CS294791A3

CS294791A3 - Fibrinogen receptor antagonists

Info

Publication number: CS294791A3
Application number: CS912947A
Authority: CS
Inventors: Mark E Duggan
Original assignee: Merck & Co Inc
Priority date: 1990-09-27
Filing date: 1991-09-26
Publication date: 1992-04-15
Also published as: EP0479481A3; IL99539A0; PT99095A; FI914532A7; IE913380A1; NO913786L; FI914532A0; AU8477891A; CA2052057A1; NO913786D0; HU913074D0; CN1060293A; MX9101311A; HUT60751A; KR920006373A; ZA917695B; JPH0517498A; EP0479481A2

Description

Antagonisty receptoru fibrinogenu

Oblast techniky - —___ 1

Vynález se týká nových antagonistů receptoru fibrinogenuobecného vzorce I, uvedeného dále, kterých je možno používatpři inhibici vazby fibrinogenu na krevní destičky a inhibiciagregace krevních destiček po podání savcům, přednostně lidem.

Dosavadní stav techniky

Interakce krevních destiček s koagulací a fibrinolytickýmisystémy při udržování hemostázy se může stát patologickou a vy-žadovat prevenci a léčení. Antagonisty receptory fibrinogenuobecného vzorce I, který je uveden dále, jsou užitečné při léče-ní různých chorob, které mají vztah k agregaci krevních destičeka tvorbě fibrinu. Zájem o inhibitory krevních destiček se znovu objevil, vdůsledku lepšího porozumění úloze krevních destiček a trombózypři patogenezi vaskulárních chorob, jako je nestabilní angína,akutní infarkt myokardu a mozková mrtvice.

Krevní destičky jsou bezjaderné fragmenty, které mají podobubuněk a jsou obsaženy v krvi všech savců. Podílejí se na koagulacikrve. Fibrinogen je glykoprotein, který je přítomen jako normálnísložka v krevní plasmě. Fibrinogen se zúčastňuje agregace krev-ních destiček a tvorby fibrinu při mechanismu srážení krve. Des-tičky se ukládají na místech poranění cév, na nichž četné fyzio-logické agonisty iniciují agregaci krevních destiček, která na-konec vede k vytvoření zátky tvořené krevními destičkami, kteráminimalizuje ztrátu krve. Jestliže zátka z destiček vznikne uvnitřcév, naruší se normální tok krve. Receptory membrán destičekjsou důležité v procesu adheze a agregace destiček. Je známo,že pro normální funkci krevních destiček je důležitá interakce 2 s receptorem komplexu Ilb/IIIa membrán destiček.

Zimmermann a další, US patent č. 4 683 291, popisuje pepti-dy, které jsou užitečné při studii interakcí fibrinogen - krevnídestička, krevní destička - krevní detička a buňka - buňka. 0těchto peptidech se uvádí, že jsou užitečné tam, kde je zapotře-bí retardovat nebo zabraňovat vzniku trombů nebo krevních sraže-nin v krvi. Tyto peptidy mají strukturu odpovídající obecnémuvzorci

H2N-(Ch)-Arg-Gly-Asp-(Cx)-H kde Ch a Cx představují sekvence aminokyselin.

Pierschbacher a další, US patent č. 4 589 881, popisujesekvenci 11,5 kD polypeptidového fragmentu fibronektinu, kterýje zodpovědný za aktivitu fibronektinu vyvolávající připojováníbuněk. Tento fragment má následující konkrétní složení H-Tyr-Ala-Val-Thr-Gly-Arg-Gly-Asp-Ser-Pro-Ala-Ser-Ser-Lys-Pro- -Ile-Ser-Ile-Asn-Tyr-Arg-Thr-Glu-Ile-Asp-Lys-Pro-Ser-Gln-Met-OH.

Ruoslahti a další, US patent č. 4 614 517, popisují tetra-peptidy, které pozměňují aktivitu buněk při jejich připojováník různým substrátům. Uvádí se, že tyto peptidy "v podstatě sestá-vají" z následující sekvence

X-Arg-Gly-Asp-Ser-Y kde X představuje atom vodíku nebo jednu nebo více aminokyselin aY představuje hydroxyskupinu nebo jednu nebo více aminokyselin.Polypeptidy, které Ruoslahti a další syntetizovali při "hledánínejmenšího peptidu vykazujícího aktivitu při vazbě buněk" jsousouhrnně uvedeny na obr. 1. Ruoslahti a další, US patent č. 4 578 079, popisují podobné tetrapeptidy, v nichž je Ser nahrazenThr nebo Cys. 3

Pierschbacher a další, Proč. Nati. Acad. Sci. USA, sv. 81,str. 5 985 - 5 988, říjen 1984, popisují varianty míst rozpozna-ných buňkami ve fibronektinu, které si zachovávají aktivitu vy-volávající spojení. Pierschbacher a další dále zjištovali akviti-tu četných struktur, které se velmi podobají peptidu Arg-Gly-Asp--Ser při připojování buněk a zjistili, že "argininové, glycinovéa aspartátové zbytky nemohou být zahrazeny ani velmi blízkýmiaminokyselinami, ale že serin je možno nahradit několika aminoky-selinami, aniž by došlo ke ztrátě aktivity".

