aminokiselina u ljudskim okvirima tako da varijabilni region imunoglobulina ne izaziva imunogeni odgovor kod normalnog čoveka. „Ljudsko“ antitelo je antitelo koje uključuje dovoljan broj položaja ljudske aminokiseline, tako da antitelo ne izaziva imunogeni odgovor kod normalnog čoveka.
[0441] „Epitop“ se odnosi na mesto na ciljanom jedinjenju koje je vezano za vezujući protein (npr., antitelo kao što je Fab ili antitelo pune dužine). U slučaju kada je ciljano jedinjenje protein, mesto se može u potpunosti sastojati od aminokiselinskih komponenti, u potpunosti sastojati od hemijskih modifikacija aminokiselina proteina (npr., glikozil delova) ili sastojati od njihovih kombinacija. Preklapajući epitopi obuhvataju bar jedan zajednički aminokiselinski ostatak, glikozilnu grupu, fosfatnu grupu, sulfatnu grupu ili drugu molekularnu osobinu.
[0442] Prvi vezujući protein (npr. antitelo) se „vezuje za isti epitop“ kao drugi vezujući protein (npr. antitelo) ako se prvi vezujući protein vezuje za isto mesto na ciljanom jedinjenju koje drugi vezujući protein vezuje ili se vezuje za mesto koje se preklapa (npr.50%, 60%, 70%, 80%, 90% ili 100% preklapanja, npr. u smislu aminokiselinske sekvence ili druge molekularne osobine (npr. glikozil grupe, fosfatne grupe ili sulfata grupa)) sa mestom na koje se vezuje drugi vezujući protein.
[0443] Prvi vezujući protein (npr. antitelo) se „nadmeće za vezivanje“ sa drugim vezujućim proteinom (npr. antitelo) ako vezivanje prvog vezujućeg proteina na njegov epitop smanjuje (npr. za 10%, 20%, 30%, 40 %, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100% ili više) količinu drugog vezujućeg proteina koji se vezuje za njegov epitop. Nadmetanje može biti direktno (npr. prvi vezujući protein se vezuje za epitop koji je isti ili se preklapa sa epitopom koji je vezan za drugi vezujući protein) ili indirektno (npr. vezivanje prvog vezujućeg proteina na njegov epitop izaziva steričnu promenu u ciljanom jedinjenju koje smanjuje sposobnost drugog vezujućeg proteina da se veže na svoj epitop).
[0444] Izračunavanje „homologije“ ili „identičnost sekvence“ između dve sekvence (izrazi se ovde koriste međusobno zamenjivo) izvršavaju se na sledeći način. Sekvence su poravnate u cilju optimalnog poređenja (npr., praznine se mogu uvesti u jednu ili obe prve i druge aminokiselinske sekvence ili sekvence nukleinske kiseline za optimalno poravnanje, i nehomologne sekvence mogu se zanemariti u svrhu poređenja). Optimalno prilagođavanje se određuje kao najbolji rezultat korišćenjem GAP programa u GCG softverskom paketu sa matricom za ocenjivanje Blossum 62 penalom razmaka 12, penalom proširenja razmaka 4, i penalom pomaka razmaka od 5. Zatim se porede aminokiselinski ostaci ili nukleotidi na odgovarajućim položajima aminokiselina ili položaja nukleotida. Kada je položaj u prvoj sekvenci zauzet istim aminokiselinskim ostacima ili nukleotidom kao odgovarajući položaj u drugoj sekvenci, onda su molekuli identični u tom položaju (kad se ovde koristi aminokiselina ili nukleinska kiselina „identičnost“ je ekvivalentan „homologiji“ aminokiseline ili nukleinske kiseline). Procenat identičnosti između dve sekvence je funkcija broja identičnih položaja koje dele sekvence.
[0445] U poželjnom otelotvorenju, dužina referentne sekvence poravnate u svrhu upoređivanja je najmanje 30%, poželjno najmanje 40%, poželjnije najmanje 50%, čak i poželjnije najmanje 60%, i još poželjnije najmanje 70%, 80%, 90%, 92%, 95%, 97%, 98% ili 100% dužine referentne sekvence. Na primer, referentna sekvenca može biti dužina sekvence varijabilnog domena imunoglobulina.
[0446] „Humanizovani“ varijabilni region imunoglobulina je varijabilni region imunoglobulina koji je modifikovan tako da uključuje dovoljan broj položaja aminokiselina ljudskog okvira, tako da varijabilni region imunoglobulina ne izaziva imunogeni odgovor kod normalnog čoveka. Opisi „humanizovanih“ imunoglobulina uključuju, na primer, U.S.
6,407,213 i U.S.5,693,762.
[0447] Kad se ovde koristi, izraz „hibridizuje pod uslovima niske strogoće, srednje strogoće, visoke strogoće ili veoma visoke strogoće“ opisuje uslove za hibridizaciju i pranje. Smernice za obavljanje reakcija hibridizacije mogu se naći u Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, N.Y. (1989), 6.3.1-6.3.6. Vodeni i nevodeni postupci opisani su u toj referenci i mogu se koristiti. Specifični uslovi hibridizacije navedeni u ovom tekstu su sledeći: (1) uslovi hibridizacije niske strogoće u 6X natrijum hloridu/natrijum citratu (SSC) na oko 45°C, nakon čega slede dva pranja u 0,2X SSC, 0,1% SDS najmanje na 50°C (temperatura pranja može se povećati na 55°C za uslove niske strogoće); (2) uslovi hibridizacije srednje strogoće u 6X SSC pri oko 45°C, praćeno jednim ili više pranja u 0,2X SSC, 0,1% SDS na 60°C; (3) uslovi hibridizacije visoke strogoće u 6X SSC na oko 45°C, praćeno jednim ili više pranja u 0,2X SSC, 0,1% SDS na 65°C; i (4) uslove vrlo visoke strogoće hibridizacije su 0,5M natrijum fosfat, 7% SDS na 65°C, nakon čega sledi jedno ili više pranja na 0,2X SSC, 1% SDS na 65°C. Uslovi veoma visoke strogoće (4) su poželjni uslovi i oni koje treba koristiti, osim ako nije drugačije naznačeno. Obelodanjenje obuhvata nukleinske kiseline koje hibridizuju sa niskom, srednjom, visokom ili veoma visokom strogoćom do nukleinske kiseline opisane ovde ili njegovog komplementa, npr. nukleinske kiseline koje kodiraju ovde opisan vezujući protein. Nukleinske kiseline mogu biti iste dužine ili unutar 30, 20 ili 10% dužine referentne nukleinske kiseline. Nukleinska kiselina može odgovarati regionu koji kodira sekvencu varijabilnog domena imunoglobulina koja je ovde opisana.
[0448] „Izolovani sastav“ odnosi se na sastav koji se uklanja iz najmanje 90% od najmanje jedne komponente prirodnog uzorka iz kog se može dobiti izolovani sastav. Sastavi proizvedeni veštački ili prirodno mogu biti „najmanje sastavi“ određenog stepena čistoće ako vrsta ili populacija vrsta od interesa bude najmanje 5, 10, 25, 50, 75, 80, 90, 92, 95, 98, ili 99% čisto na osnovu težine.
[0449] „Izolovani“ protein se odnosi na protein koji se uklanja sa najmanje 90% od najmanje jedne komponente prirodnog uzorka iz kog se može dobiti izolovani protein. Proteini mogu biti „od najmanje“ određenog stepena čistoće ako je vrsta ili populacija vrsta od interesa najmanje 5, 10, 25, 50, 75, 80, 90, 92, 95, 98 ili 99% čisto na osnovu težine.
[0450] Izraz „modulator“ odnosi se na polipeptid, nukleinsku kiselinu, makromolekule, kompleks, molekul, mali molekul, jedinjenje, vrstu ili slično (prirodne ili ne-prirodne) ili ekstrakt napravljen od bioloških materijala kao što su bakterijske, biljne, gljivične ili životinjske ćelije ili tkiva, koji mogu biti sposobni da izazovu modulaciju. Modulatori se mogu proceniti za potencijalne aktivnosti kao inhibitori ili aktivatori (direktno ili indirektno) funkcionalnog svojstva, biološke aktivnosti ili procesa ili njihove kombinacije (npr. agonist, parcijalni antagonist, parcijalni agonist, inverzni agonist, antagonist, antimikrobni agensi, inhibitori mikrobiološke infekcije ili proliferacije i slično) inkluzijom u testovima. U takvim testovima, mnogi modulatori mogu biti istovremeno prikazani. Aktivnost modulatora može biti poznata, nepoznata ili delimično poznata.
[0451] „Ne-esencijalni“ amino-kiselinski ostatak je ostatak koji se može izmeniti od divlje vrste sekvence vezujućeg agensa, npr. antitela, bez ukidanja ili poželjnije, bez bitne promene biološke aktivnosti, dok menjanje „esencijalnog“ aminokiselinskog ostatka rezultuje znatnim gubitkom aktivnosti.
[0452] „Pacijent“, „bolesnik“ ili „domaćin“ (ovi termini se koriste naizmenično) koji se tretiraju predmetnim postupkom može da označi bilo čoveka ili ne-ljudsku životinju.
[0453] Izrazi „prekalikrein“ i „prekalikrein plazme“ su ovde međusobno zamenjivi i odnose se na zimogeni oblik aktivnog kalikreina plazme, koji je takođe poznat kao prekalikrein.
[0454] Izraz „prevenciju“ ili „sprečiti“ bolesti kod pacijenta podrazumeva podvrgavanje pacijenta farmaceutskom tretmanu, npr. davanje leka, tako da se spreči najmanje jedan simptom bolesti, odnosno, primenjuje se pre kliničke manifestaciju neželjenog stanja (npr. bolesti ili drugih neželjenih stanja životinje domaćina), tako da štiti domaćina od razvoja neželjenog stanja. „prevenciju“ bolesti može se takođe nazvati „profilaksa“ ili „profilaktički tretman“.
[0455] Kad se ovde koristi, izraz „u suštini identičnom“ (ili „u suštini homologno“) se koristi da označi prvu sekvencu aminokiseline ili nukleinske kiseline koja sadrži dovoljan broj identičnih ili ekvivalentnih (npr. sa sličnim bočnim lancem, npr., konzervirane aminokiselinske supstitucije) aminokiselinskih ostataka ili nukleotida u drugu sekvencu aminokiseline ili nukleinske kiseline, tako da prva i druga sekvence aminokiseline ili nukleinske kiseline imaju (ili kodiraju proteine koje imaju) slične aktivnosti, npr. aktivnosti vezivanja, preferencije vezivanja ili biološke aktivnosti. U slučaju antitela, drugo antitelo ima istu specifičnost i ima najmanje 50%, najmanje 25% ili najmanje 10% afiniteta u odnosu na isti antigen.
[0456] Slične ili homologne sekvence (npr., najmanje oko 85% identičnosti sekvence) sekvencama koje su ovde obelodanjene su takođe deo ove prijave. U nekim otelotvorenjima identičnost sekvence može biti oko 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ili više. U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme može imati oko 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ili veću identičnost sekvence sa ovde opisanim vezujućim proteinom. U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme može imati oko 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ili veći identičnost sekvence u HC i/ili LC okvirnim regionima (npr. HC i/ili LC FR 1, 2, 3 i/ili 4) sa ovde opisanim vezujućim proteinom. U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme može imati oko 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ili veću identičnost sekvence u HC i/ili LC CDR (npr. HC i/ili LC CDR1, 2, i/ili 3) sa ovde opisanim vezujućim proteinom. U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme može imati oko 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ili veću identičnost sekvence u konstantnom regionu (npr., CH1, CH2, CH3, i/ili CL1) sa ovde opisanim vezujućim proteinom.
[0457] Osim toga, značajna identičnost postoji kada se segmenti nukleinske kiseline hibridizuju pod uslovima selektivne hibridizacije (npr., visoko strogi uslovi hibridizacije), do komplementa linije. Nukleinske kiseline mogu biti prisutne u celoj ćeliji, u ćelijskom lizatu ili u delimično prečišćenom, ili suštinski čistom obliku.
[0458] Statistička značajnost može se odrediti bilo kojim poznatim postupkom. Primeri statističkih testova uključuju: Studentov T-test, Man Vitni U neparametrijski test i Vilkoksonov neparametrijski statistički test. Neke statistički značajne veze imaju vrednost P manju od 0,05 ili 0,02. Posebni vezujući proteini mogu pokazati razlike, na primer, u specifičnosti ili vezivanju koje su statistički značajne (npr., P vrednost <0,05 ili 0,02).
Pojmovi „indukovati“, „inhibirati“, „potaknuti“, „podići“, „povećati“, „smanjiti“ ili slično, npr. koji označavaju primetne kvalitativne ili kvantitativne razlike između dva stanja, nor. statistički značajna razlika između dva stanja.
[0459] „Terapeutski efikasna doza“ poželjno modulira merljivi parametar, npr. aktivnost kalikreina plazme u statistički značajnom stepenu ili najmanje oko 20%, poželjnije za najmanje oko 40%, i još poželjnije za najmanje oko 60% i još poželjnije za najmanje oko 80% u odnosu na netretirane pacijente. Sposobnost jedinjenja da modulira merljivi parametar, na primer, parametar povezan sa bolesti, može se proceniti u sistemu životinjskog modela koji predviđa efikasnost kod poremećaja i stanja čoveka, na primer, reumatoidnog artritisa ili oralnog mukozitisa. Alternativno, ova svojstva sastava mogu se proceniti ispitivanjem sposobnosti jedinjenja da modulira parametar in vitro.
[0460] „Lečenje“ bolesti (ili stanja) kod pacijenta ili „lečenje“ pacijenta koji ima bolest podrazumeva podvrgavanje pacijenta farmaceutskom tretmanu, npr. davanje leka, tako da se bar jedan simptom bolesti izleči, ublaži ili smanji.
[0461] Izraz „prevenciju“ bolesti kod pacijenta podrazumeva podvrgavanje pacijenta farmaceutskom tretmanu, na primer, davanje leka, tako da se spreči najmanje jedan simptom bolesti, odnosno da se primenjuje pre kliničkog ispoljavanja neželjenog stanja (npr. bolest ili drugo neželjeno stanje životinje domaćina), tako da štiti domaćina od razvoja neželjenog stanja. „prevenciju“ bolesti može se takođe nazvati „profilaksa“ ili „profilaktički tretman“.
[0462] „Profilaktički efikasna količina“ odnosi se na količinu koja je efikasna, u dozama i vremenskih periodima potrebnim za postizanje željenog profilaktičkog rezultata. Tipično, pošto se profilaktička doza koristi kod osoba pre ili u ranijoj fazi bolesti, profilaktički efikasna količina će biti manja od terapeutski efikasne količine.
[0463] Kad se ovde koristi izraz „DX-2922“ se koristi naizmenično sa izrazom „X101-A01“. Ostale varijante ovog antitela su opisane u nastavku.
Vezujući proteini kalikreina plazme
[0464] Vezujući proteini kalikreina plazme mogu biti puni dužine (npr. IgG (npr. IgG1, IgG2, IgG3, IgG4), IgM, IgA (npr. IgAl, IgA2), IgD i IgE) ili mogu uključiti samo antigenvezujući fragment (npr. Fab, F(ab')2 ili scFv fragment. Vezujući protein može uključivati dva teška lanca imunoglobulina i dva laka lanca imunoglobulina ili može biti antitelo sa jednim lancem. Vezujući proteini kalikreina plazme mogu biti rekombinantni proteini kao što su kao humanizovani, CDR graftovani, himerni, deimunizovani ili in vitro generisana antitela i mogu opciono da uključuju konstantne regione izvedene iz sekvenci ljudskog germlinijskog imunoglobulina. U jednom otelotvorenju, vezujući protein kalikreina plazme je monoklonsko antitelo.
[0465] U jednom aspektu, obelodanjenje sadrži protein (npr. izolovani protein) koji se vezuje za kalikrein plazme (npr. ljudski kalikrein plazme i/ili mišiji kalikrein) i uključuje najmanje jedan varijabilni region imunoglobulina. Na primer, protein sadrži sekvencu varijabilnog domena teškog lanca (HC) imunoglobulina i/ili sekvencu varijabilnog domena lakog lanca (LC) imunoglobulina. U jednom aspektu, protein se vezuje i inhibira kalikrein plazme, npr. ljudski kalikrein plazme i/ili mišji kalikrein.
[0466] Protein može da sadrži jednu ili više od sledećih karakteristika: (a) ljudski CDR ili ljudski okvirni region; (b) sekvence varijabilnog domena HC imunoglobulina sadrže jedan ili više (npr.1, 2 ili 3) CDR koji je najmanje 85, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ili 100% identičan CDR ovde opisanog varijabilnog domena; (c) sekvence varijabilnog domena LC imunoglobulina sadrže jedan ili više (npr.1, 2 ili 3) CDR koji je najmanje 85, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ili 100% identičan CDR ovde opisanog LC varijabilnog domena; (d) sekvenca varijabilnog domena LC imunoglobulina je najmanje 85, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ili 100% identična ovde opisanom LC varijabilnom domenu npr. u celosti ili u okvirnim regionima ili CDR); (e) sekvenca HC varijabilnog domena imunoglobulina je najmanje 85, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ili 100% identična sa opisanim HC varijabilnim domenom (npr. u celosti ili u okvirnim regionima ili CDR); (f) protein vezuje epitop koji je vezan ovde opisanim proteinom, ili se nadmeće za vezivanje sa ovde opisanim proteinom; (g) primatski CDR ili primatski okvirni region; (h) sekvenca varijabilnog domena HC imunoglobulina sadrži CDR1 koji se razlikuje za najmanje jednu aminokiselinu, ali ne više od 2 ili 3 aminokiseline od CDR1 ovde opisanog HC varijabilnog domena; (i) sekvenca HC varijabilnog domena imunoglobulina sadrži CDR2 koji se razlikuje za najmanje jednu aminokiselinu, ali ne više od 2, 3, 4, 5, 6, 7 ili 8 aminokiselina od CDR2 ovde opisanog HC varijabilnog domena; (j) sekvenca varijabilnog domena HC imunoglobulina sadrži CDR3 koji se razlikuje za najmanje jednu aminokiselinu, ali ne više od 2, 3, 4, 5 ili 6 aminokiselina od CDR3 ovde opisanog HC varijabilnog domena; (k) sekvenca varijabilnog domena LC imunoglobulina sadrži CDR1 koji se razlikuje za najmanje jednu aminokiselinu, ali ne više od 2, 3, 4 ili 5
aminokiselina od CDR1 ovde opisanog LC varijabilnog domena; (1) sekvenca LC varijabilnog domena imunoglobulina sadrži CDR2 koji se razlikuje za najmanje jednu aminokiselinu, ali ne više od 2, 3 ili 4 aminokiseline od CDR2 ovde opisanog LC varijabilnog domena; (m) sekvenca varijabilnog domena LC imunoglobulina sadrži CDR3 koji se razlikuje za najmanje jednu aminokiselinu, ali ne više od 2, 3, 4 ili 5 aminokiselina od CDR3 ovde opisanog LC varijabilnog domena; (n) sekvenca varijabilnog domena LC imunoglobulina se razlikuje za najmanje jednu aminokiselinu, ali ne više od 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 aminokiselina od ovde opisanog LC varijabilnog domena (npr., u celosti ili u okvirnim regionima ili CDR); i (o) sekvenca HC varijabilnog domena imunoglobulina se razlikuje za najmanje jednu aminokiselinu, ali ne više od 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 aminokiselina od ovde opisanog HC varijabilnog domena (npr. u celosti ili u okvirima ili CDR).
[0467] Vezujući protein kalikreina plazme može biti izolovani protein (npr., najmanje 70, 80, 90, 95 ili 99% bez drugih proteina). U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme ili njegov sastav je izolovan od fragmenata cepanja antitela (npr. cepani DX-2922) koji su neaktivni ili delimično aktivni (npr. vezuju kalikrein plazme sa Ki, app od 5000 nM ili više) u poređenju sa vezujućim proteinom kalikreina plazme. Na primer, vezujući protein kalikreina plazme je najmanje 70% bez takvih fragmenta cepanja antitela; u drugim otelotvorenjima vezujući protein je najmanje 80%, najmanje 90%, najmanje 95%, najmanje 99% ili čak 100% bez fragmenata cepanja antitela koji su neaktivni ili delimično aktivni.
[0468] Vezujući protein kalikreina plazme može dodatno inhibirati kalikrein plazme, npr., kalikrein plazme ljudske plazme.
[0469] U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme ne vezuje prekalikrein (npr., ljudski prekalikrein i/ili mišiji prekalikrein), ali se vezuje za aktivni oblik kalikreina plazme (npr., ljudski kalikrein plazme i/ili mišiji kalikrein).
[0470] U određenim otelotvorenjima, protein se vezuje na ili blizu aktivnog mesta katalitičkog domena kalikreina plazme, ili njegov fragment, ili vezuje epitop koji se preklapa sa aktivnim mestom kalikreina plazme.
[0471] U nekim aspektima, protein vezuje isti epitop ili se nadmeće za vezivanje sa ovde opisanim proteinom.
[0472] Ponekad, protein nadmeće se sa ili vezuje isti epitop kao M162-A04, M160-G12, M142-H08, X63-G06, X101-A01, X81-B01, X67-D03, X67- G04, X115-B07, X115-D05, X115-E09, X115-H06, X115-A03, X115-D01, X115-F02, X115-G04, M29-D09, M145-D11, M06-D09 i M35-G04.
[0473] U nekim otelotvorenjima, protein se vezuje za (npr., položaji na kalikreinu plazme koji odgovaraju) CLIPS peptid C1, C2, C3, C4, C5, C6, ili C7, ili za više od jednog od ovih peptida, npr., protein se vezuje za C5 i C6. CLIPS peptidi C1-C7 su peptidi u kalikreinu plazme identifikovani sa CLIPS mapiranjem epitopa (pogledati SLIKE 9 i 10A- 10C). C1 odgovara položajima 55-67 katalitičkog domena, C2 položajima 81-94, C3 položajima 101-108, C4 položajima 137-151, C5 položajima 162-178, C6 položajima 186-197, i C7 položajima 214-217 kalikreina plazme.
[0474] U nekim otelotvorenjima, protein se vezuje za epitop prikazan na SLICI 9.
[0475] U nekim otelotvorenjima, protein se vezuje za jednu ili više aminokiselinu koja formira katalitičku trijadu kalikreina plazme: His434, Asp483, i/ili Ser578 (numeracija na osnovu ljudske sekvence).
[0476] U nekim otelotvorenjima, protein vezuje jednu ili više aminokiselinu od: Arg551, Gln553, Tyr555, Thr558, i/ili Arg560 (numeracija na osnovu ljudske sekvence). U nekim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme vezuje jednu ili više aminokiselinu od: S478, N481, S525, i K526 (numeracija na osnovu ljudske kalikrein sekvence).
[0477] U nekim otelotvorenjima, protein se vezuje za jednu ili više aminokiselinu od Ser479, Tyr563, i/ili Asp585 (numeracija na osnovu ljudske sekvence).
[0478] Aktivni raspon kalikreina plazme sadrži tri aminokiseline koji formiraju katalitičku trijadu (His434, Asp483 i Ser578) i rezultuju enzimskom hidrolizom vezanog supstrata (ostaci katalitičke trijade su podvučeni na SLICI 10). Peptidi odabrani za analizu mapiranja CLIPS epitopa su određeni da su površinski dostupni i da li se oblikuju ili okružuju u blizini aktivnog mesta. Peptid C1 sadrži aktivno mesto histidin 434. Peptid C3 sadrži aktivno mesto aspartat 483. Peptid C6 sadrži aktivno mesto serin 578. Moguće je da antitelo veže više površinski izloženih aminokiselina koje su diskontinuirane u aminokiselinskoj sekvenci. Na primer, pomoću CLIP analize, za X81-B01 se čini da vezuje C2, C3, C5 i C6 peptide.
[0479] U nekim otelotvorenjima, protein se vezuje za epitop koji uključuje jednu ili više aminokiselinu od CLIPS peptida C1, peptida C2, peptida C3, peptida C4, peptida C5, peptida C6, ili peptida C7.
[0480] U nekim otelotvorenjima, protein se vezuje za epitop koji uključuje aminokiseline od barem 2 različita CLIPS peptida, npr., od barem dva od peptida C1, peptida C2, peptida C3, peptida C4, peptida C5, peptida C6, ili peptida C7.
[0481] Protein može da se veže za kalikrein plazme, npr., ljudski kalikrein plazme, sa afinitetom vezivanja od barem 10<5>, 10<6>, 10<7>, 10<8>, 10<9>, 10<10>i 10<11>M<-1>. U jednom otelotvorenju, protein se vezuje za ljudski kalikrein plazme sa Koff sporijim od 1 x 10<-3>, 5 × 10<-4>s<-1>, ili 1 × 10<-4>s<-1>. U jednom slučaju, protein se vezuje za ljudski kalikrein plazme sa Konbržim od 1 × 10<2>, 1 × 10<3>, ili 5 × 10<3>M<-1>s<-1>. U jednom slučaju, protein se vezuje za kalikrein plazme, ali se ne vezuje za tkivo kalikreina i/ili prekalikreina plazme (npr., protein se vezuje za tkivo kalikreina i/ili prekalikreina plazme manje efikasno (npr., 5-, 10-, 50-, 100-, ili 1000-puta manje ili ne uopšte, npr., u poređenju sa negativnom kontrolom) nego što se vezuje za kalikrein plazme.
[0482] U jednom otelotvorenjima, protein inhibira ljudski aktivnost kalikreina plazme, npr., sa Ki manjim od 10<-5>, 10-<6>, 10<-7>, 10<-8>, 10<-9>, i 10<-10>M. Protein može da ima, na primer, IC50 manji od 100 nM, 10 nM, 1, 0,5, ili 0,2 nM. Na primer, protein može da modulira aktivnost kalikreina plazme, kao i proizvodnju Faktora XIIa (npr., Faktora XII) i/ili bradikinina (npr., od kininogena visoke molekularne težine (HMWK)). Protein može da inhibira aktivnost kalikreina plazme, i/ili proizvodnju Faktora XIIa (npr., Faktora XII) i/ili bradikinina (npr., od kininogena visoke molekularne težine (HMWK)). Afinitet proteina za ljudski kalikrein plazme može biti okarakterisan sa KDmanjim od 100 nm, manjim od 10 nM, manjim od 5 nM, manjim od 1 nM, manjim od 0,5 nM. U jednom otelotvorenju, protein inhibira kalikrein plazme, ali se ne inhibira kalikrein tkiva (npr., protein inhibira kalikrein tkiva manje efikasno (npr., 5-, 10-, 50-, 100-, ili 1000-puta manje ili ne uopšte, npr., u poređenju sa negativnom kontrolom) nego što inhibira kalikrein plazme.
[0483] U nekim otelotvorenjima, protein ima očiglednu konstantu inhibicije (Ki,app) manju od 1000, 500, 100, 5, 1, 0,5 ili 0,2 nM.
[0484] Vezujući protein kalikreina plazme mogu biti antitela. Vezujuća antitela kalikrein plazme mogu da imaju svoje sekvence varijabilnog domena HC i LC uključene u jedan polipeptid (npr., scFv), ili na različitim polipeptidima (npr., IgG ili Fab).
[0485] U poželjnom otelotvorenju, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima lake i teške lance antitela izabranih iz grupe koja se sastoji od M162-A04, M160-G12, M142-H08 X63-G06, X101-A01, X81-B01, X67-D03, X67- G04, DX-2922, X115-B07, X115-D05, X115-E09, X115-H06, X115-A03, X115-D01, X115-F02, X115-G04, M29-D09 i M145-D11.
[0486] U poželjnom otelotvorenju, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima teški lanac antitela izabran iz grupe koja se sastoji od: M162-A04, M160-G12, M142-H08, X63G06, X101-A01, X81-B01, X67-D03, X67-G04, X115- B07, X115-D05, X115-E09, X115-H06, X115-A03, X115-D01, X115-F02, X115-G04, M29-D09 i M145-D11.
[0487] U poželjnom otelotvorenju, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima laki lanac antitela izabran iz grupe koja se sastoji od: M162-A04, M160-G12, M142-H08 X63-G06, X101-A01, X81-B01, X67-D03, X67-G04, X115-B07, X115-D05, X115-E09, X115-H06, X115-A03, X115-D01, X115-F02, X115-G04, M29-D09 i M145-D11.
[0488] Protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) lake i teške varijabilne regione antitela izabrane iz grupe koja se sastoji od M162-A04, M160-G12, M142-H08, X63-G06, X101-A01, X81-B01, X67- D03, X67-G04, X115-B07, X115-D05, X115-E09, X115-H06, X115-A03, X115-D01, X115-F02, X115-G04, M29-D09 i M145-D11.
[0489] Protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima varijabilni region teškog lanca antitela izabran iz grupe koja se sastoji od: M162-A04, M160-G12, M142-H08, X63-G06, X101-A01, X81-B01, X67- D03, X67-G04, X115-B07, X115-D05, X115-E09, X115-H06, X115-A03, X115-D01, X115-F02, X115-G04, M29-D09 i M145-D11.
[0490] Protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima varijabilni region lakog lanca antitela izabran iz grupe koja se sastoji od: M162-A04, M160-G12, M142-H08, X63-G06, X101-A01, X81-B01, X67-D03, X67-G04, X115-B07, X115-D05, X115-E09, X115-H06, X115-A03, X115-D01, X115-F02, X115-G04, M29-D09 i M145-D11.
[0491] Ponekad, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima jedan ili više (npr., 1, 2, ili 3) CDR teškog lanca izabran od odgovarajućeg CDR iz grupe teških lanaca koja se sastoji od M162-A04, M160-G12, M142-H08, X63-G06, X101-A01, X81-B01, X67-D03, X67-G04, X115-B07, X115-D05, X115-E09, X115-H06, X115-A03, X115-D01, X115-F02, X115-G04, M29-D09, M145-D11, M06- D09 i M35-G04.
[0492] Ponekad, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima jedan ili više (npr., 1, 2, ili 3) CDR lakog lanca izabran od odgovarajućeg CDR iz grupe lakih lanaca koja se sastoji od M162-A04, M160-G12, M142-H08, X63-G06, X101-A01, X81-B01, X67-D03, X67-G04, X115-B07, X115-D05, X115-E09, X115-H06, X115-A03, X115-D01, X115-F02, X115-G04, M29-D09, M145-D11, M06- D09 i M35-G04.
[0493] Ponekad, protein je antitelo (npr., ljudsko antitelo) koje ima jedan ili više (npr., 1, 2, ili 3) CDR teškog lanca i jedan ili više (npr., 1, 2, ili 3) CDR lakog lanca izabran od odgovarajućeg CDR iz grupe lakih lanaca koja se sastoji od M162-A04, M160-G12, M142-H08, X63-G06, X101-A01, X81-B01, X67- D03, X67-G04, X115-B07, X115-D05, X115-E09, X115-H06, X115-A03, X115-D01, X115-F02, X115-G04, M29-D09, M145-D11, M06-D09 i M35-G04.
[0494] U jednom slu otelotvorenju čaju, sekvence varijabilnog domena HC i LC su komponente istog polipeptidnog lanca. U drugom, sekvence varijabilnog domena HC i LC su komponente različitih polipeptidnih lanaca. Na primer, protein je IgG, npr., IgG1, IgG2, IgG3, ili IgG4. Protein može biti rastvorljivi Fab. U drugim implementacijama protein uključuje Fab2', scFv, minitelo, scFv: :Fc fuziju, Fab::HSA fuziju, HSA::Fab fuziju, Fab::HSA::Fab fuziju, ili drugi molekul koji sadrži mesto za kombinovanje antigena jednog od vezujućih proteina odavde. VH i VL regioni ovih Fab-a mogu se dati kao IgG, Fab, Fab2, Fab2', scFv, PEGilovan Fab, PEGilovan scFv, PEGilovan Fab2, VH::CH1::HSA+LC, HSA::VH::CH1+LC, LC::HSA VH::CH1, HSA::LC VH::CH1, ili druga odgovarajuća konstrukcija.
[0495] U jednom otelotvorenju, protein je ljudsko ili humanizovano antitelo ili je neimunogen kod ljudi. Na primer, protein uključuje jedan ili više okvirni region ljudskog antitela, npr., svi ljudski okvirni regioni, ili okvirne regione barem 85, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% identični ljudskim okvirnim regionima. U jednom otelotvorenju, protein uključuje ljudski Fc domen, ili Fc domen koji je barem 95, 96, 97, 98, ili 99% identičan ljudskom Fc domenu.
[0496] U jednom otelotvorenju, protein je primatsko ili primatizovano antitelo ili je neimunogen kod ljudi. Na primer, protein uključuje jedan ili više okvirni region primatskog antitela, npr., svi primatski okvirni regioni, ili okvirne regione barem 85, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% identičan to primatski okvirni regioni. U jednom otelotvorenju, protein uključuje primatski Fc domen, ili Fc domen koji je barem 95, 96, 97, 98, ili 99% identičan primatskom Fc domenu. „Primat“ uključuje ljude (Homo sapiens), šimpanze (Pan troglodytes i Pan paniscus (bonoboi)), gorile (Gorilla gorilla), gibone, majmune, lemure, ajajeve (Daubentonia madagascariensis), i tarsijere.
[0497] U nekim otelotvorenjima, afinitet primatskog antitela za ljudski kalikrein plazme je okarakterisan sa KD manjim od 1000, 500, 100, 10, 5, 1, 0,5 nM, npr., manjim od 10 nM, manjim od 1 nM, ili manjim od 0,5 nM.
[0498] U određenim otelotvorenjima, protein ne uključuje sekvence od miševa ili zečeva (npr., nije mišije ili zečije antitelo).
[0499] U nekim aspektima, obelodanjenje pruža primenu proteina (npr., vezujući proteini, npr., antitela) (npr., ovde opisani proteini) koji se vezuju za kalikrein plazme (npr., ljudski kalikrein plazme) i uključuju barem jedan varijabilni region imunoglobulina u postupcima tretmana (ili prevencije) poremećaja ili stanja povezanog sa kalikreinom plazme. Na primer, vezujući protein kalikreina plazme uključuje sekvencu teškog lanca (HC) varijabilnog domena imunoglobulina i sekvencu lakog lanca (LC) varijabilnog domena imunoglobulina. Ovde je opisan veliki broj primernih vezujućih proteina kalikreina plazme.
[0500] Vezujući protein kalikreina plazme može biti izolovan protein (npr., barem 70, 80, 90, 95, ili 99% bez drugih proteina).
[0501] Vezujući protein kalikreina plazme može dodatno da inhibira kalikrein plazme, npr., ljudski kalikrein plazme i/ili mišiji kalikrein plazme. U nekim otelotvorenjima, može biti poželjno imati vezujući protein kalikreina plazme koji se vezuje i za ljudski i za mišiji kalikrein plazme, jer efikasnost ovih antitela može da se testira u mišijem modelu.
Kalikrein plazme
[0502] Primerne sekvence kalikreina plazme protiv kojih se mogu razvijati proteini vezujući za kalikrein plazme mogu uključivati aminokiselinske sekvence kalikreina plazme čoveka, miša ili pacova, sekvenca koja je 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98 %, ili 99% identična jednoj od ovih sekvenci, ili njen fragment, npr., od sekvence date u nastavku.
[0503] Niz sekvenci ljudskog kalikreina plazme koji je korišćen u selekcijama i naknadnom pregledu je prikazan u nastavku (pristupni broj NP_000883.2). Ljudski kalikrein plazme (86 kDa) koji je korišćen je prečišćen iz ljudske plazme i aktiviran sa faktorom XIIa od strane komercijalnog dobavljača. Faktor XIIa aktivira prekalikrein cepanjem polipeptidne sekvence na jednom mestu (između Arg371-Ile372, mesto cepanja označeno sa „/“ u nizu u nastavku) kako bi generisao aktivan kalikreina plazme, koji se zatim sastoji od dva disulfidno povezana polipeptida; težak lanac od oko 52 kDa i katalitički domen od otprilike 34 kDa [Colman and Schmaier, (1997) "Contact System: A Vascular Biology Modulator With Anticoagulant, Profibrinolytic, Antiadhesive, and Proinflammatory Attributes" Blood, 90, 3819-3843]
[0504] Naredne aminokiselinske sekvence ljudskog, mišjeg i pacovskog prekalikreina i mRNK sekvence koje ga kodiraju, ilustrovane su u nastavku. Sekvence prekalikreina su iste kao kalikrein plazme, osim što aktivni kalikrein plazme (pkal) ima pojedinačni polipeptidni lanac koji se cepa na jednom položaju (označen sa „/“) kako bi generisao dva lanca. Naredne sekvence su pune sekvence koje uključuju signalne sekvence. Pri lučenju iz eksprimirajuće ćelije očekuje se da se signalne sekvence uklone.
Ljudski kalikrein plazme (ACCESSION: NP_000883,2)
[0505] > gi|78191798|ref|NP_000883,2| kalikrein plazme B1 prekursor [Homo sapiens]
Ljudski kalikrein plazme mRNA (ACCESSION: NM_000892)
[0506] > gi|78191797|ref|NM_000892,3| Homo sapiens kalikrein B, plazma (Flečerov faktor) 1 (KLKB1), mRNA
Mišji kalikrein plazme (ACCESSION: NP_032481,1)
[0507] > gi|6680584|ref|NP_032481,1| kalikrein B, plazma 1 [Mus musculus]
Mišji kalikrein plazme mRNA (ACCESSION: NM_008455,2)
[0508] > gi|236465804|ref|NM_008455,2| Mus musculus kalikrein B, plazma 1 (Klkbl), mRNA
Pacovski kalikrein plazme (ACCESSION: NP_036857,2)
[0509] > gi|162138905|ref|NP_036857,2| kalikrein B, plazma 1 [Rattus norvegicus]
Pacovski kalikrein plazme mRNA (ACCESSION: NM_012725)
[0510] > gi|162138904|ref|NM_012725,2| Rattus norvegicus kalikrein B, plazma 1 (Klkbl), mRNA
Biblioteke prikaza
[0511] Biblioteka prikaza je kolekcija entiteta; gde svaki entitet uključuje dostupnu polipeptidnu komponentu i povratnu komponentu koja kodira ili identifikuje polipeptidnu komponentu. Polipeptidna komponenta varira tako da su predstavljene različite aminokiselinske sekvence. Polipeptidna komponenta može biti bilo koje dužine, npr. od tri aminokiseline do preko 300 aminokiselina. Entitet biblioteke prikaza može uključiti više od jedne polipeptidne komponente, na primer, dva polipeptidna lanca sFab-a. U jednoj primernoj primeni, biblioteka prikaza se može koristiti za identifikaciju proteina koji se vezuju za kalikrein plazme. U selekciji, polipeptidna komponenta svakog člana biblioteke je ispitana sa kalikreinom plazme (ili njegovim fragmentom), i ako se polipeptidna komponenta vezuje za kalikrein plazme, član biblioteke prikaza se identifikuje, obično zadržavanjem na podlozi.
[0512] Zadržani članovi biblioteke prikaza se prikupljaju iz podloge i analiziraju. Analiza može obuhvatiti pojačanje i naknadni izbor u sličnim ili različitim uslovima. Na primer, pozitivni i negativni izbori se mogu menjati. Analiza takođe može obuhvatati određivanje aminokiselinske sekvence polipeptidne komponente i prečišćavanje polipeptidne komponente za detaljnu karakterizaciju.
[0513] Različiti formati se mogu koristiti za biblioteke prikaza. Primeri uključuju sledeće.
