CZ2003151A3 - Peptidové inhibitory serinové proteázy NS3 a farmaceutický prostředek - Google Patents

Description

Oblast techniky

Předkládaný vynález se týká nových inhibitorů proteázy 5 hepatitidy C („HCV“), farmaceutických prostředků s obsahem jednoho nebo více těchto inhibitorů a použití pro léčení hepatitidy C a souvisejících onemocnění. Vynález zvláště popisuje nové peptidové sloučeniny jako inhibitory serinové proteázy NS3/NS4a viru HCV.

Dosavadní stav techniky

Virus hepatitidy C (HCV) je pozitivní ((+)-sense) jednořetězcový RNA virus, který je podle předpokladů hlavním činitelem vyvolávajícím non-A, non-B hepatitidu (NANBH), zvláště s krví asociovanou NANBH (BB-NANBH) (viz mezinárodní patentová přihláška No. WO 89/04669 a 15 evropská patentová přihláška No. EP 381 216). NANBH je třeba odlišovat od jiných typů jaterních onemocnění indukovaných viry, jako je onemocnění vyvolané virem hepatitidy A (HAV), virem hepatitidy B (HBV), virem hepatitidy delta (HDV), cytomegalovirem (CMV) a virem Epstein-Barrové (EBV), stejně jako od jiných forem jaterních 20 onemocnění jako je alkoholismus a primární cirrhosa jater.

V nedávné době byla identifikována, klonována a exprimována proteáza HCV nezbytná pro zpracování (procesing) polypeptidů a replikaci viru; viz například US patent No. 5,712,145. Tento polyprotein o přibližné délce 3000 aminokyselin obsahuje, od 25 aminového konce ke karboxylovému konci, protein nukleokapsidy (C), proteiny obalu (E1 a E2) a několik nestrukturních proteinů (NS1, 2, 3, 4a, 5a a 5b). NS3 je protein o velikosti přibližně 68 kDa kódovaný přibližně 1893 nukleotidy genomu HCV, který obsahuje dvě odlišné ·· domény: (a) doménu serinové proteázy, která se skládá z přibližně 200 N-koncových aminokyselin; a (b) doménu RNA-dependentní ATPázy na C-konci proteinu. Předpokládá se, že proteáza NS3 patří do skupiny chymotrypsinových proteáz _z _důvodů své podobnosti v sekvenci proteinu, celkové trojrozměrné struktuře a mechanismu katalýzy. Jiné enzymy podobné chymotrypsinu jsou elastáza, faktor Xa, thrombin, trypsin, plasmin, urokináza, tPA a PSA. Serinová proteáza viru HOV NS3 je odpovědná za proteolýzu polypeptidu (polyproteinu) ve spojeních NS3/NS4a, NS4a/NS4b, NS4b/NS5a a NS5a/NS5b a je tedy odpovědná za vytvoření čtyř virových proteinů v průběhu replikace viru. Serinová proteáza NS3 viru HCV je tedy přitažlivým cílem pro antivirovou chemoterapii.

Bylo zjištěno, že protein NS4a, což je polypeptid o délce přibližně 6 kDa, je kofaktorem aktivity serinové proteázy u proteázy NS3. Autologní štěpení spojení NS3/NS4a serinovou proteázou NS3/NS4a probíhá intramolekulárně (tj. cis), zatímco jiná místa štěpení jsou zpracována intermolekulárně (tj. trans).

Analýza přirozených štěpících míst proteázy HCV odhalila přítomnost cysteinu v místě P1 a šeřinu v místě P1’ a skutečnost, že tyto zbytky jsou ve spojeních NS4a/NS4b, NS4b/NS5a a NS5a/NS5b přísně konzervovány. Spojení NS3/NS4a obsahuje threonin v místě P1 a serin v místě Pí’. Substituce Cys-»Thr v místě NS3/NS4a podle předpokladů odpovídá za požadavek cis namísto trans zpracování v místě tohoto spojení, viz např. Pizzi a další (1994), Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 91: 888 - 892, Failla a další (1996), Folding & Design 1: 35 - 42. Štěpící místo NS3/NS4a je také tolerantnější vůči mutagenezi než jiná místa, viz např. Kollykhalov a další (1994), J. Virol. 68: 7525 7533. Bylo také zjištěno, že pro účinné štěpení jsou nezbytné kyselé zbytky v oblasti proti směru transkripce vzhledem k místu štěpení, viz např. Komoda a další (1994), J. Virol. 68: 7351 - 7357.

- 3 Mezi již popsané inhibitory proteázy HOV patří antioxidanty (viz mezinárodní patentová přihláška No. WO 98/14181), některé peptidy a peptidové analogy (viz mezinárodní patentová přihláška No. WO 98/17679, Landro a další (1997), Biochern. _ 36: 9340 - 9348, Ingallinella a další (1998), Biochern. 37: 8906 - 8914, Llinas- Brunet a další (1998), Bioorg. Med. Chem. Lett. 8: 1713 - 1718), inhibitory založené na polypeptidu o délce 70 aminokyselin eglin c (Martin a další (1998), Biochern. 37: 11459 - 11468), inhibitory afinitně selektované z lidského pankreatického sekrečního inhibitoru trypsinu (hPSTI-C3) a miniprotilátky, tzv. minibody repertoires (MBip) (Dimasi a další (1997), J. Virol. 71: 7461 - 7469), cV_HE2 („kamelizovaná“ variabilní doména fragmentu protilátky) (Martin a další (1997), Protein Enq. 10: 607 - 614), a a1 -antichymotrypsin (ACT) (Elzouki a další (1997), J. Hepat. 27: 42 - 28). Nedávno byl popsán ribozym navržený pro selektivní ničení RNA viru hepatitidy C (viz BioWorld Today 9 (217: 4 (10. listopadu 1998)).

Je možno odkázat také na zveřejněné přihlášky PCT No. WO 98/17679, zveřejněná 30. dubna 1998 (Vertex Pharmaceuticals Incorporated); WO 98/22496 zveřejněná 28. května 1998 (F. Hoffmann-La Roche AG); a WO 99/07734, zveřejněná 18. února 1999 (Boehringer Ingelheim Canada Ltd.).

Předpokládá se, že virus HCV se účastní cirrhosy jater a indukce hepatocelulárního karcinomu. Prognóza pro pacienty trpící infekcí HCV je v současnosti špatná. Infekci HCV je možné léčit obtížněji než jiné formy hepatitidy v důsledku nedostatku inuminy nebo návratu onemocnění v souvislosti s infekcí HCV. Současné údaje ukazují, že po diagnóze cirrhosy je míra přežití po čtyřech letech 50 %. Pacienti s diagnózou lokalizovaného resektovatelného hepatocelulárního karcinomu mají míru přežití 5 let 10 až 30 %, zatímco pacienti s lokalizovaným neresektovatelným hepatocelulárním karcinomem mají míru přežití 5 let nižší než 1 %.

Odkazuje se také na článek A. Marchetti a další, Synleff, SI.,

1000 - 1002 (1999), ve kterém se popisuje syntéza bicyklických analogů inhibitoru proteázy NS3 viru HCV. Tam popisovaná sloučenina má vzorec: _ _

Je možno také odkázat na článek autorů W. Han a další, Bioorganic & Medicinal Chem. Lett. (2000) W, 711 - 713, který popisuje přípravu některých a-ketoamidů, α-ketoesterů a a-diketonů 15 obsahujících allylové a ethylové funkční skupiny.

Je také možno odkázat na WO Ό0/09558 (Přihlašovatel: Boehringer Ingelheim Limited; zveřejněno 24. února 2000), kde se popisují peptidové deriváty vzorce:

přičemž v uvedené přihlášce jsou definovány různé skupiny v tomto vzorci. Ilustrativní sloučenina této řady je:

Je možno také odkázat na dokument WO 00/09543 (přihlašovatel: Boehringer Ingelheim Limited; zveřejněný 24. února 2000), kde se popisují peptidové deriváty vzorce:

a kde se definují různé substituenty obsažené v tomto vzorci.

Pro ilustraci této řady sloučenin je možno uvést sloučeninu:

.............. ·’

O Současné způsoby léčení hepatitidy C zahrnují lecbu interferonem-a (INFa) a kombinovanou terapii ribavirmem a interferonem, viz např. Beremguer a další (1998), Proc. Assoc. Arm Physicians 110 (2): 98 - 112. Tyto způsoby léčení však mají nízkou míru trvalé odezvy-a časté vedlejší účinky, viz např. Hoofnagle a další _l5 (1997), N. Enql. J- Med. 336: 347. V současnosti není k dispozici žádná vakcina proti infekci HCV.

Související patentové přihlášky No. 60/194,607, datum podaní 5. dubna 2000, a No. 60/198,204, datum podání 19. dubna 2000, No. 60/220,110, datum podání 21. července 2000, No. 60/220,109, datum ₂₀ podání’ 21. července 2000, No. 60/220,107, datum podání 21. července 2000, No. 60/254,869, datum podání 12. prosince 2000 a No. 60/220,101, datum podání 21. července 2000, popisují různé typy peptidů a/nebo jiných sloučenin jako inhibitorů serinové proteázy NS-3 viru hepatitidy C.

₂₅ Trvá potřeba nalézt nové způsoby léčení infekce HCV.

Předmětem předkládaného vynálezu je proto poskytnutí sloučenin použitelných při léčbě nebo prevenci nebo zmírnění jednoho nebo více příznaků hepatitidy C.

........... ··

Dalším,předmětem je poskytnutí způsobů léčení nebo prevence nebo zmírnění jednoho nebo více příznaků hepatitidy C.

Ještě dalším předmětem předkládaného vynálezu je poskytnutí mněním mndiilar.p aktivitv serinovvchoroteáz, _ zvláště serinové -----------5 proteázy HCV NS3/NS4a HCV s použitím poskytnutých sloučenin.

Další předmět vynálezu je poskytnutí způsobů modulace zpracování (processingu) polypeptidu HCV s použitím poskytnutých sloučenin.

Podstata vynálezu

Předkládaný vynález poskytuje ve svých mnoha provedeních novou skupinu inhibitorů proteázy HCV, farmaceutické prostředky obsahující jednu nebo více těchto sloučenin, způsoby přípravy farmaceutických prostředků s obsahem jedné nebo více těchto is sloučenin a způsoby léčení, prevence a odstraňování jednoho nebo více příznaků hepatitidy C. Poskytují se také způsoby modulace interakce polypeptidu HCV s proteázou HCV. Mezi poskytovanými sloučeninami jsou výhodné sloučeniny, které inhibují aktivitu serinové proteázy NS3/NS4a HCV. Předkládaná přihláška popisuje sloučeninu 20 včetně enantiomerů, stereoisomerů, rotamerů, tautomerů, racemátů a prekurzorů, a farmaceuticky přijatelné soli nebo solváty uvedené sloučeniny nebo uvedeného prekurzoru, kde sloučenina má obecnou strukturu ukázanou ve vzorci I:

- *8 - ” kde:

Υ je zvoleno ze skupiny: alkyl, alkylaryl, heteroalkyl, heteroaryl, arylheteroaryl, alkylheteroaryl, cykloalkyl, alkyloxy, alkylaryloxy, arvlnxv heteroarvloxv. heterocvkioalkyioxy,_cykloaikyloxy,, alkylamino, ---j ----y , · - - ....... . - - arylamino, alkylarylamino, arylamino, heteroarylamino, cykloalkylamino a heterocykloalkylamino, s podmínkou, že Y může být popřípadě 11 12 substituováno skupinami X nebo X ,

X¹¹ je alkyl, alkenyl, alkinyl, cykloalkyl, cykloalkylalkyl, heterocyklyl, heterocyklylalkyl, aryl, alkylaryl, arylalkyl, heteroaryl, alkylheteroaryl, nebo heteroarylalkyl, s podmínkou, že X¹¹ může být navíc popřípadě substituováno X ;

X¹² je hydroxy, alkoxy, aryloxy, thio, alkylthio, arylthio, amino, alkylamino, arylamino, alkylsulfonyl, arylsulfonyl, alkylsulfonamido, arylsulfonamido, karboxy, karbalkoxy, karboxamido, alkoxykarbonylamino, alkoxykarbonyloxy, alkylureido, arylureido, halogen, kyano nebo nitro, s podmínkou, že skupina alkyl, alkoxy a aryl může být navíc popřípadě substituována skupinami nezávisle zvolenými z X ;

R¹ je COR⁵ nebo B(OR)2, kde R⁵ je H, OH, OR⁸, NR⁹R¹⁰, CF3, C2F5, C3F7, CF2R⁶, R⁶, nebo COR⁷, kde R⁷ je H, OH, OR⁸, CHR⁹R¹⁰, nebo NR⁹R¹⁰, kde R⁶, R⁸, R⁹ a R¹⁰ jsou nezávisle zvoleny ze skupiny H, alkyl, aryl, heteroalkyl, heteroaryl, cykloalkyl, cykloalkyl, arylalkyl, heteroarylalkyl, [CH(R¹ )]pCOOR”, [CH(R¹ )]PCONR¹²R¹³, [CH(R¹’)]pSO2R¹¹ , [CH(R^r)]pCOR¹¹,

[CH(R¹ )]_PCH(OH)R¹¹, CH(R¹')CONHCH(R²')COOR¹¹,

CH(R¹')CONHCH(R²’)CONR¹²R¹³, CH(R¹’)CONHCH(R²)R, CH(R¹')CONHCH(R²’)CONHCH(R³')COOR¹¹, CH(R¹’)CONHCH(R²')CONHCH(R³')CONR¹²R¹³, CH(R¹’)CONHCH(R²’)CONHCH(R³')CONHCH(R⁴’)COOR¹¹, CH(R¹’)CONHCH(R²’)CONHCH(R³')CONHCH(R⁴’)CONR¹²R¹³, CH(R¹’)CONHCH(R²')CONHCH(R³’)CONHCH(R⁴’)CONHCH(R⁵)- 9 COOR¹¹, a

CH(R¹ )CONHCH(R² )CONHCH(R³ )CONHCH(R⁴ )CONHCH(R⁵ )CONR¹²R¹³, kde R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R¹¹, R¹², R¹³ θ R jsou nezávisle zvoleny ze skupiny H, alkyl, aryl, heteroalkyl, heteroaryl, cykloalkyl, alkylaryl, alkylheteroaryl, arylalkyl a heteroaralkyl;

Z je zvoleno ze skupiny O, N, CH nebo CR;

W může být přítomna nebo nepřítomna, a jestliže W je přítomna, W je zvolena ze skupiny C=O, C=S, C(=N-CN), nebo SO₂;

Q může být přítomna nebo nepřítomna, a jestliže Q je přítomna, Q je CH, N, P, (CH₂)_P, (CHR)_P, (CRR’)_P, O, NR, S, nebo SO₂; a jestliže Q je nepřítomna, M může být přítomna nebo nepřítomna; jestliže Q a M jsou nepřítomné, A je přímo navázána na L;

A je O, CH₂, (CHR)_p, (CHR-CHR’)_P, (CRR’)_P, NR, S, SO₂ nebo vazba;

E je CH, N, CR, nebo dvojná vazba k A, L nebo G;

G může být přítomna nebo nepřítomna, a jestliže G je přítomna, G je (CH₂)_P, (CHR)_P, nebo (CRR’)p; a jestliže G je nepřítomna, J je přítomna a E je přímo navázána na atom uhlíku ve vzorci I, ke kterému je navázána skupina G;

J může být přítomna nebo nepřítomna, a jestliže J je přítomna, J je (CH₂)_p, (CHR)_P, nebo (CRR’)_P, SO₂, NH, NR nebo O; a jestliže J je nepřítomna, G je přítomna a E je přímo navázána na N ukázaný ve vzorci I jako navázaný na J;

L může být přítomna nebo nepřítomna, a jestliže L je přítomna, L je CH, CR, O, S nebo NR; a jestliže L je nepřítomna, potom M může být přítomna nebo nepřítomna; a jestliže je M přítomna a L nepřítomna, potom M je přímo a nezávisle navázána na E, a J je přímo a nezávisle navázána na E;

M může být přítomna nebo nepřítomna, a jestliže M je přítomna, M je O, NR, S, SO₂, (CH₂)_P, (CHR)_p(CHR-CHR’)p, nebo (CRR')_P;

p je číslo od 0 do 6; a

R, R’, R^z, R° a R* jsou nezávisle zvoleny ze skupiny H; Ci-C-io-aikyi; C₂-Cio-alkenyl; C₃-C₈-cykloalkyl; C₃-C₈-heterocykloalkyl, alkoxy, aryloxy, alkylthio, arylthio, amino, amido, ester, karboxylové kyselina, karbamát, močovina, keton, aldehyd, kyano, nitro, halogen; (cykloalkyl)alkyl a (heterocykloalkyl)alkyl, kde uvedený cykloalkyl je vytvořen ze 3 až 8 atomů uhlíku, a 0 až 6 atomů kyslíku, dusíku, síry, nebo fosforu, a uvedený alkyl obsahuje 1 až 6 atomů uhlíku; aryl; heteroaryl; alkylaryl; a alkylheteroaryl;

kde uvedené skupiny alkyl, heteroalkyl, alkenyl, heteroalkenyl, aryl, heteroaryl, cykloalkyl a heterocykloalkyl mohou být popřípadě a chemicky vhodně substituovány, přičemž termín „substituovaný“ označuje případnou a chemicky vhodnou substituci jednou nebo více skupinami zvolenými ze skupiny alkyl, alkenyl, alkinyl, aryl, aralkyl, cykloalkyl, heterocykl, halogen, hydroxy, thio, alkoxy, aryloxy, alkylthio, arylthio, amino, amido, ester, karboxylové kyselina, karbamát, močovina, keton, aldehyd, kyano, nitro, sulfonamido, sulfoxid, sulfon, sulfonylmočovina, hydrazid, a hydroxamát;

dále kde uvedená jednotka N-C-G-E-L-J-N znamená 5-člennou nebo 6-člennou cyklickou kruhovou strukturu s podmínkou, že jestliže tato jednotka N-C-G-E-L-J-N představuje 5-člennou cyklickou kruhovou strukturu, nebo jestliže bicyklické kruhová struktura ve vzorci I zahrnujícím N, C, G, E, L, J, N, A, Q, a M znamená 5-člennou cyklickou kruhovou strukturu, potom uvedená 5-členná cyklická kruhová struktura neobsahuje jako část cyklického kruhu karbonylovou skupinu.

Mezi výše uvedenými definicemi pro různé skupiny vzorce I jsou výhodné významy pro různé skupiny následující:

- 1 f ..........

Výhodná definice pro R¹ je COR⁵, kde R⁵ je H, OH, COOR nebo

CONR⁹R¹⁰, kde R⁸, R⁹ a R¹⁰ jsou definovány výše. Výhodná skupina pro R¹ je dále COCONR⁹R¹⁰, kde R⁹ je H; a R¹° je H, R¹⁴,

[CH(R¹’)lpCOOR”, [CH(R¹ )]_PCONR¹²R¹³, JCH:R Π,,δΟρΚ .

[CH(R¹ ’jjpSOzNR’W³, [CH(R’ )]_pCOR”, CH(R^r)CONHCH(R²')COOR¹¹, CH(R’’)CONHCH(R²')CONR¹²R'³, nebo CH(R¹’)CONHCH(R²’)(R’), kde R¹⁴ je H, alkyl, aryl, heteroalkyl, heteroaryl, cykloalkyl, alkylaryl, alkylheteroaryl, arylalkyl, alkenyl, alkinyl nebo heteroaralkyl.

Mezi skupiny výhodné ve významu R¹⁰ patří: H, R¹⁴,

CH(R¹ )COOR¹¹, CH(R¹ )CH(R¹ )COOR¹¹, CH(R¹’)CONR¹²R¹³, CHÍR¹ )CH(R¹ )CONR¹²R¹³, CH(R¹ )CH(R¹ )SO2R¹¹, CH(R¹ )CH(R )-SO2NR¹²R¹³, CH(R¹ )CH(R¹ )COR¹¹, CH(R¹')CONHCH(R^2,)COOR¹¹, CH(R¹ )CÓNHCH(R²)CONR¹²R¹³, nebo CH(R¹')CONHCH(R² )(R’). kde is R¹ je H nebo alkyl, a R² je fenyl, substituovaný fenyl, heteroatomem substituovaný fenyl, thiofenyl, cykloalkyl, piperidyl nebo pyridyl.

Výhodnější skupiny jsou následující: pro R¹ je výhodná skupina H, pro R¹¹ je H, methyl, ethyl, allyl, řerc-butyl, benzyl, α-methylbenzyl, α,α-dimethylbenzyl, 1-methylcyklopropyl nebo 1-methylcyklopentyl; pro

R’ je hydroxymethyl nebo CH₂CONR¹²R¹³, kde NR¹²R¹³ je zvoleno ze skupiny:

/—NHo, —NHMe, NH-n-Pr,

N(Me)OMe,

·..··..·

Me Me X z

kde U⁶ je H, OH, nebo CH₂OH;

R¹⁴ je s výhodou zvolena ze skupiny: H, Me, Et, n-propyl, methoxy, cyklopropyl, n-butyl, 1 -but-3-inyl, benzyl, a-methylbenzyl, fenethyl, allyl, 1-but-3-enyl, OMe, cyklopropylmethyl; a

R²' je s výhodou nezávisle zvolena ze skupiny:

U¹ a U² mohou být stejné nebo různé a jsou zvoleny ze skupiny H, F, CH₂COOH, CH₂COOMe, CH2CONH2, CH₂CONHMe, CH₂CONMe2, azido, amino, hydroxyl, substituovaný amino, substituovaný hydroxyl;

U³ a U⁴ mohou být stejné nebo různé a jsou zvoleny ze skupiny O a S;

U⁵ je zvolena ze skupiny alkylsulfonyl, arylsulfonyl, heteroalkylsulfonyl, heteroarylsulfonyl, alkylkarbonyl, arylkarbonyl, heteroalkylkarbonyl, heteroarylkarbonyl, alkoxykarbonyl, aryloxykarbonyl, heteroaryloxykarbonyl, • · · · ···· • · · · · ···· · alkylaminokarbonyl, arylaminokarbonyl, heteroarylaminokarbonyl nebo jejich kombinace.

Výhodné skupiny ve významu R jsou:

ΑΛΛΑ | ‘ ««ΛΑ AAV 5 1 1 Γ r J A ch3 ' i r \ ch= ch3 y CH; ΑΛΛΛ ΑΑ.Ά ΑΛΛΑ 2^5 I | ΑΛΛΑ A Γ A / y 1 J F 10 cf3 f FS ΑΛΛΛ -VW ΑΛΛΑ / y 7- ι 'X ^S(0)o-2 u n 1 II Ah ' CH3 11 ch3 CH3 20 ^Η3 ο^Η= - ch3 ch3 r)n = 0-3 A A A A F F ΛΛΛ/V vWW »/ννΆ / \ △ Z\ A

ΑΛΛΑ ΑΛΛΑ F J<F T* F 1 F ρ3σ ch3 y / f3c^ y ' ycH3 %(Ο)0-2 [ ch3 ch3 \ A é 4f F A vvwv r

o Výhodné skupiny ve významu R jsou: -- --- 'p CH^CHs CHa^CHg f CH3 .. ch3 5 *WW »ww | 1 ^o-4 C^*íO *WX/X* ΛΛΛΛ *WW j 1 - cH3V d Q CH3 ^^COR3 • *ww <WW I । i »ww H3c^)0-3 Cj S 15 X---' $ k 0 1 ch3^ T 1 H-C SBn HO^CH, COOH 0 •WW <WW ~VW 'WWW. . ΛΑΑΛ» 0 O 0 OH Me -ww ” A ό i \_j \/ CI-^Q

CHt^^O J CH3\ {Ar' - hsAsch’ An/w I *ww Cj CHís^cooa F^F ΛΛΛΛ fj o^ch3 i CH3^rCH3 COR^1 0H3 νυυυ I Λ/υνχ* 1 F3C^ COOH CF3 *ww , Ό ř Ux. COOH CHa^J/CHs J CH3 3 ΑΑΑΛ, <VWU I L-Me Me 0-3 T F3C^CF3 -VVW 'VWV Me F F

-15.·-.:..

kde R³¹ = OH nebo O-alkyl;

Y¹⁹ je zvolena z následujících skupin:

a Y²⁰ je zvolena z následujících skupin:

3)3

NHAc

O

Nejvýhodnější skupiny pro R jsou:

CH3

CH₃ ch₃

CHf^CHs _r31·

Některé další výhodné skupiny jsou následující: pro Z je výhodná skupina N, pro R⁴ je H, a pro W je C=O.

Navíc mohou být skupiny Z-C-R³ ve vzorci I, kde R⁴ není přítomno, reprezentovány následujícími strukturami:

.:..:..-1.7--.:.. ·..··..·

-*24 kde:

Y¹¹ je zvolena ze skupiny H, COOH, COOEt, OMe, Ph, OPh, NHMe, NHAc, NHPh, CH(Me)2, 1-triazolyl, 1-imidazolyl a NHCH₂COOH;

Y¹² je zvolena ze skupiny H, COOH, COOMe, OMe, F, Cl nebo Br;

Y¹³ je zvolena z následujících skupin:

Y¹⁴ je zvolena ze skupiny MeSO₂, Ac, Boc, iBoc, Cbz, nebo Alloc;

γΊ5 θ γΐβ j_{SQU nez}ávisle zvoleny ze skupiny alkyl, aryl, heteroaíkyí a heteroaryl;

Y¹⁷ je CF₃₁ NO_2i CONH₂, OH, COOCH₃, OCH₃, OC₆H₅, C₆H₅, COC₆H₅, NH₂ nebo COOH; a

Y¹⁸ je COOCH3, NO₂, N(CH₃)2, F, OCH₃, CH₂COOH, COOH, SO₂NH₂, nebo NHCOCH3.

Y může výhodněji znamenat:

COOH

kde:

γ¹⁷ = CF₃, NO₂, CONH₂, OH, NH₂ nebo COOH;

Y¹⁸ = F, COOH,

Ještě výhodnější skupiny ve významu Y jsou:

Jak je ukázáno ve vzorci I, jednotka

znamená cyklickou kruhovou strukturu, která může být 5-člénná nebo 6-členná kruhová struktura. Jestliže cyklický kruh znamená 5členný kruh, předkládaný vynález požaduje, aby 5-členný kruh neobsahoval jako součást cyklické kruhové struktury karbonylovou 20 skupinu. Tento 5-členný kruh má s výhodou následující strukturu:

kde R a R’ jsou definovány výše. Výhodná 5-členná kruhová • · · ·’ · * · · • · «·· * · · · · struktura je následující:

kde R²⁰ je zvolena z následujících skupin:

Pětičlenný kruh spolu se sousedícími dvěma karbonylovými skupinami stojícími mimo tento kruh může být dále například následující:

O

:.. -*2S* přičemž R²¹ a R²² mohou být v tomto případě stejné nebo různé a jsou nezávisle zvoleny z následujících skupin:

Pětičlenná kruhová struktura • · · · · · · • e·· · · · · «

může mít například následující výhodné významy:

Ve struktuře c jsou skupiny G a J nezávisle zvoleny ze skupiny (CH₂)_P, (CHR)_P, (CHR-CHR’)p a (CRR’)_P; A a M jsou nezávisle zvoleny ze skupiny O, S, SO₂, NR, (CH₂)_P, (CHR)_P, (CHR-CHR )_p, a (CRR )_p, a Q je CH₂, CHR, CRR’, NH, NR, O, S, SO₂, NR, (CH₂)_P> (CHR)_P, a (CRR’)p.

Výhodné definice pro strukturu c jsou:

:.. -no·-.:.. ·..··..·

Kde cyklická kruhová struktura je znázorněna jako:

a její nejvýhodnější významy jsou následující:

Některé z ještě výhodnějších významů pro jednotku:

o

Pokud není definováno jinak, všechny technické a vědecké termíny používané v předkládané přihlášce mají stejný význam běžně používaný odborníky v oboru, do kterého předkládaný vynález patří. Tak například termín alkyl (včetně alkylových částí skupiny alkoxy) označuje jednovaznou skupinu odvozenou od přímého nebo rozvětveného nasyceného uhlovodíku odstraněním jednoho atomu, s obsahem 1 až 8 atomů uhlíku, s výhodou od 1 do 6;

·· ···· 34« aryl znamená karbocyklickou skupinu obsahující od 6 do 14 atomů uhlíku a alespoň jeden benzenoidní kruh, přičemž jako místa navázání substituentů jsou možné všechny dostupné substituovatelné aromatické atomy uhlíku karbocyklické skupiny. Výhodné arylové skupiny zahrnují fenyl, 1-naftyl, 2-naftyl a indanyl, zvláště fenyl a substituovaný fenyl;

aralkyl znamená skupinu obsahující arylovou skupinu navázanou přes nižší alkyl;

alkylaryl znamená skupinu obsahující nižší alkyl navázaný přes arylovou skupinu;

cykloalkyl znamená nasycený karbocyklický kruh s 3 až 8 atomy uhlíku, s výhodou 5 nebo 6, popřípadě substituovaný;

heterocykl znamená navíc k dále definovaným heteroarylovým skupinám nasycené a nenasycené cyklické organické skupiny obsahující alespoň jeden atom O, S a/nebo N přerušující strukturu karbocyklického kruhu, který se skládá z jednoho kruhu nebo dvou fúzovaných kruhů, kde každý kruh je 5-, 6- nebo 7-členný a může nebo nemusí obsahovat dvojné vazby postrádající delokalizované pi elektrony, kde tato kruhová struktura má od 2 do 8, s výhodou od 3 do 6 atomů uhlíku, např. 2- nebo 3-piperidinyl, 2- nebo 3-piperazinyl, 2nebo 3-morfolinyl, nebo 2- nebo 3-thiomorfolinyl;

halogen znamená fluor, chlor, brom a jod;

heteroaryl znamená cyklickou organickou skupinu obsahující alespoň jeden atom O, S a/nebo N přerušující strukturu karbocyklického kruhu a obsahující dostatečný počet delokalizovaných pi elektronů pro poskytnutí aromatického charakteru, přičemž aromatická heterocyklylová skupina obsahuje od 2 do 14, s výhodou 4 nebo 5 atomů uhlíku, např. 2-, 3- nebo 4-pyridyl, 2- nebo 3-furyl, 2nebo 3-thienyl, 2-, 4- nebo 5-thiazolyl, 2- nebo 4-imidazolyl, 2-, 4nebo 5-pyrimidinyl, 2-pyrazinyl, nebo 3- nebo 4-pyridazinyl, atd.

.....* .....-35-* *’

Výhodné heteroarylové skupiny jsou 2-, 3- a 4-pyridyl; takové heteroarylové skupiny mohou také být popřípadě substituovány. Navíc, pokud není zvláště definováno, znamená termín „substituovaný nebo nesubstituovaný“ nebo „popřípadě substituovaný“, že příslušná skupina je popřípadě a chemicky vhodně substituována skupinou náležející k R¹² nebo R¹³. Jak se zde používá, „prekurzor“ znamená sloučeniny, které jsou prekurzory léčiva, které po podání pacientovi uvolňuje léčivo in vivo prostřednictvím některých chemických nebo fyziologických procesů (např. prekurzor se na požadovanou formu léčiva převede v prostředí fyziologického pH nebo působením enzymů).

Vynález také zahrnuje tautomery, rotamery, enantiomery a jiné optické isomery sloučenin vzorce I, stejně jako jejich farmaceuticky přijatelné soli, solváty a deriváty.

Další předmět vynálezu jsou farmaceutické prostředky obsahující jako účinnou složku sloučeninu vzorce I (nebo její sůl, solvát nebo isomery) spolu s farmaceuticky přijatelným nosičem nebo pomocnou látkou.

Vynález také poskytuje způsoby přípravy sloučenin vzorce I, stejně jako způsob léčení onemocnění jako je například HCV, AIDS (syndrom získané imunitní nedostatečnosti) a souvisejících stavů. Způsoby léčení zahrnují podávání terapeuticky účinného množství sloučeniny vzorce I nebo farmaceutických prostředků s obsahem sloučeniny vzorce I pacientovi v případě potřeby.

Popisuje se také použití sloučeniny vzorce I pro výrobu farmaceutického prostředku pro léčení HCV, AIDS a souvisejících stavů.

Popisuje se také způsob léčení onemocnění souvisejícího s virem hepatitidy C, který zahrnuje podávání účinného množství jedné nebo více sloučenin podle vynálezu.

...........·-·36 -· ··

Popisuje se také způsob modulace aktivity proteázy viru hepatitidy C (HCV), který zahrnuje uvedení proteázy HCV do staku s jednou nebo více sloučeninami podle vynálezu.

Popisuje se také způsob léčení, prevence nebo zmírnění jednoho nebo více příznaků hepatitidy C, který zahrnuje podávání účinného množství jedné nebo více sloučenin podle vynálezu. Proteáza HCV je proteáza NS3 nebo NS4a. Sloučeniny podle vynálezu inhibují tuto proteázu. Modulují také zpracování polypeptidu viru hepatitidy C (HCV).

Podrobný popis výhodných provedení

V jednom provedení popisuje předkládaný vynález sloučeniny vzorce I jako inhibitory proteázy HCV, zvláště serinové proteázy HCV NS3/NS4a nebo jejich farmaceuticky přijatelný derivát, přičemž různé definice se uvádějí výše.

Reprezentativní sloučeniny podle vynálezu s vynikající inhibiční aktivitou na proteázu HCV jsou uvedeny níže v tabulkách 1 až 5 spolu s jejich aktivitou (rozmezí hodnot Kj v nM). Některé sloučeniny včetně některých dalších sloučenin se dále uvádějí v nárocích.

Tabulka 1: Sloučeniny a výsledky kontinuálního testu s proteázou HCV

Sloučenina z příkladu č.	Rozmezí Ki*
1	C
2	C
3	C
4	C
5	C
6	C
7	C

8	C
9	C
10	C
11	C
12	C
13	C
14	C
15	C
16	C
17	C
18	C
19	C
20	C
21	C
22	C
23	C
24	C
25	C
26	C
27	C
28	C
29	C
30	C
31	C
32	C
33	C
34	C
35	c
36	c
37	c
38	c

-*38

39	C
40	C
41	C
42	C
43	C
44	C
45	C
46	C
47	C
48	C
49	C
50	C
51	C
52	C
53	C
54	C
55	C
56	C
56	C
58	C
59	C
60	C
61	C
62	C
63	C
64	C
65	C
66	c
67	c
68	B
69	C

—-·39 *·

70	C
71	Β
72	C
73	Β
74	C
75	C
76	A
77	Β
78	A
79	C
80	A
81	C
82	A
83	B
84	C
85	C
86	B
87	B
88	A . .
89	B
90	C
91	C
92	C
93	C
94	C
95	C
96	C
97	C
98	B
99	B
100	A

·· *···40·-· ··

101	A
102	C
103	C
104	C
105	C
106	C
107	B
108	A
109	A
110	A
111	A
112	A
113	B
114	A
115	B
116	A
117	A
118	A
119	A
120	A
121	B
122	B
123	A
124	B
125	B
126	B
127	A
128	A
129	A
130	B
131	A

132	A
133	A
134	B
135	A
136	A
137	A
138	A
139	A
140	B
141	A
142	A
143	B
144	B
145	C
146	A
147	A
148	B
149	A
150	A
151	A
152	A
153	A
154	A
155	B
156	B
157	B
158	C
159	B
160	A
161	A
162	A

...... 42·-·

163	C
164	A
165	C
166	B
167	A
168	C
169	B
170	B
171	A
172	A
173	A
174	A
175	A
176	B
177	B
178	A
179	A
180	B
181	A
182	B
183	A
184	A
185	A
186	A
187	A
188	A
189	B
190	B
191	B
192	A
193	A

194	Β
195	A
196	Β
197	A
198	A
199	A
200	A
201	B
202	A
203	B
204	B
205	B
206	B
207	B
208	A
209	A
210	A
211	A
212	A
213	B
214	B
215	B
216	B
217	C
218	A
219	A
220	A
221	A
222	A
223	B
224	C

.. ....44·· ··

225	C
226	A
227	A
228	C
229	A
230	A
231	A
232	C
233	C
234	C
235	C
236	B
237	C
238	A
239	C
240	A
241	C
242	B
243	C
244	B
245	C
246	B
247	A
248	A
249	C
250	C
251	B
252	C
253	C
254	B
255	B

.....-45-* ”

256	A
257	C
258	A
259	A
260	C
261	C
262	A
263	B
264	B
265	C
266	B
267	A
268	C
269	A
270	C
271	A
272	C
273	C
274	C
275	C
276	A
277	B
278	A
279	B
280	A
281	C
282	C
283	C
284	C
285	C
286	___________ C_____________

• · · ♦ «··· · • ··· ·«·· .....•••Μβ*’

287	C
288	Β
289	Β
290	C
291	C
292	C
293	C
294	C
295	C
296	Β
297	C
298	C
299	Β
300	Β
301	C
302	C
303	Β
304	C
305	C
306	C
307	Β
308	Β
309	C
310	C
311	C
312	C
313	Β
314	A
315	Β
316	Β
317	A

--.-47 -*·

318	A
319	A
320	A
321	C
322	C
323	C
324	C
325	A
326	A
327	C __
328	B
329	B
330	A
331	A
332	A
333	B
334	B
335	B
336	A
337	A
338	C
339	A
340	C
341	C
342	C
343	A
344	C
345	C
346	C
347	B
348	B

349	C
350	C
351	C
352	C
353	C
354	C
355	C
356	A
357	A
358	C
359	A
360	B
361	B
362	C

Rozmezí K* používaná v kontinuálním testu HCV:

Kategorie A = 1 - 100 nM; kategorie B = 101 - 1000 nM; kategorie C >1000 nM.

Některé typy sloučenin podle vynálezu a způsoby syntézy různých typů sloučenin podle vynálezu vzorce I jsou uvedeny dále a potom schematicky popsány na ilustrativních příkladech.

’“-’49-

κ'ΧΛΑ8 Λ8 A fTx JX/X χχ Me 0Q (R = t-butyl, X = ΝΗ2) (R = Isobutyl, X = NH2) (R = t-butyl, X = OH) (R = Trichloroethyl, X = OH) O H 0 XS 0 10 0 Γ Χχ Me (X = o'Bu) (X = OH) Cl· 0 «XLhXCVXbXX-“’ XoA HOOC g = 0 X 0 H O Me = XX Me [ x/ Ο H Me H O K o η 0 V ^A-Oy A< Xj-OH M· O /χ 0 X 0 0 Me

s „ g 9 N Ať N VY N N 'IT NHz 0X0 H g Me Q 0 Q : 0X0 H ΰ X Me (X = OH) _ (X = o‘Bu) ~(X=-NH2) (X = NHMe) (X = ΝΜβ2) • ο χ ο Μ ο -Me iYA'arX3x zS 0 70 η ;roH XX Me Ο

—-·5ϋ- ··

(X = νη₂) (X = NMe₂) (X = NHMe) (X = OH)

(X = O‘Bu)(X = OH) (X = NH₂) (X = NMe₂)

(X = O‘Bu) (X = OH) (X = NH₂) (X = NMe₂) (X = NMeOMe) (R = t-butyi) (R = Isobutyl) *’*-*5*ΐ - ··

(X = Me, Y = CH₂Me) (X = OAc, Y = Me)

—-*5Z-

••*•93·- ··

···- ^4·- *··* ····

... 38·. ..

H>C CH,

Η,(\ΛΗ

V^Acm,

H,C CH,

h^ch.

I Η,Ο-^ΝΗ H,C^ACH,

—.•57- -

-58*- ..........

H,C CH,

• · · « · «L· ^......

•-•77 -'

O

H.C' o

o

•-•80 -

·!·84 -

ο ο ý οο

CH, íY°w ° ° Q '' /.· ......

CH, οο/οο

0^/0ο ka^A^C^J^

CH, 0 0^/0Q ,/ΑΥλΥ'

CH, 0 0/0O · ·~€5

CH,

V závislosti na své struktuře mohou tvořit sloučeniny podle vynálezu farmaceuticky přijatelné soli s organickými nebo anorganickými kyselinami, nebo organickými nebo anorganickými bázemi. Příklady vhodných kyselin pro tvorbu takových solí jsou 10 kyselina chlorovodíková, sírová, fosforečná, octová, citrónová, malonová, salicylová, jablečná, fumarová, jantarová, askorbová, maleiová, methansulfonová a jiné minerální a karboxylové kyseliny, dobře známé odborníkům v oboru. Pro tvorbu solí s bázemi jsou vhodné báze například NaOH, KOH, NH4OH, tetraalkylamonium15 -hydroxid, apod.

V dalším provedení poskytuje předkládaný vynález farmaceutické prostředky s obsahem peptidů podle vynálezu jako účinné složky. Tyto farmaceutické prostředky obecně dále obsahují farmaceuticky přijatelné nosné ředivo, pomocnou látku nebo nosič 20 (souhrnně zde označované jako nosné materiály). Pro svou inhibiční aktivitu na HCV jsou takové farmaceutické prostředky použitelné při léčení hepatitidy C a souvisejících onemocnění.

V ještě dalším provedení poskytuje předkládaný vynález způsoby přípravy farmaceutických prostředků s obsahem sloučenin 25 podle vynálezu jako účinných složek. Ve farmaceutických prostředcích a způsobech podle předkládaného vynálezu budou účinné složky typicky podávány spolu s vhodnými nosnými materiály vhodně volenými s ohledem na zamýšlenou formu podávání, tj. orální tablety, kapsle (buď s pevnou, polotuhou nebo kapalnou náplní), prášky pro 30 rekonstituci, orální gely, elixíry, dispergovatelné granule, sirupy,

-86·- —· suspenze apod., a v souladu s běžnou farmaceutickou praxí. Například pro orální podávání ve formě tablet nebo kapslí může být účinná složka léčiva kombinována s jakýmkoli orálním netoxickým farmaceuticky přijatelným inertním nosičem jako je laktóza, škrob, sacharóza, celulóza, stearan hořečnatý, fosforečnan vápenatý, síran vápenatý, talek, mannitol, ethylalkohol (kapalné formy) apod. Navíc mohou být do směsi v případě potřeby nebo nutnosti přidány vhodná pojivá, kluzné látky, rozvolňovadla a barviva. Prášky a tablety mohou obsahovat od přibližně 5 do přibližně 95 % hmotnostních prostředku podle vynálezu. Mezi vhodná pojivá patří škrob, želatina, přírodní cukry, kukuřičná sladidla, přírodní a syntetické gumy jako je akácie, alginát sodný, karboxymethylcelulóza, polyethylenglykol a vosky.

Mezi kluznými látkami je možno zmínit pro použití v těchto dávkových formách kyselinu boritou, benzoan sodný, octan sodný, chlorid sodný, apod. Rozvolňovadla zahrnují škrob, methylcelulózu, guarovou gumu apod.

V případě potřeby mohou být také přidána sladidla a ochucovací látky. Některé výše uvedené kategorie, zvláště rozvolňovadla, řediva, kluzné látky, pojivá apod. jsou podrobněji diskutovány dále.

Prostředky podle předkládaného vynálezu mohou být dále formulovány ve formě s prodlouženým uvolňováním, aby se dosáhlo uvolňování kterékoli složky nebo více složek nebo účinných látek řízenou rychlostí pro optimalizaci léčebných účinků, například inhibiční aktivity na HCV apod. Vhodné dávkové formy pro prodloužené uvolňování zahrnují vrstvené tablety obsahující vrstvy s různými rychlostmi rozpadávání, nebo polymerní matrice pro řízené uvolňování impregnované účinnými složkami a tvarované do tablet nebo kapslí s obsahem těchto impregnovaných nebo zapouzdřených porézních polymerních matric.

Preparáty v kapalné formě zahrnují roztoky, suspenze a emulze. Jako příklad lze uvést vodu nebo roztoky voda-propylenglykol pro

......<87«...... ·.

parenterální injekce nebo přidávání sladidel a sedativ pro orální roztoky, suspenze a emulze. Preparáty v kapalné formě mohou také zahrnovat roztoky pro intranazální podávání.

Aerosolové prostředky vhodné pro inhalaci mohou obsahovat roztoky a pevné látky ve formě prášku, které mohou být v kombinaci s farmaceuticky přijatelným nosičem, jako je inertní stlačený plyn, např. dusík.

Pro přípravu čípků se nejprve nízkotající vosk jako je směs glyceridů mastných kyselin jako kakaové máslo nejprve roztaví a účinná složka se v tomto základu homogenně disperguje mícháním nebo podobným způsobem míšení. Roztavená homogenní směs se potom vlije do forem běžné velikosti, ponechá se ochladit a tím ztuhne.

Zahrnuty jsou také prostředky v pevné formě, které jsou určené pro převedení na kapalné prostředky buď pro orální nebo parenterální podávání krátce před použitím. Takové kapalné formy zahrnují roztoky, suspenze a emulze.

Sloučeniny podle vynálezu mohou být také podávány transdermálně. Transdermální prostředky mohou mít formu krémů, mlék, aerosolů a/nebo emulzí a mohou být obsaženy v transdermální náplasti typu matrice nebo zásobníku, jak je v oboru k tomuto účelu běžné.

S výhodou se sloučenina podává orálně, intravenózně nebo subkutánně.

Farmaceutický prostředek je s výhodou v jednotkové dávkové formě. V takové formě je prostředek rozdělený do jednotkových dávek vhodné velikosti obsahujícících příslušná množství účinných složek, například účinné množství pro dosažení požadovaného účelu.

Množství účinné sloučeniny podle vynálezu v jednotkové dávce prostředku se může obecně lišit nebo nastavit od přibližně 1,0 mg do ·······« přibližně 1000 mg, s výhodou od přibližně 1,0 do přibližně 950 mg, výhodněji od přibližně 1,0 do přibližně 500 mg, a typicky od přibližně 1 do přibližně 250 mg, podle konkrétního použití. Použitá účinná dávka se může lišit v závislosti na věku, pohlaví, hmotnosti a vážnosti onemocnění pacienta. Tyto techniky jsou odborníkům v oboru dobře známé.

Orální dávková forma s obsahem účinných složek se obecně může podávat člověku 1 nebo 2 x za den. Množství a četnost podávání se bude upravovat podle úsudku ošetřujícího lékaře. Doporučený denní dávkový režim pro orální podávání může být obecně v rozmezí od přibližně 1,0 mg do přibližně 1000 mg zá^děhrv jednotlivých nebo rozdělených dávkách.

Některé použitelné termíny jsou popsány dále:

Kapsle označuje zvláštní zásobní nebo obálku vyrobenou z methylcelulózy, polyvinylalkoholů nebo denaturovaných želatin nebo škrobu pro uchovávání obsažených prostředků s účinnými složkami. Kapsle (tobolky) s tvrdým obalem se typicky vyrábějí ze směsí želatin z kostí a vepřové kůže s vysokou pevností gelu. Samotná kapsle může obsahovat malá množství barviv, zakalovacích prostředků, plastifikátorů a ochranných látek.

Tableta označuje lisovanou nebo odlévanou pevnou dávkovou formu obsahující účinné složky s vhodnými ředivy. Tableta se může připravovat lisováním směsí nebo granulátů získaných granulací za mokra, granulací za sucha nebo kompaktizací.

Orální gely jsou účinné složky dispergované nebo solubilizované v hydrofilní polotuhé matrici.

Prášek pro rekonstituci označuje práškové směsi obsahující účinné složky a vhodná řediva, které mohou být suspendovány ve vodě nebo ovocných šťávách.

