TW201620554A - 抗ｈｅｒ２抗體－藥物結合物 - Google Patents

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Abstract

本發明提供一種抗體-藥物結合物，其係作為抗腫瘤效果及安全性方面優異之具有優異治療效果的抗腫瘤藥，其特徵為使下式所示的抗腫瘤性化合物與抗HER2抗體，介隔下式：L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-或-L1-L2-LP-所示的結構之連接物(linker)而結合(抗HER2抗體係於L1之末端結合，抗腫瘤性化合物係將1位之胺基之氮原子作為結合部位，而與Lc或LP之末端結合)。 □

Description

抗HER2抗體-藥物結合物
本發明關於使抗HER2抗體與抗腫瘤性藥物介隔連接物(linker)結構部分而結合之有用於作為抗腫瘤藥的抗體-藥物結合物。
使與於癌細胞表面表現且可內在化至細胞中的抗原結合的抗體、與具有細胞毒性的藥物結合的抗體-藥物結合物(Antibody-Drug Conjugate；ADC)，因可選擇性地將藥物送達至癌細胞，可期待藥物蓄積於癌細胞內、使癌細胞消滅(參照非專利文獻1~3)。作為ADC，例如，有使抗CD33抗體與卡奇黴素(calicheamicin)結合的Mylotarg(註冊商標；吉妥珠單抗-奧佐米星(gemtuzumab ozogamicin))被認可作為急性骨髓性白血病之治療藥。又，抗CD30抗體與奧利司他汀E(auristatin E)結合的Adcetris(註冊商標；貝倫妥單抗-維多汀(brentuximab vedotin))最近已被認可作為何杰金氏淋巴瘤(Hodgkin’s lymphoma)與未分化大細胞淋巴瘤之治療藥(參照非專利文獻4)。迄今被認可的ADC所含有的藥物係以DNA或微管蛋白(tubulin)作為標的。
就抗腫瘤性之低分子化合物而言，已知有抑制拓樸異構酶I(topoisomerase I)而表現抗腫瘤作用的化合物之喜樹鹼(camptothecin)衍生物。其中已知有下式
所示的抗腫瘤性化合物(依喜替康(exatecan)，化學名：(1S,9S)-1-胺基-9-乙基-5-氟-2,3-二氫-9-羥基-4-甲基-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-10,13(9H,15H)-二酮((1S,9S)-1-amino-9-ethyl-5-fluoro-2,3-dihydro-9-hydroxy-4-methyl-1H,12H-benzo[de]pyrano[3',4'：6,7]indolizino[1,2-b]quinoline-10,13(9H,15H)-dione))(專利文獻1、2)。此化合物係與現在臨床上使用的愛萊諾迪肯(irinotecan)相異，抗腫瘤效果的表現不需要酵素所致之活性化。又，觀察到為愛萊諾迪肯的藥效本體之SN-38，較同樣於臨床上使用的拓樸替康(topot ecan)有更強的拓樸異構酶I抑制活性，認為於活體外對各種癌細胞具有更強的殺細胞活性。尤其已認可藉由P-糖蛋白之表現，亦對於對SN-38等呈示耐受性的癌細胞顯示效果。又，小鼠之人類腫瘤皮下移植模式中亦認可有強的抗腫瘤效果，雖然已進行臨床試驗，但迄今尚未上市(參照非專利文獻5~10)。對於依喜替康作為ADC是否有效地作用並不清楚。
DE-310係使依喜替康介隔GGFG胜狀間隔物結合於生物分解性之羧基甲基葡聚糖多元醇聚合物上的複合體(專利文獻3)。藉由將依喜替康高分子前藥化，使保持高血中滯留性，進一步利用腫瘤新生血管之通透性的亢進及腫瘤組織滯留性，被動地提高對腫瘤部位的指向性。DE-310係藉由酵素所致的胜肽間隔物之切斷，而使為活性本體之依喜替康、及甘胺酸與胺基結合的依喜替康持續地游離，其結果改善藥物動力學。於非臨床試驗中的各種腫瘤之評價模式，儘管DE-310其中所含的依喜替康之總量較依喜替康單劑投予時更為減少，但較單劑投予時顯示更高的有效性。關於DE-310，經實施臨床試驗亦確認有效例，已有確認相較於正常組織，活性本體更集積於腫瘤的報告。另一方面，亦有DE-310及活性本體對腫瘤之集積與對正常組織之集積無顯著差異，而於人類未見到被動標的(passive targeting)之報告(參照非專利文獻11~14)。結果，DE-310亦未達成上市，對於依喜替康是否有效地發揮作為此種指向標的之藥物的作用並不清楚。
作為DE-310之關連化合物，雖亦已知有將-NH-(CH2)4-C(=O)-所示的結構部分插入-GGFG-間隔物與依喜替康之間，將-GGFG-NH-(CH2)4-C(=O)-作為間隔物結構的複合體(專利文獻4)，但對於相同複合體之抗腫瘤效果則完全未知。
HER2係被鑑定為人類上皮細胞增殖因子受體2型相關癌基因的代表性增殖因子受體型之癌基因產物之一，為分子量185kDa之具有酪胺酸激酶區域(tyrosine kinase domian)的跨膜型受體蛋白(非專利文獻15)。HER2之DNA序列及胺基酸序列已被公開於公眾資料庫，例如，可參考M11730(Genbank)、NP_004439.2(NCBI)等之登錄號。
HER2(neu，ErbB-2)係EGFR(epidermal growth factor receptor：表皮生長因子受體)家族之一，已知藉由形成同質二聚體(homodimer)或形成與其他為EGFR受體的HER1(EGFR，ErbB-1)、HER3(ErbB-3)、HER4(ErbB-4)之異二聚體(heterodimer)(非專利文獻16-18)，而細胞內酪胺酸殘基被自體磷酸化的活性化，藉此於正常細胞及癌細胞中執行細胞之增殖、分化、生存的重要任務(非專利文獻19、20)。已報告HER2係於乳癌、胃癌、卵巢癌等各式各樣的癌症種類過度表現(非專利文獻21-26)，於乳癌為負向之預後因子(非專利文獻27、28)。
曲妥珠單抗(trastuzumab)係被稱為重組人化抗HER2單株抗體(huMAb4D5-8、rhuMAb HER2、Herceptin(註冊商標))的小鼠抗HER2抗體4D5(非專利文 獻29、專利文獻5)之人化抗體(專利文獻6)。曲妥珠單抗係與HER2之細胞外區域IV特異性地結合，藉由誘導抗體依賴性細胞毒性(Antibody dependent cell cytotoxicity，ADCC)、或抑制自HER2之訊息傳遞而發揮抗癌效果(非專利文獻30、31)。由於曲妥珠單抗係對過度表現HER2的腫瘤顯示高效果(非專利文獻32)，故1999年於美國、2001年於日本已上市作為於過度表現HER2的轉移性乳癌患者之治療藥。
乳癌中的曲妥珠單抗的治療效果被充分證明(非專利文獻33)的另一方面，已有陳述對於曲妥珠單抗的反應，僅為已接受廣泛範圍之以往的抗癌治療之過度表現ER2的乳癌患者的約15%，此集團的約85%之患者對於曲妥珠單抗處置無反應，反應僅屬微弱。
據此，已認識到為了患有對於曲妥珠單抗無反應、或反應微弱之過度表現HER2的腫瘤或與HER2表現有關的障礙的患者，將與HER2表現有關連的疾病作為標的的治療藥之必要性，已開發有於曲妥珠單抗介隔連接物結構而與抗腫瘤性藥物的T-DM1(曲妥珠單抗依坦辛(Trastuzumab emtansine)、KADCYLA(註冊商標)；非專利文獻34)、或以將HER2之細胞外區域II作為標的而阻礙異二聚體形成的方式所設計的帕妥珠單抗(pertuzumab)(Perjeta(註冊商標)；非專利文獻35、專利文獻7)。然而，反應性或活性之強度、以及適應範圍尚未充分，存在將HER2作為治療標的之未滿足的醫療需求(unmet medical needs)。
[先前技術文獻] [專利文獻]
[專利文獻1]特開平5-59061號公報
[專利文獻2]特開平8-337584號公報
[專利文獻3]國際公開第1997/46260號
[專利文獻4]國際公開第2000/25825號
[專利文獻5]美國專利第5677171號說明書
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[發明概要]
於藉由抗體的腫瘤治療，亦有觀察到即使抗體辨識抗原而與腫瘤細胞結合，抗腫瘤效果亦不充分的情形，有需要更高效果的抗腫瘤抗體的情形。又，於抗腫瘤性之低分子化合物，即使抗腫瘤效果優異，大多具有副作用或毒性面等之安全性上之問題，進一步提高安全性而獲得更優異的治療效果係成為課題。即，本發明之課題係獲得並提供抗腫瘤效果與安全性面優異之具有優異治療效果的抗腫瘤藥。
因為抗HER2抗體係可以腫瘤細胞為標的的抗體，即因其係具備可辨識腫瘤細胞的特性、可與腫瘤細胞結合的特性、可內在化至腫瘤細胞中的特性、對腫瘤細胞具有細胞毒性的特性、或對腫瘤細胞的殺細胞活性等的抗體，故本發明者們認為達成下列效果為可能的 ：藉由將抗腫瘤性化合物之依喜替康，變換為藉由連接物結構部分而與該抗體結合的抗體-藥物結合物，可使抗腫瘤性化合物更確實地移動至腫瘤細胞而使該化合物之抗腫瘤效果特異性地於腫瘤細胞中發揮；據此可期待抗腫瘤效果確實發揮的同時，抗HER2抗體之殺細胞效果之增強；再者，可將抗腫瘤性化合物之投予量較該化合物之單體投予時更為減少；即，因藉由此等可使抗腫瘤性化合物對正常細胞的影響緩和，可達成較高的安全性。
因此，本發明者們創造出特定結構之連接物，成功獲得介隔此連接物而使抗HER2抗體與依喜替康結合的抗體-藥物結合物，發現該結合物發揮優異的抗腫瘤效果而完成本發明。
即，本發明係關於：
[1]一種抗體-藥物結合物，其特徵為使下式：
所示的抗腫瘤性化合物與抗HER2抗體，介隔下式：-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-或-L1-L2-LP-
所示的結構之連接物而結合。
其中，抗HER2抗體係於L1之末端結合，抗腫瘤性化合物係將1位之胺基之氮原子作為結合部位，而與Lc或LP之末端結合，式中，n1表示0至6之整數，L1表示-(琥珀醯亞胺(Succinimid)-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-、-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-、-C(=O)-cy c.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-、或-C(=O)-(CH2)n5-C(=O)-，其中，n2表示2至8之整數，n3表示1至8之整數，n4表示1至8之整數，n5表示1至8之整數，L2表示-NH-(CH2CH2-O)n6-CH2CH2-C(=O)-、-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-、-NH-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-、-NH-[CH(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-、-NH-[CH(-CH2-COOH)]-CH2-O-CH2-(C=O)-、-S-(CH2)n8-C(=O)-、或單鍵，其中，n6表示0至6之整數，n7表示1至4之整數，n8表示1至6之整數，LP表示由2至8個之胺基酸所構成的胜肽殘基，La表示-C(=O)-NH-、-NR1-(CH2)n9-、-O-、或單鍵，其中，n9表示1至6之整數，R1表示氫原子、碳數1至6之烷基、-(CH2)na-COOH、或-(CH2)nb-OH，但na表示整數之1至4，nb表示1至6之整數，Lb表示-CR2(-R3)-、-O-、-NR4-、或單鍵，其中，R2及R3係各自獨立地表示氫原子、碳數1至6之烷基、-(CH2)nc-NH2、-(CH2)nd-COOH、或-(CH2)ne-OH，R4表示氫原子或碳數1至6之烷基，nc表示0至6之整數，nd表示整數之1至4，ne表示整數之1至4，但nc為0時，R2及R3不成為相同，Lc表示-CH2-或-C(=O)-，-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-係下式所示的結構：
於其之3位與抗體結合，於1位之氮原子上與含其之連接物結構內之亞甲基結合，-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-係下式所示的結構：
於其之3位與L2結合，於1位之氮原子上與含此結構之連接物結構內之亞甲基結合，cyc.Hex(1,4)表示1,4-伸環己基，L2為-S-(CH2)n8-C(=O)-之時，L1成為-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-。
再者，本發明亦關於以下各者。
[2]如[1]記載之抗體-藥物結合物，其中連接物為-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-所示的結構之連接物。
[3]如[2]記載之抗體-藥物結合物，其中Lc為-C(=O)-。
[4]如[2]或[3]記載之抗體-藥物結合物，其中-NH-(CH2)n1-La-Lb-係選自以下群組的結構之連接物：-NH-CH2-、-NH-CH2CH2-、-NH-CH2-O-CH2-、-NH-CH2CH2-O-、-NH-CH2CH2-O-CH2-、-NH-CH2CH2-NH-、-NH-CH2CH2-NH-CH2-、-NH-CH2CH2-N(-CH2-COOH)-CH2-、-NH-CH2CH2-N(-CH2CH2-OH)-CH2CH2-、-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH(-CH2-COOH)-、-NH-CH2CH2CH2-、-NH-CH2CH2CH2CH2-、及-NH-CH2CH2CH2CH2CH2-。
[5]如[2]或[3]記載之抗體-藥物結合物，其中-NH-(CH2)n1-La-Lb-係選自以下群組的結構之連接物：-NH-CH2-、-NH-CH2CH2-、-NH-CH2CH2CH2-、-NH-CH2-O-CH2-、及-NH-CH2CH2-O-CH2-。
[6]如[1]記載之抗體-藥物結合物，其中連接物係-L1-L2-LP-所示的結構之連接物。
[7]如[1]至[6]中任一項記載之抗體-藥物結合物，其中L1係-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-，L2係單鍵或-NH-(CH2CH2-O)n6-CH2CH2-C(=O)-、-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-、-NH-[CH(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-、-NH-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-、或-NH-[CH(-CH2-COOH)]-CH2-O-CH2-(C=O)-。
[8]如[1]至[6]中任一項記載之抗體-藥物結合物，其中L1係-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-，L2係單鍵或-NH-(CH2CH2-O)n6-CH2CH2-C(=O)-。
[9]如[8]記載之抗體-藥物結合物，其中n2係2或5，L2係單鍵。
[10]如[9]記載之抗體-藥物結合物，其中n2係5，L2係單鍵。
[11]如[8]記載之抗體-藥物結合物，其中n2係2或5，L2係-NH-(CH2CH2-O)n6-CH2CH2-C(=O)-，n6係2或4。
[12]如[11]記載之抗體-藥物結合物，其中n2係2，L2係-NH-(CH2CH2-O)n6-CH2CH2-C(=O)-，n6係2或4。
[13]如[1]至[6]中任一項記載之抗體-藥物結合物，其中L1係-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-，L2係-NH-[CH(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-。
[14]如[13]記載之抗體-藥物結合物，其中n2係2或5。
[15]如[13]記載之抗體-藥物結合物，其中n2係5。
[16]如[1]至[6]中任一項記載之抗體-藥物結合物，其中L1係-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-，L2係-NH-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-。
[17]如[16]記載之抗體-藥物結合物，其中n2係2或5。
[18]如[16]記載之抗體-藥物結合物，其中n2係5。
[19]如[1]至[6]中任一項記載之抗體-藥物結合物，其中L1係-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-，L2係-NH-[CH(-CH2-COOH)]-CH2-O-CH2-(C=O)-。
[20]如[19]記載之抗體-藥物結合物，其中n2係2或5。
[21]如[19]記載之抗體-藥物結合物，其中n2係5。
[22]如[1]至[6]中任一項記載之抗體-藥物結合物，其中L1係-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-，L2係單鍵或-NH-(CH2CH2-O)n6-CH2CH2-C(=O)-。
[23]如[22]記載之抗體-藥物結合物，其中n3係2至4，L2係單鍵。
[24]如[22]記載之抗體-藥物結合物，其中n3係2，L2係單鍵。
[25]如[22]記載之抗體-藥物結合物，其中n3係2至4，L2係-NH-(CH2CH2-O)n6-CH2CH2-C(=O)-，n6係2至4。
[26]如[25]記載之抗體-藥物結合物，其中n3係2，L2係-NH-(CH2CH2-O)n6-CH2CH2-C(=O)-，n6係2至4。
[27]如[25]記載之抗體-藥物結合物，其中L1係-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-，L2係單鍵。
[28]如[1]至[6]中任一項記載之抗體-藥物結合物，其中L1係-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-，L2係單鍵。
[29]如[28]記載之抗體-藥物結合物，其中n4係2至6。
[30]如[28]記載之抗體-藥物結合物，其中n4係2。
[31]如[1]至[6]中任一項記載之抗體-藥物結合物，其中L1係-C(=O)-(CH2)n5-C(=O)-，L2係-NH-(CH2CH2-O)n6-CH2CH2-C(=O)-或單鍵。
[32]如[31]記載之抗體-藥物結合物，其中n5係2至6，L2係單鍵。
[33]如[31]記載之抗體-藥物結合物，其中n5係6。
[34]如[1]至[6]中任一項記載之抗體-藥物結合物，其中L1係-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-，L2係-S-(CH2)n8-C(=O)-。
[35]如[34]記載之抗體-藥物結合物，其中n8係2至4。
[36]如[34]記載之抗體-藥物結合物，其中n8係2。
[37]如[1]至[36]中任一項記載之抗體-藥物結合物，其中LP係由選自包含苯丙胺酸、白胺酸、甘胺酸、丙胺酸、纈胺酸、瓜胺酸、天冬胺酸、麩胺酸、離胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、穀醯胺、天冬醯胺、組胺酸、酪胺酸、及精胺酸的群組之胺基酸的胺基酸所構成的胜肽殘基。
[38]如[1]至[36]中任一項記載之抗體-藥物結合物，其中LP係由選自包含苯丙胺酸、甘胺酸、纈胺酸、離胺酸、瓜胺酸、絲胺酸、麩胺酸、及天冬胺酸的群組之胺基酸的胺基酸所構成的胜肽殘基。
[39]如[1]至[36]中任一項記載之抗體-藥物結合物，其中LP係VK、VC、GFG、GGFG、GGFGG、GGFGS、GGFGGG、GGFGGE、GGFGGGFG、DGGF、DGGFG、DdGGFG、DGMeGFG、DGGFS、DDGGFG、KDGGFG、KGGFG、EGGFG、或SGGFG(Dd之d表示D-體之胺基酸，GMe之Me表示α-胺 基經N-甲基化)。
[40]如[1]至[36]中任一項記載之抗體-藥物結合物，其中LP係GGFG、GGFGG、GGFGS、GGFGGE、DGGF、DGGFG、DdGGFG、DGMeGFG、DGGFS、DDGGFG、KDGGFG、KGGFG、EGGFG、或SGGFG。
[41]如[1]至[36]中任一項記載之抗體-藥物結合物，其中LP係GGFG、GDGGF、DGGFG、DdGGFG、DGMeGFG、DGGFS、DDGGFG、或KDGGFG。
[42]如[1]至[36]中任一項記載之抗體-藥物結合物，其中LP係GGFG、DGGFG、DdGGFG、或DGMeGFG。
[43]如[2]至[5]中任一項記載之抗體-藥物結合物，其中LP係GGFG或DGGFG。
[44]如[6]記載之抗體-藥物結合物，其中LP係GGFG、GDGGF、DGGFG、DdGGFG、DGMeGFG、DGGFS、DDGGFG、或KDGGFG。
[45]如[6]記載之抗體-藥物結合物，其中LP係DGGFG、DdGGFG、或DGMeGFG。
[46]如[1]至[45]中任一項記載之抗體-藥物結合物，其中每1抗體之抗腫瘤性化合物的平均結合數係1至10個之範圍。
[47]如[1]至[45]中任一項記載之抗體-藥物結合物，其中每1抗體之抗腫瘤性化合物的平均結合數係1至8個之範圍。
[48]如[1]至[45]中任一項記載之抗體-藥物結合物，其中每1抗體之抗腫瘤性化合物的平均結合數係3至8個 之範圍。
[49]如[1]至[48]中任一項記載之抗體-藥物結合物，其中抗體係具備可辨識標的細胞的特性、可與標的細胞結合的特性、可內在化至標的細胞中的特性、傷害標的細胞的特性之一或其以上之特性。
[50]如[49]記載之抗體-藥物結合物，其中標的細胞係腫瘤細胞。
[51]如[49]記載之抗體-藥物結合物，其中標的細胞係來自肺癌、尿道上皮癌、大腸癌、前列腺癌、卵巢癌、胰癌、乳癌、膀胱癌、胃癌、胃腸道基質腫瘤、子宮頸癌、食道癌、鱗狀上皮癌、腹膜癌、肝臓癌、肝細胞癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮內膜癌、子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌、外陰部癌、甲狀腺癌、陰莖癌、白血病、惡性淋巴瘤、漿細胞瘤(plasmacytoma)、骨髓瘤、或肉瘤的細胞。
[52]一種醫藥，其含有如[1]至[45]中任一項記載之抗體-藥物結合物或、其鹽、或彼等之水合物。
[53]一種抗腫瘤藥及/或抗癌藥，其含有如[1]至[45]中任一項記載之抗體-藥物結合物、其鹽、或彼等之水合物。
[54]如[53]記載之抗腫瘤藥及/或抗癌藥，其係用以應用於肺癌、尿道上皮癌、大腸癌、前列腺癌、卵巢癌、胰癌、乳癌、膀胱癌、胃癌、胃腸道基質腫瘤、子宮頸癌、食道癌、鱗狀上皮癌、腹膜癌、肝臓癌、肝細胞癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮內膜癌、子宮 癌、唾液腺癌、腎臓癌、外陰部癌、甲狀腺癌、陰莖癌、白血病、惡性淋巴瘤、漿細胞瘤、骨髓瘤、或肉瘤。
[55]一種醫藥組成物，其含有作為活性成分之如[1]至[45]中任一項記載之抗體-藥物結合物、其鹽、或彼等之水合物，及藥學上可容許的製劑成分。
[56]如[55]記載之醫藥組成物，其係用以應用於肺癌、尿道上皮癌、大腸癌、前列腺癌、卵巢癌、胰癌、乳癌、膀胱癌、胃癌、胃腸道基質腫瘤、子宮頸癌、食道癌、鱗狀上皮癌、腹膜癌、肝臓癌、肝細胞癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮內膜癌、子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌、外陰部癌、甲狀腺癌、陰莖癌、白血病、惡性淋巴瘤、漿細胞瘤、骨髓瘤、或肉瘤。
[57]一種腫瘤及/或癌之治療方法，其特徵為投予如[1]至[45]中任一項記載之抗體-藥物結合物、其鹽、或彼等之水合物。
[58]如[57]記載之治療方法，其係用以應用於肺癌、尿道上皮癌、大腸癌、前列腺癌、卵巢癌、胰癌、乳癌、膀胱癌、胃癌、胃腸道基質腫瘤、子宮頸癌、食道癌、鱗狀上皮癌、腹膜癌、肝臓癌、肝細胞癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮內膜癌、子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌、外陰部癌、甲狀腺癌、陰莖癌、白血病、惡性淋巴瘤、漿細胞瘤、骨髓瘤、或肉瘤。
[59]一種抗體-藥物結合物，其特徵為使下式
所示的抗腫瘤性化合物與抗HER2抗體，介隔下式：-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-或-L1-L2-LP-
所示的結構之連接物而結合。
其中，抗HER2抗體係於L1之末端結合，抗腫瘤性化合物係於1位之胺基之氮原子作為結合部位，而與Lc或LP之末端結合，式中，n1表示0至6之整數，L1表示-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-、或-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-，但此等係藉由抗體之鉸鏈部之雙硫鍵之部分以硫醚鍵結合， 其中，n2表示2至8之整數，n3表示1至8之整數，n4表示1至8之整數，L2表示-NH-(CH2CH2-O)n6-CH2CH2-C(=O)-、-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-、-NH-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-、-NH-[CH(-COOH)]-CH2-(C=O)-、-NH-[CH(-CH2-COOH)]-CH2-O-CH2-(C=O)-、或單鍵，其中，n6表示0至6之整數，n7表示1至4之整數，LP表示由2至8個之胺基酸所構成的胜肽殘基，La表示-C(=O)-NH-、-NR1-(CH2)n9-、-O-、或單鍵，其中，n9表示1至6之整數，R1表示氫原子、碳數1至6之烷基、-(CH2)na-COOH、或-(CH2)nb-OH，但na表示整數之1至4，nb表示1至6之整數，Lb表示-CR2(-R3)-、-O-、-NR4-、或單鍵，其中，R2及R3係各自獨立地表示氫原子、碳數1至6之烷基、-(CH2)nc-NH2、-(CH2)nd-COOH、或-(CH2)ne-OH，R4表示氫原子或碳數1至6之烷基，nc表示0至6之整數，nd表示整數之1至4，ne表示整數之1至4，但nc為0時，R2及R3不成為相同，Lc表示-CH2-或-C(=O)-，-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-係下式所示的結構：
於其之3位與抗體結合，於1位之氮原子上與含其之連接物結構內的亞甲基結合。
[60]一種抗體-藥物結合物，其特徵為使下式
所示的抗腫瘤性化合物與抗HER2抗體，介隔下式：-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-或-L1-L2-LP-
所示的結構之連接物而結合。
其中，抗HER2抗體係於L1之末端結合，抗腫瘤性化合物係於1位之胺基之氮原子作為結合部位，而與Lc或LP之末端結合，式中，n1表示0至6之整數，L1表示-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-、或-C(=O)-(CH2)n5-C(=O)-，但此等係與抗體介隔醯胺鍵而結合，其中，n5表示1至8之整數，L2表示-NH-(CH2CH2-O)n6-CH2CH2-C(=O)-、-S-(CH2)n8-C(=O)-、或單鍵，但L2為-S-(CH2)n8-C(=O)-之時，L1成為-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-，其中，n6表示0至6之整數，n8表示1至6之整數，LP表示由2至8個之胺基酸所構成的胜肽殘基，La表示-C(=O)-NH-、-NR1-(CH2)n9-、-O-、或單鍵，其中，n9表示1至6之整數，R1表示氫原子、碳數1至6之烷基、-(CH2)na-COOH、或-(CH2)nb-OH，但na表示整數之1至4，nb表示1至6之整數，Lb表示-CR2(-R3)-、-O-、-NR4-、或單鍵，其中，R2及R3係各自獨立地表示氫原子、碳數1至6之烷基、-(CH2)nc-NH2、-(CH2)nd-COOH、或-(CH2)ne-OH，R4表示氫原子或碳數1至6之烷基，nc表示0至6之整數，nd表示整數之1至4，ne表示整數之1至4，但nc為0時， R2及R3不成為相同，Lc表示-CH2-或-C(=O)-，其中，-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-係下式所示的結構：
於其之3位與L2結合，於1位之氮原子上與含此結構的連接物結構內之亞甲基結合，cyc.Hex(1,4)表示1,4-伸環己基。
[61]一種藥物-連接物中間體化合物，其係下式之任一者所示的藥物-連接物中間體化合物：Q-L1a-(CH2)nQ-C(=O)-L2a-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)或Q-L1a-(CH2)nQ-C(=O)-L2a-LP-(NH-DX)
式中，Q表示(順丁烯二醯亞胺(maleimid)-N-基)-、HS-、X-CH2-C(=O)-NH-、或(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-，X表示溴原子或碘原子，L1a表示-CH[-(CH2)n3-COOH]-、-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-、或單鍵， 其中，n3表示1至8之整數，nQ表示整數之0至8，L2a表示-NH-(CH2CH2-O)n6-CH2CH2-C(=O)-、-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-、-NH-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-、-NH-[CH(-COOH)]-CH2-(C=O)-、-NH-[CH(-CH2-COOH)]-CH2-O-CH2-(C=O)-、或單鍵，其中，n6表示0至6之整數，n7表示1至4之整數，LP表示由2至8個之胺基酸所構成的胜肽殘基，n1表示0至6之整數，La表示-C(=O)-NH-、-NR1-(CH2)n9-、-O-、或單鍵，其中，n9表示1至6之整數，R1表示氫原子、碳數1至6之烷基、-(CH2)na-COOH、或-(CH2)nb-OH，但na表示整數之1至4，nb表示1至6之整數，Lb表示-CR2(-R3)-、-O-、-NR4-、或單鍵，其中，R2及R3係各自獨立地表示氫原子、碳數1至6之烷基、-(CH2)nc-NH2、-(CH2)nd-COOH、或-(CH2)ne-OH，R4表示氫原子或碳數1至6之烷基，nc表示0至6之整數，nd表示整數之1至4，ne表示整數之1至4，但nc為0時，R2及R3不成為相同，Lc表示-CH2-或-C(=O)-，但其中，(順丁烯二醯亞胺-N-基)-係下式
所示的氮原子成為結合部位的基，(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)係下式
所示的氮原子成為結合部位的基，-(NH-DX)係由下式
所示的化合物衍生的1位之胺基之氮原子成為結合部位的基。
[62]一種下式之任一者所示的藥物-連接物中間體化合物：Q-L1a-(CH2)nQ-C(=O)-L2a-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)、或Q-L1a-(CH2)nQ-C(=O)-L2a-LP-(NH-DX)
式中，Q表示(順丁烯二醯亞胺-N-基)-、HS-、X-CH2-C(=O)-NH-、或(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-，X表示溴原子或碘原子，L1a表示-CH[-(CH2)n3-COOH]-、-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-、或單鍵，其中，n3表示1至8之整數，nQ表示0至8之整數， L2a表示-NH-(CH2-CH2-O)n6-CH2-CH2-C(=O)-、-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-、-NH-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-、-NH-[CH(-COOH)]-CH2-(C=O)-、-NH-[CH(-CH2-COOH)]-CH2-O-CH2-(C=O)-、或單鍵，其中，n6表示0至6之整數，n7表示1至4之整數，LP表示以3至8個胺基酸所構成的胜肽殘基，n1表示0至6之整數，La、Lb表示單鍵，Lc表示-C(=O)-，但其中，(順丁烯二醯亞胺-N-基)-係下式
所示的氮原子成為結合部位的基，(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)係下式
所示的氮原子成為結合部位的基，-(NH-DX)係由下式
所示的化合物所衍生的1位之胺基之氮原子成為結合部位的基。
[63]一種用以獲得介隔連接物而結合抗腫瘤性化合物與抗體的抗體-藥物結合物之下式之任一者所示的結 構之連接物。
-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-或-L1-L2-LP-
其中，抗體係於L1之末端結合，抗腫瘤性化合物係於Lc或LP之末端結合，式中，n1表示0至6之整數，L1表示-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-、-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-、或-C(=O)-(CH2)n5-C(=O)-，其中，n2表示2至8之整數，n3表示1至8之整數，n4表示1至8之整數，n5表示1至8之整數，L2表示-NH-(CH2CH2-O)n6-CH2CH2-C(=O)-、-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-、-NH-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-、-NH-[CH(-COOH)]-CH2-(C=O)-、-NH-[CH(-CH2-COOH)]-CH2-O-CH2-(C=O)-、-S-(CH2)n8-C(=O)-、或單鍵，其中，n6表示0至6之整數，n7表示1至4之整數，n8表示1至6之整數，LP表示由2至8個之胺基酸所構成的胜肽殘基，La表示-C(=O)-NH-、-NR1-(CH2)n9-、-O-、或單鍵，其中，n9表示1至6之整數，R1表示氫原子、碳數1至6之烷基、-(CH2)na-COOH、或-(CH2)nb-OH，但na表示整 數之1至4，nb表示1至6之整數， Lb表示-CR2(-R3)-、-O-、-NR4-、或單鍵，其中，R2及R3係各自獨立地表示氫原子、碳數1至6之烷基、-(CH2)nc-NH2、-(CH2)nd-COOH、或-(CH2)ne-OH，R4表示氫原子或碳數1至6之烷基，nc表示0至6之整數，nd表示整數之1至4，ne表示整數之1至4，但nc為0時，R2及R3不成為相同，Lc表示-CH2-或-C(=O)-，-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-係下式所示的結構：
於其之3位與抗體結合，於1位之氮原子上與含其之連接物結構內的亞甲基結合，-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-係下式所示的結構：
於其之3位與L2結合，於1位之氮原子上與含此結構的連接物結構內之亞甲基結合，cyc.Hex(1,4)表示1,4-伸環己基，L2係-S-(CH2)n8-C(=O)-之時，L1係成為-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-。
[64]如[63]記載之連接物，其中連接物之結構係選自[2]至[45]之態樣的結構之連接物。
[65]一種抗體-藥物結合物，其係抗體-藥物結合物，具有如[63]記載之連接物結構。
[66]如[65]記載之抗體-藥物結合物，其中連接物之結構係選自[2]至[45]之態樣的結構之連接物。
[67]一種如[63]記載之連接物結構於抗體-藥物結合物中的用途。
[68]如[67]記載之用途，其中連接物之結構係選自[2]至[45]之態樣的結構之連接物。
[69]一種抗體-藥物結合物之製造方法，其特徵為使下式之任一者所示的化合物：Q-L1a-(CH2)nQ-C(=O)-L2a-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)或 Q-L1a-(CH2)nQ-C(=O)-L2a-LP-(NH-DX)
與抗HER2抗體或其反應性衍生物反應，藉由於抗體之鉸鏈部存在的雙硫鍵部分使硫醚鍵形成的方法、或於構成抗體的胺基酸之側鏈上存在的胺基或末端之胺基使醯胺鍵形成的方法，而使藥物-連接物部分與抗體結合。
式中，Q表示(順丁烯二醯亞胺-N-基)-、HS-、X-CH2-C(=O)-NH-、或(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-，X表示溴原子或碘原子，L1a表示-CH[-(CH2)n3-COOH]-或單鍵，其中，n3表示1至8之整數，nQ表示整數之0至8，L2a表示-NH-(CH2CH2-O)n6-CH2CH2-C(=O)-、-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-、或單鍵，其中，n6表示0至6之整數，n7表示1至4之整數，LP表示由2至8個之胺基酸所構成的胜肽殘基，n1表示0至6之整數，La表示-C(=O)-NH-、-NR1-(CH2)n9-、-O-、或單鍵，其中，n9表示1至6之整數，R1表示氫原子、碳數1至6之烷基、-(CH2)na-COOH、或-(CH2)nb-OH，但na表示整數之1至4，nb表示1至6之整數，Lb表示-CR2(-R3)-、-O-、-NR4-、或單鍵，其中，R2及R3係各自獨立地表示氫原子、碳數1至6之烷基、-(CH2)nc-NH2、-(CH2)nd-COOH、或-(CH2)ne-OH ，R4表示氫原子或碳數1至6之烷基，nc表示0至6之整數，nd表示整數之1至4，ne表示整數之1至4，但nc為0時，R2及R3不成為相同，Lc表示-CH2-或-C(=O)-，但其中，(順丁烯二醯亞胺-N-基)-係下式
所示的氮原子成為結合部位的基，(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)係下式
所示的氮原子成為結合部位的基， -(NH-DX)係由下式
所示的化合物所衍生的1位之胺基之氮原子成為結合部位的基。
[70]如[69]記載之抗體-藥物結合物之製造方法，其使藥物-連接物部分與抗體結合的方法係下列方法之任一者：將抗體作還原處理後，使與Q為順丁烯二醯亞胺基或X-CH2-C(=O)-NH-的化合物反應而使形成硫醚鍵的方法；使抗體與Q為(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-的化合物反應而使醯胺鍵形成的方法；或使抗體與式Q1-L1b-(CH2)nQ-C(=O)-Q2所示的化合物反應後，[式中，Q1表示(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-、 (3-磺基-吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-、RQ-O-C(=N)-、或O=C=N-，L1b表示-cyc.Hex(1,4)-CH2-、碳數1至10之伸烷基、伸苯基、-(CH2)n4-C(=O)-、-(CH2)n4a-NH-C(=O)-(CH2)n4b-、或-(CH2)n4a-NH-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-，其中，RQ表示碳數1至6之烷基，n4表示1至8之整數，n4a係0至6之整數，n4b係1至6之整數，nQ表示整數之0至8，Q2表示(順丁烯二醯亞胺-N-基)、鹵素原子、或-S-S-(2-吡啶基)，其中，(3-磺基-吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-係下式
所示的氮原子成為結合部位的基，其磺酸可形成鋰鹽、鈉鹽、鉀鹽，cyc.Hex(1,4)表示1,4-伸環己基，(2-吡啶基)表示2-吡啶基]，使與Q為HS-的化合物反應而藉由醯胺鍵使藥物-連接物結構形成的方法。
[71]一種抗體-藥物結合物，其藉由如[69]或[70]記載之製造方法所製造。
[72]如[71]記載之抗體-藥物結合物，其中連接物之結構係選自如[2]至[45]之任一者記載之態樣之結構的連接物。
藉由介隔特定結構之連接物而使抗腫瘤性化合物依喜替康結合的抗HER2抗體-藥物結合物，可達成優異的抗腫瘤效果及安全性。
[第1圖]呈示人化抗HER2單株抗體重鏈之胺基酸序列(序列識別號1)。
[第2圖]呈示人化抗HER2單株抗體輕鏈之胺基酸序列(序列識別號2)。
[第3圖]係呈示利用抗體-藥物結合物(61)、(62)、(76)、或曲妥珠單抗之對人類乳癌株KPL-4細胞皮下移植裸鼠的抗腫瘤效果的圖。圖中，橫軸表示細胞移植後之日數，縱軸表示腫瘤體積。
[第4圖]係呈示利用抗體-藥物結合物(77)、(88)、(143)、或曲妥珠單抗依坦辛之對人類胃癌株NCI-N87細胞皮下移植裸鼠的抗腫瘤效果的圖。圖中，橫軸表示細胞移植後之日數，縱軸表示腫瘤體積。
[第5圖]係呈示利用抗體-藥物結合物(77)、(88)、(143)、曲妥珠單抗、或曲妥珠單抗依坦辛之對人類乳癌 株JIMT-1細胞皮下移植裸鼠的抗腫瘤效果的圖。圖中，橫軸表示細胞移植後之日數，縱軸表示腫瘤體積。
[實施發明之形態]
以下，一邊參照圖式一邊說明用以實施本發明之較佳形態。又，以下說明的實施形態係呈示本發明之代表性的實施形態之一例，並非藉由此等而狹隘解釋本發明之範圍。
本發明之抗HER2抗體-藥物結合物係於抗HER2抗體，介隔連接物結構部分而使抗腫瘤性化合物結合的抗腫瘤性藥物，詳細說明如下。
[抗體]
本發明之抗HER2抗體-藥物結合物所使用的抗HER2抗體係可來自任一物種，但較佳可例示人類、大鼠、小鼠、及兔。抗體來自人類以外之物種的情形，較佳為使用周知之技術進行嵌合化或人化。本發明之抗體可為多株抗體，亦可為單株抗體，但單株抗體較佳。
抗HER2抗體係可以腫瘤細胞為標的的抗體，即具備可辨識腫瘤細胞的特性、可與腫瘤細胞結合的特性、被攝入腫瘤細胞內而內在化的特性、以及對腫瘤細胞的殺細胞活性等，使具有抗腫瘤活性的化合物經由連接物結合而可作成抗體-藥物結合物。
抗體之對腫瘤細胞的結合性係可使用流動式細胞測量術(flow cytometry)而確認。至腫瘤細胞內之抗體之攝入，可使用下列檢驗而確認：(1)使用與治療抗體結合的二 次抗體(螢光標識)而將被攝入細胞內的抗體藉由螢光顯微鏡進行可視化的檢驗(Cell Death and Differentiation(2008)15,751-761)、(2)使用與治療抗體結合的二次抗體(螢光標識)而測量被攝入細胞內的螢光量的檢驗(Molecular Biology of the Cell Vol.15,5268-5282,December 2004)、或(3)使用與治療抗體結合的免疫毒素，一旦被攝入細胞內則毒素被釋放而細胞增殖被抑制的Mab-ZAP檢驗(Bio Techniques 28：162-165,January 2000)。就免疫毒素而言，亦可使用白喉毒素之觸媒區與蛋白質G(Protein G)之重組複合蛋白質。
抗體之抗腫瘤活性，於活體外可藉由測定細胞之增殖的抑制活性而確認。例如，培養過度表現抗體之標的蛋白質的癌細胞株，於培養系統中以各種濃度添加抗體，可測定對病灶形成、菌落形成及類球狀體(spheroid)增殖的抑制活性。於活體內，例如，藉由對移植高度表現標的蛋白質的腫瘤細胞株的裸鼠投予抗體，測定癌細胞之變化，而可確認抗腫瘤活性。
抗體-藥物結合物由於使發揮抗腫瘤效果的化合物結合，故抗體本身具有抗腫瘤效果雖較佳，但非必須。由使抗腫瘤性化合物之細胞毒性於腫瘤細胞特異性、選擇性地發揮之目的而言，具有抗體內在化而移動至腫瘤細胞內的性質是重要且較佳的。
抗HER2抗體可藉由周知手段取得。例如，可藉由使用此領域通常實施的方法，將成為抗原的多肽對動物免疫，採取、純化生物體內產生的抗體而獲得。 抗原之來源並未限於人類，亦可將來自小鼠、大鼠等之人類以外之動物的抗原對動物進行免疫。於此情形，藉由試驗與取得的異種抗原結合的抗體與人類抗原之交叉反應性，可選出可應用於人類疾病的抗體。
又，依據周知之方法(例如，Kohler and Milstein,Nature(1975)256,p.495-497；Kennet,R.ed.,Monoclonal Antibodies,p.365-367,Plenum Press,N.Y.(1980))，藉由使產生對抗原的抗體之抗體產生細胞與骨髓瘤細胞融合，亦可建立融合瘤，獲得單株抗體。
又，抗原可藉由利用基因操作使編碼抗原蛋白質的基因於宿主細胞中產生而獲得。具體而言，製作可表現抗原基因的載體(vector)，將其導入宿主細胞而使該基因表現，純化表現的抗原即可。使用將利用上述之基因操作的抗原表現細胞或表現抗原的細胞株對動物進行免疫的方法，藉此亦可取得抗體。
抗HER2抗體係可藉由周知之手段取得。
本發明可使用的抗HER2抗體並未特別限制，但例如期望為具有以下特性者。
(1)一種抗HER2抗體，其特徵為具有以下之特性；
(a)與HER2特異性結合。
(b)具有藉由與HER2結合，而內在化至HER2表現細胞的活性。
(2)如上述(1)記載之抗體，其結合於HER2之細胞外區域。
(3)如上述(1)或(2)記載之抗體，其係單株抗體。
(4)如上述(1)至(3)中任一項記載之抗體，其具有抗體依賴性細胞傷害(ADCC)活性及/或補體依賴性細胞傷害(CDC)活性。
(5)如上述(1)至(4)中任一項記載之抗體，其係小鼠單株抗體、嵌合單株抗體、或人化單株抗體。
(6)如上述(1)至(5)中任一項記載之抗體，其係包含含序列識別號1記載之胺基酸序列的重鏈及含序列識別號2記載之胺基酸序列的輕鏈而成的人化單株抗體。
(7)如上述(1)至(6)中任一項記載之抗體，其重鏈羧基末端之離胺酸殘基缺失。
(8)如上述(7)記載之抗體，其包含含序列識別號1中胺基酸編號1至449記載之胺基酸序列的重鏈及含序列識別號2中胺基酸編號1至214記載之胺基酸序列的輕鏈而成
(9)一種抗體，其係藉由下列抗體之製造方法而獲得的抗體，該方法包含：培養宿主細胞的步驟，該宿主細胞係藉由含有編碼如上述(1)至(8)中任一項記載之抗體的多核苷酸的表現載體而轉形；及自該步驟獲得的培養物採集目的抗體的步驟。
以下，說明於本發明所使用的抗HER2抗體。
於本說明書，「癌」與「腫瘤」係以相同意義使用。
於本說明書，所謂「基因」之用語不僅包含DNA，亦包含其mRNA、cDNA、及其cRNA。
於本說明書，所謂「多核苷酸」之用語係以與核酸相同的意義使用，亦包含DNA、RNA、探針、寡核苷酸、及引子。
於本說明書，「多肽」、「蛋白質」、「蛋白」並未區別地使用。
於本說明書，「細胞」亦包含動物個體內之細胞、培養細胞。
於本說明書，所謂「HER2」之用語係以與HER2蛋白相同的意義使用。
於本說明書，抗HER2抗體並未特別限制，但可列舉帕妥珠單抗(國際公開第01/00245號)、曲妥珠單抗(美國專利第5821337號)等，但曲妥珠單抗較佳。惟，只要為與HER2特異性結合的抗HER2抗體，更佳為具有藉由與HER2結合而內在化至HER2表現細胞中的活性的抗HER2抗體則未限制。
於本說明書，「曲妥珠單抗」亦稱為HERCEPTIN(註冊商標)、huMAb4D5-8、rhuMAb4D5-8，為包含含序列識別號1(第1圖)中胺基酸編號1至449記載之胺基酸序列的重鏈及含序列識別號2(第2圖)中胺基酸編號1至214記載之胺基酸序列的輕鏈而成的人化抗體。
於本說明書，所謂「特異性結合」之用語係意指不為非特異性吸附的結合。就結合是否為特異性之判定基準而言，例如，可列舉解離常數(以下，「KD」)。適合的抗體之對HER2蛋白的KD值係1×10-5M以下，5×10-6M以下，2×10-6M以下，或1×10-6M以下；更適合為5×10-7M以下，2×10-7M以下，或1×10-7M以下；又更適合為5×10-8M以下，2×10-8M以下，或1×10-8M以下；最適合為5×10-9M以下，2×10-9M以下，或1×10-9M以下。HER2蛋白與抗體 之結合係可使用表面電漿共振(Surface Plasmon Resonance)法、ELISA法、RIA法等周知方法而測定。
本說明書中的「CDR」係意指互補性決定區(CDR：Complemetarity deterring region)。已知於抗體分子之重鏈及輕鏈各自有3處之CDR。CDR亦稱為超可變區(hypervariable domain)，位於抗體之重鏈及輕鏈之可變區內，為一次結構之變異性特高的部位，於重鏈及輕鏈之多肽鏈之一次結構上，各自分離於3處。於本說明書中，針對抗體之CDR，將重鏈之CDR自重鏈胺基酸序列之胺基末端側標記為CDRH1、CDRH2、CDRH3，將輕鏈之CDR自輕鏈胺基酸序列之胺基末端側標記為CDRL1、CDRL2、CDRL3。此等之部位係於立體結構上互相接近，而決定對結合的抗原的特異性。
於本發明，「於嚴格條件下雜交」係指於市售之雜交溶液ExpressHyb Hybridization Solution(Clontech公司製)中，於68℃進行雜交，或指藉由使用固定有DNA的濾紙，於0.7-1.0M之NaCl存在下、於68℃進行雜交後，使用0.1-2倍濃度之SSC溶液(1倍濃度SSC係包含150mM NaCl、15mM檸檬酸鈉)，於68℃洗淨，而可鑑定的條件或與其同等的條件下雜交。
1.HER2
HER2係被鑑定為人類上皮細胞增殖因子受體2型關連癌基因的代表性的增殖因子受體型之癌基因產物之一，為分子量185kDa之具有酪胺酸激酶區域的跨膜型受體蛋白。已知其為包含HER1(EGFR、ErbB-1)、HER2(neu 、ErbB-2)、HER3(ErbB-3)、HER4(ErbB-4)的EGFR家族之一，藉由同質或與其他EGFR的HER1、HER3、或HER4之異二聚體形成，細胞內酪胺酸殘基被自體磷酸化而進行活性化，藉此於正常細胞及腫瘤細胞之細胞的增殖、分化、生存上擔任重要任務。
本發明所使用的HER2蛋白係可由人類、非人類哺乳動物(大鼠、小鼠等)之HER2表現細胞直接純化而使用，或者可調製該細胞之細胞膜劃分而使用。又，亦可藉由將HER2於活體外合成、或者藉由基因操作使其於宿主細胞中產生而獲得。基因操作具體而言，藉由將HER2 cDNA組入可表現的載體後，於含轉錄與轉譯所必要的酵素、基質及能量物質的溶液中合成，或藉由使其他原核生物、或真核生物之宿主細胞轉形來使HER2表現，而可獲得該蛋白質。又，亦可將利用前述之基因操作之HER2表現細胞、或表現HER2的細胞株作為HER2蛋白使用。
HER2之DNA序列及胺基酸序列已被公開於公眾的資料庫，例如，可藉由M11730(Genbank)、NP_004439.2(NCBI)等之登錄號而參照。
又，於上述HER2之胺基酸序列，包含1或數個之胺基酸被取代、刪除及/或添加的胺基酸序列，且具有與該蛋白質同等之生物活性的蛋白質亦包含於HER2。
人類HER2蛋白係由下列所構成：由N末端22個胺基酸殘基所構成的訊息序列、由630個胺基酸殘基所構成的細胞外區域、由23個胺基酸殘基所構成的跨膜區域、由580個胺基酸殘基所構成的細胞內區域。
2.抗HER2抗體之製造
本發明之抗HER2的抗體係可藉由例如，依據此領域通常實施的方法，將HER2或選自HER2之胺基酸序列的任意多肽對動物進行免疫，採取、純化生物體內產生的抗體而獲得。成為抗原的HER2之生物種類並未限定於人類，亦可將來自小鼠、大鼠等之人類以外的動物的HER2、大鼠p185neu等對動物進行免疫。於此情形，藉由試驗與所取得的異種HER2結合的抗體與人類HER2之交叉反應性，可選出可應用於人類疾病的抗體。
又，依據周知之方法(例如，Kohler and Milstein,Nature(1975)256,p.495-497、Kennet,R.ed.,Monoclonal Antibodies,p.365-367,Plenum Press,N.Y.(1980))，藉由使產生抗HER2的抗體的抗體產生細胞與骨髓瘤細胞融合，亦可建立融合瘤，獲得單株抗體。
又，成為抗原的HER2可藉由利用基因操作使HER2基因於宿主細胞中表現而獲得。
具體而言，製作可表現HER2基因的載體，將其導入宿主細胞而使該基因表現，純化表現的HER2即可。
又，亦可將利用上述之基因操作之HER2表現細胞、或表現HER2的細胞株作為HER2蛋白來使用。抗HER2抗體係可藉由周知手段而取得。以下，具體說明抗HER2的抗體之取得方法。
(1)抗原之調製
，就用以製作抗HER2抗體之抗原而言，可列舉HER2或包含其至少6個連續的部分胺基酸序列的多肽、或者於 彼等附加有任意之胺基酸序列或載體(carrier)的衍生物。
HER2係可自人類之腫瘤組織或腫瘤細胞直接純化而使用，又，可藉由將HER2於活體外合成而獲得、或可藉由利用基因操作使其於宿主細胞中產生而獲得。
基因操作具體而言，藉由將HER2之cDNA組入可表現的載體後，於含轉錄與轉譯所必要的酵素、基質及能量物質的溶液中合成，或藉由將其他原核生物或真核生物之宿主細胞轉形來使HER2表現，而可獲得抗原。
又，藉由使連結膜蛋白質的HER2之細胞外區域與抗體之恆定區的融合蛋白質於適當宿主、載體系統中表現，亦可獲得呈分泌蛋白質之抗原。
HER2之cDNA，例如可藉由將表現HER2之cDNA的cDNA庫作為模板，使用將HER2 cDNA特異性增幅的引子，而進行聚合酶連鎖反應(PCR；參照Saiki，R.K.,et al.,Science(1988)239,p.487-489)之所謂的PCR法而取得。
就多肽之活體外(in vitro)合成而言，例如，可列舉Roche Diagnostics公司製之快速轉譯系統(Rapid Translation System)(RTS)，但未限定於此。
就原核細胞之宿主而言，例如，可列舉大腸桿菌(Escherichia coli)或枯草桿菌(Bacillus subtilis)等。為了使目的基因於此等之宿主細胞內轉形，係以含有來自可適合作為宿主物種之複製單元(replicon)，即複製起點，及調節序列的質體載體使宿主細胞轉形。又，就載體而言，具有可對轉形細胞賦予表型(表現型)之選擇性的序列者為較佳。
真核細胞之宿主細胞包含脊椎動物、昆蟲、酵母等之細胞，就脊椎動物細胞而言，例如，常使用為猴之細胞的COS細胞(Gluzman,Y.Cell(1981)23,p.175-182、ATCC CRL-1650；ATCC：美國菌種保存中心(American Type Culture Collection))、小鼠纖維母細胞NIH3T3(ATCC No.CRL-1658)或中國倉鼠卵巢細胞(CHO細胞、ATCC CCL-61)之二氫葉酸還原酵素缺損株(Urlaub,G.and Chasin,L.A.Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1980)77,p.4126-4220)等，但未限定於此等。
如上述而獲得的轉形體，可依據此領域通常實施的方法加以培養，藉由該培養而於細胞內或細胞外產生目的之多肽。
就該培養所使用的培養基而言，可因應採用的宿主細胞而適宜選擇慣用的各種者，若為大腸桿菌，例如，因應必要可於LB培養基中添加安比西林(ampicillin)等之抗生素或IPMG而使用。
藉由上述培養，轉形體之細胞內或細胞外所產生的重組蛋白質可藉由利用該蛋白質之物理性質或化學性質等的各種周知的分離操作法而分離、純化。
就該方法而言，具體而言，例如可舉例說明利用通常之蛋白質沉澱劑的處理、超過濾、分子篩層析(凝膠過濾)、吸附層析、離子交換層析、親和性層析等之各種液體層析、透析法、此等之組合等。
又，藉由於所表現的重組蛋白質連接6個殘基所構成的組胺酸標籤(histidine tag)，可以鎳親和性管柱有效率 地進行純化。或者，藉由於所表現的重組蛋白質連接IgG之Fc區域，可以蛋白質A(Protein A)管柱有效率地進行純化。
藉由組合上述方法，可容易地以高產率、高純度大量製造作為目的之多肽。
亦可將上述所述之轉形體本身作為抗原而使用。又，亦可將表現HER2的細胞株作為抗原來使用。就此類細胞株而言，可列舉人類乳癌株SK-BR-3、BT-474、KPL-4、或JIMT-1、人類胃癌株NCI-N87、以及人類卵巢癌株SK-OV-3，但只要表現HER2，則未限定於此等細胞株。
(2)抗HER2單株抗體之製造
就與HER2特異性結合的抗體之例而言，可列舉與HER2特異性結合的單株抗體，但其取得方法係如以下記載。
於單株抗體之製造，一般而言如下述的作業步驟係必要的。
即，
(a)作為抗原使用的活體高分子之純化、或抗原表現細胞之調製
(b)藉由將抗原注射於動物而免疫後，採取血液，檢定其抗體力價而決定脾臓摘出之時期後，調製抗體產生細胞的步驟
(c)骨髓瘤細胞(以下稱為「骨髓瘤」)之調製
(d)抗體產生細胞與骨髓瘤之細胞融合
(e)產生作為目的之抗體的融合瘤群之挑選
(f)對單一細胞選殖株的分割(選殖)
(g)依據情形，用以大量製造單株抗體的融合瘤之培養、或移植融合瘤的動物之飼育
(h)如此製造的單株抗體之生理活性、及其結合特異性之檢討、或作為標識試藥之特性之檢定等。
以下，將單株抗體之製作法依上述步驟詳述，但該抗體之製作法並未限制於此，例如，亦可使用脾細胞以外之抗體產生細胞及骨髓瘤。
(a)抗原之純化
就抗原而言，可使用如前述方法所調製的HER2或其一部分。
又，亦可將下列作為抗原來使用：藉由HER2表現重組體細胞所調製的膜劃分，或HER2表現重組體細胞本身，再者，使用本技術領域者所周知之方法而化學合成的本發明之蛋白質之部分胜肽。
再者，亦可將HER2表現細胞株作為抗原來使用。
(b)抗體產生細胞之調製
將步驟(a)所獲得的抗原與弗氏完全或不完全佐劑、或鉀礬(potash alum)之類的輔助劑混合，作為免疫原對實驗動物進行免疫。除此之外，亦有將抗原表現細胞作為免疫原對實驗動物免疫的方法。實驗動物可無阻地使用周知的融合瘤製作法所使用的動物。具體而言，例如可使用小鼠、大鼠、山羊、綿羊、牛、馬等。惟，由與摘出的抗體產生細胞融合的骨髓瘤細胞之取得容易性等之觀點，將小鼠或大鼠作為被免疫動物較佳。
又，實際上使用的小鼠及大鼠之品系並未別限制，若為小鼠，例如，可使用A、AKR、BALB/c、BDP、BA、CE、C3H、57BL、C57BL、C57L、DBA、FL、HTH、HT1、LP、NZB、NZW、RF、R III、SJL、SWR、WB、129等之各品系，若為大鼠，例如，可使用Wistar、Low、Lewis、Sprague、Dawley、ACI、BN、Fischer等之各品系。
此等之小鼠及大鼠可獲自例如日本CLEA股份有限公司、日本Charles River股份有限公司等之實驗動物飼育販售業者。
就被免疫動物而言，若考慮後述之與骨髓瘤細胞之融合親和性，則小鼠係BALB/c品系為特佳，大鼠係Wistar及Low品系為特佳。
又，考慮抗原之於人類與小鼠之同源性，使用去除自體抗體之使生物機制降低的小鼠，亦即使用自體免疫疾病小鼠為較佳。
又，此等小鼠或大鼠之免疫時的週齡，較佳為5~12週齡，更佳為6~8週齡。
藉由HER2或其重組體而免疫動物時，例如，可使用Weir,D.M.,Handbook of Experimental Immunology Vol.I.,II.,III.,Blackwell Scientific Publications,Oxford(1987)；Kabat,E.A.and Mayer,M.M.,Experimental Immunochemistry,Charles C Thomas Publisher Springfield,Illinois(1964)等所詳細記載的周知方法。
此等之免疫法中，若具體呈示本發明之較佳方法， 例如，如以下所示。
即，首先，將為抗原的膜蛋白質劃分、或使表現抗原的細胞投予至動物之皮內或腹腔內。惟，為了提高免疫效率，兩者之併用為較佳，前半進行皮內投予、後半或僅最終次進行腹腔內投予時，可特別地提高免疫效率。
抗原之投予時程係依被免疫動物之種類、個體差異等而異，但一般而言，抗原投予次數3~6次、投予間隔2~6週較佳，投予次數3~4次、投予間隔2~4週更佳。
又，抗原之投予量係依動物之種類、個體差異等而異，但一般而言，作成0.05~5mg，較佳為作成0.1~0.5mg左右。
追加免疫係在如以上之抗原投予的1~6週後，較佳為1~4週後，更佳為1~3週後進行。免疫原為細胞的情形，使用1×106至1×107個之細胞。
又，進行追加免疫之際的抗原投予量，依動物種類、大小等而異，但一般而言，例如若為小鼠，作成0.05~5mg，較佳為0.1~0.5mg，更佳為0.1~0.2mg左右。免疫原為細胞的情形，使用1×106至1×107個之細胞。
自上述追加免疫之1~10日後，較佳為2~5日後，更佳為2~3日後，自被免疫動物無菌地取出含抗體產生細胞的脾臓細胞或淋巴球。此時，測量抗體力價，若將抗體力價變的充分高的動物作為抗體產生細胞之供給源使用，則可提高以後操作之效率。
就本文使用的抗體力價之測定法而言，例如，可列舉RIA法或ELISA法，但未限定於此等方法。本發明中的 抗體力價之測定，例如，若依據ELISA法，可藉由如以下記載的順序進行。
首先，使純化或部分純化的抗原吸附於ELISA用96孔盤等之固相表面，進一步將抗原未吸附的固相表面以與抗原無關係的蛋白質覆蓋，例如，藉由牛血清白蛋白(BSA)覆蓋，將該表面洗淨後，與作為第一抗體之連續稀釋的試料(例如，小鼠血清)接觸，使上述抗原與試料中之抗體結合。
再者作為第二抗體，添加經酵素標識的抗小鼠抗體之抗體而與小鼠抗體結合，洗淨後添加該酵素之基質，測量基於基質分解的顯色所致之吸光度變化等，藉此算出抗體力價。
自被免疫動物的脾臓細胞或淋巴球之抗體產生細胞的分離，可依據周知方法(例如，Kohler et al.,Nature(1975)256,p.495；Kohler et al.,Eur.J.Immunol.(1977)6,p.511；Milstein et al.,Nature(1977),266,p.550；Walsh,Nature,(1977)266,p.495)而進行。例如，脾臓細胞之情形，可採用將脾臓細切而將細胞以不鏽鋼篩網過濾後，使其游離於伊格爾最低必須培養基(Eagle minimal essential medium)(MEM)而將抗體產生細胞加以分離的一般方法。
(c)骨髓瘤細胞(以下，稱為「骨髓瘤」)之調製
用於細胞融合的骨髓瘤細胞並未特別限定，可由周知之細胞株適當選擇來使用。惟，考慮自融合細胞選擇融合瘤之際的便利性，較佳使用其選擇手續已確立的 HGPRT(次黃嘌呤-鳥糞嘌呤磷酸核糖轉移酵素，Hypoxanthine-guanine phosphoribosyl transferase)缺損株。
即，來自小鼠之X63-Ag8(X63)、NS1-ANS/1(NS1)、P3X63-Ag8.U1(P3U1)、X63-Ag8.653(X63.653)、SP2/0-Ag14(SP2/0)、MPC11-45.6TG1.7(45.6TG)、FO、S149/5XXO、BU.1等；來自大鼠之210.RSY3.Ag.1.2.3(Y3)等；來自人類之U266AR(SKO-007)、GM1500‧GTG-A12(GM1500)、UC729-6、LICR-LOW-HMy2(HMy2)、8226AR/NIP4-1(NP41)等。此等之HGPRT缺損株例如可獲自ATCC等。
此等之細胞株係以適當培養基，例如8-氮鳥嘌呤培養基(於RPMI-1640培養基中添加麩醯胺酸、2-巰基乙醇、健它黴素(gentamycin)、及胎牛血清(以下稱為「FBS」)的培養基中添加8-氮鳥嘌呤的培養基)、伊斯科夫氏改良杜爾貝科氏培養基(Iscove’s Modified Dulbecco’s Medium；以下稱為IMDM)、或杜爾貝科氏改良伊格爾培養基(Dulbecco’s Modified Eagle Medium；以下稱為DMEM)繼代培養，但細胞融合之3至4日前以正常培養基(例如，含10% FCS的ASF104培養基(味之素股份有限公司製))繼代培養，於融合當日確保2×107以上之細胞數目。
(d)細胞融合
抗體產生細胞與骨髓瘤細胞之融合可依據周知之方法(Weir,D.M.,Handbook of Experimental Immunology Vol.I.,II.,III.,Blackwell Scientific Publications,Oxford(1987)、Kabat,E.A.and Mayer,M.M.,Experimental Immunochemistry,Charles C Thomas Publisher Springfield,Illinois(1964)等)，於使細胞生存率未極度降低的程度的條件下適當實施。
就此類方法而言，例如，可使用於聚乙二醇等之高濃度聚合物溶液中將抗體產生細胞與骨髓瘤細胞混合的化學方法、利用電刺激的物理方法等。其中，若呈示上述化學方法之具體例係如以下。
即，使用聚乙二醇作為高濃度聚合物溶液的情形，於分子量1500~6000，較佳為2000~4000之聚乙二醇溶液中，於30~40℃，較佳為於35~38℃之溫度下，將抗體產生細胞與骨髓瘤細胞混合1~10分鐘，較佳為5~8分鐘。
(e)融合瘤群之選擇
藉由上述細胞融合獲得的融合瘤之選擇方法並未特別限制，但通常使用HAT(次黃嘌呤‧胺基喋呤‧胸苷)選擇法(Kohler et al.,Nature(1975)256,p.495；Milstein et al.,Nature(1977)266,p.550)。
此方法對使用於胺基喋呤中無法生存的HGPRT缺損株之骨髓瘤細胞而獲得融合瘤的情形為有效的。即，藉由將未融合細胞及融合瘤以HAT培養基培養，可僅使具有對胺基喋呤之耐受性的融合瘤選擇性殘存，且使其增殖。
(f)對單一細胞選殖株之分割(選殖)
就融合瘤之選殖法而言，例如，可使用甲基纖維素法、軟瓊脂糖法、極限稀釋法等之周知方法(例如，參照 Barbara,B.M.and Stanley,M.S.：Selected Methods in Cellular Immunology,W.H.Freeman and Company,San Francisco(1980))。此等之方法中，尤其是甲基纖維素法等之三維培養法為較佳。例如，將藉由細胞融合所形成的融合瘤群懸浮於Clona Cell-HY Selection Medium D(StemCell Technologies公司製，# 03804)等之甲基纖維素培養基而培養，藉由回收形成的融合瘤菌落，單株融合瘤之取得為可能的。培養所回收的各融合瘤群落，將於獲得的融合瘤培養上清液中安定而被認可抗體力價者，選擇作為HER2單株抗體產生融合瘤株。
(g)利用融合瘤的培養之單株抗體之調製
如此選擇的融合瘤，藉由將其培養，可有效率地獲得單株抗體，但期望於培養之前，篩選產生目的單株抗體的融合瘤。
此篩選係可採用本身已知之方法。
本發明中的抗體力價的測定可藉由例如，上述(b)之項目中說明的ELISA法而進行。
藉由以上之方法所獲得的融合瘤可於液態氮中或-80℃以下之冷凍庫中以凍結狀態保存。
完成選殖的融合瘤係將培養基由HT培養基換成正常培養基而被培養。
大量培養係以使用大型培養瓶的旋轉培養、或旋轉器(spinner)培養來進行。自此大量培養中的上清液，藉由使用膠體過濾等之本技術領域者所周知之方法而純化，可獲得與本發明之蛋白質特異性結合的單株抗體
又，於同品系之小鼠(例如，上述之BALB/c)、或Nu/Nu小鼠之腹腔內注射融合瘤，使該融合瘤增殖，藉此可獲得含大量本發明之單株抗體的腹水。
投予腹腔內的情形，於事前(3~7日前)，投予2,6,10,14-四甲基十五烷(姥鮫烷(pristane))等之礦物油時，可獲得較多量之腹水。
例如，於與融合瘤同品系的小鼠腹腔內預先注射免疫抑制劑，使T細胞不活化後，於20日後，使106~107個之融合瘤‧選殖株細胞於不含血清的培養基中游離(0.5mL)而投予至腹腔內，通常於腹部為膨滿、腹水累積時，自小鼠採取腹水。藉由此方法，可獲得與培養液相比約100倍以上之濃度之單株抗體。
藉由上述方法所獲得的單株抗體，可以例如，Weir,D.M.：Handbook of Experimental Immunology,Vol.I.,II.,III.,Blackwell Scientific Publications,Oxford(1978)記載的方法而加以純化。
如此獲得的單株抗體係對HER2具有高抗原特異性。就本發明之單株抗體而言，並未特別限制，但可列舉小鼠單株抗體4D5(ATCC CRL 10463)。
(h)單株抗體之檢定
如此獲得的單株抗體之同型及亞型之決定係可如以下方式進行。
首先，可列舉歐氏雙向擴散(Ouchterlony)法、ELISA法、或RIA法作為鑑定法。
歐氏法係為簡便，但單株抗體濃度低的情形，需要 濃縮操作。
另一方面，使用ELISA法或RIA法的情形，藉由使培養上清液直接與抗原吸附固相反應，進一步使用對應各種免疫球蛋白同型、亞型的抗體作為二次抗體，而可鑑定單株抗體之同型、亞型。
又，就更簡便的方法而言，亦可利用市售之鑑定用之套組(例如，Mouse typer kit；Bio-Rad公司製)等。
再者，蛋白質之定量係可藉由自斐林-洛瑞法(Folin Lowry method)及280nm中的吸光度(1.4(OD280)=免疫球蛋白1mg/ml)算出的方法而進行。
再者，再次實施(2)之(a)至(h)的步驟而另外獨立取得單株抗體的情形，亦可能取得具有與(g)之步驟所獲得的抗HER2抗體同等的細胞傷害活性的抗體。就此類抗體之一例而言，可列舉與(g)之步驟所獲得的抗HER2抗體相同之抗原決定位結合的抗體。新製作的單株抗體若與結合前述抗HER2抗體的部分胜肽或部分立體結構結合，則可判定該單株抗體與相同抗原決定位結合。又，藉由確認對於前述抗HER2抗體之對HER2的結合，該單株抗體為競爭(即，該單株抗體妨礙前述抗HER2抗體與HER2之結合)，即使未決定具體的抗原決定位之序列或結構，亦可判定該單株抗體結合於與抗HER2抗體相同之抗原決定位。確認抗原決定位相同的情形，強烈地期待該單株抗體具有與前述抗HER2抗體同等之抗原結合能力或生物活性。
(3)其他之抗體
本發明之抗體，除了上述抗HER2的單株抗體之外，亦包含以使對人類的異種抗原性降低等為目的而人為地改變的基因重組型抗體，例如，嵌合(Chimeric)抗體、人化(Humanized)抗體、人類抗體等。此等之抗體可使用已知方法來製造。
就嵌合抗體而言，可列舉抗體之可變區與恆定區彼此為異種的抗體，例如，將來自小鼠或大鼠的抗體之可變區與來自人類的恆定區接合的嵌合抗體(參照Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,81,6851-6855(1984))。就本發明之嵌合抗體而言，並未特別限制，但可列舉含人類IgG1或IgG2之重鏈恆定區的嵌合抗體4D5。
就人化抗體而言，可列舉僅將互補決定區(CDR；complementarity determining region)組入來自人類的抗體的抗體(參照Nature(1986)321,p.522-525)、藉由CDR移植法而除了CDR之序列外亦將一部分之框架區胺基酸殘基移植於人類抗體的抗體(國際公開第90/07861號)、使用基因轉換突變誘發(gene conversion mutagenesis)策略而人化的抗體(美國專利第5821337號)。
又，本說明書中的「數個」係意指1至10個、1至9個、1至8個、1至7個、1至6個、1至5個、1至4個、1至3個、或1或者2個。
又，就本說明書中的胺基酸之取代而言，保存性胺基酸取代為較佳。保存性胺基酸取代係指與胺基酸側鏈有關連的胺基酸基團內產生的取代。較佳的胺基酸基團係如以下：酸性基團=天冬胺酸、麩胺酸；鹼性 基團=離胺酸、精胺酸、組胺酸；非極性基團=丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、脯胺酸、苯丙胺酸、甲硫胺酸、色胺酸；及非帶電極性家族=甘胺酸、天冬醯胺、麩醯胺酸、半胱胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸。其他適合的胺基酸基團係如下：脂肪族羥基團=絲胺酸及蘇胺酸；含醯胺基的基團=天冬醯胺及麩醯胺酸；脂肪族基團=丙胺酸、纈胺酸、白胺酸及異白胺酸；以及芳香族基團=苯丙胺酸、色胺酸及酪胺酸。該胺基酸取代係於不使具有原本胺基酸序列的物質之特性降低的範圍內進行者為較佳。
藉由組合與上述之重鏈胺基酸序列及輕鏈胺基酸序列呈現高同源性的序列，而可選擇具有與上述各抗體同等生物活性的抗體。如此之同源性，一般而言為80%以上之同源性，較佳為90%以上之同源性，更佳為95%以上之同源性，最佳為99%以上之同源性。又，藉由組合於重鏈或輕鏈之胺基酸序列中有1至數個之胺基酸殘基被取代、刪除或添加的胺基酸序列，而亦可選擇具有與上述各抗體同等生物活性的抗體。又，本說明書中的「同源性」係以與「相同性」相同的意義使用。
二種類之胺基酸序列間之同源性係可藉由使用Blast algorithm第2.2.2版(Altschul,Stephen F.,Thomas L.Madden,Alejandro A.Schaeffer,Jinghui Zhang,Zheng Zhang,Webb Miller,and David J.Lipman(1997),「Gapped BLAST and PSI-BLAST：a new generation of protein database search programs」,Nucleic Acids Res.25：3389-3402)之系統內定參數(default parameter)而決定。Blast algorithm亦可藉由於網際網路存取www.ncbi.nlm.nih.gov/blast而使用。
就本發明之抗體而言，進一步可列舉與HER2結合的人類抗體。抗HER2人類抗體係意指僅具有來自人類染色體之抗體之基因序列的人類抗體。抗HER2人類抗體可藉由使用具有含人類抗體之重鏈與輕鏈之基因的人類染色體片段的人類抗體產生小鼠的方法(參照Tomizuka,K.et al.,Nature Genetics(1997)16,p.133-143；Kuroiwa,Y.et.al.,Nucl.Acids Res(1998)26,p.3447-3448；Yoshida,H.et.al.,Animal Cell Technology：Basic and Applied Aspects vol.10,p.69-73(Kitagawa,Y.,Matsuda,T.and Iijima,S.eds.),Kluwer Academic Publishers,1999；Tomizuka,K.et.al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA(2000)97,p.722-727等)而取得。
此類人類抗體產生小鼠，具體而言，作為將內在性免疫球蛋白重鏈及輕鏈之基因座破壞、取而代之以通過酵母人工染色體(Yeast artificial chromosome，YAC)載體等而導入人類免疫球蛋白重鏈及輕鏈之基因座的重組動物，可藉由基因剔除動物及基因轉殖動物之製作及使此等動物彼此交配而作出。
又，利用基因重組技術，藉由各自編碼此類人類抗體之重鏈及輕鏈的cDNA，較佳為藉由含該cDNA的載體，而將真核細胞轉形，培養產生基因重組人類單株抗體 的轉形細胞，藉此亦可自培養上清液中獲得此抗體。
其中，作為宿主，例如可使用真核細胞，較佳為CHO細胞、淋巴球或骨髓瘤等之哺乳動物細胞。
又，亦已知取得自人類抗體庫選出之來自噬菌體顯示的人類抗體的方法(參照Wormstone,I.M.et.al.,Investigative Ophthalmology & Visual Science (2002),43(7),p.2301-2308；Carmen,S.et.al.,Briefings in Functional Genomics and Proteomics(2002),1(2),p.189-203；Siriwardena,D.et.al.,Ophthalmology(2002),109(3),p.427-431等)。
例如，可使用使人類抗體之可變區作為單鏈抗體(scFv)而於噬菌體表面表現，而選擇與抗原結合的噬菌體的噬菌體顯示法(Nature Biotechnology(2005),23(9),p.1105-1116)。
藉由解析以與抗原結合而選擇的噬菌體之基因，可決定編碼與抗原結合的人類抗體之可變區的DNA序列。
若與抗原結合的scFv之DNA序列變得清楚，則可藉由製作具有該序列的表現載體，導入於適當宿主而使其表現，來取得人類抗體(國際公開第92/01047號、國際公開第92/20791號、國際公開第93/06213號、國際公開第93/11236號、國際公開第93/19172號、國際公開第95/01438號、國際公開第95/15388號；Annu.Rev.Immunol(1994)12，p.433-455；Nature Biotechnology(2005)23(9)，p.1105-1116)。
就比較抗體性質之際之其他指標之一例而言 ，可列舉抗體之安定性。示差掃描熱析儀(DSC)係可快速又正確地測量成為蛋白質之相對的結構安定性良好指標的熱變性中點(Tm)的裝置。藉由使用DSC測量Tm值，比較其值，可比較熱安定性之差異。已知抗體之保存安定性呈現與抗體之熱安定性有某程度之相關(Lori Burton,et.al.,Pharmaceutical Development and Technology(2007),12,p.265-273)，可將熱安定性作為指標而選擇適合的抗體。就用以選擇抗體的其他指標而言，可列舉於適當宿主細胞中的產量高、及水溶液中之凝集性低。例如，產量最高的抗體不一定呈現最高的熱安定性，因此基於以上所述指標而綜合地判斷，有必要選出最適合對人類投予之抗體。
本發明之抗體亦包含抗體之修飾體。該修飾體係意指對本發明之抗體施予化學或生物學性修飾者。化學性修飾體係包含對胺基酸骨架之化學部分之鍵結、N-鍵結或O-鍵結碳水化物鏈之化學修飾體等。生物學性修飾體包含施予轉譯後修飾(例如，對N-鍵結或O-鍵結之糖鏈附加、N末端或C末端之加工、脫醯胺化、天冬胺酸之異構化、甲硫胺酸之氧化)者、藉由使用原核生物宿主細胞表現，而於N末端附加甲硫胺酸殘基者等。又，為了可進行本發明之抗體或抗原之檢測或單離而被標識者，例如，酵素標識體、螢光標識體、親和性標識體亦包含於該修飾物之意義。此類本發明之抗體之修飾物係有用於抗體的安定性及血中滯留性之改善、抗原性之減輕、抗體或抗原之檢出或單離等。
又，藉由調節與本發明之抗體結合的糖鏈修飾(糖苷化(glycosylation)、脫岩藻糖(fucose)化等)，可增強抗體依賴性細胞傷害活性。就抗體之糖鏈修飾之調節技術而言，已知有國際公開第99/54342號、國際公開第00/61739號、國際公開第02/31140號等，但未限定於此等。本發明之抗體亦包含該糖鏈修飾被調節的抗體。
一旦單離抗體基因後，導入適當宿主而製作抗體的情形，可使用適當的宿主與表現載體之組合。就抗體基因之具體例而言，可列舉將編碼本說明書記載的抗體之重鏈序列的基因、及編碼輕鏈序列的基因加以組合者。將宿主細胞轉形之際，重鏈序列基因與輕鏈序列基因可被插入相同表現載體，又亦可被插入各別表現載體。
將真核細胞作為宿主使用的情形，可使用動物細胞、植物細胞、真核微生物。尤其就動物細胞而言，可列舉哺乳類細胞，例如，為猴細胞的COS細胞(Gluzman,Y.Cell(1981),23,p.175-182，ATCC CRL-1650)、小鼠纖維母細胞NIH3T3(ATCC No.CRL-1658)或中國倉鼠卵巢細胞(CHO細胞，ATCC CCL-61)之二氫葉酸還原酵素缺損株(Urlaub,G.and Chasin,L.A.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.(1980),77,p.4126-4220)。
使用原核細胞的情形，例如，可列舉大腸桿菌、枯草桿菌。
藉由轉形而於此等之細胞中導入作為目的之抗體基因，並藉由將經轉形的細胞於活體外培養，可獲得抗體。於該培養，有依抗體之序列而產量不同的情形，可自 具有同等結合活性的抗體之中，以產量作為指標而選出容易作為醫藥生產者。據此，本發明之抗體亦包含藉由下列抗體之製造方法所獲得的抗體，該方法之特徵為包含：培養上述經轉形的宿主細胞的步驟、及自該步驟所獲得的培養物採收目的之抗體或該抗體的機能性片段的步驟。
已知哺乳類培養細胞所生產的抗體之重鏈之羧基末端的離胺酸殘基缺失(Journal of Chromatography A,705：129-134(1995))，又，已知相同重鏈羧基末端之甘胺酸、離胺酸之2個胺基酸殘基缺失，且新位於羧基末端的脯胺酸殘基經醯胺化(Analytical Biochemistry,360：75-83(2007))。然而，此等重鏈序列之缺失及修飾對於抗體之抗原結合能力及效應子機能(補體之活性化或抗體依賴性細胞毒性作用等)並無影響。據此，本發明之抗體亦包含受該修飾的抗體及該抗體之機能性片段，亦包含於重鏈羧基末端有1或2個之胺基酸缺失的缺失體、及經醯胺化的該缺失體(例如，羧基末端部位之脯胺酸殘基經醯胺化的重鏈)等。惟，只要保有抗原結合能力及效應子機能，本發明之抗體之重鏈之羧基末端的缺失體並未限於上述種類。構成本發明之抗體的2股重鏈可為選自包含完全長度及上述之缺失體之群組的重鏈之任一種，亦可組合任二種。各缺失體之量比係可受產生本發明之抗體的哺乳類培養細胞之種類及培養條件的影響，但就本發明之抗體之主成分而言，可列舉於2股重鏈之雙方，羧基末端之一個胺基酸殘基缺失的情形。
就本發明之抗體之同型而言，例如，可列舉IgG(IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)等，但較佳可列舉IgG1或IgG2。
就抗體之生物活性而言，一般可列舉抗原結合活性、藉由與抗原結合而內在化至表現該抗原的細胞中的活性、中和抗原之活性的活性、增強抗原之活性的活性、抗體依賴性細胞傷害(ADCC)活性、補體依賴性細胞傷害(CDC)活性及抗體依賴性細胞媒介吞噬作用(ADCP)，但本發明之抗體所具有的生物活性係對HER2的結合活性，較佳為藉由與HER2結合而內在化至HER2表現細胞中的活性。再者，本發明之抗體除了細胞內在化活性之外，亦可兼具ADCC活性、CDC活性及/或ADCP活性。
獲得的抗體可純化至均一。抗體之分離、純化只要使用通常之蛋白質所使用的分離、純化方法即可。例如，只要適宜選擇管柱層析、過濾器過濾、超過濾、鹽析、透析、調製用聚丙烯醯胺膠體電泳、等電點電泳等加以組合，即可將抗體分離、純化(Strategies for Protein Purification and Characterization：A Laboratory Course Manual,Daniel R.Marshak et al.eds.,Cold Spring Harbor Laboratory Press(1996)；Antibodies：A Laboratory Manual.Ed Harlow and David Lane,Cold Spring Harbor Laboratory(1988))，但未限定於此等。
就層析而言，可列舉親和性層析、離子交換層析、疏水性層析、膠體過濾層析、逆相層析、吸附層析等。
此等之層析可使用HPLC或FPLC等之液相層析來進行。
就用於親和性層析所使用的管柱而言，可列舉蛋白質A管柱、蛋白質G管柱。例如，就使用蛋白質A管柱的管柱而言，可列舉Hyper D、POROS、Sepharose F.F.(Pharmacia公司)等。
又亦可使用將抗原固定化的載體(carrier)，利用對抗原之結合性而純化抗體。
抗體-藥物結合物中的抗體係可以腫瘤細胞為標的的抗體即可。即，具備可辨識腫瘤細胞的特性、可與腫瘤細胞結合的特性、被攝入腫瘤細胞內而內在化的特性即可，進一步若亦具備對腫瘤細胞的殺細胞活性的抗體為更佳。將此種抗體藉由本發明之連接物結構而使與抗腫瘤性藥物結合，可獲得優異的抗體-藥物結合物。即，本發明之抗體-藥物結合物所使用的抗體係未限定於抗HER2抗體，例如，可例示抗A33抗體、抗B7-H3抗體、抗CanAg抗體、抗CD20抗體、抗CD22抗體、抗CD30抗體、抗CD33抗體、抗CD56抗體、抗CD70抗體、抗CD98抗體、抗CEA抗體、抗Cripto抗體、抗EphA2抗體、抗G250抗體、抗GPNMB抗體、抗HER3抗體、抗整合蛋白(Integrin)抗體、抗間皮素(Mesothelin)抗體、抗MUC1抗體、抗體PSMA抗體、抗SLC44A4抗體、抗肌腱蛋白(Tenascin)-C抗體、抗TROP2抗體，但未限定於此等。
[抗腫瘤性化合物]
茲描述於本發明之抗HER2抗體-藥物結合物所結合 的抗腫瘤性化合物。就本發明所使用的抗腫瘤性化合物而言，只要為具有抗腫瘤效果的化合物，且具有可與連接物結構結合的取代基、部分結構者即可，並未特別限制。抗腫瘤性化合物係連接物之一部份或全部於腫瘤細胞內被切斷，抗腫瘤性化合物部分游離，而表現抗腫瘤效果。若連接物與藥物結合部分被切斷，則抗腫瘤性化合物以未修飾的結構游離，而發揮其本來之抗腫瘤效果。
就本發明所使用的抗腫瘤性化合物而言，較佳可使用為喜樹鹼衍生物的依喜替康((1S,9S)-1-胺基-9-乙基-5-氟-2,3-二氫-9-羥基-4-甲基-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-10,13(9H,15H)-二酮；下式：)
此依喜替康雖具有優異的抗腫瘤活性，但尚 未作為抗腫瘤藥被市售。該化合物可以周知方法容易地取得，且可適合使用1位之胺基作為對連接物結構之結合部位。又，依喜替康亦有連接物之一部份為結合狀態下於腫瘤細胞內游離的情形，但其係即使為如此的結構，亦發揮優異抗腫瘤效果的優異化合物。
已知依喜替康因具有喜樹鹼結構，於酸性水性介質中(例如，pH3左右)平衡偏向有內酯環形成的結構(閉環體)，另一方面，於鹼性水性介質中(例如，pH10左右)平衡偏向內酯環為開環的結構(開環體)。即使為導入對應如此的閉環結構及開環結構的依喜替康殘基的藥物結合物，亦被期待同等之抗腫瘤效果，不用說，任一者之狀態亦被包含於本發明之範圍。
就其他之抗腫瘤性化合物而言，例如，可列舉阿黴素(Doxorubicin)、柔紅黴素(Daunorubicin)、絲裂黴素C(Mitomycin C)、博來黴素(Bleomycin)、環胞苷(Cyclocytidine)、長春新鹼(Vincristine)、長春鹼(Vinblastine)、甲氨蝶呤(Methotrexate)、白金系抗腫瘤劑(順鉑(Cisplatin)或其衍生物)、塔克素(Taxol)或其衍生物、其他之喜樹鹼或其衍生物(特開平6-87746號公報記載的抗腫瘤劑)等。
於抗體-藥物結合物，對抗體1分子之藥物之結合數係影響其有效性、安全性的重要因子。抗體-藥物結合物之製造係以藥物之結合數成為一定數目的方式，規定反應的原料、試藥之使用量等之反應條件而實施，但與低分子化合物之化學反應不同，通常係作為結合相 異數目的藥物之混合物而獲得。對抗體1分子之藥物結合數係標記平均值，即，被特定為平均藥物結合數。本發明原則上，除非另有指定，即，除了表示於具有相異藥物結合數的抗體-藥物結合物混合物中所含之具有特定藥物結合數的抗體-藥物結合物的情形，藥物之結合數係意指平均值。
依喜替康對抗體分子之結合數係可控制，就每1抗體之藥物平均結合數而言，可使1至10個左右的依喜替康結合，但較佳為2至8個，更佳為3至8個。又，若為本技術領域者，由本案實施例之記載，可設計使必要數目的藥物結合於抗體的反應，可取得控制依喜替康之結合數的抗體-藥物結合物。
[連接物結構]
1.連接物
以下描述本發明之連接物，本發明之連接物係具有下式之任一者的結構：-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-或-L1-L2-LP-。
抗體係於L1之末端、與L2結合的相反側之末端結合。抗腫瘤性藥物係於Lc之末端、與Lb結合的相反側的末端結合；或於LP之末端、與L2結合的相反側之末端結合。
連接物之-NH-(CH2)n1-所示的結構部分，n1係0至6之整數，但較佳為1至5之整數，更佳為1至3。此部分之胺基部分結合於LP之C末端。
2.LP
LP係胺基酸2至8之胜肽所構成的連接物。構成胜肽 的胺基酸係苯丙胺酸(Phe；F)、白胺酸(Leu；L)、甘胺酸(Gly；G)、丙胺酸(Ala；A)、纈胺酸(Val；V)、瓜胺酸(Cit)等之胺基酸即可。又，可為具有親水性結構部分的親水性胺基酸，亦可為天冬胺酸(Asp；D)、麩胺酸(Glu；E)、離胺酸(Lys；K)、絲胺酸(Ser；S)、蘇胺酸(THr；T)、麩醯胺酸(Gln；Q)、天冬醯胺(Asn；N)、組胺酸(His；H)、酪胺酸(Tyr；Y)、或精胺酸(Arg；R)。構成LP的胺基酸可為L-或D-胺基酸之任一者，但較佳為L-胺基酸。又，除α-胺基酸之外，可為β-丙胺酸、ε-胺基己酸、γ-胺基酪酸等，又可為例如，α-胺基經N-甲基化的胺基酸等之非天然型之胺基酸。此等之胺基酸中較佳可列舉苯丙胺酸、甘胺酸、纈胺酸、離胺酸、瓜胺酸、絲胺酸、麩胺酸、天冬胺酸。
作為LP之較佳序列，可列舉為三胜肽的GFG、四胜肽的GGFG。其中以GGFG為更佳。
此等之連接物，尤其關於GGFG連接物，藉由構成的胺基酸之取代或添加可變換為其他序列之連接物。作為此等取代或添加用之胺基酸，可適合使用親水性胺基酸。就親水性胺基酸而言，使用上述所示者即可，但較佳可列舉天冬胺酸、麩胺酸、離胺酸、絲胺酸。就附加親水性胺基酸的序列而言，可列舉於胜肽連接物之N末端添加1或2個胺基酸的序列。添加2個之親水性胺基酸的情形，其中1個為天冬胺酸較佳。作為此等序列，可列舉DGGFG、KGGFG、EGGFG、SGGFG、DDGGFG、KDGGFG、EDGGFG、SDGGFG。又，去除此等之C末端之甘胺酸 的胜肽亦可適合地使用，其中以DGGF為較佳，此等尤以連接物為-L1-L2-LP-所示的結構的情形較佳。
絲胺酸可與連接物之C末端結合。例如，可列舉GGFGS、DGGFS。
又，甘胺酸亦被分類為親水性胺基酸，已知即使為親水性，但可使2或3個以上之甘胺酸連續而結合的胜肽結合。就如此甘胺酸之態樣而言，較佳可列舉甘胺酸之二-或三-胜肽。就含如此序列的胜肽連接物而言，尤以C末端存有該序列者為較佳，例如，可列舉GGFGG、GGFGGG。於具有如此甘胺酸殘基的胜肽，進一步可使C末端與胺基酸結合，可例示GGFGGE、GGFGGGFG等。
就胜肽連接物之最小者而言，可列舉含具有親水性結構的離胺酸的二胜肽之VK之外、VC、VA。
就含D-體之胺基酸的例而言，可列舉將DGGFG之胜肽之天冬胺酸作為D-體之天冬胺酸(標記為Dd)的DdGGFG。就N-甲基胺基酸之例而言，可列舉DGGFG之自N末端第2個之甘胺酸(作為甘胺酸為第1個)之α-胺基經甲基化而變換為N-甲基甘胺酸(肌胺酸；標記為GMe)的DGMeGFG。又，關於如此成為D-體的胺基酸之選擇、經N-甲基化的胺基酸之選擇、又於如此胺基酸之胜肽內之位置之選擇，並未限定於此等之例。
由以上內容可知，於本發明，作為可較佳使用作為LP者，可列舉VK、VC、GFG、GGFG、GGFGG、GGFGS、GGFGGG、GGFGGE、GGFGGGFG、DGGF、DGGFG、DdGGFG、DGMeGFG、DGGFS、DDGGFG、KDGGFG、KGGFG 、EGGFG、或SGGFG。此等中，GGFG、GGFGG、GGFGS、GGFGGE、GDGGF、DGGFG、DdGGFG、DGMeGFG、DGGFS、DDGGFG、KDGGFG、KGGFG、EGGFG、或SGGFG為較佳。更佳為GGFG、GDGGF、DGGFG、DdGGFG、DGMeGFG、DGGFS、DDGGFG、或KDGGFG。更佳為GGFG、DGGFG、DdGGFG、或DGMeGFG。
又，連接物結構為-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-時，LP係GGFG或DGGFG為佳，GGFG為更佳。為不含-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-的-L1-L2-LP-之連接物結構時，LP係GGFG、GDGGF、DGGFG、DdGGFG、DGMeGFG、DGGFS、DDGGFG、或KDGGFG為佳，但為GGFG或含有天冬胺酸者為佳，DGGFG、DdGGFG、或DGMeGFG為較佳，GGFG或DGGFG為更佳。
3.L1
L1係-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-、-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-、或-C(=O)-(CH2)n5-C(=O)-、之各結構所示的結構之連接物。其中，n2係2至8之整數，n3係1至8之整數，n4係1至8之整數，n5係1至8之整數。
於L1之中之-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-所示的結構之連接物，『-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-』係具有下式所示的結構
此部分結構中的3位為對抗體的結合部位。又於此3位之與抗體的結合係特徵為於抗體之鉸鏈部之雙硫鍵部分形成硫醚而結合。另一方面，此結構部分之1位之氮原子係與此結構所含的連接物內存在的亞甲基之碳原子結合。即抗體-S-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-L2-係下式所示的結構：
(其中，「抗體-S-」係來自抗體)。又，n2係2至8之整數，但較佳為2至5。
L1之中之-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-所示的結構之連接物係具有親水性結構的連接物。n3係1至8之整數，但較佳為2至4，更佳為2。於此親水性結構部分之-(CH2)n3-COOH，羧基部分係可為羥基或胺基。又，L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-的情形，L2係選擇-NH-(CH2CH2-O)n6-CH2CH2-C(=O)-即可，n6係0至4為較佳。
L1之中之-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-所示的結構之連接物係亦具有親水性結構的連接物。
於L1之中之-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-所示的結構之連接物，n4係1至8之整數，但較佳為2至6。此連接物係與抗體於末端之亞甲基之碳原子上結合，但具有與先前同樣地形成硫醚而結合的下列結構(其中，「抗體-S-」係來自抗體)：抗體-S-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-L2-。
L1之中之-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-所示的結構之連接物，其中『-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-』係具有下式所示的結構：
於此結構部分，1位之氮原子係與存在於包含相同結構的連接物內的亞甲基碳原子結合。3位之碳原子係與L2中之-S-(CH2)n8-C(=O)-，於其末端之硫原子結合。又，此L2之連接物的-S-(CH2)n8-C(=O)-係僅以與L1中之-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-之組合而形成連接物結構。其中，連接物所含的『-cyc.Hex(1,4)-』表示1,4-伸環己基。連接物-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-係與抗體於末端之羰基碳形成醯胺鍵，而形成下式所示的結構：
用以形成醯胺鍵的抗體之胺基係抗體之離胺酸殘基之側鏈或抗體N末端之胺基即可。又，此連接物係除了醯胺鍵外，亦可與抗體之胺基酸所具有的羥基形成酯鍵而結合。
該連接物之『-cyc.Hex(1,4)-』結構部分係除了1,4-伸環己基之外，亦可為除此之外之2價之飽和環狀伸烷基的環伸丁基、環伸戊基、環伸庚基、環伸辛基等之2價之環狀飽和烴基。又，可為伸苯基、萘基等之2價之芳香族烴基，又，亦可為5員環、6員環之飽和、部分飽和、或芳香族的含1或2個之雜原子的2價雜環基。再者，亦可為碳數1至4之2價之伸烷基。又，2價之結合之位置係可為鄰接的位置，亦可為分離的位置，任一者皆可。
於L1之中之-C(=O)-(CH2)n5-C(=O)-所示的結構之連接物，n5係1至8之整數，但較佳為2至6。此連接物亦與上述之連接物同樣地，於末端之羰基與抗體之胺基酸之胺基形成醯胺鍵，而形成下式所示的結構：抗體-NH-C(=O)-(CH2)n5-C(=O)-L2-。
(於該結構，「抗體-NH-」係來自抗體)。
就L1之具體例而言，可列舉下列所示結構：-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2-C(=O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-、 -(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2-COOH)-C(=O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2-COOH)-C(=O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2CH2-COOH)-C(=O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2CH2CH2-COOH)-C(=O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2CH2CH2CH2-COOH)-C(=O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-COOH)-C(=O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2-COOH)-C(=O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2-COOH)-C(=O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-、-CH2-C(=O)-NH-CH2-C(=O)-、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-、 -C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-、-C(=O)-Aryl(2)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-、-C(=O)-cyc.Het(2)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-、-C(=O)-CH2-C(=O)-、-C(=O)-CH2CH2-C(=O)-、-C(=O)-CH2CH2CH2-C(=O)-、-C(=O)-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-、-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-、-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-、-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-、-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-、(上述式中，Aryl(2)表示2價之芳香族烴基，cyc.Het(2)表示2價之環狀雜環基)。
此等中較佳者係以下各者；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2-C(=O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2-COOH)-C(=O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2CH2-COOH)-C(=O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2CH2CH2-COOH)-C(=O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-、 -CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-、-C(=O)-CH2CH2-C(=O)-、-C(=O)-CH2CH2CH2-C(=O)-、-C(=O)-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-、-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-、-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-。
4.L2
L2係-NH-(CH2CH2-O)n6-CH2CH2-C(=O)-、-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-、-NH-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-、-NH-[CH(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-、-NH-[CH(-CH2-COOH)]-CH2-O-CH2-(C=O)-、或-S-(CH2)n8-C(=O)-、之各結構所示的結構之連接物，或L2可不存在，此情形，L2成為單鍵。又，n6係0至6之整數，n7係1至4之整數、n8係1至6之整數。L2係除去-S-(CH2)n8-C(=O)-而具有親水性結構的連接物。
於L2之中之-NH-(CH2CH2-O)n6-CH2CH2-C(=O)-所示的結構之連接物，n6係0至6之整數，但較佳為2 至4。又，0的情形亦較佳。該連接物係於末端之胺基之氮原子與L1結合，於相反側末端之羰基與LP之N末端結合。又，L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-時，L2之中之僅-NH-(CH2CH2-O)n6-CH2CH2-C(=O)-結合，且n6成為0。
L2係可為-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-(C(=O)-所示的結構之連接物。其中，n7為1至4之整數，但較佳為3或4。該連接物係於末端之胺基與連接物L1結合，於相反側的末端之羰基與連接物LP之N末端結合。
再者作為L2，可列舉-NH-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-、-NH-[CH(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-、或-NH-[CH(-CH2-COOH)]-CH2-O-CH2-(C=O)-之結構之連接物。任一者亦於末端之胺基與連接物L1結合，於相反側的末端之羰基與連接物LP之N末端結合。
於L2之中之-S-(CH2)n8-C(=O)-，n8為1至6之整數，但較佳為2至4。
就連接物L2之具體例而言，可列舉下列所示結構：-NH-CH2CH2-C(=O)-、-NH-CH2CH2O-CH2CH2-C(=O)-、-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(=O)-、-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(=O)-、-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(=O)-、-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2C H2O-CH2CH2-C(=O)-、-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(=O)-、-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-、-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-、-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-、-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-、-NH-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-、-NH-[CH(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-、-NH-[CH(-CH2-COOH)]-CH2-O-CH2-(C=O)-。
此等中較佳為以下各者；-NH-CH2CH2-C(=O)-、-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(=O)-、-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(=O)-、-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(=O)-、-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-、-N(-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-、-NH-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-、-NH-[CH(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-、-NH-[CH(-CH2-COOH)]-CH2-O-CH2-(C=O)-。
又L2為-S-(CH2)n8-C(=O)-的情形，經組合的L1係-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-，故就-L1-L2-連接物之具體例而言，可列舉下列所示結構：-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2-C(=O)-、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2CH2-C(=O)-、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-。
此等中較佳為以下各者；-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2CH2-C(=O)-、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-。
5.La
La係-C(=O)-NH-、-NR1-(CH2)n9-、-O-之各結構之任一者、或單鍵。n9係1至6之整數，R1係氫原子、碳數1至 6之烷基、-(CH2)na-COOH、或-(CH2)nb-OH，na係1至4之整數，nb係1至6之整數。
La之中之醯胺結構的-C(=O)-NH-係氮原子側與Lb結合。於La之中之-NR1-(CH2)n9-的結構部分，n9係1至6之整數，較佳為1至3。該部分係亞甲基側與Lb結合。
R1係氫原子或可成為碳數1至6之烷基，但碳數1至6之烷基的情形，可為直鏈狀亦可為分支鏈狀。例如，可列舉甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、二級丁基、三級丁基、戊基、異戊基、2-甲基丁基、新戊基、1-乙基丙基、己基、異己基、4-甲基戊基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、3,3-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2,3-二甲基丁基及2-乙基丁基等。此等中，較佳為甲基或乙基。
