CZ2003195A3 - Peptidové inhibitory serinové proteázy NS3 a farmaceutický prostředek - Google Patents
Peptidové inhibitory serinové proteázy NS3 a farmaceutický prostředek Download PDFInfo
- Publication number
- CZ2003195A3 CZ2003195A3 CZ2003195A CZ2003195A CZ2003195A3 CZ 2003195 A3 CZ2003195 A3 CZ 2003195A3 CZ 2003195 A CZ2003195 A CZ 2003195A CZ 2003195 A CZ2003195 A CZ 2003195A CZ 2003195 A3 CZ2003195 A3 CZ 2003195A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- compound
- group
- conhch
- mmol
- solution
- Prior art date
Links
- 0 CC(*)C*C(N[C@@](C(*)(*)*)C(N[C@@](CC(*)*)C=O)=O)=O Chemical compound CC(*)C*C(N[C@@](C(*)(*)*)C(N[C@@](CC(*)*)C=O)=O)=O 0.000 description 2
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/10—Tetrapeptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/16—Amides, e.g. hydroxamic acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
- A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
- A61K31/195—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/21—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates
- A61K31/27—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carbamic or thiocarbamic acids, meprobamate, carbachol, neostigmine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
- A61K31/357—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having two or more oxygen atoms in the same ring, e.g. crown ethers, guanadrel
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/38—Heterocyclic compounds having sulfur as a ring hetero atom
- A61K31/385—Heterocyclic compounds having sulfur as a ring hetero atom having two or more sulfur atoms in the same ring
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
- A61K31/403—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil condensed with carbocyclic rings, e.g. carbazole
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
- A61K31/4164—1,3-Diazoles
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
- A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
- A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- A61K38/05—Dipeptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C205/00—Compounds containing nitro groups bound to a carbon skeleton
- C07C205/49—Compounds containing nitro groups bound to a carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by carboxyl groups
- C07C205/50—Compounds containing nitro groups bound to a carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by carboxyl groups having nitro groups and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton
- C07C205/51—Compounds containing nitro groups bound to a carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by carboxyl groups having nitro groups and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton the carbon skeleton being saturated
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/10—Tetrapeptides
- C07K5/1002—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral
- C07K5/1005—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
- C07K5/101—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms, e.g. Val, Ile, Leu
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/02—Linear peptides containing at least one abnormal peptide link
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Virology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Oncology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
Peptidové inhibitory serinové proteázy NS3 a farmaceutický prostředek
Oblast techniky
Předkládaný vynález se týká nových inhibitorů proteázy hepatitidy C („HCV“), farmaceutických prostředků s obsahem jednoho nebo více těchto inhibitorů a použití pro léčení hepatitidy C a souvisejících onemocnění. Vynález zvláště popisuje nové peptidové sloučeniny jako inhibitory serinové proteázy NS3/NS4a viru HCV.
Dosavadní stav techniky
Virus hepatitidy C (HCV) je pozitivní jednořetězcový RNA virus, který je podle předpokladů hlavním činitelem vyvolávajícím non-A, non-B hepatitidu (NANBH), zvláště s krví asociovanou NANBH (BBNANBH) (viz mezinárodní patentová přihláška No. WO 89/04669 a evropská patentová přihláška No. EP 381 216). NANBH je třeba odlišovat od jiných typů jaterních onemocnění indukovaných viry, jako je onemocnění vyvolané virem hepatitidy A (HAV), virem hepatitidy B (HBV), virem hepatitidy delta (HDV), cytomegalovirem (CMV) a virem Epstein-Barrové (EBV), stejně jako od jiných forem jaterních onemocnění jako je alkoholismus a primární cirrhosa jater. V nedávné době byla identifikována, klonována a exprimována proteáza HCV nezbytná pro zpracování (processing) polypeptidů a replikaci viru; viz například US patent No. 5,712,145. Tento polyprotein o přibližné délce 3000 aminokyselin obsahuje, od aminového konce ke karboxylovému konci, protein nukleokapsidy (C), proteiny obalu (E1 a E2) a několik nestrukturních proteinů (NS1, 2, 3, 4a, 5a a 5b). NS3 je protein o velikosti přibližně 68 kDa kódovaný přibližně 1893 nukleotidy genomu HCV, který obsahuje dvě odlišné domény: (a) doménu serinové
- 2 -..............
proteázy, která se skládá z přibližně 200 N-koncových aminokyselin; a (b) doménu RNA-dependentní ATPázy na C-konci proteinu. Předpokládá se, že proteáza NS3 patří do skupiny chymotrypsinových proteáz z důvodů své podobnosti v sekvenci proteinu, celkové 5 trojrozměrné struktuře a mechanismu katalýzy. Jiné enzymy podobné chymotrypsinu jsou elastáza, faktor Xa, thrombin, trypsin, plasmin, urokináza, tPA a PSA. Serinová proteáza viru HCV NS3 je odpovědná za proteolýzu polypeptidu (polyproteinu) ve spojeních NS3/NS4a, NS4a/NS4b, NS4b/NS5a a NS5a/NS5b a je tedy odpovědná za io vytvoření čtyř virových proteinů v průběhu replikace viru. Serinová proteáza NS3 viru HCV je tedy přitažlivým cílem pro antivirovou chemoterapii.
Bylo zjištěno, že protein NS4a, což je polypeptid o délce přibližně 6 kDa, je kofaktorem aktivity serinové proteázy u proteázy is NS3. Autologní štěpení spojení NS3/NS4a serinovou proteázou NS3/NS4a probíhá intramolekulárně (tj. c/s), zatímco jiná místa štěpení jsou zpracována intermolekulárně (tj. trans).
Analýza přirozených štěpících míst proteázy HCV odhalila přítomnost cysteinu v místě Pí a šeřinu v místě ΡΓ a skutečnost, že 20 tyto zbytky jsou ve spojeních NS4a/NS4b, NS4b/NS5a a NS5a/NS5b přísně konzervovány. Spojení NS3/NS4a obsahuje threonin v místě P1 a serin v místě P1’. Substituce Cys-^Thr v místě NS3/NS4a podle předpokladů odpovídá za požadavek cis namísto trans zpracování v místě tohoto spojení, viz např. Pizzi a další (1994), Proc. Natl. Acad,.
Sci. (USA) 91: 888 - 892, Failla a další (1996), Folding & Design 1: 35 - 42. Štěpící místo NS3/NS4a je také tolerantnější vůči mutagenezi než jiná místa, viz např. Kollykhalov a další (1994), J. Virol- 68: 7525 7533. Bylo také zjištěno, že pro účinné štěpení jsou nezbytné kyselé zbytky v oblasti proti směru transkripce vzhledem k místu štěpení, viz 30 např. Komoda a další (1994), J. Virol. 68: 7351 - 7357.
- 3 -................
Mezi již popsané inhibitory proteázy HCV patří antioxidanty (viz mezinárodní patentová přihláška No. WO 98/14181), některé peptidy a peptidové analogy (viz mezinárodní patentová přihláška No. WO 98/17679, Landro a další (1997), Biochem. 36: 9340 - 9348, 5 Ingallinella a další (1998), Biochem. 37: 8906 - 8914, Llinas- Brunet a další (1998), Bioorq. Med. Chem. Lett. 8: 1713 - 1718), inhibitory založené na polypeptidu o délce 70 aminokyselin eglin c (Martin a další (1998), Biochem. 37: 11459 - 11468), inhibitory afinitně selektované z lidského pankreatického sekrečního inhibitoru trypsinu io (hPSTI-C3) a miniprotilátky, tzv. minibody repertoires (MBip) (Dimasi a další (1997), J. Virol. 71: 7461 - 7469), cVHE2 („kamelizovaná“ variabilní doména fragmentu protilátky) (Martin a další (1997), Protein Eng, 10: 607 - 614), a cd-antichymotrypsin (ACT) (Elzouki a další (1997), J. Hepat. 27: 42 - 28). Nedávno byl popsán ribozym navržený is pro selektivní ničení RNA viru hepatitidy C (viz BioWorld Today 9 (217: 4 (10. listopadu 1998)).
Je možno odkázat také na zveřejněné přihlášky PCT No. WO 98/17679, zveřejněná 30. dubna 1998 (Vertex Pharmaceuticals Incorporated); WO 98/22496 zveřejněná 28. května 1998 (F. 20 Hoffmann-La Roche AG); a WO 99/07734, zveřejněná 18. února 1999 (Boehringer Ingelheim Canada Ltd.).
Předpokládá se, že virus HCV se účastní cirrhosy jater a indukce hepatocelulárního karcinomu. Prognóza pro pacienty trpící infekcí HCV je v současnosti špatná. Infekci HCV je možné léčit 25 obtížněji než jiné formy hepatitidy v důsledku nedostatku inuminy nebo návratu onemocnění v souvislosti s infekcí HCV. Současné údaje ukazují, že po diagnóze cirrhosy je míra přežití po čtyřech letech 50 %. Pacienti s diagnózou lokalizovaného resektovatelného hepatocelulárního karcinomu mají míru přežití 5 let 10 až 30 %, 30 zatímco pacienti s lokalizovaným neresektovatelným hepatocelulárním karcinomem mají míru přežití 5 let nižší než 1 %.
-4 - .:·· ............
Odkazuje se také na článek A. Marchetti a další, Synleff, Sl, 1000 - 1002 (1999), ve kterém se popisuje syntéza bicyklických analogů inhibitoru proteázy NS3 viru HCV. Tam popisovaná sloučenina má vzorec:
Je možno také odkázat na článek autorů W. Han a další, Bioorganic & Medicinal Chem. Lett. (2000) 10, 711 - 713, který popisuje přípravu některých a-ketoamidů, α-ketoesterů a a-diketonu obsahujících allylové a ethylové funkční skupiny.
Je také možno odkázat na WO 00/09558 (Přihlašovatel: Boehringer Ingelheim Limited; zveřejněno 24. února 2000), kde se popisují peptidové deriváty vzorce.
přičemž v uvedené přihlášce jsou definovány různé skupiny v tomto vzorci. Ilustrativní sloučenina této řady je:
- 5 10
Je možno také odkázat na dokument WO 00/09543 (přihlašovatel: Boehringer Ingelheim Limited; zveřejněný 24. února 2000), kde se popisují peptidové deriváty vzorce:
a kde se definují různé substituenty obsažené v tomto vzorci Pro ilustraci této řady sloučenin je možno uvést sloučeninu.
- 6 - .:.. .:· ·. .:.....
Současné způsoby léčení hepatitidy C zahrnují léčbu interferonem-a (INFa) a kombinovanou terapii ribavirinem a interferonem, viz např. Beremguer a další (1998), Proc. Assoc. Arm Physicians 110 (2): 98 - 112. Tyto způsoby léčení však mají nízkou míru trvalé odezvy a časté vedlejší účinky, viz např. Hoofnagle a další (1997), N, Engl. J. Med. 336: 347. V současnosti není k dispozici žádná vakcina proti infekci HCV.
V některých dalších US patentových přihláškách se popisují různé typy peptidů jako inhibitorů serinové proteázy NS-3 viru hepatitidy C.
Je tedy zapotřebí nalézt nové způsoby léčení a ošetření infekce virem HCV. Předmětem tohoto vynálezu je tedy poskytnutí sloučenin použitelných při léčení nebo prevenci nebo odstranění jednoho nebo více příznaků hepatitidy C.
Dalším předmětem vynálezu je poskytnutí způsobu léčení nebo prevence nebo odstranění jednoho nebo více příznaků hepatitidy C.
-7- .:.. .:. ·..* .:. ·· ··
Ještě další předmět předkládaného vynálezu je poskytnutí způsobů modulace aktivity serinových proteáz, zvláště serinové proteázy NS3/NS4a viru HCV, s použitím popisovaných sloučenin.
Dalším předmětem je poskytnutí způsobů modulace zpracování 5 (processingu) polypeptidu HCV s použitím popisovaných sloučenin.
Podstata vynálezu
Předkládaný vynález poskytuje ve svých mnoha provedeních novou skupinu inhibitorů proteázy HCV, farmaceutické prostředky w s obsahem jedné nebo více těchto sloučenin, způsoby přípravy farmaceutických prostředků s obsahem jedné nebo více těchto sloučenin a způsoby léčení, prevence nebo odstranění jednoho nebo více příznaků hepatitidy C. Poskytují se také způsoby modulace interakce polypeptidu HCV s proteázou HCV. Mezi zde poskytovanými is sloučeninami jsou výhodné sloučeniny, které inhibují aktivitu serinové proteázy NS3/NS4a viru HCV. Předkládaný vynález poskytuje různé peptidové sloučeniny obsahující uspořádání aminokyselin od P3 do P2’.
V prvním provedení poskytuje předkládaný vynález sloučeninu vzorce I:
kde:
- 8 ' —
G, J a Y jsou nezávisle zvoleny ze skupin: H, alkyl, alkylaryl, heteroalkyl, heteroaryl, arylheteroaryl, alkylheteroaryl, cykloalkyl, alkyloxy, alkylaryloxy, aryloxy, heteroaryloxy, heterocykloalkyloxy, cykloalkyloxy, alkylamino, arylamino, alkylarylamino, arylamino, 5 heteroarylamino, cykloalkylamino nebo heterocykloalkylamino 11 s podmínkou, že skupina Y může být popřípadě substituována X nebo X12;
X11 je alkyl, alkenyl, alkinyl, cykloalkyl, cykloalkylalkyl, heterocyklyl, heterocyklylalkyl, aryl, alkylaryl, arylalkyl, heteroaryl, io alkylheteroaryl, nebo heteroarylalkyl, s podmínkou, že skupina
X11 může být navíc popřípadě substituována skupinou X ;
X12 je hydroxy, alkoxy, aryloxy, thio, alkylthio, arylthio, amino, alkylamino, arylamino, alkylsulfonyl, arylsulfonyl, alkylsulfonamido, arylsulfonamido, karboxy, karbalkoxy, is karboxamido, alkoxykarbonylamino, alkoxykarbonyloxy, alkylureido, arylureido, halogen, kyano, nebo nitro, s podmínkou, že skupina alkyl, alkoxy, a aryl může být navíc popřípadě substituována skupinami zvolenými ze skupiny X ;
R1 je COR5 nebo B(OR)2, kde R5 je H, OH, OR8, NR9R10, CF3, 20 C2F5, C3F7, CF2R6, Re nebo COR7, kde R7 je H, OH, OR8,
CHrSrIo, neb0 NR9R10, kde R6, R8, R9 a R10 jsou nezávisle zvoleny ze skupiny H, alkyl, aryl, heteroalkyl, heteroaryl, cykloalkyl, cykloalkyl, arylalkyl, heteroarylalkyl, CH(R1’)COOR11, CH(R1’)CONR12R13, 25 CH(R1')CONHCH(R2’)COOR11,
CH(R1’)CONHCH(R2')CONR12R13,
CH(R1')CONHCH(R2')R’, CH(R1')CONHCH(R2')CONHCH(R3’)COOR11, CH(R1')CONHCH(R2’)CONHCH(R3')CONR12R13,
- 9 ····
CH(R1’)CONHCH(R2')CONHCH(R3’)CONHCH(R4’)COOR11, CH(R1’)CONHCH(R2')CONHCH(R3’)CONHCH(R4’)-conr12r13, CH(R1’)CONHCH(R2')CONHCH(R3’)CONHCH(R4’)CONHCH5 -(R5’)COOR11, a
CH(R1 )CONHCH(R2 )CONHCH(R3 )CONHCH(R4 )CONHCH-(R5’)CONR12R13, kde
R1, R2, R3, R4, R5, R11, R12, R13 a R’ jsou nezávisle zvoleny ze skupiny H, alkyl, aryl, heteroalkyl, heteroaryl, cykloalkyl, 10 alkylaryl, alkylheteroaryl, arylalkyl a heteroaralkyl;
Z je zvoleno z O, N, nebo CH;
W může být přítomna nebo nepřítomna, a pokud je W přítomna, je W zvolena ze skupiny C=O, C=S, nebo SO2; a
R, R2, R3 a R4 jsou nezávisle zvoleny ze skupiny H; C1 -Cl0-alkyl; C215 C10-alkenyl; C3-C8-cykloalkyl; C3-C8-heterocykloalkyl, alkoxy, aryloxy, alkylthio, arylthio, amino, amido, ester, karboxylové kyselina, karbamát, močovina, keton, aldehyd, kyano, nitro; atom kyslíku, atom dusíku, atom síry a fosforu (kde počet uvedených atomů kyslíku, dusíku, síry nebo fosforu může být 0 20 až 6);
(cykloalkyl)alkyl a (heterocykloalkyl)alkyl, kde uvedený cykloalkyl je vytvořen ze 3 až 8 atomů uhlíku, a 0 až 6 atomů kyslíku, dusíku, síry nebo fosforu, kde uvedený alkyl má 1 až 6 atomů uhlíku; aryl; heteroaryl; alkylaryl; a alkylheteroaryl;
kde uvedené skupiny alkyl, heteroalkyl, alkenyl, heteroalkenyl, aryl, heteroaryl, cykloalkyl a heterocykloalkyl mohou být popřípadě substituovány, přičemž termín „substituovaný“ označuje případnou a chemicky vhodnou substituci jednou nebo více
- ίο-:’.· .:· %.’ ·:· ·.·“··* skupinami zvolenými ze skupiny alkyl, alkenyl, alkinyl, aryl, aralkyl, cykloalkyl, heterocykl, halogen, hydroxy, thio, alkoxy, aryloxy, alkylthio, arylthio, amino, amido, ester, karboxylové kyselina, karbamát, močovina, keton, aldehyd, kyano, nitro, 5 sulfonamid, sulfoxid, sulfon, sulfonylmočovina, hydrazid, a hydroxamát.
Mezi výše uvedenými definicemi různých skupin vzorce I jsou výhodné skupiny následující:
Výhodná definice pro R1 je COR5, kde R5 je H, OH, COOR nebo 10 CONR9R10, kde R8, R9 a R10 jsou definovány výše. Výhodná skupina pro R1 je COCONR9R10, kde R9 je H a R10 je H, CHÍR1 jCOOR11, CH(R1 )CONR12R13, CH(R1')CONHCH(R2')COOR11, CH(R1’)CONHCH(R2’)CONR12R13 nebo CH(R1 )CONHCH(R2 )(R)· Mezi těmito skupinami jsou výhodné skupiny ve významu R : 15 CH(R1')CONHCH(R2')COOR11, CH(R1’)CONHCH(R2)CONR12R13, CH(R1')CONHCH(R2')(R’). kde R1 je H nebo alkyl, heteroalkyl a R2 je fenyl, substituovaný fenyl, heteroatomem substituovaný fenyl, thiofenyl, cykloalkyl, heteroatomem substituovaný cykloalkyl, piperidyl a pyridyl. Výhodnější skupiny pro R1’ je H, a pro R11 je H nebo terc20 butyl; R’ je hydroxymethyl; a
R2 je zvoleno ze skupiny:
kde:
-11 .:. - ..... u1 a U2 mohou být stejné nebo různé a jsou zvoleny ze skupiny H F, CH2COOH, CH2COOMe, CH2CONH2, CH2CONHMe, CH2CONMe2, azido, amino, hydroxyl, substituovaný amino, substituovaný hydroxyl;
U3 a U4 mohou být stejné nebo různé a znamenají O nebo S,
U5 je zvoleno ze skupiny zahrnující alkylsulfonyl, arylsulfonyl, heteroalkylsulfonyl, heteroarylsulfonyl, alkylkarbonyl, arylkarbonyl, heteroalkylkarbonyl, heteroarylkarbonyl, alkoxykarbonyl, aryloxykarbonyl, heteroaryloxykarbonyl, alkylammokarbonyl, 10 arylmainokarbonyl, heteroarylaminokarbonyl nebo jejich kombinace; a
NR12R13 je zvoleno ze skupiny:
NH2, NHMe, N(Me)OMe, NMe2,
Me
kde U6 je H, OH, nebo CH2OH.
Výhodné skupiny ve významu R jsou:
-12-............
β
Výhodné skupiny ve významu R jsou:
CHá^l CH3
GH3
kde R31 = OH, nebo O-alkyl.
Navíc může mít skupina R3 také význam:
kde Y19 je zvoleno z následujících skupin:
Ještě dále může mít skupina R3 význam:
kde Y20 je zvoleno z následujících skupin:
.
Nejvýhodnější skupiny ve významu R jsou.
ČFs
Navíc může být skupina Z-C-R3 ve vzorci I. kde R4 nem přítomno, reprezentována následujícími strukturami:
- 15 Některé další výhodné skupiny jsou: pro Z je výhodná skupina N, pro R4 je H, a pro W je C=O, nebo SO2. Výhodné skupiny ve významu Y jsou:
kde:
- 16 Y11 je zvolena ze skupiny H, COOH, COOEt, OMe, Ph, OPh, NHMe, NHAc, NHPh, CH(Me)2, 1 -triazolyl, 1-imidazolyl a NHCH2COOH;
Y12 je zvoleno ze skupiny H, COOH, COOMe, OMe, F, Cl, 5 nebo Br.
Skupina Y může také znamenat:
io kde:
Y13 je zvoleno z následujících skupin
a Y14 je zvoleno z MeSO2l Ac, Boc, 'Boc, Cbz, nebo Alloc.
Další výhodné struktury pro skupinu Y jsou:
kde γ15 a Y16 mohou být stejné nebo různé a jsou nezávisle zvoleny ze skupiny alkyl, aryl nebo heteroalkyl, nebo heteroaryl.
Ještě další významy skupiny Y jsou:
| ^COOH (ι^χ „kX 1-3 Η 3C 0 κ A ^--χ BO N COO Η 0^17 F cr^Xxi ( AcHN^^\A COOH cr^xíOOH | R 9 w\? ΛΛ g > / \ o §H s ty^fr op PP 9 X Ή λ—x X ω \ // , ·\ Q λ—λ o—v y .—, / \ \_Q X X 2c \_/ / \ ο·< > z—2¾1 m \=x/ <2 X yA x b-, § / Ί 71 # V X / \ r ^2 / ý7^ XX_ \_/ a—g y X ω o—/ X x L / V o \—( II z^o X X X / M k -0 k f ) |
kde:
Y17 je CFS, N02, CONH,, OH, COOCH3, OCH3, OC6H5, C6H5, COC6H5, NH2, nebo COOH;
Y18 je COOCH3, NO2, N(CH3)2i F, OCH3, CH2COOH, COOH, SO2NH2, nebo NHCOCH3.
Výhodné skupiny ve významu J jsou.
Výhodné skupiny ve významu G jsou.
Pokud není definováno jinak, všechny technické a vědecké termíny používané v předkládané přihlášce mají stejný význam běžně používaný odborníky v oboru, do kterého předkládaný vynález patří. Tak například termín alkyl (včetně alkylových částí skupiny alkoxy) označuje jednovaznou skupinu odvozenou od přímého nebo rozvětveného nasyceného uhlovodíku odstraněním jednoho atomu, s obsahem 1 až 8 atomů uhlíku, s výhodou od 1 do 6;
aryl znamená karbocyklickou skupinu obsahující od 6 do 14 atomů uhlíku a alespoň jeden benzenoidní kruh, přičemž jako místa navázání substituentů jsou možné všechny dostupné substituovatelné aromatické atomy uhlíku karbocyklické skupiny. Výhodné arylové skupiny zahrnují fenyl, 1-naftyl, 2-naftyl a indanyl, zvláště fenyl a substituovaný fenyl;
aralkyl znamená skupinu obsahující arylovou skupinu navázanou přes nižší alkyl;
alkylaryl znamená skupinu obsahující nižší alkyl navázaný přes arylovou skupinu;
- 22 cykloalkyl znamená nasycený karbocyklický kruh s 3 až 8 atomy uhlíku, s výhodou 5 nebo 6, popřípadě substituovaný;
heterocykl znamená navíc k dále definovaným heteroarylovým skupinám nasycené a nenasycené cyklické organické skupiny obsahující alespoň jeden atom O, S a/nebo N přerušující strukturu karbocyklického kruhu, který se skládá z jednoho kruhu nebo dvou fúzovaných kruhů, kde každý kruh je 5-, 6- nebo 7-členný a může nebo nemusí obsahovat dvojné vazby postrádající delokalizované pi elektrony, kde tato kruhová struktura má od 2 do 8, s výhodou od 3 do io 6 atomů uhlíku, např. 2- nebo 3-piperidinyl, 2- nebo 3-piperazmyl, 2nebo 3-morfolinyl, nebo 2- nebo 3-thiomorfolinyl;
halogen znamená fluor, chlor, brom a jod;
heteroaryl znamená cyklickou organickou skupinu obsahující alespoň jeden atom O, S a/nebo N přerušující strukturu is karbocyklického kruhu a obsahující dostatečný počet delokalizovaných pi elektronů pro poskytnutí aromatického charakteru, přičemž aromatická heterocyklylová skupina obsahuje od 2 do 14, s výhodou 4 nebo 5 atomů uhlíku, např. 2-, 3- nebo 4-pyridyl, 2- nebo 3-furyl, 2nebo 3-thienyl, 2-, 4- nebo 5-thiazolyl, 2- nebo 4-imidazolyl, 2-, 420 nebo 5-pyrimidinyl, 2-pyrazinyl, nebo 3- nebo 4-pyridazinyl, atd.
Výhodné heteroarylové skupiny jsou 2-, 3- a 4-pyridyl; takové heteroarylové skupiny mohou také být popřípadě substituovány. Navíc, pokud není zvláště definováno, znamená termín „substituovaný nebo nesubstituovaný“ nebo „popřípadě substituovaný“, že příslušná 25 skupina je popřípadě a chemicky vhodně substituována skupinou náležející k R12 nebo R13.
Vynález také zahrnuje tautomery, rotamery, enantiomery a jiné optické isomery sloučenin vzorce I, stejně jako jejich farmaceuticky přijatelné soli, solváty a deriváty.
30 Další předmět vynálezu jsou farmaceutické prostředky obsahující jako účinnou složku sloučeninu vzorce I (nebo její sůl, solvát nebo isomery) spolu s farmaceuticky přijatelným nosičem nebo pomocnou látkou.
Vynález také poskytuje způsoby přípravy sloučenin vzorce I, stejně jako způsob léčení onemocnění jako je například HCV a 5 související stavy. Způsoby léčení zahrnují podávání terapeuticky účinného množství sloučeniny vzorce I nebo farmaceutických prostředků s obsahem sloučeniny vzorce I pacientovi v případě potřeby.
Popisuje se také použití sloučeniny vzorce I pro výrobu 10 farmaceutického prostředku pro léčení HCV a souvisejících stavů.
Podrobný popis výhodných provedení
V jednom provedení popisuje předkládaný vynález sloučeniny vzorce I jako inhibitory proteázy HCV, zvláště serinové proteázy HCV 15 NS3/NS4a nebo jejich farmaceuticky přijatelný derivát, přičemž různé definice se uvádějí výše.
Reprezentativní sloučeniny podle vynálezu s vynikající inhibiční aktivitou na proteázu HCV jsou uvedeny níže v tabulce 1 spolu s jejich aktivitou (rozmezí hodnot K, v nM).
Tabulka 1: Sloučeniny a výsledky kontinuálního testu s proteázou HCV
| Sloučenina z příkladu No. | Rozmezí Ki* |
| 1 | C |
| 2 | B |
| 3 | C |
| 4 | C |
| 5 | B |
| 6 | C |
| 7 | C |
| 8 | C I |
| 9 | C |
| 10 | C |
| 11 | A |
| 12 | C I |
| 13 | B |
| 14 | C |
| 15 | B |
| 16 | A |
| 17 | B |
| 18 | A |
| 19 | není dostupné I |
| 20 | C |
| 21 | B I |
| 22 | c I |
| 23 | c J |
| 24 | B |
| 25 | a J |
| 26 | c |
| 27 | c |
| 28 | B |
| 29 | c |
| 30 | B I |
| 31 | c |
| 32 | B |
| 33 | C |
| 34 | B |
| 35 | C |
| 36 | C |
| 37 | C |
| 38 | B |
| 39 | C |
| 40 | C |
| 41 | B |
| 42 | 0 |
| 43 | A |
| 44 | C |
| 45 | C |
| 47 | C |
| 48 | B |
| 49 | A |
| 50 | C |
| 51 | B |
| 52 | B |
| 53 | B |
| 54 | B |
| 55 | C |
| 56 | B |
| 57 | B |
| 58 | C |
| 59 | B |
| 60 | C |
-2ď·-· ·:· ·:’ *··’*··’
| 61 | C |
| 62 | A |
| 63 | C |
| 64 | B |
| 65 | C |
| 66 | B |
| 67 | C |
| 68 | B |
| 69 | B |
| 70 | B |
| 71 | B |
| 72 | B |
| 73 | A |
| 74 | B |
| 75 | B |
| 76 | B |
| 77 | C |
| 78 | B |
| 79 | C |
| 80 | B |
| 81 | B |
| 82 | C |
| 83 | C |
| 84 | C |
| 85 | C |
| 86 | C |
| 87 | B |
-27:*· .:. ·..· .:. ·..··..·
| 88 | B |
| 89 | C |
| 90 | B |
| 91 | B |
| 92 | C |
| 93 | C |
| 94 | B |
| 95 | B |
| 96 | A |
| 97 | A |
| 98 | A |
| 99 | B |
| 100 | B |
| 101 | B |
| 102 | B |
| 103 | C |
| 104 | C |
| 105 | B |
| 106 | A |
| 107 | C |
| 108 | B |
| 109 | B |
| 110 | A |
| 111 | B |
| 112 | B |
| 113 | A |
| 114 | A |
| 115 | C |
| 116 | B |
| 117 | B |
| 118 | B |
| 119 | B |
| 120 | A |
| 121 | B |
| 122 | A |
| 123 | C |
| 124 | B |
| 125 | A |
| 126 | A |
| 127 | A |
| 128 | B |
| 129 | C |
| 130 | A |
| 131 | C |
| 132 | B |
| 133 | B |
Rozmezí Ki* kontinuálního testu HCV:
Kategorie A = 0 - 100; B = 101 - 1000; C = >1000 nM.
