RS64909B1 - Anti-ctla-4 antitela i postupci za njihovu upotrebu - Google Patents

Anti-ctla-4 antitela i postupci za njihovu upotrebu

Info

Publication number
RS64909B1
RS64909B1 RS20231156A RSP20231156A RS64909B1 RS 64909 B1 RS64909 B1 RS 64909B1 RS 20231156 A RS20231156 A RS 20231156A RS P20231156 A RSP20231156 A RS P20231156A RS 64909 B1 RS64909 B1 RS 64909B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
antibody
ctla
amino acid
acid sequence
cancer
Prior art date
Application number
RS20231156A
Other languages
English (en)
Inventor
Dijk Marc Van
Cornelia Anne Mundt
Gerd Ritter
David Schaer
Jedd David Wolchok
Taha Merghoub
Nicholas Stuart Wilson
David Adam Savitsky
Mark Arthur Findeis
Dennis John Underwood
Jean-Marie Cuillerot
Igor Proscurshim
Olga Shebanova
Original Assignee
Agenus Inc
Ludwig Inst For Cancer Res Ltd
Memorial Sloan Kettering Cancer Center
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Agenus Inc, Ludwig Inst For Cancer Res Ltd, Memorial Sloan Kettering Cancer Center filed Critical Agenus Inc
Publication of RS64909B1 publication Critical patent/RS64909B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2818—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A61K2039/507—Comprising a combination of two or more separate antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
    • A61K2039/572—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2 cytotoxic response
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/51—Complete heavy chain or Fd fragment, i.e. VH + CH1
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/515—Complete light chain, i.e. VL + CL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Description

