ES2968412T3

ES2968412T3 - Método para preparar una composición hemostática

Info

Publication number: ES2968412T3
Application number: ES19723388T
Authority: ES
Inventors: Peter Lund Hammershøj; Kristian Larsen; Douglas B Johns; Nicole Smith; Michael Cardinale; Gabriella Ferrara; Guanghui Zhang
Original assignee: Ferrosan Medical Devices AS; Ethicon Inc
Current assignee: Ferrosan Medical Devices AS; Ethicon Inc
Priority date: 2018-05-09
Filing date: 2019-05-09
Publication date: 2024-05-09
Anticipated expiration: 2039-05-09
Also published as: EP4321182A2; MX2020011866A; EP4321182A3; CN112368028A; US20240009345A1; JP2021523097A; US11801324B2; EP3790600B1; US20190343981A1; US12544483B2; JP7395113B2; BR112020021998A2; CA3097819A1; AU2019266529B2; EP3790600C0; AU2019266529A1; EP3790600A1; WO2019215274A1; KR20210008479A

Abstract

La presente divulgación se refiere a un método para preparar una composición hemostática que comprende trombina, comprendiendo el método la etapa de reconstituir una trombina seca directamente en una pasta, tal como una pasta que comprende un polímero biocompatible. La composición hemostática que comprende trombina se puede preparar a partir de una composición de trombina seca y una pasta en una operación de un solo paso y usarse para el tratamiento de una herida. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Método para preparar una composición hemostática

Campo técnico

La presente divulgación se refiere a un método simplificado para preparar una composición de pasta hemostática que comprende trombina, comprendiendo el método la etapa de reconstituir una trombina seca directamente en una pasta, tal como una pasta que comprende un polímero biocompatible. La composición hemostática que comprende trombina puede prepararse a partir de una composición de trombina seca y una pasta en una operación de una sola etapa y puede usarse para el tratamiento de una herida.

Antecedentes

Algunos materiales hemostáticos basados en proteínas tales como colágeno y gelatina están disponibles comercialmente en forma de esponja sólida y polvo suelto o sin empaquetar para su uso en procedimientos quirúrgicos. La mezcla del polvo suelto o sin empaquetar con un fluido tal como solución salina o una solución de trombina puede formar una pasta o suspensión que es útil como una composición hemostática para su uso en casos de sangrado difuso, particularmente de superficies irregulares o áreas de difícil acceso, dependiendo de las condiciones de mezcla y las relaciones relativas de los materiales.

Las pastas hemostáticas convencionales se preparan normalmente en el punto de uso mediante agitación mecánica y mezcla de un polímero biocompatible, por ejemplo gelatina, y un líquido, por ejemplo una solución de trombina, para proporcionar uniformidad de la composición. La mezcla para formar una pasta usualmente requiere una mezcla extensa, tal como amasado o transferencia entre dos jeringas.

A menudo se desea que la pasta hemostática comprenda un componente de trombina para proporcionar un efecto hemostático óptimo de la pasta. Debido a razones de estabilidad, el componente de trombina se proporciona normalmente como una composición seca separada del componente de polímero biocompatible. Después, la trombina seca se reconstituye para formar una suspensión o solución antes de mezclar con el polímero biocompatible. Esta etapa de reconstitución del componente de trombina normalmente tiene lugar inmediatamente antes de mezclar con el polímero biocompatible. La reconstitución de la trombina requiere mucho tiempo y es difícil con las manipulaciones de jeringa de múltiples etapas involucradas, factores que no son deseables en un entorno de quirófano con hemorragias, ya que el cirujano tendrá que interrumpir bruscamente su procedimiento mientras espera a que se prepare el producto hemostático.

Surgiflo® Haemostatic Matrix (Ethicon), tal como se describe en la patente EP1559438A1, es un kit para producir una pasta de gelatina hemostática que comprende trombina, que se prepara reconstituyendo primero una composición de trombina seca y transfiriendo posteriormente una mezcla de matriz de gelatina-solución de trombina de un lado a otro entre dos jeringas conectadas para un total de al menos seis pasadas. Floseal® Haemostatic Matrix (Baxter) es asimismo un kit para producir una pasta de gelatina hemostática, que requiere la reconstitución inicial de una composición de trombina seca seguida por la transferencia de la mezcla de matriz de gelatina-solución de trombina de un lado a otro entre dos jeringas conectadas para un total de al menos veinte pasadas. Una vez que se logra una composición de pasta sustancialmente homogénea, las pastas hemostáticas se pueden aplicar a un sangrado para promover la hemostasia extruyendo las pastas de la jeringa. También se han hecho intentos para proporcionar el polímero biocompatible y la trombina en forma seca en la misma jeringa, tal como se ha descrito anteriormente, por ejemplo en los documentos WO 2011/151400, WO 2011/151384, WO 2011/151386 y WO 2013/185776. Sin embargo, debido a la sensibilidad de la trombina a los métodos de esterilización empleados habitualmente en la fabricación de productos hemostáticos, es decir, radiación ionizante y/u óxido de etileno, la sensibilidad de la trombina al agua y las diferentes propiedades físico-químicas de la trombina y los polímeros empleados habitualmente, tales como gelatina, ha resultado difícil fabricar dichos productos "todo en uno" de manera que retengan suficiente actividad de trombina durante la fabricación, esterilización y durante toda la vida útil del producto y/o que aseguren una distribución satisfactoria de trombina en el producto de pasta hemostática reconstituido final. Como se ha mencionado más arriba, la incorporación de trombina en la pasta hemostática es difícil debido a razones de fabricación o estabilidad o debido a la reconstitución que consume tiempo de una composición de trombina seca antes de mezclar con el polímero biocompatible. Por lo tanto, existe una necesidad en la técnica de desarrollar nuevos métodos para la incorporación rápida y fácil de trombina en la pasta hemostática.

Compendio

La presente divulgación aborda los problemas arriba indicados relacionados con la incorporación de trombina en pastas hemostáticas y proporciona un método para reconstituir una composición de trombina seca directamente en una pasta que comprende un polímero biocompatible, para generar una pasta hemostática que comprende trombina en una operación de una sola etapa. Dicho método simple y rápido para preparar una composición hemostática es altamente valioso en el quirófano, donde el sangrado potencial debe controlarse de una manera rápida y eficiente.

Así, en un aspecto, la presente divulgación se refiere a un método para preparar una composición hemostática, comprendiendo el método las etapas consistentes en:

a) proporcionar una composición de trombina seca en un primer recipiente;

b) proporcionar una pasta que comprende un polímero biocompatible en un segundo recipiente;

c) conectar el primer recipiente y el segundo recipiente utilizando medios de conexión adecuados; y d) mezclar el contenido de los recipientes.

En un segundo aspecto, la presente divulgación se refiere a un método para reconstituir una composición de trombina seca, comprendiendo el método las etapas consistentes en:

a) proporcionar una composición de trombina seca en un primer recipiente;

La mezcla del contenido de los recipientes se puede realizar transfiriendo el contenido de los recipientes de un lado a otro un número de veces, tal como menos de 20 veces, por ejemplo menos de 15 veces, tal como menos de 10 veces, preferiblemente aproximadamente seis veces.

Los inventores han encontrado sorprendentemente que dicho método para reconstituir una composición de trombina seca directamente en una pasta que comprende un polímero biocompatible da como resultado una distribución sustancialmente homogénea de la trombina en la composición hemostática. Por lo tanto, la presente divulgación proporciona un método para preparar una composición hemostática que comprende trombina de una manera rápida y simple que no requiere la reconstitución por separado del componente de trombina antes de mezclarlo con el polímero biocompatible.

La presente divulgación se refiere además a una composición hemostática obtenible mediante los métodos tal como se describen en la presente memoria así como a usos de la misma.

Descripción de los dibujos

La Figura 1

muestra una configuración y un método ejemplares para reconstituir una composición de trombina seca directamente en una pasta que comprende un polímero biocompatible para generar una composición hemostática. La composición de trombina seca está contenida en una primera jeringa y la pasta que comprende un polímero biocompatible, aquí ejemplificada por una pasta de gelatina, está contenida en una segunda jeringa. Las dos jeringas están interconectadas, en esta realización a través de un mezclador estático, y el contenido de las jeringas se transfiere de un lado a otro seis veces para generar la composición hemostática. La Figura 2

muestra la distribución de la actividad de trombina en las porciones inicial, media y final de una jeringa que comprende una composición hemostática reconstituida usando el método de la presente divulgación. La actividad de trombina media se indica como porcentaje de la actividad de trombina total. Los datos muestran que la reconstitución de trombina seca con una pasta produce una composición de pasta hemostática que tiene una distribución homogénea de trombina. Las barras de error se construyen usando una desviación estándar de la media.

La Figura 3

muestra la eficacia hemostática (tiempo hasta la hemostasia (TTH)) de una pasta de la presente invención (pasta 6TM) en comparación con el control (Surgiflo mezclado con 2 mL de solución de trombina) (media /-SEM (error estándar de la media), n = 7). Se comprobó que la pasta 6TM preparada de acuerdo con la presente invención induce la hemostasia más rápida y consistentemente que la pasta control.

Definiciones

Un "agente bioactivo" es cualquier agente, fármaco, compuesto, composición de materia o mezcla que proporciona algún efecto farmacológico, a menudo beneficioso, que se puede demostrarin vivooin vitro.Por lo tanto, un agente se considera bioactivo si tiene interacción con o efecto sobre un tejido celular en el cuerpo humano o animal. Tal como se usa en la presente memoria, esta expresión incluye además cualquier sustancia fisiológica o farmacológicamente activa que produzca un efecto localizado o sistémico en un individuo. Los agentes bioactivos pueden ser una proteína, tal como una enzima. Otros ejemplos de agentes bioactivos incluyen, pero no se limitan a, agentes que comprenden o consisten en un oligosacárido, un polisacárido, un péptido opcionalmente glicosilado, un polipéptido opcionalmente glicosilado, un oligonucleótido, un polinucleótido, un lípido, un ácido graso, un éster de ácido graso y metabolitos secundarios. Puede usarse de forma profiláctica, terapéutica, en relación con el tratamiento de un individuo, como un ser humano o cualquier otro animal. La expresión "agente bioactivo" tal como se usa en la presente memoria no incluye células, como células eucariotas o procariotas.

"Biocompatible" se refiere a la capacidad de un material para realizar su función prevista sin provocar ningún efecto local o sistémico no deseable sustancial en el huésped.

"Biológicamente absorbible" o "reabsorbible" son términos que se usan en el presente contexto para describir que los materiales de los que está hecho dicho polvo pueden degradarse en el cuerpo a moléculas más pequeñas que tienen un tamaño que les permite ser transportadas al torrente sanguíneo. Mediante dicha degradación y absorción, dichos materiales en polvo se retirarán gradualmente del sitio de aplicación. Por ejemplo, la gelatina puede ser degradada por enzimas tisulares proteolíticas a moléculas más pequeñas absorbibles, por lo que la gelatina, cuando se aplica en tejidos, se absorbe típicamente en un plazo de aproximadamente 4-6 semanas y cuando se aplica en superficies sangrantes y membranas mucosas típicamente en un plazo de 3-5 días.

