BRPI0608461A2 - hidrazinocarbonil-tieno [2,3-c] pirazóis, processo de preparo, composições que os contêm e utilização - Google Patents

Abstract

HIDRAZINOCARBONIL-TIENO [2,3-C] PIRAZóIS, PROCESSO DE PREPARO, COMPOSIçõES QUE OS CONTêM E UTILIZAçãO. A presente invenção refere-se a hidrazinocarbonil-tieno [2,3-c] pirazóis, ao respectivo processo de preparação, composições que os contêm, e à respectiva utilização como medicamento, em particular como agentes anticancerígenos.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "HIDRAZINOCARBONIL-TIENO [2,3-C] PIRAZÓIS, PROCESSO DE PREPARO, COMPOSIÇÕES QUE OS CONTÊM E UTILIZAÇÃO".

A presente invenção se refere notadamente aos Hidrazinocarbo-5 nil-tieno [2,3-c] pirazóis substituídos, ao respectivo processo de preparo, às composições que os contêm, e à sua utilização como medicamento.

Mais particularmente, e de acordo com um primeiro aspecto, a invenção se refere aos Hidrazinocarbonil-tieno [2,3-c] pirazóis substituídos, úteis como agentes anticancerosos. 10 1 H-tieno [2,3-c] pirazóis são conhecidos de WO 04/013146 e de

WO 03/101968. Esses produtos são apresentados como inibidores de numerosas proteínas quinases. Todavia, a administração desses produtos em pacientes pode induzir efeitos secundários importantes, em razão de seu largo espectro de ação. Assim, a obtenção de inibidores específicos de uma sele-15 ção de proteínas, notadamente de quinases, é buscada.

Contra qualquer espera, foi descoberto que é possível conseguir inibidores da quinase Aurora 2 (Aurora A) e de algumas outras quinases Citeis em oncologia, por Hidrazinocarbonil-tieno [2,3-c] pirazóis substituídos.

Esses produtos correspondem à seguinte fórmula geral (IK): na qual:

(I) Ri é independentemente selecionado no grupo constituído por NHCO(R2),-NHCONH(R2),-NHCOO(R2), no qual R2 é independentemente selecionado no grupo constituído por-H,-(CrC24)alquila,-(C3-C9) ciclo-alquila,-(C3-C9) cicloalquileno, heterocicloalquila, heterocicloalquileno, arila, 25 heteroarila, (CrC6) alquil-arila,-(CrC6)alquil-heteroa arila,-aril-(CrC6)alquila, hetero aril-(CrC6) alquila, eventualmente substituídos;(II) cada um dos R3, R4 e R5 é independentemente selecionado no grupo constituído por H, (CrC6)alquila, (CrC6) alquil-arila, (CrC6) alquil-heteroarila,-arila,-heteroarila, eventualmente substituídos, ou bem [(R3 e R4) ou (R3 e r5)] são ligados entre si para formar um heterociclo mono ou bicícli-5 co, saturado ou insaturado, compreendendo de 2 a 10 cadeias carbonadas e de 1 a 5 heteroátomos escolhidos dentre N, O e S, eventualmente substituído, ou para formar um grupamento N=CH-arila, esse arila sendo eventualmente substituído.

No âmbito da invenção, e salvo menção diferente no texto, en-10 tende-se por:

-halogênio: um flúor, um cloro, um bromo ou um iodo;

-alquila: um substituinte saturado, linear ou ramificado, compreendendo de 1 a 12 átomos de carbono. A título de exemplos, podem-se citar os grupos metila, etila, propila, isopropila, butila, isobutila, tercbutila, pentila, 15 1-metilbutila, 2-metilbutila, 3-metilbutila, 1,1-dimetilpropila, 1,2-dimetilpropila, 2,2-dimetilpropila, 1-etilpropila, hexila, 1-metilpentila, 2-metilpentila, 1-etil-butila, 2-etilbutila, 3,3-dimetilbutila, heptila, 1-etilpentila, etc;

-alquileno: um substituinte alquila, tal como definido acima, que é divalente. A título de exemplo, podem ser citados os grupos metileno (-CH2-) 20 ou dimetileno (-CH2-CH2-), etilenila, 1-metiletilenila, prop-1-enila, prop-2-enila, Z-1-metil prop-1-enila, E-1-metil prop-1-enila, Z-1,2-dimetil-prop-1-enila, E-1,2-dimetil prop-1-enila, but-1,3-dienila, 1-metilidenil-prop-2-enila, Z-2-metilbuti-1,3-dienila, E-2-metil but-1,3-dienila, 2-metil-1 -metilidenil prop-2-enila, undec-1 -enila e undec-10-enila, etc; 25 -arila: um substituinte aromático mono-ou policíclico tendo de 6 a14 átomos de carbono. A título de exemplos, podem-se citar os grupos feni-la, naft-1-ila, naft-2-ila, antracen-9-il, 1,2,3,4-tetra-hidronaft-5-ila, 1,2,3,4-tetra-hidronaft-6-ila, etc;

-cicloalquila: um substituinte alquila, tal como definido acima, 30 que compreende de 3 a 12 átomos de carbono e que é cíclico. A título de exemplos, podem ser citados os substituintes ciclopropila, ciclobutila, ciclo-pentila, ciclopentenila, ciclopentadienila, ciclo-hexila, ciclo-hexenila, ciclo-heptila; biciclo[2.2.1] heptila, ciclooctila, biciclo [2.2.2] octila, adamantila, per-hidro naftila, etc;

-heteroátomo: um átomo de nitrogênio, de oxigênio ou de enxofre; -heteroarila: um substituinte aromático mono-ou policíclico, com-

preendendo de 5-12 cadeias e compreendendo de 1 a 4 hetero átomos, tais como anteriormente definidos. A título de exemplos, podem-se citar os subs-tituintes pirrol-1 ila, pirrol-2-ila, pirrol3-ila, furila, tienila, imidazolila, pirazolila, oxazolila, tiazolila, isoxazolila, isotiazolila, 1,2,4-triazolila, oxadiazolila, tiadia-

zolila, tetrazolila, piridila, pirimidila, pirazinila, 1,3,5-triazinila, indolila, ben-zo[b]furila, benzo[b]tienila, indazolila, benzimidazolila, azaindolila, quinoleíla, isoquinoleíla, carbazolila, acridila, etc;

-heterociclila: um substituinte hidrocarbonado cíclico saturado ou parcialmente insaturado, compreendendo 5 a 13 cadeias e compreendendo

1 a 4 heteroátomos, tais como anteriormente definidos. De preferência, o substituinte hidrocarbonado cíclico saturado ou parcialmente insaturado será monocíclico e comportará 4 ou 5 átomos de carbono e 1 a 3 heteroátomos. A título de exemplos, podem ser citados os substituintes piperidinila, azetidi-nila, piperazinila, morfolinila, oxazepinila, pirrolidinila, diazepinila, etc;-alcóxi: um substituinte de fórmula-O-alquila no qual o grupo al-

quila é tal como anteriormente definido;

-substituído: um substituinte diferente de H, por exemplo halogê-nio, alquila, arila; heteroarila, cicloalquila, heterociclila, alquileno, alquinila, OH, O-alquila, O-alquileno, O-arila, O-heteroarila, SH, S-alquila, S-arila,S(02)H, S(02)alquila, S(02)-arila, S03H, S03-alquila, S03-arila, CHO, C(O)-alquila, C(0)-arila, C(0)OH, C(0)0-alquila, C(0)0-arila, OC(0)-alquila, OC(0)-arila, C(0)NH2) C(0)NH-arila, C(0)NHR7, C(0)NR7R8,-(Cr C3)alquila-arila,-(CrC3)alquila-heteroarila,-(CrC3)alquila-heterociclila,-(Cr C3)alquila-cicloalquila, NR7R8, nos quais os ciclos são eventualmente subs-tituídos por um ou vários substituintes do grupo halogênio, (CrC3)alquila, alcóxi, e nos quais R7 e R8 são independentemente selecionados no grupo constituído por hidrogênio (Co-C3)alquila, fenila, heteroarila, cicloalquila, he-terociclila, (Ci-C3)alquila-N[(C0-C3)alquila]2. De preferência, quando [(R3 e R4) ou (R3 e R5)] são ligados entre si para formar um ciclo ou grupo N=CH-arila, o termo "substituído" designa um ou vários substituintes do grupo halo-gênio, (Ci-C6)alquila,-(C0-C6)alquila-alcóxi; -Co: uma ligação co-valente ou-H;

-por convenção para-(Ci-C6)alquil-arila; a ligação ao resto da molécula é feita ao nível do grupo alquila. Inversamente, para-aril-(CrC6)-alquila, a ligação é feita ao nível do grupamento arila.

-Por proteínas JNK são entendidas as proteínas JNK1, 2 e 3. 10 Dentre os valores preferidos de R1, são escolhidos NHCO(R2);

no qual R2 é, de preferência, escolhido dentre arila, heteroarila, e aril-(Ci-C6) alquila, eventualmente substituído.

A invenção tem particularmente por objeto os produtos de fórmula (I'):

<formula>formula see original document page 5</formula>

na qual:

-cada um dos grupamentos R3, R4 e R5 são tais como anteriormente definidos, e

-Rô é escolhido dentre o grupo constituído pelo halogênio, (d-C3) alquila-NR7Ra, (CrC6)alcóxi, (C0-C3)alquila heterociclo, (C0-C3)alquila arila, (C0-C3) alquila heteroarila, (C0-C3) alquila-cicloalquila, nos quais os ciclos são eventualmente substituídos por um ou vários substituintes (CrC3) alquila, halogênio, alcóxi, e nos quais R7 e R8 são independentemente selecionados no grupo constituído por-H, (C0-C3) alquila, arila, (d-C3) alquila-N-[ (C0-C3) alquila]2.

Mais particularmente, o grupamento R6 está em posição 3 ou 4sobre a fenila à qual se liga.

Mais particularmente, R6, de acordo com a invenção, é-(C0-C3) alquila-heterociclo, esse heterociclo sendo ele próprio eventualmente substituído por um ou vários substituintes (C-1-C3) alquila, halogênio, alcóxi. 5 Mais particularmente, R3 é vantajosamente escolhido dentre ari-

la, heteroarila, (C-i-Ce) alquil-arila ou (CrC6) alquil-heteroarila, eventualmente substituído, de preferência dentre fenila, piridila, indolila, benzimidazolila, pirazolila, e pirrolila, eventualmente substituído.

Mais particularmente R4 é vantajosamente escolhido dentre H ou 10 alquila, notadamente-(Ci-Ce) alquila. Particularmente R4 é H, metila ou etila.

Mais particularmente R5 é vantajosamente escolhido dentre H ou alquila, notadamente-(CrC6) alquila.

Mais particularmente, R3 e R4 formam com o nitrogênio ao qual são ligados, um heterociclo de 5 a 6 cadeias contendo, além disso, se for o 15 caso, um átomo de N, O ou S, eventualmente substituído, particularmente piperidina ou pirrolidina, eventualmente substituído.

Mais geralmente, e no contexto da invenção, um arila preferido é fenila, e um heteroarila preferido é escolhido dentre piridila, indolila, benzimidazolila, pirazolila, tienil e pirrolila, eventualmente substituído. 20 Produtos ilustrativos da invenção, de acordo com seu primeiro

aspecto, podem ser escolhidos dentre:

5-(N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1H-tieno[2,3-c]pirazol-3-il]-4-metóxi-

benzamida

5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1H-tieno[2,3-c]pirazol-3-il]-25 4-metóxi-benzamida

5-(N'-ciclo-hexil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-4-metóxi-benzamida

N-[5-(N'-benzil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1H-tieno[2,3-c]pirazol-

3- il]-4-metóxi-benzamida

N-{5-[N'-(2-etil-fenil-hidrazinocarbonil]-1 H-tieno[2,3-c]pirazol-3-il}-

4- metóxi-benzamida

N-{5-[N'-(2-fluoro-fenil-hidrazinocarbonil]-1H-tieno[2,3-c]pirazol-3-il}-4-metóxi-benzamida

4-metóxi-N-[5-(N'-o-tolil-hidrazinocarbonil]-1H-tieno[2,3-c]pirazol-3-il}-4-metóxi-benzamida

N-[5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)1H-tieno[2,3-c]pirazol-3-5 il]-4-morfolin-4-ilmetil-benzamida

4-Bromo-N-[5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil]-1H-tieno[2,3-c]pirazol-3-il]-benzamida

N-[5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil) 1H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-4-(4-metil-piperazin-1 -ilmetil-benzamida 10 4-(3,5-dimetil-piperazin-1 -ilmetil)N-[5-(N'-metil-N'-fenil-

hidrazinocarbonil) 1H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-benzamida

4-(3,5-dimetil-piperazin-1-ilmetil)N-[5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil) 1H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-benzamida

4-(4-metil-per-hidro-1,4-diazepin-1 -il metil) N-[5-(N'-metil-N'-fenil-15 hidrazinocarbonil) 1 H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-benzamida;

4-(4-metil-perhidro-1,4-diazepin-1 -ilmetil) N-[5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil) 1 H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-benzamida;

N-[5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-4-piperazin-1-ilmetil-benzamida; 20 N-{5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno [2,3-c]

pirazol]-3-il}-4-piperazin-1-ilmetil-benzamida;

N-[5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-4-(3-metil-piperazin-1 -il metil)-benzamida;

N-{5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno [2,3-c] 25 pirazol-3-il}-4-piperazin-1 -ilmetil)-benzamida;

4-dietilaminometil-N-[5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-4-piperazin-1 -ilmetil-benzamida; trifluoro-acetato;

N-{5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il}-4-dietil amino metil)-benzamida; 30 N-[5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno [2,3-c] pirazol-

3-il]-3-(4-metil-piperazin-1 -il metil)-benzamida;

N-{5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno [2,3-c]pirazol-3-il}-3-(4-metil-piperazin-1 -ilmetil)-benzamida;

N-[5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1H-tieno[2,3c] pirazol-3-il]-4-piperidin-1 -ilmetil-benzamida

N-[5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil)--1H-tieno[2,3c] 5 pirazol-3-il]-4-piperidin-1-ilmetil-benzamida

N-[5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno[2,3c] pirazol-3-il]-4-piperidin-1-ilmetil-benzamida

N-[5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil)-1H-tieno[2,3c] pirazol-3-il]-4-pirrolidin-1 -ilmetil-benzamida 10 4-azetidin-1 -ilmetil-N-[5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1 H-

tieno[2,3c] pirazol-3-il]-benzamida

4-{[(2-dimetilamino-etil)-metil-amino]-metil}-N-[5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno[2,3c] pirazol-3-il]-benzamida;

N-{5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil)]-1H-tieno[2,3c] 15 pirazol-3-il}-4-{[(2-dimetil amino-etil)-metil-amino]-metil}-benzamida;

N-[5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno[2,3c] pirazol-3-il]-4-per-hidro-1,4-oxazepin-4-ilmetil-benzamida

N-{5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil)-1H-tieno[2,3c] pirazol-3-il]-4-perhidro-1,4-oxazepin-4-ilmetil-benzamida 20 N-[5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno[2,3c] pirazol-3-

il]-3-morfolin-4-ilmetil-benzamida

N-{5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil)-1H-tieno[2,3c] pirazol-3-il]-3-morfolin-4-ilmetil-benzamida

4-[(2-dietilamino-etilamino)-metil]-N-[5-(N'-metil-N'-fenil-25 hidrazinocarbonil)-1 H-tieno[2,3c] pirazol-3-il]-benzamida

N-{5-[N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil]-1H-tieno[2,3c] pirazol-3-il}-4-[(2-dietil amino-etil amino)-metil]-benzamida

4-[(metil-fenil-amino)-metil]-N-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno[2,3c] pirazol-3-il] benzamida 30 4-[(diisopropilamino)-metil]-N-[5-(N'-metil-N'-fenil-

hidrazinocarbonil)-1 H-tieno[2,3c] pirazol-3-il]-benzamida; trifluoro acetato

N-[5-(N'-benzil-hidrazinocarbonil)-1H-tieno[2,3c]pirazol-3-il]-4metóxi-benzamida

4-Metóxi-N-[5-(N'-piridin-2-il-hidrazinocarbonil)-1H-tieno[2,3c] pirazol-3-il]-4 metóxi-benzamida

N-{5-[N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil]-1H-tieno[2,3c] 5 pirazol-3-il}-4-(4-metil-piperazin-1 -il)-benzamida

N-[5-(N'-Benzil-N'-metil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno[2,3c] pirazol-3-il]-4-(4-metil-piperazin-1-il)-benzamida

N-(Piperidin-1 -il)-3-[4-(4-metil-piperazin-1 -il)-benzoil amino]-1 H-tieno[2,3c] pirazol-5 carboxamida 10 N-[5-(N'-benzil-hidrazinocarbonil]-1 H-tieno[2,3c] pirazol-3-il]-4-(4-

metil-piperazin-1 -il)-benzamida

N-[5-(N'-Etil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1H-tieno[2,3c] pirazol-3-il]-4-(4-metil-piperazin-1-il)-benzamida

N-[5-(N'-Benzil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1H-tieno[2,3c] pirazoi-15 3-il]-4-(4-metil-piperazin-1 -il)-benzamida

N-[5-(N'-Metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno[2,3c] pirazol-3-il]-4-(4-metil-piperazin-1 -il)-benzamida

N-{5-[N'-4-Cloro-fenil)-N'-ciclobutil metil-hidrazinocarbonil]-1 H-tieno[2,3c] pirazol-3-il}-4-(4-metil-piperazin-1 -il)-benzamida 20 N-{5-[N'-Etil-N'-(4-flúor-fenil)-hidrazinocarbonil]-1H-tieno[2,3c] pirazol-3-il}-4-(4-metil-piperazin-1 -il)-benzamida

N-{5-[N'-flúor-fenil)-N'-(2-metóxi-etil)-hidrazinocarbonil]-1H-tieno[2,3c] pirazol-3-il}-4-(4-metil-piperazin-1 -il)-benzamida

N-[5-(N'-Etil-N'-o-tolil-hidrazinocarbonil)-1H-tieno[2,3c] pirazol-3-25 il}-4-(4-metil-piperazin-1 -il)-benzamida

N-[5-(N'-Etil-N'-m-tolil-hidrazinocarbonil)-1H-tieno[2,3c] pirazol-3-il}-4-(4-metil-piperazin-1-il)-benzamida

N-[5-(N'-Etil-N'-m-tolil-hidrazinocarbonil)-1H-tieno[2,3c] pirazol-3-il}-4-(4-metil-piperazin-1-il)-benzamida 30 N-{5-[N'-(4-flúor-fenil)-N'-isobutil-hidrazinocarbonil]-1 H-

tieno[2,3c] pirazol-3-il}-4-(4-metil-piperazin-1 -il)-benzamida

N-{5-[N'-(3-Bromo-fenil)-N'-etil-hidrazinocarbonil]-1H-tieno[2,3c]pirazol-3-il}-4-(4-metil-piperazin-1 -il)-benzamida

6-(4-Metil-[1,4]diazepan-1 -il)-N-[5-(N'-(metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno[2,3c] pirazol-3-il]-nicotinamida

N-[5-(Benzilideno-hidrazinocarbonil)-1H-tieno[2,3c]pirazol-3-il]-4-5 (4-metil-piperazin-1-il)-benzamida

N-[5-[N'-Metil-N'-fenil)-hidrazinocarbonil)-1H-tieno[2,3c]pirazol-3-il}-4-(2-morfolin-4-il-etóxi)-benzamida

4-(4-metil-[1,4]diazepan-1-il)-N-[5-(N'-(metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno[2,3c] pirazol-3-il]-benzamida 10 Os produtos, de acordo com a invenção, podem se apresentar

sob a forma não quiral, racêmica, enriquecida com um estereo-isômero ou enriquecida com um enantiômero; e são eventualmente salificados.

De acordo com um segundo aspecto, a invenção tem por objeto um processo de preparo dos produtos, conforme seu primeiro aspecto. 15 Em particular, a invenção se refere a um processo de preparo de

um produto de fórmula geral (I), a seguir:

na qual R1 representa NHCO(R2), e na qual R3, R4 e R5 são tais como definidos anteriormente, esse produto de fórmula geral (I) sendo obtido por:

R3

R5

R4'

(0

H

(I) acoplamento entre (i-a) um ácido de fórmula geral (X) a se-

20 guir:

HO

(X)

PG

na qual R1 é tal como definido anteriormente, e no qual PG é um grupo protetor da função NH livre intracíclico do núcleo tieno[2,2-c] pirazol, e(i-b) uma hidrazina (R3) (R4)N-NH (R5), na qual R3, R4 e R5 são tais como definidos anteriormente, em presença de uma gente de aco-plamento e em presença de uma base tal como uma amina terciaria ou um carbonato de um metal alcalino; depois

(II) clivagem de PG.

O produto de fórmula geral (I) pode ser obtido por saponificação da função éster do núcleo tiofeno de um produto de fórmula geral (IX): Alkyl-0

no qual Ri é tal como definido anteriormente.

O produto de fórmula geral (IX) pode ser obtido por acoplamento

10 entre:

(I) um produto da seguinte fórmula geral (lia): Aikyl-.Q

na qual Alquila é tal como definido anteriormente, e na qual PG é um grupo protetor da função NH livre intracíclico do núcleo tieno [2,3-c] pirazol; e (II) um produto de fórmula geral (R2) CONH2, em presença: 15 - de um catalisador, tal como o iodeto de cobre (I);

- de uma amina tal como o trans-1,2-diamino ciclo-hexano, o trans-1,2-bis(metilamino) ciclohexano ou, de preferência, o N,N'-dimetil-1,2-diaminoetano; e

- de uma base tal como o fosfato triptotássico ou o carbonato de

20 césio.

O produto de fórmula geral (Ma) pode ser obtido por reação entreum mercapto acetato de alquila alquil-OCO-CH2-SH, em presença de uma base tal como o carbonato de sódio e um composto (llla):

H

Br

(llla)

no qual PG é tal como definido anteriormente:

O produto de fórmula geral (llla) pode ser obtido por (I) formila-5 ção do 3,4,5-tribromo-pirazol para a obtenção de 3,5-dibromo-4-formil-pirazol (III), depois (II) proteção da função amina intracíclico de (III) pela introdução do grupo protetor PG.

O grupo protetor PG pode ser introduzido via:

(I) reação com o etilvinil éter em presença de um ácido tal como o ácido clorídrico, para a obtenção de um grupo PG = 1-etóxi-etila, no meio

de um solvente inerte, tal como o tolueno, ou:

(II) reação com di-terc-butildicarbonato em presença de uma base tal como a trietilamina, a piridina, ou a N,N-dimetilamino-piridina, para a obtenção de um grupo PG = terc-butiloxicarbonila, no meio de um solvente

inerte, tal como o diclorometano.

De acordo com um terceiro aspecto, a invenção se refere a uma composição farmacêutica, compreendendo um produto, de acordo com seu primeiro aspecto, em combinação com um excipiente farmaceuticamente aceitável.

De acordo com um quarto aspecto, a invenção tem por objeto a

utilização de um produto, de acordo com seu primeiro aspecto, como inibidor de uma proteína quinase, de preferência escolhida dentre Aurora 1, Aurora 2, CDK1, CDK2, CDK4, FAK, KDR e Tie2. Uma quinase particularmente preferida é Aurora 2.

De acordo com um quinto aspecto, a invenção tem por objeto a

utilização de um produto, de acordo com seu primeiro aspecto, para a fabricação de um medicamento útil para tratar um estado patológico, em particu-lar o câncer.

De acordo com uma variante do quinto aspecto, a invenção tem por objeto a utilização de um produto, de acordo com seu primeiro aspecto, para a fabricação de um medicamento útil para tratar um estado patológico 5 escolhido dentre a psoríase, o glaucoma, as leucemias, as doenças ligadas ao sistema nervoso central, as inflamações, e as doenças ligadas a um dis-funcionamento das proteínas JNK.

Os compostos de fórmula (I) podem ser preparadas a partir dos compostos de fórmula geral (II), segundo o esquema de síntese geral a se-10 guir:

As reações (a) e (d) podem ser feitas, quando R1 representa NHCO (R2), no qual R2 tem a mesma significação que anteriormente em presença de uma amida de tipo (R2)CONH2, de iodeto de cobre (I), de uma amina, tal como o trans-1,2-diamino ciclo-hexano ou,-e é um dos aspectos 15 da invenção-, o N,N'-dimetil-1,2-diamino etano, e de uma base tal como o fosfato tripotássico ou o carbonato de césio no meio de um solvente inerte, tal como o dioxano a uma temperatura compreendida entre 20 °C e a temperatura de ebulição do meio reacional, segundo os métodos gerais descritospor S.L BUCHWALD et al., J. Am. Chem. Soe, 2002, 124, 7421; J. Am. Chem. Soe, 2001, 123, 7727.

As reações (b) e (c) podem ser feitas em presença de um derivado de tipo (R3)(R4) NN (R5)H no qual R3, R4, R5 têm a mesma significa-5 ção que anteriormente e de trimetilalumínio no meio de um solvente, tal como o tolueno ou a dimetilformamida a uma temperatura compreendida entre 0 °C e a temperatura de ebulição do meio reacional.

A reação (e) é feita geralmente segundo os métodos habituais que não afetam o resto da molécula, notadamente por aplicações dos méto-dos descritos por T.W. Greene e P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis (2a ed.), A. Wiley-lnterscience Publication (1991), ou por MC Omi-e, Protective Groups in Orgânica Chemistry, Plenum Press (1973) ou por Bradford P. Mundy e Michael G. Ellerd, Name Reactions and Reagents in Organic Synthesis, A. Wiley-lnterscience Publication (1988). A reação (e) pode ser feita, por exemplo, em meio básico, em presença de hidróxido de potássio ou de hidróxido de sódio, no meio de um solvente inerte, tal como uma mistura de tetrahidrofurano, de água e de um álcool (etanol ou metanol, de preferência) ou de um álcool sozinhos (etanol ou metanol, de preferência) a uma temperatura compreendida entre 20 °C e a temperatura de ebulição do meio reacional, de preferência à temperatura de refluxo do meio reacional.

A reação (f) é feita, de preferência, em presença de um derivado de tipo R3R4NNR5H, no qual R3, R4, R5 têm a mesma significação que anteriormente e de uma gente de ativação do tipo tetrafluoro borato de 0-(1H-benzo triazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametil urânio (TBTU), por exemplo, em presença de uma base (trietilamina ou diisopropiletil amina, por exemplo), no meio de um solvente inerte (acetonitrila ou dimetilformamida, por exemplo) no meio de um solvente inerte (acetonitrila ou dimetilformamida, por exemplo) a uma temperatura compreendida entre 0 °C e a temperatura de ebuli-ção do meio, ou segundo os métodos bem conhecidos de acoplamento da química peptídica (M.BODANSZKY et coll. Principies of Peptide Synthesis, Spinger-Verlag, New York, NY, 1984, 9-58) ou da formação de uma amida.Alternativamente, a reação (f) pode ser feita geralmente segundo os métodos habituais que não afetam o resto da molécula, notadamente por aplicações dos métodos descritos por Bradford P. Mundy et Michael G. Ellerd, Name Reactions and Reagentes in Organic Synthesis, A. Wiley-lnterscience 5 Publication (1988). Por exemplo, a reação (f) pode ser feita sob atmosfera inerte (por exemplo sob nitrogênio ou sob argônio) em presença de cloreto de oxalila, no meio de um solvente inerte, tal como o diclorometano, a uma temperatura compreendida entre 20 °C e a temperatura de ebulição do meio reacional, de preferência a uma temperatura próxima de 20 °C ou em pre-sença de cloreto de sulfinila, no meio de um solvente inerte tal como o cloro-fórmio, a uma temperatura compreendida entre 20 °C e a temperatura de ebulição do meio reacional, de preferência à temperatura de refluxo do meio reacional, seguido de uma reação em presença de um derivado de tipo R3R4NNR5H, no qual R3, R4, R5 têm a mesma significação que anterior-mente e de uma base, tal como a trietilamina ou a piridina, no meio de um solvente inerte tal como a dimetilformamida, a uma temperatura compreendida entre 20 °C e a temperatura de ebulição do meio reacional.

A reação de desproteção (g) pode ser feita (quando PG representa um grupamento 1-etóxi-etila) em presença de um ácido mineral tal como o ácido clorídrico, no meio de um solvente, tal como o tetrahidrofurano ou a água, a uma temperatura compreendida entre 20 °C e a temperatura de ebulição do meio reacional, ou ainda segundo os métodos bem-conhecidos de desproteção da função amina (T.W. GREENE et coll. Em Protective Groups in Organic Synthesis, third edition, 1999, Wiley-lnterscience).Os compostos de fórmula geral (Ma) podem ser preparados a

partir do 3,4,5-tribromo-pirazol, segundo o esquema de síntese geral apresentado a seguir:<formula>formula see original document page 16</formula>

A reação (a) pode ser feita em presença de um organolitiano, tal como o n-butil lítio, em presença de dimetilformamida, no meio de um solvente inerte, tal como o dietil éter ou o tetrahidrofurano a uma temperatura compreendida entre-78 °C e a temperatura ambiente. 5 A reação de proteção (b) pode ser feita em presença de etilvini-

léter, em presença de uma quantidade catalítica de um ácido, tal como o ácido clorídrico, no meio de um solvente inerte, tal como o tolueno a uma temperatura compreendida entre 20 °C e a temperatura de ebulição do meio reacional ou segundo os métodos bem conhecidos de proteção da função

amina (T.W. GREENE et coll. Em Protective Groups in Organic Synthesis, third edition, 1999, Wiley-lnterscience).

A reação (c) pode ser feita em presença de mercapto acetato de etila, em presença de uma base tal como o carbonato de sódio, no meio de um solvente inerte tal como um álcool (etanol de preferência) a uma tempe-

ratura compreendida entre 20 °C e a temperatura de ebulição do meio reacional.

Alternativamente, quando R1 representa NHCO(R2) no qual R2 tem a mesma significação que anteriormente, os compostos de fórmula (I) podem ser preparados a partir dos compostos de fórmula geral (XIV), se-20 gundo o esquema de síntese geral apresentado a seguir:H

(Ia)

A reação de proteção (a) pode ser feita (quando PG representa um grupamento terc-butiloxicarbonila) com o auxílio de di-terc-butil dicarbo-nato em presença de uma base, tal como a trietilamina ou a piridina e eventualmente em presença de N,N-dimetilamino-piridina no meio de um solvente 5 inerte (diclorometano, por exemplo) a uma temperatura compreendida entre-10 °C e a temperatura de ebulição do meio reacional, ou bem (quando PG representa um grupamento 1-etóxi-etila) em presença de etil vinil éter, em presença de uma quantidade catalítica de um ácido, tal como o ácido clorídrico, no meio de um solvente inerte, tal como o tolueno a uma temperatura

compreendida entre 20 °C e a temperatura de ebulição do meio reacional, ou segundo os métodos conhecidos de proteção da função amina (T.W. GRE-ENE et coll. Em Protective Groups in Organic Synthesis, third edition, 1999, Wiley-lnterscience).

