RS64379B1 - Anti-muc1 antitelo - Google Patents

Anti-muc1 antitelo

Info

Publication number
RS64379B1
RS64379B1 RS20230586A RSP20230586A RS64379B1 RS 64379 B1 RS64379 B1 RS 64379B1 RS 20230586 A RS20230586 A RS 20230586A RS P20230586 A RSP20230586 A RS P20230586A RS 64379 B1 RS64379 B1 RS 64379B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
antibody
amino acid
cancer
acid sequence
seq
Prior art date
Application number
RS20230586A
Other languages
English (en)
Inventor
Johanna Gellert
Anke Flechner
Doreen Weigelt
Antje Danielczyk
Original Assignee
Glycotope Gmbh
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Glycotope Gmbh filed Critical Glycotope Gmbh
Publication of RS64379B1 publication Critical patent/RS64379B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3076—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells against structure-related tumour-associated moieties
    • C07K16/3092—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells against structure-related tumour-associated moieties against tumour-associated mucins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/4738—Quinolines; Isoquinolines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/4745—Quinolines; Isoquinolines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems condensed with ring systems having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. phenantrolines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/22—Heterocyclic compounds, e.g. ascorbic acid, tocopherol or pyrrolidones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/545—Heterocyclic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/65—Peptidic linkers, binders or spacers, e.g. peptidic enzyme-labile linkers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68037—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a camptothecin [CPT] or derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B66—HOISTING; LIFTING; HAULING
    • B66B—ELEVATORS; ESCALATORS OR MOVING WALKWAYS
    • B66B5/00—Applications of checking, fault-correcting, or safety devices in elevators
    • B66B5/02—Applications of checking, fault-correcting, or safety devices in elevators responsive to abnormal operating conditions
    • B66B5/16—Braking or catch devices operating between cars, cages, or skips and fixed guide elements or surfaces in hoistway or well
    • B66B5/18—Braking or catch devices operating between cars, cages, or skips and fixed guide elements or surfaces in hoistway or well and applying frictional retarding forces
    • B66B5/22—Braking or catch devices operating between cars, cages, or skips and fixed guide elements or surfaces in hoistway or well and applying frictional retarding forces by means of linearly-movable wedges
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/575—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/10—Immunoglobulins specific features characterized by their source of isolation or production
    • C07K2317/14—Specific host cells or culture conditions, e.g. components, pH or temperature
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/40—Immunoglobulins specific features characterized by post-translational modification
    • C07K2317/41—Glycosylation, sialylation, or fucosylation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Mechanical Engineering (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Description