Ředivo označuje látky, které obvykle tvoří hlavní část prostředku nebo dávkové formy. Mezi vhodná řediva patří cukry jako je laktóza, sacharóza, mannitol a sorbitol; škroby odvozené z pšenice, kukuřice, rýže a brambor; a celulózy jako je mikrokrystalická celulóza. Množství řediva v prostředku může být v rozmezí od přibližně 10 do přibližně 90 % hmotnostních z celkového prostředku, s výhodou od přibližně 25 do přibližně 75 %, výhodněji od přibližně 30 do přibližně 60 % hmotnostních, ještě výhodněji od přibližně 12 do přibližně 60 %.

Rozvolňovadlo označuje materiály přidávané do prostředku, aby napomáhaly jeho rozpadu (desintegraci) a uvolnění účinných látek. Mezi vhodná rozvOlňovadla patří škroby; „za studená rozpustné“ modifikované škroby jako je sodný karboxymethylškrob; přírodní a syntetické gumy jako je karubová guma, karaya, guar, tragakant a agar; deriváty celulózy jako je methylcelulóza a sodná sůl karboxymethylcelulózy; mikrokrystalické celulózy a zesítěné mikrokrystalické celulózy jako je sodná sůl kroskarmelózy; algináty jako je kyselina alginová a alginát sodný; jíly jako jsou bentonity; a šumivé směsi. Množství rozvolňovadla v prostředku může být v rozmezí od přibližně 2 do přibližně 15 % hmotnostních z prostředku, výhodněji od přibližně 4 do přibližně 10 % hmotnostních.

Pojivo označuje látku, která váže nebo „lepí“ prášky dohromady a přivádí je do kohezivního stavu vytvářením granulí, a ve formulaci slouží jako „adhezivní látka“. Pojivá zvyšují kohezivní pevnost, která je již získána pomocí řediva nebo objemotvorného prostředku. Vhodná pojivá zahrnují cukry jako je sacharóza; škroby odvozené od pšenice, kukuřice, rýže a brambor; přírodní gumy jako je akácie, želatina a tragakant; deriváty mořských řas jako je kyselina alginová, alginát sodný a alginát vápenatoamonný; celulózové materiály jako je methylcelulóza a sodná sůl karboxymethylcelulózy a hydroxypropylmethylcelulóza; polyvinylpyrrolidon; a anorganické látky jako je křemičitan hlinitý. Množství pojivá v prostředku může být v rozmezí od přibližně 2 do přibližně 20 % hmotnostních z prostředku, výhodněji od přibližně 3 do přibližně 10 % hmotnostních, ještě výhodněji od přibližně 3 do přibližně 6 % hmotnostních.

Mazadlo označuje látku přidanou k dávkové formě pro umožnění uvolnění tablet, granulí atd. po lisování z raznice nebo matrice snížením tření nebo otěru. Vhodná mazadla zahrnují kovové stearany jako je stearan hořečnatý, stearan vápenatý nebo stearan draselný; kyselinu stearovou; vysokotající vosky; a ve vodě rozpustná mazadla jako je chlorid sodný, benzoan sodný, octan sodný, olean sodný, polyethylenglykoly a d/l-leucin. Mazadla se obvykle přidávají až v posledním kroku před lisováním, protože musí být přítomná na površích granulí a mezi nimi a částmi tabletovacího lisu. Množství mazadla v prostředku může být v rozmezí od přibližně 0,2 do přibližně 5 % hmotnostních z prostředku, s výhodou od přibližně 0,5 do přibližně 2 %, výhodněji od přibližně 0,3 do přibližně 1,5 % hmotnostních.

Kluzná látka je materiál, který zabraňuje shlukování a zlepšuje tokové vlastnosti granulátů, takže se dosáhne hladkého a stejnoměrného toku. Mezi vhodné kluzné látky patří oxid křemičitý a talek. Množství kluzné látky v prostředku může být od přibližně 0,1 % do přibližně 5 % hmotnostních z celkového prostředku, s výhodou od přibližně 0,5 do přibližně 2 % hmotnostních.

Barviva jsou pomocné látky, které poskytují prostředku nebo dávkové formě zbarvení. Tyto pomocné látky mohou zahrnovat potravinářská barviva a potravinářská brviva adsorbovaná na vhodný adsorbent jako je jíl nebo oxid hlinitý. Množství barviva se může lišit od přibližně 0,1 do přibližně 5 % hmotnostních z prostředku, s výhodou od přibližně 0,1 do přibližně 1 %.

Biologická dostupnost označuje rychlost a míru, ve které se účinná složka nebo terapeutická část absorbuje do systémového oběhu z podané dávkové formy ve srovnání se standardem nebo kontrolou.

9?_Λ·.·..··..·

Běžné způsoby přípravy tablet jsou známé. Tyto metody zahrnují suché metody jako je přímé lisování nebo lisování granulátu vyrobeného kompaktizací, nebo mokré metody nebo jiné speciální postupy. Běžné metody pro výrobu jiných forem pro podávání, jako jsou například kapsle, čípky apod., jsou rovněž dobře známé v oboru.

Další provedení vynálezu popisuje použití popisovaných farmaceutických prostředků pro léčení onemocnění jako je například hepatitida C apod. Tento způsob zahrnuje podávání terapeuticky účinného množství farmaceutického prostředku podle vynálezu pacientovi trpícímu takovým onemocněním v případě potřeby.

V ještě dalším provedení mohou být sloučeniny podle vynálezu používány pro léčbu HCV u člověka v monoterapii nebo při kombinační terapii (např. v dvojité nebo trojité kombinaci atd.), jako například v kombinaci s antivirovými prostředky a/nebo imunomofulsřními prostředky.

Příklady takových antivirových a/nebo imunomodulačních prostředků zahrnují Ribavirin (firmy Schering-Plough Corporation, Madison, New Jersey) a Levovirin™ (firmy ICN Pharmaceuticals, Costa Mesa, California), VP 50406™ (firmy Viropharma, Incorporated, Exton, Pennsylvania), ISIS 14803™ (firmy ISIS Pharmaceuticals, Carlsbad, California), Heptazyme™ (firmy Ribozyme Pharmaceuticals, Boulder, Colorado), VX 497™ (firmy Vertex Pharmaceuticals, Cambridge, Massachusetts), Thymosin™ (firmy SciClone Pharmaceuticals, San Mateo, California), Maxamine™ (Maxim Pharmaceuticals, San Diego, California), mykofenolátmofetil (firmy Hoffman-LaRoche, Nutley, New Jersey), interferon (jako je například interferon-alfa, konjugáty PEG-interferonu-alfa) apod. „Konjugáty PEG-interferon-alfa jsou molekuly interferonu alfa kovalentně navázané na molekulu PEG. Ilustrativní konjugáty PEG-interferon alfa zahrnují interferon alfa-2a (Roferon™, firmy Hoffman La-Roche, Nutley, New Jersey) ve formě pegylovaného interferonu alfa-2a (např.

• ♦ <·♦ ·♦♦· · ·*·····92·**···· *··*··* dodávaný pod obchodním názvem Pegasys™), interferon alfa-2b (Intron™, firmy Schering-Plough Corporation) ve formě pegylovaného interferonu alfa-2b (např. dodávaného pod obchodním názvem PEGIntron™), interferon alfa-2c (Berofor Alpha™, firmy Boehringer Ingelheim, Ingelheim, Německo) nebo konvenční interferon definovaný určením konvenční sekvence v přírodě se vyskytujících interferonů alfa (Infergen™, firmy Amgen, Thousand Oaks, Kalifornie).

Jak bylo uvedeno výše, předkládaný vynález zahrnuje tautomery, rotamery, enantiomery a jiné stereoisomery sloučenin. Jak bude tedy odborníkovi v oboru zřejmé, některé ze sloučenin podle vynálezu mohou existovat ve vhodných isomerních formách. Tyto varianty rovněž spadají do rámce předkládaného vynálezu.

Další provedení vynálezu popisuje způsob přípravy popisovaných sloučenin. Tyto sloučeniny se mohou vyrábět různými v oboru známými způsoby. Reprezentativní ilustrativní postupy se uvádějí v následujících reakčních schématech. Je zřejmé, že i když následující ilustrativní schémata popisují přípravu pouze několika reprezentativních sloučenin podle vynálezu, vhodná náhrada jakékoli z obou nepřírodních aminikyselin povede k vytvoření požadovaných sloučenin založených na této substituci. Také tyto variace spadají do rámce vynálezu.

V popisu schémat, příprav a příkladů se používají následující zkratky:

THF Tetrahydrofuran

DMF N, N-Dimethylformamid

EtOAc Ethylacetát

AcOH Kyselina octová

HOOBt 3-Hydroxy-1,2,3-benzotriazin-4(3H)-on

EDCI Hydrochlorid 1-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodi

-imidu

NMM /V-Methylmorfolin

ADDP	1,1’- (Azodikarbobyl)dipiperidin
DEAD	Diethylazodikarboxylát
MeOH	Methanol
EtOH	Ethanol
5 Et2O DMSO	Diethylether Dimethylsulfoxid
HOBt	N-Hydroxybenzotriazol
PyBrOP DCM	Brom-tris-pyrrolidinofosfoniumhexafluorfosfát Dichlormethan
io DCC	1,3-Dicyklohexylkarbodiimid
TEMPO	2,2,6,6-Tetramethyl-i-piperidinyloxy
Phg Chg Bn	Fenylglycin Cyklohexylglycin Benzyl
15 Bzl	Benzyl
Et	Ethyl
Ph	Fenyl
iBoc	Isobutoxykarbonyl
iPr	Isopropyl

^lBu nebo Bu‘: ferc-Butyl

Boc	terc-Butyloxykarbonyl
Cbz	Benzyloxykarbonyl
Cp Ts	Cyklopentyldienyl p-Toluensulfonyl
25 Me	Methyl
HATU	O-(7-Azabenzotriazol-1-yl)-1,1,3,3-tetramethyluronium

-hexafluorfosfát

DMAP	4-N,N-Dimethylaminopyridin
Bop	Benzotriazol-1-yl-oxy-tris(dimethylamino)hexafluorfosfát

Obecná schémata přípravy

Následující schémata popisují způsoby syntézy meziproduktů stavebních bloků.

Schéma 1

Schéma 2

Schéma 3

Cbz'

OH

COOMe

NaOCI

NaBr _? TEMPO

COOMe

3.2

1. TMSI (3 ekv.), 30 min

2. Boc₂O (4 ekv.)/ (i-Pr)₂NEt (3,1 ekv.)/

THF, 20 min

dioxaa

COOMe

3.5

3.3

3.4 ::,96 x ·:..:. :

Schéma 4

Boc 'η

HCI + HoN OH

OH H 2 w^h

Ν' H

S· t hoobí coobu _EQcr NMM Boc n= 1: 3.8 n= 2: 3.4.

HCI-H

H N.

n= 1:4.2 n= 2:4.6

1.4

O Ph

N ^H O

HCI

OBu¹

P Η ^OH H

Wf • n= 1:4.1 n= 2:4.5

O Ph

OBď

HOOBt

EDCI NMM lboc-Chg

O

H N

OH u Q Ph

I Π /-BuOCOCI + H-Chg-OH lboc-Chg-OH

DMF

4.9

O n= 1:4.3

- n= 2:4.7

OBu‘

Moffattova oxidace lboc-Chg )n

S

O

H N

O _H O Ph OBi?

n= 1:4.4 n= 2:4.8

Schéma 5

5.2

5.3

---«a-----re——©a— —··—·-©·©: //97:. : .·* ·: :. ’:

······ ·· ···· ·· ©»

Schéma 6

OCH₂Ph

6.1

IBoc-Chg-OH 6,0 HOOBt EDCI, NMM

NaOCl

NaBr ₀ uTEMPO

N

Iboc Chg

OCH₂Ph

^s·³ 6.4

Schéma 7

:-98'

Schéma 8

BOP, NMM

CH3ONHCH3.HCI

N°CH3 ch₃

LíAIH₄

(CH₃)₂C(OH)CN

OH

AcCl, CH3OH — 4CIH3N

1. BOC2O

2. LiOH, THF/H₂O

BocHN

NH4CI, EDC(

HOOBt

OH

BocHN

4M HCI/Dioxan

OH 0H₃Nyk_CONH2

-99 Schéma 9

Ph

oc₂h₅

1. KOt-Bu,

- 100*- **”

Schéma 10

(Boc)2O =\ DMAP F m^co2h - y Et3N Boc CH3CN ^Cl CF3CO2H '•N^*CO2tBu CH2Cl2 l Boc /. BocHN CO2H Z* Οθ£Μθ H HCI

CHCI3 NaOH(50%) m CO2tBu Boc Et3NBnCI Ci^/Q Λ HCI ^^co2h MeOH Η -CF3CO2H CI^CI HATU ” ' C/^OO2Me iPr,NEt I ________BocHN^/Y-q DMF i ·

• ··· ···· ••-•ion..... ··

CO₂Me

BOc

LiN(SiMe₃)₂

Mel.THF -78° —--20°C

a) LiEt₃BH

b) Et₃SiH, BF₃ OEt₂

KOH

MeOH, H₂O 40°C, 16h

Schéma 13

BOC2O

H₂N^^-_SMe

MCPBA

BocNH^^

SMe 'Et₃N, CH₂CI₂ ‘Βο^Η^^^θ II O

4M HCI dioxan

Schéma 14 ch₃c₆h₄so₂ci ' DMAP/báze hcí.h₂n.

o II

S-Me

II

O (Boc)₂NH

Cs₂CO₃ Lil aceton

4M HCI dioxan

Schéma 15

DCC, DMAP

CH₂CI₂

Schéma 16 • ··· · * · · •-•103·-·.....* ··

cnch₂co₂ch₃ ch₃co₂h, ch₂ci₂

LiOH, THF labor, teplota

Ph HCI.H₂N^CONMe₂

1. HOOBt, EDCI NMM, DMF

2. 4N HCI, dioxan

is Schéma 17

(EtO)₂P(O)CH₂CO₂Et

NaHMDS

LiOH

H₂

10% Pd/C

1) Me₃CCOCI, Et₃N

2) (S)-4-benzyl-2-oxazo(idinon n-BuLi

-104·- —*

1). (Boc)₂O, iPr₂NEt

2). LiOH

F F

Schéma 18 • . ·· · · · · • · · · · · · · · .....«105·-...... ··

H₂N/_z^CO₂H

Me₂CHCH₂CHO

Et₃N, NaBH₃CN

nBu₄NOH (Boc)₂O

Schéma 19

H₂ (345 kPa)

Rh na C, 7 dnů

Schéma 20

Et₃N, CH₃CN

N,N-disukcinimidylkarbonát

10K- —

Příprava meziproduktů

Preparativní příklad 1

Krok A Sloučenina (1.1)

K míchanému roztoku sloučeniny (1.08) (3,00 g, 12,0 mmol (S. L. Harbeson a další J. Med. Chem. 37 No. 18 (1994) 2918 - 2929) v DMF (15 ml) a CH₂CI₂ (15 ml) byly při -20 °C přidány HOOBt (1,97 g, 12,0 mmol), A/-methylmorfolin (4,0 ml, 36,0 mmol) a EDCI (2,79 g, 14,5 mmol) a směs byla míchána 10 min, a potom bylů přidán HCI.H₂N-Gly-OBn (2,56 g, 13,0 mmol). Získaný roztok byl míchán při -20 °C 2 hod, udržován v chladicím boxu přes noc a potom zakoncentrován do sucha, a potom zředěn EtOAc (150 ml). Roztok EtOAc byl potom dvakrát promyt nasyceným NaHCO₃, H₂O, 5% H₃PO₄, roztokem soli, sušen nad Na₂SO₄, zfiltrován a zakoncentrován do sucha za získání sloučeniny (1.09) (4,5 g, 94 %). LRMS m/z MH = 395,1.

Krok B

Sloučenina (1.1)

Roztok sloučeniny (1.09) (7,00 g, 17,8 mmol) v absolutním ethanolu (300 ml) byl míchán při teplotě laboratoře v atmosféře vodíku v přítomnosti Pd-C (300 mg, 10 %). Postup reakce byl monitorován •-•*107·*···· ·· ··

TLC. Po 2 hod byla směs zfiltrována přes lože celitu a získaný roztok byl zakoncentrován ve vakuu za získání sloučeniny (1.1) (5,40 g, kvantitativní). LRMS m/z MH⁺= 305,1.

Preparativní příklad 2

Krok A Sloučenina (1.3)

(1.1) (1-2) (1-3)

Směs sloučeniny (1.1) z preparativního příkladu 1, krok B výše (1 ekv.), sloučeniny (1.2) (firmy Novabiochem, katalogové číslo 04-125147) (1,03 ekv.), HOOBt (1,03 ekv.), N-methylmorfolinu (2,2 ekv.) a dimethylformamidu (70 ml/g) byla míchána při -20 °C. Byl přidán EDCI (1,04 ekv.) a reakční směs byla míchána 48 hod. Reakční směs byla vlita do 5% vodného KH2PO4 a extrahována ethylacetátem (2 x). Spojené organické podíly byly promyty chladným 5% vodným K₂CO₃, potom 5% vodným KH₂PO₄, potom roztokem soli, a organická vrstva byla sušena nad bezvodým MgSO₄. Směs byla zfiltrována, potom odpařena a filtrát sušen ve vakuu, zbytek byl rozetřen s Et₂Ohexanem, a zfiltrován, za poskytnutí v názvu uvedené sloučeniny (1.3) (86% výtěžek), C₂₅H₃₉N₃O₇ (493,60), hmotnostní spektrum (FAB) M+1 = 494,3.

-* 108*Krok Β_____Sloučenina (1.4)

Sloučenina (1.3) z preparativního příkladu 2, krok A (3,0 g) byla smísena s 4N HCI/dioxan (36 ml) a míchána při teplotě laboratoře 7 min. Směs byla vlita do 1,5 I chladného (5 °C) hexanu a míchána, io potom ponechána v chladu stát 0,5 hod. Směs byla zfiltrována odsátím v suché atmosféře a oddělená pevná látka byla dále sušena, za získání v názvu uvedené sloučeniny (1.4) (2,3 g, 88% výtěžek), • C₂₀H₃₁N₃O₅.HCI. ¹H NMR (DMS.O-d₆/NaOD) δ 7,38 (m, 5H), 5,25 (m, 1H), 4,3 - 4,1 (m, 1H), 3,8 (m, 2H), 3,4 - 3,3 (m, překrytý D₂O), 1,7 15 1,1 (m, 4H), 1,35 (s, 9H), 0,83 (m, 3H).

Preparativní příklad 3

Sloučenina (1.5)

Ph N^COOBď H

Sloučenina (1.3) z preparativního příkladu 2, krok A, byla zpracována v podstatě stejným způsobem jako v preparativmm 25 příkladu 7, krok A níže, za poskytnutí sloučeniny (1.5).

ιΰθ·Preparativní příklad 4

Sloučenina (1.6)

Sloučenina (1.5) z preparativního příkladu 3 byla zpracována v podstatě stejným způsobem jako v preparativním příkladu 2, krok B, za získání sloučeniny (1.6).

Preparativní příklad 5

Krok A Sloučenina (2.09)

(2.08) (2.09)

K roztoku hydročhloridu dimethylaminu (1,61 g, 19,7 mmol), N~ Boc-fenylglycinu, sloučeniny (2.08) (4,50 g, 17,9 mmol, Bachem Co. # A-2225), HOOBt (3,07 g, 18,8 mmol) a EDCI (4,12 g, 21,5 mmol) 20 vbezvodém DMF (200 ml) a CH₂CI₂ (150 ml) byl při -20 °C přidán NMM (5,90 ml, 53,7 mmol). Po 30 min míchání při této teplotě byla reakční směs udržována v mrazicím boxu přes noc (18 hod). Potom byla ponechána ohřát na laboratorní teplotu a byly přidány EtOAc (450 ml), roztok soli (100 ml) a 5% H₃PO₄ (100 ml). Po oddělení vrstev byla ₂5 organická vrstva promyta 5% H₃PO₄ (100 ml), nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (2 x 150 ml), vodou(150 ml) a roztokem soli (150 ml), sušena (MgSO₄), zfiltrována a zakoncentrována ve vakuu, za získání sloučeniny (2,09) (4,86 g) jako bílé pevné látky, která byla použita bez dalšího čištění.

Krok B Sloučenina (2.1)

(2.09)

(2.1)

Sloučenina (2.09) z preparativního příkladu 5, krok A (4,70 g, io surová) byla rozpuštěna ve 4N HCI (60 ml, 240 mmol) a získaný roztok byl míchán při teplotě laboratoře. Vývin reakce byl monitorován TLC. Po 4 hod byl roztok zakoncentrován ve vakuu za získání sloučeniny (2.1) jako bílé pevné látky, která byla použita v příští reakci bez dalšího čištění. LRMS m/z MH⁺ = 179,0.

Preparativní přiklad 6

Krok A Sloučenina (2.2)

Ph

OH H 9 _HCI »^h OH Η π f

BooHVU ₊ H₂lAcONMe₂ — ΒοοΗΝγΙγΝ^ CONMe₂ f ° I (1.1) (²·Ό (^2-2)

V podstatě stejným způsobem jako v preparativním příkladu 2, krok A, s použitím hydrochloridu fenylglycin-N,N-dimethylamidu namísto hydrochloridu fenylglycin-t-butylesteru byla připravena 25 sloučenina (2.2). Hmotnostní spektrum (FAB) M+1 = 465,3.

:.,114/.:.. ·./·./

Krok Β

Sloučenina (2.3)

(2.2) <²·³)

Sloučenina (2.2) z kroku A (1,85 g) byla ponechána reagovat se směsí 4N HCI/dioxan (50 ml) při teplotě laboratoře 1 hod. Směs byla odpařena ve vakuu ve vodní lázni při teplotě 20 °C, smísena s isopropyletherem, zfiltrována a sušena za poskytnutí sloučeniny io (2.3) (1,57 g, 98% výtěžek), C18H28N4O4.HCI, hmotnostní spektrum (FAB) M+1 = 365,3.

Preparativní příklad 7

Krok A Sloučenina (2.4)

Roztok sloučeniny (2.2) z preparativního příkladu 5, krok A 20 (2,0 g) v dichlormethanu (60 ml) byl smísen s dimethylsulfoxidem (3,0 ml) a kyselinou 2,2-dichloroctovou (0,70 ml). Míchaná směs byla ochlazena na 5 °C a potom byl přidán 1M roztok dicyklohexylkarbodiimid/dichlormethan (8,5 ml). Chladná lázeň byla odstraněna a směs byla míchána 22 hod. Byl přidán 2-propanol 25 (0,5 ml) a míchání pokračovalo 1 hod. Směs byla zfiltrována, promyta ledově chladným 0,1 N NaOH (50 ml), potom ledově chladným 0,1 N

HCI (50 ml), potom 5% vodným KH₂PO₄, potom nasyceným roztokem soli. Organický roztok byl sušen nad bezvodým síranem hořečnatým, potom zfiltrován. Filtrát byl odpařen a čištěn chromatografií na silikagelu, s elucí ethylacetátem, za získání sloučeniny (2.3) (1,87 g,

94% výtěžek), C23H34N4O6, hmotnostní spektrum (FAB) M+1 = 463,3.

ιΐ2·- ·:··

Krok B Sloučenina (2.5)

V podstatě stejným způsobem jako v preparativním příkladu 2, krok B, byla připravena sloučenina (2.5).

Preparativní příklad 8

Krok A Sloučenina (3,1).

ΌΗ

COOMe

COOMe (3-1) (3-01)

V baňce byly smíchány methylester N-Cbz-hydroxyprolinu (dostupný od firmy Bachem Biosciences, Incorporated, King of Prussia, Pennsylvánie), sloučenina (3.01) (3,0 g), toluen (30 ml) a ethylacetát (30 ml). Směs byla důkladně míchána a potom byl přidán roztok NaBr/voda (1,28 g/5 ml). Do tohoto roztoku byl přidán 2,2,6,6tetramethyl-1-piperidinyloxylový volný radikál (TEMPO, 17 mg, Aldrich

Chemicals, Milwaukee, Wisconsin). Míchaná směs byla ochlazena na 5 °C a potom byly po kapkách přidány připravený roztok oxidantu [komerčně dostupný bělicí prostředek, Cloro® (18 ml), NaHCO₃ (2,75 g) a voda pro doplnění na 40 ml] v průběhu 0,5 hod. Ke směsi • · · ♦ · · · ···· ♦ · · · · :..112.-.:.. %.··..· byl přidán 2-propanol (0,2 ml). Organická vrstva byla oddělena a vodná vrstva byla extrahována ethylacetátem. Organické extrakty byly spojeny, promyty 2% thiosíranem sodným, potom nasyceným roztokem soli. Organický roztok byl sušen nad bezvodým MgSO₄, 5 zfiltrován a filtrát odpařen ve vakuu za získání bledě žluté gumy vhodné pro následující reakce (2,9 g, 97% výtěžek), C₁₄H₁₅NO5 (277,28), hmotnostní spektrum (FAB) M+1 = 278,1.

Krok B Sloučenina (3.2)

(3.1) (3.2)

Sloučenina (3.1) z kroku A výše (7,8 g) byla rozpuštěna v dichlormethanu (100 ml) a ochlazena na 15 °C. K této směsi byl nejprve přidán 1,3-p ropand ithiol (3,1 ml) a potom čerstvě předestilovaný etherát fluoridu boritého (3,7 ml). Směs byla míchána při teplotě laboratoře 18 hod. Během důkladného míchání byl opatrně přidán roztok K₂CO₃/voda (2 g/30 mi), a potom nasycený NaHCO_{3 2}o (10 ml). Organická vrstva byla oddělena od vodné vrstvy (pH -7,4), promyta vodou (10 ml), potom roztokem soli. Organický roztok byl sušen nad bezvodým MgSO₄, zfiltrován a odpařen ve vakuu. Zbytek byl čištěn chromatografií na silikagelu s elucí toluenem, potom gradientem hexan-Et₂O (2 : 3 až 0 : 1) za získání hnědého oleje (7,0 g, ₂5 6 8% výtěžek), Ci₇H₂iNO₄S₂ (367,48), hmotnostní spektrum (FAB) M+1 = 368,1.

Krok C

Sloučenina (3.3) ·· · · · · · · J ζ _β · J <**··· · · · ·

......«114·-···· ·· ··

Roztok sloučeniny (3.2) z kroku B výše (45 g) v acetonitrilu (800 ml) byl najednou při 20 °C smísen s čerstvě předestilovaným jodtrimethylsilanem (53 ml). Reakční směs byla míchána po dobu 30 min, potom vlita do čerstvě připraveného roztoku di-tbutyldikarbonátu (107 g), ethyletheru (150 ml) a diisopropylethylaminu (66,5 ml). Směs byla míchána ještě 30 min, promyta hexanem (2 x io 500 ml). K nižší acetonitrilové vrstvě byl přidán ethylacetát (1000 ml) a potom byla vrstva promyta 10% vodným KH₂PO₄ (2 x 700 ml), a roztokem soli. Filtrát byl odpařen ve vakuu ve vodní lázni pn 25 C, převeden do čerstvého ethylacetátu (1000 ml), a postupně promyt 0,1N HCI, 0,1N NaOH, 10% vodným KH₂PO₄, a roztokem soli.

Organický roztok byl sušen nad bezvodým MgSO₄, zfiltrován a odpařen ve vakuu. Zbytek (66 g) byl čištěn chromatografií na silikagelu (2 kg), s elucí hexanem (2 I), potom směsí Et₂O/hexan (55 : 45,2 I), potom Et₂O (2 I), za získání oranžové gumy, která pomalu krystalizovala za stání (28 g, 69% výtěžek), Ci₄H₂₃NO₄S₂ (333,46), 20 hmotnostní spektrum (FAB) M+1 = 334,1.

Krok D Sloučenina (3.4).

(3.3) 0-4)

Roztok sloučeniny (3.3) z kroku C výše (11 g) v dioxanu (150 ml) při 20 °C byl smísen s 1N vodným LiOH (47 ml) a míchán 30 hod. Směs byla zakoncentrována ve vakuu ve vodní lázni při 30 C na poloviční objem. Zbytek byl zředěn vodou (300 ml), extrahován Et₂O (2 30 x 200 ml). Vodná vrstva byla okyselena na pH ~4 použitím 12N HCI (3 až 4 ml), extrahována ethylacetátem a promyta roztokem soli.

Organický roztok byl sušen nad bezvodým MgSO₄, zfiltrován a odpařen ve vakuu za získání sloučeniny (3.4) (8,1 g, 78%),

C₁₃H₂iNO₄S2 (319,44), hmotnostní spektrum (FAB) M+1 = 320,1.

Krok E Sloučenina (3.5),

K roztoku sloučeniny (3.3) z kroku C výše (1 g) v dioxanu (5 ml), byl přidán 4N roztok HCI-dioxan (50 ml). Směs byla důkladně míchána 1 hod. Směs byla odpařena ve vakuu ve 25 °C vodní lázni. Zbytek byl smísen s Et₂O a zfiltrován, za získání v názvu uvedené sloučeniny ₁₅ (0,76 g, 93% výtěžek), C₉H₁₅NO₂S₂.HCI (269,81), hmotnostní spektrum (FAB) M+1 = 234,0.

Preparativní přiklad 9

Krok A

Sloučenina (3.6)

O

(3.1) (3.6)

Použitím v podstatě stejného postupu jako pro preparativní příklad 8, krok B, s použitím ethandithiolu namísto propandithiolu, byla získána sloučenina (3.6).

Krok Β Sloučenina (3.7)

COOMe

(3.6) (3.7)

S použitím v podstatě stejného postupu jako pro preparativní příklad 8, krok C, s použitím sloučeniny (3.6) namísto sloučeniny (3.2) byla získána sloučenina (3.7).

Krok C Sloučenina (3.8)

S použitím v podstatě stejného postupu jako v preparativním příkladu 8, krok D, s použitím sloučeniny (3.7) namísto sloučeniny (3.3) byla získána sloučenina (3.8).

Krok D

Sloučenina (3.9)

(3.7) (3.9)

S použitím v podstatě stejného postupu jako v preparativním příkladu 8, krok E, s nahrazením sloučeniny (3.7) místo (3.3) byla získána sloučenina (3.9).

• ♦ · · · · ·

Preparativní příklad 10

Krok A Sloučenina (4.1)

S použitím v podstatě stejného postupu jako v preparativmm příkladu 2, krok A byla připravena sloučenina (4.1), C₃₃H48N4O₉S₂ (708,89).

S použitím v podstatě stejného postupu jako v preparativmm příkladu 2, krok B byla připravena sloučenina (4.2), hmotnostní

;o spektrum (FAB) M+1 - 609,3. Krok C Sloučenina (4.3) S><? nu u ° > o H o 25 HCI-H oj (4 2)

+ lboc-Chg-OH —v (4.9) \

s použitím v podstatě stejného postupu jako v preparativmm příkladu 2, krok A, byla připravena sloučenina (4.3), C41H61N5O10S2 (708,89), hmotnostní spektrum (FAB), M+1 = 709,3.

S použitím v podstatě stejného postupu jako v preparativmm příkladu 7, krok A, byla připravena sloučenina (4.4).

is Preparativní přiklad 11,

Krok A Sloučenina (4.5)

S použitím v podstatě stejného postupu jako v preparativmm příkladu 2, krok A, byla připravena sloučenina (4.5).

Krok B Sloučenina (4.6)

S použitím v podstatě stejného postupu jako v preparativním příkladu 2, krok B, byla připravenasloučenina (4.6).

Sloučenina (4.9) z preparativního příkladu 12, byla ponechána reagovat se sloučeninou (4.6) z kroku B výše, v podstatě stejným způsobem jako v preparativním příkladu 2, krok A, za získaní sloučeniny (4.7).

Krok D Sloučenina (4.8),

... ...>20 -·

S použitím v podstatě stejného postupu jako v preparativním 5 příkladu 7, krok A, byla připravena sloučenina (4.8).

Preparativní příklad 12

Sloučenina (4.9) /-BuOCOCI + H-Chg-OH------> lboc-Chg-OH ₁₀ (4.01) (4.02) (4.9)

Roztok L-cyklohexylglycinu (4.02) (1,0 ekv.), dimethylformamidu (20 ml/g) a diisopropylethylaminu (1,1 ekv.) byl při 5 C smísen s isobutylchlorformátem (4.01) (1,1 ekv.). Chladná lázeň byla odstraněna a směs byla míchána 6 hod. Reakční směs byla vlita do is 5% vodného KH₂PO₄ a extrahována ethylacetátem (2 x). Spojené organické podíly byly promyty 5% vodným K₂CO₃, potom 5% vodným KH₂PO₄, potom roztokem soli, a organické vrstvy byly sušeny nad bezvodým MgSO₄. Směs se zfiltruje, filtrát odpaří ve vakuu, zbytek se čistí v případě potřeby chromatografií nebo jiným způsobem, zbytek se 2o rozetře se směsí Et₂O-hexan, a zfiltruje, za získání v názvu uvedené sloučeniny (4.9), Ci₃H₂₃NO₄ (257,33).

Preparativní příklad 13

Sloučenina (13.1) /-BuOCOCI + H-Thr(Bzl)-OH------> lboc-Thr(Bzl)-OH (4.01) (13.02) (13.1)

S použitím v podstatě stejného postupu jako v preparativním příkladu 12, s použitím L-O-benzylthreoninu (13.02) (Wang et al, J.

Chem. Soc., Perkin Trans. 1, (1997) No. 5,621 - 624) namísto Lcyklohexylglycinu (4.02) se připraví sloučenina (13.1), C₁₆H₂3NO₅ (309,36), hmotnostní spektrum (FAB) M+1 = 310,2.

Sloučenina (4.8) z preparativního příkladu 11, krok D (1,0 g) byla ponechána reagovat s roztokem bezvodé kyseliny trifluoroctovédichlormethanu (1 : 1,50 ml) 2 hod. Roztok byl zředěn xylenem (100 ml) a odpařen ve vakuu. Zbytek byl smísen s Et₂O a zfiltrován, za is získání v názvu uvedené sloučeniny (5.1) (0,9 g), C₃7H53N5O₉S₂ (775,98), hmotnostní spektrum (FAB) M+1 =776,5.

S použitím v podstatě stejného postupu jako v preparativním ₂₅ příkladu 2, krok A, byla sloučenina (5.1) ponechána reagovat s amoniakem (0,5M roztok 1,4-dioxanu), za získání v názvu uvedené sloučeniny (5.2) C₃₇H₅4N₆O₈S₂ (774,99), hmotnostní spektrum (FAB)

M+1 = 775,4.

.:. 4422·-.’.:..

Preparativní příklad 15

Směs sloučeniny (5.1) z preparativního příkladu 14, krok A (0,15 g), N,N-dimethylaminu (0,12 ml 2M roztoku THF), io dimethylformamidu (10 ml) a vazebného činidla PyBrOP (0,11 g) byla ochlazena na 5 °C, potom byl přidán diisopropylethylamin (DIEA nebo DIPEA, 0,12 ml). Směs byla míchána za chladu 1 min, potom při teplotě laboratoře 6 hod. Reakční směs byla vlita do 5% vodného H3PO4 (50 ml) a extrahována ethylacetátem (2 x). Spojené organické 15 podíly byly promyty chladným 5% vodným K₂CO_3> potom 5% vodným KH₂PO₄, potom roztokem soli. Organický roztok byl sušen nad bezvodým MgSO₄, zfiltrován a odpařen ve vakuu. Zbytek byl čištěn chromatografií na silikagelu, s elucí MeOH-CH₂CI₂, za získání v názvu uvedené sloučeniny (5.3), C₃9H58N6O₃S₂ (803,05), hmotnostní 20 spektrum (FAB) M+1 = 803,5.

Preparativní příklad 16

Krok A Sloučenina (6.2)

(6.1) + lboc-Chg-OH

(6-2)

4.9)

S použitím v podstatě stejného postupu jako v preparativmm příkladu 2, krok A, byla sloučenina (6.1) hydrochlorid benzylesteru hydroxyprolinu ponechána reagovat se sloučeninou (4.9) _z preparativního příkladu 12, za získání v názvu uvedené sloučeniny (6.2), C25H36N2O6 (460,56), hmotnostní spektrum (FAB) M+1 = 461,2.

Krok B Sloučenina (6.3)

OCH₂Ph (6-2)

OCH₂Ph . S použitím v podstatě stejného postupu jako v preparativmm příkladu 8 byla připravena sloučenina (6.3), C₂5H34N₂O₆ (458,55), 15 hmotnostní spektrum (FAB) M+1 = 459,2.

Krok C (6.4)

(6-4)

Směs sloučeniny (6.3) z kroku B (1 g), 10% Pd/C (0,05 g) a EtOH (100 ml) byla míchána za tlaku 0,1 MPa H₂ 6 hod. Směs byla 25 zfiltrována a odpařena do sucha ve vakuu za získání v názvu uvedene sloučeniny (6.4) (0,77 g), C₁₈H₂₈N₂O₆ (368,42) hmotnostní spektrum (FAB) M+1 = 369,2.

:. .-:124 ’ :..:../

Preparativní příklad 17

Krok A Sloučenina (7.1)

Sloučenina (6.4) z preparativního příkladu 16, krok C, byla ponechána reagovat se sloučeninou (2.3) z preparativního příkladu 6, krok B, stejným způsobem jako v preparativním příkladu 2, krok A, za získání sloučeniny (7.1), C36H54N6O9 (714,85), hmotnostní spektrum (FAB) M+1 = 715,9.

Sloučenina (7.1) byla ponechána reagovat v podstatě stejným způsobem jako v preparativním příkladu 7, krok A, za získání sloučeniny (7.2), C36H52N6O9 (712,83), hmotnostní spektrum (FAB) M+1 = 713,5.

• · · · · · · « .:..-:12¾

Krok C Sloučenina (7.3)

Sloučenina (7.2) z kroku B výše byla ponechána reagovat v podstatě stejným způsobem jako v preparativním příkladu 8, krok B, s 1,4-butandithiolem, za získání v názvu uvedené sloučeniny (7.3), C₄₀H₆₀N₆O₈S₂ (817,07), hmotnostní spektrum (FAB) M+1 = 817,5.

S použitím výše uvedených postupů byly připraveny sloučeniny uvedené v připojené tabulce 2. Jako obecná poznámka ke všem tabulkám stejně jako k příkladům a schématům v této přihlášce platí, že všechny atomy dusíku s otevřenou nedoplněnou vazbou v chemických strukturách v příkladech a tabulkách znamenají NH, nebo v případě koncového atomu dusíku -NH₂. Podobně jakýkoli atom kyslíku s otevřenou nedoplněnou vazbou v chemických strukturách v příkladech a tabulkách znamená skupinu -OH.

Syntéza na pevné fázi

Obecné postupy pro vazebné reakce na pevné fázi

Syntéza byla prováděna v reakční nádobě vytvořené z polypropylenové stříkačky jako patrony opatřené u dna polypropylenovou fritou. Aminokyseliny chráněné Fmoc byly navazovány za standardních podmínek syntézy na pevné fázi. Do každé reakční nádoby bylo vloženo 100 mg výchozí pryskyřice FmocSieber (přibližně 0,03 mmol). Pryskyřice byla promyta 2 ml podíly DMF (2 x). Ochranná skupina Fmoc byla odstraňována 2 ml 20 % obj./obj. roztoku piperidinu v DMF 20 min. Pryskyřice byla promyta 2 ml podíly DMF (4 x). Vazebná reakce byla prováděna v DMF (2 ml), s použitím :426-. .:..

0,1 mmol Fmoc-aminokyseliny, 0,1 mmol HATU [O-(7-azabenzotriazol—1—yl)—1,1,3,3-tetramethyluroniumhexafluorfosfátu] a 0,2 mmol DIPEA (Ν,Ν-diisopropylethylamin). Po třepání 2 hod byla reakční nádoba odsáta a pryskyřice byla promyta 2 ml podíly DMF (4 x). Vazebný cyklus byl opakován s další Fmoc-aminokyselinou nebo zakončovací skupinou.

Obecný postup pro Dess-Martinovu oxidaci na pevné fázi

Syntéza byla prováděna v reakční nádobě, která byla vytvořena z polypropylenové stříkačky jako patrony opatřené u dna polypropylenovou fritou. Hydroxysloučenina navázaná na pryskyřici (přibližně 0,03 mmol) byla smísena s roztokem 0,12 mmol DessMartinova perjodinanu a 0,12 mmol t-BuOH v 2 ml DCM 4 hod. Pryskyřice byla promyta 2 ml podíly 20% obj./obj. roztoku iPrOH v DCM, THF a 50% obj./obj. roztokem THF ve vodě (4 x), THF (4 x) a DCM (4 x).

Preparativní příklad 18

Příprava N-Fmoc-2’,3^,-dimethoxvfenvlqlycinu Sloučenina (901)

KCN, (NH₄)₂CO₃ vod. EtOH

OMe

901A

FmocOSu vod. Na₂CO₂

901 .:..:^127-.:..

K roztoku kyanidu drasleného (1,465 g, 22,5 mmol) a uhličitanu amonného (5,045 g, 52,5 mmol) ve vodě (15 ml) byl přidán roztok sloučeniny 2,3-dimethoxybenzaldehyu 901A (2,5 g, 15 mmol) v ethanolu (15 ml). Reakční směs byla zahřívána při 40 °C 24 hod. Objem roztoku byl snížen na 10 ml odpařením za sníženého tlaku. Byla přidána koncentrovaná kyselina chlorovodíková (15 ml) a sloučenina 901B byla získána jako bílá sraženina. Sloučenina 901B byla izolována filtrací (2,2 g, 9,3 mmol). Sloučenina 901B byla rozpuštěna v 10% hmotn./hmotn. vodném roztoku hydroxidu sodného (15 ml) a získaný roztok byl zahříván pod zpětným chladičem 24 hod. Byla přidána koncentrovaná kyselina chlorovodíková a pH bylo upraveno na neutrální (pH 7). Získaný roztok s obsahem sloučeniny 901C byl odpařen za sníženého tlaku. Zbytek byl rozpuštěn v 5% obj./obj. vodném roztoku hydrogenuhličitanu sodného (150 ml). Roztok byl ochlazen na 0 °C v ledové lázni a byly přidány 1,4-dioxan (30 ml) a roztok 9-fluorenylmethylsukcinimidylkarbonátu (2,7 g, 8 mmol) v 1,4dioxanu (30 ml) při 0 °C. Reakční směs byla ponechána ohřát na laboratorní teplotu a byla míchána při teplotě laboratoře 24 hod. 1,4dioxan byl odpařen za sníženého tlaku. Vodný roztok byl promyt diethyletherem. Byla přidána koncentrovaná kyselina chlorovodíková a pH bylo nastaveno do kyselé oblasti (pH 1). Byl přidán ethylacetát a organická vrstva byla promyta vodou a roztokem soli. Organická vrstva byla sušena nad bezvodým síranem sodným. Rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku, za získání požadované sloučeniny 901 jáko bílé pěnovité látky (3,44 g, 7,9 mmol). MS (LCMS elektrorozprašování) 434,1 MH⁺.

• ·· ·· ·» .· «··· ···· *··· · · · • · · · · · · · • · ··· · · · · ·

Preparativní příklad 19

Sloučenina (801)

K roztoku N-Fmoc-fenylalaninu 801A (5 g, 12,9 mmol) v bezvodém DCM (22 ml) ochlazeném na -30 °C ve směsi suchý ledaceton byl postupně přidán N-methylpyrrolidin (1,96 ml, 16,1 mmol) a methylchlorformát (1,2 ml, 15,5 mmol). Reakční směs byla míchána při -30 °C 1 hod a byl přidán roztok N,O-dimethylhydroxyl-aminhydrochloridu (1,51 g, 15,5 mol) a N-methylpyrrolidinu (1,96 ml, 16,1 mmol) v bezvodém DCM (8 ml). Reakční směs byla ponechána ohřát na laboratorní teplotu a byla míchána při teplotě laboratoře přes noc. Byl přidán toluen a organická vrstva byla promyta zředěnou kyselinou chlorovodíkovou, vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a roztokem soli. Organická vrstva byla sušena nad bezvodým síranem sodným. Rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku, za poskytnutí sloučeniny 801B (4 g, 9,29 mmol).

K roztoku Red-AI (6,28 ml, 21,4 mmol) v bezvodém toluenu (8 ml) ochlazenému na -20 °C v lázni suchý led-aceton byl přidán roztok sloučeniny 801B (4 g, 9,29 mmol) v bezvodém toluenu (12 ml). Reakční směs byla míchána při -20 °C 1,5 hod. Organická vrstva byla promyta zředěnou kyselinou chlorovodíkovou, vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a roztokem soli. Organická vrstva byla

4.4.429 ’ sušena nad bezvodým síranem sodným. Rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku a surový produkt 801C byl použit v příští reakci bez dalšího čištění.

K roztoku sloučeniny 801C (přibližně 9,29 mmol) v hexanu (15 ml) byl postupně přidán roztok kyanidu drasleného (24 mg, 0,37 mmol) a tetrabutylamoniumjodidu (34 mg, 0,092 mmol) ve vodě (4 ml) a acetonkyanohydrin (1,27 ml, 13,9 mmol). Reakční směs byla míchána při teplotě laboratoře 24 hod. Byl přidán ethylacetát a organická vrstva byla promyta vodou a roztokem soli. Organická vrstva byla sušena nad bezvodým síranem sodným. Rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku za získání sloučeniny 801D (2,4 g, 6,03 mmol).

K roztoku sloučeniny 801D (2,4 g, 6,03 mmol) v 1,4-dioxanu (11 ml) byla přidána koncentrovaná kyselina chlorovodíková (11 ml). Reakční směs byla zahřívána na 80 °C 3 hod. Byl přidán ethylacetát (25 ml) a voda (25 ml). Organická vrstva byla promyta roztokem soli a sušena nad bezvodým síranem sodným. Rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku za získání požadované sloučeniny 801 jako bílé pěnovité látky (2 g, 4,8 mmol). MS (LCMS-elektrorozprašování) 418,1 MH⁺.

Sloučeniny 301B, 301C, 301D, 301E, 301F a 301G navázané na pryskyřici byly připraveny obecným postupem pro vazebné reakce na pevné fázi, přičemž se vycházelo ze 100 mg pryskyřice Fmoc-Sieber (0,03 mmol). Sloučenina 301G navázaná na pryskyřici byla oxidována na sloučeninu 301H navázanou na pryskyřici s použitím obecného postupu pro Dess-Martinovu oxidaci na pevné fázi. Sloučenina 301H navázaná na pryskyřici byla smísena s 4 ml 2% obj./obj. roztoku TFA v DCM 5 min. Filtrát byl přidán k 1 ml AcOH a roztok byl zakoncentrován ve vakuu centrifugací, za získání sloučeniny 301J (0,0069 g, 29% výtěžek). MS (LCMS-elektrorozprašování) 771,2, MH+.

