CZ2003114A3

CZ2003114A3 - 1,2-anelovaný enantiomer chinolinu inhibující farnesyltransferázu

Info

Publication number: CZ2003114A3
Application number: CZ2003114A
Authority: CZ
Inventors: Marc Gaston Venet; Patrick René Angibaud; David William End
Original assignee: Janssen Pharmaceutica N. V.
Priority date: 2000-06-22
Filing date: 2001-06-13
Publication date: 2003-05-14
Also published as: SK285699B6; PL209521B1; PL358918A1; US20080114009A1; HUP0300872A2; CA2410232C; EA200300048A1; EE04966B1; HU229095B1; DE60110592T2; US20030114471A1; IL153560A0; IS6590A; AU2006220405A1; NO324494B1; BRPI0111743B1; KR20030009463A; WO2001098302A1; AU2001263962B2; NZ522481A

Description

1,2-anelovaný enantiomer chinolinu inhibujicí farnesyltransferázu.

Oblast techniky

Předložený vynález se týká nového 1,2-anelovaného enantiomerů chinazolinu, jeho přípravy, farmaceutických přípravků zahrnujících tuto novou sloučeninu a užití této sloučeniny jako léku, stejně jako způsobů léčby podáváním této sloučeniny.

Dosavadní stav techniky

Onkogeny často kódují proteinové komponenty signálních transdukčních cest, což vede ke stimulaci růstu buňky a k mitogenezi. Exprese onkogenů v kultivovaných buňkách vede k buněčné transformaci charakterizované schopností růstu buněk v měkkém agaru a růstem buněk jako hustých ložisek s nedostatečnou kontaktní inhibici vyvolanou netransformovanými buňkami. Mutace a/nebo nadměrná exprese určitých onkogenů je často spojena s lidskou rakovinou. Zvláštní skupina onkogenů je známá jako ras, a byla identifikována u savců, rostlin, plísní a kvasinek. Rodina se skládá ze tří hlavních členů (isoforem): onkogenů H-ras, K-ras a N-ras. Tyto ras onkogeny kódují velmi příbuzné proteiny označované genericky jako p21^ras. Po navázání na plasmatické membrány, mutantní nebo onkogenní formy p21^ras poskytnou signál pro transformaci a neřízený růst maligních nádorových buněk. Aby prekurzor onkoproteinu p21^raszískal tento transformační potenciál, musí projít enzymaticky katalyzovanou farnesylací cysteinového zbytku umístěného v tetrapeptidu s C-koncem. Inhibitory enzymů, které katalyzují tuto přeměnu, tj. farnesyltrasferázy, zamezí tedy připojení ptáků, hmyzu, měkkýšů, savčích onkogenů ras p21^ras k membráně a znemožní anomální růst ras-tranformovaných • · · · · · · ······ • · · · ···· · · · ······ ··· • ··· ··· · · · · · • ···· · · · · „2- ···· ·· ·· ··· ·· ·· nádorů. Proto se v technice obecně uznává, že inhibitory farnesylové proteinové transferázy mohou být velmi užitečné jako protirakovinné léky pro nádory, u kterých k transformaci přispívá ras.

Poněvadž mutované formy onkogenů ras se často nacházejí v mnoha lidských karcinomech, zejména ve více než 50 % karcinomů tračníku a pankreatu (Kohl a jiní, Science, 260, 1834-1837,

1993), předpokládalo se, že proti těmto typům rakoviny mohou být velmi užitečné inhibitory farnesylové proteinové transferázy.

V patentech WO 97/16443, WO 97/21701, WO 98/40383 a WO 98/49157 se popisují deriváty 2-chinolonu, které mají inhibiční aktivitu vůči farnesyltransferáze. Jiné chinolonové sloučeniny mající inhibiční aktivitu farnesyltrasferázy se popisují v patentech WO 00/12498, 00/12499 a 00/47574. Patent WO 00/39082 popisuje třídu nových sloučenin 1,2-anelovaného chinolinu a chinazolinu, které nesou imidazol vázaný na dusík nebo uhlík a které vykazují inhibiční aktivitu farnesylové proteinové transferázy. Mezi takovými sloučeninami popsanými v posledně jmenovaném patentu je (±)-5-(3-chlorfenyl)-a-(4-chlorfenyl)-a(l-methyl-lH-imidazol-5-yl)tetrazolo[1,5-]china-zolin-7methanamin, který se získal ve formě enantiomerní směsi. My jsme nyní tuto směs rozdělili a získali jsme (-) enantiomer, který má proti původní enantiomerní směsi mimořádně výhodné farmakologické vlastnosti.

