DD274423A5

DD274423A5 - Verfahren zur herstellung von epipodophyllotoxinglucosid-4'-phosphat derivaten

Info

Publication number: DD274423A5
Application number: DD88318652A
Authority: DD
Inventors: Mark G Saulnier; Peter D Senter; John F Kadow
Original assignee: ��`��@��k��
Priority date: 1987-08-04
Filing date: 1988-08-03
Publication date: 1989-12-20
Also published as: IE61040B1; JPH0699465B2; FI883596A7; CZ541288A3; SK541288A3; MY104321A; NL192683B; US4904768A; NL192683C; IL87290A; NO170284C; NO170284B; DK169344B1; DK434088A; NL8801934A; CZ286893B6; DE3826562C2; KR900006230B1; MX173843B; DE3826562A1

Abstract

Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von neuartigen 4-Phosphatderivaten von Epipodophyllotoxinglucosiden. Die ueber das erfindungsgemaesse Verfahren hergestellten Verbindungen sind als Antitumormittel therapeutisch anwendbar.

Description

-I - ⁴ / ι 4 13

2744 2

Anwendungsgebiet der Erfindung

Die vorliegende Erfindung betrifft Verfahren zur Herstellung von neuartigen 4'-Phosphatderivaten von Epipodophyllotoxinglucosiden.

Charakteristik des bekannten Standes der Technik Etoposid (VP-16, I) und Teniposid (VM-26, II) sind klinisch anwendbare Antikrebsmittel, welche von natürlich vorkommendem Lignan, Podophyllotoxin (III), abgeleitet sind. Etopos:.d und Teniposid werden zu einer Verbindungsklasse gerechnet, welche auch als 4'-Demethylepipodophyllotoxinglucoside bezeichnet wird. Etoposid und Teniposid eignen sich zur Behandlung einer Vielzahl von Krebsarten einschließlich des Hoden-, kleinzelligen Lungen-, Eierstock -/ Brust-, Schilddrüsen-, Harnblasen r/Gehirnkrebses sowie der nicht-lymphatischen Leukämie und der Hodgkin¹sehen Krankheit.

Verbindungen I und II und deren Herstellungsverfahren sind im US-Patent 3 408 441 sowie im US-Patent 3 524 844 beschrieben. Die darin beschriebenen Verbindungen, insbesondere Etoposid und Teniposid, dienen als Ausgangsinaterial zur Herstellung der erfindungsgemäßen Epipodophyllotoxinglucosid-4·-phosphatderivate.

00»

IR= CH₂ II R¹ = 2-Thienyl

Die Phosphorylierung therapeutischer Verbindungen, welche eine Hydroxygruppe enthalten, ist ein geeignetes Hilfsmittel zur Maskierung der pharmakologischen Wirkung. Die phosphorylierten Derivate werden dabei in vivo durch eine Phosphatase gespalten, wodurch das aktive Ausgangsmolekül freigesetzt wird. Eine kurze Diskussion über die Verwendung von Phosphaten als potentielle Prodrugs ist in folgendem Ubersichtsartikel enthalten: "Rational for Design of Biologically Reversible Drug Derivatives: Prodrugs" (Sinkula und Yalkowsky, J. Pharm. Sei., 1975, 64:181-210 bei 189-191. Beispiele für Phosphate bekannter Antitumormittel sind Camptothecin (Japan Kokai 21-95,394 und 21-95,393, Dersent Abst. No. 87-281016 und 87-281015) und Daurorubicin (US-Patent 4 185 111).

Das Podophyllotoxinphosphat-dinatriumsalz IV wurde von Seligman et al. hergestellt. Dieses Phosphat wurde jedoch nicht von prostatischer saurer Phosphatase hydrolysiert und zeigte außerdem gegenüber nicht-derivatisiertem Podophyllotoxin keine verminderte Toxizität (Cancer Chemotherapy Reports Teil Γ, 1975, 59:233-242'.

IV

Die vorliegende Erfindung beschreibt Verfahren zur Herstellung von Phosphatestern der 4'-Demethylepipodophyllotoxinglucoside, welche aktive Antitumormittel darstellen. Insbesondere die Dihydrogenphosphate von 4'-Demethylepipodophyllotoxinglucosiden und deren Salze sind stark wasserlöslich und besitzen somit einen überlegenen pharmazeutischen Vorteil gegenüber anderen therapeutischen Mitteln dieser Klasse, wie Etoposid und Teniposid, welche nur geringfügig wasserlöslich sind.

Ziel der Erfindung

Ziel der Erfindung ist die Bereitstellung von Epipodophyllotoxinglucosid-4'-phosphatderivaten, welche als Antitumormittel therapeutisch anwendbar sind.

Darlegung des Wesens der Erfindung

Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, ein Verfahren zur Herstellung von Epipodophyllotoxinglucosid-4'-phosphatderivaten zur Verfügung zu stellen.

Die vorliegende Erfindung beschreibt somit 4'-Phosphatderivate von 4'-Demethylepipodophyllotoxinglucosiden der allgemeinen Formel V sowie deren pharmazeutisch verträgliche Salze:

worin R für Wasserstoff steht und R ausgewählt ist unter

(C_1-10)-Alkyl, (C_2-10)-Alkenyl, (C_5-6)-Cycloalkyl, 2-Furyl, 2-Thienyl, (C₆^₁₀)-Aryl, (C_7-14)-Aralkyl und (C_3-14)-Aralkenyl, worin jeder aromatische Ring unsubstituiert oder mit einer

ode»- rr.-,nreren Gruppen ausgewählt unter Halo, (C₁ „)-Alkyl,

1 — ο

(C_{1 o})-Alkoxy, Hydroxy, Nitro und Amino, substituiert sein

1 6 kann; oder R und R jeweils für einen (C_{1 Q})-Alkylrest

1 fi J-" 0

stehen; oder R und R zusammen mit dem Kohlenstoffatom, an welches sie gebunden sind, aine (Cc_-,)-Cycloalkylgruppe

7 8

bilden; X für Sauerstoff oder Schwefel steht; R und R jeweils unabhängig voneinander ausgewählt sind unter Wasserstoff, (C_1-5)-Alkyl, A-substituierteo (C_1-5)-Alkyl, (C_3-6)-Cycloalkyl, Α-substituiertes (C₃₆)-Cycloalkyl, (C_fi ι₀)-Aryl, Α-substituiertes Aryl, alkylsubstituiertes Aryl, (C_7-14)-Aralkyl, Α-substituiertes Aralkyl und

alkylsubstituiertes Aralkyl; worin die A-Substituenten eine oder mehrere Gruppen, ausgewählt unter Hydroxy, Alkoxy, Alkanoyloxy, Cyano, Amino, Alkylamino, Dialkylamin, Carboxy, Alkylthio, Mercapto, Mercaptothio, Nitropyridyldisulfid, Alkanoylamino, Alkanoyl, Carbamoyl, Nitro und Halo, darstellen.

Die Salze der Verbindungen V beinhalten sowohl monoanionische als auch dianionische Salze. Das Kation kann ein Metallion der Alkalimetall- oder Erdalkalimetallgruppe

] oder ein anderes herkömmliches Metallion oder eine organische stickstoffhaltige Gruppe, wie eine Ammonium-, Mono-, Dioder TrialkYlammoniumgruppe oder eine Pyridiniumgruppe sein. Das Kation wird vorzugsweise ausgewählt unte.r Natrium, Kalium, Lithium, Cäsium, Magnesium,- Calcium, Aluminium, Ammonium und Mono-, Di- und Trialkylammonium. In einer bevorzugter: Ausführungsform werden Verbindungen der allgemeinen

7 8 Formel V, worin R und R jeweils für Wasserstoff stehen, sowie deren pharmazeutisch verträgliche Salze hergestellt. Die a™ meisten bevorzugte Ausftlhrungsform stellen Etoposid-4'-dihydrogenphosphat und-thiophosphat sowie deren jeweilige Dinatriumsalze VIa und VIb dar.

15 20

V! a: x « 0 bi X * t

Eine weitere bevorzugte Ausführungsform beinnaltet Verbin-

7 8 düngen der allgemeinen Formel V, worin R und R identisch sind und aus der Gruppe folgender Reste ausgewählt sind:

2,2,2-Triiialoethyl-, 2-Cyanoethyl-, (C_1-5)-Alkyl-, Phenyl- und Phenylalkyl-Rest, worin der Phenylring gegebenenfalls alkyl-, halogen- oder nitro-substituiert ist.

