PT99095A - Processo para a preparacao de peptideos antagonistas do receptor do fibrinogenio - Google Patents

Description

CAMPO DO INVENTO

Este invento está relacionado com a descoberta de antagonistas do receptor do fibrinogénio da Fórmula I para usar na inibição da ligação do fibrinogénio às plaquetas sanguíneas e inibição da agregação das plaquetas do sangue quando administrado a mamíferos, preferencialmente humanos.

FUNDAMENTO DO INVENTO A interacção das plaquetas com os sistemas de coagulação e fibrinolítico na manutenção da hemostasia pode tornar-se patoginica, requerendo prevenção e tratamento. Os antagonistas do receptor do fibrinogénio da Fórmula I são úteis no tratamento de várias doenças relacionadas com a agregação de plaquetas e formação de fibrina.

Tem vindo renascer um interesse renovado pelos inibido-res das plaquetas como resultado de uma melhor compreensão do papel das plaquetas e trombose na patogénese das doenças vasculares, incluindo angina instável, enfarte agudo do miocárdio e choque.

As plaquetas são fragmentos anucleados tipo célula, encontrados em todos os animais de sangue quente, as quais participam na coagulação do sangue. 0 fibrinogénio é uma glico-proteína presente como um componente normal do plasma sanguíneo. 0 fibrinogénio participa na agregação de plaquetas e na formação de fibrina no mecanismo de coagulação do sangue. As plaquetas são depositadas nos locais de danificação vascular "onde múltiplos 4

agonistas fisiológicos actuam para inciar a agregação de plaquetas culminando na formação de um rolhão de plaquetas para minimizar a perda de sangue. Se o rolhão de plaquetas ocorrer no lumen de um vaso sanguíneo, o fluxo normal de sangue é impedido.

Os receptores da membrana de plaquetas são essenciais no processo da adesão e agregação de plaquetas. Sabe-se que a interacção do fibrinogénio com um receptor no complexo Ilb/IIIa da membrana de plaquetas é essencial para a função normal das plaquetas.

Zimmerman et al., Patente U.s. N2 4,683,291 descreve peptídeos tendo utilidade no estudo das interacções plaqueta-fi-brinogénio, plaqueta-plaqueta e célula-célula. Os peptídeos são descritos como tendo utilidade sempre que seja desejável retardar ou evitar a formação de um trombus ou coágulo no sangue. A fórmula geral para os peptídeos é:

H2N-(Ch)-Arg-Gli-Asp-(Cx)-H onde Ch e Cx são sequências de aminoãcidos.

Pierschbacher et al., Patente U.S. N2 4,589,881 descreve a sequência de um fragmento polipeptídico de 11,5 KDal da fibronectina que apresenta a actividade promotora de adesão celular da fibronectina. Um fragmento especificamente descrito é: H-Tir-Ala.Val-Tre-Gli-Arg-Gli-Asp-Ser-Pro-Ala-Ser-Ser-Lis-Pro-

Ile-Ser-Ile-Asn-Tir-Arg-Tre-Glu-Ile-Asp-Lis-Pro-Ser-Gln-Met-OH

Ruoslahti et al.f Patente U.S. N2 4,614,517, descreve tetrapeptldeos que alteram a actividade de adesão das células a vários substratos. Estabeleceu-se que os peptídeos "consistem essencialmente " na seguinte sequência:

X-Arg-Gli-Asp-Ser-Y onde X é H ou um ou mais aminoácidos e Y é OH ou um ou mais aminoácidos. A Figura 1 apresenta uma lista dos polipeptídeos que foram sintetizados por Ruoslahti et al., em "determinação do peptldeo mais pequeno que apresenta actividade de adesão celular". Ruoslahti et al., Patente U.S. Ne 4,578,079, descreve tetrapeptldeos semelhantes tendo Ser substituída por Tre ou Cis.

Pierschbacher et al., Proc. Natl. Acad. sei. USA. Vol. 81, pp.5985-5988, Outubro, 1984, descreve variantes do sítio de reconhecimento celular da fibronectina que retêm actividade promotora de ligação. Pierschbacher et al., testou ainda as actividade promotoras de ligação de uma série de estruturas que se assemelham estreitamente ao peptídeo Arg-Gli-Asp-Ser e encontrou "que os resíduos de arginina, glicina e aspartato não podem ser substituídos mesmos com aminoácidos estreitamente relacionados, mas que vários aminoácidos podem substituir serina sem perda de actividade".

Ruoslahti et al., Science. Vol. 238, pp. 491-497, 23 de Outubro, 1987, discutem as proteínas de adesão celular. Esles estabelecem especificamente que " a elucidação da sequência de aminoácidos do domínio de ligação celular na fibronectina e a sua duplicação com peptídeos sintéticos estabelece a sequência Arg-Gli-Asp (RGD) como a estrutura essencial reconhecida pelas células na fibronectina".