Opis
1. OBLAST PRONALASKA
[0001] Predmetno otkriće se odnosi na antitela koja se specifično vezuju za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4) i antitela za njihovu upotrebu.
2. OSNOV PRONALASKA
[0002] T-limfociti igraju ključnu ulogu u adaptivnom imunološkom odgovoru na antigen. Za potpunu aktivaciju naivnih T-ćelija potrebna su najmanje dva signala (Bretscher 1999, Proc Natl Acad Sci USA 96: 185-90). Prvi signal specifičan za antigen obezbeđuje interakcija T-ćelijskog receptora (TCR) sa kompleksom MHC/peptid na antigen-prezentujućoj ćeliji (APC). Drugi, kostimulatorni signal obezbeđuju interakcije između receptora na T-ćeliji i njihovih liganada na antigen-prezentujućoj ćeliji (APC). Regrutovanje i TCR/MHC i kostimulatornih interakcija dovodi do aktivacije T-ćelija preko brojnih intracelularnih puteva, uključujući kalcijumkalcineurin i puteve protein kinaze aktivirane RAS mitogenom, uz naknadnu aktivaciju transkripcionih faktora za brojna efektorska jedinjenja, uključujući citokine kao što je IL-2. Ovi događaji dovode do proliferacije T-ćelija, stvaranja skupa CD4+ pomoćnih T-ćelija (TH) i ekspanzije aktiviranih CD8+ citotoksičnih T-ćelija. Ne samo da je kostimulacija kritična za punu aktivaciju T-ćelija, već njeno odsustvo tokom vezivanja TCR/MHC rezultuje anergijom i/ili apoptozom.
[0003] Nekoliko pozitivnih i negativnih kostimulatornih puteva je uključeno u regulaciju T-ćelija; međutim, najvažniji su oni povezani sa CD28 na T-ćelijama i B7-1 (CD80) i B7-2 (CD86) na APC ćelijama. CD28 podstiče diferencijaciju T-ćelija u ćelije sa TH1 fenotipom i povećava proizvodnju antitela od strane B ćelija i aktivaciju T-ćelija. B7-1 i B7-2, eksprimirani na APC ćelijama, kao što su dendritske ćelije (DC) i B ćelije, imaju preklapajuće, ali različite funkcije. B7-2 se konstitutivno eksprimira i brzo se ushodno reguliše na APC ćelijama istovremeno sa regrutovanjem TCR/MHC (signal 1). Ekspresija B7-1 je veoma niska na ćeliji u mirovanju, ali se obično indukuje nakon produžene stimulacije T-ćelije. Ove razlike sugerišu da, iako B7-2 može da bude važan za pokretanje aktivacije T-ćelija, B7-1 može da ima značajnu ulogu u produžavanju imunološkog odgovora.
[0004] Nakon aktivacije T-ćelija, negativni regulatorni receptor citotoksični T-limfocitni antigen 4 (CTLA-4) se ushodno reguliše na T-ćelijama (Alegre et al., 2001, Nat Rev Immunol 1:220-8). CTLA-4 ima homolognu strukturu sa CD28, ali se čvršće vezuje za oba liganda, B7-1 i B7-2. CTLA-4 inhibira imunološki odgovor na nekoliko načina: kompetira sa CD28 za B7 ligande i tako blokira kostimulaciju; obezbeđuje negativan signal za inhibiciju aktivacije T-ćelija; i može da preuzme CD80 i CD86 iz naspramnih ćelija trans-endocitozom, što narušava kostimulaciju putem CD28 (Krummel and Allison, 1995, J Exp Med 182:459-465; Walunas et al., 1994, Immunity 1:405-413; Qureshi et al., 2011, Science 332:600-603). WO 2009/100140 A1 otkriva anti-CTLA-4 monoklonska antitela sa smanjenim blokiranjem vezivanja CTLA-4 za B7. WO 2012/120125 A1 otkriva humanizovana anti-CTLA-4 antitela. EP 1262193 A1 otkriva upotrebu humanih anti-CTLA-4 antitela za lečenje kancera. WO 2016/168809 A1 otkriva kombinacije antitela usmerenih na LGALS3BP i ciljne kontrolne tačke imuniteta kao što su PDL1, PD1 ili CTLA4. WO 2016/179576 A1 otkriva upotrebu antitela ili malih molekula koji vezuju i ciljno deluju i na ABCB5 i na molekul imunološke kontrolne tačke za lečenje kancera. Elise Drouin ET AL: „AGEN1884 and AGEN2041:Two functionally distinct anti-CTLA-4 antagonist antibodies“, 1 August 2016, koji može da se preuzme sa interneta sa URL:http://agenusbio.com/wpcontent/uploads/2016/08/CTLA-4 AACR 04082016 FINAL_POSTER.pdf, otkriva antitelo sa oznakom „AGEN1884“ kao anti CTLA-4 antitelo i njegovu funkciju u lečenju tumora.
[0005] S obzirom na kritičnu ulogu kostimulatornog puta B7 u pokretanju i održavanju imunološkog odgovora, terapeutski agensi dizajnirani da antagonizuju ovaj put su obećavajući za lečenje autoimunih bolesti i poremećaja.
3. REZIME
[0006] Pronalazak je definisan priloženim patentnim zahtevima. Bilo koji deo opisa koji ne spada u opseg priloženih patentnih zahteva je samo u ilustrativne svrhe. Konkretno, svaka tema označena kao „otkriće“; koja ne spada u obim priloženih patentnih zahteva ne čini deo pronalaska.
[0007] Svako pozivanje u opisu na postupke za lečenje odnosi se na antitela ili farmaceutske kompozicije ovog pronalaska za upotrebu u postupku za lečenje humanog (ili životinjskog) tela terapijom.
[0008] Ovo otkriće obezbeđuje antitela koja se specifično vezuju za humani CTLA-4 i antagonizuju funkciju CTLA-4, npr. CTLA-4-posredovano suzbijanje imuniteta. Takođe su obezbeđene farmaceutske kompozicije koje sadrže ova antitela, nukleinske kiseline koje kodiraju ova antitela, ekspresioni vektori i ćelije-domaćini za proizvodnju ovih antitela, kao i postupci za lečenje subjekta pomoću ovih antitela. Ovde opisana antitela su posebno korisna za povećanje aktivacije T-ćelija kao odgovor na antigen (npr. tumorski antigen ili antigen infektivne bolesti) i/ili smanjenje Treg-posredovanog suzbijanja imunološkog odgovora, pa otuda i za lečenje kancera kod subjekta ili za lečenje ili sprečavanje infektivne bolesti kod subjekta.
[0009] U skladu sa tim, ovo otkriće obezbeđuje izolovano antitelo koje sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži regione koji određuju komplementarnost CDRH1, CDRH2 i CDRH3 i varijabilni region lakog lanca koji sadrži regione koji određuju komplementarnost CDRL1, CDRL2 i CDRL3, gde:
(a) CDRH1 sadrži aminokiselinsku sekvencu SYSMN (SEQ ID NO: 10);
(b) CDRH2 sadrži aminokiselinsku sekvencu SISSSSSYIYYAXSVKG (SEQ ID NO: 18), gde X predstavlja E ili D;
(c) CDRH3 sadrži aminokiselinsku sekvencu VGLXGPFDI (SEQ ID NO: 19), gde X predstavlja F ili M;
(d) CDRL1 sadrži aminokiselinsku sekvencu RASQSVSRYLG (SEQ ID NO: 15);
(e) CDRL2 sadrži aminokiselinsku sekvencu GASTRAT (SEQ ID NO: 16); i
(f) CDRL3 sadrži aminokiselinsku sekvencu QQYGSSPWT (SEQ ID NO: 17),
i gde CDRH1, CDRH2 i CDRH3 sekvence antitela nisu SEQ ID NO: 10, 11, odnosno 13.
[0010] U određenom otkriću, CDRH2 sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 11. U određenom otkriću, CDRH2 sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 12. U određenom otkriću, CDRH3 sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 13. U određenom otkriću, CDRH3 sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 14. U određenom otkriću, CDRH1, CDRH2 i CDRH3 sadrže CDRH1, CDRH2 i CDRH3 aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NO: 10, 11 i 14; 10, 12 i 13; odnosno 10, 12 i 14. U određenom otkriću, CDRH1, CDRH2 i CDRH3 sadrže CDRH1, CDRH2 i CDRH3 aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NO: 10, 12, odnosno 14. U određenom otkriću, CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 i CDRL3 sadrže aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NO: 10, 11, 14, 15, 16 i 17; 10, 12, 13, 15, 16 i 17; odnosno 10, 12, 14, 15, 16 i 17. U određenom otkriću, CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 i CDRL3 sadrže aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NO: 10, 12, 14, 15, 16, odnosno 17.
[0011] Ovo otkriće obezbeđuje izolovano antitelo koje se specifično vezuje za humani CTLA-4, koje sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži regione koji određuju komplementarnost CDRH1, CDRH2 i CDRH3 i varijabilni region lakog lanca koji sadrži regione koji određuju komplementarnost CDRL1, CDRL2 i CDRL3, gde:
(a) CDRH1 sadrži aminokiselinsku sekvencu SYSMN (SEQ ID NO: 10);
(b) CDRH2 sadrži aminokiselinsku sekvencu SISSSSSYIYYAXSVKG (SEQ ID NO: 18), gde X predstavlja E ili D;
(c) CDRH3 sadrži aminokiselinsku sekvencu VGLXGPFDI(SEQ ID NO: 19), gde X predstavlja F ili M;
(d) CDRL1 sadrži aminokiselinsku sekvencu RASQSVSRYLG (SEQ ID NO: 15);
(e) CDRL2 sadrži aminokiselinsku sekvencu GASTRAT (SEQ ID NO: 16); i
(f) CDRL3 sadrži aminokiselinsku sekvencu QQYGSSPWT (SEQ ID NO: 17),
i gde CDRH1, CDRH2 i CDRH3 sekvence antitela nisu SEQ ID NO: 10, 11, odnosno 13.
[0012] U određenom otkriću, CDRH2 sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 11. U određenom otkriću, CDRH2 sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 12. U određenom otkriću, CDRH3 sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 13. U određenom otkriću, CDRH3 sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 14. U određenom otkriću, CDRH1, CDRH2 i CDRH3 sadrže CDRH1, CDRH2 i CDRH3 aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NO: 10, 11 i 14; 10, 12 i 13; odnosno 10, 12 i 14. U određenom otkriću, CDRH1, CDRH2 i CDRH3 sadrže CDRH1, CDRH2 i CDRH3 aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NO: 10, 12, odnosno 14. U određenom otkriću, CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 i CDRL3 sadrže aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NO: 10, 11, 14, 15, 16 i 17; 10, 12, 13, 15, 16 i 17; odnosno 10, 12, 14, 15, 16 i 17. U određenom otkriću, CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 i CDRL3 sadrže aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NO: 10, 12, 14, 15, 16, odnosno 17.
[0013] Predmetno otkriće obezbeđuje izolovano antitelo koje se specifično vezuje za humani CTLA-4, koje sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži regione koji određuju komplementarnost CDRH1, CDRH2 i CDRH3, i varijabilni region lakog lanca koji sadrži regione koji određuju komplementarnost CDRL1, CDRL2 i CDRL3, gde CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 i CDRL3 sadrže aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NO: 10, 12, 14, 15, 16, odnosno 17.
[0014] Predmetni pronalazak se odnosi na izolovano antitelo koje se specifično vezuje za humani CTLA-4, gde antitelo sadrži varijabilni region teškog lanca u kome se aminokiselinska sekvenca varijabilnog regiona teškog lanca sastoji od aminokiseline sekvence SEQ ID NO: 8 i varijabilnog regiona lakog lanca u kome se aminokiselinska sekvenca varijabilnog regiona lakog lanca sastoji od aminokiselinske sekvence SEQ ID NO: 9; i
gde antitelo sadrži konstantni region teškog lanca humanog IgG1, pri čemu aminokiselinska sekvenca konstantnog regiona teškog lanca humanog IgG1sadrži mutacije S239D/A330L/I332E, numerisane po sistemu numerisanja EU.
[0015] U određenom otkriću, antitelo sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 20. U određenom otkriću, antitelo sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu koja je najmanje 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99%, ili 100% identična aminokiselinskoj sekvenci izabranoj iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 2 i 4-8. U određenom otkriću, antitelo sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu koja je najmanje 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99%, ili 100% identična aminokiselinskoj sekvenci izabranoj iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 3. U određenom otkriću, varijabilni region teškog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 2 i 4-8. Varijabilni region teškog lanca antitela pronalaska sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 8. U određenom otkriću, varijabilni region teškog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 3. U određenom otkriću, antitelo sadrži teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 23. U određenom otkriću, antitelo sadrži teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 24. U određenim primerima izvođenja, antitelo sadrži teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 25. U određenom otkriću, antitelo sadrži teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 26. Antitelo može da sadrži varijabilni region teškog lanca koja ima aminokiselinsku sekvencu koja potiče iz sekvence humane klicine linije IGHV3-21 (npr. IGHV3-21<∗>01, koja, npr. ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 21).
[0016] U određenom otkriću, antitelo sadrži varijabilni region lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu koja je najmanje 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99%, ili 100% identična aminokiselinskoj sekvenci SEQ ID NO: 9. Antitelo pronalaska sadrži varijabilni region lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 9. U određenim primerima izvođenja, antitelo sadrži laki lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 27. Antitelo može da sadrži varijabilni region lakog lanca koji ima aminokiselinsku sekvencu koja potiče iz sekvence humane klicine linije IGKV3-20 (npr. IGKV3-20∗01, koja, npr. ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 22).
[0017] Obelodanjeno je izolovano antitelo koje se specifično vezuje za humani CTLA-4, gde antitelo sadrži varijabilni region teškog lanca koji ima aminokiselinsku sekvencu koja potiče iz sekvence humane klicine linije IGHV3-21 (npr. IGHV3-21<∗>01, koja, npr. ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 21), pri čemu varijabilni region teškog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu prikazanu u SEQ ID NO: 14. Otkriveno je da antitelo može da sadrži varijabilni region lakog lanca koja ima aminokiselinsku sekvencu koja potiče iz sekvence humane klicine linije IGKV3-20 (npr. IGKV3-20∗01, koja, npr. ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 22).
[0018] Predmetno otkriće obezbeđuje izolovano antitelo koje se specifično vezuje za humani CTLA-4, koje sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 2-8. Antitelo pronalaska sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 8. U određenom otkriću, antitelo sadrži teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu izabrane iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 23-26. U određenom otkriću, antitelo sadrži teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 23. U određenom otkriću, antitelo sadrži teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 24. U određenom otkriću, antitelo sadrži teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 25. U određenom otkriću, antitelo sadrži teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 26.
[0019] Obelodanjeno je izolovano antitelo koje se specifično vezuje za humani CTLA-4, koje sadrži varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanaca, gde varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanaca sadrže aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NO: 2 i 9; 3 i 9; 4 i 9; 5 i 9; 6 i 9; 7 i 9; odnosno 8 i 9. Predmetni pronalazak se odnosi na izolovano antitelo koje se specifično vezuje za humani CTLA-4, gde antitelo sadrži varijabilni region teškog lanca u kome se aminokiselinska sekvenca varijabilnog regiona teškog lanca sastoji od aminokiseline sekvence SEQ ID NO: 8 i varijabilni region lakog lanca u kome se aminokiselinska sekvenca varijabilnog regiona lakog lanca sastoji od aminokiselinske sekvence SEQ ID NO: 9; i gde antitelo sadrži konstantni region teškog lanca humanog IgG1, pri čemu aminokiselinska sekvenca konstantnog regiona teškog lanca humanog IgG1sadrži mutacije S239D/A330L/I332E, numerisane po sistemu numerisanja EU.
[0020] Antitelo sadrži varijabilni region teškog lanca koji se sastoji od aminokiselinske sekvence SEQ ID NO: 8 i varijabilni region lakog lanca koji se sastoji od aminokiselinske sekvence SEQ ID NO: 9. U određenom otkriću, antitelo sadrži teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 23; i laki lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 27. U određenom otkriću, antitelo sadrži teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 24; i laki lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 27. U određenim primerima izvođenja, antitelo sadrži teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 25; i laki lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 27. U određenom otkriću, antitelo sadrži teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 26; i laki lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 27.
[0021] Otkriveno je izolovano antitelo koje se specifično vezuje za humani CTLA-4, koje sadrži varijabilni region teškog lanca koji ima aminokiselinsku sekvencu koja potiče iz sekvence humane klicine linije IGHV3-21*01 (npr. IGHV3-21*01, npr. ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 21); i varijabilni region lakog lanca koji ima aminokiselinsku sekvencu koja potiče iz sekvence humane klicine linije IGKV3-20*01 (npr. IGKV3-20*01, npr. ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 22).
[0022] U određenom otkriću, antitelo sadrži konstantni region teškog lanca izabran iz grupe koja se sastoji od humanog IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1i IgA2. Antitelo pronalaska sadrži konstantni region teškog lanca humanog IgG1, u kome aminokiselinska sekvenca konstantnog regiona teškog lanca humanog IgG1sadrži mutacije S239D/A330L/I332E, numerisane po sistemu numerisanja EU. U određenim primerima izvođenja, antitelo sadrži konstantni region lakog lanca izabran iz grupe koja se sastoji od humanog Igκ i Igλ.
[0023] Antitelo sadrži konstantni region teškog lanca IgG1. Otkriveno je da antitelo sadrži konstantni region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 28. Otkriveno je da antitelo sadrži konstantni region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 29. Aminokiselinska sekvenca konstantnog regiona teškog lanca IgG1sadrži mutacije S239D/A330L/I332E, numerisane prema sistemu numerisanja EU. U određenim primerima izvođenja, antitelo sadrži konstantni region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 30. U određenom otkriću, aminokiselinska sekvenca konstantnog regiona teškog lanca IgG1sadrži mutacije L235V/F243L/R292P/Y300L/P396L, numerisane po sistemu numerisanja EU. U određenom otkriću, antitelo sadrži konstantni region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 31. Konstantni region teškog lanca IgG1može da bude afukozilisani IgG1.
[0024] Antitelo može da sadrži konstantni region teškog lanca humanog IgG koji je varijanta konstantnog regiona teškog lanca humanog IgG divljeg tipa, pri čemu se varijanta konstantnog regiona teškog lanca humanog IgG vezuje za FcγRIIIA sa većim afinitetom nego što se konstantni region teškog lanca humanog IgG divljeg tipa vezuje za FcγRIIIA. Varijanta konstantnog regiona teškog lanca humanog IgG može da bude varijanta konstantnog regiona teškog lanca humanog IgG1.
[0025] U određenim primerima izvođenja, antitelo sadrži konstantni region lakog lanca izabran iz grupe koja se sastoji od humanog Igκ i Igλ. Antitelo može da sadrži konstantni region lakog lanca Igκ. Antitelo može da sadrži konstantni region lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 32.
[0026] Obelodanjeno je izolovano antitelo koje se ukršta za vezivanje za humani CTLA-4 sa antitelom opisanim ovde. Otkriveno je izolovano antitelo koje unakrsno kompetira za vezivanje za humani CTLA-4 sa antitelom koje sadrži aminokiselinske sekvence varijabilnog regiona teškog i lakog lanca prikazane u SEQ ID NO: 8, odnosno 9.
[0027] Obelodanjeno je izolovano antitelo koje se vezuje za isti epitop na humanom CTLA-4 kao ovde opisano antitelo. Otkriveno je izolovano antitelo koje se vezuje za isti epitop na humanom CTLA-4 kao antitelo koje sadrži aminokiselinske sekvence varijabilnog regiona teškog i lakog lanca prikazane u SEQ ID NO: 8, odnosno 9.
[0028] Obelodanjeno je izolovano antitelo koje se vezuje, npr. specifično vezuje, za epitop humanog CTLA-4. U određenom otkriću, antitelo se vezuje za epitop koji se nalazi u regionu humanog CTLA-4 koji se sastoji od aminokiselinske sekvence izabrane iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 34-39. U određenom otkriću, antitelo se vezuje za epitop koji se nalazi u regionu humanog CTLA-4 koji se sastoji od aminokiselinske sekvence SEQ ID NO: 37. U određenom otkriću, antitelo se vezuje za epitop koji se nalazi u regionu humanog CTLA-4 koji se sastoji od aminokiselinske sekvence SEQ ID NO: 36. U određenom otkriću, antitelo se vezuje za epitop koji se nalazi u regionu humanog CTLA-4 koji se sastoji od aminokiselinske sekvence SEQ ID NO: 35. U određenom otkriću, antitelo se vezuje za epitop koji se nalazi u regionu humanog CTLA-4 koji se sastoji od aminokiselinske sekvence SEQ ID NO: 34. U određenom otkriću, antitelo se vezuje za epitop koji se nalazi u regionu humanog CTLA-4 koji se sastoji od aminokiselinske sekvence SEQ ID NO: 38. U određenom otkriću, antitelo se vezuje za epitop koji se nalazi u regionu humanog CTLA-4 koji se sastoji od aminokiselinske sekvence SEQ ID NO: 39.
[0029] Obelodanjeno je antitelo ili izolovano antitelo koje se specifično vezuje za isti epitop humanog CTLA-4 kao i svako antitelo sadašnjeg pronalaska. U određenom otkriću, antitelo se vezuje za epitop koji se nalazi u regionu humanog CTLA-4 koji se sastoji od aminokiselinske sekvence izabrane iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 34-39. U određenom otkriću, antitelo se vezuje za epitop koji se nalazi u regionu humanog CTLA-4 koji se sastoji od aminokiselinske sekvence SEQ ID NO: 37. U određenom otkriću, antitelo se vezuje za epitop koji se nalazi u regionu humanog CTLA-4 koji se sastoji od aminokiselinske sekvence SEQ ID NO: 36. U određenom otkriću, antitelo se vezuje za epitop koji se nalazi u regionu humanog CTLA-4 koji se sastoji od aminokiselinske sekvence SEQ ID NO: 35. U određenom otkriću, antitelo se vezuje za epitop koji se nalazi u regionu humanog CTLA-4 koji se sastoji od aminokiselinske sekvence SEQ ID NO: 34. U određenom otkriću, antitelo se vezuje za epitop koji se nalazi u regionu humanog CTLA-4 koji se sastoji od aminokiselinske sekvence SEQ ID NO: 38. U određenom otkriću, antitelo se vezuje za epitop koji se nalazi u regionu humanog CTLA-4 koji se sastoji od aminokiselinske sekvence SEQ ID NO: 39.
[0030] Obelodanjeno je antitelo koje, kada je vezano za humani protein CTLA-4 ili njegov fragment, koje npr. sadrži aminokiselinsku sekvencu ostataka 37-162 iz SEQ ID NO: 33, smanjuje razmenu vodonika/deuterijuma u regionu koji se sastoji od aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NO: 34 u odnosu na razmenu vodonika/deuterijuma u regionu koji se sastoji od aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NO: 34 u odsustvu antitela, određeno testom za vodonik/deuterijum. U još jednom aspektu, predmetno otkriće obezbeđuje antitelo koje, kada je vezano za humani protein CTLA-4 ili njegov fragment, koje npr. sadrži aminokiselinsku sekvencu ostataka 37-162 iz SEQ ID NO: 33, smanjuje razmenu vodonika/deuterijuma u regionu koji se sastoji od aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NO: 35 u odnosu na razmenu vodonika/deuterijuma u regionu koji se sastoji od aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NO: 35 u odsustvu antitela, određeno testom za vodonik/deuterijum. U još jednom aspektu, predmetno otkriće obezbeđuje antitelo koje, kada je vezano za humani protein CTLA-4 ili njegov fragment, koje npr. sadrži aminokiselinsku sekvencu ostataka 37-162 iz SEQ ID NO: 33, smanjuje razmenu vodonika/deuterijuma u regionu koji se sastoji od aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NO: 36 u odnosu na razmenu vodonika/deuterijuma u regionu koji se sastoji od aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NO: 36 u odsustvu antitela, određeno testom za vodonik/deuterijum. U još jednom aspektu, predmetno otkriće obezbeđuje antitelo koje, kada je vezano za humani protein CTLA-4 ili njegov fragment, koje npr. sadrži aminokiselinsku sekvencu ostataka 37-162 iz SEQ ID NO: 33, smanjuje razmenu vodonika/deuterijuma u regionu koji se sastoji od aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NO: 37 u odnosu na razmenu vodonika/deuterijuma u regionu koji se sastoji od aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NO: 37 u odsustvu antitela, određeno testom za vodonik/deuterijum. U još jednom aspektu, predmetno otkriće obezbeđuje antitelo koje, kada je vezano za humani protein CTLA-4 ili njegov fragment, koje npr. sadrži aminokiselinsku sekvencu ostataka 37-162 iz SEQ ID NO: 33, smanjuje razmenu vodonika/deuterijuma u regionu koji se sastoji od aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NO: 38 u odnosu na razmenu vodonika/deuterijuma u regionu koji se sastoji od aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NO: 38 u odsustvu antitela, određeno testom za vodonik/deuterijum. U još jednom aspektu, predmetno otkriće obezbeđuje antitelo koje, kada je vezano za humani protein CTLA-4 ili njegov fragment, koje npr. sadrži aminokiselinsku sekvencu ostataka 37-162 iz SEQ ID NO: 33, smanjuje razmenu vodonika/deuterijuma u regionu koji se sastoji od aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NO: 39 u odnosu na razmenu vodonika/deuterijuma u regionu koji se sastoji od aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NO: 39 u odsustvu antitela, određeno testom za vodonik/deuterijum.
[0031] U drugom aspektu, predmetno otkriće obezbeđuje antitelo ili izolovano antitelo koja se specifično vezuje za isti epitop humanog CTLA-4 kao i bilo koje antitelo sadašnjeg pronalaska. U određenom otkriću, antitelo, kada je vezano za humani protein CTLA-4 ili njegov fragment, koje npr. sadrži aminokiselinsku sekvencu ostataka 37-162 iz SEQ ID NO: 33, smanjuje razmenu vodonika/deuterijuma u regionu koji se sastoji od aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NO: 34 u odnosu na razmenu vodonika/deuterijuma u regionu koji se sastoji od aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NO: 34 u odsustvu antitela, određeno testom za vodonik/deuterijum. U određenom otkriću, antitelo, kada je vezano za humani protein CTLA-4 ili njegov fragment, koje npr. sadrži aminokiselinsku sekvencu ostataka 37-162 iz SEQ ID NO: 33, smanjuje razmenu vodonika/deuterijuma u regionu koji se sastoji od aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NO: 35 u odnosu na razmenu vodonika/deuterijuma u regionu koji se sastoji od aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NO: 35 u odsustvu antitela, određeno testom za vodonik/deuterijum. U određenom otkriću, antitelo, kada je vezano za humani protein CTLA-4 ili njegov fragment, koje npr. sadrži aminokiselinsku sekvencu ostataka 37-162 iz SEQ ID NO: 33, smanjuje razmenu vodonika/deuterijuma u regionu koji se sastoji od aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NO: 36 u odnosu na razmenu vodonika/deuterijuma u regionu koji se sastoji od aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NO: 36 u odsustvu antitela, određeno testom za vodonik/deuterijum. U određenom otkriću, antitelo, kada je vezano za humani protein CTLA-4 ili njegov fragment, koje npr. sadrži aminokiselinsku sekvencu ostataka 37-162 iz SEQ ID NO: 33, smanjuje razmenu vodonika/deuterijuma u regionu koji se sastoji od aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NO: 37 u odnosu na razmenu vodonika/deuterijuma u regionu koji se sastoji od aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NO: 37 u odsustvu antitela, određeno testom za vodonik/deuterijum. U određenom otkriću, antitelo, kada je vezano za humani protein CTLA-4 ili njegov fragment, koje npr. sadrži aminokiselinsku sekvencu ostataka 37-162 iz SEQ ID NO: 33, smanjuje razmenu vodonika/deuterijuma u regionu koji se sastoji od aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NO: 38 u odnosu na razmenu vodonika/deuterijuma u regionu koji se sastoji od aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NO: 38 u odsustvu antitela, određeno testom za vodonik/deuterijum. U određenom otkriću, antitelo, kada je vezano za humani protein CTLA-4 ili njegov fragment, koje npr. sadrži aminokiselinsku sekvencu ostataka 37-162 iz SEQ ID NO: 33, smanjuje razmenu vodonika/deuterijuma u regionu koji se sastoji od aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NO: 39 u odnosu na razmenu vodonika/deuterijuma u regionu koji se sastoji od aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NO: 39 u odsustvu antitela, određeno testom za vodonik/deuterijum.
[0032] U određenim primerima izvođenja, antitelo je humano antitelo. U određenom primeru izvođenja, antitelo je bispecifično antitelo.
[0033] Antitelo može da bude antagonističko za humani CTLA-4. Antitelo može da deaktivira, smanji ili inhibira aktivnost humanog CTLA-4. Antitelo može da inhibira vezivanje humanog CTLA-4 za humani CD80 ili humani CD86. Antitelo može da indukuje proizvodnju IL-2 u perifernim mononuklearnim ćelijama krvi (PBMC) stimulisanim stafilokoknim enterotoksinom A (SEA).
[0034] Antitelo može da bude konjugovano sa citotoksičnim agensom, citostatskim agensom, toksinom, radionuklidom ili detektabilnom oznakom.
[0035] N-terminalni aminokiselinski ostatak varijabilnog regiona teškog lanca i/ili varijabilnog regiona lakog lanca antitela je možda konvertovan u piroglutamat.
[0036] Otkriveno je antitelo sadašnjeg pronalaska za upotrebu kao lek.
[0037] Obelodanjena je upotreba antitela sadašnjeg pronalaska za pripremu farmaceutskih kompozicija ili lekova za imunoterapiju. Imunoterapija može da bude za povećanje aktivacije T-ćelija kao odgovor na antigen u subjektu, opciono za lečenje kancera ili lečenje ili prevenciju infektivnih bolesti.
[0038] Antitelo sadašnjeg pronalaska može da bude za upotrebu kao dijagnostičko sredstvo.
[0039] Antitelo sadašnjeg pronalaska može da se koristi za in vitro detekciju humanog CTLA-4 u biološkom uzorku.
[0040] U drugom aspektu, predmetno otkriće obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži anti-CTLA-4 antitelo pronalaska i farmaceutski prihvatljiv nosač ili ekscipijens.
[0041] U drugom aspektu, predmetno otkriće obezbeđuje izolovani polinukleotid koji kodira teški i laki lanac antitela pronalaska. U sledećem aspektu, predmetno otkriće obezbeđuje vektor koji sadrži polinukleotid. U sledećem aspektu, predmetno otkriće obezbeđuje rekombinantnu ćelijudomaćina koja sadrži polinukleotid ili vektor. U sledećem aspektu, predmetno otkriće obezbeđuje postupak za proizvodnju antitela koje se vezuje za humani CTLA-4, gde postupak obuhvata kultivisanje ćelije-domaćina tako da se polinukleotid eksprimira i da se proizvede antitelo.
[0042] Obelodanjen je postupak za povećanje aktivacije T-ćelija kao odgovor na antigen u subjektu, gde postupak obuhvata davanje subjektu efikasne količine anti-CTLA-4 antitela ili farmaceutske kompozicije, kao što je ovde opisano. Otkriven je postupak za lečenje kancera kod subjekta, gde postupak obuhvata davanje subjektu efikasne količine anti-CTLA-4 antitela ili farmaceutske kompozicije, kao što je ovde opisano. Predmetni pronalazak se dalje odnosi na izolovano antitelo pronalaska, odnosno farmaceutsku kompoziciju pronalaska, za upotrebu u postupku za lečenje kancera kod subjekta. U određenim primerima izvođenja subjekat ima kancer. U određenim primerima izvođenja, subjekat ima metastatski ili lokalno uznapredovali tumor (npr. čvrsti tumor). U određenim primerima izvođenja, kancer se leči u skladu sa postupkom koji je ovde opisan kao prva terapija kancera nakon dijagnoze metastatskog ili lokalno uznapredovalog tumora (npr. u roku od 1, 2, 3, 4, 5, ili 6 dana; 1, 2, 3, 4, 6, 8, ili 12 nedelja; ili, 1, 2, 3, 4, 6, 8, ili 12 meseci nakon dijagnoze). U određenim primerima izvođenja, kancer se leči u skladu sa postupkom koji je ovde opisan kao prva terapija kancera nakon dijagnoze progresije tumora (npr. u roku od 1, 2, 3, 4, 5, ili 6 dana; 1, 2, 3, 4, 6, 8 ili 12 nedelja; ili, 1, 2, 3, 4, 6, 8, ili 12 meseci nakon dijagnoze progresije tumora) do koje je došlo uprkos prethodnom lečenju tumora drugom terapijom za kancer, gde je opciono ovde opisani postupak obezbeđen kao druga terapija kancera koja se primenjuje. U određenim primerima izvođenja, kancer se leči u skladu sa postupkom koji je ovde opisan kao prva terapija kancera nakon dijagnoze toksičnosti drugačije terapije za kancer (npr. u roku od 1, 2, 3, 4, 5, ili 6 dana; 1, 2, 3, 4, 6, 8 ili 12 nedelja; ili, 1, 2, 3, 4, 6, 8, ili 12 meseci nakon dijagnoze toksičnosti drugačije terapije za kancer), gde je opciono ovde opisani postupak obezbeđen kao druga terapija kancera koja se primenjuje. U određenim primerima izvođenja, kancer koji se leči u skladu sa ovde opisanim postupcima je metastatski ili lokalno uznapredovali kancer (npr. čvrsti tumor) za koji nije dostupna standardna terapija. U ostalim primerima izvođenja, kancer koji se leči u skladu sa ovde opisanim postupcima je metastatski ili lokalno uznapredovali kancer (npr. čvrsti tumor) za koji je standardna terapija bila neuspela (tj. kancer je napredovao nakon standardne terapije). U određenim primerima izvođenja, terapija ne uspeva ako je kancer refraktoran na terapiju. U određenim primerima izvođenja, terapija ne uspeva ako dolazi do recidiva kancera nakon odgovora, potpunog ili delimičnog, na terapiju. U određenim primerima izvođenja, metastatski ili lokalno uznapredovali kancer (npr. čvrsti tumor) potvrđen je histološki ili citološki.
[0043] U određenim primerima izvođenja, kancer eksprimira PD-L1. U određenim primerima izvođenja, procenat tumorskih ćelija u uzorku kancera koje ispoljavaju detektabilnu membransku ekspresiju (npr. delimičnu ili potpunu membransku ekspresiju) PD-L1 je najmanje 1% (npr. najmanje 2%, 3%, 4%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 60%, 70%, 80%, ili 90%). U određenim primerima izvođenja, procenat tumorskih ćelija u uzorku kancera koje ispoljavaju detektabilnu membransku ekspresiju (npr. delimičnu ili potpunu membransku ekspresiju) PD-L1 je najmanje 1%. U određenim primerima izvođenja, procenat tumorskih ćelija u uzorku kancera koje ispoljavaju detektabilnu membransku ekspresiju (npr. delimičnu ili potpunu membransku ekspresiju) PD-L1 je najmanje 5%. U određenim primerima izvođenja, procenat tumorskih ćelija u uzorku kancera koje ispoljavaju detektabilnu membransku ekspresiju (npr. delimičnu ili potpunu membransku ekspresiju) PD-L1 je najmanje 25%. U određenim primerima izvođenja, procenat tumorskih ćelija u uzorku kancera koje ispoljavaju detektabilnu membransku ekspresiju (npr. delimičnu ili potpunu membransku ekspresiju) PD-L1 je najmanje 50%.
[0044] U određenim primerima izvođenja metastatski ili lokalno uznapredovali tumor eksprimira PD-L1. U određenim primerima izvođenja, procenat tumorskih ćelija u uzorku metastatskog ili lokalno uznapredovalog tumora koje ispoljavaju detektabilnu membransku ekspresiju (npr.
delimičnu ili potpunu membransku ekspresiju) PD-L1 je najmanje 1% (npr. najmanje 2%, 3%, 4%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 60%, 70%, 80%, ili 90%). U određenim primerima izvođenja, procenat tumorskih ćelija u uzorku metastatskog ili lokalno uznapredovalog tumora koje ispoljavaju detektabilnu membransku ekspresiju (npr. delimičnu ili potpunu membransku ekspresiju) PD-L1 je najmanje 1%. U određenim primerima izvođenja, procenat tumorskih ćelija u uzorku metastatskog ili lokalno uznapredovalog tumora koje ispoljavaju detektabilnu membransku ekspresiju (npr. delimičnu ili potpunu membransku ekspresiju) PD-L1 je najmanje 5%. U određenim primerima izvođenja, procenat tumorskih ćelija u uzorku metastatskog ili lokalno uznapredovalog tumora koje ispoljavaju detektabilnu membransku ekspresiju (npr. delimičnu ili potpunu membransku ekspresiju) PD-L1 je najmanje 25%. U određenim primerima izvođenja, procenat tumorskih ćelija u uzorku metastatskog ili lokalno uznapredovalog tumora koje ispoljavaju detektabilnu membransku ekspresiju (npr. delimičnu ili potpunu membransku ekspresiju) PD-L1 je najmanje 50%.
[0045] U određenim primerima izvođenja, kancer je kancer grlića materice. U određenim primerima izvođenja, kancer je metastatski ili lokalno uznapredovali kancer (npr. čvrsti tumor). U određenim primerima izvođenja, metastatski ili lokalno uznapredovali kancer (npr. čvrsti tumor) je metastatski ili lokalno uznapredovali, neoperabilni karcinom skvamoznih ćelija, adenoskvamozni karcinom ili adenokarcinom grlića materice. U određenim primerima izvođenja nije dostupna standardna terapija za kancer (npr. kancer grlića materice) ili metastatski ili lokalno uznapredovali tumor (npr. čvrsti tumor). U određenim primerima izvođenja, kancer (npr. kancer grlića materice) ili metastatski ili lokalno uznapredovali tumor (npr. čvrsti tumor) je refraktoran na standardnu terapiju. U određenim primerima izvođenja, kancer (npr. kancer grlića materice) ili metastatski ili lokalno uznapredovali tumor (npr. čvrsti tumor) je recidivirao nakon standardne terapije. U određenim primerima izvođenja, standardna terapija obuhvata hemoterapiju koja sadrži platinu. U određenim primerima izvođenja, standardna terapija je dublet koji sadrži platinu. U određenim primerima izvođenja, kancer (npr. kancer grlića materice) je metastatski ili lokalno uznapredovali, neoperabilni karcinom skvamoznih ćelija, adenoskvamozni karcinom ili adenokarcinom grlića materice koji je recidivirao nakon dubleta koji sadrži platinu primenjenog za lečenje uznapredovale (rekurentne, neoperabilne ili metastatske) bolesti. U određenim primerima izvođenja, kancer (npr. kancer grlića materice) ili metastatski ili lokalno uznapredovali tumor je HPV pozitivan. U određenim primerima izvođenja, kancer ili metastatski ili lokalno uznapredovali čvrsti tumor je kancer glave i vrata, melanom, karcinom renalnih ćelija, urotelni karcinom ili endometrijalni karcinom. U određenim primerima izvođenja, kancer (npr. kancer grlića materice) ili metastatski ili lokalno uznapredovali čvrsti tumor povezan je sa nestabilnošću mikrosatelita.
[0046] U određenim primerima izvođenja, subjekat ima kancer grlića materice (npr. metastatski ili lokalno uznapredovali, neoperabilni karcinom skvamoznih ćelija, adenoskvamozni karcinom ili adenokarcinom grlića materice), a postupak obuhvata davanje subjektu efikasne količine anti-CTLA-4 antitela opisanog ovde, npr. AGEN1884.H3 (IgG1S239D/A330L/I332E), ili farmaceutske kompozicije koja sadrži takvo anti-CTLA-4 antitelo, kao prve terapije protiv kancera nakon dijagnoze kancera grlića materice (npr. u roku od 1, 2, 3, 4, 5, ili 6 dana; 1, 2, 3, 4, 6, 8, ili 12 nedelja; ili, 1, 2, 3, 4, 6, 8, ili 12 meseci nakon dijagnoze), gde se opciono anti-CTLA-4 antitelo opisano ovde, npr. AGEN1884.H3 (IgG1S239D/A330L/I332E), ili farmaceutska kompozicija koja sadrži takvo anti-CTLA-4 antitelo daje u dozi i pri učestalosti izabranoj iz grupe koja se sastoji od 0.3 mg/kg na svake četiri nedelje, 1 mg/kg na svake četiri nedelje, 3 mg/kg na svake četiri nedelje, 0.3 mg/kg na svakih šest nedelja, 1 mg/kg na svakih šest nedelja, 3 mg/kg na svakih šest nedelja, 0.3 mg/kg na svakih dvanaest nedelja, 1 mg/kg na svakih dvanaest nedelja i 3 mg/kg na svakih dvanaest nedelja. U određenim primerima izvođenja, subjekat ima kancer grlića materice (npr. metastatski ili lokalno uznapredovali, neoperabilni karcinom skvamoznih ćelija, adenoskvamozni karcinom ili adenokarcinom grlića materice), a postupak obuhvata davanje subjektu efikasne količine terapeutske kombinacije koja sadrži anti-CTLA-4 antitelo opisano ovde, npr. AGEN1884.H3 (IgG1S239D/A330L/I332E), ili farmaceutsku kompoziciju koja sadrži takvo anti-CTLA-4 antitelo, kao prve terapije protiv kancera nakon dijagnoze kancera grlića materice (npr. u roku od 1, 2, 3, 4, 5, ili 6 dana; 1, 2, 3, 4, 6, 8, ili 12 nedelja; ili, 1, 2, 3, 4, 6, 8, ili 12 meseci nakon dijagnoze), gde se opciono anti-CTLA-4 antitelo opisano ovde, npr. AGEN1884.H3 (IgG1S239D/A330L/I332E), ili farmaceutska kompozicija koja sadrži takvo anti-CTLA-4 antitelo daje u dozi i pri učestalosti izabranoj iz grupe koja se sastoji od 0.3 mg/kg na svake četiri nedelje, 1 mg/kg na svake četiri nedelje, 3 mg/kg na svake četiri nedelje, 0.3 mg/kg na svakih šest nedelja, 1 mg/kg na svakih šest nedelja, 3 mg/kg na svakih šest nedelja, 0.3 mg/kg na svakih dvanaest nedelja, 1 mg/kg na svakih dvanaest nedelja i 3 mg/kg na svakih dvanaest nedelja, a pembrolizumab se daje u dozi od 200 mg na svake tri nedelje.
[0047] U određenim primerima izvođenja, kancer je nesitnoćelijski kancer pluća (NSCLC). U određenim primerima izvođenja, NSCLC je NSCLC IV stadijuma. U određenim primerima izvođenja, procenat tumorskih ćelija u uzorku NSCLC koje ispoljavaju detektabilnu membransku ekspresiju (npr. delimičnu ili potpunu membransku ekspresiju) PD-L1 je najmanje 1% (npr. najmanje 2%, 3%, 4%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 60%, 70%, 80%, ili 90%). U određenim primerima izvođenja, procenat tumorskih ćelija u uzorku NSCLC koje ispoljavaju detektabilnu membransku ekspresiju (npr. delimičnu ili potpunu membransku ekspresiju) PD-L1 je najmanje 1%. U određenim primerima izvođenja, procenat tumorskih ćelija u uzorku NSCLC koje ispoljavaju detektabilnu membransku ekspresiju (npr. delimičnu ili potpunu membransku ekspresiju) PD-L1 je najmanje 5%. U određenim primerima izvođenja, procenat tumorskih ćelija u uzorku NSCLC koje ispoljavaju detektabilnu membransku ekspresiju (npr. delimičnu ili potpunu membransku ekspresiju) PD-L1 je najmanje 25%. U određenim primerima izvođenja, procenat tumorskih ćelija u uzorku NSCLC koje ispoljavaju detektabilnu membransku ekspresiju (npr. delimičnu ili potpunu membransku ekspresiju) PD-L1 je najmanje 50%. U određenim primerima izvođenja, NSCLC nema genomske tumorske aberacije EGFR ili ALK. U određenim primerima izvođenja, metastatski ili lokalno uznapredovali NSCLC nema senzibilizujuću mutaciju EGFR (npr. mutaciju koja je podesna za lečenje inhibitorom tirozin kinaze uključujući erlotinib, gefitinib ili afatanib) ili translokaciju ALK. U određenim primerima izvođenja, subjekat nije dobijao prethodni sistemski hemoterapijski tretman za NSCLC.
[0048] U određenim primerima izvođenja, metastatski ili lokalno uznapredovali čvrsti tumor je metastatski ili lokalno uznapredovali nesitnoćelijski kancer pluća (NSCLC). U određenim primerima izvođenja, metastatski ili lokalno uznapredovali čvrsti tumor je metastatski nesitnoćelijski kancer pluća (NSCLC). U određenim primerima izvođenja, metastatski ili lokalno uznapredovali čvrsti tumor je metastatski ili lokalno uznapredovali NSCLC IV stadijuma. U određenim primerima izvođenja, metastatski ili lokalno uznapredovali čvrsti tumor je metastatski NSCLC IV stadijuma. U određenim primerima izvođenja, procenat tumorskih ćelija u uzorku metastatskog ili lokalno uznapredovalog NSCLC koje ispoljavaju detektabilnu membransku ekspresiju (npr. delimičnu ili potpunu membransku ekspresiju) PD-L1 je najmanje 1% (npr. najmanje 2%, 3%, 4%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 60%, 70%, 80%, ili 90%). U određenim primerima izvođenja, procenat tumorskih ćelija u uzorku metastatskog ili lokalno uznapredovalog NSCLC koje ispoljavaju detektabilnu membransku ekspresiju (npr. delimičnu ili potpunu membransku ekspresiju) PD-L1 je najmanje 1%. U određenim primerima izvođenja, procenat tumorskih ćelija u uzorku metastatskog ili lokalno uznapredovalog NSCLC koje ispoljavaju detektabilnu membransku ekspresiju (npr. delimičnu ili potpunu membransku ekspresiju) PD-L1 je najmanje 5%. U određenim primerima izvođenja, procenat tumorskih ćelija u uzorku metastatskog ili lokalno uznapredovalog NSCLC koje ispoljavaju detektabilnu membransku ekspresiju (npr. delimičnu ili potpunu membransku ekspresiju) PD-L1 je najmanje 25%. U određenim primerima izvođenja, procenat tumorskih ćelija u uzorku metastatskog ili lokalno uznapredovalog NSCLC koje ispoljavaju detektabilnu membransku ekspresiju (npr. delimičnu ili potpunu membransku ekspresiju) PD-L1 je najmanje 50%. U određenim primerima izvođenja, metastatski ili lokalno uznapredovali NSCLC nema genomske tumorske aberacije EGFR ili ALK. U određenim primerima izvođenja, subjekat nije dobijao prethodni sistemski hemoterapijski tretman za metastatski ili lokalno uznapredovali NSCLC.
[0049] U određenim primerima izvođenja, subjekat ima NSCLC (npr. IV stadijuma, metastatski ili lokalno uznapredovali NSCLC), opciono gde se procenat tumorskih ćelija nalazi u uzorku NSCLC koje ispoljavaju detektabilnu ekspresiju (npr. membransku ekspresiju, delimičnu ili potpunu membransku ekspresiju) PD-L1 je najmanje 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 60%, 70%, 80%, ili 90%, a postupak obuhvata davanje subjektu efikasne količine anti-CTLA-4 antitela opisanog ovde, npr. AGEN1884.H3 (IgG1S239D/A330L/I332E), ili farmaceutske kompozicije koja sadrži takvo anti-CTLA-4 antitelo, kao prve terapije protiv kancera nakon dijagnoze kancera grlića materice (npr. u roku od 1, 2, 3, 4, 5, ili 6 dana; 1, 2, 3, 4, 6, 8, ili 12 nedelja; ili, 1, 2, 3, 4, 6, 8, ili 12 meseci nakon dijagnoze), gde se opciono anti-CTLA-4 antitelo opisano ovde, npr. AGEN1884.H3 (IgG1S239D/A330L/I332E), ili farmaceutska kompozicija koja sadrži takvo anti-CTLA-4 antitelo, daje u dozi i sa učestalošću izabranim iz grupe koja se sastoji od 0.3 mg/kg na svake četiri nedelje, 1 mg/kg na svake četiri nedelje, 3 mg/kg na svake četiri nedelje, 0.3 mg/kg na svakih šest nedelja, 1 mg/kg na svakih šest nedelja, 3 mg/kg na svakih šest nedelja, 0.3 mg/kg na svakih dvanaest nedelja, 1 mg/kg na svakih dvanaest nedelja i 3 mg/kg na svakih dvanaest nedelja. U određenim primerima izvođenja, subjekat ima NSCLC (npr. IV stadijuma, metastatski ili lokalno uznapredovali NSCLC), opciono gde se procenat tumorskih ćelija nalazi u uzorku NSCLC koje ispoljavaju detektabilnu ekspresiju (npr. membransku ekspresiju, delimičnu ili potpunu membransku ekspresiju) PD-L1 je najmanje 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 60%, 70%, 80%, ili 90%, a postupak obuhvata davanje subjektu terapeutske kombinacije koja sadrži anti-CTLA-4 antitelo opisano ovde, npr. AGEN1884.H3 (IgG1S239D/A330L/I332E), ili farmaceutsku kompoziciju koja sadrži takvo anti-CTLA-4 antitelo, i pembrolizumab kao prve terapije protiv kancera nakon dijagnoze kancera grlića materice (npr. u roku od 1, 2, 3, 4, 5, ili 6 dana; 1, 2, 3, 4, 6, 8, ili 12 nedelja; ili, 1, 2, 3, 4, 6, 8, ili 12 meseci nakon dijagnoze), gde se opciono anti-CTLA-4 antitelo opisano ovde, npr. AGEN1884.H3 (IgG1S239D/A330L/I332E), ili farmaceutska kompozicija koja sadrži takvo anti-CTLA-4 antitelo, daje u dozi i sa učestalošću izabranim iz grupe koja se sastoji od 0.3 mg/kg na svake četiri nedelje, 1 mg/kg na svake četiri nedelje, 3 mg/kg na svake četiri nedelje, 0.3 mg/kg na svakih šest nedelja, 1 mg/kg na svakih šest nedelja, 3 mg/kg na svakih šest nedelja, 0.3 mg/kg na svakih dvanaest nedelja, 1 mg/kg na svakih dvanaest nedelja i 3 mg/kg na svakih dvanaest nedelja, a pembrolizumab se primenjuje u dozi od 200 mg na svake tri nedelje.
[0050] U određenim primerima izvođenja, kancer je kutani karcinom skvamoznih ćelija (cSCC). U određenim primerima izvođenja, metastatski ili lokalno uznapredovali čvrsti tumor je kutani karcinom skvamoznih ćelija (cSCC) IV stadijuma. U određenim primerima izvođenja, cSCC se dijagnostikuje histološki ili citološki prema osmom izdanju priručnika za određivanje stadijuma kancera Američkog udruženog komiteta za borbu protiv kancera. U određenim primerima izvođenja, cSCC nije izlečiv radijacionom terapijom. U određenim primerima izvođenja, subjekat ima cSCC (npr. cSCC IV stadijuma), a postupak obuhvata davanje subjektu efikasne količine anti-CTLA-4 antitela opisanog ovde, npr. AGEN1884.H3 (IgG1S239D/A330L/I332E), ili farmaceutske kompozicije koja sadrži takvo anti-CTLA-4 antitelo, kao prve terapije protiv kancera nakon dijagnoze cSCC (npr. u roku od 1, 2, 3, 4, 5, ili 6 dana; 1, 2, 3, 4, 6, 8, ili 12 nedelja; ili, 1, 2, 3, 4, 6, 8, ili 12 meseci nakon dijagnoze), gde se opciono anti-CTLA-4 antitelo opisano ovde, npr. AGEN1884.H3 (IgG1S239D/A330L/I332E), ili farmaceutska kompozicija koja sadrži takvo anti-CTLA-4 antitelo daje u dozi i sa učestalošću izabranim iz grupe koja se sastoji od 0.3 mg/kg na svake četiri nedelje, 1 mg/kg na svake četiri nedelje, 3 mg/kg na svake četiri nedelje, 0.3 mg/kg na svakih šest nedelja, 1 mg/kg na svakih šest nedelja, 3 mg/kg na svakih šest nedelja, 0.3 mg/kg na svakih dvanaest nedelja, 1 mg/kg na svakih dvanaest nedelja i 3 mg/kg na svakih dvanaest nedelja. U određenim primerima izvođenja, subjekat ima cSCC (npr. cSCC IV stadijuma), a postupak obuhvata davanje subjektu efikasne količine terapeutske kombinacije koja sadrži anti-CTLA-4 antitelo opisano ovde, npr. AGEN1884.H3 (IgG1S239D/A330L/I332E), ili farmaceutsku kompoziciju koja sadrži takvo anti-CTLA-4 antitelo, i pembrolizumab, kao prve terapije protiv kancera nakon dijagnoze cSCC (npr. u roku od 1, 2, 3, 4, 5, ili 6 dana; 1, 2, 3, 4, 6, 8, ili 12 nedelja; ili, 1, 2, 3, 4, 6, 8, ili 12 meseci nakon dijagnoze), gde se opciono anti-CTLA-4 antitelo opisano ovde, npr. AGEN1884.H3 (IgG1S239D/A330L/I332E), ili farmaceutska kompozicija koja sadrži takvo anti-CTLA-4 antitelo daje u dozi i sa učestalošću izabranim iz grupe koja se sastoji od 0.3 mg/kg na svake četiri nedelje, 1 mg/kg na svake četiri nedelje, 3 mg/kg na svake četiri nedelje, 0.3 mg/kg na svakih šest nedelja, 1 mg/kg na svakih šest nedelja, 3 mg/kg na svakih šest nedelja, 0.3 mg/kg na svakih dvanaest nedelja, 1 mg/kg na svakih dvanaest nedelja i 3 mg/kg na svakih dvanaest nedelja, a pembrolizumab se primenjuje u dozi od 200 mg na svake tri nedelje.
[0051] U određenim primerima izvođenja, anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija, kao što je ovde opisano, se primenjuju intravenski. U određenim primerima izvođenja, anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija opisana ovde primenjuje se intravenski pri 0.01 mg/kg, 0.03 mg/kg, 0.1 mg/kg, 0.3 mg/kg, 1 mg/kg, 3 mg/kg, 6 mg/kg, ili 10 mg/kg, opciono u intervalu jednom na svake dve nedelje. U određenim primerima izvođenja, anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija opisana ovde primenjuje se intravenski pri 0.01 mg/kg, 0.03 mg/kg, 0.1 mg/kg, 0.3 mg/kg, 1 mg/kg, 3 mg/kg, 6 mg/kg, ili 10 mg/kg, opciono u intervalu jednom na svake tri nedelje. U određenim primerima izvođenja, anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija opisana ovde primenjuje se intravenski pri 0.01 mg/kg, 0.03 mg/kg, 0.1 mg/kg, 0.3 mg/kg, 1 mg/kg, 3 mg/kg, 6 mg/kg, ili 10 mg/kg, opciono u intervalu jednom na svake četiri nedelje. U određenim primerima izvođenja, anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija opisana ovde primenjuje se intravenski pri 0.01 mg/kg, 0.03 mg/kg, 0.1 mg/kg, 0.3 mg/kg, 1 mg/kg, 3 mg/kg, 6 mg/kg, ili 10 mg/kg, opciono u intervalu jednom na svakih šest nedelja. U određenim primerima izvođenja, anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija opisana ovde primenjuje se intravenski pri 0.01 mg/kg, 0.03 mg/kg, 0.1 mg/kg, 0.3 mg/kg, 1 mg/kg, 3 mg/kg, 6 mg/kg, ili 10 mg/kg, opciono u intervalu jednom na svakih dvanaest nedelja. U određenim primerima izvođenja, anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija, kao što je ovde opisano, primenjuju se intratumorski. U određenim primerima izvođenja, anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija opisana ovde primenjuje se intratumorski pri 0.01 mg/kg, 0.03 mg/kg, 0.1 mg/kg, 0.3 mg/kg, 1 mg/kg ili 3 mg/kg, opciono u intervalu jednom na svake tri nedelje. U određenim primerima izvođenja, anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija opisana ovde primenjuje se intratumorski pri 0.03 mg/kg, 0.1 mg/kg ili 0.3 mg/kg, opciono u intervalu jednom na svake tri nedelje U određenim primerima izvođenja, anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija opisana ovde se daje intratumorski u dozi koja je do 5 puta, 10 puta, 20 puta, 30 puta, 40 puta, 50 puta, 60 puta, 70 puta, 80 puta, 90 puta, 100 puta ili 200 puta niža od doze koja se primenjuje sistemski. U određenim primerima izvođenja, anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija opisana ovde daje se intratumorski u dozi koja je i do 10 puta manja od doze koja se primenjuje sistemski. U određenim primerima izvođenja, anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija opisana ovde daje se intratumorski u dozi koja je i do 100 puta manja od doze koja se primenjuje sistemski. U određenim primerima izvođenja, anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija, kao što je ovde opisano, primenjuju se (npr. intratumorski ili sistemski) kao monoterapija. U određenim primerima izvođenja, anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija opisana ovde primenjuju se intratumorski i postupak dalje obuhvata davanje dodatnog terapeutskog agensa subjektu. U određenim primerima izvođenja, dodatni terapeutski agens se primenjuje sistemski. U određenim primerima izvođenja subjekat ima čvrst tumor i dodatni terapeutski agens je anti-PD-1 antitelo. U određenim primerima izvođenja, anti-PD-1 antitelo je pembrolizumab ili nivolumab. U određenim primerima izvođenja, pembrolizumab se daje u dozi od 200 mg svake tri nedelje. U određenim primerima izvođenja subjekat ima karcinom skvamoznih ćelija glave i vrata i dodatni terapeutski agens je anti-EGFR antitelo. U određenim primerima izvođenja, anti-EGFR antitelo je cetuksimab. U određenim primerima izvođenja subjekat ima HER2+ kancer dojke i dodatni terapeutski agens je anti-HER2 antitelo. U određenim primerima izvođenja, anti-HER2 antitelo je trastuzumab. U određenim primerima izvođenja, ovi postupci dalje obuhvataju davanje hemoterapijskog agensa subjektu. U određenim primerima izvođenja, hemoterapijski agens se primenjuje sistemski. U određenim primerima izvođenja, hemoterapijski agens je gemcitabin. U određenim primerima izvođenja, anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija opisana ovde se primenjuju intratumorski i subjekat ima uznapredovali ili metastatski čvrsti tumor. U određenim primerima izvođenja, anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija opisana ovde se primenjuju intratumorski i subjekat ima kancer glave i vrata (npr. relapsni/refraktorni karcinom skvamoznih ćelija glave i vrata). U određenim primerima izvođenja, anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija opisana ovde se primenjuju intratumorski i subjekat ima kancer dojke (npr. relapsni/refraktorni HER2+ kancer dojke). U određenim primerima izvođenja, anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija opisana ovde se isporučuje u limfni čvor u koji se drenira tumor. U određenim primerima izvođenja, anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija opisana ovde se isporučuje lokalizovanom primenom (npr. potkožnom primenom). U određenim primerima izvođenja, anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija opisana ovde se isporučuje lokalizovanom primenom (npr. potkožnom primenom) pri 0.01 mg/kg, 0.03 mg/kg, 0.1 mg/kg, 0.3 mg/kg, 1 mg/kg, ili 3 mg/kg. U određenim primerima izvođenja, anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija opisana ovde se isporučuje lokalizovanom primenom (npr. potkožnom primenom) u dozi koja je do 5 puta, 10 puta, 20 puta, 30 puta, 40 puta, 50 puta, 60 puta, 70 puta, 80 puta, 90 puta, 100 puta ili 200 puta niža od doze koja se primenjuje sistemski. U određenim primerima izvođenja, anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija opisana ovde se isporučuje lokalizovanom primenom (npr. potkožnom primenom) u dozi koja je i do 10 puta manja od doze koja se primenjuje sistemski. U određenim primerima izvođenja, anti CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija opisana ovde se isporučuje lokalizovanom primenom (npr. potkožnom primenom) u dozi koja je i do 100 puta manja od doze koja se primenjuje sistemski. U određenim primerima izvođenja, anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija opisana ovde se isporučuje lokalizovanom primenom (npr. potkožnom primenom) i postupak dalje obuhvata davanje dodatnog terapeutskog agensa subjektu. U određenim primerima izvođenja, dodatni terapeutski agens je vakcina. U određenim primerima izvođenja, vakcina sadrži kompleks proteina toplotnog šoka i peptida (HSPPC) koji sadrži protein toplotnog šoka u kompleksu sa antigenim peptidom. U jednom primeru izvođenja, protein toplotnog šoka je gp96 protein koji se nalazi u kompleksu sa antigenim peptidom povezanim sa tumorom, gde HSPPC potiče od tumora poreklom od subjekta. U određenim primerima izvođenja, protein toplotnog šoka bira se iz grupe koja se sastoji od hsc70, hsp70, hsp90, hsp110, grp170, gp96, kalretikulina, njihovog mutanta i kombinacija dva ili više od navedenog. U određenim primerima izvođenja, protein toplotnog šoka je hsc70. U određenim primerima izvođenja, protein toplotnog šoka je hsp70. U određenim primerima izvođenja, antigeni peptid je sintetički. U određenim primerima izvođenja subjekat ima kancer. U određenim primerima izvođenja subjekat ima infektivnu bolest. U određenim primerima izvođenja, ovi postupci dalje obuhvataju davanje dodatnog terapeutskog agensa subjektu. U određenim primerima izvođenja, dodatni terapeutski agens je hemoterapeutik ili agens koji ciljno deluje na kontrolnu tačku. U određenim primerima izvođenja, agens koji ciljno deluje na kontrolnu tačku se bira iz grupe koja se sastoji od antagonističkog anti-PD-1 antitela, antagonističkog anti-PD-L1 antitela, antagonističkog anti-PD-L2 antitela, antagonističkog anti-CTLA-4 antitela, antagonističkog anti-TIM-3 antitela, antagonističkog anti-LAG-3 antitela, antagonističkog anti-CEACAM1 antitela, agonističkog anti-GITR antitela, agonističkog anti-OX40 antitela i agonističkog anti-CD137 antitela, agonističkog anti-DR3 antitela, agonističkog anti-TNFSF14 antitela i agonističkog anti-CD27 antitela. U određenim primerima izvođenja, dodatni terapeutski agens je radioterapija. U određenim primerima izvođenja, dodatni terapeutski agens je inhibitor indoleamin-2,3-dioksigenaze (IDO). Odgovarajući IDO inhibitori uključuju, bez ograničenja, epakadostat, F001287, indoksimod i NLG919. U određenim primerima izvođenja, dodatni terapeutski agens je vakcina. U određenim primerima izvođenja, vakcina sadrži kompleks proteina toplotnog šoka i peptida (HSPPC) koji sadrži protein toplotnog šoka u kompleksu sa antigenim peptidom. U jednom primeru izvođenja, protein toplotnog šoka je gp96 protein koji se nalazi u kompleksu sa antigenim peptidom povezanim sa tumorom, gde HSPPC potiče od tumora poreklom od subjekta.
[0052] Otkriven je postupak za lečenje infektivne bolesti kod subjekta, gde postupak obuhvata davanje subjektu efikasne količine anti-CTLA-4 antitela ili farmaceutske kompozicije, kao što je ovde opisano. Otkriven je postupak za prevenciju infektivne bolesti kod subjekta, gde postupak obuhvata davanje subjektu efikasne količine anti-CTLA-4 antitela ili farmaceutske kompozicije, kao što je ovde opisano. Predmetni pronalazak se dalje odnosi na izolovano antitelo pronalaska, odnosno farmaceutsku kompoziciju pronalaska, za upotrebu u postupku za lečenje infektivne bolesti kod subjekta.
[0053] Antitelo sadašnjeg pronalaska, polinukleotid pronalaska, vektor pronalaska i/ili rekombinantna ćelija-domaćin pronalaska, mogu biti za upotrebu kao lek.
[0054] Antitelo sadašnjeg pronalaska, polinukleotid pronalaska, vektor pronalaska i/ili rekombinantna ćelija-domaćin pronalaska, mogu biti za upotrebu kao dijagnostičko sredstvo.
[0055] Antitelo sadašnjeg pronalaska, polinukleotid pronalaska, vektor pronalaska i/ili rekombinantna ćelija-domaćin pronalaska, mogu da se koriste za in vitro detekciju humanog CTLA-4 u biološkom uzorku.
[0056] U jednom aspektu, ovde je obezbeđena farmaceutska kompozicija koja sadrži anti-CTLA-4 antitelo opisano ovde i farmaceutski prihvatljiv nosač ili ekscipijens, za upotrebu kao lek.
[0057] Farmaceutska kompozicija koja sadrži anti-CTLA-4 antitelo opisano ovde i farmaceutski prihvatljiv nosač ili ekscipijens, može biti za upotrebu kao dijagnostičko sredstvo.
[0058] U jednom aspektu, ovde je obezbeđena farmaceutska kompozicija koja sadrži anti-CTLA-4 antitelo opisano ovde, polinukleotid pronalaska, vektor pronalaska i/ili rekombinantnu ćelijudomaćina pronalaska, i farmaceutski prihvatljiv nosač ili ekscipijens. Farmaceutska kompozicija može biti za upotrebu kao lek i/ili dijagnostičko sredstvo.
[0059] Obelodanjeno je da je antitelo, polinukleotid, vektor, rekombinantna ćelija-domaćin i/ili farmaceutska kompozicija sadašnjeg pronalaska, za upotrebu u postupku za povećanje aktivacije T-ćelija kao odgovor na antigen.
[0060] Obelodanjeno je da je antitelo, polinukleotid, vektor, rekombinantna ćelija-domaćin i/ili farmaceutska kompozicija sadašnjeg pronalaska, za upotrebu u postupku za povećanje aktivacije T-ćelija kao odgovor na antigen u subjektu.
[0061] Obelodanjeno je da je antitelo, polinukleotid, vektor, rekombinantna ćelija-domaćin i/ili farmaceutska kompozicija sadašnjeg pronalaska, za upotrebu u postupku za povećanje aktivacije T-ćelije kao odgovor na antigen u subjekt, koji obuhvata davanje subjektu efikasne količine antitela, polinukleotida, vektora, rekombinantne ćelije-domaćina i/ili farmaceutske kompozicije pronalaska.
[0062] Antitelo, polinukleotid, vektor, rekombinantna ćelija-domaćin i/ili farmaceutska kompozicija sadašnjeg pronalaska, mogu biti za upotrebu u postupku za lečenje kancera.
[0063] Antitelo, polinukleotid, vektor, rekombinantna ćelija-domaćin i/ili farmaceutska kompozicija sadašnjeg pronalaska, mogu biti za upotrebu u postupku za lečenje kancera kod subjekta.
[0064] Antitelo, polinukleotid, vektor, rekombinantna ćelija-domaćin i/ili farmaceutska kompozicija sadašnjeg pronalaska, mogu da budu za upotrebu u postupku za lečenje kancera kod subjekta koji obuhvata davanje subjektu efikasne količine antitela, polinukleotida, vektora, rekombinantne ćelije-domaćina i/ili farmaceutske kompozicije pronalaska.
[0065] Obezbeđeno je (a) antitelo, polinukleotid, vektor, rekombinantna ćelija-domaćin i/ili farmaceutska kompozicija sadašnjeg pronalaska i (b) dodatni terapeutski agens, poželjno anti-PD-1 antitelo, za upotrebu kao lek.
[0066] Obezbeđeno je (a) antitelo, polinukleotid, vektor, rekombinantna ćelija-domaćin i/ili farmaceutska kompozicija sadašnjeg pronalaska i (b) dodatni terapeutski agens, poželjno anti-PD-1 antitelo, za upotrebu u postupku za lečenje kancera. Kancer može da bude čvrsti tumor. Antitelo, polinukleotid, vektor, rekombinantna ćelija-domaćin i/ili farmaceutska kompozicija sadašnjeg pronalaska može da se daje subjektu intratumorski, poželjno da se daje subjektu intratumorski u dozi od 0.01 mg/kg, 0.03 mg/kg, 0.1 mg/kg, 0.3 mg/kg, 1 mg/kg, ili 3 mg/kg, opciono u intervalu jednom na svake tri nedelje.
[0067] Obezbeđena je farmaceutska kompozicija, komplet ili komplet delova koji sadrži (a) antitelo, polinukleotid, vektor, rekombinantnu ćeliju-domaćina i/ili farmaceutsku kompoziciju sadašnjeg pronalaska i (b) dodatni terapeutski agens, poželjno anti-PD-1 antitelo.
[0068] Obezbeđeno je (a) antitelo, polinukleotid, vektor, rekombinantna ćelija-domaćin i/ili farmaceutska kompozicija sadašnjeg pronalaska i (b) anti-EGFR antitelo, i opciono (c) hemoterapijski agens, za upotrebu kao lek.
[0069] Obezbeđeno je (a) antitelo, polinukleotid, vektor, rekombinantna ćelija-domaćin i/ili farmaceutska kompozicija sadašnjeg pronalaska i (b) anti-EGFR antitelo, i opciono (c) hemoterapijski agens, za upotrebu u postupku za lečenje kancera. Kancer može da bude karcinom skvamoznih ćelija glave i vrata. Antitelo, polinukleotid, vektor, rekombinantna ćelija-domaćin i/ili farmaceutska kompozicija sadašnjeg pronalaska može da se daje subjektu intratumorski, poželjno da se daje subjektu intratumorski u dozi od 0.01 mg/kg, 0.03 mg/kg, 0.1 mg/kg, 0.3 mg/kg, 1 mg/kg, ili 3 mg/kg, opciono u intervalu jednom na svake tri nedelje.
[0070] Obezbeđena je farmaceutska kompozicija, komplet ili komplet delova koji sadrži (a) antitelo, polinukleotid, vektor, rekombinantnu ćeliju-domaćina i/ili farmaceutsku kompoziciju sadašnjeg pronalaska i (b) anti-EGFR antitelo, i opciono (c) hemoterapijski agens.
[0071] Obezbeđeno je (a) antitelo, polinukleotid, vektor, rekombinantna ćelija-domaćin i/ili farmaceutska kompozicija sadašnjeg pronalaska i (b) anti-HER2 antitelo, i opciono (c) hemoterapijski agens, za upotrebu kao lek.
[0072] Obezbeđeno je (a) antitelo, polinukleotid, vektor, rekombinantna ćelija-domaćin i/ili farmaceutska kompozicija sadašnjeg pronalaska i (b) anti-HER2 antitelo, i opciono (c) hemoterapijski agens, za upotrebu u postupku za lečenje HER2+ kancera dojke. Antitelo, polinukleotid, vektor, rekombinantna ćelija-domaćin i/ili farmaceutska kompozicija sadašnjeg pronalaska može da se daje subjektu intratumorski, poželjno da se daje subjektu intratumorski u dozi od 0.01 mg/kg, 0.03 mg/kg, 0.1 mg/kg, 0.3 mg/kg, 1 mg/kg, ili 3 mg/kg, opciono u intervalu jednom na svake tri nedelje.
[0073] Obezbeđena je farmaceutska kompozicija, komplet ili komplet delova koji sadrži (a) antitelo, polinukleotid, vektor, rekombinantnu ćeliju-domaćina i/ili farmaceutsku kompoziciju sadašnjeg pronalaska i (b) anti-HER2 antitelo, i opciono (c) hemoterapijski agens.
[0074] Antitelo, polinukleotid, vektor, rekombinantna ćelija-domaćin, i/ili farmaceutska kompozicija sadašnjeg pronalaska, mogu da budu za upotrebu u postupku za lečenje kancera, gde antitelo, polinukleotid, vektor, rekombinantna ćelija-domaćin, i/ili farmaceutska kompozicija sadašnjeg pronalaska mogu da se daju subjektu intratumorski, poželjno u dozi od 0.01 mg/kg, 0.03 mg/kg, 0.1 mg/kg, 0.3 mg/kg, 1 mg/kg, ili 3 mg/kg, opciono u intervalu od jednom na svake tri nedelje.
[0075] Antitelo, polinukleotid, vektor, rekombinantna ćelija-domaćin, i/ili farmaceutska kompozicija sadašnjeg pronalaska, mogu da budu za upotrebu u postupku za lečenje kancera, pri čemu se antitelo, polinukleotid, vektor, rekombinantna ćelija-domaćin, i/ili farmaceutska kompozicija sadašnjeg pronalaska daju subjektu potkožno ili intravenski, poželjno daju subjektu intravenski u dozi od 0.01 mg/kg, 0.03 mg/kg, 0.1 mg/kg, 0.3 mg/kg, 1 mg/kg, 3 mg/kg, 6 mg/kg ili 10 mg/kg, opciono u intervalu od jednom na svake tri nedelje.
[0076] Obezbeđeno je (a) antitelo, polinukleotid, vektor, rekombinantna ćelija-domaćin i/ili farmaceutska kompozicija sadašnjeg pronalaska i (b) dodatni terapeutski agens, za upotrebu kao lek. Dodatni terapeutski agens može biti hemoterapijski agens ili agens koji ciljno deluje na kontrolnu tačku ili inhibitor indolamin-2,3-dioksigenaze (IDO) ili vakcina.
[0077] Obezbeđeno je (a) antitelo, polinukleotid, vektor, rekombinantna ćelija-domaćin i/ili farmaceutska kompozicija sadašnjeg pronalaska i (b) dodatni terapeutski agens, za upotrebu u postupku za lečenje kancera. Dodatni terapeutski agens može biti hemoterapijski agens ili agens koji ciljno deluje na kontrolnu tačku ili inhibitor indolamin-2,3-dioksigenaze (IDO) ili vakcina.
[0078] Obezbeđena je farmaceutska kompozicija, komplet ili komplet delova koji sadrži (a) antitelo, polinukleotid, vektor, rekombinantnu ćeliju-domaćina i/ili farmaceutsku kompoziciju sadašnjeg pronalaska i (b) dodatni terapeutski agens. Dodatni terapeutski agens može biti hemoterapijski agens ili agens koji ciljno deluje na kontrolnu tačku ili inhibitor indolamin-2,3-dioksigenaze (IDO) ili vakcina.
[0079] Antitelo, polinukleotid, vektor, rekombinantna ćelija-domaćin, i/ili farmaceutska kompozicija sadašnjeg pronalaska, mogu da budu za upotrebu u postupku za lečenje kancera, i/ili za upotrebu u postupku za povećanje aktivacije T-ćelije kao odgovor na antigen, pri čemu se antitelo, polinukleotid, vektor, rekombinantna ćelija-domaćin, i/ili farmaceutska kompozicija predmetnog pronalaska isporučuju u limfni čvor u koji se drenira tumor.
[0080] Obelodanjena je upotreba antitela, polinukleotida, vektora, rekombinantne ćelije-domaćina, i/ili farmaceutske kompozicije sadašnjeg pronalaska u postupku za lečenje kancera, i/ili u postupku za povećanje aktivacije T-ćelija kao odgovor na antigen u subjektu, pri čemu se antitelo, polinukleotid, vektor, rekombinantna ćelija-domaćin, i/ili farmaceutska kompozicija predmetnog pronalaska isporučuju u limfni čvor u koji se drenira tumor.
[0081] Obelodanjena je upotreba antitela, polinukleotida, vektora, rekombinantne ćelije-domaćina i/ili farmaceutske kompozicije sadašnjeg pronalaska, za pripremu lekova za imunoterapiju, na primer, za povećanje aktivacije T-ćelija kao odgovor na antigen u subjektu, lečenje kancera ili lečenje ili prevenciju infektivnih bolesti.
[0082] Obelodanjena je upotreba antitela, polinukleotida, vektora, rekombinantne ćelije-domaćina, i/ili farmaceutske kompozicije sadašnjeg pronalaska, za pripremu lekova za imunoterapiju, na primer, za povećanje aktivacije T-ćelija kao odgovor na antigen u subjektu, lečenje kancera ili lečenje ili prevenciju infektivnih bolesti, pri čemu se antitelo, polinukleotid, vektor, rekombinantna ćelija-domaćin, i/ili farmaceutska kompozicija predmetnog pronalaska isporučuju u limfni čvor u koji se drenira tumor.
[0083] Obelodanjena je upotreba (a) antitela, polinukleotida, vektora, rekombinantne ćelijedomaćina i/ili farmaceutske kompozicije sadašnjeg pronalaska i (b) anti-HER2 antitela, i opciono (c) hemoterapijskog agensa, za pripremu lekova za imunoterapiju, na primer, za povećanje aktivacije T-ćelija kao odgovor na antigen u subjektu, lečenje kancera ili lečenje ili prevenciju infektivnih bolesti.
[0084] Obelodanjena je upotreba (a) antitela, polinukleotida, vektora, rekombinantne ćelijedomaćina, i/ili farmaceutske kompozicije sadašnjeg pronalaska i (b) anti-HER2 antitela, i opciono (c) hemoterapijskog agensa, za pripremu lekova za imunoterapiju, na primer, za povećanje aktivacije T-ćelija kao odgovor na antigen u subjektu, lečenje kancera ili lečenje ili prevenciju infektivnih bolesti, pri čemu se antitelo, polinukleotid, vektor, rekombinantna ćelija-domaćin, i/ili farmaceutska kompozicija predmetnog pronalaska isporučuju u limfni čvor u koji se drenira tumor.
4. KRATAK OPIS CRTEŽA
[0085]
Slika 1A, 1B, 1C, 1D, 1E, 1F i 1G su histogrami protočne citometrije koji pokazuju vezivanje anti-CTLA-4 antitela ili IgG1izotipskog kontrolnog antitela za Jurkat ćelije konstruisane da eksprimiraju humani CTLA-4 na površini ćelije. Testirana anti-CTLA-4 antitela su: AGEN1884.H1.1 (IgG1), AGEN1884.H1.2 (IgG1), AGEN1884.H1.3 (IgG1), AGEN1884.H2.1 (IgG1), AGEN1884.H2.2 (IgG1), AGEN1884.H2.3 (IgG1) i AGEN1884.H3 (IgG1).
Slika 2 je grafikon koji prikazuje proizvodnju IL-2 primarnih humanih PBMC nakon inkubacije pod suboptimalnom stimulacijom superantigenom stafilokoknog enterotoksina A (SEA) u odsustvu ili prisustvu anti-CTLA-4 antitela AGEN1884.H3 (IgG1) ili izotipskog kontrolnog antitela (IgG1). Za svaku grupu urađeno je po osam replikata, i srednje vrednosti osam replikata su naznačene crnim stubićem.
Slika 3 je grafikon koji prikazuje rezultate reporterskog testa IL-2-luciferaza koji pokazuje da blokada CTLA-4 dovodi do aktivacije T ćelija. Faktor odgovora ekspresije luciferaze, surogat-markera za aktiviranje gena za IL-2, grafički je prikazan u nizu koncentracija antitela za AGEN1884.H3 (IgG1) ili izotipsko kontrolno antitelo (IgG1).
Slika 4 je grafikon koji prikazuje rezultate reporterskog testa, gde je istovremeno regrutovanje AGEN1884.H3 (IgG1) ciljnim ćelijama (putem vezivanja CTLA-4) i efektorskim ćelijama (putem vezivanja FcγRIIIA) pokreće ekspresiju luciferaze na ćelijama efektorske linije. Aktivnost luciferaze je surogat marker za signalizaciju FcγRIIIA. Faktor odgovora RLU vrednosti prikazan je u odnosu na niz koncentracija antitela za AGEN1884.H3 (IgG1) i izotipsko kontrolno antitelo (IgG1).
Slike 5A, 5B, 5C i 5D su histogrami protočne citometrije koji prikazuju Jurkat ćelije koje eksprimiraju CTLA-4 inkubirane sa anti-CTLA-4 antitelom AGEN1884.H3 (IgG1), AGEN1884.H3 (IgG1S239D/I332E), AGEN1884.H3 (IgG1S239D/A330L/I332E) ili AGEN1884.H3 (IgG1L235V/F243L/R292P/Y300L/P396L) ili izotipskim kontrolnim antitelom. Vezivanje antitela je detektovano pomoću sekundarnog antitela konjugovanog sa fluorohromom.
Slike 6A i 6B su grafikoni koji pokazuju blokiranje vezivanja između humanog CTLA-4 i njegovih liganda, CD80, odnosno CD86, pomoću AGEN1884.H3 (IgG1S239D/A330L/I332E). Jurkat ćelije konstruisane da konstitutivno eksprimiraju humani CTLA-4 su inkubirane sa anti-CTLA-4 antitelom AGEN1884.H3 (IgG1-S239D/A330E/I332E), referentnim anti-CTLA-4 antitelom, ili izotipskim kontrolnim antitelom (IgG1), a zatim obojene naznačenim fluorescentno označenim ligandom. Vezivanje liganda je zatim procenjeno protočnom citometrijom.
Slike 7A, 7B i 7C su grafikoni koji prikazuju proizvodnju IL-2 primarnih humanih PBMC kultivisanih pod suboptimalnom stimulacijom superantigenom SEA u odsustvu ili prisustvu izotipskog kontrolnog antitela (IgG1) ili anti-CTLA-4 antitela. Slike 7A i 7B su grafikoni koji prikazuju proizvodnju IL-2 stimulisanu jednom dozom ili titrovanim dozama izotipskog kontrolnog antitela (IgG1) ili anti-CTLA-4 antitela AGEN1884.H3 (IgG1), AGEN1884.H3 (IgG1S239D/I332E), AGEN1884.H3 (IgG1S239D/A330L/I332E) i AGEN1884.H3 (IgG1L235V/F243L/R292P/Y300L/P396L). U studiji prikazanoj na slici 7B, pored izotipskog kontrolnog antitela (IgG1) ili anti-CTLA-4 antitela, ćelije u svakom uzorku su takođe inkubirane sa izotipskim kontrolnim antitelom IgG4S228P. Slika 7C je grafikon koji prikazuje proizvodnju IL-2 stimulisanu titrovanim dozama izotipskog kontrolnog antitela (IgG1) ili anti-CTLA-4 antitela AGEN1884 (IgG1), AGEN1884 (IgG1S239D/I332E), AGEN1884 (IgG1S239D/A330L/I332E) i afukozilisanog AGEN1884 (IgG1). Slika 8A je imunoblot analiza za fosforilisani ZAP70 (Y493) u humanim PBMC nakon stimulacije sa 50 ng/ml SEA superantigena i 10 μg/ml izotipskog kontrolnog antitela (IgG1) ili anti-CTLA-4 antitela AGEN1884.H3 (IgG1), AGEN1884.H3 (IgG1S239D/A330L/I332E) ili AGEN1884.H3 (IgG1N297A). Slika 8B je grafikon koji prikazuje normalizovanu denzitometrijsku analizu podataka prikazanih na slici 8A.
Slike 9A, 9B, 9C i 9D su grafikoni koji pokazuju antitumorsku efikasnost i intratumorsku depleciju regulatornih T ćelija (Treg) izazvanu Fc varijantama mišjeg anti-CTLA-4 antitela 9D9. Slika 9A pokazuje rast tumora kod CT26 miševa nakon tretmana jednom dozom mišjim anti-CTLA-4 antitelom 9D9 (mIgG2a), Fc-tihom varijantom anti-CTLA-4 antitela 9D9 (mIgG2a-N297A), Fc varijantom anti-CTLA-4 antitela 9D9 (mIgG2aS239D/A330L/I332E) ili izotipskim kontrolnim antitelom (mIgG2a). Gornji panel prikazuje medijanu zapremine tumora tokom vremena za svaku tretmansku grupu. Preostali paneli prikazuju zapreminu tumora tokom vremena za pojedinačne životinje u svakoj tretmanskoj grupi. Slika 9B prikazuje efekat lečenja anti-CTLA-4 antitelom na populaciju T ćelija od tumorskih infiltracija prikupljenih od miševa tretiranih jednom dozom anti-CTLA-4 antitela 9D9 (mIgG2a), anti-CTLA-4 antitela 9D9 (mIgG2a-N297A), anti-CTLA-4 antitela 9D9 (mIgG2a-S239D/A330L/I332E) ili izotipskim kontrolnim antitelom (mIgG2a). Infiltracije tumora su sakupljene i analizirane protočnom citometrijom u naznačenim vremenskim tačkama nakon ubrizgavanja antitela. Analizirane populacije ćelija uključuju: FoxP3+ Treg (gornji levi panel), leukocite CD45+ (gornji desni panel) i CD4+ ne-Treg (donji levi panel). Donji desni panel prikazuje odnos CD8+ T ćelija prema Treg primećenim u infiltracijama tumora. Slika 9C prikazuje populacije FoxP3+ Treg tokom vremena u limfnim čvorovima u koje se dreniraju tumori sakupljeni od miševa tretiranih kao što je opisano za sliku 9B. Slika 9D prikazuje faktor promene FoxP3+ Treg slezine 72 sata nakon tretmana kao što je opisano za sliku 9B.
Slika 10 je serija grafikona koji prikazuju antitumorsku efikasnost anti-CTLA-4 antitela kada se kombinuju sa vakcinom protiv tumora izvedenom iz HPV+ tumora (virusni antigeni E6/E7). Prikazani su zapremina tumora tokom vremena za pojedinačne miševe koji ne primaju tretman, izotipsko kontrolno antitelo (mIgG2a), anti-CTLA-4 antitelo 9D9 (mIgG2a) ili Fc varijantu anti-CTLA-4 antitela 9D9 (mIgG2a-S239D/A330L/I332E).
Grafikoni u gornjem redu prikazuju rezultate za životinje kojima je dat samo naznačeni tretman antitelima. Grafikoni u donjem redu prikazuju rezultate za životinje kojima je dat naznačeni tretman antitelima u kombinaciji sa vakcinom protiv tumora.
Slike 11A i 11B su grafikoni koji prikazuju ekspresiju gena i CpG metilaciju populacija humanih T ćelija. CD4<+>CD25<+/->FOXP3<->neregulatorne T ćelije (Teff) i CD4<+>CD25<+>FOXP3<+>regulatorne T ćelije (Treg) su izolovane iz periferne krvi zdravih davalaca, ekspandirane i aktivirane. Slika 11A prikazuje nivoe FOXP3, intracelularnog CTLA-4 i membranskog CTLA-4 u svakoj aktiviranoj populaciji T ćelija, određeno protočnom citometrijom. Slika 11B prikazuje nivo CpG metilacije u CpG regionima u okviru lokusa FOXP3 (gornji panel) i CTLA4 (donji panel) u naivnim T ćelijama, aktiviranim efektorskim T ćelijama i aktiviranim regulatornim T ćelijama, svaka od istog davaoca. Slike 12A i 12B su grafikoni koji prikazuju vremenske tokove ćelijske citotoksičnosti zavisne od antitela (ADCC) humanih CTLA-4+ ciljnih ćelija nakon inkubacije sa anti-CTLA-4 antitelom AGEN1884.H3 (IgG1) ili njegove Fc varijante. NK-92 ćelije (koje eksprimiraju FcγRIIIA V158) su bile kokultivisane sa CTLA-4+ ciljnim ćelijama koje su bile inkubirane sa različitim Fc varijantama anti-CTLA-4 antitela ili IgG1izotipskim kontrolama (10 μg/ml). Zatim je za kvantifikaciju ADCC aktivnosti primenjena višeparametarska mikroskopija aktivacije kaspaze 3/7. Slika 12A prikazuje aktivnost ADCC u Jurkat ćelijama konstruisanim da eksprimiraju CTLA-4 na površini ćelije, kada su inkubirane sa AGEN1884.H3 (IgG1), AGEN1884.H3 (IgG1N297A), AGEN1884.H3 (IgG1S239D/A330L/I332E), AGEN1884.H3 (IgG1S267E/L328F), afukozilisanim AGEN1884.H3 (IgG1) ili izotipskim kontrolnim antitelom (IgG1). Slika 12B prikazuje aktivnost ADCC u primarnim humanim aktiviranim efektorskim T ćelijama (levi panel) ili regulatornim T ćelijama (desni panel) kada se inkubiraju sa ovim antitelima.
Slike 13A, 13B, 13C i 13D su grafikoni koji prikazuju efekte varijanti anti-CTLA-4 antitela na funkciju T ćelija kada se daju sami ili u kombinaciji sa anti-PD-1 antitelom. Humani PBMC su izolovani od dva davaoca i inkubirani pod stimulativnim uslovima kulture sa anti-CTLA-4 antitelom AGEN1884.H3 (IgG1), Fc varijantom anti-CTLA-4 antitela AGEN1884.H3 (IgG1S239D/A330L/I332E) ili izotipskim kontrolnim antitelom (IgG1), u kombinaciji sa referentnim anti-PD-1 antitelom ili izotipskim kontrolnim antitelom (IgG4), kao što je naznačeno. Za svako navedeno stanje lečenja korišćena je titrirana doza za prvo navedeno antitelo, a fiksna koncentracija (5 μg/ml) je korišćena za drugo navedeno antitelo. Ovaj eksperiment je izveden dva puta, za ukupno dva replikata po davaocu. Nivoi proizvodnje IL-2 izazvani svakom kombinacijom antitela kod PBMC prikupljenih od prvog davaoca prikazani su na slici 13A (replikat 1) i slici 13B (replikat 2). Nivoi proizvodnje IL-2 izazvani svakom kombinacijom antitela kod PBMC prikupljenih od drugog davaoca prikazani su na slici 13C (replikat 1) i slici 13D (replkat 2).
Slike 14A, 14B i 14C predstavljaju niz poravnanja sekvenci. Slika 14A je poravnanje sekvence za humani CTLA-4 (SEQ ID NO: 33), CTLA-4 makaki majmuna (SEQ ID NO: 40), mišji CTLA-4 (SEQ ID NO: 41) i pacovski CTLA-4 (SEQ ID NO: 42). Tačke predstavljaju ostatke identične odgovarajućim humanim ostacima. „*“ (zvezdica) označava pozicije koje imaju jedan, potpuno očuvan ostatak. „:“ (dve tačke) ukazuju na očuvanost između grupa sa snažno sličnim svojstvima. „.“ (tačka) ukazuje na očuvanost između grupa sa slabo sličnim svojstvima. Slike 14B i 14C su poravnanja sekvenci za humani CTLA-4 (ostaci 1-144 i ostaci 145-223 u SEQ ID NO: 33, redom), CTLA-4 makaki majmuna (ostaci 1-144 i ostaci 145-223 u SEQ ID NO: 40, redom), humani CD28 (ostaci 1-127 i ostaci 128-220 u SEQ ID NO: 43, redom), humani ICOS (ostaci 1-124 i ostaci 125-199 u SEQ ID NO: 44, redom), humani BTLA (ostaci 1-125 i ostaci 126-289 u SEQ ID NO: 45, redom) i humani PD-1 (ostaci 1-143 i ostaci 144-288 u SEQ ID NO: 46, redom). Dva regiona koja pokazuju snažno smanjenje preuzimanja deuterijuma kada je humani CTLA-4 vezan za AGEN1884-Fab su podvučeni na slikama 14A-14C: ostaci 80-82 (QVT, SEQ ID NO: 39) i ostaci 135-149 (YPPPYYLGIGNGTQI, SEQ ID NO: 37), numerisano prema SEQ ID NO: 33.
5. DETALJAN OPIS
[0086] Ovo otkriće obezbeđuje antitela koja se specifično vezuju za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4) i antagonizuju funkciju CTLA-4, npr. CTLA-4-posredovanu supresiju imuniteta. Takođe su obezbeđene farmaceutske kompozicije koje sadrže ova antitela, nukleinske kiseline koje kodiraju ova antitela, ekspresioni vektori i ćelije-domaćini za dobijanje ovih antitela, kao i antitela i farmaceutske kompozicije za upotrebu u postupcima za lečenje kancera ili infektivne bolesti kod subjekta. Ovde opisana antitela su posebno korisna za povećanje aktivacije T-ćelija kao odgovor na antigen (npr. tumorski antigen ili antigen infektivne bolesti), pa otuda i za lečenje kancera kod subjekta ili za lečenje ili prevenciju infektivne bolesti kod subjekta. Svi slučajevi „izolovanih antitela“ opisanih ovde dodatno se razmatraju kao antitela koja mogu, ali ne moraju, da budu izolovana. Svi primeri „izolovanih polinukleotida“ opisanih ovde se dodatno razmatraju kao polinukleotidi koji mogu, ali ne moraju, da budu, izolovani. Svi slučajevi „antitela“ opisanih ovde dodatno se razmatraju kao antitela koja mogu, ali ne moraju, da budu izolovana. Svi slučajevi „polinukleotida“ opisanih ovde dodatno se razmatraju kao polinukleotidi koja mogu, ali ne moraju, da budu izolovani.