[0514] Prikaz faga: Proteinska komponenta je tipično kovalentno vezana za obloženi protein bakteriofaga. Veza je rezultat prevođenja nukleinske kiseline koja kodira proteinsku jedinicu fuzionisanu za obloženi protein. Veza može uključivati fleksibilni peptidni veznik, mesto proteaze ili aminokiselinu ugrađenu kao rezultat supresije zaustavnog kodona. Prikaz faga je opisan, na primer, u U.S. Pat. br.5,223,409; Smith (1985) Science 228:1315-1317; WO 92/18619; WO 91/17271; WO 92/20791; WO 92/15679; WO 93/01288; WO 92/01047; WO 92/09690; WO 90/02809; de Haard i dr. (1999) J. Biol. Chem 274:18218-30; Hoogenboom i dr. (1998) Immunotechnology 4:1-20; Hoogenboom i dr. (2000) Immunol Today 2:371-8 i Hoet i dr. (2005) Nat Biotechnol.23(3)344-8. Bakteriofag koji prikazuje proteinsku komponentu može se uzgajati i sakupljati koristeći standardne postupke pripremanja faga, npr. PEG taloženje iz medijuma za rast. Posle selekcije pojedinačnih prikaza faga, nukleinska kiselina koja kodira odabrane proteinske komponente može biti izolovana iz ćelija inficiranih odabranim fagom ili sam fagom, nakon amplifikacije. Mogu se odabrati pojedine kolonije ili plake, izolovana i sekvencirana nukleinska kiselina.
[0515] Drugi formati prikaza. Drugi formati prikaza uključuju prikaz na ćelijama (pogledati, npr. WO 03/029456), fuzije proteina i nukleinske kiseline (pogledati, npr., U.S. Pat. br.6,207,446), ribozomski prikaz (pogledati, npr., Mattheakis i dr. (1994) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:9022 and Hanes i dr. (2000) Nat Biotechnol.18:1287-92; Hanes i dr. (2000) Methods Enzymol. 328:404-30; and Schaffitzel i dr. (1999) J Immunol Methods. 231(1-2):119-35) i periplazmični prikaz E. coli (J Immunol Methods.2005 Nov 22;PMID: 16337958).
[0516] Skele. Skele korisne za prikaz uključuju: antitela (npr. Fab fragmenti, jednolančani Fv molekuli (scFv), jednodomenska antitela, kamilja antitela i kamelizovana antitela); T-ćelijski receptori; MHC proteini; ekstracelularni domeni (npr., ponavljanja fibronektina tipa III, EGF ponavljanja); inhibitori proteaze (npr. Kunitz domeni, ekotin, BPTI i tako dalje); TPR ponavljanja ; trifoil strukture; domen cinka; DNK vezujući proteini; naročito monomerni DNK vezujuće proteine; RNK vezujući proteini; enzimi, npr., proteaze (naročito inaktivirane proteaze), RNaze; kaperoni, npr. tioreoksin i proteini toplotnog šoka; intracelularni signalni domeni (kao što su SH2 i SH3 domeni); linearni i ograničeni peptidi; i linearni peptidno supstrati. Biblioteke prikaza mogu uključivati sintetičku i/ili prirodnu raznolikost. Pogledati, na primer, U.S.2004-0005709.
[0517] Tehnologija prikaza se takođe može koristiti za dobijanje vezujućih proteina (npr. antitela) koja vezuju određene epitope cilja. Ovo se može učiniti, na primer, korišćenjem konkurentnih ne-ciljanih molekula kojima nedostaje određeni epitop ili su mutirani unutar epitopa, npr. aa alaninom. Takvi ne-ciljani molekuli mogu se koristiti u proceduri negativne selekcije kao što je opisano u nastavku, kao konkurentni molekuli kada vezuju biblioteku prikaza do cilja ili kao agens koji prethodi eluiranju, npr. za hvatanje u rastvoru pranja disociranih članova biblioteke prikaza koji nisu specifični za cilj.
[0518] Iterativna selekcija. U jednom poželjnom otelotvorenju, tehnologija biblioteke prikaza se koristi u iterativnom režimu. Prva biblioteka prikaza se koristi za identifikaciju jednog ili više vezujućih proteina za cilj. Ovi identifikovani vezujući proteini se zatim menjaju pomoću postupaka mutageneze kako bi se formirala druga biblioteka prikaza.
Vezujući proteini višeg afiniteta se zatim biraju iz druge biblioteke, npr. koristeći veću strogoću ili više konkurentsko vezivanje i uslove pranja.
[0519] U nekim implementacijama, mutageneza je usmerena na regione na vezujućem interfejsu. Ako su, na primer, identifikovani vezujući proteini antitela, onda se mutageneza može usmeriti na CDR regione teških ili lakih lanaca kao što je ovde opisano. Dalje, mutageneza se može usmeriti na okvirne regione u blizini ili u blizini CDR. U slučaju antitela, mutageneza se takođe može ograničiti na jedan ili nekoliko CDR, na primer, kako bi se napravile precizna poboljšanja u koracima. Primeri tehnike mutageneze uključuju: PCR sklonu greškama, rekombinaciju, mešanje DNK, mutagenezu usmerenu na mesto i kasetnu mutagenezu.
[0520] U jednom primeru iterativne selekcije, ovde opisani postupci se koriste kako bi se prvo identifikovali proteini iz biblioteke prikaza koje vezuje kalikrein plazme, sa barem minimalnom specifičnom vezom za ciljanu ili minimalnu aktivnost, npr. ravnoteže konstante disocijacije za vezivanje manja od 0,5 nM, 1 nM, 10 nM ili 100 nM. Sekvenca nukleinskih kiselina koja kodiraju inicijalno identifikovane proteine koriste se kao šablonska nukleinska kiselina za uvođenje varijaciju, na primer, za identifikaciju drugog proteina koji ima poboljšana svojstva (npr. afinitet vezivanja, kinetika ili stabilnost) u odnosu na početni protein.
[0521] Izbor stope. Pošto spora stopa disociacije može biti znak visokog afiniteta, naročito u pogledu interakcija između polipeptida i njihovih ciljeva, ovde opisani postupci mogu se koristiti za izolaciju vezujućih proteina sa željenom (npr. smanjenom) kinetičkom disocijacijom za vezujuću interakciju na cilju.
[0522] Kako bi odabrali sporo disocirajuće vezujuće proteine iz biblioteke prikaza, biblioteka se dovodi u dodir sa imobilizovanom metom. Imobilizovani cilj se zatim pere prvim rastvorom koji uklanja ne-specifične ili slabo vezane biomolekule. Zatim se vezani vezujući proteini eluiraju se drugim rastvorom koji uključuje zasićenu količinu visokog afiniteta kompetitivnog antitela slobodne mete ili specifičnog za cilj, t.j., replikati cilja koji nisu vezani za česticu. Slobodni cilj se vezuje za biomolekule koji se odvajaju od cilja. Ponovno vezivanje je efikasno sprečeno zasićenom količinom slobodne mete u odnosu na znatno nižu koncentraciju imobilisane mete.
[0523] Drugo rastvor može imati uslove rastvora koji su suštinski fiziološki ili su strogi. Tipično, uslovi rastvora drugog rastvora su identični uslovima rastvora prvog rastvora.
Fragmenti drugog rastvora se sakupljaju u vremenskom redosledu kako bi se brzo razlikovali od kasnijih fragmenata. Kasniji fragmenti uključuju biomolekule koji se u ranijim fragmentima odvajaju od mete sa sporijom stopom nego biomolekuli.
[0524] Dalje, takođe je moguće povratiti članove biblioteke prikaza koji su vezani za cilj i nakon proširene inkubacije. Oni ili mogu biti disocirane korišćenjem haotropskih uslova ili mogu biti pojačani dok su prikačene na metu. Na primer, fag, vezan za cilj, može se dovesti u dodir sa bakterijskim ćelijama.
[0525] Selekcija ili skrining za specifičnost. Ovde opisani postupci skrininga biblioteke prikaza mogu uključivati proces selekcije ili skrininga koji odbacuje prikazane članove biblioteke koji se vezuju za molekul koji nije ciljan. Primeri ne-ciljanih molekula obuhvataju streptavidin na magnetnim perlama, blokirajuće agense kao što su goveđi serum albumin, nemasto kravlje mleko, protein soje, bilo koji hvatanje ili ciljano imobilizujuće monoklonskog antitela ili ne-transfektovane ćelije koje ne eksprimiraju cilj.
[0526] U jednoj implementaciji, takozvani korak „negativne selekcije“ se koristi za diskriminaciju između ciljanog i povezanog ne-ciljanog molekula i povezanog, ali različitog ne-ciljanog molekula. Biblioteka prikaza ili njen skup se dovodi u dodir sa molekulom koji nije ciljan. Članovi uzorka koji se ne vezuju za ne-ciljan se sakupljaju i koriste u narednim selekcijama za vezivanje za ciljani molekul ili čak za naknadnu negativnu selekciju.
Negativni korak izbora može biti pre ili posle izbora članova biblioteke koji se vezuju za ciljani molekul.
[0527] U drugoj implementaciji, koristi se korak skeniranja. Nakon što su članovi biblioteke prikaza izolovani za vezivanje na ciljani molekul, svaki izolovani član biblioteke je testiran za svoju sposobnost da se veže na ne-ciljani molekul (npr., gore navedeni ne-cilj). Na primer, za dobijanje ovih podataka može se koristiti ELISA ispitivanje velike brzine. ELISA ispitivanje se takođe može koristiti za prikupljanje kvantitativnih podataka za vezivanje svakog člana biblioteke u cilj, kao i za reakciju unakrsnih vrsta na srodne ciljeve ili podjedinice cilja (npr. kalikrein plazme), i takođe i pod drugačijim uslovima, kao što je pH 6 ili pH 7,5. Podaci vezivanja ne-cilja i cilja su upoređeni (npr. pomoću računara i softvera) za identifikaciju članova biblioteke koji se specifično vezuju za cilj.
Druge primerne biblioteke eksprimiranja
[0528] Druge vrste kolekcija proteina (npr. biblioteke eksprimiranja) se mogu koristiti za identifikaciju proteina sa određenim svojstvima (npr., sposobnost vezivanja kalikreina plazme), uključujući, na primer, proteinske nizove antitela (pogledati, na primer, De Wildt i dr. (2000) Nat. Biotechnol.18:989-994), lambda gt11 biblioteke, dvo-hibridne biblioteke i tako dalje.
Primerne biblioteke
[0529] Moguće je imunizovati primata koji nije čovek i dobiti gene antitela primata koje se mogu prikazati na fagu (pogledati u nastavku). Iz takve biblioteke mogu se odabrati antitela koja vezuju antigen koji se koristi u imunizaciji. Pogledati, na primer, Vaccine. (2003) 22(2):257-67 or Immunogenetics. (2005) 57(10):730-8. Tako se mogu dobiti primatska antitela koja se vezuju i inhibiraju kalikrein plazme imunizacijom šimpanze ili makakija i koristeći različita agensa za odabir ili skrining za primatska antitela koja se vezuju i inhibiraju kalikrein plazme. Takođe, možemo napraviti himere primatizovanih Faba sa ljudskim konstantnim regionima, pogledati Curr Opin Mol Ther. (2004) 6(6):675-83.
„PRIMATIZOVANA antitela, genetski dizajnirana od komponenti cinomolgus makaki majmuna i ljudi, strukturno se ne razlikuju od ljudskih antitela, zbog čega je manje verovatno da će izazvati neželjene reakcije kod ljudi, čineći ih potencijalno pogodnim za dugotrajno, hronično lečenje“ Curr Opin Investig Drugs. (2001) 2(5):635-8.
[0530] Jedna primerna vrsta biblioteke predstavlja raznovrsnu bazu polipeptida, od kojih svaki uključuje domen imunoglobulina, npr., varijabilni domen imunoglobulina. Interesantne su biblioteke prikaza u kojima članovi biblioteke uključuju primatske ili „primatizovane“ (npr., poput ljudskih, primatskih ili humanizovanih) domene imunoglobulina (npr. varijabilni domen imunoglobulina) ili himerne primatizovane Fabs sa ljudskim konstantnim regionima. Biblioteke domena ljudskih ili humanizovanih imunoglobulinskih domena mogu se koristiti za identifikaciju ljudskih ili „humanizovanih“ antitela koja, na primer, prepoznaju ljudske antigene. Pošto su konstantni i okvirni regioni antitela ljudski, ova antitela mogu izbegavati da budu prepoznata i ciljana kao antigeni kada se daju ljudima. Konstantni regioni takođe mogu biti optimizovani da regrutuju efektorske funkcije imunog sistema čoveka. In vitro proces selekcije prikaza prevazilazi nemogućnost normalnog imunog sistema čoveka da generiše antitela protiv samo-antigena.
[0531] Tipična biblioteka prikaza antitela prikazuje polipeptid koji uključuje VH domen i VL domen. „Domen imunoglobulina“ odnosi se na domen iz varijabilnog ili konstantnog domena molekula imunoglobulina. Domeni imunoglobulina obično sadrže dva β-lista formirane od oko sedam β-linija i konzerviranu disulfidnu vezu (pogledati, npr., A. F. Williams and A. N. Barclay, 1988, Ann. Rev. Immunol.6:381-405). Biblioteka prikaza može prikazati antitelo kao Fab fragment (npr., koristeći dva polipeptidna lanca) ili jednolančani Fv (npr., koristeći jedan polipeptidni lanac). Drugi formati se takođe mogu koristiti.
[0532] Kao i u slučaju Fab i drugih formata, prikazano antitelo može da sadrži jedan ili više konstantni region kao deo lakog i/ili teškog lanca. U jednom aspektu, svaki lanac uključuje jedan konstantni region, npr., kao u slučaju Fab. U drugim otelotvorenjima prikazani su dodatni konstantni regioni.
[0533] Biblioteke antitela mogu se konstruisati kroz niz procesa (pogledati, na primer, de Haard i dr., 1999, J. Biol. Chem.274:18218-30; Hoogenboom i dr., 1998,
[0534] Immunotechnology 4:1-20; Hoogenboom i dr., 2000, Immunol. Today 21:371-378, and Hoet i dr. (2005) Nat Biotechnol.23(3):344-8. Dalje, elementi svakog procesa mogu se kombinovati sa onima drugih procesa. Procesi se mogu koristiti tako da varijacija bude uvedena u jedinstveni domen imunoglobulina (npr., VH ili VL) ili u višestruke domene imunoglobulina (npr., VH i VL). Varijacija se može uvesti u varijabilni domen imunoglobulina, npr. u regionu jednog ili više CDR1, CDR2, CDR3, FR1, FR2, FR3 i/ili FR4, koji se odnose na takve regione bilo i oba od teškog i lakog lanca varijabilnog domena. Na primer, varijacije mogu biti uvedene u sva tri CDR datog varijabilnog domena, ili u CDR1 i CDR2, npr., teškog lanca varijabilnog domena. Bilo koja kombinacija je izvodljiva. U jednom procesu, biblioteke antitela se konstruišu ubacivanjem različitih oligonukleotida koji kodiraju CDR u odgovarajuće regione nukleinske kiseline. Oligonukleotidi se mogu sintetisati pomoću monomernih nukleotida ili trinukleotida. Na primer, Knappik i dr., 2000, J. Mol. Biol.296:57-86 opisuju postupak za konstrukciju CDR kodiranja oligonukleotida koristeći sintezu trinukleotida i šablon sa dizajniranim mestima restrikcije za prihvatanje oligonukleotida.
[0535] U drugom postupku, životinja (npr. glodar) se vakciniše sa kalikreinom plazme.
Životinja je opciono ojačana antigenom kako bi se dodatno stimulisao odgovor. Onda su ćelije slezine izolovane od životinja, i nukleinska kiselina koja kodira VH i/ili VL domene se pojačava i klonira za eksprimiranje u biblioteci prikaza.
[0536] U još jednom procesu, biblioteke antitela su izgrađene od nukleinske kiseline amplificirane iz gena imunoglobulina naivnih germ-linija. Pojačana nukleinska kiselina uključuje nukleinsku kiselinu koja kodira VH i/ili VL domen. Izvori imunoglobulinkodirajućih nukleinskih kiselina su opisani u nastavku. Amplifikacija može obuhvatiti PCR, npr., sa prajmerima koji se kaleme za konzerviran konstantnom region ili drugi postupak amplifikacije.
[0537] Nukleinska kiselina koja kodira domene imunoglobulina može se dobiti od imunih ćelija, na primer, primata (npr., čoveka), miša, zeca, kamila ili glodara. U jednom primeru, ćelije su izabrane za određenu osobinu. B ćelije u različitim fazama zrelosti mogu biti odabrane. U drugom primeru, B ćelije su naivne.
[0538] U jednom otelotvorenju, sortiranje ćelija sa fluorescentnim aktiviranjem (FACS) se koristi za sortiranje B ćelija koje eksprimiraju površinski vezane IgM, IgD ili IgG molekule. Dalje, mogu se izolovati B ćelije koje eksprimiraju različite izotipove IgG. U drugom poželjnom otelotvorenju, B ili T ćelije su kultivisane in vitro. Ćelije se mogu stimulirati in vitro, npr., kultivisanjem sa ćelijama za hranjenje ili dodavanjem mitogena ili drugih modulacionih reagensa, kao što su antitela za CD40, CD40 ligand ili CD20, forbol miristat acetat, bakterijski lipopolisaharid, koncanavalin A, fitohemaglutinin ili mitogen vinobojke.
[0539] U drugom otelotvorenju, ćelije su izolovane od pacijenta koji ima bolest stanja opisanog ovde, npr. bolest ili stanje povezani sa kalikreinom plazme.
[0540] U jednom poželjnom otelotvorenju, ćelije su aktivirale program somatske hipermutacije. Ćelije se mogu stimulisati da podležu somatskoj mutagenezi gena imunoglobulina, na primer, tretiranjem sa anti-imunoglobulinom, anti-CD40,
i anti-CD38 antitelima (pogledati, npr., Bergthorsdottir i dr., 2001, J. Immunol. 166:2228). U drugom otelotvorenju, ćelije su naivne.
[0541] Nukleinska kiselina koja kodira varijabilni domen imunoglobulina može se izolovati iz prirodnog repertoara pomoću sledećeg primernog postupka. Prvo, RNK se izoluje od imune ćelije. mRNK pune dužine (tj. ograničene) su odvojene (npr. degradirajuće neograničene RNK sa telećom intestinalnom fosfatazom). Zatim se ograničenje uklanja pirofosfatazom duvanske kiseline i koristi se reverzna transkripcija za proizvodnju cDNK.
[0542] Obrnuta transkripcija prve (antisens) linije može se vršiti na bilo koji način sa bilo kojim odgovarajućim prajmerom. Pogledati, na primer, de Haard i dr., 1999, J. Biol. Chem.
274:18218-30. Region za vezivanje prajmera može biti konstanta među različitim imunoglobulinama, npr., kako bi se preokrenula transkripciji različitih izotipova imunoglobulina. Region za vezivanje prajmera takođe može biti specifičan za određeni izotip imunoglobulina. Tipično, prajmer je specifičan za region koji je 3' sekvenci koja kodira najmanje jedan CDR. U još jednom otelotvorenju, mogu se koristiti poli-dT prajmeri (i mogu biti poželjni za gene teškog lanca).
[0543] Sintetička sekvenca može biti vezana za 3 'kraj reverzibilne transkripcije. Sintetička sekvenca se može koristiti kao mesto vezivanja prajmera za vezivanje prednjeg prajmera tokom PCR amplifikacije nakon reverzne transkripcije. Upotreba sintetičke sekvence može sprečiti potrebu da se koristi skup različitih prajmera kako bi se u potpunosti uhvatila raspoloživa raznovrsnost.
[0544] Gena za kodiranje varijabilnog domena se zatim pojačava, npr., koristeći jedan ili više krugova. Ako se koristi više krugova, ugrađeni prajmeri se mogu koristiti za povećanje plodnosti. Pojačana nukleinska kiselina se zatim klonira u vektor biblioteke prikaza.
Sekundarni postupci snimanja
[0545] Nakon izbora članova biblioteke kandidata koji se vezuju za cilj, svaki član kandidata za biblioteku može se dalje analizirati, npr., kako bi se dalje opisala njegova vezivna svojstva za cilj, npr. kalikrein plazme. Svaki kandidat za biblioteku kandidata može biti podvrgnut jednom ili više sekundarnih ispitivanja. Analiza može biti za vezujuća svojstava, katalitička svojstva, inhibitorna svojstva, fiziološka svojstva (npr. citotoksičnosti, renalnog klirensa, imunogenosti), strukturalna svojstva (npr. stabilnost, konformacija, stanja oligomerizacije) ili neka druga funkcionalna svojstva. Isti test se može koristiti više puta, ali sa različitim uslovima, npr., da se odredi pH, jonska ili toplotna osetljivost.
[0546] Prema potrebi, testovi mogu direktno da koriste člana biblioteke prikaza, rekombinantni polipeptid proizveden iz nukleinske kiseline koja kodira izabrani polipeptid ili sintetički peptid sintetisan na osnovu sekvence izabranog polipeptida. U slučaju odabranih Fabs, Fabs se mogu proceniti ili se mogu modifikovati i proizvesti kao intaktni IgG proteini. Primeri ispitivanja vezujućih svojstava uključuju sledeće.
[0547] ELISA. Vezujući proteini mogu se proceniti pomoću ELISA testa. Na primer, svaki protein se dovodi u dodir sa mikrotitarskom pločom čija je donja površina obložena metom, npr. ograničavajućom količinom mete. Ploča se pere puferom kako bi se uklonili nespecifični vezani polipeptidi. Tada je količina vezujućeg proteina koja je vezana za cilj na ploči određena ispitivanjem ploče sa antitelom koji može prepoznati vezujući protein, npr., oznaka ili konstantni deo vezujućeg proteina. Antitelo je povezano sa sistemom detekcije (npr., enzim kao što je alkalna fosfataza ili peroksidaza rena (HRP) koja proizvodi kolorimetrijski proizvod kada su na raspolaganju odgovarajući supstrati).
[0548] Homogeni vezujući testovi. Sposobnost vezujućeg proteina opisanog ovde za vezivanje meta može se analizirati korišćenjem homogenog testa, tj. Nakon dodavanja svih komponenti testa, dodatna manipulacija tečnostima nije potrebna. Na primer, prenos energije fluorescentnom rezonancom (FRET) može se koristiti kao homogeni test (pogledati, na primer, Lakowicz i dr., U.S. Patent No. 5,631,169; Stavrianopoulos, i dr., U.S. Patent No. 4,868,103). Fluoroforna oznaka na prvom molekulu (npr., molekul identifikovan u fragmentu) odabrana je tako da njena emitovana fluorescentna energija može biti apsorbovana fluorescentnom oznakom na drugom molekulu (npr. meta) ako je drugi molekul u blizini prvog molekula. Fluorescentna oznaka na drugom molekulu fluorescira kada apsorbuje prenesenu energiju. Pošto je efikasnost prenosa energije između oznaka vezana za rastojanje između molekula, može se proceniti prostorni odnos između molekula. U situaciji u kojoj se vrši vezivanje između molekula, fluorescentna emisija oznake „akceptor“ molekula u analizi treba da bude maksimalna. Vezujući događaj koji je konfigurisan za praćenje pomoću FRET, može se pogodno meriti standardnim sredstvima za detektovanje fluorometrija, npr. pomoću fluorimetra. Titriranjem količine prvog ili drugog vezujućeg molekula, može se generisati kriva vezivanja kako bi se procenila konstanta vezivanja ravnoteže.
[0549] Još jedan primer homogenog testa je ALPHASCREEN™ (Packard Bioscience, Meriden CT). ALPHASCREEN™ koristi dve označene perle. Jedna perla generiše singlet kiseonik kada je pobuđen laserom. Druga perla generiše svetlosni signal kada se singlet kiseonik difuzira iz prve perle i sudari sa njom. Signal se generiše samo kada su dve perle u blizini. Jedna perla se može spojiti sa članom biblioteke prikaza, a druga sa metom. Signali se mere kako bi se utvrdilo obim vezivanja.
[0550] Površinska plazmonska rezonanca (SPR). Interakcija vezujućeg proteina i cilja može se analizirati pomoću SPR. SPR ili analiza biomolekularne interakcije (BIA) otkriva biospecifične interakcije u realnom vremenu, bez označavanja bilo kog interaktanata.
Promene u masi na vezujućoj površini (što ukazuje na vezni događaj) BIA čipa rezultuju promenama refraktivnog indeksa u blizini površine (optički fenomen površinske plazmonske rezonance (SPR)). Promene u refraktivnosti generišu detektabilni signal, koji se meri kao indikacija reakcija u realnom vremenu između bioloških molekula. Postupci korišćenja SPR su opisani, na primer, u U.S. Patent No.5,641,640; Raether, 1988, Surface Plasmons Springer Verlag; Sjolander and Urbaniczky, 1991, Anal. Chem.63:2338-2345; Szabo i dr., 1995, Curr. Opin. Struct. Biol.5:699-705 i onlajn resursima datim od strane BIAcore International AB (Uppsala, Sweden).
[0551] Informacije iz SPR mogu se koristiti za pružanje tačne i kvantitativne mere konstantne ravnoteže disocijacije (KD) i kinetičkih parametara, uključujući Koni Koff, za vezivanje vezujućeg proteina na metu. Takvi podaci mogu se koristiti za upoređivanje različitih biomolekula. Na primer, izabrani proteini iz biblioteke eksprimiranja mogu se uporediti sa identifikacijom proteina koji imaju visok afinitet za cilj ili koji imaju spor Koff. Ove informacije se takođe mogu koristiti za razvoj odnosa strukturnih aktivnosti (SAR). Na primer, kinetički i ravnotežni parametri vezivanja
zrele verzije roditeljskog proteina mogu se porediti sa parametrima roditeljskog proteina. Moguće je identifikovati varijantne aminokiseline u datim položajima koje koreliraju sa određenim parametrima vezivanja, npr. visokim afinitetom i sporim Koff. Te informacije mogu da se kombinuju sa strukturnim modeliranjem (npr. koristeći modeliranje homologije, minimizovane energije, ili određivanje strukture pomoću rentgenske kristalografije ili NMR). Kao rezultat, razumevanje fizičke interakcije između proteina i njegove meta može se formulisati i koristiti za vođenje drugih procesa dizajna.
[0552] Ćelijski testovi. Vezujući proteini mogu biti ispitani za sposobnost vezivanja za ćelije koje tranzitno ili stabilno eksprimiraju i prikazuju ciljanu intervenciju na površini ćelije. Na primer, vezujući proteini kalikreina plazme mogu biti fluorescentno označeni i vezivanje za kalikrein plazme u odsustvu antagonističkih antitela može se otkriti promenom intenziteta fluorescencije pomoću protočne citometrije npr. FACS mašine.
Drugi primerni postupci za dobijanje vezujućih proteina kalikreina plazme
[0553] Pored korišćenja biblioteka prikaza, drugi postupci se mogu koristiti za dobijanje vezujućeg proteina kalikreina plazme (npr., antitela). Na primer, protein kalikreina plazme ili njegov fragment se može koristiti kao antigen u životinji koja nije čovek, na primer, glodatu.
[0554] U jednom otelotvorenju, životinja koja nije čovek uključuje bar deo ljudskog gena imunoglobulina. Na primer, moguće je dizajnirati sojeve miševa deficijentne u proizvodnji antitela miša sa velikim fragmentima ljudskog Ig lokusa. Koristeći tehnologiju hibridoma, mogu se proizvesti i odabrati antigen-specifična monoklonska antitela (Mab) izvedena iz gena sa željenom specifičnošću. Pogledati, na primer, XENOMOUSE™, Green i dr., 1994, Nat. Gen.7: 13-21 ; U.S.2003-0070185, WO 96/34096, objavljen 31. oktobra 1996, i PCT Application No. PCT/US96/05928, podnet 29. aprila 1996.
[0555] U drugom otelotvorenju, monoklonsko antitelo se dobija od životinje koja nije čovek, i zatim se modifikuje, npr., humanizuje ili deimunizuje. Winter opisuje postupak CDR graftovanja koji se može koristiti za pripremu humanizovanih antitela (UK prijava patenta GB 2188638A, podneta 26. marta 1987; U.S. Pat. br.5,225,539. Svi CDR određenog ljudskog antitela mogu biti zamenjeni sa barem delom ne-ljudskog CDR ili samo neki od CDR mogu biti zamenjeni sa ne-ljudskim CDR. Potrebno je samo da se zameni broj CDR koji su potrebni za vezivanje humanizovanog antitela na unapred određeni antigen.
[0556] Humanizovana antitela mogu se generisati zamenom sekvenci Fv varijabilnog regiona koji nisu direktno uključeni u vezivanje antigena sa ekvivalentnim sekvencama iz ljudskih Fv varijabilih regiona. Opšte postupke za generisanje humanizovanih antitela dali su Morrison, S. L., 1985, Science 229:1202-1207, Oi i dr., 1986, BioTechniques 4:214, i Queen i dr. U.S. Pat. br.5,585,089, 5,693,761 i 5,693,762. Ovi postupci uključuju izolovanje, manipulaciju i eksprimiranje sekvenci nukleinske kiseline koji kodiraju sve ili deo varijabilnih regiona imunoglobulina Fv od najmanje jednog teškog ili lakog lanca. Dostupni su brojni izvori takve nukleinske kiseline. Na primer, nukleinske kiseline se mogu dobiti od hibridoma koji proizvodi antitelo protiv unapred određene mete, kao što je gore opisano. Rekombinantna DNK koja kodira humanizovano antitelo, ili njegov fragment, može onda biti klonirana u odgovarajući vektor eksprimiranja.
Smanjenje imunogenosti vezujućih proteina kalikreina plazme
[0557] Imunoglobulin vezujući proteini kalikreina plazme (npr., IgG ili Fab vezujući proteini kalikreina plazme) mogu se modifikovati kako bi se smanjila imunogenost. Smanjena imunogenost poželjna je kod vezujućih proteina kalikreina plazme namenjenih za terapiju, jer smanjuje mogućnost da će pacijent razviti imuni odgovor protiv terapeutskog molekula. Tehnike korisne za smanjenje imunogenosti vezujućih proteina kalikreina plazme obuhvataju brisanje/modifikaciju potencijalnih ljudskih T ćelijskih epitopa i „germlinovanje“ sekvenci van CDR (npr., okvir i Fc).
[0558] Vezujuće antitelo kalikreina plazme može biti modifikovano specifičnim uklanjanjem ćelijskih epitopa T ćelija ili „deimunizacijom“, na primer, postupcima obelodanjenim u WO 98/52976 i WO 00/34317. Ukratko, varijabilni regioni teškog i lakog lanca antitela analizirani su za peptide koji se vezuju za MHC Klase II; ovi peptidi predstavljaju potencijalne T-ćelijske epitope (kao što je definisano u WO 98/52976 i WO 00/34317). Za detektovanje potencijalnih T-ćelijskih epitopa, može se primeniti računarski pristup za modeliranje nazvan „peptidno navijanje“, i pored toga se mogu pretraživati baze podataka ljudskih vezujućih peptida MHC klase II za motive prisutne u VH i VL sekvencama, kako je opisano u WO 98/52976 i WO 00/34317. Ovi motivi se vezuju za bilo koji od 18 glavnih DR alotipa MHC klase II i stoga predstavljaju potencijalne T-ćelijske epitope. Potencijalni detektovani epitopi T-ćelija se mogu eliminisati zamenom malih brojeva aminokiselinskih ostataka u varijabilnim regionima, ili poželjno, pomoću pojedinačnih supstitucija aminokiselina. Koliko god je moguće, kad se rade konzervativne supstitucije, može se koristiti, ali ne i isključivo, aminokiselina koja je česta na ovom položaju u sekvencama antitela na germliniji ljudi.
Ljudske germlinijske sekvence su obelodanjene od strane Tomlinson, I.A. i dr., 1992, J. Mol. Biol. 227:776-798; Cook, G. P. i dr., 1995, Immunol. Today Vol.16 (5): 237-242; Chothia, D. i dr., 1992, J. Mol. Bio.227:799-817. V BASE direktorijum pruža sveobuhvatni direktorijum sekvenci varijabilnog regiona ljudskog imunoglobulina (sastavljen od strane Tomlinson, I.A. i dr. MRC Centre for Protein Engineering, Cambridge, UK). Nakon što su identifikovane promene deimunizacije, nukleinske kiseline koje kodiraju VHi VLmogu se konstruisati mutagenezom ili drugim sintetičkim postupcima (npr. de novo sinteza, zamena kaseta i sl.). Mutagenizovana varijabilna sekvenca može, opciono, biti spojena sa ljudskim konstantnim regionom, npr. ljudski IgG1 ili κ konstantnim regionima.
[0559] U nekim slučajevima potencijalni T-ćelijski epitop će obuhvatiti ostatke koji su poznati ili predviđeni da budu važni za funkcionisanje antitela. Na primer, potencijalni T-ćelijski epitopi su obično pristrasni prema CDR. Osim toga, potencijalni T-ćelijski epitopi se mogu javiti u okviru ostataka koji su bitni za strukturu i vezivanje antitela. Promene u eliminaciji ovih potencijalnih epitopa će u nekim slučajevima zahtevati više kontrole, na primer, stvaranjem i testiranjem lanca sa i bez promene. Kada je moguće, potencijalni T-ćelijski epitopi koji se preklapaju CDR eliminisani su supstitucijama van CDR. U nekim slučajevima, izmena unutar CDR je jedina opcija, i stoga treba da se testiraju varijante sa i bez ove supstitucije. U drugim slučajevima supstitucija koja je neophodna za uklanjanje potencijalnog T-ćelijskog epitopa je na položaju ostatka unutar okvira koji može biti kritičan za vezivanje antitela. U ovim slučajevima, varijante sa i bez ove supstitucije treba testirati. Stoga, u nekim slučajevima dizajnirano je nekoliko različitih varijabilnih regiona deimunizovanog teškog i lakog lanca, i testirane različite kombinacije teških i lakih lanaca kako bi se identifikovalo optimalno deimunizovano antitelo. Izbor finalnog deimunizovanog antitela se zatim može izvršiti uzimajući u obzir afinitet vezivanja različitih varijanti u vezi sa stepenom deimunizacije, tj. broj potencijalnih T-ćelijskih epitopa koji ostaju u varijabilnom regionu. Deimunizacija se može koristiti za modifikovanje bilo kojih antitela, npr., antitelo koje uključuje neljudsku sekvencu, npr., sintetičko antitelo, mišije antitelo, drugo neljudsko monoklonsko antitelo ili antitelo izolovano iz biblioteke prikaza.
[0560] Vezujuća antitela kalikreina plazme su „germlinovana“ tako što vraćaju jednu ili više ne-germlinijskih aminokiselina u okvirom regiona do odgovarajućih germlinijskih aminokiselina antitela, sve dok su značajna vezujuća svojstva zadržana. Slični postupci se takođe mogu koristiti u konstantnom regionu, npr. u konstantnim domenima imunoglobulina.
[0561] Antitela koja se vezuju za kalikrein plazme, npr. antitelo koje je ovde opisano, može se modifikovati kako bi varijabilni regioni antitela bili više slični jednoj ili više germlinijskoj sekvenci. Na primer, antitelo može da sadrži jednu, dve, tri ili više aminokiselinske supstitucije, npr. u okvirnom, CDR ili konstantnom regionu, kako bi se učinilo slično referentnoj germlinijskoj sekvenci. Jedan od primera postupka germlinovanja može uključivati identifikaciju jedne ili više germlinijske sekvence koje su slične (npr. najsličnije u određenoj bazi podataka) sekvenci izolovanog antitela. Mutacije (na nivou aminokiseline) se zatim izrađuju u izolovanom antitelu, bilo inkrementalno ili u kombinaciji sa drugim mutacijama. Na primer, napravljena je biblioteka nukleinskih kiselina koja uključuje sekvence koje kodiraju neke ili sve moguće mutacije germlinija. Zatim se procenjuju mutirana antitela, npr., kako bi se identifikovalo antitelo koje ima jedan ili više dodatnih germlinijskih ostataka u odnosu na izolovano antitelo, i koje je i dalje korisno (npr., ima funkcionalnu aktivnost). U jednom otelotvorenju, u izolovano antitelo se unosi što je više moguće germlinijskih ostataka.
[0562] U jednom otelotvorenju, mutageneza se koristi kako bi se susptituisao ili umetnuo jedan ili više germlinijski ostatak u okvirni i/ili konstantni region. Na primer, germlinijski ostatak okvirnog i/ili konstantnog regiona može biti iz germlinijske sekvence koja je slična (npr., najsličnija) sa modifikovanim ne-varijabilnim regionom. Nakon mutageneze, aktivnost (npr., vezivanje ili druga funkcionalna aktivnost) antitela može se proceniti kako bi se utvrdilo da li se germlinijski ostatak ili ostaci tolerišu (tj. ne ukidaju aktivnost). Slična mutageneza može se izvesti u okvirnim regionima.
[0563] Izbor sekvence za germlinijsku sekvencu može se vršiti na različite načine. Na primer, germlinijska sekvenca može se odabrati ako zadovolji unapred utvrđene kriterijume za selektivnost ili sličnost, npr. najmanje određeni procenat identičnosti, npr. najmanje 75, 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ili 99,5% identičnosti. Selekcija se može izvoditi koristeći najmanje 2, 3, 5 ili 10 germlinijske sekvence. U slučaju CDR1 i CDR2, identifikacija slične germlinijske sekvence može uključivati odabir jedne takve sekvence. U slučaju CDR3, identifikacija slične germlinijske sekvence može uključivati odabir jedne takve sekvence, ali može uključivati korišćenje dve germlinijske sekvence koje odvojeno doprinose amino-terminalnom delu i karboksi-terminalnom delu sekvence. U drugim implementacijama se koriste više od jedne ili dve germlinijske sekvence, npr., kako bi se formirala konsenzus sekvenca.
[0564] U jednom otelotvorenju, u odnosu na određenu referentnu sekvencu varijabilnog domena, npr. sekvencu koja je ovde opisana, slične sekvenca varijabilnog domena ima najmanje 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 95 ili 100% CDR položaja aminokiselina koji nisu identične sa ostacima u referentnim CDR sekvencama, ostaci koji su identični ostacima na odgovarajućim položajima u ljudskoj germlinijskoj sekvenci (tj. aminokiselinska sekvenca kodirana ljudskom germlinijskom nukleinskom kiselinom).
[0565] U jednom otelotvorenju, u odnosu na određenu referentnu sekvencu varijabilnog domena, npr. sekvencu koja je ovde opisana, slična sekvenca varijabilnog domena ima najmanje 30, 50, 60, 70, 80, 90 ili 100% FR regiona identičnih FR ljudske germlinijske sekvence, npr. germlinijska sekvenca povezana sa referentnom sekvencom varijabilnog domena.
[0566] Shodno tome, moguće je izolovati antitelo koje ima sličnu aktivnost kao dato antitelu od interesa, ali je više slično jednoj ili više germlinijskoj sekvenci, posebno jednoj ili više germlinijskoj sekvenci. Na primer, antitelo može biti najmanje 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ili 99.5% identičnosti sa germlinijskom sekvencom u regionu izvan CDR (npr., okvirni regioni). Dalje, antitelo može sadržati najmanje 1, 2, 3, 4 ili 5 germlinijskih ostataka u CDR regionu, gde je germlinijski ostatak iz germlinijske sekvence slične (npr. najsličnije) varijabilnom regionu koji se modifikuje. Germlinijske sekvence od primarnog interesa su ljudske germlinijske sekvence. Aktivnost antitela (npr. aktivnost vezivanja merena pomoću KA) može biti unutar faktora ili 100, 10, 5, 2, 0,5, 0,1 i 0,001 prvobitnog antitela.
[0567] Germlinijske sekvence ljudskih gena imunoglobulina su određene i dostupne su iz više izvora, uključujući INTERNATIONAL IMMUNOGENETICS INFORMATION SYSTEM® (IMGT), i V BASE direktorijum (prikupljeno od strane Tomlinson, I.A. i dr. MRC Centre for Protein Engineering, Cambridge, UK).
[0568] Primerne referentne germlinijske sekvence za Vkappauključuju: O12/O2, O18/O8, A20, A30, L14, L1, L15, L4/18a, L5/L19, L8, L23, L9,L24, L11, L12, O11/O1, A17, A1, A18, A2, A19/A3, A23, A27, A11, L2/L16, L6, L20, L25, B3, B2, A26/A10, i A14.