Opis
OBLAST PRONALASKA
[0001] Predmetni pronalazak se odnosi na oblast antitela. Obezbeđeno je mutirano anti-MUC1 antitelo sa povećanim afinitetom vezivanja antigena. Posebno, obezbeđena je mutirana verzija humanizovanog antitela PankoMab pri čemu je asparagin 57 varijabilnog regiona teškog lanca supstituisan drugom amino-kiselinom. Time se deletira mesto glikozilacije u CDR2 regionu i povećava se afinitet vezivanja antigena. U specifičnim primerima izvođenja, predmetni pronalazak je usmeren na terapijsku i dijagnostičku upotrebu ovog antitela i na postupke proizvodnje takvih antitela.
POZADINA PRONALASKA
[0002] Antitela prema antigenima povezanim sa tumorom su terapeutici koji su u širokoj upotrebi protiv kancera. Danas, mnoga anti-kancerska antitela su odobrena za terapiju kod ljudi. Neka od ovih antitela deluju tako što blokiraju određene signalne puteve koji su kritični za preživljavanje ili proliferaciju specifičnih ćelija kancera. Druga anti-kancerska antitela aktiviraju imunski odgovor pacijenta protiv ciljanih ćelija kancera, na primer iniciranjem ćelijske citotoksičnosti zavisne od antitela (ADCC) putem ćelija prirodnih ubica. Ovaj mehanizam se indukuje vezivanjem Fc dela antitela za Fc receptore na imunskim ćelijama.
[0003] Zanimljiva i važna grupa antitela su ona koja su usmerena prema mucin proteinima. Mucini su porodica veoma glikozilovanih proteina visoke molekulske težine koje proizvode mnoga epitelna tkiva vertebrata. Oni se mogu podeliti na mucin proteine koji su vezani za membranu zbog prisustva hidrofobnog domena koji španuje membranu i koji favorizuje zadržavanje u plazma membrani, i mucine koji se sekretuju na površine sluzokože ili se sekretuju da postanu komponenta pljuvačke. Porodica humanih mucin proteina sastoji se od mnogih članova porodice, uključujući MUC1 vezan za membranu.
[0004] Povećana proizvodnja mucina javlja se kod mnogih adenokarcinoma, uključujući kancer pankreasa, pluća, dojke, jajnika, kolona, itd. Mucini se takođe prekomerno eksprimiraju kod bolesti pluća kao što su astma, bronhitis, hronična opstruktivna bolest pluća ili cistična fibroza. Dva membranska mucina, MUC1 i MUC4, opsežno su proučavana u odnosu na njihovu patološku implikaciju u procesu bolesti. Štaviše, mucini su takođe istraživani zbog njihovog potencijala kao dijagnostičkih markera. Nekoliko antitela usmerenih prema mucin proteinima (Clin. Cancer Res., 2011. Nov 1;17(21):6822-30, PLoS One, 2011 Jan 14;6(1):e15921, Cancer Immunol. Immunother., 2006, Feb 17;55(11):1337-47, US 2015/0005474, WO 2011/012309 A1), posebno MUC1, poznato je u struci. Međutim, njihova terapijska efikasnost bi se još mogla poboljšati.
[0005] S obzirom na ovo, postoji potreba u struci da se obezbede terapijska anti-MUC1 antitela sa poboljšanim svojstvima. Sva pozivanja u opisu na postupke lečenja označavaju jedinjenja, farmaceutske kompozicije i medikamente iz predmetnog pronalaska za upotrebu u postupku za lečenje ljudskog (ili životinjskog) tela pomoću terapije (ili za dijagnozu).
SAŽETAK PRONALASKA
[0006] Predmetni pronalazači su pronašli da deletiranje mesta glikozilacije u varijabilnom regionu teškog lanca anti-MUC1 antitela PankoMab nije ukinulo vezivanje antigena, već je neočekivano povećalo afinitet antitela za antigen. Ovo je bilo posebno iznenađujuće pošto je mesto glikozilacije locirano u drugom regionu koji određuje komplementarnost varijabilnog regiona teškog lanca (CDR-H2). CDR su oni regioni antitela koji su direktno uključeni u vezivanje antigena i obezbeđuju kontakt sa epitopom. Prema tome, očekuje se da će generalno modifikovanje amino-kiselina CDR biti štetno za afinitet vezivanja antigena. Humanizovano PankoMab antitelo dodatno sadrži mesto glikozilacije u CDR-H2, koje nosi veliku ugljenohidratnu strukturu. Ova ugljenohidratna struktura je prisutna direktno na interfejsu vezivanja za antigen i otuda, smatralo se da je uključena u vezivanje antigena. Međutim, kao što je demonstrirano u primerima, PankoMab varijanta (N54Q) pri čemu je mesto glikozilacije deletirano supstitucijom amino-kiseline koja nosi ugljenohidratnu strukturu, pokazuje povećan afinitet vezivanja antigena.
[0007] Prema tome, u prvom aspektu, predmetni pronalazak je usmeren na antitelo sposobno da se vezuje za MUC1, koje sadrži
(i) varijabilni region teškog lanca koji sadrži regione koji određuju komplementarnost (CDR) CDR-H1 koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1, CDR-H2 koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 7 i CDR-H3 koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 3, i
(ii) varijabilni region lakog lanca koji sadrži regione koji određuju komplementarnost (CDR) CDR-L1 koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 4, CDR-L2 koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 5 i CDR-L3 koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 6.
[0008] U drugom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje nukleinsku kiselinu koja kodira antitelo u skladu sa pronalaskom. Štaviše, u trećem aspektu obezbeđeni su ekspresiona kaseta ili vektor koji sadrže nukleinsku kiselinu u skladu sa pronalaskom i promotor koji je operativno povezan sa navedenom nukleinskom kiselinom i, u četvrtom aspektu, ćelija domaćina koja sadrži nukleinsku kiselinu ili ekspresionu kasetu ili vektor u skladu sa pronalaskom.
[0009] U petom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje konjugat koji sadrži antitelo u skladu sa pronalaskom konjugovano za dodatni agens.
[0010] U šestom aspektu, predmetni pronalazak je usmeren na kompoziciju koja sadrži antitelo u skladu sa pronalaskom, nukleinsku kiselinu u skladu sa pronalaskom, ekspresionu kasetu ili vektor u skladu sa pronalaskom, ćeliju domaćina u skladu sa pronalaskom, ili konjugat u skladu sa pronalaskom.
[0011] U skladu sa sedmim aspektom, pronalazak obezbeđuje antitelo, nukleinsku kiselinu, ekspresionu kasetu ili vektor, ćeliju domaćina, kompoziciju ili konjugat u skladu sa pronalaskom za upotrebu u medicini, posebno u lečenju, prevenciji ili dijagnozi kancera.
[0012] Dodatno je opisan postupak povećanja afiniteta vezivanja za MUC1 antitela koje sadrži
(i) varijabilni region teškog lanca koji sadrži regione koji određuju komplementarnost (CDR) CDR-H1 koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1, CDR-H2 koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 8 i CDR-H3 koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 3, i
(ii) varijabilni region lakog lanca koji sadrži regione koji određuju komplementarnost (CDR) CDR-L1 koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 4, CDR-L2 koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 5 i CDR-L3 koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 6,
postupak sadrži korak supstitucije amino-kiselinskog ostatka na poziciji 8 CDR-H2 sa bilo kojim amino-kiselinskim ostatkom osim asparagina, što rezultuje time da CDR-H2 ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 2.
[0013] U osmom aspektu, pronalazak obezbeđuje postupak proizvodnje antitela sa povećanim afinitetom vezivanja za MUC1, koji sadrži
(a) obezbeđivanje nukleinske kiseline koja kodira antitelo koje sadrži
(i) varijabilni region teškog lanca koji sadrži regione koji određuju komplementarnost (CDR) CDR-H1 koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1, CDR-H2 koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 8 i CDR-H3 koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 3, i
(ii) varijabilni region lakog lanca koji sadrži regione koji određuju komplementarnost (CDR) CDR-L1 koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 4, CDR-L2 koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 5 i CDR-L3 koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 6;
(b) introdukovanje mutacije u navedenu nukleinsku kiselinu kako bi se proizvela mutirana nukleinska kiselina, pri čemu je mutacija introdukovana u kodon koji kodira amino-kiselinski ostatak na poziciji 8 CDR-H2 tako da navedeni kodon kodira glutamin; i
(c) proizvodnju antitela sa povećanim afinitetom vezivanja za MUC1 pomoću ekspresije mutirane nukleinske kiseline u ćeliji domaćinu.
[0014] Dodatno je opisan postupak za lečenje kancera kod subjekta kome je to potrebno koji sadrži primenu subjektu sa kancerom terapijski efikasne količine antitela u skladu sa pronalaskom, nukleinske kiseline u skladu sa pronalaskom, ekspresione kasete ili vektora u skladu sa pronalaskom, ili ćelije domaćina u skladu sa pronalaskom.
[0015] Dodatno su opisani kompleti ili uređaji koji sadrže antitelo u skladu sa pronalaskom, i povezani postupci koji su korisni u dijagnozi, detektovanju ili praćenju poremećaja povezanih sa MUC1 kao što je kancer.
[0016] Drugi ciljevi, svojstva, prednosti i aspekti predmetnog pronalaska postaće očigledni onima sa iskustvom u struci iz sledećeg opisa i priloženih patentnih zahteva.
DEFINICIJE
[0017] Kao što se ovde upotrebljavaju, sledeći izrazi su generalno namenjeni da poželjno imaju značenja koja su izneta u nastavku, osim u meri u kojoj kontekst u kome se upotrebljavaju ne ukazuje drugačije.
[0018] Izraz "sadrži", kao što se ovde upotrebljava, pored svog doslovnog značenja takođe uključuje i specifično označava izraze "sastoji se suštinski od" i "sastoji se od". Stoga, izraz "sadrži" označava primere izvođenja u kojima predmet koji "sadrži" specifično navedene elemente ne sadrži dodatne elemente, kao i primere izvođenja u kojima predmet koji "sadrži" specifično navedene elemente može i/ili zaista obuhvata dodatne elemente. Slično tome, izraz "ima" treba razumeti kao izraz "sadrži", takođe uključujući i specifično označavajući izraze "sastoji se suštinski od" i "sastoji se od". Termin "sastoji se suštinski od", gde je to moguće, posebno označava primere izvođenja u kojima predmet sadrži 20% ili manje, posebno 15% ili manje, 10% ili manje ili naročito 5% ili manje dodatnih elemenata pored specifično nabrojanih elementa od kojih se predmet suštinski sastoji.
[0019] Termin "antitelo" posebno označava protein koji sadrži najmanje dva teška lanca i dva laka lanca koji su povezani pomoću disulfidnih veza. Svaki teški lanac se sastoji od varijabilnog regiona teškog lanca (VH) i konstantnog regiona teškog lanca (CH). Svaki laki lanac se sastoji od varijabilnog regiona lakog lanca (VL) i konstantnog regiona lakog lanca (CL). Konstantni region teškog lanca sadrži tri ili - u slučaju antitela IgM- ili IgE-tipa - četiri konstantna domena teškog lanca (CH1, CH2, CH3i CH4) pri čemu je prvi konstantni domen CH1susedan varijabilnom regionu i može biti povezan sa drugim konstantnim domenom CH2pomoću regiona zgloba. Konstantni region lakog lanca se sastoji samo od jednog konstantnog domena. Varijabilni regioni se mogu dodatno podeliti na regione hipervarijabilnosti, nazvane regionima koji određuju komplementarnost (CDR), ispresecane regionima koji su više konzervirani, koji se nazivaju regionima okvira (FR), pri čemu svaki varijabilni region sadrži tri CDR i četiri FR. Varijabilni regioni teških i lakih lanaca sadrže vezujući domen koji interaguje sa antigenom. Konstantni regioni teškog lanca mogu biti bilo kog tipa kao što su teški lanci γ-, δ-, α-, μ- ili ε-tipa. Poželjno, teški lanac antitela je γ-lanac. Štaviše, konstantni region lakog lanca može takođe biti bilo kog tipa kao što su laki lanci κ- ili λ-tipa. Poželjno, laki lanac antitela je κ-lanac. Termini "teški lanac γ- (δ-, α-, μ- ili ε-) tipa" i "laki lanac κ- (λ-) tipa" označavaju teške lance antitela ili lake lance antitela, respektivno, koji imaju konstantan region amino-kiselinske sekvence izveden iz amino-kiselinskih sekvenci konstantnog regiona teškog ili lakog lanca koji se javljaju u prirodi, naročito humanih amino-kiselinskih sekvenci konstantnog regiona teškog ili lakog lanca. Posebno, amino-kiselinska sekvenca konstantnih domena teškog lanca γ-tipa (naročito γ1-tipa) je najmanje 95%, naročito najmanje 98%, identična amino-kiselinskoj sekvenci konstantnih domena γ teškog lanca humanog (naročito humanog γ1) antitela. Štaviše, amino-kiselinska sekvenca konstantnog domena lakog lanca κtipa je posebno najmanje 95%, naročito najmanje 98%, identična amino-kiselinskoj sekvenci konstantnog domena κ lakog lanca humanog antitela. Konstantni regioni antitela mogu posredovati u vezivanju imunoglobulina za tkiva ili faktore domaćina, uključujući različite ćelije imunskog sistema (npr. efektorske ćelije) i prvu komponentu (C1q) klasičnog sistema komplementa. Antitelo može biti npr. humanizovano, humano ili himerno antitelo.
[0020] Antigen-vezujući deo antitela uobičajeno označava punu dužinu ili jedan ili više fragmenata antitela koji zadržavaju sposobnost specifičnog vezivanja za antigen. Pokazano je da se antigen-vezujuća funkcija antitela može izvesti pomoću fragmenata antitela pune dužine. Primeri vezujućih fragmenata antitela uključuju Fab fragment, monovalentni fragment koji se sastoji od VL, VH, CLi CH1domena; F(ab)2fragment, bivalentni fragment koji sadrži dva Fab fragmenta, od kojih se svaki vezuje za isti antigen, povezana disulfidnim mostom u regionu zgloba; Fd fragment koji se sastoji od VHi CH1domena; Fv fragment koji se sastoji od VLi VHdomena jednog kraka antitela; i dAb fragment, koji se sastoji od VHdomena.
[0021] "Fab deo" antitela posebno označava deo antitela koji sadrži varijabilne regione teškog i lakog lanca (VHi VL) i prve domene konstantnih regiona teškog i lakog lanca (CH1i CL). U slučajevima gde antitelo ne sadrži sve ove regione, onda termin "Fab deo" označava samo one regione VH, VL, CH1i CLkoji su prisutni u antitelu. Poželjno, "Fab deo" označava onaj deo antitela koji odgovara fragmentu dobijenom digestijom prirodnog antitela sa papainom koji sadrži antigen-vezujuću aktivnost antitela. Posebno, Fab deo antitela obuhvata antigenvezujuće mesto ili njegovu antigen-vezujuću sposobnost. Poželjno, Fab deo sadrži najmanje VHregion antitela.
[0022] "Fc deo" antitela posebno označava deo antitela koji sadrži konstantne regione 2, 3 i -gde je primenljivo - 4 teškog lanca (CH2, CH3i CH4). Posebno, Fc deo sadrži dva od svakog od ovih regiona. U slučajevima gde antitelo ne sadrži sve ove regione, onda termin "Fc deo" označava samo one regione CH2, CH3i CH4koji su prisutni u antitelu. Poželjno, Fc deo sadrži najmanje CH2region antitela. Poželjno, "Fc deo" označava onaj deo antitela koji odgovara fragmentu dobijenom digestijom prirodnog antitela sa papainom koji ne sadrži antigenvezujuću aktivnost antitela. Posebno, Fc deo antitela je sposoban da se vezuje za Fc receptor i stoga, npr. sadrži vezujuće mesto za Fc receptor ili vezujuću sposobnost za Fc receptor.
[0023] Termini "antitelo" i "konstrukt antitela", kao što se ovde upotrebljava, označavaju u određenim primerima izvođenja populaciju antitela ili konstrukata antitela, respektivno, iste vrste. Posebno, sva antitela ili konstrukti antitela populacije pokazuju svojstva koja se upotrebljavaju za definisanje antitela ili konstrukta antitela. U određenim primerima izvođenja, sva antitela ili konstrukti antitela u populaciji imaju istu amino-kiselinsku sekvencu. Pozivanje na specifičnu vrstu antitela, kao što je antitelo sposobno da se specifično vezuje za MUC1, posebno označava populaciju ove vrste antitela.
[0024] Termin "antitelo" kao što se ovde upotrebljava takođe uključuje fragmente i derivate navedenog antitela. "Fragment ili derivat" antitela posebno je protein ili glikoprotein koji je izveden iz navedenog antitela i koji je sposoban da se vezuje za isti antigen, posebno za isti epitop kao antitelo. Stoga, fragment ili derivat antitela ovde generalno označava funkcionalni fragment ili derivat. U posebno poželjnim primerima izvođenja, fragment ili derivat antitela sadrži varijabilni region teškog lanca. Pokazano je da se antigen-vezujuća funkcija antitela može izvesti pomoću fragmenata antitela pune dužine ili njegovih derivata. Primeri fragmenata antitela uključuju (i) Fab fragmente, monovalentne fragmente koji se sastoje od varijabilnog regiona i prvog konstantnog domena svakog teškog i lakog lanca; (ii) F(ab)2fragmente, bivalentne fragmente koji sadrže dva Fab fragmenta povezana disulfidnim mostom u regionu zgloba; (iii) Fd fragmente koji se sastoje od varijabilnog regiona i prvog konstantnog domena CH1 teškog lanca; (iv) Fv fragmente koji se sastoje od varijabilnog regiona teškog i lakog lanca jednog kraka antitela; (v) scFv fragmente, Fv fragmente koji se sastoje od jednog polipeptidnog lanca; (vi) (Fv)2fragmente koji se sastoje od dva Fv fragmenta koja su međusobno kovalentno povezana; (vii) varijabilni domen teškog lanca; i (viii) multitela koja se sastoje od varijabilnog regiona teškog lanca i varijabilnog regiona lakog lanca koji su međusobno kovalentno povezani na takav način da se asocijacija varijabilnih regiona teškog lanca i lakog lanca može dogoditi samo intermolekulski, ali ne i intramolekulski. Derivati antitela posebno uključuju antitela koja se vezuju za isti antigen kao i roditeljsko antitelo ili su u kompeticiji sa njim, ali koja imaju drugačiju amino-kiselinsku sekvencu od roditeljskog antitela iz kog su izvedena. Ovi fragmenti i derivati antitela se dobijaju upotrebom konvencionalnih tehnika poznatih onima sa iskustvom u stuci.
[0025] Ciljna amino-kiselinska sekvenca je "izvedena" iz referentne amino-kiselinske sekvence ili joj "odgovara" ukoliko ciljna amino-kiselinska sekvenca deli homologiju ili identičnost po celoj dužini sa odgovarajućim delom referentne amino-kiselinske sekvence od najmanje 75%, poželjnije najmanje 80%, najmanje 85%, najmanje 90%, najmanje 93%, najmanje 95%, najmanje 97%, najmanje 98% ili najmanje 99%. "Odgovarajući deo" znači da, na primer, region okvira 1 varijabilnog regiona teškog lanca (FRH1) ciljnog antitela odgovara regionu okvira 1 varijabilnog regiona teškog lanca referentnog antitela. U određenim primerima izvođenja, ciljna amino-kiselinska sekvenca koja je "izvedena" iz referentne amino-kiselinske sekvence ili joj "odgovara" je 100% homologna, ili posebno 100% identična, po celoj svojoj dužini sa odgovarajućim delom referentne amino-kiselinske sekvence. "Homologija" ili "identičnost" amino-kiselinske sekvence ili nukleotidne sekvence poželjno se određuje u skladu sa pronalaskom preko cele dužine referentne sekvence ili preko cele dužine odgovarajućeg dela referentne sekvence koja odgovara sekvenci čija homologija ili identičnost je definisana. Antitelo izvedeno iz roditeljskog antitela koje je definisano pomoću jedne ili više amino-kiselinskih sekvenci, kao što su specifične CDR sekvence ili specifične sekvence varijabilnog regiona, posebno je antitelo koje ima amino-kiselinske sekvence, kao što su CDR sekvence ili sekvence varijabilnog regiona, koje su najmanje 75%, poželjno najmanje 80%, najmanje 85%, najmanje 90%, najmanje 93%, najmanje 95%, najmanje 97%, najmanje 98% ili najmanje 99% homologne ili identične, naročito identične sa odgovarajućim amino-kiselinskim sekvencama roditeljskog antitela. U određenim primerima izvođenja, antitelo izvedeno iz (tj. derivat) roditeljskog antitela sadrži iste CDR sekvence kao i roditeljsko antitelo, ali se razlikuje u preostalim sekvencama varijabilnih regiona.
[0026] Termin "antitelo" kao što se ovde upotrebljava takođe označava multivalentna i multispecifična antitela, tj. konstrukte antitela koji imaju više od dva vezujuća mesta od kojih se svako vezuje za isti epitop i konstrukte antitela koji imaju jedno ili više vezujućih mesta koja se vezuju za prvi epitop i jedno ili više vezujućih mesta koja se vezuju za drugi epitop, i opciono čak i dodatna vezujuća mesta koja se vezuju za dodatne epitope.
[0027] "Specifično vezivanje" poželjno znači da se agens kao što je antitelo jače vezuje za cilj kao što je epitop za koji je specifičan u poređenju sa vezivanjem za drugi cilj. Agens se jače vezuje za prvi cilj u poređenju sa drugim ciljem ukoliko se vezuje za prvi cilj sa konstantom disocijacije (Kd) koja je niža od konstante disocijacije za drugi cilj. Poželjno je da je konstanta disocijacije za cilj za koji se agens specifično vezuje više od 100 puta, 200 puta, 500 puta ili više od 1000 puta niža od konstante disocijacije za cilj za koji se agens ne vezuje specifično. Štaviše, termin "specifično vezivanje" posebno ukazuje na afinitet vezivanja između vezujućih partnera sa konstantom afiniteta Kaod najmanje 10<6>M<-1>, poželjno najmanje 10<7>M<-1>, poželjnije najmanje 10<8>M<-1>. Antitelo specifično za određeni antigen posebno označava antitelo koje je sposobno da se vezuje za navedeni antigen sa afinitetom koji ima Kaod najmanje 10<6>M<-1>, poželjno najmanje 10<7>M<-1>, poželjnije najmanje 10<8>M<-1>. Na primer, termin "anti-MUC1 antitelo" posebno označava antitelo koje se specifično vezuje za MUC1 i poželjno je sposobno da se vezuje za MUC1 sa afinitetom koji ima Kaod najmanje 10<6>M<-1>, poželjno najmanje 10<7>M<-1>, poželjnije najmanje 10<8>M<-1>.
[0028] Termin "MUC1" označava MUC1 protein, takođe poznat kao mucin-1, polimorfni epitelni mucin (PEM) ili kancerski antigen 15-3, posebno humani MUC1 (pristupni broj P15941). MUC1 je član porodice mucina i kodira membranski vezan, glikozilovani fosfoprotein. MUC1 ima masu jezgra proteina od 120-225 kDa koja se povećava na 250-500 kDa sa glikozilacijom. Proteže se 200-500 nm izvan površine ćelije. Protein je usidren za apikalnu površinu mnogih epitelskih ćelija pomoću transmembranskog domena. Vanćelijski domen uključuje domen tandemskog ponovka varijabilnog broja (VNTR) od 20 aminokiselina, sa brojem ponovaka koji varira od 20 do 120 kod različitih pojedinaca. Ovi ponovci su bogati ostacima serina, treonina i prolina što omogućava obimnu O-glikozilaciju. U određenim primerima izvođenja, termin "MUC1" označava MUC1 povezan sa tumorom ("TA-MUC1"). TA-MUC1 je MUC1 prisutan na ćelijama kancera. Ovaj MUC1 se razlikuje od MUC1 prisutnog na nekancerskim ćelijama po mnogo višem nivou ekspresije, svojoj lokalizaciji i glikozilaciji. Posebno, TA-MUC1 je prisutan apolarno na celoj ćelijskoj površini na ćelijama kancera, dok u nekancerskim ćelijama MUC1 ima striktno apikalnu ekspresiju i otuda nije dostupan za sistemski primenjena antitela. Štaviše, TA-MUC1 ima aberantnu O-glikozilaciju koja izlaže nove peptidne epitope na okosnici MUC1 proteina i nove ugljenohidratne tumorske antigene kao što je Tomsen-Fridenrajh (Thomsen-Friedenreich) antigen alfa (TFα).
[0029] "TFα", takođe nazvan Tomsen-Fridenrajh antigen alfa ili Core-1, označava disaharid Gal-β1,3-GalNAc koji je O-glikozidno povezan u alfa-anomernoj konfiguraciji za hidroksi amino-kiseline serin ili treonin proteina u ćelijama karcinoma.
[0030] Termin "sijalinska kiselina" posebno označava bilo koje N- ili O-supstituisane derivate neuraminske kiseline. Može označavati i 5-N-acetilneuraminsku kiselinu i 5-N-glikolilneuraminsku kiselinu, ali poželjno označava samo 5-N-acetilneuraminsku kiselinu. Sijalinska kiselina, posebno 5-N-acetilneuraminska kiselina poželjno je prikačena za ugljenohidratni lanac putem 2,3- ili 2,6-veze. Poželjno, u ovde opisanim antitelima prisutne su i 2,3- kao i 2,6-kuplovane sijalinske kiseline.
[0031] "Relativna količina glikana" u skladu sa pronalaskom označava specifičan procenat ili procentualni opseg glikana prikačenih za antitela preparata antitela ili u kompoziciji koja sadrži antitela, respektivno. Posebno, relativna količina glikana označava specifičan procenat
1
ili procentualni opseg svih glikana koji su sadržani u antitelima i stoga, prikačeni za polipeptidne lance antitela u preparatu antitela ili u kompoziciji koja sadrži antitela. 100% glikana označava sve glikane prikačene za antitela preparata antitela ili u kompoziciji koja sadrži antitela, respektivno. Na primer, relativna količina glikana koji nose dodatni GlcNAc na tački grananja (bisecting GlcNAc) od 10% označava kompoziciju koja sadrži antitela pri čemu 10% svih glikana sadržanih u antitelima i stoga prikačenih za polipeptidne lance antitela u navedenoj kompoziciji sadrži dodatni GlcNAc ostatak na tački grananja, dok 90% od svih glikana sadržanih u antitelima i stoga prikačenih za polipeptidne lance antitela u navedenoj kompoziciji ne sadrže dodatni GlcNAc ostatak na tački grananja. Odgovarajuća referentna količina glikana koja predstavlja 100% može biti bilo sve strukture glikana prikačene za antitela u kompoziciji, ili svi N-glikani, tj. sve strukture glikana prikačene za asparaginski ostatak antitela u kompoziciji, ili svi glikani kompleksnog tipa. Referentna grupa glikanskih struktura je generalno eksplicitno naznačena ili je osoba sa iskustvom direktno može izvesti iz okolnosti.
[0032] Termin "N-glikozilacija" označava sve glikane prikačene za asparaginske ostatke polipeptidnog lanca proteina. Ovi asparaginski ostaci su generalno deo mesta N-glikozilacije koja imaju amino-kiselinsku sekvencu Asn - Xaa - Ser/Thr, pri čemu Xaa može biti bilo koja amino-kiselina osim prolina. Slično, "N-glikani" su glikani prikačeni za asparaginske ostatke polipeptidnog lanca. Termini "glikan", "glikanska struktura", "ugljeni hidrat", "ugljenohidratni lanac " i "ugljenohidratna struktura" se ovde generalno upotrebljavaju kao sinonimi. N-glikani generalno imaju zajedničku strukturu jezgra koja se sastoji od dva ostatka N-acetilglukozamina (GlcNAc) i tri ostatka manoze, koji imaju strukturu Manα1,6-(Manα1,3-)Manβ1,4-GlcNAcβ1,4-GlcNAcβ1-Asn pri čemu je Asn asparaginski ostatak polipeptidnog lanca. N-glikani se dele na tri različita tipa, naime glikane kompleksnog tipa, glikane hibridnog tipa i glikane sa visokim sadržajem manoze.
[0033] Ovde date brojeve, posebno relativne količine specifičnog svojstva glikozilacije, poželjno je razumeti kao približne brojeve. Posebno, poželjno je da brojevi mogu biti do 10% viši i/ili niži, posebno do 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2% ili 1% viši i/ili niži.
[0034] U "konjugatu" dva ili više jedinjenja su međusobno povezana. U određenim primerima izvođenja, barem neka od svojstava svakog jedinjenja su zadržana u konjugatu. Povezivanje se može postići kovalentnom ili nekovalentnom vezom. Poželjno, jedinjenja konjugata su povezana putem kovalentne veze. Različita jedinjenja konjugata mogu biti direktno vezana jedno za drugo putem jedne ili više kovalentnih veza između atoma jedinjenja. Alternativno, jedinjenja mogu biti vezana jedno za drugo putem hemijske funkcionalne grupe kao što je linker molekul pri čemu je linker kovalentno prikačen za atome jedinjenja. Ukoliko se konjugat sastoji od više od dva jedinjenja, onda ova jedinjenja mogu, na primer, biti povezana u lančanu konformaciju, jedno jedinjenje je prikačeno za sledeće jedinjenje, ili nekoliko jedinjenja može pojedinačno biti prikačeno za jedno centralno jedinjenje.
[0035] Termin "nukleinska kiselina" uključuje jednolančane i dvolančane nukleinske kiseline i ribonukleinske kiseline, kao i dezoksiribonukleinske kiseline. Može da sadrži nukleotide koji se javljaju u prirodi, kao i sintetičke nukleotide i može biti prirodno ili sintetički modifikovana, na primer metilacijom, 5'- i/ili 3'-kapom.
[0036] Termin "ekspresiona kaseta" posebno označava konstrukt nukleinske kiseline koji je sposoban da omogući i reguliše ekspresiju kodirajuće sekvence nukleinske kiseline koja je u nju introdukovana. Ekspresiona kaseta može da sadrži promotore, vezujuća mesta ribozoma, pojačivače i druge kontrolne elemente koji regulišu transkripciju gena ili translaciju iRNK. Tačna struktura ekspresione kasete može da varira u zavisnosti od vrste organizma ili tipa ćelije, ali generalno sadrži 5'-netranskribovane i 5'- i 3'-netranslatirane sekvence koje su uključene u inicijaciju transkripcije i translacije, respektivno, kao što je TATA boks, sekvenca kape, CAAT sekvenca, i slično. Specifičnije, 5'-netranskribovane sekvence kontrole ekspresije sadrže region promotora koji uključuje sekvencu promotora za kontrolu transkripcije operativno povezane nukleinske kiseline. Ekspresione kasete mogu takođe da sadrže pojačivače sekvence ili uzvodne aktivatorske sekvence.
[0037] U skladu sa pronalaskom, termin "promotor" označava sekvencu nukleinske kiseline koja je locirana uzvodno (5') od sekvence nukleinske kiseline koja treba da bude eksprimirana i kontroliše ekspresiju sekvence obezbeđivanjem mesta prepoznavanja i vezivanja za RNK-polimeraze. "Promotor" može uključivati dodatna mesta prepoznavanja i vezivanja za dodatne faktore koji su uključeni u regulaciju transkripcije gena. Promotor može da kontroliše transkripciju prokariotskog ili eukariotskog gena. Štaviše, promotor može biti "inducibilan", tj. inicirati transkripciju kao odgovor na indukujući agens, ili može biti "konstitutivan" ukoliko transkripciju ne kontroliše indukujući agens. Gen koji je pod kontrolom inducibilnog promotora ne eksprimira se ili se eksprimira samo u maloj meri ukoliko je indukujući agens odsutan. U prisustvu indukujućeg agensa gen se uključuje ili se povećava nivo transkripcije. Ovo je posredovano, generalno, vezivanjem specifičnog transkripcionog faktora.
[0038] Termin "vektor" se ovde upotrebljava u svom najopštijem značenju i sadrži bilo koji intermedijarni vehikulum za nukleinsku kiselinu koji omogućava da se navedena nukleinska kiselina, na primer, introdukuje u prokariotske i/ili eukariotske ćelije i, gde je prikladno, da se integriše u genom. Vektori ove vrste se poželjno repliciraju i/ili eksprimiraju u ćelijama.
Vektori sadrže plazmide, fagemide, bakteriofage ili virusne genome. Termin "plazmid" kao što se ovde upotrebljava generalno označava konstrukt vanhromozomskog genetičkog materijala, uobičajeno cirkularni DNK dupleks, koji se može replicirati nezavisno od hromozomske DNK.
[0039] U skladu sa pronalaskom, termin "ćelija domaćin" odnosi se na bilo koju ćeliju koja se može transformisati ili transfektovati sa egzogenom nukleinskom kiselinom. Temin "ćelije domaćini" sadrži u skladu sa pronalaskom prokariotske (npr. E. coli) ili eukariotske ćelije (npr. ćelije sisara, posebno humane ćelije, ćelije kvasca i ćelije insekata). Posebna prednost se daje ćelijama sisara kao što su humane ćelije, ćelije miševa, hrčaka, svinja, koza, ili primata. Ćelije mogu biti poreklom od mnoštva tipova tkiva i sadrže primarne ćelije i ćelijske linije. Nukleinska kiselina može biti prisutna u ćeliji domaćinu u obliku jedne kopije ili u dve ili više kopija i, u jednom primeru izvođenja, eksprimira se u ćeliji domaćinu.