A reação (b) pode ser feita:

-com o auxílio de um cloreto de ácido (R2)C(0)CI no qual R2tem a mesma significação que anteriormente em presença de uma base como a trietilamina, a piridina, a diisopropiletilamina, o carbonato de potássio ou de sódio, no meio de um solvente inerte (dimetilformamida, tetrahidrofu-rano, por exemplo) ou na base orgânica ela mesma a uma temperatura 5 compreendida entre 0 °C e a temperatura de ebulição do meio reacional (G. DAIDONE et coll, Heterocycles, 1996, 43(11), 2385);

-com o auxílio de um anidrido ((R2)CO)20, no qual R2 tem a mesma significação que anteriormente no meio de um solvente inerte (dimetilformamida, tetrahidrofurano, diclorometano, por exemplo) ou no anidrido

ele próprio a uma temperatura compreendida entre 0 °C e a temperatura de ebulição do meio reacional (F. ALBERICIO, Synth. Commun., 2001, 31(2), 225, G. PROCTER, Tetrahedron, 1995, 51 (47), 12837);

-com o auxílio de um ácido (R2)C(0)OH, no qual R2 tem a mesma significação que anteriormente em presença de uma gente de ativa-

ção, tal como o hexafluorofosfato de 0-(7-aza-benzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametilurônio (HATU) em presença de uma base (piridina, diisopropiletil amina ou trietilamina, por exemplo) no meio de um solvente inerte (dimetilformamida, por exemplo) a uma temperatura compreendida entre 0°C e a temperatura de ebulição do meio reacional, ou segundo os métodos bem-

conhecidos de acoplamento da química peptídica (M. BODANSZKY et coll, Principies of Peptide Synthesis, Spinger-Verleg, New York, NY, 1984, 9-58) ou da formação de uma maida.

A reação (c) é feita geralmente segundo os métodos habituais que não afetam o resto da molécula, notadamente por aplicações dos méto-

dos descritos por T.W. GREENE et P.G.M. Wuts, Protective Groups in Orga-nic Synthesis, (2a edição), A. Wiley-lnterscience Publication (1991), ou por Mc Omie, Protective Groups in Organic Chemistry, Plenum Press (1973) ou por Bradford P. Mundy e Michael G. Ellerd, Name Reactions and Reagents in Organic Synthesis, A.Wiley-Interscience Publication (1988). A reação (c)

pode ser feita, por exemplo, em meio básico, em presença der hidróxido de potássio ou de hidróxido de sódio, no meio de um solvente inerte tal como uma mistura de tetrahidrofurano, de água e de um álcool (etanol ou metanol,de preferência) ou bem de um álcool sozinho (etanol ou metanol, de preferência) a uma temperatura compreendida entre 20 °C e a temperatura de ebulição do meio reacional, de preferência à temperatura de refluxo do meio reacional.

A reação (d) é feita, de preferência, em presença de um deriva-do de tipo R3R4NNR5H no qual R3, R4, R5 têm a mesma significação que anteriormente e de um agente de ativação do tipo tetra fluoro borato de O-(1H-benzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametilurônio (TBTU), por exemplo, em presença de uma base (trietilamina ou diisopropiletilamina, por exemplo) no meio de um solvente inerte (acetonitrila ou dimetilformamida, por exemplo) a uma temperatura compreendida entre 0°C e a temperatura de ebulição do meio, ou segundo os métodos bem-conhecidos de acoplamento da química peptídica (M.BODANSZKY et coll., Principies of peptide Synthesism Spinger-Verlag, New York, NY, 1984, 9-58) ou da formação de uma amida. Alternati-

vãmente, a reação (d) pode ser feita geralmente segundo os métodos habituais que não afetam o resto da molécula, notadamente por aplicações dos métodos descritos por Bradford P. Mundy e Michael G. Ellerd, Name Reacti-ons and Reagents in Organic Synthesis, A. Wiley-lnterscience Publication (1988). Por exemplo, a reação (d) pode ser feita sob atmosfera inerte (porexemplo sob nitrogênio ou sob argônio) em presença de cloreto de oxalila, no meio de um solvente inerte, tal como diclorometano, a uma temperatura compreendida entre 20 °C e a temperatura de ebulição do meio reacional, de preferência a uma temperatura próxima de 20 °C ou em presença decloreto de sulfinila, no meio de um solvente inerte tal como clorofórmio, a uma tem-peratura compreendida entre 20 °C e a temperatura de ebulição do meio reacional, de preferência à temperatura de refluxo do meio reacional, seguido de uma reação em presença de um derivado de tipo R3R4NNR5H no qual R3, R4, R5 têm a mesma significação que anteriormente e de uma base tal como a trietilamina ou a piridina, no meio de um solvente inerte, tal como a dimetilformamida, a uma temperatura compreendida entre 20 °C e a temperatura de ebulição do meio reacional.

A reação de desproteção (e) pode ser feita (quando PG repre-senta um grupamento terc-butiloxicarbonila) em presença de iodotrimetilsila-no, ou em meio ácido (ácido trifluroacético, ou ácido clorídrico em um solvente, tal como o diclorometano ou o dioxano, por exemplo) a uma temperatura compreendida entre 0 °C e a temperatura de ebulição do meio reacio-5 nal, ou em meio básico (carbonato de potássio no meio de um solvente, tal como um álcool (metanol, de preferência) a uma temperatura compreendida entre 0 °C e a temperatura de ebulição do meio reacional e eventualmente sob irradiação por microondas) ou em meio neutro em um solvente, tal como um álcool (metanol, de preferência) sob irradiação por microondas; ou(quando PG representa um grupamento 1-etoxietila) em presença de um ácido mineral, tal como o ácido clorídrico, no meio de um solvente, tal como o tetrahidrofurano ou a água, a uma temperatura compreendida entre 20 °C e a temperatura de ebulição do meio reacional, ou ainda segundos os métodos bem conhecidos de desproteção da função amina (T.W. GREENE etcoll. Em Protective Groups in Organic Synthesis, third edition, 1999, Wiley-Interscience).

Os compostos de fórmula geral (XVa) podem ser preparados a partir do 3-amino-4-ciano-5-metilsulfanil tiofeno-2-carboxilato de etila, segundo o esquema de síntese geral apresentado a seguir:

(XVa) <wv.)A reação (a) pode ser feita em presença de nitrito de isopentila e

de Cu(ll) no meio de um solvente inerte, tal como a dimetilformamida a uma temperatura compreendida entre 20 °C e a temperatura de ebulição do meioreacional.

A reação de oxidação (b) pode ser feita em presença de ácido 3-cloro-peroxibenzóico, no meio de um solvente inerte, tal como o diclorome-tano a uma temperatura compreendida entre-20 °C e a temperatura ambien-5 te.

A reação (c) pode ser feita em presença de hidrazina, no meio de um solvente inerte, tal como um álcool (etanol, de preferência) a uma temperatura compreendida entre 20 °C e a temperatura de ebulição do meio reacional.

A reação de ciclização (d) pode ser feita em presença de um

ácido mineral, tal como o ácido clorídrico concentrado ou o ácido sulfúrico concentrado, no meio de um solvente inerte, tal como um álcool (etanol de preferência) a uma temperatura compreendida entre 20 °C e a temperatura de ebulição do meio reacional.

A reação de proteção (e) pode ser feita (quando PG representa

um grupamento terc-butiloxicarbonila) com o auxílio de di-terc-butildicarbonato em presença de uma base, tal como a trietil amina ou a piri-dina e eventualmente em presença de N,N-dimetil amino-piridina.m no meio de um solvente inerte (diclorometano, por exemplo) a uma temperatura compreendida entre-10 °C e a temperatura de ebulição do meio reacional, ou bem (quando PG representa um grupamento 1-etóxi-etila) em presença de etil vinil éter, em presença de uma quantidade catalítica de um ácido, tal como o ácido clorídrico, no meio de um solvente inerte, tal como o tolueno a uma temperatura compreendida entre 20°C e a temperatura de ebulição do meio reacional, ou segundo os métodos bem conhecidas de proteção da função amina (T.W. GREENE et coll. Em Protective Groups in Organic Syn-thesis, third edition, 1999, Wiley-lnterscience).

A síntese do 3-amino-4-ciano-5-metilsulfanil-tiofeno-2-carboxilato de etila é descrita emn Synthesis 2003, 735.

Alternativamente, quando R1 representa NHCO(R2) na qual R2

tem a mesma significação que anteriormente, os compostos fórmula (I) podem ser preparados a partir do compostos de fórmula geral (XIV), segundo oesquema de síntese geral apresentado a seguir:

<formula>formula see original document page 22</formula>A reação (a) pode ser feita em presença de um derivado de tipo (R3)(R4)NN(R%)H nos quais R3, R4, R5 têm a mesma significação que anteriormente e de trimetilalumínio no meio de um solvente tal como o tolueno ou a dimetilformamida a uma temperatura compreendida entre 0 °C e a temperatura de ebulição do meio reacional.

A reação de proteção (b) pode ser feita (quando PG representa um grupamento terc-butiloxicarbonila) com o auxílio de di-terc-butildicarbonato em presença de uma base tal como a trietilamina ou a piri-dina e eventualmente em presença de N,N-dimetilamino-piridina, no meio de um solvente inerte (diclorometano, por exemplo) a uma temperatura compreendida entre-10 °C e a temperatura de ebulição do meio reacional, ou (quando PG representa um grupamento 1-etóxi-etila) em presença de etil vinil éter, em presença de uma quantidade catalítica de um ácido tal como oácido clorídrico, no meio de um solvente inerte tal como o tolueno a uma temperatura compreendida entre 20 °C e a temperatura de ebulição do meio reacional, ou segundo os métodos bem-conhecidos de proteção da função amina (T.W. GREENE et coll. Em Protective Groups in Organic Synthesis, 5 third edition, 1999, Wiley-lnterscience).

A reação (c) pode ser feita:

-com o auxílio de um cloreto de ácido (R2)C(0)CI no qual R2 tem a mesma significação que anteriormente em presença de uma base como a trietilamina, a piridina, a diisopropiletilamina, o carbonato de potássio

ou de sódio, no meio de um solvente inerte (dimetilformamida, tetrahidrofurano, por exemplo) ou na base orgânica ela própria a uma temperatura compreendida entre 0 °C e a temperatura de ebulição do meio reacional (G. DAIDONE et col., Heterocycles, 1996, 43(11), 2385);

-com o auxílio de um anidrido ((R2)CO)20, no qual R2 tem a

mesma significação que anteriormente no meio de um solvente inerte (dimetilformamida, tetrahidrofurano, diclorometano, por exemplo) ou no anidrido ele próprio a uma temperatura compreendida entre 0 °C e a temperatura de ebulição do meio reacional (F. ALBERICIO, Synth. Commmun., 2001, 31(2), 225, G.PROTECTER, Tetrahedron, 1995, 51 (47), 12837);

-com o auxílio de um ácido (R2)C(0)OH no qual R2 tem a mes-

ma significação que anteriormente em presença de um agente de ativação, tal como o hexafluorofosfato de 0-(7-aza-benzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametilurônio (HATU) em presença de uma base (piridina, diisopropiletilamina ou trietilamina, por exemplo) no meio de um solvente inerte (dimetilfor-

mamida, por exemplo) a uma temperatura compreendida entre 0 °C e a temperatura de ebulição do meio reacional, ou segundo os métodos bem-conhecidos de acoplamento da química peptídica (M.BODANSKY et coll., Principies of Peptide Synthesis, Spinger-Verleg, New York, NY, 1984, 9-58) ou da formação de uma amida.

A reação de desproteção (d) pode ser feita (quando PG repre-

senta um grupamento terc-butiloxicarbonila) em presença de iodotrimetilsila-no, ou em meio ácido (ácido trifluoro acético, ou ácido clorídrico em um sol-vente, tal como diclorometano ou o dioxano, por exemplo) a uma temperatura compreendida entre 0°C e a temperatura de ebulição do meio reacional, ou em meio básico (carbonato de potássio no meio de um solvente, tal como um álcool (metanol, de preferência) a uma temperatura compreendida entre 5 0°C e a temperatura de ebulição do meio reacional e eventualmente sob irradiação por microondas), ou em meio neutro em um solvente, tal como um álcool (metanol, de preferência) sob irradiação por microondas; ou (quando PG representa um grupamento 1-etóxi-etila) em presença de um ácido mineral, tal como o ácido clorídrico, no meio de um solvente, tal como o tetrahi-10 drofurano ou a água, a uma temperatura compreendida entre 20 °C e a temperatura de ebulição do meio reacional, ou ainda segundo os métodos bem-conhecidos de desproteção da função amina (T.W. GREENE et coll. Em Pro-tective Groups in Organic Synthesis, third edition, 1999, Wiley-lnterscience).

tem a mesma significação que anteriormente, os compostos de fórmula (XVI) podem ser preparados a partir dos compostos de fórmula geral (XI), segundo o esquema de síntese geral apresentado a seguir:

Alternativamente, quando R1 representa NHCO(P»2), no qual R2 <formula>formula see original document page 24</formula>A reação (a) pode ser feita em presença de um derivado de tipo (R3)(R4)NN(R5)H, no qual R3, R4, R5 têm a mesma significação que anteriormente e de trimetilalumínio no meio de um solvente, tal como o tolueno ou dimetilformamida a uma temperatura compreendida entre 0 °C e a tempera- tura de ebulição do meio reacional.

A reação de oxidação (b) pode ser feita em presença de oxona® (peroximonossulfato de potásio) ou de ácido 3-cloro-peroxibenzóico, no meio de um solvente inerte, tal como uma mistura de tetrahidrofurano ou de dimetilformamida e de água no primeiro caso ou o diclorometano no segundo ca- so, a uma temperatura compreendida entre-20°C e a temperatura ambiente.

A reação (c) pode ser feita em presença de hidrazina, no meio de um solvente inerte tal como um álcool (etanol, de preferência) a uma temperatura compreendida entre 20 °C e a temperatura de ebulição do meio reacional.

A reação (d) de ciclização pode ser feita em presença de um

ácido mineral tal como o ácido clorídrico concentrado ou o ácido sulfúrico concentrado, no meio de um solvente inerte, tal como um álcool (etanol, de preferência) a uma temperatura compreendida entre 20 °C e a temperatura de ebulição do meio reacional.

Os compostos de fórmula (Ib), nos quais R1 representa NH-

CO(R2) no qual R2 representa um grupamento fenila substituído por um grupamento de tipo-CH2NR6R7, R6 e R7 sendo independentemente selecionados no grupo constituído por-H, (CrC6)alquila, arila, heteroarila,-(Ci-C6)alquil-arila, (Ci-C6) alquil-heteroarila, eventualmente substituídos, ou (R6

e R7) sendo ligados entre si para formar um heterociclo mono ou bicíclico, saturado ou insaturado, compreendendo de 2 a 10 cadeias e de 1 a 5 hetero átomos escolhidos dentre N, O, e S, podem ser preparados a partir dos compostos de fórmula geral (IVb) , segundo o esquema de síntese geral a-presentado a seguir:<formula>formula see original document page 26</formula>

A reação (a) pode ser feita em presença de um amina de tipo HNR6R7, em presença de um sal, tal como o iodeto de tetrabutil amônio no meio de um solvente inerte, tal como dimetilformamida, a uma temperatura compreendida entre 20 °C e a temperatura de ebulição do meio reacional.

A reação de desproteção (b) pode ser feita (quando PG repre-senta um grupamento terc-butiloxicarbonila) em presença de iodotrimetilsila-no, ou em meio ácido (ácido trifluro acético, ou ácido clorídrico, em um solvente, tal como o diclorometano ou o dioxano, por exemplo) a uma temperatura compreendida entre 0 °C e a temperatura de ebulição do meio reacio-nal, ou em meio básico (carbonato de potássio no meio de um solvente, tal como um álcool (metanol, de preferência) a uma temperatura compreendida entre 0 °C e a temperatura de ebulição do meio reacional e eventualmente sob irradiação por microondas) ou em meio neutro em um solvente, tal como um álcool (metanol, de preferência) sob irradiação por microondas; ou(quando PG representa um grupamento 1-etóxi-etila) em presença de um ácido mineral tal como o ácido clorídrico, no meio de um solvente, tal como o tetrahidrofurano ou a água, a uma temperatura compreendida entre 20 °C e a temperatura de ebulição do meio reacional, ou ainda segundo os métodos bem-conhecidos de desproteção da função amina (T.W. GREENE et coll.Em Protective Groups in Organic Synthesis, third edition, 1999, Wiley-Interscience).

Os derivados de tipo (R3)(R4)NN(R5)H nos quais R3 representaum grupamento Arila e mais particularmente um grupamento fenila substituído, R4 representa um grupamento alquila, R5 representa um átomo de hidrogênio, podem ser preparados a partir dos compostos de fórmula geral (XXI), segundo um esquema de síntese geral apresentado a seguir:A reação (a) pode ser feita em presença de uma base tal como

um organo litiano, em presença de um halogeneto de alquila, no meio de um solvente inerte, tal como o tetrahidrofurano, a uma temperatura compreendida entre-80 °C-25 °C.

A reação de clivagem (b) pode ser feita em presença de um áci-10 do mineral, tal como o ácido clorídrico, no meio de um solvente inerte, tal como o tetrahidrofurano, a uma temperatura compreendida entre 25 °C e a temperatura de ebulição do meio reacional.

Os compostos de fórmula geral (XXI), nos quais Y e Z representam independentemente e mais particularmente um átomo de hidrogênio, ou 15 um grupamento halogênio ou alquila, podem ser preparados a partir dos compostos de fórmula geral (XXIII), segundo o esquema de síntese geral apresentado a seguir:A reação (a) pode ser feita em presença de benzofeno, em presença de um ácido mineral, tal como o ácido sulfúrico ou o ácido clorídrico, no meio de um solvente inerte, tal como um álcool, o etanol, de preferência a uma temperatura compreendida entre 25 °C e a temperatura de ebulição do 5 meio reacional.

Alternativamente, os compostos de fórmula geral (XXI), nos quais Y e Z representam independentemente e mais particularmente um á-tomo de hidrogênio, ou um grupamento halogênio ou alquila, podem ser preparados a partir dos compostos de fórmula geral (XXIV), segundo o esque-10 ma de síntese geral apresentado a seguir:

(XXIV) (XXI)

A reação (a) pode ser feita em presença de benzidrilideno-hidrazina, de um composto de fórmula geral (XXIV) no qual Y e Z representam independentemente e mais particularmente um átomo de hidrogênio, ou um grupamento halogênio ou alquila e no qual Hal representa mais particu-larmente um átomo de bromo ou de cloro, de um derivado de paládio (II), tal como o diacetato de paládio (II), de um ligante fosfina, de uma base tal como a soda, no meio de um solvente inerte, tal como um álcool (álcool terçam ílico, de preferência) a uma temperatura compreendida entre 20 °C e a temperatura de ebulição do meio reacional, segundo os métodos gerais des-critos por J.-M. CAMPAGNE et al., Tetrahedron, 2002, 58, 2041.

Naturalmente que, para o técnico, para a aplicação dos processos, de acordo com a invenção, descritos anteriormente, pode ser necessário introduzir grupamentos protetores das funções amina e carboxila, a fim de evitar reações secundárias. Esses grupos são aqueles que permitem ser eliminados, sem tocar no resto da molécula. Como exemplos de grupos protetores da função amina, pode-se citar o 1-etóxi-etila que pode ser eliminado em presença de um ácido mineral, tal como o ácido clorídrico (no meio deum solvente, tal como o tetrahidrofurano ou a água, por exemplo), o carba-mato de terc-butila que pode ser eliminado por meio de iodo trimetil silano ou em meio ácido (ácido trifluro acético, ou ácido clorídrico em um solvente tal como o diclorometano ou o dioxano por exemplo), o carbamato de benzila que pode ser eliminado em presença de hidrogênio ou em presença de uma mistura de um tiol (benzeno tiol, por exemplo) e de um ácido de Lewis (ete-rato de trifluoro de boro, por exemplo), a acetila que pode ser eliminado em meio ácido (ácido clorídrico, por exemplo), o 2-trimetilsilanil-etoximetila que pode ser eliminado em presença de fluoreto de tetra butil amônio ou em

meio ácido, por exemplo (ácido clorídrico, por exemplo). Como grupos protetores da função carboxila, podem ser citados os ésteres (metoxi metil éster, benzil éster, metil éster, por exemplo) que podem ser eliminados pelos métodos descritos por T.W. GREENE et coll. Em Protective Groups in Organic Synthesis, third edition, 1999, Wiley-lnterscience).

Os compostos de fórmula (I) são isolados e podem ser purifica-

dos pelos métodos conhecidos habituais, por exemplo por cristalização, cromatografia ou extração.

Os enantiômeros, diastereoisômeros dos compostos de fórmula (I) fazem também parte da invenção.

Os compostos de fórmula (I) que comportam um resto básico

podem ser eventualmente transformados em sais de adição com um sal mineral ou orgânico por ação desse ácido no meio de um solvente orgânico, tal como um álcool, uma cetona, um éter ou um solvente clorado.

Os compostos de fórmula (I) que comportam um resto ácido po-

dem ser eventualmente transformados em sais metálicos ou em sais de adição com bases nitrogenadas, segundo os métodos conhecidos em si. Esses sais podem ser obtidos por ação de uma base metálica (alcalina ou alcalino terrosa, por exemplo), do amoníaco, de uma amina ou de um sal de amina sobre um composto de fórmula (I), em um solvente. O sal formado é separa-

do pelos métodos habituais.

Esses sais fazem também parte da invenção.

Quando um produto, de acordo com a invenção, apresenta pelomenos uma função básica livre, sais farmaceuticamente aceitáveis podem ser preparados por reação entre esse produto e um ácido mineral ou orgânico. Sais farmaceuticamente aceitáveis incluem os cloretos, nitratos, sulfatos, hidrogeno-sulfatos, piro-sulfatos, bi-sulfatos, sulfitos, bi-sulfitos, fosfatos, 5 mono-hidrogeno fosfatos, di-hidrogeno fosfatos, metafosfatos, pirofosfatos, acetatos, propionatos, acrilatos, 4-hidroxi butiratos, caprilatos, caproatos, decanoatos, oxalatos, malonatos, succinatos, glutaratos, adipatos, pimela-tos, maleatos, fumaratos, citratos, tartratos, lactatos, fenil acetatos, mandela-tos, sebaçatos, suberatos, benzoatos, ftalatos, metano-sulfonatos, propano-

sulfonatos, xileno-sulfonatos, salicilatos, cinamatos, glutamatos, aspartatos, glucuronatos, galacturonatos.

Quando um produto, de acordo com a invenção, apresenta pelo menos uma função ácido livre, sais farmaceuticamente aceitáveis podem ser preparados por reação entre esse produto e uma base mineral ou orgânica.

Bases farmaceuticamente aceitáveis incluem hidróxidos de cátions de metais alcalinos ou alcalino-terrosos, tais como Li, Na, K, Mg, Ca, compostos aminados básicos, tais como amoníaco, arginina, lisina, histidina, piperidina, morfolina, piperazina, trietil amina.

A invenção é também descrita pelos seguintes exemplos, dados

a título de ilustração da invenção.

Exemplo 1: Preparo do 5-(N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-4-metóxi-benzamida

Em um balão de 20 ml sob argônio são introduzidos sucessivamente o ácido 1-(1-Etoxi-etil)-3-(4-metoxi-benzoil amino)-1H-tieno [2,3-c] 25 pirazol-5-carboxílico (0,3 g, 0,77 mmol), o tetra fluoro borato de 0-(1 H-benzo triazol-1-il)-N,N,N',N'-tetra metil urônio (TBTU) (0,247 g, 0,77 mmol, 1 eq.), dimetilformamida (3,85 ml) e a fenil-hidrazina (0,151 ml, 1,54 mmol, 2 eq.) .À mistura reacional é acrescentada a trietil amina (0,322 ml, 2,31 mmol, 3 eq.). A mistura é agitada a uma temperatura próxima de 60 °C, durante 15 horas. O solvente é em seguida evaporado sob vácuo e o óleo residual é diluído com 15 ml de acetato de etila e 10 ml de água. A fase aquosa é iso-5 lada, depois acidificada com pH 4-5 antes de ser extraída com o acetato de etila (3x15 ml). As fases orgânicas reunidas são secadas sobre sulfato de magnésio e concentradas a seco sob pressão reduzida. O resíduo é purificado por flash-cromatografia sobre sílica-gel com, como purificador, uma mistura 1:1 acetato de etila/ heptano. O produto obtido sob a forma de óleo 10 (0,310 g, 84 %, Rf = 0,47 (1:9 MeOH / diclorometano) é colocado sem outra purificação em 5 ml de tetrahidrofurano e 2,5 ml de ácido clorídrico 2,5 N. A mistura reacional é então aquecida a uma temperatura próxima de 50 °C, durante 2 horas, depois é resfriada à temperatura ambiente. À mistura são acrescentados 15 ml de água. Um precipitado se forma. O tetrahidrofurano é 15 evaporado e fase aquosa é neutralizada com NaOH 5N. O precipitado formado é filtrado, depois lavado com água. O sólido bege é secado em uma estufa a uma temperatura próxima de 60 °C sob vácuo. O sólido seco é em seguida dissolvido na acetona e precipitado com o heptano. O 5-(N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-4-metóxi-benzamida assim 20 obtido (86 mg, 33 %) possui uma pureza de 95 %. Rendimento global = 28 %.

RMN 1H (400 MHz, (CD3)2SO d6> 5 en ppm): 3,85 (s, 3H); 6,72 (t large, J = 7,5 Hz, ÍH); 6,76 (d large, J = 8,0 Hz, 2H); 7,05 (d large, J = 8,0 Hz, 2H); 7,15 (t large, J = 7,5 Hz, 2H); 7,85 (s large, 1H) ; 8,09 (d large, J = 8,0 Hz, 2H); 8,19 (s large, 1H); 10,45 (m large, 1H); 11,0 (m large, 1H); 12,9 (m large, 1H). LC/MS: m = 407, ES m/z = 408 MH+

Ácido 1 -(1 -etóxi-etil)-3-(4-metóxi-benzoil amino)-1 H-tieno [2,3-c] pirazol-5-carboxílico:Em um balão de 500 ml_ sob argônio são introduzidos 3-bromo-1-(1-etoxi-etil)-1 H-tieno [2,3-c] pirazol-5-carboxilato de etila (10 g, 28 mmol), 4-metóxi-benzamida (7,39 g, 48 mmol, 1,7 eq), iodeto de cobre (l)(0,548 g, 2,88 mmol, 0,1 eq), fosfato tripotássico (18,34 g, 86 mmol, 3 eq) previamente 5 pulverizado, e 180 ml de dioxano anidro previamente desgaseificado no argônio. A essa suspensão são acrescentados na seringa 0,306 ml (2,88 mmol, 0,1 equivalente de N,N-dimetil etileno diamina. A mistura reacional é então aquecida a uma temperatura próxima de 110 °C para um período de 24 horas. Então, o dioxano é evaporado sob vácuo e o resíduo é diluído com

acetato de etila (300 ml) e 150 ml de água. A fase orgânica é lavada 1 vez com 100 ml de água, depois ela é secada sobre sulfato de magnésio e concentrada a seco sob pressão reduzida. O resíduo é purificado por cromato-grafia sobre sílica-gel com, como purificador, uma mistura acetato de etila / heptano (1:1). O óleo amarelo obtido após purificação corresponde ao 1-(1-

etóxi-etil)-3-(4-metóxi-benzoil amino)-1 H-tieno [2,3-c] pirazol-5-carboxilato de etila (7,41 g, 64 %). As fases aquosas reunidas são acidificadas com o ácido clorídrico 5N até um pH = 5-6. Um forte precipitado aparece, este é extraído com (2 x 100 ml) de acetato de etila. A fase orgânica é, por sua vez, secada sobre sulfato de magnésio e concentrada a seco sob pressão reduzida. O sólido branco obtido após evaporação é triturado em uma mistura heptano / éter dietílico (1:1). Obtém-se, após filtragem, o ácido 1-(1-etóxi-etil)-3-(4-metóxi-benzoil amino)-1 H-tieno [2,3-c] pirazol-5-carboxílico sob a forma de um sólido branco (1,27 g, 11 %). O 1-(1-etóxi-etil)-3-(4-metóxi-benzoil ami-no)-1 H-tieno [2,3-c] pirazol-5-carboxilato de etila é submetido a uma saponi-

ficação, utilizando-se 50 ml de tetrahidrofurano e 20 ml de hidróxido de sódio 5N a uma temperatura próxima de 50 °C, durante 5 horas. O tetrahidrofurano é, então, evaporado, a fase aquosa é diluída com 150 ml de água eopHé ajustado em 3-4 com o ácido clorídrico 5N. O precipitado branco obtido é filtrado e lavado com água, depois secado sob vácuo a uma temperatura

próxima de 60 °C. São obtidos assim 7,04 g de ácido 1-(1-etóxi-etil)-3-(4-metóxi-benzoil amino)-1 H-tieno [2,3-c] pirazol-5-carboxílico, seja 98 % que é utilizado diretamente na etapa seguinte.3-bromo-1-(1-etóxi-etil)-1H-tieno [2,3c] pirazol-5-carboxilato de

etila:

Em 50 ml de etanol sob atmosfera de argônio a uma temperatura próxima de 20 °C, são introduzidos sob agitação 1,19 g (3,81 mmol) de 5 3,5-dibromo-1-(1-étoxi-etil)-1H-pirazol-4-carboxaldeído, depois são acrescentados 0,4 g (3,81 mmol) de carbonato de sódio e 0,42 ml (3,81 mmol) de 2-mercapto acetato de etila. A mistura reacional é em seguida levada ao re-fluxo durante 2 horas, depois é concentrada a seco sob pressão reduzida (2,7 kPa). O resíduo é retomado em 60 ml de [água e 60 ml de diclorometa-10 no e decantada. A fase orgânica é secada sobre sulfato de magnésio, depois concentrada a seco sob pressão reduzida (2,7 kPa). São obtidos assim 1,17 g de 3-bromo-1-(1-etóxi-etil)-1H-tieno [2,3c] pirazol-5-carboxilato de etila sob a forma de um óleo amarelo claro que se cristaliza, dando cristais cremes que se fundem a 69 °C. 15 3,5-Dibromo-1 -(1 -etoxi-etil)-1 H-pirazol-4-carboxiadeído

OHC Br

Em 30 ml_ de tolueno a uma temperatura próxima de 20 °C, é introduzido sob agitação 1 g (3,94 mmol) de 3,5-dibromo-1 H-pirazol-4-carboxaldeído, 1,5 ml (16 mmol) de etil vinil éter de 3 gotas de ácido clorídrico concentrado 12N. A mistura reacional é agitada durante 15 horas a uma 20 temperatura próxima de 20 °C, depois são derramados 1,5 ml (16 mmol) de etil vinil éter e a agitação é prosseguida durante 15 horas a uma temperatura próxima de 20 °C. A mistura reacional é em seguida diluída por 20 ml de tolueno e lavada por 2 vezes com 30 ml de uma solução saturada de hidroge-no carbonato de sódio. A fase orgânica é secada sobre sulfato de magnésio e concentrada a seco sob pressão reduzida (2,7 kPa) para dar 1,19 g de 3,5-Dibromo-1-(1-etóxi-etil)-1H-pirazol-4-carboxaldeídosf de um óleo amarelo. Espectro

■R.M.N. 1H (300 MHz, (CDâfcSO d6, 5 en ppm): 1,10 (t, J = 7,5 Hz: 3H); 1,64 (d, J = 6,5 Hz: 3H); 3,31 (mt: 1H); 3,51 (mt: 1H); 5,88 (q, J=6,5Hz: 1H);9J3(s:1H).

