ES2646545T3

ES2646545T3 - Métodos y composiciones basadas en conjugados de toxina diftérica-interleucina-3

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Publication number: ES2646545T3
Application number: ES07837840.3T
Authority: ES
Inventors: Arthur E. Frankel
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2006-09-07
Filing date: 2007-09-07
Publication date: 2017-12-14
Anticipated expiration: 2027-09-07
Also published as: BE2021C516I2; US20080138313A1; CA3153438A1; DK2063907T3; CA3053981A1; CY1123035T1; EP2063907B1; US20190169251A1; US9631006B2; CY2021011I2; EP3520806B1; CY1119654T1; LTPA2021507I1; EP4414036A2; DK3207941T6; JP6654660B2; US20180022788A1; DK3207941T3; ES2987072T3; EP2063907A2

Abstract

Una composición farmacéutica que comprende un conjugado de interleucina-3 humana (IL-3)-toxina diftérica para su uso en un método de tratamiento de cáncer en un ser humano, en la que dicho método comprende la administración del conjugado de IL-3-toxina diftérica a una dosis de aproximadamente 4 μg/kg, aproximadamente 5 4 μg/kg a aproximadamente 12,5 μg/kg, aproximadamente 4 μg/kg a aproximadamente 20 μg/kg, aproximadamente 5,3 μg/kg, aproximadamente 7,1 μg/kg, aproximadamente 9,4 μg/kg o aproximadamente 12,5 μg/kg por día, en la que dicho cáncer se caracteriza por células que expresan IL-3R; y en la que el término aproximadamente representa un valor que es no superior al 10 % por encima o por debajo de la dosis establecida.

Description

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En otro aspecto adicional, la presente divulgación se refiere a un método de tratamiento, prevención y/o gestión de una enfermedad o trastorno que se muestra o se caracteriza por expresión del receptor de interleucina-3 que comprende administrar a un ser humano en necesidad de tal tratamiento, prevención y/o gestión una composición farmacéutica que comprende una cantidad de un conjugado de interleucina-3-toxina diftérica eficaz para tratar, prevenir y/o gestionar la enfermedad o trastorno y un vehículo farmacéuticamente aceptable, en el que las células expresan la subunidad alfa del receptor de interleucina-3. En un aspecto de esta realización, las células expresan tanto las subunidades alfa como beta del receptor de interleucina-3. En aspectos específicos de esta realización, el conjugado puede administrarse a una dosis de 4 µg/kg por día o mayor. En otros aspectos, el conjugado puede administrarse a una dosis en un intervalo de aproximadamente 4 µg/kg por día a aproximadamente 20 µg/kg por día. En aún otros aspectos, el conjugado puede administrarse a una dosis en un intervalo de aproximadamente 4 µg/kg por día a aproximadamente 9 µg/kg por día. En aún otros aspectos, el conjugado puede administrarse a una dosis en un intervalo de aproximadamente 4 µg/kg por día a aproximadamente 12,5 µg/kg por día. En un aspecto específico de esta realización, el conjugado puede administrarse a una dosis de aproximadamente 5,3 µg/kg por día,

o a una dosis de aproximadamente 7,1 µg/kg por día, o a una dosis de aproximadamente 9,4 µg/kg por día, o a una dosis de aproximadamente 12,5 µg/kg por día. En un aspecto específico, el conjugado puede administrarse a o por debajo de una dosis que es la máxima dosis tolerada sin excesiva toxicidad. En un aspecto de esta realización, la expresión del receptor de interleucina-3 puede ser expresión en exceso de receptor de interleucina-3 sobre células que normalmente expresan el receptor de interleucina-3. En otro aspecto, la expresión del receptor de interleucina-3 puede ser la expresión de receptor de interleucina-3 inapropiada en células que normalmente no expresan el receptor de interleucina-3. En otro aspecto más, la enfermedad o trastorno que se muestra o se caracteriza por la presencia o presencia en exceso de un tipo de célula que expresa el receptor de interleucina-3. Enfermedades o trastornos a modo de ejemplo que pueden tratarse en esta realización de la invención incluyen, pero no se limitan a, enfermedades alérgicas o trastornos, enfermedades autoinmunitarias o trastornos, enfermedades inflamatorias o trastornos, o cánceres (incluyendo, sin limitación, leucemia mieloide aguda). En aspectos donde la enfermedad o trastorno es cáncer, el cáncer puede ser resistente, o multirresistente. En algunas realizaciones, la enfermedad o trastorno es SMD.

En otro aspecto más de la presente divulgación, se proporciona un método de tratamiento, prevención y/o gestión del cáncer, método que comprende administrar a un ser humano en necesidad de tal tratamiento, prevención y/o gestión una composición farmacéutica que comprende una cantidad de un conjugado de interleucina-3-toxina diftérica eficaz para tratar, prevenir y/o gestionar el cáncer y un vehículo farmacéuticamente aceptable, en el que las células cancerosas expresan las subunidades alfa y beta del receptor de interleucina-3, con la condición de que el cáncer no sea leucemia mieloide aguda. En otro aspecto más, la presente divulgación se refiere a un método de tratamiento o prevención de cáncer, que comprende administrar a un ser humano en necesidad de tal tratamiento o prevención una composición farmacéutica que comprende una cantidad de un conjugado de interleucina-3-toxina diftérica eficaz para tratar o prevenir el cáncer y un vehículo farmacéuticamente aceptable, en el que las células madre cancerosas expresan las subunidades alfa y beta del receptor de interleucina-3, con la condición de que el cáncer no sea leucemia mieloide aguda.

En aspectos específicos de esta realización, el conjugado puede administrarse a una dosis de 4 µg/kg por día o mayor. En otros aspectos, el conjugado puede administrarse a una dosis en un intervalo de aproximadamente 4 µg/kg por día a aproximadamente 20 µg/kg por día. En aún otros aspectos, el conjugado puede administrarse a una dosis en un intervalo de aproximadamente 4 µg/kg por día a aproximadamente 9 µg/kg por día. En aún otros aspectos, el conjugado puede administrarse a una dosis en un intervalo de aproximadamente 4 µg/kg por día a aproximadamente 12,5 µg/kg por día. En un aspecto específico de esta realización, el conjugado puede administrarse a una dosis de aproximadamente 5,3 µg/kg por día, o a una dosis de aproximadamente 7,1 µg/kg por día, o a una dosis de aproximadamente 9,4 µg/kg por día, o a una dosis de aproximadamente 12,5 µg/kg por día. En un aspecto específico, el conjugado puede administrarse a o por debajo de una dosis que es la máxima dosis tolerada sin excesiva toxicidad. Además, el conjugado puede administrarse al menos dos veces a la semana o el conjugado puede administrarse al menos tres veces a la semana, al menos cuatro veces a la semana, al menos cinco veces a la semana, al menos seis veces a la semana, o siete veces a la semana. En un aspecto específico, donde el conjugado se administra más de una vez, el conjugado puede administrarse a una dosis de 4 µg/kg por día

: o mayor cada vez. En particular, el conjugado puede administrarse durante un periodo de dos semanas o mayor. En otros aspectos, el crecimiento de las células cancerosas o las células madre cancerosas puede inhibirse al menos el 50 %, al menos el 65 %, al menos el 75 %, al menos el 80 %, al menos el 85 %, al menos el 90 %, al menos el 95 %

: o al menos el 99 % en comparación con una muestra de referencia, es decir, una muestra de células no puesta en contacto con un conjugado de la invención.