Un "gel" es un material sólido, similar a gelatina que puede tener propiedades que van desde suaves y débiles hasta duras y resistentes. Los geles se definen como un sistema reticulado sustancialmente diluido, que no muestra flujo cuando está en el estado estacionario. En peso, los geles son principalmente líquidos, pero se comportan como sólidos debido a una red reticulada tridimensional dentro del líquido. Son las reticulaciones dentro del fluido las que dan a un gel su estructura (dureza) y contribuyen a la adhesividad (pegajosidad). De esta manera, los geles son una dispersión de moléculas de un líquido dentro de un sólido en la que el sólido es la fase continua y el líquido es la fase discontinua. Un gel no es una pasta o suspensión. Por ejemplo, la gelatina no reticulada es soluble y forma un gel al contacto con un medio acuoso tal como agua.

"Hemostasia" es un proceso que provoca que el sangrado disminuya o se detenga. La hemostasia se produce cuando la sangre está presente fuera del cuerpo o de los vasos sanguíneos y es la respuesta instintiva para que el cuerpo detenga el sangrado y la pérdida de sangre. Durante la hemostasia se producen tres etapas en una secuencia rápida. El espasmo vascular es la primera respuesta a medida que los vasos sanguíneos se contraen para permitir que se pierda menos sangre. En la segunda etapa, formación de tapón de plaquetas, las plaquetas se adhieren entre sí para formar un sello temporal para cubrir la rotura en la pared del vaso. La tercera y última etapa se denomina coagulación o coagulación sanguínea. La coagulación refuerza el tapón plaquetario con hilos de fibrina que actúan como un "pegamento molecular". Por consiguiente, un compuesto hemostático es capaz de estimular la hemostasia.

"Unidad Internacional (IU)". En farmacología, la Unidad Internacional es una unidad de medida para la cantidad de una sustancia, basada en la actividad o efecto biológicos. Se abrevia como IU, Ul o IE. Se utiliza para cuantificar vitaminas, hormonas, algunos medicamentos, vacunas, productos sanguíneos y sustancias biológicamente activas similares.

Una "pasta" de acuerdo con la presente divulgación tiene una consistencia maleable, de tipo masilla, tal como pasta de dientes. Una pasta es una mezcla fluida espesa de sólido/sólido pulverizado en forma de polvo con un líquido. Una pasta es una sustancia que se comporta como un sólido hasta que se aplica una carga o tensión suficientemente grande, en cuyo punto fluye como un fluido, es decir, una pasta es fluida. Los fluidos se adaptan eficientemente a superficies irregulares después de la aplicación. Las pastas consisten típicamente en una suspensión de material granular en un fluido de fondo. Los granos individuales se aglomeran entre sí como arena en una playa, formando una estructura desordenada, vítrea o amorfa, y dando a las pastas su carácter de tipo sólido. Es esta "aglomeración entre sí" lo que da a las pastas algunas de sus propiedades más inusuales; esto hace que una pasta demuestre propiedades de materia frágil. Una pasta no es un gel/gelatina. Una "suspensión" es una mezcla fluida de un sólido en polvo/pulverizado con un líquido, tal como agua. Las suspensiones se comportan de alguna manera como fluidos espesos, que fluyen por gravedad y pueden ser bombeadas si no son demasiado espesas. Una suspensión puede ser considerada funcionalmente como una pasta acuosa, fina, pero una suspensión generalmente contiene más agua que una pasta. Las partículas de polvo sustancialmente insolubles en agua, tales como partículas de gelatina reticuladas, formarán una pasta al mezclarse con un medio acuoso.

"Porcentaje". Si no se indica nada más, el porcentaje es porcentaje en peso:%p/p o%en peso. Las relaciones se indican como peso por peso (p/p).

"Variación en el contenido de trombina". La variación en el contenido de trombina como se usa en la presente memoria se define como la diferencia porcentual en la actividad de trombina media entre dos fracciones de composición hemostática. La actividad de trombina media se indica como actividad de trombina de una fracción como un porcentaje de la actividad de trombina total de la composición hemostática completa.

Descripción detallada

La presente divulgación se refiere a un método simplificado para preparar una composición de pasta hemostática que comprende trombina. El método comprende la etapa de reconstituir una composición de trombina seca directamente en una pasta, tal como una pasta que comprende un polímero biocompatible.

Por lo tanto, la invención se refiere a un método para preparar una composición hemostática, comprendiendo el método las etapas consistentes en:

a) proporcionar una composición de trombina seca en una primera jeringa;

b) proporcionar una pasta que comprende un polímero biocompatible seleccionado del grupo que consiste en gelatina, colágeno, quitina, quitosán, alginato, celulosa, celulosa oxidada, ácido poliglicólico y ácido poliacético en una segunda jeringa;

c) conectar la primera jeringa y la segunda jeringa utilizando medios de conexión adecuados; y

d) mezclar el contenido de las jeringas.

Después de mezclar, la primera o la segunda jeringa (dependiendo del número de transferencias) se puede usar como un dispositivo de suministro para suministrar la composición hemostática al tejido. Por lo tanto, la composición hemostática que comprende trombina se puede preparar a partir de una composición de trombina seca y una pasta en una operación de una sola etapa sin necesidad de una reconstitución previa que consume tiempo y propensa a errores de la composición de trombina seca en una solución. Dicho método simple y rápido para preparar una composición hemostática es altamente valioso en el quirófano, donde el sangrado potencial debe controlarse de una manera rápida y eficiente.

Las ventajas de los métodos proporcionados en la presente divulgación y la composición hemostática obtenida mediante dichos métodos son numerosas, e incluyen:

• Menos tiempo empleado en preparar la composición hemostática, por ejemplo, el sangrado puede detenerse más rápidamente.

• Disminución del riesgo de comprometer la esterilidad de la composición hemostática durante la preparación debido a menos etapas de manipulación.

• Disminución del riesgo de cometer errores durante la preparación debido a la preparación simplificada de la pasta.

• Reconstitución fiable y consistente en un corto periodo de tiempo.

• Evita las etapas de dilución de trombina que consumen tiempo y tienden a errores de las preparaciones de composición hemostática estándar.

• Minimiza los costes de quirófano, ya que la preparación del producto actualmente descrito es tan simple y rápida que no hay razón para preparar previamente fluidos hemostáticos antes de la cirugía que pueden no ser utilizados.

• Mayor flexibilidad para añadir un medio acuoso a la pasta con el fin de modificar la consistencia de la composición mezclada final.

Todos los factores arriba indicados conducen a una mayor seguridad del paciente.

Composición seca de trombina

La presente divulgación se refiere a un método para reconstituir una composición seca de trombina directamente en una pasta.

La trombina es una proteína de serina proteasa "similar a tripsina" que en humanos está codificada por el gen F2. La protrombina (factor de coagulación II) se escinde proteolíticamente para formar trombina en la cascada de coagulación, lo que finalmente da como resultado la detención de la pérdida de sangre. La trombina a su vez actúa como una serina proteasa que convierte el fibrinógeno soluble en hebras insolubles de fibrina, así como catalizando muchas otras reacciones relacionadas con la coagulación. En la vía de coagulación sanguínea, la trombina actúa para convertir el factor XI en XIa, VIII en VIIIa, V en Va y el fibrinógeno en fibrina.

En una realización, la trombina es trombina humana.

En una realización, la trombina es trombina humana recombinante.

En otras realizaciones, el origen de la trombina es de un mamífero distinto del humano, tal como trombina bovina.

En una realización, la trombina está en forma de protrombina.

La composición de trombina seca se puede preparar mediante cualquier método conocido por el experto y se proporciona normalmente en forma estéril. Por lo tanto, en una realización, la composición de trombina seca es estéril.

En una realización, la composición de trombina seca se prepara mediante secado por pulverización o liofilización.

En una realización preferida, la composición de trombina seca se prepara mediante liofilización. En una realización, la composición de trombina seca comprende menos del 2 % de agua, tal como menos del 1 % de agua.

La cantidad de trombina en la composición hemostática debe ser suficiente para garantizar una hemostasia eficaz. En una realización, la concentración final de trombina en la composición hemostática está en el intervalo de aproximadamente 50 IU/mL a aproximadamente 1000 IU/mL, por ejemplo de 100 IU/mL a aproximadamente 500 IU/mL, tal como de aproximadamente 150 IU/mL a aproximadamente 450 IU/mL, por ejemplo de aproximadamente 200 IU/mL a aproximadamente 400 IU/mL, tal como de aproximadamente 200 IU/mL a aproximadamente 300 IU/mL.

La composición de trombina seca puede comprender opcionalmente uno o más agentes hidrófilos, tales como por ejemplo uno o más polioles y/o uno o más poli(etilenglicoles) (PEG).

En una realización, la composición de trombina seca comprende uno o más agentes bioactivos adicionales. Dichos uno o más agentes bioactivos pueden ser capaces de estimular la hemostasia, la cicatrización de heridas, la cicatrización ósea, la cicatrización de tejidos y/o la cicatrización de tendones.

En una realización, la composición de trombina seca comprende opcionalmente uno o más potenciadores de extrusión, tales como, por ejemplo, albúmina. El uso de potenciadores de extrusión para mejorar la capacidad de extrusión de pastas hemostáticas se describe, por ejemplo, en el documento WO 2015/086028.

Pasta que comprende polímero biocompatible

La composición de trombina seca de la divulgación se reconstituye directamente en una pasta, tal como una pasta que comprende un polímero biocompatible.

El polímero biocompatible de la presente divulgación puede ser un polímero biológico o no biológico. Los polímeros biológicos adecuados incluyen proteínas, tales como gelatina, colágeno, albúmina, hemoglobina, caseína, fibrinógeno, fibrina, fibronectina, elastina, queratina y laminina; o derivados o combinaciones de los mismos. De forma particularmente preferida se usa gelatina o colágeno, más preferiblemente gelatina. Otros polímeros biológicos adecuados incluyen polisacáridos, tales como glicosaminoglicanos, derivados de almidón, xilano, derivados de celulosa, derivados de hemicelulosa, agarosa, alginato y quitosán; o derivados o combinaciones de los mismos. Los polímeros no biológicos adecuados se seleccionarán para ser degradables por cualquiera de dos mecanismos, es decir, (1) la descomposición de la cadena principal polimérica o (2) la degradación de cadenas laterales que da como resultado solubilidad acuosa. Los polímeros no biológicos ejemplares incluyen sintéticos, tales como poliacrilatos, polimetacrilatos, poliacrilamidas, resinas de polivinilo, polilactido-glicólidos, policaprolactonas y polioxietilenos; o derivados o combinaciones de los mismos. También son posibles combinaciones de diferentes tipos de polímeros.

En una realización, el polímero biocompatible es biológicamente absorbible. Los ejemplos de materiales biológicamente absorbibles adecuados incluyen gelatina, colágeno, quitina, quitosán, alginato, celulosa, celulosa oxidada, ácido poliglicólico, ácido poliacético y combinaciones de los mismos. Se entenderá que para la presente divulgación también se contemplan diversas formas de las mismas, tales como formas lineales o reticuladas, sales, ésteres y similares. En una realización preferida de la invención, el material biológicamente absorbible es gelatina. La gelatina es preferible, puesto que es altamente absorbible biológicamente. Además, la gelatina es altamente biocompatible, lo que significa que no es tóxica para un animal, tal como un ser humano, cuando/si entra en el torrente sanguíneo o está en contacto a largo plazo con tejidos humanos.