Ruoslahti a další, Science, sv. 238, str. 491 - 497, 23. října1987, se zabývají proteiny, které se podílejí na adhezi buněk.Konkrétně uvádějí, že "objasnění sekvence aminokyselin doményfibronektinu zodpovědné za připojení buněk a její duplikace sesyntetickými peptidy potvrzují, že sekvence Ar-Gly-Asp (RGD)je základní strukturou, kterou buňky ve fibronektinu rozeznávají".

Cheresh, Proč. Nati. Acad. Sci. USA, sv. 84, str. 6 471 -- 6 475, září 1987, popisuje Arg-Gly-Asp-orientovaný receptoradheze, který se podílí na připojení k fibrinogenu a von Wille-brandovu faktoru.

Adams a další, US patent č. 4 857 508, popisuje tetrapeptidy,které inhibují agregaci krevních destiček a tvorbu trombu. Tetra-peptidy mají složení odpovídající obecnému vzorci

X-Gly-Asp-Y kde X představuje H2NC(=NH)NH(CH2)nCH(Z)COOH nebo Ac-Arg, kdeZ znamená H, NH2 nebo NH-acyl a n je Číslo 1 až 4 aY představuje Tyr-NH2, Phe-NH2 nebo skupinu specificky defi- novaného vzorce. Úkolem tohoto vynálezu je nalézt antagonisty receptoru fibri- nogenu, kterých by bylo možno použít při inhibici vazby fibrino- genu ke krevních'destičkám a k inhibici agregace krevních destiček. 4

Jedním z aspektů tohoto vynálezu jsou přímo sloučeniny, kterépůsobí jako antagonisty receptoru fibrinogenu. Úkolem vynálezuje dále vyvinout metody inhibice vazbu fibrinogenu ke krevnímdestičkám a inhibice agregace krevních destiček, spočívajícív podávání nových sloučenin, které jsou antagonisty receptorufibrinogenu. Tyto a další úkoly, které vynález řeší jsou podrob-něji popsány dále.

Podstata vynálezu

Předmětem vynálezu jsou sloučeniny, které působí jako anta-gonisty receptoru fibrinogenu a které mají strukturu odpovídajícíobecnému vzorci I 0

(X-(CH2) m-Y-(CH2)n-C)-Gly-Asp-AA (I) kde význam jednotlivých symbolů je uveden dále, pro použitípři inhibici vazby fibrinogenu na krevní destičky a inhibiciagregace krevních destiček. Shora uvedených sloučenin je možnopoužívat při ovlivňování receptoru fibrinogenu podáváním tera-peuticky účinného, ale netoxického množství této sloučeniny sav-cům, přednostně lidem. Předmětem vynálezu je také farmaceutickýpřípravek obsahující farmaceuticky vhodný nosič, v němž je dispergováno účinné, ale netoxické množství této sloučeniny. Dále budevynález popsán podrobněji.

Sloučeniny obecného vzorce I, které působí jako antagonistyreceptoru fibrinogenu, jsou tedy užitečné při inhibici vazbyfibrinogenu na krevní destičky a inhibici agregace krevních des-tiček. Jak již bylo uvedeno, lze strukturu antagonistů receptorufibrinogenu ilustrovat obecným vzorcem I 0

II (I)

(X-(CH2)m-Y-(CH2) n - C)-Gly-Asp-AA 5 kde představuje skupinu vzorce R-n"2$.r1ČCH2)p ,

B- / z* nebo ,1 A nebo B představuje N-R, přičemž když A představuje N-R, B představuje -CH2” a když B představuje N-R, A představuje -CH-; představuje skupinu vzorce R2

I -C- o

II -C-NH- , O, R3

O 2 11 N-R2 , -C- -S(O)q-CH2-, \=/ -SO2NH-, nebo NHR2

I 12 3 R, R , R a R nezávisle představujesubstituovaný alkyl nebo vodík; AA představuje L-aminokyselinu; m představuje číslo 1 až 10; n představuje číslo 0 až 9; q představuje číslo 0 až 2 vždy alkyl, aryl, alkaryl, 6 p představuje číslo 1 až 6.

Do rozsahu vynálezu spadají i farmaceuticky vhodné soli slouče-nin obecného vzorce I.

V přednostním provedení tohoto vynálezu mají antagonistyreceptoru fibrinogenu strukturu odpovídající obecnému vzorci I 0

II (C-(CH~)-Y-(CH~)-C)-Gly-Asp-AA (I) z m z n kde X představuje skupinu obecného vzorce

R R-tf '-^-r1 R-N , N(CH2)p nebo Y představuje skupinu vzorce R2

I —C— , 0, nebo -S(0) -CH9-;i·, q

RJ 19 3 R, R , R a R nezávisle představuje vždy alkyl, aryl, alkaryl, substituovaný alkyl nebo vodík; AA představuje L-aminokyselinu; m představuje číslo 1 až 5; n představuje číslo 0 až 5; q představuje číslo 0 až 2; P představuje číslo 2 až 4.

