<Desc/Clms Page number 1>
EMI1.1
Procédé de préparation du scilliglaucosidine-c-L-rhamnos1do isolé à partir de scilla maritima alba.
La présente invention concerne l'extraction d'un nouveau glucoside de la scille blanche.
On sait déjà par des publications de Stoll et collaborateurs (voir Ull:nan Enzyklopädie der technischen Chemie, 3ème édition, vol 8 (1957), pages 234 et suivantes) que la scille Scilla (Urginea) maritima Baker L., var, alba contient plusieurs glucosides présentant un intérêt pharmacologique qui
<Desc/Clms Page number 2>
EMI2.1
ont un effet sur l'2.ctivité cardiaque.
Parmi ces composés.. la proscillaridine A en particulier a pris recotoment une impor- tance considérable c<Jr1;,e agent thérap=ùfiɱ5µ'1(lj*Éf"'" ' La Demanderesse "a decuvr;.¯;; . , ';j,, 'F--. " urprise' q'u-'1xn autre glucoside non encore décr'/1µeb/..¯Bj.7[$)Àà.de la ' ....,,".', " ""-'.*10'1>.' scille blancie .Cozltraire;xenÉ '. " r ' .. ,......, '- ",'fVJ""i;.7! scille blanc#.Contrairement la proscil1c..ridi11B" A}:\ouveau glucoside ,qui est le scilliclaucosidine-a'-L<-x'!LA.c/ gliacoside,q1à-1 est #",:::' "..' ..,: f^.. t . a une résistance élevée à l'égard de ,'hydola.t., c-c y.oë qui pt:r:0t de l'isole],' et de le purïfir-.=d'u.e ¯.et ; . yi¯=9¯; > ,x., ..;, relativement ;,eu onéreus.e.. ":'i>':1,:,:,:.:...:,-,,,"x.>it:":-' 'i '1' \ '. .. 1 "-11: :!M" "'Ir La présente invention'a dqn'Gi.i";poU'l",,'o'b:j;1ti\trocêdé do , 0",":;':'0:.::-:
.¯. <..' . . f Ft préparation du scilliGlmcosi<.iin.... :"-'Lr1U1id,;..,iiVL1:nt lequ0'lon ...,'" 1""' SOU::1Ct une fraction <1?=an extrait de scille.blanche contenant des ,...... . ;"... glucosides et .àututasnent de la orosc,.¯.ax ie,,1 ule hydrolyse, ,)...""" !t's., 'I''f-rt7; "'-. ' '-'4 ae..,'.y' .o.. :i6 "',,(.',';" ¯ on s6pare la scilla:::idii10' formé:e'aln:,i1a;p;.t;;:cr:la proscil- ¯ , - .. ...... "i'.;:',,'" ,...... lariâinoz A et on isole le -scili1ÚauoÓ-id1Iiè- q-t",:rn!Ùanoide de ,',. j 'r
EMI2.2
la solution de réaction. ,
EMI2.3
Pour isoler le nÓuvÓau"gÙlQ9ii4Ó, on. peut" partir des 'V"''M - liqueurs :::rc3 obt.0nucs lors-.dëa''!3arati'on''deLlà pro#cillaridine A et qui can stituer:t une naat3re première particulicrcMont éconor.1ique.
La zàpz>i,;1 lon de la proscillaridine A est effectuée suivant des procèdes connus pa.r;;''6"r;at ton de scilles blanches franches ou scl:c.'os additionnés d'eau, extraction du bouillon, de fermentation au ...cyen d'un solvant approprie, élimination des f. w ¯ .,.. . .. Y .... J' impuretés indésirables par une purifi':1Pl},qÜ('t"e cris-' tallisation de la prosclllaridine A fulytée. u-,1 pux ¯.,. cîe 'la "%yii%¯;
, 'i'.J......,., d6ùridation par fermentation (voir Sto7.l='i. > ,. s '.'ç-tx.7D3 (1933) ou la 'demande publiée de brevet all"e:n(Ü1d"fi - .:::.s4)
EMI2.4
Les liqueurs de cristallisation qui contiennent le
EMI2.5
;,-:' :. nouveau glucoside, de a8e que de la proscillaridino A' résiduelle -.ë'-.