La gelatina típicamente procede de una fuente porcina, pero puede proceder de otras fuentes animales, tales como de fuentes bovinas o de pescado. La gelatina también puede fabricarse sintéticamente, es decir, fabricarse por medios recombinantes.

En una realización preferida, el polímero biocompatible está reticulado. La reticulación normalmente hace que el polímero sea sustancialmente insoluble en un medio acuoso. En una realización, el polímero biocompatible consiste en partículas de polvo que son sustancialmente insolubles en un medio acuoso. Se puede usar cualquier método de reticulación adecuado conocido por un experto en la materia, incluyendo métodos de reticulación tanto químicos como físicos.

En una realización de la presente divulgación, el polímero se ha reticulado por medios físicos, tal como por calor seco. El tratamiento térmico en seco se realiza usualmente a temperaturas entre 100 °C y 250 °C, tal como de aproximadamente 110 °C a aproximadamente 200 °C. En particular, la temperatura puede estar en el intervalo de 110-160 °C, por ejemplo, en el intervalo de 110-140 °C, o en el intervalo de 120-180 °C, o en el intervalo de 130-170 °C, o en el intervalo de 130-160 °C, o en el intervalo de 120-150 °C. El período de tiempo para la reticulación puede ser optimizado por un experto y es normalmente un período entre aproximadamente 10 minutos y aproximadamente 12 horas, tal como de aproximadamente 1 hora a aproximadamente 10 horas, por ejemplo entre aproximadamente 2 horas y aproximadamente 10 horas, tal como entre aproximadamente 4 horas y aproximadamente 8 horas, por ejemplo entre aproximadamente 5 horas y aproximadamente 7 horas, tal como aproximadamente 6 horas.

En otra realización, el polímero se ha reticulado por medios químicos, es decir, por exposición a un agente de reticulación químico. Los ejemplos de agentes de reticulación químicos adecuados incluyen, pero no se limitan a, aldehídos, en particular glutaraldehído y formaldehído, acil azida, carbodiimidas, diisocianato de hexametileno, óxido de poliéter, éter 1,4-butanodioldiglicidílico, ácido tánico, azúcares de aldosa, por ejemplo, D-fructosa, genipina y fotooxidación mediada por colorante. Los compuestos específicos incluyen, pero no se limitan a, clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (EDC) y ditiobis(dihidrazida propanoica) (DTP).

En una realización, las partículas de polímero biocompatibles utilizadas para la preparación de la pasta de acuerdo con la presente divulgación pueden obtenerse a partir de esponjas reticuladas de, por ejemplo, gelatina o colágeno, en particular esponjas reticuladas de gelatina (tales como las esponjas Spongostan® y esponjas Surgifoam®) disponibles comercialmente. Las esponjas reticuladas se micronizan mediante métodos conocidos en la técnica para obtener un polímero biocompatible reticulado en forma de polvo, tal como mediante lecho giratorio, extrusión, granulación y tratamiento en un mezclador intensivo, o molienda (por ejemplo, usando un molino de martillos o un molino centrífugo). El polímero biocompatible reticulado en forma de polvo se mezcla después con una cantidad de medio acuoso para proporcionar una pasta de una consistencia deseable.

Spongostan®/Surgifoam® disponible en Ethicon es una esponja hemostática absorbible reticulada a base de gelatina. Absorbe >35 g de sangre/g y en 4-6 semanas se absorbe completamente en el cuerpo humano.

En una realización, la pasta que comprende un polímero biocompatible comprende partículas de gelatina reticuladas obtenidas de una esponja de gelatina porosa micronizada, que se ha reticulado mediante tratamiento térmico en seco.

Pueden prepararse esponjas de gelatina porosa micronizada mezclando una cantidad de gelatina soluble con un medio acuoso para crear una espuma que comprende una fase gaseosa discontinua, secando dicha espuma y reticulando la espuma seca mediante exposición a calor seco. La esponja reticulada obtenida se puede micronizar por métodos conocidos en la técnica. La espuma de gelatina tiene normalmente una concentración de gelatina de aproximadamente el 1 % al 70 % en peso, usualmente del 3 % al 20 % en peso. El secado se realiza normalmente a una temperatura de aproximadamente 20 °C a aproximadamente 40 °C durante aproximadamente 5 a 20 horas. La espuma seca se reticula normalmente por exposición a una temperatura de aproximadamente 110 °C a aproximadamente 200 °C durante aproximadamente 15 minutos a aproximadamente 8 horas, tal como de aproximadamente 150 °C a aproximadamente 170 °C durante aproximadamente 5 a 7 horas.

En una realización, las partículas de polímero biocompatibles utilizadas para la preparación de la pasta de acuerdo con la presente divulgación se obtienen a partir de geles reticulados de, por ejemplo, gelatina o colágeno, en particular geles de gelatina reticulados. Los geles reticulados se pueden micronizar tal como se ha descrito más arriba. El polímero biocompatible reticulado en forma de polvo se mezcla después con una cantidad de medio acuoso para proporcionar una pasta de una consistencia deseable.

En una realización, la pasta que comprende un polímero biocompatible comprende partículas de gelatina reticuladas obtenidas a partir de un gel de gelatina micronizado, que se ha reticulado mediante tratamiento térmico en seco.

En una realización, la pasta que comprende un polímero biocompatible comprende o consiste en partículas de gelatina reticuladas obtenidas a partir de un hidrogel de gelatina. Un hidrogel de gelatina se puede preparar disolviendo una cantidad de gelatina en un tampón acuoso para formar un hidrogel no reticulado, que típicamente tiene un contenido de sólidos del 1 % al 70 % en peso, normalmente del 3 % al 10 % en peso. La gelatina se puede reticular, por ejemplo, por exposición a glutaraldehído (por ejemplo, del 0,01 % al 0,05 % p/p, durante la noche a una temperatura de 0 °C a 15 °C en tampón acuoso), peryodato sódico (por ejemplo, 0,05 M, mantenido a una temperatura de 0 °C a 15 °C durante 48 horas) o 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (EDC) (por ejemplo, del 0,5 % al 1,5 % p/p, durante la noche a temperatura ambiente), o por exposición a aproximadamente 0,3 a 3 megarads de radiación gamma o de haz de electrones. Los hidrogeles reticulados resultantes pueden fragmentarse y secarse para obtener un polvo de gelatina. Alternativamente, las partículas de gelatina pueden suspenderse en un alcohol, preferiblemente alcohol metílico o alcohol etílico, a un contenido de sólidos del 1 % al 70 % en peso, normalmente del 3 % al 10 % en peso, y reticularse por exposición a un agente de reticulación, típicamente glutaraldehído (por ejemplo, del 0,01 % al 0,1 % p/p, durante la noche a temperatura ambiente). Cuando se reticulan con glutaraldehído, las reticulaciones se forman a través de bases de Schiff que pueden estabilizarse mediante reducción posterior, por ejemplo, mediante tratamiento con borohidruro de sodio. Después de la reticulación, los gránulos resultantes se pueden lavar en agua y opcionalmente enjuagar en un alcohol y secar para obtener un polvo de gelatina. En una realización, las partículas de gelatina reticuladas se preparan esencialmente como se describe en el documento US 6,066,325.

En una realización, la pasta comprende un polímero biocompatible en un contenido de aproximadamente el 7 % al 20 %, tal como de aproximadamente el 8 % al 18 %, por ejemplo de aproximadamente el 10 % al 16 %, tal como de aproximadamente el 11 %-15 %, por ejemplo de aproximadamente el 12 %-14 %.

En una realización, la pasta comprende un polímero biocompatible en un contenido de aproximadamente el 7 % al 20 %, tal como de aproximadamente el 7 % al 18 %, por ejemplo de aproximadamente el 7 % al 16 %, tal como de aproximadamente el 7 % al 14 %, por ejemplo de aproximadamente el 7 % al 13 %, tal como de aproximadamente el 7 % al 12 %, por ejemplo de aproximadamente el 7 % al 11 %, tal como de aproximadamente el 7 % al 10 %, por ejemplo de aproximadamente el 7 % al 9 %.

En una realización, la pasta comprende un polímero biocompatible en un contenido de aproximadamente el 7 % al 20 %, tal como de aproximadamente el 10 % al 20 %, por ejemplo de aproximadamente el 11 % al 20 %, tal como de aproximadamente el 12 % al 20 %, por ejemplo de aproximadamente el 13 % al 20 %, tal como de aproximadamente el 14 % al 20 %, por ejemplo de aproximadamente el 15 % al 20 %, tal como de aproximadamente el 17 % al 20 %, por ejemplo de aproximadamente el 19 % al 20 %.

En una realización, la pasta comprende un polímero biocompatible en un contenido de aproximadamente el 10 % al 20 %, tal como de aproximadamente el 10 % al 18 %, por ejemplo de aproximadamente el 10 % al 16 %, tal como de aproximadamente el 10 % al 15 %.

La pasta que comprende un polímero biocompatible puede comprender además uno o más agentes hidrófilos, tales como, por ejemplo, uno o más polioles y/o uno o más polietilenglicoles (PEG).

En una realización, la pasta que comprende un polímero biocompatible comprende uno o más agentes bioactivos adicionales. Dichos uno o más agentes bioactivos pueden ser capaces de estimular la hemostasia, la cicatrización de heridas, la cicatrización ósea, la cicatrización de tejidos y/o la cicatrización de tendones.

En una realización, la pasta que comprende un polímero biocompatible comprende uno o más potenciadores de extrusión, tales como, por ejemplo, albúmina.

En una realización, la pasta que comprende un polímero biocompatible comprende uno o más agentes antimicrobianos, tales como uno o más agentes antibacterianos.

En una realización, la pasta que comprende un polímero biocompatible comprende cloruro de benzalconio.

La pasta que comprende un polímero biocompatible como se describe en la presente memoria puede prepararse de acuerdo con métodos conocidos en la técnica. Por consiguiente, la pasta que comprende un polímero biocompatible puede prepararse mezclando un polvo de polímero biocompatible con un medio acuoso para generar dicha pasta.

La pasta que comprende un polímero biocompatible se proporciona normalmente en forma estéril. Por lo tanto, en una realización, la pasta que comprende un polímero biocompatible es estéril.

La pasta que comprende un polímero biocompatible comprende además un medio acuoso, tal como por ejemplo agua, solución salina, una solución de cloruro de calcio o un medio acuoso tamponado.

Medio acuoso

En la presente divulgación se puede usar un medio acuoso para preparar la pasta que comprende un polímero biocompatible.

El medio acuoso de la presente divulgación puede ser cualquier medio acuoso adecuado para preparar una pasta conocido por un experto, por ejemplo agua, solución salina o un medio acuoso tamponado. El agua puede ser WFI (agua para inyección). Es importante que el medio acuoso se seleccione de manera que el producto de pasta reconstituido sea esencialmente isotónico cuando esté previsto para su uso en un individuo humano o animal, tal como para fines hemostáticos y/o de cicatrización de heridas. El medio acuoso es preferiblemente estéril.