S použitím techniky syntézy na pevné fázi podrobně popsané výše a následujících skupin pro různé substituce ve sloučenině vzorce byly připraveny sloučeniny v tabulce 3:

5. W

πθννν¹ ° η ° ο ο ο'ο ο'ο

AV Ύ 59 S9 5τ $9 »w ° Vu V/

J5) CF₃ ο I J οι Ο - cf₃ ο

F χν. Αχ

9^ wX^99

-Ά_ο ⁰ ηοΧ ° ΗΟ^^ °F F Ο

• · · ♦ · · · ^36-·.:..

i Η .:. .:,.137-·

Tabulka 3

Sloučeniny připravené syntézou na pevné fázi

Struktura	Třída Ki*
	C
	c
	c
H3 r ^ni'' L o 7~< * II H o w o \ o ° 1 ✓>	c
	c
^^sO ’Wji 1 <°	c
Ύ	c
KJ A«My^ xO‘^γΊΐ^δύ^0 a^-y	c

Struktura	Třída Ki*
I Ογ TV	C
	C
7 o	c
Y Χφ’	c
	c
V	c
	c
Yw/r^	c

.:. J442 -

Struktura	Třída Ki*
v	C
-VWýQgCÓ’	c
0 y-n 0=v \r»O	c
	c
°γ^ο 9 fP \ WpV | 0 V 0	c
HO r ^W<4yA LJ o ° 0^0	c
^Λν-ζΟ^Λ	c ----
oW0	c

/144 -··* ···· *····*

Struktura	Třída Ki*
P	C
P Ov .ή P i S ° ι—\	B
Γ 9	c
P i / 1 0 Ο r-Λ aWla Υήυ	B
Γ r P	C
A Vo CC-A 3-	C
L· CT / , 1 U L ° Η Γ / z*- rxMA\X^ < ^Vs/Ai » L o 2' \ q I jí » 0 ° I o |	c
Γ p P apvCC	c

.......- i*47’-*” '-**··^:

Struktura	Třída Ki*
P	B
I o=7 \=O . o=7 /= o i	c
	c
'—-Z l 0 Vy ° i I vJV, ) o	c
P	c
r 9	c
A • · Ý .^í ’.’ Ί 0	c
^WtyV0	c

• -748·-··· ·· ..*

Struktura	Třída Ki*
	c
	C
\ l	B
	C
/ <	B
/ ( - s^! y °H·	C
( \ 7 o ° ° /> °	B
/ 0 / 'O [J H A L 9 ft ’ i β Λ-/	B

’·· ·’’·· ->49·'·· ’

Struktura	Třída Ki*
/ J	C
?	A
P ίΎΥ^^Υΐόι s ’Ó1	A
	A
	B
?	A
p	B
z . V	B

Struktura	Třída Ki*
P	B
P 1 ° Ax ®	B
P ¢0¼¼^^0	B
P Ojjj·* 7 » °?p0 ks J o L o s ’0’	B
P	B
r^j ó	C
•n fo T g m r~\ 1 Cf^>ffT3 Λ0 1 ‘0’	C
P,	A

Struktura	Třída Ki*
. P	B
P cAwfe * 0 δ	B
P	B
r ?	B
o V ’V^	B
, P	B
/ 1 \ s	B
% Ap°As^o	C

1*53

Struktura	Třída Ki*
	B
p	B
, P	B
P	B
, P XpAppAřb	B
? 0¾^4¼ ° M f> οΜνχΧγΌ	A
Γ , P ζ?^^ν0χ°	B
. P	B

Struktura	Třída Ki*
P	B
oAxArXP	C
	c
81 ^xX\1b ‘ό’	c
? oPPXPNÉx	A
O (	B
P Px/y	A
P cPyAy	A

- í«S6

Struktura	Třída Ki*
Ρ Z f k. J oko | ° L o	B
P o^w ? o o' 4 í 1 ΊΓ π I T Λ Jk/^ k^ 0 k o A/ 1 1 ° >> ®	A
P o^>> —Z «? ® 9 Γ\ z^^sY^Y^YkYkYYz^kuP 0 \ U θ^φφ^	A
P o^WYp i ° Λ> °	A
ZA r (φ-Ό ο”χ—v os^S 2	A
r p	B
Γ P (ΡΦΡφ^Φ	B
P ϊ μ 5 3 L z °**	A

• β C > . ® 99 _A _ ^,:· ··’·· TsA:.\ *

Struktura	Třída Ki*
P	A
P	B
h— p cpXXpAco	B
P	C
P O^JW. f HO X J o X o íZ*-<í s ’ó‘	B
P σ'^ΆΡ i 0 X °	B
	B
P iXX XsX Q X 0 i q X3	B

• . ·: · · .: : · ....... -%58.í..

Struktura	Třída Ki*
P .	c
o \ 0 ů 1 °	c
P	c
P O^JOi. f HJ« oP^vSůPjčo	c
	B
Μχ	B
J+Apgro	B
^+¾0	B

.·’ · i iéa·-’ ·:

Struktura	Třída Ki*
	A
	A
	A
	A
oWp|P	B
ΡΡΡΑ^λΡ 1 0 \ $	c
	B
	A

• ·· · · · · * .· · : 161.·- ·: :. :

Struktura	Třída Ki*
	c
	A
	C
o1 rů	C
.. sPiwPP 0-O-* 0 r F F	C
0 /- Vy	C
F z-\ F F	C
	C

• · · · · · · .· ·-: 182.-· ·: :. :

Struktura	Třída Ki*
VcL	C
	c
	C
(/ Q	c
	C
o	c
0 0 J 0 0	B
4W 0 0 J 0 0	B

• ··· · · · · * : .· ’-riee^ ·; :. :

Struktura	Třída Ki*
F 0 o D o o	B
	B
	C
	B
'“O- o=Z \=o orz y—. x\ / \ -^Fl \=o O=Z ς iť /=\ °=<M j Ω	A
	B
	B
	B

• · · · · · · e • · · · · · · .· · :ια4.-· ·: :. :

Struktura	Třída Ki*
	Β
CMe^^^-OMe	Β
Ofe/x-OMe Ap . ra AA, ° . o J o g	Β
CMe^^^s^OMe 11^ II ajXYAAC· ΥΧρ ϊ τρ 8 ϊ ' F 0	Β
OMe^^x^^OMe AHyAv	Β
	Β
	Β
Ο Η- ΎΥ 0 (^) ίι Η ίι 1^ 11 JL 0 0 J 0 '° 0 '__	Β

Struktura	Třída Ki*
F 0 ।	A
r^^Ý-ír	B
	C
V_7	C
Ολ	c
, δΤΡφ0^ Η-ο*	C
	c
	B

Zl±ĚČ

Struktura	Třída Ki*
	c
	C
	B
1 0 0 J 0	C
jCTVyyTT 0 O J 0 0	B
	B
0 ja- TT γτ^?υ« 0 0 J 0 ο	B
	B

Struktura	Třída Ki*
	B
	B
	B
ArA M
V .	B
i i9A «A ÁAAprWr	B
	B
	B
ΑΜυΟλλαλα^	B
CCm in^i

	• · • ·
Struktura	Třída Ki*
-/χΧ-	Β
	Β
/χ^χγ55 'μ	Β
x|*x5r 1 -j-·' β 1 (	Β
1 9?-	Β
1 ·χ9γτ5τ °γ/ό	C
Γ '/\Pxy55 1 ο i Cj'	Β
ν/γχ^	Β

·· ·♦ ·* ·· ···· : L <

··· ··♦· ·· ···· ·· ··

Struktura	Třída Ki*
	C
	c
	c
Xa	c
° f	B
χϊ/χΧΧ X HO ___	C
j”^ 0 Xa «s	C
CZ^ cZZi \λ /*ί ο 9 X Ύ\ 0 L 1 T T lí Η II o L o o ° '	C

.·· * V2 .·.:: ·. • · · · ···· ··· ·· ···· ·· ··

·· ·♦ ·· ·· ····

ΛΜ-Α: L <

··· ·♦ ···· ·· ··

Struktura

Třída Ki*

··· ·· ···· ·· ··

A H-A i ··· 99 9999 99 99

Další sloučeniny, které byly připraveny, včetně jejich rozmezí aktivity (Ki*), jsou uvedeny v přiložených tabulkách 4 a 5. Postup použitý pro přípravu sloučenin v tabulkách 4 a 5 je uveden níže.

I) Syntéza meziproduktů pro sloučeniny v tabulkách 4 a 5.

Příklad I

Syntéza 4, 4-dimethylprolinmethylesteru (H-Pro(4,4-diMe)-OMe)

Syntéza terc-butvl-N-terc-butoxvkarbonyl-4-methyl-L-pyroqlutamátu * · · · · ·· · • · · · ·· · .· J7§ -.· ·: :. :

·*♦ ·· ···· 9999

Krok 1 (Boc-PyroGlu(4-methyl)-OtBu),

K roztoku terc-butyl-N-terc-butoxykarbonylpyroglutamátu (11,5 g, 40 mmol) v THF (200 ml) míchanému při -78 °C, byl přidán 1M io roztok hexamethyldisilazidu lithného v THF (42 ml, 42 mmol) po kapkách v průběhu 5 min. Po 30 min byl přidán methyljodid (3,11 ml, 50 mmol). Po 2 hod přidávání při -78 °C byla chladicí lázeň odstraněna a byl přidán 50% nasycený vodný chlorid amonný (200 ml). Roztok byl - míchán po dobu 20 min, potom extrahován etherem (3 x 200 ml). 15 Spojené organické vrstvy byly promyty roztokem soli (200 ml), sušeny (Na₂SO₄), zfiltrovány a zakoncentrovány. Zbytek byl čištěn chromatografií s elucí směsí 1 : 1 ethylacetát/hexany za získání Boc-PyroGlu(4-methyl)-OtBu (10,6 g, 35,4 mmol, 88 %) jako směsi isomerů (2 : 1 cis : trans).

Krok 2

Syntéza terc-butyl-N-terc-butoxvkarbonvl-4,4-dimethyl-L-pyroqlutamátu (Boc-PyroGlu(4,4-dimethyl)-OtBu)

K roztoku ter-butyl-N-terc-butoxykarbonyl-4-methyl-L-

pyroglutamátu (1,2 g, 4,0 mmol) v tetrahydrofuranu (20 ml) míchanému při -78 °C byl přidán 1M roztok hexamethyldisilazidu lithného v tetrahydrofuranu (4,4 ml, 4,4 mmol) po kapkách v průběhu 5 min. Po 30 min byl přidán methyljodid (0,33 ml, 5,2 mmol). Po 3 hod přidávání při -78 °C byla chladicí lázeň odstraněna a byl přidán 50% nasycený vodný chlorid amonný (40 ml). Roztok byl míchán po dobu 20 min, potom extrahován etherem (2 x 50 ml). Spojené organické vrstvy byly promyty vodou (2 x 25 ml), nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (2 x 25 ml), roztokem soli (50 ml), sušeny w (Na₂SO₄), zfiltrovány a zakoncentrovány za získání Boc-PyroGlu(4,4dimethyl)-OtBu (0,673 g, 54 %).

Krok 3

Syntéza terc-butyl-N-terc-butoxykarbonyl-4,4-dimethylprolinu—(Boo

Bylo použito modifikace známého postupu: Pedregal, C Ezquerra, J.; Escribano, A.; Carreno, M. C.; Garcia Ruano, J. L Tetrahedron Letters 1994, 35(13), 2053 - 2056).

K roztoku terc-butyl-N-terc-butoxykarbonyl-4,4-dimethylpyro-glutamátu (2,0 mmol) v tetrahydrofuranu (5 ml), míchanému pri 25 -78 °C, byl přidán 1M roztok triethylborohydridu lithného v tetrahydrofuranu (2,4 ml, 2,4 mmol) po kapkách v průběhu 5 mm. Po 30 min byla chladicí lázeň odstraněna a byl přidán nasycený vodný hydrogenuhličitan sodný (5 ml). Reakční směs byla ponořena do lázně led/voda a byl přidán 30% vodný peroxid vodíku (10 kapek). Roztok 30 byl míchán po dobu 20 min při 0 °C, potom byla reakční směs • · · · · · zakoncentrována ve vakuu pro odstranění tetrahydrofuranu. Vodný roztok byl zředěn vodou (10 ml) a extrahován dichlormethanem (3 x 40 ml). Organické vrstvy byly sušeny (Na₂SO₄), zfiltrovány a zakoncentrovány. Zbytek byl rozpuštěn v dichlormethanu (20 ml) a triethylsilanu (310 μΙ, 2,0 mmol), potom ochlazen na -78 °C a po kapkách byl přidán diethyletherát fluoridu boritého (270 μΙ, 2,13 mmol). Míchání pokračovalo 30 min, během kterých byly přidány další triethylsilan (310 μΙ, 2,0 mmol) a diethyletherát fluoridu boritého (270 μΙ, 2,13 mmol). Po míchání při -78 °C další 2 hod byla chladicí lázeň odstraněna a byl přidán nasycený vodný hydrogenuhličitan sodný (4 ml). Po 5 min byla směs extrahována dichlormethanem (3 x 40 ml). Organické vrstvy byly sušeny (Na₂SO₄), zfiltrovány a zakoncentrovány za získání Boc-Pro(4,4-dimethyl)-OtBu..

Krok 4

Syntéza 4,4-dimethylprolinu (H-Pro(4,4-dimethyl)-OH).

Roztok sloučeniny ter-butyl-N-terc-butoxykarbonyl-4,4-dimethyl-prolinu v dichlormethanu (5 ml) a kyseliny trifluoroctové (5 ml) byl míchán při teplotě laboratoře pět hodin. Roztok byl zakoncentrován, sušen ve vysokém vakuu a převeden do příštího kroku bez dalšího čištění.

••••-481·;.·.:., : :. :

Krok 5

Syntéza

N-terc-butoxykarbonyl-4,4-dimethylprolinu (Boc-Pro(4,4-dimethyl)-OH)

K roztoku trifluoracetátové soli 4,4-dimethylprolinu (1,5 mmol) v dioxanu (7 ml), acetonitrilu (12 ml) a diisopropylethylaminu (700 K, 4 mmol) byl přidán roztok sloučeniny di-terc-butyldikarbonátu (475 mg, 2,18 mmol) v acetonitrilu (5 ml). Po míchání 12 hod při teplotě laboratoře byl roztok zakoncentrován ve vakuu, rozpuštěn v nasyceném vodném hydrogenuhličitanu sodném (50 ml) a promyt diethyletherem (3 x 40 ml). Vodná vrstva byla okyselena na pH 3 kyselinou citrónovou, potom extrahována dichlormethanem (3 x 40 ml). Spojené organické vrstvy byly sušeny nad síranem sodným, zfiltrovány a zakoncentrovány.

Krok 6

Syntéza hydrochloridové soli 4.4-dimethylprolinmethylesteru (HCI.H-Pro(4,4-dimethyl)-OMe)

K roztoku Boc-Pro(4,4-diMe)-OH (0,5 g, 2,06 mmol) v bezvodém methanolu (8 ml) byl přidán po kapkách thionylchlorid (448 I,

6,18 mmol) a reakční směs byla míchána po dobu 6 hod při teplotě laboratoře. Reakční směs byla zakoncentrována na amorfní pevnou látku (377 mg, 95 %).

*-*T82 -··

Příklad II

Obecný postup syntézy N-tercbutoxvkarbonyl-4-alkvl-4-methylprolinu

Sloučeniny, ve kterých skupina R je allyl a benzyl, byly syntetizovány následujícími kroky 1 až 4 níže:

is Krok 1

Syntéza terc-butvl-N-terc-butoxykarbonyl-4-alkvl-4-methyl-L-pyro_:.

-qlutamátu

K roztoku ter-butyl-N-terc-butoxykarbonyl-4-methyl-L-pyroglutamátu (10,2 g, mmol) (viz příklad I, krok 1) v tetrahydrofuranu (170 ml), míchanému při -78 °C, byl přidán 1M roztok hexamethyldisilazidu lithného v tetrahydrofuranu (37,5 ml, 37,5 mmol) po kapkách v průběhu 5 min. Po 40 min byl přidán alkylhalid ••••«183·-.·.:..

(61,4 mmol). Po dalších 3 hod při -78 °C byla chladicí lázeň odstraněna a byl přidán 50% nasycený vodný chlorid amonný (200 ml). Roztok byl míchán po dobu 20 min, potom extrahován etherem (2 x 200 ml). Spojené organické vrstvy byly zředěny hexany (150 ml) a 5 promyty nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (100 ml), vodou (2 x 100 ml) a roztokem soli (100 ml), sušeny (Na₂SO₄), zfiltrovány a zakoncentrovány. Zbytek byl čištěn bleskovou chromatografií s použitím 20% ethylacetátu v hexanech, za získám čistého terc-butyl-N-terc-butoxykarbonyl-4-alkyl-4-methyl-L-pyrow -glutamátu.

Krok 2

Syntéza terc-butvl-N-terc-butoxykarbonvl-4-alkyl-4-methylprolinu

Bylo použito modifikace známého postupu Pedregal, C.;

Ezquerra, J.; Escribano, A.; Carreno, M. C.; Garcia Ruano, J. L, Tetrahedron Letters (1994) 35(13), 2053 - 2056).

K roztoku terc-butyl-N-terc-butoxykarbonyl-4-alkyl-4-methylpyro-glutamátu (16,6 mmol) v tetrahydrofuranu (40 ml), míchanému pn -78 °C byl přidán 1M roztok triethylborohydridu lithného 25 v tetrahydrofuranu (20 ml, 20 mmol) po kapkách v průběhu 10 min. Po 120 min byla chladicí lázeň ponechána ohřát na -25 °C, přičemž v tomto okamžiku byl přidán nasycený vodný hydrogenuhličitan sodný (40 ml). Reakční směs byla ponořena do lázně led/voda a byl přidán 30% vodný peroxid vodíku (4 ml). Roztok byl míchán po dobu 10 min

-.:..184.,*: :.

při O °C, potom byla reakční směs zakoncentrována ve vakuu pro odstranění tetrahydrofuranu. Vodný roztok byl zředěn vodou (300 ml) a extrahován dichlormethanem (3 x 200 ml). Organické vrstvy byly sušeny (síran sodný), zfiltrovány a zakoncentrovány. Zbytek byl 5 rozpuštěn v dichlormethanu (100 ml) a triethylsilanu (2,6 ml, mmol), potom ochlazen na -78 °C po kapkách byl přidán diethyletherát fluoridu boritého (2,2 ml, mmol). Míchání pokračovalo 1 hod, a potom byl přidán další triethylsilan (2,6 ml, mmol) a diethyletherát fluoridu boritého (2,2 ml, mmol). Po míchání při -78 °C další 4 hod byla io chladicí lázeň odstraněna a byly přidány nasycený vodný hydrogenuhličitan sodný (30 ml) a voda (150 ml). Po 5 min byla směs extrahována dichlormethanemem (3 x 200 ml). Organické vrstvy byly sušeny (Na₂SO₄), zfiltrovány a zakoncentrovány.

. Kr.ok 3

Syntéza 4-alkyl-4-methylprolinu

Roztok sloučeniny ter-butyl-N-terc-butoxykarbonyl-4-alkyl-4-methylprolinu v dichlormethanu (5 ml) a kyselině trifluoroctové (5 ml) byl míchán při teplotě laboratoře 5 hod. Byl přidán toluen a roztok byl zakoncentrován a potom sušen ve vysokém vakuu.

Krok 4

Syntéza N-terc-butoxvkarbonvl-4-alkyl-4-methvprolinu

K roztoku trifluoracetátové soli 4-alkyl-4-methylprolinu (1,5 mmol) v dioxanu (7 ml), acetonitrilu (12 ml) a diisopropylethylaminu (700 μΙ, 4 mmol) byl přidán roztok di-terc-butyldikarbonátu (475 mg, 2,18 mmol) v acetonitrilu (5 ml). Po 12 hod míchání při teplotě laboratoře byl roztok zakoncentrován ve vakuu, rozpuštěn v nasyceném vodném hydrogenuhličitanu sodném (50 ml) a promyt diethyletherem (3 x 40 ml). Vodná vrstva byla okyselena na pH 3 1N kyselinou chlorovodíkovou, potom extrahována dichlormethanem (3 x 40 ml). Spojené organické vrstvy byly sušeny (Na₂SO₄), zfiltrovány a zakoncentrovány. Zbytek byl čištěn bleskovou chromatografií s použitím směsi 1 : 1 ethylacetát/hexany s 1% kyselinou octovou.

Příklad III

Syntéza N-terc-butoxvkarbonvl-4-propyl-4-methylprolinu

Roztok N-tercbutoxykarbonyl-4-allyl-4-methylprolinu (400 mg, 1,48 mmol) (viz příklad II, krok 4) a 10% Pd na uhlí (400 mg) v methanolu (20 ml) byl hydrogenován při 50 psi (345 kPa) 4 hod. Směs byla zfiltrována a zakoncentrována.

Příklad IV

Syntéza Boc-4-cyklohexylprolinu

Roztok komerčně dostupného Boc-4-fenylprolinu (750 mg) a 5%

Rh na uhlí (750 mg) v methanolu (15 ml) byl hydrogenován při 50 psi (345 kPa) 24 hod. Směs byla zfiltrována a zakoncentrována za získání

730 mg produktu.

Příklad V

Příprava kyseliny fluorenvlmethoxvkarbonvl-Pro(4-spirocyklopentanb. karboxylové

Krok 1

Syntéza (4-allyl)-terc-butylesteru kyseliny Boc-pyroglutamové

LiHMDS allylbromid

THF

K chlazenému (-78 °C) roztoku komerčně dostupného N-Boc-terc-butylpyroglutamátu (10 g, 35,1 mmol) v THF (175 ml) byl přidán hexamethyldisilazid lithný (36,8 ml, 36,8 mmol) v průběhu 5 min.

Míchání pokračovalo 30 min. Do prvního roztoku byl po kápkách přidán roztok allylbromidu (6,1 mi, 70,2 mmol) v THF (39 ml). Po 2 hod při -78 °C byla reakce ukončena pomalým přidáním nasyceného roztoku chloridu amonného (50 ml). Reakční směs byla potom zředěna ethylacetátem a vrstvy byly odděleny. Organická vrstva byla sušena io nad síranem sodným a zakoncentrována. Blesková chromatografie na koloně prováděná ve směsi 2 : 8 ethylacetát : hexany poskytla produkt (6 g, 53%). NMR δ ppm (CDCI₃): 5,7 (m, 1H), 5,1 (dd, 2H), 4,4 (m, 1H), 2,6 (m, 2H), 2,4 (m, 1 H), 1,8 - 2,2 (m, 1H), 1,45 (s, 9H), 1,4 (s, 9H).

Krok 2

Syntéza (4,4-diallyl)-terc-butylesteru kyseliny N-Boc-pyroglutamové

(4-allyl)-terc-butylester kyseliny N-Boc-pyroglutamové získaný v kroku 1 výše (2,68 g, 8,24 mmol) byl podroben druhé alkylaci 25 allylbromidem za podobných podmínek. Blesková chromatografie ve směsi 15 : 85 ethylacetát : hexany poskytla 2,13 g produktu (71 %) jako čirého oleje.

e _β * ·· α _φ * · e _β * ···—Ψ88\.·.;„ : ;

Krok 3

Syntéza Boc-Pro(4,4-diallvl)-terc-butylesterů

Část a): K chladnému (-78 °C) roztoku Boc-PyroGlu(4,4-diallyl)w -terc-butylesteru (2,13 g, 5,83 mmol) v tetrahydrofuranu (14 ml) byl přidán triethylborohydrid lithný (1M v tetrahydrofuranu, 7,29 ml, 7,29 mmol) v průběhu 5 min. Po 2 hod při -78 °C byla reakce ohřátá na 0 °C a ukončena pomalým přidáním nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného (20 ml) a 30% peroxidu vodíku is (20 kapek). Míchání pokračovalo 20 min. Tetrahydrofuran byl odstraněn za sníženého tlaku a vzniklý hustý bílý zbytek byl zředěn vodou (80 ml) a extrahován 3 x dichlormethanem. Organická vrstva byla sušena, zfiltrována a zakoncentrována a převedena do dalšího kroku bez čištění.

₂₀ část b): K produktu získanému v části (a) v dichlormethanu (14 ml) byl přidán triethylsilan (931 pl, 5,83 mmol) a potom diethyletherát fluoridu boritého (776 μΙ, 6,12 mmol). Po 30 min byl přidán další triethylsilan (931 μΙ, 5,83 mmol) a diethyletherát fluoridu boritého (776, μΙ, 6,12 mmol) a reakční směs byla míchána při -78 °C 25 3 hod, a reakce byla ukončena pomalým přidáním nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a vody. Reakční směs byla extrahována dichlormethanem a organická vrstva byla sušena, zfiltrována a zakoncentrována. Blesková chromatografie v 15% ethylacetátu v hexanech poskytla 1.07 bezbarvý olej (57 %). NMR δ ppm (CDCI₃):

5,7 - 5,8 (m, 2H), 5,1 (m, 4H), 4,1 - 4,2 (2 dďs, 1H rotamery), 3,5 - 3,3 (dd, 1H) a 3,2 (dd, 1H) rotamery, 2,2 - 2,0 (m, 5H), 1,7 (m, 1 H), 1,46 (s, 9H), 1,43 (s, 9H).

Krok 4

Syntéza Boc-Pro(4-spirocyklopenten)-terc-butvlesteru

K Boc-Pro(4,4-diallyl)-terc-butylesteru (1,07 g, 3,31 mmol) v dichlormethanu (66 ml) byl přidán 5% dichlorid io bis(tricyklohexylfosfin)benzylidenruthenia IV (Grubbův katalyzátor) a směs byla zahřívána pod zpětným chladičem 1,5 hod. Reakční směs byla zakoncentrována a zbytek byl čištěn bleskovou chromatografií na koloně v 15% ethylacetátu v hexanech. Byl získán žlutý olej (0,57 g, 53 %). NMR δ ppm (CDCI₃): 5^56 (bs, 2H), 4,2 a 4,1 (t, 1H, rotamery), 15 3,2 - 3,5 (m, 2H), 2,2 - 2,5 (m, 5H), 1,9 (dd, 1H) 1,47 a 1,46 (2 s's, 9H, rotamery), 1,45 a 1,44 (2 s's, 9H, rotamery).

Krok 5

Syntéza Boc-Pro(4-spirocyklopentan)-terc-butylesteru

Roztok Boc-Pro(4-spirocyklopenten)-terc-butylesteru (1,12 g) v methanolu (18 ml), vodě (4 ml) a kyselině octové (4 ml) byl umístěn v

Parrově třepačce a byl hydrogenován 3 hod při 35 psi (241 kPa) v přítomnosti 10% paladia na uhlí (300 mg). Katalyzátor byl odfiltrován a filtrát byl zakoncentrován na bezbarvý olej (1,26 g). NMR δ ppm (CDCI3): 4,1 a 4,2 (t, 1H, rotamery, 3,4 (d, 1H), 3,2 (d, 1H), 2,1 (m,

1H), 1,9 (m, 1H), 1,6 - 1,7 (m, 10H), 1,5 (3 s's, 18H, rotamery).

Krok 6

Syntéza kyseliny Fmoc-Pro(4-spirocyklopentan)-karboxylové

Boc-Pro(4-spirocyklopentan)-terc-butylester (1,26, 3,9 mmol) byl míchán s dichlormethanem (10 ml) a kyselinou trifluoroctovou (15 ml) 3 hod. Reakční směs byla zakoncentrována a získaný žlutý olej byl rozpuštěn ve vodě (6 ml). Po částech byl přidán fluorenylmethylsukcinylkarbonát (1,45 g, 4,3 mmol) rozpuštěný v dioxanu (6 ml) a potom uhličitan draselný (2,16 g, 15,6 mmol). Reakční směs byla míchána po dobu 18 hod a zakoncentrována. Zbytek byl zředěn nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (10 ml) a promyt diethyletherem (3 x 10 ml). Vodná vrstva byla potom 20 okyselena na pH ~1 1N roztokem hydrogensíranu sodného a extrahována ethylacetátem. Organická vrstva byla sušena nad síranem sodným, zfiltrována a zakoncentrována na béžovou pěnu (1,3 g, 100 %).

Příklad VI

Syntéza Boc-Pro(4t-NH(Fmoc))-OH

Krok 1

Syntéza benzylesteru N^a-terc-butoxvkarbonvl-cis-4-chlor-L-prolinu

Cl

Směs komerčně dostupného N-terc-butoxykarbonyl-trans-4-hydroxyprolinu (8,79 g, 38 mmol), uhličitanu draselného (13,0 g, 94 mmol), benzylbromidu (4,5 ml, 38 mmol) a dimethylformamidu (150 ml) byla míchána po dobu 18 hod. Byl přidán ethylacetát (100 ml) 15 a směs byla zfiltrována. Bílý objemný filtrát byl vyčeřen přidáním 1M HCI (100 ml). Vrstvy byly odděleny a vodná vrstva byla extrahována ethylacetátem (2 x 100 ml). Spojené organické vrstvy byly promyty vodou (2 x 50 ml), sušeny (síran sodný), zfiltrovány a zakoncentrovány. K surovému benzylesteru byl přidán toluen a roztok 20 byl zfiltrován a znovu zakoncentrován. Byly přidány dichlormethan (70 ml) a chlorid uhličitý (70 ml), a potom trifenylfosfin (21,11 g, 80 mmol). Reakční směs byla míchána po dobu 10 hod, reakce byla ukončena ethanolem (7 ml) a míchána dalších 5 hod. Roztok byl zakoncentrován na přibližně 100 ml, potom byl přidán dichlormethan 25 (40 ml) a potom ether (200 ml) za míchání. Roztok byl chlazen 4 hod, zfiltrován a zakoncentrován za získání žlutohnědého oleje, který byl čištěn bleskovou chromatografií s použitím směsi ether/hexan/dichlormethan 2 : 2 : 1, za poskytnutí v názvu uvedené sloučeniny (9,13 g, 26,9 mmol, 71 %) jako bílé pevné látky.

Krok 2

Syntéza benzylesteru N^a-terc-butoxvkarbonvl-trans-4-azido-L-prolinu

^3

Roztok benzylesteru N^a-terc-butoxykarbonyl-cis-4-chlor-L-prolinu (9,0 g, 26,5 mmol) a azidu sodného (7,36 g, 113 mmol) v dimethylformamidu (270 ml) byl zahříván při 75 °C 2 dny. Byla přidána voda (100 ml) a reakční směs byla extrahována ethylacetátem (3.x 100 ml). Spojené organické vrstvy byly promyty vodou (3 x 50 ml), sušeny (síran sodný), zfiltrovány a zakoncentrovány. Olej byl čištěn 15 bleskovou chromatografií s použitím směsi ethylacetát/hexany 1 : 1, za poskytnutí v názvu uvedené sloučeniny (8,59 g, 24,8 mmol, 94 %).

Krok 3

Syntéza Boc-Pro(4t-NH(Fmoc))-OH

Směs benzylesteru N-a-t-butoxykarbonyl-trans-4-azido-L-prolinu (8,59 g, 24,8 mmol) a 10% paladia na uhlí (900 mg) v ethanolu (500 ml) byla hydrogenována při 50 psi (345 kPa) 14 hod s použitím Parrova hydrogenačního přístroje. Směs byla zfiltrovana, zakoncentrována, rozpuštěna v methanolu (60 ml), znovu zfiltrována a zakoncentrována, za získání bezbarvého oleje. Olej byl rozpuštěn ve 5 vodě (53 ml) obsahující uhličitan sodný (5,31 g, 50,1 mmol) a byl přidán roztok fluorenylmethylsukcinylkarbonátu (8,37 g, 29,8 mmol) v dioxanu (60 ml) v průběhu 40 min. Reakční směs byla míchána při teplotě laboratoře 17 hod, potom byla zakoncentrována pro odstraněni dioxanu a zředěna vodou (200 ml). Roztok byl promyt etherem (3 x io 100 ml). pH vodného roztoku bylo upraveno na 2 přidáním kyseliny citrónové (pozor - pění!) a vody-(100 ml). Směs byla extrahována dichlormethanem (400 ml, 100 ml, 100 ml) a spojené organické vrstvy byly sušeny (síran sodný), zfiltrovány a zakoncentrovány za poskytnuti v názvu uvedené sloučeniny.

Přiklad VII

Syntéza N-t-butoxykarbonyl-4-trans-(N-fluorenylmethyloxykarbonYL -aminomethyl)-L-prolinu (Boc-Pro(4t-MeNHFmoc)-QHl

Krok 1

Syntéza benzvlesteru terc-butoxykarbonyl-cis₇4-hydroxy-L-prolin u (Boc- Pro(4-cis-OH)-OBn)

Ke směsi cis-hydroxy-L-prolinu (5 g, 38,1 mmol) v benzenu (45 ml) a benzylalkoholu (45 ml) byl přidán monohydrát kyseliny ptoluensulfonové (7,6 g, 40,0 mmol). Reakční směs byla zahřívána na 125 °C 20 hod, přičemž voda (2 ml) byla odstraňována použitím DeanStark přístroje. Roztok byl zfiltrován dokud byl horký, a potom byl io přidán ether (150 ml). Roztok byl ponechán ochladit 3 hod při teplotě laboratoře, potom 3 hod při 4 °C. Získaná pevná látka byla oddělena, promyta etherem (100 ml) a sušena ve vakuu 1 hod, za získání 13,5 g bílé pevné látky. Pevná látka byla rozpuštěna v dioxanu (40 ml) a byl přidán diisopropylethylamin (7,6 ml), potom di-terc-butyldikarbonát ₁₅ (iq g, 45,8 mmol) v průběhu 5 min, přičemž pro udržování konstantní reakční teploty byla používána ledová lázeň. Po 10 hod při teplotě laboratoře byla reakční směs vlita do chladné vody (200 ml) a extrahována ethylacetátem (3 x 200 ml). Spojené organické vrstvy byly promyty vodou (3 x 100 ml) a nasyceným vodným chloridem sodným (50 ml), sušeny (síran sodný), zfiltrovány a zakoncentrovány. Surový produkt byl čištěn bleskovou chromatografií s použitím 40 až 60% ethylacetátu v hexanech za poskytnutí v názvu uvedené sloučeniny (10,04 g, 31,24 mmol, 82 %).

Krok 2

Syntéza benzylesteru N-t-butoxykarbonvl-cis-4-mesyloxy-L-prolinu (Boc-Pro(4-cis-OMs)-QBn)

K roztoku Boc-Pro(4-cis-OH)-OBn (8,45 g, 26,3 mmol) v pyridinu (65 ml) byl při 0 °C po kapkách přidáván methansulfonylchlorid (3,4 ml, 44 mmol) v průběhu 7 min. Reakční směs byla ponechána ohřát na laboratorní teplotu v průběhu 2 hod, potom byla míchána přes noc. Roztok sloučeniny 10 % vody v pyridinu (20 ml) byl přidán io v průběhu 15 min a reakční směs byla zakoncentrována. Zbytek byl rozpuštěn ve vodě a extrahován ethylacetátem (2 x 200 ml). Spojené organické vrstvy byly promyty vodou (2 x 50 ml), nasyceným vodným hydrogenuhličitanem sodným (50 ml) a nasyceným vodným chloridem sodným (50 ml), sušeny (síran sodný), zfiltrovány a zakoncentrovány.

Získaný zbytek byl rozpuštěn v toluenu (100 ml) a zakoncentrován pro odstranění stop pyridinu. Zbytek byl sušen ve vakuu 30 min za získání v názvu uvedené sloučeniny (10,7 g, 102 %), potom použit v dalším kroku bez čištění.

Krok 3

Benzylester N-t-butoxvkarbonvl-trans-4R-kvano-L-prolinu (Boc-Pro(4-trans-CN)-OBn)

CN

Roztok Boc-Pro(4-cis-OMs)-OBn (10,7 g, 26,3 mmol) a ··· · · · ♦ · ' ’ _e tetrabutylamoniumkyanidu (15,0 g, 56 mmol) v dimethylformamidu (100 ml) byl zahříván v olejové lázni na 55 °C 28 hod. Po ochlazení byla přidána voda (150 ml) a směs byla extrahována ethylacetátem (3 x 200 ml). Spojené organické vrstvy byly promyty vodou (3 x 100 ml) a 5 nasyceným vodným chloridem sodným (100 ml), sušeny (síran sodný), zfiltrovány a zakoncentrovány. Získaný zbytek byl čištěn bleskovou chromatografií (1 : 1 ether/hexany) a potom rekrystalizován ze směsi ethylacetát/hexany za poskytnutí v názvu uvedené sloučeniny (2,40 g, 7,26 mmol, 28 %).

w

Krok 4

N-t-butoxvkarbonyl-4-trans-N-fluorenylmethyloxvkarbonylamino^

-methyl)-L-prolin (Boc-Pro(4t-MeNHFmoc)-OH).

Směs sloučeniny z kroku 3 výše (2,31 g, 7 mmol), vody (10 ml), 20 methanolu (85 ml) a 10% paladia na uhlí (700 mg) byla hydrogenována při 50 psi (345 kPa) 11 hod s použitím Parrova hydrogenačního přístroje. Směs byla zfiltrována a zakoncentrována. Ke zbytku byla přidána voda (15 ml) a uhličitan sodný (1,5 g, 14,2 mmol). V průběhu 5 min byl přidán roztok fluorenylmethyl25 -sukcinylkarbonátu (2,36 g, 7,0 mmol) v dioxanu (17 ml) a míchaní pokračovalo 28 hod při teplotě laboratoře. Reakční směs byla zakoncentrována ve vakuu na 15 ml objemu a byla přidána voda (100 ml). Roztok byl promyt etherem (3 x 75 ml). pH vodného roztoku bylo upraveno na 2 přidáním kyseliny citrónové (přibližně 20 g, pozor 30 pění!) a vody (100 ml). Směs byla extrahována dichlormethanem (4 x : - $97-/, ’ ^:./··..^:

100 ml), a spojené organické vrstvy byly sušeny (síran sodný), zfiltrovány a zakoncentrovány. Surový produkt obsahoval jednu hlavní nečistotu, jejíž odstranění vyžadovalo třístupňové čištění. Surový produkt byl rozpuštěn v dichlormethanu (50 ml) a kyselině trifluoroctové (50 ml) a míchán 5 hod před zakoncentrováním. Zbytek byl čištěn preparativní HPLC s reverzními fázemi. Čistá trifluoracetátová sůl 4-(N-fluorenylmethyloxykarbonylamino-methyl)prolinu (1,887 g, 3,93 mmol) byla rozpuštěna v dioxanu (10 ml), acetonitrilu (20 ml) a diisopropylethylaminu (1,4 ml, 8 mmol). K reakční směsi byl přidán roztok di-terc-butyldikarbonátu (1,1g, 5 mmol) v dioxanu (5 ml). Po 18 hod míchání bylo pH roztoku upraveno na 2 přidáním kyseliny citrónové (pozor - pění!) a vody (100 ml). Směs byla extrahována ethylacetátem (3 x 150 ml) a spojené organické vrstvy byly promyty nasyceným vodným chloridem sodným (100 ml), sušeny (síran sodný), zfiltrovány a zakoncentrovány. Surový produkt byl rozpuštěn v nasyceném vodném hydrogenuhličitanu sodném (100 ml) a promyt etherem (3 x 75 ml). Vodná vrstva byla nastavena na pH 3 přidáním kyseliny citrónové, potom extrahována dichlormethanem (4 x 100 ml). Spojené organické vrstvy byly sušeny (síran sodný), zfiltrovány a zakoncentrovány za získání v názvu uvedené sloučeniny (1,373 g, 2,94 mmol, 42 %).

Příklad Vlil

Syntéza 3,4-isopropylidenprolinolu

Krok I

Cyklopropanační reakce (Tetrahedron Lett. 1993, 34(16) 2691 a 2695).

J ^8.

K míchanému roztoku isopropyltrifenylfosfoniumjodidu (4,14 g, 9,58 mmol) v tetrahydrofuranu (60 ml) bylo při 0 °C přidáno nbutyllithium (1,6M v hexanech, 5,64 ml, 9,02 mmol) v průběhu 5 min.

io Po 30 min byl přidán roztok enamidu ((5R,7S)-5-fenyl-5,6,7,7a-tetrahydro-6-oxapyrrolyzin-3-onu) (1,206 g, 6,0 mmol) (viz J. Org. Chem. 1999, 64(2), 547, kde je popsána syntéza enamidového výchozího materiálu) v tetrahydrofuranu (40 ml) v průběhu 10 min. Po - 10 min přidávání byla chladicí lázeň odstraněna a reakční směs byla míchána při teplotě laboratoře 4 hod. Reakční směs byla vlita do vody (400 ml) a extrahována diethyletherem (400 ml) a ethylacetátem (2 x 400 ml). Spojené organické extrakty byly sušeny síranem sodným, zfiltrovány a zakoncentrovány za získání požadovaného surového produktu. Zbytek byl čištěn bleskovou chromatografií s elucí směsí 3 :

₂₀ 5 : 2 ethylacetát/hexany/methylenchlorid, za získání čistého cyklopropanovaného produktu (750 mg, 3,08 mmol, 51 %).

Krok 2

Syntéza 3,4-isopropylidenprolinol-P[3,4-(diMe-cyklopropvl)1-alkoholu) (J. Pro. Chem. (1999) 64(2), 3301

: '-:ι96 < ’ ······· ·· ···· ·· ··

Směs produktu získaného v kroku 1 výše (1,23 g, 5,06 mmol) a lithiumaluminumhydridu (1,0M v THF, 15 ml, 15 mmol) byla zahřívána pod zpětným chladičem 5 hod. Po ochlazení na 0 °C byl zbytek aluminumhydridu opatrně odstraněn přidáváním nasyceného vodného roztoku síranu sodného (1,5 ml) po kapkách v průběhu 15 min. Směs byla zředěna ethylacetátem (40 ml) a potom zfiltrována přes celit. Filtrát byl sušen síranem sodným, zfiltrován a zakoncentrován za získání surového N-benzylaminoalkoholu (1,25 g), který byl převeden do dalšího kroku bez dalšího čištění. Roztok surového Nbenzylaminoalkoholu (1,25 g, 5,06 mmol) v 1 : 1 kyselina octová/ethylacetát (30 ml) s 10% Pd/C (1 g) byl hydrogenován při 50 psi (345 kPa) 16 hod s použitím Parrova hydrogenačního přístroje. Reakční směs byla zfiltrována pro odstranění katalyzátoru na uhlí a filtrát byl zakoncentrován. Zbytek byl rozpuštěn ve vodě (30 ml) a pH bylo nastaveno na 13 50% NaOH. Směs byla extrahována etherem (3 x 60 ml). Spojené extrakty byly sušeny síranem sodným, zfiltrovány a zakoncentrovány za získání surového aminoalkoholu (485 mg, 3,43 mmol). Tento materiál byl převeden do dalšího kroku bez dalšího čištění.

Příklad IX

Syntéza kyseliny iBoc-G(Chx)-Pro(3,4-isopropyliden)-karboxvlové

Krok 1 >-•200·-........

ίο

Κ roztoku komerčně dostupného hydrochloridu cyklohexylglycinu (15 g 77,4 mmol) v acetonitrilu (320 ml) a vodě (320 ml) byl přidán uhličitan draselný. K čirému roztoku byl přidán isobutylchloroformat ₍₁₁ t _ml, gs,t mmol) v průběhu 15 min a reakční směs byla michana podobu 17 hod. Acetonitril byl odstraněn za sníženého tlaku a zbývající vodná vrstva byla extrahována dvakrát etherem (100 ml). Vodná vrstva byla potom okyselena na pH 1 6N kyselinou chlorovodíkovou a extrahována dichlormethanem (3 x 300 ml). Organická vrstva byla sušena nad síranem sodným, zf.ltrovana a zakoncentrována, za získání 18,64 g (94%) produktu jako bíle pevne látky.

Krok 2

S^éza^jsob^^ (iBoc-GChx)-P(3,4-diMe-cyklopropyl)l-QHl

a) Vazebná reakce • · « · · ····

......-· 20 r-........

K roztoku iBoc-G(Chx)-OH (890 mg, 3,45 mmol) v acetonitrilu (20 ml) byl přidán HATU (1,33 g, 3,5 mmol), HOAt (476 mg, 3,5 g) a potom diisopropylethylamin (2,5 ml, 14 mmol). Po 2 min byl přidán 3,4-isopropylidenprolinol (485 mg, 3,43 mmol) a reakční směs byla 5 míchána přes noc. Byl přidán nasycený vodný hydrogenuhličitan sodný a potom byla směs extrahována etherem a ethylacetátem. Spojené organické vrstvy byly sušeny, zfiltrovány a zakoncentrovány. Zbytek byl čištěn bleskovou chromatografií s elucí směsí 1 : 1 ethylacetát/hexany za získání čistého dipeptidového alkoholu iBocio G(Chx)-3,4-isopropylidenprolinolu (870 mg, 2,3 mmol, 67 %).

b) Krok Jonesovy oxidace .

K roztoku dipeptidového alkoholu iBoc-G(Chx)-3,4isopropylidenprolinolu (100 mg, 0,26 mmol) v acetonu (2 ml) míchanému při 0 °C bylo přidáno Jonesovo činidlo (300 μΐ) po kapkách 15 v průběhu 5 min [Jonesovo činidlo: připraveno z oxidu chromitého (13,4 g) a koncentrované kyseliny sírové (11,5 ml) zředěné vodou na celkový objem 50 ml.] Po míchání při 0 °C 3 hod byl přidán isopropanol (500 μΙ) a míchání pokračovalo dalších 10 min. Reakcm směs byla zředěna vodou (20 ml) a extrahována ethylacetátem (3 x 70 20 ml). Spojené organické vrstvy byly sušeny, zfiltrovány a zakoncentrovány za získání dipeptidu iBoc-G(Chx)-3,4isopropylidenprolinu (100 mg, 0,25 mmol, 96 %).

Příklad X

Syntéza N-Cbz-3,4-methanoprolinu

Krok 1

Syntéza N-benzyl-3,4-methanoprolinolu

a

Směs výchozího benzylidenu (J. Org. Chem. 1999, 64(2), 547) (4,6 g, 21,4 mmol) a lithiumaluminumhydridu (1,0M v THF, 64 ml, 64 mmol) byla vařena pod zpětným chladičem 5 hod. Po ochlazení na 0 °C byl zbylý aluminumhydrid· opatrně rozložen přidáváním po kapkách nasyceného vodného síranu sodného (5 ml) v průběhů 15 min. Směs byla zředěna ethylacetátem (200 ml) a potom zfiltrována přes' celit. Filtrát byl sušen síranem sodným, zfiltrován a zakoncentrován za získání surového N-benzylaminoalkoholu (3,45 g), který byl převeden do příštího kroku bez dalšího čištění.

Krok 2

Syntéza N-benzyloxykarbonyl-3.4-methanoprolinolu (CBz-P(3,4-C±Í2k ol

Roztok surového N-benzylaminoalkoholu (3 g, 14,76 mmol) v methanolu (120 ml) a koncentrované HCl (1,5 ml) s 10% Pd/C 25 (300 mg) byl hydrogenován při 50 psi (345 kPa) 16 hod. Reakční směs byla zfiltrována pro odstranění katalyzátoru na uhlí a filtrát byl zakoncentrován. Zbytek byl rozpuštěn ve směsi voda/dioxan (100 ml) a byl přidán diisopropylethylamin (3,2 ml). Byl přidán ••-203 - ·· benzylchlorformát (2,76 ml, 16,2 mmol) a reakční směs byla míchána přes noc. Reakční směs byla zakoncentrována, rozpuštěna v 1M HCI (100 ml) a extrahována ethylacetátem (3 x 200 ml). Spojené organické vrstvy byly sušeny síranem hořečnatým, zfiltrovány a zakoncentrovány. Zbytek byl čištěn bleskovou chromatografií s použitím směsi 1 3 ethylacetát/hexany za získání N-Cbz-3,4methanoprolinolu (2,4 g).