<Desc/Clms Page number 3>
et des impuretés indésirables en quantités plus importantes, peuvent être utilisées comme matière de départ pour le procède suivant la présente invention.
L'hydrolyse peut être effectuée avantageusement pari chauffage de la matière de départ pendant peu de temps en milieu acide de préférence en solution aqueuse diluée d'un j acide minéral comme un acide halogénhydrique ou l'acide sulfu- rique, et avantageusement en solution aqueuse d'acide sulfurique à 1 %, puis séparation par filtration de la scillaridine formée.
La'matière de départ est de préférence en solution dans un sol- vant approprié, par exemple dans un alcanol, comme le méthanol.
Lorsqu'on utilise les liqueurs de cristallisation obtenues lors de la séparation de la proscillaridine A, on évapore de préfé- rence ces liqueurs à siccité et on dissout le résidu dans un alcanol, comme le méthanol.
On sépare alors le scilliglaucosidine-@-L-rhamnoside de la solution d'hydrolyse, de préférence par extraction du filtrat débarrassé de la scillaridine.
Le filtrat est avantageusemeut lavé d'abord avec un solvant relativement non polaire, comme le tétrachlorure de carbone, pour éliminer les aglycones résiduels et les impuretés indésirables. La solution est alors extraite au moyen d'un ou plusieurs.solvants polaires, avantageusement du chloroforme et un mélange de chloroforme et de méthanol (par exemple 1 :1) et les fractions contenant le glucoside recherché peuvent alors être combinées.
Le glucoside brut peut alors avantageusement être purifié par chromatographie, de préférence sur gel de silice contenant de l'eau. Par chromatographie sur gel de silice addi- tionné de 5% d'eau au moyen d'un mélange de chlorure do méthylène
<Desc/Clms Page number 4>
et de méthanol (100:5), puis nouvelle chromatographie des frac- tions enrichies en glucoside sur gel de silice additionna de 50% d'eau au moyen d'un mélange d'acétate d'éthyle saturé d'eau et de méthanol (100:0,5), on obtient des cristaux aciculaires en touffes du nouveau glucoside qu'on peut purifier davantage par recristallisation , par exemple dans une solution aqueuse chaude à 50%d'acétone.
L'analyse élémentaire du produit préparé ainsi et séché sous vide sur du pentoxyde de phosphore à 80 C donne les résultats suivants : C = 65,25%, H = 7,36%, 0 = 27,65%, ce qui .donne la formule moléculaire calculée ; C30H40O9.1/2 H2O.
Le nouveau glucoside se distingue par les propriétés suivantes :
Point de fusion : 197-198 C (avec décomposition) (non corrigé )
Pouvoir rotatoire : [a]20D = - 45,0 ¯ 2 (c = 1,méthanol)
Spectre UV : maximum à 298 m (logé, = 3,73)
Spectre IR : maximum à 2700, 1710, 1640 et 1535 cm-1 (KBr), comme le montre le dessin annexé.
Réactions colorées : a) avec le réactif de Liebermann-
Burchard : la coloration vire du mauve rose au bleu vert en passant par le bleu ; b) avec le réactif de Rosenheim : négatif, c) avec de l'acide formique concentré chaud : coloration verte.
La chromatographie on couche mince sur plaques de gel de silice G, après trois élutions au moyen de formiate d'éthyle saturé d'eau et développement par pulvérisation de SbCl3 à 20%
<Desc/Clms Page number 5>
EMI5.1
donne un Rf de 0, 35 pjur une tache vert gris sale. (La proscillaridine donne, d:lYs les ttô:es conditions, un Rf do 0,42 et
EMI5.2
une couleur bleu mauve).
EMI5.3
Le nouveau glucoside est identifie cO:'1:le indiqua ci-
EMI5.4
après :
EMI5.5
La réaction du glucoside avec ae l',anlydridc acétique dans de la pyridine anhydre donne un conposd tri-0-acetyld de formule C36H46012 (P.F. 185 - 188 C, non corrigé), /.7= J4,6 " 36/y6 12 '* ' 2 ?" "à' ÉÉÉ* 34' 2 (c = 1, J:léthanol).