Do rozsahu tohoto přednostního provedení také spadají farmaceu·ticky vhodné soli obecného vzorce I. 7 Přednostní sloučeninou podle tohoto vynálezu je sloučeninanásledujícího vzorce

Tuto sloučeninu je možno alternativně označovat vzorcem PIB-Gly-Asp-Trp.

Jako aminokyseliny (AA) , kterých lze používat podle tohotovynálezu, je možno uvést L-aminokyseliny, uvedené dále:

Ala, alanin; Arg, arginin; Asn, aspargin; Asp, aspartová kyseli-na; Cys, cystein; Gin, glutamin; Glu, glytamová kyselina., Gly,glycin; His, histidin; Ile, isoleucin; Leu, leucin; Lys, lysin;

Met, methionin; Phe, fenylalanin; Pro, prolin; Ser, serin; Thr,threonin; Trp, tryptofan; Tyr, tyrosin a Val, valin. Shora uvede-né standardní zkratky jsou běžné používány v oboru peptidovéchemie. Asp ve vzorci I sloučenin podle tohoto vynálezu předsta-vuje L-aminokyselinu.

Kromě trojpísměnových zkratek, používaných pro označováníaminokyselin, se v tomto popisu také používá následujících zkratek:Bn, benzyl; NMM, N-methylmorfolin; HOBt, 1-hydroxybenzotriazol; EDC, 1-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidhydrochlorid; DMF, dimethylformamid; Pib, 4-(4-piperidyl)butanoyl; a Boc-Asp-(Bn),N-Boc-Asp-^-benzylester.

Farmaceuticky vhodné soli sloučenin obecného vzorce I zahr-nují obvyklé netoxické soli nebo kvarterní amoniové soli slouče-nin obecného vzorce I, vytvořené například za použití netoxickýchanorganických nebo organických kyselin. Tak například takové 8 obvyklé netoxické soli zahrnují soli odvozené od anorganickýchkyselin, jako je kyselina chlorovodíková, bromovodíková, sírová,amidosulfonová, fosforečná, dusičná apod.; a soli odvozené odorganických kyselin, jako je kyselina octová, propionová, janta-rová, glykolová, stearová, mléčná, jablečná, vinná, citrónová,askorbová, pamoová, maleinová, hydroxymaleinová, fenyloctová,glutamová, benzoová, salicylová, sulfanilová, 2-acetoxybenzoová,fumarová, toluensulfonová, methansulfonová, ethandisulfonová,štavelová, isethionová apod.

Farmaceuticky vhodné soli podle vynálezu je možno synteti-zovat ze sloučenin obecného vzorce I, které obsahují bázickýnebo kyselý zbytek, konvenčními chemickými postupy. Obvykle setyto soli připravují reakcí volné báze nebo kyseliny se stechi-metrickým množstvím nebo přebytkem požadované solitvorné anorga-nické nebo organické kyseliny nebo báze ve vhodném rozpouštědlenebo různých rozpouštědlových směsích.

Farmaceuticky vhodné soli těch sloučenin obecného vzorce I,které jsou kyselinami, je možno také snadno připravovat obvyklýmipostupy, napříkad tak, že se na kyselinu obecného vzorce I působívhodnou bází, jako například hydroxidem alkalického kovu nebokovu alkalických zemin, například hydroxidem sodným, draselným,lithným, vápenatým nebo hořečnatým nebo organickou bází, jakojsou aminy, například dibenzylethylendiamin, trimethylamin, pipe-ridin, pyrrolidin, benzylamin apod. nebo kvarterním amoniovýmhydroxidem, jako je tetramethylamoniumhydroxid apod.