[0040] Termin "pacijent" u skladu sa pronalaskom znači ljudsko biće, ne-humanog primata ili drugu životinju, posebno sisara kao što su krava, konj, svinja, ovca, koza, pas, mačka ili glodar kao što su miš i pacov. U posebno poželjnom primeru izvođenja, pacijent je ljudsko biće.
[0041] Termin "kancer" u skladu sa pronalaskom posebno sadrži leukemije, seminome, melanome, karcinome, teratome, limfome, sarkome, mezoteliome, neuroblastome, gliome, rektalni kancer, kancer endometrijuma, kancer bubrega, kancer nadbubrežne žlezde, kancer štitne žlezde, kancer krvi, kancer kože, kancer mozga, kancer grlića materice, intestinalni kancer, kancer jetre, kancer kolona, kancer želuca, kancer creva, kancer glave i vrata, gastrointestinalni kancer, kancer limfnih čvorova, kancer jednjaka, kolorektalni kancer, kancer pankreasa, kancer uha, nosa i grla (ENT), kancer dojke, kancer prostate, kancer mokraćne bešike, kancer materice, kancer jajnika i kancer pluća i njihove metastaze. Termin kancer u skladu sa pronalaskom takođe sadrži metastaze kancera.
[0042] Pod "tumorom" se podrazumeva grupa ćelija ili tkiva koja je formirana pogrešno regulisanom ćelijskom proliferacijom. Tumori mogu pokazati delimični ili potpuni nedostatak strukturne organizacije i funkcionalne koordinacije sa normalnim tkivom, i uobičajeno formiraju posebnu masu tkiva, koja može biti bilo benigna ili maligna.
[0043] Pod "metastazom" se podrazumeva širenje ćelija kancera sa prvobitnog mesta na drugi deo tela. Formiranje metastaza je veoma složen proces i normalno uključuje odvajanje ćelija kancera od primarnog tumora, ulazak u telesnu cirkulaciju i smeštanje tako da rastu unutar normalnih tkiva na drugim mestima u telu. Kada tumorske ćelije metastaziraju, novi tumor se naziva sekundarni ili metastatski tumor, i njegove ćelije normalno liče na one u originalnom
1
tumoru. To znači, na primer, da, ukoliko kancer dojke metastazira u pluća, sekundarni tumor je sačinjen od abnormalnih ćelija dojke, a ne od abnormalnih ćelija pluća. Tumor u plućima se tada naziva metastatski kancer dojke, a ne kancer pluća.
[0044] Termin "farmaceutska kompozicija" posebno označava kompoziciju pogodnu za primenu čoveku ili životinji, tj. kompoziciju koja sadrži komponente koje su farmaceutski prihvatljive. Poželjno, farmaceutska kompozicija sadrži aktivno jedinjenje ili njegovu so ili prolek zajedno sa nosačem, razblaživačem ili farmaceutskim ekscipijensom kao što je pufer, konzervans i modifikator toničnosti.
[0045] Numerički opsezi koji su ovde opisani uključuju brojeve koji definišu opseg. Naslovi koji su ovde obezbeđeni nisu ograničenja različitih aspekata ili primera izvođenja ovog pronalaska koji se mogu pročitati pozivanjem na specifikaciju u celini. U skladu sa jednim primerom izvođenja, predmet opisan ovde tako da sadrži određene korake u slučaju postupaka ili tako da sadrži određene sastojke u slučaju kompozicija označava predmet koji se sastoji od odgovarajućih koraka ili sastojaka. Poželjno je da se odaberu i kombinuju poželjni aspekti i primeri izvođenja koji su ovde opisani, a specifični predmet koji proizilazi iz odgovarajuće kombinacije poželjnih primera izvođenja takođe pripada predmetnoj objavi.
DETALJAN OPIS PRONALASKA
[0046] Predmetni pronalazak se zasniva na razvoju varijante humanizovanog anti-MUC1 antitela PankoMab pri čemu je mesto glikozilacije u CDR-H2 deletirano. Deletiranje mesta glikozilacije je postignuto supstitucijom amino-kiseline Asn (asparagin) 57 varijabilnog regiona teškog lanca drugom amino-kiselinom, naročito Gln (glutamin). Asn 57 je akceptorski amino-kiselinski ostatak mesta glikozilacije za koji je prikačena ugljenohidratna struktura. Supstitucija ovog asparaginskog ostatka drugim ostatkom ukida glikozilaciju pošto se ugljenohidratna struktura može preneti samo na asparaginski ostatak pomoću enzima ćelije domaćina. Iznenađujuće je pronađeno da deletiranje mesta glikozilacije u CDR-H2 PankoMab povećava antigen-vezujući afinitet antitela.
[0047] Imajući u vidu ove nalaze, predmetni pronalazak obezbeđuje antitelo sposobno da se vezuje za MUC1, koje sadrži
(i) varijabilni region teškog lanca koji sadrži regione koji određuju komplementarnost (CDR) CDR-H1 koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1, CDR-H2 koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 7 i CDR-H3 koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 3, i
(ii) varijabilni region lakog lanca koji sadrži regione koji određuju komplementarnost (CDR) CDR-L1 koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 4, CDR-L2 koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 5 i CDR-L3 koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 6.
Vezivanje za MUC1
[0048] Antitelo se specifično vezuje za epitop MUC1. "Specifično vezivanje" znači vezivanje koje nije nespecifična adsorpcija. Primeri kriterijuma za određivanje da li je vezivanje specifično ili ne mogu uključiti konstantu disocijacije (u daljem tekstu označeno kao "KD"). Epitop je u vanćelijskim tandemskim ponovcima MUC1. U određenim primerima izvođenja, antitelo se vezuje za MUC1 na način zavisan od glikozilacije. Posebno, antitelo se jače vezuje ukoliko se navedeni tandem ponovci glikoziluju na treoninskom ostatku sa N-acetil galaktozaminom (Tn), sijalil α2-6 N-acetil galaktozaminom (sTn), galaktoza β1-3 N-acetil galaktozaminom (TF) ili galaktoza β1-3 (sijalil α2-6) N-acetil galaktozaminom (sTF), poželjno sa Tn ili TF. Poželjno, ugljenohidratna funkcionalna grupa je vezana za treoninski ostatak α-O-glikozidnom vezom. Epitop u domenu tandem ponovaka MUC1 posebno sadrži amino-kiselinsku sekvencu PDTR (SEQ ID NO: 13) ili PESR (SEQ ID NO: 14). Vezivanje za ovaj epitop poželjno je zavisno od glikozilacije, kao što je prethodno opisano, pri čemu je posebno vezivanje povećano ukoliko je prethodno opisana ugljenohidratna funkcionalna grupa prikačena za treoninski ostatak sekvence PDTR ili PESR (SEQ ID NO: 13 i 14), respektivno.
[0049] Epitop je epitop MUC1 povezanog sa tumorom (TA-MUC1). Epitop TA-MUC1 posebno označava epitop MUC1 koji je prisutan na tumorskim ćelijama, ali ne i na normalnim ćelijama i/ili koji je dostupan samo antitelima u cirkulaciji domaćina kada je prisutan na tumorskim ćelijama, ali ne i kada je prisutan na normalnim ćelijama. U određenim primerima izvođenja, vezivanje antitela za ćelije koje eksprimiraju epitop TA-MUC1 je jače od vezivanja za ćelije koje eksprimiraju normalan, ne-tumorski MUC1. Poželjno, navedeno vezivanje je najmanje 1,5 puta jače, poželjno najmanje 2 puta jače, najmanje 5 puta jače, najmanje 10 puta jače ili najmanje 100 puta jače. Za vezivanje TA-MUC1, antitelo poželjno specifično vezuje glikozilovani epitop MUC1 tumora tako da je jačina veze povećana
1
najmanje za faktor 2, poželjno faktor 4 ili faktor 10, najpoželjnije faktor 20 u poređenju sa vezom za neglikozilovani peptid identične dužine i identične peptidne sekvence. Navedeno vezivanje se može testirati ili odrediti pomoću ELISA, RIA, analize rezonance površinskih plazmona (u daljem tekstu označeno kao "SPR"), ili slično. Primeri opreme koja se upotrebljava u SPR analizi mogu uključivati BIAcore(TM) (proizvođača GE Healthcare Bio-Sciences Crop.), ProteOn(TM) (proizvođača Bio-Rad Laboratories, Inc.), DRX2 Biosenzor (proizvođača Dynamic Biosensors GmbH), SPR-Navi(TM) (proizvođača BioNavis Oy Ltd.), Spreeta(TM) (proizvođača Texas Instruments Inc.), SPRi-Plexll(TM) (proizvođača Horiba, Ltd.), i Autolab SPR(TM) (proizvođača Metrohm). Vezivanje antitela za antigen eksprimiran na površini ćelije može se testirati pomoću protočne citometrije ili slično.
[0050] Štaviše, antitelo može da pokaže antigen-vezujuća svojstva slična onima kod referentnog antitela koje sadrži varijabilni region teškog lanca sa amino-kiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 11 ili SEQ ID NO: 10 i varijabilni region lakog lanca sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 12. Poželjno, referentno antitelo je humanizovano antitelo PankoMab. Posebno, antitelo u skladu sa pronalaskom specifično se vezuje za isti antigen kao referentno antitelo, i poželjno se vezuje za navedeni antigen sa većim afinitetom. To jest, antitelo se poželjno vezuje za antigen sa afinitetom koji ima konstantu disocijacije koja je niža od one kod referentnog antitela, poželjnije najmanje 10% niža, najmanje 20% niža, najmanje 30% niža ili najmanje 50% niža. Štaviše, antitelo poželjno pokazuje unakrsnu specifičnost sa referentnim antitelom koje sadrži varijabilni region teškog lanca sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 11 i varijabilni region lakog lanca sa amino-kiselinskom sekvencom SEQ ID NO: 12. Posebno, humanizovano antitelo je u stanju da blokira vezivanje referentnog antitela za MUC1 ukoliko je prisutno u dovoljno visokoj koncentraciji. Ovo je moguće ukoliko je vezivanje referentnog antitela za MUC1 onemogućeno kada je antitelo u skladu sa pronalaskom već vezano za antigen MUC1.
Anti-MUC1 antitelo
[0051] Antitelo koje je sposobno da se vezuje za MUC1 iz predmetnog pronalaska sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži regione koji određuju komplementarnost (CDR) CDR-H1 koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1, CDR-H2 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 7 i CDR-H3 koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 3 i varijabilni region lakog lanca koji sadrži regione koji određuju komplementarnost (CDR) CDR-L1 koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 4, CDR-L2 koji ima
1
amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 5 i CDR-L3 koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 6.
[0052] U specifičnim primerima izvođenja, varijabilni region teškog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu koja je najmanje 90% identična amino-kiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 10. Naročito, varijabilni region teškog lanca sadrži amino-kiselinsku sekvencu koja je najmanje 95%, posebno najmanje 98% identična amino-kiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 10. U ovim primerima izvođenja, varijabilni region teškog lanca sadrži CDR-H1 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1, CDR-H2 koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 7 i CDR-H3 koja ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 3. Otuda, bilo koja odstupanja sekvence u odnosu na SEQ ID NO: 10 locirana su u regionima okvira, ali ne u CDR. Posebno, varijabilni region teškog lanca sadrži amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 10.
[0053] U određenim primerima izvođenja, varijabilni region lakog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu koja je najmanje 90% identična amino-kiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 12. Naročito, varijabilni region lakog lanca sadrži amino-kiselinsku sekvencu koja je najmanje 95%, posebno najmanje 98% identična amino-kiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 12. U ovim primerima izvođenja, varijabilni region lakog lanca i dalje sadrži CDR koji imaju amino-kiselinske sekvence SEQ ID NO: 4, 5 i 6. Otuda, bilo koja odstupanja sekvence u odnosu na SEQ ID NO: 12 locirana su u regionima okvira, ali ne u CDR. Posebno, varijabilni region lakog lanca sadrži amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 12.
[0054] U specifičnim primerima izvođenja, varijabilni region teškog lanca ima aminokiselinsku sekvencu koja je najmanje 90% identična amino-kiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 10, pri čemu CDR i dalje imaju amino-kiselinske sekvence SEQ ID NO: 1, 7 i 3, i varijabilni region lakog lanca ima amino-kiselinsku sekvencu koja je najmanje 90% identična aminokiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 12, pri čemu CDR i dalje imaju amino-kiselinske sekvence SEQ ID NO: 4, 5 i 6. Posebno, varijabilni region teškog lanca ima amino-kiselinsku sekvencu koja je najmanje 95% identična amino-kiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 10, pri čemu CDR i dalje imaju amino-kiselinske sekvence SEQ ID NO: 1, 7 i 3, i varijabilni region lakog lanca ima amino-kiselinsku sekvencu koja je najmanje 95% identična amino-kiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 12, pri čemu CDR i dalje imaju amino-kiselinske sekvence SEQ ID NO: 4, 5 i 6.
[0055] U specifičnim primerima izvođenja, varijabilni region teškog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu koja je najmanje 90% identična amino-kiselinskoj sekvenci koja je predstavljena amino-kiselinama br. 20 do 136 SEQ ID NO: 20. Naročito, varijabilni region teškog lanca sadrži amino-kiselinsku sekvencu koja je najmanje 95%, posebno najmanje 98%
1
identična amino-kiselinskoj sekvenci koja je predstavljena amino-kiselinama br. 20 do 136 SEQ ID NO: 20. U ovim primerima izvođenja, varijabilni region teškog lanca sadrži CDR-H1 koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1, CDR-H2 koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 7 i CDR-H3 koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 3. Otuda, bilo koja odstupanja sekvence u odnosu na amino-kiselinsku sekvencu koja je predstavljena amino-kiselinama br. 20 do 136 SEQ ID NO: 20 locirana su u regionima okvira, ali ne u CDR. Posebno, varijabilni region teškog lanca sadrži amino-kiselinsku sekvencu koja je predstavljena amino-kiselinama br.20 do 136 SEQ ID NO: 20, pri čemu je amino-kiselina na poziciji 76 SEQ ID NO: 20 glutamin. Posebno, CDR-H2 ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 7 i/ili varijabilni region teškog lanca sadrži amino-kiselinsku sekvencu koja je predstavljena amino-kiselinama br.20 do 136 SEQ ID NO: 23.
[0056] U specifičnim primerima izvođenja, varijabilni region lakog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu koja je najmanje 90% identična amino-kiselinskoj sekvenci koja je predstavljena amino-kiselinama br. 21 do 133 SEQ ID NO: 21. Naročito, varijabilni region lakog lanca sadrži amino-kiselinsku sekvencu koja je najmanje 95%, posebno najmanje 98% identična amino-kiselinskoj sekvenci koja je predstavljena amino-kiselinama br. 21 do 133 SEQ ID NO: 21. U ovim primerima izvođenja, varijabilni region lakog lanca i dalje sadrži CDR koji imaju amino-kiselinske sekvence SEQ ID NO: 4, 5 i 6. Otuda, bilo koja odstupanja sekvence u odnosu na amino-kiselinsku sekvencu koja je predstavljena amino-kiselinama br.
21 do 133 SEQ ID NO: 21 locirana su u regionima okvira, ali ne u CDR. Posebno, varijabilni region lakog lanca sadrži amino-kiselinsku sekvencu koja je predstavljena amino-kiselinama br. 21 do 133 SEQ ID NO: 21.
[0057] U specifičnim primerima izvođenja, varijabilni region teškog lanca ima aminokiselinsku sekvencu koja je najmanje 90% identična amino-kiselinskoj sekvenci koja je predstavljena amino-kiselinama br. 20 do 136 SEQ ID NO: 20, pri čemu CDR i dalje imaju amino-kiselinske sekvence SEQ ID NO: 1, 7 i 3, i varijabilni region lakog lanca ima aminokiselinsku sekvencu koja je najmanje 90% identična amino-kiselinskoj sekvenci koja je predstavljena amino-kiselinama br. 21 do 133 SEQ ID NO: 21, pri čemu CDR i dalje imaju amino-kiselinske sekvence SEQ ID NO: 4, 5 i 6. Posebno, varijabilni region teškog lanca ima amino-kiselinsku sekvencu koja je najmanje 95% identična amino-kiselinskoj sekvenci koja je predstavljena amino-kiselinama br.20 do 136 SEQ ID NO: 20, pri čemu CDR i dalje imaju amino-kiselinske sekvence SEQ ID NO: 1, 7 i 3, i varijabilni region lakog lanca ima aminokiselinsku sekvencu koja je najmanje 95% identična amino-kiselinskoj sekvenci koja je
1
predstavljena amino-kiselinama br. 21 do 133 SEQ ID NO: 21, pri čemu CDR i dalje imaju amino-kiselinske sekvence SEQ ID NO: 4, 5 i 6.
[0058] U specifičnim primerima izvođenja, teški lanac sadrži amino-kiselinsku sekvencu koja je najmanje 90% identična amino-kiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 15. Naročito, teški lanac sadrži amino-kiselinsku sekvencu koja je najmanje 95%, posebno najmanje 98% identična amino-kiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 15. U ovim primerima izvođenja, teški lanac sadrži CDR-H1 koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1, CDR-H2 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 7 i CDR-H3 koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 3. Otuda, bilo koja odstupanja sekvence u odnosu na SEQ ID NO: 15 locirana su u regionima okvira, ali ne u CDR. Posebno, teški lanac sadrži amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 15, pri čemu je amino-kiselina na poziciji 57 SEQ ID NO: 15 glutamin. Posebno, CDR-H2 ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 7 i/ili varijabilni region teškog lanca sadrži amino-kiselinsku sekvencu koja je predstavljena amino-kiselinama br. 20 do 136 SEQ ID NO: 22.
[0059] U specifičnim primerima izvođenja, laki lanac sadrži amino-kiselinsku sekvencu koja je najmanje 90% identična amino-kiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 16. Naročito, laki lanac sadrži amino-kiselinsku sekvencu koja je najmanje 95%, posebno najmanje 98% identična amino-kiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 16. U ovim primerima izvođenja, laki lanac i dalje sadrži CDR koji imaju amino-kiselinske sekvence SEQ ID NO: 4, 5 i 6. Otuda, bilo koja odstupanja sekvence u odnosu na SEQ ID NO: 16 locirana su u regionima okvira, ali ne u CDR. Posebno, laki lanac sadrži amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 16.
[0060] U specifičnim primerima izvođenja, teški lanac ima amino-kiselinsku sekvencu koja je najmanje 90% identična amino-kiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 15, pri čemu CDR i dalje imaju amino-kiselinske sekvence SEQ ID NO: 1, 7 i 3, i varijabilni region lakog lanca ima amino-kiselinsku sekvencu koja je najmanje 90% identična amino-kiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 16, pri čemu CDR i dalje imaju amino-kiselinske sekvence SEQ ID NO: 4, 5 i 6. Posebno, teški lanac ima amino-kiselinsku sekvencu koja je najmanje 95% identična aminokiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 15, pri čemu CDR i dalje imaju amino-kiselinske sekvence SEQ ID NO: 1, 7 i 3, i laki lanac ima amino-kiselinsku sekvencu koja je najmanje 95% identična amino-kiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 16, pri čemu CDR i dalje imaju aminokiselinske sekvence SEQ ID NO: 4, 5 i 6.
[0061] Antitelo u skladu sa predmetnim pronalaskom uključuje i obuhvata njegove modifikovane oblike. Modifikovani oblik antitela iz predmetnog pronalaska znači antitelo iz predmetnog pronalaska obezbeđeno sa hemijskom ili biološkom modifikacijom. Hemijski
1
modifikovani oblik uključuje oblike u kojima je amino-kiselinski skelet konjugovan za hemijsku funkcionalnu grupu, oblike koji imaju hemijski modifikovani N-povezani ili O-povezani ugljenohidratni lanac, i slično. Navedena hemijska funkcionalna grupa ili oblik mogu biti toksični ili citotoksični. Biološki modifikovani oblici uključuju oblike koji su prošli posttranslacionu modifikaciju (npr. N-povezana ili O-povezana glikozilacija, N-terminusna ili C-terminusna obrada, deamidacija, izomerizacija asparaginske kiseline, ili oksidacija metionina), oblike koji sadrže ostatak metionina dodat na N-terminus pomoću ekspresije upotrebom prokariotskih ćelija domaćina, i slično. Takav modifikovani oblik takođe se podrazumeva da uključuje oblik koji je obeležen da omogući detekciju ili izolaciju antitela iz predmetnog pronalaska ili njegovog antigena, na primer, enzimom-obeležene oblike, fluorescentno obeležene oblike, i afinitetno-obeležene oblike. Takav modifikovani oblik antitela iz predmetnog pronalaska koristan je za poboljšanje stabilnosti ili zadržavanja u krvi originalnog antitela iz predmetnog pronalaska, redukciju antigenosti, detekciju ili izolaciju antitela ili antigena, itd.
[0062] Posebno, antitelo može da sadrži jednu ili više modifikacija odabranih iz grupe koja se sastoji od defukozilacije, redukovane fukoze, N-povezane glikozilacije, O-povezane glikozilacije, N-terminusne obrade, C-terminusne obrade, deamidacije, izomerizacije asparaginske kiseline, oksidacije metionina, supstitucija dva ostatka leucina (L) alaninom (A) na pozicijama 234 i 235 teškog lanca (LALA), amidacije ostatka prolina i delecije ili nedostatka jedne, dve, ili tri amino-kiseline na karboksi-terminusu. U specifičnim primerima izvođenja, antitelu nedostaje jedna, dve, ili tri karboksi-terminusne amino-kiseline na jednom ili oba teška lanca, ili mu nedostaje jedna karboksi-terminusna amino-kiselina i karboksiterminusni ostaci prolina su amidovani na jednom ili oba teška lanca.
[0063] Takva modifikacija može biti napravljena na arbitrarnoj poziciji ili na željenoj poziciji u antitelu. Alternativno, ista ili dve ili više različitih modifikacija mogu biti napravljene na jednoj ili dve ili više pozicija u njima.
[0064] Na primer, poznato je da antitelima koja proizvode kultivisane ćelije sisara nedostaje karboksi-terminusni ostatak lizina u njihovom teškom lancu (Journal of Chromatography A, 705: 129-134 (1995)). Takođe je poznato da povremeno fale 2 karboksi-terminusna aminokiselinska ostatka (tj. glicin i lizin) teškog lanca i da je ostatak prolina koji je novolociran na karboksilnom terminusu amidovan (Analytical Biochemistry, 360: 75-83 (2007)). Takav nedostatak ili modifikacija u ovim sekvencama teškog lanca, međutim, ne utiče ni na sposobnost antitela da se vezuje za svoj antigen niti na efektorske funkcije antitela (aktivacija komplementa, citotoksičnost zavisna od antitela, itd.).
2
[0065] U određenim primerima izvođenja, antitelo sadrži deleciju ili nedostatak 1 ili 2 aminokiseline na karboksilnom terminusu teškog lanca, i ima amidovani ostatak (npr. amidovani ostatak prolina na karboksi-terminusnom mestu teškog lanca). Međutim, antitelo nije ograničeno na tipove koji su prethodno opisani, sve dok delecioni mutant održava sposobnost da se vezuje za antigen.
[0066] U određenim primerima izvođenja, dva teška lanca antitela u skladu sa predmetnim pronalaskom mogu biti sačinjena od bilo kog tipa teškog lanca odabranog iz grupe koja se sastoji od teških lanaca pune dužine i teških lanaca delecionog mutanta ili mogu biti sačinjena od kombinacije bilo koja dva tipa odabrana odatle. Kvantitativni odnos teškog(ih) lanca(aca) delecione varijante zavisi od tipa kultivisanih ćelija sisara koje proizvode antitelo u skladu sa predmetnim pronalaskom, i uslova kulture ćelija.
[0067] U specifičnim primerima izvođenja, antitelo u skladu sa predmetnim pronalaskom može uključivati dva teška lanca, kod kojih nedostaje jedan karboksi-terminusni aminokiselinski ostatak.
[0068] U specifičnim primerima izvođenja, antitelo sadrži teški lanac koji ima aminokiselinsku sekvencu koja je predstavljena amino-kiselinama br. 1 do 446 SEQ ID NO: 22 i laki lanac koji ima amino-kiselinsku sekvencu koja je predstavljena amino-kiselinama br. 1 do 219 SEQ ID NO: 16.
[0069] U određenim primerima izvođenja, antitelo u skladu sa predmetnim pronalaskom je u kompeticiji za vezivanje za TA-MUC1 sa antitelom koje sadrži varijabilni region teškog lanca koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 10 i varijabilni region lakog lanca koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 12, ili antitelom koje sadrži varijabilni region teškog lanca koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 11 i varijabilni region lakog lanca koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 12.
[0070] U određenim primerima izvođenja, antitelo ima sledeća svojstva: (a) specifično se vezuje za MUC1, i/ili (b) ima aktivnost da bude internalizovano u ćelije koje eksprimiraju MUC1 preko vezivanja za MUC1.
[0071] U određenim primerima izvođenja, antitelo sadrži najmanje jedan teški lanac antitela. Naročito, antitelo sadrži dva teška lanca antitela. Teški lanci antitela posebno sadrže VH domen, CH1 domen, region zgloba, CH2 domen i CH3 domen. U određenim drugim primerima izvođenja, teški lanci antitela sadrže CH2 domen i CH3 domen, ali ne sadrže CH1 domen. U dodatnim primerima izvođenja, jedan ili više konstantnih domena teških lanaca mogu biti zamenjeni drugim domenima, posebno sličnim domenima kao što je na primer albumin. Teški lanci antitela mogu biti bilo kog tipa, uključujući γ-, α-, ε-, δ- i μ-lance, i poželjno su γ-lanci, uključujući γ1-, γ2-, γ3- i γ4-lance, naročito γ1-lanci. Otuda, antitelo je poželjno antitelo IgG-tipa kao što je antitelo IgG1-, IgG3- ili IgG4-tipa, posebno antitelo IgG1-tipa.
[0072] Posebno, antitelo dodatno sadrži najmanje jedan laki lanac antitela, naročito dva laka lanca antitela. Laki lanci antitela posebno sadrže VL domen i CL domen. Laki lanac antitela može biti κ-lanac ili λ-lanac i naročito je κ-lanac.
[0073] U određenim primerima izvođenja, antitelo sadrži dva teška lanca antitela i dva laka lanca antitela. Posebno, antitelo sadrži dva teška lanca antitela γ1-tipa, od kojih svaki sadrži VH domen, CH1 domen, region zgloba, CH2 domen i CH3 domen, i dva laka lanca antitela κtipa, od kojih svaki sadrži VL domen i CL domen.
[0074] U alternativnim primerima izvođenja, antitelo ne sadrži laki lanac antitela. U ovim primerima izvođenja, varijabilni region lakog lanca može biti fuzionisan za N terminus varijabilnog regiona teškog lanca ili je insertovan C terminusno na varijabilni region teškog lanca. Peptidni linkeri mogu biti prisutni da povezuju varijabilni region lakog lanca sa preostalim delovima teškog lanca.
[0075] U poželjnim primerima izvođenja, antitelo sadrži Fc region. Antitelo naročito može biti celo antitelo, koje sadrži dva teška lanca od kojih svaki sadrži domene VH, CH1, region zgloba, CH2 i CH3, i dva laka lanca od kojih svaki sadrži domene VL i CL. Antitelo je posebno sposobno da se vezuje za jedan ili više humanih Fcγ receptora, naročito humani Fcγ receptor IIIA. U alternativnim primerima izvođenja, antitelo se ne vezuje ili se ne vezuje značajno za humani Fcγ receptor IIIA, a naročito se ne vezuje ili se ne vezuje značajno za bilo koji humani Fcγ receptor. U ovim primerima izvođenja antitelo posebno ne sadrži mesto glikozilacije u CH2 domenu.
[0076] U alternativnim primerima izvođenja, antitelo ne sadrži Fc region. U ovim primerima izvođenja, antitelo je posebno jednolančani fragment varijabilnog regiona (scFv) ili drugi fragment antitela koji ne sadrži Fc region.
Glikozilacija anti-MUC1 antitela
[0077] Anti-MUC1 antitelo može da sadrži CH2 domen u jednom ili više teških lanaca antitela. Prirodna humana antitela IgG-tipa sadrže mesto N-glikozilacije u CH2 domenu. CH2 domeni prisutni u antitelu mogu, ali ne moraju da sadrže mesto N-glikozilacije. U određenim primerima izvođenja, antitelo ne sadrži mesto glikozilacije u CH2 domenu. Posebno, antitelo ne sadrži asparaginski ostatak na poziciji u teškom lancu koja odgovara poziciji 297 u skladu sa IMGT/Eu sistemom numerisanja. Na primer, antitelo može da sadrži mutaciju Ala297 u teškom lancu. U ovim primerima izvođenja, antitelo poželjno ima jako redukovanu sposobnost ili mu potpuno nedostaje sposobnost da indukuje, putem vezivanja za Fcγ receptore, ćelijsku citotoksičnost zavisnu od antitela (ADCC) i/ili ćelijsku fagocitozu zavisnu od antitela (ADCP) i/ili citotoksičnost zavisnu od komplementa (CDC). Jako redukovana sposobnost u ovom pogledu posebno označava redukovanje aktivnosti na 10% ili manje, naročito 3% ili manje, 1% ili manje ili 0,1% ili manje u poređenju sa istim antitelom koje sadrži mesto N-glikozilacije u svom CH2 domenu i koje ima uobičajeni obrazac glikozilacije sisara kao što su ona koja se mogu dobiti proizvodnjom u humanim ćelijskim linijama ili u CHO ćelijskim linijama, na primer obrazac glikozilacije kao što je ovde opisano. U ovim primerima izvođenja, antitelo je posebno antitelo IgG1-tipa.
[0078] U alternativnim primerima izvođenja, CH2 domeni prisutni u antitelu sadrže mesto N-glikozilacije. Ovo mesto glikozilacije je posebno na amino-kiselinskoj poziciji koja odgovara amino-kiselinskoj poziciji 297 teškog lanca u skladu sa IMGT/Eu sistemom numerisanja i ima motiv amino-kiselinske sekvence Asn Xaa Ser/Thr pri čemu Xaa može biti bilo koja aminokiselina osim prolina. N-povezana glikozilacija na Asn297 je konzervirana u IgG sisara kao i u homolognim regionima drugih izotipova antitela. Zbog opcionih dodatnih amino-kiselina koje mogu biti prisutne u varijabilnom regionu ili drugih modifikacija sekvence, stvarna pozicija ovog konzerviranog mesta glikozilacije može da varira u amino-kiselinskoj sekvenci antitela. Poželjno, glikani prikačeni za antitelo su biantenalni kompleksni tip N-povezanih ugljenohidratnih struktura, poželjno koje sadrže barem sledeću strukturu:
Asn - GlcNAc - GlcNAc - Man - (Man - GlcNAc)2
pri čemu je Asn asparaginski ostatak polipeptidnog dela antitela; GlcNAc je N-acetilglukozamin, i Man je manoza. Terminusni GlcNAc ostaci mogu dodatno da nose ostatak galaktoze, koji opciono može da nosi ostatak sijalinske kiseline. Dodatni GlcNAc ostatak (nazvan dodatni GlcNAc na tački grananja) može biti prikačen za Man koja je najbliža polipeptidu. Fukoza može biti vezana za GlcNAc koji je prikačen za Asn. U ovim primerima izvođenja, antitelo je posebno antitelo IgG1-tipa.
[0079] U poželjnim primerima izvođenja, antitelo ne sadrži N-glikolil neuraminske kiseline (NeuGc) ili detektabilne količine NeuGc. Štaviše, poželjno antitelo takođe ne sadrži Galili epitope (Galα1,3-Gal strukture) ili detektabilne količine Galili epitopa. Posebno, relativna
2
količina glikana koji nose NeuGc i/ili Galα1,3-Gal strukture je manja od 0,1% ili čak manja od 0,02% ukupne količine glikana prikačenih za CH2 domene antitela u populaciji antitela.
[0080] Posebno, antitelo ima obrazac humane glikozilacije. Zbog ovih svojstava glikozilacije, odsutne su strane imunogene ne-humane strukture koje indukuju neželjene efekte što znači da se izbegavaju neželjeni sporedni efekti ili nedostaci za koje se zna da su uzrokovani određenim stranim strukturama šećera kao što su imunogene ne-humane sijalinske kiseline (NeuGc) ili Galili epitop (Gal-Gal strukture), obe poznate po sistemima proizvodnje u glodarima, ili druge strukture kao što su imunogene strukture sa visokim sadržajem manoze kao što je poznato iz npr. sistema kvasca.