Krok 3 ₁₀ Syntéza N-benzvloxvkarbonyl-3,4-methanoprolinu (CBz-P(3,4-CH2k

-OH

K roztoku N-Cbz-3,4-methanoprolinolu (2,2 g, 8,90 mmol) v acetonu (68 ml) míchanému při 0 °C bylo přidáno Jonesovo činidlo (6,6 ml) po kapkách v průběhu 5 min. [Jonesovo činidlo: připraveno z oxidu chromitého (13,4 g) a koncentrované kyseliny sírové (11,5 ml) 20 zředěné vodou na celkový objem 50 ml.] Po míchání při 0 °C 3 hod byl přidán isopropanol (11 ml) a míchání pokračovalo ještě 10 min. Reakční směs byla zředěna vodou (400 ml) a extrahována ethylacetátem (3 x 500 ml). Spojené organické vrstvy byly sušeny nad síranem hořečnatým, zfiltrovány a zakoncentrovány za poskytnutí N25 Cbz-3,4-methanoprolinu (2,25 g, 96 %).

• · · · · · · ••-Ζϋ4- ·’ ·’

Ο

Syntéza v názvu uvedené sloučeniny byla prováděna postupem podle Marinozzi, M.; Nataini, B.; Ni, Μ. H.; Costantino, G.; Pellicciari R., II Farmaco (1995) 50(5), 327 - 331.

Příklad XII

Syntéza kyseliny Boc-3-morfolinkarboxylové

Syntéza v názvu uvedené sloučeniny byla prováděna postupem podle Kogami Ϋ. Okawa, Κ.,-SuW. Chem. Soc. Jpn. (1987) 60, 2963 2965.

Příklad XIII

Syntéza N-terc-butoxykarbonyl^-aza-SS-hydroxykarbony^X^

2U5 - Roztok surového 2-aza-2-(1-fenylethyl)-3S-methoxykarbonyl-[2,2,2]bicyklookt-5-enu (10 mmol) (Tetrahedron (1992) 48(44) 9707

9718) a 10% Pd na uhlí (1 g) v methanolu (30 ml) byl okyselen 12N

HCI, potom hydrogenován při 50 psi (345 kPa) 16 hod s použitím Parrova hydrogenačního přístroje. Reakční směs byla zfiltrována pro odstranění katalyzátoru na uhlí filtrát byl zakoncentrován. Zbytek byl rozpuštěn v koncentrované HCI a míchán přes noc. Roztok byl io zakoncentrován a znovu rozpuštěn v acetonitrilu (50 ml). Byly přidány diisopropylethylamin (3,5 ml) a di-terc-butyldikarbonát (1 g). Reakční směs byla míchána po dobu 24 hod a potom zakoncentrována. Zbytek byl rozpuštěn v CH₂CI₂ a 5% vodné kyselině sírové. Reakční směs byla extrahována CH₂CI₂ a spojené organické vrstvy byly . zakoncentrovány. Zbytek býl rozpuštěn v 10% nasyceném hydrogenuhličitanu sodném, promyt diethyletherem (2 x) a okyselen 5% vodnou kyselinou sírovou. Vodná vrstva byla extrahována ethylacetátem (2 x). Spojené ethylacetátové vrstvy byly sušeny, zfiltrovány a zakoncentrovány za získání N-terc-butoxykarbonyl-2-aza20 -3S-hydroxykarbonyl-[2,2,2]-bicyklooktanu (650 mg).

Příklad XIV

Syntéza isobutvloxvkarbonylcvklohexylqlvcyl-4,4-dimethvlprolinu (Βο<>

-G(Chx)-P(4,4-dimethyl)-OH)

**-2ϋβ - ··

Krok I

Syntéza iBoc-G(Chx)-P(4,4-dimethyl)-OMe . Λ , O N Π V .ΟΜθ ⁵ i η II

I ⁰ J o

K roztoku iBoc-G(Chx)-OH (příklad IX, krok 1) (377 mg, 1,95 mmol) v acetonitrilu (7 ml) byly postupně přidány HCI.HN-Pro(4,4-dimethyl)OMe (příklad l, krok 6) (377 mg, 1,95 mmol), N₁₀ -hydroxybenzotriazol (239 mg, 1,75 mmol), TBTU (845 mg, 2,63 mmol) a diisopropylethylamin (1,35 ml, 7,8 mmol). Reakční směs byla míchána při teplotě laboratoře 18 hod. Reakční směs byla zakoncentrována a zbytek byl rozpuštěn v ethylacetátu. Organická - vrstva byla promyta dvakrát 10 ml částmi nasyceného roztoku ₁₅ hydrogenuhličitanu sodného, 1N roztokem kyseliny chlorovodíkové a roztokem soli. Organická vrstva byla sušena nad síranem sodným, zfiltrována a zakoncentrována na bílou pevnou látku (612 mg, 79 %).

Krok 2

Syntéza iBoc-G(Chx)-P(4,4-dimethyl)-OH

Methylester získaný v kroku 1 výše (612 mg, 1,54 mmol) v methanolu (6 ml) byl saponifikován v přítomnosti 2M hydroxidu lithného (1,16 ml) 3 hod. Methanol byl odsát za sníženého tlaku a * · · · · ····

.........-2V7- ” zbytek byl zředěn ethylacetátem a okyselen na pH 2 1N kyselinou chlorovodíkovou. Vrstvy byly odděleny a organická vrstva byla promyta vodou a roztokem soli, sušena nad síranem sodným, zfiltrována a zakoncentrována.

Příklad XV

Syntéza dimethylamidu L-fenylglycinu

Krok 1

Syntéza dimethylamidu N-benzyloxykarbonyl-L-fenylglycinu (CBz-Phg₂

-NMe^

N-benzyloxykarbonyl-L-fenylglycin (25 g, 88 mmol) byl rozpuštěn v THF (800 ml) a ochlazen na -10 °C. Byly přidány N-methylmorfolin (9,7 ml, 88 mmol) a isobutylchloroformát (11,4 ml, 88,0 mmol) a směs byla ponechána míchat 1 min. Byl přidán dimethylamin (100 ml, 2M v THF) a reakční směs byla ponechána ohřát na laboratorní teplotu.

Směs byla zfiltrována a filtrát byl zakoncentrován ve vakuu za získání dimethylamidu N-benzyloxykarbonyl-L-fenylglycinu (32,5 g) jako žlutého oleje.

• · · · · · · · · · ·· · · · ··· ·

....... “20&- ·· ··

Krok 2

Syntéza dimethvlamidu L-fenylglycinu (H-Phq-NMezl

Dimethylamid N-Benzyloxykarbonyl-L-fenylglycinu (32,5 g) o získaný výše byl rozpuštěn y methanolu (750 ml) a bylo přidáno 10% paladium na aktivním uhlí (3,3 g). Tato směs byla hydrogenovana v Patrové přístroji při 35 psi (241 kPa) 2 hod. Reakíní směs byla zfiltrována a rozpouštědlo bylo odstraněno ve vakuu a zbytek rekrystalizován ze směsi methanol-hexany za z.skam ,₅ fenylglycindimethylamidu (26 g) jako bělavé pevné látky, Enantiomerm přebytek tohoto materiálu byl zjištěn >99 % analýzou HPLC 2,3,4,6-tetra-O-acetylglukopyranosylthioisokyanátového derivátu.

Příklad XVI

Syntéza (l-methylcvklohexyljglvcinu

-methyl-1 -hvdroxymethvlcyklohexan ·· · · · ··«·

........:709-- - ··

OH

K roztoku 1-methyl-1-hydroxykarbonylcyklohexanu (10 g, ₅ 70 mmol) v tetrahydrofuranu (300 ml) byl při 0 °C přidán 1M diboran v tetrahydrofuranu (200 ml, 200 mmol) v průběhu 90 min. Chladicí lázeň byla odstraněna a reakční směs byla míchána při teplote laboratoře dva dny. Zbývající boran byl rozložen pomalým přidáváním nasyceného hydrogensíranu sodného (10 ml) v průběhu 90 min za w chlazení. Byl přidán další hydrogensíran sodný (200 ml) a po 20 min míchání byla vodná vrstva odstraněna. Organická vrstva byla promyta vodou a nasyceným chloridem sodným, sušena, zfiltrována a zakoncentrována. Zbytek byl čištěn bleskovou chromatografií s použitím 20% diethyletheru v hexanech za poskytnuti 1-methyl-1i5 hýdroxymethylcyklohexanu (6,17 g, 48 mmol, 69 %).

Krok 2

1-Methylcvklohexvlkarboxaldehyd.

K roztoku 1-methyl-1-hydroxymethylcyklohexanu (6,17 g, 48 mmol) a triethylaminu (20,1 ml, 144 mmol) v dichlormethanu (150 ml) byl při 0 °C přidán roztok komplexu pyridin - oxid sírový (22,9 g, 144 mmol) v dimethylsulfoxidu (150 ml) v průběhu 15 min. Chladicí lázeň byla ponechána ohřívat na laboratorní teplotu dve hodiny, a potom byla reakční směs vlita do roztoku soli s ledem (400 ml). Vrstvy byly odděleny a vodná vrstva byla extrahovaná ♦ · · · · · · ·· ·· dichlormethanem (200 ml). Spojené organické vrstvy byly zredeny hexany (600 ml) a promyty 1M HCI (2 x 150 ml), nasyceným chloridem sodným (2 x 100 ml), sušeny, zfiltrovány a zakoncentrovány. Zbytek byl čištěn bleskovou chromatografií za získání 1-methylcyklo5 -hexylkarboxaldehydu (1,77 g, 13,8 mmol, 29 %).

Krok 3

Syntéza N-formyl-N-qlvkosvl-l-methylcyklohexyl-terc-butylamidu

Syntéza 2,3,4-tri-O-pivaloyl-D-arabinosylaminu byla prováděná podle zveřejněného postupu (Kunz. H.; Pfrengle, W.; Ruck, K.; Wilfried, S., Syntes/s (1991) 1039 - 1042).

,₀ k roztoku 1-methylcyklohexylkarboxaldehydu (1,17 g,

8,34 mmol), 2,3,4-tri-O-pivaloyl-D-arabinosylaminu (8,3 g, 20,7 mmol), kyseliny mravenčí (850 μΙ, 22,2 mmol) a terc-butylisokyamdu (2,4 ml, 21,2 mmol) v tetrahydrofuranu (170 ml) byl při -30 °C přidán 0.5M chlorid zinečnatý v tetrahydrofuranu (41 ml, 20,57 mmol). Roztok byl míchán při -20 °C 3 dny, potom zakoncentrován. Zbytek byl zreden CH₂CI₂ (500 ml), promyt nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (2 x 500 ml), vodou (500 ml). Organická vrstva byla sušena, zfiltrována a zakoncentrována za získání čirého oleje. Blesková chromatografie (20% ethylacetát v hexanech) poskytla čistý produkt 30 (4,3 g, 6,6 mmol, 33 %).

• · · · · · ♦ ··- 211 - ♦· ··

Krok 4

Syntéza (1 -methylcyklohexyl)qlycinu

Roztok produktu získaného v kroku 3 výše (4,3 g, 6,6 mmol) v dichlormethanu (30 ml) a nasyceného bezvodého methanolického io HCI (30 ml) byl míchán přes noc. Roztok byl zakoncentrován a zbytek byl rozpuštěn ve vodě (100 ml) a promyt pentanem (2 x 100 ml). Vodná vrstva byla zakoncentrována a zbytek byl rozpuštěn v 6N HCI (50 ml) a vařen pod zpětným chladičem 30 hod. Roztok byl zakoncentrován za získání surového hydrochloridu (1-methylcyklo15 -hexyl)glycinu (790 mg, 3,82 mmol, 58 %).

Příklad XVII

Syntéza (4,4-dimethylcyklohexyl)qlycinu

O

Krok 1

Syntéza 4,4-dimethylcyklohexanonu

’-2Ϊ2*_Směs 4,4-dimethylcyklohex-2-en-1-onu (12 ml, 91,2 mmol) a 10% Pd na uhlí typu Degussa (2 g) byla hydrogenována při 40 ps, (276 kPa) 18 hod. Směs byla zfiltrována a zakoncentrována (’H NMR ukázala směs ketonu a alkoholu v poměru 5 : 3). Směs byla 5 rozpuštěna v acetonu (400 ml) a ochlazena na 0 C. Bylo přidáno Jonesovo činidlo (40 ml) v průběhu 30 min a chladicí lázeň byla odstraněna. Po 2 dnech byl přebytek acetonu odpařen a získaný zbytek byl rozpuštěn ve vodě a diethyletheru. Etherová vrstva byla promývána vodou až do odstranění zbarvení, sušena, zfiltrována a ,o zakoncentrována za získání 4,4-dimethylcyklohexanonu (7,4 g, 58,6 mmol, 64 %).

Krok 2

Syntéza methvlenoletheru 4,4-dimethvlcvklohexylkarboxaldehydu·.

K roztoku methoxymethyltrifenylfošfoniumchloridu (8,6 g) 2o v tetrahydrofuranu (125 ml) bylo při 0 C přidáno n-butyllithium (1,6M v hexanech, 14,3 ml) v průběhu 10 min. Po 30 min byla reakční směs ochlazena na -78 C a byl přidán roztok 4,4-dimethylcyklohexanonu (2,45 g. 19,1 mmol) v tetrahydrofuranu (50 ml) byl přidán v průběhu 20 min. Po 1 hod byla chladicí lázeň odstraněna a reakční směs byla ₂₅ pomalu ohřátá na 0 °C. Reakční směs byla zředěna nasyceným chloridem amonným (50 ml), ethylacetátem (100 ml) a hexany (100 ml). Organická vrstva byla promyta vodou a roztokem soli, sušena, zfiltrována a zakoncentrována. Zbytek byl míchán s hexany (70 ml) 10 min a zfiltrován. Filtrát byl zakoncentrován a čištěn ₃₀ chromatografií s použitím 25% ethylacetátu v hexanech za poskytnutí ν názvu uvedené sloučeniny (1,925 g, 12,5 mmol, 65 %).

·- Σ’ΐΤKrok 3

4,4-Dimethvlcyklohexvlkarboxaldehvd

Roztok methylenoletheru 4,4-dimethylcyklohexylkarboxaldehydu io (1,925 g, 12,5 mmol) (krok II výše), tetrahydrofuranu (100 ml) a 6M HCI (20 ml) byl míchán při teplotě laboratoře 4 hod. Reakční směs byla zředěna hexany, diethyletherem, roztokem soli a vodou. Organická vrstva byla sušena, zfiitrována a zakoncentrována za získání 4,4-dimethylcyklohexylkarboxaldehydu (1,0 g, 7,1 mmol, 15 57 %).

Krok 4

Syntéza N-formvl-N-qlvkosyl-4,4-dimethvlcvklohexvl-terc-butvlamidu

K roztoku 4,4-dimethylcyklohexylkarboxaldehydu (1,17 g, 8,34 mmol), 2,3,4-tri-O-pivaloyl-a-D-arabinosylaminu (3,43 g, 8,55 mmol), kyseliny mravenčí (350 pl, 9,17 mmol) a tercbutylisokyanidu (990 μΙ, 8,76 mmol) v THF (70 ml) byl při -30 °C přidán 3o 0,5M chlorid zinečnatý v tetrahydrofuranu (17 ml, 8,5 mmol). Roztok byl míchán při -20 °C 2 dny, potom zakoncentrován. Zbytek byl zředěn dichlormethanemem (200 ml), promyt nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (2 x 200 ml), vodou (200 ml). Organická vrstva byla sušena, zfiltrována a zakoncentrována za získání čirého 5 oleje. Blesková chromatografie (20% ethylacetát v hexanech) poskytla čistý produkt (2,1 g, 3,3 mmol, 39 %).

Krok 5

Syntéza (4,4-dimethylcvklohexyl)qlvcinu ίο ,θ _

OPiv^

CIH₃N„,₍

OPiv

OPiv ₁₅ Roztok Ugiho produktu získaného v kroku 4 výše (2,1 g, ,3 mmol) v dichlormethanu (20 ml) a nasyceného bezvodého methanolického HCI (20 ml) byl míchán přes noc. Roztok byl zakoncentrován a zbytek byl rozpuštěn ve vodě (100 ml) a promyt pentanem (2 x 100 ml). Vodná vrstva byla zakoncentrována a zbytek byl rozpuštěn v 6N HCI (40 ml) a vařen pod zpětným chladičem 30 hod. Roztok byl zakoncentrován za získání surového hydrochloridu (V -methylcyklohexyl)glycinu (300 mg, 1,36 mmol, 41 %).

Příklad XVIII

Syntéza Boc-nVal-(CHOH)-Gly-OH

Boc-HN ηΚ Ν'

Αι ι Η

....... -’2Ϊ£*-

Krok 1

Příprava Boc-norvalinolu

O

K roztoku Boc-norvalinu (25,0 g, 0,115 mol) v tetrahydrofuranu (461 ml), ochlazenému na 0 °C, byl po kapkách přidán komplex boran/tetrahydrofuran (461 ml 1,0M roztok v tetrahydrofuranu). Po io 1 hod při 0 °C byl roztok ohřát na laboratorní teplotu v průběhu 1,5 hod. TLC ukázala, že reakce je ukončena. Byl přidán methanol pro * zastavení reakce. Roztok byl zakoncentrován za získání v názvu ' uvedené sloučeniny (22,56 g, 96 %) jako pěnovitého sirupu. TLC produktů ukázala uspokojivou čistotu. R_f = 0,34 (40% ethylacetát/hexany).

Krok 2

Příprava Boc-norvalinalu

ZCl₂CHCO₂H, edc oh -----------toluen, DMSO

K Boc-norvalinolu (7,77 g, 38 mmol) v bezvodém dimethyl25 -sulfoxidu (153 ml) a toluenu (153 ml) byl přidán EDC (73,32 g, 382 mmol). Potom byl roztok ochlazen na 0 °C, po kapkách byla přidána kyselina dichloroctová (15,8 ml, 191 mmol). Když bylo přidávání ukončeno byla reakční směs míchána po dobu 15 min. Roztok byl ponechán ohřát na laboratorní teplotu v průběhu 2 hod. 30 Reakční směs byla zakoncentrována pro odstranění toluenu, potom byla rozpuštěna v ethylacetátu. Roztok byl postupně promyt 1N hydrogensíranem sodným, nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a roztokem soli, sušen nad síranem sodným, zfiltrován a zakoncentrován, za získání surového Boc-norvalinalu, který byl ihned použit v dalším kroku. TLC R_f = 0,84 (40% ethylacetát/hexany).

•-2W- ··

Krok 3

Syntéza Boc-nVal-(CHOH)-Gly-OEt

CNCH₂CO₂Et, pyridin —-------------> TFA, dichlormethan

K roztoku surového Boc-norvalinalu (4,18 g, 20,77. mmol) v dichlormethanu (83 ml) byl přidán ethylisokyanoacetát (2,72 ml, 24,93 mmol) a pyridin (6,72 ml, 83,09 mmol). Potom byl roztok < ochlazen na 0 °C, po kapkách byla přidána kyselina trifluoroctová (4,15 ml, 41,54 mmol). Po 1 hod míchání byl roztok míchán při teplotě laboratoře 18 hod, přičemž rozpouštědlo bylo ponecháno odpařit za laboratorních podmínek z reakční směsi z nezakryté nádoby. Reakční směs byla zakoncentrována, potom rozpuštěna v ethylacetátu. Roztok byl postupně promyt 1N hydrogensíranem sodným, nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a roztokem soli, sušen nad síranem sodným, zfiltrován a potom zakoncentrován. Zbytek byl čištěn bleskovou chromatografií s elucí směsí 20% : 40% ethylacetát/hexany, za získání 2,8 g v názvu uvedené sloučeniny jako žlutého sirupu. Hmotnostní spektroskopie s nízkým rozlišením potvrdila přítomnost požadovaného produktu (MH 333).

........-2ΪΓ- ’··”··’

Krok 4

Syntéza Boc-nVal-(CHOH)-Gly-OH

Získaný produkt (Boc-nVal-(CHOH)-Gly-OEt) (1,52 g, 4,70 mmol) rozpuštěný v ethanolu (23 ml) byl zmýdelňován 1N io hydroxidem lithným (18,81 ml) dvě hodiny při teplotě laboratoře.

Reakční směs byla okyselena na pH = 2 iontoměničovou pryskyřicí Dowex® 50 WX8, míchána 20 min a potom zfiltrována. Pryskyřice byla důkladně promyta ethanolem a vodou a spojené filtráty byly zakoncentrovány na bílou pěnu (0,48 g, 33 %).

Příklad XVIV

Syntéza (2R,3S,4S,5S)-terc-butyl-N-CBz-3-amino-2-hydroxy-4,5₂ -methylenhexanoátu

Krok 1

K roztoku terc-butyldiethylfosfonoacetátu (4,7 ml, 20 mmol) rozpuštěného v THF (50 ml) bylo při -78 °C přidáno 1,6M n-butyl-

-lithium v hexanech (12,4 ml). Po 30 min byl přidán (1S,2S)-2-methylcyklopropylkarboxaldehyd (1 g, 12 mmol) (Barrett, A. G. M.; Doubleday, W. W.; Kasdorf, K.; Tustin, G. J., J. Org. Chem. (1996) 61, 3280) v diethyletheru (100 ml), v průběhu 10 min. Reakční směs byla 5 zahřívána na 0 °C 2 hod a na 6 °C 12 hod. Reakce byla ukončena nasyceným chloridem amonným (20 ml) a organická vrstva byla oddělena, promyta 50 ml roztokem soli a sušena nad síranem sodným, zfiltrována a zakoncentrována, za získání 3,5 g čirého oleje. Blesková chromatografie (20% ethylacetát v hexanech) poskytla čistý io nenasycený terc-butylester (1,4 g).

Krok 2

K roztoku benzylkarbamátu (3,55 g, 23,5 mmol) v n-propanolu (24 ml) byl přidán roztok hydroxidu sodného (900 mg, 22,7 mmol) ve vodě (48 ml), a potom terc-butylhypochlorit (2,57 ml, 22,7 mmol). Po 20 15 min byla reakční směs ochlazena na 0 °C a byl přidán (DHQ)₂PHAL (350 mg, 0,45 mmol) v n-propanolu (24 ml), a potom nenasycený tercbutylester (1,4 g) z kroku výše, v n-propanolu (48 ml). Nakonec byl přidán osman draselný (110 mg, 0,30 mmol) ve vodě (2 ml) a roztok se rychle zbarvil tmavě zeleně, přičemž zbarvení přetrvalo 4 hod. Po 6 25 hod byl přidán nasycený síran sodný (50 ml) a směs byla extrahována ethylacetátem (2 x 50 ml). Spojené organické vrstvy byly promyty roztokem soli (30 ml), sušeny nad síranem sodným, zfiltrovány a zakoncentrovány. Blesková chromatografie s 20% ethylacetátem v hexanech poskytla požadovaný terc-butylester s aminovou skupinou 30 chráněnou cBz jako bílou pevnou látku (316 mg).

Směs amino-terc-butylesteru chráněného CBz (316 mg, 0,9 mmol) a 32 mg 10% paladia na uhlí v 9 ml methanolu byla hydrogenována 8 hod. Směs byla zfiltrována a zakoncentrována, za získání volného aminu jako čirého oleje (195 mg).

Příklad XX

Syntéza 1 R.2-dimethylpropylchloroformátu

.Ke komerčně dostupnému 2R-hydroxy-3-methylbutanu (410 mg, 4,65 mmol) byl přidán roztok 20 % fosgenu v toluenu (1 ml, 2 mmol). Roztok byl míchán po dobu 6 hod pro vytvoření chloroformátu (2 mmol), který byl ponechán reagovat ihned přímo s požadovaným aminem. S-isomer byl syntetizován stejným postupem.

II) Příklad syntézy inhibitorů HCV v roztoku

Příklad XXI

Syntéza iBoc-G(Chx)-Pro(4,4-dimethyl)-Leu(CO)-Gly-Phq-dimethyl·

-amidu v roztoku

Krok 1

Syntéza terc-butyloxykarbonylleucinalu (Boc-Leu-CHO)

dichlormethan, dimethylsulfoxid --> pyridin . SO₃

K roztoku komerčně dostupného (Advanced Chem Tech) Boc-L-leucinolu (0,78 g, 3,6 mmol) v bezvodém dichlormethanu (17,5 ml) byl 20 přidán triethylamin (2 ml, 14,36 mmol) a směs byla ochlazena na 0 °C. Byl přidán dimethylsulfoxid (17,5 ml) a potom komplex pyridin - oxid sírový (2,3 g, 14,36 mmol) a reakční směs byla míchána po dobu dvou hodin. TLC ve směsi 1 : 1 ethylacetát : hexany povrdila ukončení reakce. Reakční směs byla zakoncentrována a zbytek zředen 25 ethylacetátem. Ethylacetátová vrstva byla promyta 1M kyselinou chlorovodíkovou (2 x 75 ml) a potom nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (2 x 75 ml) a roztokem soli (75 ml). Organická vrstva byla sušena (síran sodný), zfiltrována a zakoncentrována, za získání 775 mg produktu.

- 221 Krok 2

Syntéza ethylesteru Boc-2-hydroxy-3-amino-5-methylhexanoYlqlYCinu (Boc-Leu-HOH)-Gly-OEt)

I . íO kyselina trifluoroctova 1 li _ | pyridin, CNCH₂CO₂Et ,ζΦ/Η---+ nH ^H O

Boc-HN j] dichlormethan

O ίο K roztoku Boc-Leucinaldehydu (0,77 g, 3,59 mmol) v bezvodem dichlormethanu (24 ml) byl přidán bezvodý pyridin (1,16 ml, 14,36 mmol) a ethylisokyanoacetát (0,4 ml, 4,66 mmol). Reakční směs byla ochlazena na 0 °C a v průběhu dvou minut byla přidána kyselina trifluoroctová (0,55 ml, 7/18 mmol). Reakční směs byla uzavřena ₁₅ víčkem a míchána při 4 °C čtyři dny, a při teplotě laboratoře jeden den. Reakční směs byla zředěna dichlormethanem (350 ml) a dvakrát promyta vždy 75 ml 1M kyseliny chlorovodíkové, nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a roztokem soli. Organická vrstva byla sušena, zfiltrována a zakoncentrována. Získaný zbytek byl cisten ₂₀ bleskovou chromatografií na koloně 2 x 6 (51 x 152 mm) silikagelu s použitím 10% ethylacetátu v hexanech (800 ml) a potom 1 : 1 ethylacetátem v hexanech (800 ml). Frakce odpovídající produktu byly spojeny a zakoncentrovány za získání 980 mg (79 %) produktu.

- 222 K roztoku Boc-Leu-(CHOH)-Gly-OEt (0,98 g, 2,83 mmol) v ethanolu (11,3 ml) byl přidán 2M hydroxid lithný (4,25 ml) a reakční směs byla míchána po dobu pěti hodin při teplotě laboratoře. Ethanol byl odstraněn za sníženého tlaku a vodná vrstva byla zředěna ethylacetátem. Organická vrstva byla promyta 1M kyselinou chlorovodíkovou a potom roztokem soli, sušena, zfiltrována a zakoncentrována, za získání 775 mg (86 %) produktu jako bílé pevné látky.

Krok 4

Syntéza Boc-Leu-(CHOH)-Glv-Phg-dimethylamidu

K roztoku Boc-Leu-(CHOH)-Gly-OH (0,37 g, 1,18 mmol) v acetonitrilu (23 ml) byly postupně přidány fenylglycindimethylamid (získaný v příkladu XV, krok 2), EDO (0,34 g, 1,76 mmol), Nhydroxybenzotriazol (HOBt) (0,18 g, 1,18 mmol) a diisopropylethylamin (DIEA) (0,82 ml, 4,7 mmol), a reakční směs byla míchána po dobu 18 hod při teplotě laboratoře. Reakční směs byla zakoncentrována a zbytek byl zředěn ethylacetátem a postupně promyt dvěma 75 ml podíly 1M kyseliny chlorovodíkové, nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a roztokem soli. Organická vrstva byla potom sušena, zfiltrována a zakoncentrována. Surový produkt byl čištěn bleskovou chromatografií na koloně silikagelu 2 x 6 (51 x 152 mm) s použitím směsi 4 : 1 ethylacetát : hexany (700 ml) a potom ethylacetátem (1000 ml) a 10% methanolem v dichlormethanu (600 ml). Frakce odpovídající produktu byly spojeny a zakoncentrovány, za získání 445 mg (80 %) bílé pevné látky.

Syntéza trifluoracetátové soli H-Leu-(CHOH)-Glv-Phg-dimethylamidjj

.........”

Krok 5

K roztoku Boc-Leu-(CHOH)-Gly-Phg-dimethylamidu (70 mg, 0,146 mmol) v dichlormethanu (1 ml) byla přidána kyselina trifluoroctová (1 ml) a reakční směs byla míchána při teplotě laboratoře 1 hod. Reakční směs byla zakoncentrována a převedena do dalšího kroku bez dalšího čištění.

, ;

Krok 6

Syntéza iBoc-G(Chx)-Pro(4,4-dimethyl)-Leu-(CHOH)-Gly-Phg₂

iBoc-G(Chx)-Pro(4,4-diMe)-OH ____________>

TBTU, HOBt, DIEA, acetonitril

K roztoku iBoc-G(Chx)-P(4,4-diMe)-OH (příklad XIV, krok 2) (53 mg, 0,148 mmol) v acetonitrilu (3 ml) byly postupně přidány 30 TFA.2HN-Leu(CHOH)Gly-Phg-NMe₂ (61 mg, 0,148 mmol), N-hydroxy-*^4 -benzotriazol (HOBt) (23 mg, 0,148 mmol), TBTU (71,5 mg,

0,222 mmol a diisopropylethylamin (103 I, 0,593 mmol). Reakční směs byla míchána při teplotě laboratoře 18 hod a zakoncentrována. Zbytek byl rozpuštěn v ethylacetátu a promyt 1M kyselinou chlorovodíkovou (2 x 5 ml), nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (2x5 ml) a roztokem soli (2 x 5. ml). Organická vrstva byla sušena, zfiltrována a zakoncentrována. Produkt (100 mg) byl převeden do dalšího kroku bez dalšího čištění.

io Krok 7

Syntéza Boc-G(Chx)-Pro(4,4-dimethyl)-Leu-(CO)-Gly-Phq-dimethyl·

-amidu

K roztoku iBoc-G(Chx)-Pro(4,4-dimethyl)-Leu-(CHOH)-Gly-Phg-dimethylamidu (30 mg, 0,04 mmol) v dichlormethanu (1 ml) bylo 25 přidáno komerčně dostupné Dess-Martinovo činidlo (Omega Chemical Company Inc.) (67,8 mg, 0,16 mmol) a reakční směs byla míchána pri teplotě laboratoře 90 min. Reakční směs byla zakoncentrována a zbytek byl míchán v 5% thiosíranu sodném. Potom byl zreden dichlormethanem a vrstvy byly odděleny. Organická vrstva byla 30 promyta thiosíranem sodným (4 x 3 ml), a potom vodou a roztokem

- 225 soli. Organická vrstva byla sušena nad síranem sodným, zfiltrována a zakoncentrována. Surový produkt byl rozpuštěn v hexanech a isopropylalkoholu a byl čištěn HPLC na koloně silikatelu Kromasil 5 a normální fází (Fenomenex, 250 x 21,20 mm, velikost pórů 100 A, 5 částice gelu 5 pm) s elucí 30 min gradientem tvořeným 0 až 25% isopropylalkoholem v hexanech (25 ml/min). Frakce odpovídající produktu byly spojeny a zakoncentrovány. Lyofilizace z vody poskytla 6,7 mg bílého prášku. Hmotnostní spektrum s nízkým rozlišením potvrdilo požadovanou hmotnost (MH⁺ = 741,4).

'

III) Syntéza na pevné fázi

Syntéza na pevné fázi je použitelná pro výrobu malých množství některých sloučenin podle vynálezu. Jako je tomu u běžné syntézy peptidů na pevné fázi, reaktory pro syntézu peptidylylketoamidů na 15 pevné fázi jsou tvořeny reaktorovou nádobou, jejíž alespoň jeden povrch je propustný pro rozpouštědlo a rozpuštěná reakční činidla, ale není propustný pro pryskyřici používanou při syntéze se zvolenou velikostí zrna. Mezi tyto reaktory patří skleněné reakční nádoby pro reakce na pevné fázi s fritou ze sintrovaného skla, polypropylenové 20 trubičky nebo kolony opatřené fritami nebo reaktory typu Kans™ firmy Irori Inc., San Diego, CA. Typ zvoleného reaktoru závisí na potřebném objemu pryskyřice pevné fáze a v různých stupních syntézy mohou být použity různé typy reaktorů. V následujících příkladech se bude odkazovat na dále uvedené postupy:

Postup A

Vazebná reakce: K pryskyřici suspendované v N-methyl_________-pyrrolidinu (NMP) (10 až 15 ml/g pryskyřice) byly přidány Fmocaminokyselina (2 ekv.), HOAt (2 ekv.), HATU (2 ekv.) a 30 diisopropylethylamin (4 ekv.). Směs byla ponechána reagovat 4 až ··· ···· ·· ···· ·· ··

- 226 48 hod. Reakční činidla byla odsáta a pryskyřice byla postupně promyta dimethylformamidem, dichlormethanem, methanolem, dichlormethanem a diethyletherem (použito 10 až 15 ml rozpouštědla/g pryskyřice). Pryskyřice byla potom usušena ve vakuu.

Postup B

Odstranění ochranných skupin Fmoc: Pryskyřice chráněná Fmoc byla ponechána reagovat s 20% piperidinem v dimethylformamidu (10 ml činidla/g pryskyřice) 30 min. Činidla byla odsáta a pryskyřice byla postupně promyta dimethylformamidem, dichlormethanem, io methanolem, dichlormethanem a diethyletherem (10 ml rozpouštědla/g pryskyřice).

Postup C

Odstranění ochranné skupiny Boc: Pryskyřice chráněná Boc byla smísena se směsí 1 : 1 dichlormethan a kyselina trifluoroctová 20 až 15 60 min (10 ml rozpouštědla/g pryskyřice). Činidla byla odsáta a pryskyřice byla postupně promyta dichlormethanem, dimethylformamidem, 5% diisopropylethylaminem v dimethyl-formamidu, dimethylformamidem, dichlormethanem a dimethyl-formamidem (10 ml rozpouštědla/g pryskyřice).

Postup D

Hydrolýza semikarbazonu: Pryskyřice byla suspendována ve štěpícím koktejlu (10 ml/g pryskyřice) s obsahem směsi kyselina trifluoroctová : kyselina pyrohroznová : dichlormethan : voda 9:2:2: 1 dvě hodiny. Reakční činidla byla odsáta a postup byl opakován ještě 25 třikrát. Pryskyřice byla postupně promyta dichlormethanem, vodou a dichlormethanem a sušena ve vakuu.

Postup E ^£ρθ_ηί usušený materiál peptid-nVal(CO)-G-O-PAM pryskyřice (50 mg) byl umístěn do nádoby pro HF obsahující malou míchací tyčinku. Jako látka vychytávající radikály byl přidán anisol

- 227 (10% celkového objemu). V přítomnosti kyseliny glutamove a aminokyselin s obsahem cysteinu byly přidány také thioanisol (10 %) a

1,2-ethandithiol (0,2 %). Nádoba pro HF byla potom zavesena do přístroje pro HF (Immuno Dynamics) a systém byl 5 min proplachován dusíkem. Nádoba byla potom ochlazena na -70 °C v lázni suchý led/isopropanol. Po 20 min byl destilován HF pro dosaženi potřebného objemu (10 ml HF/g pryskyřice). Reakce byla ponechána probíhat 1,5 hod 0 °C. Zpracování spočívalo v odstranění veškerého HF pomoci dusíku. Potom byl k pryskyřici přidán dichlormethan a směs byla w míchána po dobu 5 min. Potom byla přidána 20% kyselina octová ve vodě (4 ml). Po 20 min míchání byla pryskyřice zfiltrována s použitím nálevky opatřené fritou a dichlormethan byl odstraněn za smzeneho tlaku. Zbytek a směs byly promyty hexany (2 x) pro odstraněni vychytávacích sloučenin. Mezitím byla pryskyřice namočena do 1 ml is methanolu. Vodná vrstva (20% HOAc) byla přidána zpět k pryskyřici a ³ směs byla míchána 5 min a potom zfiltrována. Methanol byl odstraněn za sníženého tlaku a vodná vrstva byla lyofilizována. Peptid byl potom rozpuštěn v 10 až 25% methanolu (s obsahem 0,1% kyseliny trifluoroctové) a čištěn HPLC s reverzními fázemi.

Příklad XXII

Příklad syntézy na pevné fázi inhibitorů Hep C~ (iRoc-G(Chx)-P(4t

NHSO2Ph)-nV-(CO)-G-G(Ph)-NH2)

- 228 Krok 1

Syntéza Fmoc-nV-(dpsc)-Gly-OH

A) Syntéza allylisokyanoacetátu (kroky a - b níže). a) Syntéza draselné soli kyseliny isokyanoctové

CN

Et

CN

- K⁺

Ethylisokyanoacetát (96,6 ml, 0,88 mol) byl přidán po kapkách ₁₀ ke chlazenému roztoku ethanolu (1,5 I) a hydroxidu draselného (59,52 g, 1,0 mol). Reakční směs byla pomalu ohřátá na laboratorní teplotu. Po dvou hodinách byl vysrážený produkt zfiltrován na skleněné nálevce a promyt několika podíly chlazeného ethanolu. Draselná sůl ’ kyseliny isokyanoctové, která byla získána, byla usušena ve vakuu na is zlatohnědou pevnou látku (99,92 g, 91,8 %).

b) Syntéza allylisokyanoacetátu

K produktu z části a) (99,92 g, 0,81 mol) -rozpuštěnému v acetonitrilu (810 ml) byl přidán allylbromid (92 ml, 1,05 mol). Po zahřívání pod zpětným chladičem 4 hod byl získán tmavý hnědý roztok. Reakční směs byla zakoncentrována a zbytek byl rozpuštěn 25 v etheru (1,5 I) a promyt třikrát vodou (500 ml). Organická vrstva byla sušena, zfiltrována a zakoncentrována na tmavý hnědý sirup. Surový materiál byl čištěn vakuovou destilací při tlaku 7 mm Hg (933 Pa) (98 °C) na čirý olej (78,92 g, 78 %). NMR δ ppm (CDCI₃): 5,9 (m, 1H),

- 229 5,3 (m, 2H), 4,7 (d, 2H), 4,25 (s, 2H).

B) Syntéza 9-fluorenylmethoxvkarbonylnorvalinalu (kroky a - c níže}

a) Syntéza methylesteru 9-fluorenvlmethoxykarbonyl-L-norvali.nu (Fmoc-nVal-OMe)

₁₀ K chlazenému roztoku komerčně dostupného Fmoc-norvalinu (25 g, 73,75 mmol) v bezvodém methanolu (469 ml) byl v průběhu jedné hodiny přidán thionylchlorid (53,76 ml, 737,5 mmol). TLC v ethylacetátu provedená o hodinu později potvrdila ukončeni reakce ^; ₌ q ₈₅) Reakční směs byla zakoncentrována a zbytek byl rozpuštěn v ethylacetátu. Organická vrstva byla promyta několika 200 ml podíly nasyceného hydrogenuhličitanu sodného a potom roztokem soli. Organická vrstva byla sušena, zfiltrovana a zakoncentrována za získání Fmoc-norVal-OMe) jako bílé pevné látky (26,03 g) v kvantitativním výtěžku. NMR δ ppm (CD₃OD): 7,7 (m, 2H), 20 7,6 (m, 2H), 7,4 (m, 2H), 7,3 (m, 2H), 4,3 (m, 2H), 4,1 (m, 2H), 3,7 (s, _3H), 1,7 (m, 1H), 1,6 (m, 1H), 1,4 (m, 2H), 0,95 (t, 3H).

K Fmoc-nVal-OMe (26,03 g, 73,75 mmol) v tetrahydrofuranu ·· · · · · · · ·

........: 2*30·- ·· (123 ml) a methanolu (246 ml) byl přidán chlorid vápenatý (16,37 g,

147,49 mmol). Reakční směs byla ochlazena na 0 °C a v několika částech byl přidán borohydrid sodný (11,16 g, 294,98 mmol).

K získané husté pastě byl přidán methanol (500 ml) a reakční směs byla ponechána míchat při teplotě laboratoře 90 min. TLC ve směsi 2 .

ethylacetát : hexany potvrdila ukončení reakce (R_f = 0,25). Reakce byla ukončena pomalým přidáváním vody (100 ml) při 0 °C. Methanol byl odstraněn za sníženého tlaku a vodná fáze byla zředěna ethylacetátem. Organická vrstva byla promyta vodou (3 x 500 ml), io nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (3 x 500 ml) a roztokem soli (500 ml). Organická vrstva byla sušena nad síranem sodným, zfiltrována a zakoncentrována na bílou pevnou látku (21,70 g, 90,5 %). NMR δ ppm (CD₃OD): 7,8 (m, 2H), 7,7 (m, 2H), 7,4 (m, 2H), 7,3 (m; 2H), 4,3 - 4,5 (m, 2H), 4,2 (m, 1H), 3,6 (s, 1 H), 3,5 (s, 2H), 1,5 15 (m, 1H), 1,3 - 1,4 (m, 3H), 0,99 (m, 3H).

c) Syntéza 9-fluorenylmethoxvkarbonylnorvalinalu (Fmoc-nVal-CHOl

Z OH Fmcc-HN γ

O

K roztoku Fmoc-norValinolu (21,70 g, 66,77 mmol) v dichlor-methanu (668 ml) byl přidán triethylamin (37,23 ml, 267 mmol) a roztok byl ochlazen na 0 °C. K chlazenému roztoku byla pndana 25 suspenze komplexu pyridin - oxid sírový (42,51 g, 267 mmol) v dimethylsulfoxidu (96 ml). Po jedné hodině TLC ve směsi 2 : 3 ethylacetát : hexany potvrdila ukončení reakce. Dichlormethan byl odstraněn za sníženého tlaku a zbytek byl rozpuštěn v ethylacetatu a promyt vodou (2 x 50 ml), 1N nasyceným hydrogensíranem sodným (2 3o x 50 ml), nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (2 x 50 ml) a roztokem soli (50 ml). Organická vrstva byla zakoncentrována za získání bílé pevné látky. Byl předpokládán teoretický výtěžek (21,57 g) a sloučenina byla převedena do dalšího kroku bez dalšího čištěni.

_{5 C)} syntéza trifluoracetátové soli difenylmethylsemikarbazidu (dps_cl (kroky a - b níže),

a) Syntéza Boc-semikarbazid-4-vl-difenylmethanu.

K roztoku karbonyldiimidazolu (16,2 g, 0,10 mol) v dimethyl-formamidu (225 ml) byl přidán roztok t-butylkarbazátu (13,2 g, 0,100 mol) v dimethylformamidu (225 ml) po kapkách v průběhu 30 is min. V průběhu dalších 30 min byl přidán difenylmethylamin (18,3 g, 0,10 mol) 30 min. Reakční směs byla ponechána míchat pn teplote laboratoře 1 hod. Byla přidána voda (10 ml) a směs byla zakoncentrována na přibližně 150 ml za sníženého tlaku. Tento roztok byl vlit do vody (500 ml) a extrahován ethylacetátem (400 ml).

Ethylacetátová fáze byla promyta dvakrát vždy 75 ml 1N HCI, vodou, nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a chloridem sodným, a sušena síranem hořečnatým. Směs byla zfiltrována a roztok byl zakoncentrován za získání 29,5 g (85% výtěžek) bílé pěny. Tento materiál mohl být čištěn rekrystalizací ze směsi ethylacetát/hexan, ale 25 byl dostatečně čistý pro okamžité použití v dalším kroku: teplota tam 142 - 143 °C. ¹H NMR (CDCI3) d 1,45 (s, 9H), 6,10 (dd, 2H), 6,42 (s, 1H), 6,67 (bs, 1H), 7,21 - 7,31 (m, 10H). Analyticky vypočteno pro C19H23N3O3: C, 66,84; H, 6,79; N, 12,31. Nalezeno: C, 66,46; H, 6,75;

N; 12,90.

b) Syntéza trifluoracetátové soli difenylmethylsemikarbazidu (dpscj

Roztok Boc-semikarbazid-4-yl-difenylmethanu (3,43 g, 10 mmol) v dichlormethanu (12,5 ml) byl smísen s 12,5 ml kyseliny trifluoroctove při teplotě laboratoře a míchán 30 min. Roztok byl přidán po kapkách k 75 ml etheru a získaná pevná látka (2,7 g, 80%) byla oddělena filtrací. Teplota tání 182 - 184 °C. ¹H NMR (CD3OD) d 6,05 (s, 1H), 7,21 - 7,35 (m, Τ0Η). ¹³C NMR (CD3OD) d 57,6, 118,3 (q, CF₃), 126,7, 127,9, 141,6, 156,9, 160,9 (q, CF₃CO2H).

D) Syntéza Fmoc-nVal-(CHOH)-Glv-O-allylu

J allylisokyanoacetát |9

I ____________—>

pyridin, kys. trifluoroctová Fmcc-HNΝ η

Fmoc-HN [f dichlormethanOH O

O

K roztoku Fmoc-nVal-CHO (krok IB) (5,47 g, 16,90 mmol) v dichlormethanu (170 ml) byl přidán allylisokyanoacetát (krok IA) (2,46 ml, 20,28 mmol) a pyridin (5,47 ml, 67,61 mmol). Reakční směs byla ochlazena na 0 °C a po kapkách byla přidána kyselina trifluoroctová (3,38 ml, 33,80 mmol). Reakční směs byla míchána při 0 °C 1 hod a potom při teplotě laboratoře 48 hod. TLC provedená v ethylacetátu potvrdila ukončení reakce. Reakční směs byla zakoncentrována a čištěna bleskovou chromatografií s použitím 20% až 70% ethylacetátu v. hexanech. Frakce obsahující požadovaný produkt byly spojeny a zakoncentrovány na bílou pěnu (6,88 g,

87,3 %). TLC ve směsi 50 : 50 ethylacetátu ukázala jednu skvrnu (Rf

0,37). NMR δ ppm (CD₃OD): 7,8 (m, 2H), 7,65 (m, 2H), 7,4 (m, 2H),

7,3 (m, 2H), 5,9 (m, 1H), 5,1 - 5,4 (m, 2H), 4,55 - 4,65 (m, 2H), 4,3 4,4 (m, 2H), 4,15 - 4,25 (m, 1H), 4,01 (s, 1H), 3,9 - 4,0 (m, 3H), 1,5 5 1,6 (m, 2H), 1,35 - 1,45 (m, 3H), 0,9 (m, 3H).