3,5-dibromo-1 H-pirazol-4-carboxaldeído OHC Br

°C e sob atmosfera de argônio, são acrescentados sob agitação 81,7 g (0,268 mol) e 3,4,5-tribromo pirazol. A mistura é resfriada a uma temperatura próxima de 78 °C, depois são derramados gota a gota 335 ml (0,536 mol) de uma solução de n-butil lítio 1,6 M no hexano em 3h15. A mistura reacional é agitada durante 1 hora e 30 minutos a uma temperatura próxima de-75 °C, depois são derramados gota a gota 100 ml (1,34 mol) de dimetilformamida, mantendo-se a temperatura inferior a-70 °C. Deixa-se ainda agitar durante 2 horas a uma temperatura próxima de-75 °C, depois durante 15 horas a uma temperatura próxima de 20 °C. O meio reacional é em seguida resfriado em um banho gelo-água e derramam-se 1000 ml de água. Após decantação, a fase aquosa é extraída por 500 ml de éter dietílico e por 3 vezes 500 ml de acetato de etila. A fase aquosa é em seguida acidificada por uma solução de ácido cítrico com pH = 3 (observa-se a formação de um precipitado) e extraída por 2 vezes 1000 ml de éter dietílico. A fase orgânica é secada sobre sulfato de magnésio, concentrada a seco sob pressão reduzida (2,7 kPa) e o sólido amarelo obtido é retomado por 300 ml de água e agitado durante 2 horas a uma temperatura próxima de 20 °C. A mistura é em seguida filtrada e o sólido é lavado por 2 vezes 50 ml de água, secado sob cesto ventilado, depois secada sob pressão reduzida (2,7 kPa) a uma temperatura próxima de 40 °C. São obtidos assim 51,3 g de 3,5-dibromo-1H-pirazol-4-

H

Em 1500 mL de éter dietílico a uma temperatura próxima de 20carboxaldeído sob a forma de um pó amarelo que se funde a 173 °C.

Exemplo 2: Preparo do 5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-4-metóxi-benzamida

\

o

O 5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno [2,3-c] pirazol-5 3-il]-4-metóxi-benzamida é preparado de acordo com o exemplo 1. Rendimento = 36 %;

RMN1H(300

MHz, (CD3)2SO d6) ô en ppm): 3,17 (s, 3H); 3,85 (s, 3H); 6,77 (t large, J = 7,5 Hz, 1H); 6,82 (d large, J = 8,5 Hz, 2H); 7,07 (d large, J = 8,0 Hz, 2H); 7,22 (t large, J = 8,0 Hz, 2H); 8,07 (d large, J = 8,5 Hz, 2H); 8,17 (s large, 1H); 10,75 (m large, 1H); 11,0 (m étalé, 1H); 12,9 (m étalé, 1H) .LC/MS m = 421, IE m/z = 421M+-, m/z = 300(M - C8H702)+, m/z = 135C8H702+

Exemplo 3: Preparo do 5-(N'-ciclo-hexil-hidrazinocarbonil)-1H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-4-metóxi-benzamida.

\ o

u» W •

É preparado de acordo com o exemplo 1. Rendimento = 11 %.

RMN 1H (400

MHz, (CD3)2SO d6, 5 en ppm): 1,01 à 1,26 (m, 5H); 1,55 (m, 1H); de 1,63 à 1,90 (m, 4H); 2,73 (iti, 1H); 3,85 (s, 3H); 4,84 (m, 1H); 7,06 (d large, J = 8,5 Hz, 2H) ; 8,02 (s large, 1H); 8;07 (d large, J = 8,5 Hz, 2H) ; 10,05 .(s large, 1H); 10,9 (s large, 1H) ; 12,85 (s large, 1H) . LC/MS : m = 413; ES m/z = 414 MH+

Exemplo 4: Preparo do N-[5-(N'-benzil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-4-metóxi-benzamida

<formula>formula see original document page 36</formula>

O N-[5-(N'-benzil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno [2,3-c] pira-zol-3-il]-4-metóxi-benzamida é preparado de acordo com o exemplo 1. Rendimento = 7 %. SM: ES m/z = 498

RMN 1H (400 MHz, (CD3)2SO de, Sen ppm): 3,85 (s, 3H); 4,75 (s large, 2H); 6,75 (t large, J = 7,5 Hz, 1H); 6,92 (d large, J = 8,5. Hz, 2H); 7,07 (d large, J = 8,5 Hz, 2H); de 7,15 à 7,28 (m, 3H); 7,34 (t large, J -7,5 Hz, 2H) ; 7,49 (d large, J = 7,5 Hz, 2H) ; 8,07 (d large, J = 8,5 Hz, 2H); 8,17 (s large, 1H); 10,85 (s large, 1H); 11,05 (m étalé, 1H); de 12,75 à 13,1 (m três étalé, 1H). LC/MS : m = 497 ; ES m/z = 498 MH+

Exemplo 5: Preparo do N-{5-[N'-(2-etil-fenil-hidrazino-carboni]-

1 H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il}-4-metóxi-benzamida

<formula>formula see original document page 36</formula>

O N-{5-[N'-(2-etil-fenil-hidrazinocarbonil]-1 H-tieno [2,3-c] pirazol-

3-il}-4-metóxi-benzamida é preparado de acordo com o exemplo 1.

Rdt .= 60%: SM: ES

m/z=436 MH+. RMN 1H (400 MHz, (CD3)2SO d6, ô erv ppm): 1,19 (t, J = 7,5 Hz, 3H) ; 2,59 (q, J = 7,5 Hz, 2H); 3,85 (s, 3H); de 6,68 à 6,77 (m, 2H); de 6,98 à 7,11 (m, 4H); 7,26 (s large, -1H) V 8,08 .(d iarge, J =..8,5 Hz, 2H) ; 8,19. (s large, 1H); 10,5 (m étalé, 1H)..; dé 10,7 à 11,3 (m três étãlé, 1H); de 12,5 à 13,2 (m três étalé, 1H). LG/MS : m = 435, ÉS m/z = 436 MH+ .

Exemplo 6: Preparo do N-{5-[N'-(2-fluoro-fenil-hidrazinocarbonil]-1H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il}-4-metóxi-benzamida

O N-{5-[N'-(2-fluoro-fenil-hidrazinocarbonil]-1 H-tieno [2,3-c] pira-zol-3-il}-4-metóxi-benzamida é preparado de acordo com o exemplo 1. Rendimento = 65 %.

RMN 1H

(400 MHz, (CD3)2SO d6, 8 en ppm): 3,85 (s, 3H); 6,73 (m, 1H); 6,82 (t large, J = 8,0 Hz, 1H); de 6,96 à 7,13 (m, 4H); 7,78 (s large, 1H); 8,09 (d large, J = 8,5 Hz, 2H) ; 8,21 (s large, 1H); 10,5 (s large, 1H); 11,0 (s large, 1H); 12,9 (s large, 1H). LC/MS : m = 425, IC m/z = 426 MH+

Exemplo 7: preparo do 4-metóxi-N-[5-(N'-o-tolil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno [2,3c] pirazol-3-il]-benzamida

\

O 4-metóxi-N-[5-(N'-o-tolil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno [2,3c] pi-razol-3-il]-benzamida é preparado segundo o exemplo 1. Rendimento = 70 %. RMN.

RMN 1H (400 MHz,

(CD3)2SO d6, 5 en ppm): 2,19 (s, 3H); 3,85 (s, 3H); de 6j63 à 6,74 (m, 2H); 7,02 (m large, 2H); 7,08 (d large, J = 8,5 Hz, 2H); 7,25 (s large, 1H); 8,08 (d large, J = 8,5 Hz, 2H); 8,19 (s large, "1H); 10,5 (m étalé, ÍH}; de 10,7 à 11,5 (m três étâlé, 1H) ; de 12,3 à 13,3 (m três étalé, 1H). LC/MS : m = 421, ESrri/z = 422MH+ Exemplo 8: Preparo do N-[5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)1 H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-4-morfolin-4-il metil-benzamida<formula>formula see original document page 38</formula>

A uma solução de 0,09 g (154 nmol) de 5-(N'-metil-N'-fenil-

<formula>formula see original document page 38</formula>

hidrazinocarbonil)-3-(4-morfolin-4-il metil-benzoil amino)-tieno [2,3-c] pirazol-1 carboxilato de terc-butila em 5 ml de metanol em um tubo para forno de microondas, são acrescentados 21 mg (154 jimol) de carbonato de potássio. O tubo é bujonado e a mistura reacional é irradiada a uma temperatura próxima de 180 °C, durante 3 minutos. A mistura reacional é em seguida concentrada a seco sob vácuo (0,6 kPa) a uma temperatura próxima de 30 °C. O resíduo é purificado por cromatografia sobre um cartucho de sílica-gel de 25 g (0,015-0,040 mm), purificando-se com uma mistura diclorometano / metanol (9/1 em volumes, depois 98/2 e enfim 97/3) a uma vazão de 10 ml / min. As frações contendo o produto esperado são reunidas, depois concentradas a seco sob pressão reduzida (1,0 kPa) a uma temperatura próxima de 30 °C. O resíduo é retomado em 10 ml de éter diisopropílico, triturado, depois reconcentrado a seco. O sólido obtido é secado na estufa sob vácuo (0,01 kPa) a uma temperatura próxima de 60 °C. São obtidos assim 40 mg de N-[5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil) 1H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-4-morfolin-4-il metil-benzamida sob a forma de um sólido branco partido que se funde a 242 °C. SM-EI: 490 (+) = M(+).

5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-3-(4-morfolin-4-ilmetil-benzoil amino)-tieno [2,3-c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila:<formula>formula see original document page 38</formula>A uma solução de 0,27 g (0,70 mmol) de 3-amino-5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil]-tieno [2,3-c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila em 20 ml de tetrahidrofurano sob argônio, são acrescentados 193 mg (1,39 mmol) de carbonato de potássio, seguidos de 240 mg (0,87 mmol) de cloreto de 4-morfolin-4-ilmetil-benzoíla; cloridrato. A mistura reacional é agitada a uma temperatura próxima de 25 °C durante 2 horas, depois ao refluxo durante 4 horas. A mistura reacional é em seguida resfriada a uma temperatura próxima de 25 °C, depois tratada com 40 ml de água gelada. A mistura é extraída sucessivamente com 60 ml, depois 2 vezes 40 ml de acetato de etila. As fases orgânicas são reunidas, lavadas 2 vezes com 40 ml de salmoura saturada, secadas sobre sulfato de magnésio, filtradas, depois concentradas a seco sob vácuo (2 kPa) a uma temperatura próxima de 40 °C. O resíduo é purificado por cromatografia sobre um cartucho de sílica-gel de 25 g (0,015-0,040 mm) purificando-se sucessivamente com diclorometano puro, depois por misturas diclorometano/ metanol (99/1 em volumes, depois 98,5 / 1,5, 98/2 e enfim 97/3) a uma vazão de 10 ml/min. As frações contendo o produto esperado são reunidas, depois concentradas a seco sob pressão reduzida (0,6 kPa) a üma temperatura próxima de 30 °C. São obtidos assim 0,1 g de N-[5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil) 1H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-4-morfolin-4-il metil-benzamida sob a forma de um sólido branco partido que se funde a 190 °C.

O cloreto de 4-morfolin-4-ilmetil-benzoíla; cloridrato pode ser preparado de acordo com as patentes US 4.623.486 A (1986) e WO 9008128 A1.

3-amino-5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-tieno [2,3-c] pira-zol-1-carboxilato de terc-butila:

A uma suspensão de 1,19 g (4,14 mmol) de N'-metil-N'-fenil-(3-amino-1 H-tieno [2,3-c] pirazol)-5-carbo-hidrazida em 35 ml de diclorometanosob argônio, são acrescentados 0,58 ml (4,14 mmol) de trietil amina. A mistura reacional é agitada a uma temperatura próxima de 25 °C durante 15 minutos, depois 61 mg (0,50 mmol) de 4-dimetil amino-piridina são acrescentados. A mistura reacional é em seguida resfriado a uma temperatura próxima 5 de 0 °C, e uma solução de 0,90 g (4,14 mmol) de di-terc-butil-carbonato em 15 ml de diclorometano é acrescentada gota a gota. A mistura reacional é em seguida agitada a uma temperatura próxima de 0 °C durante uma hora, depois a uma temperatura próxima de 25 °C, durante 3 horas. Então, é tratada com 50 ml de água, agitada a uma temperatura próxima de 25 °C, de-

10 pois decantada. A fase aquosa é extraída duas vezes com 30 ml de diclorometano. As fases orgânicas são reunidas, lavadas com água até pH neutro (2 vezes 50 ml), secadas sobre sulfato de magnésio, filtradas, depois concentradas a seco sob vácuo (2 kPa) a uma temperatura próxima de 30 °C. O resíduo é purificado por cromatografia sobre um cartucho de sílica-gel de 70

15 g (0,015-0,040 mm), purificando-se com uma mistura diclorometano / metanol (98/2 em volumes), a uma vazão de 20 ml/min. As frações contendo o produto esperado são reunidas, depois concentradas a seco sob pressão reduzida (2 kPa) a uma temperatura próxima de 30 °C. São obtidos 0,38 g de 3-amino-5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-tienol [2,3-c] prirazol-1-

20 carboxilato de terc-butila sob a forma de um sólido bege que se funde a 195°C.

N'-metil-N'-fenil-(3-amino-1H-tieno [2,3-c] pirazol)-5-carbo-

hidrazida

o

A uma solução de 3,9 ml (32,0 mmol) de 1-metil-1-fenil-hidrazina 25 em 180 ml de tolueno a uma temperatura próxima de 25 °C e sob argônio, são acrescentados gota a gota 17,3 ml (34,5 mmol) de solução de trimetil alumínio 2M no tolueno, mantendo-se a temperatura inferior ou igual a 25 °C. A mistura reacional é agitada a uma temperatura próxima de 25 °C, du-rante 1 hora, depois 2,7 g (11,8 mmol) de 3-amino-1 H-tieno [2,3-c] pirazol)-5-carboxilato de etila são acrescentados por espatuladas. A mistura reacional é aquecida ao refluxo durante 16 horas, depois é resfriada a uma temperatura próxima de 25 °C e tratada com 200 ml de uma solução de ácido cítrico a 5 10 %. A mistura é agitada a uma temperatura próxima de 25 °C, durante 30 minutos, depois 200 ml de acetato de etila são acrescentados e a mistura reacional é decantada. A fase aquosa é extraída duas vezes com 150 ml de acetato de etila. Os extratos orgânicos são reunidos, lavados com água até um pH próximo de 6, secados sobre sulfato de magnésio, filtrados, depois

10 concentrados a seco sob vácuo (2 kPa) a uma temperatura próxima de 30 °C. O resíduo é purificado por cromatografia sobre uma coluna de sílica-gel de 200 g (0,020-0,040 mm) previamente neutralizada por purificação de uma mistura de diclorometano e de trietil amina (e volume morto), seguida por purificação com diclorometano puro (4 volumes mortos). Os produtos são purificados sucessivamente com misturas diclorometano / metanol (95/5, depois 90/10 em volumes). As frações contendo o produto esperado são reunidas, depois concentradas a seco sob pressão reduzida (2 kPa) a uma temperatura próxima de 40 °C. O resíduo é retomado em 40 ml de éter dii-sopropílico, triturado, depois filtrado sobre vidro calcinado. O sólido obtido é secado sob vácuo. São obtidos assim 1,5 g de N'-metil-N'-fenil-(3-amino-1 H-tieno [2,3-c] pirazol)-5-carbo-hidrazida sob a forma de um pó bege que se funde a 186 °C. nil-tiofeno-2-carboxilato de etila em 160 ml de etanol absoluto é aquecida ao refluxo até a dissolução, depois uma solução de 6,2 ml (0,126 mol) de hidrato de hidrazina em 40 ml de etanol absoluto são acrescentados gota a gota. A mistura reacional é agitada ao refluxo durante 2 horas, depois 4,6 ml (0,094 mol) de hidrato de hidrazina são acrescentados gota a gota e a agita-

3-amino-1 H-tieno [2,3c]-pirazol)-5-carboxilato de etila:

O

Uma suspensão de 16,4 g (0,063 mol) de 4-ciano-5-metil sulfo-ção ao refluxo é prosseguida durante duas horas. Após resfriamento a uma temperatura próxima de 25 °C, a mistura é concentrada a seco sob vácuo (2 kPa) a uma temperatura próxima de 40 °C. O resíduo é retomado em 200 ml de etanol e uma solução de 13,2 ml (0,158 mol) de ácido clorídrico 12 N é 5 adicionada sob agitação a uma temperatura próxima de 25 °C. A mistura reacional é agitada a uma temperatura próxima de 25 °C, durante 4 horas, depois é derramada lentamente em 500 ml de uma solução saturada de hi-drogeno carbonato de sódio previamente resfriada a 10 °C. Após agitação durante 30 minutos, a mistura é extraída 3 vezes com 600 ml de acetato de

10 etila. Os extratos orgânicos são reunidos, lavados 2 vezes com 300 ml de salmoura saturada, secados sobre sulfato de magnésio, filtrados e concentrados a seco sob vácuo (2 kPa) a uma temperatura próxima de 40 °C. O resíduo é purificado por cromatografia sobre uma coluna de sílica-gel de 500 g (0,020-0,045 mm), purificando-se com o acetato de etila puro. As frações

15 contendo o produto esperado são reunidas, depois concentradas a seco sob pressão reduzida (2 kPa) a uma temperatura próxima de 40 °C. São obtidos assim 3,4 g de 3-amino-1H-tieno [2,3-c] pirazol)-5-carboxilato de etila sob a forma de um pó marrom que é diretamente utilizado na etapa seguinte. SM.EI:211 (+) = M(+).

20 4-ciano-5-metil sulfonil-tiofeno-2-carboxilato de etila:

tiofeno-2-carboxilato de etila em 500 ml de diclorometano mantida a uma temperatura próxima de-5 °C, é acrescentada gota a gota em 2 horas uma solução de 92,3 g (0,374 mol) de ácido 3-cloro-peroxibenzóico em 1 I de di-25 clorometano, mantendo-se uma temperatura próxima de-5 °C. A mistura reacional é agitada a uma temperatura próxima de-5 °C, durante 1 hora, depois é agitada a uma temperatura próxima de 25 °C, durante 18 horas. Em seguida, é resfriada em um banho de gelo e tratada com 750 ml de uma solução saturada de hidrogeno carbonato de sódio e 250 ml de diclorometano.

NC,

A uma solução de 42,5 g (0,187 mol) de 4-ciano-5-metil sulfanil-Após 30 minutos de agitação, a mistura é filtrada sobre vidro calcinado e o sólido é lavado 2 vezes com 100 ml de diclorometano. Após decantação do filtrado, a fase aquosa é extraída com 500 ml de diclorometano. Os extratos orgânicos são reunidos, lavados 2 vezes com 1 L de salmoura saturada, se-5 cados sobre sulfato de sódio, filtrados depois concentrados a seco sob vácuo (1,5 kPa) a uma temperatura próxima de 45 °C. O resíduo é recristaliza-do em 200 ml de etanol. O precipitado é filtrado sobre vidro calcinado, lavado com 100 ml de etanol, secado, depois secado em um secador sob vácuo (2kPa). São obtidos assim 37 g de 4-ciano-5-metil sulfonil-tiofeno-2-10 carboxilato de etila sob a forma de um pó cristalino amarelo-pálido que se fundea110°C.

4-ciano-5-metil sulfanil-tiofeno-2-carboxilato de etila

NC,

// V o. o

Uma solução de 50 g (0,21 mol de 3-amino-4-ciano-5-,etil sulfa-nil-tiofeno-2-carboxilato de etila em 500 ml de dimetilformamida sob atmosfe-

15 ra de argônio é aquecida a uma temperatura próxima de 60 °C, depois se introduz sob agitação uma so uma so de 71, 1 ml (0,45 mol) de isopentil nitri-la em 100 ml de dimetilformamida, mantendo-se a temperatura entre 65 e 70 °C. A mistura reacional é em seguida agitada a uma temperatura próxima de 60 °C, durante 2 horas e 30 minutos, depois é resfriado a uma temperatura

20 próxima de 25 °C, e agitada durante 1 hora. A mistura é em seguida tratada com 1 I de água gelada, depois é agitada a uma te próxima de 0 °C durante 1 hora. O precipitado obtido é filtrado, depois lavado sucessivamente 3 vezes com 200 ml de água e 3 vezes com 200 ml de éter de petróleo. São obtidos assim, após secagem sob pressão reduzida, 40,5 g (86 %) de 4-ciano-

25 5-metil sulfanil-tiofeno-2-carboxilato de etila sob a forma de um pó cristalino amarelo que se funde a 100 °C. SM-CI (NH3): 245 (+) = (M+NH4) (+).

3-amino-4-ciano-5-metil sulfanil-tiofeno-2-carboxilato de etilaO

O 3-amino-4-ciano-5-metil sulfanil-tiofeno-2-carboxilato de etila pode ser preparado por adaptação do método descrito em Synthesis 2003, 735 a partir de 89,5 g de 2-[bis-(metil sulfanil) metileno] malonitrila e substitu-indo-se o carbonato de potássio pela trietil amina. São obtidos, após seca-5 gem, 120,5 g (95 %) de 3-amino-4-ciano-5-metil sulfanil-tiofeno-2-carboxilato de etila bruto sob a forma de um pó rosa que se funde a 149 °C.

2-[bis-(metil sulfanil) metileno] malononitrila:

<formula>formula see original document page 44</formula>

A 2-[bis-(metil sulfanil) metileno] malononitrila pode ser preparada segundo J. Med. Chem. 2003, 46, 1229 ou segundo Synth. Commun. 10 2003,33,3989.

Exemplo 9: preparo de 4-Bromo-N-[5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil]-1H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-benzamida

<formula>formula see original document page 44</formula>

A uma solução de 0,04 g (70 Limol) de 3-(4-Bromo-benzoil ami-no)-5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil]-tieno [2,3-c] pirazol-1-carboxilato de 15 terc-butila em 3 ml de metanol em um tubo para forno de microondas são acrescentados 14,5 mg (105 Limol) de carbonato de potássio. O tubo é bujo-nado e a mistura reacional é irradiada a uma temperatura próxima de 180 °C, durante 3 minutos. A mistura reacional é em seguida concentrada a seco sob vácuo (2 kPa) a uma temperatura próxima de 35 °C. O resíduo é reto-mado no diclorometano, depois em uma mistura de 1 ml de metanol, 4 ml de água e 10 ml de acetato de etila. Após decantação, a fase orgânica é lavada 2 vezes com 3 ml de água, secada sobre sulfato de magnésio, filtrada, depois concentrada a seco sob vácuo (2 kPa) a uma temperatura próxima de 5 35 °C. O resíduo é retomado no éter diiso propílico, filtrado sobre vidro calcinado, secado, depois secado em uma estufa sob vácuo (0,01 kPa) a uma temperatura próxima de 40 °C. O resíduo é purificado por cromatografia sobre uma coluna de sílica-gel de 15 g (0,015-0,040 mm), purificando-se com uma mistura diclorometano / metanol (99/1 em volumes, depois 98/2 e enfim 97/3) a uma vazão de 20 ml/min. As frações contendo produto esperado são reunidas, depois concentradas a seco sob pressão reduzida (2 kPa) a uma temperatura próxima de 35 °C. São obtidos assim 18 mg de 4-Bromo-N-[5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil]-1 H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-benzamida sob a forma de um sólido amarelo-pálido que se funde a 172 °C. LC-EM-DAD-ELSD: 468 (-)/... = (M-H) (-) /...; 470(+)/... = (M+H)(+)/... (1 Br presente).

3-(4-Bromo-benzoil amino)-5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil] tieno [2,3-c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila:<formula>formula see original document page 45</formula>A uma solução de 0,27 g (0,70 mmol) de 3-amino-5-(N'-metil-N'-20 fenil-hidrazinocarbonil))-tieno[2,3-c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila em 20 ml de tetrahidrofurano sob argônio, são acrescentados 169 mg (1,22 mmol) de carbonato de potássio, seguidos de 191 mg (0,87 mmol) de cloreto de 4-bromo-benzoíla. A mistura reacional é agitada ao refluxo durante 2 horas. A mistura reacional é em seguida resfriada a uma temperatura próxima de 25 25 °C, depois tratada com 40 ml de água gelada. A mistura é extraída sucessi-vãmente com 60 ml, depois duas vezes 40 ml de acetato de etila. As fases orgânicas são reunidas, lavadas duas vezes com 40 ml de salmoura saturada, secadas sobre sulfato de magnésio, filtradas, depois concentradas a seco sob vácuo (2 kPa) a uma temperatura próxima de 35 °C. O resíduo é puri-5 ficado por cromatografia sobre um cartucho de sílica-gel de 25 g (0,015-0,040 mm), purificando sucessivamente com misturas diclorometano / metanol (9/1 em volumes, depois 98/2) a uma vazão de 13 ml/min. As frações contendo o produto esperado são reunidas, depois concentradas a seco sob pressão reduzida (2 kPa) a uma temperatura próxima de 35 °C. São obti-10 dos assim 0,04 g de 3-(4-Bromo-benzoil amino)-5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil] tieno [2,3-c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila sob a forma de um sólido branco que se funde a 192 °C.

hidrazinocarbonil)-3-[4-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-benzoil amino]-tieno [2,3-c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila em 8 ml de metanol é introduzida em 20 um tubo para forno de microondas. O tubo é bujonado e a mistura reacional é irradiada a uma temperatura próxima de 100 °C, durante 20 minutos, depois 2 vezes durante 15 minutos adicionais. A mistura reacional é em seguida concentrada a seco sob vácuo (2 kPa) a uma temperatura próxima de 35 °C. O resíduo é retomado em 15 ml de éter diisopropílico, triturado, filtrado

O 3-amino-5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil] tieno [2,3-c] pirazol-1 -carboxilato de terc-butila é descrito no exemplo 8.

Exemplo 10: Preparo de N-[5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil) 1 H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-4-(4-metil-piperazin-1 -ilmetil)-benzamida

Uma solução de 0,14 g (232) |imol de 5-(N'-metil-N'-fenil-sobre vidro calcinado, lavado 2 vezes com 5 ml de éter diisopropílico, secado em uma estufa sob vácuo (0,01 kPa) a uma temperatura próxima de 60 °C. São obtidos assim 78 mg de N-[5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil) 1H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-4-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-benzamida sob a forma 5 de um sólido branco partido que se funde a 246 °C. LC-EM-DAD-ELSD; 504 (+) = (M+H) (+); 502 (-) = (M-H)(-).

5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-3-[4-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-benzoil amino]-tieno [2,3-c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila<formula>formula see original document page 47</formula> A uma solução de 0,30 g (0,77 mmol) de 3-amino-5-(N'-metil-N'-10 fenil-hidrazinocarbonil)-tieno [2,3-c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila em 16 ml de piridina sob argônio, são acrescentados 391 mg (1,55 mmol) de cloreto de 4-(4-metil piperazin-1-ilmetil)-benzoíla; cloridrato. A mistura reacional é agitada a uma temperatura próxima de 25 °C durante 16 horas, depois 294 mg (1,16 mmol) de cloreto de 4-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-benzoíla são a-15 crescentados e a agitação é prosseguida durante 5 horas. A mistura reacional é em seguida resfriada a uma temperatura próxima de 10 °C, depois tratada com 50 ml de água. A mistura é extraída 2 vezes com 100 ml de acetato de etila. As fases orgânicas são reunidas, lavadas com água até pH neutro, secadas sobre sulfato de magnésio, filtradas, depois concentradas a se-20 co sob vácuo (3 kPa) a uma temperatura próxima de 30 °C. O resíduo é purificado por cromatografia sobre um cartucho de sílica-gel de 25 g (0,015-0,040 mm), purificando-se sucessivamente com misturas diclorometano / metanol (98/2 em volumes, depois 97/3, depois 96/4 e enfim 95/5) a umavazão de 15 ml/min. As frações contendo o produto esperado são reunidas, depois concentradas a seco sob pressão reduzida (3 kPa) a uma temperatura próxima de 30 °C. São obtidos assim 0,14 g de 5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil) 3-[4-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-benzoil amino]-tieno [2,3-5 c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila sob a forma de um sólido branco partido que se funde a 218 °C.

O 3-amino-5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-tieno [2,3-c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila é descrito no exemplo 8. O cloreto de 4-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-benzoíla pode ser preparado segundo a patente 10 WO 03066613 Aí.

Exemplo 11a e 11b: Preparo do 4-(3,5-dimetil-piperazin-1-ilmetil) N-[5-(N'-metil-NMenil-hidrazinocarbonil) 1H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-benzamida e do 4-(3,5-dimetil-piperazin-1 -ilmetil) N-[5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil) 1 H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-benzamida A uma solução de 290 mg (0,54 mmol) de uma mistura aproxi-

madamente 70:30 de 3-(4-clorometil-benzoil amino)-5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-tieno [2,3-c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila e de 3-(4-clorometil-benzoil amino)-5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil)-tieno [2,3-c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila em 6 ml de dimetilformamida sob argônio, são acrescentados 40 mg (108 (imol) de iodeto de tetra butil amônio, seguidos de 184 mg (1,16 mmol) de cis-2,6-dimetil piperazina. A mistura reacional é agitada a uma temperatura próxima de 25 °C, durante 3 horas, depois é derramada em uma mistura de gelo, de acetato de etila e de n-heptano. A mistura é filtrada sobre vidro calcinado, secado e secado ao ar. O sólido obtido é dissolvido em 5 ml de metanol e a solução é introduzida em um tubo para forno de micro-ondas. O tubo é bujonado e a mistura reacional é irradiada a uma temperatura próxima de 100 °C durante 3 vezes 10 minutos. A mistura reacional é em seguida concentrada a seco sob vácuo (2kPa) a uma temperatura próxima de 40 °C. O resíduo é purificado por LC/EM preparatória (condições B'). São obtidos assim 130 mg de 4-(3,5-dimetil-piperazin-1 -ilmetil) N-[5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil) 1H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-benzamida sob a forma de um pó amarelo que se funde entre 5 192 e 202 °C. LC-EM-DAD-ELSD: 518 (+) = (M+H)(+).