Cheresh/ Proc. Natl. Acad. Sei. USA. Vol. 84, pp. 6471-6475, Setembro 1987, descreve o receptor de adesão dirigido por Arg-Gli-Asp envolvido na ligação ao fibrinogénio e o factor de von Willebrand.

Adams et al., Patente U.S. Ns 4,857,508, descreve tetrapeptídeos que inibem a agregação de plaquetas e a formação de um trombus. Os tetrapeptídeos têm a fórmula:

X-Gli-Asp-Y onde X pode ser H2NC(=NH)NH(CH2)nCH(Z)COOH ou Ac-Arg, onde Z=H, NH2 ou NH-acilo e n=l-4, e onde Y pode ser Tir-NH2, Fen-NH2 ou um grupo de uma fórmula especificamente definida. É portanto um objectivo do presente invento proporcionar antagonistas do receptor do fibrinogénio para usar na inibição da ligação do fibrinogénio a plaquetas sanguíneas e inibição da agregação das plaquetas sanguíneas. Um outro aspecto do presentes invento é proporcionar novos compostos antagonistas do receptor do fibrinogénio. Outros objectivos do presente invento são proporcionar métodos de inibição da ligação do fibrinogénio às plaquetas sanguíneas e inibição da agregação das plaquetas sanguíneas através da administração dos novos compostos antagonistas do receptor do fibrinogénio. Os objectivos atrás descritos e outros foram conseguidos pelo presente invento conforme discutido mais detalhadamente abaixo.

SUMARIO DO INVENTO 0 presente invento proporciona compostos antagonistas do receptor do fibrinogénio da Fórmula: ο •ι

I

(X-(CH2)m-Y-(CH2)n-C)-Gli-Asp-AA para usar na inibição da ligação do fibrinogénio âs plagueas sanguíneas e inibição da agregação das plaquetas sanguíneas. Os compostos atrás referidos podem ser usados num método de actuação contra sobre um receptor do fibrinogénio que se caracteriza pela administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz mas não tóxica de tal composto a um mamífero, de preferência um humano. Uma composição farmacêutica compreendendo um veículo farmaceuti-camente aceitável e, nele disperso, uma quantidade eficaz mas não tóxica de tal composto é uma outra característica deste invento.

DESCRIÇÃO DETALHADA DO INVENTO

Compostos antagonistas do receptor do fibrinogénio da Fórmula I são úteis num método de inibição da ligação do fibrinogénio a plaquetas sanguíneas e para a inibição da agregação de plaquetas sanguíneas. Os antagonistas do receptor do fibrinogénio deste invento são ilustrados por compostos tendo a fórmula: 0

II

(X-(CH2)m-Y-(CH2)n-C)-Gli-Asp-AA I em que: X é 8

A ou Β

é N-R, desde que quando A for N-R, B é . -CU -, quando B for N-R, A é -CH-; e que ο R2

I -C- , -C-NH- , Ο,

Jp Ο 2 " N-Rz , -C- . -SCO) -CH2-, w NHR2

I -S02NH-, or -c- ; i„

1 2 3 R, R , R e R são independentemente alquilo, arilo, alquilarilo, alquilo substituído ou H; AA é um L-aminoácido; m é 1-10; n é 0-9; q é 0-2; p é 1-6; e os seus sais farmaceuticamente aceitáveis.

Numa realização preferida do presente invento, o antagonista do receptor do fibrinogénio tem a seguinte fórmula: ο ιι

I

(X-(CH2)m-Y-(CH2)n-C)-Gli-Asp-AA em que: X é R-

-R'CCH2)P rh R1 ΟΓ

Y é C”/ 0, OU -S (O) -CH -; I 3 2 12 3 R, R , R e R são índependentemente alquilo, anlo, alquilarílo, alquilo substituído ou H; AA é um L-aminoácido; m é 1-5; n é 0-5; q é 0-2; 11 11

p é 2-4; e os seus sais farmaceuticamente aceitáveis.

Uma realização preferida deste invento está estabeleci· da a seguir:

Este composto pode ser alternativamente designado Pib-Gli-Asp-Trp.

Os aminoácidos (AA) que podem ser utilizados neste invento são L-aminoácidos e estão estabelecidos como se segue: Ala, Alanina; Arg, Arginina; Asn, Asparagina; Asp, acido aspárti-co; Cis, Císteina; Gin, Glutamina; Glu, Ácido Glutâmico; Gli, Glicina; His, Histidina; He, Isoleucina; Leu, Leucina; Lis, Lisina; Met, Metionina; Fen, Fenilalanina; Pro, Prolina; Ser, Serina; Tre, Treonina; Trp, Triptofano; Tir, Tirosina; e Vai, Valina. Estas abreviaturas convencionais são bem conhecidas na área da química de peptídeos. Asp na Fórmula I deste invento é um L-aminoãcido.

Para além das abreviaturas de três letras usadas para identificar os aminoácidos, este invento inclui as seguintes designações de abreviaturas; Bn, benzilo; NMM, N-metilmorflina; 12 HOBt, l-hidroxibenzotriazole; EDC, 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etil-carbodiimida-hidrocloreto; DMF, dimetilformamida; Pib, 4-(4-piperidil)butanoil; e Boc-Asp(Bn), éster N-Boc-Asp-B-benzi-lico.

Os sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos da Fórmula I incluem os sais não tóxicos de sais de amónio quaternários dos compostos da Fórmula I formados e.g., a partir de ácidos inorgânicos ou orgânicos não tóxicos. Por exemplo, tais sais não tóxicos convencionais incluem os derivados de ácidos inorgânicos tais como ácido clorídrico, bromídrico, súlfurico, sulfâmico, fosfórico, nítrico e similares; e os sais preparados a partir de ácidos orgânicos tais como acético, propiónico, succínico, glicólico, esteárico, láctico, málico, tartárico, cítrico, ascórbico, pamóico, maleico, hidroximaleico, fenilacético, glutâmico, benzóico, salicilico,sulfanílico, 2-acetoxibenzóico, fumárico, toluenossulfõnico, metanossulfónico, etanodissulfónico, oxálico, isetiónico e similares.

Os sais farmaceuticamente aceitáveis do presente invento podem ser sintetizados a partir dos compostos da Fórmula I os quais contêm uma fracção básica ou ácida por métodos químicos convencionais. De um modo geral, os sais são preparados por reacção da base ou ácido li-vre com quantidades estequiométricas ou com um excesso do ácido orgânico ou inorgânico ou base formador do sal pretendido num solvente adequado ou várias combinações de solventes.

Os sais farmaceuticamente aceitáveis dos ácidos da Fórmula I são também facilraentre preparados por processos convencionais tais como tratamento de um ácido da Fórmula I com uma quantidade adequada de uma base, como seja um hidróxido de metal alcalino ou alcalino terroso, e.g. sódio, potássio, lítio, cálcio 13

ou magnésio ou uma base orgânica como seja uma amina, e.g., dibenziletilenodiamina, trimetilamina, piperidina, pirrolidina, benzilamina e similares ou um hidróxido de amónio quaternário como seja hidróxido de tetrametilamónio e similares.

Os compostos da Fórmula I inibem a ligação do fibrino-génio às plaquetas sanguíneas e inibem a agregação das plaquetas sanguíneas. Estes compostos são úteis como agentes farmacêuticos para mamíferos, especialmente humanos. Os compostos deste invento podem ser administrados a doentes em que seja pretendida a prevenção de trombose por inibição da ligação do fibrinogénio ao receptor do complexo Ilb/IIIa glicoproteico da membrana de plaquetas. Eles são úteis em cirúrgia nas artérias periféricas (enxertos arteriais, endarterectomia de carótidas) e em cirúrgia cardiovascular sempre que a manipulação de artérias e orgãos e/ou interacção de plaquetas com superfícies arteriais, conduza à agregação e consumo de plaquetas. As plaquetas agregadas podem formar trombos e tromboembolias. Os compostos deste invento podem ser administrados a estes doentes de cirúrgia para evitar a formação de trombos e tromboembolias. A circulação fora do corpo é usada de rotina na cirurgia cardiovascular para oxigenar o sangue. As plaquetas aderem às superfícies do circuito extracorporal. A adesão está dependente da interacção entre GPIIb/IIIa nas membranas das plaquetas e o fibrinogénio adsorvido â superfície do circuito. (Gluszko et al., Amer. J. Phvsiol. 1987, 252:H, pp 615-621). As plaquetas libertadas das superfícies artificiais não apresentam função hemostáti-ca. Os compostos deste invento podem ser administrados para evitar a adesão.

Outras aplicações destes compostos incluem prevenção da trombose por plaquetas, tromboembolismo, reoclusão e restenose 14 14

durante e após a terapia trombolítica e prevenção da trombose por plaquetas, tromboembolismo, reoclusão e restenose após angioplas-tia das artérias coronárias e outras e após processos de "bypass” das artérias coronárias. Os compostos deste invento podem também ser usados para evitar ou modular o progresso do enfarte do miocárdio, angina instável e choque trombótico. Os compostos da Fórmula I podem ser administrados a mamíferos, de preferência humanos, sozinhos ou, de preferência em combinação com veículos ou diluentes farmaceuticamente aceitáveis, facultativamente com adjuvantes conhecidos, tais como alum, numa composição farmacêutica, de acordo com a prática farmacêutica convencional.Os compostos podem ser adminisrados oralmente ou parenteralmente, incluindo administração intravenosa, intramuscular, intraperito-neal, subcutânea e tópica.

Para utilização oral de um antagonista do receptor do fibrinogénio de acordo com este invento, os compostos selecciona-dos podem ser administrados, por exemplo, na forma de comprimidos ou cápsulas, ou como uma solução aquosa ou suspensão. No caso dos comprimidos para utilização oral, são normalmente usados veículos que são normalmente usados incluem lactose e amido de milho, e agentes lubrificantes, tais como estearato de magnésio. Para administração oral na fórmula de cápsula, diluentes úteis incluem lactose e amido de milho seco. Quando são necessárias suspensões aquosas para uso oral, o ingrediente activo é combinado com emulsionantes e agentes de suspensão. Caso se pretenda podem ser adicionados certos agentes edulcorantes e aromatizantes. Para utilização intramuscular, subcutânea e intravenosa, são geralmente preparadas soluções estéreis do ingrediente activo e o pH das soluções deverá ser adequadamente ajustado e tamponado. Para utilização intravenosa, a concentração total de solutos deverá ser controlada de forma a tornar a preparação isotónica. A. 15 O presente invento também engloba uma composição farmacêutica útil no tratamento de doenças relacionadas com a agregação de plaquetas e formação de fibrina, compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz mas não tóxica dos compostos da Fórmula I, com ou sem veículos ou diluen-tes farmaceuticamente aceitáveis.

As composições deste invento incluem compostos antagonistas do receptor do fibrinogénio e veículos farmacologicamente aceitáveis, e.g. soro fisiológico a um pH e.g. de 7,4, adequado para se conseguir a inibição da agregação de plaquetas. Eles podem ser combinados com agentes trombolíticos tais como activa-dores do plasminogénio ou estreptoquinase para se inibir a agregação de plaquetas. Eles podem também ser combinados com anticoagulantes tais como heparina, aspirina ou "warfarin". A administração intravenosa está presentemente contemplada como a via de administração preferida. Eles também são solúveis num meio aquoso e podem portanto ser eficazmente administrados em solução.

Quando um composto de acordo com a Fórmula I é usado como um antagonista do receptor do fibrinogénio num humano, a dosagem diária será normalmente determinada pela prescrição do médico com a dosagem varaindo geralmente de acordo com a idade, peso altura e resposta do doente individual assim como da gravidade dos sintomas do doente.

Num exemplo de aplicação, uma quantidade adequada do composto é administrada intravenosamente a uma vítima de ataque cardíaco que vai fazer angioplastia. A administração ocorre durante ou vários minutos antes da angioplastia e é numa quantidade suficiente para inibir a agregação de plaquetas, e.g. * uma quantidade que consegue uma concentração estável no plasmaentre 0,01 e 30 μΜ por quilo, de preferência entre cerca de 0,3 e 3 μΜ 16 16

por quilo. Quando esta quantidade é conseguida, uma infusão entre cerca de 1 e 100 nM por quilo por minuto, de preferência entre cerca de 10 e 30 nM por quilo por minuto é mantida para inibir a agregação de plaquetas. Caso o doente necessite de fazer cirúrgia de "bypass", a administração pode ser parada imediatamente e não causará complicações durante a cirúrgia que aconteceriam com outros materiaistais como aspirina ou anticorpos monoclonais, os efeitos dos quais duram várias horas apõs cessar a administração. O presente invento também inclui uma composição farmacêutica compreendendo compostos do presente invento e activador do plasminogénio tipo tecido ou estreptoquinase. 0 invento também inclui um método para a promoção de trombõlise e prevenção da reoclusão num doente que se caracteriza pela administração ao doente de uma quantidade eficaz das composições do invento.

Os compostos da fórmula I são preparados de acordo com os Esquemas de reacção estabelecidos abaixo:

ESQUEMA I a) cloroformato de isobutilo

Boc-Asp(Bn). 1 acetato de etilo nmm-15°c

Boc-As pC Bn)-Tr pC Bn)

b)Trp(Bn), NMM HClCg). acetato de sfcilo anisole

-20° to 5°C a).cloroformato de isobytilo

Boc-Cly-AspCBn)-TrpCBn) acetato etilo-. NMM HCl *Asp(Bn)-Trp(Bn) 4 b}Boc-Gly, NMM 3 HCl(g), acetato de etilo anisole -io°c HCl*Gly-Asp-( Bn)-Ttp( Bn) 5

Bn= benzilo NMM = N-metilmorfolina

ESQUEMA II ΚΝχΖ/^^Π B0C20, DMF, NEtg

0°C 6 7_

a) cloreto de oxal^lo CH2C12, NEtg, -78°C b) PhgPs; CHC02Et,

-78° to 0°C

1 0% Pd/C, H2 2Et acetato etilo 9_ _8 1 N NaOH, ethanol BOCN_jr v COzH + HC1* Gly-As p( Bn) -Tr p( Bn) 5 10

BOCN EDC, HOBt, DMF, NMH 0°C to 25°C ly- As p( Bn) - Tr p( Bn) 11 10% Pd/C, ethyl acetato/e tanol (1:1), H,

HCl · As p- Tr p 13 19

0 presente invento pode ser realizado noutras formas específicas sem se afastar do seu espírito ou atributos essenciais. Os Exemplos apresentados destinam-se a auxiliar a a compreensão do invento. 0 material particular empregue, espécies e condições destinam-se a ilustrar melhor o invento enão são limitantes do seu âmbito. Todas as cromatografias relâmpago em coluna e análise por TLC foram realizadas em silica gel. Todos os espectros de H NMR foram obtidos num instrumento Varian 300 MHz.

EXEMPLO 1

Preparação de Boc-Asp(Bn)-Trp(Bn) 2 A uma solução em agitação de Trp(Bn) 1 (25 g, 80 mmoles), N-metilmorfolina (NMM; 85 mmoles) e acetato de etilo (800 ml) a -15°C (gelo/etanol) adicionou-se cloroformato de isobutilo (10,4 ml, 80 mmoles) numa corrente. Após 20 minutos adicionou-se Trp(Bn) (25 g, 75 mmoles) à mistura heterogénea seguido de NNM (9,3 ml). Isto foi diluido com H20 após 2,0 horas transferido para um funil separado. Após agitação e separação, a fracção orgânica foi lavada sequenciadamente com 5% KHSO^, sat. NaHCO^ e sal, seco (MgS04), e concentrado para dar o dipeptídeo 2 (41 g) na fprma de um óleo castanho. TLC Rf=0,73 (50% acetato de etilo/hexanos).

20 EXEMPLO 2

Preparação de Asp(Bn).HCl 3

Borbolhou-se vigorosamente vapores de ácido clorídrico através de uma solução de acetato de etilo (670 ml) de 2 (40 g, 67 mmoles) e anisole (14,5 ml, 135 mmoles) a qual foi agitada mecanicamente. A temperatura interna foi inicialmente de -40°C (isopropanol/neve carbónica) mas aumentou para -20°C ao longo de um período de 30 minutos.A adição de HC1 foi para e a reacção foi deixada aquecer até -5°C ao longo de um período de uma hora. Borbulhou-se então azoto através da reacção durante 2,5 hors para remover o excesso de HCl. Adicionou-se éter (400 ml) à mistura heterogénea para fazer uma precipitação eficaz. 0 sólido foi colhido por filtração, lavado com éter, depois após permanecer in vacuo durante a noite deu o sal de HCl 3. (43,8 g) como um sólido branco. TLC Rf=0,51 (9:1:1 CH2CL2/CH3OH/AcOH).

EXEMPLO 3

Preparação de Boc-Gli-Asp(Bn)-Trp(Bn) 4 A uma solução em agitação de acetato de etilo (650 ml) Boc-Gli (12,3 g, 70 mmoles) e NMM (8,2 ml, 75 mmoles) a -15°C (etanol/gelo) adicionou-se cloroformato de isobutilo (9,1 ml, 70 mmoles) numa corrente para se obter um precipitado fino. Após 15 minutos adicionou-se amina.HCl 3. (34 g, 64 mmoles) em DMP (100 ml) seguido de NMM (8,2 ml). Após 1,5 horas a reacção foi lavada

21 21

com H^O , 5% KHS04, NaHC03 sat. e sal, seco (MgSC>4), e concentrado. O óleo resultante foi triturado com éter para dar um sólido branco. A filtração deu o tripeptídeo 4 (37,8 g) na forma de um sólido branco. TLC Rf=0,27 (50% acetato de etilo/hexanos); 1H NMR (CDC1 3> δ 8,76 (d, J= 7HZ, 1H), 8,66 (d, J = 7 Hz, 1H), 8, 10 (m, 2H) , 7, 49 (d, J = 8HZ, 1H) , 8,10 (rn, 2H), 7,49 (d, J = 8Hz, 1H), 7,18- 7, 40 (m), 7,08 (t, J = 7HZ, 1H), 7,00 (t, J = 7 HZ, 1H) 5,07 (d, J = 2Hz, 2H), 5,02 (d / J = : 3 HZ, 2H), , 4,80 (m, 1H), 3,70 (m, 2H) , 3 /50 > (m, 2H), 3,14 (m / 2H) , 2,73 (dd, - J = 17 e 4 HZ, 1H) / 2, 56 (dd, J = 17 e 8HZ, 1H), 2,50 (m, 2H). EXEMPLO 4

Preparação de Gli-Asp(Bn)-Trp(Bn) .HCl (5)

Numa mistura agitada mecanicamente de do tripeptídeo 4. (37 g, 56 mmoles), acetato de etilo (500 ml) e anisole (12,1 ml, 0,11 moles) a -30°C borbulhou-se vapores de HCl durante 15 minutos. Retirou-se o banho de arrefecimento e borbulhou-se árgon através da solução amarela durante 2,0 horas. 0 sólido branco resultante foi colhido por filtração e lavado com acetato de etilo, depois seco in vacuo durante 5,0 horas para dar a amina.-HC1 5 (30 g). TLC Rf=0,42 (9:1:1 CH2Cl2/CH3OH/AcOH). EXEMPLO 5

Preparação de N-Boc-4-piperidina-etanol 7 A uma solução em agitação de 4-piperidina-etanol 6 (18,7 g, 0,14 moles) e DMF (200 ml) a 0°C adicionou-se N-tert-bu-toxicarbinilanidrido (31 g, 0,14 moles). Após 1,0 horas o banho de arrefecimento foi removido e a mistura de reacção agitada durante 20 horas. A mistura de reacção foi diluida com éter e depois lavada com H20 (2x) e sal, seco (MgSO^), e concentrado para dar 7 (26 g) na forma de um óleo incolor. TLC Rf=0,25 (40% acetato de etilo/hexanos); lfH NMR (CDCl3r) δ 4,09 (bs, 2H), 3,72 (t, J=7Hz, 2H) , 2,70 (m, 2H), 1,75-1.10 (m, 7H), 1,46 (S, 9H). EXEMPLO 6

Preparação de 4-(N-Boc-4-PÍperidil)transcronato de etilo 8 A uma solução em agitação de cloreto de oxalilo (0,43 ml, 5,0 mmoles) em CH2rCl2 (20 a -78°c f°i adicionado gota a gota DMSO (0,52 ml, 7 mmoles). Após ter cessado a libertação de vapores (5 minutos) adicionou-se o álcool 7 (0,8 fg, 3,5 mmoles) em CH2C12 (20 ml) numa corrente. Após 20 minutos adicionou-se gota a gota trietilamina (1,7 ml, 12 mmoles) e depois retirou-se o banho de arrefecimento. Após 20 minutos adcionou-se (carbeto-ximetileno)trifenilfosforano (1,4 g, 4,0 mmoles). Após 2,0 horas a mistura de reacção foi diluida com éter de petróleo e depois lavada seguenciadamente com H20, 5% HHS04 e sal, seco (MgSC>4) e *

concentrou-se. A cromatografia relâmpago (silica, 15% acetato de etilo/hexanos) deu um éster 8. (0,57) na forma de um óleo incolor. TLC Rf=0,79 (50% acetato de etilo/hexanos); 1H MMR (CDC13) 5 6,91 (dt, J = 16 e 7 HZ, 1H), 5,81 (bd, Σ = 7Hz), 4,18 (g, J = 7Hz, 2H), 4,08 (m, 2H), 2,67 (m, 2H), 2,14 (t, w' J = 7HZ, 2H), 1,70-1,05 (m, 5H), 1,44 (s, 9H), 1,28 (t, J = 7H, 3H) . iHf- -

» EXEMPLO 7

Preparação de 4-(N-Boc-4-piperidil)butirato de etilo 8 A olefina 8 (26g, 87 mmoles) em acetato de etilo (500 ml) foi hidrogenado, à temperatura ambiente, numa atmosfera de hidrogénio (1 atm) na presença de 10% Pd/C (5,0) durante a noite. A mistura de reacção foi então aspergida com árgon seguido de filtração através de uma almofada de celite. A concentração do filtrado seguido de cromatografia relâmpago (silica, 10% acetato de etilo/hexanos) deu o éster 9 (24 g) na forma de um sólido cristalino. TLC Rf = 0,52 (20% acetato de etilo/hexanos); XH NMR (CDC13) S 4,16 (q, J= 7Hz, 2H), 4,10 (m, 2H), 2,69 (m, 2H), 2,31 (t, J = 7 HZ, 2H), 1,68 (m, 4H), 1,38 (S, 9H), 1,40 (m, 1H), 1,11 (m, 2H).

EXEMPLO 8

Preparação flo ácido 4-(N-Boc-4-PÍperidil)butanôico 10

Uma solução do éster 9. (19 g, 63 mmoles), etanol (300 ml) e 1 N NaOH (100, 100 mmoles) foi agitada à temperatura ambiente durante 2,5 horas seguido de concentração. O resíduo foi diluído com 5% de KHSD04 e acetato de etilo e depois transferido para uma ampola separada. As fases foram agitadas e depois separadas e a fracção orgânica foi lavada com sal, seco (MgS04), e concentrada para dar o ácido 10. (18g) na forma de um óleo incolor que cristalizou quando em repouso. TLC Rf = 0,68 (acetato de etilo). EXEMPLO 9

Preparação de N-Boc-Pib-Gli-Asp(Bn)-Trp(Bn) 11

Uma solução em agitação do ácido 10 (3,5 g, 12,9 mmoles), tripeptídeo (5) (7,1 g, 11,7 mmoles), 1-hidroxi-benzo-triazole hidratado (2,1 g, 15,5 mmoles), N-metil-morfolina (4,9 ml, 44 mmoles) e DMF (130 ml) a 0°C foi tratado com EDC (3,2 g, 16,7 mmoles) seguido da remoção do banho de arrefecimento. Após 18 horas a solução amarela foi diluida com acetato de etilo e depois lavada sequenciadamente com HO, 5% KHSO , sat. NaHCO e

ώ 4 J sal, (MgS04) e concentrada. A cromatografia relampago (silica, 4 a 4,5% isopropanol/CHCl^) deu 11 (6,3 g) na forma de espuma. TLC Rf=0,24 (5% isopropanol/CHCl ); «5 é

XE NMR (CDC13) 68/54 (bs, 1H) , 7,50 (d, J=8Hz, 1H), 7,35-6,95 (m, 16H), 6,81 (d, J= 2Hz, 1H), 5,98 (t, J=5Hz, 1H) 5,06 (m, 4H), 4,86 {m, 1H), 4,80 (m, 1H), 4,05 (m, 2H), 3,62 (m, 2H), 3,28 (m, 2H), 2,89 (dd, J= 17 e 5HZ, 1H) , 2,63 (m, 3H) , 2,13 (t, J= 77ΓΖ, 2H), 1,68-0,98 (m, 7H), 1,44 (s, 9H). EXEMPLO 10

Preparação de N-Boc-Pib-Gli-Asp-Trp 12

Uma mistura do éster dibenzílico 11 (6,1 g, 7,4 mmo-les), etanol (200 ml), acetato de etilo (200 ml) e 10% Pd/C (1,2 g) foi agitado à temperatura ambiente, numa atmosfera de azoto (1 atm) durante 3 horas. A reacção foi aspergida com árgon, em seguida filtrada através de uma almofada de celite para dar um óleo rosado após concentração. Cromatografia relâmpago (sílica, 10:0,8:0,8 CHCl^/AcOH/CH^OH) deu o diácido 12 (3,8 g) na forma de um óleo ligeiramente rosado. TLC Rf=0,30 (9:1:1 CHgClg/AcOH/C^OH) . » EXEMPLO 11

Preparação de Pib-Gli-Asp-Trp.HCl 13 [ ·

A uma suspensão do diácido 12 (3,7 g, 5,8 mmoles) em acetato de etilo (150 ml) a -60°C foi vigorosamente borbulhado vapores de HC1 durante 10 minutos até a temperatura interna 26

atingir -20°C. A suspensão inicial entrou em solução â medida que um precipitado bege começou a aparecer. A mistura de reacção foi então deixada a aquecer entre -20°C e -5°C durante um período de 20 minutos. Passou-se então argon através da suspensão durante 30 minutos e o solido resultante foi colhido por filtração lavando com acetato de etilo. Após armazenamento do sólido resultante ^ durante a noite sob vácuo, obteve-se a amina.HCl 13 (3,0 g) como Τ' um sólido bege.

TLC Rf=0,42 (9:1:1 CH30H/NH40H/H20); XH NMR (CD3C1)S 7,82 (d, J=8Hz, 1H), 7,26 (t, J=8HZ, 1H), 5,00 (t, J=6Hz, 1H), 4,90 (t, J=6Hz, 1H) , 4,03 (s, 2H), 3,53 (m), 3,10 (m, 2H), 2,98 (m, 2H), 2,50 (t, J=7Hz, 2H), 2,12 (m, 2H), 1,87 (m, 2H), 1,78 (m, 1H), 1,57 (m, 2H) .

Claims (1)

1. 27

   REIVINDICAÇÕES: ia. - Processo para a preparação de um antagonista do receptor do fibrinogénio da Fórmula: 0 II I (X-(CH2)m-Y-(CH2)n-C)-Gli-Asp-AA

   em que:

   A ou B é N-R, desde que quando A for N-R, B é -CEL-, e que quando B for N-R, A é -CH-; Y é

   28

   R2 I -c- 0 II -C-NH- , O, R3 'H-R2 0 II -C- -S(0)q-CH2-, w . - = NHR2 I » -so2nh-, or -c- ; l- 12 3 R, R , R e R são independentemente alquilo, arilo, alquilarilo, alquilo substituido ou H; AA é um L-aminoácido; m é 1-10; n é 0-9; q é 0-2; P é 1-6;

   e dos seus sais farmaceuticamente aceitáveis; caracterizado por se proceder à reacção entre um composto da fórmula: I*-' 29

   devidamente protegido, com um composto de fõrmula: Gli-Asp-Trp devidamente protegido, ou com um seu sal de adição de ácidos, seguido de desprotecção e, se desejado, de transformação num sal. ;»···' w ÍV-