En otros aspectos de estas realizaciones, el paciente humano puede estar en un estado de remisión del cáncer. En aún otros aspectos, el paciente humano ha sido previamente tratado con el conjugado o ha sido previamente tratado con agentes quimioterapéuticos convencionales o tiene radioterapia. En otro aspecto más, el paciente humano, concurrente con el tratamiento con compuestos de la invención, puede administrarse con un agente quimioterapéutico convencional o puede recibir radioterapia. En otros aspectos, el paciente humano no tiene niveles detectables de anticuerpos anti-toxina diftérica antes de la administración de un conjugado de la invención. En otro aspecto más, el método comprende además administrar un agente quimioterapéutico convencional. En aspectos particulares, el cáncer es un cáncer no hematológico. Además, el cáncer puede ser resistente o multirresistente.

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En un aspecto específico, los métodos de esta realización pueden comprender además monitorizar la cantidad de células cancerosas o células madre cancerosas que expresan la subunidad alfa (en algunas realizaciones, las subunidades alfa y beta) del receptor de interleucina-3 en una muestra derivada del ser humano después de la administración de un conjugado de la invención y determinar una evolución adicional del tratamiento basada en la cantidad de células cancerosas o las células madre cancerosas que expresan la subunidad alfa (en algunas realizaciones, las subunidades alfa y beta) presentes en la muestra en comparación con una muestra de referencia o una muestra de células cancerosas o las células madre cancerosas obtenidas del ser humano antes o durante la administración del conjugado.

En otro aspecto más, la presente divulgación se refiere a un método de tratamiento, prevención y/o gestión de leucemia mieloide que comprende administrar a un ser humano en necesidad de tal tratamiento, prevención y/o gestión una composición farmacéutica que comprende una cantidad de un conjugado de interleucina-3-toxina diftérica eficaz para tratar o prevenir leucemia mieloide y un vehículo farmacéuticamente aceptable, en el que el conjugado se administra a una dosis superior a 4 µg/kg, y en el que las células de leucemia mieloide expresan las subunidades alfa y beta del receptor de interleucina-3. En particular, la leucemia mieloide puede ser leucemia mieloide aguda, leucemia mieloide crónica, o síndrome mielodisplásico. En algunos casos, la leucemia mieloide puede ser resistente y/o multirresistente. En ciertos aspectos de esta realización, las células de leucemia mieloide pueden expresan tanto las subunidades alfa como beta del receptor de interleucina-3.

En aspectos específicos de esta realización, el conjugado puede administrarse a una dosis de 4 µg/kg por día o mayor. En otros aspectos, el conjugado puede administrarse a una dosis en un intervalo de aproximadamente 4 µg/kg por día a aproximadamente 20 µg/kg por día. En aún otros aspectos, el conjugado puede administrarse a una dosis en un intervalo de aproximadamente 4 µg/kg por día a aproximadamente 9 µg/kg por día. En aún otros aspectos, el conjugado puede administrarse a una dosis en un intervalo de aproximadamente 4 µg/kg por día a aproximadamente 12,5 µg/kg por día. En un aspecto específico de esta realización, el conjugado puede administrarse a una dosis de aproximadamente 5,3 µg/kg por día, o a una dosis de aproximadamente 7,1 µg/kg por día, o a una dosis de aproximadamente 9,4 µg/kg por día, o a una dosis de aproximadamente 12,5 µg/kg por día. Además, el conjugado puede administrarse al menos dos veces a la semana o el conjugado puede administrarse al menos tres veces a la semana, al menos cuatro veces a la semana, al menos cinco veces a la semana, al menos seis veces a la semana, o siete veces a la semana. En un aspecto específico, donde el conjugado se administra más de una vez, el conjugado puede administrarse a una dosis superior a 4 µg/kg por día cada vez. En particular, el conjugado puede administrarse durante un periodo de dos semanas o mayor. En ciertos aspectos, la cantidad de células de leucemia mieloide puede disminuirse al menos el 50 %, al menos el 65 %, al menos el 75 %, al menos el 80 %, al menos el 85 %, al menos el 90 %, al menos el 95 % o al menos el 99 % en comparación con una muestra de referencia, es decir, una muestra de células no puesta en contacto con un conjugado de la invención. En un aspecto específico de esta realización, el conjugado puede administrarse a una dosis de aproximadamente 5,3 µg/kg por día, o a una dosis de aproximadamente 7,1 µg/kg por día, o a una dosis de aproximadamente 9 µg/kg por día.

En otros aspectos de estas realizaciones, el paciente humano puede estar en un estado de remisión de la leucemia mieloide. En aún otros aspectos, el paciente humano ha sido previamente tratado con el conjugado o ha sido previamente tratado con agentes quimioterapéuticos convencionales o radioterapia. En otro aspecto más, el paciente humano puede administrarse simultáneamente con un agente quimioterapéutico convencional o radioterapia. En otro aspecto más, el paciente humano se administra con el conjugado 1 día, 2 días, 3 días, 4 días, 5 días, 6 días, 7 días, 2 semanas, 3 semanas, 1 mes, 2 meses, 3 meses, 4 meses, 5 meses, 6 meses, 9 meses, o 12 meses después de recibir quimioterapia convencional. En otros aspectos, el paciente humano tiene bajos niveles o ningún nivel detectable de anticuerpos anti-toxina diftérica antes de la administración de un conjugado de la invención. En otro aspecto más, el método comprende además administrar un agente quimioterapéutico convencional.

En un aspecto específico, los métodos de esta realización pueden comprender además monitorizar la cantidad de células de leucemia mieloide que expresa las subunidades alfa y/o beta del receptor de interleucina-3 en una muestra derivada del ser humano después de la administración de un conjugado de la invención y determinar una evolución adicional del tratamiento basada en la cantidad de células de leucemia mieloide que expresan las subunidades alfa y/o beta presentes en la muestra en comparación con una muestra de referencia o una muestra de células de leucemia mieloide obtenida del ser humano antes o durante la administración del conjugado.

En un aspecto específico, los métodos de esta realización pueden comprender además monitorizar la cantidad de células de leucemia mieloide que expresan la subunidad alfa del receptor de interleucina-3 en una muestra derivada del ser humano después de la administración de un conjugado de la invención y determinar una evolución adicional del tratamiento basada en la cantidad de células de leucemia mieloide que expresan la subunidad alfa presente en la muestra en comparación con una muestra de referencia o una muestra de células de leucemia mieloide obtenida del ser humano antes o durante la administración del conjugado.

La presente divulgación también se refiere a un método de prevención de una recaída de cáncer en un ser humano previamente tratados para el cáncer, que comprende administrar a un ser humano en necesidad de tal prevención que había sido previamente tratado para el cáncer, con una composición farmacéutica que comprende una cantidad de un conjugado de interleucina-3-toxina diftérica eficaz para prevenir la recaída del cáncer y un vehículo farmacéuticamente aceptable, en el que las células cancerosas o las células madre cancerosas expresan las

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Como se usa en el presente documento, el término "célula(s) madre de cáncer" se refiere a una célula que puede ser un progenitor de una célula cancerosa altamente proliferativa. Una célula madre de cáncer tiene la capacidad de volver a hacer crecer un tumor como se demuestra por su capacidad para formar tumores en ratones inmunodeprimidos, y normalmente para formar tumores tras el posterior trasplante en serie en ratones inmunodeprimidos. Las células madre de cáncer también están normalmente creciendo lentamente con respecto a la masa de un tumor; es decir, las células madre cancerosas son generalmente quiescentes. En ciertas realizaciones, pero no todas, la célula madre de cáncer puede representar aproximadamente del 0,1 al 10 % de un tumor.