Dále jsou uvedeny některé typy sloučenin podle vynálezu a 5 potom schematicky popsány způsoby výroby různých typů sloučenin podle vynálezu vzorce I a následují ilustrativní příklady.
| Me 14 O ( ^e^ Me C SR ΛνΛ“Ď Ms o °C2^ Me Me^LMe í^>t u O HOOC ^*^ Π z h 0 | —Me IJ^J h 8 h í? JL XAV Me R = Me R = Benzyi |Q) f h g π 8 1 x*^-x 11 T II N Π 0 ko H S x = oteu X = OH x = nh2 X = NMeOMe X = NMe2 0 r X = OřBu X = OH >—Me [l J j h 8 H i? 0^0 H S Me |
_ 3i _ ·:·· ·:. ·..* .:. *··* ·..·
R = Propargyl
R = Allyl
X= 0 -butyl X= OH
X = 0‘Butyl
X = OH
32-···· ·:· '··* ·:· ’··“··’
X = OfButyl
Χ = ΟΗ
X = NMe2
R = ‘Bu
R = H
R = Me
X = Η, Y = COOH
X = COOH, Y = H
-33-·· :· '··' ·:·
_ 34 - ···· ·:· ··* -· *··“··'
.35 ·-·’·· ·:· · ’··”··’
V závislosti na své struktuře mohou tvořit sloučeniny podle vynálezu farmaceuticky přijatelné soli s organickými nebo anorganickými kyselinami, nebo organickými nebo anorganickými bázemi. Příklady vhodných kyselin pro tvorbu takových solí jsou kyselina chlorovodíková, sírová, fosforečná, octová, citrónová, malonová, salicylová, jablečná, fumarová, jantarová, askorbová, maleiová, methansulfonová a jiné minerální a karboxylové kyseliny, dobřez námé odborníkům v oboru. Pro tvorbu solí s bázemi jsou vhodné báze například NaOH, KOH, NH4OH, tetraalkylamonium-hydroxid, apod.
V dalším provedení poskytuje předkládaný vynález farmaceutické prostředky s obsahem peptidů podle vynálezu jako účinné složky. Tyto farmaceutické prostředky obecně dále obsahují farmaceuticky přijatelné nosné ředivo, pomocnou látku nebo nosič (souhrnně zde označované jako nosné materiály). Pro svou inhibiční aktivitu na HCV jsou takové farmaceutické prostředky použitelné při léčení hepatitidy C a souvisejících onemocnění.
V ještě dalším provedení poskytuje předkládaný vynález způsoby přípravy farmaceutických prostředků s obsahem sloučenin podle vynálezu jako účinných složek. Ve farmaceutických prostředcích a způsobech podle předkládaného vynálezu budou účinné složky typicky podávány spolu s vhodnými nosnými materiály vhodně volenými s ohledem na zamýšlenou formu podávání, tj. orální tablety, kapsle (buď s pevnou, polotuhou nebo kapalnou náplní), prášky pro rekonstituci, orální gely, elixíry, dispergovatelné granule, sirupy, suspenze apod., a v souladu s běžnou farmaceutickou praxí. Například pro orální podávání ve formě tablet nebo kapslí může být účinná složka léčiva kombinována s jakýmkoli orálním netoxickým farmaceuticky přijatelným inertním nosičem jako je laktóza, škrob, sacharoza, celulóza, stearan hořečnatý, fosforečnan vápenatý, síran vápenatý, talek, mannitol, ethylalkohol (kapalné formy) apod. Navíc
-36-’·* ·:· '·’’ ·:· ’··’*··’ mohou být do směsi v případě potřeby nebo nutnosti přidány vhodná pojivá, kluzné látky, rozvolňovadla a barviva. Prášky a tablety mohou obsahovat od přibližně 5 do přibližně 95 % hmotnostních prostředku podle vynálezu. Mezi vhodná pojivá patří škrob, želatina, přírodní cukry, kukuřičná sladidla, přírodní a syntetické gumy jako je akácie, alginát sodný, karboxymethylcelulóza, polyethylenglykol a vosky.
Mezi kluznými látkami je možno zmínit pro použití v těchto dávkových formách kyselinu boritou, benzoan sodný, octan sodný, chlorid sodný, apod. Rozvolňovadla zahrnují škrob, methylcelulózu, guarovou gumu apod.
V případě potřeby mohou být také přidána sladidla a ochucovací látky. Některé výše uvedené kategorie, zvláště rozvolňovadla, řediva, kluzné látky, pojivá apod. jsou podrobněji diskutovány dále.
Prostředky podle předkládaného vynálezu mohou být dále formulovány ve formě s prodlouženým uvolňováním, aby se dosáhlo uvolňování kterékoli složky nebo více složek nebo účinných látek řízenou rychlostí pro optimalizaci léčebných účinků, například inhibiční aktivity na HCV apod. Vhodné dávkové formy pro prodloužené uvolňování zahrnují vrstvené tablety obsahující vrstvy s různými rychlostmi rozpadávání, nebo polymerní matrice pro řízené uvolňování impregnované účinnými složkami a tvarované do tablet nebo kapslí s obsahem těchto impregnovaných nebo zapouzdřených porézních polymerních matric.
Preparáty v kapalné formě zahrnují roztoky, suspenze a emulze. Jako příklad lze uvést vodu nebo roztoky voda-propylenglykol pro parenterální injekce nebo přidávání sladidel a sedativ pro orální roztoky, suspenze a emulze. Preparáty v kapalné formě mohou také zahrnovat roztoky pro intranazální podávání.
Aerosolové prostředky vhodné pro inhalaci mohou obsahovat roztoky a pevné látky ve formě prášku, které mohou být v kombinaci
- 37 -·:·· ·:· ··* ·:· ’··”··’ s farmaceuticky přijatelným nosičem, jako je inertní stlačený plyn, např. dusík.
Pro přípravu čípků se nejprve nízkotající vosk jako je směs glyceridů mastných kyselin jako kakaové máslo nejprve roztaví a účinná složka se v tomto základu homogenně disperguje mícháním nebo podobným způsobem míšení. Roztavená homogenní směs se potom vlije do forem běžné velikosti, ponechá se ochladit a tím ztuhne.
Zahrnuty jsou také prostředky v pevné formě, které jsou určené pro převedení na kapalné prostředky buď pro orální nebo parenterální podávání krátce před použitím. Takové kapalné formy zahrnují roztoky, suspenze a emulze.
Sloučeniny podle vynálezu mohou být také podávány transdermálně. Transdermální prostředky mohou mít formu krémů, omývacích roztoků, aerosolů a/nebo emulzí a mohou být obsaženy v transdermální náplasti typu matrice nebo zásobníku, jak je v oboru k tomuto účelu běžné.
S výhodou se sloučenina podává orálně, intravenózně nebo subkutánně.
Farmaceutický prostředek je s výhodou v jednotkové dávkové formě. V takové formě je prostředek rozdělený do jednotkových dávek vhodné velikosti obsahujícících příslušná množství účinných složek, například účinné množství pro dosažení požadovaného účelu.
Množství účinné sloučeniny podle vynálezu v jednotkové dávce prostředku se může obecně lišit nebo nastavit od přibližně 1,0 mg do přibližně 1000 mg, s výhodou od přibližně 1,0 do přibližně 950 mg, výhodněji od přibližně 1,0 do přibližně 500 mg, a typicky od přibližně 1 do přibližně 250 mg, podle konkrétního použití. Použitá účinná dávka se může lišit v závislosti na věku, pohlaví a hmotnosti pacienta a • · «·· · · · ·
- 38 .......... .......
vážnosti léčeného stavu. Tyto techniky jsou odborníkům v oboru dobře známé.
Orální dávková forma s obsahem účinných složek se obecně může podávat člověku 1 nebo 2 x za den. Množství a četnost podávání se bude upravovat podle úsudku ošetřujícího lékaře. Doporučený denní dávkový režim pro orální podávání může být obecně v rozmezí od přibližně 1,0 mg do přibližně 1000 mg za den, v jednotlivých nebo rozdělených dávkách.
Některé použitelné termíny jsou popsány dále:
Kapsle označuje zvláštní zásobník nebo obal vyrobený z methylcelulózy, polyvinylalkoholů nebo denaturovaných želatin nebo škrobu pro uchovávání obsažených prostředků s účinnými složkami. Kapsle (tobolky) s tvrdým obalem se typicky vyrábějí ze směsí želatin z kostí a vepřové kůže s vysokou pevností gelu. Samotná kapsle může obsahovat malá množství barviv, zakalovacích prostředků, plastifikátorů a ochranných látek.
Tableta označuje lisovanou nebo odlévanou pevnou dávkovou formu obsahující účinné složky s vhodnými ředivy. Tableta se může připravovat lisováním směsí nebo granulátů získaných granulací za mokra, granulací za sucha nebo kompaktizací.
Orální gely jsou účinné složky dispergované nebo solubilizované v hydrofilní polotuhé matrici.
Prášek pro rekonstituci označuje práškové směsi oosahující účinné složky a vhodná řediva, které mohou být suspendovány ve vodě nebo ovocných šťávách.
Ředivo označuje látky, které obvykle tvoří hlavní část prostředku nebo dávkové formy. Mezi vhodná řediva patří cukry jako je laktóza, sacharóza, mannitol a sorbitol; škroby odvozené z pšenice, kukuřice, rýže a brambor; a celulózy jako je mikrokrystalická celulóza. Množství řediva v prostředku může být v rozmezí od přibližně 10 do přibližně • · ··· · · · ·
- 39 .................
% hmotnostních z celkového prostředku, s výhodou od přibližně 25 do přibližně 75 %, výhodněji od přibližně 30 do přibližně 60 % hmotnostních, ještě výhodněji od přibližně 12 do přibližně 60 %.
Rozvolňovadlo označuje materiály přidávané do prostředku, aby napomáhaly jeho rozpadu (desintegraci) a uvolnění účinných látek. Mezi vhodná rozvolňovadla patří škroby; „za studená rozpustné“ modifikované škroby jako je sodný karboxymethylškrob; přírodní a syntetické gumy jako je karubová guma, karaya, guar, tragakant a agar; deriváty celulózy jako je methylcelulóza a sodná sůl karboxymethylcelulózy; mikrokrystalické celulózy a zesítěné mikrokrystalické celulózy jako je sodná sůl kroskarmelózy; algináty jako je kyselina alginová a alginát sodný; jíly jako jsou bentonity; a šumivé směsi. Množství rozvolňovadla v prostředku může být v rozmezí od přibližně 2 do přibližně 15 % hmotnostních z prostředku, výhodněji od přibližně 4 do přibližně 10 % hmotnostních.
Pojivo označuje látku, která váže nebo „lepí“ prášky dohromady a přivádí je do kohezivního stavu vytvářením granulí, a ve formulaci slouží jako „adhezivní látka“. Pojivá zvyšují kohezivní pevnost, která je již získána pomocí řediva nebo objemotvorného prostředku. Vhodná pojivá zahrnují cukry jako je sacharóza; škroby odvozené od pšenice, kukuřice, rýže a brambor; přírodní gumy jako je akácie, želatina a tragakant; deriváty mořských řas jako je kyselina alginová, alginát sodný a alginát vápenatoamonný; celulózové materiály jako je methylcelulóza a sodná sůl karboxymethylcelulózy a hydroxypropylmethylcelulóza; polyvinylpyrrolidon; a anorganické látky jako je křemičitan hlinitý. Množství pojivá v prostředku může být v rozmezí od přibližně 2 do přibližně 20 % hmotnostních z prostředku, výhodněji od přibližně 3 do přibližně 10 % hmotnostních, ještě výhodněji od přibližně 3 do přibližně 6 % hmotnostních.
Mazadlo označuje látku přidanou k dávkové formě pro umožnění uvolnění tablet, granulí atd. po lisování z raznice nebo matrice • · ··· ····
-40-—........... ·· snížením tření nebo otěru. Vhodná mazadla zahrnují kovové stearany jako je stearan hořečnatý, stearan vápenatý nebo stearan draselný; kyselinu stearovou; vysokotající vosky; a ve vodě rozpustná mazadla jako je chlorid sodný, benzoan sodný, octan sodný, olean sodný, polyethylenglykoly a d/l-leucin. Mazadla se obvykle přidávají až v posledním kroku před lisováním, protože musí být přítomná na površích granulí a mezi nimi a částmi tabletovacího lisu. Množství mazadla v prostředku může být v rozmezí od přibližně 0,2 do přibližně 5 % hmotnostních z prostředku, s výhodou od přibližně 0,5 do přibližně 2 %, výhodněji od přibližně 0,3 do přibližně 1,5 % hmotnostních.
Kluzná látka je materiál, který zabraňuje shlukování a zlepšuje tokové vlastnosti granulátů, takže se dosáhne hladkého a stejnoměrného toku. Mezi vhodné kluzné látky patří oxid křemičitý a talek. Množství kluzné látky v prostředku může být od přibližně 0,1 % do přibližně 5 % hmotnostních z celkového prostředku, s výhodou od přibližně 0,5 do přibližně 2 % hmotnostních.
Barviva jsou pomocné látky, které poskytují prostředku nebo dávkové formě zbarvení. Tyto pomocné látky mohou zahrnovat potravinářská barviva a potravinářská brviva adsorbovaná na vhodný adsorbent jako je jíl nebo oxid hlinitý. Množství barviva se může lišit od přibližně 0,1 do přibližně 5 % hmotnostních z prostředku, s výhodou od přibližně 0,1 do přibližně 1 %.
Biologická dostupnost označuje rychlost a míru, ve které se účinná složka nebo terapeutická část absorbuje do systémového oběhu z podané dávkové formy ve srovnání se standardem nebo kontrolou.
Běžné způsoby přípravy tablet jsou známé. Tyto metody zahrnují suché metody jako je přímé lisování nebo lisování granulátu vyrobeného kompaktizací, nebo mokré metody nebo jiné speciální postupy. Běžné metody pro výrobu jiných forem pro podávání, jako jsou například kapsle, čípky apod., jsou rovněž dobře známé v oboru.
Další provedení vynálezu popisuje použití popisovaných farmaceutických prostředků pro léčení onemocnění jako je například hepatitida C apod. Tento způsob zahrnuje podávání terapeuticky účinného množství farmaceutického prostředku podle vynálezu pacientovi trpícímu takovým onemocněním v případě potřeby.
V ještě dalším provedení mohou být sloučeniny podle vynálezu používány pro léčbu HCV u člověka v monoterapii nebo při kombinační terapii, jako například v kombinaci s antivirovými prostředky jako např. ribavirin a/nebo interferon jako je například α-interferon apod.
Jak bylo uvedeno výše, předkládaný vynález zahrnuje tautomery, rotamery, enantiomery a jiné stereoisomery sloučenin. Jak bude tedy odborníkovi v oboru zřejmé, některé ze sloučenin podle vynálezu mohou existovat ve vhodných isomerních formách. Tyto varianty rovněž spadají do rámce předkládaného vynálezu.
Další provedení vynálezu popisuje způsob přípravy popisovaných sloučenin. Tyto sloučeniny se mohou vyrábět různými v oboru známými způsoby. Reprezentativní ilustrativní postupy se uvádějí v následujících reakčních schématech. Je zřejmé, že i když následující ilustrativní schémata popisují přípravu pouze několika reprezentativních sloučenin podle vynálezu, vhodná náhrada jakékoli z obou nepřírodních aminikyselin povede k vytvoření požadovaných sloučenin založených na této substituci. Také tyto variace spadají do rámce vynálezu.
V popisu schémat, příprav a příkladů se používají následující zkratky:
THF Tetrahydrofuran
DMF N,N-Dimethylformamid
EtOAc Ethylacetát
AcOH Kyselina octová • · ··· ····
- 42 *...............
| HOOBt | 3-Hydroxy-1,2,3-benzotriazin-4(3H)-on |
| EDO | Hydrochlorid 1-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodi -imidu |
| DEC | Hydrochlorid 1-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodi -imidu |
| NMM | N-Methylmorfolin |
| ADDP | 1 ,T-(Azodikarbobyl)dipiperidin |
| DEAD | Diethylazodikarboxylát |
| MeOH | Methanol |
| EtOH | Ethanol |
| Et2O | Diethylether |
| DMSO | Dimethylsulfoxid |
| HOBt | N-Hydroxybenzotriazol |
| PyBrOP Bn | Brom-tr/s-pyrrolidinfosfoniumhexafluorfosfát Benzyl |
| Bzl | Benzyl |
| Et | Ethyl |
| Ph | Fenyl |
| iBoc | Isobutoxykarbonyl |
| iPr | Isopropyl |
‘Bu nebo Bu‘ terc-Butyl
| Boc | terc-Butyloxykarbonyl |
| Cbz | Benzyloxykarbonyl |
| Cp Ts | Cyklopentyldienyl p-Toluensulfonyl |
| Me | Methyl |
| THP | Tetrahydropyranyl |
| iBoc | Isobutyloxykarbonyl |
| Chg | Cyklohexylglycin |
-43 Příklady provedení vynálezu
Obecná schémata přípravy
Následující schémata popisují způsoby syntézy stavebních bloků, které slouží jako meziprodukty.
Schéma 1
H N^.COOH
HCI-HaN-Phg-OBi?
(1.2)
HOOBt EDCI NMM
BocHN
CI2CHCO2H DMSO DCC v
Ph
COOBu1
4N HCI dioxan min
Ph N^COOBu1 H | 4N HCI dioxan min
COOBu1
- 44 -................
Schéma 2
Ph N^CONMe2 Η
I 4N HCI dioxan min
Schéma 3
MeSO2H2C Boc-Chg-OH+ J. OBzl
HOOBL EDCI
3.1
HCI 6
3.2
NMM
MeSO2H2C
Boc-Chg-N'^Y0^21
Me II
O
BoeCH2SO2Me k^OH
3.4 0
HCI H2N
OH H 9 ?h
HOOBt EDCI NMM
N COOBu' H
MeSO2H2C
Boc-Chg-N π
Me §
-45 Schéma 4
MeSO2H2C H OH H £ ?h Boc-Chg-N'^f^^^T^lf N COOBu1
Me O r O M ' 3.5
MeSO2H2C h OH H
Λ .N
H-Chg-N Me o
4N HCI dioxan 7 min Q Ph
N‘ H
4.1
COOBi?
iNariwv/3 h2o
MeSO2H2C h OH H xL χΝ lboc-Chg-N Me o
O Ph
N COOBu‘ H
O
MeSO2H2C lboc-Chg-N Me
Ph
Dess-Martinův perjodistan
N^COOBu* H
4.3
4.2
TFA MeSO2H2C H — lboc-Chg-N Me A
N COOH H
O Ph
MeSO2H2C Η 0
Iboc-Chg-N^ Π Me o
O Ph
'N CONMe2 e2NH HOOBt EDCI, NMM
4.5
Příprava meziproduktů
Preparativní příklad 1
Krok A: Sloučenina (1.1)
-46- .:.. .:. ·..· .:. ·..··..·
K míchanímu roztoku sloučeniny (1.08) (3,00 g, 12,0 mmol; Harbeson, S. L; Abelleira, S. M.; Akiyama, A.; Barrett, R.; Carroll, R. M.; a další.; J, Med. Chem.; 37(18) 1994; 2918 - 2929;) v DMF (15 ml) a CH2CI2 (15 ml) se při -20 °C přidá HOOBt (1,97 g, 12,0 mmol), N5 methylmorfolin (4,0 ml, 36,0 mmol) a EDCI (2,79 g, 14,5 mmol) a směs se míchá 10 min, a potom se přidá HCI.H2N-Gly—OBn (2,56 g, 13,0 mmol). Získaný roztok byl míchán při -20 °C 2 hod, přes noc byl udržován v chladicím boxu a potom zakoncentrován do sucha, následovalo zředění EtOAc (150 ml). Roztok EtOAc byl potom dvakrát 10 promyt nasyceným NaHCOs, H2O, 5% H3PO4, roztokem soli, sušen nad Na2SO4, zfiltrován a zakoncentrován do sucha, za získání sloučeniny (1.09) (4,5 g, 94 %). LRMS m/z MH+ = 395,1.
Krok B: Sloučenina (1.1)
(1.09) (1.1)
Roztok sloučeniny (1.09) (7,00 g, 17,8 mmol) v absolutním ethanolu (300 ml) byl míchán při teplotě laboratoře v atmosféře vodíku v přítomnosti Pd-C (300 mg, 10 %). Postup reakce byl monitorován tle. Po 2 hod byla směs zfiltrována přes lože celitu a získaný roztok byl zakoncentrován ve vakuu za získání sloučeniny (1.1) (5,40 g, 25 kvantitativní). LRMS m/z MH+ = 305,1.
• * ·*· · β il • · · · · · · · · ·
- 47 - .:.. .;. ·..· ·..··..·
Preparativní příklad 2
Krok A: Sloučenina (1.3)
(1.1)
(1.2) (1-3)
Směs sloučeniny (1.1) z preparativního příkladu 1, krok B (1 ekv.), sloučeniny (1.2) (Novabiochem, No. 04-12-5147) (1,03 ekv.), HOOBt (1,03 ekv.), N-methylmorfolinu (2,2 ekv.), a dimethylformamidu (70 ml/g) byla míchána při -20 °C. Bylo přidáno EDCI (1,04 ekv.) a reakční směs byla míchána 48 hod. Reakční směs byla vlita do 5% vodného KH2PO4 a extrahována ethylacetátem (2 x). Spojené organické podíly byly promyty chladným 5% vodným K2CO3, potom 5% vodným KH2PO4, potom roztokem soli, a organická vrstva byla sušena nad bezvodým MgSO4. Směs byla zfiltrována, potom odpařena a filtrát byl usušen ve vakuu, zbytek byl smísen se směsí Et2O-hexan a zfiltrován, za získání v názvu uvedené sloučeniny (1.3) (86% výtěžek), C25H39N3O7 (493,60), hmotnostní spektrum (FAB) M+1 = 494,3.
Krok B: Sloučenina (1.4)
Sloučenina (1.3) z preparativního příkladu 2, krok A (3,0 g) byla smísena se směsí 4N HCI/dioxan (36 ml) a míchána při teplotě
-48.-.:. ·..* .:. ·..··..· laboratoře 7 min. Směs byla vlita do 1,5 I chladného (5 °C) hexanu a míchána, potom ponechána stát při 0 °C 0,5 hod. Směs byla zfiltrována odsátím v suché atmosféře, a oddělená pevná látka byla dále čištěna za poskytnutí v názvu uvedené sloučeniny (1.4) (2,3 g, 5 88% výtěžek), C20H31N3O5.HCI, 1H NMR DMSO-d6/NaOD) δ 7,38 (m,
5H), 5,25 (m, 1H), 4,3 - 4,1 (m, 1H), 3,8 (m, 2H), 3,4 - 3,3 (m, překrytý HDO), 1,7 - 1,1 (m, 4H), 1,35 (s, 9H), 0,83 (m, 3H).
Preparativní příklad 3 io Sloučenina (1.5)
(1.5)
Sloučenina (1.3) z preparativního příkladu 2, krok A, byla zpracována v podstatě stejným způsobem jako v preparativmm příkladu 7, krok A dále, za poskytnutí sloučeniny (1.5).
Preparativní příklad 4
Sloučenina (1.6)
Sloučenina (1.5) z preparativního příkladu 3 byla zpracovaná v podstatě stejným způsobem jako bylo popsáno v preparativním příkladu 2, krok B, za poskytnutí sloučeniny (1.6).
Preparativní příklad 5
Krok A: Sloučenina (2.09)
(2.08) (2·09)
K roztoku hydrochloridu dimethylaminu (1,61 g, 19,7 mmol), Nw -Boc-fenylglycinu, sloučeniny 2.08 (4,50 g, 17,9 mmol, Bachem Co. #A-2225), HOOBt (3,07 g, 18,8 mmol) a EDO (4,12 g, 21,5 mmol) vbezvodém DMF (200 ml) a CH2Cl2 (150 ml) byl při -20 °C přidán NMM (5,90 ml, 53,7 mmol). Po 30 min míchání při této teplotě byla reakční směs uchována v mrazicím boxu přes noc (18 hod). Potom 15 byla ponechána ohřát na teplotu laboratoře a byly přidány EtOAc (450 ml), roztok soli (100 ml) a 5% H3PO4 (100 ml). Po oddělení vrstev byla organická vrstva promyta 5% H3PO4 (100 ml), nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (2 x 150 ml), vodou (150 ml) a roztokem soli (150 ml), sušena (MgSO4), zfiltrována a 20 zakoncentrována ve vakuu za poskytnutí sloučeniny (2.09) (4,86 g) jako bílé pevné látky, která byla použita bez dalšího čištění.
Krok B: Sloučenina (2.1}
(2.09)
(2-1)
-50.-.:. ’ .:. ’
Sloučenina (2.09) z preparativního příkladu 5, krok A (4,70 g, surové látky) byla rozpuštěna v 4N HCI (60 ml, 240 mmol) a získaný roztok byl míchán při teplotě laboratoře. Postup reakce byl monitorován TLC. Po 4 hod byl roztok zakoncentrován ve vakuu za 5 získání sloučeniny (2.1) jako bílé pevné látky, která byla použita v příští reakci bez dalšího čištění. LRMS m/z MH+= 179,0.
Preparativní Příklad 6
Krok A: Sloučenina (2.2)
(1.1)
V podstatě stejným způsobem jako v preparativním příkladu 2, krok A, s použitím hydrochloridu fenylglycin-N,N-dimethylamidu namísto hydrochloridu fenylglycin-t-butylesteru byla připravena sloučenina (2.2), hmotnostní spektrum (FAB) M+1 = 465,3.
Krok B: Sloučenina (2.3).
(2.3)
Sloučenina (2.2) z kroku A (1,85 g) byla ponechána reagovat s 4N HCI/dioxanem (50 ml) při teplotě laboratoře 1 hod. Směs byla
-51.-.:.
odpařena ve vakuu ve 20 °C vodní lázni, rozetřeba pod isopropyletherem, zfiltrována a sušena, za poskytnutí sloučeniny (2.3) (1,57 g, 98 % výtěžek), Ci8H28N4O4.HCI, hmotnostní spektrum (FAB) M+1 = 365,3.
Preparativní příklad 7
Krok A: Sloučenina (2.4)
(2-4)
Roztok sloučeniny (2.2) z preparativního příkladu 5, krok A (2,0 g) v dichlormethanu (60 ml) byl smísen s dimethylsulfoxidem 15 (3,0 ml) a kyselinou 2,2-dichloroctovou (0,70 ml). Míchaná směs byla ochlazena na 5 °C a potom byl přidán roztok 1M dicyklohexylkarbodiimid/dichlormethanu (8,5 ml). Chladná lázeň byla odstraněna a směs byla míchána 22 hod. Potom byl přidán 2-propanol (0,5 ml) a míchání pokračovalo 1 hod. Směs byla zfiltrována, potom 20 promyta ledově chladným 0,1 N NaOH (50 ml), potom ledově chladným 0,1 N HCI (50 ml), potom 5% vodným KH2PO4, potom nasyceným roztokem soli. Organický roztok byl sušen nad bezvodým síranem hořečnatým, potom zfiltrován. Filtrát byl odpařen a čištěn chromatografii na silikagelu s elucí ethylacetátem, za poskytnutí 25 sloučeniny (2.3) (1,87 g, 94% výtěžek), C23H34N4O6, hmotnostní spektrum (FAB) M+1 = 463,3.
-52.- .:.
Krok B: Sloučenina (2.5),
V podstatě stejným způsobem jako v preparativním příkladu 2, krok B byla připravena sloučenina (2.5).
Preparativní příklad 8
Krok A: Sloučenina (3.3)
Krok A-1: Sloučenina 3.02
Me-S^ Me-S^
Me-N <3OOH Me-N COOBzl
Boc Boc (3.01) <3-02)
Roztok sloučeniny 3,01 (4,6 g, připravené z N-Boc-Smethylcysteinu, Bachem Biosciences lne., postupem podle Boger, J. Org. Chem., 1988, 53(3), 487) v DMF (150 ml) byl smísen s Cs2CO3 (6,1 9), benzylbromidem (2,3 ml), a směs byla míchána při teplotě laboratoře 4 hod. Směs byla zakoncentrována ve vakuu a zbytek suspendován v EtOAc (200 ml). Potom byla směs promyta vodným 5% KH2PO4, potom roztokem soli, a organický extrakt byl sušen nad bezvodým MgSO4. Směs byla zfiltrována a filtrát odpařen za získám produktu sloučeniny 3.02 (6,2 g); [a]o-33,7 (c 1,3, CHCI3).
