BE540998A

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Publication number: BE540998A
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Description

Procédé d'extraction et de purification d'une hormone pancréatique agissant sur les centres respiratoires.

La présente addition a pour objet un procédé d'extraction et de purification d'une hormone pancréatique agissant sur les centres respiratoires consistant en trois modes opératoires dont le premier permet l'extraction de l'hormone active sur les centres respiratoires contenue dans le pancréas de boeuf, mais comme en même temps l'insuline et la vagotonine se trouvent extraites avec l'hormone recherchée, le second mode opératoire est destiné à éliminer de l'extrait brut contenant l'hormone recherchée toute la vagotonine et, en même temps, la plus

grande partie de l'insuline;

le troisième mode opératoire est celui qui permet d'éliminer complètement les dernières traces 'd'insuline et certaines impuretés constituées en particulier par une substance hyperglycémianteg, suivant le brevet princi- pal.

Conformément à l'addition, dans le troisième mode opératoire on procède d'abord à un fractionnement à l'alcool de l'extrait pancréatique obtenu dans les deux modes opératoire: précédents et dialysé; puis on procède ensuite à un fraction- nement au chlorure de lithium de la partie active isolée par le traitement alcoolique., l'extrait étant finalement séché à l'alcool éther et sous vide...

Suivant une autre particularité de l'addition, l'ex- trait obtenu est traité de façon à éliminer l'insuline res- tante en utilisant'la propriété que possède cette dernière de former un complexe irréversible avec le ferrocyanure de potas- sium dans certaines conditions de concentration et de pH.

On donne ci-après, à titre d'exemple non limitatif, une description du procédé.

Après avoir tiré l'extrait brut correspondant à plu- sieurs tonnes de pancréas et séparé de cet extrait la plus grande partie de la vagotonine ainsi que la plus grande partie de l'insuline décelable par électrophorèse, et également la plus grande,partie de substance hyperglycémiante, on procède à un fractionnement à l'alcool de l'extrait pancréatique obtenu précédemment.

L'extrait est dissous dans sept fois son poids d'eau, le pH étant ajusté aux environs de 6, et on met la solution en dialyse pendant quatre heures. Cette opération étant terminée, le liquide reçoit un volume d'alcool éthylique absolu, tel que le titre alcoolique firl soit compris entre 15 et 20 , le pH étant ajusté à 4,7. Cette opération doit être exécutée à très basse température aux environs de -5 C et l'addition

d'alcool doit se faire par très petite quantité avec une agi- tation constante.

Le précipité qui se forme est éliminé par centrifugation
Le liquide limpide recueilli est amené au voisinage de la neutrà lité par de la soude à. 50% et versé dans 10 volumes d'alcool absolu refroidi à -500. On recueille le précipité par centrifu- gation, on le sèche à l'alcool éther et sous vide.

En partant de 100 grammes d'extrait, on aboutit ainsi à 35 gramme s environ.,
L'extrait pancréatique ainsi obtenu subit ensuite un fractionnement au sel Il'est alors remis'en solution dans 10 fois'son poids d'eau. Le pHest ajusté à 3,45;la solution est refroidie à. 0 c et reçoit un demi-volume,d'une solution à
50% de chlorure de. lithium'. Le précipita formé est élimina par centrifugation âpres une demi-heure de repos.

Le liquide recueilli est ajusté à un pH égal à 2,7, puis le précipité .est laissé au repos pendant une demi-heure avant d'être centrifugé, redissous dans le minimum d'alcool à 60 ; cette solution neutralisée est pricipitée par 10 volumes d'alcool absolu. Le précipité recueilli par centrifugation est séché à l'alcool éther et sous vide. On obtient ainsi 15 à 20 grammes d'extrait actif sur les centres respiratoires à raison de 20 à 40 unités par milligramme. Cet extrait ne contient plus du tout de substance hyperglycémiante, mais il contient encore des traces d'insuline nettement décelables par l'étude de la glycémie chez le chien avant et après injection du produit.

Pour obtenir un extrait pur, on procède à l'élimination de ces traces d'insuline en utilisant la propriété que possède cette dernière,de former un complexe irréversible avec le ferrocyanure de potassium dans certaines conditions de concen- tration et de pH.

L'extrait pancréatique obtenu dans le mode opératoire précédent (15 à 20 grammes) est dissous dans une solution

2 pour 1000 de ferrocyanure de potassium. Il faut 28 cm3 de cette solution par gramme d'extrait à purifier.

On commence à dissoudre la substance dans le quart du volume de solution à employer et on. ajuste le pH entre 3,8 et 4. Après dix minutes de repos, on ajoute le reste de la solution de ferrocyanure de potassium en trois additions suc- cessives de volume égal en séparant chaque addition par un temps de repos de dix minutes et en conservant le pH entre 3,8 et 4.

On laisse .le précipité se déposer pendant deux. heures
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à 0"C et on le sépare par centrifugation.

Le liquide limpide recueilli est acidifié par l'acide
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chlorhyirique 3N ,, jusqu'à pff c 2,8 Au cours de cette opéra- tion, on élimine par centrifugatibn les précipités qui peuvent se former. Le liquide aC,idifié ,refr9:1di 0 0 reçoit un demi- volume de solution à 50% de; chlorure de' lithium. On laisse ..
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reposer pendant trente minutes '0 0 et on recëuille le ,.. , , intr;' ,:e1ï on recéue précipité par centrifugation. 1 est dissous dans le minimum d'alcool à 60 la solution est amenée à la neutralité et versée dans' 10 volumes d'alcool absolu. Le précipité centri- fugé est séché à l'alcool éther et sous vidé.

On obtient 8 à. 10 grammes d'un extrait actif sur les centres respiratoires à raison de 100 à 200 unités par milli- gramme. Cet extrait n'a aucune activité sur le parasympathique, aucune action hyperglycémiante, aucune action, hypoglycémiante.

L'électrophorèse montre que la substance est appauvrie en impuretés et que la partie active s'est enrichie.

Diverses modifications peuvent d'ailleurs être appor- tées aux modes opératoires du procédé d'extraction et de purification de l'hormone pancréatique agissant sur les centres respiratoires sans sortir du cadre de l'addition.

Claims

RESUME Procède! d'extraction et de purification d'une hormone <Desc/Clms Page number 5> pancréatique agissant sur les centres respiratoires consistant en trois modes opératoires dont le premier permet l'extraction 'de l'hormone active sur les centres respiratoires contenue dans les pancréas de boeuf, mais comme en même temps, l'insu- line et la vagotonine se trouvent extraites avec l'hormone recherchée, le second mode opératoire est destiné à éliminer de l'extrait brut contenant l'hormone recherchée toute la vago- tonine;

le troisième mode opératoire est celui qui permet d'éliminer complètement les dernières traces d'insuline et certaines impuretés constituées en.particulier par une substance hyperglycémiante, suivait le brevet principale remar- quable notamment par les caractéristiques suivantes, consi- dérées séparément ou en combinaison : a) Dans le troisième node opératoire, on procède d'abord à un fractionnement à l'alcool de l'extrait pancréa- tique obtenu dans les deux modes opératoires précédents et dialysé;

puis on procède ensuite à un fractionnement au chloru- re de lithium de la partie active.isolée par le traitement alcoolique, l'extrait étant finalement séché à l'alcool éther et sous vide. b) L'extrait obtenu est traité de façon à éliminer l'insuline restante en utilisant la propriété que possède cette dernière de former un. complexe irréversible avec le ferrocyanure de potassium dans certaines conditions de con- centration et de pH.