Isolam-se da mesma forma 49 mg de 4-(3,5-dimetil-piperazin-1-ilmetil)-N-[5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno [2,3-c] pi-razol-3-il]-benzamida sob a forma de um pó amarelo-pálido que se funde a 212 °C.

RMN 1H (300 MHz, (CD3)2SO d6, ô en ppm): ll s'agit du sei de Ia structure attendue avec 1,18 (d, J = 6,5 Hz, 6H) ; 2,11 (t large, J = 12,5Hz, 2H); 3,00 (d large, J = 12,5Hz, 2H); 3,17 (s, 3H); 3,33 (m large, 2H); 3,73 (m partiellement masque, 2H); 6,82 (d, J = 9,0 Hz, 2H); 7,25 (d, J = 9,0 Hz, 2H); 7,50 (d, J = 8,0 Hz, 2H); 8,08 (d, J = 8,0 Hz, 2H); 8,16 (s, 1H); 8,20 (m étalé partiellement masque, 2H); 8,92 (m étalé, 1H); 10,8 (s, 1H); 11,2 (s, 1H).

3-(4-clorometil-benzoilamino)-5-(N'-metil-N'-fenil-

hidrazinocarbonil)-tieno [2,3-c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila e 3-(4-clorometil-benzoilamino)-5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil)-tieno [2,3-c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila

A uma solução de 0,39 g (1,0 mmol) de uma mistura aproxima-15 damente 70:30 de 3-amino-5(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-tieno [2,3-c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila e de 3-amino-5(N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil)-tieno [2,3-c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila em 25 ml de tetrahidrofurano sob argônio, são acrescentados 276 mg (2,0 mmol) de carbonato de potássio, seguidos de 2,0 ml (2,0 mmol) de uma solução 1M decloreto de 4-(cloro metil) benzoíla no tetrahidrofurano. A mistura reacional é agitada ao refluxo, durante 2 horas, depois é em seguida resfriada a uma temperatura próxima de 25 °C e agitada durante 2 horas, depois é em seguida resfriada a uma temperatura próxima de 25 °C e agitada a durante 16 5 horas. Em seguida é derramada na água gelada e extraída 2 vezes com 25 ml de acetato de etila. As fases orgânicas são reunidas, lavadas com salmoura saturada, secadas sobre sulfato de magnésio, filtradas, depois concentradas a seco sob vácuo (2 kPa) a uma temperatura próxima de 40 °C. O resíduo é purificado por cromatografia sobre um cartucho de sílica-gel de 25 10 g (0,015-0,040 mm), purificando com uma mistura diclorometano / metanol (98/2 em volumes) a uma vazão de 10 ml/ min. As frações contendo o produto esperado são reunidas, depois concentradas a seco sob pressão reduzida (2 kPa) a uma temperatura próxima de 40 °C. O resíduo é purificado por cromatografia sobre um cartucho de sílica-gel de 90 g (0,015-0,040 mm), 15 purificando com uma mistura diclorometano / metanol (98/2 em volumes) a uma vazão de 10 ml/ min. As frações contendo o produto esperado são reunidas, depois concentradas a seco sob pressão reduzida (2 kPa) a uma temperatura próxima de 40 °C. São obtidos assim 422 mg de uma mistura aproximadamente 70:30 de 3-(4-clorometil-benzoil amino)-5-(N'-metil-N'-20 fenil-hidrazinocarbonil)-tieno [2,3-c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila e 3-(4-clorometil-benzoil amino)-5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil)-tieno [2,3-c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila sob a forma de uma espuma alaranjada. LC-EM-DAD-ELSD e SM-EI-CI: mistura estrutura esperada (a-proximadamente 70 %; M.W = 539 /...) e análogo esperado diclorado (apro-25 ximadamente 30 % ; M.W = 573 /...).

RMN 1H (400 MHz, (GD3)2SO d6, 5 en ppm): méiange de conformères environ 80% - 20% avec 1,55 (s, 1,8H); 1,64 (s, 7,2H); 3,18 (s, 2,4H); 3,20 (s, 0,6H); 4,85 (s, 2H); 6,78 (t, J = 7,5 Hz, 0.8H); 6,83 (d, J = 8,0 Hz, 1.6H); 6,97 (t, J = 8,0 Hz, 0,2H); 7,03 (d, J = 8,0 Hz, 0.4H); 7,22 (t, J = 8,0 Hz, 1.6H); 7,32 (t, J = 8,0 Hz, 0,4H); 7,60 (d, J = 8,0 Hz, 2H); 8,11 (d, J = 8,0 Hz, 2H); 8,27 (s, 0,2H); 8,32 (s, 0,8H); 9,90 (s, 0,2H); 10,95 (s, 0,8H); 11,7 (s, 0,2H); 11,8 (s, 0.8H) .3-amino-5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-tieno [2,3-c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila e 3-amino 5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil)-tieno [2,3-c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila:

<formula>formula see original document page 51</formula>

A uma suspensão de 14 g (48,7 mmol) de uma mistura de (3-5 amino-1 H-tieno [2,3-c] pirazol-5-carbo-hidrazida (majoritário) e de 3-amino-5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil)-tieno [2,3-c] pirazol-1 -carboxilato de terc-butila (minoritário) em 500 ml de diclorometano sob argô-nio, são acrescentados 1,19 g (9,74 mmol) de 4-(dimetil amino)-piridina, depois 7,4 ml (53,8 mmol) de trietil amina. A mistura reacional é em seguida

resfriada a uma temperatura próxima de 0 °C, depois uma solução de 8,5 g (39,0 mmol) de di-rterc-butil-dicarbonato em 200 ml de diclorometano é a-crescentada gota a gota em 1 hora. A mistura reacional é em seguida agitada a uma temperatura próxima de 0 °C durante uma hora, depois é aquecida à temperatura próxima de 25 °C e concentrada a seco sob vácuo (2 kPa) a

uma temperatura próxima de 40 °C. O resíduo é purificado por cromatografia sobre uma coluna de sílica-gel de 500 g (0,020-0,040 mm), purificando com uma mistura diclorometano / metanol (99/1 em volumes). As frações contendo o produto esperado são reunidas, depois concentradas a seco sob pressão reduzida (2 kPa) a uma temperatura próxima de 40 °C. O resíduo é re-

purificado por cromatografia sobre um cartucho de sílica-gel de 400 g (0,020-0,040 mm), purificando com uma mistura diclorometano / tetrahidrofurano (98/2 em volumes). As frações contendo o produto esperado são reunidas, depois concentradas a seco sob pressão reduzida (2 kPa) a uma temperatura próxima de 40 °C. São obtidos assim 7,0 g de uma mistura aproximada-

mente 70:30 de 3-amino-5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-tieno [2,3-c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila e 3-amino-5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil)-tieno [2,3-c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila sob a forma de um sólido bege. LC-EM-DAD-ELSD e SM-EI-CI: mistura contendo aestrutura esperada (aproximadamente 70 %): 388 (+) = (M+H) (+).

N'-metil-N'-fenil-(3-amino-1 H-tieno [2,3-c] pirazol)-5-carbo-

hidrazida:

A uma solução de 29,6 g (45,2 mmol) de mistura de N'-metil-N'-5 fenil-(4-ciano-5-metanossulfinil--tiofeno)-2-carbo-hidrazida (majoritária), de N'-metil-N'-fenil-(4-ciano-5-metanossulfinil-tiofeno)-2-carbo-hidrazida (minoritária), de N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-(4-ciano-5-metanossulfinil-tiofeno)-2-carbo-hidrazida (minoritária), e de N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-(4-ciano-5-metanossulfinil--tiofeno)-2-carbo-hidrazida (majoritária), em 900 ml de etanol

10 sob argônio, são acrescentados 650 ml (650 mmol) de uma solução 1M de hidrazina no tetrahidrofurano em 20 minutos. A mistura reacional é aquecida a uma temperatura próxima de 50 °C durante 16 horas, depois é resfriado a uma temperatura próxima de 25 °C e concentrada a seco sob vácuo (2 kPa) a uma temperatura próxima de 40 °C. O resíduo é retomado em 1 L de eta-

15 nol e uma solução de 20 ml (240) mmol) de ácido clorídrico 12N é adicionada sob agitação a uma temperatura próxima de 25 °C. A mistura reacional é agitada a uma temperatura próxima de 25 °C durante 1,75 horas, depois 20 ml (240 mmol) de ácido clorídrico 12N são adicionados. A mistura reacional é agitada a uma temperatura próxima de 25 °C, durante 1 hora e 30 minutos,

20 depois é filtrada e o sólido é lavado duas vezes com 200 ml de etanol. O filtrado é concentrado a seco sob vácuo (2 kPa) a uma temperatura próxima de 40 °C. O resíduo é purificado por cromatografia sobre uma coluna de síli-ca-gel de 500 g (0,020-0,040 mm)purificando com uma mistura diclorometa-no / metanol (90/10 em volumes), depois por uma mistura diclorometano /

25 metanol / amoníaco 28 % (77 / 20 / 3 em volumes). As frações contendo o produto esperado são reunidas , depois concentradas a seco sob pressão reduzida (2 kPa) a uma temperatura próxima de 40 °C. O resíduo é retomado em 200 ml de acetato de etila e recristalizado. O sólido obtido é filtrado,secado em um secador sob vácuo. Os licores mães são concentradas a seco sob vácuo (2 kPa) a uma temperatura próxima de 40 °C. O resíduo é purificado por cromatografia sobre uma coluna de sílica-gel (0,020-0,040 mm), purificando com uma mistura diclorometano / metanol / amoníaco 28 % (77 / 5 20 /3 em volumes). As frações contendo o produto esperado são reunidas, depois concentradas a seco sob pressão reduzida (2 kPa) a uma temperatura próxima de 40 °C. O resíduo é retomado no acetato de etila, triturado, depois reconcentrado a seco nas mesmas condições. São obtidos assim no total 14 g de N'-metil-N'-fenil-(3-amino-1H-tieno [2,3-c]pirazol)-5-carbo-

10 hidrazida (majoritária), e de N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-(3-amino-1H-tieno [2,3-c]pirazol)-5-carbo-hidrazida (minoritária), sob a forma de uma espuma castanha que é diretamente utilizada na etapa seguinte.

N'-metil-N'-fenil-(4-ciano-5-metano-sulfinil-tiofeno)-2-carbo-hidrazida; N'-metil-N'-fenil-(4-ciano-5-metanossulfinil-tiofeno)-2-carbo-

15 hidrazida; N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-(4-ciano-5-metano-sulfonil-tiofeno)-2-carbo-hidrazida

A uma solução de 27,4 g (90,3 mmol) de N'-metil-N'-fenil-(4-ciano-5-metano-sulfinil-tiofeno)-2-carbo-hidrazida em 1,0 l de tetrahidrofura-no sob argônio, são acrescentados 83,3 g (135,5 mmol) de oxona ® (peroxi

20 mono-sulfato de potássio) em 5 minutos, seguidos de 100 ml de água. A mistura reacional é agitada a uma temperatura próxima de 25 °C durante 2 horas e 30 minutos, depois é filtrada sobre sulfato de magnésio. O sólido é lavado duas vezes com tetrahidrofurano e o filtrado é concentrado a seco sob vácuo (2 kPa) a uma temperatura próxima de 40 °C. O resíduo é reto-

25 mado em 500 ml de acetato de etila, decantado e a fase aquosa é extraídacom 500 ml de acetato de etila. As fases orgânicas são reunidas, secadas sobre sulfato de magnésio, filtradas, depois concentradas a seco sob vácuo (2 kPa) a uma temperatura próxima de 40 °C. São obtidos assim, 29,4 g de uma mistura de N'-metil-N'-fenil-(4-ciano-5-metano-sulfinil-tiofeno )-2-carbo-5 hidrazida (majoritário), de N'-metil-N'-fenil-(4-ciano-5-metano-sulfonil-tiofeno)-2-carbo-hidrazida (minoritário), de N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-(4-ciano-5-metano-sulfinil-(tiofeno)-2-carbo-hidrazida (minoritário) e de N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-(4-ciano-5-metano-sulfonil-tiofeno)-2-carbo-hidrazida (minoritá-rio_ sob a forma de uma espuma castanha que é utilizada diretamente na 10 etapa seguinte. LC/EM: 4 picos TR = 3,11 min. M+H+: 320.06; TR = 3,33 min. M+H+: 353,99 (1CI); TR = 3,53 min. M+H+: 336,04; TR = 3,88 min. M+H+: 369,97(1 Cl).

N'-N'-metil-N'-fenil-(4-ciano-5-metil-sulfanil-tiofeno)-2-carbo-

hidrazida

o

15 A uma solução de 24,6 ml (200,6 mmol) de 1-metil-1-fenil-

hidrazina em 300 ml de tolueno a uma temperatura próxima de 25 °C e sob argônio, são acrescentados 100,3 ml (200,6 mmol) de solução de trimetil alumínio 2M no tolueno, diluída em 600 ml de tolueno, mantendo a temperatura inferior ou igual a 25 °C. A mistura reacional é agitada a uma temperatu-

20 ra próxima de 25 °C, depois 39,3 g (172,9 mmol) de 4-ciano-5-metil sulfanil-tiofeno-2-carboxilato de etila são acrescentados por espatuladas. A mistura reacional é aquecida a uma temperatura próxima de 80 °C, durante 4 horas, depois é resfriada a uma temperatura próxima de 25 °C e agitada durante 16 horas. Em seguida é resfriada a uma temperatura próxima de 0 e 1L de áci-

25 do clorídrico 1N é acrescentado. A suspensão resultante é agitada a uma temperatura próxima de 10 °C durante uma hora, depois filtrada. O precipitado é secado, secado sob cesto ventilado durante 2 dias e meio, depois secado em um secador sob vácuo (2 kPa) durante 4 horas. O filtrado é decantado e a fase aquosa é extraída com 500 ml de acetato de etila. AS fasesorgânicas são reunidas, lavadas com 500 ml de salmoura saturada, secadas sobre sulfato de magnésio, filtradas, depois concentradas a seco sob vácuo (2 kPa) a uma temperatura próxima de 40 °C. São obtidos assim 29,1 g de N'-N'-metil-N'-fenil-(4-ciano-5-metil-sulfanil-tiofeno)-2-carbo-hidrazida sob a 5 forma de um pó ocre. SM-EI: 303 (+) = M(+).

diazepin-1-il metil) N-[5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil) 1H-tieno [2,3-c] 10 pirazol-3-il]-benzamida e do 4-(4-metil-per-hidro-1,4-diazepin-1-il metil) N-[5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil) 1 H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-benzamida

ximadamente 70:30 de 3-(4-cloro metil-benzoil amino)-5-(N'-metil-N'-fenil-15 hidrazinocarbonil)-tieno [2,3-c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila e de 3-(4-cloro metil-benzoil amino)-5-(N'(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil)-tieno [2,3-c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila em 6 ml de dimetilformamida sob argônio, são acrescentados 27 mg (75 (imol) de iodeto de tetra butil amônio, seguidos de 138 \ú (1,11 mmol) de N-metil-homopiperazina. A mistura rea-20 cional é agitada a uma temperatura próxima de 25 °C durante 16 horas, depois é tratada com gelo. Em seguida é extraída com o acetato de etila, depois 2 vezes com diclorometano. Os extratos orgânicos são reunidos, depois concentrados a seco sob vácuo (2 kPa) a uma temperatura próxima de 40 °C. O resíduo é dissolvido em 3 ml de metanol e a solução é introduzida em 25 uma tubo para forno de micro ondas. O tubo é bujonado e a mistura reacio-nal é irradiada a uma temperatura próxima de 100 °C, durante 30 minutos. A

O 4-ciano-5-metil sulfanil-tiofeno-2-carboxilato de etila é descrito

no exemplo 8.

Exemplos 12a e 12b: preparo do 4-(4-metil-per-hidro-1,4-

A uma solução de 200 mg (0,37 mmol) de uma mistura de apro-mistura reacional é em seguida concentrada a seco sob vácuo (2 kPa) a uma temperatura próxima de 40 °C. O resíduo é purificado por LC/EM preparatório (1 injeção: condições B'; 3 injeções: condições B). São obtidos assim 53 mg de 4-(4-metil-per-hidro-1,4-diazepin-1-il metil) N-[5-(N'-metil-N'-fenil-5 hidrazinocarbonil) 1 H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-benzamida sob a forma de um pó amarelo. LC-EM-DAD-ELSD: 516 (-) = (M-H) (-); 518 (+) = (M+H) (+).

Isolam-se da mesma forma 20 mg de 4-(4-metil-per-hidro-1,4-diazepin-1-il metil) N-[5-(N'-(4-cloro fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil) 1 H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-benzamida sob a forma de um pó amarelo-pálido que se 10 funde a 162 °C.

RMN 1H (300 MHz, (CD3)2SO d6, 8 en ppm): II s'agit du sei de Ia structure attendue avec 2,08 (m large, 2H); 2,84 (s, 3H); 3,18 (s, 3H); de 2,93 à 4,51 (m partiellement masque, 10H); 6,82 (d, J = 9,0 Hz, 2H); 7,24 (d, J = 9,0 Hz, 2H); 7,63 (d large, J = 8,0 Hz, 2H); 8,14 (d, J = 8,0 Hz, 2H); 8,17 (s, 1H); 8,22 (m étalé partiellement masque, 1H); 10,0 (m três étalé, 1H);10,8(s, 1H);11,3(s, 1H).

A mistura aproximadamente de 70:30 de 3-(4-cloro metil-benzoil amino)-5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil )-tieno [2,3-c]pirazol-1 -carboxilato de terc-butila e de 3-(4-cloro metil-benzoil amino)-5-(N'-(4-cloro-15 fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil)-tieno [2,3-c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila é descrito no exemplo 11.

Exemplos 13a e 13b: preparo do N-[5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-4-piperazin-1 -ilmetil-benzamida e do N-{5-[N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil]-1 H-tieno 20 [2,3-c] pirazol]-3-il}-4-piperazin-1-ilmetil-benzamida

A uma solução de 200 mg (0,37 mmol) de uma mistura de apro-ximadamente 70: 30 de 3-(4-cloro metil-benzoil amino)-5-(N'-metil)-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-tieno [2,3-c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila e de 3-(4-cloro metil-benzoil amino)-5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil)-tieno [2,3-c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila em 6 ml de dimetilformamida 5 sob argônio, são acrescentados 27 mg (74 |j,mol) de iodeto de tetra butil a-mônio, seguidos de 96 mg (1,11 mmol) de piperazina. A mistura reacional é agitada a uma temperatura próxima de 25 °C, durante 16 horas, depois é tratada com gelo. Em seguida, é extraída com o acetato de etila, depois 2 vezes com diclorometano. Os extratos orgânicos são reunidos, depois con-

centrados a seco sob vácuo (2 kPa) a uma temperatura próxima de 40 °C. O resíduo é dissolvido em 3 ml de metanol e a solução é introduzida em um tubo para forno de microondas. O tubo é bujonado e a mistura reacional é irradiada a uma temperatura próxima de 100 °C durante 2 vezes 30 minutos. A mistura reacional é em seguida concentrada a seco sob vácuo (2kPa) a

uma temperatura próxima de 40 °C. O resíduo é purificado por LC/EM preparatória (condições B). São obtidos assim 83 mg de N-[5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-piperazin-1-il metil-benzamida sob a forma de um pó amarelo que se funde a 176 °C. LC-EM-DAD-ELSD: 490 (+) = M (+H) (+).

Isolam-se da mesma forma 34 mg de N-{5-[N'-(4-cloro-fenil)-N'-

metil-hidrazinocarbonil]-1 H-tieno [2,3-c] pirazol]-3-il}-4-piperazin-1-ilmetil-benzamida sob a forma de um pó alaranjado que se funde a 180 °C. LC-EM-DAD-ELSD: 524(+)/... = (M+H)(+)/... (1 Cl).

A mistura aproximadamente de 70: 30 de 3-(4-cloro metil-benzoil

amino)-5-(N'-metil)-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-tieno [2,3-c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila e de 3-(4-cloro metil-benzoil amino)-5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil)-tieno [2,3-c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila foi descrita no exemplo 11.

Exemplos 14a e 14b: preparo do N-[5-(N'-metil-N'-fenil-

hidrazinocarbonil)-1 H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-4-(3-metil-piperazin-1-ilmetil)-benzamida e do N-{5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil]-1 H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il}-4-(3-metil-piperazin-1-ilmetil)-benzamidaA uma solução de 200 mg (0,37 mmol) de uma mistura de aproximadamente 70:30 de 3-(4-cloro metil-benzoil amino)-5-(N'-metil)-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-tieno [2,3-c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila e de 3-(4-cloro metil-benzoil amino)-5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil)-5 tieno [2,3-c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila em 6 ml de dimetilformamida sob argônio, são acrescentados 27 mg (74 |imol) de iodeto de tetra butil a-mônio, seguidos de 111 mg (1,11 mmol) de 2-metil-piperazina. A mistura reacional é agitada a uma temperatura próxima de 25 °C durante 16 horas, depois é tratada com gelo. Em seguida, é extraída com o acetato de etila,

depois 2 vezes com diclorometano. Os extratos orgânicos são reunidos, depois concentrados a seco sob vácuo (2 kPa) a uma temperatura próxima de 40 °C. O resíduo é dissolvido em 3 ml de metanol e a solução é introduzida em um tubo para forno de micro-ondas. O tubo é bujonado e a mistura reacional é irradiada a uma temperatura próxima de 100 °C, durante 30 minu-

tos. A mistura reacional é em seguida concentrada a seco sob vácuo (2kPa) a uma temperatura próxima de 40 °C. O resíduo é purificado por cromatogra-fia sobre um cartucho de sílica-gel de 12 g (0,035-0,060 mm) purificando-se inicialmente com um gradiente de uma mistura de diclorometano / metanol (100/0 a 98/2 em volumes), depois com uma mistura diclorometano / meta-

nol / amoníaco a 28 % (12/3/ 0,5 em volumes) a uma vazão de 20 ml /min. As frações contendo o produto esperado são reunidas, depois concentradas a seco sob pressão reduzida (2 kPa) a uma temperatura próxima de 40 °C. O resíduo é purificado por LC/EM preparatória (condições B). São obtidos assim 85 mg de N-[5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno [2,3-c] pi-

razol-3-il]-4-(3-metil-piperazin-1-ilmetil)-benzamida sob a forma de um póamarelo que se funde de 176 a 186 °C. LC-EM-DAD-ELSD: 504(+) = (M+H) (+)■

Isolam-se da mesma forma 8 mg de N-{5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil]-1 H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il}-4-(3-metil-piperazin-1 - ilmetil)-benzamida sob a forma de um sólido amarelopálido que se funde de 189 a 195 °C. LC-EM-DAD-ELSD: 538 (+)/... = (M+H)(+)/...(1 Cl)

A mistura de aproximadamente 70:30 de 3-(4-cloro metil-benzoil amino)-5-(N'-metil)-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-tieno [2,3-c] pirazol-1 -carboxilato de terc-butila e de 3-(4-cloro metil-benzoil amino)-5-(N'-(4-cloro- fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil)-tieno [2,3-c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila foi descrita no exemplo 11.

Exemplos 15a e 15b: preparo do 4-dietil amino metil-N-[5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-benzamida; tri-fluoro-acetato e do N-{5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil)-1H- tieno [2,3-c] pirazol-3-il}-4-dietil amino metil)-benzamida<formula>formula see original document page 59</formula>A uma solução de 100 mg (0,19 mmol) de uma mistura de aproximadamente 70:30 de 3-(4-cloro metil-benzoil amino)-5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-tieno [2,3-c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila e de 3-(4-cloro metil-benzoil amino)-5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil)-tieno [2,3-c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila em 15 ml de dimetilformamida sob argônio, são acrescentados 14 mg (37 jxmol) de iodeto de tetra butil a-mônio, depois uma suspensão de 61 mg (0,56 mmol) de cloridrato de dietil amina e 77 mg (0,56 mmol) de carbonato de potássio em 1,5 ml de dimetilformamida. A mistura reacional é agitada a uma temperatura próxima de 25 °C durante 80 horas, depois é tratada com gelo. A mistura é em seguida ex-traída 2 vezes com uma mistura 50/50 (v/v) de acetato de etila e de heptano. Os extratos orgânicos são reunidos, secados sobre sulfato de magnésio, filtrados, depois concentrados a seco sob vácuo (2 kPa) a uma temperatura próxima de 30 °C. O resíduo é dissolvido em 5 ml de metanol e a solução é 5 introduzida em um tubo para forno de microondas. O tubo é bujonado e a mistura reacional é irradiada a uma temperatura próxima de 100 °C, durante 30 minutos. A mistura reacional é em seguida concentrada a seco sob vácuo (2 kPa) a uma temperatura próxima de 40 °C. O resíduo é purificado por LC/EM preparatório (condições B). São obtidos assim 40 mg de 4-dietil ami-10 no metil- N-[5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1H-tieno [2,3-c] pirazol-benzamida; trifluoro acetato sob a forma de um pó amarelo que se funde de 158 a 170 °C.

RMN 1H (300 MHz, (CD3)2SO d6> 8 en ppm) :■ observation d'uh mélange 80 % - 20 % de confórmères avec 1,25 (t, J = 7,0 Hz, 6H); 3,11 (m, 4H); 3,18 (s, 3H); 4,41 (d, J = 5,5 Hz, 2H); 6,77 (t, J - 7,5 Hz, 0.8H); 6,82 (d, J = 8,0 Hz, 1,6H); 6,94 (t, J = 7,5 Hz, 0,2H); 7,02 (d, J = 8,0 Hz, 0.4H); 7,22 (t,.J = 8,0 Hz, 1.8H); 7,31 (t, J = 8,0 Hz, 0.2H); 7,69 (d large, J = 8,0 Hz, 2H); 8,17 (d partiellement masque, J = 8,0 Hz, 2H); 8,18 (s, 1H); 9,51 (m étalé, 1H); 9,71 (s, 0,2H); 10,75 (s, 0.8H); 11,25 (s large, 0,2H); 11,35 (s large, 0,8H); 13,0 (m três étalé, 1H).

Isolam-se da mesma forma 14 mg de N-{5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil)-1H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il}-4-dietil amino metil-15 benzamida sob a forma de um sólido amarelo-pálido que se funde 170 a 178 °C. LC-EM-DAD-ELSD: 511 (+)/... = (M+H)(+)/... (1CI).

A mistura aproximadamente de 70:30 de 3-(4-cloro metil-benzoil amino)-5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-tieno [2,3-c] pirazol-1 -carboxilato de terc-butila e de 3-(4-cloro metil-benzoil amino)-5-(N'-(4-cloro-20 fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil)-tieno [2,3-c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila foi descrita no exemplo 11.

Exemplos 16a e 16b: Preparo do N-[5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno[2,3c] pirazol-3-il]-3-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-benzamida e do N-[5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil)-1H-25 tieno[2,3c] pirazol-3-il]-3-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-benzamidaUma solução de 0,07 g (116 (imol) de uma mistura aproximadamente 70:30 de 5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-3-[3-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-benzoil amino]-tieno[2,3c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila e de 5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil)-3-[3-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-5 benzoil amino]-tieno[2,3c] pirazol carboxilato de terc-butila em 4 ml de metanol é introduzida em um tubo para forno de microondas. O tubo é bujonado e a mistura reacional é irradiada a uma temperatura próxima de 180 °C, durante 3 minutos. A mistura reacional é em seguida concentrada a seco sob vácuo (0,6 kPa) a uma temperatura próxima de 40 °C. O resíduo é purificado

10 por LC/EM preparatória (condições N). São obtidos assim 70 mg de N-[5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno[2,3c] pirazol-3-il]-3-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-benzamida sob a forma de um pó amareloq eu se funde de 149 a 156 °C. LC-EM-DAD-ELSD: 502(-) = (M-H)(-); 504 (+)= (M+H) (+).

Isolam-se da mesma forma 29 mg de N-[5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-

15 metil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno[2,3c] pirazol-3-il]-3-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-benzamida sob a forma de um pó amarelo-pálido que se funde de 149 a 159 °C.

RMN 1H (400 MHz, (CD3)2SO d6, S en ppm): 2,43 (m étalé partieilement masque, 2H); 2,79 (s, 3H); 3,03 (m étalé, 2H); 3,17 (s, 3H); de 3,25 à 3,88 (m partieilement masque, 4H); 3,74 (s large, 2H); 6,82 (d, J = 9,0 Hz, 2H); 7,25 (d, J = 9S0 Hz, 2H); 7,54 (t, J = 8,0 Hz, 1H); 7,57 (d, J = 8,0 Hz, 1H); 8,01 (d partieilement masque, J = 8,0 Hz, 1H); 8,02 (s, 1H); 8,18 (s, 1H); 9,50 (m três étalé, 1H); 10,8 (s, 1H); 11,25 (s, 1H).

N-[5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-3-[3-(4-metil-piperazin-1 -ilmetil)-benzoil amino]-tieno[2,3c] pirazol-1 -carboxilato de terc-butila e N-20 [5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil)-3-[3-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)benzoil amino]-tieno[2,3c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila:

A uma solução de 0,20 g (0,52 mmol) de uma mistura de aproximadamente 70:30 de 3-amino-N-[5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-tieno[2,3c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila e de 3-amino-5-(N'-(4-cloro-5 fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil)-tieno[2,3c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila em 15 ml de tetrahidrofurano sob argônio, são acrescentados 143 mg (1,03 mmol) de carbonato de potássio e 261 mg (1,03 mmol) de cloreto dè 3-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-benzoíla; cloridrato. A mistura reacional é agitada a uma temperatura próxima de 25 °C, durante 16 horas, depois ao refluxo durante 3 horas. 261 mg (1,03 mmol) de cloreto de 3-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-benzoíla; cloridrato são acrescentados e a agitação é prosseguida ao refluxo durante 4 horas, depois a uma temperatura próxima de 25 °C, durante 16 horas. 143 mg (1,03 mmol) de carbonato de potássio são acrescentados e a agitação é prosseguida ao refluxo durante 4 horas, depois a uma

temperatura próxima de 25 °C, durante 16 horas. A mistura reacional é em seguida resfriada a uma temperatura próxima de 25 °C, depois derramada sobre água gelada. A mistura é extraída ao acetato de etila. As fases orgânicas são reunidas, secadas sobre sulfato de magnésio, filtradas, depois concentradas a seco sob vácuo (2 kPa) a uma temperatura próxima de 40 °C. O

resíduo é purificado por cromatografia sobre um cartucho de sílica-gel de 70 g (0,015-0,040 mm), purificando-se com misturas diclorometano / metanol (95/5, depois 99/1 em volumes) a uma vazão de 40 ml / min. As frações contendo o produto esperado são reunidas, depois concentradas a seco sobpressão reduzida (2 kPa) a uma temperatura próxima de 40 °C. São obtidos assim 0,07 g de uma mistura de aproximadamente 70:30 de N-[5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-3-[3-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-benzoil amino]-tieno[2,3c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila e N-[5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-5 metil-hidrazinocarbonil)-3-[3-(4-metil-piperazin-1 -ilmetil)benzoil amino]-tieno[2,3c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila sob a forma de um p[ó branco que é utilizado diretamente na etapa seguinte. LC-EM-DAD-ELSD: produto majoritário 604(+) = (M+H)(+); 602(-)= (M-H)(-).