El medio acuoso de la presente divulgación es, en una realización, una solución salina.

En una realización, el medio acuoso es una solución de cloruro de calcio.

En otras realizaciones, el medio acuoso es agua.

El medio acuoso también puede ser un medio acuoso tamponado adecuado para su uso en una pasta hemostática. Puede utilizarse cualquier agente tampón adecuado conocido por un experto, tal como uno o más agentes tampón seleccionados del grupo que consiste en: citrato de sodio; ácido cítrico, citrato de sodio; ácido acético, acetato de sodio; K<2>HPO<4>, KH<2>PO<4>; Na<2>HPO<4>, NaH<2>PO<4>; CHES; bórax; hidróxido de sodio; TAPS; bicina; tris; tricina; TAPSO; HEPES; TES; MOPS; PIPES; cacodilato; SSC; MES, u otros. El pH del medio acuoso tamponado debe ser adecuado para crear una pasta hemostática destinada al uso humano y puede ser determinado por el experto.

Así, en una realización, la pasta que comprende un polímero biocompatible comprende un medio acuoso seleccionado del grupo que consiste en agua, solución salina, una solución de cloruro de calcio y un medio acuoso tamponado.

En una realización, la pasta que comprende un polímero biocompatible comprende entre aproximadamente el 60 % y aproximadamente el 95 % de agua, por ejemplo entre aproximadamente el 70 % y aproximadamente el 90 % de agua, tal como entre aproximadamente el 75 % y aproximadamente el 90 % de agua, por ejemplo entre aproximadamente el 80 % y aproximadamente el 90 % de agua.

El medio acuoso puede comprender uno o más agentes hidrófilos, tales como, por ejemplo, uno o más polioles o uno o más polietilenglicoles (PEG).

En una realización, el medio acuoso comprende uno o más agentes bioactivos adicionales. Dichos uno o más agentes bioactivos pueden ser capaces de estimular la hemostasia, la cicatrización de heridas, la cicatrización ósea, la cicatrización de tejidos y/o la cicatrización de tendones.

En una realización, el medio acuoso comprende uno o más potenciadores de extrusión, tales como, por ejemplo, albúmina.

Compuestos hidrófilos

En una realización, la composición hemostática comprende uno o más compuestos hidrófilos. Los compuestos hidrófilos contienen usualmente grupos funcionales polares o cargados, haciéndolos solubles en agua. Se cree que la inclusión de uno o más compuestos hidrófilos en la composición hemostática de la presente divulgación tiene un efecto beneficioso sobre la estabilidad de la trombina y puede mejorar la eficiencia de reconstitución de la composición de trombina seca. Los compuestos hidrófilos también pueden mejorar la consistencia de la composición hemostática.

En una realización, el compuesto hidrófilo es un polímero hidrófilo. El polímero hidrófilo puede ser natural o sintético, lineal o ramificado, y tener cualquier longitud adecuada.

En una realización, el polímero hidrófilo se selecciona del grupo que consiste en polietilenimina (PEI), poli(etilenglicol) (PEG), poli(óxido de etileno), poli(alcohol vinílico) (PVA), poli(sulfonato de estireno) (PSS), poli(ácido acrílico) (PAA), poli(clorhidrato de alilamina) y poli(ácido vinílico). En una realización, el compuesto hidrófilo es PEG.

En una realización, el compuesto hidrófilo se selecciona del grupo que consiste en cloruro de cetilpiridinio, docusato de sodio, glicina, hipromelosa, ftalato, lechitina, fosfolípidos, poloxámero, éteres de alquilo de polioxietileno, derivados de aceite de ricino polioxietilénico, ésteres de ácido graso de polioxietileno sorbitano, estearatos de polioxietileno, alcohol polivinílico, laurilsulfato de sodio, ésteres de sorbitano (ésteres de ácido graso de sorbitano) y tricaprilina.

En una realización preferida, el compuesto hidrófilo es un poliol. Por lo tanto, de acuerdo con una realización de la invención, en la composición hemostática pueden incluirse uno o más polioles. Los polioles pueden mejorar la velocidad de reconstitución de la composición de trombina seca, estabilizar la actividad de trombina y desempeñar una función en asegurar una consistencia óptima de la composición hemostática.

Un poliol tal como se define en la presente memoria es un compuesto con múltiples grupos funcionales hidroxilo. Los polioles incluyen azúcares (mono-, di- y polisacáridos), alcoholes de azúcar y derivados de los mismos. Son especialmente preferidos los alcoholes de azúcar.

Los monosacáridos incluyen, pero no se limitan a, glucosa, fructosa, galactosa, xilosa y ribosa.

Los disacáridos incluyen, pero no se limitan a, sacarosa, lactulosa, lactosa, maltosa, trehalosa y celobiosa. Los polisacáridos incluyen, pero no se limitan a, almidón, glucógeno, celulosa y quitina.

Un alcohol de azúcar, también conocido como un polialcohol, es una forma hidrogenada de carbohidrato, cuyo grupo carbonilo (aldehído o cetona, azúcar reductor) se ha reducido a un grupo hidroxilo primario o secundario (de ahí el alcohol). Los alcoholes de azúcar tienen la fórmula general H(HCHO)<n+1>H, mientras que los azúcares tienen H(HCHO)<n>HCO. Algunos alcoholes de azúcar comunes que se pueden usar en el método de la presente divulgación incluyen, pero no se limitan a: glicol (2-carbono), glicerol (3-carbono), eritritol (4-carbono), treitol (4-carbono), arabitol (5-carbono), xilitol (5-carbono), ribitol (5-carbono), manitol (6-carbono), sorbitol (6-carbono), dulcitol (6-carbono), fucitol (6-carbono), iditol (6-carbono), inositol (6-carbono; un alcohol de azúcar cíclico), volemitol (7-carbono), isomalt (12-carbono), maltitol (12-carbono), lactitol (12-carbono), poliglicitol.

En una realización, la composición hemostática comprende un único compuesto hidrófilo, tal como un único poliol.

En una realización de la invención, la composición hemostática comprende más de un compuesto hidrófilo, tal como dos, tres, cuatro, cinco, seis o incluso más compuestos hidrófilos diferentes.

En una realización preferida, el compuesto hidrófilo es un poliol.

En una realización de la invención, la composición hemostática comprende dos polioles, por ejemplo manitol y glicerol o trehalosa y un glicol.

En una realización de la invención, la composición hemostática comprende uno o más alcoholes de azúcar, tales como uno o más alcoholes de azúcar seleccionados del grupo que consiste en glicol, glicerol, eritritol, treitol, arabitol, xilitol, ribitol, manitol, sorbitol, dulcitol, fucitol, iditol, inositol, volemitol, isomalt, maltitol, lactitol, poliglicitol.

En una realización, la composición hemostática comprende uno o más alcoholes de azúcar y uno o más azúcares, tales como un alcohol de azúcar y un azúcar.

En una realización, la composición hemostática comprende un alcohol de azúcar y opcionalmente uno o más compuestos hidrófilos adicionales, tales como uno o más polioles, que pueden ser alcoholes de azúcar o azúcares.

En una realización, la composición hemostática no comprende un azúcar como el único poliol.

En una realización de la invención, composición hemostática comprende manitol.

En una realización de la invención, composición hemostática comprende sorbitol.

En una realización de la invención, composición hemostática comprende glicerol.

En una realización de la invención, la composición hemostática comprende trehalosa.

En una realización de la invención, la composición hemostática comprende glicol, tal como propilenglicol.

En una realización de la invención, la composición hemostática comprende xilitol.

En una realización de la invención, la composición hemostática comprende maltitol.

En una realización de la invención, la composición hemostática comprende sorbitol.

En una realización, la composición hemostática comprende de aproximadamente el 1 % a aproximadamente el 20 % de uno o más compuestos hidrófilos, por ejemplo de aproximadamente el 1 % a aproximadamente el 15 % de uno o más compuestos hidrófilos, tal como de aproximadamente el 1 % a aproximadamente el 10 % de uno o más compuestos hidrófilos, por ejemplo de aproximadamente el 1 % a aproximadamente el 7 % de uno o más compuestos hidrófilos, tal como de aproximadamente el 1 % a aproximadamente el 5 % de uno o más compuestos hidrófilos, tal como de aproximadamente el 2 % a aproximadamente el 5 % de uno o más compuestos hidrófilos, por ejemplo de aproximadamente 3 % a aproximadamente el 5 % de uno o más compuestos hidrófilos.

En una realización, el compuesto hidrófilo de la presente divulgación no es poli(etilenglicol) (PEG).

El compuesto hidrófilo puede ser un componente de la composición de trombina seca, un componente de la pasta que comprende un polímero biocompatible y/o que puede incorporarse en la composición hemostática en una etapa separada después de la reconstitución de la composición de trombina seca.

En una realización, el o los compuestos hidrófilos son un componente de la composición de trombina seca.

En una realización, el o los compuestos hidrófilos son un componente de la pasta que comprende un polímero biocompatible.

En una realización, el o los compuestos hidrófilos se incorporan en la composición hemostática en una etapa separada después de la reconstitución de la composición de trombina seca.

Preferiblemente, el o los compuestos hidrófilos se incluyen en el componente de trombina o en el componente de pasta para evitar etapas de mezcla adicionales para producir la composición hemostática.

Otros agentes bioactivos

En una realización de la invención, la composición hemostática comprende uno o más agentes bioactivos adicionales capaces de estimular la hemostasia, la cicatrización de heridas, la cicatrización ósea, la cicatrización de tejidos y/o la cicatrización de tendones. El o los agentes bioactivos pueden ser un componente de la composición de trombina seca, la pasta que comprende un polímero biocompatible y/o se pueden incorporar en la composición hemostática en una etapa separada después de la reconstitución de la composición de trombina seca. Preferiblemente, dichos agentes bioactivos se incluyen en la composición de trombina seca o en la pasta que comprende un polímero biocompatible para evitar etapas de mezcla adicionales. Es esencial que el agente bioactivo retenga su bioactividad durante el almacenamiento y la reconstitución, es decir, que el agente haya conservado su función biológica en la composición hemostática final. Muchos agentes bioactivos son inestables en solución, particularmente enzimas y otras proteínas que pueden degradarse o perder su estructura secundaria en presencia de agua.

El o los agentes bioactivos adicionales pueden ser, por ejemplo, fibrinógeno, fibrinógeno en combinación con Factor XIII, o fibrinógeno y Factor XIII en combinación con ácido tranexámico.

En una realización, la composición hemostática comprende uno o más agentes bioactivos adicionales que estimulan la cicatrización ósea y/o tendinosa y/o tisular tales como uno o más factores de crecimiento seleccionados del grupo que consiste en metaloproteinasas de matriz (MMP), factor de crecimiento similar a insulina 1 (IGF-I), factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF), factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), factor de crecimiento de fibroblastos básico (bFGF) y factor de crecimiento transformante beta (TGF-P).