[0087] Stručnjak u ovoj oblasti će znati da glutamatni (E) ili glutaminski (Q) aminokiselinski ostatak na N-terminusu varijabilnog regiona teškog lanca i/ili varijabilnog regiona lakog lanca bilo kog od antitela opisanih ovde (npr. anti-CTLA4 antitela) može, pod određenim uslovima, spontano da se pretvori u piroglutamat post-translacionom ciklizacijom slobodne amino grupe da bi se formirao laktam. U skladu sa tim, u određenim primerima izvođenja svakog i bilo kog postupka, upotrebe, farmaceutskih kompozicija ili kompleta opisanih ovde, N-terminalni aminokiselinski ostatak jednog ili više varijabilnih regiona teškog lanca i/ili varijabilnih regiona lakog lanca antitela pretvoren je u piroglutamat (npr. kao rezultat post-translacione ciklizacije slobodne amino grupe N-terminalnog E ili Q ostatka).
5.1 Definicije
[0088] Kako se ovde koristi, termini „oko“ i „približno“, kada se koriste za izmenu numeričke vrednosti ili numeričkog opsega, ukazuju na to da odstupanja od 5% do 10% iznad (npr. do 5% do 10% iznad) i 5% do 10% ispod (npr. do 5% do 10% ispod) vrednosti ili opsega ostaju u predviđenom značenju navedene vrednosti ili opsega.
[0089] Kako se ovde koristi, termin „CTLA-4“ se odnosi na protein 4 povezan sa citotoksičnim T-limfocitom. Kako se ovde koristi, termin „humani CTLA-4“ se odnosi na humani CTLA-4 protein kodiran divljim tipom humanog gena CTLA-4 npr. GenBank<™>pristupni broj NM_005214.4 ili NM_001037631.2. Primer nezrele aminokiselinske sekvence humanog CTLA-4 dat je kao SEQ ID NO: 33.
[0090] Kako se ovde koristi, termini „antitelo“ i „antitela“ uključuju antitela pune dužine, antigenvezujuće fragmente antitela pune dužine i molekule koji sadrže CDR, VH regione ili VL regione antitela. Primeri antitela uključuju monoklonska antitela, rekombinantno proizvedena antitela, monospecifična antitela, multispecifična antitela (uključujući bispecifična antitela), humana antitela, humanizovana antitela, himerna antitela, imunoglobuline, sintetička antitela, tetramerna antitela koja sadrže dva molekula teškog lanca i dva molekula lakog lanca, monomer lakog lanca antitela, monomer teškog lanca antitela, dimer lakog lanca antitela, dimer teškog lanca antitela, par lakog lanca antitela - teškog lanca antitela, intra-tela, heterokonjugatna antitela, konjugate antitela i lekova, jednodomenska antitela, monovalentna antitela, jednolančana antitela ili jednolančane Fv (scFv), kamelizovana antitela, afi-tela, Fab fragmente, F(ab')2fragmente, disulfidno vezane Fv (sdFv), antiidiotipska (anti-Id) antitela (uključujući, npr. anti-anti-Id antitela) i antigen-vezujuće fragmente svega gore navedenog. U određenim primerima izvođenja, Ovde opisana antitela se odnose na populacije poliklonskih antitela. Antitela mogu biti bilo kog tipa (npr. IgG, IgE, IgM, IgD, IgA ili IgY), bilo koje klase (npr. IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1ili IgA2) ili bilo koje potklase (npr. IgG2aili IgG2b) imunoglobulinskog molekula. U određenim primerima izvođenja, Ovde opisana antitela su IgG antitela, ili njihove klase (npr. humani IgG1ili IgG4) ili potklase. U specifičnom primeru izvođenja, antitelo je humanizovano monoklonsko antitelo. U drugom specifičnom primeru izvođenja, antitelo je humano monoklonsko antitelo.
[0091] Kako se ovde koriste, termini „VH region“ i „VL region“ odnose se na pojedinačne varijabilne regione teškog, odnosno lakog lanca antitela, koji sadrže FR (okvirni region) 1, 2, 3 i 4 i CDR (regioni koji određuju komplementarnost) 1, 2 i 3 (videti Kabat et al., (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest (NIH Publication No.91-3242, Bethesda)).
[0092] Kako se ovde koristi, termin „CDR“ ili „region koji određuje komplementarnost“ označava nekontinuirana antigen-kombinujuća mesta koja se nalaze unutar varijabilnog regiona polipeptida teškog, kao i lakog lanca. Ovi regioni su opisani u Kabat et al., J. Biol. Chem. 252, 6609-6616 (1977) i Kabat et al., Sequences of protein of immunological interest. (1991), autora Chothia et al., J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987), i autora MacCallum et al., J. Mol. Biol. 262:732-745 (1996), gde definicije uključuju preklapanje podskupova aminokiselinskih ostataka kada se međusobno porede. U određenim primerima izvođenja, termin „CDR“ je CDR kako ga definišu Kabat et al., J. Biol. Chem. 252, 6609-6616 (1977) i Kabat et al., Sequences of protein of immunological interest. (1991). U određenim primerima izvođenja, termin „CDR“ je CDR kako ga je definisao Chothia et al., J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987). U određenim primerima izvođenja, termin „CDR“ je CDR koji je definisan od strane MacCallum et al., J. Mol. Biol.262:732-745 (1996) i Martin A. „Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains,“ in Antibody Engineering, Kontermann and Dübel, eds., Chapter 31, pp. 422-439, Springer-Verlag, Berlin (2001).
[0093] Kako se ovde koristi, termin „aminokiselinski ostaci okvirnog regiona (FR)“ odnosi se na one aminokiseline u okvirnom regionu imunoglobulinskog lanca. Termin „okvirni region“ ili „FR region“ Kako se ovde koristi, uključuje aminokiselinske ostatke koji su deo varijabilnog regiona, ali nisu deo CDR regiona (npr. koristeći Kabat ili Chothia definicije CDR regiona).
[0094] Kako se ovde koriste, termini „varijabilni region“ i „varijabilni domen“ se koriste zamenljivo i uobičajeni su u ovoj oblasti. Varijabilni region se obično odnosi na deo antitela, generalno, deo lakog ili teškog lanca, obično oko 110 do 125 amino-terminalnih aminokiselina u zrelom teškom lancu i oko 90 do 115 aminokiselina u zrelom lakom lancu, koje se znatno razlikuju po sekvenci među antitelima i imaju ulogu u vezivanju i specifičnosti određenog antitela za njegov konkretni antigen. Varijabilnost u sekvenci je koncentrisana u onim regionima koji se nazivaju regioni koji određuju komplementarnost (CDR) dok se visoko očuvani regioni u varijabilnom domenu nazivaju okvirni regioni (FR). Bez želje za vezivanjem za određeni mehanizam ili teoriju, veruje se da su CDR regioni lakog i teškog lanca prvenstveno odgovorni za interakciju i specifičnost antitela sa antigenom. U određenim primerima izvođenja, varijabilni region je humani varijabilni region. U određenim primerima izvođenja, varijabilni region sadrži CDR regione glodara ili miša i humane okvirne regione (FR). U posebnim primerima izvođenja, varijabilni region je varijabilni region primata (npr. primata koji nije čovek). U određenim primerima izvođenja, varijabilni region CDR regione glodara ili miša i okvirne regione (FR) primata (npr. primata koji nije čovek).
[0095] Termini „VL“ i „VL domen“ se koriste zamenljivo za upućivanje na varijabilni region lakog lanca antitela.
[0096] Termini „VH“ i „VH domen“ se koriste zamenljivo za upućivanje na varijabilni region teškog lanca antitela.
[0097] Kako se ovde koriste, termini „konstantni region“ i „konstantni domen“ su zamenljivi i uobičajeni u ovoj oblasti. Konstantni region je deo antitela, npr. karboksi-terminalni deo lakog i/ili teškog lanca koji nije neposredno uključen u vezivanje antitela za antigen, ali koji može da ispolji različite efektorske funkcije, kao što je interakcija sa Fc receptorom (npr. Fc gama receptor). Konstantni region imunoglobulinskog molekula uglavnom ima očuvaniju aminokiselinsku sekvencu u odnosu na varijabilni domen imunoglobulina.
[0098] Kako se ovde koristi, termin „teški lanac“, kada se koristi uz pozivanje na antitela može da se odnosi na bilo koji poseban tip, npr. alfa (α), delta (δ), epsilon (ε), gama (γ) i mi (μ), na osnovu sekvence aminokiselina konstantnog domena, koja određuje IgA, IgD, IgE, IgG, odnosno IgM klasu antitela, uključujući potklase IgG, npr. IgG1, IgG2, IgG3i IgG4.
[0099] Kako se ovde koristi, termin „laki lanac“ kada se koristi uz pozivanje na antitela može da se odnosi na bilo koji poseban tip, npr. kapa (κ) ili lambda (λ) na osnovu aminokiselinske sekvence konstantnih domena. Aminokiselinske sekvence lakog lanca dobro su poznate u tehnici.
[0100] Kako se ovde koristi, termin „sistem numerisanja EU“ odnosi se na konvenciju EU o numerisanju za konstantne regione antitela, kao što je opisano u Edelman, G. M. et al., Proc. Natl. Acad. USA, 63, 78-85 (1969) i Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, U.S. Dept. Health and Human Services, 5th edition, 1991.
[0101] „Afinitet vezivanja“ se uglavnom odnosi na jačinu zbira nekovalentnih interakcija između jednog vezujućeg mesta molekula (npr. antitela) i njegovog vezujućeg partnera (npr. antigena). Osim ako nije drugačije naznačeno, kako se ovde koristi, „afinitet vezivanja“ se odnosi na intrinzički afinitet vezivanja koji odražava interakciju 1:1 između članova vezujućeg para (npr.
antitela i antigena). Afinitet molekula X za njegovog partnera Y generalno može da se predstavi konstantom disocijacije (KD). Afinitet može da se izmeri i/ili iskaže na više načina poznatih u tehnici, uključujući, ali ne ograničavajući se na ravnotežnu konstantu disocijacije (KD) i ravnotežnu konstantu asocijacije (KA). KDse izračunava iz količnika koff/kon, dok se KAizračunava iz količnika kon/koff. konse odnosi na konstantu brzine asocijacije, npr. antitela sa antigenom, a koffse odnosi na konstantu brzine disocijacije, npr. antitela sa antigenom. Kon ikoffmogu da se odrede tehnikama poznatim stručnjaku u ovoj oblasti, kao što su BIAcore<®>ili KinExA. Kako se ovde koristi, „niži afinitet“ se odnosi na veću KD.
[0102] Kako se ovde koristi, termini „specifično se vezuje“, „specifično prepoznaje“, „imunospecifično se vezuje“ i „imunospecifično prepoznaje“ su analogni termini u kontekstu antitela i odnose se na molekule koji se vezuju za antigen (npr. epitop ili imuni kompleks) onako kako takvo vezivanje razume stručnjak u ovoj oblasti. Na primer, molekul koji se specifično vezuje za antigen može da se veže za druge peptide ili polipeptide, generalno sa nižim afinitetoi određenim, npr. imunološkim testovima, BIAcore<®>, KinExA 3000 instrumentom (Sapidyne Instruments, Boise, ID) ili drugim testovima poznatim u struci. U specifičnom primeru izvođenja, molekuli koji se specifično vezuju za antigen vezuju se za antigen sa KAkoja je najmanje 2 loga (tj. faktora 10), 2.5 loga, 3 loga, 4 loga ili više od KAkada se molekuli nespecifično vezuju za drugi antigen.
[0103] U još jednom specifičnom primeru izvođenja, molekuli koji se specifično vezuju za antigen ne reaguju unakrsno sa drugim proteinima pod sličnim uslovima vezivanja. U drugom specifičnom primeru izvođenja, molekuli koji se specifično vezuje za CTLA-4 ne reaguje unakrsno sa drugim proteinima koji nisu CTLA-4. U specifičnom primeru izvođenja, ovde je obezbeđeno antitelo koje se vezuje za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4) sa većim afinitetom nego sa drugim nesrodnim antigenom. U određenim primerima izvođenja, ovde je obezbeđeno antitelo koje se vezuju za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4) sa 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ili većim afinitetom nego za drugi, nesrodni antigen, mereno, npr. radioimunološkim testom, rezonancom površinskog plazmona, ili testom kinetičkog isključivanja. U specifičnom primeru izvođenja, stepen vezivanja anti-CTLA-4 antitela opisanog ovde sa nesrodnim, ne-CTLA-4 proteinom je manji od 10%, 15%, ili 20% vezivanja antitela za CTLA-4 protein, mereno, npr. radioimunološkim testom.
[0104] Kako se ovde koristi, termin „afukozilacija“ ili „afukozilisan“ u kontekstu Fc odnosi se na suštinski nedostatak fukoze koja je kovalentno vezana, direktno ili indirektno, za ostatak 297 humanog Fc regiona IgG1, numerisano prema sistemu numerisanja EU, ili odgovarajućeg ostatka u imunoglobulinima koji nisu IgG1ili nisu humani IgG1. Tako, u kompoziciji koja sadrži mnoštvo afukozilisanih antitela, najmanje 70% antitela neće biti fukozilisano, direktno ili indirektno (npr. putem intermedijarnih šećera) na ostatku 297 Fc regiona antitela, a u nekim primerima izvođenja najmanje 80%, 85%, 90%, 95%, ili 99% neće biti fukozilisano, direktno ili indirektno, na ostatku 297 Fc regiona.
[0105] Kako se ovde koristi, „epitop“ je izraz u tehnici i odnosi se na lokalizovani region antigena za koji antitelo može specifično da se veže. Epitop mogu da budu, na primer, kontinuirane aminokiseline polipeptida (linearni ili kontinuirani epitop) ili epitop može, na primer, da se kombinuje od dva ili više nesusednih regiona jedno ili više polipeptida (konformacioni, nelinearni, diskontinuirani ili nekontinuirani epitop). U određenim primerima izvođenja, epitop za koji se vezuje antitelo može da se odredi pomoću, npr. NMR spektroskopije, kristalografske studije rendgenske difrakcije, ELISA testova, razmene vodonika/deuterijuma povezane sa masenom spektrometrijom (npr. tečna hromatografija-masena spektrometrija sa elektrosprejem), testovi skeniranja oligopeptida na čipu (npr.., ograničavanje peptida pomoću tehnologije CLIPS (Hemijsko vezivanje peptida na nosače) za mapiranje nekontinuiranih ili konformacionih epitopa), i/ili mapiranje pomoću mutageneze (npr. mapiranje pomoću mesto-specifične mutageneze). Za rendgensku kristalografiju, kristalizacija se može postići korišćenjem bilo koje od metoda poznatih u tehnici (npr. Giegé R et al., (1994) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 50(Pt 4): 339-350; McPherson A (1990) Eur J Biochem 189: 1-23; Chayen NE (1997) Structure 5: 1269-1274; McPherson A (1976). J Biol Chem 251: 6300-6303). Kristali antitelo:antigen mogu da se proučavaju korišćenjem dobro poznate tehnike rendgenske difrakcije i njihova struktura može da bude razjašnjena pomoću kompjuterskog softvera kao što je X-PLOR (Univerzitet Jejl, 1992, distribuira Molecular Simulations, Inc.; videti, npr. Meth Enzymol (1985) volumes 114 & 115, eds Wyckoff HW et al.,; U.S.2004/0014194), i BUSTER (Bricogne G (1993) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 49(Pt 1): 37-60; Bricogne G (1997) Meth Enzymol 276A: 361-423, ed Carter CW; Roversi P et al., (2000) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 56(Pt 10): 1316-1323). Studije mapiranja pomoću mutageneze mogu da budu ostvarene korišćenjem bilo koje metode poznate stručnjaku u ovoj oblasti. Videti, npr. Champe M et al., (1995) J Biol Chem 270: 1388-1394 i Cunningham BC & Wells JA (1989) Science 244: 1081-1085, za opis tehnika mutageneze, uključujući tehnike mutageneze alaninskim skeniranjem. CLIPS (Hemijsko vezivanje peptida na nosače) je tehnologija predstavljanja jednog ili više peptida u strukturno ograničenoj konfiguraciji kako bi se ponašali kao funkcionalni mimetici složenih proteinskih domena. Videti, npr. SAD objave br. US 2008/0139407 A1 i US 2007/099240 A1 i SAD patent br.7,972,993. U specifičnom primeru izvođenja, epitop antitela se određuje pomoću studija mutageneze alaninskim skeniranjem. U specifičnom primeru izvođenja, epitop antitela se određuje korišćenjem razmene vodonika/deuterijuma spregnute sa masenom spektrometrijom. U specifičnom primeru izvođenja, epitop antitela se određuje korišćenjem tehnologije mapiranja epitopa CLIPS kompanije Pepscan Therapeutics.
[0106] Kako se ovde koristi, termin „epitop koji se nalazi u regionu humanog CTLA-4“ koji se sastoji od određene aminokiselinske sekvence ili skupa aminokiselinskih ostataka odnosi se na epitop koji sadrži jedan ili više aminokiselinskih ostataka navedenog regiona, gde navedeni region uključuje prve navedene aminokiselinske ostatke i poslednje navedene aminokiselinske ostatke u regionu humanog CTLA-4. U određenim primerima izvođenja, epitop sadrži svaki od aminokiselinskih ostataka koji se nalaze u navedenom regionu. U određenim primerima izvođenja, jedan ili više dodatnih aminokiselinskih ostataka humanog CTLA-4 izvan navedenog regiona vezuju se za antitelo zajedno sa epitopom koji se nalazi u navedenom regionu.
[0107] Kako se ovde koristi, termini „T-ćelijski receptor“ i „TCR“ se koriste zamenljivo i odnose se na heterodimerne αβ ili γδ TCR pune dužine, antigen-vezujuće fragmente TCR pune dužine i molekule koji sadrže CDR ili varijabilne regione TCR. Primeri TCR uključuju, ali nisu ograničeni na TCR pune dužine, antigen-vezujuće fragmente TCR pune dužine, rastvorljive TCR kojima nedostaju transmembranski i citoplazmatični regioni, jednolančane TCR koji sadrže varijabilne regione TCR vezane fleksibilnim linkerom, lance TCR vezane konstruisanom disulfidnom vezom, monospecifične TCR, multi-specifične TCR (uključujući i bispecifične TCR), TCR fuzije, humanizovane TCR, himerne TCR, rekombinantno proizvedene TCR i sintetičke TCR. Termin obuhvata TCR divljeg tipa i genetski modifikovane TCR (npr. himerni TCR koji sadrži himerni lanac TCR koji uključuje prvi deo iz TCR prve vrste i drugi deo iz TCR druge vrste).
[0108] Kako se ovde koristi, termini „glavni kompleks histokompatibilnosti“ i „MHC“ se koriste zamenljivo i odnose se na molekul MHC klase I i/ili molekul MHC klase II.
[0109] Kako se ovde koristi, termin „kompleks peptid-MHC“ se odnosi na MHC molekul (MHC klase I ili MHC klase II) sa peptidom vezanim u džepu MHC za vezivanje peptida poznatim u tehnici.
[0110] Kako se ovde koristi, termin „lečiti“, „lečenje“ i „tretman“ se odnosi na terapijske ili preventivne mere opisane ovde. Postupci „lečenja“ koriste davanje antitela subjektu koji ima bolest ili poremećaj, ili je predisponiran da ima takvu bolest ili poremećaj, kako bi se sprečio, izlečio, odložio, smanjila ozbiljnost, ili ublažio jedan ili više simptoma bolesti ili poremećaja ili ponavljanja bolesti ili poremećaja, ili kako bi se produžilo preživljavanje subjekta iznad očekivanog u odsustvu takvog lečenja.
[0111] Kako se ovde koristi, termin „efikasna količina“ u kontekstu davanja terapije subjektu odnosi se na količinu terapije koja postiže željeni profilaktički ili terapeutski efekat.
[0112] Kako se ovde koristi u pogledu odgovora kancera na terapiju, termini „refraktorni“ i „rezistentni“ imaju svoje značenje poznato u tehnici i koriste se zamenljivo.
[0113] Kako se ovde koristi, termin „subjekt“ uključuje bilo koju životinju koja je čovek ili nije čovek. U jednom primeru izvođenja, subjekt je sisar koji je čovek ili nije čovek. U jednom primeru izvođenja, subjekt je čovek.
[0114] Utvrđivanje „procenta identičnosti“ između dve sekvence (npr. aminokiselinske sekvence ili sekvence nukleinske kiseline) može da se postigne pomoću matematičkog algoritma. Specifičan, neograničavajući primer matematičkog algoritma iskorišćen za poređenje dve sekvence je algoritam Karlin S & Altschul SF (1990) PNAS 87: 2264-2268, modifikovan kao u Karlin S & Altschul SF (1993) PNAS 90: 5873-5877. Takav algoritam je ugrađen u NBLAST i XBLAST programe Altschul SF et al., (1990) J Mol Biol 215: 403. BLAST nukleotidne pretrage se mogu izvršiti sa NBLAST nukleotidnim programskim parametrima postavljenim, npr. za rezultat=100, dužina reči=12 da bi se dobile nukleotidne sekvence homologne sa molekulom nukleinske kiseline opisanim ovde. BLAST pretrage proteina se mogu izvršiti sa XBLAST programskim parametrima postavljenim, npr. za rezultat 50, dužina reči=3 da bi se dobile aminokiselinske sekvence homologne molekulu proteina koji je ovde opisan. Da bi se dobila poravnanja sa prazninama u svrhu poređenja, može da se koristi Gapped BLAST, kao što je opisano u Altschul SF et al., (1997) Nuc Acids Res 25: 3389-3402. Osim toga, PSI BLAST se može koristiti za iteriranu pretragu koja otkriva udaljene odnose između molekula (Id.).Prilikom korišćenja BLAST, Gapped BLAST i PSI Blast programa, mogu se koristiti podrazumevani parametri odgovarajućih programa (npr. XBLAST i NBLAST) (videti, npr. Nacionalni centar za biotehnološke informacije (NCBI) na internetu, ncbi.nlm.nih.gov). Još jedan specifičan, neograničavajući primer matematičkog algoritma koji se koristi za poređenje sekvenci je algoritam Myers and Miller, 1988, CABIOS 4:11-17. Takav algoritam je ugrađen u program ALIGN (verzija 2.0) koji je deo softverskog paketa za poravnavanje sekvenci GCG. Prilikom korišćenja programa ALIGN za poređenje aminokiselinskih sekvenci, može se koristiti tabela za težinu zamene ostataka PAM120, kazna za dužinu praznine od 12 i kazna za prazninu od 4.
[0115] Procenat identičnosti između dve sekvence može da se odredi korišćenjem tehnika sličnih onima opisanim iznad, sa ili bez dozvoljavanja praznina. Prilikom izračunavanja procenta identičnosti, obično se računaju samo tačna podudaranja.
5.2 Anti-CTLA-4 antitela
[0116] U jednom aspektu predmetno otkriće obezbeđuje antitela koja se specifično vezuju za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4) i antagonizuju CTLA-4 funkciju. Aminokiselinske sekvence ilustrativnih antitela su prikazane u Tabelama 1-4 ovde.
Tabela 2. Aminokiselinske sekvence CDR teškog lanca ilustrativnih anti-CTLA-4 antitela.*
*Definisano prema Kabat sistemu numerisanja.
Tabela 3. Aminokiselinske sekvence CDR lakog lanca ilustrativnih anti-CTLA-4 antitela.<*>
.
Tabela 4. Ilustrativna anti-CTLA-4 antitela.
Antitelo Varijabilni region teškog lanca SEQ Varijabilni SEQ ID region lakog ID NO: lanca NO:
Tabela 5. Najbliži geni klicine linije.
Tabela 6. Ilustrativne sekvence CTLA-4 i članova familije.
[0117] Obelodanjeno je izolovano antitelo koje se specifično vezuje za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4), gde antitelo sadrži VH domen koji sadrži jedan, dva ili sva tri CDR regiona VH domena prikazanog u tabeli 1 ovde. U određenom otkriću, antitelo sadrži CDRH1 jednog od VH domena prikazanih u tabeli 1. U određenom otkriću, antitelo sadrži CDRH2 jednog od VH domena prikazanih u tabeli 1. U određenom otkriću, antitelo sadrži CDRH3 jednog od VH domena predstavljenih u tabeli 1.
[0118] U određenom otkriću, predmetno otkriće obezbeđuje izolovano antitelo koje se specifično vezuje za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4), gde antitelo sadrži VL domen koji sadrži jedan, dva ili sva tri CDR regiona VL domena obelodanjena u tabeli 1 ovde. U određenom otkriću, antitelo sadrži CDRL1 jednog od VL domena postavljenih u tabeli 1. U određenom otkriću, antitelo sadrži CDRL2 jednog od VL domena predstavljenih u tabeli 1. U određenom otkriću, antitelo sadrži CDRL3 jednog od VL domena predstavljenih u tabeli 1.
[0119] U određenom otkriću, CDR regioni antitela mogu da se odrede prema Kabat et al., J. Biol. Chem. 252, 6609-6616 (1977) i Kabat et al., Sequences of protein of immunological interest (1991).
[0120] U određenom otkriću, CDR regioni antitela mogu da se odrede prema šemi numeracije Chothia, koja se odnosi na lokaciju strukturnih petlji imunoglobulina (videti, npr. Chothia C & Lesk AM, (1987), J Mol Biol 196: 901-917; Al-Lazikani B et al., (1997) J Mol Biol 273: 927-948; Chothia C et al., (1992) J Mol Biol 227: 799-817; Tramontano A et al., (1990) J Mol Biol 215(1): 175–82; i SAD patent br.7,709,226). Obično, kada se koristi Kabat konvencija numerisanja, petlja Chothia CDRH1 je prisutna na aminokiselinama teškog lanca od 26 do 32, 33, ili 34, petlja Chothia CDRH2 je prisutna na aminokiselinama teškog lanca 52 do 56, a petlja Chothia CDRH3 je prisutna na aminokiselinama teškog lanca od 95 do 102, dok je petlja Chothia CDRL1 prisutna na aminokiselinama lakog lanca 24 do 34, petlja Chothia CDRL2 je prisutna na aminokiselinama lakog lanca 50 do 56, a petlja Chothia CDRL3 je prisutna na aminokiselinama lakog lanca 89 do 97. Kraj petlje Chothia CDRH1 kada je numerisan pomoću Kabat konvencije numerisanja varira između H32 i H34 u zavisnosti od dužine petlje (to je zato što Kabat šema numerisanja postavlja insercije na H35A i H35B; ako ni 35A ni 35B nisu prisutne, petlja se završava na 32; ako je samo 35A prisutna, petlja se završava u 33; ako su prisutne i 35A i 35B, petlja se završava na 34).
[0121] U određenom otkriću, predmetno otkriće obezbeđuje izolovano antitelo koje se specifično vezuje za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4), gde antitelo sadrži Chothia VH CDR regione VH obelodanjene u tabeli 1 ovde. U određenom otkriću, predmetno otkriće obezbeđuje izolovano antitelo koje se specifično vezuje za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4), gde antitelo sadrži Chothia VL CDR regione iz VL kao što je opisano u tabeli 1 ovde. U određenom otkriću, predmetno otkriće obezbeđuje izolovano antitelo koje se specifično vezuje za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4), gde antitelo sadrži Chothia VH CDR regione i Chothia VL CDR regione antitela kao što je opisano u tabeli 1 ovde. U određenom otkriću, antitela koja se specifično vezuju za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4) sadrže jedan ili više CDR regiona, u kojima Chothia i Kabat CDR regioni imaju istu aminokiselinsku sekvencu. U određenom otkriću, predmetno otkriće obezbeđuje izolovano antitelo koje se specifično vezuje za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4) i sadrži kombinacije Kabat CDR regiona i Chothia CDR regiona.
[0122] U određenom otkriću, CDR regioni antitela mogu da se odrede prema IMGT sistemu numerisanja kao što je opisano u Lefranc M-P, (1999) The Immunologist 7: 132-136 i Lefranc M-P et al., (1999) Nucleic Acids Res 27: 209-212.
[0123] U određenom otkriću, predmetno otkriće obezbeđuje antitela koja se specifično vezuju za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4) i sadrže CDR regione antitela obelodanjena u tabeli 1 ovde, određeno IMGT sistemom numerisanja, na primer, kao što je opisano u Lefranc M-P (1999), iznad i Lefranc M-P et al., (1999), iznad.
[0124] U određenom otkriću, CDR regioni antitela mogu da se odrede prema AbM šemi numerisanja, koja se odnosi na AbM hipervarijabilne regione, koji predstavljaju kompromis između Kabat CDR regiona i Chothia strukturnih petlji, a koristi je softver za modelovanje AbM antitela kompanije Oxford Molecular (Oxford Molecular Group, Inc.). U određenom primeru izvođenja, predmetno otkriće obezbeđuje antitela koja se specifično vezuju za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4) i sadrže CDR regione antitela opisane u tabeli 1 ovde, određeno AbM šemom numerisanja.
[0125] U određenom otkriću, predmetno otkriće obezbeđuje izolovano antitelo koje se specifično vezuje za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4), gde antitelo sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu regiona CDRH1, CDRH2 i CDRH3 VH domena prikazane u SEQ ID NO: 2, 4, 5, 6, 7 ili 8, i varijabilni region lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu regiona CDRL1, CDRL2 i CDRL3 VL domena prikazane u SEQ ID NO: 9, gde je svaki CDR definisan u skladu sa MacCallum definicijom, Kabat definicijom, Chothia definicijom, kombinacijom Kabat definicije i Chothia definicije, IMGT sistemom numerisanja ili AbM definicijom CDR regiona.
[0126] U određenom otkriću, predmetno otkriće obezbeđuje izolovano antitelo koje se specifično vezuje za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4), gde antitelo sadrži:
(a) CDRH1 sadrži aminokiselinsku sekvencu SYSMN (SEQ ID NO: 10); i/ili
(b) CDRH2 sadrži aminokiselinsku sekvencu SISSSSSYIYYAXSVKG (SEQ ID NO: 18), gde X predstavlja E ili D; i/ili
(c) CDRH3 sadrži aminokiselinsku sekvencu VGLXGPFDI (SEQ ID NO: 19), gde X predstavlja F ili M; i/ili
(d) CDRL1 sadrži aminokiselinsku sekvencu RASQSVSRYLG (SEQ ID NO: 15); i/ili (e) CDRL2 sadrži aminokiselinsku sekvencu GASTRAT (SEQ ID NO: 16); i/ili
(f) CDRL3 sadrži aminokiselinsku sekvencu QQYGSSPWT (SEQ ID NO: 17), a gde u CDRH1, CDRH2 i CDRH3 sekvencama antitela nisu SEQ ID NO: 10, 11, odnosno 13.
[0127] U određenom otkriću, CDRH2 sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 11. U određenom otkriću, CDRH2 sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 12. U određenom otkriću, CDRH3 sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 13. U određenom otkriću, CDRH3 sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 14.
[0128] U određenom otkriću, predmetno otkriće obezbeđuje izolovano antitelo koje se specifično vezuje za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4), gde antitelo sadrži VH domen koji sadrži aminokiselinske sekvence CDRH1, CDRH2 i CDRH3 prikazane u SEQ ID NO: 10, 11 i 14; 10, 12 i 13; ili 10, 12 i 14, redom. U određenom otkriću, predmetno otkriće obezbeđuje izolovano antitelo koje se specifično vezuje za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4), gde antitelo sadrži VH domen koji sadrži aminokiselinske sekvence CDRH1, CDRH2 i CDRH3 prikazane u SEQ ID NO: 10, 12 i 14, redom.
[0129] U određenom otkriću, predmetno otkriće obezbeđuje izolovano antitelo koje se specifično vezuje za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4), gde antitelo sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži CDRH1, CDRH2 i CDRH3 regione i varijabilni region lakog lanca koji sadrži CDRL1, CDRL2 i CDRL3 regione, gde CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 i CDRL3 regioni sadrže aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NO: 10, 11, 14, 15, 16 i 17; 10, 12, 13, 15, 16 i 17; ili 10, 12, 14, 15, 16 i 17, redom. U određenom otkriću, predmetno otkriće obezbeđuje izolovano antitelo koje se specifično vezuje za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4), gde antitelo sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži CDRH1, CDRH2 i CDRH3 regione i varijabilni region lakog lanca koji sadrži CDRL1, CDRL2 i CDRL3 regione, gde CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 i CDRL3 regioni sadrže aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NO: 10, 12, 14, 15, 16 i 17, redom.
[0130] U određenom otkriću, predmetno otkriće obezbeđuje izolovano antitelo koje se specifično vezuje za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4), koje sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 20. U određenom otkriću, predmetno otkriće obezbeđuje izolovano antitelo koje se specifično vezuje za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4), koji sadrži varijabilni regiona teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu koja je najmanje 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99%, ili 100% (npr. najmanje 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 ili 99%) identična aminokiselinskoj sekvenci predstavljenoj u SEQ ID NO: 2, 4, 5, 6, 7 ili 8. U određenom otkriću, predmetno otkriće obezbeđuje izolovano antitelo koje se specifično vezuje za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4), koji sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu koja je najmanje 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99%, ili 100% (npr. najmanje 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 ili 99%) identična aminokiselinskoj sekvenci predstavljenoj u SEQ ID NO: 3. U određenom otkriću, antitelo sadrži varijabilni region teškog lanca koji ima aminokiselinsku sekvencu prikazanu u SEQ ID NO: 2, 4, 5, 6, 7 ili 8. U određenom otkriću, antitelo sadrži varijabilni region teškog lanca koji ima aminokiselinsku sekvencu predstavljenu u SEQ ID NO: 2. U određenom otkriću, antitelo sadrži varijabilni region teškog lanca koji ima aminokiselinsku sekvencu predstavljenu u SEQ ID NO: 3. U određenom otkriću, antitelo sadrži varijabilni region teškog lanca koji ima aminokiselinsku sekvencu predstavljenu u SEQ ID NO: 4. U određenom otkriću, antitelo sadrži varijabilni region teškog lanca koji ima aminokiselinsku sekvencu predstavljenu u SEQ ID NO: 5. U određenom otkriću, antitelo sadrži varijabilni region teškog lanca koji ima aminokiselinsku sekvencu predstavljenu u SEQ ID NO: 6. U određenom otkriću, antitelo sadrži varijabilni region teškog lanca koji ima aminokiselinsku sekvencu predstavljenu u SEQ ID NO: 7. Antitelo pronalaska sadrži varijabilni region teškog lanca koji ima aminokiselinsku sekvencu predstavljenu u SEQ ID NO: 8.
[0131] U određenom otkriću, predmetno otkriće obezbeđuje izolovano antitelo koje se specifično vezuje za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4), koji sadrži varijabilni region lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu koja je najmanje 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99%, ili 100% (npr. najmanje 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 ili 99%) identična aminokiselinskoj sekvenci predstavljenoj u SEQ ID NO: 9. Antitelo pronalaska sadrži varijabilni region lakog lanca koji ima aminokiselinsku sekvencu predstavljenu u SEQ ID NO: 9.
[0132] U određenom otkriću, predmetno otkriće obezbeđuje izolovano antitelo koje se specifično vezuje za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4), koje sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 20, i varijabilni region lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 9. U određenom otkriću, predmetno otkriće obezbeđuje izolovano antitelo koje se specifično vezuje za CTLA-4 (npr.., humani CTLA-4), koje sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu koja je najmanje 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99%, ili 100% (npr. najmanje 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 ili 99%) identična aminokiselinskoj sekvenci predstavljenoj u SEQ ID NO: 2, 4, 5, 6, 7 ili 8, i varijabilni region lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu koja je najmanje 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99%, ili 100% (npr. najmanje 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 ili 99%) identična aminokiselinskoj sekvenci predstavljenoj u SEQ ID NO: 9. U određenom otkriću, predmetno otkriće obezbeđuje izolovano antitelo koje se specifično vezuje za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4), koje sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu koja je najmanje 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99%, ili 100% (npr. najmanje 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 ili 99%) identična aminokiselinskoj sekvenci predstavljenoj u SEQ ID NO: 3, i varijabilni region lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu koja je najmanje 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99%, ili 100% (npr. najmanje 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 ili 99%) identična aminokiselinskoj sekvenci predstavljenoj u SEQ ID NO: 9. U određenom otkriću, antitelo sadrži varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca koji imaju aminokiselinske sekvence predstavljene u SEQ ID NO: 2 i 9; 4 i 9; 5 i 9; 6 i 9; 7 i 9; ili 8 i 9, redom. U određenom otkriću, antitelo sadrži varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca koji imaju aminokiselinske sekvence predstavljene u SEQ ID NO: 2 odnosno 9. U određenom otkriću, antitelo sadrži varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca koji imaju aminokiselinske sekvence predstavljene u SEQ ID NO: 3 odnosno 9. U određenom otkriću, antitelo sadrži varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca koji imaju aminokiselinske sekvence predstavljene u SEQ ID NO: 4 odnosno 9. U određenom otkriću, antitelo sadrži varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca koji imaju aminokiselinske sekvence predstavljene u SEQ ID NO: 5 odnosno 9. U određenom otkriću, antitelo sadrži varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca koji imaju aminokiselinske sekvence predstavljene u SEQ ID NO: 6 odnosno 9. U određenom otkriću, antitelo sadrži varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca koji imaju aminokiselinske sekvence predstavljene u SEQ ID NO: 7 odnosno 9. Antitelo sadrži varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca koji imaju aminokiselinske sekvence predstavljene u SEQ ID NO: 8 odnosno 9.
[0133] Obelodanjeno je izolovano antitelo koje se specifično vezuje za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4), koje sadrži varijabilni region teškog lanca koja ima aminokiselinsku sekvencu izvedenu iz sekvence IGHV3-21 humane klicine linije (npr. IGHV3-21 *01, koja, npr. ima aminokiselinsku sekvenci SEQ ID NO: 21). Jedan ili više regiona odabranih od okvirnog regiona 1, okvirnog regiona 2, okvirnog regiona 3, CDRH1 i CDRH2 (npr. dva, tri, četiri ili pet od ovih regiona) mogu da potiču od sekvence IGHV3-21 humane klicine linije (npr. IGHV3-21*01, koja, npr. ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 21). U jednom primeru izvođenja, okvirni region 1, okvirni region 2, okvirni region 3, CDRH1 i CDRH2 su svi izvedeni iz sekvence IGHV3-21 humane klicine linije (npr. IGHV3-21 *01, koja, npr. ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 21).
[0134] Obelodanjeno je izolovano antitelo koje se specifično vezuje za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4), koje sadrži varijabilni region lakog lanca koja ima aminokiselinsku sekvencu izvedenu iz sekvence humane klicine linije izabrane iz grupe koja se sastoji od IGKV3-20 (npr. IGKV3-20*01, koja, npr. ima aminokiselinsku sekvenci SEQ ID NO: 22). Jedan ili više regiona odabranih od okvirnog regiona 1, okvirnog regiona 2, okvirnog regiona 3, CDRL1 i CDRL2 (npr. dva, tri, četiri ili pet od ovih regiona) mogu da potiču od sekvence humane klicine linije izabrane iz grupe koja se sastoji od IGKV3-20 (npr. IGKV3-20*01, koja, npr. ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 22). U jednom primeru izvođenja, okvirni region 1, okvirni region 2, okvirni region 3, CDRL1 i CDRL2 su svi izvedeni iz sekvence humane klicine linije izabrane iz grupe koja se sastoji od IGKV3-20 (npr. IGKV3-20*01, koja, npr. ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 22).
[0135] Otkriveno je izolovano antitelo koje se specifično vezuje za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4), koje sadrži varijabilni region teškog lanca koji ima aminokiselinsku sekvencu koja potiče iz sekvence humane klicine linije IGHV3-21 (npr. IGHV3-21*01, npr. ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 21); i varijabilni region lakog lanca koji ima aminokiselinsku sekvencu koja potiče iz sekvence humane klicine linije izabrane iz grupe koja se sastoji od IGKV3-20 (npr. IGKV3-20*01, koja, npr. ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 22).
[0136] Otkriveno je izolovano antitelo koje unakrsno kompetira za vezivanje sa CTLA-4 (npr. humanim CTLA-4) sa antitelom koje sadrži aminokiselinske sekvence varijabilnog regiona teškog lanca i varijabilnog regiona lakog lanca prikazane u SEQ ID NO: 2 i 9; 4 i 9; 5 i 9; 6 i 9; 7 i 9; ili 8 i 9, redom. U određenim primerima izvođenja, predmetno otkriće obezbeđuje izolovano antitelo koje unakrsno kompetira za vezivanje za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4) sa antitelom koje sadrži aminokiselinske sekvence varijabilnog regiona teškog lanca i lakog lanca prikazane u SEQ ID NO: 3, odnosno 9.
[0137] Obelodanjeno je izolovano antitelo koje se vezuje za isti ili preklapajući epitop CTLA-4 (npr. epitop humanog CTLA-4) kao ovde opisano antitelo npr. antitelo koje sadrži aminokiselinske sekvence varijabilnog regiona teškog lanca i lakog lanca prikazane u SEQ ID NO: 2 i 9; 4 i 9; 5 i 9; 6 i 9; 7 i 9; ili 8 i 9, redom. Obelodanjeno je izolovano antitelo koje se vezuje za isti ili preklapajući epitop CTLA-4 (npr. epitop humanog CTLA-4) kao ovde opisano antitelo, npr. antitelo koje sadrži aminokiselinske sekvence varijabilnog regiona teškog lanca i lakog lanca prikazane u SEQ ID NO: 3, odnosno 9. Epitop antitela može da se odredi pomoću, npr. NMR spektroskopije, rezonancije površinskog plazmona (BIAcore<®>), kristalografske studije rendgenske difrakcije, ELISA testova, razmene vodonika/deuterijuma povezane sa masenom spektrometrijom (npr. tečna hromatografija-masena spektrometrija sa elektrosprejem), testova skeniranja oligopeptida na čipu i/ili mapiranja pomoću mutageneze (npr. mapiranje pomoću mesto-specifične mutageneze). Za rendgensku kristalografiju, kristalizacija se može postići korišćenjem bilo koje od metoda poznatih u tehnici (npr. Giegé R et al., (1994) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 50(Pt 4): 339-350; McPherson A (1990) Eur J Biochem 189: 1-23; Chayen NE (1997) Structure 5: 1269-1274; McPherson A (1976). J Biol Chem 251: 6300-6303). Kristali antitelo:antigen mogu da se proučavaju korišćenjem dobro poznate tehnike rendgenske difrakcije i njihova struktura može da bude razjašnjena pomoću kompjuterskog softvera kao što je X-PLOR (Univerzitet Jejl, 1992, distribuira Molecular Simulations, Inc.; videti, npr. Meth Enzymol (1985) volumes 114 & 115, eds Wyckoff HW et al.; SAD patentna prijava br.2004/0014194), i BUSTER (Bricogne G (1993) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 49(Pt 1): 37-60; Bricogne G (1997) Meth Enzymol 276A: 361-423, ed Carter CW; Roversi P et al., (2000) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 56(Pt 10): 1316-1323). Studije mapiranja pomoću mutageneze mogu da budu ostvarene korišćenjem bilo koje metode poznate stručnjaku u ovoj oblasti. Videti, npr. Champe M et al., (1995), iznad i Cunningham BC & Wells JA (1989), iznad, za opis tehnika mutageneze, uključujući tehnike mutageneze alaninskim skeniranjem. U specifičnom primeru izvođenja, epitop antitela se određuje pomoću studija mutageneze alaninskim skeniranjem. Pored toga, antitela koja prepoznaju i vezuju se za iste ili preklapajuće epitope CTLA-4 (npr. humani CTLA-4) mogu se identifikovati pomoću rutinskih tehnika kao što je imunološki test, na primer, pokazivanjem sposobnosti jednog antitela da blokira vezivanje drugog antitela za ciljni antigen, odnosno, kompetitivnim testom vezivanja. Kompetitivni testovi vezivanja takođe mogu da se koriste za utvrđivanje da li dva antitela imaju sličnu specifičnost vezivanja za epitop. Kompetitivno vezivanje se može odrediti u testu u kojem imunoglobulin koji se ispituje inhibira specifično vezivanje referentnog antitela za zajednički antigen, kao što je CTLA-4 (npr. humani CTLA-4). Poznate su brojne vrste kompetitivnih testova vezivanja, na primer: direktni ili indirektni radioimunološki test čvrste faze (RIA), direktni ili indirektni enzimski imunološki test čvrste faze (EIA), „sendvič“ kompetitivni test (videti Stahli C et al., (1983) Methods Enzymol 9: 242-253); direktni biotin-avidin EIA čvrste faze (videti Kirkland TN et al., (1986) J Immunol 137: 3614-9); direktno obeleženi test čvrste faze, direktno obeleženi „sendvič“ test čvrste faze (videti Harlow E & Lane D, (1988) Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press); direktno obeleženi RIA čvrste faze sa oznakom I-125 (videti Morel GA et al., (1988) Mol Immunol 25(1): 7-15); direktni biotin-avidin EIA čvrste faze (videti Cheung RC et al., (1990) Virology 176: 546-52); i direktno obeleženi RIA (videti Moldenhauer G et al., (1990) Scand J Immunol 32: 77-82). Takav test obično podrazumeva upotrebu prečišćenog antigena (npr. CTLA-4 kao što je humani CTLA-4) vezanog za čvrstu površinu ili ćelije koje nose bilo koji od neobeleženog ispitivanog imunoglobulina i obeleženog referentnog imunoglobulina. Kompetitivna inhibicija može da se meri određivanjem količine oznake vezane sa čvrstom površinom ili ćelijama u prisustvu ispitivanog imunoglobulina. Obično je ispitivani imunoglobulina prisutan u višku. Obično, kada je kompetirajuće antitelo prisutno u višku, ono će inhibirati specifično vezivanje referentnog antitela za zajednički antigen za najmanje 50-55%, 55-60%, 60-65%, 65-70%, 70-75% ili više. Kompetitivni test vezivanja može da se konfiguriše u velikom broju različitih formata korišćenjem ili obeleženog antigena ili obeleženog antitela. U uobičajenoj verziji ovog testa, antigen je imobilisan na ploči sa 96 bunarčića. Sposobnost neobeleženih antitela da blokiraju vezivanje obeleženih antitela za antigen se zatim meri pomoću radioaktivnih ili enzimskih oznaka. Za više detalja videti, na primer, Wagener C et al., (1983) J Immunol 130: 2308-2315; Wagener C et al., (1984). J Immunol Methods 68: 269-274; Kuroki M et al., (1990) Cancer Res 50: 4872-4879; Kuroki M et al., (1992) Immunol Invest 21: 523-538; Kuroki M et al., (1992) Hybridoma 11: 391-407 i Antibodies: A Laboratory Manual, Ed Harlow E & Lane D editors supra, pp.386-389.
[0138] Obelodanjeno je izolovano antitelo koje se specifično vezuje za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4), gde antitelo sadrži teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu prikazanu u SEQ ID NO: 23, 24, 25 ili 26. Otkriveno je da antitelo sadrži teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu prikazanu u SEQ ID NO: 23. Otkriveno je da antitelo sadrži teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu prikazanu u SEQ ID NO: 24. U određenim primerima izvođenja, antitelo sadrži teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu prikazanu u SEQ ID NO: 25. Otkriveno je da antitelo sadrži teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu prikazanu u SEQ ID NO: 26.
[0139] U određenim primerima izvođenja, izolovano antitelo koje se specifično vezuje za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4) sadrži laki lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu prikazanu u SEQ ID NO: 27.
[0140] Otkriveno je izolovano antitelo koje se specifično vezuje za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4), gde antitelo sadrži teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 23 i laki lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 27. Otkriveno je izolovano antitelo koje se specifično vezuje za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4), gde antitelo sadrži teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 24 i laki lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 27. U određenim primerima izvođenja, izolovano antitelo koje se specifično vezuje za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4), sadrži teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 25 i laki lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 27. Otkriveno je izolovano antitelo koje se specifično vezuje za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4), gde antitelo sadrži teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 26 i laki lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 27.
[0141] Obelodanjeno je da bilo koji konstantni region Ig može da se koristi u antitelima opisanim ovde. Obelodanjeno je da je Ig region humani IgG, IgE, IgM, IgD, IgA, ili IgY imunoglobulinski molekul, bilo koje klase (npr. IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1i IgA2), ili bilo koje potklase (npr. IgG2ai IgG2b) imunoglobulinskog molekula.
[0142] Predmetno otkriće obezbeđuje izolovano antitelo koje se specifično vezuje za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4), gde antitelo sadrži konstantni region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 28, 29, 30 ili 31. U određenom otkriću predmetno otkriće obezbeđuje izolovano antitelo koje se specifično vezuje za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4), gde antitelo sadrži konstantni region lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 32.
[0143] Predmetno otkriće obezbeđuje izolovano antitelo koje se specifično vezuje za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4), gde antitelo sadrži konstantni region teškog lanca, npr. konstantni region IgG1, ili njegov fragment koji sadrži mutaciju izabranu iz grupe koja se sastoji od: S239D, I332E, i njihove kombinacije, numerisano prema sistemu numerisanja EU. U određenom otkriću, antitelo sadrži konstantni region teškog lanca IgG1koji sadrži mutacije S239D i I332E, numerisane po sistemu numerisanja EU. U određenom otkriću, antitelo sadrži konstantni region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 29.
[0144] Izolovano antitelo pronalaska koje se specifično vezuje za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4) sadrži konstantni region teškog lanca, koji je konstantni region humanog IgG1, koji sadrži mutacije S239D, A330L i I332E, numerisane po sistemu numerisanja EU. U određenim primerima izvođenja, antitelo sadrži konstantni region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 30.
[0145] Otkriveno je izolovano antitelo koje se specifično vezuje za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4), gde antitelo sadrži konstantni region teškog lanca, npr. konstantni region IgG1, ili njegov fragment koji sadrži mutaciju izabranu iz grupe koja se sastoji od: L235V, F243L, R292P, Y300L, P396L, i njihovih kombinacija, numerisano prema sistemu numerisanja EU. U određenom otkriću, antitelo sadrži konstantni region teškog lanca IgG1koji sadrži mutacije L235V, F243L, R292P, Y300L i P396L, numerisane po sistemu numerisanja EU. U određenom otkriću, antitelo sadrži konstantni region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 31.
[0146] IgG regioni ovde opisanih antitela mogu da imaju povećan afinitet za FcγRIIIA, npr. u poređenju sa antitelom sa Fc regionom divljeg tipa, npr. Fc IgG1. Promene sekvenci koje rezultuju povećanim afinitetom za FcγRIIIA su poznate u tehnici, na primer, u Kellner et al., Methods 65: 105-113 (2014), Lazar et al., Proc Natl Acad Sci 103: 4005-4010 (2006), Shields et al., J Biol Chem. 276(9):6591-6604 (2001). Antitelo može da sadrži konstantni region teškog lanca, npr. konstantni region IgG1, ili njegov fragment koji sadrži mutaciju izabranu iz grupe koja se sastoji od: G236A, S239D, F243L, T256A, K290A, R292P, S298A, Y300L, V305I, A330L, I332E, E333A, K334A, A339T i P396L, i njihovih kombinacija, numerisano po sistemu numerisanja EU. Antitelo može da sadrži konstantni region teškog lanca, npr. konstantni region IgG1, ili njegov fragment koji sadrži S239D, numerisano po sistemu numerisanja EU. Antitelo može da sadrži konstantni region teškog lanca, npr. konstantni region IgG1, ili njegov fragment koji sadrži T256A, numerisano po sistemu numerisanja EU. Antitelo može da sadrži konstantni region teškog lanca, npr. konstantni region IgG1, ili njegov fragment koji sadrži K290A, numerisano po sistemu numerisanja EU. Antitelo može da sadrži konstantni region teškog lanca, npr. konstantni region IgG1, ili njegov fragment koji sadrži S298A, numerisano po sistemu numerisanja EU. Antitelo može da sadrži konstantni region teškog lanca, npr. konstantni region IgG1, ili njegov fragment koji sadrži I332E, numerisano po sistemu numerisanja EU. Antitelo može da sadrži konstantni region teškog lanca, npr. konstantni region IgG1, ili njegov fragment koji sadrži E333A, numerisano po sistemu numerisanja EU. Antitelo može da sadrži konstantni region teškog lanca, npr. konstantni region IgG1, ili njegov fragment koji sadrži K334A, numerisano po sistemu numerisanja EU. Antitelo može da sadrži konstantni region teškog lanca, npr. konstantni region IgG1, ili njegov fragment koji sadrži A339T, numerisano po sistemu numerisanja EU. Antitelo može da sadrži konstantni region teškog lanca, npr. konstantni region IgG1, ili njegov fragment koji sadrži S239D i I332E, numerisano po sistemu numerisanja EU. Antitelo sadrži konstantni region teškog lanca, koja je konstantni region IgG1, koji sadrži S239D, A330L i I332E, numerisano po sistemu numerisanja EU. Antitelo može da sadrži konstantni region teškog lanca, npr. konstantni region IgG1, ili njegov fragment koji sadrži S298A, E333A i K334A, numerisano po sistemu numerisanja EU. Antitelo može da sadrži konstantni region teškog lanca, npr. konstantni region IgG1, ili njegov fragment koji sadrži G236A, S239D i I332E, numerisano po sistemu numerisanja EU. Antitelo može da sadrži konstantni region teškog lanca, npr. konstantni region IgG1, ili njegov fragment koji sadrži F243L, R292P, Y300L, V305I i P396L, numerisano po sistemu numerisanja EU.
[0147] Ovde opisana antitela mogu da ispoljavaju aktivnost ćelijske citotoksičnosti zavisne od antitela (ADCC). Ovde opisana antitela mogu da pokrenu depleciju ćelija posredovanu ćelijama prirodnim ubicama. Ovde opisana antitela mogu da se koriste za lečenje tumora infiltriranog ćelijama prirodnim ubicama. Ovde opisana antitela mogu da ispoljavaju aktivnost ćelijske fagocitoze zavisne od antitela (ADCP). Ovde opisana antitela mogu da pokrenu depleciju ćelija posredovanu makrofagima. Ovde opisana antitela mogu da se koriste za lečenje tumora infiltriranog makrofagima. Ovde opisana antitela mogu da dovedu do selektivne deplecije intratumorskih regulatornih T ćelija.
[0148] Ovde opisano antitelo može da bude antitelo koje može da se aktivira, koje u aktiviranom stanju vezuje humani CTLA-4 protein. Antitelo koje može da se aktivira može da sadrži maskirajući fragment koji inhibira vezivanje antitela u neotcepljenom stanju za humani CTLA-4 protein, i najmanje jedna otcepivi fragment kuplovan sa antitelom, gde je, npr. otcepivi fragment polipeptid koji funkcioniše kao supstrat za proteazu kojom je obogaćeno mikrookruženje tumora. Ilustrativna antitela koja mogu da se aktiviraju opisana su, npr. u SAD patentima br.8,513,390 i 8,518,404, i objavama SAD patentnih prijava br. US 2014/0255313, US 2014/0010810, US 2014/0023664. Antitelo koje može da se aktivira može da sadrži konstantni region teškog lanca humanog IgG koji je varijanta konstantnog regiona teškog lanca humanog IgG divljeg tipa, pri čemu se varijanta konstantnog regiona teškog lanca humanog IgG vezuje za humani FcγRIIIA sa većim afinitetom nego što se konstantni region teškog lanca humanog IgG divljeg tipa vezuje za humani FcγRIIIA.
[0149] Jedna, dve ili više mutacija (npr. aminokiselinske supstitucije) može biti uvedena u Fc region antitela opisanog ovde (npr. CH2 domen (ostaci 231-340 humanog IgG1) i/ili CH3 domen (ostaci 341-447 humanog IgG1) i/ili region zgloba, numerisano prema sistemu numerisanja EU, kako bi se izmenilo jedno ili više funkcionalnih svojstava antitela, kao što su poluživot u serumu, fiksacija komplementa, vezivanje za Fc receptor i/ili antigen-zavisna ćelijska citotoksičnost.
[0150] Jedna, dve ili više mutacija (npr. aminokiselinske supstitucije) mogu da budu uvedene u region zgloba Fc regiona (CH1 domen) tako da broj cisteinskih ostataka u regionu zgloba bude izmenjen (npr. povećan ili smanjen) kao što je opisano u, npr. SAD patentnu br. 5,677,425. Broj cisteinskih ostataka u regionu zgloba CH1 domena može da bude izmenjen da bi se, npr. olakšalo sklapanje lakog i teškog lanca, ili da bi se izmenila (npr. povećala ili smanjila) stabilnost antitela.
[0151] Jedna, dve ili više aminokiselinskih mutacija (npr. supstitucija, insercija ili delecija) mogu da budu uvedene u konstantni domen IgG, ili njegov FcRn-vezujući fragment (poželjno fragment domena Fc ili region zgloba-Fc) kako bi se izmenio (npr. skratio ili produžio) poluživot antitela in vivo. Videti, npr. međunarodne objave br. WO 02/060919; WO 98/23289; i WO 97/34631; i SAD patente br. 5,869,046, 6,121,022, 6,277,375 i 6,165,745, za primere mutacija koje će izmeniti (npr. skratiti ili produžiti) poluživot antitela in vivo. Jedna, dve ili više aminokiselinskih mutacija (npr. supstitucija, insercija ili delecija) mogu da budu uvedene u konstantni domen IgG, ili njegov FcRn-vezujući fragment (poželjno fragment domena Fc ili region zgloba-Fc) kako bi se skratio poluživot antitela in vivo. Jedna, dve ili više aminokiselinskih mutacija (npr. supstitucija, insercija ili delecija) mogu da budu uvedene u konstantni domen IgG, ili njegov FcRn-vezujući fragment (poželjno fragment domena Fc ili region zgloba-Fc) kako bi se produžio poluživot antitela in vivo. Antitela mogu da imaju jednu ili više aminokiselinskih mutacija (npr. supstitucija) u drugom konstantnom (CH2) domenu (ostaci 231-340 humanog IgG1) i/ili trećem konstantnom (CH3) domenu (ostaci 341-447 humanog IgG1), numerisano prema sistemu numerisanja EU. Konstantni region IgG1ovde opisanog antitela može da sadrži supstituciju metionina (M) u tirozin (Y) na poziciji 252, supstituciju serina (S) u treonin (T) na poziciji 254, i supstituciju treonina (T) u glutaminsku kiselinu (E) na poziciji 256, numerisano prema sistemu numerisanja EU. Videti SAD patent br. 7,658,921. Pokazalo se da ovaj tip mutanta IgG, koji se naziva „YTE mutant“ prikazuje četvorostruko produžen poluživot u poređenju sa verzijama divljeg tipa istog antitela (videti Dall'Acqua WF et al., (2006) J Biol Chem 281: 23514-24). Antitela mogu da sadrže konstantni IgG domen koji sadrži jednu, dve, tri ili više aminokiselinskih supstitucija aminokiselinskih ostataka na pozicijama 251-257, 285-290, 308-314, 385-389 i 428-436, numerisano prema sistemu numerisanja EU.
[0152] Jedna, dve ili više mutacija (npr. aminokiselinskih supstitucija) mogu da budu uvedene u Fc region antitela opisanog ovde (npr. CH2 domen (ostaci 231-340 humanog IgG1) i/ili CH3 domen (ostaci 341-447 humanog IgG1) i/ili region zgloba, numerisano prema sistemu numerisanja EU, kako bi se povećao ili smanjio afinitet antitela za Fc receptor (npr. aktivirani Fc receptor) na površini efektorske ćelije. Mutacije u Fc regionu antitela koje smanjuju ili povećavaju afinitet antitela za Fc receptor i tehnike za uvođenje takvih mutacija u Fc receptor ili njegov fragment su poznate stručnjaku u ovoj oblasti. Primeri mutacija u Fc receptoru antitela koje mogu da se uvedu da bi se izmenio afinitet antitela za Fc receptor opisane su u, npr. Smith P et al., (2012) PNAS 109: 6181-6186, SAD patentu br. 6,737,056, i međunarodnim objavama br. WO 02/060919; WO 98/23289; i WO 97/34631.
[0153] Dalje, jedna, dve ili više aminokiselinskih supstitucija mogu da budu uvedene u Fc region konstantnog domena IgG da bi se izmenila jedna ili više efektorskih funkcija antitela. Na primer, jedna ili više aminokiselina izabranih od aminokiselinskih ostataka 234, 235, 236, 237, 297, 318, 320 i 322, numerisano prema sistemu numerisanja EU, mogu da se zamene drugačijim aminokiselinskim ostatkom, tako da antitelo ima izmenjen afinitet prema efektorskom ligandu, ali zadržava antigen-vezujuću sposobnost parentalnog antitela. Efektorski ligand prema kome se menja afinitet može da bude, na primer, Fc receptor ili C1 komponenta komplementa. Ovaj pristup je detaljnije opisan u SAD patentu br. 5,624,821 i 5,648,260. Delecija ili inaktivacija (putem tačkastih mutacija ili drugih sredstava) domena konstantnog regiona može da smanji vezivanje Fc receptora cirkulišućim antitelom, čime se povećava lokalizacija tumora. Videti, npr. SAD patente br. 5,585,097 i 8,591,886, za opis mutacija koje dovode do delecije ili inaktivacije konstantnog domena i time povećavaju lokalizaciju tumora. Jedna ili više aminokiselinskih supstitucija mogu da se uvedu u Fc region ovde opisanog antitela da bi se uklonila potencijalna mesta glikozilacije u Fc regionu, što može da smanji vezivanje Fc receptora (videti npr. Shields RL et al., (2001) J Biol Chem 276: 6591-604). U konstantni region ovde opisanog antitela može da se uvede jedna ili više od sledećih mutacija: supstitucija N297A; supstitucija N297Q; supstitucija L235A i supstitucija L237A; supstitucija L234A i supstitucija L235A; supstitucija E233P; supstitucija L234V; supstitucija L235A; delecija C236; supstitucija P238A; supstitucija D265A; supstitucija A327Q; ili supstitucija P329A, numerisano prema sistemu numerisanja EU. Mutacija izabrana iz grupe koja se sastoji od D265A, P329A, njihove kombinacije, numerisano prema sistemu numerisanja EU, može da bude uvedena u konstantni region ovde opisanog antitela.
[0154] Ovde opisano antitelo može da sadrži konstantni domen IgG1sa aminokiselinskom supstitucijom N297Q ili N297A, numerisano prema sistemu numerisanja EU. Ovde opisano antitelo može da sadrži konstantni domen IgG1sa mutacijom izabranom iz grupe koja se sastoji od D265A, P329A i njihove kombinacije, numerisano prema sistemu numerisanja EU. Ovde opisano antitelo može da sadrži konstantni domen IgG1sa mutacijom izabranom iz grupe koja se sastoji od L234A, L235A i njihove kombinacije, numerisano prema sistemu numerisanja EU. Aminokiselinski ostaci u konstantnom regionu ovde opisanog antitela na pozicijama koje odgovaraju pozicijama L234, L235 i D265 u teškom lancu humanog IgG1, numerisano prema sistemu numerisanja EU, ne moraju da budu L, L, odnosno D. Ovaj pristup je detaljno opisan u međunarodnoj publikaciji br. WO 14/108483. Aminokiseline koje odgovaraju pozicijama L234, L235 i D265 u teškom lancu humanog IgG1mogu da budu F, E i A; ili A, A, odnosno A, numerisano prema sistemu numerisanja EU.
[0155] Jedna ili više aminokiselina izabranih od aminokiselinskih ostataka 329, 331 i 322 u konstantnom regionu antitela opisanog ovde, numerisano prema sistemu numerisanja EU, mogu da budu zamenjene drugačijim aminokiselinskim ostatkom tako da antitelo ima izmenjeno vezivanje C1q i/ili smanjenu ili ukinutu citotoksičnost zavisnu od komplementa (CDC). Ovaj pristup je detaljnije opisan u SAD patentu br. 6,194,551 (Idusogie et al.). Jedan ili više aminokiselinskih ostataka unutar aminokiselinskih pozicija 231 do 238 u N-terminalnom regionu CH2 domena antitela opisanog ovde mogu da budu izmenjeni tako da se na taj način promeni sposobnost antitela za fiksiranje komplementa, numerisano prema sistemu numerisanja EU. Ovaj pristup je dalje opisan u međunarodnoj objavi br. WO 94/29351. Fc region antitela opisanog ovde može da bude modifikovan tako da se poveća sposobnost antitela da posreduje u ćelijskoj citotoksičnosti zavisnoj od antitela (ADCC) i/ili da se poveća afinitet antitela za Fcγ receptor mutiranjem jedne ili više aminokiselina (npr. uvođenjem aminokiselinskih supstitucija) na sledećim pozicijama: 238, 239, 248, 249, 252, 254, 255, 256, 258, 265, 267, 268, 269, 270, 272, 276, 278, 280, 283, 285, 286, 289, 290, 292, 293, 294, 295, 296, 298, 301, 303, 305, 307, 309, 312, 315, 320, 322, 324, 326, 327, 328, 329, 330, 331, 333, 334, 335, 337, 338, 340, 360, 373, 376, 378, 382, 388, 389, 398, 414, 416, 419, 430, 434, 435, 437, 438, ili 439, numerisano po sistemu numerisanja EU. Ovaj pristup je detaljno opisan u međunarodnoj objavi br. WO 00/42072.
[0156] U određenom otkriću, ovde opisano antitelo sadrži konstantni region IgG4antitela i serin na aminokiselinskom ostatku 228 teškog lanca, numerisano prema sistemu numerisanja EU, je supstituisan za prolin.
[0157] Bilo koja od mutacija ili modifikacija konstantnog regiona opisanih ovde može da bude uvedena u jedan ili oba konstantna regiona teškog lanca ovde opisanog antitela koje ima dva konstantna regiona teškog lanca.
[0158] Predmetno otkriće obezbeđuje izolovano antitelo koje se specifično vezuje za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4) i funkcioniše kao antagonist.
[0159] U određenom otkriću, predmetno otkriće obezbeđuje izolovano antitelo koje se specifično vezuje za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4) i smanjuje aktivnost CTLA-4 (npr. humanog CTLA-4) za najmanje 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, ili 99%, procenjeno postupcima koji su ovde opisani i/ili poznati stručnjaku u ovoj oblasti, u odnosu na aktivnost CTLA-4 (npr. humani CTLA-4) bez ikakvog antitela ili sa nesrodnim antitelom (npr. antitelom koje se ne vezuje specifično za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4)). U određenom otkriću, predmetno otkriće obezbeđuje izolovano antitelo koje se specifično vezuje za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4) i smanjuje aktivnost CTLA-4 (npr. humanog CTLA-4) za najmanje oko 1.2 puta, 1.3 puta, 1.4 puta, 1.5 puta, 2 puta, 2.5 puta, 3 puta, 3.5 puta, 4 puta, 4.5 puta, 5 puta, 6 puta, 7 puta, 8 puta, 9 puta, 10 puta, 15 puta, 20 puta, 30 puta, 40 puta, 50 puta, 60 puta, 70 puta, 80 puta, 90 puta, ili 100 puta, procenjeno postupcima koji su ovde opisani i/ili poznati stručnjaku u ovoj oblasti, u odnosu na aktivnost CTLA-4 (npr. humanog CTLA-4) bez ikakvog antitela ili sa nesrodnim antitelom (npr. antitelom koje se ne vezuje specifično za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4)). Neograničeni primeri aktivnosti CTLA-4 (npr. humanog CTLA-4) mogu da uključuju signalizaciju CTLA-4 (npr. humanog CTLA-4), vezivanje CTLA-4 (npr. humanog CTLA-4) za ligand CTLA-4 (npr. humanog CTLA-4) (npr. CD80 ili CD86) i inhibiciju proizvodnje citokina (npr. IL-2, IFN-γ ili TNF-α). U određenom otkriću, predmetno otkriće obezbeđuje izolovano antitelo koje se specifično vezuje za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4) i deaktivira, smanjuje ili inhibira aktivnost CTLA-4 (npr. humanog CTLA-4). Smanjenje aktivnosti CTLA-4 (npr. humanog CTLA-4) može da se proceni kao što je opisano u Primerima, ispod u tekstu.
[0160] U specifičnom otkriću, predmetno otkriće obezbeđuje izolovano antitelo koje se specifično vezuje za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4) i smanjuje vezivanje CTLA-4 (npr. humanog CTLA-4) za njegov ligand (npr. CD80 ili CD86) za najmanje oko 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, ili 99%, procenjeno postupcima poznatim stručnjaku u ovoj oblasti, u odnosu na vezivanje CTLA-4 (npr. humanog CTLA-4) za njegov ligand (npr. CD80 ili CD86) bez ikakvog antitela ili sa nesrodnim antitelom (npr. antitelo koje se ne vezuje specifično za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4)). U određenom otkriću, predmetno otkriće obezbeđuje izolovano antitelo koje se specifično vezuje za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4) i smanjuje vezivanje CTLA-4 (npr. humanog CTLA-4)za njegov ligand (npr. CD80 ili CD86) za najmanje oko 1.2 puta, 1.3 puta, 1.4 puta, 1.5 puta, 2 puta, 2.5 puta, 3 puta, 3.5 puta, 4 puta, 4.5 puta, 5 puta, 6 puta, 7 puta, 8 puta, 9 puta, 10 puta, 15 puta, 20 puta, 30 puta, 40 puta, 50 puta, 60 puta, 70 puta, 80 puta, 90 puta, ili 100 puta, procenjeno postupcima poznatim stručnjaku u ovoj oblasti, u odnosu na vezivanje CTLA-4 (npr. humanog CTLA-4) za njegov ligand (npr. CD80 ili CD86) bez ikakvog antitela ili sa nesrodnim antitelom (npr. antitelo koje se ne vezuje specifično za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4)).
[0161] U specifičnom otkriću, predmetno otkriće obezbeđuje izolovano antitelo koje se specifično vezuje za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4) i povećava proizvodnju citokina (npr. IL-2, IFN-γ ili TNF-α) za najmanje oko 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, ili 99%, procenjeno postupcima koji su ovde opisani (videti Primere ispod u tekstu) i/ili poznati stručnjaku u ovoj oblasti u odnosu na proizvodnju citokina bez ikakvog antitela ili sa nepovezanim antitelom (npr. antitelom koje se ne vezuje konkretno za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4)). U određenom otkriću, predmetno otkriće obezbeđuje izolovano antitelo koje se specifično vezuje za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4) i povećava proizvodnju citokina (npr. IL-2, IFN-γ, ili TNF-α) za najmanje oko 1.2 puta, 1.3 puta, 1.4 puta, 1.5 puta, 2 puta, 2.5 puta, 3 puta, 3.5 puta, 4 puta, 4.5 puta, 5 puta, 6 puta, 7 puta, 8 puta, 9 puta, 10 puta, 15 puta, 20 puta, 30 puta, 40 puta, 50 puta, 60 puta, 70 puta, 80 puta, 90 puta, ili 100 puta, procenjeno postupcima koji su ovde opisani (videti Primere ispod u tekstu) ili poznati stručnjaku u ovoj oblasti, u odnosu na proizvodnju citokina bez ikakvog antitela ili sa nesrodnim antitelom (npr. antitelom koje se ne vezuje specifično za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4)).
[0162] U određenom otkriću, humane mononuklearne ćelije periferne krvi (PBMC) stimulisane stafilokoknim enterotoksinom A (SEA) u prisustvu antitela opisanog ovde, koje se specifično vezuje za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4), imale su povećanu proizvodnju IL-2 za najmanje oko 1.2 puta, 1.3 puta, 1.4 puta, 1.5 puta, 2 puta, 2.5 puta, 3 puta, 3.5 puta, 4 puta, 4.5 puta, 5 puta, 6 puta, 7 puta, 8 puta, 9 puta, 10 puta, 15 puta, 20 puta, 30 puta, 40 puta, 50 puta, 60 puta, 70 puta, 80 puta, 90 puta, ili 100 puta, u odnosu na PBMC stimulisane samo pomoću SEA bez ikakvog antitela ili sa nesrodnim antitelom (npr. antitelom koje se ne vezuju specifično za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4)), procenjeno postupcima koji su ovde opisani (videti Primere ispod u tekstu) ili poznati stručnjaku u ovoj oblasti.
5.3 Farmaceutske kompozicije
[0163] Ovde su obezbeđene kompozicije koje sadrže ovde opisano anti-CTLA-4 antitelo koje ima željeni stepen čistiće fiziološki prihvatljivom nosaču, ekscipijensu ili stabilizatoru (Remington's Pharmaceutical Sciences (1990) Mack Publishing Co., Easton, PA). Prihvatljivi nosači, ekscipijensi ili stabilizatori su netoksični za primaoce u dozama i koncentracijama koje se koriste i uključuju pufere, kao što su fosfat, citrat i druge organske kiseline; antioksidanse uključujući askorbinsku kiselinu i metionin; konzervanse (kao što su oktadecildimetilbenzil amonijum hlorid; heksametonijum hlorid; benzalkonijum hlorid, benzetonijum hlorid; fenol, butil ili benzil alkohol; alkil parabeni, kao što su metil ili propil paraben; katehol; rezorcinol; cikloheksanol; 3-pentanol; i m-krezol); niskomolekulske (manje od 10 ostataka) polipeptide; proteine, kao što je serumski albumin, želatin ili imunoglobulini; hidrofilne polimere, kao što je polivinilpirolidon; aminokiseline kao što su glicin, glutamin, asparagin, histidin, arginin ili lizin; monosaharide, disaharide i druge ugljene hidrate, uključujući glukozu, manozu ili dekstrine; helirajuće agense kao što je EDTA; šećere, kao što su saharoza, manitol, trehaloza ili sorbitol; kontra-jone koji formiraju so kao što je natrijum; metalne komplekse (npr. Zn-proteinske komplekse); i/ili nejonske surfaktante, kao što su TWEEN<™>, PLURONICS<™>ili polietilen glikol (PEG).
[0164] U specifičnom primeru izvođenja, farmaceutske kompozicije sadrže ovde opisano anti-CTLA-4 antitelo, i opciono jedan ili više dodatnih profilaktičkih ili terapeutskih agenasa, u farmaceutski prihvatljivom nosaču. U specifičnom primeru izvođenja, farmaceutske kompozicije sadrže efikasnu količinu antitela ili njihovog antigen-vezujućeg fragmenta koji je ovde opisan, i opciono jedan ili više dodatnih profilaktičkih ili terapeutskih agenasa, u farmaceutski prihvatljivom nosaču. U nekim primerima izvođenja, antitelo je jedini aktivni sastojak koji je uključen u farmaceutsku kompoziciju. Ovde opisane farmaceutske kompozicije mogu da budu korisne u inhibiranju aktivnosti CTLA-4 i lečenju stanja, kao što je kancer ili infektivna bolest.
[0165] Ovde je obezbeđena farmaceutska kompozicija koja sadrži anti-CTLA-4 antitelo pronalaska i farmaceutski prihvatljiv nosač ili ekscipijens, za upotrebu kao lek.
[0166] U jednom aspektu, ovde je obezbeđena farmaceutska kompozicija koja sadrži anti-CTLA-4 antitelo pronalaska i farmaceutski prihvatljiv nosača ili ekscipijens, za upotrebu u postupku za lečenje kancera.
[0167] Farmaceutski prihvatljivi nosači koji se koriste u parenteralnim preparatima uključuju vodene vehikulume nevodene vehikulume, antimikrobne agense, izotonične agense, pufere, antioksidanse, lokalne anestetike, agense za suspendovanje i dispergovanje, agense za emulgovanje, sekvestrirajuće ili helirajuće agense i druge farmaceutski prihvatljive supstance. Primeri vodenih vehikuluma uključuju injekcioni natrijum hlorid, injekcioni Ringerov rastvor, injekcionu izotoničnu dekstrozu, injekcionu sterilnu vodu, injekcioni Ringerov rastvor sa dekstrozom i laktatom. Nevodeni parenteralni vehikulumi uključuju fiksna ulja biljnog porekla, ulje semena pamuka, kukuruzno ulje, susamovo ulje i ulje od kikirikija. Antimikrobni agensi u bakteriostatskim ili fungistatskim koncentracijama mogu da se dodaju u parenteralne preparate pakovane u višedozne posude što uključuju fenole ili krezole, jedinjenja žive, benzil alkohol, hlorbutanol, metil i propil estre p-hidroksibenzojeve kiseline, timerosal, benzalkonijum hlorid i benzetonijum hlorid. Izotonični agensi uključuju natrijum hlorid i dekstrozu. Puferi uključuju fosfat i citrat. Antioksidansi uključuju natrijum bisulfat. Lokalni anestetici uključuju prokain hidrohlorid. Agensi za suspendovanje i dispergovanje uključuju natrijum karboksimetilcelulozu, hidroksipropil metilcelulozu i polivinilpirolidon. Emulgujući agensi uključuju polisorbat 80 (TWEEN<®>80). Sekvestrirajući ili helirajući agens metalnih jona uključuje EDTA. Farmaceutski nosači takođe uključuju etil alkohol, polietilen glikol i propilen glikol za vehikulume koji se mešaju sa vodom; i natrijum hidroksid, hlorovodoničnu kiselinu, limunsku kiselinu ili mlečnu kiselinu za podešavanje pH.
[0168] farmaceutska kompozicija može da bude formulisana za bilo koji put primene kod subjekta. Konkretni primeri puteva primene uključuju intranazalni, oralni, plućni, transdermalni, intradermalni i parenteralni. Parenteralna primena, koju karakteriše ili potkožna, intramuskularna ili intravenska injekcija, takođe se razmatra ovde. Injektabilni preparati se mogu pripremiti u konvencionalnim oblicima, bilo kao tečni rastvori ili suspenzije, čvrsti oblici pogodni za rastvaranje ili suspendovanje u tečnosti pre ubrizgavanja, ili kao emulzije. Injektabilni preparati, rastvori i emulzije takođe sadrže jedan ili više ekscipijenasa. Odgovarajući ekscipijensi su, na primer, voda, so, dekstroza, glicerol ili etanol. Pored toga, po želji, farmaceutske kompozicije za primenu takođe mogu da sadrže manje količine netoksičnih pomoćnih supstanci, kao što su agensi za vlaženje ili emulgovanje, pH puferski agensi, stabilizatori, pojačivači rastvorljivosti i drugi takvi agensi, kao što su na primer, natrijum acetat, sorbitan monolaurat, trietanolamin oleat i ciklodekstrini.
[0169] Preparati za parenteralnu primenu antitela uključuju sterilne rastvore spremne za ubrizgavanje, sterilne suve rastvorljive proizvode, kao što su liofilizovani prahovi, spremni da se kombinuju sa rastvaračem neposredno pre upotrebe, uključujući hipodermičke tablete, sterilne suspenzije spremne za ubrizgavanje, sterilne suve nerastvorive proizvode spremne za kombinovanje sa vehikulumom neposredno pre upotrebe i sterilne emulzije. Rastvori mogu da budu vodeni ili nevodeni.
[0170] Ako se primenjuju intravenski, odgovarajući nosači uključuju fiziološki slani rastvor ili fosfatno puferisani fiziološki rastvor (PBS), kao i rastvore koji sadrže agense za zgušnjavanje i povećanje rastvorljivosti, kao što su glukoza, polietilen glikol i polipropilen glikol i njihove smeše.
[0171] Topikalne smeše koje sadrže antitelo pripremaju se kao što je opisano za lokalnu i sistemsku primenu. Dobijena smeša može da bude rastvor, suspenzija, emulzije ili slično i može se formulisati kao kreme, gelovi, masti, emulzije, rastvori, eliksiri, losioni, suspenzije, tinkture, paste, pene, aerosoli, preparati za irigaciju, sprejevi, supozitorije, zavoji, dermalni flasteri ili bilo koje druge formulacije pogodne za topikalnu primenu.
[0172] Ovde opisano anti-CTLA-4 antitelo može da bude formulisano kao aerosol za topikalnu primenu, kao što je inhalacijom (videti, npr. SAD patente br. 4,044,126, 4,414,209 i 4,364,923, koji opisuju aerosole za isporuku steroida korisnog za lečenje upalnih bolesti, posebno astme). Ove formulacije za primenu u respiratorni trakt mogu biti u obliku aerosola ili rastvora za nebulizer, ili kao mikrofini prah za insuflacije, sam ili u kombinaciji sa inertnim nosačem kao što je laktoza. U tom slučaju, čestice formulacije će, u jednom primeru izvođenja, imati prečnike manje od 50 mikrona, u jednom primeru izvođenja manje od 10 mikrona.
[0173] Ovde opisano anti-CTLA-4 antitelo može da bude formulisano za lokalnu ili topikalnu primenu, kao što je za topikalnu primenu na kožu i mukozne membrane, kao što je u oko, u obliku gelova, krema i losiona i za primenu na oko ili za intracisternalnu ili intraspinalnu primenu. Topikalna primena se razmatra za transdermalnu isporuku, kao i za primenu na očima ili mukozi, ili za inhalacione terapije. Nazalni rastvori samog antitela sama ili u kombinaciji sa drugim farmaceutski prihvatljivim ekscipijensima takođe mogu da se primene.
[0174] Transdermalni flasteri, uključujući jonoforetske i elektroforetske uređaje, dobro su poznati stručnjacima u ovoj oblasti i mogu se koristiti za administriranje antitela. Na primer, takvi flasteri su opisani u SAD patentima br.6,267,983, 6,261,595, 6,256,533, 6,167,301, 6,024,975, 6,010715, 5,985,317, 5,983,134, 5,948,433 i 5,860,957.
[0175] U određenim primerima izvođenja, farmaceutska kompozicija koja sadrži antitelo ili njihov antigen-vezujući fragment koji je ovde opisan je liofilizovani prah, koji se može rekonstituisati za primenu kao rastvori, emulzije i druge mešavine. Takođe može biti rekonstituisan i formulisan u vidu čvrstih supstanci ili gelova. Liofilizovani prah se priprema rastvaranjem ovde opisanog antitela ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta, ili njegovog farmaceutski prihvatljivog derivata, u odgovarajućem rastvaraču. U nekim primerima izvođenja, liofilizovani prah je sterilan. Rastvarač može da sadrži ekscipijens koji poboljšava stabilnost ili drugu farmakološku komponentu praha ili rekonstituisanog rastvora, pripremljenog iz praha. Ekscipijensi koji se mogu koristiti uključuju, ali se ne ograničavaju na, dekstrozu, sorbitol, fruktozu, kukuruzni sirup, ksilitol, glicerin, glukozu, saharozu ili neki drugi odgovarajući agens. Rastvarač takođe može da sadrži pufer, kao što je citrat, natrijum ili kalijum fosfat ili neki drugi takav pufer poznat stručnjacima u ovoj oblasti, u jednom primeru izvođenja, oko neutralnog pH. Naknadna sterilna filtracija rastvora praćena liofilizacijom pod standardnim uslovima poznatim stručnjacima u ovoj oblasti obezbeđuje željenu formulaciju. U jednom primeru izvođenja, dobijeni rastvor će biti raspodeljen u bočice za liofilizaciju. Svaka bočica će sadržati jednu dozu ili više doza jedinjenja. Liofilizovani prah se može čuvati pod odgovarajućim uslovima, kao što je na oko 4°C do sobne temperature. Rekonstitucija ovog liofilizovanog praha vodom za injekcije daje formulaciju za upotrebu u parenteralnoj primeni. Za rekonstituciju se liofilizovani prah dodaje sterilnoj vodi ili drugom odgovarajućem nosaču. Precizna količina zavisi od izabranog jedinjenja. Takva količina se može empirijski odrediti.
[0176] Ovde opisana anti-CTLA-4 antitela i druge kompozicije koje su ovde obezbeđene takođe mogu da budu formulisane tako da budu usmerene na određeno tkivo, receptor ili drugu oblast tela subjekta koga treba lečiti. Mnogi takvi postupci ciljnog delovanja dobro su poznati stručnjacima u ovoj oblasti. Svi takvi postupci ciljnog delovanja se ovde razmatraju za upotrebu u predmetnim kompozicijama. Za neograničavajuće primere postupaka ciljnog delovanja, videti, npr. SAD patente br. 6,316,652, 6,274,552, 6,271,359, 6,253,872, 6,139,865, 6,131,570, 6,120,751, 6,071,495, 6,060,082, 6,048,736, 6,039,975, 6,004,534, 5,985,307, 5,972,366, 5,900,252, 5,840,674, 5,759,542 i 5,709,874. U specifičnom primeru izvođenja, antitelo ili njegov antigenvezujući fragment koji je ovde opisan je usmeren na tumor.
[0177] Kompozicije za upotrebu za in vivo primenu mogu da budu sterilne. Ovo se lako postiže filtracijom kroz, npr. membrane za sterilnu filtraciju.
5.4 Postupci za upotrebu i upotrebe
[0178] Pozivanje na postupke za lečenje u predmetnom opisu treba tumačiti kao pozivanje na jedinjenja, farmaceutske kompozicije i lekove predmetnog pronalaska za upotrebu u postupku za lečenja humanog (ili životinjskog) tela terapijom. U drugom aspektu, predmetno otkriće obezbeđuje postupak za lečenje kancera ili infektivne bolesti kod subjekta koji koristi ovde opisana anti-CTLA-4 antitela. Obelodanjeno je da se bilo koja bolest ili poremećaj kod subjekta koji bi imao koristi od inhibicije funkcije CTLA-4 može lečiti korišćenjem anti-CTLA-4 antitela opisanih ovde. Ovde opisana anti-CTLA-4 antitela su posebno korisna za inhibiranje tolerancije imunog sistema na tumore, a shodno tome mogu se koristiti i kao imunoterapija za subjekte obolele od kancera. Na primer, obelodanjen je postupak za povećanje aktivacije T-ćelija kao odgovor na antigen u subjektu, gde postupak obuhvata davanje subjektu efikasne količine anti-CTLA-4 antitela ili njegove farmaceutske kompozicije, kao što je ovde opisano. U određenim primerima izvođenja, predmetno otkriće obezbeđuje postupak za lečenje kancera kod subjekta, gde postupak obuhvata davanje subjektu efikasne količine antitela ili farmaceutske kompozicije, kao što je ovde opisano.
[0179] Kanceri koji mogu da se leče antitelima, terapeutskim kombinacijama, ili farmaceutskim kompozicijama opisanim ovde uključuju, bez ograničenja, čvrsti kancer (npr. relapsni ili refraktorni čvrsti kancer, i uznapredovali ili metastatski čvrsti kancer), karcinom, sarkom, melanom (npr. melanom III stadijuma ili IV stadijuma), sitnoćelijski kancer pluća, ne-sitnoćelijski kancer pluća, urotelijalni kancer, kancer jajnika, kancer prostate (npr. metastatski hormonski refraktorni kancer prostate i progresivni metastatski kancer prostate), kancer pankreasa, kancer dojke (npr. HER2<+>kancer dojke (npr. relapsni/refraktorni HER2<+>kancer dojke)), kancer glave i vrata (npr. relapsni/refraktorni karcinom skvamoznih ćelija glave i vrata (HNSCC)), gliom, maligni gliom, multiformni glioblastom, metastazu na mozgu, kancer Merkelovih ćelija, kancer želuca, gastroezofagealni kancer, karcinom bubrežnih ćelija, uvealni melanom, kancer debelog creva, kancer grlića materice, limfom (npr. relapsni ili refraktorni limfom), ne-Hočkinov limfom, Hočkinov limfom, leukemiju i multipli mijelom. U određenim primerima izvođenja, kancer se leči intratumorskom primenom ovde opisanog antitela, terapeutske kombinacije ili farmaceutske kompozicije. Kanceri koji se mogu lečiti intratumorskom primenom ovde opisanih antitela, terapeutskih kombinacija ili farmaceutskih kompozicija uključuju, bez ograničenja, čvrste tumore (npr. uznapredovale ili metastatske čvrste tumore), kancer glave i vrata (npr. relapsni/refraktorni karcinom skvamoznih ćelija glave i vrata (HNSCC)) i kancer dojke (npr. HER2<+>kancer dojke (npr. relapsni/refraktorni HER2<+>kancer dojke)).