EMI5.6
L;; réaction du glucoside avec du chlorhydrate d'hydro-
EMI5.7
xylanine donne une oxisc de formule {C30F1,.10T) 0, 5. l, 5 H20 (P.F. 178 - 184 C (avec décomposition); /7 = -.1,0 - 2 .
EMI5.8
L'hydrolyse acide du glucoside dans des conditions
EMI5.9
sévères ( 5 heures à 105 C dans une solution aqueuse à 1% diacide sulfurique) donne un agiycone de formule C2/rP"2804 (P.F. 223 - 228 C; L v5 = -151 , (CIICl3)). Ces valeurs correspondent à celles connues pour la 3'S-3-:nhycïxoscilltC.uuco- sidine (Stoll et collaborateurs, :ielv.Chi:a.Acta,35, 25J.3 (1952)).
Le sucre présenta à savoir le L-rhaLLnose, est isolé de la solu-
EMI5.10
tion d'hydrolyse et est identifie par détermination de son point
EMI5.11
de fusion et de son pouvoir rot3.toire) a::.n;i que :'-7' c: oaatographie. Le spectre de la -broWoph:nylhydra :one obtenue à
EMI5.12
partir du sucre présente aussi les bandes caractéristiques de
EMI5.13
la L-ri*nnosc-¯-bro;aoph6tàylhydraione.
EMI5.14
Ces résultats montrent que le nouveau glucoside est
EMI5.15
le scilliglaucosiù:Lne- 0. -L-rha..."111oGide.
EMI5.16
La présente invention a également pour objet le
EMI5.17
scilliglaucosidine- 0. -L-rhru:1nosidc.
Ce glucoside présente un mtér&t pharillucologiquc en
EMI5.18
raison de son effet sur Inactivité cardiaque. Il est aussi
<Desc/Clms Page number 6>
intéressait comme intermédiaire pour la préparation de nouveaux glucosides ayant un effet sur 1' activité cardiaque. la présente invention a aussi pour objet des compositions pharmaceutiques comprenant le scilliglaucosidine- a L-rhamnoside comme constituant actif,en combinaison avec au moins un autre constituant actif et/ou au moins un véhicule ou excipient pharmaceutique.
Les compositions peuvent comprendre d'autres constituants actifs qui ont un effet sur Inactivité cardiaque. Comme exemples de tels composes, on peut citer d'autres glucosides à activité cardiaque du type de ceux extraits de la seille ou de la digitale, des pyrimido-pyrimidines,de même que des dérivés de la théophyline,comme la 7-ss-hydroxypropylthéophylline,qui ont aussi un effet solubilisant.
,Les compositions peuvent comprendre d'autres constituants actifs ayant un effet pharmacodynamique différente par exemple des agents sympathomimétiques.
Les compositions peuvent avantageusement être présen- tées sous une forme se prêtant à 1-lad.,ninistrr-tïon par voie orale ou parentérale, Ainsi,,les compositions se prêtant à l'administration par voie orale peuvent être solides ou liquides et peuvent être présentées sous forme de granules, de comprimés, de dragées, de capsules, de sirops, d'émulsions, de suspensions ou de gouttes et elles peuvent comprendre des véhicules ou excipients pharmaceutiques classiques.tels que des solvants, des agents solubilisants, des diluants, etc.
Par exemple, des excipients convenables pour les comprimes sont notamment le lactose, l'amidon de pomme de terre et l'amidon soluble et le stéarate de magnésium.
Les compositions se prêtant à l'administration par
<Desc/Clms Page number 7>
voie parentérale présentées en ampoules peuvent comprendre comme véhicule un liquide parentéralement acceptable,comme de l'eau stérile,ou une huile convenable, comme l'huile d'ara- chide. ' "
Les compositions sont avantageusement présentées en doses unitaires, dont chacune apporte une quantité déterminée du constituant actif. Les comprimés, les dragées, les capsules et les ampoules sont des exemples de doses unitaires appropriées.
Chaque dose unitaire contient, de préférence, 0,1 à 3,0 mg, et plus avantageusement 0,15 à 1,0 mg, de scilliglaucosidine-@- L-rhanmoside.