Die vorliegende Erfindung betrifft außerdem Antitumorphosphoramidatderivate der allgemeinen Formel VII sowie deren pharmazeutisch verträgliche Salze:

35

27Ή

H,CO

VlI

worin R , R und X der oben gegebenen Definition entsprechen, Y für Chlor, OH oder NR⁴R⁵ steht; R², R³, R⁴ und R⁵ jeweils unabhängig voneinander ausgewählt sind unter Wasserstoff, (C₁₅)-Alkyl,(C_2-5)-Alkenyl, (C_3-6)-Cycloalkyl, Α-substituiertes (C,__ς)-Alkyl, Α-substituiertes (C₂₁J-Alkenyl, Α-substituiertes (C₁ ,)-Cycloalkyl; oder worin

2 3 R., R und das Stickstoffatoi, an welches sie gebunden sind, einen 3- bis 6-gliedrigen Ring darstellen; oder worin

4 5 R ^und R und das Stickstoffatom, an welches sie gebunden sind, einen 3- bis 6-gliedrigen Ring darstellen; worin die A-Substituenten der oben gegebenen Definition entsprechen.

Die vorliegende Erfindung betrifft außerdem Dichlorphosphat-Zwischenprodukte der allgemeinen Formel VIII, worin R , R und X der oben gegebenen Definition entsprechen. Diese Verbindungen eignen sich zur Herstellung von Verbindungen der allgemeinen Formel V.

-7-

10

VIII

15

Die Erfindung betrifft außerdem ein Verfahren zur Herstellung

7 8 von Verbindungen der allgemeinen Formel V, worin R und R jeweils ein Wasserstoffatom bedeuten sowie die Herstellung der pharmazeutisch verträglichen Salze davon; umfassend

(a) die Umsetzung einer Verbindung der allgemeinen Formel IX

20

26

IX

30

zu einer Verbindung der allgemeinen Formel X, worin R , R und X der oben gegebenen Definition entsprechen und G eine Phosphatschutzgruppe bedeutet;

35

(b) Entfernung der Phosphatschutzgruppe; und

(c) gegebenenfalls eine weitere Umsetzung des Produktes aus Stufe (b/ zu einem pharmazeutisch verträglichen Salz.

Nicht beschränkende Beispiele für Phosphatschutzgruppen sind Reste entsprechend der oben gegebenen Definition für R mit Ausnahme von Wasserstoff.

Sofern nicht anders angegeben/ steht "Alkyl" für gerade oder verzweigte Kohlenstoffketten mit vorzugsweise 1 bis 6/ insbesondere 1 bis 4 Kohlenstoffatomen; "Halo" beinhaltet Brom/ Chlor/ Fluor und Jod; "Etopofos" steht für die Verbindung Etoposid-4'-phosphatdinatriumsalz (d.h. Verbindung VIa). Aryl steht vorzugsweise für Phenyl.

Die Phenolgruppe von 4-Demethylepipodophyllotoxinglucosiden kann mit Phosphoroxychlorid und Thiophosphorylchlorid unter Bildung des entsprechenden Dichlorphosphates bzw. Dichlorthiophosphates (Formel VIII) phosphoryliert werden. Die Phosphorylierungsreaktion wird in einem geeigneten wasserfreien organischen Lösungsmittel, beispielsweise Acetonitril und vorzugsweise in Gegenwart einer tertiären Aminbase, z.B. N/N-Diisopropylethylamin, durchgeführt. Der Reaktionsverlauf kann durch Dünnschichtchromatographie (TLC) verfolgt werden, wobei die optimale Reaktionszeit über die Entstehung des Produktes oder über das Abreagieren des Ausgangsmaterials, oder über beide Bestimmungen, abgeschätzt werden kann. Erfahrungsgemäß beträgt die Reaktionszeit zwischen 4 und 72 h.

Die Länge der erforderlichen Reaktionsze: t scheint in erster Linie von der Qualität des eingesetzten Phosphorylierungsmittels abhängig zu sein.

Die 4'-Dichlorophosphate der allgemeinen Formel VIII stellen vielseitige Zwischenprodukte dar, welche mit Nukleophilen zu einer Vielzahl von Phosphat- und Thiophosphatderivaten weiter umgesetzt werden können. Die Zwischenprodukte kann man somit zu den Phosphaten hydrolysieren, wobei man in

lü Gegenwart einer Base die Phosphatsalze erhält. Behandelt man z.B. VIII mit überschüssiger wäßriger Natriumbicarbonatlösung, so erhält man das entsprechende 4'-Piiosphat-dinatriumsalz bzw. das 4'-Thiophosphat-dinatriumsalz. Bicarbonate anderer Kationen, wie Kalium und Ammonium, kann man ebenso zur Herstellung der entsprechenden Salze verwenden. Die Dichlorphosphat-Zwischenstufe VIII kann mit Aminen unter Bildung der entsprechenden Phosphordiaroidate oder Chlorphosphormonoamidate umgesetzt werden. Nicht beschränkende Beispiele für geeignete Amine sind Ammoniak, primäre Amine, ^wi^e Ethylamin, Chlorethylamin, Allylamin, Dimethylaminopropylamin, Hydroxyethylamin, Cyclohexylamin und Aminocyclohexancl; sowie sekundäre Amine, wie Diethylamin, Piperidin.. Ethylmethylamin, Methylaminoethanol, Ethylbutylamin und ähnliche. Die Menge des eingesetzten Amins, bezogen auf Epipodophyllotoxin-dichlorphosphat kann so gewählt werden, daß das eine oder das andere Reaktionsprodukt bevorzugt entsteht. Wenn z.B. ein großer Überschuß an Amin bezüglich Epipodophyllotoxin verwendet wird, erhält man das syiuii sche Phosphordiamidat, d.h. Verbindungen der allgemeinen

2 3

Formel VII, worin Y für NR R steht; das Chlorphosphormonoamidat, d.h. Verbindungen der allgemeinen Formel VII, worin Y ftfr Chlor steht, können dadurch hergestellt werden, daß man die Menge des eingesetzten Amins kontrolliert. Das Chlorphosphormonoamidat kann unter Bildung von Verbindüngen der allgemeinen Formel VII oder deren Salzen, sowie

10

Y für OH steht, hydrolysiert werden, oder man setzt es mit einem anderen Amin um, wobei das unsymmetrische Phosphordiamidat, d.h. Verbindunaen der allgemeinen Formel VIl,

4 5 " 2 1

worin Y für NR R steht, und ungleich NR R ist, entsteht.

Das oben beschriebene Verfahren ist im folgenden Reaktionsschema beschrieben.

Überschuß

R²R³NH

OP(X)

H W*R³

Hydrolyse

H₃C O^ Y^NjCH₃ OP(X)CIj

H₃CO

OP X)(OH),

R⁵R^NH

OP(X)

H₃CO

Hydrolyse

3CH₃ OP(XJ

H₃CO'

OCH₃

Ci'

ho'

Phosphattriester sind vorbindungen der allgemeinen Formel V,

7 8 worin R und R ke^n Wasserstoffatom bedeuten und können

durch Umsetzung von 4'-Demethylepipodophyllotoxinglucosid mit einem Halophosphat-diester (d.h. HaI-P(X)(OR⁷)(OR⁸)) δ gebildet werden. Es wurde gefunden, daß diese Reaktion am günstigsten in Acetonitril sowie in Gegenwart einer organischen Trialkylaminbase durchgeführt wird. Die bevorzugte Base ist Diiscpropylethylamin. Es wird mindestens ein Äquivalent des Halophosphates und der Arninbase eingesetzt, bei den Verbindungen werden aber vorzugsweise in molaren Äquivalenten und in geringem Überschuß bezüglich des Epipodophyllotoxinglucosides verwendet. Die Reaktion kann bei jeder beliebigen Temperatur, welche zur Produktbildung führt erfolgen; jedoch scheinen geringfügig erhöhte

Ί5 Temperaturen (d.h. 30 - 4O⁰C) die Reaktion zu begünstigen, deren Ende erst nach mehreren Tagen erreicht werden kann. Symmetrisch« Halophosphatdiester (d.h. R = R^c) können auf herkömmliche Weise aus dem Alkohol und 2.B. Phosphorylchiorid hergestellt werden, während unsymmetrische Diester

7 8 (d.h. R φ R ) aus dem Alkohol und dem Dihalophosphatester hergestellt werden. Es ist außerdem möcjlich, Phosphattriester auf anderen Wegen herzustsllen, z.B. indem man das Phenol in den entsprechenden Phosphitester, z.B. durch Umsetzung mit einem Reagens, wie (PhCH-O) ~PN (i-pr).,, überführt und anschließend das Phosphat unter Verwendung von z.B. m-Chlorperbenzoesäure, zum Phosphatester oxidiert.