Como se usa en el presente documento, el término "cantidad eficaz" se refiere a la cantidad de una terapia que es suficiente para producir la prevención del desarrollo, reaparición o aparición del cáncer y uno o más síntomas del mismo, para potenciar o mejorar el (los) efecto(s) profiláctico(s) de otra terapia, reducir la gravedad, la duración del cáncer, mejorar uno o más síntomas del cáncer, prevenir el avance del cáncer, producir la regresión del cáncer y/o potenciar o mejorar el (los) efecto(s) terapéutico(s) de otra terapia. En una realización de la invención, la cantidad de una terapia es eficaz para lograr uno, dos, tres o más resultados tras la administración de una, dos, tres o más terapias: (1) una estabilización, reducción o eliminación de la población de células madre de cáncer; (2) una estabilización, reducción o eliminación en la población de células cancerosas; (3) una estabilización o reducción en el crecimiento de un tumor o neoplasia; (4) una alteración en la formación de un tumor; (5) erradicación, eliminación

o control de cáncer primario, regional y/o metastásico; (6) una reducción en la mortalidad; (7) un aumento en la duración, o tasa, de la supervivencia sin enfermedad, sin recaída, sin progresión y/o global; (8) un aumento en la tasa de respuesta, la durabilidad de la respuesta, o número de pacientes que responden o están en remisión; (9) una disminución en la tasa de hospitalizaciones, (10) una disminución en las duraciones de hospitalización, (11) el tamaño del tumor se mantiene y no aumenta o aumenta menos del 10 %, preferentemente menos del 5 %, preferentemente menos del 4 %, preferentemente menos del 2 %, (12) un aumento en el número de pacientes en remisión, (13) un aumento en la longitud o duración de la remisión, (14) una disminución en la tasa de reaparición de cáncer, (15) un aumento en el tiempo hasta la reaparición del cáncer, y (16) una mejora de los síntomas relacionados con el cáncer y/o la calidad de vida.

Como se usa en el presente documento, la expresión "ser humano anciano" se refiere a un ser humano entre 65 años de edad o mayor, preferentemente 70 años de edad o mayor.

Como se usa en el presente documento, la expresión "adulto humano" se refiere a un ser humano de 18 años de edad o mayor.

Como se usa en el presente documento, la expresión "niño humano" se refiere a un ser humano de entre 24 meses de edad y 18 años de edad.

Como se usa en el presente documento, la expresión "lactante humano" se refiere a un ser humano de menos de 24 meses de edad, preferentemente menos de 12 meses de edad, menos de 6 meses de edad, menos de 3 meses de edad, menos de 2 meses de edad, o menos de 1 mes de edad.

Como se usa en el presente documento, la expresión "paciente humano" se refiere a cualquier ser humano, tanto anciano, adulto, niño como lactante.

Como se usa en el presente documento, el término "resistente" se determina casi siempre por el fracaso a alcanzar el criterio de valoración clínico, por ejemplo, respuesta, duración de respuesta prolongada, supervivencia sin enfermedad prolongada, recaída sin supervivencia, supervivencia sin progresión y supervivencia global. Otra forma de definir que es resistente a una terapia es que un paciente ha dejado de lograr una respuesta a una terapia de forma que se determina que la terapia no es terapéuticamente eficaz.

Como se usa en el presente documento, el término "se une específicamente a un antígeno" y términos análogos se refiere a péptidos, polipéptidos, proteínas, proteínas de fusión y anticuerpos o fragmentos de los mismos que se unen específicamente a un antígeno o un fragmento y no se unen específicamente a otros antígenos. Un péptido, polipéptido, proteína o anticuerpo que se une específicamente a un antígeno puede unirse a otros péptidos, polipéptidos o proteínas con afinidad más baja como se ha determinado por, por ejemplo, inmunoensayos, BIAcore, u otros ensayos conocidos en la técnica. Anticuerpos o fragmentos que se unen específicamente a un antígeno pueden ser reactivos de forma cruzada con antígenos relacionados. Preferentemente, anticuerpos o fragmentos que se unen específicamente a un antígeno no reaccionan de forma cruzada con otros antígenos. Un anticuerpo se une específicamente a un antígeno cuando se une al antígeno con afinidad más alta que a cualquier antígeno reactivo de forma cruzada como se determina usando técnicas experimentales, tales como radioinmunoensayos (RIA) y enzimoinmunoanálisis de adsorción (ELISA). Véase, por ejemplo, Paul, ed., 1989, Fundamental Immunology, 2nd ed., Raven Press, New York, en las páginas 332-336 para una discusión referente a la especificidad del anticuerpo.

Como se usa en el presente documento, el término "en combinación" en el contexto de la administración de una terapia a un sujeto se refiere al uso de más de una terapia (por ejemplo, profiláctica y/o terapéutica). El uso del término "en combinación" no limita el orden en el que las terapias (por ejemplo, una primera y segunda terapia) se administran a un sujeto. Una terapia puede administrarse antes de (por ejemplo, 1 minuto, 5 minutos, 15 minutos, 30 minutos, 45 minutos, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas, 12 horas, 24 horas, 48 horas, 72 horas, 96 horas, 1 semana,

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conservativas, incluso más preferentemente no más de 40 sustituciones de aminoácidos conservativas, todavía más preferentemente no más de 30 sustituciones de aminoácidos conservativas, y todavía incluso más preferentemente no más de 20 sustituciones de aminoácidos conservativas, con respecto a la secuencia de aminoácidos de IL-3 nativa (por ejemplo, la secuencia de aminoácidos de IL-3 humana nativa), que produce un cambio silencioso, es decir, ningún cambio en la actividad. En otra realización de la invención, un polipéptido de IL-3 comprende una secuencia de aminoácidos que contiene al menos una sustitución de aminoácidos conservativa; pero no más de 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 o 1 sustituciones de aminoácidos conservativas con respecto a la secuencia de aminoácidos de IL-3 nativa (por ejemplo, la secuencia de aminoácidos de IL-3 humana nativa), que produce un cambio silencioso. En otra realización más, un polipéptido de IL-3 comprende una secuencia de aminoácidos que contiene una o más sustituciones conservativas o una combinación de sustituciones de aminoácidos no conservativas y conservativas con respecto a la secuencia de aminoácidos de IL-3 nativa, que produce un cambio silencioso.

Para mejorar o alterar las características de los polipéptidos IL-3, puede emplearse ingeniería de proteínas. Puede usarse la tecnología de ADN recombinante conocida para aquellos expertos en la materia para crear proteínas mutantes novedosas o "muteínas", que incluyen sustituciones individuales o múltiples de aminoácidos, deleciones, adiciones, o proteínas de fusión. Tales polipéptidos modificados pueden mostrar, por ejemplo, actividad potenciada, potencia, afinidad y/o elevada estabilidad. Además, éstos pueden purificarse con rendimientos más altos y mostrar mejor solubilidad que el polipéptido natural correspondiente, por ejemplo, bajo ciertas condiciones de purificación y almacenamiento. Por ejemplo, para muchas proteínas, se conoce en la técnica que uno o más aminoácidos pueden ser delecionados del extremo N o extremo C sin pérdida sustancial de función biológica. Un conjugado a modo de ejemplo comprende una IL-3 modificada con sustitución de aminoácidos K116W en la IL-3 humana. Otro conjugado a modo de ejemplo comprende los aminoácidos 125-133 ausentes de IL-3 humana. Ambos de estos conjugados con secuencias de IL-3 mutantes presentan unión potenciada al receptor de IL-3 y presentan mayor citotoxicidad contra células de leucemia (para ejemplos no limitantes de conjugados, véanse Liu et al. "Diphtheria toxin fused to variant interleukin-3 provides enhanced binding to the interleukin-3 receptor and more potent leukemia cell cytotoxicity", Exp. Hematol. 32:277-281 (2004); Hogge et al. "Variant diphtheria toxin-interleukin-3 fusion proteins with increased receptor affinity have enhanced cytotoxicity against acute myeloid leukemia progenitors", Clin. Cancer Res. 12:12841291 (2006); Testa et al. "Diphtheria toxin fused to variant human interleukin-3 induces cytotoxicity of blasts from patients with acute myeloid leukemia according to the level of interleukin-3 receptor expression", Blood 106:25272529 (2005); y Klein et al. "Receptor binding kinetics of human IL-3 variants with altered proliferative activity", Biochem. Biophys. Res. Comm. 288:1244-1249 (2001)).