Les exemples ci-après illustrent la séparation du nouveau glucoside suivant la présente invention.,ainsi que la préparation d'une composition pharmaceutique contenant ce nouveau glucoside comme constituant actif.
EXE:.IPLE 1. -
De la scille séchée est soumise à une fermentation après addition d'eau, puis à une extraction au moyen d'un solvant approprié, comme le méthanol, le chloroforme ou l'acétate d'éthyle. Après le traitement habituel et la purification des ex- traits, la proscillaridine A est isolée de façon connue par cristallisation dans le méthanol. Les liqueurs mères obtenues ainsi sont évaporées à siccité.
On dissout 380 g du résidu de glucosides, subsistant après la préparation de la proscillaridine A, Mans
3,8 litres de méthanol chaud et on y ajoute alors, sous agita- tion, 3,8 litres d'une solution aqueuse à 1% d'acide sulfurique (50 C). On chauffe la solution au reflux pendant 30 à 45 minutes au bain marie et on sépare par filtration à chaud la
<Desc/Clms Page number 8>
scillaridine A formée par hydrolyse des résidus do proscillaridine A. On obtient ainsi 35 g de scillaridino A brute.
La solution refroidie est extraite au moyen do 'tétra- chloruro de carbone (2x1 litre) pour éliminer la scillaridine A résiduelle, les aglycones et les impuretés lipophiles.(au total 39 g de résidu solide). Pour isoler le nouveau glucoside, on extrait la solution méthanolique aqueuse au moyen de chloroforme (2 x 1 litre), puis au moyen d'un mélange de chloroforme et de méthanol (1: 1) (3 x 0,5litre).
Les extraits dans le chlo- roforme et dans le chloroforme/méthanol sont évaporés à siccité sous vide à une température du bain de 50 C,pour donner 215 g d'un glucoside résiduel jaune pâle,
Pour séparer la majeure partie des impuretés subsistantes, on soumet le résidu à une prépurification par chromatographie sur colonne.
Pour la préparation de la colonne, on humecte 2,2 kg de gel de silice (par exemple,gel de silice Merck d'une granu- lométrie de 0,05 à 0,20 mm) au moyen de 110 ml d'eau, puis on élue ce produit dans une colonne en verre au moyen d'un mélange de chlorure de méthylène et de méthanol (100:5).
On dissout 215 g du résidu de glucosidesdans 500 ml d'un mélange de chlorure de méthylène et de méthanol (100:5), on introduit la solution dans la colonne et on la soumet à une chromatographie au moyen du même mélange de solvants. On recueille l'éluat en fractions de 0,5 litre et on suit l'évolution do l'opération par chromato graphie En couche mince de chaque fraction.
Lorsque la quantité totale d'éluat recueilli s'élève à 14 litres, toutes les impuretés dont le Rf est supérieur à celui du nouveau , glucoside ont été éliminées de la colonne. Ces fractions con- tiennent 118 g de résidu solide. Les fractions suivantes
<Desc/Clms Page number 9>
EMI9.1
(représec1xlt ::.ll no-cal de ? .Litres ..,' éluat) ,qui contiennent' l'ens,mble du scilliglaucosidine- 0. -L-rha.!1l11oside, sont conbi- né@s et le solvant est chassé par distillation sous vide à une @empérature du bain de 50 C. On obtient ainsi 73 g d'une substance jaune pale. Cette substance est soumise à uno nouvelle chromatographie sur gel de silice en vue d'une purification plus poussée.
A cette fin, on introduit dans une colonne 1 kg de gel de silice additionné de 500 ml d'eau, on dissout le glucoside brut dans 500 ml d'un mélange d'acétate d'éthyle saturé d'eau et de méthanol (100:0,5), on introduit la solution dans la colonne et on la soumet à une chromatographie au moyen du même mélange de solvants. Après séparation d'une première fraction de 0,5 litre, le glucoside est élue de la colonne.