Pogledati, npr., Tomlinson i dr., 1995, EMBO J.14(18):4628-3.
[0569] Referentna germlinijska sekvenca za varijabilni domen HC može se zasnivati na sekvenci koja ima posebne kanoničke strukture, npr.1-3 strukture u H1 i H2 hipervarijabilnim petljama. Kanonske strukture hipervarijabilnih petlji varijabilnog domena imunoglobulina mogu se zaključiti iz njegove sekvence, kako je opisano kod Chothia i dr., 1992, J. Mol. Biol.227:799-817; Tomlinson i dr., 1992, J. Mol. Biol.227:776-798); i Tomlinson i dr., 1995, EMBO J.14(18):4628-38. Primerne sekvence sa 1-3 strukture uključuju: DP-1, DP-8, DP-12, DP-2, DP-25, DP-15, DP-7, DP-4, DP-31, DP-32, DP-33, DP-35, DP-40, 7-2, hv3005, hv3005f3, DP-46, DP-47, DP-58, DP-49, DP-50, DP-51, DP-53, i DP-54.
Proizvodnja proteina
[0570] Standardne postupci rekombinantne nukleinske kiseline mogu se koristiti za eksprimiranje proteina koji se vezuje za kalikrein plazme. Generalno, sekvenca nukleinske kiseline koja kodira protein se klonira u vektor eksprimiranja nukleinske kiseline. Naravno, ako protein sadrži više polipeptidnih lanaca, svaki lanac može biti kloniran u vektor eksprimiranja, npr. isti ili različiti vektori, koji su eksprimirani u istim ili različitim ćelijama.
[0571] Proizvodnja antitela. Neke antitela, npr., Fab, mogu se proizvoditi u bakterijskim ćelijama, npr. E. coli ćelije (pogledati npr., Nadkarni, A. i dr., 2007 Protein Expr Purif 52(1):219-29). Na primer, ako je Fab kodiran sekvencama u vektoru prikaza faga koji uključuje supresivni zaustavni kodon između entiteta prikaza i proteina bakteriofaga (ili njegovog fragmenta), vektorska nukleinska kiselina može biti prebačena u bakterijsku ćeliju koja ne može potisnuti zaustavni kodon. U ovom slučaju Fab nije spojen sa proteinom gena III i izlučen je u periplazmu i/ili medijum.
[0572] Antitela mogu se takođe proizvesti u eukariotskim ćelijama. U jednom otelotvorenju, antitela (npr., ScFv) se eksprimiraju u ćeliji kvasca kao što je Pichia (pogledati, na primer, Powers i dr., 2001, J. Immunol. Methods.251 : 123-35; Schoonooghe S. i dr., 2009 BMC Biotechnol. 9:70; Abdel-Salam, HA. i dr., 2001 Appl Microbiol Biotechnol 56(1 -2): 157-64; Takahashi K. i dr., 2000 Biosci Biotechnol Biochem 64(10):2138-44; Edqvist, J. i dr., 1991 J Biotechnol 20(3):291 -300), Hanseula, or Saccharomyces. Stručnjak u oblasti može optimizovati proizvodnju antitela u kvascu optimizacijom, na primer, uslova kiseonika (pogledati npr. Baumann K., i dr.2010 BMC Syst. Biol.4: 141), osmolarnosti (pogledati npr., Dragosits, M. i dr., 2010 BMC Genomics 11 :207), temperature (pogledati npr.
Dragosits, M. i dr., 2009 J Proteome Res.8(3): 1380-92), uslova fermentacije (pogledati npr., Ning, D. i dr.2005 J. Biochem. and Mol. Biol.38(3): 294-299), linije kvasca (pogledati npr., Kozyr, AV i dr.2004 Mol Biol (Mosk) 38(6): 1067-75; Horwitz, AH. i dr., 1988 Proc Natl Acad Sci U S A 85(22): 8678-82; Bowdish, K. i dr.1991 J Biol Chem 266(18): 11901-8), prekomernog eksprimiranja proteina za povećanje proizvodnje antitela (pogledati npr., Gasser, B. i dr., 2006 Biotechol. Bioeng.94(2):353-61), nivoa kiselosti kulture (pogledati npr., Kobayashi H., i dr., 1997 FEMS Microbiol Lett 152(2):235-42), koncentracije supstrata i/ili jona (pogledati npr. Ko JH. i dr., 2996 Appl Biochem Biotechnol 60(1):41-8). Pored toga, sistemi kvasca mogu se koristiti za proizvodnju antitela sa produženim poluživotom (pogledati npr. Smith, BJ. i dr.2001 Bioconjug Chem 12(5):750-756),
[0573] U jednom poželjnom otelotvorenju, antitela se proizvode u ćelijama sisara. Poželjne ćelije domaćina sisara za eksprimiranje klonskih antitela ili njihovih antigen-vezujućih fragmenata obuhvataju ćelije jajnika kineskog hrčka (CHO ćelije) (uključujući dhfr-CHO ćelije, opisane u Urlaub and Chasin, 1980, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216-4220, koji se koristi sa markerom koji se može odabrati DHFR, npr. kao što je opisano u Kaufman and Sharp, 1982, Mol. Biol.159:601 621), limfocitne ćelijske linije, npr., ćelije NS mijeloma i SP2 ćelije, COS ćelije, HEK293T ćelije (J. Immunol. Methods (2004) 289(1-2):65-80), i ćelija iz transgene životinje, npr., transgeni sisar. Na primer, ćelija je sisarska epitelna ćelija.
[0574] U nekim otelotvorenjima, vezujući proteini kalikreina plazme su proizvedeni u biljci ili sistemu zasnovanom bez ćelija (na primer, Galeffi, P., i dr., 2006 J Transl Med 4:39).
[0575] Osim sekvence nukleinske kiseline koja kodira diversifikovani domen imunoglobulina, rekombinantni vektori eksprimiranja mogu nositi dodatne sekvence, kao što su sekvence koje regulišu replikaciju vektora u ćelijama domaćina (npr., poreklo replikacije) i selektabilni markerski gen. Selektabilni markerski gen olakšava selekciju ćelija domaćina u koje je vektor uveden (pogledati, na primer, U.S. Patent Nos.4,399,216, 4,634,665 i 5,179,017). Na primer, tipično selektabilni markerski gen pruža otpor lekovima, kao što su G418, higromicin ili metotreksat, na ćeliji domaćina u koju je vektor uveden. Poželjni selektivni markerski geni uključuju genu dihidrofolat reduktazu (DHFR) (za upotrebu u dhfr-ćelijama domaćina sa selekcijom/amplifikacijom metotreksata) i neo gen (za G418 selekciju).
[0576] U primernom sistemu za rekombinantno eksprimiranje antitela ili njegovog dela za vezivanje antigena, rekombinantni vektor eksprimiranja koji kodira i teški lanac antitela i laki lanac antitela, uvodi se u dhfr<->CHO ćelije transfekcijom posredstvom kalcijum fosfata. U rekombinantnom vektoru eksprimiranja, geni teškog i lakog lanca antitela su svaki operativno povezani sa regulatornim elementima poboljšivača/promotera (npr. izvedeni iz SV40, CMV, adenovirusa i slično, kao što je CMV poboljšivač/regulatorni element AdMLP promotera ili SV40 poboljšivač/regulatorni element AdMLP promotera) za pokretanje visokih nivoa transkripcije gena. Rekombinantni vektor eksprimiranja takođe nosi DHFR gen, koji dozvoljava odabir CHO ćelija koje su transfektovane sa vektorom koristeći selekciju/amplifikaciju metotreksata. Odabrane ćelije domaćina transformanata su kultivisane kako bi se omogućilo eksprimiranje teških i lakih lanaca antitela, i netaknuto antitelo se regeneriše iz medijuma za kulturu. Standardni tehnike molekularne biologije koriste se za pripremu rekombinantnog vektora eksprimiranja, transfektovanje ćelije domaćina, selektovanje transformanata, kultivisanje ćelije domaćine i uzimanje antitela iz medijuma za kulturu. Na primer, neka antitela mogu biti izolovana afinitetnom hromatografijom sa Proteinom A ili Proteinom G spojenom matricom.
[0577] Za antitela koja uključuju Fc domen, sistem proizvodnje antitela može proizvesti antitela u kojima je region Fc glikozilisan. Na primer, Fc domen IgG molekula je glikozilisan u asparaginu 297 u CH2 domenu. Ovaj asparagin je mesto za modifikaciju biantenarnih oligosaharida. Demonstrirano je da je ova glikozilacija potrebna za efektorske funkcije posredovane Fcg receptorima i C1q komplementom (Burton i Woof, 1992, Adv. Immunol.
51:1-84; Jefferis i dr., 1998, Immunol. Rev.163:59-76). U jednom otelotvorenju, Fc domen je proizveden u sisarskom sistemu za eksprimiranje koji adekvatno glikoziliše ostatak koji odgovara asparaginu 297. Fc domen takođe može uključiti i druge eukariotske posttranslacijske modifikacije.
[0578] Antitela može takođe proizvesti transgena životinja. Na primer, U.S. Pat. br.
5,849,992 opisuje postupak eksprimiranja antitela u mlečnoj žlezdi transgenog sisara. Izrađen je transgen koji uključuje promoter specifičan za mleko i nukleinske kiseline koji kodiraju antitelo od interesa i signalnu sekvencu za lučenje. Mleko proizvedeno od ženki takvih transgenih sisara uključuje, luče se u njemu, antitela od interesa. Antitelo može biti prečišćeno iz mleka, ili za neke primene, može se direktno koristiti.
Karakterizacija vezujućih proteina kalikreina plazme
[0579] IC50 (Inhibitorna koncentracija 50%) i EC50 (efikasna koncentracija 50%). U okviru serije ili grupe vezujućih proteina, oni koji imaju niže IC50ili EC50vrednosti se smatraju jačim inhibitorima kalikreina plazme od onih koji vezuju proteine koji imaju više IC50ili EC50vrednosti. Primerni vezujući proteini imaju IC50vrednost manju od 800 nM, 400 nM, 100 nM, 25 nM, 5 nM ili 1 nM, npr., mereno u in vitro testu za inhibiciju aktivnosti kalikreina plazme kada je kalikrein plazme na 2 pM.
[0580] Vezujući proteini kalikreina plazme takođe mogu biti okarakterisani u odnosu na aktivnost Faktora XII i HMWK (kininogena visoke molekularne težine) signalne događaje, npr., proizvodnja Faktora XIIa i/ili bradikinina.
[0581] Vezujući proteini se takođe mogu proceniti za selektivnost prema kalikreinu plazme. Na primer, vezujući protein kalikreina plazme može se analizirati za svoju potenciju prema kalikreinu plazme i panelu kalikreina i IC50vrednost ili EC50vrednost se mogu odrediti za svaki kalikrein. U jednom otelotvorenju, jedinjenje koje pokazuje nisku IC50vrednost ili EC50vrednost za kalikrein plazme i višu IC50vrednost ili EC50vrednost, npr., barem 2-, 5- ili 10-puta višu, dok se drugi kalikrein u test ploči smatra selektivnim prema kalikreinu plazme.
[0582] Studija farmakokinetike kod pacova, miševa ili majmuna može se izvesti sa vezujućim proteinima kalikreina plazme za određivanje poluživota kalikreina plazme u serumu. Isto tako, može se proceniti efekat vezujućeg proteina in vivo, na primer, u životinjskom modelu bolest (npr. edem izazvan karageninom kod zadnje šape pacova (Winter i dr. Proc Soc Exp Biol Med.1962;111:544-7)), za upotrebu kao terapeutika, na primer, za lečenje ovde opisane bolesti ili stanja, npr. poremećaja povezanih sa kalikreinom plazme.
Farmaceutski sastav
[0583] Proteini (npr. vezujući proteini) koji se vezuju za kalikrein plazme (npr. ljudski kalikrein plazme i/ili mišji kalikrein plazme) i, na primer, uključuju najmanje jedan varijabilni region imunoglobulina mogu se koristiti u postupcima za lečenje (ili prevenciju) bolesti ili stanja povezanih sa kalikreinom plazme. Vezujući proteini mogu biti prisutni u sastavu, na primer, farmaceutski prihvatljivom sastavu ili farmaceutskom sastavu, koji uključuje protein koji vezuje kalikrein, na primer, molekul antitela ili drugi polipeptid ili peptid identifikovan kao vezujući za kalikrein plazme, kako je ovde opisano. vezujući protein kalikreina plazme može se formulisati zajedno sa farmaceutski prihvatljivim nosačem.
Farmaceutski sastavi uključuju terapeutske sastave i dijagnostičke sastave, npr., sastave koji uključuju označene vezujuće proteine kalikreina plazme za in vivo slikanje i sastave koji uključuju označene proteine vezujući za kalikrein plazme za lečenje (ili prevenciju) bolesti povezanih sa kalikreinom plazme.
[0584] Farmaceutski prihvatljiv nosač obuhvata bilo koji i sve rastvarače, disperzione medijume, prevlake, antibakterijske i antifungalne agense, izotonične agense i agensa za odlaganje apsorpcije i slično, koji su fiziološki kompatibilni. Poželjno, nosač je pogodan za intravenoznu, intramuskularnu, subkutanu, parenteralnu, spinalnu ili epidermalnu primenu (npr., Injektiranjem ili infuzijom), iako su nosioci pogodni za inhalaciju i intranazalnu primenu. U zavisnosti od načina primene, vezujući protein kalikreina plazme može biti prevučen u materijalu za zaštitu jedinjenja od dejstva kiselina i drugih prirodnih stanja koje mogu inaktivirati jedinjenje.
[0585] Farmaceutski prihvatljiva so je so koja zadržava željenu biološku aktivnost jedinjenja i ne daje nikakve neželjene toksikološke efekte (pogledati, na primer, Berge, S.M., i dr., 1977, J. Pharm. Sci.66:1-19). Primeri takvih soli uključuju kisele adicione soli i bazne adicione soli. Kisele adicione soli uključuju one koji nastaju od netoksičnih neorganskih kiselina, kao što su hlorovodonična, nitrita, fosforna, sumporna, bromovodonična, jodovodonična, fosforna i slično, kao i od netoksičnih organskih kiselina kao što su alifatske mono- i dikarboksilne kiseline, alkanoinske kiseline supstituisane sa fenilom, hidroksi alkanoinske kiseline, aromatične kiseline, alifatične i aromatične sulfonske kiseline i slično. Bazne adicione soli uključuju one koji se dobijaju iz alkalnih zemnih metala, kao što su natrijum, kalijum, magnezijum, kalcijum i slično, kao i od netoksičnih organskih amina kao što su N,N'-dibenziletilendiamin, N-metilglukamin, hloroprocain, holin, dietanolamin, etilendiamin, prokain i slično.
[0586] Sastavi mogu biti u različitim oblicima. Oni obuhvataju, na primer, tečne, polučvrste i čvrste oblike doziranja, kao što su tečni rastvori (npr. injektibilni i infuzibilni rastvori), disperzije ili suspenzije, tablete, pilule, praškovi, lipozomi i supozitorijumi. Oblik može zavisiti od planiranog načina primene i terapijske primene. Mnogi sastavi su u obliku injektibilnih ili infuzibilnih rastvora, kao što su sastavi slični onima koje se koriste za primenu antitela ljudima. Primeran način primene je parenteralan (npr., intravenozni, subkutani, intraperitonealni, intramuskularni). U jednom otelotvorenju, vezujući protein kalikreina plazme je pogodan za primenu intravenskom infuzijom ili injekcijom. U drugom poželjnom otelotvorenju, vezujući protein kalikreina plazme je pogodan za primenu intramuskularnom ili subkutanom injekcijom.
[0587] Izrazi „parenteralna primena“ i „parenteralno primenjivanje“ kad se ovde koriste, podrazumevaju načine primene osim enteralne i topikalne primene, obično injekcijom, i uključuju, bez ograničenja, intravenozne, intramuskularne, intraarterijalne, intratekalne, intrakapsularne, intraorbitalne, intrakardijske, intradermalne, intraperitonealne, transtrahealne, subkutane, subkutikularne, intraartikularne, subkapsularne, subarahnoidne, intraspinalne, epiduralne i intrasternalne injekcije i infuzije.
Sastav se može formulisati kao rastvor, mikroemulzija, disperzija, lipozom ili druga uređena struktura pogodna za visoku koncentraciju leka. Sterilni injektabilni rastvori se mogu pripremiti inkorporiranjem vezujućeg proteina u potrebnoj količini u odgovarajućem rastvaraču sa jednim ili kombinacijom sastojaka nabrojanih gore, po potrebi, nakon čega sledi filtrirana sterilizacija. Generalno, disperzije se pripremaju uključivanjem aktivnog jedinjenja u sterilan nosač koje sadrži osnovni disperzioni medijum i potrebne druge sastojke od onih nabrojanih gore. U slučaju sterilnih praškova za pripremu sterilnih injektabilnih rastvora, poželjni postupci pripreme su vakuumsko sušenje i liofilizacija koji daje prašak aktivnog sastojka plus bilo koji dodatni željeni sastojak iz ranije sterilnog filtriranog rastvora.
Odgovarajuća tečnost rastvora može se održati, na primer, korišćenjem prevlake kao što je lecitin, održavanjem potrebne veličine čestica u slučaju disperzije i korišćenjem surfaktanata. Produžena apsorpcija injekcionih sastava može se dobiti tako što se u sastav uključi agens koji odlaže apsorpciju, na primer soli monostearata i želatin.
[0588] Vezujući protein kalikreina plazme se može davati različitim postupcima, iako je za mnoge primene poželjni put/način primene intravenozna injekcija ili infuzija. Na primer, za terapeutske primene, vezujući protein kalikreina plazme može se primenjivati intravenoznom infuzijom sa stopom manje od 30, 20, 10, 5 ili 1 mg/min, kako bi se postigla doza od oko 1 do 100 mg/m<2>ili 7 do 25 mg/m<2>. Put i/ili način primene će se razlikovati u zavisnosti od željenih rezultata. U određenim otelotvorenjima, aktivno jedinjenje može biti pripremljeno sa nosačem koji će zaštititi jedinjenje od brzog oslobađanja, kao što je formulacija sa kontrolisanim oslobađanjem, uključujući implante, i sisteme za mikrokapsulirane isporuke. Mogu se koristiti biorazgradivi, biokompatibilni polimeri, kao što su etilen vinil acetat, polianhidridi, poliglikolna kiselina, kolagen, poliortoester i polilaktička kiselina. Dostupni su mnoge postupci za pripremu takvih formulacija. Pogledati, na primer, Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J.R. Robinson, ed., 1978, Marcel Dekker, Inc., New York.
[0589] Farmaceutski sastavi se mogu primenjivati sa medicinskim uređajima. Na primer, u jednom otelotvorenju, farmaceutska sastav koji je ovde obelodanjena može se davati sa uređajem, na primer, uređaja za hipodermičke injekcije bez igli, pumpi ili implanata.
[0590] U određenim otelotvorenjima, vezujući protein kalikreina plazme se može formulisati kako bi se osigurala pravilna distribucija in vivo. Na primer, krvno-moždana barijera (BBB) isključuje mnogo visoko hidrofilnih jedinjenja. Kako bi se osiguralo da terapeutska jedinjenja koja su ovde opisana prelaze BBB (ako se to želi), mogu se formulisati, na primer, u lipozomima. Za postupke proizvodnje lipozoma, pogledati, na primer, U.S. Pat. br.
4,522,811; 5,374,548; i 5,399,331. Lipozomi mogu da sadrže jednu ili više ćelija koji se selektivno transportuju u specifične ćelije ili organe, čime se poboljšava ciljana dostava lekova (pogledati, na primer, V.V. Ranade, 1989, J. Clin. Pharmacol.29:685).
[0591] Dozni režimi se prilagođavaju da obezbede optimalni željeni odgovor (npr., terapijski odgovor). Na primer, jedan bolus može biti primenjen, nekoliko podeljenih doza može da se primeni tokom vremena ili doza može biti srazmerno smanjena ili povećana, kako zahtevaju potrebama terapeutske situacije. Posebno je pogodno formulisati parenteralne sastave u obliku dozne jedinice za lakšu primenu i uniformnost doziranja. Oblik dozne jedinice kad se ovde koristi odnosi se na fizički diskretne jedinice koje su pogodne za dozne jedinice za pacijente koji se tretiraju; svaka jedinica sadrži unapred određenu količinu aktivnog jedinjenja izračunatu kako bi proizvela željeni terapeutski efekat u delovanju sa potrebnim farmaceutskim nosačem. Specifikacije za oblike doznih jedinica mogu biti diktirane i direktno zavise od (a) jedinstvenih karakteristika aktivnog jedinjenja i određenog terapijskog efekta koji treba postići, i (b) ograničenja koja su inherentna u struci sastavljanja takvog aktivnog jedinjenja za lečenje osetljivosti kod pojedinaca.
[0592] Primeran, neograničavajući opseg terapeutski ili profilaktički efikasne količine vezujućeg proteina (npr., antitela) koji je ovde opisan je 0,1-20 mg/kg, poželjnije 1-10 mg/kg. Na primer, putem intravenozne infuzije može se davati anti-kalikrein plazme antitelo, npr. brzinom manjom od 30, 20, 10, 5 ili 1 mg/min kako bi se postigla doza od oko 1 do 100 mg/m<2>ili oko 5 do 30 mg/m<2>. Za vezujuće proteine manje molekulske masi od antitela, odgovarajuće količine mogu biti srazmerno manje. Vrednosti doze mogu da se razlikuju u zavisnosti od vrste i jačine stanja koje treba ublažiti. Za određenog pacijenta, određeni režimi doziranja mogu se vremenom prilagoditi prema individualnoj potrebi i profesionalnoj proceni osobe koja primenjuje ili nadgleda primenu sastava.
[0593] Ovde opisani farmaceutski sastavi mogu uključivati „terapeutski efikasnu količinu“ ili „profilaktički efikasnu količinu“ vezujućeg proteina kalikreina plazme koji je ovde prikazan. „Terapeutski efikasna količina“ odnosi se na količinu koja je efikasna, u dozama i za vremenske periode potrebne za postizanje željenog terapeutskog rezultata. Terapeutski efikasna količina sastava može se razlikovati u zavisnosti od faktora kao što su stanje bolesti, starost, pol i težina pojedinca, i sposobnost proteina da izazove željeni odgovor kod pojedinca. Terapeutski efikasna količina je takođe ona u kojoj su svi toksični ili štetni efekti sastava nadmašeni terapeutski korisnim efektima.
[0594] „Terapeutski efikasna doza“ poželjno modulira merljivi parametar, npr. nivoi IgG antitela u cirkulaciji, za statistički značajan stepen ili najmanje oko 20%, poželjnije za najmanje oko 40%, i još poželjnije za najmanje oko 60% i još poželjnije za najmanje oko 80% u odnosu na netretirane pacijente. Sposobnost jedinjenja da modulira merljivi parametar, na primer, parametar povezan sa bolesti, može se proceniti u sistemu životinjskog modela koji predviđa efikasnost kod ljudskih poremećaja i stanja, npr. bolesti povezane sa kalikreinom plazme. Alternativno, ova osobina sastava može se proceniti ispitivanjem sposobnosti jedinjenja da modulira parametar in vitro.
[0595] „Profilaktički efikasna količina“ odnosi se na količinu koja je efikasna, u dozama i za vremenske periode potrebne za postizanje željenog profilaktičkog rezultata. Tipično, pošto se profilaktička doza koristi kod osoba pre ili u ranijoj fazi bolesti, profilaktički efikasna količina će biti manja od terapeutski efikasne količine.
Stabilizacija i zadržavanje
[0596] U jednom otelotvorenju, protein za vezivanje kalikreina plazme je fizički povezan sa delom koji poboljšava njegovu stabilizaciju i/ili zadržavanje u cirkulaciji, npr. u krvi, serumu, limfi ili drugim tkivima, npr. za najmanje 1,5, 2, 5, 10 ili 50 puta. Na primer, vezujući protein kalikreina plazme može biti povezan sa polimerom, npr., u suštini
ne-antigenim polimerom, kao što su polialkilen oksidi ili polietilen oksidi. Pogodni polimeri bitno će se težinski varirati. Mogu se koristiti polimeri koji imaju molekularni broj prosečnih težina u rasponu od oko 200 do oko 35.000 (ili oko 1.000 do oko 15.000, i 2.000 do oko 12.500). Na primer, vezujući protein kalikreina plazme može biti konjugovan sa polimerom rastvorljivim u vodi, npr. hidrofilni polivinil polimeri, npr., polivinilalkohol i polivinilpirolidon. Neograničavajuća lista takvih polimera uključuje homopolimere polialkilen oksida kao što su polietilen glikol (PEG) ili polipropilen glikoli, polioksietilenovani polioli, njihove kopolimere i blok kopolimere, pod uslovom da se održava rastvorljivost blok kopolimera u vodi.
[0597] Vezujući protein kalikreina plazme može takođe biti povezana sa nosač proteinom, npr. serumskim albuminom, kao što je ljudski serumski albumin (pogledati npr. Smith, BJ. i dr., 2001 Bioconjug Chem 12(5): 750-756). Na primer, translacijska fuzija se može koristiti za povezivanje nosač proteina sa vezujućim proteinom kalikreina plazme.
[0598] Vezujući protein kalikreina plazme može se takođe modifikovati kao derivat HESilacije. Procesi za HESilaciju vezujućeg proteina kalikreina plazme koriste hidroksietil skrob za modifikovanje proteina. HESilacija proteina može proširiti poluživot proteina u cirkulaciji i takođe smanjiti renalni klirens.
Kompleti
[0599] Ovde opisani vezujući protein kalikreina plazme mogu biti dati u kompletu, npr., kao komponenta kompleta. Na primer, komplet sadrži (a) vezujući protein kalikreina plazme, na primer, sastav (npr., farmaceutsku sastav) koji uključuje vezujući protein kalikreina plazme, i opciono (b) informacioni materijal. Informacioni materijal može biti deskriptivan, instrukcioni, marketinški ili drugi materijal koji se odnosi na postupak koji je ovde opisan i/ili upotrebu vezujućeg proteina kalikreina plazme, npr., za ovde opisan postupak.
[0600] Informacioni materijal kompleta nije ograničen po obliku. U jednom slučaju, informacioni materijal može sadržati informacije o proizvodnji jedinjenja, molekularnoj težini jedinjenja, koncentraciji, datumu isteka, informacija o seriji ili mestu proizvodnje i tako dalje. U jednom slučaju informacioni materijal se odnosi na upotrebu vezujućeg proteina za lečenje, prevenciju ili dijagnozu poremećaja i stanja, npr. bolesti ili stanja povezane sa kalikreinom plazme.
[0601] U jednom slučaju, informacioni materijal može sadržati uputstva za primenu vezujućeg proteina u kalikrein plazme na odgovarajući način za otelotvorenje postupaka koji su ovde opisani, npr. u odgovarajućoj dozi, obliku doze ili načinu primene (npr. ovde opisani doza, dozni oblik, ili način primene). U drugom slučaju, informacioni materijal može sadržati uputstva za davanje vezujućeg proteina kalikreina plazme odgovarajućem pacijentu, npr. čoveku, na primer, čoveku koji ima ili je pod rizikom za ovde opisane poremećaje ili stanja, npr. bolest ili stanje povezani sa kalikrenom plazme. Na primer, materijal može da sadrži uputstva za primenu vezujućeg proteina kalikreina plazme pacijentu sa ovde opisanim poremećajem ili stanjem, npr. bolest povezana sa kalikreinom plazme. Informacioni materijal kompleta nije ograničen po obliku. U mnogim slučajevima, informacioni materijal, npr. instrukcije, je dat štampano, ali može biti i u drugim formatima, kao što je računarski čitljiv materijal.
[0602] Vezujući protein kalikreina plazme može biti dat u bilo kom obliku, na primer, tečnom, sušenom ili liofilizovanom obliku. Poželjno je da vezujući protein kalikreina plazme bude u suštini čist i/ili sterilan. Kad je vezujući protein kalikreina plazme dat u tečnom rastvoru, tečni rastvor je poželjno vodeni rastvor, pri čemu je poželjan sterilni vodeni rastvor. Kada je vezujući protein kalikreina plazme dat u osušenom obliku, rekonstitucija se generalno podrazumeva dodavanjem pogodnog rastvarača. Rastvarač, na primer, sterilna voda ili pufer, opciono se može dati u kompletu.
[0603] Komplet može da sadrži jedan ili više kontejner za sastav koja sadrži vezujući protein kalikreina plazme. U nekim slučajevima, komplet sadrži odvojene kontejnere, razdelnike ili pregrade za sastav i informacioni materijal. Na primer, sastav može biti sadržan u boci, bočici ili špricu, i informacioni materijal se može povezati sa kontejnerom. U drugim otelotvorenjima, odvojeni elementi kompleta sadržani su u jedinstvenom, nepodeljenom kontejneru. Na primer, sastav se nalazi u boci, bočici ili špricu na koje je informacioni materijal vezan u obliku etikete. U nekim slučajevima, komplet sadrži mnoštvo (npr. pakovanje) pojedinačnih kontejnera, od kojih svaki sadrži jedan ili više oblik dozne jedinice (npr., oblik doziranja koji je ovde opisan) vezujućeg proteina kalikreina plazme. Na primer, komplet sadrži mnoštvo špriceva, ampula, pakovanja folije ili flaster pakovanja, od kojih svako sadrži jednu doznu jedinicu vezujućeg proteina kalikreina plazme. Kontejneri kompleta mogu biti vazduhootporni, vodootporni (npr., nepopustljivi za promene vlage ili isparavanja), i/ili svetlootporni.
[0604] Komplet opciono uključuje uređaj pogodan za davanje sastava, na primer, špric, inhalant, pipeta (na primer, pipeta za oči), bris (npr. pamučni bris ili drveni bris) ili bilo koji takav uređaj za isporuku. U jednom slučaju, uređaj je implantabilni uređaj koji dozvoljava dozirane količine vezujućeg proteina. Obelodanjenje takođe sadrži postupak obezbeđivanja kompleta, npr. kombinovanjem ovde opisanih komponenti.
Tretmani
[0605] Proteini koji se vezuju za kalikrein plazme, npr., kao što je ovde opisano, imaju terapeutske i profilaktičke primene, naročito kod ljudi. Ovi vezujući proteini se daju pacijentu za lečenje, prevenciju i/ili dijagnostifikovanje različitih poremećaja i stanja, uključujući npr. bolest povezanu sa kalikreinom plazme, ili čak i ćelijama u kulturi, npr. in vitro ili ex vivo. Na primer, ovi vezujući proteini se mogu koristiti za modifikovanje efekata kalikreina plazme oslobođenog iz ćelija u kulturi (Lilla i dr., J Biol Chem.284(20): 13792-13803 (2009)).
Lečenje uključuje primenu količine koja je efikasna za ublažavanje, olakšavanje, menjanje, lečenje, poboljšanje, unapređenje ili uticaj na poremećaj, simptome poremećaja ili predispoziciju za poremećaj. Tretman može takođe odložiti početak, npr., sprečiti početak ili sprečiti pogoršanje bolesti ili stanja.
[0606] Kad se ovde koristi, količina agensa za vezivanje mete koja je efikasna za prevenciju poremećaja ili profilaktički efikasne količine agensa za vezivanje odnosi se na količinu agensa za vezivanje mete, npr. vezujući protein kalikreina plazme, npr. ovde opisano antikalikrein plazme antitelo, koje je efikasno, primenom pojedinačnog ili višestrukog doziranja pacijentu, za prevenciju ili odlaganje pojave početka ili ponovnog nastanka poremećaja, npr. poremećaja koji je ovde opisan, npr. bolest povezana sa kalikreinom plazme.
[0607] Postupci primene vezujućih proteina kalikreina plazme i druge agensa takođe su opisani pod „Farmaceutski sastavi“. Odgovarajuće doze korišćenih molekula mogu zavisiti od uzrasta i težine pacijenta i specifičnog korišćenog leka. Vezujući proteini mogu se koristiti kao konkurentni agensi za inhibiranje, smanjujući neželjenu interakciju, npr. između kalikreina plazme i njegovog supstrata (npr., Faktor XII ili HMWK). Doza vezujućeg proteina kalikreina plazme može biti količina koja je dovoljna za blokiranje 90%, 95%, 99% ili 99,9% aktivnosti kalikreina plazme kod pacijenta, posebno na mestu bolesti. U zavisnosti od bolesti, to može zahtevati 0,1, 1,0, 3,0, 6,0 ili 10,0 mg/kg. Za IgG sa molekulskom masom od 150.000 g/mol (dve lokacije za vezivanje), ove doze odgovaraju približno 18 nM, 180 nM, 540 nM, 1,08 μM i 1,8 μM od mesta vezivanja za zapreminu od 5 L.
[0608] Ponekad, vezujući proteini kalikreina plazme se koriste za inhibiranje aktivnosti (npr., inhibiraju najmanje jednu aktivnost kalikreina plazme, npr., smanjuju proizvodnju Faktora XIIa i/ili bradikinina) kalikreina plazme, npr. in vivo. Vezujući proteini mogu se sami koristiti ili konjugovati sa nekim agensom, npr. citotoksičnim lekom, citotoksinskim enzimom ili radioizotopom. Ovaj postupak uključuje: primenu samog vezujućeg proteina ili vezanog za neki agens (npr., citotoksični lek), pacijentu kom je potreban takav tretman. Na primer, vezujući proteini kalikreina plazme koji ne inhibiraju u značajnoj meri kalikrein plazme mogu se koristiti za isporuku nanočestica koje sadrže agense, kao što su toksini, u ćelije ili tkiva povezane sa plazmom, povezane sa kalikreinom, npr. za lečenje poremećaja povezanog sa kalikreinom plazme.
[0609] Budući da vezujući proteini kalikreina plazme prepoznaju ćelije koje eksprimiraju klarikrein u plazmi i mogu se vezati za ćelije koje su povezane sa (npr. u blizini ili pomešane sa) poremećajem ili stanjem povezanim sa kalikreinom plazme, vezujući proteini kalikreina plazme se mogu koristiti za inhibiranje aktivnosti (npr. inhibirati barem jednu aktivnost kalikreina plazme, npr. smanjiti proizvodnju Faktora XIIa i/ili bradikinina) bilo koje takve ćelije i inhibirati bolest povezanu sa kalikreinom plazme. Smanjenje aktivnosti kalikreina plazme može indirektno inhibirati ćelije koje mogu zavisiti od aktivnosti kalikreina plazme za razvoj i/ili progresiju poremećaja povezanog sa kalikreinom.
[0610] Vezujući proteini mogu se koristiti za isporuku agensa (npr. bilo kog od različitih citotoksičnih i terapijskih lekova) ćelijama i tkivima gde je prisutan kalikrein plazme. Primeri agensa uključuju jedinjenje koje emituje zračenje, molekule biljaka, gljivice ili bakterije, biološke proteine i njihove smeše. Citotoksični lekovi mogu biti intracelularno delujući citotoksični lekovi, kao što su emiteri toksina kratkog dometa zračenja, npr., visokoenergetski α-emiteri kratkog dometa.
[0611] Kako bi se ciljale ćelije koje eksprimiraju kalikrein plazme, može se koristiti sistem proleka. Na primer, prvi vezujući protein je konjugovan sa prolekom koji se aktivira samo kada je u neposrednoj blizini aktivatora proleka. Aktivator proleka je konjugovan sa drugim vezujućim proteinom, poželjno onim koji se vezuje za ne-konkurentno mesto na ciljanom molekulu. Da li se dva vezujuća proteina vezuju za konkurentna ili ne-konkurentna mesta vezivanja može se odrediti konvencionalnim analizama vezivanja. Primer leka prolek parova su opisani kod Blakely i dr., (1996) Cancer Research, 56:32873292.
[0612] Vezujući proteini kalikreina plazme se mogu direktno koristiti in vivo da eliminišu ćelije koji eksprimiraju antigene putem prirodne komplementarne citotoksičnosti (CDC) ili ćelijske citotoksičnosti zavisne od antitela (ADCC). Vezujući proteini opisani ovde mogu uključiti efektorski domen vezivanja komplementa, kao što su Fc delovi iz IgG1, -2 ili -3 ili odgovarajući delovi IgM koji vezuju komplement. Ponekad, populacija ciljanih ćelija je ex vivo tretirana sa vezujućim agensom opisanim ovde i odgovarajućim efektorskim ćelijama. Tretman se može dopuniti dodavanjem komplementa ili seruma koji sadrži komplement. Dalje, fagocitoza ciljanih ćelija obloženih sa vezujućim proteinom opisanim ovde, može se poboljšati vezivanjem proteina komplementa. Ponekad, ćelije koje su obložene vezujućim proteinima, koje uključuju domen efektora vezivanja komplementa, lizirane su od strane komplementa.
[0613] Postupci primene vezujućih proteina kalikreina plazme opisani su pod „Farmaceutski sastavi“. Odgovarajuće doze upotrebljenih molekula zavisiće od starosti i težine pacijenta i određenog korišćenog leka. Vezujući proteini mogu se koristiti kao konkurentni agensi da inhibiraju ili smanje neželjenu interakciju, npr. između prirodnog ili patološkog agensa i kalikreina plazme.
[0614] Vezujući protein kalikreina plazme može se koristiti za isporuku makro i mikromolekula, npr., gena u ćeliju radi genetske terapije u endotel ili epitel i ciljati samo ona tkiva koja eksprimiraju kalikrein plazme. Vezujući proteini se mogu koristiti za isporuku različitih citotoksičnih lekova uključujući terapijske lekove, jedinjenje koje emituje zračenje, molekule biljaka, gljiva ili bakterije, biološke proteine i njihove smeše. Citotoksični lekovi mogu biti intracelularno delujući citotoksični lekovi, kao što su emiteri zračenja kratkog dometa, uključujući, na primer, visokoenergetski α emiteri kratkog dometa, kako je ovde opisano.
[0615] U slučaju polipeptidnih toksina, tehnike rekombinantne nukleinske kiseline mogu se koristiti za konstrukciju nukleinske kiseline koja kodira vezujući protein (npr., antitelo ili njegov antigen vezujući fragment) i citotoksin (ili njegovu polipeptidnu komponentu) kao translacione fuzije. Rekombinantna nukleinska kiselina se zatim eksprimira, na primer, u ćelijama i izoluje se polipeptid kodirane fuzije.
[0616] Alternativno, vezujući protein kalikreina plazme može biti spojen sa emiterima visokoenergetskog zračenja, na primer, radioizotopom, kao što je<131>I, γ-emiter, koji, kada je lokalizovan na nekim mestu, rezultuje ubistvom nekoliko ćelijskih prečnika. Pogledati, npr., S.E. Order, „Analysis, Results, and Future Prospective of the Therapeutic Use of Radiooznaked Antibody in Cancer Therapy“, Monoclonal Antibodies for Cancer Detection and Therapy, R.W. Baldwin i dr. (eds.), pp 303316 (Academic Press 1985). Ostali pogodni radioizotopi uključuju emitere, kao što su<212>Bi,<213>Bi, i<211>At i b emiteri, kao što su<186>Re i<90>Y. Štaviše,<177>Lu se takođe može koristiti i kao agens za slikanje i kao citotoksični agens.