Podstata vynálezu

Předmětem předloženého vynálezu je tedy (-)-5-(3-chlorfenyl)a- (4-chlorfenyl) -a- (l-methyl-líí-imidazól-5-yl) tetrazolo [1,5-a] chinazolin-7-methanamin a jeho farmaceuticky přijatelné kyselé adiční sole.

výše uvedeném (-)enantiomeru se dále mluví jako o • · • · · · · · · · · · · ······ ··· * ····· · · ·· · · * ···· · · · · ···· ·· ·· ··· ·· ν» sloučenině tohoto vynálezu.

Sloučeninu tohoto vynálezu obecně představuje její prakticky čistá forma, tj. podstatně neznečištěná opačným ( + )enantiomerem, která například obsahuje (+)enantiomer v množství menším než 5 hmotnostních %, přednostně menším než 2 hm. % a výhodně menším než 1 hm. %.

Pod výše uvedenými farmaceuticky přijatelnými kyselými adičními solemi se míní, že zahrnují terapeuticky aktivní netoxické formy kyselých adiční solí, které sloučenina tohoto vynálezu může vytvořit. Sloučeninu tohoto vynálezu lze převést na její farmaceuticky přijatelnou kyselou adiční sůl pomocí reakce báze této sloučeniny s vhodnou kyselinou. Vhodné kyseliny zahrnují například anorganické kyseliny, jako jsou halogenovodíkové kyseliny, např. kyselinu chlorovodíkovou nebo bromovodíkovou; kyselinu sírovou, dusičnou, fosforečnou a podobné kyseliny; nebo organické kyseliny, jako např. kyselinu octovou, propanovou, hydroxyoctovou, mléčnou, pyrohroznovou, oxalovou, malonovou, jantarovou (tj. kyselinu butandiovou), maleinovou, fumarovou, jablečnou, vinnou, citrónovou, methansulfonovou, ethansulfonovou, benzensulfonovou, p-toluensulfonovou, cyklohexansulfamovou, salicylovou, p-aminosalicylovou, pamoovou (kyselina 4,4'-methylenbis(3-hydroxy-2naftoová)) a podobné kyseliny.

Výraz kyselé adiční sole také zahrnuje hydráty a solvatované adiční formy, které sloučenina tohoto vynálezu může vytvořit. Příklady takových forem jsou např. hydráty, alkoholáty a podobně.

Kdekoli se dále užívá výrazu sloučenina tohoto vynál&zu, zahrnuje tento výraz také farmaceuticky přijatelné kyselé adiční sole.

Podle předloženého vynálezu lze (-)enantiomer připravit • · • · · ·

-4• flfl · ·· • flfl flfl fl· dělením matečné enantiomerní směsi, která se popisuje ve výše uvedeném patentu WO 00/39082. Dělení lze provádět obvyklým způsobem, například reakcí s vhodnou chirální kyselinou jako je kyselina (+)-6-aminopenicilinová (kyselina (+)-6-amino-3,3dimethyl-7-oxo-4-thia-l-aza-bicyclo(3.2.0]heptan-2karboxylová), kyselina D nebo L aminobutandiová, kyselina (15, 3R) nebo (IR,35)-kamforová (kyselina 1,2,2-trimethylcyclopentan-1,3-dikarboxylová), kyselina (IS) nebo (1R)-1Okamforsufonová; karbobenzyloxy-I-prolin, kyselina cholová, kyselina dehydrocholová, kyselina deoxycholová, kyselina (25,35) nebo (2R,3R) dibenzoyl vinná, kyselina (25,35). nebo (2R, 3R) . diacetylvinná,..... kyselina (25,35) nebo (2R, 3R) .vinná, kyselina (25,35) nebo (2R,3R) ditoluoylvinná; kyselina 2,3:4,6di-O-isopropyliden-2-keto-L-gulonová, kyselina ( + ) -3, 4-dihydro2íř-l-benzopyran-2-karboxylová, (R) nebo (5)-4- (2-chlorfenyl) -2hydroxy-5,5-dimethyl-l,3,2-dioxafosforinan-2-oxid, kyselina Dglukonová, kyselina D nebo i-glutamová, kyselina Disoaskorbová, , kyselina. (5) nebo (R) -2-hydroxypropanová, kyselina laktobionová, kyselina Dnebo L-jablečná, kyselina (R) nebo (5)-mandlová, kyselina. 1-2-( (4-methoxyfenyl)sulfonyl)aminopentandiová, kyselina f-2-((4-methylfenyl)sulfonyl)aminopentandiová, kyselina (5) -6-methoxý-a-methyl-2-naftalenoctová, kyselina (5)-2-(fenylkarbamoylóxy)propanová, kyselina (-)-3piriankarboxylová, kyselina (R) nebo (5)-2-pyrřolidóh-5-karboxylová nebo kyselina (R)-thiazolidin-4-karboxylová. Vzniklé formy solí se následně dělí, například selektivní nebo frakční krystalizaeí a.požadovaný enantiomer se z nich uvolní alkalií.

