BE622460A - - Google Patents

Description

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  Procédé de préparation de Go6m'r.-l.mby,èa.od,e. 
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 On vient de découvrir que les 6{-méthyl-16-iBétûyXène¯ stéroïdes de formule 1 
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 présentent des propriétés glucoeortieoïdea et anti-inflammatoi- res intéressantes, Ces nouveaux composés conviennent   particuliè-     rament   comme produits thérapeutiques pour le,traitement des maladies rhumatismales et se distinguent-par une tolérance par- 

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 bonne par .*.

   'Ifli! 91[Fil ainsi que par l'absence de rétention oodiquet 
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 L'objet de la présente invention est constitue.par des 
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 pyocëdea de préparation de 0<-'methyl-'16methylène-atercïdeB de formule I, qui oonaistent à déshydrogéner .miorobiologiquement en position 1,2 le atéroïde de base saturé en position 1,% ou à introduire dans le 21 deaxy-aompos correspondant un groupe 0-aoyle en position 21 ou éventuellement & eaterifier un grou- pe hydroxyle se* trouvant en position 21, ou respectivement à saponifier un groupe 21-ester, ou & oxyder un groupe 11-hydro- 
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 xyle par traitement.avec un agent oxydant doux en .un groupe 
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 .1- nétaz.aue, au à traiter ayeo de l'aoide ,updr,,ua 14 . 



  9/3,11/9-oxydo-stéroïde de base pws.la,,.?6part,Qn, composés dans lesquels Y * Po Zn vue de la 1$2-déohydrogênatïon miorobiologique on peut utiliser tous les nioroorganiaues courants pour cette applica- tison, par exemple les mioroorganismea des genres. s Alternariat Calonoctriag Colletotrichum, OY.indroaarpon, 'Tidymal7.ar Fuaari- um, Ophiobolus, Septomyxa, V4ï'=îcularia Mioromonospora, Nooar- dia, streptomycout Aloaligenea, Baoillua, Oorynebaoterium, 00- baoterium, Protaminobaoter, Poéùdomonao. Conviennent partioulië'- rement le Baoillue ephaerioue var. fueiformis, Corynebaotarium simplex et Tusarium aolanl. 



  Pour la déshydrogénation on ajoute.la matière première une culture submergée du mioroorganiame considère, qui et dévie- loppe dans une solution nutritive appropriée à une température 
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 optima et avec forte aération parlée méthodes usuelles de la 
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 technique de fermentation. Au lieu de cultures en état de crois- 
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 sanas sont utilisables.aussi, suivant une technique sans cela 
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 identique, des suspensions des mioroorganiamoa en solution tam- ponnée, La conversion est suivie par chromatographie et la solu- tion de fermentation après conversion intégrale de la matière 

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 première .est   extraite/par   exemple avec du chloroforme. 
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  L'introduction d'un groupe-0-acyle dans la position 21 d'un- 21-déeoxystéroïde peut par exemple se faire par traitement avec de l'iode en solution alcaline et réaction ultérieure du el-iode-ot6rolde obtenu avec un acylate alcalin, de préférence de l'acétate de potassium '   ' Suivant l'invention   il   est en   outre possible   d'estérifier   .par des   méthodes   connues en soi le groupe 21-hydroxyle d'un 
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 6 -métliyi-16"mdthylèneestérolde de formule T (a groupe hydro. xyle libre).

   Comme agents d'eatérifioation conviennent tous les acides où leurs dérivas convenant pour l'eatërifioation, qui forment des esters   physiologiquement     tolérés*     On   peut par exem- ple employer les   acides   suivants ou leurs dérivés convenant pour 
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 . une 'batêtitioat1on , acides carboxyliques comme l'acide acéti- que, acide propionique, acide butyrique, acide trimé1,ihylaoétt,... que, acide t-butyl aoétlque, acide oyôlopentylpropïonïquep acide phénylprQP1oniue, acide phénylacdtiquoi acide oapro1que, acide .