Phosphattriester können auch als Zwischenstufen zur Herstellung von Verbindungen der allgemeinen Formel V sowie deren Salzen dienen. So erhält man z.B. das Dihydroxyphosphat (V, P⁷ = R⁸ = H), wenn der Diphehylester (V, R⁷ = R⁸ = Phenyl) katalytisch hydrogeniert wird. Nicht begrenzende Beispiele für andere geeignete Schutzgruppen sind 2,2,2-Trichlorethyl, Benzyl, Cyanoethyl, p-nitrosubstituiertes Phenyl, Benzyl, Phenethyl und p-Bromphenyl. Die Dihydroxyphosphate (V,

7 8 R = R = H) werden durch Umsetzung mit einer geeigneten Base, z.B. Natriumbicarbonat, Ammoniumbicarbonat oder organischen Aminen in die entsprechenden basischen Salze übergeführt. Die Salze können auch dadurch hergestellt werden, daß man das Hydroxyphosphat über eine Säule mit einem Austauscherharz, welches das gewünschte Kation enthält, eluiert.

Obwohl erfindungsgemäß Phosphoroxychlorid/ Halophosphatdiester und die entsprechenden schwefelanalogen Verbindungen als Phosphorylierungsmittel verwendet werden, ist es offensichtlich, daß auch andere zur Phosphorylierung des Phenols geeignete Phosphorylierungsmittel eingesetzt werden können, wobei geeignete Reaktionsbedingungen sowie ein geeignetes Medium entsprechend dem jeweiligen Phosphorylierungsmittel/ ausgewählt werden. Der Ubersichtsartikel "Current Methods of Phosphorylation of Biological Molecules" (Synthesis, 1977, 737-52) beschreibt weitere Beispiele für Phosphorylierugnsmittel

20

Biologische Eigenschaften

Repräsentative Verbindungen der vorliegenden Erfindung wurden auf ihre Antitumoraktivität gegen transplantierbare Mäuse-P388-Leukämie getestet. In allen Experimenten wurden weibliche CDF.-Mäuse verwendet, welchen ein Tumorinokulum von 10 PSee-Mäuseleukämie-Asciteszellen implantiert wurde. In Experimenten mit Etoposid-4'-phosphat, dessen Dinatriumsalz und Etoposid-4'-thiophosphat-dinatriumsalz erfolgte Tumorimplantation und Medikamentenbehandlung jeweils intravenös. Bei allen anderen Experimenten erfolgte Tumorimplantation und Medikamentenbehandlung intraperitoneal. Die positive Kontrolle, nämlich Etoposid, wurde jeweils intraperitoneal verabreicht. Die Versuchsdauer betrug 28 - 46 Tage, wobei am Ende dieser Zeit die Anzahl der lebenden Tiere notiart

13

wurde. Die Antitumoraktivität wird in % T/OWerten ausgedrückt, welche das Verhältnis von mittlerer Uberlebensdauer (MST) der medikamentenbehandelten Gruppe zur MST der saline-behandelten Kontrollgruppe darstellt. Einer Verbindung mit einem % T/C-Wert größer als 125 wird im allgemeinen eine signifikante Antitumoraktivität im P388-Test zugeordnet. Tabelle I zeigt die Ergebnisse der oben beschriebenen Untersuchung; es sind jeweils die maxiTalen % T/C-Werte und die jeweils wirksame Dosis angegeben.

	Dosis* (mg/kg/inj)	TABELLE I	MST(d) %	IP IP	29,0 20,5	T/C
	Intravenös		implantierte Tumorzellen	IP IP	18,0 21,5
Antitumoraktivität	140 50	gegen Mäuse-P388-Leukämie	IV IP	IP IP	24,5 29,5	363 256
Verbindung aus	200 100	Verabreichung	IP IP	IP IP	rumorzellen	225 269
	125 100	IV IP	16,5 25,0	306 369
Beispiel 1 (Etoposid)	Intraperitoneal implantierte '	15,5 27,0
Beispiel 4 (Etoposid)	240 60	25,0 26,0	165 250
Beispiel 8 (Etoposid)	200 100	19,5 24,0	155 270
	240 100		250 260
Beispiel 2 (Etoposid)	150 100		217 267
Beispiel 3 (Etoposid)
Beispiel 7 (Etoposid)
Beispiel 9 (Etoposid)

*Das Medikament wurde im Falle fehlender zusätzlicher Angaben am Tag 5 und 8 verabreicht (Tag 1 ist der Tag der Tumorimplantation).

Für die erfindungsgemäßen Antitumorverbindungen konnte eine Aktivität gegen transplantierte Tumore in Versuchstieren gezeigt werden. Insbesondere die Verbindung der allgemeinen Formel VIa ("Etopofos") zeigte im P388-Test eine deutlich höhere Antitumoraktivität als Etoposid. Dieses selektive Mittel ist ein stark wasserlösliches Prodrug , zeigt in vitro verminderte Antitumoraktivität und wird durch alkalische Phosphatase rasch gespalten, wobei Etoposid freigesetzt wird. Das freigesetzte Etoposid besitzt im Vergleich zu normalem Etoposid identische Cytotoxizitätswerte.

Die vorliegende Erfindung beschreibt dementsprechend ein Verfahren zur Inhibierung von Tumoren bei Säugern einschließlich des Menschen, unter Verabreichung einer wirksamen tumorinhibierenden Menge einer Antitumorverbindung der allgemeinen Formel V oder VII an den tumorerkrankten Patienten. Hierzu kann das Medikament auf herkömmliche Weise verabreicht werden. Nicht limitierende Beispiele hierfür sind eine intravenöse, intramuskuläre, intratumorale, intraarterielle, intralymphatische und orale Verabreichung.

Die vorliegende Erfindung betrifft außerdem ein pharmazeutisches Mittel, welches mindestens eine Verbindung der allgemeinen Formel V oder VII sowie einen pharmazeutisch verträglichen Tracer umfaßt. Das Antitumormittel kann in jeder pharmazeutischen Form vorliegen, welche sich für die gewünschte Verabreichungsmethode eignet. Beispiele für solche Mittel beinhalten feste Mittel für eine orale Verabreichung, wie Tabletten, Kapseln, Pillen, Pulver und Granula, flüssige Mittel zur oralen Verabreichung, wie Lösungen, Suspensionen, Sirups oder Elixiere, und Präparate zur parenteralen Verabreichung, wie sterile Lösungen, Suspensionen oder Emulsionen. Diese Mittel können auch in Form steriler Feststoffe herge-

stellt werden, welche in sterilem Wasser, physiologischer Saline oder irgendeinem anderen sterilen injizierbaren Medium unmittelbar vor Gebrauch gelöst werden.

Optimale Dosierungs- und Verabreichungsbedingungen für einen bestimmten Patienten können vom Fachmann ohne Schwierigkeiten bestimmt werden. In diesem Zusammenhang ist darauf hinzuweisen, daß die wirklich eingesetzt«! Dosis abhängig ist von der jeweiligen Formulierung des Mittels, von der verwendeten Verbindung, von der Art der Verabreichung sowie vom behandelten Organ, vom Patienten und von der Krankheit. Eine Vielzahl von Faktoren, welche die Wirkung des Medikaments beeinflussen, wie Alter, Gewicht, Geschlecht, Ernährung, Verabreichungszeit, Verabreichungnart, Ausscheidungsrate, Zustand des Patienten, Medikamentenkombinationen, Reaktionsempfindlichkeiten und Schwere der Erkrankung, sind zu berücksichtigen.

Die folgenden nicht limitierenden Beispiele dienen der Veranschaulichung der vorliegenden Erfindung.

Ausführungsbeispiele

In den folgenden Beispielen wurden die Protonen und kohlenstoffkernmagnetischen Resonanz(NMR)-Spektren (Verwendung von CDCl- oder D-O als interner Standard) und Phosphor(NMR)-Spektren (unter Verwendung von 85%iger wäßriger H₃PO₄ als externe Referenz) auf einem Bruker-WM360-Spektrometer aufgenommen. Infrarotsprektren (IR) wurde auf einem Perkin-Elmer 1800-Fourier-Transform-Infrarotspektrometer bestimmt. ,"Flash Chromatographie" bezeichnet das Verfahren beschrieben von W.C. Still; M.Xahn; A.Mitra; "J. Org. Chem.", 1978, 43, 2923, und wurde unter Verwendung von E. Merck Silikagel (230-400 mesh) durchgeführt. Reverse phase-Chromatographie wurde bei Stickstoff-

druck unter Vervendung einer C\8 (Octadecylsilan)-Silikagel-Säule (40 - μπ\ Diameter, J.T. Baker supplier) durchgeführt.