   2 â. - Processo de acordo com a Reivindicação 1, carac-terizado por se preparar um antagonista do receptor do fibrino-génio da Fõrmula I em que: X é 1 R

   R-JN '_L.p1 \ / Λ OU (CH2)p rr\ R-N N y é R -C-, O, ou R3 -S(°)q-CH2-; 12 3 R, R , R e R são independentemènte alquilo, arilo, alquilarilo, alquilo substituído ou H; AA é um L-aminoãcido;

   - 30 - m

   m é 1-5; n é 0-5; g é 0-2; p é 2-4;

   e os seus sais farmaceuticamente aceitáveis. 3ã. - Processo de acordo com a Reivindicação 1, caracterizado por se preparar um composto antagonista do receptor do fibrinogénio que é

   I 4â. - Processo para a preparação de uma composição para inibição da ligação de fibrinogénio a plaquetas sanguíneas num mamífero, caracterizado por se incluir na referida composição um composto da Reivindicação 1, juntamente com um veículo farmaceu-ticamente aceitável. 5â. - Método para a inibição da ligação do fibrinogénio a plaquetas sanguíneas num mamífero, caracterizado por compreender a administração ao mamífero de uma composição de acordo com a Reivindicação 4, sendo a gama de dosagem de composto activo tal

   31 Ψ * Jt

   que conduza a uma concentração no plasma, no estado estacionário, de 0,01-30 μΜ por quilograma, de preferência de 0,3-3 μΜ por quilograma, a qual pode ser obtida mantendo uma taxa de infusão de 1-100 nM por quilograma por minuto, de preferência de 10-30 nM por quilograma por minuto. 6â. - Processo para a preparação de uma composição para a inibição da agregação de plaquetas sanguíneas num mamífero, caracterizado por se incluir na referida composição um composto da Reivindicação 1, juntamente com um veículo farmaceuticamente aceitável. 7 â. - Método para inibição da agregação de plaquetas sanguíneas num mamífero, caracterizado por compreender a administração ao mamífero de uma composição de acordo com a Reivindicação 6, sendo a gama de dosagem de composto activo tal que conduza a uma concentração no plasma, no estado estacionário, de 0,01-30 μΜ por quilograma, de preferência de 0,3-3 μΜ por quilograma, a qual pode ser obtida mantendo uma taxa de infusão de 1-100 nM por quilograma por minuto, de preferência de 10-30 nM por quilograma por minuto. 8®. - Processo para a preparação de uma composição para inibição da agregação de plaquetas sanguíneas num mamífero, caracterizado por se incluir na referida composição um composto da Reivindicação 1, em combinação com um agente trombolítico e um veículo farmaceuticamente aceitável. l·· ► i:

   9â. - Método para inibição da agregação de plaquetas sanguíneas num mamífero, caracterizado por compreender a administração ao mamífero da composição de acordo com a Reivindicação 8, sendo a gama de dosagem de composto activo tal que conduza a uma concentração no plasma, no estado estacionário, de 0,01-30 μΜ por 32 quilograma, de preferência de 0,3-3 μΜ por quilograma, a qual pode ser obtida mantendo uma taxa de infusão de 1-100 nM por quilograma por minuto, de preferência de 10-30 nM por quilograma por minuto. 10—· - Processo para a preparação de uma composição de acordo com a Reivindicação 8, caracterizado por o agente trombo-lítico ser um activador do plasminogénio ou estreptoquinase. lia. - Processo para a preparação de uma composição para inibição da agregação de plaquetas sanguíneas num mamífero, caracterizado por se incluir na referida composição um composto da Reivindicação 1, em combinação com um anticoagulante e veículo farmaceuticamente aceitável. 12ã. - Método para inibição da agregação de plaquetas sanguíneas num mamífero, caracterizado por compreender a administração a um mamífero de uma composição de acordo com a Reivindicação 11, sendo a gama de dosagem de composto activo tal que conduza a uma concentração no plasma, no estado estacionário, de 0,01-30 μΜ por quilograma, de preferência de 0,3-3 μΜ por quilograma, a qual pode ser obtida mantendo uma taxa de infusão de 1-100 nM por quilograma por minuto, de preferência de 10-30 nM por quilograma por minuto. 135. - processo para a preparação de uma composição de acordo com a Reivindicação 11, caracterizado por o anticoagulante ser heparina, aspirina ou warfarina. Lisboa/ 26 de Setembro de 1991

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