Krok A-2: Sloučenina 3.03
COOBzl
O2 Me-S
Me-N
Boc
I Boc
COOBzl (3.02) (3.03)
Použitím postupu podle U. Larsson, a další, Acta Chem. Scan., 1994, 48(6), 517 - 525, byl roztok oxonu® (16,4 g, Aldrich Chemical io Co.) ve vodě (90 ml) pomalu přidán k 0 °C roztoku sloučeniny 3.02 (6,1 g) v MeOH (150 ml). Směs byla míchána při teplotě laboratoře 4 hod, potom zakoncentrována na poloviční objem na rotační odparce, byla přidána chladná voda (100 ml), a směs byla extrahována EtOAc. Extrakt byl promyt roztokem soli a sušen nad bezvodým MgSO4. Směs 15 byla zfiltrována a filtrát byl odpařen za poskytnutí produktu 3.03 (5,9 g); [a]D-26,3 (c 0,9, CHCI3).
Krok A-3: Sloučenina 3.2
O2 Me-S
O2 Me-S^
Me-N COOBzl
Boc (3.03)
Me-N COOBzl
H-HCI (3-2)
Produkt 3.03 z předcházejícího kroku byl smísen s 4N HCI/dioxanem a směs byla ponechána reagovat 0,5 hod za poskytnutí produktu 3.2, C12H17NO4S.HCI (307,79); hmotnostní spektrum (FAB) M+1 = 272,0.
Příprava sloučeniny 3.3
MeSO^C MeSO^F^C
Boc-Chg-OH + Á χΟΒζ1 -----k Α,ΟΒζΙ
MeHNY Boc-Chg-N J
HCI ° 0 (3.1) (3.2) <3·3)
Sloučenina (3.2) (hydrochlorid benzylesteru S-methylcystem-sulfonu) a sloučenina (3.1) (N-Boc-cyklohexylglycin) byly ponechány reagovat v podstatě stejným způsobem jako v preparativním příkladu 2, krok A, za poskytnutí sloučeniny (3.3) C25H38N2O7S (510,64).
is Krok B; Sloučenina (3.4),
MeSO2H2C u kA^OBz! Boc~Chg— n f
Me k
3.3
CH2SO2Me _ Á___OH Boc-Chg-N [
Me J, 3.4
Směs sloučeniny (3.3) z kroku A výše (0,7 g), 10% Pd/C (0,05 g) směs EtOH-dioxan (100 ml) byla míchána za tlaku 0,3 MPa H2 hod. Směs byla zfiltrována a odpařena do sucha ve vakuu, za poskytnuti sloučeniny (3.4) (0,56 g, 97% výtěžek), C,8H32N2O7S (420,52) hmotnostní spektrum (FAB) M+1 = 421,2.
- 56 - · * : * ···· ··· ··
Krok C: Sloučenina (3.5)
(3.4) H-4) (3-5)
Sloučenina (3.4) z kroku B výše byla ponechána reagovat se sloučeninou (1.4) z preparativního příkladu 2, krok B v podstatě stejným způsobem jako v preparativním příkladu 2, krok A, za poskytnutí sloučeniny (3.5), C38H61N5O11S (795,98), hmotnostní spektrum (FAB) M+1 = 796,3.
Preparativní příklad 9
Sloučenina 4.1
MeSO2H2C H OH Η θ ?h N COOBi?
Me J / 0 H (3.5)
MeSO2H2C
H-Chg-N HCI Me O
Sloučenina (3.5) z preparativního příkladu 8, krok C se ponechá reagovat v podstatě stejným způsobem jako v preparativním příkladu 2, krok B, za získání sloučeniny (4.1) C33H53N5O9S.HCI (732,33).
Preparativní příklad 10
Sloučenina (4.2)
(4.1) _ (4.2)
Smísí se roztok sloučeniny (4.1) z preparativního příkladu 9 (0,7 g), dimethylformamidu (15 ml) a diisopropylethylaminu (0,38 ml) io při 5 °C s isobutylchlorformátem (0,15 ml). Odstraní se chladná lázeň a směs se míchá 6 hod. Reakční směs se vlije do 5% vodného KH2PO4 (100 ml) a extrahuje ethylacetátem (2 x 100 ml). Spojené organické podíly se promyjí chladným 5% vodným K2CO3, potom 5% vodným KH2PO4, potom roztokem soli, a suší nad bezvodým MgSO4. 15 Směs se zfiltruje, filtrát se odpaří ve vakuu, zbytek se smísí se směsi Et2O-hexan, a zfiltruje, za získání sloučeniny (4.2).
Preparativní příklad 11
Sloučenina (4.3)
Sloučenina (4.2) se ponechá reagovat v podstatě stejným způsobem jako v preparativním příkladu 14, krok H dále, za získání sloučeniny (4.3).
• · · · · · · ·
St.-.:. ’ .:. ’
Preparativní příklad 12
Sloučenina (4.4)
co OH (4.3) (4.4)
Sloučenina (4.3) z preparativního příkladu 11 (přibližně 0,10 g) io se smísí s roztokem bezvodé kyseliny trifluoroctové-dichlormethanu (1 : 1, přibližně 10 ml) přibližně 2 hod. Roztok se zředí xylenem (přibližně 50 ml) a odpaří ve vakuu. Zbytek se rozetře s Et2O a zfiltruje za získání sloučeniny (4.4).
Preparativní příklad 13
Sloučenina (4.5)
Sloučenina (4.4) z preparativního příkladu 12 se ponechá reagovat s dimethylaminem v podstatě stejným způsobem jako v preparativním příkladu 2, krok A, za získání sloučeniny (4.5).
Preparativní příklad 14
Krok A: Sloučenina (5.2)
(5.01) (5.1) (5·2)
K míchanému chlazenému roztoku sloučeniny (5.01) (1,11 g, 7,0 mmol) v bezvodém DMF (10 ml) a bezvodém CH2CI2 (10 ml) při 10 0 °C byl přidán HOBT (1,19 g, 7,25 mmol), N-methylmorfolin (2,3 ml,
21,0 mmol) a DEC (1,6 g, 8,4 mmol). Získaný roztok byl míchán při 0 °c 15 min, byl přidán H-Val-O^Bu (1,54 g, 7,35 mmol). Roztok byl udržován v mrazicím boxu přes noc. Bylo pozorováno výtvorem velkého množství sraženiny a roztok byl zakoncentrován do sucha, is extrahován směsí EtOAc-nasycený NaHCO3. Spojená organická vrstva byla potom promyta 5% roztokem H3PO4, H2O, roztokem soli, sušena nad Na2SO4, zfiltrována, za poskytnutí surového produktu 5.1 (2,4 g, 98% výtěžek).
Roztok surového produktu (získaný výše) ve směsi 4N 20 HCI/dioxan byl míchán při teplotě laboratoře 7 hod a zakoncentrován do sucha za poskytnutí sloučeniny (5.2).
Krok B: Sloučenina (5.4),
BOC
BOC O (5.4)
K míchanému roztoku sloučeniny (5.3) (F. L. Bach, Jr. a další, J. Amer. Chem. Soc., (1955) 77, 6049) (17,5 g, 0,086 mmol) v 50% MeOH/50% H2O (300 ml) byl přidán anhydrid Boc (47,0 g, 0,215 mol). Roztok byl potom upraven na pH = 9,5 přikapáváním 50% 5 koncentrovaného roztoku NaOH. Získaný roztok byl míchán přes noc při teplotě laboratoře a potom neutralizován koncentrovanou HCI na pH = 8 a okyselen kyselinou citrónovou na pH = 2,94, potom extrahován CH2CI2. Spojená organická vrstva byla sušena nad MgSO4 za získání sloučeniny (5.4) (27,16 g, 95% výtěžek).
Krok C: Sloučenina (5.5)
(5.4) (5.5)
Roztok thionylchloridu (3,37 ml, 0,046 mmol) v DMF (3,59 ml, 0,046 mol) při 0 °C byl zahřát na teplotu laboratoře a míchán 35 min. Roztok byl potom ochlazen na 0 °C, byla přidána sloučenina (5.4) 20 z kroku B výše (15,0 g, 0,045 mol) v CH3CN (150 ml) a pyridin (3,73 ml, 0,046 mol). Získaný roztok byl ohřát na laboratorní teplotu a míchán přes noc. Roztok byl potom vlit do ledové vody (700 ml) a extrahován třikrát EtOAc (150 ml). Spojená organická vrstva byla promyta roztokem soli, sušena nad Na2SO4, zfiltrována a 25 zakoncentrována do sucha za získání sloučeniny (5.5) (10,8 g).
-6θλ .:. ’ .:. ’
Krok D: Sloučenina (1.08)
OH (1.08)
Κ míchanému roztoku sloučeniny (6.6) z preparativního příkladu 14, krok D níže (6,5 g, 0,044 mol) v CH2CI2 (130 ml) byly přidány anhydrid Boc (9,65 g, 0,044 mol) a DMF (50 ml). Získaný roztok byl io míchán při teplotě laboratoře přes víkend a zakoncentrován do sucha, byla přidána H2O (120 ml) a 50% NaOH pro nastavení pH = 10 až 11. Roztok byl potom míchán 2 hod a bylo přidáno více anhydridu Boc (1,93 g, 8,8 mmol) a směs byla míchána přes noc při teplotě laboratoře. Roztok byl potom extrahován CH2CI2 a vodná vrstva byla 15 okyselena na pH = 4 při 0 °C 1N HCI a potom extrahována třikrát CH2CI2· Spojená organická vrstva byla potom promyta roztokem soli, sušena nad Na2SO4, zfiltrována a zakoncentrována do sucha, za získání sloučeniny (1.08) (4,50 g, 41% výtěžek, M-t-butyl +2 = 192).
Krok E: Sloučenina (5.7)
K míchanému roztoku sloučeniny (1.08) z výše popsaného kroku (4,5 g, 0,018 mol) v DMF (22 ml) a CH2CI2 (22 ml) byly přidány HOBT (2,7 g, 0,02 mol), N-methylmorfolin (6 ml, 0,054 mol), DEC (4,17 g,
0022 mol) a allylglycin.TsOH (6,1 g, 0,02 mol). Získaný roztok byl míchán při teplotě laboratoře přes víkend a zakoncentrován do sucha, extrahován směsí EtOAc-nasycený NaHCO3. Spojená organická vrstva byla promyta 10% H3PO4, roztokem soli, sušena nad Na2SO4 a 5 zfiltrována, za získání surového produktu (5,7 g). Roztok surového produktu v 4N HCI/dioxanu (50 ml) byl míchán při teplotě laboratoře 50 min a zakoncentrován do sucha za získání sloučeniny (5.7) (4,79 g, 94% výtěžek, MH+ = 245,1).
io Krok F: Sloučenina (5.8)
(5-7) (5.8)
K míchanému roztoku sloučeniny (5.7) z kroku E výše (3,1 g,
0,011 mol) v bezvodém CH2CI2 (55 ml) byla po kapkách přidána TEA (1,69 ml, 0,012 mol) v průběhu 13 min a sloučenina (5.5) z kroku C (2,83 g, 0,011 mol) v bezvodém CH2CI2 (55 ml). Získaný roztok byl 20 míchán při teplotě laboratoře 1,5 hod. Organická vrstva byla potom promyta nasyceným NaHCO3, roztokem soli, sušena nad Na2SO4 a zfiltrována, za získání sloučeniny (5.8) (4,67 g, MH+ = 457,2).
Krok G: Sloučenina (5.9)
(5.9) (5.8)
-62-· .:· .:. ·..··..·
K míchanému roztoku sloučeniny (5.2) z kroku A (0,34 g, 1,31 mmol) v CH2CI2 (5 ml) a DMF (5 ml) byly při 0 °C přidány HOBT (0,214 g, 1. 31 mmol), N-methylmorfolin (0,43 ml, 3,9 mmol) a DEC 5 (0,5 g, 1,09 mmol). Směs byla míchána při teplotě laboratoře 15 min, byla přidána sloučenina (5.8) z kroku F (0,5 g, 1,09 mmol). Získaný roztok byl udržován v mrazicím boxu přes noc, potom zakoncentrován do sucha, extrahován EtOAc-H2O. Spojená organická vrstva byla promyta dvakrát nasyceným NaHCO3, 5% H3PO4, a roztokem soli, 10 sušen nad Na2SO4, potom zfiltrována a zakoncentrována do sucha, za získání sloučeniny (5.9) (0,65 g, MH+ = 697,4).
Krok H: Sloučenina (5.10)
(5.9) (5·10)
K míchanému roztoku sloučeniny (5.9) z kroku G (0,6 g, 20 0,8 mmol) v bezvodém CH2CI2 (8 ml) bylo přidáno Dess-Martinovo činidlo (0,732 g, 1,72 mmol) a směs byla míchána při teplotě laboratoře 1 hod, po kapkách byla přidána H20 (0,031 ml) a DessMartinovo činidlo (0,373 g, 0,86 mmol) v CH2CI2 (12 ml). Získaný roztok byl míchán při teplotě laboratoře 2,5 hod, byl přidán roztok 25 směsi 50% nasycený NaHCO3/50% nasycený Na2S2O3 (20 ml) a směs byla důkladně míchána 1,5 hod při teplotě laboratoře. Roztok byl potom promyt H2O a roztokem soli, sušen nad Na2SO4 a zakoncentrován do sucha, za získání sloučeniny (5.10) (0,588 g, 100% výtěžek, MH+ = 695,2).
« · · ♦ · * · · « · - 6ζ·λ »♦· *»·' ·*· ‘♦·**··’
Preparativní příklad 15
Krok A: Sloučenina (6.2)
(6.1)
K míchanému roztoku sloučeniny (6.1) (5,0 g, 19,89 mmol) v CH2CI2 (20 ml) a DMF (10 ml) při -20 °C byly přidány HOBT (3,25 g, 19,89 mmol), EDCI (4,58 g, 23,87 mmol), a N-methylmorfolin (6,56 ml, 59,69 mmol). Získaný roztok byl míchán při teplotě laboratoře 10 min, byl přidán NH4CI (1,38 g) a roztok byl udržován při teplotě 0 °C přes noc. Roztok byl potom zakoncentrován a extrahován směsí EtOAcH2O. Spojená organická vrstva byla promyta dvakrát NaHCO3, H3PO4 a roztokem soli, sušena nad Na2SO4, zfiltrována a zakoncentrována do sucha. Surový produkt byl čištěn chromatografii na koloně s elucí 2,5% MeOH/97,5% CH2CI2, za získání sloučeniny (6.2) (1,95 g, MH+ = 251,1).
Krok B: Sloučenina (6.3)
(6.3)
Roztok sloučeniny (6.2) z kroku A (12,32 g, 49,28 mmol) v 4N HCI/dioxanu (270 ml, 43,08 mmol) byl míchán při teplotě laboratoře hod, potom zakoncentrován do sucha za získání sloučeniny (6.3) (8,40 g, 100% výtěžek).
Krok C: Sloučenina (1.08) (alternativní syntéza)
K míchanému roztoku 1-nitrobutanu (16,5 g, 0,16 mol) a kyseliny glyoxylové.H2O (28,1 g, 0,305 mol) v MeOH (122 ml) byl při 0 °C až 5 °C po kapkách přidán triethylamin (93 ml, 0,667 mol) v průběhu 2 hod. Roztok byl ohřát na laboratorní teplotu, míchán přes noc, potom zakoncentrován do sucha za získání oleje. Olej byl potom smísen s H2O a okyselen na pH 1 10% HCI, extrahován EtOAc. Spojená organická vrstva byla promyta roztokem soli, sušena nad Na2SO4, zfiltrována a zakoncentrována do sucha, za získání sloučeniny (6.5) (28,1 g, 99% výtěžek).
Krok D: Sloučenina (6.6)
(6-5)
K míchanému roztoku sloučeniny (6.5) z kroku C (240 g, 1,35 mmol) v kyselině octové (1,25 I) bylo přidáno 10% Pd/C (37 g). Získaný roztok byl hydrogenován při 59 psi (407 kPa) 3 hod a potom při 60 psi (414 kPa) přes noc. Kyselina octová byla potom odpařena a zbytek byl azeotropně destilován třikrát s toluenem, potom smísen s MeOH a etherem. Roztok byl potom zfiltrován a azeotropně destilován dvakrát s toluenem, za získání sloučeniny (6.6) (131 g, 66% výtěžek).
Krok E: Sloučenina (1.08)
(1.08)
K míchanému roztoku sloučeniny (6.6) z kroku D (2,0 g, 0,0136 mol) v dioxanu (10 ml) a H2O (5 ml) byl při 0 °C přidán roztok 1N NaOH (vodný) (4,3 ml, 0,014 mol). Získaný roztok byl míchán 10 min, byl přidán anhydrid Boc (0,11 g, 0,014 mol) a roztok byl míchán při 0 °C 15 min. Roztok byl ohřát na laboratorní teplotu, míchán 45 min, udržován v chladicím boxu přes noc a potom zakoncentrován do sucha, za získání surového materiálu. K roztoku surového materiálu v EtOAc a ledu byly přidány KHSO4 (3,36 g) a H2O (32 ml) a směs byla míchána 4 až 6 min. Organická vrstva byla potom oddělena a vodná vrstva byla extrahována dvakrát EtOAc. Spojená organická vrstva byla promyta H2O, roztokem soli, sušena nad Na2SO4, zfiltrována a zakoncentrována do sucha, za získání sloučeniny (1.08) (3,0 g, 89,2% výtěžek).
- 6S— ·ί·
Krok F: Sloučenina (1.09)
(1.08)
K míchanému roztoku sloučeniny (1.08) z kroku E (3,0 g, 0,012 mol) v DMF (15 ml) a CH2CI2 (15 ml) byly při -20 °C přidány HOBT (1,97 g, 0,012 mol), N-methylmorfolin (4,0 ml, 0,036 mol) a EDCI (2,79 g, 0,0145 mol). Reakční směs byla míchána 10 min, byl přidán H-Gly-OBZ.HCI (2,56 g, 0,013 mol). Získaný roztok byl míchán při -20 °C 2 hod, udržován v chladicím boxu přes noc, potom zakoncentrován do sucha, zředěn EtOAc. Roztok EtOAc byl dvakrát promyt nasyceným NaHCOs, H2O, 5% H3PO4, roztokem soli, sušen nad Na2SO4, zfiltrován a zakoncentrován za získání sloučeniny (1.09) (4,5 g, 94% výtěžek, MH+= 395,1).
Krok G: Sloučenina (6.9)
(1.09) (6.9)
Roztok sloučeniny (1.09) z kroku F (4,5 g, 0,0114 mol) v 4N HCI/dioxanu (45 ml) byl míchán při teplotě laboratoře 45 min, potom zakoncentrován do sucha za získání sloučeniny (6.9) (4,5 g, MH+ = 295,1).
-67.. .:.
Krok H: Sloučenina (6.11)
K míchanému roztoku sloučeniny Boc-fenylglycinu (6.1) (0,398 g, 1,58 mmol) v CH2CI2 (5 ml) a DMF (5 ml) ve 100 ml kulové baňce io byly při -20 °C přidány HOBT (0,258 g, 1,58 mmol), EDO (0,364 g, 1,903 mmol) a N-methylmorfolin (0,523 ml, 4,759 mmol). Směs byla míchána 5 min, byla přidána sloučenina (6.9) z kroku G (0,5 g, 1,51 mmol) a CH2O2 (5 ml). Získaný roztok byl míchán při -20 °C 10 min a potom udržován v mrazicím boxu přes noc. Reakční směs 15 byla zakoncentrována do sucha, extrahována směsí EtOAc-nasycený NaHCOs. Spojená organická vrstva byla potom promyta dvakrát 5% H3PO4 a roztokem soli, sušena nad Na2SO4, zfiltrována a zakoncentrována do sucha, za získání sloučeniny (6.11) (0,75 g, 94% výtěžek, MH+ =528,1).
Krok J: Sloučenina (6.12)
(6.12)
-6á« ·:. ’..· .:. ·..··..·
Roztok sloučeniny (6.11) z kroku H (0,75 g, 1,423 mmol) v 4N HCI/dioxanu (21 ml) byl míchán při teplotě laboratoře 3 hod, potom zakoncentrován do sucha, za získání sloučeniny (6.12) (0,68 g, 100% výtěžek).
K míchanému roztoku (6.13) (0,44 g, 1,725 mmol) v CH2CI2 (5 ml) a DMF (5 ml) byly při -20 °C přidány EDCI (0,39 g, 2,07 mmol), HOBT (0,18 g, 1,725 mmol), a N-methylmorfolin (0,523 ml, 4,76 15 mmol). Reakční směs byla míchána 5 min, byla přidána sloučenina (6.12) z kroku J (0,68 g, 1,64 mmol) v CH2CI2 (7 ml). Získaný roztok byl míchán při -20 °C 10 min a udržován v mrazicím boxu přes noc, potom zakoncentrován do sucha, extrahován směsí EtOAc-nasycený NaHCO3. Spojená organická vrstva byla promyta dvakrát 5% H3PO4, 20 roztokem soli, sušena nad Na2SO4, zfiltrována a zakoncentrována do sucha, za získání sloučeniny (6.14) (0,59 g, 54% výtěžek, MH = 667,3).
Krok L: Sloučenina (6.15)
(6.15)(6.14)
-63« .:·
K míchanému roztoku sloučeniny (6.14) z kroku K (0,593 g, 0,89 mmol) v CH2CI2 (20 ml) byl přidán Dess-Martinův perjodinan (0,76 g, 1,784 mmol). Získaný roztok byl míchán při teplotě laboratoře 2 5 hod, potom byla přidána směs H2O/CH2CI2. Směs byla míchána 45 min, potom byla přidána směs 50% nasycený NaHCO3/50% Na2S2O3 (10 ml) a směs byla míchána další 1,5 hod. K roztoku byl přidán CH2CI2 a organická vrstva byla promyta roztokem soli, sušena nad Na2SO4, zfiltrována, zakoncentrována do sucha a čištěna io chromatografií na koloně s eluci směsí 2,5% MeOH/97,5% CH2CI2, za získání sloučeniny (6.15) (0,48 g, 82% výtěžek).
Krok M: Sloučenina (6.16)
(6.16)
K míchanému roztoku sloučeniny (6.15) z kroku L (0,16 g, 20 0,24 mmol) v absolutním EtOH (10 ml) bylo přidáno Pd/C (40,8 mg).
Získaný roztok byl důkladně míchán, byla přidána 1 kapka AcOH. Roztok byl potom míchán v atmosféře H2 2 hod a potom zfiltrován přes celit, za získání sloučeniny (6.16) (0,133 g, 95% výtěžek, MH = 575,3).
-73« .:. ’
Krok Ν: Sloučenina (6.18) (6.17)
Κ míchanému roztoku (6.17) (0,5 g, 1,59 mmol) v CH2CI2 (5 ml) a DMF (5 ml) byly při -20 °C přidány HOBT (0,259 g, 1,59 mmol), NMM (0,48 g, 4,77 mmol) a EDCI (0,366 g, 1,91 mmol). Směs byla míchána 5 min, byla přidána sloučenina (6.9) z kroku G (0,5 g, 1,51 mmol) a CH2CI2 (5 ml). Získaný roztok byl míchán při -20 °C 10 min, udržován v mrazicím boxu přes noc, potom zakoncentrován do sucha, extrahován směsí EtOAc-nasycený NaHCOs. Spojená organická vrstva byla potom promyta dvakrát 5% H3PO4 a roztokem soli, sušena nad Na2SO4, zfiltrována a zakoncentrována do sucha, za získání sloučeniny (6.18) (0,95 g, MH+ = 592,1).
Krok O: Sloučenina (6.19)
Roztok sloučeniny (6.18) z kroku N (0,93 g, 1,58 mmol) v 4N
HCI/dioxanu (26 ml) byl míchán při teplotě laboratoře 2 hod, potom
-73., .:. ·..· .:. ·..··..· zakoncentrován do sucha za získání sloučeniny (6.19) (0,96 g, 100% výtěžek, MH+ = 492,1).
Krok P: Sloučenina (6.20)
K míchanému chlazenému roztoku sloučeniny (6.13) (0,51 g, 2,02 mmol) v CH2CI2 (5 ml) a DMF (5 ml) byly při -20 °C přidány HOBT (0,33 g, 2,02 mmol), N-methylmorfolin (0,61 g, 6,06 mmol) a EDCI (0,46 g, 2,42 mmol). Reakční směs byla míchána 5 min, byla přidána sloučenina (6.19) z kroku O (0,94 g, 1,92 mmol). Získaný roztok byl míchán při -20 °C 10 min, potom uchován v chladicím boxu přes noc, zakoncentrován do sucha, extrahován směsí EtOAc-nasycený NaHCOs. Spojená organická vrstva byla promyta 5% H3PO4 a roztokem soli, sušena nad Na2SO4, zfiltrována a zakoncentrována do sucha, za získání sloučeniny (6.20) (1,29 g, 87% výtěžek).
(6.20)
-72-. .:. ·..· .:.
K míchanému roztoku sloučeniny (6.20) z kroku P (1,27 g, 1,74 mmol) v absolutním EtOH (50 ml) bylo přidáno Pd/C (100 mg). Získaný roztok byl důkladně míchán, byly přidány 2 kapky AcOH. Roztok byl potom hydrogenován 2 hod a zfiltrován přes celit, za získání sloučeniny (6.21) (1,07 g, 96% výtěžek, MH = 641,1).
(6.22)
K míchanému roztoku sloučeniny (6.21) z kroku Q (0,25 g,
0,39 mmol) v CH2CI2 (5 ml) a DMF (5 ml) byly při -25 °C přidány HOBT (0,06 g, 0,39 mmol), N-methylmorfolin (0,12 g, 1,17 mmol), EDCI (0,089 g, 0,469 mmol) a směs byla míchána 10 min, byla přidána sloučenina (6.3) z kroku B (0,069 g, 0,37 mmol). Získaný roztok byl míchán při 25 °C 15 min, udržován v chladicím boxu přes noc, potom extrahován směsí EtOAc-nasycený NaHCO3. Spojená organická vrstva byla promyta 5% H3PO4, roztokem soli, sušena nad Na2SO4, zfiltrována a zakoncentrována do sucha, za získání sloučeniny (6.22).
Krok S: Sloučenina (6.23)
(622)
(6.23) • * · · . . . . . *· -73« .:. ·..· .:. ·..··..·
K míchanému roztoku sloučeniny (6.22) z kroku R (0,23 g, 0,302 mmol) v CH2CI2 (10 ml) byl přidán Dess-Martinův perjodinan (0,256 g, 0,60 mmol). Získaný roztok byl míchán při teplotě laboratoře 2 hod, byla přidána směs H2O/CH2CI2 a míchání pokračovalo 45 min. K reakční směsi byla potom přidána směs 50% nasycený NaHCO3/50% Na2S2O3 (10 ml) a směs byla míchána 1,5 hod. K roztoku byl přidán CH2CI2 a organická vrstva byla promyta roztokem soli, sušena nad Na2SO4, zfiltrována, zakoncentrována do sucha a čištěna chromatografii na koloně silikagelu, s elucí 1% až 3% MeOH/99% až 97% CH2CI2 za poskytnutí sloučeniny (6.23) (0,08 g, 34% výtěžek, MH+ = 771,2)
Preparativní příklad 16
Krok A: Sloučenina (7.2)
(7.1) (7·2)
K míchanému roztoku sloučeniny (7.1) (0,476 g, 1,51 mmol) v CH2CI2 (60 ml) a DMF (60 ml) byly při -20 °C přidány HOBT (0,246 g, 1,51 mmol), N-methylmorfolin (0,458 g, 4,53 mmol) a EDCI (0,351 g, 1,81 mmol). Reakční směs byla míchána 5 min, byla přidána sloučenina (6.8) z preparativního příkladu 15, krok F (0,5 g, 1,51 mmol). Získaný roztok byl míchán při -20 °C 3 hod, potom udržován v mrazicím boxu přes noc, zakoncentrován do sucha, extrahován směsí EtOAc-nasycený NaHCO3. Spojená organická vrstva byla promyta dvakrát 5% H3PO4, H2O, roztokem soli, sušana nad Na2SO4 a
-74- .:.. .:. ·..· .:. ·..··..· zakoncentrována do sucha za získání sloučeniny (7.2) (0,82 g, 94% výtěžek, MH+ = 592,1).
Krok B: Sloučenina (7,3)
(7.2)
Roztok sloučeniny (7.2) z kroku A (0,82 g, 1,39 mmol) v 4N HCI/dioxanu (20 ml) byl míchán při teplotě laboratoře 2 hod a potom zakoncentrován do sucha za získání sloučeniny (7.3) (0,84 g, 100% výtěžek, MH+ = 492,3).
K míchanému roztoku sloučeniny (6.13) (0,36 g, 1,40 mmol) v CH2CI2 (60 ml) a DMF (60 ml) byly při -20 °C přidány HOBT (0,228 g, 1,40 mmol), NMM (0,425 g, 4,20 mmol) a EDCI (0,322 g, 1,68 mmol). Reakčni směs byla míchána 5 min, byla přidána sloučenina (7.3) z kroku B (0,84 g, 1,40 mmol). Získaný roztok byl míchán při -20 °C 3 hod a potom udržován v mrazicím boxu přes noc, zakoncentrován do
-75 - .:.. .:. ·..· .:. ·..··..· sucha, extrahován směsí EtOAc-nasycený NaHCOs. Spojená organická vrstva byla promyta 5% H3PO4, H2O, roztokem soli, sušena nad Na2SO4, zfiltrována a zakoncentrována do sucha, za získání sloučeniny (7.4) (0,57 g, 57% výtěžek, MH+ = 731,3).
Krok D: Sloučenina (7,5)
(7.4) (7-5)
K míchanému roztoku sloučeniny (7.4) z kroku C (0,55 g, 0,75 mmol) v CH2CI2 (5 ml) byl přidán Dess-Martinův perjodinan (0,64 g, 1,50 mmol). Získaný roztok byl míchán při teplotě laboratoře 2 hod, byla přidána směs H2O/CH2CI2. Ke směsi míchané 45 min byly potom přidány 50% nasycený NaHCO3/50% Na2S20s a směs byla míchána další 1,5 hod. K roztoku byl přidán CH2CI2 a organická vrstva byla potom promyta roztokem soli, sušena nad Na2SO4 a zakoncentrována do sucha, za poskytnutí sloučeniny (7.5) (0,24 g, 44% výtěžek, MH+ = 729,5).
Krok E: Sloučenina (7.6)
(7.5)
- 76 K míchanému roztoku sloučeniny (7.5) z kroku D (0,10 g, 0,14 mmol) v absolutním EtOH (20 ml) bylo přidáno Pd/C (20 mg). Získaný roztok byl důkladně míchán ve 100 ml kulové baňce, probublán H2 a míchán v atmosféře H2 přes noc. Roztok byl potom zfiltrován přes celit, promyt EtOH a zakoncentrován do sucha za získání sloučeniny (7.6) (93 mg, 100% výtěžek, MH+ = 639,1).
R=Benzyl (8.2)
R=H (8.3)
V podstatě stejným způsobem jako v preparativním příkladu 16, kroky A - E, s použitím sloučeniny (8.1) místo sloučeniny (7.1) v kroku A, byly připraveny sloučeniny (8.2) a (8.3).
Preparativní příklad 18
Krok A: Sloučenina (9.2)
K míchanému roztoku (S)(+)-2-fenylglycinu (9.1) (15,0 g, 0,099 mol) v benzenu (350 ml) byla přidána kyselina p-toluen-77 -sulfonová.H2O (20,76 g, 0,116 mol) a benzylalkohol (30 ml, 0,29 mol). Získaný roztok byl zahříván pod zpětným chladičem přes noc a roztok se změnil na kaši. Roztok byl potom ochlazen na teplotu laboratoře a byl přidán ether. Pevné podíly byly zfiltrovány přes nálevku opatřenou sintrem a dvakrát promyty Et2O, potom sušeny v atmosféře dusíku, za získání pevné látky (35,4 g). Pevná látka byla potom rozpuštěna v CH2CI2 a promyta nasyceným NaHCO3. Spojená organická vrstva byla potom sušena nad Na2SO4 a zakoncentrována do sucha za získání volného aminu (18,1 g, 75,7% výtěžek). Volný amin byl potom rozpuštěn v etheru a probublán 1N HCI za vytvoření bílé sraženiny. Sraženina byla zfiltrována, promyta etherem a sušena ve vakuu za získání sloučeniny (9.2) (15,2 g).
Krok B: Sloučenina (9.4)
BocHN
O
(9.3) (9.4) 20 K míchanému roztoku Boc-gly-OH (9.3) (11,35 g, 0,0648 mol) v bezvodém DMF (100 ml) a bezvodém CH2CI2 (100 ml) byly při -20 C přidány HOBT (10,5 g, 0,065 mol), EDCI (13,6 g, 0,0712 mol) a Nmethylmorfolin (21,3 ml, 0,194 mol). Získaný roztok byl míchán při teplotě -20 °C 10 min, byla přidána sloučenina (9.2) z kroku A (18,0 g, 25 0,065 mol). Reakční směs byla míchána 45 min při -20 °C a potom byla udržována v mrazicím boxu přes noc. Roztok byl potom zakoncentrován do sucha, extrahován směsí EtOAc-nasycený NaHCO3. Spojená organická vrstva byla promyta H2O, potom roztokem soli, sušena nad Na2SO4 a zakoncentrována do sucha, za poskytnutí sloučeniny (9.4) (26,48 g, 100% výtěžek, MH+ = 399,2).
-78 Krok C: Sloučenina (9.5)
(9.4)
(9.5)
Roztok sloučeniny (9.4) z kroku B (26,4 g, 0,065 mol) ve směsi 4N HCI/dioxan (100 ml) byl míchán při teplotě laboratoře 1 hod a potom zakoncentrován do sucha za poskytnutí sloučeniny (9.5) (22,69 g, 100% výtěžek, MH+ = 299,1).
(1.08) (9-6)
K míchanému roztoku sloučeniny (1.08) z preparativního příkladu 15, krok E (15,5 g, 0,0627 mol) v DMF (150 ml) a CH2CI2 (150 ml) byly při -20 °C přidány HOBT (10,22 g, 0,0626 mol), EDCl (13,2 g, 0,069 mol) a NMM (20,67 g, 0,188 mol). Získaný roztok byl míchán při -20 °C 10 min, následovalo přidání sloučeniny (9.5) z kroku C (21,0 g, 0,063 mol). Reakční směs byla míchána při -20 °C 1 hod a potom byla udržována v mrazicím boxu přes noc. Roztok byl potom zakoncentrován do sucha, extrahován směsí EtOAc-nasycený NaHCOs. Spojená organická vrstva byla promyta H2O, 5% H3PO4 a roztokem soli, sušena nad Na2SO4, zfiltrována a zakoncentrována do
- 79 sucha za poskytnutí sloučeniny (9.6) (30,3 g, 92% výtěžek, MH+ = 528,1).
Krok E: Sloučenina (9.7)
V podstatě stejným způsobem jako v preparativním příkladu 18, krok C výše, byla připravena sloučenina (9.7) (30,0 g, 100% výtěžek,
MH+ = 428,1).
K míchanému roztoku Boc-His(Z)-OH (9.8) (0,5 g, 1,28 mmol) v DMF (5 ml) a CH2CI2 (5 ml) byly při -20 °C přidány HOBT (0,209 g, 1,28 mmol), EDCI (0,27 g, 1,41 mmol) a NMM (0,42 ml, 3,85 mmol). 25 Získaný roztok byl míchán při -20 °C 10 min, byla přidána sloučenina (9.7) z kroku E (0,673 g, 1,28 mmol) a směs byla míchána při -20 °C 2 hod a potom byla udržována v mrazicím boxu přes noc. Roztok byl
-80- .:.. .:. ·..· .:. ·..··..· potom zakoncentrován do sucha, extrahován směsí EtOAc-nasycený NaHCO3. Spojená organická vrstva byla promyta H2O, 5% H3PO4 a roztokem soli, sušena nad Na2SO4, zfiltrována a zakoncentrována, za poskytnutí sloučeniny (9.9) (0,858 g, 84% výtěžek, MH+ = 799).
Krok G: Sloučenina (9.11)
(9.9) (9.11)
V podstatě stejným způsobem jako v preparativním příkladu 18, krok C, byla připravena sloučenina (9.11) (0,76 g, 100% výtěžek, MH is = 699,2).
Krok H: Sloučenina (9.12)
(9.11) (9·12)
K míchanému roztoku N-Boc-cyklohexylglycinu (0,263 g, 25 1,026 mmol) v DMF (5 ml) a CH2CI2 (5 ml) byly při -20 °C přidány
HOBT (0,167 g, 1,026 mmol), EDCI (0,216 g, 1,13 mmol) a NMM (0,338 g, 3,078 mmol). Získaný roztok byl míchán při -20 °C 10 min,
- 81 byla přidána sloučenina (9.11) z kroku G (0,754 g, 1,03 mmol). Reakční směs byla míchána při -20 °C 1 hod a potom byla udržována v mrazicím boxu přes noc. Roztok byl potom zakoncentrován do sucha, extraován směsí EtOAc-nasycený NaHCOs. Spojená organická 5 vrstva byla potom promyta H2O, 5% H3PO4 a roztokem soli, sušena nad Na2SO4, zfiltrována a zakoncentrována do sucha, za poskytnutí sloučeniny (9.12) (0,735 g, MH+ = 938,4).
Krok I: Sloučenina (9.13)
(9-12)
K míchanému roztoku sloučeniny (9.12) z kroku H (0,367 g, 0,377 mmol) v bezvodém CH2CI2 (10 ml) byl přidán Dess-Martinův perjodinan (0,32 g, 0,75 mmol). Získaný roztok byl míchán při teplotě 20 laboratoře 2 hod. K roztoku byly přidány CH2CI2, nasycený Na2S2O4 a nasycený NaHCO3 a roztok byl ponechán míchat při teplotě laboratoře 1 hod. Organická vrstva byla potom oddělena a promyta H2O a roztokem soli, sušena nad Na2SO4, zfiltrována a zakoncentrována do sucha, za získání surového produktu (340 mg). Surový produkt byl 25 potom čištěn chromatografií na koloně s elucí CH2CI2 3 potom 4% MeOH/CH2CI2, za získání sloučeniny (9.13) (150 mg, MH+= 936,3).
- 82 Krok J: Sloučenina (9.14)
K míchanému roztoku sloučeniny (9.13) z kroku I (0,15 g, 1,6 mmol) v absolutním EtOH (40 ml) bylo přidáno 10% Pd/C v 50% io H2O (hmotn./hmotn.). Roztok byl probublán N2 a míchán pod balonem H2 45 min. Katalyzátor byl potom zfiltrován přes celit, promyt EtOH/CH2CI2 a potom zakoncentrován do sucha, za získání sloučeniny (9.14) (0,116 g, MH+ = 712,2).
Preparativní příklad 19
Krok A: Sloučenina (10.2)
(10.1)
Suspenze L-3-(1-naftyl)alaninu (2,0 g, 9,34 mmol) v bezvodém EtOH (200 ml) byla vlita do 500 ml baňky. Do roztoku byl potom 25 probubláván bezvodý koncentrovaný HCI (2 ml) pro rozpuštění všech pevných látek. Roztok byl ponechán ochladit na laboratorní teplotu 45 min a potom byl zakoncentrován do sucha, byly přidány EtOH
- 83 (50 ml), 10% Pd/C (300 mg) a 5% Rh/C (300 mg). Získaný roztok byl umístěn v Parrově přístroji a hydrogenován při 60 psi (414 kPa). Reakční směs byla potom zfiltrována přes celit, promyta EtOH a zakoncentrována do sucha, za získání surového materiálu (2,4 g, MH+ = 254,2). Surový produkt byl rozpuštěn v CH2CI2 a potom promyt nasyceným NaHCO3. Spojená organická vrstva byla zakoncentrována do sucha a čištěna chromatografii na koloně silikagelu, s elucí 5% 20% EtOAc/CH2CI2, za poskytnutí sloučeniny (10.2) (0,65 g).
Krok B: Sloučenina (10.3)
(10.3)
K míchanému roztoku N-Boc-cyklohexylglycinu (0,643 g, 2,5 mmol) v DMF (5 ml) a CH2CI2 (5 ml) byly při -20 °C přidány HOBT (0,407 g, 2,5 mmol), EDCI (0,527 g, 2,75 mmol) a NMM (0,825 ml, 20 7,5 mmol). Získaný roztok byl míchán 10 min při -20 °C, byla přidána sloučenina (10.2) z kroku A a CH2CI2 (3 ml), a potom byl roztok udržován v mrazicím boxu přes noc. Roztok byl potom zakoncentrován do sucha, extrahován směsí EtOAc-nasycený NaHCO3. Spojená organická vrstva byla promyta H2O, 5% H3PO4 a roztokem soli, sušena 25 nad Na2SO4, zfiltrována a zakoncentrována do sucha, za získání sloučeniny (10.3) (1,12 g, 92% výtěžek).
- 84 - ................
Krok C: Sloučenina (10.4)
(10.3)
(10.4)
K míchanému roztoku sloučeniny (10.3) z kroku B (1,1 g, 2,25 mmol) v MeOH (30 ml) a H2O (7,5 ml) byl přidán LiOH (0,283 g, io 6,75 mmol). Získaný roztok byl míchán při teplotě laboratoře přes noc, následovalo přidání 5% H3PO4. Utvořila se sraženina a roztok byl odpařen pro odstranění většiny MeOH. Byl přidán ΟΗ2ΟΙ2 θ vrstva CH2CI2 byla potom oddělena, sušena nad Na2SO4, zfiltrována a zakoncentrována do sucha, za získání sloučeniny (10.4) (1,068 g, 15 100% výtěžek, MH+ = 459,1).
Krok D: Sloučenina (10.5)
(10.4) (10-5)
K míchanému roztoku sloučeniny (10.4) z kroku C (1,0 g, 25 2,17 mmol) v DMF (10 ml) a CH2CI2 (10 ml) byly přidány HOBT (0,353 g, 2,17 mmol), EDCI (0,457 g, 2,38 mmol) a NMM (0,715 ml, 6,51 mmol). Získaný roztok byl míchán při -20 °C 10 min, byla přidána sloučenina (9.7) z preparativního příkladu 18, krok E (1,13 g,
-85- ·· ............
2,17 mmol). Reakční směs byla míchána 0,5 hod při -20 °C a potom byla udržována v mrazicím boxu přes noc. Roztok byl potom zakoncentrován do sucha, extrahován směsí EtOAc-nasycený NaHCOa. Spojená organická vrstva byla promyta H2O, 5% H3PO4 a 5 roztokem soli, sušena nad Na2SO4, zfiltrována a zakoncentrována do sucha, za poskytnutí sloučeniny (10.5) (1,8 g, M+Na = 890,4).
Krok E: Sloučenina (10.6)
(10.5)
(10.6) 15 K míchanému roztoku sloučeniny (10.5) z kroku D (1,8 g,
2,07 mmol) v bezvodém CH2Cl2 (40 ml) byl přidán Dess-Martinův perjodinan (1,76 g, 4,15 mmol). Získaný roztok byl míchán při teplotě laboratoře 1 hod, v průběhu 1,5 hod byl přikapáván bezvodý CH2CI2 (40 ml) a H2O (0,074 ml) a směs byla míchána další 2 hod. K tomuto roztoku bylo potom přidáno 40 ml směsi 50% nasycený NaHCOs/50% nasycený Na2S2O4 a získaný roztok byl důkladně míchán půl hodiny. Organická vrstva byla potom oddělena a promyta H2O. Spojená organická vrstva byla zakoncentrována do sucha a čištěna chromatografií na koloně silikagelu, s eluci směsí 2% - 3%
MeOH/CH2CI2, za získání sloučeniny (10.6) (0,95 g, MH+ = 866,2).
Krok F: Sloučenina (10.7) _ * « · · · ·»««
- 86 - ................
(10.6) (10.7)
V podstatě stejným způsobem jako v preparativním příkladu 18 krok K, byla připravena sloučenina (10.7).
Příklady
S použitím postupů z preparativního příkladu 1, krok A, a preparativního příkladu 2, krok F pro vazebné reakce; preparativního příkladu 1, krok B, preparativního příkladu 1, krok F, preparativního příkladu 2, krok D, a preparativního příkladu 4, krok J pro odstraňování ochranných skupin esterů; preparativního příkladu 2, krok E a preparativního příkladu 4, krok J, pro odstraňování ochranných skupin aminů; a preparativního příkladu 4, krok H, pro oxidaci hydroxyamidů na ketoamidy - spolu s a-aminokyselinami z příkladů uvedených výše nebo komerčně dostupných nebo popsaných v literatuře v různých nezbytných kombinacích byly připraveny sloučeniny uvedené v přiložené tabulce 2.
Syntéza na pevné fázi
Obecný postup pro vazebné reakce na pevné fázi
Syntéza byla prováděna v reakční nádobě, která byla vytvořena z patrony z polypropylenové stříkačky opatřené u dna polypropylenovou fritou. Aminokyseliny chráněné Fmoc byly
- 87 i...............
navazovány za standardních podmínek syntézy na pevné fázi. Do každé reakční nádoby bylo vloženo 100 mg výchozí pryskyřice FmocSieber (přibližně 0,035 mmol). Pryskyřice byla promyta 2 ml podíly DMF (2 x). Ochranná skupina Fmoc byla odstraněna působením 2 ml 20 % obj./obj. roztoku piperidinu v DMF 20 min. Pryskyřice byla promyta 2 ml podíly DMF (4 x). Vazebná reakce byla prováděna v DMF (2 ml), s použitím 0,12 mmol Fmoc-aminokyseliny, 0,12 mmol HATU [O-(7-azabenzotriazol-1 -yl)-1,1,3,3-tetramethyluroniumhexafluorfosfát] a 0,24 mmol DIPEA (Ν,Ν-diisopropylethylamin). Po třepání po dobu 2 hod byla reakční nádoba odsáta a pryskyřice byla promyta 2 ml podíly DMF (4 x). Vazebný cyklus byl opakován s další Fmocaminokyselinou nebo zakončovací skupinou.
Obecný postup Dess-Martinovy oxidace na pevné fázi
Tato syntéza byla prováděna v reakční nádobě vytvořené z patrony z polypropylenové stříkačky opatřené u dna polypropylenovou fritou. Hydroxysloučenina navázaná na pryskyřici (přibližně 0,035 mmol) byla zpracována působením roztoku 0,14 mmol Dess-Martinova perjodinanu a 0,14 mmol t-BuOH v 2 ml DCM 4 hod. Pryskyřice byla promyta 2 ml podíly 20 % obj./obj. roztoku iPrOH v DCM, THF a 50 % obj./obj. roztoku THF ve vodě (4 x), THF (4 x) a DCM (4 x).
- 88 -............
Preparativní příklad 20
N-Fmoc-2’,3’-dimethoxyfenylqlvcin, sloučenina (901)
FmocOSu aq. NajCOj
901
K roztoku kyanidu draselného (1,465 g, 22,5 mmol) a uhličitanu amonného (5,045 g, 52,5 mmol) ve vodě (15 ml) byl přidán roztok 2,3-dimethoxybenzaldehydu 901A (2,5 g, 15 mmol) v ethanolu (15 ml). Reakční směs byla zahřívána na 40 °C 24 hod. Objem roztoku byl redukován na 10 ml odpařením za sníženého tlaku. Byla přidána koncentrovaná kyselina chlorovodíková (15 ml) a sloučenina 901B byla získána jako bílá sraženina. Sloučenina 901B byla izolována filtrací (2,2 g, 9,3 mmol). Sloučenina 901B byla rozpuštěna v 10 % hmotn./hmotn. vodném roztoku hydroxidu sodného (15 ml) a získaný roztok byl zahříván pod zpětným chladičem 24 hod. Byla přidána koncentrovaná kyselina chlorovodíková a pH bylo upraveno na neutrální (pH 7). Získaný roztok s obsahem sloučeniny 901C byl odpařen za sníženého tlaku. Zbytek byl rozpuštěn v 5 % hmotn./hmotn. vodném roztoku hydrogenuhličitanu sodného (150 ml). Roztok byl ochlazen na 0 °C v ledové lázni byly přidány 1,4-dioxan
- 89 (30 ml) a roztok 9-fluorenylmethylsukcinimidylkarbonátu (2,7 g, 8 mmol) v 1,4-dioxanu (30 ml) při 0 °C. Reakční směs byla ponechána ohřát na laboratorní teplotu a byla míchána při teplotě laboratoře 24 hod. 1,4-dioxan byl odpařen za sníženého tlaku. Vodný roztok byl promyt diethyletherem. Byla přidána koncentrovaná kyselina chlorovodíková a pH bylo nastaveno do kyselé oblasti (pH 1). Byl přidán ethylacetát a organická vrstva byla promyta vodou a roztokem soli. Organická vrstva byla sušena nad bezvodým síranem sodným. Rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku, za poskytnutí io požadované sloučeniny 901 jako bílé pěnovité pevné látky (3,44 g, 7,9 mmol). MS (LCMS-elektrorozprašování) 434,1 MH+.
Preparativní příklad 21
Sloučenina (801)
K roztoku N-Fmoc-fenylalaninu 801A (5 g, 12,9 mmol) v bezvodém DCM (22 ml), ochlazenému na -30 °C v lázni suchý ledaceton, byly postupně přidány N-methylpyrrolidin (1,96 ml, 16,1 mmol) a methylchlorformát (1,2 ml, 15,5 mmol). Reakční směs byla míchána • · · · · ····
- 90................
při -30 °C 1 hod a byly přidány roztok hydrochloridu N,Odimethylhydroxylaminu (1,51 g, 15,5 mol) a N-methylpyrrolidin (1,96 ml, 16,1 mmol) v bezvodém DCM (8 ml). Reakčni směs byla ponechána ohřát na laboratorní teplotu a byla míchána při teplotě laboratoře přes noc. Byl přidán toluen a organická vrstva byla promyta zředěnou kyselinou chlorovodíkovou, vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a roztokem soli. Organická vrstva byla sušena nad bezvodým síranem sodným. Rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku, za poskytnutí sloučeniny 801B (4 g, 9,29 mmol).
K roztoku Red-AI (6,28 ml, 21,4 mmol) v bezvodém toluenu (8 ml) ochlazenému na -20 °C v lázni suchý led-aceton byl přidán roztok sloučeniny 801B (4 g, 9,29 mmol) v bezvodém toluenu (12 ml). Reakčni směs byla míchána při -20 °C 1,5 hod. Organická vrstva byla promyta zředěnou kyselinou chlorovodíkovou, vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a roztokem soli. Organická vrstva byla sušena nad síranem sodným. Rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku a surový produkt 801C byl použit v následující reakci bez dalšího čištění.
K roztoku sloučeniny 801C (přibližně 9,29 mmol) v hexanu (15 ml) byly postupně přidány roztok kyanidu draselného (24 mg, 0,37 mmol) a tetrabutylamoniumjodid (34 mg, 0,092 mmol) ve vodě (4 ml) a acetonkyanohydrin (1,27 ml, 13,9 mmol). Reakčni směs byla míchána při teplotě laboratoře 24 hod. Byl přidán ethylacetát a organická vrstva byla promyta vodou a roztokem soli. Organická vrstva byla sušena nad bezvodým síranem sodným. Rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku, za poskytnutí sloučeniny 801D (2,4 g, 6,03 mmol).
K roztoku sloučeniny 801D (2,4 g, 6,03 mmol) v 1,4-dioxanu (11 ml) byla přidána koncentrovaná kyselina chlorovodíková (11 ml). Reakčni směs byla zahřívána na 80 °C 3 hod. Byly přidány ethylacetát (25 ml) a voda (25 ml). Organická vrstva byla promyta roztokem soli a _91 .:. ·..’ .:. ·..··..· sušena nad bezvodým síranem sodným. Rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku za poskytnutí požadované sloučeniny 801 jako bíle pěnovité pevné látky (2 g, 4,8 mmol). MS (LCMS-elektrorozprašování)
| 418,1 MH . 5 Příklad 101J Sloučenina (101J) H ? í? H 10 itWAVyV- 0 H o L o ch3 101J is Schéma 5 FmocHN-P ---I N p ---FmocHN^ FmocHN^Y' 101A 3 101B OH H 0 H 20 FmocHN^^x. .N. A. .N~P ----*- FmocHN'^^f' 7 Π N ff II t 8 H 8 ° ch3 101D O OH H 0 Y H FmocHN-AK1A. A. A .N-P - i ΰ Π < Π N Π A. H o L o H o 25 ch3 | H s J Y H __ H 5 101C H H j Y H e Π N π to H 0 ch3 101E - |
101F
-92-......... ···
ίου
Sloučeniny 101B, 101C, 101D, 101E, 101F a 101G navázané na pryskyřici byly připraveny obecným postupem pro vazebné reakce na pevné fázi, přičemž se vycházelo ze 100 mg pryskyřice Fmoc-Sieber 15 (0,035 mmol). Sloučenina 101G navázaná na pryskyřici byla oxidována na sloučeninu 101H navázanou na pryskyřici podle obecného postupu pro Dess-Martinovu oxidaci na pevné fázi. Sloučenina navázaná na pryskyřici 101H byla zpracována působením 4 ml 2 % obj./obj. roztoku TFA v DCM 5 min. Filtrát byl přidán k 1 ml 20 AcOH a roztok byl zakoncentrován vakuovou centnfugaci za poskytnutí sloučeniny 101J (0,011 g, 45% výtěžek). MS (LCMSelektrorozprašování) 703,2 MH+.
Použitím technik syntézy na pevné fázi popsaných výše byly připraveny následující skupiny, které byly použity v souladu s 25 následujícím vzorcem: -------------- --------------
N02 O
O O
| L i 0 1 íi n xA N YV CH H Ni *w* *w» | L ó J Y -XI: ΛΛ *w» 1 0^0^ O^OH -P2: *w *'W' *w* 1 'w mu ίλα I 1 X. nzv* i \ H3mCH3 Η3σ | I . 7—^ O 5 / \___ to ? 7=0 I Z O , \ Az /—-A * š_Z \==/ ς / \\ // V) ?—C |
- 100 -
ίο
Jedna ze skupin -P1a a P1b je -H a druhá je zvolena ze skupiny:
-Z-:
- 101 -
- 102 -................
- 103 -................
S použitím výše popsaných postupů byly připraveny sloučeniny, které jsou spolu s příslušnými údaji o aktivitě uvedeny v tabulce 3.
Dále byly připraveny sloučeniny uvedené spolu s údaji o jejich aktivitě v tabulce 4. Jejich příprava se popisuje níže.
Obecné způsoby přípravy sloučenin uvedených v tabulce 4 na pevném nosiči
Syntéza na pevné fázi je použitelná pro výrobu malých množství některých sloučenin podle předkládaného vynálezu. Stejně jako je tomu v případě běžné syntézy peptidů na pevné fázi, reaktory pro syntézu peptidylketoamidů na pevné fázi jsou složeny z reaktorové nádoby, jejíž alespoň jeden povrch je propustný pro rozpouštědlo a rozpuštěná reakční činidla, ale není propustný pro syntetickou pryskyřici o zvolené velikosti zrna. Takovými reaktory jsou například reakční nádoby pro syntézu na pevné fázi ze skla opatřené fritou ze sintrovaného skla, polypropylenové trubičky nebo kolony opatřené fritami nebo reaktory Kans™ vyráběné firmou Irori Inc., San Diego CA. Typ zvoleného reaktoru závisí na objemu potřebné pryskyřice pro syntézu na pevné fázi, a v různých stupních syntézy mohou být použity reaktory různých typů. Následující postupy se budou probírat v následujících příkladech:
• · · · · ····
- 104·-·..............
Postup A
Vazebná reakce:
K pryskyřici suspendované v N-methylpyrrolidinu (NMP) (10 až 15 ml/g pryskyřice) byla přidána N-Fmoc- nebo N-Boc-aminokyselina (2 ekv.), HOAt (2 ekv.), HATU (2 ekv.) a diisopropylethylamin (4 ekv.). Směs byla ponechána reagovat 4 až 48 hod. Reakční činidla byla odsáta a pryskyřice byla postupně promyta dimethylformamidem, dichlormethanem, methanolem, dichlormethanem a diethyletherem (použito 10 až 15 ml rozpouštědla/g pryskyřice).Pryskyřice byla potom sušena ve vakuu.
Postup B
Odstranění ochranných skupin Fmoc:
Pryskyřice chráněná Fmoc byla zpracována působením 20% piperidinu v dimethylformamidu (10 ml činidla/g pryskyřice) 30 min. Reakční činidla byla odsáta a pryskyřice byla postupně promyta dimethylformamidem, dichlormethanem, methanolem, dichlormethanem a diethyletherem (10 ml rozpouštědla/g pryskyřice).
Postup C
Odstranění ochranných skupin Boc:
Pryskyřice chráněná Boc byla zpracována působením směsi 1 : 1 dichlormethanu a kyseliny trifluoroctové 20 až 60 min (10 ml rozpouštědla/g pryskyřice). Reakční činidla byla odsáta a pryskyřice byla postupně promyta dichlormethanem, dimethylformamidem, 5% diisopropylethylaminem v dimethylformamidu, dimethylformamidem, dichlormethanem a dimethylformamidem (10 ml rozpouštědla/g pryskyřice).
Postup D
Hydrolýza semikarbazonu:
-105·-...............
Pryskyřice byla suspendována ve štěpícím koktejlu (10 ml/g pryskyřice) obsahujícím kyselinu trifluoctovou : kyselinu pyrohroznovou : dichlormethan : vodu v poměru 9 : 2 : 2 : 1 po dobu dvou hodin. Reakční činidla byla odsáta a postup byl opakován ještě třikrát. Pryskyřice byla postupně promyta dichlormethanem, vodou a dichlormethanem a sušena ve vakuu.
Postup E
Štěpení pomocí HF:
Vysušený peptid-nVal(CO)-G-O-PAM pryskyřice (50 mg) byl vložen do nádoby pro HF obsahující malou míchací tyčinku. Jako látka pro vychytávání radikálů byl použit anisol (10 % celkového objemu). V přítomnosti aminokyselin kyseliny glutamové a cysteinu byly také přidány thioanisol (10 %) a 1,2-ethandithiol (0,2 %). Nádoba pro HF byla potom zavěšena do zařízení HF (Immuno Dynamics) a systém byl proplachován dusíkem 5 min. Potom byl ochlazen na -78 °C lázní suchý led/isopropanol. Po 20 min byl HF destilován na požadovaný objem (10 ml HF/g pryskyřice). Reakce byla ponechána probíhat 1,5 hod při 0 °C. Další zpracování spočívalo v odstranění veškerého HF pomocí dusíku. Potom byl do pryskyřice přidán dichlormethan a směs byla míchána 5 min. Následovalo přidání 20% kyseliny octové ve vodě (4 ml). Po 20 min míchání byla pryskyřice zfiltrována na nálevce s fritou a dichlormethan byl odstraněn za sníženého tlaku. Zbylý roztok byl promyt hexany (3 x) pro odstranění vychytávacích prostředků. Mezitím byla pryskyřice namočena v 1 ml methanolu. Vodná vrstva (20% HOAc) byla přidána zpět k pryskyřici a směs byla míchána 5 min a potom zfiltrována. Methanol byl odstraněn za sníženého tlaku a vodná vrstva byla lyofilizována. Peptid byl potom rozpuštěn v 10 až 25% methanolu (s obsahem 0,1% kyseliny trifluoroctové) a čištěn HPLC s reverzními fázemi.
• · · * · 4 « · ·
- 106 -................
II ) Syntéza meziproduktů
Příklad I. Syntéza Boc-3-alkylsulfinvlalaninu
Ke směsi hydridu sodného (20 mmol, 800 mg 60% v oleji, promytý hexany) v tetrahydrofuranu (30 ml) byly při 0 °C přidány alkylthiol (20 mmol, R = Ph, R = 1-naftyl, R = 2-naftyl, R = PhCH2CH2 nebo R = Et) v průběhu 10 min. Chladicí lázeň byla odstraněna a míchání pokračovalo 10 min, a potom byl ihned přidán Boc-2S-aminopropionyllakton (reference: Synthetic Communications, (1995) 25(16), 2475 - 2482) (3,74 g, 20 mmol). Pro udržení teploty nižší než 30 °C byla použita ledová lázeň. Reakční směs byla míchána při teplotě laboratoře 16 hod, zakoncentrována a potom rozpuštěna v 1M vodném hydrogensíranu draselném (200 ml) a 1M HCI (40 ml). Směs byla extrahována dichlormethanem (2 x 200 ml). Spojené organické vrstvy byly sušeny (síran sodný), zfiltrovány a zakoncentrovány. Zbytek byl rozpuštěn ve vodě (200 ml), methanolu (30 ml) a uhličitanu draselném (40 mmol, 5,5 g). Po částech byl přidán oxon (21 mmol, 13,0 g) za chlazení pro udržení teploty na teplotě místnosti. Směs byla míchána 18 hod a potom zakoncentrována ve vakuu pro odstranění methanolu. Roztok byl okyselen 2M hydrogensíranem draselným (pH = 1), extrahován ethylacetátem (2 x 100 ml). Spojené organické vrstvy byly sušeny (síran sodný), zfiltrovány a zakoncentrovány. Čištění bylo prováděno HPLC s reverzními fázemi. Po čištění byl produkt dále čištěn acidobazickou extrakcí pro odstranění materiálu s odstraněnými skupinami Boc a dále uchován ve formě diisopropylethylamoniové soli pro zabránění dalšího rozkladu (ztráta skupiny Boc).
- 107 - — *
Příklad II. Syntéza kyseliny 2-(1-methylethyl)-7-methyl-okt-4-enové
Výše uvedený meziprodukt byl syntetizován postupem zveřejněným v Wuts, P. G. M.; Ritter, A. R.; Pruitt, L. E., J. Org. Chem. (1992) 57, 6696 - 6700.
Příklad lil. Syntéza Fmoc-nV-(dpsc)-Gly-OH (kroky 1-7 níže)
Fmoc-HN
ΌΗ
N Y H O
IH
NH-CH(Ph)2
Krok 1. Syntéza allylisokyanoacetátu (kroky a - b níže)
a) Syntéza draselné soli isokyanoctové kyseliny
O CN-A)Et K+
Ethylisokyanoacetát (96,6 ml, 0,88 mol) byl po kapkách přidán k chlazenému roztoku ethanolu (1,5 I) a hydroxidu draselného (59,52 g, 1,0 mol). Reakční směs byla pomalu ohřátá na laboratorní teplotu. Po dvou hodinách byl vysrážený produkt oddělen filtrací a
- 108 promyt několika podíly chlazeného ethanolu. Draselná sůl kyseliny isokyanooctové, která byla získána, byla usušena ve vakuu na zlatohnědou pevnou látku (99,92 g, 91,8 %).
b) Syntéza allylisokyanoacetátu i- K+
Ό allyl
K produktu z části a) (99,92 g, 0,81 mol) rozpuštěnému v acetonitrilu (810 ml) byl přidán allylbromid (92 ml, 1,05 mol). Po zahřívání pod zpětným chladičem 4 hod byl získán tmavý hnědý roztok. Reakční směs byla zakoncentrována a zbytek byl rozpuštěn v etheru (1,5 I) a promyt vodou (3 x 500 ml). Organická vrstva byla sušena, zfiltrována a zakoncentrována na tmavě hnědý sirup. Surovina byla čištěna ve vakuu destilací při 7 mm Hg (933 Pa) (98 °C) za získání čirého oleje (78,92 g, 78 %). NMR ppm (CDCI3): 5,9 (m, 1H), 5,3 (m, 2H), 4,7 (d, 2H), 4,25 (s, 2H).
Krok 2. Syntéza 9-fluorenvlmethoxykarbonylnorvalinalu (kroky a - c níže)
a) Syntéza methylesteru 9-fluorenylmethoxykarbonyl-Lnorvalinu (Fmoc-nVal-OMe)
Fmoc-HN
Fmoc-HN' • · · · · ···· ·
- 109 *:· ·:· ···’····
Κ chlazenému roztoku komerčně dostupného Fmoc-L-norvalinu (25 g, 73,75 mmol) v bezvodém methanolu (469 ml) byl přidán thionylchlorid (53,76 ml, 737,5 mmol) v průběhu 1 hod. TLC 5 v ethylacetátu provedená o hodinu později potvrdila ukončení reakce (Rf = 0,85). Reakční směs byla zakoncentrována a zbytek byl rozpuštěn v ethylacetátu. Organická vrstva byla promyta nasyceným hydrogenuhličitanem sodným (3 x 200 ml), potom roztokem soli (200 ml). Organická vrstva byla sušena, zfiltrována a io zakoncentrována, za poskytnutí Fmoc-norVal-OMe, jako bílé pevné látky (26,03 g) v kvantitativním výtěžku. NMR ppm (CD3OD): 7,7 (m, 2H), 7,6 (m, 2H), 7,4 (m, 2H), 7,3 (m, 2H), 4,3 (m, 2H), 4,1 (m, 2H), 3,7 (s, 3H), 1,7 (m, 1H), 1,6 (m, 1H), 1,4 (m, 2H), 0,95 (t, 3H).
b) Syntéza 9-fluorenylmethoxykarbonylnorvalinolu (Fmoc-nValinol)
K Fmoc-nVal-OMe (26,03 g, 73,75 mmol) v tetrahydrofuranu (123 ml) a methanolu (246 ml) byl přidán chlorid vápenatý (16,37 g, 147,49 mmol). Reakční směs byla ochlazena na 0 °C a byl přidán borohydrid sodný (11,16 g, 294,98 mmol) v několika dávkách.
K získané husté pastě bylo přidáno 500 ml methanolu a reakční směs byla ponechána míchat při teplotě laboratoře 90 min. TLC v mobilní fázi 2 : 3 ethylacetát : hexan potvrdila ukončení reakce (Rf = 0,25). Reakce byla ukončena pomalým přidáváním 100 ml vody při 0 °C. Methanol byl odstraněn za sníženého tlaku a zbylá vodná fáze byla zředěna ethylacetátem. Organická vrstva byla promyta vodou (3 x
-1Ť0*-............
500 ml), nasyceným hydrogenuhličitanem sodným (3 x 500 ml) a roztokem soli (500 mol). Organická vrstva byla sušena nad síranem sodným a zakoncentrována na bílou pevnou látku (21,70 g, 90,5 %). NMR ppm (CD3OD): 7,8 (m, 2H), 7,7 (m, 2H), 7,4 (m, 2H), 7,3 (m, 2H), 5 4,3 - 4,5 (m, 2H), 4,2 (m, 1H), 3,6 (s, 1H), 3,5 (s, 2H), 1,5 (m, 1H), 1,3
- 1,4 (m, 3H), 0,99 (m, 3H).
c) Syntéza 9-fluorenylmethoxykarbonylnorvalinalu (Fmoc-nValCHO)
K roztoku Fmoc-norValinolu (21,70 g, 66,77 mmol) 15 v dichlormethanu (668 ml) byl přidán triethylamin (37,23 ml, 267 mmol) a roztok byl ochlazen na 0 °C. K tomuto roztoku byla přidána suspenze komplexu pyridin - oxid sírový (42,51 g, 267 mmol) v dimethylsulfoxidu (96 ml). Po jedné hodině potvrdila TLC v mobilní fázi 2 : 3 ethylacetát : hexany ukončení reakce. Dichlormethan byl 20 odstraněn za sníženého tlaku a zbytek byl rozpuštěn v ethylacetátu a promyt vodou (2 x 50 ml), 1N nasyceným hydrogensíranem sodným (2 x 50 ml), nasyceným hydrogenuhličitanem sodným (2 x 50 ml) a roztokem soli (50 ml). Organická vrstva byla zakoncentrována za získání bílé pevné látky. Byl předpokládán teoretický výtěžek (21,57 g) 25 a reakční směs byla použita v příštím kroku bez dalšího čištění.
Krok 3. Syntéza trifluoracetátové soli difenylmethylsemikarbazidu (dpsc) (kroky a - b níže)
a) Syntéza Boc-semikarbazid-4-yl-difenylmethanu
- 11T - *”
Κ roztoku karbonyldiimidazolu (16,2 g, 0,10 mol) v dimethyl-formamidu (225 ml) byl přidán roztok terc-butylkarbazátu (13,2 g, 0,100 mol) v dimethylformamidu (225 ml) po kapkách v průběhu 30 min. Difenylmethylamin (18,3 g, 0,10 mol) byl přidán během dalších 30 min. Reakční směs byla ponechána míchat při teplotě laboratoře jednu hodinu. Byla přidána voda (10 ml) a směs byla zakoncentrována na přibližně 150 ml za sníženého tlaku. Tento roztok byl vlit do vody (500 ml) a extrahován ethylacetátem (400 ml). Ethylacetátová fáze byla promyta 1N HCI (2 x 75 ml), H2O (2 x 75 ml), nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (2 x 75 ml) a chloridem sodným (2 x 75 ml), a sušena síranem hořečnatým. Směs byla zfiltrována a roztok byl zakoncentrován za získání 29,5 g (85% výtěžek) bílé pěny. Tento materiál mohl být čištěn rekrystalizací ze směsi ethylacetát/hexan, ale měl dostatečnou čistotu pro přímé použití v dalším kroku: teplota tání 142 - 143 °C. 1H NMR (CDCI3) d 1,45 (s, 9H), 6,10 (dd, 2H), 6,42 (s, 1H), 6,67 (bs, 1H), 7,21 - 7,31 (m, 10H). Analyticky vypočteno pro: C19H23N3O3: C, 66,84; H, 6,79, N, 12,31. Nalezeno; C, 66,46; H, 6,75; N; 12,90.
b) Syntéza trifluoracetátové soli difenylmethylsemi -karbazidu (dpsc)
_ 112. ...
Roztok Boc-semikarbazid-4-yl-difenylmethanu (3,43 g, 10 mmol) v dichlormethanu (12,5 ml) byl smísen s kyselinou trifluoroctovou (12,5 ml) při teplotě laboratoře a ponechán míchat 30 min. Roztok byl přidán po kapkách do 75 ml etheru a získaná pevná látka (2,7 g, 80 %) 5 byla oddělena filtrací. Teplota tání 182 - 184 °C. 1H NMR (CD3OD) d 6,05 (s, 1H), 7,21 - 7,35 (m, 10H). 13C NMR (CD3OD) d 57,6, 118,3 (q, CF3), 126,7, 127,9, 141,6, 156,9, 160,9 (q, CF3CO2H).
Krok 4. Syntéza Fmoc-nVal-(CHOH)-Glv-O-allylu
allylisokyanoacetát —------------------>
pyridin, kyselina trifluoroctová dichlormethan
K roztoku Fmoc-nVal-CHO (příklad lil, krok 2c) (5,47 g, 16,90 mmol) v dichlormethanu (170 ml) byl přidán allylisokyanoacetát 20 (příklad lil, krok 1b) (2,46 ml, 20,28 mmol) a pyridin (5,47 ml, 67,61 mmol). Reakčni směs byla ochlazena na 0 °C a po kapkách byla přidána kyselina trifluoroctová (3,38 ml, 33,80 mmol). Reakčni směs byla míchána při 0 °C 1 hod a potom při teplotě laboratoře 48 hod. TLC v ethylacetátu potvrdila ukončení reakce. Reakčni směs byla 25 zakoncentrována a čištěna bleskovou chromatografií s použitím 20% až 70% ethylacetátu v hexanech. Frakce obsahující požadovaný produkt byly spojeny a zakoncentrovány na bílou pěnu (6,88 g, 87,3 %). TLC v poměru 1 : 1 ethylacetát/hexany ukázala jednu skvrnu (Rf = 0,37). NMR ppm (CD3OD): 7,8 (m, 2H), 7,65 (m, 2H), 7,4 (m, 30 2H), 7,3 (m, 2H), 5,9 (m, 1H), 5,1 - 5,4 (m, 2H), 4,55 - 4,65 (m, 2H),
4,3 - 4,4 (m, 2H), 4,15 - 4,25 (m, 1H), 4,01 (s, 1H), 3,9 - 4,0 (m, 3H), 1,5 - 1,6 (m, 2H), 1,35 - 1,45 (m, 3H), 0,9 (m, 3H).
- 1T3’- ··’
Krok 5._____Syntéza Fmoc-nVal-(CO)-Glv-Oallylu
EDC, kyselina dichloroctová ------------------------------------> dimethylsulfoxid, toluen
K roztoku Fmoc-nVal-(CHOH)-Gly-O-allylu (krok 4) (5,01 g, 10,77 mmol) v dimethylsulfoxidu (100 ml) a toluenu (100 ml) byl přidán EDC (20,6 g, 107,7 mmol). Reakční směs byla ochlazena na 0 °C a po kapkách byla přidána kyselina dichloroctová (4,44 ml, 53,83 mmol).
Reakční směs byla míchána 15 min při 0 °C a 1 hod při teplotě laboratoře. Byla přidána voda (70 ml) při 0 °C a toluen byl odstraněn za sníženého tlaku. Zbytek byl zředěn ethylacetátem a několikrát promyt nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a 1N hydrogensíranem sodným a roztokem soli. Organická vrstva byla sušena nad síranem sodným, zfiltrována a zakoncentrována. Byl předpokládán teoretický výtěžek 4,99 g a reakční směs byla použita v příštím kroku bez dalšího čištění. TLC v poměru 1 1 ethylacetát/hexany ukazuje jednu skvrnu (Rf = 0,73).
Krok 6. Syntéza Fmoc-nVal-(dpsc)-Glv-Oallylu
difenylmethylsemikarbazid _--------------------------->
octan sodný, voda, ethanol
- 1Ť4’- ·*·
K roztoku Fmoc-nVal-(CO)-Gly-Oallylu (krok 5) (4,99 g, 10,75 mmol) v ethanolu (130 ml) a vodě (42 ml) byla přidána trifluoracetátová sůl difenylmethylsemikarbazidu (dpsc) (příklad III, krok 3b) (7,6 g, 21,5 mmol) a octan sodný.3H2O (1,76 g, 12,9 mmol).
Reakční směs byla zahřívána pod zpětným chladičem 90 min. Ukončení reakce bylo potvrzeno chromatografií na tenké vrstvě ve sněsi 1 : 1 ethylacetát : hexan. Ethanol byl odstraněn za sníženého tlaku a zbytek byl rozpuštěn v ethylacetátu a promyt 1N hydrogensíranem sodným (2 x 10 ml), nasyceným io hydrogenuhličitanem sodným (2 x 10 ml) a roztokem soli (2 x 10 ml).
Organická vrstva byla sušena, zfiltrována a zakoncentrována. Získaný zbytek byl čištěn bleskovou chromatografií v 20% až 50% ethylacetátu v hexanech za získání bílé pevné látky (5,76 g, 78 %). TLC v poměru 1 : 1 ethylacetát/hexany ukázala dvě skvrny (cis a trans isomery) s 15 hodnotami Rf = 0,42 a 0,50.
Krok 7. Syntéza Fmoc-nVal-(dpsc)-Gly-OH
dimedon, katalyzátor ----------------------------------> tetrahydrofuran
K roztoku Fmoc-nVal-(dpsc)-Gly-Oallylu (příklad lil, krok 6) (4,53 g, 6,59 mmol) v tetrahydrofuranu (300 ml) byl přidán dimedon (4,62 g, 32,97 mmol), potom katalyzátor tetrakis(trifenylfosfin)-paladium(O) (0,76 g, 0,66 mmol). Po 90 min bylo ukončení reakce potvrzeno TLC (9 : 1 dichlormethan : methanol). Reakční směs byla zakoncentrována a zbytek byl rozpuštěn v ethylacetátu a promyt 0,1 M
-115··-............
dvojfosforečnanem draselným (3 x 50 ml). Organická vrstva byla smísena s 50 ml hydrogensíranu sodného a dvoufázový systém byl míchán 15 min. Fáze byly odděleny a postup byl opakován ještě dvakrát. Organická vrstva byla sušena, zfiltrována a zakoncentrována 5 a čištěna bleskovou chromatografií na koloně (20% až 100% ethylacetát v hexanech, potom 9 : 1 dichlormethan : methanol), za získání bílé pevné látky (3,99 g, 94 %). TLC v poměru 9 : 1 dichlormethan : methanol ukazuje dvě skvrny (cis a trans isomery). NMR δ ppm (CD3OD): 7,75 (m, 2H), 7,6 (m, 3H), 7,2 - 7,4 (m, 14H), w 6,1 - 6,2 (m, 1H), 4,25 - 4,4 (m, 2H), 4,1 - 4,2 (m, 2H), 3,85 (s, 2H), 1,6 - 1,8 (m, 2H), 1,3 - 1,5 (m, 2H), 0,95 (t, 3H).
Příklad IV
Syntéza H-nVal(dpsc)-Gly-Phq-MBHA pryskyřice (kroky 1 - 2 níže)
Krok 1. Syntéza H-Phq-MBHA pryskyřice
Komerčně dostupná pryskyřice MBHA (2,6 g, 1,12 mmol/g, 2,91 mmol) byla převedena do 250 ml reakční nádoby pro syntézu na
- 1Ť6-Í............
pevné fázi opatřené fritou a vstupem dusíku. Pryskyřice byla důkladně promyta 30 ml podíly dichlormethanu, methanolu, dimethylformamidu a dichlormethanu a vázána po dobu 18 hod na komerčně dostupný Fmoc-Phg-OH (2,17 g, 5,82 mmol) použitím postupu A s 99,82% 5 účinností. Z pryskyřice byly potom odstraněny ochranné skupiny Fmoc postupem B. Kvalitativní ninhydrinový test s malým alikvotem poskytl tmavě modrou pryskyřici a roztok, což ukazuje na úspěšnou reakci.
Krok 2. Syntéza H-nVal(dpsc)-Gly-Phq-MBHA pryskyřice
Pryskyřice získaná v kroku 1 výše (2,6 g, 0,8 mmol/g, 2,91 mmol) byla ponechána reagovat s Fmoc-nVal-(dpsc)-Gly-OH (příklad III, krok 7) (5,82 mmol, 3,77 g) jako v postupu A. Po 18 hod ukázala kvantitativní ninhydrinová analýza 99,91 % účinnost reakce.
Praskyřice byla zbavena ochranných skupin Fmoc způsobem B. Kvalitativní ninhydrinový test na malém alikvotu poskytl tmavě modrou pryskyřici a roztok, což ukazuje na úspěšnou reakci.
Ill) Sestavení reprezentativních cílů pro hepatitidu C na pevné fázi 25 Příklad V: Syntéza 2.5-difluor-6-hydroxvkarbonvlfenvlkarbonvl-G(Chxh
-Leu-nVal-(CO)-Gly-Phq-NH2 na pevné fázi (kroky 1 - 5 níže)
- 1T7’-............
Krok 1. Syntéza Fmoc-Leu-nVal(dpsc)-Gly-Phq-MBHA pryskyřice
Sloučenina H-nVal(dpsc)-Gly-Phg-MBHA pryskyřice(příklad IV, krok 2) (1,5 g, 1,12 mmol/g, 1,68 mmol) byla převedena do polypropylenové zkumavky opatřené fritou a byla provedena reakce s N-Fmoc-Leu-OH (890 mg, 2,52 mmol) jako v postupu A. Po 18 hod ukázala kvalitativní ninhydrinová analýza bezbarvé kuličky a roztok.
- 1T8‘-...........*
Krok 2. Syntéza Fmoc-G(Chx)-Leu-nVal(dpsc)-Gly-Phq-MBHA_
Pryskyřice získaná v příkladu V, krok 1 (Fmoc-Leu-nVal(dpsc)-Gly-Phg-MBHA pryskyřice, 1,68 mmol) byla zbavena ochranných skupin Fmoc postupem B. Potom byla navázána komerčně dostupná Fmoc-G(Chx)OH (0,956 g, 0,2,52 mmol) jako v postupu A. Po 18 hod ukázala kvantitativní ninhydrinová analýza 98% účinnost reakce.
20 Krok 3. Syntéza 2,5-difluor-6-hvdroxvkarbonvlfenylkarbonyl-G(Chx)Leu-nVal(dpsc)-Gly-Phq-MBHA pryskyřice
Pryskyřice získaná v příkladu V, krok 2 (pryskyřice Fmoc-Leu-nVal(dpsc)-Gly-G-Phg-MBHA) byla zbavena ochranných skupin Fmoc způsobem B. Ninhydrinový test na malém alikvotu poskytl tmavě 10 modrou pryskyřici a roztok, což ukazuje na úspěšnou reakci. K pryskyřici (150 mg, 0,168 mmol) suspendované v 1 ml NMP byl přidán anhydrid kyseliny 3,6-difluorftalové (91 mg, 0,42 mmol) a potom diisopropylethylamin (0,146 ml, 84 mmol), a reakční směs byla třepána 18 hod při teplotě laboratoře. Kvantitativní ninhydrinová analýza ukázala 97,8% účinnost reakce.
Krok 4. Syntéza 2,5-difluor-6-hydroxvkarbonvlfenylkarbonyl-G(Chx)Leu-nVal(CO)-Gly-Phq-MBHA pryskyřice
-120·-· ·:* ·:· ’··”··'
Sloučenina z příkladu V, krok 3 (2,5-difluor-6-hydroxy-karbonylfenylkarbonyl-G(Chx)-Leu-nVal(dpsc)-Gly-Phg-MBHA pryskyřice) (200 mg) byla podrobena semikarbazonové hydrolýze postupem D.
Krok 5. Syntéza 2,5-difluor-6-hydroxvkarbonylfenylkarbonyl-G-(Chx)Leu-nVal(CO)-Gly-Phq-NH2
Pryskyřice z příkladu V, krok 4 (2,5-difluor-6hydroxykarbonylfenylkarbonyl-G(Chx)-Leu-nVal(CO)-Gly-Phg-MBHA pryskyřice) (100 mg) byla vystavena podmínkám štěpení HF (postup E) za získání požadovaného surového produktu. Materiál byl čištěn HPLC s použitím kolony 2,2 x 25 cm s reverzními fázemi s obsahem pryskyřice C-18 s částicemi gelu velikosti 10 pm s velikostí pórů 300 A, a s elucí gradientem s použitím 20 - 50% acetonitrilu ve vodě. Analytická HPLC s použitím kolony s reverzními fázemi 4,6 x 250 mm s pryskyřicí C-18 s částicemi gelu velikosti 5 pm a velikostí pórů 300 A, s elucí směsí 10 - 60% acetonitrilu ve vodě (s obsahem 0,1 % kyseliny trifluoroctové) ukázala jeden vrchol v čase 17,2 min.
-121’-..............
Hmotnostní spektrometrie s nízkým rozlišením potvrdila požadovanou hmotnost (MH+ 771,5).
Příklad VI
Syntéza iBoc-G(Chx)-Cvs((O2)Et)-nVal-(CO)-Gly-Phg-NH2 na pevné fázi (kroky 1-5 níže).
Krok 1. Syntéza Fmoc-Cys((O2)Et)-nVal(dpsc)-Gly-Phq-MBHA.
pryskyřice
- 122-·..... *......
Sloučenina H-nVal(dpsc)-Gly-Phg-MBHA pryskyřice(příklad IV, krok 2) (0,17 g, 0,8 mmol/g, 0,19 mmol) byla převedena do polypropylenové zkumavky opatřené fritou a byla navázána na BocCys((O2)Et)-OH (příklad I) (160 mg, 0,38 mmol) použitím postupu A. 5 Po 18 hod kvantitativní ninhydrinová analýza ukázala 99,98% průběh reakce.
Krok 2. Syntéza Fmoc-G(Chx)-Cys((O2)Et)-nVal(dpsc)-Glv-PhqMBHA pryskyřice
Pryskyřice získaná v předcházejícím kroku (příklad VI, krok 1) (Boc-Cys((O2)Et)-nVal(dpsc)-Gly-Phg-MBHA pryskyřice, 0,19 mmol) byla zbavena ochranných skupin Boc postupem C. Potom byl navázán Fmoc-G(Chx)-OH (0,170 g, 0,45 mmol) postupem A. Po 18 hod 25 ukázala kvantitativní ninhydrinová analýza 99,92% účinnost vazby.
- 123’-·.............
Krok 3. Syntéza iBoc-G(Chx)-Cvs(O2)Et)-nVal(dpsc)-Glv-Phgr
MBHA pryskyřice
Pryskyřice získaná v předcházejícím kroku (příklad VI, krok 2) (Fmoc-G(Chx)-Cys((O2)Et)-nVal(dpsc)-Gly-Phg-MBHA pryskyřice) byla zbavena ochranných skupin Fmoc postupem B. Ninhydrinový test provedený s malým alikvotem poskytl tmavě modrou pryskyřici a 20 roztok, což ukazuje na úspěšný průběh reakce. K pryskyřici (170 mg, 0,19 mmol) suspendované v 1 ml NMP byl přidán isobutylchloroformát (0,06 ml mg, 0,45 mmol), potom diisopropylethylamin (0,16 ml, 0,90 mmol), a reakčni směs byla třepána 18 hod při teplotě laboratoře. Kvantitativní ninhydrinová analýza ukázala 99,35% účinnost reakce.
Krok 4. Syntéza iBoc-G(Chx)-Cvs((O2)Et)-nVal(CO)-Gly-Phg2
MBHA pryskyřice
Sloučenina z předcházejícího kroku (příklad VI, krok 3), iBocG(Chx)-Cys(O2)Et)-nVal(dpsc)-Gly-Phg-MBHA pryskyřice (170 mg) byla vystvena semikarbazonové hydrolýze postupem D.
Krok 5. Syntéza iBoc-G(Chx)-Cys((O2)Et)-nVal(CO)-Gly-Phg-NH2
Pryskyřice z předcházejícího kroku (příklad VI, krok 4) (iBocG(Chx)Cys((O2)Et)-nVal(CO)-Gly-Phg-MBHA pryskyřice) (170 mg) byla vystavena podmínkám štěpení HF (postup E) za získání požadovaného surového produktu. Materiál byl čištěn HPLC s použitím kolony 2,2 x 25 cm s reverzními fázemi s obsahem pryskyřice C-18 s částicemi gelu 10 pm a velikostí pórů 300 A, s eluci gradientem 20 50% acetonitril ve vodě. Analytická HPLC s použitím kolony 4,6 x 250 mm s reverzními fázemi s obsahem pryskyřice Cl8 s částicemi gelu 5 pm a velikostí pórů 300 A, s eluci 10 - 60% acetonitrilem ve vodě (s obsahem 0,1% kyseliny trifluoroctové) ukázala jeden vrchol v čase 16,94 min. Hmotnostní spektrum s nízkým rozlišením potvrdilo požadovanou hmotnost (MH+ 737,5).
Test inhibiční aktivity na proteázu HCV
Spektrofotometrický test
Spektrofotometrický test na serinovou proteázu HCV byl prováděn pro sloučeniny podle vynálezu postupem popsaným autory R. Zhang a další, Analytical Biochemistry, 270 (1999) 268 - 275, jehož obsah se zařazuje odkazem. Test je založen na proteolýze chromogenních esterových substrátů a je vhodný pro kontinuální monitorování aktivity HCV proteázy NS3. Substráty byly odvozeny od místa P sekvence spojení NS5A-NS5B (Ac-DTEDWX(Nva), kde X = A nebo P), jehož C-koncové karboxylové skupiny byly esterifikovány
- 128*-............
jedním ze čtyř různých chromoforních alkoholů (3- nebo 4-nitrofenol, 7-hydroxy-4-methyl-kumarin, nebo 4-fenylazofenol). Dále je uvedena syntéza, charakterizace a použití těchto nových spektrofotometrických esterových substrátů pro screening velkého množství vzorků a podrobné kinetické vyhodnocení inhibitorů proteázy NS3 HCV.
Materiály a metody
Materiály: Chemická činidla pro pufry potřebné pro test byla získána od firmy Sigma Chemical Company (St. Louis, Missouri). Činidla pro syntézu peptidů byla od firmy Aldrich Chemicals, Novabiochem (San Diego, California), Applied Biosystems (Foster City, California) a Perseptive Biosystems (Framingham, Massachusetts). Peptidy byly syntetizovány ručně nebo na automatickém syntezátoru ABI model 431A (firmy Applied Biosystems). Spektrofotometr UV/VIS Spectrometer model LAMBDA 12 byl od firmy Perkin Elmer (Norwalk, Connecticut) a 96-jamkové destičky pro UV byly získány od firmy Corning (Corning, New York). Předehřívací blok byl od firmy USA Scientific (Ocala, Florida) a míchačka pro 96-jamkové destičky byla od firmy Labline Instruments (Melrose Park, Illinois). Odečítací zařízení pro mikrotitrační destičky Spectramax Plus s monochromátorem bylo získáno od firmy Molecular Devices (Sunnyvale, California).
Příprava enzymu:
Rekombinantní heterodimerní proteáza HCV NS3/NS4A (kmen 1a) byla připravena použitím dříve zveřejněných postupů (D. L. Sáli a další, Biochemistry, 37 (1998) 3392 - 3401). Koncentrace proteinů byly zjišťovány metodou barvení Biorad s použitím standardů protázy HCV dříve kvantifikované analýzou aminokyselin. Před zahájením testu byl vyměněn pufr pro skladování enzymu (50 mM fosforečnan sodný pH
- 127·-............
8,0, 300 mM NaCI, 10% glycerol, 0,05% laurylmaltosid a 10 mM DTT) za testovací pufr (25 mM MOPS pH 6,5, 300 mM NaCI, 10% glycerol, 0,05% laurylmaltosid, 5 μΜ EDTA a 5 μΜ DTT) s použitím hotových kolon Biorad Bio-Spin P-6.
Syntéza a čištění substrátu
Syntéza substrátů byla prováděna podle autorů R. Zhang a další, (výše) a byla zahájena ukotvením Fmoc-Nva-OH na 2-chlortritylchloridovou pryskyřici s použitím standardního protokolu (K. Barlos a další, Int. J. Pept. Protein Res., 37 (1991), 513 - 520). Peptidy byly potom sestaveny použitím chemických reakcí Fmoc, buď ručně nebo na automatickém syntezátoru peptidů ABI model 431. Nacetylované a úplně chráněné fragmenty peptidů byly od pryskyřice odštěpeny buď 10% kyselinou octovou (HOAc) a 10% trifluorethanolem (TFE) v dichlormethanu (DCM) 30 min, nebo 2% kyselinou trifluoroctovou (TFA) v DCM 10 min. Spojený filtrát a promývací roztok DCM byl azeotropně odpařen (nebo opakovaně extrahován vodným roztokem Na2CO3) pro odstranění kyseliny použité při štěpení. Fáze DCM byla sušena nad Na2SO4 a odpařena.
Esterové substráty byly sestaveny použitím standardních reakčních postupů kyselina - alkohol (K. Holmber a další, Acta Chem. Scand., B33 (1979) 410 - 412). Fragmenty peptidů byly rozpuštěny v bezvodém pyridinu (30 až 60 mg/ml), co kterého bylo přidáno 10 molárních ekvivalentů chromoforu a katalytické množství (0,1 ekv.) kyseliny para-toluensulfonové (pTSA).
Byl přidán dicyklohexylkarbodiimid (DCC, 3 ekv.) pro zahájení reakcí. Tvorba produktu byla monitorována HPLC a bylo zjištěno, že je u konce po 12 až 72 hod reakce při teplotě laboratoře. Pyridinové rozpouštědlo bylo odpařeno ve vakuu a dále azeotropním odpařením s toluenem. Ester peptidů byl zbaven ochranných skupin 95% TFA v DCM 2 hod a extrahován třikrát bezvodým ethyletherem pro
- 12«·- ··· odstranění přebytku chromoforu. Substrát bez ochranných skupin byl čištěn HPLC s reverzními fázemi na koloně C3 nebo C8 s gradientem 30% až 60% acetonitril (s použitím šesti objemů kolony). Celkový výtěžek po čištění HPLC byl přibližně 20 až 30 %. Molekulová hmotnost byla potvrzena hmotnostní spektroskopií s elektrorozprašovací ionizací. Substráty byly uchovány ve formě suchého prášku v exikátoru.
Spektra substrátů a produktů 10 Spektra substrátů a odpovídajících chromoforních produktů byla získána v testovacím pufru pH 6,5. Extinkční koeficienty byly zjištěny při optimální vlnové délce mimo vrchol v kyvetách 1 cm (340 nm pro 3Np a HMC, 370 nm pro PAP a 400 nm pro 4-Np) s použitím vícenásobného ředění. Optimální vlnová délka mimo vrchol byla is definována jako vlnová délka, která poskytne maximální frakční rozdíl v absorbanci mezi substrátem a produktem (OD produktu - OD substrátu)/OD substrátu).
Test na proteázy
Testy na proteázu HCV byly prováděny při 30 C s použitím
200 μΙ reakční směsi v 96-jamkové mikrotitrační destičce. Podmínky testovacího pufru (25 mM MOPS pH 6,5, 300 mM NaCI, 10% glycerol, 0,05% laurylmaltosid, 5 pM EDTA a 5 μΜ DTT) byly optimalizovány pro heterodimer NS3/NS4A (D. L. Sáli a další, výše)). Typicky bylo do jamek vloženo 150 μΙ směsí pufru, substrátu a inhibitoru (konečná koncentrace DMSO 4 % obj./obj.) a ponechány inkubovat při 30 °C přibližně 3 min. Pro zahájení reakce bylo potom použito 50 μΙ předehřáté proteázy (12 nM, 30 °C) v testovacím pufru (konečný objem 200 μΙ). Destičky byly monitorovány po celou dobu testu 30 (60 min) pro zjištění absorbance při příslušné vlnové délce (340 nm
- 12=9- ·:· pro 3-Νρ a HMC, 370 nm pro PAP a 400 nm pro 4-Np) s použitím odečítacího zařízení pro mikrotitrační destičky Spectromax Plus vybaveného monochromátorem (přijatelné výsledky lze také získat s odečítacími přístroji využívajícími spektrální filtry). Proteolytické 5 štěpení esterové vazby mezi Nva a chromoforem bylo monitorováno při vhodné vlnové délce proti blanku bez přidaného enzymu jako kontrole pro neenzymatickou hydrolýzu. Vyhodnocení kinetických parametrů substrátu bylo prováděno v třicetinásobném rozmezí koncentrací (~6 až 200 μΜ). Počáteční rychlosti byly zjištěny metodou io lineární regrese a kinetické konstanty byly získány proložením těchto údajů pomocí rovnice Michaelise-Mentenové pomocí nelineární regresní analýzy (Mac Curve Fit 1,1, K. Raner). Čísla přeměny (Acat) byla vypočtena za předpokladu úplné aktivity enzymu.
15 Vyhodnocení inhibitorů a inaktivátorů
Inhibiční konstanty (K,) pro kompetitivní inhibitory Ac-D-(D-Gla)-L-l-(Cha)-C-OH(27), Ac-DTEDVVA(Nva)-OH a Ac-DTEDWP(Nva)-OH byly zjištěny experimentálně při pevných koncentracích enzymu a substrátu vynesením poměru Vq/ví proti koncentraci inhibitoru ([l]o) 20 podle přeuspořádané rovnice Michaelise-Mentenové pro kinetiku kompetitivní inhibice: vo/v, = 1 + [l]o/(Kj (1 + [S]o/Km)), kde Vo je neinhibovaná počáteční rychlost, Vj je počáteční rychlost v přítomnosti inhibitoru při jakékoli dané koncentraci inhibitoru ([l]o) a [S]o je použitá koncentrace substrátu. Získané údaje byly proloženy metodou lineární 25 regrese a výsledná směrnice, 1/(Kj(1 + [S]o/Km) byla použita pro výpočet hodnoty K*.
Získané hodnoty K* pro různé sloučeniny podle předkládaného vynálezu jsou uvedené v tabulce výše, kde byly sloučeniny uspořádány v pořadí podle rozmezí hodnot Kj*. Z výsledků těchto testů 30 je zřejmé odborníkovi v oboru, že sloučeniny podle vynálezu jsou výborně použitelné jako inhibitory serinové proteázy NS3.
. ι&·- ·:· *··’ ··· ’'*··
I když byl předkládaný vynález popsán na uvedených konkrétních provedeních, odborníkovi v oboru budou zřejmé mnohé alternativy, modifikace a jiné variace těchto příkladů. Všechny takové alternativy, modifikace a variace mají spadat do rámce a podstaty 5 předkládaného vynálezu.
• » ··* · · ♦ ·
- 131*-.............
Tabulka 2
| j Sloučenina z příkladu č. | Struktura | Vzorec | LRMS (FAB) M+H |
| 1 | _J\—O O [ϊ x z o * / x o~/ J=O x Γ Z z | 809,5 | |
| 2 | HCSr . H’C CH. 0 J—CH, bb θΎ ° f ° Ů ΊΓ 0 V- 0 0 L^J CH, | C^HgoNeOs | 753,5 |
| 3 | CH, íf^l 0 ) CH, IL ΎαΧΑτ-ΛΧ- JL o x^ o 0 CH, | 042Ηβ2Νβθ8 | 779,5 |
| 4 | O Γ3 h£ ®S ? Y Bif f 0 < 0 0 d 0 | C39H54N6O3 | 735,4 |
| 5 Γ θ | V A1 $ o-^°5 x /—z 0=5% 1—o 1 *? /=/ >o Λ^_ uI /oA^-S C w V 5 οϊ=ν \ /^X /Γ\-< i Ž | C35H54N6O8 CssHsiBrNeOg | J 687,4 “Π 7207 |
- 1*32*-.......... “
| 7 | F F | C38H47F5N6O8 | 811,3 |
| 8 | ζλ 0 Η · .0 | C41H53N7O10 | 804,4 |
| 9 | ;ΥΛΧ\ν^γ^ Mj- 0 \ 0 I H (V\ | C42H54N6O8 | 771,4 |
| 10 | 1 F F | C38H49F3N6O8 | 775,4 |
| 11 | CH, 0 A. 0 V 0 0 u | C35H53N5O9 | 688,4 |
| 12 | X* °So V Z 0=4 o—» /=° SA< o o-V 2 ř | C39H51F3N6O8 | 789,4 |
| 13 | v ^=° o=^ ^---^ 7=0 Λν o=/ 4 ος 5 | C42H57N5O9 | 776,4 |
. 4δα ·..· .:. ·..· ·..·
| 1 14 | Μ t* ’ ' ° X—’ Ο Ζ ” κΑ Ν jC —A C Η , ο η ,ε — C Η, | ^34^49^ 3Νβθ8 | 727,4 |
| 15 | A Oy^aJJ^jJZ | C47H59N5O10 | 854,4 |
| 16 | C40H53N5O10 | 764,4 | |
| 17 | 048^61 Ν5Ο10 | 868,4 | |
| 18 | •V ο Υ « ’9 kJ <*> | C41H55N5O10 | 778,4 |
| 19 | - °y° ύ | C33H49N5O9S | 692,3 |
| 20 | ° °Αο Ρ | 042^59^509 | 778,4 |
- >34»-···
| 21 | AAA | C38H50FN5O9 | 740;4 |
| 22 | ητα η Hp 0 0 0 ο Α- ο 1 0 0 Μ <*3 | C38H50C1N5O9 | 756,3 |
| 23 | . . X .0 ο Á. ο 1 ο ο Οί | C38H50FN5O9 | 740,4 |
| 24 | ,__, \=ο <χχ—χ X „-X-S· / \=ο —ζ >°δ | C45H61N5O10 | 832,4 |
| 25 | ς X. -9 Αο Λ ο \ ο ο -a0 \ | CssHstNsOw | 744,4 |
| 26 | * ·=χ 9 • ^*·' II ο Μ ,C — | C47H68N6O9 | 861,5 |
| 27 | i ο \r . Μ U 1 | 043^68^6(-)9 | 813,5 |
| 28 | H o ___Z*--\ S .<~w ° \ S >-Ή \ ^=< ,--K < 0—<Á Z 1 \ \—Z N.C^X C M , | Ů41H5QN5O10 | 793,4 |
| 29 | wW 0 γαι 0 °Λο HP °S | C37H57N5O9 | 716,4 |
| 30 | 0 Z Y/V° ° 'yen, 0 0 A V 0« H,c | C39H55N5O10 | 754,4 |
| 31 | oQ o Λ . VX Y 0 | C46H59N5O10 | 842,4 |
| 32 | 5 >—< 5=° ΛΛ—Z~ Ý...A λΡ Yo % | C36H55N5O9 | 702,4 |
| 33 | cn 0 0 0 j YyýAA^iVw °ó y 0 04 | C40H63N5O9 | 758,5 |
| 34 | 0 7 0 řQ Αγγ^ΑΛγΑγ 0 | C34H49N5O9 | 672,4 |
. >36· ·:· ·· ·:· · ·· .·
| 35 | 0 A 0 > 0 0 CH,1 kJ | C38H57N5O9 | 728,4 |
| 36 | o o y o o ch. | c56h71n5o9s | 990,5- |
| 37 | ch, Xo | C44H55N5O9 | 798,4 |
| 38 | °ó | C3sH4gN7O9 | 712,4 |
| 39 | C40H61N5O10S2 | 836,4 | |
| 40 | r1 ? Λ 0 °Q | C39H59N5O9S2 | 806,4 |
| 41 | C36H53N5O9S2 | 764,3 |
. 1^7-.:. ·..· .:. ·..· ·..·
| 42 | C4oHgiN50gS2 | 820,4 | |
| 43 | C35H51N5O9S2 | 750,3 | |
| 44 | CH. y sr-* Q V ο ηρ o f ο o • Q k 0 0 ych3 h,c | θ4θΗθ4Ν6θιι3ί | 805,5 |
| 45 | ^^^áXVyýú, - °y °d | C34H52N6O9 | 689,4 |
| 47 | 0 / ο γ ο Ζ ο o °γγ«γ/*γγΑ cAy 0 y0 0 A o ^c dJ | C37H46Cl2N6O10 | 805,3 |
| 48 | ° γ®, ° ° y HP | C36H54FN5O9 | 720,4 |
| 49 | ^SúaV-t-jo ° y ° °ηΛο H,C | C35H52FN5O9 | 706,4 |
- 138.-.:.
| 50 | Ol βν°Ά^ V* A Α ,κ.Α ΧΑ,^-^Α -Τ'χ'ΊΓ^'ΧΓ Ύ ·οη \ 0^00 CM, γ-CH, V (Ι H,C 1¾^ | C49H62NeOii | 911,5 |
| 51 | ψΟ 0 / 0 ο γ 0 0 \ ο χ ο ο gh, γ—r ji HjC | 793,4 C^HgeNsOio 1 | |
| 52 Ic42h56n6o12 I ψθ> 0H 0 J' I 0 0 í 0 i? I I X— CH, 0 I I I I I | |||
| 53 Γ I C i ι 11 NMj 1 1 ?hs 1 A aL^A XA^- Ά ι \ ο V ο ο 1 1 ch, γ—ch5 ι y 1 ηϊ- 1 54 1 A/w. \ 0 \ 0 0 Α. cm r j V>^> ι Ι 0 1 ~ 56 vSa Γ1 Λ V/ Α1^ ρ °>° °ό | XH57N7o12s 336Η54Ν6Οιο I 04οΗ62ΝθΟιο C^H^NgOio | 731,4 787^5 8131 |
-13T9·-............
| 57 Γ Η | \ 0 χ ο ο CH, γ—CH, | )Ι H.C | ΟαοΗθοΝθΟιο | 785,4 |
| 58 | ο QíY^sNX^CH3 - °γ·° Ό | I C38H574N7O11 | 788,4 |
| 59 | 5Η, Í °-„° 1 aL<UL ΧΛμ-^''sA i ο χ ο ο -Α^ CH, γ— CH, ρ || η/ | | C41H65N7O12 | 880,4 |
| 60 | SUS d~u° ο=/^ r^o 2ί ο=^ | ! C40H61N5O11 | 788,4 |
| 6Ϊ ” | C39H51N5O9 | 742,4 | |
| 62 | C35H514N5O9 | 686,4 | |
| 63 | η 8 PÍ .ο YYrYAAAY^AA/ Α> CM, | I 04ΐΗ5δΝ5θ9θ2 Η Ι | 826,4 |
| 71 | fQ o Λ o C w ó | '37H49N5O9 | 708,4 |
| 72 | oQ o Λ o i o l o o A * 0 | ^HsiNsOg | 674,4 |
| 73 | yy °A o^ ^C V | CaeHssNgOioS | 765,4 |
| 74 | oP O)0 0 γγγγ ^ó «i u | C36H4gNgOioS | 757,3 |
| 75 | oQ o Λ o ιύϊΥ^κιΓί^^ΝΖ*Ύ^ ^W0 °ó | C37H47N5O10 | 722,3 |
| 76 | δ O.....o č° <f—^°^=o °=5..... _ A=° í~'XÍ_Vi5 </ | C37H45CI2N5O10 | 790,3 |
| 77 | 0 Φ / 0 0 X 0 0 P) | C34H51N5O10S | 722,3 |
- 14*2 -..........
| 78 | í? c Cos0 y^0 6 Λ CH, HP V | ^HseNeOnSz | 813,4 |
| 79 | 0 | ^36H48NsOiiS2 | 805,3 |
| 80 | fl CH, 0 0 y 0 0 Uy° ° S-ch, 0 0 Λ » h,c v* | C37H47N5O11S | 770,3 |
| 81 | Cy A /V ý—< Í«=O Ο=ξ '--f M..... σς o X | CsTbLsCLNsOn S | 838,2 |
| 82 | ?Q-1Λ ? yy ό | C37H49CI2N5O10 | 818,3 I |
| 83 | 0 T OY .CH) 0 < 0 0 Ix^AWA 0 i 0 0 A 0 | CstHstNsOs | 700,4 T 793,4 |
| 84 | «.jyA^yy HfA 1 0 \ 0 0 A. CH, H>C V | CssHgoNgÚioS |
- 143”............
| 85 | .0 .7. . ‘ VU “W °A ^*0 A U | /38H52N6O10S | 785,4 |
| 86 | 0' r F 0 Y 0 Y 0 0 1 J. ,0 0 \ 0 0 Ar rcH> A F CH KC | D39H47F4N5O10 | 822,3 - |
| 87 | T 0 ΛγΥΛγΑν Y> ° Y HjC | D33H51N5O9S | 694,3 |
| 88 | 0 y | C32H49N5O9S | 680,3 |
| 89 | ZvA^wA- T 0 | C40H63N5O11S | 822,4 |
| 90 | 5 UVa ’í \=O «. O=\_/— J \=o qrV z X oZ if /Zl \ X \=aO X □r | C39H55N5O9S | 770,4 |
| 91 | A Λ 2 í A/° CX .-pj> o X | C36H55N5O11S | 766,4 |
- 142F·-·
| 92 | o A oko o ch5 ’ | 338H57N5O-10 Γ | 744,4 |
| 93 | P Q CH, 0 I 0 0 I ΛγνΧγύΧ o A oko Ol | C34H51N5O11 | 706,4 |
| 94 | / 0 CH, 0 ( 0 0 Y xwVJcAx 0 A 0 l 0 0 cv | C40H59N5O9 | 754,4 |
| 95 | íi ch, o f op γ 0 A oko 00^· | C38H55N5O9 | 726,4 |
| 96 | Λ Q CH, 0 [ 0 0 1 | C36H51N5O9 | 698,4 |
| 97 | C34H47N5O9 | 670,3 | |
| 98 | X A, Á Y^YXAV^Ar CH 0 oko 0 LJ <n | C42H57N5O10 | 792,4 |
• · ··· ····
-145*-............
| . 99 | V-, Q 2 CH, ’«a ίκ· O i», | C40H61N5O10 | 772,4 |
| 100 | T 0 0 A. 0 L 0 o M °* | C37H48FN5O8 | 710,4 |
| 101 | C36H49N5O8S | 712,3 | |
| 102 | C40H54CIN5O8 | 768,4 | |
| 103 | Λ 0 (M, P ( p 0 γ | C39H57N5O9 | 740,4 |
| 104 | °λ ° A ° | C35H49N5O9 | 684,4 |
| 105 | CH> 0 I 0 9 Λ-γγΛγΫ^Λ0 0 zk ο \ 0 °O1, | C37H53N5O9 | 712,4 |
-ΐ4δ*- -
| 106 | 0¾ 0 k 0 0 | )36^52^08 | 697,4 |
| 107 | 0 N 0 | XsHeeNaOio | 915,5 |
| 108 Rc λ ο ο A oxo ch | C^HsaNsOio | 859,4 | |
| 109 0 A 0 Q·Xx ΑϋυΑΧ» Ό ° v | C48H65N5O10 | 872,5 | |
| Γ AAA- I 0 /R 0 X. 0 oh | C39H49N5O9 | 732,4 | |
| 1,1 A 0 0 | $ θ 1 ArRRw | C37H53N5O9 | 712,4 | |
| 2 A 0 RvyRRRt 0 A 0 R? 0 | C33H45N5O9 | 656,3 |
-ur- —
| 113 | δ 0 0¾ ? 1 ? ? i « k^ 0 | ůaaHseNeOg | 741,4 |
| 114 | C38H54N6O9 | 727,4 | |
| 115 | AW/rA^^ 0 A CH, 0 l 0 0 Oi s | C41H61N5O9 | 768,5 |
| 116 | AwAW 0 λ CH, 0 k0 0 | C37H53N5O9 | 712,4 |
| 117 | ΛγΑζΑ^Α 0 A. CH, O k 0 0 0 v | C39H58N6O3 | 739,4 |
| 118 | 0 A 0 l 0 0 CH, | C4oH6oNe08 | 753,5 |
| 119 | O CH, O 1 0 0 | CsgHsaNsOg | 755,4 |
• * · · · ····
-14’á·-............
| 120 | Ρί ch, 9 | 9 ? I 0 zL 0 I 0 0 | ^ssHsaNgOs | 725,4 |
| 121 | 0 C 0 a 'i v | C38H57N5O9 | 728,4 |
| 122 | x 0 ΛγΧνΑ· oj. oko o v | C34H49N5O9 | 672,4 |
| 123 | HO 0 f 0 0 ¥ 0 zk oko 0 CH, | C40H55N5O9 | 750,4 |
| 124 | C39H53N5O9 | 736,4 | |
| 125 | C39H53N5O9 | 736,4 | |
| 126 | C35H45N5O9 | 680,3 |
-149-............
| 127 | C36H47NsO9 | 694,3 | |
| 128 | ' '0 | ^ssHeoNeOa | 729,5 i |
| 129 | 0 0 0 | C41H53N6O8 | 763,4 j |
| 130 | W ° y ° | Csel^NgOs | 699,4 Ί |
| 131 | C43Hs7N5O8 | 772,4 1 | |
| 132 | C39H49N5O8 | 716,4 | |
| 133 | C42H55N5O9 | 774,4 |
Tabulka 3
| X XX HqA/VX QyvAPam o^oh° 0 γ | B |
| B | |
| o °*WAřo | B |
| axyXXo | B |
| B |
• Λ · · · · * · · · • · * · · ····
- 15Τ-·............
• · ··· · · · · ••-Ί52·- *........
Tabulka 4
| Struktura | Název | Rozmezí Ki* |
| ί A-o t° Λ í „ o=^ χ_δ __ \s-O C_7\ δ o=/ \=o 1 | 2-CO2,34e)PhCO-G(Chx)- ,-nV-(CO)-G- 5(Ph)-Am | a |
| 0 P aXpawz AAch o XyCH, o o I o CH X/ | 2,5-diF,63O2)PhCO-G(Chx) _-nV-(CO)-G- 3(Ph)-Am | a |
| o o=\ ---' gZ Ρλ o=$> o4 o..... 3 | (2-CO2)BnCOG(Chx)-L-nV-(CO)- G-G(Ph)-Am | c |
| 0 7 0 Y 0 < o □ ' f,o o Ach, 0 0 A A 0 | (2-SO3)PhCOG(Chx)-L-nV-(CO)G-G(Ph)-Am | b |
| i A.....o A í\°5=o X - O^ }-δ __ \==o V-ZA δ | (2- CO2)cyclopentenoy I-G(Chx)-L-nV(CO)-G-G(Ph)-Am | c |
| Χγ® 0 0 0 CH 0 CH, M | (2-002,3OH)PhCO-G(Chx)L-nV-(C0)-GG(Ph)-Am | a |
| Zo \=»o £— < * __ \—o CD > δ °=Λ \=O u.__—U. uf “· | (2,3,4,5-tetraF,6C02)PhC0-G(Ch> L-nV-(C0)-GG(Ph)-Am | a ) |
• · · · · ···· · *-’Í5Š*- .....
| , Struktura | Název | Rozmezí Ki* |
| řii 0 1 0 0 1 r A°ó Ϊ 0 0 | 2CO2)PhCO- 5(Chx)-C((O2)Et)iV-(CO)-G-G(Ph)\m | b |
| Wx c/ / 6χ w /=\ o=< tV/ ř~\_λ ° o=\ ς_ o=y ' J | 2CO2)PhCO- 3(Chx)-C((O2)Ph)iV-(CO)-G-G(Ph)λΠΊ | b |
| kJ ch> | (2CO2)PhCOG(Chx)C«02)EtPh)-nV(CO)-G-G(Ph)-Am | b |
| r041 ^0 U | iBoc-G(Chx)C((O2)Et)-nV-(CO)G-G(Ph)-Am | b _ |
| ot 0=^ /XX o=\ — JE | (2C02)PhC0- G(Chx)-C((02)- 1 Np)-nV-(CO)-GG(Ph)-Am | b |
| r^l^sk I a i d J 0 O 0 k | (2CO2)PhCO- G(Chx)-C((02)2Np}-nV-(CO)-G- G(Ph)-Am | b |
| - Xx Cj °* | iBoc-G(Chx)C((02)Ph)-nV-(CC G-G(Ph)-Am | b 0 |
•-ί54·- ··
| Struktura | Název | Rozmezí Ki* |
| ΧγΧ^ΧΧ^ °0Γ 0 | ((3-tetrahydrofuran) CH2O)CO-G(Chx)L-nV-(CO)-GG(Ph)-Am | b |
| χΧν4 CH> | 7-Me-2-iPr-Oct-4ene-(CO)-L-nV(CO)-G-G(Ph)-OH | c |
Zastupuje:
Claims (33)
1. Sloučenina včetně svých enantiomerů, stereoisomerů, 5 rotamerů a tautomerů, a farmaceuticky přijatelné soli nebo solváty této sloučeniny, vzorce I:
vzorec I kde:
is G, J a Y mohou být stejné nebo různé a jsou nezávisle zvoleny ze skupiny: H, alkyl, alkylaryl, heteroalkyl, heteroaryl, aryiheteroaryl, alkylheteroaryl, cykloalkyl, alkyloxy, alkylaryloxy, aryloxy, heteroaryloxy, heterocykloalkyloxy, cykloalkyloxy, alkylamino, arylamino, alkylarylamino, arylamino, 20 heteroarylamino, cykloalkylamino nebo heterocykloalkylamino s podmínkou, že skupina Y může být navíc popřípadě
11 12 substituována skupinou X nebo X ;
X11 je zvolena ze skupiny alkyl, alkenyl, alkinyl, cykloalkyl, cykloalkylalkyl, heterocyklyl, heterocyklylalkyl, aryl, 25 alkylaryl, arylalkyl, heteroaryl, alkylheteroaryl, nebo heteroarylalkyl, s podmínkou, že skupina X11 může být 12 navíc popřípadě substituována skupinou X ;
• · ··« ···· —-·1&β-.........