En otra realización, un polipéptido de IL-3 es al menos el 50 %, al menos el 65 %, al menos el 70 %, al menos el 75 %, al menos el 80 %, al menos el 85 %, al menos el 90 %, o al menos 95 % idéntico a una secuencia de aminoácidos de IL-3 nativa (por ejemplo, una secuencia de aminoácidos de IL-3 humana nativa).

5.1.1-MÉTODOS DE PRODUCCIÓN DE CONJUGADOS DE INTERLEUCINA-3-TOXINA DIFTÉRICA

Los conjugados de la presente invención pueden prepararse por técnicas de ADN recombinante convencionales o por técnicas de proteína sintética, por ejemplo, por el uso de un sintetizador de péptidos. Por ejemplo, una molécula de ácido nucleico que codifica un conjugado de la invención puede sintetizarse por técnicas convencionales que incluyen sintetizadores de ADN automatizados. Alternativamente, la amplificación por PCR de fragmentos de genes puede llevarse a cabo usando cebadores de anclaje que dan lugar a nucleótidos protuberantes complementarios entre dos fragmentos de genes consecutivos que posteriormente pueden hibridarse y reamplificarse para generar una secuencia de genes quimérica (véase, por ejemplo, Current Protocols in Molecular Biology, eds. Ausubel y col. John Wiley & Sons: 1992).

Las secuencias de nucleótidos que codifican un conjugado de la invención (secuencias de IL-3 y de toxina diftérica) pueden obtenerse de cualquier información disponible para aquellos expertos en la materia (es decir, de Genbank, la bibliografía, o por clonación rutinaria). La secuencia de nucleótidos que codifica un conjugado puede insertarse en un vector de expresión apropiado, es decir, un vector que contiene los elementos necesarios para la transcripción y traducción de la secuencia codificante de proteínas insertada. En algunos casos, la secuencia de toxina diftérica puede ser truncada con el fin de eliminar un dominio específico, tal como el dominio de direccionamiento. Las técnicas para modificar o truncar el ADN son muy conocidas para aquellos expertos en la materia de la biología molecular. Por tanto, las secuencias de IL-3 y de toxina diftérica pueden ligarse de tal forma que se genere una secuencia de ADN que, cuando se traduce, crea un polipéptido que es un compuesto de la invención. En ejemplos preferidos, una secuencia conectora se introduce en la secuencia recombinante que une la secuencia de IL-3 y la secuencia de toxina diftérica. Puede utilizarse una variedad de sistemas de hospedador-vector en la presente invención para expresar la secuencia codificante de proteína. Éstos incluyen, pero no se limitan a, sistemas de células de mamífero infectados con virus (por ejemplo, virus de la variolovacuna, adenovirus, etc.); sistemas de células de insecto infectadas con virus (por ejemplo, baculovirus); microorganismos tales como levadura (por ejemplo, Pichia) que contienen vectores de levadura; o bacterias (tales como E. coli) transformadas con bacteriófago, ADN, ADN de plásmido, o ADN de cósmido. Los elementos de expresión de vectores varían en sus intensidades y especificidades. Dependiendo del sistema hospedador-vector utilizado, pueden usarse uno cualquiera de varios elementos de transcripción y traducción adecuados. En una realización específica, la proteína se expresa en E. coli. En otra realización específica, la proteína se expresa en Pichia.

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La composición farmacéutica puede estar en forma de un líquido, por ejemplo, un elixir, jarabe, disolución, emulsión,

o suspensión. El líquido puede ser útil para administración por vía oral o para administración mediante inyección. Cuando está previsto para administración por vía oral, una composición puede comprender uno o más de un edulcorante, conservante, colorante/colorante, y potenciador del aroma. En una composición para administración mediante inyección, también puede incluirse uno o más de un tensioactivo, conservante, agente humectante, agente dispersante, agente de suspensión, tampón, estabilizador y agente isotónico.

Las composiciones líquidas de la invención, si son disoluciones, suspensiones, u otra forma similar, también pueden incluir uno o más de los siguientes: diluyentes estériles tales como agua para inyección, solución salina, preferentemente solución salina fisiológica, disolución de Ringer, cloruro sódico isotónico, aceites no volátiles tales como mono o diglicéridos sintéticos que pueden servir de disolvente o medio de suspensión, polietilenglicoles, glicerina, ciclodextrina, propilenglicol, u otros disolventes; agentes antibacterianos tales como alcohol bencílico o metilparabeno; antioxidantes tales como ácido ascórbico o bisulfito de sodio; agentes quelantes tales como ácido etilendiaminatetraacético; tampones tales como acetatos, citratos o fosfatos; y agentes para el ajuste de la tonicidad tales como cloruro sódico o dextrosa. Una composición parenteral puede estar encerrada en una ampolla, una jeringa desechable, o un vial de múltiples dosis hecho de vidrio, plástico u otro material. La solución salina fisiológica es un adyuvante preferido. Una composición inyectable es preferentemente estéril.

Las composiciones farmacéuticas comprenden una cantidad eficaz de un conjugado de la invención de forma que se obtendrá una dosificación adecuada (véase la Sección 5.3.1, abajo, para dosificaciones adecuadas). Normalmente, esta cantidad es al menos el 0,01 % de un conjugado de la invención en peso de la composición. Cuando está prevista para administración por vía oral, esta cantidad puede variarse para estar entre el 0,1 % y el 80 % en peso de la composición. Composiciones orales preferidas pueden comprender entre el 4 % y el 50 % del compuesto de la invención en peso de la composición. Composiciones preferidas de la presente invención se preparan de manera que una unidad de dosificación parenteral contenga entre el 0,01 % y el 2 % en peso del compuesto de la invención.

Las composiciones de la invención pueden administrarse por cualquier vía conveniente, por ejemplo, por infusión o inyección en bolo, por absorción a través de revestimientos epiteliales o mucocutáneos (por ejemplo, mucosa oral, mucosa rectal e intestinal, etc.). La administración puede ser sistémica o local. Se conocen diversos sistemas de administración, por ejemplo, micropartículas, microcápsulas, cápsulas, etc., y pueden ser útiles para administrar un compuesto de la invención. En ciertas realizaciones, más de un compuesto de la invención se administra a un sujeto. Métodos de administración pueden incluir, pero no se limitan a, administración por vía oral y administración parenteral; incluyendo la administración parenteral, pero no se limita a, intradérmica, intramuscular, intraperitoneal, intravenosa, subcutánea; intranasal, epidural, sublingual, intranasal, intracerebral, intraventricular, intratecal, intravaginal, transdérmica, por vía rectal, por inhalación, o por vía tópica a los oídos, nariz, ojos o piel. El modo de administración preferido se deja a criterio del médico, y dependerá, en parte, del sitio de la afección médica (tal como el sitio de cáncer, un tumor canceroso o una afección pre-cancerosa).