[0617] Radioimunoterapija (RIT) koristeći antitela označena sa<131>I,<90>Y, i<177>Lu je pod intenzivnim kliničkim ispitivanjem. Postoje značajne razlike u fizičkim karakteristikama ova tri nukleida i, kao rezultat, izbor radionuklida je veoma kritičan kako bi se obezbedila maksimalna doza do tkiva od interesa. Više beta energetske čestice od<90>Y mogu biti dobre za velike tumore. Relativno nisko energetske beta čestice od<131>I su idealne, ali je in vivo dehalogenacija radioiodiodiranih molekula glavni nedostatak za internalizaciju antitela. U suprotnosti sa tim,<177>Lu ima nisko energetsku beta česticu sa samo 0,2-0,3 mm dometom i isporučuje mnogo nižu dozu zračenja u koštanu srž u poređenju sa<90>Y. Pored toga, zbog dužeg fizičkog poluživota (u poređenju sa<90>Y), vreme boravka je veće. Kao rezultat, veće aktivnosti (veći mCi iznosi)<177>Lu označeni agensi se mogu primenjivati sa srazmerno manjom dozom zračenja do srži. Bilo je nekoliko kliničkih studija koje istražuju upotrebu<177>Lu označenih antitela u lečenju različitih karcinoma. (Mulligan T i dr., 1995, Clin. Canc. Res. 1: 1447-1454; Meredith RF, i dr., 1996, J. Nucl. Med.37:1491-1496; Alvarez RD, i dr., 1997, Gynecol. Oncol.65:94-101).
Primerne bolesti i stanja
[0618] Ovde opisan vezujući protein kalikreina plazme je koristan za tretman (ili prevenciju) bolesti ili stanja kod kojih je implicirana aktivnost kalikreina plazme, npr., ovde opisane bolesti ili stanja, ili za tretman (ili prevenciju) jednog ili više simptoma povezanog as njima. Ponekad, vezujući protein kalikreina plazme (npr., vezujući IgG ili Fab kalikreina plazme) inhibira aktivnost kalikreina plazme.
[0619] Primeri takvih bolesti i stanja koja mogu da se tretiraju (ili spreče) sa ovde opisanim vezujućim proteinom kalikreina plazme uključuju: reumatoidni artritis, giht, upalna bolest creva, oralni mukozitis, neuropatski bol, upalni bol, spinalna stenoza - degenerativna bolest kičme, arterijska ili venska tromboza, post operativni ileus, aortna aneurizma, osteoartritis, vaskulitis, edem, nasledni angioedem, cerebralni edem, plućna embolija, moždani udar, zgrušavanje indukovano ventrikularnim pomoćnim uređajima ili stentovima, povreda glave ili peri-tumorski moždani edem, sepsa, akutni ishemijski događaj srednje cerebralne arterije (MCA) (moždani udar), restenoza (npr., nakon angioplastike), sistemski lupus eritematozni nefritis, i opekotina. Ovde opisan vezujući protein kalikreina plazme takođe može da se koristi da pospeši zarastanje rana. Ovde opisan vezujući protein kalikreina plazme takođe može da se koristi kao onkološki tretman sa mehanizmima koji uključuju, ali nisu ograničeni na, blokiranje proizvodnju pro-angiogenog bradikinina.
[0620] Terapeutski efikasna količina vezujućeg proteina kalikreina plazme može se davati pacijentu koji ima ili je se sumnja da ima poremećaj u kom je aktivnost kalikreina plazme implicirana, čime se tretira (npr. poboljšava ili ublažava simptom ili osobina poremećaja, usporava, stabilizuje i/ili zaustavlja progresija bolesti) poremećaj.
[0621] Vezujući protein kalikreina plazme se može davati u terapeutski efikasnoj količini. Terapeutski efikasna količina vezujućeg proteina kalikreina plazme je količina koja je efikasna, primenom pojedinačne ili višestruke doze pacijentu, u lečenju pacijenta, npr. lečenje, ublažavanje, olakšanje ili poboljšanje barem jednog simptoma poremećaja u odnosu na stepen koji se očekuje u odsustvu takvog tretmana. Terapeutski efikasna količina sastava može se razlikovati u zavisnosti od faktora kao što su stanje bolesti, starost, pol i težina pojedinca, i sposobnost jedinjenja da izazove željeni odgovor kod pojedinca. Terapeutski efikasna količina je takođe ona u kojoj su svi toksični ili štetni efekti sastava nadmašeni terapeutski korisnim efektima. Terapeutski efikasno doziranje poželjno moduliše merljivi parametar, povoljno, u odnosu na netretirane pacijente. Sposobnost jedinjenja da utiče (na primer, inhibira) merljivi parametar može se proceniti u sistemu životinjskog modela koji predviđa efikasnost u poremećaju čoveka.
[0622] Dozni režimi se mogu prilagoditi kako bi se dobio optimalni željeni odgovor (npr., terapijski odgovor). Na primer, jedan bolus može biti primenjen, nekoliko podeljenih doza može da se primeni tokom vremena ili doza može biti srazmerno smanjena ili povećana, kao što nalažu potrebe terapeutske situacije. Posebno je pogodno formulisati parenteralne sastave u obliku dozne jedinice za lakšu primenu i uniformnost doziranja. Oblik dozne jedinice, kad se ovde koristi, odnosi se na fizički diskretne jedinice koje su pogodne za dozne jedinice za pacijente koji se tretiraju; gde svaka jedinica sadrži unapred određenu količinu aktivnog jedinjenja izračunatu da bi proizvela željeni terapeutski efekat u saradnji sa potrebnim farmaceutskim nosačem.
Reumatoidni artritis
[0623] Reumatoidni artritis (RA) je autoimuna, hronična upalna bolest koja uzrokuje otok i bol zglobova i obično rezultuje uništenjem zglobova. RA uglavnom prati povlačenje/povratak tok, sa „bljeskovima“ aktivnosti oboljenja prožimanih remisijom simptoma bolesti. RA je povezan sa nizom dodatnih upalnih poremećaja, uključujući Sjogrenov sindrom (suve oči i usta prouzrokovani upalom suznih i pljuvačnih žlezda), pleuritis (upala pleure koja uzrokuje bol prilikom dubokih udisaja i kašlja), reumatoidne nodule (nodularnih mesta upale koje se razvijaju u plućima), perikarditis (upala perikarda koji izaziva bol kada se leži ili naginje napred), Feltijev sindrom (splenomegalija i leukopenija primećena u kombinaciji sa RA, čineći pacijenta podložnog infekciji), i vaskulitis (upala krvnih sudova koja može blokirati protok krvi). Kalikrein plazme je umešan u reumatoidni artritis.
[0624] Simptomi aktivnog RA uključuju umor, nedostatak apetita, blago povišenu temperaturu, bolove u mišićima i zglobovima i krutost. Ukočenost mišića i zglobova je obično najznačajnija ujutro i nakon perioda neaktivnosti. Tokom bljeskova, zglobovi često postaju crveni, otečeni, bolni i nežni, uglavnom kao posledica sinovitisa.
[0625] Lečenje za reumatoidni artritis podrazumeva kombinaciju lekova, odmora, vežbi za jačanje zgloba i zaštitu zglobova. Dve klase lekova se koriste u lečenju reumatoidnog artritisa: protivupalni „lekovi prve linije“ i „antireumatski lekovi koji modifikuju bolesti“ (DMARD). Lekovi prve linije uključuju NSAIDS (npr., Aapirin, naproksen, ibuprofen i etodolak) i kortizon (kortikosteroidi). DMARD, kao što su zlato (npr. zlatne soli, zlatna tioglukoza, zlatni tiomalat, oralno zlato), metotreksat, sulfasalazin, D-penicilamin, azatioprin, ciklofosfamid, hlorambucil i ciklosporin, leflunomid, etanercept, infliksimab, anakinr i adalimumab i hidroksihlorokin, promovišu remisiju bolesti i sprečavaju progresivno uništavanje zgloba, ali nisu protivupalni agensi.
[0626] Obelodanjenje pruža postupke lečenja (npr. poboljšanje, stabilizovanje ili uklanjanje jednog ili više simptoma ili poboljšanje ili stabilizaciju rezultata pacijenta na RA skali) reumatoidnog artritisa davanjem vezujućeg proteina kalikreina plazme (npr., terapeutski efikasne količine vezujućeg proteina kalikreina plazme) pacijentu koji ima, ili se sumnja da ima RA. Pored toga, dati su postupci lečenja RA primenom vezujućeg proteina kalikreina plazme (npr. terapeutski efikasna količina vezujućeg proteina kalikreina plazme) u kombinaciji sa drugom terapijom, npr. sa najmanje jednim protivupalnim lekom prve linije (npr. NSAID i/ili kortizon) i/ili DMARD. Obelodanjenje takođe pruža postupke za prevenciju reumatoidnog artritisa ili njegovog simptoma primenom vezujućeg proteina kalikreina plazme (npr., profilaktički delotvorna količina vezujućeg proteina kalikreina plazme) pacijentu pod rizikom od razvoja RA (npr. pacijent koji ima člana porodice sa RA ili ima genetsku predispoziciju).
[0627] Dalje su navedeni postupci lečenja (npr. poboljšanje, stabilizacija ili uklanjanje jednog ili više simptoma) poremećaja povezanih sa reumatoidnim artritisom (Sjogrenov sindrom, pleuritis, plućni reumatoidni noduli, perikarditis, Feltijev sindrom i vaskulitis) davanjem vezujućeg proteina kalikreina plazme npr. terapeutski efikasna količina vezujućeg proteina kalikreina plazme) pacijentu koji ima, ili se sumnja da ima RA.
[0628] Skale korisne za procenu RA i simptoma RA uključuju, npr. skalu težine reumatoidnog artritisa (RASS; Bardwell i dr., (2002) Rheumatology 41(1):38-45), SF-36 zdravstveni indeks specifičan za artritis (ASHI; Ware i dr., (1999) Med. Care.37(5 Suppl):MS40-50), skalu za merenje uticaja artritisa ili skalu za merenje uticaja artritisa 2 (AIMS ili AIMS2; Meenan i dr. (1992) Arthritis Rheum.35(1):1-10); Stanfordski upitnik o zdravstvenoj proceni (HAQ), HAQII ili modifikovani HAQ (pogledati, na primer., Pincus i dr. (1983) Arthritis Rheum. 26(11):1346-53).
[0629] Smernice za određivanje doze koja daje terapeutski delotvornu količinu vezujućeg proteina kalikreina plazme mogu se dobiti od životinjskih modela reumatoidnog artritisa, kao što je artritis indukovan kolagenom (CIA), koji se indukuje, obično kod glodara, imunizacijom sa autologni ili heterologni kolagen tipa II u adjuvantu (Williams i dr. Methods Mol Med.98:207-16 (2004)).
Giht
[0630] Giht je stanje koje proizlazi iz taloženja kristala mokraćne kiseline u tkivima tela. Giht se karakteriše preopterećenjem mokraćne kiseline u organizmu i ponavljajućim napadima upale zgloba (artritis). Hronični giht može dovesti do depozita čvrstih ugrušaka mokraćne kiseline u i oko zglobova, smanjene funkcije bubrega i kamena u bubregu. Giht je često povezan sa nasleđenom abnormalnošću u sposobnosti tela za obradu mokraćne kiseline. Mokraćna kiselina je produkt razgradnje purina, koji su deo mnogih namirnica.
Abnormalnost u obradi mokraćne kiseline može uzrokovati napade bolnog artritisa (napad gihta), kamena u bubregu i blokiranja tubula za filtriranje bubrega sa kristalima mokraćne kiseline, što dovodi do otkazivanja bubrega. Neki pacijenti mogu razviti samo povećane nivoe mokraćne kiseline u krvi (hiperurikemija) bez problema sa artritisom ili bubrezima.
[0631] Simptomi protina uključuju, na primer, jak i neočekivani bol, otok, crvenilo, toplotu i krutost u pogođenom stopalu ili drugim delovima tela, i blagu groznicu.
[0632] Tretmani za giht uključuju, na primer, nesteroidne protivupalne lekove (NSAID), kolhicin i oralne glukokortikoide, intraartikularne glukokortikoide dati putem injekcije u zglobove, inhibitore ksantin oksidaze (npr. alopurinol, febuksostat), urikosurike (npr. probenecid, EDTA), urat oksidaze (npr. peglotikaza), natrijum bikarbonat i nisko purinsku ishranu.
[0633] Obelodanjenje pruža postupke lečenja (npr. poboljšanja, stabilizacije ili uklanjanja jednog ili više simptoma ili pogoršanja) gihta davanjem vezujućeg proteina kalikreina plazme (npr., terapeutski efikasne količine vezujućeg proteina kalikreina plazme) pacijentu koji ima ili se sumnja da ima giht. Pored toga, dati su postupci lečenja gihta primenom vezujućeg proteina kalikreina plazme (npr. terapeutski efikasne količine vezujućeg proteina kalikreina) u kombinaciji sa drugom terapijom, npr. NSAID, kolhicinom, oralnim glukokortikoidom, intraartikularnim glukokortikoidom datim preko injekcije u zglobove, inhibitor ksantin oksidaze (npr. alopurinol, febuksostat), urikosurni (npr. probenecid, EDTA), urat oksidaza (npr. pegloticaza), natrijum bikarbonat i/ili nisko purinska ishrana. Obelodanjenje takođe pruža postupke za prevenciju protina ili njegovog simptoma primenom vezujućeg proteina kalikreina plazme (npr., profilaktički efikasna količina vezujućeg proteina kalikreina plazme) pacijentu pod rizikom od nastanka gita (npr. pacijent koji ima člana porodice sa gihtom ili genetsku predispoziciju).
[0634] Smernice za određivanje doze koja daje terapeutski delotvornu količinu vezujućeg proteina kalikreina plazme mogu se dobiti od životinjskih modela gihta, pogledati, na primer, Reginato and Olsen, Curr Opin Rheumatol. 19(2): 134-45 (2007) i tamo navedenim referencama.
Upalna bolest creva (IBD)
[0635] Upalna bolest creva (IBD) je grupa upalnih stanja debelog creva i, u nekim slučajevima, tankog creva. Glavni oblici IBD su Kronova bolest i ulcerativni kolitis (UC). Prisutni u daleko manje slučajeva su drugi oblici IBD: kolagenski kolitis, limfocitni kolitis, ishemijski kolitis, diverzioni kolitis, Behčetov sindrom, infektivni kolitis i umereni kolitis. Glavna razlika između Kronove bolesti i UC su mesto i priroda upalnih promena. Kronova može uticati na bilo koji deo gastrointestinalnog trakta, od usta do anusa (preskače lezije), iako većina slučajeva počinje u terminalnom ileumu. Ulceratni kolitis, za razliku od toga, ograničen je na debelo crevo i rektum. Mikroskopski, ulcerativni kolitis je ograničen na mukozu (epitelna obloga creva), dok Kronova bolest utiče na ceo zid creva. Konačno, Kronova bolest i ulcerozni kolitis su prisutni sa ekstraintestinalnim manifestacijama (kao što su problemi sa jetrom, artritis, manifestacije kože i problemi sa očima) u različitim proporcijama.
[0636] Simptomi IBD uključuju bol u stomaku, povraćanje, dijareju, hematocheziju, gubitak telesne mase, povećanje telesne težine i razne povezane pritužbe ili bolesti (artritis, pioderma gangrenozum, primarni sklerozni holangitis). Dijagnoza je uglavnom kolonoskopija sa biopsijom patoloških lezija. Retko, definitivna dijagnoza niti Kronove bolesti ni ulcerativnog kolitisa ne može se napraviti zbog idiosinkreza u pojavi. U ovom slučaju može se napraviti dijagnoza umerenog kolitisa.
[0637] Lečenje IBD, u zavisnosti od nivoa ozbiljnosti, može zahtevati imunosupresiju za kontrolu simptoma. Mogu se koristiti imunosupresivi kao što su azatioprin, metotreksat ili 6-merkaptopurin. Obično, lečenje IBD zahteva oblik mesalamina. Često se steroidi koriste za kontrolu bljeskova oboljenja i nekad su prihvatljivi kao lek za održavanje. Biologici, kao što je infliksimab, koriste se za lečenje bolesnika sa Kronovom bolešću ili ulcerativnim kolitisom. Za teške slučajeve može se zahtevati operacija, kao što je resekcija creva, strikturaplastija ili privremena ili trajna kolostomija ili ileostomija. Tretmani alternativne medicine za IBD postoje u različitim oblicima, međutim, takve postupci se koncentrišu na kontrolu osnovne patologije kako bi se izbegla produžena izloženost steroidima ili hirurška intervencija. Obično se tretman započinje primenom lekova, kao što je prednizon, sa visokim protivupalnim uticajem. Kada se upala uspešno kontroliše, pacijent se obično prebacuje na lakši lek, kao što je asakol - mesalamin - kako bi bolest se bolest zadržala u remisiji. Ako je neuspešno, kombinacija pomenutih imunosupresivnih lekova sa mesalaminom (koji može imati i protivupalni efekat) može ali ne mora biti primenjena, u zavisnosti od pacijenta.
[0638] Obelodanjenje pruža postupke lečenja (npr. poboljšanje, stabilizaciju ili uklanjanje jednog ili više simptoma) IBD primenom vezujućeg proteina kalikreina plazme (npr. terapeutski efikasne količine vezujućeg proteina kalikreina plazme) pacijentu koji ima ili se sumnja da će imati IBD. Pored toga, dati su postupci za lečenje IBD primenom vezujućeg proteina kalikreina plazme (npr. terapeutski efikasne količine vezujućeg proteina kalikreina) u kombinaciji sa drugom terapijom, npr. imunosupresiv (npr. azatioprin, metotreksat, 6-merkaptopurin), mesalamin, steroid i/ili infliksimab. Obelodanjenje takođe sadrži postupke za prevenciju IBD ili njenih simptoma davanjem vezujućeg proteina kalikreina plazme (npr., profilaktički efikasna količina vezujućeg proteina kalikreina plazme) pacijentu sa rizikom od razvoja IBD (npr. pacijent koji ima člana porodice sa IBD ili ima genetsku predispoziciju).
[0639] Smernice za određivanje doze koja daje terapeutski efikasnu količinu vezujućeg proteina u kalikrein plazme mogu se dobiti od životinjskih modela IBD, pogledati, na primer, one opisane u U.S. Pat. br.6,114,382, WO 2004/071186, i tamo navedenim referencama.
Oralni mukozitis
[0640] Oralni mukozitis je bolna upala i ulceracija mukoznih membrana u ustima, obično kao negativni efekat hemoterapije i radioterapije kancera.
[0641] Simptomi oralnog mukozitisa uključuju, npr., čireve, periferne eriteme, goruću senzaciju praćenu crvenilom, probleme sa govorom, uzimanjem hrane ili čak otvaranjem usta i disgeuzija (promena percepcije ukusa).
[0642] Tretman za oralni mukozitis obuhvata oralnu higijenu (slano ispiranje usta, GELCLAIR®, CAPHOSOL®, MUGARD®), palifermin (ljudski faktor rasta keratinocita), citokini i drugi modifikatori upale (npr. IL-1, IL-11, TGF-beta3), suplementacija aminokiselina (npr. glutamin), vitamini, faktori koji stimulišu kolonije, krioterapija i laserska terapija.
[0643] Obelodanjenje pruža postupke lečenja (npr. poboljšanje, smanjenje ili uklanjanje jednog ili više simptoma ili stabilizaciju rezultata pacijenta na skali mukozitisa) oralnog mukozitisa putem primene vezujućeg proteina kalikreina plazme (npr. terapeutski efikasne količine vezujućeg proteina kalikreina plazme) pacijentu koji ima ili se sumnja da ima oralni mukozitis. Pored toga, dati su postupci lečenja oralnog mukozitisa primenom vezujućeg proteina kalikreina plazme (npr. terapeutski efikasne količine vezujućeg proteina kalikreina plazme) u kombinaciji sa drugom terapijom, npr. oralna higijena (slano ispiranje usta, GELCLAIR®, CAPHOSOL®, MUGARD®), palifermin (ljudski faktor rasta keratinocita), citokini i drugi modifikatori upale (npr. IL-1, IL-11, TGF-beta3), suplementacija aminokiselina (npr. glutamin), vitamini, faktori koji stimulišu kolonije, krioterapija i laserska terapija. Obelodanjenje takođe sadrži postupke za prevenciju oralnog mukozitisa ili njegovog simptoma primenom vezujućeg proteina kalikreina plazme (npr., profilaktički delotvorne količine vezujućeg proteina kalikreina plazme) pacijentu sa rizikom od razvoja oralnog mukozitisa (npr. pacijent koji je podvrgnuti hemoterapiji ili radioterapiji).
[0644] Skale korisne za procenu oralnog mukozitisa uključuju rezultat Oralne toksičnosti Svetske zdravstvene organizacije (WHO) (Handbook for reporting results of cancer treatment. Geneva, Switzerland: World Health Organization; 1979:15-22), uobičajeni kriterijumi toksičnost od National Cancer Institute (NCI-CTC) za oralni mukozitis (National Cancer Institute Common Toxicity Criteria. Version 2.0, June 1, 1999, Sonis i dr., Cancer.
85:2103-2113 (1999)), i skala procene oralnog mukozitisa (OMAS).
[0645] Smernice za određivanje doza koje isporučuju terapeutski delotvornu količinu vezujućeg proteina kalikreina plazme mogu se dobiti od životinjskih modela oralnog mukozitisa, kao što je životinjski model oralnog mukozitisa indukovan kondicioniranjem režima transplantacije hematopoetskih matičnih ćelija (Chen i dr., Zhonghua Kou Qiang Yi Xue Za Zhi.42(11):672-6 (2007)).
Neuropatski bol
[0646] Neuropatski bol je složeno hronično bolno stanje koje obično prati povreda tkiva. Sa neuropatskim bolom, nervna vlakna mogu biti oštećena, nefunkcionalna ili povređena. Ova oštećena nervna vlakna šalju netačne signale drugim centrima za bol. Uticaj povreda nervnih vlakana uključuje promenu funkcije nerva na mestu povrede i područja oko povrede.
[0647] Simptomi neuropatskog bola uključuju, na primer, pucajući i gorući bol, treperenje i utrnulost.
[0648] Tretmani za neuropatski bol uključuju npr. lekove (npr. ne-steroidni protivupalni lekovi (NSAID) (npr. ALEVE®, MOTRIN® ili morfin), antikonvulzant i antidepresive) i invazivne ili implantabilne uređaje (npr. električna stimulacija).
[0649] Obelodanjenje pruža postupke lečenja (npr. poboljšanje, smanjenje ili uklanjanje jednog ili više simptoma ili stabilizaciju rezultata pacijenta na skali bola) neuropatskog bol uz primenu vezujućeg proteina kalikreina plazme (npr., terapeutski efikasna količina vezujućeg proteina kalikreina plazme) pacijentu koji ima ili se sumnja da će imati neuropatski bol. Pored toga, dati su postupci za lečenje neuropatskog bola primenom vezujućeg proteina kalikreina plazme (npr., terapeutski efikasne količine vezujućeg proteina kalikreina plazme) u kombinaciji sa drugom terapijom, npr. nehirurški tretman ((npr., ne-steroidni protivupalni lekovi (NSAID) (npr. ALEVE®, MOTRIN® ili morfin), antikonvulzant i antidepresive) i invazivne ili implantabilne uređaje (npr. električna stimulacija). sprečavanja neuropatskog bola ili njegovog simptoma primenom vezujućeg proteina kalikreina plazme (npr., profilaktički efikasne količine vezujućeg proteina kalikreina plazme) pacijentu pod rizikom od razvoja neuropatskog bola (npr. pacijent koji je doživeo povrede tkiva).
[0650] Skale korisne za procenu neuropatskog bola uključuju npr. Vong-Bejker FACES skalu icenjivanja bola (Wong-Baker FACES Pain Rating Scale Foundation), vizuelnu analognu skalu (VAS) (Huskisson, J. Rheumatol. 9 (5): 768-9 (1982)), (MPQ) (Melzack, Pain 1 (3): 277–99 (1975)), Opisna diferencijalna skala (DDS) (Gracely i Kwilosz, Pain 35 (3): 279–88 (1988)), Skala bola lica – revidirana (FPS-R) (Hicks i dr., Pain 93 (2): 173–83 (2001)), Kutija sa 11 numeričkih tačaka (BS-11) (Jensen i dr., Clin J Pain 5 (2): 153–9 (1989)), Skala numeričkog ocenjivanja (NRS-11) (Hartrick i dr., Pain Pract 3 (4): 310–6 (2003)), Dolorimeterski indeks bola (DPI) (Hardy i dr., (1952). Bolne senzacije i reakcije. Baltimore: The Williams & Wilkins Co.), i Kratak pregled bola (BPI) (Cleeland and Ryan Ann. Acad. Med. Singap.23 (2): 129–38 (1994)).
[0651] Smernice za određivanje doze koja daje terapeutski efikasnu količinu vezujućeg proteina kalikreina plazme mogu se dobiti od životinjskih modela neuropatskog bola, pogledati, npr., one koje su opisane kod Martin i dr., Methods Mol Med.84:233-42 (2003) i tamo navedenim referencama.
Upalni bol
[0652] Upalni bol je izazvana povredom kao što su penetracione rane, opekotine, ekstremna promzlina, prelomi, artritis, autoimuna stanja, prekomerno istezanje, infekcije i vazokonstrikcija na integritet tkiva na ćelijskom nivou. Tokom upale složena neuroimuna interakcija rezultuje primarnom hiperalgezijom, u kojoj veliki spektar upalnih molekula, uključujući prostaglandine i bradikinin, indukuje i održava izmenjenu osetljivost nociceptora.
[0653] Tretmani za upalni bol uključuju, na primer, nesteroidne protivupalne lekove (NSAID) i kortikosteroide.
[0654] Obelodanjenje pruža postupke lečenja (npr. poboljšanje, smanjenje ili uklanjanje jednog ili više simptoma) upalnog bola primenom vezujućeg proteina kalikreina plazme (npr. terapeutski efikasne količine vezujućeg proteina kalikreina plazme) pacijentu koji ima ili se sumnja da ima upalni bol. Pored toga, dati su postupci za lečenje upalnog bola primenom vezujućeg proteina kalikreina plazme (npr. terapeutski efikasne količine vezujućeg proteina kalikreina plazme) u kombinaciji sa drugom terapijom, npr. nesteroidnim protivupalnim lekovima (NSAIL) i/ili kortikosteroidom. Obelodanjenje takođe pruža postupke za prevenciju upalnog bola ili njegovog simptoma davanjem vezujućeg proteina kalikreina plazme (npr., profilaktički efikasna količina vezujućeg proteina kalikreina plazme) pacijentu pod rizikom od nastanka upalnog bola (npr. pacijent koji je doživeo povredu, npr. penetracione rane, opekotine, ekstremna promzlina, prelomi, artritis, autoimuna stanja, prekomerno istezanje, infekcije).
[0655] Skale korisne za procenu upalnog bola uključuju npr. Vong-Bejker FACES skalu icenjivanja bola (Wong-Baker FACES Pain Rating Scale Foundation), vizuelnu analognu skalu (VAS) (Huskisson, J. Rheumatol. 9 (5): 768-9 (1982)), (MPQ) (Melzack, Pain 1 (3): 277-99 (1975)), Opisna diferencijalna skala (DDS) (Gracely i Kwilosz, Pain 35 (3): 279-88 (1988)), Skala bola lica – revidirana (FPS-R) (Hicks i dr., Pain 93 (2): 173-83 (2001)), Kutija sa 11 numeričkih tačaka (BS-11) (Jensen i dr., Clin J Pain 5 (2): 153-9 (1989)), Skala numeričkog ocenjivanja (NRS-11) (Hartrick i dr., Pain Pract 3 (4): 310-6 (2003)), Dolorimeterski indeks bola (DPI) (Hardy i dr., (1952). Bolne senzacije i reakcije. Baltimore: The Williams & Wilkins Co.), i Kratak pregled bola (BPI) (Cleeland and Ryan Ann. Acad. Med. Singap.23 (2): 129-38 (1994)).
[0656] Smernice za određivanje doza koje isporučuju terapeutski delotvornu količinu vezujućeg proteina kalikreina plazme može se dobiti od životinjskih modela upalnog bola, kao što je životni model hroničnog upalnog bola (Wilson i dr., Eur J Pain.10(6):537-49 (2006)) i upalni model bola i hiperalgezije (Ren i Dubner, ILAR J.40(3):111-118 (1999)).
Spinalna stenoza
[0657] Spinalna stenoza je zdravstveno stanje u kom se spinalni kanal sužava i kompresuje kičmenu moždinu i živce. Ovo se obično javlja zbog uobičajene pojave degeneracije kičme koja se javlja sa starenjem. Može ponekad biti uzrokovan herniacijom kičmenih diskova, osteoporozom ili tumorom. Spinalna stenoza može uticati na vratnu, grudnu ili lumbalnu kičmu. U nekim slučajevima može biti prisutna na sva tri mesta kod istog pacijenta.
[0658] Simptomi kičmene stenoze uključuju, na primer, bol ili grčeve u nogama, gorući bol u leđima i kuku, bol u vratu i ramenima, gubitak ravnoteže i gubitak funkcije creva ili bešike (cauda ekvina sindrom).
[0659] Tretmani za kičmenu stenozu uključuju, npr., nehirurške tretmane (npr. fizikalna terapija, nesteroidni protivupalni lekovi (NSAID) (npr. aspirin, ibuprofen i indometacin), analgetike (npr. acetaminofen), hondroitin sulfat, glukozamin, odmor ili ograničena aktivnost, kičmena proteza ili korset, epiduralna injekcija steroida (npr. kortikosteroid)) i operacije (npr. dekompresivna laminektomija, laminotomija i fuzija).
[0660] Obelodanjenje pruža postupke lečenja (npr. poboljšanje, smanjenje ili uklanjanje jednog ili više simptoma) spinalne stenoze davanjem vezujućeg proteina kalikreina plazme (npr. terapeutski efikasne količine vezujućeg proteina kalikreina plazme) pacijentu koji ima ili se sumnja da ima spinalnu stenozu. Pored toga, dati su postupci lečenja spinalne stenoze davanjem vezujućeg proteina kalikreina plazme (npr. terapeutski efikasne količine vezujućeg proteina kalikreina plazme) u kombinaciji sa drugom terapijom, npr. nehirurški tretman (npr. fizikalna terapija i/ili (NSAID) (npr. aspirin, ibuprofen ili indometacin), analgetici (npr. acetaminofen), hondroitin sulfat, glukozamin, odmor ili ograničena aktivnost, kičmena proteza ili korset, epiduralna injekcija steroida (npr. kortikosteroid) i/ili operacija (npr. dekompresivna laminektomija, laminotomija i/ili fuzija). Otkriće takođe pruža postupke sprečavanja spinalne stenoze ili njenog simptoma primenom vezujućeg proteina kalikreina plazme (npr., profilaktički efikasna količina vezujućeg proteina kalikreina plazme) pacijentu pod rizikom od nastanka spinalne stenoze (npr. pacijent koji ima degeneraciju kičme).
[0661] Smernice za određivanje doze koja daje terapeutski efikasnu količinu vezujućeg proteina kalikreina plazme mogu se dobiti od životinjskih modela spinalne stenoze, kao što je model lumbalne spinalne stenoze (Sekiguchi i dr., Spine 29, 1105–1111 (2004)).
Arterijska i venska tromboza
[0662] Arterijska tromboza je formiranje tromba unutar arterije. U većini slučajeva, arterijska tromboza prati rupturu ateroma, i zbog toga se naziva aterotromboza.
[0663] Arterijska tromboza je povezana sa nizom poremećaja, uključujući moždani udar i infarkt miokarda. U trombotičnom udaru, tromb (krvni ugrušak) se obično formira oko aterosklerotičnih plaka. Pošto je blokada arterije postepena, početak simptomatskih trombotičkih poteza je sporiji. Trombozni moždani udar može se podeliti u dve kategorije -bolest velikih krvnih sudova i bolest malih krvnih sudova. Prva utiče na sudove kao što su unutrašnji karotidi, kičmeni i Vilisov krug. Drugo može uticati na manje sudove kao što su grane Vilisovog kruga. Infarkt miokarda (MI) je uzrokovan infarktom (smrt tkiva zbog ishemije), često zbog opstrukcije koronarne arterije trombom. MI može brzo postati fatalan ako hitno lečenje nije hitno pruženo.
[0664] Venska tromboza je krvni ugrušak koji se formira unutar vene. Ako se deo krvnog ugruška koji se formira u veni razbije, može se transportovati na desnu stranu srca, i odatle u pluća. Jedan komad tromba koji se transportuje na ovaj način je embolija i proces formiranja tromba koji postaje embolija naziva se tromboembolizmom. Embolizam koji se nalazi u plućima je plućna embolija (PE). Plućna embolija je veoma ozbiljno stanje koje može biti fatalno ako se ne prepozna i odmah leči.
[0665] Površne venske tromboze mogu izazvati neugodnost, ali obično ne izazivaju ozbiljne posledice, za razliku od dubokih venskih tromboza (DVT) koje se formiraju u dubokim venama nogu ili u karličnim venama. Sistemske embolije venskog porekla mogu se javiti kod pacijenata sa atrijalnim ili ventrikularnim septalnim defektom, preko kojih embolija može doći u arterijski sistem. Ovakav događaj se naziva paradoksalnom embolijom.
[0666] Prevenciju arterijske i/ili venske tromboze obuhvata lekove (npr. antikoagulante (npr., heparin), aspirin i vitamin E) i mehaničke postupke (npr. mehaničke pumpe za noge (pneumatske kompresione čarape)).
[0667] Obelodanjenje pruža postupke lečenja (npr. poboljšanje, redukovanje ili uklanjanje jednog ili više simptoma) arterijske i/ili venske tromboze davanjem vezujućeg proteina kalikreina plazme (npr. terapeutski efikasne količine vezujućeg proteina kalikreina plazme) na pacijent koji ima ili se sumnja da ima arterijsku i/ili vensku trombozu. Pored toga, dati su postupci za lečenje arterijske i/ili venske tromboze primenom vezujućeg proteina kalikreina plazme (npr. terapeutski efikasne količine vezujućeg proteina kalikreina plazme) u kombinaciji sa drugom terapijom, npr. antikoagulanti (npr., heparin), aspirin i vitamin E) i mehanički postupci (npr. mehaničke pumpe za noge (pneumatske kompresione čarape)). Obelodanjenje takođe pruža postupke za prevenciju arterijske i/ili venske tromboze ili njihovog simptoma primenom vezujućeg proteina kalikreina plazme (npr., profilaktički efikasna količina vezujućeg proteina kalikreina plazme) pacijentu sa rizikom od razvoja arterijske i/ili venske tromboze (npr. pacijent koji je doživeo moždani udar ili infarkt miokarda).
[0668] Smernice za određivanje doze koja daje terapeutski delotvornu količinu vezujućeg proteina kalikreina plazme mogu se dobiti od životinjskih modela arterijske ili venske tromboze, kao što je dvostruki model arterijske tromboze (Gomez-Jorge i dr., J. Vasc. Inter. Rad. 9(4): 633-638 (1998), model venske tromboze kod pacova sa niskim protokom krvi u venama (Fredrich i dr., Blood Coagul Fibrinolysis.5(2):243-8 (1994)), i pseći model za vensku trombozu i spontanu plućnu emboliju (Frisbiel, Spinal Cord 43, 635–639 (2005)).
Postoperativni ileus
[0669] Postoperativni ileus je privremena paraliza dela creva obično posle abdominalne operacije. Postoperativni ileus najčešće se javlja 24 do 72 sata posle operacije abdomena.
[0670] Simptomi postoperativnog ileusa uključuju, na primer, umerenu i difuznu abdominalnu nelagodnost, zatvor, abdominalnu distenziju, mučninu ili povraćanje, nedostatak pokreta creva i/ili nadutost, i prekomerno podrigivanje.
[0671] Tretmani za postoperativni ileus uključuju npr. nil per os (NPO ili „Ništa od usta“) dok se ne čuje peristaltični zvuk iz auskultacije područja u kom se nalazi ovaj deo, nasogastrično usisavanje, parenteralna hrana i lek (npr. laktuloza i eritromicin).
[0672] Obelodanjenje pruža postupke lečenja (npr. poboljšanje, redukovanje ili uklanjanje jednog ili više simptoma) postoperativnog ileusa davanjem vezujućeg proteina kalikreina plazme (npr. terapeutski efikasne količine vezujućeg proteina kalikreina plazme) pacijentu koji ima ili se sumnja da ima postoperativni ileus. Pored toga, dati su postupci lečenja postoperativnog ileusa primenom vezujućeg proteina kalikreina plazme (npr. terapeutski efikasne količine vezujućeg proteina kalikreina plazme) u kombinaciji sa drugom terapijom, npr. nil per os, nasogastrično usisavanje, parenteralna hrana i/ili lek (npr. laktuloza i/ili eritromicin). Obelodanjenje takođe pruža postupke sprečavanja postoperativnog ileusa ili njegovog simptoma primenom vezujućeg proteina kalikreina plazme (npr. profilaktički efikasna količina vezujućeg proteina kalikreina plazme) pacijentu pod rizikom od razvoja postoperativnog ileusa (npr. pacijent koji je imao abdominalnu operaciju).
[0673] Smernice za određivanje doze koja daje terapeutski efikasnu količinu vezujućeg proteina kalikreina plazme mogu se dobiti od životinjskih modela postoperativnog ileusa, kao što je model za ispitivanje postoperativnog ileusa sa transduktorima za merenje kod budnih pacova (Huge i dr. J Surg Res. 74(2):112-8 (1998)).
Aneurizma aorte
[0674] Aneurizma aorte je opšti termin za bilo kakvo oticanje (dilatacija ili aneurizma) aorte, koje obično predstavlja osnovnu slabost u zidu aorte na toj lokaciji. Vrste aneurizma aorte uključuju aneurizmu aortnog korena, aneurizmu grudne aorte, aneurizmu abdominalne aorte i anaerizmu torakabdominalne aorte.
[0675] Većina netaknutih aneurizmi aorte ne proizvodi simptome. Kako se oni uvećavaju, simptomi aneurizme aorte uključuju, na primer, anksioznost ili osećaj stresa, mučninu ili povraćanje, lepljivu koža, brze otkucaj srca, bol u stomaku, bolove u leđima, bol ili utrnutost u nogama, nodosum eritema (lezija u nogama tipično blizu područja zglobova) i grub glas jer je levi rekurentni laringealni nerv koji se proteže oko luka aorte rastegnut. Jednom kada aneurizma pukne, ona može izazvati jak bol i masivno unutrašnje krvarenje, i fatalna je u odsustvu brzog lečenja.
[0676] Tretmani za aneurizmu aorte uključuju, npr., lekove, hirurško lečenje i endovaskularni tretman. Manje aneurizme koje nisu izložene visokom riziku pucanja mogu se tretirati lekovima za lečenje visokog krvnog pritiska, kao što su beta-blokatori; ili doksiciklin za inhibiciju matrične metaloproteinaze-9. Hirurško lečenje obično podrazumeva otvaranje dilatiranog dela aorte i umetanje sintetičke (Dacron ili Gore-tex) cevi za zatvaranje.
Endovaskularni tretman, kao minimalno invazivna alternativa otvorenoj operaciji, podrazumeva postavljanje endovaskularnog stenta putem perkutane tehnike (obično preko femoralnih arterija) u obolelom delu aorte.
[0677] Obelodanjenje pruža postupke lečenja (npr. stabilizacija, smanjenje ili uklanjanje jednog ili više simptoma) aneurizme aorte davanjem vezujućeg proteina kalikreina plazme (npr. terapeutski efikasne količine vezujućeg proteina kalikreina plazme) pacijentu koji ima ili se sumnja da ima aneurizmu aorte. Dodatno su dati postupci za lečenje aneurizme aorte primenom vezujućeg proteina kalikreina plazme (npr. terapeutski efikasne količine vezujućeg proteina kalikreina plazme) u kombinaciji sa drugom terapijom, npr. lek (npr. lek za lečenje visokog krvnog pritiska (npr. beta-blokator) ili doksiciklin), operacija i/ili endovaskularni tretman. Obelodanjenje takođe pruža postupke za prevenciju aneurizme aorte ili njenog simptoma davanjem vezujućeg proteina kalikreina plazme (npr., profilaktički efikasna količina vezujućeg proteina kalikreina plazme) pacijentu pod rizikom od razvoja aneurizme aorte (npr. pacijent koji je visok krvni pritisak).