X12 je hydroxy, alkoxy, aryloxy, thio, alkylthio, arylthio, amino, alkylamino, arylamino, alkylsulfonyl, arylsulfonyl, alkylsulfonamido, arylsulfonamido, karboxy, karbalkoxy, karboxamido, alkoxykarbonylamino, alkoxykarbonyloxy, 5 alkylureido, arylureido, halogen, kyano, nebo nitro, s podmínkou, že skupina alkyl, alkoxy, a aryl může být navíc popřípadě substituována skupinami nezávisle zvolenými ze skupiny X ;
θ
R1 je COR5 nebo B(OR)2, kde R5 je zvoleno ze skupiny H, OH, OR , o NR9R10, CF3, C2F5, C3F7, CF2R6, R6 a COR7, kde R7 je zvoleno ze skupiny H, OH, OR8, CHR9R10, a NR9R10, kde R6, R8, R9 a R10 mohou být stejné nebo různé a jsou nezávisle zvoleny ze skupiny H, alkyl, aryl, heteroalkyl, heteroaryl, cykloalkyl, cykloalkyl, arylalkyl, heteroarylalkyl, CH(R1’)COOR11, CHÍR1 )CONR12R13, 5 CHÍR1 )CONHCH(R2 )COOR11, CH(R1')CONHCH(R2’)CONR12R13, CH(Rr)CONHCH(R2)R’, CH(R1')CONHCH(R2’)CONHCH(R3')COOR11, CH(R1’)CONHCH(R2’)CONHCH(R3)CONR12R13, CH(R1')CONHCH(R2')CONHCH(R3)CONHCH(R4’)COOR11,
20 CH(R1')CONHCH(R2')CONHCH(R3’)CONHCH(R4')CONR12R13,
CH(R1’)CONHCH(R2’)CONHCH(R3')CONHCH(R4’)CONHCH-(R5’)COOR11, a
CH(R1’)CONHCH(R2')CONHCH(R3’)CONHCH(R4')CONHCH-(R5')CONR12R13, kde 25 R1, R2, R3, R4, R5, R11, R12, R13 a R’ mohou být stejné nebo různé a jsou nezávisle zvoleny ze skupiny H, alkyl, aryl, heteroalkyl, heteroaryl, cykloalkyl, alkylaryl, alkylheteroaryl, arylalkyl a heteroaralkyl;
Z je zvoleno z O, N, nebo CH;
30 W může být přítomno nebo nepřítomno, a pokud je W přítomno, je W zvoleno ze skupiny C=O, C=S, nebo SO2; a • · «·· · · · · —-Ί57-.........
R, R’, R2, R3 a R4 jsou nezávisle zvoleny ze skupiny H; C1 -C10-alkyl;
C2-C10-alkenyl; C3-C8-cykloalkyl; C3-C8-heterocykloalkyl, alkoxy, aryloxy, alkylthio, arylthio, amino, amido, ester, karboxylová kyselina, karbamát, močovina, keton, aldehyd, kyano, nitro; atom kyslíku, atom dusíku, atom síry nebo atom fosforu, kde počet atomů kyslíku, dusíku, síry nebo fosforu může být 0 až 6; (cykloalkyl)alkyl a (heterocykloalkyl)alkyl, kde cykloalkyl je složen ze 3 až 8 atomů uhlíku, a 0 až 6 atomů kyslíku, dusíku, síry nebo fosforu, kde alkyl má 1 až 6 atomů uhlíku; aryl; heteroaryl; alkylaryl; a alkylheteroaryl;
kde skupiny alkyl, heteroalkyl, alkenyl, heteroalkenyl, aryl, heteroaryl, cykloalkyl a heterocykloalkyl mohou být popřípadě substituovány, přičemž termín „substituovaný“ označuje případnou a chemicky vhodnou substituci jednou nebo více skupinami zvolenými ze skupiny alkyl, alkenyl, alkinyl, aryl, aralkyl, cykloalkyl, heterocykl, halogen, hydroxy, thio, alkoxy, aryloxy, alkylthio, arylthio, amino, amido, ester, karboxylová kyselina, karbamát, močovina, keton, aldehyd, kyano, nitro, sulfonamid, sulfoxid, sulfon, sulfonylmočovina, hydrazid, a hydroxamát.
2. Sloučenina podle nároku 1, kde R1 je COR5, a R5 je H, OH, COOR8 nebo CONR9R10.
3. Sloučenina podle nároku 2, kde R1 je COCONR9R10, a R9 je H,
R10 je zvoleno ze skupiny H, CH(R1 )COOR11,
CH(R1’)CONR12R13, CHÍR1 )CONHCH(R2 )COOR11, CH(R1’)CO-NHCH(R2')CONR12R13 a CH(R1')CONHCH(R2’)(R').
4. Sloučenina podle nároku 3, kde R10 je CH(R' )CONHCH(R2)COOR11, CH(R1')CONHCH(R2,)CONR’2R’3, nebo CH(R1')CONHCH(R2')(R'), kde Rr je H nebo alkyl, heteroalkyl a R2 je fenyl, substituovaný fenyl, heteroatomem substituovaný fenyl, thiofenyl, cykloalkyl, piperidyl a pyridyl.
5. Sloučenina podle nároku 4, kde R1’ je H.
6. Sloučenina podle nároku 5, kde
R11 je H nebo terc-butyl; R’ je hydroxymethyl; a R2 je zvoleno ze skupiny:
20 kde:
U1 a U2 mohou být stejné nebo různé a jsou nezávisle zvoleny ze skupiny H, F, CH2COOH, CH2COOMe, CH2CONH2, CH2CONHMe, CH2CONMe2, azido, amino, hydroxyl, substituovaný amino, substituovaný hydroxyl;
25 u3 a U4 mohou být stejné nebo různé a znamenají O nebo S;
U5 je zvoleno ze skupiny zahrnující alkylsulfonyl, arylsulfonyl, heteroalkylsulfonyl, heteroarylsulfonyl, alkylkarbonyl, arylkarbonyl, heteroalkylkarbonyl, heteroarylkarbonyl, alkoxykarbonyl, ••-•159”aryloxykarbonyl, heteroaryloxykarbonyl, alkylaminokarbonyl, arylmainokarbonyl a heteroarylaminokarbonyl nebo jejich kombinace;
a
NR12R13 je zvoleno ze skupiny:
NH2, NHMe, N(Me)OMe, NMe2,
HN
Me
kde U6 je H, OH, nebo CH2OH.
15
7. Sloučenina podle nároku 1, kde R2 je zvolena ze skupiny:
8. Sloučenina podle nároku 7, kde R3 je zvolena ze skupiny:
ch3 Xh3
0-3
COOH
'COOH
kde R31 = OH, nebo O-alkyl;
Y19 je zvoleno z následujících skupin:
NHMs
YH3
NHAc
CH3
Sloučenina podle nároku 8, kde R3 je zvolena z následujících struktur:
10.
Sloučenina podle nároku 9, kde Z je N a R4 je H.
11. Sloučenina podle nároku 10, kde W je C-O, nebo SO2.
15
12. Sloučenina podle nároku 11, kde Y je zvolena z následujících skupin:
-Μ 6 3·-· <Y”-i
^0-3 W0-3
5 _____
y11—^ Aa Y^—Ad
Y^-Me
10
Cd y14-A
Y
15
0Η3>^ CH3^M^
CH31 Z II-2/ .
ch3 ch3
9h3 cooh
HOOÚÁ, H3CÁ;
T / 3>ry
CH3 0-2 ?
20 j^7 CHoCHa
C3H7A/ HaCOOC^^^^A/
o-| yY
MeO2C ''‘I
Me
F-J Zks
Lo^ Mem-A
o-| y=yV--y
J Q-O
13
CHamZY HOOC^m^
ch3
HOOcd
ΗΟΟΟγγ^γ CcA.
V 0-4^ —' • · · · · ···· -164·-..........
HOOC
-••>65-· ’··’ -· :··:*··:
Α66·^· ’··’ · ··.'·..·
kde:
Υ11 je zvolena ze skupiny H, COOH, COOEt, OMe, Ph, OPh, NHMe, NHAc, NHPh, CH(Me)2, 1-triazolyl, 1-imidazolyl a NHCH2COOH;
Y12 je zvoleno ze skupiny H, COOH, COOMe, OMe, F, Cl, nebo Br;
Y13 je zvoleno z následujících skupin
Y14 je zvoleno z MeSO2, Ac, Boc, 'Boc, Cbz, nebo Alloc;
Y15 a Y16 mohou být stejné nebo různé a jsou nezávisle zvoleny ze skupiny alkyl, aryl nebo heteroalkyl, nebo heteroaryl;
Y17je CF3, NO2, CONH2, OH, COOCH3, OCH3, OC6H51 C6H5, COC6H5, NH2, nebo COOH; a
Y18 je COOCH3, NO2, N(CH3)2, F, OCH3, CH2COOH, COOH, SO2NH2, nebo NHCOCH3.
13. Sloučenina podle nároku 12, kde Y je zvoleno ze skupiny:
COOH
·· · · · « · « • · < · « · · 4 · · —Ί48.-:. .:. ·..··..·
COOH
kde:
Y17 je CF3, NO2, CONH2, OH, NH2, nebo COOH;
Y18 je F, COOH,
14.
15.
Sloučenina podle nároku 13, kde J je zvoleno ze skupiny:
BnOOC'*''-^/ HOOC^X
I 1-2?
CH3
Sloučenina podle nároku 14, kde J je zvoleno ze skupiny H, CH3 nebo Bn.
16.
Sloučenina podle nároku 15, kde G je zvoleno ze skupiny:
CH3^CH3
.0 .369.5. .:. ·..··..·
n=1-4
- 170 -
OOteu
- 171 -
18. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, ž e jako účinnou složku obsahuje sloučeninu podle nároku 1.
19. Farmaceutický prostředek podle nároku 18 pro použití při léčení onemocnění souvisejících s virem hepatitidy C.
20. Farmaceutický prostředek podle nároku 18, vyznačující se tím, že dále obsahuje farmaceuticky přijatelný nosič.
21. Způsob léčení onemocnění souvisejících s proteázou HCV, který zahrnuje podávání farmaceutického prostředku s obsahem terapeuticky účinných množství sloučeniny podle nároku 1 pacientovi v případě potřeby.
22. Způsob podle nároku 21, kde se podávání provádí subkutánně.
23. Použití sloučeniny podle nároku 1 pro výrobu farmaceutického prostředku pro léčení onemocnění souvisejících s proteázou HCV.
24. Způsob výroby farmaceutického prostředku pro léčení onemocnění souvisejících s proteázou HCV, vyznačující se tím, že sloučenina podle nároku 1 se přivede do dokonalého styku s farmaceuticky přijatelným nosičem.
- 172 -
25. Sloučenina s inhibiční aktivitou na proteázu HCV včetně enantiomerů, stereoisomerů, rotamerů a tautomerů této sloučeniny a jejích farmaceuticky přijatelných solí nebo solvátů, kterou je sloučenina zvolená z následujících struktur:
- 173 -
R = Me
R = Benzyl
X = OfBu
X = OH
X = NH2
X = NMeOMe
X = NMe2
- 174 -
X = OfBu
X = OH
X = Η, Y = tBu; X = tBu, Y = H
R = Propargyl; R = Allyl
X= OlBu; X=OH
- 175 -
X = o‘Butyi
X = OH
X = OH
X = NMe2
X = O‘Bu
X = OH
- 176 R= Bu u 0 Ϊ JkJl H u J f x γγ -
Y 0 cp 0
Te H
Me
°C
Me
Υ Ν Μβ”^
1δ ο Η Μβ^°γΝγ 0 Á
Me
A^O^h
Me γ
ο ι
R = H R = Me
< Ů H π
JxA/N\A z*X/NH:
1 Π Ν Π \0 H o
X = Η, Y = COOH X = COOH, Y = H
Me / \
>-Me
\ 0 l ο H o
J f'Me
Me
Me
Me J
-N^SX^^OH 0 ψ ay
Me 'o
^a-(«XaX Χ,οπ
Ί i0 °
Me
jO σ
^aVA^X“ AH 8 Ig H g
Me
- 177 -
26. Farmaceutický prostředek pro léčení onemocnění souvisejících s proteázou HCV, vyznačující se tím, že obsahuje terapeuticky účinné množství jedné nebo více sloučenin podle nároku 25 a farmaceuticky přijatelný nosič.
27.
Farmaceutický prostředek podle nároku
26, vyznačující se tím, že dále obsahuje antivirový prostředek.
28. Farmaceutický prostředek podle nároku 26 nebo 27, vyznačující se tím, že ještě dále obsahuje interferon.
29. Farmaceutický prostředek podle nároku 28, vyznačující se tím, že jako antivirový prostředek obsahuje ribavirin a jako interferon obsahuje ainterferon.
30. Sloučenina zvolená ze skupiny:
- 178 -
- 179 nebo její enantiomer, stereoisomer, rotamer nebo tautomer, nebo její farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát, která má inhibiční účinky na HCV.
31. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, ž e obsahuje jednu nebo více sloučenin podle nároku 30.
32. Způsob léčení onemocnění souvisejícího s virem hepatitidy C, který zahrnuje podávání účinného množství jedné nebo více sloučenin podle nároku 30.
33. Způsob modulace aktivity proteázy viru hepatitidy C, který zahrnuje uvedení proteázy HCV do styku s jednou nebo více sloučeninami podle nároku 30.
34. Způsob léčení, prevence nebo zmírnění jednoho nebo více příznaků hepatitidy C, který zahrnuje podávání účinného množství jedné nebo více sloučenin podle nároku 30.
35. Způsob podle nároku 33, kde proteázou HCV je proteáza NS3/NS4a.
- 180 -
36. Způsob podle nároku 35, kde sloučenina nebo sloučeniny inhibují proteázu HCV NS3/NS4a.
37. Způsob modulace zpracování polypeptidu viru hepatitidy C, který zahrnuje uvedení kompozice obsahující polypeptid HCV za podmínek, při kterých je polypeptid zpracováván, do styku s jednou nebo více sloučeninami podle nároku 30.
38. Sloučenina podle nároku 7, kde R3 je cyklohexyl.
39. Sloučenina podle nároku 11, kde Y je zvoleno ze skupiny 2karboxy-3-hydroxyfenyl, 3-tetrahydrofurylmethoxy a 2-sulfofenyl.
40. Sloučenina podle nároku 15, kde G je zvoleno ze skupiny ethylsulfonylmethyl, fenylsulfonylmethyl, 2-fenylethylsulfonyl-methyl a 1-naftylsulfonylmethyl.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US22010700P | 2000-07-21 | 2000-07-21 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ2003195A3 true CZ2003195A3 (cs) | 2003-04-16 |
Family
ID=22822091
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ2003195A CZ2003195A3 (cs) | 2000-07-21 | 2001-07-19 | Peptidové inhibitory serinové proteázy NS3 a farmaceutický prostředek |
Country Status (22)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US7169760B2 (cs) |
| EP (1) | EP1303487A4 (cs) |
| JP (2) | JP4452441B2 (cs) |
| KR (1) | KR20030081297A (cs) |
| CN (1) | CN1446201A (cs) |
| AR (1) | AR030249A1 (cs) |
| AU (1) | AU8063701A (cs) |
| BR (1) | BR0112666A (cs) |
| CA (1) | CA2410682A1 (cs) |
| CZ (1) | CZ2003195A3 (cs) |
| EC (1) | ECSP034439A (cs) |
| HU (1) | HUP0303358A3 (cs) |
| IL (1) | IL153669A0 (cs) |
| MX (1) | MXPA03000626A (cs) |
| NO (1) | NO20030271L (cs) |
| NZ (1) | NZ523781A (cs) |
| PE (1) | PE20020266A1 (cs) |
| PL (1) | PL365695A1 (cs) |
| RU (1) | RU2003105221A (cs) |
| SK (1) | SK742003A3 (cs) |
| WO (1) | WO2002008187A1 (cs) |
| ZA (1) | ZA200210311B (cs) |
Families Citing this family (173)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NZ335276A (en) | 1996-10-18 | 2000-09-29 | Vertex Pharma | Inhibitors of serine proteases, particularly hepatitis C virus (HCV) NS3 (Non Structural Protein 3) protease |
| AU784746B2 (en) | 1999-11-18 | 2006-06-08 | Dendreon Corporation | Nucleic acids encoding endotheliases, endotheliases and uses thereof |
| US7700341B2 (en) * | 2000-02-03 | 2010-04-20 | Dendreon Corporation | Nucleic acid molecules encoding transmembrane serine proteases, the encoded proteins and methods based thereon |
| SV2003000617A (es) | 2000-08-31 | 2003-01-13 | Lilly Co Eli | Inhibidores de la proteasa peptidomimetica ref. x-14912m |
| AU3659102A (en) * | 2000-12-12 | 2002-06-24 | Schering Corp | Diaryl peptides as ns3-serine protease inhibitors of hepatits c virus |
| US7125703B2 (en) | 2001-03-13 | 2006-10-24 | Dendreon Corporation | Nucleic acid molecules encoding a transmembrane serine protease 7, the encoded polypeptides and methods based thereon |
| US7172892B2 (en) | 2001-03-22 | 2007-02-06 | Dendreon Corporation | Nucleic acid molecules encoding serine protease CVSP14, the encoded polypeptides and methods based thereon |
| JP2005506047A (ja) | 2001-03-27 | 2005-03-03 | デンドレオン・サンディエゴ・リミテッド・ライアビリティ・カンパニー | 膜貫通型セリンプロテアーゼ９をコード化する核酸分子、コード化されたポリペプチドおよびそれらに基づく方法 |
| US7112430B2 (en) | 2001-05-14 | 2006-09-26 | Dendreon Corporation | Nucleic acid molecules encoding a transmembrane serine protease 10, the encoded polypeptides and methods based thereon |
| US7119072B2 (en) | 2002-01-30 | 2006-10-10 | Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. | Macrocyclic peptides active against the hepatitis C virus |
| US7091184B2 (en) | 2002-02-01 | 2006-08-15 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Hepatitis C inhibitor tri-peptides |
| US6642204B2 (en) | 2002-02-01 | 2003-11-04 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Hepatitis C inhibitor tri-peptides |
| EP1497282A2 (en) * | 2002-04-11 | 2005-01-19 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Inhibitors of serine protease, particularly hepatitis c virus ns3-ns4 protease |
| AU2003247084B9 (en) | 2002-06-28 | 2018-07-26 | Centre National De La Recherche Scientifique | Modified 2' and 3'-nucleoside prodrugs for treating flaviridae infections |
| US7408078B2 (en) | 2002-10-08 | 2008-08-05 | Wyeth | Anthranilic acid derivatives useful in treating infection with hepatitis C virus |
| US20050075279A1 (en) | 2002-10-25 | 2005-04-07 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Macrocyclic peptides active against the hepatitis C virus |
| CL2004001161A1 (es) | 2003-05-21 | 2005-04-08 | Boehringer Ingelheim Int | Compuestos describe compuestos derivados de quinolina; composicion farmaceutica; y su uso para tratar una enfermedad causada por el virus de la hepatitis c. |
| RU2358979C2 (ru) | 2003-05-30 | 2009-06-20 | Фармассет, Инк. | Модифицированные фторированные аналоги нуклеозида |
| ATE478886T1 (de) | 2003-07-25 | 2010-09-15 | Idenix Pharmaceuticals Inc | Purin nucleoside für die behandlung von durch flavividrae verursachten krankheiten, einschliesslich hepatitis c |
| US7576206B2 (en) | 2003-08-14 | 2009-08-18 | Cephalon, Inc. | Proteasome inhibitors and methods of using the same |
| US7223745B2 (en) | 2003-08-14 | 2007-05-29 | Cephalon, Inc. | Proteasome inhibitors and methods of using the same |
| MXPA06002250A (es) | 2003-08-26 | 2006-05-17 | Schering Corp | Inhibidores peptidomimeticos novedosos de la serina proteasa ns3 del virus de la hepatitis c. |
| MY148123A (en) | 2003-09-05 | 2013-02-28 | Vertex Pharma | Inhibitors of serine proteases, particularly hcv ns3-ns4a protease |
| EP1673385B1 (en) | 2003-09-22 | 2011-03-02 | Boehringer Ingelheim International GmbH | Macrocyclic peptides active against the hepatitis c virus |
| CN1894274A (zh) * | 2003-09-26 | 2007-01-10 | 先灵公司 | 丙肝病毒ns3丝氨酸蛋白酶的大环抑制剂 |
| NZ546663A (en) | 2003-10-10 | 2010-01-29 | Vertex Pharma | Inhibitors of serine proteases, particularly HCV NS3-NS4A protease |
| EP1944042A1 (en) | 2003-10-27 | 2008-07-16 | Vertex Pharmceuticals Incorporated | Combinations for HCV treatment |
| WO2005043118A2 (en) | 2003-10-27 | 2005-05-12 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Drug discovery method |
| GB0500020D0 (en) | 2005-01-04 | 2005-02-09 | Novartis Ag | Organic compounds |
| WO2005070955A1 (en) | 2004-01-21 | 2005-08-04 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Macrocyclic peptides active against the hepatitis c virus |
| EP1711515A2 (en) | 2004-02-04 | 2006-10-18 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Inhibitors of serine proteases, particularly hcv ns3-ns4a protease |
| WO2005080399A1 (ja) | 2004-02-24 | 2005-09-01 | Japan Tobacco Inc. | ４環縮合複素環化合物及びそのｈｃｖポリメラーゼ阻害剤としての利用 |
| EP1742914A1 (en) * | 2004-02-27 | 2007-01-17 | Schering Corporation | Cyclobutenedione groups-containing compounds as inhibitors of hepatitis c virus ns3 serine protease |
| CN1950393A (zh) | 2004-02-27 | 2007-04-18 | 先灵公司 | 丙型肝炎病毒ns3蛋白酶的抑制剂 |
| US7635694B2 (en) | 2004-02-27 | 2009-12-22 | Schering Corporation | Cyclobutenedione-containing compounds as inhibitors of hepatitis C virus NS3 serine protease |
| US7816326B2 (en) | 2004-02-27 | 2010-10-19 | Schering Corporation | Sulfur compounds as inhibitors of hepatitis C virus NS3 serine protease |
| ATE438622T1 (de) | 2004-02-27 | 2009-08-15 | Schering Corp | 3,4-(cyclopentyl)kondensierte prolinverbindungen als inhibitoren der ns3-serinprotease des hepatitis-c-virus |
| RU2006134002A (ru) | 2004-02-27 | 2008-04-10 | Шеринг Корпорейшн (US) | Новые соединения, действующие как ингибиторы сериновой протеазы ns3 вируса гепатита с |
| RU2428428C9 (ru) | 2004-02-27 | 2012-03-10 | Шеринг Корпорейшн | Серусодержащие соединения, действующие как ингибиторы сериновой протеазы ns3 вируса гепатита с |
| RU2006134005A (ru) | 2004-02-27 | 2008-04-10 | Шеринг Корпорейшн (US) | Новые соединения, действующие как ингибиторы сериновой протеазы ns3 вируса гепатита с |
| CN1984922A (zh) | 2004-05-20 | 2007-06-20 | 先灵公司 | 用作丙型肝炎病毒ns3丝氨酸蛋白酶抑制剂的取代脯氨酸 |
| JP4914355B2 (ja) | 2004-07-20 | 2012-04-11 | ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング | Ｃ型肝炎インヒビターペプチド類似体 |
| UY29016A1 (es) | 2004-07-20 | 2006-02-24 | Boehringer Ingelheim Int | Analogos de dipeptidos inhibidores de la hepatitis c |
| CN101023094B (zh) | 2004-07-21 | 2011-05-18 | 法莫赛特股份有限公司 | 烷基取代的2-脱氧-2-氟代-d-呋喃核糖基嘧啶和嘌呤及其衍生物的制备 |
| AU2005276631A1 (en) * | 2004-08-25 | 2006-03-02 | Santhera Pharmaceuticals (Schweiz) Ag | Alpha-keto carbonyl calpain inhibitors |
| MX2007002371A (es) | 2004-08-27 | 2007-04-23 | Schering Corp | Compuestos de acilsulfonamida como inhibidores de la serina proteasa ns3 del virus de la hepatitis c. |
| ES2725457T3 (es) | 2004-09-14 | 2019-09-24 | Gilead Pharmasset Llc | Preparación de ribofuranosil pirimidinas y purinas 2'fluoro-2'-alquil-sustituidas u otras opcionalmente sustituidas y sus derivados |
| US7659263B2 (en) | 2004-11-12 | 2010-02-09 | Japan Tobacco Inc. | Thienopyrrole compound and use thereof as HCV polymerase inhibitor |
| US7468383B2 (en) | 2005-02-11 | 2008-12-23 | Cephalon, Inc. | Proteasome inhibitors and methods of using the same |
| US7772178B2 (en) * | 2005-06-02 | 2010-08-10 | Schering Corporation | Pharmaceutical formulations and methods of treatment using the same |
| US20070237818A1 (en) * | 2005-06-02 | 2007-10-11 | Malcolm Bruce A | Controlled-release formulation of HCV protease inhibitor and methods using the same |
| US8119602B2 (en) | 2005-06-02 | 2012-02-21 | Schering Corporation | Administration of HCV protease inhibitors in combination with food to improve bioavailability |
| WO2006130666A2 (en) * | 2005-06-02 | 2006-12-07 | Schering Corporation | Medicaments and methods combining a hcv protease inhibitor and an akr competitor |
| RU2427372C2 (ru) | 2005-06-17 | 2011-08-27 | Новартис Аг | Применение санглиферина для лечения вируса гепатита с |
| US20110104109A1 (en) * | 2005-07-13 | 2011-05-05 | Frank Bennett | Tetracyclic indole derivatives and their use for treating or preventing viral infections |
| ES2401661T3 (es) * | 2005-08-02 | 2013-04-23 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Inhibidores de serina proteasas |
| RU2446171C2 (ru) * | 2005-08-19 | 2012-03-27 | Вертекс Фармасьютикалз Инкорпорейтед | Способы и промежуточные продукты |
| US8399615B2 (en) | 2005-08-19 | 2013-03-19 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Processes and intermediates |
| AR055395A1 (es) | 2005-08-26 | 2007-08-22 | Vertex Pharma | Compuestos inhibidores de la actividad de la serina proteasa ns3-ns4a del virus de la hepatitis c |
| US7964624B1 (en) | 2005-08-26 | 2011-06-21 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Inhibitors of serine proteases |
| NZ568324A (en) | 2005-11-11 | 2012-01-12 | Vertex Pharma | Hepatitis C virus variants |
| US7705138B2 (en) | 2005-11-11 | 2010-04-27 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Hepatitis C virus variants |
| US7816348B2 (en) | 2006-02-03 | 2010-10-19 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Viral polymerase inhibitors |
| EP1991229A2 (en) | 2006-02-27 | 2008-11-19 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Co-crystals and pharmaceutical compositions comprising the same |
| JP2009531315A (ja) | 2006-03-16 | 2009-09-03 | バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド | 重水素化ｃ型肝炎プロテアーゼインヒビター |
| MX2008012225A (es) * | 2006-03-23 | 2008-12-03 | Schering Corp | Combinaciones de inhibidores de proteasa de virus de hepatitis c e inhibidores de isoenzima 3a4 del citocromo p450, y metodos de tratamiento relacionados con las mismas. |
| JP2009536158A (ja) * | 2006-04-11 | 2009-10-08 | ノバルティス アクチエンゲゼルシャフト | Ｈｃｖ阻害剤 |
| EP2518079A3 (en) | 2006-04-11 | 2012-12-12 | Novartis AG | HCV/HIV inhibitors and their uses |
| US8017612B2 (en) | 2006-04-18 | 2011-09-13 | Japan Tobacco Inc. | Piperazine compound and use thereof as a HCV polymerase inhibitor |
| NZ573763A (en) * | 2006-06-30 | 2012-06-29 | Piramal Life Sciences Ltd | Herbal compositions for the treatment of diseases of the oral cavity comprising a curcuminoid substance |
| EP1886685A1 (en) | 2006-08-11 | 2008-02-13 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Methods, uses and compositions for modulating replication of hcv through the farnesoid x receptor (fxr) activation or inhibition |
| WO2008019477A1 (en) | 2006-08-17 | 2008-02-21 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Viral polymerase inhibitors |
| US20100081672A1 (en) * | 2006-12-07 | 2010-04-01 | Schering Corporation | Ph sensitive matrix formulation |
| JP5055377B2 (ja) | 2006-12-22 | 2012-10-24 | シェーリング コーポレイション | ［５，６−環］環形成インドール誘導体およびその使用方法 |
| KR20090106539A (ko) * | 2006-12-22 | 2009-10-09 | 쉐링 코포레이션 | Ｈｃｖ 및 관련 바이러스 감염을 치료 또는 예방하기 위한 4,5-환 환상 인돌 유도체 |
| JP5079818B2 (ja) | 2006-12-22 | 2012-11-21 | メルク・シャープ・アンド・ドーム・コーポレーション | Ｈｃｖおよび関連するウイルス疾患の治療または予防のための４，５−環インドール誘導体 |
| US8575208B2 (en) | 2007-02-27 | 2013-11-05 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Inhibitors of serine proteases |
| EA200970806A1 (ru) | 2007-02-27 | 2010-08-30 | Вертекс Фармасьютикалз Инкорпорейтед | Сокристаллы и содержащие их фармацевтические композиции |
| WO2008106167A1 (en) * | 2007-02-28 | 2008-09-04 | Conatus Pharmaceuticals, Inc. | Combination therapy comprising matrix metalloproteinase inhibitors and caspase inhibitors for the treatment of liver diseases |
| WO2008106166A2 (en) * | 2007-02-28 | 2008-09-04 | Conatus Pharmaceuticals, Inc. | Methods for the treatment of liver diseases using specified matrix metalloproteinase (mmp) inhibitors |
| KR101566036B1 (ko) * | 2007-03-23 | 2015-11-04 | 닛신 파마 가부시키가이샤 | 간질환의 예방 또는 치료용 조성물 |
| US7964580B2 (en) | 2007-03-30 | 2011-06-21 | Pharmasset, Inc. | Nucleoside phosphoramidate prodrugs |