Jiná možnost dělení požadované enantiomerní formy z matečné směsi zahrnuje . kapalinovou chromatografií s chirální stacionární fází. Čistou enantiomerní formu lze také získat z odpovídající čisté enantiomerní formy, příslušného výchozího materiálu za předpokladu, že reakce probíhá stereospecificky.

Čistou enantiomerní formu lze také získat reakcí příslušného racemického výchozího materiálu, za předpokladu, že reakce

-5·· · · probíhá enantiospecificky. Čistou enantiomerní formu lze připravit reakcí matečné enantiomerní směsi s jedním enantiomerem některého z chirálních činidel, jako jsou kyseliny nebo chloridy kyselin, aby se získaly diasteroisomerní směsi, které se rozdělí na čisté diastereomery například selektivní nebo frakční krystalizaci nebo pomocí kapalinové chromatografie. Příslušný diastereomer lze potom štěpit na požadovaný enantiomer. Matečnou enantiomerní směs lze připravit v souladu s postupem popsaným ve výše uvedeném patentu WO 00/39082 nebo jak se specifičtěji popisuje zde.

Sloučenina tohoto vynálezu a její farmaceuticky přijatelné kyselé adiční sole mají cenné farmakologické vlastnosti v tom, že jejich inhibiční účinek na farnesylovou proteinovou transferázu (FPTázu) je překvapivě silnější, než inhibiční účinek matečné enantiomerní směsi. Enantiomerní směs má IC50 FPT-ázovou inhibiční účinnost 1,1 hM, kdežto (-) enantiomer má odpovídající aktivitu 0,7 nM.

Předmětem tohoto vynálezu je způsob inhibice abnormálního růstu buněk, včetně transformovaných buněk, podáváním účinného množství sloučeniny tohoto vynálezu. Abnormálním růste buněk se označuje růst buněk nezávislý na normálních regulačních mechanismech (např. ztráta kontaktní inhibice). Zahrnuje abnormální růst: (1) nádorových buněk (nádorů) exprimujících aktivovaný ras onkogen, (2) nádorových buněk, ve kterých je ras protein aktivovaný jako výsledek onkogenní mutace jiného genu, (3) benigních a maligních buněk jiných proliferačních nemocí, ve kterých probíhá aberantní aktivace ras. V literatuře se kromě toho předpokládá, že onkogeny ras nejen přispívají k růstu tumorů in vivo přímým vlivem na růst nádorové buňky, ale také nepřímo, t j.. usnadněním angiogenéze vyvolané nádorem (Rak J. a „jiní, Cancer .Research, 55, 4575-4580, 1995). Farmakologické zaměření na mutantní onkogeny ras by tudíž případně mohlo zčásti potlačovat růst pevného nádoru in vivo pomocí inhibice angiogeneze vyvolané nádorem.