En una realización, los compuestos de la invención se administran por vía parenteral. En una realización específica, los compuestos de la invención se administran por vía intravenosa. En otra realización, los compuestos de la invención se administran por infusión continua. En una realización particular, los compuestos de la invención se administran por una infusión que dura durante aproximadamente 15 minutos, aproximadamente 20 minutos, aproximadamente 30 minutos, aproximadamente 45 minutos, aproximadamente 1 hora, o aproximadamente 2 horas.

En realizaciones específicas, puede ser deseable administrar uno o más compuestos de la invención localmente al área en necesidad de tratamiento. Esto puede lograrse, por ejemplo, y no a modo de limitación, por infusión local durante cirugía; administración tópica, por ejemplo, conjuntamente con un apósito para heridas después de cirugía; mediante inyección; por medio de un catéter; por medio de un supositorio; o por medio de un implante, siendo el implante un material poroso, no poroso, o gelatinoso, que incluye membranas, tales como membranas sialásticas, o fibras. En una realización, la administración puede ser por inyección directa en el sitio (o sitio anterior) de un cáncer, tumor, o tejido precanceroso. En ciertas realizaciones, puede desearse introducir uno o más compuestos de la invención en el sistema nervioso central por cualquier vía adecuada, que incluye inyección intraventricular e intratecal. La inyección intraventricular puede facilitarse por un catéter intraventricular, por ejemplo, unido a un depósito, tal como un depósito Ommaya. En ciertas realizaciones, uno o más compuestos de la invención pueden inyectarse por vía intraperitoneal.

También puede emplearse administración pulmonar, por ejemplo, usando un inhalador o nebulizador, y formulación con un agente aerosolizante, o mediante perfusión en un tensioactivo pulmonar de fluorocarburo o sintético. En ciertas realizaciones, los compuestos de la invención pueden formularse como un supositorio, con aglutinantes y vehículos tradicionales tales como triglicéridos.

En otra realización más, los compuestos de la invención pueden administrarse en un sistema de liberación controlada. En una realización, puede usarse una bomba (véanse Sefton, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 1987, 14, 201; Buchwald et al., Surgery 1980, 88: 507; Saudek et al., N. Engl. J. Med. 1989, 321: 574). En otra realización, pueden usarse materiales poliméricos (véase Medical Applications of Controlled Release, Langer and Wise (eds.), CRC Pres., Boca Raton, FL, 1974; Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance, Smolen and Ball (eds.), Wiley, New York, 1984; Ranger and Peppas, J. Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem. 1983, 23,

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61; véase también Levy et al., Science 1985, 228, 190; During et al., Ann. Neurol. 1989, 25, 351; Howard et al., J. Neurosurg., 1989, 71, 105). En otra realización más, puede disponerse un sistema de liberación controlada en proximidad de la diana de los compuestos de la invención, por ejemplo, el cerebro, requiriendo así solo una fracción de la dosis sistémica (véase, por ejemplo, Goodson, en Medical Applications of Controlled Release, arriba, vol. 2, 1984, pp. 115-138). También pueden usarse otros sistemas de liberación controlada tratados en la revisión por Langer (Science 1990, 249, 1527-1533).

En otra realización, pueden usarse materiales poliméricos para lograr la liberación controlada o sostenida de los compuestos de la invención (véanse, por ejemplo, la patente de EE.UU. N.º 5.679.377; la patente de EE.UU. N.º 5.916.597; la patente de EE.UU. N.º 5.912.015; la patente de EE.UU. N.º 5.989.463; la patente de EE.UU. N.º 5.128.326; publicación PCT N.º WO 99/15154; y publicación PCT N.º WO 99/20253. Ejemplos de polímeros usados en las formulaciones de liberación sostenida incluyen, pero no se limitan a, poli(metacrilato de 2-hidroxietilo), poli(metacrilato de metilo), poli(ácido acrílico), poli(etileno-co-acetato de vinilo), poli(ácido metacrílico), poliglicolidas (PLG), polianhídridos, poli(N-vinilpirrolidona), poli(alcohol vinílico), poliacrilamida, poli(etilenglicol), polilactidas (PLA), poli(lactida-co-glicolidas) (PLGA) y poliortoésteres. En una realización preferida, el polímero usado en una formulación de liberación sostenida es inerte, libre de impurezas lixiviables, estable durante el almacenamiento, estéril y biodegradable.

En una realización específica, puede usarse una bomba para administrar los compuestos de la invención (véanse, por ejemplo, Sefton, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 1987, 14, 201; Buchwald et al., Surgery 1980, 88: 507; Saudek et al., N. Engl. J. Med. 1989, 321: 574). En una realización específica, la bomba puede ser, pero no se limita a, una bomba de tipo insulina.

Las presentes composiciones pueden tomar la forma de disoluciones, suspensiones, comprimidos, píldoras, pellas, cápsulas, cápsulas que contienen líquidos, polvos, formulaciones de liberación sostenida, supositorios, emulsiones, aerosoles, esprays, suspensiones, o cualquier otra forma adecuada para su uso. En una realización, el vehículo farmacéuticamente aceptable es una cápsula (véase, por ejemplo, la patente de EE.UU. N.º 5.698.155). Otros ejemplos de vehículos farmacéuticos adecuados se describen en Remington's Pharmaceutical Sciences por E.W. Martin.

Composiciones de liberación sostenida o dirigida que pueden formularse incluyen, pero no se limitan a, compuestos de la invención protegidos con recubrimientos diferencialmente degradables, por ejemplo, por microencapsulación, múltiples recubrimientos, etc. También es posible liofilizar las composiciones y usar los liofilizados obtenidos, por ejemplo, para la preparación de productos para inyección.

En una realización preferida, los conjugados de la invención se formulan según procedimientos rutinarios como una composición farmacéutica adaptada para administración intravenosa a animales, particularmente seres humanos. Normalmente, los excipientes o vehículos para administración intravenosa son disoluciones de tampón acuoso isotónico estéril. Donde sea necesario, las composiciones también pueden incluir un agente solubilizante. Composiciones para administración intravenosa pueden opcionalmente comprender un anestésico local tal como lignocaína para aliviar el dolor en el sitio de la inyección. Generalmente, los componentes se suministran o bien por separado o bien mezclados juntos en forma de dosificación unitaria, por ejemplo, como un polvo liofilizado seco o concentrado libre de agua en un envase herméticamente sellado tal como una ampolla o sobre que indica la cantidad de agente activo. Donde un conjugado de la invención va a administrarse por infusión, puede ser dispensado, por ejemplo, con una botella de infusión que contiene agua estéril de calidad farmacéutica o solución salina. Donde el conjugado de la invención se administra mediante inyección, puede proporcionarse una ampolla de agua estéril para inyección o solución salina de manera que los componentes puedan mezclarse antes de la administración.

Composiciones para administración oral pueden estar en forma de comprimidos, pastillas para chupar, suspensiones acuosas o aceitosas, gránulos, polvos, emulsiones, cápsulas, jarabes, o elixires, por ejemplo. Las composiciones administradas por vía oral pueden contener uno o más agentes opcionales, por ejemplo, edulcorantes tales como fructosa, aspartamo o sacarina; aromatizantes tales como menta, aceite de gaulteria o cereza; agentes colorantes; y agentes conservantes, para proporcionar una preparación farmacéuticamente sabrosa. Además, donde está en forma de comprimido o píldora, las composiciones pueden recubrirse para retardar la disgregación y absorción en el tubo gastrointestinal, proporcionándose así una acción sostenida durante un periodo de tiempo prolongado. Membranas selectivamente permeables que rodean un complejo de acción osmóticamente activa también son adecuadas para composiciones administradas por vía oral de la invención. En estas plataformas posteriores, el fluido del entorno que rodea la cápsula es absorbido por el complejo de acción, que se hincha para desplazar el agente o la composición de agente a través de una abertura. Estas plataformas de administración pueden proporcionar un perfil de administración de orden esencialmente cero a diferencia de los perfiles en forma de pico de formulaciones de liberación inmediata. También puede usarse un material de retraso de tiempo tal como monoestearato de glicerol

o estearato de glicerol. Composiciones orales puede incluir excipientes estándar tales como manitol, lactosa, almidón, estearato de magnesio, sacarina sódica, celulosa, carbonato de magnesio, etc. Tales vehículos son preferentemente de calidad farmacéutica.