Le nouveau glucoside cristallise après peu de temps de la fraction principale (1 litre d'éluat) pour former dos touffes de cristaux aciculaires. Apres 24 heures, ces cristaux sont filtrés sous vide, lavés et séchés sous vide à 60 C, pour donner
EMI9.2
35e5 g de scilliglaucosidine-o-L-rhamnoside pur. On peut ob- tenir une nouvelle quantité de 5,5 g du glucosido à partir des liqueurs mères après nouvelle chromatographie.
Par recristallisation dans un mélange d'acétone et d'eau (1:1) on obtient le glucoside sous forme de cristaux aciculaires incolores. Après séchage sous vide à 80 C sur du pentoxyde de phosphore, ces cristaux ont un P.F. de 197 à 198 C (décomposition) et un pouvoir rotatoire de [Ó]20D = -45,0 ¯2 (dans le méthanol).
EMI9.3
E X 1,'.,P r, E 2 . On dissout 200 g du résidu de gluaosides obtenu lors de la préparation de la proscillaridine A à partir de scille blanche des Indes, dans 2 litres de méthanol par chauffage au reflux et,
<Desc/Clms Page number 10>
après refroidissement à 35 C, on y ajoute sous agitation 2 litres d'une solution à 1% diacide sulfurique (35 C), On agite la solution pendant 3 heures à 35 C, puis on sépare par filtration sous vide la scillaridine A qui s'est déposée' On soumet le filtrat refroidi à une extraction au tétrachlorure de car- bone (2 x 0,5 litre), puis,pour isoler le scilliglaucosidine- a- L-rhamnoside,à une extraction au moyen de chloroforme (2 x 0,5 litre), puis au moyen d'un mélange de chloroforme et de méthanol (1:1) (3 x 0,3 litre).
Les extraits dans le chloro- forme et dans le mélange de chloroforme et de méthanol sont combinés et. séchés sur du sulfate de sodium anhydre. Après sépa- ration du solvant par distillation, on obtient 140 g de résidu de glucosides.On élimine les impuretés,comme décrit dans l'exemple 1, par chromatographie du résidu sur 1,4 kg de gel de silice addi- tionné de 5% d'eau,au moyen d'un mélange de chlorure de méthy- lène et de méthanol (100:
5) comme éluant.Le résidu solide (85 g) isolé des fractions contenant le scilliglaucosidine- @-L-rhamno- side est soumis à une nouvelle purification, comme dans l'exem- ple 1, par chromatographie sur 1,2 kg de gel de silice addi- tionné de 600 ml d'eau et élution au moyen d'un mélange d'acé- tate d'éthyle saturé d'eau et de méthanol (100:0,5). Le scilli- glaucosidine-@-L-rhammoside (38 9).,qui se sépare de la frac- . tion principale par cristallisation, est isolé, puis purifié par recristallisation dans une solution aqueuse à 50% d'acétone.
Les propriétés physiques de cette substance correspondent à celles du composé obtenu dans l'exemple 1.
<Desc/Clms Page number 11>
EXEMPLE
Composition pharmaceutique (gouttes pour administration par voie orale)
EMI11.1
(-)-1-Hydroxyphényl-2-méthylaminoéthanol-(l) 50,00 g
Nouveau glucoside (Scilliglaucosidine- a -L-rhammoside) 0,25 g 7-ss -Hydroxypropylthéophylline 200,00 g
Na2S205 1,5 g
EMI11.2
Sel de sodium de l'acide éthylènediauinetétraacétique 1,50 g Acide tartrique 3,75 g Saccharine sodique 1,00 g -Hydroxybenzoate de méthyle 0,45 g -Hydroxybenzoate de,propyle 15,00 g Ethanol 75,00 g Eau déminéralisée 1500,00 ml
Le nouveau glucoside est dissous dans l'éthanol et
EMI11.3
les Irhydrox-jbenzoates sont dissous dans la quantité totale d'eau chaude.
Après refroidissement de cette solution aqueuse, tous les constituants restants y sont dissous, puis cette solution est combinée avec la solution éthanolique du nouveau glucoside. On fait l'hypothèse que 20 gouttes correspondent à 1,5 ml de solution. Le pH de la solution est de 5,0 et peut, si on le désire, être' ajusté au moyen d'un tampon.