[0678] Smernice za određivanje doze koja daje terapeutski efikasnu količinu vezujućeg proteina kalikreina plazme mogu se dobiti iz životinjskog modela aneurizme aorte, npr. modela aneurizme abdominalne aorte pacova koristeći kombinaciju intraluminalne elastazne infuzije i ekstraluminalne izloženosti kalcijum hloridu (Tanaka i dr. J Vasc Surg. 50(6):1423-32 (2009)).
Osteoartritis
[0679] Osteoartritis, poznat i kao degenerativni artritis, karakteriše probijanje i eventualni gubitak hrskavice jednog ili više zglobova. Osteoartritis se javlja kada se hrskavica koja se nalazi na krajevima kostiju u zglobovima vremenom pogoršava. Glatka površina hrskavice postaje gruba, uzrokujući iritaciju. Ukoliko se hrskavica potpuno istroši, krajevi kostiju će biti oštećeni. Osteoartritis obično utiče na ruke, stopala, kičmu i velike zglobove koji nose težinu, kao što su kukovi i kolena.
[0680] Simptomi osteoartritisa uključuju, na primer, bol, osetljivost, krutost, gubitak fleksibilnosti, škriputav osećaj i okoštavanje.
[0681] Tretmani za osteoartritis uključuju, na primer, konzervativne mere (npr. odmor, smanjenje težine, fizička i radna terapija) i lekove (npr. acetaminofen, kreme za olakšanje bolova nanete na kožu preko zglobova (npr. kapsaicin, salicin, metil salicilat, i mentol), nesteroidni protivupalni lekovi (NSAID) (npr. aspirin, ibuprofen, nabumeton i naproksen) i inhibitori Cox-2.
[0682] Obelodanjenje pruža postupke lečenja (npr. stabilizaciju, smanjenje ili uklanjanje jednog ili više simptoma ili stabilizaciju rezultata pacijenta na skali osteoartritisa) osteoartritisa primenom vezujućeg proteina kalikreina plazme (npr. terapeutski efikasne količine vezujućeg proteina kalikreina plazme) pacijentu koji ima ili se sumnja da će imati osteoartritis. Pored toga, dati su i postupci lečenja osteoartrita primenom vezujućeg proteina kalikreina plazme (npr. terapeutski efikasne količine vezujućeg proteina kalikreina plazme) u kombinaciji sa drugom terapijom, npr. konzervativne mere (npr. odmor, smanjenje težine, fizička i radna terapija) i lekove (npr. acetaminofen, kreme za olakšanje bolova nanete na kožu preko zglobova (npr. kapsaicin, salicin, metil salicilat, i mentol), nesteroidni protivupalni lekovi (NSAID) (npr. aspirin, ibuprofen, nabumeton i naproksen) i inhibitori Cox-2. Obelodanjenje takođe pruža postupke za prevenciju osteoartritisa ili njegovog simptoma davanjem vezujućeg proteina kalikreina plazme (npr., profilaktički efikasna količina vezujućeg proteina kalikreina plazme) pacijentu sa rizikom od razvoja osteoartritisa (npr. pacijent koji je imao povredu zgloba).
[0683] Skale korisne za procenu osteoartritisa uključuju, npr., Rezultat povrede kolena i osteartritisa (KOOS; Roos i dr. (1998) J. Orthop. Sports Phys. Ther.28(2):88-96), Indeks osteoartritisa Western Ontario i McMaster Univerziteta (WOMAC; Roos i dr. (2003) Health Qual. Life Outcomes 1(1):17), i 36-člani kratki oblik opšte zdravstvene skale (SF-36 GHS), kao i drugi alati za procenu poznati u struci.
[0684] Smernice za određivanje doze koja isporučuje terapeutski efikasnu količinu vezujućeg proteina kalikreina plazme mogu se dobiti iz životinjskog modela osteoartritisa, npr. ubrizgavanje mono-jodoacetata (MIA) u femorotibijalni zglob glodara koji promoviše gubitak zgloba hrskavica sličan onom koji je primećena kod osteoartritisa kod ljudi (Guzman i dr. Toxicol Pathol.31(6):619-24 (2003)), i transekcija prednjeg kružnog ligamenta (ACL) kod pasa za indukciju osteoartritisa (Fife and Brandt J Clin Invest. 84(5): 1432–1439 (1989)).
Vaskulitis
[0685] Vaskulitis se odnosi na heterogenu grupu poremećaja koji se karakteriše upalnim uništavanjem krvnih sudova. I arterije i vene mogu biti pogođene. Limfangitis se ponekad smatra vrstom vaskulitisa. Vaskulitis je prvenstveno zbog migracije leukocita i nastalog oštećenja. Vaskulitis se može klasifikovati prema osnovnom uzroku, mestu pogođenih sudova ili vrsti ili veličini krvnih sudova. Vaskulitis je povezan sa brojnim dodatnim poremećajima i uslovima, npr. Kavasaki bolest, Behčetova bolest, poliarteritis nodoza, Vegenerova granulomatoza, krioglobulinemija, Takajasuov arteritis, Čurg-Štrausov sindrom, arteritis džinovskih ćelijska (temporalni arteritis), Henok-Šonlajnn purpura, reumatske bolesti (npr. reumatoidni artritis i sistemski eritematozni lupus), rak (npr. limfomi), infekcije (npr. hepatitis C), izloženost hemikalijama i lekovima i drogama (npr. amfetamini, kokain i antraksne vakcine koji sadrže antraks zaštitni antigen kao primarni sastojak).
[0686] Simptomi vaskulitisa uključuju npr. groznicu, gubitak telesne težine, palpabilnu purpuru, livedo retikularis, mijalgiju ili miozitis, artralgiju ili artritis, mononuritis multipleks, glavobolju, moždani udar, tinitus, smanjenu vizuelnu oštrinu, akutni gubitak vida, infarkt miokarda, hipertenziju, gangrenu, krvarenje nosa, krvavi kašalj, infiltrate pluća, bol u stomaku, krvavu stolicu, perforacije i glomerulonefritis.
[0687] Tretmani za vaskulitis uključuju npr. lekove povezane sa kortizonom (npr., prednizon) i lekove za imuno supresiju (npr., ciklofosfamid).
[0688] Obelodanjenje pruža postupke lečenja (npr. stabilizaciju, smanjenje ili uklanjanje jednog ili više simptoma ili stabilizaciju rezultata pacijenta na skali vaskulitisa) vaskulitisa primenom vezujućeg proteina kalikreina plazme (npr. terapeutski efikasne količine vezujućeg proteina kalikreina plazme) pacijentu koji ima ili se sumnja da će imati vaskulitis. Pored toga, dati su postupci lečenja vaskulitisa primenom vezujućeg proteina kalikreina plazme (npr. terapeutski efikasne količine vezujućeg proteina kalikreina plazme) u kombinaciji sa drugom terapijom (npr. lekovi povezani sa kortizonom (npr., prednizon) i lekovi za imuno supresiju (npr., ciklofosfamid)). Obelodanjenje takođe pruža postupke za prevenciju vaskulitisa ili njegovog simptoma primenom vezujućeg proteina kalikreina plazme (npr., profilaktički delotvorna količina vezujućeg proteina kalikreina plazme) pacijentu pod rizikom od nastanka vaskulitisa (npr. pacijent koji je imao Kavasaki bolest, Behčetova bolest, poliarteritis nodoza, Vegenerova granulomatoza, krioglobulinemija ili Takajasov artritis i tako dalje).
[0689] Obelodanjenje takođe pruža postupke lečenja (npr. stabilizaciju, smanjenje ili uklanjanje jednog ili više simptoma ili stabilizaciju rezultata pacijenta na skali vaskulitisa) vaskulitisa povezanog sa sistemskim eritemozom lupusa davanjem vezujućeg proteina kalikreina plazme (npr., terapeutski efikasna količina vezujućeg proteina kalikreina plazme) pacijentu koji ima ili se sumnja da ima vaskulitis povezan sa sistemskom eritematozom lupusa. Pored toga, dati su postupci lečenja vaskulitisa koji su povezani sa sistemskom eritematozom lupusa davanjem vezujućeg proteina kalikreina plazme (npr. terapeutski efikasne količine vezujućeg proteina kalikreina plazme) u kombinaciji sa drugom terapijom, npr. lekovi povezani sa kortizonom (npr., prednizon) i lekovi za imuno supresiju (npr., ciklofosfamid).
[0690] Dalje su navedeni postupci lečenja (npr. poboljšanje, stabilizacija ili uklanjanje jednog ili više simptoma) poremećaja povezanih sa vaskulitisom (Kavasaki bolest, Behčetova bolest, poliarteritis nodoza, Vegenerova granulomatoza, krioglobulinemija, Takajasov arteritis, Čurg-Štrausov sindrom, arteritis džinovskih ćelijska (temporalni arteritis), Henok-Šonlajnn purpura, reumatske bolesti (npr. reumatoidni artritis i sistemski eritematozni lupus), rak (npr. limfomi), infekcije (npr. hepatitis C), izloženost hemikalijama i lekovima i drogama (npr. amfetamini, kokain i antraksne vakcine koji sadrže antraks zaštitni antigen kao primarni sastojak) davanjem vezujućeg proteina kalikreina plazme (npr., terapeutski efikasne količine vezujućeg proteina kalikreina plazme) pacijentu koji ima ili se sumnja da će imati poremećaj povezan sa vaskulitisom. Obelodanjenje takođe nudi postupke za prevenciju poremećaja povezanog sa vaskulitisom ili njegovog simptoma davanjem vezujućeg proteina kalikreina plazme (npr., profilaktički efikasna količina vezujućeg proteina kalikreina plazme) pacijentu kod kog postoji rizik od razvoja poremećaja povezanog sa vaskulitisom.
[0691] Skale korisne za procenu osteoartritisa uključuju, npr., Birmingem rezultat aktivnosti vaskulitisa (BVAS) verzija 3 (Mukhtyar i dr. Ann Rheum Dis.68(12): 1827-32 (2009)), kao i druge alate za procenu poznate u struci.
[0692] Smernice za određivanje doze koja daje terapeutski delotvornu količinu vezujućeg proteina kalikreina plazme može se dobiti iz životinjskog modela vaskulitisa, pogledati, na primer, one opisane u Katz i dr., Clin Rev Allergy Immunol.35(1-2):11-8 (2008) i tamo navedenim referencama.
Povreda glave
[0693] Povreda glave se odnosi na povredu glave, koja može ali ne mora uključiti povredu mozga. Vrste povreda glave uključuju potres mozga, epiduralni hematom, subduralni hematom, cerebralnu kontuziju i difuznu aksonijalnu povredu.
[0694] Simptomi povreda glave uključuju npr. komu, zbunjenost, pospanost, promenu ličnosti, napade, mučninu i povraćanje, glavobolju i lucidne intervale, tokom kojih pacijent deluje svesno, ali se kasnije pogorša, curenje cerebrospinalne tečnosti, vidljive deformacije ili depresije u glavi ili licu, oko koje se ne može pomeriti ili je oštećeno sa jedne strane može ukazati na to da slomljena kost na licu pritiska nerv koji kontroliše oštre mišiće, rane ili modrice na skalpu ili licu, frakture bazilarne lobanje, subkutano krvarenje nad mastoidom, hemotimpanum, rinoreja cerebrospinalne tečnosti i otorea.
[0695] Tretmani za povredu glave uključuju, npr., kontrolu povišenog intrakranijalnog pritiska (npr. sedacija, paralitika, preusmeravanje cerebrospinalne tečnosti), dekompresivna kraniektomija, barbituratna koma, hipertonični fiziološki rastvor i hipotermija.
[0696] Obelodanjenje pruža postupke lečenja (npr. stabilizaciju, smanjenje ili eliminaciju jednog ili više simptoma ili stabilizaciju rezultata pacijenta na skali glave traume) povreda glave davanjem vezujućeg proteina kalikreina plazme (npr., terapeutski efikasne količine vezujućeg proteina kalikreina plazme) pacijentu koji ima ili se sumnja da će imati povredu glave. Pored toga, dati su postupci lečenja povrede glave davanjem vezujućeg proteina kalikreina plazme (npr. terapeutski efikasne količine vezujućeg proteina kalikreina plazme) u kombinaciji sa drugom terapijom, npr. kontrola povišenog intrakranijalnog pritiska (npr. sedacija, paralitika, preusmeravanje cerebrospinalne tečnosti), dekompresivna kraniektomija, barbituratna koma, hipertonični fiziološki rastvor i hipotermija. Obelodanjenje takođe pruža postupke za prevenciju povrede glave ili njenog simptoma davanjem vezujućeg proteina kalikreina plazme (npr., profilaktički delotvorna količina vezujućeg proteina kalikreina plazme) pacijentu pod rizikom od razvoja povrede glave (npr. pacijent koji će učestvovati u opasnim aktivnostima ili kontaktnom sportu).
[0697] Skale korisne za procenu povrede glave i simptoma povrede glave uključuju, na primer, Glazgov skala kome (Teasdale and Jennett, Lancet 13;2(7872):81-4 (1974)), kao i drugi alati za procenu poznati u struci.
[0698] Smernice za određivanje doze koja daje terapeutski delotvornu količinu vezujućeg proteina kalikreina plazme može se dobiti od životinjskih modela povrede glave, pogledati, na primer, one opisane u Cernak, NeuroRx.2(3): 410-422 (2005) i tamo navedenim referencama.
Edem mozga
[0699] Edem mozga (cerebralni edem) je višak akumulacije vode u intracelularnim i/ili ekstracelularnim prostorima mozga. Vrste edema mozga uključuju, na primer, vazogeni edem cerebralne mreže, citotoksični cerebralni edem, osmotski cerebralni edem i intersticijski cerebralni edem.
[0700] Vazogeni cerebralni edem se javlja zbog razdvajanja tesnih endotelnih veza koje čine krvno-moždanu barijeru (BBB). Ovo omogućava normalno isključenim intravaskularnim proteinima i tečnostima da prodru u cerebralni parenhimski ekstracelularni prostor. Jednom kada sastojci plazme pređu BBB, edem se širi; ovo može biti prilično brzo i široko rasprostranjeno. Kako voda ulazi u belu materiju, ona se kreće ekstracelularno duž vlaknastih trakta i može uticati na sivu materiju. Ova vrsta edema se posmatra kao odgovor na traumu, tumore, fokalnu upalu, kasne faze cerebralne ishemije i hipertenzivnu encefalopatiju. Neki od mehanizama koji doprinose disfunkciji BBB su: fizičko remećenje arterijske hipertenzije ili povreda, oslobađanje vasoaktivnih i endotelnih destruktivnih jedinjenja pomoću tumora (npr., arahidonska kiselina, ekscitatorni neurotransmiteri, eikosanoidi, bradikinin, histamin i slobodni radikali). Neke od posebnih potkategorija vazogenih edema uključuju: hidrostatički cerebralni edem, cerebralni edem od raka mozga, cerebralni edem visoke nadmorske visine.
[0701] Citotoksični cerebralni edem nastaje zbog poremećaja u ćelijskom metabolizmu, što rezultuje neadekvatnim funkcionisanjem natrijumske i kalijumske pumpe u membrani glijalnih ćelija. Kao rezultat, nastaje ćelijsko zadržavanje natrijuma i vode. Citoksotični edem se vidi sa različitim inoksikacijama (dinitrofenol, trietiletin, heksahlorofen, izoniazid), kod Rejevog sindroma, teška hipotermija, rana ishemija, encefalopatija, rani moždani udar ili hipoksija, srčani zastoj, pseudotumorski cerebri i cerebralni toksini.
[0702] Osmotski cerebralni edem se javlja kada se plazma razblaži prekomernim unosom vode (ili hiponatremijom), sindromom neodgovarajuće sekrecije antidiuretičkog hormona (SIADH), hemodijalizom ili brzo redukcijom glukoze u krvi u hiperosmolarnom hiperglikemičnom stanju (HHS), ranije hiperosmolarna neketotična acidoza (HONK) i osmolalitet mozga premašuju serumsku osmolalnost stvarajući abnormalni pritisak.
[0703] Intersticijski edem mozga se javlja kod opstruktivnog hidrocefalusa. Ovaj oblik edema nastao je zbog rupture cerebralna spinalne tečnost (CSF)-mozak barijere, što dovodi do transependimalnog toka CSF, što dozvoljava CSF da prodre u mozak i proširi se u ekstracelularnom prostoru bele materije.
[0704] Simptomi edema mozga (npr., peritumoralni edema mozga) uključuju, na primer, glavobolju, gubitak koordinacije (ataksiju), slabost i opadanje nivoa svesti, uključujući dezorientaciju, gubitak sećanja, halucinacije, psihotično ponašanje i komu.
[0705] Tretmani edema mozga (npr., peritumoralni edem mozga) uključuju, na primer, lekove (npr. deksametazon, manitol, diuretike) i hiruršku dekompresiju.
[0706] Obelodanjenje pruža postupke lečenja (npr. stabilizaciju, smanjenje ili eliminaciju jednog ili više simptoma) edema mozga (npr. peritumoralni edema mozga) davanjem vezujućeg proteina kalikreina plazme (npr. terapeutski efikasne količine vezujućeg proteina kalikreina plazme) pacijentu koji ima ili se sumnja da će imati edem mozga (npr. peritumoralni edem mozga). Dodatno su dati postupci lečenja edema mozga (npr. peritumoralni edem mozga) primenom vezujućeg proteina kalikreina plazme (npr. terapeutski efikasna količina vezujućeg proteina kalikreina plazme) u kombinaciji sa drugom terapijom, npr. lekovi (npr. deksametazon, manitol i/ili diuretici) i/ili hirurška dekompresija.
Obelodanjenje takođe pruža postupke za prevenciju edema mozga ili njegovog simptoma davanjem vezujućeg proteina kalikreina plazme (npr., profilaktički efikasna količina vezujućeg proteina kalikreina plazme) pacijentu pod rizikom od razvoja edema mozga (npr. pacijent kom je dijagnostikovan tumor mozga).
[0707] Smernice za određivanje doze koja daje terapeutski efikasnu količinu vezujućeg proteina kalikreina plazme može se dobiti od životinjskih modela edema mozga, npr. pacovskog modela cerebralne embolije kod koje se recirkulacija može uvesti u ishemijsku zonu (Koizumi i dr., Jpn J Stroke 8: 1–8 (1986)).
Sepsa
[0708] Sepsa je ozbiljno zdravstveno stanje koje karakteriše upalno stanje celog tela i prisustvo poznate ili pretpostavljene infekcije. Ovaj imuni odgovor može biti uzrokovan mikrobima u krvi, urinu, plućima, koži ili drugim tkivima i može dovesti do široko rasprostranjene aktivacije proteina akutne faze, utičući na sistem komplementaa i puteve koagulacije, koji zatim oštećuju vaskulaturu kao i organe. Različiti nivoi sepse uključuju sindrom sistemskog upalnog odgovora (SIRS), sepsu (SIRS kao odgovor na potvrđeni infektivni proces), tešku sepsu (sepsa sa disfunkcijom organa, hipoperfuzija ili hipotenzija) i septični šok (sepsa sa refraktornom arterijalnom hipotenzijom ili hipoperfuzijom abnormalnosti uprkos adekvatnoj obnovi tečnosti).
[0709] Simptomi sepse obuhvataju, na primer, opšte simptome koji se odnose na infekciju, akutne upale prisutne u čitavom telu, hipotermiju ili groznicu, tahikardiju, tahipneju ili hipokapniju usled hiperventilacije, leukopenije, leukocitoze, bendemije i disfunkcije organa (npr. pluća, jetre, bubrega i/ili srca).
[0710] Tretmani za sepsu uključuju npr. antibiotike, vazopresorne lekove, insulin, kortikosteroide, drotrekogin alfa, hiruršku drenažu zaraženih tečnosti, zamenu tečnosti i odgovarajuću podršku za disfunkciju organa (npr. hemodijaliza kod otkazivanja bubrega, mehanička ventilacija kod plućne disfunkcije, transfuzija krvnih proizvoda i terapije lekovima i fluidima za otkazivanje cirkulacije). Usmerena terapija ranog cilja (EGDT), sistematski pristup reanimaciji, mogu se koristiti za lečenje teške sepse i septičkog šoka.
[0711] Obelodanjenje pruža postupke lečenja (npr. stabilizaciju, redukciju ili uklanjanje jednog ili više simptoma ili stabilizaciju rezultata pacijenta na skali sepse) sepse primenom vezujućeg proteina kalikreina plazme (npr. terapeutski efikasne količine vezujućeg proteina kalikreina plazme) pacijentu koji ima ili se sumnja da ima sepsu. Pored toga, dati su postupci lečenja sepse davanjem vezujućeg proteina kalikreina plazme (npr. terapeutski efikasne količine proteina vezujući za vezivanje kalikreina plazme) u kombinaciji sa drugom terapijom, uključujući npr. antibiotike, vazopresorne lekove, insulin, kortikosteroide, drotrekogin alfa, hiruršku drenažu zaraženih tečnosti, zamenu tečnosti i odgovarajuću podršku za disfunkciju organa (npr. hemodijaliza kod otkazivanja bubrega, mehanička ventilacija kod plućne disfunkcije, transfuzija krvnih proizvoda i terapije lekovima i fluidima za otkazivanje cirkulacije). Usmerena terapija ranog cilja (EGDT). Obelodanjenje takođe pruža postupke za prevenciju sepse ili njenog simptoma primenom vezujućeg proteina kalikreina plazme (npr., profilaktički efikasna količina vezujućeg proteina kalikreina plazme) pacijentu pod rizikom od razvoja sepse (npr. pacijent kom je dijagnostikovana infekcija).
[0712] Skale korisne za procenu sepsa i simptoma sepse uključuju, na primer, Baltimor skalu sepse (Meek i dr. J Burn Care Rehabil.12(6):564-8 (1991)), kao i druge alate za procenu poznate u struci.
[0713] Smernice za određivanje doze koja daje terapeutski delotvornu količinu vezujućeg proteina kalikreina plazme mogu se dobiti od životinjskih modela sepse, pogledati, na primer, one opisane kod U.S. Pat. br.6,964,856, i Buras i dr. Nat Rev Drug Discov. 4(10):854-65 (2005) i tamo navedenim referencama.
Akutni ishemijski događaj srednje cerebralne arterije (MCA) (moždani udar)
[0714] Akutni ishemijski događaj srednje cerebralne arterije (MCA) (moždani udar) je brz razvoj gubitka funkcije mozga usled poremećaja snabdevanja krvi u mozgu zbog ishemije (nedostatak glukoze i kiseonika) uzrokovan trombozom (npr., venska tromboza), embolizmom ili sistemskom hipoperfuzijom. Kao rezultat, pogođeno područje mozga nije u funkciji, što dovodi do nemogućnosti pomeranja jednog ili više udova na jednoj strani tela, nemogućnosti razumevanja ili formulacije govora, ili nemogućnosti korišćenja jedne strane vidnog polja. Moždani udar zahteva hitnu medicinsku pomoć i može prouzrokovati trajna neurološka oštećenja, komplikacije i/ili smrt.
[0715] Simptomi akutnog ishemijskog događaja srednje cerebralne arterije (MCA) (moždani udar) uključuju npr. hemiplegiju, smanjenu osetljivost i slabost mišića lica, utrnutost, smanjenje senzornih ili vibratornih osećaja, izmenjen miris, ukus, sluh ili vid (totalni ili parcijalni), obaranje kapaka (ptoza) i slabost očnih mišića, smanjeni refleksi, problemi sa balansom i nistagmus, promenjeno disanje i srčani otkucaji, slabost sternokleidomastoidnog mišića, nemogućnost okretanja glave na jednu stranu, slabosti u jeziku (nemogućnost izvlačenja i/ili pomeranja sa strane na stranu), afazija, aprakija, nedostaci vidnog polja, nedostatak pamćenja, hemineglekt, neorganizovane misli, zbunjenost, hiperseksualno ponašanje, anosognozija, poteškoće kretanja, promenjena koordinacija kretanja, i vertigo i/ili neravnoteža.
[0716] Tretman akutnog ishemijskog događaja srednje cerebralne arterije (MCA) (moždani udar) uključuje npr. trombolizu (npr. tkivni aktivator plazminogena (tPA)), trombektomiju, angioplastiku i stentovanje, terapijsku hipotermiju i lekove (npr. aspirin, klopidogrel i dipiridamol).
[0717] Obelodanjenje pruža postupke lečenja (npr. stabilizaciju, smanjenje ili uklanjanje jednog ili više simptoma ili stabilizaciju rezultata pacijenta na skali moždanog udara) akutnog ishemijskog događaja srednje cerebralne arterije (MCA) (moždani udar) primenom vezujućeg proteina kalikreina plazme (npr., terapeutski efikasna količina vezujućeg proteina kalikreina plazme) pacijentu koji ima ili se sumnjiči da ima akutni ishemijski događaj srednje cerebralne arterije (MCA) (moždani udar). Pored toga, dati su postupci lečenja akutnog ishemijskog događaja srednje cerebralne arterije (MCA) (moždani udar) primenom vezujućeg proteina kalikreina plazme (npr. terapeutski efikasne količine vezujućeg proteina kalikreina plazme) u kombinaciji sa drugom terapijom, npr. tromboliza (npr. tkivni aktivator plazminogena (tPA)), trombektomija, angioplastika i stentovanja, terapijska hipotermija i lekovi (npr. aspirin, klopidogrel i dipiridamol). Obelodanjenje takođe pruža postupke za prevenciju akutnog ishemijskog događaja srednje cerebralne arterije (MCA) (moždani udar) ili njegovog simptoma putem primene vezujućeg proteina kalikreina plazme (npr. profilaktički efikasna količina vezujućeg proteina kalikreina plazme) sa pacijentom pod rizikom od razvoja akutnog ishemijskog događaja srednje cerebralne arterije (MCA) (moždani udar) (npr. pacijent koji je doživeo sistemsku hipoperfuziju).
[0718] Skale korisne za procenu akutnog ishemijskog događaja srednje cerebralne arterije (MCA) (moždani udar) i simptoma akutnog ishemijskog događaja srednje cerebralne arterije (MCA) (moždani udar) uključuju, npr., klasifikaciju Oxford Community Stroke Project (OCSP, takođe poznata kao Bamford ili Oksford klasifikacija) (Bamford i dr., Lancet 337 (8756): 1521-6 (1991)) i TOAST (ispitivanje Org 10172 u tretmanu akutnog moždanog udara) (Adams i dr., Stroke 24 (1): 35–41 (1993)).
[0719] Smernice za određivanje doze koja daje terapeutski delotvornu količinu vezujućeg proteina kalikreina plazme mogu se dobiti od životinjskih modela akutnog ishemijskog događaja srednje cerebralne arterije (MCA) (moždani udar), pogledati, na primer, one opisane kod Beech i dr., Brain Res 895: 18–24 (2001), Buchan i dr., Stroke 23 (2): 273–9 (1992), Carmichael, NeuroRx 2: 396–409 (2005), Chen i dr., Stroke 17 (4): 738–43 (1986), Dittmar i dr., Stroke 34: 2252–7 (2003), Dittmar i dr., J Neurosci Methods 156: 50 (2006), Gerriets i dr., J Neurosci Methods 122: 201–11 (2003), Gerriets i dr., Stroke 35: 2372–2377 (2004), Graham i dr., Comp Med 54: 486-496 (2004), Koizumi i dr., Jpn J Stroke 8: 1–8 (2004), Longa i dr., Stroke 20 (1): 84–91 (1989), Mayzel-Oreg, Magn Reson Med 51: 1232–8 (2004), Schmid-Elsaesser i dr., Stroke 29 (10): 2162–70 (1989), Tamura i dr., J Cereb Blood Flow Metab 1: 53–60 (1981), Watson i dr., Ann Neurol 17: 497–504 (1985), i Zhang i dr., J Cereb Blood Flow Metab 17: 123–35 (1997).
Restenoza
[0720] Restenoza je ponovno pojavljivanje stenoze, suženje krvnih sudova, što dovodi do ograničenog protoka krvi. Restenoza se obično odnosi na arteriju ili drugi veliki krvni sud koji su se suzili, primili lečenje kako bi se očistila blokada kao što je angioplastika, i zatim se ponovo suzili. Može se definisati kao smanjenje obima lumena od 50% ili više i imati visoku stopu incidencije (25-50%) kod pacijenata koji su prošli balon angioplastiku, pri čemu je većini pacijenata potrebna dodatna angioplastika u roku od 6 meseci.
[0721] Tretmani za restenozu uključuju, na primer, dodatnu angioplastiku ako se restenoza javlja bez stenta ili na bilo kom kraju stenta, ponovljenu angioplastiku i ubacivanje drugog stenta unutar prvobitnog ako se restenoza javlja unutar stenta, lekom eluiran stent, brahiraterapiju i intrakoronarno zračenje.
[0722] Obelodanjenje pruža postupke lečenja (npr. stabilizaciju, redukciju ili eliminaciju jednog ili više simptoma) restenoze (npr. nakon angioplastike) primenom vezujućeg proteina kalikreina plazme (npr. terapeutski efikasne količine vezujućeg proteina kalikreina plazme) pacijentu koji ima ili je se sumnja da ima restenozu (npr. posle angioplastike). Pored toga, dati su postupci lečenja restenoze (npr. posle angioplastike) primenom vezujućeg proteina kalikreina plazme (npr. terapeutski efikasne količine vezujućeg proteina kalikreina plazme) u kombinaciji sa drugom terapijom, npr. angioplastika ako se restenoza javlja bez stenta ili na bilo kom kraju stenta, ponovljena angioplastika i ubacivanje drugog stenta unutar prvobitnog ako se restenoza javlja unutar stenta, lekom eluiran stent, brahiraterapija i intrakoronarno zračenje. Obelodanjenje takođe pruža postupke za prevenciju restenoze ili njenog simptoma primenom vezujućeg proteina kalikreina plazme (npr., profilaktički delotvorne količine vezujućeg proteina kalikreina plazme) pacijentu pod rizikom od razvoja restenoze (npr. pacijent koji je imao stenozu).
[0723] Smernice za određivanje doze koja daje terapeutski delotvornu količinu vezujućeg proteina kalikreina plazme može se dobiti od životinjskih modela restenoze, pogledati, na primer, one opisane u U.S. Pat. br.5,304,122 i 6,034,053, i Kantor i dr., Cardiovasc Radiat Med. 1(1):48-54 (1999) i tamo navedenim referencama.
Sistemski lupus eritematozni nefritis
[0724] Sistemski lupus eritematozni nefritis je upala bubrega uzrokovana sistemskim lupus eritematozusom (SLE), hroničnom autoimunom bolesti vezivnog tkiva. SLE može biti povezan sa vaskulitisom, što su poremećaji koji se karakterišu upalnim uništavanjem krvnih sudova.
[0725] Simptomi sistemskog lupus eritematoznog nefritisa uključuju, na primer, opšte simptome bolesti bubrega, povećanje telesne težine, visok krvni pritisak, tamniji penasti urin i otok oko očiju, nogu, članaka ili prstiju.
[0726] Tretmani za sistemski lupus eritematozni nefritis uključuju, na primer, terapiju steroidima (npr., kortikosteroidi), hemoterapiju (npr., ciklofosfamid, azatioprin, mofetilat mofetil ili ciklosporin) i imunosupresivna sredstva (npr., mofetilmofetil mofetil i intravenozni ciklofosfamid).
[0727] Obelodanjenje pruža postupke lečenja (npr. stabilizaciju, smanjenje ili uklanjanje jednog ili više simptoma ili stabilizaciju rezultata pacijenta na lupusovoj skali) sistemskog lupus eritematoznog nefritisa primenom vezujućeg proteina kalikreina plazme (npr. terapeutski efikasna količina vezujućeg proteina kalikreina plazme) pacijentu koji ima ili se sumnja da ima sistemski lupus eritematozni nefritis. Dodatno su dati postupci za lečenje sistemskog lupus eritematoznog nefritisa primenom vezujućeg proteina kalikreina plazme (npr. terapeutski efikasne količine vezujućeg proteina kalikreina plazme) u kombinaciji sa drugom terapijom, npr. terapija steroidima (npr., kortikosteroidi), hemoterapija (npr., ciklofosfamid, azatioprin, mofetilat mofetil ili ciklosporin) i imunosupresivna sredstva (npr., mofetilmofetil mofetil i intravenozni ciklofosfamid). Obelodanjenje takođe pruža postupke za prevenciju sistemskog lupus eritematoznog nefritisa ili njegovog simptoma davanjem vezujućeg proteina kalikreina plazme (npr., profilaktički efikasna količina vezujućeg proteina kalikreina plazme) pacijentu sa rizikom od razvoja sistemskog lupus eritematoznog nefritisa (npr. pacijent kom je dijagnostikovan lupusom ili pacijent koji ima člana porodice sa lupusom ili genetsku predispoziciju).
[0728] Skale korisne za procenu sistemskog lupus eritematoznog nefritisa i simptoma sistemskog eritematoznog nefritisa lupusa obuhvataju, na primer, klasifikaciju Svetske zdravstvene organizacije (VHO) na bazi biopsije (Weening i dr., J. Am. Soc. Nephrol.15 (2): 241–50 (2004)), kao i druge alate za procenu poznate u struci.
[0729] Smernice za određivanje doze koja daje terapeutski efikasnu količinu vezujućeg proteina u kalikrein plazme mogu se dobiti od životinjskih modela sistemskog lupus eritematoznog nefritisa, pogledati, na primer, one opisane u U.S. Pat. br.7,26,5261, Peng, Methods Mol Med. 102:227-72 (2004) i tamo navedenim referencama.
Opekotine i zarastanje rana
[0730] Opekotina je vrsta povreda koja može biti uzrokovana toplotom, električnom energijom, hemikalijama, svetlom, zračenjem ili trenjem. Mišić, kost, krvni sud, dermalno i epidermalno tkivo mogu se oštetiti uz naknadni bol zbog dubokih povreda nerva. U zavisnosti od pogođene lokacije i stepena ozbiljnosti, žrtva opekotine može doživeti veliki broj potencijalno fatalnih komplikacija uključujući šok, infekciju, disbalans elektrolita i poremećaj disajnih puteva. U povredama opekotina, oštećenje epidermisa i kožnih elemenata je rezultat nekoliko ključnih povreda koje se mogu podeliti na inicijalne (npr. opekotina, upalne medijatorne povrede, povrede izazvane ishemijom) i odložene povrede. Prekomerna toplota uzrokuje brzu denaturaciju proteina i oštećenja ćelija. Veći deo oštećenja tkiva, na primer, u perforiranoj opekotini ispod površine, može biti uzrokovan toksičnim medijatorima upale (npr., oksidansima i/ili proteazama) koji se aktiviraju sa opekotinama. Potrošnja kiseonika rane putem neutrofila može dovesti do tkivne hipoksije. Vaskularna tromboza trenutne površine se javlja zajedno sa ćelijskom smrću od opekotina i uzrokuje ishemiju i dalje oštećenje tkiva. Odložena povreda nakon početnog oštećenja i oštećenja medijatora obuhvata, na primer, upale prouzrokovane neurotičnim tkivom, bakterijama na površini, kašičkim topikalnim agensima i površinskim eksudatom; i nastavak oštećenja živih ćelija i novog tkivnog rasta pomoću viška proteolitičke aktivnosti rane i oslobađanja oksidanta.
[0731] Tretmani oštećenja opekotina uključuju, npr., intravenozne tečnosti, zavoje, upravljanje bolom (npr. analgetike (npr., ibuprofen i acetaminofen), narkotike i lokalne anestetike), inhibitore upalnog medijatora i antibiotike.
[0732] Obelodanjenje pruža postupke lečenja (npr. stabilizaciju, smanjenje ili uklanjanje jednog ili više simptoma ili stabilizaciju rezultata pacijenta na skali skale) oštećenje opekotina i/ili promovisanje zarastanja rana primenom vezujućeg proteina kalikreina plazme (npr. terapeutski efikasna količina vezujućeg proteina kalikreina plazme) pacijentu koji ima ili je se sumnja da ima povredu opekotina. Pored toga, dati su postupci lečenja oštećenja oružja primenom vezujućeg proteina kalikreina plazme (npr. terapeutski efikasne količine vezujućeg proteina kalikreina plazme) u kombinaciji sa drugom terapijom, npr. intravenozna tečnost, zavoji, upravljanje bolom (npr. analgetike (npr., ibuprofen i acetaminofen), narkotici i lokalni anestetici), inhibitori upalnog medijatora i antibiotici. Obelodanjenje takođe pruža postupke za prevenciju povreda opekotina ili njenog simptoma primenom vezujućeg proteina kalikreina plazme (npr., profilaktički delotvorna količina vezujućeg proteina kalikreina plazme) pacijentu kod kog postoji rizik od nastanka povreda (npr. pacijent čije zanimanje stvara opasnost od opekotina, npr. vatrogasci ili kuvari).
[0733] Skale koje su korisne za procenu opekotina i simptoma opekotina uključuju, npr., skale opekotina po stepenima, po debljini i ukupnoj telesnoj površini (TBSA) (Meek i dr. J Burn Care Rehabil.12(6):564-8 (1991)), kao i druge alate za procenu poznate u struci.
[0734] Smernice za određivanje doze koja daje terapeutski delotvornu količinu vezujućeg proteina kalikreina plazme mogu se dobiti od životinjskih modela opekotina, kao što je svinjski model opekotina (Singer and McClain, Methods Mol Med.78:107-19 (2003), ovčiji model opekotina (Jonkam i dr., Shock, 28:704-709 (2007)), zečiji model opekotina (Nwariaku i dr., Burns, 22:324-327 (1996)), i mišiji model opekotina (Stevenson i dr., Methods Mol Med. 78:95-105 (2003)).
Kombinacione terapije
[0735] Ovde opisan vezujući protein kalikreina plazme, npr. anti-kalikrein plazme antitelo, npr. anti-kalikrein plazme Fab ili IgG, može se primenjivati u kombinaciji sa jednom ili više drugih terapija za lečenje bolesti ili stanja povezanih sa aktivnosti kalikreina plazme, npr. ovde opisana bolest ili stanje. Na primer, vezujući protein kalikreina plazme može biti terapeutski ili profilaktički korišćen sa operacijom, drugim anti-kalikreinom plazme Fab ili IgG (na primer, ovde opisani drugi Fab ili IgG), drugim inhibitorom kalikreina plazme, inhibitorom peptida ili inhibitorom malih molekula. Primeri inhibitora kalikreina plazme koji se mogu koristiti u kombinovanoj terapiji sa ovde opisanim vezujućim proteinom kalikreina plazme uključuju inhibitore kalikreina plazme opisane u, npr., WO 95/21601 ili WO 2003/103475.
[0736] Jedan ili više inhibitora kalikreina plazme mogu se koristiti u kombinaciji sa jednim ili više ovde opisanih vezujućih proteina kalikreina plazme. Na primer, kombinacija može rezultirati manjom dozom inhibitora koji je potreban, tako da se neželjeni efekti smanjuju.
[0737] Ovde opisan vezujući protein kalikreina plazme može se primeniti u kombinaciji sa jednim ili više aktuelnih terapija za lečenje bolesti ili stanja povezanih sa kalikreinom plazme, uključujući, ali ne ograničavajući se na trenutne terapije za reumatoidni artritis, giht, upalna bolest creva, oralni mukozitis, neuropatski bol, upalni bol, spinalna stenoza -degenerativna bolest kičme, arterijska ili venska tromboza, post operativni ileus, aortna aneurizma, osteoartritis, vaskulitis, povreda glave ili peri-tumorski moždani edem, sepsa, ishemijski događaj akutne srednje cerebralne arterije (MCA) (moždani udar), restenoza (npr., nakon angioplastike), sistemski lupus eritematozni nefritis, opekotina, ili zarastanje rana. Na primer, inhibicija pKal je novi mehanizam lečenja bolesti i stoga može da obezbedi efekte koji su sinergijski ili aditivni sa drugim terapijama. Na primer, ovde opisani protein koji inhibira kalikrein plazme ili koji inhibira nizvodni događaj aktivnosti kalikreina plazme, takođe se može koristiti u kombinaciji sa drugim tretmanom za bolest povezanu sa kalikreinom plazme, kao što je operacija ili davanje drugog agensa, npr. opisanog ovde. Na primer, drugi agens može uključivati ekalantid, inhibitor C1 esteraze (npr., CINRYZE™), aprotinin (TRASYLOL®), inhibitor bradikinin B2 receptora (npr., Ikatibant (FIRAZYR®)).