[0180] U određenim primerima izvođenja, kancer koji se leči u skladu sa ovde opisanim postupcima je čvrsti tumor. U određenim primerima izvođenja, kancer koji se leči u skladu sa ovde opisanim postupcima je metastatski ili lokalno uznapredovali kancer (npr. metastatski ili lokalno uznapredovali čvrsti tumor). U određenim primerima izvođenja, kancer se leči u skladu sa postupkom koji je ovde opisan kao prva terapija kancera nakon dijagnoze metastatskog ili lokalno uznapredovalog tumora (npr. u roku od 1, 2, 3, 4, 5, ili 6 dana; 1, 2, 3, 4, 6, 8, ili 12 nedelja; ili, 1, 2, 3, 4, 6, 8, ili 12 meseci nakon dijagnoze). U određenim primerima izvođenja, kancer se leči u skladu sa postupkom koji je ovde opisan kao prva terapija kancera nakon dijagnoze progresije tumora (npr. u roku od 1, 2, 3, 4, 5, ili 6 dana; 1, 2, 3, 4, 6, 8 ili 12 nedelja; ili, 1, 2, 3, 4, 6, 8, ili 12 meseci nakon dijagnoze progresije tumora) do koje je došlo uprkos prethodnom lečenju tumora drugom terapijom za kancer, gde je opciono ovde opisani postupak obezbeđen kao druga terapija kancera koja se primenjuje. U određenim primerima izvođenja, kancer se leči u skladu sa postupkom koji je ovde opisan kao prva terapija kancera nakon dijagnoze toksičnosti drugačije terapije za kancer (npr. u roku od 1, 2, 3, 4, 5, ili 6 dana; 1, 2, 3, 4, 6, 8 ili 12 nedelja; ili, 1, 2, 3, 4, 6, 8, ili 12 meseci nakon dijagnoze toksičnosti drugačije terapije za kancer), gde je opciono ovde opisani postupak obezbeđen kao druga terapija kancera koja se primenjuje. U određenim primerima izvođenja, kancer koji se leči u skladu sa ovde opisanim postupcima je metastatski ili lokalno uznapredovali kancer (npr. čvrsti tumor) za koji nije dostupna standardna terapija. U ostalim primerima izvođenja, kancer koji se leči u skladu sa ovde opisanim postupcima je metastatski ili lokalno uznapredovali kancer (npr. čvrsti tumor) za koji je standardna terapija bila neuspela (odnosno, kancer je napredovao nakon standardne terapije). U određenim primerima izvođenja, terapija ne uspeva ako je kancer refraktoran na terapiju. U određenim primerima izvođenja, terapija ne uspeva ako dolazi do recidiva kancera nakon odgovora, potpunog ili delimičnog, na terapiju. U određenim primerima izvođenja, metastatski ili lokalno uznapredovali kancer (npr. čvrsti tumor) potvrđen je histološki ili citološki.
[0181] U određenim primerima izvođenja, kancer je čvrsti tumor. U određenim primerima izvođenja, kancer (npr. čvrsti tumor) eksprimira PD-L1. U određenim primerima izvođenja, procenat tumorskih ćelija u uzorku kancera (npr. čvrstog tumora) koje ispoljavaju detektabilnu ekspresiju (npr. delimičnu ili potpunu ekspresiju) PD-L1 je najmanje 1% (npr. najmanje 2%, 3%, 4%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 60%, 70%, 80%, ili 90%). U određenim primerima izvođenja, procenat tumorskih ćelija u uzorku kancera (npr. čvrstog tumora) koje ispoljavaju detektabilnu membransku ekspresiju (npr. delimičnu ili potpunu membransku ekspresiju) PD-L1 je najmanje 1% (npr. najmanje 2%, 3%, 4%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 60%, 70%, 80%, ili 90%). U određenim primerima izvođenja, procenat tumorskih ćelija u uzorku kancera (npr. čvrstog tumora) koje ispoljavaju detektabilnu membransku ekspresiju (npr. delimičnu ili potpunu membransku ekspresiju) PD-L1 je najmanje 1%. U određenim primerima izvođenja, procenat tumorskih ćelija u uzorku kancera (npr. čvrstog tumora) koje ispoljavaju detektabilnu membransku ekspresiju (npr. delimičnu ili potpunu membransku ekspresiju) PD-L1 je najmanje 5%. U određenim primerima izvođenja, procenat tumorskih ćelija u uzorku kancera (npr. čvrstog tumora) koje ispoljavaju detektabilnu membransku ekspresiju (npr. delimičnu ili potpunu membransku ekspresiju) PD-L1 je najmanje 25%. U određenim primerima izvođenja, procenat tumorskih ćelija u uzorku kancera (npr. čvrstog tumora) koje ispoljavaju detektabilnu membransku ekspresiju (npr. delimičnu ili potpunu membransku ekspresiju) PD-L1 je najmanje 50%.
[0182] U određenim primerima izvođenja, metastatski ili lokalno uznapredovali kancer (npr. čvrst tumor) eksprimira PD-L1. U određenim primerima izvođenja, procenat tumorskih ćelija u uzorku metastatskog ili lokalno uznapredovalog kancera (npr. čvrstog tumora) koje ispoljavaju detektabilnu ekspresiju (npr. delimičnu ili potpunu ekspresiju) PD-L1 je najmanje 1% (npr. najmanje 2%, 3%, 4%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 60%, 70%, 80%, ili 90%). U određenim primerima izvođenja, procenat tumorskih ćelija u uzorku metastatskog ili lokalno uznapredovalog kancera (npr. čvrstog tumora) koje ispoljavaju detektabilnu membransku ekspresiju (npr. delimičnu ili potpunu membransku ekspresiju) PD-L1 je najmanje 1% (npr. najmanje 2%, 3%, 4%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 60%, 70%, 80%, ili 90%). U određenim primerima izvođenja, procenat tumorskih ćelija u uzorku metastatskog ili lokalno uznapredovalog kancera (npr. čvrstog tumora) koje ispoljavaju detektabilnu membransku ekspresiju (npr. delimičnu ili potpunu membransku ekspresiju) PD-L1 je najmanje 1%. U određenim primerima izvođenja, procenat tumorskih ćelija u uzorku metastatskog ili lokalno uznapredovalog kancera (npr. čvrstog tumora) koje ispoljavaju detektabilnu membransku ekspresiju (npr. delimičnu ili potpunu membransku ekspresiju) PD-L1 je najmanje 5%. U određenim primerima izvođenja, procenat tumorskih ćelija u uzorku metastatskog ili lokalno uznapredovalog kancera (npr. čvrstog tumora) koje ispoljavaju detektabilnu membransku ekspresiju (npr. delimičnu ili potpunu membransku ekspresiju) PD-L1 je najmanje 25%. U određenim primerima izvođenja, procenat tumorskih ćelija u uzorku metastatskog ili lokalno uznapredovalog kancera (npr. čvrstog tumora) koje ispoljavaju detektabilnu membransku ekspresiju (npr. delimičnu ili potpunu membransku ekspresiju) PD-L1 je najmanje 50%.
[0183] Za sve i svaki od ovde opisanih postupaka koji zahtevaju određeni procenat ćelija u uzorku koji ispoljava detektabilnu ekspresiju (npr. membranska ekspresija, delimična ili potpuna membranska ekspresija) PD-L1, ekspresija PD-L1 se može detektovati bilo kojim postupkom koji je dobro poznat u struci, uključujući, ali ne ograničavajući se na imunohistohemiju. Ilustrativni imunohistohemijski testovi za merenje ekspresije PD-L1 u tumorskim ćelijama dati su u Hirsch et al. (2017, J. Thoracic Oncol.12(2): 208-222), Rimm et al. (2017, JAMA Oncol.3(8): 1051-1058), and Diggs and Hsueh (2017, Biomarker Res. 5:12).
[0184] U određenim primerima izvođenja, kancer koji se leči u skladu sa ovde opisanom postupkom je metastatski ili lokalno uznapredovali nesitnoćelijski kancer pluća (NSCLC). U određenim primerima izvođenja, kancer koji se leči u skladu sa ovde opisanim postupkom je metastatski nesitnoćelijski kancer pluća (NSCLC). U određenim primerima izvođenja, kancer koji se leči u skladu sa ovde opisanim postupkom je metastatski ili lokalno uznapredovali NSCLC IV stadijuma. U određenim primerima izvođenja, kancer koji se leči u skladu sa ovde opisanim postupkom je metastatski NSCLC IV stadijuma. U određenim primerima izvođenja, procenat tumorskih ćelija u uzorku metastatskog ili lokalno uznapredovalog NSCLC koje ispoljavaju detektabilnu ekspresiju (npr. delimičnu ili potpunu ekspresiju) PD-L1 je najmanje 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 60%, 70%, 80%, ili 90%. U određenim primerima izvođenja, procenat tumorskih ćelija u uzorku metastatskog ili lokalno uznapredovalog NSCLC koje ispoljavaju detektabilnu membransku ekspresiju (npr. delimičnu ili potpunu membransku ekspresiju) PD-L1 je najmanje 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 60%, 70%, 80%, ili 90%. U određenim primerima izvođenja, procenat tumorskih ćelija u uzorku metastatskog ili lokalno uznapredovalog NSCLC koje ispoljavaju detektabilnu membransku ekspresiju (npr. delimičnu ili potpunu membransku ekspresiju) PD-L1 je najmanje 1%. U određenim primerima izvođenja, procenat tumorskih ćelija u uzorku metastatskog ili lokalno uznapredovalog NSCLC koje ispoljavaju detektabilnu membransku ekspresiju (npr. delimičnu ili potpunu membransku ekspresiju) PD-L1 je najmanje 5%. U određenim primerima izvođenja, procenat tumorskih ćelija u uzorku metastatskog ili lokalno uznapredovalog NSCLC koje ispoljavaju detektabilnu membransku ekspresiju (npr. delimičnu ili potpunu membransku ekspresiju) PD-L1 je najmanje 25%. U određenim primerima izvođenja, procenat tumorskih ćelija u uzorku metastatskog ili lokalno uznapredovalog NSCLC koje ispoljavaju detektabilnu membransku ekspresiju (npr. delimičnu ili potpunu membransku ekspresiju) PD-L1 je najmanje 50%. U određenim primerima izvođenja, metastatski ili lokalno uznapredovali NSCLC nema genomske tumorske aberacije EGFR ili ALK. U određenim primerima izvođenja, metastatski ili lokalno uznapredovali NSCLC nema senzibilizujuću mutaciju EGFR (npr. mutaciju koja je podesna za lečenje inhibitorom tirozin kinaze uključujući erlotinib, gefitinib ili afatanib) ili translokaciju ALK. U određenim primerima izvođenja, subjekt koji ima metastatski ili lokalno uznapredovali NSCLC nije dobio prethodni sistemski hemoterapijski tretman za metastatski ili lokalno uznapredovali NSCLC. U određenim primerima izvođenja, metastatski ili lokalno uznapredovali NSCLC se leči u skladu sa postupkom koji je ovde opisan kao prva terapija kancera nakon dijagnoze (npr. u roku od 1, 2, 3, 4, 5, ili 6 dana; 1, 2, 3, 4, 6, 8, ili 12 nedelja; ili, 1, 2, 3, 4, 6, 8, ili 12 meseci nakon dijagnoze) metastatskog ili lokalno uznapredovalog NSCLC. U određenim primerima izvođenja, postupak sadrži lečenje subjekta koji ima NSCLC (npr. metastatski ili lokalno uznapredovali NSCLC IV stadijuma) korišćenjem ovde opisanog anti-CTLA-4 antitela, npr. AGEN1884.H3 (IgG1S239D/A330L/I332E), ili farmaceutske kompozicije koja sadrži takvo anti-CTLA-4 antitelo, gde je procenat tumorskih ćelija u uzorku NSCLC koje ispoljavaju detektabilnu membransku ekspresiju (npr. delimičnu ili potpunu membransku ekspresiju) PD-L1 najmanje 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 60%, 70%, 80%, ili 90%, i gde je postupak obezbeđen kao prva terapija protiv kancera nakon dijagnoze kancera grlića materice (npr. u roku od 1, 2, 3, 4, 5, ili 6 dana; 1, 2, 3, 4, 6, 8, ili 12 nedelja; ili, 1, 2, 3, 4, 6, 8, ili 12 meseci nakon dijagnoze).
[0185] U određenim primerima izvođenja, kancer koji se leči u skladu sa ovde opisanim postupcima je kancer grlića materice. U određenim primerima izvođenja, kancer koji se leči u skladu sa ovde opisanim postupcima je metastatski ili lokalno uznapredovali, neoperabilni karcinom skvamoznih ćelija, adenoskvamozni karcinom ili adenokarcinom grlića materice. U određenim primerima izvođenja, kancer koji se leči u skladu sa ovde opisanim postupcima je neoperabilni ili metastatski kancer grlića materice. U određenim primerima izvođenja, kancer grlića materice je napredovao nakon standardne terapije (npr. recidivirao nakon standardne terapije, ili je refraktoran na standardnu terapiju). U određenim primerima izvođenja, standardna terapija obuhvata hemoterapiju koja sadrži platinu. U određenim primerima izvođenja, hemoterapija koja sadrži platinu bira se iz grupe koja se sastoji od cisplatine, karboplatine, oksaliplatine, nedaplatine, satraplatine, pikoplatine, triplatine, fenantriplatine, iproplatine, lobaplatine, heptaplatine, lipoplatine i njihove kombinacije. U određenim primerima izvođenja, standardna terapija dalje sadrži drugu hemoterapiju. U određenim primerima izvođenja druga hemoterapija se bira iz grupe koja se sastoji od nukleotidnog analoga (npr. gemcitabina), folatnog antimetabolita (npr. pemetreksed) i taksana (npr. paklitaksel). U određenim primerima izvođenja, standardna terapija je bilo koja dublet hemoterapija na bazi platine (PT-DC) (poznata i kao dublet koji sadrži platinu) poznata u struci. U određenim primerima izvođenja, PT-DC sadrži cisplatinu i gemcitabin, cisplatinu i pemetreksed, cisplatinu i paklitaksel, karboplatinu i paklitaksel, ili cisplatinu i topotekan. Standardna terapija (npr. ona koja sadrži PT-DC) opciono dalje može da sadrži jednu ili više dodatnih terapija, kao što je bevacizumab. U određenim primerima izvođenja, standardna terapija sadrži paklitaksel i topotekan. U određenim primerima izvođenja, kancer grlića materice je HPV pozitivan. U određenim primerima izvođenja, kancer grlića materice je povezan sa nestabilnošću mikrosatelita. U određenim primerima izvođenja, kancer lečen u skladu sa ovde opisanim postupcima je metastatski ili lokalno uznapredovali, neoperabilni karcinom skvamoznih ćelija, adenoskvamozni karcinom ili adenokarcinom grlića materice koji je pokazao relaps nakon primene dubleta koji sadrži platinu za lečenje uznapredovale (rekurentne, neoperabilne ili metastatske) bolesti. U određenim primerima izvođenja, kancer grlića materice se leči u skladu sa postupkom koji je ovde opisan kao prva terapija kancera nakon dijagnoze kancera grlića materice (npr. u roku od 1, 2, 3, 4, 5, ili 6 dana; 1, 2, 3, 4, 6, 8, ili 12 nedelja; ili, 1, 2, 3, 4, 6, 8, ili 12 meseci nakon dijagnoze). U određenim primerima izvođenja, kancer grlića materice se leči u skladu sa postupkom koji je ovde opisan kao prva terapija kancera nakon dijagnoze progresije tumora (npr. u roku od 1, 2, 3, 4, 5, ili 6 dana; 1, 2, 3, 4, 6, 8 ili 12 nedelja; ili, 1, 2, 3, 4, 6, 8, ili 12 meseci nakon dijagnoze progresije tumora) do koje je došlo uprkos prethodnom lečenju kancera grlića materice drugom terapijom za kancer, gde je opciono ovde opisani postupak obezbeđen kao druga terapija kancera koja se primenjuje. U određenim primerima izvođenja, kancer grlića materice se leči u skladu sa postupkom koji je ovde opisan kao prva terapija kancera nakon dijagnoze toksičnosti drugačije terapije za kancer (npr. u roku od 1, 2, 3, 4, 5, ili 6 dana; 1, 2, 3, 4, 6, 8 ili 12 nedelja; ili, 1, 2, 3, 4, 6, 8, ili 12 meseci nakon dijagnoze toksičnosti drugačije terapije za kancer), gde je opciono ovde opisani postupak obezbeđen kao druga terapija kancera koja se primenjuje. U određenim primerima izvođenja, postupak obuhvata lečenje subjekta koji ima kancer grlića materice (npr. metastatski ili lokalno uznapredovali, neoperabilni karcinom skvamoznih ćelija, adenoskvamozni karcinom ili adenokarcinom grlića materice) korišćenjem ovde opisanog anti-CTLA-4 antitela, npr. AGEN1884.H3 (IgG1S239D/A330L/I332E), ili farmaceutske kompozicije koja sadrži takvo anti-CTLA-4 antitelo, gde je postupak obezbeđen kao prva terapija protiv kancera nakon dijagnoze kancera grlića materice (npr. u roku od 1, 2, 3, 4, 5, ili 6 dana; 1, 2, 3, 4, 6, 8, ili 12 nedelja; ili, 1, 2, 3, 4, 6, 8, ili 12 meseci nakon dijagnoze). U određenim primerima izvođenja, postupak obuhvata lečenje subjekta koji ima kancer grlića materice (npr. metastatski ili lokalno uznapredovali, neoperabilni karcinom skvamoznih ćelija, adenoskvamozni karcinom ili adenokarcinom grlića materice) korišćenjem ovde opisanog anti-CTLA-4 antitela, npr. AGEN1884.H3 (IgG1S239D/A330L/I332E), ili farmaceutske kompozicije koja sadrži takvo anti-CTLA-4 antitelo, gde je postupak obezbeđen nakon dijagnoze progresije tumora (npr. u roku od 1, 2, 3, 4, 5, ili 6 dana; 1, 2, 3, 4, 6, 8, ili 12 nedelja; ili, 1, 2, 3, 4, 6, 8, ili 12 meseci nakon dijagnoze progresije tumora) do koje je došlo uprkos prethodnom lečenju kancera grlića materice drugom terapijom protiv kancera, ili je obezbeđen nakon dijagnoze toksičnosti drugačije terapije protiv kancera (npr. u roku od 1, 2, 3, 4, 5, ili 6 dana; 1, 2, 3, 4, 6, 8 ili 12 nedelja; ili, 1, 2, 3, 4, 6, 8, ili 12 meseci nakon dijagnoze toksičnosti drugačije terapije protiv kancera), i gde je ovde opisani postupak obezbeđen kao druga terapija kancera koja se primenjuje.
[0186] U određenim primerima izvođenja, kancer koji se leči u skladu sa ovde opisanim postupcima je kutani karcinom skvamoznih ćelija (cSCC). U određenim primerima izvođenja, kancer koji se leči u skladu sa ovde opisanim postupcima je kutani karcinom skvamoznih ćelija (cSCC) IV stadijuma. U određenim primerima izvođenja, cSCC (npr. cSCC IV stadijuma) nije izlečiv terapijom zračenja. U određenim primerima izvođenja, cSCC IV stadijuma se dijagnostikuje histološki ili citološki prema osmom izdanju priručnika za određivanje stadijuma kancera Američkog udruženog komiteta za borbu protiv kancera (AJCC-8). U određenim primerima izvođenja, cSCC (npr. cSCC IV stadijuma) se leči u skladu sa ovde opisanim postupkom kao prva terapija kancera nakon dijagnoze cSCC (npr. cSCC IV stadijuma) (npr. u roku od 1, 2, 3, 4, 5, ili 6 dana; 1, 2, 3, 4, 6, 8, ili 12 nedelja; ili, 1, 2, 3, 4, 6, 8 ili 12 meseci nakon dijagnoze). U određenim primerima izvođenja, cSCC (npr. cSCC IV stadijuma) se leči u skladu sa postupkom koji je ovde opisan kao prva terapija kancera nakon dijagnoze progresije tumora (npr. u roku od 1, 2, 3, 4, 5, ili 6 dana; 1, 2, 3, 4, 6, 8 ili 12 nedelja; ili, 1, 2, 3, 4, 6, 8, ili 12 meseci nakon dijagnoze progresije tumora) do koje je došlo uprkos prethodnom lečenju cSCC (npr. cSCC IV stadijuma) drugom terapijom za kancer, gde je opciono ovde opisani postupak obezbeđen kao druga terapija kancera koja se primenjuje. U određenim primerima izvođenja, cSCC (npr. cSCC IV stadijuma) se leči u skladu sa postupkom koji je ovde opisan kao prva terapija kancera nakon dijagnoze toksičnosti drugačije terapije za kancer (npr. u roku od 1, 2, 3, 4, 5, ili 6 dana; 1, 2, 3, 4, 6, 8 ili 12 nedelja; ili, 1, 2, 3, 4, 6, 8, ili 12 meseci nakon dijagnoze toksičnosti drugačije terapije za kancer), gde je opciono ovde opisani postupak obezbeđen kao druga terapija kancera koja se primenjuje.
[0187] U određenim primerima izvođenja, kancer koji se leči u skladu sa ovde opisanim postupcima je limfom B ćelija (npr. hronična limfocitna leukemija B ćelija, ne-Hočkinov limfom B ćelija, kutani limfom B ćelija, difuzni limfom velikih B ćelija), karcinom bazalnih ćelija, kancer bešike, blastom, metastaza na mozgu, kancer dojke, Burkitov limfom, karcinom (npr. adenokarcinom (npr. gastroezofagealnog spoja)), kancer grlića materice, kancer debelog creva, kolorektalni kancer (kancer debelog creva i rektalni kancer), endometrijalni karcinom, kancer jednjaka, Juingov sarkom, folikularni limfom, kancer želuca, karcinom gastroezofagealnog spoja, gastrointestinalni kancer, glioblastom (npr. multiformni glioblastom, npr. novodijagnostikovani ili rekurentni), gliom, kancer glave i vrata (npr. karcinom skvamoznih ćelija glave i vrata), hepatična metastaza, Hočkinov i ne-Hočkinov limfom, kancer bubrega (npr. karcinom bubrežnih ćelija i Vilmsovi tumori), kancer grkljana, leukemija (npr. hronična mijelocitna leukemija, leukemija vlasatih ćelija), kancer jetre (npr. hepatički karcinom i hepatom), kancer pluća (npr. nesitnoćelijski kancer pluća i sitnoćelijski kancer pluća), limfoblastični limfom, limfom, limfom ćelija plašta, metastatski tumor mozga, metastatski kancer, mijelom (npr. multipli mijelom), neuroblastom, očni melanom, kancer orofarinksa, osteosarkom, kancer jajnika, kancer pankreasa (npr. duktalni adenokarcinom pankreasa), kancer prostate (npr. refraktoran na hormone (npr. rezistentan na kastraciju), metastatski, metastatski refraktoran na hormon (npr. rezistentan na kastraciju, nezavisan od androgena)), karcinom bubrežnih ćelija (npr. metastatski), karcinom pljuvačke žlezde, sarkom (npr. rabdomiosarkom), kancer kože (npr. melanom (npr. metastatski melanom)), sarkom mekog tkiva, čvrsti tumor, karcinom skvamoznih ćelija, sinovijalni sarkom, kancer testisa, kancer štitne žlezde, kancer tranzicionih ćelija (kancer urotelijalnih ćelija), uvealni melanom (npr. metastatski), verukozni karcinom, kancer vulve i Valdenstromova makroglobulinemija.
[0188] U određenim primerima izvođenja, kancer koji se leči u skladu sa ovde opisanim postupcima je humani sarkom ili karcinom, npr. fibrosarkom, miksosarkom, liposarkom, hondrosarkom, osteogeni sarkom, hordom, angiosarkom, endoteliosarkom, limfangiosarkom, limfangioendoteliosarkom, sinoviom, mezoteliom, Juingov tumor, lejomiosarkom, rabdomiosarkom, karcinom debelog creva, kancer pankreasa, kancer dojke, kancer jajnika, kancer prostate, karcinom skvamoznih ćelija, karcinom bazalnih ćelija, adenokarcinom, karcinom znojnih žlezda, karcinom lojnih žlezda, papilarni karcinom, papilarni adenokarcinomi, cistadenokarcinom, medularni karcinom, bronhogeni karcinom, karcinom bubrežnih ćelija (npr. metastatski), hepatom, karcinom žučnih puteva, horiokarcinom, seminom, embrionalni karcinom, Vilmsov tumor, kancer grlića materice, tumor testisa, karcinom pluća, sitnoćelijski karcinom pluća, karcinom bešike, epitelni karcinom, gliom, multiformni glioblastom, astrocitom, meduloblastom, kraniofaringiom, ependimom, pinealom, hemangioblastom, akustični neurom, oligodendrogliom, meningiom, melanom, neuroblastom ili retinoblastom.
[0189] U određenim primerima izvođenja, kancer koji se leči u skladu sa ovde opisanim postupcima je angiosarkom.
[0190] U određenim primerima izvođenja, kancer koji se leči u skladu sa ovde opisanim postupcima je akutna limfocitna leukemija ili akutna mijelocitna leukemija (npr. mijeloblastna, promijelocitna, mijelomonocitna, monocitna i eritroleukemija); hronična leukemija (hronična mijelocitna (granulocitna) leukemija ili hronična limfocitna leukemija); Hočkinova bolest; ne-Hočkinova bolest; akutna mijeloidna leukemija; limfom B ćelija; limfom T ćelija; anaplastični veliki ćelijski limfom; intraokularni limfom; folikularni limfom; limfom tankog creva; ili limfom marginalne zone slezine.
[0191] U određenim primerima izvođenja, kancer koji se leči u skladu sa ovde opisanim postupcima je multipli mijelom, Valdenstromova makroglobulinemija, bolest teškog lanca, gastrointestinalni stromalni tumori, kancer glave i/ili vrata (npr. karcinom skvamoznih ćelija hipofarinksa, karcinom skvamoznih ćelija grkljana, ćelijski karcinom orofarinksa, ili verukozni karcinom larinksa), endometrijalni stromalni sarkom, sarkom mastocita, sarkom mekog tkiva odraslih, sarkom materice, karcinom Merkelovih ćelija, urotelijalni karcinom, melanom sa metastazama na mozgu, uvealni melanom, uvealni melanom sa metastazama na jetri, nesitnoćelijski kancer pluća, rektalni kancer ili mijelodisplastični sindrom. U nekim primerima izvođenja, kancer koji se leči u skladu sa metodama je metastatski.
[0192] U određenim primerima izvođenja, kancer koji se leči u skladu sa postupcima koji su ovde opisani je kancer prostate, kancer dojke, kancer pluća, kolorektalni kancer, melanom, bronhijalni kancer, kancer bešike, kancer mozga ili centralnog nervnog sistema, kancer perifernog nervnog sistema, kancer materice ili endometrijuma, kancer oralne šupljine ili grkljana, ne-Hočkinov limfom, kancer štitne žlezde, kancer bubrega, kancer bilijarnog trakta, kancer tankog creva ili slepog creva, kancer pljuvačnih žlezda, kancer štitne žlezde, kancer nadbubrežne žlezde, kancer skvamoznih ćelija, mezoteliom, osteokarcinom, tiom/timični karcinom, glioblastom, mijelodisplastični sindrom, sarkom mekog tkiva, DIPG, adenokarcinom, osteosarkom, hondrosarkom, leukemija ili kancer pankreasa. U nekim primerima izvođenja, kancer koji se leči u skladu sa ovde opisanim postupcima uključuje karcinom (npr. adenokarcinom), limfom, blastom, melanom, sarkom ili leukemiju.
[0193] U određenim primerima izvođenja, kancer koji se leči u skladu sa ovde opisanim postupcima je kancer skvamoznih ćelija, sitnoćelijski kancer pluća, nesitnoćelijski kancer pluća, gastrointestinalni kancer, Hočkinov limfom, ne-Hočkinov limfom, kancer pankreasa, glioblastom, gliom, kancer grlića materice, kancer jajnika, kancer jetre (npr. hepatički karcinom i hepatom), kancer bešike, kancer dojke, upalni kancer dojke, karcinom Merkelovih ćelija, kancer debelog creva, kolorektalni kancer, kancer želuca, kancer mokraćne bešike, endometrijalni karcinom, mijeloma (npr. multipli mijelom), karcinom pljuvačnih žlezda, kancer bubrega (npr. karcinom bubrežnih ćelija i Vilmsovi tumori), karcinom bazalnih ćelija, melanom, kancer prostate, kancer vulve, kancer štitne žlezde, kancer testisa, kancer jednjaka, serozni adenokarcinom ili razne vrste kancera glave i vrata. U određenim primerima izvođenja, kancer koji se leči u skladu sa ovde opisanim postupcima uključuje desmoplastični melanom, upalni kancer dojke, timom, rektalni kancer, analni kancer ili operabilni ili neoperabilni gliom moždanog stabla. U specifičnom primeru izvođenja, kancer je čvrsti tumor. U drugom specifičnom primeru izvođenja, kancer je multiformni glioblastom. U nekim primerima izvođenja, multiformni glioblastom je rekurentan. U nekim primerima izvođenja, multiformni glioblastom je novodijagnostikovan. U nekim primerima izvođenja, multiformni glioblastom je kod subjekta koja ima nemetilovane MGMT promotore. U nekim primerima izvođenja, multiformni glioblastom je refraktoran na terapiju bevacizumabom. U nekim primerima izvođenja, multiformni glioblastom je kod subjekta koji nije dobijao terapiju bevacizumabom.
[0194] U određenim primerima izvođenja, kancer koji se leči u skladu sa ovde opisanim postupcima je metastatski melanom (npr. otporni metastatski melanom), metastatski kancer jajnika ili metastatski karcinom bubrega. U određenim primerima izvođenja, kancer koji se leči u skladu sa ovde opisanim postupcima je melanom koji je otporan na ipilimumab. U nekim primerima izvođenja, kancer koji se leči u skladu sa ovde opisanim postupcima je melanom koji je otporan na nivolumab ili pembrolizumab. U nekim primerima izvođenja, kancer koji se leči u skladu sa ovde opisanim postupcima je melanom koji je rezistentan na ipilimumab i nivolumab ili pembrolizumab.
[0195] U određenim primerima izvođenja, kancer koji se leči u skladu sa ovde opisanim postupcima je kancer dojke (npr. herceptin-rezistentni kancer dojke i trastuzumab-DM1 (T-DM1) rezistentni kancer dojke), kancer prostate, multiformni glioblastom, kolorektalni kancer, sarkom, kancer bešike, kancer grlića materice, kancer povezan sa HPV-om, kancer vagine, kancer vulve, kancer penisa, kancer anusa, kancer rektuma, kancer orofarinksa, multipli mijelom, karcinom bubrežnih ćelija, kancer jajnika, hepatocelularni kancer, endometrijalni kancer, kancer pankreasa, limfom i leukemija (npr. leukemija starijih osoba, akutna mijeloidna leukemija (AML) i AML starijih osoba).
[0196] U određenim primerima izvođenja, kancer koji se leči u skladu sa ovde opisanim postupcima je metastatski maligni melanom (npr. kutani ili intraokularni maligni melanom), kancer bubrega (npr. karcinom bistrih ćelija), kancer prostate (npr. adenokarcinom prostate refraktoran na hormone), kancer dojke, kancer debelog creva, kancer pluća (npr. nesitnoćelijski kancer pluća), kancer kostiju, kancer pankreasa, kancer kože, kancer glave ili vrata, kancer materice, kancer jajnika, rektalni kancer, kancer analne regije, kancer želuca, kancer testisa, kancer materice, karcinom Falopijevih tuba, endometrijalni karcinom, karcinom grlića materice, karcinom vagine, karcinom vulve, kancer jednjaka, kancer tankog creva, kancer endokrinog sistema, kancer štitne žlezde, kancer paratiroidne žlezde, kancer nadbubrežne žlezde, sarkom mekog tkiva, kancer uretre, kancer penisa, hronične ili akutne leukemije uključujući akutnu mijeloidnu leukemiju, hroničnu mijeloidnu leukemiju, akutnu limfoblastnu leukemiju, hroničnu limfoblastnu leukemiju, čvrste tumore dečijeg uzrasta, limfocitni limfom, kancer bešike, kancer bubrega ili uretera, karcinom bubrežne karlice, neoplazma centralnog nervnog sistema (CNS), primarni limfom CNS, tumorska angiogeneza, tumor kičme, gliom moždanog stabla, gliom, adenom hipofize, Kapošijev sarkom, epidermoidni kancer, kancer skvamoznih ćelija, limfom T ćelija, kanceri nastali pod uslovima sredine, uključujući i one izazvane azbestom, kancer jednjaka, kancer jetre, refraktorne ili rekurentne maligne bolesti, metastatski karcinomi, kanceri koji eksprimiraju PD-L1 i kombinacije navedenih kancera.
[0197] U određenim primerima izvođenja, subjekt je prethodno dobio imunoterapiju. U određenim primerima izvođenja, subjekt nije prethodno dobio imunoterapiju. U određenim primerima izvođenja, kancer je uznapredovali ili metastatski kancer.
[0198] U određenim primerima izvođenja, predmetno otkriće obezbeđuje postupak za lečenje infektivne bolesti kod subjekta, gde postupak obuhvata davanje subjektu efikasne količine anti-CTLA-4 antitela ili njegove farmaceutske kompozicije, kao što je ovde opisano. U jednom primeru izvođenja, ovde su obezbeđeni postupci za lečenje infekcije (npr. virusne infekcije, bakterijske infekcije, gljivične infekcije, infekcije protozoama ili parazitske infekcije). Infekcija koja se leči u skladu sa postupcima može biti uzrokovana infektivnim agensom koji je ovde identifikovan. U specifičnom primeru izvođenja, ovde opisano anti-CTLA-4 antitelo ili njegova kompozicija je jedini aktivni agens koji se daje subjektu. U nekim primerima izvođenja, ovde opisano anti-CTLA-4 antitelo ili njegova kompozicija se koristi u kombinaciji sa antiinfektivnim intervencijama (npr. antivirusnim agensima, antibakterijskim agensima, antifungalnim agensima ili antihelminticima) za lečenje infektivnih bolesti.
[0199] Infektivne bolesti koje se mogu lečiti anti-CTLA-4 antitelima ili farmaceutskim kompozicijama opisanim ovde su izazvane infektivnim agensima uključujući, ali ne ograničavajući se na bakterije, parazite, gljive, protoze i viruse. U specifičnom primeru izvođenja, infektivna bolest koja se leči ovde opisanim anti-CTLA-4 antitelima ili farmaceutskim kompozicijama je uzrokovana virusom. Virusne bolesti ili virusne infekcije koje se mogu lečiti u skladu sa ovde opisanim postupcima uključuju, ali se ne ograničavaju na, one izazvane hepatitisom tipa A, hepatitisom tipa B, hepatitisom tipa C, influencom (npr. influencom A ili influencom B), varičelom, adenovirusom, herpes simpleks virusom tipa I (HSV-I), herpes simpleks virusom tipa II (HSV-II), virusom goveđe kuge, rinovirusom, ehovirusom, rotavirus, respiratornim sincicijalnim virusom, papiloma virusom, papova virusom, citomegalovirusom, ehinovirusom, arbovirusom, hantavirusom, koksaki virusom, virusom zaušaka, virusom malih boginja, virusom rubele, polio virusom, virusom velikih boginja, Epštajn-Bar virusom, virusom humane imunodeficijencije tipa I (HIV-I), virusom humane imunodeficijencije tipa II (HIV-II) i agensima virusnih bolesti, kao što su virusni meningitis, encephalitis, denga ili velike boginje.
[0200] Bakterijske infekcije koje se mogu lečiti uključuju infekcije koje izazva Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis, Proteus vulgaris, Staphylococcus viridans i Pseudomonas aeruginosa. Bakterijske bolesti izazvane bakterijama (npr. Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis, Proteus vulgaris, Staphylococcus viridans i Pseudomonas aeruginosa) koje mogu da se leče u skladu sa ovde opisanim postupcima uključuju, ali se ne ograničavaju na, Mycobacteria rickettsia, Mycoplasma, Neisseria, S. pneumonia, Borrelia burgdorferi (lajmska bolest), Bacillus antracis (antraks), tetanus, Streptococcus, Staphylococcus, mycobacterium, veliki kašalj, koleru, kugu, difteriju, hlamidiju, S. aureus i legionelu.
[0201] Protozoalne bolesti ili protozoalne infekcije izazvane protozoom koje se mogu lečiti u skladu sa ovde opisanim postupcima uključuju, ali se ne ograničavaju na, lišmanijazu, kokcidozu, bolest izazvanu protozoom Trypanosoma schistosoma ili malariju. Parazitske bolesti ili parazitske infekcije izazvane parazitima koji se mogu lečiti u skladu sa ovde opisanim postupcima uključuju, ali nisu ograničene na, hlamidiju i rikeciju.
[0202] Gljivične bolesti ili gljivične infekcije koje se mogu lečiti u skladu sa ovde opisanim postupcima uključuju, ali nisu ograničene na, one izazvane infekcijama gljivicom Candida, zigomikozu, mastitis izazvan gljivicom Candida, progresivnu diseminiranu trihosporonozu sa latentnom trihosporonemijom, diseminiranu kandidijazu, plućnu parakokcidioidomikozu, plućnu aspergilozu, pneumoniju koju izaziva Pneumocystis carini, kriptokokni meningitis, kokcidioidni meningoencefalitis i cerebrospinalni vaskulitis, infekciju gljivicom Aspergillus niger, keratitis koji izaziva Fusarium, mikoze paranazalnih sinusa, endokarditis koji izazivaAspergillusfumigatus, tibijalnu dishondroplaziju, vaginitis koji izaziva Candida glabrata, orofaryigealnu kandidijazu, X-vezanu hroničnu granulomatoznu bolest, atletsko stopalo, kutanu kandidijazu, mikotični placentitis, diseminovanu trihosporonozu, alergijsku bronhopulmonalnu aspergilozu, mikotični keratitis, infekciju koju izaziva Cryptococcus neoformans, gljivični peritonitis, infekciju koju izaziva Curvularia geniculata, stafilokokni endoftalmitis, sporotrihozu i dermatofitozu.
[0203] U određenim primerima izvođenja, infektivna bolest je akutna. U određenim primerima izvođenja, infektivna bolest je hronična. U određenim primerima izvođenja, infektivna bolest je uzrokovana flavirusom, npr. virusom Zapadnog Nila, virusom Saint Louis encefalitis, virusom Povasan, virusom encefalitisa koji prenose krpelji, denga virusom, zika virusom, virusom bolesti šume Kjasanur, virusom žute groznice i virusom čikungunja. U određenim primerima izvođenja, zarazna bolest je uzrokovana virusom Ebola. U određenim primerima izvođenja, zarazna bolest je uzrokovana virusom influence. U određenim primerima izvođenja, zaraznu bolest izaziva virus humane imunodeficijencije (HIV), virus hepatitisa B (HBV) ili virus hepatitisa C (HCV). U određenim primerima izvođenja, anti-CTLA-4 antitelo ili njegova farmaceutska kompozicija, kao što je ovde opisano, podstiče kontrolu virusa. U određenim primerima izvođenja, anti-CTLA-4 antitelo ili njegova farmaceutska kompozicija, kao što je ovde opisano, eliminiše rezervoare virusa.
[0204] Anti-CTLA-4 antitelo pronalaska i/ili farmaceutska kompozicija pronalaska koja sadrži anti-CTLA-4 antitelo pronalaska i farmaceutski prihvatljiv nosač ili ekscipijens, može biti za upotrebu kao lek.
[0205] Anti-CTLA-4 antitelo pronalaska, i/ili njegova upotreba u kombinaciji sa farmaceutski prihvatljivim nosačima ili ekscipijensima, može biti za pripremu farmaceutskih kompozicija ili lekova za imunoterapiju (npr. imunoterapija za povećanje aktivacije T-ćelija kao odgovor na antigen kod subjekta, lečenje kancera ili lečenje infektivnih bolesti).
[0206] Predmetni pronalazak se u jednom aspektu odnosi na anti-CTLA-4 antitelo pronalaska i/ili farmaceutsku kompoziciju pronalaska koja sadrži anti-CTLA-4 antitelo pronalaska i farmaceutski prihvatljiv nosač ili ekscipijens, za upotrebu u postupku za lečenje kancera.
[0207] Otkriveno je anti-CTLA-4 antitelo pronalaska i/ili farmaceutska kompozicija pronalaska koja sadrži anti-CTLA-4 antitelo pronalaska i farmaceutski prihvatljiv nosač ili ekscipijens, za upotrebu u postupku za inhibiranje tolerancije imunog sistema na tumore i/ili za imunoterapiju za subjekte sa kancerom.
[0208] Predmetni pronalazak se u jednom aspektu odnosi na anti-CTLA-4 antitelo pronalaska i/ili farmaceutsku kompoziciju pronalaska koja sadrži anti-CTLA-4 antitelo pronalaska i farmaceutski prihvatljiv nosač ili ekscipijens, za upotrebu u postupku za lečenje infektivne bolesti.
[0209] U određenim primerima izvođenja, anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija opisana ovde se daje kao monoterapija.
[0210] U određenim primerima izvođenja, ovi postupci dalje obuhvataju davanje dodatnog terapeutskog agensa subjektu. U određenim primerima izvođenja, dodatni terapeutski agens je hemoterapeutik ili agens koji ciljno deluje na kontrolnu tačku. U određenim primerima izvođenja, agens koji ciljno deluje na kontrolnu tačku se bira iz grupe koja se sastoji od antagonističkog anti-PD-1 antitela, antagonističkog anti-PD-L1 antitela, antagonističkog anti-PD-L2 antitela, antagonističkog anti-CTLA-4 antitela, antagonističkog anti-TIM-3 antitela, antagonističkog anti-LAG-3 antitela, antagonističkog anti-CEACAM1 antitela, agonističkog anti-GITR antitela, agonističkog anti-OX40 antitela, agonističkog anti-CD137 antitela, agonističkog anti-DR3 antitela, agonističkog anti-TNFSF14 antitela i agonističkog anti-CD27 antitela. U određenim primerima izvođenja, agens koji ciljno delije na kontrolnu tačku je antagonističko anti-PD-1 antitelo. U određenim primerima izvođenja, agens koji ciljno delije na kontrolnu tačku je antagonističko anti-PD-L1 antitelo. U određenim primerima izvođenja, agens koji ciljno delije na kontrolnu tačku je antagonističko anti-LAG-3 antitelo. U određenim primerima izvođenja, dodatni terapeutski agens je agonist člana superfamilije receptora faktora nekroze tumora ili član superfamilije faktora nekroze tumora.
[0211] (a) Anti-CTLA-4 antitelo pronalaska i/ili farmaceutska kompozicija pronalaska koja sadrži anti-CTLA-4 antitelo pronalaska i farmaceutski prihvatljiv nosač ili ekscipijens i (b) dodatni terapeutski agens, može biti za upotrebu kao lek. Dodatni terapeutski agens može biti hemoterapeutik ili agens koji ciljno deluje na kontrolnu tačku.
[0212] (a) Anti-CTLA-4 antitelo pronalaska i/ili farmaceutska kompozicija pronalaska koja sadrži anti-CTLA-4 antitelo pronalaska i farmaceutski prihvatljiv nosač ili ekscipijens i (b) dodatni terapeutski agens, može biti za upotrebu u postupku za lečenje kancera.
[0213] (a) Anti-CTLA-4 antitelo pronalaska i/ili farmaceutska kompozicija pronalaska koja sadrži anti-CTLA-4 antitelo pronalaska i farmaceutski prihvatljiv nosač ili ekscipijens i (b) dodatni terapeutski agens, može biti za upotrebu u postupku za lečenje infektivne bolesti.
[0214] Ovde opisano anti-CTLA-4 antitelo može da se daje subjektu u kombinaciji sa jedinjenjem koje ciljno deluje na imunomodulatorni enzim/enzime kao što je IDO (indoleamin-(2,3)-dioksigenaza) i/ili TDO (triptofan 2,3-dioksigenaza). Takvo jedinjenje može biti izabrano iz grupe koja se sastoji od epakadostata (Incyte Corp; videti, npr. WO 2010/005958), F001287 (Flexus Biosciences), indoksimoda (NewLink Genetics) i NLG919 (NewLink Genetics). Jedinjenje može da bude epakadostat. Jedinjenje može da bude F001287. Jedinjenje može da bude indoksimod. Jedinjenje može da bude NLG919.
[0215] (a) Anti-CTLA-4 antitelo pronalaska i/ili farmaceutska kompozicija pronalaska koja sadrži anti-CTLA-4 antitelo pronalaska i farmaceutski prihvatljiv nosač ili ekscipijens i (b) jedinjenje koje ciljno deluje na imunomodulatorni enzim, može biti za upotrebu kao lek. Jedinjenje može ciljno da deluje na IDO i/ili TDO.
[0216] (a) Anti-CTLA-4 antitelo pronalaska i/ili farmaceutska kompozicija pronalaska koja sadrži anti-CTLA-4 antitelo pronalaska i farmaceutski prihvatljiv nosač ili ekscipijens i (b) jedinjenje koje ciljno deluje na imunomodulatorni enzim, može biti za upotrebu u postupku za lečenje kancera. Jedinjenje može ciljno da deluje na IDO i/ili TDO.
[0217] Ovde opisano anti-CTLA-4 antitelo može se dati subjektu u kombinaciji sa vakcinom. U određenim primerima izvođenja, vakcina je vakcina protiv tumora na bazi proteina toplotnog šoka ili vakcina protiv patogena na bazi proteina toplotnog šoka. Ovde opisano anti-CTLA-4 antitelo može se dati subjektu u kombinaciji sa vakcinom protiv tumora na bazi proteina toplotnog šoka. Proteini toplotnog šoka (HSP) su familija visoko očuvanih proteina koji su široko rasprostranjeni u svim vrstama. Njihova ekspresija može da bude snažno indukovana na mnogo više nivoe kao posledica toplotnog šoka ili drugih oblika stresa, uključujući izloženost toksinima, oksidativni stres ili nedostatak glukoze. Klasifikovani su u pet familija prema molekularnoj težini: HSP-110, -90, -70, -60 i -28. HSP isporučuju imunogene peptide pomoću puta unakrsne prezentacije u antigen-prezentujućim ćelijama (APC) kao što su makrofage i dendritske ćelije (DC), što dovodi do aktiviranja T ćelija. HSP funkcionišu kao šaperonski nosači antigenih peptida povezanih sa tumorom koji formiraju komplekse koji mogu da izazovu imunitet specifičan za tumor. Po oslobađanju iz umirućih tumorskih ćelija, komplekse HSP-antigen preuzimaju antigenprezentujuće ćelije (APC) u kojima se antigeni obrađuju u peptide koji vezuju MHC molekule klase I i klase II, što dovodi do aktiviranja antitumorskih CD8+ i CD4+ T ćelija. Imunitet koji izazivaju HSP kompleksi poreklom iz preparata tumora je specifično usmeren protiv jedinstvenog antigenog peptidnog repertoara koji eksprimira kancer svakog subjekta.
[0218] Kompleks proteina toplotnog šoka i peptida (HSPPC) je proteinsko-peptidni kompleks koji se sastoji od proteina toplotnog šoka koji je nekovalentno kompleksiran sa antigenim peptidima. HSPPC izazivaju i urođene i adaptivne imunološke odgovore. Antigeni peptid/peptidi mogu da ispolje antigenost za kancer koji se leči. APC efikasno hvataju HSPPC preko membranskih receptora (uglavnom CD91) ili vezivanjem za Tollu-slične receptore. Internalizacija HSPPC rezultuje funkcionalnim sazrevanjem APC ćelija, gde proizvodnja hemokina i citokina dovodi do aktiviranja ćelija prirodnih ubica (NK), monocita i Th1 i Th-2-posredovanih imunoloških odgovora. HSPPC koji se koriste u ovde opisanim postupcima mogu da sadrže jedan ili više proteina toplotnog šoka iz familije hsp60, hsp70 ili hsp90 proteina stresa kompleksovanih sa antigenim peptidima. HSPPC mogu da sadrže hsc70, hsp70, hsp90, hsp110, grp170, gp96, kalretikulin ili kombinacije dve ili više njih.
[0219] Ovde opisano anti-CTLA-4 antitelo može se dati subjektu u kombinaciji sa kompleksom proteina toplotnog šoka sa peptidom kompleksom (HSPPC), npr. kompleksom proteina toplotnog šoka i peptida 96 (HSPPC-96), za lečenje kancera. HSPPC-96 sadrži protein toplotnog šoka (Hsp) od 96 kDa, gp96, kompleksovan sa antigenim peptidima. HSPPC-96 je imunoterapija kancera proizvedena od tumora subjekta i sadrži antigeni „otisak prsta“ kancera. Ovaj otisak prsta može da sadrži jedinstvene antigene koji su prisutni samo u specifičnim ćelijama kancera tog određenog subjekta i ubrizgavanje vakcine je namenjeno stimulisanju imunog sistema subjekta da prepozna i napadne sve ćelije sa specifičnim otiskom prsta kancera.
[0220] HSPPC, npr. HSPPC-96, može biti proizveden iz tumornog tkiva subjekta. U specifičnom primeru izvođenja, HSPPC (npr. HSPPC-96) se proizvodi od tumora tipa kancera ili njegove metastaze koja se leči. HSPPC (npr. HSPPC-96) može biti autolog za subjekta koja se leči. U određenim primerima izvođenja, tumorsko tkivo je ne-nekrotično tumorsko tkivo. Najmanje 1 gram (npr. najmanje 1, najmanje 2, najmanje 3, najmanje 4, najmanje 5, najmanje 6, najmanje 7, najmanje 8, najmanje 9, ili najmanje 10 grama) ne-nekrotičnog tumorskog tkiva može da se koristi za proizvodnju režima vakcine. U određenim primerima izvođenja, nakon hirurške resekcije, nenekrotično tumorsko tkivo se zamrzava pre upotrebe u pripremi vakcine. HSPPC, npr. HSPPC-96, može da se izoluje iz tumorskog tkiva tehnikama prečišćavanja, da se filtrira i pripremi za injektabilnu vakcinu. Subjektu se može dati 6-12 doza HSPPC, npr. HSPCC-96. U takvom otkriću, HSPPC, npr. HSPPC-96, doze mogu da se primenjuju nedeljno za prve 4 doze, a zatim na dve nedelje za 2-8 dodatnih doza.
[0221] Dalji primeri HSPPC koji se mogu koristiti u skladu sa ovde opisanim postupcima otkriveni su u sledećim patentima i patentnim prijavama, SAD patentima br. 6,391,306, 6,383,492, 6,403,095, 6,410,026, 6,436,404, 6,447,780, 6,447,781 i 6,610,659.
[0222] (a) Anti-CTLA-4 antitelo pronalaska i/ili farmaceutska kompozicija pronalaska koja sadrži anti-CTLA-4 antitelo pronalaska i farmaceutski prihvatljiv nosač ili ekscipijens i (b) vakcinu, može biti za upotrebu kao lek. Vakcina može da bude vakcina protiv tumora na bazi proteina toplotnog šoka ili vakcina protiv patogena na bazi proteina toplotnog šoka. Vakcina može da bude virusna vakcina na bazi proteina toplotnog šoka.
[0223] (a) Anti-CTLA-4 antitelo pronalaska i/ili farmaceutska kompozicija pronalaska koja sadrži anti-CTLA-4 antitelo pronalaska i farmaceutski prihvatljiv nosač ili ekscipijens i (b) vakcinu, može biti za upotrebu u postupku za lečenje kancera. Vakcina može da bude vakcina protiv tumora na bazi proteina toplotnog šoka.
[0224] Anti-CTLA-4 antitelo i dodatni terapeutski agens (npr. hemoterapija, agens koji ciljno deluje na kontrolnu tačku, inhibitor IDO i/ili vakcina) mogu da se primene odvojeno, sekvencijalno ili uporedo kao odvojeni oblici doze. U jednom primeru izvođenja, anti-CTLA-4 antitelo se daje parenteralno, a inhibitor IDO se daje oralno.
[0225] Ovde opisano anti-CTLA-4 antitelo može da se primeni kod subjekta intratumorski. Ovde opisano anti-CTLA-4 antitelo može da se primeni kod subjekta intratumorski u kombinaciji sa dodatnim terapeutskim agensom. Dodatni terapeutski agens može da se primeni sistemski. Subjekt može da ima čvrste tumore. Subjekt možda ima karcinom skvamoznih ćelija glave i vrata (HNSCC). Subjekt može da ima HER2<+>kancer dojke. Dodatni terapeutski agens koji se primenjuje sistemski može da bude anti-PD-1 antitelo (npr. pembrolizumab ili nivolumab). Dodatni terapeutski agens koji se primenjuje sistemski može da bude anti-EGFR antitelo (npr. cetuksimab). Dodatni terapeutski agens koji se primenjuje sistemski može da bude može da bude anti-HER2 antitelo (npr. trastuzumab). Dodatni terapeutski agens koji se primenjuje sistemski može da bude hemoterapeutski agens (npr. gemcitabin). Subjekt ima čvrste tumore i dodatni terapeutski agens koji se primenjuje sistemski može da bude anti-PD-1 antitelo (npr. pembrolizumab ili nivolumab). Anti-PD-1 antitelo može da bude pembrolizumab koji se daje u dozi od 200 mg na svake tri nedelje. Subjekt može da ima karcinom skvamoznih ćelija glave i vrata (HNSCC) i dodatni terapeutski agens koji se primenjuje sistemski može da bude anti-EGFR antitelo (npr. cetuksimab). Subjekt može da ima HER2<+>kancer dojke i dodatni terapeutski agens koji se primenjuje sistemski može da bude anti-HER2 antitelo (npr. trastuzumab). Subjekat je možda dodatno primio hemoterapeutski agens (npr. gemcitabin). U jednom aspektu, predmetni pronalazak se odnosi na anti-CTLA-4 antitelo i/ili farmaceutsku kompoziciju sadašnjeg pronalaska, i opciono dodatni terapeutski agens, za upotrebu u postupku za lečenje kancera, gde se anti-CTLA-4 antitelo i/ili farmaceutska kompozicija sadašnjeg pronalaska daje subjektu intratumorski. U jednom poželjnom primeru izvođenja, dodatni terapeutski agens se daje subjektu, poželjnije, dodatni terapeutski agens se subjektu daje sistemski.
[0226] Anti-PD-1 antitelo može da se koristi u ovde opisanim postupcima. Anti-PD-1 antitelo može da bude nivolumab, poznat i kao BMS-936558 ili MDX1106, koji je razvila kompanija Bristol-Myers Squibb. Anti-PD-1 antitelo može da bude pembrolizumab, poznat i kao lambrolizumab ili MK-3475, koji je razvila kompanija Merck & Co. Anti-PD-1 antitelo može da bude pidilizumab, poznat i kao CT-011, koji je razvila kompanija CureTech. Anti-PD-1 antitelo može da bude MEDI0680, poznat i kao AMP-514, koji je razvila kompanija Medimmune. Anti-PD-1 antitelo može da bude PDR001 koji je razvila kompanija Novartis Pharmaceuticals. Anti-PD-1 antitelo može da bude REGN2810 koji je razvila kompanija Regeneron Pharmaceuticals. Anti-PD-1 antitelo može da bude PF-06801591 koji je razvila kompanija Pfizer. Anti-PD-1 antitelo može da bude BGB-A317 koji je razvila kompanija BeiGene. Anti-PD-1 antitelo može da bude TSR-042 koji su razvile kompanije AnaptysBio i Tesaro. Anti-PD-1 antitelo može da bude SHR-1210 koji je razvila kompanija Hengrui.
[0227] Dodatni neograničavajući primeri anti-PD-1 antitela koji mogu da se koriste u ovde opisanim postupcima lečenja opisani su u sledećim patentima i patentnim prijavama: SAD patentu br. 6,808,710; SAD patentu br.7,332,582; SAD patentu br.7,488,802; SAD patentu br.8,008,449; SAD patentu br.8,114,845; SAD patentu br.8,168,757; SAD patentu br.8,354,509; SAD patentu br. 8,686,119; SAD patentu br.8,735,553; SAD patentu br.8,747,847; SAD patentu br.8,779,105; SAD patentu br.8,927,697; SAD patentu br.8,993,731; SAD patentu br.9,102,727; SAD patentu br. 9,205,148; SAD objavi br. US 2013/0202623 A1; SAD objavi br. US 2013/0291136 A1; SAD objavi br. US 2014/0044738 A1; SAD objavi br. US 2014/0356363 A1; SAD objavi br. US 2016/0075783 A1; i PCT objavi br. WO 2013/033091 A1; PCT objavi br. WO 2015/036394 A1; PCT objavi br. WO 2014/179664 A2; PCT objavi br. WO 2014/209804 A1; PCT objavi br.
WO 2014/206107 A1; PCT objavi br. WO 2015/058573 A1; PCT objavi br. WO 2015/085847 A1; PCT objavi br. WO 2015/200119 A1; PCT objavi br. WO 2016/015685 A1; i PCT objavi br. WO 2016/020856 A1.
[0228] Anti-PD-L1 antitelo može da se koristi u ovde opisanim postupcima. Anti-PD-L1 antitelo može da bude atezolizumab koji je razvila kompanija Genentech. Anti-PD-L1 antitelo može da bude durvalumab koji su razvile kompanije AstraZeneca, Celgene i Medimmune. Anti-PD-L1 antitelo može da bude avelumab, poznat i kao MSB0010718C, koju su razvile kompanije Merck Serono i Pfizer. Anti-PD-L1 antitelo može da bude MDX-1105 koji je razvila kompanija Bristol-Myers Squibb. Anti-PD-L1 antitelo može da bude AMP-224 koji su razvile kompanije Amplimmune i GSK.
[0229] Neograničavajući primeri anti-PD-L1 antitela koji mogu da se koriste u ovde opisanim postupcima lečenja opisani su u sledećim patentima i patentnim prijavama: SAD patentu br.
7,943,743; SAD patentu br. 8,168,179; SAD patentu br. 8,217,149; SAD patentu br. 8,552,154; SAD patentu br. 8,779,108; SAD patentu br.8,981,063; SAD patentu br.9,175,082; SAD objavi br. US 2010/0203056 A1; SAD objavi br. US 2003/0232323 A1; SAD objavi br. US 2013/0323249 A1; SAD objavi br. US 2014/0341917 A1; SAD objavi br. US 2014/0044738 A1; SAD objavi br. US 2015/0203580 A1; SAD objavi br. US 2015/0225483 A1; SAD objavi br. US 2015/0346208 A1; SAD objavi br. US 2015/0355184 A1; i PCT objavi br. WO 2014/100079 A1; PCT objavi br. WO 2014/022758 A1; PCT objavi br. WO 2014/055897 A2; PCT objavi br. WO 2015/061668 A1; PCT objavi br. WO 2015/109124 A1; PCT objavi br. WO 2015/195163 A1; PCT objavi br. WO 2016/000619 A1; i PCT objavi br. WO 2016/030350 A1.
[0230] Anti-LAG-3 antitelo može da se koristi u ovde opisanim postupcima. Anti-LAG-3 antitelo može da bude BMS-986016 koje je razvila kompanija Bristol-Myers Squibb. Anti-LAG-3 antitelo može da bude LAG525 koje je razvila kompanija Novartis. Anti-LAG-3 antitelo može da bude GSK2831781 koje je razvila kompanija GSK.
[0231] Neograničavajući primeri anti-LAG-3 antitela koji mogu da se koriste u ovde opisanim postupcima lečenja opisani su u sledećim patentima i patentnim prijavama: SAD patentu br.
9,244,059; SAD objavi br. US 2011/0150892 A1; SAD objavi br. US 2014/0093511 A1; SAD objavi br. US 2014/0286935 A1; SAD objavi br. US 2015/0259420 A1; i PCT objavi br. WO 2015/042246 A1; PCT objavi br. WO 2015/116539 A1; PCT objavi br. WO 2015/200119 A1; i PCT objavi br. WO 2016/028672 A1.
[0232] Anti-EGFR antitelo može da se koristi u ovde opisanim postupcima. Anti-EGFR antitelo može da bude cetuksimab koji su razvile kompanije Bristol-Myers Squibb i ImClone, panitumumab koji su razvile kompanije Abgenix i Amgen, nimotuzumab koji su razvile kompanije CMI Cuba i YM BioSciences, necitumumab koji je razvila kompanija ImClone, zalutumumab koji je razvila kompanija Genmab, matuzumab koji je razvila kompanija Takeda, Sym004 koji su razvile kompanije Merck Serono i Symphogen, imgatuzumab koji su razvile kompanije Glycart i Roche, duligotumab koji su razvile kompanije Genentech i Roche, depatuksizumab koji je razvila kompanija Abbott, depatuksizumab mafodotin koji je razvila kompanija Abbvie, MM-151 koji su razvile kompanije Adimab i Merrimack, GC1118 koji je razvila kompanija Green Cross, AMG 595 koji su razvile kompanije Amgen i ImmunoGen, CetuGEX koji je razvila kompanija Glycotope, laprituksimab emtansin koji je razvila kompanija ImmunoGen, JNJ-61186372 koji su razvile kompanije Genmab i Janssen Biotech, SCT200 koji je razvila kompanija Sinocelltech, LY3164530 koji je razvila kompanija Lilly, HLX07 koji je razvila kompanija Shanghai Henlius, ili SYN004 koji je razvila kompanija Synermore.
[0233] Anti-HER2 antitelo može da se koristi u ovde opisanim postupcima. Anti-HER2 antitelo može da bude trastuzumab koji su razvile kompanije Genentech i Roche, trastuzumab emtansin koji su razvile kompanije Genentech i Roche, pertuzumab koji je razvila kompanija Genentech, ertumaksomab koji je razvila kompanija Fresenius, margetuksimab koji je razvila kompanija MacroGenics, MM-111 koji je razvila kompanija Merrimack, CT-P06 koji je razvila kompanija Celltrion, PF-05280014 koji je razvila kompanija Pfizer, MM-302 koji je razvila kompanija Merrimack, SB3 koji je razvila kompanija Merck & Co, CMAB302 koji je razvila kompanija Shanghai CP Guojian, TrasGEX koji je razvila kompanija Glycotope, ARX788 koji su razvile kompanije Ambrx i Zhejiang Medicine, SYD985 koji je razvila kompanija Synthon, FS102 koji su razvile kompanije Bristol-Myers Squibb i F-star, BCD-022 koji je razvila kompanija Biocad, ABP 980 koji je razvila kompanija Amgen, DS-8201a koji je razvila kompanija Daiichi Sankyo, HLX02 koji je razvila kompanija Shanghai Henlius, ili CANMAb koji su razvile kompanije Biocon i Mylan.
[0234] Ovde opisano antitelo ili farmaceutska kompozicija mogu da budu dostavljeni subjektu različitim putevima. Oni uključuju, ali nisu ograničene na, parenteralni, intranazalni, intratrahealni, oralni, intradermalni, topikalni, intramuskularni, intraperitonalni, transdermalni, intravenski, intratumorski, konjunktivni i potkožni put. Pulmonalna primena takođe može da se koristi, npr. upotrebom inhalatora ili nebulizatora i formulacije sa agensom za aerosolizaciju namenjene za primenu u obliku spreja. U određenim primerima izvođenja, ovde opisano antitelo ili farmaceutska kompozicija se isporučuje potkožno ili intravenski. U određenim primerima izvođenja, ovde opisano antitelo ili farmaceutska kompozicija isporučuju se intratumorski. U određenim primerima izvođenja, anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija opisana ovde se isporučuje u limfni čvor u koji se drenira tumor. U određenim primerima izvođenja, ovde opisano antitelo ili farmaceutska kompozicija isporučuju se lokalizovanom primenom (npr. potkožnom primenom). U određenim primerima izvođenja, ovde opisano anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija isporučuju se sistemski. U određenim primerima izvođenja, ovde opisano anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija isporučuju se lokalno.
[0235] Anti-CTLA-4 antitelo i/ili farmaceutska kompozicija sadašnjeg pronalaska, i opciono dodatni terapeutski agens, mogu da budu za upotrebu u postupku za lečenje kancera, gde se anti-CTLA-4 antitelo i/ili farmaceutska kompozicija sadašnjeg pronalaska isporučuju subjektu intratumorski, isporučuju se u limfni čvor u koji se drenira tumor subjekta, ili se isporučuju subjektu preko lokalizovane primene (npr. potkožne primene).
[0236] Količina antitela ili kompozicije koja će biti efikasna u lečenju i/ili prevenciji stanja zavisiće od prirode bolesti, a može se odrediti standardnim kliničkim tehnikama.
[0237] Precizna doza koja će se upotrebiti u kompoziciji zavisiće i od puta primene, i ozbiljnosti infekcije ili njome izazvane bolesti, i treba da se odredi u skladu sa procenom lekara i okolnostima vezanim za svakog subjekta. Na primer, efikasne doze takođe mogu da se razlikuju u zavisnosti od sredstava primene, ciljnog mesta, fiziološkog stanja pacijenta (uključujući starost, telesnu težinu i zdravlje), od toga da li je pacijent čovek ili životinja, od drugih primenjenih lekova, ili od toga da li je lečenje profilaktičko ili terapeutsko. Obično je pacijent čovek, ali sisari koji nisu ljudi, uključujući transgene sisare, takođe mogu da se leče. Doze za lečenje se optimalno titriraju kako bi bezbednost i efikasnost bile optimalne.
[0238] U određenim primerima izvođenja, anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija opisana ovde se daje subjektu (npr. putem intravenske injekcije) u dozi od 0.01 mg/kg, 0.03 mg/kg, 0.1 mg/kg, 0.3 mg/kg, 1 mg/kg, 3 mg/kg, 6 mg/kg, 10 mg/kg, oko 0.1 mg/kg, oko 0.3 mg/kg, oko 1 mg/kg, oko 3 mg/kg, oko 6 mg/kg, ili oko 10 mg/kg. U određenim primerima izvođenja, anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija opisana ovde se daje subjektu (npr. putem intravenske injekcije) svake nedelje, svake dve nedelje, svake tri nedelje, svake četiri nedelje, svakih šest nedelja, svakih osam nedelja, svakih dvanaest nedelja, svakog meseca, svaka dva meseca, svaka tri meseca, svaka četiri meseca, svakih pet meseci, svakih šest meseci, svakih osam meseci, i svake godine, npr. u gore opisanim dozama. U određenim primerima izvođenja, anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija opisana ovde se daje subjektu (npr. putem intravenske injekcije) svake tri nedelje u dozama opisanim iznad.
[0239] Anti-CTLA-4 antitelo i/ili farmaceutska kompozicija sadašnjeg pronalaska, i opciono dodatni terapeutski agens, mogu da budu za upotrebu u postupku za lečenje kancera, gde se anti-CTLA-4 antitelo i/ili farmaceutska kompozicija sadašnjeg pronalaska daju subjektu u dozi od 0.01 mg/kg, 0.03 mg/kg, 0.1 mg/kg, 0.3 mg/kg, 1 mg/kg, 3 mg/kg, 6 mg/kg, 10 mg/kg, oko 0.1 mg/kg, oko 0.3 mg/kg, oko 1 mg/kg, oko 3 mg/kg, oko 6 mg/kg, ili oko 10 mg/kg, poželjnije svake dve nedelje, svake tri nedelje, svake četiri nedelje, svakih šest nedelja ili svakih dvanaest nedelja.
[0240] U određenim primerima izvođenja, anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija opisana ovde se daje subjektu (npr. putem intravenske injekcije) u dozi od 0.1 mg/kg svake dve nedelje, svake tri nedelje, svake četiri nedelje, svakih šest nedelja ili svakih dvanaest nedelja. U određenim primerima izvođenja, anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija opisana ovde se daje subjektu (npr. putem intravenske injekcije) u dozi od 0.3 mg/kg svake dve nedelje, svake tri nedelje, svake četiri nedelje, svakih šest nedelja ili svakih dvanaest nedelja. U određenim primerima izvođenja, anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija opisana ovde se daje subjektu (npr. putem intravenske injekcije) u dozi od 1 mg/kg svake dve nedelje, svake tri nedelje, svake četiri nedelje, svakih šest nedelja ili svakih dvanaest nedelja. U određenim primerima izvođenja, anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija opisana ovde se daje subjektu (npr. putem intravenske injekcije) u dozi od 3 mg/kg svake dve nedelje, svake tri nedelje, svake četiri nedelje, svakih šest nedelja ili svakih dvanaest nedelja. U određenim primerima izvođenja, anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija opisana ovde se daje subjektu (npr. putem intravenske injekcije) u dozi od 6 mg/kg svake dve nedelje, svake tri nedelje, svake četiri nedelje, svakih šest nedelja ili svakih dvanaest nedelja. U određenim primerima izvođenja, anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija opisana ovde se daje subjektu (npr. putem intravenske injekcije) u dozi od 10 mg/kg svake dve nedelje, svake tri nedelje, svake četiri nedelje, svakih šest nedelja ili svakih dvanaest nedelja.
[0241] U određenim primerima izvođenja, anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija opisana ovde se daje subjektu (npr. putem intravenske injekcije) u dozi od 0.1 mg/kg ili oko 0.1 mg/kg svake tri nedelje. U određenim primerima izvođenja, anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija opisana ovde se daje subjektu (npr. putem intravenske injekcije) u dozi od 0.3 mg/kg ili oko 0.3 mg/kg svake tri nedelje. U određenim primerima izvođenja, anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija opisana ovde se daje subjektu (npr. putem intravenske injekcije) u dozi od 1 mg/kg ili oko 1 mg/kg svake tri nedelje. U određenim primerima izvođenja, anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija opisana ovde se daje subjektu (npr. putem intravenske injekcije) u dozi od 3 mg/kg ili oko 3 mg/kg svake tri nedelje. U određenim primerima izvođenja, anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija opisana ovde se daje subjektu (npr. putem intravenske injekcije) u dozi od 6 mg/kg ili oko 6 mg/kg svake tri nedelje. U određenim primerima izvođenja, anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija opisana ovde se daje subjektu (npr. putem intravenske injekcije) u dozi od 10 mg/kg ili oko 10 mg/kg svake tri nedelje.
[0242] U određenim primerima izvođenja, anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija opisana ovde se daje subjektu putem intratumorske injekcije u dozi od 0.01 mg/kg, 0.03 mg/kg, 0.1 mg/kg, 0.3 mg/kg, 1 mg/kg, 3 mg/kg, oko 0.01 mg/kg, oko 0.03 mg/kg, oko 0.1 mg/kg, oko 0.3 mg/kg, oko 1 mg/kg, ili oko 3 mg/kg. U određenim primerima izvođenja, anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija opisana ovde se daje subjektu putem intratumorske injekcije svake nedelje, svake dve nedelje, svake tri nedelje, svake četiri nedelje, svakih šest nedelja, svakih osam nedelja, svakih dvanaest nedelja, svakog meseca, svaka dva meseca, svaka tri meseca, svaka četiri meseca, svakih pet meseci, svakih šest meseci, svakih osam meseci, i svake godine, npr. u gore opisanim dozama. U određenim primerima izvođenja, anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija opisana ovde se daje subjektu putem intratumorske injekcije svake tri nedelje u dozama opisanim iznad.
[0243] U određenim primerima izvođenja, anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija opisana ovde se daje subjektu putem intratumorske injekcije u dozi od 0.01 mg/kg ili oko 0.01 mg/kg svake tri nedelje. U određenim primerima izvođenja, anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija opisana ovde se daje subjektu putem intratumorske injekcije u dozi od 0.03 mg/kg ili oko 0.03 mg/kg svake tri nedelje. U određenim primerima izvođenja, anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija opisana ovde se daje subjektu putem intratumorske injekcije u dozi od 0.1 mg/kg ili oko 0.1 mg/kg svake tri nedelje. U određenim primerima izvođenja, anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija opisana ovde se daje subjektu putem intratumorske injekcije u dozi od 0.3 mg/kg ili oko 0.3 mg/kg svake tri nedelje. U određenim primerima izvođenja, anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija opisana ovde se daje subjektu putem intratumorske injekcije u dozi od 1 mg/kg ili oko 1 mg/kg svake tri nedelje. U određenim primerima izvođenja, anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija opisana ovde se daje subjektu putem intratumorske injekcije u dozi od 3 mg/kg ili oko 3 mg/kg svake tri nedelje.
[0244] U određenim primerima izvođenja, anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija opisana ovde se daje subjektu putem lokalizovane primene (npr. potkožnom primenom) u dozi od 0.01 mg/kg, 0.03 mg/kg, 0.1 mg/kg, 0.3 mg/kg, 1 mg/kg, 3 mg/kg, oko 0.01 mg/kg, oko 0.03 mg/kg, oko 0.1 mg/kg, oko 0.3 mg/kg, oko 1 mg/kg, ili oko 3 mg/kg. U određenim primerima izvođenja, anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija opisana ovde se daje subjektu putem lokalizovane primene (npr. potkožnom primenom) svake nedelje, svake dve nedelje, svake tri nedelje, svake četiri nedelje, svakih šest nedelja, svakih osam nedelja, svakih dvanaest nedelja, svakog meseca, svaka dva meseca, svaka tri meseca, svaka četiri meseca, svakih pet meseci, svakih šest meseci, svakih osam meseci, i svake godine, npr. u gore opisanim dozama.
[0245] U određenim primerima izvođenja, terapeutska kombinacija se daje subjektu najmanje 3, 6, 9, 12, 18 ili 24 meseca. U određenim primerima izvođenja, terapeutska kombinacija se daje subjektu do 3, 6, 9, 12, 18 ili 24 meseca.
[0246] Predmetno otkriće može da obezbedi postupak za lečenje subjekta koji ima angiosarkom, gde postupak obuhvata davanje subjektu (npr. intravenski, intratumorski ili potkožno) efikasne količine anti-CTLA-4 antitela ili farmaceutske kompozicije opisane ovde. Predmetno otkriće može da obezbedi postupak za lečenje subjekta koji ima angiosarkom, gde postupak obuhvata intravensku primenu kod subjekta antitela koje se specifično vezuje za humani CTLA-4 u dozi od 0.01 mg/kg, 0.03 mg/kg, 0.1 mg/kg, 0.3 mg/kg, 1 mg/kg, 3 mg/kg, oko 0.01 mg/kg, oko 0.03 mg/kg, oko 0.1 mg/kg, oko 0.3 mg/kg, oko 1 mg/kg, ili oko 3 mg/kg, opciono svake nedelje, svake dve, ili tri nedelje. Predmetno otkriće može da obezbedi postupak za lečenje subjekta koji ima angiosarkom, gde postupak obuhvata intravensku primenu kod subjekta antitela koje se specifično vezuje za humani CTLA-4 u dozi od 0.1 mg/kg jednom na svake tri nedelje. Antitelo sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 8 i varijabilni region lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 9. U određenom otkriću, antitelo sadrži teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 23; i laki lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 27. U određenom otkriću, antitelo sadrži teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 24; i laki lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 27. U određenim primerima izvođenja, antitelo sadrži teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 25; i laki lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 27. U određenom otkriću, antitelo sadrži teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 26; i laki lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 27.
[0247] Ovde opisano anti-CTLA-4 antitelo takođe može da se koristi za ispitivanje nivoa proteina CTLA-4 u biološkom uzorku korišćenjem klasičnih imunohistoloških metoda poznatih stručnjacima u ovoj oblasti, uključujući imunološke testove, kao što je enzimski vezani imunosorbentni test (ELISA), imunoprecipitacija ili Western blotting. U struci su poznate odgovarajuće oznake za test antitela koje uključuju enzimske oznake, kao što je glukoza oksidaza; radioizotope, kao što su jod (<125>I,<121>I), ugljenik (<14>C), sumpor (<35>S), tricijum (<3>H), indijum (<121>In) i tehnecijum (<99>Tc); luminescentne oznake, kao što je luminol; i fluorescentne oznake, kao što su fluorescein i rodamin, i biotin. Takve oznake se mogu koristiti za označavanje antitela ili njegovog antigen-obavezujućeg fragmenta koji je ovde opisan. Alternativno, drugo antitelo koje prepoznaje anti-CTLA-4 antitelo ili njegov antigen-obavezujući fragment koji je ovde opisan može da se označi i koristi u kombinaciji sa anti-CTLA-4 antitelom ili njegovim antigen-vezujućim fragmentom za detekciju nivoa CTLA-4 proteina. Anti-CTLA-4 antitelo pronalaska može da se koristi za ispitivanje i/ili detektovanje nivoa CTLA-4 proteina u biološkom uzorku in vitro.
[0248]Ispitivanje nivoa ekspresije CTLA-4 proteina treba da obuhvati kvalitativno ili kvantitativno merenje ili procenu nivoa CTLA-4 proteina u prvom biološkom uzorku bilo direktno (npr. putem određivanja ili procenjivanja apsolutnog nivoa proteina) ili relativno (npr. poređenjem sa nivoom proteina povezanim sa bolešću u drugom biološkom uzorku). Nivo ekspresije CTLA-4 polipeptida u prvom biološkom uzorku može se izmeriti ili proceniti i uporediti sa standardnim nivoom proteina CTLA-4, gde je standard uzet iz drugog biološkog uzorka dobijenog od pojedinca koji nema poremećaj ili se utvrđuje uprosečavanjem nivoa iz populacije pojedinaca koji nemaju poremećaj. Kao što je poznato u struci, jednom kada se zna „standardni“ nivo CTLA-4 polipeptida, on se može ponovljeno koristiti kao standard za poređenje.
[0249] Kako se ovde koristi, termin „biološki uzorak“ se odnosi na bilo koji biološki uzorak dobijen od subjekta, ćelijske linije, tkiva ili drugog izvora ćelija koje potencijalno eksprimiraju CTLA-4. Postupci za dobijanje biopsija tkiva i telesnih tečnosti od životinja (npr. ljudi) dobro su poznati u struci. Biološki uzorci uključuju mononuklearne ćelije periferne krvi.
[0250] Ovde opisano anti-CTLA-4 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment mogu da se koriste za primenu u prognostici, dijagnostici, nadzoru i skriningu, uključujući in vitro i in vivo primenu koja je dobro poznata i standardna za stručnjaka u ovoj oblasti, i na osnovu sadašnjeg opisa. Prognostički, dijagnostički, nadzorni i skrining testovi i kompleti za in vitro procenu i ocenjivanje statusa imunog sistema i/ili imunološkog odgovora mogu da se koriste za predikciju, dijagnostikovanje i praćenje za procenu uzorka dobijenih od pacijenata, uključujući one za koje se zna ili sumnja da imaju disfunkciju imunog sistema, ili u pogledu očekivanog ili željenog odgovora imunog sistema, odgovora na antigen ili odgovora na vakcinu. Procena i ocenjivanje statusa imunog sistema i/ili imunološkog odgovora je takođe korisna u određivanju prikladnosti pacijenta za kliničko ispitivanje leka ili za primenu određenog hemoterapijskog agensa ili antitela ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta, uključujući njihove kombinacije, naspram drugog agensa ili antitela ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta Ova vrsta prognostičkog i dijagnostičkog praćenja i procene se već primenjuje korišćenjem antitela protiv HER2 proteina kod kancera dojke (HercepTest<™>, Dako) gde se test takođe koristi za procenjivanje pacijenata za terapiju antitelima koristeći Herceptin<®>. In vivo primene uključuju usmerenu ćelijsku terapiju i modulaciju imunog sistema i radiološko snimanje imunoloških odgovora.
[0251] Anti-CTLA-4 antitelo i/ili farmaceutska kompozicija sadašnjeg pronalaska može biti za upotrebu kao dijagnostik.
[0252] Anti-CTLA-4 antitelo i/ili farmaceutska kompozicija sadašnjeg pronalaska može biti za upotrebu u postupku za predikciju, dijagnostikovanje i/ili nadzor nad disfunkcijom imunog sistema i/ili kancerom.
[0253] Anti-CTLA-4 antitelo pronalaska, mogu da se koristi za predikciju, dijagnostikovanje i/ili nadzor nad disfunkcijom imunog sistema i/ili kancerom kod subjekta ispitivanjem i/ili detektovanjem nivoa CTLA-4 proteina u biološkom uzorku subjekta in vitro.
[0254] Anti-CTLA-4 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment može da se koristi u imunohistohemiji uzoraka biopsije. Anti-CTLA-4 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment može da se koristi za detektovanje nivoa CTLA-4, ili nivoa ćelija koje sadrže CTLA-4 na površini membrane, i ti nivoi se zatim mogu povezati sa određenim simptomima bolesti. Anti-CTLA-4 antitela ili njegovi antigen-vezujući fragmenti koji su ovde opisani mogu da nose vidljivu ili funkcionalnu oznaku. Kada se koriste fluorescentne oznake, trenutno dostupna mikroskopija i analiza za sortiranje ćelija aktiviranih fluorescencijom (FACS) ili kombinacija procedura oba postupka poznata u struci, može da se koristi za identifikaciju i kvantifikaciju specifičnih vezujućih članova. Anti-CTLA-4 antitela ili njihovi antigen-vezujući fragmenti koji su ovde opisani mogu da nose fluorescentnu oznaku. Primeri fluorescentnih oznaka uključuju, na primer, reaktivne i konjugovane probe npr. aminokumarin, fluorescein i Teksas crveno, boje Alexa Fluor, boje Cy i DyLight. Anti-CTLA-4 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment može da nosi radioaktivnu oznaku, kao što su izotopi<3>H,<14>C,<32>P,<35>S,<36>Cl,<51>Cr,<57>Co,<58>Co,<59>Fe,<67>Cu,<90>Y,<99>Tc,<111>In,<117>Lu,<121>I,<124>I,<125>I,<131>I,<198>Au,<211>At,<213>Bi,<225>Ac i<186>Re. Kada se koriste radioaktivne oznake, trenutno dostupne procedure brojanja poznate u struci mogu da se koriste za identifikovanje i kvantifikaciju specifičnog vezivanja anti-CTLA-4 antitela ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4). U slučaju kada je oznaka enzim, detekcija može da bude ostvarena bilo kojom trenutno primenjivanom kolorimetrijskom, spektrofotometrijskom, fluorospektrofotometrijskom, amperometrijskom ili gasometrijskom tehnikom poznatom u struci. To se može postići dovođenjem u kontakt uzorka ili kontrolnog uzorka sa anti-CTLA-4 antitelom ili njegovim antigen-vezujućim fragmentom u uslovima koji omogućavaju formiranje kompleksa između antitela ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta i CTLA-4. Svi kompleksi formirani između antitela ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta i CTLA-4 se detektuju i porede u uzorku i kontroli. S obzirom na specifično vezivanje antitela opisanih ovde za CTLA-4, antitela ili njihovi antigen-vezujući fragmenti mogu da se koriste za specifično detektovanje ekspresije CTLA-4 na površini ćelija. Ovde opisana antitela ili njihovi antigen-vezujući fragmenti takođe mogu da se koriste za prečišćavanje CTLA-4 putem imunoafinitetnog prečišćavanja. Ovde je uključen i sistem za testiranje koji se može pripremiti u obliku kompleta testa za kvantitativnu analizu obima prisustva, na primer, CTLA-4 ili kompleksa CTLA-4/ligand CTLA-4. Sistem ili komplet testa mogu da sadrže obeleženu komponentu, npr. obeleženo antitelo, i jedan ili više dodatnih imunohemijskih reagenasa.
[0255] Opisan je in vitro postupak za ispitivanje i/ili detektovanje nivoa CTLA-4 proteina u biološkom uzorku koji obuhvata (1) dovođenje u kontakt uzorka i opciono kontrolnog uzorka sa anti-CTLA-4 antitelom ili njegovim antigen-vezujućim fragmentom prema pronalasku pod uslovima koji omogućavaju formiranje kompleksa između antitela ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta i CTLA-4 i (2) detektovanje i poređenje kompleksa formiranih u uzorku i opciono u kontrolnom uzorku.
5.5 Polinukleotidi, vektori i postupci za proizvodnju anti-CTLA-4 antitela
[0256] U drugom aspektu, ovde su obezbeđeni polinukleotidi koji sadrže nukleotidnu sekvencu koja kodira teški lanac i laki lanac antitela pronalaska koji se specifično vezuje za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4) antigen, i vektori, npr. vektori koji sadrže takve polinukleotide za rekombinantnu ekspresiju u ćelijama-domaćinima (npr. E. coli i ćelije sisara). Ovde su obezbeđeni polinukleotidi koji sadrže nukleotidne sekvence koje kodiraju teški lanaca i laki lanac antitela pronalaska, kao i vektori koji sadrže takve polinukleotidne sekvence, npr. ekspresioni vektori za njihovu efikasnu ekspresiju u ćelijama-domaćinima, npr. sisarskim ćelijama.
[0257] Kako se ovde koristi, „izolovani“ polinukleotidni ili molekul nukleinske kiseline je onaj koji je odvojen od drugih molekula nukleinske kiseline koji su prisutni u prirodnom izvoru (npr. u mišu ili čoveku) molekula nukleinske kiseline. Osim toga, „izolovani“ molekul nukleinske kiseline, kao što je molekul cDNK, može da bude suštinski bez drugog ćelijskog materijala, ili medijuma za kulturu kada se proizvodi rekombinantnim tehnikama, ili suštinski bez hemijskih prekursora ili drugih hemikalija kada se hemijski sintetiše. Na primer, izraz „suštinski bez“ uključuje preparate molekula polinukleotida ili nukleinske kiseline koji imaju manje od oko 15%, 10%, 5%, 2%, 1%, 0.5%, ili 0.1% (konkretno, manje od oko 10%) drugog materijala, npr. ćelijskog materijala, medijuma za kulturu, drugih molekula nukleinskih kiselina, hemijskih prekursora i/ili drugih hemikalija. U specifičnom primeru izvođenja, molekul/molekuli nukleinske kiseline koji kodiraju ovde opisano antitelo su izolovani ili pročišćeni.
[0258] Ovde su opisani polinukleotidi koji sadrže nukleotidne sekvence koje kodiraju antitela ili njihove antigen-vezujuće fragmente, koji se specifično vezuju za CTLA-4 polipeptid (npr. humani CTLA-4) i sadrže aminokiselinsku sekvencu kao što je ovde opisano, kao i antitela koja kompetiraju sa takvim antitelima za vezivanje za CTLA-4 polipeptid (npr. na dozno-zavisan način), ili koja se vezuju za isti epitop kao onaj kod takvih antitela.
[0259] U određenim aspektima, ovde su obezbeđeni polinukleotidi koji sadrže nukleotidnu sekvencu koja kodira laki lanac i teški lanac ovde opisanog antitela. Obelodanjeno je da polinukleotidi mogu da sadrže nukleotidne sekvence koje kodiraju laki lanac koji sadrži FR i CDR regione VL ovde opisanih antitela (videti npr. tabelu 1).
[0260] Takođe su obelodanjeni polinukleotidi koji kodiraju anti-CTLA-4 antitelo koji su optimizovani, npr. optimizacijom kodona/RNK, zamenom sa heterolognim signalnim sekvencama i eliminisanjem elemenata nestabilnosti iRNK. Postupci za generisanje optimizovanih nukleinskih kiselina koje kodiraju anti-CTLA-4 antitelo ili njegov fragment (npr. laki lanac, teški lanac, VH domen ili VL domen) za rekombinantnu ekspresiju uvođenjem izmena kodona i/ili eliminisanjem inhibitornih regiona u iRNK mogu da se izvedu prilagođavanjem postupaka optimizacije opisanih u, npr. SAD patentima br. 5,965,726; 6,174,666; 6,291,664; 6,414,132; i 6,794,498, redom. Na primer, potencijalne mesta splajsovanja i elementi nestabilnosti (npr. elementi bogati A/T ili A/U) u RNK mogu da se mutiraju bez menjanja aminokiselina kodiranih sekvencama nukleinske kiseline kako bi se povećala stabilnost RNK za rekombinantnu ekspresiju. U izmenama se koristi degeneracija genetskog koda, npr. korišćenjem alternativnog kodona za identičnu aminokiselinu. U nekim primerima izvođenja, može biti poželjno da se izmeni jedan ili više kodona za kodiranje konzervativne mutacije, npr. slične aminokiseline sa sličnom hemijskom strukturom i svojstvima i/ili funkcijom kao originalna aminokiselina. Takvi postupci mogu da povećaju ekspresiju anti-CTLA-4 antitela ili njegovog fragmenta najmanje 1 put, 2 puta, 3 puta, 4 puta, 5 puta, 10 puta, 20 puta, 30 puta, 40 puta, 50 puta, 60 puta, 70 puta, 80 puta, 90 puta ili 100 puta, ili više u odnosu na ekspresiju anti-CTLA-4 antitela kodiranog polinukleotidima koji nisu optimizovani.
[0261] U određenom otkriću, optimizovana polinukleotidna sekvenca koja kodira ovde opisano anti-CTLA-4 antitelo ili njegov fragment (npr. VL domen i/ili VH domen) može da hibridizuje sa antisens (npr. komplementarnim) polinukleotidom neoptimizovane polinukleotidne sekvence koja kodira anti-CTLA-4 antitelo opisano ovde ili njegov fragment (npr. VL domen i/ili VH domen). U specifičnom otkriću, optimizovana nukleotidna sekvenca koja kodira ovde opisano anti-CTLA-4 antitelo ili njegov fragment hibridizuje pod veoma striktnim uslovima sa antisens polinukleotidom neoptimizovane polinukleotidne sekvence koja kodira ovde opisano anti-CTLA-4 antitelo ili njegov fragment. U specifičnom otkriću, optimizovana nukleotidna sekvenca koja kodira ovde opisano anti-CTLA-4 antitelo ili njegov fragment, pod uslovima hibridizacije velike, srednje ili niže striktnosti, hibridizuje sa antisens polinukleotidom neoptimizovane nukleotidne sekvence koja kodira ovde opisano anti-CTLA-4 antitelo ili njegov fragment. Informacije u vezi sa uslovima hibridizacije su opisane, u npr. objavi SAD patentne prijave br. US 2005/0048549 (npr. paragrafi 72-73).
[0262] Polinukleotidi mogu da se dobiju, a nukleotidna sekvenca polinukleotida odredi, bilo kojim postupkom poznatim u struci. Nukleotidne sekvence za kodiranje ovde opisanih antitela, npr. antitela opisanih u tabeli 1, i modifikovane verzije ovih antitela mogu da se odrede pomoću postupaka dobro poznatih u struci, tj. nukleotidni kodoni za koje se zna da kodiraju određene aminokiseline se sklapaju na takav način da generišu nukleinsku kiselinu koja kodira antitelo. Takav polinukleotid koji kodira antitelo može da se sklopi od hemijski sintetisanih oligonukleotida (npr. kao što je opisano u Kutmeier G et al., (1994), BioTechniques 17: 242-6), koji, ukratko, podrazumeva sintezu preklapajućih oligonukleotida koji sadrže delove sekvence koja kodira antitelo, hibridizovanje i spajanje tih oligonukleotida, a zatim amplifikovanje ligiranih oligonukleotida PCR metodom.
[0263] Alternativno, polinukleotid koji kodira antitelo opisano ovde može da se generiše iz nukleinske kiseline iz odgovarajućeg izvora (npr. hibridoma) korišćenjem postupaka poznatih u stanju tehnike (npr. PCR i drugi postupci molekularnog kloniranja). Na primer, PCR amplifikacija pomoću sintetičkih prajmera koji mogu da hibridizuju na 3' i 5' krajevima poznate sekvence može da se obavi pomoću genomske DNK dobijene iz ćelija hibridoma koje proizvode antitelo od interesa. Takvi postupci PCR amplifikacije mogu da se koriste za dobijanje nukleinskih kiselina koje sadrže sekvence koje kodiraju laki lanac i/ili teški lanac antitela. Takvi postupci PCR amplifikacije mogu da se koriste za dobijanje nukleinskih kiselina koje sadrže sekvencu koja kodira varijabilni region lakog lanca i/ili varijabilni region teškog lanca antitela. Amplifikovane nukleinske kiseline mogu da se kloniraju u vektore za ekspresiju u ćelijama-domaćinima i za dalje kloniranje, na primer, za dobijanje himernih i humanizovanih antitela.