Beispiel 1 Etoposid-4'-phosphat-dinatriurrtsalz (Verbindung VIa)

Eine magnetisch gerührte Suspension von Etoposid (2,30 g, 3,91 mmol) in trockenem Acetonitril (210 ml) wird unter nahezu vollständiger Lösuno gerührt. Die Lösung wird auf Raumtemperatur abgekühlt und mit N,N-Diisopropylethylamin (2,36 ml, 13,5 mmol) versetzt. Das Gemisch wird anschließend auf O⁰C abgekühlt und über eine Spritze innerhalb von 30 Sek. mit POCl₃ (666 mg, 4,34 mmol) versetzt. Die Temperatur des Gemischs läßt man innerhalb von 2 - 3 h langsam auf Raumtemperatur steigen und rührt weitere 63 h bei Raumtemperatur. Anschließend werden 20 Vol.-% des Ansatzes entnommen und mit Diethylamin gemäß Beispiel 2 behandelt. Der übrige Ansatz wird mit einer Natriumbicarbonatlösung (6,0 g, 71,4 mmol) in deionisiertem Wasser (HO ml) umgesetzt, das Gemisch wird bei Raumtemperatur 80 min lang gerührt und anschließend zwischen gesättigtem wäßrigen Natriumbicarbonat (20 ml) deionisiertem Wasser (125 ml) und Ethylacetat (350 ml) partitioniert.

Die organische Phase wird nochmals mit deionisiertem Wasser (1 χ 50 ml) extrahiert und anschließend werden die vereinigten wäßrigen Phasen nochmals mit Ethylacetat (250 inl) gewaschen. Anschließend wird bei Raumtemperatur 1 h lang ein Vakuum angelegt (0,5 mm Hg), um die Lösungsmittel zu entfernen. Der wäßrige Teil wird auf eine Silikagel-gebundene Octadecylsilan-Säule (0-4 cm» Höhe=15 cm), gepackt in Methanol und äquilibriert mit H~O, aufgetragen.

Nachdem die gesamte wäßrige Phase

überführt wurde, wird die Säule mit Wasser (175 ml) zur Entfernung der anorganischen Salze gewaschen. Anschließend

274/23

wird das Produkt mit 4:1 H-OtCH₃OH eluiert. Durch Aufkonzentrieren der Lösung bei 0,5 Torr erhält man 744 mg (36 %) der reinen Titelverbindung in Form eines farblosen Feststoffs. Eine alternativ dazu durchgeführte Lyophilisierung ergibt die Titelverbindung in Form eines flockigen Feststoffes niedriger Dichte.

IR (KBr) 3426, 1775, 1593, 1505, 1486, 1337, 1239, 1191, 1122, 1078, 1034, 983, 927, 888_t 876, 851, 840, 697, 684, 664, 547 cm"¹.

360 MHz ¹H NMR (D₂O) δ 6.93 (s,lH), 6.59 (s,lH), 6.27 (s,2H), 5.93 (d,2H), 5.09 (d,}H,J=2.8Hz), 4.83 (q,lH,J=5.0Hz), 4.68 (d,IH,J=7.9Hz), 4.62 (d,IH,J=5.7Hz), 4.47-4.35 (m,2H), 4.24 (dd,lH,J=4.4 and 10.4Hz), 3.64 (8,6H), 3.68-3.52 (m,3H), 3.44-3.30 (m,3H), 3.17-3.07 (m,lH), 1.31 (d,3H,J=5.OHz).

90 MHz ¹³C NMR (D₂O) 6 178.5, 151.8, 148.1, 146.1, 135.0, 132.6, 130.9, 127.4, 109.9, 109.5, 10/.4, 101.3,

100.4, 99.6, 79.2, 73.7. 72.7, 72.2, 69.1, 67.1, 65.4, 55.6, 20

42.8, 40.3, 37.5, 18.8.

146 MHz ³¹P NMR (D₂O) δ 3.79.

Massenspektrum (FAB), m/e, 713 (M⁺ + H). ^C29^H3i^Na2°l6^P erfordert M⁺, 712.

Analyse	für	C₂₉H₃₁Na₂O₁₆P:	48	C	4	H	6	Na
			48	,89	4	,39	6	,45
		berechnet:		,72		,56		,56
		gefunden*:

* korrigiert auf 8,16% H₃O, bestimmt nach Karl Fischer. 35

Beispiel

Etoposid-4'-(Bis-(Ν,Ν-diethyl]-phosphonamid) (VII, X=O, R^-Methyl, R⁶=H, Y=N(Et)₂/ R²=R³=Et)

Wie in Beispiel 1 angegeben, werden 20 Vol.-% des Reaktionsgemisches von Etoposid und POCl₃ mit Diethylamin (4 ml) versetzt und bei Raumtemperatur 3 h lang gerührt. Das Lösungsmittel wird im Vakuum abgedampft und der hell-orange Rückstand durch Flash-Chromatographie über Silikagel gereinigt. Die Elution mit 4% Methanol in Methylenchlorid ergibt 271,3 mg (46,9%) der reinen Titelverbindung in Form eines hellgelben Feststoffs.

IR (KBr) 3408, 2974, 2936, 2877, 1774, 1598, 1508,

I486, 1467, 1421, 1383, 1339, 1234, 1191, 1162, 1130, 1098, 1079, 1037, 902, 858, 795, 713, 700, 544 cm"¹.

360 MHz ¹H NMR (CDCl₃) δ 6.79, (β,IH), 6.50 (β,IH), 6.20 (8,2H), 5.96 (ABq,2H), 4.G7 (d,IH,J=3.2Hz), 4.71 (q,lH,J=5.1Hz), 4.61 (d,IH,J=7.6Hz), 4.57 (d,IH,J=5.2Hz), 4.39 (dd,lH,J=9.1 and 10.2Hz), 4.22-4.13 (m,2H), 3.74 (m,lH), 3.65 (s,6H), 3.55 (m,lH), 3.40 (πι,ΙΗ), 3.32-3.10 (m,llH), 2.94-2.83 (m,lH), 1.37 (d,3H,J=S.IHz), 1,10 (m,12H).

₃₁

146 MHz P NMR (CDCl₃) ί 16.49.

Massenspektrum (FAB), m/e 779 (M⁺ + H), 573 (M⁺ - Zucker) C₃₇H₅₁N₃O₁₄P erfordert M⁺, 778

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Beispiel

Etoposid-4'-(N,N-[2-chlorethyl]-phosphoryl-chlorid) (VII, R¹= Methyl, R⁶=H, X=O, Y=Cl, R²=R³=rH2CH2Cl)

Eine magnetisch gerührte Suspension von Etoposid (2,00 g, 3,40 romol) in getrocknetem Acetonitril (220 ml) wird unter annähernd vollständigem Lösen erwärmt. Das Gemisch wird auf Raumtemperatur abgekühlt und mit N,N-Diisoproylethylamin (2,05 ml, 11,8 mmol) versetzt. Das Gemisch wird anschließend unter Stickstoff auf 0⁰C abgekühlt und innerhalb von 30 Sek. mit Phosphorylchlorid (624 mg, 4,07 mmol) versetzt. Das Gemisch wird bei 0⁰C 2,5 h und bei Raumtemperatur weitere 1,5 h magnetisch gerührt. Bis-(2-chlorethylamin)-hydrochlorid (1,82 g, 10,2 mmol) wird anschließend rasch hinzugefügt, unmittelbar gefolgt von zusätzlichem N,N-Diisopropylethylamin (2,10 ml, 12,0 mmol). Das Gemisch wird bei Raumtemperatur 85 min lang gerührt, im Vakuum auf ein Volumen von etwa 5 ml aufkonzentriert und in Ethylacetat (400 ml) und Methanol (5 ml) gelöst.

Di^e dabei erhaltene Lösung wird mit einem Puffer (pH 5) (2 χ 200 ml), Wasser (150 ml) und Brine (150 ml) gewaschen und mit Na^SO./MgSO. getrocknet. Nach Abdampfen des Lösungsmittels erhält man einen gelb-organgen Feststoff, welcher durch Flash-Chromatographie über Silikagel und Elutiorv mit 3 - 4% Methanol in Methylenchlorid gereinigt wird. Man erhält 1,25 g (45,4%) der reinen Titelverbindung als farblosen Feststoff.

360 MHz ¹H NMR (CDCl₃) 6 6.82 (s.lH), 6.52 (s,lH), 6.27 (8,2H), 5.99 <d,2H), 4.90 (d,IH,J=3.4Hz), 4.73 (q, IH, J=S. OHz), 4.65-4.60 (m,2J.i), 4.41 (m.lH), 4.25-4.15 <rn.2H), 3.75-3.65 (m,5H), 3.72 (s,'6H)/ 3.60-3.23 (m,9H), 2.91-2.Θ0 (m,lH), 1.3Θ (d,3H,J=5.0Hz).

146 MHz ³¹P NMR (CDCl₃) δ 11.16 und 10.96 (zwei Peaks wegen chiralem Phosphor).

Massenspektrum (FAB), m/e, 812, 810, 808. C₃₃H₃₉Cl₃NO₁₄P erfordert M⁺ ( ³⁵Cl) 809.

