RS92804A - Piperazinski benzotijazoli kao agensi za lečenje cerebralnih ishemičnih poremećaja ili poremećaja cns - Google Patents

Abstract

Ovaj pronalazak se odnosi na derivate piperazin tijazola, značajnih za upotrebu u lečenju i/ili profilaksi cerebralnih ishemičnih poremećaja ili poremećaja CNS-a. Ovaj pronalazak se takođe odnosi na metode njihove pripreme.

Description

Piperazin benzotijazoli

Polje tehnike

Ovaj pronalazak se odnosi na derivate piperazin tijazola, čija je upotreba značajna u

lečenju i/ili profilaksi cerebralnih ishemičnih poremećaja ili poremećaja CNS-a. Ovaj pronalazak se takođe odnosi na metode njihove pripreme.

Stanje tehnike

Ćelije sisara reaguju na neke ekstracelulalrne stimulanse tako što aktiviraju signalne kaskade posredovane različitim protein-kinazama koje ativira mitogen. (MAPKs). Uprkos razlikama u njihovom odgovoru na uzlazne stimulanse, kaskade MAP kinase su organizovane na sličan način, sastoje se od MAP kinaza kinaza kinaze (MAPKKK ili MEKK), MAP kinaza kinaze (MAPKK ili MKK) i MAP kinaza (MAPK). MAP kinase predstavljaju jednu široku porodicu kinaza koja obuhvata c-Jun N-Terminalne kinaze (JNKs), koje su takođe poznate kao "protein kinaze aktivirane stresom" (SAPKs), kao i kinaze koje reguliše ekstracelularni signal (ERKs) i p38 MAP kinaze. Svaka od ove tri pod-porodice MAP kinaza učestvuje u najmanje tri različite ali paralelne putanje kojima se prenose informacije koje iniciraju spoljašnji stimulansi. JNK signalizacionu putanju aktivira izlaganje ćelija stresu iz životne sredine - kao što su hemijski toksini, zračenje, hipoksija i osmotski šok, kao i tretiranje ćelija faktorima rasta ili pro-inflamatornim citokinima, kao što je faktor tumorske nekroze alfa. (TNF-oc) ili interleukin-1 beta (IL-lp).

Dve MAP kinaza kinaze (poznate kao MKKs ili MAPKKs), tj. MKK4 (poznate takođe

kao JNKK1) i MKK7, aktiviraju JNK dvostrukom fosforilacijom specifičnih ostataka treonina i tirozina lociranih unutar Thr-Pro-Tyr motva na aktivacionoj petlji na enzimu u vidu odgovora na citokine i signale stresa. Čak i dalje uzlazno uz signalizacionu kaskadu, poznato je da se MKK4 sam aktivira preko MAP kinaza kinaza kinase, MEKK 1 fosforilacijom na ostatcima serina i treonina.

Kada se jednom aktivira, JNK se vezuje za N-terminalni region ciljeva faktora transkripcije i fosforilizije transkripcione aktivacione domene što dovodi do uzlazne regulacije ekspresije različitih genskih produkata, što može da dovede do apoptoze, inflamatornih odgovora ili onkogenih procesa. (1).

Neki faktori transkripcije za koje se zna da su supstrati JNK su Jun proteini (c-jun, JunB i Jun D), srodni faktori transkripcije ATF2 i ATFa, faktori transkripcije Ets kao što su Elk-1 i Sap-1, tumorski supresor p53 i protein iz domena ćelijske smrti (DENN).

Tri različita JNK enzima su identifikovana kao proizvodi gena JNK1, JNK2 i JNK3 a identifikovano je i deset različitih izoforma JNK (2). JNK1 i -2 se ubikvitarno eksprimiraju u humanim tkivima, dok se JNK3 eksprimira selektivno u mozgu, srcu i testisima (2). Svaki izoform se vezuje za supstrate sa različitim afinitetom, štoin vivoukazuje na specifičnu regulaciju signalnih puteva preko različitih izoforma JNK.

Aktivacija putanje JNK je dokumentovana kod jednog broja procesa bolesti, što daje razlog za ciljanje ove putanje za otkrivanje leka. Osim toga, molekularno genetičkim pristupima je vrednovana patogena uloga ove putanje kod nekoliko bolesti.

Na primer, autoimune i inflamatorne bolesti potiču od neodgovarajuće aktivacije imunog sistema. Aktivirane imune ćelije eksprimiraju mnoge gene koji kodiraju inflamatorne molekule , uključujući citokine, faktore rasta, receptore na površini ćelija, molekula ćelijske adhezije i degradativne enzime. Za mnoge od ovih gena je poznato da ih reguliše JNK putanja, preko aktivacije faktora transkripcije c-Jun i ATF-2.

Inhibicija aktivacije JNK u bakterijskim makrofagima stimulisanim lipopolisaharidima, efektivno moduliše produkciju ključnog proinflamatornog citokina, TNFa (3).

Inhibicija aktivacije JNK smanjuje aktivaciju faktora transkripcije koji je odgovoran za inducibilnu ekspresiju matričnih metaloproteinaza (MMPs) (4), za koje se zna da su odgovorne za pospešivanje erozije hrskavica i kostiju kod drugih auto-imunih bolesti. JNK kaskada je takođe aktivirana u T ćelijama stimulacijom antigena i ko-stimulacijom CD28 receptora (5) i ona reguliše produkciju IL-2 promotera (6). Neodgovarajuća aktivacija T limfocita inicira i održava mnoge auto-imune bolesti, uključujući astmu, inflamatorni sindrom creva i multipla skleroza.

U neuronima osetljivim na oštećenja usled Alchajmerove bolesti kao i u CA1 neuronima kod pacijenata sa akutnom hipoksijom (7), ekspresija JNK3 proteina je visoka. Utvrđeno je da se JNK3 gen takođe eksprimira u oštećenim regionima mozga kod pacijenata sa Alchajmerovom bolešću (8). Osim toga, nađeno je da neuroni JNK3 KO miševa postaju rezistentni na neuronsku apoptozu izazvanu kainskom kiselinom u poređenju sa neuronima miševa divljeg tipa.

Na osnovu ovih nalaza smatra se daje JNK signalizaciona putanja a posebno ona kod JNK2 i JNK3 implicirana u neurodegenerativnim bolestima koje su rezultat apoptoze kao stoje Alchajmerova bolest, Parkinsonova bolest, epilepsija i konvulzije, Hantingtonova bolest, poremećaju CNSa, traumatske povrede mozga kao i ishemični poremećaji i hemoragijski moždani udari.

Ukazano je da nekoliko malih molekula predstavlja modulatore JNK putanje (WO 00/35909; WO 00/35906; WO 00/3592, WO 00/64872, WO 01/12609, WO 00/75118, WO 01/12621).

WO 01/47920 otkriva derivati benzotijazola kao inhibitore JNK čija je formula (A).

Jedan od opštih problema u lečenju poremećaja CNS, npr. cerebralnih poremećaja, je transport terapijskih jedinjenja u CNS sistem, npr. u mozak. Dobro je poznato da krvno-moždana barijera onemogućava dolazak lekova do CNSa.

Krvno-moždana barijera (BBB) je barijera koja se sastoji od kapilarnih zidova i okolnih neuroglija, koja ograničava prolazak supstanci iz krvi u moždano tkivo.

Krvno-moždana barijera (BBB) održava homeostatsko okruženje u centralnom nervnom sistemu (CNS). Kapilari koji dovode krv do mozga imaju čvrste veze koje blokiraju prolazak većine molekula kroz kapilarne endotelijalne membrane. Iako te membrane omogućavaju prolazak materija koje su rastvorljive u lipidima, kao što su heroin i drugi psihoaktivni lekovi, materije koje se rastvaraju u vodi, kao što su glukoza, protini i amino kiseline ne prelaze preko BBB. Postoje posredovani transportni mehanizmi za transport glukoze i esencijalnih amino kiselina preko BBB. Aktivni transportni mehanizmi uklanjaju molekule koji postaju višak, kao što je kalijum iz mozga, radi opšteg pregleda videti Goldstein i Betz, 1986 i Betz et al, 1994, koji su ovde u celosti uključeni u literaturu. (14; 15).

Kratak prikaz pronalaska

Ovaj pronalazak se odnosi na derivate piperazin tijazola, značajne za upotrebu u lečenju i/ili profilaksi cerebralnih ishemičnih poremećaja ili poremećaja CNS-a. Ovaj pronalazak se takođe odnosi na metode njihove pripreme.

Opis pronalaska

U narednim paragrafima date su definicije različitih hemijskih delova koji čine jedinjenja prema ovom pronalasku a koja treba da se primenjuju podjednako tokom cele ove specifikacije i zahteva osim ukoliko nije eksplicitno drugačije definisano pod uslovom daje definicija šira.

"Cj-Cć -alkil" se odnosi na monovalentne alkilne grupe koje imaju 1 do 6 atoma ugljenika. Ovaj termin je prikazan na primeru grupa kao što su metil, etil, n-propil, izopropil, n-butil, izobutil,tert- but\\,n-heksil i slično.

"Aril" se odnosi na nezasićenu aromatičnu karbocikličnu grupu sa 6 do 14 atoma ugljenika koja ima jedan prsten( npr.,fenilni) ili više kondenzovanih prstenova( npr.,naftilnih). Preferentni aril uključuje fenil, naftil, fenantrenil i slično.

"Ci-Cć-alkil aril" se odnosi na Ci-Cć-alkilne grupe koje imaju jedan arilni supstituent, uključujući benzil, fenetil i slično.

"Heteroaril" se odnosi na monocikličnu heteroaromatičnu, ili bicikličnu ili tricikličnu heteroaromatičnu grupu sa fuzionisanim prstenom. Posebni primeri heteroaromatičnih grupa obuhvataju opciono supstitucionisani piridil, pirolil, furil, tienil, imidazolil, oksazolil, izoksazolil, tiazolil, izotiazolil, pirazolil, 1,2,3-triazolil, 1,2,4-triazolil, 1,2,3-oksadiazolil, 1,2,4-oksadiazolil, 1,2,5-oksadiazolil, l,3,4-oksadiazolil,l,3,4-triazinil, 1,2,3-triazinil, benzofuril, [2,3-dihidro]benzofuril, izobenzofuril, benzotienil, benzotriazolil, izobenzotienil, indolil, izoindolil, 3H-indolil, benzimidazolil, imidazo[l,2-a]piridil, benzotiazolil, benzoksazolil, hinolizinil, hinazolinil, ftalazinil, hinoksalinil, cinolinil, naftiridinil, pirido[3,4-b]piridil, pirido[3,2-b]piridil, pirido[4,3-b]piridil, hinolil, izohinolil, tetrazolil, 5,6,7,8-tetrahidrohinolil, 5,6,7,8-tetrahidroizohinolil, purinil, pteridinil, karbazolil, ksantenil ili benzohinolil.

"Ci-Cć-alkil heteroaril" se odnosi na CpCć-alkilne grupe koje imaju heteroarilni substituent, uključujući 2-furilmetil, 2-tienilmetil, 2-(lH-indol-3-il)etil i slično.