[0264] Ako klon koji sadrži nukleinsku kiselinu koja kodira određeno antitelo nije dostupan, ali je sekvenca molekula antitela poznata, nukleinska kiselina koja kodira imunoglobulin može da bude hemijski sintetisana ili dobijena iz odgovarajućeg izvora (npr. cDNK biblioteke antitela ili cDNK biblioteke generisane iz, ili nukleinske kiseline, poželjno poli A+ RNK, izolovane iz, bilo kog tkiva ili ćelija koje eksprimiraju antitelo, kao što su ćelije hibridoma selektovane da eksprimiraju ovde opisano antitelo) PCR amplifikacijom koristeći sintetičke prajmere koji mogu da hibridizuju sa 3' i 5' krajevima sekvence ili kloniranjem pomoću oligonukleotidne probe specifične za određenu gensku sekvencu za identifikaciju, npr. cDNK klona iz cDNK biblioteke koji kodira antitelo. Amplifikovane nukleinske kiseline generisane putem PCR zatim mogu da se kloniraju u vektore za kloniranje koji mogu da se repliciraju korišćenjem bilo kog postupka koji je poznat u struci.
[0265] DNK koja kodira anti-CTLA-4 antitela opisana ovde može lako da se izoluje i sekvencira korišćenjem konvencionalnih procedura (npr. korišćenjem oligonukleotidnih proba koje mogu da se specifično vežu za gene koji kodiraju teški i laki lanac anti-CTLA-4 antitela). Ćelije hibridoma mogu da posluže kao izvor takve DNK. Kada se izoluje, DNK može da se ubaci u ekspresione vektore, koji se zatim transficiraju u ćelije-domaćine, kao što su ćelije E. coli, majmunske COS ćelije, ćelije jajnika kineskog hrčka (npr. CHO ćelije CHO GS System<™>(Lonza)) ili ćelije mijeloma koje inače ne proizvode imunoglobulinski protein, da bi se postigla sinteza anti-CTLA-4 antitela u rekombinantnim ćelijama-domaćinima.
[0266] Da bi se dobila cela antitela, PCR prajmeri koji uključuju VH ili VL nukleotidne sekvence, restrikciono mesto i bočnu sekvencu za zaštitu restrikcionog mesta mogu da se koriste za amplifikovanje VH ili VL sekvenci u ScFv klonovima. Korišćenjem tehnika kloniranja poznatih stručnjacima, VH domeni amplifikovani putem PCR mogu da se kloniraju u vektore koji eksprimiraju konstantni region teškog lanca, npr. humani gama 4 konstantni region, a VL domeni amplifikovani putem PCR mogu da se kloniraju u vektore koji eksprimiraju konstantni region lakog lanca, npr. humani kapa ili lambda konstantni region. U određenim primerima izvođenja, vektori za eksprimiranje VH ili VL domena sadrže promotor EF-1α, signal za sekreciju, mesto kloniranja za varijabilni region, konstantne domene i selekcioni marker kao što je neomicin. VH i VL domeni se takođe mogu klonirati u jedan vektor koji eksprimira neophodne konstantne regione. Vektori za konverziju teških lanaca i vektori za konverziju lakih lanaca se zatim kotransficiraju u ćelijske linije kako bi se dobile stabilne ili tranzijentne ćelijske linije koje eksprimiraju antitela pune dužine, npr. IgG, korišćenjem tehnika poznatih stručnjacima.
[0267] DNK se takođe može izmeniti, na primer, supstitucijom kodirajuće sekvence za konstantne domene humanog teškog i lakog lanca umesto mišjih sekvenci, ili kovalentnim spajanjem cele ili dela kodirajuće sekvence za neimunoglobulinski polipeptid sa sekvencom koja kodira imunoglobulin.
[0268] Takođe su obezbeđeni polinukleotidi koji, pod uslovima hibridizacije velike, srednje ili niže striktnosti, hibridizuju sa polinukleotidima koji kodiraju ovde opisano antitelo. U specifičnim primerima izvođenja, ovde opisani polinukleotidi, pod uslovima hibridizacije velike, srednje ili niže striktnosti, hibridizuju sa polinukleotidima koji kodiraju ovde obezbeđen VH domen i/ili VL domen.
[0269] Uslovi hibridizacije opisani su u struci i poznati stručnjaku u ovoj oblasti. Na primer, hibridizacija pod striktnim uslovima može da podrazumeva hibridizaciju DNK vezane za filter u 6x natrijum hloridu/natrijum citratu (SSC) na oko 45° C praćenu jednim ili većim brojem pranja u 0.2xSSC/0.1% SDS na oko 50-65° C; hibridizacija pod veoma striktnim uslovima može da podrazumeva hibridizaciju sa nukleinskom kiselinom vezanom za filter u 6xSSC na oko 45° C praćenu sa jednim ili većim brojem pranja u 0.1xSSC/0.2% SDS na oko 68° C. Hibridizacija pod drugim striktnim uslovima hibridizacije poznata je stručnjacima u ovoj oblasti i opisana je, videti, na primer, Ausubel FM et al., eds., (1989) Current Protocols in Molecular Biology, Vol. I, Green Publishing Associates, Inc. and John Wiley & Sons, Inc., New York na stranama 6.3.1-6.3.6 i 2.10.3.
[0270] U određenim aspektima, ovde su obezbeđene ćelije (npr. ćelije-domaćini) koje eksprimiraju (npr. rekombinantno) ovde opisana antitela koja se specifično vezuju za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4) i srodne polinukleotide i ekspresione vektore. Ovde su obezbeđeni vektori (npr. ekspresioni vektori) koji sadrže polinukleotide koji sadrže nukleotidne sekvence koje kodiraju anti-CTLA-4 antitela za rekombinantnu ekspresiju u ćelijama-domaćinima, poželjno u ćelijama sisara. Ovde su takođe obezbeđene ćelije-domaćini koje sadrže takve vektore za rekombinantnu ekspresiju anti-CTLA-4 antitela opisanih ovde (npr. humano ili humanizovano antitelo). U određenom aspektu, ovde su obezbeđeni postupci za proizvodnju ovde opisanog antitela, koji obuhvataju eksprimiranje takvog antitela iz ćelije-domaćina.
[0271] Rekombinantna ekspresija ovde opisanog antitela (npr. antitelo pune dužine, teški i/ili laki lanac antitela, ili jednolančano antitelo opisano ovde) koje se specifično vezuje za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4) podrazumeva konstruisanje ekspresionog vektora koji sadrži polinukleotid koji kodira antitelo. Kada se dobije ovde opisani polinukleotid koji kodira molekul antitela, teški i/ili laki lanac antitela, ili njegov fragment (npr. varijabilni regioni teškog i/ili lakog lanca), vektor za proizvodnju molekula antitela može da se proizvede rekombinantnom DNK tehnologijom upotrebom tehnika koje su dobro poznate u struci. Tako su ovde opisani postupci za pripremu proteina ekspresijom polinukleotida koji sadrži ovde opisanu nukleotidnu sekvencu koja kodira antitelo ili fragment antitela (npr. laki lanac ili teški lanac). Postupci koji su dobro poznati stručnjacima u ovoj oblasti mogu se koristiti za konstruisanje ekspresionih vektora koji sadrže sekvence koje kodiraju antitelo ili fragment antitela (npr. laki lanac ili teški lanac) i odgovarajuće transkripcione i translacione kontrolne signale. Ovi postupci uključuju, na primer, in vitro tehnike rekombinantne DNK, sintetičke tehnike i in vivo genetsku rekombinaciju. Takođe su obezbeđeni replikabilni vektori koji sadrže nukleotidnu sekvence koja kodira ovde opisani molekul antitela, teški ili laki lanac antitela, varijabilni region teškog ili lakog lanca antitela ili njegovog fragmenta, ili CDR teškog ili lakog lanca, funkcionalno povezan sa promotorom. Takvi vektori mogu, na primer, da uključe nukleotidnu sekvencu koja kodira konstantni region molekula antitela (videti npr. međunarodnu objavu br. WO 86/05807 i WO 89/01036; i SAD patent br. 5,122,464), a varijabilni regioni antitela mogu da se kloniraju u takav vektor za ekspresiju celog teškog, celog lakog lanca, ili oba cela, teški i laki lanac.
[0272] Ekspresioni vektor može da se prenese u ćeliju (npr. ćeliju-domaćina) konvencionalnim tehnikama i dobijene ćelije mogu onda da se uzgajaju konvencionalnim tehnikama za proizvodnju ovde opisanog antitela ili njegovog fragmenta. Na taj način, ovde su obezbeđene ćelije-domaći koje sadrže polinukleotid koji kodira ovde opisano antitelo ili njegove fragmenate, ili njegov teški ili laki lanac, ili njihov fragment, ili ovde opisano jednolančano antitelo, funkcionalno povezan sa promotorom za ekspresiju takvih sekvenci u ćeliji-domaćinu. U određenim primerima izvođenja, za ekspresiju dvolančanih antitela, vektori koji kodiraju i teške i lake lance, pojedinačno, mogu da budu koeksprimirani u ćeliji-domaćinu za ekspresiju celog molekula imunoglobulina, kao što je detaljno opisano u nastavku. U određenim primerima izvođenja, ćelija-domaćin sadrži vektor koji sadrži polinukleotid koji kodira i teški lanac i laki lanac ovde opisanog antitela, ili njegovog fragmenta. U specifičnim primerima izvođenja, ćelija-domaćin sadrži dva različita vektora, prvi vektor koji sadrži polinukleotid koji kodira teški lanac ovde opisanog antitela, i drugi vektor koji sadrži polinukleotid koji kodira laki lanac ovde opisanog antitela. U drugim primerima izvođenja, prva ćelija-domaćin sadrži prvi vektor koji sadrži polinukleotid koji kodira teški lanac ovde opisanog antitela, a druga ćelija-domaćin sadrži drugi vektor koji sadrži polinukleotid koji kodira laki lanac ovde opisanog antitela. U specifičnim primerima izvođenja, teški lanac koji eksprimira prva ćelija povezuje se sa lakim lancem druge ćelije kako bi se formiralo ovde opisano anti-CTLA-4 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment. U određenim primerima izvođenja, ovde je obezbeđena populacija ćelija-domaćina koja sadrži takvu prvu ćeliju-domaćina i takvu drugu ćeliju-domaćina.
[0273] U posebnom primeru izvođenja, ovde je obezbeđena populacija vektora koja sadrži prvi vektor koji sadrži polinukleotid koji kodira laki lanac anti-CTLA-4 antitela opisanog ovde, i drugi vektor koji sadrži polinukleotid koji kodira teški lanac anti-CTLA-4 antitela opisanog ovde.
[0274] Mogu da se koriste raznovrsni sistemi ćelija-ekspresioni vektor da bi se eksprimirali ovde opisani molekuli antitela (videti, npr. SAD patent br. 5,807,715). Takvi sistemi domaćinekspresioni vektor predstavljaju sredstva putem kojih se kodirajuće sekvence od interesa mogu proizvesti i nakon toga prečistiti, ali takođe predstavljaju ćelije koje mogu, kada se transformišu ili transficiraju odgovarajućim sekvencama za kodiranje nukleotida, da eksprimiraju ovde opisani molekul antitela in situ. Ovo uključuje, ali bez ograničenja, mikroorganizme kao što su bakterije (npr. E. coli i B. subtilis) transformisane rekombinantnom DNK bakteriofaga, ekspresionim vektorima plazmidne DNK ili kozmidne DNK koji sadrže sekvence za kodiranje antitela; kvasac (npr. Saccharomyces Pichia) transformisan rekombinantnim ekspresionim vektorima kvasca koji sadrže sekvence za kodiranje antitela; ćelijske sisteme insekata inficirane rekombinantnim virusnim ekspresionim vektorima (npr. bakulovirus) koji sadrže sekvence za kodiranje antitela; ćelijske sisteme biljaka (npr. zelene alge kao što je Chlamydomonas reinhardtii) inficirane rekombinantnim virusnim ekspresionim vektorima (npr. virus mozaika karfiola, CaMV; virus mozaika duvana virus, TMV) ili transformisane rekombinantnim plazmidnim ekspresionim vektorima (npr. Ti plazmid) koji sadrže sekvence za kodiranje antitela; ili ćelijske sisteme sisara (npr. COS (npr. COS1 ili COS), CHO, BHK, MDCK, HEK 293, NS0, PER.C6, VERO, CRL7O3O, HsS78Bst, HeLa, i NIH 3T3, HEK-293T, HepG2, SP210, R1.1, B-W, L-M, BSC1, BSC40, YB/20 i BMT10 ćelije) koji nose rekombinantne ekspresione konstrukte koji sadrže promotore poreklom iz genoma sisarskih ćelija (npr. metalotioneinski promotor) ili iz sisarskih virusa (npr. kasni promotor adenovirusa; promotor vakcinija virusa 7.5K). U specifičnom primeru izvođenja, ćelije za ekspresiju ovde opisanih antitela ili njihovog antigen-vezujućeg fragmenta su CHO ćelije, na primer CHO ćelije CHO GS System<™>(Lonza). U određenom primeru izvođenja, ćelije za ekspresiju ovde opisanih antitela su humane ćelije, npr. humane ćelijske linije. U specifičnom primeru izvođenja, ekspresioni vektor sisara je pOptiVEC<™>ili pcDNA3.3. U određenom primeru izvođenja, bakterijske ćelije kao što je Escherichia coli, ili eukariotske ćelije (npr. ćelije sisara), posebno za ekspresiju celog rekombinantnog molekula antitela, koriste se za ekspresiju rekombinantnog molekula antitela. Na primer, ćelije sisara kao što su ćelije jajnika kineskog hrčka (CHO), u konjukciji sa vektorom kao što je promotorski element glavnog intermedijarno ranog gena iz humanog citomegalovirusa je efikasan ekspresioni sistem za antitela (Foecking MK & Hofstetter H (1986) Gene 45: 101-5; i Cockett MI et al., (1990) Biotechnology 8(7): 662-7). U određenim primerima izvođenja, ovde opisana antitela su proizvedena u CHO ćelijama ili NS0 ćelijama. U specifičnom primeru izvođenja, ekspresija nukleotidnih sekvenci za kodiranje ovde opisanih antitela koja se specifično vezuju za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4) reguliše se konstitutivnim promotorom, induktivnim promotorom ili tkivno-specifičnim promotorom.
[0275] U bakterijskim sistemima, određeni broj ekspresionih vektora može biti povoljno odabran u zavisnosti od predviđene upotrebe molekula antitela koje se eksprimira. Na primer, kada treba da se proizvede velika količina takvog antitela, za proizvodnju farmaceutskih kompozicija molekula antitela, mogu da budu poželjni vektori koji usmeravaju ekspresiju visokih nivoa proizvoda fuzionih proteina koji se lako pročišćavaju. Takvi vektori uključuju, ali nisu ograničeni na ekspresioni vektor E. coli pUR278 (Ruether U & Mueller-Hill B (1983) EMBO J 2: 1791-1794), u kome sekvenca za kodiranje antitela može pojedinačno da se ligira u vektor u okviru čitanja sa regionom koji kodira lac Z tako da se proizvodi fuzioni protein; pIN vektore (Inouye S & Inouye M (1985) Nuc Acids Res 13: 3101-3109; Van Heeke G& Schuster SM (1989) J Biol Chem 24: 5503-5509); i slično. Na primer, pGEX vektori se takođe mogu koristiti za ekspresiju stranih polipeptida kao fuzionih proteina sa glutation 5-transferazom (GST). Uopšteno, takvi fuzioni proteini su rastvorljivi i mogu lako da se prečiste iz liziranih ćelija adsorpcijom i vezivanjem za matricu glutation-agaroznih perlica, a zatim eluiraju u prisustvu slobodnog glutationa. Vektori pGEX vektori su dizajnirani tako da uključuju proteazna mesta isecanja trombina ili faktora Xa kako bi klonirani ciljni genski proizvod mogao da se oslobodi sa GST fragmenta.
[0276] U insekatskom sistemu, virus nuklearne polihedroze Autografa californica (AcNPV), na primer, može da se koristi kao vektor za ekspresiju stranih gena. Virus raste u ćelijama Spodoptera frugiperda. Sekvenca za kodiranje antitela može da se klonira pojedinačno u neesencijalne regione virusa (na primer, polihedrinski gen) i stavi pod kontrolu AcNPV promotora (na primer polihedrinskog promotora).
[0277] U sisarskim ćelijama-domaćinima, mogu se koristiti brojni ekspresioni sistemi zasnovani na virusima. U slučajevima kada se adenovirus koristi kao ekspresioni vektor, sekvenca za kodiranje antitela od interesa može da se ligira na adenovirusni transkripcioni/translacioni kontrolni kompleks, npr. kasni promotor i trodelna vodeća sekvenca. Ovaj himerni gen može zatim da se ubaci u genom adenovirusa pomoću in vitro ili in vivo rekombinacije. Insercija u neesencijalni region virusnog genoma (npr. region E1 ili E3) rezultovaće rekombinantnim virusom koji je vijabilan i sposoban za ekspresiju molekula antitela u inficiranim domaćinima (npr. videti Logan J & Shenk T (1984) PNAS 81(12): 3655-9). Specifični inicijacioni signali takođe mogu da budu potrebni za efikasnu translaciju insertovanih sekvenci za kodiranje antitela. Ovi signali uključuju inicijacioni kodon ATG i susedne sekvence. Pored toga, inicijacioni kodon mora da bude u fazi sa okvirom čitanja željene kodirajuće sekvence da bi se osigurala translacija celog inserta. Ovi egzogeni translacioni kontrolni signali i inicijacioni kodoni mogu da imaju različito poreklo, prirodno i sintetičko. Efikasnost ekspresije se može poboljšati uključivanjem odgovarajućih elemenata pojačivača transkripcije, terminatora transkripcije itd. (videti, npr. Bitter G et al., (1987) Methods Enzymol. 153: 516-544).
[0278] Pored toga, može se odabrati soj ćelije-domaćina koji modulira ekspresiju insertovanih sekvenci, odnosno menja i obrađuje genski proizvod na određeni željeni način. Takve modifikacije (npr. glikozilacija) i obrada (npr. cepanje) proteinskih proizvoda mogu biti važne za funkciju proteina. Različite ćelije-domaćini imaju karakteristične i specifične mehanizme za posttranslacionu obradu i modifikaciju proteina i genskih proizvoda. Mogu se izabrati odgovarajuće ćelijske linije ili sistemi domaćina kako bi se obezbedila ispravna modifikacija i obrada eksprimiranih stranih proteina. U tom smislu, mogu se koristiti eukariotske ćelije-domaćini koje poseduju ćelijsku mašineriju za pravilnu obradu primarnog transkripta, glikozilaciju i fosforaciju genskog proizvoda. Takve sisarske ćelije-domaćini uključuju, ali nisu ograničene na ćelije CHO, VERO, BHK, Hela, MDCK, HEK 293, NIH 3T3, W138, BT483, Hs578T, HTB2, BT2O i T47D, NS0 (ćelijska linija mišjeg mijeloma koja endogeno ne proizvodi nijedan lanac imunoglobulina), CRL7O3O, COS (npr. COS1 ili COS), PER. C6, VERO, HsS78Bst, HEK-293T, HepG2, SP210, R1.1, B-W, L-M, BSC1, BSC40, YB/20, BMT10 i HsS78Bst. U određenim primerima izvođenja, ovde opisano anti-CTLA-4 antitela se proizvode u ćelijama sisara, kao što su CHO ćelije.
[0279] Ovde opisana antitela ili njihovi antigen-vezujući fragmenti mogu da imaju smanjen sadržaj fukoze ili da ne sadrže fukozu. Takva antitela mogu da se proizvedu korišćenjem tehnika poznatih stručnjaku u ovoj oblasti. Na primer, antitela mogu da budu eksprimirana u ćelijama sa manjkom ili nedostatkom sposobnosti fukozilacije. U konkretnom primeru, ćelijske linije sa izbačena oba alela α1,6-fukoziltransferaze mogu da se koriste za proizvodnju antitela ili njihovih antigenvezujućih fragmenata sa smanjenim sadržajem fukoze. Sistem Potelligent<®>(Lonza) je primer takvog sistema koji se može koristiti za proizvodnju antitela ili njihovih antigen-vezujućih fragmenata sa smanjenim sadržajem fukoze.
[0280] Kod dugoročne proizvodnje sa visokim prinosom rekombinantnih proteina, mogu se generisati ćelije sa stabilnom ekspresijom. Na primer, mogu se konstruisati ćelijske linije koje stabilno eksprimiraju ovde opisano anti-CTLA-4 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment. Ćelija koja je ovde obezbeđena može stabilno da eksprimira laki lanac/varijabilni region lakog lanca i teški lanac/varijabilni region teškog lanca koji se sklapaju kako bi formirali ovde opisano antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment.
[0281] U određenim aspektima, umesto korišćenja ekspresionih vektora koji sadrže virusni oridžin replikacije, ćelije-domaćini mogu da se transformišu pomoću DNK koju kontrolišu odgovarajući ekspresioni kontrolni elementi (npr. promotor, pojačivač, sekvence, terminatori transkripcije, mesta poliadenilacije itd.) i selektabilni marker. Nakon uvođenja strane DNK/polinukleotida, konstruisane ćelije mogu da se ostave da rastu 1-2 dana u obogaćenim medijumima, a zatim da se prebace u selektivne medijume. Selektabilni marker u rekombinantnom plazmidu pruža otpor selekciji i omogućava ćelijama da stabilno integrišu plazmid u svoje hromozome i rastu, da bi formirale fokuse koji se zauzvrat mogu klonirati i ekspandirati u ćelijske linije. Ovaj postupak može pogodno da se koristi za konstruisanje ćelijskih linija koje eksprimiraju ovde opisano anti-CTLA-4 antitelo ili njegov fragment. Tako konstruisane ćelijske linije mogu da budu posebno korisne u skriningu i proceni kompozicija koje direktno ili indirektno interaguju sa molekulom antitela.
[0282] Mogu se koristiti brojni sistemi selekcije, uključujući, ali bez ograničenja, gene za timidin kinazu herpes simpleks virusa (Wigler M et al., (1977) Cell 11(1): 223-32), hipoksantin guanin fosforiboziltransferazu (Szybalska EH & Szybalski W (1962) PNAS 48(12): 2026-2034) i adenin fosforiboziltransferazu (Lowy I et al., (1980) Cell 22(3): 817-23) u tk-, hgprt- ili aprt-ćelijama, redom. Takođe, otpornost na antimetabolite može da se koristi kao osnov selekcije za sledeće gene: dhfr, koji daje otpornost na metotreksat (Wigler M et al., (1980) PNAS 77(6): 3567-70; O'Hare K et al., (1981) PNAS 78: 1527-31); gpt, koji daje otpornost na mikofenolnu kiselinu (Mulligan RC & Berg P (1981) PNAS 78(4): 2072-6); neo, koji daje otpornost na aminoglikozid G-418 (Wu GY & Wu CH (1991) Biotherapy 3: 87-95; Tolstoshev P (1993) Ann Rev Pharmacol Toxicol 32: 573-596; Mulligan RC (1993) Science 260: 926-932; i Morgan RA & Anderson WF (1993) Ann Rev Biochem 62: 191-217; Nabel GJ & Felgner PL (1993) Trends Biotechnol 11(5): 211-5); i hygro, koji daje otpornost na higromicin (Santerre RF et al., (1984) Gene 30(1-3): 147-56). Opšte poznati postupci u oblasti tehnologije rekombinantne DNK mogu rutinski da se primene da bi se odabrao željeni rekombinantni klon i takvi postupci su opisani, na primer, u Ausubel FM et al., (eds.), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY (1993); Kriegler M, Gene Transfer and Expression, A Laboratory Manual, Stockton Press, NY (1990); i u Chapters 12 and 13, Dracopoli NC et al., (eds.), Current Protocols in Human Genetics, John Wiley & Sons, NY (1994); Colbère-Garapin F et al., (1981) J Mol Biol 150: 1-14.
[0283] Nivoi ekspresije molekula antitela mogu da se povećaju amplifikacijom vektora (pregled videti u Bebbington CR & Hentschel CCG, The use of vectors based on gene amplification for the expression of cloned genes in mammalian cells in DNA cloning, Vol. 3 (Academic Press, New York, 1987)). Kada marker u vektorskom sistemu koji eksprimira antitelo može da se amplifikuje, porast nivoa inhibitora prisutnog u kulturi ćelije-domaćina povećaće broj kopija gena markera. Pošto je amplifikovani region povezan sa genom antitela, proizvodnja antitela će se takođe povećati (Crouse GF et al., (1983) Mol Cell Biol 3: 257-66).
[0284] Ćelija-domaćin može da bude kotransficirana sa dva ili više ovde opisana ekspresiona vektora, gde prvi vektor kodira polipeptid izveden iz teškog lanca, a drugi vektor kodira polipeptid izveden iz lakog lanca. Dva vektora mogu da sadrže identične selektabilne markere koji omogućavaju jednaku ekspresiju polipeptida teškog i lakog lanca. Ćelije-domaćini mogu da budu kotransficirane različitim količinama dva ili više ekspresionih vektora. Na primer, ćelije-domaćini mogu da se transficiraju bilo kojim od sledećih odnosa prvog ekspresionog vektora i drugog ekspresionog vektora: 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8, 1:9, 1:10, 1:12, 1:15, 1:20, 1:25, 1:30, 1:35, 1:40, 1:45, ili 1:50.
[0285] Alternativno, može se koristiti jedan vektor koji kodira, i može da eksprimira, polipeptide oba, i teškog i lakog lanca. U takvim situacijama, laki lanac treba da bude postavljen ispred teškog lanca kako bi se izbegao višak toksičnog slobodnog teškog lanca (Proudfoot NJ (1986) Nature 322: 562-565; i Köhler G (1980) PNAS 77: 2197-2199). Kodirajuće sekvence za teški i laki lanac mogu da sadrže cDNK ili genomsku DNK. Ekspresioni vektor može da bude monocistronski ili multicistronski. Multicistronski konstrukt nukleinske kiseline može da kodira 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 ili više, ili u opsegu od 2-5, 5-10 ili 10-20 gena/nukleotidnih sekvenci. Na primer, bicistronski konstrukt nukleinske kiseline može da sadrži sledećim redosledom promotor, prvi gen (npr. teški lanac ovde opisanog antitela), i drugi gen i (npr. laki lanac ovde opisanog antitela). U takvom ekspresionom vektoru, transkripciju oba gena može da pokreće promotor, dok translacija iRNK sa prvog gena može da se odvija putem mehanizma skeniranja zavisnog od kape, a translacija iRNK sa drugog gena može da se odvija mehanizmom nezavisnim od kape mehanizam, npr. putem IRES.
[0286] Kada je ovde opisani molekul antitela proizveden rekombinantnom ekspresijom, može biti prečišćen bilo kojim postupkom poznatom u struci za prečišćavanje imunoglobulinskog molekula, na primer, pomoću hromatografije (npr. jonoizmenjivačke, afinitetne, posebno po afinitetu prema specifičnom antigenu, posle hromatografije na proteinu A i ekskluzione hromatografije), centrifugiranja, diferencijalne rastvorljivosti ili bilo koje druge standardne tehnike za prečišćavanje proteina. Dalje, ovde opisana antitela mogu da se fuzionišu sa heterolognim polipeptidnim sekvencama koje su ovde opisane ili su inače poznate u struci, kako bi se olakšalo prečišćavanje.
[0287] U specifičnim primerima izvođenja, ovde opisano antitelo je izolovano ili prečišćeno. Generalno, izolovano antitelo je ono koje je suštinski bez drugih antitela koja imaju antigene specifičnosti različite od izolovanog antitela. Na primer, u određenom primeru izvođenja, ovde opisani preparat antitela je suštinski bez ćelijskog materijala i/ili hemijskih prekursora. Izraz „suštinski bez ćelijskog materijala“ uključuje preparate antitela u kojima je antitelo razdvojeno od ćelijskih komponenti ćelija iz kojih je izolovano ili rekombinantno proizvedeno. Stoga, antitelo koje je suštinski bez ćelijskog materijala uključuje preparate antitela koji imaju manje od oko 30%, 20%, 10%, 5%, 2%, 1%, 0.5%, ili 0.1% (po suvoj težini) heterolognog proteina (koji se ovde naziva i „kontaminirajući protein“) i/ili varijanti antitela, na primer, različitih post-translaciono modifikovanih oblika antitela ili drugih različitih verzija antitela (npr. fragmenata antitela). Kada je antitelo rekombinantno proizvedeno, ono je takođe generalno suštinski bez medijuma za kulturu, odnosno, medijum za kulturu predstavlja manje od 20%, 10%, 2%, 1%, 0.5%, ili 0.1% zapremine proteinskog preparata. Kada se antitelo proizvodi hemijskom sintezom, ono je generalno suštinski bez hemijskih prekursora ili drugih hemikalija, odnosno odvojeno je od hemijskih prekursora ili drugih hemikalija koje su uključene u sintezu proteina. U skladu sa tim, takvi preparati antitela imaju manje od oko 30%, 20%, 10% ili 5% (po suvoj težini) hemijskih prekursora ili jedinjenja osim antitela od interesa. U specifičnom primeru izvođenja, ovde opisana antitela su izolovana ili prečišćena.
[0288] Antitela ili njihovi fragmenti koji se specifično vezuju za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4) mogu se proizvesti bilo kojim postupkom poznatim u struci za sintezu antitela, na primer, hemijskom sintezom ili tehnikama rekombinantne ekspresije. U ovde opisanim postupcima koriste se, osim ako nije drugačije naznačeno, konvencionalne tehnike u molekularnoj biologiji, mikrobiologiji, genetskoj analizi, rekombinantnoj DNK, organskoj hemiji, biohemiji, PCR-u, oligonukleotidnoj sintezi i modifikaciji, hibridizaciji nukleinskih kiselina i srodnim poljima u okviru struke. Ove tehnike su opisane, na primer, u referencama navedenim ovde i u potpunosti su objašnjene u literaturi. Videti, npr. Maniatis T et al., (1982) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press; Sambrook J et al., (1989), Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press; Sambrook J et al., (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Ausubel FM et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons (1987 and annual updates); Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons (1987 and annual updates) Gait (ed.) (1984) Oligonucleotide Synthesis: A Practical Approach, IRL Press; Eckstein (ed.) (1991) Oligonucleotides and Analogues: A Practical Approach, IRL Press; Birren B et al., (eds.) (1999) Genome Analysis: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press.
[0289] Ovde opisano antitelo može da bude antitelo (npr. rekombinantno antitelo) pripremljeno, eksprimirano, stvoreno ili izolovano bilo kojim sredstvima koja podrazumevaju stvaranje, npr. putem sinteze, genetski konstruisanih DNK sekvenci. Takvo antitelo može da sadrži sekvence (npr. DNK sekvence ili aminokiselinske sekvence) koje prirodno ne postoje u okviru repertoara antitela klicine linije životinje ili sisara (npr. čoveka) in vivo.
[0290] U jednom aspektu, ovde je obezbeđen postupak za dobijanje antitela koje se specifično vezuje za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4) koji obuhvata kultivisanje ćelije ili ćelije-domaćina, kao što je ovde opisano. U određenom aspektu, ovde je obezbeđen postupak za dobijanje antitela koje se specifično vezuje za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4) koji obuhvata ekspresiju (npr. rekombinantnu ekspresiju) antitela ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta upotrebom ćelije ili ćelije-domaćina opisane ovde (npr. ćelija ili ćelija-domaćin koja sadrži polinukleotide koji kodiraju ovde opisano antitelo). Ćelija je može da bude izolovana ćelija. Egzogeni polinukleotidi mogu da budu uvedeni u ćeliju. Postupak može dodatno da sadrži korak prečišćavanja antitela ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta dobijenog iz ćelije ili ćelije-domaćina. Poželjno je da se postupak izvodi in vitro.
[0291] Postupci za proizvodnju poliklonskih antitela su poznati u struci (videti, na primer, Poglavlje 11 u: Short Protocols in Molecular Biology, (2002) 5th Ed., Ausubel FM et al., eds., John Wiley and Sons, New York).
[0292] Monoklonska antitela se mogu pripremiti korišćenjem najrazličitijih tehnika poznatih u struci, uključujući upotrebu tehnologije hibridoma, rekombinantne tehnologije i tehnologije prikaza na fagu ili njihove kombinacije. Na primer, monoklonska antitela se mogu proizvesti pomoću tehnike hibridoma uključujući one poznate u struci, kao i one o kojima se govori, na primer, u Harlow E & Lane D, Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd ed. 1988); Hammerling GJ et al., in: Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563 681 (Elsevier, N.Y., 1981). Termin „monoklonsko antitelo“, kako se ovde koristi nije ograničen na antitela proizvedena putem tehnologije hibridoma. Na primer, monoklonska antitela se mogu rekombinantno proizvesti iz ćelija-domaćina koje egzogeno eksprimiraju ovde opisana antitela ili njihov fragment, na primer, laki lanac i/ili teški lanac takvog antitela.
[0293] U specifičnim primerima izvođenja, „monoklonsko antitelo“, kako se ovde koristi, je antitelo proizvedeno od strane jedne ćelije (npr. hibridoma ili ćelije-domaćina koja proizvodi rekombinantno antitelo), gde se antitelo specifično vezuje za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4) kao što je određeno, npr. vezivanjem ELISA ili drugog testa vezivanja antigena ili kompetitivnog vezivanja koji je poznat u struci ili u ovde datim primerima. U konkretnim primerima izvođenja, monoklonsko antitelo može da bude himerno antitelo ili humanizovano antitelo. U određenim primerima izvođenja, monoklonsko antitelo je monovalentno antitelo ili multivalentno (npr. bivalentno) antitelo. U konkretnim primerima izvođenja, monoklonsko antitelo je monospecifično ili multispecifično antitelo (npr. bispecifično antitelo). Ovde opisana monoklonska antitela mogu, na primer, da budu napravljena postupkom hibridoma kao što je opisano u Kohler G & Milstein C (1975) Nature 256: 495, ili mogu, npr. da budu izolovana iz biblioteka faga upotrebom, na primer, ovde opisanih tehnika. Drugi postupci za pripremu klonskih ćelijskih linija i pri tome eksprimiranih monoklonskih antitela su dobro poznati u tehnici (videti, na primer, poglavlje 11 u: Short Protocols in Molecular Biology, (2002) 5th Ed., Ausubel FM et al., iznad).
[0294] Postupci za proizvodnju i skrining specifičnih antitela pomoću tehnologije hibridoma su rutinski i dobro poznati u struci. Na primer, u postupku hibridoma, miš ili druga odgovarajuća životinja domaćin, kao što su ovca, koza, zec, pacov, hrčak ili makaki majmun, imunizuju se tako da se pobude limfocite koji proizvode, ili su sposobni da proizvode, antitela koja će se specifično vezivati za protein (npr. CTLA-4 (npr. humani CTLA-4)) korišćen za imunizaciju. Alternativno, limfociti mogu da budu imunizovani in vitro. Limfociti se zatim fuzionišu sa ćelijama mijeloma korišćenjem odgovarajućeg agensa za fuzionisanje, kao što je polietilen glikol, da bi se formirala ćelija hibridoma (Goding JW (Ed), Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, pp. 59-103 (Academic Press, 1986)). Pored toga, tehnika RIMMS (ponovljena imunizacija više lokacija) može da se koristi za imunizaciju životinje (Kilpatrick KE et al., (1997) Hybridoma 16:381-9).
[0295] U nekim otkrićima, miševi (ili druge životinje, kao što su pacovi, majmuni, magarci, svinje, ovce, hrčci ili psi) mogu da se imunizuju antigenom (npr. CTLA-4 (npr. humani CTLA-4)) i kada se detektuje imunološki odgovor, npr. detektuju se antitela specifična za antigen u serumu miša, slezina miša se sakupi i izoluju se splenociti. Splenociti se zatim fuzionišu dobro poznatim tehnikama sa bilo kojim odgovarajućim ćelijama mijeloma, na primer ćelijama iz ćelijske linije SP20 dostupnim iz Američke kolekcije tipova kultura (ATCC<®>) (Manassas, VA), za formiranje hibridoma. Hibridomi se selektuju i kloniraju postupkom graničnog razblaženja. U određenim primerima izvođenja, limfni čvorovi imunizovanih miševa se sakupljaju i fuzionišu sa mijeloma ćelijama NS0.
[0296] Tako pripremljene ćelije hibridoma se zasejavaju i uzgajaju u odgovarajućem medijumu za kulturu koji poželjno sadrži jednu ili više supstanci koje inhibiraju rast ili opstanak nefuzionisanih, parentalnih ćelija mijeloma. Na primer, ako parentalnim ćelijama mijeloma nedostaje enzim hipoksantin guanin fosforibozil transferaza (HGPRT ili HPRT), medijum za kulturu za hibridome tipično će sadržati hipoksantin, aminopterin i timidin (HAT medijum), a te supstance sprečavaju rast HGPRT-deficijentnih ćelija.
[0297] Mogu da se koriste ćelije mijeloma koje se efikasno fuzionišu, podržavaju stabilnu proizvodnju antitela na visokom nivou od strane selektovanih ćelija koje proizvode antitela, i osetljive su na medijum kao što je HAT medijum. Među ovim ćelijskim linijama mijeloma su linije mijeloma miša, kao što su ćelijska linija NS0 ili one izvedene iz MOPC-21 i MPC-11 tumora miša dostupne u Centru za distribuciju ćelija Salk Instituta, San Dijego, CA, SAD i ćelije SP-2 ili X63-Ag8.653 dostupne iz Američke kolekcije tipova kultura, Rockville, MD, SAD. Ćelijske linije humanog mijeloma i mišje-humanog heteromijeloma takođe su opisane za proizvodnju humanih monoklonskih antitela (Kozbor D (1984) J Imunol 133: 3001-5; Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)).
[0298] Medijum za kulturu u kome rastu ćelije hibridoma ispitan je za proizvodnju monoklonskih antitela usmerenih protiv CTLA-4 (npr. humani CTLA-4). Specifičnost vezivanja monoklonskih antitela proizvedenih ćelijama hibridoma određuje se postupcima poznatim u struci, na primer, imunoprecipitacijom ili in vitro testom vezivanja, kao što je radioimunološki test (RIA) ili enzimski-vezani imunosorbentni test (ELISA).
[0299] Nakon što se identifikuju ćelije hibridoma koje proizvode antitela željene specifičnosti, afiniteta i/ili aktivnosti, klonovi mogu da budu subklonirani procedurama graničnog razblaženja i uzgajani standardnim postupcima (Goding JW (Ed), Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, iznad).Odgovarajući medijumi za kulturu u tu svrhu uključuju, na primer, medijum D-MEM ili RPMI 1640. Pored toga, ćelije hibridoma mogu da se uzgajaju in vivo kao ascitni tumori u životinji.
[0300] Monoklonska antitela koja izlučuju potklonovi se na pogodan način izdvajaju iz medijuma za kulturu, ascitne tečnosti ili seruma konvencionalnim procedurama prečišćavanja imunoglobulina kao što su, na primer, protein A-sefaroza, hidroksiapatitna hromatografija, gel elektroforeza, dijaliza ili afinitetna hromatografija.
[0301] Ovde opisana antitela uključuju fragmente antitela koji prepoznaju specifični CTLA-4 (npr. humani CTLA-4) i mogu se generisati bilo kojom tehnikom poznatom stručnjacima u ovoj oblasti. Na primer, ovde opisani Fab i F(ab')2fragmenti mogu da se proizvedu proteolitičkim cepanjem molekula imunoglobulina, korišćenjem enzima kao što su papain (za proizvodnju Fab fragmenata) ili pepsin (za proizvodnju F(ab')2fragmenata). Fab fragment odgovara jednoj od dve identične ručice molekula antitela i sadrži kompletan laki lanac uparen sa VH i CH1 domenima teškog lanca. F(ab')2fragment sadrži dve antigen-vezujuće ručice molekula antitela povezane disulfidnim vezama u regionu zgloba.
[0302] Dalje, ovde opisana antitela ili njihovi antigen-vezujući fragmenti takođe mogu da se generišu korišćenjem različitih postupaka prikaza na fagu poznatih u tehnici. Kod postupaka prikaza na fagu, funkcionalni domeni antitela su prikazani na površini čestica faga koje nose polinukleotidne sekvence koje ih kodiraju. Konkretno, DNK sekvence koje kodiraju VH i VL domene se amplifikuju iz životinjskih cDNK biblioteka (npr. biblioteke humane ili mišje cDNK zahvaćenih tkiva). DNK koja kodira VH i VL domene se rekombinuje sa ScFv linkerom pomoću PCR, i klonira se u fagmidni vektor. Vektor se elektroporiše u E. coli, a E. coli se inficira pomoćnim fagom. Fag koji se koristi u ovim postupcima je obično filamentozni fag, uključujući fd i M13, a VH i VL domeni su obično rekombinantno fuzionisani sa genom III ili genom VIII faga. Fag koji eksprimira antigen-vezujući domen koji se vezuje za određeni antigen može da bude selektovan ili identifikovan pomoću antigena, npr. upotrebom obeleženog antigena ili antigena vezanog ili zakačenog za čvrstu površinu ili perlicu. Primeri postupaka prikaza na fagu koji mogu da se upotrebe za dobijanje ovde opisanih antitela uključuju one opisane u Brinkman U et al., (1995) J Immunol Methods 182: 41-50; Ames RS et al., (1995) J Immunol Methods 184: 177-186; Kettleborough CA et al., (1994) Eur J Immunol 24: 952-958; Persic Let al., (1997) Gene 187: 9-18; Burton DR & Barbas CF (1994) Advan Immunol 57: 191-280; PCT prijavi br. PCT/GB91/001134; međunarodnim objavama br. WO 90/02809, WO 91/10737, WO 92/01047, WO 92/18619, WO 93/11236, WO 95/15982, WO 95/20401, i WO 97/13844; i SAD patentima br. 5,698,426, 5,223,409, 5,403,484, 5,580,717, 5,427,908, 5,750,753, 5,821,047, 5,571,698, 5,427,908, 5,516,637, 5,780,225, 5,658,727, 5,733,743 i 5,969,108.
[0303] Kao što je opisano u gore navedenim referencama, nakon selekcije na fagu, regioni za kodiranje antitela iz faga mogu da budu izolovani i korišćeni za generisanje celih antitela, uključujući humana antitela, ili bilo koji drugi željeni antigen-vezujući fragment, i eksprimirani u bilo kom željenom domaćinu, uključujući ćelije sisara, ćelije insekata, biljne ćelije, kvasac i bakterije, npr. kao što je dole opisano. Tehnike rekombinantne proizvodnje fragmenata antitela kao što su fragmenti Fab, Fab' i F(ab')2takođe mogu da se primene korišćenjem postupaka poznatih u struci, kao što su oni opisani u PCT objavi br. WO 92/22324; Mullinax RL et al., (1992) BioTechniques 12(6): 864-9; Sawai H et al., (1995) Am J Reprod Immunol 34: 26-34; i Better M et al., (1988). Science 240: 1041-1043.
[0304] Da bi se dobila cela antitela, PCR prajmeri koji uključuju VH ili VL nukleotidne sekvence, restrikciono mesto i bočnu sekvencu za zaštitu restrikcionog mesta mogu da se koriste za amplifikovanje VH ili VL sekvenci sa matrice, npr. ScFv klona. Korišćenjem tehnika kloniranja poznatih stručnjacima, VH domeni amplifikovani putem PCR mogu da se kloniraju u vektore koji eksprimiraju konstantni region VH, a VL domeni amplifikovani putem PCR mogu da se kloniraju u vektore koji eksprimiraju konstantni region VL, npr. humani kapa ili lambda konstantni region. VH i VL domeni se takođe mogu klonirati u jedan vektor koji eksprimira neophodne konstantne regione. Vektori za konverziju teškog lanca i vektori za konverziju lakog lanca se zatim kotransficiraju u ćelijske linije kako bi se dobile stabilne ili tranzijentne ćelijske linije koje eksprimiraju antitela pune dužine, npr. IgG, korišćenjem tehnika poznatih stručnjacima.
[0305] Himerno antitelo je molekul u kome različiti delovi antitela potiču od različitih imunoglobulinskih molekula. Na primer, himerno antitelo može da sadrži varijabilni region monoklonskog antitela miša ili pacova fuzionisan sa konstantnim regionom humanog antitela. Postupci za proizvodnju himernih antitela su poznati u struci. Videti, npr. Morrison SL (1985) Science 229: 1202-7; Oi VT & Morrison SL (1986) BioTechniques 4: 214-221; Gillies SD et al., (1989) J Immunol Methods 125: 191-202; i SAD patente br. 5,807,715, 4,816,567, 4,816,397 i 6,331,415.
[0306] Humanizovano antitelo je sposobno da se veže za unapred određeni antigen i sadrži okvirni region koji ima suštinski aminokiselinsku sekvencu humanog imunoglobulina i CDR regione koji imaju suštinski aminokiselinsku sekvencu imunoglobulina koji nije humanog porekla (npr. imunoglobulina miša). U posebnim primerima izvođenja, humanizovano antitelo takođe sadrži najmanje deo konstantnog regiona imunoglobulina (Fc), obično humanog imunoglobulina. Antitelo takođe može da uključuje regione CH1, region zgloba, CH2, CH3 i CH4 teškog lanca. Humanizovano antitelo se može izabrati iz bilo koje klase imunoglobulina, uključujući IgM, IgG, IgD, IgA i IgE, kao i bilo koji izotip, uključujući IgG1, IgG2, IgG3i IgG4. Humanizovana antitela mogu da se proizvedu pomoću različitih tehnika poznatih u struci, uključujući, ali ne ograničavajući se na, CDR graftovanje (evropski patent br. EP 239400; međunarodna objava br. WO 91/09967; i SAD patenti br. 5,225,539, 5,530,101 i 5,585,089), maskiranje ili izmenu površinskih ostataka (evropski patenti br. EP 592106 i EP 519596; Padlan EA (1991) Mol Immunol 28(4/5): 489-498; Studnicka GM etal., (1994) Prot Engineering 7(6): 805-814; i Roguska MA et al., (1994) PNAS 91: 969-973), mešanje lanaca (SAD patent br. 5,565,332), i tehnike opisane u, npr. SAD pat. br. 6,407,213, SAD pat. br. 5,766,886, međunarodnoj objavi br. WO 93/17105; Tan P et al., (2002) J Immunol 169: 1119-25; Caldas C et al., (2000) Protein Eng.13(5): 353-60; Morea V et al., (2000) Methods 20(3): 267-79; Baca M et al., (1997) J Biol Chem 272(16): 10678-84; Roguska MA et al., (1996) Protein Eng 9(10): 895904; Couto JR et al., (1995) Cancer Res. 55 (23 Supp): 5973s-5977s; Couto JR et al., (1995) Cancer Res 55(8): 1717-22; Sandhu JS (1994) Gene 150(2): 409-10 i Pedersen JT et al., (1994) J Mol Biol 235(3): 959-73. Pogledati i objavu SAD prijave br. US 2005/0042664 A1 (Feb.24, 2005).
[0307] Postupci za dobijanje multispecifičnih (npr. bispecifičnih antitela) su opisani, videti, na primer, SAD patente br. 7,951,917; 7,183,076; 8,227,577; 5,837,242; 5,989,830; 5,869,620; 6,132,992 i 8,586,713.
[0308] Jednodomenska antitela, na primer, antitela koja nemaju lake lance, mogu se proizvesti postupcima dobro poznatim u struci. Videti Riechmann L & Muyldermans S (1999) J Immunol 231: 25-38; Nuttall SD et al., (2000) Curr Pharm Biotechnol 1(3): 253-263; Muyldermans S, (2001) J Biotechnol 74(4): 277-302; SAD patent br.6,005,079; i međunarodne objave br. WO 94/04678, WO 94/25591 i WO 01/44301.
[0309] Dalje, antitela koja se specifično vezuju za CTLA-4 antigen mogu, zauzvrat, biti iskorišćena za generisanje antiidiotipskih antitela koja „oponašaju“ antigen koristeći tehnike dobro poznate stručnjacima u ovoj oblasti. (Videti, npr. Greenspan NS & Bona CA (1989) FASEB J 7(5): 437-444; i Nissinoff A (1991) J Immunol 147(8): 2429-2438).
[0310] U konkretnom otkriću, ovde opisano antitelo, koje se vezuje za isti epitop CTLA-4 (npr. humanog CTLA-4) kao ovde opisano anti-CTLA-4 antitelo, je humano antitelo ili njegov antigenvezujući fragment. U konkretnom otkriću, ovde opisano antitelo, koje kompetitivno blokira (npr. na dozno-zavisan način) bilo koje od antitela opisanih ovde, da se veže za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4), je humano antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment. Humana antitela mogu da se proizvedu bilo kojim postupkom poznatim u struci. Na primer, mogu se koristiti transgeni miševi koji ne mogu da eksprimiraju funkcionalne endogene imunoglobuline, ali koji mogu da eksprimiraju humane imunoglobulinske gene. Konkretno, kompleksi gena teškog i lakog lanca humanog imunoglobulina mogu da se uvedu nasumično ili homolognom rekombinacijom u embrionalne matične ćelije miša. Alternativno, humani varijabilni regiona, konstantni region i region diverziteta mogu da se uvedu u embrionalne matične ćelije miša pored humanih gena za teški i laki lanac. Geni teškog i lakog lanca imunoglobulina miša mogu da se učine nefunkcionalnim, odvojeno ili istovremeno sa uvođenjem lokusa humanog imunoglobulina putem homologe rekombinacije. Konkretno, homozigotna delecija regiona JHsprečava endogenu proizvodnju antitela. Modifikovane embrionalne matične ćelije se ekspanduju i mikroinjektuju u blastociste da bi se proizveli himerni miševi. Himerni miševi se zatim uzgajaju da bi proizveli homozigotno potomstvo koje eksprimira humana antitela. Transgeni miševi se imunizuju na uobičajeni način odabranim antigenom, npr. celim, ili delom, antigena (npr. CTLA-4). Monoklonska antitela usmerena protiv antigena mogu se dobiti od imunizovanih, transgenih miševa pomoću konvencionalne tehnologije hibridoma. Transgeni humanog imunoglobulina koje nose transgeni miševi se rearanžiraju tokom diferencijacije B ćelija, a zatim podležu promeni klase i somatskoj mutaciji. Na taj način je, korišćenjem takve tehnike, moguće proizvesti terapeutski korisna IgG, IgA, IgM i IgE antitela. Za pregled ove tehnologije za proizvodnju humanih antitela, pogledajte Lonberg N & Huszar D (1995) Int Rev Immunol 13:65-93. Za detaljnu diskusiju o ovoj tehnologiji za proizvodnju humanih antitela i humanih monoklonskih antitela i protokola za proizvodnju takvih antitela, pogledajte, npr. međunarodne objave br. WO 98/24893, WO 96/34096 i WO 96/33735; i SAD patente br. 5,413,923, 5,625,126, 5,633,425, 5,569,825, 5,661,016, 5,545,806, 5,814,318 i 5,939,598. Primeri miševa sposobnih da proizvedu humana antitela uključuju Xenomouse<™>(Abgenix, Inc.; SAD patent br. 6,075,181 i 6,150,184), HuAb-Mouse<™>(Mederex, Inc./Gen Pharm; SAD patent br. 5,545,806 i 5,569, 825), Trans Chromo Mouse<™>(Kirin) i KM Mouse<™>(Medarex/Kirin).
[0311] Humana antitela koja se specifično vezuju za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4) mogu da se dobiju raznim postupcima poznatim u struci, uključujući postupke prikaza na fagu opisane iznad korišćenjem biblioteka antitela poreklom iz humanih imunoglobulinskih sekvenci. Videti takođe SAD patente br.4,444,887, 4,716,111 i 5,885,793; i međunarodne objave br. WO 98/46645, WO 98/50433, WO 98/24893, WO 98/16654, WO 96/34096, WO 96/33735 i WO 91/10741.
[0312] Humana antitela se mogu proizvesti pomoću mišjih-humanih hibridoma. Na primer, humani limfociti periferne krvi transformisani Epštajn-Bar virusom (EBV) mogu da budu fuzionisani sa ćelijama mišeg mijeloma da bi se proizveli mišji-humani hibridomi koji izlučuju humana monoklonska antitela, a ovi mišji-humani hibridomi mogu da se podvrgnu skriningu da bi se odredila ona koja izlučuju humana monoklonska antitela koja se specifično vezuju za ciljni antigen (npr. CTLA-4 (npr. humani CTLA-4)). Takvi postupci su poznati i opisani su u struci, videti, npr. Shinmoto H et al., (2004) Cytotechnology 46: 19-23; Naganawa Y et al., (2005) Human Antibodies 14: 27-31.
5.6 Kompleti
[0313] Takođe su obezbeđeni kompleti koji sadrže jedno ili više antitela opisanih ovde, ili njihovu farmaceutsku kompoziciju ili konjugate. U konkretnom otkriću, ovde je obezbeđeno farmaceutsko pakovanje ili komplet koji sadrži jednu ili više posuda ispunjenih jednim ili većim brojem sastojaka farmaceutskih kompozicija opisanih ovde, kao što su jedno ili više antitela koja su ovde obezbeđena ili njihov antigen-vezujući fragment. U nekim otkrićima, kompleti sadrže farmaceutsku kompoziciju opisanu ovde i bilo koji profilaktički ili terapeutski agens, kao što su oni opisani ovde. U određenom otkriću, kompleti mogu da sadrže mitogen T-ćelije, npr. fitohemaglutinin (PHA) i/ili forbol miristat acetat (PMA), ili antitelo koje stimuliše TCR kompleks, kao što je anti-CD3 antitelo i anti-CD28 antitelo. Opciono povezano sa takvom posudom/posudama može da bude obaveštenje u obliku koji propisuje vladina agencija koja reguliše proizvodnju, upotrebu ili prodaju farmaceutskih proizvoda ili bioloških proizvoda, i ono izražava odobrenje agencije za proizvodnju, upotrebu ili prodaju za primenu kod ljudi.
[0314] Takođe su obezbeđeni kompleti koji se mogu koristiti u gore navedenim postupcima. U jednom otkriću, komplet sadrži antitela opisanog ovde, poželjno prečišćenog antitela, u jednoj ili više posuda. U konkretnom otkriću, kompleti opisani ovde sadrže suštinski izolovan CTLA-4 antigen (npr. humani CTLA-4) kao kontrolu. U drugom specifičnom otkriću, kompleti opisani ovde dalje sadrže kontrolno antitelo koje ne reaguje sa CTLA-4 antigenom. U još jednom specifičnom otkriću, kompleti opisani ovde sadrže jedan ili više elemenata za detekciju vezivanja antitela za CTLA-4 antigen (npr. antitelo može da bude konjugovano sa detektabilnim supstratom, kao što je fluorescentno jedinjenje, enzimski supstrat, radioaktivno jedinjenje ili luminescentno jedinjenje, ili drugo antitelo koje prepoznaje prvo antitelo može da bude konjugovano sa detektabilnim supstratom). U konkretnom otkriću, komplet koji je ovde obezbeđen može da uključuje rekombinantno proizveden ili hemijski sintetisan CTLA-4 antigen. CTLA-4 antigen koji je obezbeđen u kompletu takođe može da bude vezan za čvrstu podlogu. U specifičnijem otkriću, sredstva za detekciju gore opisanog kompleta uključuju čvrstu podlogu za koju je vezan CTLA-4 antigen. Takav komplet takođe može da sadrži nevezano reporterom-obeleženo anti-humano antitelo ili anti-mišje/pacovsko antitelo. U ovom otkriću, vezivanje antitela za CTLA-4 antigen može da se detektuje vezivanjem navedenog reporterom-obeleženog antitela.
[0315] Jedno otkriće se odnosi na upotrebu kompleta za in vitro ispitivanje i/ili detekciju humanog CTLA-4 u biološkom uzorku.
6. PRIMERI
[0316]Primeri u ovom odeljku (tj. odeljku 6) dati su kao ilustracija, a ne u smislu ograničenja.
6.1 Primer 1: Karakterizacija novih anti-CTLA-4 antitela
[0317] Ovaj primer opisuje karakterizaciju antitela koja se vezuju za humani CTLA-4. Ovaj primer posebno opisuje karakterizaciju antitela koja se specifično vezuju za humani CTLA-4 i inhibiraju funkciju CTLA-4. Informacije o sekvenci varijabilnih regiona ovih antitela navedene su u tabeli 4. Sva antitela su eksprimirana kao IgG1antitela i analizirana u testovima opisanim u nastavku.
6.1.1 Vezivanje anti-CTLA-4 antitela sa ćelijama koje eksprimiraju CTLA-4
[0318] Jurkat ćelije konstruisane da konstitutivno eksprimiraju humani CTLA-4 (Promega) korišćene su za analizu vezivanja anti-CTLA-4 antitela. Ukratko, ćelije su obojene pri 5×10<5>ćelija/bunarčiću korišćenjem 2 μg/ml antitela u ploči sa 96 bunarčića 30 minuta na 4°C. Ćelije su prane dva puta i inkubirane 20 minuta na 4°C sa antihumanim IgG sekundarnim antitelom (Thermo Scientific, kat br. 31529). Ćelije su oprane i suspendovane u 50 μl 2% paraformaldehida (Alfa Aesar, kat br.43368) pripremljenog u PBS-u. Podaci su prikupljeni pomoću BD FACS Canto II.
[0319] Kao što je prikazano na slikama 1A-1G, sva ispitivana anti-CTLA-4 antitela su se vezala za ćelije koje eksprimiraju CTLA-4.
6.1.2 Efekat anti-CTLA-4 antitela na humane PBMC nakon stimulacije stafilokoknim enterotoksinom A (SEA)
[0320] Funkcionalne aktivnosti anti-CTLA-4 antitela AGEN1884.H3 (IgG1) na primarnim humanim PBMC su procenjene nakon stimulacije stafilokoknim enterotoksinom A (SEA). Ukratko, kriokonzervisane ćelije PBMC su stimulisane sa 100 ng/ml SEA superantigena (Toxin Technologies, kat br. at101red) u odsustvu ili prisustvu 10 μg/ml anti-CTLA-4 antitela ili izotipskog kontrolnog antitela (IgG1)5 dana na 37°C i 5% CO2. Koncentracije IL-2 u supernatantu kulture analizirane su pomoću AlphaLISA (Perkin Elmer, kat br. AL221F).
[0321] Anti-CTLA-4 antitelo AGEN1884.H3 (IgG1) je povećalo proizvodnju IL-2 u humanim PBMC ćelijama stimulisanim SEA superantigenom (Slika 2).
6.1.3 Efekat anti-CTLA-4 antitela na IL-2-luciferaza reportersku ćelijsku liniju
[0322] Zatim, funkcionalne aktivnosti anti-CTLA-4 antitela AGEN1884.H3 (IgG1) su dodatno analizirane korišćenjem reporterskog testa IL-2-luciferaze. Ukratko, humana T-ćelijska linija (Jurkat) koja je endogeno eksprimirala CD3 i CD28 konstruisana je da konstitutivno eksprimira CTLA-4 na površini ćelije i reporterski gen luciferaze koji pokreće promotor IL-2. Reporterska ćelijska linija Jurkat bila je kokultivisana sa antigen-prezentujućom ćelijskom linijom (Raji) koja endogeno eksprimira CD80 i CD86 i konstruisana je da eksprimira vlasnički T-ćelijski aktivator (Promega). Aktiviranje T-ćelijskog receptora (TCR) (signal 1) je postignuto T-ćelijskim aktivatorom; a kostimulatorna signalizacija (signal 2) je obezbeđena u trans položaju pomoću CD80 i CD86 koji se eksprimiraju na Raji ćelijama. TCR signalizacija u T-ćelijskoj liniji Jurkat pokrenula je ekspresiju IL-2, što je dovelo do proizvodnje luciferaze, surogat obeleživača aktivacije T ćelija. Kokultivacija ove dve ćelijske linije rezultovala je vezivanjem inhibitornog koreceptora CTLA-4 (eksprimiranog na Jurkat ćelijama) sa svojim prirodnim ligandima CD80 i CD86 (eksprimiranim na Raji ćelijama) inhibirajući aktivaciju T ćelija, što je pokazano izostankom eksprimiranja luciferaze. Ova inhibicija je otklonjena dodavanjem rastućih koncentracije anti-CTLA-4 blokirajućih antitela. Eksprimiranje luciferaze je kvantifikovano pomoću Bio-Glo<™>reagensa i dobijeni podaci su korišćeni za utvrđivanje vrednosti faktora odgovora (faktor povećanja sa AGEN1884.H3 (IgG1) u poređenju sa izotipskim kontrolnim antitelom (IgG1)).
[0323] Kao što je prikazano na slici 3, anti-CTLA-4 antitelo AGEN1884.H3 (IgG1) je doznozavisno oslobađalo CTLA-4 posredovanu inhibiciju T ćelija u ovom reporterskom testu IL-2-luciferaze.
6.1.4 Efekat anti-CTLA-4 antitela na reportersku ćelijsku liniju sa Fc receptorom gama IIIA
[0324] Sposobnost anti-CTLA-4 antitela da istovremeno vezuje CTLA-4 i prenosi signal putem aktivacije Fc gama receptora ocenjena je upotrebom reporterske ćelijske linije koja eksprimira Fc gama receptor IIIA (FcγRIIIA) (Promega). Ukratko, Jurkat ćelije su konstruisane da konstitutivno eksprimiraju humani CTLA-4 na površini ćelije. Ove ciljne ćelije su bile ko-kultivisane sa efektorskom ćelijskom linijom (Jurkat) koja je konstruisana da eksprimira FcγRIIIA (V158 varijanta) ushodno od elementa odgovora NFAT (RE) koji pokreće ekspresiju luciferaze svitaca.
Titrirana doza AGEN1884.H3 (IgG1) ili izotipsko kontrolno antitelo (IgG1) dodato je ko-kulturi i inkubirano na 37°C preko noći. Istovremeno vezivanje AGEN1884.H3 sa ciljnom ćelijskom linijom (koja se vezuje sa CTLA-4 preko Fab regiona) i efektorskom ćelijskom linijom (koja se vezuje za FcγRIIIA preko Fc regiona) pokreće NFAT RE aktivaciju reporterskog gena i ekspresiju luciferaze. Sledećeg dana, Bio-Glo reagens (Promega) je dodat u ko-kulturu, luminescencija je merena pomoću čitača EnVison Multimode Plate Reader (Perkin Elmer), a relativne svetlosne jedinice (RLU) su zabeležene kako bi se izračunale vrednosti faktora odgovora (faktor povećanja sa AGEN1884.H3 (IgG1) u poređenju sa izotipskim kontrolnim antitelom (IgG1)).
[0325] Kada je vezano za ciljne ćelije koje eksprimiraju humani CTLA-4 na površini ćelije, IgG1antitelo AGEN1884.H3 aktivira FcγRIIIA signalizaciju u efektorskim ćelijama (Slika 4).
6.2 Primer 2: Karakterizacija anti-CTLA-4 antitela sa različitim Fc regionima
[0326] Ovaj primer analizira uticaj interakcije Fc/Fc-receptora na funkcionalnu aktivnost anti-CTLA-4 antitela. AGEN1884.H3 je eksprimirano kao antitela u kojima Fc region IgG1sadrži mutacije S239D/I332E, S239D/A330L/I332E, ili L235V/F243L/R292P/Y300L/P396L, numerisane prema sistemu numerisanja EU i ispitane u funkcionalnim testovima opisanim u nastavku. Antitelo AGEN1884.H3 (IgG1S239D/I332E) sadrži teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 24 i laki lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 27. Antitelo AGEN1884.H3 (IgG1S239D/A330L/I332E) sadrži teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 25 i laki lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 27. Antitelo AGEN1884.H3 (IgG1L235V/F243L/R292P/Y300L/P396L) sadrži teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 26 i laki lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 27. Poređenja radi, AGEN1884 je takođe eksprimirano kao antitelo divljeg tipa IgG1, IgG1antitelo koje sadrži mutacije S239D/I332E ili S239D/A330L/I332E, numerisane po sistemu numerisanja EU, ili afukozilisano IgG1antitelo, i testirano u nekim funkcionalnim testovima.
6.2.1 Vezivanje anti-CTLA-4 antitela sa ćelijama koje eksprimiraju CTLA-4
[0327] Vezivanje anit-CTLA-4 antitela AGEN1884.H3 (IgG1S239D/I332E), AGEN1884.H3 (IgG1S239D/A330L/I332E) i AGEN1884.H3 (IgG1L235V/F243L/R292P/Y300L/P396L) sa ćelijama koje eksprimiraju CTLA-4 okarakterisano je na sličan način kao što je gore opisano. Ukratko, Jurkat ćelije konstruisane da eksprimiraju humani CTLA-4 (Promega) su obojene prvo sa 5 μg/ml anti-CTLA-4 antitela ili izotipskog kontrolnog antitela, a zatim sa anti-humanim IgG sekundarnim antitelom (Thermo Scientific, kat. br. 31529). Ćelije su analizirane pomoću BD FACS Canto II.
[0328] Kao što je prikazano na slikama 5A-5D, AGEN1884.H3 antitela sa različitim Fc regionima su se sva vezala za ćelije koje eksprimiraju humani CTLA-4.
6.2.2 Efekat anti-CTLA-4 antitela na vezivanje liganda za humani CTLA-4
[0329] U ovom primeru, ispitana je sposobnost Fc varijante anti-CTLA-4 antitela AGEN1884.H3 (IgG1-S239D/A330E/I332E) da blokira vezivanje između humanog CTLA-4 i njegovih liganda, CD80 i CD86.
[0330] Ukratko, rekombinovani CD80-Fc i CD86-Fc proteini su konjugovani sa fluorohromom Alexa Fluor 647 (Invitrogen, A20186). Jurkat ćelije su transdukovane sa trCTLA4 (skraćeni intracelularni domen) pod kontrolom promotora EF1α, kao što je opisano u Nakaseko et al. (J Exp Med. 1999 Sep 20; 190(6): 765-774), čime je dobijena ćelijska linija koja konstitutivno eksprimira humani CTLA-4 na ćelijskoj površini. Ćelije koje eksprimiraju CTLA-4 su inkubirane sa titriranim dozama anti-CTLA-4 antitela AGEN1884.H3 (IgG1-S239D/A330E/I332E), referentnog anti-CTLA-4 antitela ili izotipskog kontrolnog antitela (IgG1). Ćelije su potom obojene fluorescentno označenim CD80-Fc ili CD86-Fc proteinom. Nakon bojenja, fluorescencija je analizirana pomoću uređaja za protočnu citometriju LSRFortessa (BD Biosciences). FACS grafikoni su analizirani pomoću kombinacije softvera FACS DIVA i WEHI Weasel. Vrednosti su prikazane pomoću softvera Graphpad Prism.
[0331] Kao što je prikazano na slici 6A, svako od AGEN1884.H3 (IgG1-S239D/A330E/I332E) i referentnog anti-CTLA-4 antitela je blokiralo vezivanje između humanog CTLA-4 i CD80 na dozno-zavisan način, dok izotipsko kontrolno antitelo (IgG1) nije imalo efekta. Kao što je prikazano na slici 6B, svako od AGEN1884.H3 (IgG1-S239D/A330E/I332E) i referentnog anti-CTLA-4 antitela je blokiralo vezivanje između humanog CTLA-4 i CD86 na dozno-zavisan način, dok izotipsko kontrolno antitelo (IgG1) nije imalo efekta. Ovi podaci pokazuju da AGEN1884.H3 (IgG1-S239D/A330E/I332E) funkcioniše kao antitelo za blokiranje liganda za CTLA-4.
6.2.3 Efekat anti-CTLA-4 antitela na humane PBMC nakon stimulacije stafilokoknim enterotoksinom A (SEA)
[0332] U ovom primeru, uticaj Fc regiona na funkcionalnu aktivnost anti-CTLA-4 antitela je analiziran korišćenjem testa stimulacije SEA opisanog iznad. Ukratko, humane PBMC ćelije su kultivisane in vitro sa 100 ng/ml SEA peptida (Toxin Technologies, kat. br. at101red) u odsustvu ili prisustvu anti-CTLA-4 antitela sa različitim Fc regionima ili izotipskim kontrolnim antitelom. Posle pet dana, koncentracije IL-2 u supernatantu kulture, marker aktivacije T ćelija, izmerene su korišćenjem AlphaLISA (Perkin Elmer, kat. br. AL221F).
[0333] Kao što je prikazano na slici 7A, tri AGEN1884.H3 antitela koja sadrže mutacije u Fc regionima IgG1, od kojih su sve pojačale vezivanje za FcγRIIIA, stimulisala su više izlučivanja IL-2 nego AGEN1884.H3 sa Fc regionom IgG1divljeg tipa.
[0334] U sličnim studijama, antitela AGEN1884.H3 ili AGEN1884 sa različitim Fc regionima testirana su u testu stimulacije SEA. Uvođenje supstitucija S239D/I332E, S239D/A330L/I332E ili L235V/F243L/R292P/Y300L/P396L u Fc region IgG1značajno je pojačalo funkcionalnu aktivnost AGEN1884.H3 (Slika 7B). Slično tome, AGEN1884 (IgG1S239D/I332E), AGEN1884 (IgG1S239D/A330L/I332E) i afukozilisano AGEN1884 (IgG1) poboljšali su proizvodnju IL-2 u znatno nižim koncentracijama u poređenju sa AGEN1884 sa Fc regionom IgG1divljeg tipa (Slika 7C).
6.2.4 Efekat anti-CTLA-4 antitela na fosforaciju ZAP70
[0335] U ovom primeru, uticaj Fc regiona na funkcionalnu aktivnost anti-CTLA-4 antitela u sinapsi T ćelija-antigen prezentujuća ćelija (APC) analiziran je pomoću testa koji meri obim fosforilacije proteinske tirozin kinaze ZAP70, koja se nakon angažovanja TCR usmerava ka TCR, gde postaje fosforilisana i olakšava nishodne signalne događaje.
[0336] Ukratko, humane PBMC ćelije su inkubirane sa suboptimalnom koncentracijom SEA peptida i 10 μg/mL izotipskog kontrolnog antitela (IgG1) ili anti-CTLA-4 antitela AGEN1884.H3 (IgG1), AGEN1884.H3 (IgG1S239D/A330L/I332E) ili AGEN1884.H3 (IgG1N297A). Ćelije su potom inkubirane na 37°C tokom 0 (pre) 1, 5, 10, 30 ili 60 minuta. Na kraju inkubacije, ćelije su bile lizirane hladnim puferom 1×RIPA dopunjenim koktelom inhibitora fosfataze/proteaze (Cell Signaling Technologies). Nakon klarifikacije supernatanta, koncentracija proteina je kvantifikovana pomoću analize bicinhoninske kiseline (BCA) (Pirs Biotechnology). Ćelijski lizati (20 μg/traci) su pripremljeni u puferu za uzorke Bolt LDS koji je razblažen i zagrejan 10 minuta na 70°C pre nego što su naneti na 4-12% Bolt Bis Tris gelove (Novex). Proteini su razdvojeni u puferu 1x Bolt MOPS (ThermoFisher) i onda preneti na PVDF membranu. Posle blokiranja sa 5% goveđeg serumskog albumina (BSA, 1 sat), uzorci su inkubirani sa primarnim anti-humanim zečjim fosfo-ZAP70 (Tyr493)/Syk (Tyr526) antitelom (Cell Signaling Technologies) u puferu za blokiranje preko noći na 4°C. Membrane su hibridizovane sa kozjim anti-zečjim sekundarnim HRP-konjugatom i vizualizovane pomoću reagensa SignalFire ECL (Cell Signaling Technology). Slike su snimljene pomoću sistema za obradu slika Chemidoc (BioRad). Kao kontrola, procenjen je ukupan ZAP70 protein nakon skidanja sa membrane pomoću pufera Restore<™>PLUS Western Blot Stripping Buffer. Urađena je denzitometrijska analiza fosfo-ZAP70 normalizovanog prema ukupnom ZAP70, upotrebom Image J (Wayne Rasband; Nacionalni institut za mentalno zdravlje, Bethesda, MD, USA) i rezultati su izraženi kao faktor promene u odnosu na uzorke tretirane izotipskom kontrolom koji su inkubirani 1 minut.
[0337] Kao što je prikazano na slikama 8A-8B, u uzorku izotipske kontrole antitela, fosforilacija ZAP70 je prolazno povećana u roku od deset minuta nakon stimulacije i brzo umanjena bez detektabilnih nivoa posle 15 minuta. Nasuprot tome, dodavanje anti-CTLA-4 antitela AGEN1884.H3 (IgG1) ili AGEN1884.H3 (IgG1S239D/A330L/I332E) produžilo je detektabilnu aktivaciju ZAP70 na 30 minuta, pri čemu je najizraženija aktivnost i relativan sadržaj zapažen sa AGEN1884.H3 (IgG1S239D/A330L/I332E).
6.2.5 Efekat mišjih anti-CTLA-4 antitela na rast tumora i depleciju intratumorskih regulatornih T ćelija u mišjem modelu
[0338] U ovom primeru, uticaj Fc regiona na antitumorsku aktivnost i aktivnost intratumorske deplecije regulatornih T ćelija (Treg) anti-CTLA-4 antitela analiziran je pomoću mišjeg modela za kancer debelog creva (miševi koji nose tumor CT26).
[0339] Ukratko, 5×10<4>CT26 tumorskih ćelija je suspendovano u 100 ml PBS-a i ubrizgano potkožno u 6-8 nedelja stare ženke BALB/cJ miševa (Jackson Laboratories). Nakon rasta implantata do zapremine tumora od 50-80mm<3>, miševi su tretirani jednom dozom od 100 μg mišjeg anti-CTLA-4 antitela 9D9 (mIgG2a), Fc-tihom varijantom anti-CTLA-4 antitela 9D9 (mIgG2a-N297A), Fc varijantom anti-CTLA-4 antitela 9D9 (mIgG2aS239D/A330L/I332E) ili izotipskim kontrolnim antitelom (mIgG2a). Aminokiseline sekvence ispitivanih mišjih antitela prikazane su u tabeli 7.
Tabela 7. Aminokiselinske sekvence mišjih anti-CTLA-4 antitela
O
Opis Sekvenca SEQ
[0340] U prvom eksperimentu, kod miševa lečenih antitelima je zatim meren rast tumora na dve nedelje. Kao što je prikazano na slici 9A, Fc varijanta anti-CTLA-4 antitela 9D9 (prikazana kao mIgG2a-S239D/A330L/I332E) indukovala je potpunu regresiju kod svih miševa koji nose tumor CT26 (osam od osam testiranih miševa). Nasuprot tome, druge varijante antitela 9D9 nisu uspele da izazovu istu efikasnost: antitelo 9D9 (mIgG2a) je samo po sebi izazvalo potpune regresije kod tri od devet testiranih miševa, a Fc-tiha varijanta antitela 9D9 (mIgG2a-N297A) nije uspela da izazove regresiju ni u jednom od devet testiranih miševa.
[0341] U drugom eksperimentu, miševi koji nose tumor CT26 tretirani su kao što je opisano iznad, a zatim žrtvovani na 0, 24, 72, ili 240 sati posle tretmana za prikupljanje tumorskih tkiva, limfnih čvorova u koje se dreniraju tumori i slezina. U prikupljenim tkivima procenjena je ekspanzija FoxP3<+>Treg protočnom citometrijom. Suspenzije pojedinačnih ćelija dobijene su mehaničkom disocijacijom praćenom filtracijom (ćelijsko sito sa porama veličine 70 μM). Da bi se smanjilo nespecifično vezivanje, ćelije su inkubirane sa antitelom koje blokira FcγR (Biolegend) u FACS puferu (PBS, 2mM EDTA, 0.5% BSA, pH 7.2) 15 minuta na sobnoj temperaturi. Uzorci su potom dva puta oprani u FACS puferu i obojeni za panel linija CD3, CD4, CD8 i CD25, kao i fiksirajućim markerom za žive/mrtve ćelije, tokom 30 minuta na 4°C. Za razgraničenje Treg, uzorci su potom oprani dva puta, fiksirani, permeabilizovani, a zatim inkubirani anti-FoxP3 antitelom (FJK-16s) 30 minuta na 4°C. Uzorci su analizirani pomoću uređaja za protočnu citometriju LSRFortessa (BD Biosciences). FACS grafikoni su analizirani pomoću kombinacije softvera FACS DIVA i WEHI Weasel. Kao što je prikazano na slici 9B, svako od anti-CTLA-4 antitela 9D9 (mIgG2a) i Fc varijante anti-CTLA-4 antitela 9D9 (mIgG2a-S239D/A330L/I332E) je smanjilo količine intratumorskih FoxP3+ Treg u poređenju sa izotipskim kontrolnim antitelom, pri čemu je Fc varijanta anti-CTLA-4 antitela 9D9 (mIgG2a-S239D/A330L/I332E) smanjila količinu intratumorskih FoxP3+ Treg najznačajnije. Fc-tiha varijanta anti-CTLA-4 antitela 9D9 (mIgG2a-N297A) nije značajno smanjila količinu intratumorskih FoxP3+ Treg u odnosu na izotipsko kontrolno antitelo. Nijedna od tretmanskih grupa nije pokazala suštinske promene u količinama intratumorskih CD45+ leukocita ili CD4+ ćelija, ne uključujući Treg. Fc varijanta anti-CTLA-4 antitela 9D9 (mIgG2a-S239D/A330L/I332E) je tokom vremena indukovala najveći porast odnosa intratumorskih CD8/Treg, zatim sledi antitelo 9D9 (mIgG2a), a zatim Fc-tiha varijanta antitela 9D9 (mIgG2a-N297A) i izotipsko kontrolno antitelo (mIgG2a).
[0342] Kao što je prikazano na slici 9C, anti-CTLA-4 antitelo 9D9 (mIgG2a), Fc varijanta anti-CTLA-4 antitela 9D9 (mIgG2a-S239D/A330L/I332E) i Fc-tiha varijanta anti-CTLA-4 antitela 9D9 (mIgG2a-N297A) nisu imali suštinski efekat na količine FoxP3+ Treg u limfnim čvorovima u koje se drenira tumor (TDLN) u poređenju sa izotipskim kontrolnim antitelom. Slično, kao što je prikazano na slici 9D, anti-CTLA-4 antitelo 9D9 (mIgG2a), Fc varijanta anti-CTLA-4 antitela 9D9 (mIgG2a-S239D/A330L/I332E) i Fc-tiha varijanta anti-CTLA-4 antitela 9D9 (mIgG2aN297A) nisu imali suštinski efekat na količine FoxP3+ Treg u slezini u poređenju sa izotipskim kontrolnim antitelom.
6.2.6 Efekat mišjih anti-CTLA-4 antitela u kombinaciji sa vakcinom protiv tumora na rast tumora
[0343] U ovom primeru, efekat na rast tumora kombinacije mišjeg anti-CTLA-4 antitela i HPV vakcine protiv tumora testiran je u HPV+ TC-1 singenom mišjem modelu tumora.
[0344] Ćelijska linija TC-1 je razvijena kotransformacijom primarnih epitelnih ćelija pluća (C57BL/6) onkogenima c-Ha-ras i HPV-16 (E6/E7), kao što je opisano u Lin et al. (1996, Cancer Res. 56(1): 21-26). Za implantaciju tumora, 2×10<5>TC-1 ćelija je potkožno ubrizgano u 6-8 nedelja stare ženke C57BL/6 miševa (Jackson Laboratories). Svakog od 5, 10. i 15. dana nakon implantacije tumora, miševima je dato 100 μg anti-CTLA-4 antitela 9D9 (mIgG2a), Fc varijante anti-CTLA-4 antitela 9D9 (mIgG2aS239D/A330L/I332E) ili izotipske kontrole antitela (mIgG2a), u kombinaciji sa dozom HPV vakcine (HPV<+>tumor, virusni antigeni E6/E7) ili bez dodatnog tretmana. Svaka doza HPV vakcine sadržala je 30 μg HSP proteina (0.4 nM) kompleksovanih sa peptidnim pulom HPV (1.2 nM) i dopunjena je sa 10 μg adjuvansa QS-21 Stimulon<®>. Nakon tretmana, rast tumora kod miševa je ocenjivan na dve nedelje i miševi su žrtvovani su kada su tumori dostigli 2000 mm<3>ili nakon ulceracije.
[0345] Kao što je prikazano na slici 10, poboljšanje antitumorske efikasnost pokazala su i anti-CTLA-4 antitela 9D9 (mIgG2a) i Fc varijanta anti-CTLA-4 antitela 9D9 (mIgG2a-S239D/A330L/I332E), kada su data u kombinaciji sa HPV vakcinom protiv tumora. Ovaj efekat je bio veći za Fc varijantu anti-CTLA-4 antitela (mIgG2a-S239D/A330L/I332E). Konkretno, Fc varijanta anti-CTLA-4 antitela 9D9 (mIgG2a-S239D/A330L/I332E) je izazvala primetno dodatno smanjenje rasta tumora TC-1 kada je kombinovana sa HPV vakcinom protiv tumora, u odnosu na slučaj kada se antitelo daje kao jedini agens. Ovo dodatno smanjenje rasta tumora bilo je veće od onog primećenog za kombinacije antitela 9D9 (mIgG2a) ili izotipskog kontrolnog antitela (mIgG2a) sa HPV vakcinom protiv tumora.
6.2.7 Karakterizacija ekspandirane i aktivirane populacije T ćelija
[0346] U ovom primeru, urađena je karakterizacija genske ekspresije i metilacije CpG kod ekspandiranih i aktiviranih populacija T ćelija. Ukratko, prirodne CD4<+>CD25<+>FOXP3<+>regulatorne T ćelije ili CD4<+>CD25<+/->FOXP3<->neregulatorne T ćelije su izolovane iz periferne krvi zdravog humanog davaoca, ekspandirane i aktivirane. Potom je protočnom citometrijom okarakterisana ekspresija FOXP3 i CTLA-4 kod T ćelija, a procenjena je i njihova linijska stabilnost ispitivanjem CpG metilacije DNK u CpG regionima u lokusima FOXP3 i CTLA4. Kao što je poznato u struci, hipometilacija na ovim CpG mestima može da se koristi za precizno razgraničavanje efektorskih od regulatornih T-ćelijskih linija (Waight et al., 2015, J. Immunol.
194(3): 878-882).
[0347] Ćelije PBMC su izolovane na gradijentu fikola iz leukotrombocitnih slojeva zdravih davalaca (Research Blood Components, LLC) i potom su obogaćeni efektorskim T ćelijama (Teff) ili prirodnim regulatornim T ćelijama (Treg) korišćenjem izdvajanja na magnetnim perlicama (MACS, Miltenyi). Obogaćene Teff ili Treg ćelije su aktivirane CD3-CD28 mikroperlicama (u odnosu perlice: ćelije 1: 1; Invitrogen) i sa rekombinantnim humanim IL-2 tokom sedam dana u RPMI medijumima dopunjenim sa 10% toplotno-inaktivisanog FBS na 37°C i 5% CO2. Nakon stimulacije, protočnom citometrijom je ocenjena ekspresija FOXP3 i CTLA-4 u ćelijama. Da bi se smanjilo nespecifično vezivanje, ćelije su prethodno inkubirane sa antitelom koje blokira FcγR (Biolegend) u FACS puferu (PBS, 2mM EDTA, 0.5% BSA, pH 7.2) 15 minuta na sobnoj temperaturi. Uzorci su potom dva puta oprani u FACS puferu i obojeni panelom linija CD3, CD4, CD8 i CD25, kao i fiksirajućim markerom za mrtve ćelije, tokom 30 minuta na 4°C. Da bi se procenila membranska ekspresija CTLA-4, urađeno je bojenje za vizuelizaciju CTLA-4 na 37°C. Za vizuelizaciju FOXP3 i CTLA-4, uzorci su oprani dva puta, fiksirani, permeabilizovani inkubirani sa anti-FOXP3 antitelom (PCH101), odnosno anti-CTLA-4 antitelom (BNI3) 30 minuta na 4°C. Uzorci su zatim oprani dva puta i analizirani pomoću uređaja za protočnu citometriju LSRFortessa (BD Biosciences). FACS grafikoni su analizirani pomoću kombinacije softvera FACS DIVA i WEHI Weasel. Za analizu metilacije CpG, ukupna DNK je izolovana iz otprilike 1×10<5>naivnih CD4<+>T ćelija, aktiviranih Teff ili aktiviranih Treg i podvrgnuta pirosekvenciranju.
[0348] Kao što je prikazano na slici 11A, visok nivo ekspresije FOXP3 je detektovan na aktiviranim Treg, kao i visoki nivoi intracelularne i membranske ekspresije CTLA-4. Nasuprot tome, aktivirani Teff su pokazali snižene nivoe FOXP3, intracelularnog CTLA-4 i membranskog CTLA-4 u odnosu na aktivirane Treg. Konkretno, primetno je da aktivirani Teff ispoljavaju suštinski manju ekspresiju membranskog CTLA-4 u poređenju sa aktiviranim Treg. Slika 11B dalje prikazuje da aktivirani Treg takođe ispoljavaju hipometilovane FOXP3 i CTLA4 CpG regione u poređenju sa naivnim i aktiviranim Teff istog davaoca.
6.2.8 Efekat anti-CTLA-4 antitela na ćelijsku citotoksičnost zavisnu od antitela kod humanih T ćelija koje eksprimiraju CTLA-4
[0349] U ovom primeru, efekat anti-CTLA-4 antitela AGEN1884.H3 (IgG1) ili njihovih Fc varijanti na ćelijsku citotoksičnosti zavisnu od antitela (ADCC) humanih T ćelija koje eksprimiraju CTLA-4 procenjen je korišćenjem višeparametarske mikroskopske analize aktivacije kaspaze 3/7 za kvantifikaciju ADCC aktivnosti.
[0350] Ukratko, ciljne ćelije koje eksprimiraju CTLA-4 su kokultivisane sa ćelijama NK-92 koje eksprimiraju FcγRIIIA, nakon opsonizacije sa 10 μg/ml anti-CTLA-4 antitela ili njegovih Fc varijanti, kao što je opisano u nastavku. U prvom eksperimentu, ćelije Jurkat konstruisane da konstitutivno eksprimiraju humani CTLA-4 na površini ćelije su upotrebljene kao ciljne ćelije. Ćelije Jurkat koje eksprimiraju CTLA-4 generisane su transdukcijom ćelijske linije Jurkat sa trCTLA4 (intracelularni domen uklonjen) pod kontrolom promotora EF1α, kao što je opisano u Nakaseko et al. (1999, J. Exp. Med.190(6): 765-774). U drugom eksperimentu, primarne humane aktivirane efektorske i regulatorne T ćelije korišćene su kao ciljne ćelije. Ciljne ćelije koje eksprimiraju CTLA-4 i ćelije NK-92 koje eksprimiraju FcγRIIIA-158V su različito obojene upotrebom crvenog i plavog obeleživača za žive ćelije (Thermo Fisher) i kokultivisane u odnosu ćelija 1:1 (1.5×10<3>ćelija/bunarčiću u pločama sa 384 bunarčića). Uzorci su tretirani sa 10 µg/ml AGEN1884.H3 (IgG1), AGEN1884.H3 (IgG1N297A), AGEN1884.H3 (IgG1S239D/A330L/I332E), AGEN1884.H3 (IgG1S267E/L328F), afukozilisanog AGEN1884.H3 (IgG1), ili izotipskim kontrolnim antitelom (IgG1). Uzorci su zatim procenjeni na indukciju apoptoze tokom vremena uz pomoć živog konfokalnog snimanja supstrata kaspaze 3/7, koji fluorescira nakon cepanja aktiviranom kaspazom. Snimci uzoraka su pravljeni na svakih 20 minuta tokom šest sati. Procentualna ADCC aktivnost se meri kao broj apoptotskih ćelija u odnosu na ukupan broj ćelija pod svakim uslovom.
[0351] Kao što je prikazano na slici 12A, svako od Fc varijante AGEN1884.H3 (IgG1S239D/A330L/I332E) antitela, afukozilisanog AGEN1884.H3 antitela i AGEN1884.H3 (IgG1) antitela je indukovalo suštinski veću aktivnost ADCC u Jurkat ćelijama konstruisanim da eksprimiraju CTLA-4 na ćelijskoj površini u odnosu na varijantu AGEN1884.H3 (IgG1N297A), varijantu AGEN1884.H3 (IgG1S267E/L328F) i izotipsko kontrolno antitelo (IgG1). Fc varijanta antitela AGEN1884.H3 (IgG1S239D/A330L/I332E) i afukozilisano antitelo AGEN1884.H3 su indukovali veća povećanja ADCC aktivnosti u poređenju sa antitelom AGEN1884.H3 (IgG1). Kao što je prikazano na slici 12B, Fc varijanta antitela AGEN1884.H3 (IgG1S239D/A330L/I332E) indukovala je najviše nivoe ADCC, kako u primarnim humanim aktiviranim efektorskim T ćelijama (levi panel) tako i u primarnim humanim aktiviranim regulatornim T ćelijama (desni panel), a za njom je sledilo afukozilisano AGEN1884.H3 antitelo. Antitelo AGEN1884.H3 (IgG1) je takođe indukovalo nešto više nivoe ADCC u poređenju sa kontrolama. Preostala testirana antitela su indukovala malo do nimalo aktivnosti ADCC u efektorskim ili regulatornim T ćelijama. Primetno je da su i Fc varijanta antitela AGEN1884.H3 (IgG1S239D/A330L/I332E) i afukozilisano AGEN1884.H3 antitelo indukovali znatno veći ADCC u regulatornim T ćelijama u poređenju sa efektorskim T ćelijama.
6.2.9 Efekat anti-CTLA-4 antitela u kombinaciji sa anti-PD-1 antitelom na funkcionalnost T ćelija
[0352] U ovom primeru ispitano je dejstvo anti-CTLA-4 antitela u kombinaciji sa anti-PD-1 antitelom na funkcije primarne humane T ćelije.
[0353] Ukratko, PBMC ćelije izolovane na gradijentu fikola iz leukotrombocitnih slojeva zdravih davalaca (Research Blood Components, LLC) dva humana davaoca. Ovaj eksperiment je izveden dva puta na PBMC ćelijama prikupljenim od svakog davaoca, sa ukupno dva replikata po davaocu. Za svaki replikat, izolovane PBMC ćelije su inkubirane četiri dana pod stimulativnim uslovima kultivisanja sa titriranim dozama anti-CTLA-4 antitela AGEN1884.H3 (IgG1), Fc varijantom anti-CTLA-4 antitela AGEN1884.H3 (IgG1S239D/A330L/I332E) ili izotipskog kontrolnog antitela (IgG1), u kombinaciji sa fiksnom dozama (5 μg/ml) referentnog anti-PD-1 antagonističkog antitela ili izotipskog kontrolnog antitela (IgG4). Stimulativni uslovi kultivisanja definisani su kao ćelije suspendovane u RPMI medijumima, dopunjenim sa 100 ng/ml SEA superantigena (Sigma-Aldrich), 10% toplotno inaktivisanog FBS na 37°C i 5% CO2. Posle inkubacije, u supernatantima bez ćelija ispitana je proizvodnja IL-2 upotrebom imunološkog testa AlphaLISA (Perkin-Elmer). Podaci su prikupljeni pomoću čitača ploča EnVision<®>Multilabel Plate Reader (Perkin-Elmer), a koncentracija IL-2 je utvrđena korišćenjem standardne krive za IL-2. Vrednosti su interpolirane i grafički prikazane pomoću softvera Graphpad Prism.
[0354] Kao što je prikazano na slikama 13A-13D, i anti-CTLA-4 antitelo AGEN1884.H3 (IgG1) i Fc varijanta anti-CTLA-4 antitela AGEN1884.H3 (IgG1S239D/A330L/I332E) su indukovali povećanu proizvodnju IL-2 u odnosu na izotipske kontrole ili samo referentno anti-PD-1 antitelo. Proizvodnja IL-2 je dodatno poboljšana kada je AGEN1884.H3 ili AGEN1884.H3 (IgG1S239D/A330L/I332E) kombinovano sa referentnim anti-PD-1 antitelom. Bez obzira da li se primenjuje sa izotipskim kontrolnim antitelom ili u kombinaciji sa referentnim anti-PD-1 antitelom, Fc varijanta anti-CTLA-4 antitela AGEN1884.H3 (IgG1S239D/A330L/I332E) je indukovala veće povećanje proizvodnje IL-2 u poređenju sa AGEN1884.H3 (IgG1). Ovaj efekat je bio dosledan u replikatima za prvog davaoca (Slike 13A i 13B) i drugog davaoca (Slike 13C i 13D).
6.3 Primer 3: Mapiranje epitopa anti-CTLA-4 antitela
[0355] Interakcija Fab fragmenta AGEN1884 (AGEN1884-Fab) sa ekstracelularnim domenom humanog CTLA-4 ispitana je masenom spektrometrijom sa izmenom vodonik-deuterijum (HDX). Ekstracelularni domen CTLA-4, sam, ili u kombinaciji sa AGEN1884-Fab, u fosfatnom puferisanom fiziološkom rastvoru na pH 7.4, razblažen je desetostrukom zapreminom pufera za obeležavanje oksidom deuterijuma i inkubiran je tokom različitih vremenskih perioda (0, 60, 300, 1800 i 7200 sekundi) na sobnoj temperaturi. Izmena vodonika deuterijumom je zaustavljena dodavanjem jedne zapremine 4 M guanidin hidrohlorida, 0.85 M TCEP (tris(2-karboksietil)fosfin) pufera, a konačni pH je bio 2.5. Uzorci su potom podvrgnuti digestiji pepsinom/proteazom tipa XIII na koloni i LC-MS analizi. Maseni spektri su snimljeni u režimu samo MS. Za izračunavanje inkorporacije deuterijuma, maseni spektri za dati peptid su kombinovani u predelu pika ekstrahovanog jonskog hromatograma i izračunat je težinski prosek m/z. Povećanje mase u odnosu na masu nativnog peptida (0 minuta) do ponderisane prosečne mase odgovara nivou inkorporacije deuterijuma. Krive nakupljanja deuterijuma tokom trajanja izmene za sve peptide prikazane su grafički za dalju analizu i upoređivane su pomoću softvera HDExaminer.
[0356] Većina CTLA-4 peptida je prikazala identične ili slične nivoe deuterijuma u prisustvu i odsustvu Fab fragmenta anti-humanog CTLA-4. Međutim, utvrđeno je da je nekoliko peptidnih segmenata značajno smanjilo inkorporaciju deuterijuma pri vezivanju Fab. Svi ostaci u ovom pasusu su numerisani prema SEQ ID NO: 33. U dva regiona, ostacima 80-82 (QVT, SEQ ID NO: 39) i ostacima 135-149 (YPPPYYLGIGNGTQI, SEQ ID NO: 37), javila se jaka zaštita od deuterijuma pri vezivanju humanog CTLA-4 za Fab. Najjače smanjenje preuzimanja deuterijuma primećeno je na ostacima 140-141 (YL), i na osnovu toga, izgleda da su oni glavna odlika koja karakteriše epitop AGEN1884 na CTLA-4. Pri ispitivanju sekvenci CTLA-4 čoveka i makaki majmuna, gde se kod obe AGEN1884 snažno vezuje (podaci nisu prikazani), otkriva gotovo potpunu identičnost sekvence u dva gore opisana regiona, osim supstitucije leucina metioninom na poziciji 141 (Slika 14A). Nasuprot tome, AGEN1884 se ne vezuje u značajnoj meri za CTLA-4 miša, kao ni pacova (podaci koji nisu prikazani) koji se razlikuju od humanog CTLA-4 na ostacima 140-143 (YLGI, SEQ ID NO: 34) na tri od četiri pozicije (Slika 14A). Dalji podaci o selektivnosti pokazuju da se AGEN1884 vezuje sa visokom specifičnošću za CTLA-4 čoveka i makaki majmuna, ali ne i za druge srodne članove familije CD28, uključujući CD28, ICOS, BTLA i PD-1 (podaci nisu prikazani). Poređenje sekvenci među ovim srodnim proteinima pokazuje da se proteini koji nisu CTLA-4 razlikuju po ostacima 140-143 (YLGI, SEQ ID NO: 34) (Slika 14B), što dodatno podržava značaj ovog epitopa za vezivanje AGEN1884.