   Óapryl"1-que acide palmitique, acide undéoylénique, de #ô#e que l'acide benzoïque ou l'aaide hexahydrobonzo%que ou les acides comme par exemple l'acide ohlorac4tïque, .Le cas échéant,, en vue de l'obtention de dérivée solubles dans l'eau/on peut aussi setdritïer le groupe 21e)iydroxyle avec don acides dioarboxyliquea, des acides amina- ou alooylaminooarboxy-. liques ou avec de l'acide phosphorique ou sulfurique. De cette 
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 manière on peut par exemple préparer les eucoinatee, oxalatea ou les sels d'addition acides d'esters aminocarboxyliquent oomme par exemple les esters d'acide aspartique ou d'acide diéthyl. am1noaoét:l.que. 



   D'un autre côté on peut saponifier par   les   méthodes   habitu-   elles un groupé   dans   les produite finaux. Comme agent de saponification convient par exemple une solution aqueu- 
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 se d'hydrogénooarluonate de sodium, de carbonate de sodium ou 

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 d'hydroxyde de sodium.   On   effectue avantageusement le esponifi- cation à l'abri de   1'oxygène.   
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  "" L'oxydation d'un groupe 11(- ou llîoihydroxyde se fait de maniera connue , par exemple par traitement du .,why4raistiro. de correspondant avec de l'anhydride chromique en présanoe de pyridine. Comme agent oxydant convient en outre un mélange d'a- aide euochromiq,ue et d'acétone. Ces réactions exigent en gêné  ral 30 minutes à 24 heures. On opère avant ageue amont & la tempe- rature ordinaire ou en refroidissant légèrement. Eventuellement on peut encore ajouter un solvant inerte supplémentaire. 



   La préparation des composés 90(-fluorésde formule I peut 
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 aussi se faire par scission du cycle /3,,3-oxydo du otérolde -de base. Avantageusement on opère en présence d'un solvant inerte et on utilise de   l'acide   fluorhydrique anhydre. La réac- tion est effectuée à des températures basses, par exemple dans 
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 l'intervalle de -70  à *.5 C. Le traitement se fait de la maniè- re usuelle, "c'est-à-dire que le mélange de réaction est par exemple versé sur de la glace et ensuite extrait avec un solvant organique approprié, par exemple avec un hydrocarbure halogène. 
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 z partir de l'extrait Séché, on '.aâ,e( le'9C(-i'luarp-I,lj,-ixyrxoxr. atéroïdé correspondant. 



  * lea 6<X-méthyl-lS .méthylène>-8téroïd   nécessaires ootsaé matière première peuvent être obtenus à partir des 16oC,17Ctf- :: do...16(4 !o111'bl;'téJ'9':de.s de base par traitement 'avec des   .acides   forte. 



   .   Les'nouveaux   composée peuvent être utilisés en mélange avec les véhicules pharmaceutiques habituels dans la médecine humaine . et vétérinaire. Comme substances   véhiculantes   on   envisage   les substances organiques ou minérales convenant pour l'administra- tion parentérale, enterai ou topique et qui ne réagissent pas avec les nouveaux composés, comme   l'eau,   les huiles végétales, 
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 les polyéthylene glycole, la gélatine, le lactose, l'amidon, le 

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 'stéarate .de magnésium, le talot la vaseline, la oholestérine,

     etc*   Pour   l'application     parentérale   servent   particulièrement   les   soldions     huileuses   ou aqueuses, ainsi que les suspensions, 
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 #émulsions ou leu implantât  En vue de l'application enterai* ' pouvant être employées les tablettes ou draguée, pour 1'applica- tion topique Ion onguant ou crèmes, qui peuvent être aterili- sés ou additionnée   d'agents   de conservation,   stabilisation   ou   mouillants,   de sels pour influencer la pression cemotique ou de   substances tampons*   
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 fixera j4e ,,1  6okméthyl l6*méthyl6ne redniBolone. 



