BE448597A - - Google Patents

Description

   <Desc/Clms Page number 1> 
 



  PROCEDE DE   FABRICATION   d'   INSULINE   CONTENANT 22 UNITES 
INTERNATIONALES par   MILLIGRAMME   
Ce procédé comporte 2 parties : 1  - préparation d'une insuline brute contenant 7 unités interna- tionales au milligramme.*- 2  - Purification à 22 unités internationales au milligramme. - 1ère partie. Les paner- frais ou congelés sont broyés et mis en macération dans l'alcool à 95   , additionné d'acide chlorhydri- que, dans la proportion de 1 de glande broyée   pour 3   en poids d'alcool chlorhydrique à 95 .- Le pH de la macération doit être égal à 1,5, ce que l'on obtient en ajoutant la quantité suffisante d'acide chlorhydrique gazeux en solution alcoolique.

   Après 24 heu- res de macération à la température ordinaire, l'alcool est séparé par filtration au filtre presse et le marc est repris par deux fois son poids d'alcool à 95 .- On laisse macérer à nouveau pen- dant 24 heures, on sépare l'alcool au filtre-presse et cette deu-   xième   solution alcoolique est réunie à la première solution   alooo-     lique.-   

 <Desc/Clms Page number 2> 

 
Les deux solutions alcooliques ainsi réunies sont traitées par l'ammoniaque liquide jusqu'à obtention d'un préci- pité persistant que l'on sépare immédiatement par filtration ou centrifugation. 



   Ce précipité est rejeté et le liquide séparé est amené au pH =   2,@   par addition d'acide chlorhydrique . - Cette solution est alors concentrée dans le vide jusqu'à réduction au 10ème du volume primitif. 



   Le liquide ainsi concentré est traité par une solu- tion de sulfate d'ammonium à 40 % jusquà obtention d'un   préci-   pité persistant et sans employer un excès de sulfate d'ammo- nium. 



   Le précipité ainsi obtenu est séparé par filtration ou centrifugation. puis il est séché rapidement dans le vide en présence d'anhydride phosphorique . 



   La poudre ainsi obtenue est épuisée à froid par l'é- ther anhydre pour enlever les matières grasses puis par l'al- cool absolu, puis, enfin, par l'éther.- 
Cette poudre   contient   de   7   à 10 U.I. au milligramme et constitue une insuline brute identique à celle que l'on ob- tient dans tous les procédés de fabrication.- Deuxième partie.- La poudre d'insuline brute est titrée par la méthode du Codex français et on en prépare une solution dans l'eau   bi-distillée,   telle que le titre corresponde à 60   U.I.   d' insuline par Co., qu'on amène par l'addition   ména-   gée d'acide chlorhydrique dilué au pH = 2.- On laisse dépo- ser   24   heures à la température de 4  .- On décante le liquide qui est mis de   coté,

     et on reprend le résidu par de l'eau ad- 

 <Desc/Clms Page number 3> 

 ditionnée d'acide chlorhydrique, de façon à avoir un pH = 2, en employant un volume de liquide égal à la moitié du volume qui a été précédemment mis de   côté.   on laisse de nouveau en contact pendant 24 heures à la température de 4  et on centrifuge à nouveau. Le liquide centrifugé est réuni au premier liquide, le résidu de centrifugation étant éliminé.- 
Les liquides ainsi réunis sont traités par la soude diluée jusqu'au pH = 4,6. On ajoute alors une solution à 10 % de chlorure de sodium, de façon à obtenir un précipité perma- nent. On laisse déposer pendant 48 heures à la température da 4 , on centrifuge et on élimine le liquide de centrifugation. 



  On recueille le précipité qui contient l'insuline et on dis- sout dans lteau acidulée par l'acide chlorhydrique dilué, de façon à ce que le liquide ait un pH égal à 2.- on ramène a- lors, au moyen de lteau, la solution à contenir 100 U.I. par cc. On a ainsi une solution complètement liquide. Cette solu- tion est précipitée par une solution à 10 % de soude, de façon à être amende au pH = 5,2. 



   On laisse en contact 48 heures, à la température de 4 , puis on centrifuge. Le liquide de centrifugation est éli- miné et le précipité est dissous dans lteau additionnée d'acide ohlorhydrique, de façon à obtenir un   pH = 2   et un volume de liquide correspondant à   200   U.I. au co.- 
Dn précipite par la soude au pH 5,2.- Le précipité est séparé par centrifugation et est recueilli. Il constitue une poudre, qui, après dessication, contient 16 U.I. au milligramme. 