Claims (14)

Patentni zahtevi
1. Izolovano antitelo koje se specifično vezuje za humani CTLA-4, gde antitelo sadrži varijabilni region teškog lanca pri čemu se aminokiselinska sekvenca varijabilnog regiona teškog lanca sastoji od aminokiselinske sekvence SEQ ID NO: 8 i varijabilni region lakog lanca pri čemu se aminokiselinska sekvenca varijabilnog regiona lakog lanca sastoji od aminokiselinske sekvence SEQ ID NO: 9; i
gde antitelo sadrži konstantni region teškog lanca humanog IgG, pri čemu aminokiselinska sekvenca konstantnog regiona teškog lanca humanog IgG sadrži mutacije S239D/A330L/I332E, numerisane prema sistemu numerisanja EU.
2. Izolovano antitelo prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time, što antitelo sadrži konstantni region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 30.
3. Izolovano antitelo prema bilo kom od patentnih zahteva 1-2, naznačeno time, što antitelo sadrži konstantni region lakog lanca izabran iz grupe koja se sastoji od konstantnog regiona humanog kapa lakog lanca i konstantnog regiona humanog lambda lakog lanca.
4. Izolovano antitelo prema bilo kom od patentnih zahteva 1-3, naznačeno time, što aminokiselinska sekvenca teškog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 25, a aminokiselinska sekvenca lakog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 27.
5. Izolovano antitelo prema patentnom zahtevu 4, naznačeno time, što se aminokiselinska sekvenca teškog lanca sastoji od aminokiselinske sekvence SEQ ID NO: 25, a aminokiselinska sekvenca lakog lanca se sastoji od aminokiselinske sekvence SEQ ID NO: 27.
6. Izolovano antitelo prema bilo kom od patentnih zahteva 4 do 5, naznačeno time, što se antitelo sastoji od dva molekula teškog lanca i dva molekula lakog lanca, gde se aminokiselinska sekvenca teškog lanca sastoji od aminokiselinske sekvence SEQ ID NO: 25, a aminokiselinska sekvenca lakog lanca se sastoji od aminokiselinske sekvence SEQ ID NO: 27.
7. Izolovano antitelo prema bilo kom od patentnih zahteva 4 do 6, naznačeno time, što se antitelo proizvodi u ćelijama jajnika kineskog hrčka (CHO).
8. Izolovano antitelo prema bilo kom od patentnih zahteva 1-5, naznačeno time, što
(a) antitelo je humano antitelo; i/ili
(b) antitelo je bispecifično antitelo.
9. Farmaceutska kompozicija koja sadrži antitelo prema bilo kom od patentnih zahteva 1-8 i farmaceutski prihvatljiv nosač ili ekscipijens.
10. Izolovani polinukleotid koji kodira:
teški lanac i laki lanac antitela prema bilo kom od patentnih zahteva 1-8.
11. Vektor koji sadrži polinukleotid prema patentnom zahtevu 10.
12. Rekombinantna ćelija-domaćin koja sadrži polinukleotid prema patentnom zahtevu 10 ili vektor prema patentnom zahtevu 11.
13. Postupak za proizvodnju antitela koje se specifično vezuje za humani CTLA-4, gde postupak obuhvata kultivisanje ćelije-domaćina prema patentnom zahtevu 12, na taj način, da se polinukleotid eksprimira i da se proizvede antitelo.
14. Izolovano antitelo prema bilo kom od patentnih zahteva 1-8, ili farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 9, za upotrebu u postupku za:
(a) lečenje kancera kod subjekta; i/ili
(b) lečenje infektivne bolesti kod subjekta.
RS20231156A 2016-12-07 2017-12-07 Anti-ctla-4 antitela i postupci za njihovu upotrebu RS64909B1 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201662431272P 2016-12-07 2016-12-07
EP17818406.5A EP3551660B1 (en) 2016-12-07 2017-12-07 Anti-ctla-4 antibodies and methods of use thereof
PCT/US2017/065011 WO2018106862A1 (en) 2016-12-07 2017-12-07 Anti-ctla-4 antibodies and methods of use thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS64909B1 true RS64909B1 (sr) 2023-12-29