• · · · • · · · · · · · · ···· ·· ·· ··· ·· »·

Předmětem tohoto vynálezu je také způsob inhibice růstu nádoru podáváním účinného množství sloučeniny tohoto vynálezu subjektu, např. savci (a obzvláště člověku), který takovou léčbu potřebuje. Předmětem tohoto vynálezu je zvláště způsob inhibice růstu nádorů exprimujicích aktivované onkogeny ras, pomocí podávání účinného množství sloučeniny tohoto vynálezu. Příklady tumorů, které lze inhibovat/ ale neomezují se jen na tento výčet, jsou: rakovina plic (např. adenokarcinom a zahrnuje non-small cell lung cancer - heterogenní celek alespoň tří histologických nálezů u rakoviny plic), rakovina pankreatu (např. pankreaťický karcinom jako je například exokrinní pankreatický karcinom), rakovina tračníku (např. kolorektální karcinom jako je například adenokarcinom tračníku a adenom tračníku), hematopoesní nádory lymfoidního původu (např. akutní lymfatická leukémie, lymfom B-buněk, Burkittův lymfom), myeloidní leukémie (např. akutní myeloidní leukémie (AML)), folikulární nádor štítné žlázy, myelodysplastický syndrom (MDS), nádory mezenchymálního původu (např. fibrosarkomy a rabdomyosarkomy), melanomy, teratomy, neuroblastorny, gliomy, benigní nádor pokožky (např. keratoakantomy), karcinom prsu (např. rozvinutý karcinom prsu), karcinom ledvin, karcinom vaječníku, karcinom močového měchýře a epidermální karcinom.

Vynález může také poskytovat způsob inhibice proliferačních nemocí, benigních a maligních, v nichž ras proteiny se nenormálně aktivují v důsledku onkogenní mutace v genech. Této inhibice se dosáhne podáváním účinného množství zde popisované sloučeniny subjektu, který takovou léčbu potřebuje. Benigní proliferační neurofibromatózní potíže nebo nádory, v nichž ras je aktivován v důsledku mutací nebo nadměrné exprese lze například inhibovat pomocí tyrosinkinázových onkogenu, sloučenin tohoto vynálezu.

Sloučeninu podle tohoto vynálezu' lze použít terapeutickým účelům,, například:

dalším

a} zvýšení citlivosti nádorů k radioterapii pomocí podávání sloučeniny podle vynálezu před, během nebo po ozařování nádoru pro léčení rakoviny, například podle popisu v patentu WO 00/01411,

b) léčení atropatií, jako je revmatoidní artritida, osteoartritida, juvenilní artritida, dna, polyartritida, psoriatická artritida, ankylózní spondylitida a kolagenóza, například jak se popisuje v patentu WO '00/01386,

c) inhibice proliferace buněk hladkého svalstva zahrnující vaskulární proliferační potíže, aterosklerózu a restenózu, například jak se popisuje v patentu WO 98/55124,

d) léčení zánětlivých stavů jako je ulcerózní kolitida, Crohnova nemoc, alergická rinitida, reakce štěpu proti hostiteli, konjunktivitida, astma, ARDS, Behcetova nemoc, odmítnutí transplantátu, utikaria, alergická dermatitida, alopecie areata, sklerodermie, exantém, ekzém, dermatomyozitida, akné, diabetes, kolagenóza, Kawasakiho nemoc, roztroušená skleróza, emfyzém, cystická fibróza a chronická bronchitida,

e) léčení endometriózy, děložních fibroidů, disfunkčních děložních krvácení,, a endometriální hyperplazie,

f) léčení oční vaskularizace včetně vaskulopatie ovlivňující retinální a choroidální cévy,

g) léčení patologických důsledků heterotrimerické membránové fixace G proteinu včetně nemocí vztahujících se k následujícím biologickým funkcím nebo potížím: čich, chuť, závratě, vnímání, neurotransmise, neurodegenerace, činnost endokrinních a exokrinních žláz, autokrinní a parakrinní regulace, krevní tlak, embryogeneze, virové infekce, imunologické funkce, diabetes, obesita,

h) inhibice virové morfogeneze například současnou nebo následnou prenylační reakcí virových proteinů jako je velký delta antigen viru hepatitidy D; a léčení HIV

-8- *··· • ·· · • · infekcí,

i) léčba polycystického ledvinového onemocnění,

j) potlačení indukce indukovatelného oxidu dusnatého potíže zprostředkované oxidem dusnatým nebo septický šok, inhibici apoptozy a inhibici zahrnuj ící cytokinem, cytotoxicity oxidu dusnatého,

k) léčení malárie.

Předložený vynález tudíž popisuje sloučeninu tohoto vynálezu, jakož i její použiti pro přípravu lékových forem pro léčeni jednoho nebo vlče výše uvedených stavů.