[0738] Izraz „kombinacija“ odnosi se na upotrebu dva ili više agensa ili terapija za lečenje istog pacijenta, pri čemu se upotreba ili dejstvo agenasa ili terapija vremenski preklapaju. Agensi ili terapije mogu se davati istovremeno (npr., kao jedinstvena formulacija koja se daje pacijentu ili kao dve odvojene formulacije date istovremeno) ili sekvencijalno u bilo kom redosledu. Sekvencijalne primene su primene koje se daju u različito vreme. Vreme između primene jednog agensa i drugog agensa može se meriti minutima, satima, danima ili nedeljama. Upotreba vezujućeg proteina kalikreina plazme opisana ovde može takođe da se koristi da smanji dozu druge terapije, na primer, kako bi se smanjili neželjeni efekti povezani sa drugim agensom koji se primenjuje. Prema tome, kombinacija može uključivati davanje drugog agensa u dozi najmanje 10, 20, 30 ili 50% nižoj nego što bi se koristilo u odsustvu vezujućeg proteina kalikreina plazme.
[0739] Drugi agens ili terapija takođe mogu biti drugi agens za terapiju povezanu sa kalikreinom u plazmi. Neograničavajući primeri drugog tretmana za bolest ili stanje povezane sa kalikreinom plazme uključuju npr. Ekalantid, inhibitor C1 esteraze (npr. CINRYZE ™), aprotinin (TRASYLOL®), inhibitor bradikinin B2 receptora (npr. Ikatibant (FIRAZYR®)) ili drugi ovde opisan vezujući protein.
[0740] Kombinovana terapija može uključivati primenu agensa koji smanjuje neželjene efekte drugih terapija. Agens može biti agens koje smanjuje neželjene efekte tretmana bolesti povezane sa kalikreinom plazme. Na primer, za upalne bolesti, inhibitor pKal može biti steroidni par. Takođe, može doći do sinergije sa inhibitorom TNF alfa za lečenje upale ili VEGF blokator za lečenje raka i/ili angiogeneze.
Dijagnostičke upotrebe
[0741] Protein koji se vezuje za ovde opisani kalikrein plazme može imati in vitro i in vivo dijagnostičke primene. Ovde opisani vezujući protein kalikreina plazme (npr., protein koji vezuje ili vezuje i inhibira kalikrein plazme) može se koristiti, npr., za in vivo slikanje, npr., u toku terapije za bolest ili stanje gde je kalikrein plazme aktivan, na primer, ovde opisana bolest ili stanje, ili u dijagnostici ovde opisane bolesti ili stanja.
[0742] U jednom aspektu, obelodanjenje pruža dijagnostički postupak za detektovanje prisustva kalikreina plazme, in vitro ili in vivo (na primer., in vivo snimanje u pacijentu). Postupak može uključiti lokalizaciju kalikreina plazme u pacijentu ili u uzorku od pacijenta. U pogledu procene uzorka, postupak može uključivati, na primer: (i) dovođenje u dodir uzorka sa vezujućim proteinom kalikreina plazme; i (ii) detektovanje lokacije vezujućeg proteina kalikreina plazme u uzorku.
[0743] Vezujući protein kalikreina plazme se takođe može koristiti za određivanje kvalitativnog ili kvantitativnog nivoa eksprimiranja kalikreina plazme u uzorku. Ovaj postupak takođe može uključiti dovođenje u dodir referentnog uzorka (npr., kontrolni uzorak, npr., negativna kontrolu) sa vezujućim proteinom i određivanje odgovarajuće procene referentnog uzorka. Razlika (npr. povećanje), na primer, statistički značajna razlika u formiranju kompleksa u uzorku ili pacijentu u odnosu na kontrolni uzorak ili pacijenta može biti indikativna za prisustvo kalikreina plazme u uzorku. Ponekad, vezujući protein kalikreina plazme ne reaguje unakrsno sa drugim proteinom kalikreina, kao što je kalikrein tkiva i/ili prekalikrein plazme. npr., vezujući protein se vezuje za drugi protein kalikreina ili za prekalikrein 5- do 10-puta manje dobro (ili čak još manje dobro) nego što se vezuje za kalikrein plazme. Na primer, vezujući protein može se vezati za kalikrein plazme sa KD od ~10-50 pM, dok se vezuje za kalikrein tkiva i/ili prekalikrein na ~10 nM.
[0744] Vezujući protein kalikreina plazme može biti direktno ili indirektno označena sa detektabilnom supstancom za olakšavanje detekcije vezanih ili nevezanih antitela. Pogodne detektabilne supstance uključuju različite enzime, prostetske grupe, fluorescentne materijale, luminescentne materijale i radioaktivne materijale.
[0745] Kompleksno formiranje između vezujućeg proteina kalikreina plazme i kalikreina plazme može se detektovati procenom vezujućeg proteina vezanog za kalikrein plazme ili nevezanog vezujućeg proteina. Konvencionalni testovi detekcije mogu se koristiti, npr., enzimski-povezani imunosorbentni testovi (ELISA), radioimunotest (RIA) ili imunohistohemija tkiva. Pored označavanja vezujućeg proteina kalikreina plazme, prisustvo kalikreina plazme može se analizirati u uzorku pomoću kompetitivnig imunotesta koristeći standarde označene sa detektabilnom supstancom i neoznačenim vezujućim proteinom kalikreina plazme. U jednom primeru ovog testa, biološki uzorak, označeni standardi i vezujući protein kalikreina plazme su kombinovani i određena je količina označenog standarda vezanog za neoznačeni vezujući protein. Količina kalikreina plazme u uzorku je obrnuto proporcionalna količini označenog standarda vezanog za vezujući protein kalikreina plazme.
[0746] Mogu se pripremiti fluoroforom i hromoforom označeni proteini. Pošto antitela i drugi proteini apsorbuju svetlost sa talasnim dužinama do oko 310 nm, fluorescentne grupe treba da budu odabrane tako da imaju značajnu apsorpciju na talasnim dužinama iznad 310 nm i poželjno iznad 400 nm. Različiti pogodni fluorescenati i hromofori su opisani od strane Stryer, 1968, Science 162:526 and Brand, L. i dr., 1972, Annu. Rev. Biochem. 41:843-868. Proteini se mogu označiti fluorescentnim hromofornim grupama konvencionalnim postupcima kao što su oni obelodanjeni u U.S. Pat. br.3,940,475, 4,289,747, i 4,376,110. Jedna grupa fluorescenata koji imaju više poželjnih gore opisanih osobina su ksantenske boje, koje uključuju fluoresceine i rodamine. Druga grupa fluorescentnih jedinjenja su naftilamini. Jednom označen fluoroforom ili hromoforom, protein se može koristiti za detektovanje prisustva ili lokalizacije kalikreina plazme u uzorku, na primer, koristeći fluorescentnu mikroskopiju (kao što je konfokalna ili dekonvoluciona mikroskopija).
[0747] Histološka analiza. Imunohistokemija se može izvesti korišćenjem proteina opisanih ovde. Na primer, u slučaju antitela, antitelo može biti sintetisano oznakom (kao što je oznaka prečišćavanja ili epitop), ili se može detektabilno označiti, npr., konjugovanjem oznake ili grupe za vezivanje oznaka. Na primer, kelator može biti vezan za antitelo. Antitelo se tada dovodi u dodir sa histološkim sastavom, npr., fiksiranim delom tkiva koji se nalazi na mikroskopskom slajdu. Nakon inkubacije za vezivanje, sastav se pere kako bi se uklonio nevezano antitelo. Sastav se zatim analizira, npr., koristeći mikroskopiju, kako bi se identifikovalo da li je antitelo vezano za pripremu.
[0748] Naravno, antitelo (ili drugi polipeptid ili peptid) može biti neoznačeno u vreme vezivanja. Nakon vezivanja i pranja, antitelo je označeno kako bi se detektovalo.
[0749] Proteinski nizovi. Vezujući protein kalikreina plazme takođe može biti imobilisan na proteinskom nizu. Proteinski niz se može koristiti kao dijagnostički alat, npr. za pregled medicinskih uzoraka (kao što su izolovane ćelije, krv, serumi, biopsije i slično). Naravno, proteinski niz može uključivati i druge vezujuće proteine, npr., koji se vezuju za kalikrein plazme ili za druge ciljane molekule.
[0750] Postupci proizvodnje polipeptidnih nizova su opisane, npr., kod e Wildt i dr., 2000, Nat. Biotechnol.18:989-994; Lueking i dr., 1999, Anal. Biochem. 270:103-111; Ge, 2000, Nucleic Acids Res.28, e3, I-VII; MacBeath and Schreiber, 2000, Science 289:1760-1763; WO 01/40803 i WO 99/51773A1. Polipeptidi za niz se mogu primetiti pri velikoj brzini, npr. koristeći komercijalno dostupne robotske aparate, npr., od Genetic MicroSystems ili BioRobotics. Supstrat niza može biti, na primer, nitroceluloza, plastika, staklo, na primer, površinski-modifikovano staklo. Niz može takođe uključiti poroznu matricu, npr. akrilamid, agarozu ili drugi polimer.
[0751] Na primer, niz može biti niz antitela, npr., kako je opisano kod De Wildt, supra. Ćelije koje proizvode proteine mogu se uzgajati na filteru u formatu niza. Proizvodnja polipeptida je indukovana, i eksprimirani polipeptidi se imobilizuju na filter na lokaciji ćelije. Proteinski niz se može dovesti u dodir sa označenom metom kako bi se odredio stepen vezivanja mete na svaki imobilizovani polipeptid. Informacije o obimu vezivanja na svakoj adresi niza mogu se memorisati kao profil, npr. u računarskoj bazi podataka. Proteinski niz može biti proizveden u replikama i koristi se za upoređivanje profila vezivanja, npr., mete i ne-mete.
[0752] FACS (sortiranje ćelija aktivirane fluorescencije). Vezujući protein kalikreina plazme se može koristiti za označavanje ćelija, na primer, ćelije u uzorku (npr. uzorak pacijenta). Vezujući protein je takođe pričvršćen (ili može da se pričvrsti) na fluorescentno jedinjenje. Ćelije se zatim mogu sortirati pomoću fluorescentnog aktivnog ćelijskog sortera (npr. pomoću sortera dostupnog od Becton Dickinson Immunocytometry Systems, San Jose CA; pogledat tkaođe U.S. Pat. br.5,627,037; 5,030,002; i 5,137,809). Kako ćelije prolaze kroz sorter, laserski zraci pobuđuju fluorescentno jedinjenje dok detektor broji ćelije koje prolaze i određuje da li je fluorescentno jedinjenje vezano za ćeliju detektovanjem fluorescencije. Količina oznake koja je vezana za svaku ćeliju može se kvantifikovati i analizirati kako bi se karakterizovao uzorak.
[0753] Sorter takođe može odbaciti ćeliju i odvojiti ćelije vezane vezujućim proteinom od onih ćelija koje nisu vezane vezujućim proteinom. Odvojene ćelije mogu biti kultivisane i/ili okarakterisane.
[0754] In vivo snimanje. Prikazan je takođe i postupak za detektovanje prisustva tkiva koja eksprimiraju kalikrein plazme in vivo. Ovaj postupak obuhvata (i) primenu pacijentu (npr. pacijentu koji ima, na primer, bolest ili stanje povezano sa kalikreinom plazme) anti-kalikrein plazme antitelo, konjugovano sa detektabilnim markerom; (ii) izlaganje pacijenta agensu za detektovanje navedenog detektabilnog markera u tkivima ili ćelijama koje eksprimiraju kalikrein plazme. Na primer, pacijent je snimljen, npr., NMR ili drugim tomografskim sredstvima.
[0755] Primeri oznaka korisnih za dijagnostičko slikanje uključuju radiooznake kao što su<131>I,<111>In,<123>I,<99m>Tc,<32>P,<125>I,<3>H,<14>C, i<188>Rh, fluorescentne oznake kao što su fluorescein i rodamin, aktivne oznake nuklearne magnetne rezonance, pozitronski izotopi koji se mogu detektovati pomoću skenera pozitronske emisione tomografije („PET skener“), hemiluminijere kao što je luciferin i enzimski markeri kao što su peroksidaza ili fosfataza.
Moguće je koristiti i satelite kratkog dometa, kao što su izotopi detektabilni od strane detektor sondi kratkog dometa. Protein se može označiti takvim reagensima; na primer, pogledati Wensel i Meares, 1983, Radioimmunoimaging and Radioimmunotherapy, Elsevier, New York za tehnike koje se odnose na radioaktivno označavanje antitela i D. Colcher i dr., 1986, Meth. Enzymol. 121: 802-816.
[0756] Vezujući protein se može označiti radioaktivnim izotopom (kao što su<14>C,<3>H,<35>S,<125>I,<32>P,<131>I). Radioaktivno označeni vezujući protein može se koristiti za dijagnostičke testove, npr. in vitro testiranje. Specifična aktivnost izotopski označenog vezujućeg proteina zavisi od poluživota, izotopske čistoće radioaktivne oznake i kako je oznaka ugrađena u antitelo.
[0757] U slučaju radioaktivno označenog vezujućeg proteina, vezujući protein se daje pacijentu, lokalizovan je na ćelijama koje nose antigen sa kojim reaguje vezujući protein i otkriven je ili „snimljen“ in vivo koristeći poznate tehnike kao što je radionuklearno skeniranje koristeći npr. gama kameru ili emisionu tomografiju. pogledati, na primer, A.R. Bradwell i dr., „Developments in Antibody Imaging“, Monoclonal Antibodies for Cancer Detection and Therapy, R.W. Baldwin i dr., (eds.), pp 6585 (Academic Press 1985).
Alternativno, skenera pozitronske emisione transaksijalne tomografije, kao što je namenjen Pet VI koji se nalazi u Brookhaven National Laboratory, može se koristiti tamo gde radiooznaka emituje pozitron (npr.<11>C,<18>F,<15>O, i<13>N).
[0758] MRI kontrastni agensi. Magnetna rezonanca (MRI) koristi NMR za vizualizaciju unutrašnjih osobina živog pacijenta i korisna je za prognozu, dijagnozu, lečenje i hirurgiju. MRI se može koristiti bez radioaktivnih tragova jedinjenja za očiglednu korist. Neke MRI tehnike su sumirane u EP-A-0 502 814. Uopšteno gledano, razlike vezane za konstante vremena relaksacije T1 i T2 vodenih protona u različitim sredinama koriste se za generisanje slike. Međutim, ove razlike mogu biti nedovoljne za pružanje oštrih slika visoke rezolucije.
[0759] Razlike u konstantama vremena relaksacije mogu se poboljšati kontrastnim agensima. Primeri takvih kontrastnih agenasa obuhvataju magnetne agense, paramagnetne agense (koji prvenstveno menjaju T1) i feromagnetne ili superparamagnetne (koji prvenstveno menjaju T2 odgovor). Helati (npr., EDTA, DTPA i NTA helati) se mogu koristiti za vezivanje (i smanjenje toksičnosti) nekih paramagnetnih supstanci (npr., Fe<+3>, Mn<+2>, Gd<+3>). Ostali agensi mogu biti u vidu čestica, npr., manji od 10 mm do oko 10 nM u prečniku). Čestice mogu imati feromagnetna, antiferomagnetna ili superparamagnetna svojstva. Čestice mogu uključivati, npr., Magnetit (Fe3OC4), γ-Fe2O3, ferite i druga magnetna mineralna jedinjenja tranzicionih elemenata. Magnetne čestice mogu uključivati: jedan ili više magnetnih kristala sa i bez nemagnetnog materijala. Nemagnetni materijal može uključivati sintetičke ili prirodne polimere (kao što su sefaroza, dekstran, dekstrin, skrob i slično.
[0760] Vezujući protein kalikreina plazme takođe može biti označen sa indikatornom grupom koja sadrži aktivni NMR<19>F atom ili mnoštvo takvih atoma, ukoliko su (i) u suštini svi prirodno bogati atomi fluora<19>F izotop i, stoga, u suštini svi jedinjenja koja sadrže fluor, su NMR aktivna; (ii) mnoga hemijsko aktivna polifluorirana jedinjenja, kao što je trifluorosirćetni anhidrid, komercijalno dostupna po relativno niskoj ceni; i (iii) za mnoga fluorirana jedinjenja je otkriveno da su medicinski prihvatljiva za upotrebu kod ljudi kao što su perfluorirani polietri koji se koriste za prenos kiseonika kao zamena hemoglobina. Posle dopuštanja takvog vremena za inkubaciju, MRI celog tela se izvodi pomoću aparata kao što je jedan od onih koji su opisani kod Pykett, 1982, Sci. Am. 246:78 88 kako bi se pronašla i slikala tkiva koja eksprimiraju kalikrein plazme.
[0761] Sledeći primeri daju dodatnu ilustraciju i nisu ograničavajući.
PRIMERI PRIMER 1:
[0762] Otkrili smo nekoliko antitela inhibitora i veznika kalikreina plazme (pKal).
Najpotentniji od njih su dalje karakterisani i pokazuju da imaju očigledne konstante inhibicije (Ki,app) < 10 nM, da su specifični pKal inhibitori u odnosu na druge testirane serinske proteaze, i da ne vezuju prekalikrein. Aminokiselinske sekvence CDR za inhibitore i veznike su prikazane u Tabelama 1 i 2, respektivno.
[0763] Korišćene skraćenice: „T/B“ je ELISA signal dobijen korišćenjem „mete“ (biotinilovan kalikreina plazme) podeljen sa ELISA signalom „pozadine“ (streptavidin); oba su obložena na pločama sa mikrotitrom. „nd“ nije određeno. Simbol „k“ odnosi se na zaustavni kodon koji se može suzbiti (TAG), koji se prevede kao glutamin (Q) u linijama E. coli kao što su TG1 ćelije koje su korišćene da eksprimiraju Fab fragmente.
[0763] Aminokiselinske sekvence varijabilnog domena lakog lanca (LC) i teškog lanca (HC) inhibitora pKal antitela su prikazane u nastavku.
[0765] Napomena: X81-B01 je germilinirani IgG izveden iz X63-G06 koji je prikazan u Tabeli 7.
kal P
od
telati an aik
ezn lv na sig
LISA
,E R D
C
ence kvse
ske liniseokin m
2.A a
abel T
9 0 9 0 9 0 1 0 1 1 1 0 1 11 Po na M H M H M H M A M A M B M C
[0766] Korišćene skraćenice: „T/B“ je ELISA signal dobijen korišćenjem „mete“ (biotinilovan kalikreina plazme) podeljen sa ELISA signalom „pozadine“ (streptavidin); oba su obložena na pločama sa mikrotitrom. „nd“ nije određeno. Simbol „k“ odnosi se na zaustavni kodon koji se može suzbiti (TAG), koji se prevede kao glutamin (Q) u linijama E. coli kao što su TG1 ćelije koje su korišćene da eksprimiraju Fab fragmente.
[0767] U nastavku prikazane aminokiselinske sekvence varijabilnog domena lakog lanca (LC) i teškog lanca (HC) antitela veznika pKal.
PRIMER 2: Vodeća antitela inhibitori
[0768] Antitela su izabrana kao vodeći inhibitori kalikrein plazme na osnovu očigledne konstantne inhibicije (Ki,app), specifičnosti u pogledu nedostatka inhibicije drugih serinskih proteaza, inhibicije generisanja bradikinina i nedostatka vezivanja za prekalikrein plazme (Tabela 3). Kalikrein plazme cirkuliše u plazmi kao neaktivan zimogen (prekalikrein) u koncentraciji od oko 500 nM. Antitela koje vezuju prekalikrein mogu biti nedovoljna za aktivnu inhibiciju kalikreina plazme i značajno mogu povećati in vivo dozu potrebnu za efikasnost. Zbog toga je test za površinsku plazmonsku rezonancu (SPR) korišćen za identifikaciju antitela koja ne vezuju prekalikrein (podaci nisu prikazani). Konkretno, ljudski IgG-i (X81-B01, M162-A04 (R84-H05); M160-G12 (R84-D02); i M142-H08) su uhvaćeni na CM5 čipu koristeći površinu anti-ljudskog Fc i 100 nM kalikreina plazme ili 100 nM ili 500 nM prekalikreina. Prekalikrein je tretiran aprotinin-sefarozom kako bi se uklonio aktivni kalikrein plazme. Prekalikrein koji se koristi za X81-B01 je bio zamenjen puferom u tačnoj pripremi SPRtekućeg pufera (HEPES puferisani fiziološki rastvor) kako bi se izbegle promene refraktivnog indeksa koje su primećene sa tri druga antitela koja su testirana: M162-A04 (R84-H05); M160-G12 (R84-D02); i M142-H08.
[0769] Od antitela navedenih u Tabeli 3, samo M142-H08 inhibira ljudski kalikrein plazme sa subnanomolarnim Ki,app. Međutim, kada je M142-H08 proizveden kao IgG, utvrđeno je da se cepa u CDR3 teškog lanca. Shodno tome, odlučili smo da preduzmemo dva pristupa za poboljšanje afiniteta: 1) afinitetno sazrevanje M162-A04 i M160-G12 koristeći nov oblik premeštanja lakog lanca pod nazivom ROLIC (Rapid Optimization of Light Chains – brza optimizacija lakih lanaca) (pogledati, npr., WO 2009/102927 i U.S.2009-0215119); i 2) optimizaciju sekvence M142-H08 u cilju sprečavanja cepanja IgG-a koji se javlja pri čuvanju vezivanja i inhibitorskih osobina M142-H08.
Tabela 3. Najviše rangirana antitela inhibitori od PKal pre sazrevanja afiniteta ili optimizacije sekvence
PRIMER 3: Optimizacija sekvenci M142-H08
[0770] Od antitela navedenih u Tabeli 3, samo M142-H08 inhibira ljudski pKal sa subnanomolarnim Ki,app. Međutim, kada je M142-H08 proizveden kao IgG, utvrđeno je da se cepa u CDR3 teškog lanca. M142-H08 je pronađen pomoću masene spektrometrije koja se cepi nakon arginina u „WFR“ sekvenci HC-CDR3 sekvence (GGLLLWFRELKSNYFDY). Ovo rastojanje ukazuje na to da proteaza iz ćelija koje se koriste za eksprimiranje antitela (i CHO i 293T ljudske ćelije bubrega) enzimski rastavlja antitelo na jednom specifičnom mestu. Mi smo mutirali HC-CDR3 sekvencu M142-H08 kako bismo identifikovali supstitucije aminokiselina koje sprečavaju cepanje IgG koje se javlja, uz zadržavaju vezivanje i inhibitorske osobine M142-H08. Prethodno iskustvo sa slično „skraćenim“ antitelima ukazalo je da prosto fokusiranje na putativni P1 položaji (pod-mesto proteaze 1, pogledati Tabelu 4) možda neće biti dovoljno da se identifikuju antitela koja zadržavaju snažnu inhibiciju ciljanog enzima, dok nisu skraćena proteazom ćelije domaćina. Zbog toga smo napravili malu biblioteku mutacija jedne tačke u regionu oko mesta cepanja kako bismo identifikovali varijante M142-H08 koje nisu iscrtane, ali su i dalje potencijalni pKal inhibitori. Ovu biblioteku nazivamo „CDR3 po dizajnu“ bibliotekom. Mala biblioteka je konstruisana primenom PCR prajmera koji sadrže randomizovani NNK kodon na bilo kom od P3, P2, P1 ili P1' mesta. Ovo rezultuje u maloj biblioteci gde svaki od 4 položaji može sadržati bilo koju od 20 aminokiselina (20 20 20 20 = 80 članova). Koristeći PCR, ova biblioteka je klonirana u M142-H08 Fab sekvencu u pMid21 vektoru, što je standardni fagemidni vektor.
Tabela 4. Prajmer sekvence
559AP1 20
[0771] DNK sekvenciranjem, izvukli smo 61 od mogućih 80 antitela (Tabela 5). Ova antitela su proizvedena kao Fab fragmenti u maloj razmeri (~20 μg) i testirana su za inhibiciju protiv ljudskog pKal u in vitro analizi cepanja proteaze koristeći Pro-Phe-Arg-aminometilkumarin kao sintetički peptidni supstrat. Fab za koje je utvrđeno da su inhibitori ljudske pKal subklonirani su u naš pBRH1 f vektor (vektor za prolazno eksprimiranje IgG u 293T ćelijama) za pretvaranje u ljudska IgG1 antitela pune dužine. Pet antitela je zatim eksprimirano u 293T ćelijama i prečišćeno protein A hromatografijom na sefarozi. Antitela su analizirana pomoću SDS-PAGE kako bi se utvrdilo koji inhibitorni mutante nisu cepani proteazama ćelija domaćina (podaci nisu prikazani). Cepana antitela (559A-X67-G05, 559A-X67-H01, 559A-X67-G09) imala su dodatni opseg koji je migrirao između 38 i 49 kDa markera molekulske težine. Taj opseg je odsutan kod 559A-X67-H04 i 559A-X67-D03 antitela, što ukazuje na to da su ova antitela netaknuta.
[0772] Ki,appvrednosti su određene kinetikom enzimske stabilnosti za ona kod kojih je pomoć SDS-PAGE pokazano da se ne cepaju (Tabela 5). Zanimljivo je da je položaj P2 jedini položaj gde su supstitucije aminokiselina da netaknute inhibitore antitela od pKal. Od 14 različitih mutacija koje su oporavljene na položaju P3 (Tabela 5), otkriveno je da je samo jedan mutant (V do L) bio inhibitor pKal kao Fab, ali je kasnije pokazano da je skraćen kao IgG. Ni za jednu od 16 različitih mutacija na položaju P1 (Tabela 5) nije otkriveno da je pKal inhibitor. Za osam od 15 različitih mutacija na položaju P1 je utvrđeno da su inhibitori pKal kao Fab, ali sve su bile označeni kao IgG. Shodno tome, samo mutacije na položaju P2 dovele su do antitela inhibitora koji nisu bili skraćeni tokom eksprimiranja. Od 16 različitih mutacija koje su dobijene na položaju P2 (Tabela 5), za osam mutanata je otkriveno da su pKal inhibitor kao Fab, ali je kasnije utvrđeno da su skraćeni kao IgG. Utvrđeno je da su četiri mutanta na položaju P2 imala subnanomolarne Ki,appvrednosti: X67-G04 (F do A), X67-C03 (F do M), X67-F01 (F do K) i X67-D03 (F do N). Antitelo sa najvećom potencijom je X67-D03 (Ki,app= 0,1 nM). Dva antitela prikazana u Tabela 6 nisu cepana kada su eksprimirani kao IgG, i otkriveno je da inhibiraju pKal sa subnanomolarnim Ki,app.
[0773] Poravnanja DNK i aminokiselinskih sekvenci lakih lanaca negermlinovanih (X63-G06) i germlinovanih, kodonski optimizovanih (X81-B01) verzija istog antitela otkrivena pomoću ROLIC sazrevanja afiniteta prikazane su na SLIKAMA 4 i 5, respektivno.
Poravnanja DNK i aminokiselinske sekvence teških lanaca negermlinovanih (X63-G06) i germlinovanih, kodonski optimizovanih (X81-B01) verzija istog antitela otkrivena p pomoću ROLIC sazrevanja afiniteta prikazane su na SLIKAMA 6 i 7, respektivno.
Tabela 5. HV-CDR3 sekvence dobijene od „CDR3 po dizajnu“ biblioteke*
[0774] Aminokiselinske sekvence varijabilnog domena lakog lanca (LC) i teškog lanca (HC) od pKal antitela sa dizajniranim HC CDR3 su prikazana u nastavku.
[0775] Aminokiselinske sekvence varijabilnog domena lakog lanca (LC) i teškog lanca (HC) afinitetno zrelih antitela inhibitora od pKal otkrivenih pomoću ROLIC su prikazane u nastavku.
[0776] X81-B01 je germlinovan IgG proizveden u verziji HEK 293T ćelija od X63-G06 Fab, kako je naznačeno gore.
[0777] X101-A01 (aka DX-2922) je germlinovan IgG proizveden u verziji CHO ćelija od X63-G06 Fab
PRIMER 4: Afinitetno sazrevanje
[0778] Pored optimizacije sekvence skraćenog antitela (M142-H08), izvršili smo i afinitetno sazrevanje na dva antitela identifikovana prikazom faga (M162-A04 i M160-G12). Oba ova antitela inhibiraju ljudski pKal sa jednocifrenom nanomolarnom potencijom, izgledaju specifično za pKal i ne vezuju prekalikrein (Tabela 3). Prvo smo izveli novu oblik premeštanja lakog lanca pod nazivom ROLIC (Rapid Optimization of Light Chains – brza optimizacija lakih lanaca) na M162-A04 i M160-G12 (pogledati, na primer, WO 2009/102927 i U.S.2009-0215119). Iz skrininga antitela otkrivenih pomoću ROLIC identifikovali smo jedno antitelo sa subnamolarnom potencijom (X63-G06) koje je delilo isti teški lanac kao i M160-G12. Zatim smo konstruisali HV-CDR3 vrh afinitetnog sazrevanja biblioteke na osnovu CDR3 sekvenci u M162-A04 i X63-G06 (opisani dole).
[0779] Afinitetno sazrevanje pomoću ROLIC. Koristili smo ROLIC kako bi afinitetno sazreli dva elementa iz Tabele 3 koji nisu cepani (M162-A04 i M160-G12). Ovaj proces je identifikovao jedno antitelo koje inhibira pKal sa subnanomolarnim Ki,app(Tabela 7). X63-G06 inhibira pKal sa Ki,appod oko 0,4 nM kao Fab fragment. Kada je ovo antitelo pretvoreno u IgG koji je germiliniran i optimizovan sekvenciranjem za eksprimiranje CHO ćelija (X81-B01), utvrđeno je da inhibira pKal sa Ki,appod oko 0,2 nM.
PRIMER 5: Afinitetno sazrevanje teškog lanca CDR1/2 i CDR3
[0780] Koristili smo još dve strategije afinitetnog sazrevanja kako bismo identifikovali veoma potentna antitela na osnovu dva različita roditeljska antitela inhibitora: M162-A04 i X63-G06. Jedan od pristupa je bio da se generišu biblioteke koje su premeštale CDR1/2 HC od dva različita roditeljska antitela inhibitora (M162-A04 i X63-G06) protiv dodatne CDR1/2 razlike. Drugi pristup je bio kreiranje biblioteka vrhova teških lanaca CDR3 na osnovu ovih elemenata.
[0781] 82 antitela koja su otkrivena na osnovu poboljšanja u M162-A04 zbog modifikacija u CDR1/2 i CDR3 regionu prikazana su u Tabeli 8. Skrining inhibicije sa 10 nM antitela (kao Fab fragmenti) otkrilo je da je bilo 33 antitela koja inhibiraju aktivnost pKal za preko 90%. Pokazano je da su nekoliko antitela subnanomolarni inhibitori ljudske pKal.
[0782] 62 antitela koja su otkrivena na osnovu poboljšanja u X63-G06 zbog modifikacija u CDR1/2 i CDR3 regiji su prikazana u Tabeli 9. Skrining inhibicije sa 10 nM antitelom (kao Fab fragmenti) otkrio je da su bilo 24 antitela koja inhibiraju aktivnost pKal za više od 90%. Pokazano je da su nekoliko antitela subnanomolarni inhibitori ljudske pKal.
40
-A
62
1
M
a M n
vu
no
os
a n
ja
n
reva
az
s
nog
G
itet
afin
ha
vr
a
tek
io
bl
bi
3
R D T
i C
1/2
R D C S
od
e
en
bij
do
la
ite A
ant
ence
ekv
8.S
ela
ba
T
A o M A M C M F M A M C M A M D
G T
A
A
C C C
G T
A
C
G
T
S
A
2 E
[0783] Aminokiselinske sekvence varijabilnog domena lakog lanca (LC) i teškog lanca (HC) pKal antitela dobijene od CDR1/2 i CDR3 biblioteka vrhova afinitetnog sazrevanja na osnovu M162-A04.
06
63-G X
u ov
osn naja an
zrev sa
nog tite
afin a
hov vrateklio
bib 3 R
D
i C 2 1/R D
C
od e
ijen
dob
elatitan ec en
Sekv 9. laeab T
A o M H M G M H M E M B M C M G
A o M G M A M B M B M G M A M H
Y D Y Y Y Y Y
A o M C M A M F M A M B M D M H
[0784] Aminokiselinske sekvence varijabilnog domena lakog lanca (LC) i teškog lanca (HC) od pKal antitela dobijene od CDR1/2 i CDR3 biblioteka vrhova afinitetnog sazrevanja na osnovu X63-G06.
PRIMER 6: In Vivo testiranje M162-A04 (IgG) i X101-A01
[0785] Bradikinin i drugi biološki aktivni kinini su prethodno bili uključeni u edeme izazvane karaginanom i upalni bol (Sharma J.N. i dr. (1998) Inflammopharmacology 6, 9-17; Asano M. i dr. (1997) Br J Pharmacol 122, 1436-1440; De Campos R.O. i dr. (1996) Eur J Pharmacol 316, 277-286). Kalikrein plazme i kalikrein tkiva 1 su dve primarne kininogenaze kod sisara (Schmaier A.H. (2008) Int Immunopharmacol 8, 161-165). M162-A04 (M162-A4) (IgG), specifičan inhibitor kalikreina plazme, je testiran kako bi se utvrdilo da li bi bio efikasan kod edema izazvanog karaginanom. Dizajn studije je prikazan u Tabeli 10. Put primene (ROA) za nosač (PBS), antitelo i pozitivnu kontrolu (indometacin) bio je intraperitonealni (IP) i primenjen je 30 minuta pre injekcije karaginanom (0,1 mL 2% rastvora karaginana). Iz ovoga je očigledno sa SLIKE 2 da su doze antitela na 10 mg/kg i više bile jednako efikasne u smanjenju edema izazvanog karaginanom kao pozitivna kontrola (indometacin). Međutim, antitelo nije bilo efikasno u smanjenju toplotne hiperalgezije indukovane karaginanom (SLIKA 3). Razlog za disocijaciju između efikasnosti kod edema i hiperalgezije nije očigledan, ali može biti zbog razlika u bioaktivnosti različitih metabolita kinina. Lys-desArg9-bradikinin je najsnažniji agonist B1 receptora, za koji se veruje da je primarno uključen u preosetljivost na bol (Leeb-Lundberg L.M i dr. (2005) Pharmacol Rev 57, 27-77). Ovaj kinin metabolit generiše kalikrein tkiva 1, ne ne kalikrein plazme (Schmaier A.H. (2008) Int Immunopharmacol 8,161-165). Ova razlika u stvaranju kinina i posledična aktivacijom bradikinin receptora može dovesti do neočekivanog razdvajanja edema i hiperalgezije u ovom modelu.
[0786] Još jedan inhibitor pKal antitela X101-A01 takođe je testiran u CPE modelu koristeći dizajn studije prikazan u tabeli 10B. Podaci dobijeni na SLICI 14 pokazuju da je X101-A01 inhibirao edem u zavisnosti od doze u meri koja je uporediva sa onom kod pozitivne kontrole (indometacin).
Tabela 10A. Dizajn studije za karagenanom indukovani edem šape za testiranje M162-
A04
Tabela 10B. Dizajn studije za karagenanom indukovani edem šape za testiranje X101-
PRIMER 7: Procena izabranih antitela inhibitora kalikreina plazme
[0787] Procena izabranih optimizovanih antitela (X81-B01 i X67-D03) je prikazana u Tabeli 11. Nijedno antitelo nema nikakve potencijalna mesta deamidacije, izomerizacije ili oksidacije.
Tabela 11
PRIMER 8: Mapiranje epitopa
[0788] Region pKal vezan izabranim anti-pKal antitelima istražen je korišćenjem nekoliko postupaka. Prvo, testovi konkurencije su korišćeni kako bi se utvrdilo da li su se antitela nadmetala za vezivanje za pKal sa poznatim aktivnim inhibitorima usmerenim na mesto. Drugo, antitela su grupisana prema tome da li su inhibitori ili samo veznici za pKal. Treće, ispitani su epitopi korišćenjem sintetičkih peptida i peptidnih struktura na osnovu sekvence i trodimenzionalne strukture pKal. Ove peptidne strukture nazivaju se „CLIPS“ (hemijski povezani peptidi na skelama), i testiranje je izvršeno za naknadu od strane uslužne kompanije Pepscan.
[0789] Četvrto, antitela su testirana za svoju sposobnost da inhibiraju pKal od drugih vrsta, pored čoveka, gde je aminokiselinska sekvenca pKal određena kako bi se identifikovale aminokiseline koje mogu uzrokovati razlike u inhibiciji.
Testovi nadmetanja
[0790] Korišćenjem BIACORE® SPR testa antitela od interesa su testirana za nadmetanje sa poznatim inhibitorima aktivnog mesta od pKal. EPI-KAL2 je potentan (Ki,app= 0,1 nM) inhibitor aktivnog mesta od pKal i inhibitor Kunitz domena na bazi prvog domena inhibitora puta faktora tkiva (Markland (1996) Iterativna optimizacija visoko-afinitetnih proteaznih inhibitora korišćenjem prikaza faga.2. Kalikrein plazme i trombin. Biochemistry.
35(24):8058-67). Kunitz domeni su poznati inhibitori aktivnih mesta serinskih proteaza, kao što je pKal.
[0791] Sekvenca EPI-KAL2 je:
(aminokiseline u kurzivu su one koje se razlikuju od TFPI)
[0792] Kao što je prikazano u SLIKAMA 8A-8B, antitela X81-B01 i X67-D03 su se nadmetala za vezivanje za pKal u prisustvu ili EPI-KAL2. Ovaj rezultat ukazuje na to da se ili ova antitela vezuju u blizini aktivnog mesta ili alosterijske promene u konformaciji kompleksa pKal-EPI-KAL2 sprečavaju vezivanje antitela.
Antitela veznici u poređenju sa inhibitorima
[0793] Kao što je prikazano u Tabelama 1 i 2, sva jedinstvena antitela otkrivena prikazom faga su okarakterisana pKal kao bilo inhibitori, ili kao veznici ali ne inhibitori. Antitela koja inhibiraju aktivnost pKal se vezuju u blizini aktivnog mesta i sprečavaju interakcije supstratora (konkurentski inhibitori) ili se vezuju daleko od aktivnog mesta i indukuju alosterijske promene u strukturi aktivnog mesta (nekonkurentni inhibitori). Antitela koje vezuju, ali ne inhibiraju pKal, malo verovatno će se vezivati u blizini aktivnog mesta i mogu vezati nekatalitički domen (tj. Domen jabuke). Tabela 12 kategoriše izabrana antitela kao inhibitore ili veznici pKal .U Tabela 12 je za navedena antitela takođe prikazano da li reaguju sa mišjim pKal kao inhibitori i da li se vezuju za prekalikrein.
Tabela 12. Vezujuća svojstva izabranih anti-pKal antitela
Mapiranje epitopa koristeći CLIPS
[0794] 11 anti-pKal antitela navedena u Tabeli 12, plus jedna negativna kontrola (A2) testirani su za vezivanje na 5000 različitih sintetičkih CLIPS (hemijski povezanih peptida na skelama) od strane Pepscana, kako je opisano u nastavku u odeljku CLIP POSTUPCI. Ova analiza dovela je do identifikacije peptidnih regiona u pKal koji su verovatno deo epitopa antitela za svako od testiranih antitela (SLIKA 9).