R1為-(CH2)na-COOH所示的結構時，na為整數之1至4，但較佳為1或2。
R1為-(CH2)nb-OH所示的結構時，nb為1至6之整數，但較佳為1或2。
就R1而言，氫原子、甲基、乙基、-CH2-COOH、-CH2CH2-COOH、或-CH2CH2-OH為較佳，更佳為氫原子、甲基、-CH2-COOH。更佳為氫原子。
又，La可為-O-、或單鍵。
5.Lb
Lb係-CR2(-R3)-、-O-、-NR4-之各結構之任一者，或單鍵。其中，R2及R3係各自獨立地表示氫原子、碳數1 至6之烷基、-(CH2)nc-NH2、-(CH2)nd-COOH、或-(CH2)ne-OH，R4係氫原子或碳數1至6之烷基，nc係整數之0至6，nd係整數之1至4，ne係整數之0至4，但nc或ne為0時，R2及R3不成為相同。
R2及R3為烷基時，此烷基係與R1中的烷基同樣地被定義的烷基。R2及R3為-(CH2)nc-NH2之結構時，nc係0至6之整數，但較佳為0，或3至5。又，nc為0時，R2及R3不成為相同。R2及R3為-(CH2)nd-COOH之結構時，nd係整數之1至4，但較佳為1或2。R2及R3為-(CH2)ne-OH之結構時，ne係整數之0至4，但較佳為1或2。
作為R2及R3，較佳為氫原子、甲基、乙基、-NH2、-CH2CH2CH2-NH2、-CH2CH2CH2CH2-NH2、-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-NH2、-CH2-COOH、-CH2CH2-COOH、-CH2-OH、或-CH2CH2-OH為較佳，更佳為氫原子、甲基、-NH2、-CH2CH2CH2CH2-NH2、-CH2-COOH、-CH2CH2-COOH、-CH2-OH、或-CH2CH2-OH。更佳為氫原子。
R4為碳數1至6之烷基時，此烷基係與R1中的烷基同樣地被定義的烷基。就R4而言，氫原子或甲基為較佳，更佳為氫原子。
就連接物之-NH-(CH2)n1-La-Lb-所示的結構之具體例而言，可列舉下列所示結構：-NH-CH2-、-NH-CH(-Me)-、-NH-C(-Me)2-、-NH-CH2-CH(-Me)-、 -NH-CH(-CH2-OH)-、-NH-CH(-CH2-COOH)-、-NH-CH(-CH2CH2-COOH)-、-NH-CH(-CH2CH2CH2CH2-NH2)-、-NH-CH2CH2-、-NH-CH2-O-CH2-、-NH-CH2CH2-O-、-NH-CH2CH2-O-CH2-、-NH-CH2CH2C(-Me)2-、-NH-CH2CH2-NH-、-NH-CH2CH2-NH-CH2-、-NH-CH2CH2-N(-Me)-CH2-、-NH-CH2CH2-N(-Me)-CH2CH2-、-NH-CH2CH2-NH-CH2CH2-、-NH-CH2CH2-N(-Me)-CH2CH2-、-NH-CH2CH2-N(-CH2-COOH)-CH2-、-NH-CH2CH2-N(-CH2COOH)-CH2CH2-、-NH-CH2CH2-N(-CH2CH2-OH)-CH2-、-NH-CH2CH2-N(-CH2CH2-OH)-CH2CH2-、-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH(-CH2-OH)-、-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH(-CH2-COOH)-、-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH(-CH2CH2CH2CH2-NH2)-、-NH-CH2CH2CH2-、-NH-CH2CH2CH2CH2-、 -NH-CH2CH2CH2CH2CH2-、-NH-CH2CH2CH2CH2CH(-NH2)-。
此等之中較佳為下列所示結構：-NH-CH2-、-NH-CH2-CH(-Me)-、-NH-CH(-CH2-OH)-、-NH-CH(-CH2CH2-COOH)-、-NH-CH2CH2-、-NH-CH2-O-CH2-、-NH-CH2CH2-O-、-NH-CH2CH2-O-CH2-、-NH-CH2CH2C(-Me)2-、-NH-CH2CH2-NH-、-NH-CH2CH2-NH-CH2-、-NH-CH2CH2-N(-Me)-CH2-、-NH-CH2CH2-N(-Me)-CH2CH2-、-NH-CH2CH2-N(-CH2-COOH)-CH2-、-NH-CH2CH2-N(-CH2CH2-OH)-CH2-、-NH-CH2CH2-N(-CH2CH2-OH)-CH2CH2-、-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH(-CH2-OH)-、-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH(-CH2-COOH)-、-NH-CH2CH2CH2-、-NH-CH2CH2CH2CH2-、-NH-CH2CH2CH2CH2CH2-。
更佳為下列所示結構： -NH-CH2-、-NH-CH2CH2-、-NH-CH2-O-CH2-、-NH-CH2CH2-O-、-NH-CH2CH2-O-CH2-、-NH-CH2CH2-NH-、-NH-CH2CH2-NH-CH2-、-NH-CH2CH2-N(-CH2-COOH)-CH2-、-NH-CH2CH2-N(-CH2CH2-OH)-CH2CH2-、-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH(-CH2-COOH)-、-NH-CH2CH2CH2-、-NH-CH2CH2CH2CH2-、-NH-CH2CH2CH2CH2CH2-。
更佳為下列所示結構：-NH-CH2-、-NH-CH2CH2-、-NH-CH2CH2CH2-、-NH-CH2-O-CH2-、-NH-CH2CH2-O-CH2-。
6.Lc
Lc係-CH2-或-C(=O)-所示的結構。於該連接物與抗腫瘤性化合物結合。作為連接物之Lc，-C(=O)-為更佳。
7.連接物與藥物活性
可推測本發明之抗體-藥物結合物係移動至腫瘤細胞內後，連接物部分被切斷，NH2-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-D X)所示的結構之藥物衍生物游離而表現抗腫瘤作用。就自本發明之抗體-藥物結合物游離的表現抗腫瘤效果的抗腫瘤性衍生物而言，可列舉使先前舉例的連接物之-NH-(CH2)n1-La-Lb-所示的結構與Lc結合，具有末端成為胺基的結構部分的抗腫瘤性衍生物，但特佳為下列各者：NH2-CH2-C(=O)-(NH-DX)、NH2-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、NH2-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、NH2-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、NH2-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)。
又，NH2-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)之情形，因相同分子內的縮醛胺(aminal)結構不安定，進一步自己分解，HO-CH2-C(=O)-(NH-DX)
被游離。此等之化合物亦可適合使用作為本發明之抗體-藥物結合物之製造中間體。
8.-L1-L2-LP-或-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-
於本發明之抗體-藥物結合物，藥物-連接物結構部分係每1抗體之平均結合數，使結合1至10即可，但較佳為2至8，更佳為3至8。就藥物-連接物結構部分而言，使以下記載的結構之連接物結構部分與藥物結合者為較佳。連接物之結構係可採取-L1-L2-LP-NH-(CH2)n 1-La-Lb-Lc-之結構，或與LP與藥物直接結合的-L1-L2-LP-之任一者之結構。
藥物-連接物結構部分藉由硫醚鍵而與抗體結合時 ，就L1而言，使用-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)--(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-、或-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-、所示的結構之連接物即可，使藥物-連接物結構部分藉由醯胺鍵與抗體結合時，作為L1，使用-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-或-C(=O)-(CH2)n5-C(=O)-、所示的結構之連接物即可。
L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-時，L2為單鍵或-NH-(CH2CH2-O)n6-CH2CH2-C(=O)-、-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-、-NH-[CH(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-、-NH-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-、或-NH-[CH(-CH2-COOH)]-CH2-O-CH2-(C=O)-。如此於L1、L2，作為-L1-L2-LP-，具體而言，可列舉下列所示結構：-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2- C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-LP-、-L1-NH-CH2CH2-C(=O)-LP-、-L1-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-LP-、-L1-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-LP-、-L1-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-LP-、-L1-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-LP-、-L1-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-LP-、-L1-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-LP-、-L1-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-LP-、-L1-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2-CH2-C(=O)-LP-、-L1-N[-CH2CH2-O-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-LP-、-L1-N[-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-LP-、-L1-N[-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-LP-、-L1-N[-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O- CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-LP-、-L1-NH-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-LP-、-L1-NH-[CH(-CH2-COOH)]-CH2-O-CH2-(C=O)-LP-。
其中，L1係n2為2或3的下列所示結構者為較佳：-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-、或-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-
據此，就-L1-L2-LP-而言，具有如下列結構之L1的下列所示結構者為較佳；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2-CH2-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH2-CH2-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2-CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-N H-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2-CH2-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-N[-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-N[-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-N[-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-N[-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-N[-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-N[-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-[CH(-CH2-COOH)]-CH2-O-CH2-(C=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-[CH(-CH2-COOH)]-CH2-O-CH2-(C=O)-LP-。
此等中更佳為下列所示結構；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2-CH2-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH2-CH2-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2-CH2-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-N[-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-N[-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-N[-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-N[-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-N[-CH2CH2- O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-N[-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-[CH(-CH2-COOH)]-CH2-O-CH2-(C=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-[CH(-CH2-COOH)]-CH2-O-CH2-(C=O)-LP-。
L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-時，L2為單鍵或-NH-(CH2CH2-O)n6-CH2CH2-C(=O)-。於如此L1、L2，作為-L1-L2-LP-，具體而言，下列所示結構為較佳：-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2-COOH)-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2-COOH)-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2CH2-COOH)-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2CH2CH2-COOH)-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2CH2CH2CH2-CO OH)-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-COOH)-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2-COOH)-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2-COOH)-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-LP-、此等中較佳為n3係2至4的下列所示結構：-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2-COOH)-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2CH2-COOH)-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2CH2CH2-COOH)-C(=O)-LP-、 -(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2-COOH)-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2-COOH)-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2-COOH)-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2-COOH)-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2-COOH)-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2-CH2-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2CH2-COOH)-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2-COOH)-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2CH2-COOH)-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2CH2-COOH)-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2-CH2-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2CH2-COOH)-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2-CH2-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2CH2CH2-COOH)-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-LP-、 -(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2CH2CH2-COOH)-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2CH2CH2-COOH)-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2CH2CH2-COOH)-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2-CH2-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2CH2CH2-COOH)-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2-CH2-C(=O)-LP-、此等中更佳為n3為2的下列所示結構所示者：-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2-COOH)-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2-COOH)-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2-COOH)-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2-COOH)-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2-COOH)-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2-COOH)-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-LP-、又，n6為0的態樣亦較佳，即 -(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-NH-CH2-CH2-C(=O)-LP-
之結構所示者為較佳，具體而言，下列所示結構所示者為較佳：-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2-COOH)-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2CH2-COOH)-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-LP-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2CH2CH2-COOH)-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-LP-、L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-時，L2可為單鍵。於如此L1、L2，作為-L1-L2-LP-，具體而言，為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-LP-所示的結構。
L1為-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-時，L2可為單鍵。於如此L1、L2，作為L1-L2-LP-，具體而言係下列所示結構：-CH2-C(=O)-NH-CH2-C(=O)-LP-、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-LP-、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-LP-、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-LP-、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-LP-、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-LP-、 -CH2-C(=O)-NH-CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-LP-、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-LP-。
L1為-C(=O)-(CH2)n5-C(=O)-時，L2為選自-NH-(CH2CH2-O)n6-CH2CH2-C(=O)-或單鍵。於如此L1、L2，作為-L1-L2-LP-，具體而言，下列所示結構：-C(=O)-CH2-C(=O)-LP-、-C(=O)-CH2CH2-C(=O)-LP-、-C(=O)-CH2CH2CH2-C(=O)-LP-、-C(=O)-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-LP-、-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-LP-、-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-LP-、-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-LP-、-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-LP-、-C(=O)-(CH2)n5-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-LP-、-C(=O)-(CH2)n5-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-LP-、-C(=O)-(CH2)n5-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-LP-、-C(=O)-(CH2)n5-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-LP-、-C(=O)-(CH2)n5-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-LP-、-C(=O)-(CH2)n5-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-C H2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-LP-、-C(=O)-(CH2)n5-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-LP-、-C(=O)-(CH2)n5-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-LP-、-C(=O)-(CH2)n5-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2-H2-O-CH2-H2-O-CH2-H2-O-CH2-CH2-C(=O)-LP-、再者，L2為-S-(CH2)n8-C(=O)-所示的結構之連接物係以與L1之中之-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-之組合而使用。於如此L1、L2，作為-L1-L2-LP-，具體而言，為下列所示結構：-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2-C(=O)-LP-、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-LP-、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2CH2-C(=O)-LP-、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-LP-、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-LP-、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-C H2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-LP-。
於上述之各連接物結構，就LP部分而言，選自包含VK、VC、GFG、GGFG、GGFGG、GGFGS、GGFGGG、GGFGGE、GGFGGGFG、DGGF、DGGFG、DdGGFG、DGMeGFG、DGGFS、DDGGFG、KDGGFG、KGGFG、EGGFG、及SGGFG的群組的胜肽即可。此等LP之中，GGFG、GGFGG、GGFGS、GGFGGE、GDGGF、DGGFG、DdGGFG、DGMeGFG、DGGFS、DDGGFG、KDGGFG、KGGFG、EGGFG、或SGGFG為較佳。更佳為GGFG、GDGGF、DGGFG、DdGGFG、DGMeGFG、DGGFS、DDGGFG、或KDGGFG。更佳為GGFG、DGGFG、DdGGFG、或DGMeGFG。
又，對上述之-L1-L2-LP-，-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-部分結合的情形，-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-部分係3至7原子的鏈長的情形為較佳。更佳為4至7原子的鏈長的情形，更佳為5或6原子之鏈長。連接物之-NH-(CH2)n1-La-Lb-部分之具體例，如先前說明，但-NH-CH2CH2-C(=O)-、-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-、-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-、或-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-為特佳者。
[連接物-藥物結構]
於本發明之ADC，使具有以下所示各結構的連接物-藥物部分與抗體結合，可獲得表現優異特性的ADC。
a.為藉由雙硫鍵使與抗體結合之具有-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)之結構的連接物-藥物部分，作為該LP為GGFG的結構之連接物-藥物部分為優異者係如以下； -(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)。
b.為藉由雙硫鍵使與抗體結合之具有-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)之結構的連接物-藥物部分，該LP為GGFG，又作為於-La-Lb-Lc-具有烷基分支鏈的結構之連接物-藥物部分為優異者係如以下；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CMe(-H)-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH(-Me)-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2C(-Me)2-C(=O)-(NH-DX)。
c.為藉由雙硫鍵使與抗體結合之具有-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)之結構的連接物-藥物部分，該LP為GGFG，又作為於-La-Lb-Lc-具有氮原子的結構之連接物-藥物部分為優異者係如以下；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-NH-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-NH-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-G GFG-NH-CH2CH2-N(-Me)-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-N(-Me)-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)。
d.為藉由雙硫鍵使與抗體結合之具有-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)之結構的連接物-藥物部分，該LP為GGGF，又作為具有親水性取代基的分支鏈部分的結構之連接物-藥物部分為優異者係如以下；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2-COOH)-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2-COOH)-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFG-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-N[-CH2-COOH]-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-[CH(-CH2-COOH)]-CH2-O-CH2-(C=O)-GFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-N(-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-N(-CH2CH2-OH)-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-G GFG-NH-CH2CH2-N(-CH2-COOH)-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-N(-CH2-COOH)-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH(-CH2-OH)-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH(-CH2-COOH)-C(=O)-(NH-DX)。
e.為經由醯胺鍵而使與抗體結合之具有-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)之結構的連接物-藥物部分，作為該LP為GGFG的結構之連接物-藥物部分為優異者係如以下；-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)。
f.作為藉由雙硫鍵使與抗體結合之具有-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)之結構的連接物-藥物部分，該LP為GFG的結構之連接物-藥物部分為優異者係如以下所示；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-[CH(-CH2-COOH)]-CH2-O-CH2-(C=O)-GFG-(NH-DX)。
g.作為藉由雙硫鍵使與抗體結合之具有-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)之結構的連接物-藥物部分，於該LP包含4個以上甘胺酸的結構之連接物-藥物部分為優異者係如以下；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-GGFGG-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-GGFGGG-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-GGFGGGFG-(NH-DX)。
h.為藉由雙硫鍵使與抗體結合之具有-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)之結構的連接物-藥物部分，作為於該LP之C末端具有親水性胺基酸的結構之連接物-藥物部分為優異者係如下；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-GGFGS-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-GGFGGE-(NH-DX)。
i.為藉由雙硫鍵使與抗體結合之具有-L1-L2-LP-(NH-DX)之結構的連接物-藥物部分，作為該LP為GGFG的結構之連接物-藥物部分為優異者係如以下；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-(NH-DX)。
j.為藉由雙硫鍵使與抗體結合之具有-L1-L2-LP-(NH-DX)之結構的連接物-藥物部分，該LP為GGGF，又作為具有親水性取代基的分支鏈部分的結構之連接物-藥物部分為優異者係如以下；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-GGFG-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-[CH(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-GGFG-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-GGFG-(NH-DX)。
k.為藉由醯胺鍵而使與抗體結合之具有-L1-L2-LP-(NH-DX)之結構的連接物-藥物部分，作為該LP為GGFG的結構之連接物-藥物部分為優異者係如以下；-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-GGFG-(NH-DX)。
l.為藉由雙硫鍵使與抗體結合之具有-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)之結構的連接物-藥物部分，該LP為含有親水性胺基酸之天冬胺酸、離胺酸、麩胺酸、絲胺酸的胜肽殘基，尤其作為N末端成為天冬胺酸的胜肽殘基的結構之連接物-藥物部分為優異者如以下；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、 -(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)。
-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-D GGFG-NH-CH2CH2C(Me)2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGMeGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DDGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)。
m.為藉由雙硫鍵使與抗體結合之具有-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)之結構的連接物-藥物部分，該LP為含有親水性胺基酸之天冬胺酸、離胺酸、麩胺酸、絲胺酸的胜肽殘基，尤其作為成為N末端為天冬胺酸以外之親水性胺基酸的胜肽殘基的結構之連接物-藥物部分為優異者係如以下；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-EGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KDGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)。
n.為藉由醯胺鍵而使與抗體結合之具有-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)之結構的連接物-藥物部分，該LP為含有親水性胺基酸之天冬胺酸、離胺酸、麩胺酸、絲胺酸的胜肽殘基，尤其作為含有天冬胺酸作為親水性胺基酸的胜肽殘基的結構之連接物-藥物部分為優異者係如以下； -C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)。
o.為藉由雙硫鍵使與抗體結合之具有-L1-L2-LP-(NH-DX)之結構的連接物-藥物部分，該LP為含有親水性胺基酸之天冬胺酸、離胺酸、麩胺酸、絲胺酸的胜肽殘基，尤其作為N末端成為天冬胺酸的胜肽殘基的結構之連接物-藥物部分為優異者係如以下；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-DGGFG-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2-C(=O)-NH-DGGFG-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-DGGFG-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-DdGGFG-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-DGMeGFG-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-DGGFS-(NH-DX)。
p.為藉由雙硫鍵使與抗體結合之具有-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-(NH-DX)之結構的連接物-藥物部分，該LP係含有親水性胺基酸之天冬胺酸、離胺酸、麩胺酸、絲胺酸的胜肽殘基，尤其作為N末端不成為天冬胺酸的胜肽殘基的結構之連接物-藥物部分為優異者係如以下；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-KGGFG-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-SGGFG-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-EGGFG-(NH-DX)。
q.為藉由雙硫鍵使與抗體結合之具有-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-(NH-DX)之結構的連接物-藥物部分，作為該LP為二胜肽之胜肽殘基的結構之連接物-藥物部分為優異者係如以下；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-VK-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-VC-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)。
再者，於本發明之ADC，使具有以下所示結構的連接物-藥物部分與抗體結合者為較佳。
A.關於本發明之連接物-藥物部分，LP為GGGF，作為-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)之結構之連接物-藥物部分為較佳者呈示如下。
A-1. L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C( =O)-，L2為單鍵的情形；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-CH2-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-(NH-DX)。
此等中更佳為以下各者；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-(NH-DX)。
A-2. L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-，且L2為-NH-(CH2CH2-O)n6-CH2CH2-C(=O)-的情形；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-(NH-DX)、 -(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-CH2-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-CH2-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-N H-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-(NH-DX)。
A-3. L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-，且L2為單鍵的情形；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2-COOH)-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2-COOH)-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2-COOH)-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2-COOH)-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2-COOH)-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2-COOH)-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)。
此等中更佳為以下各者；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2-COOH)-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、 -(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2-COOH)-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2-COOH)-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)。
A-4. L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-，且L2為-NH-(CH2CH2-O)n6-CH2CH2-C(=O)-的情形；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2-COOH)-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFG-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2-COOH)-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFG-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2-COOH)-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFG-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2-COOH)-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFG-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2-COOH)-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFG-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2-COOH)-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFG-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)。
此等中更佳為以下各者；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2-COOH)-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFG-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2-COOH)-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFG-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、 -(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH(-CH2CH2-COOH)-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFG-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)。
A-5. L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-，且L2為單鍵的情形；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)。
A-6. L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-，且L2為-NH-(CH2-CH2-O)n6-CH2-CH2-C(=O)-的情形；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-CH2-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2C H2-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-CH2-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-CH2-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-CH2-(NH-DX)。
A-7. L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-，且L2為單鍵，於-La-Lb-Lc-具有烷基分支鏈的情形；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CMe(-H)-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH(-Me)-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2C(-Me)2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CMe(-H)-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH(-Me)-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2C(-Me)2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CMe(-H)-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH(-Me)-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2C(-Me)2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CMe(-H)-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH(-Me)-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-G GFG-NH-CH2CH2C(-Me)2-C(=O)-(NH-DX)。
此等中較佳為以下各者；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CMe(-H)-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH(-Me)-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2C(-Me)2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CMe(-H)-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH(-Me)-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2C(-Me)2-C(=O)-(NH-DX)。
更佳為以下各者；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CMe(-H)-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH(-Me)-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2C(-Me)2-C(=O)-(NH-DX)。
A-8. L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-，且L2為單鍵，於-La-Lb-Lc-鏈具有氮原子的情形；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-NH-C(=O)-(NH-DX)、 -(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-NMe-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-NH-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-NMe-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-NMe-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-NH-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-NMe-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-NH-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-NMe-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-NMe-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)。
此等中更佳為以下各者；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-NH-C(=O)-(NH-DX)、 -(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-NMe-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-NH-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-NMe-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-NMe-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)。
A-9. L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-，且L2為單鍵，於-La-Lb-Lc-具有氮原子，且具有羥基的分支鏈部分的情形；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-N(-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-N(-CH2CH2-OH)-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-N(-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-N(-CH2CH2-OH)-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)。
此等中更佳為以下各者；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-N(-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-(NH-DX)、 -(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-N(-CH2CH2-OH)-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)。
A-10. L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-，且L2為單鍵，於-La-Lb-Lc-鏈具有氮原子，且具有羧基的分支部分的情形； -(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-N(-CH2-COOH)-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-N(-CH2-COOH)-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-N(-CH2CH2-COOH)-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-N(-CH2CH2-COOH)-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-N(-CH2-COOH)-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-N(-CH2-COOH)-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-N(-CH2CH2-COOH)-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-N(-CH2CH2-COOH)-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)。
此等中更佳為以下各者；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-N(-CH2-COOH)-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-N(-CH2-COOH)-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-N(-CH2CH2-COOH)-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-N(-CH2CH2-COOH)-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)。
更佳為以下各者；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-N(-CH2-COOH)-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-N(-CH2-COOH)-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)。
A-11. L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-，且L2為單鍵，於-La-Lb-Lc-具有具羥基或羧基的分支部分的情形；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-NH-CH(-CH2-OH)-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-NH-CH(-CH2CH2-OH)-C(=O)-(NH-DX)、 -(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-NH-CH(-CH2-COOH)-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-NH-CH(-CH2CH2-COOH)-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH(-CH2-OH)-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH(-CH2CH2-OH)-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH(-CH2-COOH)-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH(-CH2CH2-COOH)-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-NH-CH(-CH2-OH)-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-NH-CH(-CH2CH2-OH)-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-NH-CH(-CH2-COOH)-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-NH-CH(-CH2CH2-COOH)-C(=O)-(NH-DX)、 -(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH(-CH2-OH)-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH(-CH2CH2-OH)-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH(-CH2-COOH)-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH(-CH2CH2-COOH)-C(=O)-(NH-DX)。
此等中更佳為以下各者；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-NH-CH(-CH2-OH)-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-NH-CH(-CH2CH2-OH)-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-NH-CH(-CH2-COOH)-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-NH-CH(-CH2CH2-COOH)-C(=O)-(NH-DX)、 -(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH(-CH2-OH)-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH(-CH2CH2-OH)-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH(-CH2-COOH)-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH(-CH2CH2-COOH)-C(=O)-(NH-DX)。
更佳為以下各者；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH(-CH2-OH)-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH(-CH2CH2-OH)-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH(-CH2-COOH)-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH(-CH2CH2-COOH)-C(=O)-(NH-DX)。
而且其中較佳為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH(-CH2-OH)-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH(-CH2-COOH)-C(=O)-(NH-DX)。
A-12. L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-，且L2為單鍵，於-La-Lb-Lc-具有烷基分支鏈的情形；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CMe(-H)-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH(-Me)-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2C(-Me)2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CMe(-H)-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH(-Me)-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2C(-Me)2-C(=O)-(NH-DX)。
A-13. 於-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-，L1為-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-，且L2為單鍵的情形；-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2- C(=O)-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、 -CH2-C(=O)-NH-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)。
此等中以下各者為更佳；-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)。
A-14. L1為-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-，且L2為-NH-(CH2CH2-O)n6-CH2CH2-C(=O)-的情形；-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-CH2 CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C( =O)-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)。
此等中係以下各者為更佳；-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-C(=O)-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)。
A-15. L1為-C(=O)-(CH2)n5-C(=O)-，且L2為單鍵的情形；-C(=O)-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2C H2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)。
此等中係以下各者為更佳；-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)。
A-16. L1為-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-，且L2為-S-(CH2)n8-C(=O)-的情形；-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-C H2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)。
此等中係以下各者為更佳；-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)。
A-17. L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-，且L2為-NH-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-的情形；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-N(-CH2-COOH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-N(-CH2-COOH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O )-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-N(-CH2-COOH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-N(-CH2-COOH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-N(-CH2-COOH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-N(-CH2-COOH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)。
此等中係以下各者為更佳；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-N(-CH2-COOH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-N(-CH2-COOH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-N(-CH2-COOH)-CH2-C(=O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)。
A-18. L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-，且L2為-NH-[CH(-CH2-CO OH)]-CH2-O-CH2-(C=O)-的情形；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-[CH(-CH2-COOH)]-CH2-O-CH2-(C=O)-GFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-[CH(-CH2-COOH)]-CH2-O-CH2-(C=O)-GFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-[CH(-CH2-COOH)]-CH2-O-CH2-(C=O)-GFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-[CH(-CH2-COOH)]-CH2-O-CH2-(C=O)-GFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-[CH(-CH2-COOH)]-CH2-O-CH2-(C=O)-GFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-[CH(-CH2-COOH)]-CH2-O-CH2-(C=O)-GFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)。
此等中係以下各者為更佳；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-[CH(-CH2-COOH)]-CH2-O-CH2-(C=O)-GFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-[CH(-CH2-COOH)]-CH2-O-CH2-(C=O)-GFG-NH-CH2C H2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-[CH(-CH2-COOH)]-CH2-O-CH2-(C=O)-GFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)。
A-19. 又，作為與GGFG胜肽連接物類似的連接物，以下各者亦較佳。
L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-，且L2為單鍵，胜肽殘基為GFG的情形；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-[CH(-CH2-COOH)]-CH2-O-CH2-(C=O)-GFG-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-[CH(-CH2-COOH)]-CH2-O-CH2-(C=O)-GFG-(NH-DX)。
A-20. L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-，且L2為單鍵，於胜肽殘基含有4個以上之甘胺酸的情形；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-GGFGG-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-GGFGGG-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-GGFGGGFG-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-GGFGG-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-GGFGGG-(NH-DX)、 -(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-GGFGGGFG-(NH-DX)。
此等中以下各者為更佳；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-GGFGG-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-GGFGGG-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-GGFGGGFG-(NH-DX)。
A-21. L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-，且L2為單鍵，於C末端含有親水性胺基酸的情形；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-GGFGS-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-GGFGGE-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-GGFGS-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-GGFGGE-(NH-DX)。
此等中以下各者為更佳；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-GGFGS-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-GGFGGE-(NH-DX)。
B. LP為GGGF，且作為-L1-L2-LP-(NH-DX) 之結構的連接物-藥物部分為較佳者呈示如下。
B-0. L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-，L2為單鍵的情形；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-GGFG-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-GGFG-(NH-DX)。
B-1. L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-，L2為-NH-(CH2-CH2-O)n6-CH2-CH2-C(=O)-的情形；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-(NH-DX)。
此等中更佳為以下各者；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-GGFG-(NH-DX)。
B-2. L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-，L2為單鍵的情形，-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-GGFG-(NH-DX)為較佳。
B-3. L1為-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-，L2為-S-(CH2)n8-C(=O)-的情形，-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-GGFG-(NH-DX)為較佳。
B-4. L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-，L2為-NH-[CH(-CH2-COOH)]-CH2-O-CH2-(C=O)-的情形；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-[CH(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-GGFG-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-[CH(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-GGFG-(NH-DX)。
更佳為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-[CH(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-GGFG-(NH-DX)。
B-5. L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-，L2為-NH-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-的情形；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-GGFG-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-GGFG-(NH-DX)。
更佳為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-GGFG-(NH-DX)。
C. 於LP含有親水性胺基酸之天冬胺酸、離胺酸、麩胺酸、絲胺酸，尤其是天冬胺酸，且較佳作為-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)之結構的連接物-藥物部分者呈示如下。
C-1. L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-，且L2為單鍵的情形；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)。
此等中以下各者為更佳。
-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-D GGF-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGF-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)。
C-2. L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-，且L2為單鍵的情形；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)。
此等中以下各者為較佳；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH- CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)。
C-3. L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-，且L2為-NH-(CH2CH2-O)n6-CH2CH2-C(=O)-的情形；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2- O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2- C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)。
此等中以下各者為較佳；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)。
C-4. L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-，L2為單鍵，於-La-Lb-Lc-含有烷基分支鏈的情形，以下各者為較佳；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2C(-Me)2-C(=O)-(NH-DX)、 -(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2C(-Me)2-C(=O)-(NH-DX)。
更佳為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2C(-Me)2-C(=O)-(NH-DX)。
C-5. L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-，L2為單鍵、含有肌胺酸的胜肽殘基的情形；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-DGMeGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-DGMeGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-DGMeGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGMeGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGMeGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGMeGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)。
此等中更佳為以下各者；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGMeGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGMeGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-D GMeGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)。
C-6. L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-，且L2為單鍵，含有離胺酸的胜肽殘基的情形； -(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)。
此等中更佳為以下各者；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KGGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)。
C-7. L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-，且L2為單鍵，含有麩胺酸的胜肽殘基的情形；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-EGGFG-NH- CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-EGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-EGGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-EGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-EGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-EGGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)。
此等中更佳為以下各者；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-EGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-EGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-EGGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)。
C-8. L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-，L2為-NH-(CH2CH2-O)n6-CH2CH2-C(=O)-，且於-La-Lb-Lc-含有氧原子的情形，以下各者為較佳；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)。
更佳為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-(NH-DX)。
C-9. L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-，且L2為單鍵，於胜肽殘基含有複數個親水性胺基酸的情形，以下各者為較佳；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-DDGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-DDGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-DDGGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DDGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DDGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DDGGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-KDGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-KDGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-KDGGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-K DGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KDGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KDGGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)。
此等中更佳為以下各者；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DDGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DDGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DDGGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KDGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KDGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KDGGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)。
更佳為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DDGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-KDGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)。
C-10. L1為-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-，L2為-S-(CH2)n8-C(=O)-的情形，以下各 者為較佳；-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)。
此等中以下各者為較佳。
-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)。
D. 於LP含有親水性胺基酸之天冬胺酸、離胺酸、麩胺酸、絲胺酸，尤其是天冬胺酸，較佳作為-L1-L2-LP-(NH-DX)之結構的連接物-藥物部分者呈示如下。
D-1. L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-，且L2為-NH-(CH2CH2-O)n6-CH2CH2-C(=O)-的情形；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-DGGFG-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-DGGFS-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-N H-DGGFG-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-(NH-DX)。
此等中更佳為以下各者；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-DGGFG-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-C(=O)-DGGFG-(NH-DX)。
D-2. L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-，且L2為單鍵的情形，以下各者為較佳；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-DGGFG-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2-C(=O)-NH-DGGFG-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-DGGFG-(NH-DX)。
D-3. L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-，且L2為單鍵的情形，天冬胺酸為D-體的以下各者 為較佳；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-DdGGFG-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-DdGGFG-(NH-DX)。
D-4. L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-，L2為單鍵的情形，甘胺酸成為肌胺酸的以下各者為較佳；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-DGMeGFG-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-DGMeGFG-(NH-DX)。
D-5. L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-，且L2為單鍵的情形，於胜肽殘基含有天冬胺酸以外之親水性胺基酸的以下各者為較佳；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-KGGFG-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-SGGFG-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-EGGFG-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-NH-DGGFS-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-KGGFG-(NH-DX)、 -(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-SGGFG-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-EGGFG-(NH-DX)。
此等中更佳為以下各者；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-KGGFG-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-SGGFG-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-EGGFG-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-NH-DGGFS-(NH-DX)。
E. L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-，且L2為單鍵，胜肽殘基為二胜肽，-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)之結構的連接物-藥物部分，較佳呈示如下；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-VK-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-VC-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-VK-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-VC-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、 -(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-VK-NH-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-C(=O)-VC-NH-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-VK-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-VC-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-VK-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-VC-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-VK-NH-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-VC-NH-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)。
此等中更佳為以下各者；-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-VK-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-VC-NH-CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-VK-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-VC-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、 -(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-VK-NH-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-VC-NH-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)。
更佳為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-VK-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(=O)-VC-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-(NH-DX)。
本發明之抗HER2抗體-藥物結合物之優異特性係可藉由將抗HER2抗體及依喜替康具有的特性，藉由結合此等的連接物而使充分發揮而達成。據此，藉由採用本發明之結構之連接物，可獲得優異特性之抗體-藥物結合物。本發明之連接物結構與抗體，可藉由周知之方法而使硫醚鍵或醯胺鍵形成，而容易地結合，用以使抗體與本發明之連接物結合的特別要件係對於抗體並非必要。又，若為具有與抗腫瘤性藥物亦可形成醯胺鍵、醚鍵、酯鍵、碳-碳烷基鍵等的官能基的化合物，則使結合為可能的。如此，經由使抗HER2抗體以外之抗體、以及依喜替康以外之藥物藉由本發明之連接物結構而結合，可取得優異的抗體-藥物結合物。
[與抗體之反應性化合物]
針對上述之連接物-藥物結構，作為用以將其等導入抗體之化合物，各自可適合地使用：
1.連接物-藥物結構之末端為(琥珀醯亞胺-3-基-N) 基的情形，該部分成為順丁烯二醯亞胺基的化合物
2.使連接物-藥物結構以-CH2-C(=O)-NH-基與抗體作雙硫鍵結的情形，該亞甲基成為鹵甲基的化合物
3.使連接物-藥物結構藉由-C(=O)-CH2CH2-C(=O)，以醯胺鍵與抗體結合的情形，末端以(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-基變換為活性酯的化合物
4.使連接物-藥物結構以-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-與抗體結合的情形，藉由於末端具有L2所示的結構的化合物，相同部分之S成為HS的化合物
上述之各結構係使用變換為此等的化合物即可。
[製造方法]
其次，說明本發明之抗體-藥物結合物或其製造中間體之代表性的製造方法。又，於以下，為了呈示化合物，使用各反應式中所示的化合物的編號。即，稱為『式(1)之化合物』、『化合物(1)』等。又關於此以外之編號之化合物亦同樣地記載。
1.製造方法1
式(1)所示的抗體-藥物結合物中，藉由硫醚而抗體與藥物-連接物結構結合者，例如，可藉由下述之方法來製造。
[式中，AB表示具有氫硫基(sulfhydryl)的抗體，L1’表示於L1所示的連接物結構，末端變換為順丁烯二醯亞胺基(下式)的結構
(其中，氮原子為結合部位)、或末端變換為鹵素的結構之連接物。例如，作為L1所示的-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-等之結構中的-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-部分成為順丁烯二醯亞胺基的基，或作為L1所示的-CH2C(=O)NH-(CH2)n4-C(=O)-之末端之亞甲基經鹵化而成為鹵乙醯胺、鹵素-CH2-C-(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-基等。
又，-(NH-DX)係下式所示的結構：
係呈現抗腫瘤性藥物之1位之胺基的氫原子1個被除去而生成的基。又，於上述之反應式，記載於式(1)之化合物，1個自藥物至連接物末端之結構部分對於1個抗體結合的結構，但此係為了說明之方便的記載，實際上大多為該結構部分對抗體分子結合複數個的情形。又，此於以下之製造方法之說明部分亦為同樣的]。
即，藉由使利用後述方法取得的化合物(2)與具有氫硫基的抗體(3a)反應，可製造抗體-藥物結合物(1)。
具有氫硫基的抗體(3a)係可以本技術領域者周知之方法獲得(Hermanson,G.T,Bioconjugate Techniques,pp.56-136,pp.456-493,Academic Press(1996))。例如，可列舉使陶特氏試藥(Traut’s reagent)對抗體之胺基作用 ；使N-琥珀醯亞胺基S-乙醯基硫烷酸酯類與抗體之胺基作用後，使羥基胺作用；使N-琥珀醯亞胺基3-(吡啶基二硫基)丙酸酯作用後，使還原劑作用；使二硫蘇糖醇、2-巰基乙醇、參(2-羧基乙基)膦鹽酸鹽(TCEP)等之還原劑對抗體作用而將抗體內鉸鏈部之雙硫鍵還原等之方法，但未限定於此等。
具體而言，可於具有氫硫基的抗體(3a)之磷酸緩衝食鹽水溶液(pH7.2)中，添加化合物(2)之二甲基亞碸溶液，而製造抗體-藥物結合物(1)。之後，於使抗體-藥物結合生成的反應，如通常使用的方式，添加N-乙醯基-L-半胱胺酸(NAC)，使未反應之化合物(2)之反應性失活，經製造的抗體-藥物結合物(1)係藉由以下之操作，進行濃縮、緩衝液交換、純化，進行抗體濃度及抗體每一分子之藥物平均結合數之測定、及凝集體含有率的算出，可進行抗體-藥物結合物(1)之鑑定。
共通操作A：抗體或抗體-藥物結合物水溶液之濃縮
於Amicon Ultra(50,000 MWCO,Millipore Corpor ation)之容器內置入抗體或抗體-藥物結合物溶液，以使用離心機(Allegra X-15R,Beckman Coulter,Inc.)的離心操作(以2000-3800G離心5-20分鐘)，而將抗體或抗體-藥物結合物溶液濃縮。
共通操作B：抗體之濃度測定
使用UV測定器(Nanodrop 1000,Thermo Fisher Scientific Inc)，依據製造商規定之方法，進行抗體濃度 之測定。此時，各抗體使用相異的280nm吸光係數(1.3-1.8/mg/mL)。
共通操作C-1：抗體之緩衝液交換
將使用Sephadex G-25擔體的NAP-25管柱(Cat.No.17-0852-02,GE Healthcare Japan Corporation)，依據製造商規定之方法，以含氯化鈉(137mM)及乙二胺四乙酸(EDTA；5mM)的磷酸緩衝液(10mM,pH6.0；本說明書中稱為PBS6.0/EDTA)使其平衡化。對每一根此NAP-25管柱，放置抗體水溶液2.5mL後，分取以PBS6.0/EDTA 3.5mL溶出的劃分(3.5mL)。將此劃分藉由共通操作A濃縮，使用共通操作B，而進行抗體濃度之測定後，使用PBS6.0/EDTA調整抗體濃度至10mg/mL。
共通操作C-2：抗體之緩衝液交換
將使用Sephadex G-25擔體的NAP-25管柱(Cat.No.17-0852-02，GE Healthcare Japan Corporation)，依據製造商規定之方法，以含氯化鈉(50mM)及EDTA(2mM)的磷酸緩衝液(50mM，pH6.5；於本說明書中稱為PBS6.5/EDTA)使其平衡化。對每一根此NAP-25管柱放置抗體水溶液2.5mL後，分取以PBS6.5/EDTA 3.5mL溶出的劃分(3.5mL)。將此劃分藉由共通操作A濃縮，使用共通操作B而進行抗體濃度之測定後，使用PBS6.5/EDTA將抗體濃度調整至20mg/mL。