En una realización, la composición hemostática comprende una o más proteínas morfogenéticas óseas (BMP). Las proteínas morfogenéticas óseas (BMP) son un subgrupo de la superfamilia TGF-p. Las proteínas morfogenéticas óseas (BMP) son un grupo de factores de crecimiento también conocidos como citocinas y como metabológenos. Originalmente descubiertas por su capacidad para inducir la formación de hueso y cartílago, ahora se considera que las BMP constituyen un grupo de señales morfogenéticas fundamentales, que orquestan la arquitectura tisular en todo el cuerpo.

En una realización, la composición hemostática comprende una o más metaloproteinasas de matriz (MMP).

Las MMP son endopeptidasas dependientes de cinc. Las MMP tienen una función muy importante en la degradación y remodelación de la matriz extracelular (ECM) durante el proceso de curación después de una lesión. Ciertas MMP que incluyen MMP-1, MMP-2, MMP-8, MMP-13 y m Mp -14 tienen actividad de colagenasa, lo que significa que, a diferencia de muchas otras enzimas, son capaces de degradar las fibrillas de colágeno

Todos estos factores de crecimiento tienen diferentes funciones durante el proceso de curación. El IGF-1 aumenta la producción de colágeno y proteoglicano durante la primera etapa de la inflamación, y el PDGF también está presente durante las primeras etapas después de la lesión y promueve la síntesis de otros factores de crecimiento junto con la síntesis de ADN y la proliferación de células. Se sabe que las tres isoformas de TGF-p (TGF-p1, TGF-p2, TGF-p3) desempeñan una función en la curación de heridas y la formación de cicatrices. El VEGF es bien conocido por promover la angiogénesis y por inducir la proliferación y migración de células endoteliales.

En una realización, la composición hemostática de la presente divulgación comprende escamas o partículas de matriz extracelular (ECM). La ECM es la parte extracelular del tejido animal que normalmente proporciona soporte estructural a las células animales además de realizar varias otras funciones importantes. Se ha demostrado que la ECM tiene un efecto muy beneficioso en la curación, ya que facilita la regeneración de tejido funcional.

La variedad de agentes bioactivos adicionales que se pueden usar junto con la composición hemostática de la invención es amplia. En general, los agentes bioactivos que se pueden administrar a través de la composición hemostática de la invención incluyen, sin limitación, antiinfecciosos, tales como antibióticos y agentes antivirales; analgésicos y combinaciones de analgésicos; antihelmínticos; antiartríticos; anticonvulsivos; antidepresivos; antihistamínicos; agentes antiinflamatorios; preparaciones antimigraña; antineoplásicos; fármacos antiparkinsonismo; antipsicóticos; antipiréticos, antiespasmódicos; anticolinérgicos; simpatomiméticos; derivados de xantina; preparaciones cardiovasculares que incluyen bloqueadores de los canales de calcio y beta-bloqueantes tales como pindolol y antiarrítmicos; antihipertensivos; diuréticos; vasodilatadores, incluyendo coronarios generales, periféricos y cerebrales; estimulantes del sistema nervioso central; hormonas, tales como estradiol y otros esteroides, incluyendo corticosteroides; inmunosupresores; relajantes musculares; parasimpaticolíticos; psicoestimulantes; proteínas derivadas de forma natural o modificadas genéticamente, polisacáridos, glicoproteínas o lipoproteínas; oligonucleótidos, anticuerpos, antígenos, colinérgicos, quimioterapéuticos, agentes radioactivos, agentes osteoinductivos, cistefeparáticos, agentes procoagulantes y hemostáticos, tales como protrombina, trombina, fibrinógeno, fibrina, fibronectina, heparinasa, Factor X/Xa, Factor VlI/VIIa, Factor VIN/VNIa, Factor IX/IXa, Factor Xl/XIa, Factor XlI/XIIa, Factor XNI/XNIa, factor tisular, batroxobina, ancrod, ecarina, Factor von Willebrand, glicoproteínas de la superficie de las plaquetas, vasopresina, análogos de vasopresina, epinefrina, selectina, veneno procoagulante, inhibidor de plaquetas, activador inhibidor de plasminógeno, agentes activadores de plaquetas y péptidos sintéticos que tienen actividad hemostática.

En una realización, el o los agentes bioactivos adicionales son un componente de la composición de trombina seca.

En una realización, el o los agentes bioactivos adicionales son un componente de la pasta que comprende un polímero biocompatible.

Compuestos adicionales

La composición hemostática de la invención puede comprender además uno o más de los siguientes: DMSO (dimetil sulfóxido) y/o 2-metil-2,4-pentanodiol (MPD).

En una realización, la composición hemostática de la presente divulgación comprende uno o más agentes antimicrobianos, tales como uno o más agentes antibacterianos.

En una realización, la composición hemostática de la presente divulgación comprende cloruro de benzalconio.

En una realización, la composición hemostática de la presente invención no comprende ningún agente antimicrobiano.

En una realización, la composición hemostática comprende además un potenciador de extrusión, es decir, un compuesto capaz de facilitar la extrusión de una pasta desde una jeringa.

Se ha demostrado previamente que la provisión de ciertos potenciadores de extrusión, tales como albúmina en una cantidad apropiada, permite el uso de concentraciones de gelatina más altas, ya que disminuye la cantidad de fuerza necesaria para extruir la composición de pasta de gelatina desde, por ejemplo, una jeringa. El uso de concentraciones de gelatina más altas puede a su vez mejorar las propiedades hemostáticas de dichos productos. Los potenciadores de extrusión se han de proporcionar en cantidades apropiadas. Las cantidades son preferiblemente lo suficientemente altas como para obtener el efecto de extrusión, es decir, para permitir una pasta fluida incluso para cantidades relativamente altas del polímero biocompatible, por ejemplo, gelatina reticulada, de modo que la composición hemostática pueda ser aplicada con precisión por un cirujano utilizando, por ejemplo, una jeringa que comprende una punta aplicadora; por otro lado, las cantidades deben ser tan bajas como para evitar las propiedades funcionales negativas potenciales de la composición hemostática.

El potenciador de extrusión es preferiblemente albúmina, especialmente albúmina de suero humano.

En la composición hemostática de la presente invención, el potenciador de extrusión, tal como albúmina, está presente en una cantidad entre aproximadamente el 0,1 % y aproximadamente el 10 %, tal como entre aproximadamente el 0,2 % y aproximadamente el 8 %, por ejemplo entre aproximadamente el 0,3 % y aproximadamente el 7 %, preferiblemente entre aproximadamente el 0,5 % y aproximadamente el 5 %, tal como entre aproximadamente el 1 % y aproximadamente el 4 %.

En una realización, la composición hemostática de la presente invención comprende cantidades traza de albúmina, tal como menos del 0,1 %, por ejemplo menos del 0,01 %, tal como menos del 0,001 %, por ejemplo menos del 0,0001 %.

El o los compuesto(s) adicional(es) pueden ser un componente de la composición de trombina seca, un componente de la pasta que comprende un polímero biocompatible y/o que puede incorporarse en la composición hemostática en una etapa separada después de la reconstitución de la composición de trombina seca.

En una realización, el o los compuesto(s) adicional(es) son un componente de la composición de trombina seca.

En una realización, el o los compuesto(s) adicional(es) son un componente de la pasta que comprende un polímero biocompatible.

En una realización, el o los compuesto(s) adicional(es) se incorporan en la composición hemostática en una etapa separada después de la reconstitución de la composición de trombina seca.

Preparación de la composición hemostática/reconstitución de la composición de trombina seca

La presente divulgación se refiere a un método para reconstituir una composición de trombina seca directamente en una pasta para generar una composición hemostática adecuada para su uso en el tratamiento de una herida; particularmente para fines hemostáticos.

Por lo tanto, en una realización se proporciona un método para preparar una composición hemostática, comprendiendo el método las etapas consistentes en:

a) proporcionar una composición de trombina seca en un primer recipiente;

c) conectar el primer recipiente y el segundo recipiente utilizando medios de conexión adecuados; y d) mezclar el contenido de los recipientes

En una realización se proporciona un método para reconstituir una composición de trombina seca, comprendiendo el método las etapas consistentes en:

a) proporcionar una composición de trombina seca en un primer recipiente;

Los recipientes consisten normalmente en jeringas, más preferiblemente jeringas interconectables.

En una realización, los medios de conexión adecuados comprenden un mezclador estático. Dicho mezclador estático puede proporcionar la capacidad de mezclar aire en la pasta durante la mezcla. Las dimensiones del mezclador estático pueden influir en la consistencia de la composición hemostática y la capacidad de mezclar aire en la composición hemostática.

En una realización, los medios de conexión adecuados comprenden una porción de conector de un tipo estándar, tal como un conector Luer lock o Luer slip. Las dimensiones de la conexión Luer lock o Luer slip pueden influir en la consistencia de la composición hemostática y la capacidad de mezclar aire en la composición hemostática.

La mezcla se realiza transfiriendo el contenido de los recipientes de un lado a otro varias veces.

En una realización, el número de transferencias es inferior a 20 veces, por ejemplo inferior a 15 veces, tal como inferior a 12 veces, por ejemplo inferior a 10 veces, tal como inferior a 6 veces.

En una realización, el número de transferencias es inferior a 10 veces, por ejemplo inferior a 9 veces, tal como inferior a 8 veces, por ejemplo inferior a 7 veces, tal como inferior a 6 veces, por ejemplo inferior a 5 veces.

En una realización, el número de transferencias es menor que 8.

En una realización preferida, el número de transferencias es de aproximadamente 6 veces o menos.

La mezcla con 6 transferencias se puede realizar de la siguiente manera: la mezcla se inicia mediante la transferencia de la pasta que comprende un polímero biocompatible al primer recipiente que contiene la composición de trombina seca. Por lo tanto, la primera transferencia se caracteriza por la transferencia de la pasta que comprende un polímero biocompatible desde el segundo recipiente al primer recipiente. La segunda transferencia se caracteriza por la transferencia de la mezcla de trombina y pasta, resultante de la primera transferencia, desde el primer recipiente al segundo recipiente, que inicialmente contiene la pasta que comprende un polímero biocompatible. La tercera transferencia se caracteriza por la transferencia de la mezcla de trombina y pasta, que resulta de la segunda transferencia, desde el segundo recipiente al primer recipiente. La cuarta transferencia se caracteriza por la transferencia de la mezcla de trombina y pasta, resultante de la tercera transferencia, desde el primer recipiente al segundo recipiente. La quinta transferencia se caracteriza por la transferencia de la mezcla de trombina y pasta, resultante de la cuarta transferencia, desde el segundo recipiente al primer recipiente. La sexta y última transferencia se caracteriza por la transferencia de la mezcla de trombina y pasta, resultante de la quinta transferencia, desde el primer recipiente al segundo recipiente.

En una realización se usan más de seis transferencias entre el primer y segundo recipientes para reconstituir la composición de trombina seca en la pasta.

En una realización, la transferencia final se caracteriza por la transferencia de la mezcla de trombina y pasta desde el primer recipiente al segundo recipiente. La composición hemostática resultante puede aplicarse después directamente desde dicho segundo recipiente sobre un sitio de tratamiento, por ejemplo, sobre una herida sangrante. En algunas realizaciones, una punta aplicadora puede ajustarse a la jeringa y emplearse tal como se ha descrito anteriormente.

La mezcla de la composición de trombina seca y la pasta que comprende un polímero biocompatible da como resultado una distribución sustancialmente homogénea de trombina en la composición hemostática.