A mistura de aproximadamente 70:30 de 3-amino-5-(N'-metil-N'-

fenil-hidrazinocarbonil]-tieno [2,3-c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila e de 3-amino-5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil]-tieno [2,3-c] pirazol-1 -carboxilato de terc-butila foi descrita no exemplo 11.0 cloreto de 3-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-benzoíla; cloridrato pode ser preparado segundo a patente WO 03066613 A1.

Exemplos 17a e 17b: preparo do N-[5-(N'-metil-N'-fenil-

hidrazinocarbonil)]-1 H-tieno[2,3c] pirazol-3-il]-4-piperidin-1-ilmetil-benzamida e do N-[5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil)]-1H-tieno[2,3c] pira-zol-3-il]-4-piperidin-1 -ilmetil-benzamida.

A uma solução de 200 mg (0,37 mmol) de uma mistura de apro-20 ximadamente 70:30 de 3-(4-cloro metil-benzoil amino)-5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-tieno [2,3-c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila e de 3-(4-cloro metil-benzoil amino)-5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil)-tieno [2,3-c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila em 6 ml de dimetilformamida sob argônio, são acrescentados 27 mg (74 ^imol) de iodeto de tetra butil a-25 mônio, depois 110 \i\ (1,11 mmol) de piperidina. A mistura reacional é agita-da a uma temperatura próxima de 25 °C, durante 16 horas, depois é derramada em gelo. Em seguida, é extraída 2 vezes com uma mistura de acetato de etila e de heptano. Os extratos orgânicos são reunidos, secados sobre sulfato de magnésio, depois concentrados a seco sob vácuo (2 kPa) a uma 5 temperatura próxima de 40 °C. O resíduo é dissolvido em 4 ml de metanol e a solução é introduzida em um tubo para forno de micro ondas. O tubo é bu-jonado e a mistura reacional é irradiada a uma temperatura próxima de 100 °C, durante 30 minutos. A mistura reacional é em seguida concentrada a seco sob vácuo (2 kPa) a uma temperatura próxima de 40 °C. O resíduo é puri-ficado por LC/EM preparatória (condições B). São obtidos assim 75 mg de N-[5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)]-1H-tieno[2,3c] pirazol-3-il]-4-piperidin-1-ilmetil-benzamida sob a forma de um pó amarelo que se funde de 170 a 182 °C. LC-EM-DAD-ELSD: 487(-) = (M-H)(-); 489(=)^(M=H)(+).

Isolam-se da mesma forma 5 mg de N-[5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'- metil-hidrazinocarbonil)]-1 H-tieno[2,3c] pirazol-3-il]-4-piperidin-1 -ilmetil-benzamida sob a forma de um pó amarelo-pálido. LC-EM-DAD-ELSD: 523(+)/...= (M+H)(+)/... (1 Cl).

A mistura de aproximadamente 70:30 de 3-(4-cloro metil-benzoil amino)-5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-tieno [2,3-c] pirazol-1- carboxilato de terc-butila e de 3-(4-cloro metil-benzoil amino)-5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil)-tieno [2,3-c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila foi descrita no exemplo 11.

Exemplos 18a e 18b: preparo do N-[5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno[2,3c] pirazol-3-il]-4-pirrolidin-1 -ilmetil-benzamida e do N-[5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil)-1H-tieno [2,3-c] pira-zol-3-il]-4-pirrolidin-1 -ilmetil-benzamida.A uma solução de 200 mg (0,37 mmol) de uma mistura de aproximadamente 70:30 de 3-(4-cloro metil-benzoil amino)-5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-tieno [2,3-c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila e de 3-(4-cloro metil-benzoil amino)-5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil)-5 tieno [2,3-c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila em 6 ml de dimetilformamida sob argônio, são acrescentados 27 mg (74 u.mol) de iodeto de tetra butil a-mônio, depois 93 |jJ (1,11 mmol) de pirrolidina. A mistura reacional é agitada a uma temperatura próxima de 25 °C durante 16 horas, depois é derramada em gelo. Em seguida, é extraída 2 vezes com uma mistura de 50/50 de ace-10 tato de etila e de heptano. Os extratos orgânicos são reunidos, secados sobre sulfato de magnésio, depois concentrados a seco sob vácuo (2 kPa) a uma temperatura próxima de 40 °C. O resíduo é dissolvido em 4 ml de metanol e a solução é introduzida em um tubo para forno de micro-ondas. O tubo é bujonado e a mistura reacional é irradiada a uma temperatura próxi-15 ma de 100 °C, durante 30 minutos. A mistura reacional é em seguida concentrada a seco sob vácuo (2 kPa) a uma temperatura próxima de 40 °C. O resíduo é purificado por LC/EM preparatória (condições B). São obtidos assim 25 mg de N-[5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)]-1H-tieno[2,3c] pira-zol-3-il]-4-pirrolidin-1-ilmetil-benzamida sob a forma de um pó amarelo que 20 se funde de 172 a 178 °C. LC-EM-DAD-ELSD: 475 (+) = (M+H) (+). Isolam-se da mesma forma 18 mg de N-[5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-4-pirrolidin-1-ilmetil-benzamida sob a forma de um pó amarelo que se funde de 170 a 179 °C. RMN 1H (400 MHz, (CD3)2SO d6f 5 en ppm): II s'agit du sei de la structure attendue avec i,87 (m, 2H); 2,05 (m, 2H); 3,13 (m, 2H); 3,18 (s, 3H); 3,40 (m, 2H); 4,45 (d, J - 4,5 Hz, 2H); 6,82 (d, J = 9,0 Hz, 2H); 7,25 (d, J = 9,0 Hz, 2H); 7,68 (d, J = 8,0 Hz, 2H); 8,16 (d, J = 8,0 Hz, 2H); 8,18 (s, 1H); 9,85 (m étalé, 1H); 10,85 (s, 1H); 11,35 (s large, 1H); 1.3,0 (m três étalé, 1H).

A mistura aproximadamente de 70:30 de 3-(4-cloro metil-benzoil amino)-5-(N'-metil)-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-tieno [2,3-c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila e de 3-(4-cloro metil-benzoil amino)-5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil)-tieno [2,3-c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila foi descrita no exemplo 11.

Exemplo 19: preparo do 4-azetidin-1-ilmetil-N-[5-( N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno[2,3c] pirazol-3-il]-benzamida

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ximadamente 70:30 de 3-(4-cloro metil-benzoil amino)-5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil )-tieno [2,3-c]pirazol-1-carboxilato de terc-butila e de 3-(4-cloro metil-benzoil amino)-5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil)-tieno [2,3-c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila em 6 ml de dimetilformamida sob argônio, são acrescentados 27 mg (74 jimol) de iodeto de tetra butil a-

mônio, depois 75 uJ (1,11 mmol) de azetidina. A mistura reacional é agitada a uma temperatura próxima de 25 °C, durante 16 horas, depois é derramada em gelo. Em seguida, é extraída 2 vezes com uma mistura de 50/50 de acetato de etila e de heptano. Os extratos orgânicos são reunidos, secados sobre sulfato de magnésio, depois concentrados a seco sob vácuo (2 kPa) a

uma temperatura próxima de 40 °C. O resíduo é dissolvido em 4 ml de metanol e a solução é introduzida em um tubo para forno de micro-ondas. O tubo é bujonado e a mistura reacional é irradiada a uma temperatura próxima de 100 °C, durante 30 minutos. A mistura reacional é em seguida concentrada a seco sob vácuo (2 kPa) a uma temperatura próxima de 40 °C. O

resíduo é purificado por LC/EM preparatória (condições B). São obtidos assim 3 mg de 4-azetidin-1-ilmetil-N-[5-( N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1H-tieno[2,3c] pirazol-3-il]-benzamida sob a forma de um pó amarelo que se funde de 155 a 160 °C. LC-EM-DAD-ELSD: 461 (+)=(M+H)(+).

amino)-5-(N'-metil)-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-tieno [2,3-c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila e de 3-(4-cloro metil-benzoil amino)-5-(N'-(4-cloro-

A uma solução de 200 mg (0,37 mmol) de uma mistura de apro-

A mistura de aproximadamente 70:30 de 3-(4-cloro metil-benzoilfenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil)-tieno [2,3-c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila foi descrita no exemplo 11.

Exemplos 20a e 20b: preparo do 4-{[(2-dimetil amino-etil)-metil-amino]-metil}-N-[5-( N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno[2,3c] pirazol-5 3-il]-benzamida e do N-{5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil)]-1H-tieno[2,3c] pirazol-3-il}-4-{[(2-dimetilamino-etil)-metil-amino]-metil}-benzamida.

A uma solução de 200 mg (0,37 mmol) de uma mistura de aproximadamente 70:30 de 3-(4-cloro metil-benzoil amino)-5-(N'-metil)-N'-fenil- hidrazinocarbonil)-tieno [2,3-c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila e de 3-(4-cloro metil-benzoil amino)-5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil)-tieno [2,3-c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila em 6 ml de dimetilformamida sob argônio, são acrescentados 27 mg (74 |a,mol) de iodeto de tetra butil a-mônio, depois 144 ul (1,11 mmol) de N,N,N'-trimetil etileno diamina. A mistu-ra reacional é agitada a uma temperatura próxima de 25 °C, durante 16 horas, depois é derramado no gelo. Em seguida é extraída 2 vezes com uma mistura 50/50 de acetato de etila e dé heptano. Os extratos orgânicos são reunidos, secados sobre sulfato de magnésio, depois concentrados a seco sob vácuo (2 kPa) a uma temperatura próxima de 40 °C. O resíduo é dissol-vido em 4 ml de metanol e a solução é introduzida em um tubo para forno de microondas. O tubo é bujonado e a mistura reacional é irradiada a uma temperatura próxima de 100 °C, durante 30 minutos. A mistura reacional é em seguida concentrada a seco sob vácuo (2 kPa) a uma temperatura próxima de 40 °C. O resíduo é purificado por LC/EM preparatória (condições B). Sãoobtidos assim 40 mg de 4-{[(2-dimetil amino-etil)-metil-amino]-metil}-N-[5-( N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno[2,3c] pirazol-3-il]-benzamida sob a forma de um pó amarelo. LC-EM-DAD-ELSD: 506(+) = (M+H)(+).

Isolam-se da mesma forma 26 mg de N-{5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-5 metil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno[2,3c] pirazol-3-il}-4-{[(2-dimetil amino-etil)-metil-amino]-metil}-benzamida sob a forma de uma resina incolor.

RMN 1H

(400 MHz, (CD3)2SO d6, ô en ppm): 2,44 (m étalé partiellement masque, 7H); 2,82 (s, 6H); 3,17 (s, 3H); 3,37 (m large, 2H); 6,82 (d, J = 9,0 Hz, 2H); 7,25 (d, J = 9,0 Hz, 2H); 7,60 (d large, J = 8,0 Hz, 2H); 8,12 (d, J = 8,0 Hz, 2H) ; 8,18 (s, 1H); 10,85 (s, 1H); 11,25 (s large, 1H); 13,0 (m três étalé, 1H).

A mistura de aproximadamente 70:30 de 3-(4-cloro metil-benzoil amino)-5-(N'-metil)-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-tieno [2,3-c] pirazol-1 -carboxilato de terc-butila e de 3-(4-cloro metil-benzoil amino)-5-(N'-(4-cloro-10 fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil)-tieno [2,3-c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila foi descrita no exemplo 11.

Exemplos 21a e 21b: preparo do N-[5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno[2,3c] pirazol-3-il]-4-per-hidro-1,4-oxazepin-4-ilmetil-benzamida e do N-{5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil)-1H-15 tieno[2,3c] pirazol-3-il]-4-perhidro-1,4-oxazepin-4-ilmetil-benzamida

A uma solução de 200 mg (0,37 mmol) de uma mistura de aproximadamente 70:30 de 3-(4-cloro metil-benzoil amino)-5-(N'-metil)-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-tieno [2,3-c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila e de 3-(4-cloro metil-benzoil amino)-5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil)-20 tieno [2,3-c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila em 6 ml de dimetilformamidasob argônio, são sucessivamente acrescentados 27 mg (74 nmol) de iodeto de tetra butil amônio, 153 mg (1,11 mmoi) de clridrato de homo morfolina e 153 mg (1,11 mmol) de carbonato de potássio. A mistura reacional é agitada a uma temperatura próxima de 25 °C durante 16 horas, depois é derramado 5 no gelo. Em seguida, é extraída 2 vezes com uma mistura 50/50 de acetato de etila e de heptano. Os extratos orgânicos são reunidos, secados sobre sulfato de magnésio, depois concentrados a seco sob vácuo (2 kPa) a uma temperatura próxima de 40 °C. O resíduo é dissolvido em 4 ml de metanol e a solução é introduzida em um tubo para forno de microondas. O tubo é bu-

jonado e a mistura reacional é irradiada a uma temperatura próxima de 40 °C. O resíduo é purificado por LC/EM preparatória (condições B). São obtidos assim 34 mg de N-[5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1H-tieno[2,3c] pirazol-3-il]-4-per-hidro-1,4-oxazepin-4-ilmetil-benzamida sob a forma de um pó amarelo que se funde de 174 a 179 °C. LC-EM-DAD-ELSD: 505(+) =

15 (M+H) (+). Isolam-se da mesma forma 38 mg de N-{5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno[2,3c] pirazol-3-il]-4-perhidro-1,4-oxazepin-4-ilmetil-benzamida sob a forma de um pó amarelo.

RMN 1H (400 MHz,

(CD3)2SO d6) ô en ppm): II s'agítdu sei de !a structure attendue avec 2,08 (m, 2H); de 3,13 à 4,07 (m, 8H); 3,18 (s, 3H); 4,50 (s large, 2H); 6,82 (d, J = 9,0 Hz, 2H) ; 7,25 (d, J = 9,0 Hz, 2H); 7,70 (d large, J = 8,0 Hz, 2H); 8,17 (d partiellement masque, J = 8,0 Hz, 2H); 8,18 (s, 1H); 9,75 (m étalé, 1H); 10,85 (s, 1H); 11,3 (s, 1H); 12,95 (m três étalé, 1H).

A mistura de aproximadamente 70:30 de 3-(4-cloro metil-benzoil amino)-5-(N'-metil)-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-tieno [2,3-c] pirazol-1 -20 carboxilato de terc-butila e de 3-(4-cloro metil-benzoil amino)-5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil)-tieno [2,3-c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila foi descrita no exemplo 11.

Exemplos 22a e 22b: preparo do N-[5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno[2,3c] pirazol-3-il]-3-morfolin-4-ilmetil-benzamida e 25 do N-{5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil)-1H-tieno[2,3c] pirazol-3-il]-3-morfolin-4-ilmetil-benzamidaO Q

o ó Uma solução de 257 mg (0,44 mmol) de uma mistura de aproximadamente 70:30 de 5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-3-(3-morfolin-4-ilmetil-benzoil amino)-tieno[2,3-c]pirazol-1-carboxilato de terc-butila e de 5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil)-3-(3-morfolin-4-ilmetil-benzoil 5 amino)-1 H-tieno[2,3c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila em 4 ml de metanol é introduzida em um tubo para forno de microondas. O tubo é bujonado e a mistura reacional é irradiada a uma temperatura próxima de 100 °C, durante 3 minutos. A mistura reacional é em seguida concentrada a seco sob vácuo (2 kPa) a uma temperatura próxima de 40 °C. O resíduo é purificado por 10 LC/EM preparatória (condições B). São obtidos assim 105 mg de N-[5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1H-tieno[2,3c] pirazol-3-il]-3-morfolin-4-ilmetil-benzamida sob a forma de um pó amarelo que se funde de 168 a 178 °C.

RMN1H (400 MHz, (CD3)2SO d6, 5 en ppm): observation du sei de la structure attendue avec un mélange 80 % - 20 % de conformères tel que: 3,16 (m large partiellement masque, 2H); 3,18 (s, 3H); 3,32 (m large, 2H); 3,63 (m large, 2H); 3,98 (m, 2H); 4,44 (s large, 2H); 6,77 (t, J = 7,5 Hz, 0,8H); 6,82 (d, J = 8,0 Hz, 1,6H); 6,94 (t, J = 8,0 Hz, 0,2H); 7,02 (d, J = 8,0 Hz, 0,4H); 7,22 (t, J = 8,0 Hz, 1,6H); 7,31 (d, J = 8,0 Hz, 0,4H); 7,66 (t, J = 8,0 Hz, 1H); 7,74 (d, J = 8,5 Hz, 1H); 8,15 (m, 3H); 9,70 (s, O^H); 10,0 (m étalé, 1H); 10,75 (s, 0.8H); 11,25 (s, 0,2H); 11,35 (s, 0.8H); 12,95 (m três étalé, 1H).

Isolam-se da mesma forma 34 mg de N-{5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-15 metil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno[2,3c]pirazol-3-il]-3-morfolin-4-ilmetil-benzamida sob a forma de um pó amarelo. RMN 1H(400 MHz, (CD3)2SO d6, ô em ppm): trata-se de um sal da estrutura esperada com 3,07 a 3,55 (m parcialmente oculto, 4H);

RMN 1H (400 MHz, (CD3)2SO d6, ô en ppm): II s'aglt d'un sei de Ia structuré attendue avec de 3,07 à 3,55 (m partiellement masque, 4H); 3,18 (s, 3H); 3,63 (t large, J = 12,5 Hz, 2H); 3,99 (d large, J = 12,5 Hz, 2H); 4,44 (s large, 2H); 6,82 (d, J = 9,0 Hz, 2H); 7,25 (d, J = 9,0 Hz, 2H); de 7,60 à 7,76 (m, 2H); 8,17 (m, 3H); 9,90 (m étaléi 1H); 10,8 (s, 1H); 11,3 (s large, 1H); 13,0 (m três étalé, 1H).

5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-3-(3-(4-metil-piperazin-1-5 ilmetil)-benzoil amino]-tieno[2,3-c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila e 5-(N'-(4-cloro-fenil)-N-metil-hidrazinocarbonil)-3-[3-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-benzoil amino]-tieno[2,3-c] pirazol-1 -carboxilato de terc-butila

A uma solução de 0,20 g (0,52 mmol) de uma mistura de aproximadamente 70:30 de 3-amino-5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-tieno[2,3-c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila e de 3-amino-5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil)-tieno[2,3-c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila em 15 ml de tetrahidrofurano sob argônio, são acrescentados 214 mg (1,55 mmol) de carbonato de potássio e 285 mg (1,03 mmol) de cloreto de 3-(morfolin-l-ilmetil)-benzoíla; cloridrato. A mistura reacional é agitada a uma temperatura próxima de 25 °C, durante 16 horas, depois é derramado sobre água gelada. A mistura é extraída ao acetato de etila. As fases orgânicas são reunidas, secadas sobre sulfato de magnésio, filtradas, depois concen-tradas a seco sob vácuo (2 kPa) a uma temperatura próxima de 40 °C- O resíduo é purificado por cromatografia sobre um cartucho de sílica-gel de 30 g (0,015-0,040 mm), purificando-se com diclorometano puro, depois com uma mistura diclorometano / metanol (90/10 em volumes). As frações contendo os produtos esperados são reunidas, depois concentradas a seco sob pressão reduzida (2 kPa) a uma temperatura próxima de 40 °C. São obtidos assim 257 mg de uma mistura aproximadamente de 70:30 de 5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-3-(3-morfolin-4-ilmetil-benzoil amino]-tieno[2,3-c] pi-razol-1-carboxilato de terc-butila e 5-(N'-(4-cloro-fenil)-N-metil-

hidrazinocarbonil)-3-[3-(4-metil-piperazin-1 -ilmetil)-benzoil amino]-tieno[2,3-c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila sob a forma de uma espuma amarela que é utilizada diretamente na etapa seguinte.

A mistura de aproximadamente 70:30 de 3-amino-5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil] tieno [2,3-c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila e de 3-

amino-5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil] tieno [2,3-c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila foi descrito no exemplo 11.0 cloreto de 3-(morfolin-1-ilmetil)-benzoíla; cloridrato pode ser preparado, segundo a patente WO 9008128 A1.

Exemplos 23a e 23b: preparo do 4-[(2-dietil amino-etil amino)-

metil]-N-[5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno[2,3c] pirazol-3-il]-benzamida e do N-{5-[N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil]-1H-tieno[2,3c] pirazol-3-il}-4-[(2-dietil amino-etil amino)-metil]-benzamida

<formula>formula see original document page 72</formula>

A uma solução de 200 mg (0,37 mmol) de uma mistura aproximadamente de 70:30 de 3-(4-cloro metil-benzoil amino)-5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-tieno[2,3-c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila e de 3-(4-cloro metil-benzoil arnino)-5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil)-tieno[2,3-c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila em 6 ml de dimetilformamida sob argônio, são sucessivamente acrescentados 27 mg (74 |imol) de iodeto 5 de tetra butil amônio, 156 uJ (1,11 mmol) de N,N-dietil etileno diamina e 153 mg (1,11 mmol) de carbonato de potássio. A mistura reacional é agitada a uma temperatura próxima de 25 °C durante 16 horas, depois é derramada em gelo. Em seguida, é extraída 2 vezes com uma mistura 50/50 de acetato de etila e de heptano. Os extratos orgânicos são reunidos, secados sobre sulfato de magnésio, depois concentrados a seco sob vácuo (2 kPa) a uma temperatura próxima de 40 °C. O resíduo é dissolvido em 4 ml de metanol e a solução é introduzida em um tubo para forno de microondas. O tubo é bu-jonado e a mistura reacional é irradiada a uma temperatura próxima de 100 °C, durante 30 minutos. A mistura reacional é em seguida concentrada a se- co sob vácuo (2 kPa) a uma temperatura próxima de 40 °C. O resíduo é purificado por LC/EM preparatória (condições B). As frações contendo os produtos esperados são reunidas, depois concentradas a seco sob pressão reduzida (2 kPa) a uma temperatura próxima de 40 °C. O resíduo é repurificado por cromatografia sobre um cartucho de sílica-gel de 4 g (0,035-0,060 mm),purificando-se com uma mistura diclorometano / metanol, depois com uma mistura de diclorometano e de metanol / amoníaco a 28 % (85/15 em volumes). As frações contendo os produtos esperados são reunidas, depois concentradas a seco sob pressão reduzida (2 kPa) a uma temperatura próxima de 40 °C. São obtidos assim 8 mg de 4-[(2-dietil amino-etil amino)-metil]-N-[5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno[2,3c] pirazol-3-il]-benzamida sob a forma de um pó amarelo-pálido que se funde de 143 a 150 °C. LC-EM-DAD-ELSD: 520 (+)/... = (M+H) (+)/... (1 Cl).

Isolam-se da mesma forma 10 mg de N-{5-[N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil]-1H-tieno[2,3c] pirazol-3-il}-4-[(2-dietil amino-etil ami- no)-metil]-benzamida sob a forma de um pó amarelo.RMN H (4Ó0

MHz, (CD3)2SO d6, ô en ppm): II s'agit du sei de Ia structure attendue avec 1,21 (t iarge, J = 7,0 Hz, 6H); 3,18 (s, 3H); 3,20 (m étalé partiellemènt masque, 6H); de 3,29 à 3,54 (m masque, 2H); 4,31 (m large, 2H); 6,82 (d, J = 9,0 Hz, 2H); 7,25 (d, J = 9,0 Hz, 2H); 7,64 (d large, J = 8,0 Hz, 2H); 8,16 (d, J = 8,0 Hz, 2H); 8,19 {s, 1H); 9,20 (m étalé, 2H); 10,85 (s, 1H); 11,3 (s large, 1H); 13,0 (m três étalé, 1H).

A mistura de aproximadamente 70: 30 de 3-(4-cloro metil-benzoil amino)-5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-tieno [2,2-c] pirazol-1 -carboxilato de terc-butila e de 3-(4-cloro metil-benzoil amino)-5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil)-tieno [2,3-c] pirazol-1-carboxilato de terc-5 butila foi descrita no exemplo 11.

Exemplo 24: preparo do 4-[(metil-fenil-amino)-metil]-N-[5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno[2,3c] pirazol-3-il] benzamida ximadamente 70:30 de 3-(4-cloro metil-benzoil amino)-5-(N'-metil-N'-fenil- hidrazinocarbonil )-tieno [2,3-c]pirazol-1 -carboxilato de terc-butila e de 3-(4-cloro metil-benzoil amino)-5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil)-tieno [2,3-c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila em 6 ml de dimetilformamida sob argônio, são sucessivamente acrescentados 27 mg (74 |j,mol) de iodeto de tetra butil amônio e 121 pJ (1,11 mmol) de N-metil anilina. A mistura rea- cional é agitada a uma temperatura próxima de 25 °C durante 15 dias, depois é derramada em gelo. A mistura é em seguida extraída 2 vezes com uma mistura 50/50 de acetato de etila e de heptano. Os extratos orgânicos são reunidos, lavados com salmoura saturada, secados sobre sulfato de A uma solução de 200 mg (0,37 mmol) de uma mistura de apro-magnésio, depois concentrados a seco sob vácuo (2 kPa) a uma temperatura próxima de 40 °C. O resíduo é dissolvido em 4 ml de metanol e a solução é introduzida em um tubo para forno de microondas. O tubo é bujonado e a mistura reacional é irradiada a uma temperatura próxima de 180 °C, durante 5 3 minutos. A mistura reacional é em seguida concentrada a seco sob vácuo (0,6 kPa) a uma temperatura próxima de 30 °C. O resíduo é purificado por cromatografia sobre um cartucho de sílica-gel de 25 g (0,015-0,040 mm), purificando-se com uma mistura diclorometano / metanol (9/1 em volumes, depois 98/2 e enfim 97/3) a uma vazão de 10 ml / min. As frações contendo o produto esperado são reunidas, depois concentradas a seco sob pressão reduzida (1,0 kPa) a uma temperatura próxima de 30 °C. O resíduo é retomado em 10 ml de éter diisopropílico, triturado, depois reconcentrado a seco. O sólido obtido é secado na estufa sob vácuo (0,01 kPa) a uma temperatura próxima de 60 °C. O tubo é bujonado e a mistura reacional é irradiada a

uma temperatura próxima de 100 °C, durante 30 minutos. A mistura reacional é em seguida concentrada a seco sob vácuo (0,6 kPa) a uma temperatura próxima de 30 °C. O resíduo é purificado por cromatografia sobre um cartucho de sílica-gel de 25 g (0,015-0,040 mm), purificando-se com uma mistura diclorometano puro, depois com uma mistura diclorometano / metanol /

amoníaco a 28 % (12 /3 / 0,5 em volumes) a uma vazão de 10 ml / min. As frações contendo o produto esperado são reunidas, depois concentradas a seco sob pressão reduzida (2 kPa) a uma temperatura próxima de 40 °C. O resíduo é purificado por LC/EM preparatório (condições B). São obtidos assim 11 mg de 4-[(metil-fenil-ámino)-metil]-N-[5-(N'-metil-N'-fenil-

hidrazinocarbonil)-1H-tieno[2,3c] pirazol-3-il] benzamida sob a forma de um pó bege que se funde a 242 °C. LC-EM-DAD-ELSD: 511(+) = (M+H) (+).

A mistura de aproximadamente 70:30 de 3-(4-cloro metil-benzoil amino)-5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-tieno [2,3-c]pirazol-1-carboxilato de terc-butila e de 3-(4-cloro metil-benzoil amino)-5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-

metil-hidrazinocarbonil)-tieno [2,3-c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila é descrito no exemplo 11.N° de palavras: 7567

Exemplo 25: Preparo de 4-[(diiso propil amino)-metil]-N-[5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno[2,3c] pirazol-3-il]-benzamida; trifluo-ro acetato

ximadamente 70:30 de 3-(4-cloro metil-benzoil amino)-5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-tieno [2,3-c] pirazol-1 carboxilato de terc-butija e de 3-(4-cloro metil-benzoil amino)-5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil)-tieno [2,3-c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila em 6 ml de dimetilformamida sob argônio, são acrescentados 27 mg (74 |imol) de iodeto de tetra butil a-mônio, seguidos de 156 ml (1,11 mmol) de diiso propil amina. A mistura rea-cional é agitada a uma temperatura próxima de 25 °C durante 9 dias, depois 220 ml (1,56 mmol) de disso propil amina são acrescentados e a mistura reacional é agitada a uma temperatura próxima de 25 °C, durante 6 dias. Em seguida, é derramada em gelo e extraída 2 vezes com uma mistura 50/50 de acetato de etila e de heptano. Os extratos orgânicos são reunidos, depois concentrados a seco sob vácuo (2 kPa) a uma temperatura próxima de 40 °C. O resíduo é dissolvido em 4 ml de metanol e a solução é introduzida em um tubo para forno de micro-ondas. O tubo é bujonado e a mistura reacional é irradiada a uma temperatura próxima de 100 °C, durante 30 minutos. A mistura reacional é em seguida concentrada a seco sob vácuo (2kPa) a uma temperatura próxima de 40 °C. O resíduo é purificado por LC/EM preparatória (condições B). São obtidos assim 10 mg de 4-[(diiso propil amino)-metil]-N-[5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1H-tieno[2,3c]pirazol-3-il]-benzamida; trifluoro acetato sob a forma de um pó bege que se funde de 170 a 182°C.o.

NH

A uma solução de 200 mg (0,37) mmol de uma mistura de apro-RMN 1H (400 MHz, (CD3)2SO d6, 5 en ppm): pour ce lot, tous ies signaux sont larges avec de 1,27 à 1,42 (m, 12H); 3,18 (s, 3H); 3,70 (m, 2H); 4,48 (s, 2H); de 6,71 à 6,88 (m, 3H); 7,22 (t, J - 8,0 Hz, 2H); 7,70 (m, 2H); 8,17 (m, 3H); 8,55 (s, 1H); 10,75 (s, 1H); 11,3 (s, 1H); 13,05 (s,1H).