共通操作D-1：抗體-藥物結合物之純化
以市售之磷酸緩衝液(PBS7.4，Cat.No.10010-023，Invitrogen公司)、含氯化鈉(137mM)的磷酸鈉緩衝液 (10mM，pH6.0；於本說明書中稱為PBS6.0)或含山梨糖醇(5%)的乙酸緩衝液(10mM，pH5.5；於本說明書中稱為ABS)之任一種緩衝液使NAP-25管柱平衡化。於此NAP-25管柱中，置入抗體-藥物結合物反應水溶液(約1.5mL)，藉由以製造商規定量之緩衝液溶出，分取抗體劃分。將此分取劃分再次置入NAP-25管柱並以緩衝液溶出的膠體過濾純化操作共計重複2至3次，獲得去除未結合之藥物連接物、低分子化合物(參(2-羧基乙基)膦鹽酸鹽(TCEP)、N-乙醯基-L-半胱胺酸(NAC)、二甲基亞碸)的抗體-藥物結合物。
共通操作D-2：琥珀醯亞胺基4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)-環己烷-1-甲酸酯(SMCC)衍生物化抗體之純化
以PBS6.5/EDTA使NAP-25管柱平衡化。於此NAP-25管柱中，置入含有琥珀醯亞胺基4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)-環己烷-1-甲酸酯(於本說明書稱為SMCC)衍生物化抗體的反應液(約0.5mL)，藉由以製造商規定量之緩衝液溶出，分取抗體劃分，並進行純化。
共通操作E：抗體-藥物結合物中的抗體濃度及抗體每一分子之藥物平均結合數之測定
抗體-藥物結合物中的結合藥物濃度係可藉由測定抗體-藥物結合物水溶液之例如280nm及370nm之二波長中的UV吸光度後，進行下述之計算而算出。
因某波長中的全吸光度係等於系統內存在的全部吸收化學物種之吸光度之和[吸光度之加成性]，故於抗體與藥物之結合前後，假設抗體及藥物之莫耳吸光係數未 變化時，抗體-藥物結合物中的抗體濃度及藥物濃度係如下述之關係式所示。
A280=AD,280+AA,280=εD,280CD+εA,280CA 式(1)
A370=AD,370+AA,370=εD,370CD+εA,370CA 式(2)
其中，A280表示280nm中的抗體-藥物結合物水溶液之吸光度；A370表示370nm中的抗體-藥物結合物水溶液之吸光度；AA,280表示280nm中的抗體之吸光度；AA,370表示370nm中的抗體之吸光度；AD,280表示280nm中的結合物前驅物之吸光度；AD,370表示370nm中的結合物前驅物之吸光度；εA,280表示280nm中的抗體之莫耳吸光係數；εA,370表示370nm中的抗體之莫耳吸光係數；εD,280表示280nm中的結合物前驅物之莫耳吸光係數；εD,370表示370nm中的結合物前驅物之莫耳吸光係數；CA表示抗體-藥物結合物中的抗體濃度；CD表示抗體-藥物結合物中的藥物濃度。
其中，εA,280、εA,370、εD,280、εD,370係藉由事前之測定而為已知。測定抗體-藥物結合物水溶液之A280及A370，藉由將此等之值代入式(1)及(2)而解聯立方程式，可求得CA及CD。再藉由以CA除CD，可求得每1抗體之藥物平均結合數。
以下描述於製造方法1中作為中間體化合物所使用的式(2)所示的化合物。此等係例如，具有下列結構的化合物。
鹵素-CH2C(=O)NH-(CH2)n3-C(=O)-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)
鹵素-CH2C(=O)NH-(CH2)n3-C(=O)-NH-[(CH2CH2-O)n6-CH2CH2-OH]-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)
鹵素-CH2C(=O)NH-(CH2)n3-C(=O)-L2-LP-(NH-DX)
鹵素-CH2C(=O)NH-(CH2)n3-C(=O)-NH-[(CH2CH2-O)n6-CH2CH2-OH]-LP-(NH-DX)
[上述式中，n1、n2、n3、n4、n7、L2、LP、 La、Lb及Lc係如已定義者，LP或Lc之末端成為與藥物的結合部位]。
作為如此本發明之抗體-藥物結合物之製造上有用的中間體之較佳者係n2為整數之2至5，L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-時，L2為-NH-(CH2CH2-O)n6-CH2CH2-C(=O)-，又n6係2至4，或為-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-，又n7為3或4，或為-NH-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-、-NH-[CH(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-、或-NH-[CH(-CH2-COOH)]-CH2-O-CH2-(C=O)-之任一者或為單鍵者較佳。
L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-時，n3為1至4之整數為較佳，更佳為1或2，L2為-NH-(CH2CH2-O)n6-CH2CH2-C(=O)-，且n6係0至4為較佳，但n6為0或單鍵較佳，L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-時，L2係單鍵為較佳，L1為-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-時，n4係2為較佳，L2係單鍵為較佳，LP為VK、VC、GFG、GGFG、GGFGG、GGFGS、GGFGGG、GGFGGE、GGFGGGFG、DGGF、DGGFG、DdGGFG、DGMeGFG、DGGFS、DDGGFG、KDGGFG、KGGFG、EGGFG、或SGGFG即可。此等中，GGFG、GGFGG、GGFGS、GGFGGE、GDGGF、DGGFG、DdGGFG、DGMeGFG、DGGFS 、DDGGFG、KDGGFG、KGGFG、EGGFG、或SGGFG為較佳。更佳為GGFG、GDGGF、DGGFG、DdGGFG、DGMeGFG、DGGFS、DDGGFG、或KDGGFG。更佳為GGFG、DGGFG、DdGGFG、或DGMeGFG。
-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-部分係-NH-CH2CH2-C(=O)-、-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-、-NH-CH2CH2CH2CH2-C(=O)-、-NH-CH2CH(-Me)-C(=O)-、-NH-CH2C(-Me)H-C(=O)-、-NH-CH2CH2C(-Me)2-C(=O)-、-NH-CH2CH2-NH-C(=O)-、-NH-CH2CH2-NH-CH2-C(=O)-、-NH-CH2CH2-NMe-CH2-C(=O)-、-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-、-NH-CH2CH2-N(-CH2CH2-OH)-CH2-C(=O)-、-NH-CH2CH2-N(-CH2CH2-OH)-CH2CH2-C(=O)-、-NH-CH2CH2-N(-CH2-COOH)-CH2-C(=O)-、-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH(-CH2-COOH)-C(=O)-、-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH(-CH2-OH)-C(=O)-、-NH-CH2CH2-、或-NH-CH2CH2CH2CH2-即可，但其中-NH-CH2CH2-C(=O)-、-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-、-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-、或-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-之部分結構為較佳。
關於此等之化合物，具體而言可例示以下各者[其中，(順丁烯二醯亞胺-N-基)表示順丁烯二醯亞胺基(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)]。
L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-時，L2為-NH-(CH2CH2-O)n6-CH2CH2-C(=O)-、-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-、-NH-[CH(-CH2-COOH)]-CH2- (C=O)-、-NH-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-、或單鍵，故作為製造中間體，較佳為下式：(順丁烯二醯亞胺-N-基)-(CH2)n2-C(=O)-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)、(順丁烯二醯亞胺-N-基)-(CH2)n2-C(=O)-NH-(CH2CH2-O)n6-CH2CH2-C(=O)-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)，且n6為2至4、或(順丁烯二醯亞胺-N-基)-(CH2)n2-C(=O)-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)，且n7為3或4、或(順丁烯二醯亞胺-N-基)-(CH2)n2-C(=O)-NH-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)、(順丁烯二醯亞胺-N-基)-(CH2)n2-C(=O)-NH-[CH(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)、或(順丁烯二醯亞胺-N-基)-(CH2)n2-C(=O)-NH-[CH(-CH2-COOH)]-CH2-O-CH2-(C=O)-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)、所示的結構之化合物可適合地使用。
其中，n2為2至5，且-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-部分為-NH-CH2CH2-C(=O)-、-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-、-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-、或-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-較佳。
就LP而言，可適合使用VK、GFG、GGFG、GGFGG、GGFGS、GGFGGG、GGFGGE、GGFGGGFG、DGGF、 DGGFG、DdGGFG、DGMeGFG、DGGFS、DDGGFG、KDGGFG、KGGFG、EGGFG、或SGGFG。此等中，GGFG、GGFGG、GGFGS、GGFGGE、GDGGF、DGGFG、DdGGFG、DGMeGFG、DGGFS、DDGGFG、KDGGFG、KGGFG、EGGFG、或SGGFG為較佳。更佳為GGFG、GDGGF、DGGFG、DdGGFG、DGMeGFG、DGGFS、DDGGFG、或KDGGFG。更佳為GGFG、DGGFG、DdGGFG、或DGMeGFG。又，LP與藥物直接鍵結者亦較佳。
L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-時，L2為-NH-(CH2CH2-O)n6-CH2CH2-C(=O)-或單鍵，故作為製造中間體，下式：(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-NH-(CH2-CH2-O)n6-CH2-CH2-C(=O)-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)或(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)
所示的結構之化合物可適合地使用。其中，n6為0至6，但0為特佳。n3為2至4，-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-部分係-NH-CH2CH2-C(=O)-、-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-、-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-、或-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-者較佳。
作為LP，可適合使用VK、VC、GFG、GGFG、GGFGG、GGFGS、GGFGGG、GGFGGE、GGFGGGFG、DGGF、DGGFG、DdGGFG、DGMeGFG、DGGFS、DDGGFG、KDGGFG、KGGFG、EGGFG、或SGGFG。此等中，GGFG、GGFGG 、GGFGS、GGFGGE、GDGGF、DGGFG、DdGGFG、DGMeGFG、DGGFS、DDGGFG、KDGGFG、KGGFG、EGGFG、或SGGFG為較佳。更佳為GGFG、GDGGF、DGGFG、DdGGFG、DGMeGFG、DGGFS、DDGGFG、或KDGGFG。更佳為GGFG、DGGFG、DdGGFG、或DGMeGFG。又，LP與藥物直接鍵結者亦較佳。LP係GGFG為較佳。
L1為-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-，且L2係單鍵的情形，適合使用具有鹵乙醯基的下式：X-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)
所示的結構之化合物作為製造中間體。
其中，n4為2至5，-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-部分為-NH-CH2CH2-C(=O)-、-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-、-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-、或-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-較佳。
作為LP，可適合使用VK、VC、GFG、GGFG、GGFGG、GGFGS、GGFGGG、GGFGGE、GGFGGGFG、DGGF、DGGFG、DdGGFG、DGMeGFG、DGGFS、DDGGFG、KDGGFG、KGGFG、EGGFG、或SGGFG。此等中，GGFG、GGFGG、GGFGS、GGFGGE、GDGGF、DGGFG、DdGGFG、DGMeGFG、DGGFS、DDGGFG、KDGGFG、KGGFG、EGGFG、或SGGFG為較佳。更佳為GGFG、GDGGF、DGGFG、DdGGFG、DGMeGFG、DGGFS、DDGGFG、或KDGGFG。更佳為GGFG、DGGFG、DdGGFG、或DGMeGFG。又，LP與藥物直接鍵結者亦較佳。又作為X，溴或碘為較佳。
其中，上述之式中之X表示溴原子或碘原子。此等之 溴化合物及碘化合物係任一者皆可適合作為製造中間體來使用。
L1為-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-，且L2為-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-的情形，作為製造中間體，可較佳使用下式所示的結構之化合物：X-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)。
其中，n4為2至5，n7為3或4，-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-部分為-NH-CH2CH2-C(=O)-、-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-、-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-、或-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-較佳。
就LP而言，可適合使用VK、VC、GFG、GGFG、GGFGG、GGFGS、GGFGGG、GGFGGE、GGFGGGFG、DGGF、DGGFG、DdGGFG、DGMeGFG、DGGFS、DDGGFG、KDGGFG、KGGFG、EGGFG、或SGGFG。此等中，GGFG、GGFGG、GGFGS、GGFGGE、GDGGF、DGGFG、DdGGFG、DGMeGFG、DGGFS、DDGGFG、KDGGFG、KGGFG、EGGFG、或SGGFG為較佳。更佳為GGFG、GDGGF、DGGFG、DdGGFG、DGMeGFG、DGGFS、DDGGFG、或KDGGFG。更佳為GGFG、DGGFG、DdGGFG、或DGMeGFG。又，LP與藥物直接鍵結者亦較佳。LP係GGFG為較佳。
又，為了確保結合物之量，將以同樣條件所製作獲得的平均藥物數為相同程度之複數個結合物(例如，±1左右)混合而可作成新的批次。此情形，平均藥物數係落在 混合前之平均藥物數之間。
2.製造方法2
式(1)所示的抗體-藥物結合物或彼等之藥理上可容許的鹽中，與抗體之結合為醯胺鍵，且又於連接物內具有硫醚鍵的連接物，-L1-L2-為-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-(CH2)n8-C(=O)-之結構，亦可藉由下述之方法來製造。
[式中，AB-L1'表示抗體與連接物L1藉由醯胺鍵結合，進一步具有L1之末端被變換為N-順丁烯二醯亞胺基的結構的化合物。即，於AB-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-，-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-被變換為順丁烯二醯亞胺基的結構。L2'表示於末端具有巰基的HS-(CH2)n8-C(=O)-所示的基，AB表示抗體]。
即，藉由使後述方法可取得的化合物(2a)、與具有順丁烯二醯亞胺基的連接物結合的抗體(3b)反應，可製造抗體-藥物結合物(1)。
具有順丁烯二醯亞胺基的抗體(3b)亦可以本技術領域者周知之方法獲得(Hermanson,G.T,Bioconjugate Techniques,pp.56-136,pp.456-493,Academic Press (1996))。例如，可列舉使具有與胺基、羥基之結合性、 且具有順丁烯二醯亞胺基的琥珀醯亞胺基4-(N-順丁烯二醯亞胺甲基)環己烷-1-甲酸酯(SMCC)等之二官能性連接物與抗體之胺基作用，而導入順丁烯二醯亞胺基等之方法，但未限定於此等。
例如，若為將對胺基之反應性部分、與對硫醇基之反應性部分以連接物結合的化合物即可適合地使用。其中對胺基之反應性部分係若為活性酯、醯亞胺酯等即可，又硫醇反應性部分係若為順丁烯二醯亞胺基、鹵化乙醯基、鹵化烷基、又二硫吡啶基等即可。
於構成抗體的胺基酸之胺基或羥基，尤其於胺基，作為藉由醯胺鍵而使抗體-藥物結合物構築用之方法，例如，有使用使具有順丁烯二醯亞胺基的連接物結合之本發明之抗體(3b)的方法。作為使與用以獲得此化合物之抗體反應的化合物而言，可適合地使用周知之下式所示的化合物：Q1-L1a-Q2
[式中，Q1表示(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-、(3-磺基-吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-、RQ-O-C(=N)-、或O=C=N-，L1a-表示-cyc.Hex(1,4)-CH2-、碳數1至10之伸烷基、伸苯基、-(CH2)n4-C(=O)-、-(CH2)n4a-NH-C(=O)-(CH2)n4b-、或-(CH2)n4a-NH-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-，Q2表示(順丁烯二醯亞胺-N-基)、鹵素原子、或-S-S-(2-吡啶基)，但RQ表示碳數1至6之烷基，n4表示1至8之整數，n4a 係0至6之整數，n4b係1至6之整數]。
其中，RQ若為碳數1至6之烷基即可，但更佳為甲基或乙基。
就L1a中的伸烷基而言，若為碳數1至10者即可。就伸苯基而言，可為鄰位、間位、對位任一者，但對位、或間位更佳。
作為L1a較佳者係可列舉-cyc.Hex(1,4)-CH2-、-(CH2)5-NH-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-、-(CH2)2-NH-C(=O)-CH2-、-(CH2)5-NH-C(=O)-(CH2)2-、-CH2-、-(CH2)2-、-(CH2)3-、-(CH2)5-、-(CH2)10-、-(para-Ph)-、-(meta-Ph)-、-(para-Ph)-CH(-Me)-、-(CH2)3-(meta-Ph)-、或-(meta-Ph)-NH-C(=O)-CH2-。
作為Q1較佳為(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-，Q2係(順丁烯二醯亞胺-N-基)為較佳，但使雙硫鍵形成時，使用-S-S-(2-吡啶基)即可。
其中，(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-係下式
所示的氮原子成為結合部位的基，(3-磺基- 吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-係下式
所示的氮原子成為結合部位的基，其磺酸係可形成鋰鹽、鈉鹽、鉀鹽，較佳為鈉鹽，cyc.Hex(1,4)表示1,4-伸環己基，(順丁烯二醯亞胺-N-基)係下式
所示的氮原子成為結合部位的基，(2-吡啶基)表示2-吡啶基，(para-Ph)表示對伸苯基，(meta-Ph)表示間伸苯基。
就如此化合物而言，上述之化合物之外，可使用磺 基琥珀醯亞胺基4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1-甲酸酯(sulfo-SMCC)、N-琥珀醯亞胺基-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)-環己烷-1-羧基-(6-胺基己酸酯)(LC-SMCC)、κ-順丁烯二醯亞胺基十一酸N-琥珀醯亞胺基酯(KMUA)、γ-順丁烯二醯亞胺基酪酸N-琥珀醯亞胺基酯(GMBS)、ε-順丁烯二醯亞胺基己酸N-羥基琥珀醯亞胺酯(EMCS)、m-順丁烯二醯亞胺基苯甲醯基-N-羥基琥珀醯亞胺酯(MBS)、N-(α-順丁烯二醯亞胺基乙醯氧基)-琥珀醯亞胺酯(AMAS)、琥珀醯亞胺基-6-(β-順丁烯二醯亞胺基丙醯胺基)己酸酯(SMPH)、N-琥珀醯亞胺基4-(p-順丁烯二醯亞胺基苯基)-丁酸酯(SMPB)、N-(p-順丁烯二醯亞胺基苯基)異氰酸酯(PMPI)、N-琥珀醯亞胺基-4-(碘乙醯基)-胺基苯甲酸酯(SIAB)、N-琥珀醯亞胺基碘乙酸酯(SIA)、N-琥珀醯亞胺基溴乙酸酯(SBA)、N-琥珀醯亞胺基3-(溴乙醯胺)丙酸酯(SBAP)、N-琥珀醯亞胺基-3-(2-吡啶二硫基)丙酸酯(SPDP)、及琥珀醯亞胺基氧基羰基-α-甲基-α-(2-吡啶基二硫)甲苯(SMPT)等。
具體而言，例如，相對於抗體(3)，將2至6當量之SMCC，於pH6至7之磷酸緩衝液中，藉由使於室溫反應1至6小時，SMCC之活性酯與抗體反應而可獲得具有順丁烯二醯亞胺基的抗體(3b)。獲得的抗體(3b)係藉由下述之共通操作D-2純化，可用於與下列化合物(2a)之反應。
使連接物部分結合的抗體之胺基、羥基係各自表示例如，抗體具有的N末端胺基及/或離胺酸殘基所具有的胺基，以及絲胺酸殘基所具有的羥基，但未限定於此等。
製造的抗體-藥物結合物(1)係以如製造方法1所述進行濃縮、緩衝液交換、純化、抗體濃度及抗體每一分子之藥物平均結合數之測定、以及凝集體含有率之算出所致的抗體-藥物結合物(1)之鑑定。
於製造方法2，式(3b)所示的化合物係具有下列結構(下式；於該結構，「抗體-NH-」係來自抗體)。
為用以製造本發明之抗體-藥物結合物的中間體且具有上述結構的化合物係如下所示(式中，n為1至10之整數，但較佳為2至8，更佳為3至8)。
作為具有-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-S-(CH2)n8-C(=O)-之結構作為L1-L2-，使抗體-藥物結合物構築用、末端為巰基、且用以使與上述之中間體反應之連接物-藥物部分的化合物，係可適合使用下式所示的結構之化合物：HS-(CH2)n8-C(=O)-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)。
其中，n8係2至5，-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-部分係-NH-CH2CH2-C(=O)-、-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-、-NH-CH2-O-CH2-C(=O)-、或-NH-CH2CH2-O-CH2-C(=O)-為較佳。
就LP而言，可適合使用VK、VC、GFG、GGFG、GGFGG、GGFGS、GGFGGG、GGFGGE、GGFGGGFG、DGGF、DGGFG、DdGGFG、DGMeGFG、DGGFS、DDGGFG、KDGGFG、KGGFG、EGGFG、或SGGFG。此等中，GGFG、GGFGG、GGFGS、GGFGGE、GDGGF、DGGFG、DdGGFG、DGMeGFG、DGGFS、DDGGFG、KDGGFG、KGGFG、EGGFG、或 SGGFG為較佳。更佳為GGFG、GDGGF、DGGFG、DdGGFG、DGMeGFG、DGGFS、DDGGFG、或KDGGFG。更佳為GGFG、DGGFG、DdGGFG、或DGMeGFG。又，LP與藥物直接鍵結者亦較佳。
3.製造方法3
式(1)所示的抗體-藥物結合物或彼等之藥理上可容許的鹽中，藉由醯胺鍵而藥物連接物部分與抗體結合者，可以下列方法製造。例如，L1為-C(=O)-(CH2)n5-C(=O)-的情形，可進一步適合使用變換為活性酯的L1’，例如，(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-(CH2)n5-C(=O)-。再者，L2係單鍵的情形，例如，可藉由下述之方法來製造。
即，藉由使以後述方法所取得的化合物(2b)與抗體(3)反應，可製造抗體-藥物結合物(1)。
化合物(2b)係具有與抗體之胺基、羥基之結合性。抗體之胺基、羥基係如製造方法2所記載，各自表示例如，抗體具有的N末端胺基及/或離胺酸殘基所具有的胺基、絲胺酸殘基所具有的羥基，但未限定於此等。
化合物(2b)係由N-羥基琥珀醯亞胺基酯基而形成的活性酯，但亦可使用其他之活性酯，例如，磺酸基琥珀 醯亞胺基酯基、N-羥基鄰苯二甲醯亞胺基酯、N-羥基磺酸基鄰苯二甲醯亞胺基酯、鄰-硝基苯基酯、對-硝基苯基酯、2,4-二硝基苯基酯、3-磺醯基-4-硝基苯基酯、3-羧基-4-硝基苯基酯、五氟苯基酯等。
化合物(2b)與抗體(3)之反應係抗體(3)每一個，使用2至20莫耳當量之化合物(2b)，可製造抗體每1個有1個至10個之藥物結合的抗體-藥物結合物(1)。具體而言，藉由於含抗體(3)的緩衝液中，添加使化合物(2b)溶解的溶液並使反應，可製造抗體-藥物結合物(1)。其中，作為緩衝液，可使用乙酸鈉溶液、磷酸鈉或硼酸鈉等。反應時之pH若為5至9即可，更適合地於pH7附近反應即可。就使化合物(2b)溶解的溶媒而言，可使用二甲基亞碸(DMSO)、二甲基甲醯胺(DMF)、二甲基乙醯胺(DMA)、N-甲基-2-吡咯啶酮(NMP)等之有機溶媒。若將使化合物(2b)溶解的有機溶媒溶液，添加1至20%v/v至含抗體(3)的緩衝液而使反應即可。反應溫度係0至37℃，更適合地為10至25℃，反應時間係0.5至20小時。
製造的抗體-藥物結合物(1)中的濃縮、緩衝液交換、純化、抗體濃度及抗體每一分子之藥物平均結合數之測定所致的抗體-藥物結合物(1)之鑑定係可以與製造方法1同樣地進行。
於製造方法3(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-(CH2)n5-C(=O)-係具有下述結構。
L1為-C(=O)-(CH2)n5-C(=O)-的情形，作為以醯胺鍵使連接物-藥物部分與抗體結合用的化合物，可列舉於末端具有上述之結構部分的結構之連接物-藥物化合物：
4.製造方法4
於先前之製造方法所使用的中間體之式(2)或(2b)所示的化合物或彼等之藥理上可容許的鹽係可藉由例如下述之方法而製造。
[式中，Lc為-C(=O)-，且與-(NH-DX)之結合 係形成醯胺鍵，L1'表示L1之末端被變換為順丁烯二醯亞胺基、鹵乙醯基、或(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-(CH2)n4-C(=O)-的結構，P1、P2及P3表示保護基]。
將羧酸(5)誘導為活性酯、混合酸酐、或酸鹵化物等，藉由與NH2-DX[表示依喜替康；化學名：(1S,9S)-1-胺基-9-乙基-5-氟-2,3-二氫-9-羥基-4-甲基-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-10,13(9H,15H)-二酮](4)或其藥理上可容許的鹽反應，可製造化合物(6)。又，亦可添加適當鹼。
此反應只要適用胜肽合成中所通常使用的反應試藥及條件即可。活性酯係有各種者，但例如，將p-硝基酚等之酚類、N-羥基苯并三唑或N-羥基琥珀醯亞胺等與羧酸(5)，使用N,N’-二環己基碳二亞胺(dicyclohexyl carbodiimide)或1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳二亞胺‧鹽酸鹽等之縮合劑而使其反應即可製造。又，活性酯亦可藉由下列製造：羧酸(5)與五氟苯基三氟乙酸酯等之反應；羧酸(5)與1-苯并三唑基氧基三吡咯啶鏻六氟亞磷酸酯(1-benzotriazolyloxy tripyrrolidinophosphonium hexafluorophosphite)之反應；羧酸(5)與氰基膦酸二乙酯之反應(鹽溶法)；羧酸(5)與三苯基膦及2,2'-二吡啶基二硫醚之反應(向山法(Mukaiyama's method))；羧酸(5)與氯化4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三-2-基)-4-甲基啉鎓(DMTMM)等之三衍生物之反應等。又，亦可利用藉由將羧酸(5)以亞硫醯氯、草醯氯等之酸鹵化物處理而製造 之酸鹵化物法等來進行反應。藉由將如上述獲得的羧酸(5)之活性酯、混合酸酐、或酸鹵化物，於化合物(4)與適當鹼存在下，使其於惰性溶媒中於-78℃~150℃下反應，可製造化合物(6)。(又，「惰性溶媒」係意指於採用該溶媒的反應中不阻礙實施反應的溶媒)。又，亦可添加適當鹼。
上述之各步驟所使用的具體的鹼而言，例如，可列舉碳酸鈉、碳酸鉀、乙醇鈉、丁醇鉀、氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫化鈉、氫化鉀等之鹼金屬或鹼土類金屬之碳酸鹽、鹼金屬烷氧化物、鹼金屬氫氧化物或氫化物；n-丁基鋰等之烷基鋰、二異丙基醯胺鋰(lithium diisopropylamide)等之二烷基胺基鋰所代表的有機金屬鹼；鋰雙(三甲基矽烷基)醯胺等之雙矽烷基胺之有機金屬鹼；或吡啶、2,6-二甲基吡啶、柯林鹼(collidine)、4-二甲基胺基吡啶、三乙基胺、N-甲基啉、二異丙基乙基胺、二吖雙環[5.4.0]十一-7-烯(DBU)等之有機鹼等。
就本反應所使用的惰性溶媒而言，可列舉二氯甲烷、氯仿、四氯化碳等之鹵化烴系溶媒；四氫呋喃、1,2-二甲氧基乙烷、二烷等之醚系溶媒；苯、甲苯等之芳香族烴系溶媒；N,N-二甲基甲醯胺、N,N-二甲基乙醯胺、N-甲基吡咯啶-2-酮等之醯胺系溶媒，除了此等之外，依情形亦可使用二甲基亞碸、環丁碸等之亞碸系溶媒；甲醇、乙醇等之醇系之溶媒；丙酮、甲基乙基酮等之酮系溶媒等。
化合物(6)之La及Lb係如後述，其羥基、羧基 、胺基等可經有機化合物之合成所通常使用的保護基保護。具體而言，作為羥基之保護基，可列舉甲氧基甲基等之烷氧基甲基；苯甲基、4-甲氧基苯甲基、三苯基甲基等之芳基甲基；乙醯基等之烷醯基；苯甲醯基等之芳醯基；三級丁基二苯基矽烷基等之矽烷基等。羧基可做成與甲基、乙基、三級丁基等之烷基、烯丙基、或苯甲基等之芳基甲基之酯等而加以保護。胺基可藉由三級丁基氧基羰基、甲氧基羰基、乙氧基羰基等之烷基氧基羰基；烯丙氧基羰基、9-茀基甲基氧基羰基、苯甲基氧基羰基、對甲氧基苯甲基氧基羰基、對(或鄰)硝基苯甲基氧基羰基等之芳基甲基；此外，乙醯基等之烷醯基；苯甲基、三苯基甲基等之芳基甲基；苯甲醯基等之芳醯基；或2,4-二硝基苯磺醯基、鄰硝基苯磺醯基等之芳基磺醯基等之胜肽合成所通常使用的胺基之保護基而加以保護。上述之保護基之附脫係依據通常實施的方法進行即可。
就化合物(6)之末端胺基之保護基P1而言，可使用三級丁基氧基羰基、9-茀基甲基氧基羰基、苯甲基氧基羰基等之胜肽合成通常使用的胺基之保護基。就其他之胺基之保護基而言，可列舉乙醯基等之烷醯基；甲氧基羰基、乙氧基羰基等之烷氧基羰基；對甲氧基苯甲基氧基羰基、對(或鄰)硝基苯甲基氧基羰基等之芳基甲氧基羰基；苯甲基、三苯基甲基等之芳基甲基；苯甲醯基等之芳醯基；或2,4-二硝基苯磺醯基、鄰硝基苯磺醯基等之芳基磺醯基。保護基P1只要因應保護胺基的化合 物之性質等來選擇即可。
可藉由使獲得的化合物(6)之末端胺基之保護基P1脫保護，而製造化合物(7)。只要選擇因應保護基的試藥、條件即可。
將N末端以P2保護的胜肽羧酸(8)誘導為活性酯、混合酸酐等，藉由使與獲得的化合物(7)反應，可製造化合物(9)。形成胜肽羧酸(8)與化合物(7)之胜肽鍵的反應條件、試藥、鹼、及惰性溶媒，只要由化合物(6)之合成所述者加以適宜選擇來使用即可。保護基P2係只要由化合物(6)之保護基所述者加以適宜選擇來使用即可，只要因應保護胺基的化合物之性質等來選擇即可。又，如胜肽合成所通常使用，將構成胜肽羧酸(8)的胺基酸或胜肽順次反應並重複脫保護，而使伸長，亦可製造化合物(9)。
可藉由使獲得的化合物(9)之胺基之保護基P2脫保護而製造化合物(10)。選擇因應其保護基的試藥、條件即可。
將羧酸(11)及(11b)誘導為活性酯、混合酸酐、或酸鹵化物等，藉由使與獲得的化合物(10)反應，可製造化合物(2)或(2b)。形成羧酸(11)或(11b)與化合物(10)之胜肽鍵的反應條件、試藥、鹼、及不活性溶媒係只要由化合物(6)之合成所述者適宜選擇來使用即可。
化合物(9)亦可以例如，以下述之方法製造。
可將N末端以P2保護的胜肽羧酸(8)誘導為活性酯、混合酸酐等，鹼存在下，藉由使與羧基經P3保護的胺化合物(12)反應而製造化合物(13)。形成胜肽羧酸(8)與化 合物(12)之胜肽鍵的反應條件、試藥、鹼、及惰性溶媒係只要由化合物(6)之合成所述者適宜選擇來使用即可。化合物(13)之胺基之保護基P2係只要由化合物(6)之保護基所述者適宜選擇來使用即可。就羧基之保護基P3而言，只要為有機合成化學，尤其是於胜肽合成中作為羧基之保護基之通常使用的保護基即可，具體而言為甲基、乙基、三級丁基等之烷基酯、烯丙基酯、苯甲基酯等之只要由化合物(6)之保護基所述者適宜選擇來使用即可。於此情形，胺基之保護基與羧基之保護基必須可以相異方法或條件去除。例如，可列舉P2為三級丁基氧基羰基，P3為苯甲基的組合等作為代表性者。彼等之保護基只要因應保護胺基及羧基的化合物之性質等，自上述者加以選擇即可，即使於彼等之保護基之切斷之際，只要選擇因應其保護基的試藥、條件即可。
可藉由使獲得的化合物(13)之羧基之保護基P3脫保護而製造化合物(14)。只要選擇因應其保護基的試藥、條件即可。
可藉由使獲得的化合物(14)誘導為活性酯、混合酸酐、或酸鹵化物等，於鹼存在下，與化合物(4)反應而製造化合物(9)。此反應係只要適用胜肽合成所通常使用的反應試藥、條件即可，反應條件、試藥、鹼及惰性溶媒係只要由化合物(6)之合成所述者適宜選擇來使用即可。
化合物(2)或(2b)係例如，以可以下述之方法製造。
可藉由使化合物(13)之胺基之保護基P2脫保護而製 造化合物(15)。只要選擇因應其保護基的試藥、條件即可。
可藉由將羧酸衍生物(11)或(11b)誘導為活性酯、混合酸酐、或酸鹵化物等，鹼存在下，使與獲得的化合物(15)反應，而製造化合物(16)或(16b)。形成胜肽羧酸(11)或(11b)與化合物(15)之醯胺鍵的反應條件、試藥、鹼、及惰性溶媒係只要由化合物(6)之合成所述者適宜選擇來使用即可。
可藉由使獲得的化合物(16)或(16b)之羧基之保護基脫保護而製造化合物(17)或(17b)。可與化合物(14)之製造中的羧基之脫保護同樣地進行。
將化合物(17)或(17b)誘導為活性酯、混合酸酐、或酸鹵化物等，鹼存在下，藉由使與化合物(4)反應，可製造化合物(2)或(2b)。此反應係只要適用胜肽合成所通常使用的反應試藥、條件即可，反應條件、試藥、鹼及惰性溶媒係只要由化合物(6)之合成所述者適宜選擇來使用即可。
5.製造方法5
中間體之式(2)所示的化合物亦可藉由下述之方法來製造。
[式中，Lc為-C(=O)-且與-(NH-DX)之結合係形成醯胺鍵，L1'表示L1之末端被變換為順丁烯二醯亞胺基、鹵乙醯基、或(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-(CH2)n4-C(=O)-的結構，P4表示保護基]。
將化合物(11)或(11b)誘導為活性酯、混合酸酐等，鹼存在下，藉由使與C末端經P4保護的胜肽羧酸(18)反應，可製造化合物(19)或(19b)。形成胜肽羧酸(18)與化合物(11)之胜肽鍵的反應條件、試藥、鹼、及惰性溶媒係只要由化合物(6)之合成所述者適宜選擇來使用即可。化合物(18)之羧基之保護基P4係只要由化合物(6) 之保護基所述者適宜選擇來使用即可。
可藉由使獲得的化合物(19)或(19b)之羧基之保護基脫保護而製造化合物(20)或(20b)。可與化合物(14)之製造中的羧基之脫保護同樣地進行。
將獲得的化合物(20)或(20b)誘導為活性酯、或混合酸酐等，藉由使與化合物(7)反應，可製造化合物(2)。此反應係只要適用胜肽合成所通常使用的反應試藥、條件即可，反應條件、試藥、鹼及惰性溶媒係只要由化合物(6)之合成所述者適宜選擇來使用即可。
6.製造方法6
製造方法2記載之製造中間體(2a)，且L2'為L2之末端被變換為巰基烷醯基的結構的化合物係可藉由下述之方法來製造。
將具有末端巰基的羧酸(21)誘導為活性酯、或混合酸酐等，藉由使與化合物(10)反應，可製造化合物(2a)。此反應係只要適用胜肽合成所通常使用的反應 試藥、條件即可，反應條件、試藥、鹼及惰性溶媒係只要由化合物(4)之合成所述者加以適宜選擇來使用即可。
又，將化合物(21)誘導為活性酯、混合酸酐、或酸鹵化物等，使與化合物(15)反應，藉由將獲得的化合物(22)之羧基之保護基加以脫保護，可製造化合物(23)。
將化合物(23)誘導為活性酯、混合酸酐、或酸鹵化物等，鹼存在下，藉由使與化合物(4)反應，可製造化合物(2a)。此反應係只要適用胜肽合成所通常使用的反應試藥、條件即可，反應條件、試藥、鹼及惰性溶媒係只要由化合物(6)之合成所述者適宜選擇來使用即可。
7.製造方法7
以下，詳述製造方法4記載之製造中間體(10)中，n1=1、La=O、及Lb=CR2(R3)的化合物(10')之製造方法。式(10')所示的化合物、其鹽、或彼等之溶媒合物係可以例如下述之方法而加以製造。
[式中，LP、R2、及R3表示與前述相同者，L表示乙醯基或氫原子等，X及Y係各自獨立表示1個之胺基酸殘基或包含2或3個之胺基酸的寡肽，P5及P7表示胺基之保護基，P6表示羧基之保護基]。
式(24)所示的化合物係藉由日本特開2002-60351號公報記載的手法或文獻(J.Org.Chem.,51卷，3196頁，1986年)記載之方法、或應用其之方法，因應必要進行保護基之去除或官能基變換，而可加以製造。或，藉由將末端胺基經保護的胺基酸或胺基經保護的寡肽之酸醯胺以醛或酮處理，可加以獲得。
藉由使化合物(24)，於惰性溶媒中、酸或鹼存在下，於冷卻下~室溫，與具有羥基的化合物(25)反應，可製造化合物(26)。就使用的酸而言，例如，可列舉氫氟酸、鹽酸、硫酸、硝酸、磷酸、硼酸等之無機酸；乙酸、檸檬酸、對甲苯磺酸、甲烷磺酸等之有機酸；四氟硼酸鹽、氯化鋅、氯化錫、氯化鋁、氯化鐵等之路易士酸等。尤其對甲苯磺酸為較佳。就使用的鹼而言，只要自前述之鹼之中適宜選擇來使用即可，尤其較佳為三級丁醇鉀等之鹼金屬烷氧化物；氫氧化鈉、氫氧化鉀等之鹼金屬氫氧化物；氫化鈉、氫化鉀等之鹼金屬氫化物；二異丙基醯胺鋰(lithium diisopropylamide)等之二烷基胺基鋰所代表的有機金屬鹼；雙(三甲基矽烷基)醯胺鋰等之雙矽烷基胺之有機金屬鹼等。就反應所使用的溶媒而言，可使用四氫呋喃、1,4-二烷等之醚系溶媒；苯、甲苯等之芳香族烴系溶媒等。上述之溶媒可為與水之混合物。又，就P5所例示的胺基之保護基而言，通常，只要胺基之保護所使用的基即可，並未特別限制，作為代表性者，可列舉製造方法4所記載的胺基之保護基，但於本反應中，P5所例示的胺基之保護基有被切斷的情形。於此情形，因應 必要有必要與適當的胺基之保護試藥反應。
化合物(27)係可藉由去除化合物(26)之保護基P6而製造。其中，作為P6之例示的羧基之保護基，將代表性者以製造方法4所記載，但其情形冀望胺基之保護基P5與羧基之保護基P6以相異方法或條件可去除的保護基。例如，可列舉P5為9-茀基甲基氧基羰基，P6為苯甲基的組合等作為代表性者。彼等之保護基只要因應保護胺基及羧基的化合物之性質等來選擇即可，彼等之保護基之去除之際亦只要選擇因應其保護基的試藥、條件即可。
將羧酸(27)誘導為活性酯、混合酸酐、或酸鹵化物等，鹼存在下，藉由使與化合物(4)或彼等之藥理上可容許的鹽反應而製造化合物(28)，並藉由將獲得的化合物(28)之保護基P5去除，可製造化合物(29)。化合物(4)與羧酸(27)之反應及去除保護基P6的反應，只要使用與製造方法4所述的試藥、反應條件同樣者即可。
可藉由使化合物(29)與末端胺基被保護的胺基酸或胺基被保護的寡肽(30)反應而製造化合物(9')，藉由將獲得的化合物(9')之保護基P7去除，而製造化合物(10')。就P7所例示的胺基之保護基而言，通常，只要胺基之保護所使用的基即可，並未特別限制，作為代表性者，可列舉製造方法4記載的胺基之保護基，其保護基之去除之際亦只要選擇因應保護基的試藥、條件即可。化合物(29)與化合物(30)之反應，只要適用胜肽合成所通常使用的反應試藥、條件即可。上述之方法所製造的化合物(10')係可依據上述之製造方法而導向本發明化合物(1)。
8.製造方法8
以下，詳述製造方法4記載之製造中間體(2)中，n1=1、La=O、及Lb=CR2(-R3)化合物(2')或(2b')之製造方法。式(2')或(2b')所示的化合物、其鹽、或彼等之溶媒合物係可例如以下述之方法製造。
[式中，L1'、L2、LP、R2、及R3表示與前述相同者，Z表示1個之胺基酸殘基或包含2或3個之胺基酸的寡肽，P8表示胺基之保護基，P9表示羧基之保護基]。
藉由將末端胺基及羧基經保護的胺基酸或寡肽(31)之保護基P8去除，製造化合物(32)，藉由使獲得的胺體(32)與化合物(11)或(11b)反應，可製造化合物(33)或(33b)。就P8所例示的胺基之保護基而言，通常，只要胺基之保護所使用的基即可，並未特別限制，作為代表性者，可列舉製造方法4所記載的胺基之保護基。又，即使保護基P8之去除之際，只要選擇因應其保護基的試藥、條件即可。化合物(32)與羧酸(11)或(11b)之反應，只要使用與製造方法4所述的試藥、反應條件同樣者即可。
藉由去除化合物(33)或(33b)之保護基P9而製造化合物(34)或(34b)，藉由使獲得的羧酸(34)與化合物(29)反應而製造製造中間體(2')或(2b')。就作為P8所例示的羧基之 保護基而言，代表性者記載於製造方法4，但其脫保護反應只要使用與製造方法4所述的試藥、反應條件同樣者即可。又，化合物(29)與羧酸(34)或(34b)之反應，只要適用胜肽合成所通常使用的反應試藥、條件即可。上述之方法所製造的化合物(2')或(2b')係可依據上述之製造方法而導向本發明化合物(1)。
9.製造方法9
以下，詳述製造方法4記載之製造中間體(17)中，n1=1、La=O、及Lb=CR2(R3)之化合物(17')或(17b')之製造方法。式(17')或(17b')所示的化合物、其鹽、或彼等之溶媒合物亦可藉由例如下述之方法來製造。
[式中，L1'、L2、LP、R2、R3、X、Y、P5、P6、及P7表示與前述相同者]。
藉由將末端胺基及末端羧基經保護的化合物(26)之胺基之保護基P5脫保護而製造化合物(35)，藉由使獲得的胺體(35)與末端胺基或胺基經保護的寡肽(30)反應，可製造化合物(36)。就P5所例示的胺基之保護基而言，通常，只要為胺基之保護所使用的基即可，並未特別限制，作為代表性者，可列舉製造方法4所記載的胺基之保護基。又，即使保護基P5之去除之際，只要選擇因應其保護基的試藥、條件即可。其中，作為P6所示的羧基 之保護基及作為P7所示的胺基之保護基而言，可列舉作為代表性者之製造方法4所記載的羧基及胺基之保護基，但冀望羧基之保護基P6與胺基之保護基P7可以相同方法或條件去除的保護基。例如，可列舉P6為苯甲基酯基，P7為苯甲基氧基羰基的組合等作為代表性者。
可藉由去除化合物(36)之羧基之保護基P6與胺基之保護基P7而製造化合物(37)。亦可藉由依序各自去除羧基之保護基P6及胺基之保護基P7而製造化合物(37)，若為P6與P7可於相同方法或條件下去除的保護基，可將兩者於一步驟去除而製造化合物(37)。
可藉由使獲得的化合物(37)與化合物(11)或(11b)反應而製造化合物(17')或(17b')。化合物(37)與化合物(11)或(11b)之反應係只要使用與製造方法4所述的試藥、反應條件同樣者即可。
10.製造方法10
為先前之製造方法所使用的中間體的式(2)所示的化合物或彼等之藥理上可容許的鹽中，連接物為-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-所示的結構，LP為其N末端有親水性胺基酸，且於N末端有甘胺酸以外之親水性胺基酸的胜肽殘基的情形，例如，可藉由下述之方法製造。
[式中，Lc表示-C(=O)-基，L1'表示L1之末端被變換為順丁烯二醯亞胺基或鹵乙醯基的結構，LP表示包含-Lp1-Lp2-的結構，P3、P10、P11、P12、P13及P14表示保護基]。
LP因係使Lp1及Lp2結合而形成，LP之N末端之親水性胺基酸來自Lp1的緣故，Lp1係只要採用N末端為親水性胺基酸者即可。又，親水性胺基酸可為複數個。又，若採用於Lp2有親水性胺基酸者，因應其位置，可製造於LP之N末端或N末端以外之位置含有複數個親水性胺基酸的LP。
將N末端以P10保護的胜肽或胺基酸(38)誘導為活性酯、混合酸酐等，藉由使與獲得的化合物(7)反應，可製造化合物(39)。形成胜肽或胺基酸(38)與化合物(7)之醯胺鍵的反應條件、試藥、鹼、及溶媒只要不阻礙反應即可，可自化合物(6)之合成所述者適宜選擇來使用。胺基之保護基P10係只要自化合物(6)之保護基所述者適宜選擇來使用即可，因應其化合物之性質等來選擇即可。又，如胜肽合成所通常使用的方式，將構成胜肽或胺基酸(38)的胺基酸或胜肽依序反應並重複脫保護，而使伸長，亦可製造化合物(39)。
可藉由使獲得的化合物(39)之胺基之保護基P10脫保護而製造化合物(40)。只要選擇因應其保護基的試藥、條件即可。
將N末端以P11、側鏈之羧基或羥基、胺基以P12保護的胺基酸或胜肽(41)誘導為活性酯、混合酸酐等，藉由使與獲得的化合物(40)反應，可製造化合物(42)。形成胺基酸或胜肽(41)與化合物(40)之胜肽鍵的反應條件、試藥、鹼、及溶媒係只要由化合物(6)之合成所述者適宜選擇來使用即可。就保護基P11及P12而言，自於化合物(6)之胺基、羧基或羥基之保護基所述者適宜選擇來使用即可。惟，於此情形，胺基之保護基P11與側鏈之官能基之保護基P12有必要以相異方法或條件可去除。例如，可列舉P11為9-茀基甲基氧基羰基，P12若為羧基之保護基則為三級丁基等、若為羥基之保護基則為甲氧基甲基等、若為胺基之保護基則為三級丁基氧基羰基等的組合等作為代 表性者。側鏈之官能基之保護基P12經由交付於酸性條件而可脫保護的保護基為較佳，但並未限定於此等，因應保護的化合物之胺基、羧基或羥基之性質等而自上述者選擇即可，即使於彼等之保護基之切斷之際，選擇因應其保護基的試藥、條件即可。又，如胜肽合成所通常使用的方式，亦可將構成的胺基酸或胜肽依序反應、重複脫保護，而使伸長來製造化合物(42)。
可藉由使獲得的化合物(42)之末端胺基之保護基P11脫保護而製造化合物(43)。只要選擇因應其保護基的試藥、條件即可。
將羧酸衍生物(11)誘導為活性酯、混合酸酐、或酸鹵化物等，藉由使與獲得的化合物(43)反應，可製造化合物(44)。其中，羧酸衍生物(11)係於L1'之連接物末端具有順丁烯二醯亞胺基或鹵乙醯基的結構之化合物。
形成羧酸衍生物(11)與化合物(43)之胜肽鍵的反應條件、試藥、鹼、及溶媒係只要由化合物(6)之合成所述者適宜選擇來使用即可。
可藉由使獲得的化合物(44)之胜肽部分之胺基酸側鏈之羧基或羥基、胺基之保護基P12脫保護來製造化合物(2)。只要選擇因應其保護基的試藥、條件即可。
化合物(39)係例如，可以下述之方法來製造。
將N末端以P10保護的胜肽或胺基酸(38)誘導為活性酯、混合酸酐等，鹼存在下，可藉由與將末端之羧基以P3保護的胺化合物(12)反應而製造化合物(45)。形成胜肽或胺基酸(38)與化合物(12)之胜肽鍵的反應條件、試藥、 鹼、及溶媒係只要由化合物(6)之合成所述者適宜選擇來使用即可。化合物(45)之胺基之保護基P10係只要由化合物(6)之保護基所述者適宜選擇來使用即可。就羧基之保護基P3而言，只要使用於有機合成化學，尤以胜肽合成中所通常使用作為羧基之保護基的保護基即可。具體而言，甲基、乙基、三級丁基等之烷基酯、烯丙酯、苯甲基酯等，只要由化合物(6)之保護基所述者適宜選擇來使用即可。於此情形，胺基之保護基P10與羧基之保護基P3有必要以相異方法或條件可去除。例如，可列舉P10為三級丁基氧基羰基，P3為苯甲基的組合等作為代表性者。彼等之保護基係因應保護胺基與羧基的化合物之性質等而自上述者選擇即可，即使於彼等之保護基之切斷之際，選擇因應其保護基的試藥、條件即可。
可藉由使獲得的化合物(45)之羧基之保護基P3脫保護而製造化合物(46)。只要選擇因應其保護基的試藥、條件即可。
將獲得的化合物(46)誘導為活性酯、混合酸酐、或酸鹵化物等，鹼存在下，可藉由使與化合物(4)反應而製造化合物(39)。此反應係只要適用胜肽合成所通常使用的反應試藥、條件即可，反應條件、試藥、鹼及溶媒係只要由化合物(6)之合成所述者適宜選擇來使用即可。
化合物(42)係例如，亦可以下述之方法來製造。
可藉由使化合物(45)之胺基之保護基P10脫保護而製造化合物(47)。只要選擇因應其保護基的試藥、條件即 可。
將胺基酸或胜肽(41)誘導為活性酯、混合酸酐、或酸鹵化物等，鹼存在下，可藉由使與獲得的化合物(47)反應而製造化合物(48)。形成胺基酸或胜肽(41)與化合物(47)之醯胺鍵的反應條件、試藥、鹼、及溶媒係只要由化合物(6)之合成所述者適宜選擇來使用即可。其中，胺基酸或胜肽(41)之保護基P11、P12與化合物(47)之保護基P3係有必要各自以相異方法或條件來去除。例如，可列舉P11為9-茀基甲基氧基羰基，P12為三級丁基氧基羰基、三級丁基、或甲氧基甲基，P3為苯甲基等的組合等作為代表性者。又，如上述側鏈之官能基之保護基P12係藉由交付酸性條件而可脫保護的保護基為較佳，但並未限定於此等，因應保護的化合物之胺基、羧基或羥基之性質等而自上述者選擇即可，即使於彼等之保護基之切斷之際，選擇因應其保護基的試藥、條件即可。
藉由使獲得的化合物(48)之羧基之保護基P3脫保護可製造化合物(49)。只要選擇因應其保護基的試藥、條件即可。
將化合物(49)誘導為活性酯、混合酸酐、或酸鹵化物等，鹼存在下，藉由使與化合物(4)反應可製造化合物(42)。此反應係只要適用胜肽合成所通常使用的反應試藥、條件即可，反應條件、試藥、鹼、及溶媒係只要由化合物(6)之合成所述者適宜選擇來使用即可。
化合物(44)係例如，亦可以下述之方法來製造。
可藉由使化合物(48)之胺基之保護基P11脫保護來製造化合物(50)。只要選擇因應其保護基的試藥、條件即可。
將羧酸衍生物(11)誘導為活性酯、混合酸酐、或酸鹵化物等，鹼存在下，藉由使與獲得的化合物(50)反應，可製造化合物(51)。形成羧酸衍生物(11)與化合物(50)之醯胺鍵的反應條件、試藥、鹼、及溶媒係只要由化合物(6)之合成所述者適宜選擇來使用即可。
可藉由使獲得的化合物(51)之羧基之保護基P3脫保護而製造化合物(52)。只要選擇因應其保護基的試藥、條件即可。
可藉由將化合物(52)誘導為活性酯、混合酸酐、或酸鹵化物等，鹼存在下，使化合物(4)反應而製造化合物(44)。此反應係只要適用胜肽合成所通常使用的反應試藥、條件即可，反應條件、試藥、鹼及溶媒係只要由化合物(6)之合成所述者適宜選擇來使用即可。
化合物(44)係例如，亦可以下述之方法來製造。
將羧酸衍生物(11)誘導為活性酯、混合酸酐、或酸鹵化物等，鹼存在下，藉由使與羧基以P13、側鏈之羧基、羥基或胺基以P12保護的胺基酸或胜肽(53)反應，可製造化合物(54)。形成羧酸衍生物(11)與化合物(53)之醯胺鍵的反應條件、試藥、鹼、及溶媒係只要由化合物(6)之合成所述者適宜選擇來使用即可。其中，就化合物(54)之保護基P12及P13而言，自化合物(6)之羧基、羥基或胺基之保 護基所述者適宜選擇來使用即可。惟，於此情形，羧基之保護基P13與側鏈之官能基之保護基P12有必要以相異方法或條件可去除。例如，可列舉P13為苯甲基，P12若為羧基之保護基則為三級丁基等、若為羥基之保護基則為甲氧基甲基等、若為胺基之保護基則為三級丁基氧基羰基等的組合等作為代表性者。側鏈之官能基之保護基P12係藉由交付酸性條件而可脫保護的保護基為較佳，但並未限定於此等，因應保護的化合物之胺基、羧基或羥基之性質等而自上述者選擇即可，即使於彼等之保護基之切斷之際，選擇因應其保護基的試藥、條件即可。
可藉由使獲得的化合物(54)之羧基之保護基P13脫保護而製造化合物(55)。只要選擇因應其保護基的試藥、條件即可。
又，將化合物(55)誘導為活性酯、混合酸酐、或酸鹵化物等，鹼存在下，可藉由使與羧基以P14保護的胺基酸或胜肽(56)反應，可製造化合物(57)。此反應係只要適用胜肽合成所通常使用的反應試藥、條件即可，反應條件、試藥、鹼、及溶媒係只要由化合物(6)之合成所述者適宜選擇來使用即可。其中就化合物(57)之保護基P12及P14而言，只要自化合物(6)之羧基、羥基或胺基之保護基所述者適宜選擇來使用即可。惟，於此情形，羧基之保護基P14與側鏈之官能基之保護基P12有必要以相異方法或條件可去除。例如，可列舉P14為苯甲基，P12若為羧基之保護基則為三級丁基等、若為羥基之保護基則為甲氧基甲基等、若為胺基之保護基則為三級丁基氧基羰基等 組合等作為代表性者。側鏈之官能基之保護基P12係藉由交付酸性條件而可脫保護的保護基為較佳，但並未限定於此等，因應保護的化合物之胺基、羧基或羥基之性質等而自上述者選擇即可，即使於彼等之保護基之切斷之際，選擇因應其保護基的試藥、條件即可。又，化合物(57)亦可使構成的胺基酸或胜肽依序反應、重複脫保護、使伸長而加以製造。
可藉由使獲得的化合物(57)之羧基之保護基P14脫保護而製造化合物(58)。只要選擇因應其保護基的試藥、條件即可。
將化合物(58)誘導為活性酯、混合酸酐、或酸鹵化物等，鹼存在下，可藉由使與化合物(40)反應而製造化合物(44)。此反應係只要適用胜肽合成所通常使用的反應試藥、條件即可，反應條件、試藥、鹼及溶媒係只要由化合物(6)之合成所述者適宜選擇來使用即可。
化合物(57)係例如，亦可以下述之方法來製造。
將胺基酸或胜肽(56)誘導為活性酯、混合酸酐、或酸鹵化物等，鹼存在下，藉由使與將N末端以P11、側鏈之羧基、羥基或胺基以P12保護的胺基酸或胜肽(41)反應而製造胜肽(59)。形成胺基酸或胜肽(56)與胺基酸或胜肽(41)之胜肽鍵的反應條件、試藥、鹼、及溶媒係只要由化合物(6)之合成所述者適宜選擇來使用即可。其中，就胺基酸或胜肽(56)之羧基之保護基P14、與胺基酸或胜肽(41)之保護基P11及P12而言，係如上述，但有必要可以彼此相異的方法或條件去除。例如，可列舉P11為9-茀基甲 基氧基羰基，P12若為羧基之保護基則為三級丁基等、若為羥基之保護基則為甲氧基甲基等、若為胺基之保護基則為三級丁基氧基羰基等，P7為苯甲基的組合等作為代表性者。側鏈之官能基之保護基P4係藉由交付酸性條件而可脫保護的保護基為較佳，但並未限定於此等，因應保護的化合物之胺基、羧基或羥基之性質等而自上述者選擇即可，即使於彼等之保護基之切斷之際，選擇因應其保護基的試藥、條件即可。
可藉由使獲得的胜肽(59)之N末端之保護基P11脫保護可製造胜肽(60)。只要選擇因應其保護基的試藥、條件即可。
將羧酸衍生物(11)誘導為活性酯、混合酸酐、或酸鹵化物等，鹼存在下，可使與獲得的胜肽(60)反應而製造化合物(57)。形成羧酸衍生物(11)與胜肽(60)之醯胺鍵的反應條件、試藥、鹼、及溶媒係只要由化合物(6)之合成所述者適宜選擇來使用即可。
化合物(42)係例如，亦可以下述之方法來製造。
可藉由使上述之胜肽(59)之C末端之保護基P14脫保護而製造胜肽(61)。只要選擇因應其保護基的試藥、條件即可。
將獲得的胜肽(61)誘導為活性酯、混合酸酐、或酸鹵化物等，鹼存在下，可藉由使與上述之化合物(7)反應而製造化合物(42)。形成胜肽(61)與化合物(7)之醯胺鍵的反應條件、試藥、鹼、及溶媒係只要由化合物(6)之合成所述者適宜選擇來使用即可。
11.製造方法11
式(2)所示的製造中間體中，連接物為-L1-L2-LP-所示的結構，LP為其N末端為親水性胺基酸，且於N末端具有甘胺酸以外之親水性胺基酸的胜肽殘基的情形，亦可藉由下述之方法來製造。
[式中，L1'表示L1之末端被變換為順丁烯二醯亞胺基或鹵乙醯基的結構，LP表示包含-Lp1-Lp2-的結構，P10、P11、P12、及P14表示保護基]。
LP因係使Lp1及Lp2結合而形成，LP之N末端 之親水性胺基酸成為來自Lp1，故Lp1只要採用N末端為親水性胺基酸即可。又，親水性胺基酸可為複數個。又，若於Lp2採用有親水性胺基酸者，因應其位置，可製造於LP之N末端或N末端以外之位置含有複數個親水性胺基酸的LP。
將製造方法10記載之N末端以P10保護的胜肽或胺基酸(38)誘導為活性酯、混合酸酐等，藉由使與化合物(4)或其鹽反應，可製造化合物(62)。形成胜肽或胺基酸(38)與化合物(4)之胜肽鍵的反應條件、試藥、鹼、及溶媒係只要不阻礙反應即可，只要自化合物(6)之合成所述者適宜選擇來使用即可。保護基P10係自化合物(6)之保護基所述者加以適宜選擇來使用即可，因應保護胺基的化合物之性質等來選擇即可。又，如胜肽合成所通常使用的方式，將胜肽或構成胺基酸(38)的胺基酸或胜肽依序反應及重複脫保護，而使伸長，亦可製造化合物(62)。
可藉由使獲得的化合物(62)之胺基之保護基P10脫保護而製造化合物(63)。只要選擇因應其保護基的試藥、條件即可。
藉由將製造方法10記載之N末端以P11、側鏈之羧基、羥基、或胺基以P12保護的胺基酸或胜肽(41)誘導為活性酯、混合酸酐等，使與獲得的化合物(63)反應，可製造化合物(64)。形成胺基酸或胜肽(41)與化合物(63)之胜肽鍵的反應條件、試藥、鹼、及溶媒係只要由化合物(6)之合成所述者適宜選擇來使用即可。就保護基P11及P12而言，係如製造方法10記載。又，如胜肽合成所通常使 用的方式，化合物(64)亦可將構成的胺基酸或胜肽依序反應、重複脫保護、使伸長而加以製造。
藉由使獲得的化合物(64)之胺基之保護基P11脫保護可製造化合物(65)。只要選擇因應其保護基的試藥、條件即可。
將羧酸衍生物(11)誘導為活性酯、混合酸酐、或酸鹵化物等，藉由使與獲得的化合物(65)反應，可製造化合物(66)。形成羧酸衍生物(11)與化合物(65)之胜肽鍵的反應條件、試藥、鹼、及溶媒係只要由化合物(6)之合成所述者適宜選擇來使用即可。
藉由使獲得的化合物(66)之羧基或羥基、胺基之保護基P12脫保護可製造化合物(2)。只要選擇因應其保護基的試藥、條件即可。
化合物(64)係例如，亦可以下述之方法來製造。
藉由將製造方法10記載之胜肽(61)誘導為活性酯、混合酸酐、或酸鹵化物等，使與化合物(4)或其鹽反應，可製造化合物(64)。形成胜肽(61)與化合物(4)之胜肽鍵的反應條件、試藥、鹼、及溶媒係只要由化合物(6)之合成所述者適宜選擇來使用即可。
化合物(66)係例如，亦可以下述之方法來製造。
將製造方法10記載之化合物(58)誘導為活性酯、混合酸酐等，鹼存在下，藉由使與化合物(4)反應，或將製造方法10記載之胺基酸或胜肽(55)誘導為活性酯、混合 酸酐等，鹼存在下，藉由使與上述之化合物(63)反應，可製造化合物(66)。形成各自之胜肽鍵的反應條件、試藥、鹼、及溶媒係只要由化合物(6)之合成所述者適宜選擇來使用即可。
12.製造方法12
式(2)所示的製造中間體之中，連接物具有-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-或-L1-L2-LP-之任一者之結構，LP為其N末端為親水性胺基酸，且於N末端具有甘胺酸以外之親水性胺基酸的胜肽殘基的情形，例如，亦可藉由下述之方法來製造。
[式中，L1'表示L1之末端為被變換為順丁烯二醯亞胺基、鹵乙醯基、或(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-(CH2)n4-C(=O)-的結構，LP表示包含-Lp1-Lp2-的結構，P11、P15表示保護基]。
式(2)所示的製造中間體有連接物為-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-所示的結構、及-L1-L2-LP-所示的結構之二種態樣。
連接物為-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-所示的結構之化合物(2)或(2b)係可如以下製造。
化合物(67)可與製造方法10記載之化合物(42)同樣地合成，但與化合物(42)不同，其胺基之保護基P11與側鏈之官能基之保護基P15可不需可以相異方法或條件去除。側鏈之官能基為羧基或羥基，亦可使其胺基之保護基P11與側鏈之羧基或羥基之保護基P15同時脫保護。例如，可列舉P11為三級丁基氧基羰基而P15為三級丁基或三苯甲基、或P11為苯甲基氧基羰基而P15為苯甲基等組合等作為代表性者。彼等之保護基係因應保護的化合物之胺基、羧基、或羥基之性質等，自化合物(6)之保護基所述者適宜選擇來使用即可，即使於彼等之保護基之切斷之際，選擇因應其保護基的試藥、條件即可。化合物(67)係只要使用滿足上述性質的經保護的胺基酸或胜肽，則可以與製造方法10同樣地合成。
可藉由使化合物(67)之保護基P11、P15依序或同時脫保護來製造化合物(68)。只要選擇因應其保護基的試藥、條件即可。
化合物(68)雖LP之親水性側鏈之官能基並未特別保護，但於鹼存在下，藉由與誘導為活性酯、混合酸酐等的化合物(11)或(11b)反應，可製造化合物(2)或(2b)。形成各自之胜肽鍵的反應條件、試藥、鹼、及溶媒係只要由化合物(6)之合成所述者適宜選擇來使用即可。
連接物為-L1-L2-LP-所示的結構之化合物(2)或(2b)可如以下方式製造。
化合物(69)亦可與製造方法11記載之化合物(64)同樣地合成，但與化合物(64)不同，其胺基之保護基P11與側鏈之官能基之保護基P15可不需可以相異方法或條件去除。側鏈之官能基為羧基或羥基，亦可使其胺基之保護基P11與側鏈之羧基或羥基之保護基P15同時脫保護。例如，可列舉P11為三級丁基氧基羰基，P15為三級丁基或三苯甲基、或P11為苯甲基氧基羰基，P15為苯甲基等組合等作為代表性者。彼等之保護基係因應保護的化合物之胺基、羧基或羥基之性質等而自化合物(6)之保護基所述者適宜選擇來使用即可，即使於彼等之保護基之切斷之際，選擇因應其保護基的試藥、條件即可。化合物(69)若使用滿足上述之性質的經保護胺基酸或胜肽，則可與製造方法11同樣地合成。
可藉由使化合物(69)之保護基P11、P15依序或同時脫保護而製造化合物(70)。只要選擇因應其保護基的試藥、條件即可。
化合物(70)係雖LP之親水性側鏈之官能基並未特別保護，但於鹼存在下，藉由使與誘導為活性酯、混合酸酐等的化合物(11)或(11b)反應，可製造化合物(2)或(2b)。形成各自之胜肽鍵的反應條件、試藥、鹼、及溶媒係只要由化合物(6)之合成所述者適宜選擇來使用即可。
13.製造方法13
製造方法11所示的化合物(64)中，連接物-LP-具有包含-Lp1-Gly-Gly-Phe-Gly-的結構的情形，亦可藉由下述之方法製造。
[式中，P11、P12表示保護基]。
可將製造方法10記載之胺基酸或胜肽(41)誘導為活性酯、混合酸酐、或酸鹵化物等，鹼存在下，藉由使與甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺醯胺(國際公開第97/46260號記載的醫藥化合物之游離體)(71)或其鹽反應而製造化合物(72)。形成胺基酸或胜肽(41)與化合物(71)之胜肽鍵的反應條件、試藥、鹼、及溶媒係只要由化合物(6)之合成所述者適宜選擇來使用即可。就N末端之保護基P11、側鏈之官能基之保護基P12而言，如於上述製造方法10。又，亦可無側鏈之官能基之保護基P12，使用僅保護N末端的胺基酸或胜肽(41)進行反應，可獲得化合物(72)。
14.製造方法14
式(2)或(2b)所示的化合物中，連接物係-L1-L2-LP-所示的結構之化合物或彼等之藥理上可容許的鹽，例如，可藉由下述之方法製造。
[式中，L1'表示L1之末端被變換為順丁烯二醯亞胺基、末端鹵乙醯基、或(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-(CH2)n4-C(=O)-的結構，LP表示包含-Lp1-Lp2-的結構，P14及P16表示保護基]。
胜肽(73)係其N末端以P16保護。胜肽(73)係如胜肽合成所通常使用的方式，可將此構成的胺基酸或胜肽依序縮合反應及重複脫保護而合成。
將胜肽(73)誘導為活性酯、混合酸酐等，藉由與化合物(4)或其鹽反應，可製造化合物(74)。形成胜肽(73)與化合物(4)之胜肽鍵的反應條件、試藥、鹼、及溶媒係只要由化合物(6)之合成所述者適宜選擇來使用即可。保護基P16係只要由化合物(6)之合成所述者適宜選擇來使用即可。
又，化合物(74)亦可藉由將N末端以P16保護的胺基酸或胜肽(75)誘導為活性酯、混合酸酐等，使與製造方法11記載之化合物(63)反應而製造。形成胺基酸或胜肽(75)與化合物(63)之胜肽鍵的反應條件、試藥、鹼、及溶 媒係只要由化合物(6)之合成所述者適宜選擇來使用即可。保護基P16係只要由化合物(6)之合成所述者適宜選擇來使用即可。
可藉由使獲得的化合物(74)之胺基之保護基P16脫保護而製造化合物(76)。只要選擇因應其保護基的試藥、條件即可。
將羧酸衍生物(11)或(11b)誘導為活性酯、混合酸酐、或酸鹵化物等，藉由使與獲得的化合物(76)反應，可製造化合物(2)或(2b)。形成羧酸衍生物(11)或(11b)與化合物(76)之醯胺鍵的反應條件、試藥、鹼、及溶媒係只要由化合物(6)之合成所述者適宜選擇來使用即可。
化合物(2)亦可以下述之方法製造。
化合物(77)可以與製造方法10記載之化合物(55)同樣地合成。將製造方法10記載的胺基酸或胜肽(56)誘導為活性酯、混合酸酐、或酸鹵化物等，藉由使與化合物(77)反應，可製造化合物(78)。其中，胺基酸或胜肽(56)係其C末端經P14保護。形成胺基酸或胜肽(56)與化合物(77)之醯胺鍵的反應條件、試藥、鹼、及溶媒係只要由化合物(6)之合成所述者適宜選擇來使用即可。
化合物(78)亦可藉由將化合物(11)誘導為活性酯、混合酸酐等，使與C末端經P14保護的胜肽(79)反應而製造。胜肽(79)係如胜肽合成所通常使用的方式，可將其構成的胺基酸或胜肽依序縮合反應及重複脫保護而合成。形成胜肽(79)與化合物(11)之胜肽鍵的反應條件、試藥、鹼、及溶媒係只要由化合物(6)之合成所述者適宜選擇來使 用即可。保護基P14係於酸條件下可脫保護的保護基為較佳，但並未限定於此等，由化合物(6)之合成所述者適宜選擇來使用即可。
可藉由使獲得的化合物(78)之羧基之保護基P14脫保護來製造化合物(80)。只要選擇因應其保護基的試藥、條件即可。
將化合物(80)誘導為活性酯、混合酸酐等，藉由使與化合物(4)或其鹽反應，可製造化合物(2)。形成化合物(80)與化合物(4)之胜肽鍵的反應條件、試藥、鹼、及溶媒係只要由化合物(6)之合成所述者適宜選擇來使用即可。
此外，化合物(2)亦可以下述之方法製造。
將製造方法11記載之化合物(63)誘導為活性酯、混合酸酐等，鹼存在下，藉由使與化合物(77)反應，可製造化合物(2)。形成化合物(77)與化合物(63)之腔肽鍵的反應條件、試藥、鹼、及溶媒係只要由化合物(6)之合成所述者適宜選擇來使用即可。
15.製造方法15
製造方法2記載的式(2a)所示的製造中間體，L2'為L2之末端被變換為巰基烷醯基的結構的情形，可藉由下述之方法製造。
[式中，LP表示包含Lp1-Lp2的結構，P3、P12、P14、P17表示保護基]。
於式(2a)所示的製造中間體，連接物有-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-所示的結構、及-L1-L2-LP-所示的結構之二種態樣。
連接物為-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-所示的結構之化合物(2a)係可如以下方式製造。
將末端之巰基以P17保護的羧酸化合物(81)誘導為活性酯或混合酸酐等，藉由使與製造方法10記載之化合物(43)反應，可製造化合物(82)。此反應係只要適用胜肽合成所通常使用的反應試藥、條件即可，反應條件、試藥 、鹼、及溶媒係只要由化合物(6)之合成所述者適宜選擇來使用即可。就巰基之保護基P17而言，只要使用於有機合成化學通常使用作為巰基之保護基的保護基即可，具體而言由S-甲基硫醚基(S-methyl sulfide group)、S-乙基硫醚基、S-2-吡啶基硫醚基等之硫醚基；乙醯基等之酯基；苯甲基、9-茀基甲基、三苯甲基等之芳基甲基醚基；S-2-氰基乙基等之乙基醚基等適宜選擇來使用即可。於此情形，就Lp1之側鏈之胺基、羧基或羥基之保護基P12而言，藉由交付酸性條件而可脫保護的保護基為較佳，但並未限定於此等，因應保護的化合物之胺基、羧基或羥基之性質等，自上述者選擇而使用即可，但巰基之保護基P17係有必要可以與Lp1之側鏈之羧基或羥基、胺基之保護基P12相異的方法或條件去除。例如，可列舉於羧基的情形，保護基P12為三級丁基，保護基P17為S-甲基硫醚基的組合等作為代表性者。又，保護基P17亦可不存在，於此情形，化合物(82)之巰基係以無保護的狀態下存在。
可藉由使獲得的化合物(82)之Lp1之側鏈之羧基或羥基、胺基之保護基P12脫保護而製造化合物(83)。只要選擇因應其保護基的試藥、條件即可。
可藉由使獲得的化合物(83)之巰基之保護基P17脫保護而製造化合物(2a)。只要選擇因應其保護基的試藥、條件即可。
化合物(82)亦可以下述之方法製造。
將上述之巰基以P14保護的羧酸化合物(81)誘導為活性酯、混合酸酐、或酸鹵化物等，藉由使與製造方法10 記載之化合物(50)反應，可製造化合物(84)。此反應係只要適用胜肽合成所通常使用的反應試藥、條件即可，反應條件、試藥、鹼及溶媒係只要由化合物(6)之合成所述者適宜選擇來使用即可。保護基P12及P17係如上述，就羧基之保護基P3而言，只要由化合物(6)之保護基所述者適宜選擇來使用即可，但巰基之保護基P17及側鏈之官能基之保護基P12有必要可以與羧基之保護基P3相異的方法或條件去除。例如，可列舉P12若為羧基之保護基則為三級丁基，P17為S-甲基硫醚基，P3為烯丙基的組合等作為代表性者。又，P17可不存在，此情形係化合物(84)之巰基無保護地存在。
可藉由使獲得的化合物(84)之羧基之保護基P3脫保護而製造化合物(85)。只要選擇因應其保護基的試藥、條件即可。
將化合物(85)誘導為活性酯、混合酸酐、或酸鹵化物等，鹼存在下，可藉由使與化合物(4)反應而製造化合物(82)。此反應係只要適用胜肽合成所通常使用的反應試藥、條件即可，反應條件、試藥、鹼、及溶媒係只要由化合物(6)之合成所述者適宜選擇來使用即可。
連接物為-L1-L2-LP-所示的結構之化合物(2a)，LP為其N末端為親水性胺基酸，N末端具有甘胺酸以外之親水性胺基酸的胜肽殘基的情形，可如以下方式製造。
將上述之巰基以P17保護的羧酸化合物(81)誘導為活性酯、混合酸酐、或酸鹵化物等，藉由使與製造方法11記載之化合物(65)反應，可製造化合物(86)。此反應係只 要適用胜肽合成所通常使用的反應試藥、條件即可，反應條件、試藥、鹼及溶媒係只要由化合物(6)之合成所述者適宜選擇來使用即可。保護基P12及P17係如上述。
化合物(86)係例如，亦可以下述之方法來製造。
將巰基以P17保護的羧酸化合物(81)誘導為活性酯或混合酸酐等，藉由使與製造方法10記載之胜肽(60)反應，可製造化合物(87)。此反應係只要適用胜肽合成所通常使用的反應試藥、條件即可，反應條件、試藥、鹼、及溶媒係只要由化合物(6)之合成所述者適宜選擇來使用即可。保護基P12、P14及P17係如上述，只要由化合物(6)之保護基所述者適宜選擇來使用即可，但巰基之保護基P17及側鏈之官能基之保護基P12有必要可以與羧基之保護基P14相異的方法或條件去除。例如，可列舉P12若為羧基之保護基則為三級丁基，P17為S-甲基硫醚基，P14為烯丙基的組合等作為代表性者。又，P17係可不存在，於此情形化合物(87)之巰基係以無保護下存在。
可藉由使獲得的化合物(87)之胜肽之羧基之保護基P14脫保護而製造化合物(88)。只要選擇因應其保護基的試藥、條件即可。
將獲得的化合物(88)誘導為活性酯、混合酸酐、或酸鹵化物等，鹼存在下，藉由使與化合物(4)或其鹽反應，可製造化合物(86)。此反應係只要適用胜肽合成所通常使用的反應試藥、條件即可，反應條件、試藥、鹼及溶媒係只要由化合物(6)之合成所述者適宜選擇來使用即可。
可藉由使獲得的化合物(86)之LP1之側鏈的保護基P4脫保護而製造化合物(89)。只要選擇因應其保護基的試藥、條件即可。
可藉由使獲得的化合物(89)之巰基之保護基P17脫保護而製造化合物(2a)。只要選擇因應其保護基的試藥、條件即可。
連接物係-L1-L2-LP-所示的結構之化合物(2a)，LP為其C末端2或3個以上之甘胺酸所構成的寡肽，與藥物結合，且即使N末端成為親水性胺基酸的情形亦不成為甘胺酸以外之親水性胺基酸的胜肽殘基的情形，可如以下方式製造。
將羧酸化合物(81)誘導為活性酯、或混合酸酐等，藉由使與製造方法14記載之化合物(76)反應，可製造化合物(2a)。其中，巰基可不以P17保護。此反應係只要適用胜肽合成所通常使用的反應試藥、條件即可，反應條件、試藥、鹼及溶媒係只要由化合物(6)之合成所述者適宜選擇來使用即可。
16.製造方法16
式(2)所示的製造中間體之中，L1’為L1之末端被變換為(順丁烯二醯亞胺-N-基)-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-的結構的情形，可藉由下述之方法製造。
[式中，P18、P19表示保護基]。
於式(2)所示的製造中間體，連接物有-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-所示的結構及-L1-L2-LP-所示的結構之二種態樣。
連接物為-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-所示的結構之化合物(2)係可如以下方式製造。
將側鏈之羧基以P18保護的胺基酸(90)與N-甲氧基羰基順丁烯二醯亞胺(91)於水中、碳酸氫鈉等之鹼存在下，藉由使於-40℃至100℃反應，可製造(順丁烯二醯亞胺-N-基)-化的化合物(92)。順丁烯二醯亞胺基化合物係可自具有胺基的化合物，使用N-甲氧基羰基順丁烯二醯亞胺而以周知之方法(例如，Keller,O.；Rudinger,J.Helv.Chem.Acta 1975,58(2),531-541.)或依據其之方法而合成。就羧基之保護基P18而言，只要使用於有機合成化學 通常使用作為羧基之保護基的保護基即可，藉由交付酸性條件而可脫保護的保護基為較佳，但未限定於此等。
將末端之胺基以P19保護的化合物(93)誘導為活性酯、混合酸酐等，鹼存在下，藉由使與製造方法12記載的化合物(68)反應，可製造化合物(94)。形成化合物(93)與化合物(68)之醯胺鍵的反應條件、試藥、鹼、及溶媒係只要由化合物(6)之合成所述者適宜選擇來使用即可。化合物(93)之胺基之保護基P19係只要由化合物(6)之保護基所述者適宜選擇來使用即可。
可藉由使獲得的化合物(94)之胺基之保護基P19脫保護而製造化合物(95)。只要選擇因應其保護基的試藥、條件即可。
將上述化合物(92)誘導為活性酯、混合酸酐等，鹼存在下，可藉由使與獲得的化合物(95)反應而製造化合物(96)。化合物(92)與化合物(95)之醯胺鍵形成之反應條件、試藥、鹼、及溶媒係只要由化合物(6)之合成所述者適宜選擇來使用即可。
可藉由使獲得的化合物(96)之羧基之保護基P18脫保護而製造化合物(2)。只要選擇因應其保護基的試藥、條件即可。
連接物為-L1-L2-LP-所示的結構之化合物(2)係可如以下方式製造。
同樣地將末端之胺基以P12保護的化合物(93)誘導為活性酯、混合酸酐等，鹼存在下，可藉由使與製造方法12記載的化合物(70)反應而製造化合物(97)。形成化合物 (93)與化合物(70)之醯胺鍵的反應條件、試藥、鹼、及溶媒係只要由化合物(6)之合成所述者適宜選擇來使用即可。保護基P19係如上述。
可藉由使獲得的化合物(97)之胺基之保護基P19脫保護而製造化合物(98)。只要選擇因應其保護基的試藥、條件即可。
將上述的化合物(92)誘導為活性酯、混合酸酐等，鹼存在下，可藉由使與獲得的化合物(98)反應而製造化合物(99)。化合物(92)與化合物(98)之醯胺鍵形成之反應條件、試藥、鹼、及溶媒係只要由化合物(6)之合成所述者適宜選擇來使用即可。
可藉由使獲得的化合物(99)之羧基之保護基P18脫保護而製造化合物(2)。只要選擇因應其保護基的試藥、條件即可。
17.製造方法17
式(2)所示的製造中間體之中，L1’係L1之末端被變換為順丁烯二醯亞胺基或鹵乙醯基的結構，L2係N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-者，可藉由下述之方法製造。
[式中，P20表示保護基，E1表示脫離基]。
於式(2)所示的製造中間體，連接物有-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-所示的結構及-L1-L2-LP-所示的結構之二種態樣。
連接物為-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-所示的結構之化合物(2)可以如下方式製造。
將C末端以P20保護的甘胺酸衍生物(100)，於鹼存在下，可藉由使與化合物(101)反應而製造化合物(102)。羧基之保護基P20係藉由交付酸性條件而可脫保護的保護基為較佳，但並未限定於此等。化合物(101)之脫離基E1為p-甲苯磺酸酯、甲基磺酸酯、三氟甲基磺酸酯等，磺酸酯之外，可列舉碘、溴、氯等鹵化物等。此反應適用N-烷基化所通常使用的反應條件即可，鹼、溶媒係只要由化合物(6)之合成所述者加以選擇即可。
將羧酸衍生物(103)誘導為活性酯、混合酸酐、或酸 鹵化物等，藉由使與獲得的化合物(102)反應，可製造化合物(104)。形成羧酸衍生物(103)與化合物(102)之胜肽鍵的反應條件、試藥、鹼、及溶媒係只要由化合物(6)之合成所述者適宜選擇來使用即可。
可藉由使獲得的化合物(104)之羧基之保護基P13脫保護而製造化合物(105)。只要選擇因應其保護基的試藥、條件即可。
將獲得的化合物(105)誘導為活性酯、混合酸酐、或酸鹵化物等，藉由使與製造方法12記載之化合物(68)反應，可製造化合物(2)。形成羧酸衍生物(105)與化合物(68)之醯胺鍵的反應條件、試藥、鹼、及溶媒係只要由化合物(6)之合成所述者適宜選擇來使用即可。
連接物為-L1-L2-LP-所示的結構之化合物(2)可如以下方式製造。
同樣地，將化合物(105)誘導為活性酯、混合酸酐、或酸鹵化物等，藉由使與製造方法12記載之化合物(70)反應，可製造化合物(2)。形成羧酸衍生物(105)與化合物(70)之醯胺鍵的反應條件、試藥、鹼、及溶媒係只要由化合物(6)之合成所述者適宜選擇來使用即可。
18.製造方法18
製造方法4所示的化合物(10)中，-La-Lb-Lc-具有包含-N(-Q-H)-(CH2)n8-CO-的結構的情形，亦可藉由下述之方法來製造。
[式中，-Q-表示單鍵、-CH2-、-(CH2)-O-、或-(CH2)-COO-，P2、P21、P22、P23表示保護基，E2、E3表示脫離基]。
將一邊之末端胺基經P21保護的伸烷基二胺(106)，鹼存在下，可藉由使與化合物(107)反應而製造化合物(108)。胺基之保護基P21係藉由交付酸性條件而可脫保護的保護基為較佳，但未限定於此等。羧基之保護基P22可列舉苯甲基等作為代表性者。彼等之保護基只要因應保護的化合物之性質等來選擇即可，即使於彼等之保護基之去除之際，只要選擇因應其保護基的試藥、條件即可。化合物(107)之脫離基E2及化合物(109)或化合物(117)之脫離基E3除了碘、溴、氯等鹵化物之外，可列舉p-甲苯磺酸酯、甲基磺酸酯、三氟甲基磺酸酯等、磺酸酯等。此反應只要適用N-烷基化所通常使用的反應條件即可，鹼、溶媒係只要由化合物(6)之合成所述者選擇即可。
將獲得的化合物(108)，鹼存在下，藉由使與化合物(109)反應，可製造化合物(110)。形成化合物(108)與化合物(109)之胺基烷基的反應條件、試藥、鹼、及溶媒係自化合物(108)之合成所述者適宜選擇來使用即可。保護基P23係對胺基之保護基的情形，藉由交付鹼性條件而可脫保護的保護基為較佳，但以有機化合物之合成所通常使用的保護基來保護即可。具體而言，只要由化合物(6)之合成所述者選擇即可。
可藉由使獲得的化合物(110)之羧基之保護基P22脫保護而製造化合物(111)。只要選擇因應其保護基的試藥、條件即可。
將獲得的化合物(111)誘導為活性酯、混合酸酐等，藉由使與化合物(4)或其鹽反應，可製造化合物(112)。形成羧酸(111)與化合物(4)之胜肽鍵的反應條件、試藥、鹼、及溶媒係只要不阻礙反應即可，由化合物(6)之合成所述者適宜選擇來使用即可。
可藉由使獲得的化合物(112)之胺基之保護基P21脫保護而製造化合物(113)。只要選擇因應其保護基的試藥、條件即可。
藉由將獲得的化合物(113)誘導為活性酯、混合酸酐等，使與製造方法4記載之化合物(8)或其鹽反應，可製造化合物(114)。形成胜肽或胺基酸(8)與化合物(113)之胜肽鍵的反應條件、試藥、鹼、及溶媒係只要不阻礙反應即可，由化合物(6)之合成所述者適宜選擇來使用即可。
可藉由使獲得的化合物(114)之保護基P23脫保護而 製造化合物(115)。只要選擇因應其保護基的試藥、條件即可。
化合物(108)亦可以下述之方法製造。
將一邊之末端胺基經P21保護的伸烷基二胺(106)，鹼存在下，藉由使與化合物(116)反應，可製造化合物(108)。胺基之保護基P21係藉由交付酸性條件而可脫保護的保護基為較佳，但未限定於此等。羧基之保護基P22可列舉苯甲基等作為代表性者。彼等之保護基係只要因應保護的化合物之性質等來選擇即可，即使於彼等之保護基之去除之際，只要選擇因應其保護基的試藥、條件即可。此反應只要適用有機合成所通常使用的反應條件即可，鹼、溶媒係只要由化合物(6)之合成所述者選擇即可。
化合物(115)亦可以下述之方法製造。
將化合物(108)，鹼存在下，藉由使與化合物(117)反應，可製造化合物(118)。形成化合物(108)與化合物(117)之胺基烷基的反應條件、試藥、鹼、及溶媒係由化合物(108)之合成所述者加以適宜選擇來使用即可。
可藉由使獲得的化合物(118)之羧基之保護基P22脫保護而製造化合物(119)。只要選擇因應其保護基的試藥、條件即可。
將獲得的化合物(119)誘導為活性酯、混合酸酐等，藉由使與化合物(4)或其鹽反應，可製造化合物(120)。形成羧酸(119)與化合物(4)之胜肽鍵的反應條件、試藥、鹼、及溶媒係只要不阻礙反應即可，由化合物(6)之合成所述者適宜選擇來使用即可。
可藉由使獲得的化合物(120)之胺基之保護基P21脫保護而製造化合物(121)。只要選擇因應其保護基的試藥、條件即可。
將獲得的化合物(121)誘導為活性酯、混合酸酐等，藉由使與製造方法4記載之化合物(8)或其鹽反應，可製造化合物(122)。形成胜肽或胺基酸(8)與化合物(121)之胜肽鍵的反應條件、試藥、鹼、及溶媒只要不阻礙反應即可，由化合物(6)之合成所述者適宜選擇來使用即可。可藉由使獲得的化合物(122)之保護基P2脫保護而製造化合物(115)。只要選擇因應其保護基的試藥、條件即可。
化合物(122)亦可以下述之方法製造。
可藉由使化合物(112)之胺基之保護基P21及P23脫保護而製造化合物(123)。只要選擇因應其保護基的試藥、條件即可。
將獲得的化合物(124)誘導為活性酯、混合酸酐等，藉由使與製造方法4記載之化合物(8)或其鹽反應，可製造化合物(124)。形成胜肽或胺基酸(8)與化合物(123)之胜肽鍵的反應條件、試藥、鹼、及溶媒係只要不阻礙反應即可，由化合物(6)之合成所述者適宜選擇來使用即可。
可藉由使獲得的化合物(124)之保護基P2脫保護而製造化合物(122)。只要選擇因應其保護基的試藥、條件即可。
又，製造方法1至製造方法18之中間體之化合物可為任一種鹽。
本發明之抗體-藥物結合物藉由放置於大氣 中、或進行再結晶或純化操作，而有吸收水分、或者附著吸附水等而成為水合物的情形，此類含水的化合物及鹽亦包含於本發明。
又，本發明中亦包含以各種放射性或非放射性同位素標誌的化合物。構成本發明之抗體-藥物結合物的原子之1個以上可以非天然比率含有原子同位素。就原子同位素而言，例如，可列舉氘(2H)、氚(3H)、碘-125(125I)、或碳-13(13C)等。又，本發明化合物係例如，可以氚(3H)、碘-125(125I)或碳-14(14C)等之放射性同位素作放射性標誌。經放射性標誌的化合物係有用於作為治療或預防劑、研究試藥，例如，檢驗試藥、及診斷劑，例如，活體影像診斷劑。本發明之抗體-藥物結合物之全部之同位素變異種不論是否有放射性，皆包含於本發明之範圍。
[醫藥]
本發明之抗HER2抗體-藥物結合物因顯示對癌細胞的細胞傷害活性，故可作為醫藥使用，尤其可作為抗癌的治療劑及/或預防劑使用。
即，本發明之抗HER2抗體-藥物結合物係可選擇作為癌治療之主要治療法的化學療法用之藥劑而使用，就其結果而言，可使癌細胞之成長遲緩、抑制增殖、進而破壞癌細胞。藉由此等，於癌患者，可達成解除由癌所致的症狀、生活品質(QOL)之改善，保持癌患者之生命而達成治療效果。即使為未達到癌細胞之破壞的情形，可藉由癌細胞之增殖之抑制或控制，而於癌患者達成高QOL的同時，亦達成更長期之生存。
除了於此類藥物療法中的藥物單獨使用之外，亦可於輔助療法中作為與其他療法組合的藥劑來使用，可與外科手術、或放射線療法、荷爾蒙療法等組合。再者，亦可作為新輔助療法(neoadjuvant therapy)中的藥物療法之藥劑使用。
如以上的治療用途之外，亦可期待抑制微細轉移癌細胞之增殖，進而破壞的效果。尤其於原發性之癌細胞中HER2的表現被確認時，藉由投予本發明之抗HER2抗體-藥物結合物，可期待癌轉移之抑制、預防效果。例如，可期待抑制、破壞在轉移過程位於體液中的癌細胞的效果、或對於剛在任一組織著床的微細癌細胞的抑制、破壞等之效果。據此，尤其可期待於外科性癌之去除後之癌轉移的抑制、預防效果。
本發明之抗HER2抗體-藥物結合物，對患者除了作為全身療法而投予之外，於癌組織局部投予亦可期待治療效果。
就本發明之抗HER2抗體-藥物結合物所應用的癌之種類而言，可列舉肺癌、尿道上皮癌、大腸癌、前列腺癌、卵巢癌、胰癌、乳癌、膀胱癌、胃癌、胃腸道基質腫瘤、子宮頸癌、食道癌、鱗狀上皮癌、腹膜癌、肝臓癌、肝細胞癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮內膜癌、子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌、外陰部癌、甲狀腺癌、或陰莖癌等。本發明之抗HER2抗體-藥物結合物係於成為治療對象的癌細胞，以表現抗體-藥物結合物中之抗體可辨識的HER2蛋白的癌細胞成為治療對象 。於本說明書，「表現HER2蛋白的癌」係包含於其細胞表面具有HER2蛋白的細胞的癌。HER2蛋白係於各式各樣的人類腫瘤中過度表現，可使用評價HER2蛋白之過度表現的免疫組織化學染色法(IHC)或評價HER2基因之增幅的螢光原位雜交法(fluorescence in situ hybridization)(FISH)等之本領域通常實施的方法而加以評價。
又，本發明之抗HER2抗體-藥物結合物係藉由其抗HER2抗體辨識於癌細胞表面表現的HER2蛋白，進一步內在化而表現抗腫瘤效果，故本發明之抗HER2抗體-藥物結合物之治療對象係未限定於「表現HER2蛋白的癌」，例如白血病、惡性淋巴瘤、漿細胞瘤、骨髓瘤、或肉瘤亦可成為治療對象。
本發明之抗HER2抗體-藥物結合物係可適合對哺乳動物投予，但更佳為人類。
就含本發明之抗HER2抗體-藥物結合物的醫藥組成物中使用的物質而言，於投予量或投予濃度，可自此領域所通常使用的其他製劑添加物加以適宜選擇而應用。
本發明之抗HER2抗體-藥物結合物係可作為含有1種以上之藥學上適合性之成分的藥學組成物而投予。例如，上述藥學組成物，具代表性的為含有1種以上之藥學載劑(例如，滅菌液體)。其中，液體包含例如，水及油(石油、動物來源、植物來源、或合成來源之油)。油可為例如，花生油、大豆油、礦物油、芝麻油等。 水於上述藥學組成物為經靜脈內投予的情形，為更具代表性的載劑。食鹽水溶液、以及右旋糖水溶液及甘油水溶液亦可作為液體載劑，尤其可用於注射用溶液。適當的藥學賦形劑可自此領域周知者適宜選擇。上述組成物，只要需要，亦可含有微量之濕潤劑或乳化劑、或pH緩衝化劑。適當之藥學載劑之例係記載於E.W.Martin之「Remington’s Pharmaceutical Sciences」。其處方係對應投予之態樣。
各種輸送系統為周知的，可使用於投予本發明之抗HER2抗體-藥物結合物。就導入方法而言，可列舉皮內、肌肉內、腹腔內、靜脈內、及皮下之路徑，但並未限定於此等。投予可為例如經由注入或團式注射(bolus injection)者。於特定之較佳實施形態，上述配位體藥物結合體之投予係經由注入。非經口的投予係較佳的投予路徑。
於代表性實施形態，上述藥學組成物係作為適合對人類靜脈內投予的藥學組成物，依據常用順序而被調配。具代表性地，靜脈內投予用之組成物係滅菌之等張性之水性緩衝液中的溶液。必要的情形，上述醫藥亦可含有助溶劑及用以緩和注射部位之疼痛的局部麻醉劑(例如，利卡多因(lignocaine))。一般而言，上述成分係以下列任一者而供給，例如，密封於顯示活性劑的量的安瓿或小袋(sachet)等而經封口的容器中之呈乾燥冷凍乾燥粉末或無水之濃縮物，各別、或於單位劑型中一起混合。藉由注入上述醫藥而被投予的形態的情形，其 可例如以含有滅菌之製藥等級的水或食鹽水的注入瓶而投藥。上述醫藥係藉由注射而被投予的情形，注射用滅菌水或食鹽水之安瓿例如可以將上述成分於投予前混合的方式而提供。
本發明之醫藥組成物可為僅含有本發明之抗HER2抗體-藥物結合物的醫藥組成物，亦可為含有抗HER2抗體-藥物結合物及至少一個其他之癌治療劑的醫藥組成物。本發明之抗HER2抗體-藥物結合物亦可與其他癌治療劑一起投予，據此，可使抗癌效果增強。以如此之目的而使用的其他抗癌劑，可與抗體-藥物結合物同時、各別、或連續地投予至個體，亦可變換各自之投予間隔而投予。就此類癌治療劑而言，可列舉5-FU、帕妥珠單抗(pertuzumab)、卡鉑定(carboplatin)、順鉑(cisplatin)、吉西他濱(gemcitabine)、截瘤達錠(capecitabine)、愛萊諾迪肯(irinotecan)(CPT-11)、紫杉醇(paclitaxel)、多西他賽(docetaxel)、培美曲塞(pemetrexed)、索拉非尼(sorafenib)、長春鹼(vinblastin)、溫諾平(vinorelbine)、依维莫司(everolims)、坦螺旋黴素(tanespimycin)、貝伐單抗(bevacizumab)、奥沙利鉑(oxaliplatin)、拉帕替尼(lapatinib)、阿多曲妥珠單抗依坦辛(ado-trastuzumab emtansine(T-DM1))或國際公開第2003/038043號所記載之藥劑，又可列舉LH-RH類似物(亮丙瑞林(leuprorelin)、戈舍瑞林(goserelin)等)、雌二醇氮芥磷酸酯(estramustine phosphate)、雌激素(estrogen)拮抗藥(他莫昔芬(tamoxifen)、雷洛昔芬(raloxifene)等) 、芳香酶(aromatase)抑制劑(阿那曲唑(anastrozole)、利妥唑(letrozole)、依西美坦(exemestane)等)等，但只要具有抗腫瘤活性的藥劑即可，並未限定於此等。
此類醫藥組成物，作為具有所選擇的組成及必要純度的製劑，只要製劑化為冷凍乾燥製劑或液狀製劑即可。製劑化為冷凍乾燥製劑之際，可為含有此領域所使用的適當製劑添加物的製劑。又於液劑亦同樣地可製劑化為含有此領域所使用的各種製劑添加物的液狀製劑。
醫藥組成物之組成及濃度亦依投予方法而變化，但本發明之醫藥組成物所含的抗HER2抗體-藥物結合物，於抗體-藥物結合物之對抗原的親和性，即對抗原的解離常數(Kd值)之點，係親和性越高(Kd值低)，越能即使以少量之投予量亦使藥效發揮。據此，於抗體-藥物結合物之投予量之決定時，亦可基於抗體-藥物結合物與抗原之親和性的狀況而設定投予量。將本發明之抗體-藥物結合物對人類投予之際，例如，只要將約0.001~100mg/kg以1次或以1~180日1次之間隔作複數次投予即可。
[實施例]
藉由以下所示實施例而具體說明本發明，但本發明並未限定於此等例。又，此等於任何的意義皆非作限定解釋。又，於本說明書，未特別記載之試藥、溶媒及起始材料係可自市售之供給源容易地取得。
參考例1曲妥珠單抗之調製
將Herceptin(Genentech,Inc.)440mg/小瓶之14瓶份溶解於陽離子交換層析緩衝液A(25mM檸檬酸鹽緩衝液，30mM NaCl，pH5.0)之2L，以0.2μm過濾器(Millipore Co.：Stericup 0.22μm，GVPVDF Membrane)進行過濾。將試料供給於陽離子交換層析管柱(SP Sepharose HP 240ml，XK50管柱)，以陽離子交換層析緩衝液B(25mM檸檬酸鹽緩衝液，500mM NaCl，pH5.0)，藉由NaCl濃度30mM~500mM之線性梯度(linear gradient)而溶出，劃分出IgG單體。藉由尺寸排除層析分析，合併單體高純度98%以上之樣品，進行利用UF30K(Millipore Co.：PELLICON XL Filter，BIOMAX 30K，PXB030A50)之濃縮及置換為CBS緩衝液(10mM檸檬酸鹽/140mM NaCl，pH6.0)。置換為CBS緩衝液的樣品以0.2μm過濾器(Sartorius：Minisart-Plus 0.2μm，17823K)進行過濾。
參考例2曲妥珠單抗依坦辛之製造T-DM1
抗體之SMCC化：將以參考例1作成的曲妥珠單抗使用製造方法1記載的共通操作C-2(使用PBS6.5/EDTA作為緩衝液)、共通操作A及共通操作B(使用1.37mLmg-1cm-1作為280nm吸光係數)，緩衝液交換為PBS6.5/EDTA，將於PBS6.5/EDTA(7.60mL)溶解曲妥珠單抗(160.0mg)的溶液準備於15mL聚丙烯製管。其次，於室溫添加SMCC(1.84mg)之DMSO溶液(0.40mL；相對於抗體一分子相當為約5.1當量)，將反應溶液之抗體濃度調整為20mg/mL，使用試管混勻器(Tube Rotator)(MTR-103，AS ONE股份有限公司)，於室溫使其反應2小時。將此反 應液依據共通操作D-2(使用PBS6.5/EDTA作為緩衝液)進行純化，獲得12mL之含154.9mg之SMCC衍生物化的抗體的溶液。
抗體與藥物連接物之結合：對置入50mL聚丙烯製管中的上述溶液，於室溫添加PBS6.5/EDTA(2.56mL)及N2-脫乙醯-N2-(3-巰基-1-側氧基丙基)-美登素(maytansine)(4.67mg；DM1，Journal of Medicinal Chemistry，2006年，49卷，14號，4392項)之DMA(二甲基乙醯胺)溶液(0.93mL；相對於經SMCC衍生物化的抗體一分子相當為約5.8當量)，將反應溶液之抗體濃度調整為10mg/mL，使用試管混勻器而於室溫使其反應16.5小時。
純化操作：將上述溶液，進行藉由使用含氯化鈉(137mM)的磷酸鈉緩衝液(10mM，pH6.5)的共通操作D-1之純化，獲得35mL之含有目的之參考例化合物的溶液。
特性評價：使用利用252nm及280nm之二波長中的UV吸光度的共通操作E，獲得下述之特性值。
抗體濃度：4.14mg/mL，抗體產量：144.9mg(91%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.0。
實施例1中間體(1)
步驟1：(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并 [de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4-側氧基丁基)胺甲酸三級丁酯
將4-(三級氧基羰基胺基)丁酸(0.237g，1.13mmoL)溶解於二氯甲烷(10mL)，添加N-羥基琥珀醯亞胺(0.130g，1.13mmoL)、及1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(0.216g，1.13mmoL)而攪拌1小時。將其反應溶液滴加至添加依喜替康之甲烷磺酸鹽(0.500g，0.94mmoL)、及三乙基胺(0.157mL，1.13mmoL)的N,N-二甲基甲醯胺溶液(10mL)，於室溫攪拌1日。減壓餾除溶媒，將獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇=8：2(v/v)]純化，獲得標題化合物(0.595g，定量的)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.2Hz),1.31(9H,s),1.58(1H,t,J=7.2Hz),1.66(2H,t,J=7.2Hz),1.82-1.89(2H,m),2.12-2.21(3H,m),2.39(3H,s),2.92(2H,t,J=6.5Hz),3.17(2H,s),5.16(1H,d,J=18.8Hz),5.24(1H,d,J=18.8Hz),5.42(2H,s),5.59-5.55(1H,m),6.53(1H,s),6.78(1H,t,J=6.3Hz),7.30(1H,s),7.79(1H,d,J=11.0Hz),8.40(1H,d,J=8.6Hz).
MS(APCI)m/z：621(M+H)+.
步驟2：4-胺基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]丁醯胺
將上述步驟1所獲得的化合物(0.388g，0.61mmoL)溶解於二氯甲烷(9mL)。添加三氟乙酸(9mL)而攪拌4小時。減壓餾除溶媒，將獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿 ~氯仿：甲醇：水=7：3：1(v/v/v)之分配有機層]純化，獲得標題化合物之三氟乙酸鹽(0.343g，定量的)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.2Hz),1.79-1.92(4H,m),2.10-2.17(2H,m),2.27(2H,t,J=7.0Hz),2.40(3H,s),2.80-2.86(2H,m),3.15-3.20(2H,m),5.15(1H,d,J=18.8Hz),5.26(1H,d,J=18.8Hz),5.42(2H,s),5.54-5.61(1H,m),6.55(1H,s),7.32(1H,s),7.72(3H,brs),7.82(1H,d,J=11.0Hz),8.54(1H,d,J=8.6Hz).
MS(APCI)m/z：521(M+H)+.
實施例2抗體-藥物結合物(2)
步驟1：N-(三級丁氧基羰基)甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4-側氧基丁基)甘胺醯胺
將N-(三級丁氧基羰基)甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基甘胺酸(0.081g，0.19mmoL)溶解於二氯甲烷(3mL)，添加N-羥基琥珀醯亞胺(0.021g，0.19moLL)、及1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(0.036g， 0.19mmoL)並攪拌3.5小時。將此反應溶液滴加於添加實施例1步驟2所獲得的化合物(0.080g，0.15mmoL)的N,N-二甲基甲醯胺溶液(1.5mL)，於室溫攪拌4小時。減壓餾除溶媒，將獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇=8：2(v/v)]純化，獲得標題化合物(0.106g，73%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.4Hz),1.36(9H,s),1.71(2H,m),1.86(2H,t,J=7.8Hz),2.15-2.19(4H,m),2.40(3H,s),2.77(1H,dd,J=12.7,8.8Hz),3.02(1H,dd,J=14.1,4.7Hz),3.08-3.11(2H,m),3.16-3.19(2H,m),3.54(2H,d,J=5.9Hz),3.57-3.77(4H,m),4.46-4.48(1H,m),5.16(1H,d,J=19.2Hz),5.25(1H,d,J=18.8Hz),5.42(2H,s),5.55-5.60(1H,m),6.53(1H,s),7.00(1H,t,J=6.3Hz),7.17-7.26(5H,m),7.31(1H,s),7.71(1H,t,J=5.7Hz),7.80(1H,d,J=11.0Hz),7.92(1H,t,J=5.7Hz),8.15(1H,d,J=8.2Hz),8.27(1H,t,J=5.5Hz),8.46(1H,d,J=8.2Hz).
MS(APCI)m/z：939(M+H)+.
步驟2：甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4-側氧基丁基)甘胺醯胺
將上述步驟1所獲得的化合物(1.97g，2.10mmoL)溶解於二氯甲烷(7mL)，添加三氟乙酸(7mL)而攪拌1小時。減壓餾除溶媒，添加甲苯而進行共沸，將獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇：水=7：3：1(v/v/v) 之分配有機層]純化，獲得標題化合物之三氟乙酸鹽(1.97g，99%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.4Hz),1.71-1.73(2H,m),1.82-1.90(2H,m),2.12-2.20(4H,m),2.40(3H,s),2.75(1H,dd,J=13.7,9.4Hz),3.03-3.09(3H,m),3.18-3.19(2H,m),3.58-3.60(2H,m),3.64(1H,d,J=5.9Hz),3.69(1H,d,J=5.9Hz),3.72(1H,d,J=5.5Hz),3.87(1H,dd,J=16.8,5.9Hz),4.50-4.56(1H,m),5.16(1H,d,J=19.2Hz),5.25(1H,d,J=18.8Hz),5.42(2H,s),5.55-5.60(1H,m),7.17-7.27(5H,m),7.32(1H,s),7.78-7.81(2H,m),7.95-7.97(3H,m),8.33-8.35(2H,m),8.48-8.51(2H,m).
MS(APCI)m/z：839(M+H)+.
步驟3：N-(三級丁氧基羰基)-β-丙胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4-側氧基丁基)甘胺醯胺
將上述步驟2所獲得的化合物(0.839g，1.00mmoL)，使用N-(三級丁氧基羰基)-β-丙胺酸替代4-(三級丁氧基羰基胺基)丁酸，使與實施例1步驟1同樣地反應，獲得的粗生成物不進行純化而用於下一步驟。
步驟4：β-丙胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4-側氧 基丁基)甘胺醯胺
將上述步驟3所獲得的粗生成物，使與上述步驟3同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(0.610g，67%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.4Hz),1.67-1.77(2H,m),1.79-1.92(2H,m),2.09-2.22(4H,m),2.40(3H,s),2.46-2.55(2H,m),2.82-2.73(1H,m),2.95-3.13(5H,m),3.14-3.21(2H,m),3.55-3.80(6H,m),4.44-4.52(1H,m),5.20(2H,dd,J=35.0,19.0Hz),5.42(2H,s),5.53-5.60(1H,m),6.54(1H,s),7.14-7.28(5H,m),7.31(1H,s),7.67(2H,brs),7.72-7.78(1H,m),7.80(1H,d,J=11.0Hz),8.10-8.17(2H,m),8.29(1H,t,J=5.9Hz),8.42(1H,t,J=5.7Hz),8.47(1H,d,J=8.6Hz).
步驟5：N-(溴乙醯基)-β-丙胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4-側氧基丁基)甘胺醯胺
於2-溴乙酸(96.3mg，0.693mmoL)之二氯甲烷(4.5mL)溶液，加入N-羥基琥珀醯亞胺(79.7mg，0.693mmoL)、1,3-二異丙基碳二亞胺(0.107mL，0.693mmoL)，並於室溫攪拌。反應溶液於0℃加到上述步驟4所獲得的化合物(473mg，0.462mmoL)、三乙基胺(0.154mL，1.11mmoL)之N,N-二甲基甲醯胺(4.5mL)溶液，並於室溫攪拌1小時。反應溶液以矽膠管柱層析[溶出溶媒：氯仿~氯仿：甲醇=85：15(v/v)]純化，獲得的固 體以氯仿：甲醇：二乙基醚混合溶媒洗淨，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(191mg，40%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.4Hz),1.67-1.77(2H,m),1.79-1.92(2H,m),2.08-2.22(4H,m),2.33(2H,t,J=7.0Hz),2.40(3H,s),2.74-2.83(1H,m),2.99-3.12(3H,m),3.14-3.21(2H,m),3.24-3.30(2H,m),3.56-3.77(6H,m),3.82(2H,s),4.41-4.51(1H,m),5.20(2H,q,J=18.9Hz),5.42(2H,s),5.54-5.60(1H,m),6.54(1H,s),7.15-7.27(5H,m),7.31(1H,s),7.69-7.74(1H,m),7.80(1H,d,J=10.9Hz),8.06(1H,t,J=5.7Hz),8.13(1H,d,J=7.8Hz),8.21-8.34(3H,m),8.46(1H,d,J=8.6Hz).
MS(ESI)m/z：1030,1032(M+H)+.