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Las composiciones farmacéuticas de la invención pueden ser previstas para administración tópica, en cuyo caso el vehículo puede estar en forma de una disolución, emulsión, pomada, o base de gel. La base, por ejemplo, puede comprender uno o más de los siguientes: petrolato, lanolina, polietilenglicoles, cera de abeja, aceite mineral, diluyentes tales como agua y alcohol, y emulsionantes y estabilizadores. Los espesantes pueden estar presentes en una composición para administración tópica. Si está prevista para administración transdérmica, la composición puede estar en forma de un parche transdérmico o un dispositivo de iontoforesis. Formulaciones tópicas pueden comprender una concentración de un compuesto de la invención de entre el 0,01 % y el 10 % en peso/volumen (peso por unidad volumen de composición).

Las composiciones pueden incluir diversos materiales que modifican la forma física de una unidad de dosificación sólida o líquida. Por ejemplo, la composición puede incluir materiales que forman una vaina de recubrimiento alrededor de los principios activos. Los materiales que forman la vaina de recubrimiento normalmente son inertes, y pueden seleccionarse de, por ejemplo, azúcar, Shellac, y otros agentes de recubrimiento entérico. Alternativamente, los principios activos pueden estar encerrados en una cápsula de gelatina.

Las composiciones pueden consistir en unidades de dosificación gaseosas, por ejemplo, pueden estar en forma de un aerosol. El término aerosol se usa para indicar una variedad de sistemas que varían de aquellos de naturaleza coloidal a sistemas que consisten en envases presurizados. La administración puede ser por un gas licuado o comprimido o por un sistema de bomba adecuado que dispensa los principios activos. Los aerosoles de las composiciones pueden administrarse en sistemas monofásicos, bifásicos o trifásicos con el fin de administrar la composición. La administración del aerosol incluye los recipientes necesarios, activadores, válvulas, sub-receptores, espaciadores y similares, que juntos pueden formar un kit. Aerosoles preferidos pueden ser determinados por un experto en la materia, sin excesiva experimentación.

Si están en forma sólida, líquida o gaseosa, las composiciones de la presente invención pueden comprender un agente activo adicional seleccionado de entre aquellos que incluyen, pero no se limitan a, un agente profiláctico adicional, un agente terapéutico adicional, un agente antiemético, un factor estimulante de colonias hematopoyético, una terapia adyuvante, una vacuna u otro agente inmunoestimulante, un agente basado en anticuerpo/fragmento de anticuerpo, un antidepresivo y un agente analgésico. Por ejemplo, en una realización particular, la composición farmacéutica comprende un compuesto de la invención, un agente adicional y un excipiente o vehículo aceptable farmacéuticamente aceptable.

Las composiciones farmacéuticas pueden prepararse usando metodología muy conocida en la técnica farmacéutica. Por ejemplo, una composición prevista para ser administrada mediante inyección puede prepararse combinando un compuesto de la invención con agua para formar una disolución. Un tensioactivo puede añadirse para facilitar la formación de una disolución o suspensión homogénea. Los tensioactivos son complejos que pueden interaccionar no covalentemente con un compuesto de la invención para facilitar la disolución o suspensión homogénea del compuesto de la invención en el sistema de administración acuosa.

En una realización, las composiciones farmacéuticas de la presente invención pueden comprender uno o más agentes terapéuticamente activos conocidos.

5.3 USOS TERAPÉUTICOS Y PROFILÁCTICOS DE CONJUGADOS DE FUSIÓN DE INTERLEUCINA-3-TOXINA DIFTÉRICA

La presente divulgación proporciona métodos de inhibición del receptor de IL-3 que expresan células en un ser humano en necesidad del mismo administrando una cantidad eficaz de un conjugado de IL-3 humana-toxina diftérica de la invención. En ciertas realizaciones, el receptor de IL-3 que expresa las células no son células de leucemia mieloide. En algunas realizaciones, las células expresan la subunidad alfa del receptor de interleucina-3. En otras realizaciones, las células expresan la subunidad beta del receptor de interleucina-3. En aún otras realizaciones, las células expresan tanto las subunidades alfa como beta del receptor de IL-3.

La presente invención se refiere a terapias que implican administrar uno o más de los conjugados de interleucina-3toxina diftérica de la invención y composiciones que comprenden los conjugados de interleucina-3-toxina diftérica a un sujeto, preferentemente un sujeto humano, para prevenir, tratar, gestionar y/o mejorar la enfermedad o trastorno que muestra o se caracteriza por la expresión del receptor de interleucina-3 o uno o más síntomas de la misma. En una realización, la invención proporciona un método de prevención, tratamiento, gestión y/o mejora de una enfermedad o trastorno que muestra o se caracteriza por la expresión del receptor de interleucina-3 o uno o más síntomas de la misma, comprendiendo dicho método administrar a un sujeto en necesidad del mismo una cantidad eficaz de uno o más los conjugados de interleucina-3-toxina diftérica de la invención. Tales enfermedades y trastornos incluyen cáncer, enfermedades alérgicas, enfermedades inflamatorias y enfermedades autoinmunitarias.

La invención también proporciona métodos que comprenden administrar a un sujeto en necesidad del mismo un conjugado de interleucina-3-toxina diftérica de la invención y una o más terapias (por ejemplo, uno o más agentes profilácticos o terapéuticos) distintas del conjugado de interleucina-3-toxina diftérica de la invención que están actualmente siendo usadas, se han usado, son conocidas por ser útiles, o pueden ser útiles en la prevención, tratamiento, gestión y/o mejora de una enfermedad o trastorno que muestra o se caracteriza por la expresión del

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Aunque no se está ligado a teoría específica alguna, los solicitantes creen que por la administración de los regímenes profilácticamente y/o terapéuticamente eficaces, la población de células madre de cáncer de un cáncer/tumor se estabiliza o reduce, para limitar o prevenir la posible repoblación del tumor.

En ciertas realizaciones de estos aspectos, los regímenes comprenden administrar un régimen profilácticamente eficaz y/o un régimen terapéuticamente eficaz, en el que el régimen produce una reducción en la población de células madre de cáncer en el paciente. En una realización, el paciente que recibe el régimen se monitoriza para determinar si el régimen ha producido una reducción en la población de células madre de cáncer en el paciente.

Normalmente, la monitorización de la cantidad de células madre cancerosas se realiza detectando la cantidad de células madre cancerosas en un espécimen extraído del paciente. Métodos de detección de la cantidad de células madre cancerosas en un espécimen se describen abajo en la Sección 5.4. Esta etapa de monitorización normalmente se realiza al menos 1, 2, 4, 6, 7, 8, 10, 12, 14, 15, 16, 18, 20, o 30, 60, 90, 120 días, 6 meses, 9 meses, 12 meses, o >12 meses después de que el paciente empiece a recibir el régimen.