Pro léčení výše uvedených stavů lze sloučeninu tohoto vynálezu výhodně používat v kombinaci s jedním nebo více dalšími cytostatiky, které se například vyberou z koordinačních sloučenin platiny, například cisplatina nebo carboplatina, taxanových sloučenin, například paclitaxel nebo docetaxel, kamfotecinových sloučenin, například irinotekan nebo topotekan, protinádorových vinka-alkaloidů např. vinblastin, vinkristin nebo vinorelbin, protinádorových derivátů nukleosidů, například 5-floururacil, gemcitabin nebo capecitabin, alkylačních činidel - derivátů 2-chlorethylaminu nebo nitrosomočoviny, například cyklofosfamid, chlorambucil, carmustin nebo lomustin, protinádorových anthracyklinových derivátů, například daunorubicin, doxorubicin nebo idarubicin, protilátek HER2, například trastumab, podofylotoxinových protinádorových derivátů například etoposid nebo teniposid a antiestrogenových činidel zahrnujících antagonisty receptorů estrogenu nebo selektivní modulátory receptorů estrogenu, výhodně tamoxifen nebo alternativně toremifen, droloxifen, faslodex a raloxifen nebo inhibitorů aromatázy, jako je exemestan, anastrazol, letrozol a vorozol.

Vzhledem k jejím prospěšným farmakologický vlastnostem lze předmětnou sloučeninu pro účely podávání připravovat v různých • φ · ·

-9• · · · · · • · · ·· ·· farmaceutických formách.

Pro přípravu farmaceutických, přípravků tohoto vynálezu se účinné množství sloučeniny, ve formě (báze nebo kyselé adiční·' sole jako aktivní složky, spojí v dokonalé příměsi s farmaceuticky přijatelným nosičem, jehož rozličné formy závisí na formě přípravku požadovaného pro podání. Tyto farmaceutické přípravky by měly být v jednotkové dávkové formě vhodné přednostně pro podání orální, rektální, perkutánní nebo pomocí parenterální injekce. Při přípravě přípravků v orální dávkové formě lze například využít jakékoli obvyklé farmaceutické médium, takové jako je například voda, glykoly, oleje, alkoholy a podobně, jedná-li se o orální kapalné přípravky, jako jsou suspenze, sirupy, tinktury a roztoky nebo pevné nosiče jako jsou škroby, cukry, kaolin, oleje, tmely, desintegrační činidla a podobně, jedná-li se o prášky, pilulky, tobolky a tabletky. Nejvýhodnějšími jednotkami pro orální dávkováni, ve kterých se zjevně používají pevné farmaceutické nosiče, jsou tablety a tobolky, vzhledem k jejich snadnému podávání. Pro parenterální přípravky bude nosič obvykle zahrnovat sterilní vodu, alespoň z velké části, ačkoliv například pro lepší rozpustnost lze zahrnout další přísady. Lze například připravit injekční roztoky, ve kterých nosič zahrnuje fyziologický roztok, roztok glukózy nebo jejich směs. Lze také připravit injekční suspenze, v případě kterých lze vyžít vhodné kapalné nosiče, suspendující činidla a podobně. V přípravcích vhodných pro. perkutánní podávání může nosič volitelně zahrnovat činidlo zrychlující pronikání a/nebo vhodné smáčecí činidlo, volitelně ve spojení s malým podílem vhodných přísad jakékoliv podstaty nemajících výrazně škodlivý účinek na pokožku. Takové přísady mohou usnadňovat podávání do kůže a/nebo mohou napomáhat při přípravě požadovaných přípravků. Tyto přípravky lze podávat různými způsoby, např. jako transdermální náplast, jako cílený přípravek, jako mast.

Pro snadné podávání a jednotnost dávky je zvláště výhodné ··· · připravovat výše zmíněné farmaceutické přípravky v jednotkové dávkové formě. Jednotková dávková forma, jak se zde používá v popisu a v patentových nárocích, označuje fyzikální samostatné jednotky vhodné jako jednotkové dávky, z nichž každá jednotka obsahuje předem stanovené množství aktivní složky vypočítané k docílení požadovaného terapeutickému účinku ve spojení s požadovaným farmaceutickým nosičem. Příklady takových jednotkových dávkových forem jsou tablety (zahrnující tablety s drážkou a tablety potahované), tobolky, prášky, pilulky, balené prášky, oplatky, injekční roztoky nebo suspenze, množství na čajovou lžičku, polévkovou lžíci a podobně a jejich jednotlivé násobky.