步驟6：抗體-藥物結合物(2)
抗體之還原：將參考例1製作的曲妥珠單抗，使用共通操作C-1及B(使用1.48mLmg-1cm-1作為280nm吸光係數)，將介質置換為PBS6.0/EDTA，調製10mg/mL之抗體濃度。將本溶液(1.25mL)置入1.5mL聚丙烯製管中，於其中添加10mM TCEP水溶液(0.019mL；相對於抗體一分子為2.3當量)及1M磷酸氫二鉀水溶液(0.0625mL)。確認本溶液之pH為7.4±0.1內後，藉由於37℃培育1小時，使抗體內鉸鏈部之雙硫鍵還原。
抗體與藥物連接物之結合：於上述溶液，於室溫中添加DMSO(Sigma-Aldrich Co.LLC；0.098mL)及含10mM之上述步驟5之化合物的DMSO溶液(0.039mL；相對於抗體一分子為4.6當量)，使用試管混勻器(Tube Rotator)於 室溫攪拌40分鐘，使藥物連接物與抗體結合。其次，添加100mM NAC水溶液(0.008mL)，再於室溫攪拌20分鐘，使藥物連接物之反應停止。
純化：上述溶液進行使用共通操作D(使用ABS作為緩衝液)的純化，獲得6mL之含有目的之化合物的溶液。
特性評價：使用共通操作B、E，而獲得下述之特性值。
抗體濃度：1.41mg/mL，抗體產量：8.5mg(68%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.3。
實施例3抗體-藥物結合物(3)
抗體之還原：將以參考例1製作的曲妥珠單抗，使用共通操作C-1及B(使用1.48mLmg-1cm-1作為280nm吸光係數)，將介質置換為PBS6.0/EDTA，調製為10mg/mL之抗體濃度。將本溶液(1.25mL)置入1.5mL聚丙烯製管，於其中添加10mM TCEP水溶液(0.039mL；相對於抗體一分子為4.6當量)及1M磷酸氫二鉀水溶液 (0.0625mL)。確認本溶液之pH為7.4±0.1內後，藉由於37℃培育1小時，使抗體內鉸鏈部之雙硫鍵還原。
抗體與藥物連接物之結合：於室溫對上述溶液添加DMSO(0.065mL)及含10mM之實施例2步驟5之化合物的DMSO溶液(0.078mL；相對於抗體一分子為9.2當量)，使用試管混勻器於室溫攪拌40分鐘，使藥物連接物與抗體結合。其次，添加100mM NAC水溶液(0.0155mL)，再於室溫攪拌20分鐘，使藥物連接物之反應停止。
純化：將上述溶液進行使用共通操作D(使用ABS作為緩衝液)的純化，獲得6mL之含有目的化合物的溶液。
特性評價：使用共通操作B、E，而獲得下述之特性值。
抗體濃度：1.55mg/mL，抗體產量：9.3mg(74%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：6.0。
實施例4中間體(4)
步驟1：[2-(2-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-2-側氧基乙氧基)乙基]胺甲酸三級丁酯
將依喜替康之甲烷磺酸鹽(3.10g，5.47moL)，使用{2-[(三級丁氧基羰基)胺基]乙氧基}乙酸(J.Med.Chem. ，1992年，35卷，2928頁；1.55g，6.01mmoL)替代4-(三級丁氧基羰基胺基)丁酸，使與實施例1步驟1同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(2.56g，73%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.3Hz),1.26(9H,s),1.81-1.91(2H,m),2.13-2.22(2H,m),2.40(3H,s),3.08-3.26(4H,m),3.43-3.53(2H,m),4.00(1H,d,J=15.1Hz),4.05(1H,d,J=15.1Hz),5.14(1H,d,J=18.7Hz),5.22(1H,d,J=18.7Hz),5.40(1H,d,J=16.6Hz),5.44(1H,d,J=16.6Hz),5.59-5.66(1H,m),6.53(1H,s),6.86(1H,t,J=5.4Hz),7.31(1H,s),7.79(1H,d,J=10.9Hz),8.49(1H,d,J=9.1Hz).
MS(APCI)m/z：637(M+H)+.
步驟2：2-(2-胺基乙氧基)-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]乙醯胺
使上述步驟1所獲得的化合物(1.50g，2.36moL)，與實施例1步驟2同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物之三氟乙酸鹽(1.50g，定量的)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.5Hz),1.81-1.92(2H,m),2.15-2.23(2H,m),2.41(3H,s),3.05(2H,t,J=5.1Hz),3.15-3.23(2H,m),3.71(2H,t,J=5.1Hz),4.10(2H,s),5.19(1H,d,J=18.7Hz),5.24(1H,d,J=18.7Hz),5.43(2H,s),5.58-5.66(1H,m),6.55(1H,s),7.33(1H,s),7.73-7.84(4H,m),8.55(1H,d,J=9.1Hz).
MS(APCI)m/z：537(M+H)+.
實施例5抗體-藥物結合物(5)
步驟1：4-({N6-(三級丁氧基羰基)-N2-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-L-離胺醯基}胺基)丁酸三級丁酯
於Nε-(三級丁氧基羰基)-Nα-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-L-離胺酸(1.00g，2.14mmoL)、N-羥基琥珀醯亞胺(0.370g，3.20mmoL)、及4-胺基丁酸三級丁基酯鹽酸鹽(0.830g，4.27mmoL)之N,N-二甲基甲醯胺(10.0mL)溶液中添加1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽 (0.610g，3.20mmoL)及N,N-二異丙基乙基胺(0.410mL，2.35mmoL)，並於室溫攪拌3日。將反應液以乙酸乙酯稀釋，以10%檸檬酸水溶液、飽和碳酸氫鈉水溶液、及飽和食鹽水洗淨後，有機層以無水硫酸鎂乾燥。減壓下餾除溶媒，獲得呈無色固體之標題化合物(1.35g，定量的)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：1.14-1.42(4H,m),1.36(9H,s),1.37(9H,s),1.48-1.67(4H,m),2.18(2H,t,J=7.6Hz),2.84-2.93(2H,m),2.99-3.11(2H,m),3.84-3.94(1H,m),4.18-4.30(3H,m),6.76(1H,t,J=5.4Hz),7.33(2H,t,J=7.3Hz),7.39-7.45(3H,m),7.73(2H,dd,J=7.3,2.7Hz),7.85-7.92(3H,m).
步驟2：4-{[N6-(三級丁氧基羰基)-L-離胺醯基]胺基}丁酸三級丁酯
於上述步驟1所獲得的化合物(1.35g，2.22mmoL)之N,N-二甲基甲醯胺(8.00mL)溶液中，添加哌啶(2.00mL)，並於室溫攪拌1.5小時。減壓餾除溶媒，獲得含標題化合物的混合物。本混合物不進行進一步純化而用於下一反應。
步驟3：N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-L-纈胺醯基-N6-(三級丁氧基羰基)-N-(4-三級丁氧基-4-側氧基丁基)-L-離胺醯胺
於上述步驟2所獲得的混合物(2.22mmoL)之N,N-二甲基甲醯胺(30.0mL)溶液中，添加N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-L-纈胺酸(1.13g，3.32mmoL)、N-羥基琥珀醯亞胺(0.310g，2.66mmoL)、及1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(0.550g，2.88mmoL)，並於室溫攪拌18 小時。將反應液以乙酸乙酯稀釋，以飽和碳酸氫鈉水溶液及飽和食鹽水洗淨後，有機層以無水硫酸鎂乾燥。減壓下餾除溶媒，將獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇=9：1(v/v)]純化，獲得呈無色固體(0.363g，23%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.84(6H,t,J=6.0Hz),1.12-1.64(8H,m),1.34(9H,s),1.38(9H,s),1.90-2.04(1H,m),2.17(2H,t,J=7.3Hz),2.79-2.90(2H,m),2.99-3.09(2H,m),3.83-3.91(1H,m),4.08-4.44(4H,m),6.71(1H,t,J=5.4Hz),7.32(2H,t,J=7.3Hz),7.42(3H,t,J=7.3Hz),7.74(2H,t,J=7.0Hz),7.85-7.91(4H,m).
MS(ESI)m/z：709(M+H)+.
步驟4：N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-L-纈胺醯基-N-(3-羧基丙基)-L-離胺醯胺
於上述步驟3所獲得的化合物(0.363mg，0.512mmoL)中添加甲酸(10.0mL)，並於室溫攪拌4小時。減壓下餾除溶媒，獲得標題化合物之甲酸鹽。本化合物不進行進一步純化而用於下一反應。
步驟5：N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-L-纈胺醯基-N6-(三級丁氧基羰基)-N-(3-羧基丙基)-L-離胺醯胺
於上述步驟4所獲得的化合物(0.512mmoL)之1,4-二烷(5.00mL)懸浮液中，添加飽和碳酸氫鈉水溶液(20.0mL)及二(三級丁基)二碳酸酯(0.178mL，0.769mmoL)，並於室溫攪拌3小時。將反應液以乙酸乙酯稀釋，以10%檸檬酸水溶液及飽和食鹽水洗淨後，有 機層以無水硫酸鎂乾燥。減壓下餾除溶媒，獲得呈無色固體之標題化合物(0.295g，88%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.84(6H,t,J=6.7Hz),1.13-1.39(4H,m),1.35(9H,s),1.48-1.62(4H,m),1.91-2.04(1H,m),2.20(2H,t,J=7.3Hz),2.80-2.89(2H,m),2.99-3.11(2H,m),3.87(1H,dd,J=8.5,6.7Hz),4.06-4.35(4H,m),6.71(1H,t,J=6.0Hz),7.32(2H,t,J=7.6Hz),7.39-7.46(3H,m),7.74(2H,t,J=7.6Hz),7.83-7.94(4H,m).
MS(ESI)m/z：653(M+H)+
步驟6：N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-L-纈胺醯基-N6-(三級丁氧基羰基)-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4-側氧基丁基)-L-離胺醯胺
將依喜替康之甲烷磺酸鹽(0.240g，0.452mmoL)，使用上述步驟5所獲得的化合物(0.295g，0.452mmoL)替代4-(三級丁氧基羰基胺基)丁酸，使與實施例1步驟1同樣地反應，獲得呈淡橙色固體之標題化合物(0.208g，43%)。
MS(ESI)m/z：1071(M+H)+.
步驟7：L-纈胺醯基-N6-(三級丁氧基羰基)-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4-側氧基丁基)-L-離胺醯胺
使上述步驟6所獲得的化合物(0.208g，0.194mmoL) 與上述步驟2同樣地反應，獲得含標題化合物的混合物。本混合物不進行進一步純化而用於下一反應。
步驟8：N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]-L-纈胺醯基-N6-(三級丁氧基羰基)-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4-側氧基丁基)-L-離胺醯胺
於上述步驟7所獲得的混合物(0.194mmoL)之N,N-二甲基甲醯胺(110mL)溶液中，添加6-順丁烯二醯亞胺己酸N-琥珀醯亞胺基酯(84.5mg，0.271mmoL)，並於室溫攪拌17小時。減壓餾除溶媒，將獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇=9：1(v/v)]純化，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(0.133g，56%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.77(6H,t,J=5.7Hz),0.87(3H,t,J=7.3Hz),1.14-1.71(10H,m),1.35(9H,s),1.77-1.95(3H,m),2.02-2.23(7H,m),2.40(3H,s),2.84(3H,q,J=6.4Hz),3.05(2H,d,J=6.7Hz),3.17(2H,s),3.26-3.39(3H,m),4.01-4.16(2H,m),5.15(1H,d,J=18.7Hz),5.24(1H,d,J=18.7Hz),5.36-5.48(2H,m),5.51-5.60(1H,m),6.52(1H,s),6.72(1H,t,J=6.0Hz),6.99(2H,s),7.31(1H,s),7.71-7.85(5H,m),8.41(1H,d,J=9.1Hz).
MS(ESI)m/z：1041(M+H)+.
步驟9：N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]-L-纈胺醯基-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5- 氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4-側氧基丁基)-L-離胺醯胺
於上述步驟8所獲得的化合物(0.110mg，0.106mmoL)之二氯甲烷(10.0mL)溶液中，添加三氟乙酸(4.00mL)，並於室溫攪拌5小時。減壓下餾除溶媒，獲得呈淡黃色固體之標題化合物之三氟乙酸鹽(70.0mg，64%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.76-0.81(6H,m),0.87(3H,t,J=7.3Hz),1.12-1.31(4H,m),1.39-1.56(8H,m),1.57-1.74(3H,m),1.79-1.96(3H,m),2.06-2.18(7H,m),2.40(3H,s),2.70-2.80(2H,m),3.01-3.10(2H,m),3.13-3.22(2H,m),4.04(1H,t,J=7.6Hz),4.10-4.20(1H,m),5.15(1H,d,J=18.7Hz),5.24(1H,d,J=18.7Hz),5.36-5.47(2H,m),5.52-5.60(1H,m),6.53(1H,s),7.00(2H,s),7.32(1H,s),7.61(3H,brs),7.75-7.88(4H,m),8.43(1H,d,J=8.5Hz).
MS(ESI)m/z：941(M+H)+.
步驟10：抗體-藥物結合物(5)
使用參考例1製作的曲妥珠單抗及上述步驟9所獲得的化合物，藉由與實施例2步驟6同樣之方法，獲得標題抗體-藥物結合物。再使用共通操作A，將溶液濃縮後，使用共通操作B、E，而獲得下述之特性值。
抗體濃度：10.64mg/mL，抗體產量：7.4mg(59%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.3。
實施例6抗體-藥物結合物(6)
步驟1：抗體-藥物結合物(6)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及實施例5步驟9所獲得的化合物，藉由與實施例2步驟1同樣之方法，獲得標題抗體-藥物結合物。再使用共通操作A，將溶液濃縮後，使用共通操作B、E，而獲得下述之特性值。
抗體濃度：10.41g/mL，抗體產量：7.3mg(58%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：5.9。
實施例7中間體(7)
步驟1：(3-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-3-側氧基丙基)胺甲酸三級丁酯
將依喜替康之甲烷磺酸鹽(500mg，0.941mmoL)，使用N-(三級丁氧基羰基)-β-丙胺酸替代4-(三級丁氧基羰基胺基)丁酸，使與實施例1步驟1同樣地反應，獲得呈黃茶色固體之標題化合物(616mg，定量的)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.2Hz),1 .29(9H,s),1.86(2H,dt,J=15.1,7.3Hz),2.04-2.22(2H,m),2.31(2H,t,J=6.8Hz),2.40(3H,s),3.10-3.26(4H,m),5.15(1H,d,J=18.8Hz),5.26(1H,d,J=19.2Hz),5.42(2H,dd,J=18.8,16.4Hz),5.57(1H,dt,J=8.5,4.2Hz),6.53(1H,s),6.78(1H,t,J=5.5Hz),7.30(1H,s),7.80(1H,d,J=11.0Hz),8.46(1H,d,J=8.6Hz).
MS(ESI)m/z：607(M+H)+.
步驟2：N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]-β-丙胺醯胺
使上述步驟1所獲得的化合物與實施例1步驟2同樣地反應，獲得呈黃色固體之標題化合物之三氟乙酸鹽(499mg，86%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.2Hz),1.86(2H,dquin,J=14.6,7.2,7.2,7.2,7.2Hz),2.06-2.27(1H,m),2.41(3H,s),2.46-2.57(2H,m),3.08(2H,t,J=6.8Hz),3.14-3.24(2H,m),5.22(1H,d,J=18.8Hz),5.29(1H,d,J=18.8Hz),5.43(2H,s),5.58(1H,dt,J=8.5,4.5Hz),6.55(1H,s),7.32(1H,s),7.74(3H,brs),7.82(1H,d,J=11.0Hz),8.67(1H,d,J=8.6Hz).
MS(ESI)m/z：507(M+H)+.
實施例8中間體(8)
步驟1：(6-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4- 甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-6-側氧基己基)胺甲酸三級丁酯
將依喜替康之甲烷磺酸鹽(0.500g，0.882mmoL)，使用6-(三級丁氧基羰基胺基)己酸替代4-(三級丁氧基羰基胺基)丁酸，使與實施例1步驟1同樣地反應，獲得標題化合物(0.620g，定量的)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ：0.83(3H,t,J=7.8Hz),1.14-1.28(2H,m),1.31(9H,s),1.47-1.61(2H,m),1.75-1.89(2H,m),2.04-2.17(4H,m),2.35(3H,s),2.81-2.88(2H,m),3.09-3.16(2H,m),5.10(1H,d,J=19.4Hz),5.16(1H,d,J=19.4Hz),5.39(2H,s),5.48-5.55(1H,m),6.50(1H,s),6.73-6.78(1H,m),7.26(1H,s),7.74(1H,d,J=10.9Hz),8.39(1H,d,J=9.0Hz).
步驟2：6-胺基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]己醯胺
將上述步驟1所獲得的化合物(0.397g，0.611mmoL)，與實施例1步驟2同樣地反應，獲得標題化合物之三氟乙酸鹽(0.342g，84%)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ：0.88(3H,t,J=7.2Hz),1.31-1.41(2H,m),1.52-1.70(4H,m),1.80-1.94(2H,m),2.05-2.18(2H,m),2.21(2H,t,J=7.4Hz),2.40(3H,s),2.81(2H,t,J=7.4Hz),3.10-3.25(2H,m),3.33(2H,brs),5.18(1H,d,J=19.8Hz),5.22(1H,d,J=19.8Hz),5.41(2H,d,J=16.6Hz),5.45(2H,d,J=16.6Hz ),5.53-5.60(1H,m),6.55(1H,s),7.32(1H,s),7.80(1H,d,J=10.9Hz),8.49(1H,d,J=9.2Hz).
實施例9中間體(9)
步驟1：2-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-2-側氧基乙基乙酸酯
於冰冷下，於依喜替康之甲烷磺酸鹽(0.500g，0.941mmoL)之N,N-二甲基甲醯胺(20.0mL)懸浮液中添加N,N-二異丙基乙基胺(0.492mL，2.82mmoL)及乙醯氧基乙醯氯(0.121mL，1.13mmoL)，並於室溫攪拌1小時。減壓餾除溶媒，將獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇：水=7：3：1(v/v/v)之分配有機層]純化，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(0.505g，定量的)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.4Hz),1.81-1.92(2H,m),2.08(3H,s),2.08-2.22(2H,m),2.41(3H,s),3.14-3.21(2H,m),4.51(2H,dd,J=19.4,14.7Hz),5.22(2H,dd,J=40.1,19.0Hz),5.43(2H,s),5.56-5.61(1H,m),6.53(1H,s),7.31(1H,s),7.81(1H,d,J=11.0Hz),8.67(1H,d,J=8.6Hz).
MS(ESI)m/z：536(M+H)+.
步驟2：N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]-2-羥基乙醯胺
於上述步驟1所獲得的化合物(0.504g，0.941mmoL)之甲醇(50.0mL)懸浮液中，添加四氫呋喃(20.0mL)及1N氫氧化鈉水溶液(4.00mL，4.00mmoL)，並於室溫攪拌1小時。添加1N鹽酸(5.00mL，5.00mmoL)而停止反應，減壓餾除溶媒。將獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇：水=7：3：1(v/v/v)之分配有機層]純化，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(0.412g，89%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.3Hz),1.78-1.95(2H,m),2.09-2.28(2H,m),2.39(3H,s),3.07-3.27(2H,m),3.96(2H,d,J=6.0Hz),5.11-5.26(2H,m),5.42(2H,s),5.46-5.54(1H,m),5.55-5.63(1H,m),6.52(1H,s),7.30(1H,s),7.78(1H,d,J=10.9Hz),8.41(1H,d,J=9.1Hz).
MS(ESI)m/z：494(M+H)+.
實施例10(實施例9之化合物之另一合成法)
步驟1：N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4- 甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]-2-羥基乙醯胺
將乙醇酸(0.0201g，0.27mmoL)溶解於N,N-二甲基甲醯胺(1.0mL)，添加N-羥基琥珀醯亞胺(0.0302g，0.27mmoL)、及1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(0.0508g，0.27mmoL)而攪拌1小時。將此反應溶液於依喜替康之甲烷磺酸鹽(0.1g，0.176mmoL)之N,N-二甲基甲醯胺(1.0mL)懸浮液中，添加三乙基胺(0.025mL，0.18mmoL)，並於室溫攪拌24小時。減壓餾除溶媒，將獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇=10：1(v/v)]純化，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(0.080g，92%)。機器數據係與實施例9步驟2所獲得的化合物相同。
實施例11抗體-藥物結合物(11)
步驟1：N-(3-硫烷基丙醯基)甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基 -4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4-側氧基丁基)甘胺醯胺
將實施例2步驟2所獲得的化合物(84.0mg，0.100mmoL)，使用3-巰基丙酸N-琥珀醯亞胺基酯替代6-順丁烯二醯亞胺己酸N-琥珀醯亞胺基酯，使與實施例5步驟8同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(61.2mg，66%)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.4Hz),1.77-1.66(2H,m),1.79-1.92(2H,m),2.07-2.24(4H,m),2.31-2.47(3H,m),2.40(3H,s),2.59-2.69(2H,m),2.78(1H,dd,J=13.7,9.8Hz),2.98-3.13(3H,m),3.14-3.23(2H,m),3.54-3.79(6H,m),4.40-4.50(1H,m),5.20(2H,dd,J=36.8,19.2Hz),5.36-5.47(2H,m),5.52-5.63(1H,m),6.54(1H,s),7.14-7.28(5H,m),7.31(1H,s),7.68-7.74(1H,m),7.80(1H,d,J=10.9Hz),8.03-8.09(1H,m),8.13(1H,d,J=7.8Hz),8.19-8.29(2H,m),8.46(1H,d,J=8.6Hz).
MS(ESI)m/z：927(M+H)+.
步驟2：抗體-藥物結合物(11)
抗體之SMCC衍生物化：將以參考例1製作的曲妥珠單抗，使用共通操作C-2及B(使用1.37mLmg-1cm-1作為280nm吸光係數)，將介質置換為PBS6.5/EDTA，調製20mg/mL之抗體濃度。將本溶液(0.5mL)置入1.5mL管，於室溫於其中添加含27.6mM之琥珀醯亞胺基4-(N-順丁烯二醯亞胺甲基)環己烷-1-甲酸酯(SMCC，Thermo Fisher Scientific Inc.)的DMSO溶液(0.0125mL；相對於抗體一分子相當為約5.1當量)及DMSO(0.0125mL)，並於室溫使反應2小時。將此反應液進行使用共通操作D-2的純化，獲得1.2mL之含約10mg之經SMCC衍生物化的抗體的溶液。
抗體與藥物連接物之結合：於室溫對上述溶液添加DMSO(0.09mL)及含10mM之上述步驟1所獲得的化合物的DMSO溶液(0.03mL；相對於抗體一分子相當為約5.8當量)，使用試管混勻器(MTR-103，AS ONE股份有限公司)，於室溫攪拌16小時，使藥物連接物與抗體結合。
純化：將上述溶液進行使用共通操作D(使用ABS作為緩衝液)的純化，獲得6mL之含有目的化合物的溶液。
特性評價：使用共通操作B、E，而獲得下述之特性值。
抗體濃度：1.20mg/mL，抗體產量：7.2mg(72%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.3。
實施例12抗體-藥物結合物(12)
步驟1：抗體-藥物結合物(12)
抗體之SMCC衍生物化：將以參考例1製作的曲妥珠單抗，使用共通操作C-2及B(使用1.37mLmg-1cm-1作為280nm吸光係數)，將介質置換為PBS6.5/EDTA，調製20mg/mL之抗體濃度。將本溶液(0.5mL)置入1.5mL管，於室溫於其中添加含27.6mM之琥珀醯亞胺基4-(N-順丁烯二醯亞胺甲基)環己烷-1-甲酸酯(SMCC，Thermo Fisher Scientific Inc.)的DMSO溶液(0.025mL；相對於抗體一分子相當為約10當量)，並於室溫使反應2小時。將此反應液進行使用共通操作D-2的純化，獲得1.2mL之含約10mg之SMCC衍生物化的抗體的溶液。
抗體與藥物連接物之結合：對上述溶液，於室溫添加DMSO(0.06mL)及含10mM之實施例11步驟1所獲得的化合物的DMSO溶液(0.06mL；相對於抗體一分子為相當約11.6當量)，使用試管混勻器(MTR-103，AS ONE股份有限公司)，而於室溫攪拌16小時，使藥物連接物與抗體結合。
純化：將上述溶液進行使用共通操作D(使用ABS作為緩衝液)的純化，獲得6mL之含有目的化合物的溶液。再使用共通操作A，將溶液濃縮後，使用共通操作B、E，而獲得下述之特性值。
抗體濃度：2.36mg/mL，抗體產量：2.8mg(28%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：4.8。
實施例13抗體-藥物結合物(13)
步驟1：N-{8-[(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)氧基]-8-側氧基辛醯基}甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4-側氧基丁基)甘胺醯胺
將實施例2步驟2所獲得的化合物(84.0mg，0.100mmoL)，使用辛二酸二(N-琥珀醯亞胺基)替代6-順丁烯二醯亞胺己酸N-琥珀醯亞胺基酯，使與實施例5步驟8同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(77.1mg，71%)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.2Hz),1.21-1.38(4H,m),1.43-1.50(2H,m),1.55-1.63(2H,m),1.68-1.76(2H,m),1.80-1.91(2H,m),2.07-2.22(6H,m),2.40(3H,s),2.60-2.67(2H,m),2.76-2.84(5H,m),2.97-3.22(5H,m),3.56-3.76(6H,m),4.40-4.50(1H,m),5.20(2H,q,J=18.8Hz),5.37-5.48(2H,m),5.53-5.62(1H,m),6.54(1H,s),7.15-7.28(5H,m),7.31(1H,s),7.71(1H,t,J=5.5Hz),7.80(1H,d,J=10.9Hz),8.04(1H,t,J=5.9Hz),8.09(1H,t,J=5.9Hz),8.14(1H,d,J=7.8Hz),8.26(1H,t,J=5.9Hz),8.47(1H,d,J=8.6Hz).
MS(ESI)m/z：1092(M+H)+.
步驟2：抗體-藥物結合物(13)
抗體與藥物連接物之結合：將以參考例1製作的曲妥珠單抗，使用共通操作C-2及B(使用1.37mLmg-1cm-1作為280nm吸光係數)，將介質置換為PBS6.5/EDTA，調製20mg/mL之抗體濃度。將本溶液(0.33mL)置入1.5mL管，於室溫於其中添加含10mM之以上述步驟1獲得的化合物的DMSO溶液(0.04mL；相對於抗體一分子為相當約9當量)，並使用試管混勻器(MTR-103，AS ONE股份有限公司)於室溫攪拌16小時，使藥物連接物與抗體結合。
純化：將上述溶液進行使用共通操作D(使用ABS作為緩衝液)的純化，獲得3.5mL之含有標題抗體-藥物結合物的溶液。
特性評價：使用共通操作B、E，而獲得下述之特性值。
抗體濃度：1.20mg/mL，抗體產量：4.2mg(63%)，抗 體每一分子之藥物平均結合數(n)：5.6。
實施例14抗體-藥物結合物(14)
步驟1：抗體-藥物結合物(14)
抗體與藥物連接物之結合：將以參考例1製作的曲妥珠單抗，使用共通操作C-2及B(使用1.37mLmg-1cm-1作為280nm吸光係數)，將介質置換為PBS6.5/EDTA，調製20mg/mL之抗體濃度。將本溶液(0.33mL)置入1.5mL管後，添加1M磷酸氫二鉀水溶液(Nacalai Tesque,Inc.)，並調整為pH7.2。於室溫於其中添加含10mM之以實施例14步驟1獲得的化合物的DMSO溶液(0.04mL；相對於抗體一分子相當為約9當量)，使用試管混勻器(MTR-103，AS ONE股份有限公司)而於室溫攪拌16小時，使藥物連接物與抗體結合。
純化：將上述溶液進行使用共通操作D(使用ABS作為緩衝液)的純化，獲得3.5mL之含有目的之化合物的溶液。
特性評價：使用共通操作B、E，而獲得下述之特性 值。
抗體濃度：1.09mg/mL，抗體產量：3.8mg(57%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：5.1。
實施例15抗體-藥物結合物(15)
步驟1：4-({N5-胺甲醯基-N2-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-L-鳥胺醯基}胺基)丁酸三級丁基酯
於N-α-(9-茀基甲氧基羰基)-L-瓜胺酸(2.00g， 5.03mmoL)、N-羥基琥珀醯亞胺(0.869g，7.55mmoL)、及4-胺基丁酸三級丁基酯鹽酸鹽(1.48g，7.55mmoL)之N,N-二甲基甲醯胺(40.0mL)溶液中添加1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(1.45g，7.55mmoL)及N,N-二異丙基乙基胺(0.877mL，5.03mmoL)，並於室溫攪拌3日。將反應液注入水中，攪拌後，濾取析出的不溶物，獲得呈無色固體之標題化合物(2.70g，99%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：1.36(9H,s),1.44(6H,tt,J=44.0,13.2Hz),2.17(2H,t,J=7.4Hz),2.89-3.07(4H,m),3.85-3.95(1H,m),4.15-4.26(3H,m),5.37(2H,brs),5.93(1H,t,J=5.9Hz),7.31(2H,td,J=7.4,1.2Hz),7.40(2H,t,J=7.4Hz),7.47(1H,d,J=8.2Hz),7.72(2H,dd,J=7.4,2.7Hz),7.87-7.89(3H,m).
步驟2：4-[(N5-胺甲醯基-L-鳥胺醯基)胺基]丁酸三級丁酯
於上述步驟1所獲得的化合物(1.70g，3.16mmoL)之N,N-二甲基甲醯胺(20.0mL)溶液中，添加哌啶(1.56mL，15.8mmoL)，並於室溫攪拌1小時。減壓餾除溶媒，獲得標題化合物。本化合物不進行進一步純化而用於下一反應。
步驟3：N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-L-纈胺醯基-N-(4-三級丁氧基-4-側氧基丁基)-N5-胺甲醯基-L-鳥胺醯胺
於上述步驟2所獲得的化合物(3.16mmoL)之N,N-二甲基甲醯胺(40.0mL)溶液中，添加N-[(9H-茀-9-基甲氧基 )羰基]-L-纈胺酸(1.07g，3.16mmoL)、N-羥基琥珀醯亞胺(0.363g，3.16mmoL)、及1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(0.908g，4.73mmoL)，並於室溫攪拌11日。將反應液以乙酸乙酯稀釋，以飽和碳酸氫鈉水溶液及飽和食鹽水洗淨後，有機層以無水硫酸鎂乾燥。減壓下餾除溶媒，將獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿/(氯仿：甲醇=9：1(v/v))=100/0-0/100]純化，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(0.280g，14%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.82(6H,t,J=6.6Hz),1.36(9H,s),1.25-1.64(4H,m),1.86-2.06(1H,m),2.16(3H,t,J=7.4Hz),2.80-3.07(4H,m),3.86(1H,dd,J=8.8,6.8Hz),4.06-4.37(5H,m),5.35(2H,brs),5.90(1H,t,J=5.5Hz),7.31(2H,t,J=7.4Hz),7.37-7.44(3H,m),7.72(2H,t,J=6.6Hz),7.84-7.94(4H,m).
步驟4：N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-L-纈胺醯基-N5-胺甲醯基-N-(3-羧基丙基)-L-鳥胺醯胺
於上述步驟3所獲得的化合物(0.280g，0.439mmoL)之二氯甲烷(10.0mL)溶液中添加三氟乙酸(10.0mL)，並於室溫攪拌3日。減壓餾除溶媒，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(0.212g，83%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.82(6H,t,J=6.8Hz),1.17-1.69(4H,m),1.87-2.01(1H,m),2.15-2.32(3H,m),2.83-3.09(4H,m),3.87(1H,dd,J=8.8,6.8Hz),4.08-4.37(5H,m),5.35(2H,brs),5.91(1H,brs),7.31(2H,t,J=7.4Hz),7.36-7.44(3H,m),7.72(2H,t,J=6.8Hz),7.85-7.94(4H,m),12.04(1H,brs).
步驟5：N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-L-纈胺醯基-N5-胺甲醯基-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4-側氧基丁基)-L-鳥胺醯胺
於上述步驟4所獲得的化合物(0.212g，0.364mmoL)、N-羥基琥珀醯亞胺(42.0mg，0.364mmoL)、及依喜替康之甲烷磺酸鹽(0.194g，0.364mmoL)之N,N-二甲基甲醯胺(10.0mL)溶液中添加1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(0.145g，0.547mmoL)及N,N-二異丙基乙基胺(63.5μL，0.364mmoL)，並於室溫攪拌1日。減壓下餾除溶媒，將獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿/(氯仿：甲醇=9：1(v/v))=100/0-0/100]純化，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(0.169g，46%)。
MS(ES+APCI)m/z：999(M+H)+.
步驟6：L-纈胺醯基-N5-胺甲醯基-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4-側氧基丁基)-L-鳥胺醯胺
使上述步驟5所獲得的化合物(0.169g，0.169mmoL)，與上述步驟2同樣地反應，獲得標題化合物。本化合物不進行進一步純化而用於下一反應。
步驟7：N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]-L-纈胺醯基-N5-胺甲醯基-N-(4-{[(1S,9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4-側氧基丁基)-L-鳥胺醯胺
於上述步驟6所獲得的化合物(0.131g，0.169mmoL)之N,N-二甲基甲醯胺(10.0mL)溶液中，添加6-順丁烯二醯亞胺己酸N-琥珀醯亞胺基酯(78.2mg，0.254mmoL)，並於室溫攪拌18小時。減壓餾除溶媒，將獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿/(氯仿：甲醇=9：1(v/v))=100/0-0/100]純化，獲得呈淡橙色固體之標題化合物(52.0mg，40%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.74(6H,t,J=6.6Hz),0.85(4H,t,J=7.2Hz),1.10-1.19(1H,m),1.19-1.36(1H,m),1.38-1.50(4H,m),1.50-1.62(1H,m),1.62-1.73(2H,m),1.77-1.94(4H,m),2.03-2.19(6H,m),2.38(3H,s),2.56(1H,s),2.82-2.95(2H,m),2.98-3.08(2H,m),3.09-3.21(2H,m),3.32(2H,q,J=8.2Hz),4.02-4.16(2H,m),5.18(2H,q,J=17.0Hz),5.34(2H,s),5.41(2H,s),5.50-5.58(1H,m),5.89(1H,t,J=6.3Hz),6.52(1H,s),6.98(2H,s),7.29(1H,s),7.73-7.88(4H,m),8.42(1H,d,J=8.6Hz).
MS(ES+APCI)m/z：970(M+H)+.
步驟8：抗體-藥物結合物(15)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及上述步驟7所獲得的化合物，藉由與實施例2步驟6同樣之方法，獲得標題抗體-藥物結合物。
抗體濃度：1.62mg/mL，抗體產量：9.7mg(78%)，抗 體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.1。
實施例16抗體-藥物結合物(16)
步驟1：抗體-藥物結合物(16)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及實施例15步驟7所獲得的化合物，藉由與實施例3步驟1同樣之方法，獲得標題抗體-藥物結合物。
抗體濃度：1.47mg/mL，抗體產量：8.8mg(70%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：5.8。
實施例17中間體(17)
步驟1：(5-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-5-側 氧基戊基)胺甲酸三級丁酯
將依喜替康之甲烷磺酸鹽(500mg，0.941mmoL)，使用5-(三級丁氧基羰基胺基)纈草酸替代4-(三級丁氧基羰基胺基)丁酸，使與實施例1步驟1同樣地反應，獲得呈黃茶色固體之標題化合物(571mg，96%)。不進行進一步純化而用於下一反應。
MS(ESI)m/z：635(M+H)+.
步驟2：5-胺基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]戊醯胺
將上述步驟1所獲得的化合物(558mg，0.879mmoL)，與實施例1步驟2同樣地反應，獲得呈黃色固體之標題化合物之三氟乙酸鹽(363mg，64%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.88(3H,t,J=7.4Hz),1.52-1.71(4H,m),1.87(2H,tt,J=14.4,6.9Hz),2.07-2.18(2H,m),2.22(2H,t,J=7.0Hz),2.40(3H,s),2.76-2.88(2H,m),3.13-3.22(2H,m),5.18(1H,d,J=18.8Hz),5.24(1H,d,J=18.8Hz),5.43(2H,s),5.53-5.61(1H,m),6.55(1H,s),7.33(1H,s),7.65(3H,br.s.),7.81(1H,d,J=11.3Hz),8.49(1H,d,J=8.6Hz).
MS(ESI)m/z：535(M+H)+.
實施例18中間體(18)
步驟1：[(2S)-3-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-2-甲基-3-側氧基丙基]胺甲酸三級丁酯
將依喜替康之甲烷磺酸鹽(300mg，0.564mmoL)，使用(2S)-3-[(三級丁氧基羰基)胺基]-2-甲基丙酸替代4-(三級丁氧基羰基胺基)丁酸及使用3H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶-3-醇替代N-羥基琥珀醯亞胺，使與實施例1步驟1同樣地反應，獲得呈淡白色固體之標題化合物(376mg，定量的)。不進行進一步純化而用於下一反應。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.2Hz),1.01(3H,d,J=6.6Hz),1.16(9H,s),1.84(2H,tt,J=13.8,7.3Hz),2.02-2.21(2H,m),2.40(3H,s),2.44-2.55(1H,m),2.84-2.94(1H,m),3.07-3.23(3H,m),5.10(1H,d,J=18.8Hz),5.31(1H,d,J=18.8Hz),5.39(1H,d,J=16.4Hz),5.45(1H,d,J=16.4Hz),5.53-5.63(1H,m),6.54(1H,s),6.70(1H,t,J=5.5Hz),7.30(1H,s),7.81(1H,d,J=10.9Hz),8.43(1H,d,J=9.0Hz).
步驟2：(2S)-3-胺基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]-2-甲基丙醯胺
使上述步驟1所獲得的化合物，與實施例1步驟2同樣地反應，獲得標題化合物之三氟乙酸鹽(339mg，95%，2步驟)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.2Hz),1.17(3H,d,J=7.0Hz),1.86(2H,tt,J=14.4,7.3Hz),2.05-2.15(1H,m),2.15-2.24(1H,m),2.42(3H,s),2.63(1H,q,J=6.3Hz),2.82-2.91(1H,m),3.03-3.12(1H,m),3.14-3.23(2H,m),5.27(1H,d,J=19.2Hz),5.33(1H,d,J=18.8Hz),5.44(2H,s),5.50-5.58(1H,m),6.57(1H,s),7.33(1H,s),7.75(3H,br.s.),7.83(1H,d,J=10.9Hz),8.62(1H,d,J=8.2Hz).
MS(ESI)m/z：521(M+H)+.
實施例19抗體-藥物結合物(19)
步驟1：N-(三級丁氧基羰基)甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-[(2S)-3-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟 -9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-2-甲基-3-側氧基丙基]甘胺醯胺
使實施例18步驟2所獲得的化合物(308mg，0.485mmoL)，與實施例2步驟1同樣地反應，獲得標題化合物(422mg，93%)。不進行進一步純化而用於下一反應。
步驟2：甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-[(2S)-3-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10，13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-2-甲基-3-側氧基丙基]甘胺醯胺
使上述步驟1所獲得的化合物，與實施例2步驟2同樣地反應，獲得標題化合物之三氟乙酸鹽(419mg，91%，2步驟)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.86(3H,t,J=7.4Hz),1.06(3H,d,J=7.0Hz),1.78-1.90(2H,m),2.05-2.19(2H,m),2.40(3H,s),2.57(1H,t,J=6.6Hz),2.73(1H,dd,J=13.7,10.2Hz),3.01(1H,dd,J=14.5,4.7Hz),3.10-3.22(2H,m),3.21-3.46(2H,m),3.57(2H,br.s.),3.61-3.75(3H,m),3.87(1H,dd,J=16.8,5.9Hz),4.47-4.58(1H,m),5.18(1H,d,J=18.8Hz),5.28(1H,d,J=19.2Hz),5.39(1H,d,J=16.0Hz),5.45(1H,d,J=16.0Hz),5.50-5.58(1H,m),6.55(1H,s),7.13-7.28(5H,m),7.33(1H,s),7.81(2H,d,J=10.6Hz),7.96(3H,br.s.),8.27-8.36(2H,m),8.48(1H,t,J=5.3Hz),8.53(1H,d,J=8.2Hz).
MS(ESI)m/z：839(M+H)+.
步驟3：N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-[(2S)-3-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-2-甲基-3-側氧基丙基]甘胺醯胺
使上述步驟2所獲得的化合物(100mg，0.105mmoL)，與實施例5步驟8同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(27.0mg，25%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.86(3H,t,J=7.2Hz),1.05(3H,d,J=6.3Hz),1.11-1.26(3H,m),1.44(4H,quin,J=7.4Hz),1.77-1.90(2H,m),2.01-2.18(4H,m),2.39(3H,s),2.76(1H,dd,J=14.1,8.6Hz),2.99(1H,dd,J=14.3,4.5Hz),3.10-3.22(3H,m),3.22-3.38(3H,m),3.39-3.82(6H,m),4.38-4.47(1H,m),5.18(1H,d,J=18.8Hz),5.28(1H,d,J=18.8Hz),5.41(2H,d,J=6.6Hz),5.49-5.60(1H,m),6.53(1H,s),6.99(2H,s),7.11-7.29(5H,m),7.32(1H,s),7.73(1H,t,J=5.5Hz),7.80(1H,d,J=11.3Hz),7.99(1H,t,J=5.7Hz),8.06(1H,t,J=5.3Hz),8.13(1H,d,J=8.6Hz),8.25(1H,t,J=6.3Hz),8.52(1H,d,J=8.6Hz).
MS(ESI)m/z：1032(M+H)+.
步驟4：抗體-藥物結合物(19)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及上述步驟3所獲得的化合物，藉由與實施例2步驟6同樣之方法，獲得標題抗體-藥物結合物。
抗體濃度：1.59mg/mL，抗體產量：9.5mg(76%)，抗 體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.7。
實施例20抗體-藥物結合物(20)
步驟1：抗體-藥物結合物(20)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及實施例19步驟3所獲得的化合物，藉由與實施例3步驟1同樣之方法，獲得標題抗體-藥物結合物。
抗體濃度：1.62mg/mL，抗體產量：9.7mg(78%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：7.0。
實施例21中間體(21)
步驟1：[(2R)-3-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基 }-2-甲基-3-側氧基丙基]胺甲酸三級丁酯
將依喜替康之甲烷磺酸鹽(300mg，0.564mmoL)，使用(2R)-3-[(三級丁氧基羰基)胺基]-2-甲基丙酸替代4-(三級丁氧基羰基胺基)丁酸及使用3H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶-3-醇替代N-羥基琥珀醯亞胺，使與實施例1步驟1同樣地反應，獲得呈淡白色固體之標題化合物(376mg，定量的)。不進行進一步純化而用於下一反應。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.2Hz),1.06(3H,d,J=6.6Hz),1.38(9H,s),1.77-1.93(1H,m),2.09-2.18(2H,m),2.40(3H,s),2.44-2.55(1H,m),2.92-3.00(1H,m),3.09-3.22(3H,m),5.12(1H,d,J=19.2Hz),5.20(1H,d,J=18.8Hz),5.42(2H,s),5.51-5.59(1H,m),6.54(1H,s),6.85(1H,t,J=5.5Hz),7.30(1H,s),7.79(1H,d,J=10.9Hz),8.44(1H,d,J=8.6Hz).
步驟2：(2R)-3-胺基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]-2-甲基丙醯胺
使上述步驟1所獲得的化合物，與實施例1步驟2同樣地反應，獲得標題化合物之三氟乙酸鹽(376mg，92%，2步驟)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.88(3H,t,J=7.4Hz),1.16(3H,d,J=7.0Hz),1.86(2H,tt,J=13.7,6.8Hz),2.12-2.24(2H,m),2.41(3H,s),2.67(1H,q,J=5.9Hz),2.82-2.93(1H,m),3.03-3.12(1H,m),3.13-3.22(2H,m),5.10(1H,d,J=18.8Hz),5.24(1H,d,J=18.8Hz),5.42(2H,s),5.58(1H,dt,J=8.9,4.7Hz),6. 55(1H,s),7.31(1H,s),7.79(3H,br.s.),7.82(1H,d,J=11.3Hz),8.73(1H,d,J=8.6Hz).
MS(ESI)m/z：521(M+H)+.
實施例22抗體-藥物結合物(22)
步驟1：N-(三級丁氧基羰基)甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-[(2R)-3-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-2-甲基-3-側氧基丙基]甘胺醯胺
使實施例21步驟2所獲得的化合物(296mg，0.466mmoL)，與實施例2步驟1同樣地反應，獲得標題化合物(398mg，91%)。
不進行進一步純化而用於下一反應。
步驟2：甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-[(2R)-3-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-2-甲基-3-側氧基丙基]甘胺醯胺
使上述步驟1所獲得的化合物，與實施例2步驟2同樣地反應，獲得標題化合物之三氟乙酸鹽(398mg，92%，2步驟)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.2Hz),1.09(3H,d,J=6.6Hz),1.79-1.92(2H,m),2.11-2.20(2H,m),2.40(3H,s),2.52-2.59(1H,m),2.76(1H,dd,J=13.7,10.2Hz),3.05(1H,dd,J=13.9,4.1Hz),3.12-3.19(2H,m),3.21(2H,t,J=6.5Hz),3.58(2H,br.s.),3.64-3.79(3H,m),3.87(1H,dd,J=16.6,5.7Hz),4.51-4.61(1H,m),5.13(1H,d,J=19.2Hz),5.19(1H,d,J=18.8Hz),5.42(2H,s),5.52-5.60(1H,m),6.54(1H,s),7.15-7.29(5H,m),7.31(1H,s),7.80(1H,d,J=11.3Hz),7.91(1H,t,J=6.3Hz),7.96(3H,br.s.),8.31-8.38(2H,m),8.49(1H,t,J=5.5Hz),8.56(1H,d,J=8.6Hz).
MS(ESI)m/z：839(M+H)+.
步驟3：N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-[(2R)-3-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-2-甲基-3-側氧基丙基]甘胺醯胺
使上述步驟2所獲得的化合物(100mg，0.105mmoL)，與實施例5步驟8同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(27.0mg，25%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.0Hz),1.09(3H,d,J=7.0Hz),1.13-1.26(3H,m),1.37-1.51(4H,m),1.77-1.92(2H,m),2.08(2H,t,J=7.4Hz),2.11-2.20(2H,m),2.39(3H,s),2.79(1H,dd,J=13.7,9.8Hz),3.04(1H,dd,J=13.7,3.9Hz),3.10-3.25(4H,m),3.28-3.38(2H,m),3.50-3.80(6H,m),4.42-4.54(1H,m)，5.14(1H,d,J=19.6Hz),5.19(1H,d,J=19.2Hz),5.42(2H,s),5.51-5.61(1H,m),6.53(1H,s),6.99(2H,s),7.13-7.28(5H,m),7.30(1H,s),7.79(1H,d,J=10.9Hz),7.84(1H,t,J=5.9Hz),8.01(1H,t,J=5.7Hz),8.07(1H,t,J=5.3Hz),8.14(1H,d,J=7.8Hz),8.25(1H,d,J=10.9Hz),8.54(1H,d,J=9.0Hz).
MS(ESI)m/z：1032(M+H)+.
步驟4：抗體-藥物結合物(22)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及上述步驟3所獲得的化合物，藉由與實施例2步驟6同樣之方法，獲得標題抗體-藥物結合物。
抗體濃度：1.59mg/mL，抗體產量：9.5mg(76%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.8。
實施例23抗體-藥物結合物(23)
步驟1：抗體-藥物結合物(23)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及實施例22步驟3所獲得的化合物，藉由與實施例3步驟1同樣之方法，獲得標題抗體-藥物結合物。
抗體濃度：1.59mg/mL，抗體產量：9.5mg(76%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：6.9。
實施例24中間體(24)
步驟1：(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-3,3-二甲基-4-側氧基丁基)胺甲酸三級丁酯
將依喜替康之甲烷磺酸鹽(300mg，0.564mmoL)，使用4-[(三級丁氧基羰基)胺基]-2,2-二甲基丁酸替代4-(三 級丁氧基羰基胺基)丁酸及使用3H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶-3-醇替代N-羥基琥珀醯亞胺，使與實施例1步驟1同樣地反應，獲得標題化合物。不進行進一步純化而用於下一反應。
步驟2：4-胺基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]-2,2-二甲基丁醯胺三氟乙酸鹽
使上述步驟1所獲得的化合物，與實施例1步驟2同樣地反應，獲得標題化合物(358mg，96%，2步驟)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.88(3H,t,J=7.4Hz),1.21(3H,s),1.24(3H,s),1.74-1.93(4H,m),2.13(2H,q,J=6.6Hz),2.41(3H,d,J=1.6Hz),2.79-2.90(1H,m),3.09-3.25(2H,m),5.10(1H,d,J=18.4Hz),5.19(1H,d,J=18.4Hz),5.42(2H,s),5.55-5.63(1H,m),6.56(1H,s),7.33(1H,s),7.71(3H,brs),7.81(1H,d,J=10.9Hz),8.20(1H,d,J=8.2Hz).
MS(ESI)m/z：549(M+H)+.
實施例25抗體-藥物結合物(25)
步驟1：N-(三級丁氧基羰基)甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-3,3-二甲基-4-側氧基丁基)甘胺醯胺
使實施例24步驟2所獲得的化合物(358mg，0.540mmoL)，與實施例2步驟1同樣地反應，獲得標題化合物。不進行進一步純化而用於下一反應。
步驟2：甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-3,3-二甲基-4- 側氧基丁基)甘胺醯胺三氟乙酸鹽
使上述步驟1所獲得的化合物，與實施例2步驟2同樣地反應，獲得標題化合物(576mg，定量的，2步驟)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.88(3H,t,J=7.4Hz),1.20(3H,s),1.21(3H,s),1.64-1.71(2H,m),1.80-1.92(2H,m),2.09-2.18(2H,m),2.39(3H，d,J=1.2Hz),2.76(1H,dd,J=14.1,9.8Hz),3.05(2H,dd,J=14.1,4.3Hz),3.09-3.24(2H,m),3.54-3.60(2H,m),3.63-3.75(3H,m),3.82-3.91(2H,m),4.52-4.61(1H,m),5.12(1H,d,J=18.4Hz),5.18(1H,d,J=18.4Hz),5.42(2H,s),5.55-5.63(1H,m),6.55(1H,s),7.15-7.30(5H,m),7.32(1H,s),7.77-7.84(2H,m),7.97(3H,d,J=7.0Hz),8.16(1H,d,J=8.2Hz),8.29-8.37(2H,m),8.50(1H,t,J=5.5Hz).
MS(ESI)m/z：867(M+H)+.
步驟3：N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-3,3-二甲基-4-側氧基丁基)甘胺醯胺
使上述步驟2所獲得的化合物(100mg，0.102mmoL)，與實施例5步驟8同樣地反應，獲得呈固體之標題化合物(24mg，22%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.2Hz),1.13-1.25(2H,m),1.20(3H,s),1.21(3H,s),1.39-1.52(4H,m),1.62-1.72(2H,m),1.86(2H,dt,J=14.2,6.8Hz),2.09(2H,t,J=7. 4Hz),2.10-2.18(2H,m),2.39(3H,s),2.79(1H,dd,J=13.7,9.4Hz),2.98-3.08(2H,m),3.08-3.22(3H,m),3.29-3.39(2H,m),3.53-3.79(6H,m),4.41-4.52(1H,m),5.11(1H,d,J=18.8Hz),5.18(1H,d,J=18.4Hz),5.42(2H,s),5.53-5.64(1H,m),6.54(1H,s),6.99(2H,s),7.14-7.29(5H,m),7.31(1H,s),7.71(1H,t,J=5.5Hz),7.79(1H,d,J=10.9Hz),8.03(1H,t,J=5.9Hz),8.06-8.19(3H,m),8.24(1H,t,J=6.1Hz).
MS(ESI)m/z：1060(M+H)+.
步驟4：抗體-藥物結合物(25)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及上述步驟3所獲得的化合物，藉由與實施例2步驟6同樣之方法，獲得標題抗體-藥物結合物。使用共通操作B、E，而獲得下述之特性值。
抗體濃度：1.44mg/mL，抗體產量：8.6mg(69%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.3。
實施例26抗體-藥物結合物(26)
步驟1：抗體-藥物結合物(26)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及實施例25步驟3所獲得的化合物，藉由與實施例3步驟1同樣之方法，獲得標題抗體-藥物結合物。再使用共通操作A，將溶液濃縮後，使用共通操作B、E，而獲得下述之特性值。
抗體濃度：1.38mg/mL，抗體產量：8.3mg(66%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：6.1。
實施例27抗體-藥物結合物(27)
步驟1：9H-茀-9-基甲基(2-異氰酸酯乙基)胺甲酸酯
將N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-β-丙胺酸(3.1g，10mmoL)之四氫呋喃(30mL)溶液於氮氣環境下冷卻至-15℃，依序滴加N-甲基啉(1.2mL，11mmoL)、氯甲酸乙酯(1.1mL，11mmoL)，於-15℃攪拌10分鐘。於此溶液 中於-15℃滴加疊氮化鈉(0.98g，15mmoL)水溶液(2mL)，並於-15℃攪拌1小時。於反應液中添加5%碳酸鈉水後，以二氯甲烷萃取，有機層以10%檸檬酸，接著以水洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，減壓餾除溶媒。將獲得的殘留物(無色固體)溶解於甲苯(50mL)，於65℃攪拌1小時。減壓餾除溶媒，獲得的殘留物(無色固體)不進行純化而用於下一反應。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ：3.30-3.38(2H,m),3.41-3.47(2H,m),4.21(1H,t,J=6.6Hz),4.42(2H,d,J=7.0Hz),5.03(1H,brs),7.31(2H,t,J=7.4Hz),7.39(2H,t,J=7.4Hz),7.57(2H,d,J=7.4Hz),7.75(2H,d,J=7.4Hz).
步驟2：9H-茀-9-基甲基[2-({[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺甲醯基}胺基)乙基]胺甲酸酯
於上述步驟1所獲得的化合物(0.36g，1.2mmoL)之N,N-二甲基甲醯胺(10mL)溶液中添加依喜替康之甲烷磺酸鹽(0.55g，0.97mmoL)、N,N-二異丙基乙基胺(0.33mL，1.9mmoL)，並於50℃攪拌1小時後，添加10%硫酸氫鉀水溶液後，以乙酸乙酯萃取。有機層以水洗淨，以無水硫酸鈉乾燥後，減壓餾除溶媒，將獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇=10：1(v/v)]純化，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(0.79g，定量的)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.82(2H,t,J=7.2Hz),1.73-1.86(2H,m),2.00-2.20(2H,m),2.35(3H,s),3.00-3.16(5 H,m),3.17-3.27(1H,m),4.11-4.27(3H,m),5.08(1H,d,J=19.2Hz),5.26-5.38(4H,m),5.97-6.03(1H,m),6.51(1H,s),6.67(1H,d,J=9.0Hz),7.24-7.30(2H,m),7.32-7.39(3H,m),7.62(2H,t,J=7.4Hz),7.72-7.82(3H,m).
MS(APCI)m/z：744(M+H)+.
步驟3：1-(2-胺基乙基)-3-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]脲
使上述步驟2所獲得的化合物(0.744g，1.00mmoL)，與實施例15步驟2同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(0.452g，87%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.65(3H,t,J=7.2Hz),1.50-2.35(3H,m),2.23(3H,s),2.84-3.07(4H,m),3.11-3.22(1H,m),3.42-3.76(3H,m),4.40-4.46(1H,m),4.53-4.73(2H,m),4.81(1H,d,J=19.9Hz),5.24-5.35(1H,m),6.12(1H,s),6.39-6.47(1H,m),6.56(1H,d,J=9.8Hz),7.38(1H,d,J=10.6Hz),7.71(1H,s),8.17(1H,s).
步驟4：N-(三級丁氧基羰基)甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-[2-({[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺甲醯基}胺基)乙基]甘胺醯胺
使上述步驟3所獲得的化合物(0.452g，0.867mmoL)，與實施例2步驟1同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標 題化合物(0.510g，63%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.2Hz),1.35(9H,s),1.77-1.94(2H,m),2.08-2.24(2H,m),2.39(3H,s),2.71-2.82(1H,m),2.98-3.80(13H,m),4.40-4.55(1H,m),5.16-5.49(5H,m),6.06-6.11(1H,m),6.53(1H,s),6.77(1H,d,J=8.6Hz),6.96-7.03(1H,m),7.14-7.27(5H,m),7.32(1H,s),7.78(1H,d,J=11.0Hz),7.83-7.95(2H,m),8.15(1H,s),8.29(1H,s).
步驟5：甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-[2-({[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺甲醯基}胺基)乙基]甘胺醯胺
使上述步驟4所獲得的化合物(0.510g，0.543mmoL)，與實施例2步驟2同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(0.351g，77%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.2Hz),1.79-1.92(2H,m),2.04-2.24(2H,m),2.39(3H,s),2.76(1H,dd,J=13.7,9.8Hz),3.03-3.18(7H,m),3.58(2H,brs),3.62-3.91(4H,m),4.50-4.58(1H,m),5.17-5.49(5H,m),6.08-6.15(1H,m),6.54(1H,s),6.79(1H,d,J=9.0Hz),7.13-7.30(5H,m),7.32(1H,s),7.79(1H,d,J=10.9Hz),7.91-8.03(3H,m),8.34(2H,d,J=7.4Hz),8.49(1H,t,J=5.7Hz).
步驟6：N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-[2-({[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側 氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺甲醯基}胺基)乙基]甘胺醯胺
使上述步驟5所獲得的化合物(84.0mg，0.100mmoL)，與實施例5步驟8同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(75.6mg，73%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.2Hz),1.12-1.22(2H,m),1.40-1.51(4H,m),1.79-1.93(2H,m),2.03-2.22(4H,m),2.38(3H,s),2.47-3.38(11H,m),3.54-3.76(6H,m),4.42-4.52(1H,m),5.14-5.49(5H,m),6.07-6.12(1H,m),6.53(1H,s),6.77(1H,d,J=9.0Hz),6.99(1H,s),7.19(5H,dd,J=22.1,6.5Hz),7.31(1H,s),7.78(1H,d,J=10.6Hz),7.84-7.88(1H,m),7.99-8.10(2H,m),8.14(1H,d,J=7.8Hz),8.23-8.29(1H,m).
MS(ESI)m/z：1033(M+H)+.
步驟7：抗體-藥物結合物(27)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及上述步驟6所獲得的化合物，藉由與實施例2步驟6同樣之方法，獲得標題抗體-藥物結合物。
抗體濃度：1.65mg/mL，抗體產量：9.9mg(79%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.2。
實施例28抗體-藥物結合物(28)
步驟1：抗體-藥物結合物(28)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及實施例27步驟6所獲得的化合物，藉由與實施例3步驟1同樣之方法，獲得標題抗體-藥物結合物。
抗體濃度：1.83mg/mL，抗體產量：11.0mg(88%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：6.4。
實施例29抗體-藥物結合物(29)
步驟1：(2-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}乙基)胺甲酸三級丁酯
將依喜替康之甲烷磺酸鹽(0.541g，1.00mmoL)溶解於N,N-二甲基甲醯胺(0.5mL)，添加氯仿(100mL)、甲醇(100mL)、N-(2-側氧基乙基)胺甲酸三級丁酯(0.238g，1.5mmoL)、乙酸(0.086mL，1.5mmoL)。於此溶液中添加 三乙醯氧基氫化硼鈉(316mg，1.5mmoL)並於室溫攪拌12小時。於反應液中添加水後，以氯仿萃取，有機層以無水硫酸鈉乾燥後，減壓餾除溶媒，將獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇=10：1(v/v)]純化，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(0.20g，34%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.96(4H,t,J=7.3Hz),1.44(9H,s),1.88-2.03(2H,m),2.04-2.14(1H,m),2.23-2.37(1H,m),2.47(3H,s),2.73-2.82(1H,m),2.86-2.94(1H,m),3.08-3.17(3H,m),3.25-3.34(1H,m),4.31-4.36(1H,m)，5.48(2H,s),5.52(2H,s),6.62(1H,s),6.85-6.90(1H,m),7.40(1H,s),7.84(1H,d,J=10.7Hz).
MS(APCI)m/z：579(M+H)+.
步驟2：(1S,9S)-1-[(2-胺基乙基)胺基]-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-1,2,3,9,12,15-六氫-10H,13H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮
使上述步驟1所獲得的化合物(0.174g，0.300mmoL)，與實施例1步驟2同樣地反應，獲得的粗生成物不進行純化，用於下一反應。
步驟3：N-(三級丁氧基羰基)甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-(2-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}乙基)甘胺醯胺
使上述步驟2所獲得的粗生成物，與實施例2步驟1同樣地反應，獲得的粗生成物不進行純化，用於下一反 應。
步驟4：甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-(2-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}乙基)甘胺醯胺
使上述步驟3所獲得的粗生成物，與實施例2步驟2同樣地反應，獲得的粗生成物不進行純化，用於下一反應。
步驟5：N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-(2-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}乙基)甘胺醯胺
使上述步驟4所獲得的粗生成物，與實施例5步驟8同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(42.2mg，14%，4步驟)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.86(3H,t,J=7.2Hz),1.11-1.20(2H,m),1.38-1.50(4H,m),1.79-1.92(2H,m),2.02-2.25(5H,m),2.38(3H,s),2.69-3.39(10H,m),3.53-3.77(6H,m),4.21-4.31(1H,m),4.42-4.51(1H,m),5.31-5.55(4H,m),6.54(1H,s),6.99(2H,s),7.12-7.28(5H,m),7.32(1H,s),7.65-7.71(1H,m),7.75(1H,d,J=10.9Hz),7.98-8.10(2H,m),8.16(1H,d,J=7.4Hz),8.39(1H,t,J=6.1Hz).
MS(ESI)m/z：990(M+H)+.
步驟6：抗體-藥物結合物(29)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及上述步驟5所獲得的化合物，藉由與實施例2步驟6同樣之方法，獲得標題抗體-藥物結合物。
抗體濃度：1.75mg/mL，抗體產量：10.5mg(84%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.9。
實施例30抗體-藥物結合物(30)
步驟1：抗體-藥物結合物(30)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及實施例29步驟5所獲得的化合物，藉由與實施例3步驟1同樣之方法，獲得標題抗體-藥物結合物。
抗體濃度：1.70mg/mL，抗體產量：10.2mg(82%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：7.6。
實施例31抗體-藥物結合物(31)
步驟1：二(三級丁基)(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}丁基)亞胺二碳酸酯
將依喜替康之甲烷磺酸鹽(2.13g，4.00mmoL)，使用二(三級丁基)(4-側氧基丁基)亞胺二甲酸酯替代N-(2-側氧基乙基)胺甲酸三級丁酯，使與實施例29步驟1同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(1.73g，61%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(4H,t,J=7.2Hz),1 .39(18H,s),1.60-1.34(4H,m),1.80-1.93(2H,m),1.96-2.05(1H,m),2.19-2.30(1H,m),2.37(3H,s),2.61-2.71(1H,m),2.73-2.83(1H,m),2.96-3.06(1H,m),3.17-3.26(1H,m),3.42-3.51(2H,m),4.19-4.25(1H,m),5.29-5.46(4H,m),6.52(1H,s),7.30(1H,s),7.74(1H,d,J=11.3Hz).
步驟2：(1S,9S)-1-[(4-胺基丁基)胺基]-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-1,2,3,9,12,15-六氫-10H,13H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮
使上述步驟1所獲得的化合物(0.283g，0.400mmoL)，與實施例1之步驟2同樣地反應，獲得的粗生成物不進行純化，而用於下一步驟。
步驟3：N-(三級丁氧基羰基)甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}丁基)甘胺醯胺
使上述步驟2所獲得的粗生成物，與實施例2步驟1同樣地反應，獲得的粗生成物不進行純化，用於下一反應。
步驟4：甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}丁基)甘胺醯胺
使上述步驟3所獲得的粗生成物，與實施例2步驟2同樣地反應，獲得的粗生成物不進行純化，用於下一反 應。
步驟5：N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}丁基)甘胺醯胺
使上述步驟4所獲得的粗生成物，與實施例5步驟8同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(53.7g，13%，4步驟)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=6.6Hz),1.14-1.28(2H,m),1.40-1.56(8H,m),1.81-1.92(2H,m),1.97-2.28(5H,m),2.37(3H,s),2.46-3.42(10H,m),3.51-3.80(6H,m),4.19-4.26(1H,m),4.41-4.50(1H,m),5.29-5.48(4H,m),6.54(1H,s),6.99(2H,s),7.09-7.28(5H,m),7.31(1H,s),7.61-7.69(1H,m),7.74(1H,d,J=11.3Hz),7.99-8.17(3H,m),8.24(1H,s).
MS(ESI)m/z：1018(M+H)+.
步驟6：抗體-藥物結合物(31)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及上述步驟5所獲得的化合物，藉由與實施例2步驟6同樣之方法，獲得標題抗體-藥物結合物。
抗體濃度：1.81mg/mL，抗體產量：10.9mg(87%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.9。
實施例32抗體-藥物結合物(32)
步驟1：抗體-藥物結合物(32)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及實施例31步驟5所獲得的化合物，藉由與實施例3步驟1同樣之方法，獲得標題抗體-藥物結合物。
抗體濃度：1.77mg/mL，抗體產量：10.6mg(85%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：7.6。
實施例33中間體(33)
步驟1：N-{2-[(三級丁氧基羰基)胺基]乙基}甘胺酸苯甲酯
將N-(2-胺基乙基)胺甲酸三級丁酯(3.00g，18.7mmoL)溶解於乙腈(10.0mL)，添加碳酸鉀(2.59g，18.7mmoL)、及2-溴乙酸苯甲酯(1.46mL，9.36mmoL)，並於室溫攪拌1日。過濾此反應溶液，將獲得的濾液於減壓下餾除溶媒。將獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇=8：2(v/v)]純化，獲得無色油狀之標題化合物(1.71g，59%)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ：1.44(9H,s),2.72(2H,t,J=5.7Hz),3.19(2H,q,J=5.7Hz),3.43(2H,s),4.68(1H,s),5.16(2H,s),7.34-7.36(6H,m).
MS(APCI)m/z：309(M+H)+.
步驟2：N-{2-[(三級丁氧基羰基)胺基]乙基}-N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]甘胺酸苯甲酯
將上述步驟1所獲得的化合物(0.370g，1.19mmoL)溶解於1,4-二烷(5.00mL)。添加二異丙基乙基胺(2.00mL，11.9mmoL)、及氯甲酸9-茀基甲酯(1.23g，4.76mmoL)，並於室溫攪拌3小時。減壓餾除溶媒，獲得的殘留物以矽膠管柱層析[己烷~己烷/乙酸乙酯=1：1(v/v)]純化，獲得無色油狀之標題化合物(0.479g，76%)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ：1.40-1.43(9H,m),2.99-3.25(2H,m),3.34-3.40(2H,m),3.95-4.01(2H,m),4.08-4.24(1H,m),4.38(1H,d,J=6.6Hz),4.52(1H,d,J=6.3Hz),5.10-5.16(2H,m),7.24-7.41(9H,m),7.50(1H,d,J=7.4Hz),7.56(1H,d,J =7.4Hz),7.73(1H,d,J=7.4Hz),7.76(1H,d,J=7.4Hz).
步驟3：N-{2-[(三級丁氧基羰基)胺基]乙基}-N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]甘胺酸
將上述步驟2所獲得的化合物(461mg，0.868mmoL)溶解於甲醇(5.00mL)。添加觸媒量之鈀碳觸媒，於氫氣環境下攪拌1小時。通過矽藻土層而過濾，將濾液於減壓下餾除溶媒。獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇：水=7：3：1(v/v/v)之分配有機層]純化，獲得無色油狀之標題化合物(236mg，62%)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ：1.36(9H,s),3.00-3.02(1H,m),3.24-3.27(2H,m),3.41-3.43(1H,m),3.67-3.69(1H,m),3.90-3.95(2H,m),4.17-4.20(1H,m),4.34-4.43(2H,m),7.29-7.33(4H,m),7.52-7.54(2H,m),7.71(2H,d,J=7.0Hz).
MS(APCI)m/z：439(M-H)-.
步驟4：9H-茀-9-基甲基{2-[(三級丁氧基羰基)胺基]乙基}(2-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-2-側氧基乙基)胺甲酸酯
將依喜替康之甲烷磺酸鹽(230mg，0.435mmoL)，使用上述步驟3所獲得的化合物(228mg，0.519mmoL)替代4-(三級丁氧基羰基胺基)丁酸，而使與實施例1步驟1同樣地反應，獲得呈黃色固體之標題化合物(336mg，90%)。
1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ：0.89-0.97(3H,m),1.35-1.40(9H,m),1.77-1.79(2H,m),2.16-2.23(2H,m),2.29(3H,s) ,2.62(1H,s),3.12-3.22(4H,m),3.36-3.52(1H,m),3.88-4.17(3H,m),4.32-4.36(2H,m),4.67-4.81(2H,m),5.03-5.38(2H,m),5.59(1H,dd,J=20.1,15.1Hz),6.69(1H,t,J=7.6Hz),7.03(1H,dt,J=28.0,7.5Hz),7.16-7.57(6H,m),7.69(1H,d,J=7.4Hz),7.96(1H,s).
MS(APCI)m/z：858(M+H)+.
步驟5：9H-茀-9-基甲基(2-胺基乙基)(2-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-2-側氧基乙基)胺甲酸酯
使上述步驟4所獲得的化合物(347mg，0.404mmoL)，與實施例1步驟2同樣地反應，獲得呈黃色固體之標題化合物之三氟乙酸鹽(307mg，定量的)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ：1.05(3H,t,J=7.4Hz),1.85-1.92(2H,m),2.29-2.32(2H,m),2.45(3H,s),2.82-2.84(1H,m),3.25-3.28(2H,m),3.58-3.65(1H,m),3.98-4.12(3H,m),4.30-4.33(2H,m),4.55-4.62(2H,m),4.89-5.41(4H,m),5.60-5.72(1H,m),6.83(1H,t,J=7.4Hz),7.12-7.19(1H,m),7.30-7.65(7H,m),7.81(1H,d,J=7.4Hz).
MS(APCI)m/z：758(M+H)+.
步驟6：N2-(2-胺基乙基)-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺醯胺
使上述步驟5所獲得的化合物(191mg，0.253mmoL)，與實施例15步驟6同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(97.7mg，72%)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.2Hz),1.84-1.87(2H,m),2.16-2.17(2H,m),2.38(3H,s),2.76(2H,t,J=5.5Hz),2.86-2.87(2H,m),3.00-3.02(2H,m),3.17-3.18(2H,m),3.26-3.28(2H,m),3.35(2H,br.s),5.19(2H,s),5.42(2H,s),5.58-5.60(1H,m),7.31(1H,s),7.78(1H,d,J=11.0Hz),8.57(1H,d,J=9.0Hz).
MS(APCI)m/z：758(M+H)+.
實施例34抗體-藥物結合物(34)
步驟1：N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基甘胺酸三級丁酯
於N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]甘胺醯基甘胺醯基-L-苯丙胺酸(特開2002-60351；5.43g，10.8mmoL)、1-羥基苯并三唑(2.93g，21.7mmoL)及甘胺酸三級丁酯鹽酸鹽(2.72g，16.2mmoL)、三乙基胺(3.02mL，21.7mmoL)之二氯甲烷(50.0mL)溶液中，添加1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(4.15g，21.7mmoL)，並於室溫 攪拌20小時。添加10%檸檬酸水溶液(100mL)，以氯仿(100mL)萃取3次，有機層以無水硫酸鈉乾燥。減壓下將溶媒餾除後，將獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇=8：2(v/v)]純化，獲得呈無色固體之標題化合物(6.02g，定量的)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ：1.40(9H,s),2.76(1H,dd,J=13.7,10.6Hz),3.05(1H,dd,J=13.7,3.9Hz),3.55-3.80(6H,m),4.21-4.31(3H,m),4.52(1H,td,J=9.3,3.4Hz),7.19-7.26(5H,m),7.32(2H,t,J=7.4Hz),7.42(2H,t,J=7.4Hz),7.60(1H,t,J=5.9Hz),7.71(2H,d,J=7.0Hz),7.89(2H,d,J=7.8Hz),8.00(1H,t,J=5.3Hz),8.14(1H,d,J=8.2Hz),8.39(1H,t,J=5.7Hz).
MS(APCI)m/z：615(M+H)+.
步驟2：N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基甘胺酸
使上述步驟1所獲得的化合物(5.00g，8.13mmoL)，與實施例2步驟2同樣地反應，獲得標題化合物(4.47g，98%)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ：2.76(1H,dd,J=13.7,10.2Hz),3.05(1H,dd,J=13.7,3.9Hz),3.55-3.79(7H,m),4.21-4.30(3H,m),4.54(1H,td,J=9.0,3.7Hz),7.16-7.25(5H,m),7.33(2H,t,J=7.4Hz),7.42(2H,t,J=7.4Hz),7.59(1H,t,J=5.7Hz),7.71(2H,d,J=7.4Hz),7.89(2H,d,J=7.4Hz),8.00(1H,t,J=5.3Hz),8.13(1H,d,J=8.6Hz),8.38(1H,t,J=5.7Hz).
MS(APCI)m/z：559(M+H)+.
步驟3：N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]甘胺醯 基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-(2-{(2-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-2-側氧基乙基)[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]胺基}乙基)甘胺醯胺
將實施例33步驟5所獲得的化合物(200mg，0.264mmoL)，使用上述步驟2所獲得的化合物(177mg，0.317mmoL)替代N-(三級丁氧基羰基)甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基甘胺酸，使與實施例2步驟1同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(297mg，87%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.80-0.86(3H,m),1.75-1.82(2H,m),2.10-2.12(2H,m),2.35-2.38(4H,m),2.75-2.81(2H,m),3.00-3.17(7H,m),3.58-3.86(8H,m),4.18-4.28(4H,m),4.47-4.49(1H,m),5.14-5.23(2H,m),5.33-5.38(2H,m),5.56-5.58(1H,m),6.52-6.53(1H,m),7.17-7.43(17H,m),7.59-7.62(2H,m),7.69-7.71(2H,m),7.80-7.90(4H,m),8.01-8.03(1H,m),8.14-8.16(1H,m),8.29-8.32(1H,m),8.50-8.54(1H,m).
MS(APCI)m/z：1298(M+H)+.
步驟4：甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-{2-[(2-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-2-側氧基乙基)胺基]乙基}甘胺醯胺
使上述步驟3所獲得的化合物(297mg，0.229mmoL)，與實施例5步驟2同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標 題化合物(95.6mg，49%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.86(3H,t,J=7.2Hz),1.82-1.89(2H,m),2.15-2.17(2H,m),2.29-2.31(1H,m),2.38(3H,s),2.60(2H,t,J=6.1Hz),2.76(1H,dd,J=15.1,11.1Hz),3.00(1H,dd,J=14.1,4.3Hz),3.15-3.18(5H,m),3.27-3.46(3H,m),3.55-3.80(6H,m),4.46(1H,dd,J=8.2,4.3Hz),5.20(2H,s),5.43(2H,s),5.58(1H,d,J=7.8Hz),6.54(1H,s),7.19-7.24(5H,m),7.31(1H,s),7.74-7.78(2H,m),8.23-8.31(3H,m),8.51(1H,d,J=8.6Hz).
MS(APCI)m/z：854(M+H)+.
步驟5：N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-{2-[(2-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-2-側氧基乙基)胺基]乙基}甘胺醯胺
使上述步驟4所獲得的化合物(90.0mg，0.105mmoL)，與實施例15步驟6同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(60.1mg，55%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.81(3H,t,J=7.2Hz),1.13-1.14(2H,m),1.39-1.40(4H,m),1.78-1.82(2H,m),2.03(2H,t,J=7.2Hz),2.09-2.12(2H,m),2.31(3H,s),2.57-2.59(2H,m),2.72-2.75(1H,m),2.92-2.96(1H,m),3.08-3.30(8H,m),3.57-3.65(6H,m),4.38-4.39(1H,m),5.12(2H,s),5.36(2H,s),5.51-5.53(1H,m),6.48(1H,s),6.93(2H,s),7.13-7.18(5H,m),7. 24(1H,s),7.62(1H,t,J=5.9Hz),7.71(1H,d,J=10.9Hz),7.89(1H,s),7.97(1H,t,J=5.5Hz),8.04(1H,t,J=5.7Hz),8.08(1H,d,J=7.8Hz),8.19(1H,t,J=5.5Hz),8.43(1H,d,J=9.0Hz).
MS(APCI)m/z：1047(M+H)+.
步驟6：抗體-藥物結合物(34)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及上述步驟5所獲得的化合物，藉由與實施例2步驟6同樣之方法，獲得標題抗體-藥物結合物。
抗體濃度：1.51mg/mL，抗體產量：9.1mg(73%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.2。
實施例35抗體-藥物結合物(35)
步驟1：抗體-藥物結合物(35)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及實施例34步驟5所獲得的化合物，藉由與實施例3步驟1同樣之方法，獲得標題抗體-藥物結合物。
抗體濃度：1.58mg/mL，抗體產量：9.5mg(76%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：5.9。
實施例36中間體(36)
步驟1：N-{2-[(三級丁氧基羰基)胺基]乙基}-N-甲基甘胺酸苯甲基酯
將實施例33步驟1所獲得的化合物(335mg，1.09mmoL)溶解於二氯甲烷(5.00mL)。添加二異丙基乙基胺(0.379mL，2.18mmoL)、及碘甲烷(0.102mL，1.63mmoL)，並於室溫攪拌1日。減壓餾除溶媒，獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿：甲醇=9：1(v/v)]純化，獲得無色油狀之標題化合物(319mg，91%)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ：1.44(9H,s),2.37(3H,s),2.63(2H,t,J=5.9Hz),3.19(2H,q,J=5.3Hz),3.32(2H,s),5.15(2H,s),7.31-7.33(5H,m).
MS(APCI)m/z：323(M+H)+.
步驟2：N-{2-[(三級丁氧基羰基)胺基]乙基}-N-甲基甘胺酸
使上述步驟1所獲得的化合物(319mg,0.990mmoL)，與實施例33步驟3同樣地反應，獲得無色油狀之標題化合物(203mg，88%)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ：1.42(9H,s),2.91(3H,br.s),3.28(2H,br.s),3.51(2H,br.s),3.70(2H,br.s).
MS(APCI)m/z：233(M+H)+.
步驟3：{2-[(2-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-2-側氧基乙基)(甲基)胺基]乙基}胺甲酸三級丁酯
將依喜替康之甲烷磺酸鹽(385mg，0.724mmoL)，使用上述步驟2所獲得的化合物(202mg，0.869mmoL)替代4-(三級丁氧基羰基胺基)丁酸，而使與實施例1步驟1同樣地反應，獲得呈黃色固體之標題化合物(332mg，71%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.88(3H,t,J=7.8Hz),1.37(9H,s),1.83-1.90(2H,m),2.11-2.14(2H,m),2.33(3H,s),2.39(3H,s),2.92-3.59(8H,m),4.26(1H,s),5.21(1H,s),5.27(1H,s),5.38(2H,s),5.55(1H,s),6.53(1H,s),7.30(1H,s),7.76(1H,d,J=10.9Hz),8.57(1H,d,J=9.0Hz).
MS(APCI)m/z：650(M+H)+.
步驟4：N2-(2-胺基乙基)-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]-N2-甲基甘胺醯胺
使上述步驟3所獲得的化合物(340mg，0.523mmoL)，與實施例1步驟2同樣地反應，獲得呈黃色固體之標題化合物之三氟乙酸鹽(289mg，定量的)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.4Hz),1 .86(2H,tt,J=21.1,7.1Hz),2.16-2.24(2H,m),2.40(3H,s),2.59(2H,br.s),3.08(3H,br.s),3.17-3.19(2H,m),3.70(4H,br.s),5.21(1H,d,J=18.8Hz),5.27(1H,d,J=19.2Hz),5.42(2H,s),5.60-5.64(1H,m),6.57(1H,br.s),7.32(1H,s),7.81(1H,d,J=11.0Hz),7.95(3H,br.s),8.88(1H,br.s).
MS(APCI)m/z：550(M+H)+.
實施例37抗體-藥物結合物(37)
步驟1：N-(三級丁氧基羰基)甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-{2-[(2-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-2-側氧基乙基)(甲基)胺基]乙基}甘胺醯胺
使實施例36步驟4所獲得的化合物(200mg， 0.364mmoL)，與實施例2步驟1同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(140mg，40%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.86(3H,t,J=7.2Hz),1.36(9H,s),1.81-1.84(2H,m),2.15-2.18(2H,m),2.28(3H,s),2.37(3H,s),2.90-3.22(7H,m),3.40-3.86(9H,m),4.37-4.38(1H,m),5.20(2H,s),5.42(2H,s),5.56-5.59(1H,m),6.53(1H,s),7.01(1H,t,J=6.1Hz),7.17-7.25(5H,m),7.30(1H,s),7.62(1H,t,J=5.7Hz),7.78(1H,d,J=10.9Hz),7.92(1H,t,J=5.5Hz),8.15-8.24(2H,m),8.45(1H,d,J=9.0Hz).
MS(APCI)m/z：968(M+H)+.
步驟2：甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-{2-[(2-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-2-側氧基乙基)(甲基)胺基]乙基}甘胺醯胺
使上述步驟1所獲得的化合物(140mg，0.145moL)，與實施例2步驟2同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(113mg，90%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.86(3H,t,J=7.2Hz),1.85-1.88(2H,m),2.20-2.29(2H,m),2.42(3H,s),2.75-2.77(2H,m),2.89(3H,s),3.01-3.04(2H,m),3.34-3.45(4H,m),3.56-3.57(4H,m),3.64-3.72(4H,m),3.85(2H,dd,J=14.3,5.7Hz),4.54-4.59(1H,m),5.24(1H,d,J=18.0Hz),5.34(1H,d,J=20.3Hz),5.43(2H,s),5.62-5.68(1H,m),6.58(1H,s),7.19-7.27(5H,m),7.33(1H,s),7.84(1H,d,J=10.9Hz),7.98(3H,br.s),8.33(1 H,d,J=8.2Hz),8.41(1H,s),8.50(1H,t,J=5.3Hz).
MS(APCI)m/z：868(M+H)+.
步驟3：N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-{2-[(2-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-2-側氧基乙基)(甲基)胺基]乙基}甘胺醯胺
使上述步驟2所獲得的化合物(110mg，0.126mmoL)，與實施例5步驟8同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(41.1mg，31%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.86(3H,s),1.17-1.19(2H,m),1.44-1.47(6H,m),1.83-1.85(2H,m),2.08-2.16(3H,m),2.27-2.30(2H,m),2.38(3H,s),2.59(3H,s),2.78-2.80(2H,m),2.91(2H,s),3.17(4H,s),3.55(7H,t,J=40.5Hz),4.37-4.40(1H,m),5.21(2H,s),5.42(2H,s),5.56-5.59(1H,m),6.52(1H,s),6.99(2H,s),7.17-7.21(5H,m),7.31(1H,s),7.61(1H,s),7.78(1H,d,J=9.8Hz),8.01-8.08(2H,m),8.20(1H,s),8.32(1H,s),8.45(1H,s).
MS(APCI)m/z：1061(M+H)+.
步驟4：抗體-藥物結合物(37)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及上述步驟3所獲得的化合物，藉由與實施例2步驟6同樣之方法，獲得標題抗體-藥物結合物。
抗體濃度：1.46mg/mL，抗體產量：8.8mg(60%)，抗 體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.1。
實施例38抗體-藥物結合物(38)
步驟1：抗體-藥物結合物(38)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及實施例37步驟3所獲得的化合物，藉由與實施例3步驟1同樣之方法，獲得標題抗體-藥物結合物。
抗體濃度：1.44mg/mL，抗體產量：8.6mg(69%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：6.1。
實施例39中間體(39)
步驟1：苯甲基N-{2-[(三級丁氧基羰基)胺基]乙基}-N-[2-(四氫-2H-哌喃-2-基氧基)乙基]甘胺酸酯
將實施例33步驟1所獲得的化合物(299mg，0.970mmoL)溶解於二甲基甲醯胺(5.00mL)。添加碳酸鉀(268mg，1.94mmoL)、及2-(2-溴乙氧基)四氫哌喃(0.232mL，1.45mmoL)，並於60℃攪拌3日。過濾此反應溶液，將獲得的濾液於減壓下餾除溶媒。獲得的殘留物以矽膠管柱層析[己烷：乙酸乙酯=9：1(v/v)~己烷：乙酸乙酯=1：1(v/v)]純化，獲得無色油狀之標題化合物(121mg，29%)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ：1.44(9H,s),1.47-1.81(6H,m),2.80-2.83(2H,m),2.89(2H,t,J=5.5Hz),3.17(2H,s),3.46(2H,dq,J=18.5,4.4Hz),3.52(2H,s),3.76-3.86(2H,m),4.58(1H,t,J=3.5Hz),5.14(2H,s),5.47(1H,br.s),7.31-7.35(5H,m).