La composición hemostática

La composición hemostática de esta divulgación se prepara reconstituyendo una composición de trombina seca directamente en una pasta que comprende un polímero biocompatible. La reconstitución de la pasta se puede realizar mediante métodos tal como se describen en la presente memoria. La composición hemostática tiene una distribución sustancialmente homogénea de trombina en la composición hemostática.

En una realización, la distribución homogénea de trombina se caracteriza por una variación en el contenido de trombina a lo largo de la composición hemostática de menos del 20 %, por ejemplo menos del 10 %, tal como menos del 5 %, por ejemplo menos del 4 %, tal como menos del 3 %, por ejemplo menos del 2 %, tal como menos del 1 %. La variación en el contenido de trombina puede medirse como la diferencia en la actividad o concentración de trombina entre diferentes fracciones de la pasta hemostática en el recipiente, tal como por ejemplo entre la fracción de inicio de una jeringa, la fracción media de una jeringa o la fracción final de una jeringa.

En una realización, la variación en el contenido de trombina a lo largo de la composición hemostática es inferior al 10 %.

En una realización, la variación en el contenido de trombina a lo largo de la composición hemostática es inferior al 5 %.

En una realización, la variación en el contenido de trombina a lo largo de la composición hemostática es inferior al 4 %.

En una realización, la variación en el contenido de trombina a lo largo de la composición hemostática es inferior al 3 %.

En una realización, la variación en el contenido de trombina a lo largo de la composición hemostática es inferior al 2 %.

En una realización, la variación en el contenido de trombina a lo largo de la composición hemostática es inferior al 1 %.

La composición hemostática obtenida mediante los métodos descritos en la presente memoria es preferiblemente una composición fluida. La composición hemostática obtenida mediante los métodos descritos en la presente memoria es adecuada para su uso en la hemostasia y/o la cicatrización de heridas.

La composición hemostática puede comprender uno o más agentes hidrófilos, tales como, por ejemplo, uno o más polioles o uno o más polietilenglicoles (PEG).

En una realización, la composición hemostática comprende uno o más agentes bioactivos adicionales además de trombina. Dichos uno o más agentes bioactivos pueden ser capaces de estimular la hemostasia, la cicatrización de heridas, la cicatrización ósea, la cicatrización de tejidos y/o la cicatrización de tendones. En una realización, la composición hemostática comprende uno o más potenciadores de extrusión, tales como, por ejemplo, albúmina.

La composición hemostática se puede obtener mediante cualquier método de reconstitución de una composición de trombina seca tal como se describe en la presente memoria.

En una realización, la composición hemostática tiene una consistencia dentro del intervalo de aproximadamente 100 g x s a aproximadamente 10.000 g x s, tal como de aproximadamente 500 g x s a aproximadamente 5000 g x s, por ejemplo de aproximadamente 1000 g x s a aproximadamente 3000 g x s, tal como de aproximadamente 1500 g x s a aproximadamente 2000 g x s.

En una realización, la composición hemostática tiene una consistencia de menos de aproximadamente 5000 g x s, por ejemplo menos de aproximadamente 4000 g x s, tal como menos de aproximadamente 3000 g x s, por ejemplo menos de aproximadamente 2000 g x s.

Recipientes

Cualquier recipiente adecuado conocido por un experto en la materia puede usarse para preparar la composición hemostática, tal como viales, frascos, tubos, bandejas, cartuchos o jeringas.

La composición de trombina seca se proporciona en un primer recipiente y la pasta que comprende un polímero biocompatible se proporciona en un segundo recipiente.

El primer y el segundo recipientes pueden estar hechos de cualquier material adecuado tal como plástico, vidrio, cerámica, plástico o metal, tal como acero inoxidable. Los ejemplos de materiales plásticos adecuados incluyen, pero no se limitan a, polietileno, polipropileno, poliestireno, cloruro de polivinilo y politetrafluoroetileno (PTFE).

En una realización, la composición de trombina seca se proporciona en un primer recipiente que se puede seleccionar entre una jeringa, un vial, un frasco, un tubo, una bandeja o un cartucho.

En una realización preferida, dicho primer recipiente que contiene la composición de trombina seca es un dispositivo de administración médica adecuado para dispensar composiciones hemostáticas fluidas a un paciente que lo necesita, tal como una jeringa.

El primer recipiente está hecho usualmente de un material adecuado para la esterilización química de la superficie sin influir en el contenido del recipiente. Por ejemplo, dicho primer recipiente puede estar hecho de un material que es impermeable al óxido de etileno, tal como, por ejemplo, hecho de metal, vidrio o un plástico que es impermeable al óxido de etileno.

La composición de trombina seca puede proporcionarse preferiblemente en un recipiente de vidrio, permitiendo así la esterilización de dicho recipiente usando gas de óxido de etileno. En una realización, dicho primer recipiente es una jeringa de vidrio. En una realización, dicho primer recipiente es una jeringa que tiene un inserto de vidrio que contiene la trombina seca.

En una realización, la pasta que comprende un polímero biocompatible se proporciona en un segundo recipiente que puede seleccionarse entre una jeringa, un vial, un frasco, un tubo, una bandeja o un cartucho. La pasta que comprende un polímero biocompatible puede prepararse mediane métodos conocidos en la técnica, tales como mezclando un polvo de polímero biocompatible con un medio acuoso para generar dicha pasta. La pasta que comprende un polímero biocompatible puede prepararse adecuadamente a granel y transferirse/dividirse en alícuotas en dicho segundo recipiente.

En una realización preferida, el recipiente que contiene la pasta que comprende un polímero biocompatible es un dispositivo de administración médica adecuado para dispensar composiciones hemostáticas fluidas a un paciente que lo necesita, tal como una jeringa. En una realización, el segundo recipiente es una jeringa de plástico de un solo uso.

En una realización, el primer y el segundo recipientes son interconectables. La porción de conector puede ser una porción de conector de un tipo estándar, tal como un conector Luer lock o Luer slip. La porción de conector puede estar provista de una porción roscada para una conexión segura con un conector coincidente. Las dimensiones de dicha conexión Luer lock o Luer slip pueden ser capaces de cambiar la capacidad de incorporación de aire por mezcla en la composición hemostática durante la mezcla de la composición de trombina seca y la pasta que comprende un polímero biocompatible. Además, las dimensiones de la conexión Luer lock o Luer slip pueden influir en la consistencia de la composición hemostática.

En una realización, la porción de conector comprende un mezclador estático. Las dimensiones de dicho mezclador estático pueden ser capaces de cambiar la capacidad de incorporación de aire por mezcla en la composición hemostática durante la mezcla de la composición de trombina seca y la pasta que comprende un polímero biocompatible. Además, las dimensiones del mezclador estático pueden influir en la consistencia de la composición hemostática.

Envase exterior

En una realización, la composición de trombina seca y/o la pasta que comprende un polímero biocompatible contenida dentro de, por ejemplo, una jeringa, tal como la jeringa descrita en la presente memoria, u otra unidad de contención, está contenida además dentro de un envase exterior de manera que el producto se mantiene estéril hasta su uso. Esto permitirá que el usuario retire el envase exterior y transfiera los componentes de la composición hemostática a un campo estéril.

El envase exterior está hecho usualmente de un material flexible, semirrígido o rígido y típicamente consiste en materiales tales como plástico, lámina de aluminio y/o laminado plástico, donde el plástico puede seleccionarse del grupo que consiste en PET, PETG, PE, LLDPE, CPP, PA, PETP, MeTp ET, Tyvek y opcionalmente unido con un adhesivo, tal como poliuretano, o coextruido.

En una realización, el envase exterior es un envase exterior de lámina de aluminio.

El envase exterior preferiblemente forma una barrera completa a la humedad.

El envase exterior es preferiblemente capaz de soportar el tratamiento de esterilización tal como por radiación.

En una realización, la primera jeringa que comprende una composición de trombina seca y la segunda jeringa que comprende una pasta que comprende un polímero biocompatible están contenidas en envases exteriores separados.

Esterilización

La composición de trombina seca, la pasta que comprende un polímero biocompatible y/o la composición hemostática de la presente divulgación son preferiblemente estériles. Puede utilizarse cualquier método de esterilización adecuado conocido en la técnica. La esterilización se refiere a cualquier proceso que mate o elimine eficazmente agentes transmisibles (tales como hongos, bacterias, virus, priones y formas de esporas, etc.). La esterilización se puede lograr, por ejemplo, mediante la aplicación de calor, productos químicos y/o irradiación.

La esterilización se puede lograr mediante esterilización por calor, incluye autoclave (usa vapor a altas temperaturas) y calor seco.

La esterilización se puede lograr mediante irradiación, por ejemplo irradiación ionizante, para proporcionar esterilidad a los componentes. Dicha irradiación puede incluir haz electrónico (irradiación beta), rayos X, rayos gamma y beta, luz UV y partículas subatómicas. El nivel de irradiación y las condiciones para la esterilización, incluyendo el tiempo, son aquellos que proporcionan composiciones estériles. Las condiciones de esterilización son similares a las utilizadas actualmente en la técnica y pueden ser determinadas por el experto.

La esterilización puede realizarse mediante esterilización química tal como usando gas de óxido de etileno, ozono, lejía con cloro, glutaraldehído, formaldehído, orto-ftalaldehído, peróxido de hidrógeno y/o ácido peracético.

La composición de trombina seca se prepara usualmente utilizando métodos asépticos, proporcionando de este modo una composición de trombina seca estéril en dicho primer recipiente.

En una realización, la superficie del primer recipiente que comprende una composición de trombina seca se esteriliza con esterilización química, tal como con gas de óxido de etileno.

En una realización, la pasta que comprende un polímero biocompatible se esteriliza por irradiación, tal como por irradiación gamma.

En una realización, la esterilización del segundo recipiente que comprende una pasta que comprende un polímero biocompatible se esteriliza utilizando irradiación beta o gamma, proporcionando de este modo una pasta estéril y un recipiente estéril.

En una realización, la esterilización del segundo recipiente que comprende una pasta que comprende un polímero biocompatible se produce como esterilización terminal, es decir, cuando el segundo recipiente que comprende una pasta que comprende un polímero biocompatible está contenido dentro de un envase exterior.

Uso médico

La presente divulgación se refiere además al uso de la composición hemostática obtenida mediante los métodos de esta divulgación para promover la hemostasia y/o la cicatrización de heridas.

La composición hemostática de la presente divulgación puede usarse, por ejemplo, en una serie de procedimientos quirúrgicos en los que se desea el control de la hemorragia. La composición hemostática está en la forma de una pasta que se adapta a superficies irregulares para detener rápidamente el sangrado y, por lo tanto, es útil para proporcionar hemostasia rápida en superficies rugosas o irregulares donde las esponjas hemostáticas no son eficientes.