[0081] U specifičnim primerima izvođenja, antitelo sadrži obrazac glikozilacije koji ima detektabilnu količinu glikana koji nose dodatni GlcNAc ostatak na tački grananja. Posebno, relativna količina glikana koji nose dodatni GlcNAc ostatak na tački grananja je najmanje 0,5%, naročito najmanje 1% ukupne količine glikana koji su prikačeni za mesta glikozilacije antitela u kompoziciji. Štaviše, u određenim primerima izvođenja obrazac glikozilacije sadrži relativnu količinu glikana koji nose najmanje jedan ostatak galaktoze od najmanje 25% ukupne količine glikana koji su prikačeni za antitelo u kompoziciji. Posebno, relativna količina glikana koji nose najmanje jedan ostatak galaktoze je najmanje 30%, naročito najmanje 35% ili najmanje 40% ukupne količine glikana koji su prikačeni za antitelo u kompoziciji. U specifičnim primerima izvođenja, obrazac glikozilacije sadrži relativnu količinu glikana koji nose najmanje jedan ostatak sijalinske kiseline od najmanje 1% ukupne količine glikana koji su prikačeni za antitelo u kompoziciji. Posebno, relativna količina glikana koji nose najmanje jedan ostatak sijalinske kiseline je najmanje 1,5%, naročito najmanje 2% ukupne količine glikana koji su prikačeni za antitelo u kompoziciji.
[0082] Antitelo može imati obrazac glikozilacije koji ima veliku količinu fukoze u jezgru ili malu količinu fukoze u jezgru. Redukovana količina fukozilacije povećava sposobnost antitela da indukuje ADCC. U određenim primerima izvođenja, relativna količina glikana koji nose ostatak fukoze u jezgru je 40% ili manje, naročito 30% ili manje ili 20% ili manje od ukupne količine glikana koji su prikačeni za antitelo u kompoziciji. U alternativnim primerima izvođenja, relativna količina glikana koji nose ostatak fukoze u jezgru je najmanje 60%, naročito najmanje 65% ili najmanje 70% ukupne količine glikana koji su prikačeni za antitelo u kompoziciji.
[0083] Putem prisustva ili odsustva mesta glikozilacije u CH2 domenu anti-MUC1 antitela i prisustva ili odsustva fukoze u strukturama glikana na navedenom mestu glikozilacije, može se kontrolisati sposobnost antitela da indukuje ADCC i jačina navedene ADCC indukcije.
ADCC aktivnost se povećava glikozilacijom Fc dela antitela i dodatno redukovanjem količine fukozilacije u navedenoj glikozilaciji. U određenim aplikacijama, fino podešavanje ADCC aktivnosti je važno. Prema tome, u određenim situacijama, antitelo bez mesta glikozilacije u CH2 domenu, antitelo sa mestom glikozilacije u CH2 domenu i sa velikom količinom fukozilacije, ili antitelo sa mestom glikozilacije u CH2 domenu i sa malom količinom fukozilacije može biti najpogodnije.
Proizvodnja anti-MUC1 antitela
[0084] Antitelo se poželjno proizvodi rekombinantno u ćeliji domaćinu. Ćelija domaćin koja se upotrebljava za proizvodnju antitela može biti bilo koja ćelija domaćin koja se može upotrebljavati za proizvodnju antitela. Pogodne ćelije domaćini su posebno eukariotske ćelije domaćini, naročito ćelije domaćini sisara. Primeri ćelija domaćina uključuju ćelije kvasca kao što su Pichia pastoris ćelijske linije, ćelije insekata kao što su SF9 i SF21 ćelijske linije, biljne ćelije, ćelije ptica kao što su EB66 ćelijske linije patke, ćelije glodara kao što su CHO, NS0, SP2/0 i YB2/0 ćelijske linije, i humane ćelije kao što su HEK293, PER.C6, CAP, CAP-T, AGE1.HN, Mutz-3 i KG1 ćelijske linije.
[0085] U određenim primerima izvođenja, antitelo se proizvodi rekombinantno u ćelijskoj liniji humane krvi, posebno u ćelijskoj liniji humane mijeloidne leukemije. Poželjne humane ćelijske linije koje se mogu upotrebljavati za proizvodnju antitela kao i pogodne procedure proizvodnje opisane su u WO 2008/028686 A2. U specifičnom primeru izvođenja, antitelo se dobija ekspresijom u ćelijskoj liniji humane mijeloidne leukemije koja je odabrana iz grupe koja se sastoji od NM-H9D8, NM-H9D8-E6 i NM-H9D8-E6Q12 i ćelijskih linija koje su poreklom od njih. Ove ćelijske linije su deponovane pod pristupnim brojevima DSM ACC2806 (NM-H9D8; deponovano 15. septembra 2006.), DSM ACC2807 (NM-H9D8-E6; deponovano 5. oktobra 2006.) i DSM ACC2856 (NM-H9D8-E6Q12; deponovano 8. avgusta 2007.) u skladu sa zahtevima Budimpeštanskog ugovora u Nemačkoj kolekciji mikroorganizama i ćelijskih kultura (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen - DSMZ), Inhoffenstraβe 7B, 38124 Braunschweig (DE) od strane Glycotope GmbH, Robert-Rössle-Str. 10, 13125 Berlin (DE). NM-H9D8 ćelije obezbeđuju obrazac glikozilacije sa visokim stepenom sijalilacije, visokim stepenom dodatnog GlcNAc na tački grananja, visokim stepenom galaktozilacije i visokim stepenom fukozilacije. NM-H9D8-E6 i NM-H9D8-E6Q12 ćelije obezbeđuju obrazac glikozilacije sličan onom kod NM-H9D8 ćelija, osim što je stepen fukozilacije veoma nizak. Druge pogodne ćelijske linije uključuju K562,
2
ćelijsku liniju humane mijeloidne leukemije koja je prisutna u Američkoj kolekciji tipova kultura (American Type Culture Collection - ATCC CCL-243), kao i ćelijske linije koje su poreklom od prethodno pomenutog.
[0086] U dodatnim primerima izvođenja, antitelo se proizvodi rekombinantno u CHO ćelijama. Naročito, antitelo može biti proizvedeno rekombinantno u CHO dhfr- ćelijskoj liniji kao što je ćelijska linija ATCC br. CRL-9096.
Konjugati anti-MUC1 antitela
[0087] U određenim primerima izvođenja, antitelo sadrži jedan ili više dodatnih agenasa koji su konjugovani za njega. Dodatni agens može biti bilo koji agens koji je pogodan za konjugaciju za antitelo. Ukoliko je više od jednog dodatnog agensa prisutno u antitelu, ovi dodatni agensi mogu biti identični ili različiti, i posebno su svi identični. Konjugacija dodatnog agensa za antitelo može se postići upotrebom bilo kog postupka koji je poznat u struci. Dodatni agens može biti kovalentno, posebno fuzijom ili hemijskim kuplovanjem, ili nekovalentno prikačen za antitelo. U određenim primerima izvođenja, dodatni agens je kovalentno prikačen za antitelo, naročito putem linker funkcionalne grupe. Linker funkcionalna grupa može biti bilo koji hemijski entitet koji je pogodan za prikačinjanje dodatnog agensa za antitelo.
[0088] Dodatni agens je poželjno koristan u terapiji, dijagnozi, prognozi, detektovanju i/ili praćenju bolesti, posebno kancera. Na primer, dodatni agens može biti odabran iz grupe koja se sastoji od radionuklida, hemioterapijskih agenasa, antitela ili fragmenata antitela, posebno onih različite specifičnosti od anti-MUC1 antitela, npr. antitela kontrolne tačke koja blokiraju ili aktiviraju imunomodulatorne ciljeve, enzima, domena interakcije, detektabilnih obeleživača, toksina, citolitičkih komponenti, imunomodulatora, imunoefektora, antigena MHC klase I ili klase II, i lipozoma. Posebno poželjni dodatni agens je radionuklid ili citotoksični agens koji je sposoban da ubije ćelije kancera, kao što je hemioterapijski agens. U određenim poželjnim primerima izvođenja, hemioterapijski agens je prikačen za anti-MUC1 antitelo formirajući konjugat.
[0089] Specifični primeri hemioterapijskih agenasa koji se mogu konjugovati kao dodatni agens uključuju alkilujuće agense kao što je cisplatin, anti-metabolite, biljne alkaloide i terpenoide, vinka alkaloide, podofilotoksin, taksane kao što je taksol, inhibitore topoizomeraze kao što su irinotekan i topotekan, antineoplastike kao što je doksorubicin ili inhibitore mikrotubula kao što su auristatini i majtanzin/majtanzinoidi.
2
[0090] Hemioterapijski agens može posebno biti odabran iz grupe koja se sastoji od inhibitora V-ATPaze, pro-apoptotskog agensa, inhibitora Bcl2, inhibitora MCL1, inhibitora HSP90, inhibitora IAP, inhibitora mTor, stabilizatora mikrotubula, destabilizatora mikrotubula, auristatina, dolastatina, majtanzina, majtanzinoida, amatoksina, metionin aminopeptidaze, inhibitora nukleusnog eksporta proteina CRM1, inhibitora DPPIV, inhibitora proteazoma, inhibitora reakcija transfera fosforil grupe u mitohondrijama, inhibitora sinteze proteina, inhibitora kinaze, inhibitora CDK2, inhibitora CDK9, inhibitora kinezina, inhibitora HDAC, agensa koji oštećuje DNK, alkilujućeg agensa DNK, interkalatora DNK, bajndera manjih žlebova DNK, inhibitora DHFR, inhibitora formiranja mikrotubula, stabilizatora mikrotubula, stabilizatora aktina, inhibitora topoizomeraze II, jedinjenja platine, inhibitora ribozoma, inhibitora RNK polimeraze II i bakterijskog toksina. U specifičnim primerima izvođenja, hemioterapijski agens prikačen za anti-MUC1 antitelo je odabran iz grupe koja se sastoji od auristatina, inhibitora mikrotubula kao što je majtanzinoid, agensa koji oštećuje DNK, alkilujućeg agensa DNK i bajndera manjih žlebova DNK.
[0091] U nekim primerima izvođenja hemioterapijski agens je majtanzin ili majtanzinoid. Specifični primeri majtanzinoida korisnih za konjugaciju uključuju majtanzinol, N<2'>-deacetil-N<2'>-(3-merkapto-1-oksopropil)-majtanzin (DM1), N<2'>-deacetil-N<2'>-(4-merkapto-1-oksopentil) -majtanzin (DM3), i N<2'>-deacetil-N<2>-(4-metil-4-merkapto-1-oksopentil)-majtanzin (DM4). Posebno, DM1 ili DM4 je prikačen za anti-MUC1 antitelo. U nekim primerima izvođenja, hemioterapijski agens koji je prikačen za anti-MUC1 antitelo je auristatin, posebno monometil auristatin F (MMAF), monometil auristatin E (MMAE) ili auristatin T. U nekim primerima izvođenja, hemioterapijski agens koji je prikačen za anti-MUC1 antitelo je bajnder manjih žlebova DNK, posebno pirolobenzodiazepin (PBD), pirolobenzodiazepin dimer (PBD dimer), duokarmicin, duokarmicin-hidroksibenzamid-azaindol (DUBA), seko-duokarmicinhidroksibenzamid-azaindol (seco-DUBA) ili doksorubicin. U nekim primerima izvođenja, hemioterapijski agens koji je prikačen za anti-MUC1 antitelo je alkilujući agens DNK, posebno indolinobenzodiazepin ili oksazolidinobenzodiazepin. U nekim primerima izvođenja, hemioterapijski agens koji je prikačen za anti-MUC1 antitelo je agens koji oštećuje DNK, posebno kaliheamicin. U nekim primerima izvođenja, hemioterapijski agens koji je prikačen za anti-MUC1 antitelo je inhibitor formiranja mikrotubula, posebno tubulizin, ansamitocin, podofilotoksin ili vinblastin. U nekim primerima izvođenja, hemioterapijski agens koji je prikačen za anti-MUC1 antitelo je stabilizator mikrotubula, posebno paklitaksel ili epotilon. U nekim primerima izvođenja, hemioterapijski agens koji je prikačen za anti-MUC1 antitelo je stabilizator aktina, posebno falotoksin. U nekim primerima izvođenja, hemioterapijski agens
2
koji je prikačen za anti-MUC1 antitelo je inhibitor topoizomeraze II, posebno tenipozid, XK469, razoksan, amsakrin, idarubicin ili mebaron. U nekim primerima izvođenja, hemioterapijski agens koji je prikačen za anti-MUC1 antitelo je jedinjenje platine, posebno cisplatin, karboplatin, oksaliplatin, nedaplatin, triplatin tetranitrat, fenantriplatin, pikoplatin ili satraplatin. U nekim primerima izvođenja, hemioterapijski agens koji je prikačen za anti-MUC1 antitelo je inhibitor ribozoma, posebno ricin, saporin, abrin, toksin difterije ili egzotoksin A. U nekim primerima izvođenja, hemioterapijski agens koji je prikačen za anti-MUC1 antitelo je inhibitor RNK polimeraze II, posebno amatoksin, kao što je npr. amanitin. U nekim primerima izvođenja, hemioterapijski agens koji je prikačen za anti-MUC1 antitelo je bakterijski toksin, posebno antraks toksin. Pogodni antitelo lek konjugati su takođe opisani u EP 16151 774.3 i LU 92659, na koje se ovde izričito poziva.
[0092] U određenim primerima izvođenja, dodatni agens je polipeptid ili protein. Ovaj polipeptid ili protein može posebno biti fuzionisan za polipeptidni lanac antitela. U određenim primerima izvođenja, dodatni agens koji je polipeptid ili protein je fuzionisan za C terminus lakog lanca antitela. U primerima izvođenja u kojima antitelo sadrži dva laka lanca antitela, dodatni agens koji je polipeptid ili protein može biti fuzionisan za C terminus svakog od dva laka lanca antitela. U dodatnim primerima izvođenja, dodatni agens koji je polipeptid ili protein je fuzionisan za C terminus teškog lanca antitela. U primerima izvođenja u kojima antitelo sadrži dva teška lanca antitela, dodatni agens koji je polipeptid ili protein može biti fuzionisan za C terminus svakog od dva teška lanca antitela. Dodatni agensi mogu biti identični ili različiti i posebno imaju istu amino-kiselinsku sekvencu. Pogodni primeri takvih dodatnih agenasa koji su polipeptid ili protein mogu biti odabrani iz grupe koja se sastoji od citokina, hemokina, antitela, antigen-vezujućih fragmenata, enzima i domena interakcije.
[0093] U određenim primerima izvođenja, dodatni agens koji je polipeptid ili protein je antitelo kontrolne tačke koje blokira i/ili pokreće aktivirajuće signale. Primeri odgovarajućih ciljeva uključuju CD40, CD3, CD137 (4-1BB), OX40, GITR, CD27, CD278 (ICOS), CD154 (CD40 ligand), CD270 (HVEM) i CD258 (LIGHT) kao aktivirajući ciljevi, CTLA4, PD1, CD80, CD244, A2AR, B7-H3 (CD276), B7-H4 (VTCN1), BTLA, IDO, KIR, LAG3, TIM-3, VISTA i fosfatidilserin kao inhibitorni ciljevi, i njihovi odgovarajući ligandi kao što je PDL1. U specifičnim primerima, anti-MUC1 antitelo sadrži dva teška lanca i dva laka lanca kao što je ovde opisano, pri čemu je scFv fragment koji se specifično vezuje za CD3 fuzionisan za C terminus svakog teškog lanca; ili pri čemu je scFv fragment koji se specifično vezuje za PDL1 fuzionisan za C terminus svakog lakog lanca.
2
[0094] U dodatnim primerima izvođenja, dodatni agens koji je polipeptid ili protein je imunomodulatorno jedinjenje kao što je hemokin, citokin ili faktor rasta. Pogodni citokini u ovom pogledu uključuju interferone kao što su interferon-α, interferon-β i interferon-γ, i interleukine. Pogodni faktori rasta uključuju G-CSF i GM-CSF.
Nukleinska kiselina, ekspresiona kaseta, vektor, ćelijska linija i kompozicija
[0095] U dodatnom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje nukleinsku kiselinu koja kodira antitelo. Sekvenca nukleinske kiseline navedene nukleinske kiseline može imati bilo koju nukleotidnu sekvencu koja je pogodna za kodiranje antitela. Međutim, poželjno sekvenca nukleinske kiseline je barem delimično prilagođena upotrebi specifičnog kodona ćelije domaćina ili organizma u kome nukleinska kiselina treba da bude eksprimirana, posebno upotrebi kodona ljudi. Nukleinska kiselina može biti dvolančana ili jednolančana DNK ili RNK, poželjno dvolančana DNK kao što je cDNK ili jednolančana RNK kao što je iRNK. To može biti jedan neprekidni molekul nukleinske kiseline ili može biti sastavljen od nekoliko molekula nukleinske kiseline, od kojih svaki kodira različiti deo antitela. U poželjnim primerima izvođenja, predmetni pronalazak obezbeđuje nukleotidnu sekvencu teškog lanca PankoMab varijante (PM-N54Q) koja je predstavljena pomoću SEQ ID NO: 17 i nukleotidnu sekvencu lakog lanca PankoMab varijante (PM-N54Q) koja je predstavljena pomoću SEQ ID NE: 18.
[0096] Ukoliko je antitelo sačinjeno od više od jednog različitog lanca amino-kiselina, kao što su laki lanac i teški lanac antitela, nukleinska kiselina može, na primer, biti jedan molekul nukleinske kiseline koji sadrži nekoliko kodirajućih regiona, od kojih svaki kodira jedan od lanaca amino-kiselina antitela, poželjno odvojeni regulatornim elementima kao što su IRES elementi kako bi se generisali odvojeni lanci amino-kiselina, ili nukleinska kiselina može biti sačinjena od nekoliko molekula nukleinske kiseline pri čemu svaki molekul nukleinske kiseline sadrži jedan ili više kodirajućih regiona od kojih svaki kodira jedan od lanaca aminokiselina antitela. Pored kodirajućih regiona koji kodiraju antitelo, nukleinska kiselina može takođe da sadrži dodatne sekvence nukleinske kiseline ili druge modifikacije koje, na primer, mogu da kodiraju druge proteine, mogu da utiču na transkripciju i/ili translaciju jednog ili više kodirajućih regiona, mogu da utiču na stabilnost ili druga fizička ili hemijska svojstva nukleinske kiseline, ili mogu da uopšte nemaju nikakvu funkciju.
[0097] U dodatnom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje ekspresionu kasetu ili vektor koji sadrži nukleinsku kiselinu u skladu sa pronalaskom i promotor koji je operativno povezan
2
sa navedenom nukleinskom kiselinom. Pored toga, ekspresiona kaseta ili vektor mogu da sadrže dodatne elemente, posebno elemente koji su sposobni da utiču i/ili regulišu transkripciju i/ili translaciju nukleinske kiseline, amplifikaciju i/ili reprodukciju ekspresione kasete ili vektora, integraciju ekspresione kasete ili vektora u genom ćelije domaćina, i/ili broj kopija ekspresione kasete ili vektora u ćeliji domaćinu. Pogodne ekspresione kasete i vektori koji sadrže odgovarajuće ekspresione kasete za ekspresiju antitela su dobro poznati u stanju tehnike i stoga im nije potreban dodatan opis ovde.
[0098] Štaviše, predmetni pronalazak obezbeđuje ćeliju domaćina koja sadrži nukleinsku kiselinu u skladu sa pronalaskom ili ekspresionu kasetu ili vektor u skladu sa pronalaskom. Ćelija domaćin može biti bilo koja ćelija domaćin. To može biti izolovana ćelija ili ćelija koja je sadržana u tkivu. Poželjno, ćelija domaćin je kultivisana ćelija, posebno primarna ćelija ili ćelija uspostavljene ćelijske linije, poželjno ćelija poreklom od tumora. Poželjno, to je bakterijska ćelija kao što je E. coli, ćelija kvasca kao što je Saccharomyces ćelija, posebno S. cerevisiae, ćelija insekata kao što je Sf9 ćelija, ili ćelija sisara, posebno humana ćelija kao što je humana ćelija poreklom od tumora, ćelija hrčka kao što je CHO, ili ćelija primata. U poželjnom primeru izvođenja pronalaska, ćelija domaćin je poreklom od ćelija humane mijeloidne leukemije. Poželjno, ona je odabrana od sledećih ćelija ili ćelijskih linija: K562, KG1, MUTZ-3, ili ćelije ili ćelijske linije poreklom od njih, ili smeša ćelija ili ćelijskih linija koja sadrži najmanje jednu od prethodno navedenih ćelija. Ćelija domaćin je poželjno odabrana iz grupe koja se sastoji od NM-H9D8, NM-H9D8-E6, NM-H9D8-E6Q12, i ćelija ili ćelijska linija poreklom od bilo koje od navedenih ćelija domaćina. Ove ćelijske linije i njihova svojstva detaljno su opisana u PCT-prijavi WO 2008/028686 A2. U dodatnim primerima izvođenja, ćelija domaćin je CHO dhfr- ćelijska linija kao što je ćelijska linija ATCC br. CRL-9096. U poželjnim primerima izvođenja, ćelija domaćin je optimizovana za ekspresiju glikoproteina, posebno antitela, koja imaju specifičan obrazac glikozilacije. Poželjno, upotreba kodona u kodirajućem regionu nukleinske kiseline u skladu sa pronalaskom i/ili promotor i dodatni elementi ekspresione kasete ili vektora su kompatibilni sa i, poželjnije, optimizovani za tip ćelije domaćina koji se upotrebljava. Poželjno, antitelo se proizvodi od strane ćelije domaćina ili ćelijske linije kao što je prethodno opisano.
[0099] U specifičnom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje postupak proizvodnje antitela u ćelijama domaćina kao što je ovde opisano. Postupak posebno sadrži korake obezbeđivanja ćelije domaćina koja sadrži nukleinsku kiselinu koja kodira antitelo, kultivisanje ćelije domaćina pod uslovima koji su pogodni za ekspresiju antitela, i dobijanje antitela koje eksprimira ćelija domaćin. Antitelo u skladu sa pronalaskom može se dobiti ili može biti dobijeno pomoću navedenog postupka.
[0100] U sledećem aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje kompoziciju koja sadrži antitelo, nukleinsku kiselinu, ekspresionu kasetu ili vektor, ili ćeliju domaćina. Kompozicija takođe može da sadrži više od jedne od ovih komponenti. Štaviše, kompozicija može da sadrži jednu ili više dodatnih komponenti koje su odabrane iz grupe koja se sastoji od rastvarača, razblaživača, i ekscipijenasa. Poželjno, kompozicija je farmaceutska kompozicija. U ovom primeru izvođenja, sve komponente kompozicije poželjno su farmaceutski prihvatljive. Kompozicija može biti čvrsta ili tečna kompozicija, posebno - poželjno vodeni -rastvor, emulzija ili suspenzija ili liofilizovani prah.
Upotreba u medicini
[0101] Antitelo je posebno korisno u medicini, posebno u terapiji, dijagnozi, prognozi, detektovanju i/ili praćenju bolesti, posebno bolesti kao što je ovde opisano, poželjno kancera, infekcija, inflamatornih bolesti, bolesti kalem-protiv-domaćina i imunodeficijencije.
[0102] Prema tome, u dodatnom aspektu, pronalazak obezbeđuje antitelo, nukleinsku kiselinu, ekspresionu kasetu ili vektor, ćeliju domaćina, ili kompoziciju za upotrebu u medicini. Poželjno, upotreba u medicini je upotreba u lečenju, prognozi, dijagnozi, detektovanju i/ili praćenju bolesti kao što su, na primer, bolesti povezane sa abnormalnim ćelijskim rastom kao što je kancer, infekcije kao što su bakterijske, virusne, gljivične ili parazitske infekcije, inflamatorne bolesti kao što su autoimunske bolesti i inflamatorne bolesti creva, i bolesti povezane sa redukcijom imunske aktivnosti kao što su imunodeficijencije. U poželjnom primeru izvođenja, bolest je kancer.
[0103] Poželjno, kancer ima detektabilnu ekspresiju MUC1 ili TA-MUC1, poželjno detektabilnu pomoću imunohistohemije, ELISA, RIA, enzimom-povezanog imunospot (ELISPOT) testa, tačkastim blotovanjem, Ouhterloni (Ouchterlony) testa ili kontraimunoelektroforeze (CIE), ili in situ hibridizacije. Naročito uključuje ćelije koje imaju ekspresiju MUC1 ili TA-MUC1 koja se može detektovati pomoću imunohistohemije ili in situ hibridizacije. Kancer se može testirati na nivo MUC1 ili TA-MUC1 pre primene anti-MUC1 antitela.
[0104] Predmetni pronalazak dodatno obezbeđuje komplete i uređaje koji sadrže antitelo u skladu sa pronalaskom, i povezane postupke koji su korisni u dijagnozi, detektovanju ili praćenju poremećaja koji su povezani sa MUC1 kao što je kancer. U nekim primerima
1
izvođenja, obezbeđen je sendvič ELISA komplet za testiranje, detektovanje ili dijagnozu koji sadrži antitelo iz predmetnog pronalaska. Ovaj komplet može dodatno da sadrži jedan ili više rastvora MUC1 ili TA-MUC1 protein standarda, reagens za bojenje, puferski rastvor za razblaživanje, antitelo za čvrstu fazu, antitelo za detekciju, i rastvor za ispiranje, i slično. Poželjno, količina antitela vezanog za antigen može se izmeriti primenom postupka kao što je postupak apsorbance, fluorescencije, luminescencije, ili radioizotopa (RI). Poželjno, u merenju se upotrebljava čitač apsorbance ploče, čitač fluorescencije ploče, čitač luminescencije ploče, RI tečni scintilacioni brojač, ili slično.
[0105] U nekim primerima izvođenja, predmetni pronalazak obezbeđuje antitelo u skladu sa pronalaskom za upotrebu u imunohistohemijskoj (IHC) analizi, i kompoziciju koja sadrži isto.
[0106] Imunohistohemija nije posebno ograničena sve dok ovaj pristup uključuje reagovanje tkivnog preseka sa antigen-vezujućim antitelom (primarno antitelo) i detektovanje primarnog antitela koje je vezano za antigen.
[0107] Različiti oblici kancera uključujući metastaze mogu se lečiti antitelom u skladu sa pronalaskom. Kancer se posebno može odabrati iz grupe koja se sastoji od kancera kolona, kancera pluća, kancera jajnika, kancera dojke kao što je trostruko negativan kancer dojke, kancera pankreasa, kancera grlića materice, kancera endometrijuma, gastrointestinalnog kancera, kancera bubrega, kancera glave i vrata, kancera štitne žlezde i urotelnog kancera. Kancer se dodatno može posebno odabrati od kancera želuca, kancera jetre, kancera mokraćne bešike, kancera kože, kancera prostate i kancera krvi. U određenim primerima izvođenja, kancer je kancer koji metastazira. Kancer može uključiti bilo koji tip metastaza, kao što su metastaze u koži, metastaze u limfnim čvorovima, metastaze u plućima, metastaze u jetri, peritonealne metastaze, pleuralne metastaze i/ili metastaze u mozgu. U određenim primerima izvođenja, kancer ima inflamatorni fenotip. U ovim primerima izvođenja, bilo koji od prethodno opisanih tipova kancera može biti inflamatorni kancer.
[0108] U određenim primerima izvođenja, virusna infekcija je uzrokovana virusom humane imunodeficijencije, herpes simpleks virusom, Epštajn Bar (Epstein Barr) virusom, virusom gripa, virusom limfocitnog horiomeningitisa, virusom hepatitisa B ili virusom hepatitisa C. Inflamatorna bolest može biti odabrana od inflamatorne bolesti creva, inflamatorne bolesti karlice, ishemijskog udara, Alchajmerove (Alzheimerꞌs) bolesti, astme, pemfigus vulgarisa i dermatitisa/ekcema. Autoimunska bolest može biti odabrana iz grupe koja se sastoji od celijakije, dijabetes melitusa tipa 1, Grejvsove (Gravesꞌ) bolesti, inflamatorne bolesti creva, multipla skleroze, psorijaze, reumatoidnog artritisa, sistemskog eritematoznog lupusa, vitiliga, psorijatičnog artritisa, atopijskog dermatitisa, skleroderme, sarkoidoze, primarne bilijarne
2
ciroze, Gilen-Bareovog (Guillain-Barre) sindroma, autoimunskog hepatitisa i ankiloznog spondilitisa. U određenim primerima izvođenja, bolest sadrži ili je povezana sa ćelijama koje eksprimiraju MUC1, naročito TA-MUC1. Na primer, kancer koji se leči je MUC1 pozitivan, naročito TA-MUC1 pozitivan, tj. sadrži ćelije kancera koje eksprimiraju MUC1, naročito TA-MUC1.
[0109] U specifičnim primerima izvođenja, antitelo se upotrebljava za lečenje u kombinaciji sa drugim terapijskim agensom, naročito za lečenje kancera u kombinaciji sa drugim antikancerskim agensom. Navedeni dodatni terapijski agens može biti bilo koji poznati antikancerski agens. Pogodni anti-kancerski terapijski agensi koji se mogu kombinovati sa antitelom u skladu sa pronalaskom mogu biti hemioterapijski agensi, druga antitela, imunostimulatorni agensi, citokini, hemokini, i vakcine. Štaviše, terapija sa antitelom može se kombinovati sa terapijom zračenjem, operacijom i/ili tradicionalnom kineskom medicinom.
[0110] Anti-kancerski agensi koji se mogu upotrebljavati u kombinaciji sa anti-MUC1 antitelom mogu biti odabrani od bilo kog hemioterapijskog agensa, posebno hemioterapijskih agenasa za koje se zna da su efikasni u lečenju MUC1 pozitivnih kancera. Tip hemioterapijskog agensa takođe zavisi od kancera koji se leči. Kombinacioni partner može biti odabran iz grupe koja se sastoji od taksana kao što su paklitaksel (Taxol), docetaksel (Taxotere) i SB-T-1214; ciklofosfamida; imatiniba; pazopaniba; kapecitabina; citarabina; vinorelbina; gemcitabina; antraciklina kao što su daunorubicin, doksorubicin, epirubicin, idarubicin, valrubicin i mitoksantron; inhibitora aromataze kao što su aminoglutetimid, testolakton (Teslac), anastrozol (Arimidex), letrozol (Femara), eksemestan (Aromasin), vorozol (Rivizor), formestan (Lentaron), fadrozol (Afema), 4-hidroksiandrostendion, 1,4,6-androstatrien-3,17-dion (ATD) i 4-androsten-3,6,17-trion (6-OXO); inhibitora topoizomeraze kao što su irinotekan, topotekan, kamptotecin, lamelarin D, etopozid (VP-16), tenipozid, doksorubicin, daunorubicin, mitoksantron, amsakrin, elipticini, aurintrikarboksilna kiselina i HU-331; hemioterapijskih agenasa zasnovanih na platini kao što su cisdiamindihloroplatina(II) (cisplatin), cis-diamin(1,1-ciklobutandikarboksilato)platina(II) (karboplatin) i [(1R,2R)-cikloheksan-1,2-diamin](etandioato-O,O ꞌ)platina(II) (oksaliplatin); PARP inhibitora kao što su olaparib, rukaparib i niraparib; TLR agonista kao što su imikvimod i resikvimod; i antimetabolita, posebno antifolata kao što su metotreksat, pemetreksed, raltitreksed i pralatreksat, analoga pirimidina kao što su fluoruracil, gemcitabin, floksuridin, 5-fluorouracil i tegafur-uracil, i analoga purina, selektivnih modulatora estrogenskih receptora i agenasa koji smanjuju ekspresiju estrogenskih receptora.
[0111] Štaviše, terapijska antitela se takođe mogu upotrebljavati kao dodatni kombinacioni partner. To može biti bilo koje antitelo koje je korisno u terapiji kancera koje se razlikuje od anti-MUC1 antitela. Posebno, dodatno antitelo je odobreno za lečenje kancera od strane administracije kao što su Američka uprava za hranu i lekove (U.S. Food and Drug Administration - FDA), Evropska agencija za lekove (European Medicines Agency - EMA, ranije EMEA) i Nemački federalni zavod za lekove i medicinske proizvode (Bundesinstitut für Arzneimittel und Medizinprodukte - BfArM). Primeri dodatnog antitela koje se može upotrebljavati za kombinovani tretman su anti-EGFR antitela kao što su cetuksimab, tomuzotuksimab, panitumumab, zalutumumab, nimotuzumab, matuzumab i necitumumab; anti-HER2 antitela kao što su trastuzumab, timigutuzumab i pertuzumab; anti-VEGF antitela kao što je bevacizumab (Avastin); anti-CD52 antitela kao što je alemtuzumab (Campath); anti-CD30 antitela kao što je brentuksimab (Adcetris); anti-CD33 antitela kao što je gemtuzumab (Mylotarg); i anti-CD20 antitela kao što su rituksimab (Rituxan, Mabthera), tositumomab (Bexxar) i ibritumomab (Zevalin). Dodatni primeri antitela koja su pogodna za kombinaciju sa terapijom kancera koja je ovde opisana uključuju antitela prema antigenima koji su odabrani iz grupe koja se sastoji od Tomsen-Fridenrajh antigena (TFα, TFβ), Tn, Lewis Y, CD44, folatnog receptora α, NeuGc-GM3 gangliozida, DLL-3, RANKL, PTK7, Notch-3, Ephrin A4, receptora faktora rasta sličnog insulinu 1, kinaze slične aktivin receptoru-1, klaudina-6, disijalogangliozida GD2, endoglina, transmembranskog glikoproteina NMB, CD56, transducera kalcijumovog signala povezanog sa tumorom 2, tkivnog faktora, ektonukleotida pirofosfataze/fosfodiesteraze 3, CD70, P-kadherina, mezotelina, šest transmembranskih epitelskih antigena prostate 1 (STEAP1), karcinoembrionalnog antigenu-srodnog ćelijskog adhezionog molekula 5 (CEACAM5), nektina 4, guanilil ciklaze C, člana 4 porodice 44 nosača rastvorka (SLC44A4), membranskog antigena specifičnog za prostatu (PSMA), transportera cinka ZIP6 (LIV1 (ZIP6)), SLIT i NTRK-sličnog proteina 6 (SLITRK6), glikoproteina trofoblasta (TPBG; 5T4), Fyn3, karboanhidraze 9, NaPi2b, fibronektin ekstra-domena B, endotelinskog receptora ETB, VEGFR2 (CD309), tenascina c, kolagena IV i periostina.
[0112] Anti-MUC1 antitelo se dodatno može kombinovati sa antitelima kontrolne tačke, tj. antitelima koja blokiraju ili aktiviraju imunomodulatorne ciljeve. Na taj način, inhibitorni signali za imunski odgovor mogu biti blokirani i/ili aktivirajući signali mogu biti pokrenuti. Primeri odgovarajućih ciljeva uključuju CD40, CD3, CD137 (4-1BB), OX40, GITR, CD27, CD278 (ICOS), CD154 (CD40 ligand), CD270 (HVEM) i CD258 (LIGHT) kao aktivirajući ciljevi, CTLA4, PD1, CD80, CD244, A2AR, B7-H3 (CD276), B7-H4 (VTCN1), BTLA,