En algunas realizaciones, el espécimen puede ser un espécimen de sangre, en el que se cuantifica la cantidad de células madre cancerosas por unidad de volumen (por ejemplo, 1 ml) u otra unidad medida (por ejemplo, por campo de unidad en el caso de un análisis histológico). En ciertas realizaciones, la cantidad de células madre cancerosas se determina como una porción (por ejemplo, un porcentaje) de las células cancerosas presentes en el espécimen de sangre, como un subconjunto de las células cancerosas presentes en el espécimen de sangre, o como un subconjunto de un subconjunto de las células cancerosas presentes en el espécimen de sangre. La cantidad de células madre de cáncer, en otras realizaciones, puede determinarse como un porcentaje de los glóbulos sanguíneos totales.

En otras realizaciones, el espécimen extraído del paciente es un espécimen de tejido (por ejemplo, una biopsia extraída de supuesto tejido canceroso), donde la cantidad de células madre cancerosas puede medirse, por ejemplo, basándose en la cantidad de células madre cancerosas por unidad de peso del tejido. En ciertas realizaciones, la cantidad de células madre cancerosas se determina como una porción (por ejemplo, un porcentaje) de las células cancerosas presentes en el tejido, como un subconjunto de las células cancerosas presentes en el tejido, o como un subconjunto de un subconjunto de las células cancerosas presentes en el tejido.

La cantidad de células madre cancerosas en el espécimen extraído puede compararse con la cantidad de células madre cancerosas medidas en muestras de referencia para evaluar la eficacia del régimen, y la mejora del cáncer en terapia. En una realización, la muestra de referencia es un espécimen extraído del paciente que recibe la terapia, en la que el espécimen se extrae del paciente en un momento de tiempo temprano (por ejemplo, antes de recibir el régimen, como una muestra de referencia del nivel inicial, o en un momento de tiempo anterior mientras que recibe la terapia). En otra realización, la muestra de referencia se extrae de un paciente sanos no afectado por el cáncer.

En otras realizaciones, la cantidad de células madre cancerosas en el espécimen extraído puede compararse con un intervalo de referencia predeterminado. En una realización específica, el intervalo de referencia predeterminado se basa en i) la cantidad de células madre cancerosas obtenidas de una población (poblaciones) de pacientes que padecen el mismo tipo de cáncer que el paciente que recibe la terapia, o ii) la cantidad de células madre obtenidas de una población (poblaciones) de pacientes sin cáncer.

Si se determina que la reducción en la cantidad de células madre cancerosas es demasiado pequeña tras comparar con la cantidad de células madre cancerosas en el espécimen extraído del paciente que recibe el régimen con el espécimen de referencia, entonces el profesional médico tiene varias opciones para ajustar el régimen. Por ejemplo, el profesional médico pueden entonces aumentar o bien la dosificación del compuesto o composición de la invención administrada, la frecuencia de la administración, la duración de la administración, o bien cualquier combinación de los mismos. En una realización específica, después de hacerse la determinación, puede administrarse una segunda cantidad eficaz de un compuesto o composición de la invención al paciente.

En ciertas realizaciones, si se determina que la reducción en la cantidad de células madre cancerosas es aceptable tras comparar con la cantidad de células madre cancerosas en la muestra obtenida del paciente que recibe el régimen terapéutico o profiláctico con la muestra de referencia, entonces el profesional médico puede elegir no ajustar el régimen. Por ejemplo, el profesional médico puede elegir no aumentar o bien la dosificación del compuesto

: o composición de la invención que se administra, la frecuencia de la administración, la duración de la administración,

: o bien cualquier combinación de los mismos. Además, el profesional médico puede elegir añadir terapias adicionales

: o combinar terapias.

En otras realizaciones, los regímenes comprenden administrar un régimen profilácticamente eficaz y/o un régimen terapéuticamente eficaz, en el que el régimen produce una reducción en la cantidad de células cancerosas en el paciente. En una realización, el paciente que recibe el régimen se monitoriza para determinar si el régimen ha producido una reducción en la cantidad de células cancerosas en el paciente.

Normalmente, la monitorización de la cantidad de células cancerosas se realiza detectando la cantidad de células cancerosas en un espécimen extraído del paciente. Métodos de detección de la cantidad de células cancerosas en un espécimen se describen abajo en la Sección 5.5. Esta etapa de monitorización normalmente se realiza al menos

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Tabla 4 Nivel de dosis y efectos tóxicos relacionados con los fármacos de pacientes con LMA tratados con DT388IL3

Paciente N.º: Dosis µg/kg/ día Gr 2 relacionado con el fármaco o efectos secundarios más altos (grado de toxicidad de CTC)

6: 4 Gr 2 hipotensión; Gr 2 hipocalcemia

7: 4 Gr 2 hipoalbuminemia

8: 5,32 Gr 2 hipoalbuminemia

9: 5,32 Gr 2 hipoalbuminemia; Gr 2 hipocalcemia; Gr 2 AST; Gr 2 ALT

10: 5,32 Gr 2 taquicardia supraventricular; Gr 2 hipoalbuminemia

11: 5,32 Gr 2 fiebre; Gr 2 hipoalbuminemia; Gr 2 hipocalcemia; Gr 2 AST; Gr 2 ALT

12: 5,32 Gr 2 hipotensión; Gr 2 fiebre; Gr 2 escalofríos moderados / escalofríos intensos; Gr 2 aumento de peso; Gr 2 hipoalbuminemia; Gr 2 hipocalcemia

13: 5,32 Gr 2 hipoalbuminemia

14: 5,32 Gr 2 hipoalbuminemia; Gr 2 hipocalcemia; Gr 2 ALT

15: 5,32 Gr 2 fatiga; Gr 2 escalofríos moderados / escalofríos intensos; Gr 2 hipoalbuminemia; Gr 2 hipocalcemia; Gr 2 ALT

16: 7,07 Gr 2 hipoalbuminemia; Gr 2 hipocalcemia; Gr 2 ALT

17: 7,07 Gr 2 hipoalbuminemia

18: 7,07 Gr 2 hipertensión; Gr 2 fatiga; Gr 2 fiebre; Gr 2 urticaria/descamación; Gr 2 hipoalbuminemia; Gr 2 debilidad muscular, cuerpo entero/generalizado; Gr 2 Disnea

19: 7,07 Gr 2 síndrome de fuga vascular agudo; Gr 2 hipertensión; Gr 2 hipoalbuminemia; Gr 2 hipocalcemia; Gr 2 disnea; Gr 2 hipoxia

20: 7,07 Gr 2 hiperbilirrubinemia; Gr 2 hiperglucemia; Gr 2 hipoalbuminemia; Gr 2 hipocalcemia; Gr 2 AST; Gr 2 ALT

21: 7,07 Gr 2 hipoalbuminemia, Gr 2 AST, Gr 2 ALT

22: 7,07 Ninguno

23: 7,07 Gr 2 fiebre; Gr 2 hipocalcemia; Gr 2 hipoalbuminemia; Gr 2 síndrome de fuga vascular agudo

24: 7,07 Ninguno

25: 7,07 Gr 2 hipoalbuminemia

26: 7,07 Gr 2 AST

27: 9 Gr 2 fiebre; Gr 2 ALT; Gr 2 hipoalbuminemia

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Tabla 6 Características clínicas de pacientes con LMA tratados con DT388IL3

Paciente N.º: Edad (años)/sexo Estado de enfermedad Historia de tratamiento Citogenética

4a: 67/F 2º rel Ida/Ara-C; Mylotarg; Campath/Cytoxan; madre alógenas; Mylotarg; DLI; DLI; Mylotarg; DLI Normal

5: 57/M 1º rel 7&3/Citarabina/Dauno; 5&2/Citarabina/dauno; Citarabina/Mylotarg; Cytoxan/VP-18 +13