   A une   culture   agitée âgée de 6 heures de   Baoillus   sphaeri- cus, qui a été cultivée dans 2000 om3 d'une solution nutritive 
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 à 1 de Baeamin Buoà à 2800g on ajoute 700 mg de 6  méthy'.d' , méthylène-hydrooortisone ou de son Si-acétate dans 40 om3 de méthanol. Aprfea 24 heures supplémentaires d'agitation à 28 C, on extrait la culture trois fois avec le même volume de   ohloro-   forme et   on concentre   les extraits réunis à siccité. par chroma* 
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 tographie en couche mince on ne sait plus déceler la matière première! on a exclusivement de la 6#¯méthyl-l6-méthylfene pre<ï"* nîeolone. Point de fusion 236-237 Cî (j) + 5 3* (dioxane); Max 241 m/tit Ble 1 am 393. 



  Exemple 2, 21,-acétqte dé'v6-méth 1.-.6-mdt lne- rednitolane. 



  On chauffe au bain de vapeur pendant 2 heures 20 g de 60(-!n6thyl-l6-méthylëne-predniaolone dans 200 cm3 d'anhydride acétique et 200 cm3 de pyridine. On laisse refroidir, on intro- duit le   mélange dans   3 litres d'eau glacée et on sépare par   filtration.l'ester   qui se présente   à   l'état   cristallisé.   
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  P.P. z8-zg C;-()A la* (dioxane); X41ax 241 ' E i cm 351. ' 

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 On diaBout 5 g de dans .110 OM3 de dioxine absolu, on ajoute 1 55 om3 de chlorure de chlorecdtylo et 2 om3 de pyri4in.. on lai... reposer durant . uni nuit à la température ambiante. On verso nlu1lt mélange de réaction dans de Ilane on sépare avec succion le précipité -et on le lave. avec de l'sau .. , ..!,..< On 4:1880ut '1. ,2l..(\1b:ra:oétati'lbÍ'U.t\ l'db.. dani' 40'0 om' d'acétone et on le laisse reposer 4ureilt.W},. nUit-aveo'55 oct3 de 411thlam1nl et 4 on? d'eau à 0*C. Par concentration sous pression réduite., le 21-diéthylaminpaoéta'te  e adpalie par or1., talliaation. # #- . 



  On dissout 3#6 B du 21..d1'tlam1noao4tat. de 6W*méthyl  16-at@thylàne"predniaolone .date 8g om3 de tétr6h14Qtuan a4ol.9 et on y ajoute 70 em3 d'une solution d'aoïde-ahlorhydrique dans 
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 du chloroforme* Le chlorhydrate qui. précipite.est .filtre avec 
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 suoeion, lavé' aVéa du térahfd01urane..t séchée ff.3Ç.e,îtml,fl. ,4 l-.&.o..&te,.,¯.Mthl6.thyn A une culture âgée de 16, heures de Coryn4baoterïui atmplex qui a été tultîvde-dane 2000 OM3 d'un  solution nutritive à 0,1?* d'extrait de levure à 2800# on ajoute 700 og 4taoéta. de.6  !néthyl-'l6<méthylène"oortiaone dans 40 cm3 de méthanol. Là réac- tion est ouivie par chromatpgraphib en couche mince jusque ce que la matière première ait disparu et qu'on.ne décelé plus jque l'acétate de 6-méthyl-*16-"!aéthylnepredni.aone..

   Apre 8 heures on extrait tout en agitant la culture trpia foin avec le 'lJ1e.' volume de chloroforme, on concentre perdv4pg.ation.,08 extraite réunis et on les purifie avec de i4ther de pétrole.. 