4
IDO, KIR, LAG3, TIM-3, VISTA i fosfatidilserin kao inhibitorni ciljevi, i njihovi odgovarajući ligandi kao što je PDL1.
[0113] U dodatnim primerima izvođenja, anti-MUC1 antitelo može se kombinovati sa tretmanom sa imunomodulatornim jedinjenjima kao što su hemokini, citokini, faktori rasta i vakcine. Pogodni citokini u ovom pogledu uključuju interferone kao što su interferon-α, interferon-β i interferon-γ, i interleukine. Pogodni faktori rasta uključuju G-CSF i GM-CSF.
[0114] Anti-MUC1 antitelo se poželjno upotrebljava za lečenje primarnog tumora, rekurentnog tumora i/ili metastaza takvih tumora, i posebno se upotrebljava za lečenje pre, tokom ili posle operacije i za prevenciju ili lečenje metastaza. Anti-MUC1 antitelo je posebno za lečenje pacijenata kao adjuvansna terapija. U određenim primerima izvođenja, anti-MUC1 antitelo je za lečenje pacijenata kao neoadjuvansna terapija ili u kombinovanoj neoadjuvansno-adjuvansnoj terapiji. Štaviše, anti-MUC1 antitelo je za lečenje pacijenata kao palijativna terapija.
[0115] Terapija kancera sa anti-MUC1 antitelom poželjno rezultuje inhibicijom rasta tumora i posebno redukcijom veličine tumora. Štaviše, lečenjem se sprečava nastanak dodatnih metastaza i/ili se njihov broj redukuje. Tretman poželjno rezultuje povećanjem preživljavanja bez napredovanja bolesti; i/ili produžavanjem životnog veka i time i sveukupnog preživljavanja.
[0116] Dodatno su opisani postupci terapije, dijagnoze, prognoze, detektovanja i/ili praćenja bolesti upotrebom antitela u skladu sa pronalaskom. Primeri izvođenja i primeri upotrebe antitela u medicini takođe se primenjuju na medicinske postupke. Posebno, opisan je postupak za lečenje bolesti kod subjekta kome je to potrebno, koji sadrži primenu subjektu terapijski efikasne količine antitela u skladu sa predmetnim pronalaskom.
[0117] Na primer, opisan je postupak za lečenje kancera kod subjekta kome je to potrebno koji sadrži primenu subjektu sa kancerom terapijski efikasne količine antitela u skladu sa pronalaskom. U specifičnim primerima izvođenja, kancer se karakteriše ekspresijom TA-MUC1. Kancer može biti odabran iz grupe koja se sastoji od kancera jajnika, kancera dojke, kancera pankreasa, kancera pluća, kancera kolona, kancera želuca, kancera jetre, kancera bubrega, kancera krvi, kancera endometrijuma, kancera štitne žlezde, leukemije, seminoma, melanoma, karcinoma, teratoma, limfoma, sarkoma, mezotelioma, neuroblastoma, glioma, rektalnog kancera, kancera nadbubrežne žlezde, kancera kože, kancera mozga, kancera grlića materice, intestinalnog kancera, kancera creva, kancera glave i vrata, gastrointestinalnog kancera, kancera limfnih čvorova, kancera jednjaka, kolorektalnog kancera, kancera uha, nosa i grla (ENT), kancera prostate, kancera mokraćne bešike, kancera materice i njihovih metastaza.
[0118] Štaviše, opisan je postupak za dijagnozu, detektovanje ili praćenje kancera, koji sadrži korak dovođenja u kontakt test uzorka sa antitelom u skladu sa pronalaskom.
Postupci povećanja afiniteta vezivanja za MUC1
[0119] Dodatno je opisan postupak povećanja afiniteta vezivanja za MUC1 antitela koje sadrži
(i) varijabilni region teškog lanca koji sadrži regione koji određuju komplementarnost (CDR) CDR-H1 koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1, CDR-H2 koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 8 i CDR-H3 koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 3, i
(ii) varijabilni region lakog lanca koji sadrži regione koji određuju komplementarnost (CDR) CDR-L1 koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 4, CDR-L2 koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 5 i CDR-L3 koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 6,
postupak sadrži korak supstitucije amino-kiselinskog ostatka na poziciji 8 CDR-H2 sa bilo kojim amino-kiselinskim ostatkom osim asparagina, što rezultuje time da CDR-H2 ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 2.
[0120] Antitelo čiji afinitet vezivanja za MUC1 treba da bude povećan posebno je antitelo sposobno da se vezuje za MUC1 kao što je ovde opisano, osim što sadrži asparagin na poziciji 8 CDR-H2 sekvence.
[0121] U određenim primerima izvođenja, varijabilni region teškog lanca antitela čiji afinitet vezivanja za MUC1 treba da bude povećan sadrži amino-kiselinsku sekvencu koja je najmanje 90% identična amino-kiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 11. Naročito, varijabilni region teškog lanca sadrži amino-kiselinsku sekvencu koja je najmanje 95%, posebno najmanje 98% identična amino-kiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 11. U ovim primerima izvođenja, varijabilni region teškog lanca i dalje sadrži CDR koji imaju amino-kiselinske sekvence SEQ ID NO: 1, 8 i 3. Otuda, bilo koja odstupanja sekvence u odnosu na SEQ ID NO: 11 locirana su u regionima okvira, ali ne u CDR. Posebno, varijabilni region teškog lanca sadrži amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 11.
[0122] U određenim primerima izvođenja, varijabilni region lakog lanca antitela čiji afinitet vezivanja za MUC1 treba da bude povećan sadrži amino-kiselinsku sekvencu koja je najmanje 90% identična amino-kiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 12. Naročito, varijabilni region lakog lanca sadrži amino-kiselinsku sekvencu koja je najmanje 95%, posebno najmanje 98% identična amino-kiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 12. U ovim primerima izvođenja, varijabilni region lakog lanca i dalje sadrži CDR koji imaju amino-kiselinske sekvence SEQ ID NO: 4, 5 i 6. Otuda, bilo koja odstupanja sekvence u odnosu na SEQ ID NO: 12 locirana su u regionima okvira, ali ne u CDR. Posebno, varijabilni region lakog lanca sadrži amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 12.
[0123] U specifičnim primerima izvođenja, varijabilni region teškog lanca antitela čiji afinitet vezivanja za MUC1 treba da bude povećan ima amino-kiselinsku sekvencu koja je najmanje 90% identična amino-kiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 11, pri čemu CDR i dalje imaju amino-kiselinske sekvence SEQ ID NO: 1, 8 i 3, i varijabilni region lakog lanca ima aminokiselinsku sekvencu koja je najmanje 90% identična amino-kiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 12, pri čemu CDR i dalje imaju amino-kiselinske sekvence SEQ ID NO: 4, 5 i 6. Posebno, varijabilni region teškog lanca ima amino-kiselinsku sekvencu koja je najmanje 95% identična amino-kiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 11, pri čemu CDR i dalje imaju aminokiselinske sekvence SEQ ID NO: 1, 8 i 3, i varijabilni region lakog lanca ima aminokiselinsku sekvencu koja je najmanje 95% identična amino-kiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 12, pri čemu CDR i dalje imaju amino-kiselinske sekvence SEQ ID NO: 4, 5 i 6.
[0124] Na primer, antitelo čiji afinitet vezivanja za MUC1 treba da bude povećan je anti-MUC1 antitelo kao što je objavljeno u WO 2004/065423 A2 ili WO 2011/012309 A1. Posebno, antitelo čiji afinitet vezivanja za MUC1 treba da bude povećan je gatipotuzumab ili PankoMab.
[0125] Antitelo čiji je afinitet vezivanja za MUC1 povećan posebno je antitelo koje je sposobno da se vezuje za MUC1 kao što je ovde opisano.
[0126] U određenim primerima izvođenja, vezivanje za MUC1 je kao što je ovde opisano. Povećanje afiniteta vezivanja za MUC1 ili TA-MUC1 posebno označava povećanje od najmanje 10%, najmanje 20%, najmanje 33% ili najmanje 50%. U poželjnim primerima izvođenja, afinitet vezivanja za MUC1 je povećan za najmanje 50%. Afinitet vezivanja za MUC1 može se odrediti kao što je opisano u primerima, naročito upotrebom analize rezonance površinskih plazmona ili switchSENSE<®>tehnologije (DRX2 Biosensor, proizvođača Dynamic Biosensors GmbH), kao što je opisano, npr. u primeru 4a i b.
[0127] U određenim primerima izvođenja, korak supstitucije amino-kiselinskog ostatka na poziciji 8 CDR-H2 postiže se introdukovanjem mutacije u nukleinsku kiselinu koja kodira antitelo, pri čemu se mutacija introdukuje u kodon koji kodira navedeni amino-kiselinski ostatak. Introdukovanje mutacije se može izvršiti bilo kojim postupkom. Nekoliko pogodnih postupaka je poznato u struci i osoba sa iskustvom je sposobna da izvrši neophodne zadatke za introdukovanje mutacije. Antitelo sa povećanim afinitetom vezivanja za MUC1 se onda može dobiti ekspresijom mutirane nukleinske kiseline, na primer u ćeliji domaćinu. Nukleinske kiseline, ćelije domaćini i postupci za proizvodnju antitela su ovde opisani i mogu se upotrebljavati za postupak za povećanje afiniteta vezivanja za MUC1.
[0128] U specifičnim primerima izvođenja, postupak povećanja afiniteta vezivanja antitela za MUC1 sadrži korake
(a) obezbeđivanja nukleinske kiseline koja kodira antitelo čiji afinitet vezivanja za MUC1 treba da bude povećan
(b) introdukovanja mutacije u navedenu nukleinsku kiselinu kako bi se proizvela mutirana nukleinska kiselina, pri čemu se mutacija introdukuje u kodon koji kodira amino-kiselinski ostatak na poziciji 8 CDR-H2 tako da navedeni kodon kodira bilo koji amino-kiselinski ostatak osim asparagina; i
(c) ekspresije mutirane nukleinske kiseline za proizvodnju antitela sa povećanim afinitetom vezivanja za MUC1.
[0129] Predmetni pronalazak dodatno obezbeđuje postupak proizvodnje antitela sa povećanim afinitetom vezivanja za MUC1, koji sadrži
(a) obezbeđivanje nukleinske kiseline koja kodira antitelo koje sadrži
(i) varijabilni region teškog lanca koji sadrži regione koji određuju komplementarnost (CDR) CDR-H1 koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1, CDR-H2 koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 8 i CDR-H3 koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 3, i
(ii) varijabilni region lakog lanca koji sadrži regione koji određuju komplementarnost (CDR) CDR-L1 koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 4, CDR-L2 koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 5 i CDR-L3 koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 6;
(b) introdukovanje mutacije u navedenu nukleinsku kiselinu kako bi se proizvela mutirana nukleinska kiselina, pri čemu se mutacija introdukuje u kodon koji kodira amino-kiselinski ostatak na poziciji 8 CDR-H2 tako da navedeni kodon kodira glutamin; i
(c) proizvodnju antitela sa povećanim afinitetom vezivanja za MUC1 pomoću ekspresije mutirane nukleinske kiseline u ćeliji domaćinu.
[0130] Primeri izvođenja, svojstva i primeri koji su ovde opisani za druge aspekte, naročito za postupak povećanja afiniteta vezivanja antitela za MUC1, takođe se primenjuju na postupak proizvodnje antitela sa povećanim afinitetom vezivanja za MUC1.
[0131] U određenim primerima izvođenja, postupak proizvodnje antitela sa povećanim afinitetom vezivanja za MUC1 dodatno sadrži korak (d) obrade antitela sa povećanim afinitetom vezivanja za MUC1.
[0132] Na primer, obrada antitela sa povećanim afinitetom vezivanja za MUC1 može uključivati izolovanje antitela iz ćelijske kulture. Izolacija antitela posebno označava odvajanje antitela od preostalih komponenti ćelijske kulture. Odvajanje antitela iz medijuma ćelijske kulture može se izvesti, na primer, pomoću hromatografskih postupaka. Pogodni postupci i sredstva za izolovanje antitela poznati su u struci i osoba sa iskustvom ih može lako primeniti.
[0133] Dobijeno antitelo može opciono biti podvrgnuto dodatnim koracima obrade kao što su npr. koraci modifikacije kao što je hemijsko ili enzimsko kuplovanje dodatnog agensa sa antitelom, i/ili koraci formulacije kako bi se proizvelo antitelo u željenom kvalitetu i kompoziciji. Takvi dodatni koraci i postupci obrade su generalno poznati u struci.
[0134] U dodatnim primerima izvođenja, korak (d) dodatno sadrži korak obezbeđivanja farmaceutske formulacije koja sadrži antitelo. Obezbeđivanje farmaceutske formulacije koja sadrži antitelo ili formulisanje antitela kao farmaceutske kompozicije posebno sadrži zamenu puferskog rastvora ili komponenti puferskog rastvora kompozicije koja sadrži antitelo.
Štaviše, ovaj korak može uključivati liofilizaciju antitela. Posebno, antitelo se prenosi u kompoziciju koja sadrži samo farmaceutski prihvatljive sastojke.
SLIKE
[0135]
Slika 1 pokazuje ELISA krive vezivanja anti-MUC1 antitela za različite MUC1 peptide. (A) pokazuje vezivanje za antigen PankoMab N54Q (PM-N54Q) kome nedostaje Fab glikozilacija i PankoMab koje sadrži Fab glikozilaciju (PM) za MUC1 peptid koji sadrži epitopsku sekvencu PDTR. Treonin MUC1 peptida je glikozilovan sa Tn, sTn, TF ili sTF. (B) pokazuje vezivanje PankoMab i PankoMab N54Q za MUC1 peptid koji sadrži varijantu epitopske sekvence PESR. Serin MUC1 peptida je glikozilovan sa Tn. (C) pokazuje vezivanje PankoMab N54Q za MUC1 peptid koji sadrži epitopsku sekvencu PDTR. Treonin MUC1 peptida je glikozilovan sa Tn ili nije glikozilovan. (D) pokazuje vezivanje nekoliko N54X varijanti za Tn-PDTR MUC1 peptid u poređenju sa PankoMab koji sadrži Fab glikozilaciju razblažene iz supernatanta ćelijske kulture prolazno transfektovanih ćelija. (E) pokazuje krive vezivanja tri prečišćene varijante N54X bez Fab glikozilacije u poređenju sa PankoMab sa Fab glikozilacijom za Tn-PDTR, TF-PDTR i ne-glikozilovani PDTR MUC1 peptid. (F) pokazuje vezivanje dve varijante regiona okvira PM-N54Q za Tn-PDTR MUC1 peptid u poređenju sa PankoMab sa Fab glikozilacijom. Za varijantu regiona okvira mf-a devet amino-kiselina je mutirano u regionu okvira VH i tri u regionu okvira VL, za mf-b takođe je devet amino-kiselina mutirano u regionu okvira VH i četiri u regionu okvira VL.
Slika 2 pokazuje rezonancu površinskih plazmona (Biacore) vezivanja anti-MUC1 antitela PM i PM-N54Q za Tn-glikozilovani PDTR-MUC1 peptid. Maksimalni signali vezivanja različitih koncentracija PankoMab N54Q i PankoMab prikazani su u grafičkom formatu u odnosu na koncentraciju antitela.
Slika 3 pokazuje rezultate osećanja blizine fluorescencije (Fluorescence Proximity Sensing) na DRX instrumentu. Pokazane su krive asocijacije i disocijacije. (A) PM sa Fab glikozilacijom u poređenju sa (B) PM-N54Q bez Fab glikozilacije.
4
Slika 4 pokazuje SDS akrilamidni gel elektroforetske separacije PankoMab N54Q i PankoMab pod neredukujućim (levo) i redukujućim (desno) uslovima. Traka 1: PankoMab N54Q posle koraka hvatanja; traka 2: PankoMab N54Q posle koraka poliranja; traka 3: PankoMab posle koraka hvatanja; traka 4: PankoMab posle koraka poliranja; traka 5: marker molekulske težine.
Slika 5 pokazuje gel obojen sa Coomassie plavom bojom u testu izoelektričnog fokusiranja sa PankoMab N54Q kome nedostaje Fab glikozilacija i PankoMab koje je Fab-glikozilovano. Traka 1: PankoMab sa Fab glikozilacijom; traka 2: PankoMab N54Q bez Fab glikozilacije.
Slika 6 pokazuje vezivanje anti-MUC1 antitela za Fcγ receptor IIIa. Povećane koncentracije antitela PankoMab N54Q ili PankoMab izmeštaju zečje-anti-mišje kuplovane akceptorske perle iz donorskih perli napunjenih sa FcγRIIIa, čime se redukuje detektovana hemiluminescencija. U testu su primenjena na Slici 6A niskofukozilovana antitela i na Slici 6B visoko-fukozilovana antitela.
Slika 7 pokazuje vezivanje anti-MUC1 antitela PM-N54Q, PM-N54D i PM sa Fab glikozilacijom za ćelijske linije tumora (A) CaOV-3 i (B) HSC-4 kao što je analizirano pomoću protočne citometrije.
Slika 8 pokazuje amino-kiselinsku sekvencu teškog lanca humanizovanog antitela PankoMab N54Q (SEQ ID NO: 15, pri čemu je amino-kiselina na poziciji 57 Gln, naime SEQ ID NO: 22).
Slika 9 pokazuje amino-kiselinsku sekvencu lakog lanca humanizovanog antitela PankoMab N54Q (SEQ ID NO: 16).
Slika 10 pokazuje amino-kiselinsku sekvencu teškog lanca humanizovanog antitela PankoMab (SEQ ID NO: 19).
Slika 11 pokazuje amino-kiselinsku sekvencu teškog lanca himernog antitela PankoMab N54Q (SEQ ID NO: 20, pri čemu je amino-kiselina na poziciji 76 Gln, naime SEQ ID NO: 23).
Slika 12 pokazuje amino-kiselinsku sekvencu lakog lanca himernog antitela PankoMab N54Q (SEQ ID NO: 21).
PRIMERI
Primer 1: Proizvodnja anti-MUC1 antitela
[0136] Sekvenca nukleinske kiseline teškog lanca humanizovanog PankoMab antitela (videti, npr. WO 2011/012309) modifikovana je mutiranjem kodona za Asn54 u skladu sa Kabat/EU sistemom numerisanja (amino-kiselinska pozicija 57 u SEQ ID NO: 11) u kodon za bilo koju amino-kiselinu osim Asn, naročito za Gln.
1) Proizvodnja anti-MUC1 antitela u ćelijskoj liniji poreklom od humane mijeloidne leukemije
[0137] Vektori koji sadrže kodirajuće sekvence teškog lanca γ1-tipa i lakog lanca κ-tipa mutiranih antitela transfektovani su u ćelijsku liniju NM-H9D8 poreklom od humane mijeloidne leukemije (DSM ACC2806). Različita αMUC1-antitela koja sadrže N54X mutaciju (PankoMab N54X / PM-N54X pri čemu je X bilo koja amino-kiselina osim N/Asn) ili amino-kiselinske mutacije u sekvencama regiona okvira VH i VL eksprimirana su u dobijenim klonovima, proizvodeći konstrukte sa humanim obrascem glikozilacije. Koncentracija αMUC1-antitela u supernatantu određena je Octet merenjem upotrebom igli obloženih proteinom A ili je kvantifikovana pomoću UV280 absorbance posle prečišćavanja pomoću protein A hromatografije. Karakteristike vezivanja različitih αMUC1-antitela određene su pomoću antigen-ELISA (videti primer 2), i odabrana prečišćena antitela su takođe analizirana pomoću Scatchard analize (videti primer 3), pomoću Biacore (videti primer 4a), pomoću DRX<2>switchSENSE<®>tehnologije (videti primer 4b), ili pomoću protočne citometrije (primer 7).
[0138] Pored toga, PM-N54Q i nemutirano PankoMab sa Fab-glikozilacijom su takođe eksprimirana u ćelijskoj liniji NM-H9D8-E6Q12 poreklom od humane mijeloidne leukemije (DSM ACC2856) koja eksprimira antitelo sa redukovanom fukozom. Zajedno sa istim antitelima eksprimiranim u NM-H9D8, ova antitela su prečišćena i analizirana u primeru 6 u pogledu njihovog ponašanja vezivanja za Fc gama receptor III A.
2) Proizvodnja anti-MUC 1 antitela u ćelijskoj liniji CHO
[0139] Sekvence koje kodiraju PM-N54Q (nukleotidna sekvenca teškog lanca PM-N54Q predstavljena pomoću SEQ ID NO: 17 i nukleotidna sekvenca lakog lanca PM-N54Q predstavljena pomoću SEQ ID NO: 18) koje su sintetisane pomoću GeneArt™ kompanije ThermoFisher scientific klonirane su u ekspresione vektore i rezultujući plazmidi su elektrotransfektovani u CHO ćelije. Pulirane ćelije uzgajane pod pritiskom selekcije primenjene su za proizvodnju PM-N54Q mutantnog antitela sa opštim procedurama.
Primer 2: Antigen ELISA
[0140] Karakteristike vezivanja PankoMab N54X za antigen, pri čemu je mesto N-glikozilacije u Fab delu nokautirano, upoređene su sa PankoMab koje ima mesto N-glikozilacije u svom Fab delu.
[0141] Karakteristike vezivanja Fab-deglikozilovane verzije MUC1-specifičnog antitela PankoMab (PM-N54Q) u poređenju sa (glikozilovanim) PankoMab-GEX<®>analizirane su upotrebom različito glikozilovanih i neglikozilovanih tandem ponovak peptida izvedenih iz MUC1 u ELISA studijama. U principu, oba antitela pokazuju istu gradaciju što se tiče vezivanja za glikozilovane PDTR peptide (APPAHGVTSAPD-T(X)-RPAPGSTAPPAHGVTSA) sa različitim glikozilacijama na T: Najjače vezivanje je uočeno za PDTR peptid koji nosi Galß1-3GalNAcalpha(TF) koji prate sijalilovani TF i GalNAcalfa(Tn) O-glikozilacija. Vezivanje za sijalilovanu GalNAcalpha(sTn) O-glikozilaciju je značajno niže. Kao PankoMab-GEX<®>, PM-N54Q je pokazalo samo malu aktivnost vezivanja za neglikozilovani MUC1 PDTR peptid, što ukazuje na adekvatnu tumor specifičnost (Slika 1C).
[0142] Međutim, u poređenju sa PankoMab-GEX<®>, četiri puta veće vezivanje je pronađeno za PM-N54Q u TA-MUC1 antigen ELISA upotrebom biotinilisanog glikopeptida koji nosi GalNAcalpha(Tn) O-glikan. PM-N54Q se oko sedam puta bolje vezuje za isti MUC1 peptid kada je glikozilovan sa sijalilovanim GalNAcalpha(sTn). Vezivanje za Galβ1-3GalNAcalpha(TF) i sijalilovani TF (sTF) na treoninu PDTR-sekvence (Slika 1A) bilo je dva puta bolje za PM-N54Q.
[0143] Oba antitela pokazuju snažno smanjeno vezivanje za MUC1 peptidnu varijantu APPAHGVTSAPE-S(Tn)-RPAPGSTAPPAHGVTSA sa Tn glikozilacijom na serinu u
4
poređenju sa onom na PDT(Tn)R-peptidu. Međutim, i ovde se Fab-deglikozilovano PM-N54Q vezuje značajno jače od PankoMab-GEX<®>(Slika 1B).
[0144] Različite druge Fab-deglikozilovane PM-N54X varijante upoređene su sa PankoMab koje ima N-glikozilaciju u svom Fab delu. Prvo, sve varijante su upoređene direktno iz supernatanta, bez prečišćavanja. Koncentracija je određena pomoću Octet. Sve PM-N54X varijante su se bolje vezivale od Fab-glikozilovanog PM. Pored toga, bio je vidljiv jasan trend u zavisnosti od hemijskih svojstava bočnog lanca amino-kiselina. Grupe karboksilne kiseline na bočnom lancu pokazale su najniže poboljšanje vezivanja. Najbolje vezivanje je uočeno za amino-kiseline sa jednim ili dva azota (kao primarni ili sekundarni amini) (Slika 1D).
[0145] Pored toga, odabrane Fab-deglikozilovane varijante (PM-N54H, -W i -Q) su prečišćene pomoću protein A hromatografije i analizirane na ELISA (Slika 1E). Poboljšanje vezivanja za TF-MUC1 peptid je oko 5 do 8 puta i za Tn-MUC1 peptid oko 2 do 3 puta u poređenju sa PankoMab sa Fab-glikozilacijom, respektivno.
[0146] Štaviše, dve različite varijante regiona okvira PM-N54Q analizirane su na vezivanje za Tn-glikozilovani PDTR-MUC1 peptid u ELISA (videti Sliku 1F). Varijanta regona okvira mfa nosi devet amino-kiselinskih mutacija u regionu okvira VH i tri u regionu okvira VL; varijanta mf-b takođe nosi devet amino-kiselinskih mutacija u regionu okvira VH i četiri u regionu okvira VL. Obe mutirane varijante pokazuju slično vezivanje u poređenju sa PM-N54Q antitelom.
Primer 3: Analiza zasićenja vezivanja anti-MUC1 antitela za MCF-7 i ZR-75-1 ćelije
[0147] Dva faktora su naročito kritična za terapijsku podobnost antitela: afinitet i broj mesta vezivanja antitela na tumorskim ćelijama.
[0148] Vezivanje Fab-deglikozilovane verzije MUC1-specifičnog antitela PankoMab (PM-N54Q) za TA-MUC-1 pozitivne humane tumorske ćelijske linije procenjeno je upotrebom radioaktivno obeleženih antitela analizom zasićenja vezivanja na ćelijskim linijama humanog karcinoma dojke ZR-75-1 i MCF-7 u poređenju sa Fab-glikozilovanim PankoMab-GEX<®>. Antitela su helirana sa 12 puta molarnim viškom p-SCN-benzil-DTPA u 50 mM natrijum karbonatu, 150 mM NaCl, pH 8,7, tokom 2 h na 37 °C, koje je pratila inkubacija preko noći na 2-8 °C. Slobodni helator je uklonjen preko kolona za deslinaciju i statičke filtracije (deadend filtration) (50 kDa granična vrednost, 6x zamena pufera za PBS). Helirana antitela su radioaktivno obeležena sa<111>In bez nosača (2 μCi/μg antitela) tokom 1 h na 37 °C u 6 mM fosfatu, 1,6 mM KCI, 80 mM NaCl, 0,2 M Na-acetatu, 0,1 M HCl. Preparati su neutralisani dodavanjem 8-9 puta veće zapremine 10x koncentrovanog PBS. Oko 1/50 zapremine fetalnog goveđeg seruma dodato je neutralisanom preparatu obeleženih antitela. Upotrebljen je pristup vezivanja po ćeliji 1 x 10<6>ćelija. Nekoliko koncentracija obeleženih antitela je dodato u peletirane ćelije (30-1000 ng/200 μl u 1% BSA/PBS). Resuspendovane ćelija-antitelo smeše izmerene su na gama brojaču i inkubirane 1 h na 4 °C. Ćelije sa vezanim antitelima su odvojene centrifugiranjem i isprane sa 1% BSA/PBS tokom sledećih sat vremena na 4 °C. U ćelijskom peletu je zatim izmereno vezano<111>In-obeleženo antitelo u gama brojaču. Procena je izvedena pomoću "ka specifične za jedno mesto" u GraphPad Prism. Dobijeni podaci su sumirani u Tabeli 1. Podaci pokazuju visok afinitet i veoma veliki broj mesta vezivanja PM-N54Q na ovim tumorskim ćelijama. Vezivanje je bilo više od 2,5 puta veće nego za PankoMab-GEX<®>, i takođe je malo povećan broj mesta vezivanja.
Tabela 1: Konstanta asocijacije i antigen-vezujuća mesta na MUC1<+>tumorskim
ćelijama
Primer 4a: Analiza rezonance površinskih plazmona (BiaCore)
[0149] Vezivanje Fab-deglikozilovane verzije MUC1-specifičnog antitela PankoMab (PM-N54Q) za glikozilovani peptid izveden iz TA-MUC-1 procenjeno je analizom rezonance površinskih plazmona (Biacore). Streptavidin senzorski čip je obložen biotinilisanim TA-MUC1 peptidom (Tn glikozilovan ili neglikozilovan). PankoMab i PM-N54Q su razblažena sekvencijalno 1:3 od 3.600 do 4,9 nM u HPS-EP. Razblaženja su injektirana pri 50 μl/min. Maksimalno vezivanje svake koncentracije je određeno kao jedinice odgovora (RU), respektivno, i procenjeno sa GraphPad Prism upotrebom "vezivanja specifičnog za jedno
4
mesto". Slika 2 pokazuje dobijene krive vezivanja sa PM-N54Q u poređenju sa PankoMab-GEX<®>. Afiniteti (KD) od 388 nM i 652 nM su izračunati za PM-N54Q i PankoMab-GEX<®>, respektivno. Prema tome, u ovom eksperimentalnom okruženju je detektovano skoro dvostruko povećanje afiniteta.
Primer 4b: Osećanje blizine fluorescencije (pomoću DRX<2>, Dynamic Biosensors)
[0150] Novi postupak za određivanje konstanti vezivanja i afiniteta je osećanje blizine fluorescencije upotrebom jednolančane DNK (96mer) tačkasto raspoređene na čipu i komplementarne DNK kuplovane za ligand. U predmetnoj studiji streptavidin je upotrebljen kao ligand za hvatanje biotinilisanih TA-MUC1 peptida. Vezivanje PankoMab za peptide rezultovalo je promenom fluorescencije. On- i off-stope mogu se izračunati tokom asocijacije i disocijacije. Zbog veće osetljivosti mogu se pratiti brže interakcije u poređenju sa rezonancom površinskih plazmona. Ovo rezultuje kinetikom vezivanja različitom od SPR, ali uporedivijom sa "zlatnim standardom" postupkom KinExA, izmerenom u tečnom sistemu.
[0151] PankoMab i PM-N54Q su razblažena od 300 nM u koracima od 1:9 do 3,67 nM u PE140 puferu i primenjena na peptide vezane za čip. Krive vezivanja su procenjene pomoću mono-eksponencijalnog globalnog fitovanja (softver instrumenta). Krive vezivanja PM i PM-N54Q su pokazane kao primer na Slici 3A i B. Izračunati afiniteti PankoMab varijanti su pokazani u Tabeli 2:
Tabela 2: Konstante disocijacije PankoMab varijanti za antigen peptid
Primer 5: Biohemijska karakterizacija
[0152] Neredukujuća i redukujuća SDS-PAGE se upotrebljava za analizu čistoće i identičnosti antitela. Obrazac traka u neredukujućim gelovima pokazuje glavnu traku na oko
4
160 kDa i metodičke artefakte teških i lakih lanaca i njihove kombinacije (~25, 50-55, 75, 110, 135 kDa). Redukujući gelovi pokazuju različite trake lakih i teških lanaca na 25 i 50-55 kDa. Zbog nedostatka Fab glikozilacije PM-N54Q ima manji teški lanac, kao što je očekivano (videti Sliku 4, desno).
[0153] Profil naelektrisanja je jasno drugačiji, kao što je pokazano pomoću izoelektričnog fokusiranja (IEF; videti Sliku 5). Fab glikozilacija je značajno sijalilovana, pri čemu je Fc glikozilacija samo minimalno sijalilovana. Stoga PankoMab-GEX<®>ima više naelektrisanih izoformi od PM-N54Q, što odražava njegov viši nivo negativno naelektrisanih sijalinskih kiselina u Fab delu.
Primer 6: Vezivanje Fcγ receptora
[0154] Testovi vezivanja FcγR za FcγRIIIa (CD16a) su zasnovani na AlphaScreen<®>tehnologiji kompanije PerkinElmer. AlphaScreen<®>platforma se oslanja na jednostavnu PerkinElmer tehnologiju zasnovanu na perlama i efikasnija je alternativa tradicionalnoj ELISA pošto nisu neophodni koraci ispiranja.
[0155] Za testove vezivanja receptora, His-označeni FcγRIIIa (Glycotope GmbH) je uhvaćen pomoću Ni-heliranih donorskih perli. Anti-MUC1 antitela i zečje-anti-mišje kuplovane akceptorske perle su u kompeticiji za vezivanje za FcγR. U slučaju interakcije FcγR sa zečjim-anti-mišjim-vezanim akceptorskim perlama, donorske i akceptorske perle dolaze u neposrednu blizinu što dovodi, nakon laserske ekscitacije na 680 nm, do emisije svetlosti. Maksimalni signal se postiže (signalmax) bez kompetitora. U slučaju kompeticije, gde se test antitelo vezuje za FcγR, signalmaxse redukuje na način zavisan od koncentracije. Hemiluminescencija je kvantifikovana merenjem na 520-620 nm (postupak AlphaScreen<®>) upotrebom EnSpire 2300 čitača za više obeleživača (PerkinElmer). Svi rezultati su izraženi kao srednja vrednost ± standardna devijacija duplikata uzoraka. Podaci su procenjeni i izračunati upotrebom fitovanja nelinearne krive (sigmoidni varijabilni nagib doza-odgovor) sa GraphPad Prism 5 softverom. Kao rezultat, dobijena je sigmoidna kriva zavisna od koncentracije, koja je definisana pomoću gornjeg platoa, donjeg platoa, nagiba i EC50.
[0156] Kao što je pokazano na Slici 6A i B, afinitet vezivanja FcγRIIIa bio je uporediv za PankoMab N54Q i PankoMab, pri čemu su u testu primenjena na Slici A nisko-fukozilovana antitela i na Slici B visoko-fukozilovana antitela. Otuda, uklanjanje Fab glikozilacije nije uticalo na interakciju receptora i antitela.
4
Primer 7: Vezivanje za ćelijski TA-MUC1
[0157] N54Q i N54D su prolazno eksprimirana i prečišćena pomoću protein A hromatografije. Vezivanje dve varijante za TA-MUC1 na ćelijskoj površini upoređeno je u odnosu na PM sa Fab glikozilacijom upotrebom dve različite ćelijske linije karcinoma. Linija pločastih ćelija karcinoma jezika HSC-4 eksprimira TA-MUC1 u srednjem stepenu i ćelijska linija karcinoma jajnika CaOV-3 u visokom stepenu. Tumorske ćelije su inkubirane sa antitelima u serijskim razblaženjima i vezana antitela su detektovana upotrebom kozjeg antihumanog IgG (teškog i lakog lanca) antitela konjugovanog za fikoeritrin. Humana IgG kontrola je uključena za kontrolu pozadinskog bojenja. Vezivanje je analizirano pomoću protočne citometrije.
[0158] Analizirani konstrukti PM, PM-N54Q i PM-N54D pokazuju snažno i specifično vezivanje za HSC-4 i CaOV-3 ćelije koje eksprimiraju TA-MUC1 u poređenju sa kontrolnim humanim IgG1 (Slika 7). Vezivanje PM-N54D za CaOV-3 ćelije sa visokim nivoom TA-MUC1 bilo je uporedivo sa PM sa Fab glikozilacijom, dok je PM-N54Q pokazalo nešto bolje vezivanje (Slika 7A). Upotrebom HSC-4 ćelija karcinoma koje eksprimiraju TA-MUC1 na srednjem nivou, varijanta PM-N54Q je bila očigledno superiornija u vezivanju za ćelijski TA-MUC1 u poređenju sa PM dok je PM-N54D pokazalo inferiorno vezivanje u poređenju sa PM sa Fab glikozilacijom (Slika 7B).
Identifikacija deponovanog biološkog materijala
[0159] Ćelijske linije DSM ACC 2806, DSM ACC 2807 i DSM ACC 2856 deponovane su u DSMZ - Nemačkoj kolekciji mikroorganizama i ćelijskih kultura GmbH, Inhoffenstraße 7B, 38124 Braunschweig (DE) od strane Glycotope GmbH, Robert-Rössle-Str. 10, 13125 Berlin (DE) na datume navedene u sledećoj tabeli.
4