E) Syntéza Fmoc-nVal-(CO)-Gly-Oallylu

kyselina dichloroctová __:-------,--------------------------------->

dimethyisulfoxid, toluen

K roztoku Fmoc-nVal-(CHOH)-Gly-Oallylu (krok D) (5,01 g, 10,77 mmol) v dimethylsulfoxidu (100 ml) a toluenu (100 ml) byl přidán is EDO (20,6 g, 107,7 mmol). Reakční směs byla ochlazena na 0 °C a po ' kapkách byla přidána kyselina dichloroctová (4,44 ml, 53,83 mmol). Reakční směs byla míchána po dobu 15 min při 0 °C a 1 hod při teplotě laboratoře. Po ochlazení na 0 °C byla přidána voda (70 ml)^a toluen byl odstraněn za sníženého tlaku. Zbytek byl zreden ₂₀ ethylacetátem a promyt několikrát nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a potom 1N hydrogensíranem sodným a roztokem soli. Organická vrstva byla sušena nad síranem sodným, zfiltrována a zakoncentrována. Byl předpokládán teoretický výtezek 4,99 g a reakční směs byla převedena do dalšího kroku bez dalšího 25 čištění. TLC v 50 : 50 ethylacetátu ukázala jednu skvrnu (Rf = 0,73).

F) Syntéza Fmoc-nVal-(dpsc)-Gly-Oallylu

Fmoc-HN

difenylmethylsemikarbazid ______>

octan sodný, voda, ethanol

K roztoku Fmoc-nVal-(CO)-Gly-Oallylu (krok E) (4,99 g, 10,75 mmol) v ethanolu (130 ml) a vodě (42 ml) byly postupně přidány trifluoracetátová sůl difenylmethylsemikarbazidu (dpsc) (krok IC) (7,6 g, 21,5 mmol) a octan sodný.3H₂O (1,76 g, 12,9 mmol). Reakční 5 směs byla zahřívána pod zpětným chladičem 90 min. Ukončeni reakce bylo potvrzeno TLC prováděné ve směsi 1 : 1 ethylacetát : hexan. Ethanol byl odstraněn za sníženého tlaku a zbytek byl rozpuštěn v ethylacetátu a promyt 1N hydrogensíranem sodným (2 x 10 ml), nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (2x10 ml), a potom w roztokem soli (10 ml). Organická vrstva byla sušena, zfiltrována a zakoncentrována. Získaný zbytek byl čištěn bleskovou chromatografií v 20% až 50% ethylacetátu v hexanech, za získání bílé pevné látky (5 76 g, 78 %). TLC ve směsi 50 : 50 ethylacetát : hexan ukázala dvě skvrny (cis a trans isomery) s Rf = 0,42 a 0,5.

G) Syntéza Fmoc-nVal-(dpsc)-GÍy-OH dimedon, katalyzátor

NH ⁰⁼³^NH-CH(Ph)2 tetrahydrofuran

NH

NH-CH(Ph)2

K roztoku Fmoc-nVal-(dpsc)-Gly-Oallylu (krok IG) (4,53 g, 25 6,59 mmol) v tetrahydrofuranu (300 ml) byl přidán dimedon (4,62 g,

32,97 mmol) a potom katalyzátor tetrakis(trifenylfosfin)paladium(0) (0,76 g, 0,66 mmol). Ukončení reakce bylo potvrzeno TLC po 90 min s použitím směsi 9 : 1 dichlormethan : methanol. Reakční směs byla zakoncentrována a zbytek byl rozpuštěn v ethylacetátu a promyt tnkrat 30 5 0 ml 0,1 M dihydrogenfosforečnanu draselného. Organická vrstva byla potom smísena s 50 ml hydrogensíranu sodného a dvě fáze byly *-*235 -’ ’* míchány po dobu 15 min. Fáze byly odděleny a postup byl opakován ještě dvakrát. Organická vrstva byla sušena a zakoncentrován a čištěna bleskovou chromatografií s 20% až 100% ethylacetátem v hexanech. Potom následoval roztok 9 : 1 dichlormethan : methanol.

Frakce odpovídající čistému produktu byly spojeny a zakoncentrovány za získání bílé pevné látky (3,99 g, 94 %). TLC ve směsi 9 : 1 dichlormethan : methanol ukázala dvě skvrny (cis a trans isomery). NMR δ ppm (CD₃OD): 7,75 (m, 2H), 7,6 (m, 3H), 7,2 - 7,4 (m, 14H), 6 1 - 6,2 (m, 1H), 4,25 - 4,4 (m, 2H), 4,1 - 4,2 (m, 2H), 3,85 (s, 2H), io 1,6 - 1,8 (m, 2H), 1,3 - 1,5 (m, 2H), 0,95 (t, 3H).

Krok 2

Syntéza H-Phq-MBHA pryskyřice

Komerčně dostupná MBHA pryskyřice (2,6 g, 1,12 mmol/g, 20 2,91 mmol) byla převedena do 250 ml reakční nádoby pro syntézu na pevné fázi opatřené fritou a vstupem dusíku. Potom byla důkladně promyta 30 ml podíly dichlormethanu, methanolu, dimethylformamidu a dichlormethanu a ponechána reagovat 18 hod s komerčně dostupným Fmoc-Phg-OH (2,17 g, 5,82 mmol) podle postupu A 25 s 99,82% účinností. Pryskyřice byla potom zbavena ochranné skupiny Fmoc postupem B. Kvalitativní ninhydrinový test na malém alikvotu poskytl tmavě modrou pryskyřici a roztok, což ukazuje na úspěšný průběh reakce.

Krok 3

Syntéza H-nVal(dpsc)-Gly-Pha-MBHA pryskyřice

Pryskyřice získaná v kroku II (2,6 g, 0,8 mmol/g, 2,91 mmol) byla ponechána reagovat s Fmoc-nVal-(dpsc)-Gly-Oallylem (krok IG) (5,82 mmol, 3,77 g) podle postupu A. Po, 18 hod kvantitativní ninhydrinová analýza ukázala 99,91 % účinnost reakce. Pryskyřice byla zbavena Fmoc postupem B. Kvalitativní ninhydrinový test na malém alikvotu poskytl tmavě modrou pryskyřici a roztok, což ukazuje na úspěšný průběh reakce

Krok 4

Syntéza Boc-Pro(4t-NHFmoc)-nVal (dpsc)-Gly-Pha-MBHA pryskyřice _?NH-Fmoc

NH-MBHA pryskyřice

Sloučenina H-nVal(dpsc)-Gly-Phg-MBHA pryskyřice (krok 3 výše) (600 mg, 0,8 mmol/g, 0,67 mmol) byla převedena do polypropylenové trubičky opatřené fritou a byla ponechána reagovat s Boc-Pro(4t-NHFmoc)-OH (příklad VI, krok 3) (610 mg, 1,34 mmol) jako v postupu A. Po 18 hod kvantitativní ninhydrinová analýza ukázala 99,96% účinnost reakce.

Krok 5

Syntéza Boc-Pro(4t-NH2)-nVal(dpsc)-Gly-Pha-MBHA pryskyřice _ΛΝΗ₂

H pryskyřice ^H ° Ι^Ί ŇH o=k ^H-CH(Ph)₂

Pryskyřice z předcházejícího kroku (Boc-Pro(4t-NHFmoc)nVal(dpsc)-Gly-Phg-MBHA pryskyřice) byla zbavena ochranných skupin Fmoc postupem B. Kvalitativní ninhydrinový test na malém alikvotu poskytl tmavě modrou pryskyřici a roztok, coz ukazuje na úspěšný průběh reakce.

Krok 6

Syntéza Boc-Pro(4t-NHSO₂Bn)-nVal(dpsc)-Gly-Phq-MBHA pryskyřice

K pryskyřici získané v předcházejícím kroku (Boc-Pro(4t-NH₂)-

nVal(dpsc)Gly-Phg-MBHA pryskyřice) (0,2 g, 0,22 mmol) suspendované v NMP (2 ml) byl přidán 2,4,6-kolidin (0,24 ml, 1,79 mmol) a benzensulfonylchlorid a reakční směs byla třepana 18 hod. Rozpouštědlo bylo odsáto a pryskyřice byla důkladně promyta 5 2 ml podíly dichlormethanu, methanolu, dimethylformamidu a dichlormethanu. Kvalitativní ninhydrinová analýza ukázala bezbarvé kuličky a roztok, což ukazuje na úspěšný průběh reakce.

Krok 7 _w Syntéza Fmoc-G(Chx)-Pro(4t-NHSÓ2Rn)-nValMpsc)-GlY-Phq-MBHA pryskyřice aA /x o- i í j JMH

XC j

Fmoc-HN | ⁰ H ° ° pryskyřice ^H N ^H O

NH ’

0==/^

NH-CH(Ph)_{2 20} Pryskyřice získaná v předcházejícím kroku (Boc-Pro(4tNHSO₂Bn)-nVal(dpsc)Gly-Phg-MBHA pryskyřice) byla zbavena ochranných skupin Boc postupem C. Fmoc-G(Chx) (0,17 g, 0,45 mmol) byl potom navázán podle postupu A. Po 18 hod ukazala kvalitativní ninhydrinová analýza bezbarvé kuličky a kvantitativní ₂5 ninhydrinová analýza 99,79% účinnost reakce.

Krok 8

Syntéza iBoc-G(Chx)-Pro(4t-NHSO2Rn)-nVal(dpsc)-Gly-Phq-MBHA

pryskyřice

Pryskyřice získaná v předcházejícím kroku (Fmoc-G(Chx)Pro(4t-NHSO₂Bn)-nVal(dpsc)-Gly-Phg-MBHA pryskyřice) byla zbavena ochranných skupin Fmoc postupem B. Ninhydrinový test na malém alikvotu poskytl tmavě modrou pryskyřici a roztok, což ukazuje na 15 úspěšnou reakci. K pryskyřici (0,2 g. 0,22 mmol) suspendované ve 2 ml NMP byl přidán isobutylchlorformát (0,12 ml, 0,90 mmol) a potom diisopropylethylamin (0,31 ml, 1,79 mmol), a reakční směs byla třepána 18 hod při teplotě laboratoře. Kvalitativní ninhydrinová analýza ukázala bezbarvé kuličky a roztok, což ukazuje na úspěšný průběh reakce.

Krok 9

Syntéza iBoc-G(Chx)-Pro(4t-NHS^Rn)-nVal^O)pryskyřice

Sloučenina z předcházejícího kroku (iBoc-G(Chx)-Pro(4t-NHSO₂Bn)-nVal(dpsc)-Gly-Phg-MBHA pryskyřice) (200 mg) byla 10 vystavena hydrolýze semikarbazonu postupem D.

Krok 10

Syntéza iBoc-G(Chx)-Pro(4t-NHSO₂Bn)-nVal(CO.)-GlY-Pha-NH₂

Pryskyřice z předcházejícího kroku (iBoc-G(Chx)-Pro(4t-NHSO₂Bn)-nVal(CO)Gly-Phg-MBHA pryskyřice) (100 mg) byla štěpena HF (podmínky štěpení dle postupu E) za získání požadovaného surového produktu. Materiál byl čištěn HPLC s použitím kolony 2,2 x 25 cm s reverzními fázemi, s obsahem C-18 pryskyřice složené z částic gelu velikosti 10 pm s velikostí pórů 300 A, s elucí gradientem 20 až 50% acetonitrilu ve vodě. Analytická HPLC s použitím a kolony 4,6 x 250 mm s reverzními fázemi, s obsahem ΟΙ 8 pryskyřice s velikostí částic 5 pm a velikostí pórů 300 A, s elucí 25 až 75% acetonitrilem (obsahující 0,1% kyselinu trifluoroctovou) ukázala jeden vrchol v čase 13,5 min. Hmotnostní spektrometrie s nízkým rozlišením potvrdila požadovanou hmotnost (MH⁺ 826,4).

IV, Další sloučeniny připravené syntézou v roztoku

Reprezentativní postupy pro přípravu dalších sloučenin podle vynálezu jsou ukázány dále, přičemž sloučeniny připravené těmito io postupy jsou uvedeny v tabulce 5.

Příklad XXIII

Příprava sloučeniny vzorce XXIII

ΧΧΠΙ

Krokl

Míchaný roztok ketiminu XXIIIa (50 g, 187,1 mmol) pod N₂ v suchém THF (400 ml) byl ochlazen na -78 C a smísen s 1M

-*^2 “ roztokem Κ-*ΒυΟ (220 ml, 1,15 ekv.) v THF. Reakční směs byla ohřátá na 0 °C a míchána 1 hod a smísena s brommethylcyklobutanem (28 ml, 249 mmol). Reakční směs byla míchána při teplotě laboratoře hod a zakoncentrována ve vakuu. Zbytek byl rozpuštěn v Et20 (300 ml) a smísen s vodným HCI (2M, 300 ml). Získaný roztok byl míchán při teplotě laboratoře 5 hod a extrahován Et₂O (1 I). Vodná vrstva byla zalkalizována na pH ~12 až 14 NaOH (50 % vod. roztok) a extrahována CH₂CI₂ (3 x 300 ml). Spojené organické vrstvy byly sušeny (MgSO₄), zfiltrovány a zakoncentrovány za získám čistého io aminu (XXIHb, 18 g) jako bezbarvého oleje.

Krok 2

Roztok aminu XXlllb (18 g, 105,2 mmol) při 0 °C v CH₂CI₂ (350 ml) byl smísen s di-terc-butyldikarbonátem (23 g, 105,4 mmol) a míchán při teplotě laboratoře pod dobu 12 hod. Po ukončení reakce 2o (TLC) byla reakční směs zakoncentrována ve vakuu a zbytek byl rozpuštěn v THF/H₂O (200 ml, 1 : 1) a smísen s LiOH.H₂O (6,5 g, 158,5 mmol) a míchán při teplotě laboratoře 3 hod. Reakční směs byla zakoncentrována a základní vodná vrstva byla extrahována Et₂O. Vodná vrstva byla okyselena konc. HCI na pH ~1 až 2 a extrahována 25 CH₂CI₂. Spojené organické vrstvy byly sušeny (MgSO₄), zfiltrovány a zakoncentrovány ve vakuu za získání XXIIIc jako bezbarvého viskózního oleje, který byl použit v příštím kroku bez dalšího čištěni.

Krok 3

_e XXllIc XXIIId

Roztok kyseliny XXllIc (15,0 g, 62 mmol) v CH₂CI₂ (250 ml) byl smísen s činidlem BOP (41,1 g, 93 mmol), N-methylmorfolinem (27 ml), hydrochloridem N,O-dimethylhydroxylaminu (9,07 g, 93 mmol) a míchán přes noc při laboratorní teplotě. Reakční směs byla zředěna ίο 1N vod. HCI (250 ml), vrstvy byly odděleny a vodná vrstva byla extrahována CH₂CI₂ (3 x 300 ml). Spojené organické vrstvy byly sušeny (MgSO₄), zfiltrovány a zakoncentrovány ve vakuu a čištěny chromatografií (SiO₂, EtOAc/hex 2 : 3) za získání amidu XXIIId (15,0 g) jako bezbarvé pevné látky.

Krok 4

XXIIId

Roztok amidu XXIIId (15 g, 52,1 mmol) v suchém THF (200 ml) byl po kapkách smísen s roztokem LiAIH₄ (1M, 93 ml, 93 mmol) při 0 °C. Reakční směs byla míchána při teplotě laboratoře 1 hod a reakce byla opatrně ukončena při 0 °C roztokem KHSO₄ (10% vod.) a 25 směs byla míchána 0,5 hod. Reakční směs byla zředěna vodným HCI (1M, 150 ml) a extrahována CH2CI2 (3 x 200 ml). Spojené organické vrstvy byly promyty vodným HCI (1M), nasyceným NaHCO₃, roztokem soli, a sušeny (MgSO₄). Směs byla zfiltrována a zakoncentrována ve vakuu za získání XXIIIe jako viskózního bezbarvého oleje (14 g).

Krok 5

O

BocHN

XXIIle

XXlllf

Roztok aldehydu XXIIle (14 g, 61,6 mmol) v CH₂CI₂ (50 ml), byl smísen s Et₈N (10,73 ml, 74,4 mmol) a acetonkyanohydrinem (10,86 g, 127,57 mmol) a míchán při teplotě laboratoře 24 hod. Reakční směs w byla zakoncentrována ve vakuu a zředěna vod. HCI (1M, 200 ml) a extrahována do CH₂CI₂ (3 x 200 ml). Spojená organická vrstva byla promyta H₂O, roztokem soli, sušena (MgSO₄), zfiltrována, zakoncentrována a čištěna chromatografií (SiO₂, EtOAc/hex 1 : 4) za , získání XXlllf (10,3 g) jako bezbarvé kapaliny.

Krok 6

XXlllf

Methanol nasycený HCI*, připravený probubláváním plynného HCI do CH₃OH (700 ml) při 0 °C, byl smísen s kyanohydrinem XXlllf a zahříván pod zpětným chladičem 24 hod. Reakční směs byla zakoncentrována ve vakuu za získání XXIIIg, která byla použita v 25 dalším kroku bez čištění.

*Alternativně může být použit 6M HCI připravený přidáním AcCI do suchého methanolu.

245

Krok 7

XXllIg XXIllh

Roztok hydrochloridu aminu XXllIg v CH2CI2 (200 ml) byl smísen s Et₃N (45,0 ml, 315 mmol) a Boc₂O (45,7 g, 209 mmol) při -78 °C. Reakční směs byla potom míchána při teplotě laboratoře přes noc a 10 zředěna HCI (2M, 200 ml) a extrahována do CH₂CI₂ Spojené organické vrstvy byly sušeny (MgSO₄) zfiltrovány, zakoncentrovány ve vakuu a čištěny chromatografií (EtOAc/hex 1 : 4) za získání hydroxyesteru XXIllh.

Krok 8

XXIllh ΧΧΙΙΠ

Roztok methylesteru XXIllh (3 g, 10,5 mmol) v THF/H₂O (1 : 1) byl smísen s LiOH.H₂O (645 mg, 15,75 mmol) a míchán při teplotě laboratoře pod dobu 2 hod. Reakční směs byla okyselena vodným HCI (1M, 15 ml) a zakoncentrována ve vakuu. Zbytek byl sušen ve vakuu.

Roztok kyseliny v CH₂CI₂ (50 ml) a DMF (25 ml) byl smísen 25 sNH₄CI (2,94 g, 55,5 mmol), EDCI (3,15 g, 16,5 mmol), HOOBt (2,69 g, 16,5 mmol) a NMM (4,4 g, 44 mmol). Reakční směs byla míchána při teplotě laboratoře 3 dny. Rozpouštědla byla odstraněna ve vakuu a zbytek byl zředěn vodným HCI (250 ml) a extrahován

- 246 -’

CH2CI2. Spojené organické vrstvy byly promyty vodným nasyceným NaHCO₃, sušeny (MgSO₄), zfiltrovány a zakoncentrovány, za získání XXIIIi, která byla použita jako taková v následujících krocích. (Alternativně může také být XXIIIi získána přímo reakcí sloučeniny XXIIIf (4,5 g, 17,7 mmol) s vodným H2O2 (10 ml), LÍOH.H2O (820 mg, 20,8 mmol) při 0 °C v 50 ml CH₃OH 0,5 hod.).

Krok 9

XXIllj

Roztok sloučeniny XXIIIi získané v předcházejícím kroku byl rozpuštěn v 4N HCI v dioxanu a-míchán při teplotě laboratoře po dobu 2 hod. Reakční směs byla zakoncentrována ve vakuu za získání XXIllj jako pevné látky, která byla použita bez dalšího čištění.

Krok 10

BocHN

CH^CHs

XXIHk + / ₊ V/OCH3 ν'-u H2CI o

CH3^CH₃

XXIIII

Aminoester XXIIII byl připraven následující metodou podle R. Zhang a J. S. Madalengoitia (J. Org. Chem. 1999, 64, 330), s tím rozdílem, že skupina Boc byla odštěpena reakcí Boc-chráněné

247 aminokyseliny s methanolickým HCI.

Roztok komerčně dostupné aminokyseliny Boc-Chg-OH, XXIIIk (Senn chemicals, 6,64 g, 24,1 mmol) a aminhydrochloridu XXIIII (4,5 g, 22 mmol) v CH₂CI₂ (100 ml) byl při 0 °C smísen s činidlem BOP 5 a míchán při teplotě laboratoře po dobu 15 hod. Reakční směs byla zakoncentrována ve vakuu, potom byla zředěna vodným 1M HCI a extrahována do EtOAc (3 x 200 ml). Spojené organické vrstvy byly promyty nasyceným NaHCO₃ (200 ml), sušeny (MgSO₄), zfiltrovány a zakoncentrovány ve vakuu, a čištěny chromatografií (SiO₂, EtOAc/hex w 3 : 7), za získání XXIIIm (6,0 g) jako bezbarvé pevné látky.

Krok 11

Roztok methylesteru XXIIIm (4,0 g, 9,79 mmol) v THF/H₂O (1 : ₂o 1) byl smísen s LiOH.H₂O (401 mg, 9,79 mmol) a míchán při teplotě laboratoře pod dobu 3 hod. Reakční směs byla okyselena vodným HCI a zakoncentrována ve vakuu za získání volné kyseliny.

Roztok kyseliny (1,5 g; 3,74 mmol) v DMF/CH₂CI₂ (1 : 1, 50 ml) byl smísen s aminem XXIIIj (772 mg, 3,74 mmol), EDCI (1,07 g, 5,61 25 mmol), HOOBt (959 mg, 5,61 mmol) a NMM (2,15 ml, 14,96 mmol) při -10 °C. Reakční směs byla míchána při 0 °C 48 hod a zakoncentrována ve vakuu. Zbytek byl zředěn vodným 1M HCI a extrahován CH₂CI₂, Spojené organické vrstvy byly extrahovány vod. NaHCO₃, vod. HCI, roztokem soli, sušeny (MgSO₄), zfiltrovány a ’- 248 -‘ ’* zakoncentrovány ve vakuu za získání XXllln (2,08 g) jako světle hnědě zbarvené pevné látky.

Krok 12

XXllln ΧΧΠΙ

Roztok amidu XXllln (2,08 g, 3,79 mmol) v toluenu a DMSO (1:1, 20 ml) při 0 °C byl smísen s EDCI (7,24 g, 37,9 mmol) a kyselinou dichloroctovou (2,42' g, 19,9 mmol) a míchán při teplotě laboratoře po dobu 4 hod. Reakční směs byla zředěna CH₂CI₂, promyta nasyceným NaHCO₃ a roztokem soli. Organická vrstva byla sušena (MgSO₄), zfiltrována, zakoncentrována ve vakuu a čištěna

chromatografií (SiO2, aceton/hexany 3 bezbarvé pevné látky. Příklad XXIV Příprava sloučeniny vzorce XXIV CH3^CH3 Γ~\ H H H lCÍ chC, ΊΓ ^3°¾^

7), za získání XXIII jako O TCnh2 \ O

XXIV

Krok 1

CH

h₂ci ó

CH₃^/CH₃

ch₃^ch₃

U/ri3

XXIVa

ΧΧΠΠ

XXIVb

Roztok Boc-terc-Lue XXIVa (Fluka, 5,0 g 21,6 mmol) v suchém CH2CI2/DMF (50 ml, 1 : 1) byl ochlazen na 0 °C a smísen s aminem 10 XXIIII (5,3 g, 25,7 mmol), NMM (6,5 g, 64,8 mmol) a činidlem BOP (11,6 g, 25,7 mmol). Reakční směs byla míchána při laboratorní teplotě 24 hod, zředěna vodným HCI (1M) a extrahována CH2CI2. Spojené organické vrstvy byly promyty HCI (vod., 1M), nasyceným ^? NáHCO₃, roztokem soli, .sušeny (MgSO₄), zfiltrovány a zakoncentrovány ve vakuu a čištěny chromatografií (SiO₂, aceton/hexan 1 : 5) za získání sloučeniny XXIVb jako bezbarvé pevné látky.

Krok 2

CHs^CH-j

XXIVb

Roztok methylesteru XXIVb (4,0 g, 10,46 mmol) byl rozpuštěn v HCI (4M roztok dioxanu) a míchán při teplotě laboratoře po dobu 3 hod. Reakční směs byla zakoncentrována ve vakuu za získání hydrochloridové soli aminu, která byla použita v dalším kroku.

250

Roztok hydrochloridové soli aminu (397 mg, 1,24 mmol) v CH₂CI₂ (10 ml) byl ochlazen na -78 °C a smísen s tercbutylisokyanátem (250 mg, 2,5 mmol) a míchán při laboratorní teplote přes noc. Reakční směs byla zakoncentrována ve vakuu a zbytek byl 5 zředěn vodným HCI (1M) a extrahován CH₂CI₂. Spojené organické vrstvy byly promyty vodným HCI (1M), nasyceným NaHCO₃ a roztokem soli. Organické vrstvy byly sušeny, zfiltrovány a zakoncentrovány ve vakuu a zbytek byl čištěn chromatografií (SiO₂, aceton/hex 1 : 4), za získání XXiVc jako bezbarvé pevné látky.

Krok 3

Roztok methylesteru XXIVc (381 mg, 1,0 mmol) v THF/H₂O (1 : 1, 1,5 ml) byl smísen s LiOH.H₂O (62 mg, 1,5 mmol) a míchán při 20 teplotě laboratoře pod dobu 3 hod. Reakční směs byla okyselena vodným HCI a zakoncentrována ve vakuu za získání volné kyseliny.

Roztok kyseliny (254,9 mg, 0,69 mmol) v DMF/CH₂Cl₂ (1:1, 5,0 ml) byl smísen s aminem XXIIIj (159 mg, 0,763 mmol), EDCI (199 mg, 1,04 mmol), HOOBt (169,5 mg, 1,04 mmol) a NMM (280 mg, 25 2,77 mmol) při -20 °C. Reakční směs byla míchána při -20 °C 48 hod a zakoncentrována ve vakuu. Zbytek byl zředěn vodným 1M HCI a extrahován EtOAc. Spojené organické vrstvy byly extrahovány vodným NaHCO₃, vodným HCI, roztokem soli, sušeny (MgSO₄), zfiltrovány, zakoncentrovány ve vakuu, za získání sloučeniny XXIVd (470 mg) jako

251 světle hnědé pevné látky.

Krok 4

XXIVd

XXIV ₁₀ Roztok amidu XXIVd (470 mg, 0,9 mmol) v toluenu a DMSO (1 : 1, 20 ml) byl při 0 °C smísen s EDCI (1,72 g, 9,0 mmol) a kyselinou dichloroctovou (0,37 ml, 4,5 mmol) a míchán při 0 °C 4 hod. Reakční směs byla zředěna CH2CÍ2 a promyta nasyceným roztokem NaHCO₃ a roztokem soli. Organická vrstva byla sušena (MgSO₄), 15 zfiltrována, zakoncentrována ve vakuu a čištěna chromatografií (S1O2, aceton/hexany 3 : 7), za získání XXIV jako bezbarvé pevné látky.

Příklad XXV

Příprava sloučeniny vzorce XXV

XXV

Krok 1

₅ XXV a XXVb _XXVc

Roztok Fmoc-glycinu (Bachem, 2,0 g, 6,87 mmol) v CH2CI2 (20 ml) byl smísen s 2-fenyl-2-propanolem (Aldrich, 3,36 g, 24,7 mmol), DCC (1M roztok CH₂CI₂, 8,24 ml), DMAP (167 mg, 1,37 mmol) a míchán při teplotě laboratoře po dobu 24 hod. Reakční 10 směs byla zakoncentrována ve vakuu a zředěna Et₂O (100 ml). Oddělená pevná látka byla zfiltrována a filtrát byl promyt nasyceným roztokem NaHCO₃. Organická vrstva byla sušena (MgSO₄), zfiltrována, zakoncentrována ve vakuu a čištěna chromatografií (S1O2, EtOAc/hexany 1 : 5) za získání esteru XXVc (1,1 g) jako bezbarvé 15 viskózní kapaliny.

Krok 2

XXVc

Roztok sloučeniny XXVc v CH₂CI₂ (16,0 ml) byl smísen s piperidinem (4,0 ml) a míchán při teplotě laboratoře pod dobu 25 0,5 hod. Reakční směs byla zakoncentrována ve vakuu a čištěna chromatografií (SiO₂, aceton/hexany 1 : 10 až 1 : 1) za získání aminu XXVd (420 mg) jako bezbarvé kapaliny.

”-*253 -*

Roztok methylesteru XXIVc (381 mg, 1,0 mmol) v THF/H₂O (1 : 1 ,5 ml) byl smísen s LiOH.H₂O (62 mg, 1,5 mmol) a míchán při io teplotě laboratoře po dobu 3 hod. Reakční směs byla okyselena vodným HCI a zakoncentrována ve vakuu za získání volné kyseliny.

Roztok kyseliny (2,0 g, 5,5 mmol) v DMF/CH₂CI₂ (1:1, 40,0 ml) byl při -10 °C smísen s aminem XXIIIg (1,51 g, 6,8 mmol),'EDCI (1,57 g, 8,25 mmol), HOOBt (1,41 g, 8,25 mmol) a NMM (2,5 g, 15 24,7 mmol). Reakční směs byla míchána při 0 °C 48 hod a zakoncentrován ve vakuu. Zbytek byl zředěn vodným 1M HCI (100 ml) a extrahován CH₂CI₂ (3 x 100 ml). Spojené organické vrstvy byly extrahovány vodným NaHCO₃, vodným HCI, roztokem soli, sušeny (MgSO₄), zfiltrovány, zakoncentrovány ve vakuu za získání XXVe 20 (3,17 g) jako světle hnědé pevné látky, která byla dále použita bez čištění.

XXVe ch₃^ch₃

XXVf

Roztok methylesteru

XXVe (2,5 g, 4,66 mmol)

- 254 v THF/H₂O/CH₃OH (1 : 1 : 1, 60 ml) byl smísen s LiOH.H₂O (200 mg, 4,87 mmol) a míchán při teplotě laboratoře po dobu 4 hod. Reakční směs byla okyselena vodným HCI a zakoncentrována ve vakuu za získání volné kyseliny.

Roztok kyseliny (200,0 mg, 0,38 mmol) v DMF/CH₂CI₂ (1 : 1, 6,0 ml) byl při -10 °C smísen s aminem XXVd (78 mg, 0,4 mmol), EDCI (105 mg, 0,55 mmol), HOOBt (95 mg, 0,55 mmol) a NMM (150 mg, 1,48 mmol). Reakční směs byla míchána při 0 °C 48 hod a zakoncentrována ve vakuu. Zbytek byl zředěn vodným 1M HCI (30 ml) a extrahován CH₂CI₂ (3 x 30 ml). Spojené organické vrstvy byly extrahovány vodným NaHCOs (2 x 30 ml), vodným HCI, roztokem soli (30 ml), sušeny (MgSO₄), zfiltrovány, zakoncentrovány ve vakuu za získání XXVf (240 mg) jako bezbarvé pevné látky.

Krok 5

XXV

Roztok sloučeniny XXVf (240 mg, 0,28 mmol) v CH₂Cl₂ (10 ml) byl smísen s Dess-Martinovým činidlem (Omega, 242 mg, 0,56 mmol) a míchán při teplotě laboratoře po dobu 2 hod. Po ukončení oxidace (TLC, aceton/hexany 1 : 4) byla reakční směs zředěna nasyceným

- 255 -*' roztokem NaHCOj (20 ml) a Na₂S₂O₃ (10% vodný roztok, 20 ml). Reakční směs byla míchána po dobu 30 min a extrahována CH₂CI₂ (3 x 30 ml). Spojené organické vrstvy byly extrahovány nasyceným roztokem NaHCO₃, roztokem soli, sušeny (MgSO₄), zfiltrovány a ₅ zakoncentrovány ve vakuu, a čištěny chromatografií (SÍO₂, aceton/hexany 1 : 5), za získání XXV (122 mg) jako bezbarvé pevné látky.

Příklad XXVI ₁₀ Příprava sloučeniny vzorce XXVI

K míchanému roztoku N-Boc-3,4-dehydroprolinu XXVIa (5,0 g, 23,5 mmol), di-terc-butyldikarbonátu (7,5 g, 34,4 mmol), a 4-Ν,Ν-dimethylaminopyridinu (0,40 g, 3,33 mmol) v acetonitrilu (100 ml) pn 2₅ teplotě laboratoře byl přidán triethylamin (5,0 ml, 35,6 mmol). Získaný roztok byl míchán při této teplotě 18 hod před zakoncentrováním ve vakuu. Tmavě hnědý zbytek byl čištěn bleskovou chromatografií na koloně s elucí 10 až 25% EtOAc/hexan, za poskytnutí produktu XXVIb

256 cl n jako světležlutého oleje (5,29 g, 84 %).

Krok 2

CO^tBu

K míchanému roztoku dehydroprolinu XXVIb (10,1 g, 37,4 mmol), benzyltriethylamoniumchloridu (1,60 g, 7,02 mmol) ₁₀ vchlorformu (120 ml) při teplotě laboratoře byl přidán 50% vodný hydroxid sodný (120 g). Po důkladném míchání při této teplote po dobu 24 hod byla černá směs zředěna CH₂CI₂ (200 ml) a diethyletherem (600 ml). Po, oddělení vrstev byl vodný roztok ^: extrahován CH₂CI₂/Et₂O (1 : 2, 3-x 600 ml). Organický roztok byl sušen is (MgSO₄) a zakoncentrován. Zbytek byl čištěn bleskovou chromatografií na koloně s použitím 5 až 20% EtOAc/hexan, za získání 9,34 g (71 %) sloučeniny XXVIc jako bělavé pevné látky.

Krok 3

CL ΌΙ _N^CO₂tBu _n^CO₂H

H •CF₃CO₂H

XXVIc

XXVId

Roztok sloučeniny XXVIc (9,34 g, 26,5 mmol) v CH₂CI₂ (25 ml) a ₂5 CF₃CO₂H (50 ml) byl míchán při teplotě laboratoře 4,5 hod před zakoncentrováním ve vakuu, za získání hnědého zbytku, který byl použit v kroku 4 bez dalšího čištění.

Krok 4 ci^ci ^α _ν ⁰¹

Λ --------- ZA · HCI

Q^O₂H '^CF3CO2H 5 H ·

XXJlId XX¹¹¹®

Komerční koncentrovaná kyselina chlorovodíková (4,5 ml) byla přidána k roztoku zbytku z kroku 3 v methanolu (70 ml) a získana směs byla ohřátá na 65 °C v olejové lázni. Po 18 hod byla směs io zakoncentrována ve vakuu za poskytnutí hnědého oleje XXVIe, který byl použit v kroku 5 bez dalšího čištění.

Krok 5

CI^CI

CL Cl EocHN^-CO₂H C/^COjMe

C X/ -

XXVIe XXVlf

K míchanému roztoku prolinmethylesteru XXVIe z kroku 4, 20 komerčního N-Boc-cyklohexylglycinu XXVlf (10,2 g, 40,0 mmol) a [O-(7-azabenzotriazol-1-yl)-1,1,3,3-tetramethyluroniumhexafluorfosfátu] (HATU) (16,0 g, 42,1 mmol) v DMF (200 ml) byl při 0 C přidán diisopropylethylamin (18,0 ml, 104 mmol). Po ohřátí na laboratorní teplotu spolu s ledovou lázní přes noc (18 hod) byla reakcm směs 25 zředěna EtOAc (600 ml), 5% H₃PO₄ (150 ml) a roztokem soli (150 ml).

Organický roztok byl promyt 5% H₃PO₄ (150 ml), nasyceným NaHCO₃ (2 x 200 ml), potom sušen (MgSO₄), zfiltrován a zakoncentrován ve vakuu. Zbytek byl čištěn bleskovou chromatografií na koloně s použitím 5 - 20% EtOAc/hexan, za získání 3,84 g (32 %, tři kroky) sloučeniny XXVIg jako bělavé pevné látky.

Krok 6

XXVIg

Roztok methylesteru XXVIg (5,87g, 13,1 mmol) a LiOH (1,65 g,

39,3 mmol) v THF/MeOH/H₂O (1 : 1 : 1, 90 ml) byl míchán při teplotě laboratoře 4 hod. Methanol a THF byly odstraněny za sníženého tlaku. Vodný roztok byl okyselen na pH 2 použitím 1N vodného roztoku HCI (50 ml) a nasycen pevným chloridem sodným, před extrahováním

EtOAc (3 x 150 ml). Organické roztoky byly spojeny, sušeny (MgSO₄), zfiltrovány a zakoncentrovány ve vakuu, za získání bílé pevné látky XXVIh (5,8 g, kvantitativní).

Krok 7

Požadovaný produkt XXIIII byl připraven jako v postupu v příkladu XXIII, krok 11.

Požadovaný produkt XXVI byl připraven podobným postupem jako v příkladu XXIII, krok 12.

Příklad XXVII

Příprava sloučeniny vzorce XXVII

Požadovaný produkt XXVIIa byl připraven postupem jako v příkladu XXIII, krok 9.

.260.»

H

N

XXVllb

XXVI [a

Požadovaný produkt XXVllb byl připraven postupem jako v příkladu XXIV, krok 2.

Krok 3

Η H

XXVllb

H ^0H

N NH₂

Požadovaný produkt XXVII v příkladu XXIII, krok 12.

Příklad XXVIII

Příprava sloučeniny vzorce XXVIII

BocHN

Me Me

H

N cl di

Η H

XXVII

O

H N

nh₂ byl připraven postupem

O nh₂ jako

XXVIII

..•..íVeíX.X '

Krok 1 ο ?^Η

II Η₂Ν^ .OMe

BOCHN.A ------ HClTY | .HCI < —q

XXVIlla XXVHtb

Meziprodukt XXVIIIb byl připraven postupem jako v příkladu XXIII, kroky 3 až 6.

Krok 2

Kyselina z příkladu XXIV, krok 2 (XXVIIIc) (0,7g) byla ponechána reagovat s produktem z kroku 1 výše (0,436 g), HATU (0,934 g) a DIPEA (1,64 ml) způsobem popsaným v příkladu IX, krok 2a, za získání 0,66 g požadovaného produktu XXVIIId.

Krok 3

XXVIIId

Produkt z kroku 2 (0,5 g) byl ponechán reagovat s DessMartinovým činidlem (1 g) způsobem popsaným v předcházejícím příkladu XX, krok 7. Čištění bleskovou chromatografií na koloně (40%

EtOAc, hexan, oxid křemičitý) poskytlo 0,35 g produktu XXVIIIe.

Hmotnostní spektrum (LCMS) 522 (M+H⁺).

.:. .:..262-‘·..··..·

XXVlltf

Produkt z kroku 4 (0,3 g) byl přidán k 1/1 roztoku H₂O/MeOH (20 ml) a pevného NaHCO₃ (242 mg, 5 ekv.). Po 18 hod míchání při teplotě laboratoře byla reakční' směs zředěna EtOAc a vrstvy byly is odděleny. Vodná vrstva byla okyselena na pH 2 HCI 1,0N a extrahována EtOAc. Vrstva EtOAc byla promyta roztokem soli, potom sušena nad MgSO₄, zfiltrována a zakoncentrována ve vakuu, za získání produktu XXVIIIf jako bílého prášku (0,26 g). Hmotnostní spektrum (LCMS) 508 (M+H⁺).

Produkt z kroku 5 (0,15 g) byl rozpuštěn v CH₂CI₂ a ponechán reagovat s HATU (0,137 g), NH₄CI (0,08 g, 5 ekv.) a DIPEA (0,53 ml).

.:..:,263-.:..

Po 2 hod při teplotě laboratoře byla reakční směs zředěna EtOAc, promyta 10% roztokem kyseliny citrónové, potom nasyceným roztokem NaHCOs. Vrstva EtOAc byla promyta roztokem soli, potom sušena nad MgSO₄, zfiltrována a zakoncentrována ve vakuu za získání surové směsi. Čištění bleskovou chromatografií na koloně (30% aceton, hexan, osid křemičitý) poskytlo požadovaný produkt XXVIII (0,096 g). Hmotnostní spektrum (LCMS) 507 (M+H⁺).

Příklad XXIX

Příprava sloučeniny vzorce XXIX

Krok 1

XXlXa

K roztoku výchozího aldehydu (4,0 g) v CH2CI2 (75 ml) při 0 °C byla přidána kyselina octová (2,0 ekv., 2,15 ml) a potom methyliso-kyanoacetát (1,1 ekv., 1,9 ml). Reakční směs byla potom postupně ohřátá na laboratorní teplotu. Po 18 hod (přes noc) byla reakční směs zředěna EtOAc a promyta nasyceným roztokem NaHCOs. Vrstva EtOAc byla promyta roztokem soli, potom sušena nad MgSO₄, zfiltrována a zakoncentrována ve vakuu, za získání surové směsi.

Čištění bleskovou chromatografií na koloně (30 až 40% EtOAc, hexan, oxid křemičitý) poskytlo produkt XXIXa (4,5 g).

Krok 2

XXIXa

XXIXb ₁₀ K 0 °C roztoku sloučeniny XXIXa (4,4 g) v THF (100 ml) bylo přidáno 26 ml (2,2 ekv.) 1,0N roztoku LiOH. Reakční směs byla míchána při této teplotě 2 hod, potom ohřátá na laboratorní teplotu. Po 2 hod byla reakční směs okyselena na pH 2 1,0N roztokem HCI. Byl přidán EtOAc a vrstvy byly odděleny. Vrstva EtOAc byla promyta 15 roztokem soli, potom sušena nad MgSO₄, zfiltrována a zakoncentrována ve vakuu za získání produktu XXIXb (3,7 g).

Krok 3

XXlXc **”-265 í··’··

Kyselina XXIXb byla ponechána reagovat s aminem z příkladu

XV postupem popsaným v příkladu XXI, krok 4. Získaný meziprodukt byl potom smísen s HCI způsobem popsaným v příkladu XXIII, krok 9, za získání produktu XXIXc.

Kyselina XXVIIIc (2,43 g) byla rozpuštěna v CH₂CI₂ a byla ponechána reagovat s aminem XXIXc (2,47 g), HATU (2,5 g) a DIPEA 20 (5,8 ml) postupem popsaným v příkladu IX, krok 2a, za poskytnutí, po čištění bleskovou chromatografií na koloně (4% MeOH, CH₂CI₂, oxid křemičitý), požadovaného produktu XXIXd (4,35 g). Hmotnostní spektrum (LCMS) 727 (M+H⁺).

Krok 5 ••••±•266 --

XXIX

Produkt z kroku 4 (4,2, g) byl ponechán reagovat s DessMartinovým činidlem (6,4 g) způsobem popsaným v preparativním příkladu XX, krok 7. Čištění bleskovou chromatografií na koloně (100% 15 EtOAc, oxid křemičitý) poskytlo 3 g finálního produktu XXIX. Hmotnostní spektrum (LCMS) 725 (M+H⁺).

Příklad XXX

Příprava sloučeniny vzorce XXX

XXX ·- ’-·767 - *

Krok 1

Alkohol 2-(trifluormethyl)propan-2-ol (1,28 g) byl ponechán reagovat s N,N-disukciminidylkarbonátem (3,84 g) a Et₃N (4,2 ml) v suchém CH₃CN (50 ml) 18 hod. Směs byla zředěna EtOAc (200 ml) a zfiltrována. Filtrát byl promyt NaHCO₃, roztokem soli, potom sušen w nad MgSO₄, zfiltrován a zakoncentrován ve vakuu za získání surové směsi. Čištění bleskovou chromatografií na koloně (50% EtOAc, hexan, oxid křemičitý) poskytlo požadovaný produkt XXXa (0,3 g).

Krok 2

XXXb

Produkt z příkladu XXIX (0,3 g) byl smísen se 100 ml 4,ON HCI v dioxanu. Po 1 hod bylo přidáno 200 ml Et₂O a získaná sraženina byla odfiltrována a sušena ve vakuu za získání produktu XXXb

.....-*268*- *— (0,27 g) jako bílého prášku. Hmotnostní spektrum (LCMS) 625 (MHCI+H⁺).

Krok 3

XXXa

XXXb

K roztoku XXXb (0,05 g) v CH₂CI₂ (5 ml) při teplotě laboratoře byl přidán DIPEA (0,040 ml), XXXa (1,5 ekv., 0,030 g) a potom jeden krystal DMAP. Po 30 min byla reakční směs zředěna EtOAc (20 ml) a promyta HCI 1,5N, potom NaHCO₃, potom roztokem soli. Vrstva EtOAc byla sušena nad MgSO4, zfiltrována a zakoncentrována ve vakuu za získání surové směsi. Čištění preparativní chromatografií (40% aceton, hexan, osid křemičitý) poskytlo požadovaný produkt XXX (0,044 g). Hmotnostní spektrum (LCMS) 779 (M+H⁺).

Příklad XXXI

Příprava sloučeniny vzorce XXXI •-•269··- —·

XXXb

XXXI

K roztoku sloučeniny XXXb (0,05 g) v CH2CI2 (5 ml) při teplotě 20 laboratoře byl přidán DIPEA (0,040 ml) a terc-butylisokyanát (1,2 ekv., 0,01 ml). Po 18 hod byla reakční směs zředěna EtOAc (20 ml) a promyta HCI 1,5N, NaHCO₃ a roztokem soli. Vrstva EtOAc byla sušena nad MgSO₄, zfiltrována a zakoncentrována ve vakuu za získání surové směsi. Čištění preparativní chromatografií (100% 25 EtOAc, oxid křemičitý) poskytlo finální produkt XXXI (0,021 g). Hmotnostní spektrum (LCMS) 724 (M+H⁺).

•••••-•270’-·........

Produkt z příkladu XXVIII byl zpracován způsobem popsaným v preparativním příkladu XXX, krok 2, za získání produktu XXXIIa. Hmotnostní spektrum (LCMS) 407 (M-HCI+H⁺).

Krok 2

XXXIIa

Amin XXXIIa byl ponechán reagovat se sloučeninou XXXa způsobem popsaným v preparativním příkladu XXX, krok 3, za získání požadovaného produktu XXXII. Hmotnostní spektrum (LCMS) 508 (M+H⁺).

Příklad XXXIII

Příprava sloučeniny vzorce XXXIII

XXXHI

Amin XXXIIa byl ponechán reagovat s terc-butylisokyanátem způsobem popsaným v příkladu XXXI, krok 1, za získání produktu XXXIII. Hmotnostní spektrum (LCMS) 561 (M+H⁺).

•272 *

Příklad XXXIV

Příprava sloučeniny vzorce XXXIV

Ke směsi esteru (6,0 g) a molekulárních sít (5,2 g) v bezvodém methylenchloridu (35 ml) byl přidán pyrrolidin (5,7 ml, 66,36 mmol). Získaná hnědá kaše byla míchána při teplotě laboratoře pod N₂ 24 hod, zfiltrována a promyta bezvodým CH₃CN. Spojený filtrát byl zakoncentrován za získání požadovaného produktu.

Nal, K₂CO₃

·· · · 9 9 9 9 9 9 9 • · · · O · 9 9 ·^:··^73**·’-·· ····’..·’

K roztoku produktu z předcházejícího kroku v CH₃CN (35 ml) byl přidán bezvodý K2CO₃, methallylchlorid (2,77 g, 30,5 mmol), Nal (1,07 g, 6,7 mmol). Získaná kaše byla míchána při teplotě laboratoře v atmosféře N2 24 hod. Bylo přidáno 50 ml ledově chladné vody a potom 5 2N roztok KHSO₄ dokud pH nebylo 1. Byl přidán EtOAc (100 ml) a směs byla míchána po dobu 0,75 hod. Spojená organická vrstva byla oddělena a promyta roztokem soli, sušena nad MgSO₄ a odpařena, za získání požadovaného produktu.