Beispiel 4 Etoposid-4^>-^hiophosphat-dinatriuinsalz (Verbindung VIb)

Eine magnetisch gerührte Suspension von Etoposid (2,04 g, 3,47 mrnol) in trockenem Acetonitril (175 ml) wird unter nahezu vollständigem Lösen erwärmt. Die Lösung wird auf Raumtemperatur abgekühlt und mit N,N-Diisopropylethylamin (2,00 ml, 11,5 mmol) versetzt. Das Gemisch wird anschließend auf O⁰C abgekühlt und mit Thiophosphorylchlorid (0,720 g, 4,17 mmol) über eine Spritze innerhalb von 30 Sek. versetzt. Man läßt das Gemisch innerhalb von 2 - 3 h langsam auf Raumtemperatur erwärmen und es wird 16 h lang bei Raumtemperatur weitergerührt. Das Gemisch wird anschließend auf 30 - 35°C erwärmt und weitere 4 h bei dieser Temperatur gehalten. Bei Durchführung einer TLC (5% CH₃OH in CH₂Cl₂) beobachtet .aan ein neues Hauptprodukt mit einem höheren R_f-Wert als Etoposid. Das Reaktionsgemisch wird mit festem Natriumbicarbonat (7,4 g) behandelt und anschließend mit deionisierten Wasser (100 ml) versetzt. Das Gemisch wird bei 28 - 25⁰C 1,5 h und bei Raumtempratur weitere 1,5 h gerührt. Das Gemisch wird zwischen deionisiertem Wasser (200 ml), gesättigtem wäßrigem Natriumbicarbonat (30 ml) und Ethylacetat (300 ml) partitioniert. Die weitere Aufarbeitung sowie die reverse phase-Chromatographie wird entsprechend Beispiel 1 durchgeführt. Man erhält dabei 1,03 g (40,8%) der reinen Titelverbindung in Form eines farblosen Feststoffs.

360 MHz ¹H NMR (DjO) δ 6.93 (β,IH), 6.60 (β,IH), 6.27(8,2H), 5.93 (d.2H), 5.09 (d, IH, J=2 . 8Hr.), 4.83 (q,lH,J=5.0Hz), 4.68 (d,IH,J=7.8Hz), 4.63 (d,IH,J=5.7Hz), 4.47-4.35 (m,2H), 4.24 (dd„lH,J=4.3 and IC.5Hz), 3.64(8,6H). 3.67-3.52 (m,3H), 3.47-3.29 (m,3H), 3.17-3.07 (m,lH). 1.31 (d,3H,J=5.0Hz).

Massenspektrum (FAB), m/e 728 (M⁺), 706 (M⁺ + H - Na).

^C29^H31^Na2°15^{PS erfordert M+}' ⁷²⁸· 10

Beispiel 5

Etoposid-4'-[[N,N-Bis-(2-chlorethyl)-amino]-[N-(3-hydroxypropyl)-amino]]-phosphat

(VII, X=O, R¹=Methyl, R⁶=H, R²=R³=2-Chlorethy.l, Y=-NH(CH2)3OH

Eine magnetisch gerührte Lösung der Verbindung aus Beispiel 3 (280 mg, 0,346 mmol) in CH CL (3 ml) wird mit einer Lösung von 3-Amino-l-propanol (33,5 mg, 0,446 mmol) in CH^Clp (1 ml) behandelt. Nach 5 min wird nochmals 3-Amino-l-propanol (31,0 mg, 0,413 mmol) in absolutem Methanol (0,5 ml) hinzugefügt. Das Reaktionsgemisch wird direkt auf vier präparative TLC-Platten (1 mm, E. Merck-Silikagel) aufgetragen und unter Entwicklung in 5-8% CH₃OH in CH-Cl- gereinigt. Nach Elution der gewünschten Produktbande mit 5% CH^OH in Ethylacetat, gefolgt von Eindampfen im Vakuum und weiterem Trocknen bei 0,1 Torr erhält man 185 mg (63%) der reinen Titelverbindung in Form eines farblosen Feststoffes (Gemisch der Diastoromeren am Phosphor).

360 MHz ¹H NMR (CDCl₃) δ 7.20 (br 8, IH), 6.80 (s, IH), 6.50 and 6.48 (2s, IH), 6.26 and 6.25 (2s, 2H), 5.97 (d, 2H), 4.88 (m, IH), 4.73 (q, IH), 4.64-4.57 (m, 2H), 4.40 (m, IH), 4.21-4.13 (m, 2H), 3.71, 3.70 (2s, 6H), 3.71-3.06 (m, 18H), 2.90-2.80 (m, IH), 1.37 (d, 3H).

Massenspektrum (FAB), m/e, 849, 851 (M⁺ + H, ³⁵Cl, ³⁷Cl). C₃₆H₄₇Cl₂N₂O₁₅P erfordert M⁺ 848 (^j5C1) und 850 (³⁷Cl).

Beispiel

Etoposid-4'-{[N-Bis-(2-chlorethyl)-amino]-[N-[2-[(3-nitropyridyi-2-yl)-disulfid]-ethyl]]-amino]-phosphat (VII, X=O, R¹=Methyl, R⁶=H, R²=R³=2-Chlorethyl, Y=NH(CH₂)2-SS-(3-Nitropyridyl-2-yl)

Ein Gemisch der Verbindung aus Beispiel 3 (248 mg, 0,306 mmol) und 2-(3-Nitropyridyl)- 1-(2-aminoethyl)-disulfid-hydrochlorid (105 mg, 0,393 mmol) wird mit CH-Cl-(7 ml) behandelt und anschließend mit Diisopropylethylamin (100 μΐ, 0,570 mmol) und trockenem Methanol (0,5 ml) versetzt. Die daraus resultierende Lösung wird bei Raumtemperatur 1,5h gerührt und anschließend direkt auf vier präparative TLC-Platten (1 mm, E.Merck-Silikagel) aufgetragen und durch Entwicklung mit 4-5% CH^OH in Ethylacetat gereinigt.

Nach Elution der gewünschten Produktbande mit 5% CH^OH in Ethylacetat, anschließendem Eindampfen im Vakuum und zusätzlichem Trocknen bei 0,1 Torr erhält man 231,7 mg (75,3%) der reinen Titelverbindung in Form eines gelbbraunen Feststoffes (Diastereomerengemisch am Phosphor).

IR (KBr) 1774, 1598, 1584, 1559, 1509, I486, 1456, 1421, 1397, 1342, 1236, 1160, 1128, 1096, 1038, 1004, 926, 857, 747, 699 cm"¹.

360 MHz ¹H NMR (CDCl₃) δ 8.81 and 8.77 (2m. IK), 8.48 (m, IH), 7.33 (m, IH), 6.81 (s, IH), 6.51 and 6.50 (2s, IH), 6.26 (br s, 2H), 5.97 (d, 2H), 4.89 (m, IH), 4.73 (q, IH), 4.65-4.52 (m, 3H), 4.41 (m, IH), 4.24-4.14 (m, 2H). 3.71, 3.70 (2s, 6H), 3.71-2.85 (m, 19 H), 2.68 (br s, IH, OH), 2.37 (br 8, IH, OH), 1.37 (d, 3H).

2/44

Massenspektrum (FAB), m/e, 1005, 1007 (M⁺ + H, ³⁵Cl, ³⁷Cl).

C, .H. .,Cl₀N.O₁ ,PS₀ erfordert M^f, 1004 (³⁵Cl) und 10C6 (³⁷Cl).

41) 4/ ^ 4 Ib £

Beispiel

Etoposid-4'-diphenylphosphat (R¹^CH₃, R⁶=fi, R⁷=R⁸=Phenyl)

Eine magnetisch gerührte Suspension von tcoposid (10,50 g, 17,84 mmol, getrocknet über P₃O₅ bei 80°C/0,5 Torr) in

trockenem Acetonitril (450 ml) wird mit Diisopropylethylamin (4,20 ml, 24,1 romol) behandelt und anschließend mit Diphenylchlorophosphat (2,00 ml, 9,65 mmol) in unverdünnter Form über eine Spritze versetzt. Das Gemisch wird unter Stickstoff 2 h lang bei 5O⁰C gerührt, wobei sich das gesamte Etoposid löst. Weiteres Diphenylchlorophosphat (1,80 ml, 8,68 mmol) wird hinzugefügt und das Reaktionsgemisch 72 h lang auf 45°C gehalten. Nachdem eine zusätzliche Menge der Aminbase (0,75 ml, 4,3 mmol) und Diphenylchlorophosphat (0,80 ml, 3,86 mmol) hinzugegeben wurden, rührt man das Gemisch 27 h lang bei 40 -- 45⁰C, versetzt nochmals mit Diphenylchlorophosphat (0,40 ml, 193 mmol) und hält 22 h auf 40 - 45⁰C. Isopropanol (20 ml) wird anschließend hinzugefügt, das Lösungsmittel wird im Vakuum abgedampft und der feste Rückstand in CH₂Cl₃ (500 ml) gelöst und mit H-O (400 ml) partitioniert. Die wäßrige Phase wird nochmals mit CH₂Cl₀ (100 ml) extrahiert und die vereinigten organischen Extrakte werden mit Brine (250 ml) gewaschen und getrocknet (Na_S0./MgSO.) . Nach Einengen im Fcotationsverdampfer und Flash-Chromatographie über Silikagel unter Verwendung von 2-3% CH₃OH in CH₂Cl₂ erhält man 12,50 g (85%) der reinen Titelverbindung in Form eines farblosen Feststoffes .