Claims (18)

Patentni zahtevi
1. Antitelo sposobno da se vezuje za MUC1, naznačeno time što sadrži
(i) varijabilni region teškog lanca koji sadrži regione koji određuju komplementarnost (CDR) CDR-H1 koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1, CDR-H2 koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 7 i CDR-H3 koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 3, i
(ii) varijabilni region lakog lanca koji sadrži regione koji određuju komplementarnost (CDR) CDR-L1 koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 4, CDR-L2 koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 5 i CDR-L3 koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 6.
2. Antitelo u skladu sa patentnim zahtevom 1, naznačeno time što varijabilni region teškog lanca ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 10 ili amino-kiselinsku sekvencu koja je najmanje 90% identična amino-kiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 10; i/ili varijabilni region lakog lanca ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 12 ili amino-kiselinsku sekvencu koja je najmanje 90% identična amino-kiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 12.
3. Antitelo u skladu sa patentnim zahtevom 1 ili 2, naznačeno time što varijabilni region teškog lanca antitela ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 10 i varijabilni region lakog lanca antitela ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 12.
4. Antitelo u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 3, naznačeno time što antitelo sadrži Fc region i poželjno je antitelo IgG1, IgG2 ili IgG4-tipa; poželjnije pri čemu antitelo sadrži teški lanac koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 22, i laki lanac koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 16.
5. Antitelo u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 4, naznačeno time što se antitelo može dobiti proizvodnjom u ćeliji sisara, kao što je humana ćelijska linija odabrana iz grupe koja se sastoji od NM-H9D8 (DSM ACC 2806), NM-H9D8-E6 (DSM ACC 2807), NM-H9D8-E6Q12 (DSM ACC 2856) i ćelijskih linija poreklom od njih, ili CHO ćelijska linija ili ćelijska linija poreklom od nje.
4
6. Antitelo u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 5, naznačeno time što je antitelo u kompeticiji za vezivanje za TA-MUC1 sa antitelom koje sadrži varijabilni region teškog lanca koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 10 i varijabilni region lakog lanca koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 12.
7. Nukleinska kiselina koja kodira antitelo u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 6.
8. Ekspresiona kaseta ili vektor naznačeni time što sadrže nukleinsku kiselinu u skladu sa patentnim zahtevom 7 i promotor koji je operativno povezan sa navedenom nukleinskom kiselinom.
9. Ćelija domaćin naznačena time što sadrži nukleinsku kiselinu u skladu sa patentnim zahtevom 7 ili ekspresionu kasetu ili vektor u skladu sa patentnim zahtevom 8.
10. Konjugat naznačen time što sadrži antitelo u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 6 konjugovano za dodatni agens, pri čemu je dodatni agens polipeptid ili protein, kao što je citokin, imunomodulatorno jedinjenje, tumor-specifično antitelo ili blokirajuće ili aktivirajuće antitelo imunske kontrolne tačke.
11. Kompozicija naznačena time što sadrži antitelo u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 6, nukleinsku kiselinu u skladu sa patentnim zahtevom 7, ekspresionu kasetu ili vektor u skladu sa patentnim zahtevom 8, ćeliju domaćina u skladu sa patentnim zahtevom 9, ili konjugat u skladu sa patentnim zahtevom 10.
12. Antitelo u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 6, konjugat u skladu sa patentnim zahtevom 10, ili kompozicija u skladu sa patentnim zahtevom 11 za upotrebu u medicini.
13. Antitelo, konjugat ili kompozicija za upotrebu u medicini u skladu sa patentnim zahtevom 12 za upotrebu u lečenju kancera, infekcije, autoimunske bolesti ili poremećaja imunodeficijencije.
14. Antitelo, konjugat ili kompozicija za upotrebu u medicini u skladu sa patentnim zahtevom 12 za upotrebu u dijagnozi, detektovanju i/ili praćenju kancera, infekcije, autoimunske bolesti ili poremećaja imunodeficijencije.
15. Antitelo, konjugat ili kompozicija za upotrebu u medicini u skladu sa patentnim zahtevom 13 ili 14, pri čemu je kancer okarakterisan ekspresijom TA-MUC1; i/ili pri čemu je kancer odabran iz grupe koja se sastoji od kancera jajnika, kancera dojke, kancera pankreasa, kancera pluća, kancera kolona, kancera želuca, kancera jetre, kancera bubrega, kancera krvi, kancera endometrijuma, kancera štitne žlezde, leukemija, seminoma, melanoma, karcinoma, teratoma, limfoma, sarkoma, mezotelioma, neuroblastoma, glioma, rektalnog kancera, kancera nadbubrežne žlezde, kancera kože, kancera mozga, kancera grlića materice, intestinalnog kancera, kancera creva, kancera glave i vrata, gastrointestinalnog kancera, kancera limfnih čvorova, kancera jednjaka, kolorektalnog kancera, kancera uha, nosa i grla (ENT), kancera prostate, kancera mokraćne bešike, kancera materice i njihovih metastaza.
16. Antitelo, konjugat ili kompozicija za upotrebu u medicini u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 12 do 15, naznačeno time što se antitelo upotrebljava u kombinaciji sa dodatnim agensom.
17. Postupak proizvodnje antitela sa povećanim afinitetom vezivanja za MUC1, naznačen time što sadrži
(a) obezbeđivanje nukleinske kiseline koja kodira antitelo koje sadrži
(i) varijabilni region teškog lanca koji sadrži regione koji određuju komplementarnost (CDR) CDR-H1 koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1, CDR-H2 koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 8 i CDR-H3 koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 3, i
(ii) varijabilni region lakog lanca koji sadrži regione koji određuju komplementarnost (CDR) CDR-L1 koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 4, CDR-L2 koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 5 i CDR-L3 koji ima amino-kiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 6;
(b) introdukovanje mutacije u navedenu nukleinsku kiselinu kako bi se proizvela mutirana nukleinska kiselina, pri čemu se mutacija introdukuje u kodon koji kodira amino-kiselinski ostatak na poziciji 8 CDR-H2 tako da navedeni kodon kodira glutamin; i
1
(c) proizvodnju antitela sa povećanim afinitetom vezivanja za MUC1 pomoću ekspresije mutirane nukleinske kiseline u ćeliji domaćinu.
18. Postupak u skladu sa patentnim zahtevom 17, naznačen time što dodatno sadrži korak (d) obrade antitela sa povećanim afinitetom vezivanja za MUC1.
2
RS20230586A 2018-05-18 2019-05-17 Anti-muc1 antitelo RS64379B1 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP18173253 2018-05-18
PCT/EP2019/062756 WO2019219889A1 (en) 2018-05-18 2019-05-17 Anti-muc1 antibody
EP19724502.0A EP3794041B1 (en) 2018-05-18 2019-05-17 Anti-muc1 antibody