Krok 3

Produkt z předcházejícího kroku (2,7 g, 8,16 mmol) byl 20 rozpuštěn v dioxanu (20 ml) a smísen s čerstvě připraveným 1N LiOH (9 ml). Reakční směs byla míchána při laboratorní teplotě v atmosféře N₂ 20 hod. Reakční směs byla vložena do EtOAc a promyta H₂O. Spojená vodná fáze byla ochlazena na 0 °C a okyselena na pH 1,65 s použitím 1N HCI. Kalná směs byla extrahována EtOAc (2 x 100 ml). 25 Spojená organická vrstva byla promyta roztokem soli, sušena nad MgSO₄, a zakoncentrována, za získání požadované kyseliny (3,40 g).

Krok 4 • · · · · · • · · · • · · · · 4..

NaBH(OAc)₃

K suspenzi NaBH(OAc)₃ (3,93 g, 18,5 mmol) v CH₂CI₂ (55 ml) byl přidán roztok produktu z předcházejícího kroku v bezvodém CH₂CI₂ (20 ml) a kyselina octová (2 ml). Kaše byla míchána při laboratorní teplotě 20 hod. Ke kaši byla přidána ledově chladná voda (100 ml) a io směs byla míchána 1/2 hod. Organická vrstva byla oddělena, zfiltrována, sušena a odpařena za získání požadovaného produktu.

Krok 5

Roztok produktu z předcházejícího kroku (1,9 g) v MeOH (40 ml) 20 byl smísen s přebytkem roztoku CH₂N₂/Et₂P a směs byla míchána přes noc. Reakční směs byla zakoncentrována do sucha za získám surového zbytku. Zbytek byl čištěn chromatografií na silikagelu s elucí gradientem EtOAc/hexan, za získání 1,07 g čistého požadovaného produktu.

Krok 6

Roztok produktu z předcházejícího kroku (1,36 g) v bezvodém CH₂C12 (40 ml) byl smísen s BF₃.Me₂O (0,7 ml). Reakční směs byla míchána při laboratorní teplotě 20 hod a reakce byla ukončena NaHCO₃ (30 ml) a dále míchána 1/2 hod. Organická vrstva byla 10 oddělena a spojená organická vrstva byla promyta roztokem soli, sušena nad MgSO₄, zakoncentrována, za získání surového zbytku. Zbytek byl čištěn chromatografií na silikagelu s elucí gradientem EtOAc/hexan, za získání 0,88 g požadované sloučeniny.

H₂-10% Pd/C

K roztoku produktu (0,92 g) z předcházejícího kroku v MeOH (30 ml) bylo přidáno 10% Pd/C (0,16 g) při teplotě laboratoře a směs byla hydrogenována při teplotě laboratoře při tlaku 1 atm (0,1 MPa). Reakční směs byla míchána po dobu 4 hod a zakoncentrována do sucha, za získání požadované sloučeniny.

Krok 8 • · · · · · · · · · ·

postupem popsaným

Požadovaný produkt byl připraven v příkladu XXIII, krok 10.

Požadovaná kyselina byla připravena postupem z příkladu XXIV, krok 3.

Krok 10

XXXIV

Požadovaný produkt XXXIV byl připraven postupem jako v příkladu XXIX, kroky 4 až 5.

• · · s · ··· · · · • · · · · · · ·

Příklad XXXV

Příprava sloučeniny vzorce XXXV,

Roztok triethylfosfonátu (44,8 g) v THF (30 ml) byl při 0 C smísen s 1M roztokem (200 ml) bis(trimethylsilylamidu) sodného v THF. Získaná směs byla míchána při teplotě laboratoře 0,5 hod a potom ochlazena na 0 °C. Po kapkách byl přidán roztok 1,4cyklohexandionethylenketalu (15,6 g) v THF (50 ml), a získaný roztok byl míchán při teplotě laboratoře 18 hod. Reakční směs byla potom ochlazena na 0 °C, smísena s chladnou vodnou kyselinou citrónovou a směs byla extrahována EtOAc. Extrakt byl promyt nasyceným vodným NaHCOs, potom roztokem soli, potom sušen nad bezvodým Na₂SO₄, zfiltrován a filtrát byl odpařen. Zbytek byl čištěn chromatografií na silikagelu s elucí gradientem CH₂CI₂/EtOAc, za získání v nazvu • ······· uvedené sloučeniny (21 g), 92% výtěžek. Hmotnostní spektrum (FAB)

227,3 (M+H⁺).

Krok 2

Produkt z předcházejícího kroku (20 g) byl rozpuštěn v EtOH io (150 ml) a smísen s 10% Pd/C při tlaku 1 atm (0,1 MPa) vodíku 3 dny. Směs byla zfiltrována a filtrát odpařen za získání v názvu uvedené sloučeniny (20,3 g), 100 % výtěžek. Hmotnostní spektrum (FAB) 229,2 (M+H⁺).

Krok 3

Produkt z předcházejícího kroku (20 g) byl rozpuštěn v MeOH (150 ml) a smísen s roztokem LiOH (3,6 g) ve vodě (50 ml). Směs byla míchána po dobu 18 hod a zakoncentrován ve vakuu. Zbytek byl rozpuštěn v chladné vodě (100 ml), roztok byl okyselen na pH 2 až 3 5N HCI, a získaná směs byla extrahována EtOAc. Extract byl sušen nad bezvodým Na₂SO₄, zfiltrován a filtrát odpařen za získání v názvu uvedené sloučeniny (17,1 g), 97% výtěžek. Hmotnostní spektrum (FAB) 201,2 (M+H⁺).

·· · · · · ·· · • · · · · · ·

Krok 4

1. Produkt z předcházejícího kroku (3,0 g) byl rozpuštěn v Et₂O (150 ml), smísen s Et₃N (2,1 ml) a roztok byl ochlazen na -78 °C. Po kapkách byl přidán pivaloylchlorid (1,85 ml) a po 0,25 hod dalšího míchání byla reakce ponechána ohřát na 0 °C v průběhu 0,75 hod, a potom byla znovu ochlazena na -78 °C, za získání roztoku směsného anhydridu pro reakci v části 2.

2. Roztok (S)-4-benzyl-2-oxazolidinonu (2,66 g) v THF (22 ml) byl ochlazen na -78 °C a po kapkách byl přidán 1,6M roztok (9,38 ml) n-butyllithia v hexanu. Po dalším 0,33 hod míchání při této teplotě byl roztok převeden jehlou do chladného roztoku z části 1. Směs byla míchána při -78 °C, potom ohřátá na 0 °C a míchána při této teplotě 0,5 hod. Organická vrstva byla oddělena, vodná vrstva byla extrahována Et₂O, spojené organické podíly byly promyty roztokem soli, sušeny nad bezvodým Na₂SO₄, zfiltrovány, a filtrát byl odpařen. Zbytek byl čištěn chromatografií na silikagelu s eluci gradientem hexan/EtOAc (9 : 1) za získání v názvu uvedené sloučeniny (5,0 g), 93% výtěžek. Hmotnostní spektrum (FAB) 360,4 (M+H⁺).

Krok 5

Produkt z předcházejícího kroku (2,7 g) byl rozpuštěn v THF (25 ml), ochlazen na -78 °C, převeden jehlou do roztoku 0,5M bis(trimethylsilyl)amid draselný/toluen (16,5 ml) v THF (25 ml) při -78 5 C, a získaný roztok byl míchán při -78 °C 0,75 hod. K tomuto roztoku byl jehlou přidán roztok trisylazidu (3,01 g) v THF (25 ml), předem ochlazený na -78 °C. Po 1,5 min byla reakce ukončena kyselinou octovou (1,99 ml), ohřátá na laboratorní teplotu a potom míchána 16 hod. Reakční směs byla zředěna EtOAc (300 ml) a promyta 5% io vodným NaCI. Vodná fáze byla extrahována EtOAc, spojené organické fáze byly promyty nasyceným vodným NaHCOs, potom roztokem soli, potom sušeny nad bezvodým Na₂SO4, zfiltrovány a filtrát odpařen. Zbytek byl čištěn chromatografií na silikagelu, s elucí EtOAc/hexan (1 : 3), za získání v názvu uvedené sloučeniny (2,65 g), 88% výtěžek.

Krok 6

Produkt z předcházejícího kroku (11,4 g) byl rozpuštěn v 95% kyselině mravenčí (70 ml) a zahříván na 70 °C 0,5 hod za míchám. Roztok byl odpařen ve vakuu a zbytek byl vložen do EtOAc. Roztok byl 25 promyt nasyceným vodným NaHCOs, potom roztokem soli, potom sušen nad bezvodým Na₂SO₄, zfiltrován a filtrát byl odpařen. Zbytek byl čištěn chromatografií na silikagelu za získání v názvu uvedené sloučeniny (8,2 g).

Krok 7

• · · · · · * 281: .· ·: :. :

··· · · ···· ·· ··

Produkt z předcházejícího kroku (8,2 g) byl rozpuštěn v CH₂CI₂ (16 ml) a ponechán reagovat s trifluoridem diethylaminosírovým (DAST, 7,00 ml) při laboratorní teplotě 3 hod. Reakční směs byla vlita io do směsi led/voda (200 cm³) a extrahována CH₂CI₂. Extrakt byl promyt nasyceným vodným NaHCO₃, potom roztokem soli, potom sušen nad bezvodým Na₂SO₄, zfiltrován a filtrát byl odpařen. Zbytek byl čištěn chromatografií na silikagelu, s elucí EtOAc/hexan (15 : 85), za získání v názvu uvedené sloučeniny (4,5 g), 52% výtěžek.

Krok 8

Produkt z předcházejícího kroku (3,7 g) byl rozpuštěn ve směsi THF (150 ml) a vody (48 ml), ochlazen na 0 °C, smísen s 30% H₂O₂ (3,95 ml), a potom s LiOH.H₂O (0,86 g). Směs byla míchána po dobu 1 25 hod při 0 °C, potom byla reakce ukončena roztokem Na₂SO₃ (5,6 g) ve vodě (30 ml), a potom byl přidán roztok 0,5N NaHCO₃ (100 ml). Směs byla zakoncentrována ve vakuu na 1/2 objemu, zředěna vodou (do 500 ml), a extrahována CH₂CI₂ (4 x 200 ml). Vodná fáze byla okyselena na .:..:..-282.-.:.. ·..··..· pH 1 až 2 5N HCI, a extrahována EtOAc (4 x 200 ml). Extrakt byl promyt roztokem soli; potom sušen nad bezvodým Na₂SO₄, zfiltrován a filtrát byl odpařen, za získání v názvu uvedené sloučeniny (1,95 g),

91% výtěžek, který byl ihned použit v dalším kroku.

Krok 9

Produkt z předcházejícího příkladu (2,6 g) byl rozpuštěn v Et₂O (50 ml) a míšen po kapkách s roztokem CH₂N₂ v Et₂O, dokud roztok zůstával žlutý. Roztok byl míchán po dobu 18 hod, potom odpařen ve vakuu za získání v názvu uvedené sloučeniny (2.8), která byla ihned použita v dalším kroku.

Krok 10

F F

Produkt z předcházejícíhokroku (1,95 g) byl rozpuštěn v MeOH (150 ml), smísen s kyselinou mravenčí (1,7 ml), potom smísen s 10% Pd/C (3,3 g, Degussa type E101) při tlaku 1 atm (0,1 MPa) vodíku 1,5 hod. Směs byla zfiltrována a filtrát odpařen za získání v názvu uvedené sloučeniny (2,1 g) jako soli s kyselinou mravenčí, která byla • · · · ···· .:..:.^282-.:.. ·..··..· ihned použita v dalším kroku.

Krok 11

F F

Produkt z předcházejícího kroku (2,1 g) byl rozpuštěn v 1,4dioxanu (100 ml) a byl přidán di-terc-butyldikarbonát (1,9 g) a potom io diisopropylethylamin (2,9 ml). Roztok byl míchán po dobu 18 hod a zakoncentrován ve vakuu. Zbytek byl smísen s vodným 5% KH2PO4 a směs byla extrahována EtOAc. Extrakt byl promyt roztokem soli, potom sušen nad bezvodým MgSO₄, zfiltrován a filtrát byl odpařen. Zbytek byl čištěn chromatografií na silikagelu, s elucí gradientem 15 CH₂Cl2/Et2O, za získání v názvu uvedené sloučeniny (2,5 g), 99% výtěžek. Hmotnostní spektrum (FAB) 307,9 (M+H⁺).

Krok 12

Produkt z předcházejícího kroku (2,5 g) byl rozpuštěn v 1,4dioxanu (35 ml), smísen s vodným 1M LiOH (17 ml), a míchán 2 hod.

Reakce byla ukončena směsí led/voda (125 ml), směs byla okyselena na pH 3 až 4 3N HCI, a extrahována EtOAc. Extrakt byl sušen nad bezvodým MgSO₄, zfiltrován a filtrát byl odpařen za získání v názvu uvedené sloučeniny (2,3 g), 96% výtěžek. Hmotnostní spektrum (FAB) • · · · · · · :λ 2845.:1 ’ ^:.5·.5

294,0 (Μ+Η⁺).

Krok 13

1.5

Požadovaný produkt byl připraven podle postupu v příkladu

XXIV, krok 3.

Krok 15

Požadovaná kyselina byla připravena podle postupu z příkladu

XXIX, krok 4.

Příklad XXXVI

Příprava sloučenin vzorců XXXVI a XXXVIII

Sloučeniny vzorců XXXVI a XXXVIII byly připraveny podle následujícího schématu a s použitím výše popsaných preparativních příkladů 11 až 15.

cf. Preparative Example 15 ·- 286·-........

Sloučenina vzorce XXXVIb byla připravena ze sloučeniny vzorce

XXXVIa následujícími známými postupy:

10% Pd/C

TsOH,MeOH,H₂O

XXXVIa

K roztoku sloučeniny XXXVIa (6,58 g, 22 mmol) v 100 ml MeOH byly přidány 10% Pd/C (0,8 g) a kyselina p-toluensulfonová (4,2 g). Reakční směs byla zpracována hydrogenací při teplotě laboratoře přes noc. Reakční směs byla zfiltrována přes celit a promyta přebytkem MeOH. Spojený filtrát byl zakoncentrován ve vakuu za poskytnutí v názvu uvedené sloučeniny XXXVIb jako gumy. Konverze sloučeniny XXXVIb na XXXVI a XXXVII probíhala způsobem ukázaným na schématu výše a v preparativních příkladech 11 až 15.

Příklad XXXVIII

Příprava sloučeniny vzorce XXXVIII

Sloučenina vzorce XXXVIII byla připravena s použitím následujícího schématu a preparativních příkladů 11 až 15 diskutovaných výše.

•••••«287·< ·~· ··’*··’

Příklad XXXIX

Syntéza sloučeniny vzorce XXXIX ch₃^ch₃

XXXIX

Krok 1 <•288··

CbzHN

XXXlXa

CbzHN^XXXlXb

Roztok sulfonylchloridu XXXlXa připraveného postupem podle H. Mcklwain (J. Chem. Soc. 1941, 75) byl přidán po kapkách ke směsi 1,1 ekv. t-butylmethylaminu a triethylaminu při -78 °C a směs byla míchána při laboratorní teplotě 2 hod. Reakční směs byla zakoncentrována ve vakuu a čištěna chromatografií (SiO₂, hex/aceton 4 : 1) za získání sulfonamidu XXXlXb jako bezbarvého oleje.

Krok 2

CbzHN

0^<S<O

XXXlXb

H₂N^^ .N.

0^*0 XXXIXc

Roztok Cbz-chráněného aminu XXXlXb byl rozpuštěn v methanolu a smísen s 5 mol% Pd/C (5% hmotn./hmotn.) a hydrogenován při 60 psi (414 kPa). Reakční směs byla zfiltrována přes lože celitu a zakoncentrována ve vakuu za získání volného aminu XXXIXc, který stáním ztuhnul.

Krok 3 nAAoch₃

XXXIXd

Hydroxysulfonamid XXXIXd byl syntetizován podobně jako v postupu syntézy sloučeniny XXVf, kromě náhrady aminu XXVd sloučeninou XXXIXc. Surová reakční směs byla ihned použita v další reakci.

Krok 4 ch₃^ch₃

XXXIXd

Hydroxyamid XXXIXd byl oxidován na sloučeninu XXXIX s použitím Dess-Martinova činidla postupem popsaným pro syntézu 15 sloučeniny XXV (krok 5). Surová směs byla čištěna chromatografií (SiO₂, aceton/hexan 3 : 7), za získání sloučeniny XXXIX jako bezbarvé pevné látky.

Test na inhibiční aktivitu na HCV proteázu ₂o Spektrofotometrický test

Spektrofotometrický test na serinovou proteázu HCV byl prováděn pro sloučeniny podle vynálezu postupem popsaným autory R. Zhang a další, Analytical Biochemistry, 270 (1999) 268 - 275, jehož obsah se zařazuje odkazem. Test je založen na proteolýze ₂5 chromogenních esterových substrátů a je vhodný pro kontinuální monitorování aktivity HCV proteázy NS3. Substráty byly odvozeny od místa P sekvence spojení NS5A-NS5B (Ac-DTEDWX(Nva), kde X = A nebo P), jehož C-koncové karboxylové skupiny byly esterifikovány • ··· . · · · • · · · · · .· · . * .:..:..-29(/.:.. ·..··..· jedním ze čtyř různých chromoforních alkoholů (3- nebo 4-nitrofenol,

7-hydroxy-4-methyl-kumarin, nebo 4-fenylazofenol). Dále je uvedena syntéza, charakterizace a použití těchto nových spektrofotometrických esterových substrátů pro screening velkého množství vzorků a podrobné kinetické vyhodnocení inhibitorů proteázy NS3 HCV.

Materiály a metody

Materiály: Chemická činidla pro pufry potřebné pro test byla získána od firmy Sigma Chemical Company (St. Louis, Missouri). Činidla pro syntézu peptidů byla od firmy Aldrich Chemicals, Novabiochem (San Diego, California), Applied Biosystems (Foster City, California) a Perseptive Biosystems (Framingham, Massachusetts). Peptidy byly syntetizovány ručně nebo na automatickém syntezátoru ABI model 431A (firmy Applied Biosystems). Spektrofotometr UV/VIS Spectrometer model LAMBDA 12 byl od firmy Perkin Elmer (Norwalk, Connecticut) a 96-jamkové destičky pro UV byly získány od firmy Corning (Corning, New York). Předehřívací blok byl od firmy USA Scientific (Ocala, Florida) a míchačka pro 96-jamkové destičky byla od firmy Labline Instruments (Melrose Park, Illinois). Odečítací zařízení pro mikrotitrační destičky Spectramax Plus s monochromátorem bylo získáno od firmy Molecular Devices (Sunnyvale, California).

Příprava enzymu:

Rekombinantní heterodimerní proteáza HCV NS3/NS4A (kmen

1a) byla připravena použitím dříve zveřejněných postupů (D. L. Sáli a další, Biochemistry, 37 (1998) 3392 - 3401). Koncentrace proteinů byly zjišťovány metodou barvení Biorad s použitím standardů protázy HCV dříve kvantifikované analýzou aminokyselin. Před zahájením testu byl vyměněn pufr pro skladování enzymu (50 mM fosforečnan sodný pH · ·.····· • · · · · · (· · · · - 2S1·..··..·

8,0, 300 mM NaCI, 10% glycerol, 0,05% laurylmaltosid a 10 mM DTT) za testovací pufr (25 mM MOPS pH 6,5, 300 mM NaCI, 10% glycerol,

0,05% laurylmaltosid, 5 μΜ EDTA a 5 μΜ DTT) s použitím hotových kolon Biorad Bio-Spin P-6.

Syntéza a čištění substrátu

Syntéza substrátů byla prováděna podle autorů R. Zhang a další, (výše) a byla zahájena ukotvením Fmoc-Nva-OH na 2-chlortritylchloridovou pryskyřici s použitím standardního protokolu (K. Barlos a další, Int. J. Pept. Protein Res., 37 (1991), 513 - 520). Peptidy byly potom sestaveny použitím chemických reakcí Fmoc, buď ručně nebo na automatickém syntezátoru peptidů ABI model 431. Nacetylované a úplně chráněné fragmenty peptidů byly od pryskyřice odštěpeny buď 10% kyselinou octovou (HOAc) a 10% trifluorethanolem (TFE) v dichlormethanu (DCM) 30 min, nebo 2% kyselinou trifluoroctovou (TFA) v DCM 10 min. Spojený filtrát a promývací roztok DCM byl azeotropně odpařen (nebo opakovaně extrahován vodným roztokem Na₂CO₃) pro odstranění kyseliny použité při štěpení. Fáze DCM byla sušena nad Na₂SO₄ a odpařena.

Esterové substráty byly sestaveny použitím standardních reakčních postupů kyselina - alkohol (K. Holmber a další, Acta Chem. Scand., B33 (1979) 410 - 412). Fragmenty peptidů byly rozpuštěny v bezvodém pyridinu (30 až 60 mg/ml), co kterého bylo přidáno 10 molárních ekvivalentů chromoforu a katalytické množství (0,1 ekv.) kyseliny para-toluensulfonové (pTSA). Byl přidán dicyklohexyl-karbodiimid (DCC, 3 ekv.) pro zahájení reakcí. Tvorba produktu byla monitorována HPLC a bylo zjištěno, že je u konce po 12 až 72 hod reakce při teplotě laboratoře. Pyridinové rozpouštědlo bylo odpařeno ve vakuu a dále azeotropním odpařením s toluenem. Ester peptidu byl zbaven ochranných skupin 95% TFA v DCM 2 hod a extrahován třikrát bezvodým ethyletherem pro odstranění přebytku chromoforu. Substrát bez ochranných skupin byl čištěn HPLC s reverzními fázemi na koloně C3 nebo C8 s gradientem 30% až 60% acetonitril (s použitím šesti objemů kolony). Celkový výtěžek po čištění HPLC byl přibližně 20 až 30 %. Molekulová hmotnost byla potvrzena hmotnostní spektroskopií s elektrorozprašovací ionizací. Substráty byly uchovány ve formě suchého prášku v exikátoru.

Spektra substrátů a produktů

Spektra substrátů a odpovídajících chromoforních produktů byla získána v testovacím pufru pH 6,5. Extinkční koeficienty byly zjištěny při optimální vlnové délce mimo vrchol v kyvetách 1 cm (340 nm pro 3Np a HMC, 370 nm pro PAP a 400 nm pro 4-Np) s použitím vícenásobného ředění. Optimální vlnová délka mimo vrchol byla definována jako vlnová délka, která poskytne maximální frakční rozdíl v absorbanci mezi substrátem a produktem (OD produktu - OD substrátu)/OD substrátu).

Test na proteázy

Testy na proteázu HCV byly prováděny při 30 °C s použitím 200 pl reakční směsi v 96-jamkové mikrotitrační destičce. Podmínky testovacího pufru (25 mM MOPS pH 6,5, 300 mM NaCI, 10% glycerol, 0,05% laurylmaltosid, 5 μΜ EDTA a 5 μΜ DTT) byly optimalizovány pro heterodimer NS3/NS4A (D. L. Sáli a další, výše)). Typicky bylo do jamek vloženo 150 μΙ směsí pufru, substrátu a inhibitoru (konečná koncentrace DMSO 4 % obj./obj.) a ponechány inkubovat při 30 °C přibližně 3 min. Pro zahájení reakce bylo potom použito 50 μΙ předehřáté proteázy (12 nM, 30 °C) v testovacím pufru (konečný objem 200 μΙ). Destičky byly monitorovány po celou dobu testu (60 min) pro zjištění absorbance při příslušné vlnové délce (340 nm pro 3-Np a HMC, 370 nm pro PAP a 400 nm pro 4-Np) s použitím • ·· ·· ·« ·« ··· • * · · · · · · · · · * · · · « « · · • ««··« .«· · .:..:..-2^3 4.. ·..··..· odečítacího zařízení pro mikrotitrační destičky Spectromax Plus vybaveného monochromátorem (přijatelné výsledky lze také získat s odečítacími přístroji využívajícími spektrální filtry). Proteolytické štěpení esterové vazby mezi Nva a chromoforem bylo monitorováno při vhodné vlnové délce proti blanku bez přidaného enzymu jako kontrole pro neenzymatickou hydrolýzu. Vyhodnocení kinetických parametrů substrátu bylo prováděno v třicetinásobném rozmezí koncentrací (~6 až 200 μΜ). Počáteční rychlosti byly zjištěny metodou lineární regrese a kinetické konstanty byly získány proložením těchto údajů pomocí rovnice Michaelise-Mentenové pomocí nelineární regresní analýzy (Mac Curve Fit 1,1, K. Raner). Čísla přeměny (k_cat) byla vypočtena za předpokladu úplné aktivity enzymu.

Vyhodnocení inhibitorů a inaktivátorů

Inhibiční konstanty (Kj) pro kompetitivní inhibitory Ac-D-(D-Gla)-L-l-(Cha)-C-OH(27), Ac-DTEDVVA(Nva)-OH a Ac-DTEDWP(Nva)-OH byly zjištěny experimentálně při pevných koncentracích enzymu a substrátu vynesením poměru v₀/Vj proti koncentraci inhibitoru ([l]₀) podle přeuspořádané rovnice Michaelise-Mentenové pro kinetiku kompetitivní inhibice: v₀/Vj = 1 + [l]₀/(Ki (1 + [S]₀/K_m)), kde v₀ je neinhibovaná počáteční rychlost, v, je počáteční rychlost v přítomnosti inhibitoru při jakékoli dané koncentraci inhibitoru ([l]₀) a [S]_o je použitá koncentrace substrátu. Získané údaje byly proloženy metodou lineární regrese a výsledná směrnice, 1/(K,(1 + [S]₀/K_m) byla použita pro výpočet hodnoty Kj*.

Získané hodnoty Kj* pro různé sloučeniny podle předkládaného vynálezu jsou uvedené v tabulce výše, kde byly sloučeniny uspořádány v pořadí podle rozmezí hodnot K,*. Z výsledků těchto testů je zřejmé odborníkovi v oboru, že sloučeniny podle vynálezu jsou výborně použitelné jako inhibitory serinové proteázy NS3.

• ·««··«·» · -^944..

I když byl předkládaný vynález popsán na uvedených konkrétních provedeních, odborníkovi v oboru budou zřejmé mnohé alternativy, modifikace a jiné variace těchto příkladů. Všechny takové alternativy, modifikace a variace mají spadat do rámce a podstaty 5 předkládaného vynálezu.

Tabulka 2

Příklad	Struktura	Mh
1	O í 7 i» ti X 0 < £ O^-O ^—\T	691,7853
2	yX 2 i. < ’	627,7441
3	0 s •s * Ά° '-r í ... X X o	754,8883
4	!7 / ° \ (' · o <	527,6259
5	Ϊ5 \ o b Ί Ιχ X- o O λ O /-o 1 υ-γ-Χ) .	698,7799
6	pWr-A^ A í %	631,7352
7___	(2 >=o r u lf	381,476

8	am. CH. ° /ť ur // Ν >9 0 \_ ^ 0	540,6626
9	U ΑΑχ V CH	498,5813
10	°··. ο Ύο 7===^ 9° ' c'o Υ	633,7482
11	AAA y ο ο α	641,7249
12	ΗΙ£—_Ζζ^α'^'''’^ ί 0 Αί 0 '^ί	641,7249
13	Κις^,*'’ β I ' Ζ 4 Α\>’ r=^ - . , y Μ 0 \__/ χ--	683,8061
14	Μ^/0’ <-Χ ο^\ ' / X /Η o“ί /	637,7802

• · · · · ··· ,:257

15	υΛ I οΑ ο	637,7802
16	'-Ρ	637,7802
17	' ο \ ·> /-ν\ ο z· ό%	625,769
18	' p—< 0 0 H’c 0 Ν—/ ΟΜ ►ο	613,6707
- 19	>=« ►0	613,6707
20	ο \ II Ιι ! (Λ Q° u 0 v z	627,6978
21___	AK °/~~^—p. v o^~Y“ 0 /1-< M3 J -	609,726

•..•r:298s.

22	o / N O 0 < t. HO	609,726
23	[ c>S .p 0	609,726
24	r\ 0 o z/o =«i ° Γ~\ ic OZ \__V”-**	611,742
25	’ Xl^-Ap 0 * J	600,7183
26	cwp·'-!. A-č ° 1 \ u \=o ť 0	554,7361
27	PXf 0 M M MX	478,5937
28	O Λ z^-\ A >> J=OXy O^N H	546,7132

* ^:..^:3k9bs.^s*..^:

29	S OS O^M	562,7562
30	rU 5=o J*o~Z •í y χ Ά j 1 wx) X \/ * ' J o	699,8519
31	o ιΦ'Μ λ ΐ σ ' A 0= J	643,7435
32	ψ^ν-Αρ ' “ AX ! Ý N w.c	> 509,6077
33	v Caz'/ O 4?—* 0 • °-^H ° /-^ • Ζά '^cx,	637,7802
34	Γ-Λ H‘c'^\r< o Jr-* o Ο^,Ν °)— °> v „/''ex,	637,7802
35__	aXq K,c I O /“ 0 °5>^* 0 ’S' Π_(Ο	579,6995

·..·j_eoo%.··..·

36	*s ° Z““' Λ—ν ο *SC X	537,6619
— 37	V-N O CH	539,6342
38	X CkJi ° )-/ a ' ' y·* ° H.C \_^ J. CH Ά OS	597,7149
39	0 □ . °^N 0. 1 /? xV04,3 \___/ 0 CH.	493,6055
40	—-----0 p 'χ^'ζ Z—f Z—\ \=O ^V=O Y I n X	632,8044
41	O^°Y° A. V 0V=0 np OS | C 4 _/ Y 0 X K $ -.C	747,8965
42	lCTaJ / N MX	523,6348

·· s-361 -··

43	ί o Os=< ct ° ° V δ	598,7024
44	_ /*X 0 0 O S 0 I o r η\ A	578,712
45	0 o L Jx TT x^x/^A o O^N 0 l·	495,6214
46	o»J a) = M 0 A jTT i a ''TT 2	627,7878
47	H l< l 0 O 0 Η 1 L 0	541,6501
48	?s o f c • JL A^ix^^Xřř0 0 c H í °Ί 0	543,666
49__	A o < a AAA^AA CCC° T ϊ Η 1 0	501,5847

S02 -

50	q a O J 0	656,7394
51	2 YC^os	578,712
52	_—_ /Ύ . o o (i ” -0^ z-^os 0 / *0 ° / 0 „XM A Γ o	725,8901
53	í M© cv q M3	584,6782
54	I 5 X. M© / \ o C\ \ ) O '---( u af	538,6467
55	/*^1 o 0 L-Áj' o / % 0 0 T- PS °s N '-_0 c-4 z-—n 7 0 Cj	685,8248
56	r <j=\ ' i'-Vi	527,6695

·· --363--

- 57	f I 7 oj” A ’ Wb	810,9557
58	OM 1 vP o Vs CH, O U.)	552,6737
59	1 =^y° =. i ° o yH -y i j y O	592,7391
60	cm: ? v$=o ^v>-o o	534,702
61	^bO^XyJL 'i *0 y. H,cy^y c o	653,8232
62	Λ \W v y j y=o z Y o b	696,892
63__	ϋ o í 2 h !! Jll x^x0” rt^r^^r l Ayy>° ° 0 M 1 I J 1 \y o^o	606,7662

·· !·304 -··

64	γ-* OS	643,7435
65	Ο^Η <>. OS fT^ ύΑ ®S	742,8771
66	r py®· “’'AoA α <Y YY 2 Γ’ °	747,8965
67	Ax? CA y 0 “ητ-χΛ ’) 5 » I 0 i /“xj ®s WAA	747,8965
68	Í o ?'O Yu «•-/A A s/	761,9236
69	Q P r' ? । η b “s i 0 ’'il a ; 3 0 o	747,8965
70	T 1 yA» °A S- / o OBS^	733,913

•-•305 -

71	η Ρ 0 Ό	746,9118
72	X ο/ ί	646,7935
73	9 0 ο=^ 8__^ •i?·’ Q· ο/ 1	746,9118
74	ο—X” 0 7 ’Š>-M r U 1 - Q ο ’^Ν Ύ+Χ, ι ι sU	668,8782
75	OH ^“χ 0. f 0 Γ ^0 KC'^l 0 ^*Ν II ι^ Ν ? ° X Χ-= li S\X	628,8129
76	αΛ °Ύ Kf 7=ο ^-^- if	760,9792
77	χί ΟΧ»’ Χ'ίο < 1	818,0723

” -‘3V6 -

78	J „y? čPíA \ >° Ό \ s-<O o	761,964
---- 79-		844,0702
80	η θ Γ ? I Ο Τ' M-C1 τ t' o ® γ XX a ^-^a ΑΑγ-^ΑΑo °	753,9443
81	p. . “· »^Α^Λ-νΑίΛΛ ; Y <,	844,0702
82	os 0 * . Ό	753,9443
83	''Ά C3 ^áXo 2 °s aay^yaa’· ° Ό	747,8965
84__	b o λχ ΟβΖ / O X—. ·ΚΌ dp	804,0049

3Ό7 -

85	Λ X ° ’ ΊΓ Ύ f ϊ « V*' = ° ‘ ‘0	879,2858
86	r^i €3 ° A Γ1 αΥΥλ. ' '0	823,1774
87	P _[ A-0 ΛΑ·· ) y v ex, A—-A A. o = Aáá Ya a	832,0994
88	o / .. Al·* 0^__J o 0 A Ά. o V' = vrA •ÓT)	775,9911
89	° A-aW • Ό	725,8901
90	*;C CMj ”A e ΓΛ> / ΆΝ > ΑΛ 1 ο / ο M.C''’^') 0 Η O A. ^-s	698,9483
j 91___	OH A \ Γ U A 0 / 0 H,C| 0 Ά*Η °τΆό Ό<)	642,84

’* -*3t)8-’·

92	1 _ O *—/ ° z—v \=O * ”$X Λ A r	853,0995
93	o o, 0 τρ Γ”\ ?S 1 1 1 1 j. ) J V p ® 7» 0 0 Qj	789,9778
94	X.^. OH 0	809,9682
95	0 0 ,K :Ž? So a	878,8583
96	' Q X ilX Γ ΑΑΑχχ ř o 0 οΑζγ^^γ^α O C3	772,006
97	o ^Í=Q^ r /Λ-? h	761,9672
98_	I j * 1 £> Τ' f ? Ϊ OS “ -s • '0	728,85

3T)9 -

99	i La 1 o. 1 QÁ s ď °Ύ ť*	828,0239
100	n d/ V—«λ *Ά Λ o o Xo / A	789,0334
101	A Y ° oz \ ^1/0 í-o -A υ jf	775,0063
102	a . A ^*^0 ov / xo □ ό ΎΥ%	886,1102
103	Ω Q Oí=Z '--' OA o	880,8306
104	r ‘ ó	855,0718
105___	°!	790,7047

310106

107

108

109

110

111

821,0543

685,7812

891,8973

775,0063

785,0452

789,0334

803,0605

112

113	PC QM 0	862,4689
114	H,C Ά ,η cA· ° Λ υ 0 - ρ 0	884,1323
115	ί J rfly <cd .? ϊύ ί 3	889,5384
116	= 1 !Τ' Τ Ά^ VpCV ΐΛ ° ° ο	887,1794
117	•Κ X-C □ =/ '—' Co C ο/-. ο	831,071
118	0 rV^ 7s ° χ^®, ° C^0 1 0 Ο ο	830,0863
119	β rí-^ ?s ^c-ΑΛΑ v β -.^=5 Ž ι T ICvvA, V*°S o*tt >< li T ° * Q	858,1405

120

121

122

123

124

125

904,1227

929,195

873,0867

872,1019

900,1561

874,1399

860,11

126 I

-*3‘1 3

·· 314-*·

134	η ? Ψ Λα Α 0 Ο'^'ίΛ, Οι	842,1382
135	Λ~1 ° V O\”s Τ’ r ο ο* 11” μ ι = «Αγ^γΑ ο ο Α>.	786,0299
136	ajApx -...r ° Xaac· C 0	813,0994
137	O A) /—1 ° ^ \ * 0,1 X A A A A~ / *sc. -.ο. Α^ΎΥ Ao 3 Y T II 1 ‘ Ό	829,0988
138	<> 8-^ ™ / V/ \=SO αΎ Y 0=( o d	788,0022
139	ft 0 Oo r X O=t/ ft—. / = O A /—. \ = o 0=7 o Ó ...... 1 '“ ·	815,0717
140__	xidv^ ά II j f n ? ο a Os.	846,1265

·’ -’315

“ -716 - ·*

.........SV-” ··

	155	0 /Uj 0 < ° 0 >c > “· e-C ’ Χθ1ι	816,0784
156	A Q LA upr Yr _ o L o o y-* 0 y “Ά	773,0125
157	A o OAaA °vP ° 4 ’ ° •'X	787,0396
158	9 A . a TT *x \ Az* A^-0 A aV-4 S ι o T-.c0’- y - a !	850,0959
159	Q s, o ρΑΑΑγΑ^γ-^ο, % Α» c S ° r ®s	807,03
	1 9*o A—» r J Ά~ ' b 4ri7	I 821,0571

“ -219 -

169	& β	817,0876
170	A Ύ =^° 0 °·' Ά s y z*\ T T i / ° 0 vj	817,0876
171	Í o iXo r í-yVo '°4 P u.	777,0223
172	O ° 1* /V5 *r+Wn ··.'· °S 0 >^0 0 Ό	777,0223
173	p / / y-H Ύ = /^0 0 'O’. ApM' Ο o .	I 801,0882
174	ο P A o * /—\ o=Z '—' Αί ps 0	919,9515
175	0 7 cX^S^o 11 1 ° - 0 “0	919,9515

- 320 -

183	0 “0	763,9799
184	JÍA~’os, Y’ X e T β T ] f ll 1 «. ° yS 0 Ό	791,0494
185	^αΧΧλ 3 * T ll 1 3 Ό	791,0494
186	o o Γ X\“4 -γ-Λγγ 9 o . v os = Αγ^Α^. ' 0	791,0494
187	«.^os O o | r^5 X o í ‘1 í II 1 ° ií N h i 0 ° 0 l<f:^]	809,0674
188	í o ífo c rA° Qy: Q >=o gj—< u z >o	809,0674
189	ťf n Ί rO rSÁ w Xp	823,0945

190	Ž X-Í ° Ji	823,0945
191	A-ý X o / (y A 4	865,1758
192	5 o 4/0 r AA X £ 14	865,1758
193	o oA y:P(i Ji >f 7b Ji' *	817,0876
194	oA o=< .1 \ ° Ji Po Ji' ·?	817,0876
195	<# op \ X rv.	1606,121
196		1606,121

323 -

197	4b	1638,12
198	?o *. e r“'y byr'* yp	1638,12
199	?s Z \ H>e^L-©S \ / □ I y \ * ®% JL Ax. X<~ ž X* Η,£χ ’•wii r ° i 0 ’•^l “ |T T^° ° 3 Λί^Χ rj	775,0063
200	o .y yyi ) —o o-P ° 5	775,0063
201	'j- 0 AyyA - -Λ’υΆ· V 5 ° Ό '	763,887
202	ý, o y ř^< í \—o o—< jo ?	707,7786
203 _	. / d ο^Αγ^Χχ^ °Ó “	734,848

• ·· ·

204	Ή* °s —-o	774,9659
205	Y* ©s /***q	800,0139
206	6mA X—K o < 0 o °v 0 1 y-M -, r°	687,7971
207	/ ©b r X,G—\ ©h	714,8666
208	©•i «, “Vv^V? / s ”'X 0 :ó	853,0774
209	S] o i- 5o ů /4Q>< Q \=so 4—< Xd 4°	853,0774
210__	Γ JJ b o O	811,0398

...... ” -’575 - ” ”

211	vK O 0 Γ r\s 0X1 «ΑΧΑΡΑ J o A 0 Ai j ° u ° °q	811,0398
212	A 0	811,0398
213	n * Λ- Α ’4 40 h i	817,0876
214	9; ’ ^γΌ S · f •0	817,0876
215	u . 0 -	835,1057
216	Z °1 H.C /—“^ • X 0 / 0 / A--N ¢/ Η..2γ^ o k«ii '	630,8288
217_	OH KC r^o u r.· \ ^CH, Ox 1 0 «c—Y 1 0 Á 0 II j γγ	616,8018

......-’326 - ·

218	7 Q r—, o o ex, Ο - X » A ' Γ 0¾^ °h 2 ^G^OS	742,9208
219	,=jp KC A LÍ Ύ» 9 Α> o'— ο ο S=^f·0 ι ch,	744,9367
220	0 V vaV> ' s }	735,9694 r
221	If o rk> Γ Apo w M-o P°	853,0774
222	if „ Ao \®o Í oA «—» Yo w o £	809,0862
223	p y-Ad 0 c A Aau. s kU	749,9965
224	A ps Aa _A ο, r o H,<r η ο ύ.ν aaU	612,7703

*S27

225	OH A ox r£ A A PS ' . 0 / 0 AX -	598,7432
226	HjC A Q /—. Ο o CH, r\ A a 11 A > τΎ Yy AT η,ο-R A. 0 < o o I °γΝ r° KjC^CK,	758,9638
227	4 A' ‘1 4° z O~ / y-t> y. a0	684,8401
228	Aa a ok Ao Τ'\ m ) ^,N \ __/ os 4 O'Q Xos	758,9638
229	o A %-Á θ ps s°A4 • o / xc Μ,χη 0 ύΧα	758,9638
230	θ>·, A ;ao 4 o/./ °	795,0404
231__	00	795,0404

232	Ά '--' \=ο ο—< ς ο X 5!	624,7815
233	δ \=ο °=\ /--V rd . ťť b r	610,7544
234 .	j n K )—\ ° ° r 9 y~2 -7 ><As L z /=^ O=/ '—' y	770,9749
235	c— a- H.C n X O / o KC^? γ-Ν Λ v τιΡΡ 'o-C*’ =»>	612,7703
236	3 P 0<ϊγζ·Ν ^CH, ^'s-z'0 CM,	722,8369
237	CH / P--n ° C> λ.'P1-° h_c η o X>-n XPA	598,7432
238	AppC _or 0 M * ”[] 0 ‘0	795,0592

239	η ο— Λ ί	758,9638
240	.ČA- __.aAy Λ Ά 0 Ό	839,0414
241	9 °Α_ ’ Ο Ζ*ί 0 ο γ PS < I „ Π „ ίι ΙΑ ! || I II M II 3-^ 0 < 0 o ——K / 0 I Cj	729,8375
242	hC -} n X O □ / y-N a °^' ° ii T i / o xt*.^ ’—As	756,0443
243	*s\ )— νΆ / X-—OH M.C Γ--^ ' \ 0 i 0 / '^-N H H,~—iX 1 q N VNYů	701,9518
244	JI A / /( y '7 I Í	734,0159
245	A ř \ 1 oV Í )/ O=o<f í o A /	715,9789

246	ch, N-Z _/ OH A y A vX o VJ 0 y44	715,9789
247	/—OH y44 <4^ o Vů 0 XXL Á TX%	741,9951
248	δ O X 1 o=r/ /4AÝ á	821,0786
249	o. c-^ / ’ f_____Z °^N ° °s 44 J. 0 / o I j? 'X—N OS	626,7974
250	/-LJ OH ' A HxC'^\ 0 ' c ) ___N °s V-4 JL 0 / 0 H.C η 0 —N OS	612,7703
251	S κ ° Q Γ' Χ4λΥ M^c'^y^‘0 ] °γΝ => 4 XC^CM,	698,8672
252	I^Cy0^ 0 y—0 ° -XaTYt^0^ 0 ] O^N OS 0 M<^os	674,842

- 331 -

253	’A A P ?	584,7162
254	γ ov Ao O / 'y—N \—^/ x 1 Z/*' O ° PA “kAS“ \ * s )	735,9694
255	0 OS w Ά v^3 O Λ . A \=Α^Α’	772,9909
256	áa7 Y*H os Xc	776,9383
257	7 <H ás 35 ° Y-j 0=/ ίγ' \_Lo	626,7974
258	H i s V ok3 0 V- 0 । Γ o, •seX^	835,0189
259_	n A\ 3 5 1^ Ά°	835,0189

• · .:: .: * ·

260	7 yT0 =*, >-€ 1 o / 0 οϊΫή	612,7703
261	CX, n. T Π 7’ A » TP ° J i ! II Ϊ “s ° 'yo 0 ® ΓΊ)	686,856
262	if o pO 5=0 o=< jf—y ^=O if,, yc A o Τ’ u.	686,856
263	° 1 A o ’A“' °*· ° A° ° 0 u	686,856
264	O’. MX/os A = 1A? -.--s A ’ A'-yU'-Yy-A 0 ° Ta	686,856
265	J \—. onP * aT Ji “=< }=° _ yG* z z	742,9236
266	-.<A ° 1 r~\ ^y^oAMAó>y <, -.a OS 0 0 0 /^X	738,9325

267	Ho - 0 A u	738,9325
268	V‘ o >=o _ X >o δ O=( /--' d X* A <7 A CM j-	817,0444
269	ra Ó □ ÍJ	738,9325-
270	N □ r^0 ΖΛ ?> X c > c κε·^η ο Ά^ν AA^iÁ	772,9909
271	Z o >°J· Á’ Hh •p’ ói· “ Jí	795,0592
272	CA n °” o M O 0 T^ T-**^*'^*' ϊ ίί χ ί' xAL As ο X ο ° I °γΝ	758,9638
273	ArŤA-^A *·ς ι^β Ί °γΗ ^OS .o	810,9966

\.·.:384 :..