  P.P. 195'-19ô*C! (O():o + 105- .'<dioxanar" ..,', '.' ÀmBX 240, ih. Eim "4'. ". .' . ' 

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   6[alpha]-méthyl-16-méthylène-predniscne. 0.(   
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 Dans un petit fementateur on inocule 15 litron d'un  solu. tien nutritive à 1% 4'extrait de levure, pH 6900 Avec 0,5 litre de oulture agitée de Bail1uè sphaerioua. La culture ne dévolop- pe- tout- en agitant constamment et en aérant fortoment à 2890 et l'on fait après environ 10 heures une addition de 7p5 g de 21-acétate de 60(-methyll6-'!Bethylene'*ooftiaane diaaoua dans 300 cm3 de méthanol.

   La   déahydrogénation   est suivie par chroma. tographie sur papier et elle   est   terminée après 28 à 36   heures*   La solution de   culture' est   extraite à   trois     reprint$   avec le   même,volume   de   chloroforme   et on concentre par évaporation   le$   
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 8olutinna.ohlorotormiques réunies. ! partir d'acétone la set. jaéthyl-16-méthylène¯predniB0na cristallise. À'max 29. ePo ElOI . 3713 Exemple 6. 
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 Sel apdique glorthophosipKate 6ethyl redni.80,l.,ope'. 



     On     laisse, reposer pendant   10 jours à l'état   $collé   10 g de dans 20 cm3 de   pyridine   
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 absolue avec 9  3 g de chlorure de phosphoryl-dimorpholide. ôa   vire*     alors   la   charge   dans la quantité calculée d'acide   aulfuri'-   que dilué et on extrait le avec du   chloroforme    
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 On diaaout le reaidu ohloroformique dans 40 em3 dtdthanolw oh y ajoute de l'eau jusqu'à premier trouble permanent et on agite après addition de 110 8 d'!mber11te IR.120 pendant 6 heu. res.

   On sépare par   filtration,   on lave l'échangeur avec de 
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 Ildthanols on- neutralise le filtrat aveo de la soude caustique et on oonoentre fortement   nous   pression réduites On   laisse   re-   froidir,   on extrait avec du chloroforme toutes les parties neu- tres, on acidifie ensuite la phase aqueuse avec de l'acide sul- 

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 furique dilué et on extrait avec du bigtanoi normal. On abohe l'extrait avec du sulfate de aodiua, on neutralisa avec du 
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 méthylate de sodium et on concentre un peu* Au refroidissement 
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 le sel eodique ne sépara.

   On le filtre, l'extrait a avoo- du méthanol, on ajoute à l'extrait du butanol ot on concentre fortement et ainsi le sel sodique pur précipite* 8 m 1e 6méthyl-9-fluorB-16-m Dans un petit te=entatour de 12 litres on inocule avec 800 em3 de culture submergée de Qorynebaoterlua sinplex 12 li- troo d'une solution nutritive à 0,1 de Basamin Bush tamponnée - avec du phosphate de Sorenaen à pH 6,8. La culture ce développe tout en aérant fortement et en agitant à 2800 et l'on fait après 6 heures une addition de 6 g de 6n-mthy.wc'..'luarc-.d-méth,r . lene-hydroeortisone dans 200 om3 de méthanol* Tandis .que l'on poursuit l'aération à 28*ip on surveille la conversion par ohro- 
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 matographie en couche mince. Après 9 heures on ne décelé plus la matière première.

   On extrait la solution de culture trois fois par agitation avec le même volume de chloroforme, on concentre 
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 à siccité par évaporation les extraits et on les purifie avec de l'éther de pétrole. Après reoriatalliaation on obtient 3,9 s de 6t9i. méthy,-tt,uara-16-qéthyirrapraiaalane puxal 2' J m r adt 'C. 
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 Exemple,... 8  
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 6C-mhyl-o<fluoro-16-m 
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 Dans un petit fermentateur on inocule 12 litres d'une 
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 solution nutritive à 1% de Basamin Buth, pE 6,5, avec 60n or3 d'une culture submergée de Baoillua ophacrieune La culture et développe nous forte aération et agitation à 2800 et l'on fait après 10 heures une addition de 6   de 60<-.m6thyl-9<!<-fluoro- 16-méthylnecortiaone dans 200 cm3 de méthanol.