"C2-C6-alkenil" se odnosi na alkienilne grupe koje preferentno imaju od 2 do 6 atoma ugljenika i imaju najmanje 1 ili 2 mesta alkienilne nezasićenosti. Preferentne alkienilne grupe uključuju etenil (-CH=CH2), n-2-propenil (allil, -CH2CH=CH2) i slično.

"C2-C6-alkenil aril" se odnosi na C2-C6-alkienilne grupe koje imaju jedan arilni supstituent, uključujući 2-fenilvinil i slično.

"C2-C6-alkenil heteroaril" se odnosi na C2-C6-alkienilne grupe koje imaju heteroarilni substituent, uključujući 2-(3-piridinil)vinil i slično.

"C2-C6-alkinil" se odnosi na alkinilne grupe koje preferentno imaju od 2 do 6 atoma ugljenika i imaju najmanje 1-2 mesta alkinične nezasićenosti, preferentne alkinilne grupe uključuju etinil (-C=CH), propargil (-CH2CsCH) i slično.

"C2-C6-alkinil aril" se odnosi naC2-C6-alkinilne grupe koje imaju jedan arilni supstituent, uključujući feniletinil i slično.

"C2-C6-alkinil heteroaril" se odnosi naC2-C6-alkinilne grupe koje imaju heteroarilni substituent, uključujući 2-tieniletinil i slično.

"C3-Cg-cikloalkil" se odnosi na zasićenu karbocikličnu grupu sa 3 do 8 atoma ugljenika koja ima jedan prsten( npr.,cikloheksil) ili više kondenzovanih prstenova( npr.,norbornil). Preferentni cikloalkil obuhvata ciklopentil, cikloheksil, norbornil i slično.

"Heterocikloalkil" se odnosi na C3-C8-cikloalkilnu grupu prema gornjoj definiciji, u kojoj je do 3 atoma ugljenika zamenjeno heteroatomima odabranim iz grupe koja se sastoji od 0, S, NR, R koji su definisani kao vodonik ili metil. Preferentni heterocikloalkil obuhvata pirolidin, piperidin, piperazin, 1-metilpiperazin, morfolin i slično.

"Ci-Cć-alkil cikloalkil" se odnosi na Ci-C6-alkilne grupe koje imaju cikloalkilni substituent, uključujući cikloheksilmetil, ciklopentilpropil i slično.

"Ci-Cć-alkil heterocikloalkil" se odnosi na Ci-C6-alkilne grupe koje imaju heterocikloalkilni substituent, uključujući 2-(l-pirolidinil)etil, 4-morpholinilmetil, (1-metil-4-piperidinil)metil i slično.

"Karboksi" se odnosi na grupu-C(0)OH.

"Ci-Cć-alkil karboksi" se odnosi na Ci-C5-alkilne grupe koje imaju karboksi substituent, uključujući 2-karboksietil i slično.

"Acil" se odnosi na grupu-C(0)R što je naznačeno time da R obuhvata "Ci-C6-alkil", "aril", "heteroaril", "C,-C6-alkil aril" ili "C,-C6-alkil heteroaril".

"CpCć-alkil acil" se odnosi na d-Cć-alkilne grupe koje imaju acilni substituent, uključujući 2-acetiletil i slično.

"Aciloksi" se odnosi na grupu-OC(0)R što je naznačeno time da R obuhvata "Ci-Cć-alkil", "aril", "hetero-aril", "C,-C6-alkil aril" ili "CrC6-alkil heteroaril".

"Ci-C6-alkil aciloksi" se odnosi na Ci-Cć-alkilne grupe koje imaju aciloksi substituent, uključujući 2-(acetiloksi)etil i slično.

"Alkoksi" se odnosi na grupu-O-R što je naznačeno time da R obuhvata "Ci-Ce-alkil" ili "aril" ili "hetero-aril" ili "C,-C6-alkil aril" ili "Ci-C6-alkil heteroaril". Preferentne alkoksi grupe obuhvataju na primer metoksi, ethoksi, fenoksi i slično.

"Ci-C6-alkil alkoksi" se odnosi naCi-Cs-alkilne grupe koje imaju alkoksi substituent, uključujući 2-ethoksietil i slično.

"Alkoksikarbonil" se odnosi na grupu-C(0)OR što je naznačeno time da R obuhvata H, "Ci-C6-alkil" ili "aril" ili "heteroaril" ili "Ci-C6-alkil aril" ili "CrC6-alkil heteroaril".

"Ci-Cć-alkil alkoksikarbonil" se odnosi na C|-C6-alkilne grupe koje imaju alkoksikarbonilni substituent, uključujući 2-(benziloksikarbonil)etil i slično.

"Aminokarbonil" se odnosi na grupu-C(0)NRR' što je naznačeno time da svako R, R' uključuje nezavisno vodonik ili Ci-C6-alkil ili aril ili heteroaril ili "Cj-Cć-alkil aril" ili "Cj-Ce-alkil hetero-aril".

"Ci-C6-alkil aminokarbonil" se odnosi na C]-C6-alkilne grupe koje imaju aminokarbonilni substituent, uključujući 2-(dimetilaminokarbonil)etil i slično.

"Acilamino" se odnosi na grupu-NRC(0)R' što je naznačeno time daje svako R, R' nezavisno vodonik ili "Ci-C6-alkil" ili "aril" ili "heteroaril" ili "Ci-Cć-alkil aril" ili "Ci-Cć-alkil heteroaril".

"Ci-Cć-alkil acilamino" se odnosi na C|-C6-alkilne grupe koje imaju acilamino substituent, uključujući 2-(propionilamino)etil i slično.

"Ureido" se odnosi na grupu-NRC(0)NR'R" što je naznačeno time daje svako R, R', R" nezavisno vodonik ili "C]-C6-alkil" ili "aril" ili "heteroaril" ili "C1-C6-alkil aril" ili "CrC6-alkil heteroaril" "cikloalkil" ili "heterocikloalkil", što je naznačeno time da R' i R", zajedno sa atomom azota sa kojim su vezani, mogu opciono da formiraju heterocikloalkilni prsten sa 3-8 članova.

"C|-Cg-alkil ureido" se odnosi na Ci-Cs-alkilne grupe koje imaju ureido substituent, uključujući 2-(<y>V'-metilureido)etil i slično.

"Amino" se odnosi na grupu-NRR' što je naznačeno time daje svako R,R' nezavisno vodonik ili "C|-C6-alkil" ili "aril" ili "heteroaril" ili "C,-C6-alkil aril" ili "Ci-C6-alkil heteroaril", ili "cikloalkil", ili "heterocikloalkil", što je naznačeno time da R i R', zajedno sa atomom azota sa kojem su vezani, mogu opciono da formiraju heterocikloalkilni prsten sa 3-8 članova.

"Ci-Cć-alkil amino" se odnosi naCi-Cs-alkilne grupe koje imaju amino substituent, uključujući 2-(l-pirolidinil)etil i slično.

"Amonijum" se odnosi na pozitivno naelektrisanu grupu -N<+>RR'R", što je naznačeno time daje svako R,R',R" nezavisno "C,-C6-alkil" ili "Ci-C6-aIkil aril" ili "CrC6-alkil heteroaril", ili "cikloalkil", ili "heterocikloalkil", stoje naznačeno time da R i R', zajedno sa atomom azota sa kojem su vezani, mogu opciono da formiraju heterocikloalkilni prsten sa 3-8 članova.

"Halogen" se odnosi na floro, horo, Romo i jodo atome.

"Sulfoniloksi" se odnosi na grupu -OSO2-R što je naznačeno time daje R odabrano među H, "Ci-C6-alkil", "Ci-Cć-alkil" supstitucionisanih sa helogenima,npr.,jedna -OSO2-CF3 grupa, "aril", "heteroaril", "C,-C6-alkil aril" ili "CrC6-alkil heteroaril".

"C]-C6-alkil sulfoniloksi" se odnosi naCi-C6-alkilne grupe koje imaju sulfoniloksi substituent, uključujući 2-(metilsulfoniloksi)etil i slično.

"Sulfonil" se odnosi na grupu "-SO2-R" što je naznačeno time daje R odabrano među II, "aril", "heteroaril", "Ci-Cć-alkil", "Ci-C6-alkil" supstitucionisanih sa helogenima,npr.,kao što su -SO2-CF3grupa, "C,-C6-alkil aril" ili "C,-C6-alkil heteroaril".

"Ci-Cć-alkil sulfonil" se odnosi na C]-C6-alkilne grupe koje imaju sulfonilni substituent, uključujući 2-(metilsulfonil)etil i slično.

"Sulfinil" se odnosi na grupu "-S(0)-R" što je naznačeno time da je R odabrano među H, "Ci-Cć-alkil", "Ci-Ce-alkil" supstitucionisanih sa helogenima,npr. kao što siz-SO-CFagrupa, "aril", "heteroaril" , "CrC6-alkil aril" ili "Ci-C6-alkil heteroaril".

"Ci-Cć-alkil sulfinil" se odnosi na CpCs-alkilne grupe koje imaju sulfinilni substituent, uključujući 2-(metilsulfinil)etil i slično.

"Sulfanil" se odnosi na grupe -S-R što je naznačeno time da R obuhvata "Ci-Cć-alkil" ili "aril" ili "hetero-aril" ili "C,-C6-alkil aril" ili "C,-C6-alkil heteroaril". Preferentne sulfanil grupe obuhvataju metilsulfanil, etilsulfanil, i slično.

"Ci-C6-alkil sulfanil" se odnosi naC|-C6-alkilne grupe koje imaju sulfanil substituent, uključujući 2-(etilsulfanil)etil i slično.

"Sulfonilamino" se odnosi na grupu -NRSCh-R' stoje naznačeno time da svako R, R' is nezavisno vodonik ili "Ci-C6-alkil" ili "aril" ili "heteroaril" ili "Ci-C6-alkil aril" ili "Q-C6-alkil heteroaril".

"Ci-Cb-alkil sulfonilamino" se odnosi na Ci-Cć-alkilne grupe koje imaju sulfonilamino substituent, uključujući 2-(etilsulfonilamino)etil i slično.

"Supstitucionisani ili nesupstitucionisani" : Ukoliko nije drugačije definisano definicijom nekog individualnog supstituenta, gore navedene grupe, kao što su "alkilna", "alkenilna", "alkinilna", "arilna" i "heteroarilna" itd. grupa mogu opciono da budu supstitucionisane sa ldo 5 substituenata odabranih iz grupe koja se sastoji od "Ci-Cć-alkil", "C2-C6-alkenil", "C2-C6-alkinil", "cikloalkil", "heterocikloalkil", "C,-C6-alkil aril", "C,-C6-alkil heteroaril", "C,-C6-alkil cikloalkil", "C,-C6-alkil heterocikloalkil", "amino", "amonijum", "acil", "aciloksi", "acilamino", "aminokarbonil", "alkoksikarbonil", "ureido", "aril", "heteroaril", "sulfinil", "sulfonil", "alkoksi", "sulfanil", "halogen", "karboksi", trihalometil, cijano, hidroksi, merkapto, nitro i slično. Umesto toga, navedena supstitucija može takođe da uključuje situacije u kojima je kod susednih supstituenata došlo do zatvaranja prstena, posebno kada su uključeni obližnji funkcionalni supstituenti, i na taj način formiranjanpr.,laktama, laktona, cikličnih anhidrida, ali isto tako i acetala, tioacetala, aminala formiranih zatvaranjem prstena, kao što je to na primer slučaj pri pokušaju da se dobije protektivna grupa.