274	Λ /° 4s 4° 4s	610,7544
275	Ρ °Η / y 3 4-4 JL 0 0 H.C η 0 <5—« ννΜ ° 1----( · «Η. CtP1 *0 j-CH, CH,	596,7273
276	Η. y y, Λ5 Μ λ ob	756,9479
277	0 ακ Η y^· V Λ Ο Ρ V ι. ο / ο y jy	756,9479
278	0^: y y y=° %·	744,9799
279	j n j5 jr \— o n n y . ^<4° 7	698,8672
280__	P )—v o n P H \=o I /=\ Qts/ V—/	698,8672

·..· .:385-··*’··’

281	/°-O A JL A4 o A ° ° “ 0 k	709,8471
282	KC p! V A 0	598,7432
283 '	Y Ο-i '1 -/7 y=o .δ A / ’ H. 71/ W \ r	810,9966
284	o C Zi A—. 0 0 Ά , ΥΎ ΥΎ ji As ο < ο o v 0 \ H,C-^=>S	758,9638
285	OŽ p. “A 4 A ř u	742,9236
286	0. ’>—। o a CA j< A>>m I1*’ ! i ji i V AA, 4-A 3 A 0 z<x 0 ®S pr· A 0 r’	817,0444
287	A o io	817,0444

·..·.:386-.·”···

288	0 at Η __ H,C 7% Μ/ί^Ά3^ J. 0 1 '°	759,9526
289	/A 0 / ,fL JL ^NH. Au <ϊ ‘ ivr^^o η O^N CH. H.C ’	494,6367
290	’ P. / \—N 0 / % 3 ov 0 0 ·\—-X	719,9263
291	a-V 1. O=/ y--' í Á° ίϊ Q.-f * °'' ďU0 \» 3f	731,938
292	Q u a /Ύ 1 %— H 0 °%—/ 0 0. v LP / J)	677,8887
293	í 0 0=< \=o 0' °A0 cď-L ř í^t ť*	612,7703
294	Q r-t 0 0 O JL AíVV qvn <Wi .0 mA^os	612,7703

295 1	n\ <9 P o=< A A,	716,9261
296	A Q °γΝ A r° «-.c^-cx,	717,9109
	I -- Q *Π b / <AJ o/-a A	950,0884
297
	i o o	729,9221
298	ť Λ * YA °^....^ A ‘-Γ υ.
299	zt Ύ -^r ' ”ΛίΗ -1 JZ y~ o o \ 5	578,712
300	Kc vo/-1 o o “4 AAf ch v A° kAch,	564,6849
301	n 7—i 0 9 Tr (ΑΑ·ΑΑο χ Τ’ |V i I kc—L L o < o Αφ । - Ο,γ,Ν °S KC^CH,	703,8838

·· ί·338 -·*

302	ý—y 0 η WvV ,ο Η,^Ο-,	553,7021
303	J . .9 ^ΧΎΥΤ C^N ά bScT^os	703,8838
304	ΛΛ ιι 11 1 ιι ί ϋ ο V 0 ι^° 1 αχ A ►χσ^οχ	552,7173 ____
305	Δϊ 0 os Xyy+ -“Υ Υ. 0 X c °γΝ Yy-0 V CH,.	523,6756
306	CA rx °· X ?= κσ^γ^0 ι ο^ν ^ο	731,9783
307	κ·°χ Δϊ. ο % Ν 1 η °γΝ CH,	509,6485
308	Vy01· Čk^/Lο\ if Π xk/A ο L ο H,C γ ο ] °γΝ ^os οχ	508,6638

• · · · · · · ·· -·*39 - ·· ··

309	° 4 λ Γ—\ 0 « 1 ΥΑ Ο;^Ν ο Η,ίΑ-Οή,	731,9783
310	psQyvS^’^’’ HC-d L q L o Yi ° I =Y* ^,0	667,8503
311	CA A I (° «.c^os	667,8503
312	H.C Q n CA x—< / T | a V--x c <o C. ' C I γ-* o CH,	567,7292
313	Π □ 0 C =% < ' JLaA “*· AV iY N A Q 's 0 C Γ ° ! iC CM,	724,9054
314	“’V“’’ iíA čc^^iX^ f « [Π A i Xm, M,C^-0 ν'Λκ,	724,9054
315	K,'^ K.C-L 4s. 0 X o 0 VI ° ’ «γ (° .c^os	762,9736

·· -*3*40 - -

316	H,C XX A 0 = Φ H.C-4 A. o X 0 C i^3 [ »y Sh, -O	764,9896
317	XA 3 o ;—. o o Y ©s xc-i A ο V 0 0 ^CX, 4 MjC^OS	764,9896
318	θ I? /--\ O ° ? j? °A p o * r{ r J ra 7 X c X rsi	764,9896
319	A J 5χ ? V a X f Ž. o=^~O s	908,0734
320	ά: X Χχ { \-o . Λ. ο χί * 1 υ u	724,9054
321	ť* o >~θ o \«y~ Vo 4q-( r 4>v	508,5638
322	O^N SH, KC^y0 ^CK	522,6909

·- .$41 - ··

323	V o-X oop Xqs o Jr °=< Ay rs s	522,6909
324	h-cJy L 0 L 0 0« °γΝ .· ^OS r° n.c^O<	731,938
325	1 jO f. / r A c „y )/ X >J íW .,¥°	744,9367 __
326	A ./ ° č „o ΧαοΆ A A. o \ o ° Ojj^N H,S ^Yo0 mxO cx,	727,9102
__ΑΑ.	q ζ\ II 0^04. a <*Ύ*ΥΥ kcA A □ L c N X A	567,7292

328	Αυϋγ 1 Α. Α> © A ο a Ο^,Ν Cř\ ,ο Κ'Αό^	584,8029
329	.ř )-v OOP ' z Y Z Λ=\ O=\ v—z rs jí	726,9214
330	O jx /—\ o η P A* jí °A V=o Z ! O2ÁJ Ji	726,9214
331	A-aY 7 ií । V N Ύ xc-A A> o L o o '° i Z	726,9214
332	ÝJ-K °<4 ’ i_ /“W o ' řA Ji	740,9484
333	O CH, ,4'°v yA° O H.C-Y o 1 „ II ; XA °S OH	688,8284
334	°Y< =”> Xx0 V ffl.	564,6849

-*343 -

• 335	O^N X ay V CH,	550,6578
336	o ,®S ^=7 M,A o, <*o ·=Ύ j Y ΐίΑ_^_ O	820,9918
337	Vy», !y] Ái 0 0 y “S /\ ii Ji ! rAA ž m,g-4. 1- oko o ►S3 ] 0 li Q^N °S CM,	710,8784
338	•S P A yy w A M o 3S-	. 746,9089 _
339	«vos Ρΐ ojljX7 M.C-J k 0 X 0 0 il °γ Χ3 >c οχ	710,8784
340	Ύ Aá Μ,ςΆχ, C>S	590,6823
341	Μ ,m’ i O V-. o o «bkA 0 \ 0 m,c 3 η °y <os	716,9261

• ···· · · · · · • · ··· · · · ·

.........-^44 - ·· ··

342	q 7s [ ίι Ρ/ Π ΑΆ A γΝ k .o «Ao·,	539,675
343	o os λ-Ά . Ab Λ .CH, 0 7^0 ~xPC os	772,9473
344	i “o o— -Ά 5 A'5 A/ 5 Ji- σϊ	731,938
345	HO y^cH, ,M—/ »·A b JL 0. / 0 H,C η 0 'A- * TA. OS	731,938
346	MO ^-QS p^o-b J. 0 / X0 1 n OS	731,938
347	^aA A ° A 0 Η,ογ^ο Ί °γΝ Ακ V «,	546,7132
348 _	X J' «Γ J ,f V ο ο n °OJ í	606,7662

• · · · · · · *••*-•^45 -*··* *··’

349	ΙΑ , pí □ 9	578,712
350	Ο γ νο ί Ο=/ /--' íí	564,7722
351 '	/A c CTAAa A’ l * γτ V h >L o v o A	548,7291
352	9 z y=o & o—/ J-r p° x V θ MM, * YMí Λ	562,7562
353	'r, Ύ' duo \—0 r z /V θ M.	642,8432
354	HC Oy /A c «.v YV Yv - c x o KC^p-0 c· I	536,718
355	o ” O h,c^ ΠΎΥ Ί >L o x o V γ Νο η . °γΝ A κ°-ΑΟ	574,7673

*··*-δ46 -·

356	XX 7s 7 « I < ί I As. O < 0 Ot 0 ° I O^N ^Cxx° os	726,9214
357	V oif yr * 40 r? J	726,9214
358	►SC^CH, H-C-^L xtx 0 \ 0 CH, Xi 0 η O^N ~ yr ^C CH,	580,7279
359	/y 0 0 p /Ύ xU 0 \ 0 h,c τ'0 B 0^ °s ►y CH,	639,799
360	Ay yA / O 1 \ J?	538,6902
361	H.cy· /-4 0 (Τ' 11 >< /CH, KC.P \ Ύ Υϊ °»yL y □ y 0 0 1 y y OS	562,7562
362	Η,'-γ'*’ /-4 0 /\ Π ., H,y |Y [ft ' ? pl 0 L 0 CH, Η,ε^ρ/^ο > °γΝ kCH, 1 °s	566/444

Tabulka 4 '34*7 -

Struktura	Název	Rozmezí Ki*
Al 0^^,0 N .úl, 0 o rj	Boc-G{Chx)-P(4tNHiBoc)-nV-(CO)G-G(Ph)-Am	A
Cx ip L. P 0 o Γ TI	(2-CO2)PhCO- G(Chx)-P(4t- MeNHC0Ph(3OPh)-nV-(CO)-GG(Ph)-Am	A
X “b )—o / 1 A o%. xvP A ZY / \ ° o=< y=o - A o-c X	iBoc-G(Chx)-P(4t- NHS02Ph)-nV(CO)-G-G(Ph)-Am	A
^^ss·0 I M ch, π —\ fH’ fl A i í 0 Zs «í*'“'Tj''Vr s^· XX ° °	iBoc-G(Chx)-P(4tUreaPh)-nV-(CO)G-G(Ph)-Am	A
X “a }-: •4 op XUO “O’-5 z •4 op	iBoc-G(Chx)-P(4tMeNHCOPh)-nV(C0)-G-G(Ph)-Am	A
po i z „ O=/ 5—v \=O οτο-ζ 5ό P° X* / υ— ( υ„ X	iBoc-G(Chx)-P(4tMeNHSO2Ph)-nV- (C0)-G-G(Ph)-Am	A
ÍO T P AČ 0<ΪΗ 5ό >° 4. X	iBoc-G(Chx)-P(4tMeNHCOPh(3OPh))-nV-(CO)-GG(Ph)-Am	B

Struktura	Název	Rozmezí Ki*
Q ° /—A c H i LAzA-'—v j o 0 T y i lil m JL ο^***ομ oíí:^N'’”'>''''A ΑχΧ^'ΜΗ’ L -J 0 0 4A	(2-CO2)PhCO- G(chx)-P(4t- UreaPh)-nV-(CO)- G-G(ph)-Am	C
X 7i 4 o O.....c z \ z“^ / \ o o=\ 5 \=o M .4 Oyo X	iBcc-G(Chx)-P(4tNHSO2-(4Me)Ph)nV(CO)-G-G(Ph)Am	B
Cl 1 Oa □ A e«, s /—f í*1 K ς-^^Ο\φΝν^“Η Y <0 0 ,c ll -: H II 0 A -Ο». AA Z-K 0. Λ'γν'γ ^xh, 0 ° 4%. Q	iBoc-G(Chx)-P(4tNHSO2-(3CI)Ph)nV-(CO)-G-G(Ph)Am	B
«.szs^ T 11,« l^J 0 0 xÁj, O	iBoc-G(Chx)-P(4tNHSO2-(4NHAc)Ph)-nV(CO)-G-G(Ph)-Am	A
Á z 5—o Αψ ( Χό >° 4 u .	iBoc-G(Chx)-P(4tNHSO2-(3,4diCI)Ph)-nV-(CO)G-G(Ph)-Am	B
X “n t·=< 0·$. φ< 8 j. Oýn z	iBoc-G(Chx)-P(4tUrea-1-Np)-nV(CO)-G-G(Ph)-Am	B
Ol U- JL χ,ο CH, «J ,---( «. Φ^ο-^-Ά-A x o o M+ π í i i 8 „ ji ° (A =ί*Άί yAmk' Is-J 0 9 /As (A	iBoc-G(Chx)-P(4tNHSO2-2-Np)-nV(CO)-G-G(Ph)-Am	B

Struktura	Název	Rozmezí Ki*
i o S CH CH O y '» J 0	Boc-G(Chx)-P(4t\IHSO2-(4CI)Ph)iV-(CO)-G-G(Ph)λΓΠ	B
n ú A θ'V yy •4 op X	Boc-G(Chx)-P(4tNHSO2-5(2,3dihydrobenzofuran ))-nV-(CO)-GG(Ph)-Am	B
°γγ--Ο' = Η, CH, O /—M CH, “P* j o h.-^-^ π j । f ji _ , ji 0 ζ-γ ο^χ—Ύ^Η· ’ O	iBcc-G(Chx)-P(4tNHSO2-6(4OMe)Courmarin)nV-(CO)-G-G(Ph)- Am	B
ό ή 0 /—γ* ίΗ· ϊ ’ u J1_J> J ·= I s ι Γ ι .______»,JU 1 J ο ° z-^ís Aj	iBoc-G(Chx)-P(4tUrea-Ph(4-OMe))nV-(CO)-G-G(Ph)Am	A
X . Ο=Υ υΆ /^° 0 \__/ Ό-”'Ό-( ίο >° Q U X	iBoc-G(Chx)-P(4t- Urea-Ph(4-CI))-nV(CO)-G-G(Ph)-Am	B
η ^0 °=< 0$ Ηγ-α· οχ/ ο \=Q ' οί :	iBoc-G(Chx)-P(4tUrea-Ph(4-CI))-nV (CO)-G-G(Ph)-Am	C
η “4 0:<. ΚΟΌί / ‘Λ ο X—η \=α A 00 X	iBoc-G(Chx)-P(4tUrea-Ph(4-Ac))nV-(CO)-G-G(Ph) Am	B

Struktura	Název	Rozmezí Ki*
A t A? $0 o X / υ—1 *1 X	3cc-G(Chx)-P(4tJrsa-Ph(4-Ac))iV-(CO)-G-G(Ph)\m	B
ί. •’r -‘ fy χ/^./ L J 0 o ο	Bcc-G(Chx)-P(4t^HSO2-Ph(43Me))-nV-(C0)-GG(Ph)-Am	B
OUo. cÁ Γ’ lO Γ Μ:=Α ν^Ύ Υ „i ° ° .Ύ Ο	Bcc-V-P(4t- NHS02-Ph)-nV(CO)-G-G(Ph)-Am	B
ί·ο ζ „ θ—\ 5—, \=Ο Ο \ / v? ΐ ° ”$Ο >° 4 ο X	iBcc-G(Chx)-P(4tNHS02-1Np)-nV(CO)-G-G(Ph)-Am	B
ίπ χΥ. >·^ C Τ,» CH, 5 / Α „ ί 0 XS ο’+^ηΌ^χ'^Υ' Ύ^: 1 J 0 0 χΑ- ο	iBcc-G(Chx)-P(4tNHSO2-8QuinolineýnV(CO)-G-G(Ph)-Am	B
4ο X r. °—\ 5-\ 2=° γΆ: ř όο φ.	(2,5-oiF-6- C02)PhC0G<Chx)-P(4t-NHiBoc)-nV-(CO)-G- G(Ph)-Am	A
.ΑυΑ'Λ . A ο^’Ά91Άτ'Ν ι I J 0 Ο χΑ^. ο	(2,5-diF-6- C02)PhC0- G(Chx)-P(4tNHS02-Ph)-nV(COJ-G-G(Ph)-An	A n

.............

Struktura	Název	Rozmezí Ki*
ΪΌ X } 4o \=o / X z—< O DyM u	(3,4-ďiCI-6- C02)PhC0- G(Chx)-P(4t-NHBoc)-nV-(CO)-GG(Ph)-Am	A
ŽO Z 0- (X. -yó 0	(3,4-diCI-6- C02)PhC0- G(Chx)-P(4tUreaPh)-nV(CO)G-G(Ph)-Am	A
4o 2 h OS?/ U—v \=O U O \/ b-V 4d r· X	iBoc-G(Chx)-P(4t- Urea-(3-Cl)Ph)-nV- (C0)-G-G(Ph)-Am	B
V44X 0^0«° χΧ; LJ 0 ° /4 Q	(3,4-diCI-o- C02)PhC0- G(Chx)-P(4t- NHS02-Ph)-nV(C0)-G-G(Ph)-Am	A
y q Xv4 ryV^X* °ó C	iBoc-G(Chx)-P(3,4 iPr)-nV-{CO)-GG(Ph)-OH	A
CH, 0 0 < □ 0 OS	ÍBoc-G(Chx)-P(4t- Chx)-nV-(CO)-G- G(Ph)-Am	B
x4x4 CH, 0 0 < 0 0 04	iBoc-G(Chx)-P(4diMe)-nV-(CO)-GG(Ph)-Am	A

.........-·3θ2 - ·· ··’

Struktura	Název	Rozmezí Ki*
Ο 0 k ο 0 «S	Boc-G(Chx)-P(4Bn,4-Me)-nV-(C0)· G-G(Ph)-Am	B
0 (/ ° ? 1 Oi	Boc-G(Chx)-P(4spirocyclopentane )-nV-(CO)-GG(Ph)-OH	A
ť' 5-o r í °=< o U”X /° ^~° 7	iBoc-G(Chx)-2Azabicyc!o(2.2.2]o ctane-3-CO-nV(CO)-G-G(Ph)-Am	B
0 0 k 0 o	ÍPrOCO-G(Chx)P(4-0tBu)-nV(CO)-G-G(Ph)-OH	A
,ΎΟ · rt ΆΛΑ/ΖΖ 5 0 0 <0 0 os	Neopentoxy(CO)G(Chx)-P(4-0tBu)nV- (CO)-G-G(Ph) OH	B
Za ? f? ΥΛγΧγοΖ 0 0 io 0	Neopentoxy(CO)G(Chx)-P(OH)-nV(CO)-G- G(Ph)OH	B
ΧγΛ* OS	Ethoxy(CO)G(Chx)-P(OH)-nV (CO)-G- G(Ph)OH	B

’••*>$53 -..

Struktura	Název	Rozmezí Ki*
0 PS θ Vn o o ch	iBoc-G(Chx)-P(4,4 diMe)-nV-(CO)- GG(Ph)-N(Me)2	A
Αχ Π Ό. í °	ÍBoc-G(Chx)-P(3,4 iPr)-nV-(CO)- G- G(Ph)-N(Me)2	A
0 CH, O V-N O 0 CH, •^ó JTAJ	iBoc-G(Chx)-P(4spirocycíopentane )- nV-(CO)-GG(Ph)-N(Me)2	A
0 CH, 9 ^-N 0 0 Ύ50Ύ ch.	iBoc-G(Chx)-P(4c- Me,4t-Pr)- nV(CO)-G-G(Ph)- N(Me)2	A
0 CH. O X-N 0 0 Ch. YY+M; 1 J H,C ° \ /	ÍBoc-G(Chx)-P(4,4 diMe)-nV-(CO)- GG(Ph)-OMe	A
ps P Vn o o αχ ΥΟ p_. M 0 OJ1 A	iBoc-G(Chx)-P(4spirocyciopentane )- nV-(CO)-GG(Ph)-OMe	A
0 η 1 -X ,ΛγΜΓγγΙ-ΥΑ ”Ó· -	iBoc-G(Chx)-P(3t- Me)-nV-(CO)- G- G(Ph)-N(Me)2	A

·· -654-..

Struktura	Název	Rozmezí Ki*
yo O=/ A A .....p_ AC) o=y '— 8	Boc-G(Chx)-P(4,4· ďiMe)-nV-(CO)S(Me)-G(Ph)-OH	A
γ-y 7 CH,	iBoc-G(Chx)-P(4,4 diMe)-nV-(CO)-SG(Ph)-OH	B
δ z-. A° ťAA ~ o=č í M Υ É-\ /=° P P	iBoc-G(Chx)-P(4,4 diMe)-nV-(CO)G(Ac)-G(Ph)-OH	C
?A « A 'APr A’ o 0 ) o o CH,	N-Me-G(Chx)P(4,4-diMe)-nV(CO)-G- G(Ph)C02H	C
Ύα’Ί' CH, 0 0^/0 0 °S	ÍBoc-G(tBu)-P(4,4diMe)-nV-(CO)-GG(Ph)-N(Me)2	A
0 A Q 04, 0 0 0 o	tBoc-G(Chx)-P(3,4 (diMecyclopropyi))G((S,S)-Mecyciopropyl)-(CO)G-G(Ph)-N(Me)	A
„ í 5-Z ^..-^ ^=1O O=/ \=»o Oc/ ko 5 y=o r<O _ y=o o=/ P	iBoc-G(Chx)-P(6S CEM)-nV-(CO)-GG(Ph)-N(Me)2	A

·· -‘395 - ··

Struktura	Název	Rozmezí Ki*
YA AT f Ο o O ) 0 0 CH,	Poc-G(tBu)-P(4,4diMe)-nV-(CO)-GG(Ph)-N(Me)2	A
Y zx °~·° YA í J > O 5 Y O 0 a 1 «,^Αγγ^ΥγΟΑ^ CH, 0 0 ) 0 0 °S	iBoc-G(Chx)-P(6RCEM)-nV-(C0)-G- G(Ph)-N(Me)2	A
^aAYYyíAy OH, o 0 0 0 A	iBoc-G(tBu)-P(4,4dtMe)-L-(CO)-GG(Ph)-N(Me)2	A .
&J oí° Y \=0 AY ΑΎ 0=/ A 2¼	((R)-l-Me-iBoc)G(Chx)-P(4,4diMe)-nV-(CO)-GG(Ph)-N(Me)2	A
^γΑ$ΡζΧΑρΑ OS o “ o 0	ÍBoc-G(Chx)-P(5c/t-Me)-nV-(CO)G-G(Ph)-C02H	z Ý
1 o o o 0 A	iBoc-G(Chx)-P(5cts-Ph)-nV-(CO)G-G(Ph)-C02H	B
γΑ^ΡΑΥ/Ρ 1 0 o ) o o	iBoc-G(4,4diMeChx)-P(4,4diMe)-nV-(CO)-GG(Ph)-N(Me)2	A

•..P5.56 -·./·..·

Struktura	Název	Rozmezí Ki*
yPŽ	O F rXvT^X^ ί 0 0 0 0	Bcc-G(l-MeChx)’(^WiMej-nVCO)-G-G(Ph)4(Me)2	A
yol5	γΑΡνΤ ο ο k. ο ο	Boc-G(Chx)-P(3,4 2H2)^iV4CO)-G3(Ph)-N(Me)2	A
o CM,	Tm. ·' Ο CM,	Boc-Chg-Pip-nV(CO)-G-G(Ph)N(Me)2	C
yoU	υΧρΤτ^^Χ 0 0!« ο \	iEoc-G(Chx)-P(4,4 diMe)-L-(CO)-G- G(Ph)-N(Me)2	A
A	υΤΤΑχΣ 0 0 0 0 pY	ÍPoc-G(tBu)-P(4,4diMe)-L-(CO)-GG(Ph)-N(Me)2	A
	iPoc-G(tBu)-P(5c/t-Me)-nV-(CO)G-G(Ph)-N(Me)2	A
	((R)-l-Me-iBoc)G(tBu)-P(4,4diMe)nV-(CO)-G G(Ph)-N(Me)2	Á

-357 - -

Struktura	Název	Rozmezí Ki*
1 0 0 k 0 0	(S)-l-MeiBoc- G(Chx)-P(4,4diMe)-nV-(CO)-G- G(Ph)-N(Me)2	A
X ° p°	iBoc-G(tBu)-P(4- cis-Me)-nV-(CO)- G-G(Ph)-N(Me)2	A
\ z οΆ° ”°í __.-.--,. —.....	iBoc-G(Chx)-P(4cis-Me)-nV-(CO)G-G(Ph)-N(Me)2	A
X i γ «	iBoc-G(tBu)-P(5- cis-Me)-nV-(CO)- G-G(Ph)-N(Me)2	A
Vfj γ/ο o o y / 0° r 0 0	iBoc-G(Chx)-P(5cis-Me)-nV-(CO)- G-G(Ph)-N(Me)2	A
γο-ΑχΑζΑ 1 0 0 \ o 0	iBoc-G(Chx)-P(t3Ph)-nV-(C0)-GG(Ph)-N(Me)2	B
1 0 0 0 0	iBoc-allo(lle)-P(4,4 diMe)-nV-(CO)-GG(Ph)-N(Me)2	A

·· «·368 ··

Struktura	Název	Rozmezí Ki*
1 ο · 0 k 0 0	ÍBoc-G(Chx)-Pip(4· morpholino)-nV(CO)-G-G(Ph)N(Me)2	B
Α-Α 1 o ο > ο ο	iBoc-G(l-MeChx)- P[3,4-(diMecyclopropyl)]-nV(CO)-G-G(Ph)- N(Me)2	A
z ο 4° R	ÍBoc-G(l-MeChx)P[3,4-(diMecyclopropyl)]-L(CO)-G-G(Ph)N(Me)2	A
	iBoc-G(tBu)-P[3,4(diMecyciopropyí)]-L(CO)-G-G(Ph)N(Me)2	A
	iBoc-efythro-D,L- F(beta-Me)-P(4,4diMe)nV-(CO)-G-G(Ph)N(Me)2	A
XzyX	((R)-1-Me)iBoc- G(1-MeChx)-P[3,4· (diMecyclorpropyl)]-nV(CO)-G-G(Ph)N(Me)2	A
HC 0 ζχςχχζχζ 0 ο 0 ο «1	iPoc-G(tBu)-P[3,4(diMecyctopropyl)]-nV(CO)-G-G(Ph)N(Me)2	A

- ..V^59

Struktura	Název	Rozmezí Ki*
xCwA 0 Hgi ° °	iPoc-G(tBu)-P[3,4(diMecyclopropyl)]-L(CO)-G-G(Ph)N(Me)2	A
04, 0 0 ° 0 =H,	ÍBoc-G(tBu)-P(3,4CH2)-nV-(C0)-G- G(Ph)-N(Me)2	A
X 0 0 o 0 CHJ	iBoc-G(Chx)-P(3,4 CH2)-nV-(C0)-G- G(Ph)-N(Me)2	A
0 0^/0 O o3	iPpc-G(tBu)-P(3,4- CH2)-nV-(C0)-G- G(Ph)-N(Me)2	A
op 0 0^/0 o OL	((R)-1-Me)iBoc- G(tBu)-P(3,4CH2)-nV-(C0)-GG(Ph)-N(Me)2	A
CH, 0 ° (7 0 ° CH,	((R)-1-Me)iBcc- G(1-MeChx)-P(3,4 CH2)-nV-(C0)-G- G(Ph)-N(Me)2	A

·· .:360 Tabulka 5

Struktura	Mh Rozmezí Ki’
’Λ/'os /VAr y^. o o y λ γ c*s	507	B
f-\ 0 O^N	481	B
η,ο^η 3 44 o / yk /4/n hi CH, N TT 7r II HjC>4 4¾. ° ° H3CxZ^Y o ] % 4 CHj o=s I CHj	473	C
41 o y^A/»· CH. N^ Pp yr M/^l I H 1 ll y> o \ ° Hsc^y^° । y>y ^^5 ©^o^y H/:----'CM,	586	B
·Ύ	497	C
	483	C
ArW y··· ο	481	C

ΑΑ ο \ Ak Η. C«3 « Xf · Κ+“·>Α Ο 0 H,C Ο 0,¾^ N Η jC^^O w.c'll CH,	479	B
Δα 0 4 0«^ ^«κ JL ^nh ch, YT Tu h3{>CX. o I o h3c 9 k. χ\ Η,Ο^,χΟ ch,	507	A
HjC^Cni cdcrX“' O^N ch, 1 H ,C^_x-0 Η Χ-! CH,	521	A
/-X. CT^x^N^^Í^NH, ClXJV CH, Οχ 'P HX^^CH,	612	A
c^A”1 Η,°^χΟ CH3	533	A
H.C^CH, AA o CkyyJONM: cuXTTT χ*' -o 0<;χΝ \7 HjC^.0 H,A CK1	569	A
I ® k. e	557	B

” -^2 - ”

	521	C
CA 0 k. 0	555	Α
Ά 0 AA yyA S° A ° γ\	497	C
	569	Β
>·» CAaA« *C °	533	Β
Ζ Ο “$Λ0 ¥Υ Λ	519	C
Α-Α^ϊ [ΑτΑι '“^x>a,'s^^ β 3 ιΓ π 0	621	Β

Aj	392	C
φγν·	418	C
<x, ΆΥ ^= h;^/O H.C O*4	509	B
A- °γΝ 4\°	493	C
XJsλί rτ । it A—X xA 0 \ 0 0 1 °<^A */*\0	507	B
<YjA	567	A
h^ch, Aa 0 X JL· xU. O l 0 0 v HjC i CH,	519	A

- 364 -

χ0	519	B \
00, T 0 £ o=/ 5	535	B
Η,Ο^Η, AA o / \ H C 0- UU /Ύ CM, >r y< >< .0. o I o Ος^^Ν ’* CM, 1 M ,0·^! 1 CM,	523	C
H,c^,CM> j-ÍMyV °° V K ,C--0 H=- CH,	493	B
H;CxCH> 00 y·1 △ ΗΧ>^ζ.Ο CM,	547	B
«0 C00 KjC^^O^	519	A
C0A KC^-0 KďT ' °S	505	C

yTyVy As o < o 1 Q^N CH, ' CH, HX	494	B
A Y* A γΑ CH,	480	B
hY=h. p-L o / Jl ,m JL -nh. c*j TTÍ* IÍ * H,C- ! H i H >x A o x ° Hx^y-^^o η O^^-N CH, TN CH,	466	C
-rwÍT γΐ 0 V «A/0 1 A	493	B
yy X CM,	505	B
αΤΆ TmTAx, ° x 0	491	B
K,C CHS oTrA’ Oíyl CH1 HjCs^A0 CH,	541	B

• · · · ···· · :.. t.36S<. ·..··..·

	473	C
Ν^χ	555	B
0\ φγΑγ1	S54	B
H CH , X Z A- 0.44/0 CH, N 77 7\ |] A A “ △ ° O^N H 3C^^0 h,A CM,	465	C
u r 04, HA/ A\ 0 OxAsAz·^ i] 1 II | I! 1 XX o 1 o ^1^° l <^y.N CHj ΗγφΜ CH,	520	A
04 N	553	A
Í \~o o=/ i> \=° ť J 0 íjÉlí	532	A

Apr	547	B
Apr P	547	B
VΎν	553	A
AA Η,τγο η Q^N	520	B
aa^Xj1^	521	A
,?A ^A’ Ί	543	C
/=\ p\ . ii . xs ΑΧΧΡ^ΧΧ	569	B

£ \=o oy ZX	507	B
Vr O^N CHj	522	B
Η,!^ ZA^ZV J Q^N CH, Vaz\X	606	C
H,C =Η, cZMr Ος^Ν CH, Η3°Ύ*° CM,	493	B
í-AtV' A. A. o V ® H,C ηρ 0 ] CH1 1 CM,	467	c
H5C^,CMi aM’ °í^N H,C^/° H.C'X ’ CH,	507	B
x,cv=H> ΧΧζΧ'’ yH e>s	572	A

A Z-	718	C
4 o—y 1 * °X3	547	A
/~\ ^ li . ΖΊ PiP [iT	666	B
qAxV	540	C
CAp ^t95z^ X li Jx^ 0 X. 9 ^Ύ*^ 3 I	554	B
(Z\ όχ^ΆΑ ΖγΟτσ α^^Ν \^N 1	540	B
44Ý	632	. B

.373

	566	C
Οοτ.	599	Β
	553	Β
	1 568	Β
ΟχρΥΊΫ	566	A
οΥΑ	566	A
0^0^	644	A

• ···· ···· ·

'..372« ·..··..·

	543	C
a|Y4r	574	A
Ογ^φί	534	C
	549	Β
0,^^Ά	562	A
oJ^nV	662	A
oL^-aa	563	B

:* *-373- *: :. :

··· ·· ···· ·· ··

π,α/Ηϊ 444 Q^N X	518	B
rp ί γ cr	492	B
t i □./	533	A
O=b .?	510	C
4V4 H>= 11 ° V Ύ	504	A
Κ,ίγ'Ηϊ cXp 0<^xN ΗΧχ^χΝ	530	B
H C ’ Ϊ c44	516	B

	574	B
_ Z^ -Δ*. Jt L^ >Υ X ® 0	561	B
CX jCAr v'	533	B
x 7 4. _zX \ L H l A l. o < . o θ^^'Χ,>*	493	C
/ X « 09 ι«{Ύ Px Jx. 0 □ i O	546	A
Y Δ o (0 L«|Y L 1. .K o > o	' 561	A
í	505	B

ÁÁ	490	B
X Λ—/ Ο ΌχχΑζΗ, Η,ς I Α ΥΐΓ ° S 0 H,C \ I Ο^Ν Sh:. η ,=^° ηχΑ CM,	539	C
oAy	532	A
AY ^'° KC ex	561	A
YXxTtV	573	A
Qx^taV	567	A
AA ° O> γγγγ	581	A

/Λ ΑΑ 0 /=s\ V Α^ X JL ✓Ν V/x Τ ιΓ II A. Α- ο \ ο 0<^Ν	60S	A
Ac	587	Β
(^ Αψγ '—( 1 1 Τ Τ η ^**1 ^*5 1	561	Β
/^\ A . 1 . mč lT τΤ	581	A
ζ~\ CAA. ΑΑ l ιί|Αι ΑΑ*»^ /xs ° \ 0 ο·ί5γν*	573	A
cpr	624	A
	547	A

	583	Α
£	545	Β
Α Φύ Λ. ® \ * I ’ / \ \ _/	609	C
\ / ί π 1 Η Ά'^’ Αχ α·^^-^’ \^,_ν	549	C
4α 44	575	C
	613	Α
	573	Α

	561	A
	625	A
Ά ο00	666	C
Οη AX' Υ °	588	A
_ Υ JL >4 χΥ Ν ΐι ji ιΐ < Μ Μ ο \ 0 ---0 Γ> °<Ϊ^Ν	599	A
^Yw ί 1 k y 4 0 γ-- °'^^χ'	573	A
α\χ*·α	587	A

• · · · · · · ···· · · · · ·

	615	A
n-e CH, X kYAT Y CH,	535	B
ΎΜι η VyTT” Ά^0 v	561	A
A y. C^P CAp/pí λ^Γ' CH,	531	A
v CApU · Σρ	651	A
1 V s. 3 Ύί 1 a ^»γΜ\0 \ A	506	A
X 0 /Al ,N 9ΎΤ	520	A

μ - CH, X ογχτ Η,Ο'^’ΟΚ,	533	Β
Η,Ο^Η, AA 0 Z Δ. YA .NH. CH, « Γ1 ΊΓ íT HX^I | u 1 II H,c XX o X7 O^N 0^ hx^ch,	507	A
Q 0 ~**\	598	A
A'/	535	A
ΑγΆ· Q ’ Y < T	561	A
=γα x XX Vj/ί 7 ií Ύ X. o < 0 φ >	633	A
^^.CHj -AY/r Η,ς^γΤ^ο o ^H 3 Hr\X κ,οΑη,	497	' C

• '· · · ···· ·

Gyci /A ° /—“X A -A^ JL χ^Λπ ? τΓ Τά — A> o < 0 °Ύ—ν	607	A
/2 a o—t-/ « 1 1 y=o o-—/	574	B
XX ^XTX^X L^ ο X e °,^^>xz'* ’ !	518	B
Ζό χθ	580	C
^X^”^ o X I	544	B
4 a· i L y T T o	562	A
xA— ΑγΧ· ’ v3	561	A

·· · « ·· · · · · • ·······

	587	. A
Η,^Η, haj II I* oko η,=Ύ^Ο y	533	A
oVtV·' 0¾^24 XM ,	559	A
^^CH, /Λ ů Λ X V. A'. Jk XNHS N TT ^T 11 VyyUíy, ° 1 ° %^N F^F Π^Χ/0 HjC^Y CM,	557	C
C^Cí A CVnJ^n i í^ i Π ηρ o ] O<^-A	535	A
«,=V CH· M,C“^Y----o \ , <y« fA ^0 hjc”7\ HjG CMj	535	B
c /° Y \ a **>L·^ ® i * ^***r**^ 9 \yZ	547	A

·· e · v · » « « * · • · · · · * · ·

·..··..·

	546	A
40 ° V 1	546	B
í * X	523	B
’ *y»C M ' f '·. 0 CCaa-, COCA a? A »C'“4 . “CC	663-	C
.* \ 0 cm. μ Oř* * dX ’ ,C><A k ’ ^*0·° Γ .C^m , ’	637	c
A\ o / N 11 NK. cm.^n-^ΑΦ Χφ 7f ‘ ΆΆΙ 1 ‘1 i X ’ A. o A. 0 h.c |^ ; o<5^0 ^”1 M1C .	521	B
cOď	573	B

\p . ppp A z	559	A
CAJL·». AOXTVT H,C ^° V> H,C	533	A
H3C^chj c444r li CM,	573	B
__ AA o VA > AT T \—-Ά A ο X 0 0 X__= Ο^^,Ν F ? .0 Hsc“7\ H,C CH j	595	/ B
H 3C H 1 Ύ,-Ύ»χ^ <τ aTu · ΑΟγΑ ° o 1 F «X A CM,	575	A
ΗΆ’ c^ytr X-N H-c-χ· • MjC CM,	560	B
H’C\/CM1 HjCO\ H,C CH, i	534	C

° ΑΛ/ρΎ3 0 °0	759	B
	669	B
Ύ /-'cb^0 »7“θ	669	A
yy L o l o o K° G Y	554	C
Ay ° / Q o^ r· <b~ „y> >-a s ’	610	8
Jy4b '•ry0 v v Hi^O 04,	711	A
Q^N *χθ	713	A

.·’ ·:- 388^ ·

ex A ' ‘0	745	C
C4 HC Y hAJJch, 0 °o	745	C
~ CY O, wr r γτ Y ii I 0 ° Ό	745	C
os o CC • . Yrr^'r ° ύ	759	C
if o b$o Λ Y ox δ \=o 64—c Ύ Ύ	759	C
CH. P*1 Nkpos ^kL-CH, ΡΟέρρχ j 0 °ό	759	C
ΑγΥ. H.C-JL Js, 0 < □ 0 >^T ° >7 ^γ0 v OS	668	C

• · · · · · .·* · :- 39 Γ-*

pA'	725	A
Η A * O X ° \ M z /-- Y=o 1 « os=p “ z 0 z—o g' -*	781	B
H.C Γ1 „ \ / CM. O [ /--\ A^A 7 χ· o ΑγπΑ 0	743	B
H.C A OS ' \ . A ΜΑ Γ H,.. WSl] ° í 0 y- 0 Ό	743	C
Αχ ’ Ό	743	A
?) o n-o í °A A’ Ly— δ \=o A 1 O=Z 6K r r	757	B
δ ,° ípo t í 0=/ A< υ^νζ k'Y\ y 6 A° Aa 1A	757	C

• · · · · · · · ·

YaA pVA ί 0 A	741	C
γγΑ ’ Ý	715	C
	837	B
rA A W	751	A
/P γί	725	C
AP γί	711	C
^ρΎ'ύΡ'ι' A-	737	A

z’ ’:- 394·; ·:.,: ..J

ΟγΝ χο	775	A
000^	729	A
i OyuA Yyvv ρ °	729	A
	715	A
	775	A
y	739	A
y Ό	713	A

: 395·-’·:

o if oX 9 ď r-T0 xCA í 2· Ayy 7\> ^'θ ť if ř	719	A
y Q OU As 0 V 0 zX 0 η HX CH, y CH> o’ )-01, HO	719	A
Q H- P '/V |N Ν 1 ’Λλ0° γ C^N CH, °Ή H,C	719	A
ΑψΑ ΧΛΑο o < ° • A A?	773	A
-V’ Q Cy^A^A. A^ ch ^rr< s H’C>A A o k o A η M,C CH, CHi H ►Χ'Ύκ,	727	A
X z I» h χ x \— / o b h / v< 7 x y < ηΣ ú w o o I	727	A
M>cyCM’ íX) 2Á 0 0 Ί| ΛΎ ___k Jk^o CH, H^Tl I lí N I M’c-i A o k o m,c',?^*X^o η cm, c^a* ch, H,C^xO HX^CH,	727	A

	787	A
	809	C
	709	A
χ^Χ	769	B
oT Q oAA^A °γΝ HiS/° M^l * ^1	723	C
“ -c II ρχ'	713	A
A QYV XT T χζ^χζ^Χφ η <^^z'í*	723	. A

: .·’ ·: $9.8’-· : :.

·..···· ·· ···· ·· *·

: / · Η? - ·:

up °*» Δ\ « » e>s ΛΑ । 1 1 1 ^X~ 04,	746	A
-e v* * A L - Í 1 ? °* ’ T “1	752	A
xy Y' 0*1	741	A
yy y ° γ·^ =*, Ύ H C 04,	727	A
P A - y flYchY 4>Γ Vi ’ γϊ 'y y* 0 y 0 0 k .yy^ 0 η o^4« << Mrk^O	699	A
Z\ 0 0 CM. O^sAx sA Ay< YY 1 Y 1« ‘ KCpL 0 L 0 o 0 1 0^ CM, 0	739	A
.., ^γγ4 ’Ά^ρ.. O’* Ze	712	A

• * · · · · · · · • ·· - 4&0 ···· ·· ··

AY°*.'	698	A
ΓΑχ ο»	757	Β
ΥΥ i ο L 0 0 ύ*^ o > - Ύ	790	A
Y κς	712	A
	732	A
ΥΥ· 0,1	738	A

···· -·40Ί.ί·. ·· ··

1	725	A
o’y <^Ί / ° •A /-	787	A
BpjP 9	785	A
γ^γΥρ χ^,ο	737	A
Aa5a CyXY pY Y	737	A
ΓΧλυΑ Xy*. o \ o o QyN Q	739	A
0 .^pO	855	A

« · · · · · · :1 *

0Υ0Υ Ϋ ' 0	538	C
00 'č	522	C
ν Uy PT0 1	496	C
H,cy 000 py v 1 ΗΛ^Ο O,	522	c
0r0Y 00° Y	540	c
ůMo uS	598	c
0Ý H:=y ° H.C0 OS	480	c

.·. : í4Q3 -.:: ·.

• ··· · · · ·

o / ° /d o=\ /xj · A u, „ \_2 ‘ H X o « ° 4. ΟΧ X	508	B
a- o ď Vo o=/ if. X	548	C
' o Caa ° U v? cy^A M.C^.C H.C'M - CHj	534	B
h^ch, /Á o L A A. o I 0 φ = y H'“AA° =4,	584	C
H.CyCH. Z-Á 0 F Z ?“VX^Z M íi Π A Vs. o 1 ° A A 1 Η,Ο^χ^,Ο M J CH,	570	B
Acr'4	558	c
O AA	433	c

.·. : -:409--.: : ·.

• ··· ····

Υ. 0 < 0 C° v KtrTci	407	C
υΑΗ: ΦΑοβ H.C^YCH, CH,	393	C
ΥττΥ'·	433	C
H,C^C H3 ΑυυΆ /° v	419	C
/ ΦγφγΑ \J<x^ o l o ! ° V? C^N H-C^O KCi - OS	534	C
HX^K ΑΛ o <Xa ° T 4 v7 ^zv/0 ηχΆ ' CM,	520	B
αίαΥ	534	C

.·.»ια·-.: :

• ··· ····

04	520	B
Hi0H. 0^0 H,C Κ^.^,0 ΗΧ*1 CH,	550	C
Κ'φ”1 /£2ι ο 4. Qi 0 1 0 θ z-* j C<0^z-N H,C HjC^/O CHj	536	C
H,C0>S ex a τη CH> η'-°>ΑΑ%· ° k '° „0 0^N CM, H,C^_O Hi ' CH,	538	C
co ’-V HXoV 0l °	568	B
CX ^r'Ycr^ .zX·» 0 \ ’ \. °cy» A A^'·^	582	C
	570	c

.·. : -:414·-.: : ·. • · · · · · · ·

f A o /=\ Γ\ ii Aaj Yz '0 \__	584	C
A	418	C
O1, > -< 0 / \ -II x A-χ ' k/A x. Cn - γΓ Y ΊΓ -'S í-jL 0 L 3 ^AT 0 1 °1’ -M,	554	C
Η,ς^Η, / *\ 0 A«jc> ch, AT ΎιΤ -* A. Ass. 0 \ 0 M*cX^i^° r> A CH,	508	C
Al 0 AAr Or v 1 H,C^.° A cp	494	B
h,c^h, η ΦνΑ pa y MjAa0 A CH,	562	C
Η,ο^0^ AA 0 A AxA^^aXa·1” aa h3c^^° A CH,	548	A

: .· · : -:432 -·: :. :

Ο^^,Ν Η:= CH.	520	C
H,C^,CM1 ru ΫυΆτ L -zk zk 0 -- 0 ο^ν Η H1C X	506	C
tw αο ύ o* CH> 1 H,C ,0 H-	540	C
ČVÁa CóAXr ·' H;cO k Η,Ζ'Π 1 CH.	562	C
YY 7 if ι Ν > --^-^=-0 X 0<s^-N \ 1 H -:°^0 CM,	548	B
H.Cv CM1 Aa o cm, >υατ 7\Y :H; ΗΧ^γ· '□ °Í^XN Η,Ο.^0 H:c. CH,	480	C
H,C^H, rYvAv“ JL X- o o h,c o °^z*N H.C^^0 M--C CH,	466	c

.· . : -:412 . : : ·.

• · · · ····

Η α“Ό CK,	568	C
Η,=γΗ : ο^ν ν Η:ογ° CH,	554	Β
/4 fi ^0Η ο - 0^>Ν 1 η,ο,^^ο HjiAj CH,	508	Β
5 \=ο ,, ο=/ δ ‘iw r'£ __-	482	C
Ηι^εΗ, Ο *=íáT u CH: H.C^/O CH,	496	C
Η,Ογ’ < /Κ/4 0 < 0 H-jC-^0 Η,οΟ 3 CM,	522	C
δ-γΧ^ . I ϊ 11 i II 4’	535	C

.· . : -^14*-.: : ·.

• ··· ····

	539	Β
δ ?Χη· I	563	Β
ο-δ Γ . Ά ‘ W ť* ι	567	C
νΥχΑ 0	561	C
Q-· A ΥΥ ,Υ-ο, HC 0 I /—( ps 0	567	C
‘<τ4^ Q^=° τ ζ ρ /---rj? // : ' 2	531	« C
	495	C

• · · · ···· · · · : :y_:

1 A0 9 0 αγΝ 11 z\°	654	B
y\ J _ Ά Π 1Ύ χΑγ'° | kc^i ' C*S	549	C
A$pL.. 0	567	C
CK 9 xPžA 0	581	c
JMYo C^N Y 1 /\°	654	c
HřyCH, ΗΟοζΧ oko H HO I 0 1 CyNH H'yO HC C4	626	D
0 1	654	. A

ΑΜϊ- ^0	535	C
	535	B
00 S	523	C
00r^ 00 T	523	C
K0 00 ^N CK zO	561	B
_ 7—1 0 00° '	511	c
Ύ—, o ζΑνΆΑ'·^^ ^.y y	537	c

• · · ··*· · »···· .·.: : : ·.

• · · · ···· ···· ·♦ ···♦ ·· ··

£0^	654	Β
ΟγΝ	654	Α
+>< χ<5> 0 < Ο η,ο γ ο ι ΆχΝ ^3 ο 'j άά	626	Β
A CcAY e. -ν α\ ΑΑ κ/Α,	652	Β
n-A Ύψ·^ ex, 1 Ρ-.Αχ0 έΛ	525	C
Η,^γ^ο ''ι °S »V\,ó ΗΖ/Ι ‘ «,	539	C
ΗΧ V Μ ° η,α ΑΎτ‘ ’ >L Α. οκο κ,σ^Υ^ο η Οζγζ* CM1 ^os	549	C

.·. : 441^- · J *. • · · · · · · ·

·· ·· ·· *··· • · · · · · 9 • : ·. ’· ···· ·· ··

• ·· ·» ·· ·· ···· • · · · * · · · ·· · : .: -5420·-.:: -.

• · · · · ·♦ · · ··· ·*·· ·· ···· ·· ··

? í	641	Β
x o I r, O=/ ií SA^° o=/ u	565	C
H,C y CH, a/Xb x 0	579	C
4A	644	C
	587	C
Αψγο Χγ^Ο Ί G^N % 4	654	B
4 ___	716	B

4*2 j:-

Zy 1 /\°	668	3
\^Ο	670	A
Ο^Ν	666	C
Zy ΟγΝ Ά°	666	C
^4υυ Υ	630	Β
Yuy γυ Ο^Ν ^ο	531	C
nr s° __	.563	C

···· · · · · · · · • .·. : : - 422 ; : ·.