Odborníci v technice by mohli snadno určit účinné množství z výsledků zkoušek uvedených výše. Obecně se předpokládá, že účinné množství by bylo od 0,01 mg/kg do 100 mg/kg tělesné hmotnosti a zvláště od 0,05 mg/kg do 10 mg /kg tělesné hmotnosti. Pro dospělé osoby se obecně upřednostňují denní dávky od 10 do 600 mg, výhodně od 50 do 500 mg, zvláště od 100 do 400 mg aktivní složky a obzvláště výhodné jsou dávky od 200 nebo 300 mg. Může být vhodné podávat požadovanou dávku jako dvě, tři, čtyři nebo více menších dávek ve vhodných intervalech během dne. Tyto subdávky lze připravovat jako jednotkové dávkové formy, které například obsahují 10 až 500 mg a zvláště 50 mg až 300 mg aktivní složky na jednotkovou dávkovou formu; zvláště výhodné jsou dávkové jednotky obsahující 50 mg, 100 mg, 200 mg nebo 300 mg aktivní složky.

Smysl následujících příkladů je ilustrační.

·« ·♦ • · « • · · · · « ·£ J ·· · · ·« ··

Příklady provedení vynálezu

Dále se používají zkratky: THF pro tetrahydrofuran, DIPE pro diisopropylether a EtOAc pro ethyl-acetát.

a) Příprava meziproduktu (2).

meziprodukt (2)

Směs 6- (4-chlorbenzoyl) -4- (3-chlor.fenyl) -2 (IH) chinazolinonu (meziprodukt (1), 0,0506 mol), připravená podle WO98/49157, v

POC1₃ (100 mL) se míchala za varu pod zpětným chladičem 1 hodinu. Rozpouštědlo se odpařilo do sucha. Zbytek se několikrát vytřepal do CH₂C1₂. Rozpouštědlo se odpařilo do sucha a zbytek se rozpustil v CH₂C1₂. Směs se nalila do směsi led/NH₄OH. Organická vrstva se oddělila, sušila (MgSO₄), zfiltrovala a rozpouštědlo se odpařilo do sucha. Zbytek (24,2 g) se nechal krystalizovat z CH₃CN. Krystaly se odfiltrovaly a vysušily s výtěžkem 19,8 g meziproduktu (2) (94%), b.t. 152°C.

b) Příprava meziproduktu (3).

meziprodukt (3) φφφφφφφ · « · · * • · · · · φφφφ

-12 - *·*· ’· ·· ··· ·· ··

Roztok n-butyllithia v hexanu (1,6 M, 90 mL) se přikapal pod proudem N₂ při -70°C ke směsi 1-methylimidazolu (0,144 mol) v THF (120 mL). Směs se míchala 15 minut při -70°C. Při -70°C se přikapal chlortriethylsilan (0,148 mol) a. směs se při této teplotě míchala 15 minut. Po kapkách se přidal roztok nbutyllithia v hexanu (1,6 M, 80 mL). Směs se míchala 15 minut při -70 °C. Poté se přidal po kapkách roztok meziproduktu (2) (0,0822 mol) ve 300 mL THF. Směs se míchala 1 hodinu při -70°C, hydrolyzovala se, extrahovala EtOAc a dekantovala. Organická vrstva se sušila (MgSO₄), filtrovala a rozpouštědlo se odpařilo. Zbytek se přečistil sloupcovou chromatografií na silikagelu. Čisté frakce se spojily, rozpouštědlo se odpařilo a získalo se 24,9 g (61%) meziproduktu (3).

meziprodukt (2) meziprodukt (3)

c)Příprava meziproduktu (4)

Směs meziproduktu (3) (0,0061 mol) a azidu sodného (0,0079 mol) ve 20 mL Ν,Ν-diaethylacetamidu (DMA) se míchala 18 hodin při 50°C. Směs se ochladila na pokojovou teplotu a vlila se do ledové vody. Sraženina se odfiltrovala, pečlivě se promyla H₂O a rozpustila v CH₂C1₂. Organický roztok se vysušil, filtroval a rozpouštědlo se odpařilo. Zbytek se nechal krystalizovat z CH3CN-DIPE. Sraženina se odfiltrovala a vysušila za vzniku 2,3 g (75%) (+)-5-(3-chlorfenyl)-a-(4-chlorfenyl)-a-(l-methyl-lHimidazol-5-yi)tetrozolo[1,5-a]chinazolín-7-methanolu (meziprodukt 4); b.t. 232-233°C.