Sloučeniny obecného vzorce I inhibují vazbu fibrinogenuke krevním destičkám a inhibují také agregaci krevních destiček.Proto jsou tyto sloučeniny užitečné jako farmaceutická činidlapro léčení savců, zejména lidí. Sloučeniny podle vynálezu semohou podávat pacientům v těch případech, kdy je třeba předchá-zet trombóze inhibicí vazby fibrinogenu na receptor glykoproteinového komplexu Ilb/IIIa membrány destiček. Jsou užitečné při chi-rurgických zákrocích na periferních tepnách (tepenné rouby,karotické endarterektomii) a při kardiovaskulární chirurgii, 9 při níž manipulace s arteriemi a orgány a/nebo interakce krevníchdestiček s umělými povrchy vede k agregaci a konsumpci destiček.Agregované krevní destičky mohou způsobovat tromby a tromboembó-lii. Sloučeniny podle vynálezu je možno podávat pacientům, kteříse podrobili takovým chirurgickým zákrokům, aby se u nich zabrá-nilo vzniku trombů a tromboembólii. Při kardiovarkulární chirurgii se pro okysličování krverutinně používá mimotělního krevního oběhu. Při tom krevní des-tičky ulpívají na vnitřním povrchu zařízení pro mimotělní oběh. .Adheze krevních destiček je závislá na interakci mezi GPIIb/IIIaná membránách destiček a fibrinogenem adsorbovaným na tomto po-vrchu (Gluszko a další, Amer. J. Physiol., 1987, 252:H, str. 615 - 621) . Krevní destičky, které se z umělého povrchu uvolňu-jí, mají zhoršenou hemostatickou funkci. Sloučeniny podle vyná-lezu je možno podávat za účelem zabránění této adhezi. Z jiných aplikací sloučenin podle vynálezu je možno uvéstprevenci trombózy způsobené krevními destičkami, tromboembólie,reokluze a restenoze v průběhu trombolytického léčení a po něma prevenci trombózy způsobené krevními destičkami, tromboembólie,reokluze a restenoze při angioplastice koronárních a jiných tepena při zákrocích, při nichž se vytváří bypass koronární arterie.Sloučenin podle vynálezu je také možno používat pro prevencinebo modulaci průběhu infarktu myokardu, nestabilní anginy atrombotické mozkové mrtvice.

Sloučeniny obecného vzorce I je možno podávat savcům, před-nostně lidem, bud samotné, nebo přednostně v kombinaci s farma-ceuticky vhodnými nosiči nebo ředidly, popřípadě za spolupoužitíznámých pomocných látek, jako je kamenec, ve formě farmaceutické-ho přípravku sestaveného standardními farmaceutickými postupy.Sloučeniny podle vynálezu je možno podávat orálně nebo parente-rálně, jako například intravenózně, intramuskulárně, intraperi-toneálně, subkutánně a topikálně. 10

Když se antagonisty receptoru fibrinogenu podle vynálezumají podávat orálně, mohou se například zpracovávat na takovépřípravky, jako jsou tablety nebo kapsle nebo vodné roztoky nebosuspenze. V případě tablet pro orální použití se používá obvyk-lých nosičů, jako je laktóza a kukuřičný škrob a mazadel, jakoje stearan hořečnatý. Vhodnými ředidly pro kapsle určené proorální podávání jsou například laktóza a sušený kukuřičný škrob.Mají-li se sloučeniny podle vynálezu podávat orálně ve forměvodných suspenzí, mísí se účinná složka s emulgačními a suspenz-ními činidly, Je-li to žádoucí, mohou se také přidávat sladidlaa/nebo aromatizační látky. Při intramuskulárním, intraperitone-álním, subkutánním a intravenózním podávání se obvykle používásloučenin podle vynálezu ve formě sterilních roztoků” účinné slož-ky. Hodnotu pH těchto roztoků je možno účelně nastavovat pomocípufrů. Celkovou koncentraci rozpuštěných látek je při přípravěroztoků určených pro intravenózní podávání zapotřebí regulovattak, aby byl přípravek isotonický. Předmětem vynálezu je také farmaceutický přípravek určenýpro léčení chorob spojených s agregací krevních destiček a tvor-bou fibrinu a způsob jeho výroby. Tento přípravek se vyrábí smí-sením terapeuticky vhodného, ale netoxického množství sloučeninyobecného vzorce I s farmaceuticky vhodnými nosiči nebo ředidly. -Přípravky podle tohoto vynálezu obsahují antagonisty recep-toru fibrinogenu a farmakologicky vhodné nosiče, například roz-tok chloridu sodného o hodnotě pH například 7,4. Přípravky proinhibici agregace destiček podle vynálezu se mohou kombinovats trombolytickými činidly, jako s aktivátory plasminogenu nebostreptokinázou, které rovněž inhibují agregaci krevních destiček.Také je možno je kombinovat s antikoagulanty, jako je heparin,aspirin nebo warfarin. Za přednostní způsob podávání se v současnédobě považuje intravenózní podávání. Sloučeniny podle vynálezujsou rozpustné ve vodném prostředí, a proto je možno je účinnněpodávat ve formě roztoku. 11

Používá-li se sloučeniny obecného vzorce I jako antagonistyreceptoru fibrinogenu u humánních pacientů, stanoví ošetřujícílékař denní dávky obvykle v závislosti na věku, hmotnosti a ode-zvě konkrétního pacienta a na prudkosti příznaků choroby.

Jako jeden příklad aplikace sloučeniny podle vynálezu jemožno uvést intravenózní podání oběti srdeční mrtvice, kteráje podrobena angioplastice. Podání se uskutečňuje v průběhu angioplastiky nebo několik minut po ní a účinná látka se dávkuje vmnožství postačujícím pro inhibici agregace krevních destiček,například v množství, kterým lze dosáhnout ustálené koncentraceúčinné látky v plasmě v rozmezí od 0,01 do 30/UM/kg, přednostněod asi 0,3 do 3yuM/kg. Po dosažení této hladiny se pacientoviaplikuje infúze v množství asi 1 až 100/UM/kg/min, přednostněasi 10 až 30yuM/kg/min pro udržení inhibice agregace krevníchdestiček. Pokud stav pacienta vyžaduje chirurgický zásah bypass,může se podávání sloučeniny podle vynálezu ihned přerušit, anižby to způsobilo komplikace v průběhu chirurgického zásahu, knimž za použití jiných látek, jako je aspirin nebo monoklonálníprotilátka, dochází v důsledku toho, že jejich účinek trvá něko-lik hodin po přerušení podávání.