| MX2009011930A (es) | 2007-05-04 | 2009-11-18 | Vertex Pharma | Terapia de combinacion para el tratamiento de infeccion de virus de hepatitis c. |
| WO2009018657A1 (en) | 2007-08-03 | 2009-02-12 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Viral polymerase inhibitors |
| WO2009032124A1 (en) * | 2007-08-29 | 2009-03-12 | Schering Corporation | Substituted indole derivatives and methods of use thereof |
| RU2010111550A (ru) * | 2007-08-29 | 2011-10-10 | Шеринг Корпорейшн (US) | 2,3-замещенные индольные производные для лечения вирусных инфекций |
| EP2195317B1 (en) | 2007-08-29 | 2012-01-18 | Schering Corporation | 2,3-substituted azaindole derivatives for treating viral infections |
| EP2436682A1 (en) | 2007-08-30 | 2012-04-04 | Vertex Pharmceuticals Incorporated | Co-crystals and pharmaceutical compositions comprising the same |
| CN102317285A (zh) * | 2007-11-16 | 2012-01-11 | 先灵公司 | 3-氨基磺酰基取代的吲哚衍生物及其使用方法 |
| US8765757B2 (en) * | 2007-11-16 | 2014-07-01 | Merck Sharp & Dohme Corp. | 3-heterocyclic substituted indole derivatives and methods of use thereof |
| EP2234977A4 (en) | 2007-12-19 | 2011-04-13 | Boehringer Ingelheim Int | VIRAL POLYMERASE INHIBITORS |
| RU2490272C2 (ru) * | 2008-02-04 | 2013-08-20 | Айденикс Фармасьютикалз, Инк. | Макроциклические ингибиторы серинпротеазы |
| TW200946541A (en) | 2008-03-27 | 2009-11-16 | Idenix Pharmaceuticals Inc | Solid forms of an anti-HIV phosphoindole compound |
| JP5580814B2 (ja) * | 2008-06-13 | 2014-08-27 | メルク・シャープ・アンド・ドーム・コーポレーション | ３環式インドール誘導体およびその使用方法 |
| KR20110065440A (ko) | 2008-07-02 | 2011-06-15 | 아이데닉스 파마슈티칼스, 인코포레이티드 | 바이러스 감염의 치료를 위한 화합물 및 제약 조성물 |
| WO2010022121A1 (en) | 2008-08-20 | 2010-02-25 | Schering Corporation | Substituted pyridine and pyrimidine derivatives and their use in treating viral infections |
| US8470834B2 (en) | 2008-08-20 | 2013-06-25 | Merck Sharp & Dohme Corp. | AZO-substituted pyridine and pyrimidine derivatives and their use in treating viral infections |
| CA2734487A1 (en) | 2008-08-20 | 2010-02-25 | Southern Research Institute | Ethynyl-substituted pyridine and pyrimidine derivatives and their use in treating viral infections |
| WO2010022128A1 (en) | 2008-08-20 | 2010-02-25 | Schering Corporation | Ethenyl-substituted pyridine and pyrimidine derivatives and their use in treating viral infections |
| MX2011006890A (es) | 2008-12-23 | 2011-07-20 | Pharmasset Inc | Analogos de nucleosidos. |
| CL2009002206A1 (es) | 2008-12-23 | 2011-08-26 | Gilead Pharmasset Llc | Compuestos derivados de pirrolo -(2-3-d]-pirimidin-7(6h)-tetrahidrofuran-2-il fosfonamidato, composicion farmaceutica; y su uso en el tratamiento de enfermedades virales. |
| AR074897A1 (es) | 2008-12-23 | 2011-02-23 | Pharmasset Inc | Fosforamidatos de nucleosidos |
| KR20110116136A (ko) | 2009-01-07 | 2011-10-25 | 싸이넥시스, 인크. | Ｈｃｖ 및 ｈｉｖ 감염의 치료에 사용하기 위한 사이클로스포린 유도체 |
| US8102720B2 (en) * | 2009-02-02 | 2012-01-24 | Qualcomm Incorporated | System and method of pulse generation |
| WO2010101967A2 (en) | 2009-03-04 | 2010-09-10 | Idenix Pharmaceuticals, Inc. | Phosphothiophene and phosphothiazole hcv polymerase inhibitors |
| TW201040181A (en) | 2009-04-08 | 2010-11-16 | Idenix Pharmaceuticals Inc | Macrocyclic serine protease inhibitors |
| US20110182850A1 (en) | 2009-04-10 | 2011-07-28 | Trixi Brandl | Organic compounds and their uses |
| US8512690B2 (en) | 2009-04-10 | 2013-08-20 | Novartis Ag | Derivatised proline containing peptide compounds as protease inhibitors |
| LT2421527T (lt) * | 2009-04-25 | 2018-09-10 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Farmakokinetinių savybių pagerinimo būdai |
| US8618076B2 (en) | 2009-05-20 | 2013-12-31 | Gilead Pharmasset Llc | Nucleoside phosphoramidates |
| TWI576352B (zh) | 2009-05-20 | 2017-04-01 | 基利法瑪席特有限責任公司 | 核苷磷醯胺 |
| JP2012528195A (ja) | 2009-05-29 | 2012-11-12 | メルク・シャープ・アンド・ドーム・コーポレーション | Ｃ型肝炎などの疾患を処置するための３つの結合アリール部分で構成された抗菌性化合物 |
| AR077712A1 (es) | 2009-08-05 | 2011-09-14 | Idenix Pharmaceuticals Inc | Inhibidores de serina proteasa macrociclica |
| WO2011063076A1 (en) | 2009-11-19 | 2011-05-26 | Itherx Pharmaceuticals, Inc. | Methods of treating hepatitis c virus with oxoacetamide compounds |
| WO2011066241A1 (en) | 2009-11-25 | 2011-06-03 | Schering Corporation | Fused tricyclic compounds and derivatives thereof useful for the treatment of viral diseases |
| MY159958A (en) | 2009-12-18 | 2017-02-15 | Idenix Pharmaceuticals Inc | 5,5-fused arylene or heteroarylene hepatitis c virus inhibitors |
| WO2011087740A1 (en) | 2009-12-22 | 2011-07-21 | Schering Corporation | Fused tricyclic compounds and methods of use thereof for the treatment of viral diseases |
| NZ600786A (en) | 2009-12-22 | 2013-12-20 | Cephalon Inc | Proteasome inhibitors and processes for their preparation, purification and use |
| GB201001070D0 (en) * | 2010-01-22 | 2010-03-10 | St George's Hospital Medical School | Theraputic compounds and their use |
| US9433621B2 (en) | 2010-02-18 | 2016-09-06 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Substituted pyridine and pyrimidine derivatives and their use in treating viral infections |
| MA34147B1 (fr) | 2010-03-09 | 2013-04-03 | Merck Sharp & Dohme | Composes tricycliques fusionnes de silyle et leurs methodes d'utilisation dans le cadre du traitement de maladies virales |
| AP2012006535A0 (en) | 2010-03-31 | 2012-10-31 | Gilead Pharmasset Llc | Stereoselective synthesis of phosphorous containing actives |
| TWI515000B (zh) | 2010-04-01 | 2016-01-01 | 伊迪尼克製藥公司 | 用於治療病毒感染之化合物及醫藥組合物 |
| CA2805440A1 (en) | 2010-07-26 | 2012-02-09 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Substituted biphenylene compounds and methods of use thereof for the treatment of viral diseases |
| EP2621279B1 (en) | 2010-09-29 | 2018-04-04 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Fused tetracycle derivatives and methods of use thereof for the treatment of viral diseases |
| CN103179966B (zh) | 2010-10-08 | 2017-03-15 | 诺瓦提斯公司 | 磺酰胺ns3抑制剂的维生素e制剂 |
| ES2716158T3 (es) | 2010-11-30 | 2019-06-10 | Gilead Pharmasset Llc | 2'-spiro-nucleótidos para el tratamiento de hepatitis C |
| TW201309690A (zh) | 2011-02-10 | 2013-03-01 | Idenix Pharmaceuticals Inc | 巨環絲胺酸蛋白酶抑制劑，其醫藥組合物及其於治療ｈｃｖ感染之用途 |
| WO2012107589A1 (en) | 2011-02-11 | 2012-08-16 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Methods and pharmaceutical compositions for the treatment and prevention of hcv infections |
| US9243025B2 (en) | 2011-03-31 | 2016-01-26 | Idenix Pharmaceuticals, Llc | Compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections |
| US20120252721A1 (en) | 2011-03-31 | 2012-10-04 | Idenix Pharmaceuticals, Inc. | Methods for treating drug-resistant hepatitis c virus infection with a 5,5-fused arylene or heteroarylene hepatitis c virus inhibitor |
| EP2697242B1 (en) | 2011-04-13 | 2018-10-03 | Merck Sharp & Dohme Corp. | 2'-azido substituted nucleoside derivatives and methods of use thereof for the treatment of viral diseases |
| WO2012142085A1 (en) | 2011-04-13 | 2012-10-18 | Merck Sharp & Dohme Corp. | 2'-substituted nucleoside derivatives and methods of use thereof for the treatment of viral diseases |
| WO2013033899A1 (en) | 2011-09-08 | 2013-03-14 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Substituted benzofuran compounds and methods of use thereof for the treatment of viral diseases |
| WO2013033900A1 (en) | 2011-09-08 | 2013-03-14 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Tetracyclic heterocycle compounds and methods of use thereof for the treatment of viral diseases |
| WO2013033901A1 (en) | 2011-09-08 | 2013-03-14 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Heterocyclic-substituted benzofuran derivatives and methods of use thereof for the treatment of viral diseases |
| US9403863B2 (en) | 2011-09-12 | 2016-08-02 | Idenix Pharmaceuticals Llc | Substituted carbonyloxymethylphosphoramidate compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections |
| AU2012308900A1 (en) | 2011-09-12 | 2013-05-09 | Idenix Pharmaceuticals, Inc. | Compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections |
| US20140378416A1 (en) | 2011-09-14 | 2014-12-25 | Michael P. Dwyer | Silyl-containing heterocyclic compounds and methods of use thereof for the treatment of viral diseases |
| AR089650A1 (es) | 2011-10-14 | 2014-09-10 | Idenix Pharmaceuticals Inc | Fosfatos 3,5-ciclicos sustituidos de compuestos de nucleotido de purina y composiciones farmaceuticas para el tratamiento de infecciones virales |
| US8889159B2 (en) | 2011-11-29 | 2014-11-18 | Gilead Pharmasset Llc | Compositions and methods for treating hepatitis C virus |
| US9089574B2 (en) | 2011-11-30 | 2015-07-28 | Emory University | Antiviral JAK inhibitors useful in treating or preventing retroviral and other viral infections |
| WO2013133927A1 (en) | 2012-02-13 | 2013-09-12 | Idenix Pharmaceuticals, Inc. | Pharmaceutical compositions of 2'-c-methyl-guanosine, 5'-[2-[(3-hydroxy-2,2-dimethyl-1-oxopropyl)thio]ethyl n-(phenylmethyl)phosphoramidate] |
| MD20140134A2 (ro) | 2012-05-22 | 2015-04-30 | Idenix Pharmaceuticals, Inc. | Compuşi ai D-aminoacizilor pentru tratamentul bolilor hepatice |
| WO2013177195A1 (en) | 2012-05-22 | 2013-11-28 | Idenix Pharmaceuticals, Inc. | 3',5'-cyclic phosphate prodrugs for hcv infection |
| EP2852604B1 (en) | 2012-05-22 | 2017-04-12 | Idenix Pharmaceuticals LLC | 3',5'-cyclic phosphoramidate prodrugs for hcv infection |
| ES2674980T3 (es) | 2012-10-08 | 2018-07-05 | Idenix Pharmaceuticals Llc | Análogos de 2'-cloro nucleósidos para infección por VHC |
| EP2909223B1 (en) | 2012-10-19 | 2017-03-22 | Idenix Pharmaceuticals LLC | Dinucleotide compounds for hcv infection |
| WO2014066239A1 (en) | 2012-10-22 | 2014-05-01 | Idenix Pharmaceuticals, Inc. | 2',4'-bridged nucleosides for hcv infection |
| WO2014078427A1 (en) | 2012-11-14 | 2014-05-22 | Idenix Pharmaceuticals, Inc. | D-alanine ester of rp-nucleoside analog |
| WO2014078436A1 (en) | 2012-11-14 | 2014-05-22 | Idenix Pharmaceuticals, Inc. | D-alanine ester of sp-nucleoside analog |
| US9211300B2 (en) | 2012-12-19 | 2015-12-15 | Idenix Pharmaceuticals Llc | 4′-fluoro nucleosides for the treatment of HCV |
| WO2014137930A1 (en) | 2013-03-04 | 2014-09-12 | Idenix Pharmaceuticals, Inc. | Thiophosphate nucleosides for the treatment of hcv |
| WO2014137926A1 (en) | 2013-03-04 | 2014-09-12 | Idenix Pharmaceuticals, Inc. | 3'-deoxy nucleosides for the treatment of hcv |
| EP2981542B1 (en) | 2013-04-01 | 2021-09-15 | Idenix Pharmaceuticals LLC | 2',4'-fluoro nucleosides for the treatment of hcv |
| EP3004130B1 (en) | 2013-06-05 | 2019-08-07 | Idenix Pharmaceuticals LLC. | 1',4'-thio nucleosides for the treatment of hcv |
| US20150037282A1 (en) | 2013-08-01 | 2015-02-05 | Idenix Pharmaceuticals, Inc. | D-amino acid phosphoramidate pronucleotides of halogeno pyrimidine compounds for liver disease |
| EA201690473A1 (ru) | 2013-08-27 | 2017-03-31 | ГАЙЛИД ФАРМАССЕТ ЭлЭлСи | Комбинированный состав двух противовирусных соединений |
| EP3046924A1 (en) | 2013-09-20 | 2016-07-27 | IDENIX Pharmaceuticals, Inc. | Hepatitis c virus inhibitors |
| WO2015061683A1 (en) | 2013-10-25 | 2015-04-30 | Idenix Pharmaceuticals, Inc. | D-amino acid phosphoramidate and d-alanine thiophosphoramidate pronucleotides of nucleoside compounds useful for the treatment of hcv |
| WO2015065817A1 (en) | 2013-10-30 | 2015-05-07 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Pseudopolymorphs of an hcv ns5a inhibitor and uses thereof |
| WO2015066370A1 (en) | 2013-11-01 | 2015-05-07 | Idenix Pharmaceuticals, Inc. | D-alanine phosphoramidate pronucleotides of 2'-methyl 2'-fluoro guanosine nucleoside compounds for the treatment of hcv |
| EP3074399A1 (en) | 2013-11-27 | 2016-10-05 | Idenix Pharmaceuticals LLC | 2'-dichloro and 2'-fluoro-2'-chloro nucleoside analogues for hcv infection |
| WO2015095419A1 (en) | 2013-12-18 | 2015-06-25 | Idenix Pharmaceuticals, Inc. | 4'-or nucleosides for the treatment of hcv |
| US20170135990A1 (en) | 2014-03-05 | 2017-05-18 | Idenix Pharmaceuticals Llc | Pharmaceutical compositions comprising a 5,5-fused heteroarylene flaviviridae inhibitor and their use for treating or preventing flaviviridae infection |
| WO2015134780A1 (en) | 2014-03-05 | 2015-09-11 | Idenix Pharmaceuticals, Inc. | Solid prodrug forms of 2'-chloro-2'-methyl uridine for hcv |
| WO2015134560A1 (en) | 2014-03-05 | 2015-09-11 | Idenix Pharmaceuticals, Inc. | Solid forms of a flaviviridae virus inhibitor compound and salts thereof |
| EP3131914B1 (en) | 2014-04-16 | 2023-05-10 | Idenix Pharmaceuticals LLC | 3'-substituted methyl or alkynyl nucleosides for the treatment of hcv |
| JP7164521B2 (ja) | 2016-06-21 | 2022-11-01 | オリオン・オフサルモロジー・エルエルシー | 炭素環式プロリンアミド誘導体 |
| JP7179721B2 (ja) | 2016-06-21 | 2022-11-29 | オリオン・オフサルモロジー・エルエルシー | 複素環式プロリンアミド誘導体 |
| WO2018032468A1 (en) | 2016-08-18 | 2018-02-22 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Heterocycle-substitued tetracyclic compounds and methods of use thereof for treatment of viral diseases |
| WO2018032467A1 (en) | 2016-08-18 | 2018-02-22 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Chromane-substitued tetracyclic compounds and uses thereof for treatment of viral diseases |
| WO2022265577A2 (en) * | 2021-06-15 | 2022-12-22 | Agency For Science, Technology And Research | Coronavirus enzyme modulators, methods of synthesis and uses thereof |
Family Cites Families (42)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5496927A (en) * | 1985-02-04 | 1996-03-05 | Merrell Pharmaceuticals Inc. | Peptidase inhibitors |
| ZA86746B (en) * | 1985-02-04 | 1986-09-24 | Merrell Dow Pharma | Novel peptidase inhibitors |
| WO1989004669A1 (en) | 1987-11-18 | 1989-06-01 | Chiron Corporation | Nanbv diagnostics and vaccines |
| ZA897514B (en) | 1988-10-07 | 1990-06-27 | Merrell Dow Pharma | Novel peptidase inhibitors |
| US5359138A (en) * | 1989-04-15 | 1994-10-25 | Zaidan Hojin Biseibutsu Kagaku Kenkyu Kai | Poststatin and related compounds or salts thereof |
| EP0672648B1 (en) * | 1989-04-15 | 1998-09-23 | Zaidan Hojin Biseibutsu Kagaku Kenkyu Kai | Threo (2R,3S)-3-amino-2-hydroxypentanoic acid and threo (2R,3S)-3-(p-methoxy-benzyloxycarbonyl/FMOC) amino-2-hydroxy-pentanoic acid |
| AU7675491A (en) * | 1990-04-04 | 1991-10-30 | Chiron Corporation | Hepatitis c virus protease |
| JP2804817B2 (ja) * | 1990-04-13 | 1998-09-30 | 財団法人微生物化学研究会 | ３―アミノ―２―オキソ脂肪酸誘導体の製造法 |
| JPH04149166A (ja) | 1990-10-12 | 1992-05-22 | Nippon Kayaku Co Ltd | 新規ケト酸アミド誘導体 |
| WO1992011850A2 (en) | 1990-12-28 | 1992-07-23 | Cortex Pharmaceuticals, Inc. | Use of calpain inhibitors in the inhibition and treatment of neurodegeneration |
| AU666176B2 (en) * | 1992-01-31 | 1996-02-01 | Abbott Laboratories | Mammalian expression systems for HCV proteins |
| AU4544993A (en) | 1992-06-24 | 1994-01-24 | Cortex Pharmaceuticals, Inc. | Use of calpain inhibitors in the inhibition and treatment of medical conditions associated with increased calpain activity |
| US5514694A (en) | 1992-09-21 | 1996-05-07 | Georgia Tech Research Corp | Peptidyl ketoamides |
| US5414018A (en) * | 1993-09-24 | 1995-05-09 | G. D. Searle & Co. | Alkylaminoalkyl-terminated sulfide/sulfonyl-containing propargyl amino-diol compounds for treatment of hypertension |
| US5843450A (en) * | 1994-02-14 | 1998-12-01 | Abbott Laboratories | Hepatitis GB Virus synthetic peptides and uses thereof |
| IT1272179B (it) * | 1994-02-23 | 1997-06-16 | Angeletti P Ist Richerche Bio | Metodologia per riprodurre in vitro l'attivita' proteolitica della proteasi ns3 del virus hcv. |
| US5500208A (en) | 1994-06-07 | 1996-03-19 | The Procter & Gamble Company | Oral compositions comprising a novel tripeptide |
| US5843752A (en) | 1995-05-12 | 1998-12-01 | Schering Corporation | Soluble active hepatitis C virus protease |
| US5919765A (en) | 1995-06-07 | 1999-07-06 | Cor Therapeutics, Inc. | Inhibitors of factor XA |
| GB9517022D0 (en) | 1995-08-19 | 1995-10-25 | Glaxo Group Ltd | Medicaments |
| US5763576A (en) * | 1995-10-06 | 1998-06-09 | Georgia Tech Research Corp. | Tetrapeptide α-ketoamides |
| IL120310A (en) | 1996-03-01 | 2002-02-10 | Akzo Nobel Nv | Serine protease inhibitors and pharmaceuticals containing them |
| US5633388A (en) * | 1996-03-29 | 1997-05-27 | Viropharma Incorporated | Compounds, compositions and methods for treatment of hepatitis C |
| IT1285158B1 (it) | 1996-09-17 | 1998-06-03 | Angeletti P Ist Richerche Bio | Polipeptidi solubili con l'attivita' di serino-proteasi di ns3 del virus dell'epatite c, e procedimento per la loro preparazione e il |
| ATE229066T1 (de) * | 1996-09-24 | 2002-12-15 | Procter & Gamble | Flüssige reinigungsmittel, die proteolytisches enzym, peptidaldehyd und eine borsäurequelle enthalten |
| US5922757A (en) | 1996-09-30 | 1999-07-13 | The Regents Of The University Of California | Treatment and prevention of hepatic disorders |
| NZ335276A (en) * | 1996-10-18 | 2000-09-29 | Vertex Pharma | Inhibitors of serine proteases, particularly hepatitis C virus (HCV) NS3 (Non Structural Protein 3) protease |
| GB9623908D0 (en) | 1996-11-18 | 1997-01-08 | Hoffmann La Roche | Amino acid derivatives |
| US6291640B1 (en) | 1996-12-27 | 2001-09-18 | Boehringer Ingelheim Ltd. | Peptidomimetic inhibitors of the human cytomegalovirus protease |
| WO1998037180A2 (en) | 1997-02-22 | 1998-08-27 | Abbott Laboratories | Hcv fusion protease and polynucleotide encoding same |
| PT1012180E (pt) | 1997-08-11 | 2005-04-29 | Boehringer Ingelheim Ca Ltd | Analogos de peptidos inibidores da hepatite c |
| IL134232A0 (en) | 1997-08-11 | 2001-04-30 | Boehringer Ingelheim Ca Ltd | Hepatitis c inhibitor peptides |
| GB9809664D0 (en) * | 1998-05-06 | 1998-07-01 | Hoffmann La Roche | a-Ketoamide derivatives |
| AU4556999A (en) | 1998-06-09 | 1999-12-30 | Neurogen Corporation | Pyrido[2,3-b]indolizine derivatives and aza analogues thereof; crf1 specific ligands |
| GB9812523D0 (en) | 1998-06-10 | 1998-08-05 | Angeletti P Ist Richerche Bio | Peptide inhibitors of hepatitis c virus ns3 protease |
| US6576613B1 (en) | 1998-07-24 | 2003-06-10 | Corvas International, Inc. | Title inhibitors of urokinase |
| AR022061A1 (es) | 1998-08-10 | 2002-09-04 | Boehringer Ingelheim Ca Ltd | Peptidos inhibidores de la hepatitis c, una composicion farmaceutica que los contiene, el uso de los mismos para preparar una composicion farmaceutica, el uso de un producto intermedio para la preparacion de estos peptidos y un procedimiento para la preparacion de un peptido analogo de los mismos. |
| US6323180B1 (en) | 1998-08-10 | 2001-11-27 | Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd | Hepatitis C inhibitor tri-peptides |
| JP2000256396A (ja) | 1999-03-03 | 2000-09-19 | Dainippon Pharmaceut Co Ltd | 複素環式化合物およびその中間体ならびにエラスターゼ阻害剤 |
| AU2055301A (en) * | 1999-12-03 | 2001-06-12 | Bristol-Myers Squibb Pharma Company | Alpha-ketoamide inhibitors of hepatitis c virus ns3 protease |
| AU2001251165A1 (en) | 2000-04-03 | 2001-10-15 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Inhibitors of serine proteases, particularly hepatitis c virus ns3 protease |
| SV2003000617A (es) | 2000-08-31 | 2003-01-13 | Lilly Co Eli | Inhibidores de la proteasa peptidomimetica ref. x-14912m |
-
2001
- 2001-07-19 SK SK74-2003A patent/SK742003A3/sk unknown
- 2001-07-19 WO PCT/US2001/022813 patent/WO2002008187A1/en not_active Ceased
- 2001-07-19 CA CA002410682A patent/CA2410682A1/en not_active Abandoned
- 2001-07-19 EP EP01959041A patent/EP1303487A4/en not_active Withdrawn
- 2001-07-19 JP JP2002514094A patent/JP4452441B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2001-07-19 HU HU0303358A patent/HUP0303358A3/hu unknown
- 2001-07-19 BR BR0112666-0A patent/BR0112666A/pt not_active IP Right Cessation
- 2001-07-19 NZ NZ523781A patent/NZ523781A/en unknown
- 2001-07-19 AU AU8063701A patent/AU8063701A/xx not_active Withdrawn
- 2001-07-19 MX MXPA03000626A patent/MXPA03000626A/es unknown
- 2001-07-19 US US09/909,012 patent/US7169760B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-07-19 RU RU2003105221/04A patent/RU2003105221A/ru not_active Application Discontinuation
- 2001-07-19 PE PE2001000733A patent/PE20020266A1/es not_active Application Discontinuation
- 2001-07-19 IL IL15366901A patent/IL153669A0/xx unknown
- 2001-07-19 PL PL01365695A patent/PL365695A1/xx not_active Application Discontinuation
- 2001-07-19 CN CN01813921A patent/CN1446201A/zh active Pending
- 2001-07-19 KR KR10-2003-7000861A patent/KR20030081297A/ko not_active Ceased
- 2001-07-19 CZ CZ2003195A patent/CZ2003195A3/cs unknown
- 2001-07-20 AR ARP010103451A patent/AR030249A1/es unknown
-
2002
- 2002-12-19 ZA ZA200210311A patent/ZA200210311B/en unknown
-
2003
- 2003-01-20 EC EC2003004439A patent/ECSP034439A/es unknown
- 2003-01-20 NO NO20030271A patent/NO20030271L/no not_active Application Discontinuation
-
2005
- 2005-03-24 US US11/089,192 patent/US7595299B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2009
- 2009-08-06 JP JP2009183355A patent/JP2009292832A/ja not_active Withdrawn
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2009292832A (ja) | 2009-12-17 |
| MXPA03000626A (es) | 2004-07-30 |
| AU8063701A (en) | 2002-02-05 |
| EP1303487A4 (en) | 2005-11-23 |
| JP4452441B2 (ja) | 2010-04-21 |
| RU2003105221A (ru) | 2004-09-20 |
| BR0112666A (pt) | 2003-06-10 |
| US20020160962A1 (en) | 2002-10-31 |
| NZ523781A (en) | 2004-10-29 |
| CA2410682A1 (en) | 2002-01-31 |
| CN1446201A (zh) | 2003-10-01 |
| HUP0303358A3 (en) | 2005-10-28 |
| PE20020266A1 (es) | 2002-05-11 |
| WO2002008187A1 (en) | 2002-01-31 |
| SK742003A3 (en) | 2003-06-03 |
| ZA200210311B (en) | 2004-03-19 |
| NO20030271D0 (no) | 2003-01-20 |
| JP2004513881A (ja) | 2004-05-13 |
| PL365695A1 (en) | 2005-01-10 |
| NO20030271L (no) | 2003-03-18 |
| ECSP034439A (es) | 2003-03-10 |
| US20050176648A1 (en) | 2005-08-11 |
| AR030249A1 (es) | 2003-08-13 |
| EP1303487A1 (en) | 2003-04-23 |
| US7595299B2 (en) | 2009-09-29 |
| IL153669A0 (en) | 2003-07-06 |
| US7169760B2 (en) | 2007-01-30 |
| KR20030081297A (ko) | 2003-10-17 |
| WO2002008187A9 (en) | 2003-01-03 |
| HUP0303358A2 (hu) | 2004-01-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP4452441B2 (ja) | Ｃ型肝炎ウイルスのｎｓ３−セリンプロテアーゼ阻害剤としての新規ペプチド | |
| EP1301486B1 (en) | Imidazolidinones as ns3-serine protease inhibitors of hepatitis c virus | |
| JP4748912B2 (ja) | アルキルおよびアリールアラニンｐ２部分を含むｃ型肝炎ウイルスに対する大員環ｎｓ３−セリンプロテアーゼ阻害剤 | |
| US6800434B2 (en) | Peptides as NS3-serine protease inhibitors of hepatitis C virus | |
| US6846802B2 (en) | Macrocyclic NS3-serine protease inhibitors of hepatitis C virus comprising N-cyclic P2 moieties | |
| JP4298289B2 (ja) | Ｃ型肝炎ウイルスのｎｓ３−セリンプロテアーゼ阻害剤としての新規ペプチド | |
| EP1343807B1 (en) | Diaryl peptides as ns3-serine protease inhibitors of hepatits c virus | |
| AU2001280637B2 (en) | Novel peptides as NS3-serine protease inhibitors of hepatitis C virus | |
| AU2001280637A1 (en) | Novel peptides as NS3-serine protease inhibitors of hepatitis C virus |