En general, las pastas hemostáticas se preparan directamente en el sitio quirúrgico en el momento en el que las necesite el facultativo, es decir, los médicos o enfermeros, normalmente mediante la adición de líquido (que comprende opcionalmente trombina) a un recipiente, tal como una jeringa, que contiene una cantidad de un polímero biocompatible. El polímero biocompatible puede estar previamente humedecido con el líquido o estar esencialmente seco (polvo de flujo libre). Por lo tanto, la pasta se prepara a menudo en condiciones extremadamente estresantes y, por lo tanto, es esencial que el proceso para preparar la pasta sea simple y rápido para garantizar que el sangrado se detenga lo más rápidamente posible y que no se cometan errores mientras se prepara la pasta de manera que la enfermera pueda mantenerse centrada en las necesidades del cirujano en lugar de en la preparación del producto hemostático. También es importante que la consistencia de la pasta sea adecuada para su uso como una pasta hemostática y que la consistencia del producto sea independiente de una preparación a otra y a lo largo del tiempo.

Los productos de pasta fluida actualmente disponibles (Floseal® y Surgiflo®) requieren la reconstitución de una composición de trombina en un líquido antes de la mezcla mecánica de dicha solución de trombina reconstituida con el polímero biocompatible pasando el polímero biocompatible y el líquido entre dos jeringas conectadas un número de veces para obtener una pasta sustancialmente homogénea. La reconstitución de la trombina requiere mucho tiempo y es propensa a errores, dos factores no deseados en un entorno de quirófano. Estos productos a menudo se preparan previamente en el quirófano antes de la cirugía en caso de que se necesiten durante la cirugía y el producto no utilizado a menudo se desecha causando altos costes de quirófano innecesarios.

El método de preparación de una composición hemostática de la presente divulgación es superior a los métodos actualmente disponibles, ya que reduce el número de etapas de manipulación en el procedimiento al permitir la reconstitución directa de una composición de trombina seca en una pasta. La composición hemostática de la presente divulgación puede prepararse simplemente añadiendo una cantidad de una pasta que comprende un polímero biocompatible a un recipiente que comprende la composición de trombina seca y mezclando el contenido, tal como transfiriendo el contenido entre dos jeringas interconectadas varias veces, con lo que se forma una pasta hemostática lista para usar que comprende trombina distribuida sustancialmente de forma homogénea.

El hecho de que no se requiera la reconstitución previa de la composición de trombina seca en un líquido también significa que se gasta menos tiempo en preparar la pasta, lo que a su vez conduce a una mayor seguridad del paciente, tanto debido al hecho de que la composición hemostática se puede aplicar al paciente más rápidamente, como debido a que el método de preparación simple disminuye la probabilidad de errores que se cometen durante la preparación de la composición hemostática. Además, el método de preparación de una composición hemostática de la presente divulgación puede disminuir los costos de quirófano, ya que no hay necesidad de preparar previamente el producto actual antes de la cirugía debido a que la preparación es tan simple y rápida.

Otra ventaja notable del método de la presente invención consiste en que se puede preparar un kit que consiste en menos componentes en comparación con los kits fluidos hemostáticos actuales. Todo lo que se requiere para preparar una composición de pasta fluida en el quirófano es la composición de trombina seca tal como se describe en la presente memoria contenida dentro de un primer recipiente, tal como una jeringa, y un segundo recipiente, tal como un dispositivo de administración médica que comprende una pasta que comprende un polímero biocompatible. Tras la conexión de los dos y la mezcla, se forma una pasta fluida lista para usar que contiene todos los agentes necesarios para una hemostasia eficaz que incluye trombina. Por lo tanto, no se requieren jeringas, adaptadores de vial, agujas y tazones de mezcla adicionales con el producto preparado de acuerdo con los métodos de la presente divulgación. Esto significa que los costes de fabricación pueden reducirse y también garantiza una buena seguridad del paciente, ya que hay menos componentes que el personal de quirófano tenga que seguir de cerca durante la cirugía. La preparación sin aguja del producto hemostático también garantiza la seguridad del personal del quirófano.

En una realización, la presente divulgación se refiere a un método para detener el sangrado/promover la hemostasia en un individuo que lo necesita mediante la aplicación de la composición hemostática preparada por los métodos de la presente divulgación a un sitio de sangrado.

La composición hemostática de la presente divulgación se puede usar para cualquier tipo de cirugía, incluyendo cirugía general, cirugía cardiotorácica, cirugía vascular, cirugía plástica, cirugía pediátrica, cirugía colorrectal, cirugía de trasplante, oncología quirúrgica, cirugía de trauma, cirugía endocrina, cirugía de mama, cirugía de piel, otorrinolaringología, ginecología, cirugía oral y maxilofacial, cirugía dental, cirugía ortopédica, neurocirugía, oftalmología, cirugía podiátrica, urología.

En una realización, la presente divulgación se refiere a un método para promover la cicatrización de heridas en un individuo que lo necesita mediante la aplicación de la composición hemostática preparada por los métodos de la presente divulgación a la herida.

Una "herida" se refiere en términos generales a lesiones en la piel y/o tejido subyacente (subcutáneo) iniciadas de diferentes maneras (por ejemplo, llagas de presión del reposo en cama prolongado y heridas inducidas por trauma) y con características variables. Las heridas pueden clasificarse en uno de cuatro grados dependiendo de la profundidad de la herida: i) Grado I: heridas limitadas al epitelio; ii) Grado II: heridas que se extienden en la dermis; iii) Grado III: heridas que se extienden en el tejido subcutáneo; y iv) Grado IV (o heridas de espesor total): heridas en las que los huesos están expuestos (por ejemplo, un punto de presión ósea tal como el trocánter mayor o el sacro). La presente divulgación se refiere al tratamiento de cualquier tipo de herida arriba mencionada utilizando la composición hemostática de la presente divulgación.

El tratamiento de una herida puede en principio dar como resultado la cicatrización de la herida o la cicatrización acelerada de la herida. La cicatrización acelerada puede ser un resultado, por ejemplo, de la administración de una sustancia promotora de la cicatrización de heridas. Alternativamente, la cicatrización de la herida puede promoverse previniendo la infección bacteriana o vírica, o reduciendo el riesgo de dicha infección que de otro modo habría prolongado el proceso de tratamiento de la herida.

En una realización, la presente divulgación se refiere a un método para promover la cicatrización ósea y/o de tendones en un individuo que lo necesita mediante la aplicación de la composición hemostática preparada por los métodos de la presente divulgación al hueso/tendón lesionado.

El "individuo" al que se hace referencia en la presente memoria puede ser cualquier mamífero, incluyendo, pero sin limitarse a, mamíferos del orden Rodentia, tales como ratones y hámsteres, y mamíferos del orden Logomorpha, tales como conejos. Es preferible que los mamíferos sean del orden Carnivora, incluyendo Felinos (gatos) y Caninos (perros). Es más preferible que los mamíferos sean del orden Artiodactyla, incluyendo Bovinos (vacas) y Porcinos (cerdos) o del orden Perssodactyla, incluyendo Equinos (caballos). Es totalmente preferible que los mamíferos sean del orden Primates, Ceboides o Simoides (monos) o del orden de Antropoides (seres humanos y simios). Un mamífero especialmente preferido es el humano.

En una realización, la presente divulgación se refiere a una composición hemostática tal como se describe en la presente memoria para su uso en el tratamiento de una herida, por ejemplo, para detener el sangrado o para promover la cicatrización de la herida.

Un kit hemostático

La presente divulgación se refiere además a un kit hemostático que comprende la composición de trombina seca de la presente divulgación y una pasta que comprende un polímero biocompatible adaptado a la cantidad de la composición de trombina seca de manera que, al mezclarse, se formará una composición hemostática que tiene un contenido de trombina adecuado para su uso en hemostasia.

Por lo tanto, en una realización, la presente invención se refiere a un kit que comprende

a) una primera jeringa que comprende una composición de trombina seca;

b) una segunda jeringa que comprende una pasta que comprende un polímero biocompatible seleccionado del grupo que consiste en gelatina, colágeno, quitina, quitosán, alginato, celulosa, celulosa oxidada, ácido poliglicólico y ácido poliacético; y

c) opcionalmente un envase exterior, en el que las dos jeringas son interconectables.

En una realización, el kit hemostático comprende:

a) una primera jeringa que comprende una composición de trombina seca en un envase exterior;

b) una segunda jeringa que comprende una pasta que comprende un polímero biocompatible en un envase exterior; y

c) opcionalmente un envase exterior que comprende los componentes de a) y b), en donde las dos jeringas son interconectables.

En una realización, el kit comprende además una o más puntas aplicadoras.

El kit puede contener opcionalmente instrucciones para el uso del kit.

Los componentes del kit hemostático pueden ser tal como se describe en otra parte de la presente memoria. Ejemplos

Ejemplo 1: Distribución de trombina en pasta

Materiales:

2000 UI de trombina seca en una jeringa de vidrio de 10 mL (primera jeringa).

5 mL de una pasta de gelatina en una jeringa de 10 mL (segunda jeringa).

Método:

Las dos jeringas están interconectadas a través de un Luer lock y el contenido de pasta de gelatina se transfiere a la jeringa que contiene la composición de trombina seca (primera transferencia). La mezcla resultante de trombina y pasta de gelatina se transfiere entonces de un lado a otro entre la primera y la segunda jeringas cinco veces, dando como resultado una composición hemostática contenida en la segunda jeringa (Figura 1). El número total de transferencias es de 6. La composición hemostática obtenida es una formulación de pasta fluida que comprende trombina y se identifica en la presente memoria como la pasta "6tomix" o "6TM". Como consecuencia de la mezcla, se mezcla un total de aproximadamente 3 mL de aire en la pasta proporcionando un volumen final de la pasta de aproximadamente 8 mL.

Resultados:

La composición hemostática final es una pasta que tiene un volumen de aproximadamente 8 mL.

El contenido de trombina de la composición hemostática se mide como la actividad media de trombina en diferentes fracciones de la composición hemostática. Se aplican las siguientes divisiones fraccionarias: la fracción de inicio (es decir, el primer 1/3 de composición hemostática extruida desde la jeringa), la fracción media (el 1/3 medio de composición hemostática extruida desde la jeringa) y la fracción final (el último 1/3 de composición hemostática extruida desde la jeringa).

La actividad de trombina de la composición hemostática total se establece en el 100 % y la actividad de trombina media de las fracciones individuales se calcula como porcentaje de la actividad total. Una distribución de trombina completamente homogénea en la composición hemostática daría como resultado una actividad media de trombina de cada una de las tres fracciones del 33,333 %.

Variación en el contenido de trombina:

La variación en el contenido de trombina se calcula como la diferencia porcentual en la actividad media de trombina entre dos fracciones.

La variación máxima en el contenido de trombina se calcula aquí de la siguiente manera:

(36/(31+36))-0,50*100 = 3,7%.

En conclusión, esto demuestra que una composición de trombina seca puede reconstituirse directamente en una pasta de gelatina, mediante seis transferencias de los dos componentes entre dos jeringas, para generar una composición hemostática que tiene una distribución sustancialmente homogénea de trombina en la composición hemostática.

Ejemplo 2: Efecto hemostático de la pasta

Propósito

El propósito del estudio era probar la eficacia hemostática de la pasta 6TM del Ejemplo 1. La eficacia hemostática de la pasta se comparó con la de la pasta Surgiflo® comercialmente disponible. Surgiflo® es una formulación de pasta de gelatina porcina estéril, absorbible, aprobada para uso hemostático mediante su aplicación a una superficie sangrante y es un producto establecido en el mercado.