6a: 54/M 2º rel Ara-C/Ida; Ara-C/Gem/CPT-11; AraC/etopósido; trasplante de células madre; BiSusulphace/VP-18; madre autólogas -7

7b: 51/M 2º rel 7 + 3 + 3; Ara-C/L-asparaginasa; AraC/VP-16, Busulfán/ VP-16 más madre autólogas; Ara-C/Mito/Lasparaginasa; Ara-C/Mito/Lasparaginasa; Mylotarg t (6; 12)

8: 82/M 1º rel Citarabina/Dauno t(3; 21)(q26; q26)

9: 83/M 1º rel Citarabina/Dauno Normal

10: 89/M 1º rel Dauno/Ara-C; Dauno/Ara-C; Dauno/Ara-C; Dauno/Ara-C Normal

11: 54/F Ref ERYC/Ida (7 + 3); ERYC Normal

12: 81/F De Novo +8, +9

13: 76/M 2º rel Ida/Ara-C; VP16/Mito/Ara-C; Mylotarg; Vion/Timidor; Gem/Fludarabina/Mito Normal

14: 67/F Ref Inducción de ERYC/Ida (7 + 3) t(11; 18) (q25; q21), del (9) (p22p24); +8

15: 25/F 2º rel Terapia de inducción de 7 + 3; minl VP-16/Cytoxan/ Ara-C; re-inducción de CECA seguido de 7 + 3 t(9; 11) (p22; q23)

16: 44/F Ref HiDAC/dauno; VP-16/Ciclofosfamida Normal

17: 62/M Ref Terapia de inducción de 7 + 3; 6 + 2/Citarabina/Asparaginasa; Clorotoxina/Tomodar; Mitn/Gem/Fludarabina t(1; 4) (q42; q21), t(4; 12) (q12; p13)

18: 62/F 1º rel Inducción de 7 + 3 Normal

19: 72/F Ref Inducción de 7 + 3 Normal

20: 62/M 1º rel Citarabina/Ida añadir (2) (p21), añadir (3) (p25), -4, -7, si. del (17) (q23), dsll, del (11) (q23)

21b: 59/F 1º rel Ara-C/dauno; rescate con VP-16/ciclo t (1; 5)

22: 32/M Ref Ara-C/dauno; VP-16/Mito; AraC/dauno; VP-16/Cytoxan del (7) (q22q34)

23: 73/F 1º rel Ciclosporina, daunorubicina, citarabina +11, -12, der (17) t (12; 17) (q10; p12)

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24: 33/M 2º rel ADE-10; MACE/Midac; Hydrea/leucoforesis; Citosina/Ara-C Normal

25b: 66/F Ref Revlimid, 7 + 3, L001281814/MK0457 del (5) (q23), -12, -13, añadir (16) (q22), + mero 20

26: 73/F Ref Ara-C/dauno; 7 + 3 Normal

27: 70/F De Novo ND

28: 60/M Ref 7 + 3 del (5)

29: 41/F 2º rel 7 + 3; Hi-Dos Citarabina; re-inducción de 7 + 3 Normal

30: 32/M Ref HiDAC/dauno; VP-16/Ciclofosfamida; HiDAC ND

31b: 77/M De Novo Normal

32b: 72/M Ref Ara-C -Y

33: 78/M 1º rel 7 + 3; Hi-Dos Citarabina Normal

34: 77/M De Novo ND

35b: 65/M Ref 7 + 3, Ara-C de alta dosis, PT-523 (q5), del (7), t (16; 17)

36: 71/M MDS 6-azacitidina; decitabina -7

a El paciente 4 tuvo un trasplante alógeno, y el paciente 6 tuvo un trasplante autólogo.b El paciente 3 tuvo una historia de LMA secundaria. El paciente 7, 21, 25, 31, 32 y 35 tuvo una historia previa de SMD.

6.2.3 RESULTADOS -TOXICIDADES

Las toxicidades relacionadas con el fármaco fueron de leves a moderadas y transitorias que incluyen fiebre, escalofríos, hipotensión, síndrome de fuga vascular, hipoxemia, hipocalcemia, transaminasemia e hipoalbuminemia (Tabla 7 y Figura 5). No hay correlación del nivel de dosis con la incidencia de toxicidad o grado.

TABLA 7 Resultados de toxicidades de pacientes tratados con DT388IL3, farmacocinética, respuesta inmunitaria y respuesta clínica* Paciente N.º Nivel de dosis Toxicidades Cmáx d1/d12 Anticuerpo anti-DT (mg/ml) Respuesta clínica (ug/kg) Gr2 CTCV3 (mg/ml) d1 d15 d30

1 4 N-V, Trans 0 0 0,8 23 235 0 2 4 0 0 0 2,5 ND ND 0 3 4 F, N-V, Alb, Hipo 0 0,18 0 ND 36 0 4 4 F, Alb ND ND 0 ND ND 0 5 4 F, Alb ND ND 0 ND 48 0 6 4 Hipo ND ND 0,9 ND 36 0 7 4 Alb 0 0 2,2 1 6,2 0

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8 5,32 Alb 0,19 0 1 221 263 0 9 5,32 Alb, Trans 0,14 0,15 0,8 440 ND PR 10 5,32 Alb 0,22 ND 0,5 ND 1,1 0 11 5,32 F, Alb, Trans 0 ND 2,5 ND ND 0 12 5,32 Hipo, F, Alb 0,34 0 1,3 600 ND 0 13 5,32 Alb 0 0,3 1,5 ND ND MR 14 5,32 Alb, Trans 0,38 0,36 0,3 0,3 ND MR 15 5,32 Alb, Trans 0,06 0,29 0 1,6 29 MR 16 7,07 Alb, Trans ND 0,21 1 0 ND 0 17 7,07 Alb ND ND 1,2 ND ND 0 18 7,07 F, Alb, Disn 0,22 0,37 0,7 0,4 ND 0 19 7,07 VLS, Alb, Disn 0,32 0,54 0,8 8,3 22,4 CR 20 7,07 Alb, Trans 0,48 ND 0,4 ND ND 0 21 7,07 Alb, Trans 0,08 0,35 2,1 1,5 4,2 0 22 7,07 Alb, Trans 0,13 0,29 1,7 1,2 ND 0 23 7,07 F, Alb, VLS 0,61 ND 2,2 32 104 PR 24 7,07 0 0 0,38 4,3 ND 4 0 25 7,07 Alb 0,11 ND 3,8 ND ND 0 26 7,07 F, Alb, Trans 0,23 ND 0,5 ND ND 0 27 9,4 F, Alb, Trans 0,18 ND 3 ND ND 0 28 9,4 F, Alb 0,27 ND 1,3 300 ND 0 29 7,07 F, Alb ND ND 1,5 ND ND 0 30 9,4 Alb 0,15 0,32 3 0,8 ND 0 31 9,4 F, Trans 0,23 ND 2,3 ND ND 0 32 9,4 Alb, Trans 0,26 0,38 2,2 3,1 ND 0 33 9,4 Alb, Trans 0,37 ND 1,2 ND ND 0 34 9,4 Alb, Trans 0,55 ND 2,2 ND 306 0 35 9,4 Alb 0,23 0 0,8 252 ND 0 36 12,5 Alb, Trans 0,34 ND 1,3 11,2 16,8 PR * F = fiebre, N-V = náuseas y vómitos, Trans = transaminasemia, VLS = síndrome de fuga vascular, Alb = hipoalbuminemia, Hipo = hipotensión, Disn = disnea, ND = no determinado, MR = respuesta mínima, PR = respuesta parcial, CR = respuesta completa.

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Claims

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