Do rozsahu tohoto vynálezu také spadá farmaceutický přípra-vek obsahující sloučeninu podle tohoto vynálezu a aktivátor plas-minogenu tkáňového typu nebo streptokinázu. Vynález se také týkázpůsobu vyvolávání trombolýzy a zábrany reokluze u pacientů,kterým se podává účinné množství přípravku podle vynálezu.

Sloučeniny obecného vzorce I se připravují podle následují-cích reakčních schémat: 12

Schéma I

Boc-Asp(Bn) a) isobutylchlorformiát, ethylacetát, NMM -15 C Boc-Asp(Bn)-Trp(Bn)

b) Trp(Bn), NMM HCl(g), ethylacetát, anisol,

-20 až 5’C

Boc-Gly-Asp(Bn)-Trp(Bn)

a) isobutylchlorformiát,ethylacetát, NMM

V HC1.Asp(Bn)-Trp(Bn)

b)’Boc-Gly, NMM HCl(g),ethylacetát,anisol,

-10*C HC1.Gly-Asp(Bn)-Trp(Bn)

Bn = benzyl NMM = N-methylmorfolin 13

Schéma II HN.

BOC2O, DMF, NEtg BOCN

O°C

a) oxalylchloridCH2C12, NEt3, -78°C b) Ph3P=CHCO2Et,

-78° to 0°C

BOCN

1 0% Pd/C, H2co2Et ethylacetát BOCN

CO2Et 1 N NaOH, ethanol

BOCN ( + HC1· Gly-asp(Bn)-Trp(Bn) 10

EDC, HOBt, DMF, NMH 0°C až 25°C BOCN^^^''^^ As p( Bn) - Tr p( Bn) 10% Pd/C, ethylacetát ./ethanol (1: 1),H2

BOCN -asp-Trp

HCl(g), ethylacetát, anisol , -5°C HC1 ♦ HN^ As p-Tr p 12 13 14

Vynález se možno realizovat i jinými konkrétními formami,aniž by bylo zapotřebí rezignovat na jeho základní znaky a vzdá-lit se jeho podstatě. Vynález je blíže popsán v následujícíchpříkladech provedení. Konkrétně použité látky a podmínky majípouze ilustrativní charakter a v žádném směru neomezují rozsahvynálezu, který je vymezen pouze připojenými nároky. Všechnyanalýzy prováděné sloupcovou chromatografií typu flash a TLCse provádějí na silikagelu. Všechna NMR spektra byla získánana přístroji Varian 300 MHz. Příklady provedeni vynálezu Příklad 1 Příprava Boc-Asp(Bn)-Trp(Bn) (sloučenina č. 2) K roztoku Trp(Bn) (sloučenina č. 1) (25 g, 80 mmol) v N-methylmorfolinu (NMM; 9 ml, 85 mmol) a ethylacetátu (800 ml)o teplotě -15°C (led/ethanol) se za míchání přidá isobutylchlor-formiát (10,4 ml, 80 mmol) ve formě proudu. Po 20 minutách seke vzniklé heterogenní směsi přidá Trp(Bn) (25 g, 75 mmol) apotom NMM (9,3 ml). Po dvou hodinách se směs zředí vodou a pře-vede do dělící nálevky. Obsah dělící nálevky se protřepe a necha-jí se rozdělit fáze. Organická fáze se postupně promyje 5% roz-tokem hydrogensÍránu draselného, nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a roztokem chloridu sodného, vysuší síranem hořečnatým a zkoncentruje. Získá se dipeptid (sloučenina č. 2) (41 g) ve formě hnědého oleje. TLC Rf=0,73 (ethylacetát/hexany, 1:1) Příklad 2 Příprava Asp(Bn)-Trp(Bn).HC1 (sloučenina č. 3)

Roztok sloučeniny č. 2 (40 g, 67 mmol) a anisolu (14,5 ml,135 mmol) v ethylacetátu (670 mí) se za mechanického míchání 15 intenzívně probublává plynným chlorovodíkem. Teplota uvnitř ná-doby je zpočátku -40°C (chlazení směsí isopropylalkoholu a suché-ho ledu), ale v průběhu 30 minut vzroste na -20°C. Probubláváníchlorovodíkem se přeruší a reakční směs se nechá během 1,0 hodi-ny ohřát na -5°C. Potom se reakční směsí po dobu 2,5 hodiny pro-bublává dusík, aby se odstranil přebytek chlorovodíku. K hetero-genní směsi se přidá ether (400 ml), aby se vyvolalo účinné srá-žení. Pevná látka se odfiltruje, promyje etherem a uloží přesnoc za vakua. Získá se hydrochlorid (sloučenina č. 3) (34,8 g) ve formě špinavě bílé pevné látky. TLC Rf=0,51 (9:1:1 CH2C12/CH3OH/AcOH) Příklad 3