·· ·· ► * · · • · · • ···

9 >··· 99

13·· ····

d) Příprava meziproduktu (5).

Směs meziproduktu (4) (0,00573 mmol) a sulfonylmočoviny (300 g) se míchala 5 hodin při 160°C a pak se ochladila. Přidala se ledová voda, pak methylenchlorid a směs se zfiltrovala přes celit. Organická vrstva se oddělila, sušila MgSO₄, filtrovala a směs se odpařila do sucha. Zbytek se přečistil sloupcovou chromatografií na silikagelu. Čisté frakce se spojily a odpařením rozpouštědla se získalo 7,5 g (26%) (+)-5-(3chlorfenyl)-a-(4-chlorfenyl)-a-(l-methyl-lH-imidazol-5yl)tetrazolo[1,5-a]chinazolin-7-methanaminu (meziprodukt 5).

e) Meziprodukt (5) se rozdělil na enantiomery a přečistil se sloupcovou chromatografií na Chiralpaku AD® (eluent: hexan/EtOH 50/50; 15-35 pm). Čisté první frakce (A) se spojily a odpařením rozpouštědla se získalo 3,3 g zbytku, který se nechal krystalizovat z CH₃CN/DIPE. Sraženina se odfiltrovala a vysušením poskytla 2,55 g (-)-5-(3-chlorfenyl)-a-(4-chlorfenyl) -a- (l-methyl-líř-imidazol-5-yl) tetrozolo [1,5-a] chinazolin-7-methanaminu (sloučenina 1) [a]_D ²⁰ = -7,16° (c = 5 mg/ml MeOH); b.t. = 178-180°C; 1H-NMR (DMSO, 400 MHz) δ v ppm: 8,73 (d, J= 8,6 Hz, IH), 8,38 (dd, J= 8, 6 Hz, J= 1,5 Hz, IH), 7,74 - 7,67 (m, 3H), 7,64 (s, IH) , 7, 62-7, 56 (m, 2H) , 7,40 (d, J=8, 6 Hz, 2H), 7,21 (d, J= 8,6 Hz, 2H) , 5,93 (S,1H), 3,43 (s, 3H) ,

3,40 (rozšířený s, 2H); MS (elektronový rozptyl, pozitivní mód, OR=50V) m/z'. 501-505 (M+H)⁺; 473-477, 391-395, 83; Elementární analýza pro C₂5Hi₈Cl2N₈: % C vypočteno 59,89, nalezeno 59,71, % H vypočteno 3,62, nalezeno 3,52, % N vypočteno 22,35, nalezeno

22,17. Podle HPLC (Chiralpak AD® 10 pm eluent hexan/ethanol 50/50) obsahuje tato sloučenina méně něž 0,5 % hmotnostních (+) enantiomeru.

Druhé (B) frakce se spojily a odpařením poskytly 3,3 g zbytku, který krystalizoval z CH3CN/DIPE. Krystaly se odfiltrovaly a ·« ·· · ·· ···· ···· ·»·· · · « • ··· · · · ··· *.

* ···» ··«« . 14 -........... ’· ·· sušením poskytly 2,6 g (+)-5-(3-chlorfenyl)-a-(4-chlorfenyl)a- (l-methyl-líí-imidazol-5-yl) tetrozolo [1,5-a] chinazolin-7methanaminu (sloučenina 2) [a]_D ²⁰ = +5,9° (c = 5 mg/ml MeOH). Tato sloučenina obsahuje 4 % hmot. (-) enantiomeru podle měření pomocí HPLC (Chiralpak AD® 10 pm eluent hexan/ethanol 50/50) .

Farmakologický příklad

1. „Zkouška inhibice farnesylové proteinové transferázy in vi tro'¹''

Zkouška inhibice farnesylové proteinové transferázy in vitro se provedla v podstatě podle popisu v patentu WO 98/40383, str. 33-34.

2. „Zkouška reverze fenotypu ras-transformované buňky

Zkouška reverze.fenotypu ras-transformované buňky se provedla v podstatě podle popisu v patentu WO 98/40383, str. 34-36.