"Farmaceutski prihvatljive soli ili kompleksi" se odnosi na soli ili komplekse dole navedenih jedinjenja čije su formule (I) i (U) koja zadržavaju željenu biološku aktivnost. Primeri takvih soli su bez ograničavanja na soli dobijene dodavanjem kiselina formiranih uz pomoć neorganskih kiselina( npr.,hlorovodonična kiselina, bromovodonična kiselina, sumporna kiselina, fosforna kiselina, azotna kiselina i slično), i soli formirane sa organskim kiselinama kao što su sirćetna kiselina, oksalna kiselina, vinska kiselina, ćilibarna kiselina, jabučna kiselina, fumarna kiselina, maleinska kiselina, askorbinska kiselina, benzojeva

kiselina, štavna kiselina, pamoična kiselina, alginska kiselina, poliglutaminska kiselina, naftalinsulfo kiselina, naftalindisulfo kiselina i poli-galakturna kiselina. Navedena jedinjenja se takođe mogu davati kao farmaceutski prihvatljive kvaternarne soli koje su poznate stručnjacima iz ove oblasti, što posebno obuhvata kvaternarnu so amonijuma čija je formula -NR,R',R"<+>Z", što je naznačeno time da su R, R', R" pojedinačno vodonik, alkil, ili benzil, Ci-C6-alkil, C2-C6-alkenil, C2-Cr,-alkinil, C,-C6-alkil aril, Ci-C6-alkil heteroaril, cikloalkil, heterocikloalkil, a Zje suprotni jon, uključujući hloride, bromide, jodide, -O-alkil, toluensulfonat, metilsulfonat, sulfonat, fosfate ili karboksilate (kao što su benzoat, sukcinat, acetat, glikolat, maleat, malat, fumarat, citrat, tartrat, askorbat, cinamonat, mandeloat i difenilacetat).

"Farmaceutski aktivan derivat" se odnosi na bilo koje jedinjenje koje pri davanju primaocu može da obezbedi, direktno ili indirektno, aktivnost koja je ovde opisana.

"Enantiomerni višak" (ee) se odnosi na proizvode koji se dobijaju asimetričnom sintezom, tj. Sintezom koja obuhvata neracemske početne materije i/ili reagense ili sintezu koja obuhvata najmanje jedan enantioselectivni korak, čime se dobija višak jednog enantiomera reda veličine od najmanje oko 52% ee.

Navedena formula takođe obuhvata njene tautomere, njene geometrijske izomere, njene optički aktivne forme u vidu enantiomera, diastereomera i njene racemske forme kao i njihove farmaceutski prihvatljive soli. Preferentne farmaceutski prihvatljive soli formule (I) su soli sa dodatkom kiselina formirane uz pomoć farmaceutski prihvatljivih kiselina kao što su hidrohlorid, hidrobromid, sulfat ili bisulfat, fosfat ili vodonik fosfat, acetat, benzoat, sukcinat, fumarat, maleat, laktat, citrat, tartrat, glukonat, metansulfonat, benzensulfonat, i soli /wa-toluenesulfonata.

Jedinjenja prema ovom pronalasku su ona koja imaju formulu I.

R u formuli (I) odabrano u grupu koja obuhvata ili se sastoji od vodonika, supstitucionisanog ili nesupstitucionisanog CpCg-alkila, supstitucionisanog ili nesupstitucionisanog Ci-Cć-alkil arila, supstitucionisanog ili nesupstitucionisanog heteroarila, supstitucionisanog ili nesupstitucionisanog Ci-Cć-alkil heteroarila, supstitucionisanog ili nesupstitucionisanog C2-C6-alkenila, supstitucionisanog ili nesupstitucionisanog C2-C6-alkenil arila, supstitucionisanog ili nesupstitucionisanog Cj- C(,-alkenil heteroarila, supstitucionisanog ili nesupstitucionisanog C2-C6-alkinila, supstitucionisanog ili nesupstitucionisanog C2-C6-alkinil arila, supstitucionisanog ili nesupstitucionisanog C2-C6-alkinil heteroarila, supstitucionisanog ili nesupstitucionisanog C3-Qrcikloalkila, supstitucionisanog ili nesupstitucionisanog heterocikloalkila, supstitucionisanog ili nesupstitucionisanog Cj-Ce-alkil cikloalkila, supstitucionisanog ili nesupstitucionisanog Ci-Co-alkil heterocikloalkila, supstitucionisanog ili nesupstitucionisanog Ci-Cć-alkil karboksi, acila, supstitucionisanog ili nesupstitucionisanog Ci-Cć-alkil acila, aciloksi, supstitucionisanog ili nesupstitucionisanog Cj-Cć-alkil aciloksi, supstitucionisanog ili nesupstitucionisanog Ci-Cć-alkil alkoksi, alkoksikarbonila, supstitucionisanog ili nesupstitucionisanog Ci-C6-alkil alkoksikarbonila, aminokarbonila, supstitucionisanog ili nesupstitucionisanog Ci-Cć-alkil aminokarbonila, acilamino, supstitucionisanog ili nesupstitucionisanog C)-C6-alkil acilamino, ureido, supstitucionisanog ili nesupstitucionisanog Ci-C6-alkil ureido, amino, supstitucionisanog ili nesupstitucionisanog Ci-Cć-alkil amino, sulfoniloksi, supstitucionisanog ili nesupstitucionisanog C]-C6-alkil sulfoniloksi, sulfonil, supstitucionisanog ili nesupstitucionisanog Ci-C6-alkil sulfonil, sulfinil, supstitucionisanog ili nesupstitucionisanog Ci-Cć-alkil sulfinil, sulfanil, supstitucionisanog ili nesupstitucionisanog Ci-Cć-alkil sulfanil, sulfonilamino, supstitucionisanog ili nesupstitucionisanog Ci-Cć-alkil sulfonilamino.

R<1>odabrano u grupi koja obuhvata ili se sastoji od H, halogena, cijano, nitro, amino, supstitucionisanog ili nesupstitucionisanog CpCć-alkila, posebno C1-C3alkila, kao što je metil ili etil ili -CF3, supstitucionisanog ili nesupstitucionisanog C2-C6-alkenila, supstitucionisanog ili nesupstitucionisanog C2-C6-alkinila, supstitucionisanog ili nesupstitucionisanog Ci-Cć-alkil-arila, supstitucionisanog ili nesupstitucionisanog arila ili supstitucionisanog ili nesupstitucionisanog heteroarila, supstitucionisanog ili nesupstitucionisanog Ci-C6-alkil-heteroarila, -C(0)-OR<2>, -C(0)-R<2>, -C(0)-NR<2>R<2>', -

(S02)R% 2 gde su 2 i 2' nezavisno odabrani iz grupe koja obuhvata ili se sastoji od vodonika, nesupstitucionisanog ili supstitucionisanog Ci-Cćalkila, nesupstitucionisanog ili supstitucionisanog C2-C6alkenila, nesupstitucionisanog ili supstitucionisanog C2-C6alkinila, nesupstitucionisanog ili supstitucionisanog arila, nesupstitucionisanog ili supstitucionisanog heteroarila, nesupstitucionisanog ili supstitucionisanog CpCe-alkil arila, nesupstitucionisanog ili supstitucionisanog CpCć-alkil heteroarila. Poželjno je da R<1>bude H. ili neki ceo broj od 0 do 3, a najpoželjniji je broj 1.

Prema jednom preferentnijem konceptu, derivati piperazin benzotijazola prema ovom pronalasku su oni naznačeni time daje R vodonik, C1-C3alkil, aminokarbonil, Ci-Cć-alkil alkoksikarbonil, Ci-Cć-alkil alkoksi, Ci-Cć-alkil aciloksi, alkoksikarbonil, C|-C6-alkil aminokarbonil. Specifično, R H, ili C1-C3alkil, posebno metilni ili etilni deo, ili Ci-Cć-alkil alkoksi.

Ovaj pronalazak takođe obuhvata odgovarajuće tautomere koji imaju sledeću formulu:

Specifični derivati piperazin tijazola prema ovom pronalasku su odabrani iz sledeće grupe: l,3-benzotiazol-2-il[2-({4-[(4-metilpiperazin-l-il)metil]benzil}oksi)pirimidin-4-iljacetonitril l,3-benzotiazol-2-il[2-({4-[(4-benzil-piperazin-l-il)metil]-benzil}oksi)pirimidin-4-iljacetonitril l,3-benzotiazol-2-il(2-{[4-(piperazin-l-ilmetil)benzil]oksi}pirimidin-4-il)acetonitril 1,3-benzotiazol-2-il[2-({4-[(4-formilpiperazin-l -il)metil]benzU}oksi)pirimidin-4-iljacetonitril

[2-({4-f(4-acetilpiperazin-l-il)metil]benzil}oksi)pirimidin-4-il](l,3-benzotiazol-2-il)acetonitril

(3H-Benzotiazol-2-iliden)-{2-[4-(4-[l,2,4]oksadiazol-3-ilmetil-piperazin-l-ilmetil)-benziloksi]-pirimidin-4-il}-acetonitril

4-(4-{4-[(3H-Benzotiazol-2-iliden)-cijano-metil]-pirimidin-2-iloksimetil}-benzil)-piperazin-l-karboksilna kiselina metil ester

2-[4-(4-{4-[(3H-Benzotiazol-2-iliden)-cijano-metil]-pirimidin-2-iloksimetil}-benzil)-piperazin-1 -il] -acetamide

(2-{4-[4-(2-Amino-acetil)-piperazin-l-ilmetil]-benziloksi}-pirimidin-4-il)-(3H-benzotiazol-2-iliden)-acetonitril

[4-(4-{4-[(3H-Benzotiazol-2-iliden)-cijano-metil]-pirimidin-2-iloksimetil}-benzil)-piperazin-1-il]-metil estar sirćetne kiseline

(3H-Benzotiazol-2-iliden)-(2-{4-[4-(2-metoksi-etil)-piperazin-l-ilmetil]-benziloksi}-pirimidin-4-il)-acetonitril

4-(4-{4-[(3H-Benzotiazol-2-iliden)-cijano-metil]-pirimidin-2-iloksimetil}-benzil)-piperazin-l-dimetilamid karboksilne kiseline

(3H-Benzotijazol-2-iliden)-{2-[4-(4-etil-piperazin-l-i]metil)-benziloksi]-pirirnidin-4-il}-acetonitril

(3H-Benzotiazol-2-iliden)-(2-{4-[4-(2-hidroksi-etil)-piperazin-l-ilrnetil]-benziloksi}-pirimidin-4-il)-acetonitril

Ovaj pronalazak takođe obuhvata geometrijske izomere, optički aktivne forme, enantiomere, diastereomere jedinjenja prema formuli I, kao i njihove racemate i takođe i farmaceutski prihvatljive soli i farmaceutski aktivne derivate piperazin tijazola sa formulom I.

Jedinjenja iz ovog pronalaska su inhibitori JNKs, posebno inhibitori JNK3 i stoga se mogu koristiti u lečenju poremećaja posredovanih sa JNKs. Iznenađujuće je da jedinjenja iz ovog pronalaska pokazuju značajnu sposobnost prelaska preko krvno-moždane barijere (BBB) pa su stoga posebno korisni u lečenju cerebralnih ishemičnih poremećaja ili poremećaja CNS-a. Stoga, naredni aspekt ovog pronalaska podrazumeva upotrebu derivata piperazin tijazola iz ovog pronalaska u lečenju i/ili profilaksi cerebralnih ishemičnih poremećaja ili poremećaja CNS-a.

Naredni aspekt ovog pronalaska se odnosi na upotrebu derivata piperazin tijazola prema formuli I ili II za pripremu farmaceutskih sastava za lečenje cerebralnih ishemičnih poremećaja ili poremećaja CNS-a.

Još jedan predmet ovog pronalaska je proces za pripremu novih derivata benzotijazola prema formulama I ili II. Opšti sintetički pristup jedinjenjima prema formuli I je definisan u shemi I.

Kako je ilustrovano na gornjoj shemi I, početna jedinjenja formule III stupaju u reakciju sa (adekvatno supstitucionisanim (aktiviranim) pirimidinima), kao što su halogeno pirimidinin. 2,4-đihloro-pirimiđin formule VI kako bi se dobila pirimidino-benzotijazolna jedinjenja IV. Preferentno se takve reakcije obavljaju u prisustvu stabilnih baza, npr. natrijum hidrida, kalijum hidrida i slično u bezvodnoj inertnoj atmosferi, preferentno u polarnom rastvaraču kao što je DMF, DMA, MeCN ili THF na temperature u opsegu od oko -78°Cdo 100° C.

Benzotijazole formule III su ili komercijalno dostupni, na primer od Mavbridge Chemical Co. Ltd ili se mogu pripremiti od komercijalno dostupnih jedinjenja uz pomoć konvencionalnih postupaka.

Halogenizovani pirimidini, npr. 2,4-dihloropirimidin formule VI, takođe mogu biti komercijalno dostupni, npr. kod kompanija Aldrich, Fluka, Sigma i slično ili se mogu pripremiti korišćenjem konvencionalnih postupaka.

Za dobijanje finalnih piperazin benzotijazola formule (I), poželjno je da među-jedinjenja formule (IV) stupaju u reakciju sa odgovarajućim alkoholima formule (V), kako je ilustrovano u shemi II.

Ova reakcija se preferentno vrši u prisustvu rastvarača kao što su DMF, DMA, NMP, DMSO ili ACN, a najpreferentnije u prisustvu DMA ili MeCN, u prisustvu pogodne baze kao što je tBuOK, CS2C03 (Cezijum karbonat) sa ili bez Cul, NaH, ili slično, a najpreferentnije NaH, na temperaturi opsegu od oko 25 to 120°C. Kod jedne preferentne metode, početna jedinjenja se zagrevaju na 25° do 100°C u rastvoru u DMA u prisustvu NaH.

Među-jedinjenja (V) se mogu dobiti sintetičkim pristupom koji je ilustrovan u shemi III. U navedenoj shemi III početni građevinski blok je metil-p-toluat koji služi za pripremu benzil alkohola. U slučaju fenetilalkohola ili fenilpropil alkohola prema formuli (V), metil-/?-toluat se može zameniti odgovarajućim početnim materijalom, koji je komercijalno dostupan uli se priprema uz pomoć konvencionalnih metoda.

U smislu u kom je ovde korišćen, termin "tretiranje" se odnosi na inhibiciju ili zaustavljanje razvoja bolesti, poremećaja ili stanja i/ili izazivanje smanjenja, remisije ili regresije simptoma bolesti, poremećaja ili stanja. Stručnjaci iz ove oblasti će razumeti sa se mogu koristiti različite metodologije i eseji za procenu razvoja bolesti, poremećaja ili stanja, a slično tome, različite metodologije i eseji se mogu koristiti za procenu smanjenja, remisije ili regresije simptoma bolesti, poremećaja ili stanja.

Kada se koriste kao lekovi, derivati piperazin tijazola iz ovog pronalaska se tipično daju u vidu nekog farmaceutskog sastava. Stoga su farmaceutski sastavi koji sadrže jedinjenje formule I i neki farmaceutski prihvatljiv nosač, rastvarač ili eksicipijent takođe u delokrugu ovog pronalaska. Stručnjak iz ove oblasti će svestan različitosti takvih nosača, rastvarača i ekscipijenata koji su pogodni za formulisanje nekog farmaceutskog sastava. Takođe, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenja koja će se koristiti kao lek.

Jedinjenja iz ovog pronalaska, zajedno sa uobičajeno upotrebljavanim adjuvantom, nosačem,, rastvaračem ili ekscipijentom mogu se koristiti u vidu farmaceutskih formulacija i njihovih jediničnih doza, a u takvim formama mogu se koristiti u solidnim oblicima, kao što su tablete ili napunjene kapsule ili u tečnim oblicima, kao što su rastvori, suspenzije, emulzije, eliksiri ili kapsule punjene njima, sve za oralnu upotrebu, ili u obliku sterilnih rastvora za injekcije za parenteralnu upotrebu (uključujući i subkutanu upotrebu). Takvi farmaceutski sastavi i njihovi oblici jedinica doza mogu sa sadrže sastojke u uobičajenim srazmerama, sa ili bez dodatnih aktivnih jedinjenja ili principa, a takvi oblici jedinica doza mogu sa sadrže bilo koju pogodnu efektivnu količinu aktivnog sastojka koja je jednaka planiranoj dnevnoj dozi koja će se koristiti.

Farmaceutski sastavi iz ovog pronalazaka se mogu davati na različite načine, uključujući oralni, rektalni, transdermalni, subkutani, intravenski, intramuskularni, intratekalni, intraperitonealni i intranazalni. U zavisnosti od planiranog načina davanja, prave se preferentne formulacije jedinjenja u vidu sastava za injekcije, površinsku ili oralnu upotrebu. Formulacije za oralnu primenu mogu biti u vidu nezapakovanih tečnih rastvora ili suspenzija ili nezapakovanog praha. Međutim, ove formulacije su češće pakovane u vidu jediničnih oblika doza kako bi se olakšalo tačno doziranje. Termin "jedinični oblici doza " se odnosi na fizički odvojene jedinice pogodne za jednako doziranje kod humanih Ispitanika i drugih sisara, gde svaka jedinica sadrži prethodno određenu količinu aktivne materije za koju je izračunato da daje željeni terapijski efekat i koja je udružena sa pogodnim farmaceutskim ekscipijentom tipični jedinični oblici doza obuhvataju prethodno napunjene i prethodno izmerene ampule, špriceve sa tečnim formulacijama ili pilule, tablete, kapsule ili slično kad su u pitanju solidne formulacije. Kod takvih formulacija, jedinjenje piperazin benzotijazol obično predstavlja manju komponentu (od oko 0.1 do oko 50% težine ili od oko 1 do oko 40% težine) dok ostatak čine različiti nosači i ekscipijenti koji pomažu preradu radi formulisanja željenih oblika doza.

Tečni oblici pogodni za oralnu administraciju mogu da uključuju odgovarajuće vodene ili ne-vodene nosače sa puferima, agense za suspenziju ili dispenziju, kolorante, arome i slično. Solidni oblici mogu na primer da obuhvataju neki od sledećih sastojaka ili jedinjenja slične prirode. Agens za tabletiranje kao što je mikrokristalna celuloza, tragakant gumu ili želatin; ekscipijent kao stoje škrob ili laktoza, agens za dezintegraciju kao što je alginska kiselina, Primogel ili kukuruzni škrob, lubrikant, kao što je magnezijum stearat; glidant kao stoje koloidni silikon dioksid; zaslađivač kao što je saharoza ili saharin ili aromu kao što je pepermint, metil salicilat ili aroma pomorandže.

Formulacije za injekcije se obično zasnivaju na sterilnom fiziološkom rastvoru za injekcije ili rastvoru sa fosfatnim puferom ili drugim nosačima za injekcije koji su poznati u ovoj stručnoj oblasti. Kako je gore pomenuto, derivat piperazin tijazola formule I u takvim jedinjenjima obično predstavlja manju komponentu, koja se četo kreće između 0.05 i 10% po težinu, dok ostatak predstavlja injektabilni nosač i slično.

Gore opisane formulacije za oralnu administraciju ili injekcije su samo reprezentativne. Drugi materijali kao i tehnike prerade i slično definisani su u Delu 8 Remingtonovih farmaceutskih nauka( Remington ' s Pharmaceutical Sciences,17<th>Edition, 1985, Marck Publishing Companv, Easton, Pennsilvania) koje su ovde uključene u okviru literature.

Jedinjenja iz ovog pronalaska se takođe mogu davati u formulacijama sa produženim oslobađanjem ili uz korišćenje sistema za davanje laka sa produženim osobađanjem. Opis primera materijala za produženo osobađanje se može rakođe naći u materijalima uključenim uRemingtonove farmaceutske nauke.

U narednom tekstu ovaj pronalazak će biti ilustrovan uz pomoć nekih primera koje ne treba tumačiti kao ograniučavajuće u domenu ovog pronalaska.

U narednom tekstu ovaj pronalazak će biti ilustrovan uz pomoć nekih primera koje ne treba tumačiti kao ograniučavajuće u domenu ovog pronalaska.

Podatci dobijeni uz pomoć HPLC, NMR i MS koji su dati u primerima koji su dole opisani dobijeni su na sledeći način: HPLC: kolona Waters Symmetry C8 50 x 4.6 mm, Uslovi: a-MeCN/H20 0.09% TFA, 0 do 100% (10 min); b- MeCN/H20, 5 do 100% (8 min), max plot 230-400 nm; Maseni spektri: PE-SCIEX API 150 EX (APCI i ESI), LC/MS spektri: Waters ZMD (ES); 'H-NMR: Bruker DPX-300MHz.

Purifikacije su urađene na sledeći način: Preparativna HPLC Waters Prep LC 4000 sistem opremljen sa kolonama Prep Nova-Pak<®>HR Cl86 um 60A, 40x30mm (do lOOmg) ili 40x300 mm (dolg). Sve purifikacije su urađene sa gradijentom od MeCN/H20 0.09% TFA.

Primer A: Priprema među- jedinjenja ( IV) : ( videti shemu 1)

L3- benzotiazol- 2- il( 2- hloro- 4- pirimidinil)- acetonitril

U promešanu suspenziju NaH (60% u ulju , 9.2 g, 0.23 mol) u suvom THF (200 ml) dodat je kap po kap u inertnoj atmosferi rastvor l,3-benzotiazol-2il-acetonitrila (20 g, 0.15 mol) u suvom THF (200 ml). Posle lh30 mešanja na s.t., rastvor 2,4-dihloropiri-midina (17.1 g, 0.15 mol) u suvom THF (200 ml) dodat je kap po kap . Reakciona mešavina je ostavljena da se izmeša u inertnoj atmosferi na s.t. sve do potpunog nestanka početnog materijala. Reakcija je kvenčovana dodavanjem vode a THF je uparen. Dodata je voda a suspenzija je blago acidifikovana vodenim rastvorom HC1 IM. Dobijeni precipitat je isfiltriran i temeljno ispran vodom sve dok nije postao neutralan a potom heklanom kako bi se uklonilo ulje. Sirova solidna materija je osušena pod vakumom na temperaturi od 40°C, što je dalo 28 g (84 %) naslovnog jedinjenja u vidu svetio smeđeg praha: mp 246°C dec; MS: 286.8 (M+l); HPLC (Uslovi a, 268 nm) 97%, rt.5.66 min; 'HNMR (DMSO-d6) 5 13.25 (br s, IH, izmenljiv), 8.09 (d,J =4.14 Hz, IH), 7.90 (d, J = 7.53 Hz, IH), 7.61(d, J= 7.92 Hz, IH), 7.39-7.34 (m, IH), 7.20-7.15 (m, IH), 6.96 (br d, IH).

CHN analiza: C13H7CIN4S: Izračunato: C, 54.19 %, H 2.48 %, N 19.45 %; Nađeno : C 53.35 %, H 2.77 %, N 17.62 %

Primer B : Priprema među- jedinjenja ( Va), ( videti shemu 3)

( 4-( 4- Metil- piperazin- 1 - ilmetil- fenil)- metanol

Korak 1: Metil-p-toluat

U rastvor/?-toluilske kiseline (175g, 1.28mol) u metanolu (2L) dodat je kap po kap tionilhlorid (612g, 5.14mol) uz mešanje na 5°C. Ova mešavina je refluksovana tokom noći a potom je rastvarač uparen. Dobijeni ostatak je tretiran sa 10% vodenim rastvorom NaHC03(pH~8). Proizvod je ekstrahovan sa etil acetatom, ispran vodom i osušen. Rastvarač ke uklonjen a sirova materija je purifikovana uz pomoć hromatografije sa kolonom (pet etar/etil acetat) da bi se dobio metil-/?-toluat u vidu bezbojne tečnosti (180g, 93%).

Korak 2: 4-Metoksi karbonil benzil bromid

U mešavinu metil-/?-toluata (180g, 1.2mol) i N-bromosukcimida (235g, 1.32mol) u CC14(2L) dodat je u delovima benzoil peroksid (18g, 0.1 puta) na 50°C. Ova mešavina je refluksovana tokom 5h. Potom je mešavina ostavljena da se ohladi do 40°C pa je potom solidni deo filtriran. Filtrat je koncentrisan i dobijen je 4-metoksi karbonil benzil bromid (252g, 91%) u vidu svetio žute tečnosti..

Korak 3: N-metil(4-Metoksikarbonilbenzil)piperazin

U rastvor N-metil piperazina (80g, 0.91 mol) i trietilamina (232g, 2.29mol) u apsolutnom alkoholu (1750 ml) dodat je kap po kap na 0°C rastvor 4-metoksikarbonil-benzil bromida (252g, 1.1034 mol) u apsolutnom alkoholu (250 ml). Ta mešavina je mešana preko noći na ST. Potom je mešavina koncentrisana a dobijeni ostatak je stavljen u 1.5NHCl(3L)i potom ispran dietil etrom (3 puta) i etil acetatom. Rastvor je neutralisan sa 10% vodenim rastvorom NaOH i bazifikovan do pH=8 uz pomoć 10% vodenog rastvora NaHC03. Proizvod je ekstrahovan sa CHCI3, ispran vodom I slanim rastvorom i potom osušen na Na2S04. Rastvarač je uklonjen a sirova materija purifikovan uz pomoć hromatografije sa kolonom CHCVMeOH kako bi se dobio N-metil(4-metoksi karbonil benzil) piperazin (150g, 70%) u vidu smeđe tečnosti.

Korak 4: (4-(4-Metil-piperazin-l-ilmetil-fenil)-metanol

U mešavinu LAH (36g, 0.957mol) u suvom THF (1750 ml) dodat je kap po kap na 0°C u prisustvu N2 rastvorjV-(4-metoksikarbonil benzil) bromida (150g, 0.638mol) u suvom THF (250 ml). Ta mešavina je mešana preko noći na ST u prisustvu N2, potom kvenčovana sa 10%o vodenim rastvorom NaOH. Čvrsta materija je isfiltrirana a filtrat je koncentrisan. Ostatak je unet u DCM (IL) i ispran vodom. Rastvarač je uparen i dobijen je iV-metil(4-hidroksimetilbenzil)piperazin (96g, 73%) u vidu svetio žute tečnosti.

M<+>(ES):221.2

'H NMR (DMSO-c/6) 5 7.26-7.19 (m, 4H), 5.11(t, 7=5.65 Hz, IH), 4.45(d, J=5.65 Hz, 2H), 3.40 (s, 2H), 3.39-2.20 (m, 8H), 2.12 (s, 3H)

Na sličan način se mogu dobiti sledeća među-jedinjenja.

(3-(4-Metil-piperazin-l-ilmetil-fenil)-metanol

*H NMR (DMSO-ć/6) 5 7.27-7.11 (m, 4H), 5.17-5.13 (m, IH), 4.48-4.46 (m, 2H), 3.41 (s, 2H), 2.41-2.21 (m, 8H), 2.13 (s, 3H)

4-(4-Hidroksimetil-benzil)-piperazin-l- tert-butil ester karboksilne kiseline M<+>(ES): 307.2

'H NMR (DMSO-c/6) 5 7.27-7.21(m, 4H), 5.12 (t, J= 5.65 Hz,IH), 4.46( d, J=5.65 Hz, 2H), 3.43 (s, 2H), 3.28 (br t, 4H), 2.27 (t,J=4.9Hz, 4H), 1.40 (s, 9H).

{4-[(4-etilpiperazin-l-il)metil]fenil}metanol

Y= 78 %, M<+>(ES): 235.3;

'H NMR(DMSO-rftf)5 7.26-7.19 (m, 4H), 5.12 (t,J =5.6 Hz, 1H), 4.46 (br d, 2H), 3.33 (s, 2H), 2.44-2.20 (m, 8H), 2.27 (q,J=7.2 Hz, 2H), 0.95 (t,J=7.2 Hz, 3H).

(4- {[4-(2-metoksietil)piperazin-1 -iljmetil} feniljmetanol

Y= 66%, M+(ES):265;

'H NMR ( DMSO- d6) 57.23-7.22 (m,4H), 5.11 (t, 7=5.7 Hz, IH), 4.45 (br d, 2H), 3.40 (s, 2H), 3.38( t, J=5.9 Hz, 2H), 3.20 (s, 3H), 2.42( t, J=5.9 Hz, 2H), 2.48-2.25 (m, 8H).

(4-{[4-benzil-piperazin-l-iljmetil }fenil)metanol; Y = 78%, M+(ES): 297

Primer 1: Priprema l, 3- benzotiazol- 2- il[ 2-({ 4- r( 4- metilpiperazin- l- il) metil1-benzil} oksi) pirimidin- 4- il"| acetonitril ( so trimesilata) ( videti shemu 2)

To a suspenzija of NaH (60% u ulju , 1.68 g, 69.75 mmol) u suvom DMA (80 ml) dodat je rastvor (4-(4-metil-piperazin-l-ilmetil-fenil)-metanol (formula jedinjenja V u shemi 2)

(7.68 g, 34.88 mmol) u suvom DMA (80 ml). Dobijena suspenzija je mešana lh na s.t. u inertnoj atmosferi. Rastvor IV (5g, 17.44 mmol) u DMA (80 ml) dodat je kap po kap a suspenzija je mešana na 100°C u inertnoj atmosferi. Posle 4 sata reakcija je ohlađena i

kvenčovana dodavanjem vode. Rastvarači su upareni a ostatak je unet u vodu (lOOml). 10 mL of EtOAc i cikloheksan su dodati kako bi se uhvatilo rezidualno ulje iz NaH a rastvor je čuvan na4°C tokom jednog dana. Formirani precipitat isfiltriran i ispiran vodom sve do neutralne pH vrednosti a potom cikloheksanom, što je dalo 6.17 g sirove baze.

3.5 g sirove baze je uneto u vodu (125 ml) i dodato je 1.25 ml metan sulfokiseline . Rastvor je liofilizoivan kako bi se dobila narandžasto žuta solidna materija koja je isprana sa ACN i osušena pod vakumom na 30°C kako bi se dobilo 4.99 g (prinos = 66 %) naslovnog jedinjenja u vidu žutog praha.

M"(ESI): 469.1; M<+>(ESI): 471.16; HPLC (Uslovi b, max plot) %, st. 2.01 min.

'H NMR( DMSO- d6)8 10.30 (IH), 8.06-8.03 (m, 2H), 7.82 (d,J=8.3 Hz, IH), 7.76 (d,J= 7.9 Hz, 2H), 7.69 (d,J=7.9 Hz, 2H), 7.56-7.51 (m, IH), 7.40-7.35 (m, IH), 6.88 (br d, IH), 5.82 (s, 2H), 4.52 (s, 2H), 3.85-3.57 (m, 4H), 3.48-3.26 (m, 4H), 2.95 (s, 3H), 2.48 (s, 9H).

Primer 2: Priprema of l, 3- benzotiazol- 2- ilf2-({ 4-[( 4- benzil- piperazin- l- il) metil]-benzil} oksi) pirimidin- 4- il] acetonitril ( 2Mes)

Naslovno jedinjenje je dobijeno primenom istog protokola koji je defmisan u gornjem primeru 1, što je naznačeno time da se (4-(4-benzil-piperazin-1 -ilmetil-fenil)-metanol koristi umesto (4-(4-metil-piperazin-l-ilmetil-fenil)-metanola.

Y: 42 %; M"(ESI) 545.7; M<+>(ESI) 547.2; HPLC (Uslovi b, max plot) 99.8 %, rt. 2.52 min.

'H NMR( DMSO- d6)5 7.95-7.93 (m, 2H), 7.73(d, J=7.9 Hz, IH), 7.67-7.64 (m, 2H), 7.56-7.40 (m, 8H), 7.29-7.24 (m, IH), 6.75 (br d, IH), 5.73 (s, 2H), 4.45-4.15 (m, 4H), 3.60-3.30 (m, 4H), 3.25, 2.90 (m, 4H).

Primer 3: Priprema( 3H- Benzotiazol- 2- iliden)-{ 2-[ 4-( 4- etil- piperazin- l- ilmetil)-benziloksil- pirimidin- 4- il}- acetonitrila

Naslovno jedinjenje je dobijeno je primenom istog protokola koji je definisan u gornjem primeru 1, što je naznačeno time da se {4-[(4-etilpiperazin-l-il)metil]fenil}metanol koristi umesto (4-(4-metil-piperazin-1 -ilmetil-fenilj-metanola.

Y=: 83 %, M<+>(ES): 485.18; HPLC (Uslovi b, max plot) 97.8 %, rt. 2.06 min.

'HNMR(DMSO-Jfi) 5 7.95 (d,J=7.9Hz,IH), 7.90 (br d, IH), 7.74 (d, .7=7.9 Hz, IH), 7.67 (d,J=7.9 Hz, 2H), 7.58 (d, ./= 7.9 Hz, IH), 7.45-7.40 (m, IH), 7.30-7.24 (m, IH), 6.73 (br d, IH), 5.73 (s, 2H), 4.32 (s, 2H), 4.42-4.23 (m, 2H), 3.76-3.38 (m, 4H), 3.32-2.89 (m, 4H), 1.21( t, J=7.1 Hz, 3H)

Primer 4: Priprema ( 3H- Benzotiazol- 2- iliden)-( 2-{ 4-[ 4-( 2- metoksi- etil)- piperazin- l-ilmetil1- benziloksi}- pirimidin- 4- il)- acetonitrila ( 3TFA)

Naslovno jedinjenje je dobijeno je primenom istog protokola koji je definisan u gornjem primeru 1, što je naznačeno time da se (4-{[4-(2-metoksietil)piperazin-l-il]metil}fenil)metanol koristi umesto (4-(4-metil-piperazin-l-ilmetil-fenil)-metanola.

Y=: 33 %, M<+>(ES): 515.06; HPLC (Uslovi b, max plot) 99.5 %, rt. 2.10 min.

*H NMR ( DMSO- d6) 8 7.93(d, J= 7.9 Hz, IH), 7.87 (br d, 1H),7.74 (d, J = 8.3 Hz, IH), 7.63 (d,J=7.9 Hz, 2H), 7.50( d, J=7. 9 Hz, 2H), 7.44-7.39 (m, IH), 7.28-7.23 (m, IH), 6.70 (br d, IH), 5.71 (s, 2H), 4.10 (s, 2H), 3.63-3.60 (m, 2H), 3.50-2.90 (m, 13H).

Primer 5: Priprema l, 3- benzotiazol- 2- il( 2-{[ 4-( piperazin- l- ilmetil) benzil] oksi}- pirimidin-4- il) acetonitrila ( 3TFA)

Naslovno jedinjenje je dobijeno je primenom istog protokola koji je definisan u gornjem primeru 1, stoje naznačeno time da se 4-(4-Boc-piperazin-l-ilmetil-fenil)-metanol koristi umesto (4-(4-metil-piperazin-l-ilmetil-fenil)-metanola . Tako je dobijena Boe zaštićena sirova baza.

Boe zaštićena sirova baza je stavljena u mešavinu DCM/TFA (9:1) i mešana 2 sata na s.t. DCM je uparen na s.t. Urađena je trituricija ostatka u etru i on je potom filtrirani i osušen pod vakumom na s.t. PN (preko noći). Posle purifikacije uz pomoć preparativne HPLC, čiste frakcije su prikupljene i liofilizovane dajući 3.03g (34%) naslovnog jedinjenja u vidu žutog praha.

Y= 34 %; M"(ES) 455.2; M<+>(ES) 457.4; HPLC (Uslovi b, max plot) 99.7 %, rt. 1.98 min;

'H NMR (DMSO-Jć) 5 9.00 (br s, IH), 7.93(d, J=7.6 Hz, IH), 7.87 (br d, IH), 7.74 (d,J =7. 9 Hz, IH), 7.63 (d,J=7. 9 Hz, 2H), 7.51 (d,J= 7. 9Hz, 2H), 7.45-7.39 (m, IH), 7.28-7.23 (m, IH), 6.72(d, J=6.4 Hz, IH), 5.71 (s, 2H), 4.10 (s, 2H), 3.32-3.18 (m, 4H), 3.13-2.92 (m, 4H)

Primer 6: Priprema l, 3- benzotiazol- 2- il[ 2-({ 4-|"( 4- formilpiperazin- l- il) metin-

benzil| oksi) pirimidin- 4- il] acetonitrila ( 2TFA)

Boc-deprotektovana sirova baza dobijena u primeru 3 (0.6g, 1.31 mmol) je suspendovana u 15 ml metilformata u zatvorenoj posudi. Reakciona mešavina je mešana na 40°C tokom 15 dana i potom ohlađena do s.t. Formirani precipitat je isfiltriran i potom ispran vodom a sirovi proizvod je purifikovan uz pomoć preparativne HPLC. Čiste frakcije su prikupljene i liofilizovane dajući 0.26 g naslovnog jedinjenja u vidu žutog praha.

Y = 28 %; M'(ES) 483.3; M<+>(ES) 485.5; HPLC (Uslovi b, max plot) 99.7 %, rt. 2.18 min.

'H NMR (DMSO-t/6) d 9.95 (br s, IH), 8.03 (s, IH), 7.93(d, J= 7. 9Hz, IH), 7.96-7.84 (very br d, IH), 7.73 (d,J =7. 9 Hz, IH), 7.68 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.54 (d,J= 7. 9 Hz, 2H), 7.47-7.40 (m, IH), 7.29-7.24 (m, IH), 6.73 (br d, IH), 5.73 (s, 2H), 4.36 (s, 2H), 4.05-2.80

(m, 8H)

Primer 7: Priprema ( 2-{ 4-[ 4-( 2- Amino- acetil)- piperazin- l- ilmetil]- benziloksi}- pirimidin-4- il)- f3H- benzotiazol- 2- iliden)- acetonitrila ( 2Mes) ( 3TFA)

U rastvor DMA (40ml) Boc-deprotektovanog sirovog proizvoda (2.9g, 3.65 mmol)

dobijenog u primeru 5 dodat je amberlist A21 (0.7g, 3.76 mmol) i rastvor je mešan na s.t. tokom 20 min. Smola je filtrirana a u filtrat je dodat rastvor Boe Glicina (0.74 g, 4 mmol), HOBt (0.73 g, 5.47 mmol), EDC (1. 05 g, 5.47 mmol) i DIPEA (1.9 g, 14.6 mmol) u DMA (30 ml) . Dobijeni rastvor je mešan tokom noći na s.t. Posle uparavanja rastvarača pod smanjenim pritiskom, dobijeni ostatak je suspendovan u mešavini MeOH i EtOAc i ostavljen tokom noći na 4°C. Precipitat je isfiltriran, ispran sa EtOAc i osušen pod vakumom na 40°C, dajući 1.04 g naslovnog jedinjenja u vidu žute solidne materije.

Y= 10 %, M<+>(ES): 514.06; HPLC (Uslovi b, max plot) 99.9 %, rt. 2.00 min.

'H NMR (DMSO-<*<5) 5 8.13-8.02 (m, 2H), 7.94-7.91 (m, 2H), 7.73 (br d,IH), 7.67 ( d, J =7.9 Hz, 2H), 7.54 (d,J=7.9 Hz, 2H), 7.45-7.40 (m, IH), 7.29-7.24 (m, IH), 6.74 (br d, IH), 5.74 (s, 2H), 4.34 (s, 2H), 3.89 (s, 2H), 3.73-3.10 (m, 8H)

Primer 8: Priprema [ 2-({ 4- l( 4- acetilpiperazin- l- il) metil] benziUoksi) piirmidin- 4- il1( l, 3-benzotiazol- 2- il) acetonitrila ( 2TFA)

U rastvor DMA (6ml) Boc-deprotektovanog sirovog proizvoda (0.3g, 0.66 mmol) dobijenog u primeru 5 dodat je trietilamin (0.09 ml, 0.66 mmol) i acetil hlorid (0.09 ml, 1.31 mmol) i rastvor je mešan 5 min na s.t. Reakciona mešavina je koncentrisana skoro do suva a dobijeni ostatak je purifikovan uz pomoć preparativne HPLC. Ciste frakcije su prikupljene i liofilizovane dajući 0.1 g (21 %) naslovnog jedinjenja u vidu žutog praha. M"(ES) 496.9; M<+>(ES) 499.1; HPLC (Uslovi b, max plot) 99 %, rt. 2.19 min.

'H NMR (DMSO-dć) 5 10.05 (br s, IH), 7.93 (d,J=7.9 Hz, IH), 7.93-7.84 (very br d, IH), 7.74 (d,J=7.9 Hz, IH), 7.67 (d,J=8 Hz, 2H), 7.54 (d, J= 7.9 Hz, 2H), 7.45-7.39 (m, IH), 7.29-7.24 (m, IH), 6.72 (br d, IH), 5.73 (s, 2H), 4.36 (s, 2H), 4.02-3.87 (m, IH), 3.42-2.75 (m, 7H), 2.01 (s, 3H).

Primer 9: Priprema 4-( 4-{ 4-[( 3H- Benzotiazol- 2- iliden)- ciiano- metil]- pirimidin- 2-

iloksimetil}- benzil)- piperazin- l- dimetilamid karboksilne kiseline ( 2TFA)

U DMA rastvor (12 ml) Boc-deprotektovanog sirovog proizvoda (0.5g, 0.63 mmol) dobijenog u primeru 5 dodat je amberlist A21 (1.12g, 5.35 mmol) i dimetilkarbamoil hlorid (0.12 ml, 1.31 mmol) i rastvor je mešan na 0°C tokom lh. Obzirom da nikakav proizvod nije dobijen, rastvor je zagrevan na s.t. tokom 12 da bi se postigao potpun nestanak početnog materijala. Amberlist je isfiltriran a voda je dodata u filtrat. Obzirom da se nije formirano bilo kakav precipitat, rastvarači su upareni pod smanjenim pritiskom a ostatak je unet u vodu i liofilizovan. Dobijeni ostatak je purifikovan uz pomoć preparativne HPLC. Čiste frakcije su prikupljene i liofilizovane dajući 85 mg naslovnog jedinjenja u vidu žute solidne materije.

Y= 18 %, M<+>(ES): 528.09; HPLC (Uslovi b, max plot) 98.9 %, rt. 2.32 min.

'H NMR (DMSO-ć/ć) 5 9.82 (very br s,IH), 7.94-7.86 (m, 2H), 7.73(d, J= 7.9 Hz,IH), 7.67 (d,J=7.9 Hz, 2H), 7.55 (d,J=7.9 Hz, 2H), 7.44-7.39 (m, IH), 7.28-7.23 (m, IH), 6.72 (br d, IH), 5.73 (s, 2H), 4.37 (s, 2H), 3.65-3.48 (m, 2H), 3.32-3.18 (m, 2H), 3.11-2.90 (m, 4H), 2.74 (s, 6H)

Na sličan način se mogu dobiti sledeća jedinjenja.

4-(4-{4-[(3H-Benzotiazol-2-iliden)-cijano-metil]-pirimidin-2-iloksimetil}-benzil)-piperazin-l-karboksilna kiselina metil ester (2TFA)

Y= 32 %, M<+>(ES): 514.85; HPLC (Uslovi b, max plot) 99 %, rt. 2.36 min.