MS(APCI)m/z：437(M+H)+.
步驟2：N-{2-[(三級丁氧基羰基)胺基]乙基 }-N-[2-(四氫-2H-哌喃-2-基氧基)乙基]甘胺酸
使上述步驟1所獲得的化合物(823mg，1.89mmoL)，與實施例33步驟3同樣地反應，獲得無色油狀之標題化合物(616mg，94%)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ：1.43(9H,s),1.54-1.81(6H,m),3.28-3.67(8H,m),3.74-4.00(4H,m),4.62(1H,s),6.35(1H,s),9.76(1H,s).
MS(APCI)m/z：347(M+H)+.
步驟3：(2-{(2-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-2-側氧基乙基)[2-(四氫-2H-哌喃-2-基氧基)乙基]胺基}乙基)胺甲酸三級丁酯
將依喜替康之甲烷磺酸鹽(780mg，1.47mmoL)，使用上述步驟2所獲得的化合物(610mg，1.76mmoL)替代4-(三級丁氧基羰基胺基)丁酸，使與實施例1步驟1同樣地反應，獲得呈黃色固體之標題化合物(874mg，78%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,s),1.29-1.59(15H,m),1.84-1.87(2H,m),2.16-2.18(2H,m),2.40(3H,s),2.62-2.97(6H,m),3.48-3.81(8H,m),4.34-4.56(1H,m),5.20(2H,s),5.42(2H,s),5.60(1H,s),6.55(1H,s),6.69(1H,s),7.31(1H,s),7.80(1H,d,J=10.6Hz),8.32(1H,s).
MS(APCI)m/z：764(M+H)+.
步驟4：N2-(2-胺基乙基)-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六 氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]-N2-(2-羥基乙基)甘胺醯胺
使上述步驟3所獲得的化合物(707mg，0.926mmoL)，與實施例1步驟2同樣地反應，獲得呈黃色固體之標題化合物之三氟乙酸鹽(524mg，98%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.2Hz),1.81-1.91(2H,m),2.17-2.18(2H,m),2.39(3H,s),2.75-3.00(6H,m),3.34-4.02(6H,m),5.23(2H,s),5.42(2H,s),5.57-5.59(1H,m),6.56(1H,s),7.31(1H,s),7.70-7.84(4H,m),8.69-8.77(1H,m).
MS(APCI)m/z：580(M+H)+.
實施例40抗體-藥物結合物(40)
步驟1：N-(三級丁氧基羰基)甘胺醯基甘胺醯 基-L-苯基丙胺醯基-N-{2-[(2-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-2-側氧基乙基)(2-羥基乙基)胺基]乙基}甘胺醯胺
使實施例39步驟4所獲得的化合物(200mg，0.345mmoL)，與實施例2步驟1同樣地反應，獲得呈黃色固體之標題化合物(198mg，57%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.0Hz),1.38(9H,s),1.84-1.87(2H,m),2.12-2.14(2H,m),2.33-2.38(2H,m),2.40(3H,s),3.16-3.17(8H,m),3.54-3.60(3H,m),3.62-3.65(2H,m),3.73-3.78(2H,m),3.86(2H,d,J=5.9Hz),4.10-4.12(1H,m),4.52-4.55(2H,m),5.22(2H,s),5.43(2H,s),5.57-5.59(1H,m),6.54(1H,s),7.01(1H,s),7.18-7.26(5H,m),7.31(1H,s),7.89-7.92(2H,m),8.17-8.19(2H,m),8.49-8.51(2H,m).
MS(APCI)m/z：998(M+H)+.
步驟2：甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-{2-[(2-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-2-側氧基乙基)(2-羥基乙基)胺基]乙基}甘胺醯胺
使上述步驟1所獲得的化合物(198mg，0.198mmoL)，與實施例2步驟2同樣地反應，獲得呈黃色固體之標題化合物之三氟乙酸鹽(59.5mg，34%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.2Hz),1.85-1.86(2H,m),2.16-2.33(2H,m),2.40(3H,s),2.80-2.94(8 H,m),3.34-4.11(10H,m),4.53-4.56(2H,m),5.26-5.28(2H,m),5.43(2H,s),5.59-5.61(1H,m),6.57(1H,s),7.21-7.24(5H,m),7.33(1H,s),7.82(1H,d,J=10.9Hz),7.99(4H,br.s),8.33-8.36(2H,m),8.49-8.51(2H,m).
MS(APCI)m/z：898(M+H)+.
步驟3：N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-{2-[(2-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-2-側氧基乙基)(2-羥基乙基)胺基]乙基}甘胺醯胺
使上述步驟2所獲得的化合物(100mg，0.111mmoL)，與實施例5步驟8同樣地反應，獲得呈黃色固體之標題化合物(33.0mg，27%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.4Hz),1.16-1.19(2H,m),1.45-1.48(4H,m),1.83-1.85(2H,m),2.09-2.17(4H,m),2.36(3H,s),2.70-2.96(2H,m),3.14-3.76(20H,m),4.39-4.41(1H,m),4.47-4.50(1H,m),5.14(1H,d,J=19.2Hz),5.24(1H,d,J=18.8Hz),5.42(2H,s),5.57-5.58(1H,m),6.53(1H,s),6.99(2H,s),7.19-7.23(5H,m),7.30(1H,s),7.58(1H,s),7.75(1H,d,J=10.9Hz),8.01-8.03(1H,m),8.10-8.12(2H,m),8.21-8.23(1H,m),8.49(1H,d,J=8.6Hz).
MS(APCI)m/z：1091(M+H)+.
步驟4：抗體-藥物結合物(40)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及上述步驟3所獲 得的化合物，藉由與實施例2步驟6同樣之方法，獲得標題抗體-藥物結合物。
抗體濃度：1.54mg/mL，抗體產量：9.2mg(74%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.8。
實施例41抗體-藥物結合物(41)
步驟1：抗體-藥物結合物(41)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及實施例40步驟3所獲得的化合物，藉由與實施例3步驟1同樣之方法，獲得標題抗體-藥物結合物。
抗體濃度：1.54mg/mL，抗體產量：9.2mg(74%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：6.9。
實施例42中間體(42)
步驟1：苯甲基三級丁基2,2'-({2-[(三級丁氧基羰基)胺基]乙基}亞胺基)二乙酸酯
將實施例33步驟1所獲得的化合物(0.753g，2.44mmoL)溶解於二氯甲烷(10.0mL)。添加N,N-二異丙基乙基胺(0.851mL，4.89mmoL)、及2-溴乙酸三級丁酯(0.541mL，3.66mmoL)，並攪拌1日。減壓餾除溶媒，獲得的殘留物以矽膠管柱層析[己烷：乙酸乙酯=90：10-0：100(v/v)]純化，獲得無色油狀之標題化合物(0.614g，60%)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ：1.44(9H,s),1.45(9H,s),2.84(2H,t,J=5.7Hz),3.15(2H,q,J=5.3Hz),3.42(2H,s),3.58(2H,s),5.13(2H,d,J=4.7Hz),5.62(1H,s),7.30-7.38(5H,m).
MS(APCI)m/z：423(M+H)+.
步驟2：[{2-[(三級丁氧基羰基)胺基]乙基}(2-三級丁氧基-2-側氧基乙基)胺基]乙酸
使上述步驟1所獲得的化合物(0.614g，1.45mmoL)，與實施例33步驟3同樣地反應，獲得無色油狀之標題化 合物(0.469g，97%)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ：1.44(9H,s),1.47(9H,s),2.95(2H,s),3.24(2H,s),3.57(4H,s),5.79(1H,s),10.68(1H,brs).
MS(APCI)m/z：333(M+H)+.
步驟3：[{2-[(三級丁氧基羰基)胺基]乙基}(2-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-2-側氧基乙基)胺基]乙酸三級丁酯
將依喜替康之甲烷磺酸鹽(620mg，1.17mmoL)，使用上述步驟2所獲得的化合物(465mg，1.40mmoL)替代4-(三級丁氧基羰基胺基)丁酸，使與實施例1步驟1同樣地反應，獲得呈黃色固體之標題化合物(666mg，76%)。
1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ：1.01(3H,t,J=7.0Hz),1.14(9H,s),1.37(9H,s),1.94(2H,q,J=6.9Hz),2.24-2.26(1H,m),2.35(3H,s),2.45-2.48(1H,m),2.75-2.86(2H,m),3.16-3.21(3H,m),3.34-3.46(3H,m),3.52(1H,d,J=17.2Hz),3.62(1H,d,J=17.6Hz),4.66(1H,d,J=18.8Hz),5.20(1H,d,J=18.8Hz),5.32(1H,d,J=16.0Hz),5.56(1H,d,J=16.0Hz),5.70-5.76(1H,m),6.51-6.57(1H,m),7.44(1H,d,J=10.6Hz),7.50(1H,s),8.04(2H,brs).
MS(APCI)m/z：750(M+H)+.
步驟4：[(2-胺基乙基)(2-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1- 基]胺基}-2-側氧基乙基)胺基]乙酸
使上述步驟3所獲得的化合物(587mg，0.783mmoL)，與實施例1步驟2同樣地反應，獲得呈黃色固體之標題化合物(477mg，定量的)。
1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ：0.96(3H,t,J=7.2Hz),1.90(2H,q,J=7.0Hz),2.07-2.09(1H,m),2.28(3H,s),2.38-2.40(1H,m),3.02-3.23(6H,m),3.56-3.67(4H,m),4.71(1H,d,J=18.4Hz),5.02(1H,d,J=18.4Hz),5.28(1H,d,J=16.0Hz),5.49(1H,d,J=16.4Hz),5.63-5.65(1H,m),7.32(1H,d,J=10.6Hz),7.44(1H,s).
MS(APCI)m/z：594(M+H)+.
實施例43抗體-藥物結合物(43)
步驟1：N-(三級丁氧基羰基)甘胺醯基甘胺 醯基-L-苯基丙胺醯基-N-{2-[(羧基甲基)(2-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-2-側氧基乙基)胺基]乙基}甘胺醯胺
使實施例42步驟4所獲得的化合物(300mg，0.505mmoL)，與實施例2步驟1同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(316mg，62%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.86(3H,t,J=6.8Hz),1.36(9H,s),1.81-1.83(2H,m),2.14-2.20(2H,m),2.37(3H,s),2.86-3.46(18H,m),4.38-4.41(1H,m),5.14(1H,d,J=19.6Hz),5.22(1H,d,J=18.8Hz),5.41(2H,s),5.56-5.58(1H,m),6.53(1H,s),7.06-7.20(5H,m),7.75(1H,d,J=10.6Hz),7.90-7.92(2H,m),8.09(1H,s),8.18(2H,s),8.34-8.40(2H,m),8.73(1H,s).
MS(APCI)m/z：1012(M+H)+.
步驟2：甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-{2-[(羧基甲基)(2-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-2-側氧基乙基)胺基]乙基}甘胺醯胺
使上述步驟1所獲得的化合物(316mg，0.312mmoL)，與實施例2步驟2同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(285mg，定量的)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.86(3H,t,J=7.2Hz),1.85-1.86(2H,m),2.21-2.24(2H,m),2.40(3H,s),2.69-2.75(2 H,m),3.01-3.03(3H,m),3.17-3.19(3H,m),3.28-3.30(1H,m),3.56-3.89(9H,m),3.96(1H,s),4.55(1H,td,J=8.8,4.7Hz),5.23(1H,d,J=19.6Hz),5.30(1H,d,J=21.5Hz),5.43(2H,s),5.58-5.63(1H,m),7.16-7.26(6H,m),7.33(1H,s),7.82(1H,d,J=10.0Hz),7.97(3H,brs),8.31(1H,d,J=7.0Hz),8.37(1H,t,J=5.5Hz),8.49(1H,t,J=5.7Hz),8.80(1H,s).
MS(APCI)m/z：912(M+H)+.
步驟3：N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-{2-[(羧基甲基)(2-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-2-側氧基乙基)胺基]乙基}甘胺醯胺
使上述步驟2所獲得的化合物(100mg，0.110mmoL)，與實施例5步驟8同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(79.6mg，66%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.86(3H,t,J=7.2Hz),1.12-1.18(2H,m),1.44-1.46(4H,m),1.81-1.83(2H,m),2.08-2.11(2H,m),2.23-2.29(2H,m),2.38(3H,s),2.65-2.74(5H,m),3.11-3.72(15H,m),4.36(1H,td,J=8.2,3.4Hz),5.14(1H,d,J=18.8Hz),5.23(1H,d,J=18.8Hz),5.38-5.42(2H,m),5.55-5.58(1H,m),6.50(1H,s),6.99(2H,s),7.15-7.22(6H,m),7.74(1H,d,J=10.9Hz),8.06-8.23(5H,m),8.49(1H,brs),8.81(1H,b).
MS(APCI)m/z：1105(M+H)+.
步驟4：抗體-藥物結合物(43)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及上述步驟3所獲得的化合物，藉由與實施例2步驟6同樣之方法，獲得標題抗體-藥物結合物。
抗體濃度：1.58mg/mL，抗體產量：9.5mg(76%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.8。
實施例44抗體-藥物結合物(44)
步驟1：抗體-藥物結合物(44)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及實施例43步驟3所獲得的化合物，藉由與實施例3步驟1同樣之方法，獲得標題抗體-藥物結合物。
抗體濃度：1.68mg/mL，抗體產量：10.1mg(81%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：6.9。
實施例45中間體(45)
步驟1：N-{2-[(三級丁氧基羰基)胺基]乙基}-β-丙胺酸苯甲酯
將N-(2-胺基乙基)胺甲酸三級丁酯(3.00g，18.7mmoL)溶解於吡啶(10.0mL)，添加碳酸鉀(2.59g，18.7mmoL)、及丙烯酸苯甲酯(1.43mL，9.36mmoL)，並於室溫攪拌1日。將反應溶液於減壓餾除溶媒。獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇=8：2(v/v)]純化，獲得無色油狀之標題化合物(1.58g，52%)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ：1.44(9H,s),2.54(2H,t,J=6.5Hz),2.71(2H,t,J=5.9Hz),2.89(2H,t,J=6.5Hz),3.19(2H,q,J=5.5Hz),5.00(1H,brs),5.13(2H,s),7.32-7.37(6H,m).
MS(APCI)m/z：323(M+H)+.
步驟2：N-{2-[(三級丁氧基羰基)胺基]乙基}-N-甲基-β-丙胺酸苯甲酯
使上述步驟1所獲得的化合物(490mg，1.52mmoL)，與實施例36步驟1同樣地反應，獲得無色油狀之標題化合物(327mg，64%)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ：1.43(9H,s),2.20(3H,s),2.45(2H,t,J=5.9Hz),2.50(2H,t,J=6.8Hz),2.70(2H,t,J=7.0Hz),3.18(2H,q,J=5.5Hz),5.13(2H,s),7.32-7.34(5H,m).
MS(APCI)m/z：337(M+H)+.
步驟3：N-{2-[(三級丁氧基羰基)胺基]乙基}-N-甲基-β-丙胺酸
使上述步驟2所獲得的化合物(327mg，0.971mmoL)，與實施例33步驟3同樣地反應，獲得無色油狀之標題化合物(236mg，99%)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ：1.43(9H,s),2.61-2.64(2H,m),2.75(3H,s),3.08-3.11(2H,m),3.20-3.23(2H,m),3.47-3.50(2H,m),6.43(1H,br.s),11.09(1H,br.s).
MS(APCI)m/z：247(M+H)+.
步驟4：{2-[(3-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-3-側氧基丙基)(甲基)胺基]乙基}胺甲酸三級丁酯
將依喜替康之甲烷磺酸鹽(410mg，0.771mmoL)，使用上述步驟3所獲得的化合物(228mg，0.926mmoL)替代4-(三級丁氧基羰基胺基)丁酸，使與實施例1步驟1同樣地反應，獲得呈黃色固體之標題化合物(122mg，24%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.4Hz),1.31(9H,s),1.82-1.90(2H,m),2.14-2.16(4H,m),2.30-2.32(2H,m),2.41(3H,s),2.59(3H,s),2.59-2.64(2H,m),2.91-2.93(2H,m),3.16-3.17(2H,m),5.23(2H,s),5.43(2H,s),5.54-5.56(1H,m),6.42-6.63(1H,m),6.54(1H,s),7.31(1H,s),7.80(1H,d,J=10.9Hz),8.54(1H,d,J=7.8Hz).
MS(APCI)m/z：664(M+H)+.
步驟5：N3-(2-胺基乙基)-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]-N3-甲基-β-丙胺醯胺
使上述步驟4所獲得的化合物(389mg，0.585mmoL)，與實施例1步驟2同樣地反應，獲得呈黃色固體之標題化合物之三氟乙酸鹽(304mg，92%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,br.s),1.85-1.88(2H,m),2.16-2.19(2H,m),2.40(3H,s),2.67(3H,s),2.77-2.79(2H,m),3.25-3.37(8H,m),5.24-5.29(2H,m),5.43(2H,s),5.58-5.60(1H,m),6.56(1H,s),7.32(1H,s),7.80(1H,d,J=10.2Hz),8.17(3H,br.s),8.81(1H,s).
MS(APCI)m/z：564(M+H)+.
實施例46抗體-藥物結合物(46)
步驟1：N-(三級丁氧基羰基)甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-{2-[(3-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-3-側氧基丙基)(甲基)胺基]乙基}甘胺醯胺
使實施例45步驟5所獲得的化合物(200mg，0.355mmoL)，與實施例2步驟1同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(165mg，47%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.86(3H,t,J=7.2Hz),1.37(9H,s),1.85(2H,td,J=14.9,7.2Hz),2.14-2.16(2H,m),2.15(3H,s),2.32-2.37(4H,m),2.39(3H,s),2.65-2.67(2H,m),2.76(1H,dd,J=13.5,9.6Hz),3.01(1H,dd,J=13.7,4.3Hz),3.10(2H,q,J=6.4Hz),3.16-3.17(2H,m),3.53-3.77(6H,m),4.45-4.50(1H,m),5.22(2H,s),5.43(2H,s),5.53-5.57(1H,m),6.54(1H,s),7.01(1H,t,J=5.9Hz),7.14-7.26(5H,m),7.30(1H,s),7.60(1H,t,J=5.5Hz),7.79(1H,d,J=10.9Hz),7.93(1H,t,J=5.5Hz),8.16(1H,d,J=8.2Hz),8.29(1H,t,J=5.7Hz),8.55(1H,d,J=8.6Hz).
MS(APCI)m/z：982(M+H)+.
步驟2：甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-{2-[(3-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-3-側氧基丙基)(甲基)胺基]乙基}甘胺醯胺
使上述步驟1所獲得的化合物(165mg，0.168mmoL) ，實施例2步驟2同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(148mg，定量的)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.2Hz),1.81-1.92(2H,m),2.13-2.19(2H,m),2.41(3H,s),2.66(2H,dd,J=8.6,5.1Hz),2.74(1H,dd,J=13.9,10.0Hz),2.82(3H,s),3.03(1H,dd,J=13.9,4.5Hz),3.45-3.48(9H,m),3.57(2H,d,J=5.1Hz),3.67-3.76(2H,m),3.86(1H,dd,J=16.8,5.9Hz),4.57(1H,td,J=9.1,4.0Hz),5.20(1H,d,J=18.8Hz),5.28(1H,d,J=19.2Hz)，5.44(2H,s),5.57-5.61(1H,m),6.58(1H,s),7.11-7.25(5H,m),7.33(1H,s),7.84(1H,d,J=10.9Hz),7.98(3H,s),8.13(1H,s),8.34(1H,d,J=7.8Hz),8.43(1H,t,J=5.9Hz),8.49(1H,t,J=5.3Hz),8.79(1H,d,J=8.6Hz).
MS(APCI)m/z：882(M+H)+.
步驟3：N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-{2-[(3-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-3-側氧基丙基)(甲基)胺基]乙基}甘胺醯胺
使上述步驟2所獲得的化合物(100mg，0.113mmoL)，與實施例5步驟8同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(43.4mg，36%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.86(3H,t,J=7.2Hz),1.14-1.22(4H,m),1.44-1.48(4H,m),1.80-1.91(2H,m),2.09-2.13(3H,m),2.10(2H,t,J=7.4Hz),2.38-2.40(6H,m),2.79(2H, dd,J=13.7,9.8Hz),3.02(1H,dd,J=13.7,4.3Hz),3.09(1H,q,J=7.3Hz),3.15-3.18(4H,m),3.35-3.77(9H,m),4.46(1H,td,J=8.7,4.2Hz),5.21(2H,s),5.42(2H,s),5.53-5.58(1H,m),6.54(1H,s),6.99(2H,s),7.14-7.25(5H,m),7.30(1H,s),7.68(1H,br.s),7.79(1H,d,J=10.4Hz),8.03(1H,t,J=5.7Hz),8.09(1H,t,J=5.7Hz),8.13(1H,d,J=7.8Hz),8.27(1H,t,J=5.3Hz),8.59(1H,d,J=5.5Hz).
MS(APCI)m/z：1075(M+H)+.
步驟4：抗體-藥物結合物(46)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及上述步驟3所獲得的化合物，藉由與實施例2步驟6同樣之方法，獲得標題抗體-藥物結合物。
抗體濃度：1.57mg/mL，抗體產量：9.4mg(75%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.9。
實施例47抗體-藥物結合物(47)
步驟1：抗體-藥物結合物(47)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及實施例46步驟3所獲得的化合物，藉由與實施例3步驟1同樣之方法，獲得標題抗體-藥物結合物。
抗體濃度：1.61mg/mL，抗體產量：9.7mg(78%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：7.2。
實施例48中間體(48)
步驟1：苯甲基N-{2-[(三級丁氧基羰基)胺基]乙基}-N-[2-(四氫-2H-哌喃-2-基氧基)乙基]-β-丙胺酸酯
使實施例45步驟1所獲得的化合物(387mg，1.20mmoL)，與實施例39步驟1同樣地反應，獲得無色油狀之標題化合物(251mg，46%)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ：1.43(9H,s),1.48-1.82(6H,m),2.51(2H,t,J=7.0Hz),2.60(2H,t,J=5.7Hz),2.66-2.69(2H,m),2.88(2H,dd,J=10.8,4.1Hz),3.17(2H,t,J=4.5Hz),3.41(1H,dt,J=11.5,5.2Hz),3.50(1H,dq,J=12.9,2.9Hz),3.73-3.78(1H,m),3.81-3.87(1H,m),4.57(1H,t,J=3.5Hz),5.13(2H,s),5.30(1H,d,J=4.3Hz),7.29-7.37(5H,m).
MS(APCI)m/z：451(M+H)+.
步驟2：N-{2-[(三級丁氧基羰基)胺基]乙基}-N-[2-(四氫-2H-哌喃-2-基氧基)乙基]-β-丙胺酸
使上述步驟1所獲得的化合物(436mg，0.968mmoL)，與實施例33步驟3同樣地反應，獲得無色油狀之標題化合物(337mg，97%)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ：1.43(9H,s),1.57-1.77(6H,m),2.71-2.72(2H,m),3.21-3.23(2H,m),3.32-3.35(4H,m),3.50-3.53(3H,m),3.72-3.77(1H,m),3.83(1H,dt,J=13.0,4.5Hz),4.04(1H,dt,J=11.3,4.4Hz),4.62(1H,s),6.21(1H,s),9.04(1H,br.s).
MS(APCI)m/z：361(M+H)+.
步驟3：(2-{(3-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-3-側氧基丙基)[2-(四氫-2H-哌喃-2-基氧基)乙基]胺基}乙基)胺甲酸三級丁酯
將依喜替康之甲烷磺酸鹽(410mg，0.771mmoL)，使用上述步驟2所獲得的化合物(334mg，0.926mmoL)替代4-(三級丁氧基羰基胺基)丁酸，使與實施例1步驟1同樣地反應，獲得呈黃色固體之標題化合物(366mg，61%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.0Hz),1.33-1.40(6H,m),1.33(9H,s),1.85-1.87(2H,m),2.12-2.14(2H,m),2.28-2.34(2H,m),2.40(3H,s),2.79-3.08(12H,m),3.57-3.66(2H,m),4.43-4.45(1H,m),5.18(1H,d,J=18.2Hz),5.25(1H,d,J=18.4Hz),5.42(2H,s),5.55-5.58(1H,m),6.49-6.52(1 H,m),6.54(1H,s),7.30(1H,s),7.80(1H,d,J=11.3Hz),8.50(1H,d,J=8.2Hz).
MS(APCI)m/z：778(M+H)+.
步驟4：N3-(2-胺基乙基)-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]-N3-(2-羥基乙基)-β-丙胺醯胺
使上述步驟3所獲得的化合物(356mg，0.458mmoL)，與實施例1步驟2同樣地反應，獲得呈黃色固體之標題化合物之三氟乙酸鹽(270mg，99%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.2Hz),1.81-1.92(2H,m),2.15-2.17(2H,m),2.40(3H,s),2.58-2.61(2H,m),2.92-3.60(12H,m),5.20(1H,d,J=18.8Hz),5.26(1H,d,J=19.2Hz),5.43(2H,s),5.59-5.60(1H,m),6.55(1H,s),7.32(1H,s),7.79-7.82(2H,m),8.03(3H,br.s),8.77-8.79(1H,m).
MS(APCI)m/z：594(M+H)+.
實施例49抗體-藥物結合物(49)
步驟1：N-(三級丁氧基羰基)甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-{2-[(3-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-3-側氧基丙基)(2-羥基乙基)胺基]乙基}甘胺醯胺
使實施例48步驟4所獲得的化合物(200mg，0.337mmoL)，與實施例2步驟1同樣地反應，獲得呈黃色固體之標題化合物(270mg，79%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.86(3H,t,J=7.0Hz),1.36(9H,s),1.83-1.85(2H,m),2.16-2.18(2H,m),2.38(3H,s),2.59(4H,s),3.02-3.94(18H,m),4.43-4.47(2H,m),5.19(1H,d,J=19.2Hz),5.26(1H,d,J=19.2Hz),5.43(2H,s),5.58(1H,s),6.54(1H,d,J=5.1Hz),7.00(1H,s),7.21-7.23(5H,m),7.31(1H,s ),7.80(1H,t,J=11.3Hz),7.92-7.95(2H,m),8.12-8.14(1H,m),8.23-8.26(1H,m),8.49(1H,d,J=8.2Hz).
步驟2：甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-{2-[(3-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-3-側氧基丙基)(2-羥基乙基)胺基]乙基}甘胺醯胺三氟乙酸鹽
使上述步驟1所獲得的化合物(270mg，0.267mmoL)，與實施例2步驟2同樣地反應，獲得呈黃色固體之標題化合物(103mg，42%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.2Hz),1.85-1.88(2H,m),2.17-2.20(2H,m),2.41(3H,s),2.66-3.04(8H,m),3.31-4.11(12H,m),4.57-4.59(2H,m),5.21(1H,d,J=18.4Hz),5.28(1H,d,J=18.4Hz),5.43-5.45(2H,m),5.58-5.61(1H,m),6.58(1H,s),7.21-7.23(5H,m),7.34(1H,s),7.84(1H,d,J=10.9Hz),7.96(4H,br.s),8.31-8.33(2H,m),8.47-8.49(2H,m).
MS(APCI)m/z：912(M+H)+.
步驟3：N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-{2-[(3-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-3-側氧基丙基)(2-羥基乙基)胺基]乙基}甘胺醯胺
使上述步驟2所獲得的化合物(100mg，0.110mmoL)，與實施例5步驟8同樣地反應，獲得呈黃色固體之標題 化合物(38.4mg，32%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.0Hz),1.15-1.22(2H,m),1.45-1.48(4H,m),1.82-1.89(2H,m),2.09-2.11(4H,m),2.30-2.33(1H,m),2.38(3H,s),2.59(1H,s),2.77-2.79(2H,m),3.03-3.72(18H,m),4.35-4.37(1H,m),4.46-4.49(1H,m),5.19(2H,s),5.42(2H,s),5.55-5.56(1H,m),6.53(1H,s),6.99(2H,s),7.16-7.25(5H,m),7.30(1H,s),7.61(1H,s),7.78(1H,d,J=10.9Hz),8.02(1H,t,J=5.5Hz),8.08-8.11(2H,m),8.25(1H,t,J=5.5Hz),8.55(1H,d,J=8.6Hz).
MS(APCI)m/z：1105(M+H)+.
步驟4：抗體-藥物結合物(49)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及上述步驟3所獲得的化合物，藉由與實施例2步驟6同樣之方法，獲得標題抗體-藥物結合物。
抗體濃度：1.57mg/mL，抗體產量：9.4mg(75%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.7。
實施例50抗體-藥物結合物(50)
步驟1：抗體-藥物結合物(50)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及實施例49步驟3所獲得的化合物，藉由與實施例3步驟1同樣之方法，獲得標題抗體-藥物結合物。
抗體濃度：1.61mg/mL，抗體產量：9.7mg(78%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：6.9。
實施例51中間體(51)
步驟1：N-{2-[(三級丁氧基羰基)胺基]乙基}-N-(2-三級丁氧基-2-側氧基乙基)-β-丙胺酸苯甲酯
使實施例45步驟1所獲得的化合物(0.926mg，2.87mmoL)，與實施例42步驟1同樣地反應，獲得無色油狀之標題化合物(1.10g,88%)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ：1.43(9H,s),1.45(9H,s),2.49(2H,t,J=6.8Hz),2.72(2H,t,J=5.7Hz),2.98(2H,t,J=6.8Hz),3.14(2H,q,J=5.6Hz),3.22(2H,s),5.13(2H,s),5.30(1H,brs),7.30-7.34(5H,m).
MS(APCI)m/z：437(M+H)+.
步驟2：N-{2-[(三級丁氧基羰基)胺基]乙基}-N-(2-三級丁氧基-2-側氧基乙基)-β-丙胺酸
使上述步驟1所獲得的化合物(1.25g，2.87mmoL)，與實施例33步驟3同樣地反應，獲得無色油狀之標題化合物(0.850g，83%)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ：1.43(9H,s),1.47(9H,s),2.50(2H,t,J=6.3Hz),2.82-2.85(2H,m),3.02(2H,t,J=6.5Hz),3.22-3.25(2H,m),3.39(2H,s),5.62(1H,brs),10.36(1H,brs).
MS(APCI)m/z：347(M+H)+.
步驟3：N-{2-[(三級丁氧基羰基)胺基]乙基}-N-(3-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-3-側氧基丙基)甘胺酸三級丁酯
將依喜替康之甲烷磺酸鹽(1.00g，1.88mmoL)，使用上述步驟2所獲得的化合物(0.782g，2.26mmoL)替代4-(三級丁氧基羰基胺基)丁酸，使與實施例1步驟1同樣地反 應，獲得呈黃色固體之標題化合物(1.43g，定量的)。
1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ：0.95(3H,t,J=7.4Hz),1.20(9H,s),1.33(9H,s),1.87(2H,q,J=7.3Hz),2.24-2.28(1H,m),2.29(3H,s),2.35-2.48(3H,m),2.57-2.65(2H,m),2.89-2.92(2H,m),3.06-3.28(6H,m),3.66-3.67(1H,m),4.76(1H,d,J=19.2Hz),5.13(1H,d,J=18.8Hz),5.25(1H,d,J=16.0Hz),5.49(1H,d,J=16.0Hz),5.62(1H,t,J=5.7Hz),7.37(1H,d,J=10.6Hz),7.43(1H,s),7.97(2H,s).
MS(APCI)m/z：764(M+H)+.
步驟4：N-(2-胺基乙基)-N-(3-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-3-側氧基丙基)甘胺酸
使上述步驟3所獲得的化合物(1.43g，1.87mmoL)，與實施例1步驟2同樣地反應，獲得呈黃色固體之標題化合物之三氟乙酸鹽(1.06g，93%)。
1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ：0.96(3H,t,J=6.3Hz),1.90(2H,d,J=6.3Hz),2.22-2.27(1H,m),2.29(3H,s),2.42-2.54(2H,m]),2.95-3.08(6H,m),3.33-3.35(3H,m),3.66-3.69(2H,m),4.04-4.07(1H,m),4.84(1H,d,J=18.4Hz),5.10(1H,d,J=18.4Hz),5.25(1H,d,J=16.0Hz),5.45(1H,d,J=16.0Hz),5.76-5.79(1H,m),7.09(1H,d,J=10.6Hz),7.33(1H,s).
MS(APCI)m/z：608(M+H)+.
實施例52抗體-藥物結合物(52)
步驟1：N-(三級丁氧基羰基)甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-{2-[(羧基甲基)(3-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-3-側氧基丙基)胺基]乙基}甘胺醯胺
使實施例51步驟4所獲得的化合物之三氟乙酸鹽(300mg，0.494mmoL)，與實施例2步驟1同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(221mg，44%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.86(3H,t,J=7.2Hz),1.36(9H,s),1.83-1.85(2H,m),2.12-2.14(2H,m),2.33(3H,s),2.37-2.39(1H,m),2.43-2.45(1H,m),2.64-3.73(18H,m),4.48-4.51(1H,m),5.20(2H,s),5.42(2H,s),5.53-5.56(1H,m),6.54( 1H,s),7.01-7.29(5H,m),7.79(1H,d,J=10.6Hz),7.91(1H,s),8.09-8.14(2H,m),8.26-8.31(4H,m),8.63(1H,s).
MS(APCI)m/z：1026(M+H)+.
步驟2：甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-{2-[(羧基甲基)(3-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-3-側氧基丙基)胺基]乙基}甘胺醯胺
使上述步驟1所獲得的化合物(221mg，0.216mmoL)，與實施例2步驟2同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(196mg，98%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.2Hz),1.85-1.87(2H,m),2.17-2.19(2H,m),2.41(3H,s),2.67-2.77(2H,m),2.99-3.05(3H,m),3.32-3.35(3H,m),3.56-3.96(13H,m),4.54-4.56(1H,m),5.21(1H,d,J=19.0Hz),5.27(1H,d,J=19.0Hz),5.43(2H,s),5.58-5.59(1H,m),6.57(1H,s),7.18-7.24(5H,m),7.33(1H,s),7.83(1H,d,J=10.9Hz),7.98(3H,br.s),8.33(1H,d,J=8.2Hz),8.39(1H,s),8.50(1H,s),8.71(1H,s).
MS(APCI)m/z：926(M+H)+.
步驟3：N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-{2-[(羧基甲基)(3-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-3-側氧基丙基)胺基]乙基}甘胺醯胺
使上述步驟2所獲得的化合物(100mg，0.108mmoL)，與實施例5步驟8同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(79.2mg，66%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.4Hz),1.12-1.18(2H,m),1.44-1.48(4H,m),1.80-1.91(2H,m),2.09-2.15(2H,m),2.09(2H,t,J=7.6Hz),2.33(2H,t,J=6.8Hz),2.39(3H,s),2.65(2H,t,J=6.8Hz),2.78(2H,dd,J=13.7,9.8Hz),2.91(2H,t,J=6.6Hz),3.00-3.76(14H,m),4.47(1H,td,J=8.8,4.3Hz),5.22(2H,s),5.43(2H,s),5.54-5.58(1H,m),6.52(1H,s),6.99(2H,s),7.13-7.25(6H,m),7.30(1H,s),7.71(1H,s),7.79(1H,d,J=10.9Hz),8.09-8.13(2H,m),8.21-8.23(2H,m),8.57(1H,d,J=8.6Hz).
MS(APCI)m/z：1119(M+H)+.
步驟4：抗體-藥物結合物(52)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及上述步驟3所獲得的化合物，藉由與實施例2步驟6同樣之方法，獲得標題抗體-藥物結合物。
抗體濃度：1.56mg/mL，抗體產量：9.4mg(75%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：4.1。
實施例53抗體-藥物結合物(53)
步驟1：抗體-藥物結合物(53)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及實施例52步驟3所獲得的化合物，藉由與實施例3步驟1同樣之方法，獲得標題抗體-藥物結合物。
抗體濃度：1.61mg/mL，抗體產量：9.7mg(78%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：7.3。
實施例54抗體-藥物結合物(54)
步驟1：9H-茀-9-基甲基[(2S)-3-三級丁氧基-1-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-1-側氧基丙-2-基]胺甲酸酯
將依喜替康之甲烷磺酸鹽，使用O-三級丁基 -N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-L-絲胺酸替代4-(三級丁氧基羰基胺基)丁酸，使與實施例1步驟1同樣地反應，獲得標題化合物。本化合物不進行進一步純化而用於下一反應。
MS(ES+APCI)m/z：801(M+H)+.
步驟2：O-三級丁基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]-L-絲胺醯胺
使上述步驟1所獲得的化合物(1.10g，1.37mmoL)，與實施例15步驟6同樣地反應，獲得標題化合物。本化合物不進行進一步純化而用於下一反應。
步驟3：9H-茀-9-基甲基{2-[(4-{[(2S)-3-三級丁氧基-1-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-1-側氧基丙-2-基]胺基}-4-側氧基丁基)胺基]-2-側氧基乙基}胺甲酸酯
將上述步驟2所獲得的化合物(0.460mmoL)，使用4-({N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]甘胺醯基}胺基)丁酸替代N-(三級丁氧基羰基)甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基甘胺酸，使與實施例2步驟1同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(0.106g，24%，3步驟)。
MS(ES+APCI)m/z：943(M+H)+.
步驟4：N-[(2S)-3-三級丁氧基-1-{[(1S,9S)-9- 乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-1-側氧基丙-2-基]-4-(甘胺醯基胺基)丁醯胺
使上述步驟3所獲得的化合物(0.106g，0.112mmoL)，與實施例15步驟6同樣地反應，獲得標題化合物。本化合物不進行進一步純化而用於下一反應。
步驟5：N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-(4-{[(2S)-3-三級丁氧基-1-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-1-側氧基丙-2-基]胺基}-4-側氧基丁基)甘胺醯胺
將上述步驟4所獲得的化合物(0.112mmoL)，使用N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]甘胺醯基甘胺醯基-L-苯丙胺酸替代N-(三級丁氧基羰基)甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基甘胺酸，使與實施例2步驟1同樣地反應，獲得呈橙色固體之標題化合物(63.0mg，48%)。
MS(ES+APCI)m/z：1175(M+H)+.
步驟6：N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-(4-{[(2S)-1-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-3-羥基 -1-側氧基丙-2-基]胺基}-4-側氧基丁基)甘胺醯胺
使上述步驟5所獲得的化合物(63.0mg，53.6μmoL)，與實施例5步驟8同樣地反應，獲得呈黃色固體之標題化合物(20.0mg，33%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.84(3H,t,J=7.2Hz),1.09-1.20(2H,m),1.28-1.60(6H,m),1.74-1.91(2H,m),2.01-2.20(6H,m),2.37(3H,s),2.69-2.84(1H,m),2.88-3.05(3H,m),3.07-3.18(2H,m),3.21-3.40(3H,m),3.46-3.78(8H,m),4.17-4.35(1H,m),4.36-4.48(1H,m),5.07-5.27(2H,m),5.40(2H,s),5.47-5.59(1H,m),6.50(1H,brs),6.96(2H,s),7.10-7.29(6H,m),7.58(1H,t,J=4.7Hz),7.77(1H,d,J=11.3Hz),7.87(1H,t,J=7.4Hz),7.96-8.13(3H,m),8.21(1H,t,J=5.9Hz),8.52(1H,d,J=8.2Hz).
MS(ES+APCI)m/z：1119(M+H)+.
步驟7：抗體-藥物結合物(54)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及上述步驟6所獲得的化合物，藉由與實施例2步驟6同樣之方法，獲得標題抗體-藥物結合物。
抗體濃度：1.46mg/mL，抗體產量：8.8mg(88%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.4。
實施例55抗體-藥物結合物(55)
步驟1：抗體-藥物結合物(55)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及實施例54步驟6所獲得的化合物，藉由與實施例3步驟1同樣之方法，獲得標題抗體-藥物結合物。
抗體濃度：1.35mg/mL，抗體產量：7.2mg(72%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：6.3。
實施例56抗體-藥物結合物(56)
步驟1：4-[[2-(9H-茀-9-基甲氧基羰基胺基)乙醯基]胺基]丁酸
將4-[(2-胺基乙醯基)胺基]丁酸(0.500g，3.12mmoL)溶解於飽和碳酸氫鈉水(20.0mL)。滴加溶解於1,4-二烷 (10.0mL)的N-(茀基甲氧基羰基氧基)琥珀醯亞胺(1.58g，4.68mmoL)，並攪拌3日。以二乙基醚洗淨後，水層以5N之鹽酸作成酸性，吸引濾取析出的沉澱物，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(1.19g，99%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：1.61-1.62(2H,m),2.21(2H,t,J=7.4Hz),3.07(2H,q,J=6.5Hz),3.57(2H,t,J=2.9Hz),4.21-4.29(3H,m),7.33(2H,t,J=7.4Hz),7.42(2H,t,J=7.4Hz),7.51(1H,t,J=6.1Hz),7.70(2H,t,J=10.4Hz),7.86(1H,t,J=5.5Hz),7.90(3H,d,J=7.4Hz).
步驟2：N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]-N2-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-L-α-天冬醯胺三級丁酯
將依喜替康之甲烷磺酸鹽(1.00g，1.88mmoL)，使用N-α-(9-茀基甲氧基羰基)-L-天冬胺酸β-t-丁基酯(0.930mg，2.26mmoL)替代4-(三級丁氧基羰基胺基)丁酸，使與實施例1步驟1同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(0.890mg，57%)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ：1.01(3H,t,),1.35(9H,s),1.83(2H,brs),2.13-2.26(2H,m),2.32(3H,s),2.67-2.69(1H,m),2.92-3.02(4H,m),3.46(1H,s),4.09(1H,s),4.33(2H,s),4.57(1H,s),4.99-5.18(2H,m),5.53-5.56(1H,m),6.28(1H,s),7.16-7.67(11H,m),7.99(1H,s).
MS(APCI)m/z：829(M+H)+.
步驟3：N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4- 甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]-N2-[4-({N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]甘胺醯基}胺基)丁醯基]-L-α-天冬醯胺三級丁酯
將上述步驟2所獲得的化合物(0.500g，0.604mmoL)溶解於N,N-二甲基甲醯胺(3.00mL)，添加哌啶(0.598mL，6.04mmoL)並攪拌1小時。減壓乾固溶媒，將獲得的殘留物溶解於N,N-二甲基甲醯胺(10.0mL)。於此溶液中，滴加將上述步驟1所獲得的化合物(0.277mg，0.724mmoL)、及1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(0.139mg，0.724mmoL)、N-羥基琥珀醯亞胺(0.0834mg，0.724mmoL)溶解於二氯甲烷(5.00mL)並攪拌2小時的反應溶液，並攪拌15.5小時。添加10%檸檬酸水(20.0mL)並以氯仿(20.0mL，3次)萃取，有機層以飽和食鹽水洗淨後，使以無水硫酸鈉乾燥並過濾。減壓餾除濾液之溶媒，獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇=8：2(v/v)]純化，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(0.333g，57%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.86(3H,brs),1.26(9H,s),1.57-1.59(2H,m),1.84-1.87(2H,m),2.14-2.23(4H,m),2.37(3H,s),2.67-2.71(1H,m),3.04-3.40(5H,m),3.54-3.57(2H,m),4.13-4.25(3H,m),4.58-4.60(1H,m),5.08-5.24(2H,m),5.41-5.53(3H,m),6.53(1H,s),7.31-7.46(6H,m),7.70-7.89(6H,m),8.16-8.24(1H,m),8.59-8.61(1H,m).
MS(APCI)m/z：971(M+H)+.
步驟4：(11S,22S)-11-苯甲基-22-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺甲醯基}-1-(9H-茀-9-基)-3,6,9,12,15,20-六側氧基-2-氧-4,7,10,13,16,21-六氮二十四酸三級丁酯
將上述步驟3所獲得的化合物(413mg，0.418mmoL)，使用(2S)-2-[[2-[[2-(9H-茀-9-基甲氧基羰基胺基)乙醯基]胺基]乙醯基]胺基]-3-苯基-丙酸替代上述步驟1所獲得的化合物，使與上述步驟3同樣地反應，獲得呈黃色固體之標題化合物(122.6mg，32%)。
1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ：0.90(3H,t,J=6.8Hz),1.29(9H,s),1.40-1.46(2H,m),1.66-1.78(2H,m),2.20-2.28(4H,m),2.25(3H,s),2.67(1H,t,J=8.8Hz),2.79-3.18(6H,m),3.42-3.47(1H,m),3.59-3.91(6H,m),4.03(1H,t,J=6.7Hz),4.18-4.21(1H,m),4.34-4.41(2H,m),4.70(1H,t,J=6.5Hz),5.17(2H,t,J=18.2Hz),5.41-5.45(3H,m),7.15-7.25(9H,m),7.34-7.41(2H,m),7.50(2H,d,J=7.4Hz),7.60-7.63(2H,m).
MS(APCI)m/z：1232(M+H)+.
步驟5：(3S,14S)-14-苯甲基-27-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-3-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺甲醯基}-5,10,13,16,19,22-六側氧基-4,9,12,15,18,21-六氮二十七酸三級丁酯
將上述步驟4所獲得的化合物(100mg，81.1μmoL)溶解於N,N-二甲基甲醯胺(3.00mL)，添加哌啶(9.64μL，97.4μmoL)並攪拌1小時。減壓乾固溶媒，將獲得的殘留物溶解於N,N-二甲基甲醯胺(5.00mL)。添加6-順丁烯二醯亞胺己酸N-琥珀醯亞胺基酯(30.0mg，97.4μmoL)，並攪拌2日。添加10%檸檬酸水(20.0mL)，以氯仿(20.0mL，3次)萃取，有機層以飽和食鹽水洗淨後，使以無水硫酸鈉乾燥而過濾。減壓餾除濾液之溶媒，獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿：甲醇=10：1(v/v)]純化，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(15.5mg，16%)。
1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ：0.98(3H,t,J=7.3Hz),1.21-1.30(2H,m),1.33(9H,s),1.44-1.79(6H,m),1.93-1.94(1H,m),2.16-2.48(6H,m),2.40(3H,s),2.70-2.81(1H,m),2.95-3.00(2H,m),3.13-3.21(3H,m),3.39-3.51(4H,m),3.75-3.93(6H,m),4.39-4.44(1H,m),4.61(2H,s),5.07-5.16(1H,m),5.35(2H,dd,J=17.3,5.1Hz),5.55-5.60(2H,m),6.76(2H,s),7.20-7.26(5H,m),7.56-7.58(2H,m).
MS(APCI)m/z：1203(M+H)+.
步驟6：(3S,14S)-14-苯甲基-27-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-3-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺甲醯基}-5,10,13,16,19,22-六側氧基-4,9,12,15,18,21-六氮二十七酸
使上述步驟5所獲得的化合物(15.5mg，12.9μmoL) ，與實施例1步驟2同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(5.50mg，37%)。
1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ：0.99(3H,t,J=7.4Hz),1.22-1.30(2H,m),1.49-1.79(6H,m),1.94(1H,t,J=7.8Hz),2.20-2.22(4H,m),2.30-2.40(2H,m),2.39(3H,s),2.72-2.77(2H,m),2.87-3.26(6H,m),3.43-3.51(2H,m),3.59-3.69(2H,m),3.77-3.87(4H,m),4.38-4.45(1H,m),4.69(2H,q,J=6.7Hz),5.15(1H,t,J=18.0Hz),5.32-5.38(2H,m),5.51-5.60(2H,m),6.76(2H,s),7.19-7.23(5H,m),7.53-7.55(2H,m).
MS(APCI)m/z：1147(M+H)+.
步驟7：抗體-藥物結合物(56)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及上述步驟6所獲得的化合物，藉由與實施例2步驟6同樣之方法，獲得標題抗體-藥物結合物。
抗體濃度：1.60mg/mL，抗體產量：9.6mg(77%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：2.8。
實施例57抗體-藥物結合物(57)
步驟1：抗體-藥物結合物(57)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及實施例56步驟6所獲得的化合物，藉由與實施例3步驟1同樣之方法，獲得標題抗體-藥物結合物。
抗體濃度：1.53mg/mL，抗體產量：9.2mg(74%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：5.1。
實施例58抗體-藥物結合物(58)
步驟1：(3S,12S)-12-苯甲基-21-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-3-{[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]胺基}-4,7,10,13,16,21-六側氧基-5,8,11,14,17-五氮二十一-1-酸三級丁酯
將(2S)-4-三級丁氧基-2-{[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]胺基}-4-側氧基丁酸(0.625g，1.52mmoL)溶解於二氯甲烷(10.0mL)，添加N-羥基琥珀醯亞胺(0.175g，1.52moL)、 及1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(0.291g，1.52mmoL)而攪拌1小時。將此反應溶液滴加到添加實施例2步驟2所獲得的化合物(1.00g，1.01mmoL)的N,N-二甲基甲醯胺溶液(10.0mL)中，並於室溫攪拌20小時。減壓餾除溶媒，將獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇=8：2(v/v)]純化，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(0.873g，70%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：0.88(3H,t,J=7.4Hz),1.37(9H,s),1.68-1.78(2H,m),1.81-1.93(2H,m),2.10-2.23(4H,m),2.41(3H,s),2.68-2.85(3H,m),2.99-3.22(5H,m),3.58-3.81(6H,m),4.19-4.36(3H,m),4.38-4.52(2H,m),5.17(1H,d,J=19.2Hz),5.25(1H,d,J=19.2Hz),5.43(2H,s),5.54-5.62(1H,m),6.55(1H,s),7.15-7.34(8H,m),7.41(2H,t,J=7.2Hz),7.66-7.75(4H,m),7.81(1H,d,J=11.0Hz),7.88(2H,d,J=7.4Hz),8.01-8.06(1H,m),8.14(1H,d,J=8.2Hz),8.17-8.22(1H,m),8.25-8.30(1H,m),8.47(1H,d,J=8.6Hz).
MS(APCI)m/z：1232(M+H)+.
步驟2：(3S,12S)-12-苯甲基-3-{[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]胺基}-21-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4,7,10,13,16,21-六側氧基-5,8,11,14,17-五氮二十一-1-酸三級丁酯
將上述步驟1所獲得的化合物(0.800g，0.649mmoL)溶解於N,N-二甲基甲醯胺(3.00mL)，添加哌啶(0.643mL，6.49mmoL)而攪拌1小時。減壓乾固溶媒，將獲得的殘留物溶解於N,N-二甲基甲醯胺(10mL)。添加6-順丁烯二醯亞胺己酸N-琥珀醯亞胺基酯(0.300g，0.974mmoL)，攪拌20小時。減壓餾除溶媒，將獲得的殘留物以矽膠管柱層析[[氯仿~氯仿：甲醇=8：2(v/v)]純化，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(0.224g，29%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.6Hz),1.15-1.22(2H,m),1.35(9H,s),1.44-1.47(4H,m),1.71-1.73(2H,m),1.80-1.91(2H,m),2.08(2H,t,J=7.6Hz),2.13-2.20(4H,m),2.40(3H,s),2.67(1H,dt,J=11.1,4.8Hz),2.78(1H,dd,J=13.6,9.4Hz),2.99-3.17(6H,m),3.31-3.36(2H,m),3.57-3.76(6H,m),4.45-4.47(1H,m),4.57-4.60(1H,m),5.16(1H,d,J=18.7Hz),5.25(1H,d,J=18.7Hz),5.42(2H,s),5.55-5.60(1H,m),6.53(1H,s),6.99(2H,s),7.15-7.27(5H,m),7.31(1H,s),7.70(1H,t,J=5.4Hz),7.80(1H,d,J=10.9Hz),7.99(1H,t,J=5.7Hz),8.09-8.12(3H,m),8.25(1H,t,J=6.0Hz),8.45(1H,d,J=9.1Hz).
MS(APCI)m/z：1203(M+H)+.
步驟3：N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]-L-α-天冬胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4-側氧基丁基)甘胺醯胺
使上述步驟2所獲得的化合物(0.224g，0.186mmoL)與實施例1步驟2同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(21.2mg，10%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.2Hz),1.13-1.21(2H,m),1.42-1.45(6H,m),1.70-1.72(2H,m),1.85-1.88(2H,m),2.06-2.20(6H,m),2.39(3H,s),2.63-2.67(1H,m),2.78-2.81(1H,m),3.04-3.12(6H,m),3.63-3.70(6H,m),4.46-4.52(2H,m),5.16(1H,d,J=19.2Hz),5.25(1H,d,J=18.8Hz),5.42(2H,s),5.55-5.58(1H,m),6.53(1H,s),6.99(2H,s),7.18-7.23(6H,m),7.30(1H,s),7.71(1H,t,J=5.5Hz),7.79(1H,d,J=10.9Hz),7.99-8.02(1H,m),8.10-8.11(3H,m),8.27-8.30(1H,m),8.47-8.50(1H,m).
MS(APCI)m/z：1147(M+H)+.
步驟8：抗體-藥物結合物(58)
抗體之還原：將以參考例1製作的曲妥珠單抗，使用共通操作B(使用1.37mLmg-1cm-1作為280nm吸光係數)及C-1，以PBS6.0/EDTA調製為10mg/mL。本溶液(1mL)置入1.5mL管，於其中添加10mM參(2-羧基乙基)膦鹽酸鹽(TCEP，東京化成工業股份有限公司)水溶液(0.032mL)及1M磷酸氫二鉀水溶液(Nacalai Tesque,Inc.；0.100mL)，調製TCEP相對於抗體之莫耳比4.6之反應液。確認本溶液之pH為7.4±0.1後，藉由於37℃培育1小時，使抗體內鉸鏈部之雙硫鍵還原。
抗體與藥物連接物之結合：對上述溶液，於室溫添加上述步驟3所獲得的化合物10mM DMSO溶液 (0.062mL)，並調製藥物連接物相對於抗體的莫耳比9.2之反應液，使用試管混勻器(MTR-103，AS ONE股份有限公司)而於室溫攪拌40分鐘，使藥物連接物與抗體結合。其次，添加100mM N-乙醯基半胱胺酸(NAC)水溶液(0.0062mL)，調製NAC相對於抗體之莫耳比18.4之反應液，再於室溫攪拌20分鐘，使藥物連接物之反應停止。
純化：將上述溶液，進行使用共通操作D-1(使用PBS6.0作為緩衝液)的純化，獲得6mL之含有目的化合物的溶液。
抗體濃度：1.22mg/mL，抗體產量：7.3mg(73%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：4.4。
實施例59抗體-藥物結合物(59)
步驟1：抗體-藥物結合物(59)
抗體之還原：將以參考例1製作的曲妥珠單抗，使用共通操作B(使用1.37mLmg-1cm-1作為280nm吸光係數)及C-1，以PBS6.0/EDTA調製為10mg/mL。本溶液(1mL)置入1.5mL管，於其中添加10mMTCEP水溶液(0.016mL)及 1M磷酸氫二鉀水溶液(0.050mL)，調製TCEP相對於抗體之莫耳比2.3之反應液。確認本溶液之pH為7.4±0.1後，藉由於37℃培育1小時，使抗體內鉸鏈部之雙硫鍵還原。
抗體與藥物連接物之結合：對上述溶液，於室溫添加實施例58步驟3所獲得的化合物10mM DMSO溶液(0.031mL)，並調製藥物連接物相對於抗體之莫耳比4.6之反應液，使用試管混勻器於室溫攪拌40分鐘，使藥物連接物與抗體結合。其次，添加100mM NAC水溶液(0.0062mL)，調製NAC相對於抗體之莫耳比9.2之反應液，再於室溫攪拌20分鐘，使藥物連接物之反應停止。
純化：將上述溶液，進行使用共通操作D-1(使用PBS6.0作為緩衝液)的純化，獲得6mL之含有目的化合物的溶液。2批次調製此檢體並合併而獲得12mL，將其中8mL濃縮，獲得含有目的之化合物的溶液2.5mL，使用共通操作B、E、F，獲得下述之特性值。
抗體濃度：3.82mg/mL，抗體產量：9.6mg(72%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：2.2。
實施例60抗體-藥物結合物(60)
步驟1：抗體-藥物結合物(60)
將作為原料的抗體之量80mg(即，將PBS6.0/EDTA作為介質的濃度10mg/mL之溶液為8mL)，將反應容器設為50mL之聚丙烯製管，與實施例58步驟4同樣地獲得含有目的之化合物的溶液，使用離心式超過濾過濾器(Amicon Ultra-4，分界的分子量：50k)而進行濃縮，獲得含有目的之化合物的溶液13mL，並獲得下述之特性值。
抗體濃度：4.16mg/mL，抗體產量：54mg(68%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：4.8。
實施例61抗體-藥物結合物(61)
步驟1：抗體-藥物結合物(61)
將作為原料的抗體之量80mg(即，將PBS6.0/EDTA作為介質的濃度10mg/mL之溶液為8mL)，將反應容器設為50mL之聚丙烯製管，與實施例59步驟1同樣地獲得含有目的之化合物的溶液，使用離心式超過濾過濾器(Amicon Ultra-4，分界的分子量：50k)而進行濃縮，獲得含有目的之化合物的溶液17mL，並獲得下述之特性值。
抗體濃度：3.79mg/mL，抗體產量：64mg(80%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.1。
實施例62抗體-藥物結合物(62)
步驟1：抗體-藥物結合物(62)
抗體之還原：將以參考例1製作的曲妥珠單抗，使用共通操作B(使用1.37mLmg-1cm-1作為280nm吸光係數)及C-1，以PBS6.0/EDTA調製為10mg/mL。將本溶液(5.0mL)採取至15mL管中，添加30mM TCEP水溶液(0.0777mL；相對於抗體一分子為6.9當量)及1M磷酸氫二鉀水溶液(0.250mL)。確認本溶液之pH為7.4±0.1內後，藉由於37℃培育1小時，使抗體內鉸鏈部之雙硫鍵還原。
抗體與藥物連接物之結合：將上述溶液於22℃培育10分鐘後，添加含30mM之實施例58步驟3所獲得的化合物的DMSO溶液(0.1555mL；相對於抗體一分子為13.8當量)，並於22℃培育40分鐘，使藥物連接物與抗體結合。其次，添加100mM NAC水溶液(0.0933mL；相對於抗體一分子為27.6當量)，再於22℃培育20分鐘，使藥物連接物之反應停止。
純化：將上述溶液，進行使用共通操作D-1(使用ABS作為緩衝液)的純化，獲得含有目的之化合物的溶液。
特性評價：使用共通操作B、E、F，獲得下述之特性值。
抗體濃度：3.35mg/mL，抗體產量：29.5mg(59%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：7.4。
實施例63抗體-藥物結合物(63)
步驟1：N-(2-{2-[2-(2-羥基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基)甘胺酸三級丁酯
於2-{2-[2-(2-羥基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基4-甲基苯磺酸酯(Bioorg.Med.Chem.Lett.,2011年，21卷，550項；1.75g，5.00mmoL)、及甘胺酸三級丁酯鹽酸鹽 (1.26g，7.52mmoL)之N,N-二甲基甲醯胺(50.0mL)溶液中，添加N,N-二異丙基乙基胺(1.94g，15.0mmoL)，並於60℃攪拌10小時。於反應溶液中添加氯仿，有機層以1N鹽酸洗淨，獲得的有機層以硫酸鈉乾燥，並過濾。減壓餾除溶媒，將獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇=8：1(v/v)]純化，獲得無色油狀之標題化合物(426mg，28%)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ：1.47(9H,s),2.80(2H,t,J=5.3Hz),3.32(2H,s),3.76-3.54(17H,m).
步驟2：N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]-N-(2-{2-[2-(2-羥基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基)甘胺酸三級丁酯
使上述步驟1所獲得的化合物(426mg，1.39mmoL)，與實施例5步驟8同樣地反應，獲得無色油狀之標題化合物(489mg，70%)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ：1.28-1.36(2H,m),1.45(9H,s),1.57-1.71(4H,m),2.39(2H,t,J=7.3Hz),3.48-3.76(3H,m),4.02(2H,s),6.68(2H,s).
步驟3：N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]-N-(2-{2-[2-(2-羥基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基)甘胺酸
使上述步驟2所獲得的化合物(489mg，0.977mmoL)，與實施例1步驟2同樣地反應，獲得呈無色固體之標題化合物(211mg，49%)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ：1.38-1.28(2H,m),1.73-1. 55(4H,m),2.28(2H,t,J=7.0Hz),3.50-3.79(18H,m),4.12(2H,s),6.68(2H,s).
步驟4：N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]-N-(2-{2-[2-(2-羥基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基)甘胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4-側氧基丁基)甘胺醯胺
將上述步驟3所獲得的化合物(48.9mg，0.110mmoL)，使用實施例2步驟2所獲得的化合物(84.0mg，0.100mmoL)替代依喜替康之甲烷磺酸鹽，使與實施例1步驟1同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(54.0mg，43%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.2Hz),1.14-1.26(2H,m),1.39-1.51(4H,m),1.68-1.76(2H,m),1.81-1.91(2H,m),2.08-2.23(4H,m),2.40(3H,s),2.73-2.84(1H,m),2.98-3.21(5H,m),3.25-3.79(26H,m),3.93(2H,s),4.43-4.49(1H,m),4.54-4.61(1H,m),5.21(2H,q,J=18.6Hz),5.42(2H,s),5.54-5.60(1H,m),6.53(1H,s),7.00(2H,s),7.14-7.27(5H,m),7.31(1H,s),7.68-7.74(1H,m),7.80(1H,d,J=11.0Hz),8.02-8.32(4H,m),8.46(1H,d,J=8.6Hz).
MS(ESI)m/z：1265(M+H)+.
步驟5：抗體-藥物結合物(63)
抗體之還原：將以參考例1製作的曲妥珠單抗，使用 共通操作C-1及B(使用1.37mLmg-1cm-1作為280nm吸光係數)，將介質置換為PBS6.0/EDTA，調製為10mg/mL之抗體濃度。將本溶液(1.25mL)置入1.5mL聚丙烯製管，於其中添加10mM TCEP水溶液(0.019mL；相對於抗體一分子為2.3當量)及1M磷酸氫二鉀水溶液(0.0625mL)。確認本溶液之pH為7.4±0.1內後，藉由於37℃培育1小時，使抗體內鉸鏈部之雙硫鍵還原。
抗體與藥物連接物之結合：對上述溶液，於室溫添加DMSO(Sigma-Aldrich Co.LLC；0.109mL)及含10mM之上述步驟4所獲得的化合物的DMSO溶液(0.039mL；相對於抗體一分子為4.6當量)，並使用試管混勻器於室溫攪拌40分鐘，使藥物連接物與抗體結合。其次，添加100mM NAC水溶液(0.008mL)，再於室溫攪拌20分鐘，使藥物連接物之反應停止。
純化：將上述溶液，進行使用共通操作D-1(使用ABS作為緩衝液)的純化，獲得6mL之含有目的化合物的溶液。
特性評價：使用共通操作B、E，而獲得下述之特性值。
抗體濃度：1.76mg/mL，抗體產量：10.6mg(84%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：2.9。
實施例64抗體-藥物結合物(64)
步驟1：抗體-藥物結合物(64)
抗體之還原：將以參考例1製作的曲妥珠單抗，使用共通操作C-1及B(使用1.37mLmg-1cm-1作為280nm吸光係數)，將介質置換為PBS6.0/EDTA，調製為10mg/mL之抗體濃度。將本溶液(1.25mL)置入1.5mL聚丙烯製管，於其中添加10mM TCEP水溶液(0.039mL；相對於抗體一分子為4.6當量)及1M磷酸氫二鉀水溶液(0.0625mL)。確認本溶液之pH為7.4±0.1內後，藉由於37℃培育1小時，使抗體內鉸鏈部之雙硫鍵還原。
抗體與藥物連接物之結合：對上述溶液，於室溫添加DMSO(Sigma-Aldrich Co.LLC；0.072mL)及含10mM之實施例63步驟4所獲得的化合物的DMSO溶液(0.078mL；相對於抗體一分子為9.2當量)，使用試管混勻器於室溫攪拌40分鐘，使藥物連接物與抗體結合。其次，添加 100mM NAC水溶液(0.0155mL)，再於室溫攪拌20分鐘，使藥物連接物之反應停止。
純化：將上述溶液，進行使用共通操作D-1(使用ABS作為緩衝液)的純化，獲得6mL之含有目的之實施例化合物的溶液。
特性評價：使用共通操作B、E，而獲得下述之特性值。
抗體濃度：1.74mg/mL，抗體產量：10.4mg(83%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：5.6。
實施例65抗體-藥物結合物(65)
步驟1：N-(三級丁氧基羰基)-β-丙胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4-側氧基丁基)甘胺醯胺
將實施例2步驟2所獲得的化合物(0.839g，1.00mmoL)，使用N-(三級丁氧基羰基)-β-丙胺酸替代6-順丁烯二醯亞胺己酸N-琥珀醯亞胺基酯，使與實施例5步驟8同樣地反應，獲得的粗生成物不進行純化而用於下一步驟。
步驟2：β-丙胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4-側氧基丁基)甘胺醯胺
使上述步驟1所獲得的粗生成物，與實施例1步驟2同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(0.610g，67%，2步驟)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.4Hz),1.67-1.77(2H,m),1.79-1.92(2H,m),2.09-2.22(4H,m),2.40(3H,s),2.46-2.55(2H,m),2.82-2.73(1H,m),2.95-3.13(5H,m),3.14-3.21(2H,m),3.55-3.80(6H,m),4.44-4.52(1H,m),5.20(2H,dd,J=35.0,19.0Hz),5.42(2H,s),5.53-5.60(1H,m),6.54(1H,s),7.14-7.28(5H,m),7.31(1H,s),7.67(2H,brs),7.72-7.78(1H,m),7.80(1H,d,J=11.0Hz),8.10-8.17(2H,m),8.29(1H,t ,J=5.9Hz),8.42(1H,t,J=5.7Hz),8.47(1H,d,J=8.6Hz).
步驟3：(2S)-5-三級丁氧基-2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-5-側氧基戊酸
將L-麩胺酸5-三級丁酯(1.02g，5.00mmoL)溶解於飽和碳酸氫鈉水溶液(20.0mL)，於0℃添加N-甲氧基羰基順丁烯二醯亞胺(0.775g，5.00mmoL)，並於0℃攪拌30分鐘後，於室溫攪拌1小時。於反應溶液中，於0℃添加5N鹽酸，作成酸性後，以乙酸乙酯萃取。獲得的有機層以硫酸鈉乾燥，並過濾。減壓餾除溶媒，獲得粗生成物。獲得的粗生成物不進行純化而用於下一步驟。
步驟4：N-[(2S)-5-三級丁氧基-2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-5-側氧基戊醯基]-β-丙胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4-側氧基丁基)甘胺醯胺
將上述步驟3所獲得的粗生成物(85.0mg，0.300mmoL)，使用上述步驟2所獲得的化合物(182mg，0.200mmoL)替代依喜替康之甲烷磺酸鹽，使與實施例1步驟1同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(102mg，43%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.2Hz),1.35(9H,s),1.67-1.76(2H,m),1.81-1.90(2H,m),2.35-2.05(10H,m),2.40(3H,s),2.75-2.83(1H,m),2.99-3.13(3H,m),3.14 -3.26(4H,m),3.55-3.76(6H,m),4.36-4.50(2H,m),5.21(2H,q,J=18.9Hz),5.42(2H,s),5.54-5.61(1H,m),6.53(1H,s),7.03(2H,s),7.17-7.26(5H,m),7.31(1H,s),7.68-7.73(1H,m),7.80(1H,d,J=10.6Hz),8.00-8.05(2H,m),8.12(1H,d,J=7.8Hz),8.16-8.20(1H,m),8.23-8.28(1H,m),8.46(1H,d,J=8.6Hz).
步驟5：N-[(2S)-4-羧基-2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丁醯基]-β-丙胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4-側氧基丁基)甘胺醯胺
使上述步驟4所獲得的化合物(102mg，86.8μmoL)，與實施例1步驟2同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(76.0mg，78%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.4Hz),1.68-1.75(2H,m),1.84-1.91(2H,m),2.35-2.05(10H,m),2.40(3H,s),2.74-2.83(1H,m),2.99-3.12(3H,m),3.14-3.26(4H,m),3.55-3.77(6H,m),4.41-4.49(2H,m),5.21(2H,dd,J=38.7,18.8Hz),5.42(2H,s),5.54-5.61(1H,m),6.54(1H,s),7.03(2H,s),7.15-7.27(5H,m),7.31(1H,s),7.69-7.74(1H,m),7.80(1H,d,J=10.9Hz),8.01-8.07(2H,m),8.12(1H,d,J=8.2Hz),8.19(1H,t,J=5.5Hz),8.27(1H,t,J=6.3Hz),8.47(1H,d,J=8.6Hz),12.12(1H,s).
MS(ESI)m/z：1119(M+H)+.
步驟6：抗體-藥物結合物(65)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及上述步驟5所獲得的化合物，藉由與實施例2步驟6同樣之方法，獲得標題抗體-藥物結合物。
抗體濃度：1.39mg/mL，抗體產量：8.3mg(66%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.6。
實施例66抗體-藥物結合物(66)
步驟1：抗體-藥物結合物(66)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及實施例65步驟5所獲得的化合物，藉由與實施例3步驟1同樣之方法，獲得標題抗體-藥物結合物。
抗體濃度：1.45mg/mL，抗體產量：8.7mg(70%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：6.5。
實施例67抗體-藥物結合物(67)
步驟1：N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]甘胺醯基甘胺醯基-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4-側氧基丁基)-L-苯丙胺醯胺
將實施例1步驟2所獲得的化合物(300mg，0.473mmoL)，使用N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]甘胺醯基甘胺醯基-L-苯丙胺酸(特開2002-60351；346mg， 0.691mmoL)替代4-(三級丁氧基羰基胺基)丁酸，使與實施例1步驟1同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(230mg，40%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.85(3H,t,J=7.2Hz),1.67-1.68(2H,m),1.81-1.84(2H,m),2.13(4H,t,J=6.8Hz),2.39(3H,s),2.76(1H,t,J=11.4Hz),2.96-3.08(4H,m),3.16-3.17(2H,m),3.59-3.74(4H,m),4.22-4.28(2H,m),4.39-4.42(1H,m),5.16-5.22(2H,m),5.36-5.41(2H,m),5.56-5.59(1H,m),6.52(1H,s),7.14-7.20(5H,m),7.29-7.31(3H,m),7.38-7.41(2H,m),7.61(1H,t,J=6.0Hz),7.69(2H,d,J=7.4Hz),7.79(1H,d,J=11.0Hz),7.87(2H,d,J=7.8Hz),7.95(1H,s),8.07(2H,t,J=4.3Hz),8.42(1H,d,J=8.6Hz).
MS(APCI)m/z：1004(M+H)+.
步驟2：甘胺醯基甘胺醯基-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4-側氧基丁基)-L-苯丙胺醯胺
於上述步驟1所獲得的化合物(226mg，0.225mmoL)之N,N-二甲基甲醯胺(1.00mL)溶液中，添加哌啶(0.223mL，2.25mmoL)，並於室溫攪拌5小時。減壓餾除溶媒，獲得含標題化合物的混合物。本混合物不進行進一步純化而用於下一反應。
步驟3：(3S,12S)-12-苯甲基-18-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基 -2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-3-{[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]胺基}-4,7,10,13,18-五側氧基-5,8,11,14-四氮十八-1-酸三級丁酯
將上述步驟2所獲得的化合物(0.225mmoL)，使用N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-L-天冬胺酸4-三級丁酯(104mg，0.337mmoL)替代4-(三級丁氧基羰基胺基)丁酸，使與實施例1步驟1同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(114mg，43%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.86(3H,t,J=7.2Hz),1.35(9H,s),1.66-1.69(2H,m),1.84-1.85(2H,m),2.11-2.13(4H,m),2.39(3H,s),2.43-2.45(1H,m),2.68-2.79(2H,m),2.94-3.16(5H,m),3.66(5H,tt,J=30.5,10.0Hz),4.23-4.30(3H,m),4.39-4.41(1H,m),5.15(1H,d,J=19.2Hz),5.21(1H,d,J=18.8Hz),5.37(1H,d,J=17.2Hz),5.42(1H,d,J=16.0Hz),5.53-5.57(1H,m),6.54(1H,s),7.15-7.22(5H,m),7.26-7.34(3H,m),7.38-7.40(2H,m),7.68-7.70(2H,m),7.79(1H,d,J=10.9Hz),7.86-7.87(2H,m),7.88-7.90(1H,m),7.96(1H,t,J=6.3Hz),8.03-8.07(2H,m),8.20(1H,t,J=5.5Hz),8.43(1H,d,J=8.6Hz).
MS(APCI)m/z：1175(M+H)+.
步驟4：(3S,12S)-3-胺基-12-苯甲基-18-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4,7,10,13,18-五側氧基-5,8,11,14-四氮十八-1-酸三級丁酯
使上述步驟3所獲得的化合物(110mg，0.0936mmoL)，與上述步驟2同樣地反應，獲得含標題化合物的混合物。本混合物不進行進一步純化而用於下一反應。
步驟5：(3S,12S)-12-苯甲基-3-{[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]胺基}-18-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4,7,10,13,18-五側氧基-5,8,11,14-四氮十八-1-酸三級丁酯
使上述步驟4所獲得的化合物(0.0936mmoL)，與實施例5步驟8同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(40.2mg，38%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.86(3H,t,J=7.4Hz),1.17-1.19(2H,m),1.35(9H,s),1.44-1.47(4H,m),1.66-1.67(2H,m),1.81-1.88(2H,m),2.06-2.13(6H,m),2.39-2.41(1H,m),2.40(3H,s),2.67(1H,dd,J=16.0,5.5Hz),2.76(1H,dd,J=13.3,9.0Hz),2.96(1H,dd,J=13.5,4.9Hz),3.04(2H,td,J=13.4,6.6Hz),3.18(2H,s),3.36(2H,d,J=7.0Hz),3.58(1H,dd,J=16.8,5.5Hz),3.70(3H,dt,J=21.5,7.2Hz),4.38-4.41(1H,m),4.57-4.59(1H,m),5.16(1H,d,J=18.8Hz),5.24(1H,d,J=19.2Hz),5.38(1H,d,J=16.4Hz),5.43(1H,d,J=16.0Hz),5.57-5.58(1H,m),6.54(1H,s),6.99(2H,s),7.13-7.25(5H,m),7.31(1H,s),7.80(1H,d,J=10.9Hz),7.94-8.04(3H,m),8.13-8.16(2H,m),8.43(1H,d,J=8.6Hz).
MS(APCI)m/z：1146(M+H)+.
步驟6：N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]-L-α-天冬胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4-側氧基丁基)-L-苯丙胺醯胺
使上述步驟5所獲得的化合物(40.0mg，0.0349mmoL)，與實施例1步驟2同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(33.6g，88%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,q,J=7.2Hz),1.14-1.20(2H,m),1.46(4H,td,J=14.8,7.3Hz),1.67(2H,td,J=12.9,6.3Hz),1.84(2H,dq,J=25.5,7.2Hz),2.11(6H,dt,J=23.4,7.3Hz),2.39(3H,s),2.45-2.47(1H,m),2.69(1H,dd,J=16.5,5.5Hz),2.76(1H,dd,J=13.7,9.3Hz),2.94-3.01(1H,m),3.05(2H,dq,J=25.1,6.4Hz),3.17-3.19(1H,m),3.34-3.46(4H,m),3.59(1H,dd,J=16.6,5.6Hz),3.69(2H,dt,J=20.1,6.8Hz),4.37-4.41(1H,m),4.55(1H,dd,J=13.5,7.7Hz),5.16(1H,d,J=19.0Hz),5.22(1H,d,J=18.6Hz),5.38(1H,d,J=16.4Hz),5.43(1H,d,J=16.4Hz),5.55-5.59(1H,m),6.54(1H,s),6.99(2H,s),7.19(5H,dq,J=31.6,7.9Hz),7.31(1H,s),7.79(1H,d,J=11.0Hz),7.99(3H,ddd,J=25.1,14.2,6.2Hz),8.11(1H,t,J=5.5Hz),8.17(1H,d,J=7.6Hz),8.44(1H,d,J=8.5Hz),12.32(1H,s).
MS(APCI)m/z：1090(M+H)+.
步驟7：抗體-藥物結合物(67)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及上述步驟6所獲 得的化合物，藉由與實施例2步驟6同樣之方法，獲得標題抗體-藥物結合物後，使用共通操作A，而將溶液濃縮。
抗體濃度：17.6mg/mL，抗體產量：8.8mg(70%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.7。
實施例68抗體-藥物結合物(68)
步驟1：抗體-藥物結合物(68)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及實施例67步驟6所獲得的化合物，藉由與實施例3步驟1同樣之方法，獲得標題抗體-藥物結合物後，使用共通操作A，而將溶液濃縮。
抗體濃度：13.3mg/mL，抗體產量：9.3mg(74%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：5.0。
實施例69抗體-藥物結合物(69)
步驟1：N6-(三級丁氧基羰基)-N2-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-L-離胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4-側氧基丁基)甘胺醯胺
將實施例2步驟2所獲得的化合物(167mg，0.176mmoL)，使用Nε-(三級丁氧基羰基)-Nα-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-L-離胺酸(103mg，0.22mmoL)替代4-(三級丁氧基羰基胺基)丁酸，使與實施例1步驟1同樣地反應，獲得的粗生成物不進行純化而用於下一步驟。
步驟2：N6-(三級丁氧基羰基)-L-離胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4-側氧基丁基)甘胺醯胺
於上述步驟1所獲得的粗生成物之N,N-二甲基甲醯胺(4.00mL)溶液中添加哌啶(0.400mL)，並於室溫攪拌2小時。減壓餾除溶媒，將獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇：水=7：3：1(v/v/v)之分配有機層]純化，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(113mg，60%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.4Hz),1.18-1.49(5H,m),1.36(9H,s),1.51-1.60(1H,m),1.67-1.76(2H,m),1.80-1.91(2H,m),2.09-2.20(4H,m),2.39(3H,s),2.76-2.89(3H,m),2.99-3.22(6H,m),3.58-3.77(6H,m),4.43-4.49(1H,m),5.20(2H,q,J=18.5Hz),5.42(2H,s),5.55-5.60(1H,m),6.54(1H,s),6.76(1H,t,J=5.5Hz),7.15-7.26(5H,m),7.31(1H,s),7.69-7.74(1H,m),7.80(1H,d,J=10.9Hz),8.08(1H,t,J=5.7Hz),8.14(1H,d,J=7.8Hz),8.22-8.30(2H,m),8.47(1H,d,J=8.6Hz).
步驟3：N6-(三級丁氧基羰基)-N2-[6-(2,5-二 側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]-L-離胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4-側氧基丁基)甘胺醯胺
使上述步驟2所獲得的化合物(113mg，0.106mmoL)，與實施例5步驟8同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(102mg，61%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.2Hz),1.11-1.53(11H,m),1.35(9H,s),1.56-1.65(1H,m),1.68-1.76(2H,m),1.81-1.92(2H,m),2.06-2.20(6H,m),2.40(3H,s),2.74-2.90(3H,m),2.96-3.39(7H,m),3.57-3.74(6H,m),4.14-4.21(1H,m),4.42-4.49(1H,m),5.20(2H,q,J=18.9Hz),5.42(2H,s),5.55-5.60(1H,m),6.54(1H,s),6.72-6.78(1H,m),7.00(2H,s),7.15-7.26(5H,m),7.31(1H,s),7.69-7.72(1H,m),7.80(1H,d,J=10.9Hz),7.93(1H,d,J=7.4Hz),7.99-8.04(1H,m),8.10-8.18(2H,m),8.26(1H,t,J=6.1Hz),8.46(1H,d,J=8.2Hz).
步驟4：N2-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]-L-離胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4-側氧基丁基)甘胺醯胺
添加上述步驟3所獲得的化合物(102mg，80.9μmoL)之二氯甲烷(4.00mL)、三氟乙酸(1.00mL)，並於室溫攪拌 2小時。減壓餾除溶媒，將獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇：水=7：3：1(v/v/v)之分配有機層]純化，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(57.0mg，61%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.2Hz),1.12-1.35(4H,m),1.41-1.55(7H,m),1.61-1.77(3H,m),1.80-1.91(2H,m),2.07-2.22(6H,m),2.40(3H,s),2.84-2.71(3H,m),2.97-3.40(7H,m),3.59-3.76(6H,m),4.20-4.25(1H,m),4.45-4.50(1H,m),5.20(2H,q,J=18.5Hz),5.42(2H,s),5.54-5.60(1H,m),6.55(1H,s),7.01(2H,s),7.15-7.26(5H,m),7.31(1H,s),7.74(1H,t,J=5.7Hz),7.81(1H,d,J=10.9Hz),7.97(1H,d,J=7.8Hz),8.05(1H,t,J=6.1Hz),8.13-8.18(2H,m),8.28(1H,t,J=5.7Hz),8.47(1H,d,J=8.6Hz).
MS(ESI)m/z：1160(M+H)+.
步驟5：抗體-藥物結合物(69)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及上述步驟4所獲得的化合物，藉由與實施例2步驟6同樣之方法，獲得標題抗體-藥物結合物後，使用共通操作A，而將溶液濃縮。
抗體濃度：20.6mg/mL，抗體產量：8.3mg(66%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.6。
實施例70抗體-藥物結合物(70)
步驟1：抗體-藥物結合物(70)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及實施例69步驟4所獲得的化合物，藉由與實施例3步驟1同樣之方法，獲得標題抗體-藥物結合物後，使用共通操作A，而將溶液濃縮。
抗體濃度：23.5mg/mL，抗體產量：9.4mg(75%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：7.0。
實施例71抗體-藥物結合物(71)
步驟1：N-(三級丁氧基羰基)甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基甘胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]-β-丙胺醯胺
使實施例7步驟2所獲得的化合物(484mg，0.780mmoL)，與實施例2步驟1同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(626mg，87%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.4Hz),1.27-1.42(9H,m),1.77-1.93(2H,m),2.06-2.22(2H,m),2.36(2H,t,J=7.2Hz),2.40(3H,d,J=1.6Hz),2.44-2.54(2H,m),2.76(1H,dd,J=14.5,10.2Hz),3.02(1H,dd,J=13.9,4.5Hz),3.12-3.22(2H,m),3.52(6H,d,J=6.3Hz),4.42-4.54(1H,m),5.19(1H,d,J=19.2Hz),5.26(1H,d,J=18.4Hz),5.42(1H,dd,J=18.4,16.4Hz),5.57(1H,dt,J=8.7,4.4Hz),6.53(1H,s),6.98(1H,t,J=5.9Hz),7.14-7.28(5H,m),7.31(1H,s),7.77-7.84(1H,m),7.91(1H,t,J=5.5Hz),8.16(1H,d,J=7.8Hz),8.27(1H,t,J=5.1Hz),8.52(1H,d,J=9.0Hz).
步驟2：甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基甘胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]-β-丙胺醯胺三氟乙酸鹽
使上述步驟1所獲得的化合物(624mg，0.675mmoL)，與實施例2步驟2同樣地反應，獲得呈黃色固體之標題化合物(626mg，92%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.4Hz),1.86(2H,tt,J=14.5,7.2Hz),2.07-2.22(2H,m),2.36(2H,t,J=7.2Hz),2.40(3H,s),2.44-2.54(2H,m),2.75(1H,dd,J=13.7,9.8Hz),3.04(1H,dd,J=13.7,4.3Hz),3.12-3.22(2H,m),3.58(2H,d,J=4.7Hz),3.69(3H,td,J=11.2,5.7Hz),3.87(1H,dd,J=17.0,5.7Hz),4.54(1H,m,J=17.8,4.5Hz),5.19(1H,d,J=19.2Hz),5.26(1H,d,J=18.8Hz),5.43(2H,s),5.51-5.60(1H,m),6.55(1H,s),7.14-7.29(5H,m),7.32(1H,s),7.81(1H,d,J=10.9Hz),7.88 (1H,t,J=5.7Hz),7.97(3H,brs),8.29-8.38(2H,m),8.50(1H,t,J=5.7Hz),8.55(1H,d,J=8.6Hz).
MS(ESI)m/z：825(M+H)+.
步驟3：(9S,18S)-9-苯甲基-1-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-18-{[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]胺基}-1,5,8,11,14,17-六側氧基-4,7,10,13,16-五氮二十-20-酸三級丁酯
將上述步驟2所獲得的化合物(150mg，0.182mmoL)，使用(2S)-4-三級丁氧基-2-{[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]胺基}-4-側氧基丁酸(90.0mg，0.219mmoL)替代N-(三級丁氧基羰基)甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基甘胺酸，與實施例2步驟1同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(84.0mg，38%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.82-0.91(3H,m),1.35(9H,s),1.85(2H,tt,J=14.0,7.3Hz),2.06-2.21(2H,m),2.39(3H,s),2.31-2.53(5H,m),2.64-2.73(1H,m),2.78(1H,dd,J=13.7,9.8Hz),3.02(1H,dd,J=13.9,4.5Hz),3.11-3.20(2H,m),3.55-3.80(6H,m),4.17-4.35(3H,m),4.35-4.43(1H,m),4.44-4.51(1H,m),5.18(1H,d,J=19.2Hz),5.24(1H,d,J=19.2Hz),5.41(2H,dd,J=18.8,16.4Hz),5.51-5.60(1H,m),6.53(1H,s),7.13-7.20(1H,m),7.20-7.27(4H,m),7.27-7.34(3H,m),7.39(2H,t,J=7.2Hz),7.65-7.73(3H,m),7.79(2H,d,J=10.6Hz),7.87(2H,d,J=7.4Hz),8.00(1H,t,J=6.1Hz),8.08-8.20(2H,m),8.22-8.3 1(1H,m),8.52(1H,d,J=8.2Hz).
MS(ESI)m/z：1218(M+H)+.
步驟4：(9S,18S)-9-苯甲基-18-{[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]胺基}-1-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-1,5,8,11,14,17-六側氧基-4,7,10,13,16-五氮二十-20-酸三級丁酯
使上述步驟3所獲得的化合物(81.0mg，0.0665mmoL)與實施例58步驟2同樣地反應，獲得標題化合物(56.0mg，71%)。
MS(ESI)m/z：1189.5(M+H)+.
步驟5：N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]-L-α-天冬胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基甘胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]-β-丙胺醯胺
使上述步驟2所獲得的化合物(52.0mg，0.0437mmoL)，與實施例1步驟2同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(35.0mg，71%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.4Hz),1.12-1.22(2H,m),1.39-1.51(4H,m),1.78-1.92(2H,m),2.04-2.19(2H,m),2.08(2H,t,J=7.2Hz),2.40(3H,s),2.31-2.46(6H,m),2.61-2.72(1H,m),2.73-2.85(1H,m),3.02(1H,dd,J=14.1, 4.7Hz),3.17(2H,m,J=5.5Hz),3.26-3.43(2H,m),3.55-3.77(6H,m),4.42-4.50(1H,m),4.51-4.58(1H,m),5.19(1H,d,J=18.4Hz),5.26(1H,d,J=18.4Hz),5.42(2H,brs),5.52-5.60(1H,m),6.53(1H,s),6.99(2H,s),7.12-7.27(5H,m),7.31(1H,s),7.80(2H,d,J=10.9Hz),7.93-8.02(1H,m),8.03-8.17(3H,m),8.22-8.31(1H,m),8.53(1H,d,J=8.6Hz).
MS(ESI)m/z：1133(M+H)+.
步驟6：抗體-藥物結合物(71)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及上述步驟3所獲得的化合物，藉由與實施例2步驟6同樣之方法，獲得標題抗體-藥物結合物。
抗體濃度：1.18mg/mL，抗體產量：7.08mg(71%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：2.4。
實施例72抗體-藥物結合物(72)
步驟1：抗體-藥物結合物(72)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及實施例71步驟5所獲得的化合物，藉由與實施例3步驟1同樣之方法，獲得標題抗體-藥物結合物。
抗體濃度：1.04mg/mL，抗體產量：6.24mg(62%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：4.4。
實施例73抗體-藥物結合物(73)
步驟1：(5S,14S)-5-苯甲基-1-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基 -2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-14-{[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]胺基}-1,4,7,10,13-五側氧基-3,6,9,12-四氮十六-16-酸三級丁酯
於冰冷下，於游離體之甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺醯胺(國際公開第97/46260號；0.250g，0.332mmoL)、N-羥基琥珀醯亞胺(57.2mg，0.497mmoL)、及N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-L-天冬胺酸4-三級丁酯(0.205g，0.497mmoL)之N,N-二甲基甲醯胺(10.0mL)溶液中，添加N,N-二環己基碳二亞胺(0.123g，0.497mmoL)，並於室溫攪拌2日。減壓餾除溶媒，將獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇=9：1(v/v)]純化，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(0.278g，73%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.86(3H,t,J=7.1Hz),1.35(9H,s),1.79-1.90(2H,m),2.03-2.25(2H,m),2.40(3H,s),2.40-2.51(2H,m),2.64-2.82(2H,m),2.98(1H,dd,J=13.7,4.6Hz),3.16(2H,brs),3.55(1H,dd,J=16.7,5.7Hz),3.63-3.80(4H,m),4.16-4.34(3H,m),4.36-4.50(2H,m),5.23(2H,s),5.37(1H,d,J=16.5Hz),5.43(1H,d,J=16.5Hz),5.51-5.62(1H,m),6.52(1H,s),7.10-7.25(5H,m),7.26-7.33(3H,m),7.39(2H,t,J=7.3Hz),7.65-7.72(3H,m),7.80(1H,d,J=11.0Hz),7.86(2H,d,J=7.3Hz),7.98(1H,t,J=5.5Hz),8.07(1H,d,J=7.8Hz),8.15(1H,t, J=5.5Hz),8.31(1H,t,J=5.5Hz),8.41(1H,d,J=8.7Hz).
MS(ESI)m/z：1147(M+H)+.
步驟2：(5S,14S)-14-胺基-5-苯甲基-1-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-1,4,7,10,13-五側氧基-3,6,9,12-四氮十六-16-酸三級丁酯
於上述步驟1所獲得的化合物(0.279g，0.242mmoL)之N,N-二甲基甲醯胺(2.00mL)溶液中添加哌啶(0.240mL，2.42mmoL)，並於室溫攪拌1小時。減壓餾除溶媒，將獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇=2：1(v/v)]純化，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(0.265g，定量的)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.88(3H,t,J=7.2Hz),1.39(9H,s),1.81-1.94(1H,m),2.07-2.28(2H,m),2.37(1H,dd,J=15.8,8.0Hz),2.43(3H,s),2.60(1H,dd,J=15.8,4.9Hz),2.75-2.82(1H,m),3.00(1H,dd,J=13.9,4.5Hz),3.16-3.25(2H,m),3.50-3.61(2H,m),3.65-3.81(5H,m),4.40-4.51(1H,m),5.27(2H,dd,J=24.1,19.0Hz),5.43(2H,dd,J=21.3,16.2Hz),5.56-5.65(1H,m),6.55(1H,s),7.15-7.28(5H,m),7.33(1H,s),7.83(1H,d,J=11.0Hz),8.04(1H,t,J=5.7Hz),8.09(1H,d,J=8.2Hz),8.26-8.39(2H,m),8.44(1H,d,J=8.2Hz).
步驟3：(5S,14S)-5-苯甲基-14-{[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]胺基}-1-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧 基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-1,4,7,10,13-五側氧基-3,6,9,12-四氮十六-16-酸三級丁酯
於上述步驟2所獲得的化合物(0.100g，0.108mmoL)之N,N-二甲基甲醯胺(2.00mL)溶液中添加6-順丁烯二醯亞胺己酸N-琥珀醯亞胺基酯(40.0mg，0.130mmoL)，並於室溫攪拌2日。減壓餾除溶媒，將獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇=9：1(v/v)]純化，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(80.0mg，66%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.88(3H,t,J=7.2Hz),1.13-1.23(2H,m),1.37(9H,s),1.42-1.54(4H,m),1.80-1.96(2H,m),2.08-2.25(4H,m),2.35-3.76(15H,m),2.43(3H,s),4.39-4.49(1H,m),4.55-4.67(1H,m),5.21-5.34(2H,m),5.43(2H,dd,J=21.1,16.4Hz),5.56-5.64(1H,m),6.55(1H,s),7.01(2H,d,J=0.8Hz),7.16-7.26(5H,m),7.33(1H,s),7.83(1H,d,J=11.3Hz),8.04-8.18(3H,m),8.30-8.37(1H,m),8.43(1H,d,J=8.6Hz).
MS(ESI)m/z：1118(M+H)+.
步驟4：N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]-L-α-天冬胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺醯胺
於冰冷下，於上述步驟3所獲得的化合物(70.0mg，62.6μmoL)中添加三氟乙酸(4.00mL.)，並於室溫攪拌1小時。減壓餾除溶媒，獲得呈淡黃色固體之標題化合物 (55.0mg，83%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.88(3H,t,J=7.4Hz),1.14-1.24(2H,m),1.41-1.53(4H,m),1.79-1.95(2H,m),2.08-2.28(4H,m),2.37-2.60(2H,m),2.42(3H,s),2.63-2.82(2H,m),2.99(1H,dd,J=14.1,5.1Hz),3.12-3.25(2H,m),3.29-3.44(1H,m),3.52-3.80(6H,m),4.38-4.48(1H,m),4.56(1H,dd,J=13.7,7.4Hz),5.27(2H,dd,J=24.3,18.8Hz),5.43(2H,dd,J=21.5,16.4Hz),5.57-5.62(1H,m),6.55(1H,s),7.01(2H,s),7.15-7.26(5H,m),7.33(1H,s),7.82(1H,d,J=11.0Hz),7.98(1H,brs),8.08(1H,d,J=6.7Hz),8.15(1H,d,J=7.8Hz),8.34(1H,brs),8.44(1H,d,J=8.6Hz),12.26(1H,brs).
MS(ESI)m/z：1062(M+H)+.
步驟5：抗體-藥物結合物(73)
抗體之還原：將以參考例1製作的曲妥珠單抗，共通操作B(使用1.37mLmg-1cm-1作為280nm吸光係數)及C-1，以PBS6.0/EDTA調製為10mg/mL。將本溶液(3.0mL)採取於15mL管中，添加30mM TCEP水溶液(0.0467mL；相對於抗體一分子為6.9當量)及1M磷酸氫二鉀水溶液(0.150mL)。確認本溶液之pH為7.4±0.1內後，藉由於37℃培育1小時，使抗體內鉸鏈部之雙硫鍵還原。
抗體與藥物連接物之結合：將上述溶液於22℃培育10分鐘後，添加含有30mM之上述步驟4所獲得的化合物的DMSO溶液(0.0933mL；相對於抗體一分子為13.8當量)，於22℃培育40分鐘，使藥物連接物與抗體結合。其次，添加100mM NAC水溶液(0.0560mL；相對於抗體一分 子為27.6當量)，再於22℃培育20分鐘，使藥物連接物之反應停止。
純化：將上述溶液，進行使用共通操作D-1(使用PBS6.0作為緩衝液)的純化，獲得含有目的之實施例化合物的溶液。
特性評價：使用共通操作B、E、F，獲得下述之特性值。
抗體濃度：3.24mg/mL，抗體產量：19.4mg(65%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：2.6。
實施例74抗體-藥物結合物(74)
步驟1：抗體-藥物結合物(74)
抗體之還原：將以參考例1製作的曲妥珠單抗，使用共通操作B(使用1.37mLmg-1cm-1作為280nm吸光係數)及C-1，以PBS6.0/EDTA調製為10mg/mL。將本溶液(8mL)置入50mL管中，於其中添加10mM TCEP水溶液 (0.124mL)及1M磷酸氫二鉀水溶液(0.400mL)，並調製TCEP相對於抗體之莫耳比4.6之反應液。確認本溶液之pH為7.4±0.1後，藉由於37℃培育1小時，使抗體內鉸鏈部之雙硫鍵還原。
抗體與藥物連接物之結合：對上述溶液，於室溫添加實施例73步驟4所獲得的化合物10mM DMSO溶液(0.249mL；相對於抗體一分子為9.2當量)，並使用試管混勻器於室溫攪拌40分鐘，使藥物連接物與抗體結合。其次，添加100mM NAC水溶液(0.050mL)，調製NAC相對於抗體之莫耳比18.4之反應液，再於室溫攪拌20分鐘，使藥物連接物之反應停止。
純化：將上述溶液，進行使用共通操作D-1(使用PBS6.0作為緩衝液)的純化，獲得6mL之含有目的之化合物的溶液，使用離心式超過濾過濾器(Amicon Ultra-4，分界的分子量：50k)而進行濃縮，獲得含有目的之化合物的溶液13mL，並獲得下述之特性值。
抗體濃度：3.69mg/mL，抗體產量：48mg(60%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：6.7。
實施例75抗體-藥物結合物(75)
步驟1：抗體-藥物結合物(75)
調節10mM TCEP水溶液之添加量使TCEP相對於抗體還原時之抗體之莫耳比成為2.3，調節10mM藥物連接物溶液之添加量使藥物連接物結合時之藥物連接物相對於抗體之莫耳比成為4.6，又，調節100mM NAC水溶液之添加量使反應停止時之NAC相對於抗體之莫耳比成為9.2，藉由與實施例74步驟1同樣之操作，獲得含有目的之化合物的溶液17mL，並獲得下述之特性值。
抗體濃度：3.66mg/mL，抗體產量：62mg(78%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.3。
實施例76抗體-藥物結合物(76)
步驟1：抗體-藥物結合物(76)
抗體之還原：將以參考例1製作的曲妥珠單抗，使用共通操作B(使用1.37mLmg-1cm-1作為280nm吸光係數)及C-1，以PBS6.0/EDTA調製為10mg/mL。將本溶液(5.0mL)採取至15mL管中，添加30mM TCEP水溶液(0.0777mL；相對於抗體一分子為6.9當量)及1M磷酸氫二鉀水溶液(0.250mL)。確認本溶液之pH為7.4±0.1內後，藉由於37℃培育1小時，使抗體內鉸鏈部之雙硫鍵還原。
抗體與藥物連接物之結合：將上述溶液於22℃培育10分鐘後，添加含有30mM之實施例73步驟4所獲得的化合物的DMSO溶液(0.1555mL；相對於抗體一分子為13.8當量)，並於22℃培育40分鐘，使藥物連接物與抗體結合。其次，添加100mM NAC水溶液(0.0933mL；相對於抗體一分子為27.6當量)，再於22℃培育20分鐘，使藥物連接物之反應停止。
純化：將上述溶液，進行使用共通操作D-1(使用ABS作為緩衝液)的純化，獲得含有目的之化合物的溶液。
特性評價：使用共通操作B、E、F，獲得下述之特性值。
抗體濃度：3.91mg/mL，抗體產量：27.4mg(55%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：5.4。
實施例77抗體-藥物結合物(77)
使用實施例73步驟4所獲得的化合物作為藥物連接物，調節10mM TCEP水溶液之添加量使TCEP相對於抗體還原時之抗體之莫耳比成為4.6，調節10mM藥物連接物溶液之添加量使藥物連接物結合時之藥物連接物相對於抗體之莫耳比成為9.2，又，調節100mM NAC水溶液之添加量使反應停止時之NAC相對於抗體之莫耳比成為18.4，藉由與實施例3步驟1同樣之操作，獲得6mL之含有目的之化合物的溶液，並獲得下述之特性值。
抗體濃度：1.50mg/mL，抗體產量：8.55mg(68%)， 抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：6.3。
實施例78抗體-藥物結合物(78)
步驟1：N6-(三級丁氧基羰基)-N2-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-L-離胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺醯胺
將游離體之甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基 -N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺醯胺(國際公開第97/46260號；0.300g，0.397mmoL)，使用Nε-(三級丁氧基羰基)-Nα-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-L-離胺酸替代N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-L-天冬胺酸4-三級丁酯，使與實施例73步驟1同樣地反應，獲得呈黃色固體之標題化合物(0.471g，98%)。
MS(ESI)m/z：1204(M+H)+.
步驟2：N6-(三級丁氧基羰基)-L-離胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺醯胺
使上述步驟1所獲得的化合物(0.417g，0.391mmoL)，與實施例73步驟2同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(0.272g，71%)。
MS(ESI)m/z：1062(M+H)+.
步驟3：N6-(三級丁氧基羰基)-N2-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]-L-離胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺醯胺
使上述步驟2所獲得的化合物(0.210g，0.213mmoL) ，與實施例73步驟3同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(63.0mg，21%)。
MS(ESI)m/z：1175(M+H)+.
步驟4：N2-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]-L-離胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺醯胺
於冰冷下，於上述步驟3所獲得的化合物(63.0mg，53.6μmoL)中添加三氟乙酸(2.00mL)，並於室溫攪拌1小時。減壓餾除溶媒，獲得呈黃色固體之標題化合物之三氟乙酸鹽(50.0mg，78%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.89(3H,t,J=7.2Hz),1.13-1.39(4H,m),1.43-1.58(7H,m),1.61-1.73(1H,m),1.80-1.94(2H,m),2.07-2.28(4H,m),2.43(3H,s),2.72-2.84(4H,m),3.00(1H,dd,J=13.7,3.9Hz),3.20(2H,brs),3.55-3.80(6H,m),4.20-4.30(1H,m),4.42-4.52(1H,m),5.27(2H,dd,J=23.7,19.8Hz),5.43(2H,dd,J=21.9,16.4Hz),5.55-5.65(1H,m),6.56(1H,s),7.02(2H,s),7.15-7.27(5H,m),7.34(1H,s),7.64(3H,brs),7.83(1H,d,J=10.6Hz),7.98-8.04(2H,m),8.09-8.20(2H,m),8.37(1H,t,J=5.5Hz),8.47(1H,d,J=8.6Hz).
MS(ESI)m/z：1075(M+H)+.
步驟5：抗體-藥物結合物(78)
抗體之還原：將以參考例1製作的曲妥珠單抗，使用共通操作B(使用1.37mLmg-1cm-1作為280nm吸光係數)及 C-1，以PBS6.0/EDTA調製為10mg/mL。將本溶液(1mL)置入1.5mL管，於其中添加10mM TCEP水溶液(0.024mL)及1M磷酸氫二鉀水溶液(0.050mL)，調製TCEP相對於抗體之莫耳比3.5之反應液。確認本溶液之pH為7.4±0.1後，藉由於37℃培育1小時，使抗體內鉸鏈部之雙硫鍵還原。
抗體與藥物連接物之結合：對上述溶液，於室溫添加上述步驟4所獲得的化合物10mM DMSO溶液(0.047mL)，調製上述步驟4所獲得的化合物相對於抗體之莫耳比6.9之反應液，使用試管混勻器於室溫攪拌40分鐘，使藥物連接物與抗體結合。其次，添加100mM NAC水溶液(0.0093mL)，調製NAC相對於抗體之莫耳比13.8之反應液，再於室溫攪拌20分鐘，使藥物連接物之反應停止。
純化：將上述溶液，進行使用共通操作D-1(使用PBS6.0作為緩衝液)的純化，獲得6mL之含有目的化合物的溶液。
特性評價：使用共通操作B、E、F，獲得下述之特性值。
抗體濃度：1.26mg/mL，抗體產量：7.6mg(76%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.1。
實施例79抗體-藥物結合物(79)
步驟1：抗體-藥物結合物(79)
調節10mM TCEP水溶液之添加量使TCEP之莫耳比相對於抗體還原時之抗體成為4.6，調節10mM藥物連接物溶液之添加量使藥物連接物結合時之藥物連接物相對於抗體的莫耳比成為9.2，又，調節100mM NAC水溶液之添加量使反應停止時之NAC相對於抗體之莫耳比成為18.4，藉由與實施例78步驟5同樣之操作，獲得6mL之含有目的之化合物的溶液，並獲得下述之特性值。
抗體濃度：1.19mg/mL，抗體產量：7.1mg(71%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.7。
實施例80中間體(80)
步驟1：(2-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3’,4’：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-2-側氧基乙基)胺甲酸三級丁酯
於N-(三級丁氧基羰基)-甘胺酸(0.395g，2.26mmoL)之二氯甲烷(3.00mL)溶液中，添加N-羥基琥珀醯亞胺(0.260g，2.26mmoL)、1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(0.433mg，2.26mmoL)，並於室溫攪拌1小時。將此溶液添加到包含依喜替康之甲烷磺酸鹽(1.00g，1.88mmoL)、三乙基胺(0.315mL，2.26mmoL)、及N,N-二甲基甲醯胺(3.00mL)的溶液，並於室溫攪拌16.5小時。反應溶液以氯仿稀釋，以10%檸檬酸溶液洗淨後，有機層以無水硫酸鈉乾燥。減壓餾除溶媒，將獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇=9：1(v/v)]純化，獲得呈黃色固體之標題化合物(1.16g，99%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.86(3H,t,J=7.2Hz),1.30(9H,s),1.81-1.89(2H,m),2.09-2.21(2H,m),2.38(3H,s),3.15-3.17(2H,m),3.55-3.56(2H,m),5.15(1H,d,J=18.8Hz),5.23(1H,d,J=19.2Hz),5.41(2H,s),5.55-5.56(1H,m),6.53(1H,s),6.95(1H,t,J=5.5Hz),7.28(1H,s),7.77(1H,d,J=11.0Hz),8.39(1H,d,J=8.6Hz).
MS(APCI)m/z：593(M+H)+.
步驟2：N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺醯胺
上述步驟1所獲得的化合物(0.513g，1.01mmoL)使與實施例69步驟4同樣地反應，獲得呈黃色固體之標題化合物(0.463g，93%)。
1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ：0.96(3H,t,J=7.0Hz),1.89-1.91(2H,m),2.14-2.16(1H,m),2.30(3H,s),2.40-2.42(1H,m),3.15-3.21(2H,m),3.79-3.86(2H,m),4.63-4.67(1H,m),5.00-5.05(1H,m),5.23(1H,d,J=16.0Hz),5.48(1H,d,J=16.0Hz),5.62-5.64(1H,m),7.40-7.45(2H,m).
MS(APCI)m/z：493(M+H)+.
實施例81抗體-藥物結合物(81)
步驟1：N-(三級丁氧基羰基)甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基甘胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1- 基]甘胺醯胺
將N-(三級丁氧基羰基)-甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基甘胺酸(0.292mg，0.669mmoL)溶解於二氯甲烷(5.00mL)，添加N-羥基琥珀醯亞胺(77.0mg，0.0.669mmoL)、及N,N-二環己基碳二亞胺(128mg，0.669mmoL)，並攪拌1小時20分鐘。將此反應溶液滴加到實施例80步驟2之化合物(0.275g，0.558mmoL)之N,N-二甲基甲醯胺溶液(5.00mL)，並於室溫攪拌1日。添加10%檸檬酸水溶液(20.0mL)，以氯仿(20mL)提取3次。減壓餾除獲得的有機層，將獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇=8：2(v/v)]純化，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(0.430g，85%)。
1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ：0.94(3H,t,J=7.2Hz),1.43(9H,s),1.83-1.85(2H,m),2.20-2.22(1H,m),2.29(3H,s),2.36-2.39(2H,m),2.50-2.53(1H,m),2.67(1H,s),3.08-3.11(1H,m),3.18-3.21(1H,m),3.63-3.67(4H,m),3.78-3.82(1H,m),3.99(2H,dd,J=23.5,16.8Hz),4.16(1H,s),4.58(1H,d,J=18.8Hz),5.15(1H,d,J=19.2Hz),5.25(1H,d,J=16.4Hz),5.52(1H,d,J=16.4Hz),5.59-5.61(1H,m),6.89(2H,d,J=6.7Hz),7.15-7.17(3H,m),7.28(1H,d,J=10.6Hz),7.41(1H,s).
MS(APCI)m/z：911(M+H)+.
步驟2：甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基甘胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺醯胺
將上述步驟1所獲得的化合物(0.227g，0.249mmoL)溶解於二氯甲烷(1.00mL)。添加三氟乙酸(3.00mL)並攪拌1小時。減壓餾除溶媒，將獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇：水=7：3：1(v/v/v)之分配有機層]純化，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(0.200g，99%)。
1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ：0.93(3H,t,J=7.4Hz),1.85(2H,q,J=7.3Hz),2.24-2.45(5H,m),2.32(3H,s),2.56(1H,dd,J=13.7,5.5Hz),3.09-3.25(2H,m),3.66-3.76(6H,m),4.18-4.24(1H,m),4.76(1H,d,J=19.2Hz),5.18(1H,d,J=18.8Hz),5.30(1H,t,J=18.4Hz),5.52(1H,d,J=16.0Hz),5.63(1H,t,J=5.9Hz),6.93(2H,d,J=6.6Hz),7.17(3H,q,J=7.3Hz),7.30(1H,d,J=10.9Hz),7.42(1H,s).
MS(APCI)m/z：811(M+H)+.
步驟3：N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基甘胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺醯胺
使上述步驟2所獲得的化合物(0.125g，0.154mmoL)與實施例73步驟3同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(0.0775g，50%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.86(3H,t,J=7.2Hz),1.18-1.19(2H,m),1.45-1.48(4H,m),1.83-1.85(2H,m),2.12-2.17(4H,m),2.39(3H,s),2.68(1H,dd,J=24.4,14.7Hz),2.83-2.87(1H,m),3.17-3.78(12H,m),4.42-4.45(1H,m),5.23(2H,s), 5.41(2H,s),5.58-5.60(1H,m),6.53(1H,s),6.99(2H,s),7.15-7.29(6H,m),7.76(1H,d,J=10.9Hz),7.97-8.00(1H,m),8.09-8.12(3H,m),8.25-8.28(1H,m),8.44(1H,d,J=8.2Hz).
MS(APCI)m/z：1004(M+H)+.
步驟4：抗體-藥物結合物(81)
抗體之還原：將以參考例1製作的曲妥珠單抗，使用使用共通操作C-1及B(使用1.37mLmg-1cm-1作為280nm吸光係數)，將介質置換為PBS6.0/EDTA，調製為10mg/mL之抗體濃度。將本溶液(0.5mL)置入1.5mL管，於其中添加10mM TCEP水溶液(0.0078mL；相對於抗體一分子為2.3當量)及1M磷酸氫二鉀水溶液(0.025mL)。確認本溶液之pH為7.4±0.1內後，藉由於37℃培育1小時，使抗體內鉸鏈部之雙硫鍵還原。
抗體與藥物連接物之結合：對上述溶液，於室溫添加DMSO(Sigma-Aldrich Co.LLC；0.039mL)及含10mM之上述步驟3所獲得的化合物的DMSO溶液(0.0155mL；相對於抗體一分子為4.6當量)，使用試管混勻器於室溫攪拌40分鐘，使藥物連接物與抗體結合。其次，添加100mM NAC水溶液(0.003mL)，再於室溫攪拌20分鐘，使藥物連接物之反應停止。
純化：將上述溶液進行使用共通操作D-1(使用ABS作為緩衝液)的純化，獲得3mL之含有目的之化合物的溶液。再使用共通操作A，將溶液濃縮後，使用共通操作B、E，而獲得下述之特性值。
抗體濃度：8.31mg/mL，抗體產量：3.3mg(83%)，抗 體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.2。
實施例82抗體-藥物結合物(82)
步驟1：抗體-藥物結合物(82)
抗體之還原：將以參考例1製作的曲妥珠單抗，使用共通操作C-1及B(使用1.37mLmg-1cm-1作為280nm吸光係數)，將介質置換為PBS6.0/EDTA，調製為10mg/mL之抗體濃度。將本溶液(0.5mL)置入1.5mL管，於其中添加10mM TCEP水溶液(0.0155mL；相對於抗體一分子為4.6當量)及1M磷酸氫二鉀水溶液(0.025mL)。確認本溶液之pH為7.4±0.1內後，藉由於37℃培育1小時，使抗體內鉸鏈部之雙硫鍵還原。
抗體與藥物連接物之結合：對上述溶液，於室溫添加DMSO(Sigma-Aldrich Co.LLC；0.029mL)及含10mM之實施例81步驟3所獲得的化合物的DMSO溶液(0.031mL；相對於抗體一分子為9.2當量)，並使用試管混勻器於室 溫攪拌40分鐘，使藥物連接物與抗體結合。其次，添加100mM NAC水溶液(0.006mL)，再於室溫攪拌20分鐘，使藥物連接物之反應停止。
純化：將上述溶液，進行使用共通操作D-1(使用ABS作為緩衝液)的純化，獲得3mL之含有目的之化合物的溶液。再使用共通操作A，將溶液濃縮後，使用共通操作B、E，而獲得下述之特性值。
抗體濃度：9.62mg/mL，抗體產量：3.8mg(76%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：6.5。
實施例83中間體(83)
步驟1：N-(三級丁氧基羰基)甘胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺醯胺
將依喜替康之甲烷磺酸鹽(0.800g，1.51mmoL)，使用N-(三級丁氧基羰基)-甘胺醯基甘胺酸(0.419g，1.81mmoL)替代4-(三級丁氧基羰基胺基)丁酸，使與實施例1步驟1同樣地反應，獲得呈黃色固體之標題化合物(0.965g，99%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.4Hz),1.23(9H,s),1.82-1.89(2H,m),2.11-2.19(2H,m),2.40(3H,s),3 .16-3.17(2H,m),3.52(2H,ddd,J=21.3,15.5,4.7Hz),3.77(2H,ddd,J=24.3,16.8,5.9Hz),5.23(2H,s),5.43(2H,s),5.56-5.60(1H,m),6.53(1H,s),7.04(1H,t,J=5.9Hz),7.31(1H,s),7.80(1H,d,J=11.0Hz),8.12(1H,t,J=5.5Hz),8.31(1H,d,J=8.6Hz).
MS(APCI)m/z：650(M+H)+.
步驟2：甘胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺醯胺
使上述步驟1所獲得的化合物(0.884g，1.36mmoL)，與實施例1步驟2同樣地反應，獲得呈黃色固體之標題化合物之三氟乙酸鹽(0.787g，定量的)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.2Hz),1.82-1.89(2H,m),2.11-2.18(2H,m),2.41(3H,s),3.17-3.18(2H,m),3.63(2H,s),3.88(2H,d,J=5.5Hz),5.19(1H,d,J=18.8Hz),5.25(1H,d,J=19.2Hz),5.42(2H,s),5.56-5.61(1H,m),6.56(1H,s),7.32(1H,s),7.81(1H,d,J=11.0Hz),8.01(3H,brs),8.65(1H,d,J=8.6Hz),8.72(1H,t,J=5.5Hz).
MS(APCI)m/z：550(M+H)+.
實施例84抗體-藥物結合物(84)
步驟1：N-(三級丁氧基羰基)甘胺醯基甘胺醯基苯基丙胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺醯胺
將實施例83步驟2所獲得的化合物之三氟乙酸鹽(0.400g，0.728mmoL)，使用N-(三級丁氧基羰基)-甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基甘胺酸(0.381mg，0.873mmoL)替代4-(三級丁氧基羰基胺基)丁酸，使與實施例1步驟1同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(0.545g，77%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.2Hz),1.37(9H,s),1.80-1.90(2H,m),2.09-2.11(1H,m),2.18-2.21(1H,m),2.40(3H,s),2.72-2.77(1H,m),3.01(1H,dd,J=13.7,4.3Hz),3.16-3.17(2H,m),3.52-3.83(10H,m),4.48-4.51(1H,m),5.21(1H,d,J=19.2Hz),5.26(1H,d,J=18.8Hz),5.43(2H,s),5.55-5.59(1H,m),6.53(1H,s),6.99(1H,t,J=5.9Hz),7.18-7.24(5H,m),7.31(1H,s),7.80(1H,d,J=11.0Hz),7.90(1H,t,J=5.3Hz),8.02(1H,t,J=5.5Hz),8.15-8.19(2H,m),8.30(1H,t,J=5.5Hz),8.43(1H,d,J=8.6Hz).
MS(APCI)m/z：968(M+H)+.
步驟2：甘胺醯基甘胺醯基苯基丙胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺醯胺三氟乙酸鹽
使上述步驟1所獲得的化合物(0.429g，0.443mmoL)，與實施例1步驟2同樣地反應，獲得呈黃色固體之標題化合物(0.385g，定量的)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.4Hz),1.82-1.89(2H,m),2.11-2.19(2H,m),2.40(3H,s),2.74(1H,dd,J=13.7,9.8Hz),3.03(1H,dd,J=13.7,4.3Hz),3.16-3.18(2H,m),3.57-3.58(2H,m),3.67-3.76(7H,m),3.82-3.90(1H,m),4.53-4.56(1H,m),5.23(2H,s),5.43(2H,s),5.55-5.59(1H,m),6.55(1H,s),7.17-7.19(1H,m),7.22-7.29(4H,m),7.31(1H,s),7.80(1H,d,J=10.9Hz),8.00(3H,brs),8.07(1H,t,J=5.7Hz),8.22( 1H,t,J=5.7Hz),8.36(2H,dd,J=10.9,7.0Hz),8.47-8.52(2H,m).
MS(APCI)m/z：868(M+H)+.
步驟3：N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]甘胺醯基甘胺醯基苯基丙胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺醯胺
使上述步驟2所獲得的化合物(0.278g，0.320mmoL)與實施例73步驟3同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(0.166g，49%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.2Hz),1.14-1.22(2H,m),1.44-1.49(4H,m),1.80-1.90(2H,m),2.06-2.13(3H,m),2.20(1H,d,J=14.1Hz),2.40(3H,s),2.77(1H,dd,J=13.3,8.7Hz),3.01(1H,dd,J=13.3,4.3Hz),3.17(2H,t,J=6.7Hz),3.35-3.38(2H,m),3.56-3.84(10H,m),4.48(1H,dd,J=13.1,9.2Hz),5.23(2H,s),5.43(2H,s),5.55-5.59(1H,m),6.53(1H,s),6.99(2H,s),7.20-7.24(5H,m),7.31(1H,s),7.80(1H,d,J=11.0Hz),8.00(2H,q,J=5.5Hz),8.06(1H,t,J=5.9Hz),8.13(1H,d,J=8.2Hz),8.18(1H,t,J=5.7Hz),8.28(1H,t,J=5.7Hz),8.43(1H,d,J=8.6Hz).
MS(APCI)m/z：1061(M+H)+.
步驟4：抗體-藥物結合物(84)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及上述步驟3所獲得的化合物，藉由與實施例2步驟6同樣之方法，獲得目 的之化合物。
抗體濃度：1.53mg/mL，抗體產量：9.2mg(74%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.5。
實施例85抗體-藥物結合物(85)
步驟1：抗體-藥物結合物(85)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及實施例84步驟3所獲得的化合物，藉由與實施例3步驟1同樣之方法，獲得目的之化合物。
抗體濃度：1.51mg/mL，抗體產量：9.1mg(73%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：6.8。
實施例86抗體-藥物結合物(86)
步驟1：N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺醯胺
使游離體之甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺醯胺(國際公開第97/46260號；0.150g，0.200moL)與實施例73步驟3同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(70.0mg，37%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.4Hz),1.15-1.21(2H,m),1.41-1.50(4H,m),1.80-1.90(2H,m),2.07-2.12(4H,m),2.17-2.23(1H,m),2.35-2.40(1H,m),2.41(3H,s),2.73-2.81(1H,m),2.98(1H,dd,J=13.7,4.6Hz),3.15-3.20(2H,m),3.53(1H,dd,J=16.6,5.7Hz),3.62-3.77(5H,m),4.39-4.4 5(1H,m),5.22(1H,d,J=18.9Hz),5.27(1H,d,J=18.9Hz),5.39(1H,d,J=16.0Hz),5.44(1H,d,J=16.0Hz),5.55-5.60(1H,m),6.53(1H,s),6.98(2H,s),7.13-7.24(5H,m),7.32(1H,s),7.81(1H,d,J=10.3Hz),7.95-8.00(1H,m),8.05-8.09(2H,m),8.28-8.31(1H,m),8.41(1H,d,J=8.6Hz).
MS(APCI)m/z：947(M+H)+.
步驟2：抗體-藥物結合物(86)
將以參考例1製作的曲妥珠單抗，使用共通操作B(使用1.37mLmg-1cm-1作為280nm吸光係數)及C-1，以PBS6.0/EDTA調製為10mg/mL。將本溶液(5.0mL)採取於15mL管中，添加10mM TCEP水溶液(0.155mL；相對於抗體一分子為4.6當量)及1M磷酸氫二鉀水溶液(0.250mL)。確認本溶液之pH為7.4±0.1內後，藉由於37℃培育1小時，使抗體內鉸鏈部之雙硫鍵還原。
抗體與藥物連接物之結合：將上述溶液於22℃培育10分鐘後，添加含有10mM之上述步驟1所獲得的化合物的DMSO溶液(0.311mL；相對於抗體一分子為9.2當量)，並於22℃培育40分鐘，使藥物連接物與抗體結合。其次，添加100mM NAC水溶液(0.0622mL；相對於抗體一分子為18.4當量)，再於22℃培育20分鐘，使藥物連接物之反應停止。
純化：將上述溶液進行使用共通操作D-1(使用PBS7.4作為緩衝液)的純化，獲得含有目的之實施例化合物的溶液。
特性評價：使用共通操作B、E、F，獲得下述之特 性值。
抗體濃度：3.04mg/mL，抗體產量：32.5mg(65%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.4。
實施例87抗體-藥物結合物(87)
步驟1：抗體-藥物結合物(87)
抗體之還原：將以參考例1製作的曲妥珠單抗，使用共通操作B(使用1.37mLmg-1cm-1作為280nm吸光係數)及C-1，以PBS6.0/EDTA調製為10mg/mL。將本溶液(9.0mL)採取於50mL管中，添加10mM TCEP水溶液(0.280mL；相對於抗體一分子為4.6當量)及1M磷酸氫二鉀水溶液(0.450mL)。確認本溶液之pH為7.4±0.1內後，藉由於37℃培育1小時，使抗體內鉸鏈部之雙硫鍵還原。
抗體與藥物連接物之結合：將上述溶液於22℃培育10分鐘後，添加含10mM之實施例31之步驟1所獲得的化合物的DMSO溶液(0.559mL；相對於抗體一分子為9.2當量)，並於22℃培育40分鐘，使藥物連接物與抗體結合。其次，添加100mM NAC水溶液(0.112mL；相對於抗體一 分子為18.4當量)，再於22℃培育20分鐘，使藥物連接物之反應停止。
純化：將上述溶液，進行使用共通操作D-1(使用PBS7.4作為緩衝液)的純化，獲得含有目的之實施例化合物的溶液。
特性評價：使用共通操作B、E、F，獲得下述之特性值。
抗體濃度：3.45mg/mL，抗體產量：49.7mg(55%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.4。
實施例88抗體-藥物結合物(88)
步驟1：抗體-藥物結合物(88)
使用實施例86步驟1所獲得的化合物作為藥物連接物，調節10mM TCEP水溶液之添加量使抗體還原時之TCEP相對於抗體之莫耳比成為4.6，調節10mM藥物連接物溶液之添加量使藥物連接物結合時之藥物連接物相對於抗體的莫耳比成為9.2，又，調節100mM NAC水溶液之添加量使反應停止時之NAC相對於抗體之莫耳比成為 18.4，藉由與實施例3步驟1同樣之操作，獲得6mL之含有目的之化合物的溶液，並獲得下述之特性值。
抗體濃度：1.50mg/mL，抗體產量：8.55mg(68%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：4.3。
實施例89抗體-藥物結合物(89)
步驟1：(9S,18S)-9-苯甲基-18-{[3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯基]胺基}-1-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-1,5,8,11,14,17-六側氧基-4,7,10,13,16-五氮二十-20-酸三級丁酯
將實施例71步驟2所獲得的化合物(76mg，0.076mmoL)，使用3-順丁烯二醯亞胺丙酸N-琥珀醯亞胺酯替代6-順丁烯二醯亞胺己酸N-琥珀醯亞胺基酯，使與 實施例58步驟2同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(73mg，83%)。
MS(ESI)m/z：1147(M+H)+.
步驟2：N-[3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯基]-L-α-天冬胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基甘胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]-β-丙胺醯胺
使上述步驟1所獲得的化合物(69mg，0.060mmoL)，與實施例1步驟2同樣地反應，獲得呈黃色固體之標題化合物之三氟乙酸鹽(32mg，44%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.6Hz),1.85(2H,m,J=14.1Hz),2.06-2.20(2H,m),2.40(3H,s),2.31-2.57(7H,m),2.61-2.71(1H,m),2.73-2.83(1H,m),2.98-3.06(1H,m),3.12-3.22(2H,m),3.29-3.40(2H,m),3.54-3.79(6H,m),3.80-4.41(3H,m),4.43-4.57(2H,m),5.19(1H,d,J=19.6Hz),5.26(1H,d,J=19.2Hz),5.42(2H,brs),5.52-5.60(1H,m),6.98(2H,s),7.14-7.28(5H,m),7.31(1H,s),7.77-7.84(2H,m),7.90-7.97(1H,m),8.07-8.14(2H,m),8.23-8.30(1H,m),8.35(1H,d,J=7.0Hz),8.53(1H,d,J=8.6Hz).
MS(ESI)m/z：1091(M+H)+.
步驟3：抗體-藥物結合物(89)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及上述步驟2所獲得的化合物，藉由與實施例2步驟6同樣之方法，獲得目的之化合物。
抗體濃度：1.67mg/mL，抗體產量：10.0mg(80%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.6。
實施例90抗體-藥物結合物(90)
步驟1：抗體-藥物結合物(90)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及實施例89步驟2所獲得的化合物，藉由與實施例3步驟1同樣之方法，獲得目的之化合物。
抗體濃度：1.64mg/mL，抗體產量：9.8mg(78%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：6.8。
實施例91抗體-藥物結合物(91)
步驟1：(9S,18S)-9-苯甲基-18-{[4-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丁醯基]胺基}-1-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-1,5,8,11,14,17-六側氧基-4,7,10,13,16-五氮二十-20-酸三級丁酯
將實施例71步驟2所獲得的化合物(75mg，0.075mmoL)，使用4-順丁烯二醯亞胺酪酸N-琥珀醯亞胺基酯替代6-順丁烯二醯亞胺己酸N-琥珀醯亞胺基酯，使與實施例58步驟2同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(72mg，82%)。
MS(ESI)m/z：1161(M+H)+.
步驟2：N-[4-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丁醯基]-L-α-天冬胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L- 苯基丙胺醯基甘胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]-β-丙胺醯胺
使上述步驟1所獲得的化合物(69mg，0.059mmoL)，與實施例1步驟2同樣地反應，獲得呈黃色固體之標題化合物之三氟乙酸鹽(24mg，34%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.86(3H,t,J=7.4Hz),1.63-1.74(2H,m),1.78-1.91(2H,m),2.05-2.21(4H,m),2.30-2.56(3H,m),2.40(3H,s),2.61-2.72(1H,m),2.73-2.83(1H,m),2.97-3.07(1H,m),3.12-3.23(2H,m),3.29-3.43(4H,m),3.53-3.79(6H,m),3.80-4.58(3H,m),4.43-4.57(2H,m),5.19(1H,d,J=19.2Hz),5.26(1H,d,J=18.8Hz),5.42(2H,s),5.51-5.61(1H,m),7.00(2H,s),7.12-7.29(5H,m),7.31(1H,s),7.76-7.84(2H,m),7.94(1H,t,J=5.9Hz),8.05-8.14(2H,m),8.19(1H,d,J=7.0Hz),8.26(1H,t,J=5.7Hz),8.52(1H,d,J=9.0Hz).
MS(ESI)m/z：1105(M+H)+.
步驟3：抗體-藥物結合物(91)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及上述步驟2所獲得的化合物，藉由與實施例2步驟6同樣之方法，獲得目的之化合物。
抗體濃度：1.51mg/mL，抗體產量：9.7mg(78%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.6。
實施例92抗體-藥物結合物(92)
步驟1：抗體-藥物結合物(92)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及實施例91步驟2所獲得的化合物，藉由與實施例3步驟1同樣之方法，獲得目的之化合物。
抗體濃度：1.66mg/mL，抗體產量：10.0mg(80%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：6.7。
實施例93抗體-藥物結合物(93)
步驟1：(9S,18S)-9-苯甲基-18-({3-[2-(2-{[3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯基]胺基}乙氧基)乙氧基]丙醯基}胺基)-1-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-1,5,8,11,14,17-六側氧基-4,7,10,13,16-五氮二十-20-酸三級丁酯
將實施例71步驟2所獲得的化合物(80mg，0.080mmoL)，使用3-(2-(2-(3-順丁烯二醯亞胺丙醯胺)乙 氧基)乙氧基)丙酸N-琥珀醯亞胺基酯替代6-順丁烯二醯亞胺己酸N-琥珀醯亞胺基酯，使與實施例58步驟2同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(87mg，83%)。
MS(ESI)m/z：1307(M+H)+.
步驟2：N-{3-[2-(2-{[3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯基]胺基}乙氧基)乙氧基]丙醯基}-L-α-天冬胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基甘胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]-β-丙胺醯胺
使上述步驟1所獲得的化合物(82mg，0.063mmoL)，與實施例1步驟2同樣地反應，獲得呈黃色固體之標題化合物之三氟乙酸鹽(30mg，35%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.86(3H,t,J=7.0Hz),1.85(2H,dt,J=14.6,7.4Hz),2.07-2.22(2H,m),2.40(3H,s),2.29-2.58(7H,m),2.63-2.72(1H,m),2.78(1H,dd,J=13.7,10.6Hz),3.02(1H,dd,J=13.9,4.1Hz),3.09-3.21(4H,m),3.30-3.39(4H,m),3.45(4H,s),3.54-3.78(10H,m),3.78-4.53(3H,m),4.43-4.52(1H,m),4.52-4.59(1H,m),5.19(1H,d,J=18.8Hz),5.26(1H,d,J=19.2Hz),5.43(2H,s),5.52-5.61(1H,m),7.00(2H,s),7.13-7.28(5H,m),7.31(1H,s),7.77-7.85(2H,m),7.94(1H,t,J=5.7Hz),8.02(1H,t,J=6.3Hz),8.05-8.14(2H,m),8.22-8.30(2H,m),8.53(1H,d,J=9.0Hz).
MS(ESI)m/z：1250(M+H)+.
步驟3：抗體-藥物結合物(93)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及上述步驟2所獲得的化合物，藉由與實施例2步驟6同樣之方法，獲得目的之化合物。
抗體濃度：1.70mg/mL，抗體產量：10.2mg(82%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.6。
實施例94抗體-藥物結合物(94)
步驟1：抗體-藥物結合物(94)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及實施例93步驟2所獲得的化合物，藉由與實施例3步驟1同樣之方法，獲得目的之化合物。
抗體濃度：1.65mg/mL，抗體產量：9.9mg(79%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：6.5。
實施例95抗體-藥物結合物(95)
步驟1：(21S)-21-{[(7S)-7-苯甲基-15-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-2,5,8,11,15-五側氧基-3,6,9,12-四氮十五-1-基]胺甲醯基}-1-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-3,19-二側氧基-7,10,13,16-四氧-4,20-二氮二十三-23-酸三級丁酯
將實施例71步驟2所獲得的化合物(80mg，0.080mmoL)，使用1-順丁烯二醯亞胺-3-側氧基 -7,10,13,16-四氧-4-氮十九-19-酸N-琥珀醯亞胺基酯替代6-順丁烯二醯亞胺己酸N-琥珀醯亞胺基酯，使與實施例58步驟2同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(91mg，81%)。
MS(ESI)m/z：1395(M+H)+.
步驟2：N-[19-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-17-側氧基-4,7,10,13-四氧-16-氮十九-1-醯基]-L-α-天冬胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基甘胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]-β-丙胺醯胺
使上述步驟1所獲得的化合物(86mg，0.062mmoL)，與實施例1之步驟2同樣地反應，獲得呈黃色固體之標題化合物之三氟乙酸鹽(30mg，34%)。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.86(3H,t,J=7.4Hz),1.85(2H,dt,J=14.5,7.2Hz),2.05-2.22(2H,m),2.28-2.59(7H,m),2.40(3H,s),2.64-2.72(1H,m),2.73-2.82(1H,m),3.02(1H,dd,J=13.5,4.5Hz),3.09-3.21(4H,m),3.35(4H,t,J=6.3Hz),3.48(11H,d,J=8.2Hz),3.53-3.78(11H,m),3.98-4.89(3H,m),4.43-4.51(1H,m),4.52-4.59(1H,m),5.19(1H,d,J=19.6Hz),5.26(1H,d,J=18.8Hz),5.42(2H,s),5.52-5.61(1H,m),7.00(2H,s),7.13-7.29(5H,m),7.31(1H,s),7.77-7.85(2H,m),7.94(1H,t,J=5.1Hz),8.02(1H,t,J=5.7Hz),8.05-8.14(2H,m),8.22-8.31(2H,m),8.53(1H,d,J=9.4Hz).
MS(ESI)m/z：1339(M+H)+.
步驟3：抗體-藥物結合物(95)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及上述步驟2所獲得的化合物，藉由與實施例2步驟6同樣之方法，獲得目的之化合物。
抗體濃度：1.68mg/mL，抗體產量：10.1mg(81%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.6。
實施例96抗體-藥物結合物(96)
步驟1：抗體-藥物結合物(96)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及實施例95步驟2所獲得的化合物，藉由與實施例3步驟1同樣之方法，獲得目的之化合物。
抗體濃度：1.67mg/mL，抗體產量：10.0mg(80%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：6.6。
實施例97抗體-藥物結合物(97)
步驟1：(3S,12S)-12-苯甲基-3-{[3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯基]胺基}-21-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4,7,10,13,16,21-六側氧基-5,8,11,14,17-五氮二十一-1-酸三級丁酯
將實施例58步驟1所獲得的化合物(90mg，0.089mmoL)，使用3-順丁烯二醯亞胺丙酸N-琥珀醯亞胺基酯替代6-順丁烯二醯亞胺己酸N-琥珀醯亞胺基酯，使與實施例58步驟2同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(67mg，65%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.4Hz),1.35(9H,s),1.66-1.77(2H,m),1.79-1.92(2H,m),2.08-2.22(4H,m),2.31-2.46(3H,m),2.40(3H,s),2.65(1H,dd,J=15.8,5.7 Hz),2.78(1H,dd,J=13.7,9.8Hz),2.97-3.04(1H,m),3.05-3.12(2H,m),3.14-3.21(2H,m),3.54-3.80(8H,m),4.42-4.50(1H,m),4.54-4.62(1H,m),5.16(1H,d,J=18.8Hz),5.25(1H,d,J=18.8Hz),5.42(2H,s),5.54-5.62(1H,m),6.53(1H,s),6.99(2H,s),7.14-7.29(5H,m),7.31(1H,s),7.71(1H,t,J=5.5Hz),7.80(1H,d,J=10.9Hz),7.97(1H,t,J=5.9Hz),8.10(1H,d,J=8.2Hz),8.15(1H,t,J=5.9Hz),8.26(1H,t,J=4.7Hz),8.34(1H,d,J=8.2Hz),8.46(1H,d,J=8.6Hz).
MS(ESI)m/z：1161(M+H)+.
步驟2：N-[3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯基]-L-α-天冬胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4-側氧基丁基)甘胺醯胺
使上述步驟1所獲得的化合物(67mg，0.058mmoL)，與實施例1步驟2同樣地反應，獲得呈黃色固體之標題化合物(50mg，78%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.2Hz),1.71(2H,dt,J=14.6,7.4Hz),1.86(2H,dt,J=15.0,7.2Hz),2.08-2.22(4H,m),2.31-2.55(3H,m),2.39(3H,brs),2.67(1H,dd,J=16.2,6.1Hz),2.78(1H,dd,J=13.9,9.2Hz),3.01(1H,dd,J=12.7,4.5Hz),3.04-3.12(2H,m),3.13-3.21(2H,m),3.30-3.51(2H,m),3.53-3.79(6H,m),4.42-4.50(1H,m),4.54(1H,dd,J=13.7,7.4Hz),5.16(1H,d,J=19.2Hz),5.25(1H,d,J=18.8Hz),5.42( 2H,s),5.53-5.61(1H,m),6.53(1H,brs),6.98(2H,s),7.12-7.27(5H,m),7.31(1H,s),7.71(1H,t,J=5.5Hz),7.80(1H,d,J=10.9Hz),7.95(1H,t,J=5.9Hz),8.05-8.15(2H,m),8.26(1H,t,J=6.1Hz),8.35(1H,d,J=7.8Hz),8.46(1H,d,J=8.6Hz),12.30(1H,brs).
MS(ESI)m/z：1105(M+H)+.
步驟3：抗體-藥物結合物(97)
抗體之還原：將以參考例1製作的曲妥珠單抗，使用共通操作B(使用1.37mLmg-1cm-1作為280nm吸光係數)及C-1，以PBS6.0/EDTA調製為10mg/mL。將本溶液(1mL)置入1.5mL管，於其中添加10mM TCEP水溶液(0.016mL)及1M磷酸氫二鉀水溶液(0.050mL)，調製TCEP相對於抗體之莫耳比2.3之反應液。確認本溶液之pH為7.4±0.1後，藉由於37℃培育1小時，使抗體內鉸鏈部之雙硫鍵還原。
抗體與藥物連接物之結合：對上述溶液，於室溫添加上述步驟2所獲得的化合物10mM DMSO溶液(0.031mL)，調製上述步驟2所獲得的化合物相對於抗體之莫耳比4.6之反應液，使用試管混勻器於室溫攪拌40分鐘，使藥物連接物與抗體結合。其次，添加100mM NAC水溶液(0.0062mL)，調製NAC相對於抗體之莫耳比9.2之反應液，再於室溫攪拌20分鐘，使藥物連接物之反應停止。
純化：將上述溶液，進行使用共通操作D-1(使用PBS6.0作為緩衝液)的純化，獲得6mL之含有目的化合物的溶液。
特性評價：使用共通操作B、E、F，獲得下述之特性值。
抗體濃度：1.37mg/mL，抗體產量：8.2mg(82%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.2。
實施例98抗體-藥物結合物(98)
步驟1：抗體-藥物結合物(98)
調節10mM TCEP水溶液之添加量使抗體還原時之TCEP相對於抗體之莫耳比成為4.6，調節10mM藥物連接物溶液之添加量使藥物連接物結合時之藥物連接物相對於抗體的莫耳比成為9.2，又，調節100mM NAC水溶液之添加量使反應停止時之NAC相對於抗體之莫耳比成為18.4，藉由與實施例97步驟3同樣之操作，獲得6mL之含有目的之化合物的溶液，並獲得下述之特性值。
抗體濃度：1.25mg/mL，抗體產量：7.5mg(75%)，抗 體每一分子之藥物平均結合數(n)：6.2。
實施例99抗體-藥物結合物(99)
步驟1：(3S,12S)-12-苯甲基-3-{[4-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丁醯基]胺基}-21-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4,7,10,13,16,21-六側氧基-5,8,11,14,17-五氮二十一-1- 酸三級丁酯
將實施例58步驟1所獲得的化合物(90mg，0.089mmoL)，使用4-順丁烯二醯亞胺酪酸N-琥珀醯亞胺基酯替代6-順丁烯二醯亞胺己酸N-琥珀醯亞胺基酯，使與實施例58步驟2同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(88mg，84%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.4Hz),1.34(9H,s),1.64-1.76(4H,m),1.86(2H,tt,J=14.8,7.1Hz),2.05-2.22(6H,m),2.35-2.55(1H,m),2.39(3H,s),2.67(1H,dd,J=16.0,5.9Hz),2.78(1H,dd,J=13.9,9.2Hz),3.01(1H,dd,J=13.9,4.5Hz),3.05-3.12(2H,m),3.14-3.21(2H,m),3.39(2H,t,J=7.0Hz),3.53-3.79(6H,m),4.42-4.50(1H,m),4.53-4.62(1H,m),5.16(1H,d,J=19.2Hz),5.25(1H,d,J=18.8Hz),5.42(2H,s),5.54-5.61(1H,m),6.53(1H,s),7.00(2H,s),7.13-7.29(5H,m),7.31(1H,s),7.68-7.73(1H,m),7.80(1H,d,J=10.9Hz),7.97(1H,t,J=5.9Hz),8.07-8.15(2H,m),8.18(1H,d,J=7.8Hz),8.25(1H,t,J=6.1Hz),8.46(1H,d,J=9.0Hz).
MS(ESI)m/z：1175(M+H)+.
步驟2：N-[4-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丁醯基]-L-α-天冬胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4-側氧基丁基)甘胺醯胺
使上述步驟1所獲得的化合物(88mg，0.075mmoL)， 與實施例1步驟2同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(72mg，86%)。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.4Hz),1.62-1.77(4H,m),1.86(2H,dt,J=15.4,7.5Hz),2.04-2.24(6H,m),2.39(3H,s),2.30-2.53(2H,m),2.75-2.87(1H,m),3.01(1H,dd,J=13.7,4.7Hz),3.04-3.12(2H,m),3.13-3.20(2H,m),3.38(2H,t,J=7.0Hz),3.52-3.77(6H,m),4.31-4.46(1H,m),4.46-4.56(1H,m),5.16(1H,d,J=18.8Hz),5.25(1H,d,J=19.2Hz),5.42(2H,s),5.53-5.61(1H,m),6.53(1H,s),7.00(2H,s),7.12-7.28(5H,m),7.31(1H,s),7.79(1H,d,J=11.3Hz),7.67-7.84(1H,m),7.95-8.22(4H,m),8.25-8.43(1H,m),8.42-8.61(1H,m),12.30(1H,brs).
MS(ESI)m/z：1119(M+H)+.
步驟3：抗體-藥物結合物(99)
使用上述步驟2所獲得的化合物作為藥物連接物，藉由與實施例2步驟6同樣之操作，獲得6mL之含有目的之化合物的溶液，並獲得下述之特性值。
抗體濃度：1.32mg/mL，抗體產量：7.9mg(79%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.3。
實施例100抗體-藥物結合物(100)
步驟1：抗體-藥物結合物(100)
調節10mM TCEP水溶液之添加量使抗體還原時之TCEP相對於抗體之莫耳比成為4.6，使用實施例99步驟2所獲得的化合物作為藥物連接物，調節10mM藥物連接物溶液之添加量使藥物連接物結合時之藥物連接物相對於抗體的莫耳比成為9.2，又，調節100mM NAC水溶液之添加量使反應停止時之NAC相對於抗體之莫耳比成為18.4，藉由與實施例99步驟3同樣之操作，獲得6mL之含有目的之化合物的溶液，並獲得下述之特性值。
抗體濃度：1.17mg/mL，抗體產量：7.0mg(70%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：6.2。
實施例101抗體-藥物結合物(101)
步驟1：(3S,12S)-12-苯甲基-3-({3-[2-(2-{[3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯基]胺基}乙氧基)乙氧基]丙醯基}胺基)-21-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4,7,10,13,16,21-六側氧基-5,8,11,14,17-五氮二十一-1-酸三級丁酯
將實施例58步驟1所獲得的化合物(107mg，0.106mmoL)，使用3-(2-(2-(3-順丁烯二醯亞胺丙醯胺)乙 氧基)乙氧基)丙酸N-琥珀醯亞胺基酯替代6-順丁烯二醯亞胺己酸N-琥珀醯亞胺基酯，使與實施例58步驟2同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(107mg，76%)。
MS(ESI)m/z：1321(M+H)+.
步驟2：N-{3-[2-(2-{[3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯基]胺基}乙氧基)乙氧基]丙醯基}-L-α-天冬胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4-側氧基丁基)甘胺醯胺
使上述步驟1所獲得的化合物(107mg，0.081mmoL)，與實施例1步驟2同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(91mg，89%)。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.2Hz),1.71(2H,t,J=7.0Hz),1.79-1.93(2H,m),2.07-2.22(4H,m),2.32(2H,t,J=7.2Hz),2.35-2.41(2H,m),2.39(3H,s),2.75-2.86(1H,m),3.01(1H,dd,J=13.9,4.5Hz),3.05-3.21(6H,m),3.29-3.37(6H,m),3.45(4H,s),3.52-3.78(8H,m),4.38-4.47(1H,m),4.48-4.60(1H,m),5.16(1H,d,J=18.8Hz),5.25(1H,d,J=19.2Hz),5.42(2H,s),5.53-5.61(1H,m),6.53(1H,s),7.00(2H,s),7.12-7.27(5H,m),7.31(1H,s),7.73(1H,t,J=5.7Hz),7.79(1H,d,J=11.3Hz),8.03(2H,t,J=5.7Hz),8.07-8.26(3H,m),8.26-8.42(1H,m),8.45-8.55(1H,m),12.32(1H,brs).
MS(ESI)m/z：1264(M+H)+.
步驟3：抗體-藥物結合物(101)
使用上述步驟2之化合物作為藥物連接物，藉由與實施例2步驟6同樣之操作，獲得6mL之含有目的之實施例化合物的溶液，並獲得下述之特性值。
抗體濃度：1.40mg/mL，抗體產量：8.4mg(84%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.2。
實施例102抗體-藥物結合物(102)
步驟1：抗體-藥物結合物(102)
使用實施例101步驟2所獲得的化合物作為藥物連接物，調節10mM TCEP水溶液之添加量使抗體還原時之TCEP相對於抗體之莫耳比成為4.6，調節10mM藥物連接物溶液之添加量使藥物連接物結合時之藥物連接物相對於抗體的莫耳比成為9.2，又，調節100mM NAC水溶液之添加量使反應停止時之NAC相對於抗體之莫耳比成為18.4，藉由與實施例101步驟3同樣之操作，獲得6mL之含有目的之化合物的溶液，並獲得下述之特性值。
抗體濃度：1.22mg/mL，抗體產量：7.3mg(73%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：5.9。
實施例103抗體-藥物結合物(103)
步驟1：(21S)-21-{[(7S)-7-苯甲基-16-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-2,5,8,11,16-五側氧基-3,6,9,12-四氮十六-1-基]胺甲醯基}-1-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-3,19-二側氧基 -7,10,13,16-四氧-4,20-二氮二十三-23-酸三級丁酯
將實施例58步驟1所獲得的化合物(107mg，0.106mmoL)，使用1-順丁烯二醯亞胺-3-側氧基-7、10、13、16-四氧-4-氮十九-19-酸N-琥珀醯亞胺基酯替代6-順丁烯二醯亞胺己酸N-琥珀醯亞胺基酯，使與實施例58步驟2同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(157mg，定量的)。
步驟2：N-[19-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-17-側氧基-4,7,10,13-四氧-16-氮十九-1-醯基]-L-α-天冬胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4-側氧基丁基)甘胺醯胺
將上述步驟1所獲得的化合物(156g，0.111mmoL)，與實施例1步驟2同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(83mg，55%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.4Hz),1.72(2H,t,J=7.4Hz),1.79-1.93(2H,m),2.05-2.23(4H,m),2.32(2H,t,J=7.4Hz),2.39(3H,s),2.35-2.42(2H,m),2.76-2.87(1H,m),3.01(1H,dd,J=13.5,4.5Hz),3.05-3.21(6H,m),3.29-3.38(4H,m),3.48(12H,d,J=8.2Hz),3.54-3.79(10H,m),4.38-4.47(1H,m),4.48-4.59(1H,m),5.16(1H,d,J=18.8Hz),5.25(1H,d,J=19.2Hz),5.42(2H,s),5.53-5.62(1H,m),6.53(1H,s),7.00(2H,s),7.13-7.29(5H,m),7.31(1H,s),7.70-7.77(1H,m),7.7 9(1H,d,J=10.9Hz),8.03(2H,t,J=5.5Hz),8.07-8.28(3H,m),8.29-8.45(1H,m),8.46-8.57(1H,m),12.33(1H,brs).
MS(ESI)m/z：1353(M+H)+.
步驟3：抗體-藥物結合物(103)
使用上述步驟2之化合物作為藥物連接物，藉由與實施例2步驟6同樣之操作，獲得6mL之含有目的之化合物的溶液，並獲得下述之特性值。
抗體濃度：1.27mg/mL，抗體產量：7.6mg(76%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.3。
實施例104抗體-藥物結合物(104)
步驟1：抗體-藥物結合物(104)
使用實施例103步驟2所獲得的化合物作為藥物連接物，調節10mM TCEP水溶液之添加量使抗體還原時之TCEP相對於抗體之莫耳比成為4.6，調節10mM藥物連接物溶液之添加量使藥物連接物結合時之藥物連接物相對於抗體的莫耳比成為9.2，又，調節100mM NAC水溶液之添加量使反應停止時之NAC相對於抗體之莫耳比成為 18.4，藉由與實施例103步驟3同樣之操作，獲得6mL之含有目的之化合物的溶液，並獲得下述之特性值。
抗體濃度：1.21mg/mL，抗體產量：7.3mg(73%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：6.0。
實施例105抗體-藥物結合物(105)
步驟1：(10S,19S)-10-苯甲基-1-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-19-{[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]胺基}-1，6,9,12,15,18-六側氧基-5,8,11,14,17-五氮二十二-22-酸三級丁酯
將實施例2步驟2所獲得的化合物(150mg，0.179mmoL)，使用(2S)-5-三級丁氧基-2-{[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]胺基}-5-側氧基戊酸替代(2S)-4-三級丁氧基-2-{[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]胺基}-4-側氧基丁酸，使與實施例58步驟1同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(176mg，79%)。
MS(ESI)m/z：1247(M+H)+.
步驟2：(10S,19S)-10-苯甲基-19-{[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]胺基}-1-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-1,6,9,12,15,18-六側氧基-5,8,11,14,17-五氮二十二-22-酸三級丁酯
使上述步驟1所獲得的化合物(165mg，0.132mmoL)，與實施例58步驟2同樣地反應，獲得呈白色固體之標題化合物(125mg，78%)。
MS(ESI)m/z：1218(M+H)+.
步驟3：N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]-L-α-麩胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4-側氧基丁基)甘胺醯胺
使上述步驟2所獲得的化合物(125mg，0.103mmoL)，與實施例1步驟2同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標 題化合物(102mg，85%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.2Hz),1.16(2H,m,J=14.5Hz),1.46(4H,quin,J=7.3Hz),1.72(3H,dt,J=14.2,7.2Hz),1.78-1.94(3H,m),2.01-2.27(8H,m),2.39(3H,s),2.79(1H,dd,J=13.7,9.4Hz),3.02(1H,dd,J=13.3,4.7Hz),3.05-3.12(2H,m),3.17(2H,d,J=5.1Hz),3.28-3.40(2H,m),3.50-3.83(6H,m),4.18-4.27(1H,m),4.40-4.50(1H,m),5.16(1H,d,J=19.6Hz),5.25(1H,d,J=19.2Hz),5.42(2H,s),5.51-5.62(1H,m),6.53(1H,s),6.99(2H,s),7.12-7.29(5H,m),7.31(1H,s),7.71(1H,t,J=5.5Hz),7.79(1H,d,J=10.9Hz),8.01(1H,d,J=7.4Hz),8.05-8.21(3H,m),8.32(1H,s),8.47(1H,d,J=8.6Hz),12.08(1H,brs).
MS(ESI)m/z：1161(M+H)+.
步驟4：抗體-藥物結合物(105)
抗體之還原：將以參考例1製作的曲妥珠單抗，使用共通操作C-1及B(使用1.37mLmg-1cm-1作為280nm吸光係數)，將介質置換為PBS6.0/EDTA，調製為10mg/mL之抗體濃度。將本溶液(1.25mL)置入1.5mL聚丙烯製管，於其中添加10mM TCEP水溶液(0.019mL；相對於抗體一分子為2.3當量)及1M磷酸氫二鉀水溶液(0.0625mL)。確認本溶液之pH為7.4±0.1內後，藉由於37℃培育1小時，使抗體內鉸鏈部之雙硫鍵還原。
抗體與藥物連接物之結合：對上述溶液，於室溫添加DMSO(Sigma-Aldrich Co.LLC；0.109mL)及含10mM之上述步驟3所獲得的化合物的DMSO溶液(0.039mL；相對 於抗體一分子為4.6當量)，並使用試管混勻器於室溫攪拌40分鐘，使藥物連接物與抗體結合。其次，添加100mM NAC水溶液(0.008mL)，再於室溫攪拌20分鐘，使藥物連接物之反應停止。
純化：將上述溶液，進行使用共通操作D-1(使用ABS作為緩衝液)的純化，獲得6mL之含有目的化合物的溶液。
特性評價：使用共通操作B、E，而獲得下述之特性值。
抗體濃度：1.71mg/mL，抗體產量：10.3mg(82%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：2.7。
實施例106抗體-藥物結合物(106)
步驟1：抗體-藥物結合物(106)
抗體之還原：將以參考例1製作的曲妥珠單抗，使用共通操作C-1及B(使用1.37mLmg-1cm-1作為280nm吸光係數)，將介質置換為PBS6.0/EDTA，調製為10mg/mL之抗 體濃度。將本溶液(1.25mL)置入1.5mL聚丙烯製管，於其中添加10mM TCEP水溶液(0.039mL；相對於抗體一分子為4.6當量)及1M磷酸氫二鉀水溶液(0.0625mL)。確認本溶液之pH為7.4±0.1內後，藉由於37℃培育1小時，使抗體內鉸鏈部之雙硫鍵還原。
抗體與藥物連接物之結合：對上述溶液，於室溫添加二甲基亞碸(0.072mL)與含10mM之實施例105步驟3所獲得的化合物的DMSO溶液(0.078mL；相對於抗體一分子為9.2當量)，使用試管混勻器於室溫攪拌40分鐘，使藥物連接物與抗體結合。其次，添加100mM NAC水溶液(0.0155mL)，再於室溫攪拌20分鐘，使藥物連接物之反應停止。
純化：將上述溶液進行使用共通操作D-1(使用ABS作為緩衝液)的純化，獲得6mL之含有目的化合物的溶液。
特性評價：使用共通操作B、E，而獲得下述之特性值。
抗體濃度：1.46mg/mL，抗體產量：8.8mg(70%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：5.1。
實施例107抗體-藥物結合物(107)
步驟1：(3S,12S)-3-胺基-12-苯甲基-21-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4,7,10,13,16,21-六側氧基-5,8,11,14,17-五氮二十一-1-酸三級丁酯
於實施例58步驟1所獲得的化合物(300mg，0.243mmoL)之N,N-二甲基甲醯胺(2.5mL)溶液中，添加哌 啶(0.245mL，2.43mmoL)，並於室溫攪拌1.5小時。減壓餾除溶媒，將獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇：水=7：3：1(v/v/v)之分配有機層]純化，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(210mg，85%)。
1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δ：0.90(3H,t,J=6.8Hz),1.40(9H,s),1.70-1.77(2H,m),1.83-1.92(2H,m),2.12-2.23(4H,m),2.32-2.39(1H,m),2.42(3H,s),2.55-2.62(1H,m),2.78-2.85(1H,m),3.00-3.07(1H,m),3.07-3.13(2H,m),3.17-3.21(2H,m),3.50-3.80(7H,m),4.45-4.51(1H,m),5.19(1H,d,J=17.3Hz),5.28(1H,d,J=17.3Hz),5.43-5.47(2H,m),5.57-5.63(1H,m),6.56(1H,s),7.18-7.28(5H,m),7.34(1H,s),7.70-7.74(1H,m),7.83(1H,d,J=10.7Hz),8.05-8.15(3H,m),8.28-8.30(3H,m),8.49(1H,d,J=9.3Hz).
步驟2：(3S,6S,15S)-15-苯甲基-6-(2-三級丁氧基-2-側氧基乙基)-24-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-3-{[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]胺基}-4,7,10,13,16,19,24-七側氧基-5,8,11,14,17,20-六氮二十四-1-酸三級丁酯
使上述步驟1所獲得的化合物(105mg，0.104mmoL)與實施例58步驟1同樣地反應，獲得標題化合物(105mg，72%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.86(3H,t,J=7.4Hz),1.33(9H,s),1.36(9H,s),1.65-1.76(2H,m),1.78-1.92(2H,m),2 .06-2.22(4H,m),2.39(3H,s),2.41-2.53(2H,m),2.64-2.74(2H,m),2.78(1H,dd,J=13.3,9.8Hz),3.01(1H,dd,J=13.7,4.7Hz),3.08(2H,dt,J=12.2,6.2Hz),3.13-3.21(2H,m),3.54-3.80(6H,m),4.16-4.33(3H,m),4.34-4.43(1H,m),4.43-4.51(1H,m),4.54-4.63(1H,m),5.15(1H,d,J=19.2Hz),5.23(1H,d,J=18.8Hz),5.42(2H,br.s.),5.52-5.60(1H,m),6.54(1H,s),7.13-7.19(1H,m),7.20-7.27(4H,m),7.27-7.34(3H,m),7.40(2H,t,J=7.6Hz),7.65-7.74(4H,m),7.80(1H,d,J=10.9Hz),7.87(2H,d,J=7.8Hz),7.98(1H,t,J=5.9Hz),8.05-8.09(1H,m),8.12(1H,d,J=7.8Hz),8.23-8.31(2H,m),8.46(1H,d,J=9.0Hz).
步驟3：(3S,6S,15S)-15-苯甲基-6-(2-三級丁氧基-2-側氧基乙基)-3-{[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]胺基}-24-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4,7,10,13,16,19,24-七側氧基-5,8,11,14,17,20-六氮二十四-1-酸三級丁酯
使上述步驟2所獲得的化合物(99mg，0.071mmoL)，與實施例58步驟2同樣地反應，獲得呈淡茶白色固體之標題化合物(83mg，86%)。
MS(ESI)m/z：1375(M+H)+.
步驟4：N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]-L-α-天冬胺醯基-L-α-天冬胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六 氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4-側氧基丁基)甘胺醯胺
使上述步驟3所獲得的化合物(80mg，0.058mmoL)，與實施例1步驟2同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(30mg，41%)。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.2Hz),1.10-1.22(2H,m),1.45(4H,t,J=7.0Hz),1.71(2H,m,J=7.4Hz),1.78-1.93(2H,m),2.06(2H,t,J=7.4Hz),2.10-2.23(4H,m),2.31-2.57(2H,m),2.40(3H,s),2.61-2.85(3H,m),3.01(1H,dd,J=13.9,3.7Hz),3.05-3.12(2H,m),3.17(2H,brs),3.28-3.41(2H,m),3.46-3.85(6H,m),4.41-4.50(1H,m),4.50-4.60(2H,m),5.16(1H,d,J=19.6Hz),5.25(1H,d,J=18.8Hz),5.42(2H,s),5.52-5.62(1H,m),6.54(1H,s),7.00(2H,s),7.12-7.28(5H,m),7.31(1H,s),7.72(1H,brs),7.80(1H,d,J=11.3Hz),7.94(1H,brs),8.00(1H,brs),8.10(1H,d,J=7.8Hz),8.15(1H,d,J=7.0Hz),8.19(1H,d,J=7.4Hz),8.28(1H,brs),8.46(1H,d,J=8.2Hz),12.34(2H,brs).
MS(ESI)m/z：1262(M+H)+.
步驟5：抗體-藥物結合物(107)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及上述步驟4所獲得的化合物，藉由與實施例2步驟6同樣之方法，獲得目的之化合物。
抗體濃度：1.74mg/mL，抗體產量：10.4mg(83%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：4.3。
實施例108抗體-藥物結合物(108)
步驟1：抗體-藥物結合物(108)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及實施例107步驟4所獲得的化合物，藉由與實施例3步驟1同樣之方法，獲得目的之化合物。
抗體濃度：2.0mg/mL，抗體產量：12mg(96%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：8.1。
實施例109抗體-藥物結合物(109)
步驟1：(3S,12S)-12-苯甲基-3-{[(2S)-6-[(三級丁氧基羰基)胺基]-2-{[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]胺基}己醯基]胺基}-21-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de] 哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4,7,10,13,16,21-六側氧基-5,8,11,14,17-五氮二十一-1-酸三級丁酯
將實施例105步驟1所獲得的化合物(105mg，0.104mmoL)，使用N6-(三級丁氧基羰基)-N2-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-L-離胺酸替代(2S)-4-三級丁氧基-2-{[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]胺基}-4-側氧基丁酸，使與實施例58步驟1同樣地反應，獲得標題化合物(105mg，69%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.86(3H,t,J=7.4Hz),1.30-1.34(9H,m),1.34-1.40(9H,m),1.44-1.54(2H,m),1.55-1.65(2H,m),1.66-1.77(2H,m),1.79-1.91(2H,m),2.06-2.22(4H,m),2.39(3H,s),2.43-2.55(2H,m),2.65-2.91(5H,m),3.01(1H,dd,J=14.1,4.7Hz),3.05-3.12(2H,m),3.13-3.21(2H,m),3.54-3.81(6H,m),3.89-4.01(1H,m),4.15-4.30(3H,m),4.42-4.51(1H,m),4.53-4.62(1H,m),5.17(1H,d,J=19.9Hz),5.23(1H,d,J-19.2Hz),5.42(2H,s),5.52-5.60(1H,m),6.54(1H,s),6.73-6.81(1H,m),7.12-7.27(5H,m),7.27-7.35(3H,m),7.36-7.44(2H,m),7.54(1H,d,J=7.8Hz),7.66-7.75(3H,m),7.80(1H,d,J=11.3Hz),7.87(2H,d,J=7.8Hz),7.95-8.01(1H,m),8.01-8.06(1H,m),8.11(1H,d,J=7.0Hz),8.21-8.31(2H,m),8.46(1H,d,J=9.0Hz).
步驟2：(3S,12S)-12-苯甲基-3-{[(2S)-6-[(三級丁氧基羰基)胺基]-2-{[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]胺基}己醯基]胺基}-21-{[(1S,9S)-9- 乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4,7,10,13,16,21-六側氧基-5,8,11,14,17-五氮二十一-1-酸三級丁酯
使上述步驟1所獲得的化合物(101mg，0.069mmoL)，與實施例58步驟2同樣地反應，獲得呈淡茶白色固體之標題化合物(87mg，88%)。
MS(ESI)m/z：1432(M+H)+.
步驟3：N2-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]-L-離胺醯基-L-α-天冬胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4-側氧基丁基)甘胺醯胺
使上述步驟2所獲得的化合物(84mg，0.059mmoL)，與實施例1步驟2同樣地反應，獲得呈淡茶白色固體之標題化合物(28mg，37%)。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.0Hz),1.17(2H,dt,J=13.7,7.0Hz),1.21-1.34(2H,m),1.37-1.56(6H,m),1.57-1.77(3H,m),1.78-1.92(2H,m),1.99-2.25(6H,m),2.31-2.58(3H,m),2.40(3H,s),2.64-2.86(3H,m),3.02(1H,dd,J=13.3,4.3Hz),3.05-3.13(2H,m),3.13-3.22(2H,m),3.26-3.39(2H,m),3.39-3.81(6H,m),4.14-4.27(1H,m),4.40-4.58(2H,m),5.16(1H,d,J=19.6Hz),5.25(1H,d,J=19.9Hz),5.43(2H,s),5.51-5.63(1H,m),6.55(1H,s),7.01(2H,s),7.23(5H,s),7.31( 1H,s),7.65(2H,brs),7.76(1H,brs),7.80(1H,d,J=10.6Hz),7.94-8.09(3H,m),8.13(1H,d,J=7.8Hz),8.23(1H,d,J=7.4Hz),8.31-8.39(1H,m),8.49(1H,d,J=7.8Hz),12.18-12.56(1H,m).
MS(ESI)m/z：1276(M+H)+.
步驟4：抗體-藥物結合物(109)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及上述步驟3所獲得的化合物，藉由與實施例2步驟6同樣之方法，獲得目的之化合物。
抗體濃度：1.76mg/mL，抗體產量：10.6mg(85%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.6。
實施例110抗體-藥物結合物(110)
步驟1：抗體-藥物結合物(110)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及實施例109步驟3所獲得的化合物，藉由與實施例3步驟1同樣之方法，獲得目的之實施例化合物。
抗體濃度：1.81mg/mL，抗體產量：10.8mg(86%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：7.2。
實施例111抗體-藥物結合物(111)
步驟1：(3S,12S)-3-胺基-12-苯甲基-21-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-20,20-二甲基-4,7,10,13,16,21-六側氧基-5,8,11,14,17-五氮二十一-1-酸三級丁酯
對(2S)-4-三級丁氧基-2-{[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]胺基}-4-側氧基丁酸(114mg，0.277mmoL)之二氯甲烷 (2.5mL)混合液，添加N-羥基琥珀醯亞胺(31.9mg，0.277mmoL)、及1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(66.3mg，0.346mmoL)，並於室溫攪拌1小時。將此反應溶液，滴加至實施例25步驟2所獲得的化合物(200mg，0.231mmoL)之N,N-二甲基甲醯胺(2.0mL)溶液，添加三乙基胺(0.0643mL，0.461mmoL)，並於室溫攪拌23小時。於反應混合物中添加10%檸檬酸水溶液，並以氯仿萃取。獲得的有機相以水-飽和食鹽水(1：1)、飽和食鹽水的順序洗淨，以無水硫酸鈉乾燥。過濾後，減壓下將溶媒餾除，獲得的殘留物以矽膠管柱層析[二氯甲烷~二氯甲烷/甲醇=9/1(v/v)]純化，將獲得的化合物溶解於N,N-二甲基甲醯胺(2.00mL)，添加哌啶(0.140mL，1.42mmoL)並攪拌1小時。將減壓下餾除溶媒而獲得的殘留物，以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇：水=7：3：1(v/v/v)之分配有機層]純化，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(104mg，49%)。
1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.6Hz),1.20(3H,s),1.21(3H,s),1.37(9H,s),1.62-1.73(2H,m),1.81-1.91(2H,m),2.10-2.18(2H,m),2.34(1H,dd,J=15.6,7.8Hz),2.39(3H,s),2.57(1H,dd,J=16.1,4.9Hz),2.80(1H,dd,J=13.9,9.5Hz),2.99-3.07(2H,m),3.08-3.23(3H,m),3.27-3.37(2H,m),3.50(1H,dd,J=7.3,4.9Hz),3.56-3.78(6H,m),4.44-4.51(1H,m),5.12(1H,d,J=18.6Hz),5.18(1H,d,J=18.6Hz),5.42(2H,s),5.56-5.62(1H,m),6.52(1H,s),7.15-7.20(1H,m),7.21-7.27(4H,m),7.31(1H,s),7.70(1H,t,J=5.6Hz),7.79(1H,d,J=10.7Hz ),8.05(1H,t,J=5.6Hz),8.08(1H,d,J=7.8Hz),8.14(1H,d,J=8.8Hz),8.23(1H,t,J=6.1Hz),8.28(1H,brs).
MS(ESI)m/z：1038(M+H)+.
步驟2：(3S,12S)-12-苯甲基-3-{[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]胺基}-21-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-20,20-二甲基-4,7,10,13,16,21-六側氧基-5,8,11,14,17-五氮二十一-1-酸三級丁酯
將上述步驟1所獲得的化合物(104mg，0.100mmoL)溶解於N,N-二甲基甲醯胺(1.00mL)，添加6-順丁烯二醯亞胺己酸N-琥珀醯亞胺基酯(61.8mg，0.200mmoL)，並於室溫攪拌17小時。將減壓下餾除溶媒而獲得的殘留物，以矽膠管柱層析[二氯甲烷~二氯甲烷/甲醇=17/3(v/v)]純化，獲得呈淡茶白色固體之標題化合物(114mg，92%)。
MS(ESI)m/z：1232(M+H)+.
步驟3：N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]-L-α-天冬胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-3,3-二甲基-4-側氧基丁基)甘胺醯胺
使上述步驟2所獲得的化合物(111mg，0.0901mmoL)，與與實施例1步驟2同樣地反應，獲得呈黃色固體之標 題化合物(83.0mg，78%)。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.2Hz),1.12-1.25(2H,m),1.20(3H,s),1.21(3H,s),1.39-1.52(4H,m),1.63-1.72(2H,m),1.86(2H,m,J=7.4Hz),2.08(2H,t,J=7.4Hz),2.11-2.19(2H,m),2.39(3H,s),2.42-2.54(1H,m),2.68(1H,dd,J=16.0,5.5Hz),2.79(1H,dd,J=13.5,9.6Hz),2.96-3.08(2H,m),3.08-3.25(3H,m),3.35(2H,t,J=7.0Hz),3.53-3.78(6H,m),4.43-4.52(1H,m),4.52-4.60(1H,m),5.11(1H,d,J=19.2Hz),5.18(1H,d,J=18.8Hz),5.42(2H,s),5.54-5.64(1H,m),6.54(1H,brs),6.99(2H,s),7.14-7.29(5H,m),7.31(1H,s),7.72(1H,t,J=5.3Hz),7.79(1H,d,J=10.9Hz),7.98(1H,t,J=5.7Hz),8.05-8.12(2H,m),8.15(2H,d,J=7.0Hz),8.25(1H,t,J=5.5Hz),12.29(1H,brs).
MS(ESI)m/z：1175(M+H)+.
步驟4：抗體-藥物結合物(111)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及上述步驟3所獲得的化合物，藉由與實施例2步驟6同樣之方法，獲得目的之化合物。
抗體濃度：1.69mg/mL，抗體產量：10.1mg(81%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.5。
實施例112抗體-藥物結合物(112)
步驟1：抗體-藥物結合物(112)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及實施例111步驟3所獲得的化合物，藉由與實施例3步驟1同樣之方法，獲得目的之化合物。
抗體濃度：1.84mg/mL，抗體產量：11.0mg(88%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：6.6。
實施例113抗體-藥物結合物(113)
步驟1：(3S,12S)-12-苯甲基-21-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-3-{[3-(甲基二硫烷基)丙醯基]胺基}-4,7,10,13,16,21-六側氧基-5,8,11,14,17-五氮二十一-1-酸三級丁酯
將實施例107步驟1所獲得的化合物(202mg，0.200mmoL)，使用4-(甲基二硫)丙酸(36.5mg，0.240mmoL)替代(2S)-4-三級丁氧基-2-{[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]胺基}-4-側氧基丁酸，使與實施例58步驟1同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(153mg， 67%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.2Hz),1.36(9H,s),1.67-1.76(2H,m),1.79-1.92(2H,m),2.08-2.23(4H,m),2.36-2.57(6H,m),2.39(3H,s),2.69(1H,dd,J=16.0,5.5Hz),2.78(1H,dd,J=13.3,9.8Hz),2.88(2H,t,J=7.2Hz),2.97-3.13(3H,m),3.14-3.21(2H,m),3.55-3.79(6H,m),4.42-4.51(1H,m),4.56-4.65(1H,m),5.20(2H,q,J=18.5Hz),5.37-5.48(2H,m),5.52-5.62(1H,m),6.54(1H,s),7.13-7.28(5H,m),7.31(1H,s),7.68-7.74(1H,m),7.80(1H,d,J=10.9Hz),7.95-8.01(1H,m),8.11(1H,d,J=8.2Hz),8.14-8.20(1H,m),8.23-8.30(1H,m),8.34(1H,d,J=8.2Hz),8.46(1H,d,J=8.6Hz).
步驟2：N-[3-(甲基二硫烷基)丙醯基]-L-α-天冬胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4-側氧基丁基)甘胺醯胺
使上述步驟1所獲得的化合物(153mg，0.134mmoL)，與實施例1步驟2同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(103mg，71%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.2Hz),1.67-1.77(2H,m),1.81-1.91(2H,m),2.09-2.21(4H,m),2.39(3H,s),2.58-2.35(6H,m),2.65-2.84(2H,m),2.88(2H,t,J=7.2Hz),2.97-3.21(5H,m),3.58-3.76(6H,m),4.42-4.50(1H,m),4.53-4.62(1H,m),5.21(2H,q,J=18.6Hz),5.42(2H,s),5.53-5.6 2(1H,m),6.53(1H,s),7.14-7.27(5H,m),7.31(1H,s),7.68-7.74(1H,m),7.80(1H,d,J=11.0Hz),7.93-7.99(1H,m),8.07-8.17(2H,m),8.23-8.29(1H,m),8.35(1H,d,J=7.8Hz),8.46(1H,d,J=8.2Hz),12.33(1H,brs).
步驟3：N-(3-硫烷基丙醯基)-L-α-天冬胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4-側氧基丁基)甘胺醯胺
將上述步驟2所獲得的化合物(103mg，0.0947mmoL)，溶解於甲醇(1.00mL)、乙酸乙酯(0.500mL)、0.05N磷酸鉀緩衝液(0.500mL)，添加參(2-羧基乙基)膦鹽酸鹽(81.4mg，0.284mmoL)，並於室溫攪拌3小時。於反應溶液中添加水，並以氯仿萃取。獲得的有機層以硫酸鈉乾燥，並過濾。減壓餾除溶媒，將獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇：水=7：3：1(v/v/v)之分配有機層]純化，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(24.0mg，24%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.4Hz),1.66-1.76(2H,m),1.80-1.91(2H,m),2.08-2.22(4H,m),2.37-2.69(9H,m),2.75-2.85(1H,m),2.99-3.17(5H,m),3.53-3.78(6H,m),4.39-4.49(1H,m),4.51-4.60(1H,m),5.20(2H,q,J=18.6Hz),5.42(2H,s),5.53-5.61(1H,m),6.53(1H,s),7.14-7.27(5H,m),7.31(1H,s),7.69-7.75(1H,m),7.80(1H,d,J=10.9Hz),7 .92-8.21(4H,m),8.23-8.38(2H,m),8.45-8.52(1H,m),12.32(1H,s).
MS(ESI)m/z：1042(M+H)+.
步驟4：抗體-藥物結合物(113)
抗體之SMCC衍生物化：將以參考例1製作的曲妥珠單抗，使用共通操作C-2及B(使用1.37mLmg-1cm-1作為280nm吸光係數)，將介質置換為PBS6.5/EDTA，調製為20mg/mL之抗體濃度。將本溶液(0.5mL)置入1.5mL管，於其中於室溫添加含27.6mM之琥珀醯亞胺基4-(N-順丁烯二醯亞胺甲基)環己烷-1-甲酸酯(SMCC，Thermo Fisher Scientific Inc.)的二甲基亞碸溶液(0.0125mL；相對於抗體一分子為約5.1當量相當)及二甲基亞碸(0.0125mL)，並於室溫使反應2小時。將此反應液進行使用共通操作D-2的純化，獲得1.2mL之含約10mg之SMCC衍生物化的抗體的溶液。
抗體與藥物連接物之結合：對上述溶液，於室溫添加0.09mL之二甲基亞碸及含10mM之上述步驟3所獲得的化合物的二甲基亞碸溶液(0.03mL；相對於抗體一分子為約5.8當量相當)，使用試管混勻器而於室溫攪拌16小時，使藥物連接物與抗體結合。
純化：將上述溶液，進行使用共通操作D-1(使用ABS作為緩衝液)的純化，獲得6mL之含有目的化合物的溶液。
特性評價：使用共通操作B、E，而獲得下述之特性值。
抗體濃度：1.19mg/mL，抗體產量：7.1mg(71%)，抗 體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.4。
實施例114抗體-藥物結合物(114)
步驟1：抗體-藥物結合物(114)
抗體之SMCC衍生物化：將以參考例1製作的曲妥珠單抗，使用共通操作C-2及B(使用1.37mLmg-1cm-1作為280nm吸光係數)，將介質置換為PBS6.5/EDTA，調製為20mg/mL之抗體濃度。將本溶液(0.5mL)置入1.5mL管，於其中於室溫添加含27.6mM之SMCC的二甲基亞碸溶液(0.025mL；相對於抗體一分子相當為約10當量)，並於室溫使反應2小時。將此反應液進行使用共通操作D-2的純化，獲得1.2mL之含約10mg之SMCC衍生物化的抗體的溶液。
抗體與藥物連接物之結合：對上述溶液，於室溫添加二甲基亞碸(0.06mL)及含10mM之實施例113步驟3所獲得的化合物的二甲基亞碸溶液(0.06mL；相對於抗體一 分子相當為約11.6當量)，使用試管混勻器於室溫攪拌16小時，使藥物連接物與抗體結合。
純化：將上述溶液進行使用共通操作D(使用ABS作為緩衝液)的純化，獲得6mL之含有目的化合物的溶液。再使用共通操作A，將溶液濃縮後，使用共通操作B、E，而獲得下述之特性值。
抗體濃度：1.96mg/mL，抗體產量：2.4mg(24%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：5.0。
實施例115抗體-藥物結合物(115)
步驟1：N-(三級丁氧基羰基)甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-(5-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H- 苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-5-側氧基戊基)甘胺醯胺
使實施例17步驟2所獲得的化合物(348mg，0.537mmoL)，與實施例2步驟1同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(429mg，84%)。不進行進一步純化而用於下一反應。
步驟2：甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-(5-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-5-側氧基戊基)甘胺醯胺
使上述步驟1所獲得的化合物(427mg，0.448mmoL)，與實施例2步驟2同樣地反應，獲得呈黃色固體之標題化合物之三氟乙酸鹽(430mg，99%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.2Hz),1.38-1.49(2H,m),1.54-1.66(2H,m),1.86(2H,tt,J=14.5,7.0Hz),2.08-2.16(2H,m),2.19(2H,t,J=7.2Hz),2.40(3H,s),2.76(1H,dd,J=13.9,10.0Hz),3.00-3.12(3H,m),3.14-3.21(2H,m),3.57(2H,d,J=4.7Hz),3.60-3.75(3H,m),3.87(1H,dd,J=16.8,5.9Hz),4.55(1H,td,J=9.0,4.7Hz),5.16(1H,d,J=18.8Hz),5.23(1H,d,J=18.4Hz),5.44(2H,s),5.53-5.60(1H,m),6.55(1H,s),7.14-7.29(5H,m),7.32(1H,s),7.74(1H,t,J=5.5Hz),7.81(1H,d,J=10.9Hz),7.96(3H,br.s.),8.30-8.37(1H,m),8.44-8.53(2H,m).
MS(ESI)m/z：853(M+H)+.
步驟3：(3S,12S)-12-苯甲基-22-{[(1S,9S)-9- 乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-3-{[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]胺基}-4,7,10,13,16,22-六側氧基-5,8,11,14,17-五氮二十二-1-酸三級丁酯
使上述步驟2所獲得的化合物(140mg，0.164mmoL)，與實施例58步驟1同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(140mg，68%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.86(3H,t,J=7.2Hz),1.31-1.37(9H,m),1.39-1.47(2H,m),1.53-1.64(2H,m),1.85(2H,tt,J=14.2,7.1Hz),2.07-2.15(2H,m),2.18(2H,t,J=7.2Hz),2.39(3H,s),2.40-2.54(1H,m),2.70(1H,dd,J=16.8,5.5Hz),2.79(1H,dd,J=13.9,9.6Hz),2.99-3.10(3H,m),3.12-3.20(2H,m),3.56-3.79(6H,m),4.17-4.35(3H,m),4.35-4.43(1H,m),4.44-4.52(1H,m),5.15(1H,d,J=19.2Hz),5.21(1H,d,J=19.2Hz),5.42(2H,s),5.51-5.60(1H,m),6.54(1H,s),7.12-7.19(1H,m),7.20-7.27(4H,m),7.27-7.34(3H,m),7.40(2H,t,J=7.4Hz),7.62-7.73(4H,m),7.80(1H,d,J=11.3Hz),7.87(2H,d,J=7.4Hz),8.02(1H,t,J=5.7Hz),8.11(1H,d,J=7.8Hz),8.17(1H,t,J=5.3Hz),8.25(1H,t,J=5.7Hz),8.44(1H,d,J=9.0Hz).
MS(ESI)m/z：1247(M+H)+.
步驟4：(3S,12S)-12-苯甲基-3-{[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]胺基}-22-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并 [3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4,7,10,13,16,22-六側氧基-5,8,11,14,17-五氮二十二-1-酸三級丁酯
使上述步驟3所獲得的化合物(137mg，0.110mmoL)，與實施例58步驟2同樣地反應，獲得標題化合物(103mg，77%)。
MS(ESI)m/z：1218(M+H)+.
步驟5：N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]-L-α-天冬胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-(5-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-5-側氧基戊基)甘胺醯胺
使上述步驟4所獲得的化合物(88mg，0.072mmoL)，與實施例1步驟2同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(51mg，61%)。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.2Hz),1.12-1.22(2H,m),1.38-1.51(6H,m),1.54-1.64(2H,m),1.80-1.92(2H,m),2.03-2.15(4H,m),2.19(2H,t,J=7.0Hz),2.31-2.56(2H,m),2.40(3H,s),2.60-2.71(1H,m),2.75-2.86(1H,m),2.98-3.10(3H,m),3.17(2H,d,J=5.1Hz),3.26-3.40(2H,m),3.54-3.78(6H,m),4.39-4.49(1H,m),4.50-4.59(1H,m),5.16(1H,d,J=19.6Hz),5.23(1H,d,J=19.6Hz),5.43(2H,s),5.52-5.60(1H,m),6.53(1H,s),6.99(2H,s),7.14-7.28(5H,m),7.31(1H,s),7.62-7.72(1H,m),7.80(1H,d,J=11.3Hz),7.95-8.19(4H,m),8.2 4-8.36(1H,m),8.45(1H,d,J=9.0Hz).
MS(ESI)m/z：1161(M+H)+.
步驟4：抗體-藥物結合物(115)
抗體之還原：將以參考例1製作的曲妥珠單抗，使用共通操作B(使用1.37mLmg-1cm-1作為280nm吸光係數)及C-1，以PBS6.0/EDTA調製為10mg/mL。將本溶液(1.0mL)採取至2mL管中，添加10mM TCEP水溶液(0.0155mL；相對於抗體一分子為2.3當量)及1M磷酸氫二鉀水溶液(0.050mL)。確認本溶液之pH為7.4±0.1內後，藉由於37℃培育1小時，使抗體內鉸鏈部之雙硫鍵還原。
抗體與藥物連接物之結合：將上述溶液於22℃培育10分鐘後，添加含10mM之上述步驟3所獲得的化合物的DMSO溶液(0.0311mL；相對於抗體一分子為4.6當量)，並於22℃培育40分鐘，使藥物連接物與抗體結合。其次，添加100mM NAC水溶液(0.00622mL；相對於抗體一分子為9.2當量)，再於22℃培育20分鐘，使藥物連接物之反應停止。
純化：將上述溶液，進行使用共通操作D-1(使用PBS6.0作為緩衝液)的純化，獲得6mL之含有目的化合物的溶液。
特性評價：使用共通操作B、E、F，獲得下述之特性值。
抗體濃度：0.99mg/mL，抗體產量：5.94mg(59%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：2.2。
實施例116抗體-藥物結合物(116)
步驟1：抗體-藥物結合物(116)
抗體之還原：將以參考例1製作的曲妥珠單抗，使用共通操作B(使用1.37mLmg-1cm-1作為280nm吸光係數)及C-1，以PBS6.0/EDTA調製為10mg/mL。將本溶液(1.0mL)採取至2mL管中，添加10mM TCEP水溶液(0.0311mL；相對於抗體一分子為4.6當量)及1M磷酸氫二鉀水溶液(0.050mL)。確認本溶液之pH為7.4±0.1內後，藉由於37℃培育1小時，使抗體內鉸鏈部之雙硫鍵還原。
抗體與藥物連接物之結合：將上述溶液於22℃培育10分鐘後，添加含10mM之實施例115步驟3所獲得的化合物的DMSO溶液(0.0622mL；相對於抗體一分子為9.2當量)，於22℃培育40分鐘，使藥物連接物與抗體結合。其次，添加100mM NAC水溶液(0.0124mL；相對於抗體一分子為18.4當量)，再於22℃培育20分鐘，使藥物連接物之反應停止。
純化：將上述溶液，進行使用共通操作D-1(使用PBS6.0作為緩衝液)的純化，獲得6mL之含有目的化合物的溶液。
特性評價：使用共通操作B、E、F，獲得下述之特性值。
抗體濃度：0.95mg/mL，抗體產量：5.70mg(57%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：4.0。
實施例117抗體-藥物結合物(117)
步驟1：(2S)-5-三級丁氧基-2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-5-側氧基戊酸
將L-麩胺酸5-三級丁酯(1.02g，5.00mmoL)溶解於飽和碳酸氫鈉水溶液(20.0mL)，於0℃添加N-甲氧基羰基順 丁烯二醯亞胺(0.775g，5.00mmoL)，並於0℃攪拌30分鐘後，於室溫攪拌1小時。反應溶液於0℃添加5N鹽酸，作成酸性後，以乙酸乙酯萃取。獲得的有機層以硫酸鈉乾燥，並過濾。減壓餾除溶媒，獲得粗生成物。獲得的粗生成物不進行純化而用於下一反應。
步驟2：N-[(2S)-5-三級丁氧基-2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-5-側氧基戊醯基]甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4-側氧基丁基)甘胺醯胺
將上述步驟1所獲得的化合物(85.0mg，0.300mmoL)，使用實施例2步驟2所獲得的化合物(168mg，0.200mmoL)替代依喜替康之甲烷磺酸鹽，使與實施例1步驟1同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(113mg，51%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.2Hz),1.35(9H,s),1.67-1.76(2H,m),1.79-1.93(2H,m),2.03-2.29(8H,m),2.40(3H,s),2.74-2.82(1H,m),2.97-3.13(3H,m),3.14-3.22(2H,m),3.50-3.80(6H,m),4.41-4.49(1H,m),4.50-4.57(1H,m),5.20(2H,q,J=18.6Hz),5.42(2H,s),5.54-5.61(1H,m),6.53(1H,s),7.04(2H,s),7.14-7.27(5H,m),7.31(1H,s),7.66-7.72(1H,m),7.80(1H,d,J=11.0Hz),7.98-8.03(1H,m),8.11(1H,d,J=7.8Hz),8.22-8.27(1H,m),8.31-8.37(1H,m),8.45(1H,d,J=8.6Hz).
步驟3：N-[(2S)-4-羧基-2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丁醯基]甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4-側氧基丁基)甘胺醯胺
使上述步驟2所獲得的化合物(113mg，0.102mmoL)，與實施例1步驟2同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(81.0mg，76%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.2Hz),1.67-1.75(2H,m),1.80-1.91(2H,m),2.07-2.35(8H,m),2.39(3H,s),2.77(1H,dd,J=13.7,9.8Hz),2.96-3.13(3H,m),3.13-3.22(2H,m),3.38-3.80(6H,m),4.42-4.50(1H,m),4.53-4.60(1H,m),5.20(2H,q,J=18.6Hz),5.42(2H,s),5.54-5.60(1H,m),6.54(1H,brs),7.04(2H,s),7.17-7.26(5H,m),7.31(1H,s),7.70(1H,t,J=5.3Hz),7.80(1H,d,J=10.9Hz),8.01(1H,t,J=5.5Hz),8.12(1H,d,J=8.2Hz),8.26(1H,t,J=5.9Hz),8.32-8.38(1H,m),8.46(1H,d,J=8.6Hz).
MS(ESI)m/z：1048(M+H)+.
步驟4：抗體-藥物結合物(117)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及上述步驟3所獲得的化合物，藉由與實施例2步驟6同樣之方法，獲得目的之化合物。
抗體濃度：1.38mg/mL，抗體產量：8.3mg(66%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.6。
實施例118抗體-藥物結合物(118)
步驟1：抗體-藥物結合物(118)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及實施例117步驟3所獲得的化合物，藉由與實施例3步驟1同樣之方法，獲得目的之化合物。
抗體濃度：1.52mg/mL，抗體產量：9.1mg(73%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：6.5。
實施例119抗體-藥物結合物(119)
步驟1：N-{2-[(三級丁氧基羰基)胺基]乙基}-N-(2-三級丁氧基-2-側氧基乙基)甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4-側氧基丁基)甘胺醯胺
使用實施例40步驟2所獲得的化合物(0.250g，0.300mmoL)替代(2S)-4-三級丁氧基-2-{[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]胺基}-4-側氧基丁酸，使與實施例58步驟1同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(59.9mg，17%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.2Hz),1.35(9H,s),1.40(9H,s),1.68-1.75(2H,m),1.80-1.91(2H,m),2.16-2.31(4H,m),2.40(3H,s),2.80(1H,d,J=7.0Hz),2.95-2.98 (3H,m),3.19-3.24(6H,m),3.40(4H,s),3.62-3.72(6H,m),4.44-4.48(1H,m),5.16(1H,d,J=19.2Hz),5.25(1H,d,J=19.2Hz),5.42(2H,s),5.56-5.59(1H,m),6.54(1H,s),6.79(1H,t,J=6.8Hz),7.20-7.22(5H,m),7.31(1H,s),7.72(1H,t,J=6.5Hz),7.80(1H,d,J=10.6Hz),8.09(2H,t,J=5.7Hz),8.15(1H,d,J=7.8Hz),8.27(1H,t,J=5.7Hz),8.47(1H,d,J=7.4Hz).
MS(APCI)m/z：1153(M+H)+.
步驟2：N-(2-胺基乙基)-N-(羧基甲基)甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4-側氧基丁基)甘胺醯胺
使上述步驟1所獲得的化合物(50.6mg，43.8μmoL)，與實施例1步驟2同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(29.5mg，67%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.6Hz),1.71-1.74(2H,m),1.85-1.87(2H,m),2.10-2.20(4H,m),2.39(3H,s),2.66-2.68(1H,m),2.77-2.80(7H,m),3.15-3.18(4H,m),3.50(2H,s),3.60(4H,s),3.74-3.76(2H,m),4.37-4.39(1H,m),5.17(1H,d,J=19.2Hz),5.25(1H,d,J=19.2Hz),5.42(2H,s),5.57-5.59(1H,m),6.55(1H,s),7.23-7.24(6H,m),7.31(1H,s),7.76-7.80(4H,m),8.10-8.13(2H,m),8.39-8.41(1H,m),8.57-8.60(2H,m).
MS(APCI)m/z：997(M+H)+.
步驟3：N-(羧基甲基)-N-[2-(2,5-二側氧基 -2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙基]甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4-側氧基丁基)甘胺醯胺
將上述步驟2所獲得的化合物(76.0mg，76.2μmoL)，冰冷下溶解於飽和碳酸氫鈉水溶液(2.00mL)，並攪拌30分鐘。冰冷下添加2,5-二側氧基吡咯-1-甲酸甲酯(13.0mg，83.9μmoL)，並攪拌20分鐘。再者，於室溫攪拌2小時。添加10%檸檬酸水溶液並攪拌1晚。反應溶液以氯仿萃取，獲得的有機層以硫酸鈉乾燥，並過濾。減壓下將濾液餾除溶媒。將獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇：水=7：3：1(v/v/v)之分配有機層]純化，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(18.1mg，22%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=8.5Hz),1.71-1.73(2H,m),1.84-1.87(2H,m),2.12-2.19(4H,m),2.36(3H,s),2.65-2.68(1H,m),2.89-3.15(9H,m),3.48-3.66(10H,m),4.35-4.37(1H,m),5.16(1H,d,J=18.4Hz),5.24(1H,d,J=18.8Hz),5.42(2H,s),5.55-5.58(1H,m),6.53(1H,s),6.95(2H,s),7.19-7.21(6H,m),7.30(1H,s),7.77-7.80(2H,m),8.19(1H,s),8.32(1H,s),8.49(1H,s),8.62(2H,s).
MS(APCI)m/z：1077(M+H)+.
步驟4：抗體-藥物結合物(119)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及上述步驟3所獲得的化合物，藉由與實施例2步驟6同樣之方法，獲得目 的之化合物。再使用共通操作A，將溶液濃縮後，使用共通操作B、E，而獲得下述之特性值。
抗體濃度：10.02mg/mL，抗體產量：7.0mg(56%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：2.6。
實施例120抗體-藥物結合物(120)
步驟1：抗體-藥物結合物(120)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及實施例119步驟3所獲得的化合物，藉由與實施例3步驟1同樣之方法，獲得目的之化合物。再使用共通操作A，將溶液濃縮後，使用共通操作B、E，而獲得下述之特性值。
抗體濃度：10.36mg/mL，抗體產量：7.3mg(58%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：4.8。
實施例121抗體-藥物結合物(121)
步驟1：N-(羧基甲基)-N-(2-{[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]胺基}乙基)甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4-側氧基丁基)甘胺醯胺
將實施例119步驟2所獲得的化合物(25.8mg，25.9μmoL)溶解於N,N-二甲基甲醯胺(1.50mL)。添加6-順丁烯二醯亞胺己酸N-琥珀醯亞胺基酯(12.0mg，38.9μmoL)，並攪拌1日。減壓餾除溶媒，將獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇：水=7：3：1(v/v/v)之分配有機層]純化，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(6.07mg，20%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=6.7Hz),1.18(4H,dd,J=25.4,19.2Hz),1.41-1.43(4H,m),1.73(2H,d,J=4.3Hz),1.82-1.90(2H,m),1.98(2H,s),2.12-2.19(4H,m),2.38(3H,s),3.08-3.15(10H,m),3.39-3.41(4H,m),3.60-3.71(8H,m),4.32-4.35(1H,m),5.16(1H,d,J=19.2Hz),5.25(1H,d,J=18.0Hz),5.42(2H,s),5.57(1H,s),6.53(1H,s),6.99(2H,s),7.20-7.22(5H,m),7.30(1H,s),7.72-7.81(3H,m),8.26-8.32(2H,m),8.59-8.62(2H,m).
MS(APCI)m/z：1190(M+H)+.
步驟2：抗體-藥物結合物(121)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及上述步驟1所獲得的化合物，藉由與實施例2步驟6同樣之方法，獲得目的之化合物。
抗體濃度：1.40mg/mL，抗體產量：8.4mg(67%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：2.0。
實施例122抗體-藥物結合物(122)
步驟1：抗體-藥物結合物(122)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及實施例121步驟1所獲得的化合物，藉由與實施例3步驟1同樣之方法，獲得目的之化合物。
抗體濃度：1.49mg/mL，抗體產量：8.9mg(71%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.4。
實施例123抗體-藥物結合物(123)
步驟1：(5S,14S)-5-苯甲基-14-{[3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯基]胺基}-1-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-1,4,7,10,13-五 側氧基-3,6,9,12-四氮十六烷-16-酸三級丁酯
將實施例73步驟2所獲得的化合物(0.185g，0.200mmoL)，使用3-順丁烯二醯亞胺丙酸N-琥珀醯亞胺基酯替代6-順丁烯二醯亞胺己酸N-琥珀醯亞胺基酯，使與實施例73步驟3同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(0.152g，71%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.86(3H,t,J=7.2Hz),1.35(9H,s),1.78-1.93(2H,m),2.04-2.46(5H,m),2.41(3H,s),2.61-2.69(1H,m),2.72-2.81(1H,m),2.93-3.02(1H,m),3.13-3.22(2H,m),3.49-3.80(8H,m),4.38-4.49(1H,m),4.53-4.62(1H,m),5.25(2H,dd,J=25.0,19.2Hz),5.41(2H,dd,J=21.1,16.4Hz),5.54-5.62(1H,m),6.54(1H,s),6.98(2H,s),7.12-7.26(5H,m),7.31(1H,s),7.81(1H,d,J=10.9Hz),7.93(1H,t,J=5.7Hz),8.06(1H,d,J=7.8Hz),8.13(1H,t,J=5.9Hz),8.29-8.39(2H,m),8.42(1H,d,J=8.2Hz).
步驟2：N-[3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯基]-L-α-天冬胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺醯胺
使上述步驟1所獲得的化合物(0.152g，0.141mmoL)，與實施例1步驟2同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(0.112g，78%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.86(3H,t,J=7.2Hz),1.81-1.89(2H,m),2.56-2.03(6H,m),2.41(3H,s),2.77(1H,dd, J=13.5,9.6Hz),2.94-3.02(1H,m),3.12-3.24(2H,m),3.48-3.80(8H,m),4.35-4.47(1H,m),4.47-4.57(1H,m),5.25(2H,dd,J=25.2,19.4Hz),5.41(2H,dd,J=20.5,16.2Hz),5.53-5.62(1H,m),6.54(1H,s),6.99(2H,s),7.12-7.27(5H,m),7.31(1H,s),7.81(1H,d,J=11.3Hz),7.89-8.00(1H,m),8.03-8.17(2H,m),8.27-8.54(3H,m),12.31(1H,s).
MS(ESI)m/z：1020(M+H)+.
步驟3：抗體-藥物結合物(123)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及上述步驟2所獲得的化合物，藉由與實施例2步驟6同樣之方法，獲得目的之化合物。
抗體濃度：1.83mg/mL，抗體產量：11.0mg(88%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：4.2。
實施例124抗體-藥物結合物(124)
步驟1：抗體-藥物結合物(124)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及實施例123步驟2所獲得的化合物，藉由與實施例3步驟1同樣之方法，獲 得目的之化合物。
抗體濃度：1.91mg/mL，抗體產量：11.5mg(92%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：7.4。
實施例125抗體-藥物結合物(125)
步驟1：(5S,14S)-5-苯甲基-14-{[4-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丁醯基]胺基}-1-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-1,4,7,10,13-五側氧基-3,6,9,12-四氮十六烷-16-酸三級丁酯
將實施例73步驟2所獲得的化合物(0.185g， 0.200mmoL)，使用4-順丁烯二醯亞胺酪酸N-琥珀醯亞胺基酯替代6-順丁烯二醯亞胺己酸N-琥珀醯亞胺基酯，使與實施例73步驟3同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(0.166g，76%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.86(3H,t,J=7.2Hz),1.34(9H,s),1.64-1.74(2H,m),1.78-1.92(2H,m),2.03-2.45(5H,m),2.41(3H,s),2.63-2.71(1H,m),2.72-2.82(1H,m),2.93-3.02(1H,m),3.13-3.23(2H,m),3.42-3.36(2H,m),3.53(1H,dd,J=16.8,5.9Hz),3.61-3.77(5H,m),4.38-4.47(1H,m),4.53-4.61(1H,m),5.25(2H,dd,J=25.6,19.0Hz),5.41(2H,dd,J=21.5,16.4Hz),5.53-5.63(1H,m),6.54(1H,s),7.00(2H,s),7.12-7.27(5H,m),7.31(1H,s),7.81(1H,d,J=10.9Hz),7.93(1H,t,J=5.7Hz),8.06(1H,d,J=8.2Hz),8.11(1H,t,J=5.9Hz),8.18(1H,d,J=8.2Hz),8.29-8.35(1H,m),8.42(1H,d,J=8.6Hz).
步驟2：N-[4-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丁醯基]-L-α-天冬胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺醯胺
使上述步驟1所獲得的化合物(0.166g，0.152mmoL)，與實施例1步驟2同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(0.100g，63%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.86(3H,t,J=7.2Hz),1.64-1.75(2H,m),1.79-1.92(2H,m),2.04-2.51(5H,m),2.41(3H,s),2.62-2.82(2H,m),2.97(1H,dd,J=13.3,4.7Hz),3.13-3.2 2(2H,m),3.38(2H,t,J=6.8Hz),3.51-3.74(6H,m),4.38-4.47(1H,m),4.49-4.58(1H,m),5.25(2H,dd,J=25.4,19.2Hz),5.41(2H,dd,J=20.5,16.6Hz),5.53-5.63(1H,m),6.54(1H,brs),7.00(2H,s),7.11-7.27(5H,m),7.31(1H,s),7.81(1H,d,J=10.9Hz),7.92(1H,t,J=5.7Hz),8.03-8.12(2H,m),8.20(1H,d,J=7.4Hz),8.32(1H,t,J=5.7Hz),8.42(1H,d,J=8.2Hz).
MS(ESI)m/z：1034(M+H)+.
步驟3：抗體-藥物結合物(125)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及上述步驟2所獲得的化合物，藉由與實施例2步驟6同樣之方法，獲得目的之化合物。
抗體濃度：1.81mg/mL，抗體產量：10.9mg(87%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.9。
實施例126抗體-藥物結合物(126)
步驟1：抗體-藥物結合物(126)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及實施例125步驟2所獲得的化合物，藉由與實施例3步驟1同樣之方法，獲得目的之化合物。
抗體濃度：2.11mg/mL，抗體產量：12.0mg(96%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：7.6。
實施例127抗體-藥物結合物(127)
步驟1：(15S)-1-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-15-[(2-{[2-({(2S)-1-[(2-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-2-側氧基乙基)胺基]-1-側氧基-3-苯基丙-2-基}胺基)-2-側氧基乙基]胺基}-2-側氧基乙基)胺甲醯基 ]-3,13-二側氧基-7,10-二側氧基-4,14-二氮十七烷-17-酸三級丁酯
將實施例73步驟2所獲得的化合物(0.185g，0.200mmoL)，使用3-(2-(2-(3-順丁烯二醯亞胺丙醯胺)乙氧基)乙氧基)丙酸N-琥珀醯亞胺基酯替代6-順丁烯二醯亞胺己酸N-琥珀醯亞胺基酯，使與實施例73步驟3同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(0.157g，64%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.86(3H,t,J=7.4Hz),1.35(9H,s),1.79-1.94(2H,m),2.05-2.26(2H,m),2.28-2.47(8H,m),2.63-2.71(1H,m),2.72-2.82(1H,m),2.93-3.03(1H,m),3.08-3.24(4H,m),3.28-3.49(6H,m),3.50-3.62(5H,m),3.63-3.77(5H,m),4.39-4.48(1H,m),4.55-4.65(1H,m),5.25(2H,dd,J=25.6,19.0Hz),5.41(2H,dd,J=21.5,16.4Hz),5.54-5.63(1H,m),6.54(1H,s),7.00(2H,s),7.13-7.26(5H,m),7.31(1H,s),7.81(1H,d,J=10.9Hz),7.91-7.98(1H,m),7.99-8.04(1H,m),8.04-8.14(2H,m),8.24(1H,d,J=8.2Hz),8.30-8.36(1H,m),8.42(1H,d,J=9.0Hz).
步驟2：N-{3-[2-(2-{[3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯基]胺基}乙氧基)乙氧基]丙醯基}-L-α-天冬胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺醯胺
使上述步驟1所獲得的化合物(0.157g，0.127mmoL)，與實施例1步驟2同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標 題化合物(0.120g，80%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.86(3H,t,J=7.4Hz),1.79-1.92(2H,m),2.05-2.27(2H,m),2.28-2.45(8H,m),2.64-2.81(2H,m),2.92-3.02(1H,m),3.08-3.23(4H,m),3.30-3.78(16H,m),4.39-4.47(1H,m),4.52-4.61(1H,m),5.25(2H,dd,J=26.4,19.4Hz),5.41(2H,dd,J=20.3,16.4Hz),5.54-5.62(1H,m),6.55(1H,brs),7.00(2H,s),7.13-7.25(5H,m),7.31(1H,s),7.81(1H,d,J=10.9Hz),7.89-7.97(1H,m),7.99-8.12(3H,m),8.26(1H,d,J=7.8Hz),8.30-8.36(1H,m),8.43(1H,d,J=8.6Hz),12.32(1H,brs).
MS(ESI)m/z：1179(M+H)+.
步驟3：抗體-藥物結合物(127)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及上述步驟2所獲得的化合物，藉由與實施例2步驟6同樣之方法，獲得目的之化合物。
抗體濃度：1.77mg/mL，抗體產量：10.6mg(85%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.9。
實施例128抗體-藥物結合物(128)
步驟1：抗體-藥物結合物(128)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及實施例127步驟2所獲得的化合物，藉由與實施例3步驟1同樣之方法，獲得目的之化合物。
抗體濃度：1.98mg/mL，抗體產量：11.9mg(95%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：7.3。
實施例129抗體-藥物結合物(129)
步驟1：(21S)-1-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-21-[(2-{[2-({(2S)-1-[(2-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-2-側氧基乙基)胺基]-1-側氧基-3-苯基丙-2-基}胺基)-2-側氧基乙基]胺基}-2-側氧基乙基)胺甲醯基]-3,19-二側氧基-7,10,13,16-四氧-4,20-二氮二十三-23-酸三級丁酯
將實施例73步驟2所獲得的化合物(0.185g，0.200mmoL)，使用1-順丁烯二醯亞胺-3-側氧基-7,10,13,16-四氧-4-氮-19-十九酸N-琥珀醯亞胺基酯替代6-順丁烯二醯亞胺己酸N-琥珀醯亞胺基酯，使與實施例73步驟3同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物 (0.161g，61%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.86(3H,t,J=7.4Hz),1.35(9H,s),1.79-1.91(2H,m),2.06-2.26(2H,m),2.28-2.46(8H,m),2.63-2.71(1H,m),2.72-2.82(1H,m),2.93-3.03(1H,m),3.10-3.22(4H,m),3.28-3.53(14H,m),3.54-3.62(5H,m),3.63-3.78(5H,m),4.39-4.47(1H,m),4.55-4.65(1H,m),5.25(2H,dd,J=25.4,19.2Hz),5.41(2H,dd,J=21.1,16.4Hz),5.55-5.62(1H,m),6.54(1H,s),7.00(2H,s),7.16-7.25(5H,m),7.31(1H,s),7.81(1H,d,J=10.9Hz),7.91-7.98(1H,m),8.00-8.15(3H,m),8.24(1H,d,J=7.8Hz),8.30-8.36(1H,m),8.42(1H,d,J=8.6Hz).
步驟2：N-[19-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-17-側氧基-4,7,10,13-四氧-16-氮十九-1-醯基]-L-α-天冬胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺醯胺
使上述步驟1所獲得的化合物(0.161g，0.122mmoL)，與實施例73步驟4同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(0.133g，86%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.86(3H,t,J=7.4Hz),1.78-1.92(2H,m),2.03-2.25(2H,m),2.28-2.44(8H,m),2.65-2.82(2H,m),2.94-3.01(1H,m),3.10-3.22(4H,m),3.35(2H,t,J=5.7Hz),3.42-3.80(22H,m),4.39-4.47(1H,m),4.52-4.60(1H,m),5.25(2H,dd,J=26.2,18.8Hz),5.41(2H,dd,J=20.3,16.4Hz),5.55-5.62(1H,m),6.55(1H,brs),7.00(2H,s),7.13-7.26( 5H,m),7.31(1H,s),7.81(1H,d,J=10.9Hz),7.90-7.96(1H,m),8.00-8.10(3H,m),8.27(1H,d,J=7.8Hz),8.30-8.36(1H,m),8.43(1H,d,J=9.0Hz).
MS(ESI)m/z：1267(M+H)+.
步驟3：抗體-藥物結合物(129)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及上述步驟2所獲得的化合物，藉由與實施例2步驟6同樣之方法，獲得目的之化合物。
抗體濃度：1.80mg/mL，抗體產量：10.8mg(86%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.9。
實施例130抗體-藥物結合物(130)
步驟1：抗體-藥物結合物(130)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及實施例129步驟2所獲得的化合物，藉由與實施例3步驟1同樣之方法，獲得目的之化合物。
抗體濃度：1.88mg/mL，抗體產量：11.3mg(90%)， 抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：7.2。
實施例131抗體-藥物結合物(131)
步驟1：N-(三級丁氧基羰基)甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基甘胺酸乙酯
於N-(三級丁氧基羰基)甘胺醯基甘胺醯基-L-苯丙胺酸(特開2002-60351；5.90g，15.6mmoL)、1-羥基苯并三唑(2.62g，17.1mmoL)及甘胺酸乙基酯鹽酸鹽(2.62g，17.1mmoL)、二異丙基乙基胺(5.42mL，31.1mmoL)之二氯 甲烷(40.0mL)溶液中，添加1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(3.58g，18.68mmoL)，並於室溫攪拌2小時。將反應液以二氯甲烷稀釋後，以1N鹽酸、水、飽和食鹽水洗淨，以無水硫酸鈉乾燥。將溶媒餾除後，將獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇=9：1(v/v)]純化，獲得呈無色固體之標題化合物(5.86g，82%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：1.20(3H,q,J=7.3Hz),1.38(9H,s),2.75(1H,dd,J=13.9,9.7Hz),3.05(1H,dd,J=13.9,4.2Hz),3.51-3.61(3H,m),3.75(1H,dd,J=16.9,6.0Hz),3.81-3.86(2H,m),4.10(2H,q,J=7.3Hz),4.53(1H,td,J=9.4,4.0Hz),6.96-7.02(1H,m),7.16-7.21(1H,m),7.23-7.28(4H,m),7.88(1H,t,J=5.4Hz),8.15(1H,d,J=9.1Hz),8.47(1H,t,J=5.7Hz).
MS(ESI)m/z：465(M+H)+.
步驟2：甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基甘胺酸乙酯
於上述步驟1所獲得的化合物(5.80g，12.5mmoL)之二烷(40.0mL)溶液中，添加4N鹽酸二烷溶液(15.0mL)並於室溫放置一晚。減壓餾除溶媒，於獲得的殘留物中添加乙酸乙酯，濾取析出物而獲得呈無色固體之標題化合物之鹽酸鹽(5.74g，定量的)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：1.20(3H,t,J=7.5Hz),2.76(1H,dd,J=13.9,10.3Hz),3.05(1H,dd,J=13.9,4.2Hz),3.53-3.57(2H,m),3.63-3.72(1H,m),3.82-3.90(3H,m),4.10(2H,q,J=7.5Hz),4.53-4.60(1H,m),7.12-7.22(2H,m),7.23-7.29(5H,m),8.06(1H,brs),8.36(1H,d,J=8.8Hz),8.55(2H,td,J=11 .3,5.6Hz).
MS(ESI)m/z：365(M+H)+.
步驟3：N-(三級丁氧基羰基)-L-絲胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基甘胺酸乙酯
於上述步驟2所獲得的化合物(0.940g，2.34mmoL)之N,N-二甲基甲醯胺(10.0mL)溶液中，添加4-二甲基胺基吡啶(0.572g，4.69mmoL)、N-(三級丁氧基羰基)-L-絲胺酸(0.625g，3.05mmoL)、1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(0.584g，3.05mmoL)，並於室溫攪拌2小時。反應液以氯仿稀釋後，以1N鹽酸及0.1N磷酸緩衝液(pH7.4)之順序洗淨，以無水硫酸鈉乾燥。將溶媒餾除後，將獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇=9：1(v/v)]純化，獲得標題化合物(0.750g，58%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：1.16(3H,t,J=7.1Hz),1.35(9H,s),2.74(1H,dd,J=13.7,10.0Hz),3.01(1H,dd,J=13.7,4.4Hz),3.50-3.59(3H,m),3.64-3.74(3H,m),3.81(2H,ddd,J=22.5,16.6,5.4Hz),3.96(1H,q,J=6.2Hz),4.07(2H,q,J=7.2Hz),4.50(1H,td,J=9.2,3.7Hz),4.85(1H,t,J=5.9Hz),6.70(1H,d,J=7.3Hz),7.13-7.18(1H,m),7.20-7.25(5H,m),7.96(1H,t,J=5.4Hz),8.07-8.12(1H,m),8.44(1H,t,J=5.9Hz).
MS(ESI)m/z：552(M+H)+.
步驟4：N-(三級丁氧基羰基)-L-絲胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基甘胺酸
於上述步驟3所獲得的化合物(0.155g，0.280mmoL)之二烷(5.00mL)溶液中，冰冷下，添加1N氫氧化鈉水 溶液(0.310mL，0.310mmoL)，並攪拌10分鐘。添加1N鹽酸(0.310mL，0.310mmoL)而中和後，將溶媒餾除，獲得呈無色固體之標題化合物(0.147g，定量的)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：1.35(9H,s),2.73(1H,dd,J=13.7,9.8Hz),3.01(1H,dd,J=13.7,4.1Hz),3.51-3.59(4H,m),3.67-3.71(2H,m),3.72-3.76(2H,m),3.96(1H,dd,J=12.9,5.6Hz),4.50(1H,td,J=9.3,3.6Hz),6.71(1H,d,J=7.8Hz),7.13-7.18(1H,m),7.20-7.24(5H,m),7.96(1H,t,J=5.9Hz),8.06-8.13(2H,m),8.35(1H,t,J=5.9Hz),12.56(1H,s).
步驟5：N-(三級丁氧基羰基)-L-絲胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺醯胺
於上述步驟4所獲得的化合物(0.147g，0.280mmoL)之N,N-二甲基甲醯胺(1.00mL)溶液中，添加N-羥基琥珀醯亞胺(32.4mg，0.280mmoL)、1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(54mg，0.28mmoL)，並於室溫攪拌30分鐘。將此溶液加到包含依喜替康之甲烷磺酸鹽(0.145mg，0.260mmoL)、N,N-二異丙基乙基胺(89.3μL，0.510mmoL)、及N,N-二甲基甲醯胺(0.200mL)的溶液，並於室溫攪拌1小時。將反應溶液減壓餾除，並將獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇=9：1(v/v)]純化，獲得標題化合物(197mg，82%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.84(3H,t,J=7.6Hz),1 .33(9H,s),1.83(2H,dq,J=25.4,7.2Hz),2.03-2.13(1H,m),2.14-2.21(1H,m),2.38(3H,s),2.50-2.52(2H,m),2.74(1H,dd,J=13.7,9.3Hz),2.95(1H,dd,J=13.7,4.6Hz),3.12-3.18(2H,m),3.49-3.56(3H,m),3.62-3.76(5H,m),3.93-3.99(1H,m),4.37-4.43(1H,m),4.84-4.91(1H,m),5.20(1H,d,J=18.8Hz),5.25(1H,d,J=18.8Hz),5.36(1H,d,J=16.1Hz),5.41(1H,d,J=16.1Hz),5.53-5.58(1H,m),6.51(1H,s),6.71(1H,d,J=7.8Hz),7.11-7.23(5H,m),7.29(1H,s),7.78(1H,d,J=10.7Hz),7.96(1H,t,J=5.9Hz),8.05(1H,d,J=7.3Hz),8.11(1H,d,J=5.4Hz),8.28-8.33(1H,m),8.40(1H,d,J=8.3Hz).
MS(ESI)m/z：941(M+H)+.
步驟6：L-絲胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺醯胺
將上述步驟5所獲得的化合物(0.190g，0.200mmoL)溶解於三氟乙酸，於室溫放置1小時。減壓餾除反應溶液，於獲得的殘留物中添加二乙基醚，攪拌後，濾取獲得的固體，獲得標題化合物之三氟乙酸鹽(175mg，91%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.90(3H,t,J=7.3Hz),1.81-1.95(2H,m),2.11-2.19(1H,m),2.19-2.26(1H,m),2.44(3H,s),2.79(1H,dd,J=14.3,10.0Hz),3.00(1H,dd,J=14.3,4.4Hz),3.18-3.24(2H,m),3.65(1H,dd,J=16.6,5.4Hz),3.69-3.83(6H,m),3.87(1H,dd,J=16.6,5.4Hz),3.90-3.95(1H,m),4.52(1H,td,J=8.8,4.2Hz),5.25(1H,d,J=19.0Hz),5.30(1H,d,J=19. 0Hz),5.42(1H,d,J=16.1Hz),5.47(1H,d,J=16.1Hz),5.51(1H,t,J=5.1Hz),5.58-5.63(1H,m),6.58(1H,s),7.17-7.29(6H,m),7.35(1H,s),7.85(1H,d,J=10.7Hz),8.09-8.18(3H,m),8.43(1H,t,J=5.6Hz),8.52(1H,d,J=8.8Hz),8.70(1H,t,J=5.6Hz).
MS(ESI)m/z：841(M+H)+.
步驟7：N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]-L-絲胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺醯胺
於上述步驟6所獲得的化合物(90.0mg，94.3μmoL)之N,N-二甲基甲醯胺(2.00mL)溶液中，添加6-順丁烯二醯亞胺己酸N-琥珀醯亞胺基酯(32.0mg，0.100μmoL)、N,N-二異丙基乙基胺(17.4μL，0.100μmoL)，並於室溫攪拌1小時。減壓餾除反應溶液，將獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇=9：1(v/v)]純化，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(50mg，51%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.3Hz),1.12-1.25(2H,m),1.41-1.51(4H,m),1.79-1.92(2H,m),2.09-2.15(3H,m),2.17-2.24(1H,m),2.41(3H,s),2.77(1H,dd,J=13.9,9.7Hz),2.98(1H,dd,J=13.9,4.5Hz),3.14-3.21(2H,m),3.35-3.38(2H,m),3.50-3.60(3H,m),3.63-3.76(5H,m),4.26(1H,q,J=6.2Hz),4.43(1H,td,J=8.5,4.8Hz),4.94(1H,t,J=5.4Hz),5.21(1H,d,J=19.3Hz),5.27(1H,d,J=19.3Hz),5.38(1H,d,J=16.3Hz),5.44(1H,d,J=16.3Hz),5.54-5.60(1H,m),6.53(1H,s) ,6.99(2H,s),7.13-7.25(5H,m),7.31(1H,s),7.80(1H,d,J=11.5Hz),7.89(1H,d,J=7.9Hz),7.99(1H,t,J=5.7Hz),8.06(1H,d,J=7.9Hz),8.15(1H,t,J=5.4Hz),8.29-8.34(1H,m),8.41(1H,d,J=8.5Hz).
MS(ESI)m/z：1034(M+H)+.
步驟8：抗體-藥物結合物(131)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及上述步驟7所獲得的化合物，藉由與實施例2步驟6同樣之方法，獲得目的之化合物。
抗體濃度：1.79mg/mL，抗體產量：5.4mg(43%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.4。
實施例132抗體-藥物結合物(132)
步驟1：抗體-藥物結合物(132)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及實施例131步驟7所獲得的化合物，藉由與實施例3步驟1同樣之方法，獲 得目的之化合物。
抗體濃度：1.86mg/mL，抗體產量：10.7mg(86%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：6.6。
實施例133抗體-藥物結合物(133)
步驟1：(5S,14R)-5-苯甲基-1-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-14-{[(9H-茀-9-基甲氧基) 羰基]胺基}-1,4,7,10,13-五側氧基-3,6,9,12-四氮十六烷-16-酸三級丁酯
於N-羥基琥珀醯亞胺(28.5mg，0.250mmoL)、N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-D-天冬胺酸4-三級丁酯(0.101g，0.250mmoL)之N,N-二甲基甲醯胺(1.00mL)溶液中，添加1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(47.4mg，0.250mmoL)，並於室溫攪拌30分鐘。將此溶液加到包含游離體之甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺醯胺(國際公開第97/46260號；0.195g，0.225mmoL)、N,N-二異丙基乙基胺(78.4μL，0.450mmoL)、及N,N-二甲基甲醯胺(1.00mL)的溶液，並於室溫攪拌1小時。反應溶液以氯仿稀釋，以10%檸檬酸溶液洗淨後，有機層以硫酸鈉乾燥。減壓餾除溶媒，將獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇=9：1(v/v)]純化，獲得標題化合物(0.187mg，72%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.86(3H,t,J=6.7Hz),1.37(9H,s),1.77-1.92(2H,m),2.07-2.28(2H,m),2.40(3H,s),2.67-2.80(2H,m),2.98(1H,d,J=10.3Hz),3.14-3.21(2H,m),3.50-3.60(1H,m),3.73-3.78(5H,m),4.15-4.35(3H,m),4.36-4.48(2H,m),5.24(2H,s),5.38(1H,d,J=17.2Hz),5.43(1H,d,J=17.2Hz),5.54-5.60(1H,m),6.53(1H,d,J=1.8Hz),7.10-7.27(5H,m),7.30-7.37(3H,m),7.39(2H,t,J=7.3Hz),7.69(3H,t,J=7.3Hz),7.81(1H,d,J=10.9Hz),7.87(2H,d,J=7.9Hz),7.97-8.02 (1H,m),8.08-8.13(1H,m),8.13-8.20(1H,m),8.32(1H,d,J=1.8Hz),8.42(1H,d,J=8.5Hz).
MS(ESI)m/z：1147(M+H)+.
步驟2：(5S,14R)-14-胺基-5-苯甲基-1-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-1,4,7,10,13-五側氧基-3,6,9,12-四氮十六烷-16-酸三級丁酯
使上述步驟1所獲得的化合物(182mg，0.158mmoL)與實施例73步驟2同樣地反應，獲得標題化合物(132mg，91%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.0Hz),1.06(1H,t,J=6.7Hz),1.37(9H,s),1.78-2.04(4H,m),2.04-2.26(2H,m),2.34(1H,dd,J=16.3,7.3Hz),2.41(3H,s),2.56-2.60(1H,m),2.77(1H,dd,J=9.1,13.9Hz),2.99(1H,dd,J=13.9,4.2Hz),3.15-3.21(2H,m),3.40-3.58(3H,m),3.64-3.76(4H,m),4.39-4.46(1H,m),5.22(1H,d,J=19.6Hz),5.28(1H,d,J=19.6Hz),5.38(1H,d,J=16.6Hz),5.44(1H,d,J=16.6Hz),5.54-5.61(1H,m),6.53(1H,s),7.13-7.26(5H,m),7.31(1H,s),7.81(1H,d,J=10.9Hz),8.01(1H,t,J=5.7Hz),8.08(1H,d,J=7.9Hz),8.21-8.33(2H,m),8.41(1H,d,J=9.1Hz).
MS(ESI)m/z：925(M+H)+.
步驟3：(5S,14R)-5-苯甲基-14-{[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]胺基}-1-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧 基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-1,4,7,10,13-五側氧基-3,6,9,12-四氮十六烷-16-酸三級丁酯
使上述步驟2所獲得的化合物(130mg，0.140mmoL)與實施例73步驟3同樣地反應，獲得標題化合物(85.0mg，54%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.5Hz),1.12-1.23(2H,m),1.35(9H,s),1.40-1.50(4H,m),1.80-1.91(2H,m),2.04-2.18(3H,m),2.18-2.21(1H,m),2.41(3H,s),2.63-2.71(1H,m),2.77(1H,dd,J=14.2,9.7Hz),2.98(1H,dd,J=14.2,4.5Hz),3.15-3.20(2H,m),3.26-3.38(3H,m),3.54(1H,dd,J=16.3,5.4Hz),3.64-3.75(4H,m),4.39-4.46(1H,m),4.55-4.62(1H,m),5.22(1H,d,J=19.3Hz),5.28(1H,d,J=19.3Hz),5.38(1H,d,J=16.0Hz),5.44(1H,d,J=16.0Hz),5.54-5.61(1H,m),6.53(1H,s),6.99(2H,t,J=14.8Hz),7.13-7.25(5H,m),7.31(1H,s),7.81(1H,d,J=10.9Hz),7.95(1H,t,J=5.7Hz),8.04-8.15(3H,m),8.27-8.33(1H,m),8.42(1H,d,J=9.1Hz).
MS(ESI)m/z：1147(M+H)+.
步驟4：N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]-D-α-天冬胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺醯胺
使上述步驟3所獲得的化合物(85.0mg，0.0760mmoL)，與實施例1步驟2同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標 題化合物(20.0mg，25%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.3Hz),1.11-1.21(2H,m),1.39-1.50(4H,m),1.80-1.91(2H,m),2.05-2.16(3H,m),2.17-2.25(1H,m),2.40(3H,s),2.44-2.47(2H,m),2.81(1H,dd,J=13.4,10.4Hz),2.99(1H,dd,J=13.4,4.3Hz),3.15-3.20(2H,m),3.57-3.78(6H,m),4.30-4.40(1H,m),4.51(1H,q,J=6.9Hz),5.27(2H,s),5.38(1H,d,J=16.5Hz),5.43(1H,d,J=16.5Hz),5.53-5.60(1H,m),6.53(1H,s),6.97(2H,s),7.13-7.27(7H,m),7.31(1H,s),7.80(1H,d,J=11.0Hz),8.00-8.10(4H,m),8.49(2H,d,J=7.9Hz),12.40(1H,brs).
MS(ESI)m/z：1062(M+H)+.
步驟5：抗體-藥物結合物(133)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及上述步驟4所獲得的化合物，藉由與實施例2步驟6同樣之方法，獲得目的之化合物。
抗體濃度：1.63mg/mL，抗體產量：9.8mg(78%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.8。
實施例134抗體-藥物結合物(134)
步驟1：抗體-藥物結合物(134)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及實施例133步驟4所獲得的化合物，藉由與實施例3步驟1同樣之方法，獲得目的之化合物。
抗體濃度：1.66mg/mL，抗體產量：10mg(80%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：7.0。
實施例135抗體-藥物結合物(135)
步驟1：(5S,14S)-5-苯甲基-1-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-14-{[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]胺基}-1,4,7,10,13-五側氧基-3,6,9,12-四氮十七烷-17-酸三級丁酯
於游離體之甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基 -2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺醯胺(國際公開第97/46260號；0.316g，0.360mmoL)、1-羥基苯并三唑(61.4mg，0.400mmoL)、及N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-L-麩胺酸5-三級丁酯(0.175g，0.400mmoL)、三乙基胺(0.178mL，1.28mmoL)之N,N-二甲基甲醯胺(5.00mL)溶液中，添加1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(76.8mg，0.400mmoL)，並於室溫攪拌一晚。減壓餾除溶媒，將獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇=9：1(v/v)]純化，獲得標題化合物(0.215g，51%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.89(3H,t,J=7.3Hz),1.40(9H,s),1.74-2.03(4H,m),2.08-2.17(1H,m),2.19-2.30(3H,m),2.43(3H,s),2.81(1H,dd,J=13.9,9.5Hz),3.01(1H,dd,J=13.7,4.4Hz),3.17-3.22(2H,m),3.57(1H,dd,J=16.6,5.4Hz),3.66-3.78(5H,m),3.88-3.95(1H,m),4.21-4.34(3H,m),4.42-4.48(1H,m),5.26(2H,s),5.41(1H,d,J=16.1Hz),5.45(1H,d,J=16.1Hz),5.57-5.62(1H,m),6.57(1H,s),7.16-7.27(5H,m),7.32-7.36(3H,m),7.42(2H,td,J=7.4,2.8Hz),7.74(3H,d,J=7.3Hz),7.83(1H,d,J=11.2Hz),7.90(2H,d,J=7.3Hz),8.05-8.12(2H,m),8.19(1H,t,J=5.6Hz),8.34(1H,t,J=5.9Hz),8.45(1H,d,J=8.8Hz).
MS(ESI)m/z：1161(M+H)+.
步驟2：(5S,14S)-14-胺基-5-苯甲基-1-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并 [3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-1,4,7,10,13-五側氧基-3,6,9,12-四氮十七烷-17-酸三級丁酯
使上述步驟1所獲得的化合物(185mg，0.160mmoL)，與實施例73步驟2同樣地反應，獲得標題化合物(110mg，73%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.0Hz),1.05(1H,td,J=7.1,1.6Hz),1.40(9H,s),1.57-1.69(1H,m),1.76-1.92(3H,m),2.06-2.15(1H,m),2.16-2.25(3H,m),2.41(3H,s),2.54(3H,d,J=1.2Hz),2.77(1H,dd,J=13.9,9.7Hz),2.98(1H,dd,J=13.9,4.2Hz),3.23-3.28(1H,m),3.44(1H,ddd,J=13.9,6.7,1.2Hz),3.53(1H,dd,J=17.2,5.1Hz),3.62-3.68(2H,m),3.69-3.75(2H,m),4.38-4.46(1H,m),5.21(1H,d,J=19.3Hz),5.28(1H,d,J=19.3Hz),5.38(1H,d,J=16.3Hz),5.43(1H,d,J=16.3Hz),5.54-5.60(1H,m),6.54(1H,brs),7.13-7.26(5H,m),7.32(1H,s),7.81(1H,d,J=10.9Hz),8.02-8.09(2H,m),8.21-8.15(3H,m),8.29-8.34(1H,m),8.42(1H,d,J=8.5Hz).
MS(ESI)m/z：939(M+H)+.
步驟3：(5S,14S)-5-苯甲基-14-{[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]胺基}-1-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-1,4,7,10,13-五側氧基-3,6,9,12-四氮十七烷-17-酸三級丁酯
使上述步驟2所獲得的化合物(110mg，0.117mmoL)與實施例73步驟3同樣地反應，獲得標題化合物(113mg ，85%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.86(3H,t,J=7.3Hz),1.13-1.24(2H,m),1.36(9H,s),1.41-1.53(4H,m),1.67-1.79(1H,m),1.79-1.95(3H,m),2.03-2.10(3H,m),2.13-2.22(3H,m),2.41(3H,s),2.45-2.48(1H,m),2.77(1H,dd,J=13.9,9.1Hz),2.98(1H,dd,J=13.6,4.5Hz),3.14-3.22(2H,m),3.34-3.38(2H,m),3.53(1H,dd,J=16.6,5.7Hz),3.65(2H,d,J=5.4Hz),3.71(2H,dd,J=12.4,5.7Hz),4.01-4.08(1H,m),4.38-4.45(1H,m),5.22(1H,d,J=19.0Hz),5.28(1H,d,J=19.0Hz),5.38(1H,d,J=16.3Hz),5.44(1H,d,J=16.3Hz),5.54-5.60(1H,m),6.53(1H,s),6.99(2H,s),7.13-7.25(5H,m),7.31(1H,s),7.81(1H,d,J=10.9Hz),8.00-8.09(3H,m),8.14(1H,t,J=5.7Hz),8.28-8.33(1H,m),8.41(1H,d,J=8.5Hz).
MS(ESI)m/z：1133(M+H)+.
步驟4：N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]-L-α-麩胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺醯胺
使上述步驟3所獲得的化合物(113mg，0.0998mmoL)，與實施例1步驟2同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(85.0mg，80%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.89(3H,t,J=7.2Hz),1.15-1.24(2H,m),1.44-1.53(4H,m),1.70-2.02(4H,m),2.10(2H,t,J=7.4Hz),2.21(2H,t,J=7.8Hz),2.43(3H,s),2.79(1H,dd, J=13.7,9.4Hz),3.00(1H,dd,J=13.7,4.3Hz),3.16-3.23(2H,m),3.40-3.44(1H,m),3.55(1H,dd,J=16.8,5.5Hz),3.67(2H,d,J=5.5Hz),3.73(2H,dd,J=14.1,5.9Hz),4.12-4.19(1H,m),4.40-4.47(1H,m),5.24(1H,d,J=19.2Hz),5.30(1H,d,J=19.2Hz),5.40(1H,d,J=16.2Hz),5.46(1H,d,J=16.2Hz),5.57-5.63(1H,m),6.52-6.58(1H,m),7.01(2H,s),7.15-7.27(5H,m),7.34(1H,s),7.83(1H,d,J=11.0Hz),8.03(1H,t,J=5.9Hz),8.08(2H,d,J=7.8Hz),8.15(1H,t,J=5.7Hz),8.32(1H,t,J=6.1Hz),8.43(1H,d,J=8.2Hz),12.54(1H,s).
MS(ESI)m/z：1076(M+H)+.
步驟5：抗體-藥物結合物(135)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及上述步驟4所獲得的化合物，藉由與實施例2步驟6同樣之方法，獲得目的之化合物。
抗體濃度：1.61mg/mL，抗體產量：9.7mg(78%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.9。
實施例136抗體-藥物結合物(136)
步驟1：抗體-藥物結合物(136)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及實施例135步驟4所獲得的化合物，藉由與實施例3步驟1同樣之方法，獲得目的之化合物。
抗體濃度：1.60mg/mL，抗體產量：9.6mg(77%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：6.9。
實施例137抗體-藥物結合物(137)
步驟1：(5S,15S)-15-胺基-5-苯甲基-1-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-1,4,7,10,13-五側氧基-3,6,9,12-四氮十六烷-16-酸三級丁酯
將游離體之甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺醯胺(國際公開第97/46260號；150mg，0.199mmoL)，使用N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-L-天冬胺酸1-三級丁酯替代N-[(9H-茀-9-基甲氧 基)羰基]-L-天冬胺酸4-三級丁酯，使與實施例73步驟1同樣地反應，使獲得的粗生成物，與實施例73步驟2同樣地反應，獲得標題化合物(72.0mg，39%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=6.5Hz),1.38(9H,s),1.79-1.92(2H,m),2.06-2.15(1H,m),2.15-2.24(1H,m),2.25-2.35(1H,m),2.41(3H,br.s.),2.45-2.58(2H,m),2.71-2.82(1H,m),2.93-3.04(1H,m),3.10-3.23(2H,m),3.29-3.37(2H,m),3.41-3.79(6H,m),4.32-4.48(1H,m),5.16-5.33(2H,m),5.36-5.46(2H,m),5.53-5.63(1H,m),6.55(1H,s),7.12-7.26(5H,m),7.31(1H,s),7.81(1H,d,J=10.6Hz),7.94-8.04(1H,m),8.24-8.39(3H,m),8.43(1H,d,J=7.4Hz).
步驟2：N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]-L-β-天冬胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺醯胺
使上述步驟1所獲得的化合物(72.0mg，0.0778moL)，與實施例73步驟3同樣地反應，使獲得的粗生成物與實施例2步驟1同樣地反應，獲得呈固體之標題化合物(31.0mg，37%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.4Hz),1.11-1.22(2H,m),1.34-1.52(4H,m),1.85(2H,m,J=8.2Hz),1.94-2.02(2H,m),2.03-2.13(1H,m),2.15-2.25(1H,m),2.31-2.60(2H,m),2.38(3H,s),2.77-2.88(1H,m),2.99(1H,dd,J=13.3,3.5Hz),3.12-3.21(2H,m),3.28-3.41(2H,m),3.41-3.83(6H, m),4.05-4.33(2H,m),5.20(1H,d,J=19.6Hz),5.26(1H,d,J=19.2Hz),5.41(2H,dd,J=19.6,16.4Hz),5.51-5.59(1H,m),6.52(1H,s),7.00(2H,s),7.12-7.27(5H,m),7.30(1H,s),7.77(1H,d,J=10.2Hz),7.83-8.06(2H,m),8.28-9.04(3H,m),8.47(1H,d,J=8.6Hz),12.39-12.69(1H,m).
MS(ESI)m/z：1062(M+H)+.
步驟3：抗體-藥物結合物(137)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及上述步驟2所獲得的化合物，藉由與實施例2步驟6同樣之方法，獲得目的之化合物。
抗體濃度：1.52mg/mL，抗體產量：9.1mg(73%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.7。
實施例138抗體-藥物結合物(138)
步驟1：抗體-藥物結合物(138)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及實施例137步驟2所獲得的化合物，藉由與實施例3步驟1同樣之方法，獲 得目的之化合物。
抗體濃度：1.51mg/mL，抗體產量：9.1mg(73%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：6.7。
實施例139抗體-藥物結合物(139)
步驟1：9H-茀-9-基甲基[(2S)-3-三級丁氧基-1-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并 [3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-1-側氧基丙-2-基]胺甲酸酯
將依喜替康之甲烷磺酸鹽(0.750g,1.41mmoL)，使用O-三級丁基-N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-L-絲胺酸替代N-(三級丁氧基羰基)-甘胺酸，使與實施例80步驟1同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(1.10g，97%)。
MS(ESI)m/z：801(M+H)+.
步驟2：O-三級丁基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]-L-絲胺醯胺
使上述步驟1所獲得的化合物(659mg，0.823mmoL)，與實施例73步驟2同樣地反應，獲得標題化合物(395mg，83%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.84(3H,t,J=7.0Hz),0.90(9H,s),1.02-1.11(1H,m),1.71-1.94(4H,m),2.06-2.16(1H,m),2.17-2.27(1H,m),2.40(3H,s),3.14-3.22(2H,m),3.23-3.29(1H,m),5.22(1H,d,J=19.2Hz),5.29(1H,d,J=19.2Hz),5.42(2H,s),5.56-5.64(1H,m),6.54(1H,s),7.29(1H,s),7.80(1H,d,J=10.9Hz),8.34-8.46(1H,m).
步驟3：甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-O-三級丁基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]-L-絲胺醯胺
將上述步驟2所獲得的化合物(362mg，0.626mmoL) ，使用N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]甘胺醯基甘胺醯基-L-苯丙胺酸(特開2002-60351)替代N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-L-天冬胺酸4-三級丁酯，使用3H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶-3-醇替代N-羥基琥珀醯亞胺，使與實施例58步驟1同樣地反應，使獲得的粗生成物與實施例73步驟2同樣地反應，獲得標題化合物(257mg，49%)。
MS(ESI)m/z：840(M+H)+.
步驟4：(5S,8S,17S)-8-苯甲基-5-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺甲醯基}-17-{[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]胺基}-2,2-二甲基-7,10,13,16-四側氧基-3-氧-6,9,12,15-四氮十九-19-酸三級丁酯
使上述步驟3所獲得的化合物(249mg，0.297mmoL)，與實施例73步驟1同樣地反應，獲得標題化合物(259mg，71%)。
MS(ESI)m/z：1234(M+H)+.
步驟5：(5S,8S,17S)-17-胺基-8-苯甲基-5-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺甲醯基}-2,2-二甲基-7,10,13,16-四側氧基-3-氧-6,9,12,15-四氮十九-19-酸三級丁酯
使上述步驟4所獲得的化合物(259mg，0.210mmoL)，與實施例73步驟2同樣地反應，獲得標題化合物(99.0mg ，47%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.76-0.92(3H,m),0.85(9H,br.s.),1.00-1.12(2H,m),1.37(9H,br.s.),1.73-1.92(1H,m),2.03-2.17(1H,m),2.19-2.29(1H,m),2.30-2.60(2H,m),2.41(3H,br.s.),2.65-2.77(1H,m),2.81-2.92(1H,m),3.15-3.25(2H,m),3.27-3.36(2H,m),3.37-3.42(1H,m),3.45-3.57(2H,m),3.62-3.77(3H,m),4.27-4.39(1H,m),4.46-4.56(1H,m),5.17(1H,d,J=19.9Hz),5.28-5.45(3H,m),5.54-5.64(1H,m),6.54(1H,br.s.),7.08-7.24(5H,m),7.28(1H,br.s.),7.81(1H,d,J=9.4Hz),7.93-8.10(3H,m),8.20-8.31(1H,m),8.44-8.54(1H,m).
MS(ESI)m/z：1011(M+H)+.
步驟6：N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]-L-α-天冬胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]-L-絲胺醯胺
使上述步驟5所獲得的化合物(94.0mg，0.0930moL)，與實施例73步驟3同樣地反應，使獲得的粗生成物與實施例1步驟2同樣地反應，獲得呈固體之標題化合物(51.0mg，50%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.85(3H,t,J=7.4Hz),1.17(2H,quin,J=7.7Hz),1.38-1.52(4H,m),1.76-1.91(2H,m),2.08(3H,t,J=7.2Hz),2.18-2.36(1H,m),2.37-2.53(1H,m),2.41(3H,s),2.60-2.75(2H,m),2.85(1H,dd,J=13.7,3.9Hz),3.1 4-3.22(2H,m),3.29-3.39(2H,m),3.47-3.72(6H,m),4.28(1H,dd,J=12.9,5.5Hz),4.43-4.61(2H,m),4.88-5.01(1H,m),5.19(1H,d,J=18.4Hz),5.29(1H,d,J=18.8Hz),5.40(2H,dd,J=21.9,16.8Hz),5.51-5.60(1H,m),6.52(1H,s),6.94-7.03(2H,m),7.10-7.24(5H,m),7.29(1H,s),7.80(1H,d,J=10.6Hz),7.92-7.99(1H,m),7.99-8.08(2H,m),8.09-8.16(2H,m),8.41(1H,d,J=9.4Hz),12.29(1H,brs).
MS(ESI)m/z：1092(M+H)+.
步驟7：抗體-藥物結合物(139)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及上述步驟6所獲得的化合物，藉由與實施例2步驟6同樣之方法，獲得目的之化合物。
抗體濃度：1.61mg/mL，9.7mg(78%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.9。
實施例140抗體-藥物結合物(140)
步驟1：抗體-藥物結合物(140)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及實施例139步驟6所獲得的化合物，藉由與實施例3步驟1同樣之方法，獲得目的之化合物。
抗體濃度：1.52mg/mL，抗體產量：9.1mg(73%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：6.9。
實施例141抗體-藥物結合物(141)
步驟1：N-{3-[2-(2-{[3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯基]胺基}乙氧基)乙氧基]丙醯基}-甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺醯胺
使用3-(2-(2-(3-順丁烯二醯亞胺丙醯胺)乙氧基)乙氧基)丙酸N-琥珀醯亞胺基酯替代6-順丁烯二醯亞胺己酸N-琥珀醯亞胺基酯，使與實施例86步驟1同樣地反應，獲得呈固體之標題化合物(39mg，55%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.3Hz),1 .79-1.91(2H,m),2.06-2.15(1H,m),2.16-2.24(1H,m),2.29-2.34(2H,m),2.37-2.43(2H,m),2.41(3H,s),2.54-2.58(2H,m),2.77(1H,dd,J=14.2,9.6Hz),2.98(1H,dd,J=14.2,4.6Hz),3.10-3.15(2H,m),3.15-3.20(2H,m),3.44-3.47(4H,m),3.55-3.61(6H,m),3.62-3.69(2H,m),3.70-3.75(2H,m),4.39-4.46(1H,m),5.22(1H,d,J=18.8Hz),5.28(1H,d,J=18.8Hz),5.39(1H,d,J=16.5Hz),5.44(2H,d,J=16.5Hz),5.54-5.61(1H,m),6.53(1H,s),6.99(2H,s),7.14-7.25(5H,m),7.32(1H,s),7.81(1H,d,J=11.0Hz),7.97-8.03(2H,m),8.08(1H,d,J=7.8Hz),8.17(1H,t,J=5.7Hz),8.31(1H,t,J=6.0Hz),8.42(1H,d,J=8.7Hz).
MS(APCI)m/z：1064(M+H)+.
步驟2：抗體-藥物結合物(141)
使用上述步驟1所獲得的化合物作為藥物連接物，調節10mM TCEP水溶液之添加量使抗體還原時之TCEP相對於抗體之莫耳比成為2.3，調節10mM藥物連接物溶液之添加量使藥物連接物結合時之藥物連接物相對於抗體的莫耳比成為4.6，又，調節100mM NAC水溶液之添加量使反應停止時之NAC相對於抗體之莫耳比成為9.2，藉由與實施例2步驟6同樣之操作，獲得6mL之含有目的之化合物的溶液，並獲得下述之特性值。
抗體濃度：1.28mg/mL，抗體產量：7.68mg(77%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：2.6。
實施例142抗體-藥物結合物(142)
步驟1：抗體-藥物結合物(142)
使用實施例141步驟1所獲得的化合物作為藥物連接物，調節10mM TCEP水溶液之添加量使抗體還原時之TCEP相對於抗體之莫耳比成為4.6，調節10mM藥物連接物溶液之添加量使藥物連接物結合時之藥物連接物相對於抗體的莫耳比成為9.2，又，調節100mM NAC水溶液之添加量使反應停止時之NAC相對於抗體之莫耳比成為18.4，藉由與實施例3步驟1同樣之操作，獲得6mL之含有目的之化合物的溶液，並獲得下述之特性值。
抗體濃度：1.14mg/mL，抗體產量：6.84mg(68%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：4.8。
實施例143抗體-藥物結合物(143)
步驟1：抗體-藥物結合物(143)
使用實施例141步驟1所獲得的化合物作為藥物連接物，調節10mM TCEP水溶液之添加量使抗體還原時之TCEP相對於抗體之莫耳比成為4.6，調節10mM藥物連接物溶液之添加量使藥物連接物結合時之藥物連接物相對於抗體的莫耳比成為9.2，又，調節100mM NAC水溶液之添加量使反應停止時之NAC相對於抗體之莫耳比成為18.4，藉由與實施例3步驟1同樣之操作，獲得6mL之含有目的之化合物的溶液，並獲得下述之特性值。
抗體濃度：1.60mg/mL，抗體產量：9.12mg(73%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：5.8。
實施例144抗體-藥物結合物(144)
步驟1：N-{2-[(三級丁氧基羰基)胺基]乙基}-N-(2-三級丁氧基-2-側氧基乙基)甘胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺醯胺
使用實施例51步驟2所獲得的化合物(0.198g，0.597mmoL)替代(2S)-4-三級丁氧基-2-{[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]胺基}-4-側氧基丁酸，使與實施例58步驟1同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(0.380g，89%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.2Hz),1.35(9H,s),1.39(9H,s),1.84-1.86(2H,m),2.09-2.11(1H,m),2.18-2.21(1H,m),2.41(3H,s),2.97-2.99(5H,m),3.18-3.23(4 H,m),3.38-3.40(3H,m),3.55-3.73(6H,m),4.43(1H,s),5.22(1H,d,J=19.2Hz),5.28(1H,d,J=19.2Hz),5.39(1H,d,J=16.4Hz),5.44(1H,d,J=16.4Hz),5.59(1H,s),6.54(1H,s),6.59(1H,s),6.78(1H,s),7.15-7.23(5H,m),7.32(1H,s),7.81(1H,d,J=10.9Hz),8.05-8.09(2H,m),8.32(1H,s),8.42(1H,d,J=8.6Hz).
MS(APCI)m/z：1068(M+H)+.
步驟2：N-(2-胺基乙基)-N-(羧基甲基)甘胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺醯胺
使上述步驟1所獲得的化合物(0.366g，0.338mmoL)，與實施例1步驟2同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(0.180g，58%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.0Hz),1.82-1.89(2H,m),2.11-2.13(1H,m),2.18-2.20(1H,m),2.41(3H,s),2.77-2.81(5H,m),2.98-3.00(1H,m),3.16-3.18(3H,m),3.39-3.43(3H,m),3.58(1H,dd,J=16.8,5.5Hz),3.71-3.73(5H,m),4.45-4.46(1H,m),5.22(1H,d,J=18.0Hz),5.28(1H,d,J=18.0Hz),5.39(1H,d,J=17.6Hz),5.44(1H,d,J=15.6Hz),5.58-5.59(1H,m),6.55(1H,s),7.18-7.23(6H,m),7.32(1H,s),7.80(2H,br.s),7.82(1H,d,J=10.9Hz),8.10(1H,d,J=5.5Hz),8.19(1H,d,J=7.8Hz),8.36(1H,s),8.43(1H,s),8.49(1H,d,J=8.6Hz).
MS(APCI)m/z：912(M+H)+.
步驟3：N-(羧基甲基)-N-[2-(2,5-二側氧基 -2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙基]甘胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺醯胺
將上述步驟2所獲得的化合物(81.0mg，88.8μmoL)，冰冷下溶解於飽和碳酸氫鈉水溶液(1.00mL)、及1,4-二烷(4.00mL)，並攪拌10分鐘。冰冷下添加甲基2,5-二側氧基吡咯-1-甲酸酯(13.8mg，88.8μmoL)，並攪拌20分鐘。再於室溫攪拌30分鐘。添加10%檸檬酸水溶液並攪拌1晚。以氯仿萃取，獲得的有機層以硫酸鈉乾燥，並過濾。減壓下將濾液餾除溶媒。將獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇：水=7：3：1(v/v/v)之分配有機層]純化，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(14.9mg，17%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.2Hz),1.80-1.91(2H,m),2.09-2.11(1H,m),2.17-2.20(1H,m),2.38(3H,s),2.63-2.68(2H,m),2.84-3.00(2H,m),3.12-3.16(3H,m),3.40-3.45(6H,m),3.63-3.76(5H,m),4.33-4.35(1H,m),5.24(2H,s),5.38(1H,d,J=16.8Hz),5.43(1H,d,J=16.4Hz),5.56-5.57(1H,m),6.52(1H,s),6.95(2H,s),7.14-7.21(6H,m),7.31(1H,s),7.78(1H,d,J=11.0Hz),8.10(1H,s),8.54(1H,d,J=7.8Hz),8.72(3H,br.s).
MS(APCI)m/z：992(M+H)+.
步驟4：抗體-藥物結合物(144)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及上述步驟3所獲 得的化合物，藉由與實施例2步驟6同樣之方法，獲得目的之化合物。
抗體濃度：10.55mg/mL，抗體產量：7.4mg(59%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.4。
實施例145抗體-藥物結合物(145)
步驟1：抗體-藥物結合物(145)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及實施例144步驟3所獲得的化合物，藉由與實施例3步驟1同樣之方法，獲得目的之實施例化合物。
抗體濃度：9.91mg/mL，抗體產量：6.9mg(55%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：6.3。
實施例146抗體-藥物結合物(146)
步驟1：N-(羧基甲基)-N-(2-{[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]胺基}乙基)甘胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺醯胺
使實施例144步驟2所獲得的化合物(49.0mg，53.7μmoL)，與實施例121步驟1同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(14.9g，25%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.2Hz),1.07-1.16(2H,m),1.41-1.43(4H,m),1.85-1.87(2H,m),1.96-1.98(2H,m),2.09-2.12(1H,m),2.17-2.19(1H,m),2.37-2.42(3H,m),2.38(3H,s),2.48-2.60(4H,m),2.87-3.48(8H,m),3.63- 3.82(5H,m),4.30(1H,s),5.22(1H,d,J=20.3Hz),5.29(1H,d,J=19.2Hz),5.41(2H,s),5.56-5.58(1H,m),6.53(1H,s),6.99(2H,s),7.20(6H,d,J=10.6Hz),7.32(1H,s),7.78-7.80(3H,m),8.14-8.16(2H,m),8.32(1H,s),8.53(1H,d,J=8.2Hz).
MS(APCI)m/z：1105(M+H)+.