Family

ID=60782393

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20231156A RS64909B1 (sr) 2016-12-07 2017-12-07 Anti-ctla-4 antitela i postupci za njihovu upotrebu

Country Status (26)

Country Link
US (5) US11013802B2 (sr)
EP (2) EP3551660B1 (sr)
JP (3) JP6992068B2 (sr)
KR (2) KR20230037664A (sr)
CN (2) CN110248961B (sr)
AU (2) AU2017373944B2 (sr)
BR (1) BR112019011651A2 (sr)
CA (1) CA3046205A1 (sr)
DK (1) DK3551660T5 (sr)
EA (1) EA201991383A1 (sr)
ES (1) ES2963226T3 (sr)
FI (1) FI3551660T3 (sr)
HR (1) HRP20231579T1 (sr)
HU (1) HUE065144T2 (sr)
IL (2) IL266918B2 (sr)
LT (1) LT3551660T (sr)
MA (1) MA50949B1 (sr)
MD (1) MD3551660T2 (sr)
MX (2) MX2019006340A (sr)
PL (1) PL3551660T3 (sr)
PT (1) PT3551660T (sr)
RS (1) RS64909B1 (sr)
SG (1) SG10201912560YA (sr)
SI (1) SI3551660T1 (sr)
SM (1) SMT202300440T1 (sr)
WO (1) WO2018106862A1 (sr)

Families Citing this family (40)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MA44594B1 (fr) * 2015-05-29 2020-09-30 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Anticorps anti-ctla-4 et méthodes d'utilisation de ceux-ci
NL2017270B1 (en) * 2016-08-02 2018-02-09 Aduro Biotech Holdings Europe B V New anti-hCTLA-4 antibodies
WO2018106862A1 (en) 2016-12-07 2018-06-14 Agenus Inc. Anti-ctla-4 antibodies and methods of use thereof
JP7106538B2 (ja) 2016-12-07 2022-07-26 アジェナス インコーポレイテッド 抗体およびその使用方法
US11643463B2 (en) 2017-05-19 2023-05-09 Wuxi Biologics (Shanghai) Co., Ltd. Monoclonal antibodies to cytotoxic T-lymphocyte-associated protein 4 (CTLA-4)
EP3672990A1 (en) 2017-08-25 2020-07-01 Five Prime Therapeutics, Inc. B7-h4 antibodies and methods of use thereof
JP2021514379A (ja) 2018-02-21 2021-06-10 ファイブ プライム セラピューティクス， インコーポレイテッド Ｂ７−ｈ４抗体製剤
MA52416A (fr) 2018-03-02 2021-04-21 Five Prime Therapeutics Inc Anticorps b7-h4 et leurs procédés d'utilisation
EP3617230A1 (en) * 2018-09-03 2020-03-04 BioInvent International AB Novel antibodies and nucleotide sequences, and uses thereof
WO2020081497A1 (en) * 2018-10-15 2020-04-23 Five Prime Therapeutics, Inc. Combination therapy for cancer
WO2020081579A1 (en) * 2018-10-15 2020-04-23 Board Of Regents, The University Of Texas System Monoclonal antibodies against human dickkopf3 and uses thereof
HUE067601T2 (hu) 2018-11-14 2024-10-28 Regeneron Pharma PD-1 inhibitorok intraléziós beadása a bõrrák kezelésére
CN113614109A (zh) 2018-12-21 2021-11-05 Ose免疫疗法公司 双功能抗pd-1/il-7分子
BR112021012536A2 (pt) * 2018-12-26 2021-09-14 City Of Hope Proteínas de ligação anti-ctla4 mascaradas ativáveis
WO2020165374A1 (en) 2019-02-14 2020-08-20 Ose Immunotherapeutics Bifunctional molecule comprising il-15ra
CA3131132A1 (en) * 2019-03-01 2020-09-10 Rampart Health, L.L.C. Pharmaceutical composition combining immunologic and chemotherapeutic method for the treatment of cancer
WO2020205516A1 (en) * 2019-03-29 2020-10-08 Xencor, Inc. Dosing of a bispecific antibody that binds pd1 and ctla4
US20230046904A1 (en) * 2019-09-17 2023-02-16 Guangzhou Maxinovel Pharmaceuticals Co., Ltd. Combination of small molecule inhibitor of the pd-1/pd-l1 interaction and anti-pd-1 antibody for treating cancer
AU2020406083A1 (en) 2019-12-17 2022-06-16 Boehringer Ingelheim International Gmbh Bifunctional molecules comprising an IL-7 variant
AR122043A1 (es) * 2020-05-12 2022-08-03 Bristol Myers Squibb Co Dosificación y administración del anticuerpo anti-ctla-4 activable
US20230295301A1 (en) * 2020-07-21 2023-09-21 Shanghai Junshi Biosciences Co., Ltd. Anti-ctla-4 antibody and use thereof
WO2022098952A1 (en) * 2020-11-06 2022-05-12 Bristol-Myers Squibb Company Dosing and administration of non-fucosylated anti-ctla-4 antibody as monotherapy
WO2022112198A1 (en) 2020-11-24 2022-06-02 Worldwide Innovative Network Method to select the optimal immune checkpoint therapies
KR102540416B1 (ko) * 2021-04-09 2023-06-12 주식회사 애티스랩 암 진단용 조성물, 키트, 및 이를 이용한 암 진단 방법
AU2022253351A1 (en) 2021-04-09 2023-10-12 Boehringer Ingelheim International Gmbh New scaffold for bifunctional molecules with improved properties
EP4320156A1 (en) 2021-04-09 2024-02-14 Ose Immunotherapeutics Scaffold for bifunctioanl molecules comprising pd-1 or cd28 and sirp binding domains
US12448451B2 (en) 2021-06-25 2025-10-21 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-CTLA-4 antibody and use thereof
WO2024003360A1 (en) 2022-07-01 2024-01-04 Institut Curie Biomarkers and uses thereof for the treatment of neuroblastoma
WO2024028386A1 (en) 2022-08-02 2024-02-08 Ose Immunotherapeutics Multifunctional molecule directed against cd28
EP4582453A1 (en) * 2022-09-02 2025-07-09 Cichlid Inc. Anti-ctla-4 monoclonal antibody and use thereof
WO2024091999A1 (en) * 2022-10-25 2024-05-02 Seismic Therapeutic, Inc. Variant igg fc polypeptides and uses thereof
WO2024092031A1 (en) * 2022-10-25 2024-05-02 Seismic Therapeutic, Inc. VARIANT IgG FC POLYPEPTIDES AND USES THEREOF
WO2024206604A2 (en) * 2023-03-28 2024-10-03 Agenus Inc. Methods of treating melanoma using an anti-ctla4 antibody
CN121358499A (zh) 2023-03-30 2026-01-16 Ose免疫疗法 靶向活化的免疫细胞以表达免疫细胞增强分子的基于脂质的纳米粒及其用途
AU2024254671A1 (en) 2023-03-30 2025-10-02 Ose Immunotherapeutics Method of synthesis of targeted lipid nanoparticle and uses thereof
WO2024216028A1 (en) * 2023-04-12 2024-10-17 Agenus Inc. Methods of treating cancer using an anti-ctla4 antibody and an enpp1 inhibitor
WO2025038492A1 (en) 2023-08-11 2025-02-20 Abalytics Oncology, Inc. Anti-ctla-4 antibodies and related binding molecules and methods and uses thereof
WO2025242835A1 (en) 2024-05-22 2025-11-27 Ose Immunotherapeutics Molecules comprising masking linkers and uses thereof for the treatment of cancer
WO2025245317A1 (en) * 2024-05-23 2025-11-27 Agenus Inc. Methods of treating colorectal cancer using an anti-ctla4 antibody
WO2026068705A1 (en) 2024-09-26 2026-04-02 Ose Immunotherapeutics Lipid-based nanoparticles comprising non-glycosylated fc domains and uses thereof