FAB MS m/e (relative Intensität) 820 (M+H)⁺.

27U

IR (KBr) 3460, 2925, 177S, 1601, 1490 cm"¹. ¹H NMR (CDCl₃) β 7.28 (m,8H), 7.15 (m,2H), 6.78 (8,1H), 6.47 (8,1H), 5.95 (m,2H), 4.85 (d,J=3.5Hz,IH), 4.71 (m.lH), 4.60 (d,J=7.6Hz₄IH), 4.56 (d,J=5.IHz,IH), 4.38 (m.lH), 4.22-4.13 (m,2H), 3.72-3.60 (m,lH), 3.48 (β,6Η), 3.54-3.28 (m,3H), 3,23 (dd, J=14.2, 5.3Hz,IH), 2.78 (m,IH), 1.35 (d,J=5.lHz, 3H).

Analyse	für C₄₁F	60	C	5	H
		60	,00	5	,04
			,20		,16

I₄₁O₁₆P:

ber. :
gef. :

Beispiel 8

Etoposid-4'-phosphat (V; R¹=CH₃, R⁶=H, R⁷=R⁸=H)

Platinoxid (0,198 g, 0,87 mmol) aus einer frischgeöffneten Flasche (Aldrich Chemical Co .) wird zu einer Lösung von Etoposid-4'-diphenylphosphat (Produkt aus Beispiel 7; 0,79 g, 0,962 mmol) in 95 ml absolutem Ethanol hinzugegeben. Die Lösung wird in einer Parr-Apparatur bei 45-50 PSI 4 h lang bei Raumtemperatur hydriert. Das Reaktionsgemisch wird über ein Celite-Bett unter Verwendung von Ethanol als Eluenten filtriert. Nach Aufkonzentrieren in Vakuum und 14-stündigem Trocknen über P₀O₁. im Vakuum erhält man das gewünschte Produkt als weißen Feststoff (0,627g, 94%)

30

FAB MS m/e (relative Intensität)'669 (M+H)⁺.

IR (KBr) 3440, 2930, 1778, 1604, 1498 era"¹.

¹H NMR (DMSO-d₆) 6 6.93 (s,lH), 6,46 (β,IH), 6.12 (8,2H), 5.94 (m,2H), 5.17 (bs.lH), 4.86 (d.J=3.93Hz,IH), 4.64 (q,J=7.5,5.8Hz,lH), 4.51-4.42 (m,2H), 4.20 (d,J=IO.7Hz,IH), 4.01 (dd,J=12.1,5.3Hz,IH), 3.51 (β,6H), 3.51-2.75 (m,7H). 2.83 (m,lH), 1.16 (d,J=S.IHz,3H).

2 7 4 4

¹³C NMR (DMSO-d₆) 6 174.5, 151.2, 151.1, 147.7, 146.2,126.1, 132.3, 128.8, 109.8, 109.7, 107.9, 101.5, 101.2, 98.5, 80.0, 74.3, 72.7, 71.7, 67.6, 67.2, 65.7, 55.8, 43.0. 37.1, 20.2, 18.5.

Analyse für ^c ₂9^H33°i6^P ' °'^{85% H}2^0:

C H

ber.: 50,95 5,11

gef.: 51,42 4,97

Beispiel 9

Etoposid-4'-Bis-(2,2,2-trichlorethyl)-phosphat (VIII; R⁶=CH3, Ri=H, R⁷=R⁸=CH₂CCl3)

Das Verfahren nach Beispiel 7 wird unter Verwendung von Bis-(2 , 2 , 2-tric.hlorethyl)-chlorophosphat wiederholt. Man erhält die Ticelverbindung im Anschluß an eine Flash-Chromatographie über Silikagel in 100%iger Ausbeute in Form eines farblosen Feststoffes.

IR (KBr) :.78O, 1610, 1490, 141S, 1345, 1240, 1040, 960, 725 cm'¹.

300 MHz ¹H NMR (CDCl₃) 6 6.81 (s,lH), 6.49 (s,lH), 6.27 (s,2H), 5.98 (dd,2H), 4.88 (d,IH,J=3.4Hz), 4.82-4.70 (m,5H), 4.64 (d,lH,J=7.6Hz), 4.61 (d,IH,J=5.3Hz), 4.41 (dd,lH), 4.25-4.13 (m,2H), 3.75 (m,lH), 3.73 (β,6H)₁ 3.56 (m,lH), 3.43 (dd.lH), 3.34-3.24 (m,3H), 2.91-2.82 (m.lH), 1.38(d,3H,J^4.9Hz).

Massenspektrum (FAB), m/e = 928.9848 (M⁺+H).

C--H,,Cl₄-O₁ _CP erfordert 928.9872. JJ Jb b Ib

Beispiel 10

Etoposid-4'-phosphat, Dinatriumsalz von Etoposid 4'-Phosphat

Methode Λ

Handelsübliches Dowex 50 χ 8--100 Kationenaustauscherharz in der H -Form (20 g, Aldrich Chemical Co.) wird mit überschüssiger IN NaOH behandelt. Der dadurch erhaltene Austauscher in Na -Form wird in eine 2 cm-Säule gefüllt und mit Wasser äquilibriert. Etoposid- 4'-phosphat (Produkt von Beispiel 8, 1,25 g, 1,87 mmol), welches in 25 ml deionisiertem Wasser gelöst ist, wird auf die gepackte Säule aufgetragen und anschließend wird die Säule mit Wasser eluiert. Fraktionen, welche die Titelverbindung enthalten, werden vereinigt, filtriert und lyophilisiert, wonach man 1,15 g der Titelverbindung in Form eines weißen flockigen Materials erhält.

Methode B

Zu 2,90 g (4,34 mmol) des ungereinigten Etoposid-4'-phosphates (Produkt aus Beispiel 8) gibt man deionisiertes Wasser (50 ml) und Natriumbicarbonat (3,00 g, 35,7 mmol) Das Gemisch wird bei Raumtemperatur 30 min lang gerührt, wobei die CO₂-Entwicklung zum Stillstand kommt. Das Gemisch wird anschließend entsprechend Beispiel 1 chromatographiert. Nach Elution mit deionisiertem Wasser (300 ml) und 4:1 H₂OiCH₃OH ergibt nach Lyophilisierung 1,90 g (61%) der reinen Titelverbindung in Form eines flockigen weißen Feststoffs.

Beispiel IJ₁

Die allgemeine Versuchsvorschrift von Beispiel 2 wird wiederholt, wobei das darin verwendete Diethylamin durch eines der unten angegebenen Amine ersetzt wird und man das ent-

27

sprechende Etoposid-4 '-phosphordiainidat erhält.

Amin

Verbindung VII (X=O, R¹=Methyl, R⁶=H, Y=NH²R³)

Propylamin	H	CH₂CH₂^K₃
Ethanolamin	H	CH₂CH₂OH
Methoxyethylain	H	CH₂CH₂OCH₃
N-Acetylethylendiamin	H	CH₂CHNC(O)CH^
2-Methylallylamin	H	CH₂CH(CH₃J=CH₂
Allylamin	H	CH₂CH=CH₂
Dimethylaminopropylamin	H	(CH₂)N(CH₃)₂
N-Methy!ethylendiamin	H	CH₂CH₂NCH₃
Trifluorethylamin	H	CH₃CF₃
2-Aminoethanthiol	H	CH₂CH₂SH
Cyclohexylamin	H	Cyclohexyl
2-Amino-1-methoxypropan	H	CH(CH₃)CH₂OCH₃
2- (Ethyltthio)-ethylamin	H	CH₂CH₂SCH₂CH₃
Chlorethylamin	H	CH₂CH₂Cl
4-Aminocyclohexanol	H	4-OH-Cyclohexyl
Ethylmethylamin	CH₀	CH₂CH₃
Ethylbutylamin	CH₂CH₃	(CH₂J₃CH₃
Methylaminoethanol	CH₃	CH₂CH₂OH
Bis- (2-chloroethyl)-amin	CH₂CH₂Cl	CH₂CH₉Cl
2-Propylaminoethanol	CH₉CK₂CH₃	CH₂CH₃OH
3-Methylaminopropionitril	^C»3 ,	CH₂CH₂CN
Piperidin	R² ₊R³ =	-(CH₂J₅-

B e i ;·> ρ i e

12

Die allgemeine Versuchsvorschrift von Beispiel 3 wird wiederholt, wobei das darin verwendete Bis-(2-chlorethyl)-amin durch eines der unten angegebenen Amine ersetzt wird, wodurch das entsprechende Etoposid-chlor phosphoroainidat ent steht.