CLIPS POSTUPCI
[0795] Linearni i CLIPS peptidi su sintetisani na bazi aminokiselinske sekvence ciljanog proteina koristeći standardnu Fmoc-hemiju i uklonjeni zaštitom koristeći trifluornu kiselinu sa čistačima. Ograničeni peptidi su sintetisani na hemijskim skelama kako bi se rekonstruisali konformacioni epitopi, koristeći tehnologiju hemijsko vezanih peptida na skelama (CLIPS) (Timmerman i dr. (2007). Na primer, sintetizovani su pojedinačni obmotani peptidi koji sadrže dicistein koji je bio ciklizovan tretiranjem sa alfa,alfa'-dibromoksilenom i veličina petlje varirala je uvođenjem ostataka cisteina u varijabilnom razmaku. Ukoliko su bili prisutni i drugi cisteini, bili su zamenjeni alaninom, i bočni lanci višestrukih cisteina u peptidima su povezani sa CLIPS šabloe reakcijama PEPSCAN karticama formata kreditne kartice (455 peptidnih formata/karticu) sa 0,5 mM rastvorom CLIPS šablona kao što je 1,3-bis(bromometil) benzen u amonijum bikarbonatu (20 mM, pH 7,9)/acetonitril (1:1(v/v)). Kartice su nežno mešane u rastvoru od 30 do 60 minuta dok nisu potpuno pokrivene u rastvoru. Konačne, kartice su oprane detaljno sa viškom H2O i sonifikovane u disruptorpuferu koji sadrži 1 procenat SDS/0,1 procenat beta-merkaptoetanola u PBS (pH 7,2) na 70°C u trajanju od 30 minuta, nakon čega sledi sonifikacija u H2O tokom još 45 minuta. Vezivanje antitela na svaki peptid je testirano u ELISA na osnovu PEPSCAN.455-komorične polipropilenske u obliku kartice kreditne kartice, koje sadrže kovalentno povezane peptide, inkubirane su primarnim rastvorom antitela, na primer koji se sastoji od 1 mikrograma/ml razblažen u blokirajućem rastvoru nazvanom SQ (4% konjski serum, 5% ovalbumin (w/v) u PBS/1% Tween ili razblažen u PBS npr., 20% SQ) preko noći. Posle pranja, peptidi su inkubirani sa 1/1000 razređivanjem peroksidaze zečijeg anti-ljudskog antitela ili kozjie-anti-ljudske FAB peroksidaze u toku jednog sata na 25°C. Posle pranja, dodati su supstrat peroksidaze 2,2'-azino-di -3-etilbenztiazolin sulfonat (ABTS) i 2 mikrolitara od 3 procenta H2O2. Nakon jednog sata, izmeren je razvoj boje. Razvoj boja je kvantifikovan pomoću uređaja za punjenje (CCD) - kamere i sistema za obradu slike (kao što je prvo opisano kod Slootstra i dr., 1996).
Obračun podataka
Sirovi podaci: Optička gustina (proizvoljne OD jedinice)
[0796] Sirovi podaci su optičke vrednosti dobijene CCD kamerom. Vrednosti se uglavnom kreću od 0 do 3000, logaritamska skala slična sa 1 do 3 standardnim elisa čitačem 96-komoričnih ploča. Prva CCD kamera pravi sliku kartice pre bojenja peroksidazom, i zatim ponovo sliku nakon bojenja peroksidazom. Ove dve slike su oduzete jedna od druge što dovodi do podataka koji se nazivaju sirovi podaci. Ovo se kopira u Peplab<tm>bazu podataka. Zatim se vrednosti kopiraju u Excel i ova datoteka je označena kao sirova datoteka. Jedna naknadna manipulacija je dozvoljena. Ponekad komorica sadrži vazdušni mehur koji rezultuje lažno pozitivnom vrednošću, kartice se ručno pregledaju i svaka vrednost uzrokovana vazdušnim mehurom se vrednuje kao 0.
[0797] Obično se analize ne rade u replikatu (samo na zahtev klijenta). Replikati testova su obično veoma slični. Pored toga, skup podataka na hiljadama peptida sadrži mnoge slične peptide, tako da se rezultati nikad ne zasnivaju na prepoznavanju jednog peptida, već na porodicama sličnih peptida. Ako se jedan ili nekoliko peptida ne veže, ili pokazuju manju vezu, u repliciranom eksperimentu, obično se ne pripisuje različito mapiranje epitopa.
[0798] Timmerman i dr. (2007). Functional reconstruction and synthetic mimicry of a conformational epitope using CLIPS™ technology. J. Mol. Recognit. 20:283-99
[0799] Slootstra i dr. (1996). Structural aspects of antibody-antigen interaction revealed through small random peptide libraries, Molecular Diversity, 1, 87-96.
PRIMER 9: Analiza pKal sekvenci iz različitih vrsta
[0800] Sve raspoložive pKal sekvence su dobijene iz javnih baza podataka i poravnate koristeći ClustalW i regioni su istaknuti na osnovu dostupnosti solvenata, dodira sa Kunitz inhibitorom aktivnog mesta i onih peptida identifikovanih pomoću CLIPS analize (SLIKA 10A-10C). Citrirana plazma svake od ovih vrsta je dobijena i aktivirana pomoću komercijalno dostupnog prekalikrein aktivatora (od Enzyme Research Laboratories) prema uputstvima proizvođača. Kalikreinska aktivnost je tada merena u svakom od uzoraka u prisustvu ili odsustvu X81-B01.
[0801] Utvrđeno je da je X81-B01 inhibirao pKal od svih vrsta osim svinjskog pKal. S obzirom da CLIPS analiza identifikuje četiri peptida pKal koja X81-B01 vezuje za-C2 (položaji 81-94), C3 (položaji 101-108), C5 (položaji 162-178) i C6 (položaji 186-197) -razlike u sekvencama svinjskog pKal koje odgovara ovim peptidima ispitana je kako bi se identifikovale potencijalne promene aminokiselina koje uzrokuju nedostatak inhibicije svinjskog pKal od strane X81-B01. Peptidi C2 i C3 su blizu u sekvenci i oba su veoma slična po sekvenci među različitim vrstama. Međutim, postoji razlika na položaju 479. Sve vrste osim svinja, žabe i psa imaju serin na položaju 479. pKal sekvenca žaba i pasa ima alanin i treonin na položaju 479, respektivno; oba se smatraju konzervativnim supstitucijama serina. Nasuprot tome, svinjska pKal sekvenca ima leucin na položaju 479, što je znatno manje konzervativna supstitucija serina. Peptid C5 kod svinjskog pKal je veoma sličan sekvencama drugih vrsta. Međutim, na položaju 563, samo kod svinjskog pKal je prisutan histidin (podebljan na SLICI 10C). Ova položaj u svim ostalim vrstama, osim žabe, je tirozin. Kod žabljeg pKal, koji je inhibiran od strane X81-B01, ova položaj je treonin. Peptid C6 kod svinjskog pKal je opet veoma sličan ostalim sekvencama. Međutim, samo u svinjskoj pKal sekvenci je položaj 585 glutamat (podebljan na SLICI 10C). U svim ostalim vrstama ovaj položaj je aspartat. Ova analiza može ukazivati na potencijalno kritične ostatke u pKal koji interakuju sa X81-B01.
PRIMER 10: In vitro i in vivo testovi za procenu efikasnosti vezujućeg proteina kalikreina plazme.
[0802] Vezivanje za prekalikrein u odnosu na kalikrein: Prednost antitela inhibitora pKal koji ne vezuje prekalikrein u odnosu antitelo koje vezuje prekalikrein može se pokazati eksperimentalno. Na primer, in vitro eksperiment se može dizajnirati za upoređivanje potencijala antitela inhibitora pKal koje ne vezuje prekalikrein (npr. DX-2922) sa onim koje vezuje prekalikrein (npr. M6-D09) pomoću aktiviranog vremena delimičnog tromboplastina (APTT) u periodu za grupisanje plazme. APTT analiza indukuje grupisanje u plazmi dodavanjem reagensa koji specifično aktivira komponentu kontaktnog sistema intrističkog puta koagulacije, čija je aktivnost pKal uključena. U literaturi je dobro poznato da inhibicija pKal, ili da genetski nedostatak u pKal, vode do produženog aPPT (pogledati npr. Morishita, H., i dr., Thromb Res, 1994.73(3-4): p.193-204 ; Wynne Jones, D., i dr., Br J Haematol, 2004. 127(2): p.220-3). In vitro eksperiment se može izvesti kako bi se utvrdio efekat citrirane ljudske plazme sa različitim koncentracijama bilo M6-D09 ili DX-2922 u posmatranim periodima koagulacije indukovane korišćenjem komercijalno dostupnih APTT reagensa i koagulacionog analizatora (Tabela 13). Očekuje se da će posmatrani EC50 za APTT produžavanje M6-D09 biti značajno veći od onog kod DX-2922 zbog vezivanja M6-D09 na visoku koncentraciju prekalikreina (~500 nM) u normalnom uzorku plazme.
Efikasnost antitela inhibitora pKal kao što je pokazano APTT produžavanjem podržava potencijalnu terapeutsku upotrebu antitela u lečenju ili sprečavanju kardiovaskularnih bolesti povezanih sa nepravilnim formiranjem tkiva, kao što se može zapaziti kod ateroskleroze, moždanog udara, vaskulitisa, aneurizma i pacijenata kom su implantiraniventrikularni uređaji.
Tabela 13: Dizajn studije za merenje efekta antitela inhibitora pKal na APTT
[0803] Efikasnost kod pacovskog modela edema: In vivo eksperiment takođe može biti izveden kako bi se pokazala povećana jačina antitela inhibitora pKal koja ne vezuju prekalikrein. Karaginanom-indukovan edem šape (CPE) kod pacova je uobičajeni farmakološki model. Grupa pacova će se tretirati eskalacijom doza M6-D09 i DX-2922 intraperitonealnom (IP) injekcijom pre injektiranja karaginana (npr.0,1 ml 10% w/v rastvora) u šape pacova (Tabela 14). Očekuje se da će DX-2922 biti efikasniji u smanjenju opaženog otoka šape nego M6-D09. Efikasnost antitela podržava terapeutsku upotrebu antitela kod različitih upalnih oboljenja koja su povezana ili sa oticanjem (npr. nasledni angioedem, edem izazvanim moždanim udarom, edem mozga) ili upala i i bol posredovani bradikininom (npr. reumatoidni artritis, upalna bolest creva).
Tabela 14: Dizajn studije za posmatranje efekta antitela inhibitora na CPE
[0804] Poluživot merenja: Farmakokinetička svojstva DX-2922 će se odrediti kod pacova i cinomolgus majmuna u dizajnu studije opisanom u Tabeli 15. Serum će se sakupljati u vremenima koja su navedena nakon injekcije DX-2922. Koncentracija DX-2922 će se odrediti pomoću ELISA i prikazati u zavisnosti od vremena u cilju dobijanja farmakokinetičkih parametara (čišćenje, poluživot, zapremina distribucije itd.). Očekuje se da će DX-2922 imati polu-život veći od 5 dana kod cinomolgus majmuna koji će preneti na poluživot duži od 7 dana kod ljudi.
Tabela 15: Farmakokinetička studija pKal inhibitora kalikreina plazme primenjenog intravenskim i subkutanim putevima cinomolgus majmunima.
PRIMER 11: Mapiranje epitopa koristeći aminokiselinske mutacije pKal
[0805] Na osnovu studija mapiranja epitopa opisanih ovde u Primeru 8, pregledali smo objavljeni trodimenzionalni model u RCSB Protein Data Bank (dostupan na Internetu na rcsb.org; pdb kod 2ANI) i identifikovali smo skup setova aminokiselina u površinski pristupačnim petljama u blizini aktivnog mesta enzima, za koje smo smatrali, da bi mogli da deluju sa vezivanjem antitela, što dovodi do inhibicije enzima. Ove aminokiseline su zamenjene alaninom i katalitički domen svakog mutanta je eksprimiran kod Pichia pastoris sa HIS fuzijom tagova i pročišćenim IMAC. Sintetisana su i testirani četiri različita pKal mutanta:
Mutant 1: Aminokiseline S478, N481, S525 i K526 ljudske kalikrein sekvence (Pristupni broj NP_00883.2) su mutirane u alanin. Određene su ove aminokiseline uključene u prepoznavanje supstrata (S3 podlokacija).
Mutant 2: Ostaci aminokiselina R551, K553, I555, T558 i R560 ljudske kalikrein sekvence (Pristupni broj NP_00883.2) su mutirani u alanin. Utvrđeno je da su ovi ostaci uključeni u prepoznavanje supstrata na aktivnoj lokaciji (S1 podlokacija). Mutant 3: Aminokiseline D572, K575 i D577 ljudske kalikrein sekvence (Pristupni broj NP_00883.2) su mutirane u alanin. Ovi aminokiselinski ostaci uključeni su u prepoznavanje supstrata (S1' podlokacija)
Mutant 4: Aminokiseline N395, S397 i S398 ljudske kalikrein sekvence (Pristupni broj NP_00883.2) su mutirane u alanin. Ovi ostaci su distalni od aktivnog mesta kalikreina plazme.
[0806] Tri od 4 mutanta (Mutant 1, 2 i 4) imaju sličnu aktivnost kao divlji katalitički domen pKal. Supstitucije aminokiselina na Mutantu 3 daju neaktivan protein koji nije prepoznat u testovima vezivanja SPR (Biacore) pomoću bilo kog testiranog anti-pKal antitela.
[0807] Antitela ispitana za inhibiciju mutanata 1, 2 i 4 su prikazana ovde u Tabeli 16. Na osnovu izmerene vrednosti Ki,appvrednosti za antitela u Grupi 1 (tj. antitela koja inhibiraju ljudski i mišiji pKal ali se ne vezuju za prekalikrein), očigledno je da ova grupa antitela povezuje epitop na pKal koji sadrži aminokiseline koje su mutirani u Mutantu 2, ali nisu zavisne od ostataka mutiranih u Mutantima 1 ili 4. Pored toga, supstitucije u Mutantu 1 negativno utiču na interakciju vezujućih proteina kalikreina plazme X81-B01/X101-A01/DX-2922 i afinitetno zrelog derivata X115-B07 sa kalikreinom. Za primer razlika u sposobnosti antitela da vezuju prekalikrein pogledati, na primer, Slike 11A i 11B, koje upoređuju vezivanje prekalikreina DX-2922 (Grupa 1) sa onim od M6-D09 (Grupa 3).
[0808] Antitela u Grupi 2 (tj. ona koja inhibiraju ljudski pKal, ne mišiji pKal, i ne vezuju prekalikrein) nisu značajno pogođena mutiranim aminokiselinama što ukazuje na to da stupaju u kontakt sa alternativnim aminokiselinama. Antitela Grupe 2 se verovatno vezuju u blizini aktivnog mesta, jer nisu mogla da vezuju pKal kompleksovan sa Kunitz domenom (EPI-KAL2), za koje se zna da se vezuju na aktivnom mestu serinske proteaze. Osim toga, jedno od antitela u grupi 2 (M145-D11) je slično onima u Grupi 1 po tome što nije u mogućnosti da vezuje pKal u Biacore testu koji je inaktiviran sa inhibitorom samoubistva AEBSF (4-(2-aminoetil)benzensulfonil fluorid hidrohlorid), koji je mali kovalentni inhibitor molekulskih serinskih proteinaza tripsina (Slika 12). Međutim, drugo antitelo (M29-D09) dodeljeno Grupi 2 je moglo da veže AEBSF inaktiviran pKal, što ukazuje na to da može vezati drugačiji epitop od M145-D11 uprkos tome što deli slična vezujuća svojstva.
[0809] Antitela u Grupi 3 inhibirale su pKal čoveka i miša ali su vezala prekalikrein. Jedno od ovih antitela, M6-D09, nije uspelo da vezuje pKal inaktiviran od strane EPI-KAL2 ili AEBSF, što ukazuje na to da ova grupa inhibitora pKal interakuje sa alternativnim aminokiselinama u blizini aktivnog mesta. Ki,appza M6-D09 se povećao približno 5 puta prema Mutantu 2 (tj. smanjena potencija M6-D09).
PRIMER 12: Afinitetno sazrevanje
[0810] Pored afinitetnog sazrevanja koje je ovde opisano u Primerima 4 i 5, koje uključuje optimizaciju lakog lanca, pokušali smo da dodatno optimizujemo afinitet sa bibliotekama koje variraju aminokiseline u CDR1, CDR2 i CDR3 regionima varijabilnog teškog lanca dva različita roditeljska anti-pKal antitela. Oba antitela izabrana za dalju optimizaciju (X63-G06 i M162-A04) pokazuju poželjna svojstva za dalji razvoj kao terapeutsko antitelo inhibitor kalikreina plazme; osobine uključuju: a) potpunu inhibiciju ljudskog i glodarskog kalikreina plazme, i b) nema vezivanja za prekalikrein. U nekim otelotvorenjima, potpuna inhibicija ljudskog pKal je suštinska za blokiranje aktivnosti kalikreina plazme kod primena za bolesti. Inhibicija glodarskog pKal olakšava pretklinički razvoj, uključujući procenu toksičnosti. Nedostatak vezivanja za prekalikrein je veoma poželjno svojstvo antitela inhibitora pKal kako bi se maksimalizovala biodostupnost terapijskog antitela prema aktivnoj pKal meti i potencijalno smanjila doza potrebna za efikasnost.
[0811] Afinitetno sazrevanje izvršeno je korišćenjem 4 različite biblioteke prikaza faga. Za svako roditeljsko antitelo (npr., I62-A04) izgrađena je biblioteka koja sadrži različite položaje aminokiselina u CDR1 i CDR2 teškog lanca. Izrađena je dodatna biblioteka za svako od dva roditeljske antitela gde su položaji u CDR3 teškog lanca različiti. Svaka od ove 4 biblioteke faga izabrana je sa smanjenjem količine aktivnog pKal u svakom sledećem krugu radi dobijanja visoko afinitetnih antitela. Kako bi se smanjio pojavljivanje vezivanja prekalikreina u odabranim antitelima, biblioteke su u početku bile iscrpljene protiv imobilizovanog prekalikreina. Nakon skrininga kao Fab fragmenata, otkrili smo afinitetno zrela antitela prikazana u Tabeli 16 (tj. antitela sa identifikacionim brojem počevši od „X115“).
[0812] Četiri otkrivena antitela (X115-B07, X115-D05, X115-E09 i X115-H06) izvedena su iz roditeljskog antitela DX-2922 (takođe poznatog kao X63-G06 kao Fab fragment, X81-B01 kao IgG proizveden u 293T ćelijama. ili X101-A01 kao IgG proizveden u CHO ćelijama), i otkriveno je da su potentni pKal inhibitori. Za poređenje prikazana je aminokiselinska sekvenca DX-2922. Očigledno je da tri afinitetno zrela antitela (X115-B07, X115-E09 i X115-H06) sadrže mutacije u Hv-CDR3; dok X115-D05 ima drugačiji Hv-CDR1/CDR2. Još četiri otkrivena antitela (X115-F02, X115-A03, X115-D01 i X115-G04) izvedena su iz roditeljskog antitela M162-A04. Nijedno od ovih 8 afinitetno zrelih antitela ne vezuje prekalikrein.
Tabela 16: Sažetak konstanti (Ki,app) afinitetno zrelih anti-pKal inhibitor antitela za divlji tip pKal katalitičkog domena i Mutante 1, 2 i 4<a>.
Merenje ravnoteže Ki,app. Očigledne konstante inhibicije (Ki,appvrednosti) su merene preinkubiranjem enzima i inhibitorskim rastvorima pre iniciranja reakcija sa supstratom. Enzim i inhibitor su prethodno inkubirani tokom 2 sata na 30°C u 96-komoričnoj ploči dodavanjem 10 μL 10X enzimskog rastvora i 10 μL 10X inhibitorskog rastvora do 70 μL reakcionog pufera. Reakcije su započete dodavanjem 10 μL 10X koncentrisanog supstrata i praćene su na 30°C u čitaču fluorescentne ploče sa talasnim dužinama ekscitacije i emitovanja postavljene na 360 nm/460 nm, respektivno. Kinetički podaci su nabavljeni porastom fluorescencije, i početne stope za svaki uslov su iscrtane prema ukupnoj koncentraciji inhibitora. Podaci su bili u skladu sa sledećom jednačinom za inhibitore vezivanja:
[0814] Gde je A = početna stopa koja se primećuje pri svakoj koncentraciji inhibitora; Ao= inicijalna stopa primećena u odsustvu inhibitora; Ainh= inicijalna stopa koja je primećena za kompleks inhibitora enzima; Inh = koncentracija inhibitora; E = ukupna koncentracija enzima (tretirana kao plutajući parametar); i Ki,app= očigledna ravnotežna konstanta inhibicije.
[0815] Grupe antitela inhibitora. Antitela u Grupi 1 inhibiraju ljudski i mišji pKal, ali se ne vezuju za prekalikrein. Antitela u Grupi 2 inhibiraju ljudski, ali ne mišiji pKal i ne vezuju prekalikrein. Antitela u Grupi 3 inhibiraju ljudski i mišiji pKal, ali vezuju prekalikrein.
Biacore kompetitivna analiza sa primernim kalikrein antitelom, epi-Kal2.
[0816] Epi-Kal2 je antitelo inhibitor kalikreina koji deluje vezivanjem na aktivno mesto kalikreina (za sekvencu pogledati Primer 8). Biacore kompetitivna analiza se ovde koristi kao test za utvrđivanje da li se test kalikrein antitelo vezuje za isto mesto kao i epi-Kal2 i procenjuje se merenjem konkurencije (npr. pomeranja) između epi-Kal2 i test antitela za vezivanje na aktivno mesto.
[0817] Kozji anti-ljudski Fc fragment specifičan IgG ili anti-ljudski Fab IgG je imobilizovan aminskim spojem na CM5 senzorskom čipu pri gustini imobilizacije od oko 5000 RU. AntipKal antitela ili sFab su zarobljeni na odgovarajućim površinama ubrizgavanjem 50 nM rastvora IgG/sFab tokom 1-2 minuta na 5 u μl/min. Ljudski pKal (100 nM) ili ljudski pKalep-kal2 kompleks (100 nM hPKal koji je prethodno inkubiran sa 1 μM epi-kal2 tokom 1 sata na sobnoj temperaturi) ubrizgavani su preko uhvaćenih IgG ili sFab tokom 5 minuta pri 20-50 μl/min, nakon čega sledi faza disociacije od 5-10 minuta. Vezujući odgovori su zabeleženi na kraju faze pridruživanja. Smatra se da se anti-pKal IgG ili sFab nadmeću sa epi-kal2 za vezivanje za ljudski pKal ako je vezivanje pKal-epi-kal2 kompleksa na anti-pKal antitela značajno smanjeno (> 70%) u poređenju sa injekcijom samo hpKal. Površina senzorskog čipa je regenerisana impulsom od 10 mM glicina pH 1,5 sa brzinom protoka od 100 μl/min.
Merenja su izvedena na 25°C korišćenjem HBS-P (10 mM HEPES pH 7,4, 150 mM NaCl i 0,005% surfaktanta P20) kao aktivni pufer. Rezultati kompetitivne analize Biacore za epi-Kal2 prikazani su ovde na Slikama 11A i 11B.
Biacore kompetitivna analiza sa inhibitorima kalikreina malog molekula, AEBSF.
[0818] AEBSF (tj., 4-(2-aminoetil)benzen sulfonil fluorid hidrohlorid) je inhibitor kalikreina malog molekula. Biacore kompetitivna analiza se ovde koristi kako bi se utvrdilo da li se antitelo za testiranje vezuje za isto mesto (ili mesto preklapanja) koje koristi AEBSF za inhibiciju kalikreina.
[0819] Kozji anti-ljudski Fc fragment specifičan IgG ili anti-ljudski Fab IgG je imobilisan aminskim spojem na CM5 senzorskom čipu pri gustini imobilizacije od oko 5000 RU. AntipKal antitela ili sFab su zarobljeni na odgovarajućim površinama ubrizgavanjem 50 nM rastvora IgG/sFab tokom 1-2 minuta na 5 u μl/min. Ljudski pKal (100 nM) ili ljudski pKal-AEBSF kompleks (100 nM hPKal koji je prethodno inkubiran sa 1 μM AEBSF tokom 1 sata na sobnoj temperaturi) ubrizgavani su preko uhvaćenih IgG ili sFab tokom 5 minuta pri 20-50 μl/min, nakon čega sledi faza disociacije od 5-10 minuta. Vezujući odgovori su zabeleženi na kraju faze pridruživanja. Smatra se da se anti-pKal IgG ili sFab nadmeću sa AEBSF za vezivanje za ljudski pKal ako je vezivanje pKal- AEBSF kompleksa na anti-pKal antitela značajno smanjeno (> 70%) u poređenju sa injekcijom samo hpKal. Površina senzorskog čipa je regenerisana impulsom od 10 mM glicina pH 1,5 sa brzinom protoka od 100 μl/min.
Merenja su izvedena na 25°C korišćenjem HBS-P (10 mM HEPES pH 7,4, 150 mM NaCl i 0,005% surfaktanta P20) kao aktivni pufer. Rezultati kompetitivne analize Biacore za AEBSF prikazani su ovde na Slici 12.
[0820] Slede sekvence za varijabilne regije lakog lanca (LV), i varijabilne regije teškog lanca (HV) za 8 primernih afinitetno zrelih anti-pKal antitela:

Claims (13)

Patentni zahtevi
1. Nukleinska kiselina(e) koja kodira antitelo izabrano iz grupe koju čine:
(i) antitelo koje obuhvata VHsekvencu
i VLsekvencu
(ii) antitelo koje obuhvata VHsekvencu
i VLsekvencu
(iii) antitelo koje obuhvata VHsekvencu
i VLsekvencu
(iv) antitelo koje obuhvata VHsekvencu
i VLsekvencu
(v) antitelo koje obuhvata VH sekvencu
i VL sekvencu
(vi) antitelo koje obuhvata VH sekvencu
i VL sekvencu
(vii) antitelo koje obuhvata VH sekvencu
i VL sekvencu
(viii) antitelo koje obuhvata VH sekvencu
i VL sekvencu
(ix) antitelo koje obuhvata VH sekvencu
i VL sekvencu
(x) antitelo koje obuhvata VH sekvencu
i VL sekvencu
(xi) antitelo koje obuhvata VH sekvencu i VL sekvencu
(xii) antitelo koje obuhvata VH sekvencu i VL sekvencu
(xiii) antitelo koje obuhvata VH sekvencu i VL sekvencu
(xiv) antitelo koje obuhvata VH sekvencu i VL sekvencu
(xv) antitelo koje obuhvata VH sekvencu
i VL sekvencu
(xvi) antitelo koje obuhvata VH sekvencu
i VL sekvencu
(xvii) antitelo koje obuhvata VH sekvencu
i VL sekvencu
(xviii) antitelo koje obuhvata VH sekvencu
i VL sekvencu
2. Nukleinska(e) kiselina(e) prema patentnom zahtevu 1, gde antitelo sadrži sekvencu varijabilnog domena teškog lanca imunoglobulina (VH)
i sekvencu varijabilnog domena lakog lanca imunoglobulina (VL)
3. Nukleinska(e) kiselina(e) prema patentnom zahtjevu 1 ili patentnom zahtjevu 2, gde je antitelo, antitelo pune dužine.
4. Nukleinska(e) kiselina(e) prema patentnom zahtjevu 1 ili patentnom zahtjevu 2, gde je antitelo rastvorljivi Fab (sFab).
5. Nukleinska(e) kiselina(e) prema patentnom zahtjevu 4, gde je antitelo IgG.
6. Vektor(i) koji sadrži nukleinsku(e) kiselinu(e) prema bilo kom od patentnih zahteva 1-5.
7. Vektor(i) prema patentnom zahtevu 6, gde je/su vektor(i) ekspresijski vektor(i).
8. Ćelija domaćina koja sadrži nukleinsku(e) kiselinu(e) prema bilo kom od patentnih zahteva 1-5 ili vektor(e) prema zahtevu 6 ili zahtevu 7.
9. Ćelija domaćina prema patentnom zahtevu 8, gde je ćelija, ćelija sisavca.
10. Ćelija domaćina prema patentnom zahtevu 9, gde je ćelija sisavca ćelija jajnika kineskog hrčka (CHO).
11. Postupak za proizvodnju antitela koje se vezuje za aktivni oblik kalikreina ljudske plazme i ne vezuje ljudski prekalikrein, koji obuhvata
kultivisanje ćelije domaćina prema bilo kom od zahteva 8-10 u medijumu za kultivisanje, čime se proizvodi antitelo.
12. Postupak prema patentnom zahtevu 11, koji dalje obuhvata izdvajanje antitela iz medijuma za kultivisanje.
13. Postupak prema patentnom zahtevu 11 ili patentnom zahtevu 12, koji dalje obuhvata prečišćavanje antitela.
RS20220075A 2010-01-06 2011-01-06 Proteini koji vezuju kalikrein plazme RS62853B1 (sr)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US29261410P 2010-01-06 2010-01-06
EP18185298.9A EP3459564B1 (en) 2010-01-06 2011-01-06 Plasma kallikrein binding proteins

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS62853B1 true RS62853B1 (sr) 2022-02-28

Family

ID=44306145

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20220075A RS62853B1 (sr) 2010-01-06 2011-01-06 Proteini koji vezuju kalikrein plazme
RS20181061A RS57870B1 (sr) 2010-01-06 2011-01-06 Proteini koji vezuju kalikrein plazme

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20181061A RS57870B1 (sr) 2010-01-06 2011-01-06 Proteini koji vezuju kalikrein plazme

Country Status (21)

Country Link
US (10) US8822653B2 (sr)
EP (3) EP2521568B1 (sr)
JP (6) JP6037841B2 (sr)
AU (1) AU2011204349C1 (sr)
CA (3) CA2786019C (sr)
CY (3) CY1122268T1 (sr)
DK (2) DK3459564T3 (sr)
ES (2) ES2688093T3 (sr)
FR (1) FR19C1029I2 (sr)
HR (2) HRP20181419T1 (sr)
HU (3) HUE057244T2 (sr)
LT (3) LT3459564T (sr)
LU (1) LUC00115I2 (sr)
NL (1) NL300986I2 (sr)
NO (1) NO2019020I1 (sr)
PL (2) PL3459564T3 (sr)
PT (2) PT3459564T (sr)
RS (2) RS62853B1 (sr)
SI (2) SI3459564T1 (sr)
SM (2) SMT201800552T1 (sr)
WO (1) WO2011085103A2 (sr)

Families Citing this family (61)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6057287A (en) 1994-01-11 2000-05-02 Dyax Corp. Kallikrein-binding "Kunitz domain" proteins and analogues thereof
US20050222023A1 (en) * 2002-02-07 2005-10-06 Hans-Peter Hauser Albumin-fused kunitz domain peptides
US7153829B2 (en) 2002-06-07 2006-12-26 Dyax Corp. Kallikrein-inhibitor therapies
CA2488558C (en) 2002-06-07 2013-08-20 Dyax Corp. Prevention and reduction of blood loss
US7235530B2 (en) 2004-09-27 2007-06-26 Dyax Corporation Kallikrein inhibitors and anti-thrombolytic agents and uses thereof
US8637454B2 (en) 2009-01-06 2014-01-28 Dyax Corp. Treatment of mucositis with kallikrein inhibitors
RS62853B1 (sr) 2010-01-06 2022-02-28 Takeda Pharmaceuticals Co Proteini koji vezuju kalikrein plazme
AU2012204202A1 (en) 2011-01-06 2013-07-11 Dyax Corp. Plasma kallikrein binding proteins
CA2838984A1 (en) * 2011-06-10 2012-12-13 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods for modulating kallikrein (klkb1) expression
WO2013003808A1 (en) 2011-06-29 2013-01-03 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods for modulating kallikrein (klkb1) expression
FI2734552T3 (fi) 2011-07-22 2025-02-12 Csl Behring Gmbh Monoklonaaliset anti-tekijä xii/xiia -vasta-aineet ja niiden käyttö
IL273688B2 (en) 2013-01-20 2024-12-01 Dyax Corp Evaluation and treatment of bradykinin-mediated disorders
HRP20190528T1 (hr) * 2013-01-20 2019-05-17 Dyax Corp. PROCJENA, TESTOVI I LIJEČENJE POREMEĆAJA POSREDOVANIH S pKAL
CA3208188A1 (en) 2013-03-15 2014-09-25 Takeda Pharmaceutical Company Limited Anti-plasma kallikrein antibodies
CN103336127A (zh) * 2013-05-20 2013-10-02 许瑞安 一种早期肝病、肝纤维化和肝硬化指示剂与诊断剂
RU2712559C9 (ru) 2013-08-28 2020-10-08 Ионис Фармасьютикалз, Инк. Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
WO2015061182A1 (en) 2013-10-21 2015-04-30 Dyax Corp. Diagnosis and treatment of autoimmune diseases
EP3060582B1 (en) 2013-10-21 2020-09-23 Dyax Corp. Assays for determining plasma kallikrein system biomarkers
PT3096798T (pt) 2014-01-21 2021-02-25 Dyax Corp Proteínas de ligação à calicreína plasmática e seus usos no tratamento de angioedema hereditário
AU2015235967B2 (en) 2014-03-27 2020-10-22 Takeda Pharmaceutical Company Limited Compositions and methods for treatment of diabetic macular edema
HUE052709T2 (hu) 2014-05-01 2021-05-28 Ionis Pharmaceuticals Inc Módosított antiszensz oligonukleotidok konjugátumai és azok alkalmazása PKK expressziójának módosítására
EP4310097A3 (en) 2014-12-05 2024-04-03 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Chimeric antigen receptors targeting b-cell maturation antigen and uses thereof
CA2969877A1 (en) 2014-12-05 2016-06-09 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Antibodies targeting b-cell maturation antigen and methods of use
IL253180B2 (en) 2015-01-02 2023-04-01 Dyax Corp Bispecific antibodies against plasma kallikrein and factor xii
IL305207A (en) * 2015-03-30 2023-10-01 Takeda Pharmaceuticals Co Plasma kallikrein inhibitors and their uses to prevent the outbreak of hereditary angioedema
KR102794955B1 (ko) 2015-07-21 2025-04-15 다케다 파머수티컬 컴패니 리미티드 Xiia 인자의 단일클론 항체 저해제
EP3839514B1 (en) 2015-10-19 2023-12-13 Takeda Pharmaceutical Company Limited Immunoassay to detect cleaved high molecular weight kininogen
CN116077648A (zh) 2015-12-11 2023-05-09 武田药品工业株式会社 血浆激肽释放酶抑制剂及其治疗遗传性血管性水肿发作的用途
CN108475034B (zh) * 2015-12-25 2021-04-13 佳能株式会社 定影装置和成像装置
WO2017205820A1 (en) * 2016-05-27 2017-11-30 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Affinity matured broad spectrum antibodies to hepatitis c virus
IL314752A (en) 2016-09-16 2024-10-01 Takeda Pharmaceuticals Co Metabolite biomarkers for diseases associated with the contact activation system
JP7319916B2 (ja) 2016-09-16 2023-08-02 武田薬品工業株式会社 遺伝性血管性浮腫のｒｎａバイオマーカー
KR20250073510A (ko) 2016-09-16 2025-05-27 다케다 파머수티컬 컴패니 리미티드 접촉 활성화 시스템과 연관된 질환을 위한 단백질 바이오마커
CA3053305A1 (en) * 2017-02-17 2018-08-23 Mapp Biopharmaceutical, Inc. Monoclonal antibodies and cocktails for treatment of ebola infections
CN110461335A (zh) 2017-02-17 2019-11-15 弗雷德哈钦森癌症研究中心 用于治疗bcma相关癌症和自身免疫性失调的联合疗法
WO2018194181A1 (en) 2017-04-18 2018-10-25 Takeda Pharmaceutical Company Limited Heterocyclic compounds useful as modulators of acetylcholine receptors
TWI843344B (zh) 2017-06-02 2024-05-21 美商輝瑞大藥廠 對ｆｌｔ３具特異性之抗體及其用途
KR102845789B1 (ko) 2017-11-01 2025-08-14 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 B 세포 성숙 항원에 특이적인 키메라 항원 수용체 및 암호화 폴리뉴클레오타이드
KR20200074997A (ko) 2017-11-01 2020-06-25 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 B-세포 성숙 항원에 특이적인 항체 및 키메릭 항원 수용체
US12193994B2 (en) 2017-11-06 2025-01-14 Juno Therapeutics, Inc. Combination of a cell therapy and a gamma secretase inhibitor
WO2019165184A1 (en) * 2018-02-22 2019-08-29 Vanderbilt University Human japanese encephalitis virus antibodies and methods of use therefor
MX2021005024A (es) 2018-11-01 2021-07-21 Juno Therapeutics Inc Metodos de tratamiento que utilizan receptores de antigenos quimericos especificos para antigeno de maduracion de celulas b.
US12163956B2 (en) 2019-02-21 2024-12-10 Takeda Pharmaceutical Company Limited Lateral flow immunoassay for measuring functional C1-esterase inhibitor (C1-INH) in plasma samples
JP7531518B2 (ja) 2019-04-16 2024-08-09 武田薬品工業株式会社 機能的なＣ１エステラーゼインヒビター（ｆＣ１－ＩＮＨ）の定量化のための方法
JP2022540806A (ja) 2019-07-19 2022-09-20 オンコレスポンス，インク． 免疫調節抗体およびその使用方法
US20230037660A1 (en) * 2019-12-19 2023-02-09 Blaze Bioscience, Inc. Methods of treating vascular lesions and malformations
MX2022008649A (es) 2020-01-13 2022-09-23 Takeda Pharmaceuticals Co Inhibidores de calicreina plasmatica y sus usos para tratar episodios de angioedema hereditario pediatrico.