Se ensayó la eficacia hemostática en un modelo de biopsia de bazo porcino como se describe a continuación.

Modelo experimental

Se usó un modelo de perforación de biopsia de bazo porcino aplicando punciones de 8 mm (3 mm de profundidad) en el bazo con un periodo de compresión inicial de 10 segundos seguido por un periodo de evaluación de 120 segundos y siguientes periodos de compresión de 10 segundos.

El modelo de perforación de biopsia de bazo porcino es un modelo establecido para evaluar la eficacia hemostática de pastas hemostáticasin vivo(Hutchinson et al., 2015, Surgical Technology International XXVII). El modelo de perforación de biopsia de bazo porcino del presente estudio es similar al utilizado en Hutchinson et al., 2015. El presente estudio se llevó a cabo con el permiso de la Inspección de Experimentos con Animales de Dinamarca (Dyreforsogstilsynet).

Animal experimental

El cerdo es el animal de elección para este modelo, ya que tiene un gran volumen de sangre (70 mL/kg) y un bazo vascular grande que permite muchas comparaciones hemostáticas en un solo animal. Las cerdas del presente estudio tenían un peso aproximado de 40 kg (± 5 kg) y una edad aproximada de tres meses. El criterio de inclusión para el cerdo fue el peso. El límite inferior de peso se fijó para asegurar que los órganos que habían de ser ensayados fueran de un tamaño apropiado, mientras que el límite superior fue una guía para asegurar que el tamaño del cerdo fuera estandarizado.

En el momento de la cirugía, los cerdos ensayados no mostraron signos de enfermedad clínica.

Anestesia y terapia con fluidos

Los cerdos habían estado en ayunas durante al menos 6 horas antes de la cirugía. La anestesia se indujo mediante una inyección intramuscular (1 mL/10 kg) de la siguiente mezcla: 6,25 mL de Narcoxyl (Xilazina 20 mg/mL), 1,25 mL de Ketaminol (Ketamina 100 mg/mL), 2 mL de Turbogesic (Butorfanol 10 mg/mL), y 2 mL de Metadon (Metadona 10 mg/mL) añadidos a un vial de Zoletil 50 Vet (que contenía 125 mg de Tiletamina y 125 mg de Zolazepam).

Los cerdos se intubaron y se ventilaron con un respirador con una mezcla de 0,5 l de oxígeno/2,5 l de aire/min. La anestesia se mantuvo mediante la administración intravenosa de Fentanilo (50 pg/mL, 1 mL/10 kg/hora) y Propofol (10 mg/mL, 1,5 mL/kg/hora). Los animales se mantuvieron normohidratados con solución de Ringer lactato (125 mL/hora). Previamente se ha evaluado que el uso del medicamento mencionado no afecta a la hemostasia.

Los cerdos utilizados en el presente estudio fueron sacrificados después de la cirugía usando una sobredosis de barbiturato que dio como resultado un paro cardíaco.

Procedimiento de ensayo

Preparación de la muestra

La pasta 6TM de la presente invención se preparó tal como se describe en el Ejemplo 1, es decir, mezclando una pasta de gelatina húmeda con una preparación seca de trombina sin reconstitución previa de la trombina en solución salina.

La pasta de Surgiflo (control) se mezcló con una solución de trombina de acuerdo con las Instrucciones de Uso de Surgiflo fechadas el 11 de junio de 2014.

Una vez mezclada con trombina, la composición química y el contenido de agua del producto de control (Surgiflo) y la pasta 6TM de la presente invención eran iguales.

Para imitar las condiciones de almacenamiento, las pastas se almacenaron a 40 °C durante 3 meses antes de mezclarlas con trombina y las pruebas posteriores, consistiendo la única diferencia en que la pasta de control contenía 2 mL menos de líquido (solución salina) que la pasta 6TM de la presente invención durante el almacenamiento. Los 2 mL de solución salina con trombina se añadieron a la pasta de control inmediatamente antes del ensayo, mientras que la pasta 6TM de la presente invención se mezcló con trombina seca como se describe en el Ejemplo 1 inmediatamente antes del ensayo.

Procedimientos quirúrgicos

Se realizó una incisión abdominal en la línea media para exponer el bazo. Se realizó una perforación de 8 mm (3 mm de profundidad) en el bazo. La intensidad del sangrado se evaluó en una escala de 0-5 como se describe más abajo en la presente memoria. Solo las intensidades de sangrado 3 y 4 se consideraron aceptables. La perforación estaba ahora lista para una muestra de control o una muestra de prueba. Para cada muestra de ensayo se hizo una nueva perforación.

Cada tipo de muestra se ensayó 7 veces (n = 7). Las muestras se ensayaron en un orden aleatorio.

Se realizó un control negativo de 12 minutos, usando solo gasa humedecida, al inicio y la finalización del periodo de prueba en cada cerdo. Los controles negativos se usaron como una indicación de la capacidad del animal para sangrar durante todo el estudio.

El parámetro de prueba primario consistía en medir el tiempo hasta la hemostasia (TTH). El TTH se define como el tiempo total menos el período final de evaluación de la hemostasia que garantiza que no se produzca ninguna hemorragia adicional, es decir, que no se produzca ninguna nueva hemorragia.

La evaluación de la intensidad de sangrado y la aplicación de muestras de ensayo y controles negativos se describen en detalle más abajo.

Intensidad de sangrado

La intensidad de sangrado de cada perforación fue evaluada por el cirujano en una escala de 0-5 (véase la Tabla más abajo).

Se observó la intensidad de sangrado a t = 0 para cada perforación. Para el análisis adicional solo se usaron pruebas realizadas en heridas con una intensidad de sangrado de 3-4.

Control negative

Se colocó gasa humedecida directamente sobre la perforación. Se aplicó presión digital durante 30 segundos seguido de un periodo de evaluación de la hemostasia de 120 segundos. Se evaluó la hemostasia (definida como ausencia de tamizado de la sangre debajo del artículo de ensayo durante 30 segundos). Si no se conseguía la hemostasia en los 120 segundos, se aplicó presión digital adicional durante 30 segundos y se realizó una reevaluación de la hemostasia de 120 segundos. La aplicación del taponamiento y los periodos de observación se realizaron hasta que se detuvo el sangrado y se alcanzó la hemostasia, o hasta que el periodo de prueba alcanzó los 12 minutos. No se consiguió la hemostasia dentro de los 12 minutos del período de ensayo para los controles negativos, mostrando así la capacidad del cerdo para sangrar durante todo el estudio.

Aplicación de muestras de ensayo

Se aplicaron aproximadamente 1-2 mL de pasta directamente en la perforación con una punta aplicadora. Durante la aplicación, la punta penetró en la perforación para asegurar el contacto con el tejido. Después de la aplicación se colocó una gasa humedecida en solución salina al 0,9 % sobre la perforación. Se aplicó presión digital (taponamiento) durante 10 segundos. Se detuvo la presión y se retiró la gasa, seguido de una evaluación de la hemostasia. Si no se observaba tamizado de la sangre desde debajo del artículo de prueba durante 120 segundos, se concluyó que se había logrado la hemostasia y se terminó el experimento. Si se tamizaba sangre debajo del artículo de ensayo en el período de tiempo de 120 segundos, se registraba el tiempo para el tamizado y se aplicaba de nuevo presión digital durante 10 segundos, después de lo cual se inspeccionaba la hemostasia. Este procedimiento continuó hasta conseguir la hemostasia o durante 12 minutos, lo que ocurriera primero.

Ejemplo de cálculo para la evaluación del tiempo hasta la hemostasia

10 segundos de presión digital, inspeccionar la hemostasia: tamices de sangre después de 39 segundos, presión digital durante otros 10 segundos, inspeccionar la hemostasia durante 120 segundos: sin tamizado -conclusión: la hemostasia se alcanzó después de 10 39 10 segundos = 59 segundos, es decir, el último período de observación no se incluye en el cálculo de la TTH.

Resultados

Los resultados del presente estudio se muestran en la siguiente tabla y se representan adicionalmente en la figura 3.

Los resultados muestran una reducción de casi 2 veces en el TTH medio de la pasta 6TM en comparación con la pasta de control.

La mediana de TTH de la pasta de control fue de 37 segundos, mientras que la mediana de TTH de la pasta de 6TM fue de 10 segundos.

Los datos muestran sorprendentemente que la pasta 6TM preparada de acuerdo con la presente invención conduce a la hemostasia más rápida y más consistentemente que la pasta de control.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un método para preparar una composición hemostática, comprendiendo el método las etapas consistentes en:

a) proporcionar una composición de trombina seca en una primera jeringa;

d) mezclar el contenido de las jeringas.

2. El método según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el polímero biocompatible es gelatina.

3. El método según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde la pasta en b) comprende el polímero biocompatible en un contenido de aproximadamente el 7 al 20 %, tal como de aproximadamente el 8 al 18 %, por ejemplo de aproximadamente el 10 al 16 %, tal como aproximadamente el 11-15 %, preferiblemente aproximadamente el 12-14 %.

4. El método según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde la composición hemostática comprende uno o más compuestos hidrófilos, tal como en donde el o los compuestos hidrófilos son uno o más polioles, tal como en donde el o los polioles se seleccionan entre alcoholes de azúcar, azúcares y/o derivados de los mismos, tal como en donde el alcohol de azúcar se selecciona del grupo que consiste en glicol, glicerol, eritritol, treitol, arabitol, xilitol, ribitol, manitol, sorbitol, dulcitol, fucitol, iditol, inositol, volemitol, isomalt, maltitol, lactitol, poliglicitol y mezclas de los mismos.

5. El método según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde la composición hemostática comprende uno o más agentes bioactivos adicionales capaces de estimular la hemostasia, la cicatrización de heridas, la cicatrización ósea, la cicatrización de tejidos y/o la cicatrización de tendones.

6. El método según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde la composición hemostática comprende además uno o más potenciadores de extrusión, tales como albúmina, preferiblemente albúmina sérica humana.

7. El método según una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 6, en donde el compuesto hidrófilo según la reivindicación 4, el agente bioactivo según la reivindicación 5 y/o el potenciador de extrusión según la reivindicación 6 son un componente de la composición de trombina seca en a), son un componente de la pasta en b) y/o se incorporan en la composición hemostática en una etapa separada después de la etapa d).

8. El método según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde la composición de trombina seca se prepara mediante secado por pulverización o liofilización.

9. El método según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde la composición de trombina seca comprende menos del 1 % de agua.

10. El método según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde la mezcla se realiza transfiriendo el contenido de los recipientes de un lado a otro entre 5 y 10 veces.

11 El método según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde los medios de conexión comprenden un conector Luer lock o Luer slip.

12. El método según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde la primera jeringa es una jeringa de vidrio o en donde la primera jeringa comprende un inserto de vidrio que comprende la composición de trombina seca.

13. El método según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde la segunda jeringa es una jeringa de plástico.

14. El método según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el método comprende una etapa adicional de esterilización de la composición de trombina seca en a), la pasta en b) y/o la composición hemostática.

15. Un kit que comprende

a) una primera jeringa que comprende una composición de trombina seca;

c) opcionalmente un envase exterior,

en donde las dos jeringas son interconectables.