A mistura reacional de aproximadamente 70:30 de 3-(4-cloro metil-benzoil amino)-5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-tieno [2,3-c] pira-zol-1 carboxilato de terc-butila e de 3-(4-cloro metil-benzoil amino)-5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil)-tieno [2,3-c] pirazol-1-carboxilato de terc-butila foi descrita no exemplo 11.Exemplo 26: Preparo de N-[5-(N'-benzil-hidrazinocarbonil)-1H-tieno[2,3c] pirazol-3-il]-4 metóxi-benzamida

<formula>formula see original document page 77</formula>

A N-[5-(N'-benzil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno[2,3c] pirazol-3-il]-4 metóxi-benzamida é preparado, de acordo com o exemplo 1. Rendimento = 10 3%.

RMN 1H (400 MHz, (CD3)2SO d6, S en ppm): 3,85 (s, 3H); 3,98 (s, 2H); 7,06 (d, J = 8,5 Hz, 2H); 7,26 (t, J = 7,5 Hz, 1H); 7,33 (t, J = 7,5 Hz, 2H); 7,38 (d, J = 7,5 Hz, 2H); 7,94 (s large, 1H) ; 8,05 (d, J = 8,5 Hz, 2H); 10,15 (s, 1H); 10,95 (m étalé, 1H); 12,85 (m três étalé, 1H).

Exemplo 27. Preparo de 4-Metóxi-N-[5-(N'-piridin-2-il-

hidrazinocarbonil)-1 H-tieno[2,3c] pirazol-3-il]-4 metóxi-benzamida<formula>formula see original document page 77</formula>Le ^méthoxy-N-íõ-ÍN-pyridin^-yl-hydrazinocarbonylí-l H-thiéno[2,3-

c]pyrazol-3-yl3-benzamide est prepare suivant 1'exemple 1. Rdt = 56%. SM: IEm/z=408 M+. m/z=300 (M-C5H6N3)+ m/z=135 C8H702+ pie de base. RMN 1H (400 MHz, (CD3)2SO de, 5 en ppm): 3,85 (s, 3H); 6,63 (d, J = 8,5 Hz, 1H); 6,71 (m, -1H); 7,07 (d large, J = 8,5 Hz, 2H); 7,54 (m, 1H); de 8,03 à 8,12 (m, 3H) ; 8,20 (s, 1H) ; 8,44 (s, 1H); 10,5 (s,

Exemplo 28: preparo de N-{5-[N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil]-1 H-tieno[2,3c] pirazol-3-il}-4-(4-metil-piperazin-1 -il)-

benzamida

/

Em um balão de 20 ml sec sob argônio, é introduzido o 1-(1-5 etóxi-etil)-4-[4-(4-metil piperazin-1 -il)-benzoil amino]-1 H-tieno [2,3-c]pirazol-5-carboxilato de etila (0,5 g, 1,03 mmol, 1 eq.) e tolueno (5 ml). A suspensão é agitada a uma temperatura próxima de 0 °C, depois uma solução de trimetil alumínio (1,54 ml , 3 eq.) é adicionada gota a gota para evitar elevações de temperaturas. Uma vez a adição concluída, deixa-se agitar durante 30 minu-tos a uma temperatura próxima de 25 °C, depois se adiciona uma solução de N-(4-cloro-fenil)-N-metil-hidrazina (0,480 g, 3,09 mmol, 3 eq.). A mistura rea-cional é, então, aquecida a uma temperatura próxima de 50 °C, até o desaparecimento total do produto de partida. Após 2h30, deixa-se voltar a uma temperatura próxima de 25 °C, depois se dilui a mistura reacional com o ace- tato de etila. são acrescentados aí algumas gotas de fosfato mono potássico até o fim do desprendimento gasoso, depois se deixa agitar durante 1 hora. Então, se evapora o solvente, depois o resíduo é dissolvido em uma mistura de diclorometano e de metanol. Coloca-se essa solução diretamente sobre sílica-gel para purificação por cromatografia, purificando-se na partida comuma mistura metanol / diclorometano (10/90 em volumes). Intermediária etoxi etila: LC / EM TA = 3.41 min; M+H+ 596.1, M-H-594.2. Após evaporação, o sólido obtido é colocado diretamente em 5 ml de tetrahidrofurano e 2 ml de ácido clorídrico 5N a uma temperatura próxima de 50 °C. Obtém-se 5 assim

-{5-[N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil]-1H-tieno[2,3c] pirazol-3-il}-4-(4-metil-piperazin-1-il)-benzamida (119 mg, 22 % para as duas etapas). EM: ES m/z = 524

MH+ pico de base.

RMN 1H (400 MHz, (CD3)2SO d6, ô en ppm): 2,23 (s, 3H); 2,44 (m, 4H); 3,17 (s, 3H); de 3,25 à 3,33 (m partiellement masque, 4H); 6,82 (d, J = 9,0 Hz, 2H); 7,00 (d large, J = 9,0 Hz, 2H); 7,24 (d. J = 9,0 Hz, 2H); 7,97 (d large, J = 9,0 Hz, 2H); 8,16 (s, 1H); 10,8 (s, 1H); 10,9 (m étalé, 1H); 12,9(métalé, 1H).1-(1-etóxi-etil)-3-[4-(4-metil-piperazin-1-il)-benzoil amino]-1H-

tieno [2,3-c]pirazol-5-carboxilato de etila:

Em um balão de 500 ml sob argônio é colocado o 3-bromo-1-(1-etóxi-etil)-1H-tieno [2,3-c]pirazol-5-carboxilato de etila (10,9 g, 31 mmol), o 4-(4-metil-piperazin-1-il)-benzamida (9g, 41 mmol, 1,3 eq.), iodeto de cobre (I)0,601 g, 3,1 mmol, 0,1 eq), fosfato triptássico (20,1 g, 94 mmol, 3 eq.) previamente pulverizado, e 70 ml de dioxano anidro previamente desgaseificado ao argônio. A essa suspensão é acrescentada na seringa a N,N'-dimetil eti-leno diamina (0,336 ml, 3,16 mmol, 0,1 eq.). A mistura reacional ;e então aquecida a uma temperatura próxima de 110 °C para um período de 24 ho-ras. Então, o dioxano é evaporado sob vácuo e o resíduo é diluído com o acetato de etila (300 jllI) e 150 ml de água. A fase orgânica é lavada com 100ml de água, secada sobre sulfato de magnésio, depois concentrada a seco sob pressão reduzida. O resíduo é purificado por cromatografia sobre sílica-gel com, como purificador de partida, uma mistura diclorometano / metanol (90 / 10 em volumes). Obtém-se assim o 1-(1-etóxi-etil)-3-[4-(4-metil-5 piperazin-1-il)-benzoil amino]-1H-tieno [2,3-c]pirazol-5-carboxilato de etila (4,05 g, 27 %) sob a forma de um óleo amarelo-pálido que é utilizado diretamente na etapa seguinte.

O 3-bromo-1-(1-etóxi-etil)-1H-tieno [2,3-c]pirazol-5-carboxilato de etila foi descrito no exemplo 1.

N-(4-cloro-fenil)-N-metil-hidrazina

Coloca-se N'-benzidrilideno-N-(4-cloro-fenil)-N-metil-hidrazina (1,5 g, 4,68 mmol) em 20 ml de tetrahidrofurano sob agitação. São aí acrescentados 5 ml de ácido clorídrico 5N, depois se deixa agitar a solução a uma temperatura próxima de 50 °C, durante 16 horas. Então, se neutraliza a fase

aquosa com soda 5N, depois se extrai com o acetato de etila. O óleo obtido após extração é purificado por cromatografia sobre sílica-gel com, como purificador de partida, uma mistura acetato de etila / heptano (10/90 em volumes). Obtém-se assim a N-(4-cloro-fenil)-N-metil-hidrazina sob a forma de óleo amarelo-pálido, 0,53 g (72 %). (Rf = 0,48, AcOEt/ heptano 20 / 80 (v/v)).

N'-benzidrilideno-N-(4-cloro-fenil)-N-metil-hidrazina

Em um balão de 20 ml previamente secado sob argônio, intro-duz-se N'-benzidrilideno-N-(4-cloro-fenil)-hidrazina (0,2 g, 0,65 mmol, 1 eq) e 3,2 ml de tetrahidrofurano. A solução é resfriada a uma temperatura próxima de-10 °C, depois se acrescenta uma solução 0,5 M de hexa metil bissilil a-

mideto de potássio (1,43 ml, 1,1 eq). A solução se escurece, deixa-se agitar a essa temperatura durante 30 minutos, depois se adiciona uma solução de iodeto de metila no metil terc-butil éter (0,49 ml, 1,5 eq). Deixa-se então a mistura voltar a uma temperatura próxima de 25 °C e deixa-se agitar durante 4 horas. Após tratamento com hidrogeno carbonato de sódio, extrai-se com

acetato de etila. Os extratos orgânicos são reunidos, secados sobre sulfato de magnésio, depois concentrados a seco sob vácuo. O óleo residual é purificado por cromatografia sobre sílica-gel com, como purificador, uma misturaacetato de etila / heptano (/90 em volumes). Obtém-se N'-benzidrilideno-N-(4-cloro-fenil)-N-metil-hidrazina com um rendimento de 96 % sob a forma de um sólido amarelo que é utilizado diretamente na etapa seguinte. N-benzidrilideno-N'-(4-cloro-fenil)-N-metil-hidrazina 5 Em um balão de 500 ml, colocam-se 260 ml de 2-metil-2-butanol

que se desgaseifica ao argônio, durante 30 minutos. Uma vez a desgaseifi-cação concluída, colocam-se em um balão anexado seco sob argônio 60 ml de 2-metil-2-butanol, diacetato de paládio (II) (0,857 g, 1,27 mmo, 0,025 eq) e o ligante MePHOS (0,928g, 2,55 mmo, 0,05 eq.). Deixa-se agitar durante 30 minutos a uma temperatura próxima de 25 °C. Por outro lado, no balão de 500 ml, acrescenta-se 1,4-dicloro benzeno (7,49 g, 1 eq) e soda em pó (2,85 g, 1,4 eq). O catalisador é então transferido para o balão de 500 ml que se aquece a uma temperatura próxima de 100 °C. Acaba-se por aí acrescentar benzidrilideno-hidrazina (10 g, 50,9 mmol, 1 eq). Deixa-se agitar a suspen- são resultante que troca de cor rapidamente (vermelho escuro) até desaparecimento total do halogeneto. Então, evapora-se o solvente a seco, depois se retoma o resíduo com diclorometano. O sólido é filtrado sobre Célite ®, depois lavado abundantemente com diclorometano. A fase orgânica é lavada com uma solução saturada de cloreto de amônio, secada sobre sulfato de magnésio, depois concentrada a seco sob vácuo. O resíduo é purificado por cromatografia sobre uma coluna de sílica-gel com, como purificador de partida, uma mistura acetato de etila / heptano (10/90 em volumes). Obtém-se assim N'-benzidrilideno-N-(4-cloro-fenil)-hidrazina (85 %) sob a forma de um sólido amarelo (Rf = 0,35, AcOEt / heptano 25 / 75 (v/v)).4-(4-metil-piperazin-1-il)-benzamida

Em um balão de 250 ml, introduz-se 4-fluoro benzo nitrila (12g, 99 mmol, 1 eq) e 100 ml de DMF. A essa solução acrescenta-se N-metil pi-perazina (16 ml, 1,6 eq, 123 mmol). A solução laranja é aquecida a uam temperatura próxima de 90 grupamento durante 15 horas. Então, evapora-se o solvente a seco, depois se dilui o resíduo com 500 ml de éter dietílico. A solução é lavada com um solução de hidrogeno carbonato de sódio (2 x 100 ml), depois por uma solução saturada de cloreto de sódio (100 ml). Apósevaporação, o 4-(4-metil-piperazin-1-il)-benzonitrila (sólido laranja, 10 g, 77 %) é utilizado sem outra purificação na etapa seguinte de hidrólise. Ele é acrescentado a uma temperatura próxima de 0 °C sobre uma solução de ácido sulfúrico a 98 % (25 ml) e 5 ml de água. Aquece-se então a solução púrpura a uma temperatura próxima de 100 °C, durante 8 horas. A solução é resfriada, depois hidrolisada, derramando-a sobre gelo. O pH é reajustado a 9-10 com a soda em pastilhas. O precipitado obtido é filtrado e lavado abundantemente com água, depois com tetrahidrofurano que se solubiliza parcialmente o produto. Decanta-se a água. Após evaporação a seco da fase orgânica, obtém-se um sólido que é purificado por cromatografia sobre sílica-gel como, como purificador, uma mistura metano / diclorometano (15/85 em volumes). Obtém-se assim 4-(4-metil-piperazin-1-il)-benzamida (8,7 g, 80 %) sob a forma de um sólido branco que é utilizado diretamente na etapa seguinte.

Exemplo 29: preparo de N-(2-metoxi metil-pirrolidin-1 -il)-3-[4-(4-metil-piperazin-1-il)-benzoil amino]-1 H-tieno [2,3-c] pirazol-5-carboxamida

<formula>formula see original document page 82</formula>

O N-(2-metoxi metil-pirrolidin-1 -il)-3-[4-(4-metil-piperazin-1 -il)-benzoil amino]-1 H-tieno [2,3-c] pirazol-5-carboxamida é preparado conforme o exemplo 28. LC/EM intermediário etoxi etila TA = 2.62 min., M+H+ 571.1, M-H-568.1; Produto final : rendimento = 33 %. EM: ES m/z = 498 MH+ pico de base.RMN 1H (400 MHz, (CD3)2SO d6l ô en ppm): 1,58 (m, 1H); de 1,70 à 1,87 (m, 2H); 2,00 (m, 1H); 2,25 (s, 3H); 2,48 (m partiellement masque, 4H) ; 2,86 (m large, 1H); de 2,98 à 3,36 (m étalé, 3H); 3,21 (s, 3H); 3,32 (m, 4H) ; 3,46 (m, 1H); 6,98 (d, J = 9,0 Hz, 2H) ; 7,96 (d, J = 9,0 Hz, 2H); 8,05 <s large 1H).

Exemplo 30: preparo d<formula>formula see original document page 83</formula> a N-[5-(N'-benzil-N'-metil-hidrazinocarbonil))-1 H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-4-(4-metil-piperazin-1-il)-benzamida razol-3-il]-4-(4-metil-piperazin-1-il)-benzamida é preparada conforme o e-xemplo 28. LC/EM intermediário etoxi etila TA = 3.19 min., M+H+ 576.1, M-H-574.2. Produto final: Rendimento = 16 %. EM: ES m/z = 504 MH+ pico de base. RMN 1H(400 MHz, (CD3)2SO d6, 5 em ppm): os sinais do espectro são amplos com uma mistura de rotâmeros 60 %-40 %; RMN 1H(400 MHz, (CD3)2SO d6, 5 en ppm): les signaux du spectre sont larges avec un mélange de rotamères 60 % - 40 %: 2,36 (s, 3H); de 2,54 à 2,72 (m, 7H); 3,36 (m partiellement masque, 4H); 3,89 (s, 1,2H); 3,98 (s, 0,8H); 7,02 (d, J = 8,5 Hz, 2H); de 7,16 à 7,45 (m, 5H); 7,89 (s, 0,6H); 7,99 (d, J = 8,5 Hz, 2H); 8,08 (s, 0,4H); 8,85 (s, 0,4H); 9,58 (s, 0,6 H); 9,70 (m étalé, 0,4H); 10,7 (m étalé, 0.6H); 12,65 (m étalé, 0,4H); 12,85 (m étalé, 0.6H).

Exemplo 31: preparo de N-(piperidin-1-il)-3-[4-(4-metil-piperazin-1-il)-benzoil amino]-1 H-tieno {2,3-c]pirazol-5-carboxamida A N-[5-(N'-benzil-N'-metil-hidrazinocarbonil))-1 H-tieno [2,3-c] pi-

<formula>formula see original document page 83</formula>Prepara-se N-(piperidin-1 -il)-3-[4-(4-metil-piperazin-1 -il)-benzoil amino]-1H-tieno {2,3-c]pirazol-5-carboxamida conforme o exemplo 28. LC/EM intermediário etoxi etila TA = 2.97 min., M+H+ 540.4, M-H-538.2. Produto final. Rendimento = 38 %.

RMN 1H (400 MHz, (CD3)2SO d6, ô en ppm): 1,55 (m large, 2H); 1,88 (m large, 4H); 2,87 (s, 3H); de 3,05 à 3,21 (m, 4H); de 3,43 à 3,59 (m, 6H); de 4,02 à 4,10 (m, 2H); 7,10 (d, J = 9,0 Hz, 2H); 8,04 (d, J = 9,0 Hz, 2H); 8,27 (s,1H).

Exemplo 32: preparo de N-[5-(N'-benzil-hidrazinocarbonil)-1H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-4-(4-metil-piperazin-1-il)-benzamida.

<formula>formula see original document page 84</formula>Prepara-se N-[5-(N'-benzil-hidrazinocarbonil)-1H-tíeno [2,3-c] pirazol-3-il]-4-(4-metil-piperazin-1-il)-benzamida conforme o exemplo 28. LC/EM intermediário etoxi etila TA = 3.10, MH+ 562.3, MH-560.2. Produto final: rendimento = 13 %. SM: ES m/z = 490 MH+ pico de base.

RMN 1H (400 MHz,

(CD3)2SO d6, 5 en ppm): 2,23 (s, 3H); 2,44 (m, 4H); 3,30 (m partiellement masque, 4H); 3,97 (d, J = 5,0 Hz, 2H); 5,37 (m, 1H); 7,00 (d, J = 9,0 Hz,

2H); 7,25 (t, J = 7,5 Hz, 1H); 7,33 (t, J = 7,5 Hz, 2H); 7,38 (d, J = 7,5 Hz, 2H); de 7,92 à 7,98 (m, 3H); 10,1 (d, J = 5,0 Hz, 1H); 10,8 (m três étalé, 1H); 12,9 (m três étalé, 1H).

Exemplo 33. Preparo de N-[5-(N'-etil-N'-hidrazinocarbonil)-1H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-4-(4-metil-piperazin-1-il)-benzamida.<formula>formula see original document page 84</formula>Prepara-se N-[5-(N'-etil-N'-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-4-(4-metil-piperazin-1-il)-benzamida, conforme o exemplo 28. LC/EM intermediário etoxi etila: Rt = 3.25 min. M+H+ 576.3, M-H-574.1. Produto final. Rendimento = 28 %. SM: ES m/z = 504 MH+ pico de base.

(400 MHz, (CD3)2SO d6l 6 en ppm): 1,18 (t, J = 7,0 Hz, 3H); 2,21 (s, 3H); 2,43 (m, 4H); 3,31 (m partiellement masque, 4H); 3,53 (q, J = 7,0 Hz, 2H); 6,74 (t, J = 7,5 Hz, 1H); 6,82 (d, J = 7,5 Hz, 2H); 7,01 (d large, J = 8,5 Hz, 2H); 7,21 (t, J = 7,5 Hz, 2H); 7,98 (d large, J = 8,5 Hz, 2H); 8,22 (s, 1H); 10, 55 (s, 1H); 10,85 (m étalé, 1H); 12,9 (m étalé, 1H).

Exemplo 34: preparo de N-[5-(N'-benzil-N'-fenil hidrazinocarbo-

nil)-1 H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-4-(4-metil-piperazin-1 -il)-benzamida.

[2,3-c] pirazol-3-il]-4-(4-metil-piperazin-1-il)-benzamida, conforme o exemplo 28. LC/EM intermediário etoxi etilado: TA = 3.68 min, M+H+ 638.5. Produto 10 final: Rendimento = 8 %. SM: ES m/z = 566 MH+ pico de base. RMN 1H (400 MHz, (CD3)2 SO d6 ô em ppm): todos os sinais do espectro são amplos com 2,32

(CD3)2SO d6, Ô en ppm): tous les signaux du spectre sont larges avec2,32 (s, 3H); 2,59 (m, 4H); 3,35 (m partiellement masque, 4H); 4,75 (s, 2H); 6,75 (t, J= 7,5 Hz, 1H); 6,81 (d, J = 8,5 Hz, 2H); 7,02 (d, J = 8,5 Hz, 2H); de 7,11 à 7,38 (m, 5H); 7,49 (d, J = 8,5 Hz, 2H); 7,98 (d, J = 8,5 Hz, 2H); 8,17 (s, 1H); 10,8 (s, 1H); 10,9 (m étalé, 1H); 12,95 (m étalé, 1H).

Exemplo 35: preparo de N-[5-(N'-metil-N'-fenil hidrazinocarbonil)-1 H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-4-(4-metil-piperazin-1 -il)-benzamida.

RMN 1H

/

Prepara-se N-[5-(N'-benzil-N'-fenil hidrazinocarbonil)-1 H-tieno

RMN H (400 MHz,Prepara-se N-[5-(N'-metil-N'-fenil hidrazinocarbonil)-1H-tieno

[2,3-c] pirazol-3-il]-4-(4-metil-piperazin-1-il)-benzamida conforme o exemplo 28. LC/EM intermediário etoxi etila: TA = 2.74 min, M+H+ 561.0. Produto final: rendimento = 22 %.

(CD3)2SO d6, S en ppm): tous les signaux du spectre sont larges avec2,32 (s, 3H); 2,59 (m, 4H); 3,35 (m partiellement masque, 4H); 4,75 (s, 2H); 6,75 (t, J= 7,5 Hz, 1H); 6,81 (d, J = 8,5 Hz, 2H); 7,02 (d, J = 8,5 Hz, 2H); de 7,11 à 7,38 (m, 5H); 7,49 (d, J = 8,5 Hz, 2H); 7,98 (d, J = 8,5 Hz, 2H); 8,17 (s, 1H); 10,8 (s, 1H); 10,9 (m étalé, 1H); 12,95 (m étalé, 1H).

Exemplo 36: preparo de N-{5-[N'-(4-cloro-fenil-N'-ciclo butil metil hidrazinocarbonil]-1 H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il}-4-(4-metil-piperazin-1-il)-benzamida

<formula>formula see original document page 86</formula>

Prepara-se N-{5-[N'-(4-cloro-fenil-N'-ciclo butil metil hidrazino-carbonil]-1 H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il}-4-(4-metil-piperazin-1 -il)-benzamidaconforme o exemplo 28. LC/EM intermediário: etoxi etila RMN 1H (400 MHz, (CD3)2SO d6, 5 en ppm): De 1,71 à 1,88 (m, 3H); 2,03 (m, 1H); 2,63 (m, 1H); 2,85 (s, 3H); 3,14 (m large, 4H); de 3,47 à 3,56 (m partiellemeiit masque , 2H); 3,51 (d, J = 7,0 Hz, 2H); 4,07 (m large, 2H); 6,83 (d, J = 9,0 Hz, 2H); 7,11 (d, J = 9,0 Hz, 2H); 7,22 (d; J = 9,0 Hz, 2H); 8,04 (d, J = 9,0 Hz, 2H); 8,20 (s, 1H); 10,05 (m étalé, 1H); 10,6 (s, 1H); 10,95 (m étalé, 1H); 12,9 (m étalé, 1H).

N-(4-cloro-fenil)-N-ciclo butil metil-hidrazina Prepara-se N-(4-cloro-fenil)-N-ciclo butil metil-hidrazina conforme no exemplo 28.

Rendimento (2 etapas), 0,65 g (63 %(. Rf = 0,43, (AcOEt / hep-

tano 30/70 (v/v)).

N'-benzidrilideno-N-(4-cloro-fenil)-N-ciclo butil metil-hidrazina: Rf = 0,77, (AcOEt / heptano 30/70 (v/v)) (desproteção imediata). A N-benzidrilideno-N'-(4-cloro-fenil)-hidrazina foi descrita no exemplo 28. 10 Exemplo 37: Preparo de N-{5-[N'-etil-N'-(4-fluoro-fenil)-

hidrazinocarbonil]-1 H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il}-4-(4-metil-piperazin-1 -il)-benzamida

RMN 1H (400 MHz, (CD3)2SO de. 5 en ppm): De 1,71 à 1,88 (m, 3H); 2,03 (m, 1H); 2,63 (m, 1H); 2,85 (s, 3H); 3,14 (m large, 4H); de 3,47 à 3,56 (m partiellemerit masque , 2H); 3,51 (d, J = 7,0 Hz, 2H); 4,07 (m large, 2H); 6,83 (d, J = 9,0 Hz, 2H); 7,11 (d, J = 9,0 Hz, 2H); 7,22 (d, J = 9,0 Hz, 2H); 8,04 (d, J = 9,0 Hz, 2H); 8,20 (s, 1H); 10,05 (m étalé, 1H); 10,6 (s, 1H); 10,95 (m étalé, 1H); 12,9 (m étalé, 1H).

Prepara-se N-{5-[N'-etil-N'-(4-fluoro-fenil)-hidrazinocarbonil]-1 H-

tieno [2,3-c] pirazol-3-il}-4-(4-metil-piperazin-1-il)-benzamida conforme o e-

xemplo 28. LC/EM intermediário: etoxi etila

RMN 1H (400 MHz, (CD3)2SO d6, 5 en ppm): observation d'un mélange de rotamères 80 %- 20 %: 1,16 (t, J = 7,0 Hz, 2-.4H); 1,31 (t, J = 7,0 Hz, 0,6H); 2,87 (s, 3H); de 3,02 à 3,20 (m, 4H); de 3,35 à 3,59 (m partiellement masque, 2H); 3,50 (q partiellement masque, J = 7,0 Hz, 1,6H); 4,08 (m, 2H); 4,30 (q, J = 7,0 Hz, 0,4H); 6,83 (dd, J = 4,5 et 9,0 Hz, 1,6H); de 7,00 à 7,17 (m, 4.4H); 8,03 (d, J = 9,0 Hz, 2H); 8,17 (s, 0,2H); 8,21 (s, 0.8H); 9,67 (s, 0,2H); 9,77 (m étalé, 1H); 10,55 (s, 0.8H); 10,95 (m, 1H); 12,9 (m três étalé, 1H).N-etil-N-(4-fluoro-fenil)-hidrazina

Prepara-se N-etil-N-(4-fluoro-fenil)-hidrazina conforme no exemplo 28 . Óleo amarelo-pálido, 0,32 g (30 %).

N-benzidrilideno-N-etil-N-(4-fluoro-fenil)-hidrazina: 5 Prepara-se N-benzidrilideno-N-etil-N-(4-fluoro-fenil)-hidrazina

conforme no exemplo 28.

Sólido laranja, 1,9 g (86 %), Rf = 0,64 (AcOEt/ heptano 20/80

(v/v)).

N-benzidrilideno-N'-(4-flúor-fenil)-hidrazina: 10 Prepara-se N-benzidrilideno-N'-(4-flúor-fenil)-hidrazina conforme

no exemplo 28.

Sólido amarelo, rendimento 54 % (Rf = 0,33, AcOEt/ heptano 10/90 (v/v)), LC/EM MH + 291.1, MH-289.2.

Exemplo 38: Preparo de N-{5-[N'-(4-fluoro-fenil)-N'-(2-metóxi-15 etil)-hidrazinocarbonil]-1H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il}-4-(4-metil-piperazin-1-il)-benzamida

Prepara-se N-{5-[N'-(4-fluoro-fenil)-N'-(2-metóxi-etil)-hidrazinocarbonil]-1 H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il}-4-(4-metil-piperazin-1-il)-benzamida conforme exemplo 28. Rendimento = 45 %.

RMN 1H (400 MHz, (CD3)2SO d6, Ô en ppm): 2,23 (s, 3H); 2,44 (m, 4H); 3,27 (s, 3H); de 3,28 à 3,31 (m, 4H); 3,58 (m, 2H); 3,64 (m, 2H); 6,83 (dd, J = 4,5 et 9,0 Hz, 2H); de 6,98 à 7,06 (m, 4H); 7,98 (d, J = 8,5 Hz, 2H); 8,21 (s iarge, 1H); 10,7 (s, 1H); 10,9 (m étalé, 1H); 12,9 (m étalé, 1H). N-(4-fluoro-fenil)-N-(2-metóxi-etil)-hidrazina

Prepara-se N-(4-fluoro-fenil)-N-(2-metóxi-etil)-hidrazina conforme o exemplo 28.0,57 g (60 %) . Rf = 0,10 (AcOEt/ heptano 20 /80 (v/v)), LC/EM TA = 4.18, MH 183.3.

N'-benzidrilideno-N-(4-fluoro-fenil)-N-(2-metóxi-etil)-hidrazina:

Prepara-se N'-benzidrilideno-N-(4-fluoro-fenil)-N-(2-metóxi-etil)-hidrazina conforme exemplo 28.

1,2 g (66 %). Rf = 0,26 (AcOEt/ heptano 10/90 (v/v)). Preparo de N'-benzidrilideno-N-(4-fluoro-fenil)-N-(2-metóxi-etil)-hidrazina conforme descrito no exemplo 37.

Exemplo 39: Preparo de N-[5-[N'-etil-N'-o-tolil-hidrazinocarbonil]-1 H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-4-(4-metil-piperazin-1 -il)-benzamida

<formula>formula see original document page 89</formula>

Prepara-se N-[5-[N'-etil-N'-o-tolil-hidrazinocarbonil]-1 H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-4-(4-metil-piperazin-1-il)-benzamida conforme exemplo 28. Rendimento-14 %; EM: ES m/z = 518 MH+ pico de base.

(CD3)2SO d6, ô en ppm): 1,15 (t, J = 7,0 Hz, 3H); 2,23 (s, 3H); 2,29 (s, 3H); 2,44 (m, 4H); de 3,23 à 3,33 (m partiellement masque, 6H); 6,96 (t, J = 7,5 Hz, 1H); 7,00 (d, J = 9,0 Hz, 2H); de 7,12 à 7,17 (m, 2H); 7,29 (d, J = 8,0 Hz, 1H); 7,98 (d, J = 8,5 Hz, 2H); 8,12 (s, 1H); 10,2 (s, 1H); 11,0 (m étalé, 1H); 12,9 (m três étalé, 1H).

Exemplo 40: Preparo de N-[5-(N'-etil-N'-m-tolil-

hidrazinocarbonil)-1 H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-4-(4-metil-piperazin-1 -il)-benzamida

<formula>formula see original document page 89</formula>

Prepara-se N-[5-(N'-etil-N'-m-tolil-hidrazinocarbonil)-1H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-4-(4-metil-piperazin-1-il)-benzamida conforme exemplo 28. Rendimento = 18 %. EM: ES m/z = 518 MH+ pico de base. (CD3)2SO d6, 5 en ppm): observation d'un mélange de rotamères 80 % -20%: 1,16 (t, J = 7,0 Hz, 3H); 2,22 (s, 3H); 2,24 (s, 2,4H); 2,28 (s, 0,6H); 2,44 (m, 4H); de 3,25 à 3,35 (m masque, 4H); 3,52 <q, J = 7,0 Hz, 2H); 6,57 (d, J = 7,5 Hz, 0,8H); de 6,59 à 6,66 (m, 1,6H); 6,73 (d, J = 7,5 Hz, 0,2H); de 6,81 à 6,87 (m, 0,4H); 7,00 (d, J = 9,0 Hz, 2H); 7,08 (t, J = 7,5 Hz, 0,8H); 7,17 (t, J = 7,5 Hz, 0.2H); 7,99 (d, J = 9,0 Hz, 2H); 8,16 (s, 0,2H); 8,22 (0,8H); 9,62 (m étalé, 0.2H); 10,5 (s, 0,8H); 11,1 (m étalé, 1H); 12,9 (m étalé, 1H). Exemplo 41: Preparo de N-[5-(N'-etil-N'-m-tolil-5 hidrazinocarbonjl)-1 H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-4-(4-metil-piperazin-1-il)-benzamida Prepara-se N-[5-(N'-etil-N'-m-tolil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-4-(4-metil-piperazin-1-il)-benzamida conforme exemplo 28. Rendimento = 3 %. SM: ES m/z = 518 MH+ pico de base. RMN 1H (400 MHz, (CD3)2SO d6) Ô en ppm): 1,15 (t, J = 7,0 Hz, 3H); 2,20 (s, 3H); 2,23 (s, 3H); 2,45 (m, 4H); de 3,20 à 3,41 (m masque, 4H); 3,49 (q, J = 7,0 Hz, 2H); 6,73 (d, J = 9,0 Hz, 2H); de 6,96 à 7,04 (m, 4H); 7,99 (d, J = 9,0 Hz, 2H); 8,21 ($, 1H); 10,45 (s, 1H); 11,25 (m étalé, 1.H); 13,1 (m étalé, 1H).

Exemplo 42: preparo de N-{5-[N'-(4-fluoro-fenil)-N'-isobutil-hidrazinocarbonil]-1 H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il}-4-(4-metil-piperazin-1-il)-benzamidaPrepara-se N-{5-[N'-(4-fluoro-fenil)-N'-isobutil-hidrazinocarbonil]-1H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il}-4-(4-metil-piperazin-1-il)-benzamida conforme exemplo 28. Rendimento = 59 %, SM: ES m/z = 550 MH+ pico de base. RMN 1H (400 MHz, (CD3)2SO d6, 6 en ppm): 0,97 (d, J = 6,5 Hz, 6H); 1,91 (m, 1H); 2,22 (s, 3H); 2,44 (m, 4H); de 3,24 à 3,34 (m partiellement masque, 6H); 6,81 (dd, J = 4,5 et 9,0 Hz, 2H); de 6,98 à 7,06 (m, 4H); 7,98 (d, J - 9,0 Hz, 2H); 8,21 (s, 1H); 10,6 (s, 1H); 11,0 (m étalé, 1H); 13,0 (m étaíé.lH).

N-(4-fluoro-fenil)-N-isobutil-hidrazina

Prepara-se N-(4-fluoro-fenil)-N-isobutil-hidrazina conforme e-

xemplo 28.

Óleo incolor, 0,62 g (82 %). Rf = 0,34 (AcOEt/ heptano 20/80 (v/v)), LC/EM TA = 2.48 min.

N'-benzidrilideno-N-(4-fluoro-fenil)-N-isobutil-hidrazina

Prepara-se N'-benzidrilideno-N-(4-fluoro-fenil)-N-isobutil-hidrazina, conforme exemplo 28.

Sólido amarelo, 1,151 g (44 %). Rf = 0,52 (acetona / heptano 3/97 (v/v)), LC/EM TA = 6.03 min, sem ionização . N'-benzidrilideno-N-(4-fluoro-fenil)-N-isobutil-hidrazina fica conforme descrito no exemplo 37.

Exemplo 43: Preparo de N-{5-[N'-(3-bromo-fenil)-N'-etil-hidrazinocarbonil]-1H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il}-4-(4-metil-piperazin-1-il)-benzamidaLe N-íõ-tNHS-bromo-phényO-N-éthyl-hydrázinocarbonyll-IH-thiéno^.S-c]pyrazo!-3-yI}-4-(4-méthyl-pipérazin-1-yl)-benzamide est prepare suivant l'exemple 28. Rdt = 5%. SM: ES m/z=582 MH+ pie de base. RMN 1H (400 MHz, (CD3)2SO d6, ô en ppm): 1,16 (t, J = 7,0 Hz, 3H); 2,22 (s, 3H); 2,44 (m, 4H); de 3,26 à 3,34 (m partiellement masque, 4H); 3,54 (q, J = 7,0 Hz, 2H); 6,82 (dd, J = 2,0 et 8,0 Hz, 1H); 6,89 (dd, J = 2,0 et 8,0 Hz, 1H); 6,92 (t, J = 2,5 Hz, 1H); 7,01 (d, J = 9,0 Hz, 2H); 7,16 (t, J = 8,5 Hz, 1H); 7,98 (d, J = 9,0 Hz, 2H); 8,24 (s, 1H); 10,7 (s, 1H); 10,95 (m étalé, 1H); 12,95 (m étalé, 1H).

Exemplo 44: Preparo de 6-(4-metil-[1,4] diazepan-1-il)-N-[5-N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-nicotinamida

/

Prepara-se 6-(4-metil-[1,4] diazepan-1 -il)-N-[5-N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-nicotinamida conforme exem-5 pio 28.

MS: ES m/z=505 MH+ pie de base. RMN 1H (400 MHz, (CD3)2SO d6, Ô en ppm): 1,89 (rh, 2H); 2,26 (s, 3H) ; 2,47 (m partiellement masque, 2H) ; 2,61 (m, 2H); 3,17 (s, 3H); 3,67 (t, J = 6,0 Hz, 2H); 3,80 (m, 2H); 6,71 (d, J - 9,0 Hz, 1H); 6,76 (t, J = 7,5 Hz, 1H); 6,82 (d, J = 8,0 Hz, 2H); 7,22 (m, 2H); 8,15 (dd partiellement masque, J = 2,5 et 9,0 Hz, 1H); 8,16 (s, 1H); 8,80 (d, J = 2,5 Hz, 1H); 10,75 (s, 1H); 11,0 (m étalé, 1H); 12,9 (m, étalé, 1H).

4-(4-metil-[1,4]diazepan-1 -il)-benzamida

Em um balão de 100 ml introduz-se 4-fluorp benzonitrila (5g, 41 mmol, 1 eq) e 35 ml de dimetilformamida. A essa solução, acrescenta-se a N-metil homo piperazina (5,18 g, 45 mmol, 1,1 eq). A solução é aquecida a 10 uma temperatura próxima de 90 °C durante 36 horas, depois o solvente éevaporado a seco. O resíduo é diluído com 150 ml de acetato de etila e 30 ml de água. A fase aquosa é extraída com o acetato de etila e as fases orgânicas reunidas são secadas sobre sulfato de magnésio. Após evaporação, purifica-se o óleo residual por cromatografia sobre uma coluna de sílica-gel 5 como, com purificador, um gradiente 0-10 %, metanol / diclorometano (Rf = 0,2, metanol / diclorometano 10/90 (v/v)). 4-(4-metil-[1,4] diazepan-1-il)-benzonitrila (sólido amarelo) é colocado diretamente em uma mistura de 20 ml de ácido sulfúrico a 98 % e de 2 ml de água. Essa solução laranja é a-quecida a uma temperatura próxima de 100 °C, durante 18 horas, depois ela

é resfriada e hidrolisada, derramando-a sobre gelo. O pH é reajustado em 9-10 com soda em pastilhas. O precipitado amarelo obtido é filtrado e lavado abundantemente com água, depois secado sob vácuo. Obtém-se assim 4-(4-metil-[1,4]diazepan-1-il)-benzamida (3,7 g, 38 %) sob a forma de um sólido amarelo que é utilizado diretamente na etapa seguinte.

Exemplo 45: Preparo de N-[5-(benzilideno-hidrazinocarbonil)-1H-

tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-4-(4-metil-piperazin-1-il)-benzamida.

/

Em um balão de 5 ml seco sob argônio, coloca-se N-(5-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-4-(4-metil-piperazin-1 -il)-benzamida (0,150 g, 0,318 mmol, 1 eq), etanol (1 ml) e na seringa benzalde-

ido (0,048 ml, 0,47 mmol, 1,3 eq). São acrescentados à suspensão duas gotas de ácido clorídrico 5N. A mistura reacional é agitada a uma temperatura próxima de 50 °C, durante 3 horas, depois o solvente é evaporado e o resíduo é colocado diretamente sobre uma coluna de sílica-gel neutralizada. A purificação é feita com uma mistura metanol / diclorometano (10/90 em

volumes). O produto obtido é diretamente adicionado a uma mistura de 1 ml de tetrahidrofurano e 0,5 ml de ácido clorídrico 5N. O precipitado obtido é filtrado, lavado com água e secado. Obtém-se N-[5-(benzilideno-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-4-(4-metil-piperazin-1-il)-benzamida sob a forma de um sólido branco(0,029 g, 16 %). EM:ES m/z = 488 MH+ pico de base.

RMN 1H (400 MHz, (CD3)2SO d6> 6 en ppm): 2,53 (s paríiellement masque, 3H); 2,87 (m, 4H); 3,47 (m, 4H); 7,03 (d, J = 9,0 Hz, 2H); de 7,39 à 7,49 (m, 3H); 7,79 (d, J = 7,5 Hz, 2H); 8,01 (d, J = 9,0 Hz, 2H); 8,28 (s, 1H);8,39(s, 1H).

N-(5-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il)-4-(4-metil-5 piperazin-1-il)-benzamida

Em um balão de 15 ml, introduz-se 3-[4-(4-metil-piperazin-1-il)-benzoil amino]-1 H-tieno [2,3-c] pirazol-5-carboxilato de etila (0,5 g, 1,03 mmo, 1eq), etanol (2 ml) e acrescenta-se uam solução 1M de hidrazina (3,09 ml, 3,09 mmol), assim como 2 ml de hidrazina mono-hidrato. A mistura rea- cional é agitada ao refluxo durante 5 horas, depois o solvente é evaporado e o resíduo é retomado na água. O precipitado branco é filtrado, lavado com água, depois secado a uma temperatura próxima de 80 °C sob vácuo. Obtém-se assim N-(5-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il)-4-(4-metil-piperazin-1-il)-benzamida (0,15 g, 49 %), Rf = 0,32 (metanol / diclorometano10 / 90,(v/v)), que é utilizado diretamente na etapa seguinte. Pode-se obter 3-[4-(4-metil-piperazin-1-il)-benzoil amino]-1 H-tieno [2,3-c] pirazol-5-carboxilato de etila por desproteção do 1-(1-etóxi-etil)-3-[4-(4-metil-piperazin-1-il)-benzoil amino]-1 H-tieno [2,3-c] pirazol-5-carboxilato de etila, conforme exemplo 28.Exemplo 46: Preparo de N-[5-(N'-metil-N'-fenil-

hidrazinocarbonil)-1 H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-4-(2-morfolin-4-il-etóxi)-benzamida

Prepara-se

N-[5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno[2,3-c] pirazol-3-il]-4-(2-morfolin-4-il-etóxi)-benzamida, conforme exemplo 28. (Intermediário etoxi etila: LC/EM TA = 3.10 min., MH+ 593.5). A purificação do intermediário é feita sobre sílica-gel com, como purificador uma mistura metanol / diclorometano (10/90 em volumes). O tratamento da etapa de desproteção é feito da seguinte forma: a mistura reacional é tratada com á-gua, depois extraída com 5 ml de acetato de etila. A fase aquosa é basifica-da com soda 5N, depois extraída de novo com acetato de etila (2x5 ml). Essa fase orgânica é secada sobre sulfato de magnésio, depois concentrada a seco. O sólido amarelo obtido é triturado com heptano. Após filtragem do sólido, este é secado sob vácuo para dar N-[5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-4-(2-morfolin-4-il-etóxi)-benzamida, 0,192 g (40 % para daus etapas). SM:ES m/z = 521 MH+ pico de base.

RMN 1H (400 MHz, (Cp3)2SO d6, 5 en ppm): 2,48 (m partiellement masque, 4H); 2,72 (t, J = 6,0 Hz, 2H); 3,17 (s, 3H); 3,58 (m, 4H); 4,18 (t, J = 6,0 Hz, 2H); 6,76 (t, J = 7,5 Hz, 1H); 6,82 (d, J = 8,5 Hz, 2H); de 7,00 à 7,10 (m, 3H); 7,22 (t large, J = 8,0 Hz, 2H); 8,05 (d large, J = 8,5 Hz, 2H); 8,16 (s large, 1H); 10,75 (s large, 1H); 10,9 (m três étalé, 1H); 12,9 (m três étalé,1H).

4-(2-morfolin-4-il-etóxi)-benzamida

Em um balão de 250 ml, introduz-se carbonato de potássio (15,1

g, 109 mmol, 3 eq), acetonitrila (73 ml), depois 4-hidroxi-benzamida (5 g, 36,5 mmol, 1 eq). A suspensão é agitada durante 30 minutos antes da adição do cloridrato da 4-(2-cloro-etil)-morfolina (8.82 g, 47 mmol, 1,3 eq). A essa suspensão, são acrescentados 10 ml de dimetilformamida, depois a

mistura reacional é agitada a uma temperatura próxima de 40 °C, durante 16 horas. Evapora-se então o solvente, depois se dilui com água, e extrai-se com diclorometano. A fase aquosa é acidificada com o ácido clorídrico 5N e reextraída ao diclorometano. As fases orgânicas são combinadas, secadas sobre sulfato de magnésio, depois concentradas a seco sob vácuo. Obtém-

se assim 4-(2-morfolin-4-il-etóxi)-benzamida 2,17 g (23 %) sob a forma de um sólido branco que é utilizado diretamente na etapa seguinte.Exemplo 47: Preparo de 4-(4-metil-[1,4] diazepan-1-il)-N-[5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno [2,3-c]pirazol-3-il]-benzamida.

<formula>formula see original document page 96</formula>

Prepara-se 4-(4-metil-[1,4] diazepan-1-il)-N-[5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno [2,3-c]pirazol-3-il]-benzamida, conforme exemplo 5 28. SM:IE m/z = 503 M+. m/z = 382

RMN Vi (400 MHz, (CD3)2SO d6, ô en ppm): 1,90 (m, 2H); 2,26 (s, 3H); 2,45 (m, 2H); 2,62 (m, 2H); 3,17 (s, 3H); 3,52 (t, J = 6,0 Hz, 2H); 3,59 (m, 2H); de 6,73 à 6,79 (m, 3H); 6,82 (d, J = 8,5 Hz, 2H); 7,21 (t, J = 7,5 Hz, 2H); 7,94 (d, J = 8,5 Hz, 2H); 8,16 (s, 1H); 10,7 (s, 1H); 10,8 (m étalé, 1H); 12,9 (m étalé, 1H). Le 4-(4-méthyl-[1,4]diazepan-1-yl)-benzamide est décrit à Pexemple 44.

Análises por LC/EM

As análises LC/EM foram feitas sobre um aparelho Micromass modelo LCT ligado a um aparelho HP 1100. A abundância dos produtos foi medida com o auxílio de um detector com barra de diodos HP G1315A em

uma faixa de onda de 200-600 nm e um detector de dispersão de luz Sedex 65. A aquisição dos espectros de massas foi realizada em uma faixa de 180 a 800 unidades de massa atômica. Os dados foram analisados, utilizando-se o soft Micromass MassLynx. A separação foi feita em uma coluna Hypersil Gold de Thermo C18 50 x 3 mm, partículas de 3 |im, purificando-se por um

gradiente linear de 5 a 95 % de acetonitrila contendo 0,1 % (v/v) de ácido fórmico na água contendo 0,1 % (v/v) de ácido fórmico em 5 min a uma vazão de 0,8 ml/min/ O tempo total de análise, incluindo o período de reequilí-brio da coluna, é de 7 min. Os espectros EM foram realizados em eletros-pray (ES7ES") sobre um aparelho Platform II (Micromass). Os principais íonsobservados são descritos. Purificação por LC/EM

Os produtos podem ser purificados por LC/EM, utilizando-se um sistema Waters Fractions Lynx composto de uma bomba de gradiente Wa-5 ters modelo 600, de uma bomba de regeneração Waters modelo 515, de uma bomba de diluição Waters Reagent Manager, de um auto-injetor Waters modelo 2700, de duas válvulas Rheodyne modelo LabPro, de um detector com barra de diodos Watersmodelo 996, de um espectrometro de massa Waters modelo ZMD e de um coletor de frações Gilson modelo 204. O sis-tema é controlado pelo soft Waters Fractions Lynx. Antes da purificação, as amostras são preparadas da seguinte forma: cada amostra é solubilizada no dimetil sulfóxido a uma concentração próxima de 60 mg/ml e injetada à razão de 1 ml por injeção.

Método A: a separação é feita alternadamente em duas colunas Waters Symmetry (C18, 5 u,M, 19 x 50 mm), uma coluna estando em curso de regeneração por uma mistura água/ acetonitrila 95/5 (v/v), contendo 0,07 % (v/v) de ácido trifluro acético, enquanto que a outra coluna estava em curso de separação. A purificação das colunas é conduzida, utilizando-se um gradiente linear em 11 minutos de 20 a 95 % de acetonitrila, contendo 0,07 % (v/v) de ácido trifluoro acético, a uma vazão de 10 ml/min. À saída da coluna de separação o fluxo de solvente é dividido por um sistema LC Packing Accurate: um milésimo do efluente diluído por metanol a uma vazão de 0,5 ml/min e enviado para detectores, à razão de 75 % para o detector de barras de diodos, e os 25 % restantes para o espectrometro de massa. O resto do efluente (999/1000) é enviado para o coletor de frações onde o fluxo é eliminado quando a massa do produto esperado não é detectada pelo Fractions-Lynx. As fórmulas moleculares dos produtos esperados são fornecidas ao FractionsLynx que aciona a coleta do produto, quando o sinal de massa detectado corresponde ao íon [M+H]+ e/ou ao [M+Na]+. Em certos casos, de- pendendo dos resultados de LC/EM analítico, quando um íon intenso correspondente a [M+2H]++ tiver sido detectada, o valor correspondente à metade das massa molecular calculada (PM/2) é também fornecido ao Fracti-onsLynx. Nessas condições, a coleta é também acionada quando o sinal de massa do íon [M+2H]++ e/ou [M+Na+H]++ são detectados. Os produtos são coletados em tubo de vidro regulado. Após coleta, os solventes são evaporados, em evaporadores centrífugos Savant AES 2000 ou Genevac HT8 e as 5 massas de produtos são determinadas por pesagem dos tubos após evaporação dos solventes. Alternativamente, os solventes são evaporados a seco em um evaporador rotativo sob vácuo (2 kPa) a uma temperatura próxima de 40 °C. Cad produto obtido é analisado por LC/EM.

Método A': a separação é feita do mesmo modo que o método A,a purificação das colunas é feita com um gradiente linear em 11 minutos de 5 a 95 % de acetonitrila contendo 0,07 % (v/v) de ácido trifluoroacético na água, contendo ),07 % (v/v) de ácido trifluoroacético, a uma vazão de 10 ml/min.

Método B: a separação é feita sobre uma coluna Waters SunFire

(C18, 5 |i,M, 30 x100 mm). A purificação é conduzida, utilizando-se um gradiente linear em 11 minutos de 5 a 95 % de acetonitrila, contendo 0,07 % (v/v) de ácido trifluro acético na água contendo 0,07 % (v/v) de ácido trifluoro acético, a uma vazão de 30 ml/min. -saída da coluna de separação, o fluxo de solvente é dividido por um sistema LC Packing Accurate: um décimo milésimo do efluente diluído por metanol a uma vazão de 1 ml/min e enviado para os detectores, à razão de 75 % para o detector de barras de diodos, e os 25 % restantes par o espectrômetros de massa. O resto do efluente (9999/10000) é enviado para o coletor de frações onde o fluxo é eliminado quando a massa do produto esperado não é detectada pelo FractionsLynx.

As fórmulas molecular es dos produtos esperados são fornecidas ao FractionsLynx que aciona a coleta do produto, quando o sinal de massa detectado corresponde ao íon [M+H]+ e/ou ao [M+Na]+. Em certos casos, dependendo dos resultados de LC/EM analítico, quando um íon intenso correspondente a [M+2H]++ tiver sido detectado, o valor correspondente à metade da massamolecular calculada (MW2) é também fornecido ao FractionsLynx. Nessas condições, a coleta é também acionada quando o sinal de massa do íon [M+2H]++ e/ou [M+Na+H]++ são detectados. Os produtos são coletados emtubo de vidro. Após coleta, os solventes são evaporados, em um evaporador centrífugo Jouan RC1010. Alternativamente, os solventes são evaporados a seco em um evaporação rotativo sob vácuo (2 kPa) a uma temperatura próxima de 40 °C. Cada produto obtido é analisado por LC/EM. 5 O resíduos secos são retomados por metanol e de novo evapo-

rados, levando a produtos secos sob a forma de pó.

Método B': a separação é feita do mesmo modo que o método B, a purificação das colunas é feita com um gradiente linear em 11 minutos de 10 a 95 % de acetonitrila contendo 0,07 % (v/v) de ácido trifluro acético na 10 água contendo 0,07 % (v/v) de ácido trifluoro acético, a uma vazão de 30 ml/min.

Os produtos, de acordo com a invenção, podem estar sob a forma não quiral, ou racêmica, ou enriquecida em um estereo-isômero, ou enriquecida em um enantiômero; e podem eventualmente ser salificados.

15 Um produto, de acordo com a invenção, poderá ser utilizado pa-

ra a fabricação de um medicamento útil para tratar um estado patológico, em particular um câncer.

A presente invenção se refere também às composições terapêuticas, contendo um composto, de acordo com a invenção, em associação

20 com um excipiente farmaceuticamente aceitável, segundo o modo de administração escolhido. A composição farmacêutica pode se apresentar sob a forma sólida, líquida ou de lipossomas.

Dentre as composições sólidas , podem ser citados pós, cápsulas, comprimidos. Dentre as formas orais, podem-se incluir as formas sólidas

25 protegidas face ao meio ácido do estômago. Os suportes utilizados para as formas sólidas são constituídos notadamente de suportes minerais como os fosfatos, os carbonatos ou de suportes orgânicos como a lactose, as celuloses, o amido ou os polímeros. As formas líquidas são constituídas de soluções de suspensões ou de dispersões. Elas contêm como suporte dispersivo

30 seja a água, seja um solvente orgânico (etanol, NMP ou outros) ou de misturas de agentes tensoativos e de solventes ou de agentes complexantes e de solventes.As formas líquidas serão, de preferência, injetáveis e, dessa forma, terão uma formulação aceitável para essa utilização.

Vias de administração por injeção aceifveis incluem as vias in-travenosa, intra-peritoneal, intramuscular e subcutânea, a via intravenosa 5 sendo preferida.

A dose administrada dos compostos da invenção será adaptada pelo prático em função da via de administração do paciente e do estado deste.

Os compostos da presente invenção podem ser administrados 10 sozinhos ou em mistura com outros anticancerígenos. Dentre as associações possíveis, podem-se citar:

. os agentes alquilantes e notadamente ciclofosfamida, melfalan, ifosfamida, clorambucil, bu-sulfan, tiotepa, predimustina, carmustina, lomus-tina, semustina, esteptozotocina, decarbazina, temozololida, procarbazida e 15 hexametil melamina;

. os derivados da platina, como notadamente a cisplatina, a car-boplatina ou a oxaliplatina;

. os agentes antibióticos, como notadamente bleomicina, a mi-tomicina, a dactinomicina; 20 . os agentes antimicrotúbulos, como notadamente a vinblastina,

a vincristina, a vindesina, a vinorelbina, os taxóides (pacltaxel e docetaxel);

. as antraciclinas , como notadamente a doxo-rubicina, a dauno-rubicina, a ida-rubicina, a epi-rubicina, a mitoxantrona, a losoxantrona;

. os agentes inibidores de topoisomerases dos grupos I e II, tais 25 como a etoposida, a teniposida, a amsacrina, o irinotecan, o topotecan e o tomudex;

. as fluoropirimidinas, tais como a 5-fluorouracila, a UFT, a floxu-

ridina;

. os análogos de citidina, tais como a 5-azacitidinam, a citarabi-30 na, a gemcitabina, a 6-mercapto murina, a 6-tioguanina;

. os análogos de adenosina, tais como a pentostatina, a citarabi-na ou o fosfato de fludarabina;. o metrotrexato e o ácido folínico;

. as enzimas e compostos diversos, tais como a L-asparaginase, a hidroxiuréia, o ácido trans-retinóico, a suramina, a dexrazoxana, a amifos-tina, a herceptin, assim como os hormônios estrogênicos, androgênicos; 5 . os agentes antivasculares, tais como os derivados da combre-

tastatina ou da colchicina e suas prodrogas.

Também é possível associar aos compostos da presente invenção um tratamento por radiações. Esses tratamentos podem ser administrados simultaneamente, separadamente, seqüencialmente. O tratamento será adaptado pelo prático em função da doença a tratar.

A progressão do ciclo celular é freqüentemente gerada por qui-nases ciclina dependentes (CDK) que são ativadas por uma interação com proteínas pertencentes à família das ciclinas, ativação que termina pela fos-forilação de substratos e finalmente pela divisão celular. Além dos inibidores

endógenos das CDK que são ativadas (família das INK4 e KIP/CIP) regulam, de forma negativa a atividade das CDK. O crescimento das células normais é devido a uma balança entre os ativadores de CDK (as ciclinas) e os inibidores endógenos de CDK. Em vários tipos de cânceres, a expressão ou atividade aberrante de vários desses reguladores do ciclo celular foi descrita.

A ciclina E ativa a quinase Cdk2 que age em seguida para fosfo-

rilar a proteína pRb (proteína de retinoblastoma) resultante em um engajamento na divisão celular irreversível e uma transição para a fase S (PL Too-good, Medicinal Research Reviews (2001), 21(6); 487-498. A quinase CDK2 e pode ser CDK3 são necessárias para a progressão na fase G1 e a entrada

em fase S. Quando da formação de complexo com a ciclina E, elas mantêm a hiperfosforilação de pRb para auxiliar a progressão da fase G1 em fase S. Nos complexos com a Ciclina A, CDK2 exerce um papel na inativação de E2F, e é necessária para a resíduo da fase S (TD. Davies et al. (2001) Struc-ture 9, 389-3).

O complexo CDK1/ciclina B regula a progressão do ciclo celular

entre a fase G2 e a fase M. A regulação negativa do complexi CDK/Ciclina B impede as células normais de entrarem em fase S, antes que a fase G2 te-nha sido correta e completamente concluída. (K.K. Roy and E.A. Sausville Current Pharmaceutical Design, 2001, 7, 1669-1687.

Um nível de regulagem da atividade das CDK existe. Os ativado-res de ciclina dependentes quinase (CAK) têm uma ação positiva de regula-5 gem das CDK. CAK fosforial as CDK sobre o resíduo treonina para tornar a enzima alvo totalmente ativa.

A presença dos defeitos nas moléculas que intervém sobre o ciclo celular acarreta a ativação das CDK e a progressão do ciclo, é normal querer inibir a atividade das enzimas CDK para bloquear o crescimento celu-

lar das células cancerosas.

Numerosas proteínas implicadas na segregação dos cromossomas e a ligação do fuso foram identificadas no lêvedo e na drosofila. A desorganização dessas proteínas leva à não segregação dos cromossomas e a fusos monopolares ou desorganizados. Dentre essas proteínas, certas

15 quinases, das quais Aurora e Ipl1, provenientes respectivamente de drosofila e de S. Cerevisiae, são necessárias para a segregaçãp dos cromossomas e a separação do centrossoma. Um análogo humano de IpM de lêvedo foi recentemente clonado e caracterizado por diferentes laboratórios. Essa quinase, denominada Aurora 2, STK15 ou BTAL pertence à família das quinases

com serina/treonina. Bischoff et al. mostraram que Aurora 2 é oncógena e é amplificada nos cânceres colo-retais humanos (EMBO J, 1998k n17, 3052-3065). Foi também exemplificado nos cânceres, implicando tumores epiteli-ais, tais como o câncer do seio.

Tie-2 (TEK) é um membro de uma família de receptores com

tirosina quinase, específico das células endoteliais. Tie2 é o primeiro receptor com atividade tirosina quinase do qual se conhece, ao mesmo tempo o agonista (angiopoietina 1 ou Ang 1) que estimula a autofosforilação do receptor e a sinalização celular [S.Davis et al (1996) Cell 87, 1161-1169] e a antagonista (angiopoietina 2 ou Ang2) [P.C.Maisonpierre et al. (1997) Scien-

ce 277, 55-60]. A angiopoietina 1 pode sinergizar com o VEGF nos últimos estágios da neoangiogênese [AsaharaT. Circ. Res. (1998) 233-240]. As experiências de knock-out e as manipulações transgênicas da expressão deTie 2 ou de Ang1 levam a animais que apresentam defeitos de vasculariza-ção [D.J. Dumont et (1994) Genes Dev. 8, 1897-1909 et C. Suri (1996) Cell 87, 1171-1180]. A ligação de Ang1 a seu receptor leva à autofosforilação do domínio quinase de Tie2 que é essencial para a neovascularização, assim 5 como para o recrutamento e a interação dos vasos com os perfeitos e as células musculares lisas; esses fenômenos contribuem para a maturação e a estabilidade dos vasos novamente formados [P.C. Maisonpierre et al (1997) Science 277, 55-60]. Lin et al (1997) J. Clin. Invest. 100, 8: 2072-2078 et Lin P. (1998) PNAS 95, 8829-8834, mostraram uma inibição do crescimento e 10 da vascularização tumoral, assim como uma diminuição das metástases de pulmão, quando de infecções adenovirais ou de injeções do domínio extra-celular de Tie-2 (Tek) em modelos de xenoenxertos de tumor do seio e de melanoma.

Os inibidores de Tie2 podem ser utilizados nas situações onde uma neovascularização é feita de forma inapropriada (isto é, na retinopatia diabética, a inflamação crônica, a psoríase, o sarcoma de Kaposi, a neovascularização crônica devido à degeneração macular, a artrite reumatóide, o hemoangioma infantil e os cânceres).