   la conversion est suivie par rohromatographle en couche mince pendant que l'on 

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 continue à aérer à 2890* Apres 26 heures on ne décèle plus la matière   première.   On extrait la solution de culture trois foie avec le même volume de chloroforme tout en agitant, on concentre les extraits à siocité et on les purifie avec de   l'éther   de 
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 pétrole. Apres reoristallisation on obtient 4,2 g de 5l'-mthyl- pure, 238 M/Ut Ble 352. 



  Exemple 2. 



  21-âoêtate de 6,o(-méthyl,-6-méthy& Dam  30 om3 de méthanol qui contient 0,6 g de chlorure de calcium anhydre, on met en suspension 6 g de SO.m6thy116- méthy.èna-1,. pégnadiène..,0-dione.-l./3,x?Q-d.oa et on y ajoute 3 g d'oxyde de calcium. En l'espace de 30 minutes on a- joute goutte à goutte tout en agitant une solution de 9 g d'iode 
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 dans 30 om3 de méthanol, qui contient de mdle in,6 g de chlorure de calcium anhydre, en maintenant en l'occurrence la température à   25-28*0.   On agite encore pendant   30   minutes, on refroidit 0 C et on   verse jle   tout dans un mélange de 150 cm3 d'eau   glacée   et de 4,5 om3 d'acide acétique   glacial,     l'iodure   qui précipite est   séparé   avec   succion,

       lavé à     l'eau   et séché à 50 C. 



   Puis on le dissout à 40 C dans 100 cm3   d'acétone   qui   con-   
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 tient 1 cm3 d'eau, 0, 5 ON3 d'acide acétique glacier et 90 g   d'acétate   de   potassium,   on chauffe pendant 2 heures à l'ébulli-      
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 tion a reflux etion introduit le tout en agitant dans bzz litres   d'eau   glacée. On sépare avec succion et on lave avec 200 cm3 d'eau.   On dissout  àchaud la matière humide dans 120 cm3 de 
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 méthanol et, après addition d'une solution de 301 g de pyrosul- fite de sodium dans 45 cm3 d'eau, on chauffe pendant 2   heureuse   à l'ébullition à reflux.

   On chasse ensuite 35 cm3 par   distilla-   tion et après cela   le'21-acétate   se sépare par   cristallisation.   
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 i.'. 23-239 a¯ (o0p + 18* (dioxane)} 
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 241 m/u,Wcm 351. 



  1, 241 , . 1%. cm ..*-.' 

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 On dissout 7,9 z de 21 acétate de 60(*méthyll6.mé')!hylene- ptfednieolone dans 250 om3 de méthanol bouillant., on y ajoute une solution chaude de 2,18 g d'hydrogénooarbonate de aodiua dans 4 om3 d'eau et on chauffe & l'ébullition à reflux pendant , 15 minutes dans un courant d'azote. On neutralise avec de l'aci'" de acétique glaciale on concentre noue pression réduite jusqu un tiers et on verse le mélange dane,de'l'eau; de ce fait le' produit précipite à l'état cristallise' , È.7mê 262'.O, . 



  (OO3 + 5,3* (d1oxane)J i\ mu 241 310 3ST3. 