US20230077716A1 (en) * 2020-02-07 2023-03-16 Washington University Antibodies protective against influenza b
EP4126219A2 (en) * 2020-04-04 2023-02-08 Takeda Pharmaceutical Company Limited Plasma kallikrein inhibitors and uses thereof for treating acute respiratory distress syndrome
WO2021198534A1 (en) 2020-04-04 2021-10-07 Oxurion NV Plasma kallikrein inhibitors for use in the treatment of coronaviral disease
EP4232071A4 (en) * 2020-10-23 2024-08-28 Asher Biotherapeutics, Inc. FUSIONS WITH CD8 ANTIGEN-BINDING MOLECULES TO MODULATE IMMUNE CELL FUNCTION
US20240117072A1 (en) * 2020-12-18 2024-04-11 Bioardis, Llc Fap binding molecules and uses thereof
WO2022156798A1 (zh) * 2021-01-25 2022-07-28 成都康弘生物科技有限公司 一种抗体及其用途
EP4284839A4 (en) * 2021-01-28 2025-04-23 Astria Therapeutics, Inc. Plasma kallikrein antibodies and uses thereof
KR20240024829A (ko) 2021-05-19 2024-02-26 애셔 바이오테라퓨틱스, 인크. Il-21 폴리펩타이드 및 표적화된 작제물
IL311518A (en) 2021-10-01 2024-05-01 Adarx Pharmaceuticals Inc Preparations that modulate perkalkerine and methods of using them
WO2023144030A1 (en) 2022-01-31 2023-08-03 Oxurion NV Plasma kallikrein inhibitor therapy for anti-vegf sensitization
WO2023148016A1 (en) 2022-02-04 2023-08-10 Oxurion NV Biomarker for plasma kallikrein inhibitor therapy response
US12487299B2 (en) 2022-06-20 2025-12-02 Shanghai United Imaging Healthcare Co., Ltd. Magnetic resonance imaging devices and radiation therapy systems including the magnetic resonance imaging devices
EP4548103A2 (en) 2022-06-30 2025-05-07 Takeda Pharmaceutical Company Limited Protein biomarkers for lanadelumab treatment
WO2024206568A2 (en) * 2023-03-31 2024-10-03 Ibio, Inc. Anti-cd3 antibodies

Family Cites Families (251)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BR6915369D0 (pt) * 1969-02-27 1973-03-13 Bayer Ag Emprego de inibidores biologicos de proteases para conservacao de orgaos tecidos e alimentos
US3691016A (en) * 1970-04-17 1972-09-12 Monsanto Co Process for the preparation of insoluble enzymes
US3940475A (en) 1970-06-11 1976-02-24 Biological Developments, Inc. Radioimmune method of assaying quantitatively for a hapten
CA1023287A (en) * 1972-12-08 1977-12-27 Boehringer Mannheim G.M.B.H. Process for the preparation of carrier-bound proteins
US4179337A (en) * 1973-07-20 1979-12-18 Davis Frank F Non-immunogenic polypeptides
DE2619246A1 (de) * 1976-04-30 1977-11-10 Bayer Ag Desamino-derivate des kallikrein- trypsin-inhibitors, verfahren zu ihrer herstellung sowie ihre verwendung als arzneimittel
US4195128A (en) * 1976-05-03 1980-03-25 Bayer Aktiengesellschaft Polymeric carrier bound ligands
DE2654124A1 (de) * 1976-11-29 1978-06-01 Bayer Ag Derivate des trypsin-kallikrein-inhibitors aus rinderorganen (bpti) mit proteasenhemmwirkung und antiphlogistischer wirkung, ihre herstellung und ihre verwendung als arzneimittel
US4330440A (en) * 1977-02-08 1982-05-18 Development Finance Corporation Of New Zealand Activated matrix and method of activation
CA1093991A (en) * 1977-02-17 1981-01-20 Hideo Hirohara Enzyme immobilization with pullulan gel
US4229537A (en) * 1978-02-09 1980-10-21 New York University Preparation of trichloro-s-triazine activated supports for coupling ligands
US4289747A (en) 1978-12-26 1981-09-15 E-Y Laboratories, Inc. Immunological determination using lectin
AT359653B (de) * 1979-02-15 1980-11-25 Immuno Ag Verfahren zur herstellung eines gewebekleb- stoffes
US5179017A (en) 1980-02-25 1993-01-12 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US4399216A (en) 1980-02-25 1983-08-16 The Trustees Of Columbia University Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US4634665A (en) 1980-02-25 1987-01-06 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US4376110A (en) 1980-08-04 1983-03-08 Hybritech, Incorporated Immunometric assays using monoclonal antibodies
US4522811A (en) 1982-07-08 1985-06-11 Syntex (U.S.A.) Inc. Serial injection of muramyldipeptides and liposomes enhances the anti-infective activity of muramyldipeptides
AU560584B2 (en) * 1983-07-28 1987-04-09 Bayer Aktiengesellschaft Homologues of aprotinin
US4657893A (en) * 1984-05-09 1987-04-14 Syntex (U.S.A.) Inc. 4H-3,1-benzoxazin-4-ones and related compounds and use as enzyme inhibitors
US4845242A (en) * 1987-04-28 1989-07-04 Georgia Tech Research Corporation Isocoumarins with basic substituents as serine proteases inhibitors, anticoagulants and anti-inflammatory agents
US4609725A (en) * 1984-10-09 1986-09-02 Merck & Co., Inc. Cardiac atrial peptides
US5374548A (en) 1986-05-02 1994-12-20 Genentech, Inc. Methods and compositions for the attachment of proteins to liposomes using a glycophospholipid anchor
MX9203291A (es) 1985-06-26 1992-08-01 Liposome Co Inc Metodo para acoplamiento de liposomas.
CA1312564C (en) * 1985-07-12 1993-01-12 Robert W. Colman Monoclonal antibodies to human plasma prekallikrein and methods of preparing and using same
US5444156A (en) * 1985-07-12 1995-08-22 Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education Monoclonal antibodies to human plasma prekallikrein
JPH0623113B2 (ja) 1986-01-31 1994-03-30 浩 前田 癌性胸・腹水貯留抑制剤
US4868103A (en) 1986-02-19 1989-09-19 Enzo Biochem, Inc. Analyte detection by means of energy transfer
WO1987005396A1 (en) * 1986-03-03 1987-09-11 Brigham And Women's Hospital A method for evaluating nephrotoxicity
GB8607679D0 (en) 1986-03-27 1986-04-30 Winter G P Recombinant dna product
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
EP0255011A3 (en) 1986-07-29 1988-11-23 Miles Inc. Human inter-alpha-trypsin inhibitor gene
US5260203A (en) * 1986-09-02 1993-11-09 Enzon, Inc. Single polypeptide chain binding molecules
US4881175A (en) 1986-09-02 1989-11-14 Genex Corporation Computer based system and method for determining and displaying possible chemical structures for converting double- or multiple-chain polypeptides to single-chain polypeptides
US4946778A (en) 1987-09-21 1990-08-07 Genex Corporation Single polypeptide chain binding molecules
EP0332640A1 (en) 1986-11-17 1989-09-20 California Biotechnology, Inc. Recombinant alzheimer's amyloid protein
EP0285123A3 (en) 1987-04-03 1989-02-01 Stabra AG A method for complete mutagenesis of nucleic acids
US4966852A (en) * 1987-07-23 1990-10-30 Monsanto Company DNA clone of human tissue factor inhibitor
US5106833A (en) * 1987-07-23 1992-04-21 Washington University Coagulation inhibitors
IL87172A (en) 1987-07-23 1994-12-29 Univ Washington Method of isolating highly purified tissue factor inhibitor
GB2208511A (en) * 1987-08-07 1989-04-05 Bayer Ag Variants of bovine pancreatic trypsin inhibitor produced by recombinant dna technology
DK225488D0 (da) 1988-04-26 1988-04-26 Novo Industri As Polypeptid
ES2035317T5 (es) 1987-11-09 1998-03-16 Becton Dickinson Co Metodo para analizar celulas hematopoyeticas en una muestra.
IL87171A (en) 1987-11-23 1995-08-31 Monsanto Co cDNA of human tissue factor inhibitor
US5223409A (en) 1988-09-02 1993-06-29 Protein Engineering Corp. Directed evolution of novel binding proteins
US7078383B2 (en) 1988-09-02 2006-07-18 Dyax Corp. ITI-D1 Kunitz domain mutants as HNE inhibitors
US5045452A (en) * 1988-09-02 1991-09-03 Brigham And Women's Hospital Method for evaluating nephrotoxicity
EP1541682A3 (en) 1988-09-02 2005-07-06 Dyax Corp. Generation and selection of recombinant varied binding proteins
US5663143A (en) * 1988-09-02 1997-09-02 Dyax Corp. Engineered human-derived kunitz domains that inhibit human neutrophil elastase
US5372933A (en) * 1988-10-03 1994-12-13 The Scripps Research Institute Polypeptides that mimic receptor-induced binding sites, and methods of using same
US5530101A (en) * 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
DK0401508T3 (da) * 1989-05-13 1995-05-15 Bayer Ag Proteaseinhibitorer, fremgangsmåde til deres fremstilling samt lægemidler med indhold deraf
US5030002A (en) 1989-08-11 1991-07-09 Becton, Dickinson And Company Method and apparatus for sorting particles with a moving catcher tube
US5378614A (en) * 1989-08-18 1995-01-03 Novo Nordisk A/S Vector and method for making tissue factor pathway inhibitor (TFPI) analogues in yeast
DK408089D0 (da) * 1989-08-18 1989-08-18 Novo Nordisk As Proteiner
US5278285A (en) * 1990-02-01 1994-01-11 Bayer Aktiengesellschaft Variant of Kunitz-type inhibitor derived from the α3-chain of human type VI collagen produced by recombinant DNA technology
US5427908A (en) 1990-05-01 1995-06-27 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
JPH06508511A (ja) 1990-07-10 1994-09-29 ケンブリッジ　アンティボディー　テクノロジー　リミティド 特異的な結合ペアーの構成員の製造方法
IE76732B1 (en) 1990-08-07 1997-11-05 Becton Dickinson Co One step test for absolute counts
US5583107A (en) * 1990-09-04 1996-12-10 Cor Therapeutics, Inc. Agents affecting thrombosis and hemostasis
US5278144A (en) * 1990-09-04 1994-01-11 Cor Therapeutics, Inc. Antithrombosis agents
IL99585A0 (en) 1990-10-01 1992-08-18 Novo Nordisk As Aprotinin analogues,their production and pharmaceutical compositions containing them
AU641568B2 (en) 1990-11-13 1993-09-23 Mochida Pharmaceutical Co., Ltd. Polypeptide,DNA fragment encoding the same and process for producing the same, and enzyme inhibition process, drug composition and methods of treating using the same
DE69129154T2 (de) 1990-12-03 1998-08-20 Genentech, Inc., South San Francisco, Calif. Verfahren zur anreicherung von proteinvarianten mit geänderten bindungseigenschaften
US5304122A (en) 1991-02-14 1994-04-19 Medtronic, Inc. Method for providing a restenosis model in porcine coronary arteries
US5370901A (en) 1991-02-15 1994-12-06 Bracco International B.V. Compositions for increasing the image contrast in diagnostic investigations of the digestive tract of patients
US20030223977A1 (en) 1991-03-01 2003-12-04 Ley Arthur Charles Kunitz domain mutants as cathepsin G inhibitors
DE69233769D1 (de) 1991-03-01 2009-09-24 Dyax Corp Chimäres Protein mit Mikroprotein mit zwei oder mehr Disulfidbindungen und Ausgestaltungen davon
ATE414768T1 (de) 1991-04-10 2008-12-15 Scripps Research Inst Bibliotheken heterodimerer rezeptoren mittels phagemiden
US5166133A (en) * 1991-04-17 1992-11-24 Cetus Corporation Method for inhibing adhesion of white blood cells to endothelial cells
EP0940468A1 (en) 1991-06-14 1999-09-08 Genentech, Inc. Humanized antibody variable domain
DE4122599C2 (de) 1991-07-08 1993-11-11 Deutsches Krebsforsch Phagemid zum Screenen von Antikörpern
WO1993009233A2 (en) 1991-10-31 1993-05-13 The Salk Institute Biotechnology/Industrial Associates Inc. Recombinant amyloid precursor protein inhibitor domain and treatment of various disease states
IL104327A0 (en) * 1992-01-07 1993-05-13 Novo Nordisk As Variant of human kunitz-type protease inhibitor
IL104325A (en) 1992-01-07 2000-10-31 Novo Nordisk As Variants of human kunitz-type protease inhibitor domain II of tissue factor pathway inhibitor (TFPI) pharmaceutical compositions containing them a DNA construct encoding them their expression vectors a cell containing said DNA constructs and methods for the production of all the above
IL104314A0 (en) * 1992-01-07 1993-05-13 Novo Nordisk As Human kunitz-type protease inhibitor and variants thereof,their production and pharmaceutical compositions containing them
IL104326A0 (en) 1992-01-07 1993-05-13 Novo Nordisk As Variant of human kunitz-type protease inhibitor
IL104324A0 (en) 1992-01-07 1993-05-13 Novo Nordisk As Variant of human kunitz-type protease inhibitor
EP0552108B1 (en) 1992-01-17 1999-11-10 Lakowicz, Joseph R. Energy transfer phase-modulation fluoro-immunoassay
US5212091A (en) * 1992-03-02 1993-05-18 Monsanto Company Method of producing tissue factor pathway inhibitor
US6063764A (en) * 1992-06-01 2000-05-16 Washington University & Chiron Corp. Method for using lipoprotein associated coagulation inhibitor to treat sepsis
SE9201984D0 (sv) 1992-06-29 1992-06-29 Pharmacia Biosensor Ab Improvement in optical assays
EP0651766A4 (en) * 1992-07-13 1996-07-31 Corvas Int Inc INHIBITORS OF FACTOR Xa, DERIVED FROM THE INHIBITOR OF THE PANCREATIC TRYPSON FROM BEEF.
US5436153A (en) * 1992-12-02 1995-07-25 Sprecher; Cindy A. Human amyloid protein precursor homolog and Kunitz-type inhibitor
AU5684594A (en) * 1992-12-02 1994-06-22 Novo Nordisk A/S Novel human amyloid protein precursor homologue and kunitz-type inhibitors
US5426224A (en) * 1993-03-18 1995-06-20 The University Of North Carolina At Chapel Hill Mammalian DNA topoisomerase II inhibitor and method
JP3929484B2 (ja) * 1993-09-14 2007-06-13 ジェネンテック・インコーポレーテッド エコチンおよびその同族体を含む医薬的組成物
US5455338A (en) 1993-11-05 1995-10-03 Zymogenetics, Inc. DNA encoding novel human kunitz-type inhibitors and methods relating thereto
US5951974A (en) * 1993-11-10 1999-09-14 Enzon, Inc. Interferon polymer conjugates
US5446090A (en) * 1993-11-12 1995-08-29 Shearwater Polymers, Inc. Isolatable, water soluble, and hydrolytically stable active sulfones of poly(ethylene glycol) and related polymers for modification of surfaces and molecules
US5759548A (en) * 1993-11-30 1998-06-02 Lxr Biotechnology Inc. Compositions which inhibit apoptosis, methods of purifying the compositions and uses thereof
US5827690A (en) 1993-12-20 1998-10-27 Genzyme Transgenics Corporatiion Transgenic production of antibodies in milk
US6057287A (en) 1994-01-11 2000-05-02 Dyax Corp. Kallikrein-binding "Kunitz domain" proteins and analogues thereof
PT739355E (pt) 1994-01-11 2005-01-31 Dyax Corp Proteinas de 'dominio de kunitz' inibidoras de calicreina e seus analogos
PT1489097E (pt) 1994-01-11 2012-01-04 Dyax Corp Inibidores de plasmina humana derivados de domínios kunitz e ácidos nucleicos codificando os mesmos
US5795954A (en) * 1994-03-04 1998-08-18 Genentech, Inc. Factor VIIa inhibitors from Kunitz domain proteins
HU221311B1 (en) * 1994-06-02 2002-09-28 Merrell Pharma Inc Perfluoroalkyl tripeptides inhibitors of elastase, pharmaceutical compositions comprising thereof and their use
JP3779728B2 (ja) * 1994-08-05 2006-05-31 カイロン コーポレイション 組織因子活性インヒビターの産生
US5589359A (en) 1994-08-05 1996-12-31 Chiron Corporation Chimeric proteins
US5648331A (en) * 1994-08-26 1997-07-15 G.D. Searle & Co. Method of inhibiting tissue ischemia and reperfusion injury
ES2276396T3 (es) * 1994-10-18 2007-06-16 Dendreon Corporation Proteinas anticoagulantes e inhibidores de la serina proteasa extraidos de nematodos.
US6159938A (en) 1994-11-21 2000-12-12 Cortech, Inc. Serine protease inhibitors comprising α-keto heterocycles
JPH10510540A (ja) 1994-12-12 1998-10-13 オメロス メディカル システムズ，インコーポレーテッド 灌注用溶液並びに疼痛、炎症及びけいれんの抑制法
MX9703988A (es) * 1994-12-12 1998-02-28 Omeros Med Sys Inc SOLUCIaN Y MÉTODO DE IRRIGACIaN PARA LA INHIBICIaN DEL DOLOR, LA INFLAMACIaN Y ES ESPASMO.
US5914316A (en) * 1994-12-16 1999-06-22 Washington University Method of inhibiting intimal hyperplasia
US5932462A (en) * 1995-01-10 1999-08-03 Shearwater Polymers, Inc. Multiarmed, monofunctional, polymer for coupling to molecules and surfaces
ATE251141T1 (de) 1995-03-10 2003-10-15 Berlex Lab Benzamidin-derivate, deren herstellung und deren verwendung als anti-koagulantien
US5695760A (en) * 1995-04-24 1997-12-09 Boehringer Inglehiem Pharmaceuticals, Inc. Modified anti-ICAM-1 antibodies and their use in the treatment of inflammation
CA2219486A1 (en) 1995-04-28 1996-10-31 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US5804376A (en) * 1995-05-02 1998-09-08 Incyte Pharmaceuticals, Inc. Pancreas-derived serpin
ZA963619B (en) * 1995-05-08 1996-11-22 Scios Inc Protease inhibitor peptides
WO1996035788A2 (en) 1995-05-08 1996-11-14 Scios, Inc. Kunitz type protease inhibitors
US5786328A (en) * 1995-06-05 1998-07-28 Genentech, Inc. Use of kunitz type plasma kallikrein inhibitors
US5780265A (en) * 1995-06-05 1998-07-14 Genentech, Inc. Kunitz type plasma kallikrein inhibitors
US6242414B1 (en) 1995-06-07 2001-06-05 Chiron Corporation Regulation of cytokine synthesis and release
US6126933A (en) 1995-06-27 2000-10-03 Genetics Institute Methods of treating inflammatory bowel diseases by administering IL-11
US5672662A (en) * 1995-07-07 1997-09-30 Shearwater Polymers, Inc. Poly(ethylene glycol) and related polymers monosubstituted with propionic or butanoic acids and functional derivatives thereof for biotechnical applications
JPH0959838A (ja) 1995-08-24 1997-03-04 Kuraray Co Ltd 紡績糸
JPH11512439A (ja) * 1995-09-14 1999-10-26 エルエックスアール バイオテクノロジー インコーポレイテッド リン脂質の混合物を含む抗アポトーシス活性を有する組成物
KR19990063648A (ko) * 1995-09-21 1999-07-26 프레드한 아룬디프 에스 글루타민산 데카복실라제에 대한 항체와 폴리(에틸렌 글리콜)공액물을 섬세포에 제공하는 방법
US5736364A (en) * 1995-12-04 1998-04-07 Genentech, Inc. Factor viia inhibitors
AU716923B2 (en) 1996-03-11 2000-03-09 Aerovance, Inc. Human bikunin
US6013763A (en) * 1996-06-04 2000-01-11 Genentech, Inc. Peptide variants of protein A
US5869637A (en) * 1996-07-22 1999-02-09 Incyte Pharmaceuticals, Inc. Human Kallikrein
DE19632772A1 (de) 1996-08-14 1998-02-19 Basf Ag Neue Benzamidine
US6214966B1 (en) 1996-09-26 2001-04-10 Shearwater Corporation Soluble, degradable poly(ethylene glycol) derivatives for controllable release of bound molecules into solution
US6255455B1 (en) 1996-10-11 2001-07-03 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Rh(D)-binding proteins and magnetically activated cell sorting method for production thereof
US6258351B1 (en) 1996-11-06 2001-07-10 Shearwater Corporation Delivery of poly(ethylene glycol)-modified molecules from degradable hydrogels
EP2305027B1 (en) 1996-12-03 2014-07-02 Amgen Fremont Inc. Transgenic mammals having human Ig loci including plural VH and Vkappa regions and antibodies produced therefrom
ATE529509T1 (de) 1997-01-21 2011-11-15 Gen Hospital Corp Selektion von proteinen unter verwendung von rna- protein-fusionen
US5840871A (en) * 1997-01-29 1998-11-24 Incyte Pharmaceuticals, Inc. Prostate-associated kallikrein
EP1005551A2 (en) 1997-01-31 2000-06-07 Human Genome Sciences, Inc. Tissue factor pathway inhibitor-3
US5962300A (en) * 1997-03-26 1999-10-05 Incyte Pharmaceuticals, Inc. Human kallikrein
DE69833755T2 (de) 1997-05-21 2006-12-28 Biovation Ltd. Verfahren zur herstellung von nicht-immunogenen proteinen
US5990237A (en) * 1997-05-21 1999-11-23 Shearwater Polymers, Inc. Poly(ethylene glycol) aldehyde hydrates and related polymers and applications in modifying amines
JP3786832B2 (ja) 1998-01-07 2006-06-14 デビオ ルシェルシュ ファルマシュティーク ソシエテ アノニム 分解性のヘテロ二官能性ポリ（エチレングリコール）アクリレート及びそれから誘導されるゲル及び複合体
ATE268609T1 (de) 1998-03-12 2004-06-15 Nektar Therapeutics Al Corp Polyethylenglycolderivate mit benachbarten reaktiven gruppen
US6455639B1 (en) 1998-03-24 2002-09-24 Nof Corporation Oxirane derivative and process for the preparation thereof
US6017723A (en) * 1998-03-27 2000-01-25 Long Island Jewish Medical Center Method for isolating inhibitors of protease activity
AU3463699A (en) 1998-04-03 1999-10-25 Phylos, Inc. Addressable protein arrays
US6001596A (en) * 1998-05-07 1999-12-14 Incyte Pharmaceuticals, Inc. Growth-associated protease inhibitor heavy chain precursor
US6087473A (en) * 1999-05-26 2000-07-11 Zymogenetics, Inc. Kunitz domain polypeptide and materials and methods for making it
AU4229599A (en) 1998-06-03 1999-12-20 Scios Inc. Protease inhibitor peptides
US6034053A (en) 1998-07-13 2000-03-07 Wayne Hughes Institute EGF-isoflavone conjugates for the prevention of restenosis
US6783965B1 (en) 2000-02-10 2004-08-31 Mountain View Pharmaceuticals, Inc. Aggregate-free urate oxidase for preparation of non-immunogenic polymer conjugates
CA2338665C (en) 1998-08-06 2011-01-18 Mountain View Pharmaceuticals, Inc. Peg-urate oxidase conjugates and use thereof
CA2342072C (en) 1998-09-03 2005-01-11 Zymogenetics, Inc. Kunitz domain polypeptide zkun6
US7067144B2 (en) 1998-10-20 2006-06-27 Omeros Corporation Compositions and methods for systemic inhibition of cartilage degradation
US6114382A (en) 1998-11-11 2000-09-05 Moretti; Itagiba G. Methods for treating inflammatory bowel disease
AU2346900A (en) 1998-11-30 2000-06-19 Eli Lilly And Company Erythropoietic compounds
AU776910B2 (en) 1998-12-08 2004-09-23 Merck Patent Gesellschaft Mit Beschrankter Haftung Modifying protein immunogenicity
US6610503B1 (en) 1999-03-17 2003-08-26 Xenogen Corporation Animal models for predicting sepsis mortality
US20030012969A1 (en) 1999-04-06 2003-01-16 Clark Bert Thomas Soluble membrane strengthened paper products
US6605316B1 (en) 1999-07-31 2003-08-12 The Regents Of The University Of California Structures and fabrication techniques for solid state electrochemical devices
US6180607B1 (en) 1999-08-05 2001-01-30 Christopher Davies Protein having proteinase inhibitor activity
NZ517202A (en) 1999-08-24 2004-05-28 Medarex Inc Human CTLA-4 antibodies and their uses
IL149267A0 (en) 1999-11-12 2002-11-10 Maxygen Holdings Ltd Interferon gamma conjugates
GB9928787D0 (en) 1999-12-03 2000-02-02 Medical Res Council Direct screening method
US6348558B1 (en) 1999-12-10 2002-02-19 Shearwater Corporation Hydrolytically degradable polymers and hydrogels made therefrom
US6376604B2 (en) 1999-12-22 2002-04-23 Shearwater Corporation Method for the preparation of 1-benzotriazolylcarbonate esters of poly(ethylene glycol)
US6544760B2 (en) 1999-12-22 2003-04-08 Zymogenetics, Inc. Kunitz domain polypeptide Zkun11
US6413507B1 (en) 1999-12-23 2002-07-02 Shearwater Corporation Hydrolytically degradable carbamate derivatives of poly (ethylene glycol)
US20020102703A1 (en) 1999-12-29 2002-08-01 Sheppard Paul O. Kunitz domain polypeptide zkun10
GB9930882D0 (en) 1999-12-30 2000-02-23 Nps Allelix Corp GLP-2 formulations
AU2001249074A1 (en) 2000-03-13 2001-09-24 Eli Lilly And Company Human hepatocyte growth factor activator inhibitor homologue
JP2003530838A (ja) 2000-04-12 2003-10-21 ヒューマン ゲノム サイエンシズ インコーポレイテッド アルブミン融合タンパク質
CN1331213A (zh) 2000-06-30 2002-01-16 上海博德基因开发有限公司 一种新的多肽——人大蛋白10.01和编码这种多肽的多核苷酸
DE10034357C1 (de) 2000-07-14 2001-12-13 Elotherm Gmbh Verfahren und Vorrichtung zum Härten von Flächen an Bauteilen
DE60100500T2 (de) 2000-10-31 2004-04-15 Debiopharm S.A. Suspension enthaltend ein epi-hne protein, verfahren zu ihrer herstellung, daraus hergestelltes trockenpulveraerosol, arzneimittelzusammensetzungen enthaltend diese suspension oder dieses aerosol und ihre verwendungen
WO2002061131A2 (en) 2000-12-04 2002-08-08 Bristol-Myers Squibb Company Human single nucleotide polymorphisms
TW593427B (en) 2000-12-18 2004-06-21 Nektar Therapeutics Al Corp Synthesis of high molecular weight non-peptidic polymer derivatives
US20020168323A1 (en) 2001-05-11 2002-11-14 Igor Gonda Optimization of the molecular properties and formulation of proteins delivered by inhalation
HUP0400442A2 (hu) 2001-05-21 2005-03-29 Nektar Therapeutics Kémiailag módosított inzulin pulmonáris beadása és eljárás az előállítására
US20040152633A1 (en) 2001-05-31 2004-08-05 Jorgensen Marianne Ulrich Kunitz-type sequences and polypeptides
JP4287269B2 (ja) 2001-07-10 2009-07-01 日本電産サンキョー株式会社 バルブ駆動装置
EP1406652A2 (en) 2001-07-10 2004-04-14 Omnio AB Novel drug targets for arthritis
US6913900B2 (en) * 2001-08-29 2005-07-05 Nippon Zoki Pharmaceutical Co., Ltd. Plasma prekallikrein activation and kallikrein production assay
DE60232672D1 (de) 2001-10-01 2009-07-30 Dyax Corp Mehrkettige eukaryontische display-vektoren und deren verwendungen
US20040005709A1 (en) 2001-10-24 2004-01-08 Hoogenboom Henricus Renerus Jacobus Mattheus Hybridization control of sequence variation
JP4653915B2 (ja) 2001-10-29 2011-03-16 独立行政法人科学技術振興機構 全身性エリテマトーデスモデル非ヒト動物
IL161677A0 (en) 2001-11-08 2004-09-27 Protein Design Labs Stable liquid pharmaceutical formulation of igg antibodies
KR20110014661A (ko) 2002-02-07 2011-02-11 노보자임스 바이오파마 디케이 에이/에스 알부민-융합 쿠니츠 도메인 펩타이드
CA2488558C (en) 2002-06-07 2013-08-20 Dyax Corp. Prevention and reduction of blood loss
US7153829B2 (en) 2002-06-07 2006-12-26 Dyax Corp. Kallikrein-inhibitor therapies
US7132100B2 (en) 2002-06-14 2006-11-07 Medimmune, Inc. Stabilized liquid anti-RSV antibody formulations
RU2296769C2 (ru) 2002-07-24 2007-04-10 Ф.Хоффманн-Ля Рош Аг Пэгилированный полипептид т20
WO2004012773A1 (en) 2002-07-24 2004-02-12 F. Hoffmann-La Roche Ag Polyalkylene glycol acid additives
ES2709103T3 (es) 2002-08-28 2019-04-15 Dyax Corp Métodos para conservar órganos y tejidos
US8129330B2 (en) 2002-09-30 2012-03-06 Mountain View Pharmaceuticals, Inc. Polymer conjugates with decreased antigenicity, methods of preparation and uses thereof
US20040062748A1 (en) 2002-09-30 2004-04-01 Mountain View Pharmaceuticals, Inc. Polymer conjugates with decreased antigenicity, methods of preparation and uses thereof
US7314613B2 (en) 2002-11-18 2008-01-01 Maxygen, Inc. Interferon-alpha polypeptides and conjugates
RS20050502A (sr) 2002-12-26 2007-08-03 Mountain View Pharmaceuticals Inc., Polimerni konjugati interferona- beta sa povećanom biološkom aktivnošću
WO2004063337A2 (en) 2003-01-07 2004-07-29 Dyax Corporation Kunitz domain library
EP1599222B1 (en) 2003-01-08 2009-03-04 Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. Stabilized aqueous compositions comprising tissue factor pathway inhibitor (tfpi) or tissue factor pathway inhibitor variant
EP1589949B1 (en) 2003-01-08 2008-08-13 Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. Stabilized lyophilized compositions comprising tissue factor pathway inhibitor or tissue factor pathway inhibitor variants
US6989369B2 (en) 2003-02-07 2006-01-24 Dyax Corp. Kunitz domain peptides
GB0303085D0 (en) 2003-02-11 2003-03-19 Pfizer Ltd Model
JP2007528721A (ja) 2003-08-14 2007-10-18 ダイアックス コーポレイション エンドセリアーゼ−２リガンド
EP1663279A4 (en) 2003-08-29 2009-02-18 Dyax Corp MODIFIED PROTEASE INHIBITORS
DK1663281T3 (en) 2003-08-29 2014-03-17 Dyax Corp POLY-PEGYLED PROTEASE INHIBITORS
EP1674480A4 (en) * 2003-09-04 2007-06-20 Riken ANTIBODY RECOGNIZING THE REGIONAL SECTION CONTROLLING TGF-BETA ACTIVATION
US8114123B2 (en) 2003-09-19 2012-02-14 St. Jude Medical, Inc. Apparatus and methods for tissue gathering and securing
WO2005032556A1 (en) 2003-10-02 2005-04-14 Elan Pharmaceuticals, Inc. Method for reducing pain
US20060228331A1 (en) 2003-10-10 2006-10-12 Novo Nordisk A/S IL-21 Derivatives and variants
WO2005041631A2 (en) 2003-10-21 2005-05-12 Dyax Corp. Endotheliase-1 ligands
EP1713929A2 (en) * 2004-02-03 2006-10-25 Bayer HealthCare AG Diagnostics and therapeutics for diseases associated with plasma kallikrein (klkb1)
AU2005271523B2 (en) 2004-08-03 2011-09-15 Dyax Corp. hk1-binding proteins
US7235530B2 (en) 2004-09-27 2007-06-26 Dyax Corporation Kallikrein inhibitors and anti-thrombolytic agents and uses thereof
WO2006057997A2 (en) 2004-11-22 2006-06-01 Dyax Corp. Plasmin-inhibitory therapies
JP5118492B2 (ja) 2004-12-23 2013-01-16 ツェー・エス・エル・ベーリング・ゲー・エム・ベー・ハー 血栓の形成の防止および／または安定化の防止
US20060183771A1 (en) 2005-02-17 2006-08-17 Seiffert Dietmar A Novel combination of selective factor VIIa and/or factor XIa inhibitors and selective plasma kallikrein inhibitors
SI1877435T2 (sl) 2005-05-04 2021-05-31 Zealand Pharma A/S Analogi glukagonu podobnega peptida-2(GLP-2)
US20070079096A1 (en) 2005-09-30 2007-04-05 Chih-Wei Chen Data storage unit access authorization table automatic rebuilding method and system
PT1981519T (pt) 2005-12-29 2018-02-23 Dyax Corp Inibição de protéases
US7276480B1 (en) 2005-12-30 2007-10-02 Dyax Corp. Prevention and reduction of blood loss
CA2643693A1 (en) 2006-03-10 2007-09-20 Dyax Corp. Formulations for ecallantide
HUE039108T2 (hu) 2006-03-16 2018-12-28 Dyax Corp Készítmények és eljárások szembetegségek kezelésére
EP1873344A1 (de) 2006-06-30 2008-01-02 Sika Technology AG Mittels Silikon agedichtete Verklebung
AU2007281220B2 (en) 2006-07-31 2013-08-15 Activesite Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of plasma kallikrein
US20080299050A1 (en) 2006-10-05 2008-12-04 Drugtech Corporation Topical therapies for oral mucositis and other conditions
KR100846354B1 (ko) 2007-03-21 2008-07-15 (주) 프로탄바이오 혈청 당단백질부터 분리한 폐암 진단용 마커
EP2195010A4 (en) 2007-08-21 2012-03-14 Genzyme Corp TREATMENT WITH INHIBITORS OF KALLIKREINE
CA2695012A1 (en) 2007-08-23 2009-02-26 Genzyme Corporation Treatment with kallikrein inhibitors
US8359965B2 (en) 2007-09-17 2013-01-29 Oxford J Craig Apparatus and method for broad spectrum radiation attenuation
WO2009102927A1 (en) 2008-02-13 2009-08-20 Dyax Corp. Improved methods for producing specific binding pairs
DE102008027574A1 (de) 2008-06-10 2009-12-17 Merck Patent Gmbh Neue Pyrrolidinderivate als MetAP-2 Inhibitoren
DE102008033095A1 (de) 2008-07-15 2010-01-28 Uhde Gmbh Vorrichtung zur Schlackeabführung aus einem Kohlevergasungsreaktor
JP2012531885A (ja) 2008-07-02 2012-12-13 エマージェント プロダクト デベロップメント シアトル， エルエルシー Ｉｌ６免疫治療剤
US8637454B2 (en) * 2009-01-06 2014-01-28 Dyax Corp. Treatment of mucositis with kallikrein inhibitors
CN101928346B (zh) 2009-07-31 2013-01-16 华中科技大学同济医学院附属同济医院 一种抗人组织激肽释放酶单克隆抗体及其制备
RS62853B1 (sr) 2010-01-06 2022-02-28 Takeda Pharmaceuticals Co Proteini koji vezuju kalikrein plazme
AU2012204202A1 (en) 2011-01-06 2013-07-11 Dyax Corp. Plasma kallikrein binding proteins
US8691861B2 (en) 2011-04-13 2014-04-08 Activesite Pharmaceuticals, Inc. Prodrugs of inhibitors of plasma kallikrein
US10040855B2 (en) 2011-05-02 2018-08-07 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Formulation for anti-α4β7 antibody
JP6345123B2 (ja) 2012-02-16 2018-06-20 サンタラス， インコーポレイテッド 抗ｖｌａ１（ｃｄ４９ａ）抗体医薬組成物
US9216219B2 (en) 2012-06-12 2015-12-22 Novartis Ag Anti-BAFFR antibody formulation
IL273688B2 (en) 2013-01-20 2024-12-01 Dyax Corp Evaluation and treatment of bradykinin-mediated disorders
HRP20190528T1 (hr) 2013-01-20 2019-05-17 Dyax Corp. PROCJENA, TESTOVI I LIJEČENJE POREMEĆAJA POSREDOVANIH S pKAL
CA3208188A1 (en) 2013-03-15 2014-09-25 Takeda Pharmaceutical Company Limited Anti-plasma kallikrein antibodies
KR20140119396A (ko) 2013-03-29 2014-10-10 삼성전자주식회사 단백질 약물의 액상 제형
EP3060582B1 (en) 2013-10-21 2020-09-23 Dyax Corp. Assays for determining plasma kallikrein system biomarkers
PT3096798T (pt) 2014-01-21 2021-02-25 Dyax Corp Proteínas de ligação à calicreína plasmática e seus usos no tratamento de angioedema hereditário
AU2015235967B2 (en) 2014-03-27 2020-10-22 Takeda Pharmaceutical Company Limited Compositions and methods for treatment of diabetic macular edema
IL305207A (en) 2015-03-30 2023-10-01 Takeda Pharmaceuticals Co Plasma kallikrein inhibitors and their uses to prevent the outbreak of hereditary angioedema
CN116077648A (zh) 2015-12-11 2023-05-09 武田药品工业株式会社 血浆激肽释放酶抑制剂及其治疗遗传性血管性水肿发作的用途
IL314752A (en) 2016-09-16 2024-10-01 Takeda Pharmaceuticals Co Metabolite biomarkers for diseases associated with the contact activation system
WO2019048960A1 (en) 2017-09-05 2019-03-14 Bat Call D. Adler Ltd. ELECTRONIC STHETHOSCOPE WITH IMPROVED FEATURES
AU2019328324B2 (en) 2018-08-30 2025-06-19 Takeda Pharmaceutical Company Limited Plasma kallikrein inhibitors and uses thereof for treating hereditary angioedema attack
EP3938404A1 (en) 2019-03-14 2022-01-19 Takeda Pharmaceutical Company Limited Plasma kallikrein inhibitors and uses thereof for treating hereditary angioedema attack
MX2022008649A (es) 2020-01-13 2022-09-23 Takeda Pharmaceuticals Co Inhibidores de calicreina plasmatica y sus usos para tratar episodios de angioedema hereditario pediatrico.

Also Published As

Publication number Publication date
PL3459564T3 (pl) 2022-04-19
US20230340150A1 (en) 2023-10-26
EP2521568B1 (en) 2018-07-25
ES2688093T3 (es) 2018-10-30
EP3459564A1 (en) 2019-03-27
CA3021759A1 (en) 2011-07-14
LUC00115I2 (sr) 2024-05-22
PT3459564T (pt) 2022-01-31
JP2025029090A (ja) 2025-03-05
CY1125705T1 (el) 2024-02-16
SMT202200056T1 (it) 2022-03-21
WO2011085103A3 (en) 2011-09-09
CA3168591A1 (en) 2011-07-14
SI3459564T1 (sl) 2022-06-30
LTPA2019012I1 (lt) 2019-05-27
EP4011917A1 (en) 2022-06-15
JP6779944B2 (ja) 2020-11-04
EP2521568A4 (en) 2013-06-12
US11505620B2 (en) 2022-11-22
HUS1900023I1 (hu) 2019-04-23
JP2013516478A (ja) 2013-05-13
SI2521568T1 (sl) 2019-01-31
US20140335023A1 (en) 2014-11-13
FR19C1029I1 (sr) 2019-06-21
LTC2521568I2 (lt) 2020-05-11
EP3459564B1 (en) 2021-10-27
NL300986I1 (nl) 2019-05-15
SMT201800552T1 (it) 2018-11-09
US8822653B2 (en) 2014-09-02
ES2905545T3 (es) 2022-04-11
US12460016B2 (en) 2025-11-04
US20110200611A1 (en) 2011-08-18
CA2786019A1 (en) 2011-07-14
CY1122268T1 (el) 2020-05-29
PL2521568T3 (pl) 2019-03-29
AU2011204349C1 (en) 2017-02-16
US20180037666A1 (en) 2018-02-08
NL300986I2 (nl) 2019-11-21
US20180037665A1 (en) 2018-02-08
US10336832B2 (en) 2019-07-02
HUE039605T2 (hu) 2019-01-28
CY2019020I1 (el) 2020-05-29
AU2011204349A1 (en) 2012-08-02
CA2786019C (en) 2018-12-18
NO2019020I1 (no) 2019-04-25
HRP20181419T1 (hr) 2018-11-16
DK2521568T3 (en) 2018-11-19
FR19C1029I2 (fr) 2020-05-15
WO2011085103A2 (en) 2011-07-14
JP2018197234A (ja) 2018-12-13
JP6037841B2 (ja) 2016-12-07
RS57870B1 (sr) 2018-12-31
JP2021006582A (ja) 2021-01-21
JP2022188112A (ja) 2022-12-20
JP7146871B2 (ja) 2022-10-04
EP2521568A2 (en) 2012-11-14
LT2521568T (lt) 2018-12-10
US20180002449A1 (en) 2018-01-04
AU2011204349B2 (en) 2014-09-04
JP2017081919A (ja) 2017-05-18
US20180002447A1 (en) 2018-01-04
PT2521568T (pt) 2018-10-26
LT3459564T (lt) 2022-03-10
JP6356199B2 (ja) 2018-07-11
CY2019020I2 (el) 2020-05-29
US20180037664A1 (en) 2018-02-08
HUE057244T2 (hu) 2022-04-28
HRP20220107T1 (hr) 2022-04-15
US20200109213A1 (en) 2020-04-09
DK3459564T3 (da) 2022-02-07
US20180002448A1 (en) 2018-01-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7146871B2 (ja) 血漿カリクレイン結合タンパク質
CN103635489B (zh) 血浆前激肽释放酶结合蛋白
AU2016244213B2 (en) Plasma kallikrein binding proteins
HK40077094A (en) Plasma kallikrein binding proteins
AU2013205129A1 (en) Plasma kallikrein binding proteins
HK40006299B (en) Plasma kallikrein binding proteins
HK40006299A (en) Plasma kallikrein binding proteins
HK1176886A (en) Plasma kallikrein binding proteins
HK1176886B (en) Plasma kallikrein binding proteins