7 4 4

Amin

28

Verbindung VII, (X=O, R¹=Methyl_/ R⁶=H, Y=Cl)

Propylamin	H	CH₂CH₂CH₃
Ethanolamin	H	CH₂CH₂OH
Methoxyethylamin	H	CH₂CH₂OCH₃
N-Acetylethyiendiamin	H	CH₂CHNC(O)CH₃
2-Methylallylamin	H	CH₂CH(CH₃J=CH₂
Allylamin	H	CH₂CH=CH₂
Dimethylaminopropylamin	H	(CH₂)N(CH₃J₂
N-Methy!ethylendiamin	H	CH₂CH₇NCH₃
Trifluorethylamin	H	CH₂CF₃
2-Aminoethanthiol	H	CH₂CH₂SH
Cyclohexylamin	H	Cyclohexyl
2-Amino-l-methoxypropan	H	CH(CH₃)CH₂OCH₃
2.- (Ethylthio) -ethylamin	H	CH₂CH₂SCH₂CH₃
Chlorethylamin	H	CH₂CH₂Cl
4-Aminocyclohexanol	H	4-OH-Cyclohexyl
Ethylmethylamin	CH₃	CH₂CH₃
Ethylbutylamin	CH₂CH₃	(CH₂J₃CH₃
Methylaminoethanol	CH₃	CH₂CH₂OH
Diethylamin	CH₂CH₃	CH₂CH₃
2-Propylaminoethanol	CH₂CH₂CH₃	CH₂CH₂OH
3-Methylaminopropionitril		CH₂CH₂CN
Piperidin	R²+R³ =	- (CH₂) -

Beispiel

13

Die allgemeine Versuchsvorschriit von Beispiel 5 wird wiederholt, wobei das darin verwendete 3-Aminopropanol durch eines der folgenden Amine ersetzt wird und man das entsprechende unsymmetrische Etoposid-phosphordiamidat. erhält.

29

Amin

Verbindung VlI (X=O, R «Methyl, Propylamin Ethanolamin Methoxyethylamin N-Acety!ethylendiamin

2-Methylallylamin Allylamin

Dimethylaminopropylamin N-Methy!ethylendiamin Trifluorethylamin2-Aminoethanthiol Cyclohexylamin 2-Amino-1-methoxypropan 2-(Ethylthio)-ethylamin Chlorethylamin4-Aminocyclohexanol Ethylmethylamin Ethylbutylamin Me ;hylaminoethanol Bis-(2-chloroethyl)-amin2-Propylaminoethanol3-Methylaminopropionitril Piperidin

R⁶«H,	Y-NR⁴	R⁵, R =R³=CH₂CH₂C1)
R⁴		R⁵
H		CH₂CH₂CH₃
H		CH₂CHjOH
H		CH₂CH₂OCH₃
H		CH₂CHNC(O)CH₃
H		CH₂CH(CH₃J=CH₂
H		CH₂CH=CH₂
H		(CH₂)N(CH₃) ₂
H		CH₂CH₂NCH₃
H		CH₂CF₃
H		CH₂CH₂SH
H		Cyclohexyl
H		CH(CH₃)CH₂OCH₃
H		CH₂CHjSCH₂CH₃
H		CH₂CH₂Cl
H		4-OH-Cyclohexyl
CH₃		CH₂CH₃
CH₂CH	3	(CH₂J₃CH₃
CH₃		CH₂CHjOH
CHjCH	jCl	CHjCHjCI
CHjCH	₂CH₃	CHjCHjOH
CH₃		CHjCHjCN

-(CHj)₅

Beispiel

14

Die allgemeine Versuchsvorschrift von Beispiel 7 wird wiederholt, wobei m&i? das darin verwendete Diphenylchlor -phosphat durch eines «5er folgenden Chlorophosphate ersetzt und man £ie entsprechenden Etoposid-4'-phosphatdi-

ester (X=O, R¹ =* Methyl, R⁶ » H, R R

R unten be-

30 schrieben) erhält.

. 23

Chlorphosphate [(RO)₂P(O)Cl]

5 R= Methyl

Ethyl Benzyl

p-Nitrobenzyl

p-Nitrophenyl

10 p-Brombenzyl,

p-Nitrophenethyl

Cyanoe-.hyl

o-(t-But/1)-phenyl.

Beispiel lj>

Die allgemeinen Versuchsvorschriften der Beispiele 1 bis werden wiederholt, wobei die darin verwendeten Etoposid-Ausgangsprodukte durch die entsprechenden Teniposid-Verbin-20 düngen ersetzt werden, wodurch man die korrespondierenden Teniposid-Produkte erhält.

Claims

Patentansprüche:

worin Y für OR⁷ und Z für OR⁸ steht; oder Y für Chlor» OH oder NR⁴R⁵ steht und Z für NR²R³ steht; worin R für Wasserstoff steht und R ausgewählt ist unter (C_{1-1 n})-Alkyl, (C₉ ,_n)-Alkenyl, (Cc_-1-) -Cycloalkyl,

2-Furyl, 2-Thienyl, (C, _ln)-Aryl, (C, ..-^-^ralkyl und

b—IU /—14

(C₀ , _A)-Aralkenyl, wobei jeder aromatische Aing unsub-

o~ XQ

stituiert oder mit einer oder mehreren Gruppen substituiert sein kann/ die ausgewählt sind unter Halo , (C_1-8)-Alkyl , (C₁ p)-Alkoxy, Hydroxy, Nitro und Amino; oder

1 6
R und R jeweils einen (C_{1 O})-Alkylrest bedeuten; oder

16 '

R und R und das Kohlenstoffatom, an welches sie gebunden sind, eine (C_c ,)-Cycloalkylgruppe bilden;

X für Sauerstoff oder Schwefel steht; 7 8
R und R unabhängig voneinander aus der Gruppe folgender

Reste ausgewählt sind: einGir. Wasserstoffatom, einem

_1-5-, Α-substituierten (C_1-5J-AlKyI-, (C_3-6)-Cycloalkyl-, Α-substituierten (C₃-)-Cycloalkyl-, (C,- _in)-Aryl-, Α-substituierten Aryl-, alkylsubstituierten Aryl-, (C_7-14)-Aralkyl-, Α-substituierten Aralkyl- und alkylsubstituierten Aralkylrest;

2 3 4 5
R , R , R und R jeweils unabhängig voneinander aus der Gruppe folgender Reste ausgewählt sind: einem Wasserstoffatom, einem (C, _,.) -Alkyl-, (C_7-1.)-Alkenyl-, (C_3-6)-Cycloalkyl-, Α-substituierten (C_1-5)-Alkyl-, Α-substituierten (C-_-5)-Alkenyl- und A-substituierten (C, ,)-Cycloalkylrest; oder

2 3
R , R und das Stickstoffatom, an welches sie gebunden sind, zusammen einen 3- bis 6-gliedrigen Ring bilden; oder

R , R und das Stickstoffatom, an welches sie gebunden sind, zusammen einen 3- bis 6-gliedrigen Ring bilden; wobei die A-Substituenten eine oder mehrere Gruppen ausgewählt unter einem Hydroxy-, Alkoxy-, Alkanoyloxy-, Cyano-, Amino-, Alkylamino-, Dialkylamino-, Carboxy-, Alkylthio-, Mercapto-, Mercaptothio-, Nitropyridyldisulfid-, Alkanoy!amino-, Alkanoyl-, Carbamoyl-, Nitro- und Halorest bedeuten,

dadurch gekennzeichnet, daß / 26 man

(a) eine Verbindung de.v allgemeinen Formel IX

30

IX

35

27 4 ^

mit einer Verbindung der allgemeinen Formel P(X)Cl in Gegenwart eines Wasserstoffakzeptors zu einem Zwischenprodukt der allgemeinen Formel VIII

10 15

VIII

20

CH

worin R ; R und X der oben angegebenen Definition entsprechen/ umsetzt; oder

eine Verbindung der allgemeinen Formel IX mit einer

7 8

Verbindung der allgemeinen Formel HaI-P (X) (OR ) (OR ),

7 8

worin R , R und X der oben gegebenen Definition entsprechen, zu einer Verbindung der allgemeinen Formel V

26

30

umsetzt; und

35

(b) eine Verbindung der allgemeinen Formel VIII gegebenen-

falls in Gegenwart einer Base hydrolysiert oder eine

7 Verbindung der allgemeinen Formel V/ in der R und/oder

CJ

R nicht für ein Wasserstoffatom stehen, in Gegenwart eines Katalysators hydrogeniert/ wobei man eine Verbindung der allgemeinen Formel VI

