TR201809043T4

TR201809043T4 - Sentetik adjuvan içeren aşı bileşimi.

Info

Publication number: TR201809043T4
Application number: TR2018/09043T
Authority: TR
Inventors: G Reed Steven; Carter Darrick
Original assignee: Infectious Disease Res Inst
Priority date: 2006-09-26
Filing date: 2007-09-26
Publication date: 2018-07-23
Also published as: US20210069323A1; CN101516396B; EP2484375A2; KR101378872B1; US10765736B2; US9987355B2; US20130058997A1; US8273361B2; TR201807756T4; US20080131466A1; ES2387327T3; JP5443164B2; US20130084307A1; ES2675915T3; SI2486938T1; US20140341970A1; CN103705919A; ATE555808T1; LT2486938T; US20140037691A1

Abstract

Büyük ölçüde homojen formda sağlanan sentetik bir glukopiranosil lipid adjuvandaki (GLA) kullanışlı immünolojik adjuvan özelliklerin keşfine dayalı olarak bir immün tepkiyi indüklemek ya da arttırmak için bileşimler ve aşılar ve farmasötik bileşimler içeren metotlar ifşa edilmektedir. Kimyasal olarak tanımlı, sentetik GLA, doğal ürün adjuvanları riske atan kirleticiler ya da aktivite bakımından yığından yığına değişimler olmayan tutarlı bir aşı bileşeni sunmaktadır. Ayrıca GLA ve bir antijen, bir toll benzeri reseptör (TLR) agonisti, bir ko-adjuvan ve farmasötik bir taşıyıcı gibi bir taşıyıcıdan bir ya da daha fazlasını içren farmasötik bileşimler ve aşılar sağlanmaktadır.

Description

TARIFNAME SENTETIK ADJUVAN IÇEREN ASI BILESIMI DEVLET HISSESI BEYANI Bu bulus, Ulusal Saglüg Enstitüleri tarafîldan verilen AI-25038 say [[EHibe uyarßca kßmi devlet destegiyle yap Em Sti. Devlet bu bulus üzerinde çesitli haklara sahiptir. Teknik Alan Mevcut bulus farmasötik ve asl bilesimleri alaniyla ilgilidir. Daha spesifik olarak, burada tarif edilen uygulamalar farmasötik ve as lbilesimleri ve aynl lzamanda alaka] l profilaktik ve terapötik metotlarla ilgili olup, içerisindeki bilesimler bir glukopiranozil lipid adjuvan (GLA) içermektedir. Önceki Teknik Gelismis organizmalari immün sistemi bildik ya da "kendi" bilesenlerinin ajanlarßi yabanci: ajanlardan (ya da "kendinden olmayan" ajanlardan) aymt edilmesiyle karakterize edilir, bu sekilde de yabanc Jajanlar immün tepkilere yol açarken, "kendi" bilesenleri yok say ll lya da tolare edilir. Immün tepkiler geleneksel olarak antijenlere özgü antikorlar n plazma hücreleri olarak bilinen farkl'lasmls B lenfositler taraflndan üretildigi humoral tepkiler olarak ya da T lenfositlerin çesitli tiplerinin çesitli mekanizmalar vasîasýla antijenleri elimine etmek için islev gördügü hücre araCJJJ tepkiler olarak karakterize edilmistir. Örnegin, spesifik antijenleri tanSlabilen CD4+ yardEncEF hücreler, bir immün tepkiye kat Tmas Elçin immün sistemin diger hücrelerini almak için sitokinler gibi çözünebilir aracührEsalarak cevap verebilir. Ayrßa, yine spesifik antijenleri tanß/abilen CD8+ sitotoksik T hücreler, antijen tas Stan bir hücre ya da partiküle baglanarak ve bunu yok ederek ya da zarar vererek cevap verebilir. Immünolojik tekniklerde genellikle bir konakta istenilen bir immün tepkinin indüklenmesi amaciyla çesitli formülasyonlara göre belirli as lar saglandlgI l bilinmektedir. Bir konaga bir aslnln uygulanmas lvasltaslyla spesifik immün tepkilerin ortaya çlkartllmasFliçin çesitli stratejiler araslîida @lýla öldürülmüs ya da zayîlatllnls canlîl bulasEEpatojenlerle, örnegin virüsler, bakteriler ya da belirli ökaryotik patojenlerle as &ama; immün bir tepkinin istendigi antijeni (antijenleri) kodlayan genetik materyalin ekspresyonunu yönetebilen virülan olmayan bir enfektif ajanla aslIama; ve patojene karsEimmüniteyi indüklemek için belirli bir patojenden izole edilen immünojenleri (örnegin proteinleri) içeren alt birim aSJhrßlla as lama bulunmaktad î!. (Bkz, ör, Liu, 1998 Nature Medicine 4(5 suppl.):515.) Belirli antijenler için, insan immün yetmezlik virüsleri ya da diger bulasLchatojenler, kanser, otoimmün hastalLk ya da diger klinik durumlara karsl | bir konagi l immünolojik olarak korumada etkili olan as lar n gelistirilmesinde bu yaklas inlar n hiç birinin özellikle etkili olmadlgl lbir ya da daha fazla immünite çesidi bulunabilir. Enterobakteriyel lipopolisakkaridin (LPS) immün sistemin potent bir stimülatörü oldugu, buna karsi adjuvanlarda kullanEnlIiEi toksik etkilerinden dolayEkEa kesildigi uzun süredir bilinmektedir. LPS"nin toksik olmayan bir türevi, çekirdek karbonhidrat grubunun ve fosfat& indirgeyici uç glikozaminden uzaklastmülnasüyoluyla üretilen monofosforil lipid A (MPL) Ribi ve arkadaslarE tarafîldan tarif edilmistir (1986, MPL"nin toksinlerden arTldTrlllnls versiyonu, disakkarit omurgasillîi 3-pozisyonundan açil zincirinin uzaklastEÜmas mdan kaynaklanm ve 3-O-açil grubu uzaklastßüing monofosforil lipid A (3D-MPL) olarak adlandEEIE. GB 2122204B sayjlüdokümanda aç Eklanan metotlarla saflastmühbilir ve haz îllanabilir, söz konusu referans ayn Ezamanda difosforil lipid A ve bunun 3-O-asil grubu uzaklastlîümg varyantlarlîiüfsa etmektedir. Örnegin, 3D-MPL, çap olarak 0.2 um°den daha az bir partikül büyüklügüne sahip olan bir emülsiyon formunda hazîlanmßtî ve bunun imalat metodu WO 94/21292 sayJJEl dokümanda ifsa edilmektedir. Monofosforil lipid A ve bir yüzey aktif madde içeren sulu forrnülasyonlar WO9843670A2 sayllll dokümanda tarif edilmistir. Adjuvan kombinasyonlarlnda formüle edilecek olan bakteriyel lipopolisakkarit türevi adjuvanlar bakteriyel kaynaklardan saflastln labilir ve islenebilir ya da alternatif olarak sentetik olabilirler. Örnegin, saflastlîlllnl's monofosforil lipid A Ribi ve arkadaslarlî 1986'da (yukarüaki referans) tarif edilmektedir ve Salmonella sp."den türetilen 3-O-asil say EEdokümanlarda tarif edilmektedir. 3D-MPL ve ß(1-6) glukozamin disakkaritler ve aynEzamanda diger saflastmhiß ve sentetik lipopolisakkaritler tarif edilmistir (WO kabugundan elde edilen saponin adjuvanlar ve 3D-MPL kombinasyonlarl tarif edilmistir. WC 95/ 17210 sayllll doküman skualen, a-tokoferol, ve immünostimülan QS21 ile formüle edilen ve istege baglîolarak 3D-MPL içeren polioksietilen sorbitan monooleat (TWEENTM-80)°e dayalEbir adjuvant emülsiyon sistemini ifsa etmektedir. Bu kombinasyonlarß erisilebilirligine karsîl, dogal ürünlerden türetilen adjuvanlarîl kullanEnEta yüksek üretim maliyetleri, gruptan gruba tutars EMI, büyük ölçekli üretimle iliskili güçlükler ve herhangi bir belirli preparatß kompozisyonel hazElama isleminde yabanc [maddelerin bulunmas Bila ilgili belirsizlik gibi sorunlar eslik etmektedir. AçLk bir biçimde, gelismis as lara ihtiyaç bulunmaktadLij ve özellikle yüksek saflüstta, kimyasal olarak tanlihlanm s, gruptan gruba tutarllllk sergileyen ve istenmeyen ya da yaplsal olarak tanimlanmamls kirletici maddeler dahil edilmeden endüstriyel bir ölçekte verimli bir biçimde iinal edilebilen adjuvan bilesenleri içeren asiIara ihtiyaç bulunmaktad E. Mevcut bulus, bu as [[ar için bilesimler ve metotlar saglamakta ve baska iliskili avantajlar sunmaktad m. Johnson A G ve ark "A comparison of the immunomodulating properties of two forms of monophosphoryl lipid A analogues" Journal of Immunotherapy, vol. 10, no. 6, 1991, sayfalar 398-404 belgesi, MPL,ye kßlasla sentetik lipit A, bilesik 504,ün immünomodüler özellikleri, bakteriyel hücre duvarlarßdan izole edilen saflastiltng monofosforil lipit A"yEarastlî;maktad1I. BULUSUN KISA AÇIKLAMASI Mevcut bulus bir hastada bir immün tepkinin artlrlllmas lveya baslatlltnaslna yönelik yöntemde kullanlma yönelik hücreler ve GLA içeren bir bilesimi saglamaktadlr, burada hücreler GLA,n|îi asagdaki formüle sahip oldugu, bir hastadan al Timi-s hücreleri içeren bir ex vivo hücre kültüründen izole edilmislerdir: R1 R3 gîHoFo 0 on Rl , R3, R5 ve R6 undesildir ve R2, R4 tridesildir. Mevcut bulus, istemlerde taniilanmß olan, mevcut bulusun anlaSEImasßD kolaylastEElabilecek olan asagîla açEklanan ürünler ve yöntemleri de açEEtlamaktadî ("saglamaktadE" veya "tarif etmektedir"). Mevcut bulus, birkaç yaplandimasida bir adjuvan ve asübileseni olarak avantajlj biçimde sentetik glukopiranosil lipit adjuvanlnl { (GLA) kullanan yöntemler ve bilesimleri saglamaktad 11. Bu bulusun burada tarif edilen bir yapiland iimaslria göre, istemlerde izah edildigi gibi bir antijen ve bir glukopiranosil lipid adjuvan (GLA) içeren bir as Fbilesimi saglanmaktad lî. Baska yap land imalarda, (a) bir antijen; istemlerde izah edildigi gibi bir glukopiranosil lipid adjuvan (GLA); ve bir toll benzeri reseptör (TLR) agonisti içeren bir as Ebilesimi saglanmakta olup, içerisindeki diger yapiandlîmalarda TLR agonisti lipopolisakkarit, peptidoglikan, polilzC, CpG, 3M003, Ilagellin, ökaryotik ribozomal uzamanß Laysmanya homologu ve baslatma faktörü 4a (LeII) ve en az bir hepatit C antijeninden seçilir. Baska bir yapllandlranada asagidakileri içeren bir asi lbilesimi saglanmaktad 11: bir antijen; istemlerde izah edildigi gibi bir glukopiranosil lipid adjuvan |(GLA); ve saponinler ve saponin mimetiklerinden seçilen en az bir ko-adjuvan. Baska bir yapllandlrmada,bir antijen; istemlerde izah edildigi gibi bir glukopiranosil lipid adjuvanl'(GLA); ve en az bir yag ve lSCOMATRlXTM içeren bir taslýlîilîiçeren bir asi? bilesimi saglanmaktadm. Baska bir yapihndßmadabir antijen; isteinlerde izah edildigi gibi bir glukopiranosil lipid adjuvanlGLA); ve (i) en az bir ko-adjuvan, (ii) en az bir TLR agonisti, (iii) en az bir imidazokuinolin immün tepki modifiye edici, ve (iv) en az bir çift sap iplik immün modifiye ediciden (double stem loop immune modifier; dSLIM) bir ya da daha fazlasßü içeren bir asE bilesimi saglanmaktadm. Belirli baska yap [[andîmalarda (i) bulunmasjhalinde ko-adjuvan sap, bir bitki alkaloidi ve bir deterjandan seçilmekte olup, içerisindeki bitki alkaloidi tomatinden seçilir ve deterjan saponin, Polisorbat 80, Span 85 ve Stearil tirosinden seçilir, (ii) bulunmasl halinde TLR agonisti lipopolisakkarit, peptidoglikan, polilzC, CpG, 3M003, flagellin, ökaryotik ribozomal uzamani Laysmanya homologu ve baslatma faktörü 4a (LelF) ve en az bir hepatit C antijeni ve (iii) bulunmasühalinde imidazokuinolin immün tepki modifiye edici resikuimod (R848), imikuimod ve gardikuimoddan seçilir. Baska bir yap [[andîmada asag Bakileri içeren bir asü bilesimi saglanmaktadlî: bir antijen; istemlerde izah edildigi gibi bir glukopiranosil lipid adjuvanE(GLA); ve bir ko-adjuvan ve farmasötik olarak kabul edilebilir bir tasSlBIîan en az birisi, içerisinde: ko-adjuvan bir sitokin, bir deterjan ve bir blok kopolimer ya da biyolojik olarak parçalanabilir bir polimerden seçilir ve farmasötik olarak kabul edilebilir taslchLkalsiyum fosfat, bir suda yag emülsiyonu, bir yagda su emülsiyonu, bir lipozom, bir novosom, bir niosom ve bir mikropartikülden seçilen bir taslylcl içerir. Bir liposom ya da benzer tasly dln n kullanlldFgF belirli bir yapilandlîrnadaßöz konusu GLA liposomun katmaanyaplsIT halindedir ya da kapsüllüdür. Bir mikropartikülün kullanmdtgj belirli baska bir yapEIandEInada,mikr0partikül polimer yag lipitlerine dayanan ya da bunlarüiçeren bir mikropartiküldür. Belirli baska yap land Emalarda, söz konusu sitokin GM-CSF, IL-2, IL-7, IL-12, TNF-oi ve IFN-gamadan seçilir, blok kopolimer ya da biyolojik olarak parçalanabilir polimer Pluronik L121, CRL1005, PLGA, PLA, PLG, ve polilzC,den seçilir ve söz konusu deterjan saponin, Polisorbat 80, Span 85 ve Stearil tirosinden olusan gruptan seçilir. Baska yapllandlrlmalarda asag dakileri içeren bir as lbilesimi saglanmaktadlil: Bir antijeni kodlayan bir nükleik asit sekanslna uygulanabilir sekilde bagll blan bir baslatld l içeren en az bir rekombinan ekspresyon yastlî ve bir glukopiranosil lipid adjuvanlî (GLA). Bir yapfland mrnada, rekombinan ekspresyon yapßÇ belirli baska yap [Iandîmalarda bir adenovirüs, bir adeno iliskili virüs, bir herpesvirüs, bir lentivirüs, bir poksvirüs ve bir retrovirüsten seçilen bir virüste bulunan bir viral vektörde bulunur. YukarEla açEEtlanan yapiandîmalardan herhangi birine göre, GLA 3`-de-O-asilatl] degildir. YukarEla açEklanan yapflandßmalardan herhangi birine göre GLA sunlarj içennektedir: (i) indirgeyici olmayan terminus glukosaminin heksosamin pozisyonu 1 ve indirgeyici terminus glukosaminin heksosamin pozisyonu 6 araslndaki bir eter baglantlsl içerisinden indirgeyici olinayan terminus glukosamine bagll olan indirgeyici terminus glukosamine sahip bir diglukosamin omurgaslü (ii) indirgeyici olmayan terminus glukosaminin heksosamin pozisyonu 4aüne baglEbir O-fosforil grubu; ve (iii) altEyagljasil zincirine kadar zincir; burada yaglEasil zincirlerinden biri bir ester baglantüçerisinden indirgeyici terminus glukosaminin 3-hidroksisine baglßi ve burada yaglEasil zincirlerinden biri bir amid baglantüiçerisinden indirgeyici olmayan terminus glukosaminin 2-aminosuna baglßlî ve bir ester baglantE içerisinden 12 karbon atomundan fazla olan bir alkanoil zincirine baglE bir tetra dekanoil zincirini içermektedir, ve burada yaglJasil zincirlerinden biri bir ester baglantLliçerisinden indirgeyici terminus glukosaminin 3-hidr0ksisine baglldlr ve bir ester baglantslll içerisinden 12 karbon atomundan fazla olan bir alkanoil zincirine bagll bir tetradekanoil zincirini içermektedir. Bir TLR agonisti içeren yukar Zla tarif edilen uygulamalarîl herhangi birisine göre, TLR agonisti TLR-2, TLR-3, TLR-4, TLR-5, TLR-6. TLR-7, TLR-8 ve TLR-9'dan seçilen en az bir TLR ile etkileserek biyolojik bir sinyali verebilir. Belirli baska yapEandEmalarda, TLR agonisti lipopolisakkarit, peptidoglikan, polilzc, CpG, 3M003, flagellin, ökaryotik ribozomal uzamanEl Laysmanya homologu ve baslatma faktörü 4a (LeIf) ve en az bir hepatit C antijeninden seçilir. TLR-7 ve/veya TLR-8 agonistinin kullanlldlgl belirli bir yap land,11rnada,TLR-7 ve/veya TLR-8 agonisti bir vezikül içerisinde yakalanlr. Bu bulusun yukarda tarif edilen yapilandlnmalarlna göre, GLA asagldaki formüle sahiptir: burada: R1, R3, R5 ve R6 ifadeleri undesildir; ve R2 ve R4 ifadeleri tridesildir. YukarEla tarif edilen uygulamalarlîi herhangi birisine göre, as :bilesimi bir konakta bir immün tepkiyi ortaya çEkartabilir. Belirli baska yap [land Emalarda immün tepki antijene özgüdür. YukarEla tarif edilen uygulamalarîl herhangi birisine göre, söz konusu antijen bir konakta humoral bir tepki ve bir hücre aracllll Itepkiden seçilen bir immün tepkiye neden olabilir. Yukar da tarif edilen uygulamalarin herhangi birisine göre, söz konusu asl bilesimi bir konakta bir THI-tipi T lenfosit tepkisi, bir THZ-tipi T lenfosit tepkisi, bir sitotoksik T lenfosit (CTL) tepkisi, bir antikor tepkisi, bir sitokin tepkisi, bir lenfokin tepkisi, bir kemokin tepkisi ve bir inflamatuar tepkiden seçilen en az bir immün tepkiye neden olabilir. Yukaera tarif edilen uygulamalar& herhangi birisine göre, söz konusu as Ebilesimi bir konakta (a) sitokinin interferon-gama (IF N-y), tümör nekroz faktörü-alfa (TNF-a)7dan seçildigi bir ya da birden daha fazla sitokinin üretimi, (b) interlökinin IL- bir ya da birden daha fazla interlökinin üretimi, (c) kemokinin MIP-lu, MIP-lß, RANTES, CCL4 ve CCL5°ten seçildigi bir ya da birden daha fazla kemokinin üretimi, ve (d) bir bellek T hücre tepkisi, bir bellek B hücre tepkisi, bir efektör T hücre tepkisi, bir sitotoksik T hücre tepkisi ve bir efektör B hücre tepkisinden seçilen bir lenfosit tepkisinden seçilen en az bir immune tepkiye neden olabilir. Yukarüa tarif edilen yapEandEmalarß herhangi birisine göre, söz konusu antijen bir bakteriyum, bir Virüs ve bir mantardan seçilen en az bir bulasld patojenden elde edilir. Belirli baska yap Tand Tlmalarda, söz konusu bakteri bir aktinobakteriyumdur ve yine belirli baska yap [[and Emalarda söz konusu aktinobakteriyum bir mikobakteriyumdur. Iliskili baska yapühndümalarda söz konusu mikobakteriyum M. tuberculosi's ve M. lepraêden seçilir. Belirli baska alakalüyapüandîmalarda söz konusu bakteriyum Salmonella, Nei'sserz'a, Borrelia, Chlamydz'a ve Bordetella°dan seçilir. Belirli ve iliskili baska yap landijmalarda, söz konusu Virüs bir herpes simpleks virüsü, bir insan immün yetmezlik virüsü (HIV), bir kedi immün yetmezlik virüsü (FIV), sitomegalovirüs, Varisella Zoster Virüsü, hepatit virüsü, Epstein Barr Virüsü (EBV), respiratuar sinsityal virüs, insan papillom Virüsü (HPV) ve bir sitomegalovirüsten seçilir. Yukarüa tarif edilen uygulamalarîi herhangi birisine göre, söz konusu antijen belirli baska yap [[andîmalarda HIV-l ve HIV-?den seçilen bir insan immün yetmezlik virüsünden elde edilir. Belirli ve iliskili baska yap Jhnd Emalarda, söz konusu mantar Aspergillus, Blastomyces, Cocci'di'oides ve Pneumocystiften seçilir. Belirli ve iliskili baska yap Jhndmmalarda söz konusu mantar belirli baska yap landijmalarda bir Candida olan bir mayadLij, içerisinde yine belirli baska yap landlilmalarda söz konusu Candida C. albz'cans, C. glabrata, C. krusei', C. lusi'tam'ae, C. tropicali's ve C. parapsilosz'slten seçilir. YukarEla tarif edilen uygulamalarîl herhangi birisine göre söz konusu antijen belirli baska yapüandmmalarda bir protozoan olan, belirli baska yapEIandEmalarda bir Plasmodyum olan, yine belirli baska yapEandmmalarda P. falciparum, P. vivax, P. mala/'ide ve P. 0vale°den seçilen bir parazitten elde edilir. Belirli baska yapEandEmalarda söz konusu parazit Acanthamoeba, Entamoeba histolyti'ca, Angi'ostrongylus, Schistosoma mansoni'i', Schistosoma haematobium, Schistosoma japoni'cum, Schistosoma mekongi, Cryptospori'di'um, Ancylostoma, Entamoeba histolyti'ca, Entamoeba coli, Entamoeba dispar, Entamoeba hartmanni', Entamoeba polecki, Wuchereri'a bancrofîi, Giardia, Laysmanya, Enterobius vermicularis, Ascaris lumbricoi'des, T ri'churi's trichuri'a, Necator americanus, Aricylostoma duodenale, Brugi'a malayi', Onchocerca volvulus, Dracanculus medinensi's, T richi'nella spiralis, Strongyloi'des stercorali's, Opisthorchi's sinensis, Paragom'mus sp, Fasci'ola hepazica, Fasci'ola magna, F asciola gigantica), T aenia sagi'nata ve T aenia solium'dan seçilir. YukarEla tarif edilen uygulamalar& herhangi birisine göre, söz konusu antijen en az bir kanser hücresinden elde edilir. Belirli baska yapüandßmalarda, söz konusu kanser hücresi bir primer katEtümörden kaynaklanß ve belirli baska yap Jhndßmalarda, söz konusu kanser hücresi metastatik ya da sekonder bir katEtümör olan bir kanserden kaynaklanLt ve belirli baska yap landLiimalarda, söz konusu kanser hücresi dolas mdaki bir tümör ya da bir asit tümörü olan bir kanserden kaynaklanlii. Belirli ve iliskili baska yapllandlrmalarda, söz konusu kanser hücresi serviks kanseri, yumurtallk kanseri, meme kanseri, prostat kanseri, fibrosarkom, miksosarkom, liposarkom, kondrosarkom, osteojenik sarkom, kordom, anjiyosarkom, endotelyosarkom, lenfanjiyosarkom, pseudomyxoma petitonei, lenfanjiyoendotelyosarkom, sinovyom, mezotelyoma, Ewing tümörü, leiomiyosarkom, rabdomiyosarkom, kolon karsinomu, pankreatik kanser, skuamöz hücreli karsinom, bazal hücreli karsinom, adenokarsinom, ter bezi karsinomu, yagbezi karsinomu, papiller karsinom, papiller adenokarsinomlar, kistadenokarsinom, medüller karsinom, bronkojenik karsinom, renal hücre karsinomu, hepatom, safra kanalj karsinomu, koriyokarsinom, seminom, embriyonal karsinom ve Wilm tümöründen seçilen bir kanserden kaynaklan'ii. Belirli ve iliskili baska yap land limalarda, kanser hücresi testiküler tümör, akciger karsinomu, küçük hücreli akciger karsinomu, mesane karsinomu, epitelyal karsinom, gliyom, astrositom, medulloblastom, kraniyofaringiyom, ependimom, pinealom, hemanjiyoblastom, akustik nörom, oliodendrogliyom, meninjiyom, melanom, nöroblastom, retinoblastom, lösemi, lenfoma, multipl miyelom, Waldenstrom makroglobulinemi ve ag& zincir hastalgîidan seçilen bir kanserden kaynaklari E. YukarEla tarif edilen uygulamalari herhangi birisine göre, söz konusu antijen otoimmün bir hastalLkla iliskili olan en az bir epitop, biyomolekül, hücre ya da bir dokudan elde edilir ya da bunlarla immünolojik olarak çapraz reaktiftir. Belirli baska yapilandlrrnalarda otoimmün bir hastal'kla iliskili olan epitop, biyomolekül, hücre ya da doku, otoimmün hastalik sistemik eritematöz oldugunda snRNP, otoimmün hastal ki bir Graves hastallgl oldugunda tiroid epitelyal hücre, tiroglobulin, tirotropin reseptöründen en az birisi, otoimmün hastalik trombositopenik purpura oldugunda bir troinbosit, otoimmün hastalik pemfigus oldugunda pemfigus antijen, desmoglein-3, desmoplakin, envoplakin ve büllöz pemfigoid antijen l,den en az birisi, otoimmün hastalik multipl skleroz oldugunda miyelin bazik protein, otoimmün hastalik tip 1 diyabet oldugunda bir pankreatik adack beta hücre ve otoimmün hastalIi miyasteni gravis oldugunda bir asetilkolin reseptörüdür. Baska bir yapLlandLrInada,bir immün tepkinin indüklenmesi ya da arttLijLljnasJiçin farmasötik bir bilesim saglanmakta olup, Söz konusu bilesim istemlerde izah edildigi gibi bir glukopiranosil lipid adjuvanl (GLA); ve farmasötik olarak kabul edilebilir bir tasß/TCT ya da eksipiyan içerir. Baska bir yapilhndlîlmadabir iininün tepkinin indüklenmesi ya da arttmlmasEiçin farmasötik bir bilesim saglanmakta olup, söz konusu bilesim bir antijen; istemlerde izah edildigi gibi bir glukopiranosil lipid adjuvanl (GLA); ve farmasötik olarak kabul edilebilir bir tasßlßüya da eksipiyan içerir. Baska bir yap [[andEmada,bir immün tepkinin indüklenmesi ya da arttßiûnas Eiçin farmasötik bir bilesim saglanmakta olup, söz konusu bilesim bir antijen; istemlerde izah edildigi gibi bir glukopiranosil lipid adjuvan3(GLA); bir toll benzeri reseptör (TLR) agonisti; ve farmasötik olarak kabul edilebilir bir tasyod ya da eksipiyan içerir. Baska bir yapllandlrrnada,TLR agonisti lipopolisakkarit, peptidoglikan, polilzC, CpG, 3M003, flagellin, ökaryotik ribozoinal uzamanln Laysmanya homologu ve baslatma faktörü 4a (Lelf) ve en az bir hepatit C antijeninden seçilir. Baska bir yapilandlîlmada bir iinmün tepkinin indüklenmesi ya da arttiillnas üiçin farmasötik bir bilesim saglanmaktad E, söz konusu bilesim sunlarj içermektedir: bir antijen; istemlerde izah edildigi gibi bir glukopiranosil lipid adjuvan 3(GLA); saponinler ve saponin mimetiklerinden seçilen en az bir ko-adjuvan; ve farmasötik olarak kabul edilebilir bir tasSlleya da eksipiyan. Baska bir yaplandlîmadabir immün tepkinin indüklenmesi ya da arttmilhiasjiçin farmasötik bir bilesim saglanmakta olup, söz konusu bilesim bir antij en; istemlerde izah edildigi gibi bir glukopiranosil lipid adjuvanl_ (GLA); ve bir yag ve içerir. Baska bir yap land nmada bir immün tepkinin indüklenmesi ya da arttlrllmasl için farmasötik bir bilesim saglanmakta olup, söz konusu bilesim sunlarl içermektedir: (a) bir antijen; (b) istemlerde izah edildigi gibi bir glukopiranosil lipid adjuvan (GLA); (e) (i: en az bir ko-adjuvan, (ii) en az bir TLR agonisti, (iii) en az bir imidazokuinolin immün tepki modifiye edici, ve (iv) en az bir çift sap iplik modifiye edici (dSLlM); ve (d) farmasötik olarak kabul edilebilir bir taslýlîzüya da eksipiyandan bir ya da daha fazlasl: Belirli baska yap Iand Bmalarda (i) bulunmas :halinde ko-adjuvan sap, bir bitki alkaloidi ve bir deterjandan seçilmekte olup, içerisindeki bitki alkaloidi tomatinden seçilir ve deterjan saponin, Polisorbat 80, Span 85 ve Stearil tirosinden seçilir, (ii) bulunmasühalinde TLR agonisti lipopolisakkarit, peptidoglikan, polil:C, CpG, 3MOO3, flagellin, ökaryotik ribozomal uzamanLrl Laysmanya homologu ve baslatma faktörü 4a (LeIF) ve en az bir hepatit C antijeni ve (iii) bulunmas halinde imidazokuinolin immün tepki modifiye edici resikuimod (R848), imikuimod ve gardikuimoddan seçilir. Baska bir yap [land Emada bir immün tepkinin indüklenmesi ya da arttmÜInasD için farmasötik bir bilesim saglanmakta olup, söz konusu bilesim sunlarüiçermektedir: bir antijen; istemlerde izah edildigi gibi bir glukopiranosil lipid adjuvan IGLA); ve bir ko- adjuvan ve farmasötik olarak kabul edilebilir bir tasSlBZlan en az birisi, içerisinde: ko- adjuvan bir sitokin, bir blok kopolimer ya da biyolojik olarak parçalanabilir bir polimer ve bir deterjandan seçilir ve farmasötik olarak kabul edilebilir tasSIEEkalsiyum fosfat, bir suda yag emülsiyonua bir yagda su emülsiyonu, bir lipozom ve bir mikropartikülden seçilen bir taslyldl liçerir. Belirli baska yapllandlrmalarda, söz konusu sitokin GM-CSF, parçalanabilir polimer Pluronik® L121, CRLIOOS, PLGA, PLA, PLG, ve polil: C"den seçilir ve söz konusu deterjan saponin, Polisorbat 80, Span 85 ve Stearil tirosinden olusan gruptan seçilir. Baska bir yap Iandimada asagîiakileri içeren bir farmasötik bilesim saglanmaktad 3: Bir antijeni kodlayan bir nükleik asit sekansîla uygulanabilir sekilde bagljolan bir baslatßüçeren en az bir rekombinan ekspresyon yapßî istemlerde izah edildigi gibi bir glukopiranosil lipid adjuvanL(GLA); ve farmasötik olarak kabul edilebilir bir taslchLya da eksipiyan. Belirli baska yapilandlrmalarda, rekombinan ekspresyon yapls.,| belirli baska yapllandlrmalarda bir adenovirüs, bir adeno iliskili virüs, bir herpesvirüs, bir lentivirüs, bir poksvirüs ve bir retrovirüsten seçilen bir virüste bulunan bir viral vektörde bulunur. YukarEla tarif edilen farmasötik bilesimlerin belirli baska yap [[and Emalar &da göre, söz konusu antijen ve GLA birbiriyle temas halindedir ve yukarüa tarif edilen farmasötik bilesimlerin belirli baska yap Jhnd imalarida göre söz konusu antijen ve GLA birbiriyle temas halinde degildir. Antijen ve GLAinß birbiriyle temas halinde olmadgj belirli baska yap Jhnd îrnalarda bunlar ayrükaplarda bulunur. Baska yap Iandîlmalarda, bir immün tepkisinin indüklenmesi ya da arttmlnasj için farmasötik bir bilesim saglanmakta olup, söz konusu bilesim bir antijen ve bir ilk farmasötik olarak kabul edilebilir taslylcl ya da eksipiyan içeren bir ilk kombinasyon; ve bir glukopiranosil lipid adjuvanl (GLA) ve içerisindeki antijen ve GLA birbiriyle temas halinde olmadlgl ikinci bir farmasötik olarak kabul edilebilir taslýFcH ya da eksipiyan içeren ikinci bir kombinasyon içermektedir. Baska bir yapIland Emada,söz konusu antijen ve GLA ayrü kaplarda bulunur. Belirli iliskili yap Hand Emalarda, farmasötik olarak kabul edilebilir ilk tasg/EE ya da eksipiyan, farmasötik olarak kabul edilebilir ikinci tasSlBJ ya da eksipiyandan farkllIlE. Belirli ve iliskili baska yapüandmmalarda, farmasötik olarak kabul edilebilir ilk tasgIßEya da eksipiyan, farmasötik olarak kabul edilebilir ikinci tasgzßEya da eksipiyandan farklEdegildir. Baska bir yap land limada, bulasldl lhastallk' tasima riski oldugundan süphelenilen ya da taslyan bir denekte bulas dl lbir hastallgln tedavi edilmesi ya da önlenmesi metodu saglanmakta olup, söz konusu metot denege (a) bir antijen; ve (b) glukopiranosil lipid adjuvan (GLA) içeren bir asEbilesiminin uygulanmasEiÜve bu suretle de bulasßj hastalEgEi tedavi edilmesi ya da önlenmesini içermektedir, söz konusu antijen bulasßü hastallkla iliskilendirilen en az bir bulasßü patojenden türetilir ya da bununla immünolojik olarak çapraz reaktiftir. Baska bir yap [[and Emada, bulasEEhastal It tas ila riski oldugundan süphelenilen ya da tasglan bir denekte bulaslIiElbir hastalgîl tedavi edilmesi ya da önlenmesi metodunda, bu bulusun Glukopiranozil lipid adjuvanmß kullanLmLI saglanmakta olup, söz konusu metot denege (a) bir antijen; ve (b) glukopiranosil lipid adjuvan (GLA); ve (0) bir toll benzeri reseptör (TLR) agonisti içeren bir asl bilesiminin uygulanmaslnl Ive bu suretle de bulasld lhastallgln tedavi edilmesi ya da önlenmesini içermektedir, söz konusu antijen bulasldl hastal kla iliskilendirilen en az bir bulasldl patojenden elde edilir ya da bununla immünolojik olarak çapraz reaktiftir. Baska bir yap land imada, TLR agonisti lipopolisakkarit, peptidoglikan, polil:C, CpG, 3M003, flagellin, ökaryotik ribozomal uzamanß Laysmanya homologu ve baslatma faktörü 4a (Lelf) ve en az bir hepatit C antijeninden seçilir. Baska bir yap [[and Emada, bulasEEhastalR tas &la riski oldugundan süphelenilen ya da tas @an bir denekte bulasEEbir hastalfgß tedavi edilmesi ya da önlenmesi metodu saglanmakta olup, söz konusu metot denege (a) bir antijen; ve (b) bir glukopiranosil lipid adjuvan (GLA); ve (o) saponinler ve saponin mimetiklerinden olusan gruptan seçilen en az bir ko-adjuvan içeren bir asleilesiminin uygulanmasnjve bu suretle de bulaslcl hastaligin tedavi edilmesi ya da önlenmesini içermektedir, söz konusu antijen bulaslcl hastalikla iliskilendirilen en az bir bulaslcl patojenden elde edilir ya da bununla immünolojik olarak çapraz reaktiftir. Baska bir yap Ilandîmada, bulasßîhastalll tas îna riski oldugundan süphelenilen ya da tasßl'an bir denekte bulaslübir hastalgîl tedavi edilmesi ya da önlenmesi metodu saglanmakta olup, söz konusu metot denege (a) bir antijen; ve (b) bir glukopiranosil lipid adjuvan (GLA); ve (e) bir yag ve uygulanmasElEve bu suretle de bulasBJhastalEgEl tedavi edilmesi ya da önlenmesini içermektedir, söz konusu antijen bulasßühastalkla iliskilendirilen en az bir bulasßü patojenden elde edilir ya da bununla immünolojik olarak çapraz reaktiftir. Baska bir yapllandlrrnada, bulasldl hastallk tasima riski oldugundan süphelenilen ya da taslyan bir denekte bulas O bir hastallg n tedavi edilmesi ya da önlenmesi metodunda, bu bulusun Glukopiranozil lipid adjuvanmm kullanüiîsaglanmakta olup, söz konusu metot denege (a) bir antijen; ve (b) bir glukopiranosil lipid adjuvan (GLA); ve (e) (i) en az bir ko- adjuvan, (ii) en az bir TLR agonisti, (iii) en az bir imidazokuinolin immün tepki modifiye edici, ve (iv) en az bir çift sap iplik immün modifiye ediciden (dSLIM) bir ya da daha fazlasEiEiçeren bir asjbilesiminin uygulanmasEiEve bu suretle de bulasßj hastalEglIi tedavi edilmesi ya da önlenmesini içermektedir, söz konusu antijen bulasEiEl hastalEkla iliskilendirilen en az bir bulasßüpatojenden elde edilir ya da bununla immünolojik olarak çapraz reaktiftir. Belirli baska yapLlandLijmalarda (i) bulunmasi halinde ko-adjuvan sap, bir bitki alkaloidi ve bir deterjandan seçilmekte olup, içerisindeki bitki alkaloidi tomatinden seçilir ve deterjan saponin, Polisorbat 80, Span 85 ve Stearil tirosinden seçilir, (ii) bulunmasl halinde TLR agonisti lipopolisakkarit, peptidoglikan, polilzC, CpG, 3M003, flagellin, ökaryotik ribozomal uzamanln Laysmanya homologu ve baslatma faktörü 4a (LelF) ve en az bir hepatit C antijeninden olusan gruptan seçilir ve (iii) bulunmas Ehalinde imidazokuinolin immün tepki modifiye edici resikuimod (R848), imikuimod ve gardikuimoddan olusan gruptan seçilir. Baska bir yap Jhnd Emada, bulasßühastalîk tas Ena riski oldugundan Süphelenilen ya da tasßlan bir denekte bulasBDbir hastalEgEi tedavi edilmesi ya da önlenmesi metodu saglanmakta olup, söz konusu metot denege (a) bir antijen; ve (b) bir glukopiranosil lipid adjuvan (GLA); ve (e) bir ko-adjuvan ve farmasötik olarak kabul edilebilir bir taslylcldan en az birisini içeren bir asl 'bilesiminin uygulanmas n lve bu suretle de bulaslcl hastaligin tedavi edilmesi ya da önlenmesini içermektedir, söz konusu ko- adjuvan bir sitokin, bir blok kopolimer ya da biyolojik olarak parçalanabilir bir polimer ve bir deterjandan seçilir ve söz konusu farmasötik olarak kabul edilebilir tasßtßü kalsiyum fosfat, bir suda yag emülsiyonu, bir yagda su emülsiyonu, bir liposom ve bir mikropartikülden olusan gruptan seçilen bir tasSEEiçerir, söz konusu antijen bulasBj hastalüâla iliskilendirilen en az bir bulasßüpatojenden elde edilir ya da bununla immünolojik olarak çapraz reaktiftir. Belirli baska yap [[andîmalarda, söz konusu sitokin GM-CSF, IL-2, IL-7, IL-12, TNF-on ve IFN-gamadan seçilir, blok kopolimer ya da biyolojik olarak parçalanabilir polimer Pluronik L121, CRL1005, PLGA, PLA, PLG, ve polil: C7den seçilir ve söz konusu deterjan saponin, Polisorbat 80, Span 85 ve Stearil tirosinden olusan gruptan seçilir. Baska bir yap land Emada, bulasßühastalüg tas &na riski oldugundan Süphelenilen ya da tasglan bir denekte bulasBübir hastalîgm tedavi edilmesi ya da önlenmesi metodu saglanmakta olup, söz konusu metot denege (a) bir antijeni kodlayan bir nükleik asit sekans Ela uygulanabilir bir biçimde bagljolan bir baslatBjiçeren en az bir rekombinan ekspresyon yapim ve (b) bir glukopiranosil lipid adjuvan (GLA) içeren bir asl bilesiminin uygulanmasîijve bu suretle de bulasiZthastalEgEi tedavi edilmesi ya da önlenmesini içermektedir, söz konusu antijen bulaso _hastalLlstla iliskilendirilen en az bir bulaslcl patojenden elde edilir ya da bununla immünolojik olarak çapraz reaktiftir. Baska bir yapllandlilmada, rekombinan ekspresyon yap'SU belirli baska yapllandlrmalarda bir adenovirüs, bir adeno iliskili virüs, bir herpesvirüs, bir lentivirüs, bir poksvirüs ve bir retrovirüsten seçilen bir virüste bulunan bir viral vektörde bulunur. YukarFda tarif edilen metotlarla ilgili belirli yaplTandEmalara göre, söz konusu antijen bir bakteriyum, bir virüs ve bir mantardan seçilen en az bir bulasîijpatojenden elde Baska bir yap [[andîmada, otoimmün bir hastalEk tas ßia riski oldugundan süphelenilen ya da tas [San bir denekte otoimmün hastalEgEl tedavi edilmesi ya da önlenmesi metodu saglanmakta olup, söz konusu metot denege (a) bir antijen; ve (b) bir glukopiranosil lipid adjuvan (GLA) içeren bir asi_ bilesiminin uygulanmasni ve bu suretle de otoimmün hasta] g n tedavi edilmesi ya da önlenmesini içermektedir, söz konusu antijen otoimmün hastalikla iliskilendirilen en az bir epitop, biyomolekül, hücre ya da dokudan elde edilir ya da bununla immünolojik olarak çapraz reaktiftir. Baska bir yapEIandîmada, otoimmün bir hastalEk tasima riski oldugundan süphelenilen ya da tasglan bir denekte otoimmün hastalEgEi tedavi edilmesi ya da önlenmesi metodu saglanmakta olup, söz konusu metot denege (a) bir antijen; (b) bir glukopiranosil lipid adjuvan (GLA); ve (c) toll benzeri bir reseptör (TLR) agonisti içeren bir as Ebilesiminin uygulanmasElEve bu suretle de otoimmün hastalgîl tedavi edilmesi ya da önlenmesini içermektedir, söz konusu antijen otoimmün hastalEkla iliskilendirilen en az bir epitop, biyomolekül, hücre ya da dokudan elde edilir ya da bununla immünolojik olarak çapraz reaktiftir. Baska yap land Ilmalarda, TLR agonisti lipopolisakkarit, peptidoglikan, poli11C, CpG, 3M003, flagellin, ökaryotik ribozomal uzamanln Laysmanya homologu ve baslatma faktörü 4a (Lelf) ve en az bir hepatit C antijeninden seçilir. Baska bir yapEIandEmada, otoimmün bir hastalER tasina riski oldugundan süphelenilen ya da tasglan bir denekte otoimmün bir hastalîgß tedavi edilmesi ya da önlenmesi metodu saglanmakta olup, söz konusu metot denege (a) bir antijen; ve (b) bir glukopiranosil lipid adjuvan (GLA); ve (c) saponinler ve saponin mimetiklerinden olusan gruptan seçilen en az bir ko-adjuvan içeren bir asElbilesiminin uygulanmasîlîlve bu suretle de otoimmün hastalgîl tedavi edilmesi ya da önlenmesini içermektedir, söz konusu antijen otoimmün hastalLlstla iliskilendirilen en az bir epitop, biyomolekül, hücre ya da dokudan elde edilir ya da bununla immünolojik olarak çapraz reaktiftir. Baska bir yapilandlrrnada, otoimmün bir hastalik taslma riski oldugundan süphelenilen ya da taslyan bir denekte otoimmün bir hastallgln tedavi edilmesi ya da önlenmesi metodu saglanmakta olup, söz konusu metot denege (a) bir antijen; ve (b) bir glukopiranosil tas @E :içeren bir as :bilesiminin uygulanmasîijve bu suretle de otoimmün hastalEgîl tedavi edilmesi ya da önlenmesini içermektedir, söz konusu antijen otoimmün hastalüîla iliskilendirilen en az bir epitop, biyomolekül, hücre ya da dokudan elde edilir ya da bununla immünolojik olarak çapraz reaktiftir. Baska bir yapIandimada, otoimmün hastalEk tas ila riski oldugundan süphelenilen ya da tasglan bir denekte bulasßEbir otoimmün hastalEgB tedavi edilmesi ya da önlenmesi metodu saglanmakta olup, söz konusu metot denege (a) bir antijen; ve (b) bir glukopiranosil lipid adjuvan (GLA); ve (e) (i) en az bir ko-adjuvan, (ii) en az bir TLR agonisti, (iii) en aZ bir imidazokuinolin immün tepki modifiye edici, ve (iv) en az bir çift sap iplik immün modifiye ediciden (dSLlM) bir ya da daha fazlasîiîiçeren bir asFbilesiminin uygulanmasüirve bu suretle de otoimmün hastalgîi tedavi edilmesi ya da önlenmesini içermektedir, söz konusu antijen otoimmün hastalEkla iliskilendirilen en az bir epitop, biyomolekül, hücre ya da dokudan elde edilir ya da bununla immünolojik olarak çapraz reaktiftir. Belirli baska yap [[andEmalarda (i) bulunmasjhalinde ko-adjuvan sap, bir bitki alkaloidi ve bir deterjandan seçilmekte olup, içerisindeki bitki alkaloidi tomatinden seçilir ve deterjan saponin, Polisorbat 80, Span 85 ve Stearil tirosinden seçilir, (ii) bulunmas Üialinde TLR agonisti lip0p01isakkarit, peptidoglikan, polil:C5 CpG, 3MOO3, flagellin, ökaryotik ribozomal uzaman'ri Laysmanya homologu ve baslatma faktörü 4a (LeIF) ve en az bir hepatit C antijeninden olusan gruptan seçilir ve (iii) bulunmasl halinde imidazokuinolin immün tepki modifiye edici resikuimod (R848), imikuimod ve gardikuimoddan olusan gruptan seçilir. Baska bir yap [[andEmada, bir otoimmün hastalEk tas lîna riski oldugundan süphelenilen ya da tas &an bir denekte otoimmün hastalEgß tedavi edilmesi ya da önlenmesi metodu saglanmakta olup, söz konusu metot denege (a) bir antijen; ve (b) bir glukopiranosil lipid adjuvan (GLA); ve (0) bir ko-adjuvan ve farmasötik olarak kabul edilebilir bir tasgiLcLdan en az birisini içeren bir asLbilesiminin uygulanmasnive bu suretle de otoimmün hastaligin tedavi edilmesi ya da önlenmesini içermektedir: söz konusu ko- adjuvan bir sitokin, bir blok kopolimer ya da biyolojik olarak parçalanabilir bir polimer ve bir deterjandan seçilir ve söz konusu farmasötik olarak kabul edilebilir taslyldll kalsiyum fosfat, bir suda yag emülsiyonu, bir yagda su emülsiyonu, bir liposom ve bir mikropartikülden olusan gruptan seçilen bir taslýrclîçerir, söz konusu antijen otoimmün hastalEkla iliskilendirilen en az bir epitop, biyomolekül, hücre ya da dokudan elde edilir ya da bununla immünolojik olarak çapraz reaktiftir. Baska bir yaptlhndimadaßöz konusu sitokin GM-CSF, IL-2, IL-7, IL-12, TNF-a ve lFN-gamadan seçilir, blok kopolimer ya da biyolojik olarak parçalanabilir polimer Pluronik L121, CRLlOOS, PLGA, PLA, PLG, ve polil: C°den seçilir ve söz konusu deterjan saponin, Polisorbat 80, Span 85 ve Stearil tirosinden olusan gruptan seçilir. Baska bir yapllandlrmada, bir otoimmün hastalik tasima riski oldugundan süphelenilen ya da taslyan bir denekte otoimmün hastaligin tedavi edilmesi ya da önlenmesi metodu saglanmakta olup, söz konusu metot denege (a) bir antijeni kodlayan bir nükleik asit sekans Eia uygulanabilir bir biçimde baglîblan bir baslatîiîliçeren en az bir rekombinan ekspresyon yapîslj ve (b) bir glukopiranosil lipid adjuvan (GLA) içeren bir as: bilesiminin uygulanmaslîtjve bu suretle de otoimmün hastalglîi tedavi edilmesi ya da önlenmesini içermektedir, söz konusu antijen otoimmün hastalEEtla iliskilendirilen en az bir epitop, biyomolekül, hücre ya da dokudan elde edilir ya da bununla immünolojik olarak çapraz reaktiftir. Baska bir yap [[land Emada, rekombinan ekspresyon yapîübelirli baska yapLlandLrInalarda bir adenovirüs, bir adeno iliskili virüs, bir herpesvirüs, bir lentivirüs, bir poksvirüs ve bir retrovirüsten seçilen bir virüste bulunan bir viral vektörde bulunur. Bir otoimmün hastaltgm tedavi edilmesi ya da önlenmesi metodu ile ilgili olarak yukarüa tarif edilen belirli yapEandmmalarda, söz konusu otoimmün hastalE Tip 1 diyabet, römatoid artrit, multipl skleroz, sistemik lupus eritematöz, miyestani gravis, Crohn hastalEgÇ Graves hastalEgÇ trombositopenik purpura ve pemfigustan olusan gruptan seçilir. Bir otoimmün hastalEgEl tedavi edilmesi ya da önlenmesi metoduyla ilgili olarak yukarßa tarif edilen baska yaptlandßmalarda otoimmün hastalkla iliskili olan epitop, biyomolekül, hücre ya da doku, otoimmün hastalLk sistemik eritematöz oldugunda snRNP, otoimmün hastalik bir Graves hasta] g loldugunda tiroid epitelyal hücre, tiroglobulin, tirotropin reseptöründen en az birisi, otoimmün hastallk trombositopenik purpura oldugunda bir trombosit, otoimmün hastallk pemfîgus oldugunda pemf'igus antijen, desmoglein-3, desmoplakin, envoplakin ve büllöz pemfigoid antijen Vden en az birisi, otoimmün hastalik multipl skleroz oldugunda miyelin bazik protein, otoimmün hastalüî tip 1 diyabet oldugunda bir pankreatik adack beta hücre ve otoimmün hastalEk miyasteni gravis oldugunda bir asetilkolin reseptöründen seçilir. Baska yap Ühndßmalara göre, kanser tas ßia riski oldugundan süphelenilen ya da tas [San bir denekte kanserin tedavi edilmesi ya da önlenmesi metodu saglanmakta olup, söz konusu metot denege (a) bir antijen; ve (b) bir glukopiranosil lipid adjuvan (GLA) içeren bir as bilesiminin uygulanmasini lve bu suretle de kanserin tedavi edilmesi ya da önlenmesini içermektedir, söz konusu antijen kanserle iliskilendirilen en az bir epitop, biyomolekül, hücre ya da dokudan elde edilir ya da bununla immünolojik olarak çapraz reaktiftir. Baska yap Jhnd îlmalara göre, kanser tas ET& riski oldugundan süphelenilen ya da tasßlan bir denekte kanserin tedavi edilmesi ya da önlenmesi metodu saglanmakta olup, söz konusu metot denege (a) bir antijen; (b) bir glukopiranosil lipid adjuvan (GLA); ve (c) toll benzeri bir reseptör (TLR) agonisti içeren bir asübilesiminin uygulanmasElE ve bu suretle de kanserin tedavi edilmesi ya da önlenmesini içermektedir, söz konusu antijen kanserle iliskilendirilen en az bir epitop, biyomolekül, hücre ya da dokudan elde edilir ya da bununla immünolojik olarak çapraz reaktiftir. Baska yapllandlrmalarda, TLR agonisti lipopolisakkarit, peptidoglikan, polil:C, CpG, 3M003, flagellin, ökaryotik ribozomal uzaman n Laysmanya homologu ve baslatma faktörü 4a (Lelf) ve en az bir hepatit C antijeninden seçilir. Baska yapilandmmalara göre, kanser tasßia riski oldugundan süphelenilen ya da tasýan bir denekte kanserin tedavi edilmesi ya da önlenmesi metodu saglanmakta olup, söz konusu metot denege (a) bir antijen; (b) bir glukopiranosil lipid adjuvan (GLA); ve (c) saponinler ve saponin mimetiklerinden olusan gruptan seçilen en az bir ko-adjuvan içeren bir as jbilesiminin uygulanmasElE ve bu suretle de kanserin tedavi edilmesi ya da Önlenmesini içermektedir, söz konusu antijen kanserle iliskilendirilen en az bir epitop, biyomolekül, hücre ya da dokudan elde edilir ya da bununla immünolojik olarak çapraz reaktiftir. Baska yapllandlnmalara göre, kanser taslma riski oldugundan süphelenilen ya da taslyan bir denekte kanserin tedavi edilmesi ya da önlenmesi metodu saglanmakta olup, söz konusu metot denege (a) bir antijen; (b) bir glukopiranosil lipid adjuvan (GLA); ve (0) bir yag ve ISCOMATRIXTM'den en az birisini içeren bir taslýrcl_ içeren bir as? bilesiminin uygulanmasîijve bu suretle de kanserin tedavi edilmesi ya da önlenmesini içermektedir, söz konusu antijen kanserle iliskilendirilen en az bir epitop, biyomolekül, hücre ya da dokudan elde edilir ya da bununla immünolojik olarak çapraz reaktiftir. Baska yap Elhndmmalara göre, kanser tas ßia riski oldugundan süphelenilen ya da tas lSlan bir denekte bulasEIEkanserin tedavi edilmesi ya da önlenmesi metodu saglanmakta olup, söz konusu metot denege (a) bir antijen; (b) bir glukopiranosil lipid adjuvan (GLA); ve (0) (i) en az bir ko-adjuvan, (ii) en az bir TLR agonisti, (iii) en az bir imidazokuinolin immün tepki modifiye edici, ve (iv) en az bir çift sap iplik immün modifiye ediciden (dSLIM) bir ya da daha fazlas If liçeren bir asl bilesiminin uygulanmaslnl ve bu suretle de kanserin tedavi edilmesi ya da önlenmesini içermektedir, söz konusu antij en kanserle iliskilendirilen en az bir epitop, biyomolekül, hücre ya da dokudan elde edilir ya da bununla immünolojik olarak çapraz reaktiftir. Belirli baska yap [land mmalarda (i) bulunmas Dhalinde ko-adjuvan sap, bir bitki alkaloidi ve bir deterjandan olusan gruptan seçilmekte olup, içerisindeki bitki alkaloidi tomatinden seçilir ve deterjan saponin, Polisorbat 80, Spam 85 ve Stearil tirosinden seçilir, (ii) bulunmas Ehalinde TLR agonisti lipopolisakkarit, peptidoglikan, polil:C, CpG, 3M003, flagellin, ökaryotik ribozomal uzamanm Laysmanya homologu ve baslatma faktörü 4a (LeIF) ve en az bir hepatit C antijeninden olusan gruptan seçilir ve (iii) bulunmas lhalinde imidazokuinolin immün tepki modifiye edici resikuimod (R848), iinikuimod ve gardikuimoddan olusan gruptan seçilir. Baska yap land Emalara göre, kanser tasima riski oldugundan süphelenilen ya da tas @an bir denekte kanserin tedavi edilmesi ya da önlenmesi metodu saglanmakta olup, söz konusu metot denege (a) bir antijen; (b) bir glukopiranosil lipid adjuvan (GLA); ve (c) bir ko-adjuvan ve farmasötik olarak kabul edilebilir bir tasglßlîlan en az birisini içeren bir as lilesiminin uygulanmasmüve bu suretle de kanserin tedavi edilmesi ya da önlenmesini içermektedir, söz konusu ko-adjuvan bir sitokin, bir blok kopolimer ya da biyolojik olarak parçalanabilir bir polimer ve bir deterjandan seçilir ve söz konusu farmasötik olarak kabul edilebilir tasyddkalsiyum fosfat, bir suda yag emülsiyonu, bir yagda su emülsiyonu, bir liposom ve bir mikropartikülden olusan gruptan seçilen bir taslylcl içerir, söz konusu antijen kanserle iliskilendirilen en az bir epitop, biyomolekül, hücre ya da dokudan elde edilir ya da bununla immünolojik olarak çapraz reaktiftir. Baska bir yap land iimada, söz konusu sitokin GM-CSF, IL-2, IL-7, IL-12, TNF-d ve Pluronik L121, CRL1005, PLGA, PLA, PLG, ve polil: Csden seçilir ve söz konusu deterjan saponin, Polisorbat 80, Span 85 ve Stearil tirosinden olusan gruptan seçilir. Baska yap [landmmalara göre, kanser tas Ena riski oldugundan süphelenilen ya da tas [Sian bir denekte kanserin tedavi edilmesi ya da önlenmesi metodu saglanmakta olup, söz konusu metot denege (a) bir antijeni kodlayan bir nükleik asit sekans ßa uygulanabilir bir biçimde baglEolan bir baslatEEiçeren en az bir rekombinan ekspresyon yapîüve (b) bir glukopiranosil lipid adjuvan (GLA) içeren bir as leilesiminin uygulanmasnive bu suretle de kanserin tedavi edilmesi ya da önlenmesini içermektedir, söz konusu antijen kanserle iliskilendirilen en az bir epitop, biyomolekül, hücre ya da dokudan elde edilir ya da bununla immünolojik olarak çapraz reaktiftir. Baska bir yap Tandimada, rekombinan ekspresyon yapiübelirli baska yap [Band Imalarda bir adenovirüs, bir adeno iliskili virüs, bir herpesvirüs, bir lentivirüs, bir poksvirüs ve bir retrovirüsten seçilen bir virüste bulunan bir viral vektörde bulunur. Kanserin tedavi edilmesi ya da önlenmesi metotlarîlda yukarZîa tarif edilen yöntemin belirli baska yap Eandîmalarda, söz konusu antijen, belirli baska yap [[andmmalarda bir primer katitümörden kaynaklanan ve belirli baska yap LlandLnnalarda metastatik ya da sekonder bir katl l tümör olan bir kanserden kaynaklanan ve belirli baska yapllandlrmalarda dolaslmdaki bir tüinör ya da bir asit tüinör olan bir kanserden kaynaklanan en az bir kanser hücresinden elde edilir. Belirli yapilhndFrmalarda, söz konusu kanser hücresi serviks kanseri, yumurtalER kanseri, meme kanseri, prostat kanseri, fibrosarkom, miksosarkom, liposarkom, kondrosarkom, 0steojenik sarkom, kordom, anjiyosarkom, endotelyosarkom, lenfanjiyosarkom, pseudomyxoma petitonei, lenfanjiyoendotelyosarkom, sinovyom, mezotelyoma, Ewing tümörü, leiomiyosarkom, rabdomiyosarkom, kolon karsinomu, pankreatik kanser, skuamöz hücreli karsinom, bazal hücreli karsinom, adenokarsinom, ter bezi karsinomu, yagbezi karsinomu, papiller karsinom, papiller adenokarsinomlar, kistadenokarsinom, medüller karsinom, bronkojenik karsinom, renal hücre karsinomu, hepatom, safra kanal lkarsinomu, koriyokarsinom, seminom, embriyonal karsinom ve Wilms" tümöründen seçilen bir kanserden kaynaklanln. Belirli baska yap land nmalarda, kanser hücresi testiküler tümör, akciger karsinomu, küçük hücreli akciger karsinomu, mesane karsinomu, epitelyal karsinom, gliyom, astrositom, medulloblastom, kraniyofaringiyom, ependimom, pinealom, hemanjiyoblastom, akustik nörom, oliodendrogliyom, meninjiyom, melanom, nöroblastom, retinoblastom, lösemi, lenfoma, multipl miyelom, Waldenstrom makroglobulinemi ve ag& zincir hastalEgEidan seçilen bir kanserden kaynaklanE. BulasßEhastalH& ya da otoimmün hastalEk ya da kanserin tedavi edilmesi ya da önlenmesi metotlarEida yukarüa tarif edilen yöntemlerin herhangi birinin belirli baska yapLlandLunalaana göre, uygulama adLmL bir kez gerçeklestirilir, diger taraftan bu metotlarln diger belirli yapllandlrrnalarlnda, uygulama ad mi | en az iki kez gerçeklestirilir ve belirli baska yapllandlnmalar nda uygulama adlml | üç kez gerçeklestirilir ve belirli baska yapilandEmalariida uygulama adeFdört ya da daha fazla kez gerçeklestirilir. Bulasßühastalk ya da otoimmün hastalüg ya da kanserin tedavi edilmesi ya da önlenmesi için yukarma tarif edilen metotlarEi herhangi birinin belirli baska yapEandlîmalarEia göre, uygulama adEnidan önce, denek, bakteriyel bir ekstrakt, canljbir virüs ass] antijeni kodlayan bir nükleik asit sekans Ea uygulanabilir bir biçimde baglanan bir baslatîljiçeren en az bir rekombinan ekspresyon yapßüve antijeni kodlayan bir nükleik asit sekansEia uygulanabilir bir biçimde baglanan bir baslathLiçeren bir viral vektörden seçilen bir hazLrlachLakanla hazLr hale getirilir. Baska bir yapilandlnmada,bakteriyel ekstrakt Bacillus Calmet-Guerin (BCG)"den elde Baska bir yathndîlmada, bir denekte istenilen bir antijene özgü iininün tepkisinin ortaya çEIîartEmas Eya da arttmülnas Biçin olan bir metot saglanmakta olup, söz konusu metot denege (a) bir antijen, ve (b) glukopiranosil lipid adjuvan (GLA) içeren bir aSD bilesiminin uygulanmasEiDiçerir. Baska bir yapilandmmada, bir denekte istenilen bir antijene özgü immün tepkisinin ortaya çItart Itnas :lya da arttîanas :için olan bir metot saglanmakta olup, söz konusu metot denege (a) bir antijen, (b) glukopiranosil lipid adjuvan (GLA), ve bir toll benzeri reseptör (TLR) agonisti içeren bir asLbilesiminin uygulanmaslnl . içerir. Baska yap land nnalarda, TLR agonisti lipopolisakkarit, peptidoglikan, poliliC, CpG, 3M003, flagellin, ökaryotik ribozomal uzamanln Laysmanya homologu ve baslatma faktörü 4a (Lelf) ve en az bir hepatit C antijeninden seçilir. Baska bir yap land rrnada, bir denekte istenilen bir antijene özgü immün tepkisinin ortaya çükartllmas Fis/a da arttlîllmaslîçin olan bir metot saglanmakta olup, söz konusu metot denege (a) bir antijen, (b) bir glukopiranosil lipid adjuvan (GLA), ve (c) saponin ve saponin mimetiklerinden olusan gruptan seçilen en az bir ko-adjuvan içeren bir as Ebilesiminin uygulanmasîijiçerir. Baska bir yap Jhnd Emada, bir denekte istenilen bir antijene özgü immün tepkisinin ortaya çEkartElInasZlya da arttEEünasEiçin olan bir metot saglanmakta olup, söz konusu metot denege (a) bir antijen, (b) bir glukopiranosil tasg/LcLiçeren bir asLbilesiminin uygulanmasLuLliçerir. Baska bir yapLlandLnnada, bir denekte istenilen bir antijene özgü immün tepkisinin ortaya çlkaitllmasl ya da arttlrllmasl için olan bir metot saglanmakta olup, söz konusu metot denege (a) bir antijen, (b) bir glukopiranosil lipid adjuvan (GLA) ve (e) (i) en az bir ko-adjuvan, (ii) en az bir TLR agonisti, (iii) en az bir imidazokuinolin immün tepki modifiye edici, ve (iv) en az bir çift sap iplik immün modifiye edici (dSLIM) içeren bir asübilesiminin uygulanmasEiEiçerir. Belirli baska yap Iand imalarda (i) bulunmas [halinde ko-adjuvan sap, bir bitki alkaloidi ve bir deterjandan olusan gruptan seçilmekte olup, içerisindeki bitki alkaloidi tomatinden seçilir ve deterjan saponin, Polisorbat 80, Spam 85 ve Stearil tirosinden seçilir, (ii) bulunmas :lhalinde TLR agonisti lipopolisakkarit, peptidoglikan, poli12C, CpG, 3M003, Ilagellin, ökaryotik ribozomal uzamanuj Laysmanya homologu ve baslatma faktörü 4a (LeIF) ve en az bir hepatit C antijeninden olusan gruptan seçilir ve (iii) bulunmasl lhalinde imidazokuinolin immün tepki modifiye edici resikuimod (R848), imikuimod ve gardikuimoddan olusan gruptan seçilir. Baska bir yapIandîlmada, bir denekte istenilen bir antijene özgü immün tepkisinin ortaya çEllartEl'mas Eya da arttmülnas Üiçin olan bir metot saglanmakta olup, söz konusu metot denege (a) bir antijen, (b) glukopiranosil lipid adjuvan (GLA), ve (e) bir ko- adjuvan ve farmasötik olarak kabul edilebilir bir tasßzßßan en az birisini içeren bir tasß/ßEiçeren bir asEbilesiminin uygulanmasEiEiçerir, söz konusu ko-adjuvan bir sitokin, bir blok kopolimer, biyolojik olarak parçalanabilir bir polimer ve bir deterjandan seçilir ve söz konusu farmasötik olarak kabul edilebilir taslylcl .kalsiyum fosfat, bir suda yag emülsiyonu, bir yagda su emülsiyonu, bir liposom ve bir mikropartikülden olusan gruptan seçilen bir taslylcl içerir. Belirli baska yapllandlrmalarda, söz konusu sitokin GM-CSF, IL-2, lL-7, IL-12, TNF-oi ve IFN- gamadan seçilir, blok kopolimer ya da biyolojik olarak parçalanabilir polimer Pluronik L121, CRL1005, PLGA, PLA, PLG, ve polil: C,den seçilir ve söz konusu deterjan saponin, Polisorbat 80, Span 85 ve Stearil tirosinden olusan gruptan seçilir. Baska bir yapIandimada, bir denekte istenilen bir antijene özgü immün tepkisinin ortaya çEEartEmas Eya da arttßühias Diçin olan bir metot saglanmakta olup, söz konusu metot denege (a) bir antijeni kodlayan bir nükleik asit sekansEia uygulanabilir bir biçimde baglanan bir baslatduiçeren en az bir rekombinan ekspresyon yapLsiL, ve (b) glukopiranosil lipid adjuvan (GLA) içeren bir as lbilesiminin uygulanmasn liçerir. Belirli baska yapilandlnmalarda, rekombinan ekspresyon yaplSU belirli baska yapilandEmalarda bir adenovirüs, bir adeno iliskili virüs, bir herpesvirüs, bir lentivirüs, bir poksvirüs ve bir retrovirüsten seçilen bir virüste bulunan bir Viral vektörde bulunur. Bir sujede, istenilen antijene özgü cevablîi ortaya çEIîarElînasEveya anilnaslîia iliskin yukarüa açERlanan yöntemlerin ilave yapEIandEmalarEida, GLA 3,-de-O-asilatlEl degildir. Bir sujede istenilen antijene özgü cevabi ortaya çügarümas Eveya artmühias lîla iliskin diger ilave yapIandimalarda, GLA sunlarjiçermektedir: (i) ister indirgetici olmayan terminus glukosaminin Vinci heksosamin pozisyonu ve indirgeyici terminus glukosaminin heksosamin pozisyonu 6 aras nda bir eter baglant 9› ivas'tas yla indirgeyici olmayan terminus glukosamine bagli indirgeyici bir terminus glukosamine sahip bir diglukosamin omurgasF; (ii) indirgeyici olmayan terminus glukosaminin heksosamin pozisyonu 4"e bagIIO-fosforil grubu; ve (iii) altEyaglîasil zincirine kadar zincir; burada yaglE asil zincirlerinden biri bir ester baglantE içerisinden indirgeyici terminus glukosaminin 3-hidroksisine bagllîllî, burada yaglüasil zincirlerinden biri bir amid baglantEiçerisinden indirgeyici olmayan terminus glukosaminin 2-aminosuna baglîîm ve bir ester baglantßEiçerisinden 12 karbon atomundan daha fazla olan bir alkanoil zincirine baglE olan bir tetradekonoil zincirini içermektedir ve burada yaglü asil zincirlerinden biri bir esterbaglantsi içerisinden indirgeyici olmayan terminus glukosaminin 3-hidroksisine baglldlr ve bir ester baglantIsll liçerisinden 12 karbon atomundan fazla olan bir alkanoil zincirine bagll bir tetradekanoil zincirini içermektedir. Bazi iliskili ilave yapllandlrmalarda TLR agonisti, mevcut oldugunda TLR-2, TLR-3, TLR-4, TLR-5, TLR-6, TLR-7, TLR-8 ve TLR-9"dan seçilen en az bir TLR ile etkilesime geçerek bir biyolojik sinyali iletebilmektedir. Belirli ve iliskili baska yapEandEmalarda, bulunmasjhalinde TLR agonisti TLR-2, TLR-3, TLR-4, TLR-5, TLR-6, TLR-7, TLR-8 ve TLR-9`dan seçilen en az bir TLR ile etkileserek biyolojik bir sinyali verebilir. Baska yapllandlrlmalarda, TLR agonisti lipopolisakkarit, peptidoglikan, polil:C, CpG, 3M003, flagellin, ökaryotik ribozomal uzamanm Laysmanya homologu ve baslatma faktörü 4a (Lelf) ve en az bir hepatit C antij eninden seçilir. Bir denekte istenilen bir antijene özgü tepkinin ortaya çÜîartEl'mas Eya da arttmülnas Ea yönelik yukarüa tarif edilen yöntemlerin belirli ilave yap [lhndmmalarßda, söz konusu GLA asag maki formüle sahiptir: R1, R3, R5 ve R6 ifadeleri undesildir; ve R2 ve R4 ifadeleri tridesildir. Bir denekte istenilen bir antijene özgü tepkinin ortaya çElîartEl'mas Eya da arttmühias îia iliskin yukarEla tarif edilen yöntemlerin belirli baska yap Jhndmmalarlîlda, as Ebilesimi bir konakta bir immün tepkisini ortaya çLkartabilir. Belirli baska yapLlandLijmalarda immün tepki antijene Özgüdür. Bir denekte istenilen bir antijene özgü tepkiyi ortaya çikartma ya da arttlnnak için yukarida tarif edilen metotlar ri belirli baska yapilandlîmalarlîlda, söz konusu antijen bir konakta humoral bir tepki ve bir hücre aracEEtepkiden seçilen bir immün tepkiye neden olabilir. Bir denekte istenilen bir antijene özgü tepkinin ortaya çEkartElrnasüya da arttillnas jiçin yukarîla tarif edilen metotlarEi belirli baska yapiandlîmalarßda, as jbilesimi bir konakta asagmakilerden olusan gruptan seçilen bir immün tepkisini ortaya çEEartabilir: bir THl-tipi T lenfosit tepkisi, bir TH2-tipi T lenfosit tepkisi, bir sitotoksik T lenfosit (CTL) tepkisi, bir antikor tepkisi, bir sitokin tepkisi, bir lenfokin tepkisi, bir kemokin tepkisi ve bir inflamatuar tepki. Bir denekte istenilen bir antijene özgü tepkinin ortaya çLlstartLIinasl_ ya da arttlrllmasl 'için yukarida tarif edilen metotlarln belirli baska yap'land'itmalar nda, as› l bilesimi bir konakta asagldakilerden olusan gruptan seçilen bir immün tepkisini ortaya çlkartabilir: (a) sitokinin interferon-gama (lFN-y) ve tümör nekroz faktörü-alfa (TNF- d),dan seçildigi bir ya da birden daha fazla sitokinin üretimi, (b) interlökinin lL-l, lL-2, birden daha fazla interlökinin üretimi, (0) kemokinin MIP-la, MIP-l ß, RANTES, CCL4 ve CCL5°ten seçildigi bir ya da birden daha fazla kemokinin üretimi, ve ((1) bir bellek T hücre tepkisi, bir bellek B hücre tepkisi, bir efektör T hücre tepkisi, bir sitotoksik T hücre tepkisi ve bir efektör B hücre tepkisinden seçilen bir lenfosit tepkisi. Belirli baska yapllandlrtmalara göre bir asl ` bilesimin hazlrilamak için bir metot saglanmakta olup, söz konusu metot (a) bir antijen ve (b) bir glukopiranosil lipid adjuvan (GLA) kar lêtFrlllnash îçermektedir. Belirli baska yap Hand ilmalara göre, bir aslT bilesimi haz Elamak için bir metot saglanmakta olup, söz konusu metot (a) bir antijen, (b) bir glukopiranosil lipid adjuvanD(GLA) ve (e) bir toll benzeri reseptör (TLR) agonistinin karßtmmnaslîiü içermektedir. Baska yap Ühnd Emalarda, TLR agonisti lipopolisakkarit, peptidoglikan, polil:C, CpG, 3M003, flagellin, ökaryotik ribozomal uzamanlîl Laysmanya homologu ve baslatma faktörü 4a (Lelf) ve en az bir hepatit C antijeninden seçilir. Belirli baska yap Iandimalara göre bir as Ebilesimi haz Mamak için bir metot saglanmakta olup, söz konusu metot (a) bir antijen, (b) bir glukopiranosil lipid adjuvan (GLA), ve (c) saponinler ve saponin mimetiklerinden olusan gruptan seçilen en az bir ko-adjuvan n karlsltiii lmasn› içermektedir. Belirli baska yapllandlrmalara göre bir asl bilesimin hazirlamak için bir metot saglanmakta olup, söz konusu metot (a) bir antijen, (b) bir glukopiranosil lipid adjuvan (GLA), ve (0) bir yag ve Belirli baska yap Iand Ilmalara göre bir asE bilesimi hazmlamak için bir metot saglanmakta olup, söz konusu metot (a) bir antijen; (b) bir glukopiranosil lipid adjuvan: (GLA); ve (i) en az bir ko-adjuvan, (ii) en az bir TLR agonisti, (iii) en az bir imidazokuinolin immün tepki modifiye edici, ve (iv) en az bir çift sap iplik immün modifiye ediciden (double stem loop immune modifier; dSLIM) bir ya da daha fazlasßm karßtßümaslîaüçermektedir. Belirli baska yapEandlîzmalarda (i) bulunmasj halinde ko-adjuvan sap, bir bitki alkaloidi ve bir deterjandan olusan gruptan seçilmekte olup, içerisindeki bitki alkaloidi tomatinden seçilir ve deterjan saponin, Polisorbat 80, Span 85 ve Stearil tirosinden seçilir, (ii) buluninasl l halinde TLR agonisti lipopolisakkarit, peptidoglikan, polilzC, CpG, 3M003, flagellin, ökaryotik ribozomal uzamanß Laysmanya homologu ve baslatma faktörü 4a (LelF) ve en az bir hepatit C antijeninden olusan gruptan seçilir ve (iii) bulunmasjhalinde imidazokuinolin immün tepki modifiye edici resikuimod (R848), imikuimod ve gardikuimoddan olusan gruptan seçilir. Belirli baska yapIand imalara göre, bir asübilesimi hazElamak için bir metot saglanmakta olup, söz konusu metot (a) bir antijen, (b) glukopiranosil lipid adjuvan (GLA), ve (o) bir ko-adjuvan ve farmasötik olarak kabul edilebilir bir tasßlßßi karLstLrLlmasLnLiçermektedir, söz konusu ko-adjuvan bir sitokin, bir blok k0polimer ya da biyolojik olarak parçalanabilir bir polimer ve bir deterjandan seçilir ve söz konusu farmasötik olarak kabul edilebilir tas y d kalsiyum fosfat, bir suda yag emülsiyonu, bir yagda su emülsiyonu, bir liposom ve bir mikropartikülden olusan gruptan seçilen bir tas @E Eiçerir. Belirli baska yap [land Ernalarda, söz konusu sitokin GM-CSF, lL-2, lL-7, parçalanabilir polimer Pluronik L121, CRL1005, PLGA, PLA, PLG, ve polil: C°den seçilir ve söz konusu deterjan saponin, Polisorbat 80, Span 85 ve Stearil tirosinden olusan gruptan seçilir. Belirli baska yapLlandemalara göre, bir asi bilesimi hazLrlamak için bir metot saglanmakta olup, söz konusu metot (a) bir antijeni kodlayan bir nükleik asit sekans na uygulanabilir bir biçimde baglanan bir baslatlcl içeren en az bir rekoinbinan ekspresyon yaplsl, ve (b) glukopiranosil lipid adjuvanln (GLA) karlStlIillmas n içermektedir. Belirli baska yapllandlrmalarda, rekombinan ekspresyon yaplsl ,lbelirli baska yaplland nmalarda bir adenovirüs, bir adeno iliskili Virüs, bir herpesvirüs, bir lentivirüs, bir poksvirüs ve bir retrovirüsten seçilen bir Virüste bulunan bir viral vektörde bulunur. Belirli yap [Iandîmalarda söz konusu GLA 3,-de-O-açillenmis degildir. Belirli yap [[andîmalarda, TLR agonisti TLR-2, TLR-3, TLR-4, TLR-5, TLR-6, TLR-7, TLR-8 ve TLR-9,dan seçilen en az bir TLR ile etkileserek biyolojik bir sinyali verebilir. Baska yap [[andîmalarda, TLR agonisti lipopolisakkarit, peptidoglikan, polilzc, CpG, 3M003, flagellin, ökaryotik ribozomal uzamanß Laysmanya homologu ve baslatma faktörü 4a (LeIF) ve en az bir hepatit C antijeninden seçilir. Yukarida tarif edilen bir asl [bilesimi hazirlama metotlarlnln belirli yapllandlrimalarlna göre, söz konusu GLA asagmaki formüle sahiptir: R1, R3, R5 ve R6 ifadeleri undesildir; ve R2 ve R4 ifadeleri tridesildir. Belirli baska yap [[and mmalarda, kar @tmma adiij emülsiyon haline getirmeyi içermektedir ve belirli baska yap Iand Emalarda, karßtîma adlînü belirli yapEandEmalarda mikropartiküllerden olusan partiküller olusturulmasElüiçermektedir. Belirli baska yap Ühndmmalarda, karßtima adEnEantijenin tamamEya da bir kßmßüve GLAhEl tamam Dya da bir kßmüüçeren bir çökelti olusturulmasElüçermektedir. Belirli baska yap land Ilmalarda, asag dakileri içeren bir immünolojik adjuvan farmasötik bilesimi saglanmaktadlîl: istemlerde izah edildigi gibi bir glikopiranosil lipid adjuvanE(GLA); ve farmasötik olarak kabul edilebilir bir tasßtßüya da eksipiyan. Belirli baska yapllandîlmalarda, immünolojik bir adjuvan bilesimi saglanmakta olup, söz konusu bilesim istemlerde izah edildigi gibi bir glikopiranosil lipid adjuvan (GLA); ve bir toll benzeri reseptör (TLR) agonisti içermektedir. Belirli baska yap land îlmalarda, TLR agonisti lipopolisakkarit, peptidoglikan, polilzC, CpG, 3M003, flagellin, ökaryotik ribozomal uzamani Laysmanya homologu ve baslatma faktörü 4a (LeII) ve en az bir hepatit C antijeninden seçilir. Belirli baska yapLlanstmalarda, asagLdakileri içeren bir immünolojik adjuvan bilesimi saglanmaktadir: istemlerde izah edildigi gibi bir glukopiranosil lipid adjuvan (GLA); ve saponinler ve saponin mimetiklerinden seçilen en az bir ko-adjuvan. Belirli baska yapHandTrmalarda, asagldakileri içeren bir immünolojik adjuvan farmasötik bilesimi saglanmaktadfüz istemlerde izah edildigi gibi bir glikopiranosil lipid adjuvanü(GLA); ve bir yag ve ISCOMATRIXTM"den en az birisini içeren farmasötik olarak kabul edilebilir bir tasSIEE Belirli baska yap [[andEmalarda, asag Elakileri içeren bir immünolojik adjuvan bilesimi saglanmaktadî: (a istemlerde izah edildigi gibi bir glukopiranosil lipid adjuvan (GLA); (b) (i) en az bir ko-adjuvan, (ii) en az bir TLR agonisti, (iii) en az bir imidazokuinolin immün tepki modifiye edici, ve (iv) en az bir çift sap iplik modifiye ediciden (dSLIM) bir ya da daha fazlaslg Belirli baska yap Handlrlmalarda (i) bulunmas Fhalinde ko-adjuvan sap, bir bitki alkaloidi ve bir deterjandan olusan gruptan seçilmekte olup, içerisindeki bitki alkaloidi tomatindir ve deterjan saponin, Polisorbat 80, Span 85 ve Stearil tirosinden seçilir, (ii) bulunmasü halinde TLR agonisti lipopolisakkarit, peptidoglikan, polilzC, CpG, 3M003, flagellin, ökaryotik ribozomal uzamanß Laysmanya homologu ve baslatma faktörü 4a (LeIF) ve en az bir hepatit C antijeninden olusan gruptan seçilir ve (iii) bulunmasE halinde imidazokuinolin immün tepki modifiye edici resikuimod (R848), imikuimod ve gardikuimoddan olusan gruptan seçilir. Belirli baska yapiland'iimalarda, asag dakileri içeren bir immünolojik adjuvan bilesimi saglanmaktadlr: istemlerde izah edildigi gibi bir glukopiranosil lipid adjuvanl (GLA); ve bir ko-adjuvan ve farmasötik olarak kabul edilebilir bir taslylcldan en az birisi, içerisinde: söz konusu ko-adjuvan bir sitokin, bir blok kopolimer ya da biyolojik olarak parçalanabilir bir polimer ve bir deterj andan seçilir ve farmasötik olarak kabul edilebilir tasgllîzEkalsiyum fosfat, bir suda yag emülsiyonu, bir yagda su emülsiyonu, bir lipozom ve bir mikropartikülden seçilen bir taslS/@Eiçerin Belirli baska yapülandimalarda, söz konusu sitokin GM-CSF, IL-2, IL-7, IL-l2, TNF ve IFN-gamadan seçilir, blok kopolimer ya da biyolojik olarak parçalanabilir polimer Pluronik L121, CRLlOOS, PLGA, PLA, PLG, ve polil: C"den seçilir ve söz konusu deterjan saponin, Polisorbat 80, Spam 85 ve Stearil tirosinden olusan gruptan seçilir. Belirli baska yapilandliimalarda, bir konakta immünolojik cevap verme yetenegini degistirmenin bir metodu saglanmakta olup, söz konusu kullanEn sunlarFliçermektedir: konaga istemlerde izah edildigi gibi bir glikopiranosil lipid adjuvanD (GLA) ve farmasötik olarak kabul edilebilir bir tasßlBDya da eksipiyan içeren bir immünolojik adjuvan farmasötik bilesimi uygulanmas jve bu suretle de konagîi immünolojik cevap verme yeteneginin degistirilmesi. Belirli baska yapÜhndßmalarda, bir konakta immünolojik cevap verme yetenegini degistirmek için bir metot saglanmakta olup, söz konusu metot sunlarüçermektedir: konaga (a) bir glikopiranosil lipid adjuvan (GLA) ve (b) toll benzeri bir reseptör (TLR) agonisti içeren bir immünolojik adjuvan bilesimi uygulanmasl l ve bu suretle de konagln immünolojik cevap verme yeteneginin degistirilmesi. Baska yapllandlrmalarda, TLR agonisti lipopolisakkarit, peptidoglikan, poli12C, CpG, 3M003, flagellin, ökaryotik ribozomal uzamanTrl Laysmanya homologu ve baslatma faktörü 4a (Lelf) ve en az bir hepatit C antijeninden seçilir. Belirli baska yapEandEInalarda, bir konakta immünolojik cevap verme yetenegini degistirmek için bir metot saglanmakta olup, söz konusu metot sunlarEiçermektedir: konaga bir glikopiranosil lipid adjuvan (GLA) ve saponinler ve saponin mimetiklerinden olusan gruptan seçilen en az bir ko-adjuvan içeren bir immünolojik adjuvan bilesimi uygulanmasü ve bu suretle de konagEl immünolojik cevap verme yeteneginin degistirilmesi. Belirli baska yapLllandLijmalarda, bir konakta immünolojik cevap verme yetenegini degistirmenin bir metodu saglanmakta olup, söz konusu kullanim sunlarI l içermektedir: konaga bir glikopiranosil lipid adjuvan (GLA) ve bir yag ve içeren bir immünolojik adjuvan bilesimi uygulanmas lve bu suretle de konag n immünolojik cevap verme yeteneginin degistirilmesi. Belirli baska yapTand Tlmalarda, bir konakta immünoloj ik cevap verme yetenegini degistirmenin bir metodu saglanmakta olup, söz konusu kullanlîh sunlarjiçermektedir: konaga bir glikopiranosil lipid adjuvan (GLA) ve (i) en az bir ko-adjuvan, (ii) en az bir TLR agonisti, (iii) en az bir imidazokuinolin immün tepki modifiye edici, ve (iv) en az bir çift sap iplik immün modifiye ediciden (DSLIM) bir ya da daha fazlaslîiüiçeren bir immünolojik adjuvan bilesimi uygulanmasEve bu suretle de konaglîi immünolojik cevap verme yeteneginin degistirilmesi. Belirli baska yapilandlrimalarda bulunmasl halinde ko-adjuvan sap, bir bitki alkaloidi ve bir deterjandan olusan gruptan seçilmekte olup, içerisindeki bitki alkaloidi tomatindir ve deterjan saponin, Polisorbat 80, Span 85 ve Stearil tirosinden seçilir, bulunmas üialinde TLR agonisti lipopolisakkarit, peptidoglikan, poli11C, CpG, 3MOO3, Ilagellin, ökaryotik ribozomal uzamanîl Laysmanya homologu ve baslatma faktörü 4a (LeIF) ve en az bir hepatit C antijeninden olusan gruptan seçilir ve bulunmasjhalinde imidazokuinolin immün tepki modifiye edici resikuimod (R848), imikuimod ve gardikuimoddan olusan gruptan seçilir. Belirli baska yapllandlrimalarda, bir konakta immünolojik cevap verme yetenegini degistirmenin bir metodu saglanmakta olup, söz konusu kullanlm sunlarl liçermektedir: konaga bir glukopiranosil lipid adjuvan (GLA); ve bir ko-adjuvan ve farmasötik olarak kabul edilebilir bir tasýßian en az birisini içeren immünolojik bir adjuvan bilesiminin uygulanmasü ve bu suretle konagß immünolojik cevap verme yeteneginin degistirilmesi, söz konusu ko-adjuvan bir sitokin, bir blok kopolimer ya da biyolojik olarak parçalanabilir bir polimer ve bir deterjandan seçilir ve söz konusu farmasötik olarak kabul edilebilir taslSIEEkalsiyum fosfat, bir suda yag emülsiyonu, bir yagda su emülsiyonu, bir liposom ve bir mikropartikülden olusan gruptan seçilen bir tasßlßü içerir. Belirli baska yap LlandLijmalarda, söz konusu sitokin GM-CSF, IL-2, IL-7, IL-12, TNF-a ve IFN-gamadan seçilir, blok kopoliiner ya da biyolojik olarak parçalanabilir polimer Pluronik L121, CRL1005, PLGA, PLA, PLG, ve polil: C"den seçilir ve söz konusu deterjan saponin, Polisorbat 80, Span 85 ve Stearil tirosinden olusan gruptan seçilir. Bir konakta immünolojik cevap verme yeteneginin degistirilmesi için yukarEla tarif edilen yöntemlerin belirli baska yapühndmmalarlîida, uygulama ad lInEbir, iki, üç, dört ya da daha fazla kez gerçeklestirilir. Bir konakta immünolojik cevap verme yetenegini degistirmek için yukarEia tarif edilen metotlarß diger çesitli yapflandimalarida, konakta immünolojik cevap verme yeteneginin degistirilmesi bir immün tepkinin indüklenmesi ya da arttEEmasßEiçermektedir. Bir konakta immünolojik cevap verme yetenegini degistirmek için yukarLda tarif edilen metotlarij diger çesitli yapllandlrmalarlnda, konakta immünolojik cevap verme yeteneginin degistirilmesi bir immün tepkinin asag lyönlü olarak regüle edilmesini içermektedir. Bir konakta immünolojik cevap verme yetenegini degistirmek için yukarfda tarif edilen metotlarm belirli baska yapEIandîmalarEida, söz konusu metot ayrßa immünolojik cevap verme yeteneginin indüklenmesi ya da arttEtImas Eistenen bir bulas B :hastalü'çla iliskili olan en az bir bulasEEpatojenden elde edilen ya da bununla immünolojik olarak çapraz reaktif olan bir antijenin es zamanlEolarak ya da sEalîblarak uygulanmasüüiçermektedir. Bu yap [[andîmalarda uygulama adiiîbir, iki, üç, dört ya da daha fazla kez gerçeklestirilir. Bir konakta immünolojik cevap verme yetenegini degistirmek için yukarßa tarif edilen metotlaan belirli baska yapLlandLijmalarijda, söz konusu metot immünolojik cevap verme yeteneginin asagl !yönlü olarak regüle edilmesi istenen bir otoimmün hastallkla iliskili olan en az bir epitop, biyomolekül, hücre ya da dokudan elde edilen ya da bunlarla immünolojik olarak çapraz reaktif olan bir antijenin es zamanl`lolarak ya da sEalEolarak uygulanmasEiEiçermektedir. Bu yap Hand Emalarda uygulama adînüair, iki, üç, dört ya da daha fazla kez gerçeklestirilir. Bir konakta immünolojik cevap verme yetenegini degistirmek için yukarma tarif edilen metotlarlîi belirli baska yapEandEmalarEida, söz konusu metot immünolojik cevap verme yeteneginin indüklenmesi ya da arttBJhiasjistenen bir kanserle iliskili olan en az bir epitop, biyomolekül, hücre ya da dokudan elde edilen ya da bunlarla immünolojik olarak çapraz reaktif olan bir antijenin es zamanlL olarak ya da sLrjalLJ olarak uygulanmasLnU içermektedir. Bu yap landliimalarda uygulama adlml bir, iki, üç, dört ya da daha fazla kez gerçeklestirilir. Baska bir yapllandlnmada asagldakileri içeren bir kit saglanmaktadln: Yukarlda tarif edildigi gibi bir ilk kapta immünolojik bir adjuvan bilesimi; ve ikinci bir kapta bir antijen, söz konusu immünolojik adjuvan bilesimi antijenle temas halinde degildir. Baska bir yapülandmmada asagidakileri içeren bir kit saglanmaktadß: YukarEla tarif edildigi gibi bir ilk kapta immünolojik bir adjuvan bilesimi; ve ikinci bir kapta bir antijeni kodlayan bir nükleik asit sekansEia uygulanabilir bir biçimde baglanan bir baslatEEiçeren en az bir rekombinan ekspresyon yaplEÇ söz konusu immünolojik adjuvan bilesimi rekombinan ekspresyon yapgýla temas halinde degildir. YukarEla tarif edilen kitin diger belirli yap landLnnalaanda, söz konusu antijen bir bakteri, bir Virüs, bir maya ve bir protozoandan seçilen en az bir bulasldl patojenden elde edilir. Yukarlda tarif edilen kitin diger belirli yapilandlrlmalarlnda, söz konusu antijen en az bir kanser hücresinden elde edilir. Yukarda tarif edilen kitin diger belirli yapEandEmalarEida, söz konusu antijen otoimmün bir hastalüîla iliskili olan en az bir epitop, biyomolekül, hücre ya da bir dokudan elde edilir ya da bunlarla immünolojik olarak çapraz reaktiftir. Mevcut bulusun bu ve diger yönleri, asagEiaki detayljtarifname ve ekteki çizimler referans al marak daha aç& bir biçimde anlas [[acaktE. Ek olarak, istemlerde tanEnlanan bu bulusun çesitli yönlerini daha detayli_ olarak tarif eden ve bu nedenle kendi bütünlükleri içerisinde referans olarak dahil edilen çesitli referanslar aç klanmaktad 11. SEKILLERIN ÇESITLI YÖNLERININ KISA AÇIKLAMASI Sekil 1, MPL-AF ve GLA-AF`nin HPLC kromatogramßlm. Sekil 1, MPL-AF ve GLA-AF içerisindeki kirletici materyallerin sayßlîiüve miktarEiD ortaya koyan HPLC verilerini göstermektedir. Bu kromatogramlar bir Agilent 1100 sistemi ve bir ESA Corona CAD dedektörü kullanarak toplanmßtlî. Bu metot bir Waters Atlantis C18 kolon üzerinde metanoldan kloroforma gradiyent kullanarak gerçeklestirilmistir. Enjeksiyonlar sLijaslyla 2.5 ug GLA ve MPL ve bir çözündürücü ajan olarak kullanllan içermistir. Sekil 2, insan antijenini sunan hücreler üzerindeki GLA,n n stimüle edici etkisidir. Sekil 2, GLA stimülasyonuna tepki olarak Mono Mac 6 hücre hattlnln (a - e panelleri) ve PBMC türevi DClnin (f 7 h panelleri) insan makrofajlarl taraf ndan eksprese edilen sitokin ve kemokin düzeylerini ortaya koyan ELISA verilerini göstermektedir. Hücreler 24 saat boyunca GSK Biologicals MPL®`nin bir sulu formülasyonu (MPL-AF), GLA (GLA-AF), ya da tek bas Ija AF ile 1 x 105 hücre / kuyucuk olacak sekilde kültive edilmistir. Süpernatantlardaki MIP-l b, IP-10, IL-6, IL-23 ve IL-lb düzeyleri sandwich ELISA ile ölçülmüstür. Sekil 3. Influenza asßEia GLA-AF ve GLA-SEnin adjuvan etkisi Sekil 3, tek bas ßa Fluzone ile kars Iastmüdgîda GLA-AF ya da GLA-SE ile formüle edilen Fluzone asLrjLn iki farkl_ldozu kullanLlarak her as Llmadan bir hafta sonra (yani 7. günde, panel A; 28. günde panel B) farelerde indüklenen anti-Fluzone antikor üretiminin düzeylerini ortaya koyan ELISA verilerini göstermektedir. Panel A ve B, ilk (A) ya da ikinci (B) enjeksiyondan bir hafta sonra, GLA-AF, GLA-SE içeren ya da adjuvan içermeyen bir formülasyonda F luzone (F lu) asßüidan 20 m1 (1.8 ug) ya da 2 m1 (0.18 ug) ile 3 hafta aralEkla iki kez as Elanan farelerin ELISA Ab titrelerini göstermektedir. Panel C, ikinci asüamadan sonra farelerin serumunda nötralize edici antikorun (HAI) titrelerini göstermektedir. Sekil 4. Laysmanya antijeni SMT"ye hümoral cevapla ilgili GLA-SE"nin adjuvan etkisi. Sekil 4, tek bas îla SMT antijeni kullanarak ya da GLA-SE ile formüle edilen üçüncü as Llamadan bir hafta sonra farelerde indüklenen anti-SMT antikor üretiminin düzeylerini ortaya koyan ELISA verilerini göstermektedir. C57BL/6 fareler, GLA (GLA-SE; her asilama için her hayvan için 20 tig) içeren stabil bir emülsiyon içerisinde formüle edilen SMT antijeni (her as lama için her hayvan için 10 ug) ile üç haftalk arallklarla üç kez as [[anmßtE ya da tek bas Ela SMT proteini enjekte edilmistir. Her as Iamadan bir hafta sonra kanatarak serum almmß ve SMTlye özgü IgGl ve IgG20 antikorlarEiEi serum düzeyleri ELISA ile incelenmistir. Kars 1111 :bitis noktasDtitrelerinin ortalamalarüve SEM degeri gösterilmektedir. Sekil 5. Leish-l lOF ye özgü hümoral cevaplar. Sekil 5, salin kontrollerle karsüastîldfgßda farkIJGLA miktarlarü(40, 20, 5, ya da 1 ug) ile formüle edilen Leish-llOf antijen kullanarak ilk asLlamadan bir hafta sonra farelerde indüklenen anti-Leish-l 10f antikor üretiminin düzeylerini ortaya koyan ELISA verilerini göstermektedir. Balb/c fareler, 40, 20, 5, ya da 1 ug GLA (GLA-SE) içeren stabil bir emülsiyon içerisinde formüle edilen Leish-l lOf antijeni (her asllama için her hayvan için 10 ug) ile üç haftallk aral klarla üç kez as lanmlst 11 ya da tek basina salin enjekte edilmistir. Her asTamadan bir hafta sonra kanatarak serum allîimß ve Leish-l 10Fye özgü lgGl ve IgGZa antikorlarîlîl serum düzeyleri ELISA ile incelenmistir. llinci immünizasyondan 7 gün sonra toplanan serumlar için karsllklü bitis noktas Etitrelerinin ortalamalarüve SEM degeri gösterilmektedir. Sekil 6. Thl/Th2 Leish-l 10f'ye özgü sitokin cevaplar. Sekil 6, salin kontrollerle karsüastEEItIEglîlda farklEGLA miktarlarjile formüle edilen Leish-l 10f antijen kullanarak üçüncü asEamadan bir hafta sonra farelerde indüklenen anti-Leish-llOf IFN-y sitokin üretiminin düzeylerini ortaya koyan ELISA verilerini göstermektedir. 40, 5 ya da 1 ug MPL (MPL-SE) ya da GLA (GLA-SE) içeren stabil bir emülsiyon içerisinde formüle edilen Leish-l lOf antijenle (10 pg) iki haftallk arallklarla üç kez asllanan Balb/c farelerden ya da bir salin solüsyonu enjekte edilen farelerden elde edilen splenositler, tek bas Ea ortamda ya da 10 mg/ml Leish-l 10f ya da 3 mg/ml Concanavalin A (ConA) içeren ortamda 3 gün boyunca in vitro olarak kültive edilmistir. Süpematantlardaki IFN-g düzeyleri ELISA ile ölçülmüstür. Ortalama ve SEM degeri gösterilmektedir. Sekil 7. ID83 ,e özgü hücresel cevaplar. Sekil 7, tek basEia ya da GLA (GLA-SE), GLA+CpG (GLA/CpG-SE), veya GLA+GDQ (GLA/GDQ-SE) içeren forrnülasyonlarla adjuvant eklenen ID83 kullanarak üçüncü as lamadan bir hafta sonar farelerde indüklenen CD4+ ve CD8+ T hücreler üreten ID83-spesifik IFN-y, IL-2, ve TNF sitokinin frekanslarlnl lortaya koyan ICS verilerini göstermektedir. Üç haftallk arallklarla üç kez GLA-SE, GLA/CpG-SE, GLA/Gardikuimod (GDQ)-SE ile formüle edilen M. tuberculosis lD83 füzyon proteini (8 ug) ile aSEIanan ya da salin enjekte edilen C57BL/6 farelerden elde edilen splenositler, 12 saat boyunca 10 mg/ml ID83 içeren ortamda in vitro olarak kültive edilmistir. IL-2, TNF, and IFN-g in CD3+CD4+ ya da CD3+CD8+ geçitli T hücrelerin hücre düzeyleri intraselüler boyama yoluyla saptanmß ve bir BD LSRII FACS üzerinde akß sitometrisi ile ölçülmüstür. Sekil 8. ML0276"ya özgü hücresel cevaplar Sekil 8 panel A, salin ve saf kontrollerle karslast iilld g nda CpG ya da Iinikuimod (IMQ) içeren sulu formülasyonlarla ya da GLA (GLA-SE) içeren stabil bir yag emülsiyonuyla ya da bu üçünün karlsjlm yla formüle edilen ML0276 antijen kullan larak üçüncü as lamadan bir hafta sonra farelerde indüklenen CD4+ T hücreleri üreten ML0276-spesifik IFN-'y sitokinin frekanslarlîm ortaya koyan ICS verilerini göstermektedir. Üç haftalEk aralERlarla üç kez CpG, Imikuimod (IMQ), GLA-SE, bu üçünün bir kombinasyonu ile formüle edilen M. leprea ML0276 antijen (10 ug) ile as Eanan ya da salin enjekte edilen C57BL/6 farelerden elde edilen splenositler, 12 saat boyunca 10 ing/ml ML0276 içeren ortamda in vitro olarak kültive edilmistir. Panel A, intraselüler boyama yoluyla saptanan ve BD LSRII FACS üzerinde akü sitometrisi ile ölçülen CD3+CD4+ T hücrelerde IFN-yanîl hücre düzeylerini göstermektedir. Panel B, bir koruma iliskisi olarak lenf bogumu selülarite boyamasLrlLgöstennektedir. BULUSUN AYRINTILI AÇIKLAMASI Burada, as Dbilesimleri, adjuvan bilesimleri ve sentetik bir glukopiranosil lipid adjuvan (GLA) kullanînmükapsayan iliskili metotlar açERlanmaktadE. GLA, önceki teknigin adjuvanlarßa göre ve özellikle dogal ürün adjuvanlara göre avantajlEbir biçimde büyük ölçüde homojen formda hazlîlanabilen sentetik bir immünolojik adjuvan saglamaktad i. Bunun yan Is [Ia, GLA, dogal ürün türevi adjuvanlarEi aksine verimli ve ekonomik bir biçimde büyük ölçekli sentetik kimyasal imalat yoluyla hazElanabilir. Nicelik ve nitelik bakLandan yLgLndan yLgLna tutarlLlLk sergileyen kimyasal olarak tanLmlJbir ürün elde etmek için tanimll lbaslanglç materyallerinden kimyasal olarak sentezlenen sentetik bir adjuvan olarak GLA, ürün kalite kontrolünde iyilesme gibi benzeri görülmemis faydalar saglamaktadrr. SasH'tEFbir biçimde, 3-açillenmis monofosforile edilmis lipid A belirli toksisitelerle iliskilendirilmis olmasEia karsEi, 2 amin pozisyonu tek bir açil zinciri içerdiginde moleküllerin kabul edilebilir güvenlik profillerini korudugu saptanmîsltm. Ayrßa, bu bilesiklerin sentezi kolaylastillnßtî çünkü 3 pozisyonunda spesifik deaçilasyon teknik güçlüklere yol açmaktadE. Bu da, güvenlik ve sentez kolaylîgj bakin Eldan ilave avantaj lar sunmaktad m. Burada tarif edildigi gibi, GLA içeren bilesimler ve bunlaan kullanLm metotlarleazU yapllandlrmalarda GLA,nln kendisinin immünolojik adjuvan aktivitesi için farmasötik olarak kabul edilebilir bir taslýldl lya da eksipiyanla birlikte kullan m n lkapsamakta olup, içerisinde bir denege GLA uygulamas ,l denekte ortaya çlkartllmasl ya da arttlrllmasl istenen bir immün tepkisinin (örnegin bir antijene özgü tepki) bir ya da daha fazla antijeninin denege uygulanmasîidan tamamen baglînsß ve/veya geçici ve/veya kalEE olarak ayrJhiE olabilir. Baska yap [[and Emalar aynE zamanda bir immün tepkisinin böyle bir as Slla ortaya çkart Dnak ya da arttmÜInak istendigi bir ya da birden fazla antij eni kapsayan bir as Ebilesiminde GLA kullanßiîiîkapsamaktadlî Burada tarif edildigi gibi, bu asÜoilesimleri belirli iliskili yap land Bmalarda ayn Jzamanda bir ya da daha fazla toll benzeri reseptör (TLR) agonisti ve/veya bir veya daha fazla ko-adjuvan, bir imidazokuinolin immün tepkisi modifiye edici ve bir çift sap iplik immün modifiye ediciden (dSLIM) bir ya da birden daha fazlasLiil_ içerebilir. Diger iliskili yapllandlrmalarda, burada saglanan sekliyle bir as bilesimi GLA ve bir ya da daha fazla rekombinan ekspresyon yaplsl içerebilir, bunlarln her biri denekte ortaya çlkartllmasl ya da arttEllmasTlistenen bir immün tepkisinin (örnegin bir antijene özgü tepki) antijenini kodlayan bir nükleik amino asit sekansßa uygulanabilir bir biçimde baglübir baslatElD Yine yukarßa kaydedildigi gibi, kimyasal olarak sentezlenmis bir adjuvan olarak GLA, büyük ölçüde homojen bir formda hazElanabilir, bu da bir GLA preparatßlîl GLA molekülüne göre en az % 80, tercih edilen sekliyle en az % 85, daha tercih edilen sekliyle en az % 90, daha tercih edilen sekliyle en az % 95 ve yine daha da tercih edilen sekliyle en az % 96, % 97, % 98 ya da % 99 saf oldugunu göstermektedir. Belirli bir GLA preparatiiii saflfk derecesinin belirlenmesi uygun analitik kimya metodolojilerine asina olan kimseler tarafßdan örnegin gaz kromatografisi, sîlükromatografisi, kütle spektroskopisi ve/veya nükleer manyetik rezonans analizi vas Iasßlla kolayca gerçeklestirilebilir. Burada kullan [[an sekliyle bir GLA asag Eiaki genel yap @al formüle sahip olabilir: R5 oi-i burada R1, R3, R5 ve R6 ifadeleri undesildir; ve R2 ve R4 ifadeleri tridesildir. GLA ticari olarak örnegin Avanti Polar Lipids, lnc. sirketinden elde edilebilir (Alabaster. AL: ürün numaras E699800). Antijen Burada tarif edilen GLA kullanmam asE bilesimlerinin ve metotlarßß belirli yapEandEmalarElda kullanEn için bir antijen herhangi bir hedef epitop, molekül (bir biyomolekül gibi), moleküle kompleks (biyomoleküller içeren moleküler kompleksler dahil), subselüler düzenleme, hücre ya da doku olabilir ve bunlara karsLbir denekte immünoreaktivitenin ortaya çlkartllmas ya da artt ii lrnas istenir. Slkllkla, antijen terimi söz konusu bir polipeptid antijenini gösterecektir. Bununla birlikte burada kullanllan sekliyle antijen ifadesi ayni zamanda söz konusu bir polipeptid antijeni kodlayan bir rekombinan yapi lolarak adland ri labilir (örnegin bir ekspresyon yapidl). Tercih edilen belirli yapilandlîlmalarda, söz konusu antijen enfeksiyon, kanser, otoimmün hastalll, alerji, astîh ya da antijen Özgü bir immün tepkinin stimülasyonunun istenebildigi ya da yararlEolacagEdiger her türlü kosulla iliskilendirilen bulasijir patojen ve/veya bir epitop, biyomolekül, hücre ya da dokudan elde edilebilir ya da bunlarla immünolojik olarak çapraz reaktif olabilir. Tercih edilen sekliye ve belirli yap [lhndümalarda, burada aç Elanan as Elformülasyonlarü bir insan ya da baska memeli patojenine kars lbir immün tepki ortaya koyabilen bir antijen ya da antijenik bilesim içermektedir, söz konusu antijen ya da antijenik bilesim HIV-l (örnegin tat, nef, gplZO ya da gp160), insan herpes virüsleri, örnegin gD ya da bunun türevleri ya da lmmediate Early proteinler, örnegin HSVl ya da HSV2"den Rotavirüs (canli-lzayliilatllln s virüsler), EPstein Barr virüsü (örnegin gp350 ya da bunun türevleri), Varisella Zoster Virüsü (örnegin gpl, ll ve lE63) gibi bir virüsten ya da hepatit B virüsü (örnegin Hepatit B Yüzey antijeni ya da bunun bir türevi), hepatit A virüsü, hepatit C virüsü ve hepatit B virüsü gibi bir hepatit virüsünden, ya da paramiksovirüsler gibi diger viral patojenlerden: Respiratuar Sinsitiyal virüs (örnegin F ve G proteinleri ya da bunun bir türevi), paraintluenza virüsü, küaml virüsü, kabakulak virüsü, insan papilom virüsleri (örnegin HPV6, 11, 16, 18, vs), flavivirüsler (örnegin SarÜ-Iumma Virüsü, Dang virüsü, keneyle tas Ilan viral ensefalit virüsü, Japon Ensefalit Virüsü) ya da Influenza virüsü (tam canlUya da inaktive edilmis virüs, yumurtalarda ya da MDCK hücrelerde gelisen split influenza virüsü, ya da tam flu bunlarüi saflastmlmrs ya da rekombinan proteinleri, örnegin HA, NP, NA ya da M proteinleri ya da bunlar& kombinasyonlarü elde edilen bir bilesimi kapsayabilir. Tercih edilen belirli baska yapühndîlmalarda burada açklanan as jformülasyonlarjbir insan ya da baska memeli patojene kars :bir immün tepki ortaya çkartabilen bir antijen ya da antijenik bir bilesim içermektedir, söz konusu antijen ya da antijenik bilesim Nez'sseria spp, örnegin N. gonorrhea ve N. meningiti'dis (örnegin kapsüler polisakkaritler ve bunun konjugatlard transferin baglaydi proteinler, laktoferrin baglaylcl proteinler, PilC, adezinler), S. pyogenes (örnegin M proteinleri ya da bunun fragmanlarl, C5A proteaz, lipoteikoik asitler), S. agalacti'ae, S. mutans: H. ducreyi; Moraxella spp, örnegin aynF zamanda Branhamella catarrhali's olarak bilinen M catarrhali's (örnegin yüksek ve düsük moleküler agüillklEadezinler ve invazinler); Bordetella spp, örnegin B. pertussis (örnegin pertaktin, pertussis toksini ya da bunun türevleri, filamentöz hemaglutinin, adenilat siklaz, fimbriae), B. parapertussis ve B. bronchisepti'ca; Mycobacterium spp., Örnegin M. tuberculosis (örnegin ESAT6, Antijen 85A, -B ya da -C), M. bovis, M leprae, M avi'um, M paratuberculosis, M smegmatis; Legi'onella spp, örnegin L. pneumophz'la; Escheri'chi'a Spp, örnegin enterotoksik E. 0011' (örnegin kolonizasyon faktörleri, syla kararsm hale gelen toksin ya da bunun türevleri, lslyla stabil hale gelen toksin ya da bunun türevleri), enterohemorajik E. 0011', enteropatojenik E. coli (örnegin shiga toksin benzeri toksin ya da bunun türevleri); Vibrio spp, örnegin V. cholera (örnegin kolera toksini ya da bunun türevleri); Shigella spp, örnegin S. sonnei', S. dysenteriae, S. flexneri'i', Yersinia spp, örnegin Y. enterocoliti'ca (örnegin bir Yop proteini), Y. pesti's, Y. pseudotuberculosis; Campylobacter spp, örnegin C. jejum' (örnegin toksinler, adezinler ve invasinler) ve C. coli; Salmonella spp, örnegin S. lyphi, S. paratyphi, S. choleraesuis, S. enteritidis; Listeri'a spp., örnegin L. monocytogenes; Helicobacter spp, Örnegin H. pylori (Örnegin üreaz, katalaz, bosluk Olusturucu toksin); Pseudomonas spp, örnegin P. aeruginosa; Staphylococcus spp., örnegin S. aureus, S. epidermi'di's; Enterococcus spp., örnegin E. faecali's, E. faecium; Clostri'di'um spp., örnegin C. tetani' (örnegin tetanoz toksini ve bunun türevleri), C. botulinum (örnegin botulinum toksini ve bunun türevleri), C. diffîci'le (örnegin clostridium toksinleri A ya da B ve bunun türevleri); Baci'llus spp., örnegin B. anthracis (örnegin botulinum toksini ve bunun türevleri); Corynebacterz'um spp., örnegin C. di'phtheri'ae (örnegin difteri toksini ve bunun türevleri); Borreli'a spp., örnegin B. burgdorféri (örnegin OspA, OspC, Dpr, DbpB), B. gari'm'i (örnegin OspA, OspC, Dpr, DbpB), B. qfgeli'i' (örnegin OspA, OspC, Dpr, DbpB), B. andersonii' (örnegin OspA, OspC, Dpr, DbpB), B. hermsiz'; Ehrlichi'a spp. , Örnegin E. equi ve Insan Granülositik Ehrlichiosis ajanE Rickettsia spp, örnegin R. rickettsii; Chlamydia spp. örnegin C. trachomatis (örnegin MOMP, heparin- baglayEE proteinler), C. pneumoniae (örnegin MOMP, heparin-baglayElîproteinler), C. psittaci; Leptospira spp., örnegin L. interroganlar; Treponema spp., örnegin T. pallidum (örnegin nadir dsl membran proteinleri), T. denticola, T. hyodysenteriae; ya da baska bakteriyel patojenler gibi bir ya da daha fazla patojenden elde edilen bir bilesim içerebilir. Tercih edilen belirli baska yap Iand Ernalarda, burada aç Elanan as Jformülasyonlarjbir insan ya da baska memeli patojenine kars [bir immün tepki ortaya koyabilen bir antijen ya da antijenik bilesim içermektedir, söz konusu antij en ya da antijenik bilesim bir ya da daha fazla parazitten elde edilen bir bilesim içerebilir (Bkz, ör. , John, D.T. and Petri, W.A., Markell and Vogels Medical Parasitology-9th Ed., 2006, WB Saunders, Philadelphia; Bowman, D.D., Georgis7 Parasitology for Veterinarians-8th Ed., 2002, WB Saunders, Philadelphia), örnegin Plasmodium spp., örnegin P. falciparum; Toxoplasma spp., örnegin T. gondii (örnegin SAGZ, SAG3, Tg34); Entamoeba spp., örnegin E. histolyti'ca; Babesi'a spp., örnegin B. microti'; Trypanosoma spp., örnegin T. cruzi; Gi'ardi'a spp., örnegin G. lamblia; Leshmani'ci spp., örnegin L. major; Pneumocystis spp., örnegin P. carini'i'; Trichomonas spp., örnegin T. vagi'nali's;ya da bir memeliyi enfekte edebilen bir parazitten elde edilen bir bilesim içerebilir, örnegin: (i) nematod enfeksiyonlar: (bunlarla sEiElü olmamak kaydßlla örnegin Enterobi'us vermiculari's, Ascaris lumbri'coides, T richuris trichuria, Necator americanus, Ancylostoma duodenale, Wuchereria bancrofti', Brugia malayi, Onchocerca volvulus, Dracanculus medinensi's, Trichinella spirali's, ve Strongyloides stercorali's) ; (ii) trematod enfeksiyonlarj (bunlarla sEiElü olmamak kaydlýla örnegin Schistosoma mansoni, Schistosoma haemazobium, Schistosoma japonicum, Schistosoma mekongi, Opisthorchi's sinensis, Paragom'mus sp, Fasci'ola hepati'ca, Fasciola magma, Fasciola giganti'ca) ; ve (iii) bag rsak kurdu enfeksiyonlar |(bunlarla sn rill lolmamak kayd yla örnegin Taeni'a saginata ve Taeni'a solium) . Bu nedenle belirli yapilandlnmalarda Schi'sostoma spp., Schistosoma mansonii, Schistosoma haematobium, ve/Veya Schistosoma japonicum,dan elde edilen ya da örnegin Candida spp., örnegin C. albi'cans; Cryptococcus spp., örnegin C. izeqfbrmans gibi mayalardan elde edilen bir antij en içeren as Ebilesimleri düsünülebilir. M. tuberculosi's için tercih edilen diger spesifik antijenler örnegin Th Ra12, Tb H9, Tb Ra35, Tb. M. tuberculosis için proteinler ayanamanda füzyon proteinleri ve bunun varyantlarnd kapsamaktadlr, burada M. tuberculosisin en az iki, tercih edilen sekliyle üç polipeptidi büyük bir proteine kaynast'ii 1111. Tercih edilen fîîzyonlar RalZ-TbH9-Ra35, Erdl4- DPV-MTI, DPV-MTI-MSL, Erd14DPV-MTI-MSL-mTCC2, Erd14-DPV-MTI-MSL, DPV-MTl-MSL-mTCCZ, TbH9-DPV-MTI*yE(WO 99151748) kapsamaktad m. Chlamydia için en çok tercih edilen antij enler örnegin Yüksek Molekül Agßl 111 Protein (HWMP) (WO ve farazi membran proteinlerini (Pmpller) kapsamaktad& ASE formülasyonunun diger Chlamydia antijenleri WO 9912875 say [[Edokümanda tarif edilen gruptan seçilebilir. Tercih edilen bakteriyel as [[ar Streptococcus Spp, örnegin S. pneumoniae (örnegin kapsüler polisakkaritler ve bunun konjugatlarl, PsaA, PspA, streptolisin, kolin baglayldl lproteinler) ve protein antijen Pathogenesis, 25, 337-342), ve bunlar n mutant toksinleri giderilmis türevlerinden elde bakteriyel asflar Haemophz'lus spp., örnegin H. influenzae tip B (örnegin PRP ve bunlar& konjugatlarE), non typeable H. influenzae, örnegin OMP26, yüksek molekül agîllklîadesinler, PS, P6, protein D ve lipoprotein D, ve fimbrin ve fimbrin türevi peptidleri (U.S. Pat. No. 5,843,464) içermektedir. Hepatit B Yüzey antijen türevleri teknik iyi bilinmektedir ve diger seylerin yanEsßa EP- edilen PreSl, ParsZ S antijenleri kapsamaktadLij. Burada aç Llilanan bir as Lformülasyonu özellikle CHO hücrelerde eksprese edildiginde HIV-1 antijeni, gp120 içerir. Baska bir yapllandlrmada, burada aç klanan bir asi formülasyonu burada daha önce tan mlandlg 1 gibi gDZt içerir. Burada ileri sürülen adjuvan jiçeren burada aç Eklanan as Jhr, fenital sigillerden (HPV 6 ya da HPV 11 ve digerleri) sorumlu oldugu düsünülen Insan Papillom Virüsünden (HPV) ve serviks kanserinden (HPV 16, HPVIS ve digerleri) sorumlu olan HPV virüslerinden elde edilen antijen içerebilmektedir. Özellikle tercih edilen genital sigil formlar &da profilaktik ya da terapötik asDHPV 6 ve HPV 11 proteinleri E6, E7, L1, ve L2"den seçilen bir ya da daha fazla antijen içeren füzyon proteinleri, Ll partiküller ya da kapsomerleri içermektedir. Füzyon proteininin çesitli tercih edilen formlar lWO kapsamaktad E. Tercih edilen bir HPV servikal enfeksiyon ya da kanserde, profilaksi ya da terapötik as Ebilesimi HPV 16 ya da 18 antijenlerini içerebilir. Örnegin, Ll ya da L2 antijen monomerler ya da Ll ya da L2 antijenler birlikte bir virüs benzeri partikül (VLP) olarak sunulmustur ya da tek basia Ll proteini bir VLP ya da kapsomer yapßEida sunulmustur. Bu antijenler, virüs benzeri partiküller ve kapsomer aslîlda Ilave erken proteinler tek baslna ya da E7, E2 ya da tercih edilen sekliyle F5 gibi füzyon proteinleri olarak dahil edilebilir; özellikle tercih edilen yap land nmalar L1E7 füzyon proteinlerini içeren bir VLP"yi kapsamaktad 11 (WC 96/ 1 1272). Özellikle tercih edilen HPV 16 antijenleri, Protein D-E6 ya da E7 füzyonlarlnl olusturmak için HPV 16,dan bir protein D tasßtlcßtla birlikte füzyonda erken proteinler E6 ya da F7lyi ya da bunlarlîi kombinasyonlarEiEiçerir; ya da L2 ile E6 ya da E7 kombinasyonlarmüiçerir (WO molekül, tercih edilen sekliyle bir Protein D-E6/E7 füzyon halinde sunulabilir. Bu as] istege baglüolarak tercih edilen sekliyle bir Protein D-E6 ya da Protein D-E7 füzyon proteini ya da Protein D E6/E7 füzyon proteini formunda E6 ve E7 proteinleri ön HPV 18 içerebilir. Mevcut bulusun asEJilave olarak diger HPV suslarlîidan, tercih edilen sekliyle HPV 31 ya da 33 suslaandan antijenleri içerebilir. Mevcut bulusun asllarl layrlda s thiaya yola açan parazitlerden elde edilen antijenleri içerir. Örnegin, Plasmodi'aféilciparum,dan elde edilen tercih edilen antijenler RTS,S ve TRAPÜkapsamaktad m. RTS, Hepatit B yüzeyi antijeninin preSZ kîslmEiEi dört amino asidi vasffasßlla hepatit B virüsünün yüzey (S) antijenine baglanan, Pfizlci'parum'un sirkumsporozoit (CS) proteininin büyük ölçüde tüm C-terminal klmîljiçeren bir hibrit proteindir. Tam yapßj91243907 say EDUK patent basvurusundan rüçhan hakkütalep eden WO 93/ 10152 olarak yaylîilanan Uluslararasü Patent Basvurusu No. PCT/EP92/02591'de ifsa edilmektedir. Mayada eksprese edildiginde, bir lipoprotein partikülü olarak RTS üretilir ve HBViden S antijeni ile birlikte eksprese edildiginde, RTS.S olarak bilinen karma bir partikül üretir. Patent Basvurusunda tarif edilmektedir. Mevcut bulusun tercih edilen bir yap Jhnd Ilmasj bir smna asîslîli ve içerisindeki antijenik preparat, RTS,S ve TRAP antijenlerinin bir kombinasyonunu içermektedir. Çok asamalj bir slîrna asßEiEi bilesenleri olarak muhtemel adaylar olan diger plazmodia antijenleri P. faci'parum MSPl, AMAl, MSP3, EBA, GLURP, RAPl, RAPZ, Sekuestrin, PfEMPl, P832, LSAl, LSA3, STARP, Plasmodium spp. analoglarLdLij. Buna göre, burada ifsa edilen belirli bir yap landliimada bir bakteriyum, bir virüs ya da bir mantar gibi en az bir bulasld lpatojenden elde edilen bir antijen düsünülinektedir, örnegin Aktinobakterium, örnegin M. tuberculosis ya da M. leprae ya da baska bir mycobacterium; bir bakteriyum, örnegin Salmonella, Neisserz'a, Borrelia, Chlamydi'a ya da Bordetella cinsi; bir virüs örnegin bir herpes simpleks virüsü, bir insan immün yetmezlik virüsü (HIV), bir kedi immün yetmezlik virüsü (FlV), sitomegalovirüs, Varicella Zoster Virüsü, hepatit virüsü, Epstein Barr Virüsü (EBV), respiratuar sinsitiyal virüs, insan papillom virüsü (HPV) ve bir sitomegalovirüs; HIV örnegin HIV- 1 ya da HIV-2; bir mantar örnegin Aspergi'llus, Blastomyces, Coccidioides ve Pneumocysti' ya da bir maya örnegin Candida türleri, örnegin C. albi'cans, C. glabrata, C. krusei, C. lusitani'ae, C. tropi'cali's ve C. parapsz'losis; bir parazit örnegin protozoan, örnegin bir Plasmodi'um türü, P. falciparum, P. vivax, P. malariae ve P. ovale; ya da baska bir parazit, örnegin bir ya da daha fazla Acanthamoeba, Entamoeba histolytica, Angi'ostrongylus, Schistosoma mansom'i', Schistosoma haemalobi'um, Schistosoma japonicum, Ciyptosporidi'um, Ancylostoma, Eiztamoeba histolyti'ca, Entamoeba coli', Entamoeba dispar, Enlamoeba hartmanni, Entamoeba polecki, Wuchereria bancrqfti, Giardia, ve Leishmam'a. Örnegin, Borrelia spfden elde edilen antijenleri içeren GLA içeren as] yapüandîmalarßda, söz konusu antijenler nükleik asit, patojen türevi antijen ya da antijenik preparatlar, rekombinan olarak üretilen protein ya da peptidler ve kimerik füzyon proteinleri içerebilir. Böyle bir antijen OspA'dln. OspA, konak bir hücrede kendi biyosentezi sayesinde lipide edilmis bir formda tam matür bir protein olabilir (Lipo- OspA) ya da alternatif olarak lipide edilmemis bir türev olabilir. Böyle lipide edilmemis türevler influenza virüsünün yag Ea] olmayan proteininin (NS 1) ilk 81 N-terminal amino asitlerine sahip olan lipide edilmemis NSl-OspA füzyon proteinini ve tam OspA proteinini kapsamaktadlî ve diger, MDF-OspA, 3 ilave N-terminal amino asidini tas Slan lipide edilmemis bir OspA formudur. Teknikte burada tarif edildigi gibi bulasßüoir patojenle bir enfeksiyona sahip olan ya da riski tasLdLgLndan süphe edilen denekleri tanLmlamak için bilesimler ve metotlar bilinmektedir. Örnegin, Mycobacterium tuberculosis bakterisi tüberküloza (TB) yol açar. Bakteriler genellikle akcigerlere saldlrlrl fakat aynl lzamanda böbrek, dalak ve beyne de saldirabilir. Dogru bir biçimde tedavi edilmemesi durumunda tüberküloz hastalfglîölümcül olabilir. Bu hastalER bulasan kimse hapsEdEgEida ya da öksürdügünde hava yoluyla kisiden kisiye tasîli 2003 yllîida Birlesik Devletlerde 14.000,den fazla tüberküloz vakasj rapor edilmistir. Tüberküloz genel olarak uzatJInß antibiyotik terapisi kullanülarak kontrol edilebilmesine kars ß, bu tedavi hastalgîl yay Jinaslîiüönlemek için yeterli degildir ve antibiyotik dirençli suslaan potansiyel seçimine iliskin endiseler bulunmaktadLii Enfekte olan bireyler asemptomatik, fakat bazen bulas dl lolabilir. Ek olarak, tedavi rejimiyle uyum kritik olmasina karsin, hasta davransnln izlenmesi güçtür. Baz l hastalar tedavi seyrini tainamlamaz ve bu da etkisiz tedaviye ve ilaç direnci gelismesine yol açabilir. (ör, U.S. Patent 7,087,713) Su anda, canljbakterilerle asühma tüberküloza karsEkoruyucu bagßllgüindüklemek için en etkili metottur. Bu amaçla kullanIan en yaygm mikobakteriyum, Mikobakteriyum bovis,in avirulan bir susu olan Bacillus Calmette-Guerin (BCGYdir. Bununla birlikte, BCG"nin güvenlik ve efikasitesi tartgma konusudur ve Birlesik Devletler gibi baz Jülkeler genel nüfusu as LlamamaktadLr. Teshisi genel olarak bir deri testi kullan larak yapllllr' ve tüberkülin PPD°ye (saflast almis protein türevi) intradermal olarak tutulmasln lgerektirir. Antijene özgü T hücre tepkileri enjeksiyondan 48 ila 72 saat sonrasma kadar enjeksiyon alanmda ölçülebilir sertlesme ile sonuçlanü ve bu da mikobakteriyel antijenlere maruziyeti gösterir. Bununla birlikte sensitivite ve spesifite bu testte sorun olmustur ve BCG ile as Jhnan bireyler enfekte olan bireylerden ayBt edilemez. (ör, U.S. Patenti 7,087,713) MakrofajlarEi M. Tuberculosis bagßtklEgEiD etkileyen temel etmenler olarak islev gördügü gösterilmis olmasi karsß, T hücreler bu bagßÜgIEgEi en etkili indükleyicileridir. T hücrelerin M. tuberculosis enfeksiyonuna karsukorumadaki zaruri rolü, insan immün yetmezlik virüsü (HIV) enfeksiyonu ile iliskilendirilen CD4 T hücrelerin tüketiininden dolayi AIDS hastalarlnda M. tuberculosisîn slk meydana gelmesiyle aç klanmaktadlr. Mikobakteriyum-reaktif CD4 T hücrelerin, farelerde makrofajlarln anti-mikobakteriyel etkilerini tetikledigi gösterilen gama-interferonun (lFN-gama) potent üreticileri oldugu gösterilmistir. Insanlarda lFN-gamanlîi rolü daha belirsiz olmasma karsm, çalgmalar tek basEia ya da lFN-gama ya da tümör nekroz faktörü alfa ile kombinasyon hakinde 1,23-dihidroksi-vitamin D3'in M. tuberculosis enfeksiyonunu inhibe edecek sekilde insan makrofajlarüüiktive ettigini göstermektedir. Bunun yanjsEa, IFN-gamanEl 1,25-dihidr0ksi-vitamin D3"ü yapmasüiçin insan makrofajlarlîstimüle ettigi bilinmektedir. Benzer sekilde, IL-l2,nin M. tuberculosis enfeksiyonuna kars Eldirenci stimüle etmede rol oynadEgEgösterilmistir. M. tuberculosis enfeksiyonunun immünolojisine iliskin bir inceleme için, bkz. Chan and Kaufmann, Tuberculosis: Pathogenesis, Protection and Control, Bloom (ed), ASM Press. Washington, D.C. (1994). Tüberküloz teshisi için ve tüberküloza karsükoruyucu bagßkltgüindüklemek için mevcut bilesikler ve metotlar aras Eda bir ya da daha fazla Mikobakteriyum proteinin en az bir immünojenik kßmiüiçeren polipeptidlerin ve bu polipeptidleri kodlayan DNA moleküllerinin kullanlînEbulunmaktadü Bu polipeptidleri ya da DNA sekanslarîijve uygun bir saptama aylîaclîiüiçeren tanßal kitler, hastalarda ve biyolojik örneklerde Mikobakteriyum enfeksiyonunun saptanmasjiçin kullanüabilir. Bu polipeptidlere karsü yöneltilen antikorlar da saglanmaktadhi Ek olarak, bu bilesikler Mikobakteriyum enfeksiyonuna karsl las lama için asllar ve/Veya farmasötik bilesimler seklinde formüle SEma dünyanüi çogu kßmüida l960°larda elimine edilmistir, bununla birlikte bu hastalEk devam etmektedir ve hatalfgm mevcut ilaçlara kars :dirençli yeni suslarEortaya çERmaktadlI. Süha 90°dan fazla ülkede temel bir halk saglEgE sorunudur. Sîma vakalarEiEi onda dokuzu Sahra altÜAfrika ülkelerinde görülmektedir. Dünya nüfusunun üçte birinden fazlasü risk altlîldadi ve her y]] 350 ila 500 milyon kisiye sîîna bulasmaktadE. Bu yol kikbes milyon gebe kadir sEina bulasma riski tas Enaktadî. Her yLl zaten enfekte olan bireylerden 1 milyondan fazlaskl önlenebilir bir hastallsttan ölmektedir. Bu ölümlerin çogunlugu Afrika,daki çocuklardlrl. Sltma, genellikle bir kimse enfekte bir disi anofel sivrisinegi taraflndan s nld g nda bulasmaktadlr. Bulasmasl için, sivrisinek zaten sltma taslyan bir kimseden kan almas l yoluyla enfekte olmallîllî. Stlnaya bir parazit neden olmaktadlrl ve hastallgîi klinik semptomlarEarasElda ates ve grip benzer hastalER, örnegin titreme, bas agrß: kas agrEIarE ve bitkinlik bulunmaktadm. Bu semptomlara bulant] kusma ve ishal eslik edebilir. SE'ma, klîmâEkan hücrelerinin kayblîidan dolayEaynEzamanda anemi ve sarEEga da neden olabilir. Bir sIma tipi, yani Plasmodium falcz'parum ile enfeksiyon, derhal tedavi edilmezse böbrek yetmezligi, krizler, kafa karßÜgIEgÇ koma ve ölüme neden olabilir. Bir bireyde sltma için in vitro bir tanlsal metot bilinmektedir ve bir molekül ya da polipeptid bilesimiyle temas halinde bir bireyden al dan bir doku ya da biyolojik bir sWEim yerlestirilmesini içermektedir, söz konusu molekül ya da polipeptid bilesimi, dokuda ya da biyolojik sßlEla bulunabilen bahsedilen bilesim ve antikorlar aras Ilda in vitro immünolojik reaksiyona ve olusan antijen-antikor komplekslerinin in vitro olarak saptanmaslîia imkan tanlS/an kosullar altEida, bulasEüP. falci'parum aktivitesinden kaynaklanan proteinlerin bir ya da daha fazla T epitopunun tamamlya da bir kßmij tasßlan bir ya da daha fazla peptid sekansEiçermektedir (Bkz. Örn. U.S. Patenti 7,087,231). Rekombinan Plasmodium falciparum (3D7) AMA-1 ektodomain ekspresyonu ve saflastlrllmasl tarif edilmistir. Önceki metotlar, dogal molekülün katlanmas !ve disülfit köprüsünü koruyan son derece saf bir protein üretmistir. Rekombinan AMA-l, tan slal bir ayiaç olarak ve aynEzamanda antikor üretiminde ve tek basma veya sîmayj önlemek için bir asEiEi parças Eolarak kullanßlßlm (ör, U.S. Patenti 7,029,685) Teknikte, türlere özgü P. Vivax malaryal peptid antijenlerini kodlayan polinükleotidler tarif edilmistir, bunlar bu antijenlere karsüyöneltilen monoklonal ya da poliklonal antikorlara sahip oldugundan, enfeksiyondan sonra duyarlüair memeli konagîl plazmasl içerisine sekrete edilen proteinler ya da protein fragmanlardji Peptid antijenleri, monoklonal antikorlar ve/veya poliklonal antikorlardan, sltma teshisi ve aynl zamanda Plasmodium vivax"n enfeksiyondan sorumlu olup olmadlglnln belirlenmesi için kullanilan analizlerde yararlanlllr. (U.S. Patenti 6,706, 872) Türlere özgü P. Vivax malaryal peptid antijenleri rapor da edilmistir ve bunlar bu antijenlere karsl yöneltilen monoklonal ya da poliklonal antikorlara sahip oldugundan, enfeksiyondan sonra duyarlT bir memeli konagîi plazmasü içerisine sekrete edilen proteinler ya da protein fragmanlarEllI. Peptid antijenleri, monoklonal antikorlar ve/veya poliklonal antikorlardan, SEIna teshisi ve aynü zamanda Plasmodium vivax°ß enfeksiyondan sorumlu olup olmadEgEiEi belirlenmesi için kullanüan analizlerde yararlanEÜß (bkz. örn. U.S. Patenti 6,231,861). Rekombinan bir Plasmodi'um falciparum (3D7) AMA-1 ectodomain ayni_ zamanda dogal bir molekülün katlanmasl lve disülfit köprüsünü koruyan son derece saf bir protein üreten bir inetotla da eksprese edilmistir. Rekombinan AMA-l , tanlsal bir ay rlaç olarak antikor üretiminde ve bir as dolarak kullanîn için kullan sltdi'i (U.S. Patenti 7,060,276) Benzer sekilde, dogal molekülün katlanmas Eve disülfit köprüsünü koruyan rekombinan bir Plasmodi'um .falci'parum (3D7) MSP-142'nin ekspresyonu ve saflastEJInasj da bilinmektedir. Rekombinan MSP-l42, tanßal bir ay Eaç olarak antikor üretiminde ve bir as Eolarak kullanlîn için kullanßlmlî. (U.S. Patenti 6,855,322) Bir sîma bulasßEpatojenle enfeksiyona sahip olan ya da risk tasüEgEidan süphelenilen bir denegi teshis etmek için, insan sitna enfeksiyonlaanLn saptanmasLiçin tansal metotlar, bu ve iliskili patent aç klamalarlna göre bilinmektedir. Spesifik olarak, örnegin kan örnekleri 3-asetil piridin adenin dinükleotid (APAD), bir substrat (örnegin bir laktat tuzu ya da laktik asit) içeren bir ayFraçla kombine edilir. Söz konusu ayiaç sltlna paraziti taraflîidan üretilen benzersiz bir glikolitik enziinin varlgmj saptamak için dizayn edilmistir. Bu enzim, parazit laktik asit dehidrojenaz (PLDH) olarak bilinmektedir. PLDH, yukarma tarif edilen ayßaç kullanüarak konak LDH'den kolayca ayEt edilebilir. AyiacEi parazitli bir kan örnegiyle kombinasyonu APADWîi azalmasj ile sonuçlanß. Bununla birlikte APAD konak LDH tarafîldan azaltüînaz. Azaltülan APAD, daha sonra spektral, florimetrik, elektroforetik ya da kolorimetrik analiz gibi çesitli tekniklerle saptanabilir. YukarLdaki sekilde azalan APAD"Ln saptanmasLd sjîma enfeksiyonunun pozitif bir göstergesini saglar (örn. U.S. Patenti 5,124,141). Slttna teshisi için baska bir metodolojide, Plasmodium falciparum antijeni GLURPltan elde edilen karakteristik bir amino asit sekans liçeren bir polipeptid, polipeptide karsll kullanllan spesifik bir antikor tarafindan bir test örneginde tanlrtlr. (U.S. Patenti ,231,168) Laysmanyaz Hint YarEnadasü Afrika ve Latin Amerikaida yaygii bir parazitik salgm hastalügtlî ve Dünya Saglüî Örgütü'nün asE gelistirme önceliklerindendir. Farklü hastalüglarß bir kompleksi olan Laysmanya parazitleri iç organlarda ölümcül enfeksiyonlara ve aynüzamanda ciddi deri hastalEgßa neden olur. Laysmanyaz& en yEkßE formlarßdan birisi, burun ve agüdaki biçim bozan bir enfeksiyondur. Laysmanyaz vakalaanLn sayLsL artmaktade ve simdi çogu bölgelerde kontrolden çlkmaktadlr. Laysmanyaz HIV enfeksiyonunun sonucunda özellikle güney Avrupa gibi bazl gelismis ülkelerde de art Stad ri. Mevcut ilaçlar toksik ve pahalldlr ve uzun dönemli günlük enjeksiyonlar gerektirir. Laysmanya, makrofajlarda ve immün sistemin beyaz kan hücrelerinde yasayan protozoan parazitlerdir. Parazitler küçük kan emici böceklerin (kum sinekleri) EEmaslS/la bulasm ve gezegenin büyük bir kEmlIida yasadEklarEidan kontrol edilmesi Iç organlardaki laysmanyaz, hastalgn üç belirtisinden en tehlikeli olanLdLr. Her yLlJ iç organlarda görülen formdan (kala-azar ya da "öldürücü hastallk") yaklaslk 500.000 yeni vaka meydana geldigi tahmin edilmektedir. Iç organlardaki laysmanyaz riski taslyan 200 milyonda fazla insan bulunmaktad Fr. Iç organlardaki laysmanyaz vakalarîlîl yüzde 90,1Iidan fazlasD Hindistan, Banglades, Sudan, Brezilya ve Nepalida meydana gelmektedir. Ölçümlerin çogunlugu çocuklarda meydana gelmektedir. Kütanöz formlarü olanlar genellikle kallEEbir biçimde biçim bozukluguna maruz kalmaktad i Laysmanta enfeksiyonlarîlEl teshisi güçtür ve tipik olarak doku biyopsi numunelerinin histopatolojik analizin gerektirir. Bununla birlikte çesitli serolojik ve immünolojik uygun hale getirilmis ortam üretmek için kültür ortamDiçerisine metabolik ürünlerini salmaktadE. Bu metabolik ürünler konaga bagßlklîk saglar. Bkz. Schnur, L. F., ve ark., Dünya genelinde 40 milyon civarinda insan AIDS'e yol açan Virüs olan HIV enfeksiyonu taslmaktadlr. Her ylllbu hastal ktan 3 milyon civarlnda insan ölmektedir ve bunlar& yüze 95'i gelismekte olan dünyadadrr. Her yFIL 5 inilyona yaki insana HIV bulasmaktad E. Günümüzde, hastalEgîl en agi yükünü alt Sahra Afrikasütas &has Ea karsEi Hindistan, Çin ve Rusya gibi baska ülkelere süratli bir biçimde yaymnaktadî. Bu salglîi en hâl :biçimde az 3111 nüfuslar [aras Elda artmaktad E. 1981 ,den bu yana Birlesik Devletlerde 950.000"den fazla AIDS vakasE olmustur. AIDS insanlarü en üretken yülarlîida vurmaktadm. Kadilar, hem biyolojik hem de sosyal nedenlerle yüksek bir HIV/AIDS riski tas Enaktad E. AIDS'e Vücudun immün sisteminin hücrelerini öldüren ve zarar veren ve Vücudun enfeksiyonlarla ve belirli kanserlerle savasma yetenegini dereceli olarak ortadan kaldrran insan immün yetmezlik Virüsü (HIV) neden olur. HIV Virüsü en yaygîl sekliyle enfeksiyonlu bir partnerle korunmasâ Cinsel iliskiyle yayJJE. Sorunla ilgili en saglütlü çözüm virüsün yayEImasmEi engellenmesidir. Bu amaca ulasmanîl bir yolu güvenli, etkili ve uygun maliyetli bir HIV aslIsEhazilanmasElE. Dünya genelinde, yüksek HIV enfeksiyon riski olan bes kimseden birisinden daha azmlîl etkin korumaya erisimi HIV enfeksiyonlaanLn teshis edilmesi için virüs kültürü, hasta numunelerinden eksiksiz nükleik asit sekanslarl lile PCR ve hasta serumunda anti-HIV antikorlarlnln varlgl liçin antikor testleri gibi metotlar bilinmektedir (bkz. örn., U.S. Patent No. 6,979,535, Burada ifsa edildigi gibi belirli baska yapilandîmalara göre, asl'bilesimleri ve iliskili formülasyonlarEve kullanûi metotlar] immünoterapötik kanser tedavisi için kullan 313 olabildiginden bir kanserden elde edilen bir antijeni kapsayabilir. Örnegin, adjuvan formülasyonu prostat, meme, kolorektal, akciger, pankreatik, renal ya da melanom kanserler için olanlar gibi tümör rejeksiyon antijenleriyle kullanEn alanE bulabilir. Örnek niteligindeki kanser ya da kanser hücresi türevi antijenler MAGE 1, 3 ve MAGE 4 ya da baska MAGE antijenlerin kapsamaktadm, örnegin WO99/40188, PRAME, BAGE, Lage (ayanamanda NY Eos 1 olarak bilinmektedir) SAGE ve HAGE (WO Cancer Institute 89, p. 293 gibi yayßlarda ifsa edilenleri kapsamaktadi. Kanser antijenlerinin bu kîlülayEEblmayan örnekleri melanom, akciger karsinomu, sarkom ve mesane karsinomu gibi çesitli tümör tiplerinde eksprese edilmektedir. Bkz, ör. , U.S. Patent No. 6,544,518. Su anda ifsa edilen belirli yap Handmmalara göre GLA ile kullanii için uygun olan diger tümöre özgü antijenler, bunlarla kLsiLtlLlolmamak kaydiyla tümöre özgü ya da tümörle iliskili GM2, ve GM3 gibi gangliyozidler ya da bunlarln konjugatlarl Ibulunmaktadiri; ya da bir anti kanser immün tepkisi ortaya çlkarmak ya da artt nmak için bir GLA as l bilesiminde kullanma için bir antijen tam uzunluklu Gonimmuneofin hormon salhi horrnunu (GnRH, WO 95/20600) gibi bir self peptid hormon, kßa bir 10 amino asit uzunlugunda peptid olabilir. Baska bir yapmandmmada prostata özgü antijen (PSA), prostat antijenleri ya da tercih edilen bir yapEandmmada Prostaz olarak bilinen bir antijen kullanüînaktadm. (ön, Nelson, ve ark., Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1999) 96: Burada aç klanan diger tümörle iliskili antijenler sunlarTkapsamaktad Ti: Plu -I (J Biol. Ilave olarak, kanser terapisindeki as [Bar için özellikle uygun olan antijenler tirosinaz ve survivini de kapsamaktadî. Burada ifsa edilen bir kanser antijeni içeren GLA içeren asEbiiesimleri ile ilgili uygulamalar, HER-2/neu ekspresyonu gibi tümörle iliskili antijen ekspresyonu ya da diger kansere özgü ya da kanserle iliskili antijenler taraf ndan karakterize edilen her türlü kansere karsi kullanisli olacaktlri. Kanseri olan ya da kanser olma riski oldugundan süphelenilen bir denekteki kanser tanEEklinik görünüm, kanserin ilerleme derecesi, kanserin tipi ve diger etmenler gibi çesitli etmenlere dayalEblarak degisebilen, teknikte kabul edilen çesitli metodolojilerden herhangi birisi ile yapEDibilir. Kanser tanßüörnekleri arasEida hasta numunelerinin (örnegin kan, deri biyopsisi, diger doku biyopsisi, cerrahi numuneler, vs.) histopataolojik, histokimyasal, immünohistokimyasai ve immünohistopatolojik incelemesi, tanLmlLI genetik (örnegin nükleik asit) markerlariiçin PCR testleri, bu antijenleri tasyan hücreler ya da dolaslmdaki kanserle iliskili antijenler için ve tan m1› 1 spesifiteye sahip antikorlar için serolojik testler ya da teknikte uzman olan kimselerin asina oldugu baska metodolojiler bulunmaktadi. Bkz, öm. U.S. Patent No. 6,734,172; Burada açERlanan aslbilesimleri ve metotlarjaynEzamanda otoimmün hastalklari profilaksisi ya da terapisi için de kullanEabilir, söz konusu hastalElar bir konagB ya da denegin immün sisteminin "seli" dokulara, hücrelere, biyomoleküllere (örnegin peptidler, polipeptidler, proteinler, glikoproteinler, lipoproteinler, proteolipidler, lipidler, glikolipidler, nükleik asitler, Örnegin RNA ve DNA, oligosakkaritler, polisakkaritler, proteoglikanlar, glikozaminoglikanlar ya da benzerle ve denek hücreleri ve dokularlnlrt diger moleküler bilesenleri) ya da epitoplara (örnegin bir antikor degisken bölgesi tamamlayölll& belirleme bölgesi (CDR) taraflîidan ya da bir T hücre reseptör tamamlayßütk belirleme bölgesi taraf îldan tan Ilanlar gibi spesifik immünolojik olarak tanlInlEtan Ena yap Hart) kars :yöneltilen bir immün tepkisine zararlü bir biçimde arac [DER ettigi hastal Eklar ü kosullar Eya da bozukluklar :kapsamaktad i. Dolayßßlla otoimmün hastalEklar her durumda normal otolog dokulara kars Dyöneltilen hücreleri ya da antikorlarEkapsayan bir anormal immün tepki ile karakterize edilir. Memelilerdeki otoimmün hastalklar genel olarak iki farli kategoriden birisinde slnlflandlrllabilir: hücre arac'lll hasta] 11 (yani T-hücre) ya da antikor arac 1| bozukluklar. Hücre aracllll lotoiininün hastalklarn kdltlay dl lolmayan örnekleri inultipl skleroz, romatoid artrit, Hashimoto tiroidit, tip 1 diyabetes mellitus (Juvenil baslanglölrldiyabet) ve otoimmün uvoretiniti kapsamaktad E. Antikor arac JJIbtoimmün bozukluklar, bunlarla sEiElEolmamak kaydglla miyasteni gravis, sistemik lupus eritematöz (ya da SLE), Graves hastalg] otoimmün hemolitik anemi, otoimmün trombositopeni, otoimmün astün, kriyoglobulinemi, trombik trombositopenik purpura, primer biliyer skleroz ve pemisyöz anemiyi kapsamaktadi. Antijen(ler) sunlarla iliskilidir: sistemik lupus eritematöz küçük nükleer ribonükleik asit proteinleridir (snRNP); Graves hastaltgü tirotr0pin reseptörü, trioglobulin ve diger tiroid epitelyal hücre bilesenleridir (Akamizu pemfigus kaderin benzeri pemfig'us antijenleri, örnegin demoglein 3 ve diger adezyon Hashimoto, 1993); ve trombik trombositopenik purpura tormbositlerin antijenleridir. Academic Publishers, Norwell, MA; Radbruch and Lipsky, P.E. (Eds.) Current Concepts in Autoimmunity and Chronic Inflammation (Curr. Top. Microbiol. and Otoimmünite tip 1 diyabet, multipl skleroz, lupus, romatoid artrit, skleroderma ve tiroid hastallklarl .gibi 80,den fazla farkll hastalkta rol oynamaktadlr. Çogu otoimmün hastalik için güçlü kantitatif morbidite tahminleri bulunmamaktadlr. 199071ar nda sonunda yapilan en yak ri zamanli i çalismalar otoimmün hastal klarin Birlesik Devletlerdeki en yaygn üçüncü büyük hastalik oldugunu ve en yaygn otoimmün hastaliklarin 85 milyondan fazla Amerikaliýî etkiledigini ortaya koymaktadiîi. HastalEgEi su anki yaygilk tahminleri Birlesik Devletler nüfusunun yüzde 5 ila 8°i aralEgEidadE. Çogu otoimmün hastalik: orantßü olarak kadüilarE etkilemektedir. KadEilarEi bir otoimmün hastalEga yakalanma riski erkeklerden 2.7 kat daha fazladi Kadülar otoimmün hastalklara karsü daha duyarlElE; erkeklerin kadilardan daha yüksek dogal katil hücre aktivitesi düzeylerine sahip oldugu görülmektedir. (Jacobsen Otoimmün hastal klar, immün sistem self dokular honself sandiginda meydana gelir ve uygun olmayan bir saldiri hazirligina girisir. Vücut otoimmün hastaliklardan örnegin bagFrsak (Crohn hastaligi) ve beyin (multipl skleroz) gibi farklFksekillerde etkilenebilir. Bir otoantikorun, fonksiyonlarma zarar vermek için self hücreler ya da self dokulara saldîdgEve sonuç olarak otoimmün hastalklara neden oldugu ve otoantikorun, bir otoimmün hastalEgiIi asü] meydana çkgidan (örnegin klinik belirtiler ve semptomlari görülmesinden) önce hastanin serumunda saptanabildigi bilinmektedir. Dolayßgila, bir otoantikorun saptanmasjbir otoimmün hastalgi gelismesi riskinin ya da varlgîii erken teshisine ya da farkîia varÜInasia imkan tani. Bu bulgulara dayaljolarak otoantijenlere kars Jçesitli otoantikorlar kesfedilmistir ve klinik testlerde otoantijenlere 6,919,078), diger taraftan otoimmün tan lari ilgili bir metabolitin saptanmas (örn. , U.S. Pat. No. 4,659,659) ya da immünoloj ik bir reaktivitenin saptanmashkapsayabilir (örn. Belirli yapüandmmalarda, burada aç Elanan bilesimler özellikle yaslElarEi tedavisinde ve/veya böbrek diyalizi yap [11111 denekler, kemoterapi alan denekler ve/veya radyasyon terapisi alan denekler gibi immünosupresyona ugramg transplant alEEIarD ve benzerlerinin tedavisinde uygulanabilecektir. Bu bireyler genel olarak aslara azalan immün tepkiler verir ve bu nedenle de burada açiklanan bilesimlerin kullanml,| bu deneklerde elde edilen immün tepkileri arttirabilir. Baska yapllandlrrnalarda, burada açlklanan bilesimlerde kullanllan antijen ya da antijenler, respiratuar hastallklarla, örnegin kronik obstrüktif pulmoner hastalik (COPD) gibi kosullarm terapisi ve profilaksisi için bakteriyel enfeksiyonun (örnegin pnömokokal) neden oldugu ya da siddetlenen hastalfklarla iliskili antijenleri kapsamaktadE. COPD, fizyolojik olarak kronik bronsiti ve/veya amfizemi olan hastalarda tersinemeyen ya da kßmen tersinebilen hava yolu obstrüksiyonunun COPD*un siddetlenmesine genellikle bakteriyel (örnegin pnömokokal) enfeksiyon Burada tarif` edildigi gibi, mevcut bulusun belirli uygulamalarC bir ya da daha fazla toll benzeri reseptör agonisti (TLR agonisti) içeren farmasötik bilesimler gibi as Üsilesimleri ve immünolojik adjuvan bilesimleri düsünmektedir. Toll benzeri reseptörler (TLR), çok sayma bulasijatojende ya da bunlar üzerinde bulunabilenler gibi çesitli korunmus mikrobiyal moleküler yap Jhr için konak hücrelere erken asamada tari @a yetenegi veren dogustan Immün sistemin hücre yüzeyi transmembran reseptörlerini kapsamaktadm. Dogustan immün sistem vasmas Slla immün tepkilerin baslatfllnashühlîtlandßmak için TLR aracmüsinyal transdüksiyonunun indüklenmesi, hücre yüzeyi TLR*sini mesgul eden TLR agonistleri taraflîldan gerçeklestirilebilir. Örnegin, lipopolisakkarit (LPS) TLR2 ya da TLR4 vasßasßlla bir TLR agonisti olabilir (Tsan ve ark., 2004 J. Leuk. metillenmemis sitozin-guanozin ya da "CpG" dinükleotid motifleri içeren Opinion on Biological Therapy 52673; Vollmer ve ark., 2004 Antimicrob. Agents etanol hidrat, Mol. Wt. 318 Da from 3M Phamiaceuticals, St. Paul, MN, ayn _tzamanda agonisti olabilir (Feuillet ve ark., ; ve hepatit C antijenleri TLR7 ve/veya TLR9 vas îasgl'la TLR agonistleri olarak 2005 Hepatol. 42:724).Baska TLR agonistleri de bilinmektedir (Örnegin Schirrnbeck ve kullanEabilir. Örnegin ve arka plan olarak (bkz. örn. U.S. Patent No. 6,544,518), hem sistemik hem de mukozal rotalar vasltaslyla uygulandiginda adjuvan olarak metillenmemis CpD dinükleotidler ("CpG") içeren immünostimülatör oligonükleotidler bilinmektedir (WO dinükleotid motifleri için bir kßaltmadî CG motifinin immünostimülasyondaki analiz, CG motifinin belirli bir sekans baglamüda olmas Dgerektigini ve bu sekanslarîl bakteriyel DNA7da yaygEi olmakla birlikte omurgalE DNA'sEida nadir oldugunu göstermistir. Immünostimülatör sekans sJsttJj: Purin, Purin C, G, primidin, pirimidin; içerisinde dinükleotid CG motifi metillenmez fakat diger metillenmemis CpG sekanslarlnln immünostimülatör olduklarl Ibilinmektedir ve mevcut bulusun belirli yapllandlrmalarlnda kullan labilir. Asllar seklinde formüle edildiginde CpG, serbest antijenle birlikte serbest solüsyon halinde uygulanabilir () ya da kovalent olarak bir antijene konjuge edilebilir (WO 96/02555; McCluskie and Davis, supra) ya da alüminyum hidroksit gibi bir tasgl'ßßila formüle edilebilir (örnegin Davis ve ark. supra, Mevcut bulusun adjuvanlarü ya da asüarßda kullanEn için tercih edilen oligonükleotidler tercih edilen sekliyle en az üç, daha tercih edilen sekliyle en az altüya da daha fazla nükleotidle ayrEan iki ya da daha fazla dinükleotid CpG motifi içerir. Oligonükleotidler tipik olarak deoksinükleotidlerdir. Tercih edilen bir yap ilandijmada, oligonükleotiddeki intemükleotid fosforoditioat ya da daha tercih edilen sekliyle bir fosforotioat bagldlr, buna karsin fosfodiester ve diger intemükleotid baglarl bu bulusun kapsamFliçerisindedir, örnegin karma internükleotid baglantllhrHolan oligonükleotidler bu bulusun kapsamEiçerisindedir. Fosforotioat oligonükleotidler ya da fosforoditioat patentlerde tarif edilmektedir. Tercih edilen oligonükleotid örnekleri asagElaki yayEilarda ifsa edilen sekanslara sahiptir; burada ifsa edilen çesitli uygulamalar için sekanslar tercih edilen sekliyle fosforotioat modifiye edilmis intemükleotid baglantLlaanLiçermektedir: CPG 7909: Cooper ve ark., "CPG 7909 adjuvant improves hepatitis B virus vaccine seroprotection in antiretroviral-treated HIV-infected adults." AIDS, CpG 10101: Bayes ve ark., "Gateways to clinical trials." Methods Find. Exp. Vollmer J., "Progress in drug development of immunostimulatory CpG oligodeoxynucleotide ligands for TLR9." Expert Opinion on Biological Therapy. 2005 Alternatif CpG oligonükleotidler, yukar da sayilan yaylnlarda tarif edilen tercih edilen sekanslarln önemsiz nükleotid sekans ornatmalarl,l yerlestirmeleri, silmeleri ve/Veya eklemeleri baklinlndan fakl llk gösteren varyantlarl içerebilir. Mevcut bulusun belirli yap lland lîmalarlîida kullan Flan CpG oligonükleotidler teknikte bilinen hertürlü metotlar sentezlenebilir (örnegin EP 468520). Uygun bir biçimde, bu oligonükleotidler otomatiklestirilmis bir sentezleyiciden yararlanarak sentezlenebilir. Oligonükleotidler tipik olarak deoksinükleotidlerdir. Tercih edilen bir yapEIandEmadaßligonükleotid içerisindeki internükleotid bagE fosforoditioattm ya da daha tercih edilen sekliyle fosforotioat baglîlm, bununla birlikte fosfodiesterler de su anda düsünülen uygulamalar& kapsamEiçerisindedir. Örnegin karStEJhig fosforotioat fosfodiesterler gibi farklLinternükleotid baglantLlhrl_ içeren oligonükleotidler de düsünülmektedir. Oligonükleotidi stabilize eden baska intemükleotid baglarl da kullanllabilir. Ko-adjuvan Burada saglanan sekliyle belirli uygulamalar as Ebilesimlerini ve immünolojik adjuvan kompozisyonlarEiÇ örnegin GLA,ya ilave olarak bu bilesimlerin adjuvan aktiviteye sahip olan fakat GLA dßßdaki bir bilesenini gösteren en az bir ko-adjuvan içeren farrnasötik bilesimleri kapsamaktadî Böyle bir adjuvan aktiviteye sahip olan bir ko- adjuvan, bir insan (örnegin bir insan hasta), insan olmayan bir primat, bir memeli ya da tanLnan bir immün sisteme sahip olan baska bir gelismis ökaryotik organizma gibi bir denege uygulandlglnda, bir immün tepkinin potensini ve/veya ömrünü degistirebilen (yani istatistiksel olarak anlamli bir biçimde artt nabilen ya da azaltabilen ve tercih edilen belirli yaplandimalarda arttFrabilen ya da yükseltebilen) bir bilesimi kapsamaktadE. (Bkz. örn. Powell and Newman, "Vaccine design - The Subunit and Adjuvant Approach", 1995, Plenum Press, New York) Burada ifsa edilen çesitli yapElandlîmalarda, GLA ve istenilen bir antijen ve istege baglEolarak bir ya da daha fazla ko-adjuvan, GLA ile aynjzamanda uygulanabilen ya da zaman ve/veya bosluk (örnegin farklEbir anatomik alanda) ayrühbilen istenilen antijene karsEyöneltilen bir immün tepkiyi degistirebilir, örnegin ortaya çügartabilir ya da arttîlabilir, fakat belirli yapLlanstmalaan bu sekilde sLnnlanmasLamaçlanmamaktadLu ve dolaysyla belirtilen bir antijeni içermeyen fakat ayn lzamanda bir ya da aha fazla TLR agonisti, ko-adjuvan, bir imidazokuinolin, immün tepkisi modifiye edici ve çift sap iplik iinmün modifiye edici (dSLlM) içerebilen bir bilesimde GLA"nln uygulamaslnl da düsünmektedir. Buna göre ve yukariia kaydedildigi gibi, ko-adjuvanlar adjuvan etkilere sahip olan GLA3dan baska bilesimleri, örnegin saponinler ve saponin mimetiklerini, örnegin QS21 95/ 17210), sap, bitki alkaloidleri, örnegin tomatin, deterjanlar, örnegin (bunlarla kßmlü olmamak kayd Slla) saponin, polisorbat 80, Spam 85 ve stearil tirosin, bir ya da daha fazla sitokin (örnegin GM-CSF, IL-2, 1L-7, 1L-12, TNF-alfa, IFN-gamma), bir imidazokuinolin immün tepki modifiye edici ve bir çift sap iplik immune modifiye edici Saponinler gibi deterjanlara iliskin bilgiler örnegin U.S. Patent 6,544,518; Lacaille- verilmektedir. Quil A (saponin) içeren Immün Stimüle edici kompleksler (lmmune Stimulating Complexes (ISCOMS)) olarak adlandmühn partikülat yapüarEhemolitiktir ve asElarlIi üretiminde kullanülngtm (Morein, B., EP 0 109 942 B1). Bu yathrIi Hemolitik saponinler QSZl ve QSl7 (HPLC ile saflastmühig Quil A fraksiyonlarü potent sistemik adjuvanlar olarak tarif edilmistir ve bunlarLrl üretim metodu U.S. Pat. ayrica sistemik asilar için potent bir adjuvan olarak islev gören QS7°nin kullanlml ltarif edilmektedir (hemolitik olmayan bir Quil-A fraksiyonu). QSZl kullanîhlîiyröa Kensil QS21 ve polisorbat ya da siklodekstrin kombinasyonlar] da bilinmektedir (WO çalßmalarlîida kullaHJInlIs olan diger saponinler, Gypsophila ve Saponaria gibi baska bitki türlerinden elde edilenleri kapsamaktadß (Bomford ve ark., Vaccine, 10(9):572- 577, 1992). Escin, burada ifsa edilen uygulamalarin adjuvan bilesimlerinde kullanim için saponinlerle iliskili deger bir deterjand It Escin Merck indeksinde (12. Baslm: giris no 3737) at kestanesi agac|,| Aesculus hippocastanum'un tohumunda meydana gelen bir saponin karTslînFl olarak tanlînlanmaktadîl. Kromatografi ve saflastîtma (Fiedler, Arzneimittel-Forsch. 4, 213 (1953)) ve iyon degisim reçineleri (Erbring ve ark., U.S. Pat. No. 3,238,190) vas Ias Stla izolasyonu tarif edilmektedir. Escin fraksiyonlarE(aynD zamanda escin olarak da bilinir) satlastiüknîslti ve biyolojik olarak aktif olduklarîJ gösterilmistir (Yoshikawa M, ve ark. (Chem Pharm Bull (Tokyo) 1996 August;44(8): olarak taniqlanan, Digitalis purpurea1dan elde edilen ve Gisvold ve ark., J. Am. tarif edilen prosedüre göre saflastlrtllan baska bir deterj andlr. Burada ifsa edilen belirli baska yap ÜandFrlmalara göre kullantfh için diger ko-adjuvanlar bir blok ko-polimer ya da ilgili teknikteki kimselerin asina olacagEbir polimerik bilesik smrfm Egösteren biyolojik olarak parçalanabilir bir polimeri kapsamaktad m. Bir GLA asD bilesimi ya da bir GLA immünolojik adjuvan içerisine dahil edilebilen bir blok ko- polimer ya da biyolojik olarak parçalanabilir bir polimerin örnekleri aras îida Pluronic® ko-glikolit) (PLG), ve p01i1:C bulunmaktadln (Bkz, örn., Powell and Newman, "Vaccine design - The Subunit and Adjuvant Approach", 1995, Plenum Press, New York) Çesitli uygulamalar bir yag içeren GLA asüarE ve GLA immünolojik adjuvanlarj düsünmektedir, bunlar bu türden baz Eyap [land mmalarda ko-adjuvan aktivitesine katk Zla bulunabilir ve bu türden baska yapmandlîlmalarda ilave olarak ya da alternatif olarak farmasötik olarak kabul edilebilir bir tasgtßjya da eksipiyan saglayabilir. Mevcut patent açlklamasßa dayalEl olarak çok sayEla uygun yag bilinmektedir ve asEl bilesimlerin ve immünolojik adjuvan bilesimlerin dahil etmek için seçilebilir. Bu gibi yaglaan örnekleri, örnek olarak ve kLsLülama olmadan skualen, skualan, mineral yagd zeytinyagl,.kolesterol ve mannid monooleatl kapsamaktadlit imidazokuinolin iinmün tepki modifiye ediciler gibi immün tepki modifiye ediciler de teknikte bilinmektedir ve aynl lzamanda su anda ifsa edilen belirli yapllandlrmalarda ko- adjuvanlar olarak dahil edilebilirler. Tercih edilen belirli imidazokuinolin immün tepki modifiye ediciler, kßEflayEEolmayan örnek olarak resikuimod (R848), imikuimod ve diger imidazokuinolin immün tepki modifiye ediciler, uygun kosullar altEida ayn: zamanda burada tarif edildigi gibi TLR agonist aktivitesine sahiptir. Diger immün tepki modifiye ediciler, nükleik asit esaslüçift sap iplik immün modifiye edicilerdir (dSLIM). Su anda ifsa edilen belirli yapLlandLijmalarda kullanin için düsünülen spesifik dSLIM örnekleri su yaylnlarda bulunabilir: Schmidt ve ark., 2006 Allergy 61:56; Weihrauch ve Knâblein (Editor). John Wiley & Sons, December 6, 2005. (dSLIM tartslhn sayfalar http://WWW.mol-ogen.com/English/04.20-dSL1M.shtml]. Yine yukarEla kaydedildigi gibi, burada tarif edildigi gibi GLA ile kullanii için bir ko- adjuvan tipi genel olarak "sap" olarak adlandEÜhn alüminyum ko-adjuvanlarüolabilir. Sap ko-adjuvanlarüasag Elakilere dayanmaktad i: alüminyum oksi-hidroksit; alüminyum hidroksifosfoat; ya da çesitli tescilli tuzlar. Sap ko-adjuvanlarLlkullanan asLlhr burada tarif edildigi gibi tetanöZ suslar ,lHPV, hepatit A, inaktive edilmis polio Virüsü ve diger antijenler için asllarl kapsayabilir. Iyi bir güvenlik kaydlna sahip olduklarlndan, antikor tepkilerini arttildlklarmdan, antijenleri stabilize ettiklerinden ve büyük ölçekli üretimi nispeten kolay oldugundan sap ko-adjuvanlarE avantajlüî (Edelman 2002 Mol. Etkili immün stimülasyonu için GLA ile kombine edilebilen diger ko-adjuvanlar, saponinleri ve saponin mimetiklerini, örnegin QSZl ve QS21"e benzer etkiler veren yapßal olarak iliskili olan ve QS21 mimetikleri olarak adlandlIEan bilesikleri kapsamaktadLr. QSZl, tercih edilen bir ko-adjuvan olarak kabul edilmistir. QSZl, Quillaja Saponaria Molina agaç kabugundan elde edilen HPLC yöntemi ile saflastlrllmls toksik olmayan bir fraksiyon içerebilir. QS21 üretimi U.S. Pat. No. ,057,540 say 1| ldokümanda ifsa edilmektedir. (Bkz. aynl lzamanda U.S. Patent No. GLA aynüzamanda belirli yapEandîmalarda ICOMS (öm. U.S. Patent No. 6,869,607, (Stockholm, Sweden) ve CSL Ltd. (Parkville, Victoria, AustraliaYdan tedarik edilebilen saponin türevi ISCOMATRIX® gibi "immünostimülatör kompleksler" ile kombine edilebilir. Rekombinan Ekspresvon Yap 19 l_ Burada ifsa edilen belirli yapllandlrmalara göre, GLA asl bilesimi bir antijeni kodlayan bir nükleik asit sekansna uygulanabilir bir biçimde baglanan bir baslatßîliçeren en az bir rekombinan ekspresyon yapîj içerebilir. Belirli baska yapEIand Ernalarda, rekombinan ekspresyon yapEEbir viral vektörde, örnegin bir adenovirüs, adeno iliskili virüs, herpesvirüs, lentivirüs, poksvirüs ya da retrovirüs vektöründe bulunur. Örnegin Molecular Biology, 2006 John Wiley & Sons, NY yayEißda Ausubel ve ark. (Eds.), Current Protocols"e göre burada saglandEgügibi polipeptid antijenlerinin ekspresyonu için bu ekspresyon yap Jhrjve vektörlerini hazmlamak ve kullanmak için bilesimler ve metotlar teknikte bilinmektedir. Rekombinan ekspresyon yap LlaanLn kLsLtlachLblmayan yaymlarda ve su anda ifsa edilen belirli yapEIandEmalarda kullanlîh için burada saglanan sekliyle polipeptid antijenlerinin ekspresyonuna adapte edilebilen ögretilerle birlikte bulunabilir. Bu bulus dolaylelyla bir immün tepkiyi düzenleyebilen bir konaktaki immün tepkileri degistirmek (yani örnegin teknikte uzman olan kimselerce bilinen uygun bir kontrole göre istatistiksel olarak anlamll bir biçimde arttlrimak ya da azaltmak) için bilesimler saglamaktadlr. Teknikte slradan uzmanl ga sahip olan kimselerce bilenecegi üzere, bir immün tepki bir konagln immün statüsündeki her türlü aktif degisim olabilir ve konagln immün statüsünün korunmasiida ve/Veya regülasyonunda rol oynayan bir ya da daha fazla doku, organ, hücre ya da molekülün yapßüya da fonksiyonundaki her türlü degisimi kapsayabilir. Tipik olarak, immün tepkiler iyi bilinen çesitli parametrelerle saptanabilir, örnegin bunlarla sîißlüolmamak kaydglla in vivo ya da in vitro olarak çözünebilir immünoglobulinler ya da antikorlarß; sitokinler, lenfokinler, kemokinler, hormonlar, büyüme faktörleri ve benzerleri gibi çözünebilir aracühr ve aynüzaman baska çözünebilir peptid, karbonhidrat, nükleotid ve/veya lipid aracEarE immün sistemin hücrelerinin degisen fonksiyonel ya da yap Lsal özellikleriyle belirlenen sekliyle selüler aktivasyon durumundaki degisimler, örnegin hücre proliferasyonu, degisen motilite, spesifik gen ekspresyonu ya da sitolitik davranls gibi uzmanlasllrnls aktivitelerin indüklenmesi; immün sistemin hücreleri tarafindan selüler farklflasma, örnegin degismis yüzey antijen ekspresyon profilleri ya da apoptoz baslangîlj (programlEhücre ölümü); ya da bir immün tepkinin varlgîli saptanabildigi her türlü baska kriterin saptanmasü Immün tepkiler genellikle örnegin konagEl immün sisteminin hücreleri ve dokular] taraflîidan moleküler ve selüler düzeylerde self ve non-self yapEDar arasßdaki ayrßi olarak farz edilebilir, fakat bulus bunlarla sLnLiilanmamalLdLij. Örnegin, immün sistem bilesenlerinin tipik regülasyonu gibi çesitli normal kosullar eslik edebildiginden ya da otoimmün ve dejenereatif hastaliklarda gözlenen uygun otoimmün tepkiler gibi patolojik kosullarda bulunabildiginden, immün tepkiler ayn Flzamanda self moleküllerin, hücre ya da dokularîl immün sistemce tanEimasEidan kaynaklanan immün sistemdeki durum degisimlerini de kapsayabilir. Baska bir örnek olarak, belirli iininün sistem aktivitelerinin (örnegin antikor ve/veya sitokin üretimi ya da hücre aracmüimmünitenin aktivasyonu) yukarjyönlü regülasyonuyla indüklemeye ek olarak, immün tepkiler ayn: zamanda seçilen antijen, antijen uygulamasEiEi sekli, spesifik tolerans indüksiyonu ya da baska etmenlerin sonucu olabilen saptanabilir immünitenin supresyonunu, zay Ltlamas LrlLdiger her türlü asag Lyönlü regülasyonunu da kapsayabilir. Mevcut bulusun asilar yla bir immün tepkinin indüklenmesinin belirlenmesi, teknikte slradan uzmanI ga sahip olanlarn kolayca anlayacagl | üzere iyi bilinen çesitli immünolojik analizlerle saptanabilir. Bu gibi analizler bunlarla slnlrlll olmamak kaydlyla in vivo ya da in vitro olarak çözünebilir antikorlarm; sitokinler, lenfokinler, kemokinler, hormonlar, büyüme faktörleri ve benzerleri gibi çözünebilir arac [Bar ve ayn: zaman baska çözünebilir peptid, karbonhidrat, nükleotid ve/veya lipid arac Ihrü immün sistemin hücrelerinin degisen fonksiyonel ya da yap ßal Özellikleriyle belirlenen sekliyle selüler aktivasyon durumundaki degisimler, örnegin hücre proliferasyonu, degisen motilite, spesifik gen ekspresyonu ya da sitolitik davranß gibi uzmanlasüînß aktivitelerin indüklenmesi; immün sistemin hücreleri tarafiidan selüler farklühsma, örnegin degismis yüzey antijen ekspresyon profilleri ya da apoptoz baslangcnn (programli hücre ölümü) saptanmaslnl kapsamaktadlrl. Bu ve benzer analizleri gerçeklestirmek için prosedürler yayg n bir biçimde bilinmektedir ve örnegin Lefkovits yaymmda bulunabilir (lmmunology Methods Manual: The Comprehensive Sourcebook of Techniques, 1998; see also Current Protocols in lmmunology; see also, eg., Weir, Handbook of Experimental lmmunology, 1986 Blackwell Scientific, Boston, MA; Mishell and Shigii (eds.) Selected Methods in Cellular Immunology, 1979 Freeman cited therein.). Antijen-reaktif T hücrelerin proliferasyonunun saptanmasu bilinen çesitli teknikler vasltaslyla gerçeklestirilebilir. Örnegin, T hücre proliferasyonu DNA sentezinin hz n n ölçülmesi yoluyla saptanabilir ve aday antijen-reaktif T hücrelerin maruz kaldlgl antijen spesifitesi uyaranlarîi (örnegin istenen spesifik antijen- ya da kontrol antijen pulslu antijen sunan hücreler) kontrol edilinesi yoluyla belirlenebilir. Çogalmas Jiçin uyarÜInE T hücreler, artan bir DNA sentez hâEsergiler. DNA sentezinin hîîlîi ölçülmesi için tipik bir yol, yeni sentezlenmis DNA içerisine dahil edilen bir nükleosit prekürsörü olan tritiye timidinle Örnegin T hücrelerinin puls etiketleme kültürleri vasEasgIladE. Dahil edilen tritiye timidin miktarE bir SEIE sintilasyon spektrofotometre kullanarak belirlenebilir. T hücre proliferasyonunun saptanmas :için diger yollar interlökin-2 (IL-2) üretimi, Ca2+ flux ya da 3-(4,5-dimetiltiazol-Z-il)-2,5-difenil-tetrazolyum gibi boya allmlndaki artlSlarln ölçülmesini kapsamaktadlii. Alternatif olarak, lenfokinlerin (örnegin interferon-gama) sentezi ölçülebilir ya da belirli bir antijene tepki verebilen T hücrelerin saylSl belirlenebilir. Antijene özgü antikor üretiminin saptanmasrörnegin radyoimmünoanaliz (RIA), enzim baglEimmünosorbent analizi (ELISA), denge diyalizi ya da Western blotting gibi kat fazlEimmünoblotting gibi in vitro metodolojiler kullanarak mevcut bulusa göre bir aslS/la isleme tabi tutulan bir konaktan bir örnegin (örnegin serum, plazma ya da kan gibi örnek içeren bir immünoglobulin) analiz edilmesi yoluyla gerçeklestirilebilir. Tercih edilen yapIandEmalarda, ELISA analizler ayrîia örnegin analizin duyarlIgE] arttEmak için antijen özgü bir katüfazlümonoklonal antikorla hedef antijenin antijen- yakalama immobilizasyonunu kapsayabilir. Çözünebilir arac larii (örnegin sitokinleri, kemokinler, lenfokinler, prostaglandinler, vs.) detaylari laynl lzamanda örnegin ticari kaynaklardan (örn. Sigma, St. Louis, M0; see also R & D Systems 2006 Catalog, R & D Systems, Minneapolis, MN) kolayca tedarik edilebilen metotlar, aparatlar ve ayFrlaçlar kullanEIarak enzim baglÜ iininünosorbent analizi (ELISA) vasEtlasßlla kolayca belirlenebilir. Teknikte iyi bilinen rutin analizler kullanarak diger her türlü immünolojik parametre izlenebilir. Bunlar aras [Iida örnegin antikora bag @11 Ihücre arac [IJESItotoksisite (ADCC) analizler, sekonder in vitro antikor tepkileri, çesitli periferik kan ve yerlesik marker antijen sistemleri, immünohistokimya ya da baska analizler kullanilarak lenfoid mononükleer hücre alt popülasyonlarlnln akls immünositoflorimetrik analizi bulunabilir. Bu ve diger analizler örnegin Rose ve ark. (Eds.), Manual of Clinical Laboratory Immunology, 5th Ed., 1997 American Society of Microbiology, Washington, DC yayEiEida bulunabilir. Buna göre, burada saglanan as jve adjuvan bilesimlerinin bir konakta bir THl-tipi T lenfosit tepkisi, bir THZ-tipi T lenfosit tepkisi, bir sitotoksik T lenfosit (CTL) tepkisi, bir antikor tepkisi, bir sitokin tepkisi, bir lenfokin tepkisi, bir kemokin tepkisi ve bir inflamatuar tepkiden seçilen en az bir immün tepkiyi ortaya çlkartabilecegi ya da arttLrabilecegi düsünülmektedir. Belirli yapLlanstmalarda, söz konusu immün tepki sitokinin interferon-gama (IFN-y), tümör nekroz faktörü-alfa (TNF-afdan seçildigi bir ya da birden daha fazla sitokinin üretimi,, interlökinin IL-l , IL-2, IL-3, IL-4, lL-6, IL-S, interlökinin üretimi, kemokinin MlP-la, MIP-lß, RANTES, CCL4 ve CCL5,ten seçildigi bir ya da birden daha fazla kemokinin üretimi, ve bir bellek T hücre tepkisi, bir bellek B hücre tepkisi, bir efektör T hücre tepkisi, bir sitotoksik T hücre tepkisi ve bir efektör B hücre tepkisinden seçilen bir lenfosit tepkisinden seçilen en az bir üretimi Farmasötik Bilesimler Farmasötik bilesimler genel olarak GLA (Avanti Polar Lipids, Inc., Alabaster, AL'den tedarik edilebilir, ürün numarasi 699800) içerrnektedir ve ayrBa burada saglanan sekliyle farmasötik olarak kabul edilebilir bir tasSlBj eksipiyan ya da seyreltici ile kombinasyon halinde antijen, TLR agonisti, ko-adjuvan (istege baglîblarak bir sitokin, bir imidazokuinolin immün tepki modifiye edici ve/Veya bir dSLIM), ve/Veya rekombinan bir ekSpresyon yapleLndan seçilen bir ya da daha fazla bilesen içerebilir. Burada ayrlca GLA "monoterapisi" açlklanmakta olup, içerisindeki GLA, burada tarif edildigi gibi, diger antijenlerden büyük ölçüde yoksun olan bir bilesim içerisinde formüle edilir ve bir organizma tarafEidan enfeksiyon gibi bir durum ya da bir hastalEgü tedavi etme ya da önleme amac Slla örnegin spesifik olmayan bir immün tepki gibi bir immün tepkiyi stimüle etmek için bir denege uygulan E. Bir yap [[andßmada, bilesimler ve metotlar bir denekte bir immün tepkiyi stimüle etmek için monofosforile edilmis bir disakkarit kullani. Belirli baska bir yap mandîmada, söz konusu bilesimler ve metotlar bir denekte bir immün tepkiyi stimüle etmek için Lipid A2nEi 2-mon0açil formunu kullanLr. Baska bir belirli yap Jandijmada,söz konusu GLA istege baglJolarak bir kit içerisinde saglanan bir sprey formundadlii. Söz konusu GLA tercih edilen sekliyle stabil bir emülsiyon seklinde formüle edilebilir. Belirli bir yapilandlrimada, Örnegin diger antijenlerden büyük ölçüde yoksun olan stabil bir emülsiyonda bir lipid A türevi içeren bir bilesim saglanlîl. Baska bir belirli yapEandîmada, memelilerde kullanii için uygun olan bir 3-açillenmis monofosforile edilmis lipid A türevi içeren bir bilesim saglanmakta olup, içerisindeki 2 ainin pozisyonu tekli bir açil zincirine sahiptir ve büyük Ölçüde diger antijenlerden yoksundur. Belirli baska yap Eandîmalarda, farmasötik bilesim hem GLA hem de burada saglanan sekliyle farmasötik olarak kabul edilebilir bir tasydd eksipiyan ya da seyreltici ile kombinasyon halinde TLR agonisti, ko-adjuvan (örnegin bir sitokin, bir imidazokuinolin immün tepki modifiye edici ve/Veya bir dSLIM) ve benzerleri ve/Veya rekombinan bir ekspresyon yastEidan seçilen bir ya da daha fazla bilesen içerebilen bir as Üsilesimleridir. Örnek niteligindeki tasßtBÜhr kullan [Ian dozaj ve konsantrasyonlarda alEEar için toksik olmayacaktlî. GLA art :lnükleik asit esaslüas [[ar için ya da GLA artEbir antijen içeren as Ear için, tipik olarak intradermal, subkütanöz, intramüsküler ya da intravenöz yoldan ya da diger yollardan yaklasik 0.01 ug/kg ila yaklasüg 100 mg/kg°l]î dozaj uygulanacaktLr. Tercih edilen bir dozaj yaklaslk l pg/kg ila yaklasik 1 mg/kgsdlri ve yaklas k 5 ug/kg ila yaklasik 200 ug/kg tercih edilir. Teknikte uzman olan kimseler için, uygulama sayîsmve süglEgEiEi konagi tepkisini baglEolacagJaçEktE. Terapötik kullanüi için "Farmasötik olarak kabul edilebilir tasglßüar" farmasötik tekniginde iyi bilinmektedir ve örnegin Remingtons Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing C0. (A.R. Gennaro edit. 1985) yayEiEida tarif edilmektedir. Örnegin, fizyolojik bir pH degerine sahip olan steril bir salin ve fosfat tamponlu salin kullantlabilir. Farmasötik bilesimde koruyucular, stabilizatörler, boyalar ve hatta tatlandlîßü ajanlar saglanabilir. Koruyucu olarak örnegin, sodyum benzoat, sorbik asit ve p-hidroksibenzoik asidin esterleri eklenebilir. 1449°da Li. Ek olarak, antioksidanlar ve süspansiyon haline getirici ajanlar kullanilabilir. l_d. inorganik asidin (asit ekleme tuzlarl)l ya da bir organik ya da inorganik bazlîl (baz ekleme tuzlar] kombinasyonundan elde edilen mevcut bulusun bilesiklerinin tuzlarElD göstermektedir. Mevcut bulusun bilesimleri serbest baz ya da tuz formlarîjda kullan Eabilir ve her iki form mevcut bulusun kapsam :içerisinde olarak düsünülür. Farmasötik bilesimler, bilesimin bir hastaya uygulanmas [Ela imkan tanßlan herhangi bir formda olabilir. Örnegin, söz konusu bilesim bir katglsgtya da gaz (aerosol) formunda olabilir. Tipik uygulama rotalarLlksilama olmakstln oral, t0pikal, parenteral (örnegin sublingual ya da bukkal), rektal, vajinal ve intranazal (örnegin bir sprey olarak) uygulamayi lkapsamaktadlri. Burada kullan lan sekliyle parenteral terimi iyontoferetik enjeksiyonlarÇ intravenöz, intramüsküler, intrastemal, intrakavernöz, intratekal, intrameatal, intraüretral enjeksiyon ya da infuzyon tekniklerini kapsamaktadLii Belirli bir yapiland'nmada, burada tarif edilen bir bilesim (asi ve farmasötik bilesimleri içeren) iyontoforez, mikrokavitasyon, sonoforez ya da mikroignelerden seçilen bir teknik vas Ffas Fyla intradermal olarak uygulan il. Söz konusu farmasötik bilesim, bilesimin bir hastaya uygulanmas &dan sonra içerisinde bulunan aktif bilesenlerin biyoyararlanlîh saglamasüiçin formüle edilir. Bir hastaya uygulanacak olan bilesimler, bir ya da daha fazla dozaj birimi formunu al& ve burada örnegin bir tablet tek bir dozaj birimi olabilir ve aerosol formundaki bir ya da birden daha fazla bilesiginin bir kab Eçok say [Ela dozaj birimini tutabilir. Oral uygulama için, bir eksipiyan ve/veya baglaylcl bulunabilir. Örnekler sükroz, kaolin, gliserin, nisasta dekstrinler, sodyum aljinat, karboksimetil selüloz ve etil selülozdur. Renklendirici ve/Veya tatlandtrlcl ajanlar bulunabilir. Bir kaplama kabugundan yararlanilabilir. Söz konusu bilesim örnegin bir iksir, surup, solüsyon, emülsiyon ya da süspansiyon gibi bir sE/Eformunda olabilir. Sîljörnegin oral uygulama için ya da enjeksiyon yoluyla dag Etna için olabilir. Oral uygulama için tasarlandg'hda, tercih edilen bilesimler tatlandElEEaj an, koruyucular, boya/renklendirici ve tat artßElan bir ya da daha fazlasij içerir. Enjeksiyon yoluyla uygulanmas Jtasarlanan bir bilesime bir yüzey aktif madde, koruyucu, @latma maddesi, dispersleme maddesi, süspansiyon haline getirici ajan, tampon, stabilizatör ve izotonik ajandan bir ya da daha fazlas _dahil edilebilir. Burada kullan lan sekliyle slVl bir farmasötik bilesim, ister bir solüsyon, süspansiyon ya da baska bir benzer formda olsun, su taslýßlîya da eksipiyanlardan bir ya da daha fazlasEiEiçerebilir: steril seyrelticiler, örnegin enjeksiyon amaçljsu, salin solüsyonu, tercih edilen sekliyle fizyolojik salin, Ringer solüsyonu, izotonik sodyum klorür, skualen, skualen, mineral yag: bir mannid monooleat, kolesterol ve/veya solvent ya da süspansiyon haline getirici ortam olarak islev görebilen sentetik mono ya da digliseritler, polietilen glikoller, gliserin, propilen glikol ya da baska solventler; benzil alkol ya da metil paraben gibi antibakteriyel ajanlar; askorbik asit ya da sodyum bisülfit gibi antioksidanlar; etilendiamintetraasetik asit gibi selatlama ajanlarL; asetatlar, sitratlar ya da fosfatlar gibi tamponlar ve sodyum klorür ya da dekstroz gibi tonisite ayarlama amaçl] l ajanlar. Parenteral preparat cam veya plastikten yapllan ampüller, tek kullaninlfk slrlüigalar ya da çok dozlu siselere kapatlTabilir. Enjekte edilebilir bir farmasötik bilesim tercih edilen sekliyle sterildir. Belirli bir yapüandlîmada, bu bulusun farmasötik ya da as :bilesimi 0.2 um9dan az stabil bir sulu süspansiyon ve ayrßa fosfolipidler, yag asitleri, yüzey aktif maddeler, deterjanlar, saponinler, IlorlanmE lipidler ve benzerlerinden olusan gruptan seçilen en az bir bilesen içerir. Baska bir yapilandlrimada, bu bulusun bir bilesimi aerosol haline getirilebilen bir tarzda formüle edilir. Aynl zamanda, bir asi lya da farmasötik bilesime bunlarla slnliill lolmamak kaydlyla alüminyum tuzlarîl yagda su emülsiyonlarîl biyolojik olarak parçalanabilir tasßlkllfar, suda yag emülsiyonlarü biyolojik olarak parçalanabilir mikrokapsüller ve lipozoinlar gibi dag Iîha araçlar :gibi baska bilesenlerin dahil edilmesi istenebilir. Bu gibi araçlarda kullanEn için ilave immünostimülatör maddelerin (ko-adjuvanlar) örnekleri de yukarîla tarif edilmistir ve N-asetilmuramil-L-alanin-D-izo-glutamin (MDP), glukan, IL-12, GM-CSF, gama interferon ve IL-12"yi kapsayabilir. Teknikte uzman olan kimselerce bilinen her türlü tasg/LCL bu bulusun farmasötik bilesimlerinde kullan labilmesine kars'n, taslyldlnln tipi uygulama sekline ve sürekli bir salim istenip istenmedigine bagl lolarak degisiklik gösterecektir. Parenteral uygulama için, örnegin subkütanöz enjeksiyon için, söz konusu tasýîîtercih edilen sekliyle su, salin, alkol, bir yag, bir mum ya da bir tampon içermektedir. Oral uygulama için, yukarElaki tasSlßIar ya da kat: bir tasßtîlü örnegin mannitol, laktoz, nisasta, magnezyum stearat, sodyum sakarin, talk, selüloz, sükroz ve magnezyum karbonattan herhangi birisi kullanEIabilir. Biyolojik olarak parçalanabilir mikrosferler (ömegin polilaktik galaktid) aynüzamanda bu bulusun farmasötik bilesimleri için tasglkimar olarak kullanüabilir. Biyolojik olarak parçalanabilir uygun mikrosferler örnegin mikrosferin yaklaslk olarak 25 mikrodan büyük olmas] tercih edilmektedir. Farmasötik bilesimler (örnegin GLA asllarlîve GLA immünolojik adjuvanlarl)l ayn? zamanda tamponlar gibi seyrelticiler, antioksidanlar, örnegin askorbik asit, düsük molekül agmlîleWaklasüg 10 kalmtüan azJ polipeptidler, proteinler, amino asitler, glikoz, sükroz ya da dekstrin gibi karbonhidratlar, selatlama ajanlar: örnegin EDTA, glutatyon ve diger stabilizatörler ve eksipiyanlarüiçerebilir. Nötr tamponlu salin ya da spesifik olmayan serum albüminle karßtîülng salin örnek niteliginde uygun seyrelticilerdir. Tercih edilen sekliyle, ürün, seyreltici olarak uygun eksipiyan solüsyonlaruömegin sükroz) kullanarak bir liyofilizat seklinde formüle edilebilir. Burada tarif edildigi gibi, bu bulusun belirli uygulamalar istenilen antijenleri kodlayan nükleik asit moleküllerini dagltabilen bilesimleri kapsamaktadlr. Bu bilesimler WO 89/01973)), bir polikatyonik molekül seklinde kompleks haline getirilen rekombinan ekspresyon yapßEnükleik asit molekülleri (bkz. WO 93/03709), ve lipozomlarla iliskilendirilen nükleik asitleri (bkz. Wang ve ark., Proc. Natl. Acad. Sci. öldürülen ya da inaktive edilen adenovirüse baglanabilir (bkz. Curiel ve ark., Hum. 1992). Diger uygun bilesimler DNA-ligandH (bkz. Wu ve ark., J. Biol. Chem. Dogrudan in vivo prosedürlere ilave olarak, hücrelerin bir konaktan çItartIdEg] moditiye edildigi ve aynjya da baska bir konak hayvana yerlestirildigi ex vivo prosedürler kullanEabilir. Yukarîla kaydedilen bilesimlerden herhangi birisinin, antijeni kodlayan nükleik asit moleküllerinin bir ex vivo baglamda doku hücrelerine dahil edilmesi için kullanlabilecegi aç ktlr. Viral, fiziksel ve kimyasal allm metotlarl için protokoller teknikte iyi bilinmektedir. Buna göre, mevcut bulus bir konak, bir hasta ya da bir hücre kültüründe bir immün tepkinin arttmÜInasD ya da ortaya çEkartÜlnasDiçin kullanßlîlm. Burada kullanüan sekliyle, "hasta" terimi tercih edilen sekliyle bir insan gibi her türlü sßak kanljiayvanj göstermektedir. Bir hasta bulasßübir hastalEk, kanser, örnegin meme kanseri ya da otoimmün bir hastalRtan muzdarip olabilir ya da normal (yani saptanabilir hastaltk ve/veya enfeksiyondan bag îhs [2) olabilir. Bir "hücre kültürü", immün bakîndan yeterli hücreler ya da izole edilmis immün sistem hücreleri içeren her türlü preparattLr (örnegin bunlarla slnlrll olmamak kaydlyla T hücreler, makrofajlar, monositler, B hücreler ve dendritik hücreler). Bu hücreler teknikte s'rbdan uzmanllga sahip olan kimselerce iyi bilinen çesitli tekniklerden herhangi birisi vas tas yla izole edilebilir (örnegin Ficoll- hypaque yogunluk santritîijasyonu). Söz konusu hücreler kanserden muzdarip olan bir hastadan izole edilebilir (fakat zorunlu degildir) ve tedaviden sonra bir hastaya geri verilebilir. Belirli yap Ülandmmalarda, parenteral ya da oral uygulama için tasarlanan bir sElIJ bilesim, uygun bir dozaj elde edilecek sekilde GLA as Ebilesiminin uygun bir miktarij içermelidir. Tipik olarak, bu miktar bilesimdeki antijenden ag Elliça en az % 0.01 ,din Oral uygulama için tasarlandEgEida, bu miktar bilesimin agElEgßß % 0.1 ve yaklaslt 70'i aras nda degisebilir. Tercih edilen oral bilesimler antijenin yaklask % 4 ve yaklasik % SO'si arallglnl içerir. Tercih edilen bilesimler ve preparatlar, parenteral dozaj biriminin aktif bilesenden aglrllkça % 0.01 ila 1 arallglnl içerecegi sekilde hazliilan ri. Farmasötik bilesim topikal uygulama için tasarlanabilir ve bu durumda söz konusu tas @E Euygun bir biçimde bir solüsyon, emülsiyon, merhem ya da jel baz içerebilir. Söz konusu baz örnegin asagElakilerden bir ya da daha fazlasijiçerebilir: vazelin, lanolin, polietilen glikoller, balmumu, mineral yagü su ve alkol gibi seyrelticiler ve emülsiyon haline getiriciler ve stabilizatörler. Kîl'am arttmßü ajanlar topikal uygulama için farmasötik bir bilesimde bulunabilir. Transdermal uygulama için tasarlanmasEhalinde, söz konusu bilesim transdermal bir yama ya da iyontoforez cihazUiçerebilir. Topikal formülasyonlar yaklask % 0.1 ila yaklask 10 ag'iil k/hacim konsantrasyonuyla bir antijen (örnegin GLA-antijen asl lbilesimi) ya da GLA (örnegin immünolojik adjuvan bilesimi; GLA, Avanti Polar Lipids, Inc., Alabaster, AL9den 699800 ürün numarasßlla tedarik edilebilir) içerebilir. Söz konusu bilesim rektal uygulama için örnegin rektumda eriyecek ve ilacEsalacak olan bir suppozituar formunda tasarlanabilir. Rektal uygulama için bilesim, uygun bir irrite edici olmayan eksipiyan olarak bir yagljbaz içerebilir. Bu bazlar kßmlama olmaksEHîi lanolin, kakao yagü ve polietilen glikolü kapsamaktadî. Bu bulusun metotlaanda asJ bilesimleri/adjuvanlard insert(ler), kürecik(ler), zamanla salnan formülasyon(lar), yama(lar) ya da hlz'll I salim formülasyon(larl)l kullanilarak uygulanabilir. Belirli yapllandlrlmalarda, ayn lzamanda burada tarif edilen bir ya da daha fazla kapta saglanabilen GLA asl'bilesimlerini ve/veya GLA immünolojik adjuvan bilesimlerini içeren kitler de düsünülmektedir. Bir yap [land mmada, GLA as Ebilesimleri ve/veya GLA immünolojik adjuvan bilesimlerinin tüm bilesenleri tek bir kap içerisinde birlikte bulunur, fakat yathndimalari bu sekilde kßlîlanmasÜtasarlanmamaktadm ve aynIJ zamanda örnegin bir GLA immünolojik adjuvan bilesiminin ayrEbir formda oldugu ve antijen bileseni ile temas etmedigi iki ya da daha fazla kap da düsünülmektedir. Kßmaylîiî olmayan teoriyle, bazE durumlarda yalnî GLA immünolojik adjuvan bilesiminin uygulanmasLnLyararlleir biçimde gerçeklestirilebildigine, diger taraftan baska durumlarda bu uygulamanln yararli bir biçimde antijenin uygulamas ndan geçici ve/Veya yersel olarak (örnegin farkl lbir anatomik alanda) ayrl lolabildigi, yine baska durumlarda denege yapilan uygulamanlh yararlFlbir biçimde burada tarif edildigi gibi hem antijen hem de GLAayüve aynjzamanda istege bagljolarak burada tarif edilen diger bilesenleri içeren bir GLA as Ebilesimiyle gerçeklestirildigine inan Jinaktad m. Bu kit yap [[andîmalarEia göre bir kap her türlü uygun kap, ufak sise, ampül, tüp, kap, kutu, sise, dar boyunlu sise, kavanoz, tabak, tek kuyucuklu ya da çok kuyucuklu aygîlarm kuyucugu, rezervuar, tank ya da benzerleri veya burada ifsa edilen bilesimlerin yerlestirilebileeegi, saklanabilecegi ve/veya tasnabilecegi ve içeriklerini çlkartmak için erisilebilecegi baska bir düzenek olabilir. Tipik olarak, söz konusu kap tasarlanan kullanimla uyumlu olan ve içerisinde bulunan içeriklerin allnmaslnl kolay olan bir materyalden yapllabilir. Bu gibi kaplarFrl tercih edilen örnekleri, bir igne ve SEEiga kullanarak içeriklerinin çekilmesine uygun olan cam ve/veya plastik kaplÜya da geri kapat mabilir tüpler ve ampüller, örnegin kauçuk bir bölmeye veya baska sâdîmallk araçlarlîia sahip olanlarDkapsamaktad 1. Bu gibi kaplar örnegin kaptan materyallerin verimli bir biçimde al imas Ela imkan tangian ve/veya materyali örnegin aslîümorötesi kirleticilerin girmesinden koruyan bir materyalden yap [[abilen ya da kaplanabilen cam ya da kimyasal olarak uyumlu plastik ya da reçineden olabilir. Kaplar tercih edilen sekliyle sterildir ya da sterilize edilebilir ve her türlü tas|y|c|,Ieksipiyan, solvent, taslyldl l ya da benzerleriyle uyumlu olacak sekilde yaplllr, örnegin burada tarif edilen asll bilesimleri ve/veya immünolojik adjuvan bilesimleri ve/veya antijenleri ve/Veya rekombinan ekspresyon yapilarlrt lvs. süspansiyon haline getirmek ya da çözündürmek için kullan Habilir. Emülsiyon sistemleri de mevcut bulusun bilesimlerini formüle etmede kullanjhbilir. Örnegin, birçok tek ya da çok evreli emülsiyon sistemi tarif edilmistir. Suda yag emülsiyon adjuvanlarßß tek basßa adjuvan bilesimi olarak kullanßlEoldugu ileri sürülmüstür (EP 0 399 843B) aynüzamanda suda yag emülsiyonlarEve diger aktif ajanlarEi kombinasyonlarEasEar için adjuvanlar olarak tarif edilmistir (WO 95/ 17210; 480 981 B) gibi baska yag emülsiyon adjuvanlar ltarif edilmistir. Mevcut bulusta kullanin için yag einülsiyon adjuvanlarrdogal ya da sentetik olabilir ve mineral ya da organik olabilir. Mineral ve organik yaglarEi örnekleri teknikte uzman olan kimselerce Belirli bir yapIandîmada, bu bulusun bir bilesimi su içerisinde bir yag emülsiyonu içermekte olup, içerisinde GLA yag faz Eida dahil edilir. Baska bir yap Jhndmmada, bu bulusun bir bilesimi su içerisinde bir yag emülsiyonu içermekte olup, içerisinde GLA yag faz Lnda dahil edilir ve içerisinde burada tarif edildigi gibi ilave bir bilesen, örnegin bir ko-adjuvan, TLR agonisti ya da benzeri bulunur. Her türlü su içerisinde yag bilesiminin insana uygulama için uygun olmasHiçin, emülsiyon sisteminin yag fazEtercih edilen sekliyle metabolize edilebilir bir yag içermektedir. Metabolize edilebilir yag teriminin anlamEteknikte iyi bilinmektedir. Metabolize edilebilir terimi, "metabolizma tarafîidan dönüstürülebilen" anlamlîia gelmektedir (Dorland,s illustrated Medical Dictionary, W. B. Saunders Company, 25th edition (1974)). Söz konusu yag, alßjiçin toksik olmayan ve metabolizma taraflîldan dönüstürülebilen her türlü nebati yag, balk yagü hayvan yagE ya da sentetik yag olabilir. Kabuklu yemisler (örnegin yerfLstLgLyap L)l, tohumlar ve tahLIJar yaygLn nebati yag kaynaklarldlr. Sentetik yaglar da bu bulusun bir parças dn ve NEOBEE® ve digerleri gibi ticari olarak tedarik edilebilen yaglarl kapsayabilir. köpekbalfgüaraciger yaglîida büyük miktarlarda ve zeytinyaglîida, bugdaylîi einbriyon kßmüida, pirinç kepegi yagmda ve inayada az miktarlarda bulunan doymamß bir yagdî ve bu bulusta kullanEh için özellikle tercih edilen bir yagd E. Skualen, kolesterol biyosentezinde bir ara ürün oldugundan metabolize edilebilir bir yagdü (Merck index, 10th Edition, entry n0.8619). Özellikle tercih edilen yag emülsiyonlarü suda yag emülsiyonlarEve özellikle su emülsiyonlarßdaki skualendir. Ek olarak, mevcut bulusun en çok tercih edilen yag emülsiyon adjuvanlarEtercih edilen sekliyle yag alfa-tokoferol 99/11241 say ll dokümanlar, istege bagl blarak immünostimülanlar QSZl ve/veya 3D- MPL ile formüle edilen skualen, alfa-tokoferol ve TWEEN® 80,e dayall lemülsiyon adjuvanlarF ifsa etmektedir. WO 99/ 12565 sayin-l doküman, yag fazîia bir sterol eklenmesiyle bu skualen emülsiyonlarmdaki bir ilerlemeyi ifsa etmektedir. Ilave olarak, emülsiyonu stabilize etmek için yag faz Ela trikaprilin (C27H5006) gibi bir trigliserit eklenebilir (WO 98/56414). Stabil suda yag emülsiyonlar içerisinde bulunan yag damlac DilarElEl büyüklügü, foton korelasyon spektroskopisi yoluyla ölçülen sekliyle tercih edilen sekliyle 1 mikrondan azdLr, 30-600 nm aralLgLiçerisinde bulunabilir, tercih edilen sekliyle çap olarak büyük ölçüde 30-500 nm arallglnda olabilir ve en çok tercih edilen sekliyle çap olarak büyük ölçüde 150-500 nm arallglndadlr ve özellikle çap olarak yaklask 150 nmidir. Bu bakindan, damlaclklarm sayma % 80"i, daha tercih edilen sekliyle % 90ldan fazlasî tercih edilen aralklar içerisinde bulunmalîli ve en çok tercih edilen sekliyle yag damlac Elllarmß sayZia % 95"ten fazlasü tanîhlü büyüklük aralElîlarE içerisindedir. Mevcut bulusun yag emülsiyonlariida bulunan bilesenlerin miktarlarl uygun bir biçimde % 2 ila 10 yag, örnegin skualen aralgîidad i; ve bulunmas üialinde % 2 ila 10 alfa tokoferol; ve % 03 ila 3 oranlîlda yüzey aktif madde, örnegin polioksietilen sorbitan monooleattß. Tercih edilen sekliyle yag: alfa tokoferol oran DI 'e esit ya da daha azdLr çünkü bu oran daha stabili bir emülsiyon saglamaktadhi YaklasUg % 1 düzeyinde Span 85 de bulunabilir. Baz. ldurumlarda, mevcut bulusun asllarlnln ayr da bir stabilizatör içermesi avantajli blabilir. Su emülsiyonlarl içerisinde yag üretme metodu teknikte uzman olan kimselerce iyi bilinmektedir. Genel olarak, bu metot yag fazlîlîl bir PBS /TWEEN80® solüsyonu gibi bir yüzey aktif madde ile karßtiülnasîijve bunu takiben bir homojenizatör kullanarak homojenize edilmesini içermektedir. Örnegin, karßiiîl bir sîmgalEigne içerisinden bir, iki ya da daha fazla kez geçirilmesini içeren bir metot, küçük sßiîhacimlerinin homojenize edilmesi için uygun olacaktm Esit sekilde, daha küçük ya da daha büyük emülsiyon hacimleri üretmek için bir mikro sElEastmIEEliçerisindeki emülsiûkasyon prosesi adapte edilebilir (6 barlk maksimum basliç girisiyle 2 dakikalEk bir zaman dilimi boyunca maksimum 50 geçislik MIIOS microfluidics makine (çLkLs basLrch yaklasik 850 bar)). Gerekli çapa sahip olan yag damlaclklarlyla bir preparat elde edilene kadar sonuçta olusan emülsiyonun ölçümünü içeren rutin deneyler vas tas yla bu adaptasyon saglanabilir. Asag maki örnekler örnek olarak verilmistir ve kßmama amac Etas Enamaktad E. ÖRNEKLER ÖRNEKl GLA SULU FORMÜLASYONU Bu örnek GLA içeren bir adjuvan sulu formülasyonunun hazlîllanmasîFl tarif etmektedir. Sulu GLA formülasyonu (GLA-AF) enjeksiyon amaçljsu (WFl), GLA (Avanti Polar Lipids, lnc., Alabaster, AL; ürün numarasü699800) ve l-palmitoil-Z- oleil-sn-gliser içerir. Bu formülasyon önceden belirlenen bir GLA miktaria bir etanol ve POPC solüsyonu eklenmesi yoluyla hazElanmStm. ultrasonik banyoda tutulmustur. GLA daha sonra nitrojen gazjaltEida kurutulmustur. Kurutulan GLA ve POPC, dogru hacme gelecek sekilde enjeksiyon amaçli_ suyla sulandlrllmlStlr. Bu solüsyon, GLA ve POPC solüsyon haline gelene kadar 15-30 dakika boyunca 60 °C,de ultrasonik banyoya tabi tutulmustur. Uzun dönemli saklama için, GLA-AF formülasyonlarl liyofilize edilmelidir. Liyofilizasyon islemi, toplam hacmin % 2'si olana kadar solüsyona gliserol eklenmesinden olusmustur. Daha sonra bu solüsyon l-l 0 mL"lik siselere yerlestirilmistir. Bu siseler daha sonra solüsyonun dondurulmas l've daha sonra donan suyun sublimlesme yoluyla çekilmesi için vakuma yerlestirilmesinden olusan liyofilizasyon isleminden geçirilmistir. GLA HPLC ANALIZI Bu örnek GLA içeren bir adjuvan sulu formülasyonunun HPLC analizini tarif etmektedir. Formülasyon üretildikten sonra (yukarlda Örnek lie bakln), ürün kalitesi ve çogaltllabilirligini saglamak için çesitli salih ve stabilite testleri gerçeklestirilmistir. Tüm formülasyonlar Yüksek PerformanslISÜÜKromatografisi (HPLC), Dinamik ISER Saç [[EnEKDSL) ve görsel inceleme kullanJhrak salEn ve uzun dönemli stabilite için test edilmistir. HPLC kromatogramlarEbir Agilent 1100 sistemi ve bir ESA Corona CAD dedektörü kullanarak toplanmStE. Bu metot bir Waters Atlantis C18 kolon üzerinde metanoldan kloroforma gradiyent kullanarak gerçeklestirilmistir. Enjeksiyonlar 2.5 ug GLA (Avanti Polar Lipids, Inc., Alabaster, AL; ürün numaras E ya da MPL® (GSK Biologicalsa Rixensart, Belgium, MPL-AF) ve bir çözündürücü ajan Sekil 1, MPL-AF ve GLA-AF içerisindeki kirletici materyallerin sayrsmlîve miktarFiilT ortaya koyan HPLC verilerini göstermektedir. HPLC profilleri, GLA-AF,nin büyük ölçüde MPL-AF'den daha saf oldugunu göstermistir. Yani, GLA-AF içerisinde MPL-AF adjuvan formülasyonundan daha az kirletici madde doruk degerleri bulunmustur. Daha saf bir baslangß ürünü arastîmacüara muazzam fayda saglamaktadE çünkü elde edilen biyolojik tepki, GLA formülasyonlaanda kullanLllan baslLca tek bilesenden elde edilmektedir. GLA YAG FORMÜLASYONU Bu örnek GLA içeren bir adjuvan yag formülasyonundan bir mililitre hazmlanmasîij tarif etmektedir. GLA (100 mikrogram; Avanti Polar Lipids, Inc., Alabaster, AL; ürün F-68 (BASF Corp., Mount Olive, NJ) ya da benzer bir blok ko-polimeri (0.364 mg) ile birlikte 25 milimolar amonyum fosfat tampon (pH = 5.1) içerisinde bir antioksidan olarak 0.5 mg D,L-alfa-tokofer01 kullanlarak skualen (343 mg) içerisine emülsiyon haline getirilmistir. Bu karLsLm, aerSmayan ve 180 nm°den az bir ortalama partikül büyüklügüne sahip olan bir emülsiyon olusana kadar yüksek bas nç altlnda islenmistir. Söz konusu emülsiyon daha sonra cam tek dozluk siseler içerisine steril olarak fîltrelenmis ve uzun dönemli saklama için kapatllnrstlrl Bu preparat 2-8 °Cade saklandEgEida en az üç ymboyunca kullanühbilir. MURIN MAKROFAJ LAR VE DENDRITIK HÜCRELERIN GLA STIMÜLASYONU Bu örnek, GLA'nLn adjuvan etkisini ortaya koyan bir in vitro modeli tarif` etmektedir. Standart doku kültür metodolojileri ve ay naçlar kullan Im|St n. Murin J774 hücreleri ve RAW267.4 makrofaj hüre hatt |(Amerikan Tipi Kültür Koleksiyonu, Manassas, VA), tedarikçinin önerilerine göre saklanmg ve çok kuyucuklu kaplarda yapFslk hücre monokatmanlarEolarak kültive edilmistir. Xiong ve arkadaslarüiüi (J. Biol. Chem 2004, hücreler elde edilmistir. Hücre kültür ortamîida (% 10 fotal bovin serumu içeren DMEM) sulu bir adjuvan preparat seyreltilerek çesitli sentetik GLA adjuvan konsantrasyonlarD(Avanti Polar Lipids, Inc., Alabaster, AL; ürün numarasü699800) elde edilmistir ve hücreler hücresiz kültür süpernatantlarîrtoplanmadan önce % 5 C02 içeren nemli bir atmosfer içerisinde 37 oC'de 24 saat boyunca tutulmustur. Süpernatant aklskanlarl IIL-l2, IL-6 ve TNF gibi çözünebilir murin sitokinleri ve RANTES gibi kemokinler için, üreticinin talimatlarlna uygun olarak spesifik sandviç ELISA analiz kitleri (sitokinler için eBiosciences, San Diego, CA, ve keinokinler için R&D Systems, Minneapolis, MN) kullanarak analiz edilmistir. Fare makrofaj hücre hatlarEida ve primer murin DC'de GLA-AF indüklü doza bag 11113 immün tepkiler lL-l2p40, IL-6, ve TNF gibi sitokinlerin ve RANTES gibi kemokinlerin sekresyonu ile karakterize edilmistir. INSAN MAKROFAJLAR VE DENDRITIK HÜCRELERIN GLA STIMÜLASYONU Bu örnek, GLA`n|n adjuvan etkilerini ortaya koyan bir in vitro modeli tarif` etmektedir. Standart doku kültür metodolojileri ve aylraçlarl kullanllrnlsltlrt Insan Mono Mac 6 makrofaj hücre hattEiEi hücreleri (Amerikan Tipi Kültür Koleksiyonu, Manassas, VA), tedarikçinin önerilerine göre saklanmg ve çok kuyucuklu plakalarda yapSEk hücre monokatmanlarEolarak kültive edilmistir. Dendritik hücreler standart bir protokol izlenerek periferik kan mononükleer hücrelerden (PBMC) elde edilmistir. Hücre kültür ortamîlda (MonoMac 6 için % 10 fötal bovin serumu ve DC için % 10 insan serumu içeren DMEM) sulu bir adjuvan preparat seyreltilerek çesitli sentetik GLA adjuvan (Avanti Polar Lipids, Inc., Alabaster, AL; ürün numaras L699800) ya da dogal ürün (GSK Biologicals, Rixensart, Belgium) konsantrasyonlarl lelde edilmistir ve hücreler hücresiz kültür süpernatantlar toplanmadan önce % 5 C0; içeren nemli bir atmosfer içerisinde 37 °C,de 24 saat boyunca tutulmustur. Süpernatant akßkanlarElL-lß, lL-23, ve IL-6 gibi çözünebilir insan sitokinleri ve lP-lO, RANTES ve MIP-lß gibi kemokinler için, üreticinin talimatlarma uygun olarak spesifik sandviç ELISA analiz kitleri (sitokinler için eBiosciences, San Diego, CA, ve kemokinler için R&D Systems, Minneapolis, MN) kullanarak analiz edilmistir. Sekil 2, GLA stimülasyonuna tepki olarak Mono Mac 6 hücre hattßß (a - e panelleri) ve monosit türevi DC,nin (f - h panelleri) insan makrofajlarLtaraandan eksprese edilen sitokin ve kemokin düzeylerini ortaya koyan ELISA verilerini göstermektedir. Insan makrofaj hücre hattl Mono Mac 6 (SEKIL 2, panel a - e) ve primer DC (SEKIL 2, panel fýh),taki GLA-AF indüklü doza baglmll bir iininün tepki, IL-lß, IL-6, lL-23 gibi sitokinlerin ve RANTES, lP-lO, MlP-lß gibi kemokinlerin sekresyonu ile karakterize edilmistir. GLA-AF, test edilen tüm sitokinler ve keinokinler için MPL-AF ile kars [[aStEEdEgEida 5 -500 düsük konsantrasyonlarda aktif olmustur. INSAN KAN HÜCRELERININ GLA STIMÜLASYONU Bu örnek, GLA`n|n adjuvan etkilerini ortaya koyan bir in vitro modeli tarif` etmektedir. Standart doku kültür metodolojileri ve aylraçlarl kullanllrnlsltlii. Hücre kültür ortamElda (% 10 fötal bovin serumu içeren DMEM) sulu bir adjuvan preparat seyreltilerek elde edilen çesitli sentetik GLA adjuvan (Avanti Polar Lipids, Rixensart, Belgium) konsantrasyonlarßlla insan tam kan hücreleri kültive edilmistir. Kan hücreleri kültür süpernatantlarl:toplanmadan önce % 5 COZ içeren nemli bir atmosfer içerisinde 37 °C7de 16 saat boyunca tutulmustur. Süpernatant akßkanlarünsan sitokin IL-lß için, üreticinin talimatlaana uygun olarak Spesifik sandviç ELISA analiz kitleri (eBiosciences, San Diego, CA) kullanarak analiz edilmistir. Insan tan kan hücrelerinde GLA-AF indüklü doza bagHnlHbir immün tepki lL-l ß sitokinin sekresyonu ile karakterize edilmistir. Bu analizde, 92 nM GLA potens olarak 7,000 nM MPL-AF*ye esdeger olmustur. IN VIVO OLARAK GLA IÇEREN ASI KULLANIMI Bu örnek, Inf'luenza"ya karsl bir aslda GLA'nii adjuvan etkisini ortaya koyan bir in Vivo modeli tarif etmektedir. Standart iininünolojik metodolojiler ve aylrlaçlardan yararlanllmlsltlr (Current Protocols in Immunology, Coligan ve ark. (Eds.) 2006 John Wiley & Sons, NY). Fareler (her grup için üç Balb/c hayvan), yukarEla Örnek 3Ste kullan Ian prosedüre göre dozaj Etek bas [Iia, ya da (i) yukar Ela Örnek 1,de kullan Jhn prosedüre göre GLA (Avanti Polar Lipids, Inc., Alabaster, AL; ürün numaras D699800; her as Iama için her hayvan için 20 ug) ("GLA-AF"), ya da (ii) GLA içeren stabil bir emülsiyon içerisinde formüle edilmistir (Avanti Polar Lipids, Inc., Alabaster, AL; ürün numaras %99800; her as [Dama için her hayvan için 20 ug) üç haftalLk aralLklarla iki kez as LlanmLStLij. Her as lamadan bir hafta sonra hayvanlardan kanatarak serum alinmis ve yay'iilanan metotlara (Id.) göre ELISA vasltaslyla Fluzona özgü toplam lgG antikorlarlnln serum düzeyleri incelenmistir. Virüsü nötralize eden antikorlarn serum düzeyleri de yayillanan metotlara göre Hemaglutinasyon lnhibisyon Analizi (HAl) vas Ilas Slla incelenmistir. Sekil 3, tek basEia Fluzone ile kars Iastßüllgida GLA-AF ya da GLA-SE ile formüle edilen Fluzone asßß iki farklîkiozu kullanührak her as [[madan bir hafta sonra (yani 7. günde, panel A; 28. günde panel B) farelerde indüklenen anti-Fluzone antikor üretiminin düzeylerini ortaya koyan ELISA verilerini göstermektedir. Her grupta/zaman noktas Lnda kars JlklLl bitis noktasLl titrelerinin ortalamalari ve SEM degeri gösterilmektedir. Sekil 3, tek baslna Fluzone ile karsllastlnlldlglnda GLA-AF ya da GLA-SE ile formüle edilen Fluzone aslnln iki farkli dozu kullan larak ikinci asllamadan bir hafta sonra farelerde indüklenen virüsü nötralize eden antikor üretiminin düzeylerini ortaya koyan HAl verilerini göstermektedir. Her grupta/zaman noktas Eida kars [[[klü bitis noktas Etitrelerinin ortalamalarDve SEM degeri gösterilmektedir. Fluzone as [Ihmaya tepki olarak toplam IgG ve nötralize edici antikor titreleri sulu ya da stabil bir yag formülasyonunda GLA eklenerek arttmlllnâtm GLAhEi adjuvan etkisi 2 ul,lik Fluzone asZldozuyla daha belirgin olmus ve tek bas ila 20 ul Fluzone asBîla benzer (GLA-AF) ya da daha fazla (GLA-SE) antijene özgü humoral tepkileri indüklemistir. Bu sonuçlar, GLA içeren forrnülasyonlarla desteklenerek Fluzone aslSlnln dozunun azaltllmaslnln mümkün oldugunu ve yine yüksek lgG düzeylerini indükledigini ve antikor titrelerini nötralize ettigini düsündürmektedir. Bu durum Kus gribi gibi dünya genelindeki salgln bir enfeksiyon baglamlnda Özellikle önemlidir. IN VIVO OLARAK GLA IÇEREN ASI KULLANIMI Bu örnek, spesifik bir Laysmanya antijeni içeren bir asIia GLA'nEi adjuvan etkisini ortaya koyan bir in vivo modeli tarif etmektedir. Standart immünolojik metodolojiler ve ayLraçlardan yararlanlhiStLij (Current Protocols in Immunology. Coligan ve ark. (Eds.) 2006 John Wiley & Sons, NY). Fareler (her grup için üç C57BL/6 hayvan), yukarFda Örnek 33te kullanilan prosedüre göre tek bas Ela kullan Jhn SMT antijeni (her as [[ama için her hayvan için 10 ug) ile ya da GLA (Avanti Polar Lipids, Inc., Alabaster, AL; ürün numaras 3699800; her as [Dama için her hayvan için 20 ug) içeren stabil bir emülsiyon seklinde formüle edilerek üç haftalEk aralEklarla üç kez as EanmStE. Üçüncü as Iamadan bir hafta sonra hayvanlardan kanatarak serum al [hmß ve SMT antijenine özgü IgGl ve IgGZC antikorlarlîllîi serum düzeyleri yay Elanan metotlara göre ELISA ile incelenmistir. Sekil 4, tek bas na SMT antijeni kullanarak ya da GLA-SE ile formüle edilen üçüncü asilamadan bir hafta sonra farelerde indüklenen anti-SMT antikor üretiminin düzeylerini ortaya koyan ELISA verilerini göstermektedir. Her grup kars lllitlî bitis noktasî titrelerinin ortalamalarEve SEM degeri gösterilmektedir. iliskilidir. THl tepkisinin Laysmanya enfeksiyonuna kars [koruma için gerekligi oldugu ortaya konulmustur. Tek bas Eia SMT as lama, genellikle SMT'ye özgü IgGl antikorunu indüklemistir. SMT+ GLA-SE asEIama, daha yüksek antikor titrelerini indüklemis ve fenotipi agLrjlLklLolarak hastalga karsLJkoruma ile iliskilendirilen IgGZc antijene özgü antikor tepkisine döndürmüstür. IN VIVO OLARAK GLA IÇEREN ASI KULLANIMI Bu örnek, spesifik bir Laysmanya antijeni içeren bir asIla GLA'nEi adjuvan etkisini ortaya koyan bir in vivo modeli tarif etmektedir. Standart immünolojik metodolojiler ve ay Eaçlardan yararlanJInStm (Current Protocols in Immunology, Coligan ve ark. (Eds.) 2006 John Wiley & Sons, NY). Fareler (her grup için üç Balb/c hayvan) GLA"nLn (Avanti Polar Lipids, Inc., Alabaster, AL; ürün numaras 699800; yukarida Örnek 37te kullanilan prosedüre göre her asllama için her hayvan için 40, 20, 5 ya da 1 ug, GLA-SE) farkl tmiktarlarln liçeren stabil bir emülsiyon içerisinde formüle edilen Leish-l lOf antijenle (her asllama için her hayvan için 10 ug) iki haftalk aralüglarla üç kez as Jlanmßtm. Ilk as Iamadan bir hafta sonra hayvanlardan kanatarak serum al ilmî ve yay mlanan metotlara (Id.) göre ELlSA vas [Ias Sila Leish-l IOF ye özgü IgGl ve IgG2a antikorlarii serum düzeyleri incelenmistir. Sekil 5, salin kontrollerle karsüastEEdEgßda farliGLA miktarlarü(40, 20, 5, ya da 1 tig) ile formüle edilen Leish-llOf antijen kullanarak ilk asLlamadan bir hafta sonra farelerde indüklenen anti-Leish-llûf antikor üretiminin düzeylerini ortaya koyan ELlSA verilerini göstermektedir. Her grup kars llkl | bitis noktasl | titrelerinin ortalamalarFve SEM degeri gösterilmektedir. Leish-l lOf* ye özgü lgGl ve IgGZa antikor titreleri GLA dozuna bag Ehlîblmustur. THl ile iliskili IgGZa antikorunun agîlgj test edilen tüm GLA konsantrasyonlar Ilda gözlenmistir. IN VIVO OLARAK GLA IÇEREN ASI KULLANIMI Bu örnek, spesifik bir Laysmanya antijeni içeren bir as da GLA'nln adjuvan etkisini ortaya koyan bir in vivo modeli tarif etmektedir. Standart immünolojik metodolojiler ve aylîaçlardan yararlan lln stli (Current Protocols in Immunology, Coligan ve ark. (Eds.) 2006 John Wiley & Sons, NY). Fareler (her grup için üç Balb/c hayvan) GLA (Avanti Polar Lipids, Inc., Alabaster, AL; ürün numaras 3699800; yukarEla Örnek 3lte kullanflhn prosedüre göre her as [[ama için her hayvan için 20 ug, GLA-SE) içeren stabil bir emülsiyon içerisinde formüle edilen Leish-l 1 If antijenle (her as &ama için her hayvan için 10 ug) iki haftalüg aralEklarla üç kez asLllanmLStLii Son enjeksiyondan iki hafta sonra, fareler öldürülmüs ve yay nlanan metotlara göre ELISA vas tas yla in vitro antijen stimülasyonuna T-hücre bag ml IFN-y ve IL-4 sitokin tepkilerini analiz etmek için dalaklarl alinm Stln. ve digerleri, THl tepkisinin Laysmanya enfeksiyonuna karsü koruma için gerekli oldugunu ortaya koyduk. Tüm hayvanlar potent bir mitojen olan C0nA3ya iyi tepki vermistir. Leish-lllf+GLA-SE aSJhma, Leish-lllf antijene özgü sitokin tepkilerini indüklemistir, diger taraftan salin kontrol grubunda hiç tepki gözlenmemistir. ConA ile karsEastEEdEgEida, Leish-111f+GLA-SE asühma, IL-47ten çok daha fazla IFN- y indüklemistir, bir TH1:TH2 orani_ ya da fenotipi bu hastalga karsJ korumayla iliskilendirilmistir. IN vivo OLARAK GLA IÇEREN ASI KULLANIMI Bu örnek, spesifik bir Laysmanya antijeni içeren bir asîla GLA'nEi adjuvan etkisini ortaya koyan bir in vivo modeli tarif etmektedir. Standart immünolojik metodolojiler ve ayEaçlardan yararlanJhIEtm (Current Protocols in Immunology, Coligan ve ark. (Eds.) 2006 John Wiley & Sons, NY). Fareler (her grup için üç Balb/c hayvan), (i) yukarlda Örnek 3"te kullanllan prosedüre göre GLA (Avanti Polar Lipids, Inc., Alabaster, AL; ürün numarasl 699800; her asllama için her hayvan için 40, 5, ya da 1 ug) ya da (ii) üretici taraflndan saglanan bir emülsiyon içerisinde MPL® (her as mama için her hayvan için 40, 5, ya da 1 ug) ("MPL- SE", GSK Biologicals, Rixensart, Belgium) farklj miktarlarßü içeren stabil bir emülsiyon içerisinde formüle edilen Leish-l lOf antij en (her as [Dama için her hayvan için pg) ya da salinle iki haftalE aralügtlarla üç kez asflanmßtî. Son enjeksiyondan bir hafta sonra, fareler öldürülmüs ve yayüilanan metotlara (Id.) göre ELISA vas Easlýla in vitro antijen stimülasyonuna T-hücre bag ßilülFN-y sitokin tepkilerini analiz etmek için dalaklarEalElmStm. IFN- y sitokin tepkileri, Laysmanya enfeksiyonuna karsEbir THl koruyucu fenotip ile iliskilendirilmistir. Sekil 6, salin kontrollerle karsilastlnlldlglnda farkli GLA miktarlar lile formüle edilen Leish-l lOf antijen kullanarak üçüncü asllamadan bir hafta sonra farelerde indüklenen anti-Leish-llOf lFN-y sitokin üretiminin düzeylerini ortaya koyan ELISA verilerini göstermektedir. Her grupta ortalama ve SEM degerleri gösterilmektedir. Tüm hayvanlar potent bir hücre aktivatörü ve mitoj en olan ConA"ya iyi tepki vermistir. Leish-110f+GLA-SE as [[ama, Leish-l 10f antijene özgü sitokin tepkilerini doza bag %11] bir biçimde indüklemistir, diger taraftan salin kontrol grubunda hiç tepki gözlenmemistir. Test edilen tüm konsantrasyonlarda, GLA-SE antijene özgü T hücreler taraflndan sekrete edilen daha yüksek IFN- y düzeylerini indüklemede MPL-SE,den daha potent olmustur. Sonuç olarak, Laysmanya asîia stabil bir yag formülasyonu içerisinde GLA eklenmesi, koruyucu THl fenotipi ile iliskilendirilen selüler tipte (T hücre) agîlklj olarak antijene özgü immün tepkilerini indüklemistir. Ek olarak, GLA-SE, IFN- y gibi sitokinlerle iliskili korumay :lndükleme MPL-SE°den daha potent olmustur. IN VIVO OLARAK GLA IÇEREN ASI KULLANIMI Bu örnek, spesifik bir Laysmanya antijeni içeren bir as da GLA'nln adjuvan etkisini ortaya koyan bir in vivo modeli tarif etmektedir. Standart immünolojik metodolojiler ve aylîaçlardan yararlan lln @tm (Current Protocols in Immunology, Coligan ve ark. (Eds.) 2006 John Wiley & Sons, NY). Fareler (her grup için üç Balb/c hayvan), (i) yukarlîla Örnek 3ite kullanüan prosedüre göre GLA (Avanti Polar Lipids, Inc., Alabaster, AL; ürün numaras E699800; her as &ama için her hayvan için 20 ug ya da Spg (GLA-SE)) ya da (ii) üretici tarafßdan saglanan bir emülsiyon içerisinde MPL® (her asülama için her hayvan için 20 tig ya da 5 iig) ("MPL-SE", GSK Biologicals, Rixensart, Belgium) farklLtmiktarlaanLiçeren stabil bir emülsiyon içerisinde formüle edilen Leish-l 10f antijen (her asilama için her hayvan için ug) ya da salinle iki haftal k arallklarla üç kez asllanmlStlr. Son enjeksiyondan bir hafta sonra, fareler öldürülmüs ve yayüllanan metotlara (Id.) göre intraselüler hücre boyama (lCS) ve Akg sitometrisi vasEfasß'la in vitro antijen stimülasyonuna T-hücre bagEnlEIFN-y, lL-2, ve TNF sitokin tepkilerini analiz etmek için dalaklarEalmmStm. Bu üç sitokin, Laysmanya enfeksiyonuna karsD bir THl koruyucu fenotiple iliskilendirilmistir. Tek hücre düzeyinde analiz edildiginde, tüm IFN-y, IL-2, ve TNF sitokinlerini ya da bir 110f+MPL-SE grubu ile karsllastlnlldlglnda Leish-110f+GLA-SE grubunda daha yüksek olmustur ve bu durum hem 20pg hem de 5 pg dozlarda gözlenmistir. IFN-y, IL- 2, ve TNF sitokinlerinin hepsini eksprese eden CD4+ T hücrelerin yüksek frekansmîl, Laysmanya enfeksiyonuna karsEkorumayla iliskili oldugu rapor edilmistir (Seder ve Sonuç olarak, Laysmanya asêia stabil bir yag formülasyonu içerisinde GLA eklenmesi, koruyucu THl fenotipi ile iliskilendirilen selüler tipte (T hücre) agîlkll olarak antijene özgü immün tepkilerini indüklemistir. Ek olarak, GLA-SE, IFN-y, IL-2, ve TNF gibi sitokinlerle iliskili korumayLindüklemede MPL-SE"den daha potent olmustur. IN VIVO OLARAK GLA IÇEREN ASI KULLANIMI Bu örnek, spesifik bir Mycobacteri'um tuberculosis antijeni içeren bir asma GLA*nm adjuvan etkisini ortaya koyan bir in vivo modeli tarif etmektedir. Standart immünolojik metodolojiler ve ay îlaçlardan yararlanüînßtß (Current Protocols in Immunology, Coligan ve ark. (Eds.) 2006 John Wiley & Sons, NY). Fareler (her grup için üç C57BL/6 hayvan), tek basLna kullanüan ya da GLA (Avanti Polar Lipids, Inc., Alabaster, AL; ürün numarasi | 699800; yukarida Örnek 3,te kullanilan prosedüre göre her asilama için her hayvan için 20 ug) içeren stabil bir emülsiyon seklinde formüle edilen ID83 antijeni (her asllama için her hayvan için 8 ug) ile üç haftalEk aralklarla üç kez asühnmgti Üçüncü asllamadan bir hafta sonra hayvanlardan kanatarak serum al ilmî ve yaymlanan metotlara (1d.) göre ELlSA vaslîasgzla ID83°e özgü IgGl ve IgGZC antikorlarîiîi serum düzeyleri incelenmistir. iliskilidir. THl tepkisinin Mycobacterium tuberculosis enfeksiyonuna kars :koruma için gerekligi oldugu ortaya konulmustur. Tek baslna ID83 ile asllama, aglnl kl l olarak antijene özgü IgGl antikorunu indüklemistir. Bunun aksine, ID83+ GLA-SE asllama, daha yüksek antikor titrelerini indüklemis ve fenotipi agîlllilîolarak hastaliga karsFkoruma ile iliskilendirilen lgGZc antijene özgü antikor tepkisine döndürmüstür. IN VIVO OLARAK GLA IÇEREN ASI KULLANIMI Bu örnek, spesifik bir Mycobacteri'um tuberculosis antijeni içeren bir asLda GLA'nLn adjuvan etkisini ortaya koyan bir in vivo modeli tarif etmektedir. Standart immünolojik metodolojiler ve ay Iiaçlardan yararlanllinlstlii (Current Protocols in Immunology, Coligan ve ark. (Eds.) 2006 John Wiley & Sons, NY). Fareler (her grup için üç C57BL/6 hayvan) tek bas lîia kullan flan ya da GLA (GLA-SE), GLA + CpG (CpGigzÖ, Coley Pharmaceuticals, 25 ug) (GLA/CpG-SE), ya da GLA + Gardikuimod (GDQ) (Invivogen, 20 ug) (GLA/GDQ-SE) içeren stabil bir emülsiyon içerisinde formüle edilen ID83 antijenle (her asIama için her hayvan için 8 ug) üç haftalüg aralEElarla üç kez asüanmßtî. Son enjeksiyondan üç hafta sonra, fareler öldürülmüs ve yayîllanan metotlara göre intraselüler hücre boyama (ICS) ve AkE sitometrisi vasEasglla in vitro ID83 antijen stimülasyonuna CD4+ ve CD8+ T hücre bagLmlLIFN-y, IL-2, ve TNF sitokin tepkilerini analiz etmek için dalaklarLalLrtmLsltLii koruyucu TH] tepkileri ile iliskilendirilmistir. Sekil 7, tek basma ya da GLA (GLA-SE), GLA+CpG (GLA/CpG-SE), ya da GLA+GDQ (GLA/GDQ-SE) içeren formülasyonlarla adjuvant eklenen ID83 kullanarak üçüncü aSJhmadan bir hafta sonra farelerde indüklenen CD4+ ve CD8+ T hücreler üreten ID83-spesifik IFN-y, IL-2, ve TNF sitokinin frekanslarßüortaya koyan ICS verilerini göstermektedir. CD4+ ya da CD8+ T hücreler üreten ID83`e özgü sitokinin frekanslarLJ salin ve tek baslna ID83 as lgruplarl `için arka plan düzeylerinde olmustur. Hem CD4+ hem de CD8+ olmak üzere T hücreler üreten ID83 antijene özgü sitokin lD83+GLA-SE aslllama ile indüklenmistir ve bunlari frekans FGDQ (TLR gibi ikinci bir TLR ligandüeklenerek daha da artmgtm lFN-y + TNF ya da lFN-y + IL-2 eksprese eden T hücreler, hakim olan popülasyonlar olmustur. Sonuç olarak, M. tuberculosi'sk karsübir antijenin GLA-SE ile desteklenmesi, IFN-y, özgü selüler tepkiyi (T hücreler) önemli ölçüde arttîmßtî. GLA-SEnIn baska bir TLA ligandLile kombine edilmesi, bu hastalga kars Lkorumayla iliskili bir fenotipi, hücreleri üreten antijene özgü sitokin frekanslnl daha da arttlrimlsltlrl. IN VIVO OLARAK GLA IÇEREN ASI KULLANIMI Bu örnek, spesifik bir Mycobacterium leprae antijeni içeren bir as lila GLA'nEl adjuvan etkisini ortaya koyan bir in vivo modeli tarif etmektedir. Standart immünolojik metodolojiler ve ayîlaçlardan yararlanmnßtß (Current Protocols in Immunology, Coligan ve ark. (Eds.) 2006 John Wiley & Sons, NY). Fareler (her grup için üç C57BL/6 hayvan) CpG (CpGlggö, Coley Pharmaceutical, her asllama için her hayvan için 25 ug), ya da Imikuimod (IMQ) (3M Phanna, her asilama için her hayvan için 25 ug), ya da GLA (Avanti Polar Lipids, Inc., Alabaster, AL; ürün numaras7699800; yukarda örnek 33te kullanilan prosedüre göre her asllama için her hayvan için 25 ug, GLA-SE), bu üçünün bir karßßiEya da negatif kontrol olarak salin içeren sulu formülasyonlarla desteklenen MLO276 antijeni (her as [[ama için her hayvan için 10 ug) ile üç haftalER aralEBlarla üç kez asIanmßtB. Ikinci asIamadan üç hafta sonra hayvanlardan kanatarak serum al ßmß ve yay Blanan metotlara (Id.) göre ELISA vas [Ias &la ML0276,ya özgü lgG serum düzeyleri incelenmistir. Salin grubundan elde edilen hayvanlar ML0276'ya özgü IgG sergilememistir ve MLO276+CpG ve ML0276+IMQ gruplarlndan elde edilenler çok düsük bir antijene özgü antikor düzeyi sergilemistir. Bunun aksine, ML0276+GLA-SE, üç adjuvant birlikte kullanllliigrrlda daha da artmlê olan ML0276sya özgü yüksek bir lgG düzeyini indüklemistir. Sonuç olarak, bu veriler, antijene özgü antikorlarlîi indüklenmesi için antijen ML0276 ile birlikte kullanEldEgEida, ilave TLR ligandlarEile GLA-SE kombinasyonu ve/veya GLA-SEnin destekleyici etkisini desteklemektedir. IN vivo OLARAK GLA IÇEREN ASI KULLANIMI Bu örnek, spesifik bir Mycobacterium leprae antijeni içeren bir aslda GLA'nln adjuvan etkisini ortaya koyan bir in vivo modeli tarif etmektedir. Standart immünolojik metodolojiler ve ayiaçlardan yararlanmnßtm (Current Protocols in Immunology, Coligan ve ark. (Eds.) 2006 John Wiley & Sons, NY). Fareler (her grup için üç C57BL/6 hayvan) CpG (CpGim, Coley Pharmaceutical, her as &ama için her hayvan için 25 ug), ya da Imikuimod (IMQ) (3M Pharma, her as [lama için her hayvan için 25 ug), ya da GLA (Avanti Polar Lipids, Inc., Alabaster, AL; ürün numarasL699800; yukarda örnek 3"te kullanLllan prosedüre göre her asLlama için her hayvan için 25 ug, GLA-SE), bu üçünün bir karlslml ya da negatif kontrol olarak salin içeren sulu formülasyonlarla desteklenen ML0276 antijeni (her asllama için her hayvan için 10 ug) ile üç haftalü& arallklarla üç kez asllanmstlü. Son enjeksiyondan üç hafta sonra, fareler öldürülmüs ve yayEilanan metotlara göre intraselüler hücre boyama (lCS) ve Akß sitometrisi vas îas gla in vitro ML0276 antijen stimülasyonuna CD4+ T hücre bag EnlEIFN- y sitokin tepkilerini analiz etmek için dalaklarEalEimßtm. IFN- y sitokinin ekspresyonu, M. lepme enfeksiyonuna karsü koruyucu THl tepkileri ile iliskilendirilmistir. Sekil 8 panel A, salin ve saf kontrollerle karslastijütlgnda CpG ya da Imikuimod (IMQ) içeren sulu formülasyonlarla ya da GLA (GLA-SE) içeren stabil bir yag emülsiyonuyla ya da bu üçünün karlSlm yla formüle edilen ML0276 antijen kullan larak üçüncü asTamadan bir hafta sonra farelerde indüklenen CD4+ T hücreleri üreten ML0276-spesifik lFN-y sitokinin frekanslarßü ortaya koyan lCS verilerini göstermektedir. Her grupta ortalama degerleri gösterilmektedir. Sekil S, panel B, salin ve saf kontrollerle karsühstiîblgîtda, CpG ya da Imikuimod (IMQ) içeren sulu formülasyonlarla ya da GLA (GLA-SE) veya bu üçünün bir kargßißüçeren stabil bir emülsiyonla formüle edilen ML0276 antijeni ile asIanan farelerde M. Laprae enfeksiyon alanEiE bosaltan lenf bogumlarßlîi selüleritesini ortaya koyan verileri göstermektedir. Her grupta ortalama ve SEM degerleri gösterilmektedir. Salin grubundan hayvanlar, % 0.04 pozitif hücreden olusan bir arka plan frekans yla ML0276'ya özgü lFN-y tepkiler sergilememistir. CpG ve IMQ gruplarlndan elde edilenler slrlaslyla % 0.17 ve % 0.11 oranlar yla antijene özgü sitokin üreten hücre frekanslarlîida hafif bir arts sergilemistir. Bunun aksine, bir adjuvan olarak GLA-SE kullanEdEgEida, önemli ölçüde yüksek sayEla ML02761ya özgü lFN-'y+ CD4+ T hücre (% 66) gözlenmistir, bu frekans üç adjuvant birbiriyle kargtîlItlEgîida daha da yükselmistir (% 2.14). Daha sonra M. Laprae ile bir fare alt kümesi karsEkarsSla getirilmis ve enfekte olan salin kontrollerle karsüastßEdEgEida karsEDasma alani: bosaltan lenf bogumlarßdaki hücrelerin sayßßdaki azalmaya ölçülen sekliyle ML0276+GLA-SE tarafîldan korundugu saptanmLgtE. ML0276+CpG ve ML0276+IMQ ile asLlama, salinle karslastnjügnda hücre sayLsLnda yalanl az miktarda azalmayl indüklemistir. Sonuç olarak, bu veriler, antijene özgü selüler tepkilerin indüklenmesi için antijen ML0276 ile birlikte kullanüldîgîida, ilave TLR liaganlarüile GLA-SE kombinasyonu ve/veya GLA-SE'nin destekleyici etkisini desteklemektedir. TR TR TR TR TR TR TR