步驟2：抗體-藥物結合物(146)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及上述步驟1所獲得的化合物，藉由與實施例2步驟6同樣之方法，獲得目的之化合物。
抗體濃度：1.48mg/mL，抗體產量：8.9mg(71%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.1。
實施例147抗體-藥物結合物(147)
步驟1：抗體-藥物結合物(147)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及實施例146步驟1所獲得的化合物，藉由與實施例3步驟1同樣之方法，獲得目的之化合物。
抗體濃度：1.49mg/mL，抗體產量：8.9mg(71%)，抗 體每一分子之藥物平均結合數(n)：6.0。
實施例148抗體-藥物結合物(148)
步驟1：N-(3-磺醯基丙醯基)甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺醯胺
將游離體之甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺醯胺(國際公開第97/46260號；0.200g，0.27mmoL)，使用3-巰基丙酸(62.0mg，0.58mmoL)替代N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-L-天冬胺酸4-三級丁酯，使與實施例73步驟1同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(55.0mg，25%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.88(3H,t,J=7.4Hz),1 .82-1.93(2H,m),2.03-2.29(2H,m),2.35-2.57(3H,m),2.43(3H,s),2.66(2H,q,J=7.0Hz),2.79(1H,dd,J=13.7,9.4Hz),3.00(1H,dd,J=13.5,4.5Hz),3.12-3.25(2H,m),3.56(1H,dd,J=16.8,5.5Hz),3.63-3.79(5H,m),4.42-4.48(1H,m),5.27(2H,dd,J=23.9,19.2Hz),5.43(2H,dd,J=20.9,16.2Hz),5.54-5.64(1H,m),6.55(1H,s),7.13-7.28(5H,m),7.33(1H,s),7.83(1H,d,J=11.0Hz),8.03(1H,t,J=5.9Hz),8.10(1H,d,J=8.2Hz),8.24(1H,t,J=5.5Hz),8.34(1H,t,J=5.7Hz),8.45(1H,d,J=8.6Hz).
MS(ESI)m/z：842(M+H)+.
步驟2：抗體-藥物結合物(148)
抗體之SMCC衍生物化：將以參考例1製作的曲妥珠單抗，使用共通操作C-2及B(使用1.37mLmg-1cm-1作為280nm吸光係數)，將介質置換為PBS6.5/EDTA，調製為20mg/mL之抗體濃度。將本溶液(0.5mL)置入1.5mL管，於其中於室溫添加含27.6mM之SMCC的二甲基亞碸溶液(0.0125mL；相對於抗體一分子相當為5.1當量)及二甲基亞碸(0.0125mL)，並於室溫使反應2小時。對此反應液進行使用共通操作D-2的純化，獲得1.2mL之含約10mg之SMCC衍生物化的抗體的溶液。
抗體與藥物連接物之結合：對上述溶液，於室溫添加含10mM之上述步驟1所獲得的化合物的二甲基乙醯胺溶液(0.03mL；相對於抗體一分子相當為5.8當量)，使用試管混勻器而於室溫攪拌16小時，使藥物連接物與抗體結合。
純化：將上述溶液，進行使用共通操作D-1(使用ABS 作為緩衝液)的純化，獲得6mL之含有目的化合物的溶液。
特性評價：使用共通操作B、E，而獲得下述之特性值。
抗體濃度：1.22mg/mL，抗體產量：7.3mg(73%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：2.7。
實施例149抗體-藥物結合物(149)
步驟1：抗體-藥物結合物(149)
調節27.6mM SMCC之DMSO溶液之添加量，使SMCC相對於抗體一分子之添加量成為10.2當量，調節10mM藥物連接物之二甲基乙醯胺溶液之添加量使實施例148步驟1所獲得的化合物相對於抗體一分子之添加量成為11.6當量，藉由與實施例148步驟2同樣之操作，獲得6mL之含有目的之化合物的溶液，並獲得下述之特性值。
抗體濃度：1.10mg/mL，抗體產量：6.6mg(66%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：4.2。
實施例150抗體-藥物結合物(150)
步驟1：N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基甘胺醯基-O-三級丁基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]-L-絲胺醯胺
將實施例139步驟2所獲得的化合物(0.27g，0.46mmoL)，使用實施例34步驟2所獲得的化合物(0.39g，0.69mmoL)替代4-(三級丁氧基羰基胺基)丁酸，使與實施例1步驟1同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(0.313g，72%)。
MS(ESI)m/z：1119(M+H)+.
步驟2：甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基甘胺醯基-O-三級丁基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]-L-絲胺醯胺
使上述步驟1所獲得的化合物(0.31g，0.28moL)，與實施例73步驟2同樣地反應，將溶媒濃縮後，不進行純化而用於下一反應。
步驟3：N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基甘胺醯基-O-三級丁基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]-L-絲胺醯胺
使上述步驟2所獲得的化合物(0.28moL)與實施例73步驟3同樣地反應，獲得呈橙色固體之標題化合物(0.306g，定量的，2步驟)。
MS(ESI)m/z：1090(M+H)+.
步驟4：N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基甘胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]-L-絲胺醯胺
使上述步驟3所獲得的化合物(0.31g，0.28moL)，與實施例1步驟2同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化 合物(0.12g，41%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.86(3H,t,J=7.4Hz),1.13-1.23(2H,m),1.39-1.52(6H,m),1.74-1.90(2H,m),2.03-2.14(4H,m),2.39(3H,s),2.60-2.95(2H,m),3.49-3.81(10H,m),4.15-4.59(3H,m),5.15-5.31(2H,m),5.40(2H,s),5.53-5.61(1H,m),6.52(1H,brs),6.99(2H,s),7.12-7.29(6H,m),7.76(1H,d,J=11.0Hz),7.94-8.16(4H,m),8.25(1H,t,J=5.5Hz),8.50(1H,d,J=8.6Hz).
MS(ESI)m/z：1034(M+H)+.
步驟5：抗體-藥物結合物(150)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及上述步驟4所獲得的化合物，藉由與實施例2步驟6同樣之方法，獲得目的之化合物。
抗體濃度：1.57mg/mL，抗體產量：9.4mg(75%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.4。
實施例151抗體-藥物結合物(151)
步驟1：抗體-藥物結合物(151)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及實施例150步驟4所獲得的化合物，藉由與實施例3步驟1同樣之方法，獲得目的之化合物。
抗體濃度：1.76mg/mL，抗體產量：10.6mg(85%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：6.9。
實施例152抗體-藥物結合物(152)
步驟1：N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]-N2-[(9H- 茀-9-基甲氧基)羰基]-L-α-麩醯胺酸三級丁酯
將依喜替康之甲烷磺酸鹽(532mg，1.00mmoL)，使用N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-L-麩胺酸5-三級丁酯(511mg，1.20mmoL)替代N-(三級丁氧基羰基)-甘胺酸，使與實施例80步驟1同樣地反應，獲得的粗生成物不進行純化而用於下一反應。
步驟2：N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]-L-α-麩醯胺酸三級丁酯
使上述步驟1獲得的粗生成物，與實施例73步驟2同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(411mg，66%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.4Hz),1.32(9H,s),1.51-2.35(8H,m),2.41(3H,s),3.13-3.22(3H,m),5.21(2H,dd,J=57.7,19.0Hz),5.42(2H,dd,J=18.4,16.4Hz),5.51-5.59(1H,m),6.54(1H,s),7.30(1H,s),7.81(1H,d,J=10.9Hz),8.34-8.42(1H,m).
步驟3：N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]甘胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]-L-α-麩醯胺酸三級丁酯
將上述步驟2所獲得的化合物(411mg，0.662mmoL)，使用N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]甘胺酸(236mg，0.795mmoL)替代N-(三級丁氧基羰基)-甘胺酸，使與實施 例80步驟1同樣地反應，獲得的粗生成物不進行純化而用於下一反應。
步驟4：甘胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]-L-α-麩醯胺酸三級丁酯
使上述步驟3獲得的粗生成物，與實施例73步驟2同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(219mg，49%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.4Hz),1.27(9H,s),1.66-2.45(8H,m),2.41(3H,s),3.11-3.45(4H,m),4.30-4.37(1H,m),5.19(2H,dd,J=109.1,18.8Hz),5.41(2H,dd,J=16.4,19.9Hz),5.50-5.58(1H,m),6.55(1H,s),7.31(1H,s),7.81(1H,d,J=10.9Hz),8.14(1H,s),8.65(1H,d,J=8.2Hz).
步驟5：N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]-L-α-麩醯胺酸酯三級丁酯
將上述步驟4所獲得的化合物(219mg，0.323mmoL)，使用N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基甘胺酸(217mg，0.388mmoL)替代N-(三級丁氧基羰基)-甘胺酸，使與實施例80步驟1同樣地反應，獲得的粗生成物不進行純化而用於下一反應。
步驟6：甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基 甘胺醯基甘胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]-L-α-麩醯胺酸三級丁酯
使上述步驟5獲得的粗生成物，與實施例73步驟2同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(131mg，41%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.2Hz),1.28(9H,s),1.66-2.29(8H,m),2.40(3H,s),2.72-2.80(1H,m),3.00-3.08(1H,m),3.37-3.10(4H,m),3.55-3.84(6H,m),4.23-4.31(1H,m),4.49-4.55(1H,m),5.19(2H,dd,J=104.4,18.8Hz),5.42(2H,dd,J=19.9,16.4Hz),5.50-5.58(1H,m),6.55(1H,s),7.16-7.28(5H,m),7.31(1H,s),7.81(1H,d,J=10.9Hz),7.96-8.01(1H,m),8.09(1H,d,J=7.4Hz),8.12-8.19(1H,m),8.24(1H,d,J=8.2Hz),8.34-8.40(1H,m),8.52(1H,d,J=8.6Hz).
步驟7：N-[3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯基]甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]-L-α-麩醯胺酸三級丁酯
將上述步驟6所獲得的化合物(131mg，0.132moL)，使用3-順丁烯二醯亞胺丙酸N-琥珀醯亞胺基酯替代6-順丁烯二醯亞胺己酸N-琥珀醯亞胺基酯，使與實施例73步驟3同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(102mg ，68%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.4Hz),1.28(9H,s),2.87-2.86(10H,m),2.40(3H,s),2.73-2.82(1H,m),2.99-3.07(1H,m),3.11-3.20(2H,m),3.54-3.80(10H,m),4.23-4.31(1H,m),4.45-4.52(1H,m),5.19(2H,dd,J=104.1,18.8Hz),5.41(2H,dd,J=16.4,20.0Hz),5.50-5.58(1H,m),6.54(1H,s),6.99(2H,s),7.14-7.26(5H,m),7.31(1H,s),7.81(1H,d,J=11.0Hz),7.92-7.97(1H,m),8.00-8.05(1H,m),8.06-8.13(2H,m),8.26-8.32(2H,m),8.50(1H,d,J=8.6Hz).
步驟8：N-[3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯基]甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3’,4’：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]-L-α-麩醯胺酸
使上述步驟7所獲得的化合物(102mg，0.0889moL)，與實施例1步驟2同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(74.0mg，76%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.88(3H,t,J=7.4Hz),2.56-1.74(10H,m),2.40(3H,s),2.74-2.83(1H,m),2.99-3.08(1H,m),3.12-3.19(2H,m),3.55-3.78(10H,m),4.22-4.33(1H,m),4.44-4.53(1H,m),5.19(2H,dd,J=83.1,19.0Hz),5.43(2H,s),5.49-5.56(1H,m),6.53(1H,s),6.99(2H,s),7.15-7.29(5H,m),7.31(1H,s),7.80(1H,d,J=11.3Hz),7.93-8.19(4H,m),8.24-8.36(2H,m),8.44-8.53(1H,m),12.08(1H,s).
MS(APCI)m/z：1091(M+H)+.
步驟9：抗體-藥物結合物(152)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及上述步驟8所獲得的化合物，藉由與實施例2步驟6同樣之方法，獲得目的之化合物。
抗體濃度：1.58mg/mL，抗體產量：9.5mg(76%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.9。
實施例153抗體-藥物結合物(153)
步驟1：抗體-藥物結合物(153)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及實施例152步驟8所獲得的化合物，藉由與實施例3步驟1同樣之方法，獲得目的之實施例化合物。
抗體濃度：1.45mg/mL，抗體產量：8.7mg(70%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：7.2。
實施例154抗體-藥物結合物(154)
步驟1：N-(三級丁氧基羰基)甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基甘胺醯基甘胺醯基甘胺醯基苯基丙胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺醯胺
將甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基 -N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺醯胺(0.550g，0.730mmoL)，使用N-(三級丁氧基羰基)-甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基甘胺酸(0.382g，0.876mmoL)替代N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-L-天冬胺酸4-三級丁酯，使與實施例73步驟1同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(0.566g，66%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.86(3H,t,J=7.2Hz),1.37(9H,s),1.79-1.90(2H,m),2.10-2.13(1H,m),2.18-2.21(1H,m),2.41(3H,s),2.77-2.80(2H,m),2.98(1H,dd,J=13.9,4.5Hz),3.04(1H,dd,J=13.7,3.9Hz),3.17-3.19(2H,m),3.54-3.61(4H,m),3.70-3.74(8H,m),4.44(1H,td,J=8.4,4.7Hz),4.52(1H,td,J=8.8,4.0Hz),5.22(1H,d,J=19.6Hz),5.28(1H,d,J=19.6Hz),5.38(1H,d,J=16.4Hz),5.44(1H,d,J=16.4Hz),5.56-5.60(1H,m),6.53(1H,s),6.99(1H,t,J=5.7Hz),7.17-7.23(10H,m),7.31(1H,s),7.81(1H,d,J=11.0Hz),7.89(1H,t,J=6.1Hz),8.03-8.05(2H,m),8.10(1H,d,J=7.8Hz),8.15(1H,d,J=8.2Hz),8.32-8.33(2H,m),8.44(1H,d,J=8.2Hz).
MS(APCI)m/z：1172(M+H)+.
步驟2：甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基甘胺醯基甘胺醯基甘胺醯基苯基丙胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺醯胺
使上述步驟1所獲得的化合物(0.440g，0.376mmoL)，與實施例1步驟2同樣地反應，獲得呈黃色固體之標題化合物(0.264g，66%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.86(3H,t,J=7.2Hz),1.79-1.90(2H,m),2.14-2.20(2H,m),2.41(3H,s),2.73-2.80(2H,m),2.98(1H,dd,J=13.7,4.3Hz),3.05(1H,dd,J=13.9,4.5Hz),3.17-3.18(2H,m),3.55-3.88(12H,m),4.45(1H,dd,J=13.1,8.8Hz),4.56(1H,td,J=8.9,4.3Hz),5.22(1H,d,J=19.9Hz),5.27(1H,t,J=10.9Hz),5.38(1H,d,J=16.0Hz),5.44(1H,d,J=16.4Hz),5.58(1H,t,J=4.1Hz),6.55(1H,s),7.16-7.32(10H,m),7.32(1H,s),7.81(1H,d,J=10.9Hz),7.99(3H,brs),8.07-8.12(2H,m),8.34-8.38(3H,m),8.47-8.51(2H,m).
MS(APCI)m/z：1072(M+H)+.
步驟3：N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基甘胺醯基甘胺醯基甘胺醯基苯基丙胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺醯胺
使上述步驟2所獲得的化合物(0.229g，0.213mmoL)，與實施例5步驟8同樣地反應，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(0.0282g，11%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.2Hz),1.17-1.63(8H,m),2.08-2.10(3H,m),2.31-2.35(1H,m),2.40(3H,s),2.76(1H,dd,J=10.6,3.1Hz),2.95-3.11(2H,m),3.13-3.2 4(3H,m),3.36-3.41(2H,m),3.59-3.79(12H,m),4.50-4.52(2H,m),5.23-5.25(2H,m),5.40-5.41(2H,m),5.57-5.58(1H,m),6.53(1H,s),6.99(2H,s),7.14-7.26(10H,m),7.32(1H,s),7.81(1H,d,J=11.0Hz),7.97-8.13(6H,m),8.28-8.32(2H,m),8.42-8.47(1H,m).
MS(APCI)m/z：1265(M+H)+.
步驟4：抗體-藥物結合物(154)
使用上述步驟3所獲得的化合物作為藥物連接物，調節10mM TCEP水溶液之添加量使抗體還原時之TCEP相對於抗體之莫耳比成為2.3，調節10mM藥物連接物溶液之添加量使藥物連接物結合時之藥物連接物相對於抗體的莫耳比成為4.6，又，調節100mM NAC水溶液之添加量使反應停止時之NAC相對於抗體之莫耳比成為9.2藉由與實施例78步驟5同樣之操作，獲得6mL之含有目的之實施例化合物的溶液，並獲得下述之特性值。
抗體濃度：1.16mg/mL，抗體產量：7.0mg(70%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：2.2。
實施例155抗體-藥物結合物(155)
步驟1：抗體-藥物結合物(155)
使用實施例154步驟3所獲得的化合物作為藥物連接物，調節10mM TCEP水溶液之添加量使抗體還原時之TCEP相對於抗體之莫耳比成為4.6，調節10mM藥物連接物溶液之添加量使藥物連接物結合時之藥物連接物相對於抗體的莫耳比成為9.2，又，調節100mM NAC水溶液之添加量使反應停止時之NAC相對於抗體之莫耳比成為18.4，藉由與實施例78步驟5同樣之操作，獲得6mL之含有目的之化合物的溶液，並獲得下述之特性值。
抗體濃度：1.36mg/mL，抗體產量：8.2mg(82%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：4.9。
實施例156抗體-藥物結合物(156)
步驟1：(3S)-4-{[2-(苯甲基氧基)-2-側氧基乙基](甲基)胺基}-3-{[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]胺基}-4-側氧基丁酸三級丁酯
將(2S)-4-三級丁氧基-2-{[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]胺基}-4-側氧基丁酸(9.00g，21.9mmoL)溶解於N,N-二甲基甲醯胺(30.0mL)，添加1-羥基苯并三唑(2.96g，21.9mmoL)、及1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(8.39g，43.8mmoL)並於室溫攪拌1小時。添加苯甲基N-甲基甘胺酸酯4-甲基苯磺酸酯(7.69g，21.9mmoL)、及三乙基胺(3.05mL，21.88mmoL)，於室溫攪拌21小時。添加水(200mL)，以150mL之乙酸乙酯萃取3次，有機層以無水硫酸鈉乾燥。減壓下餾除溶媒，獲得含標題化合物的無色固體之混合物(11.9g)。本混合物不進行進一步純化而用於下一反應。
步驟2：{[(2S)-4-三級丁氧基-2-{[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]胺基}-4-側氧基丁醯基](甲基)胺基}乙酸
將上述步驟2所獲得的混合物(11.9g)溶解於甲醇(200mL)。添加鈀碳觸媒(500mg)，氫氣環境下，於室溫攪拌7小時。藉由矽藻土過濾去除不溶物，減壓餾除溶媒，獲得含標題化合物的無色固體之混合物(9.21g)。本混合物不進行進一步純化而用於下一反應。
步驟3：N-(三級丁氧基羰基)甘胺醯基-L-苯基丙胺酸苯甲基酯
將N-(三級丁氧基羰基)甘胺酸(5.00g，28.5mmoL)溶解於N,N-二甲基甲醯胺(30mL)，添加1-羥基苯并三唑(3.86g，28.5mmoL)、及1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(10.9g，57.1mmoL)並於室溫攪拌1小時。添加苯甲基L-苯基丙胺酸酯4-甲基苯磺酸酯(12.2g， 28.5mmoL)、及三乙基胺(3.98mL，28.5mmoL)，並於室溫攪拌17小時。將反應液注入水中，攪拌後，濾取析出的不溶物。以水洗淨而獲得呈無色固體之標題化合物(11.7g，99%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：1.38(9H,s),2.96(1H,dd,J=13.7,8.5Hz),3.03(1H,dd,J=13.8,6.0Hz),3.52(1H,dd,J=17.0,6.2Hz),3.58(1H,dd,J=16.8,6.3Hz),4.54(1H,dd,J=14.2,7.6Hz),5.06(1H,d,J=12.4Hz),5.10(1H,d,J=12.4Hz),6.93(1H,t,J=6.0Hz),7.17-7.37(10H,m),8.27(1H,d,J=7.8Hz).
MS(ESI)m/z：413(M+H)+.
步驟4：苯甲基甘胺醯基-L-苯基丙胺酸酯
將上述步驟3所獲得的化合物(11.7g，28.2mmoL)溶解於4N鹽酸二烷溶液(100mL)，並於室溫攪拌2小時。減壓餾除溶媒，獲得呈無色固體之標題化合物之鹽酸鹽(9.98g，定量的)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：2.96(1H,dd,J=13.8,8.7Hz),3.08(1H,dd,J=13.9,5.9Hz),3.51-3.57(2H,m),4.62(1H,q,J=7.2Hz),5.07(1H,d,J=12.4Hz),5.13(1H,d,J=12.7Hz),7.21-7.38(10H,m),8.10(3H,s),9.00(1H,s).
MS(ESI)m/z：313(M+H)+.
步驟5：苯甲基(5S,14S)-14-苯甲基-5-(2-三級丁氧基-2-側氧基乙基)-1-(9H-茀-9-基)-7-甲基-3,6,9,12-四側氧基-2-氧-4,7,10,13-四氮十五烷-15-酸酯
將步驟2所獲得的混合物(2.8g)溶解於N,N-二甲基甲醯胺(20mL)，添加1-羥基苯并三唑(780mg，5.80mmoL) 、及1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(10.9g，11.6mmoL)、步驟4所獲得的化合物(2.02g，5.80mmoL)、三乙基胺(590μL，5.80mmoL)，並於室溫攪拌13小時。將反應液注入水中，攪拌後，濾取析出的不溶物。以水洗淨而獲得呈無色固體之標題化合物(4.51g，87%，3步驟)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：1.36(9H,s),2.43-2.48(1H,m),2.60-2.66(1H,m),2.79-2.81(1H,m),2.93-2.97(1H,m),3.03(3H,s),3.63-4.07(4H,m),4.17-4.35(3H,m),4.51-4.57(1H,m),4.69-4.80(1H,m),5.05-5.09(2H,m),7.18-7.46(14H,m),7.58-7.83(2H,m),7.82-8.03(4H,m),8.26-8.44(1H,m).
MS(ESI)m/z：777(M+H)+.
步驟6：(5S,14S)-14-苯甲基-5-(2-三級丁氧基-2-側氧基乙基)-1-(9H-茀-9-基)-7-甲基-3,6,9,12-四側氧基-2-氧-4,7,10,13-四氮十五烷-15-酸
將上述步驟5所獲得的化合物(4.49g，5.78mmoL)溶解於甲醇(50.0mL)。添加觸媒量之鈀碳觸媒，並於氫氣環境下，於室溫攪拌1.5小時。不溶物藉由矽藻土過濾而去除，減壓餾除溶媒，獲得呈無色固體之標題化合物(3.99g，定量的)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：1.35(9H,s),2.42-2.45(1H,m),2.62-2.67(1H,m),2.77(1H,s),2.85-2.90(1H,m),3.00(3H,s),3.03-3.06(1H,m),3.61-4.06(3H,m),4.25-4.29(3H,m),4.40-4.42(1H,m),4.79-4.80(1H,m),7.19-7.43(9H,m),7.64-7.70(2H,m),7.81-7.89(3H,m),7.99(1H,t,J=5.7Hz),8.12 (1H,d,J=8.1Hz),8.21(1H,d,J=7.3Hz).
MS(ESI)m/z：687(M+H)+.
步驟7：(5S,14S)-5-苯甲基-1-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-14-{[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]胺基}-12-甲基-1,4,7,10,13-五側氧基-3,6,9,12-四氮十五烷-16-酸三級丁酯
將實施例80步驟2之化合物之甲烷磺酸鹽(400mg，0.659mmoL)溶解於N,N-二甲基甲醯胺(10mL)，添加1-羥基苯并三唑(90.0mg，0.659mmoL)、及1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(250mg，1.32mmoL)、上述步驟6所獲得的化合物(450mg，0.659mmoL)、三乙基胺(90.0μL，0.0659mmoL)，並於室溫攪拌19小時。減壓餾除溶媒，將獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇=4：1(v/v)]純化，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(595mg，78%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.86(3H,t,J=7.3Hz),1.35(9H,s),1.80-1.89(2H,m),2.10-2.11(1H,m),2.17-2.19(1H,m),2.39(3H,s),2.40-2.45(1H,m),2.58-2.82(3H,m),2.99(3H,s),3.17(2H,s),3.53-4.01(5H,m),4.25-4.40(5H,m),4.65-4.79(1H,m),5.22(2H,s),5.37(1H,d,J=16.4Hz),5.42(1H,d,J=16.4Hz),5.56-5.58(1H,m),6.52(1H,s),7.14-7.40(9H,m),7.66-7.68(2H,m),7.79-7.84(4H,m),7.96-8.22(2H,m),8.34-8.43(3H,m).
MS(ESI)m/z：1161(M+H)+.
步驟8：(5S,14S)-14-胺基-5-苯甲基-1-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-12-甲基-1,4,7,10,13-五側氧基-3,6,9,12-四氮十五烷-16-酸三級丁酯
將上述步驟7所獲得的化合物(520mg，0.448mmoL)溶解於N,N-二甲基甲醯胺(8.00mL)，添加哌啶(2.00mL)，並於室溫攪拌1小時。減壓餾除溶媒，將獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇：水=7：3：1(v/v/v)之分配有機層]純化，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(350mg，83%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.86(3H,t,J=7.1Hz),1.36(9H,s),1.82-1.88(3H,m),2.12-2.22(3H,m),2.40(3H,s),2.54(1H,s),2.76-2.81(1H,m),2.98-3.03(1H,m),3.04(3H,s),3.16-3.17(2H,m),3.33(2H,s),3.50-4.16(6H,m),4.47(1H,t,J=17.1Hz),5.24(2H,s),5.39(1H,d,J=16.6Hz),5.43(1H,d,J=16.4Hz),5.57-5.59(1H,m),6.53(1H,s),7.17-7.22(5H,m),7.31(1H,s),7.79-7.81(1H,m),7.89-8.01(1H,m),8.18-8.46(3H,m).
MS(ESI)m/z：939(M+H)+.
步驟9：(5S,14S)-5-苯甲基-14-{[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]胺基}-1-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并 [3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-12-甲基-1,4,7,10,13-五側氧基-3,6,9,12-四氮十五烷-16-酸三級丁酯
將上述步驟8所獲得的化合物(351mg，0.374mmoL)溶解於N,N-二甲基甲醯胺(6.00mL)。添加6-順丁烯二醯亞胺己酸N-琥珀醯亞胺基酯(115mg，0.374mmoL)，並於室溫攪拌16.5小時。減壓餾除溶媒，將獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇=4：1(v/v)]純化，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(403mg，95%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.86(3H,t,J=7.3Hz),1.15-1.18(2H,m),1.35(9H,s),1.41-1.44(4H,m),1.83-1.88(2H,m),1.99-2.00(1H,m),2.03-2.06(1H,m),2.10-2.12(1H,m),2.19-2.21(1H,m),2.33(1H,dd,J=15.9,6.8Hz),2.40(3H,s),2.61(1H,dq,J=26.1,6.5Hz),2.78(1H,dd,J=13.8,9.6Hz),2.97-2.99(1H,m),2.98(3H,s),3.17-3.19(2H,m),3.35-3.37(2H,m),3.67-3.83(6H,m),4.41-4.49(1H,m),4.90-5.02(1H,m),5.24(2H,s),5.39(1H,d,J=16.1Hz),5.43(1H,d,J=16.4Hz),5.57(1H,dd,J=8.4,4.3Hz),6.53(1H,s),6.99(2H,s),7.19(5H,dq,J=26.7,6.8Hz),7.32(1H,d,J=7.6Hz),7.80(1H,d,J=10.7Hz),7.92(1H,dd,J=21.0,15.4Hz),8.09(1H,dt,J=20.1,5.9Hz),8.22(1H,dd,J=14.5,8.4Hz),8.32-8.45(2H,m).
MS(ESI)m/z：1132(M+H)+.
步驟10：N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]-L-α-天冬胺醯基-N-甲基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基 -4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺醯胺
將上述步驟9所獲得的化合物(343mg，0.302mmoL)溶解於三氟乙酸(6.00mL)，並於室溫攪拌22小時。減壓餾除溶媒，將獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇=4：1(v/v)]純化，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(42.2mg，13%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.2Hz),1.16-1.17(2H,m),1.45-1.48(4H,m),1.81-1.91(2H,m),2.00-2.02(2H,m),2.11-2.17(2H,m),2.38(3H,s),2.71-3.17(8H,m),3.11(3H,s),3.37-3.38(3H,m),3.63-3.80(3H,m),4.24-4.32(1H,m),4.86-4.90(1H,m),5.26(2H,s),5.39(1H,d,J=16.6Hz),5.44(1H,d,J=16.4Hz),5.57-5.58(1H,m),6.51(1H,s),7.00(2H,s),7.16-7.25(5H,m),7.31(1H,d,J=3.2Hz),7.76-7.78(2H,m),8.05-8.14(3H,m),8.54(1H,d,J=7.6Hz),8.73(1H,s).
MS(ESI)m/z：1077(M+H)+.
步驟11：抗體-藥物結合物(156)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及上述步驟10所獲得的化合物，藉由與實施例3步驟1同樣之方法，獲得標題抗體-藥物結合物。
抗體濃度：1.82mg/mL，抗體產量：15.5mg(78%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：5.2。
實施例157抗體-藥物結合物(157)
步驟1：(3S)-3-{[(苯甲基氧基)羰基]胺基}-4-羥基丁酸三級丁酯
於N-α-苯甲基氧基羰基-L-天冬胺酸α-(N-羥基琥珀醯亞胺基)β-t-丁基酯(10.0g，5.29mmoL)及乙醇酸苯甲酯(1.16g，7.93mmoL)之四氫呋喃(50.0mL)溶液中，於0℃添加氫化硼鈉(1.47g，35.7mmoL)之水溶液(10.0mL)，並於同溫攪拌1小時。反應溶液以乙酸乙酯稀釋，以水洗淨後，有機層以硫酸鈉乾燥。減壓餾除溶媒，將獲得的殘留 物以矽膠管柱層析[己烷：乙酸乙酯=4：1(v/v)~乙酸乙酯]純化，獲得呈無色透明油狀物質之標題化合物(7.91g，定量的)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ：1.44(9H,s),2.41(1H,brs),2.48-2.62(2H,m),3.72(2H,t,J=5.4Hz),3.99-4.08(1H,m),5.11(2H,s),5.42-5.53(1H,m),7.28-7.40(5H,m).
MS(API)m/z：310(M+H)+.
步驟2：(3S)-3-{[(苯甲基氧基)羰基]胺基}-4-(丙-2-烯-1-基氧基)丁酸三級丁酯
於上述步驟所獲得的化合物(3.75g，12.1mmoL)及烯丙基甲基碳酸酯(2.05mL，18.1mmoL)之四氫呋喃(50.0mL)溶液中，添加肆(三苯基膦)鈀(0.700g，0.600mmoL)，並於60℃加熱攪拌13小時。減壓餾除溶媒，將獲得的殘留物以矽膠管柱層析[己烷~己烷：乙酸乙酯=2：1(v/v)]純化，獲得呈黃色油狀物質之標題化合物(2.08g，49%)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ：1.43(9H,s),2.54(2H,d,J=6.0Hz),3.43-3.57(2H,m),3.97(2H,d,J=5.4Hz),4.10-4.22(1H,m),5.10(2H,s),5.17(1H,dd,J=10.3,1.2Hz),5.24(1H,dd,J=17.2,1.2Hz),5.32-5.43(1H,m),5.80-5.91(1H,m),7.30-7.36(5H,m).
MS(API)m/z：350(M+H)+.
步驟3：{[(2S)-2-{[(苯甲基氧基)羰基]胺基}-4-三級丁氧基-4-側氧基丁基]氧基}乙酸
於過碘酸鈉(3.06g，14.3mmoL)之水溶液(15.0mL)中 ，添加乙腈(10.0mL)、氯化釕‧水合物(15.0mg)、及上述步驟所獲得的化合物(0.500g，1.43mmoL)之乙酸乙酯(10.0mL)溶液，並於室溫攪拌1.5小時。於反應溶液中添加水，並以乙酸乙酯萃取，獲得的有機層以硫酸鈉乾燥。減壓餾除溶媒，將獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇：水=7：3：1(v/v/v)之分配有機層]純化，獲得無色油狀之標題化合物(0.187g，36%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：1.36(9H,s),2.29(1H,dd,J=15.4,8.8Hz),2.43-2.54(1H,m),3.36(1H,dd,J=9.7,6.0Hz),3.43(1H,dd,J=9.7,6.0Hz),3.93-4.03(1H,m),4.00(2H,s),4.98(1H,d,J=12.7Hz),5.03(1H,d,J=12.7Hz),7.25-7.39(6H,m),12.63(1H,brs).
MS(API)m/z：368(M+H)+.
步驟4：N-({[(2S)-2-{[(苯甲基氧基)羰基]胺基}-4-三級丁氧基-4-側氧基丁基]氧基}乙醯基)甘胺醯基-L-苯基丙胺酸苯甲酯
於實施例156步驟4所獲得的化合物(0.266g，0.760mmoL)、N-羥基琥珀醯亞胺(89.4mg，0.660mmoL)、及上述步驟所獲得的化合物(0.187g，0.510mmoL)之N,N-二甲基甲醯胺(10.0mL)溶液中，添加N,N-二異丙基乙基胺(0.124mL，0.710mmoL)及1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(0.127g，0.660mmoL)，並於室溫攪拌22小時。反應溶液以氯仿：甲醇=9：1(v/v)稀釋，以10%檸檬酸水溶液、飽和碳酸氫鈉水溶液、及飽和食鹽水洗淨後，有機層以硫酸鈉乾燥。減壓餾除溶媒，將 獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇=9：1(v/v)]純化，獲得呈淡橙色油狀物質之標題化合物(0.373g，定量的)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：1.35(9H,s),2.33(1H,dd,J=15.1,9.1Hz),2.47-2.53(1H,m),2.93(1H,dd,J=13.9,8.5Hz),3.03(1H,dd,J=13.9,6.0Hz),3.37(1H,dd,J=9.1,5.4Hz),3.44(1H,dd,J=9.7,4.8Hz),3.69(1H,dd,J=16.3,6.0Hz),3.79(1H,dd,J=16.3,6.0Hz),3.87(2H,s),3.99-4.09(1H,m),4.53(1H,dd,J=14.2,8.2Hz),4.94-5.12(4H,m),7.16-7.40(15H,m),7.92-7.99(2H,m),8.41(1H,d,J=7.9Hz).
MS(API)m/z：662(M+H)+.
步驟5：N-({[(2S)-2-胺基-4-三級丁氧基-4-側氧基丁基]側氧基}乙醯基)甘胺醯基-L-苯丙胺酸
將上述步驟所獲得的化合物(0.373g，0.560mmoL)溶解於N,N-二甲基甲醯胺(30.0mL)。添加鈀碳觸媒(0.400g)，氫氣環境下，於室溫攪拌4日。將不溶物藉由矽藻土過濾而去除，減壓餾除溶媒，獲得標題化合物。本化合物不進行進一步純化而用於下一反應。
MS(API)m/z：438(M+H)+.
步驟6：N-({[(2S)-4-三級丁氧基-2-{[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]胺基}-4-側氧基丁基]氧基}乙醯基)甘胺醯基-L-苯丙胺酸
於上述步驟所獲得的混合物(0.560mmoL)之N,N-二甲基甲醯胺(10.0mL)溶液中，添加6-順丁烯二醯亞胺己酸N-琥珀醯亞胺基酯(0.261g，0.850mmoL)及N,N-二異丙 基乙基胺(98.2μL，0.560mmoL)，並於室溫攪拌2日。減壓餾除溶媒，獲得的殘留物以乙酸乙酯稀釋，以10%檸檬酸水溶液及飽和食鹽水洗淨後，有機層以硫酸鈉乾燥。減壓餾除溶媒，將獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇=9：1(v/v)]純化，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(0.246g，69%)。
1H-NMR(400MHz、CDCl3)δ：1.23-1.34(2H,m),1.44(9H,s),1.53-1.67(4H,m),2.16(2H,t,J=7.6Hz),2.43-2.55(2H,m),3.03-3.28(2H,m),3.46-3.59(4H,m),3.81-4.06(4H,m),4.38-4.49(1H,m),4.69-4.78(1H,m),6.61-6.73(1H,m),6.67(2H,s),6.99(1H,brs),7.11-7.33(5H,m),7.51(1H,brs).
MS(API)m/z：631(M+H)+.
步驟7：N-({[(2S)-4-三級丁氧基-2-{[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]胺基}-4-側氧基丁基]氧基}乙醯基)甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺醯胺
於實施例80步驟2之化合物之甲烷磺酸鹽(0.101g，0.170mmoL)、1-羥基苯并三唑(25.7mg，0.190mmoL)、及上述步驟所獲得的化合物(0.100g，0.160mmoL)之N,N-二甲基甲醯胺(10.0mL)溶液中，添加N,N-二異丙基乙基胺(29.0μL，0.170mmoL)及1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(39.5mg，0.210mmoL)，並於室溫攪拌18小時。減壓餾除溶媒，將獲得的殘留物以矽膠管柱層析[ 氯仿~氯仿：甲醇=9：1(v/v)]純化，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(90.0mg，51%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.3Hz),1.11-1.19(2H,m),1.35(9H,s),1.41-1.48(4H,m),1.82-1.89(2H,m),2.00(2H,t,J=7.3Hz),2.06-2.35(3H,m),2.41(3H,s),2.76(1H,dd,J=13.9,9.7Hz),2.98(1H,dd,J=13.6,4.5Hz),3.14-3.22(2H,m),3.24-3.49(5H,m),3.58(1H,dd,J=16.9,5.4Hz),3.73-3.80(3H,m),3.82(2H,s),4.16-4.28(1H,m),4.41-4.51(1H,m),5.25(2H,s),5.35-5.47(2H,m),5.54-5.62(1H,m),6.52(1H,s),6.99(2H,s),7.12-7.26(5H,m),7.31(1H,s),7.74-7.84(3H,m),8.17(1H,d,J=8.5Hz),8.36(1H,t,J=5.4Hz),8.42(1H,d,J=8.5Hz).
MS(API)m/z：1106(M+H)+.
步驟8：N-{[(2S)-3-羧基-2-{[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]胺基}丙氧基]乙醯基}甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]甘胺醯胺
於冰冷下，於上述步驟所獲得的化合物(85.0mg，80.0μmoL)中添加三氟乙酸(6.00mL)，並於室溫攪拌1.5小時。減壓餾除溶媒，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(60.0mg，74%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.6Hz),1.12-1.20(2H,m),1.41-1.48(4H,m),1.80-1.91(2H,m),2.00(2 H,t,J=7.3Hz),2.05-2.26(2H,m),2.34(1H,dd,J=15.7,7.9Hz),2.41(3H,s),2.76(1H,dd,J=13.6,9.4Hz),2.98(1H,dd,J=13.6,4.5Hz),3.13-3.22(2H,m),3.29-3.47(5H,m),3.59(1H,dd,J=16.9,5.4Hz),3.71-3.81(3H,m),3.83(2H,s),4.15-4.25(1H,m),4.41-4.51(1H,m),5.25(2H,s),5.35-5.47(2H,m),5.54-5.62(1H,m),6.52(1H,brs),6.99(2H,s),7.12-7.26(5H,m),7.31(1H,s),7.75-7.84(3H,m),8.17(1H,d,J=7.9Hz),8.36(1H,t,J=5.7Hz),8.42(1H,d,J=9.1Hz),12.17(1H,brs).
HRMS(FAB)m/z：(M+H)+：Calcd for C53H58FN8O14：1049.40564；Found：1049.40646.
步驟9：抗體-藥物結合物(157)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及上述步驟8所獲得的化合物，藉由與實施例3步驟1同樣之方法，獲得標題抗體-藥物結合物。
抗體濃度：1.90mg/mL，抗體產量：16.2mg(81%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：5.8。
實施例158抗體-藥物結合物(158)
步驟1：{2-[(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4-側氧基丁基)胺基]-2-側氧基乙基}胺甲酸三級丁酯
將實施例1步驟1之化合物(1.70g，2.68mmoL)溶解於N,N-二甲基甲醯胺(10.0mL)，添加1-羥基苯并三唑(362mg，2.68mmoL)、及1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(1.03g，5.36mmoL)，並於室溫攪拌30分 鐘。添加N-(三級丁氧基羰基)甘胺酸(469mg，2.68mmoL)、及三乙基胺(373μL，2.68mmoL)，並於室溫攪拌4小時。減壓餾除溶媒，將獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇=4：1(v/v)]純化，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(1.82g，91%)。
1H-NMR(400MHz、CD3OD)δ：0.94(3H,t,J=6.6Hz),1.37(9H,s),1.88-1.90(4H,m),2.07-2.08(1H,m),2.23(3H,s),2.33-2.36(3H,m),3.16-3.30(4H,m),3.66-3.73(2H,m),4.54(1H,d,J=18.8Hz),4.95-4.98(1H,m),5.25(1H,d,J=16.0Hz),5.47(1H,d,J=16.0Hz),5.54-5.57(1H,m),7.29(1H,d,J=10.6Hz),7.38(1H,s).
MS(APCI)m/z：678(M+H)+.
步驟2：N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]-4-(甘胺醯基胺基)丁醯胺
將上述步驟1所獲得的化合物(1.66g，2.45mmoL)溶解於二氯甲烷(6.00mL)，添加三氟乙酸(6.00mL)，並於室溫攪拌30分鐘。減壓餾除溶媒，將獲得的殘留物以矽膠管柱層析[[氯仿~氯仿：甲醇：水=7：3：1(v/v/v)之分配有機層]純化，獲得呈黃色固體之標題化合物(1.69g，93%)。
1H-NMR(400MHz、CD3OD)δ：0.97(3H,t,J=6.8Hz),1.95-2.04(5H,m),2.31(3H,s),2.35-2.43(3H,m),3.07(1H,s),3.22(1H,d,J=17.2Hz),3.35-3.37(2H,m),3.78(2H,s),4.74-5.0 1(1H,m),5.10(1H,d,J=18.8Hz),5.30(1H,d,J=16.4Hz),5.51(1H,d,J=16.0Hz),5.61-5.63(1H,m),7.43(1H,d,J=10.6Hz),7.47(1H,s).
MS(APCI)m/z：578(M+H)+.
步驟3：(3S,12S)-12-苯甲基-21-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-3-{[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]胺基}-5-甲基-4,7,10,13,16,21-六側氧基-5,8,11,14,17-五氮二十一-1-酸三級丁酯
將實施例156步驟6所獲得的化合物(1.56g，2.27mmoL)溶解於N,N-二甲基甲醯胺(20mL)，添加1-羥基苯并三唑(307mg，2.27mmoL)、及1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(870mg，4.54mmoL)，並於室溫攪拌1小時30分鐘。添加上述步驟2所獲得的化合物(1.57g，2.27mmoL)、及三乙基胺(316μL，2.27mmoL)，於室溫攪拌17小時。減壓餾除溶媒，將獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇=4：1(v/v)]純化，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(2.65g，94%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.86(3H,t,J=7.0Hz),1.35(9H,s),1.71-1.73(2H,m),1.80-1.91(2H,m),2.09-2.12(2H,m),2.18(2H,t,J=7.2Hz),2.37(3H,s),2.40-2.48(1H,m),2.64-2.77(2H,m),3.01(3H,s),3.02-3.13(5H,m),3.59-3.68(3H,m),3.75-3.80(2H,m),3.98-4.07(1H,m),4.17-4.30(3H,m),4.47-4.48(1H,m),4.65-4.83(1H,m),5.14(1H,d,J=19.2Hz),5.2 0(1H,d,J=18.8Hz),5.39(1H,d,J=17.2Hz),5.44(1H,d,J=17.2Hz),5.53-5.56(1H,m),6.53(1H,s),7.18-7.24(9H,m),7.39-7.41(2H,m),7.65-7.87(5H,m),7.98-8.00(1H,m),8.13-8.14(1H,m),8.23-8.30(2H,m),8.45(1H,d,J=7.8Hz).
MS(ESI)m/z：1247(M+H)+.
步驟4：(3S,12S)-3-胺基-12-苯甲基-21-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-5-甲基-4,7,10,13,16,21-六側氧基-5,8,11,14,17-五氮二十一-1-酸三級丁酯
將上述步驟3所獲得的化合物(1.85g，1.48mmoL)溶解於N,N-二甲基甲醯胺(16.0mL)，添加哌啶(4,00mL)，並於室溫攪拌1小時。減壓餾除溶媒，將獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇：水=7：3：1(v/v/v)之分配有機層]純化，獲得呈黃色固體之標題化合物(1.15g，76%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.2Hz),1.37(9H,s),1.72-1.73(2H,m),1.80-1.92(2H,m),2.17-2.22(5H,m),2.37(3H,s),2.53-2.56(1H,m),2.73-2.82(1H,m),2.99-3.15(7H,m),3.30-3.32(2H,m),3.57-4.00(6H,m),4.39-4.45(1H,m),5.14(1H,d,J=19.0Hz),5.20(1H,d,J=19.0Hz),5.40(1H,d,J=19.3Hz),5.43(1H,d,J=16.4Hz),5.55-5.56(1H,m),6.53(1H,s),7.16-7.21(7H,m),7.30(1H,s),7.69-7.72(1H,m),7.77(1H,d,J=11.0Hz),8.02-8.09(1H,m),8.25-8.31(2H,m),8.47 (1H,d,J=8.5Hz).
MS(ESI)m/z：1025(M+H)+.
步驟5：(3S,12S)-12-苯甲基-3-{[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]胺基}-21-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-5-甲基-4,7,10,13,16,21-六側氧基-5,8,11,14,17-五氮二十一-1-酸三級丁酯
將上述步驟4所獲得的化合物(1.09g，1.06mmoL)溶解於N,N-二甲基甲醯胺(6.00mL)。添加6-順丁烯二醯亞胺己酸N-琥珀醯亞胺基酯(328mg，1.06mmoL)，並於室溫攪拌17.5小時。減壓餾除溶媒，將獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇=4：1(v/v)]純化，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(730mg，56%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.0Hz),1.14-1.16(2H,m),1.34(9H,s),1.44(4H,d,J=7.0Hz),1.71-1.73(2H,m),1.83-1.86(2H,m),1.98-2.18(6H,m),2.31-2.35(1H,m),2.38(3H,s),2.56-2.66(1H,m),2.74-2.78(1H,m),3.00(3H,s),3.03-3.09(3H,m),3.16-3.18(4H,m),3.58-4.22(6H,m),4.45-4.48(1H,m),4.89-5.07(1H,m),5.15(1H,d,J=18.8Hz),5.23(1H,d,J=19.2Hz),5.42(2H,s),5.55-5.58(1H,m),6.53(1H,s),6.99(2H,s),7.18-7.23(5H,m),7.30(1H,s),7.70-7.73(1H,m),7.78(1H,d,J=11.0Hz),7.97-7.99(1H,m),8.10-8.14(1H,m),8.21-8.27(2H,m),8.45(1H,d,J=8.2Hz).
MS(ESI)m/z：1218(M+H)+.
步驟6：N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]-L-α-天冬胺醯基-N-甲基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4-側氧基丁基)甘胺醯胺
將上述步驟5所獲得的化合物(690mg，0.567mmoL)溶解於二氯甲烷(3.00mL)，添加三氟乙酸(6.00mL)，並於室溫攪拌1小時。減壓餾除溶媒，將獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇=4：1(v/v)]純化，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(346mg，53%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.2Hz),1.14-1.16(2H,m),1.44-1.45(4H,m),1.71-1.73(2H,m),1.81-1.89(2H,m),1.99-2.03(2H,m),2.12-2.14(2H,m),2.17-2.19(2H,m),2.34-2.39(1H,m),2.39(3H,s),2.69-2.76(2H,m),3.01(3H,s),3.09-3.13(2H,m),3.16-3.18(2H,m),3.35-3.36(2H,m),3.58-3.89(7H,m),4.45-4.47(1H,m),4.91-4.99(1H,m),5.16(1H,d,J=19.0Hz),5.23(1H,d,J=19.0Hz),5.42(2H,s),5.56-5.58(1H,m),6.52(1H,s),6.99(2H,s),7.17-7.25(5H,m),7.31(1H,s),7.70-7.72(1H,m),7.79(2H,d,J=11.0Hz),7.94-7.96(1H,m),8.10-8.12(1H,m),8.19-8.28(2H,m),8.47(1H,d,J=7.1Hz).
MS(ESI)m/z：1162(M+H)+.
步驟7：抗體-藥物結合物(158)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及上述步驟6所獲得的化合物，藉由與實施例2步驟6同樣之方法，獲得標題抗體-藥物結合物。
抗體濃度：1.76mg/mL，抗體產量：15.0mg(75%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：2.8。
實施例159抗體-藥物結合物(159)
步驟1：抗體-藥物結合物(159)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及實施例158步驟6所獲得的化合物，藉由與實施例3步驟1同樣之方法，獲得標題抗體-藥物結合物。
抗體濃度：1.75mg/mL，抗體產量：15.0mg(75%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：4.9。
實施例160抗體-藥物結合物(160)
步驟1：N-({[(2S)-4-三級丁氧基-2-{[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]胺基}-4-側氧基丁基]氧基}乙醯基)甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4-側氧基丁基)甘胺醯胺
將實施例157步驟6之化合物(21.8mg，34.6μmoL)溶解於N,N-二甲基甲醯胺(3.00mL)，添加1-羥基苯并三唑(4.68mg，34.6μmoL)、及1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(9.96mg，51.9μmoL)。再者，添加實施例158步驟2之化合物(20.0mg，34.6μmoL)，並於室溫攪拌21小時。減壓餾除溶媒，將獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇=4：1(v/v)]純化，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(15.1mg，37%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.2Hz),1.11-1.19(2H,m),1.35(9H,s),1.40-1.48(4H,m),1.67-1.75(2H,m),1.80-1.91(2H,m),1.99(2H,t,J=7.4Hz),2.15-2.18(4H,m),2.27-2.32(2H,m),2.40(3H,s),2.67(1H,s),2.77(1H,dd,J=13.7,9.8Hz),3.01(1H,dd,J=13.9,4.5Hz),3.06-3.11(2H,m),3.17(2H,t,J=2.5Hz),3.36-3.47(3H,m),3.58-3.67(3H,m),3.80(1H,t,J=8.2Hz),3.85(2H,s),4.20-4.24(1H,m),4.45-4.50(1H,m),5.16(1H,d,J=18.8Hz),5.25(1H,d,J=18.8Hz),5.42(2H,s),5.55-5.59(1H,m),6.53(1H,s),6.99(2H,s),7.17-7.23(5H,m),7.31(1H,s),7.71(1H,d,J=5.9Hz),7.78(1H,s),7.81(1H,d,J=3.5Hz),7.86(1H,t,J=5.7Hz),8.21(1H,d,J=7.8Hz),8.30(1H,t,J=5.9Hz),8.45(1H,d,J=8.6Hz).
MS(ESI)m/z：1190(M+H)+.
步驟2：N-{[(2S)-3-羧基-2-{[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]胺基}丙氧基]乙醯基}甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-(4-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-4-側氧基丁基)甘胺醯胺
將上述步驟1所獲得的化合物(14.3mg，0.12.0μmoL)溶解於二氯甲烷(1.00mL)，添加三氟乙酸(1.00mL)，並於室溫攪拌1小時。減壓餾除溶媒，以濾取乙醇及二乙基醚析出的不溶物，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(11.8mg，87%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.87(3H,t,J=7.2Hz),1 .15(2H,t,J=7.2Hz),1.40-1.48(4H,m),1.68-1.75(2H,m),1.80-1.91(2H,m),2.00(2H,t,J=7.4Hz),2.12-2.19(4H,m),2.34(2H,dd,J=16.0,7.8Hz),2.40(3H,s),2.77(1H,dd,J=13.5,9.6Hz),3.01(1H,dd,J=13.7,4.7Hz),3.05-3.11(2H,m),3.16-3.18(2H,m),3.33-3.35(3H,m),3.44-3.47(2H,m),3.61-3.68(2H,m),3.80(1H,dd,J=16.6,6.1Hz),3.85(1H,s),4.22-4.25(1H,m),4.47-4.50(1H,m),5.16(1H,d,J=18.8Hz),5.25(1H,d,J=19.2Hz),5.42(2H,s),5.57(1H,s),6.99(2H,s),7.15-7.26(6H,m),7.31(1H,s),7.71(1H,t,J=5.5Hz),7.78-7.81(2H,m),7.84(1H,t,J=5.7Hz),8.21(1H,d,J=7.8Hz),8.30(1H,t,J=6.8Hz),8.45(1H,d,J=8.6Hz).
MS(ESI)m/z：1134(M+H)+.
步驟1：抗體-藥物結合物(160)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及上述步驟2所獲得的化合物，藉由與實施例3步驟1同樣之方法，獲得標題抗體-藥物結合物。
抗體濃度：1.75mg/mL，抗體產量：14.7mg(74%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：5.0。
實施例161抗體-藥物結合物(161)
步驟1：({N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]甘胺醯基}胺基)甲基乙酸酯
於包含N-9-茀基甲氧基羰基甘胺醯基甘胺酸(4.33g，12.2mmoL)、四氫呋喃(120mL)、及甲苯(40.0mL)的混合物中，添加吡啶(1.16mL，14.7mmoL)及四乙酸鉛(6.84g ，14.7mmoL)，並加熱回流5小時。將反應液冷卻至室溫後，不溶物藉由矽藻土過濾而去除，減壓下濃縮。將獲得的殘留物溶解於乙酸乙酯，以水及飽和食鹽水洗淨後，有機層以無水硫酸鎂乾燥。減壓下將溶媒餾除後，將獲得的殘留物以矽膠管柱層析[己烷：乙酸乙酯=9：1(v/v)~乙酸乙酯]純化，獲得呈無色固體之標題化合物(3.00g，67%)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ：2.07(3H,s),3.90(2H,d,J=5.1Hz),4.23(1H,t,J=7.0Hz),4.46(2H,d,J=6.6Hz),5.26(2H,d,J=7.0Hz),5.32(1H,brs),6.96(1H,brs),7.32(2H,t,J=7.3Hz),7.41(2H,t,J=7.3Hz),7.59(2H,d,J=7.3Hz),7.77(2H,d,J=7.3Hz).
步驟2：[({N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]甘胺醯基}胺基)甲氧基]乙酸苯甲基酯
於上述步驟1所獲得的化合物(7.37g，20.0mmoL)之四氫呋喃(200mL)溶液中，於0℃添加乙醇酸苯甲基酯(6.65g，40.0mmoL)、及p-甲苯磺酸一水合物(0.381g，2.00mmoL)，並於室溫攪拌2小時30分鐘。於反應溶液中添加飽和碳酸氫鈉水溶液，並以乙酸乙酯萃取，獲得的有機層以硫酸鈉乾燥，並過濾。減壓餾除溶媒，將獲得的殘留物以矽膠管柱層析[己烷：乙酸乙酯=100：0(v/v)~0：100]純化，獲得呈無色固體之標題化合物(6.75g，71%)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ：3.84(2H,d,J=5.5Hz),4.24(3H,t,J=6.5Hz),4.49(2H,d,J=6.7Hz),4.88(2H,d,J=6.7Hz) ,5.15-5.27(1H,m),5.19(2H,s),6.74(1H,brs),7.31-7.39(7H,m),7.43(2H,t,J=7.4Hz),7.61(2H,d,J=7.4Hz),7.79(2H,d,J=7.4Hz).
步驟3：N-[(苯甲基氧基)羰基]甘胺醯基甘胺醯基-L-苯丙胺酸-N-{[(2-(苯甲基氧基)-2-側氧基乙氧基]甲基}甘胺醯胺
於上述步驟2所獲得的化合物(6.60g，13.9mmoL)之N,N-二甲基甲醯胺(140mL)溶液中，於0℃添加1,8-二氮雙環[5.4.0]十一-7-烯(2.22g，14.6mmoL)，並於室溫攪拌15分鐘。於反應溶液中添加預先於室溫攪拌1小時後之N-[(苯甲基氧基)羰基]甘胺醯基甘胺醯基-L-苯丙胺酸(6.33g，15.3mmoL)、N-羥基琥珀醯亞胺(1.92g，16.7mmoL)、及1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(3.20g，16.7mmoL)之N,N-二甲基甲醯胺(140mL)溶液，並於室溫攪拌4小時。於反應溶液中添加0.1N鹽酸，以氯仿萃取，獲得的有機層以硫酸鈉乾燥，並過濾。減壓餾除溶媒，將獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇=8：2(v/v)]純化，獲得呈無色固體之標題化合物(7.10g，79%)。
1h-nmr(dmso-D6)δ：2.78(1h,DD,j=13.9,9.6hZ),3.05(1h,DD,j=13.9,4.5hZ),3.56-3.80(6h,M),4.15(2h,S),4.47-4.55(1h,M),4.63(2h,D,j=6.6hZ),5.03(2h,S),5.15(2h,S),7.16-7.38(15h,M),7.52(1h,T,j=5.9hZ),8.03(1h,T,j=5.5hZ),8.17(1h,D,j=8.2hZ),8.36(1h,T,j=5.7hZ),8.61(1h,T,j=6.6hZ).
步驟4：甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基 -N-[(羧基甲氧基)甲基]甘胺醯胺
於上述步驟3所獲得的化合物(7.00g，10.8mmoL)之N,N-二甲基甲醯胺(216mL)溶液中，添加鈀碳觸媒(7.00g)，氫氣環境下，於室溫攪拌24小時。將不溶物藉由矽藻土過濾而去除，減壓餾除溶媒。將獲得的殘留物溶解於水，將不溶物藉由矽藻土過濾而去除，重複2次減壓餾除溶媒的操作，獲得呈無色固體之標題化合物(3.77g，82%)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ：2.84(1H,dd,J=13.7,9.8Hz),3.08(1H,dd,J=13.7,4.7Hz),3.50-3.72(4H,m),3.77-3.86(2H,m),3.87(2H,s),4.52-4.43(1H,m),4.61(2H,d,J=6.6Hz),7.12-7.30(5H,m),8.43(1H,t,J=5.9Hz),8.54(1H,d,J=7.8Hz),8.70(1H,t,J=6.3Hz),8.79(1H,t,J=5.5Hz).
步驟5：(5S,14S)-14-苯甲基-5-[2-(苯甲基氧基)-2-側氧基乙基]-3,6,9,12,15,18-六側氧基-1-苯基-2,21-二氧-4,7,10,13,16,19-六氮二十三-23-酸
將(2S)-4-(苯甲基氧基)-2-{[(苯甲基氧基)羰基]胺基}-4-側氧基丁酸(123mg，0.344mmoL)溶解於N,N-二甲基甲醯胺，添加N-羥基琥珀醯亞胺(39.5mg，0.344mmoL)、及1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(65.9mg，0.344mmoL)，並於室溫攪拌30分鐘。添加上述步驟4之化合物(121mg，0.286mmoL)、及三乙基胺(39.6μL，0.286mmoL)，並於室溫攪拌4小時。減壓餾除溶媒，將獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇：水=7：3：1(v/v/v)之分配有機層]純化，獲得呈無色固體之標題化合物(66.2mg，30%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：2.55(1H,s),2.62(1H,dd,J=16.4,7.4Hz),2.80(1H,dd,J=13.9,10.0Hz),2.86(1H,dd,J=16.2,4.9Hz),2.99(1H,dd,J=14.3,7.2Hz),3.63-3.73(6H,m),3.96(2H,s),4.46-4.52(2H,m),4.61(2H,d,J=6.7Hz),5.00(1H,d,J=12.5Hz),5.05(1H,d,J=15.3Hz),5.07(2H,s),7.24-7.26(5H,m),7.31-7.35(10H,m),7.76(1H,d,J=8.2Hz),8.07(1H,t,J=5.1Hz),8.18(1H,d,J=8.2Hz),8.30(1H,t,J=5.3Hz),8.34(1H,t,J=5.5Hz),8.60(1H,t,J=6.7Hz).
MS(ESI)m/z：761(M-H)-.
步驟6：L-α-天冬胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-[(2-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-2-側氧基乙氧基)甲基]甘胺醯胺
將上述步驟5所獲得的化合物(85.6mg，0.112mmoL)、及依喜替康(63.7mg，0.112mmoL)溶解於N,N-二甲基甲醯胺(1.50mL)、及甲醇(0.500mL)之混合溶媒，添加三乙基胺(15.6μL，0.112mmoL)、及4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三-2-基)-4-甲基味啉鎓氯丹(methylmorpholinium chlordane)水合物(49.6mg，0.168mmoL)，並於室溫攪拌17.5小時。減壓餾除溶媒，將獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇=4：1(v/v)]純化，獲得呈淡黃色固體之標題化合物(59.8mg，45%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.86(3H,t,J=7.2Hz),1.80-1.90(2H,m),2.16-2.20(2H,m),2.38(3H,s),2.63(1H,dd, J=16.4,9.0Hz),2.76(1H,dd,J=13.7,9.8Hz),2.85(1H,dd,J=16.2,4.9Hz),3.01(1H,dd,J=13.5,4.5Hz),3.11-3.23(2H,m),3.58-3.76(6H,m),4.02(2H,s),4.45-4.50(2H,m),4.63(2H,d,J=6.3Hz),4.98-5.01(2H,m),5.06(2H,s),5.20(2H,s),5.41(2H,s),5.58-5.61(1H,m),6.53(1H,s),7.16-7.22(5H,m),7.29-7.34(11H,m),7.70(1H,d,J=8.2Hz),7.79(1H,d,J=11.0Hz),7.99(1H,t,J=5.7Hz),8.12(1H,d,J=7.8Hz),8.23(1H,d,J=5.5Hz),8.32(1H,t,J=5.7Hz),8.52(1H,d,J=9.0Hz),8.64(1H,t,J=6.7Hz).
MS(ESI)m/z：1180(M+H)+.
步驟7：(10S,19S)-10-苯甲基-19-{[(苯甲基氧基)羰基]胺基}-1-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-1,6,9,12,15,18-六側氧基-3-氧-5,8,11,14,17-五氮二十一-21-酸苯甲酯
將上述步驟6所獲得的化合物(57.3mg，48.6μmoL)溶解於N,N-二甲基甲醯胺(6.00mL)。添加鈀碳觸媒(10.0mg)，氫氣環境下，於室溫6日。不溶物藉由矽藻土過濾而去除，減壓餾除溶媒，獲得含標題化合物的淡黃色固體之混合物(46.8mg)。本混合物不進行進一步純化而用於下一反應。
步驟8：N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]-L-α-天冬胺醯基甘胺醯基甘胺醯基-L-苯基丙胺醯基-N-[(2-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲 基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4'：6,7]吲并[1,2-b]喹啉-1-基]胺基}-2-側氧基乙氧基)甲基]甘胺醯胺
將上述步驟7所獲得的混合物(43.6mg，1.06mmoL)溶解於N,N-二甲基甲醯胺(0.500mL)。添加6-順丁烯二醯亞胺己酸N-琥珀醯亞胺基酯(28.1mg，91.2μmoL)，並於室溫攪拌23小時。將獲得的殘留物以矽膠管柱層析[氯仿~氯仿：甲醇：水=7：3：1(v/v/v)之分配有機層]純化而獲得呈淡黃色固體之標題化合物(4.23mg，8.1%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：0.86(3H,t,J=7.2Hz),1.16(2H,dt,J=18.9,6.0Hz),1.45-1.50(4H,m),1.79-1.91(2H,m),2.09-2.14(4H,m),2.32(2H,dd,J=5.3,3.7Hz),2.36(3H,s),2.67-3.19(4H,m),3.43-3.48(2H,m),3.56-3.76(6H,m),4.01(2H,s),4.21-4.22(1H,m),4.35-4.37(1H,m),4.62-4.63(2H,m),5.21(2H,s),5.41(2H,s),5.56-5.59(1H,m),6.51(1H,s),6.99(2H,s),7.10-7.30(9H,m),7.75-7.78(2H,m),8.32-8.36(1H,m),8.55-8.70(2H,m),9.02-9.04(1H,m).
MS(ESI)m/z：1149(M+H)+.
步驟9：抗體-藥物結合物(161)
使用以參考例1製作的曲妥珠單抗及上述步驟8所獲得的化合物，藉由與實施例3步驟1同樣之方法，獲得標題抗體-藥物結合物。
抗體濃度：1.89mg/mL，抗體產量：15.9mg(79%)，抗體每一分子之藥物平均結合數(n)：3.4。
評價例1抗體-藥物結合物之抗細胞效果
HER2抗原陽性細胞之人類乳癌株的KPL-4(川崎醫科大學‧紅林淳一教師；British Journal of Cancer,(1999)79(5/6).707-717)、HER2抗原陰性細胞之MCF7(ECACC；歐洲細胞保存中心(European Collection of Cell Cultures))係以含10%胎牛血清(MOREGATE)的RPMI1640(GIBCO；以下，培養基)培養。將KPL-4、MCF7各自以培養基調製成為2.5×104個細胞/mL，於96孔細胞培養用微量盤中各添加100μL而培養一晚。翌日，將以培養基稀釋為1000nM、200nM、40nM、8nM、1.6nM、0.32nM、0.064nM的曲妥珠單抗及抗體-藥物結合物各添加10μL於微量盤中。未添加抗體的孔(well)則各添加10μL培養基。於37℃、5%CO2下，培養5至7日。培養後，將微量盤自培養箱中取出，並於室溫靜置30分鐘。添加與培養液等量之CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay(Promega)而攪拌。於室溫靜置10分鐘後，以平盤讀數機(plate reader)(Perkin Elmer)測量發光量。IC50值係以下式算出
IC50(nM)=antilog((50-d)×(LOG10(b)-LOG10(a))÷(d-c)+LOG10(b))
a：樣品a之濃度
b：樣品b之濃度
c：樣品a之活細胞率
d：樣品b之活細胞率
各濃度中之細胞生存率係以下式算出。
細胞生存率(%)=a÷b×100
a：樣品孔之發光量之平均值(n=2)
b：未添加抗體的孔之發光量之平均值(n=10)
結果示於「表1」。又，曲妥珠單抗對KPL-4細胞、MCF7細胞之任一者皆未顯示抗細胞效果(>100(nM))。
評價例2抗腫瘤試驗(1)
小鼠：將5-6週齡之雌BALB/c裸鼠(日本Charles River股份有限公司)於實驗使用前，於SPF條件下馴化4-7日。對小鼠以經滅菌的固體飼料(FR-2，Funabashi Farms Co.,Ltd)進行給餌，並給予經滅菌的自來水(添加5-15ppm次亞氯酸鈉溶液而調製)。
測定、計算式：於全部之研究，將腫瘤之長徑及短徑以電子式數位測徑器(CD-15CX，Mitutoyo Corp.)於1週測定2次，計算腫瘤體積(mm3)。計算式係如以下所示。
腫瘤體積(mm3)=1/2×長徑(mm)×[短徑(mm)]2
抗體-藥物結合物及抗體係全部以生理食鹽水(大塚製藥工場股份有限公司)稀釋，將10mL/kg之液量投予至尾靜脈內。將人類乳癌株KPL-4細胞懸浮於生理食鹽水，將1.5×107個細胞皮下移植至雌裸鼠之右體側部(第0日)，第15日實施隨機分組。將抗體-藥物結合物(61)、(62)、(76)及作為對照組之抗HER2抗體曲妥珠單抗(參考例1)於第15、22日全部以10mg/kg之用量作尾靜脈內投予。設定無處置組作為對照組。
將結果示於第3圖。經由曲妥珠單抗之投予，腫瘤之增殖被抑制，但觀察到抗體-藥物結合物(61)、(62)、(76)之投予其腫瘤增殖抑制效果更為顯著，尤其於抗體-藥物結合物(62)、(76)之投予觀察到顯著的腫瘤增殖抑制效果。又，圖中，橫軸表示細胞移植後之日數，縱軸表示腫瘤體積。又，於投予曲妥珠單抗及抗體-藥物結合物(61)、(62)、(76)的小鼠，未見到特別顯著之體重減少等，認為抗體-藥物結合物(61)、(62)、(76)具有高安全性。
評價例3抗腫瘤試驗(2)
將購自ATCC(美國菌種保存中心(American Type Culture Collection))的人類胃癌株NCI-N87細胞懸浮於生理食鹽水，將1×107個細胞皮下移植至雌裸鼠之右體側部(第0日)，於第7日實施隨機分組。將抗體-藥物結合物(77)、(143)、(88)及曲妥珠單抗依坦辛(參考例2)於第7日全部以10mg/kg之用量作尾靜脈內投予。設定無處置組作為對照組。
將結果示於第4圖。抗體-藥物結合物(77)、(143)、(88)被觀察到伴隨與曲妥珠單抗依坦辛同等之腫瘤退縮的強抗腫瘤效果。又，即使投予抗體-藥物結合物(77)、(143)、(88)及曲妥珠單抗依坦辛亦未觀察到小鼠之體重減少。
評價例4抗腫瘤試驗(3)
將購自DSMZ(德國微生物及細胞保存中心(German collection of microorganisms and cell cultures)股份有限公司)的人類乳癌株JIMT-1細胞懸浮於生理食鹽水，而將3×106個細胞皮下移植至雌裸鼠之右體側部(第0日)，於第12日實施隨機分組。將抗體-藥物結合物(77)、(88)、(143)、曲妥珠單抗及曲妥珠單抗依坦辛於第12、19日全部以10mg/kg之用量，作尾靜脈內投予。設定生理食鹽水投予組為對照組。
將結果示於第5圖。對JIMT-1腫瘤，曲妥珠單抗、曲妥珠單抗依坦辛之投予並未抑制腫瘤之增殖。另一方面，經由抗體-藥物結合物(77)、(88)、(143)之投 予，腫瘤之增殖被顯著抑制。又，即使投予抗體-藥物結合物(77)、(88)、(143)、曲妥珠單抗及曲妥珠單抗依坦辛亦未觀察到小鼠之體重減少。
[序列表之非關鍵詞文字(Sequence Listing Free Text)]
序列識別號1：人化抗HER2單株抗體重鏈之胺基酸序列
序列識別號2：人化抗HER2單株抗體輕鏈之胺基酸序列
<110> 第一三共股份有限公司
<120> 抗HER2抗體-藥物結合物
<130> PD20-9011W0
<150> JP2014-081180
<151> 2014-04-10
<160> 2
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人化抗-HER2單株抗體之重鏈之胺基酸序列
<400> 1
<210> 2
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人化抗-HER2單株抗體之重鏈之胺基酸序列
<400> 2

Claims (32)

  1. 一種抗體-藥物結合物，其特徵係使下式 所示的抗腫瘤性化合物與抗HER2抗體介隔下式：-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-或-L1-L2-LP-所示的結構之連接物(linker)而結合，其中，抗HER2抗體係於L1之末端結合，抗腫瘤性化合物係將1位之胺基之氮原子作為結合部位，而與Lc或LP之末端結合，式中，n1表示0至6之整數，L1表示-(琥珀醯亞胺(Succinimid)-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-、-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-、- C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-、或-C(=O)-(CH2)n5-C(=O)-，其中，n2表示2至8之整數，n3表示1至8之整數，n4表示1至8之整數，n5表示1至8之整數，L2表示-NH-(CH2CH2-O)n6-CH2CH2-C(=O)-、-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-、-NH-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-、-NH-[CH(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-、-NH-[CH(-CH2-COOH)]-CH2-O-CH2-(C=O)-、-S-(CH2)n8-C(=O)-、或單鍵，其中，n6表示0至6之整數，n7表示1至4之整數，n8表示1至6之整數，LP表示由2至8個之胺基酸所構成的胜肽殘基，La表示-C(=O)-NH-、-NR1-(CH2)n9-、-O-、或單鍵，其中，n9表示1至6之整數，R1表示氫原子、碳數1至6之烷基、-(CH2)na-COOH、或-(CH2)nb-OH，但na表示整數之1至4，nb表示1至6之整數，Lb表示-CR2(-R3)-、-O-、-NR4-、或單鍵，其中，R2及R3係各自獨立地表示氫原子、碳數1至6之烷基、-(CH2)nc-NH2、-(CH2)nd-COOH、或-(CH2)ne-OH，R4表示氫原子或碳數1至6之烷基，nc表示0至6之整數，nd表示整數之1至4，ne表示整數之1至4，但nc為0時，R2及R3不成為相同，Lc表示-CH2-或-C(=O)-，-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-係下式： 所示的結構，於其之3位與抗體結合，於1位之氮原子上與含此結構的連接物結構內的亞甲基結合-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-係下式： 所示的結構，於其之3位與L2結合，於1位之氮原子上與含此結構的連接物結構內之亞甲基結合，cyc.Hex(1,4)表示1,4-伸環己基，L2為-S-(CH2)n8-C(=O)-之時，L1成為-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-。
  2. 如請求項1之抗體-藥物結合物，其中連接物為-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-所示的結構之連接物。
  3. 請求項2之抗體-藥物結合物，其中Lc為-C(=O)-。
  4. 求項2或3之抗體-藥物結合物，其中-NH-(CH2)n1-La-Lb -為選自以下群組的結構之連接物：-NH-CH2-、-NH-CH2CH2-、-NH-CH2-O-CH2-、-NH-CH2CH2-O-、-NH-CH2CH2-O-CH2-、-NH-CH2CH2-NH-、-NH-CH2CH2-NH-CH2-、-NH-CH2CH2-N(-CH2-COOH)-CH2-、-NH-CH2CH2-N(-CH2CH2-OH)-CH2CH2-、-NH-CH2CH2CH2-C(=O)-NH-CH(-CH2-COOH)-、-NH-CH2CH2CH2-、-NH-CH2CH2CH2CH2-、及-NH-CH2CH2CH2CH2CH2-。
  5. 求項2或3之抗體-藥物結合物，其中-NH-(CH2)n1-La-Lb-為選自以下群組的結構之連接物：-NH-CH2-、-NH-CH2CH2-、-NH-CH2CH2CH2-、-NH-CH2-O-CH2-、及-NH-CH2CH2-O-CH2-。
  6. 請求項1之抗體-藥物結合物，其中連接物為-L1-L2-LP-所示的結構之連接物。
  7. 請求項1至6中任一項之抗體-藥物結合物，其中L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-，L2為單鍵或-NH -(CH2CH2-O)n6-CH2CH2-C(=O)-、-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-、-NH-[CH(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-、-NH-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-、或-NH-[CH(-CH2-COOH)]-CH2-O-CH2-(C=O)-。
  8. 請求項1至6中任一項之抗體-藥物結合物，其中L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-，L2為單鍵或-NH-(CH2CH2-O)n6-CH2CH2-C(=O)-。
  9. 如請求項1至6中任一項之抗體-藥物結合物，其中L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-，L2為-NH-[CH(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-。
  10. 如請求項1至6中任一項之抗體-藥物結合物，其中L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-，L2為-NH-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-。
  11. 如請求項1至6中任一項之抗體-藥物結合物，其中L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-，L2為-NH-[CH(-CH2-COOH)]-CH2-O-CH2-(C=O)-。
  12. 如請求項1至6中任一項之抗體-藥物結合物，其中L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-，L2為單鍵或-NH-(CH2CH2-O)n6-CH2CH2-C(=O)-。
  13. 如請求項1至6中任一項之抗體-藥物結合物，其中L1為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-，L2為單鍵。
  14. 如請求項1至6中任一項之抗體-藥物結合物，其中L1為-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-，L2為單鍵。
  15. 如請求項1至6中任一項之抗體-藥物結合物，其中L1 為-C(=O)-(CH2)n5-C(=O)-，L2為-NH-(CH2CH2-O)n6-CH2CH2-C(=O)-或單鍵。
  16. 如請求項1至6中任一項之抗體-藥物結合物，其中L1為-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-，L2為-S-(CH2)n8-C(=O)-。
  17. 如請求項1至6中任一項之抗體-藥物結合物，其中LP為胜肽殘基，該胜肽殘基包含選自包含苯丙胺酸、甘胺酸、纈胺酸、離胺酸、瓜胺酸、絲胺酸、麩胺酸、及天冬胺酸之群組之胺基酸的胺基酸。
  18. 如請求項1至16中任一項之抗體-藥物結合物，其中LP為VK、VC、GFG、GGFG、GGFGG、GGFGS、GGFGGG、GGFGGE、GGFGGGFG、DGGF、DGGFG、DdGGFG、DGMeGFG、DGGFS、DDGGFG、KDGGFG、KGGFG、EGGFG、或SGGFG(式中，Dd之d表示D-體之胺基酸，GMe之Me表示α-胺基經N-甲基化)。
  19. 如請求項2至5中任一項之抗體-藥物結合物，其中LP為GGFG或DGGFG。
  20. 如請求項6之抗體-藥物結合物，其中LP為DGGFG、DdGGFG、或DGMeGFG。
  21. 如請求項1至20中任一項之抗體-藥物結合物，其中每1抗體之抗腫瘤性化合物的平均結合數為1至10個之範圍。
  22. 如請求項1至20中任一項之抗體-藥物結合物，其中每1抗體之抗腫瘤性化合物的平均結合數為1至8個之範圍。
  23. 如請求項1至20中任一項之抗體-藥物結合物，其中每1抗體之抗腫瘤性化合物的平均結合數為3至8個之範圍。
  24. 一種醫藥，其含有如請求項1至20中任一項之抗體-藥物結合物、其鹽、或彼等之水合物。
  25. 一種抗腫瘤藥及/或抗癌藥，其含有如請求項1至20中任一項之抗體-藥物結合物、其鹽、或彼等之水合物。
  26. 如請求項25之抗腫瘤藥及/或抗癌藥，其係用以應用於肺癌、尿道上皮癌(urothelial carcinoma)、大腸癌、前列腺癌、卵巢癌、胰癌、乳癌、膀胱癌、胃癌、胃腸道基質腫瘤(gastrointestinal stromal tumor)、子宮頸癌、食道癌、鱗狀上皮癌(squamous carcinoma)、腹膜癌、肝臓癌、肝細胞癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮內膜癌、子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌、外陰癌(vulvar carcinoma)、甲狀腺癌、陰莖癌、白血病、惡性淋巴瘤、漿細胞瘤(plasmacytoma)、骨髓瘤、或肉瘤。
  27. 一種醫藥組成物，其含有作為活性成分之如請求項1至20中任一項之抗體-藥物結合物、其鹽、或彼等之水合物，及藥學上可容許的製劑成分。
  28. 如請求項27之醫藥組成物，其係用以應用於肺癌、尿道上皮癌、大腸癌、前列腺癌、卵巢癌、胰癌、乳癌、膀胱癌、胃癌、胃腸道基質腫瘤、子宮頸癌、食道癌、鱗狀上皮癌、腹膜癌、肝臓癌、肝細胞癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮內膜癌、子宮癌、唾 液腺癌、腎臓癌、外陰癌、陰莖癌、白血病、惡性淋巴瘤、漿細胞瘤、骨髓瘤、或肉瘤。
  29. 一種腫瘤及/或癌之治療方法，其特徵為投予如請求項1至20中任一項之抗體-藥物結合物、其鹽、或彼等之水合物。
  30. 如請求項29之治療方法，其係用以應用於肺癌、尿道上皮癌、大腸癌、前列腺癌、卵巢癌、胰癌、乳癌、膀胱癌、胃癌、胃腸道基質腫瘤、子宮頸癌、食道癌、鱗狀上皮癌、腹膜癌、肝臓癌、肝細胞癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮內膜癌、子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌、外陰癌、陰莖癌、白血病、惡性淋巴瘤、漿細胞瘤、骨髓瘤、或肉瘤。
  31. 一種下式之任一者所示的藥物-連接物中間體化合物，Q-L1a-(CH2)nQ-C(=O)-L2a-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-(NH-DX)或Q-L1a-(CH2)nQ-C(=O)-L2a-LP-(NH-DX)式中，Q表示(順丁烯二醯亞胺(maleimid)-N-基)-、HS-、X-CH2-C(=O)-NH-、或(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)-O-C(=O)-，X表示溴原子或碘原子，L1a表示-CH[-(CH2)n3-COOH]-、-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-、或單鍵，其中，n3表示1至8之整數，nQ表示0至8之整數，L2a表示-NH-(CH2CH2-O)n6-CH2CH2-C(=O)-、-N[-( CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-、-NH-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-、-NH-[CH(-COOH)]-CH2-(C=O)-、-NH-[CH(-CH2-COOH)]-CH2-O-CH2-(C=O)-、或單鍵，其中，n6表示0至6之整數，n7表示1至4之整數，LP表示由2至8個之胺基酸所構成的胜肽殘基，n1表示0至6之整數，La表示-C(=O)-NH-、-NR1-(CH2)n9-、-O-、或單鍵，其中，n9表示1至6之整數，R1表示氫原子、碳數1至6之烷基、-(CH2)na-COOH、或-(CH2)nb-OH，但na表示整數之1至4，nb表示1至6之整數，Lb表示-CR2(-R3)-、-O-、-NR4-、或單鍵，其中，R2及R3係各自獨立地表示氫原子、碳數1至6之烷基、-(CH2)nc-NH2、-(CH2)nd-COOH、或-(CH2)ne-OH，R4表示氫原子或碳數1至6之烷基，nc表示0至6之整數，nd表示整數之1至4，ne表示整數之1至4，但nc為0時，R2及R3不成為相同，Lc表示-CH2-或-C(=O)-，但其中，(順丁烯二醯亞胺-N-基)-係下式 所示之氮原子成為結合部位的基，(吡咯啶-2,5-二酮-N-基)係下式 所示之氮原子成為結合部位的基，-(NH-DX)係由下式 所示的化合物所衍生之1位之胺基之氮原子成為結合部位的基。
  32. 一種下式之任一者所示的結構之連接物，其係用以獲得介隔連接物而結合抗腫瘤性化合物與抗體的抗體-藥物結合物，-L1-L2-LP-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-或-L1-L2-LP-其中，抗體係於L1之末端結合，抗腫瘤性化合物係於Lc或LP之末端結合，式中，n1表示0至6之整數，L1表示-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH2)n2-C(=O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH[-(CH2)n3-COOH]-C(=O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-CH2-( C=O)-、-CH2-C(=O)-NH-(CH2)n4-C(=O)-、-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-、或-C(=O)-(CH2)n5-C(=O)-，其中，n2表示2至8之整數，n3表示1至8之整數，n4表示1至8之整數，n5表示1至8之整數，L2表示-NH-(CH2CH2-O)n6-CH2CH2-C(=O)-、-N[-(CH2CH2-O)n7-CH2CH2-OH]-CH2-C(=O)-、-NH-CH2CH2-[N(-CH2-COOH)]-CH2-(C=O)-、-NH-[CH(-COOH)]-CH2-(C=O)-、-NH-[CH(-CH2-COOH)]-CH2-O-CH2-(C=O)-、-S-(CH2)n8-C(=O)-、或單鍵，其中，n6表示0至6之整數，n7表示1至4之整數，n8表示1至6之整數，LP表示由2至8個之胺基酸所構成的胜肽殘基，La表示-C(=O)-NH-、-NR1-(CH2)n9-、-O-、或單鍵，其中，n9表示1至6之整數，R1表示氫原子、碳數1至6之烷基、-(CH2)na-COOH、或-(CH2)nb-OH，但na表示整數之1至4，nb表示1至6之整數，Lb表示-CR2(-R3)-、-O-、-NR4-、或單鍵，其中，R2及R3係各自獨立地表示氫原子、碳數1至6之烷基、-(CH2)nc-NH2、-(CH2)nd-COOH、或-(CH2)ne-OH，R4表示氫原子或碳數1至6之烷基，nc表示0至6之整數，nd表示整數之1至4，ne表示整數之1至4，但nc為0時，R2及R3不成為相同，Lc表示-CH2-或-C(=O)-，-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-係下式： 所示的結構，於其之3位與抗體結合，於1位之氮原子上與含此結構的連接物結構內的亞甲基結合-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-係下式： 所示的結構，於其之3位與L2結合，於1位之氮原子上與含此結構的連接物結構內之亞甲基結合，cyc.Hex(1,4)表示1,4-伸環己基，L2為-S-(CH2)n8-C(=O)-之時，L1成為-C(=O)-cyc.Hex(1,4)-CH2-(N-基-3-琥珀醯亞胺)-。
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