'H NMR (DMSO-atf) 5 7.94-7.91 (m, 2H), 7.73 (br d, IH), 7.66 (d,J=7. 9 Hz, 2H), 7.53 (d,J=7.9 Hz, 2H), 7.46-7.40 (m, IH), 7.29-7.24 (m, 2H), 6.73 (br d, IH), 5.73 (s, 2H), 4.34 (s, 2H), 4.13-3.92 (m, 2H), 3.63 (s, 3H), 3.60-2.94 (m, 6H)

Primer 10: Priprema ( 3H- Benzotiazol- 2- iliden)-{ 2-[ 4-( 4-[ l, 2, 4] oksadiazol- 3- ilmetil-

piperazin- 1 - ilmetil)- benziloksi1- pirimidin- 4- il} - acetonitrila ( 3TFA)

U DMA rastvor (10 ml) Boc-deprotektovanog sirovog proizvoda (0.5g, 0.63 mmol) dobijenog u primeru 5 dodat je amberlist A21 (0.7g, 3.76 mmol) i rastvor je mešan na s.t. tokom 20 min. Smola je isfiltrirana a u filtrat je dodat 3-(hlorometil)-l,2,4-oksadiazole i kalijum karbonat. Dobijena suspenzija je mešana na s.t. tokom 48h. Potpun nestanak početnog materijala je postignut posle 3 dana mešanja na s.t i dodavanjem 2.4 Eq 3-(hlorometil)-l,2,4-oksadiazola. Posle filtracije i uklanjanja rastvarača pod smanjenim pritiskom, dobijeni ostatak je purifikovan uz pomoć preparativne HPLC. Čiste frakcije su prikupljene i liofilizovane dajući 110 mg naslovnog jedinjenja u vidu žute solidne materije. Y= 20 %, M<+>(ES): 538.94; HPLC (Uslovi b, max plot) 97 %, rt. 2.31 min.

'H NMR (DMSO-d6) 6 9.62 (s, IH), 7.93-7.91 (m, 2H), 7.73 (d,J=7.9 Hz, IH), 7.65 (d,J= 7.9 Hz, 2H), 7.53(d, J=7.9 Hz, 2H), 7.44-7.39 (m, IH), 7.27-7.22 (m, IH), 6.72 (br d, IH), 5.72 (s, 2H), 4.32 (s, 2H), 3.85 (s, 2H), 3.34-3.17 (m, 2H), 3.12-2.88 (m, 4H), 2.58-2.41 (m, 2H)

Na sličan način se mogu dobiti sledeća jedinjenja.

(3H-Benzotiazol-2-iliden)-(2-{4-[4-(2-hidroksi-etil)-piperazin-l-ilmetil]-benziloksi}-pirimidin-4-il)-acetonitril (3TFA)

Y= 22 %, M<+>(ES): 500.92; HPLC (Uslovi b, max plot) 99.3 %, rt. 2.03 min.

'H NMR (DMSO-^rJ) 5 7.93 (d, J = 7.9 Hz,IH), 7.86 (very br d, 1H), 7.74 (br d, IH), 7.58 (br d, 2H), 7.43-7.36 (m, 3H), 7.28-7.23 (m, IH), 6.71 (br d, IH), 5.69 (s, 2H), 4.20-3.60 (m, 4H), 3.70-3.67 (m, 2H), 3.52-3.34 (m, 2H), 3.20-2.92 (m, 4H)

[4-(4-{4-[(3H-Benzotiazol-2-iliden)-cijano-metil]-pirimidin-2-iloksimetil}-benzil)-piperazin-l-il]-metil estar sirćetne kiseline (3TFA)

Y= 14 %, M<+>(ES): 528.85; HPLC (Uslovi b, max plot) 98 %, rt. 2.38 min.

'H NMR(DMSO-ć/ć)S 7.94-7.91 (m, 2H), 7.73 (br d, IH), 7.65 (d,J=7. 9 Hz, 2H), 7.53 (d,J= 7. 9Hz, 2H), 7.44-7.39 (m, IH), 7.28-7.23 (m, 2H), 6.71 (br d, IH), 5.72 (s, 2H), 4.30 (br s, 2H), 3.62 (s, 3H), 3.49-3.36 (m, 2H), 3.30-3.15 (m, 2H), 3.10-2.85 (m, 4H),2.73-2.54 (m, 2H)

2-[4-(4-{4-[(3H-Benzotiazol-2-iliden)-cijano-metil]-pirimidin-2-iloksimetil}-benzil)-piperazin-l-il]-acetamide (3TFA)

Y= 16 %, M<+>(ES): 513.95; HPLC (Uslovi b, max plot) 93 %, rt. 2.08 min.

'H NMR( ĐMSO- dđ)5 7.93(d, J=7.9Hz,IH), 7.88 (br d, IH), 7.73(d,.7=7.9 Hz, IH), 7.61 (d,J=7.9 Hz, 2H), 7.46 (br d, 2H), 7.45-7.40 (m, IH), 7.28-7.23 (m, IH), 6.72 (br d, IH), 5.71 (s, 2H), 4.30-2.65 (m, 12H)

Primer 11: Priprema farmaceutske formulacije

Sledeći primeri formulacija ilustruju reprezentativne farmaceutske sastave ali nisu ograničeni samo na njih.

Formulacija 1 - Tablete

Piperazin benzotijazol sa formulom jedinjenja i je izmešan u vidu suvog praha sa suvim

želatinskim sredstvom za tabletiranje u težinskoj srazmeri od približno 1:2 Dodata je manja količina magnezijum stearata kao lubrikanta. Od mešavine su formirane tablete od 240-270 mg (80-90 mg aktivnog jedinjenja piperazin benzotijazola po tableti) u presi za tabletiranje.

Formulacija 2 - Kapsule

Piperazin benzotijazol sa formulom jedinjenja i je izmešan u vidu suvog praha sa škrobnim rastvaračem u težinskoj srazmeri od približno 1:1. Ovom mešavino msu napunjene kapsule od 250 mg (125 mg aktivnog jedinjenja piperazin benzotijazola po kapsuli).

Formulacija 3 - Tečnost

Piperazin benzotijazol sa formulom jedinjenja I (1250 mg), saharoza (1.75 g) i ksantan guma(4 mg) su izmešane, propuštene kroz sito No. 10 mesh U.S., i potom pomešan sa prethodno pripremljenim rastvorom mikrokristalne celuloze i natrijum karboksimetil celuloze (11:89, 50 mg) u vodi. Natrijum benzoat (10 mg), aroma i boja su dodate uz mešanje.. Tada je dodata količina vode koja je dovoljna da bi se dobio ukupni volumen od of 5 mL.

Formulacija 4 - Tablete

Piperazin benzotijazol sa formulom jedinjenja I je izmešan u vidu suvog praha sa suvim želatinskim sredstvom za tabletiranje u težinskoj srazmeri od približno 1:2. Dodata je manja količina magnezijum stearata kao lubrikanta. Od mešavine su formirane tablete od 450-900 mg (150-300 mg aktivnog jedinjenja piperazin benzotijazola ) u presi za

tabletiranje.

Formulacija 5 - Injekcije

Piperazin benzotijazol sa formulom jedinjenja I je rastvoren u puferovanom sterilnom fiziološkom rastvoru za injekcije do koncentracije od približno 5 mg/ml.

Primer 12 : Biološki eseji

Jedinjenja iz ovog pronalaska mogu biti podvrgnuta sledećim esejima:

a) JNK2i -3in vitroesej:

Jedinjenja iz ovog pronalaska su inhibitori JNKs, posebno JNK2 i 3. Fosforilacijom c-jun

uz pomoć JNK2 ili JNK3 može se odrediti praćenjem inkorporacije<33>P u c-jun prema dole datom protokolu. Inhibitorna aktivnost jedinjenja prema formuli I, ka c-jun fosforilaciji preko JNK, se određuje izračunavanjem fosforilacione aktivnosti u prisustvu ili odsustvu jedinjenja prema formuli I.

Eseji JNK3 i/ili -2 se vrše na MTT pločicama sa 96 udubljenja: inkubacija 0.5 u.g rekombinantnog, prethodno aktiviranog GST-JNK3 ili GST-JNK2 sa 1 p.g rekombinantnog, biotiniliranog GST-c-Jun i 2 uM<j3>y-ATP (2 nCi/uI), u prisustvu ili odsustvu jedinjenja prema formuli I uz reakcioni volumen od 50 ul koji sadrži 50 mM Tris-HCl, pH 8.0; 10 mM MgCl2; 1 mM Ditiotreitola, i 100 uM NaV04. Inkubacija se vrši 120 min. na S.T i prekida se posle dodavanja 200 ul rastvora koji sadrži 250 ug perli obloženih streptavidinom (Amersham, Inc.)<*>, 5 mM EDTA, 0.1% Triton X-100 i 50 uM ATP, u puderu u fosfatnom fiziološkom rastvoru.

Posle inkubacije tokom 60 minuta na ST, perle su sedimentovana centrifugiranjem na 1500 x g tokom 5 minuta, resuspendovane u 200 jal PBS koji sadrži 5 mM EDTA, 0.1% Triton X-100 i 50 uM ATP a radioaktivnost je izmerena u scintilacionom P brojaču, posle sedimentacije perli kako je gore opisano.

Ispitivana jedinjenja prema formuli I ispoljavaju inhibiciju (IC5o) prema JNK3 od manje od 10 uM, preferentno manje odi uM a još preferentnije manje od 0.25 uM.

b) Globalna ishemija kod gerbila

Sposobnost JNK inhibitora opisanih u formuli I da štite ćelijsku smrt tokom moždanog

udara može se proceniti uz pomoć sledećeg protokola:

Bilateralna okluzija karotida kod gerbila je dobro opisani životinjski model akutnog ishemijskopg moždanog udara i podrazumeva relativno lake hirurške tehnike.

Degeneracija neurona u hipokampusu se razvija tokom nekoliko dana i obično se naziva "odloženom smrću neurona". Osim toga, neurodegeneracija koja je histološki zabeležena je očigledna i lako se kvantifikuje (11). Takođe, histopatologija viđena kod gerbila je slična onoj koja se viđa kod hipokampusnog CA1 regiona ljudskog mozga posle srčanog zastoja. . Opservacije vezane za ponašanje, kao što su testovi memorije, mogu se sprovoditi čak i kod gerbila. Ova vrsta testova za utvrđivanje stepena oporavka se teško sprovodi na drugim modelima kao što su pacovi čije su sposobnosti učenja daleko lošije (12).

Neuroprotektivni efekat prema formuli I vezan za zaštitu se može proceniti korišćenjem globalne ishemije kod gerbila i takvog jednog protokola:

-1- METODA

<*>Hirurški zahvat

- Anestezija izofuranom (0.5-4%).

- Zajedničke karotidne arterije (leva i desna) se oslobađaju od tkiva.

- Okluzija arterija uz korišćenje Bulldog microklema tokom 5 min.

- Uklanjanje klema (reperfuzija)

- Stabulacija životinja pod lampom za zagrevanje dok se ne probude

- Stabulacija životinja u zverinjaku u individualnim kavezima.

<*>Žrtvovanje životinja

- 7 dana posle ishemije (dekapitacija ili prekomerna doza pentobarbitala).

- Uzorkovanje mozga.

<*>Histološki parametri

- Zamrzavanje mozga u izopentanu (-20°C)

- Sekcija hipokampusa uz pomoć krio-mikrotoma (20 (im).

- Prebojavanje uz pomoć cresil violet metode

- Evaluacija lezija (u CA1/CA2 subpoljima hipokampusa) modifikovanim

Gerhard & Boast skorom (13).