  'D + Max M..J<. ¯ ' '' ' On dissout 2 ± d'acétate de 60(.Métbl'-l6*-éthyiene-'3.<4'- dans 70 OM3 d'todtone et on ajoute goutte à goutte à 1000 tout en agitant 1,5 on? 
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 d'une solution oxydante* Celle-ci est préparée' par dissolution - 
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 de 5 g de trioxyde de chrome dans 4f4 om3 d'acide sÙlfùriqu8' concevtré et en complétant avec de l'eau à 20 im340 On agite la. ' charge d'oxydation pendant 30 minutes ,.la température or41nai' 
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 - et on la trait. de la Manière usuelle avec du chloroforme et de 
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 l'eau$ La solution ohluroform1qu8 làv'. jU8qfà neutralisé il odehd  est aMenée a iticoité goud pi'easion réduite  On obtient 1,7 g de 2l-acêta1.e de 6c(...tt1'th11"16'':'métlène-l,4...piég%1a(Hlur.- 17aidioL-3,ll,20-trione. P.?. 195-196'0; C0Oj> #² 105a (dioxane); Aaax 240 =u...)!Otl1 ,,. 



  "&%mv\*:..12.. ' " * "-' 21-acétate..de 6Of"méthyl 16?méhylèe*1.4 pr:é/mad!lrne 17  21 diol?3 . 11 t2Q"trione . ' ¯ - ¯;# ' ' ' , On ajoute 1,5 g d'anhydride chromique dans 150 oa"3 depyri- dîne refroidie Tout en agitant on ajoute 4 la température r41 

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 Mire une solution de 2f5 8 de 21-acétate de 6 t-rné tîiyl-16  
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 dans 
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 200 om; ;de- P3rid,ue et on laisse reposer le mélange pendant 430 
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 heures la' température ordinaire. Puis on verse celui-ci dama 
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 500 OM3 d'eau, on entraîne pendant 30 minutes 4 la vapeur d'eau et on extrait au chloroforme. On lave 1 'extrait avoode l'eau, on le sèche.et on le débarrasse du solvants Cn obtient 1,9 g de xa4'ate de fmthxx athyv4,r.s,dne ", 21diol'-3,ll,20<.trione. P.P. 195"196*p (0() xâ" .xsns3 m,2.244 ur ° 34â. 



  2aptate,de6-mëthjy t!...ud aL6w dik na d..ecs. 



  On dsoût4,2 g de 21-acétate de 6tt"9j',.w dan 42 om3 'de chloroforme absolu et on ,', jaud - 3 .G dans 25 om3 d'un mxans de . 40 ¯ om de 15 om3 de ohloyo- force et 25 6 d'acide xu.¯d.,ue. On laisse reposer la solu- tion de réaction pendant 4 heures !t "'30*0 On la yerse alors dans une solution d'hydrogénooarbonate de sodium  on extrait le etérol4o avec du 0410rotormet on sèche la solution chloroforme- que et on la concentre par évaporât ion  5ë résidu, le 21*aoétate de on reorie- tallise.a partir, d'acétone, Max 238 3le 332. 



  RBVBNDIOATIONS. 



  1- Procédé de préparation de 6O( méHhyl¯l6 méthylèn<*  steroïdes de tomule 1 
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 caractériel on M qu'on deahydrogeniae wioro1biologique!aent ,en position 1,2 le ateroïde de baise saturé en position 1,2, ou m}.. ce qu'on introduit dans le 21-deaoxy"oompoee correspondant un groupe   0-aoyle   en position 21, ou en ce   qu'éventuellement   on 
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 entérîtis un groupe hydroxyle ce trouvant en position 219 ou en ce qu'on   saponifie   un groupe 21-seter ou en ce qu'on oxyde   un .   groupe   11-hydroxyle   par traitement avec un agent   oxydant   doux en groupe 11-cétonique,ou en ce que pour la préparation de 
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 oompoaea dans lesquels Y m 7,

   on traite le 9/11/3 "oxydo-* stéroïde debase avec   de l'aoide   fluorhydrique. 



     2,¯ Composés   de formule : 
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 3< 6C<-mthyl'-16-'!athylëM'-py$dni ûibn. ' , t x , 48   6 (-méhy,-16méhbylne-pxd,aa. .,.,". '"\ -'; 5.  W6ifniyâ.A."7A'.L.l4ÎÂ,r'i.SJ''l;A'5,i,,WülirSldrpl1' " "kt.: '\