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS64379B1 true RS64379B1 (sr) 2023-08-31

Family

ID=62217845

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20240625A RS65580B1 (sr) 2018-05-18 2019-05-17 Anti-muc1-eksatekan antitelo-lek konjugat
RS20230586A RS64379B1 (sr) 2018-05-18 2019-05-17 Anti-muc1 antitelo

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20240625A RS65580B1 (sr) 2018-05-18 2019-05-17 Anti-muc1-eksatekan antitelo-lek konjugat

Country Status (28)

Country Link
US (6) US12297289B2 (sr)
EP (4) EP3794041B1 (sr)
JP (4) JP7257422B2 (sr)
KR (3) KR102933368B1 (sr)
CN (3) CN112351999A (sr)
AU (3) AU2019270459C1 (sr)
BR (2) BR112020023373A2 (sr)
CA (2) CA3100745A1 (sr)
CO (2) CO2020013664A2 (sr)
DK (1) DK3794042T5 (sr)
ES (2) ES2980468T3 (sr)
FI (1) FI3794042T3 (sr)
HR (2) HRP20230787T1 (sr)
HU (2) HUE067382T2 (sr)
IL (3) IL278718B2 (sr)
LT (1) LT3794042T (sr)
MX (4) MX421206B (sr)
MY (2) MY205343A (sr)
PH (2) PH12020551970A1 (sr)
PL (2) PL3794042T3 (sr)
PT (1) PT3794042T (sr)
RS (2) RS65580B1 (sr)
SG (2) SG11202010496WA (sr)
SI (1) SI3794042T1 (sr)
SM (2) SMT202400202T1 (sr)
TW (3) TWI825098B (sr)
WO (2) WO2019219889A1 (sr)
ZA (1) ZA202006684B (sr)

Families Citing this family (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SG11202010496WA (en) 2018-05-18 2020-12-30 Daiichi Sankyo Co Ltd Anti-muc1 antibody-drug conjugate
CA3108044A1 (en) * 2018-07-31 2020-02-06 Daiichi Sankyo Company, Limited Treatment of metastatic brain tumor by administration of antibody-drug conjugate
US11555019B2 (en) 2019-07-10 2023-01-17 Cybrexa 3, Inc. Peptide conjugates of microtubule-targeting agents as therapeutics
MX2022000449A (es) 2019-07-10 2022-04-25 Cybrexa 2 Inc Conjugados peptídicos de citotoxinas como terapéuticos.
US20230054458A1 (en) * 2019-12-12 2023-02-23 Jiangsu Hengrui Medicine Co., Ltd. Anti-claudin antibody-drug conjugate and pharmaceutical use thereof
EP4093439A1 (en) * 2020-01-22 2022-11-30 MedImmune Limited Compounds and conjugates thereof
CN116390771A (zh) * 2020-07-13 2023-07-04 瑞泽恩制药公司 与蛋白中的谷氨酰胺残基缀合的喜树碱类似物及其用途
CN113941007B (zh) * 2020-07-16 2024-06-07 成都科岭源医药技术有限公司 一种串联的双药物链接组装单元及其应用
AU2021378152A1 (en) * 2020-11-11 2023-06-22 Daiichi Sankyo Company, Limited COMBINATION OF AN ANTIBODY-DRUG CONJUGATE WITH ANTI-SIRPα ANTIBODY
TW202320858A (zh) 2021-07-19 2023-06-01 美商薩諾管理公司 免疫接合物及方法
US11806405B1 (en) 2021-07-19 2023-11-07 Zeno Management, Inc. Immunoconjugates and methods
JP2024534148A (ja) * 2021-08-27 2024-09-18 ペプトロン インコーポレイテッド 新規抗ｍｕｃ１抗体およびその用途
CN116059339B (zh) * 2021-11-04 2023-09-22 元本(珠海横琴)生物科技有限公司 一种治疗和预防癌症的药物和应用
CA3241734A1 (en) * 2022-01-12 2023-07-20 Amy Han Camptothecin analogs conjugated to a glutamine residue in a protein, and their use
CN119317447A (zh) * 2022-04-12 2025-01-14 米纳瓦生物技术公司 抗可变muc1*抗体及其用途
EP4514391A1 (en) 2022-04-27 2025-03-05 Daiichi Sankyo Company, Limited Combination of antibody-drug conjugate with ezh1 and/or ezh2 inhibitor
JP2025529210A (ja) 2022-09-01 2025-09-04 ユニバーシティ・オブ・ジョージア・リサーチ・ファウンデイション・インコーポレイテッド アポリポタンパク質ｌ１を導いて哺乳動物の細胞死を誘導するための組成物及び方法
CN119630672B (zh) * 2023-02-23 2026-01-30 一线医药（杭州）有限公司 喜树碱衍生物及其偶联物以及其制备方法和医药用途
TW202506190A (zh) 2023-04-05 2025-02-16 日商第一三共股份有限公司 利用抗ｍｕｃ１抗體－藥物結合物投予的藥劑低敏感性癌之治療方法
EP4737483A1 (en) 2023-06-30 2026-05-06 Daiichi Sankyo Company, Limited Antibody-drug conjugate production method including purification step using activated carbon material
WO2025054996A1 (en) * 2023-09-15 2025-03-20 Duality Biologics (Suzhou) Co., Ltd. Antibody-drug conjugate
WO2025149667A1 (en) 2024-01-12 2025-07-17 Pheon Therapeutics Ltd Antibody drug conjugates and uses thereof
WO2025153001A1 (zh) * 2024-01-17 2025-07-24 北京泰德制药股份有限公司 含有噻唑[5,4-b]吡啶结构的抗体偶联药物及其用途
WO2025161939A1 (en) * 2024-01-31 2025-08-07 Biocytogen Pharmaceuticals (Beijing) Co., Ltd. Antibodies and uses thereof
WO2025180383A1 (en) * 2024-02-26 2025-09-04 Biocytogen Pharmaceuticals (Beijing) Co., Ltd. Anti-tpbg/muc1 antibodies and uses thereof
WO2025252189A1 (zh) * 2024-06-06 2025-12-11 海思科医药集团股份有限公司 喜树碱类衍生物及其用途
WO2025260285A1 (en) * 2024-06-19 2025-12-26 Duality Biologics (Suzhou) Co., Ltd. Antibody drug conjugate
WO2025262130A1 (en) * 2024-06-19 2025-12-26 BioNTech SE Antibody drug conjugate
WO2026035986A1 (en) 2024-08-07 2026-02-12 Bighat Biosciences, Inc. Humanized anti-cdh17 antibodies and use of the same
WO2026082031A1 (zh) * 2024-10-14 2026-04-23 先声再明医药股份有限公司 一种包含抗cdh6抗体或其adc的药物组合物