3. Inhibiční model sekundárního nádoru farnesylové proteinové transferázy

Inhibiční model sekundárního nádoru farnesylové proteinové transferázy se použil podle popisu v patentu WO 98/40383, str.

37.

Příklad přípravku: Potažené tablety

Příprava jádra tablety

Směs 100 g sloučeniny tohoto vynálezu, 570 g laktózy a 200 g škrobu se dobře promísí a poté se zvlhčí roztokem 5 g natriumdodecylsulfátu a 10 g polyvinyl-pyrrolidonu v asi 200 mL vody.

Vlhká prášková směs se proseje, suší a znovu proseje. Potom se • <* ·· ·· ·· « ·· • · · · · · ·« · • ··* · · * · · φ • · · · · ·

-15 - **** ” ** ·’* ·· přidá 100 g mikrokrystalické celulózy a 15 g hydrogenovaného rostlinného oleje. Vše se dobře promisi a lisuje do tablet. Získá se 10 000 tablet, každá obsahuje 10 mg sloučeniny tohoto vynálezu.

Potažení

K roztoku 10 g methylcelulózy v 75 ml denaturovaného ethanolu se přidá roztok 5 g ethylcelulózy ve 150 ml dichlormethanu. Pak se přidá 75 mL dichlormethanu a 2,5 mL 1,2,3-propantriolu. Roztaví se 10 g polyethylenglykolu a rozpustí ve 75 mL dichlormethanu. Tento roztok se přidá k předchozímu roztoku a pak se k jejich směsi přidá 2,5 g magnesium-oktadekanoátu, 5 g polyvinylpyrrolidonu, 30 mL koncentrované barevné suspenze a vše se homogenizuje. Tabletová jádra se potahují takto získanou směsi v aparatuře na potahování.

• 0 00

0 0 0

0 «

0 0··0

0 0 00 0

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Enantiomer (-)-5-(3-chlorfenyl)-α-(4-chlorfenyl)-α-(1methyl-líí-imidazol-5-yl) tetrozolo [1,5-a)chinazolin-7methanaminu a jeho farmaceuticky přijatelné kyselé adiční sole.
2. Farmaceutický přípravek vyznačující se tím, že zahrnuje farmaceuticky přijatelný nosič a jako aktivní přísadu terapeuticky účinné množství sloučeniny podle nároku 1.
3. Farmaceutický přípravek podle nároku 2 v jednotkové dávkové formě.
4. Farmaceutický přípravek podle nároku 3 vyznačující se tím, že obsahuje v každé jednotkové dávkové formě 50 až 300 mg aktivní přísady.
5. Farmaceutický přípravek podle nároku 3 nebo podle nároku 6 ve formě tablet.
6. Způsob přípravy farmaceutického přípravku podle kteréhokoli z nároků 2 až 5 vyznačující se tím, že terapeuticky účinné množství aktivní složky se důkladně smísí s farmaceuticky přijatelným nosičem.
7. Sloučenina podle nároku 1 pro použití v lékařství.
8. Použití sloučeniny podle nároku 1 pro výrobu léku pro inhibici růstu nádoru.
9. Způsob inhibice růstu nádoru v subjektu vyznačující se tím, že zahrnuje podání účinného množství sloučeniny podle nároku 1 subjektu.

• tt tt···

-17· • tt tttt • tttt c • · · tt tttttt • · • tttt» ·· tt* • · ·· tttt · • tttt · · · • tt · tt · · · • * » · · · · tttt tttttt tttt ·«

10.Způsob podle nároku 9 vyznačuj ící s e tím, ž e sloučenina se podává v denní dávce od 10 do 600 mg. 11.Způsob podle nároku 10 vyznačuj ící s e tím, ž e sloučenina se podává v denní dávce od 50 do 500 mg.
12.Způsob přípravy sloučeniny podle nároku 1 vyznačující se tím, že zahrnuje zpracování (+)-5- (3-chlorfenyl) -a- (4chlorfenyl)-a-(l-methyl-lff-imidazol-5-yl)tetrozolo[1,5a]chinazolin-7-methanaminu nebo jeho farmaceuticky adiční sole, aby se oddělily složky (+) a a izoloval (-) enantiomer nebo jeho adiční sůl.

přijatelné kyselé (-) enantiomerů přijatelná kyselá