Γί^ϊ VI

CH₁(T

oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon erhält; oder

(c) eine Verbindung der allgemeinen Formel VIII jeweils mit mindestens einem Äquivalent R OH

und R OH in Gegenwart eines Wasserstoffakzeptors 7 8
umsetzt, worin R und R der oben gegebenen Defini-

7 8 tion entsprechen, mit der Maßgabe, daß R und R

nicht gleichzeitig für ein Wasserstoffatom stehen;

7 8
und wenn R oder R ein Wasserstoffatom bedeutet,

die Verbindung gegebenenfalls durch Behandlung

Γ 26 roi-t einer Base in -:;in pharmazeutisch verträgliches

Salz überführt; oder

(d) eine Verbindung der allgemeinen Formel VIII mit

2 3 einem Amin der allgemeinen Formel HNR R oder einem 2 3 Säureadditionssalz davon, worin R und R der oben

gegebenen Definition entsprechen, zu einer Verbindung der allgemeinen Formel VII η

.3 5

Vila

10

umsetzt und

15 20

26

(e) gegebenenfalls eine V«.-Mndung der allgemeinen

Formel Vila mit einem zweiten Amin der allgemeinen

A 5

Formel HNR R oder einem Säureadditionssalz davon,

4 5

worm R und R der oben gegebenen Definition entsprechen, zu einer Verbindung der allgemeinen Formel VIIb

VTI b

CH₁

Wt»

30

umsetzt; oder

35

(f) eine Verbindung der allgemeinen Formel viia gegebenenfalls in Gegenwart einer Base zu einer Verbindung der allgemeinen Formel VIIc

2744

CH

VII

10

oder einem pharmazeutisch verträglichen Salz davon, hydrolysiert.

15

20

η 2
2. Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß man eine Verbindung der allgemeinen Formel

oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon

16 7 8
erhält, worin R , R , R , R und X der oben gegebenen

Definition entsprechen.
3. Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß man eine Verbindung der allgemeinen Formel

35

2744

oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon
erhält, worin R , R und X der oben gegebenen Definition entsprechen.
4. Verfahren nach Anspruch 2 oder 3, dadurch gekennzeichnet, daß man eine Verbindung erhält, worin R ein Wasserstoffatom und R eine Methyl- oder 2-Thienylgruppe bedeutet.
5. Verfahren nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß man eine Verbindung erhält, worin R ein Wasserstoffatom und R eine Methylgruppe bedeutet.
6. Verfahren nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß man eine Verbindung erhält, worin X ein Sauerstoffatom

C 26 bedeutet.
7. Verfahren nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß man eine Verbindung erhält, worin X ein Schwefelatom
bedeutet.
8. Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß man als pharmazeutisch verträgliches Salz das Natriumsalz der Verbindungen erhält.
9. Verfahren nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß

744

man Etoposid-4'-phosphat-dinatriumsalz der Formel

10

erhält.
10. Verfahren nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß man Etoposid-4'-thiophosphat-dinatriumsalz der Formel

20

25

30 35

erhält.
11. Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß man eine Verbindung erhält, worin R aus der Gruppe folgender Reste ausgewählt ist: (C. _)-Alkyl-, A-substituierter (C.__)-Alkyl-, (C_3-6)-Cycloalkyl-, Α-substituierter (C, ,)-Cycloalkyl-, (C, _1n)-Aryl-,

j-o o — l U

Λ-substituierter Aryl-, alkyl^ubstituierter Aryl-, (C₇ , .)-Aralkyl-, Α-substituierter Aralkyl- und alkyl-

substituierter Aralkylrest; und R für ein Wasserstoffatom oder für eine Gruppe entsprechend der Definition vor R steht; worin die A-Substituenten der oben gegebenen Definition entsprechen; oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon erhält.

L2. Verfahren nach Anspruch 11, dadurch gekennzeichnet, daß man eine Verbindung erhält, worin R° ein Wasserstoffatom und R eine Methyl- oder 2-Thienylgruppe bedeutet.
13. Verfahren nach Anspruch 12, dadurch gekennzeichnet, 7 8 daß man eine Verbindung erhält, worin R und R jeweils unabhängig voneinander aus der Gruppe folgender Reste ausgewählt sind: (C, _) -Alkyl-, halosubstituierter (C, _c)-Alkyl-, cyanosubstituierter (C_{1 c})-Alkyl-,

1—D 1—j

(C/- ,_A)-Aryl- und (C, . .) -Aralkylrest; worin der

D — IU / — I*»

Ring der Aryl- und Arylalkylgruppen gegebenenfalls mit einer oder mehreren Gruppen ausgewählt unter einem Alkyl-, Halo- und Nitrorest substituiert ist.
14. Verfahren nach Anspruch 13, dadurch gekennzeichnet, daß man eine '
bedeutet.

man eine Verbindung erhält, worin R eine Methylgruppe
15. Verfahren nach Anspruch 14, dadurch gekennzeichnet, daß man eine Verbindung erhält, worin X für ein Sauerstoffatom steht.
16. Verfahren nach Anspruch 15, dadurch gekennzeichnet, daß man eine Verbindung er
Pheny!gruppe bedeuten.

7 8 man eine Verbindung erhält, worin R und R jeweils eine

16

HO
17. Verfahren nach Anspruch 15, dadurch gekennzeichnet, daß man eine Verbindung erhält, worin F 2,2,2--Trichlorethy!gruppe bedeuten.

"7 ß

man eine Verbindung erhält, worin R und R jeweils eine
18. Vorfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man eine Verbindung der allgemeinen Formel

oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon erhält, worin R bis R , X und Y der oben gegebenen Definition entsprechen.
19. Verfahren nach Anspruch 18, dadurch gekennzeichnet, daß man eine Verbindung erhält, worin R für ein Wasserstoff-

( 25 atom steht, R eine Methyl- oder 2-Thic»nylgruppe bedeutet;

Y für Chlor oder NR⁴R⁵ steht; X für Sauerstoff oder

2 j 4 5 Schwefel steht; und R , R , R und R jeweils unabhängig voneinander aus der Gruppe folgender Reste ausgewählt sind: Wasserstoffatom, t^i_c)-Alkyl-, halosubstituierter (C₁₅)-Alkyl-, hydro.cysubstituierter (C_1-5)-Alkyl- und nitropyridyldisulf idsubstituierter (C_1-- ) -Aikylres';.
20. Verfahren nach Anspruch 19, dadurch gekennzeichnet, daß man eine Verbindung erhält, worin X für Sauerstoff steht.

35
21. Verfahren nach Anspruch 20, dadurch gekennzeichnet, daß man eine Verbindung erhält, worin R für eine Methylgruppe steht.
22. Verfahren nach Anspruch 21, dadurch gekennzeichnet, daß

2 3 man eine Verbindung erhHlt, worin R und R jeweils ein

2-Chlorethy!gruppe bedeuten und Y für Chlor steht.
23. Verfahren nach Anspruch 21, dadurch gekennzeichnet, daß 4 5 man eine Verbindung erhält, worin Y für NR R steht.
24. Verfahren nach Anspruch 23, dadurch gekennzeichnet, daß man eine Verbindung erhält, wori
weils eine Ethy!gruppe bedeuten.

2 3 4 5 man eine Verbindung erhält, worin R , R , R und R je-
25. Verfahren nach Anspruch 23, dadurch gekennzeichnet, daß

2 3 man eine Verbindung erhält, worin R und R jeweils

4 eine 2-Chlorethy!gruppe bedeuten; R für Wasserstoff

steht; und R eine 3-Hydroxypropylgruppe bedeutet.
26. Verfahren nach Anspruch 23, dadurch gekennzeichnet, daß

2 3 man eine Verbindung erhält, worin R und R jeweils

eine 2-Chlorechylgruppe bedeuten; R für ein Wasserstoffatom steht und R⁵ für

O₂N

steht.
27. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung nach An spruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß man

(a) eine Verbindung der allgemeinen Formel (IX) 35

(ix)

in eine Verbindung der allgemeinen Formel(x) 10

»τ ^ γ t\ _(χ)

überführt/ worin R / R und X der oben gegebenen Definition entsprechen und Q eine Phosphatschutzgruppe bedeutet/

( 25 (b) ^^^e Phosphatschutzgruppe entfernt und

(c) das aus Stufe (b) erhaltene Produkt gegebenenfalls in ein pharmazeutisch verträgliches Salz überführt.
28. Verfahren nach Anspruch 27/ dadurch gekennzeichnet/ daß die Umsetzung einer Verbindung der allgemeinen Formel IX mit einer Verbindung der allgemeinen Formel HaI-P(X)(O-G) in Acetonitril oder (C₂₅)CN sowie in Gegenwart eines Trialkylamins erfolgt/ wobei Hai für Halogen steht/ und X und G der oben gegebenen Defintion entsprechen. 35