  Par une nouvelle solution au pH 2 dans l'eau chlorhydrique et   @     reprécipitation   au pH 5,2 par la soude dans une solution conte- nant 300 U.I. au cc., on obtient finalement une poudre conte- nant 22   U.I.   au milligramme.-

Claims (1)

1. REVENDICATIONS 1 - Procédé de fabrication d'insuline comprenant la préparation d'une insuline brute contenant 7 unités internationales au mil- ligramme et la purification de cette insuline brute à 83 unités internationales au milligramme.

   2 - Procédé de fabrication suivant la revendication 1 d'après lequel la préparation de l'insuline brute est effectuée ca la manière ci-après : a) on part de pan@réas frais ou congelés, broyés et mis en macération dans de l'alcool à 95 additionné d'acide chlorhydrique, puis l'alcool est séparé par fil tration et le marc est repris par deux fois son poids d'alcool à 95 et, après nouvelle macération, l'alcool est séparé par filtration, après quoi la seconde solu- tion alcoolique est réunie à la première solution al- coolique. b) Les deux solutions alcooliques ainsi réunies sont traitées par l'ammoniaque liquide et le précipité en résultant est séparé par filtration ou centrifugation. c) le liquide séparé est amené au pH voulu, notamment 2,3 par addition d'acide chlorhydrique puis concentré dans le vide.

   d) le liquide ainsi concentré est trai té par une solu- tion de sulfata d'ammonium, et le précipité en résul- tant est séparé par filtration ou centrifugation, puis séché dans le vide en présence d'anhydride phosphorique e) la poudre résultant du traitement suivant le para- graphe d) est épuisé@ à froid par l'éther anhydre puis par l'alcool absolu et enfin par l'éther après quoi la dite poudre contient 7 à 10 unités internationales au milligramme et constitue l'insuline brute. <Desc/Clms Page number 5>

   3 - Procédé de fabrication Suivant la revendication 1 et 2 d'apr@ lequel la purification de l'insuline brute, obtenue d'après la re vendioation 2 est soumise au traitement ci-après : a) la poudre d'insuline brute est titrée par la méthode du Codex français puis préparée en une solution avec de @ l'eau bi-distil@ée, telle que le titre corresponde à 60 u- nités internationales d'insuline par centimètre cube, la dite solution étant amenée par addition chlorhydrique di- 1 lué au pH = 2;

   puis on laisse déposer la solution pendant 24 heures environ à la température de 4 , et après décan- tation, le liquide est mis de coté, puis on reprend le ré- sidu par de l'eau additionnés d'acide chlorhydrique en vue d'obtenir un pH = 2 en employant un volume de liquide égal à la moitié du volume préc édemment mis de côté; on laisse à nouveau en contact pendant 24 heures environ à la tempé- rature de 4 et on procède à une centrifugation;

   après quoi le liquide centrifugé est réuni au premier liquide, résidu de centrifugation étant éliminé. b) les liquides ainsi réunis sont traités par la soude diluée jusqu'au pH = 4,6 et une solution de chlorure de sodium à 10 % est ajoutée, de façon à obtenir un précipité permanent. c) on laisse déposer pendant 48 heures environ à la tem- pérature de 4 , puis on centrifuge et on élimine le liqui- de de centrifugation. d) le précipité recueilli contenant l'insuline est dis- sous dans de l'eau acidulée par l'acide chlorhydrique di lué, de façon que le liquide ait un pH égal à 2, et la so- lution est ramenée, au moyen de l'eau, à contenir 100 u- nités internationales par centimètre cube.

   e) la solution résultant du traitement ci-dessus, prévu au paragraphe d) est précipitée par une solution à 10 % de soude de faon à être amenée au pH = 5,2. <Desc/Clms Page number 6> f) le précipité ci-dessus est laissé en contant pendant 48 heures environ à la température de 4 , puis centrifugé; après élimination du liquide de centrifugation, le préci- pité est dissous dans de l'eau additionnée d'acide chlorhy- drique de façon à obtenir un pH = 2 et un volume de liquide correspondant à 200 unités internationales au centimètre cube. g) la solution provenant du traitement prévu au paragra- phe f) ci-dessus est précipitée par la soude au #H 5;2;

   puis séparée par centrifugation et recueilli sous forme dtune poudre qui, après dessication contient 16 unités internationales au milligramme. h) la poudre séchée ainsi obtenue est traitée par une nou- velle solution au pH 2 dans lteau chlorhydrique, puis re- précipitée au pH 5,2 par la soude dans une solution con- tenant 300 unités internationales au centimètre cube, mo- yennant quoi, on obtient finalement une poudre enntenant 22 unités internationales au milligramme.