-2- TRETMAN

- Administracija (ip) jedinjenja prema formuli I ili nosača: 15 min, 24 sata i 48 sati posle reperfuzije (5-10 min posle oporavka iz anestezije).

- Standardni protokol

Upotrebljeno je ukupno 40 životinja; pomenute životinje su podeljene u 5 grupa sa po 8 životinja:

Grupa A : kontrola (fiziološki rastvor)

Grupe B-D : ispitivano jedinjenje se daje u 3 različite doze (10 mg/kg; 20 mg/kg, 40 mg/kg);

Grupa E : referentno jedinjenje (Orotična kiselina 3x300 mg/kg,ip).

Za ispitivano jedinjenje definisano u Primeru 1 (tj. l,3-benzotiazol-2-il[2-({4-[(4-metilpiperazin-l-il)metil]-benzil}oksi)pirimidin-4-il]acetonitril) koje je korišćeno u gore opisanom eseju u koncentraciji od 40 mg po kg, određena je inhibicija neuronske smrti od oko 60%.

c) Procena prelaska krvno-moždane barijere (BBB): uzorkovanje mozga i plazme

Jedinjenja iz ovog pronalaska su korisna za lečenje i/ili profilaksu cerebralnih ishemičnih

poremećaja ili poremećaja CNS-a. Specifično, jedinjenja iz ovog pronalaska ispoljavaju dobru sposobnost prelaska preko krvno-moždane barijere (BBB). Sposobnost prelaska BBB jedinjenja prema formulama I ili II se može proceniti uz pomoć donjeg protokola. Cilj ovog eseja je da se kvantifikuje količina ispitivanih jedinjenja prema formulama I ili II u mozgu pacova posle i.v. administracije.

Šest mužjaka Crl:CD(SD)Br Sprague Dawley pacova (starih oko 8 nedelja teških oko 300

g) podeljeno je na sledeće 3 grupe:

Grupa 1

2 životinje za i.v. administraciju (10 mg/kg ispitivanog jedinjenja formule I u 0.9% NaCl za injekcije). Ispitivano jedinjenje se daje u vidu pojedinačne doze (režim doziranja). Uzorkovanje je izvršeno 0.25 h posle žrtvovanja.

Grupa 2

2 životinje za i.v. administraciju (10 mg/kg ispitivanog jedinjenja formule I u 0.9% NaCl za injekcije). Ispitivano jedinjenje se daje u vidu pojedinačne doze (režim doziranja). Uzorkovanje je izvršeno 0.5 h posle žrtvovanja.

Grupa 3

2 životinje za i.v. administraciju (10 mg/kg ispitivanog jedinjenja formule I u 0.9% NaCl za injekcije). Ispitivano jedinjenje se daje u vidu pojedinačne doze (režim doziranja). Uzorkovanje je izvršeno 1 h posle žrtvovanja.

U vreme planiranog vremena žrtvovanja, životinje iz odgovarajuće grupe su uvedene u duboku anesteziju dietil etrom. Uzeta je krv za odgovarajuće uzorke krvi u heparinizovane epruvete i potom je centrifugirana kako bi se uklonile krvne ćelije i tako dobila plazma. Uzorci plazme dobijeni u svakom vremenu uzorkovanja (tj. t = 0.25 h, 0.5 h, 1 h) od pacova iz svake grupe posle administracije ispitivanog jedinjenja formule(I) su objedinjeni kako bi se dobio 1 zbirni uzorak po vremenu uzorkovanja po grupi. Pacovi su potom žrtvovani ekssangvinacijom.

Pri uzorkovanju mozga, ceo mozak (cercbrum i cerebclum) žrtvovanih životinja je izvađen. Mozgovi dve životinje po svakom vremenu uzorkovanja (tj. t = 0.25 h, 0.5 h, 1 h posle administracije) su objedinjeni kako bi se dobio jedan zbirni uzorak po vremenu uzorkovanja. Svaki zbirni uzorak je homogenizovan u mešavini rastvarača (acetonitril/metanol/dimetil-sulfoksid, 50:48:2 prema zapremini) centrifugiran a supernatant je analiziran po pitanju ispitivanog jedinjenja.

Koncentracije u uzorcima homogenata plazme i mozga su kvantifikovane prema jednoj analitičkoj HPLC-MS/MS metodi, koja je razvijena na odgovarajući način za ovo jedinjenje.

Ispitivano jedinjenje korišćeno u ovom eseju je ono definisano u Primeru 1 (tj. 1,3-benzotiazol-2-il[2-({4-[(4-metilpiperazin-l-il)metil]-benzil}oksi)pirimidin-4-il]acetonitril.

Koncentracije ispitivanog jedinjenja u zorcima homogenata plazme i mozga određivane uz pomoć HPLC-MS/MS ilustrovane su u Tabeli 1 dole.

Iz Tabele 1, može se videti značajan i održiv prolazak ispitivanog jedinjenja u mozak.

Claims (1)

1. Derivati piperazin tijazola prema formuli I kao i njegovi tautomeri, njegovi geometrijski izomeri, njegove optički aktivne forme kao što su enantiomeri, diastereomeri i njegove racemske forme, kao i njihove farmaceutski prihvatljive soli, što je naznačeno time daje R odabrano u grupi koja obuhvata ili se sastoji od vodonika, C]-C6-alkil, Ci-C6-alkil aril, heteroaril, Ci-Cć-alkil heteroaril, C2-C6-alkenil, C2-C6-alkenil aril, C2-C6-alkenil heteroaril, C2-C6-alkinil, C2-C6-alkinil aril, C2-C6-alkinil heteroaril, C3-C8-cikloalkil, heterocikloalkil, Ci-C6-alkil cikloalkil, Ci-Cć-alkil heterocikloalkil, Cj-Cć-alkil karboksi, acil, C|-Cć-alkil acil, aciloksi, CVCValkil aciloksi, Ci-Cć-alkil alkoksi, alkoksikarbonil, Ci-C6-alkil alkoksikarbonil, aminokarbonil, CpCć-alkil aminokarbonil, acilamino, Ci-C6-alkil acilamino, ureido, Ci-Cć-alkil ureido, amino, CpCć-alkil amino, sulfoniloksi, C\- C^-alkil sulfoniloksi, sulfonil, Ci-Cć-alkil sulfonil, sulfinil, Ci-Cć-alkil sulfinil, sulfanil, Ci-Cć-alkil sulfanil, sulfonilamino, Ci-Cć-alkil sulfonilamino; R<1>odabrano u grupi koja obuhvata ili se sastoji od H, halogen, cijano, nitro, amino, Ci-Cć-alkil, C2-C6-alkenil, C2-C6-alkinil, Ci-Cć-alkil-aril, aril ili heteroaril, Ci-Cć-alkil-heteroaril, -C(0)-OR<2>, -C(0)-R<2>, -C(0)-NR<2>R<2>', -(S02)R<2>, gde su R 2 i R 2' nezavisno odabrani iz grupe koja obuhvata ili se sastoji od vodonika, C\- C(, alkil, C2-Cćalkenil, C2-Cćalkinil, aril, heteroaril, Ci-Cć-alkil aril, Ci-Cć-alkil heteroarila; nje neki ceo broj od 0 do 3.

2. Derivat piperazin benzotijazola prema zahtevu 1, stoje naznačeno time daje R<1>vodonik.

3. Derivat piperazin benzotijazola prema zahtevu 1 ili 2, što je naznačeno time da je R odabrano u grupi koja se sastoji od vodonika, C1-C3alkila, aminokarbonila, Ci-C6-alkil alkoksikarbonila, Ci-C6-alkil alkoksi, Ci-C6-alkil aciloksi, alkoksikarbonila, C> Cć-alkil aminokarbonila.

5. Derivat piperazin benzotijazola prema zahtevu 4, što je naznačeno time da je R zapravo II, ili C1-C3alkil, posebno metilni ili etilni deo, ili Ci-Q-alkil alkoksi.

6. Derivat piperazin benzotijazola prema bilo kom od prethodnih zahteva, što je naznačeno time da je n jednako 1.

7. Derivat piperazin benzotijazola prema bilo kom od prethodnih zahteva odabran iz sledećih grupa: l,3-benzotiazol-2-il[2-({4-[(4-metilpiperazin-l-il)metil]benzil}oksi)pirimidin-4-iljacetonitril l,3-benzotiazol-2-il[2-({4-[(4-benzil-piperazin-l-il)metil]-benzil}oksi)pirimidin-4-iljacetonitril l,3-benzotiazol-2-il(2-{[4-(piperazin-l-ilmetil)benzil]oksi}pirimidin-4-il)acetonitril 1,3-benzotiazol-2-il[2-({4-[(4-formilpiperazin-1 -il)metil]benzil }oksi)pirimidin-4-iljacetonitril [2-({4-[(4-acetilpiperazin-l-il)metil]benzil}oksi)pirimidin-4-il](l,3-benzotiazol-2-il)acetonitril (3H-Benzotiazol-2-iliden)-{2-[4-(4-[l,2,4]oksadiazol-3-ilmetil-piperazin-l-ilmetiI)-benziloksi]-pirimidin-4-il}-acetonitril 4-(4-{44(3H-Benzotiazol-2-iliden)-cijano-metil]-pirimidin-2-iloksimetil}-benzil)-piperazin-l-karboksilna kiselina metil ester 2-[4-(4-{4-[(3H-Benzotiazol-2-iliden)-cijano-metil]-pirimidin-2-iloksimetil}-benzil)-piperazin-1 -il] -acetamid (2-{4-[4-(2-Amino-acetil)-piperazin-l-ilmetil]-benziloksi}-pirimidin-4-il)-(3H-benzotiazol-2-iliden)-acetonitril [4-(4-{4-[(3H-Benzotiazol-2-iliden)-cijano-metil]-pirimidin-2-iloksimetil}-benzil)-piperazin-l-il]-metil estar sirćetne kiseline (3H-Benzotiazol-2-iliden)-(2-{4-[4-(2-metoksi-etil)-piperazin-l-ilmetil]-benziloksi}-pirimidin-4-il)-acetonitril 4-(4-{4-[(3H-Benzotiazol-2-iliden)-cijano-metil]-pirimidin-2-iloksimetil}-benzil)-piperazin-l-dimetilamid karboksilne kiseline (3H-Benzotiazol-2-iliden)-{2-[4-(4-etil-piperazin-l-ilmetil)-benziloksi]-pirimidin-4-il}-acetonitril (3H-Benzotiazol-2-iliden)-(2-{4-[4-(2-hidroksi-etil)-piperazin-l-ilmetil]-benziloksi}-pirimidin-4-il)-acetonitril

8. Derivat piperazin benzotijazola prema bilo kom od prethodnih zahteva za upotrebu u vidu medikamenta.

9. Upotreba derivata piperazin tijazola prema bilo kom zahtevu od 1 do 7 za proizvodnju medikamenta za lečenje cerebralnih ishemičnih poremećaja ili poremećaja CNS-a.

10. Proces za pripremu derivata piperazin benzotijazola prema bilo kom zahtevu od 1 do 7, koji uključuje sledeći korak: stoje naznačeno time da su R, R<1>u skladu sa onim stoje gore opisano .