Family Cites Families (193)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4966843A (en) 1982-11-01 1990-10-30 Cetus Corporation Expression of interferon genes in Chinese hamster ovary cells
AU2353384A (en) 1983-01-19 1984-07-26 Genentech Inc. Amplification in eukaryotic host cells
KR850004274A (ko) 1983-12-13 1985-07-11 원본미기재 에리트로포이에틴의 제조방법
US4943533A (en) 1984-03-01 1990-07-24 The Regents Of The University Of California Hybrid cell lines that produce monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor
US4931275A (en) 1985-12-02 1990-06-05 Yeda Research & Development Co., Ltd. Anti-tumor vaccines and their preparation
US5683674A (en) 1987-01-07 1997-11-04 Imperial Cancer Research Technology Ltd. Antibody against human mucin core protein and method of preparing and using same
JP3040121B2 (ja) 1988-01-12 2000-05-08 ジェネンテク，インコーポレイテッド 増殖因子レセプターの機能を阻害することにより腫瘍細胞を処置する方法
US5183884A (en) 1989-12-01 1993-02-02 United States Of America Dna segment encoding a gene for a receptor related to the epidermal growth factor receptor
JP3008226B2 (ja) 1991-01-16 2000-02-14 第一製薬株式会社 六環性化合物
US5658920A (en) 1991-01-16 1997-08-19 Daiichi Pharmaceutical Co., Ltd. Substituted 1H,12H-benz-[DE]pyrano[3',4':6,7] indolizino[1,2-B]quinoline-10,13(9H,15H)-dione compound
CA2100671C (en) 1991-02-27 1999-02-02 James S. Huston Serine rich peptide linkers
EP1400536A1 (en) 1991-06-14 2004-03-24 Genentech Inc. Method for making humanized antibodies
GB9200415D0 (en) 1992-01-09 1992-02-26 Bagshawe Kenneth D Inactivation of cytotoxic drugs
JP3698370B2 (ja) 1992-04-13 2005-09-21 ダナ−ファーバー キャンサー インスティチュート インク 癌腫抗原用抗体
JP3359955B2 (ja) 1992-07-16 2002-12-24 第一製薬株式会社 抗腫瘍剤
US5804187A (en) 1992-11-16 1998-09-08 Cancer Research Fund Of Contra Costa Modified antibodies with human milk fat globule specificity
US6214345B1 (en) 1993-05-14 2001-04-10 Bristol-Myers Squibb Co. Lysosomal enzyme-cleavable antitumor drug conjugates
JP3626187B2 (ja) 1993-06-07 2005-03-02 バイカル インコーポレイテッド 遺伝子治療に適するプラスミド
DE4329004A1 (de) 1993-08-28 1995-03-09 Max Delbrueck Centrum Monoklonale Antikörper gegen das Thomsen-Friedenreich-Antigen, ihre Herstellung und ihre Verwendung zum Tumornachweis
AU7965694A (en) 1993-10-15 1995-05-04 Curators Of The University Of Missouri, The Dna encoding the human p2u receptor and null cells expressing p2u receptors
US5443953A (en) 1993-12-08 1995-08-22 Immunomedics, Inc. Preparation and use of immunoconjugates
US5997873A (en) 1994-01-13 1999-12-07 Mount Sinai School Of Medicine Of The City University Of New York Method of preparation of heat shock protein 70-peptide complexes
US5961979A (en) 1994-03-16 1999-10-05 Mount Sinai School Of Medicine Of The City University Of New York Stress protein-peptide complexes as prophylactic and therapeutic vaccines against intracellular pathogens
US5888773A (en) 1994-08-17 1999-03-30 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Method of producing single-chain Fv molecules
US6504029B1 (en) 1995-04-10 2003-01-07 Daiichi Pharmaceutical Co., Ltd. Condensed-hexacyclic compounds and a process therefor
JPH08337584A (ja) 1995-04-10 1996-12-24 Dai Ichi Seiyaku Co Ltd 縮合六環式アミノ化合物、これを含有する医薬及びその製法
US5739277A (en) 1995-04-14 1998-04-14 Genentech Inc. Altered polypeptides with increased half-life
JPH11507535A (ja) 1995-06-07 1999-07-06 イムクローン システムズ インコーポレイテッド 腫瘍の成長を抑制する抗体および抗体フラグメント類
CA2225460A1 (en) 1995-06-23 1997-01-09 Winston Campbell Patterson Transcriptional regulation of genes encoding vascular endothelial growth factor receptors
SG50747A1 (en) 1995-08-02 1998-07-20 Tanabe Seiyaku Co Comptothecin derivatives
JPH1095802A (ja) 1995-12-28 1998-04-14 Tanabe Seiyaku Co Ltd カンプトテシン誘導体
CA2192725C (en) 1995-12-28 2004-04-20 Kenji Tsujihara Camptothecin derivatives
GB9603256D0 (en) 1996-02-16 1996-04-17 Wellcome Found Antibodies
US5968511A (en) 1996-03-27 1999-10-19 Genentech, Inc. ErbB3 antibodies
EP0906444A1 (de) 1996-04-19 1999-04-07 Gabriele Pecher Gentransfizierte humane dendritische zellen, ihre herstellung und ihre verwendung, bevorzugt als vakzine
TW409058B (en) 1996-06-06 2000-10-21 Daiichi Seiyaku Co Method for preparation of a drug complex
TW527183B (en) 1996-06-06 2003-04-11 Daiichi Seiyaku Co Drug complex
JPH1171280A (ja) 1997-06-26 1999-03-16 Tanabe Seiyaku Co Ltd 医薬組成物
US6172213B1 (en) 1997-07-02 2001-01-09 Genentech, Inc. Anti-IgE antibodies and method of improving polypeptides
JPH1192405A (ja) 1997-09-19 1999-04-06 Dai Ichi Seiyaku Co Ltd 薬物複合体
ATE550042T1 (de) 1997-11-20 2012-04-15 Vical Inc Behandlung von krebs mithilfe cytokin- exprimierender polynukleotide und zusammensetzungen dafür
US5948646A (en) 1997-12-11 1999-09-07 Fordham University Methods for preparation of vaccines against cancer comprising heat shock protein-peptide complexes
DK1071700T3 (da) 1998-04-20 2010-06-07 Glycart Biotechnology Ag Glykosylerings-modifikation af antistoffer til forbedring af antistofafhængig cellulær cytotoksicitet
EA003398B1 (ru) 1998-05-22 2003-04-24 Дайити Фармасьютикал Ко., Лтд. Лекарственный комплекс c полимерным носителем
CN1191093C (zh) 1998-10-30 2005-03-02 第一制药株式会社 Dds化合物及其测定方法
US6465220B1 (en) 1998-12-21 2002-10-15 Glycozym Aps Glycosylation using GalNac-T4 transferase
AUPP816899A0 (en) 1999-01-14 1999-02-11 Food Technology Innovations Pty Limited Improved microbial products
EP1399538A4 (en) 1999-03-02 2004-03-24 Human Genome Sciences Inc TECHOLOGICAL MANIPULATION OF INTRACELLULAR SIALIZATION PATHS
CA2368734C (en) 1999-03-30 2005-08-23 Japan Tobacco Inc. Method for preparing monoclonal antibody
CA2704600C (en) 1999-04-09 2016-10-25 Kyowa Kirin Co., Ltd. A method for producing antibodies with increased adcc activity
BR0012196A (pt) 1999-06-25 2002-03-19 Genentech Inc Método de tratamento de um tumor em mamìferos através do uso de conjugados de maitansinóide e anticorpo receptor anti-erbb e artigo industrializado
US7147850B2 (en) 1999-08-18 2006-12-12 Altarex Medical Corp. Therapeutic binding agents against MUC-1 antigen and methods for their use
ATE290879T1 (de) 1999-08-18 2005-04-15 Altarex Medical Corp Therapeutische antikörper gegen das muc-1 antigen und verfahren zu deren verwendung
AU7743100A (en) 1999-09-30 2001-04-30 Corixa Corporation Stress protein compositions and methods for prevention and treatment of cancer and infectious disease
JP2002060351A (ja) 2000-03-22 2002-02-26 Dai Ichi Seiyaku Co Ltd 水酸基を有する薬物を含むｄｄｓ化合物
WO2001075110A2 (en) 2000-03-30 2001-10-11 Dyax Corp. Mucin-1 specific binding members and methods of use thereof
GB2362531A (en) 2000-05-15 2001-11-21 Nokia Mobile Phones Ltd Indicating the temporal order of reference frames in a video sequence
FR2809312B1 (fr) 2000-05-25 2002-07-12 Gervais Danone Sa Utilisation de l. casei dans des compositions immunostimulantes
US20030166513A1 (en) 2000-06-29 2003-09-04 Akihiro Imura Dds compound and process for the preparation thereof
AU2001271037A1 (en) 2000-07-13 2002-01-30 Daiichi Pharmaceutical Co., Ltd. Pharmaceutical compositions containing dds compounds
FR2814096B1 (fr) 2000-09-15 2002-12-27 Montupet Sa Procede de fabrication de pieces de fonderie munies d'inserts avec cohesion mecanique piece/insert amelioree, et insert utilisable dans un tel procede
US6946292B2 (en) 2000-10-06 2005-09-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity
CA2424977C (en) 2000-10-06 2008-03-18 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Process for purifying antibody
GB0029360D0 (en) 2000-12-01 2001-01-17 Univ Nottingham Humanised antibodies and uses thereof
JPWO2002061118A1 (ja) 2001-02-01 2004-06-03 株式会社ヤクルト本社 発酵乳飲食品中のビフィドバクテリウム属細菌の腸内到達度評価方法
US7183388B2 (en) 2001-03-30 2007-02-27 The Regents Of The University Of California Anti-MUC-1 single chain antibodies for tumor targeting
EP1283053A1 (en) 2001-08-09 2003-02-12 Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Inhibitors of HER3 activity
AU2002336981A1 (en) 2001-08-17 2003-03-03 Charite Glycoconjugates of sialic acid derivates, methods for their production and use thereof
DE10139428A1 (de) 2001-08-17 2003-03-27 Nemod Immuntherapie Ag Herstellung und Verwendung von humanen CD124 und CD116 positiven Tumorzelllinien zur Herstellung von allogenen oder semi-allogenen Immuntherapeutika
CA2451998A1 (en) 2001-08-17 2003-02-27 Eli Lilly And Company Anti-a.beta. antibodies
TWI313609B (en) 2001-08-21 2009-08-21 Mitsubishi Tanabe Pharma Corp Pharmaceutical composition for inhibiting the metastasis or preventing the recurrence of malignant tumor
MEP38608A (en) 2001-10-22 2011-02-10 Merck Serono Sa Gonadotrophins for folliculogenesis
GB0125473D0 (en) 2001-10-24 2001-12-12 Syngenta Ltd Chemical process
CA2463879C (en) 2001-10-25 2012-12-04 Genentech, Inc. Glycoprotein compositions
CA2467242A1 (en) 2001-11-20 2003-05-30 Seattle Genetics, Inc. Treatment of immunological disorders using anti-cd30 antibodies
EP1451217A4 (en) 2001-11-20 2005-10-12 Atgen Co Ltd NEW PEPTIDES PROVIDING ENVIRONMENTAL RESISTANCE, AND FUSION PROTEINS CONTAINING THOSE PEPTIDES
US8877901B2 (en) 2002-12-13 2014-11-04 Immunomedics, Inc. Camptothecin-binding moiety conjugates
CA2478047C (en) 2002-03-01 2014-01-21 Immunomedics, Inc. Rs7 antibodies
US9745380B2 (en) 2002-03-01 2017-08-29 Immunomedics, Inc. RS7 antibodies
AU2003217912A1 (en) 2002-03-01 2003-09-16 Xencor Antibody optimization
GB0212046D0 (en) 2002-05-24 2002-07-03 Glaxo Group Ltd Vaccines
ES2524442T3 (es) 2002-07-22 2014-12-09 Glycotope Gmbh Procedimiento para la producción de una mucina (MUC1) inmunoestimulante
DK1530628T3 (da) 2002-08-16 2011-01-10 Glycotope Gmbh Fremgangsmåde til fremstilling af temperaturinducerede tumorcellelysater til anvendelse som immunogene forbindelser
DE10256900A1 (de) 2002-11-29 2004-06-24 Nemod Immuntherapie Ag Tumorspezifische Erkennungsmoleküle
CA2508831C (en) 2002-12-13 2012-05-01 Immunomedics, Inc. Immunoconjugates with an intracellularly-cleavable linkage
DE10303664A1 (de) * 2003-01-23 2004-08-12 Nemod Immuntherapie Ag Erkennungsmoleküle zur Behandlung und Detektion von Tumoren
US20040202666A1 (en) 2003-01-24 2004-10-14 Immunomedics, Inc. Anti-cancer anthracycline drug-antibody conjugates
US7709610B2 (en) 2003-05-08 2010-05-04 Facet Biotech Corporation Therapeutic use of anti-CS1 antibodies
WO2005019258A2 (en) 2003-08-11 2005-03-03 Genentech, Inc. Compositions and methods for the treatment of immune related diseases
CA2535489C (en) 2003-08-14 2014-09-30 D. Collen Research Foundation Vzw Antibodies against factor viii with modified glycosylation in the variable region
SI1654353T1 (sl) 2003-08-18 2013-09-30 Glycotope Gmbh Tumorski celični liniji NM-F9 (DSM ACC2606) in NM-D4 (DSM ACC2605), njihove uporabe
FR2861080B1 (fr) 2003-10-20 2006-02-17 Lab Francais Du Fractionnement Anticorps presentant un taux de fucose et de galactose optimise
US20050203010A1 (en) 2003-11-14 2005-09-15 Atgen Co., Ltd. Novel peptides conferring environmental stress resistance and fusion proteins including said peptides
CN103627670B (zh) 2004-02-13 2016-12-21 格莱克托普有限公司 高活性糖蛋白加工条件及其有效生产方法
US20050228007A1 (en) 2004-02-26 2005-10-13 Prakash Jagtap Isoquinoline derivatives and methods of use thereof
JP4942643B2 (ja) 2004-03-02 2012-05-30 シアトル ジェネティックス， インコーポレイテッド 部分的に付加された抗体およびそれらの結合体化方法
JP4758984B2 (ja) 2004-03-29 2011-08-31 アボット バイオセラピューティクス コーポレイション 抗ｃｓ１抗体の治療的使用
US20060051353A1 (en) 2004-05-14 2006-03-09 Jean-Frederic Colombel Methods and compositions to evaluate antibody treatment response
JP4806680B2 (ja) 2004-05-19 2011-11-02 メダレックス インコーポレイテッド 自己犠牲リンカー及び薬剤複合体
NZ579482A (en) 2004-06-01 2011-02-25 Genentech Inc Antibody drug conjugates and methods
DK1771482T3 (da) 2004-07-22 2014-10-20 Genentech Inc HER2-antistofsammensætning
JP4904266B2 (ja) 2004-07-26 2012-03-28 ザ リサーチ ファウンデイション オブ ステイト ユニバーシティー オブ ニューヨーク 抗−ｔｆ−抗原抗体の治療的使用
US8802820B2 (en) 2004-11-12 2014-08-12 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
JP2008521828A (ja) 2004-11-29 2008-06-26 シアトル ジェネティックス， インコーポレイテッド 操作された抗体およびイムノコンジュゲート
CN102580084B (zh) 2005-01-21 2016-11-23 健泰科生物技术公司 Her抗体的固定剂量给药
WO2006081553A2 (en) * 2005-01-28 2006-08-03 Ramot At Tel Aviv University, Ltd. ANTI-MUC1 α/ß ANTIBODIES
DE102005009099A1 (de) 2005-02-28 2006-08-31 Ktb Tumorforschungsgesellschaft Mbh Proteinbindende Camptothecin-Peptid-Derivate und diese enthaltende Arzneimittel
DE102005009084A1 (de) 2005-02-28 2006-08-31 Ktb Tumorforschungsgesellschaft Mbh Proteinbindende Anthrazyklin-Peptid-Derivate und diese enthaltende Arzneimittel
US7833979B2 (en) 2005-04-22 2010-11-16 Amgen Inc. Toxin peptide therapeutic agents
EP1888637A2 (en) 2005-05-19 2008-02-20 Amgen Inc. Compositions and methods for increasing the stability of antibodies
PT1896071E (pt) 2005-06-30 2015-07-09 Janssen Biotech Inc Métodos e composições com melhorias na atividade terapêutica
GB0519398D0 (en) 2005-09-23 2005-11-02 Antisoma Plc Biological materials and uses thereof
JP4919146B2 (ja) * 2005-09-27 2012-04-18 独立行政法人産業技術総合研究所 スイッチング素子
US20090181016A1 (en) 2005-11-30 2009-07-16 University Of Southern California FCgamma POLYMORPHISMS FOR PREDICTING DISEASE AND TREATMENT OUTCOME
AR056857A1 (es) 2005-12-30 2007-10-24 U3 Pharma Ag Anticuerpos dirigidos hacia her-3 (receptor del factor de crecimiento epidérmico humano-3) y sus usos
KR20080104143A (ko) 2006-02-14 2008-12-01 코닌클리케 필립스 일렉트로닉스 엔.브이. 광 디스크 판독용 비트 검출
US20080131428A1 (en) 2006-02-24 2008-06-05 Arius Research, Inc. Cytotoxicity mediation of cells evidencing surface expression of TROP-2
PT1999154E (pt) 2006-03-24 2013-01-24 Merck Patent Gmbh Domínios proteicos heterodiméricos modificados
WO2007124992A1 (en) 2006-04-28 2007-11-08 Unilever N.V. Method of manufacturing a cultured edible product comprising omega-3 polyunsaturated fatty acids
CN101490087B (zh) 2006-05-30 2013-11-06 健泰科生物技术公司 抗体和免疫偶联物及其用途
EP2032606B1 (en) 2006-05-30 2013-11-27 Genentech, Inc. Antibodies and immunoconjugates and uses therefor
ITMI20061473A1 (it) 2006-07-26 2008-01-27 Indena Spa Derivati della camptotecina ad attivita antitumorale
EP1911766A1 (en) 2006-10-13 2008-04-16 Glycotope Gmbh Use of human cells of myeloid leukaemia origin for expression of antibodies
EP1900750A1 (en) 2006-09-18 2008-03-19 Glycotope Gmbh Fully human high yield production system for improved antibodies
EP3539981A1 (en) 2006-09-10 2019-09-18 Glycotope GmbH Use of human cells of myeloid leukaemia origin for expression of antibodies
PL1920781T3 (pl) 2006-11-10 2015-06-30 Glycotope Gmbh Kompozycje zawierające core-1-dodatnie mikroorganizmy i ich zastosowanie w leczeniu lub profilaktyce nowotworów
CA2673410A1 (en) 2006-12-21 2008-07-03 Schering Corporation Pyrrolo [3, 2-a] pyridine derivatives for inhibiting ksp kinesin activity
KR101598229B1 (ko) 2007-02-16 2016-02-26 메리맥 파마슈티컬즈, 인크. Ｅｒｂｂ3에 대한 항체 및 이의 용도
WO2008101177A2 (en) 2007-02-16 2008-08-21 University Of Virginia Patent Foundation Ige antibodies to chimeric or humanized igg therapeutic monoclonal antibodies as a screening test for anaphylaxis
WO2008112707A1 (en) 2007-03-13 2008-09-18 Peros Systems Technologies, Inc. Immunoactive compositions for improved oral delivery of vaccines and therapeutic agents
US20100143245A1 (en) 2007-03-22 2010-06-10 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Uses of monoclonal antibody 8h9
RS53008B2 (sr) 2007-04-03 2022-12-30 Amgen Res Munich Gmbh Interspecijski specifičan cd3-epsilon vezujući domen
NZ610239A (en) 2008-04-30 2014-11-28 Immunogen Inc Cross-linkers and their uses
WO2009140242A1 (en) 2008-05-13 2009-11-19 Genentech, Inc. Analysis of antibody drug conjugates by bead-based affinity capture and mass spectrometry
JP2011520435A (ja) 2008-05-13 2011-07-21 グリコトープ ゲーエムベーハー 発酵プロセス
TW201006485A (en) 2008-06-03 2010-02-16 Abbott Lab Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
CN102264765B (zh) 2008-10-28 2016-01-20 盐野义制药株式会社 抗muc1抗体
WO2010059315A1 (en) 2008-11-18 2010-05-27 Merrimack Pharmaceuticals, Inc. Human serum albumin linkers and conjugates thereof
ES3000111T3 (en) 2009-02-13 2025-02-27 Immunomedics Inc Intermediates for preparing conjugates with an intracellularly-cleavable linkage
US9079957B2 (en) 2009-04-16 2015-07-14 The University Of Tokyo Diagnosis and treatment of cancer using anti-TMPRSS11E antibody
US20120171201A1 (en) 2009-07-22 2012-07-05 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating her2 positive cancer with her2 receptor antagonist in combination with multi-arm polymeric conjugates of 7-ethyl-10-hydroxycamptothecin
EP2281844A1 (en) * 2009-07-31 2011-02-09 Glycotope GmbH MUC 1 antibodies
JP5829520B2 (ja) 2009-08-20 2015-12-09 国立大学法人 千葉大学 コルヒチン誘導体
JP2013505944A (ja) 2009-09-24 2013-02-21 シアトル ジェネティックス， インコーポレイテッド Ｄｒ５リガンド薬物結合体
EP2896632B1 (en) 2009-11-13 2017-10-25 Daiichi Sankyo Europe GmbH Material and methods for treating or preventing HER-3 associated diseases
ES2978177T3 (es) 2009-12-02 2024-09-06 Immunomedics Inc Combinación de radio inmunoterapia y conjugados anticuerpo-fármaco para mejorar la terapia contra el cáncer
US9017669B2 (en) 2009-12-28 2015-04-28 Oncotherapy Science, Inc. Anti-CDH3 antibodies and uses thereof
EP2347769A1 (en) 2010-01-20 2011-07-27 Glycotope GmbH Cancer stem cell markers and uses thereof
MX2012013001A (es) 2010-05-13 2013-02-26 Univ Indiana Res & Tech Corp Peptidos de la superfamilia de glucagon que presentan actividad del receptor nuclear de hormonas.
EA201500220A1 (ru) 2010-05-17 2015-10-30 Ливтех, Инк. Антитело против trop-2 человека, обладающее противоопухолевой активностью in vivo
US20110300150A1 (en) 2010-05-18 2011-12-08 Scott Eliasof Compositions and methods for treatment of autoimmune and other disease
WO2011155579A1 (ja) 2010-06-10 2011-12-15 北海道公立大学法人札幌医科大学 抗Ｔｒｏｐ－２抗体
RU2012157167A (ru) 2010-07-12 2014-08-20 КовЭкс Текнолоджиз Айэлэнд Лимитед Полифункциональные антительные конъюгаты
WO2012019024A2 (en) 2010-08-04 2012-02-09 Immunogen, Inc. Her3-binding molecules and immunoconjugates thereof
WO2012018404A2 (en) 2010-08-06 2012-02-09 U3 Pharma Gmbh Use of her3 binding agents in prostate treatment
PT2603528T (pt) 2010-08-10 2016-12-01 Glycotope Gmbh Anticorpos glicosilados em fab
US9051370B2 (en) 2010-08-10 2015-06-09 Glycotope Gmbh Humanized EGFR antibodies
WO2012064733A2 (en) 2010-11-09 2012-05-18 Medimmune, Llc Antibody scaffold for homogenous conjugation
US20120121615A1 (en) 2010-11-17 2012-05-17 Flygare John A Alaninyl maytansinol antibody conjugates
US9175092B2 (en) 2011-06-28 2015-11-03 Oxford Biotherapeutics Ltd Antibodies to bone marrow stromal antigen 1
TWI495644B (zh) 2011-11-11 2015-08-11 Rinat Neuroscience Corp 營養層細胞表面抗原（Ｔｒｏｐ－２）之專一性抗體類及彼等之用途
US9427464B2 (en) 2011-11-22 2016-08-30 Chiome Bioscience Inc. Anti-human TROP-2 antibody having an antitumor activity in vivo
SG11201403085PA (en) 2011-12-14 2014-10-30 Seattle Genetics Inc Fgfr antibody drug conjugates (adcs) and the use thereof
ES2728278T3 (es) 2011-12-21 2019-10-23 Novartis Ag Composiciones que comprenden anticuerpos dirigidos al factor P y C5
US20130280282A1 (en) 2012-04-24 2013-10-24 Daiichi Sankyo Co., Ltd. Dr5 ligand drug conjugates
CN104619350A (zh) 2012-06-14 2015-05-13 Ambrx公司 结合到核受体配体多肽的抗psma抗体
ES2773710T3 (es) 2012-10-11 2020-07-14 Daiichi Sankyo Co Ltd Enlazadores para conjugados de anticuerpo - fármaco
WO2014061277A1 (ja) 2012-10-19 2014-04-24 第一三共株式会社 親水性構造を含むリンカーで結合させた抗体－薬物コンジュゲート
JP6499079B2 (ja) 2012-11-13 2019-04-10 バイオエヌテック アーゲーＢｉｏＮＴｅｃｈ ＡＧ クローディンを発現するガン疾患を処置するための剤
EP2927227A4 (en) 2013-01-03 2015-12-30 Celltrion Inc ANTIBODY CONCENTRATOR REMEDY CONJUGATE, METHOD OF MANUFACTURING THEREOF, AND ANTIBODY TOGETHER THEREWITH
CA2897505A1 (en) 2013-01-18 2014-07-24 Glycotope Gmbh Peptides for enhancing protein expression
AU2014298514A1 (en) * 2013-08-02 2016-03-10 Sanofi Use of anti-MUC1 maytansinoid immunoconjugate antibody for the treatment of solid tumors
JP2017507900A (ja) 2013-12-17 2017-03-23 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｐｄ−１軸結合アンタゴニスト及び抗ｈｅｒ２抗体を使用してｈｅｒ２陽性がんを治療する方法
AU2014371934B2 (en) 2013-12-25 2020-01-23 Daiichi Sankyo Company, Limited Anti-TROP2 antibody-drug conjugate
JP2015138634A (ja) 2014-01-22 2015-07-30 株式会社オートネットワーク技術研究所 端子金具付き電線及びその製造方法
WO2015116753A1 (en) 2014-01-29 2015-08-06 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Antibodies against the muc1-c/extracellular domain (muc1-c/ecd)
IL310627B2 (en) 2014-01-31 2026-04-01 Daiichi Sankyo Co Ltd Anti-HER2 antibody-drug conjugates, compositions containing them and uses thereof
KR102445502B1 (ko) 2014-04-10 2022-09-21 다이이찌 산쿄 가부시키가이샤 항her3 항체-약물 콘주게이트
GB201406767D0 (en) 2014-04-15 2014-05-28 Cancer Rec Tech Ltd Humanized anti-Tn-MUC1 antibodies anf their conjugates
US10239950B2 (en) 2014-04-28 2019-03-26 Medicinal Chemistry Pharmaceuticals, Co., Ltd. Anti-MUC1 antibody or antigen-binding fragment thereof and uses thereof
KR102762243B1 (ko) 2014-06-30 2025-02-05 알토 바이오사이언스 엘엘씨 Il-15-베이즈드 분자 및 이의 사용 방법
LU92659B1 (en) 2015-02-23 2016-08-24 Glycotope Gmbh Glycooptimized antibody drug conjugates
AU2016232009B2 (en) 2015-03-17 2021-07-15 Tilt Biotherapeutics Oy Oncolytic adenoviruses coding for bi-specific antibodies and methods and uses related thereto
US10524738B2 (en) 2015-05-04 2020-01-07 Cercacor Laboratories, Inc. Noninvasive sensor system with visual infographic display
CN105118845B (zh) 2015-07-23 2018-01-26 京东方科技集团股份有限公司 有机电致发光显示基板及制备方法、显示面板、显示装置
US20190343953A1 (en) 2017-01-27 2019-11-14 Glycotope Gmbh Anti-cancer treatments with an anti-muc1 antibody and an erbb inhibitor
WO2018178123A1 (en) 2017-03-29 2018-10-04 Glycotope Gmbh BISPECIFIC MUC-1 x PD-L1 ANTIBODIES
WO2018178046A1 (en) 2017-03-29 2018-10-04 Glycotope Gmbh Humanized anti-cd40 antibodies
WO2018178047A1 (en) 2017-03-29 2018-10-04 Glycotope Gmbh Multispecific antibody constructs binding to muc1 and cd3
US20200148785A1 (en) 2017-03-29 2020-05-14 Glycotope (GmbH) Pd-l1 and ta-muc1 antibodies
US10561686B2 (en) 2018-01-12 2020-02-18 Innovative Cellular Therapeutics CO., LTD. Modified cell expansion and uses thereof
CA3090407A1 (en) 2018-03-01 2019-09-06 Glycotope Gmbh Fusion protein constructs comprising an anti-muc1 antibody and il-15
SG11202010496WA (en) 2018-05-18 2020-12-30 Daiichi Sankyo Co Ltd Anti-muc1 antibody-drug conjugate

Also Published As

Publication number Publication date
PL3794041T3 (pl) 2023-08-28
ZA202006684B (en) 2021-09-29
HUE063066T2 (hu) 2024-01-28
RS65580B1 (sr) 2024-06-28
US20210187118A1 (en) 2021-06-24
JP7257422B2 (ja) 2023-04-13
PH12020551969A1 (en) 2021-09-20
MX2025000067A (es) 2025-03-07
AU2019270459B2 (en) 2025-08-28
AU2019270459C1 (en) 2026-03-05
US12291577B2 (en) 2025-05-06
US20250257149A1 (en) 2025-08-14
EP4257611A3 (en) 2024-03-06
PH12020551970A1 (en) 2021-09-13
DK3794042T3 (da) 2024-04-15
US20230372520A1 (en) 2023-11-23
SMT202300227T1 (it) 2023-09-06
EP3794041C0 (en) 2023-07-12
BR112020023346A2 (pt) 2021-02-09
US11872289B2 (en) 2024-01-16
IL278734A (en) 2020-12-31
JP7519910B2 (ja) 2024-07-22
SG11202010493XA (en) 2020-11-27
US20230139769A1 (en) 2023-05-04
CO2020013664A2 (es) 2020-12-21
CN117815404A (zh) 2024-04-05
CN112449641A (zh) 2021-03-05
ES2980468T3 (es) 2024-10-01
EP3794042A1 (en) 2021-03-24
AU2019270459A1 (en) 2020-12-03
MX2020011996A (es) 2021-01-29
KR102933368B1 (ko) 2026-03-04
AU2019270457A1 (en) 2020-12-03
PL3794042T3 (pl) 2024-06-10
CN112351999A (zh) 2021-02-09
EP4257611A2 (en) 2023-10-11
EP3794041B1 (en) 2023-07-12
PT3794042T (pt) 2024-06-14
MX2020011997A (es) 2021-03-25
KR20260036595A (ko) 2026-03-17
MX421206B (es) 2025-02-10
TW202003583A (zh) 2020-01-16
SMT202400202T1 (it) 2024-07-09
IL278734B1 (en) 2026-01-01
BR112020023373A2 (pt) 2021-02-09
EP3794042B1 (en) 2024-03-27
IL324866A (en) 2026-01-01
DK3794042T5 (da) 2024-08-19
IL278718A (en) 2021-01-31
JP2024116256A (ja) 2024-08-27
US20210221910A1 (en) 2021-07-22
JP2021524852A (ja) 2021-09-16
US20250223375A1 (en) 2025-07-10
TWI825098B (zh) 2023-12-11
EP4249002A2 (en) 2023-09-27
AU2019270457B2 (en) 2025-08-21
EP3794041A1 (en) 2021-03-24
JP7502402B2 (ja) 2024-06-18
MX2024010489A (es) 2024-09-05
FI3794042T3 (fi) 2024-05-31
EP4249002A3 (en) 2023-11-22
LT3794042T (lt) 2024-05-27
JP2023027259A (ja) 2023-03-01
WO2019219891A1 (en) 2019-11-21
ES2951674T3 (es) 2023-10-24
HUE067382T2 (hu) 2024-10-28
SG11202010496WA (en) 2020-12-30
HRP20240756T1 (hr) 2024-09-13
US12297289B2 (en) 2025-05-13
KR20210013107A (ko) 2021-02-03
KR102945875B1 (ko) 2026-03-30
AU2025271211A1 (en) 2025-12-18
CA3100608A1 (en) 2019-11-21
CO2020014435A2 (es) 2020-12-21
MY205343A (en) 2024-10-16
JP2021524740A (ja) 2021-09-16
IL278718B2 (en) 2026-03-01
SI3794042T1 (sl) 2024-07-31
MY206244A (en) 2024-12-05
IL278718B1 (en) 2025-11-01
WO2019219889A1 (en) 2019-11-21
HRP20230787T1 (hr) 2023-10-27
TWI839357B (zh) 2024-04-21
TW202003579A (zh) 2020-01-16
CA3100745A1 (en) 2019-11-21
KR20210010565A (ko) 2021-01-27
US12479926B2 (en) 2025-11-25
JP7823114B2 (ja) 2026-03-03
TW202402806A (zh) 2024-01-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20250257149A1 (en) Anti-muc1 antibody
RU2792347C2 (ru) Антитело против muc1
RU2804703C2 (ru) Конъюгат антитело против muc1-лекарственное средство
HK40041660A (en) Anti-muc1 antibody
HK40038925B (en) Anti-muc1- exatecan antibody-drug conjugate
HK40038925A (en) Anti-muc1- exatecan antibody-drug conjugate