Boc-Gly-Asp(Bn)-Trp(Bn) (sloučenina č. 4) K roztoku ethylacetátu (650 ml), Boc-Gly (12,3 g, 70 mmol)a NMM (8,2 ml, 75 mmol) o teplotě -15°C (ethanol/led) se za mí-chání přidá ve formě proudu isobutylchlorformiát (9,1 ml, 70 mmol),přičemž vznikne jemná sraženina. Po 15 minutách se přidá hydro-chlorid aminu (sloučenina č. 3) (34 g, 64 mmol) v DMF (100 ml) a potom NMM (8,2 ml). Po 1,5 hodiny se reakční směs promyje vo-dou, 5% roztokem hydrogensíranu draselného, nasyceným roztokemhydrogenuhličitanu sodného a roztokem chloridu sodného, vysušíse síranem hořečnatým a zkoncentruje. Zbývající olej se tritu-ruje s etherem, za vzniku bílé pevné látky. Filtrací se oddělítripeptid (sloučenina č. 4) (37,8 g) ve formě bílé pevné látky. TLC Rf = 0,27 (1 : 1 ethylacetát/hexany); 1H NMR (CDC13) δ 8,76 (d, J = 7 Hz, 1H), 8,66 (d, J = 7 Hz, 1H), 8,10 (m, 2H), 7,49 (d, J - 8 Hz, 1H) , 7,18-7,40 (m) , 7,08 (t, J » 7 Hz, 1H), 7,00 (t, J = 7 Hz, 1H) 5,07 (d, J = 2 Hz, 2H), 5,02 (d, J = 3Hz, 2H) , 4,80 (m, 1H) , 4,56 (m, 1H), 3,70 (m, 2H), 3,50 (m, 2H), 3,14 (m, 2H), 2,73 (dd, J = 17 a 4 Hz, 1 H) , 2,56 (dd, J = 17 a 8 Hz, 1H) 2,5 (m, 2H). 16 Příklad 4 Příprava Gly-Asp(Bn)-Trp(Bn).HC1 (sloučenina č. 5)

Mechanicky míchaná směs tripeptidu (sloučenina č. 4) (37 g, 56 mmol), ethylacetátu (500 ml) a anisolu (12,1 ml, 0,11 mol)se při -30°C 15 minut probublává plynným chlorovodíkem. Potomse chladící lázeň odstaví a žlutým roztokem se po dobu 2,0 ho-diny probublává argon. Výsledná špinavě bílá pevná látka se od-filtruje, promyje ethylacetátem a potom 5,0 hodiny suší za vakua.Získá se hydrochlorid aminu (sloučenina č. 5) (30 g). TLC Rf = 0,42 (9 í 1 : 1 CH2Cl2/CH3OH/AcOH) Příklad 5 Příprava N-Boc-4-piperidinethanolu (sloučenina č. 7) K roztoku 4-piperidinethanolu (sloučenina č. 6) (18,7 g, 0,14 mol) v DMF (200 ml) se za míchání při 0°C přidá N-terc.butoxy-karbonylanhydrid (31 g, 0,14 mol). Chladící lázeň se po 1,0 hodinyodstaví a reakční směs se 20 hodin míchá. Potom se reakční směszředí etherem a promyje vodou (2 x) a roztokem chloridu sodného,vysuší síranem hořečnatým a zkoncentruje. Získá se sloučeninač. 7 (26 g) ve formě bezbarvého oleje. r·· TLC Rf - 0,25 (40 % ethylacetátu v hexanech); 1H NMR (CDC13) δ 4,09 (bs, 2H), 3,72 (t, J = 7 Hz, 2H), 2,70(m, 2H), 1,75 - 1,10 (m, 7H), 1,45 (s, 9H) . Příklad 6 Příprava ethyl 4-(N-Boc-4-piperidyl)transkrotonátu(sloučenina č. 8) K roztoku oxalylchloridu (0,43 ml, 5,0 mmol) v dichlormetha-nu (20 ml) se za míchání při teplotě -78°C přikape dimethylsulf-oxid (DMSO) (0,52 ml, 7 mmol). Když se přestane vyvíjet plyn(po 5 minutách), přidá se alkohol (sloučenina č. 7) (0,8 g, 3,5 mmol) 17 v dichlormethanu (20 ml) ve formě proudu. Po 20 minutách se při-kape triethylamin (1,7 ml, 12 mmol) a potom se chladící lázeňodstaví. Po dalších 20 minutách se přidá (ethoxykarbonylmethylen)-trifenylfosforan (1,4 g, 4,0 mmol). Po 2,0 hodiny se reakční směszředí petroletherem a postupně promyje vodou, 5% roztokem hydro-gensíranu draselného a roztokem chloridu sodného, vysuší síranemhořečnatým a zkoncentruje. Flash chromatografií (silikagel, 15 %ethylacetátu v hexanech) se získá ester (sloučenina č. 8) (0,57 g) ve formě bezbarvého oleje. , TLC Rf = 0,79 (50 % ethylacetátu v hexanech); XH NMR (CDC13) 56,91 (dt, J = 16 a 7 Hz, 1H) , 5,81 (bd, J = 7 Hz,1H), 4,18 (g, J = 7 Hz, 2H), 4,08 (m, 2H), 2,67(m, 2H), 2,14 (t, J = 7 Hz, 2H), 1,70 - 1,05(m, 5H), 1,44 (s, 9H), 1,28 (t, J = 7 Hz, 3H). Příklad 7 Příprava ethyl 4-(N-Boc-4-piperidyl)butyrátu (sloučenina č. 9)