• · ··· ····

	537	C
C^N OH,	575	B
X . ř . n 0 s ° C^N ^S CM,	591	B
χχγο os l c>s	586	C
A- = < = ,0c A C<^N °S	586	C
Ařn0 í^/N °Λ ^A/0 KC< - CM,	585	B
6j_í ο-£χ A i' r	563	B

• · ··· ····

v ’ 9 H== =H,	547	B
0 o KC Υ □ Q^N	519	C
^CH, Cy NH CH, Η.Οχ^Ο HA ch,	640	B
	546	B
	646	B
X X A% , n—· >=o oA z o X	594	C
O=Z A ° £ o«=/ y—U Ml· ‘ w X X	592	B

• · · · · · · : : /424:- :. :

Xxa Ťs O ° *Sj : ] CH, 1 - CH,	533	C
aa ° < ° ' s 0>^Ν \	545	C
ΛΔ o ' (V ” vyv Y 0	659	B
γΓχγ	609	A
ypYV Αγ- ° T ° ° ' >?	635	B
A% O^N “ 0	685	B
A ^γ·Χγ^ Y	519	C

• · · · ···· · · · • · · · ····

	621	B
γΑ 0 °Ay	521	B
opA A	547	B
A pbpA HjO/O M-CV	573	B
^y0”5 π,ΧΧ _A__	609	3
Cy °<Y^N A	547	B
	719	B

• · · · · · · :λ *

	. 719	C
4ΧΑό 0 1 ΟγΝ /^°	653	Β
	597	Β
I JL A 0 4 0 Ο1 χ/γ^ο ί CL^N Χ,ζ0	697	A
/X /Χ,^Αχ/α 1 [ ιί^ν οΑ ° *\ 3 Ζ/^ΧΖ^*'-5 [	619	Β
ΟγΝ4Χ4γ /4°° S0 0γΝ 5 X	651	C
	592	Β

. : : .4-2/- : % • · · · ····

0	587	C
y 0 wyy H0	563	B
y z> C Jy ϊ ϊ I c0 MyO h,(A	589	C
1 Ύ. A. o y, o 0 |	621	c
Mrůy vL A	519	c
0‘ Y y	597	B
00 hTYOo P HjtY° OS	549	c

• · · · · · ·

/. * ^:.A.í&b' ^:.A..^:

vy ΛΑ ° hj/Vx η yAy CHi ’ M5 q H/A]	535	C
7Λ o /\ II cm /A/ Γ» । ii I Q ± As 0 V 0 q^n °*’ Η,σ-; CM,	521	B
vy čzA^ As 0 \ 0 γ^ο X Q^N H:CyO Η4ΖΊ CM,	519	C
'/γ0	689	c
zY^	611	c
? 0=^^°J-	600	c
	595	B

.·*. : : ,429: ·. *;

H ZA o οηΛν-^X YY '^^ch. H^C- | 1 II ‘‘ - >k As o 1— O HjC ο η o^ A* CM’ OZ --CH, h3c	541	C
h,cv ch> m ^ch’ MjC^^O 1	549	B
ynY	593	C
CH Au CA/N	680	B
aY XPAÁA-^ v_	559	C
	559	C
	573	B

yyj V /fÚ I	644	C
J γ=ο ° \ /— Vo __f ο .....4 \=ο )-{	537	C
	627	C
οΥΑ	609	Β
Υνν^γ ΑΧ, 0 X 0 ° 'τ 0 1 Λ Ογ.Ν Ά°	664	Β
Ayr χα. ο \ ο χ ι - [ χ Ο^/Ν Ss Χ\°	650	C
υχο° \ 0 * γ ς	661	Β

· · 4« · · · · : .· ·: : ..431::.:

444 ·»·· ·· 4444 44 44

px	571	C
- -A 0 V ® XTT*· ί	661	B
οΑγ- Q^N Ay -^ο	607	B
	625	c
Α<Ρ . px ρ ' <ρ	575	B
ΆΡ’ <> 7 ΐΓ |Υ L -k, 0 k 0 ο ) CM> H,C	575	. B
o=^-S A oKř X	575	B

M C C K * X αΑΑ CH1 X	575	B
H,C > + A- O / V - IL· χτ>χ —η ΑΆγ A X — CH; l 9 L· * CM’ £	559	B
rt C c H j / \ O L o a o ^-χ^Κχ' --0 η o^^^z^ CH’ i	573	B
AAX' xx0	637	B
	473	C
	559	B
S\,°s r.^AW^' a. <^Z« *F *£ Oi,	549	C

	587	C
	547	C
	547	B
íi l π Y Ύ 1 J. JX. « X. 0 MM >Z ^*5 ] i L	573	C
οχγ	573	C
	607	C
oXy L	595	B

OpCpr-	581	3
	609	3
cO	629	C
	694	C
	605	c
	579	c
Av	627	c

• 9 · · · · · .· · : :-435 4 :. :

··· · · 9 999 9 9 9 9

'Ό H.CL,0	563	C
0 i	571	C
II Γ II I Έ 1 L. ΑΑ· * χ. °	572	Β
ΥΑ	551	C
ΑΑ''· 1	609	C
/=\ αΑ ΜΖλγΜ ΑΧ ί	593	Β
	593	C

• · · · · * · ·· -·4·36 - ·· ··

	613	C
	593	B
Aaá •C	5S1	C
Vo í X- Á° o. -Ή O X Φ	571	B
cr O, 0 CK r A	577	C
A0 1 AC '“'Ό	615	C
y°S H~A A CH,	571	C

X ° CKj	571	C
/	545	c
η ΟΌγ^Α“' 1 1 1 i < 0 0 CH, * 4^φο | 44 cx 1 *44 X- ot 1	633	c
0^4 ”44^ *F &s	535	B
«P^os nYY^ V Á A o V o Ζ/γ^ο > 1 M,C oí.	587	B
4 4 . Vo δ Ύ4 5κ .4°° * 5x	647	B
h γ Ύ S'^O“0 f a	512	C

δ 5 >°δ ο=/ /	575	C
ααΑ	658	C
A ° o L 0 '	621	C
A ° A° if 0	565	C _
A o ( J. ΓΑ ιΆ A I 1 A. o \ 0 1 <=γΝ Sh,	572	A
HP OS	587	A
HP^OS XYÝ0 Hp-A^	587	B

APA·' A	509	C
1 C ο Vo Ο ° χ 1 Η£^/0 CH,	533	C
C οΧΧ' 1 vy HiC Q-Lj	587	Β
Χγ^ΖΟ CXjZ-^X β	644	C
' οχχ	594 :	Β
θΧγχ4	695	Β
Χχ Ογ Φ,	650	Β

wo -

C00 0/N 0H. CM, CH.	600	B
Q γγ0Τ^^ I 1 A o y o xxy-o η ΟγΝ (CH, «Λ^	628	A
h,c CM1 000 =γ Yh, N H.C	556	B
A:X0- O0>.	674	B
0° V (^.NH »S Yos	579	C
	637	C
	671	c

·· · · · ···· — ·— -.m ·· ··

	583	C
rA 0 1 A Αχ Ο k 0 \Μ^Μ^0 > Qx^N k 1 « Η-.Χ CH,	587	B
	601	B
HA XL A 0 < ο ο CM. Cj^M OS I xo ‘CH.	623	B
qAx— ^-*χζΜο η V s ^Yť’0 HX	621	A
ΎX i ΤΣθ	645	C
--.°v-=s AA^ A’ ° S ° γ A	664	B

^42 -

p X * a—' >o	573	C
	559	C
π ΟύΎτ^^ LUA 0 > 0 ίΥ CH, J	847	B
Μ^γΧΗ, /-A o / Y M A M CXXa M W° X Ay CH.	651	B
//, Ay _____ ΠζΎ LU	547	C
	561	B
A^	561	B

	546	C
-y	545	C
	633	Β
γΙτγχίΧ	681	C
	561	C
ΗΧ , cL,.X/x t Á ý ο V ο >τγ ο ]	598	Β
χγ Ί	583	C

• · · · ···· · * ··· ···· :.. ·.. .044-·· ··

.	567	C
	539	C
,4- \ o Ck 11 x/x \/ ίΐΓϊ x y i. o \ 0 ι	519	C
AÁ o iXT ΥΎ ^=_ μ Αχ- ο V. o . N,e ch,o ^cx, =·^Ά/>	708	D
/ \ 0 CAvpAVk \l JL o l ο o 1	649	c
a 0 o 0 °^Ν ^CH. HA CH,	561	s
^CH, . kXX' | v	461	c

\ -Α.^ ° A. ° □ η	531	C
A	606	A
Ου 0 k. 0	606	A
yZ^pY^	592	A
X , re O^AP^ •W M 1“ ^χΆ * A. 0 OyX	666	C
θ|γγΑ οχ	626	B
o	640	B

ό	654	Β
	698	Β
ι ’	654	Β
OXU 0	758	C
^^CH, αα 0 X 3^ ^Ν. JL >.Ν^ -s. ^CM. M.C CM, Ν χ χ ηχ-Αυ^ο θ X ° ο^Υ Αχ,	638	A
οχ-χ^^	683	Β
	593	A

·· ·· *· ·*·· ·« · · · * · * * ♦ · : .: * ·. Ί • · ··· · · · · »»» ··«« ·· ···· »♦ ··

AL· o Ji JU- N C K. cm. *Ά/ τ it < o < o η Ym. i M.C H:C>A H CHS HT“ CM,	616	Β
^X/04^	572	A
Λ~> $ α& c5yN 45^/°	547	C
αφΑ^ HZkÁ H>Y CH.	561	C
As 0 <0 ^γ-Ν H,CX CM.	521	C
α^ΥΛ	620	B
	578	B

0 co— hAjA0 s 6	560	A
CX 0 c H10/N c^	620	A
---------------------- - ex 'ύ^ —1*. /Ά. a a 0 ^*7: 3 1	618	B
	632	B
4x	662	B
%0 ’	592	B
Cci^Y'xX'^^	590	B

···· ···· · · · :- 4^0 * j .

······· ·· ···· ·· · ·

ο	690	Β
	609	Β
«A^ch, Π „A χ/Υ ίΎ Άρ jif * ΑχΑο ° X ° 1 L Α. I	749	Β
Hp^CKj γη ΡχΤυ'ύ»·· χΑ X, 1	648	Α
Δ—' /~° 9 °=< L '	783	Β
/ §7 Δ— Υ=ο L	783	Β
cAýY	634	C

• · · · · · · · ·· · : 45V; : X .; :. ·.

aJ+Áí 3	648	C
ΟγτύΎ	634	C
ΟρϊγΑΎ	649	C
xy ο ςχΖ ο =\	629	C
Oy ρ	657	C
CyO ΛΑ ο _ χ JLa<x^ U> Μ >[ J η L A JA o \ o χ/γγ η Q^N ^- zY°	614	A
A\ o / \ „ 11 ‘ Ο <Ύ IT UyQ 0 S 0 0^4 Β- y-°	702	B

:- 4/2 -·: : .· ·: :. :

··· ···· ·· ···· c· ··

Β·γ3Γ Ο y χ	702	A
MyH· pA ο ch, ? 1ί ΊΓ ιΓ ΗΎΧ Α ο < ο 'ι c^y ^cm, γο ( Υ-ζ;	675	B
δ ο—/ ο—/ >ο ί ο—/ /— ί 4%	647	B
CH, < J J If x/po “ \ ° °ι hY^CH-j	563	C
1 1 L O v 0 X <γΝ Xh, ^xr CM,	619	C
o y	482	c
©	576	c

:- 453·-: : .· ·: :. :

··· ···· ·· ···· ©· ··

	617	B
	651	C
r X i1 ÍlA 3. QU	637	C
	684	B
	685	B
/=5 CA ll y/~~\ 0ΥΥ	698	B
	605	B

• . · · · · · · · í 454 -· : : .· ·: :. :

·· ···· *· ···· ·· ··

fl i	620	B
Π pC v	672	C
0^^* 1	620	B
Ά^’ i	594	B
ορΑτΑ	606	B
/v Ca Čs/x Wy lh [ť As. 0 \ 0 ΊΙ ^3 í	580	C
A ° '	532	B

• ·_ · · · · · · · :- 455--: : .· ·: :. ;

··· ···· ·· ···· ·· ··

	572	B
(9—L. xL ° z Y ' \ y	738	A
AOJ r	718	B
Yh L	664	B
CJ^ Cl /A 0 vi N ΊΙ i H A° v ^χ-Ν z\°	614	B
/\ !1 Οχπ^	624 '	B
	558	B

s 456 -· : : .· · ; ;. :

······ · · ···· · · ··

GO lÍ -k L \ o	633	Β
45 i /—/ \=o s “Y	770	C
____0 /A’ V τι 1 π f V Ais 0 4 0 ‘° ι Ν CHi Η’°Ύ*° HjC CH,	535	C
CaA 0 S 0 n /Α_ζ0	533	C
___ ΧΖγ“ \ As. Ο X- 0 Ζ^ζ'***^ ° 1 .Ν βΗ1 Ο^ΚνΖ H,C.>Z'0 H.C » CH,	677	C
χ’ ο Ατ,ί Η ζ 5 Α ρ ο A ι” X	563	Β
ο4Α^ ΗΧ^^0 HjC CM,	651	' A

• · · 9 · « * · · · _v • ··· · · · * :-45-7 -: : .· ·: :. :

YWrAA L O L Ο O CM, κ/γ^ο > yN Y ”/9m.	634	A
Ά J	706	C
0 ' A ο ο γ ~ XyX C JLX 0 \ o mmmm xq η 1	757	A
1 1 i ň 1 ll < A A o \ ° XMMM\q > <γΝ V	662	A
n L L A ο V ο o xzy^o > Y A ^Y0 H.C	660	A
ApC:	648	A
., Xj) Í I	648	C

οΛ Aq	668	s
0	618	A
y CT^ ČCCxz^' Cly^CAj	660	B .
___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________1	601	B
/=\ A\ i AA	673	B
0: /A 0 /==^ Οχ.^·νΑ>··Χ^Χ v/χ C j r Zk ZZ 0 X 0 xz y ^Q p	662	A
Ca	602	A

• · · · · · · ·

1469-: : .· ·: :. :

·· ···· ·· ···· ·· ··

AÁ o / \ II ° C /Lxk ° K^x^K-X^fQ A Η,Γ \ 3 1 CH, %h, HjCL-O H,C CH,	681	A
kc /°i * xZzX, q cAÁ^5 -O KX CM,	681	C
nySi, q AL xU O K o 0 X, ’ η/ΎΑ ] tyč H.c	c.55	C
HX— 'h,c ch.	689	B
rt’C-V'CH, π ^vyV“^ L L· A. o V o o X, Ί V =*> M^-N M^C CM,	660	A
Cl α A A 0	538	C
VyXH, Xavv O 1 A \ • L Ke i / γ*	764	A

• · · · ···· .:460. ’ ‘

o Pc	816	C
o 1 ° fC/CCH. yN A ' J	780	B
My“*, . o A A cu a O	560	C
A A « i L	602	c
hx^ch, ΛΛ M S M a A r> fljn c H-A A 0 < 0 0 CM. kAT^° ? ^yA0 CH,	. 625	B
Kp^CHj oyppr-A ‘Ay^ HP OH,	685	B
QpYpXi^ 4	587	A

• · ·, · · · · · « · •»•454·- ’··* ·ί·· *··* *··*

	587	A
pAA	601	A
	625	Β
X/ ^^ΥΥ^Υ^^^ _γ Αγ. β X ° Υ	601	A
Ct - χ/υ ν^ β η	627	Β
1 “4υ- ^zk, 8 ks 3 Αρ ^*α η	679	A
αΥ	628	A

• ·· ·« ·· ·· ·♦·· • · · ··· · ·

oY/a	587	A
	641	A
V^cx, οΥγΑΖ Η,γ^ίΓ MX V	659	A
CH, λΑ o c-u Y HXa,	674	A
P z Vo #, °=/ ,— B. Boy	615	B
r\ 0 cuyVy Os^N % 1 /Y°	641	B
okYc U\Ao° Y Y k x^Q	641	B

• ··· · · · · • · · · · · '· · · · •h 483 - ·..·.:.. ·..··..·

A- X^x.	627	A
70 ·' *.....y	665	A
γ A- L Jx ® K ® A^A^XyX^^x“® η 3	614	A
γ Y.Y· : 1 Jx Jks ο V ° 0 Η-c CH. {J *-00^ *P os	. 737	B
°\ ^=° / °=Z ,—v Í A°o 0A . c50	666	A
0W H.CyJ L o V 0 o H.C-- 1 A CH,	660	A
	591	C

.:.434.-

'/A UyAyq χΟ	615	C
. (Ay I 1 ι II Τ 1 1 A Us ο y Ο cx-x2i Υ/γ χο η Υ Q^-N Λ **	754	B
0· Mch,	577	c
npy Mýa H,C ch.	X· 694	A
Qo 00%° V p\°	702	A
C0-'< 1	701	A
M£ CHs Y r~\ 0 py- H,C CH,	546	B

4βδ<τ

/Δ ο ΛΛ J κ. τπ SCA ο 1 ° H.C ^Ο Χ^ Ε^χ'Ν Η.'Υ' Η,Ο ΟΙ,	520	B
kAó'“' Ύ° ν	546	B
V^CH, a i yjcO qXy v ^Ύγ ^c η Qy* Α^, ^-χΧ HjC CH,	723	B
íyOS íl 1 « i “ Ύη 1 L J. O V o OHX CH. «γΝ Y Ύ0 HX ος	675	A _
	Q k° k u	771	B
/o γ-ο	847	C
χΑ	641	’ A

• 4 ** ·· ··«·*· « · · · * · ·

-1/.:1 * I/’./

	613	A
a^^o	651	C
χ ί ι9 rv ζχΟγΟ^ρ. dCo° v C^N A^°	700	A .
0(9 ry/ O=Z z —' )—o O=Z /	569	A
Aš o /A ]| 1 11 i « l A O O V o 0 .□< \z-0o 'x -y/ cA -A H,C c$ Hr 01	756	B
/—i 0 Ouc CH 0 C A	786	A
OP II y-1^“ //	669	B

	601	A
CynV	601	Β
cyCt 1 /Y°	683	A
ηηπΑτ φ ’ \	673	A
V^cjí, A ? 0 yy KC^zN H.C CH,	680	A
A Y L Jx^ >Ax ° x ° o η '^Y'3	602	A
Ογγ^Υ-	735	A

;_:468 · -.5.: : <

c· ο = (51/^4/^5 Γ1Γ jT [ \ 1· Js, ο < α \ζ^» Χ-ζ^ρΖ ^<ο X fl 1	743	A
γγΎΤΤ γ	655	B
αγγ4 H-C^N ’S'- ch3	692	A
X . .9 ^yyr/ Ά°->< y. 0 < 0 «4γ^° Il °γ-Ν syy SC CH,	639	A
' Q >Y yy0 π 041 HjC N S^cx,	639	A
4	675	A
oA4y	621	A

.:.,:469--..-.:..

O-.N

A?	701	A
Μ> Τ^°	588	Β
οΤΎ^' Ύ	638	A
AiaTxV	630	A
	697	A
Qrjy/r^ ζ^χ3 1	621	A
QyTý^	608	B

	632	A
Αψύ Ay0 CH,	667	B
JL L ο < o Η,Υ^Ο 0 y,N CH, - OS	520	8
JA yN A H r ΰ ex,	645	B
,______, AP .. ,, x~^r° O“1/ °	669	c
οφπφ HX CH,	575	A
A ^ΟΧ° M,C CM,	709	B

Ah KC^-N AA	652	B
O XYVr'^L ° L A A> o V o k/^x Ύ A v ΗΧ^,Ν *P CH,	714	A
V* ^AA’ 1 γζ* *>C	561	B
OC” η «γ» k	561	B
ΛΟ . o 9 °Λ Ί» /~~~\ π^] Χ~θ n OR o	635	B

:U3

H3cycH3 YY ΟγΝΗ A° H3COH3	580	A
h3c^ch3 QiYO ΟγΝΗ T^CH3	606	A
H3C^CH3 Π3Ο3 ΐ 0 X 0 H XJ H3CPO0 CyNH H3C 0 H3crT ch3 _______ ________	653	A

Claims (60)

1. Sloučenina, včetně svých enantiomerů, stereoisomerů, rotamerů, tautomerů, racemátů a prekurzoru, a farmaceuticky přijatelné soli nebo solváty uvedené sloučeniny nebo uvedeneho prekurzoru, kde sloučenina má obecnou strukturu ukázanou ve vzorci

I:

“· ·:·475 .......

PATENTOVÉ NÁROKY

kde:

Y je zvoleno ze skupiny: alkyl, alkylaryl, heteroalkyl, heteroaryl, arylheteroaryl, alkylheteroaryl, cykloalkyl, alkyloxy, alkylaryloxy, aryloxy, heteroaryloxy, heterocykloalkyloxy, cykloalkyloxy,, alkylamino, arylamino, alkylarylamino, arylamino, heteroarylamino, cykloalkylammo a heterocykloalkylamino, s podmínkou, že Y může být popřípadě substituováno skupinami X nebo X ,

X¹¹ je alkyl, alkenyl, alkinyl, cykloalkyl, cykloalkylalkyl, heterocyklyl, heterocyklylalkyl, aryl, alkylaryl, arylalkyl, heteroaryl, alkylheteroaryl, nebo heteroarylalkyl, s podmínkou, že X¹¹ může být navíc popřípadě substituováno X ;

X¹² je hydroxy, alkoxy, aryloxy, thio, alkylthio, arylthio, amino, alkylamino, arylamino, alkylsulfonyl, arylsulfonyl, alkylsulfonamido, arylsulfonamido, karboxy, karbalkoxy, karboxamido, ··· ·\*47δ·** ···· ’ alkoxykarbonylamino, alkoxykarbonyloxy, alkylureido, arylureido, halogen, kyano nebo nitro, s podmínkou, že skupina alkyl, alkoxy a aryl může být navíc popřípadě substituována skupinami nezávisle zvolenými z X ;

R¹ je COR⁵ nebo B(OR)2, kde R⁵ je H, OH, OR⁸, NR⁹R¹⁰, CF3, C₂F_5i C₃F₇, CF₂R⁶, R⁶, nebo COR⁷, kde R⁷ je H, OH, OR⁸, CHR⁹R¹⁰, nebo NR⁹R¹⁰, kde R⁶, R⁸, R⁹ a R¹⁰ jsou nezávisle zvoleny ze skupiny H, alkyl, aryl, heteroalkyl, heteroaryl, cykloalkyl, cykloalkyl, arylalkyl, heteroarylalkyl, [CH(R¹ )]PCOOR¹¹, [CH(R¹')]pCONR¹²R¹³, [CH(R^1,)]pSO2R¹¹, [CH(R¹ )]PCOR¹¹,

[CH(R¹ )]_PCH(OH)R¹¹, CH(R¹’)CONHCH(R²)COOR¹¹,

CH(R¹’)CONHCH(R²’)CONR¹²R¹³, CH(R¹’)CONHCH(R²’)R', CH(R¹)CONHCH(R²')CONHCH(R³’)COOR¹¹, CH(R¹’)CONHCH(R²')CONHCH(R³')CONR¹²R¹³, CH(R¹’)CONHCH(R²’)CONHCH(R³')CONHCH(R⁴')COOR¹¹, CH(R¹')CONHCH(R²’)CONHCH(R³')CONHCH(R⁴')CONR¹²R¹³, CH(R¹’)CONHCH(R²')CONHCH(R³')CONHCH(R⁴’)CONHCH(R⁵')COOR¹¹, a ‘

CH(R¹)CONHCH(R²’)CONHCH(R³’)CONHCH(R⁴’)CONHCH(R⁵’)CONR¹²R¹³, kde R¹ , R², R³, R⁴, R⁵, R¹¹, R¹², R¹³ a R’ jsou nezávisle zvoleny ze skupiny H, alkyl, aryl, heteroalkyl, heteroaryl, cykloalkyl, alkylaryl, alkylheteroaryl, arylalkyl a heteroaralkyl;

Z je zvoleno ze skupiny O, N, CH nebo CR;

W může být přítomna nebo nepřítomna, a jestliže W je přítomna, W je zvolena ze skupiny C=O, C=S, C(=N-CN), nebo SO₂;

Q může být přítomna nebo nepřítomna, a jestliže Q je přítomna, Q je CH, N, P, (CH₂)_P, (CHR)_P, (CRR’)_P, O, NR, S, nebo SO₂; a jestliže Q je nepřítomna, M může být přítomna nebo nepřítomna;

jestliže Q a M jsou nepřítomné, A je přímo navázána na L;

- · · ..- · .:. .:147*7^:.-/.:1. * ’:

A je O, CH₂, (CHR)_P, (CHR-CHR’)_P, (CRR’)_P, NR, S, S0₂ nebo vazba;

E je CH, N, CR, nebo dvojná vazba k A, L nebo G;

G může být přítomna nebo nepřítomna, a jestliže G je přítomna, G je (CH₂)_p, (CHR)_P, nebo (CRR’)p; a jestliže G je nepřítomna, J je přítomna a E je přímo navázána na atom uhlíku ve vzorci I, ke kterému je navázána skupina G;

J může být přítomna nebo nepřítomna, a jestliže J je přítomna, J je (CH₂)_p, (CHR)_P, nebo (CRR’)_P, SO₂, NH, NR nebo O; a jestliže J je nepřítomna, G je přítomna a E je přímo navázána na N ukázaný ve vzorci I jako navázaný na J;

L může být přítomna nebo nepřítomna, a jestliže L je přítomna, L je CH, CR, O, S nebo NR; a jestliže L je nepřítomna, potom M může být přítomna nebo nepřítomna; a jestliže je M přítomna a L nepřítomna, potom M je přímo a nezávisle navázána na E, a J je přímo a nezávisle navázána na E;

M může být přítomna nebo nepřítomna, a jestliže M je přítomna, M je O, NR, S, SO₂, (CH₂)_p, (CHR)_p(CHR-CHR’)_p, nebo (CRR’)_P;

p je číslo od 0 do 6; a

R, R’, R², R³ a R⁴ jsou nezávisle zvoleny ze skupiny H; Ci-Cio-alkyl; C₂-Cio-alkenyl; C3-C₈-cykloalkyl; Cg-Cg-heterocykloalkyl, alkoxy, aryloxy, alkylthio, arylthio, amino, amido, ester, karboxylová kyselina, karbamát, močovina, keton, aldehyd, kyano, nitro, halogen; (cykloalkyl)alkyl a (heterocykloalkyl)alkyl, kde uvedený cykloalkyl je vytvořen ze 3 až 8 atomů uhlíku, a 0 až 6 atomů kyslíku, dusíku, síry, nebo fosforu, a uvedený alkyl obsahuje 1 až 6 atomů uhlíku; aryl; heteroaryl; alkylaryl; a alkylheteroaryl;

kde uvedené skupiny alkyl, heteroalkyl, alkenyl, heteroalkenyl, aryl, heteroaryl, cykloalkyl a heterocykloalkyl mohou být popřípadě a chemicky vhodně substituovány, přičemž termín „substituovaný“ označuje případnou a chemicky vhodnou substituci jednou nebo více skupinami zvolenými ze skupiny alkyl, alkenyl, alkinyl, aryl, aralkyl, cykloalkyl, heterocykl, halogen, hydroxy, thio, alkoxy, aryloxy, alkylthio, arylthio, amino, amido, ester, karboxylová kyselina,

5 karbamát, močovina, keton, aldehyd, kyano, nitro, sulfonamido, sulfoxid, sulfon, sulfonylmočovina, hydrazid, a hydroxamát;

dále kde uvedená jednotka N-C-G-E-L-J-N znamená 5-člennou nebo 6-člennou cyklickou kruhovou strukturu s podmínkou, že jestliže tato jednotka N-C-G-E-L-J-N představuje 5-člennou cyklickou 10 kruhovou strukturu, nebo jestliže bicyklická kruhová struktura ve vzorci

I zahrnující N, C, G, E, L, J, N, A, Q, a M znamená 5-člennou cyklickou kruhovou strukturu, potom uvedená 5-členná cyklická kruhová struktura neobsahuje jako část cyklického kruhu karbonylovou skupinu.

2. Sloučenina podle nároku 1, kde R¹ je COR , a R ja H> OH, COOR⁸ nebo CONR⁹R¹⁰.

3. Sloučenina podle nároku 2, kde R¹ je COCONR R , a R 20 je H Rio je h, R¹⁴, [CH(R¹ )]PCOOR¹¹, [CH(R¹')]PCONR¹²R¹³, [CH(R¹')]pSO₂R¹¹, [CH(R¹')]pSO2NR¹²R¹³, [CHÍR¹ )]pCOR¹¹ , CH(R¹)CONHCH(R²')COOR¹¹, CH(R¹')CONHCH(R²')CONR¹²R¹³, nebo CH(R¹ )CONHCH(R² )(R’), kde R¹⁴ je H, alkyl, aryl, heteroalkyl, heteroaryl, cykloalkyl, alkylaryl, alkylheteroaryl, arylalkyl, alkenyl, ₂₅ alkinyl nebo heteroaralkyl.

4. Sloučenina podle nároku 3, kde R¹⁰ je H, R¹⁴,

CH(R¹ )COOR¹¹, CH(R¹ )CH(R¹ )COOR¹¹, CH(R¹')CONR¹²R¹³, CH(R¹ )CH(R¹ )CONR¹²R¹³, CH(R¹ )CH(R¹ )SO2R¹¹, CH(Ry)CH(R^r)30 -SO2NR¹²R¹³, CH(R¹')CH(R¹')COR¹¹, CH(R¹')CONHCH(R²)COOR¹¹,

CH(RAONHCH(R²')CONR¹²R¹³, nebo CH(R¹’)CONHCH(R²’)(R’), kde

R¹ je H nebo alkyl, a R² je fenyl, substituovaný fenyl, heteroatomem substituovaný fenyl, thiofenyl, cykloalkyl, piperidyl nebo pyridyl.

5. Sloučenina podle nároku 4, kde R¹ je H.

6. Sloučenina podle nároku 5, kde R¹¹ je H, methyl, ethyl, allyl, terc-butyl, benzyl, α-methylbenzyl, α,α-dimethylbenzyl, 1-methylcyklopropyl nebo 1-methylcyklopentyl;

R’ je hydroxymethyl nebo CH2CONR¹²R¹³;

R² je nezávisle zvolena ze skupiny:

U¹ a U² mohou být stejné nebo různé a jsou zvoleny ze skupiny H, F, CH₂COOH, CH₂COOMe, CH₂CONH₂, CH₂CONHMe, CH₂CONMe₂, azido, amino, hydroxyl, substituovaný amino, substituovaný hydroxyl;

U³ a U⁴ mohou být stejné nebo různé a jsou zvoleny ze skupiny O a S;

U⁵ je zvolena ze skupiny alkylsulfonyl, arylsulfonyl, heteroalkylsulfonyl, heteroarylsulfonyl, alkylkarbonyl, arylkarbonyl, heteroalkylkarbonyl, heteroarylkarbonyl, alkoxykarbonyl, aryloxykarbonyl, heteroaryloxykarbonyl, alkylaminokarbonyl, arylaminokarbonyl, heteroarylaminokarbonyl nebo jejich kombinace; a

NR¹²R¹³ je zvoleno ze skupiny: /—NH₂, yNHMe,

NH-n-Pr, ξ-Ν(Μβ)ΟΜβ,

Me

is kde U⁶ je H, OH, nebo CH₂OH, a

R¹⁴ je zvoleno ze skupiny H, Me, Et, n-propyl, methoxy, cyklopropyl, n-butyl, 1 -but-3-inyl, benzyl, α-methylbenzyl, fenethyl, allyl, 1but-3-enyl, OMe, cyklopropylmethyl

7. Sloučenina podle nároku 2, kde R² je zvolena z následující skupiny

z následující skupiny

h₃c

ch₃

kde

R³¹ je OH nebo O-alkyl;

25 Y¹⁹ je zvolena z následujících skupin:

·,4δ3.ι ·..· y^0OOH X^CH O C γΧΟοΟΗ X/jHj X 5 a Y²⁰ je zvolena z následujících skupin: 1 ί> ϊ Π Π vO^ch₃ \AA/ vA' 10 ^JXnHMs Q ycH₃ y_o-^KCH₃)₃ ch₃ 9. Sloučenina podle nároku 8, is z následující skupiny zL, pu /^Cn- CH0 CH, ch_{3 ch}ch₀ 3 _r3i .yVVU ΑΑΑΛ* ΛΛΛΛ> www ²⁰ 0 ó O 0 ΛΛ/Ά WW ΑΛΛΑ. | Co CO CH₃ I Me Me CH₃ OH • · • · 0_sH₅ XX^SC₂NH₂ Y. ch₃ OX/NHAc kde R³ je zvolena AAZZV ΛΛΛ. 4)0-4 AA»V>*^^ ^XoR³¹ e$^CH3 Xo-3 /0 o o

10. Sloučenina podle nároku 9, kde Z je N a R⁴ je H.

11. Sloučenina podle nároku 10, kde W je C=O.

12. Sloučenina podle nároku 11, kde Y je zvolena z následující skupiny

Me

CH₃

C₃H₇

COOH

CH-> CH₃ hooct'''--''·

9 · · · ·_· ·· · ♦

-.467:.. ·..··..·

Me

15 kde:

Y ¹¹ je zvolena ze skupiny H, COOH, COOEt, OMe, Ph, OPh, NHMe, NHAc, NHPh, CH(Me)₂, 1-triazolyl, 1-imidazolyl a NHCH₂COOH;

Y ¹² je zvolena ze skupiny H, COOH, COOMe, OMe, F, Cl nebo Br;

Y ¹³ je zvolena z následujících skupin:

s/tav. ·

5 Y¹⁴ je zvolena ze skupiny MeSO2, Ac, Boc, iBoc, Cbz, nebo Alloc;

γΐ5 θ γΐβ j_{sou neZ}g_Vj_S|_e zvoleny ze skupiny alkyl, aryl, heteroalkyl a heteroaryl;

Y¹⁷ je CF₃, NO₂, CONH₂, OH, COOCH₃, OCH₃, OC₆H₅, C₆H₅, COC₆H₅, NH₂ nebo COOH; a io Y¹⁸ je COOCH₃, NO2, N(CH₃)_2i F, OCH₃, CH₂COOH, COOH, SO₂NH₂, nebo NHCOCH₃.

13. Sloučenina podle nároku 12, kde Y je zvolena ze skupiny

Me i

Me

.:.* ^:-.59.Q?.

-·4^ι.:.. ·..· kde:

γ¹⁷ = CF₃, NO2, CONH₂, OH, NH₂ nebo COOH;

Y¹⁸ = F, COOH.

5

14. Sloučenina z následující skupiny Μβχ/Οχ; Me^Z Me Me-pO-^r io Me Me Me-JT CK Me / 15 Me ²⁰ H Me^N^ MeY / Me Me |_| Me-A .N_K/ / Me ] / Me podle nároku 13, kde Y je zvolena _Me Me H₃CSO₂HNA\ 1 ΓΥ ζ^θχ,' i ^Me I /. Me^/ Me 1 Me Me Me „ _ 1 n Me-J „ Me^CY/ MeAZ / mPPY^Č/ 1 r Me Me _Me ⁷ Me ^CF3 Me^A^⁰ XxA Mej L JI '¹’³Me Me A^e \ / / I j / ZXx^^Me A ČA.. Me ,, Me Me θΧ F Αία 1X XI j/ Ci^/^^X^CO₂H °°2^Η F OH Qfl CX^ Qp H Me Me ,, Me^N^r ^z %/W ^CF3 Me λ H /X _u AO Xv írV AAn_s. hn^; °·³ Z '^0-3 y Z í • · · · * · · · · · :492:.. ·..··..·

15. Sloučenina podle nároku 14, kde L a M jsou nepřítomny a

J je přímo navázána na E.

16. Sloučenina podle nároku 14, kde L, J a M jsou nepřítomny a E je přímo navázána na N.

17. Sloučenina podle nároku 14, kde G a M jsou nepřítomny.

18. Sloučenina podle nároku 14, kde skupina znamená

19. Sloučenina podle nároku 18, kde struktura a je zvolena z následujících struktur:

• · · · · · · · · · · • · · · *··· • · · · · · ··· · ··· ·.·· -.492.«. *·♦* *··

20. Sloučenina podle nároku 18, kde struktura a je:

kde R²⁰ je zvolena z následujících skupin:

21. Sloučenina podle nároku 18, kde struktura a je:

kde R²¹ a R²² mohou být stejné nebo různé a jsou nezávisle zvoleny z následujících skupin:

• · · · · · · · · · :.494^

22. Sloučenina podle nároku 18, kde struktura a je zvolena z

25 následujících struktur:

9 9 9 * · · 4 4 44 ·- « · 4 4 444 • 4 4 4 4 4 '· 4 4·

23. Sloučenina podle nároku 14, kde je

kde Q může být přítomna nebo nepřítomna, a jestliže je Q přítomna, M je přímo navázána na A.

24. Sloučenina podle nároku 23, kde struktura b je zvolena z následujících struktur:

25. Sloučenina podle nároku 14,

kde skupiny G a J jsou nezávisle zvoleny ze skupiny (CH₂)_P, (CHR)p, (CHR-CHR’)_P a (CRR’)_P; A a M jsou nezávisle zvoleny ze skupiny O, S, SO₂, NR, (CH₂)_P, (CHR)_P, (CHR-CHR )_p, a (CRR)_P, a Q je CH₂, CHR, CRR’, NH, NR, O, S, SO₂, NR, (CH₂)_P, (CHR)_P, a (CRR’)_P.

26. Sloučenina podle nároku 25, kde struktura c je zvolena z následujících struktur:

27. Sloučenina podle nároku 14, kde:

je zvolena z následujících struktur:

499:

o

29. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že jako účinnou složku obsahuje sloučeninu podle nároku

10 1.

30. Farmaceutický prostředek podle nároku 29 pro použití při léčení onemocnění souvisejících s HCV.

31. Farmaceutický prostředek podle nároku 29, vyznačující se tím, že dále obsahuje farmaceuticky přijatelný nosič.

32. Farmaceutický prostředek podle nároku 31, vyznačující se tím, že dále obsahuje antivirový prostředek.

33. Farmaceutický vyznačující se 25 interferon.

prostředek podle nároku 32, tím, že ještě dále obsahuje

..^2- ·· ··.*

34. Farmaceutický prostředek podle nároku 33, vyznačující se tím, že antivirový prostředek je ribavirin a interferon je α-interferon nebo pegylovaný interferon.

35. Způsob léčení onemocnění souvisejících s HCV, kde tento způsob zahrnuje podávání farmaceutického prostředku s obsahem terapeuticky účinných množství sloučeniny podle nároku 1 pacientovi v případě potřeby.

36. Způsob podle nároku 35, kde podání se provádí orálně nebo subkutánně.

37. Použití sloučeniny podle nároku 1 pro výrobu farmaceutického prostředku pro léčení onemocnění souvisejících s HCV.

38. Způsob výroby farmaceutického prostředku pro léčení onemocnění souvisejících s HCV, vyznačující se tím, že se do dokonalého styku přivedou sloučenina podle nároku 1 a farmaceuticky přijatelný nosič.

39. Sloučenina s inhibiční aktivitou na proteázu HCV včetně svých enantiomerů, stereoisomerů, rotamerů, tautomerů, racemátů a prekurzoru, a farmaceuticky přijatelných solí nebo solvátů uvedené sloučeniny nebo jejích prekurzoru, která je zvolena ze skupiny sloučenin:

(R = t-butyl, X = NH₂) (R = Isobutyi, X = NH₂) (R = t-butyi, X = OH) (R = T richloroethyi, X = OH)

(X = o‘bu) (X = OH) (X = OH) (X = O^!Bu) (X = NH₂) (X = NHMe) (X = NMe^

Η θΧΐ Η ° Η g mA- X Λ iff Ae^Me ° V° ⁰ Me P> mA a MX Ar 0 0 \ 0 ^H , p Me ] A^y ^Me MeY^J Me I Me A Q ₀ O ^Me 1 H gA η ° H g 1 _Ao _Ny X _N Y N YL. y. ογ oko Η Η ΥΥ Me (X = O*Bu) (X = OH) (X = NH₂) (X = NMe₂) (X = NMeOMe) am ^h ” i ^h λ ? ΌΗ Me^ ^NX nX N X N JL NY ^X C3 ^m® (X = NH₂) (X = NMe₂) (X = NHMe) (X = OH) , Μβ^χΝχ.^Κχ^ΝΥΙ.^^ΟΗ ⁰ C3 ⁰ l> ⁰ _r- ^Me Me (X = O‘Bu) (X = OH) (X = NH₂) (X = NMe₂) -X C3 ^Me (R = t-butyl) (R = Isobutyl)

:. 505*-: ’· ·* *: ^: · :

• · · ···· ·· ···· ·· ··

^ΟΜε·Χ Me Me

(X = Me, Y = CH₂Me) (X = OAc, Y = Me)

• · · · · · ·

-506·-: : .· · : :. :

» ···· ·· ···· ·· ··

.ί; 03? -.:1. ’

• · · · · ••-’572- - ···*

: 5.: r .’ . i :. ·.

*-*’··’

'* · ’< '♦ 9 · 9 · '9· : : .·. ι:

« .4 .9 9 ·9· ·’* **5^7* ** '*♦·· *< **

H,C CH,

•^5·-

- Ó3U -

CH,

CH,

O

Q

5 5

Ο 0 \ ο ο

^J / Ο ο

: 539 -

40. Farmaceutický prostředek pro léčení onemocněni souvisejících sHCV, vyznačující se tím, ze obsahuje terapeuticky účinné množství jedné nebo více sloučenin podle nároku 39 a farmaceuticky přijatelný nosíc.

41. Farmaceutický prostředek podle nároku 40, vyznačující se prostředek.

dále obsahuje antivirový tím, že

42. Farmaceutický prostředek podle nároku 41, vyznačující se tím, že ještě dále obsahuje interferon nebo konjugát PEG - interferon alfa.

43. Farmaceutický prostředek podle nároku 42, vyznačující se tím, že antivirový prostředek je ribavirin a interferon je alfa interferon.

44. Způsob léčení onemocnění souvisejícího s virem hepatitidy C, který zahrnuje podávání účinného množství jedné nebo více sloučenin podle nároku 39.

\.A5A0 -·..··..·

45. Způsob modulace aktivity proteázy viru hepatitidy C, HCV, vyznačující se tím, že proteáza HCV se přivede do styku s jednou nebo více sloučeninami podle nároku 39.

₅

46. Způsob léčení, prevence nebo zmírnění jednoho nebo více příznaků hepatitidy C, který zahrnuje podávání účinného množství jedné nebo více sloučenin podle nároku 39.

47. Způsob podle nároku 45, kde proteáza HCV je proteáza io NS3/NS4a.

48. Způsob podle nároku 47, kde sloučenina nebo sloučeniny inhibují HCV proteázu ŇS3/NS4a.

49. Způsob modulace zpracování polypeptidu viru hepatitidy C, HCV, vyznačující se tím, že se směs obsahující polypeptid HCV za podmínek, při kterých se tento polypeptid zpracovává, přivede do styku s jednou nebo více sloučeninami podle nároku 39.

3 ·

50. Sloučenina podle nároku 8, kde skupina R je:

H₃c

51. Sloučenina s inhibiční aktivitou na proteázu HCV včetně svých enantiomerů, stereoisomerů, rotamerů, tautomerů, racematu a prekurzorů, a farmaceuticky přijatelných solí nebo solvatu teto sloučeniny nebo jejího prekurzoru, kterou je.

52 Sloučenina s inhibiční aktivitou na proteázu HCV včetně ₁₀ svých enantiomerů, stereoisomerů, rotamerů, tautomerů, racematu a prekurzorů, a farmaceuticky přijatelných solí nebo solvatu teto sloučeniny nebo jejího prekurzoru, kterou je:

53. Sloučenina s inhibiční aktivitou na proteázu HCV vcetne 20 svých enantiomerů, stereoisomerů, rotamerů, tautomerů, racematu a prekurzorů, a farmaceuticky přijatelných solí nebo solvatu teto sloučeniny nebo jejího prekurzoru, kterou je.

54. Sloučenina s inhibiční aktivitou na proteázu HCV včetně svých enantiomerů, stereoisomerů, rotamerů, tautomerů, racemátů a prekurzorů, a farmaceuticky přijatelných solí nebo solvátů této

5 sloučeniny nebo jejího prekurzoru, kterou je:

•..‘542-·

55. Sloučenina s inhibiční aktivitou na proteázu HCV včetně svých enantiomerů, stereoisomerů, rotamerů, tautomerů, racemátů a 15 prekurzorů, a farmaceuticky přijatelných solí nebo solvátů této sloučeniny nebo jejího prekurzoru, kterou je:

56. Sloučenina s inhibiční aktivitou na proteázu HCV včetně

25 svých enantiomerů, stereoisomerů, rotamerů, tautomerů, racemátů a prekurzorů, a farmaceuticky přijatelných solí nebo solvátů této sloučeniny nebo jejího prekurzoru, kterou je:

• · · · · · · ·

57. Sloučenina s inhibiční aktivitou na proteázu HCV včetně svých enantiomerů, stereoisomerů, rotamerů, tautomerů, racemátů a prekurzorů, a farmaceuticky přijatelných solí nebo solvátů této w sloučeniny nebo jejího prekurzoru, kterou je:

58. Sloučenina s inhibiční aktivitou na proteázu HCV včetně svých enantiomerů, stereoisomerů, rotamerů, tautomerů, racemátů a 20 prekurzorů, a farmaceuticky přijatelných solí nebo solvátů této sloučeniny nebo jejího prekurzoru, kterou je:

• · · · « · · .· ·; :-544--: :. :

··· ·· ···· ·· ··

59. Sloučenina s inhibiční aktivitou na proteázu HCV včetně svých enantiomerů, stereoisomerů, rotamerů, tautomerů, racemátů a prekurzorů, a farmaceuticky přijatelných solí nebo solvátů této sloučeniny nebo jejího prekurzoru, kterou je:

60.

Sloučenina s inhibiční aktivitou na proteázu HCV včetně svých enantiomerů, stereoisomerů, rotamerů, tautomerů, racemátů a prekurzorů, a farmaceuticky přijatelných solí nebo solvátů této sloučeniny nebo jejího prekurzoru, kterou je:

61. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje jako účinnou složku sloučeninu včetně svých enantiomerů, stereoisomerů, rotamerů, tautomerů, racemátů a prekurzorů, a farmaceuticky přijatelných solí nebo solvátů této sloučeniny nebo jejího prekurzoru, kterou je:

e e e ' e e ® c β «'β * • ··· · · · · .:..:1 * 15.^7 15-.5

62. Farmaceutický prostředek vyznačující se tím, že prostředek.

podle nároku 61, dále obsahuje antivirový

63. Farmaceutický prostředek podle nároku 62, vyznačující se tím, že ještě dále obsahuje interferon nebo konjugát PEG - interferon alfa.

64. Farmaceutický prostředek podle nároku 63, io vyznačující se tím, že antivirový prostředek je ribavirin a interferon je interferon alfa.

65. Způsob léčení onemocnění souvisejících s HCV, kde tento způsob zahrnuje podávání farmaceutického prostředku s obsahem 15 terapeuticky účinných množství sloučeniny včetně svých enantiomerů, stereoisomerů, rotamerů, tautomerů, racemátů a prekurzorů, a farmaceuticky přijatelných solí nebo solvátů této sloučeniny nebo jejího prekurzoru, kterou je: