CH405340A

CH405340A - Procédé de préparation de polypeptides de haut poids moléculaire

Info

Publication number: CH405340A
Application number: CH8133759A
Authority: CH
Original assignee: Prositec S A
Priority date: 1959-12-01
Filing date: 1959-12-01
Publication date: 1966-01-15

Description

Procédé de préparation de polypeptides de haut poids moléculaire
La présente invention concerne la préparation de polypeptides de haut poids moléculaire.

Les corps de Leuchs sont des anhydrides mixtes obtenus par l'action de certains réactifs sur des amino-acides. Par exemple:
EMI1.1

Ces anhydrides mixtes sont peu stables et donnent naissance par décarboxylation à des radicaux libres dont la vie moyenne est suffisamment longue pour qu'ils puissent se souder à eux-mêmes ou à des radicaux semblables, appartenant à des chaînes hydrocarbonées différentes.

On peut obtenir ainsi des polypeptides de poids moléculaire élevé. Les peptides simples et les polypeptides binaires sont bien connus. On a réussi aussi la synthèse d'un polypeptide ternaire, le glutamylleucyl-lysine.

En revanche, les polypeptides supérieurs ont été jusqu'ici très difficiles à préparer et les rendements deviennent très faibles.

Il a été découvert maintenant que, en respectant certaines conditions déterminées, il est possible de préparer par synthèse des polypeptides supérieurs, notamment des hexapeptides voire des octopeptides, avec un rendement de 80 /o, la réaction étant totale en une heure environ.

L'invention a pour objet un procédé de préparation de polypeptides, de haut poids moléculaire, caractérisé en ce qu'un mélange d'acides aminés est transformé en le mélange d'anhydrides mixtes par réaction soit avec un ester chloroformique et du chlorure de thionyle soit avec du phosgène, on dissout le mélange d'anhydrides mixtes ainsi obtenus dans un mélange de glycol éthylénique fraîchement redistillé et d'alcool éthylique redistillé sur du magnésium, mélange solvant dans lequel lesdits anhydrides mixtes sont décarboxylés en engendrant des radicaux libres qui s'associent en un polypeptide.

La transformation des acides aminés en anhydrides mixtes peut se faire en recourant soit à un ester chloroformique et au chlorure de thionyle, soit au phosgène. Les corps complexes susceptibles d'être obtenus par le procédé selon l'invention ouvrent un chemin d'approche vers les holoprotéines, avec toutes les perspectives d'intérêt que cela comporte pour la chimie, la biochimie et la biophysique, et surtout la pharmacologie.

Dans le domaine de la médecine, c'est l'immunochimie qui pourra utiliser le plus fructueusement ces corps. On sait en effet que l'insuline et le venin de cobra, par exemple, sont également des holoprotéines, donc uniquement composées d'amino-acides, et leurs propriétés sont pourtant tout à fait exceptionnelles.

Exemple
On mélange les six acides aminés simples (purs, racémiques), soit le glycocolle, l'alanine, la valine, la leucine, la phénylalanine et l'isoleucine, dans les proportions respectives de 0,4 g, 2,4 g, 6,0 g, 10,0 g, 3,6 g et 6,0 g. On ajoute aux 28,4 g du mélange des acides aminés 3 cm3 de soude 2 N. On opère dans un ballon muni d'un agitateur. La dissolution est incomplète, le pH de la solution se stabilisant aux environs de 10,35. On verse alors simultanément, en deux filets liquides, 17 cm3 de chloroformiate de méthyle et 3 cm3 de soude 2 N. On verse les deux liquides ensemble de façon à avoir une introduction terminée en même temps dans les deux ampoules, l'opération s'étendant sur 30 minutes environ. Le ballon de réaction étant sur bain de glace pilée, la température passe de 00 initialement à 80 en fin d'introduction.

Après 20 minutes, la température retombe à 20 C. Le bain de glace est remplacé par de l'eau à 200, l'agitation est toujours maintenue et la température de la solution remonte en une demiheure, de 20 à 200. Le pH est alors de 10.

On continue l'agitation pendant une heure environ, et le pH se fixe à 9,4. On ajoute alors 32 cm d'acide chlorhydrique concentré. Il se forme un précipité blanc collant sur les parois.

On effectue deux extractions en utilisant 162 cm3 d'éther sulfurique. Après chaque séparation, l'éther est lavé avec deux fois 50 cm3 d'eau distillée. Les eaux mères aqueuses sont encore extraites par 100 cm3 d'éther sulfurique. Les solutions éthérées sont concentrées, mises dans un cristallisoir taré où le mélange des amides, qui se présente comme huile incolore, finit de perdre l'éther. Rendement 80 O/o.

Sur 12,2 g du mélange d'amides ainsi préparé, on fait agir 10 cm3 soit 16,5 g de chlorure de thionyle.

La réaction est assez violente au début. On maintient la température inférieure à 200. On laisse réagir pendant 15 heures environ. On obtient une solution marron rougeâtre, claire. On évapore sous vide à 400 jusqu'à ce que tout le chlorure de thionyle restant soit éliminé. Il reste 8,8 g de mélange d'anhydride brut, soit un rendement de 87 O/o.

8,8 g du mélange d'anhydrides sont dissous dans un mélange de 6 cm : 3 de glycol éthylénique redistillé depuis moins d'une heure et de 15,5 cm3 d'alcool éthylique séché par distillation sur magnésium. On obtient une solution brune qui se transforme en un gel rigide en une heure environ. Desséché sous vide, le gel perd ses solvants et se transforme en une poudre qui est épuisée par l'eau. Le résidu se présente comme une poudre blanche qui est un polypeptide de haut poids moléculaire.

Claims

REVENDICATION Procédé de préparation de polypeptides, de haut poids moléculaire, caractérisé en ce qu'un mélange d'acides aminés est transformé en le mélange d'anhydrides mixtes par réaction soit avec un ester chloroformique et du chlorure de thionyle soit avec du phosgène, on dissout le mélange d'anhydrides mixtes ainsi obtenus dans un mélange de glycol éthylénique fraîchement redistillé et d'alcool éthylique redistillé sur du magnésium, mélange solvant dans lequel lesdits anhydrides mixtes sont décarboxylés en engendrant des radicaux libres qui s'associent en un polypeptide.

SOUS-REVENDICATIONS 1. Procédé selon la revendication, caractérisé en ce que le mélange initial comprend au moins quatre acides aminés.

2. Procédé selon la revendication, caractérisé en ce que le mélange initial comprend six acides aminés simples.

3. Procédé selon la revendication, caractérisé en ce que le mélange brut des anhydrides mixtes est acidifié, soumis à une extraction par l'éther sulfurique, la solution éthérée est lavée à l'eau et le solvant évaporé.

4. Procédé selon la revendication, caractérisé en ce que le produit de réaction obtenu dans le mélange de glycol éthylénique et d'alcool éthylique est débarrassé des solvants et épuisé par l'eau, le résidu constituant le polypeptide cherché.