Olefin (sloučenina č. 8) (26 g, 87 mmol) v ethylacetátu (500 ml) se hydrogenuje při teplotě místnosti pod vodíkovou atmo-sférou (0,1 MPa) za přítomnosti 10% Pd/C (5,0 g) přes noc. Reakčnísměs se potom propláchne argonem a přefiltruje přes celitovoupodložku. Zkoncentrováním filtrátu a následující flash chroma-tograf ií (silikagel, 10% ethylacetátu v hexanech) se získá ester(sloučenina č. 9) (24 g) ve formě krystalické pevné látky. TLC Rf = 0,52 (20 % ethylacetátu v hexanech); XH NMR (CDC13) 54,16 (q, J = 7 Hz, 2H), 4,10 (m, 2H), 2,69 (m, 2H),2,31 (t, J = 7 Hz, 2H) , 1,68 (m, 4H), 1,38 (s, 9H) ,1,40 (m, 1H), 1,11 (m, 2H). Příklad 8 Příprava 4-(N-Boc-4-piperidyl)butanové kyseliny (sloučenina č. 10) 18

Roztok esteru (sloučenina č. 9) (19 g, 63 mmol) v ethanolu(300 ml) a 1N hydroxidu sodném (100 ml, 100 mmol) se 2,5 hodinymíchá při teplotě okolí a potom zkoncentruje. Zbytek se zředí5% hydrogensíranem draselným a ethylacetátem a směs se převededo dělící nálevky. Obsah dělící nálevky se protřepe, nechajíse oddělit fáze a organická fáze se promyje roztokem chloridusodného, vysuší síranem hořečnatým a zkoncentruje. Získá se kyse-lina (sloučenina č. 10) (18 g) ve formě bezbarvého oleje, který v průběhu stání vykrystaluje. TLC Rf = 0,68 (ethylacetátu). Příklad 9 Příprava N- (Boc-Pib-Gly-Asp(Bn) -Trp(Bn) (sloučenina č. 11)

Na míchaný roztok kyseliny (sloučenina č. 10) (3,5 g, 12,9 mmol), tripeptidu (sloučenina č. 5) (7,1 g, 11,7 mmol),1-hydroxybenzotriazolhydrátu (2,1 g, 15,5 mmol), N-methylmorfoli-nu (4,9 ml, 44 mmol) v DMF (130 ml) o teplotě 0°C se působí EDC(3,2 g, 16,7 mmol) a potom se chladící lázeň odstaví. Žlutý roz-tok, který vznikne, se po 18 hodinách zředí ethylacetátem a po-stupně promyje vodou, 5% roztokem hydrogensíranu draselného,nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a roztokem chlori-du sodného, vysuší síranem hořečnatým a zkoncentruje. Flash chro-matografií (silikagel, 4 až 4,5 % isopropylalkoholu v chloroformu)se získá sloučenina č. 11 (6,3 g) ve formě pěny. TLC Rf = 0,24 (5 % isopropylalkoholu v trichlormethanu); 1H NMR (CDClj) δ 8,54 (bs, 1H), 7,50 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,35 - -6, 95 (m, 16H) , 6,81 (d , J -- » 2 Hz, 1H), 5,98 (t, J = 5 Hz, 1H), 5,06 (m, 4H), 4,86 (m, 1H), 4,8 0 (m, 1H) , 4,05 (m, 2H) , 3,62 (m, 2H), 3,28 (m, 2H) , 2,89 (dd, J = 17 a 5 Hz, 1H), 2,63 (m, 3H) , 2,13 (t, J = 7 Hz, 2H), 1,68 - 0,98 (m, 7H) , 1,44 (s, 9H) . 19 Přikladlo Příprava N-Boc-Pib-Gly-Asp-Trp (sloučenina č. 12)

Směs dibenzylesteru (sloučenina č. 11) (6,1 g, 7,4 mmol), ethanolu (200 ml), ethylacetátu (200 ml) a 10% Pd/C (1,2 g) semíchá při teplotě okolí pod atmosférou vodíku (0,1 MPa) po dobu3 hodin. Reakční směs se propláchne argonem a přefiltruje přescelitovou podložku, přičemž se získá roztok, který po zkoncentrování poskytne růžový olej. Flash chromatografií (silikagel, 10 s: 0,8 : 0,8 CHClg/AcOH/CHgOH) se získá dikyselina (sloučeninač. 12) (3,8 g) ve formě narůžovělého oleje. TLC Rf = 0,30 (9:1:1 CH2C12/AcOH/CH3OH). Příklad ll Příprava Pib-Gly-Asp-Trp.HCl (sloučenina č. 13)

Suspenzí dikyseliny (sloučenina č. 12) (3,7 g, 5,8 mmol) v ethylacetátu (150 ml) se při -60°C po dobu 10 minut intenzivněprobublává plynný chlorovodík tak dlouho, dokud teplota uvniřnádoby nevzroste na -20°C. Počáteční suspenze přejde na roztoka současně se začíná objevovat béžová sraženina. Reakční směsse v průběhu 20 minut nechá ohřát z -20°C na -5°C. Vzniklou sus- penzí se po dobu 30 minut probublává argon a potom se vzniklápevná látka odfiltruje a promyje ethylacetátem. Výsledná pevnálátka se nechá stát za vakua přes noc. Získá se hydrochlorid aminu (sloučenina č. 13) (3,0 g) ve formě béžové pevné látky. TLC Rf = 0,42 (9:1:1 CH3OH/NH4OH/H2O); 1H NMR (CDC13) δ 7,82 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,58 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,37 (s, 1H) , 7,32 (t, J = 8 Hz, 1H), 7,26 (t, J = 8 Hz , 1H) , 5,00 (t, J = 6 Hz, 1H), 4,90 (t, J = 6 Hz, 1H), 4,03 (s, 2H), 3,53 (m), 3,10 (m, 2H), 2,98 (m, 2H), 2,50 (t, J = 7 Hz, 2H), 2,12 (m, 2H) , 1,87 (m, 2H), 1,78 (m, 1H), 1,57 (m, 2H).

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Antagonisty receptoru fibrinogenu obecného vzorce Iji (X-(CH-) -Y-(CH0)-C)-Gly-Asp-AA (I) z m z n kde X představuje skupinu obecného vzorce R1

, ΑΛ3Γ30 < jAZ31V Ά Ohdov$n

l 6 XI 9 2ffUgca

A nebo B představuje N-R, přičemž když A představuje N-R, B před-stavuje ”CH2“ a když B představuje N-R-, A představuje -CH-; Y představuje skupinu vzorce i2 0 1 II -C- , -C-NH- , O, R3 O N-R2 , -C- , -S(O)q-CH2-, -SO2NH-, nebo NHR2 I -C- ;i. II 12 3 R, R , R a R nezávisle představuje vždy alkyl, aryl, alkarylsubstituovaný alkyl nebo vodík; AA představuje L-aminokyselinu; « m představuje číslo 1 v az 10; * n představuje číslo 0 v az 9? q představuje číslo 0 v az 2; P představuje číslo 1 až 6, a jejich farmaceuticky vhodné soli.
2. Antanogisty receptoru fibrinogenu obecného vzorce I podle nároku 1, kde X představuje skupinu obecného vzorce R1 r-n^n CCH2)p nebo Vj_7 ; Y představuje skupinu vzorceR2 I -C- , 0 nebo -S(0) -CH~-; l3 q 2 R 12 3 R, R , R a R nezávisle představuje vždy alkyl, aryl, alkarylsubstituovaný alkyl nebo vodík; AA představuje L-aminokyselinu; m představuje číslo 1 až 5; n představuje číslo 0 až 5; q představuje číslo 0 až 2; P představuje číslo 2 až 4 a jejich farmaceuticky vhodné soli. III
3. Antagonista receptoru fibrinogenu podle nároku 1, kterýmje sloučenina vzorce
4. Přípravek pro inhibici vazby fibrinogenu ke krevním des-tičkám u savců, vyznačující se tím, že obsahu-je sloučeninu podle nároku 1 a farmaceuticky vhodný nosič.
5. Přípravek pro inhibici agregace krevních destiček u savců,vyznačující se tím, že obsahuje sloučeninupodle nároku 1 a farmaceuticky vhodný nosič.
6. Přípravek pro inhibici agregace krevních destiček u savců,vyznačující se tím, že obsahuje sloučeninupodle nároku 1 v kombinaci s trombolytickým činidlem a farmaceu-ticky vhodným nosičem. Λ
7. Přípravek podle nároku 6, vyznačující setím, že jako trombolytické činidlo obsahuje aktivátor plasmino- »genu nebo streptokinázu.
8. Přípravek pro inhibici agregace krevních destiček u savců,vyznačující se tím, že obsahuje sloučeninupodle nároku 1 v kombinaci s antikoagulantem a farmaceutickyvhodným nosičem.
9. Přípravek podle nároku 8, vyznačující setím , že jako antikoagulant obsahuje heparin, aspirin nebowarfarin. ΜΡ-990-91-ΗΟ