FAK é uma tirosina quinase citoplasmática que exerce um papel importante na transducção do sinal transmitido p[elas integrinas, família de receptores hetero diméricos da adesão celular. FAK e as integrinas são co-localizadas em estruturas perimembranárias denominadas placas de aderência. Foi mostrado em numerosos tipos celulares que a ativação de FAK, assim como sua fosforilação sobre resíduos tirosina e, em particular, sua autofosforilação sobre a tirosina 397 eram dependentes da ligação das integrinas a seu ligantes extracelulares e, portanto, induzidas, quando da adesão celular [Kornberg L, et al. J. Biol. Chem. 267 (33): 23439-442. (1992)]. A autofosforilação sobre a tirosina 397 de FAK representa um local de ligação para umaoutra tirosina quinase, Src, via seu domínio SH2 [Schaller et al.Mol. Cell. Biol. 14: 1680-1688. !994; Xing et al. Mol. Cell. Biol. 5: 413-421. 1994]. Src pode então fosforilar FAK sobre a tirosina 925, recrutando assim a proteína adaptadora Grb2 e induzindo em certas células a ativação da viaras e MAP quinase implicada no controle da proliferação celular [Schlaepfer et al. Nature; 372: 786-791.1994; Schlaepfer et al. Prog. Biophy. Mol. Biol. 71: 435-478. 1999; Schlaepfer and Hunter, J.Biol. Chem. 272:13189-13195. 1997]. A ativação de FAK pode também induzir a via de sinalização jun NH2-5 terminal quinase (JNK) e resultar na progressão das células para a fase G1 do ciclo celular [Oktay et al., J. Cell. Biol. 145: 1461-1469. 1999]. Fosfatodili-nositol-3-OH quinase (PI3-quinase) se liga também à FAK sobre a tirosina 397 e essa interação poderia ser necessária à ativação de PI3-quinase [Chen and Guan, Proc. Nat. Acad. Sei. USA. 91: 10148-10152. 1994; Ling et

al. J.Cell. Biochem. 73:533-544. 1999]. O complexo FAK/Src fosforila diferentes substratos como a paxilina e p130CAS nos fibroblastos [Vuori et al. Mol., Cell. Biol. 16: 2606-2613. 1996].

Os resultados de numerosos estudos sustentam a hipótese que os inibidores de FAK poderiam ser úteis no tratamento do câncer. Estudos

sugeriram que FAK pode exercer um papel importante na proliferação e/ou na sobrevida celular in vitro. Por exemplo, nas células CHO, certos autores demonstraram que a superexpressão de p15FAK leva a uma aceleração datransição G1 a S, sugerindo que p125FAK favorece a proliferação celular [Zhao J.-H et al. J. Cell Biol. 143:1997-2008. 1998]. Outros autores mostra-

ram que células tumorais tratadas com oligonucleotídeos anti-sentido de FAK perdem sua adesão e entram em apoptose (Xu et al, Cell Growth Differ. 4:413-418. 1996). Foi também demonstrado que FAL promove a migração das células in vitro. Assim, fibroblastos deficientes para a expressão de FAK (ratos knockut para FAK) apresentam uma morfologia arredondada, defici-

ências de migração celular em resposta a sinais quimiotáticos e esses defeitos são suprimidos por uma reexpressão de fAK [DJ. Sieg. et al., J. Cell Science. 112:2677-91. 1999]. A superexpressão do domínio C-terminal de FAK (FRNK) bloqueia o estiramento das células aderentes e reduz a migração celular in vitro [ Richardson A. and Parsons J.T. Nature. 380:538-540. 1996].

A superexpressão de FAK em células CHO, COS ou em células de astroci-toma humano favorece a migração das células. A implicação de FAK na promoção da proliferação e da migração das células em numerosos tiposcelulares in vitro sugere o papel potencial de FAK nos processos neoplási-cos. Um estudo recente demonstrou efetivamente o aumento da proliferação das células tumorais in vivo após indução da expressão de FAK em células de astrocitoma humano [Cary L.A. et al. J. Cell Sei. 109: 1787-94. 1996; 5 Wang D et al. J. Cell Sei. 113: 4221-4230.2000]. Além disso, estudos imuno-histoquímicos de biópsias humanas demonstram que FAK era superexpres-so nos cânceres da próstata, do seio, da tyireóidem do cólon, do melanoma, do cérebro e do pulmãol, o nível de expressão de FAK estando diretamente correlacionado com os tumores que apresentam o fenótipo o mais agressivo

[Weiner TM, et al. Lancet. 342 (8878): 1024-1025. 1993; Owens et al. Câncer Research. 55:2752-2755. 1995; Maung K et al. Oncogene. 18:6824-6828. 1999; Wang D et al. J. Cell Sei. 113:4221-4230. 2000].

KDR (Kinase Insert Domain Receptor) também denoninada VEGF-R2 (vascular Endothelial Growth Factor Receptor 2) é expressa uni-

camente nas células endoteliais. Esse receptor se fixa no fator de crescimento angiogênico VEGF, e serve assim de mediador a um sinal transduc-cional via a ativação de seu domínio quinase intracelular. A inibição direta da atividade quinase de VEGF-R2 permite reduzir o fenômeno de angiogênese em presença de VEGF exógeno (vascular Endothelial Growth Factor: fator

de crescimento vascular endotelial) (Strawn et al. Câncer Research, 1996, vol. 56, p.3540-3545). Esse processo foi demonstrado notadamente com ao uxílio de mutantes VEGF-R2 (Millauer et al. Câncer Research, 1996, vol. 56, p.1615-1620). O receptor VEGF-R2 parece na ter nenhuma outra função no adulto que aquela ligada à atividade angiogênica do VEGF. Por conseguinte,

um inibidor seletivo da atividade quinase do VEGF-R2 só deveria demonstrar pouca toxicidade.

Além desse papel central no processo dinâmico angiogênico, resultados recentes sugerem que a expressão de VEGF contribui para a so-brevida das células tumorais após quimio-e radioterapias, sublinhando a si-

nergia potencial de inibidores de KDR com outros agentes (Lee et al. Câncer Research, 2000, vol. 60, p.5565-5570).Protocoles experimentais sobre os testes biológicos 1. Aurora 1 e Aurora 2

O efeito inibidor de compostos face às quinases Aurora 1 e Aurora 2 é determinado por um teste enzimático, utilizando uma detecção de radioatividade.

A atividade quinase de Aurora 1 e Aurora 2 é avaliada pela fos-forilação do substrato Numa-histidina em presença de ATP radiomarcado ([33P]ATP), utilizando placas 96 cavidades Flash plate, onde o níquel-quelato é fixado na superfície da microplaca. A quantidade de fosfato 33P incorpora- do ao substrato NuMA é proporcional à atividade da enzima Aurora 1 ou Aurora 2. Proteínas

As proteínas são produzidas no laboratório de produção de proteínas do grupo Sanofi-Aventis.

Aurora 1: complexo recombinante Aurora-B/INCENP-C3, purificado a aproximadamente 50 % cuja extremidade N-terminal de Aurora B foi marcada à histidina.

Aurora 2: proteína recombinante total, compreendendo uma parte histidina em N-terminal, foi expressa em E.coli e purificada a mais de 82 20 %.

NuMA (proteína Nuclear que se associa com o aparelho mitóti-co(: fragmento de 424 ácidos aminas, expresso em E.coli, cuja extremidade N-terminal foi marcada à histidina e utilizada como substrato para as duas enzimas Aurora. Protocolo:

As microplacas utilizadas são placas Flash-Plate, 96 cavidades, níquel-quelato (perkin Elmer, modelo SMP107).

Os produtos a avaliar são incubados em um volume reacional de 100 uJ por cavidade, em presença de 10 nM de Aurora 1 ou Aurora 2, 500 nM de substrato NuMA em um tampão composto de 50 nM de Tris/HCI (pH 7.5), 50 mM NaCI, 5 mM MgCI2 (Aurora-B) ou 10 mM MgCI2 (Aurora A) e 1 mM de DTT, a 37 °C.Em cada cavidade, 80 \i\ do tampão de incubação enzima/ substrato são distribuídos, depois 10 uJ do produto a avaliar, em concentrações variáveis. A reação é iniciada por adição de 1 fiM de ATP final contendo 0.2 |iCi de [33P]ATP (10 |il). Após 30 minutos de incubação, a reação é parada 5 por simples eliminação do tampão reacional e cada cavidade é lavado duas vezes com 300 |jJ do tampão Tris/HCI. A radioatividade é então medida em cada cavidade com o auxílio de um aparelho de cintilação, modelo Packard, Top Count.

A atividade enzimática controle de Aurora é expressa pelo nú-10 mero de corte por minuto obtido em 30 minutos após dedução do ruído de fundo (mistura reacional não contendo a enzima). A avaliação dos diversos produtos testados é expressa em percentagem de inibição da atividade Aurora em relação ao controle.

2. CDK2/ciclina E:

Purificação do complexo CDK2/Ciclina E-(His)6 por IMAC (Im-

mobilized Metal Affinity Chromatography)

Dois baculovírus recombinantes portando as seqüência humanas codificando respectivamente para CDK2 e a Ciclina E (esta comportando um tag hexa-histidina em C terminal) são utilizados para co-infectar célu-Ias de inseto Sf21. Dois a três dias após o começo da co-infecção, as células são coletadas por centrifugação, depois conservadas a-40 °C até sua utilização. Após descongelamento e lise mecânica das células, o complexo presente no que flutua de lise é purificado por cromatografia de afinidade sobre Níquel (IMAC) e conservado a-80 °C.Teste Flashplate CDK2/Ciclina E em formato 96 cavidades

Um formato em placas 96 cavidades coatados à estreptavidina é utilizado para testar a atividade dos compostos sobre a atividade quinase de CDK2/Ciclina E.

Para realizar esse teste, o substrato peptídico biotinilado, frag-30 mento da proteína pRb (biotinil-

SACPLNLPLQNNHTAADMYLSPVRSPKKKGSTTR-OH) é solubilizado à concentração de 1 mM em tampão quinase (HEPES / NaOH 50 mM, NaCI 1mM, MgCI2 5 mM, pH 7.5), a fim de constituir uma solução-estoque conservada a-20 °C sob a forma de alíquotas de 110 jlxI. No dia da experiência, uma alíquota dessa solução é descongelado e diluído em tampão quinase, contendo 1 mM de Ditiotreitol, acrescentado ao tampão extemporaneamente, a 5 fim de obter uma concentração de 14.3 |o.M. 70 jlxI dessa solução são acrescentados em cada cavidade da Flashplate, a fim de obter uma concentração final em substrato de 10 |iM, quando da reação enzimática conduzida no volume final do meio reacional de 100 uJ (cf. a seguir).

Diluições intermediárias de inibidores (produtos da invenção) a

diferentes concentrações são preparadas no DMSO a partir de soluções estoque a 10 mM em tubos separados. Fazem-se assim diluições a 1000 uJví, 333.3 uJví, 111.1 |iM, 37.03 \M, 12.35 |iM, 4.11 nM, e 1.37. Um \i\ de cada uma dessas soluções (ou 1 uJ de DMSO para os controles) é transferido nos cavidades da placa de teste.

Em cada cavidade, são em seguida acrescentados 19 fxl de uma

solução de uma mistura de adenosinetrifosfato (ATP) e de ATPy33P no tampão quinase à concentração de 5,26 yM de ATP total e de 52,6 )j.Ci/ml de 33P. A reação enzimática é desencadeada por adição de 10 jllI por cavidade de uma solução de CDK2/Ciclina E a 200 nM no tampão quinase, contendo

1 mM de ditiotreitol (ou 10 m de ditiotritol (ou 10 jlxI de tampão quinase contendo 1 mM de ditiotritol para os brancos reacionais).

Após adição de cada um dos reagentes, o volume final de cada cavidade é de 100 uJ, a concentração final de substrato é de 10 jiM, as concentrações finais em inibidores são de 10 uJví, 3,33 [M, 1,11 |iM, 0,37 jiM,

0,123 |i.M, 0,041 uJví e 0,014 |xM (segundo a concentração da diluição intermediária), a concentração final em ATP é de 1 |iM, a quantidade final de 33P é de 1 u.Ci/cavidade, a concentração final de complexo CDK2/Ciclina E é de 20 nM.

Após a adição de todos os reagentes, a placa de teste incubada 30 a 30 °C sob agitação orbital a 650 rpm.

Quando a incubação é concluída, a placa é lavada três vezes por 300 uJ por cavidade de PBS (Phosphate Buffered Saline, pH = 7,4, semcálcio, nem magnésio, referência 10010-015, Gibco BRL). A incorporação de 33P ao peptídeo é quantificada por contagem por cintilação com um aparelho Packard Topcount.NXT. A atividade inibidora dos produtos da invenção é avaliada por medida da concentração de inibidor, permitindo uma diminuição 5 da atividade enzimática de 50 % (CI50). 3. Tie2

A seqüência codificante de Tie2 humano correspondente aos ácidos aminados do domínio intracelular 776-1124 foi gerada por PCR, utilizando-se o cDNA isolado de placenta humana como modelo. Essa seqüên-

cia foi introduzida em um vetor de expressão baculovirus pFastBacGT sob a forma de proteína de fusão GST.

O efeito inibidor das moléculas é determinado em um teste de fosforilação de PLC por Tie2 em presença de GST-Tie2 purificada a aproximadamente 80 % de homogeneidade. O substrato é composto dos fragmen-

tos SG2-SH3 da PLC expressa sob a forma de proteína de fusão GST.

A atividade quinase de Tie 2 é medida em um tampão MOPS 20 mM pH 7.2, contendo 10 mM MgCb, 1 mM DTT, 10 mM de glicerofosfato. Em uma placa 96 cavidades FlashPlate mantida sobre gelo, deposita-se uma mistura reacional composta de 70 de tampão quinase contendo 100

ng de enzima GST-Tie2 por cavidade. Em seguida 10 jllI da molécula a testar diluída em DMSO a uma concentração de 10 % máximo são acrescentados. Para um concentração determinada, cada medida é feita em quatro exemplares. A reação é iniciada, acrescentando-se 20 |il de solução, contendo 2 \x.g de GST-PLC, 2 uM de ATP frio e 1 uCi de 33P[ATP}. Após 1 hora de in-

cubação a 37 °C, a reação é parada, acrescentando-se 1 volume (100 mJ) de EDTA a 200 nM. Após eliminação do tampão de incubação, os cavidades são lavados três vezes com 300 uJ de PBS. A radioatividade é medida sobre um MicroBeta 1450 Wallac.

A inibição da atividade Ti2 é calculada e expressa em percenta-

gem de inibição em relação à atividade controle determinada na ausência de composto.

Atividade dos produtos preparados:A atividade dos produtos foi determinada por medida da inibição da atividade de Aurora 1, Aurora 2, CDK2 e Tie2. Os resultados são dados

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Claims (34)

1. Produto, caracterizado pelo fato de que corresponde à fórmula geral apresentada a seguir:em que: (I) Ri é independentemente selecionado no grupo constituídopor NHCO(R2),-NHCONH(R2),-NHCOO(R2), em que R2 é independentemente selecionado no grupo constituído por-H,-(CrC24)alquila,-(C3-C9) ciclo-alquila(-(C3-C9) cicloalquileno, heterocicloalquila, heterocicloalquileno, arila, heteroarila, (Ci-C6) alquil-arila,-(Ci-C6)alquil-heteroarila,-aril-(Ci-C6)alquila, heteroaril-(Ci-C6) alquila, eventualmente substituídos; (II) cada um dos R3, R4 e R5 é independentemente selecionado no grupo constituído por H,-(Ci-C6)alquila,-(CrC6) alquil-arila, (CrC6) alquil-heteroarila,-arila,-heteroarila, eventualmente substituídos, ou bem [(R3 e R4) ou (R3 e R5)] são ligados entre si para formar um heterociclo mono ou bicí-clico, saturado ou insaturado, compreendendo de 2 a 10 cadeias carbonadas e de 1 a 5 heteroátomos escolhidos dentre N, O e S, eventualmente substituído, ou para formar um grupamento N=CH-arila, esse arila sendo eventualmente substituído.

2. Produto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo 20 fato de que R5 é H.

3. Produto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que R4 é H.

4. Produto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que R4 é metila ou etila.

5. Produto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelofato de que R3 e R4 formam com o nitrogênio ao qual são ligados, um hete-rociclo de 5 a 6 cadeias contendo, além disso, se for o caso, um átomo de N, O, ou S, eventualmente substituído.

6. Produto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que R1 é NHCO(R2), R2 sendo tal como definido na reivindicação 1.

7. Produto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelofato de que R3 é arila ou heteroarila,-(CrC6) alquil-arila ou-(CrC6)alquil-heteroarila, eventualmente substituído.

8. Produto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que corresponde à fórmula (!'):<formula>formula see original document page 114</formula> em que:-cada um dos grupamentos R3, R4 e R5 são tais como definidos nas reivindicações 1 a 7,-R6 é escolhido dentre o grupo constituído pelo halogenio, (Cr C3) alquila-NR7R8, (CrC6)alcóxi, (C0-C3)alquila-heterociclo, (C0-C3)alquila-15 arila, (C0-C3) alquila heteroarila, (C0-C3) alquila-cicloalquila, em que os ciclos são eventualmente substituídos por um ou vários substituintes (CrC3) alquila, halogenio, alcóxi, e em que R7 e R8 são independentemente selecionados no grupo constituído por-H, (C0-C3) alquila, arila, (d-C3) alquila-N-[ (C0-C3) alquila]2.

9. Produto, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelofato de que R6 é em posição 3 ou 4.

10. Produto, de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que R6 é (C0-C3) alquila-heterociclo, esse heterociclo sendo eventualmente substituído por um ou vários substituintes (CrC3) alquila, halogenio, alcóxi.

11. Produto, de acordo com uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de que arila e heteroarila são cada um independentemente escolhidos dentre fenila, piridila, indolila, benzimidazolila, pirazolila, tienila e pirrolila, eventualmente substituído.

12. Produto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelofato de que é escolhido dentre:5-(N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1H-tieno[2,3-c]pirazol-3-il]-4-metóxi-benzamida,5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1H-tieno[2,3-c]pirazol-3-il]- 4-metóxi-benzamida,N-[5-(N'-ciclohexil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-4-metóxi-benzamida,N-[5-(N'-benzil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-4-metóxi-benzamida, N-{5-[N'-(2-etil-fenil-hidrazino-carboni]-1 H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il}-4-metóxi-benzamida,N-{5-[N'-(2-flúor-fenil-hidrazinocarbonil]-1 H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il}-4-metóxi-benzamida4-metóxi-N-[5-(N'-o-tolil-hidrazinocarbonil]-1H-tieno[2,3-c] pira-zol-3-il]-benzamida.N-[5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonÍI) 1 H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-4-morfolin-4-ilmetil-benzamida,4-Bromo-N-[5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil]-1 H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-benzamida, N-[5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil) 1 H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-4-(4-metil-piperazin-1-ilmetil-benzamida,4-(3,5-dimetil-piperazin-1-ilmetil)N-[5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil) 1 H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-benzamida,4-(3,5-dimetil-piperazin-1-ilmetil) N-[5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil- hidrazinocarbonil) 1 H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-benzamida,4-(4-metil-perhidro-1,4-diazepin-1 -ilmetil) N-[5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil) 1 H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-benzamida,4-(4-metil-perhidro-1,4-diazepin-1 -ilmetil) N-[5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil) 1H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-benzamida;N-[5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-4-piperazin-1-ilmetil-benzamida, N-{5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno [2,3-c]pirazol]-3-il}-4-piperazin-1-ilmetil-benzamida,N-[5-[N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil]-1 H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-4-(3-metil-piperazin-1-il metil)-benzamida;N-{5-[N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil]-1 H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il}-4-(3-metil-piperazin-1-ilmetil)-benzamida;4-dietilaminometil-N-[5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-benzamida; trifluoro-acetato,N-{5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il}-4-dietilamino metil)-benzamida, N-[5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-3-(4-metil-piperazin-1-il metil)-benzamida,N-[5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno [2,3-c] pirazol-3-il]-3-(4-metil-piperazin-1 -ilmetil)-benzamida,N-[5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno[2,3c] pirazol-3- il]-4-piperidin-1-ilmetil-benzamida,N-[5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil)-1H-tieno[2,3c] pirazol-3-il]-4-piperidin-1 -ilmetil-benzamida,N-[5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1H-tieno[2,3c] pirazol-3-il]-4-piperidin-1-ilmetil-benzamida, N-[5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil)-1H-tieno[2,3c] pirazol-3-il]-4-pirrolidin-1-ilmetil-benzamida,4-azetidin-1 -ilmetil-N-[5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno[2,3c] pirazol-3-il]-benzamida,4-{[(2-dimetilamino-etil)-metil-amino]-metil}-N-[5-(N'-metil-N'-fenil- hidrazinocarbonil)-1H-tieno[2,3c] pirazol-3-il]-benzamida;N-{5-[N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil]-1 H-tieno[2,3c] pirazol-3-il}-4-{[(2-dimetil amino-etil)-metil-amino]-metil}-benzamida,N-[5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1H-tieno[2,3c] pirazol-3-il]-4-perhidro-1,4-oxazepin-4-ilmetil-benzamidaN-{5-[N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil)-1H-tieno[2,3c] pirazol-3-il}-4-perhidro-1,4-oxazepin-4-ilmetil-benzamida, 5 N-[5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno[2,3c] pirazol-3-il]-3-morfolin-4-ilmetil-benzamidaN-[5-(N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil)-1H-tieno[2,3c] pirazol-3-il]-3-morfolin-4-ilmetil-benzamida,4-[(2-dietilamino-etilamino)-metil]-N-[5-(N'-metil-N'-fenil-10 hidrazinocarbonil)-1 H-tieno[2,3c] pirazol-3-il]-benzamida,N-{5-[N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil]-1H-tieno[2,3c] pirazol-3-il}-4-[(2-dietil amino-etilamino)-metil]-benzamida,4-[(metil-fenil-amino)-metil]-N-(5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno[2,3c] pirazol-3-il] benzamida, 15 4-[(diisopropilamino)-metil]-N-[5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno[2,3c] pirazol-3-il]-benzamida; trifluoroacetato,N-[5-(N'-benzil-hidrazinocarbonil)-1H-tieno[2,3c]pirazol-3-il]-4 metóxi-benzamida,4-Metóxi-N-[5-(N'-piridin-2-il-hidrazinocarbonil)-1H-tieno[2,3c] 20 pirazol-3-il]-benzamida,N-{5-[N'-(4-cloro-fenil)-N'-metil-hidrazinocarbonil]-1 H-tieno[2,3c] pirazol-3-il}-4-(4-metil-piperazin-1-il)-benzamida,N-[5-(N'-Benzil-N'-metil-hidrazinocarbonil)-1H-tieno[2,3c] pirazol-3-il]-4-(4-metil-piperazin-1-il)-benzamida, 25 N-(Piperidin-1 -il)-3-[4-(4-metil-piperazin-1 -il)-benzoil amino]-1 H-tieno[2,3c] pirazol-5 carboxamida,N-[5-(N'-benzil-hidrazinocarbonil]-1H-tieno[2,3c] pirazol-3-il]-4-(4-metil-piperazin-1-il)-benzamida,N-[5-(N'-Etil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno[2,3c] pirazol-3-30 il]-4-(4-metil-piperazin-1-il)-benzamida,N-[5-(N'-Benzil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1H-tieno[2,3c] pirazol-3-il]-4-(4-metil-piperazin-1-il)-benzamida,N-[5-(N'-Metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno[2,3c] pirazol-3-il]-4-(4-metil-piperazin-1-il)-benzamida,N-{5-[N'-(4-Cloro-fenil)-N'-ciclobutil metil-hidrazinocarbonil]-1 H-tieno[2,3c] pirazol-3-il}-4-(4-metil-piperazin-1-il)-benzamida, 5 N-{5-[N'-Etil-N'-(4-flúor-fenil)-hidrazinocarbonil]-1H-tieno[2(3c] pirazol-3-il}-4-(4-metil-piperazin-1 -il)-benzamida,N-{5-[N'-4-flúor-fenil)-N'-(2-metóxi-etil)-hidrazinocarbonil]-1H-tieno[2,3c] pirazol-3-il}-4-(4-metil-piperazin-1 -il)-benzamida,N-[5-(N'-Etil-N'-o-tolil-hidrazinocarbonil)-1H-tieno[2,3c] pirazol-3-10 il]-4-(4-metil-piperazin-1 -il)-benzamida,N-[5-(N'-Etil-N'-m-tolil-hidrazinocarbonil)-1H-tieno[2,3c] pirazol-3-il]-4-(4-metil-piperazin-1 -il)-benzamida,N-[5-(N'-Etil-N'-m-tolil-hidrazinocarbonil)-1H-tieno[2,3c] pirazol-3-il]-4-(4-metil-piperazin-1-il)-benzamida 15 N-{5-[N'-(4-flúor-fenil)-N'-isobutil-hidrazinocarbonil]-1 H-tieno[2,3c] pirazol-3-il}-4-(4-metil-piperazin-1-il)-benzamida,N-{5-[N'-(3-Bromo-fenil)-N'-etil-hidrazinocarbonil]-1H-tieno[2,3c] pirazol-3-il}-4-(4-metil-piperazin-1-il)-benzamida,6-(4-Metil-[1,4]diazepan-1-il)-N-[5-(N'-(metil-N'-fenil-20 hidrazinocarbonil)-1H-tieno[2,3c] pirazol-3-il]-nicotinamida,N-[5-(Benzilideno-hidrazinocarbonil)-1H-tieno[2,3c] pirazol-3-il]-4-(4-metil-piperazin-1 -il)-benzamida,N-[5-[N'-Metil-N'-fenil)-hidrazinocarbonil)-1H-tieno[2,3c] pirazol-3-il]-4-(2-morfolin-4-il-etóxi)-benzamida; 25 4-(4-metil-[1,4]diazepan-1-il)-N-[5-(N'-metil-N'-fenil-hidrazinocarbonil)-1 H-tieno[2,3c] pirazol-3-il]-benzamida.

13. Produto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizado pelo fato de que está sob a forma:1) não quiral, ou 30 2) racêmica, ou3) enriquecida em um estéreo-isômero, ou4) enriquecida em um enantiômero;e pelo fato de ser eventualmente salificado.

14. Processo de preparo de um produto de fórmula geral (I) a-presentada a seguir:em que Ri é NHCO(R2), e em que R3, R4 e R5 são tais como definidos anteriormente, esse produto de fórmula geral sendo obtido por:(I) acoplamento entre (i-a) um ácido de fórmula geral (X) apresentada a seguir:HOS-(X)em que R1 é tal como definido anteriormente, e em que PG é um grupo protetor da função NH livre intracíclico do núcleo tieno[2,3-c]pirazol, e 10 (i-b) uma hidrazina (R3)(R4)-N-NH(R5), em que R3, R4 e R5 sãotais como definidos anteriormente, em presença de um agente de acoplamento e em presença de uma base tal como uma amina terciária ou um carbonato de um metal alcalino; depois(II) clivagem de PG.

15. Processo de preparo de um produto de fórmula geral (X), deacordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que é obtido por saponificação da função éster do núcleo tiofeno de um produto de fórmula geral (IX):8(IX)em que R1 é tal como definido anteriormente.

16. Processo de preparo de um produto de fórmula geral (IX), de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que é obtido por acoplamento entre: 5 (I) um produto de fórmula geral (Ma) apresentada a seguir:Alkyl(lia)em que alquila é tal como definida anteriormente, e em que PG é um grupo protetor da função NH livre intracíclico do núcleo tieno[2,3-c]pirazol; e (II) um produto de fórmula geral (R2)CONH2, em presença:- de um catalisador tal como o iodeto de cobre (I); - de uma amina tal como o trans-1,2-diamino ciclohexano, otrans-1,2-bis(metilamino) ciclohexano ou, de preferência, o N,N'-dimetil-1,2-diaminoetano; e- de uma base tal como o fosfato tripotássico ou o carbonato decésio.

17. Processo de preparo de um produto de fórmula geral (lia), deacordo com a reivindicação 16, caracterizado pelo fato de que é obtido por reação entre um mercapto acetato de alquila Alquil-OCO-CH2-SH, em presença de uma base, tal como o carbonato de sódio e um composto (Mia):<formula>formula see original document page 121</formula>em que PG é tal como definido anteriormente.

18. Processo de preparo de um produto de fórmula geral (llla), de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que é obtido por (IK) formilação do 3,4,5-tribromo-pirazol para a obtenção de 3,5-dibromo-4-formil-pirazol (III), depois (II) proteção da função amina intracíclica de (III) pela introdução do grupo protetor PG.

19. Processo, de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que o grupo protetor PG é introduzido via:(I) reação com o etilvinil éter em presença de um ácido, tal como o ácido clorídrico, para a obtenção de um grupo PG = 1-etóxi-etila, no meio de um solvente inerte tal como o tolueno, ou:(II) reação com diterc-butildicarbonato em presença de uma base, tal como a trietilamina, a piridina, ou a N,N-dimetilamino-piridina, para a obtenção de um grupo PG = terc-butiloxicarbonila, no meio de um solventeinerte, tal como o diclorometano.

20. Composição farmacêutica, compreendendo um produto, como definido em uma das reivindicações 1 a 13, em combinação com um ex-cipiente farmaceuticamente aceitável.

21. Utilização de um produto, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 13, como inibidor de uma proteína quinase.

22. Utilização, de acordo com a reivindicação 21, caracterizada pelo fato de que a quinase é escolhida dentre Aurora 1, Aurora 2, CDK1, CDK2, CDK4, FAK, KDR e Tie2.

23. Utilização, de acordo com a reivindicação 22, caracterizada pelo fato de que a quinase é a Aurora 2.

24. Utilização de um produto, como definido em uma das reivindicações 1 a 13, para a fabricação de um medicamento útil para tratar umestado patológico, em particular o câncer.

25. Utilização de um produto, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 13, para a fabricação de um medicamento útil, para tratar um estado patológico escolhido entre a psoríase, o glaucoma, as leu-cemias, as doenças ligadas ao sistema nervoso central, as inflamações, e as doenças ligadas a uma desregulagem, das proteínas JNK.

26. Produto, caracterizado pelo fato de corresponder à fórmula geral (XIV) apresentada a seguir:alkyle = alquila

27. Produto, caracterizado pelo fato de que corresponde à fórmula geral (XlVa), apresentada a seguir:

28. Produto, caracterizado pelo fato de que corresponde à fórmula geral (XV) apresentada a seguir:iPG(XV)em que PG é um grupo protetor.

29. Produto, caracterizado pelo fato de que corresponde à fórmula geral (XVI) apresentada a seguir:<formula>formula see original document page 123</formula>(XVI)em que R3, R4 e R5 são tais como definidos em uma das reivindicações 1 a 7.

30. Produto, caracterizado pelo fato de que corresponde à fór-mula geral (XVII) apresentada a seguir:<formula>formula see original document page 123</formula>(XVII)em que R3, R4, R5 são tais como definidos em uma das reivindicações 1 a 7 ePGéum grupo protetor.

31. Produto, caracterizado pelo fato de que corresponde à fór-10 mula geral (XVIII) apresentada a seguir:<formula>formula see original document page 123</formula>(XVIII)em que R3, R4, R5 são tais como definidos em uma das reivindicações 1 a 7.

32. Produto, caracterizado pelo fato de que corresponde à fórmula geral (XIX) apresentada a seguir:em que R3, R4, R5 são tais como definidos em uma das reivindicações 1 a 7.

33. Produto, caracterizado pelo fato de que corresponde à fórmula geral (XX) apresentada a seguir:H2N(XX)em que R3, R4, R5 são tais como definidos em uma das reivindicações 1 a 7.

34. Produto, caracterizado pelo fato de que corresponde à fórmula geral (IVb) apresentada a seguir:em que R3, R4, R5 são tais como definidos em uma das reivindicações 1 a 7 10 e PG é um grupo protetor.