Family Cites Families (331)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5569A (en) 1848-05-16 Corn-sheller
US825A (en) 1838-07-09 Bail way cooking-stove
GB1429184A (en) 1972-04-20 1976-03-24 Allen & Hanburys Ltd Physically anti-inflammatory steroids for use in aerosols
US4044126A (en) 1972-04-20 1977-08-23 Allen & Hanburys Limited Steroidal aerosol compositions and process for the preparation thereof
US4444887A (en) 1979-12-10 1984-04-24 Sloan-Kettering Institute Process for making human antibody producing B-lymphocytes
US4716111A (en) 1982-08-11 1987-12-29 Trustees Of Boston University Process for producing human antibodies
GB8308235D0 (en) 1983-03-25 1983-05-05 Celltech Ltd Polypeptides
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US5807715A (en) 1984-08-27 1998-09-15 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and transformed mammalian lymphocyte cells for producing functional antigen-binding protein including chimeric immunoglobulin
AU584417B2 (en) 1985-04-01 1989-05-25 Lonza Group Ag Transformed myeloma cell-line and a process for the expression of a gene coding for a eukaryotic polypeptide employing same
GB8601597D0 (en) 1986-01-23 1986-02-26 Wilson R H Nucleotide sequences
GB8607679D0 (en) 1986-03-27 1986-04-30 Winter G P Recombinant dna product
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
US5869620A (en) 1986-09-02 1999-02-09 Enzon, Inc. Multivalent antigen-binding proteins
WO1988007089A1 (en) 1987-03-18 1988-09-22 Medical Research Council Altered antibodies
GB8717430D0 (en) 1987-07-23 1987-08-26 Celltech Ltd Recombinant dna product
US5677425A (en) 1987-09-04 1997-10-14 Celltech Therapeutics Limited Recombinant antibody
US5223409A (en) 1988-09-02 1993-06-29 Protein Engineering Corp. Directed evolution of novel binding proteins
EP0436597B1 (en) 1988-09-02 1997-04-02 Protein Engineering Corporation Generation and selection of recombinant varied binding proteins
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5413923A (en) 1989-07-25 1995-05-09 Cell Genesys, Inc. Homologous recombination for universal donor cells and chimeric mammalian hosts
GB8928874D0 (en) 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies
US5585112A (en) 1989-12-22 1996-12-17 Imarx Pharmaceutical Corp. Method of preparing gas and gaseous precursor-filled microspheres
WO1991010737A1 (en) 1990-01-11 1991-07-25 Molecular Affinities Corporation Production of antibodies using gene libraries
US5780225A (en) 1990-01-12 1998-07-14 Stratagene Method for generating libaries of antibody genes comprising amplification of diverse antibody DNAs and methods for using these libraries for the production of diverse antigen combining molecules
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
EP1690934A3 (en) 1990-01-12 2008-07-30 Abgenix, Inc. Generation of xenogeneic antibodies
IT1246382B (it) 1990-04-17 1994-11-18 Eurand Int Metodo per la cessione mirata e controllata di farmaci nell'intestino e particolarmente nel colon
US5427908A (en) 1990-05-01 1995-06-27 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
US5814318A (en) 1990-08-29 1998-09-29 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
ATE300615T1 (de) 1990-08-29 2005-08-15 Genpharm Int Transgene mäuse fähig zur produktion heterologer antikörper
US5698426A (en) 1990-09-28 1997-12-16 Ixsys, Incorporated Surface expression libraries of heteromeric receptors
US5543390A (en) 1990-11-01 1996-08-06 State Of Oregon, Acting By And Through The Oregon State Board Of Higher Education, Acting For And On Behalf Of The Oregon Health Sciences University Covalent microparticle-drug conjugates for biological targeting
CA2405246A1 (en) 1990-12-03 1992-06-11 Genentech, Inc. Enrichment method for variant proteins with alterred binding properties
DK0580737T3 (da) 1991-04-10 2004-11-01 Scripps Research Inst Heterodimere receptorbiblioteker ved anvendelse af phagemider
EP0519596B1 (en) 1991-05-17 2005-02-23 Merck & Co. Inc. A method for reducing the immunogenicity of antibody variable domains
CA2110799A1 (en) 1991-06-14 1992-12-23 Arnold H. Horwitz Microbially-produced antibody fragments and their conjugates
EP1400536A1 (en) 1991-06-14 2004-03-24 Genentech Inc. Method for making humanized antibodies
US5637481A (en) 1993-02-01 1997-06-10 Bristol-Myers Squibb Company Expression vectors encoding bispecific fusion proteins and methods of producing biologically active bispecific fusion proteins in a mammalian cell
US5851795A (en) 1991-06-27 1998-12-22 Bristol-Myers Squibb Company Soluble CTLA4 molecules and uses thereof
ES2136092T3 (es) 1991-09-23 1999-11-16 Medical Res Council Procedimientos para la produccion de anticuerpos humanizados.
ES2341666T3 (es) 1991-12-02 2010-06-24 Medimmune Limited Produccion de autoanticuerpos de repertorios de segmentos de anticue rpos expresados en la superficie de fagos.
EP1291360A1 (en) 1991-12-13 2003-03-12 Xoma Corporation Methods and materials for preparation of modified antibody variable domains and therapeutic uses thereof
GB9203459D0 (en) 1992-02-19 1992-04-08 Scotgen Ltd Antibodies with germ-line variable regions
GB9206422D0 (en) 1992-03-24 1992-05-06 Bolt Sarah L Antibody preparation
US5733743A (en) 1992-03-24 1998-03-31 Cambridge Antibody Technology Limited Methods for producing members of specific binding pairs
US6174666B1 (en) 1992-03-27 2001-01-16 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Method of eliminating inhibitory/instability regions from mRNA
US6010715A (en) 1992-04-01 2000-01-04 Bertek, Inc. Transdermal patch incorporating a polymer film incorporated with an active agent
US6024975A (en) 1992-04-08 2000-02-15 Americare International Diagnostics, Inc. Method of transdermally administering high molecular weight drugs with a polymer skin enhancer
WO1993022332A2 (en) 1992-04-24 1993-11-11 Board Of Regents, The University Of Texas System Recombinant production of immunoglobulin-like domains in prokaryotic cells
US6005079A (en) 1992-08-21 1999-12-21 Vrije Universiteit Brussels Immunoglobulins devoid of light chains
AU701578B2 (en) 1992-08-21 1999-02-04 Vrije Universiteit Brussel Immunoglobulins devoid of light chains
US5639641A (en) 1992-09-09 1997-06-17 Immunogen Inc. Resurfacing of rodent antibodies
ATE199392T1 (de) 1992-12-04 2001-03-15 Medical Res Council Multivalente und multispezifische bindungsproteine, deren herstellung und verwendung
US6274552B1 (en) 1993-03-18 2001-08-14 Cytimmune Sciences, Inc. Composition and method for delivery of biologically-active factors
US5985307A (en) 1993-04-14 1999-11-16 Emory University Device and method for non-occlusive localized drug delivery
US5523092A (en) 1993-04-14 1996-06-04 Emory University Device for local drug delivery and methods for using the same
WO1994025591A1 (en) 1993-04-29 1994-11-10 Unilever N.V. PRODUCTION OF ANTIBODIES OR (FUNCTIONALIZED) FRAGMENTS THEREOF DERIVED FROM HEAVY CHAIN IMMUNOGLOBULINS OF $i(CAMELIDAE)
AU691811B2 (en) 1993-06-16 1998-05-28 Celltech Therapeutics Limited Antibodies
US6004534A (en) 1993-07-23 1999-12-21 Massachusetts Institute Of Technology Targeted polymerized liposomes for improved drug delivery
EP0733070A1 (en) 1993-12-08 1996-09-25 Genzyme Corporation Process for generating specific antibodies
US5997873A (en) 1994-01-13 1999-12-07 Mount Sinai School Of Medicine Of The City University Of New York Method of preparation of heat shock protein 70-peptide complexes
PT1231268E (pt) 1994-01-31 2005-11-30 Univ Boston Bancos de anticorpos policlonais
US6719972B1 (en) 1994-06-03 2004-04-13 Repligen Corporation Methods of inhibiting T cell proliferation or IL-2 accumulation with CTLA4- specific antibodies
US5516637A (en) 1994-06-10 1996-05-14 Dade International Inc. Method involving display of protein binding pairs on the surface of bacterial pili and bacteriophage
US5759542A (en) 1994-08-05 1998-06-02 New England Deaconess Hospital Corporation Compositions and methods for the delivery of drugs by platelets for the treatment of cardiovascular and other diseases
US5660854A (en) 1994-11-28 1997-08-26 Haynes; Duncan H Drug releasing surgical implant or dressing material
US5869046A (en) 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US6121022A (en) 1995-04-14 2000-09-19 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US5983134A (en) 1995-04-23 1999-11-09 Electromagnetic Bracing Systems Inc. Electrophoretic cuff apparatus drug delivery system
CA2219361C (en) 1995-04-27 2012-02-28 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
EP0823941A4 (en) 1995-04-28 2001-09-19 Abgenix Inc HUMAN ANTIBODIES DERIVED FROM IMMUNIZED XENO MOUSES
US6316652B1 (en) 1995-06-06 2001-11-13 Kosta Steliou Drug mitochondrial targeting agents
US5811097A (en) 1995-07-25 1998-09-22 The Regents Of The University Of California Blockade of T lymphocyte down-regulation associated with CTLA-4 signaling
US6167301A (en) 1995-08-29 2000-12-26 Flower; Ronald J. Iontophoretic drug delivery device having high-efficiency DC-to-DC energy conversion circuit
US5935576A (en) 1995-09-13 1999-08-10 Fordham University Compositions and methods for the treatment and prevention of neoplastic diseases using heat shock proteins complexed with exogenous antigens
GB9601081D0 (en) 1995-10-06 1996-03-20 Cambridge Antibody Tech Specific binding members for human transforming growth factor beta;materials and methods
US5989830A (en) 1995-10-16 1999-11-23 Unilever Patent Holdings Bv Bifunctional or bivalent antibody fragment analogue
US6039975A (en) 1995-10-17 2000-03-21 Hoffman-La Roche Inc. Colon targeted delivery system
JP2978435B2 (ja) 1996-01-24 1999-11-15 チッソ株式会社 アクリロキシプロピルシランの製造方法
JP4046354B2 (ja) 1996-03-18 2008-02-13 ボード オブ リージェンツ，ザ ユニバーシティ オブ テキサス システム 増大した半減期を有する免疫グロブリン様ドメイン
TW345603B (en) 1996-05-29 1998-11-21 Gmundner Fertigteile Gmbh A noise control device for tracks
US6027947A (en) 1996-08-20 2000-02-22 Ramtron International Corporation Partially or completely encapsulated top electrode of a ferroelectric capacitor
US5985317A (en) 1996-09-06 1999-11-16 Theratech, Inc. Pressure sensitive adhesive matrix patches for transdermal delivery of salts of pharmaceutical agents
HUP0000116A3 (en) 1996-10-01 2000-08-28 Stanford Res Inst Int Taste-masked microcapsule compositions and methods of manufacture
US5916771A (en) 1996-10-11 1999-06-29 Abgenix, Inc. Production of a multimeric protein by cell fusion method
US6131570A (en) 1998-06-30 2000-10-17 Aradigm Corporation Temperature controlling device for aerosol drug delivery
WO1998023289A1 (en) 1996-11-27 1998-06-04 The General Hospital Corporation MODULATION OF IgG BINDING TO FcRn
EP1500329B1 (en) 1996-12-03 2012-03-21 Amgen Fremont Inc. Human antibodies that specifically bind human TNF alpha
US20060034844A1 (en) 1996-12-04 2006-02-16 The Regents Of The University Of California Stimulation of T cells against self antigens using CTLA-4 blocking agents
US6017540A (en) 1997-02-07 2000-01-25 Fordham University Prevention and treatment of primary and metastatic neoplastic diseases and infectious diseases with heat shock/stress protein-peptide complexes
US5860957A (en) 1997-02-07 1999-01-19 Sarcos, Inc. Multipathway electronically-controlled drug delivery system
US6277375B1 (en) 1997-03-03 2001-08-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobulin-like domains with increased half-lives
US6120751A (en) 1997-03-21 2000-09-19 Imarx Pharmaceutical Corp. Charged lipids and uses for the same
JP2001523958A (ja) 1997-03-21 2001-11-27 ブライハム アンド ウィミンズ ホスピタル，インコーポレイテッド 免疫療法のｃｔｌａ−４結合ペプチド
BRPI9809391B8 (pt) 1997-04-14 2021-05-25 Amgen Res Munich Gmbh processo para a produção de um receptor de antígeno anti-humano, anticorpo humano e composição farmacêutica
US6060082A (en) 1997-04-18 2000-05-09 Massachusetts Institute Of Technology Polymerized liposomes targeted to M cells and useful for oral or mucosal drug delivery
US7951917B1 (en) 1997-05-02 2011-05-31 Genentech, Inc. Method for making multispecific antibodies having heteromultimeric and common components
US20020062010A1 (en) 1997-05-02 2002-05-23 Genentech, Inc. Method for making multispecific antibodies having heteromultimeric and common components
US6235883B1 (en) 1997-05-05 2001-05-22 Abgenix, Inc. Human monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor
US5948433A (en) 1997-08-21 1999-09-07 Bertek, Inc. Transdermal patch
WO1999021537A1 (fr) 1997-10-28 1999-05-06 Bando Chemical Industries, Ltd. Feuille de timbre cutane et procede de production d'une feuille de base pour timbre
US5948646A (en) 1997-12-11 1999-09-07 Fordham University Methods for preparation of vaccines against cancer comprising heat shock protein-peptide complexes
AU3107699A (en) 1998-03-19 1999-10-11 Heska Corporation Novel forms of t cell costimulatory proteins, nucleic acid molecules, and uses thereof
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
US6048736A (en) 1998-04-29 2000-04-11 Kosak; Kenneth M. Cyclodextrin polymers for carrying and releasing drugs
CA2352783C (en) 1998-12-03 2012-04-10 The Regents Of The University Of California Stimulation of t cells against self antigens using ctla-4 blocking agents
US6682736B1 (en) 1998-12-23 2004-01-27 Abgenix, Inc. Human monoclonal antibodies to CTLA-4
HU230769B1 (hu) 1999-01-15 2018-03-28 Genentech Inc. Módosított effektor-funkciójú polipeptid-változatok
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
AR022303A1 (es) 1999-01-22 2002-09-04 Lundbeck & Co As H Derivados de piperidina, tetrahidropiridina y piperazina, su preparacion y utilizacion
US6271359B1 (en) 1999-04-14 2001-08-07 Musc Foundation For Research Development Tissue-specific and pathogen-specific toxic agents and ribozymes
US6256533B1 (en) 1999-06-09 2001-07-03 The Procter & Gamble Company Apparatus and method for using an intracutaneous microneedle array
EP1210428B1 (en) 1999-08-23 2015-03-18 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Pd-1, a receptor for b7-4, and uses therefor
IL148079A0 (en) 1999-08-24 2002-09-12 Medarex Inc Human ctla-4 antibodies and compositions containing the same
US7605238B2 (en) 1999-08-24 2009-10-20 Medarex, Inc. Human CTLA-4 antibodies and their uses
DE60042789D1 (de) 1999-11-29 2009-10-01 Bac Ip B V Immobilisierte antigenbindende moleküle aus einer domäne
AU784634B2 (en) 1999-11-30 2006-05-18 Mayo Foundation For Medical Education And Research B7-H1, a novel immunoregulatory molecule
EP1261376A1 (en) 2000-01-27 2002-12-04 Genetics Institute, LLC Antibodies against ctla4(cd152), conjugates comprising same, and uses thereof
EP1125905A1 (en) 2000-02-16 2001-08-22 Pepscan Systems B.V. Segment synthesis
US6261595B1 (en) 2000-02-29 2001-07-17 Zars, Inc. Transdermal drug patch with attached pocket for controlled heating device
WO2001079300A1 (en) 2000-04-12 2001-10-25 Genetics Institute, Llc. Surface-bound antigen binding portions of antibodies that bind to ctla-4 and cd28 and uses therefor
EP1197755A1 (en) 2000-10-11 2002-04-17 Pepscan Systems B.V. Identification of protein binding sites
CN1487996B (zh) 2000-11-30 2010-06-16 米德列斯公司 用于生产人类抗体的转基因转染色体啮齿动物
PT1355919E (pt) 2000-12-12 2011-03-02 Medimmune Llc Moléculas com semivida longa, composições que as contêm e suas utilizações
US7658921B2 (en) 2000-12-12 2010-02-09 Medimmune, Llc Molecules with extended half-lives, compositions and uses thereof
EP1377830A2 (en) 2001-02-16 2004-01-07 Pepscan Systems B.V. Arrays for determining binding of biomolecules
IL149701A0 (en) 2001-05-23 2002-11-10 Pfizer Prod Inc Use of anti-ctla-4 antibodies
MXPA05000511A (es) 2001-07-12 2005-09-30 Jefferson Foote Anticuepros super humanizados.
WO2003042402A2 (en) 2001-11-13 2003-05-22 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Agents that modulate immune cell activation and methods of use thereof
AUPS054702A0 (en) 2002-02-14 2002-03-07 Immunaid Pty Ltd Cancer therapy
US20040132101A1 (en) 2002-09-27 2004-07-08 Xencor Optimized Fc variants and methods for their generation
US20040014194A1 (en) 2002-03-27 2004-01-22 Schering Corporation Beta-secretase crystals and methods for preparing and using the same
BR0309254A (pt) 2002-04-12 2005-03-01 Medarex Inc Uso de um anticorpo anti-ctla-4
WO2003092624A2 (en) 2002-05-02 2003-11-13 University Of Connecticut Health Center Use of heat shock proteins to enhance efficacy of antibody therapeutics
IL149820A0 (en) 2002-05-23 2002-11-10 Curetech Ltd Humanized immunomodulatory monoclonal antibodies for the treatment of neoplastic disease or immunodeficiency
ES2350687T3 (es) 2002-07-03 2011-01-26 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Composiciones de inmunopotenciación.
WO2004029069A2 (en) 2002-09-30 2004-04-08 Pfizer Products Inc. Hybridomas producing high levels of human sequence antibody
CN1753912B (zh) 2002-12-23 2011-11-02 惠氏公司 抗pd-1抗体及其用途
US9068234B2 (en) 2003-01-21 2015-06-30 Ptc Therapeutics, Inc. Methods and agents for screening for compounds capable of modulating gene expression
US8388955B2 (en) 2003-03-03 2013-03-05 Xencor, Inc. Fc variants
US7465446B2 (en) 2003-05-30 2008-12-16 Medarex, Inc. Surrogate therapeutic endpoint for anti-CTLA4-based immunotherapy of disease
WO2005035575A2 (en) 2003-08-22 2005-04-21 Medimmune, Inc. Humanization of antibodies
EP1732600A2 (en) 2004-03-26 2006-12-20 Pfizer Products Incorporated Uses of anti-ctla-4 antibodies
US7494779B2 (en) 2004-06-14 2009-02-24 Li-Te Chin Method for producing human antibodies to human CD152 with properties of agonist, antagonist, or inverse agonist
US20060057626A1 (en) 2004-09-03 2006-03-16 Nichol Geoffrey M Assessment of CTLA-4 polymorphisms in CTLA-4 blockade therapy
US20090252741A1 (en) 2004-09-08 2009-10-08 Ohio State University Research Foundation Human monoclonal anti-ctla4 antibodies in cancer treatment
DE102004063494A1 (de) 2004-12-23 2006-07-13 Tegenero Ag Antikörper
EP1871806A2 (en) 2005-03-08 2008-01-02 Pharmacia & Upjohn Company LLC ANTI-MAdCAM ANTIBODY COMPOSITIONS
US20060240006A1 (en) 2005-04-20 2006-10-26 Chishih Chu Novel antibody structures derived from human germline sequences
RU2494107C2 (ru) 2005-05-09 2013-09-27 Оно Фармасьютикал Ко., Лтд. Моноклональные антитела человека к белку программируемой смерти 1 (pd-1) и способы лечения рака с использованием анти-pd-1-антител самостоятельно или в комбинации с другими иммунотерапевтическими средствами
JP2006327937A (ja) 2005-05-23 2006-12-07 Ritsutoku Kin ヒト胚細胞系遺伝子構造を具えたヒト抗体構造及びその誘導フラグメント
CN101355965A (zh) 2005-06-08 2009-01-28 达纳－法伯癌症研究院 通过抑制程序性细胞死亡1（pd-1）途经治疗持续性感染和癌症的方法及组合物
CN104356236B (zh) 2005-07-01 2020-07-03 E.R.施贵宝&圣斯有限责任公司 抗程序性死亡配体1(pd-l1)的人单克隆抗体
WO2007056539A2 (en) 2005-11-08 2007-05-18 Medarex, Inc. Prophylaxis and treatment of enterocolitis associated with anti-ctla-4 antibody therapy
EP1954311A4 (en) 2005-12-07 2009-12-23 Medarex Inc CTLA-4 ANTIBODY DOSAGE ESCALATION THERAPY
CN101584858A (zh) 2005-12-20 2009-11-25 布里斯托尔-迈尔斯斯奎布公司 稳定蛋白质制剂
JP6092497B2 (ja) 2006-03-30 2017-03-08 ユニバーシティー オブ カリフォルニア 抗ｃｔｌａ−４抗体の限局性分泌のための方法および組成物
US7919079B2 (en) 2006-03-31 2011-04-05 Biosante Pharmaceuticals, Inc. Cancer immunotherapy compositions and methods of use
CA2647282A1 (en) 2006-04-05 2007-10-11 Pfizer Products Inc. Ctla4 antibody combination therapy
CN101074264B (zh) 2006-05-17 2011-08-17 上海抗体药物国家工程研究中心有限公司 一种重组抗ctla4单克隆抗体及其制备方法和用途
EP2102241A2 (en) 2006-12-15 2009-09-23 Ablynx N.V. Amino acid sequences that modulate the interaction between cells of the immune system
CN103536915A (zh) 2006-12-27 2014-01-29 埃默里大学 用于治疗传染病和肿瘤的组合物和方法
WO2008100562A2 (en) 2007-02-14 2008-08-21 Medical College Of Georgia Research Institute, Inc. Indoleamine 2,3-dioxygenase, pd-1/pd-l pathways, and ctla4 pathways in the activation of regulatory t cells
US9244059B2 (en) 2007-04-30 2016-01-26 Immutep Parc Club Orsay Cytotoxic anti-LAG-3 monoclonal antibody and its use in the treatment or prevention of organ transplant rejection and autoimmune disease
HRP20131167T1 (hr) 2007-06-18 2014-01-03 Merck Sharp & Dohme B.V. Antitijela za humani receptor programirane smrti pd-1
ES2776406T3 (es) 2007-07-12 2020-07-30 Gitr Inc Terapias de combinación que emplean moléculas de enlazamiento a GITR
PE20140196A1 (es) * 2007-08-09 2014-03-19 Boehringer Ingelheim Int Anticuerpos anti-cd37
CA2697032C (en) 2007-08-22 2021-09-14 The Regents Of The University Of California Activatable binding polypeptides and methods of identification and use thereof
US7968300B2 (en) 2007-11-21 2011-06-28 Li-Te Chin Method of isolating regulatory T cells from human samples
US8227577B2 (en) 2007-12-21 2012-07-24 Hoffman-La Roche Inc. Bivalent, bispecific antibodies
US8449886B2 (en) 2008-01-08 2013-05-28 Bristol-Myers Squibb Company Combination of anti-CTLA4 antibody with tubulin modulating agents for the treatment of proliferative diseases
WO2009100140A1 (en) 2008-02-04 2009-08-13 Medarex, Inc. Anti-clta-4 antibodies with reduced blocking of binding of ctla-4 to b7 and uses thereof
PT2242773T (pt) 2008-02-11 2017-09-15 Cure Tech Ltd Anticorpos monoclonais para o tratamento de tumores
WO2009114335A2 (en) 2008-03-12 2009-09-17 Merck & Co., Inc. Pd-1 binding proteins
PL2315756T3 (pl) 2008-07-08 2015-02-27 Incyte Holdings Corp 1,2,5-oksadiazole jako inhibitory 2,3-dioksygenazy indoloaminy
WO2010014784A2 (en) 2008-08-01 2010-02-04 Bristol-Myers Squibb Company Combination of anti-ctla4 antibody with diverse therapeutic regimens for the synergistic treatment of proliferative diseases
AR072999A1 (es) 2008-08-11 2010-10-06 Medarex Inc Anticuerpos humanos que se unen al gen 3 de activacion linfocitaria (lag-3) y los usos de estos
CN102203132A (zh) 2008-08-25 2011-09-28 安普利穆尼股份有限公司 Pd-1拮抗剂的组合物和使用方法
US8927697B2 (en) 2008-09-12 2015-01-06 Isis Innovation Limited PD-1 specific antibodies and uses thereof
KR101814408B1 (ko) 2008-09-26 2018-01-04 다나-파버 캔서 인스티튜트 인크. 인간 항-ｐｄ-１, ｐｄ-ｌ１, 및 ｐｄ-ｌ2 항체 및 그의 용도
AU2009333580B2 (en) 2008-12-09 2016-07-07 Genentech, Inc. Anti-PD-L1 antibodies and their use to enhance T-cell function
US20100189651A1 (en) 2009-01-12 2010-07-29 Cytomx Therapeutics, Llc Modified antibody compositions, methods of making and using thereof
GB0903325D0 (en) 2009-02-26 2009-04-08 Univ Aberdeen Antibody molecules
JP5816170B2 (ja) 2009-06-26 2015-11-18 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッドＲｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． 天然の免疫グロブリン形式を有する容易に単離される二重特異性抗体
ES2666152T3 (es) 2009-08-13 2018-05-03 The Johns Hopkins University Métodos de modulación de la función inmunitaria con anticuerpos anti-B7-H7CR
CA2777226A1 (en) 2009-10-12 2011-04-21 Pfizer Inc. Cancer treatment
GB0920258D0 (en) 2009-11-19 2010-01-06 Alligator Bioscience Ab New medical agents and use thereof
NZ628923A (en) 2009-11-24 2016-02-26 Medimmune Ltd Targeted binding agents against b7-h1
CN102134276A (zh) 2010-01-22 2011-07-27 上海抗体药物国家工程研究中心有限公司 一种抗ctla-4嵌合抗体
US20130202623A1 (en) 2010-02-16 2013-08-08 Nicolas Chomont Pd-1 modulation and uses thereof for modulating hiv replication
CN102892786B (zh) 2010-03-11 2016-03-16 Ucb医药有限公司 Pd-1抗体
BR112012024489A2 (pt) 2010-03-29 2016-05-31 Zymeworks Inc anticorpos com função efetora suprimida ou aumentada
DE102011002045B4 (de) 2010-08-13 2014-09-11 Johnson Controls Gmbh Einsatz für Polsterausnehmung und Fahrzeugsitz
GB201103955D0 (en) * 2011-03-09 2011-04-20 Antitope Ltd Antibodies
KR101970025B1 (ko) 2011-04-20 2019-04-17 메디뮨 엘엘씨 Ｂ7-ｈ1 및 ｐｄ-1과 결합하는 항체 및 다른 분자들
US9328170B2 (en) 2011-05-25 2016-05-03 Merck Sharp & Dohme Corp. Method for preparing Fc containing polypeptides having improved properties
WO2012177624A2 (en) 2011-06-21 2012-12-27 The Johns Hopkins University Focused radiation for augmenting immune-based therapies against neoplasms
JP6240600B2 (ja) 2011-07-24 2017-11-29 キュアテク リミテッド ヒト化免疫モノクローナル抗体の変異体
EP2742953B1 (en) 2011-08-11 2021-09-22 ONO Pharmaceutical Co., Ltd. Therapeutic agent for autoimmune diseases comprising pd-1 agonist
US8920075B2 (en) 2011-09-01 2014-12-30 Halo Maritime Defense Systems, Inc. Marine barrier and gate
WO2013043569A1 (en) 2011-09-20 2013-03-28 Vical Incorporated Synergistic anti-tumor efficacy using alloantigen combination immunotherapy
HRP20201595T1 (hr) 2011-11-28 2020-12-11 Merck Patent Gmbh Anti-pd-l1 protutijela i njihova uporaba
AU2013222185B2 (en) 2012-02-23 2018-07-26 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Prediction of responsiveness to treatment with immunomodulatory therapeutics and method of monitoring abscopal effects during such treatment
WO2013142796A2 (en) 2012-03-23 2013-09-26 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treatments using ctla4 antibodies
AU2013255511B2 (en) 2012-05-04 2016-01-28 Pfizer Inc. Prostate-associated antigens and vaccine-based immunotherapy regimens
US9863935B2 (en) 2012-05-08 2018-01-09 H. Lee Moffitt Cancer And Research Institute, Inc. Predictive biomarkers for CTLA-4 blockade therapy and for PD-1 blockade therapy
CN113967253A (zh) 2012-05-15 2022-01-25 百时美施贵宝公司 通过破坏pd-1/pd-l1信号传输的免疫治疗
HK1204557A1 (en) 2012-05-31 2015-11-27 Sorrento Therapeutics, Inc. Antigen binding proteins that bind pd-l1
WO2013192546A1 (en) 2012-06-22 2013-12-27 Cytomx Therapeutics, Inc. Activatable antibodies having non-binding steric moieties and mehtods of using the same
MX2014016038A (es) 2012-06-22 2015-08-14 Cytomx Therapeutics Inc Anticuerpos de reaccion cruzada anti - jagged 1 / jagged 2, anticuerpos anti - jagged activables y metodos para uso de los mismos.
AR091649A1 (es) 2012-07-02 2015-02-18 Bristol Myers Squibb Co Optimizacion de anticuerpos que se fijan al gen de activacion de linfocitos 3 (lag-3) y sus usos
BR112015000167B1 (pt) 2012-07-06 2021-11-23 Genmab B.V. Proteína dimérica, proteína, composição, kit de partes e seus usos, bem como método para aumentar a oligomerização em solução de uma proteína dimérica compreendendo um primeiro e segundo polipeptídeo, cada um compreendendo pelo menos as regiões ch2 e ch3 de uma cadeia pesada de igg1 humana e proteína dimérica variante
JP6403166B2 (ja) 2012-08-03 2018-10-10 ダナ−ファーバー キャンサー インスティテュート， インコーポレイテッド 単一抗原抗ｐｄ−ｌ１およびｐｄ−ｌ２二重結合抗体およびその使用方法
CA2886433C (en) 2012-10-04 2022-01-04 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Human monoclonal anti-pd-l1 antibodies and methods of use
US9789182B2 (en) 2012-10-23 2017-10-17 Bristol-Myers Squibb Company Combination of anti-KIR and anti-CTLA-4 antibodies to treat cancer
CA2889182A1 (en) 2012-10-26 2014-05-01 The University Of Chicago Synergistic combination of immunologic inhibitors for the treatment of cancer
CN104968364A (zh) 2012-12-03 2015-10-07 百时美施贵宝公司 强化免疫调变性Fc融合蛋白的抗癌活性
AR093984A1 (es) 2012-12-21 2015-07-01 Merck Sharp & Dohme Anticuerpos que se unen a ligando 1 de muerte programada (pd-l1) humano
CA2896282C (en) 2013-01-04 2021-07-20 Cytomx Therapeutics, Inc. Compositions and methods for detecting protease activity in biological systems
ES2699599T3 (es) 2013-03-15 2019-02-11 Abbvie Biotherapeutics Inc Variantes de Fc
EA037554B1 (ru) 2013-03-15 2021-04-13 Глаксосмитклайн Интеллекчуал Проперти Дивелопмент Лимитед Анти-lag-3 связывающие белки
WO2014179491A2 (en) 2013-04-30 2014-11-06 La Jolla Institute For Allergy And Immunology MODULATION OF REGULATORY T CELL FUNCTION VIA PROTEIN KINASE C-η
JP6742903B2 (ja) 2013-05-02 2020-08-19 アナプティスバイオ インコーポレイティッド プログラム死−１（ｐｄ−１）に対する抗体
US9676853B2 (en) 2013-05-31 2017-06-13 Sorrento Therapeutics, Inc. Antigen binding proteins that bind PD-1
WO2014209804A1 (en) 2013-06-24 2014-12-31 Biomed Valley Discoveries, Inc. Bispecific antibodies
CN104250302B (zh) 2013-06-26 2017-11-14 上海君实生物医药科技股份有限公司 抗pd‑1抗体及其应用
CA2916681A1 (en) 2013-07-16 2015-01-22 Genentech, Inc. Methods of treating cancer using pd-1 axis binding antagonists and tigit inhibitors
CA2917858A1 (en) 2013-08-02 2015-02-05 Aduro Biotech Holdings, Europe B.V. Combining cd27 agonists and immune checkpoint inhibition for immune stimulation
EP3036255A4 (en) 2013-08-22 2017-03-22 The Council Of The Queensland Institute Of Medical Research Immunoreceptor modulation for treating cancer and viral infections
WO2015035112A1 (en) 2013-09-05 2015-03-12 The Johns Hopkins University Cancer therapy via a combination of epigenetic modulation and immune modulation
US10077305B2 (en) 2013-09-10 2018-09-18 Medimmune Limited Antibodies against PD-1 and uses thereof
EA034666B1 (ru) 2013-09-13 2020-03-04 Бейджин Свитзерланд Гмбх Антитело против pd-1 и его применение для лечения рака или вирусной инфекции и фрагмент антитела
SG11201601763SA (en) 2013-09-20 2016-04-28 Bristol Myers Squibb Co Combination of anti-lag-3 antibodies and anti-pd-1 antibodies to treat tumors
US10570204B2 (en) 2013-09-26 2020-02-25 The Medical College Of Wisconsin, Inc. Methods for treating hematologic cancers
WO2015058048A1 (en) 2013-10-18 2015-04-23 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions comprising a combination of a vegf antagonist and an anti-ctla-4 antibody
WO2015061668A1 (en) 2013-10-25 2015-04-30 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Anti-pd-l1 monoclonal antibodies and fragments thereof
CN104558177B (zh) 2013-10-25 2020-02-18 苏州思坦维生物技术股份有限公司 拮抗抑制程序性死亡受体pd-1与其配体结合的单克隆抗体及其编码序列与用途
KR20160093012A (ko) 2013-11-05 2016-08-05 코그네이트 바이오서비시즈, 인코포레이티드 암 치료를 위한 체크포인트 억제제 및 치료제의 배합물
MY184154A (en) 2013-12-12 2021-03-23 Shanghai hengrui pharmaceutical co ltd Pd-1 antibody, antigen-binding fragment thereof, and medical application thereof
SI3094351T1 (sl) 2014-01-15 2022-05-31 Kadmon Corporation, Llc Imunomodulatorna sredstva
TWI680138B (zh) 2014-01-23 2019-12-21 美商再生元醫藥公司 抗ｐｄ-ｌ１之人類抗體
EP3099716A1 (en) 2014-01-28 2016-12-07 Bristol-Myers Squibb Company Anti-lag-3 antibodies to treat hematological malignancies
US9676863B2 (en) 2014-02-10 2017-06-13 Merck Patent Gmbh Targeted TGFβ inhibitors
EP3114144A1 (en) 2014-03-05 2017-01-11 Bristol-Myers Squibb Company Treatment of renal cancer using a combination of an anti-pd-1 antibody and another anti-cancer agent
US20150259420A1 (en) 2014-03-14 2015-09-17 Novartis Ag Antibody molecules to lag-3 and uses thereof
CN104974253A (zh) 2014-04-01 2015-10-14 上海中信国健药业股份有限公司 抗ctla-4/pd-1双特异性抗体、其制备方法及应用
WO2015153820A1 (en) 2014-04-02 2015-10-08 Felder Mitchell S Ctla-4 blockade with metronomic chemotherapy for the treatment of cancer
CN104292334B (zh) 2014-04-25 2018-11-27 河南省健康伟业生物医药研究股份有限公司 一种全人源抗ctla-4单克隆抗体、制备方法及应用
JP2017515859A (ja) 2014-05-15 2017-06-15 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ 抗ｐｄ−１抗体と他の抗癌剤の組み合わせを使用する肺癌の処置
EP3149042B1 (en) 2014-05-29 2019-08-28 Spring Bioscience Corporation Pd-l1 antibodies and uses thereof
WO2015195163A1 (en) 2014-06-20 2015-12-23 R-Pharm Overseas, Inc. Pd-l1 antagonist fully human antibody
TWI693232B (zh) 2014-06-26 2020-05-11 美商宏觀基因股份有限公司 與pd-1和lag-3具有免疫反應性的共價結合的雙抗體和其使用方法
TWI726608B (zh) 2014-07-03 2021-05-01 英屬開曼群島商百濟神州有限公司 抗pd-l1抗體及其作為治療及診斷之用途
DK3169341T3 (da) 2014-07-16 2019-08-05 Transgene Sa Onkolytisk virus til ekspression af immun-checkpoint-modulatorer
CN105330740B (zh) 2014-07-30 2018-08-17 珠海市丽珠单抗生物技术有限公司 抗pd-1抗体及其应用
CN105296433B (zh) 2014-08-01 2018-02-09 中山康方生物医药有限公司 一种ctla4抗体、其药物组合物及其用途
WO2016020856A2 (en) 2014-08-05 2016-02-11 MabQuest SA Immunological reagents
JO3663B1 (ar) 2014-08-19 2020-08-27 Merck Sharp & Dohme الأجسام المضادة لمضاد lag3 وأجزاء ربط الأنتيجين
WO2016030455A1 (en) 2014-08-28 2016-03-03 Medimmune Limited Anti-b7-h1 and anti-ctla-4 antibodies for treating non-small lung cancer
MY193723A (en) 2014-08-29 2022-10-27 Hoffmann La Roche Combination therapy of tumor-targeted il-2 variant immunocytokines and antibodies against human pd-l1
ES2771926T3 (es) 2014-09-13 2020-07-07 Novartis Ag Terapias de combinación
AU2015327868A1 (en) 2014-10-03 2017-04-20 Novartis Ag Combination therapies
TWI716362B (zh) 2014-10-14 2021-01-21 瑞士商諾華公司 針對ｐｄ－ｌ１之抗體分子及其用途
JP2018500384A (ja) 2014-11-11 2018-01-11 メディミューン リミテッド 腫瘍形成を治療するための治療の組合せ
EP4098278A1 (en) 2014-11-13 2022-12-07 The Johns Hopkins University Checkpoint blockade and microsatellite instability
MX2017007390A (es) 2014-12-16 2017-11-06 Bristol Myers Squibb Co Uso de inhibidores de punto de control inmunitario en neoplasmas de sistemas nerviosos centrales.
WO2016100882A1 (en) 2014-12-19 2016-06-23 Novartis Ag Combination therapies
US20180021378A1 (en) 2014-12-31 2018-01-25 Anthrogenesis Corporation Methods of treating hematological disorders, solid tumors, or infectious diseases using natural killer cells
CN108271359B (zh) 2015-02-13 2021-11-09 索伦托药业有限公司 结合ctla4的抗体治疗剂
US10196445B1 (en) 2015-03-17 2019-02-05 Bristol-Myers Squibb Company Ipilimumab variant with enhanced ADCC
WO2016149387A1 (en) 2015-03-18 2016-09-22 The Johns Hopkins University Androgen deprivation with immune checkpoint blockade delays the development of castration resistant prostate cancer
WO2016168809A1 (en) * 2015-04-17 2016-10-20 Krishnan Nandabalan Compositions and methods for preventing tumor growth and treating cancer by targeting lectin galactoside-binding soluble 3 binding protein
WO2016179576A1 (en) * 2015-05-07 2016-11-10 Bioxcel Corporation Novel immunomodulatory therapeutic strategies targeting tumors in cancer
WO2016183469A1 (en) 2015-05-13 2016-11-17 Robert Kirken Anti-ctla-4 blockade
US20160347848A1 (en) 2015-05-28 2016-12-01 Medimmune Limited Therapeutic combinations and methods for treating neoplasia
US11078278B2 (en) 2015-05-29 2021-08-03 Bristol-Myers Squibb Company Treatment of renal cell carcinoma
MA44594B1 (fr) 2015-05-29 2020-09-30 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Anticorps anti-ctla-4 et méthodes d'utilisation de ceux-ci
CN106714836A (zh) 2015-06-05 2017-05-24 H·李·莫菲特癌症中心研究有限公司 Gm‑csf/cd40l疫苗和检查点抑制剂联合治疗
JP2018522887A (ja) 2015-07-14 2018-08-16 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ 免疫チェックポイント阻害剤を使用する癌の処置法
EP3331917A1 (en) 2015-08-04 2018-06-13 GlaxoSmithKline Intellectual Property Development Limited Combination treatments and uses and methods thereof
EP3331919A1 (en) 2015-08-07 2018-06-13 GlaxoSmithKline Intellectual Property Development Limited Combination therapy comprising anti ctla-4 antibodies
CN114605548A (zh) 2015-09-01 2022-06-10 艾吉纳斯公司 抗-pd-1抗体及其使用方法
WO2017062615A2 (en) 2015-10-08 2017-04-13 Macrogenics, Inc. Combination therapy for the treatment of cancer
WO2017079303A1 (en) 2015-11-02 2017-05-11 The Cleveland Clinic Foundation Sequentially orchestrated immune checkpoint therapy for the treatment and prevention of cancer
FI3389699T3 (fi) 2015-12-15 2024-05-28 Oncoc4 Inc Kimeerisiä ja humanisoituja humaaneja monoklonaalisia ctla4-vasta-aineita ja niiden käyttötapoja
WO2017117521A1 (en) 2015-12-31 2017-07-06 Berkeley Lights, Inc. Tumor infilitrating cells engineered to express a pro-inflammatory polypeptide
US20190241658A1 (en) 2016-01-10 2019-08-08 Modernatx, Inc. Therapeutic mRNAs encoding anti CTLA-4 antibodies
WO2017129790A1 (en) 2016-01-28 2017-08-03 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical composition for the treatment of cancer
US20170233476A1 (en) 2016-02-12 2017-08-17 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibody Therapeutics That Bind CTLA4
US10358496B2 (en) 2016-03-01 2019-07-23 Ralf Kleef Low dose immune checkpoint blockade in metastatic cancer
DK3423087T3 (da) 2016-03-04 2023-12-18 Io Biotech Aps Kombinationsterapi mod cancer
PL3426271T3 (pl) 2016-03-10 2025-11-24 Cg Oncology, Inc. Sposoby leczenia guzów litych terapią skojarzoną
WO2017160717A2 (en) 2016-03-15 2017-09-21 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Method of treating diseases using kinase modulators
SG10201603721TA (en) 2016-05-10 2017-12-28 Agency Science Tech & Res Anti-CTLA-4 Antibodies
CN107400166A (zh) 2016-05-19 2017-11-28 苏州康宁杰瑞生物科技有限公司 针对ctla4的单域抗体及其衍生蛋白
WO2017201502A1 (en) 2016-05-20 2017-11-23 Biohaven Pharmaceutical Holding Company Ltd. Use of glutamate modulating agents with immunotherapies to treat cancer
WO2017210631A1 (en) 2016-06-03 2017-12-07 Bristol-Myers Squibb Company Anti-pd-1 antibody for use in a method of treatment of recurrent small cell lung cancer
SI3468586T1 (sl) * 2016-06-14 2025-01-31 Xencor, Inc. Bispecifična protitelesa za zaviralce kontrolnih točk
US10711312B2 (en) 2016-07-12 2020-07-14 The Regents Of The University Of California Methods for immunotherapy-based treatment and assessment of cancer
GB2567093A (en) 2016-07-15 2019-04-03 Viracta Therapeutics Inc Histone deacetylase inhibitors for use in immunotherapy
WO2018035413A1 (en) 2016-08-18 2018-02-22 The Uab Research Foundation Compositions and methods for cancer immunotherapy
CN106404915B (zh) 2016-08-29 2019-02-19 湖南农业大学 一种细胞牵引力的实时与定量测定方法
US10793632B2 (en) * 2016-08-30 2020-10-06 Xencor, Inc. Bispecific immunomodulatory antibodies that bind costimulatory and checkpoint receptors
CA3040194A1 (en) 2016-10-13 2018-04-19 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Compositions and methods for predicting response and resistance to ctla4 blockade in melanoma using a gene expression signature
EP4491237A3 (en) 2016-10-28 2025-03-26 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating urothelial carcinoma using an anti-pd-1 antibody
US11644467B2 (en) 2016-12-01 2023-05-09 Yale University Prediction of response to immune-modulatory therapies
JP7106538B2 (ja) 2016-12-07 2022-07-26 アジェナス インコーポレイテッド 抗体およびその使用方法
WO2018106862A1 (en) 2016-12-07 2018-06-14 Agenus Inc. Anti-ctla-4 antibodies and methods of use thereof
JP7165995B2 (ja) 2017-02-21 2022-11-07 アールイーエムディー バイオセラピューティクス，インコーポレイテッド 細胞傷害性ｔリンパ球抗原－４（ｃｔｌａ－４）に結合する抗体を使用した癌治療
CN110366565A (zh) 2017-02-28 2019-10-22 百时美施贵宝公司 具有增强的adcc的抗ctla-4抗体增强对疫苗的免疫应答的用途
JP2020513819A (ja) 2017-03-15 2020-05-21 スージョウ ギャラクシー バイオファーマ カンパニー リミテッド Ｃｔｌａ４抗体、医薬組成物およびその使用
WO2018178989A1 (en) 2017-03-30 2018-10-04 Tel Hashomer Medical Research Infrastructure And Services Ltd. Methods for treating melanoma
CN110505882A (zh) 2017-03-31 2019-11-26 默沙东公司 用pd-1的拮抗剂和抗ctla4抗体的组合治疗癌症的组合物和方法
RU2019138067A (ru) 2017-05-02 2021-06-02 Эллигейтор Биосайенс Аб Биспецифическое антитело против ox40 и ctla-4
SG11201910134SA (en) 2017-05-02 2019-11-28 Merck Sharp & Dohme Stable formulations of anti-ctla4 antibodies alone and in combination with programmed death receptor 1 (pd-1) antibodies and methods of use thereof
US11643463B2 (en) 2017-05-19 2023-05-09 Wuxi Biologics (Shanghai) Co., Ltd. Monoclonal antibodies to cytotoxic T-lymphocyte-associated protein 4 (CTLA-4)
WO2018237173A1 (en) 2017-06-22 2018-12-27 Novartis Ag Antibody molecules to cd73 and uses thereof
EP3641752A4 (en) 2017-06-22 2021-03-17 Moonshot Pharma LLC METHOD OF TREATMENT OF CANCER WITH COMPOSITIONS WITH AMLEXANOX AND IMMUNE MODULATORS
TWI799432B (zh) 2017-07-27 2023-04-21 美商再生元醫藥公司 抗ctla-4抗體及其用途
CN109420167B (zh) 2017-08-28 2022-02-11 四川九章生物科技有限公司 一种治疗肿瘤的联合用药物
KR102678252B1 (ko) 2017-09-01 2024-06-26 쓰촨 케룬-바이오테크 바이오파마수티컬 컴퍼니 리미티드 재조합 이중특이적 항체
CA3073984A1 (en) 2017-09-21 2019-03-28 Eucure (Beijing) Biopharma Co., Ltd Anti-ctla4 antibodies and uses thereof
RU2020115161A (ru) 2017-10-06 2021-11-08 Дзе Уистар Инститьют Оф Энэтоми Энд Байолоджи Днк моноклональных антител против ctla-4 для лечения и профилактики рака
CA3081696A1 (en) 2017-11-07 2019-05-16 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Inhibition of ctla-4 and/or pd-1 for regulation of t cells
WO2019113072A1 (en) 2017-12-05 2019-06-13 Intendet Services, Inc. Immune-stimulating peptides and checkpoint inhibitors, and uses thereof for treating cancer

Also Published As

Publication number Publication date
AU2017373944B2 (en) 2022-02-03
ES2963226T3 (es) 2024-03-26
EA201991383A1 (ru) 2019-12-30
US11638755B2 (en) 2023-05-02
EP4289484A2 (en) 2023-12-13
CN119285772A (zh) 2025-01-10
US20180185481A1 (en) 2018-07-05
JP6992068B2 (ja) 2022-02-03
IL307242A (en) 2023-11-01
US11013802B2 (en) 2021-05-25
EP3551660B1 (en) 2023-09-13
US20230330225A1 (en) 2023-10-19
DK3551660T5 (da) 2024-09-02
BR112019011651A2 (pt) 2020-01-07
MX2023007045A (es) 2023-06-23
KR102504605B1 (ko) 2023-03-02
SMT202300440T1 (it) 2024-01-10
MA50949A (fr) 2020-10-14
IL266918B1 (en) 2023-11-01
IL266918A (en) 2019-07-31
EP3551660A1 (en) 2019-10-16
HRP20231579T1 (hr) 2024-03-15
WO2018106862A1 (en) 2018-06-14
SG10201912560YA (en) 2020-02-27
MX2019006340A (es) 2019-11-07
US10912831B1 (en) 2021-02-09
JP2020500538A (ja) 2020-01-16
CA3046205A1 (en) 2018-06-14
IL266918B2 (en) 2024-03-01
JP2024031996A (ja) 2024-03-07
PT3551660T (pt) 2023-11-30
SI3551660T1 (sl) 2024-02-29
HUE065144T2 (hu) 2024-05-28
CN110248961A (zh) 2019-09-17
FI3551660T3 (fi) 2023-12-11
KR20230037664A (ko) 2023-03-16
AU2017373944A1 (en) 2019-06-20
JP7395554B2 (ja) 2023-12-11
LT3551660T (lt) 2023-12-27
DK3551660T3 (da) 2023-12-11
US20210023214A1 (en) 2021-01-28
MA50949B1 (fr) 2023-12-29
AU2022202108B2 (en) 2024-08-22
PL3551660T3 (pl) 2024-02-26
CN110248961B (zh) 2024-11-01
US20210205451A1 (en) 2021-07-08
AU2022202108A1 (en) 2022-04-14
MD3551660T2 (ro) 2024-03-31
EP4289484A3 (en) 2024-03-06
US20250360209A1 (en) 2025-11-27
US12246066B2 (en) 2025-03-11
KR20190100191A (ko) 2019-08-28
JP2022022373A (ja) 2022-02-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7395554B2 (ja) 抗ｃｔｌａ－４抗体およびそれらの使用方法
EP3303394B1 (en) Anti-ctla-4 antibodies and methods of use thereof
RS64576B1 (sr) Anti-tigit antitela i postupci njihove primene
CA3152027A1 (en) Anti-cd96 antibodies and methods of use thereof
HK40105128A (en) Anti-ctla-4 antibodies and methods of use thereof
EA044966B1 (ru) Антитела против ctla-4 и способы их применения
HK40015267B (en) Anti-ctla-4 antibodies and methods of use thereof
HK40015267A (en) Anti-ctla-4 antibodies and methods of use thereof
NZ794974A (en) Anti-ctla-4 antibodies and methods of use thereof
NZ751913A (en) Anti-lag-3 antibodies and methods of use thereof
NZ751913B2 (en) Anti-lag-3 antibodies and methods of use thereof
EA051992B1 (ru) Антитела против lag-3 и способы их применения
HK1253250B (en) Anti-ctla-4 antibodies and methods of use thereof